JP3135491B2 - 新規抗生物質 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規ペプチドからな
る抗生物質、特にグラム陽性菌の増殖阻害に有効である
抗生物質、および該ペプチドを有効成分として含む抗菌
剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】微生物が生産する抗生物質は、現在まで
に５，０００種類以上報告されている。このうちストレ
プトマイセス属に属する微生物からは、ストレプトマイ
シン、アクチノマイシンＣ，Ｄなどが報告されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】抗生物質の使用におい
ては、耐性菌の発現が問題になっており、新しいタイプ
の物質が望まれている。

【０００４】本発明の目的は、抗菌活性の強い新規抗生
物質を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明により、

【化３】 で示される新規ペプチド（以下、本発明ペプチドとい
う）からなる抗生物質（以下、本発明抗生物質という）
が提供される。

【０００６】本発明抗生物質は、ストレプトマイセス属
に属する本発明抗生物質生産菌株、例えば、放線菌スト
レプトマイセス・ノビリス（Streptomyces nobilis、以
下「Ｓ．ノビリス」と略記する）を培養し、得られた培
養液または同液の乾固物もしくは培養菌体から有機溶剤
によって抽出された抽出物を、各種カラムクロマトグラ
フィーに付し、目的物を含むカラムクロマトグラフィー
画分を再結晶処理することにより得られる。

【０００７】本発明抗生物質を生産する放線菌Ｓ．ノビ
リスは、公的保存機関から入手可能であり、たとえば理
化学研究所の保存菌（ＪＣＭ４２７４）（これは米国に
おいてＡＴＣＣ１９２５２およびオランダにおいてＣＢ
Ｓ１９８．６５としても保存）などの菌が使用できる。

【０００８】放線菌Ｓ．ノビリスの培養は、然るべき栄
養物を含んだ培地を用いて行う。液体培養の場合、その
培地の成分としてはブドウ糖などの糖類、ペプトンや麦
芽エキスなどのタンパク質類、ビタミン類、核酸類、ア
ミノ酸類、複合糖質類の一種または数種を含んだ水溶液
が好適に用いられる。代表的な培地例としては、澱粉・
アンモニウム系の液体培地（可溶性澱粉、Ｋ₂ ＨＰ
Ｏ₄ 、ＮＨ₄ Ｃｌを含む）が挙げられる。液体培地のｐ
Ｈは２〜９が好ましく、培養温度は１５〜４２℃が好ま
しい。また液体培養の好ましい培養時間は１〜１４日で
ある。こうして得たＳ．ノビリスの培養液またはその乾
固物もしくは菌体自体から溶剤を用いて本発明ペプチド
を抽出する。

【０００９】Ｓ．ノビリスの培養液またはその乾固物も
しくは菌体自体の抽出液を硫酸アンモニウム（硫安）処
理し、得られた沈殿物を溶媒抽出してもよい。硫安処理
に際しては、培養液またはその乾固物もしくは菌体自体
の抽出液に添加する硫安は、固体のままの状態でもよい
し、溶液状態のものでもよい。硫安の添加量は好ましく
は飽和濃度の３０〜９０重量％の範囲である。処理時間
は特に限定されないが、好ましくは３０分〜５時間の範
囲である。沈殿物を得るための遠心分離に際しては、遠
心力が３，０００Ｇ〜２０，０００Ｇであることが好ま
しく、遠心時間は２〜６０分であることが好ましい。

【００１０】抽出に用いる溶剤としては有機溶剤が好ま
しく、その代表例としては、酢酸エチルなどのエステル
類、メタノール、エタノール、プロパノールなどのアル
コール類、エチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル
類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類のほ
かジクロロメタン、クロロホルムなどが挙げられるが、
使用可能な溶剤はこれらに限定されない。また、上記溶
剤の混合物を用いることもできる。特に好適な溶剤は酢
酸エチル、ジクロロメタン、アセトンなどである。抽出
時間は溶剤の種類や抽出温度などによっても異なるが、
好ましくは３〜１２０分の範囲である。また抽出中は液
を静置してもまたは攪拌してもよい。好ましくは、同一
試料に対して抽出操作を複数回繰り返す。抽出温度は特
に制限されない。

【００１１】次に、溶剤抽出物に対するカラムクロマト
グラフィーについて述べる。

【００１２】カラムクロマトグラフィーの充填剤として
は、ＯＤＳ（オクタデシルジメチルクロロシランのよう
なオクタデシルシラン類）が好ましい。充填量は特に限
定されないが、チャージする溶剤抽出物に対する重量比
１０〜５００倍量を充填することが好ましい。溶剤抽出
物をカラムにチャージする際はまずＯＤＳに吸着させる
ことが好ましい。このときＯＤＳの量は特に限定されな
いが、好ましくは吸着させる溶剤抽出物に対する重量比
０．５〜２０倍量のＯＤＳを用いてこれに抽出物を吸着
させた後、この抽出物吸着ＯＤＳを少量の溶剤に懸濁し
てからカラムにチャージする。溶出溶媒は特に限定され
ないが、好ましくは極性がメタノール：アセトニトリル
＝１：１混合溶剤を８０％含む水溶液からメタノールの
間にある溶剤を用いる。

【００１３】次に、本発明ペプチドの再結晶による精製
について述べる。

【００１４】再結晶に用いる溶剤は、本発明ペプチドを
溶かす溶剤であれば特に限定されないが、好ましくはメ
タノール、エタノールなどである。再結晶の方法として
は、当該物質を含有するカラム溶出画分を加熱下に少量
の溶剤に溶かし、得られた溶液を徐々に冷やしてこの物
質を再結晶させてもよいし、当該物質を含有するカラム
溶出画分を当該物質の溶解性の高い溶剤に溶かし、そこ
に当該物質の溶解性の低い液（例えば水）を徐々に加え
てこの物質を再結晶させてもよい。

【００１５】本発明ペプチドは、後述する薬理試験の結
果から分かるように、特にグラム陽性菌の増殖阻害に有
効であるに抗生物質である。

【００１６】本発明抗生物質を製剤化するには、通常は
これを製剤用担体とともに製剤組成物の形態とする。担
体としては剤形に応じた薬剤を調製するのに通常使用さ
れる充填剤、崩壊剤、増量剤、結合剤、着色剤、矯味矯
臭剤、ｐＨ調整剤、可溶化剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定
化剤、保存剤、付質剤、界面活性剤、滑沢剤、賦形剤、
抗酸化剤、分散剤、噴射剤、溶解剤、溶解補助剤が例示
される。また適当な溶剤を選定することにより、得られ
た本発明ペプチドをそのままの形態で液剤として使用す
ることもできる。

【００１７】本発明創傷治癒物質を用いて製剤化される
創傷治癒剤の投与単位形態としては、上記のごとき液剤
のほか、錠剤、丸剤、飲用液剤、リモナーゼ剤、注入
剤、散剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、エキス剤、細粒剤、
シロップ剤、浸剤、煎剤、点眼剤、トローチ剤、パップ
剤、リニメント剤、ローション剤、エリキシル剤、眼軟
膏剤、硬膏剤、カプセル剤、坐剤、浣腸剤、注射剤（液
剤、懸濁剤など）、貼付剤、軟膏剤、ゼリー剤、パスタ
剤、吸入剤、クリーム剤、スプレー剤、点鼻剤、エアゾ
ール剤などが例示される。

【００１８】抗菌剤中に含有すべき本発明抗生物質の量
は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、好まし
くは抗菌剤中に１０^-7〜１０重量％の範囲である。

【００１９】本発明抗生物質より得られた抗菌剤は、そ
の使用に際し各種形態に応じた方法で投与される。たと
えば外用剤の場合には、これを皮膚ないしは粘膜などの
所要部位に直接噴霧、貼付または塗布し、錠剤、丸剤、
飲用液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場
合には経口投与され、注射剤の場合には静脈内、筋肉
内、皮内、皮下、関節腔内もしくは腹腔内投与され、坐
剤の場合には直腸内投与される。

【００２０】本発明抗生物質より得られた抗菌剤の投与
量は、使用目的、症状などにより適宜選択されるが、通
常は１日当り本発明抗生物質として１０ｐｇ／ｋｇ〜１
０ｍｇ／ｋｇ程度の範囲である。また上記製剤組成物を
１〜４回／日に分けて投与することももちろん差し支え
ない。

【００２１】

【発明の実施の形態】以下に、本発明の実施例を示す
が、これらの例は本発明をよりよく理解するためのもの
であり、本発明の範囲を限定するものではない。

【００２２】

【実施例】

本発明ペプチドの製造例実施例１ 理化学研究所から入手した放線菌Ｓ．ノビリス（ＪＣＭ
４２７４）を、酵母エキス０．２％添加澱粉・アンモニ
ウム培地１００ｍｌ中で４０時間振盪培養（前々培養）
し、続いて同培地３リットルに前々培養菌液６０ｍｌを
接種し、２５時間振盪培養（種培養）した。さらに澱粉
・アンモニウム培地（蒸留水１００ｍｌ中に可溶性澱粉
を１ｇ、リン酸水素二カリウムを０．０５ｇ、塩化アン
モニウムを０．０５ｇ含む）２８５リットルに種培養し
た全量を接種し、約３０℃で８日間振盪培養した。この
培養液を遠心分離し、得られた上清液２５０リットルに
硫酸アンモニウムを上清１リットル当たり６６２ｇ添加
し、１時間攪拌した。続いて２０，０００Ｇ（流速３６
０−５００リットル／時間）で連続的に遠心分離を行
い、約１．２ｋｇの沈殿物を得た。

【００２３】上記により得られた沈殿物１．２ｋｇに水
３．６リットルを添加し、８０℃で３０分間攪拌した。
次に等量の酢酸エチルを添加し、１０分間振盪後、全体
を５，０００Ｇで１０分間遠心した。酢酸エチル相を分
離後、水相について本操作を数回繰り返し、溶剤抽出物
を得た。

【００２４】次に、上記により得られた溶剤抽出物を、
ＯＤＳ（オクタデシルジメチルクロロシラン）担体２５
ｇに吸着させた。ついで、ＯＤＳ担体２７５ｇを充填し
た径３．２ｃｍのカラム内の上記担体上に上記抽出物吸
着担体をチャージし、ＯＤＳカラムを作成した。このＯ
ＤＳカラムを用いて下記の条件で精製を行なった。溶出
溶剤としてａ）メタノール：アセトニトリル：水＝７：
７：６を１．５リットル、ｂ）メタノール：アセトニト
リル：水＝８：８：４を１．２リットル、ｃ）メタノー
ル：アセトニトリル：水＝９：９：２を１５０ｍｌ、
ｄ）メタノール：アセトニトリル：水＝１９：１９：２
を１リットル、ｅ）メタノールを１リットル、この順に
流速１０．５ｍｌ／分で流した。分画は、溶剤組成を変
更する毎に行い、特にメタノール：アセトニトリル：水
＝１９：１９：２の溶出画分は、適宜フラクションコレ
クターを用いて少量ずつ（２分間ずつ）分画した。各溶
出画分について、ＯＤＳ−８０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×
長さ２５．０ｃｍの東ソー社製のカラムを用いたＨＰＬ
Ｃ（日立社製、ポンプＬ−６０００、Ｌ−６２００、検
出器Ｌ−３０００、カラムオープン６５５Ａ−５２）に
おいて、検出波長２１０ｎｍ、カラム温度４０℃、流速
１ｍｌ／分の条件で、溶離液として水：アセトニトリ
ル：メタノール＝６：７：７（０分）〜０：１：１（３
０分）を用いて分析を行った。上記画分のうちリテンシ
ョンタイムが１８〜２０分のピークを含むもののみを集
め、同一画分とし（１００ｍｇ）、メタノール−水を用
いて繰り返し再結晶を行い、針状結晶４５ｍｇを得た。

【００２５】この物質の構造は、種々の機器分析データ
より式［Ｉ］であると決定した。

【００２６】実施例２ 実施例１と同様にして培養を行い、得られた菌体２１５
ｇ（湿重量）にジクロロメタン２．１５リットルを加
え、３０分間超音波処理をした後、さらにジクロロメタ
ン８．６リットルを添加し、全体を室温で１時間攪拌し
た。菌体を濾別後、得られた濾液を濃縮乾固した。この
抽出物の乾固物を少量のヘキサンに溶解した後、ヘキサ
ン相をメタノールで３回抽出処理した。ヘキサン不溶物
とメタノール抽出物をメタノールに再溶解した。

【００２７】次に、上記により得られた溶剤抽出物を、
ＯＤＳ担体２８ｇに吸着させた。ついで、ＯＤＳ担体２
７５ｇを充填した径３．２ｃｍのカラム内の上記担体上
に上記抽出物吸着担体約３０ｇをチャージし、ＯＤＳカ
ラムを作成した。このＯＤＳカラムを用いて下記の条件
で精製を行なった。溶出溶剤としてａ）メタノール：ア
セトニトリル：水＝７：７：６を１．５リットル、ｂ）
メタノール：アセトニトリル：水＝８：８：４を１．２
リットル、ｃ）メタノール：アセトニトリル：水＝９：
９：２を２００ｍｌ、ｄ）メタノール：アセトニトリ
ル：水＝１９：１９：２を１リットル、ｅ）メタノール
を５００ｍｌ、この順に流速１０．５ｍｌ／分で流し
た。分画は、溶剤組成を変更する毎に行い、特にメタノ
ール：アセトニトリル：水＝１９：１９：２の溶出画分
は、適宜フラクションコレクターを用いて少量ずつ（２
分間ずつ）分画した。各溶出画分について、ＯＤＳ−８
０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×長さ２５．０ｃｍの東ソー社
製のカラムを用いたＨＰＬＣ（日立社製、ポンプＬ−６
０００、Ｌ−６２００、検出器Ｌ−３０００、カラムオ
ープン６５５Ａ−５２）において、検出波長２１０ｎ
ｍ、カラム温度４０℃、流速１ｍｌ／分の条件で、溶離
液として水：アセトニトリル：メタノール＝６：７：７
（０分）〜０：１：１（３０分）を用いて分析を行っ
た。上記画分のうちリテンションタイムが１８〜２０分
のピークを含むもののみを集め、同一画分とし（８４０
ｍｇ）、メタノール−水を用いて繰り返し再結晶を行
い、針状結晶の本発明ペプチド３３０ｍｇを得た。

【００２８】この物質の構造は、実施例１と同様にして
種々の機器分析データより式［Ｉ］であると決定した。

【００２９】構造分析データ 実施例１および２で得られた物質の機器分析データを以
下に示す。

【００３０】

【表１】 １．ＭＳ ・ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９１３．６（Ｍ＋Ｈ−Ｈ₂ Ｏ）⁺ ， ９３１．６（Ｍ＋Ｈ）⁺ ， ９５３．６（Ｍ＋Ｎａ）⁺

【表２】 ・ＨＲＦＡＢ−ＭＳ Found ： ｍ／ｚ＝９１３．５０７９（Ｍ＋Ｈ−Ｈ₂ Ｏ）⁺ ， ｍ／ｚ＝９１３，９５３，９３１ （９１３がメイン，９３１は非常に小さい） Calcd for ： Ｃ₄₅Ｈ₆₉Ｎ₈ Ｏ₁₂ ｍ／ｚ＝９１３．５０５３

【表３】

【００３１】３．アミノ酸分析 加水分解物としてＤ−セリン、Ｌ−アラニンおよびＤ−
Ｎ−メチル−フェニルアラニンが認められた。

【００３２】４．組成式 質量分析と後述するＮＭＲのデータから新規ペプチドの
組成式はＣ₄₅Ｈ₇₀Ｎ₈Ｏ₁₃であることが分かった。

【００３３】５．ＮＭＲ ａ）部分構造Ａについて ＨＭＢＣスペクトル測定の結果、アラニン（Ａｌａ）の
カルボニル炭素（１７３．６ｐｐｍ）とＮ−ＣＨ₃ −フ
ェニルアラニン（Ｐｈｅ）のＣＨ₃ （３．０４ｐｐｍ）
とにロングレンジの相関が観測されたことにより、Ａの
部分構造が推定された。

【００３４】ｂ）部分構造Ｂ、Ｃについて¹ Ｈ− ¹Ｈ COSY,HOHAHA から同様のスピン系を持つ２
つの成分が推定された。

【００３５】

【表４】

【００３６】両者の¹³Ｃシフトはよく一致しているので
同じ構造のもの（残基）と考えられる。さらに、ＣＨ₂
プロトンが非等価であることから環状構造と推定でき
る。

【００３７】このシフトはモナマイシン（Monamycin ）
に含まれれるPiperazic acid(Pip）のものに合うことか
ら、この成分はＰｉｐ（部分構造Ｂの左の部分と部分構
造Ｃ）と推定された。

【００３８】

【表５】 α β γ δ Ｐｉｐ¹⁾ 49.8 24.1 21.0 47.0 （ＣＤＣｌ₃ 溶液） 実測値 52-53 24-25 21 46-48 （ＣＤＣｌ₃ 溶液）

【００３９】また、セリン（Ｓｅｒ）の６．４０ｐｐｍ
のＮＨとＰｉｐの１６８．９ｐｐｍのカルボニルの間に
ロングレンジが観測されたことにより、部分構造Ｂが推
定された。

【００４０】1) C.H.Hassall, W.A.Thomas, M.C.Mosch
idis，J.Chem.Soc.,Perkin Trans.I, 1977, 2371(1977)

【００４１】ｃ）部分構造Ｄについて¹ Ｈ− ¹Ｈスピン結合から（ＣＨ₃ ）₂ −ＣＨ−ＣＨ−
ＣＨ−ＮＨ−なる部分構造が導かれ、ロングレンジの ¹
Ｈ−¹³Ｃ結合によりこの部分構造が確認され、また、１
７０．６ｐｐｍのカルボニルと４．８８ｐｐｍのＣＨと
のスピン結合から、β−ＯＨ−ロイシン（Ｌｅｕ）の構
造がわかり、５．４６ｐｐｍのＣＨからβ−ＯＨ−Ｌｅ
ｕがそのβ位でエステル結合していることが推定され
た。

【００４２】¹Ｈ− ¹Ｈスピン結合、ロングレンジの ¹
Ｈ−¹³Ｃ結合およびＮＯＥ(NuclearOverhauser Effect)
の測定結果より、部分構造Ｄの側鎖部（左）の部分構
造がわかった。

【００４３】ロングレンジの ¹Ｈ−¹³Ｃ結合から、β−
ＯＨ−Ｌｅｕの４．８８ｐｐｍのＣＨおよび８．３４ｐ
ｐｍのＮＨと側鎖部の１７７ｐｐｍのカルボニルとにロ
ングレンジの相関が観測されたことにより部分構造Ｄが
推定された。

【００４４】ｄ）新規ペプチドの化学構造について ロングレンジの ¹Ｈ−¹³Ｃ結合から、Ｓｅｒの１７０．
２ｐｐｍのカルボニルとβ−ＯＨ−Ｌｅｕの５．４６ｐ
ｐｍのＣＨとにロングレンジ相関が観測されたことによ
り、部分構造Ｂと部分構造ＤがＳｅｒとβ−ＯＨ−Ｌｅ
ｕの間でエステル結合していることがわかった。また、
β−ＯＨ−Ｌｅｕの５．４６ｐｐｍのＣＨとＰｉｐ（部
分構造Ｃ）の４．３８ｐｐｍのＮＨ、β−ＯＨ−Ｌｅｕ
の８．３４ｐｐｍのＮＨとＰｉｐ（部分構造Ｃ）の２．
８９ｐｐｍのＣＨ₂ ，４．９０ｐｐｍのＣＨとにＮＯＥ
が観測されたことから、部分構造Ｃがβ−ＯＨ−Ｌｅｕ
の１７０．６ｐｐｍのカルボニル基に結合していること
がわかった。残る部分構造Ａの結合方法は一通りであ
り、新規ペプチドの化学構造を決定した。

【００４５】また、Ｓｅｒの６．４０ｐｐｍとＮＨとＮ
−ＣＨ₃ −Ｐｈｅの３．０４ｐｐｍのＣＨ₃ の間にもＮ
ＯＥが観測されていることから、上記構造が正しいこと
が示唆されている。

【００４６】ｅ）ＮＭＲの測定結果は下記の通りであ
る。

【００４７】表６と表７は¹³Ｃシフトと炭素タイプ、お
よび直接結合する ¹Ｈを示し、表８〜表１０は ¹Ｈシフ
ト、スピン結合する ¹Ｈ、¹³Ｃ、およびロングレンジ結
合する¹³Ｃを示し、表１１と表１２はＮＯＥ測定結果を
示し、表１３〜表１６は¹³Ｃおよび ¹Ｈの帰属を示す。

【００４８】

【表６】

【表７】

【表８】

【表９】

【表１０】

【表１１】

【表１２】

【表１３】

【表１４】

【表１５】

【表１６】

【化４】

【化５】

【化６】

【化７】

【化８】

【化９】 製剤の調製例製剤例１ （軟膏剤） 本発明ペプチド １ｍｇ プラスチベース（大正製薬社製） １ｇ 本発明ペプチド１ｍｇを乳鉢を用いて細かく粉砕した
後、プラスチベース１ｇを添加し、これらを乳鉢上でよ
く混合して、軟膏剤を調製した。

【００４９】製剤例２（軟膏剤） 本発明ペプチド ０．２ｍｇ メタノール １２．５μｌ プラスチベース（大正製薬社製） １ｇ 本発明ペプチド０．８ｍｇをメタノール５０μｌに溶解
した後、得られた本発明ペプチド含有メタノールのうち
１２．５μｌを乳鉢上でプラスチベース１ｇとよく混合
して軟膏剤を調製した。

【００５０】製剤例３（液剤） 本発明ペプチド ０．５ｍｇ ＤＭＳＯ ０．１ｍｌ ５重量％アラビアゴム水溶液 １．９ｍｌ 本発明ペプチド０．５ｍｇにＤＭＳＯ ０．１ｍｌを添
加して前者を溶解させた後、得られた本発明ペプチド含
有ＤＭＳＯ溶液０．１ｍｌを少量ずつ攪拌しながら５重
量％アラビアゴム溶液１．９ｍｌに添加し、均一に懸濁
した液剤を調製した。

【００５１】製剤例４（液剤） 本発明ペプチド ０．５ｍｇ 生理食塩水 ２ｍｌ 本発明ペプチド０．５ｍｇに少量の生理食塩水を添加
し、超音波を用いて均一な懸濁液にした後、生理食塩水
を添加して溶液量を２ｍｌとし、液剤を調製した。

【００５２】製剤例５（液剤） 本発明ペプチド ２５ｍｇ エタノール ２．５ｍｌ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０ １ｍｇ 生理食塩水 ９６．５ｍｌ 本発明ペプチド２５ｍｇをエタノール２．５ｍｌに溶解
した後、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０を１ｍｇ
を加えた。得られた溶液を少量ずつ攪拌しながら生理食
塩水９６．５ｍｌに添加し、液剤を調製した。

【００５３】製剤例６（液剤） 本発明ペプチド １０ｍｇ マクロゴール４００ ５０ｍｌ 生理食塩水 適量 本発明ペプチド１０ｍｇをマクロゴール５０ｍｌに溶解
した後、これに生理食塩水を加えて１００ｍｌにし、液
剤を調製した。

【００５４】薬理試験試験例１ 抗菌活性 本発明ペプチドのメタノール溶液（１０，０００μｇ／
ｍｌ）を、最終濃度がそれぞれ２，０００μｇ／ｍｌ、
５００μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌお
よび１μｇ／ｍｌとなるように滅菌水で希釈して、５段
階の希釈液を調製した。約５０℃に保った感受性測定用
培地［細菌：Mueller Hinton Broth (Difco 社製) 、カ
ビ：1.５％寒天加ブドウ糖ペプトン培地（日水製薬社
製）］に各希釈液をそれぞれ１／９量加えて十分に混合
した後、この混合液をシャーレに分注し、固化させて感
受性測定用平板培地（本発明ペプチド２００μｇ／ｍ
ｌ、５０μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍ
ｌおよび０．１μｇ／ｍｌ）を作成した。

【００５５】被験菌として、グラム陽性菌であるスタ
フィロコッカス・アウレウス (Staphylococcus aureus)
IFO 12732［黄色ブドウ球菌］、スタフィロコッカス
・アウレウス (Staphylococcus aureus) IID 1677(meth
icillin-resistant S.aureus;MRSA)、［メチシリン耐性
黄色ブドウ球菌］エンテロコッカス・ファエカリス(E
nterocooccus Faecalis) IFO 12964 ［腸球菌］および
スタフィロコッカス・エピデルミディス (Staphyloco
ccus epidermidis) IFO 13889 ［表皮ブドウ球菌］と、
グラム陰性菌であるシュウドモナス・アルギノサ (Ps
eudomonas aeruginosa) IFO 13275 ［緑膿菌］と、カビ
であるトリコフィトン・メンタグロフィテス (Tricho
phyton mentagrophytes) IFO 6202 ［白癬菌］を用い
た。

【００５６】各被験菌を表１７に示す培地および条件で
培養した。細菌〜については培地Mueller Hinton B
rothを用いて菌数が約１０⁶ ／ｍｌになるように接種用
菌液を調製し、カビについては、滅菌０．００５％ス
ルホコハク酸ジオクチルナトリウム溶液にこれを浮遊さ
せ、菌数が約１０⁶ ／ｍｌとなるように接種用菌液を調
製した。

【００５７】こうして得られた接種用菌液を感受性測定
用平板にプラスチック製ループ（内径約１ｍｍ）で２ｃ
ｍ程度画線塗抹し、細菌〜は３５℃で１８〜２０時
間、カビは２５℃で７日間培養した。

【００５８】所定時間培養後、菌の発育が阻止される最
低濃度をもって最小発育阻止濃度（ＭＩＣ、μｇ／ｍ
ｌ）とした。こうして得られた結果を表１８に示す。

【００５９】

【表１７】

【表１８】 この結果より、本発明ペプチドは現在院内感染などの問
題になっているMRSAを含むグラム陽性菌に対しては非常
に強い菌活性を示すことが認められた。

【００６０】試験例２ 毒性試験 次の方法でラットに対する本発明ペプチドの毒性を調べ
た。まず、本発明ペプチドを、５重量％アラビアゴム水
溶液にジメチルスルホキサイドを５重量％添加して成る
溶液に懸濁し、供試液とした。被験動物としては体重１
２０ｇ〜２００ｇのウイスター雄性ラットを用いた。

【００６１】上記供試液をラットに皮下投与し、死亡状
況を確認した。その結果、２０ｍｇ／ｋｇ投与でも死亡
しなかった。

【００６２】

【発明の効果】本発明により、グラム陽性菌の増殖阻害
に有効である新規抗生物質を提供することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:465） (56)参考文献 特開 平５−25053（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−172194（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−304785（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−123989（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−145065（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 7/52 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 【化１】 で示されるペプチドからなる抗生物質。
2. 【請求項２】 【化２】 で示されるペプチドを有効成分として含む抗菌剤。