JP3095608B2 - 血液凝固時間測定乾燥試薬 - Google Patents
血液凝固時間測定乾燥試薬Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は臨床検査に使用されるト
ロンボテスト活性を測定するための血液凝固時間測定乾
燥試薬に関する。
ロンボテスト活性を測定するための血液凝固時間測定乾
燥試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】トロンボテスト（以下ＴＴと略す）測定
は経口抗凝血薬投与効果のモニタリングの目的で設けら
れた血液凝固検査項目である。
は経口抗凝血薬投与効果のモニタリングの目的で設けら
れた血液凝固検査項目である。
【０００３】経口抗凝血薬は生体内でビタミンＫの作用
を阻害するため、これを投与するとビタミンＫの作用に
よって活性化される血液凝固第ＩＩ、ＶＩＩ、Ｘ因子等
の活性が低下する。従って、経口抗凝血薬投与効果は、
これらの凝固因子活性を調べれば判明するため、これら
の因子活性を総合的に反映する血液凝固アッセイを行っ
て評価を行う方法が一般に使用されている。
を阻害するため、これを投与するとビタミンＫの作用に
よって活性化される血液凝固第ＩＩ、ＶＩＩ、Ｘ因子等
の活性が低下する。従って、経口抗凝血薬投与効果は、
これらの凝固因子活性を調べれば判明するため、これら
の因子活性を総合的に反映する血液凝固アッセイを行っ
て評価を行う方法が一般に使用されている。
【０００４】ＴＴを測定した場合、その測定結果から血
液凝固第因子ＩＩ、ＶＩＩ、Ｘの活性を総合的に判断す
ることができる。ＴＴ試薬による測定の特長は、予め試
薬に血液凝固第Ｉ及び第Ｖ因子を添加している点であ
る。血液凝固第Ｉ及び第Ｖ因子は、経口抗凝血薬投与効
果のモニタリングの際、凝固時間に本来の活性値と無関
係な影響を与えるものである。しかし、ＴＴ測定は試薬
にこれらの因子を予め添加することで安定に測定値を得
ることができるため、モニタリングに最適である。
液凝固第因子ＩＩ、ＶＩＩ、Ｘの活性を総合的に判断す
ることができる。ＴＴ試薬による測定の特長は、予め試
薬に血液凝固第Ｉ及び第Ｖ因子を添加している点であ
る。血液凝固第Ｉ及び第Ｖ因子は、経口抗凝血薬投与効
果のモニタリングの際、凝固時間に本来の活性値と無関
係な影響を与えるものである。しかし、ＴＴ測定は試薬
にこれらの因子を予め添加することで安定に測定値を得
ることができるため、モニタリングに最適である。
【０００５】ところで、従来用いられてきたＴＴの測定
法は、すべて溶液状の試薬を用いた測定法であり現在で
も広く使用されている。この方法は、まず溶液状の試薬
を調製し、これに血液試料を添加して反応させ、該反応
液の濁度変化あるいは粘度変化をモニターして凝固を判
定する方法である。その例を以下具体的に示す。
法は、すべて溶液状の試薬を用いた測定法であり現在で
も広く使用されている。この方法は、まず溶液状の試薬
を調製し、これに血液試料を添加して反応させ、該反応
液の濁度変化あるいは粘度変化をモニターして凝固を判
定する方法である。その例を以下具体的に示す。
【０００６】ＴＴ試薬は組織トロンボプラスチン、牛吸
着血漿、カルシウム塩を含むもので、凍結乾燥品が一般
に市販されている。該乾燥品ＴＴ試薬を水溶液にしたＴ
Ｔ試薬溶液を調製しておき、予備加温しておく。次に、
同じく予備加温しておいた血漿または全血に、該ＴＴ試
薬溶液を混合し、添加直後から濁度変化あるいは粘度変
化をモニターし、凝固するまでの秒数を測定して凝固時
間を求める。上記のように求めた凝固時間がＴＴの凝固
時間であり、経口抗凝血薬の投与で凝固因子活性が低下
するに従って延長する。
着血漿、カルシウム塩を含むもので、凍結乾燥品が一般
に市販されている。該乾燥品ＴＴ試薬を水溶液にしたＴ
Ｔ試薬溶液を調製しておき、予備加温しておく。次に、
同じく予備加温しておいた血漿または全血に、該ＴＴ試
薬溶液を混合し、添加直後から濁度変化あるいは粘度変
化をモニターし、凝固するまでの秒数を測定して凝固時
間を求める。上記のように求めた凝固時間がＴＴの凝固
時間であり、経口抗凝血薬の投与で凝固因子活性が低下
するに従って延長する。
【０００７】一方、乾燥試薬を用いた簡便な血液凝固ア
ッセイシステムが最近になって開発された（特表平３−
５０４０７６号公報）。該アッセイシステムの原理は、
血液凝固試薬に磁性粒子を含有させた乾燥状態の試薬を
作製し、該乾燥試薬に血液試料を添加し、その直後に振
動磁場と静止磁場の組合せにかけて磁性粒子を運動さ
せ、同時にこの磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニ
ターして凝固を検知するものである。
ッセイシステムが最近になって開発された（特表平３−
５０４０７６号公報）。該アッセイシステムの原理は、
血液凝固試薬に磁性粒子を含有させた乾燥状態の試薬を
作製し、該乾燥試薬に血液試料を添加し、その直後に振
動磁場と静止磁場の組合せにかけて磁性粒子を運動さ
せ、同時にこの磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニ
ターして凝固を検知するものである。
【０００８】上記公報には、該システムを使用し、乾燥
試薬中に種々の血液凝固試薬を適用した多数のアッセイ
法が示されている。しかし、上記公報には乾燥試薬中の
血液凝固試薬をＴＴ試薬としたもの、即ちＴＴ測定用の
乾燥試薬及び該乾燥試薬を用いたＴＴの測定についての
具体的な記載は全くなされていない。
試薬中に種々の血液凝固試薬を適用した多数のアッセイ
法が示されている。しかし、上記公報には乾燥試薬中の
血液凝固試薬をＴＴ試薬としたもの、即ちＴＴ測定用の
乾燥試薬及び該乾燥試薬を用いたＴＴの測定についての
具体的な記載は全くなされていない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】現在使用されている溶
液法によるＴＴ測定方法では、経口抗凝血薬投与効果の
迅速且つ的確なモニタリングというＴＴ測定目的に対し
て、試薬溶液の調製等の操作が繁雑で時間がかかるこ
と、容器や計量器の完備した場所でないと行えないこと
等の大きな問題点があった。また、液状試薬は保存性が
悪く、全量を使用しないと経済的でないという問題点も
ある。ところが、乾燥試薬による測定法であれば、上記
の問題点が一応解決するものと考えられた。
液法によるＴＴ測定方法では、経口抗凝血薬投与効果の
迅速且つ的確なモニタリングというＴＴ測定目的に対し
て、試薬溶液の調製等の操作が繁雑で時間がかかるこ
と、容器や計量器の完備した場所でないと行えないこと
等の大きな問題点があった。また、液状試薬は保存性が
悪く、全量を使用しないと経済的でないという問題点も
ある。ところが、乾燥試薬による測定法であれば、上記
の問題点が一応解決するものと考えられた。
【００１０】そこで我々は、前記公報に記載されている
血液凝固アッセイ用乾燥試薬の作製方法に従って、ＴＴ
測定用の乾燥試薬を以下のように試作した。即ち、ＴＴ
試薬溶液に磁性粒子を添加して懸濁液とし、反応スライ
ドに分注して凍結乾燥した。この乾燥試薬に血漿を滴下
し、凝固時間の測定を試みたところ、凝固時間の再現性
が悪く、且つ測定可能な活性値範囲が狭いという大きな
問題点があり、全く使用に耐えないものであった。従っ
て、前記公報に記載されているＴＴ以外の測定項目用乾
燥試薬の作製方法を単純にそのまま利用するのでは、使
用に耐えるＴＴ測定用の乾燥試薬は作製できないことが
判明した。
血液凝固アッセイ用乾燥試薬の作製方法に従って、ＴＴ
測定用の乾燥試薬を以下のように試作した。即ち、ＴＴ
試薬溶液に磁性粒子を添加して懸濁液とし、反応スライ
ドに分注して凍結乾燥した。この乾燥試薬に血漿を滴下
し、凝固時間の測定を試みたところ、凝固時間の再現性
が悪く、且つ測定可能な活性値範囲が狭いという大きな
問題点があり、全く使用に耐えないものであった。従っ
て、前記公報に記載されているＴＴ以外の測定項目用乾
燥試薬の作製方法を単純にそのまま利用するのでは、使
用に耐えるＴＴ測定用の乾燥試薬は作製できないことが
判明した。
【００１１】本発明が解決しようとする課題は、実用に
供することができるＴＴ測定用の血液凝固時間測定乾燥
試薬（以下、ＴＴ乾燥試薬ともいう）とそれを用いたＴ
Ｔ測定法の開発である。
供することができるＴＴ測定用の血液凝固時間測定乾燥
試薬（以下、ＴＴ乾燥試薬ともいう）とそれを用いたＴ
Ｔ測定法の開発である。
【００１２】
【課題を解決するための手段】我々は上記の課題を解決
するために鋭意研究を重ねたところ、ＴＴ乾燥試薬の凝
固時間再現性向上と測定可能な活性値範囲の拡大は、ど
ちらも血液試料を添加した際のＴＴ乾燥試薬の溶解性を
向上させることで実現できることを見いだした。
するために鋭意研究を重ねたところ、ＴＴ乾燥試薬の凝
固時間再現性向上と測定可能な活性値範囲の拡大は、ど
ちらも血液試料を添加した際のＴＴ乾燥試薬の溶解性を
向上させることで実現できることを見いだした。
【００１３】さらにこの試薬溶解性の向上は、ある特定
の添加剤を加えてＴＴ乾燥試薬を作製することにより可
能となることが明らかとなり、さらに研究を進めた結果
本発明を提案するに至った。
の添加剤を加えてＴＴ乾燥試薬を作製することにより可
能となることが明らかとなり、さらに研究を進めた結果
本発明を提案するに至った。
【００１４】即ち、本発明は組織トロンボプラスチン、
カルシウム塩、牛吸着血漿、磁性粒子、並びに糖類、界
面活性剤、アミノ酸、アミノ酸塩、タンパク、及び多価
アルコールよりなる群から選ばれた少なくとも１種の添
加剤を含有してなる血液凝固乾燥記試薬に関するもので
ある。
カルシウム塩、牛吸着血漿、磁性粒子、並びに糖類、界
面活性剤、アミノ酸、アミノ酸塩、タンパク、及び多価
アルコールよりなる群から選ばれた少なくとも１種の添
加剤を含有してなる血液凝固乾燥記試薬に関するもので
ある。
【００１５】本発明のＴＴ乾燥試薬の調製方法は特に限
定されないが、上記必須成分を含む水溶液をＴＴ乾燥試
薬用最終溶液として調製した後、反応スライドに一定量
分注し、凍結乾燥する方法が一般的である。以下、詳述
する。
定されないが、上記必須成分を含む水溶液をＴＴ乾燥試
薬用最終溶液として調製した後、反応スライドに一定量
分注し、凍結乾燥する方法が一般的である。以下、詳述
する。
【００１６】ＴＴ乾燥試薬用最終溶液を分注する上記反
応スライドの材質は、ＴＴ測定時、血液試料とＴＴ乾燥
試薬からなる反応液の粘度上昇を磁性粒子の運動シグナ
ルの減衰として光学的にモニターできるものであれば特
に限定されず、代表的にはポリエステル、ポリ塩化ビニ
ル等が使用される。
応スライドの材質は、ＴＴ測定時、血液試料とＴＴ乾燥
試薬からなる反応液の粘度上昇を磁性粒子の運動シグナ
ルの減衰として光学的にモニターできるものであれば特
に限定されず、代表的にはポリエステル、ポリ塩化ビニ
ル等が使用される。
【００１７】例示すると、図１及び図２に示したような
反応スライドが挙げられる。図１は、反応スライドを上
方から見た図である。図１の点線で囲んだ部分がＴＴ乾
燥試薬用最終溶液分注口と血漿添加口とからなる主要部
である。主要部の構造を詳しく示したのが図２である。
通常白色のポリエステル板Ｃに透明色のポリエステル板
Ｂを貼合わせ、次にＢの上にさらに透明色のポリエステ
ル板Ａを貼合わせることで、主要部を構成する。
反応スライドが挙げられる。図１は、反応スライドを上
方から見た図である。図１の点線で囲んだ部分がＴＴ乾
燥試薬用最終溶液分注口と血漿添加口とからなる主要部
である。主要部の構造を詳しく示したのが図２である。
通常白色のポリエステル板Ｃに透明色のポリエステル板
Ｂを貼合わせ、次にＢの上にさらに透明色のポリエステ
ル板Ａを貼合わせることで、主要部を構成する。
【００１８】前述のＴＴ乾燥試薬用最終溶液を図１に示
す分注口から入れると、Ｄの部分に該最終溶液が充填さ
れる。続いて、凍結乾燥または風乾することにより試薬
成分を反応スライド中に保持し、本発明のＴＴ乾燥試薬
が作製できる。
す分注口から入れると、Ｄの部分に該最終溶液が充填さ
れる。続いて、凍結乾燥または風乾することにより試薬
成分を反応スライド中に保持し、本発明のＴＴ乾燥試薬
が作製できる。
【００１９】本発明のＴＴ乾燥試薬中の各構成成分の含
量は任意に決定すればよいが、以下代表的数値を例示す
る。尚、以下に述べる各構成成分の含量は、反応スライ
ドに２０μｌの前記ＴＴ乾燥試薬用最終溶液を分注して
乾燥した場合の含量で示す。
量は任意に決定すればよいが、以下代表的数値を例示す
る。尚、以下に述べる各構成成分の含量は、反応スライ
ドに２０μｌの前記ＴＴ乾燥試薬用最終溶液を分注して
乾燥した場合の含量で示す。
【００２０】本発明でいう組織トロンボプラスチンとは
牛脳から抽出された血液凝固因子であり、血液試料の凝
固を開始させる成分である。一般に組織トロンボプラス
チンは２×１０-8〜２×１０-3ｇで使用されるが、凝固
反応の進行がより安定する点から２×１０-6ｇ〜２×１
０-4ｇが好適である。
牛脳から抽出された血液凝固因子であり、血液試料の凝
固を開始させる成分である。一般に組織トロンボプラス
チンは２×１０-8〜２×１０-3ｇで使用されるが、凝固
反応の進行がより安定する点から２×１０-6ｇ〜２×１
０-4ｇが好適である。
【００２１】カルシウム塩は凝固反応に必須のカルシウ
ムイオンの供給源であり、例えば塩化カルシウムや乳酸
カルシウム等が具体的に挙げられる。一般に該カルシウ
ム塩は１．１×１０-6ｇ〜２．２×１０-4ｇで使用され
るが、凝固反応の進行がより安定する点から２．２×１
０-6ｇ〜１．１×１０-5ｇが好適である。
ムイオンの供給源であり、例えば塩化カルシウムや乳酸
カルシウム等が具体的に挙げられる。一般に該カルシウ
ム塩は１．１×１０-6ｇ〜２．２×１０-4ｇで使用され
るが、凝固反応の進行がより安定する点から２．２×１
０-6ｇ〜１．１×１０-5ｇが好適である。
【００２２】牛吸着血漿は牛血液から遠心処理等で血球
を除き、さらに 血液凝固第ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ因
子を除いて調製したもので、血液凝固第Ｉ、Ｖ凝固因子
等の供給源であり、粉末でも液体でも構わない。血液凝
固第ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ因子の除去方法には、例え
ば硫酸バリウム粉末等で吸着除去する通常の方法を用い
ることができる。一般に牛吸着血漿は８×１０-5ｇ〜
１．５×１０-3ｇで使用されるが、凝固反応の進行がよ
り安定する点から２×１０-4ｇ〜６×１０-4ｇが好適で
ある。
を除き、さらに 血液凝固第ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ因
子を除いて調製したもので、血液凝固第Ｉ、Ｖ凝固因子
等の供給源であり、粉末でも液体でも構わない。血液凝
固第ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ因子の除去方法には、例え
ば硫酸バリウム粉末等で吸着除去する通常の方法を用い
ることができる。一般に牛吸着血漿は８×１０-5ｇ〜
１．５×１０-3ｇで使用されるが、凝固反応の進行がよ
り安定する点から２×１０-4ｇ〜６×１０-4ｇが好適で
ある。
【００２３】磁性粒子はその運動シグナルで反応液の粘
度上昇及び低下をモニターするものであり、例えば四三
酸化鉄粒子、三二酸化鉄粒子、ニッケル粒子、コバルト
粒子等の強磁性体が好適に使用できるが、得られるシグ
ナルの強度が大きく安定している点から四三酸化鉄粒子
が特に好ましい。磁性粒子の大きさは一般に平均粒子径
１０μｍ以下が使用できるが、得られるシグナルの強度
がより大きい点から平均粒子径０．４〜０．９μｍであ
る粒子が好適に使用できる。磁性粒子の含量は通常２×
１０-6ｇ〜２×１０-4ｇで使用されるが、得られるシグ
ナルの強度がより大きい点から２×１０-5ｇ〜１．２×
１０-4ｇが好適である。
度上昇及び低下をモニターするものであり、例えば四三
酸化鉄粒子、三二酸化鉄粒子、ニッケル粒子、コバルト
粒子等の強磁性体が好適に使用できるが、得られるシグ
ナルの強度が大きく安定している点から四三酸化鉄粒子
が特に好ましい。磁性粒子の大きさは一般に平均粒子径
１０μｍ以下が使用できるが、得られるシグナルの強度
がより大きい点から平均粒子径０．４〜０．９μｍであ
る粒子が好適に使用できる。磁性粒子の含量は通常２×
１０-6ｇ〜２×１０-4ｇで使用されるが、得られるシグ
ナルの強度がより大きい点から２×１０-5ｇ〜１．２×
１０-4ｇが好適である。
【００２４】添加剤はＴＴ乾燥試薬の溶解性を向上させ
るものであり、糖類、界面活性剤、アミノ酸、アミノ酸
塩、タンパク、及び多価アルコールよりなる群から選ば
れ、これらは単独または２種以上組み合わせて用いられ
る。
るものであり、糖類、界面活性剤、アミノ酸、アミノ酸
塩、タンパク、及び多価アルコールよりなる群から選ば
れ、これらは単独または２種以上組み合わせて用いられ
る。
【００２５】糖類としては、グルコース、フルクトー
ス、ショ糖等のオリゴ糖類、デキストラン等の多糖類等
が挙げられ、いずれも使用できるが、ＴＴ乾燥試薬の溶
解性がより良好でかつ安定である点からオリゴ糖類が好
適に使用される。該糖類は通常２×１０-5ｇ〜４×１０
-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好
でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3ｇが
好適である。
ス、ショ糖等のオリゴ糖類、デキストラン等の多糖類等
が挙げられ、いずれも使用できるが、ＴＴ乾燥試薬の溶
解性がより良好でかつ安定である点からオリゴ糖類が好
適に使用される。該糖類は通常２×１０-5ｇ〜４×１０
-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好
でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3ｇが
好適である。
【００２６】界面活性剤は、塩化ベンザルコニウム、臭
化ウンデシルトリメチルアンモニウム等の陽イオン性界
面活性剤、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナト
リウム等の陰イオン性界面活性剤、3ー〔(3−Cholamidop
ropyl)dimetylammonio〕ー1ーpropanesulfonate（ＣＨＡ
ＰＳ）、3ー〔(3−Cholamidopropyl)dimetylammonio〕ー2
ーhydroxy-1-propanesulfonate（ＣＨＡＰＳＯ）等の両
イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンアルキルエー
テル等の非イオン性界面活性剤のいずれも使用できる
が、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好でかつ安定である
点から、非イオン性界面活性剤が好適に使用できる。該
界面活性剤は通常２×１０-5ｇ〜２×１０-3ｇで使用さ
れるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好でかつ均一で
ある点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3ｇが好適である。
化ウンデシルトリメチルアンモニウム等の陽イオン性界
面活性剤、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナト
リウム等の陰イオン性界面活性剤、3ー〔(3−Cholamidop
ropyl)dimetylammonio〕ー1ーpropanesulfonate（ＣＨＡ
ＰＳ）、3ー〔(3−Cholamidopropyl)dimetylammonio〕ー2
ーhydroxy-1-propanesulfonate（ＣＨＡＰＳＯ）等の両
イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンアルキルエー
テル等の非イオン性界面活性剤のいずれも使用できる
が、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好でかつ安定である
点から、非イオン性界面活性剤が好適に使用できる。該
界面活性剤は通常２×１０-5ｇ〜２×１０-3ｇで使用さ
れるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好でかつ均一で
ある点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3ｇが好適である。
【００２７】アミノ酸又はその塩としては、例えば中性
アミノ酸又はその塩としてグリシン、アラニン、グリシ
ン塩酸塩等、酸性アミノ酸又はその塩としてはグルタミ
ン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸ナトリウム等、塩
基性アミノ酸又はその塩としては、リジン、リジン塩酸
塩、アルギニン等があげられ、いずれも使用できるが、
ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好でかつ安定である点か
ら、酸性アミノ酸及び酸性アミノ酸塩が好適に使用でき
る。該アミノ酸又はその塩は通常２×１０-5ｇ〜２×１
０-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良
好でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3ｇ
が好適である。
アミノ酸又はその塩としてグリシン、アラニン、グリシ
ン塩酸塩等、酸性アミノ酸又はその塩としてはグルタミ
ン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸ナトリウム等、塩
基性アミノ酸又はその塩としては、リジン、リジン塩酸
塩、アルギニン等があげられ、いずれも使用できるが、
ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良好でかつ安定である点か
ら、酸性アミノ酸及び酸性アミノ酸塩が好適に使用でき
る。該アミノ酸又はその塩は通常２×１０-5ｇ〜２×１
０-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより良
好でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3ｇ
が好適である。
【００２８】タンパクとしては、例えばカゼイン、ゼラ
チン、牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）等のいず
れも使用できる。該タンパクは通常２×１０-5ｇ〜２×
１０-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより
良好でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3
ｇが好適である。
チン、牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）等のいず
れも使用できる。該タンパクは通常２×１０-5ｇ〜２×
１０-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより
良好でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１×１０-3
ｇが好適である。
【００２９】多価アルコールとしては、例えばグリセロ
ール、ポリエチレングリコール（以下ＰＥＧと略す）等
が挙げられ、いずれも使用できるが、ＴＴ乾燥試薬の溶
解性がより良好でかつ安定である点から、ＰＥＧが好適
に使用でき、なかでも平均分子量５０００〜１００００
ものが好適である。該多価アルコールは通常２×１０-5
ｇ〜２×１０-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解
性がより良好でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１
×１０-3ｇが好適である。
ール、ポリエチレングリコール（以下ＰＥＧと略す）等
が挙げられ、いずれも使用できるが、ＴＴ乾燥試薬の溶
解性がより良好でかつ安定である点から、ＰＥＧが好適
に使用でき、なかでも平均分子量５０００〜１００００
ものが好適である。該多価アルコールは通常２×１０-5
ｇ〜２×１０-3ｇで使用されるが、ＴＴ乾燥試薬の溶解
性がより良好でかつ均一である点から１×１０-4ｇ〜１
×１０-3ｇが好適である。
【００３０】これら添加剤の中でも、特に溶解性が安定
し凝固時間の再現性が良好である点から糖類及び多価ア
ルコールが好適である。上記本発明中の添加剤を一切用
いない場合、ＴＴ乾燥試薬の溶解性が著しく低下し、再
現性のある凝固時間が得られないためＴＴの測定は困難
である。
し凝固時間の再現性が良好である点から糖類及び多価ア
ルコールが好適である。上記本発明中の添加剤を一切用
いない場合、ＴＴ乾燥試薬の溶解性が著しく低下し、再
現性のある凝固時間が得られないためＴＴの測定は困難
である。
【００３１】本発明の血液凝固時間測定乾燥試薬におい
て、組織トロンボプラスチン、カルシウム塩、牛吸着血
漿、強磁性体磁性粒子、並びに糖類及び多価アルコール
よりなる群から選ばれた少なくとも１種の添加剤を含有
してなる血液凝固時間測定乾燥試薬が、血液試料と該試
薬との溶解性に優れる結果、得られる磁性粒子の運動シ
グナル強度が大きく判定が容易でありしかも測定感度が
向上する、更に凝固時間の再現性がよい、従来の溶液法
との相関性がよい等の種々の点で好ましい試薬である。
て、組織トロンボプラスチン、カルシウム塩、牛吸着血
漿、強磁性体磁性粒子、並びに糖類及び多価アルコール
よりなる群から選ばれた少なくとも１種の添加剤を含有
してなる血液凝固時間測定乾燥試薬が、血液試料と該試
薬との溶解性に優れる結果、得られる磁性粒子の運動シ
グナル強度が大きく判定が容易でありしかも測定感度が
向上する、更に凝固時間の再現性がよい、従来の溶液法
との相関性がよい等の種々の点で好ましい試薬である。
【００３２】本発明のＴＴ乾燥試薬の調製方法は特に限
定されないが、前出の組織トロンボプラスチン、牛吸着
血漿及びカルシウム塩を含む市販の乾燥品ＴＴ試薬を用
いて、この乾燥品ＴＴ試薬を水で復元し次いで磁性粒子
と添加剤の水溶液を加えて、或は乾燥品ＴＴ試薬に直接
磁性粒子と添加剤の水溶液を加えてＴＴ乾燥試薬用最終
溶液した後、該最終溶液を所定の反応スライドに一定量
分注し乾燥する方法が代表的な調製方法である。
定されないが、前出の組織トロンボプラスチン、牛吸着
血漿及びカルシウム塩を含む市販の乾燥品ＴＴ試薬を用
いて、この乾燥品ＴＴ試薬を水で復元し次いで磁性粒子
と添加剤の水溶液を加えて、或は乾燥品ＴＴ試薬に直接
磁性粒子と添加剤の水溶液を加えてＴＴ乾燥試薬用最終
溶液した後、該最終溶液を所定の反応スライドに一定量
分注し乾燥する方法が代表的な調製方法である。
【００３３】上記復元する際の液、並びに添加剤を溶解
させる液としては、通常水を使用するが、ｐＨ６〜ｐＨ
８の任意の濃度の緩衝液、例えば２０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ７．３）、２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．
３）等を用いてもよい。
させる液としては、通常水を使用するが、ｐＨ６〜ｐＨ
８の任意の濃度の緩衝液、例えば２０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ７．３）、２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．
３）等を用いてもよい。
【００３４】ＴＴ乾燥試薬作製時の凍結方法は、液体窒
素等で瞬時に凍結する方法あるいは緩慢に凍結する方法
のどちらでも構わないが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより
良好でかつ均一である点から、緩慢に凍結する方法が好
適である。凍結方法を例示すると、所定の反応スライド
にＴＴ乾燥試薬用最終溶液を室温で一定量分注した後、
−４０℃の冷凍庫に入れ、緩慢に凍結する方法が使用で
きる。
素等で瞬時に凍結する方法あるいは緩慢に凍結する方法
のどちらでも構わないが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより
良好でかつ均一である点から、緩慢に凍結する方法が好
適である。凍結方法を例示すると、所定の反応スライド
にＴＴ乾燥試薬用最終溶液を室温で一定量分注した後、
−４０℃の冷凍庫に入れ、緩慢に凍結する方法が使用で
きる。
【００３５】乾燥方法は、凍結乾燥あるいは風乾のどち
らでも構わないが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより均一で
ある点から、凍結乾燥が好適である。凍結乾燥方法を例
示すると、真空状態で温度を−３０℃から３０℃まで８
時間で上昇させて凍結乾燥する方法が使用できる。
らでも構わないが、ＴＴ乾燥試薬の溶解性がより均一で
ある点から、凍結乾燥が好適である。凍結乾燥方法を例
示すると、真空状態で温度を−３０℃から３０℃まで８
時間で上昇させて凍結乾燥する方法が使用できる。
【００３６】本発明のＴＴ乾燥試薬でのＴＴの測定は特
に限定されないが、代表的にはＴＴ乾燥試薬に一定量の
血液試料を滴下し、すぐに振動磁場と静止磁場の組合せ
にかけて磁性粒子を運動させ、同時にＴＴ乾燥試薬中に
含まれる磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニターし
て凝固を検知する方法で行うことができる。このような
測定は、市販の血液凝固時間測定装置である商品名ＣＯ
ＡＧ１〔和光純薬工業（株）販売〕や商品名ＣＧ−０１
〔（（株）Ａ＆Ｔ販売〕等を使用して行うことができ
る。
に限定されないが、代表的にはＴＴ乾燥試薬に一定量の
血液試料を滴下し、すぐに振動磁場と静止磁場の組合せ
にかけて磁性粒子を運動させ、同時にＴＴ乾燥試薬中に
含まれる磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニターし
て凝固を検知する方法で行うことができる。このような
測定は、市販の血液凝固時間測定装置である商品名ＣＯ
ＡＧ１〔和光純薬工業（株）販売〕や商品名ＣＧ−０１
〔（（株）Ａ＆Ｔ販売〕等を使用して行うことができ
る。
【００３７】上記の方法でＴＴを測定するとき、通常Ｔ
Ｔ凝固時間とは血液試料を添加してから凝固点までの時
間を指す。凝固点はＴＴ乾燥試薬中の磁性粒子の運動シ
グナルの強度変化をもとに判断することができる。凝固
点としては、シグナル強度の減衰速度が最大になる点、
或はシグナル強度がその最大値に対して任意の割合まで
減衰した点等が採用される。得られる凝固時間の再現性
がより良好であることから、シグナル強度の減衰速度が
最大になる点が好適に使用できる。
Ｔ凝固時間とは血液試料を添加してから凝固点までの時
間を指す。凝固点はＴＴ乾燥試薬中の磁性粒子の運動シ
グナルの強度変化をもとに判断することができる。凝固
点としては、シグナル強度の減衰速度が最大になる点、
或はシグナル強度がその最大値に対して任意の割合まで
減衰した点等が採用される。得られる凝固時間の再現性
がより良好であることから、シグナル強度の減衰速度が
最大になる点が好適に使用できる。
【００３８】経口抗凝血薬投与効果を評価する場合、Ｔ
Ｔ活性値を使用することもある。ＴＴ活性値は、ＴＴ凝
固時間の機種間差をなくす標準化のために使用されるも
のである。
Ｔ活性値を使用することもある。ＴＴ活性値は、ＴＴ凝
固時間の機種間差をなくす標準化のために使用されるも
のである。
【００３９】本発明のＴＴ乾燥試薬を用いて任意の血液
試料のＴＴ活性値を求める方法は、標準曲線を利用し
て、得られたＴＴ凝固時間から算出する一般的な方法が
使用できる。標準曲線の作成方法は特に限定されない
が、例えばＴＴ活性値既知の血液試料を任意に５段階に
希釈し、両対数グラフの縦軸を凝固時間とし、横軸をＴ
Ｔ活性値として作成する方法が好適に使用できる。
試料のＴＴ活性値を求める方法は、標準曲線を利用し
て、得られたＴＴ凝固時間から算出する一般的な方法が
使用できる。標準曲線の作成方法は特に限定されない
が、例えばＴＴ活性値既知の血液試料を任意に５段階に
希釈し、両対数グラフの縦軸を凝固時間とし、横軸をＴ
Ｔ活性値として作成する方法が好適に使用できる。
【００４０】本発明により試薬溶解性が向上した結果、
初めて実用に適したＴＴ測定用のＴＴ乾燥試薬が提供可
能となった。従って、緊急性の高いＴＴ測定に最適な、
試薬溶液の調製等が必要ない測定法が可能となった。
初めて実用に適したＴＴ測定用のＴＴ乾燥試薬が提供可
能となった。従って、緊急性の高いＴＴ測定に最適な、
試薬溶液の調製等が必要ない測定法が可能となった。
【００４１】
実施例１ 添加剤を含むＴＴ乾燥試薬の再現性 ＴＴ乾燥試薬の製造は以下のようにして行った。市販の
ＴＴ試薬である複合因子Ｔコクサイ〔（株）国際試薬；
牛脳由来組織トロンボプラスチン、牛吸着血漿及び乳酸
カルシウムを含む〕を取扱い説明書に従って調製して水
溶液とする際、水に代えてグルコースの最終濃度が１重
量％となるように調製されたグルコース水溶液を添加し
た。さらにＦｅ3Ｏ4粒子（レアメタリック社製）を最終
濃度５ｍｇ／ｍｌとなるように添加してＴＴ乾燥試薬用
最終溶液を作成し、よく振とう攪拌した。該最終溶液
を、図１に示す反応スライドに２０μｌずつ分注し、−
４０℃の冷凍庫で凍結し、続いて凍結乾燥を行った。凍
結乾燥は、真空状態で−３０℃から７時間で２０℃まで
直線的に温度を上昇させる方法で行った。
ＴＴ試薬である複合因子Ｔコクサイ〔（株）国際試薬；
牛脳由来組織トロンボプラスチン、牛吸着血漿及び乳酸
カルシウムを含む〕を取扱い説明書に従って調製して水
溶液とする際、水に代えてグルコースの最終濃度が１重
量％となるように調製されたグルコース水溶液を添加し
た。さらにＦｅ3Ｏ4粒子（レアメタリック社製）を最終
濃度５ｍｇ／ｍｌとなるように添加してＴＴ乾燥試薬用
最終溶液を作成し、よく振とう攪拌した。該最終溶液
を、図１に示す反応スライドに２０μｌずつ分注し、−
４０℃の冷凍庫で凍結し、続いて凍結乾燥を行った。凍
結乾燥は、真空状態で−３０℃から７時間で２０℃まで
直線的に温度を上昇させる方法で行った。
【００４２】ＴＴ乾燥試薬を用いたＴＴの測定は以下の
ようにして行った。試料として用いたサイトロールＩ
（正常モデル血漿、デイド・バクスター社製）は、取扱
い書に指示された通りに調製した後、オーレンベロナー
ル緩衝液（シグマ社製）を等量加えて１／２濃度に希釈
し、ＴＴ乾燥試薬１枚につき２５μｌを測定に用いた。
凍結乾燥後４℃にて保存しておいたＴＴ乾燥試薬はデシ
ケータ中にて室温になるまで放置し、ＣＧ０１〔（株）
Ａ＆Ｔ販売〕を用いて以下に述べる凝固時間を２回測定
した。試料添加後の磁性粒子の運動を散乱光の変化とし
て測定すると、このシグナルの強度は凝固に伴う粘度の
増加に従い急激に小さくなる。試料添加直後から、図３
に示したようにこのシグナル強度の減衰速度が最大とな
る変曲点を凝固点とし、試料を添加してからこの凝固点
までを凝固時間とし、結果を表１に示した。また、シグ
ナル強度最大値も表１に示した。ＴＴ乾燥試薬の溶解性
が高ければ、シグナル強度の最大値は大きくなる。
ようにして行った。試料として用いたサイトロールＩ
（正常モデル血漿、デイド・バクスター社製）は、取扱
い書に指示された通りに調製した後、オーレンベロナー
ル緩衝液（シグマ社製）を等量加えて１／２濃度に希釈
し、ＴＴ乾燥試薬１枚につき２５μｌを測定に用いた。
凍結乾燥後４℃にて保存しておいたＴＴ乾燥試薬はデシ
ケータ中にて室温になるまで放置し、ＣＧ０１〔（株）
Ａ＆Ｔ販売〕を用いて以下に述べる凝固時間を２回測定
した。試料添加後の磁性粒子の運動を散乱光の変化とし
て測定すると、このシグナルの強度は凝固に伴う粘度の
増加に従い急激に小さくなる。試料添加直後から、図３
に示したようにこのシグナル強度の減衰速度が最大とな
る変曲点を凝固点とし、試料を添加してからこの凝固点
までを凝固時間とし、結果を表１に示した。また、シグ
ナル強度最大値も表１に示した。ＴＴ乾燥試薬の溶解性
が高ければ、シグナル強度の最大値は大きくなる。
【００４３】表１より、上記のグルコースを添加したＴ
Ｔ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性がよく、ＴＴ
測定への使用に適することがわかる。また、シグナル強
度最大値が大きく試薬が十分に溶解していることがわか
る。
Ｔ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性がよく、ＴＴ
測定への使用に適することがわかる。また、シグナル強
度最大値が大きく試薬が十分に溶解していることがわか
る。
【００４４】実施例２ 添加剤を含むＴＴ乾燥試薬の再
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液調製
時にグルコース水溶液に代えて非イオン性界面活性化剤
であるポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート水
溶液を添加し、ＴＴ乾燥試薬の製造を行った。作製した
ＴＴ乾燥試薬によるＴＴ測定も実施例１と同様に行い、
その結果を表１に示した。
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液調製
時にグルコース水溶液に代えて非イオン性界面活性化剤
であるポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート水
溶液を添加し、ＴＴ乾燥試薬の製造を行った。作製した
ＴＴ乾燥試薬によるＴＴ測定も実施例１と同様に行い、
その結果を表１に示した。
【００４５】表１より、上記のポリオキシエチレンソル
ビタンモノオレエートを添加したＴＴ乾燥試薬では２回
測定した場合の再現性がよく、ＴＴ測定への使用に適す
ることがわかる。またシグナル強度最大値が大きく試薬
が十分に溶解していることがわかる。
ビタンモノオレエートを添加したＴＴ乾燥試薬では２回
測定した場合の再現性がよく、ＴＴ測定への使用に適す
ることがわかる。またシグナル強度最大値が大きく試薬
が十分に溶解していることがわかる。
【００４６】実施例３ 添加剤を含むＴＴ乾燥試薬の再
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液作製
時にグルコース水溶液に代えてグルタミン酸ナトリウム
水溶液を添加し、ＴＴ乾燥試薬の製造を行った。作製し
たＴＴ乾燥試薬によるＴＴ測定も実施例１と同様に行
い、その結果を表１に示した。
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液作製
時にグルコース水溶液に代えてグルタミン酸ナトリウム
水溶液を添加し、ＴＴ乾燥試薬の製造を行った。作製し
たＴＴ乾燥試薬によるＴＴ測定も実施例１と同様に行
い、その結果を表１に示した。
【００４７】表１より、上記のグルタミン酸ナトリウム
を添加したＴＴ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性
がよく、ＴＴ測定への使用に適することがわかる。また
シグナル強度最大値が大きく試薬が十分に溶解している
ことがわかる。
を添加したＴＴ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性
がよく、ＴＴ測定への使用に適することがわかる。また
シグナル強度最大値が大きく試薬が十分に溶解している
ことがわかる。
【００４８】実施例４ 添加剤を含むＴＴ乾燥試薬の再
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液作製
時にグルコース水溶液に代えてＢＳＡ水溶液を添加し、
ＴＴ乾燥試薬の製造を行った。作製したＴＴ乾燥試薬に
よるＴＴ測定も実施例１と同様に行い、その結果を表１
に示した。
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液作製
時にグルコース水溶液に代えてＢＳＡ水溶液を添加し、
ＴＴ乾燥試薬の製造を行った。作製したＴＴ乾燥試薬に
よるＴＴ測定も実施例１と同様に行い、その結果を表１
に示した。
【００４９】表１より、上記のＢＳＡを添加したＴＴ乾
燥試薬では２回測定した場合の再現性がよく、ＴＴ測定
への使用に適することがわかる。またシグナル強度最大
値が大きく試薬が十分に溶解していることがわかる。
燥試薬では２回測定した場合の再現性がよく、ＴＴ測定
への使用に適することがわかる。またシグナル強度最大
値が大きく試薬が十分に溶解していることがわかる。
【００５０】実施例５ 添加剤を含むＴＴ乾燥試薬の再
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液作製
時にグルコース水溶液に代えてＰＥＧ６０００（和光純
薬製；平均分子量７５００）水溶液を添加し、ＴＴ乾燥
試薬の製造を行った。作製したＴＴ乾燥試薬によるＴＴ
測定も実施例１と同様に行い、その結果を表１に示し
た。
現性 実施例１と同様の方法で、ＴＴ乾燥試薬用最終溶液作製
時にグルコース水溶液に代えてＰＥＧ６０００（和光純
薬製；平均分子量７５００）水溶液を添加し、ＴＴ乾燥
試薬の製造を行った。作製したＴＴ乾燥試薬によるＴＴ
測定も実施例１と同様に行い、その結果を表１に示し
た。
【００５１】表１より、上記のＰＥＧ６０００を添加し
たＴＴ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性が最もよ
く、ＴＴ測定への使用に適することがわかる。またシグ
ナル強度最大値が大きく試薬が十分に溶解していること
がわかる。
たＴＴ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性が最もよ
く、ＴＴ測定への使用に適することがわかる。またシグ
ナル強度最大値が大きく試薬が十分に溶解していること
がわかる。
【００５２】比較例１ 添加剤を含まないＴＴ乾燥試薬
の再現性 実施例１と同様の方法で、但しＴＴ乾燥試薬用最終溶液
作製時に添加剤を全く加えず、ＴＴ乾燥試薬の製造を行
った。作製したＴＴ乾燥試薬によるＴＴ測定も実施例１
と同様に行い、その結果を表１に示した。
の再現性 実施例１と同様の方法で、但しＴＴ乾燥試薬用最終溶液
作製時に添加剤を全く加えず、ＴＴ乾燥試薬の製造を行
った。作製したＴＴ乾燥試薬によるＴＴ測定も実施例１
と同様に行い、その結果を表１に示した。
【００５３】表１より、上記の添加剤を全く加えないＴ
Ｔ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性が著しく劣っ
ていることがわかる。またシグナル強度最大値が非常に
小さく試薬がほとんど溶解していないことがわかる。以
上の結果より、本発明の添加剤を使用せずにＴＴ乾燥試
薬を作成した場合、ＴＴの測定に使用するのは困難であ
り、添加剤を使用して初めてＴＴの測定に使用可能な凝
固時間の再現性を示すことがわかる。
Ｔ乾燥試薬では２回測定した場合の再現性が著しく劣っ
ていることがわかる。またシグナル強度最大値が非常に
小さく試薬がほとんど溶解していないことがわかる。以
上の結果より、本発明の添加剤を使用せずにＴＴ乾燥試
薬を作成した場合、ＴＴの測定に使用するのは困難であ
り、添加剤を使用して初めてＴＴの測定に使用可能な凝
固時間の再現性を示すことがわかる。
【００５４】
【表１】
【００５５】実施例６ ＴＴ活性標準曲線 添加剤としてＰＥＧ６０００を使用して実施例１と同様
にＴＴ乾燥試薬を製造した。測定試料はヒト標準血漿
〔（株）国際試薬、トロンボテスト活性１１０％〕を希
釈液でＴＴ活性１１、２２、５５、８２．５％の希釈血
漿とし、各ＴＴ活性の凝固時間を測定した。希釈液はＢ
ＳＡ５％、シュクロース１０％、塩化ナトリウム０．９
％を含む水溶液を用いた。測定結果は図４に示した。
にＴＴ乾燥試薬を製造した。測定試料はヒト標準血漿
〔（株）国際試薬、トロンボテスト活性１１０％〕を希
釈液でＴＴ活性１１、２２、５５、８２．５％の希釈血
漿とし、各ＴＴ活性の凝固時間を測定した。希釈液はＢ
ＳＡ５％、シュクロース１０％、塩化ナトリウム０．９
％を含む水溶液を用いた。測定結果は図４に示した。
【００５６】測定結果より、図４のように両対数グラフ
上で良好な標準曲線が得られた。従って、本発明の試薬
を用いた場合標準曲線を求めることで、凝固時間からＴ
Ｔ活性値を算出できることがわかる。
上で良好な標準曲線が得られた。従って、本発明の試薬
を用いた場合標準曲線を求めることで、凝固時間からＴ
Ｔ活性値を算出できることがわかる。
【００５７】実施例７ 因子感受性試験 添加剤としてＰＥＧ６０００を使用して実施例１と同様
にＴＴ乾燥試薬を製造し、血液凝固第Ｘ因子感受性を調
べた。測定試料は正常血漿及び血液凝固第Ｘ因子欠乏血
漿（ジョージキング社）を用いて作製した。正常血漿を
因子含有率１００％とし、因子欠乏血漿を因子含有率０
％として因子含有率５、１０、２０、５０、７５％とな
るように２種の血漿を混合して用いた。測定結果は図５
に示した。
にＴＴ乾燥試薬を製造し、血液凝固第Ｘ因子感受性を調
べた。測定試料は正常血漿及び血液凝固第Ｘ因子欠乏血
漿（ジョージキング社）を用いて作製した。正常血漿を
因子含有率１００％とし、因子欠乏血漿を因子含有率０
％として因子含有率５、１０、２０、５０、７５％とな
るように２種の血漿を混合して用いた。測定結果は図５
に示した。
【００５８】図５より、本発明の試薬は血液凝固第Ｘ因
子に対して十分な感受性を持つことがわかる。
子に対して十分な感受性を持つことがわかる。
【００５９】実施例８ 従来法との相関 添加剤としてＰＥＧ６０００を使用して実施例１と同様
にＴＴ乾燥試薬を製造し、測定試料にヒト血漿３８検体
を用いて従来法との相関を調べた。従来法の測定は、Ｔ
Ｔ試薬としてトロンボテストオーレン（エーザイ）を、
測定装置としてＫＣ−１０（アメルンク社）を各々の取
扱い説明書に従って使用した。測定結果は図６に示し
た。
にＴＴ乾燥試薬を製造し、測定試料にヒト血漿３８検体
を用いて従来法との相関を調べた。従来法の測定は、Ｔ
Ｔ試薬としてトロンボテストオーレン（エーザイ）を、
測定装置としてＫＣ−１０（アメルンク社）を各々の取
扱い説明書に従って使用した。測定結果は図６に示し
た。
【００６０】本発明のＴＴ測定用のＴＴ乾燥試薬を用い
た測定法と従来法の関係は測定結果よりＹ＝１７．４＋
１．４５Ｘと表すことができ、このときの相関係数は
０．９９０３であった。従って、本発明のＴＴ乾燥試薬
を用いたＴＴ測定法は、従来のＴＴ測定法と非常に良好
な相関関係を持つことがわかる。
た測定法と従来法の関係は測定結果よりＹ＝１７．４＋
１．４５Ｘと表すことができ、このときの相関係数は
０．９９０３であった。従って、本発明のＴＴ乾燥試薬
を用いたＴＴ測定法は、従来のＴＴ測定法と非常に良好
な相関関係を持つことがわかる。
【００６１】実施例９ 従来法との相関 グルコース水溶液に代えて最終濃度が１０重量％になる
ように調製されたショ糖水溶液を使用し、実施例１と同
様にしてＴＴ乾燥試薬を製造し、測定試料にヒト血漿２
８検体を用いて従来法との相関を調べた。従来法の測定
は、ＴＴ試薬としてトロンボテストオーレン（エーザ
イ）を、測定装置としてＫＣ−１０（アメルンク社）を
各々の取扱い説明書に従って使用した。測定結果は図７
に示した。
ように調製されたショ糖水溶液を使用し、実施例１と同
様にしてＴＴ乾燥試薬を製造し、測定試料にヒト血漿２
８検体を用いて従来法との相関を調べた。従来法の測定
は、ＴＴ試薬としてトロンボテストオーレン（エーザ
イ）を、測定装置としてＫＣ−１０（アメルンク社）を
各々の取扱い説明書に従って使用した。測定結果は図７
に示した。
【００６２】本発明のＴＴ測定用のＴＴ乾燥試薬を用い
た測定法と従来法の関係は測定結果よりＹ＝−７．９５
４＋１．６５３Ｘと表すことができ、このときの相関係
数は０．９９００であった。従って、本発明のＴＴ乾燥
試薬を用いたＴＴ測定法は、従来のＴＴ測定法と非常に
良好な相関関係を持つことがわかる。
た測定法と従来法の関係は測定結果よりＹ＝−７．９５
４＋１．６５３Ｘと表すことができ、このときの相関係
数は０．９９００であった。従って、本発明のＴＴ乾燥
試薬を用いたＴＴ測定法は、従来のＴＴ測定法と非常に
良好な相関関係を持つことがわかる。
【００６３】
【発明の効果】本発明により、血液試料を滴下した際の
トロンボテスト測定用のＴＴ乾燥試薬の溶解性が向上し
た。この結果、凝固時間の同時再現性が向上し、得られ
る磁性粒子の運動シグナル強度が大きくなり判定が容易
となり且つ測定感度が向上し、しかも、従来の溶液法と
の相関性がよい等の種々の点で優れたＴＴ乾燥試薬が得
られるようになった。
トロンボテスト測定用のＴＴ乾燥試薬の溶解性が向上し
た。この結果、凝固時間の同時再現性が向上し、得られ
る磁性粒子の運動シグナル強度が大きくなり判定が容易
となり且つ測定感度が向上し、しかも、従来の溶液法と
の相関性がよい等の種々の点で優れたＴＴ乾燥試薬が得
られるようになった。
【００６４】従って、実用に適したＴＴ乾燥試薬の提供
が可能になり、手術等で抗凝固剤を投与する際に患者血
液の凝固能力のモニタリングを迅速に行うことができ
る。
が可能になり、手術等で抗凝固剤を投与する際に患者血
液の凝固能力のモニタリングを迅速に行うことができ
る。
【図１】 図１は、ＴＴ乾燥試薬用反応スライドの１例
の概観図である。
の概観図である。
【図２】 図２は、ＴＴ乾燥試薬用反応スライドの１例
の主要部の構成図である。
の主要部の構成図である。
【図３】 図３は、ＴＴ乾燥試薬に血液試料を添加した
場合のシグナル強度の変化である。
場合のシグナル強度の変化である。
【図４】 図４は、実施例６におけるＴＴ活性の標準曲
線で、縦軸（対数）が凝固時間、横軸（対数）がＴＴ活
性値である。
線で、縦軸（対数）が凝固時間、横軸（対数）がＴＴ活
性値である。
【図５】 図５は、実施例７における血液凝固第Ｘ因子
感受性のグラフで、縦軸（対数）が凝固時間、横軸（対
数）が因子含有率である。
感受性のグラフで、縦軸（対数）が凝固時間、横軸（対
数）が因子含有率である。
【図６】 図６は、実施例８における本法と従来法の相
関グラフで、縦軸が本法の凝固時間、横軸が従来法の凝
固時間である。
関グラフで、縦軸が本法の凝固時間、横軸が従来法の凝
固時間である。
【図７】 図７は、実施例９における本法と従来法の相
関グラフで、縦軸が本法の凝固時間、横軸が従来法の凝
固時間である。
関グラフで、縦軸が本法の凝固時間、横軸が従来法の凝
固時間である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/56 G01N 33/86 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 組織トロンボプラスチン、カルシウム
塩、牛吸着血漿、磁性粒子、並びに糖類、界面活性剤、
アミノ酸、アミノ酸塩、タンパク、及び多価アルコール
よりなる群から選ばれた少なくとも1種の添加剤を含有
してなる、溶液にすることなく血液試料を添加して測定
に供することを特徴とする血液凝固時間測定乾燥試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06039794A JP3095608B2 (ja) | 1993-03-30 | 1994-03-10 | 血液凝固時間測定乾燥試薬 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5-71888 | 1993-03-30 | ||
| JP7188893 | 1993-03-30 | ||
| JP06039794A JP3095608B2 (ja) | 1993-03-30 | 1994-03-10 | 血液凝固時間測定乾燥試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06337267A JPH06337267A (ja) | 1994-12-06 |
| JP3095608B2 true JP3095608B2 (ja) | 2000-10-10 |
Family
ID=26379186
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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