JP3148850B2 - 新規ペプチド - Google Patents
新規ペプチドInfo
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- JP3148850B2 JP3148850B2 JP26032494A JP26032494A JP3148850B2 JP 3148850 B2 JP3148850 B2 JP 3148850B2 JP 26032494 A JP26032494 A JP 26032494A JP 26032494 A JP26032494 A JP 26032494A JP 3148850 B2 JP3148850 B2 JP 3148850B2
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- Japan
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- methanol
- solvent
- column
- extract
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規ペプチドに関するも
のである。本発明による新規ペプチドはアレルギー性お
よび非アレルギー性炎症抑制作用、免疫抑制作用、抗菌
作用、抗腫瘍作用などを示し、炎症抑制剤、免疫抑制
剤、抗生物質、抗腫瘍剤などの用途に有用である。
のである。本発明による新規ペプチドはアレルギー性お
よび非アレルギー性炎症抑制作用、免疫抑制作用、抗菌
作用、抗腫瘍作用などを示し、炎症抑制剤、免疫抑制
剤、抗生物質、抗腫瘍剤などの用途に有用である。
【０００２】
【従来の技術】放線菌ストレプトマイセス・ノビリス
（Streptomyces nobilis、以下「Ｓ．ノビリス」と略記
する）の培養液またはその乾固物から有機溶剤によって
抽出されてなる抽出混合物は、アレルギー性炎症抑制作
用を有する物質を含むことが知られている（特開平５−
２５０５３号公報参照）。
（Streptomyces nobilis、以下「Ｓ．ノビリス」と略記
する）の培養液またはその乾固物から有機溶剤によって
抽出されてなる抽出混合物は、アレルギー性炎症抑制作
用を有する物質を含むことが知られている（特開平５−
２５０５３号公報参照）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記薬理作用
を有する物質はいかなる化学構造をなすものであるか解
明されていなかった。
を有する物質はいかなる化学構造をなすものであるか解
明されていなかった。
【０００４】本発明は、この物質の構造を明らかにし、
新規ペプチドを提供するものである。
新規ペプチドを提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明により、
【化２】 で示される新規ペプチド（以下、本発明ペプチドとい
う）が提供される。
う）が提供される。
【０００６】本発明ペプチドは、例えば、放線菌Ｓ．ノ
ビリスを培養し、得られた培養液または同液の乾固物も
しくは培養菌体から有機溶剤によって抽出された抽出物
を、各種カラムクロマトグラフィーに付し、目的物を含
むカラムクロマトグラフィー画分を再結晶処理すること
により得られる。
ビリスを培養し、得られた培養液または同液の乾固物も
しくは培養菌体から有機溶剤によって抽出された抽出物
を、各種カラムクロマトグラフィーに付し、目的物を含
むカラムクロマトグラフィー画分を再結晶処理すること
により得られる。
【０００７】本発明ペプチドを生産する放線菌Ｓ．ノビ
リスは、公的保存機関から入手可能であり、たとえば理
化学研究所の保存菌（ＪＣＭ４２７４）（これは米国に
おいてＡＴＣＣ１９２５２およびオランダにおいてＣＢ
Ｓ１９８．６５としても保存）などの菌が使用できる。
リスは、公的保存機関から入手可能であり、たとえば理
化学研究所の保存菌（ＪＣＭ４２７４）（これは米国に
おいてＡＴＣＣ１９２５２およびオランダにおいてＣＢ
Ｓ１９８．６５としても保存）などの菌が使用できる。
【０００８】放線菌Ｓ．ノビリスの培養は、然るべき栄
養物を含んだ培地を用いて行う。液体培養の場合、その
培地の成分としてはブドウ糖などの糖類、ペプトンや麦
芽エキスなどのタンパク質類、ビタミン類、核酸類、ア
ミノ酸類、複合糖質類の一種または数種を含んだ水溶液
が好適に用いられる。代表的な培地例としては、澱粉・
アンモニウム系の液体培地（可溶性澱粉、Ｋ2 ＨＰ
Ｏ4 、ＮＨ4 Ｃｌを含む）が挙げられる。液体培地のｐ
Ｈは２〜９が好ましく、培養温度は１５〜４２℃が好ま
しい。また液体培養の好ましい培養時間は１〜１４日で
ある。こうして得たＳ．ノビリスの培養液またはその乾
固物もしくは菌体自体から溶剤を用いて本発明ペプチド
を抽出する。
養物を含んだ培地を用いて行う。液体培養の場合、その
培地の成分としてはブドウ糖などの糖類、ペプトンや麦
芽エキスなどのタンパク質類、ビタミン類、核酸類、ア
ミノ酸類、複合糖質類の一種または数種を含んだ水溶液
が好適に用いられる。代表的な培地例としては、澱粉・
アンモニウム系の液体培地（可溶性澱粉、Ｋ2 ＨＰ
Ｏ4 、ＮＨ4 Ｃｌを含む）が挙げられる。液体培地のｐ
Ｈは２〜９が好ましく、培養温度は１５〜４２℃が好ま
しい。また液体培養の好ましい培養時間は１〜１４日で
ある。こうして得たＳ．ノビリスの培養液またはその乾
固物もしくは菌体自体から溶剤を用いて本発明ペプチド
を抽出する。
【０００９】Ｓ．ノビリスの培養液またはその乾固物も
しくは菌体自体の抽出液を硫安処理し、得られた沈殿物
を溶媒抽出してもよい。硫安処理に際しては、培養液ま
たはその乾固物もしくは菌体自体の抽出液に添加する硫
安は、固体のままの状態でもよいし、溶液状態のもので
もよい。硫安の添加量は好ましくは飽和濃度の３０〜９
０重量％の範囲である。処理時間は特に限定されない
が、好ましくは３０分〜５時間の範囲である。沈殿物を
得るための遠心分離に際しては、遠心力が３，０００Ｇ
〜２０，０００Ｇであることが好ましく、遠心時間は２
〜６０分であることが好ましい。
しくは菌体自体の抽出液を硫安処理し、得られた沈殿物
を溶媒抽出してもよい。硫安処理に際しては、培養液ま
たはその乾固物もしくは菌体自体の抽出液に添加する硫
安は、固体のままの状態でもよいし、溶液状態のもので
もよい。硫安の添加量は好ましくは飽和濃度の３０〜９
０重量％の範囲である。処理時間は特に限定されない
が、好ましくは３０分〜５時間の範囲である。沈殿物を
得るための遠心分離に際しては、遠心力が３，０００Ｇ
〜２０，０００Ｇであることが好ましく、遠心時間は２
〜６０分であることが好ましい。
【００１０】抽出に用いる溶剤としては有機溶剤が好ま
しく、その代表例としては、酢酸エチルなどのエステル
類、メタノール、エタノール、プロパノールなどのアル
コール類、エチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル
類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類のほ
かジクロロメタン、クロロホルムなどが挙げられるが、
使用可能な溶剤はこれらに限定されない。また、上記溶
剤の混合物を用いることもできる。特に好適な溶剤は酢
酸エチル、ジクロロメタン、アセトンなどである。抽出
時間は溶剤の種類や抽出温度などによっても異なるが、
好ましくは３〜１２０分の範囲である。また抽出中は液
を静置してもまたは攪拌してもよい。好ましくは、同一
試料に対して抽出操作を複数回繰り返す。抽出温度は特
に制限されない。
しく、その代表例としては、酢酸エチルなどのエステル
類、メタノール、エタノール、プロパノールなどのアル
コール類、エチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル
類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類のほ
かジクロロメタン、クロロホルムなどが挙げられるが、
使用可能な溶剤はこれらに限定されない。また、上記溶
剤の混合物を用いることもできる。特に好適な溶剤は酢
酸エチル、ジクロロメタン、アセトンなどである。抽出
時間は溶剤の種類や抽出温度などによっても異なるが、
好ましくは３〜１２０分の範囲である。また抽出中は液
を静置してもまたは攪拌してもよい。好ましくは、同一
試料に対して抽出操作を複数回繰り返す。抽出温度は特
に制限されない。
【００１１】次に、溶剤抽出物に対するカラムクロマト
グラフィーについて述べる。
グラフィーについて述べる。
【００１２】カラムクロマトグラフィーの充填剤として
は、ＯＤＳ（オクタデシルジメチルクロロシランのよう
なオクタデシルシラン類）が好ましい。充填量は特に限
定されないが、チャージする溶剤抽出物に対する重量比
１０〜５００倍量を充填することが好ましい。溶剤抽出
物をカラムにチャージする際はまずＯＤＳに吸着させる
ことが好ましい。このときＯＤＳの量は特に限定されな
いが、好ましくは吸着させる溶剤抽出物に対する重量比
０．５〜２０倍量のＯＤＳを用いてこれに抽出物を吸着
させた後、この抽出物吸着ＯＤＳを少量の溶剤に懸濁し
てからカラムにチャージする。溶出溶媒は特に限定され
ないが、好ましくは極性がメタノール：アセトニトリル
＝１：１混合溶剤を８０％含む水溶液からメタノールの
間にある溶剤を用いる。
は、ＯＤＳ（オクタデシルジメチルクロロシランのよう
なオクタデシルシラン類）が好ましい。充填量は特に限
定されないが、チャージする溶剤抽出物に対する重量比
１０〜５００倍量を充填することが好ましい。溶剤抽出
物をカラムにチャージする際はまずＯＤＳに吸着させる
ことが好ましい。このときＯＤＳの量は特に限定されな
いが、好ましくは吸着させる溶剤抽出物に対する重量比
０．５〜２０倍量のＯＤＳを用いてこれに抽出物を吸着
させた後、この抽出物吸着ＯＤＳを少量の溶剤に懸濁し
てからカラムにチャージする。溶出溶媒は特に限定され
ないが、好ましくは極性がメタノール：アセトニトリル
＝１：１混合溶剤を８０％含む水溶液からメタノールの
間にある溶剤を用いる。
【００１３】次に、本発明ペプチドの再結晶による精製
について述べる。
について述べる。
【００１４】再結晶に用いる溶剤は、本発明ペプチドを
溶かす溶剤であれば特に限定されないが、好ましくはメ
タノール、エタノールなどである。再結晶の方法として
は、当該物質を含有するカラム溶出画分を加熱下に少量
の溶剤に溶かし、得られた溶液を徐々に冷やしてこの物
質を再結晶させてもよいし、当該物質を含有するカラム
溶出画分を当該物質の溶解性の高い溶剤に溶かし、そこ
に当該物質の溶解性の低い液（例えば水）を徐々に加え
てこの物質を再結晶させてもよい。
溶かす溶剤であれば特に限定されないが、好ましくはメ
タノール、エタノールなどである。再結晶の方法として
は、当該物質を含有するカラム溶出画分を加熱下に少量
の溶剤に溶かし、得られた溶液を徐々に冷やしてこの物
質を再結晶させてもよいし、当該物質を含有するカラム
溶出画分を当該物質の溶解性の高い溶剤に溶かし、そこ
に当該物質の溶解性の低い液（例えば水）を徐々に加え
てこの物質を再結晶させてもよい。
【００１５】
【実施例】実施例１ 理化学研究所から入手した放線菌Ｓ．ノビリス（ＪＣＭ
４２７４）を、酵母エキス０．２％添加澱粉・アンモニ
ウム培地１００ｍｌ中で４０時間振盪培養（前々培養）
し、続いて同培地３リットルに前々培養菌液６０ｍｌを
接種し、２５時間振盪培養（種培養）した。さらに澱粉
・アンモニウム培地（蒸留水１００ｍｌ中に可溶性澱粉
を１ｇ、リン酸水素二カリウムを０．０５ｇ、塩化アン
モニウムを０．０５ｇ含む）２８５リットルに種培養し
た全量を接種し、約３０℃で８日間振盪培養した。この
培養液を遠心分離し、得られた上清液２５０リットルに
硫酸アンモニウムを上清１リットル当たり６６２ｇ添加
し、１時間攪拌した。続いて２０，０００Ｇ（流速３６
０−５００リットル／時間）で連続的に遠心分離を行
い、約１２ｋｇの沈殿物を得た。
４２７４）を、酵母エキス０．２％添加澱粉・アンモニ
ウム培地１００ｍｌ中で４０時間振盪培養（前々培養）
し、続いて同培地３リットルに前々培養菌液６０ｍｌを
接種し、２５時間振盪培養（種培養）した。さらに澱粉
・アンモニウム培地（蒸留水１００ｍｌ中に可溶性澱粉
を１ｇ、リン酸水素二カリウムを０．０５ｇ、塩化アン
モニウムを０．０５ｇ含む）２８５リットルに種培養し
た全量を接種し、約３０℃で８日間振盪培養した。この
培養液を遠心分離し、得られた上清液２５０リットルに
硫酸アンモニウムを上清１リットル当たり６６２ｇ添加
し、１時間攪拌した。続いて２０，０００Ｇ（流速３６
０−５００リットル／時間）で連続的に遠心分離を行
い、約１２ｋｇの沈殿物を得た。
【００１６】上記により得られた沈殿物１．２ｋｇに水
３．６リットルを添加し、８０℃で３０分間攪拌した。
次に等量の酢酸エチルを添加し、１０分間振盪後、全体
を５，０００Ｇで１０分間遠心した。酢酸エチル相を分
離後、水相について本操作を数回繰り返し、溶剤抽出物
を得た。
３．６リットルを添加し、８０℃で３０分間攪拌した。
次に等量の酢酸エチルを添加し、１０分間振盪後、全体
を５，０００Ｇで１０分間遠心した。酢酸エチル相を分
離後、水相について本操作を数回繰り返し、溶剤抽出物
を得た。
【００１７】次に、上記により得られた溶剤抽出物を、
ＯＤＳ（オクタデシルジメチルクロロシラン）担体２５
ｇに吸着させた。ついで、ＯＤＳ担体２７５ｇを充填し
た径３．２ｃｍのカラム内の上記担体上に上記抽出物吸
着担体をチャージし、ＯＤＳカラムを作成した。このＯ
ＤＳカラムを用いて下記の条件で精製を行なった。溶出
溶剤としてａ）メタノール：アセトニトリル：水＝７：
７：６を１．５リットル、ｂ）メタノール：アセトニト
リル：水＝８：８：４を１．２リットル、ｃ）メタノー
ル：アセトニトリル：水＝９：９：２を１５０ｍｌ、
ｄ）メタノール：アセトニトリル：水＝１９：１９：２
を１リットル、ｅ）メタノールを１リットル、この順に
流速１０．５ｍｌ／分で流した。分画は、溶剤組成を変
更する毎に行い、特にメタノール：アセトニトリル：水
＝１９：１９：２の溶出画分は、適宜フラクションコレ
クターを用いて少量ずつ（２分間ずつ）分画した。各溶
出画分について、ＯＤＳ−８０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×
長さ２５．０ｃｍの東ソー社製のカラムを用いたＨＰＬ
Ｃ（日立社製、ポンプＬ−６０００Ｌ−６２００、検出
器Ｌ−３０００、カラムオープン６５５Ａ−５２）にお
いて、検出波長２１０ｎｍ、カラム温度４０℃、流速１
ｍｌ／分の条件で、溶離液として水：アセトニトリル：
メタノール＝６：７：７（０分）〜０：１：１（３０
分）を用いて分析を行った。上記画分のうちリテンショ
ンタイムが１８〜２０分のピークを含むもののみを集
め、同一画分とし（１００ｍｇ）、メタノール−水を用
いて繰り返し再結晶を行い、針状結晶４５ｍｇを得た。
ＯＤＳ（オクタデシルジメチルクロロシラン）担体２５
ｇに吸着させた。ついで、ＯＤＳ担体２７５ｇを充填し
た径３．２ｃｍのカラム内の上記担体上に上記抽出物吸
着担体をチャージし、ＯＤＳカラムを作成した。このＯ
ＤＳカラムを用いて下記の条件で精製を行なった。溶出
溶剤としてａ）メタノール：アセトニトリル：水＝７：
７：６を１．５リットル、ｂ）メタノール：アセトニト
リル：水＝８：８：４を１．２リットル、ｃ）メタノー
ル：アセトニトリル：水＝９：９：２を１５０ｍｌ、
ｄ）メタノール：アセトニトリル：水＝１９：１９：２
を１リットル、ｅ）メタノールを１リットル、この順に
流速１０．５ｍｌ／分で流した。分画は、溶剤組成を変
更する毎に行い、特にメタノール：アセトニトリル：水
＝１９：１９：２の溶出画分は、適宜フラクションコレ
クターを用いて少量ずつ（２分間ずつ）分画した。各溶
出画分について、ＯＤＳ−８０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×
長さ２５．０ｃｍの東ソー社製のカラムを用いたＨＰＬ
Ｃ（日立社製、ポンプＬ−６０００Ｌ−６２００、検出
器Ｌ−３０００、カラムオープン６５５Ａ−５２）にお
いて、検出波長２１０ｎｍ、カラム温度４０℃、流速１
ｍｌ／分の条件で、溶離液として水：アセトニトリル：
メタノール＝６：７：７（０分）〜０：１：１（３０
分）を用いて分析を行った。上記画分のうちリテンショ
ンタイムが１８〜２０分のピークを含むもののみを集
め、同一画分とし（１００ｍｇ）、メタノール−水を用
いて繰り返し再結晶を行い、針状結晶４５ｍｇを得た。
【００１８】この物質の構造は、種々の機器分析データ
より式［Ｉ］であると決定した。
より式［Ｉ］であると決定した。
【００１９】実施例２ 実施例１と同様にして培養を行い、得られた菌体２１５
ｇ（湿重量）にジクロロメタン２．１５リットルを加
え、３０分間超音波処理をした後、さらにジクロロメタ
ン８．６リットルを添加し、全体を室温で１時間攪拌し
た。菌体を濾別後、得られた濾液を濃縮乾固した。この
抽出物の乾固物を少量のヘキサンに溶解した後、ヘキサ
ン相をメタノールで３回抽出処理した。ヘキサン不溶物
とメタノール抽出物をメタノールに再溶解した。
ｇ（湿重量）にジクロロメタン２．１５リットルを加
え、３０分間超音波処理をした後、さらにジクロロメタ
ン８．６リットルを添加し、全体を室温で１時間攪拌し
た。菌体を濾別後、得られた濾液を濃縮乾固した。この
抽出物の乾固物を少量のヘキサンに溶解した後、ヘキサ
ン相をメタノールで３回抽出処理した。ヘキサン不溶物
とメタノール抽出物をメタノールに再溶解した。
【００２０】次に、上記により得られた溶剤抽出物を、
ＯＤＳ担体２８ｇに吸着させた。ついで、ＯＤＳ担体２
７５ｇを充填した径３．２ｃｍのカラム内の上記担体上
に上記抽出物吸着担体約３０ｇをチャージし、ＯＤＳカ
ラムを作成した。このＯＤＳカラムを用いて下記の条件
で精製を行なった。溶出溶剤としてａ）メタノール：ア
セトニトリル：水＝７：７：６を１．５リットル、ｂ）
メタノール：アセトニトリル：水＝８：８：４を１．２
リットル、ｃ）メタノール：アセトニトリル：水＝９：
９：２を２００ｍｌ、ｄ）メタノール：アセトニトリ
ル：水＝１９：１９：２を１リットル、ｅ）メタノール
を５００ｍｌ、この順に流速１０．５ｍｌ／分で流し
た。分画は、溶剤組成を変更する毎に行い、特にメタノ
ール：アセトニトリル：水＝１９：１９：２の溶出画分
は、適宜フラクションコレクターを用いて少量ずつ（２
分間ずつ）分画した。各溶出画分について、ＯＤＳ−８
０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×長さ２５．０ｃｍの東ソー社
製のカラムを用いたＨＰＬＣ（日立社製、ポンプＬ−６
０００Ｌ−６２００、検出器Ｌ−３０００、カラムオー
プン６５５Ａ−５２）において、検出波長２１０ｎｍ、
カラム温度４０℃、流速１ｍｌ／分の条件で、溶離液と
して水：アセトニトリル：メタノール＝６：７：７（０
分）〜０：１：１（３０分）を用いて分析を行った。上
記画分のうちリテンションタイムが１８〜２０分のピー
クを含むもののみを集め、同一画分とし（８４０ｍ
ｇ）、メタノール−水を用いて繰り返し再結晶を行い、
針状結晶の本発明ペプチド３３０ｍｇを得た。
ＯＤＳ担体２８ｇに吸着させた。ついで、ＯＤＳ担体２
７５ｇを充填した径３．２ｃｍのカラム内の上記担体上
に上記抽出物吸着担体約３０ｇをチャージし、ＯＤＳカ
ラムを作成した。このＯＤＳカラムを用いて下記の条件
で精製を行なった。溶出溶剤としてａ）メタノール：ア
セトニトリル：水＝７：７：６を１．５リットル、ｂ）
メタノール：アセトニトリル：水＝８：８：４を１．２
リットル、ｃ）メタノール：アセトニトリル：水＝９：
９：２を２００ｍｌ、ｄ）メタノール：アセトニトリ
ル：水＝１９：１９：２を１リットル、ｅ）メタノール
を５００ｍｌ、この順に流速１０．５ｍｌ／分で流し
た。分画は、溶剤組成を変更する毎に行い、特にメタノ
ール：アセトニトリル：水＝１９：１９：２の溶出画分
は、適宜フラクションコレクターを用いて少量ずつ（２
分間ずつ）分画した。各溶出画分について、ＯＤＳ−８
０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×長さ２５．０ｃｍの東ソー社
製のカラムを用いたＨＰＬＣ（日立社製、ポンプＬ−６
０００Ｌ−６２００、検出器Ｌ−３０００、カラムオー
プン６５５Ａ−５２）において、検出波長２１０ｎｍ、
カラム温度４０℃、流速１ｍｌ／分の条件で、溶離液と
して水：アセトニトリル：メタノール＝６：７：７（０
分）〜０：１：１（３０分）を用いて分析を行った。上
記画分のうちリテンションタイムが１８〜２０分のピー
クを含むもののみを集め、同一画分とし（８４０ｍ
ｇ）、メタノール−水を用いて繰り返し再結晶を行い、
針状結晶の本発明ペプチド３３０ｍｇを得た。
【００２１】この物質の構造は、実施例１と同様にして
種々の機器分析データより式［Ｉ］であると決定した。
種々の機器分析データより式［Ｉ］であると決定した。
【００２２】構造分析データ 実施例１および２で得られた物質の機器分析データを以
下に示す。
下に示す。
【００２３】
【表１】１．ＭＳ ・ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９１３．６（Ｍ＋Ｈ−Ｈ
2 Ｏ）+ ，９３１．６（Ｍ＋Ｈ）+ ，９５３．６（Ｍ＋
Ｎａ）+
2 Ｏ）+ ，９３１．６（Ｍ＋Ｈ）+ ，９５３．６（Ｍ＋
Ｎａ）+
【表２】・ＨＲＦＡＢ−ＭＳ Found ： ｍ／ｚ＝９１３．５０７９（Ｍ＋Ｈ−Ｈ
2 Ｏ）+ ， ｍ／ｚ＝９１３，９５３，９３１ （９１３がメイン，９３１は非常に小さい） Calcd for ： Ｃ45Ｈ69Ｎ8 Ｏ12 ｍ／ｚ＝９１３．５０５３
2 Ｏ）+ ， ｍ／ｚ＝９１３，９５３，９３１ （９１３がメイン，９３１は非常に小さい） Calcd for ： Ｃ45Ｈ69Ｎ8 Ｏ12 ｍ／ｚ＝９１３．５０５３
【表３】２．ＩＲ ＩＲ： ３，４００ｃｍ-1：−ＯＨ, −ＮＨ， ２，９００ｃｍ-1：アルキル基， １，７５０ｃｍ-1：−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−， １，６５０ｃｍ-1：−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−
【００２４】３．アミノ酸分析 加水分解物としてＤ−セリン、Ｌ−アラニンおよびＤ−
Ｎ−メチル−フェニルアラニンが認められた。
Ｎ−メチル−フェニルアラニンが認められた。
【００２５】４．組成式 質量分析と後述するＮＭＲのデータから新規ペプチドの
組成式はＣ45Ｈ70Ｎ8Ｏ13であることが分かった。
組成式はＣ45Ｈ70Ｎ8Ｏ13であることが分かった。
【００２６】５．ＮＭＲ ａ）部分構造Ａについて ＨＭＢＣスペクトル測定の結果、アラニン（Ａｌａ）の
カルボニル炭素（１７３．６ｐｐｍ）とＮ−ＣＨ3 −フ
ェニルアラニン（Ｐｈｅ）のＣＨ3 （３．０４ｐｐｍ）
とにロングレンジの相関が観測されたことにより、Ａの
部分構造が推定された。
カルボニル炭素（１７３．６ｐｐｍ）とＮ−ＣＨ3 −フ
ェニルアラニン（Ｐｈｅ）のＣＨ3 （３．０４ｐｐｍ）
とにロングレンジの相関が観測されたことにより、Ａの
部分構造が推定された。
【００２７】ｂ）部分構造Ｂ、Ｃについて1 Ｈ− 1Ｈ COSY,HOHAHA から同様のスピン系を持つ２
つの成分が推定された。
つの成分が推定された。
【００２８】
【表４】ｉ） ＮＨ(4.38ppm） ＣＨ2 （46.1 , 2.89 , 3.15ppm ） ＣＨ2 （21.3 , 1.45 , 1.63ppm ） ＣＨ2 （24.2 , 1.93 , 2.25ppm ） ＣＨ（51.7 , 4.90ppm） ii） ＮＨ（3.93ppm ） ＣＨ2 （47.9 , 2.56 , 3.30ppm ） ＣＨ2 （21.5 , 1.55 , 1.66ppm ） ＣＨ2 （24.4 , 1.67 , 2.58ppm ） ＣＨ（52.5 , 5.18ppm）
【００２９】両者の13Ｃシフトはよく一致しているので
同じ構造のもの（残基）と考えられる。さらに、ＣＨ2
プロトンが非等価であることから環状構造と推定でき
る。
同じ構造のもの（残基）と考えられる。さらに、ＣＨ2
プロトンが非等価であることから環状構造と推定でき
る。
【００３０】このシフトはモナマイシン（Monamycin ）
に含まれれるPiperazic acid(Pip）のものに合うことか
ら、この成分はＰｉｐ（部分構造Ｂの左の部分と部分構
造Ｃ）と推定された。
に含まれれるPiperazic acid(Pip）のものに合うことか
ら、この成分はＰｉｐ（部分構造Ｂの左の部分と部分構
造Ｃ）と推定された。
【００３１】
【表５】 α β γ δ Ｐｉｐ1) 49.8 24.1 21.0 47.0 （ＣＤＣｌ3 溶液） 実測値 52-53 24-25 21 46-48 （ＣＤＣｌ3 溶液）
【００３２】また、セリン（Ｓｅｒ）の６．４０ｐｐｍ
のＮＨとＰｉｐの１６８．９ｐｐｍのカルボニルの間に
ロングレンジが観測されたことにより、部分構造Ｂが推
定された。
のＮＨとＰｉｐの１６８．９ｐｐｍのカルボニルの間に
ロングレンジが観測されたことにより、部分構造Ｂが推
定された。
【００３３】1) C.H.Hassall, W.A.Thomas, M.C.Mosch
idis，J.Chem.Soc.,Perkin Trans.I, 1977, 2371(1977)
idis，J.Chem.Soc.,Perkin Trans.I, 1977, 2371(1977)
【００３４】ｃ）部分構造Ｄについて1 Ｈ− 1Ｈスピン結合から（ＣＨ3 ）2 −ＣＨ−ＣＨ−
ＣＨ−ＮＨ−なる部分構造が導かれ、ロングレンジの 1
Ｈ−13Ｃ結合によりこの部分構造が確認され、また、１
７０．６ｐｐｍのカルボニルと４．８８ｐｐｍのＣＨと
のスピン結合から、β−ＯＨ−ロイシン（Ｌｅｕ）の構
造がわかり、５．４６ｐｐｍのＣＨからβ−ＯＨ−Ｌｅ
ｕがそのβ位でエステル結合していることが推定され
た。
ＣＨ−ＮＨ−なる部分構造が導かれ、ロングレンジの 1
Ｈ−13Ｃ結合によりこの部分構造が確認され、また、１
７０．６ｐｐｍのカルボニルと４．８８ｐｐｍのＣＨと
のスピン結合から、β−ＯＨ−ロイシン（Ｌｅｕ）の構
造がわかり、５．４６ｐｐｍのＣＨからβ−ＯＨ−Ｌｅ
ｕがそのβ位でエステル結合していることが推定され
た。
【００３５】1Ｈ− 1Ｈスピン結合、ロングレンジの 1
Ｈ−13Ｃ結合およびＮＯＥ(NuclearOverhauser Effect)
の測定結果より、部分構造Ｄの側鎖部（左）の部分構
造がわかった。
Ｈ−13Ｃ結合およびＮＯＥ(NuclearOverhauser Effect)
の測定結果より、部分構造Ｄの側鎖部（左）の部分構
造がわかった。
【００３６】ロングレンジの 1Ｈ−13Ｃ結合から、β−
ＯＨ−Ｌｅｕの４．８８ｐｐｍのＣＨおよび８．３４ｐ
ｐｍのＮＨと側鎖部の１７７ｐｐｍのカルボニルとにロ
ングレンジの相関が観測されたことにより部分構造Ｄが
推定された。
ＯＨ−Ｌｅｕの４．８８ｐｐｍのＣＨおよび８．３４ｐ
ｐｍのＮＨと側鎖部の１７７ｐｐｍのカルボニルとにロ
ングレンジの相関が観測されたことにより部分構造Ｄが
推定された。
【００３７】ｄ）新規ペプチドの化学構造について ロングレンジの 1Ｈ−13Ｃ結合から、Ｓｅｒの１７０．
２ｐｐｍのカルボニルとβ−ＯＨ−Ｌｅｕの５．４６ｐ
ｐｍのＣＨとにロングレンジ相関が観測されたことによ
り、部分構造Ｂと部分構造ＤがＳｅｒとβ−ＯＨ−Ｌｅ
ｕの間でエステル結合していることがわかった。また、
β−ＯＨ−Ｌｅｕの５．４６ｐｐｍのＣＨとＰｉｐ（部
分構造Ｃ）の４．３８ｐｐｍのＮＨ、β−ＯＨ−Ｌｅｕ
の８．３４ｐｐｍのＮＨとＰｉｐ（部分構造Ｃ）の２．
８９ｐｐｍのＣＨ2 ，４．９０ｐｐｍのＣＨとにＮＯＥ
が観測されたことから、部分構造Ｃがβ−ＯＨ−Ｌｅｕ
の１７０．６ｐｐｍのカルボニル基に結合していること
がわかった。残る部分構造Ａの結合方法は一通りであ
り、新規ペプチドの化学構造を決定した。
２ｐｐｍのカルボニルとβ−ＯＨ−Ｌｅｕの５．４６ｐ
ｐｍのＣＨとにロングレンジ相関が観測されたことによ
り、部分構造Ｂと部分構造ＤがＳｅｒとβ−ＯＨ−Ｌｅ
ｕの間でエステル結合していることがわかった。また、
β−ＯＨ−Ｌｅｕの５．４６ｐｐｍのＣＨとＰｉｐ（部
分構造Ｃ）の４．３８ｐｐｍのＮＨ、β−ＯＨ−Ｌｅｕ
の８．３４ｐｐｍのＮＨとＰｉｐ（部分構造Ｃ）の２．
８９ｐｐｍのＣＨ2 ，４．９０ｐｐｍのＣＨとにＮＯＥ
が観測されたことから、部分構造Ｃがβ−ＯＨ−Ｌｅｕ
の１７０．６ｐｐｍのカルボニル基に結合していること
がわかった。残る部分構造Ａの結合方法は一通りであ
り、新規ペプチドの化学構造を決定した。
【００３８】また、Ｓｅｒの６．４０ｐｐｍとＮＨとＮ
−ＣＨ3 −Ｐｈｅの３．０４ｐｐｍのＣＨ3 の間にもＮ
ＯＥが観測されていることから、上記構造が正しいこと
が示唆されている。
−ＣＨ3 −Ｐｈｅの３．０４ｐｐｍのＣＨ3 の間にもＮ
ＯＥが観測されていることから、上記構造が正しいこと
が示唆されている。
【００３９】ｅ）ＮＭＲの測定結果は下記の通りであ
る。
る。
【００４０】表６と表７は13Ｃシフトと炭素タイプ、お
よび直接結合する 1Ｈを示し、表８〜表１０は 1Ｈシフ
ト、スピン結合する 1Ｈ、13Ｃ、およびロングレンジ結
合する13Ｃを示し、表１１と表１２はＮＯＥ測定結果を
示し、表１３〜表１６は13Ｃおよび 1Ｈの帰属を示す。
よび直接結合する 1Ｈを示し、表８〜表１０は 1Ｈシフ
ト、スピン結合する 1Ｈ、13Ｃ、およびロングレンジ結
合する13Ｃを示し、表１１と表１２はＮＯＥ測定結果を
示し、表１３〜表１６は13Ｃおよび 1Ｈの帰属を示す。
【００４１】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【表１６】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【化７】
【００４２】
【発明の効果】本発明により、アレルギー性および非ア
レルギー性炎症抑制作用、免疫抑制作用、抗菌作用、抗
腫瘍作用などを示し、炎症抑制剤、免疫抑制剤、抗生物
質、抗腫瘍剤などの用途に有用である新規ペプチドを提
供することができる。
レルギー性炎症抑制作用、免疫抑制作用、抗菌作用、抗
腫瘍作用などを示し、炎症抑制剤、免疫抑制剤、抗生物
質、抗腫瘍剤などの用途に有用である新規ペプチドを提
供することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 37/08 37/08 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 稲垣 孝司 大阪府三島郡島本町百山２−１ 積水化 学工業株式会社内 (56)参考文献 特開 平５−25053（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−247863（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−172194（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−119992（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−176189（ＪＰ，Ａ) Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ （1994）Ｖｏｌ．64，ＳＵＰＰＬ １, ｐ．95Ｐ，０−49 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/06 C12P 21/00 - 21/02 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 【化１】 で示される新規ペプチド。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26032494A JP3148850B2 (ja) | 1994-10-25 | 1994-10-25 | 新規ペプチド |
| US08/809,406 US5858971A (en) | 1994-10-25 | 1994-10-25 | Cyclic peptide and method of making same by culturing a strain of actinomyces S. nobilis |
| PCT/JP1995/002187 WO1996012732A1 (fr) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Nouveau peptide et agent therapeutique |
| AT95935558T ATE186735T1 (de) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Neues peptid und therapeutisches agens |
| CA002203631A CA2203631C (en) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Cyclic peptide obtained from actinomyces s. nobilis useful as therapeutic agent |
| KR1019970702830A KR100351180B1 (ko) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | 신규의펩티드및치료제 |
| EP95935558A EP0792886B1 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Novel peptide and therapeutic agent |
| AU37533/95A AU699488B2 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Novel peptide and therapeutic agent |
| DE69513419T DE69513419T2 (de) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Neues peptid und therapeutisches agens |
| ES95935558T ES2141391T3 (es) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Nuevo peptido y agente terapeutico. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26032494A JP3148850B2 (ja) | 1994-10-25 | 1994-10-25 | 新規ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08119993A JPH08119993A (ja) | 1996-05-14 |
| JP3148850B2 true JP3148850B2 (ja) | 2001-03-26 |
Family
ID=17346434
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26032494A Expired - Lifetime JP3148850B2 (ja) | 1994-10-25 | 1994-10-25 | 新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3148850B2 (ja) |
-
1994
- 1994-10-25 JP JP26032494A patent/JP3148850B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９４）Ｖｏｌ．６４，ＳＵＰＰＬ １，ｐ．９５Ｐ，０−４９ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08119993A (ja) | 1996-05-14 |
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| Gross | Peptide antibiotics |
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