JP3174778B2 - 糖タンパク質由来の腫瘍−関連抗原の定性的または定量的検出方法 - Google Patents
糖タンパク質由来の腫瘍−関連抗原の定性的または定量的検出方法Info
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Description
【０００１】本発明は、ヒト体液中におけるＮ−ＣＡＭ
と称される糖タンパク質由来の腫瘍−関連抗原の定性的
または定量的検出方法に関する。また本発明は、主とし
て小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、メラノーマ、神経芽腫およ
び他の神経外胚葉起源の腫瘍の、一定の腫瘍関連抗原に
結合するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）およびそれらの
フラグメント、その製造のためのハイブリドーマ細胞、
ならびにこれらの抗体または抗体フラグメントを使って
定義および／または単離できる抗原に関する。これらの
抗体、抗体フラグメントおよび抗原は、診断補助剤、活
性物質または活性物質担体として使用できる。
と称される糖タンパク質由来の腫瘍−関連抗原の定性的
または定量的検出方法に関する。また本発明は、主とし
て小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、メラノーマ、神経芽腫およ
び他の神経外胚葉起源の腫瘍の、一定の腫瘍関連抗原に
結合するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）およびそれらの
フラグメント、その製造のためのハイブリドーマ細胞、
ならびにこれらの抗体または抗体フラグメントを使って
定義および／または単離できる抗原に関する。これらの
抗体、抗体フラグメントおよび抗原は、診断補助剤、活
性物質または活性物質担体として使用できる。
【０００２】腫瘍の確認、特性づけおよび治療は、診断
および治療の最も重要な領域のひとつである。この領域
における開発は、特異性の高いモノクローナル抗体の製
造が可能になったことにより著しく進歩した。この関連
では、いわゆる腫瘍マーカーの同定がとくに重要になっ
てきた。腫瘍マーカーとは、腫瘍細胞の産生物、たとえ
ば腫瘍関連抗原のみでなく、また悪性増殖に対する生体
の反応としての健康組織によって形成される物質を意味
する。既知の腫瘍マーカーの例には、ＣＥＡ、ＡＦＰ、
またさらにモノクローナル抗体によって定義される腫瘍
抗原、ＣＡ１９−９またはＣＡ１２５がある。
および治療の最も重要な領域のひとつである。この領域
における開発は、特異性の高いモノクローナル抗体の製
造が可能になったことにより著しく進歩した。この関連
では、いわゆる腫瘍マーカーの同定がとくに重要になっ
てきた。腫瘍マーカーとは、腫瘍細胞の産生物、たとえ
ば腫瘍関連抗原のみでなく、また悪性増殖に対する生体
の反応としての健康組織によって形成される物質を意味
する。既知の腫瘍マーカーの例には、ＣＥＡ、ＡＦＰ、
またさらにモノクローナル抗体によって定義される腫瘍
抗原、ＣＡ１９−９またはＣＡ１２５がある。
【０００３】in vitro診断における腫瘍マーカーの主な
使用領域は、腫瘍患者の治療と進行のモニタリングであ
る。ある種の腫瘍マーカーはまた鑑別診断またはリスク
グループのスクリーニングにも使用できる。
使用領域は、腫瘍患者の治療と進行のモニタリングであ
る。ある種の腫瘍マーカーはまた鑑別診断またはリスク
グループのスクリーニングにも使用できる。
【０００４】小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）の確認にはすでに
数多くの試験が行われてきた。すなわち、たとえば小細
胞気管支癌または神経芽腫のような神経外胚葉起源の悪
性腫瘍によって、ニューロン特異的エノラーゼ、エノラ
ーゼ（ＥＣ４．２．１．１１）のアイソザイムの生成が
増加し、腫瘍患者ではその血清濃度の上昇をみること
が、たとえば知られている。
数多くの試験が行われてきた。すなわち、たとえば小細
胞気管支癌または神経芽腫のような神経外胚葉起源の悪
性腫瘍によって、ニューロン特異的エノラーゼ、エノラ
ーゼ（ＥＣ４．２．１．１１）のアイソザイムの生成が
増加し、腫瘍患者ではその血清濃度の上昇をみること
が、たとえば知られている。
【０００５】しかしながら、上述の腫瘍に罹病している
患者の一部には偽陰性の結果を与えるという問題が起こ
っている。さらに、赤血球も血小板も比較的大量のＮＳ
Ｅを含有するので、その分解によってＮＳＥの血清また
は血漿レベルが不当に上昇し、そのため偽陽性の値が得
られることも事実である（Pahlmanら：Tumour Biology,
５：１２７〜１３９，１９８４）。
患者の一部には偽陰性の結果を与えるという問題が起こ
っている。さらに、赤血球も血小板も比較的大量のＮＳ
Ｅを含有するので、その分解によってＮＳＥの血清また
は血漿レベルが不当に上昇し、そのため偽陽性の値が得
られることも事実である（Pahlmanら：Tumour Biology,
５：１２７〜１３９，１９８４）。
【０００６】欧州特許出願0,323,802には、肺癌の細胞
表面抗原に対するモノクローナル抗体が開示されてい
る。しかしながら、Maierら（Br. J. Cancer, ５９：６
９２〜６９５，１９８９）は、EP 0,323,802に用いられ
た抗体ＳＷＡ２０は、試験したＳＣＬＣサンプルの４５
％で中等度ないし強度の陽性反応を示すのみのエピトー
プ（クラスター５）を認識することを明らかにしてい
る。
表面抗原に対するモノクローナル抗体が開示されてい
る。しかしながら、Maierら（Br. J. Cancer, ５９：６
９２〜６９５，１９８９）は、EP 0,323,802に用いられ
た抗体ＳＷＡ２０は、試験したＳＣＬＣサンプルの４５
％で中等度ないし強度の陽性反応を示すのみのエピトー
プ（クラスター５）を認識することを明らかにしてい
る。
【０００７】したがって、ＮＳＥには無関係な、神経芽
腫および小細胞肺癌に対する別の特異的腫瘍マーカーの
製造が望まれている。
腫および小細胞肺癌に対する別の特異的腫瘍マーカーの
製造が望まれている。
【０００８】本発明は、腫瘍関連抗原に対するモノクロ
ーナル抗体を提案するものであり、この場合、抗原は主
として、たとえば小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、メラノー
マ、神経芽腫のような神経外胚葉腫瘍群に属する腫瘍、
およびこれらの腫瘍の細胞系の培養上澄液に由来する抗
原、とくに非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥにおいて分子量１７
０±１０kDa、１４０±１０kDa、１０５±１０kDa、６
７±１０kDaおよび５０±１０kDaを示すＳＣＬＣ細胞系
からの抗原、または腫瘍患者の体液に由来する抗原、と
くに非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥにおいて分子量２２０〜２
６０kDaおよび１６０〜２００kDaを有するＳＣＬＣ患者
の血清からの抗原である。これらのバンドはＭＡｂ Ｂ
Ｗ ＳＣＬＣ−１によりウェスタンブロットで検出さ
れ、ＳＣＬＣ腫瘍患者４例中４例に見出された。正常血
清４例中２例には、これらのバンドは全く認められず、
２例では腫瘍患者血清の場合と同じ位置にきわめて弱い
バンドがみられた。
ーナル抗体を提案するものであり、この場合、抗原は主
として、たとえば小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、メラノー
マ、神経芽腫のような神経外胚葉腫瘍群に属する腫瘍、
およびこれらの腫瘍の細胞系の培養上澄液に由来する抗
原、とくに非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥにおいて分子量１７
０±１０kDa、１４０±１０kDa、１０５±１０kDa、６
７±１０kDaおよび５０±１０kDaを示すＳＣＬＣ細胞系
からの抗原、または腫瘍患者の体液に由来する抗原、と
くに非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥにおいて分子量２２０〜２
６０kDaおよび１６０〜２００kDaを有するＳＣＬＣ患者
の血清からの抗原である。これらのバンドはＭＡｂ Ｂ
Ｗ ＳＣＬＣ−１によりウェスタンブロットで検出さ
れ、ＳＣＬＣ腫瘍患者４例中４例に見出された。正常血
清４例中２例には、これらのバンドは全く認められず、
２例では腫瘍患者血清の場合と同じ位置にきわめて弱い
バンドがみられた。
【０００９】この関連で好ましいモノクローナル抗体
は、標準抗体ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および／または
ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２によっても結合される抗原に
結合するモノクローナル抗体である。
は、標準抗体ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および／または
ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２によっても結合される抗原に
結合するモノクローナル抗体である。
【００１０】この関連でとくに好ましいモノクローナル
抗体は、ハイブリドーマ細胞系ＢＷＳＣＬＣ−１および
ＳＣＬＣ−２の少なくとも一方によって産生されるモノ
クローナル抗体である。
抗体は、ハイブリドーマ細胞系ＢＷＳＣＬＣ−１および
ＳＣＬＣ−２の少なくとも一方によって産生されるモノ
クローナル抗体である。
【００１１】本発明はさらに、本発明のモノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ細胞系に関し、この場
合、ハイブリドーマ細胞系ＢＷ ＳＣＬＣ−１および２
がとくに好ましい。
抗体を産生するハイブリドーマ細胞系に関し、この場
合、ハイブリドーマ細胞系ＢＷ ＳＣＬＣ−１および２
がとくに好ましい。
【００１２】モノクローナル抗体は、本発明の範囲内
に、たとえばＦａｂおよびＦ(ａｂ)2ならびに誘導体の
ような抗体フラグメントを包含するものとして定義され
る。モノクローナル抗体ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１およ
びＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２を産生するハイブリドーマ
細胞系ＢＷ ＳＣＬＣ−１および２は、１９９０年２月
２１日、European Callection of Animal Cell Culture
（ＥＣＡＣＣ）にそれぞれ90 022 109および90 022 110
の番号で寄託された。
に、たとえばＦａｂおよびＦ(ａｂ)2ならびに誘導体の
ような抗体フラグメントを包含するものとして定義され
る。モノクローナル抗体ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１およ
びＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２を産生するハイブリドーマ
細胞系ＢＷ ＳＣＬＣ−１および２は、１９９０年２月
２１日、European Callection of Animal Cell Culture
（ＥＣＡＣＣ）にそれぞれ90 022 109および90 022 110
の番号で寄託された。
【００１３】本発明はさらに、標準抗体と同じエピトー
プに結合可能なことにより識別される、たとえばモノ−
もしくはポリクローナル抗体、レクチンおよび類似物質
のような特異的結合パートナーに関する。本発明の範囲
内に含まれる標準抗体はＭＡｂＢＷ ＳＣＬＣ−１およ
びＳＣＬＣ−２である。
プに結合可能なことにより識別される、たとえばモノ−
もしくはポリクローナル抗体、レクチンおよび類似物質
のような特異的結合パートナーに関する。本発明の範囲
内に含まれる標準抗体はＭＡｂＢＷ ＳＣＬＣ−１およ
びＳＣＬＣ−２である。
【００１４】モノクローナル抗体は、本技術分野の熟練
者にはそれ自体よく知られた方法により、好ましくは免
疫処置に、非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥで分子量１７０±１
０kDa、１４０±１０kDa、１０５±１０kDa、６７±１
０kDaまたは５０±１０kDaを有する、ＳＣＬＣ細胞系の
上澄液からの抗原を用いて、製造できる。本発明はま
た、免疫吸着により請求項１記載の抗体に結合できる抗
原に関する。
者にはそれ自体よく知られた方法により、好ましくは免
疫処置に、非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥで分子量１７０±１
０kDa、１４０±１０kDa、１０５±１０kDa、６７±１
０kDaまたは５０±１０kDaを有する、ＳＣＬＣ細胞系の
上澄液からの抗原を用いて、製造できる。本発明はま
た、免疫吸着により請求項１記載の抗体に結合できる抗
原に関する。
【００１５】免疫吸着は、本発明の範囲内では、本技術
分野の熟練者にはそれ自体よく知られている単離方法で
あって、その場合の少なくとも１個の精製工程が本発明
の請求項１記載の抗体、好ましくは請求項２記載の抗体
との間の免疫化学反応に基づくものと定義される。この
場合、Ａｂ−Ａｇ複合体の除去は、本技術分野の熟練者
にはそれ自体よく知られた方法、たとえば抗体を固相に
結合させることによって実施できる。
分野の熟練者にはそれ自体よく知られている単離方法で
あって、その場合の少なくとも１個の精製工程が本発明
の請求項１記載の抗体、好ましくは請求項２記載の抗体
との間の免疫化学反応に基づくものと定義される。この
場合、Ａｂ−Ａｇ複合体の除去は、本技術分野の熟練者
にはそれ自体よく知られた方法、たとえば抗体を固相に
結合させることによって実施できる。
【００１６】本発明はまた、本発明の抗原の、哺乳動物
に免疫応答を発生させるための使用に関する。この場
合、哺乳動物にはとくにヒトが包含される。
に免疫応答を発生させるための使用に関する。この場
合、哺乳動物にはとくにヒトが包含される。
【００１７】本発明はまた、本発明の抗体および／また
は抗原の診断および／または治療に関する。
は抗原の診断および／または治療に関する。
【００１８】診断においては、抗体は、本技術分野の熟
練者にはそれ自体よく知られている不均一系または均一
系免疫化学的測定法に用いられるのが好ましい。均一系
の場合には粒子を増大させる比濁法が好ましい。不均一
系イムノアッセイの場合には、固相結合サンドイッチア
ッセイが好ましく、固相としては、ポリスチレン管、ラ
テックス粒子、磁化可能な粒子またはシート様固相が好
ましい。腫瘍関連抗原を検出する診断法が好ましく、そ
の場合、本発明の抗体は特異的結合パートナーとして用
いられる。
練者にはそれ自体よく知られている不均一系または均一
系免疫化学的測定法に用いられるのが好ましい。均一系
の場合には粒子を増大させる比濁法が好ましい。不均一
系イムノアッセイの場合には、固相結合サンドイッチア
ッセイが好ましく、固相としては、ポリスチレン管、ラ
テックス粒子、磁化可能な粒子またはシート様固相が好
ましい。腫瘍関連抗原を検出する診断法が好ましく、そ
の場合、本発明の抗体は特異的結合パートナーとして用
いられる。
【００１９】本発明による抗体および抗原はバイオセン
サーに使用することもできる。バイオセンサーは本技術
分野の熟練者にはそれ自体よく知られている。とくに好
ましい方法は、たとえば抗体、レクチンまたは受容体の
ような第二の特異的結合パートナーを使用する方法であ
る。
サーに使用することもできる。バイオセンサーは本技術
分野の熟練者にはそれ自体よく知られている。とくに好
ましい方法は、たとえば抗体、レクチンまたは受容体の
ような第二の特異的結合パートナーを使用する方法であ
る。
【００２０】この関連でとくに非常に好ましい方法は、
第二の特異的結合パートナーがシアル酸、ポリシアル酸
またはα−（２−８）−連結Ｎ−アセチルノイラミン酸
を認識する方法である。
第二の特異的結合パートナーがシアル酸、ポリシアル酸
またはα−（２−８）−連結Ｎ−アセチルノイラミン酸
を認識する方法である。
【００２１】この場合には、特異的結合パートナーのひ
とつに検出および定量用の検知可能な標識をもたせるこ
とができる。これらの標識は本技術分野の熟練者にはそ
れ自体よく知られていて、たとえば発色団、発光団、蛍
光団、酵素、放射性同位元素または着色もしくは無色の
粒子である。好ましい方法は、非標識特異的結合パート
ナーは、本技術分野における熟練者にはそれ自体よく知
られている方法により、直接または間接に、たとえば他
の抗体もしくはビオチン−アビジン橋を介して、固相に
カップリングさせる。
とつに検出および定量用の検知可能な標識をもたせるこ
とができる。これらの標識は本技術分野の熟練者にはそ
れ自体よく知られていて、たとえば発色団、発光団、蛍
光団、酵素、放射性同位元素または着色もしくは無色の
粒子である。好ましい方法は、非標識特異的結合パート
ナーは、本技術分野における熟練者にはそれ自体よく知
られている方法により、直接または間接に、たとえば他
の抗体もしくはビオチン−アビジン橋を介して、固相に
カップリングさせる。
【００２２】さらにとくに好ましい方法は、実施例に記
載された実施態様である。
載された実施態様である。
【００２３】ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および−２は、
正常ヒト組織および腫瘍へのそれらの免疫組織化学的結
合により、ＳＣＬＣクラスター１ ＭＡｂと呼ばれる（S
ouhamiら：Lancet, １９８７年８月８日号、３２５〜３
２６）。このクラスターは、小細胞肺癌へ最適に結合す
るＭＡｂを含む。さらに、これらのＭＡｂは神経組織、
神経芽腫および一部のメラノーマに結合する。
正常ヒト組織および腫瘍へのそれらの免疫組織化学的結
合により、ＳＣＬＣクラスター１ ＭＡｂと呼ばれる（S
ouhamiら：Lancet, １９８７年８月８日号、３２５〜３
２６）。このクラスターは、小細胞肺癌へ最適に結合す
るＭＡｂを含む。さらに、これらのＭＡｂは神経組織、
神経芽腫および一部のメラノーマに結合する。
【００２４】Patelら（Int. J. Cancer, ４４：５７３
〜５７８、１９８９）は、これらのクラスター１ ＭＡ
ｂが、Ｎ−ＣＡＭ、とくに主として１４０および１８０
kDaアイソフォームを認識することを示した（Patelら：
Int. J. Cancer, ４４：１０６２〜１０６８、１９８
９）。現在までＮ−ＣＡＭならびにとくに１６０〜１８
０、１３０〜１５０、９５〜１１５、５７〜７７または
４０〜６０kDa（培養上澄液）および２２０〜２６０kDa
と１６０〜２００kDa（血清）アイソフォームの腫瘍細
胞による能動分泌についての記載はなく、したがってそ
れを腫瘍マーカーとして使用する可能性についての報告
もない。Ｎ−ＣＡＭは、とくに神経、筋肉および腎臓組
織に検出できるので（Rothら：Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, ８５：２９９９〜３００３、１９８８；Rothら：
Virchows Archives B，５６：９５〜１０２、１９８
８）、これらは他の病的過程とくに上述の組織に影響す
る病態の患者の体液中でもＮ−ＣＡＭ濃度の変化が期待
でき、したがってＮ−ＣＡＭはこれらの疾患の診断マー
カーとしても使用できる。
〜５７８、１９８９）は、これらのクラスター１ ＭＡ
ｂが、Ｎ−ＣＡＭ、とくに主として１４０および１８０
kDaアイソフォームを認識することを示した（Patelら：
Int. J. Cancer, ４４：１０６２〜１０６８、１９８
９）。現在までＮ−ＣＡＭならびにとくに１６０〜１８
０、１３０〜１５０、９５〜１１５、５７〜７７または
４０〜６０kDa（培養上澄液）および２２０〜２６０kDa
と１６０〜２００kDa（血清）アイソフォームの腫瘍細
胞による能動分泌についての記載はなく、したがってそ
れを腫瘍マーカーとして使用する可能性についての報告
もない。Ｎ−ＣＡＭは、とくに神経、筋肉および腎臓組
織に検出できるので（Rothら：Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, ８５：２９９９〜３００３、１９８８；Rothら：
Virchows Archives B，５６：９５〜１０２、１９８
８）、これらは他の病的過程とくに上述の組織に影響す
る病態の患者の体液中でもＮ−ＣＡＭ濃度の変化が期待
でき、したがってＮ−ＣＡＭはこれらの疾患の診断マー
カーとしても使用できる。
【００２５】ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および−２の特
異性は様々な腫瘍組織および正常組織の免疫組織化学的
鑑別に使用できるのみでなく、また驚くべきことに、固
相抗体としてα−（２−８）−連結Ｎ−アセチルノイラ
ミン酸を認識する抗−Ｎ−ＣＡＭ ＭＡｂ（Finneら：J.
Immunol., １３８：４４０２〜４４０７、１９８７；H
aeyrinenら：Molecular Immunology, ２６：５２３〜５
２９、１９８９）と接合抗体としてＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬ
Ｃ−１および２の組合せは腫瘍マーカーイムノアッセイ
の開発にとくに適当であることが証明された。このアッ
セイが用いられて、ＳＣＬＣおよび神経芽腫の患者の血
清または血漿中に認められる抗原が、健康な対照群の血
清または血漿中よりも明瞭に高い濃度で存在することが
多いという事実が明らかにされた。これから、上記腫瘍
についてのアッセイの感度は良好であると推論できる。
異性は様々な腫瘍組織および正常組織の免疫組織化学的
鑑別に使用できるのみでなく、また驚くべきことに、固
相抗体としてα−（２−８）−連結Ｎ−アセチルノイラ
ミン酸を認識する抗−Ｎ−ＣＡＭ ＭＡｂ（Finneら：J.
Immunol., １３８：４４０２〜４４０７、１９８７；H
aeyrinenら：Molecular Immunology, ２６：５２３〜５
２９、１９８９）と接合抗体としてＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬ
Ｃ−１および２の組合せは腫瘍マーカーイムノアッセイ
の開発にとくに適当であることが証明された。このアッ
セイが用いられて、ＳＣＬＣおよび神経芽腫の患者の血
清または血漿中に認められる抗原が、健康な対照群の血
清または血漿中よりも明瞭に高い濃度で存在することが
多いという事実が明らかにされた。これから、上記腫瘍
についてのアッセイの感度は良好であると推論できる。
【００２６】抗体ＢＷ ＳＣＬＣ−１および−２または
そのフラグメントはまた、それらを免疫シンチグラフィ
ーまたは他の免疫療法に使用するため、本技術分野の熟
練者には既知の方法により放射標識することもできる。
さらに、これらのモノクローナル抗体はまた、たとえば
細胞毒素のための活性物質担体として用い、悪性疾患の
治療に利用できる可能性がある。たとえばヒトＭＡｂの
フレームワークに超可変部を挿入して、抗体構築物を生
成させることも、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および−２
のＶ遺伝子の全ヌクレオチド配列の解析後、技術的に可
能である（Jonesら：Nature, ３２１：５２２〜５２
５、１９８６；Verhoeyenら：Science, ２３９：１５３
４〜１５３６、１９８８）。
そのフラグメントはまた、それらを免疫シンチグラフィ
ーまたは他の免疫療法に使用するため、本技術分野の熟
練者には既知の方法により放射標識することもできる。
さらに、これらのモノクローナル抗体はまた、たとえば
細胞毒素のための活性物質担体として用い、悪性疾患の
治療に利用できる可能性がある。たとえばヒトＭＡｂの
フレームワークに超可変部を挿入して、抗体構築物を生
成させることも、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および−２
のＶ遺伝子の全ヌクレオチド配列の解析後、技術的に可
能である（Jonesら：Nature, ３２１：５２２〜５２
５、１９８６；Verhoeyenら：Science, ２３９：１５３
４〜１５３６、１９８８）。
【００２７】本発明の抗原はまた能動ワクチンの製造に
使用することができ、適当な抗体は受動ワクチンの製造
に使用できる。
使用することができ、適当な抗体は受動ワクチンの製造
に使用できる。
【００２８】以下の実施例は本発明を例示するものであ
り、いかなる意味においても本発明を限定するものでは
ない。
り、いかなる意味においても本発明を限定するものでは
ない。
【００２９】実施例 １ モノクローナル抗体ＢＷ ＳＣＬＣ−１および−２の産
生 免疫原としてはヒト小細胞肺癌細胞系ＧＯＴおよびＭＲ
２２を使用した。これらは、１０％ウシ血清を加えた基
礎培地（ＤＭＥＭ）中懸濁培養としてin vitroで培養し
た。Ｂａｌｂ／ｃマウスを、食塩水（ＰＢＳ）中で３回
洗浄した細胞により、以下の計画に従って免疫した。
生 免疫原としてはヒト小細胞肺癌細胞系ＧＯＴおよびＭＲ
２２を使用した。これらは、１０％ウシ血清を加えた基
礎培地（ＤＭＥＭ）中懸濁培養としてin vitroで培養し
た。Ｂａｌｂ／ｃマウスを、食塩水（ＰＢＳ）中で３回
洗浄した細胞により、以下の計画に従って免疫した。
【００３０】
【表１】
【００３１】この方法で免疫したマウスの脾臓を日３５
に取り出し、Koehler & Milstein（Nature, ２５６：４
９５、１９７５）によって記載された方法によってＳＰ
−２ミエローマ細胞系（Shulmanら：Nature, ２７６：
２６９、１９７８）と６：１（脾臓細胞対ミエローマ細
胞）の比で融合させた。
に取り出し、Koehler & Milstein（Nature, ２５６：４
９５、１９７５）によって記載された方法によってＳＰ
−２ミエローマ細胞系（Shulmanら：Nature, ２７６：
２６９、１９７８）と６：１（脾臓細胞対ミエローマ細
胞）の比で融合させた。
【００３２】８〜２８日の期間に増殖したハイブリッド
を細胞蛍光測定解析によって検定し、それらがＧＯＴお
よびＭＲ２２ ＳＣＬＣ細胞系に結合するＭＡｂを分泌
するかどうかを調べた。陽性ハイブリッドを３回限界希
釈法でクローン化し、これらのサブクローンによって産
生されたＭＡｂを様々な免疫学的検定に付した。これら
の免疫学的検定に基づいてとくに興味あるＭＡｂを分泌
するハイブリッドを液体窒素中で凍結し、ＢＷ ＳＣＬ
Ｃ−１またはＢＷ ＳＣＬＣ−２の名称で、ＥＣＡＣＣ
に寄託番号90 022 109または90 022 110として寄託され
た。これらのハイブリッドによって分泌されるＭＡｂは
ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１またはＭＡｂＢＷ ＳＣＬＣ
−２と呼ばれる。
を細胞蛍光測定解析によって検定し、それらがＧＯＴお
よびＭＲ２２ ＳＣＬＣ細胞系に結合するＭＡｂを分泌
するかどうかを調べた。陽性ハイブリッドを３回限界希
釈法でクローン化し、これらのサブクローンによって産
生されたＭＡｂを様々な免疫学的検定に付した。これら
の免疫学的検定に基づいてとくに興味あるＭＡｂを分泌
するハイブリッドを液体窒素中で凍結し、ＢＷ ＳＣＬ
Ｃ−１またはＢＷ ＳＣＬＣ−２の名称で、ＥＣＡＣＣ
に寄託番号90 022 109または90 022 110として寄託され
た。これらのハイブリッドによって分泌されるＭＡｂは
ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１またはＭＡｂＢＷ ＳＣＬＣ
−２と呼ばれる。
【００３３】実施例 ２ ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１およびＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ
−２の特異性の免疫組織化学的特性 両ＭＡｂによって認識される、凍結保存ヒト正常組織お
よび腫瘍上のエピトープの発現の測定にはＡＰＡＡＰ法
（Cordellら：J. Histochem. Cytochem, ３２：２１
９、１９８４）を使用した。これから、その発現は神経
外胚葉起源の腫瘍に限定されることが明らかにされた。
すなわち、小細胞肺癌（図１）、神経芽腫および脳腫瘍
の８０％以上で明瞭に陽性を示し（表２）、これはメラ
ノーマの大部分でも同様であった。神経外胚葉に由来し
ない他の腫瘍の大部分は陰性であった（表２参照）。Ｍ
Ａｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１の凍結保存正常ヒト組織との反
応は表３にまとめる。ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２によっ
て示される反応パターンと同等であった。唯一の差は骨
髄への結合がさらに顕著なことであった。
−２の特異性の免疫組織化学的特性 両ＭＡｂによって認識される、凍結保存ヒト正常組織お
よび腫瘍上のエピトープの発現の測定にはＡＰＡＡＰ法
（Cordellら：J. Histochem. Cytochem, ３２：２１
９、１９８４）を使用した。これから、その発現は神経
外胚葉起源の腫瘍に限定されることが明らかにされた。
すなわち、小細胞肺癌（図１）、神経芽腫および脳腫瘍
の８０％以上で明瞭に陽性を示し（表２）、これはメラ
ノーマの大部分でも同様であった。神経外胚葉に由来し
ない他の腫瘍の大部分は陰性であった（表２参照）。Ｍ
Ａｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１の凍結保存正常ヒト組織との反
応は表３にまとめる。ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２によっ
て示される反応パターンと同等であった。唯一の差は骨
髄への結合がさらに顕著なことであった。
【００３４】実施例 ３ ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１およびＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ
−２によって認識される抗原およびエピトープの特性 ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１はプロテインＡアフィニティ
ークロマトグラフィーにより、α−（２−８）−連結Ｎ
−アセチルノイラミン酸に対するＭＡｂ７３５の場合と
全く同様に、ＣＮＢｒ−活性化Sepharoseにカップリン
グさせて精製した（Eyら：Immunochemistry, １５：４
２９、１９７８；Pharmacia Fine Chemicals：Affinity
Chromatography, Principles and Methods, １５〜１
８頁、１９７９）。ＧＯＴ細胞系を培養した細胞培養培
地を、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１を負荷したＣＮＢｒ−
活性化Sepharoseカラム上にポンプで送り、pH７で特異
的に結合する抗原物質をpH２.５で溶出した。得られた
溶出液を、還元および非還元の両条件下にＳＤＳポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）によっ
て分画し、次に、本技術分野の熟練者には既知の方法に
より銀染色に付すか、またはニトロセルロースに移し
（ウェスタンブロット）、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１ま
たは−２および特異性が既知の他のＭＡｂの抗原の存在
を免疫化学的に調べた。
−２によって認識される抗原およびエピトープの特性 ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１はプロテインＡアフィニティ
ークロマトグラフィーにより、α−（２−８）−連結Ｎ
−アセチルノイラミン酸に対するＭＡｂ７３５の場合と
全く同様に、ＣＮＢｒ−活性化Sepharoseにカップリン
グさせて精製した（Eyら：Immunochemistry, １５：４
２９、１９７８；Pharmacia Fine Chemicals：Affinity
Chromatography, Principles and Methods, １５〜１
８頁、１９７９）。ＧＯＴ細胞系を培養した細胞培養培
地を、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１を負荷したＣＮＢｒ−
活性化Sepharoseカラム上にポンプで送り、pH７で特異
的に結合する抗原物質をpH２.５で溶出した。得られた
溶出液を、還元および非還元の両条件下にＳＤＳポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）によっ
て分画し、次に、本技術分野の熟練者には既知の方法に
より銀染色に付すか、またはニトロセルロースに移し
（ウェスタンブロット）、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１ま
たは−２および特異性が既知の他のＭＡｂの抗原の存在
を免疫化学的に調べた。
【００３５】この間に以下の所見が得られた。
【００３６】ａ） ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１によって
認識される抗原およびＭＡｂ ＢＷＳＣＬＣ−２によっ
て認識される抗原は、いずれもエピトープ陽性小細胞肺
癌細胞系からの上澄液中に存在する。
認識される抗原およびＭＡｂ ＢＷＳＣＬＣ−２によっ
て認識される抗原は、いずれもエピトープ陽性小細胞肺
癌細胞系からの上澄液中に存在する。
【００３７】抗原の分子量は非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥに
おいて、１７０±１０kDa、１４０±１０kDa、１０５±
１０kDa、６７±１０kDaおよび５０±１０kDaである。
バンドの広さは、糖蛋白質を指示している。還元条件下
では、これらの抗原はも早、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１
および−２によって認識されない。
おいて、１７０±１０kDa、１４０±１０kDa、１０５±
１０kDa、６７±１０kDaおよび５０±１０kDaである。
バンドの広さは、糖蛋白質を指示している。還元条件下
では、これらの抗原はも早、ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１
および−２によって認識されない。
【００３８】ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１でのウェスタン
ブロットの免疫ステインニングの後には、分子量１７０
±１０kDa、１４０±１０kDaおよび１０５±１０kDaの
抗原のみの検出が可能である。
ブロットの免疫ステインニングの後には、分子量１７０
±１０kDa、１４０±１０kDaおよび１０５±１０kDaの
抗原のみの検出が可能である。
【００３９】ｃ） 抗原のビブリオコレラ菌ノイラミニ
ダーゼ（０.１Ｕ／ml、１２時間、３７℃）処理後およ
びＮａＩＯ4（１mM、１時間、２５℃）処理後にも、両
ＭＡｂとも依然として抗原に結合可能であった。これら
の所見はＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および２によって糖
蛋白質抗原上に定められるエピトープは蛋白質エピトー
プであることを示している。
ダーゼ（０.１Ｕ／ml、１２時間、３７℃）処理後およ
びＮａＩＯ4（１mM、１時間、２５℃）処理後にも、両
ＭＡｂとも依然として抗原に結合可能であった。これら
の所見はＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１および２によって糖
蛋白質抗原上に定められるエピトープは蛋白質エピトー
プであることを示している。
【００４０】これらの所見は、エピトープがプロテアー
ゼ処理（Pronase P；０.１mg／ml、７２時間、３７℃）
で破壊されるという事実によって支持される。
ゼ処理（Pronase P；０.１mg／ml、７２時間、３７℃）
で破壊されるという事実によって支持される。
【００４１】ｄ） 比較に使用したＮ−ＣＡＭ（神経細
胞付着分子）に対する２種のＭＡｂ（Kibbelaarら：J.
Pathol., １５９：２３〜２８、１９８９）はいずれも
１７０±１０kDa、１４０±１０kDaおよび１０５±１０
kDa抗原への結合を示した。ＭＡｂ７３５はα−（２−
８）−連結Ｎ−アセチルノイラミン酸に対する抗体であ
る。１０５±１０kDaの小さい優先的に染色される糖蛋
白質バンドは小細胞肺癌細胞系からの上澄液中の大きな
Ｎ−ＣＡＭアイソフォームのほかに比較的高濃度で検出
できるＮ−ＣＡＭの３種のアイソマーの多分小さいもの
であろうと推測される。ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１のア
フィニティー定数は３種の異なるヒトグリオーマ細胞系
に対する細胞結合アッセイで測定され、１×１０10 Ｍ
-1の領域にある。
胞付着分子）に対する２種のＭＡｂ（Kibbelaarら：J.
Pathol., １５９：２３〜２８、１９８９）はいずれも
１７０±１０kDa、１４０±１０kDaおよび１０５±１０
kDa抗原への結合を示した。ＭＡｂ７３５はα−（２−
８）−連結Ｎ−アセチルノイラミン酸に対する抗体であ
る。１０５±１０kDaの小さい優先的に染色される糖蛋
白質バンドは小細胞肺癌細胞系からの上澄液中の大きな
Ｎ−ＣＡＭアイソフォームのほかに比較的高濃度で検出
できるＮ−ＣＡＭの３種のアイソマーの多分小さいもの
であろうと推測される。ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１のア
フィニティー定数は３種の異なるヒトグリオーマ細胞系
に対する細胞結合アッセイで測定され、１×１０10 Ｍ
-1の領域にある。
【００４２】ｅ） ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１によるア
フィニティークロマトグラフィー後、ＳＣＬＣ腫瘍患者
からの血清中に、多分Ｎ−ＣＡＭのアイソフォームと思
われる分子量７０〜８０および９０〜１２０kDaの２種
の抗原を検出するには、非還元条件下のＳＤＳ ＰＡＧ
Ｅおよびウェスタンブロットを用いた。さらに、ＳＣＬ
Ｃ患者の血清から、非還元条件のＳＤＳ ＰＡＧＥで分
子量２２０〜２６０kDaおよび１６０〜２００kDaを有
し、ウェスタンブロットにおいてＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ
−１により免疫化学的に染色できる抗原を単離するた
め、ＭＡｂ７３５−Sepharoseによるアフィニティーク
ロマトグラフィーを使用した。この型の抗原は、同じ実
験条件下で健康な供血者の血清には検出できないかまた
は有意に低い量であった。
フィニティークロマトグラフィー後、ＳＣＬＣ腫瘍患者
からの血清中に、多分Ｎ−ＣＡＭのアイソフォームと思
われる分子量７０〜８０および９０〜１２０kDaの２種
の抗原を検出するには、非還元条件下のＳＤＳ ＰＡＧ
Ｅおよびウェスタンブロットを用いた。さらに、ＳＣＬ
Ｃ患者の血清から、非還元条件のＳＤＳ ＰＡＧＥで分
子量２２０〜２６０kDaおよび１６０〜２００kDaを有
し、ウェスタンブロットにおいてＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ
−１により免疫化学的に染色できる抗原を単離するた
め、ＭＡｂ７３５−Sepharoseによるアフィニティーク
ロマトグラフィーを使用した。この型の抗原は、同じ実
験条件下で健康な供血者の血清には検出できないかまた
は有意に低い量であった。
【００４３】次に、Ｉ−１２５で標識したＭＡｂ ＢＷ
ＳＣＬＣ−１の各場合２種のin vitroで培養したヒトメ
ラノーマ細胞および神経芽腫細胞系への結合を測定する
ためにラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用した。３
７℃ではＭＡｂはエピトープ陽性細胞にきわめて迅速に
（１〜５分）に結合したが、比較的速やかに（＞１０
分、３７℃）再び放出された。４℃ではＭＡｂは長時
間、腫瘍細胞に結合したままであった。この所見および
小細胞肺癌細胞系からの上澄液中における上述の５種の
糖蛋白質（Ｎ−ＣＡＭアイソフォーム）の存在は、神経
外胚葉起源の腫瘍による抗原の能動放出を示している。
ＳＣＬＣ−１の各場合２種のin vitroで培養したヒトメ
ラノーマ細胞および神経芽腫細胞系への結合を測定する
ためにラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用した。３
７℃ではＭＡｂはエピトープ陽性細胞にきわめて迅速に
（１〜５分）に結合したが、比較的速やかに（＞１０
分、３７℃）再び放出された。４℃ではＭＡｂは長時
間、腫瘍細胞に結合したままであった。この所見および
小細胞肺癌細胞系からの上澄液中における上述の５種の
糖蛋白質（Ｎ−ＣＡＭアイソフォーム）の存在は、神経
外胚葉起源の腫瘍による抗原の能動放出を示している。
【００４４】ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１のビオチン化
後、二重抗原決定基検定により、さらに、Ｎ−ＣＡＭが
このＭＡｂに対して少なくとも２個のエピトープをもつ
ことを明らかにし得た。ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２との
競合試験では、この２種のＭＡｂが同一の抗原上の別の
エピトープを認識することがわかった。
後、二重抗原決定基検定により、さらに、Ｎ−ＣＡＭが
このＭＡｂに対して少なくとも２個のエピトープをもつ
ことを明らかにし得た。ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２との
競合試験では、この２種のＭＡｂが同一の抗原上の別の
エピトープを認識することがわかった。
【００４５】実施例 ４ ヒト体液中の腫瘍関連抗原を測定するイムノアッセイ ＭＡｂ７３５をマイクロタイタープレートのウエルのポ
リスチレン表面へ吸着によって結合させるため、またＭ
Ａｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１およびＢＷ ＳＣＬＣ−２を酵
素ペルオキシダーゼに共有結合によりカップリングさせ
るためには、本技術分野の熟練者によく知られている方
法を用いた。上述の腫瘍関連抗原の濃度の測定には、各
場合、サンプル物質１０μｌとサンプル緩衝液（ＯＳＮ
Ｄ, Behringwerke）１００μｌを、ＭＡｂ７３５でコー
トしたマイクロタイタープレート（ＮＵＮＵ）のウエル
にピペットで加え、３７℃で２時間インキュベートし
た。
リスチレン表面へ吸着によって結合させるため、またＭ
Ａｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１およびＢＷ ＳＣＬＣ−２を酵
素ペルオキシダーゼに共有結合によりカップリングさせ
るためには、本技術分野の熟練者によく知られている方
法を用いた。上述の腫瘍関連抗原の濃度の測定には、各
場合、サンプル物質１０μｌとサンプル緩衝液（ＯＳＮ
Ｄ, Behringwerke）１００μｌを、ＭＡｂ７３５でコー
トしたマイクロタイタープレート（ＮＵＮＵ）のウエル
にピペットで加え、３７℃で２時間インキュベートし
た。
【００４６】希釈Enzygnost洗浄緩衝液（ＯＳＥＷ、Ｂ
Ｗ）で３回洗浄した後、ＭＡｂ ＢＷＳＣＬＣ−１−Ｐ
ＯＤまたはＢＷ ＳＣＬＣ−２−ＰＯＤ接合体１００μ
ｌを各ウエルに注いだ。次に３７℃で２時間のインキュ
ベーション工程を行い、これは３回の連続洗浄操作によ
って終結させた。
Ｗ）で３回洗浄した後、ＭＡｂ ＢＷＳＣＬＣ−１−Ｐ
ＯＤまたはＢＷ ＳＣＬＣ−２−ＰＯＤ接合体１００μ
ｌを各ウエルに注いだ。次に３７℃で２時間のインキュ
ベーション工程を行い、これは３回の連続洗浄操作によ
って終結させた。
【００４７】次に緩衝液／基質色原体溶液（Ｈ2Ｏ2／Ｔ
ＭＢ；ＯＵＶＧ／ＯＵＶＦ、ＢＷ）１００μｌを各ウエ
ルにピペットで加えて第３回目のインキュベーション工
程を室温で行い、酵素反応は３０分間にEnzygnost停止
溶液（ＯＳＦＡ、ＢＷ）によって停止させた。サンプル
の吸光を４５０nmで測定した。
ＭＢ；ＯＵＶＧ／ＯＵＶＦ、ＢＷ）１００μｌを各ウエ
ルにピペットで加えて第３回目のインキュベーション工
程を室温で行い、酵素反応は３０分間にEnzygnost停止
溶液（ＯＳＦＡ、ＢＷ）によって停止させた。サンプル
の吸光を４５０nmで測定した。
【００４８】結果：このイムノアッセイを用いて測定さ
れた吸光は、サンプル中の腫瘍関連抗原の濃度に相当す
るレベルを示す。小細胞肺癌または神経芽腫患者の血清
中の腫瘍関連抗原の濃度は、健康供血者での値よりも多
くの場合高いことが明らかにされた（図２）。
れた吸光は、サンプル中の腫瘍関連抗原の濃度に相当す
るレベルを示す。小細胞肺癌または神経芽腫患者の血清
中の腫瘍関連抗原の濃度は、健康供血者での値よりも多
くの場合高いことが明らかにされた（図２）。
【００４９】他のアッセイの組合せでも（たとえば、固
相抗体：ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１、接合体：麦芽アグ
ルチニン−ＰＯＤ＝ＷＧＡ−ＰＯＤ；固相抗体：ＭＡｂ
ＢＷ ＳＣＬＣ−２，接合体：ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−
１−ＰＯＤ）でも腫瘍血清に高い抗原レベルが観察され
た。しかしながら、健康人からの血清または血漿サンプ
ルと悪性腫瘍患者からのサンプルとの間の差は、前述の
検定変数ほど顕著なものではなかった。
相抗体：ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１、接合体：麦芽アグ
ルチニン−ＰＯＤ＝ＷＧＡ−ＰＯＤ；固相抗体：ＭＡｂ
ＢＷ ＳＣＬＣ−２，接合体：ＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−
１−ＰＯＤ）でも腫瘍血清に高い抗原レベルが観察され
た。しかしながら、健康人からの血清または血漿サンプ
ルと悪性腫瘍患者からのサンプルとの間の差は、前述の
検定変数ほど顕著なものではなかった。
【００５０】
【表２】
【００５１】
【表３】
【図１】 ヒト肺腫瘍に対するＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−
１の免疫組織学的特異性を示す図である。
１の免疫組織学的特異性を示す図である。
【図２】 腫瘍関連抗原測定イムノアッセイの結果を示
す図である。
す図である。
図１中、 Ａ：小細胞癌 Ｂ：腺癌 Ｃ：扁平上皮細胞 Ｄ：未分化癌 Ｅ：細気管支−歯槽癌 図２中、 ＮＳ：健康供血者からの血液サンプル（ｎ＝６１） ＳＣＬＣ：治療前の小細胞肺癌患者からの血清（ｎ＝２
２） ＮＢ：神経芽腫患者からの血清（ｎ＝１８）
２） ＮＢ：神経芽腫患者からの血清（ｎ＝１８）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ヘルムート・ペータース ドイツ連邦共和国デー−3550マルブル ク．フエルトベルクシユトラーセ60 (56)参考文献 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＰＡＴＨＯＬ ＯＧＹ，ＶＯＬ．159，（1989），ｐ. 23−28 ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，Ｖ ＯＬ．50，（ＦＥＢ．15 1990），ｐ. 1102−1106 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/574 C07K 16/32 G01N 33/577 A61K 39/00 A61K 39/395 A61P 35/00 C12P 21/08
Claims (9)
- 【請求項１】 ヒト体液中のＮ−ＣＡＭと称される糖タ
ンパク質クラス由来の腫瘍−関連抗原の定性的または定
量的検出方法であって、シアル酸、ポリシアル酸または
α−（２,８）−連結Ｎ−アセチルノイラミン酸に対す
る特異的結合パートナーと、シアル酸、ポリシアル酸ま
たはα−（２,８）−連結Ｎ−アセチルノイラミン酸に
対してではないが上記腫瘍−関連抗原上の他のエピトー
プを認識する第二の特異的結合パートナーとを組み合わ
せて用いることからなる上記方法。 - 【請求項２】 第一の特異的結合パートナーが抗体、レ
クチンまたはレセプターである請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 第一の特異的結合パートナーがＭＡｂ
７３５である請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 第二の特異的結合パートナーがプロテイ
ンエピトープを認識するものである請求項１〜３のいず
れかの項に記載の方法。 - 【請求項５】 第二の特異的結合パートナーが、ハイブ
リドーマー細胞系（ＥＣＡＣＣ寄託番号第９００２２１
１０）によって生成されるＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−１で
ある請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 第二の特異的結合パートナーが、ハイブ
リドーマー細胞系（ＥＣＡＣＣ寄託番号第９００２２１
０９）によって生成されるＭＡｂ ＢＷ ＳＣＬＣ−２で
ある請求項４に記載の方法。 - 【請求項７】 特異的結合パートナーの一方が、検出可
能な標識を付されている請求項１〜６のいずれかの項に
記載の方法。 - 【請求項８】 標識が酵素、発色団、発光団、蛍光団、
放射性同位元素または着色もしくは無色粒子である請求
項７記載の方法。 - 【請求項９】 特異的結合パートナーの他方が、固相に
直接に又は間接的に結合している請求項７または８に記
載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4005630A DE4005630A1 (de) | 1990-02-22 | 1990-02-22 | Monoklonale antikoerper gegen tumorassoziierte antigene, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung |
| DE4005630.9 | 1990-02-22 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03078690A Division JP3074193B2 (ja) | 1990-02-22 | 1991-02-21 | 腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体、その製造方法およびその使用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000249710A JP2000249710A (ja) | 2000-09-14 |
| JP3174778B2 true JP3174778B2 (ja) | 2001-06-11 |
Family
ID=6400763
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03078690A Expired - Lifetime JP3074193B2 (ja) | 1990-02-22 | 1991-02-21 | 腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体、その製造方法およびその使用 |
| JP2000052793A Expired - Lifetime JP3174778B2 (ja) | 1990-02-22 | 2000-02-29 | 糖タンパク質由来の腫瘍−関連抗原の定性的または定量的検出方法 |
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