JP3034625B2 - タンパクのゲル化促進物質とその抽出精製方法 - Google Patents
タンパクのゲル化促進物質とその抽出精製方法Info
- Publication number
- JP3034625B2 JP3034625B2 JP3060463A JP6046391A JP3034625B2 JP 3034625 B2 JP3034625 B2 JP 3034625B2 JP 3060463 A JP3060463 A JP 3060463A JP 6046391 A JP6046391 A JP 6046391A JP 3034625 B2 JP3034625 B2 JP 3034625B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- tuna
- gelation
- heart
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規なタンパクのゲル化
促進物質、特に魚肉練製品を製造する際に用いるにタン
パクのゲル化を促進するに適当な新規なタンパクのゲル
化促進物質に関するものである。
促進物質、特に魚肉練製品を製造する際に用いるにタン
パクのゲル化を促進するに適当な新規なタンパクのゲル
化促進物質に関するものである。
【０００２】
【従来の技術と解決すべき課題】従来、魚肉を加工処理
して、すり身又は練り製品を製造するに当っては、魚肉
タンパクのゲル化促進剤を用いたり又はゲル形成阻害物
質を除去したりして、魚肉のゲル化促進を計っている
が、近年、トランスグルタミナーゼと呼ばれる酵素が大
豆タンパクや魚肉すり身のゲル強度補強に利用しうると
言われていきている。
して、すり身又は練り製品を製造するに当っては、魚肉
タンパクのゲル化促進剤を用いたり又はゲル形成阻害物
質を除去したりして、魚肉のゲル化促進を計っている
が、近年、トランスグルタミナーゼと呼ばれる酵素が大
豆タンパクや魚肉すり身のゲル強度補強に利用しうると
言われていきている。
【０００３】この酵素は、従来、モルモットの肝臓を由
来とするものが一般的であり、近年になり微生物起源の
ものが見出されるまでは、供給量の点から各種製品加工
等への応用は現実的には困難なものであった。本発明者
等は、非微生物由来のゲル化促進物質を天然廃棄物より
大量に抽出供給する事を目的とし、鋭意研究を進めてき
たところ、これまで廃物として処理されていた水産動物
又は畜産動物の心臓中の必ずしもトランスグルタミナー
ゼ活性を示さない水溶性抽出液にも強力なタンパク質の
ゲル化活性が認められる事を見出し、さきに水産動物又
は畜産動物の心臓の水溶性抽出液又はその濃縮物からな
るタンパクのゲル化促進物質を開発して特許出願した
（特願平１−２５４７３４号）。
来とするものが一般的であり、近年になり微生物起源の
ものが見出されるまでは、供給量の点から各種製品加工
等への応用は現実的には困難なものであった。本発明者
等は、非微生物由来のゲル化促進物質を天然廃棄物より
大量に抽出供給する事を目的とし、鋭意研究を進めてき
たところ、これまで廃物として処理されていた水産動物
又は畜産動物の心臓中の必ずしもトランスグルタミナー
ゼ活性を示さない水溶性抽出液にも強力なタンパク質の
ゲル化活性が認められる事を見出し、さきに水産動物又
は畜産動物の心臓の水溶性抽出液又はその濃縮物からな
るタンパクのゲル化促進物質を開発して特許出願した
（特願平１−２５４７３４号）。
【０００４】しかし、そのようなゲル化促進物質の有効
利用を図るにはまだ種々の問題があり、その解決が望ま
れた。
利用を図るにはまだ種々の問題があり、その解決が望ま
れた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】かくて本発明者等はその
解決を図るべくこれらタンパクのゲル化促進物質につい
て更に研究、実験をすすめたところ、マグロ類及びカツ
オ類の心臓の水溶性抽出液からイオン交換クロマトグラ
フィー、カルシウム依存型アフィニティクロマトグラフ
ィー、ゲル濾過分画精製処理を経て得られた、ゲル濾過
により算定される分子量約９９，０００±２，０００
（ゲル濾過による）、電気泳動により算定される分子量
９０，０００±５，０００（１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥに
よる）の物質が特にすぐれたゲル化能を有し、その有効
利用を図りうることを見出して本発明に至ったものであ
る。
解決を図るべくこれらタンパクのゲル化促進物質につい
て更に研究、実験をすすめたところ、マグロ類及びカツ
オ類の心臓の水溶性抽出液からイオン交換クロマトグラ
フィー、カルシウム依存型アフィニティクロマトグラフ
ィー、ゲル濾過分画精製処理を経て得られた、ゲル濾過
により算定される分子量約９９，０００±２，０００
（ゲル濾過による）、電気泳動により算定される分子量
９０，０００±５，０００（１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥに
よる）の物質が特にすぐれたゲル化能を有し、その有効
利用を図りうることを見出して本発明に至ったものであ
る。
【０００６】よって本発明はマグロ類及びカツオ類の心
臓の水溶性抽出液からえられ、分子量９９，０００±２
０００（Superose ６ＨＲ若しくはSuperose １２ＨＲ
を用いたゲル濾過による）、９０，０００±５，０００
（１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる）、至適カルシウム濃
度０．０１mM〜５０mMの性質を示すカルシウム依存型の
タンパクゲル化促進物質を提供するものである。本発明
はまたその物質の抽出精製方法を提供するものである。
臓の水溶性抽出液からえられ、分子量９９，０００±２
０００（Superose ６ＨＲ若しくはSuperose １２ＨＲ
を用いたゲル濾過による）、９０，０００±５，０００
（１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる）、至適カルシウム濃
度０．０１mM〜５０mMの性質を示すカルシウム依存型の
タンパクゲル化促進物質を提供するものである。本発明
はまたその物質の抽出精製方法を提供するものである。
【０００７】
【実施例】以下、本発明について詳しく説明する。
【０００８】本発明においてマグロ類とは、ビンナガ、
クロマグロ、ミナミマグロ、メバチ、キハダ、タイセイ
ヨウマグロ、コシナガ等を言い、カツオ類とはカツオ等
を言うものとする。
クロマグロ、ミナミマグロ、メバチ、キハダ、タイセイ
ヨウマグロ、コシナガ等を言い、カツオ類とはカツオ等
を言うものとする。
【０００９】通常、これらの心臓をその重量の２倍又は
それ以上の量の水を加えてホモジナイズし、遠心分離し
てその上清をとって水溶性抽出液を得る。水に代えて
０．１〜０．３ＭのＮａＣｌ又はＫＣｌなどの塩類を含
む低温濃度の水溶液を用いることができる。このような
マグロ類及びカツオ類の心臓の水溶性抽出液について、
順次、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー
クロマトグラフィー、ゲル濾過分画精製を行う。
それ以上の量の水を加えてホモジナイズし、遠心分離し
てその上清をとって水溶性抽出液を得る。水に代えて
０．１〜０．３ＭのＮａＣｌ又はＫＣｌなどの塩類を含
む低温濃度の水溶液を用いることができる。このような
マグロ類及びカツオ類の心臓の水溶性抽出液について、
順次、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー
クロマトグラフィー、ゲル濾過分画精製を行う。
【００１０】これら各段階の処理の例をメバチマグロ心
臓の抽出液の場合について述べれば、まず陰イオン交換
クロマトグラフィーにおいては、その抽出液を通常ＤＥ
ＡＥSepharose ＣＬ−６Ｂにより分画する。この行程
により目的とするタンパクは吸着され結果的に上記抽出
液中の色素タンパク質が除去される。
臓の抽出液の場合について述べれば、まず陰イオン交換
クロマトグラフィーにおいては、その抽出液を通常ＤＥ
ＡＥSepharose ＣＬ−６Ｂにより分画する。この行程
により目的とするタンパクは吸着され結果的に上記抽出
液中の色素タンパク質が除去される。
【００１１】上記分画後、回収した活性画分をＣａ2+依
存アフィニティークロマトグラフィーにかける。アフィ
ニティークロマトグラフィーにより回収したサンプルは
濃縮後、ゲル濾過に供し、ゲル化試験で活性ピークを確
認後、ゲル濾過スタンダードによる検量線から、活性物
質の分子量を９９，０００±２，０００と算出した。以
下にカラム条件の一例を示す。 カラム：Superose ６ＨＲ、１２ＨＲ カラムサイズ：１×３０cm 分画分子量範囲：５，０００〜５×１０６（６ＨＲ） １，０００〜３×１０５（１２ＨＲ） 平衡緩衝液：０．１５Ｍ ＮａＣｌ ０．５mM ジチオ
スレイトール（ＤＴＴ）、１０mMトリス（ヒドロキシメ
チル）アミノメタンpH７．５ 流速：０．４ml／min 検出：２８０nm 温度：５℃ またゲル濾過により回収された活性画分を１０％ＳＤＳ
−ＰＡＧＥに供したところ、分子量９０，０００±５，
０００の付近に活性物質のタンパク質バンドが認められ
た。回収された活性画分のゲル化試験を後述する方法で
実施した結果は（＋＋）の判定であった。
存アフィニティークロマトグラフィーにかける。アフィ
ニティークロマトグラフィーにより回収したサンプルは
濃縮後、ゲル濾過に供し、ゲル化試験で活性ピークを確
認後、ゲル濾過スタンダードによる検量線から、活性物
質の分子量を９９，０００±２，０００と算出した。以
下にカラム条件の一例を示す。 カラム：Superose ６ＨＲ、１２ＨＲ カラムサイズ：１×３０cm 分画分子量範囲：５，０００〜５×１０６（６ＨＲ） １，０００〜３×１０５（１２ＨＲ） 平衡緩衝液：０．１５Ｍ ＮａＣｌ ０．５mM ジチオ
スレイトール（ＤＴＴ）、１０mMトリス（ヒドロキシメ
チル）アミノメタンpH７．５ 流速：０．４ml／min 検出：２８０nm 温度：５℃ またゲル濾過により回収された活性画分を１０％ＳＤＳ
−ＰＡＧＥに供したところ、分子量９０，０００±５，
０００の付近に活性物質のタンパク質バンドが認められ
た。回収された活性画分のゲル化試験を後述する方法で
実施した結果は（＋＋）の判定であった。
【００１２】Superose ６ＨＲ、１２ＨＲによる分画の
２８０nmにおける吸収値の変化を表わす代表的溶出パタ
ーンを図１、２に示す。
２８０nmにおける吸収値の変化を表わす代表的溶出パタ
ーンを図１、２に示す。
【００１３】図１、２に示すように分画で溶出の早い順
にピークＩ、II、III とし、分画分子量５，０００のモ
ルモットでそれぞれ２２倍、３６倍、２１倍に濃縮し、
１／２スケールでゲル化試験を行ったところ、ピークII
のみが（＋＋）を示した。
にピークＩ、II、III とし、分画分子量５，０００のモ
ルモットでそれぞれ２２倍、３６倍、２１倍に濃縮し、
１／２スケールでゲル化試験を行ったところ、ピークII
のみが（＋＋）を示した。
【００１４】なお、マグロ類及びカツオ類の心臓より本
発明の物質を得る方法は上記記載のものが最も優れたも
のであるが、その他に、硫安分画などの塩析法、プロタ
ミンやキトサンなどを用いた凝集分画法、水溶性ポリマ
ーなどを用いる分画手法、有機溶剤などを用いる分画手
法、電気透析などを用いる分画法、ＤＥＡＥ−Sepharos
e ＣＬ−６Ｂ以外の各種陰イオン交換体、陽イオン交
換体、ハイドロキシアパタイト、各種疎水性クロマトグ
ラフ担体、アフィニティークロマトグラフ担体、各種ゲ
ル濾過担体などを用いた分画手法などを単独、あるいは
組み合わせ、繰り返し用いる事によっても同一の物質を
得ることができる。
発明の物質を得る方法は上記記載のものが最も優れたも
のであるが、その他に、硫安分画などの塩析法、プロタ
ミンやキトサンなどを用いた凝集分画法、水溶性ポリマ
ーなどを用いる分画手法、有機溶剤などを用いる分画手
法、電気透析などを用いる分画法、ＤＥＡＥ−Sepharos
e ＣＬ−６Ｂ以外の各種陰イオン交換体、陽イオン交
換体、ハイドロキシアパタイト、各種疎水性クロマトグ
ラフ担体、アフィニティークロマトグラフ担体、各種ゲ
ル濾過担体などを用いた分画手法などを単独、あるいは
組み合わせ、繰り返し用いる事によっても同一の物質を
得ることができる。
【００１５】尚本発明で用いられたゲル化試験法は次の
とおりである。まず次のような混合物をつくる。 アクトミオシン抽出液 ５００μｌ サ ン プ ル ５００μｌ １ＭTris−ＨＣｌ緩衝液pH７．５ １２５μｌ １００mM塩化カルシウム １２５μｌ 以上を内径１０mmのガラス試験管に入れよく攪拌してか
ら３０℃２時間インキュベートしゲル化させた。ゲル化
の判定は、上記のように作製したものを逆さにしたとき
の状態で以下のように行った。 判 定 ＋＋ 十分ゲル化して内容物が落ちない ＋ 部分的にゲル化しているが外からかるく衝撃をあ
たえるとくずれる − ゲル化しておらず流れ落ちる。
とおりである。まず次のような混合物をつくる。 アクトミオシン抽出液 ５００μｌ サ ン プ ル ５００μｌ １ＭTris−ＨＣｌ緩衝液pH７．５ １２５μｌ １００mM塩化カルシウム １２５μｌ 以上を内径１０mmのガラス試験管に入れよく攪拌してか
ら３０℃２時間インキュベートしゲル化させた。ゲル化
の判定は、上記のように作製したものを逆さにしたとき
の状態で以下のように行った。 判 定 ＋＋ 十分ゲル化して内容物が落ちない ＋ 部分的にゲル化しているが外からかるく衝撃をあ
たえるとくずれる − ゲル化しておらず流れ落ちる。
【００１６】アクトミオシン抽出液の作製法は上記特願
平１−２５４７３４号明細書に記載されている。
平１−２５４７３４号明細書に記載されている。
【００１７】以上本発明を一例としてメバチマグロの心
臓抽出液について述べてきたが、勿論メバチマグロ以外
のマグロ及びカツオの場合についても、本発明に従って
良好なタンパクのゲル化促進物質がえらることは明らか
である。
臓抽出液について述べてきたが、勿論メバチマグロ以外
のマグロ及びカツオの場合についても、本発明に従って
良好なタンパクのゲル化促進物質がえらることは明らか
である。
【００１８】また、カルシウム濃度を変化させゲル化試
験を行ったところ、本物質の活性はカルシウム濃度で
０．０１〜５０mMの範囲で、好ましくは３〜１０mMの範
囲で最も強く認められた。またいずれの場合もＥＧＴＡ
等のキレート剤を添加することで活性は認められなくな
った。
験を行ったところ、本物質の活性はカルシウム濃度で
０．０１〜５０mMの範囲で、好ましくは３〜１０mMの範
囲で最も強く認められた。またいずれの場合もＥＧＴＡ
等のキレート剤を添加することで活性は認められなくな
った。
【００１９】
【発明の効果】本発明によれば、マグロ類及びカツオ類
の心臓の水溶性抽出液についてイオン交換クロマトグラ
フィー、Ｃａ2+依存アフィニティークロマトグラフィー
等の処理を経て得られる分子量９９，０００±２，００
０（ゲル濾過法）、９０，０００±５，０００（ＳＤＳ
−ＰＡＧＥ法）なる物質が特にすぐれたゲル化促進能を
有しており、魚肉練製品の製造にあたって、品質管理上
きわめて有効に用いることができる。
の心臓の水溶性抽出液についてイオン交換クロマトグラ
フィー、Ｃａ2+依存アフィニティークロマトグラフィー
等の処理を経て得られる分子量９９，０００±２，００
０（ゲル濾過法）、９０，０００±５，０００（ＳＤＳ
−ＰＡＧＥ法）なる物質が特にすぐれたゲル化促進能を
有しており、魚肉練製品の製造にあたって、品質管理上
きわめて有効に用いることができる。
【図１】本発明によりマグロ心臓抽出液からえられた試
料のSuperose ６ＨＲによる分画の代表的パターンを示
すグラフ。
料のSuperose ６ＨＲによる分画の代表的パターンを示
すグラフ。
【図２】前記試料のSuperose １２ＨＲによる分画の代
表的パターンを示すグラフ。
表的パターンを示すグラフ。
フロントページの続き (72)発明者 杉 本 昌 明 東京都八王子市北野台１−18−７ (72)発明者 村 上 哲 也 東京都日野市西平山３−40−22 ハイツ 大沢101 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A23L 1/05 - 1/09 A23J 3/00 C07G 17/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (2)
- 【請求項１】マグロ類及びカツオ類の心臓の水溶性抽出
液から得られ、 分子量 ９９，０００±２，０００（Superose ６
ＨＲ若しくはSuperose １２ＨＲを用いたゲル濾過による） ９０，０００±５，０００（１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥに
よる） 至適カルシウム濃度 ０．０１mM〜５０mM の性質を示す、カルシウム依存型のタンパク質ゲル化促
進物質。 - 【請求項２】マグロ類及びカツオ類の心臓の水溶性抽出
液をイオン交換クロマトグラフィー、カルシウム依存型
アフィニティークロマトグラフィー、ゲル濾過分画処理
による精製処理を行うことを特徴とする、請求項１に記
載のタンパク質ゲル化促進物質の抽出精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3060463A JP3034625B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | タンパクのゲル化促進物質とその抽出精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3060463A JP3034625B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | タンパクのゲル化促進物質とその抽出精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04293465A JPH04293465A (ja) | 1992-10-19 |
| JP3034625B2 true JP3034625B2 (ja) | 2000-04-17 |
Family
ID=13142992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3060463A Expired - Fee Related JP3034625B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | タンパクのゲル化促進物質とその抽出精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3034625B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112450447B (zh) * | 2020-10-30 | 2023-12-15 | 浙江波拉波拉食品股份有限公司 | 植物蛋白素食香肠及其制备方法 |
-
1991
- 1991-03-25 JP JP3060463A patent/JP3034625B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04293465A (ja) | 1992-10-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kopperschläger et al. | Affinity partitioning with polymer-bound Cibacron blue F3G-A for rapid, large-scale purification of phosphofructokinase from baker's yeast | |
| Caprioli et al. | A cell division-active protein from E. coli | |
| CN104313093A (zh) | 一种利用鱼加工下脚料制备蛋白胨的方法 | |
| JP3034625B2 (ja) | タンパクのゲル化促進物質とその抽出精製方法 | |
| Ting et al. | Partial purification of salmon muscle cathepsins | |
| IE801358L (en) | Gelling of whey proteins. | |
| CN108103132A (zh) | 一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法 | |
| JP2556109B2 (ja) | 肉粒用素材 | |
| JP2650366B2 (ja) | 固形脂及びその製造法 | |
| JP2590373B2 (ja) | 新規なすり身とその製造方法 | |
| CN108191971B (zh) | 重组人金属硫蛋白Ⅲα片段纯品的制备方法 | |
| JP3297187B2 (ja) | 練り製品の坐りのコントロール剤および練り製品の製造方法 | |
| JPH0215192B2 (ja) | ||
| JP3297188B2 (ja) | トランスグルタミナーゼの酵素活性抑制剤 | |
| JPH0822971B2 (ja) | 螢光を有する天然赤色色素の製造法 | |
| JP3518778B2 (ja) | ポリアミンの調製方法 | |
| JPH0892123A (ja) | 腎疾患用低リン含量の大豆蛋白質酵素分解物 | |
| JPS6031479B2 (ja) | 純コンドロイチナ−ゼｃの製造法 | |
| NO168218B (no) | Elektrisk hengeisolator | |
| RU2177997C1 (ru) | Способ выделения карбоксипептидазы в | |
| SU1717072A1 (ru) | Способ получени гидролизата из форменных элементов крови | |
| JP3388264B2 (ja) | アミノペプチダーゼおよびその製造法 | |
| SU975797A1 (ru) | Способ выделени лейцинаминопептидазы из aSpeRGILLUS oRYZae | |
| RU2074732C1 (ru) | Способ получения лизоцима из яичного белка | |
| JPH0499448A (ja) | 油糧種子由来蛋白質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |