JP3233050B2 - 免疫定量装置 - Google Patents
免疫定量装置Info
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- JP3233050B2 JP3233050B2 JP33656596A JP33656596A JP3233050B2 JP 3233050 B2 JP3233050 B2 JP 3233050B2 JP 33656596 A JP33656596 A JP 33656596A JP 33656596 A JP33656596 A JP 33656596A JP 3233050 B2 JP3233050 B2 JP 3233050B2
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、被検液中の抗原量
を酵素標識抗体を用いて定量する免疫定量装置に関する
ものであり、特にその精度を向上させるものである。
を酵素標識抗体を用いて定量する免疫定量装置に関する
ものであり、特にその精度を向上させるものである。
【０００２】
【従来の技術】臨床検査分野では酵素標識抗体を用いた
免疫測定法が広く用いられている。この測定法を用いた
従来の免疫定量装置は、被検液を添加した後、酵素標識
抗体と特異結合反応しなかった未結合物質を洗浄除去し
た後、基質を添加して酵素反応による発色度の測定をす
るといった煩雑な操作が必要である。
免疫測定法が広く用いられている。この測定法を用いた
従来の免疫定量装置は、被検液を添加した後、酵素標識
抗体と特異結合反応しなかった未結合物質を洗浄除去し
た後、基質を添加して酵素反応による発色度の測定をす
るといった煩雑な操作が必要である。
【０００３】そこで洗浄や基質の添加などの手間がな
く、簡単な操作で迅速に測定できる装置として、図４の
分解斜視図及び図５の断面図に示すものが既に提案され
ている。図５は図４に示す装置の検出部位の断面図であ
る。図において、上部ケース１と下部ケース１１の内部
には、目的とする抗原を酵素標識抗体に特異結合させた
後、この酵素の基質との酸化還元反応によって生じる電
流を測定するための構造が含まれている。
く、簡単な操作で迅速に測定できる装置として、図４の
分解斜視図及び図５の断面図に示すものが既に提案され
ている。図５は図４に示す装置の検出部位の断面図であ
る。図において、上部ケース１と下部ケース１１の内部
には、目的とする抗原を酵素標識抗体に特異結合させた
後、この酵素の基質との酸化還元反応によって生じる電
流を測定するための構造が含まれている。
【０００４】図において、２は被検液中の目的とする抗
原に特異結合する酵素標識抗体と、電子伝達物質と、緩
衝液成分とをガラス繊維濾紙に含浸させた後、乾燥させ
た試薬層である。４は、ガラス繊維濾紙からなる反応層
である。３は試薬層２と反応層４との間に設けた溶液不
透過性シールであり、たとえばＰＥＴ（ポリエチレンテ
レフタレート）、アルミシール、ビニールテープなどが
用いられる。
原に特異結合する酵素標識抗体と、電子伝達物質と、緩
衝液成分とをガラス繊維濾紙に含浸させた後、乾燥させ
た試薬層である。４は、ガラス繊維濾紙からなる反応層
である。３は試薬層２と反応層４との間に設けた溶液不
透過性シールであり、たとえばＰＥＴ（ポリエチレンテ
レフタレート）、アルミシール、ビニールテープなどが
用いられる。
【０００５】５はその中央部に被検液の通過口１２を形
成し、上部ケース１の空間と下部ケース１１の空間との
境界を定める電極基板であり、下面には作用電極６と対
電極７とをスクリーン印刷している。電極基板５の一端
はケースの側面より突出しており、作用電極６と対電極
７間の電流量を測定するために、外部装置に接続可能に
なっている。
成し、上部ケース１の空間と下部ケース１１の空間との
境界を定める電極基板であり、下面には作用電極６と対
電極７とをスクリーン印刷している。電極基板５の一端
はケースの側面より突出しており、作用電極６と対電極
７間の電流量を測定するために、外部装置に接続可能に
なっている。
【０００６】８は、例えばセルロース混合エステル膜等
の多孔性膜の表面に、被検液中の定量すべき抗原と同じ
抗原を、被検液によっても溶け出さないように固定した
抗原不溶化膜である。１０は例えば過酸化水素等の酵素
基質を含浸後、乾燥させた濾紙からなる基質層である。
１８は、抗原不溶化膜８と基質層１０との間に接着した
溶液不透過性シールであり、上述の溶液不透過性シール
３と同様の材料で作られる。
の多孔性膜の表面に、被検液中の定量すべき抗原と同じ
抗原を、被検液によっても溶け出さないように固定した
抗原不溶化膜である。１０は例えば過酸化水素等の酵素
基質を含浸後、乾燥させた濾紙からなる基質層である。
１８は、抗原不溶化膜８と基質層１０との間に接着した
溶液不透過性シールであり、上述の溶液不透過性シール
３と同様の材料で作られる。
【０００７】測定時には、上部ケース１の検体口１３か
ら被検液を注入すると、まず検体は試薬層２の成分を溶
解しながら反応層４へと流れ込む。反応層４では、試薬
組成である酵素標識抗体と被検液中の抗原が特異結合を
起こす。このとき溶液不透過性シール３を迂回して反応
層４へ被検液が流れるようにしているので、定量すべき
被検液中のすべての抗原を、酵素標識抗体に反応させる
ことができる。
ら被検液を注入すると、まず検体は試薬層２の成分を溶
解しながら反応層４へと流れ込む。反応層４では、試薬
組成である酵素標識抗体と被検液中の抗原が特異結合を
起こす。このとき溶液不透過性シール３を迂回して反応
層４へ被検液が流れるようにしているので、定量すべき
被検液中のすべての抗原を、酵素標識抗体に反応させる
ことができる。
【０００８】通過口１２から被検液が抗原不溶化膜８を
流れるとき、特異結合しなかった残りの酵素標識抗体
は、抗原不溶化膜８表面の抗原と結合する。溶液不透過
性シール１８により、被検液は抗原不溶化膜８の全面に
広がって結合が進み、そして基質層１０を十分に湿潤す
る。
流れるとき、特異結合しなかった残りの酵素標識抗体
は、抗原不溶化膜８表面の抗原と結合する。溶液不透過
性シール１８により、被検液は抗原不溶化膜８の全面に
広がって結合が進み、そして基質層１０を十分に湿潤す
る。
【０００９】被検液は基質層１０中の酵素基質を溶解
し、酵素基質は溶液不透過性シール１８を迂回して、再
び電極基板５へ達する。そして不溶化抗原に結合した酵
素標識抗体が酵素反応を開始するので、電子伝達物質の
酸化還元反応が生じるので、このとき作用電極６と対電
極７に電位を与えると、酵素反応量に比例した電流が流
れる。この電流値により被検液中の抗原量を測定するこ
とができる。
し、酵素基質は溶液不透過性シール１８を迂回して、再
び電極基板５へ達する。そして不溶化抗原に結合した酵
素標識抗体が酵素反応を開始するので、電子伝達物質の
酸化還元反応が生じるので、このとき作用電極６と対電
極７に電位を与えると、酵素反応量に比例した電流が流
れる。この電流値により被検液中の抗原量を測定するこ
とができる。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら上記従来
の構成では、基質層１０を湿潤した被検液が、作用電極
６及び対電極７まで達するには、溶液不透過性シール１
８を迂回する必要があるため、基質層１０中の酵素基質
が電極の近傍にまで均一に拡散する時間は、各免疫定量
測定装置ごとに一定ではなくばらついてしまう。したが
って、電流値を読みとるタイミングは拡散速度に左右さ
れてしまうという問題があった。
の構成では、基質層１０を湿潤した被検液が、作用電極
６及び対電極７まで達するには、溶液不透過性シール１
８を迂回する必要があるため、基質層１０中の酵素基質
が電極の近傍にまで均一に拡散する時間は、各免疫定量
測定装置ごとに一定ではなくばらついてしまう。したが
って、電流値を読みとるタイミングは拡散速度に左右さ
れてしまうという問題があった。
【００１１】また反応層４からの被検液が抗原不溶化膜
８を流れる際、酵素標識抗体のみならず、被検液中のタ
ンパク質などの成分が抗原不溶化膜に非特異結合してし
まう。このため抗原不溶化膜８に結合する酵素標識抗体
の量にばらつきが生じ、測定精度を低下させる問題があ
った。
８を流れる際、酵素標識抗体のみならず、被検液中のタ
ンパク質などの成分が抗原不溶化膜に非特異結合してし
まう。このため抗原不溶化膜８に結合する酵素標識抗体
の量にばらつきが生じ、測定精度を低下させる問題があ
った。
【００１２】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明の免疫定量装置は、抗原不溶化膜に被検液を
十分に展開させるために設ける不透過性シールを、酵素
標識は通過させず酵素基質は通過しうる半透過性シール
で構成したことを特徴としている。さらに抗原不溶化膜
に予めブロッキング処理を施したことを特徴としてい
る。
に、本発明の免疫定量装置は、抗原不溶化膜に被検液を
十分に展開させるために設ける不透過性シールを、酵素
標識は通過させず酵素基質は通過しうる半透過性シール
で構成したことを特徴としている。さらに抗原不溶化膜
に予めブロッキング処理を施したことを特徴としてい
る。
【００１３】これにより基質層から電極部への基質の拡
散速度を迅速かつ均一にするとともに、被検液中の抗原
以外の成分が抗原不溶化膜へ非特異的結合することを防
止している。
散速度を迅速かつ均一にするとともに、被検液中の抗原
以外の成分が抗原不溶化膜へ非特異的結合することを防
止している。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明の請求項１に記載の発明
は、少なくとも被検液中の目的とする抗原に特異結合す
る酵素標識抗体を含む試薬層と、前記試薬層に導入され
た被検液と酵素標識抗体との間で特異結合が行われる反
応層と、前記被検液中の抗原と特異結合しなかった酵素
標識抗体を取得するため、被検液中に含まれる抗原と同
じ抗原を予め固定した抗原不溶化膜と、前記抗原不溶化
膜に特異結合した酵素標識抗体に対する酵素基質を含む
基質層と、前記抗原不溶化膜及び基質層の上部に設けら
れ、前記抗原不溶化膜に特異結合した酵素標識抗体と前
記酵素基質との間で生じる酵素反応量に応じた電流値を
モニタする電極とを備えた免疫定量装置であって、前記
抗原不溶化膜と基質層との間に、前記酵素標識は通過さ
せず、前記酵素基質は通過しうる半透過性シールを設け
たことを特徴とするものであり、これにより基質層から
の電極への酵素基質の拡散が迅速に行われ、迅速な測定
を行うことができる。
は、少なくとも被検液中の目的とする抗原に特異結合す
る酵素標識抗体を含む試薬層と、前記試薬層に導入され
た被検液と酵素標識抗体との間で特異結合が行われる反
応層と、前記被検液中の抗原と特異結合しなかった酵素
標識抗体を取得するため、被検液中に含まれる抗原と同
じ抗原を予め固定した抗原不溶化膜と、前記抗原不溶化
膜に特異結合した酵素標識抗体に対する酵素基質を含む
基質層と、前記抗原不溶化膜及び基質層の上部に設けら
れ、前記抗原不溶化膜に特異結合した酵素標識抗体と前
記酵素基質との間で生じる酵素反応量に応じた電流値を
モニタする電極とを備えた免疫定量装置であって、前記
抗原不溶化膜と基質層との間に、前記酵素標識は通過さ
せず、前記酵素基質は通過しうる半透過性シールを設け
たことを特徴とするものであり、これにより基質層から
の電極への酵素基質の拡散が迅速に行われ、迅速な測定
を行うことができる。
【００１５】請求項２に記載の発明は、抗原不溶化膜に
ブロッキング処理を施したものであり、溶液中成分及び
酵素標識抗体の抗原不溶化膜への非特異的結合を防止す
ることにより、より高精度な定量が可能になる。
ブロッキング処理を施したものであり、溶液中成分及び
酵素標識抗体の抗原不溶化膜への非特異的結合を防止す
ることにより、より高精度な定量が可能になる。
【００１６】（実施の形態１）以下に、本発明の請求項
１に記載された発明の実施の形態について図１を用いて
説明する。図１で示す断面図においては、図４，５で示
す溶液不透過性シール１８を、半透過性シール９で構成
した点で従来の構成と異なっている。
１に記載された発明の実施の形態について図１を用いて
説明する。図１で示す断面図においては、図４，５で示
す溶液不透過性シール１８を、半透過性シール９で構成
した点で従来の構成と異なっている。
【００１７】この半透過性シール９は、酵素基質は通過
させるが、酵素標識抗体にて標識された抗原は通過させ
ない膜からなり、たとえば透析膜、セルロース製膜等を
用いることができる。
させるが、酵素標識抗体にて標識された抗原は通過させ
ない膜からなり、たとえば透析膜、セルロース製膜等を
用いることができる。
【００１８】上記構成において、上部ケース１から導入
した被検液が試薬層２、反応層４そして通過口１２を通
過して、抗原不溶化膜８から基質層１０に流れ込むとき
には、半透過性シール９を迂回して基質層１０を浸潤す
る。
した被検液が試薬層２、反応層４そして通過口１２を通
過して、抗原不溶化膜８から基質層１０に流れ込むとき
には、半透過性シール９を迂回して基質層１０を浸潤す
る。
【００１９】被検液に溶解した酵素基質は、半透過性シ
ール９を迂回することなく通過できるため、電極全面に
迅速かつ均一に拡散する。このため各免疫定量装置ごと
の拡散速度のばらつきは、従来の装置に比べて極めて小
さくなる。したがって電位を与えて電流値を読みとるタ
イミングを一定にしても、各免疫定量装置でほぼ等しい
条件下で測定することができるようになる。
ール９を迂回することなく通過できるため、電極全面に
迅速かつ均一に拡散する。このため各免疫定量装置ごと
の拡散速度のばらつきは、従来の装置に比べて極めて小
さくなる。したがって電位を与えて電流値を読みとるタ
イミングを一定にしても、各免疫定量装置でほぼ等しい
条件下で測定することができるようになる。
【００２０】（実施の形態２）次に本発明の請求項２に
記載された発明の実施の形態について図１，２を用いて
説明する。図１の断面図に示した抗原不溶化膜８は、そ
の表面にブロッキング処理を施した点で、従来の構成と
異なっている。
記載された発明の実施の形態について図１，２を用いて
説明する。図１の断面図に示した抗原不溶化膜８は、そ
の表面にブロッキング処理を施した点で、従来の構成と
異なっている。
【００２１】図２（ａ）は、ブロッキング処理を施して
いない従来の抗原不溶化膜８を示している。図中１４は
不溶化した抗原を、１５は酵素標識抗体を、１６は被検
液中のタンパク質を示している。ブロッキング処理を施
していない状態では、酵素標識抗体１５のほかに、被検
液中のタンパク質１６が非特異的に結合してしまうた
め、抗原不溶化膜に結合する酵素標識抗体量にばらつき
が生じてしまう。
いない従来の抗原不溶化膜８を示している。図中１４は
不溶化した抗原を、１５は酵素標識抗体を、１６は被検
液中のタンパク質を示している。ブロッキング処理を施
していない状態では、酵素標識抗体１５のほかに、被検
液中のタンパク質１６が非特異的に結合してしまうた
め、抗原不溶化膜に結合する酵素標識抗体量にばらつき
が生じてしまう。
【００２２】しかしながら図２（ｂ）で示すように、膜
８の表面に抗原を不溶化した後、ブロッキング剤１７
（例えばＢＳＡ、カゼイン、ゼラチン）でコーティング
することにより、タンパク質の非特異的結合は生じず、
ばらつきも発生しにくい。
８の表面に抗原を不溶化した後、ブロッキング剤１７
（例えばＢＳＡ、カゼイン、ゼラチン）でコーティング
することにより、タンパク質の非特異的結合は生じず、
ばらつきも発生しにくい。
【００２３】図３には上記従来の装置（図（ａ））と、
本実施の形態１，２の両構成を備える装置（図（ｂ））
による測定結果を参考までに示している。半透過性シー
ル及びブロッキング処理により、抗原濃度（横軸）に応
じた電流値（縦軸）が得られており、さらにそのばらつ
き（ＣＶ）は低下した。
本実施の形態１，２の両構成を備える装置（図（ｂ））
による測定結果を参考までに示している。半透過性シー
ル及びブロッキング処理により、抗原濃度（横軸）に応
じた電流値（縦軸）が得られており、さらにそのばらつ
き（ＣＶ）は低下した。
【００２４】
【発明の効果】以上のように本発明は、従来の溶液不透
過性シールに代え、半透過性シールにより抗原不溶化膜
の全面に被検液を展開させるようにしたので、基質層か
らの基質は、半透過性シールを迂回することなくその全
面を通過し、電極部へ迅速かつ均一に拡散できるように
なり、迅速な測定が可能となる。
過性シールに代え、半透過性シールにより抗原不溶化膜
の全面に被検液を展開させるようにしたので、基質層か
らの基質は、半透過性シールを迂回することなくその全
面を通過し、電極部へ迅速かつ均一に拡散できるように
なり、迅速な測定が可能となる。
【００２５】さらに本発明は、被検液中の抗原と特異結
合しなかった酵素標識抗体を取り除くための抗原不溶化
膜にブロッキング処理を施したことを特徴としており、
これにより被検液中のタンパク質などが非特異結合する
ことが防止され、測定精度を向上させることができる。
合しなかった酵素標識抗体を取り除くための抗原不溶化
膜にブロッキング処理を施したことを特徴としており、
これにより被検液中のタンパク質などが非特異結合する
ことが防止され、測定精度を向上させることができる。
【図１】本発明の一実施の形態による免疫定量装置を示
す断面図
す断面図
【図２】抗原不溶化膜の模式図
【図３】本発明の一実施の形態における免疫定量装置
と、従来の免疫定量装置の測定結果を比較する説明図
と、従来の免疫定量装置の測定結果を比較する説明図
【図４】従来の免疫定量装置を示す分解斜視図
【図５】同定量装置の検出部位の断面図
１ 上部ケース ２ 試薬層 ３，１８ 溶液不透過性シール ４ 反応層 ５ 電極基板 ６ 作用電極 ７ 対電極 ８ 抗原不溶化膜 ９ 半透過性シール １０ 基質層 １１ 下部ケース １２ 通過口 １３ 検体口 １４ 不溶化した抗原 １５ 酵素標識抗体 １６ タンパク質 １７ ブロッキング剤
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/543 591 G01N 27/327
Claims (2)
- 【請求項１】少なくとも被検液中の目的とする抗原に特
異結合する酵素標識抗体を含む試薬層と、前記試薬層に
導入された被検液と酵素標識抗体との間で特異結合が行
われる反応層と、前記被検液中の抗原と特異結合しなか
った酵素標識抗体を取得するため、被検液中に含まれる
抗原と同じ抗原を予め固定した抗原不溶化膜と、前記抗
原不溶化膜に特異結合した酵素標識抗体に対する酵素基
質を含む基質層と、前記抗原不溶化膜及び基質層の上部
に設けられ、前記抗原不溶化膜に特異結合した酵素標識
抗体と前記酵素基質との間で生じる酵素反応量に応じた
電流値をモニタする電極とを備えた免疫定量装置であっ
て、 前記抗原不溶化膜と基質層との間に、前記酵素標識は通
過させず、前記酵素基質は通過しうる半透過性シールを
設けたことを特徴とする免疫定量装置。 - 【請求項２】抗原不溶化膜にブロッキング処理を施した
ことを特徴とする請求項１に記載の免疫定量装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33656596A JP3233050B2 (ja) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | 免疫定量装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33656596A JP3233050B2 (ja) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | 免疫定量装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10177026A JPH10177026A (ja) | 1998-06-30 |
| JP3233050B2 true JP3233050B2 (ja) | 2001-11-26 |
Family
ID=18300462
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33656596A Expired - Fee Related JP3233050B2 (ja) | 1996-12-17 | 1996-12-17 | 免疫定量装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3233050B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4904611B2 (ja) * | 2000-04-21 | 2012-03-28 | 三菱化学メディエンス株式会社 | 酵素濃度の測定方法および酵素濃度の測定装置 |
| TWM580681U (zh) * | 2018-12-17 | 2019-07-11 | 馬縈嬛 | Multi-sample test strip structure |
-
1996
- 1996-12-17 JP JP33656596A patent/JP3233050B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10177026A (ja) | 1998-06-30 |
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