JP2002522060A - エキソケリンを合成するための新規方法 - Google Patents
エキソケリンを合成するための新規方法Info
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来技術の欠点を克服する、エキソケリンを合成的に調製するための方法を提供する。
【解決手段】 Ｌ−Ｎ−［（２−ベンジルオキシ−（ベンゾイル）］セリン又はＬ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−（ベンゾイル）］トレオニン、Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン、及びスベリル酸を用いるエキソケリンの合成方法。
Description
【０００１】
本願は、現在は米国特許第 5,721,209号である米国出願 08/383,180 号、現在
は米国特許第 5,786,326号である米国出願 08/796,791 号、米国出願 08/882,12
2 号及び米国出願 08/ 960,714号を、参照することにより、明白に組み込むもの
であり、これらの各々は独占的ライセンスの下にあるか、又は共通の存在に譲渡
されており、この存在は本願の譲受人である。これらの特許及び出願は、全て、
生物学的に調製された精製エキソケリン（Exochelins）の医学的用途を論じてい
る。このエキソケリンは、ここに記載され、かつ請求される合成経路によって調
製される。
は米国特許第 5,786,326号である米国出願 08/796,791 号、米国出願 08/882,12
2 号及び米国出願 08/ 960,714号を、参照することにより、明白に組み込むもの
であり、これらの各々は独占的ライセンスの下にあるか、又は共通の存在に譲渡
されており、この存在は本願の譲受人である。これらの特許及び出願は、全て、
生物学的に調製された精製エキソケリン（Exochelins）の医学的用途を論じてい
る。このエキソケリンは、ここに記載され、かつ請求される合成経路によって調
製される。
【０００２】 本発明は、エキソケリンとして知られる高親和性の鉄結合性化合物を合成生成
するための従来開示されていない方法に関し、特には、エキソケリンを製造する
ための合成方法及びこれらの新たに合成された化合物の、それらの生理学的特性
を変化させるための修飾に関し、これには、哺乳動物における疾患の診断及び治
療へのこれらの新たに合成された実用的な化合物の適用が含まれる。 上で参照される米国特許及び出願は、エキソケリンが独特の生理学的利点を有
することを示している。例えば、急性心筋梗塞においては、心臓組織が２つの連
続的な現象、虚血相における低酸素血症及び再灌流相における酸化的損傷による
損傷を受ける。虚血相において損傷を受けた心筋は虚血領域に血液を再導入する
ことによって救出することができる。しかしながら、再灌流は、組織への白血球
の移動及び反応性酸素種の生成によって生じる炎症性応答の結果として、再灌流
した組織に損傷を与える可能性がある。最も反応性の種の１つがヒドロキシルラ
ジカル（−ＯＨ）であり、これは鉄の存在下で生成し、かつしばしば細胞の死又
は関連酸化性組織損傷を生じる。
するための従来開示されていない方法に関し、特には、エキソケリンを製造する
ための合成方法及びこれらの新たに合成された化合物の、それらの生理学的特性
を変化させるための修飾に関し、これには、哺乳動物における疾患の診断及び治
療へのこれらの新たに合成された実用的な化合物の適用が含まれる。 上で参照される米国特許及び出願は、エキソケリンが独特の生理学的利点を有
することを示している。例えば、急性心筋梗塞においては、心臓組織が２つの連
続的な現象、虚血相における低酸素血症及び再灌流相における酸化的損傷による
損傷を受ける。虚血相において損傷を受けた心筋は虚血領域に血液を再導入する
ことによって救出することができる。しかしながら、再灌流は、組織への白血球
の移動及び反応性酸素種の生成によって生じる炎症性応答の結果として、再灌流
した組織に損傷を与える可能性がある。最も反応性の種の１つがヒドロキシルラ
ジカル（−ＯＨ）であり、これは鉄の存在下で生成し、かつしばしば細胞の死又
は関連酸化性組織損傷を生じる。
【０００３】 （−ＯＨ）の形成を防ぐことで致死性の細胞損傷が幾つかの機構によって防止
される。（−ＯＨ）の形成が遊離の鉄の存在に依存し、かつ鉄キレート剤が再灌
流傷害を防止することは公知である。例えば、鉄キレート剤デスフェロキサミン
は、再灌流以前に投与されたとき、冠状動脈の閉塞及び再灌流の間、傷害を防止
し、かつ心筋梗塞の大きさを減少させる。しかしながら、再灌流傷害は虚血性心
筋への血流が再度確立された直後に生じる。 （−ＯＨ）ラジカルの形成は遊離の鉄の存在に依存し、鉄キレート剤は遊離の
鉄を捕捉して、それによりその鉄を、ヒドロキシルラジカルの形成を触媒するの
に利用不可能なものとすることができる。しかしながら、従来公知のキレート手
段は、フェントン反応（Fenton reaction ）による（−ＯＨ）の生成を防止しな
い（すなわち、ＥＤＴＡ）か、又は細胞への侵入が遅すぎる（すなわち、デスフ
ェロキサミン）かのいずれかである。結果として、十分迅速に作用して（−ＯＨ
）の形成並びにそれが生じる細胞の損傷及び破壊を防止するのに十分な鉄をキレ
ート化するのに十分な量のキレート剤を利用することができない。
される。（−ＯＨ）の形成が遊離の鉄の存在に依存し、かつ鉄キレート剤が再灌
流傷害を防止することは公知である。例えば、鉄キレート剤デスフェロキサミン
は、再灌流以前に投与されたとき、冠状動脈の閉塞及び再灌流の間、傷害を防止
し、かつ心筋梗塞の大きさを減少させる。しかしながら、再灌流傷害は虚血性心
筋への血流が再度確立された直後に生じる。 （−ＯＨ）ラジカルの形成は遊離の鉄の存在に依存し、鉄キレート剤は遊離の
鉄を捕捉して、それによりその鉄を、ヒドロキシルラジカルの形成を触媒するの
に利用不可能なものとすることができる。しかしながら、従来公知のキレート手
段は、フェントン反応（Fenton reaction ）による（−ＯＨ）の生成を防止しな
い（すなわち、ＥＤＴＡ）か、又は細胞への侵入が遅すぎる（すなわち、デスフ
ェロキサミン）かのいずれかである。結果として、十分迅速に作用して（−ＯＨ
）の形成並びにそれが生じる細胞の損傷及び破壊を防止するのに十分な鉄をキレ
ート化するのに十分な量のキレート剤を利用することができない。
【０００４】 デスフェロキサミンは、心筋梗塞の発生前に投与されていれば有効ではあるが
再灌流の開始時又はその後に投与された場合には無効であることが示されている
。心臓組織に対する同様の傷害は心臓バイパス法の結果として、例えば、開心術
の間に生じることがあり、又は他の身体臓器に対する同様の傷害が手術及び傷害
の結果として酸素化血液が欠乏したときに生じることがある。したがって、酸化
性組織傷害の防止には鉄捕捉性キレート剤が明らかに必要である。
再灌流の開始時又はその後に投与された場合には無効であることが示されている
。心臓組織に対する同様の傷害は心臓バイパス法の結果として、例えば、開心術
の間に生じることがあり、又は他の身体臓器に対する同様の傷害が手術及び傷害
の結果として酸素化血液が欠乏したときに生じることがある。したがって、酸化
性組織傷害の防止には鉄捕捉性キレート剤が明らかに必要である。
【０００５】 Horwitz らの開示以前に、英国 Hull 大学の Macham 、Ratledgeと Barclayに
よりエキソケリンと呼ばれる化合物が簡潔に記述され、放線菌の成長におけるそ
れらの一般的な機能も同様に論じられていた（MACHAM, L.P., RATLEDGE, C.と N
OCTON J.C., "Extracellular Iron Acquisition by Mycobacteria: Role of the
Exochelins and Evidence Against the Participation of Mycobactin", Infec tion and Immunity, Dec. 1975, pp.1242-1251. Vol.12, No.6；BARCLAY, R. と
RATLEDGE, C., "Mycobactins and Exochelins of Mycobacterium tuberculosis
, M. bovis, M. africanum and Other Related Species", Journal of General Microbiology , 1988, pp.134, 771-776 ；MACHAM, L.P.と RATLEDGE, C., Journ al of General Microbiology , 1975, pp.89, 379-382）。
よりエキソケリンと呼ばれる化合物が簡潔に記述され、放線菌の成長におけるそ
れらの一般的な機能も同様に論じられていた（MACHAM, L.P., RATLEDGE, C.と N
OCTON J.C., "Extracellular Iron Acquisition by Mycobacteria: Role of the
Exochelins and Evidence Against the Participation of Mycobactin", Infec tion and Immunity, Dec. 1975, pp.1242-1251. Vol.12, No.6；BARCLAY, R. と
RATLEDGE, C., "Mycobactins and Exochelins of Mycobacterium tuberculosis
, M. bovis, M. africanum and Other Related Species", Journal of General Microbiology , 1988, pp.134, 771-776 ；MACHAM, L.P.と RATLEDGE, C., Journ al of General Microbiology , 1975, pp.89, 379-382）。
【０００６】 Machamは細胞外液中に見出される物質の存在を同定し、彼はそれを‘エキソケ
リン' と命名した。Machamはさらに、彼がエキソケリンと命名した物質を、遊離
の鉄をキレート化する能力を有する水溶性かつクロロホルム可溶性化合物として
記述した。Machamらはエキソケリンを単離も精製もしておらず、単にそれらを、
とりわけ７５０〜８００の範囲の分子量を有する、ペンタもしくはヘキサペプチ
ドとして特徴付けた。 Machamらの研究によると、彼の化合物は、細胞壁中に位置して鉄を細胞内部に
透過させる機能をするミコバクチン（mycobactin）との類似性を有している。し
かしながら、細胞外環境に拡散してそこから遊離の鉄を吸収することができない
親油性水不溶性分子であるミコバクチンとは異なり、エキソケリンは生理学的ｐ
Ｈで血清中の他の鉄担持化合物から鉄を隔離する機能を果たす。また、エキソケ
リンの細菌源に依存して、Machamらはこれらの分子がサリチル酸又はベータ−ア
ラニンを含み得ることも開示した。
リン' と命名した。Machamはさらに、彼がエキソケリンと命名した物質を、遊離
の鉄をキレート化する能力を有する水溶性かつクロロホルム可溶性化合物として
記述した。Machamらはエキソケリンを単離も精製もしておらず、単にそれらを、
とりわけ７５０〜８００の範囲の分子量を有する、ペンタもしくはヘキサペプチ
ドとして特徴付けた。 Machamらの研究によると、彼の化合物は、細胞壁中に位置して鉄を細胞内部に
透過させる機能をするミコバクチン（mycobactin）との類似性を有している。し
かしながら、細胞外環境に拡散してそこから遊離の鉄を吸収することができない
親油性水不溶性分子であるミコバクチンとは異なり、エキソケリンは生理学的ｐ
Ｈで血清中の他の鉄担持化合物から鉄を隔離する機能を果たす。また、エキソケ
リンの細菌源に依存して、Machamらはこれらの分子がサリチル酸又はベータ−ア
ラニンを含み得ることも開示した。
【０００７】 Barclay ら（同書）も同様に、Ｍ．ツベルキュロシス（M.tuberculosis）及び
関連種の２２の異なる株からのエキソケリンの生成を記述した。しかしながら、
これらも他のいかなる従来の既知研究者も、エキソケリンの具体的な構造を決定
してはおらず、細胞壁内に位置するミコバクチンへの鉄の輸送媒体としてのそれ
らの機能以外のそれらのいかなる用途をも同定してはいなかった。 要するに、Machamらは、例えばフェリチンもしくはトランスフェリン（及び血
清中に見出される同様の鉄担持化合物）から、鉄が隔離された後に隔離された鉄
がミコバクチンに移送することができる形態で存在することを認識していたが、
これに対して Barclayらは既知放線菌株からのエキソケリンの生成を、それらの
構造を正確に明らかにすることなく記述した。
関連種の２２の異なる株からのエキソケリンの生成を記述した。しかしながら、
これらも他のいかなる従来の既知研究者も、エキソケリンの具体的な構造を決定
してはおらず、細胞壁内に位置するミコバクチンへの鉄の輸送媒体としてのそれ
らの機能以外のそれらのいかなる用途をも同定してはいなかった。 要するに、Machamらは、例えばフェリチンもしくはトランスフェリン（及び血
清中に見出される同様の鉄担持化合物）から、鉄が隔離された後に隔離された鉄
がミコバクチンに移送することができる形態で存在することを認識していたが、
これに対して Barclayらは既知放線菌株からのエキソケリンの生成を、それらの
構造を正確に明らかにすることなく記述した。
【０００８】 関連化合物、ミコバクチンＳ２の全合成は Maurer と Miller によって１９８
３年に報告された（MAUER, P.J. と MILLER, M.J. "Total Synthesis of a Myco
bactin: Mycobactin S2", 1983, J. Am. Chem. Soc., pp.240-245, Vol.105）。
Maucr らは複雑な多工程合成経路を用いて２９ミリグラムのミコバクチンを調製
することに成功した。しかしながら、ミコバクチンＳ２は本発明の合成による標
的化合物とは大きく異なる。同様に、エクソケリンの合成は現在まで未報告のま
まである。
３年に報告された（MAUER, P.J. と MILLER, M.J. "Total Synthesis of a Myco
bactin: Mycobactin S2", 1983, J. Am. Chem. Soc., pp.240-245, Vol.105）。
Maucr らは複雑な多工程合成経路を用いて２９ミリグラムのミコバクチンを調製
することに成功した。しかしながら、ミコバクチンＳ２は本発明の合成による標
的化合物とは大きく異なる。同様に、エクソケリンの合成は現在まで未報告のま
まである。
【０００９】 以下の参考文献は本発明による合成に関連する技術を提供する： MAUER, P.J. と MILLER, M.J., 1982, J. Am. Chem. Soc., 104, 3096 ； FARKAS, L.ら, 1967, Tetrahedron, 23, 741； SCHNIEPP, L.E.と GELLER, H.H., 1946, J. Am. Chem. Soc., 68, 1646； GAUDRY, R., 1948, Can. J. Res. Sect. B, 26, 387 ； DREYFUSS, P., 1974, J. Med. Chem., 17(2), 252 ； BERLINGUET, L.と GAUDRY, R., 1952, J. Biol. Chem., 198, 765 ； BODANSZKY, M. ら, 1978, J. Med. Chem., 21(10), 1030 ； MAURER, P.J.と MILLER, M.J. 1981, J. Org. Chem. Soc., 46(13), 2835； BIRNBAUM, S.M., LEVINTOW, L. KINGSLEY, R.B. と GREENSTEIN, J.P., 195
2, J. Biol. Chem., 194, 455 ； COREY, E.J. と VANKATESWARLU, A., 1972, J. Am. Chem. Soc., 94, 6190
； SIEBER, P., 1977, Helv. Chim. Acta, 60, 2711 (b)； GERLACH, H., 1977, Helv. Chim. Acta, 60, 3039 ； MITSUNOBU, O., 1981, Synthesis, 1981, 1 。
2, J. Biol. Chem., 194, 455 ； COREY, E.J. と VANKATESWARLU, A., 1972, J. Am. Chem. Soc., 94, 6190
； SIEBER, P., 1977, Helv. Chim. Acta, 60, 2711 (b)； GERLACH, H., 1977, Helv. Chim. Acta, 60, 3039 ； MITSUNOBU, O., 1981, Synthesis, 1981, 1 。
【００１０】 Horwitz らは現在受け入れられているエキソケリンの構造的な性質を発見し、
再灌流の間に生じる鉄介在オキシダント傷害を防止するための新規鉄キレート剤
としてのその使用の特許を得ており、かつ癌、アテローム性動脈硬化及び血管形
成術後の血管閉塞に加えて移植用臓器の保存を含む生活組織に対する他のヒドロ
キシルラジカル関連侵襲に対する係属中の特許出願を有している。参照すること
により組み込まれる、上で参照される出願及び米国特許を参照のこと。 同様に、関連化合物の合成は、合成バージョンの、そのような重要で必要とさ
れる化合物に対する医学的な必要性及びその生成を強く示唆する。例えば、HU,
J.と MILLER, M.J., "Total Synthesis of a Mycobactin a Siderophore and Gr
owth Promoter of Mycobacterium Smegmatis, and Determination of its Growt
h Inhibitory Activity against Mycobacterium tuberculosis", 1997, pp.3462
-3468, J. Chem. Soc. 119を参照のこと。しかしながら、所望の化合物の合成に
おける複雑性は既知の手順の改変を必要とし、様々な立体化学的な制約が従来合
成経路によるエキソケリンの生成を妨げている。
再灌流の間に生じる鉄介在オキシダント傷害を防止するための新規鉄キレート剤
としてのその使用の特許を得ており、かつ癌、アテローム性動脈硬化及び血管形
成術後の血管閉塞に加えて移植用臓器の保存を含む生活組織に対する他のヒドロ
キシルラジカル関連侵襲に対する係属中の特許出願を有している。参照すること
により組み込まれる、上で参照される出願及び米国特許を参照のこと。 同様に、関連化合物の合成は、合成バージョンの、そのような重要で必要とさ
れる化合物に対する医学的な必要性及びその生成を強く示唆する。例えば、HU,
J.と MILLER, M.J., "Total Synthesis of a Mycobactin a Siderophore and Gr
owth Promoter of Mycobacterium Smegmatis, and Determination of its Growt
h Inhibitory Activity against Mycobacterium tuberculosis", 1997, pp.3462
-3468, J. Chem. Soc. 119を参照のこと。しかしながら、所望の化合物の合成に
おける複雑性は既知の手順の改変を必要とし、様々な立体化学的な制約が従来合
成経路によるエキソケリンの生成を妨げている。
【００１１】 現在では生活組織の酸化的損傷を防止するための手段として認識されている鉄
のキレート化をもってすると、エキソケリン及び関連化合物は潜在的な用途に富
む。鉄担持タンパク質から鉄を除去することが可能である生理学的系における鉄
捕捉剤として、エキソケリンは血流が中断された後の細胞の破壊を有効に防止す
る。同様に、他の金属のキレート化が、身体への様々な望ましい金属の搬送、エ
キソケリンに結合した有益な薬物を用いる疾患臓器のターゲッティング、又は同
様の合成輸送手段を含む、様々な他の治療上の設定におけるそれら金属の濃度の
調節を可能にする。
のキレート化をもってすると、エキソケリン及び関連化合物は潜在的な用途に富
む。鉄担持タンパク質から鉄を除去することが可能である生理学的系における鉄
捕捉剤として、エキソケリンは血流が中断された後の細胞の破壊を有効に防止す
る。同様に、他の金属のキレート化が、身体への様々な望ましい金属の搬送、エ
キソケリンに結合した有益な薬物を用いる疾患臓器のターゲッティング、又は同
様の合成輸送手段を含む、様々な他の治療上の設定におけるそれら金属の濃度の
調節を可能にする。
【００１２】 Horwitz らの従来の研究では生物学的源から精製エキソケリンが得られており
、遊離の鉄の捕捉剤としてのそれらの有用性及び組織損傷性ヒドロキシルラジカ
ルの形成又はひとたびヒドロキシルラジカルが形成されたときの組織に対する損
傷を防止する上でのそれらの有効性が示された。特には、Horwitz らはＭ．ツベ
ルキュロシスからエキソケリンを精製し、それらが、結核菌のいかなる感染特性
をも移すことなく、生理学的ｐＨでトランスフェリン、ラクトフェリン及びフェ
リチンから鉄を有効に除去することを示した。同様に、Horwitz らは、これらの
エキソケリンがフェントン反応によるヒドロキシルラジカルの形成を遮断し、か
つ、心筋細胞の応答に基づいて、心筋梗塞後の再灌流傷害又は他の組織に対する
血管性の侵襲を、そのような症状の後数時間に加えて攻撃が生じた後に投与され
たとき、防止するのに有効であることを最初に示す責を負った。
、遊離の鉄の捕捉剤としてのそれらの有用性及び組織損傷性ヒドロキシルラジカ
ルの形成又はひとたびヒドロキシルラジカルが形成されたときの組織に対する損
傷を防止する上でのそれらの有効性が示された。特には、Horwitz らはＭ．ツベ
ルキュロシスからエキソケリンを精製し、それらが、結核菌のいかなる感染特性
をも移すことなく、生理学的ｐＨでトランスフェリン、ラクトフェリン及びフェ
リチンから鉄を有効に除去することを示した。同様に、Horwitz らは、これらの
エキソケリンがフェントン反応によるヒドロキシルラジカルの形成を遮断し、か
つ、心筋細胞の応答に基づいて、心筋梗塞後の再灌流傷害又は他の組織に対する
血管性の侵襲を、そのような症状の後数時間に加えて攻撃が生じた後に投与され
たとき、防止するのに有効であることを最初に示す責を負った。
【００１３】 さらに、Horwitz らは、エキソケリンの化学構造の解明において、上記従来の
参考文献が実際の構造を定義できておらず、その代わりに、エキソケリンをペプ
チドとして特徴付けていることを記述した。エキソケリンファミリーの実際の構
造を同定しようとするこれらの不成功に終わった試みも、同様に、それらの合成
の着手又は達成を妨げている。エキソケリンが示す広範囲の分子量を明らかにす
ることにより、Horwitz らは、分子量に識別し得る差を有する数組の化合物が組
分けで適切に含まれることを発見している。エキソケリンはペプチドであるとは
考えることができず、その代わりに、３つのアミノ酸並びにアミド（−ＮＨ−Ｃ
Ｏ−）、ヒドロキサメート（−Ｎ（ＯＨ）−ＣＯ−）及びエステル縮合（−ＣＯ
−Ｏ）によって形成される他の構造部分（サリチル酸、ジカルボン酸もしくはモ
ノエステル類似体、及びヒドロキシカルボン酸）を含む。
参考文献が実際の構造を定義できておらず、その代わりに、エキソケリンをペプ
チドとして特徴付けていることを記述した。エキソケリンファミリーの実際の構
造を同定しようとするこれらの不成功に終わった試みも、同様に、それらの合成
の着手又は達成を妨げている。エキソケリンが示す広範囲の分子量を明らかにす
ることにより、Horwitz らは、分子量に識別し得る差を有する数組の化合物が組
分けで適切に含まれることを発見している。エキソケリンはペプチドであるとは
考えることができず、その代わりに、３つのアミノ酸並びにアミド（−ＮＨ−Ｃ
Ｏ−）、ヒドロキサメート（−Ｎ（ＯＨ）−ＣＯ−）及びエステル縮合（−ＣＯ
−Ｏ）によって形成される他の構造部分（サリチル酸、ジカルボン酸もしくはモ
ノエステル類似体、及びヒドロキシカルボン酸）を含む。
【００１４】 同様に、同時係属米国出願 08/882,122 号においては、鉄の剥奪が、エキソケ
リンが特によく指向する様式によって癌細胞を攻撃することが示されている。そ
れらの鉄に対する非常に高い親和性及び脂質可溶性のため、例えばミコバクテリ
ウム・ツベルキュロシスの、エキソケリンは細胞に侵入する能力が高められてい
る。脂質溶解性を有する合成鉄キレート剤は、明らかに、癌の診断、治療及びス
クリーニングへの取り組みを支援する。 明らかに、迅速な金属のキレート化に有効な改善された合成作用物質又は化合
物に対する長年の要求が存在し、これは、それらが心筋梗塞の相殺、並びに癌及
び遊離金属の存在によって追い込まれる他の関連医学的条件の治療、又はヒドロ
キシルラジカル並びに細胞の死及び破壊をもたらす関連機構によって損傷し得る
組織の保護に利用可能となるためである。
リンが特によく指向する様式によって癌細胞を攻撃することが示されている。そ
れらの鉄に対する非常に高い親和性及び脂質可溶性のため、例えばミコバクテリ
ウム・ツベルキュロシスの、エキソケリンは細胞に侵入する能力が高められてい
る。脂質溶解性を有する合成鉄キレート剤は、明らかに、癌の診断、治療及びス
クリーニングへの取り組みを支援する。 明らかに、迅速な金属のキレート化に有効な改善された合成作用物質又は化合
物に対する長年の要求が存在し、これは、それらが心筋梗塞の相殺、並びに癌及
び遊離金属の存在によって追い込まれる他の関連医学的条件の治療、又はヒドロ
キシルラジカル並びに細胞の死及び破壊をもたらす関連機構によって損傷し得る
組織の保護に利用可能となるためである。
【００１５】
したがって、本発明の目的は、従来技術の欠点を克服する、エキソケリンを合
成的に調製するための方法を提供することにある。 本発明のさらなる目的は、全ての点で Horwitzらが単離した天然物質と同様の
挙動を示す化合物を合成することである。 本発明のさらなる目的は、溶液中の第二鉄を迅速にキレート化する合成脱第２
鉄エキソケリン（Desferri Exochelin）７８６ＳＭ（Ｒ）の調製方法を提供する
ことである。 本発明のさらなる目的は、他の金属のうちでも鉄を迅速に結合するのに有効な
脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の化学的合成に備えることである。 本発明のさらなる目的は、アセトニトリルと同じ濃度で天然分子として逆相Ｈ
ＰＬＣ（フェニルカラム）で溶出する、合成で調製されたエキソケリン化合物を
提供することである。 本発明のさらに別の目的は、生活組織に対する酸化的損傷の防止において用い
るため、産業スケールで合成エキソケリンを生成するための簡素化されたプロセ
スデザインを提供することである。
成的に調製するための方法を提供することにある。 本発明のさらなる目的は、全ての点で Horwitzらが単離した天然物質と同様の
挙動を示す化合物を合成することである。 本発明のさらなる目的は、溶液中の第二鉄を迅速にキレート化する合成脱第２
鉄エキソケリン（Desferri Exochelin）７８６ＳＭ（Ｒ）の調製方法を提供する
ことである。 本発明のさらなる目的は、他の金属のうちでも鉄を迅速に結合するのに有効な
脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の化学的合成に備えることである。 本発明のさらなる目的は、アセトニトリルと同じ濃度で天然分子として逆相Ｈ
ＰＬＣ（フェニルカラム）で溶出する、合成で調製されたエキソケリン化合物を
提供することである。 本発明のさらに別の目的は、生活組織に対する酸化的損傷の防止において用い
るため、産業スケールで合成エキソケリンを生成するための簡素化されたプロセ
スデザインを提供することである。
【００１６】 簡潔に述べると、非環式ヒドロキサメートにカップリングするメチルエステル
で終止する６炭素鎖を４つの立体原性（stereogenic ）中心と共に有し、３つの
Ｓ異性体及びＢサブユニットでのＲ配置を含む新規分子である、エキソケリン７
８６ＳＭ（Ｒ）を生成するための合成方法が提供される。 本発明の特徴によると、エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の合成方法であって、
Ｎ−（２−ベンジルオキシ−ベンゾイル）−Ｌ−セリンを生成する工程、Ｄ，Ｌ
−ε−ヒドロキシノルロイシンを調製する工程、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ε−ヒ
ドロキシノルロイシンを生成する工程、Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノ
ルロイシンを生成する工程、Ｏ−ベンジルメチルスベリル（suberyl ）ヒドロキ
サメートを生成する工程、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチル
シリルエチルエステルを提供する工程、Ｏ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサ
メートをＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチルエス
テルとカップリングさせてＬ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（
ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエチルエステルを得る工程、Ｌ−
Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−ト
リメチルシリルエチルエステルのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除
去して置換リジンを得る工程、及びそれをＬ−Ｎ−２−［ベンジルオキシ（ベン
ゾイル）］セリンとカップリングさせてジベンジルエキソケリン酸（Exochelic
acid）の２−トリメチルシリルエチルエステルを得る工程、ジベンジルエキソケ
リン酸の２−トリメチルシリルエチルエステルをジベンジルエキソケリン酸に変
換する工程、ベンジルエピコバクチン（epi-cobactin）を調製する工程、ジベン
ジルエキソケリン酸とベンジルエピコバクチンとの間にエステル結合を形成する
工程；並びに、エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）を合成するため、それらから３つ
のベンジル基を水素化分解的に除去する工程を含む方法が提供される。
で終止する６炭素鎖を４つの立体原性（stereogenic ）中心と共に有し、３つの
Ｓ異性体及びＢサブユニットでのＲ配置を含む新規分子である、エキソケリン７
８６ＳＭ（Ｒ）を生成するための合成方法が提供される。 本発明の特徴によると、エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の合成方法であって、
Ｎ−（２−ベンジルオキシ−ベンゾイル）−Ｌ−セリンを生成する工程、Ｄ，Ｌ
−ε−ヒドロキシノルロイシンを調製する工程、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ε−ヒ
ドロキシノルロイシンを生成する工程、Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノ
ルロイシンを生成する工程、Ｏ−ベンジルメチルスベリル（suberyl ）ヒドロキ
サメートを生成する工程、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチル
シリルエチルエステルを提供する工程、Ｏ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサ
メートをＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチルエス
テルとカップリングさせてＬ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（
ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエチルエステルを得る工程、Ｌ−
Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−ト
リメチルシリルエチルエステルのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除
去して置換リジンを得る工程、及びそれをＬ−Ｎ−２−［ベンジルオキシ（ベン
ゾイル）］セリンとカップリングさせてジベンジルエキソケリン酸（Exochelic
acid）の２−トリメチルシリルエチルエステルを得る工程、ジベンジルエキソケ
リン酸の２−トリメチルシリルエチルエステルをジベンジルエキソケリン酸に変
換する工程、ベンジルエピコバクチン（epi-cobactin）を調製する工程、ジベン
ジルエキソケリン酸とベンジルエピコバクチンとの間にエステル結合を形成する
工程；並びに、エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）を合成するため、それらから３つ
のベンジル基を水素化分解的に除去する工程を含む方法が提供される。
【００１７】 本発明の上述の、及び他の目的、特徴及び利点は、本発明による合成方法の一
組の態様を概述して説明する添付の図面、表及び式と共に以下の説明を読むこと
から明らかになり、ここでは、同じ参照指示数が共通の化学種部分及び官能基を
表すのに通して用いられる。 本発明のこれらの、及び他の特徴、側面及び利点は以下の説明、添付の請求の
範囲、及び添付の図面を参照することでよりよく理解されるようになる。
組の態様を概述して説明する添付の図面、表及び式と共に以下の説明を読むこと
から明らかになり、ここでは、同じ参照指示数が共通の化学種部分及び官能基を
表すのに通して用いられる。 本発明のこれらの、及び他の特徴、側面及び利点は以下の説明、添付の請求の
範囲、及び添付の図面を参照することでよりよく理解されるようになる。
【００１８】
本発明者らは、出願人の同時係属出願及び米国特許に記載されるように、エキ
ソケリンが、組織の鉄介在触媒及びヒドロキシルラジカルが介在するフリーラジ
カル反応から生じる組織への酸化的損傷を遮断するか、又は大きく減少させるこ
とが見出されていることを発見している。特には、そのような効果は、少なくと
も再灌流傷害、動脈硬化白内障（cateract）形成、癌及び生活組織に対する他の
分解性（degredative ）傷害に関与することが示されている。 同様に、エキソケリンは、再灌流の開始時又はそれと同時に投与されたときに
再灌流傷害を、及び血管形成術後の動脈閉塞を有効に防止し、又は少なくとも遅
延させ、並びに癌を治療するための化学療法の結果生じる正常組織に対する損傷
を低減させることが示されている。さらに本発明者らは、エキソケリンが、Mach
amら及び Barclayらによって最初に理論付けられたものよりも広範な、異なる化
学構造を有する物質のクラスを含むことを従来開示している。
ソケリンが、組織の鉄介在触媒及びヒドロキシルラジカルが介在するフリーラジ
カル反応から生じる組織への酸化的損傷を遮断するか、又は大きく減少させるこ
とが見出されていることを発見している。特には、そのような効果は、少なくと
も再灌流傷害、動脈硬化白内障（cateract）形成、癌及び生活組織に対する他の
分解性（degredative ）傷害に関与することが示されている。 同様に、エキソケリンは、再灌流の開始時又はそれと同時に投与されたときに
再灌流傷害を、及び血管形成術後の動脈閉塞を有効に防止し、又は少なくとも遅
延させ、並びに癌を治療するための化学療法の結果生じる正常組織に対する損傷
を低減させることが示されている。さらに本発明者らは、エキソケリンが、Mach
amら及び Barclayらによって最初に理論付けられたものよりも広範な、異なる化
学構造を有する物質のクラスを含むことを従来開示している。
【００１９】 エキソケリンは今や広範囲の金属をキレート化することが知られており、適切
に修飾された場合には、指定された疾患の治療、（とりわけ）癌細胞の攻撃並び
に疾患の存在を検出することによる診断及び監視機能の補助に用いることができ
る。例えば、神経芽種細胞は、健常組織に対する有害な影響を伴うデスフェリオ
キサミンを用いる鉄の除去により、ネガティブに影響を受け得る。同様に、白血
病の間に用いられるもののような化学療法はしばしば（輸液と同様の）鉄の過負
荷を生じ、エキソケリンはその治療に有効であることが示されている。 ここで図を、特には図１ａ及び１ｂを参照すると、標的分子エキソケリン７８
６ＳＭ（Ｒ）がミコバクチンＳ２と比較及び対照させて示されている。この分子
は構造がミコバクチンＳ２に類似するが、大きな相違が存在する。エキソケリン
７８６ＳＭ（Ｒ）は非環式ヒドロキサメートにカップリングするメチルエステル
で終止する８炭素鎖を有する（サブユニットＦ、図１ｃ）が、ミコバクチンＳ２
は対応する位置にメチル基のみを含む。他の構造上の変化は自然状態での立体化
学である。各々の化合物は４つの立体源中心を有し、ミコバクチンＳ２の場合に
は、これらは全てＳ配置として現れる。しかしながら、エキソケリン７８６ＳＭ
（Ｒ）はサブユニットＢにＲ配置を有する。残りの３つの中心はミコバクチンＳ
２と同様にＳ−異性体として現れる。これらの相違により、標的分子を合成する
ために確立された手順の適切な改変を用いることが求められる。
に修飾された場合には、指定された疾患の治療、（とりわけ）癌細胞の攻撃並び
に疾患の存在を検出することによる診断及び監視機能の補助に用いることができ
る。例えば、神経芽種細胞は、健常組織に対する有害な影響を伴うデスフェリオ
キサミンを用いる鉄の除去により、ネガティブに影響を受け得る。同様に、白血
病の間に用いられるもののような化学療法はしばしば（輸液と同様の）鉄の過負
荷を生じ、エキソケリンはその治療に有効であることが示されている。 ここで図を、特には図１ａ及び１ｂを参照すると、標的分子エキソケリン７８
６ＳＭ（Ｒ）がミコバクチンＳ２と比較及び対照させて示されている。この分子
は構造がミコバクチンＳ２に類似するが、大きな相違が存在する。エキソケリン
７８６ＳＭ（Ｒ）は非環式ヒドロキサメートにカップリングするメチルエステル
で終止する８炭素鎖を有する（サブユニットＦ、図１ｃ）が、ミコバクチンＳ２
は対応する位置にメチル基のみを含む。他の構造上の変化は自然状態での立体化
学である。各々の化合物は４つの立体源中心を有し、ミコバクチンＳ２の場合に
は、これらは全てＳ配置として現れる。しかしながら、エキソケリン７８６ＳＭ
（Ｒ）はサブユニットＢにＲ配置を有する。残りの３つの中心はミコバクチンＳ
２と同様にＳ−異性体として現れる。これらの相違により、標的分子を合成する
ために確立された手順の適切な改変を用いることが求められる。
【００２０】 図１ｃ（特には、Ａ〜Ｆと命名される標的分子の機能的ユニットの区画分けさ
れた図）を参照して、この合成の最初の目的はエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の
Ｅ／Ｄサブユニットの調製であった。 図２、スキームＩを参照すると、図示される合成部分はミコバクチンＳ２の調
製において用いられるものと同一である。この第１工程は、Farkasらによる、還
流Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中での塩化ベンジル及び無水炭酸カ
リウムを用いるサリチル酸２からベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート３
への変換を含んでいた。その後、粗製生成物をメタノール性水酸化ナトリウムで
加水分解して２−ベンジルオキシ安息香酸を９５％の総収率で得た。
れた図）を参照して、この合成の最初の目的はエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の
Ｅ／Ｄサブユニットの調製であった。 図２、スキームＩを参照すると、図示される合成部分はミコバクチンＳ２の調
製において用いられるものと同一である。この第１工程は、Farkasらによる、還
流Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中での塩化ベンジル及び無水炭酸カ
リウムを用いるサリチル酸２からベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート３
への変換を含んでいた。その後、粗製生成物をメタノール性水酸化ナトリウムで
加水分解して２−ベンジルオキシ安息香酸を９５％の総収率で得た。
【００２１】 次に、２−ベンジルオキシ安息香酸４を酢酸エチル中でｐ−ニトロフェノール
５及びジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と反応させることで、後処理
の後、４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ）ベンゾエート６が４５％の
収率で生成した。ベンゾエート６をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）／水中におい
てＬ−セリン７及びトリエチルアミン（ＴＥＡ）で処理することにより、エキソ
ケリンＳＭ（Ｒ）の保護Ｅ／Ｄ断片８が７９％の収率で得られた。このセグメン
トを次にＣ／Ｆ断片の保護形態と反応させることで、標的化合物の最も大きいサ
ブユニットを生成させる。 ここで図３を参照すると、本発明による合成の次の目的はエキソケリン７８６
ＳＭ（Ｒ）のＡ及びＣサブユニットの鍵となる化合物の調製であった。これらの
断片の両者は同じ基本要素Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４を含む。
５及びジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と反応させることで、後処理
の後、４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ）ベンゾエート６が４５％の
収率で生成した。ベンゾエート６をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）／水中におい
てＬ−セリン７及びトリエチルアミン（ＴＥＡ）で処理することにより、エキソ
ケリンＳＭ（Ｒ）の保護Ｅ／Ｄ断片８が７９％の収率で得られた。このセグメン
トを次にＣ／Ｆ断片の保護形態と反応させることで、標的化合物の最も大きいサ
ブユニットを生成させる。 ここで図３を参照すると、本発明による合成の次の目的はエキソケリン７８６
ＳＭ（Ｒ）のＡ及びＣサブユニットの鍵となる化合物の調製であった。これらの
断片の両者は同じ基本要素Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４を含む。
【００２２】 上で論じられるように、本発明の方法の好ましい態様による経路ではアミノ酸
Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンが主要シントンとして用いられる。この合成で
は、安価で容易に入手可能な非対称性出発物質をラセミ−ヒドロキシノルロイシ
ンＤＬ−１４の調製に用いる。酵素的分離によりＬ−異性体を得、それを様々な
保護及びカップリング反応に処してエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の必要な断片
を得る。 スキームII（図３）に示される手順の第１工程は、塩酸で触媒する３，４−ジ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン９の水性加水分解である。その結果生じる中間アルデヒド
１０を亜硫酸水素ナトリウム（主としてＮａ2 Ｓ2 Ｏ5 であり、水中に溶解する
と２当量のＮａＨＳＯ3 を生じる）で処理することで中和後に亜硫酸水素付加生
成物１１が形成され、次にそれをシアン化カリウムで処理することでシアノヒド
リン１２が in situで生成する。この物質を僅かに異なる抽出後処理を用いて単
離し、水中において炭酸アンモニウムで処理することで、純粋なヒダントイン１
３がある場合には４２．５％の収率で、第２の場合には３７％の収率で生成した
。このヒダントイン１３の試料をオートクレーブ内、約１２６℃で水酸化バリウ
ムを用いて加水分化することで、後処理及び水／イソプロパノールからの再結晶
化の後、収率３８％で純粋Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンＤＬ−１４が生
成した。組成の検証は独立した研究室で元素分析により達成した。
Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンが主要シントンとして用いられる。この合成で
は、安価で容易に入手可能な非対称性出発物質をラセミ−ヒドロキシノルロイシ
ンＤＬ−１４の調製に用いる。酵素的分離によりＬ−異性体を得、それを様々な
保護及びカップリング反応に処してエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の必要な断片
を得る。 スキームII（図３）に示される手順の第１工程は、塩酸で触媒する３，４−ジ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン９の水性加水分解である。その結果生じる中間アルデヒド
１０を亜硫酸水素ナトリウム（主としてＮａ2 Ｓ2 Ｏ5 であり、水中に溶解する
と２当量のＮａＨＳＯ3 を生じる）で処理することで中和後に亜硫酸水素付加生
成物１１が形成され、次にそれをシアン化カリウムで処理することでシアノヒド
リン１２が in situで生成する。この物質を僅かに異なる抽出後処理を用いて単
離し、水中において炭酸アンモニウムで処理することで、純粋なヒダントイン１
３がある場合には４２．５％の収率で、第２の場合には３７％の収率で生成した
。このヒダントイン１３の試料をオートクレーブ内、約１２６℃で水酸化バリウ
ムを用いて加水分化することで、後処理及び水／イソプロパノールからの再結晶
化の後、収率３８％で純粋Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンＤＬ−１４が生
成した。組成の検証は独立した研究室で元素分析により達成した。
【００２３】 Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンＤＬ−１４を水溶液中でｐ−ニトロフェ
ニルアセテート１５及びトリエチルアミン（ＴＥＡ）と反応させることでＮ−ア
セチル−Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１６が生成した。この物質は、お
そらくは中和プロセスに由来する塩酸トリエチルアミンで、幾らか汚染されてい
たが、パイロット分割反応では不純なＮ−アセテートから比較的純粋なＬ−ε−
ヒドロキシ−ノルロイシンを得ることができることが示された。この反応をスケ
ールアップし、約３６０グラムの粗製Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノ
ルロイシン１６を生成した。
ニルアセテート１５及びトリエチルアミン（ＴＥＡ）と反応させることでＮ−ア
セチル−Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１６が生成した。この物質は、お
そらくは中和プロセスに由来する塩酸トリエチルアミンで、幾らか汚染されてい
たが、パイロット分割反応では不純なＮ−アセテートから比較的純粋なＬ−ε−
ヒドロキシ−ノルロイシンを得ることができることが示された。この反応をスケ
ールアップし、約３６０グラムの粗製Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノ
ルロイシン１６を生成した。
【００２４】 歴史的には、Ｎ−アセチル−ヒドロキシノルロイシンは、ブタ腎臓アシラーゼ
を用いる酵素触媒加水分解によってＬ−ε−ヒドロキシ−ノルロイシンに分割さ
れている。当業者はアスペルギルス（Aspergillus ）種に由来するアシラーゼＩ
を日常的に分割に用いており、この源からの酵素が標的反応に等しく作用するこ
とを見出している。生成物であるＬ−ε−ヒドロキシノルロイシンはキラル薄層
クロマトグラフィーによって鏡像異性的に純粋であることが示された（Ｄ−異性
体が検出されない）が、シリカゲルクロマトグラフィーによって示されるように
、極性の小さい不純物が依然としてその物質中に存在していた（＜５％）。これ
は旋光度データによって支持される。
を用いる酵素触媒加水分解によってＬ−ε−ヒドロキシ−ノルロイシンに分割さ
れている。当業者はアスペルギルス（Aspergillus ）種に由来するアシラーゼＩ
を日常的に分割に用いており、この源からの酵素が標的反応に等しく作用するこ
とを見出している。生成物であるＬ−ε−ヒドロキシノルロイシンはキラル薄層
クロマトグラフィーによって鏡像異性的に純粋であることが示された（Ｄ−異性
体が検出されない）が、シリカゲルクロマトグラフィーによって示されるように
、極性の小さい不純物が依然としてその物質中に存在していた（＜５％）。これ
は旋光度データによって支持される。
【００２５】 将来的な合成操作のため、Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンＬ−１４をテトラ
ヒドロフラン／水中においてジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート及びトリエチ
ルアミンで処理し、このアミノ酸のＮ−末端をＢＯＣ誘導体としてブロックした
。この反応を３つのバッチで行ったところ、約４０ｇのＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−ε
−ヒドロキシノルロイシンＬ−１７が生じた。これらのバッチの累積的な収率は
、アミノ酸ＤＬ−１４から出発する系列の３つの工程について１７．６、３１．
１、及び３０％であった。最初の２つの物質試料（１．５及び１３．５グラム）
は薄層クロマトグラフィーによって＞９９％純粋であることが示され、旋光度デ
ータによって光学的に純粋であることが示された。ＢＯＣ誘導体の試料をトリフ
ルオロ酢酸で加水分解し、ラセミ化が生じていないことを保証した。得られたア
ミノ酸の CHIRALPLATE（商標）クロマトグラフィー分析により、その生成物が光
学的に純粋なＬ−異性体であることが確認された。
ヒドロフラン／水中においてジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート及びトリエチ
ルアミンで処理し、このアミノ酸のＮ−末端をＢＯＣ誘導体としてブロックした
。この反応を３つのバッチで行ったところ、約４０ｇのＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−ε
−ヒドロキシノルロイシンＬ−１７が生じた。これらのバッチの累積的な収率は
、アミノ酸ＤＬ−１４から出発する系列の３つの工程について１７．６、３１．
１、及び３０％であった。最初の２つの物質試料（１．５及び１３．５グラム）
は薄層クロマトグラフィーによって＞９９％純粋であることが示され、旋光度デ
ータによって光学的に純粋であることが示された。ＢＯＣ誘導体の試料をトリフ
ルオロ酢酸で加水分解し、ラセミ化が生じていないことを保証した。得られたア
ミノ酸の CHIRALPLATE（商標）クロマトグラフィー分析により、その生成物が光
学的に純粋なＬ−異性体であることが確認された。
【００２６】 ここで図４（スキームIII ）を参照して、Ｆ部分の調製は、ＴＨＦ中、過剰の
ピリジンの存在下で、Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩１８を塩化メチル
スベリル１９と反応させることにより達成した。標準的な後処理及び生成物の単
離により９５％の収率で粗製ヒドロキサメート２０が得られ、これはＴＬＣ及び 1 Ｈ ＮＭＲ分析によって次のサブユニットＣとのカップリングにおいて用いる
のに十分な純度であるものと判定された。 ここで図５（スキームIV）を参照して、前に調製したＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε
−ヒドロキシノルロイシン１７をＯ−メチル−Ｎ，Ｎ' −ジイソプロピルイソ尿
素と反応させて粗製メチルエステル生成物２１を得た。この生成物をさらに精製
することなくＴＨＦ中でトリフェニルホスフィン／四臭化炭素と反応させた後、
クロマトグラフィー精製することでＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシンメ
チルエステル２２を得た。これらの２つの工程の収率は７１％であった。この物
質は、1 Ｈ ＮＭＲ及び旋光度分析により、文献で報告されるものと同一である
ことが示された。図９を参照のこと。
ピリジンの存在下で、Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩１８を塩化メチル
スベリル１９と反応させることにより達成した。標準的な後処理及び生成物の単
離により９５％の収率で粗製ヒドロキサメート２０が得られ、これはＴＬＣ及び 1 Ｈ ＮＭＲ分析によって次のサブユニットＣとのカップリングにおいて用いる
のに十分な純度であるものと判定された。 ここで図５（スキームIV）を参照して、前に調製したＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε
−ヒドロキシノルロイシン１７をＯ−メチル−Ｎ，Ｎ' −ジイソプロピルイソ尿
素と反応させて粗製メチルエステル生成物２１を得た。この生成物をさらに精製
することなくＴＨＦ中でトリフェニルホスフィン／四臭化炭素と反応させた後、
クロマトグラフィー精製することでＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシンメ
チルエステル２２を得た。これらの２つの工程の収率は７１％であった。この物
質は、1 Ｈ ＮＭＲ及び旋光度分析により、文献で報告されるものと同一である
ことが示された。図９を参照のこと。
【００２７】 Maurerと Miller は彼らのミコバクチンＳ２の合成におけるこのメチルエステ
ル２２の保護中間体としての使用を示している。しかしながら、次のエキソケリ
ン７８６ＳＭ（Ｒ）を形成するための保護Ｃ／Ｆ断片の操作の間の競合反応の結
果として、合成上の厄介な問題が生じる。中間体２０及び２２のカップリングは
Ｆ部分のメチルエステルによって悪影響を受けることはない。他方、２２のカル
ボキシル基は、必要な合成操作に耐えるのに十分な強さではあるがＦ部分のエス
テルの存在下で選択的に脱保護することができる、適切に保護された類似体に変
換しなければならない。
ル２２の保護中間体としての使用を示している。しかしながら、次のエキソケリ
ン７８６ＳＭ（Ｒ）を形成するための保護Ｃ／Ｆ断片の操作の間の競合反応の結
果として、合成上の厄介な問題が生じる。中間体２０及び２２のカップリングは
Ｆ部分のメチルエステルによって悪影響を受けることはない。他方、２２のカル
ボキシル基は、必要な合成操作に耐えるのに十分な強さではあるがＦ部分のエス
テルの存在下で選択的に脱保護することができる、適切に保護された類似体に変
換しなければならない。
【００２８】 メチルエステル２２から対応する酸２３への変換を、そのエステルをテトラヒ
ドロフラン／水中、室温で２時間ケン化して９４％の収率で所望の酸を得ること
によって達成した。 次に、その酸から２−トリメチルシリルエチルエステル２４への変換を、Sieb
erの手順によって達成した。酸２３を、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド／ピリジンの存在下、アセトニトリル中で２−（トリメチルシリル）エタノー
ルと反応させることで、後処理及びクロマトグラフィー精製の後、９２％の収率
で所望のエステル２４を得た。
ドロフラン／水中、室温で２時間ケン化して９４％の収率で所望の酸を得ること
によって達成した。 次に、その酸から２−トリメチルシリルエチルエステル２４への変換を、Sieb
erの手順によって達成した。酸２３を、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド／ピリジンの存在下、アセトニトリル中で２−（トリメチルシリル）エタノー
ルと反応させることで、後処理及びクロマトグラフィー精製の後、９２％の収率
で所望のエステル２４を得た。
【００２９】 手許にある適切に保護されたエステル２４（サブユニットＣ）及びヒドロキサ
メート２０（サブユニットＦ）を用いて、Ｃ／Ｆ断片を形成するためのカップリ
ングをスキームIVに従い、Maurerと Miller によって記述される反応条件下で達
成した。エステル２４をヒドロキサメート２０と、０．２当量のヨウ化カリウム
及び２．５当量の無水炭酸カリウムの存在下、還流アセトン中で一晩反応させた
。 ２４時間後、さらに０．３当量のヨウ化カリウムを添加し、その反応混合物を
激しく攪拌して還流させた。１２０時間後、その反応混合物を濾過して濃縮し、
新鮮な試薬を用いて還流温度で一晩再度処理した。その反応混合物を再度濾過し
て濃縮し、生じた残滓をクロマトグラフィー精製に処することで３つの画分を得
た。
メート２０（サブユニットＦ）を用いて、Ｃ／Ｆ断片を形成するためのカップリ
ングをスキームIVに従い、Maurerと Miller によって記述される反応条件下で達
成した。エステル２４をヒドロキサメート２０と、０．２当量のヨウ化カリウム
及び２．５当量の無水炭酸カリウムの存在下、還流アセトン中で一晩反応させた
。 ２４時間後、さらに０．３当量のヨウ化カリウムを添加し、その反応混合物を
激しく攪拌して還流させた。１２０時間後、その反応混合物を濾過して濃縮し、
新鮮な試薬を用いて還流温度で一晩再度処理した。その反応混合物を再度濾過し
て濃縮し、生じた残滓をクロマトグラフィー精製に処することで３つの画分を得
た。
【００３０】 第１溶出画分は、ＴＬＣ及び1 Ｈ ＮＭＲにより、回収された出発物質、Ｌ−
Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２−トリメチルシリルエチルエステル２４
であることが示された。第２画分は、1 Ｈ ＮＭＲ分析により、おそらくはヒド
ロキシメート副生物の、約９：１混合物であることが示された。1 Ｈ ＮＭＲ分
析により、第３画分が所望の生成物２５であることが示された。所望のＮ−アル
キル化生成物の収率は回収された出発物質を考慮して７８％であった。 この反応は時間を延長した後にも完了に到達しなかったが、７８％の収率は許
容し得るものである（Maurerと Miller は類似の反応について６５％の収率を報
告した）。加えて、Ｎ−アルキル化のＯ−アルキル化に対する比はほぼ８：１で
あり、これに対して５：１の比が Maurer と Miller によって報告されている。
最後に、２５のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の除去は置換リジン２
６を得るためのトリフルオロ酢酸での簡単な処理の影響を受けた。
Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２−トリメチルシリルエチルエステル２４
であることが示された。第２画分は、1 Ｈ ＮＭＲ分析により、おそらくはヒド
ロキシメート副生物の、約９：１混合物であることが示された。1 Ｈ ＮＭＲ分
析により、第３画分が所望の生成物２５であることが示された。所望のＮ−アル
キル化生成物の収率は回収された出発物質を考慮して７８％であった。 この反応は時間を延長した後にも完了に到達しなかったが、７８％の収率は許
容し得るものである（Maurerと Miller は類似の反応について６５％の収率を報
告した）。加えて、Ｎ−アルキル化のＯ−アルキル化に対する比はほぼ８：１で
あり、これに対して５：１の比が Maurer と Miller によって報告されている。
最後に、２５のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の除去は置換リジン２
６を得るためのトリフルオロ酢酸での簡単な処理の影響を受けた。
【００３１】 ここで図６（スキームＶ）を参照して、Ｃ／Ｆ及びＥ／Ｄ断片のカップリング
並びに続くジベンジルエキソケリン酸２９への変換を達成した。前に調製したＣ
／Ｆ部分２６を、２−エトキシ−Ｎ−（エトキシカルボニル）−１，２−ジヒド
ロキノリン（ＥＥＤＱ）を用いてクロロホルム中で保護Ｅ／Ｄ８とカップリング
させた。標準的な後処理及び生成物の単離により、７２％の収率で粗製ジペプチ
ド２７を得た。置換セリンの脱水環化を塩化チエニルで処理することにより達成
し、クロマトグラフィー精製の後に５６％の収率でオキサゾリン２８を生成させ
た。この分子、ジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチルシリルエチルエステ
ルの構造を質量スペクトル及び1 Ｈ ＮＭＲ分析によって検証した。
並びに続くジベンジルエキソケリン酸２９への変換を達成した。前に調製したＣ
／Ｆ部分２６を、２−エトキシ−Ｎ−（エトキシカルボニル）−１，２−ジヒド
ロキノリン（ＥＥＤＱ）を用いてクロロホルム中で保護Ｅ／Ｄ８とカップリング
させた。標準的な後処理及び生成物の単離により、７２％の収率で粗製ジペプチ
ド２７を得た。置換セリンの脱水環化を塩化チエニルで処理することにより達成
し、クロマトグラフィー精製の後に５６％の収率でオキサゾリン２８を生成させ
た。この分子、ジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチルシリルエチルエステ
ルの構造を質量スペクトル及び1 Ｈ ＮＭＲ分析によって検証した。
【００３２】 化合物２８からジベンジルエキソケリン酸２９への変換は、潜在的にラセミ化
を受ける可能性のある２つのキラル中心を含む様々な官能基の存在下での、２−
トリメチルシリルエチルエステルの選択的除去を必要とする。 第１の試みは、エステル２８のテトラヒドロフラン溶液を２当量のフッ化テト
ラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）で処理することを含んでいた。室温で１時間
後、ＴＬＣ分析により出発物質の完全な不在及び１つの主要新スポットの出現が
示された。後処理及び生成物の単離により、明黄褐色のガラス状物質が７４％の
収率で得られた。この粗製生成物を1 Ｈ ＮＭＲ分析にかけたところ、所望の反
応がジベンジルエキソケリン酸２９をもたらしたことが示された。この1 Ｈ Ｎ
ＭＲは、少量のテトラブチルアンモニウム塩で汚染されてはいたが、その物質が
主として単一の成分からなることを示し、ラセミ化を含む副反応に由来するいか
なる副生物も示されなかった。
を受ける可能性のある２つのキラル中心を含む様々な官能基の存在下での、２−
トリメチルシリルエチルエステルの選択的除去を必要とする。 第１の試みは、エステル２８のテトラヒドロフラン溶液を２当量のフッ化テト
ラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）で処理することを含んでいた。室温で１時間
後、ＴＬＣ分析により出発物質の完全な不在及び１つの主要新スポットの出現が
示された。後処理及び生成物の単離により、明黄褐色のガラス状物質が７４％の
収率で得られた。この粗製生成物を1 Ｈ ＮＭＲ分析にかけたところ、所望の反
応がジベンジルエキソケリン酸２９をもたらしたことが示された。この1 Ｈ Ｎ
ＭＲは、少量のテトラブチルアンモニウム塩で汚染されてはいたが、その物質が
主として単一の成分からなることを示し、ラセミ化を含む副反応に由来するいか
なる副生物も示されなかった。
【００３３】 エステル２８の残りをＴＢＡＦで処理し、その粗製生成物を小スケール試験反
応に由来するものと合わせ、その物質をシリカゲルクロマトグラフィーで生成し
て純粋なジベンジルエキソケリン酸２９を無色透明なガラス状物質として５４％
の収率で得た。 ここで図７（スキームVI）を参照して、Ａ／Ｂ断片、ベンジルエピ−コバクチ
ン３４を Mauerと Miller によって報告された方法で調製した。サブユニットＡ
の合成は、前に調製したＬ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ノルロイシン１７のカルボキ
シル基からＯ−ベンジルヒドロキサメート３０への変換と、それに続くカプロラ
クタム３１への環化を含んでいた。 Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ノルロイシンを、ｐＨ４．５の水溶液中で、１−エチル
−３−（ジメチルアミノ）プロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）をカップ
リング剤として用いて、Ｏ−ベンジル−ヒドロキシルアミンと反応させた。２つ
の別々の反応から純粋な生成物を得た。このヒドロキサメートを調製するための
代わりの非水性手順は僅かに６０％の収率をもたらした。
応に由来するものと合わせ、その物質をシリカゲルクロマトグラフィーで生成し
て純粋なジベンジルエキソケリン酸２９を無色透明なガラス状物質として５４％
の収率で得た。 ここで図７（スキームVI）を参照して、Ａ／Ｂ断片、ベンジルエピ−コバクチ
ン３４を Mauerと Miller によって報告された方法で調製した。サブユニットＡ
の合成は、前に調製したＬ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ノルロイシン１７のカルボキ
シル基からＯ−ベンジルヒドロキサメート３０への変換と、それに続くカプロラ
クタム３１への環化を含んでいた。 Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ノルロイシンを、ｐＨ４．５の水溶液中で、１−エチル
−３−（ジメチルアミノ）プロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）をカップ
リング剤として用いて、Ｏ−ベンジル−ヒドロキシルアミンと反応させた。２つ
の別々の反応から純粋な生成物を得た。このヒドロキサメートを調製するための
代わりの非水性手順は僅かに６０％の収率をもたらした。
【００３４】 ヒドロキサメート３０を無水テトラヒドロフラン中においてトリフェニルホス
フィン及びジエチルアゾジカルボキシレートで処理してカプロラクタム３１への
環化を誘発した。この反応は生成物の混合物を生じ、それをシリカゲルでの中圧
液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）によって分画した。その主要画分は、逆相
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、２つの主要成分を含むことが
示された（５２％及び３５％）。所望の生成物がシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー及びヘキサンからの再結晶化の組み合わせにより９７％純粋の形態で得ら
れた。構造の検証は1 Ｈ ＮＭＲ及び質量スペクトル分析によって決定した。 トリフルオロ酢酸での簡単な処理により３１のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボ
ニル（Ｎ−ｔ−ＢＯＣ）保護基を除去することでフリーのアミン３２を得、それ
を次に、ＥＥＤＱを用いてＳ−（＋）−３−ヒドロキシ酪酸３３とカップリング
させた。酸３３は、そのナトリウム塩の酸性水溶液の連続エーテル抽出によって
前に得たものであった。粗製カップリング生成物を酢酸エチル／エーテルから再
結晶化することによって精製することで、７８％の収率でベンジルエピ−コバク
チン３４が生じた。
フィン及びジエチルアゾジカルボキシレートで処理してカプロラクタム３１への
環化を誘発した。この反応は生成物の混合物を生じ、それをシリカゲルでの中圧
液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）によって分画した。その主要画分は、逆相
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、２つの主要成分を含むことが
示された（５２％及び３５％）。所望の生成物がシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー及びヘキサンからの再結晶化の組み合わせにより９７％純粋の形態で得ら
れた。構造の検証は1 Ｈ ＮＭＲ及び質量スペクトル分析によって決定した。 トリフルオロ酢酸での簡単な処理により３１のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボ
ニル（Ｎ−ｔ−ＢＯＣ）保護基を除去することでフリーのアミン３２を得、それ
を次に、ＥＥＤＱを用いてＳ−（＋）−３−ヒドロキシ酪酸３３とカップリング
させた。酸３３は、そのナトリウム塩の酸性水溶液の連続エーテル抽出によって
前に得たものであった。粗製カップリング生成物を酢酸エチル／エーテルから再
結晶化することによって精製することで、７８％の収率でベンジルエピ−コバク
チン３４が生じた。
【００３５】 ここで図８を参照して、エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）１の合成の最終工程は
、スキームVII に示されるように、ジベンジルエキソケリン酸２９とベンジルエ
ピ−コバクチン３４との間にエステル結合を形成した後、３つのベンジル基を水
素化分解性除去することからなるものであった。 Maurerと Miller の手順の僅かな改変を用いることで、トリフェニルホスフィ
ン／ＤＥＡＤ介在エステル結合形成が望み通りに進行し、トリベンジルエキソケ
リン７８６ＳＭ（Ｒ）３５が６１％の収率で単離された。文献の前例は、このプ
ロセスによりエステル形成の間に３４のヒドロキシル炭素での反転が生じること
を示す。これは化合物３５におけるその中心でのＲ配置を生じ、それがこの分子
に必要とされる全体的な立体化学；Ｓ，Ｓ，Ｒ，Ｓにつながる。最後に、３５の
ベンジル基を水素化分解することで、２４ｍｇのエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）
１が、1 Ｈ ＮＭＲ、ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析に基づいて約９８％純粋の形態で
得られた。
、スキームVII に示されるように、ジベンジルエキソケリン酸２９とベンジルエ
ピ−コバクチン３４との間にエステル結合を形成した後、３つのベンジル基を水
素化分解性除去することからなるものであった。 Maurerと Miller の手順の僅かな改変を用いることで、トリフェニルホスフィ
ン／ＤＥＡＤ介在エステル結合形成が望み通りに進行し、トリベンジルエキソケ
リン７８６ＳＭ（Ｒ）３５が６１％の収率で単離された。文献の前例は、このプ
ロセスによりエステル形成の間に３４のヒドロキシル炭素での反転が生じること
を示す。これは化合物３５におけるその中心でのＲ配置を生じ、それがこの分子
に必要とされる全体的な立体化学；Ｓ，Ｓ，Ｒ，Ｓにつながる。最後に、３５の
ベンジル基を水素化分解することで、２４ｍｇのエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）
１が、1 Ｈ ＮＭＲ、ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析に基づいて約９８％純粋の形態で
得られた。
【００３６】 本発明者らは、標的分子、エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）を実験室規模で合成
できることを示している。合成スキーム全体の鍵中間体はＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−
ε−ヒドロキシノルロイシン１７であり、その理由はこれがエキソケリン７８６
ＳＭ（Ｒ）の主要サブ区画のうちの２つの主要基本要素であるためである。この
化合物の構築の間に遭遇する収率は文献に報告されるものよりもかなり低い。さ
らに、この物質の半分は分割の結果としてこの経路の最後に向かううちに不可避
的に失われる；望ましくないＤ−異性体はこの時点で単純に“廃棄" される。 要するに、本発明の合成方法は、とりわけ、メチルエステル部分で終止するア
ルキル鎖を有する化合物の生成を結果として生じ、これが本発明の合成をミコバ
クチンＳ２及び関連化合物に関して行われるものと区別している。さらに、この
合成分子を天然エキソケリンと比較することで、本発明の合成の目的が達成され
ていることを支持する結果が得られた。例として、本発明者らは機能的研究を行
っており、それは標的分子に関して以下にまとめられている。
できることを示している。合成スキーム全体の鍵中間体はＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−
ε−ヒドロキシノルロイシン１７であり、その理由はこれがエキソケリン７８６
ＳＭ（Ｒ）の主要サブ区画のうちの２つの主要基本要素であるためである。この
化合物の構築の間に遭遇する収率は文献に報告されるものよりもかなり低い。さ
らに、この物質の半分は分割の結果としてこの経路の最後に向かううちに不可避
的に失われる；望ましくないＤ−異性体はこの時点で単純に“廃棄" される。 要するに、本発明の合成方法は、とりわけ、メチルエステル部分で終止するア
ルキル鎖を有する化合物の生成を結果として生じ、これが本発明の合成をミコバ
クチンＳ２及び関連化合物に関して行われるものと区別している。さらに、この
合成分子を天然エキソケリンと比較することで、本発明の合成の目的が達成され
ていることを支持する結果が得られた。例として、本発明者らは機能的研究を行
っており、それは標的分子に関して以下にまとめられている。
【００３７】 合成脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の機能研究 鉄をキレート化する受容能力 合成脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）が、天然形態が行うように、鉄
をキレート化できるかどうかを決定するため、クエン酸アンモニウム第２鉄を、
鉄をエキソケリンに対して１０倍モル過剰で含む０．１％ＴＦＡにエキソケリン
を溶解した。次に、その溶液を Bondapak Phenyl１２５Ａ １０μｍ（３．９×
３００ｍｍ）ＨＰＬＣカラムにのせ、エキソケリンを Rainin （Woburn、ＭＡ）
ＨＰＸＬシステムを用いる逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）にかけ
た。エキソケリンを、０．１％ＴＦＡ及び５０％アセトニトリルからなるバッフ
ァの０〜１００％勾配を用いて１ｍｌ／分の流速で溶出した。第２鉄−エキソケ
リンを２００ｎｍ及び４５０ｎｍの吸光度で監視した。４５０ｎｍのピークの下
の面積を測定し、既知量の第２鉄−エキソケリンの検定から誘導される変換因子
を用いることにより第２鉄−エキソケリンの質量を検定した。 クエン酸アンモニウム第２鉄が存在しない状況においては、添加したエキソケ
リンの２．１６％に等しい少量の第２鉄−エキソケリンのみがＨＰＬＣカラムか
ら溶出した。クエン酸アンモニウム第２鉄の存在下においては、１００％のエキ
ソケリンが第２鉄形態でカラムから溶出した。 したがって、脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は溶液中の第２鉄を迅
速にキレート化する。
をキレート化できるかどうかを決定するため、クエン酸アンモニウム第２鉄を、
鉄をエキソケリンに対して１０倍モル過剰で含む０．１％ＴＦＡにエキソケリン
を溶解した。次に、その溶液を Bondapak Phenyl１２５Ａ １０μｍ（３．９×
３００ｍｍ）ＨＰＬＣカラムにのせ、エキソケリンを Rainin （Woburn、ＭＡ）
ＨＰＸＬシステムを用いる逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）にかけ
た。エキソケリンを、０．１％ＴＦＡ及び５０％アセトニトリルからなるバッフ
ァの０〜１００％勾配を用いて１ｍｌ／分の流速で溶出した。第２鉄−エキソケ
リンを２００ｎｍ及び４５０ｎｍの吸光度で監視した。４５０ｎｍのピークの下
の面積を測定し、既知量の第２鉄−エキソケリンの検定から誘導される変換因子
を用いることにより第２鉄−エキソケリンの質量を検定した。 クエン酸アンモニウム第２鉄が存在しない状況においては、添加したエキソケ
リンの２．１６％に等しい少量の第２鉄−エキソケリンのみがＨＰＬＣカラムか
ら溶出した。クエン酸アンモニウム第２鉄の存在下においては、１００％のエキ
ソケリンが第２鉄形態でカラムから溶出した。 したがって、脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は溶液中の第２鉄を迅
速にキレート化する。
【００３８】 逆相ＨＰＬＣでの溶出プロフィール 合成エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）及び天然エキソケリン７８４ＳＭ（Ｒ）を
、０．１％ＴＦＡ及び過剰のクエン酸アンモニウム第２鉄を含有する水に溶解し
、上述のように独立にフェニルカラムにのせた。エキソケリンを、０．１％ＴＦ
Ａ及び５０％アセトニトリルからなるバッファの０〜１００％勾配を用いて、１
ｍｌ／分の流速で、Rainin（Wobum 、ＭＡ）ＨＰＸＬシステムを用いて溶出した
。エキソケリンはそれらの４５０ｎｍの吸光度で同定した。 天然エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は天然エキソケリン７８４ＳＭ（Ｒ）の直
前で溶出した（すなわち、７８４ＳＭ（Ｒ）が溶出する濃度よりも約０．５％少
ないアセトニトリル濃度）。合成エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）が天然エキソケ
リン７８４ＳＭ（Ｒ）に対して同じ場所で溶出するかどうかを決定するため、こ
れらのエキソケリンを個別に、及び一緒にフェニルカラムにかけた。合成エキソ
ケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は、天然エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）が溶出するとこ
ろで、天然エキソケリン７８４ＳＭ（Ｒ）が溶出するものよりも約０．５％少な
いアセトニトリル濃度で正確に溶出した。 したがって、合成脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は天然エキソケリ
ン７８６ＳＭ（Ｒ）と同じ逆相ＨＰＬＣでの溶出プロフィールを有する。
、０．１％ＴＦＡ及び過剰のクエン酸アンモニウム第２鉄を含有する水に溶解し
、上述のように独立にフェニルカラムにのせた。エキソケリンを、０．１％ＴＦ
Ａ及び５０％アセトニトリルからなるバッファの０〜１００％勾配を用いて、１
ｍｌ／分の流速で、Rainin（Wobum 、ＭＡ）ＨＰＸＬシステムを用いて溶出した
。エキソケリンはそれらの４５０ｎｍの吸光度で同定した。 天然エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は天然エキソケリン７８４ＳＭ（Ｒ）の直
前で溶出した（すなわち、７８４ＳＭ（Ｒ）が溶出する濃度よりも約０．５％少
ないアセトニトリル濃度）。合成エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）が天然エキソケ
リン７８４ＳＭ（Ｒ）に対して同じ場所で溶出するかどうかを決定するため、こ
れらのエキソケリンを個別に、及び一緒にフェニルカラムにかけた。合成エキソ
ケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は、天然エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）が溶出するとこ
ろで、天然エキソケリン７８４ＳＭ（Ｒ）が溶出するものよりも約０．５％少な
いアセトニトリル濃度で正確に溶出した。 したがって、合成脱第２鉄−エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）は天然エキソケリ
ン７８６ＳＭ（Ｒ）と同じ逆相ＨＰＬＣでの溶出プロフィールを有する。
【００３９】 以下の例は、上で参照される全てのシントンを含む中間体の調製に用いられる
具体的な方法を説明し、本発明の教示による数グラム量のエキソケリン７８６Ｓ
Ｍ（Ｒ）の生成の促進への本教示の使用に関して当業者に手引きを提供する。そ
れらによる、又は出願人の新規方法の好ましい態様を示すために本発明の明細書
に添付される、分光分析及び溶出プロフィールをさらに含む添付の１３の図によ
る、出願人が請求する主題に対する限定は意図されていない。
具体的な方法を説明し、本発明の教示による数グラム量のエキソケリン７８６Ｓ
Ｍ（Ｒ）の生成の促進への本教示の使用に関して当業者に手引きを提供する。そ
れらによる、又は出願人の新規方法の好ましい態様を示すために本発明の明細書
に添付される、分光分析及び溶出プロフィールをさらに含む添付の１３の図によ
る、出願人が請求する主題に対する限定は意図されていない。
【００４０】
標的化合物を調製する様々な工程を以下で説明する。 全ての物質の旋光度はナトリウムの５８９（Ｄ）線で、周囲温度でRudolph Re
search Autopol III旋光計を用いて５ｃｍセル内で測定したものであり、溶液１
００ｍｌ当たりの溶質グラムで表す。薄層クロマトグラフィー分析（ＴＬＣ）は
、Sillca Gel 60 F254（E. Merck）のプレコート・アルミニウムシート及びＣｕ -2 及びキラル試薬をコートした Sillca Gel RP改変体（CHIRALPLATE （商標）、
Macherey-Nagel）のプレコート・ガラスシート（０．２５ｍｍ）で行った。中圧
液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）は、シリカゲル（２３０〜４００メッシュ
、グレード６０）を収容する２．５ｃｍ×４６．０ｃｍガラスカラムで、FMI Mo
del RP-SY ポンプを用いて行った。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は
、Raininデュアルポンプシステム（Dynamax Model SD-200）を用いて２５４ｎｍ
でＵＶ検出（Rainin Model UV-C ）することで行った。この研究において用いた
市販の試薬及び溶媒は全て試薬グレードであった。
search Autopol III旋光計を用いて５ｃｍセル内で測定したものであり、溶液１
００ｍｌ当たりの溶質グラムで表す。薄層クロマトグラフィー分析（ＴＬＣ）は
、Sillca Gel 60 F254（E. Merck）のプレコート・アルミニウムシート及びＣｕ -2 及びキラル試薬をコートした Sillca Gel RP改変体（CHIRALPLATE （商標）、
Macherey-Nagel）のプレコート・ガラスシート（０．２５ｍｍ）で行った。中圧
液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）は、シリカゲル（２３０〜４００メッシュ
、グレード６０）を収容する２．５ｃｍ×４６．０ｃｍガラスカラムで、FMI Mo
del RP-SY ポンプを用いて行った。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は
、Raininデュアルポンプシステム（Dynamax Model SD-200）を用いて２５４ｎｍ
でＵＶ検出（Rainin Model UV-C ）することで行った。この研究において用いた
市販の試薬及び溶媒は全て試薬グレードであった。
【００４１】 Ａ．ベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート、３： 無水炭酸カリウムを乳鉢及び乳棒で微細粉末に粉砕し、磁器製るつぼに移して
ブンゼンバーナー上で１．０時間加熱した。この物質を共栓付き丸底フラスコに
移した。 メカニカルスターラー、ガスバブラーを装備するコンデンサー、及び共栓を備
える１Ｌ三首丸底フラスコを乾燥窒素でフラッシュし、２０．０ｇ（０．１４５
モル）のサリチル酸２、５８．０ｇ（０．４５８モル）の塩化ベンジル、４５０
ｍｌの無水ジメチルホルムアミド、及び９０．０ｇ（０．６５１モル、上述の通
りに新たに粉末化して加熱）の無水炭酸カリウムを入れた。この混合物を攪拌し
て還流温度、窒素の下で１．５時間加熱し、室温に冷却して２．５Ｌの氷／水に
注いだ。この溶液を３０分間攪拌し、ブフナー漏斗を用いて真空濾過して、生じ
た白色固体を氷冷水で洗浄した（３×１００ｍｌ）。
ブンゼンバーナー上で１．０時間加熱した。この物質を共栓付き丸底フラスコに
移した。 メカニカルスターラー、ガスバブラーを装備するコンデンサー、及び共栓を備
える１Ｌ三首丸底フラスコを乾燥窒素でフラッシュし、２０．０ｇ（０．１４５
モル）のサリチル酸２、５８．０ｇ（０．４５８モル）の塩化ベンジル、４５０
ｍｌの無水ジメチルホルムアミド、及び９０．０ｇ（０．６５１モル、上述の通
りに新たに粉末化して加熱）の無水炭酸カリウムを入れた。この混合物を攪拌し
て還流温度、窒素の下で１．５時間加熱し、室温に冷却して２．５Ｌの氷／水に
注いだ。この溶液を３０分間攪拌し、ブフナー漏斗を用いて真空濾過して、生じ
た白色固体を氷冷水で洗浄した（３×１００ｍｌ）。
【００４２】 この固体を２５０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、５００ｍｌ分離漏斗に移し
て水（１×１００ｍｌ）及び飽和食塩水（１×１００ｍｌ）で洗浄し、ジクロロ
メタン層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。この溶液を粗い焼結ガラス製漏
斗を通して真空濾過し、真空中で濃縮して５３．８ｇ（１１６．７％）の黄色油
を得、それを３℃でオフホワイトの固体に固化した。ＴＬＣ（上と同じ条件）は
１つの主要生成物、Ｒf ０．４３を示す。 上記プロセスを２６．２ｇ（０．１９０モル）のサリチル酸、７６ｇ（０．６
００モル）の塩化ベンジル、５００ｍｌの無水ジメチルホルムアミド、及び１１
８．０ｇ（０．８５４モル、上述の通りに新たに粉末化して加熱）の無水炭酸カ
リウムを用いて繰り返した。 その後、この混合物を上述の通りに扱うことで６８．１（１１２．７％）ｇの
黄色油を得、それを３℃でオフホワイトの固体に固化した。ＴＬＣ（上と同じ条
件）は１つの主要生成物、Ｒf ０．４３を示す。次に、これらの２つの調製品を
合わせて１２１．９ｇの粗製ベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート３を得
た。
て水（１×１００ｍｌ）及び飽和食塩水（１×１００ｍｌ）で洗浄し、ジクロロ
メタン層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。この溶液を粗い焼結ガラス製漏
斗を通して真空濾過し、真空中で濃縮して５３．８ｇ（１１６．７％）の黄色油
を得、それを３℃でオフホワイトの固体に固化した。ＴＬＣ（上と同じ条件）は
１つの主要生成物、Ｒf ０．４３を示す。 上記プロセスを２６．２ｇ（０．１９０モル）のサリチル酸、７６ｇ（０．６
００モル）の塩化ベンジル、５００ｍｌの無水ジメチルホルムアミド、及び１１
８．０ｇ（０．８５４モル、上述の通りに新たに粉末化して加熱）の無水炭酸カ
リウムを用いて繰り返した。 その後、この混合物を上述の通りに扱うことで６８．１（１１２．７％）ｇの
黄色油を得、それを３℃でオフホワイトの固体に固化した。ＴＬＣ（上と同じ条
件）は１つの主要生成物、Ｒf ０．４３を示す。次に、これらの２つの調製品を
合わせて１２１．９ｇの粗製ベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート３を得
た。
【００４３】 Ｂ．２−ベンジルオキシ安息香酸、４： 磁気攪拌子及びガスバブラーを装備するコンデンサーを備える２Ｌ丸底フラス
コを窒素でフラッシュし、８７５ｍｌのメタノール、１６０ｍｌ（１．６００モ
ル）の４０％水酸化ナトリウム水溶液、及び１２１．９ｇ（理論値−０．３３４
モル）の粗製ベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート３を入れた。この溶液
を窒素の下で攪拌して還流温度で２．５時間加熱し、冷却して真空中で濃縮し、
生じた固体を１．５Ｌの水に溶解した。この溶液を激しく攪拌し、濃塩酸でｐＨ
１．０に酸性化した。油が分離し、それを氷／水浴内で２．５時間冷却すること
によって固化した。この固体を真空濾過によって単離し、冷水（５００ｍｌ）で
洗浄して風乾し、次いで真空乾燥して７８．５ｇの粗製生成物を得た。この物質
を２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、生じた不透明溶液を２ｇの無水硫酸マグ
ネシウムで処理し、粗い焼結ガラス製漏斗を通して真空濾過した。その透明黄色
溶液を熱ヘキサンで曇り点まで処理して攪拌しながら−２０℃に冷却し、その状
態を１８時間保持した。生じた結晶性生成物をブフナー漏斗を用いる真空濾過に
よって単離し、５０ｍｌのヘキサンで洗浄し、真空下で乾燥させて２−ベンジル
オキシ安息香酸４と同定される白色固体７２．４ｇを得た。これは４６．２ｇの
出発サリチル酸２を基準にして９５．０％の収率である。
コを窒素でフラッシュし、８７５ｍｌのメタノール、１６０ｍｌ（１．６００モ
ル）の４０％水酸化ナトリウム水溶液、及び１２１．９ｇ（理論値−０．３３４
モル）の粗製ベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエート３を入れた。この溶液
を窒素の下で攪拌して還流温度で２．５時間加熱し、冷却して真空中で濃縮し、
生じた固体を１．５Ｌの水に溶解した。この溶液を激しく攪拌し、濃塩酸でｐＨ
１．０に酸性化した。油が分離し、それを氷／水浴内で２．５時間冷却すること
によって固化した。この固体を真空濾過によって単離し、冷水（５００ｍｌ）で
洗浄して風乾し、次いで真空乾燥して７８．５ｇの粗製生成物を得た。この物質
を２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、生じた不透明溶液を２ｇの無水硫酸マグ
ネシウムで処理し、粗い焼結ガラス製漏斗を通して真空濾過した。その透明黄色
溶液を熱ヘキサンで曇り点まで処理して攪拌しながら−２０℃に冷却し、その状
態を１８時間保持した。生じた結晶性生成物をブフナー漏斗を用いる真空濾過に
よって単離し、５０ｍｌのヘキサンで洗浄し、真空下で乾燥させて２−ベンジル
オキシ安息香酸４と同定される白色固体７２．４ｇを得た。これは４６．２ｇの
出発サリチル酸２を基準にして９５．０％の収率である。
【００４４】 Ｃ．４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ）ベンゾエート、６： 磁気攪拌子及び共栓を備える５００ｍｌ丸底フラスコに、氷／水浴内で０〜３
℃で冷却しながら、１０．０ｇ（４３．８１ミリモル）の上記Ｂからの２−ベン
ジルオキシ安息香酸４、６．７ｇ（４８．１６ミリモル）のｐ−ニトロフェノー
ル５、及び２５０ｍｌの酢酸エチルを入れた。全ての固体が１５分の攪拌の後に
溶解した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（９．９４ｇ、４８．１８ミリモル
）をこの混合物に添加し、その溶液を０〜３℃で３０分間攪拌し、次いで室温で
４時間混合した。その溶液を５００ｍｌ分離漏斗に移し、１０％炭酸ナトリウム
水溶液（４×５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、粗い焼結
ガラス製漏斗を通して濾過し、真空中で濃縮して粗製固体とした。
℃で冷却しながら、１０．０ｇ（４３．８１ミリモル）の上記Ｂからの２−ベン
ジルオキシ安息香酸４、６．７ｇ（４８．１６ミリモル）のｐ−ニトロフェノー
ル５、及び２５０ｍｌの酢酸エチルを入れた。全ての固体が１５分の攪拌の後に
溶解した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（９．９４ｇ、４８．１８ミリモル
）をこの混合物に添加し、その溶液を０〜３℃で３０分間攪拌し、次いで室温で
４時間混合した。その溶液を５００ｍｌ分離漏斗に移し、１０％炭酸ナトリウム
水溶液（４×５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、粗い焼結
ガラス製漏斗を通して濾過し、真空中で濃縮して粗製固体とした。
【００４５】 この粗製固体を２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解して４００ｍｌの熱ヘキサン
で処理し、徐々に室温まで冷却した後、冷蔵庫内、−２０℃で１８時間冷却した
。結晶性固体をブフナー漏斗を用いる真空濾過によって単離し、約１００ｍｌの
ヘキサンで洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて６．１０ｇの生成物を得た。この
物質を１００ｍｌの熱エタノール（２００プルーフ）に溶解し、徐々に室温まで
、次いで冷蔵庫（−２０℃）内で４時間冷却し、ブフナー漏斗を用いて真空濾過
し、−２０℃エタノール（１×１５ｍｌ）で洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて
５．８６ｇの最終生成物（３８．３％）を得た。
で処理し、徐々に室温まで冷却した後、冷蔵庫内、−２０℃で１８時間冷却した
。結晶性固体をブフナー漏斗を用いる真空濾過によって単離し、約１００ｍｌの
ヘキサンで洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて６．１０ｇの生成物を得た。この
物質を１００ｍｌの熱エタノール（２００プルーフ）に溶解し、徐々に室温まで
、次いで冷蔵庫（−２０℃）内で４時間冷却し、ブフナー漏斗を用いて真空濾過
し、−２０℃エタノール（１×１５ｍｌ）で洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて
５．８６ｇの最終生成物（３８．３％）を得た。
【００４６】 次に、第２のより大きいバッチを同様の方法で作製した。磁気攪拌子及び共栓
を備える１Ｌ丸底フラスコに２５．０ｇ（１０９．５３ミリモル）の２−ベンジ
ルオキシ安息香酸、１６．８ｇ（１２０．７７ミリモル）のｐ−ニトロフェノー
ル、及び６２５ｍｌの酢酸エチルを入れた。このフラスコを氷／水浴において０
〜３℃で冷却し、混合物を１５分間攪拌したところ、その間に全ての固体が溶解
した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（２５．０ｇ、１２１．１７ミリモル）
を一度に添加し、その溶液を０〜３℃で１時間、次いで室温で４時間攪拌した。
その溶液を１Ｌ分離漏斗に移し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（４×１００ｍｌ
）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、粗い焼結ガラス製漏斗を通して
濾過し、真空中で濃縮して粗製固体とした。この物質を１７０ｍｌの熱エタノー
ル（２００プルーフ）に溶解し、室温まで徐々に、次いで冷蔵庫内、−２０℃で
１８時間冷却した。結晶性固体をブフナー漏斗を用いる真空濾過によって単離し
て３０ｍｌの−２０℃エタノールで洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて１７．２
８ｇの生成物（４５．１２％）を得た。融点＝９９〜１００℃。両反応の生成物
を合わせて２３．１４ｇの４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ）ベンゾ
エート６を得た。
を備える１Ｌ丸底フラスコに２５．０ｇ（１０９．５３ミリモル）の２−ベンジ
ルオキシ安息香酸、１６．８ｇ（１２０．７７ミリモル）のｐ−ニトロフェノー
ル、及び６２５ｍｌの酢酸エチルを入れた。このフラスコを氷／水浴において０
〜３℃で冷却し、混合物を１５分間攪拌したところ、その間に全ての固体が溶解
した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（２５．０ｇ、１２１．１７ミリモル）
を一度に添加し、その溶液を０〜３℃で１時間、次いで室温で４時間攪拌した。
その溶液を１Ｌ分離漏斗に移し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（４×１００ｍｌ
）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、粗い焼結ガラス製漏斗を通して
濾過し、真空中で濃縮して粗製固体とした。この物質を１７０ｍｌの熱エタノー
ル（２００プルーフ）に溶解し、室温まで徐々に、次いで冷蔵庫内、−２０℃で
１８時間冷却した。結晶性固体をブフナー漏斗を用いる真空濾過によって単離し
て３０ｍｌの−２０℃エタノールで洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて１７．２
８ｇの生成物（４５．１２％）を得た。融点＝９９〜１００℃。両反応の生成物
を合わせて２３．１４ｇの４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ）ベンゾ
エート６を得た。
【００４７】 Ｄ．Ｌ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ（ベンゾイル）］セリン、８； 磁気攪拌子及び共栓を備える２Ｌ丸底フラスコに１３．０ｇ（３７．２１ミリ
モル）の、上記Ｃにおいて生成した４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ
）ベンゾエート６、３．９１３ｇ（３７．２３ミリモル）のＬ−セリン７、１０
．３５ｍｌ（７４．２２ミリモル）のトリエチルアミン、５４０ｍｌの水、及び
７４０ｍｌのテトラヒドロフランを入れた。この混合物を室温で２４時間攪拌し
、真空中で濃縮してテトラヒドロフランを除去し、残留する水溶液を６Ｎ塩酸水
溶液で処理してｐＨ５．３（ｐＨメーターを用いて）とした。この溶液を１Ｌ分
離漏斗に移してエーテル（３×１００ｍｌ）で抽出し、水層を６Ｎ塩酸水溶液で
ｐＨ２．３にさらに酸性化した。この溶液を氷／水浴において２時間冷却し、白
色沈殿をブフナー漏斗を用いる真空濾過によって単離し、冷水（３℃、３×２５
ｍｌ）で洗浄して乾燥（風乾／真空）させ、９．２４ｇのＬ−Ｎ−［２−ベンジ
ルオキシ（ベンゾイル）］セリン８、１３０〜１３１．５℃の融点を有する白色
結晶性固体（７８．８％）を得てスキームＩ（図２）を完了させた。
モル）の、上記Ｃにおいて生成した４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ
）ベンゾエート６、３．９１３ｇ（３７．２３ミリモル）のＬ−セリン７、１０
．３５ｍｌ（７４．２２ミリモル）のトリエチルアミン、５４０ｍｌの水、及び
７４０ｍｌのテトラヒドロフランを入れた。この混合物を室温で２４時間攪拌し
、真空中で濃縮してテトラヒドロフランを除去し、残留する水溶液を６Ｎ塩酸水
溶液で処理してｐＨ５．３（ｐＨメーターを用いて）とした。この溶液を１Ｌ分
離漏斗に移してエーテル（３×１００ｍｌ）で抽出し、水層を６Ｎ塩酸水溶液で
ｐＨ２．３にさらに酸性化した。この溶液を氷／水浴において２時間冷却し、白
色沈殿をブフナー漏斗を用いる真空濾過によって単離し、冷水（３℃、３×２５
ｍｌ）で洗浄して乾燥（風乾／真空）させ、９．２４ｇのＬ−Ｎ−［２−ベンジ
ルオキシ（ベンゾイル）］セリン８、１３０〜１３１．５℃の融点を有する白色
結晶性固体（７８．８％）を得てスキームＩ（図２）を完了させた。
【００４８】 Ｅ．ヒダントイン、１３： 磁気攪拌子及びコンデンサーを備える２Ｌ丸底フラスコに１００．０ｇ（１．
１８９モル）のジヒドロピラン９及び４００ｍｌの０．０２Ｎ塩酸水溶液を入れ
た。この２相混合液を加熱して約１５分間攪拌したところ、僅かに黄色の一相溶
液が生じた。フラスコを加熱から取り除いてさらに１５分間攪拌し、０．４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液で中和した（ｐＨ７．０）。この攪拌溶液を水浴において
冷却し、３つに分けた１２５ｇ（０．６５８モル）の亜硫酸水素ナトリウムで、
５分にわたって、反応混合物の温度を室温に維持しながら処理した。全ての亜硫
酸水素塩が溶解した後、溶液を１０分間攪拌し、水１００ｍｌ中に７８．０ｇ（
１．２００モル）のシアン化カリウムを滴下によって添加することで３０分にわ
たって処理し、室温でさらに３０分攪拌した。この溶液を２Ｌ分離漏斗に移し、
ジクロロメタンで抽出した。３つの別の層（生成物層、水層、及びジクロロメタ
ン層）が形成され、それを分離した。
１８９モル）のジヒドロピラン９及び４００ｍｌの０．０２Ｎ塩酸水溶液を入れ
た。この２相混合液を加熱して約１５分間攪拌したところ、僅かに黄色の一相溶
液が生じた。フラスコを加熱から取り除いてさらに１５分間攪拌し、０．４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液で中和した（ｐＨ７．０）。この攪拌溶液を水浴において
冷却し、３つに分けた１２５ｇ（０．６５８モル）の亜硫酸水素ナトリウムで、
５分にわたって、反応混合物の温度を室温に維持しながら処理した。全ての亜硫
酸水素塩が溶解した後、溶液を１０分間攪拌し、水１００ｍｌ中に７８．０ｇ（
１．２００モル）のシアン化カリウムを滴下によって添加することで３０分にわ
たって処理し、室温でさらに３０分攪拌した。この溶液を２Ｌ分離漏斗に移し、
ジクロロメタンで抽出した。３つの別の層（生成物層、水層、及びジクロロメタ
ン層）が形成され、それを分離した。
【００４９】 このジクロロメタン画分は、ＴＬＣにより、生成物と共に数種類の不純物を含
有することが示された。水層をジエチルエーテル（４×２５０ｍｌ）で抽出し、
それらの抽出物を有機生成物層と合わせ、得られた混合物を真空中で濃縮した。
その残滓を、水４００ｍｌに溶解した２３０ｇ（２．３９４モル）の炭酸アンモ
ニウムと共に５０〜５５℃で１時間攪拌し、１０ｇの活性炭を用いて沸点で１０
分間処理し、ブフナー漏斗を通して真空濾過した。濾液を真空中で濃縮し、その
残滓を３００ｍｌの水（総容積）に溶解した。この溶液を攪拌しながら室温に冷
却した後、さらに３℃で１８時間冷却した。結晶化した固体を真空濾過によって
単離して冷水（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて８７．０ｇのヒダントイン
１４（４２．５％）を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、溶媒系−アセトニトリル／ｔ
−ブタノール／トルエン／酢酸／水（１：１：１：１：１、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ／ｖ
）又はＡＢＴＡＷ；可視化−（１）ニンヒドリン、加熱、次いで（２）４％ホス
ホモリブデン酸／エタノール、加熱。単一成分、Ｒf ０．５８。
有することが示された。水層をジエチルエーテル（４×２５０ｍｌ）で抽出し、
それらの抽出物を有機生成物層と合わせ、得られた混合物を真空中で濃縮した。
その残滓を、水４００ｍｌに溶解した２３０ｇ（２．３９４モル）の炭酸アンモ
ニウムと共に５０〜５５℃で１時間攪拌し、１０ｇの活性炭を用いて沸点で１０
分間処理し、ブフナー漏斗を通して真空濾過した。濾液を真空中で濃縮し、その
残滓を３００ｍｌの水（総容積）に溶解した。この溶液を攪拌しながら室温に冷
却した後、さらに３℃で１８時間冷却した。結晶化した固体を真空濾過によって
単離して冷水（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて８７．０ｇのヒダントイン
１４（４２．５％）を得た。ＴＬＣ：シリカゲル、溶媒系−アセトニトリル／ｔ
−ブタノール／トルエン／酢酸／水（１：１：１：１：１、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ／ｖ
）又はＡＢＴＡＷ；可視化−（１）ニンヒドリン、加熱、次いで（２）４％ホス
ホモリブデン酸／エタノール、加熱。単一成分、Ｒf ０．５８。
【００５０】 このプロセスを以下の通り繰り返した：磁気攪拌子及びコンデンサーを備える
３Ｌ丸底フラスコに１６９．４ｇ（２．０１４モル）のジヒドロピラン及び７０
０ｍｌ（０．０１４モル）の０．０２Ｎ塩酸水溶液を入れ、その２相混合液を還
流温度で１時間加熱した。１５分後、溶液は均一である。この反応混合物を冷水
浴の助けを借りてＲＴに冷却し、ＲＴの温度を維持しながら０．４Ｎ水酸化ナト
リウムで処理してｐＨ７．０とする。この溶液を３つに分けた２１２ｇ（１．１
１５モル）の亜硫酸水素ナトリウムを用いてＲＴで１５分にわたって処理し、３
０分間攪拌し、水１７０ｍｌに溶解した１３２．０（２．０２７モル）のシアン
化カリウムを滴下により添加することで、ＲＴで４０分にわたって処理した。こ
の溶液を２時間攪拌し、２Ｌ分離漏斗に移して層を分離した。水層をジエチルエ
ーテル（５×５００ｍｌ）で抽出した。抽出物を合わせて真空中で濃縮し、その
残滓を元の有機層と合わせた。
３Ｌ丸底フラスコに１６９．４ｇ（２．０１４モル）のジヒドロピラン及び７０
０ｍｌ（０．０１４モル）の０．０２Ｎ塩酸水溶液を入れ、その２相混合液を還
流温度で１時間加熱した。１５分後、溶液は均一である。この反応混合物を冷水
浴の助けを借りてＲＴに冷却し、ＲＴの温度を維持しながら０．４Ｎ水酸化ナト
リウムで処理してｐＨ７．０とする。この溶液を３つに分けた２１２ｇ（１．１
１５モル）の亜硫酸水素ナトリウムを用いてＲＴで１５分にわたって処理し、３
０分間攪拌し、水１７０ｍｌに溶解した１３２．０（２．０２７モル）のシアン
化カリウムを滴下により添加することで、ＲＴで４０分にわたって処理した。こ
の溶液を２時間攪拌し、２Ｌ分離漏斗に移して層を分離した。水層をジエチルエ
ーテル（５×５００ｍｌ）で抽出した。抽出物を合わせて真空中で濃縮し、その
残滓を元の有機層と合わせた。
【００５１】 この物質を水９００ｍｌに溶解した３９０．０ｇ（４．０５９モル）の炭酸ア
ンモニウムで処理し、５５〜６０℃で２時間攪拌した。その混合物を１６ｇの活
性炭を用いて沸騰温度で１５分間処理し、ブフナー漏斗を用いて熱濾過した。黄
色濾液を真空中で濃縮し、その残滓を５００ｍｌの熱水に溶解し、激しく攪拌し
ながらＲＴに、及び氷／水浴において０〜３℃で２時間冷却した。真空濾過、冷
水（３×７５ｍｌ）洗浄、及び乾燥により１６８．１４ｇ（４８．５％）を得た
。ＴＬＣ：ＡＢＴＡＷ、（上記参照）ではＲf ０．５５に１つの主要成分が、Ｒ f ０．３１に微量成分が生じた。この粗製生成物を４００ｍｌ（総容積）の熱水
に溶解し、攪拌しながらＲＴに冷却し、氷／水浴において２時間冷却し、濾過し
、冷水（３×７５ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて１４２．５ｇのヒダントインを得
た。この物質は依然として５％の不純物を含んでおり、したがって、再結晶化手
順を繰り返して１２７．５ｇ（３６．８％）の純粋ヒダントイン１３を得た。
ンモニウムで処理し、５５〜６０℃で２時間攪拌した。その混合物を１６ｇの活
性炭を用いて沸騰温度で１５分間処理し、ブフナー漏斗を用いて熱濾過した。黄
色濾液を真空中で濃縮し、その残滓を５００ｍｌの熱水に溶解し、激しく攪拌し
ながらＲＴに、及び氷／水浴において０〜３℃で２時間冷却した。真空濾過、冷
水（３×７５ｍｌ）洗浄、及び乾燥により１６８．１４ｇ（４８．５％）を得た
。ＴＬＣ：ＡＢＴＡＷ、（上記参照）ではＲf ０．５５に１つの主要成分が、Ｒ f ０．３１に微量成分が生じた。この粗製生成物を４００ｍｌ（総容積）の熱水
に溶解し、攪拌しながらＲＴに冷却し、氷／水浴において２時間冷却し、濾過し
、冷水（３×７５ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて１４２．５ｇのヒダントインを得
た。この物質は依然として５％の不純物を含んでおり、したがって、再結晶化手
順を繰り返して１２７．５ｇ（３６．８％）の純粋ヒダントイン１３を得た。
【００５２】 Ｆ．Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン、１４： ヒダントイン１３をアミノ酸に加水分解する３つの試みを行った。磁気攪拌子
を備える１Ｌエーレンマイヤーフラスコに１５．０ｇ（８７．１２ミリモル）の
ヒダントイン１３、５３．０ｇ（１６８．００ミリモル）の水酸化バリウム８水
和物、及び２５０ｍｌの水を入れ、沸騰温度で２〜３分間加熱した。その溶液を
約１２６℃及び１８ｐｓｉで１時間オートクレーブ処理して冷却し、粗い焼結ガ
ラス製漏斗を通して濾過し、その濾液を１１．０ｇ（１１４．４８ミリモル）の
粉末化炭酸アンモニウムで処理した。そのスラリーをＲＴで３０分間攪拌して前
と同様に濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。さらなる沈殿が形成され、した
がって溶液を再濾過した。その濾液を、攪拌／ホットプレート上で激しく攪拌し
、熱イソプロピルアルコールを添加することによって約２５０ｍｌの容積を維持
しながら濃縮した。結晶化の開始時に溶液をホットプレートから取り除き、室温
に、次いで冷蔵庫内で１８時間冷却した。生成物を真空濾過により単離して冷（
３℃）イソプロピルアルコールで洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて４．８５ｇ
（３７．９％）のアミノ酸を得た。融点＝２５２〜２５３℃（分解、未修整）。
ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷ、ではＲf ０．２７に単一の成分が生じた。元素分析（Atla
ntic Microlab ）−Ｃ6 Ｈ13ＮＯ3 （Ｍ．Ｗ．１４７．１７）について算出、算
出値：Ｃ、４８．９７ Ｈ、８．９０ Ｎ、９．５２ 実測値：Ｃ、４８．８０
、８．７３ Ｎ、９．４０。第２クロップのアミノ酸（４．０ｇ、３１．３％）
を単離したところ、ＴＬＣによって不純物（約５〜１０％、上述のようにＡＢＴ
ＡＷにおいてＲf ０．５０）を含有することが示された。
を備える１Ｌエーレンマイヤーフラスコに１５．０ｇ（８７．１２ミリモル）の
ヒダントイン１３、５３．０ｇ（１６８．００ミリモル）の水酸化バリウム８水
和物、及び２５０ｍｌの水を入れ、沸騰温度で２〜３分間加熱した。その溶液を
約１２６℃及び１８ｐｓｉで１時間オートクレーブ処理して冷却し、粗い焼結ガ
ラス製漏斗を通して濾過し、その濾液を１１．０ｇ（１１４．４８ミリモル）の
粉末化炭酸アンモニウムで処理した。そのスラリーをＲＴで３０分間攪拌して前
と同様に濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。さらなる沈殿が形成され、した
がって溶液を再濾過した。その濾液を、攪拌／ホットプレート上で激しく攪拌し
、熱イソプロピルアルコールを添加することによって約２５０ｍｌの容積を維持
しながら濃縮した。結晶化の開始時に溶液をホットプレートから取り除き、室温
に、次いで冷蔵庫内で１８時間冷却した。生成物を真空濾過により単離して冷（
３℃）イソプロピルアルコールで洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて４．８５ｇ
（３７．９％）のアミノ酸を得た。融点＝２５２〜２５３℃（分解、未修整）。
ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷ、ではＲf ０．２７に単一の成分が生じた。元素分析（Atla
ntic Microlab ）−Ｃ6 Ｈ13ＮＯ3 （Ｍ．Ｗ．１４７．１７）について算出、算
出値：Ｃ、４８．９７ Ｈ、８．９０ Ｎ、９．５２ 実測値：Ｃ、４８．８０
、８．７３ Ｎ、９．４０。第２クロップのアミノ酸（４．０ｇ、３１．３％）
を単離したところ、ＴＬＣによって不純物（約５〜１０％、上述のようにＡＢＴ
ＡＷにおいてＲf ０．５０）を含有することが示された。
【００５３】 磁気攪拌子を備える２．８Ｌエーレンマイヤーフラスコに８７．０ｇ（０．３
８９モル）のヒダントイン１３、２０３．０ｇ（０．６４３モル）の水酸化バリ
ウム８水和物、及び１Ｌの水を入れた。この溶液を攪拌し、加熱して２〜３分間
沸騰させ、約１２６℃及び１８ｐｓｉで１時間オートクレーブ処理し、ほぼＲＴ
に冷却し、粗い焼結ガラス製漏斗を通して濾過した。濾液を３９．０ｇ（０．４
０６モル）の粉末化炭酸アンモニウムと共にＲＴで１．５時間攪拌し、上述の通
りに濾過し、濾液を真空中で約５００ｍｌまで濃縮し、再濾過し、その濾液を真
空中で濃縮した。その残滓を２５０ｍｌの水に溶解して総容積約１００ｍｌに濃
縮し、激しく攪拌しながら５００ｍｌの熱無水エタノールを添加した。その溶液
をＲＴに、３℃で１４時間、及び−２０℃で２時間冷却し、濾過し、−２０℃エ
タノール（３×１００ｍｌ）及びジエチルエーテル（３×５０ｍｌ）で洗浄し、
風乾及び真空乾燥して６１．７１ｇのアミノ酸を白色結晶性固体として得た。Ｔ
ＬＣ／ＡＢＴＡＷではＲf ０．２７に主要成分が、Ｒf ０．５０に微量（約５％
）成分が生じた。この物質を約１５０ｍｌ（総容積）の熱水から再結晶化し、熱
イソプロパノール（約２９０ｍｌ）で曇り点まで処理した。その溶液をＲＴに、
次いで−２０℃で一晩冷却し、濾過し、冷イソプロパノール（３×１００ｍｌ）
及びＲＴエーテル（３×１００ｍｌ）で洗浄し、風乾／真空乾燥させて物質を得
たが、これは依然として不純物を含有していた。このアミノ酸を複数の再結晶化
手順（イソプロパノール／水、メタノール／水、エタノール／水）に処したが、
不純物は除去されなかった。これら様々な再結晶化からの母液を合わせて真空中
で濃縮し、回収したアミノ酸混合物を保存した。
８９モル）のヒダントイン１３、２０３．０ｇ（０．６４３モル）の水酸化バリ
ウム８水和物、及び１Ｌの水を入れた。この溶液を攪拌し、加熱して２〜３分間
沸騰させ、約１２６℃及び１８ｐｓｉで１時間オートクレーブ処理し、ほぼＲＴ
に冷却し、粗い焼結ガラス製漏斗を通して濾過した。濾液を３９．０ｇ（０．４
０６モル）の粉末化炭酸アンモニウムと共にＲＴで１．５時間攪拌し、上述の通
りに濾過し、濾液を真空中で約５００ｍｌまで濃縮し、再濾過し、その濾液を真
空中で濃縮した。その残滓を２５０ｍｌの水に溶解して総容積約１００ｍｌに濃
縮し、激しく攪拌しながら５００ｍｌの熱無水エタノールを添加した。その溶液
をＲＴに、３℃で１４時間、及び−２０℃で２時間冷却し、濾過し、−２０℃エ
タノール（３×１００ｍｌ）及びジエチルエーテル（３×５０ｍｌ）で洗浄し、
風乾及び真空乾燥して６１．７１ｇのアミノ酸を白色結晶性固体として得た。Ｔ
ＬＣ／ＡＢＴＡＷではＲf ０．２７に主要成分が、Ｒf ０．５０に微量（約５％
）成分が生じた。この物質を約１５０ｍｌ（総容積）の熱水から再結晶化し、熱
イソプロパノール（約２９０ｍｌ）で曇り点まで処理した。その溶液をＲＴに、
次いで−２０℃で一晩冷却し、濾過し、冷イソプロパノール（３×１００ｍｌ）
及びＲＴエーテル（３×１００ｍｌ）で洗浄し、風乾／真空乾燥させて物質を得
たが、これは依然として不純物を含有していた。このアミノ酸を複数の再結晶化
手順（イソプロパノール／水、メタノール／水、エタノール／水）に処したが、
不純物は除去されなかった。これら様々な再結晶化からの母液を合わせて真空中
で濃縮し、回収したアミノ酸混合物を保存した。
【００５４】 磁気攪拌子を備える２つの２Ｌエーレンマイヤーフラスコに６３．７５ｇ（０
．３７０モル）のヒダントイン１３、１８７．２ｇ（０．５９３モル）の水酸化
バリウム８水和物、及び９２５ｍｌの水を入れ、上述の通りオートクレーブ処理
によって別々に加水分解した。その溶液を上述の通りに濾過し、濾液を真空中で
濃縮した。その残滓を約１００ｍｌの熱水に溶解し、再濃縮して粘性油とし、そ
れを約６００ｍｌの熱無水エタノールで処理した。この溶液をＲＴに、次いで−
２０℃で７２時間冷却し、濾過し、冷エタノール（２×５０ｍｌ）及びエーテル
（３×１００ｍｌ）で洗浄し、風乾／真空乾燥させて１１８．１ｇのアミノ酸（
１２７．５ｇのヒダントインから１０８．３％）を得た。この物質を約１５０ｍ
ｌの熱水に溶解して４００ｍｌの熱無水エタノールで処理し、ＲＴに、次いで−
２０℃で１８時間冷却した。濾過、無水エタノール（−２０℃、３×５０ｍｌ）
及びジエチルエーテル（３×１００ｍｌ）洗浄、及び風乾／真空乾燥により、１
１５．３ｇの白色結晶性アミノ酸（Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４）
を得た。
．３７０モル）のヒダントイン１３、１８７．２ｇ（０．５９３モル）の水酸化
バリウム８水和物、及び９２５ｍｌの水を入れ、上述の通りオートクレーブ処理
によって別々に加水分解した。その溶液を上述の通りに濾過し、濾液を真空中で
濃縮した。その残滓を約１００ｍｌの熱水に溶解し、再濃縮して粘性油とし、そ
れを約６００ｍｌの熱無水エタノールで処理した。この溶液をＲＴに、次いで−
２０℃で７２時間冷却し、濾過し、冷エタノール（２×５０ｍｌ）及びエーテル
（３×１００ｍｌ）で洗浄し、風乾／真空乾燥させて１１８．１ｇのアミノ酸（
１２７．５ｇのヒダントインから１０８．３％）を得た。この物質を約１５０ｍ
ｌの熱水に溶解して４００ｍｌの熱無水エタノールで処理し、ＲＴに、次いで−
２０℃で１８時間冷却した。濾過、無水エタノール（−２０℃、３×５０ｍｌ）
及びジエチルエーテル（３×１００ｍｌ）洗浄、及び風乾／真空乾燥により、１
１５．３ｇの白色結晶性アミノ酸（Ｄ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４）
を得た。
【００５５】 Ｇ．Ｄ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン、１６； Ｄ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン１６の５つのバッチを調
製した。磁気攪拌子を備える１００ｍｌ丸底フラスコに１．０ｇ（６．７９ミリ
モル）のＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４及び２５ｍｌの水を入れた。
その溶液をＲＴで全ての固体が溶解するまで攪拌し、溶解した時点で１．３５ｇ
（７．４５ミリモル）のｐ−ニトロフェニルアセテート及び１．９ｍｌ（１．３
８ｇ、１３．６３ミリモル）のトリエチルアミンを添加して、その溶液をＲＴで
一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸水溶液でｐＨ２．５に酸性化して２５
０ｍｌ分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（３×２５ｍｌ）で抽出して水層を真
空中で濃縮した。その残滓にアセトン（５０ｍｌ）を添加して数分回旋した後、
その溶液を濾過し、固体（トリエチルアミン塩酸塩）をさらなるアセトン（２×
５０ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その残滓をさらに２回上述の通
りにアセトンで処理して２．３３ｇの粗製Ｄ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキ
シノルロイシン１６を得た。
製した。磁気攪拌子を備える１００ｍｌ丸底フラスコに１．０ｇ（６．７９ミリ
モル）のＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４及び２５ｍｌの水を入れた。
その溶液をＲＴで全ての固体が溶解するまで攪拌し、溶解した時点で１．３５ｇ
（７．４５ミリモル）のｐ−ニトロフェニルアセテート及び１．９ｍｌ（１．３
８ｇ、１３．６３ミリモル）のトリエチルアミンを添加して、その溶液をＲＴで
一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸水溶液でｐＨ２．５に酸性化して２５
０ｍｌ分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（３×２５ｍｌ）で抽出して水層を真
空中で濃縮した。その残滓にアセトン（５０ｍｌ）を添加して数分回旋した後、
その溶液を濾過し、固体（トリエチルアミン塩酸塩）をさらなるアセトン（２×
５０ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その残滓をさらに２回上述の通
りにアセトンで処理して２．３３ｇの粗製Ｄ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキ
シノルロイシン１６を得た。
【００５６】 より大きいバッチを得るため、磁気攪拌子を備える５００ｍｌ丸底フラスコに
１０．０ｇ（６７．９４ミリモル）のＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン及び
２５０ｍｌの水を入れた。その溶液を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪拌し、
溶解した時点で１３．５４ｇ（７４．７５ミリモル）のｐ−ニトロフェニルアセ
テート及び１９．０ｍｌ（１３．７９ｇ、１３６．３１ミリモル）のトリエチル
アミンを添加して、その溶液をＲＴで一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸
水溶液でｐＨ２．５に酸性化して１Ｌ分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（３×
５０ｍｌ）で抽出して水層を真空中で濃縮した。その残滓にアセトン（２００ｍ
ｌ）を添加して数分回旋した後、その溶液を濾過し、固体をさらなるアセトン（
２×１００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その残滓をさらに２回上
述の通りにアセトンで処理して１１．４ｇの粗製生成物を得た。
１０．０ｇ（６７．９４ミリモル）のＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン及び
２５０ｍｌの水を入れた。その溶液を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪拌し、
溶解した時点で１３．５４ｇ（７４．７５ミリモル）のｐ−ニトロフェニルアセ
テート及び１９．０ｍｌ（１３．７９ｇ、１３６．３１ミリモル）のトリエチル
アミンを添加して、その溶液をＲＴで一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸
水溶液でｐＨ２．５に酸性化して１Ｌ分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（３×
５０ｍｌ）で抽出して水層を真空中で濃縮した。その残滓にアセトン（２００ｍ
ｌ）を添加して数分回旋した後、その溶液を濾過し、固体をさらなるアセトン（
２×１００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その残滓をさらに２回上
述の通りにアセトンで処理して１１．４ｇの粗製生成物を得た。
【００５７】 第３の１０．０ｇアセチル化反応を正確に上述の通りに行い、１３．０ｇの粗
製Ｄ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン１６を得た。 磁気攪拌子を備える２Ｌ丸底フラスコに５１．７ｇ（０．３５１モル）のＤ，
Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン及び１２５０ｍｌの水を入れた。その溶液を全
ての固体が溶解するまでＲＴで激しく攪拌し、溶解した時点で９８．０ｍｌ（７
１．１５ｇ、０．７０３モル）のトリエチルアミンを添加した。数分後、７０．
０ｇ（０．３８６モル）のｐ−ニトロフェニルアセテート及び２５０ｍｌの水を
添加し、溶液をＲＴで一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸水溶液（約３０
０ｍｌ）でｐＨ２．５に酸性化して４Ｌ分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（３
×１５０ｍｌ）で抽出し、水層を真空中で濃縮して白色ゲルとした。その残滓に
アセトン（３００ｍｌ）を添加して数分回旋した後、その溶液を濾過し、固体を
さらなるアセトン（２×１００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その
残滓をさらに２回上述の通りにアセトンで処理して、１０８．５ｇの粗製Ｎ−ア
セテートを得た。ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷではＲf ０．５０（生成物）及びＲf ０．
３４（トリエチルアミン塩酸塩）の２つの成分が生じた。
製Ｄ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン１６を得た。 磁気攪拌子を備える２Ｌ丸底フラスコに５１．７ｇ（０．３５１モル）のＤ，
Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン及び１２５０ｍｌの水を入れた。その溶液を全
ての固体が溶解するまでＲＴで激しく攪拌し、溶解した時点で９８．０ｍｌ（７
１．１５ｇ、０．７０３モル）のトリエチルアミンを添加した。数分後、７０．
０ｇ（０．３８６モル）のｐ−ニトロフェニルアセテート及び２５０ｍｌの水を
添加し、溶液をＲＴで一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸水溶液（約３０
０ｍｌ）でｐＨ２．５に酸性化して４Ｌ分離漏斗に移し、ジエチルエーテル（３
×１５０ｍｌ）で抽出し、水層を真空中で濃縮して白色ゲルとした。その残滓に
アセトン（３００ｍｌ）を添加して数分回旋した後、その溶液を濾過し、固体を
さらなるアセトン（２×１００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その
残滓をさらに２回上述の通りにアセトンで処理して、１０８．５ｇの粗製Ｎ−ア
セテートを得た。ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷではＲf ０．５０（生成物）及びＲf ０．
３４（トリエチルアミン塩酸塩）の２つの成分が生じた。
【００５８】 磁気攪拌子を備える５Ｌ丸底フラスコに１００．０ｇ（０．６７９モル）のＤ
，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン及び２．５Ｌの水を入れた。この溶液を全て
の固体が溶解するまでＲＴで激しく攪拌し、溶解した時点で１９０．０ｍｌ（１
３７．９４ｇ、１．３６３モル）のトリエチルアミンを添加した。数分後、１３
５．４ｇ（０．７４７モル）のｐ−ニトロフェニルアセテート及び５００ｍｌの
水を添加し、その溶液をＲＴで一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸水溶液
（約６００ｍｌ）でｐＨ２．５に酸性化して６Ｌ分離漏斗に移し、ジエチルエー
テル（３×２００ｍｌ）で抽出し、水層を真空中で濃縮して白色ゲルとした。そ
の残滓にアセトン（約５００ｍｌ）を添加して数分回旋した後、その溶液を濾過
し、固体をさらなるアセトン（２×２００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃
縮し、その残滓をさらに２回上述の通りにアセトンで処理して、２２０．７ｇの
粗製Ｎ−アセテートを得た。
，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン及び２．５Ｌの水を入れた。この溶液を全て
の固体が溶解するまでＲＴで激しく攪拌し、溶解した時点で１９０．０ｍｌ（１
３７．９４ｇ、１．３６３モル）のトリエチルアミンを添加した。数分後、１３
５．４ｇ（０．７４７モル）のｐ−ニトロフェニルアセテート及び５００ｍｌの
水を添加し、その溶液をＲＴで一晩攪拌した。その混合物を２．０Ｎ塩酸水溶液
（約６００ｍｌ）でｐＨ２．５に酸性化して６Ｌ分離漏斗に移し、ジエチルエー
テル（３×２００ｍｌ）で抽出し、水層を真空中で濃縮して白色ゲルとした。そ
の残滓にアセトン（約５００ｍｌ）を添加して数分回旋した後、その溶液を濾過
し、固体をさらなるアセトン（２×２００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空中で濃
縮し、その残滓をさらに２回上述の通りにアセトンで処理して、２２０．７ｇの
粗製Ｎ−アセテートを得た。
【００５９】 Ｈ．Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン、１４： Ｌ−イソ型（すなわち異性体）形態を分離するため、磁気攪拌子を備える５０
０ｍｌ吸引フラスコに１３．０ｇ（約６７．９４ミリモル）のＤ，Ｌ−Ｎ−アセ
チル−ε−ヒドロキシノルロイシン１６及び１５０ｍｌの水を入れ、その混合物
を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪拌した。その溶液のｐＨ（初期ｐＨ、２．
２５）を水酸化リチウム水溶液（約１０ｍｌの２Ｎ ＬｉＯＨ、次いで２ｍｌの
１Ｎ ＬｉＯＨ）で７．５に調整し、水１０ｍｌに溶解した５００ｍｇのアシラ
ーゼＩを粗い焼結ガラス製漏斗を通してこの溶液中に濾過した。得られた混合物
のｐＨを７．５に調整し、３７℃で１８時間インキュベートした。この溶液のｐ
Ｈ（７．２）を０．１Ｎ ＬｉＯＨで７．５に調整し、第２のアシラーゼＩを上
述の通りに添加して（水１０ｍｌ中に５００ｍｇ）、３７℃でのインキュベーシ
ョンをさらに１８時間継続した。その溶液のｐＨを氷酢酸で５．０に調整して活
性炭（５００ｍｇ）及び Celite （５００ｍｇ）を添加し、その混合物を沸騰温
度で５分間激しく攪拌し、ブフナー漏斗を通して熱濾過し、濾液を真空中で濃縮
して粘性油とした。その油に無水エタノール（２００ｍｌ）を激しく攪拌しなが
ら添加し、その混合物をＲＴで１時間、次いで−２０℃で３０分間攪拌して濾過
し、無水エタノール（３×１００ｍｌ、−２０℃）で洗浄し、風乾して３．５８
ｇのＬ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４（１０．０ｇのＤ，Ｌ−アミノ酸から
）を得た。ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷではＲf ０．２７に１つの主要成分、Ｒf ０．５
０に微量（約５％）成分が生じた。CHIRALPLATE （Macherey-Nagel（商標））、
溶媒系−アセトニトリル／メタノール／水（２００：５０：５０、ｖ／ｖ／ｖ）
；可視化−（１）ニンヒドリン、加熱、次いで（２）４％ホスホモリブデン酸／
エタノール、加熱。Ｒf ０．４５の単一成分（Ｄ，Ｌ−アミノ酸標準は２つのス
ポット、Ｒf ０．４５のＬ−異性体及びＲf ０．３８のＤ−異性体）。［２α］ D ＋８．４゜（conc. ２．０、６Ｎ ＨＣｌ水溶液、Ｔ＝２３℃）、Ｌｉｔ3.9 ：［α］D ＋２２．９°（conc. ２．０、６Ｎ ＨＣｌ水溶液）。
０ｍｌ吸引フラスコに１３．０ｇ（約６７．９４ミリモル）のＤ，Ｌ−Ｎ−アセ
チル−ε−ヒドロキシノルロイシン１６及び１５０ｍｌの水を入れ、その混合物
を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪拌した。その溶液のｐＨ（初期ｐＨ、２．
２５）を水酸化リチウム水溶液（約１０ｍｌの２Ｎ ＬｉＯＨ、次いで２ｍｌの
１Ｎ ＬｉＯＨ）で７．５に調整し、水１０ｍｌに溶解した５００ｍｇのアシラ
ーゼＩを粗い焼結ガラス製漏斗を通してこの溶液中に濾過した。得られた混合物
のｐＨを７．５に調整し、３７℃で１８時間インキュベートした。この溶液のｐ
Ｈ（７．２）を０．１Ｎ ＬｉＯＨで７．５に調整し、第２のアシラーゼＩを上
述の通りに添加して（水１０ｍｌ中に５００ｍｇ）、３７℃でのインキュベーシ
ョンをさらに１８時間継続した。その溶液のｐＨを氷酢酸で５．０に調整して活
性炭（５００ｍｇ）及び Celite （５００ｍｇ）を添加し、その混合物を沸騰温
度で５分間激しく攪拌し、ブフナー漏斗を通して熱濾過し、濾液を真空中で濃縮
して粘性油とした。その油に無水エタノール（２００ｍｌ）を激しく攪拌しなが
ら添加し、その混合物をＲＴで１時間、次いで−２０℃で３０分間攪拌して濾過
し、無水エタノール（３×１００ｍｌ、−２０℃）で洗浄し、風乾して３．５８
ｇのＬ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４（１０．０ｇのＤ，Ｌ−アミノ酸から
）を得た。ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷではＲf ０．２７に１つの主要成分、Ｒf ０．５
０に微量（約５％）成分が生じた。CHIRALPLATE （Macherey-Nagel（商標））、
溶媒系−アセトニトリル／メタノール／水（２００：５０：５０、ｖ／ｖ／ｖ）
；可視化−（１）ニンヒドリン、加熱、次いで（２）４％ホスホモリブデン酸／
エタノール、加熱。Ｒf ０．４５の単一成分（Ｄ，Ｌ−アミノ酸標準は２つのス
ポット、Ｒf ０．４５のＬ−異性体及びＲf ０．３８のＤ−異性体）。［２α］ D ＋８．４゜（conc. ２．０、６Ｎ ＨＣｌ水溶液、Ｔ＝２３℃）、Ｌｉｔ3.9 ：［α］D ＋２２．９°（conc. ２．０、６Ｎ ＨＣｌ水溶液）。
【００６０】 第２バッチにおいては、磁気攪拌子を備える２Ｌ吸引フラスコに１０８．５ｇ
（約０．３５１モル）のＤ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン１
６及び４００ｍｌの水を入れ、その混合物を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪
拌した。その溶液のｐＨを２Ｎ水酸化リチウム水溶液（約３００ｍｌ）で７．５
に調整し、水５０ｍｌに溶解した３．５ｇのアシラーゼＩを粗い焼結ガラス製漏
斗を通してこの溶液中に濾過した。得られた混合物のｐＨを７．５に調整し、３
７℃で１８時間インキュベートした。この溶液のｐＨを０．１Ｎ ＬｉＯＨで７
．５に調整し、第２のアシラーゼＩを上述の通りに添加して（水２５ｍｌ中に１
．５ｇ）、３７℃でのインキュベーションをさらに３６時間継続した。その溶液
のｐＨを氷酢酸で５．０に調整して活性炭（２．５ｇ）及び Celite （２．５ｇ
）を添加し、その混合物を沸騰温度で１０分間激しく攪拌し、ブフナー漏斗を通
して熱濾過し、濾液を真空中で濃縮して黄色半固体とした。その油に無水エタノ
ール（８００ｍｌ）を激しく攪拌しながら添加し、その混合物を還流温度で１時
間攪拌し、ＲＴに、次いで−２０℃で４時間冷却して濾過し、無水エタノール（
３×１００ｍｌ、−２０℃）で洗浄し、風乾して３２．０ｇのＬ−ε−ヒドロキ
シノルロイシン１４をオフホワイトの粉末として得た。ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷでは
Ｒf ０．２７に１つの主要成分、Ｒf ０．５０に微量（約５％）成分が生じた。
CHIRALPLATE （Macherey-Nagel（商標））、溶媒系−アセトニトリル／メタノー
ル／水（２００：５０：５０、ｖ／ｖ／ｖ）；可視化−（１）ニンヒドリン、加
熱、次いで（２）４％ホスホモリブデン酸／エタノール、加熱。Ｒf ０．４５の
単一成分。
（約０．３５１モル）のＤ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン１
６及び４００ｍｌの水を入れ、その混合物を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪
拌した。その溶液のｐＨを２Ｎ水酸化リチウム水溶液（約３００ｍｌ）で７．５
に調整し、水５０ｍｌに溶解した３．５ｇのアシラーゼＩを粗い焼結ガラス製漏
斗を通してこの溶液中に濾過した。得られた混合物のｐＨを７．５に調整し、３
７℃で１８時間インキュベートした。この溶液のｐＨを０．１Ｎ ＬｉＯＨで７
．５に調整し、第２のアシラーゼＩを上述の通りに添加して（水２５ｍｌ中に１
．５ｇ）、３７℃でのインキュベーションをさらに３６時間継続した。その溶液
のｐＨを氷酢酸で５．０に調整して活性炭（２．５ｇ）及び Celite （２．５ｇ
）を添加し、その混合物を沸騰温度で１０分間激しく攪拌し、ブフナー漏斗を通
して熱濾過し、濾液を真空中で濃縮して黄色半固体とした。その油に無水エタノ
ール（８００ｍｌ）を激しく攪拌しながら添加し、その混合物を還流温度で１時
間攪拌し、ＲＴに、次いで−２０℃で４時間冷却して濾過し、無水エタノール（
３×１００ｍｌ、−２０℃）で洗浄し、風乾して３２．０ｇのＬ−ε−ヒドロキ
シノルロイシン１４をオフホワイトの粉末として得た。ＴＬＣ／ＡＢＴＡＷでは
Ｒf ０．２７に１つの主要成分、Ｒf ０．５０に微量（約５％）成分が生じた。
CHIRALPLATE （Macherey-Nagel（商標））、溶媒系−アセトニトリル／メタノー
ル／水（２００：５０：５０、ｖ／ｖ／ｖ）；可視化−（１）ニンヒドリン、加
熱、次いで（２）４％ホスホモリブデン酸／エタノール、加熱。Ｒf ０．４５の
単一成分。
【００６１】 第３のバッチにおいては、磁気攪拌子を備える２Ｌ吸引フラスコに２２０．７
ｇ（約０．６７９モル）のＤ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン
１６及び８００ｍｌの水を入れ、その混合物を全ての固体が溶解するまでＲＴで
攪拌した。その溶液のｐＨを２Ｎ水酸化リチウム水溶液（約３００ｍｌ）で７．
５に調整し、水６０ｍｌ中の７．０ｇのアシラーゼＩを粗い焼結ガラス製漏斗を
通してこの溶液中に濾過した。得られた混合物のｐＨを７．５に調整し、３７℃
で７２時間インキュベートした。この溶液のｐＨを０．１Ｎ ＬｉＯＨで７．５
に調整し、第２のアシラーゼＩを上述の通りに添加して（水５０ｍｌ中に３．０
ｇ）、３７℃でのインキュベーションをさらに２４時間継続した。その溶液のｐ
Ｈを氷酢酸で５．０に調整して活性炭（５．０ｇ）及び Celite （５．０ｇ）を
添加し、その混合物を沸騰温度で１０分間激しく攪拌し、ブフナー漏斗を通して
熱濾過し、濾液を真空中で濃縮して２２１．４ｇの黄色半固体とした。その半固
体に無水エタノール（１．６Ｌ）を激しく攪拌しながら添加し、その混合物を還
流温度で１時間攪拌し、ＲＴに冷却して一晩攪拌し、次いで−２０℃で４時間、
濾過し、無水エタノール（３×３００ｍｌ、−２０℃）で洗浄し、風乾して１４
７．０ｇの湿潤固体を得た。 この物質を、磁気攪拌子を備える４Ｌエーレンマイヤーフラスコに入れ、２Ｌ
の無水エタノールと共に還流温度で１時間攪拌した。そのスラリーを攪拌しなが
ら一晩徐々にＲＴに冷却し、濾過して無水エタノール（３×３００ｍｌ）で洗浄
し、乾燥（風乾／真空）させて５１．０ｇのＬ−アミノ酸１４を得た。ＴＬＣ；
シリカゲル／ＡＢＴＡＷではＲf ０．２７に１つの主要成分、Ｒf ０．５０に微
量（約５％）成分が生じた。CHIRALPLATE （上述の通り）によりＲf ０．４５の
単一成分が生じた。
ｇ（約０．６７９モル）のＤ，Ｌ−Ｎ−アセチル−ε−ヒドロキシノルロイシン
１６及び８００ｍｌの水を入れ、その混合物を全ての固体が溶解するまでＲＴで
攪拌した。その溶液のｐＨを２Ｎ水酸化リチウム水溶液（約３００ｍｌ）で７．
５に調整し、水６０ｍｌ中の７．０ｇのアシラーゼＩを粗い焼結ガラス製漏斗を
通してこの溶液中に濾過した。得られた混合物のｐＨを７．５に調整し、３７℃
で７２時間インキュベートした。この溶液のｐＨを０．１Ｎ ＬｉＯＨで７．５
に調整し、第２のアシラーゼＩを上述の通りに添加して（水５０ｍｌ中に３．０
ｇ）、３７℃でのインキュベーションをさらに２４時間継続した。その溶液のｐ
Ｈを氷酢酸で５．０に調整して活性炭（５．０ｇ）及び Celite （５．０ｇ）を
添加し、その混合物を沸騰温度で１０分間激しく攪拌し、ブフナー漏斗を通して
熱濾過し、濾液を真空中で濃縮して２２１．４ｇの黄色半固体とした。その半固
体に無水エタノール（１．６Ｌ）を激しく攪拌しながら添加し、その混合物を還
流温度で１時間攪拌し、ＲＴに冷却して一晩攪拌し、次いで−２０℃で４時間、
濾過し、無水エタノール（３×３００ｍｌ、−２０℃）で洗浄し、風乾して１４
７．０ｇの湿潤固体を得た。 この物質を、磁気攪拌子を備える４Ｌエーレンマイヤーフラスコに入れ、２Ｌ
の無水エタノールと共に還流温度で１時間攪拌した。そのスラリーを攪拌しなが
ら一晩徐々にＲＴに冷却し、濾過して無水エタノール（３×３００ｍｌ）で洗浄
し、乾燥（風乾／真空）させて５１．０ｇのＬ−アミノ酸１４を得た。ＴＬＣ；
シリカゲル／ＡＢＴＡＷではＲf ０．２７に１つの主要成分、Ｒf ０．５０に微
量（約５％）成分が生じた。CHIRALPLATE （上述の通り）によりＲf ０．４５の
単一成分が生じた。
【００６２】 Ｉ．Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン、１７： 磁気攪拌子を備える２５０ｍｌ丸底フラスコに３．５８ｇ（２４．３２ミリモ
ル）のＬ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４及び１２０ｍｌのテトラヒドロフラ
ン／水（１：１、ｖ／ｖ）を入れた。この混合物を全ての固体が溶解するまでＲ
Ｔで攪拌し、３．４ｍｌ（２．４７ｇ、２４．３９ミリモル）のトリエチルアミ
ンを添加した。５分後、テトラヒドロフラン１０ｍｌ中の６．３７ｇ（２９．１
８ミリモル）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを添加し、その溶液をＲＴ
で一晩激しく攪拌した。その反応混合物を真空中で濃縮してテトラヒドロフラン
を除去し、３０ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加した。その溶液を５０
０ｍｌ分離漏斗に移して酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出し、水相を固体クエ
ン酸でｐＨ３．０に調整した。その溶液を酢酸エチル（４×５０ｍｌ）で抽出し
、合わせた抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、真空中で濃縮して
１．８ｇの白色固体、Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７を
得た。この粗製生成物を約３０ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、熱ヘキサンで曇り
点にした。その溶液を攪拌し、ＲＴに、次いで冷蔵庫内で２時間冷却し、濾過し
、固体をヘキサン（３×１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて１．４
８ｇの白色粉末Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７を得た（
１０．０ｇのＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４から１７．６％、３工程
）。ＴＬＣ（ＡＢＴＡＷ、上述の通り）；Ｒf ０．７９の単一成分。融点（ＭＰ
）１１３〜１１４℃（未修整）。Ｌｉｔ3.9 ：１１２〜１１３℃、［α］D −６
．７７°（conc. ７．０、メタノール、Ｔ＝２３℃）、Ｌｉｔ3.9 ：［α］D −
６．３６＋／−０．８°（conc. ７．３、メタノール）。
ル）のＬ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４及び１２０ｍｌのテトラヒドロフラ
ン／水（１：１、ｖ／ｖ）を入れた。この混合物を全ての固体が溶解するまでＲ
Ｔで攪拌し、３．４ｍｌ（２．４７ｇ、２４．３９ミリモル）のトリエチルアミ
ンを添加した。５分後、テトラヒドロフラン１０ｍｌ中の６．３７ｇ（２９．１
８ミリモル）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを添加し、その溶液をＲＴ
で一晩激しく攪拌した。その反応混合物を真空中で濃縮してテトラヒドロフラン
を除去し、３０ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加した。その溶液を５０
０ｍｌ分離漏斗に移して酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出し、水相を固体クエ
ン酸でｐＨ３．０に調整した。その溶液を酢酸エチル（４×５０ｍｌ）で抽出し
、合わせた抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、真空中で濃縮して
１．８ｇの白色固体、Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７を
得た。この粗製生成物を約３０ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、熱ヘキサンで曇り
点にした。その溶液を攪拌し、ＲＴに、次いで冷蔵庫内で２時間冷却し、濾過し
、固体をヘキサン（３×１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（風乾／真空）させて１．４
８ｇの白色粉末Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７を得た（
１０．０ｇのＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４から１７．６％、３工程
）。ＴＬＣ（ＡＢＴＡＷ、上述の通り）；Ｒf ０．７９の単一成分。融点（ＭＰ
）１１３〜１１４℃（未修整）。Ｌｉｔ3.9 ：１１２〜１１３℃、［α］D −６
．７７°（conc. ７．０、メタノール、Ｔ＝２３℃）、Ｌｉｔ3.9 ：［α］D −
６．３６＋／−０．８°（conc. ７．３、メタノール）。
【００６３】 第２バッチにおいては、磁気攪拌子を備える２Ｌ丸底フラスコに３２．０ｇ（
０．２１７モル）のＬ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４及び１Ｌのテトラヒド
ロフラン／水（１：１、ｖ／ｖ）を入れた。この混合物を全ての固体が溶解する
までＲＴで攪拌し、３０．０ｍｌ（２１．７８ｇ、０．２１５モル）のトリエチ
ルアミンを添加した。約５分後、テトラヒドロフラン１００ｍｌ中に５７．０ｇ
（０．２６１モル）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを添加し、その溶液
をＲＴで一晩激しく攪拌した。
０．２１７モル）のＬ−ε−ヒドロキシノルロイシン１４及び１Ｌのテトラヒド
ロフラン／水（１：１、ｖ／ｖ）を入れた。この混合物を全ての固体が溶解する
までＲＴで攪拌し、３０．０ｍｌ（２１．７８ｇ、０．２１５モル）のトリエチ
ルアミンを添加した。約５分後、テトラヒドロフラン１００ｍｌ中に５７．０ｇ
（０．２６１モル）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを添加し、その溶液
をＲＴで一晩激しく攪拌した。
【００６４】 この反応混合物を真空中で濃縮してテトラヒドロフランを除去し、２５０ｍｌ
の１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加した。その溶液を４Ｌ分離漏斗に移して酢
酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、水相を固体クエン酸（約２００ｇ）でｐ
Ｈ３．０に調整した。その溶液を２００ｍｌの酢酸エチルと共に振盪したが、エ
マルジョンが形成された。その溶液を、磁気攪拌子を備える２Ｌエーレンマイヤ
ーフラスコに移し、固体塩化ナトリウムと共にＲＴで一晩激しく攪拌して層を塩
析した。それらの層を２Ｌ分離漏斗において分離し、水相を酢酸エチル（２×２
００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで一晩乾燥させ
た。その溶液を濾過し、濾液を真空中で濃縮して２３．０ｇの粘性黄褐色油を得
た。その粗製生成物を、磁気攪拌子を収容する１Ｌエーレンマイヤーフラスコ内
で２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、熱ヘキサン（約１００ｍｌ）で曇り点に
した。その溶液を攪拌し、ＲＴに冷却した後冷蔵庫内で７２時間冷却して濾過し
、固体をヘキサン（３×１００ｍｌ）で洗浄して乾燥（風乾／真空）させ、１３
．５ｇのＬ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７を白色粉末とし
て得た（５１．７ｇのＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンから３１．１％、３
工程）。ＴＬＣ（ＡＢＴＡＷ、上述の通り）；Ｒf ０．７９の１つの主要成分に
加えてＲf ０．８５の痕跡量の不純物。融点（ＭＰ）１１０〜１１３℃（未修整
）；［α］D −６．４１゜（conc. ７．０、メタノール、Ｔ＝２３℃）。
の１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加した。その溶液を４Ｌ分離漏斗に移して酢
酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、水相を固体クエン酸（約２００ｇ）でｐ
Ｈ３．０に調整した。その溶液を２００ｍｌの酢酸エチルと共に振盪したが、エ
マルジョンが形成された。その溶液を、磁気攪拌子を備える２Ｌエーレンマイヤ
ーフラスコに移し、固体塩化ナトリウムと共にＲＴで一晩激しく攪拌して層を塩
析した。それらの層を２Ｌ分離漏斗において分離し、水相を酢酸エチル（２×２
００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで一晩乾燥させ
た。その溶液を濾過し、濾液を真空中で濃縮して２３．０ｇの粘性黄褐色油を得
た。その粗製生成物を、磁気攪拌子を収容する１Ｌエーレンマイヤーフラスコ内
で２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、熱ヘキサン（約１００ｍｌ）で曇り点に
した。その溶液を攪拌し、ＲＴに冷却した後冷蔵庫内で７２時間冷却して濾過し
、固体をヘキサン（３×１００ｍｌ）で洗浄して乾燥（風乾／真空）させ、１３
．５ｇのＬ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７を白色粉末とし
て得た（５１．７ｇのＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンから３１．１％、３
工程）。ＴＬＣ（ＡＢＴＡＷ、上述の通り）；Ｒf ０．７９の１つの主要成分に
加えてＲf ０．８５の痕跡量の不純物。融点（ＭＰ）１１０〜１１３℃（未修整
）；［α］D −６．４１゜（conc. ７．０、メタノール、Ｔ＝２３℃）。
【００６５】 第３バッチの作製は、５１．０ｇ（０．３４７モル）のＬ−ε−ヒドロキシノ
ルロイシン１４及び１．６Ｌのテトラヒドロフラン／水（１：１、ｖ／ｖ）を、
磁気攪拌子を備える３Ｌ丸底フラスコに加えることによって行った。この混合物
を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪拌し、５０．０ｍｌ（３６．３ｇ、０．３
５７モル）のトリエチルアミンを添加した。１０分後、テトラヒドロフラン１５
０ｍｌ中に９１．０ｇ（０．４１７モル）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネー
トを添加し、その溶液をＲＴで一晩激しく攪拌した。その反応混合物を真空中で
濃縮してテトラヒドロフランを除去し、５００ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液を添加した。その溶液を４Ｌ分離漏斗に移して酢酸エチル（２×１５０ｍｌ）
で抽出し、水相を固体クエン酸（約３００ｇ）でｐＨ３．０に調整した。その溶
液を、磁気攪拌子を備える４Ｌエーレンマイヤーフラスコに移し、３００ｍｌの
酢酸エチルと共にＲＴで一晩激しく攪拌した。４Ｌ分離漏斗において層を分離し
、水相を酢酸エチル（２×３００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を無水硫
酸ナトリウムで一晩乾燥させた。その溶液を濾過し、濾液を真空中で濃縮して４
５．６ｇの粘性黄褐色油を得た。その粗製生成物を、磁気攪拌子を収容する１Ｌ
エーレンマイヤーフラスコ内で２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、熱ヘキサン
（約１５０ｍｌ）で曇り点にした。その溶液を攪拌し、ＲＴに冷却した後、冷蔵
庫に１８時間入れた。その溶液を濾過し、固体をヘキサン（２×１００ｍｌ）で
洗浄して乾燥（風乾／真空）させ、２５．４ｇのオフホワイトの粉末を得たが、
これはスキームII（図３）の所望の最終生成物であるＬ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−
ヒドロキシノルロイシン１７と同定された（１００．０ｇのＤ，Ｌ−ε−ヒドロ
キシノルロイシン１６から３０．２％、３工程）。ＴＬＣ（ＡＢＴＡＷ、上述の
通り）；１つの主要成分、Ｒf ０．７９に加えてＲf ０．８５の痕跡量の不純物
。融点（ＭＰ）１０７〜１１２℃（未修整）；［α］D −５．４４゜（conc. ７
．０、メタノール、Ｔ＝２３℃）。この物質の試料（１０〜２０ｍｇ）を試験管
に入れ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸と共に１５分間振盪した。その試料を窒素流
で濃縮して数滴の水に溶解し、キラル薄層クロマトグラフィー、CHIRALPLATE （
上述の通り）に処したところ、Ｒf ０．４５に単一の成分が生じた。
ルロイシン１４及び１．６Ｌのテトラヒドロフラン／水（１：１、ｖ／ｖ）を、
磁気攪拌子を備える３Ｌ丸底フラスコに加えることによって行った。この混合物
を全ての固体が溶解するまでＲＴで攪拌し、５０．０ｍｌ（３６．３ｇ、０．３
５７モル）のトリエチルアミンを添加した。１０分後、テトラヒドロフラン１５
０ｍｌ中に９１．０ｇ（０．４１７モル）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネー
トを添加し、その溶液をＲＴで一晩激しく攪拌した。その反応混合物を真空中で
濃縮してテトラヒドロフランを除去し、５００ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液を添加した。その溶液を４Ｌ分離漏斗に移して酢酸エチル（２×１５０ｍｌ）
で抽出し、水相を固体クエン酸（約３００ｇ）でｐＨ３．０に調整した。その溶
液を、磁気攪拌子を備える４Ｌエーレンマイヤーフラスコに移し、３００ｍｌの
酢酸エチルと共にＲＴで一晩激しく攪拌した。４Ｌ分離漏斗において層を分離し
、水相を酢酸エチル（２×３００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を無水硫
酸ナトリウムで一晩乾燥させた。その溶液を濾過し、濾液を真空中で濃縮して４
５．６ｇの粘性黄褐色油を得た。その粗製生成物を、磁気攪拌子を収容する１Ｌ
エーレンマイヤーフラスコ内で２００ｍｌの熱酢酸エチルに溶解し、熱ヘキサン
（約１５０ｍｌ）で曇り点にした。その溶液を攪拌し、ＲＴに冷却した後、冷蔵
庫に１８時間入れた。その溶液を濾過し、固体をヘキサン（２×１００ｍｌ）で
洗浄して乾燥（風乾／真空）させ、２５．４ｇのオフホワイトの粉末を得たが、
これはスキームII（図３）の所望の最終生成物であるＬ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−
ヒドロキシノルロイシン１７と同定された（１００．０ｇのＤ，Ｌ−ε−ヒドロ
キシノルロイシン１６から３０．２％、３工程）。ＴＬＣ（ＡＢＴＡＷ、上述の
通り）；１つの主要成分、Ｒf ０．７９に加えてＲf ０．８５の痕跡量の不純物
。融点（ＭＰ）１０７〜１１２℃（未修整）；［α］D −５．４４゜（conc. ７
．０、メタノール、Ｔ＝２３℃）。この物質の試料（１０〜２０ｍｇ）を試験管
に入れ、１ｍｌのトリフルオロ酢酸と共に１５分間振盪した。その試料を窒素流
で濃縮して数滴の水に溶解し、キラル薄層クロマトグラフィー、CHIRALPLATE （
上述の通り）に処したところ、Ｒf ０．４５に単一の成分が生じた。
【００６６】 Ｊ．Ｏ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサメート、２０： Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩１８（１．４４ｇ、９．０４ミリモル
）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に懸濁させて磁気攪拌し、氷浴において０℃に冷却して
ピリジン（４．４８ｍＬ、４５．２ミリモル）で処理した。ＴＨＦ（８ｍＬ）中
に溶解した塩化スベリルメチル１９（９３４ｍｇ、４．５２ミリモル）を滴下に
より添加した。その反応混合物を０℃で約１時間攪拌した後、室温に温めてさら
に一晩攪拌した。酢酸エチル（８０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を添加し、層を分
離した。水相を３０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。次に、合わせた有機層を
５０ｍＬ １ＮＨＣｌで２回、５０ｍＬ Ｈ2 Ｏで１回、次いで飽和ＮａＨＣＯ 3 食塩水で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4 ）。乾燥した有機溶液を濾過し、濃
縮して１．２６ｇ（９５％）の透明淡黄色粘性油を得たが、これはＯ−ベンジル
メチルスベリルヒドロキサメート２０と同定された。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）１．３１（ｂｒ ｍ、４Ｈ）、１．６２（ｂｒ ｍ、４Ｈ）、２．０３（ｂｒ
ｍ、２Ｈ）、２．２９（ｔ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、４．９２（ｂｒ
ｍ、２Ｈ）、７．３８（ｂｒ ｓ、５Ｈ）、８．０１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）；Ｔ
ＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０）、０．２１のＲf 。（
Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミンＨＣｌ ０．３４のＲf ）。図１０を参照。
）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に懸濁させて磁気攪拌し、氷浴において０℃に冷却して
ピリジン（４．４８ｍＬ、４５．２ミリモル）で処理した。ＴＨＦ（８ｍＬ）中
に溶解した塩化スベリルメチル１９（９３４ｍｇ、４．５２ミリモル）を滴下に
より添加した。その反応混合物を０℃で約１時間攪拌した後、室温に温めてさら
に一晩攪拌した。酢酸エチル（８０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を添加し、層を分
離した。水相を３０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。次に、合わせた有機層を
５０ｍＬ １ＮＨＣｌで２回、５０ｍＬ Ｈ2 Ｏで１回、次いで飽和ＮａＨＣＯ 3 食塩水で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4 ）。乾燥した有機溶液を濾過し、濃
縮して１．２６ｇ（９５％）の透明淡黄色粘性油を得たが、これはＯ−ベンジル
メチルスベリルヒドロキサメート２０と同定された。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）１．３１（ｂｒ ｍ、４Ｈ）、１．６２（ｂｒ ｍ、４Ｈ）、２．０３（ｂｒ
ｍ、２Ｈ）、２．２９（ｔ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、４．９２（ｂｒ
ｍ、２Ｈ）、７．３８（ｂｒ ｓ、５Ｈ）、８．０１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）；Ｔ
ＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０）、０．２１のＲf 。（
Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミンＨＣｌ ０．３４のＲf ）。図１０を参照。
【００６７】 Ｋ．Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンメチルエステル、２１： 上記工程ＩからのＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７（５００
ｍｇ、２．０２ミリモル）をＣＨ2 Ｃｌ2 （４ｍＬ）に懸濁させて磁気攪拌し、
Ｏ−メチル−Ｎ，Ｎ' −ジイソプロピルイソ尿素（３７０μＬ、２．０２ミリモ
ル）で処理した。（懸濁した物質はイソ尿素試薬の添加後直ちに溶解した。）こ
の反応混合物を一晩還流して氷浴において冷却し（３０分）、ブフナー漏斗で濾
過（大部分のＮ，Ｎ' −ジイソプロピル尿素を除去）して濃縮した。ＴＬＣでは
相当量の出発物質が残留することが示された。この物質を還流ＣＨ2 Ｃｌ3 （３
ｍＬ）中において０．５当量のＯ−メチル−Ｎ，Ｎ' −ジイソプロピルイソ尿素
（１８４μＬ、１．０１ミリモル）でさらに処理した。（反応溶液を週末にわた
って還流させ、反応フラスコ内、５０℃；油浴、で攪拌することでその間にＣＨ 2 Ｃｌ2 がコンデンサーを通して蒸発し、粘性黄色油及び白色固体が残った。）
濃縮した反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ2 Ｃｌ2 （６ｍＬ）を添加した。得ら
れた溶液を氷浴において冷却し（３０分）、ブフナー漏斗で濾過（大部分のＮ，
Ｎ' −ジイソプロピル尿素を除去）して濃縮し、６４２ｍｇの粗製生成物を黄色
油として得た。ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール、５０：５０、Ｖ
／Ｖ０．７４のＲf 。［Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンメチルエ
ステル２１ ０．４６のＲf ］。この物質をさらに精製することなく次工程にお
いて直接用いた。
ｍｇ、２．０２ミリモル）をＣＨ2 Ｃｌ2 （４ｍＬ）に懸濁させて磁気攪拌し、
Ｏ−メチル−Ｎ，Ｎ' −ジイソプロピルイソ尿素（３７０μＬ、２．０２ミリモ
ル）で処理した。（懸濁した物質はイソ尿素試薬の添加後直ちに溶解した。）こ
の反応混合物を一晩還流して氷浴において冷却し（３０分）、ブフナー漏斗で濾
過（大部分のＮ，Ｎ' −ジイソプロピル尿素を除去）して濃縮した。ＴＬＣでは
相当量の出発物質が残留することが示された。この物質を還流ＣＨ2 Ｃｌ3 （３
ｍＬ）中において０．５当量のＯ−メチル−Ｎ，Ｎ' −ジイソプロピルイソ尿素
（１８４μＬ、１．０１ミリモル）でさらに処理した。（反応溶液を週末にわた
って還流させ、反応フラスコ内、５０℃；油浴、で攪拌することでその間にＣＨ 2 Ｃｌ2 がコンデンサーを通して蒸発し、粘性黄色油及び白色固体が残った。）
濃縮した反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ2 Ｃｌ2 （６ｍＬ）を添加した。得ら
れた溶液を氷浴において冷却し（３０分）、ブフナー漏斗で濾過（大部分のＮ，
Ｎ' −ジイソプロピル尿素を除去）して濃縮し、６４２ｍｇの粗製生成物を黄色
油として得た。ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール、５０：５０、Ｖ
／Ｖ０．７４のＲf 。［Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンメチルエ
ステル２１ ０．４６のＲf ］。この物質をさらに精製することなく次工程にお
いて直接用いた。
【００６８】 Ｌ．Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシンメチルエステル、２２： 上記Ｋのエステル化反応からの粗製生成物２１（６４２ｍｇ）をＴＨＦ（６ｍ
Ｌ）に溶解した。トリフェニルホスフィン（７９５ｍｇ、３．０３ミリモル）を
添加した後、ＴＨＦ２ｍＬ中の四臭化炭素（１．００５ｇ、３．０３ミリモル）
を滴下により添加した。その混合物を室温で一晩攪拌した後、回転蒸発によって
ＴＨＦを除去し、残滓をシリカゲル（２×３０ｃｍ）で、ＣＨ2 Ｃｌ2 で溶出し
てクロマトグラフィー処理し、ブロモ−エステル２２（図９を参照）と同定され
る化合物を淡黄色油として得た：４６２ｍｇ（２工程で７１％）；1 Ｈ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）１．２〜２．１（１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を含むｂｒ ｍ、１
５Ｈ）、３．４０（ｔ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、４．３２（ｂｒ ｍ、
１Ｈ）、５．０４（ｄ、１Ｈ、ＮＨ）；［α］24D −１３．３（約６．４１、Ｃ
Ｈ3 ＯＨ）；ＴＬＣ（シリカゲル、５：１ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）０．７４の
Ｒf 。
Ｌ）に溶解した。トリフェニルホスフィン（７９５ｍｇ、３．０３ミリモル）を
添加した後、ＴＨＦ２ｍＬ中の四臭化炭素（１．００５ｇ、３．０３ミリモル）
を滴下により添加した。その混合物を室温で一晩攪拌した後、回転蒸発によって
ＴＨＦを除去し、残滓をシリカゲル（２×３０ｃｍ）で、ＣＨ2 Ｃｌ2 で溶出し
てクロマトグラフィー処理し、ブロモ−エステル２２（図９を参照）と同定され
る化合物を淡黄色油として得た：４６２ｍｇ（２工程で７１％）；1 Ｈ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ3 ）１．２〜２．１（１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を含むｂｒ ｍ、１
５Ｈ）、３．４０（ｔ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、４．３２（ｂｒ ｍ、
１Ｈ）、５．０４（ｄ、１Ｈ、ＮＨ）；［α］24D −１３．３（約６．４１、Ｃ
Ｈ3 ＯＨ）；ＴＬＣ（シリカゲル、５：１ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）０．７４の
Ｒf 。
【００６９】 Ｍ．Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン、２３； Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシンメチルエステル２２（４４０ｍｇ、
１．３６ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＯＨ（１５ｍＬのＨ2 Ｏ中に５５ｍｇ）で処理した。この溶液を室温で２時間攪拌した後、回転蒸発に
よって大部分のＴＨＦを除去した（反応溶液は３５ｍＬから約１５ｍＬに濃縮さ
れた）。水（１５ｍＬ）を添加し、その溶液をＥｔ2 Ｏ（１×２０ｍＬ；僅かな
エマルジョン−少量の食塩水を添加）で抽出した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌ
を滴下により添加することでｐＨ２．５に酸性化した（初期ｐＨ１１．２５；１
Ｎ ＨＣｌの総容積約２ｍＬ）。その後、水層を３×２０ｍＬ ＥｔＯＡｃで抽
出し、合わせた有機層を食塩水で洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ4 ）させた後、その
溶液を濾過し、濃縮して３９５ｍｇ（９４％）の透明粘性油（（Ｌ）−Ｎ−Ｂｏ
ｃ−ε−ブロモノルロイシン、２３）を得た。ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル
／メタノール、５：１、ｖ／ｖ、Ｒf は０．１９から０．５４にわたる。
１．３６ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＯＨ（１５ｍＬのＨ2 Ｏ中に５５ｍｇ）で処理した。この溶液を室温で２時間攪拌した後、回転蒸発に
よって大部分のＴＨＦを除去した（反応溶液は３５ｍＬから約１５ｍＬに濃縮さ
れた）。水（１５ｍＬ）を添加し、その溶液をＥｔ2 Ｏ（１×２０ｍＬ；僅かな
エマルジョン−少量の食塩水を添加）で抽出した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌ
を滴下により添加することでｐＨ２．５に酸性化した（初期ｐＨ１１．２５；１
Ｎ ＨＣｌの総容積約２ｍＬ）。その後、水層を３×２０ｍＬ ＥｔＯＡｃで抽
出し、合わせた有機層を食塩水で洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ4 ）させた後、その
溶液を濾過し、濃縮して３９５ｍｇ（９４％）の透明粘性油（（Ｌ）−Ｎ−Ｂｏ
ｃ−ε−ブロモノルロイシン、２３）を得た。ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル
／メタノール、５：１、ｖ／ｖ、Ｒf は０．１９から０．５４にわたる。
【００７０】 Ｎ．Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ホモノルロイシントリメチルシリルエチルエステル、 ２４ ： Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２３（２２５ｍｇ、０．７２５ミリ
モル）を磁気攪拌しながらアルゴンの下でＣＨ3 ＣＮ（１ｍＬ）に溶解し、氷浴
において０℃に冷却した（１５分）。ピリジン（１１８μＬ、１．４５ミリモル
）及び２−（トリメチルシリル）エタノール（１２５μＬ、０．８７ミリモル）
を連続的に、シリンジによって滴下により添加した。１０分後、１，３−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（１６５ｍｇ、０．８０ミリモル）を添加したところ
、約２分後に白色沈殿が形成した。その反応混合物を０℃で４時間攪拌した。Ｔ
ＬＣでは出発物質が存在することが示された（約２５％ＳＭ、７５％生成物）；
その反応混合物を４℃で７２時間保存した。ＴＬＣで、反応が完了していること
が示された。ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を添加してその溶液を５分間攪拌し、ブフ
ナー漏斗で濾過して白色沈殿を除去し、その固体をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）
で洗浄した。濾液を１Ｎ ＨＣｌ、Ｈ2 Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3 、及び食塩水（各
々１×２ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4 ）。濾過及び濃縮により約３
５０ｍｇの粗製生成物が得られ、それを５％から５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン
の勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２×３０ｃｍ）によって精製
して、２７４ｍｇ（９２％）の、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリ
メチルシリルエチルエステル２４と同定される淡黄色油を得た：1 Ｈ ＮＭＲ（
ＣＤＣｌ3 図１１を参照）０．０５（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ）、１．０２（ｍ、２
Ｈ）、１．４０〜１．９０（１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を含むｂｒ ｍ、１５Ｈ
）、３．５３（ｔ、２Ｈ）、４．２２（ｍ、２Ｈ）、４．２８（ｂｒ ｍ、１Ｈ
）、５．０５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、ＮＨ）；ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メ
タノール、５：１、ｖ／ｖ）０．７６のＲf ；（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキ
サン、１０：９０、ｖ／ｖ）０．１４のＲf 。図１１を参照。
モル）を磁気攪拌しながらアルゴンの下でＣＨ3 ＣＮ（１ｍＬ）に溶解し、氷浴
において０℃に冷却した（１５分）。ピリジン（１１８μＬ、１．４５ミリモル
）及び２−（トリメチルシリル）エタノール（１２５μＬ、０．８７ミリモル）
を連続的に、シリンジによって滴下により添加した。１０分後、１，３−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（１６５ｍｇ、０．８０ミリモル）を添加したところ
、約２分後に白色沈殿が形成した。その反応混合物を０℃で４時間攪拌した。Ｔ
ＬＣでは出発物質が存在することが示された（約２５％ＳＭ、７５％生成物）；
その反応混合物を４℃で７２時間保存した。ＴＬＣで、反応が完了していること
が示された。ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を添加してその溶液を５分間攪拌し、ブフ
ナー漏斗で濾過して白色沈殿を除去し、その固体をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）
で洗浄した。濾液を１Ｎ ＨＣｌ、Ｈ2 Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ3 、及び食塩水（各
々１×２ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4 ）。濾過及び濃縮により約３
５０ｍｇの粗製生成物が得られ、それを５％から５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン
の勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２×３０ｃｍ）によって精製
して、２７４ｍｇ（９２％）の、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリ
メチルシリルエチルエステル２４と同定される淡黄色油を得た：1 Ｈ ＮＭＲ（
ＣＤＣｌ3 図１１を参照）０．０５（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ）、１．０２（ｍ、２
Ｈ）、１．４０〜１．９０（１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を含むｂｒ ｍ、１５Ｈ
）、３．５３（ｔ、２Ｈ）、４．２２（ｍ、２Ｈ）、４．２８（ｂｒ ｍ、１Ｈ
）、５．０５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、ＮＨ）；ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メ
タノール、５：１、ｖ／ｖ）０．７６のＲf ；（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキ
サン、１０：９０、ｖ／ｖ）０．１４のＲf 。図１１を参照。
【００７１】 Ｏ．Ｌ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジ ン２−トリメチルシリルエチルエステル、２５ ； 上記ＮからのＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチ
ルエステル２４（２７０ｍｇ、０．６５８ミリモル）を磁気攪拌しながらアルゴ
ンの下で３ｍＬ無水アセトン（無水Ｋ2 ＣＯ3 で乾燥、６０＋分）に溶解した。
上記ＪからのＯ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサメート２０（２９０ｍｇ、
０．９８７ミリモル）をアセトン溶液（１ｍＬ；１×１ｍＬですすぎ）として添
加した。ＫＩ（２２ｍｇ、０．１３２ミリモル）、次いで無水Ｋ2 ＣＯ3 （２２
７ｍｇ、１．６４５ミリモル）を添加した。その反応混合物を還流温度（６５℃
の油浴）に２４時間、アルゴンの下で加熱した。還流温度で２４時間後のＴＬＣ
分析では主として出発物質が存在することが示された；Ｒf ０．５（シリカゲル
、酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０、ｖ／ｖ）の新たなスポットは所望の生成
物かもしれないが淡い＜１０％。さらに０．３当量のＫＩ（３３ｍｇ）を添加し
た；その反応溶液を還流温度、アルゴンの下で激しく攪拌した。還流温度で９６
時間後のＴＬＣ分析ではＲf ＝０．５に、より濃厚な潜在的な生成物スポットが
示され（ＴＬＣにより反応は約５０％完了）、そこで還流温度で反応を継続させ
た。還流温度、アルゴンの下で１２０時間後のＴＬＣでは大きな変化は示されな
かった。その反応溶液を室温に冷却してブフナー漏斗で濾過し（３×１０ｍＬの
乾燥アセトンですすぎ）、回転蒸発（rotovap ）で濃縮した。その残滓を乾燥ア
セトン（無水Ｋ2 ＣＯ3 で乾燥、５日）に再溶解してＫＩ（５５ｍｇ、０．３２
９ミリモル）及び粉末化無水Ｋ2 ＣＯ3 （２３０ｍｇ、１．６４５ミリモル）を
添加し、その反応混合物を還流温度、アルゴンの下で一晩激しく攪拌した。
ルエステル２４（２７０ｍｇ、０．６５８ミリモル）を磁気攪拌しながらアルゴ
ンの下で３ｍＬ無水アセトン（無水Ｋ2 ＣＯ3 で乾燥、６０＋分）に溶解した。
上記ＪからのＯ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサメート２０（２９０ｍｇ、
０．９８７ミリモル）をアセトン溶液（１ｍＬ；１×１ｍＬですすぎ）として添
加した。ＫＩ（２２ｍｇ、０．１３２ミリモル）、次いで無水Ｋ2 ＣＯ3 （２２
７ｍｇ、１．６４５ミリモル）を添加した。その反応混合物を還流温度（６５℃
の油浴）に２４時間、アルゴンの下で加熱した。還流温度で２４時間後のＴＬＣ
分析では主として出発物質が存在することが示された；Ｒf ０．５（シリカゲル
、酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０、ｖ／ｖ）の新たなスポットは所望の生成
物かもしれないが淡い＜１０％。さらに０．３当量のＫＩ（３３ｍｇ）を添加し
た；その反応溶液を還流温度、アルゴンの下で激しく攪拌した。還流温度で９６
時間後のＴＬＣ分析ではＲf ＝０．５に、より濃厚な潜在的な生成物スポットが
示され（ＴＬＣにより反応は約５０％完了）、そこで還流温度で反応を継続させ
た。還流温度、アルゴンの下で１２０時間後のＴＬＣでは大きな変化は示されな
かった。その反応溶液を室温に冷却してブフナー漏斗で濾過し（３×１０ｍＬの
乾燥アセトンですすぎ）、回転蒸発（rotovap ）で濃縮した。その残滓を乾燥ア
セトン（無水Ｋ2 ＣＯ3 で乾燥、５日）に再溶解してＫＩ（５５ｍｇ、０．３２
９ミリモル）及び粉末化無水Ｋ2 ＣＯ3 （２３０ｍｇ、１．６４５ミリモル）を
添加し、その反応混合物を還流温度、アルゴンの下で一晩激しく攪拌した。
【００７２】 その反応溶液を室温に冷却し、ブフナー漏斗で濾過（すすぎ３×１０ｍＬ乾燥
アセトン）して濃縮した。残滓をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に取り、不溶性白色固
体を残してデカントした。そのＥｔＯＡｃ溶液を濃縮して、約６５０ｍｇの透明
油を得た。この油をＥｔ2 Ｏ（３０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｎ ＮａＯＨ（２×
１５ｍＬ）、Ｈ2 Ｏ（１５ｍＬ）、食塩水（１５ｍＬ）で洗浄して乾燥させた（
ＭｇＳＯ4 ）。乾燥させた溶液を濾過し、濃縮して約５５０ｍｇの透明粘性油を
得、これを５％から５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲル
クロマトグラフィー（２×３０ｃｍ）によって精製して３つの画分を得た。第１
溶出画分を濃縮することで１０３ｍｇの無色透明油が得られ、これは、ＴＬＣ（
シリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、０．７１のＲf ）及び1 Ｈ ＮＭＲ
により、回収された出発物質、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２−ト
リメチルシリルエチルエステル２４であることが示された。
アセトン）して濃縮した。残滓をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に取り、不溶性白色固
体を残してデカントした。そのＥｔＯＡｃ溶液を濃縮して、約６５０ｍｇの透明
油を得た。この油をＥｔ2 Ｏ（３０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｎ ＮａＯＨ（２×
１５ｍＬ）、Ｈ2 Ｏ（１５ｍＬ）、食塩水（１５ｍＬ）で洗浄して乾燥させた（
ＭｇＳＯ4 ）。乾燥させた溶液を濾過し、濃縮して約５５０ｍｇの透明粘性油を
得、これを５％から５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲル
クロマトグラフィー（２×３０ｃｍ）によって精製して３つの画分を得た。第１
溶出画分を濃縮することで１０３ｍｇの無色透明油が得られ、これは、ＴＬＣ（
シリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、０．７１のＲf ）及び1 Ｈ ＮＭＲ
により、回収された出発物質、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２−ト
リメチルシリルエチルエステル２４であることが示された。
【００７３】 第２画分を濃縮することで２６ｍｇの無色透明油が得られた。ＴＬＣ（シリカ
ゲル、酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０、ｖ／ｏ）０．６１のＲf 。1 Ｈ Ｎ
ＭＲ分析では、Maurer と Miller が報告した結果との比較により、おそらくは
Ｚ−ヒドロキシメート：Ｅ−ヒドロキシメートの、約９：１混合物であることが
示された。Ｚ−ヒドロキシメート：1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１２を参照）
０．０４（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ）、１．０１（ｍ、２Ｈ）、１．２０〜１．９０（
１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を含むｂｒ ｍ、２３Ｈ）、２．１６（ｔ、２Ｈ）、
２．２９（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、４．１０（ｔ、２Ｈ）、４．２
１（ｍ、２Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．９５（ｓ、２Ｈ）、５．０３（ｂ
ｒ ｄ、１Ｈ、ＮＨ）、７．３５（ｍ、５Ｈ）。
ゲル、酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０、ｖ／ｏ）０．６１のＲf 。1 Ｈ Ｎ
ＭＲ分析では、Maurer と Miller が報告した結果との比較により、おそらくは
Ｚ−ヒドロキシメート：Ｅ−ヒドロキシメートの、約９：１混合物であることが
示された。Ｚ−ヒドロキシメート：1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１２を参照）
０．０４（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ）、１．０１（ｍ、２Ｈ）、１．２０〜１．９０（
１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を含むｂｒ ｍ、２３Ｈ）、２．１６（ｔ、２Ｈ）、
２．２９（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、４．１０（ｔ、２Ｈ）、４．２
１（ｍ、２Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．９５（ｓ、２Ｈ）、５．０３（ｂ
ｒ ｄ、１Ｈ、ＮＨ）、７．３５（ｍ、５Ｈ）。
【００７４】 第３画分を濃縮することで１９７ｍｇの無色透明油が得られた；1 Ｈ ＮＭＲ
分析では、Maurerと Miller が報告した結果との比較により、この物質が所望の
トリメチルシリルエチルエステル２５生成物であることが示された。回収された
出発物質（１０３ｍｇ）3 に基づくと、所望のＮ−アルキル化生成物の収率は７
８％である。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１３）０．０４（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ
）、１．００（ｍ、２Ｈ）、１．２０〜１．９０（１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を
含むｂｒ ｍ、２３Ｈ）、２．２９（ｔ、２Ｈ）、２．３６（ｔ、２Ｈ）、３．
６１（ｂｒ ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、４．２０（ｍ、２Ｈ）、４．
２４（ｍ、１Ｈ）、４．８０（ｓ、２Ｈ）、５．０５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、ＮＨ）
、７．３８（ｍ、５Ｈ）；ＴＬＣ（シリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）
Ｒｆ＝０．４７。
分析では、Maurerと Miller が報告した結果との比較により、この物質が所望の
トリメチルシリルエチルエステル２５生成物であることが示された。回収された
出発物質（１０３ｍｇ）3 に基づくと、所望のＮ−アルキル化生成物の収率は７
８％である。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１３）０．０４（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ
）、１．００（ｍ、２Ｈ）、１．２０〜１．９０（１．４４のｔ−Ｂｕ一重項を
含むｂｒ ｍ、２３Ｈ）、２．２９（ｔ、２Ｈ）、２．３６（ｔ、２Ｈ）、３．
６１（ｂｒ ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、４．２０（ｍ、２Ｈ）、４．
２４（ｍ、１Ｈ）、４．８０（ｓ、２Ｈ）、５．０５（ｂｒ ｄ、１Ｈ、ＮＨ）
、７．３８（ｍ、５Ｈ）；ＴＬＣ（シリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）
Ｒｆ＝０．４７。
【００７５】 Ｐ．Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンベンジルヒドロキサメート、 ３０ ； 磁気攪拌子及びｐＨ探索子を備える１００ｍｌ丸底フラスコに２．００グラム
（８．０９ミリモル）の、工程ＩからのＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロ
イシン１７、１．５５０グラム（９．７１ミリモル）のＯ−ベンジルヒドロキシ
ルアミン塩酸塩、及び８０ｍｌの水を入れた。その懸濁液を、２Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液を滴下により添加することによってｐＨを４．５０に調整しながら激
しく攪拌することで反応体を溶解した。１−エチル−３−［３−（ジメチルアミ
ノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）（１．９５６グラム、１０
．２０ミリモル）を６ｍｌの水に溶解し、反応混合物に滴下により約５分間にわ
たって添加した。その溶液を室温で１５分間攪拌し（ｐＨ７．２６）、その時点
でさらに水１ｍｌ中に０．４４グラム（２．３０ミリモル）のカルボジイミドを
滴下により添加した。得られた溶液を室温で１５分間攪拌し（ｐＨ７．５３）、
２５０ｍｌ分離漏斗に移してエーテル（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせたエ
ーテル層を０．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４×２５ｍｌ）で抽出し、合わせ
た水性抽出物をエーテル（１×２５ｍｌ）で洗浄して、クエン酸でｐＨ６．６に
酸性化した。この処理の間にｐＨが６．３５に低下したため、３Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液を滴下により添加して溶液を６．６に戻した。その溶液をジクロロメ
タン（４×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥
させて真空中で濃縮し、０．８８グラム（収率３０．９％）の粗製生成物を得た
。ＴＬＣ分析では１つの主要スポットが示された（シリカゲル；メタノール／ク
ロロホルム、１０：９０、ｖ／ｖ；可視化−ＵＶ光、次いでアニスアルデヒド、
加熱、次に４％ホスホモリブデン酸／エタノール、加熱）。
（８．０９ミリモル）の、工程ＩからのＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロ
イシン１７、１．５５０グラム（９．７１ミリモル）のＯ−ベンジルヒドロキシ
ルアミン塩酸塩、及び８０ｍｌの水を入れた。その懸濁液を、２Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液を滴下により添加することによってｐＨを４．５０に調整しながら激
しく攪拌することで反応体を溶解した。１−エチル−３−［３−（ジメチルアミ
ノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）（１．９５６グラム、１０
．２０ミリモル）を６ｍｌの水に溶解し、反応混合物に滴下により約５分間にわ
たって添加した。その溶液を室温で１５分間攪拌し（ｐＨ７．２６）、その時点
でさらに水１ｍｌ中に０．４４グラム（２．３０ミリモル）のカルボジイミドを
滴下により添加した。得られた溶液を室温で１５分間攪拌し（ｐＨ７．５３）、
２５０ｍｌ分離漏斗に移してエーテル（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせたエ
ーテル層を０．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４×２５ｍｌ）で抽出し、合わせ
た水性抽出物をエーテル（１×２５ｍｌ）で洗浄して、クエン酸でｐＨ６．６に
酸性化した。この処理の間にｐＨが６．３５に低下したため、３Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液を滴下により添加して溶液を６．６に戻した。その溶液をジクロロメ
タン（４×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥
させて真空中で濃縮し、０．８８グラム（収率３０．９％）の粗製生成物を得た
。ＴＬＣ分析では１つの主要スポットが示された（シリカゲル；メタノール／ク
ロロホルム、１０：９０、ｖ／ｖ；可視化−ＵＶ光、次いでアニスアルデヒド、
加熱、次に４％ホスホモリブデン酸／エタノール、加熱）。
【００７６】 磁気攪拌子及びｐＨ探索子を備える５００ｍｌ丸底フラスコに５．００グラム
（２０．２２ミリモル）のＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７、
３．８８グラム（２４．３１ミリモル）のＯ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸
塩、及び２００ｍｌの水を入れた。その懸濁液を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
を滴下により添加することによってｐＨを４．５０に調整しながら激しく攪拌し
た。この時点で固体物質は全て溶解した。１−エチル−３−［３−（ジメチルア
ミノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（４．８０グラム、２５．０４ミリモ
ル）を１５ｍｌの水に溶解し、それを反応混合物に６０ｍｌ添加漏斗を介して滴
下により約５分間にわたって添加した。得られた混合物を室温で３０分間攪拌し
た後、第２の一部（１．１０グラム、５．７４ミリモル、３ｍｌの水に溶解）を
添加した。その溶液を室温で１５分間攪拌し（ｐＨ７．２６）、その時点でさら
に水１ｍｌ中に０．４４グラム（２．３０ミリモル）のカルボジイミドを滴下に
より添加した。ＴＬＣ分析（上述の通り）では生成物に対して相当量の出発物質
が示されたため、その混合物をＲＴで一晩攪拌した。その溶液を５００ｍｌ分離
漏斗に移し、エーテル（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせたエーテル層を０
．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた水性抽出物
をエーテル（１×５０ｍｌ）で洗浄して、クエン酸でｐＨ６．６に酸性化した。
その溶液をジクロロメタン（４×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物を無水
硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して２．３４グラム（収率３２．６
％）の、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンベンジルヒドロキサメー
ト３０と同定される粗製生成物を得た。ＴＬＣ分析（上述の通り）では１つの主
要成分が示される。
（２０．２２ミリモル）のＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシン１７、
３．８８グラム（２４．３１ミリモル）のＯ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸
塩、及び２００ｍｌの水を入れた。その懸濁液を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
を滴下により添加することによってｐＨを４．５０に調整しながら激しく攪拌し
た。この時点で固体物質は全て溶解した。１−エチル−３−［３−（ジメチルア
ミノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（４．８０グラム、２５．０４ミリモ
ル）を１５ｍｌの水に溶解し、それを反応混合物に６０ｍｌ添加漏斗を介して滴
下により約５分間にわたって添加した。得られた混合物を室温で３０分間攪拌し
た後、第２の一部（１．１０グラム、５．７４ミリモル、３ｍｌの水に溶解）を
添加した。その溶液を室温で１５分間攪拌し（ｐＨ７．２６）、その時点でさら
に水１ｍｌ中に０．４４グラム（２．３０ミリモル）のカルボジイミドを滴下に
より添加した。ＴＬＣ分析（上述の通り）では生成物に対して相当量の出発物質
が示されたため、その混合物をＲＴで一晩攪拌した。その溶液を５００ｍｌ分離
漏斗に移し、エーテル（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせたエーテル層を０
．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた水性抽出物
をエーテル（１×５０ｍｌ）で洗浄して、クエン酸でｐＨ６．６に酸性化した。
その溶液をジクロロメタン（４×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物を無水
硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して２．３４グラム（収率３２．６
％）の、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンベンジルヒドロキサメー
ト３０と同定される粗製生成物を得た。ＴＬＣ分析（上述の通り）では１つの主
要成分が示される。
【００７７】 Ｑ．Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−α−アミノ−Ｎ−（ベンジルオキシ）カプロラクタム、３ １ ； 磁気攪拌子及び共栓を備える５０ｍｌ丸底フラスコに０．８８グラム（２．５
０ミリモル）の、工程ＰからのＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンベ
ンジルヒドロキサメート３０、１５ｍｌの無水テトラヒドロフラン、及び０．８
２グラム（３．１３ミリモル）のトリフェニルホスフィンを入れた。ジエチルア
ゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）（０．５２グラム、２．９８６ミリモル）を
添加し、得られた黄色溶液をＲＴで２時間攪拌してＴＬＣ［シリカゲル；溶媒系
−酢酸エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）；可視化−（１）ＵＶ光、（２
）アニスアルデヒド噴霧試薬、加熱及び（３）４％ホスホモリブデン酸／エタノ
ール、加熱］でチェックした。その溶液を真空中で濃縮し、残滓を１０ｍｌの酢
酸エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）と共に攪拌して、粗い焼結ガラス製
漏斗を通して濾過した。漏斗内の固体物質を酢酸エチル／ヘキサンで数回（４×
１０ｍｌ）洗浄し、濾液を濃縮して１．６０グラムの、カプロラクタム３１と同
定される粗製生成物を得た。
０ミリモル）の、工程ＰからのＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンベ
ンジルヒドロキサメート３０、１５ｍｌの無水テトラヒドロフラン、及び０．８
２グラム（３．１３ミリモル）のトリフェニルホスフィンを入れた。ジエチルア
ゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）（０．５２グラム、２．９８６ミリモル）を
添加し、得られた黄色溶液をＲＴで２時間攪拌してＴＬＣ［シリカゲル；溶媒系
−酢酸エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）；可視化−（１）ＵＶ光、（２
）アニスアルデヒド噴霧試薬、加熱及び（３）４％ホスホモリブデン酸／エタノ
ール、加熱］でチェックした。その溶液を真空中で濃縮し、残滓を１０ｍｌの酢
酸エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）と共に攪拌して、粗い焼結ガラス製
漏斗を通して濾過した。漏斗内の固体物質を酢酸エチル／ヘキサンで数回（４×
１０ｍｌ）洗浄し、濾液を濃縮して１．６０グラムの、カプロラクタム３１と同
定される粗製生成物を得た。
【００７８】 この調製を以下のように繰り返した：磁気攪拌子及び共栓を備える２５０ｍｌ
丸底フラスコに２．３４グラム（６．６４ミリモル）のＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒ
ドロキシノルロイシンベンジルヒドロキサメート、５０ｍｌの無水テトラヒドロ
フラン、及び２．１８グラム（８．３１ミリモル）のトリフェニルホスフィンを
入れた。ジエチルアゾジカルボキシレート（１．４５グラム、８．３３ミリモル
）を添加し、得られた黄色溶液をＲＴで２時間攪拌してＴＬＣ（上述の通り）で
チェックした。この分析では出発物質の不在が示されたので、その溶液を真空中
で濃縮し、残滓を２５ｍｌの酢酸エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）と共
に攪拌して、粗い焼結ガラス製漏斗を通して濾過した。漏斗内の固体物質を酢酸
エチル／ヘキサンで数回（４×２５ｍｌ）洗浄し、濾液を濃縮して４．７８グラ
ムの粗製生成物を得た。 上記２つの調製からの粗製環化反応生成物を合わせ（６．３８グラム）、５ｍ
ｌのジクロロメタンに溶解し、シリカゲル（２３０〜４００メッシュ、グレード
６０）を収容する２．５×４６．０ｃｍガラスＭＰＬＣカラム上に注入し、酢酸
エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）で溶出した。画分（５０ｍｌ）を集め
、ＴＬＣによって分析し、ＴＬＣの結果に従ってプールし、濃縮して５つの主要
画分を得た：
丸底フラスコに２．３４グラム（６．６４ミリモル）のＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ヒ
ドロキシノルロイシンベンジルヒドロキサメート、５０ｍｌの無水テトラヒドロ
フラン、及び２．１８グラム（８．３１ミリモル）のトリフェニルホスフィンを
入れた。ジエチルアゾジカルボキシレート（１．４５グラム、８．３３ミリモル
）を添加し、得られた黄色溶液をＲＴで２時間攪拌してＴＬＣ（上述の通り）で
チェックした。この分析では出発物質の不在が示されたので、その溶液を真空中
で濃縮し、残滓を２５ｍｌの酢酸エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）と共
に攪拌して、粗い焼結ガラス製漏斗を通して濾過した。漏斗内の固体物質を酢酸
エチル／ヘキサンで数回（４×２５ｍｌ）洗浄し、濾液を濃縮して４．７８グラ
ムの粗製生成物を得た。 上記２つの調製からの粗製環化反応生成物を合わせ（６．３８グラム）、５ｍ
ｌのジクロロメタンに溶解し、シリカゲル（２３０〜４００メッシュ、グレード
６０）を収容する２．５×４６．０ｃｍガラスＭＰＬＣカラム上に注入し、酢酸
エチル／ヘキサン（３０：７０、ｖ／ｖ）で溶出した。画分（５０ｍｌ）を集め
、ＴＬＣによって分析し、ＴＬＣの結果に従ってプールし、濃縮して５つの主要
画分を得た：
【００７９】
【表１】画分＃ 物質の重量 成分のＲf ＵＶポジティブ 収率 1 80 mg 0.66 （主）、0.73 0.66 2 90 mg 0.39 、0.58、0.66 0.66 3 190 mg 0.37 、0.44 0.37 4 2.22 g 0.25 （主）、0.35 0.25 72.5％ 5 281.39 mg* 0.11 * 、0.16 0.16* アニスアルデヒド試薬で明黄色に染色
【００８０】 上記ＴＬＣシステムの起点に留まる、高度にＵＶ活性のスポットを１００％酢
酸エチルでカラムから洗い流した（おそらくは、酸化トリフェニルホスフィン）
。 画分＃４をＨＰＬＣ［カラム− CAPCELL PAK C18（４．６×２５０ｍｍ、SG12
0 、５ミクロン）；溶媒系−アセトニトリル／水勾配（７０：３０で５分間、５
分にわたって９０：１０に増加、及び５分間保持）；検出−ＵＶ＠２５４ｎｍ］
によってさらに分析したところ、３．２３分（５．０５％）、４．６４分（５２
．２２％）、５．５５分（３５．４３％）、及び９．６６分（６．６１％）の保
持時間に４つの主要成分を含むことが示された。この物質を２５ｍｌのジクロロ
メタンに溶解し、焼結ガラスフリットを取り付けたガラスカラム内のシリカゲル
の３．０×５０．０ｃｍ床にのせた。試料をフラスコから洗い流してさらなるＣ
Ｈ2 Ｃｌ2 （３×１０ｍｌ）と共にカラムにのせ、１００％ジクロロメタンで溶
出した。１．５ＬのＣＨ2 Ｃｌ2 で流出する物質はない。次に、このカラムをジ
クロロメタン中５％のエタノールで処理して１００〜２００ｍｌの画分を切り捨
て、ＴＬＣの結果に従って合わせて真空中で濃縮した。４つの主要画分を得た：
酸エチルでカラムから洗い流した（おそらくは、酸化トリフェニルホスフィン）
。 画分＃４をＨＰＬＣ［カラム− CAPCELL PAK C18（４．６×２５０ｍｍ、SG12
0 、５ミクロン）；溶媒系−アセトニトリル／水勾配（７０：３０で５分間、５
分にわたって９０：１０に増加、及び５分間保持）；検出−ＵＶ＠２５４ｎｍ］
によってさらに分析したところ、３．２３分（５．０５％）、４．６４分（５２
．２２％）、５．５５分（３５．４３％）、及び９．６６分（６．６１％）の保
持時間に４つの主要成分を含むことが示された。この物質を２５ｍｌのジクロロ
メタンに溶解し、焼結ガラスフリットを取り付けたガラスカラム内のシリカゲル
の３．０×５０．０ｃｍ床にのせた。試料をフラスコから洗い流してさらなるＣ
Ｈ2 Ｃｌ2 （３×１０ｍｌ）と共にカラムにのせ、１００％ジクロロメタンで溶
出した。１．５ＬのＣＨ2 Ｃｌ2 で流出する物質はない。次に、このカラムをジ
クロロメタン中５％のエタノールで処理して１００〜２００ｍｌの画分を切り捨
て、ＴＬＣの結果に従って合わせて真空中で濃縮した。４つの主要画分を得た：
【００８１】 画分＃１：Ｒf ０．１３のスポットのみ、４２０ｍｇ 画分＃２：Ｒf ０．１３（主要成分）及びＲf ０．０４のスポットの混合物、
５１０ｍｇ 画分＃３：Ｒf ０．１３及びＲf ０．０４（主要成分）のスポットの混合物、
９４０ｍｇ 画分＃４：Ｒf ０．０４のスポットのみ、２６５ｍｇ カラムから回収された全物質＝２．１３５グラム（９７％）
５１０ｍｇ 画分＃３：Ｒf ０．１３及びＲf ０．０４（主要成分）のスポットの混合物、
９４０ｍｇ 画分＃４：Ｒf ０．０４のスポットのみ、２６５ｍｇ カラムから回収された全物質＝２．１３５グラム（９７％）
【００８２】 画分＃４の試料をアセトニトリルに溶解し、ＨＰＬＣ［カラム− Microsorb-M
V C18 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５ミクロン）；方法− generalmeth７０％；
検出器−ＵＶ＠２５４ｎｍ］によって分析した。１つの主要成分、保持時間−５
．２２１分（９６．００３％）。この物質を熱ヘキサンから再結晶化し、２４０
ｍｇの僅かに精製された物質を得た（９６．７％）。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）１．２０〜２．１０（１．４６のｔ−Ｂｕ一重項を含むｍ、１５Ｈ）、３．５
５（ｍ、２Ｈ）、４．２３（ｍ、１Ｈ）、４．９５（ＡＢｑ、２Ｈ）、５．９１
（ｂｒ ｄ、１Ｈ）、７．３０〜７．４６（ｍ、５Ｈ）。ＮＭＲ（図１４）によ
り、この物質はＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−α−アミノ−Ｎ−（ベンジルオキシ）カプロラ
クタム３１と同定される。
V C18 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５ミクロン）；方法− generalmeth７０％；
検出器−ＵＶ＠２５４ｎｍ］によって分析した。１つの主要成分、保持時間−５
．２２１分（９６．００３％）。この物質を熱ヘキサンから再結晶化し、２４０
ｍｇの僅かに精製された物質を得た（９６．７％）。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）１．２０〜２．１０（１．４６のｔ−Ｂｕ一重項を含むｍ、１５Ｈ）、３．５
５（ｍ、２Ｈ）、４．２３（ｍ、１Ｈ）、４．９５（ＡＢｑ、２Ｈ）、５．９１
（ｂｒ ｄ、１Ｈ）、７．３０〜７．４６（ｍ、５Ｈ）。ＮＭＲ（図１４）によ
り、この物質はＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−α−アミノ−Ｎ−（ベンジルオキシ）カプロラ
クタム３１と同定される。
【００８３】 Ｒ．Ｌ−Ｎ2 −Ｌ−Ｎ−（２−ベンジルオキシベンゾイル）−セリンアミジル］ −Ｎ6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリ ルエチル］エステル、２７ ： スキームIV（図５）の最終工程に従い、工程Ｑにおいて調製したＬ−Ｎ2 −Ｂ
ｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチル
シリルエチルエステル２５（１９５ｍｇ、０．３１３ミリモル）をトリフルオロ
酢酸（ＴＦＡ、１ｍｌ）と共に５分間攪拌した後、過剰のＴＦＡをロータリーエ
バポレーターを用いて減圧で除去した。その残滓をクロロホルム（２ｍｌ）及び
５％炭酸ナトリウム（１ｍｌ）に分配し、激しく攪拌した後、層を分離させて有
機層をピペットで除去した。水層をクロロホルム（２×１ｍｌ）で抽出し、合わ
せた有機層をＫ2 ＣＯ3 で簡単に乾燥させ、ブフナー漏斗を通して濾過した。濾
液をロータリーエバポレーターで濃縮し、化合物２６、図５と同定されるその残
滓を３ｍｌのクロロホルムに溶解した。スキームＶ（図６）に従い、上で調製し
た化合物２６の溶液に工程ＤからのＬ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ（ベンゾイル
）］セリン８（９９．０ｍｇ、０．３１３ミリモル）、次いでＥＥＤＱ（８１．
０ｍｇ、０．３２８ミリモル）を添加した。この丸底フラスコの側面をさらに１
ｍｌのクロロホルムですすいだ。
ｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチル
シリルエチルエステル２５（１９５ｍｇ、０．３１３ミリモル）をトリフルオロ
酢酸（ＴＦＡ、１ｍｌ）と共に５分間攪拌した後、過剰のＴＦＡをロータリーエ
バポレーターを用いて減圧で除去した。その残滓をクロロホルム（２ｍｌ）及び
５％炭酸ナトリウム（１ｍｌ）に分配し、激しく攪拌した後、層を分離させて有
機層をピペットで除去した。水層をクロロホルム（２×１ｍｌ）で抽出し、合わ
せた有機層をＫ2 ＣＯ3 で簡単に乾燥させ、ブフナー漏斗を通して濾過した。濾
液をロータリーエバポレーターで濃縮し、化合物２６、図５と同定されるその残
滓を３ｍｌのクロロホルムに溶解した。スキームＶ（図６）に従い、上で調製し
た化合物２６の溶液に工程ＤからのＬ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ（ベンゾイル
）］セリン８（９９．０ｍｇ、０．３１３ミリモル）、次いでＥＥＤＱ（８１．
０ｍｇ、０．３２８ミリモル）を添加した。この丸底フラスコの側面をさらに１
ｍｌのクロロホルムですすいだ。
【００８４】 この無色透明の溶液はＥＥＤＱの添加の約１５分後に曇ってきて、その後結晶
性沈殿が徐々に形成された。その反応混合物を室温で一晩攪拌し、回転蒸発によ
り濃縮して、残滓を４ｍｌの酢酸エチルに溶解した。その溶液を分離漏斗に移し
、Ｈ2 Ｏ（１×３ｍｌ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１×３ｍｌ）、０．２Ｎ
塩酸水溶液（３×３ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１×３ｍｌ）、及び
飽和食塩水（１×３ｍｌ）で洗浄した。その溶液を無水炭酸カリウムで乾燥させ
、ブフナー漏斗を通して濾過し、回転濾過及び高真空によって濃縮することで、
Ｌ−Ｎ2 −Ｌ−Ｎ−２−ベンジルオキシ（ベンゾイル）−セリンアミジル］−Ｎ 6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエ
チルエステル２７と同定される生成物が無色透明油として残った（１８５．０ｍ
ｇ、７２％）。ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／ヘキサン、５０：５
０、ｖ／ｖ）では０．０９のＲf に単一成分が示される。ＴＬＣ（シリカゲル；
溶媒系−酢酸エチル）、Ｒf ０．４６。
性沈殿が徐々に形成された。その反応混合物を室温で一晩攪拌し、回転蒸発によ
り濃縮して、残滓を４ｍｌの酢酸エチルに溶解した。その溶液を分離漏斗に移し
、Ｈ2 Ｏ（１×３ｍｌ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１×３ｍｌ）、０．２Ｎ
塩酸水溶液（３×３ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１×３ｍｌ）、及び
飽和食塩水（１×３ｍｌ）で洗浄した。その溶液を無水炭酸カリウムで乾燥させ
、ブフナー漏斗を通して濾過し、回転濾過及び高真空によって濃縮することで、
Ｌ−Ｎ2 −Ｌ−Ｎ−２−ベンジルオキシ（ベンゾイル）−セリンアミジル］−Ｎ 6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエ
チルエステル２７と同定される生成物が無色透明油として残った（１８５．０ｍ
ｇ、７２％）。ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／ヘキサン、５０：５
０、ｖ／ｖ）では０．０９のＲf に単一成分が示される。ＴＬＣ（シリカゲル；
溶媒系−酢酸エチル）、Ｒf ０．４６。
【００８５】 Ｓ．２−トリメチルシリルエチルエステル保護ジベンジルエキソケリン酸、２８
： 粗製Ｌ−Ｎ2 −Ｌ−Ｎ−２−ベンジルオキシ（ベンゾイル）−セリンアミジル
］−Ｎ6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシ
リルエチルエステル２７（１８５ｍｇ、０．２２５ミリモル）を無水テトラヒド
ロフラン（１．５ｍｌ、水素化カルシウムから新たに蒸留）に溶解し、その無色
透明溶液を氷／塩浴（−１０〜−１５℃）において冷却した。乾燥テトラヒドロ
フラン中の塩化チオニル（１１５μＬ、１．５７９ミリモル）をその攪拌溶液に
滴下により２０分にわたって添加した。その反応混合物を冷蔵庫（−２０℃）内
に一晩保存した。その透明黄色反応混合物を−２０℃で乾燥エーテル（３５ｍｌ
）に注ぎ入れ、期待される沈殿が形成されない場合には、得られた溶液を−２０
℃で５０ｍｌの乾燥エーテルに注ぎ入れた。５％重炭酸ナトリウム水溶液（１５
ｍｌ）をこの冷エーテル溶液に添加し、その混合物を１５分間激しく攪拌した。
層を分離し、水層をエーテル（１×１０ｍｌ）で抽出して、合わせた有機層を飽
和食塩水（１×１０ｍｌ）で洗浄した。その溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥
させ、ブフナー漏斗を通して濾過し、回転濾過及び高真空によって溶媒を除去す
ることで、粗製生成物が粘性のオレンジ色の油１９５ｍｇ（１０８％）として残
った。５％から７５％の酢酸エチル／ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（２×３０ｃｍ）による精製で、保護ジベンジルエキソケ
リン酸２８と同定される、１００．５ｍｇ（５６％）の透明明黄色油が得られた
。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１５）０．０４（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ）、０．９
９（ｍ、２Ｈ）、１．１０〜１．８０（ｍ、１４Ｈ）、２．２４〜２．３４（ｍ
、４Ｈ）、３．４８（ｂｒ ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、４．２０（ｍ
、２Ｈ）、４．４５（ｍ、１Ｈ）、４．６０（ｍ、２Ｈ）、４．７１（ｓ、２Ｈ
）、４．９２（ｄｄ、１Ｈ）、５．２３（ＡＢｑ、２Ｈ）、６．９５〜７．２１
（ｍ、３Ｈ）、７．２４〜７．５４（ｍ、１１Ｈ）、７．７８〜７．８４（ｄｄ
、１Ｈ）グラムＮｏ．７を参照；質量スペクトル（図１６）ｍ／ｅ ９１（１０
０、Ｃ7 Ｈ7 + ）、８０１（９９．６、Ｍ+ ）、８０２（５５、Ｍ＋１）；ＴＬ
Ｃ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０、ｖ／ｖ）Ｒf ０
．２８の単一成分。ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル）、０．６１のＲ f 。
： 粗製Ｌ−Ｎ2 −Ｌ−Ｎ−２−ベンジルオキシ（ベンゾイル）−セリンアミジル
］−Ｎ6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシ
リルエチルエステル２７（１８５ｍｇ、０．２２５ミリモル）を無水テトラヒド
ロフラン（１．５ｍｌ、水素化カルシウムから新たに蒸留）に溶解し、その無色
透明溶液を氷／塩浴（−１０〜−１５℃）において冷却した。乾燥テトラヒドロ
フラン中の塩化チオニル（１１５μＬ、１．５７９ミリモル）をその攪拌溶液に
滴下により２０分にわたって添加した。その反応混合物を冷蔵庫（−２０℃）内
に一晩保存した。その透明黄色反応混合物を−２０℃で乾燥エーテル（３５ｍｌ
）に注ぎ入れ、期待される沈殿が形成されない場合には、得られた溶液を−２０
℃で５０ｍｌの乾燥エーテルに注ぎ入れた。５％重炭酸ナトリウム水溶液（１５
ｍｌ）をこの冷エーテル溶液に添加し、その混合物を１５分間激しく攪拌した。
層を分離し、水層をエーテル（１×１０ｍｌ）で抽出して、合わせた有機層を飽
和食塩水（１×１０ｍｌ）で洗浄した。その溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥
させ、ブフナー漏斗を通して濾過し、回転濾過及び高真空によって溶媒を除去す
ることで、粗製生成物が粘性のオレンジ色の油１９５ｍｇ（１０８％）として残
った。５％から７５％の酢酸エチル／ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（２×３０ｃｍ）による精製で、保護ジベンジルエキソケ
リン酸２８と同定される、１００．５ｍｇ（５６％）の透明明黄色油が得られた
。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１５）０．０４（ｓ、９Ｈ、ＴＭＳ）、０．９
９（ｍ、２Ｈ）、１．１０〜１．８０（ｍ、１４Ｈ）、２．２４〜２．３４（ｍ
、４Ｈ）、３．４８（ｂｒ ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、４．２０（ｍ
、２Ｈ）、４．４５（ｍ、１Ｈ）、４．６０（ｍ、２Ｈ）、４．７１（ｓ、２Ｈ
）、４．９２（ｄｄ、１Ｈ）、５．２３（ＡＢｑ、２Ｈ）、６．９５〜７．２１
（ｍ、３Ｈ）、７．２４〜７．５４（ｍ、１１Ｈ）、７．７８〜７．８４（ｄｄ
、１Ｈ）グラムＮｏ．７を参照；質量スペクトル（図１６）ｍ／ｅ ９１（１０
０、Ｃ7 Ｈ7 + ）、８０１（９９．６、Ｍ+ ）、８０２（５５、Ｍ＋１）；ＴＬ
Ｃ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／ヘキサン、５０：５０、ｖ／ｖ）Ｒf ０
．２８の単一成分。ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル）、０．６１のＲ f 。
【００８６】 Ｔ．ジベンジルエキソケリン酸、２９： スキームＶ（図６）を完了させるため、２−トリメチルシリルエチルエステル
保護ジベンジルエキソケリン酸２８（８．５ｍｇ、０．０１０６ミリモル）を０
．５ｍｌの無水テトラヒドロフランに溶解し、この溶液にフッ化テトラブチルア
ンモニウム（２１．２μＬ、０．０２１２ミリモル；テトラヒドロフラン中の１
Ｍ溶液）を添加した。その反応混合物を室温で攪拌し、６０分後のＴＬＣ分析で
は出発物質が残っていないことが示された。その反応溶液をロータリーエバポレ
ーターで濃縮して残滓に１ｍｌの水を添加し、その水溶液を〜１０滴の０．１Ｎ
塩酸水溶液でｐＨ２．５に酸性化した。生成物を酢酸エチル（３×２ｍｌ）で抽
出して無水炭酸カリウムで乾燥させ、ブフナー漏斗を通して濾過した。ロータリ
ーエバポレーター及び高真空で濃縮することにより、５．５ｍｇ（７４％）の、
ジベンジルエキソケリン酸２９と同定される明黄褐色ガラス状物質が得られた。 1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１７）１．１０〜１．９０（ｍ、１４Ｈ）、２．
１５〜２．３０（ｍ、４Ｈ）、３．４６（ｂｒ ｍ、２Ｈ）、３．６３（ｓ、３
Ｈ）、４．０６（ｍ、１Ｈ）、４．４８（ｍ、２Ｈ）、４．６５（ｓ、２Ｈ）、
４．８９（ｄｄ、１Ｈ）、５．２０（ｓ、２Ｈ）、６．８７〜６．９５（ｍ、２
Ｈ）、７．１５〜７．４２（ｍ、１２Ｈ）、７．７２〜７．７８（ｄｄ、１Ｈ）
；ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／メタノール、５０：５０、ｖ／ｖ
、加えて１０滴の氷酢酸）。Ｒf ０．６７の単一成分。
保護ジベンジルエキソケリン酸２８（８．５ｍｇ、０．０１０６ミリモル）を０
．５ｍｌの無水テトラヒドロフランに溶解し、この溶液にフッ化テトラブチルア
ンモニウム（２１．２μＬ、０．０２１２ミリモル；テトラヒドロフラン中の１
Ｍ溶液）を添加した。その反応混合物を室温で攪拌し、６０分後のＴＬＣ分析で
は出発物質が残っていないことが示された。その反応溶液をロータリーエバポレ
ーターで濃縮して残滓に１ｍｌの水を添加し、その水溶液を〜１０滴の０．１Ｎ
塩酸水溶液でｐＨ２．５に酸性化した。生成物を酢酸エチル（３×２ｍｌ）で抽
出して無水炭酸カリウムで乾燥させ、ブフナー漏斗を通して濾過した。ロータリ
ーエバポレーター及び高真空で濃縮することにより、５．５ｍｇ（７４％）の、
ジベンジルエキソケリン酸２９と同定される明黄褐色ガラス状物質が得られた。 1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１７）１．１０〜１．９０（ｍ、１４Ｈ）、２．
１５〜２．３０（ｍ、４Ｈ）、３．４６（ｂｒ ｍ、２Ｈ）、３．６３（ｓ、３
Ｈ）、４．０６（ｍ、１Ｈ）、４．４８（ｍ、２Ｈ）、４．６５（ｓ、２Ｈ）、
４．８９（ｄｄ、１Ｈ）、５．２０（ｓ、２Ｈ）、６．８７〜６．９５（ｍ、２
Ｈ）、７．１５〜７．４２（ｍ、１２Ｈ）、７．７２〜７．７８（ｄｄ、１Ｈ）
；ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／メタノール、５０：５０、ｖ／ｖ
、加えて１０滴の氷酢酸）。Ｒf ０．６７の単一成分。
【００８７】 所望の生成物の大バッチの生成は、２−トリメチルシリルエチルエステル保護
ジベンジルエキソケリン酸２８（９２．０ｍｇ、０．１１４７ミリモル）を乾燥
テトラヒドロフラン（５ｍｌ）に溶解することによって行い、この溶液にフッ化
テトラブチルアンモニウム（２３０μＬ、．２２９４ミリモル；テトラヒドロフ
ラン中の１Ｍ溶液）を添加した。その反応混合物を室温で攪拌し、６０分後のＴ
ＬＣ分析では出発物質が残っていないことが示された。その反応溶液をロータリ
ーエバポレーターで濃縮して残滓に６ｍｌの水を添加し、その水溶液を〜１０滴
の１．０Ｎ塩酸水溶液でｐＨ２．５に酸性化した。生成物を酢酸エチル（３×５
ｍｌ）で抽出して無水炭酸カリウムで乾燥させ、重力濾過した。ロータリーエバ
ポレーター及び高真空による濃縮で５２．５ｍｇの明黄褐色ガラス状物質を得た
。
ジベンジルエキソケリン酸２８（９２．０ｍｇ、０．１１４７ミリモル）を乾燥
テトラヒドロフラン（５ｍｌ）に溶解することによって行い、この溶液にフッ化
テトラブチルアンモニウム（２３０μＬ、．２２９４ミリモル；テトラヒドロフ
ラン中の１Ｍ溶液）を添加した。その反応混合物を室温で攪拌し、６０分後のＴ
ＬＣ分析では出発物質が残っていないことが示された。その反応溶液をロータリ
ーエバポレーターで濃縮して残滓に６ｍｌの水を添加し、その水溶液を〜１０滴
の１．０Ｎ塩酸水溶液でｐＨ２．５に酸性化した。生成物を酢酸エチル（３×５
ｍｌ）で抽出して無水炭酸カリウムで乾燥させ、重力濾過した。ロータリーエバ
ポレーター及び高真空による濃縮で５２．５ｍｇの明黄褐色ガラス状物質を得た
。
【００８８】 小スケール（５．５ｍｇ）及び“大" スケール（５２．５ｍｇ）反応からの粗
製生成物を合わせて５８．０ｍｇを得、それをシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（１×２０ｃｍ）によって精製した。カラムを酢酸エチル／氷酢酸（比＝１
ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）で湿潤充填し、試料を２ｍｌの酢酸エチルに溶解した。そ
の物質を、〜２０ｍｌの酢酸エチル／氷酢酸（比＝１ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）、〜
５０ｍｌの酢酸エチル／メタノール（９５：５、ｖ／ｖ）／氷酢酸（比＝１ｍｌ
：１滴、ｖ／ｖ）、〜５０ｍｌの酢酸エチル／メタノール（９０：１０、ｖ／ｖ
）／氷酢酸（比＝１ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）で溶出した。画分をＴＬＣ特性に従っ
てプールして濃縮し、４７．５ｍｇ（５４％）の主要成分を無色透明ガラス状物
質として得た。ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／メタノール（９０：
１０、ｖ／ｖ）／氷酢酸（比＝１ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）；Ｒf ０．１７の１つの
主要成分及びＲf ０．３８の不純物。
製生成物を合わせて５８．０ｍｇを得、それをシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（１×２０ｃｍ）によって精製した。カラムを酢酸エチル／氷酢酸（比＝１
ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）で湿潤充填し、試料を２ｍｌの酢酸エチルに溶解した。そ
の物質を、〜２０ｍｌの酢酸エチル／氷酢酸（比＝１ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）、〜
５０ｍｌの酢酸エチル／メタノール（９５：５、ｖ／ｖ）／氷酢酸（比＝１ｍｌ
：１滴、ｖ／ｖ）、〜５０ｍｌの酢酸エチル／メタノール（９０：１０、ｖ／ｖ
）／氷酢酸（比＝１ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）で溶出した。画分をＴＬＣ特性に従っ
てプールして濃縮し、４７．５ｍｇ（５４％）の主要成分を無色透明ガラス状物
質として得た。ＴＬＣ（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／メタノール（９０：
１０、ｖ／ｖ）／氷酢酸（比＝１ｍｌ：１滴、ｖ／ｖ）；Ｒf ０．１７の１つの
主要成分及びＲf ０．３８の不純物。
【００８９】 Ｕ．Ｓ−（＋）−３−ヒドロキシ酪酸（Ｌ−ε−ヒドロキシ酪酸）、３３： Ｓ−（＋）−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム塩（２５０ｍｇ、１．９８ミリモ
ル）を２．５ｍｌの脱イオン水に溶解し、ｐＨ８の無色透明溶液を得た。その攪
拌溶液を、１Ｎ硫酸水溶液を滴下によって添加することによりｐＨ２に調整した
。その溶液をピペットで連続抽出装置に移した。その酸性反応混合物をジエチル
エーテルで一晩連続抽出することによりフリーの酸を得た。エーテル層を無水硫
酸マグネシウムで乾燥させて濾過し、ロータリーエバポレーターで慎重に濃縮し
た。生成物は極度に揮発性であるため、その溶液を、全てのジエチルエーテルが
蒸発した後さらに６０秒間だけ濃縮して、２０１ｍｇ（９８％）の無色透明油を
得た。この物質をさらに精製することなく次工程において直接用いた。
ル）を２．５ｍｌの脱イオン水に溶解し、ｐＨ８の無色透明溶液を得た。その攪
拌溶液を、１Ｎ硫酸水溶液を滴下によって添加することによりｐＨ２に調整した
。その溶液をピペットで連続抽出装置に移した。その酸性反応混合物をジエチル
エーテルで一晩連続抽出することによりフリーの酸を得た。エーテル層を無水硫
酸マグネシウムで乾燥させて濾過し、ロータリーエバポレーターで慎重に濃縮し
た。生成物は極度に揮発性であるため、その溶液を、全てのジエチルエーテルが
蒸発した後さらに６０秒間だけ濃縮して、２０１ｍｇ（９８％）の無色透明油を
得た。この物質をさらに精製することなく次工程において直接用いた。
【００９０】 Ｖ．ベンジルエピ−コバクチン、３４： Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−α−アミノ−Ｎ−（ベンジルオキシ）カプロラクタム３１（
２４０ｍｇ、０．７１８ミリモル）を１ｍｌのトリフルオロ酢酸と共に室温で５
分間攪拌した。回転蒸発を用いて減圧でトリフルオロ酢酸を除去し、残滓を５ｍ
ｌのジクロロメタン及び５ｍｌの１Ｎアンモニア水に分配した。水層をジクロロ
メタン（２×５ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を無水炭酸カリウムで乾燥させ
、濾過して濃縮することで１８８ｍｇ（１１０％）の油３２が残った。この物質
をさらに精製することなく次工程において直接用いた。その残滓を２ｍｌの乾燥
テトラヒドロフラン（水素化カルシウムから新たに蒸留）中で攪拌し、不溶性の
膜を伴う無色透明溶液を得た。２ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解した、上
で調製したＬ−ε−ヒドロキシ酪酸３３（８８ｍｇ、０．８４３ミリモル）をこ
の攪拌溶液に添加したところ、白色沈殿が形成された。２−エトキシ−Ｎ−（エ
トキシカルボニル）−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、２４０ｍｇ、０．
９６２ミリモル）を添加し、その反応混合物を、一晩、攪拌して５０℃で加熱し
、室温に冷却して回転蒸発によって濃縮することで４６１ｍｇの白色固体とした
。その粗製生成物を酢酸エチル／エーテルから再結晶化することによって精製し
、１８０ｍｇ（７８．２５％）の、ベンジルエピ−コバクチン３４と同定される
白色粉末を得た。 1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１８）１．２４（ｄ、３Ｈ）、１．３０〜２．
０５（ｍ、６Ｈ）、２．２７〜２．４４（ｍ、２Ｈ）、３．４４〜３．６８（ｍ
、２Ｈ）、４．１９（ｍ、１Ｈ）、４．４７（ｍ、１Ｈ）、４．９５（ＡＢｑ、
２Ｈ）、６．９３（ｂｒ ｄ、１Ｈ）、７．３２〜７．４６（ｍ、５Ｈ）；ＴＬ
Ｃ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール、５：１、ｖ／ｖ）０．４９のＲf ；
融点：１３８〜１３９℃（未修整）。
２４０ｍｇ、０．７１８ミリモル）を１ｍｌのトリフルオロ酢酸と共に室温で５
分間攪拌した。回転蒸発を用いて減圧でトリフルオロ酢酸を除去し、残滓を５ｍ
ｌのジクロロメタン及び５ｍｌの１Ｎアンモニア水に分配した。水層をジクロロ
メタン（２×５ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を無水炭酸カリウムで乾燥させ
、濾過して濃縮することで１８８ｍｇ（１１０％）の油３２が残った。この物質
をさらに精製することなく次工程において直接用いた。その残滓を２ｍｌの乾燥
テトラヒドロフラン（水素化カルシウムから新たに蒸留）中で攪拌し、不溶性の
膜を伴う無色透明溶液を得た。２ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解した、上
で調製したＬ−ε−ヒドロキシ酪酸３３（８８ｍｇ、０．８４３ミリモル）をこ
の攪拌溶液に添加したところ、白色沈殿が形成された。２−エトキシ−Ｎ−（エ
トキシカルボニル）−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、２４０ｍｇ、０．
９６２ミリモル）を添加し、その反応混合物を、一晩、攪拌して５０℃で加熱し
、室温に冷却して回転蒸発によって濃縮することで４６１ｍｇの白色固体とした
。その粗製生成物を酢酸エチル／エーテルから再結晶化することによって精製し
、１８０ｍｇ（７８．２５％）の、ベンジルエピ−コバクチン３４と同定される
白色粉末を得た。 1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１８）１．２４（ｄ、３Ｈ）、１．３０〜２．
０５（ｍ、６Ｈ）、２．２７〜２．４４（ｍ、２Ｈ）、３．４４〜３．６８（ｍ
、２Ｈ）、４．１９（ｍ、１Ｈ）、４．４７（ｍ、１Ｈ）、４．９５（ＡＢｑ、
２Ｈ）、６．９３（ｂｒ ｄ、１Ｈ）、７．３２〜７．４６（ｍ、５Ｈ）；ＴＬ
Ｃ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール、５：１、ｖ／ｖ）０．４９のＲf ；
融点：１３８〜１３９℃（未修整）。
【００９１】 Ｗ．トリベンジルエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）、３５： 工程Ｔからのジベンジルエキソケリン酸２９（４７．０ｍｇ、０．０６６９ミ
リモル）を１ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解した。工程Ｖからのベンジル
エピ−コバクチン３４（２１．５ｍｇ、０．０６６９ミリモル）及びトリフェニ
ルホスフィン（２６．４ｍｇ、０．１００５ミリモル）を添加し、その混合物を
全ての物質が溶解するまで室温で攪拌した。ジエチルアゾジカルボキシレート（
１５．８３μＬ、０．１００５ミリモル）をシリンジを介してこの攪拌溶液に添
加したところ、室温で１時間後、ＴＬＣ分析で新たなスポット（おそらく生成物
）がジベンジルエキソケリン酸の強いスポット（おおよそ６０％生成物／４０％
出発物質）及びベンジルエピ−コバクチンの弱いスポットと共に示された。２時
間後のＴＬＣ分析が同じ結果をもたらしたため、さらに０．２５当量のベンジル
エピ−コバクチン（５．４ｍｇ）、０．５当量のトリフェニルホスフィン（８．
８ｍｇ）、及び０．５当量のジエチルアゾジカルボキシレート（５．３Ｌ）を添
加した。さらに１．５時間後のＴＬＣ分析では幾らか改善された生成物／ジベン
ジルエキソケリン酸比（おおよそ８０％生成物／２０％出発物質）が示されたが
、ジベンジルエキソケリン酸に相当するスポットは強いままであった。３時間後
のＴＬＣでは、反応混合物が変化しないままであることが示された。再度、さら
に０．２５当量のベンジルエピ−コバクチン（５．４ｍｇ）、０．５当量のトリ
フェニルホスフィン（８．８ｍｇ）、及び０．５当量のジエチルアゾジカルボキ
シレート（５．３Ｌ）を添加した。１時間後のＴＬＣ分析では、再び、改善され
た生成物／ジベンジルエキソケリン酸比（おおよそ９０％生成物／１０％出発物
質）が示された。この時点で反応フラスコにきつく蓋をし、３〜４℃で４８時間
保存した。
リモル）を１ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解した。工程Ｖからのベンジル
エピ−コバクチン３４（２１．５ｍｇ、０．０６６９ミリモル）及びトリフェニ
ルホスフィン（２６．４ｍｇ、０．１００５ミリモル）を添加し、その混合物を
全ての物質が溶解するまで室温で攪拌した。ジエチルアゾジカルボキシレート（
１５．８３μＬ、０．１００５ミリモル）をシリンジを介してこの攪拌溶液に添
加したところ、室温で１時間後、ＴＬＣ分析で新たなスポット（おそらく生成物
）がジベンジルエキソケリン酸の強いスポット（おおよそ６０％生成物／４０％
出発物質）及びベンジルエピ−コバクチンの弱いスポットと共に示された。２時
間後のＴＬＣ分析が同じ結果をもたらしたため、さらに０．２５当量のベンジル
エピ−コバクチン（５．４ｍｇ）、０．５当量のトリフェニルホスフィン（８．
８ｍｇ）、及び０．５当量のジエチルアゾジカルボキシレート（５．３Ｌ）を添
加した。さらに１．５時間後のＴＬＣ分析では幾らか改善された生成物／ジベン
ジルエキソケリン酸比（おおよそ８０％生成物／２０％出発物質）が示されたが
、ジベンジルエキソケリン酸に相当するスポットは強いままであった。３時間後
のＴＬＣでは、反応混合物が変化しないままであることが示された。再度、さら
に０．２５当量のベンジルエピ−コバクチン（５．４ｍｇ）、０．５当量のトリ
フェニルホスフィン（８．８ｍｇ）、及び０．５当量のジエチルアゾジカルボキ
シレート（５．３Ｌ）を添加した。１時間後のＴＬＣ分析では、再び、改善され
た生成物／ジベンジルエキソケリン酸比（おおよそ９０％生成物／１０％出発物
質）が示された。この時点で反応フラスコにきつく蓋をし、３〜４℃で４８時間
保存した。
【００９２】 ＴＬＣ分析では大きな変化が生じていないことが示された；そこで、溶媒を回
転蒸発で除去することで黄色油を残した。この物質をシリカゲルクロマトグラフ
ィー（１×２０ｃｍ）によって精製した。カラムを酢酸エチル／ヘキサン（５０
：５０、ｖ／ｖ）で湿潤充填し、粗製生成物を２ｍｌの酢酸エチル／ヘキサン（
５０：５０、ｖ／ｖ）に溶解してカラムにのせた。この物質を５０ｍｌの酢酸エ
チル／ヘキサン（５０：５０、ｖ／ｖ）、２５ｍｌの酢酸エチル／ヘキサン（７
５：２５、ｖ／ｖ）、２５ｍｌの酢酸エチル、１００ｍｌの酢酸エチル、及び最
後に酢酸エチル／メタノール（９０：１０、ｖ／ｖ）で溶出した。画分（５〜１
０ｍｌ）をＴＬＣ特性に従って集め、プールして濃縮した。主要プール画分のＴ
ＬＣ分析では、その生成物が、僅かに高いＲf の弱い線条及びより低いＲf のベ
ンジルエピ−コバクチンで僅かに汚染されていることが示された。酢酸エチル／
メタノール（９５：５、ｖ／ｖ）で展開する分離用ＴＬＣ（シリカゲルＧＦ、２
０×２０ｃｍ、２０００ミクロン）による第２精製とそれに続く生成物の単離に
より、４１．１ｍｇ（６１．２％）の、トリベンジルエキソケリン３５と同定さ
れる無色透明ガラス状物質が得られた。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１９）１
．１０〜２．００（１．２９の３Ｈ ｄを含むｍ、２３Ｈ）、２．２０〜２．３
４（ｍ、４Ｈ）、２．５０（ｍ、２Ｈ）、３．４０〜３．６７（３．６５の３Ｈ
を含むｍ、７Ｈ）、４．３８〜４．５０（ｍ、２Ｈ）、４．５８（ｍ、２Ｈ）、
４．７０（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、４．９１（ｍ、１Ｈ）、４．９３（ＡＢｑ、２Ｈ
）、５．２３（ＡＢｑ、２Ｈ）、５．３２（ｍ、１Ｈ）、６．９６〜７．０４（
ｍ、３Ｈ）、７．１７〜７．７２（ｍ、１７Ｈ）、７．８１（ｄｄ、１Ｈ）；質
量スペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ９１（１００、Ｃ7 Ｈ7 + ）、１００４（５０
、Ｍ＋１）；ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール、５：１、ｖ／ｖ、
０．７０のＲf 。
転蒸発で除去することで黄色油を残した。この物質をシリカゲルクロマトグラフ
ィー（１×２０ｃｍ）によって精製した。カラムを酢酸エチル／ヘキサン（５０
：５０、ｖ／ｖ）で湿潤充填し、粗製生成物を２ｍｌの酢酸エチル／ヘキサン（
５０：５０、ｖ／ｖ）に溶解してカラムにのせた。この物質を５０ｍｌの酢酸エ
チル／ヘキサン（５０：５０、ｖ／ｖ）、２５ｍｌの酢酸エチル／ヘキサン（７
５：２５、ｖ／ｖ）、２５ｍｌの酢酸エチル、１００ｍｌの酢酸エチル、及び最
後に酢酸エチル／メタノール（９０：１０、ｖ／ｖ）で溶出した。画分（５〜１
０ｍｌ）をＴＬＣ特性に従って集め、プールして濃縮した。主要プール画分のＴ
ＬＣ分析では、その生成物が、僅かに高いＲf の弱い線条及びより低いＲf のベ
ンジルエピ−コバクチンで僅かに汚染されていることが示された。酢酸エチル／
メタノール（９５：５、ｖ／ｖ）で展開する分離用ＴＬＣ（シリカゲルＧＦ、２
０×２０ｃｍ、２０００ミクロン）による第２精製とそれに続く生成物の単離に
より、４１．１ｍｇ（６１．２％）の、トリベンジルエキソケリン３５と同定さ
れる無色透明ガラス状物質が得られた。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図１９）１
．１０〜２．００（１．２９の３Ｈ ｄを含むｍ、２３Ｈ）、２．２０〜２．３
４（ｍ、４Ｈ）、２．５０（ｍ、２Ｈ）、３．４０〜３．６７（３．６５の３Ｈ
を含むｍ、７Ｈ）、４．３８〜４．５０（ｍ、２Ｈ）、４．５８（ｍ、２Ｈ）、
４．７０（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、４．９１（ｍ、１Ｈ）、４．９３（ＡＢｑ、２Ｈ
）、５．２３（ＡＢｑ、２Ｈ）、５．３２（ｍ、１Ｈ）、６．９６〜７．０４（
ｍ、３Ｈ）、７．１７〜７．７２（ｍ、１７Ｈ）、７．８１（ｄｄ、１Ｈ）；質
量スペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ９１（１００、Ｃ7 Ｈ7 + ）、１００４（５０
、Ｍ＋１）；ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール、５：１、ｖ／ｖ、
０．７０のＲf 。
【００９３】 Ｘ．エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）、１： トリベンジルエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）３５（３９．０ｍｇ、０．０３８
８ミリモル）を２ｍｌのイソプロパノールに溶解した。イソプロパノール１ｍｌ
中の１０％パラジウム付着炭素（２０．０ｍｇ）の溶液をピペットで添加し、得
られた溶液を水素（１気圧、バロン）の下、室温で６時間攪拌した。その溶液を
小ブフナー漏斗を通して濾過し、濃縮して２７．５ｍｇ（９６．６％）の無色透
明ガラス状物質を得た。ＴＬＣ分析（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／メタノ
ール／氷酢酸、５：１：５、ｖ／ｖｖ）で、トリベンジル出発物質（Ｒf ０．７
３）が存在しないことが示された。おそらくは所望の生成物（Ｒf ０．５４）で
ある主スポットは、非常に少量の僅かに極性が小さい２種類の物質、おそらくは
モノベンジル化エキソケリン（Ｒf ０．５９）及びジベンジル化エキソケリン（
Ｒf ０．６４）で汚染されていた。ＨＰＬＣ分析では、おそらくはそれぞれエキ
ソケリン、モノベンジル化、及びジベンジル化物質に相当する、３．２９分（９
３％）、６．５４分（６％）、及び９．５８分（１％）の３つのピークが示され
た。この粗製生成物を１．５ｍｌのイソプロパノールに再溶解し、イソプロパノ
ール１ｍｌ中の１０％パラジウム付着炭素１５ｍｇで処理した。
８ミリモル）を２ｍｌのイソプロパノールに溶解した。イソプロパノール１ｍｌ
中の１０％パラジウム付着炭素（２０．０ｍｇ）の溶液をピペットで添加し、得
られた溶液を水素（１気圧、バロン）の下、室温で６時間攪拌した。その溶液を
小ブフナー漏斗を通して濾過し、濃縮して２７．５ｍｇ（９６．６％）の無色透
明ガラス状物質を得た。ＴＬＣ分析（シリカゲル；溶媒系−酢酸エチル／メタノ
ール／氷酢酸、５：１：５、ｖ／ｖｖ）で、トリベンジル出発物質（Ｒf ０．７
３）が存在しないことが示された。おそらくは所望の生成物（Ｒf ０．５４）で
ある主スポットは、非常に少量の僅かに極性が小さい２種類の物質、おそらくは
モノベンジル化エキソケリン（Ｒf ０．５９）及びジベンジル化エキソケリン（
Ｒf ０．６４）で汚染されていた。ＨＰＬＣ分析では、おそらくはそれぞれエキ
ソケリン、モノベンジル化、及びジベンジル化物質に相当する、３．２９分（９
３％）、６．５４分（６％）、及び９．５８分（１％）の３つのピークが示され
た。この粗製生成物を１．５ｍｌのイソプロパノールに再溶解し、イソプロパノ
ール１ｍｌ中の１０％パラジウム付着炭素１５ｍｇで処理した。
【００９４】 得られた溶液を室温、１気圧水素の下で４時間攪拌した。その溶液を小ブフナ
ー漏斗を通して濾過した後、２ミクロン・フィルターディスクを通して濾過した
。濃縮することで２４．８ｍｇ（８７．１％）の無色透明ガラス状物質を得た。
ＴＬＣ分析では、この物質が、所望の生成物エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）１と
同定される、Ｒf ０．５３の１つのスポットに完全かつ明白に変換されているこ
とが示された。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図２０）１．２０〜２．１０（１．
３５の３Ｈ ｄを含むｍ、２３Ｈ）、２．１８〜２．３５（ｍ、４Ｈ）、２．５
８（ｍ、２Ｈ）、３．５６（ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｍ
、２Ｈ）、４．４６〜４．７６（ｍ、４Ｈ）、４．９８（Ｍ、１Ｈ）、５．２７
（ｍ、１Ｈ）、６．８８〜７．７４（ｍ、６Ｈ）。質量スペクトル（ＦＡＢ、図
２１）ｍ／ｅ ７３４（３０、Ｍ＋１）；ＴＬＣ（シリカゲル、５：１：１ Ｅ
ｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＨＯＡｃ）０．５３のＲf 。
ー漏斗を通して濾過した後、２ミクロン・フィルターディスクを通して濾過した
。濃縮することで２４．８ｍｇ（８７．１％）の無色透明ガラス状物質を得た。
ＴＬＣ分析では、この物質が、所望の生成物エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）１と
同定される、Ｒf ０．５３の１つのスポットに完全かつ明白に変換されているこ
とが示された。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、図２０）１．２０〜２．１０（１．
３５の３Ｈ ｄを含むｍ、２３Ｈ）、２．１８〜２．３５（ｍ、４Ｈ）、２．５
８（ｍ、２Ｈ）、３．５６（ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｍ
、２Ｈ）、４．４６〜４．７６（ｍ、４Ｈ）、４．９８（Ｍ、１Ｈ）、５．２７
（ｍ、１Ｈ）、６．８８〜７．７４（ｍ、６Ｈ）。質量スペクトル（ＦＡＢ、図
２１）ｍ／ｅ ７３４（３０、Ｍ＋１）；ＴＬＣ（シリカゲル、５：１：１ Ｅ
ｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＨＯＡｃ）０．５３のＲf 。
【００９５】 添付の図を参照して本発明の好ましい態様を説明したが、本発明はそれらの態
様そのものに限定されるものではなく、添付の請求の範囲に定義される本発明の
範囲又は精神から逸脱することなく当業者がその中で様々な変更及び変形をなし
得ることは理解されるべきである。 U.S.5,721,209 に記載されるように、エキソケリンは、'209特許においてはＲ
側鎖と呼ばれる、Ｆ機能ユニットのアルキル側鎖におけるＣＨ2 基の数、又はこ
の系列の最終工程の間に水素化されるその側鎖における二重結合の不在もしくは
存在によって互いに区別される化合物のファミリーである。加えて、セリン及び
トレオニン（theronine ）系列は、'209に示されるようにＲ3 のメチル基の存在
又は不在（すなわち、Horchs）に関連し、これはＤ部分の５員環の利用可能な炭
素に相当する。当業者は上記合成の変形、特には、Ｆの形成における塩化スベリ
ルメチル１９の代わりにスキームIII （図４）において異なる化合物を用いるこ
とによる、及び／又はＤ成分の形成においてスキームＩ（図２）におけるＬ−セ
リンの代わりにＬ−トレオニンを用いることによる変形を認めるであろう。特に
は、塩化スベリルメチル１９は、ジカルボン酸スベリン酸（オクタン二酸、ＣＯ
ＯＨ（ＣＨ2 ）6 ＣＯＯＨ）から形成することができる。出発ジカルボン酸中の
（ＣＨ2 ）6 基の修飾、短縮又は延長及び上記反応スキームにおける適切なメチ
ル化及び塩素化形態の使用によりエキソケリンファミリーの異なるメンバーが生
じるであろう。代替出発物質はシュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、ア
ジピン酸、ピメリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、マレイン酸及びフマル酸並
びにそれらの分岐もしくは置換変種である。当業者は、用いることができる多く
の同族ジカルボン酸を認識するであろう。上記によっては、Ｃ10ジカルボン酸が
最大の利用可能な反応体であることは示唆されない。例えば、ウンデコン酸をス
ベリル酸の代わりに用いた場合にはエキソケリン８２８ＳＭ（Ｒ）が生じ、同じ
調製においてセリンの代わりにＬ−トレオニンを用いることでエキソケリン８４
２ＴＭ（Ｒ）が生じる。同様に、ドデカン酸はエキソケリン８４２ＳＭ（Ｒ）を
生じる。 したがって、以下に定義される出願人の方法及び生成物の好ましいものの記載
による添付の請求の範囲の範囲又は精神に対する限定は意図されていない。
様そのものに限定されるものではなく、添付の請求の範囲に定義される本発明の
範囲又は精神から逸脱することなく当業者がその中で様々な変更及び変形をなし
得ることは理解されるべきである。 U.S.5,721,209 に記載されるように、エキソケリンは、'209特許においてはＲ
側鎖と呼ばれる、Ｆ機能ユニットのアルキル側鎖におけるＣＨ2 基の数、又はこ
の系列の最終工程の間に水素化されるその側鎖における二重結合の不在もしくは
存在によって互いに区別される化合物のファミリーである。加えて、セリン及び
トレオニン（theronine ）系列は、'209に示されるようにＲ3 のメチル基の存在
又は不在（すなわち、Horchs）に関連し、これはＤ部分の５員環の利用可能な炭
素に相当する。当業者は上記合成の変形、特には、Ｆの形成における塩化スベリ
ルメチル１９の代わりにスキームIII （図４）において異なる化合物を用いるこ
とによる、及び／又はＤ成分の形成においてスキームＩ（図２）におけるＬ−セ
リンの代わりにＬ−トレオニンを用いることによる変形を認めるであろう。特に
は、塩化スベリルメチル１９は、ジカルボン酸スベリン酸（オクタン二酸、ＣＯ
ＯＨ（ＣＨ2 ）6 ＣＯＯＨ）から形成することができる。出発ジカルボン酸中の
（ＣＨ2 ）6 基の修飾、短縮又は延長及び上記反応スキームにおける適切なメチ
ル化及び塩素化形態の使用によりエキソケリンファミリーの異なるメンバーが生
じるであろう。代替出発物質はシュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、ア
ジピン酸、ピメリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、マレイン酸及びフマル酸並
びにそれらの分岐もしくは置換変種である。当業者は、用いることができる多く
の同族ジカルボン酸を認識するであろう。上記によっては、Ｃ10ジカルボン酸が
最大の利用可能な反応体であることは示唆されない。例えば、ウンデコン酸をス
ベリル酸の代わりに用いた場合にはエキソケリン８２８ＳＭ（Ｒ）が生じ、同じ
調製においてセリンの代わりにＬ−トレオニンを用いることでエキソケリン８４
２ＴＭ（Ｒ）が生じる。同様に、ドデカン酸はエキソケリン８４２ＳＭ（Ｒ）を
生じる。 したがって、以下に定義される出願人の方法及び生成物の好ましいものの記載
による添付の請求の範囲の範囲又は精神に対する限定は意図されていない。
【００９６】
【図１】 図１ａは標的分子エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）（１）である。 図１ｂは、比較のために示される、ミコバクチンＳ２（１ｂ）である。 図１ｃは、以下のスキームＩ〜VII としてさらに説明される様々な機構の説明
を補助するため、セクションＡ〜Ｆと命名される機能的部分に分離された図１ａ
の標的分子を示す。
を補助するため、セクションＡ〜Ｆと命名される機能的部分に分離された図１ａ
の標的分子を示す。
【図２】 標的分子の一部の前駆体を形成する、本発明の合成方法の一態様による化学経
路をスキーム１として示す。
路をスキーム１として示す。
【図３】 標的分子の第２部分を形成する、本発明の合成方法の一態様による化学経路を
スキームIIとして示す。
スキームIIとして示す。
【図４】 標的分子の第３部分を形成する、本発明の合成方法の一態様による化学経路を
スキームIII として示す。
スキームIII として示す。
【図５】 標的分子のそれ以前に生成した部分を合わせて該標的分子のより大きい部分を
形成する、本発明の合成方法の一態様による化学経路をスキームIVとして示す。
形成する、本発明の合成方法の一態様による化学経路をスキームIVとして示す。
【図６】 それ以前に生成した部分を標的分子のさらに大きい部分に組み合わせる、本発
明の合成方法の一態様による化学経路をスキームＶとして示す。
明の合成方法の一態様による化学経路をスキームＶとして示す。
【図７】 標的分子の最後の部分を形成する、本発明の合成方法の一態様による化学経路
をスキームVIとして示す。
をスキームVIとして示す。
【図８】 図６及び７において生成した部分を合わせて標的分子を生成する、本発明の合
成方法の一態様による化学経路をスキームVII として示す。
成方法の一態様による化学経路をスキームVII として示す。
【図９】 （Ｌ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシンメチルエステル２２のＮＭＲス
ペクトルを示す。
ペクトルを示す。
【図１０】 ヒドロキサメート２０のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１１】 Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２−トリメチルシリルエチルエステ
ル（サブユニットＣ）２４のＮＭＲスペクトルを示す。
ル（サブユニットＣ）２４のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１２】 スキームIV（図５）において生じる望ましくない最終生成物のＮＭＲスペクト
ルを示す。
ルを示す。
【図１３】 Ｌ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン
２−トリメチルシリルエチルエステル２５のＮＭＲスペクトルを示す。
２−トリメチルシリルエチルエステル２５のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１４】 カプロラクタム（サブユニットＡ）３１のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１５】 ２−トリメチルシリルエチル保護ジベンジルエキソケリン酸２８のＮＭＲスペ
クトルを示す。
クトルを示す。
【図１６】 ２−トリメチルシリルエチルジベンジル保護エキソケリン酸２８の質量スペク
トルを示す。
トルを示す。
【図１７】 ジベンジルエキソケリン酸２９のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１８】 ベンジルエピ−コバチン３４のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１９】 トリベンジルエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）３５のＮＭＲスペクトルを示す。
【図２０】 エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）１のＮＭＲスペクトルを示す。
【図２１】 エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）１のＮＭＲスペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，Ｇ Ｈ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B064 AE03 BG01 BH01 BH08 BJ11 CA21 CB06 DA08 4H039 CA62 CF90 CH60
Claims (12)
- 【請求項１】 エキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）の合成方法であって： Ｎ−（２−ベンジルオキシ−ベンゾイル）−Ｌ−セリンを生成する工程； Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンを作製し、それを反応させてＬ
−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチルエステルを生成
する工程； Ｏ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサメートをＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモ
ノルロイシントリメチルシリルエチルエステルとカップリングさせてＬ−Ｎ2 −
Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチ
ルシリルエチルエステルを得る工程； Ｌ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチルスベリル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン
２−トリメチルシリルエチルエステルのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護
基を除去して置換リジンを得、それをＬ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ（ベンゾイ
ル）］セリンとカップリングさせてジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチル
シリルエチルエステルを得る工程； ジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチルシリルエチルエステルをジベンジ
ルエキソケリン酸に変換する工程； ベンジルエピコバクチンを調製する工程； ジベンジルエキソケリン酸とベンジルエピコバクチンとの間にエステル結合を
形成して中間体を形成する工程；及び、 該中間体から３つのベンジル基を水素化分解的に除去して合成エキソケリン７
８６ＳＭ（Ｒ）を生じる工程、 を含む方法。 - 【請求項２】 Ｎ−（２−ベンジルオキシ−ベンゾイル）−Ｌ−セリンを生
成する工程が、 サリチル酸を保護する工程、 Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの還流において塩化ベンジル及び無水炭酸カリ
ウムを用いて粗製生成物を形成する、ベンジル−２−ベンジルオキシベンゾエー
トを作製する工程； 該粗製生成物をメタノール性水酸化ナトリウムで加水分解して２−ベンジルオ
キシ安息香酸を得る工程； ２−ベンジルオキシ安息香酸をエチルアルコール中においてｐ−ニトロフェノ
ール及びジシクロヘキシルカルボジイミドと反応させて４−ニトロフェニル−２
−（ベンジルオキシ）ベンゾエートを生成する工程；及び、 ４−ニトロフェニル−２−（ベンジルオキシ）ベンゾエートを水中のテトラヒ
ドロフラン中においてＬ−セリン及びトリエチルアミンで処理する工程、 を含む請求項１による方法。 - 【請求項３】 ３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピランを、触媒として作用する塩
酸で水性加水分解し； 生じた中間アルデヒドを亜硫酸水素ナトリウムで処理して亜硫酸水素付加生成
物を形成し； 該硫酸水素付加生成物を in situでシアン化カリウムで処理してシアノヒドリ
ンを生成し； 該シアノヒドリンを、炭酸アンモニウムを用いて環化して、ヒダントイン及び
ジヒドロピランを生成し； 該ヒダントインを、オートクレーブ内で、水酸化バリウム水溶液で加水分解し
てＤ，Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンを得； 該Ｄ，Ｌ化合物をアセチル化して、酵素的分割によってＬ−異性体を得；及び
、 該Ｌ−異性体を保護する、 ことを含む、Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンを調製する工程をさらに含む、請
求項１による方法。 - 【請求項４】 Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンを作製す
る工程が、 Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンを、テトラヒドロフラン及び水中で、ジ−ｔ
ｅｒｔ−ブチルジカーボネート及びトリエチルアミンで処理して、該アミノ酸の
Ｎ末端をブロックする、 ことをさらに含む、請求項３による方法。 - 【請求項５】 Ｏ−ベンジルメチルスベリルヒドロキサメートを生成する工
程が： Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩をＴＨＦ中、過剰のピリジンの存在下
において塩化スベリルメチルと反応させる、 ことを含む請求項１による方法。 - 【請求項６】 Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンをＯ−メ
チル−Ｎ，Ｎ’ジイソプロピルイソ尿素と反応させてメチルエステルを得； 該メチルエステルを対応する酸に変換し； 該対応する酸を１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド及びピリジンの存在
下において、アセトニトリル中で、２−（トリメチルシリル）エタノールと反応
させて、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチルエス
テルを形成する、 ことをさらに含む、請求項１による方法。 - 【請求項７】 Ｌ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−（ベンゾイル）］−Ｌ−セ
リンを置換リジンと反応させることによるジベンジルエキソケリン酸を形成する
工程が、まずＬ−Ｎ2 ［Ｎ−（２−ベンジルオキシ）ベンゾイル］セリンアミジ
ル］−Ｎ6 −メチルスベリル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチル
シリルエチルエステルを生成し、それをテトラヒドロフラン中で塩化チオニルに
晒して２−トリメチルシリルエチルエステル保護ジベンジルエキソケリン酸を形
成し、該２−トリメチルシリルエチルエステルをフッ化テトラブチルアンモニウ
ムに晒すことによって該保護化合物から除去する、請求項１の方法。 - 【請求項８】 Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシン２−トリメチルシ
リルエチルエステルをジベンジルエキソケリン酸に変換する工程が： 適切に保護されたエステル及びヒドロキサメートを提供し； 該適切に保護されたエステルを、ヨウ化カリウム及び無水炭酸カリウムの存在
下において還流アセトン中で一晩、該ヒドロキサメートと反応させ； さらなるヨウ化カリウムを添加し、１２時間にわたって激しく混合及び還流し
； 生じる混合物からの複数の画分を濾過し、濃縮して、クロマトグラフィー精製
し； 所望のＮ−アルキル化生成物を分離し； 該所望のＮ−アルキル化生成物を、２−エトキシ−Ｎ−（エトキシカルボニル
）−１，２−ジヒドロキノリンを用いてクロロホルム中で、Ｎ−［２−ベンジル
オキシ（ベンゾイル）−Ｌ−セリンとカップリングさせ； 塩化チオニルで処理することによって脱水的に環化してオキサゾリンを生成し
； ２−トリメチルシリルエチルエステルを選択的に除去することによりオキサゾ
リンをジベンジルエキソケリン酸に変換し；そして、 ジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチルシリルエチルエステルのテトラヒ
ドロフラン溶液を２当量のフッ化テトラブチルアンモニウムで処理する、 ことをさらに含む、請求項１による方法。 - 【請求項９】 ベンジルエピ−コバクチンを調製する工程が： Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ノルロイシンを、１−エチル−３−（ジエチルアミノ）
プロピルカルボジイミド塩酸塩をカップリング剤として用いて、ｐＨ４．５の水
溶液中のＯ−ベンジルヒドロキシルアミンと反応させて、Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−
ヒドロキシノルロイシンベンジルヒドロキサメートを形成し； 該ベンジルヒドロキサメートを、無水テトラヒドロフラン中で、トリフェニル
ホスフィン及びジエチルアゾジカルボキシレートで処理して、カプロラクタムへ
の環化を誘発し； トリフルオロ酢酸で処理することによって該Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニ
ル（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ）保護基を除去して、そのフリーのアミンを形成し、そして
該フリーのアミンを、ＥＥＤＱの存在下、ＴＨＦ中でヒドロキシ酪酸と反応させ
る、 ことをさらに含む、請求項１による方法。 - 【請求項１０】 ジベンジルエキソケリン酸をベンジルエピ−コバクチンと
反応させて中間体を形成する工程が： 該化合物をトリフェニルホスフィン／ＤＥＡＤの存在下で混合し；そして トリベンジルエキソケリン７８６ＳＭ（Ｒ）を単離する、 ことをさらに含む、請求項１による方法。 - 【請求項１１】 エキソケリンの合成方法であって、 Ｎ−［２−ベンジルオキシ−（ベンゾイル）］−Ｌ−セリンを生成する工程； Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ε−ヒドロキシノルロイシンを作製し、それを反応させ
てＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチルエステルを
生成する工程； ジカルボン酸を提供し、そして該ジカルボン酸からＯ−ベンジルメチルヒドロ
キサメートを形成する工程； Ｏ−ベンジルメチルヒドロキサメートを該Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロ
イシントリメチルシリルエチルエステルとカップリングさせ、上記の通り修飾さ
れたジカルボン酸を組み込んだ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチル，Ｎ6 −（ベンジ
ルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエチルエステルを得る工程； 該Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を該Ｌ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メ
チル、Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエチルエステルか
ら除去して、置換リジンを得、それを該Ｌ−Ｎ［２−ベンジルオキシ（ベンゾイ
ル）セリンとカップリングさせて、ジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチル
シリルエチルエステルを得る工程； ジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチルシリルエチルエステルをジベンジ
ルエキソケリン酸に変換する工程； ベンジルエピ−コバクチンを調製する工程； 該ジベンジルエキソケリン酸とベンジルエピ−コバクチンとの間にエステル結
合を形成して、中間体を形成する工程、及び 該中間体から３つのベンジル基を水素化分解的に除去して、合成エキソケリン
を生成する工程、 を含む方法。 - 【請求項１２】 エキソケリンの合成方法であって、 Ｎ−［２−ベンジルオキシ（ベンゾイル）］−Ｌ−トレオニンを生成する工程
； Ｌ−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ε−ヒドロキシノルロイシンを作製し、それを反応させ
てＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイシントリメチルシリルエチルエステルを
生成する工程； ジカルボン酸を提供し、該ジカルボン酸からＯ−ベンジルメチルヒドロキサメ
ートを形成する工程； Ｏ−ベンジルメチルヒドロキサメートをＬ−Ｎ−Ｂｏｃ−ε−ブロモノルロイ
シントリメチルシリルエチルエステルとカップリングさせ、上記の通り修飾され
たジカルボン酸を組み込んだＬ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチル，Ｎ6 −（ベンジ
ルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエチルエステルを得る工程； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を該Ｌ−Ｎ2 −Ｂｏｃ−Ｎ6 −メチ
ル，Ｎ6 −（ベンジルオキシ）リジン２−トリメチルシリルエチルエステルから
除去して置換リジンを得、それを該Ｌ−Ｎ−［２−ベンジルオキシ（ベンゾイル
）トレオニンとカップリングさせてジベンジルエキソケリン酸の２−トリメチル
シリルエチルエステルを得る工程； ジベンジルエキソケリン酸の該２−トリメチルシリルエチルエステルをジベン
ジルエキソケリン酸に変換する工程； 該ベンジルエピ−コバクチンを調製する工程； ジベンジルエキソケリン酸とベンジルエピ−コバクチンとの間にエステル結合
を形成して中間体を形成する工程、及び 該中間体から３つのベンジル基を水素化分解的に除去して合成エキソケリンを
生成する工程、 を含む方法。
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