NO168218B - Elektrisk hengeisolator - Google Patents
Elektrisk hengeisolator Download PDFInfo
- Publication number
- NO168218B NO168218B NO861242A NO861242A NO168218B NO 168218 B NO168218 B NO 168218B NO 861242 A NO861242 A NO 861242A NO 861242 A NO861242 A NO 861242A NO 168218 B NO168218 B NO 168218B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- trypsin
- inhibitor
- solution
- column
- kallikrein
- Prior art date
Links
- 239000012212 insulator Substances 0.000 title 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 24
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 23
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 18
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 claims description 18
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 claims description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 18
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 14
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims description 12
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 5
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 4
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 7
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 101000975003 Homo sapiens Kallistatin Proteins 0.000 description 3
- 101001077723 Homo sapiens Serine protease inhibitor Kazal-type 6 Proteins 0.000 description 3
- 229940122920 Kallikrein inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 102100025421 Serine protease inhibitor Kazal-type 6 Human genes 0.000 description 3
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 3
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- YYXLGGIKSIZHSF-UHFFFAOYSA-N ethene;furan-2,5-dione Chemical group C=C.O=C1OC(=O)C=C1 YYXLGGIKSIZHSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001038 ethylene copolymer Polymers 0.000 description 2
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical group CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 108010027597 alpha-chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- IQPQWNKOIGAROB-UHFFFAOYSA-N isocyanate group Chemical group [N-]=C=O IQPQWNKOIGAROB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 description 1
- WBWKHWRBNIVHSX-UHFFFAOYSA-N n-(3-fluorophenyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NC1=CC=CC(F)=C1 WBWKHWRBNIVHSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003681 parotid gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000001913 submandibular gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01B—CABLES; CONDUCTORS; INSULATORS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR CONDUCTIVE, INSULATING OR DIELECTRIC PROPERTIES
- H01B17/00—Insulators or insulating bodies characterised by their form
- H01B17/42—Means for obtaining improved distribution of voltage; Protection against arc discharges
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Power Engineering (AREA)
- Insulators (AREA)
- Cable Accessories (AREA)
- Buffer Packaging (AREA)
- Centrifugal Separators (AREA)
- Application Of Or Painting With Fluid Materials (AREA)
Description
Fremgangsmåte til konsentrering av inhibitorer for kalli--krein, trypsin, plasmin og chymotrypsin.
Det er kjent at enzymer og stoffer med proteinkarakter kan bindes til høyeremolekylære polymere stoffer (oversikt av I.H. Silman og E. Katchalski i Ann.Rev. Biochemistry, 35_, 873 (1966)). I de derved dannede addisjonsprodukter bibeholder enzymene mer eller mindre deres biologiske aktivitet.
Det er således kjent at trypsin kan bindes til kopolymere av maleinsyreanhydrid og etylen (E. Katchalski et al} Biochemistry, 3, 1905 (1964)). Det er i denne sammenheng kjent at
man kan hemme den enzymatiske aktivitet av de på denne måte bundne enzymer ved hjelp av inhibitorer (E. Katchalsi et al, jfr. ovenfor).
Det er derimot hittil ukjent at enzyminhibitorer fra organekstrakter, vegetabilske ekstrakter og legemsvæsker kan bindes til de polymere fikserte enzymer, og at det derved dannede enzympolymeraddisjonsprodukt-inhibitor-kompleks igjen kan spaltes i dets enkelte bestanddel, nemlig enzympolymeraddisjonsproduktet og den fri inhibitor.
Det har ifølge oppfinnelsen vist seg at inhibitorer
for kallikrein, trypsin, plasmin og chymotrypsin, f.eks. kallikreininhibitoren fra kvegorganer, som lunger, parotis, lever, milt og pankreas, som dessuten hemmer enzymene trypsin, chymotrypsin og plasmin, og som er identiske med den i 1936 av Kunitz og Northrop fra oksepankreas isolerte trypsininhibitor (oversikt av R. Vogel, I. Trautschold og E. Werle i Natiirliche Proteinasen-Inhibitoren, George Thieme Verlag, Stuttgart 1968), kan konsentreres ved at et vannuoppløselig enzympolymer-addisjonsprodukt hvor enzymet er trypsin, chymotrypsin eller kallikrein, bringes i kontakt med en oppløsning av den angjeldende inhibitor for dannelse av et vannuopp-løselig enzympolymer-addisjonsprodukt-inhibitor-kompleks, hvorfra alle ledsagerstoffer utvaskes med vandige pufferoppløsninger, hvoretter komplekset bringes til dissosiasjon i sur oppløsning eller spaltes med urinstoffoppløsning og den konsentrerte inhibitorholdige oppløsning skilles fra det uoppløselige enzympolymeraddisjonsprodukt.
På samme måte kan man også konsentrere inhibitorer
for de samme.enzymer fra bukspyttkjertel, fra sædblærer, submandi-bularis-kjertler og sekreter fra disse kjertler, fra sera og fra
. kornfrø, f.eks. fra søyabønner og mais.
Med hensyn til de polymere som skal anvendes ifølge foreliggende oppfinnelse, skal disse inneholde funksjonelle grupper som er' i stand til å reagere med de nevnte enzymer etter peptid-kjemiens metoder. Her skal i første rekke nevnes de harpikser som inneholder anhydridgrupper, syrekloridgrupper, isocyanatgrupper og azidgrupper, samt de harpikser som inneholder aktiverte fluoratomer (jfr. Makromolekular-Chemie, 39 , (1960), side 13 oversikt i Ann. Rev. Biochem., 35, (1966), side-873). Også de kjente i handelen værende karboksylholdige ionebytterharpikser kommer etter innføring av aktiverte grupper som deretter kan reagere med enzymene, i betrakt-ning, (sml. Ann. Rev. Biochemistry, 35, 873 (1966)).
Ved utførelsen av den her omhandlede fremgangsmåte vaskes enzympolymeraddisj onsprodukt-inhibitor-komplekset grundig med vandige pufferoppløsninger for fjernelse av ledsagerstoffer og forurensninger og bringes deretter til dissosiasjon. Denne dissosiasjon skjer i sur oppløsning, f.eks. ved forskyvning av pH-verdien eller ved tilsetning av en urinstoffoppløsning som kan spalte komplekset.
Den her omhandlede fremgangsmåte har den fordel at det ved anvendelse herav på enkel måte er mulig med gode utbytter og renhetsgrader å konsentrere, rense og isolere de omhandlede inhibitorer, som det hittil har vært vanskelig og kostbart å konsentrere fra urene oppløsninger.
Utførelseseksempler.
Som polymere anvendes de såkalte EMA-harpikser, bestående av kopolymere av etylen og maleinsyreanhydrid. Videre anvendes krystallisert trypsin og chymotrypsin og kallikrein inneholdende ca. 2^ug protein pr. KE samt inhibitorholdige vevs-ekstrakter.
Forsøksbetingelser.
(Tallene henviser til tabellens angivelser).
A. EMA- trypsin: Fremstillingen av EMA-trypsin-cellulose-søylene samt bindingen av kallikrein-inhibitor (A.l.) fra vevs-ekstrakter og dens etterfølgende dissosiasjon fra trypsin-harpiks-inhibitor-komplekset samt eluering fra søylen med sure puffere gjennomføres etter følgende forskrift.
Fremstilling av det vannuoppløselige trypsin- polymer- derivat ( A) :
Det vannuoppløselige trypsin-polymer-derivat fremstilles analogt med forskriften fra Katchalski et al. (Biochemistry 3, 1905 (1964)) på følgende måte: 5 g trypsin oppløst i 500 ml 0,2-n kaliumfosfatpuffer med en pH-verdi på 7,5, suspenderes med 1 g maleinsyreanhydrid-etylen-copolymer i 1 liter av ovennevnte puffer og tilsettes 100 ml av en 0,l$'s vandig oppløsning av heksametylendiamin. Heksametylendiamin tjener til tverrbinding av kopolymerkjedene og dermed til nedsettelse av enzympolymeraddisjonsproduktets oppløselighet. Etter omsetningen blandes produktet med det dobbelte volum fraslemmet cellulosepulver og helles på'en søyle. Denne vaskes med 0,1-n trietanolaminpuffer med pH = 7,8, som dessuten er 0,1 molar med hensyn til MaCl og 0,01 molar med hensyn til CaCl2, inntil det ikke mer finnes mer aktivt trypsin i eluatet. Alle operasjoner gjennomføres under avkjøling (4°C).
A. l. Rensning av kallikreininhibitoren:
Vevshomogenatet, som inneholder inhibitoren, f.eks.
av okselunger, befris, for protein med perklorsyre eller etanol, konsentreres i vakuum og innstilles med puffer (sml. ovenfor) på en pH-verdi på 7,8. Det helles direkte på den ovenfor omtalte søyle. Denne kan komplekst binde en inhibitormengde som kan hemme ca. lg trypsin. Etterat inhibitoroppløsningen er rent gjennom søylen, vaskes denne fri for protein med vandig pufferoppløsning. Deretter elueres inhibitoren igjen fra søylen med en pufferoppløsning (ph = 2) av HCl'og KC1 (0,-2-n KC1). Etterat pH-verdien erinnstillet på 7,8
(se ovenfor), kan søylen anvendes til neste renseoperasjon. Den kan, hvis det arbeides under avkjøling (4°C, vann), anvendes til iso-lering av trypsininhibitorer i flere måneder uten merkbart kapasi-tetstap. Den således isolerte inhibitor er fullstendig fri for ledsagende proteiner (spesifik aktivitet 2,8 TlmE/^ug protein). Utbyttet er ca. 80%, hvis rensningen foretas ved 4 til 8°C. Etter inndampning befris den sure inhibitoroppløsning for salt (dextrangel, dialyse) og lyofiliseres.
De oppnådde utbytter av rene, ennå saltholdige inhibitorer fremgår av.tabellen. På analog måte isoleres de i tabellen angitte trypsininhibitorer A.2. og A.3.
Den under A.l. angitte fremgangsmåte kan såvel med hensyn til den anvendte arbeidsmåte (a) som med hensyn til den anvendte, harpiks (b eller c) varieres således som det fremgår av det
følgende:
a) Et trypsin-harpiks-kompleks fremstilles ifølge A. 2. fra 500 mg maleinsyreanhydrid-etylen-cpolymerisat og 250 mg trypsin
(183 enheter) og frasentrifugeres. Den gjenværende fra trypsin-harpiksen vaskes 5 ganger med 0,05 molar fosfatpuffer med pH = 7>0 og 5 ganger med 0,1 molar natriumklorid på sentrifugen. Vaskevannet er deretter fritt for enhver tryptisk aktivitet. De samlede ovenstående væsker har en trypsinaktivitet på 10 enheter. Dermed er ca. 95% av det anvendte trypsin bundet til harpiksen. Til harpiksen settes det deretter under isavkjøling (ved pH = 7,0) 2,12 ml av en rå, for protein befridd oppløsning av inhibitoren fra svinepankreas, som inneholder 18,7 enheter inhibitor (spesifikk aktivitet 55 mE/mg protein ifølge Waddell). Etter 5 minutters omrøring avsentrifugeres harpiksen og vaskes 5 ganger med 0,1 molar natriumkloridoppløsning på sentrifugen.
De forenede ovenstående væsker viser ikke lengere noen trypsinhemming. Residuet suspenderes deretter i isbad i 100 ml 0,1 molar natriumkloridoppløsning og innstilles på en pH-verdi på 2,0 med 50 ml 0,1-n saltsyre. Det sentrifugeres og residuet vaskes 'ennå en gang i en blanding av 150 ml 0,1 molar natriumklorid og 0,1-n HC1 med pH 2,0 på sentrifugen. De forenede ovenstående væsker har en hemmende virkning på 11,9 enheter, dvs. 6l% av det anvendte hemmende stoff. Den spesifikke hemmende virkning er 900 mE/mg protein ifølge Waddell. Konsentreringen er dermed l6-doblet. Harpiksen kan anvendes igjen.
b) 0,4 g maleinsyreanhydrid-vinylpyrrolidon-copolymerisat (inneholdende 53$ vinylpyrrolidon) omsettes ifølge A.2. med 2,0 g
trypsin (1168 enheter) og fylles på en søyle sammen med cellulosepulver. Søylen fylles med 163 enheter av en rå inhibitoroppløsning fra svinepankreas, vaskes og elueres med en oppløsning av 0,1 molar saltsyre og 0,1 molar natriumklorid. Utbyttet av inhibitor er 99 enheter, dvs. 6l% av den anvendte mengde.
c) Et copolymerisat av metakrylsyre og metakrylsyre-3-fluor-anilid ifølge Manecke (Makromolekular-Chemie, 39, 13 (1960))
omsettes med trypsin ved 4°C i 0,1 molar bikarbonatpuffer i suspen-sjon. Den fremkommende harpiks blandes med cellulosepulver, fylles på en søyle og utvaskes ved 4°C med 0,1 molar trietanolaminpuffer med pH = 7,8, inntil det ikke lenger kan påvises trypsin i eluatet. Til denne søyle settes det deretter ved pH = 7,8 en uren oppløsning
av svinepankreas-inhibitoren og det ettervaskes med 0,1 molar trietanolaminpuffer med pH=7,8, inntil det i eluatet ikke lengere kan påvises noen inhibitor. Den på søylen fikserte inhibitor
elueres heretter med en oppløsning av 0,1 molar HC1 i 0,1 molar NaCl.
B. EMA- chymotrypsin ( chymotrypsinpolymeraddisjonsprodukt):
200 mg EMA homogeniseres i kort tid i 200 ml puffer
ved 0°C og omrøres i 3 min. med 20 ml av en 0,1$'s heksametylendi-aminoppløsning. Heretter tilsettes det 1 g a-chymotrypsin, oppløst i 100 ml 0,2 molar fosfatpuffer ved pH = 7, 5 og blandingen omrøres natten over ved 0-4°C, idet oppløsningens pH-verdi holdes på 7,5
ved eventuell tilsetning av puffer.
Utfellingen vaskes (sentrifugering) flere ganger med trietanolamin-pufferoppløsning med pH = 7>8 (0,1 molar trietanol-amin, 0,1 molar NaCl og 0,01 molar CaCl2), hvoretter den røres sammen med ca. det 3-dobbelte volum cellulosepulver og helles på en vann-avkjølt søyle.. Søylen vaskes ytterligere i 6 timer med den samme puffer.
Adsorpsjon av inhibitorer:
B.l.) 50.000 K1E kallikrein-inaktivator, oppløst i ovennevnte puffer med pH = 7*8, adsorberes fullstendig på søylen. Elueringen av kallikrein-inaktivatoren skjer kvantitativt med
0,25 molar KCl/HCl-puffer med pH =2,0.
B.2.) En med perklorsyre for protein befridd og over dextrangel for salt befridd ekstrakt av oksepankreas inneholder 200.000 ImE trypsin, hvorav ca. 50$ skyldes tilstedeværelsen av Kunitz-inhibitoren. Ekstraktet overføres etter titetning av NaCl (0,2 molar) og puffer med pH = 8,0 på EMA-chymotrypsinsøylen. I søylefiltratet ble det funnet 100.000 ImE trypsin, hvorav bare mindre enn 1% skyldes tilstedeværelse av Kunitz-inhibitoren.
Den i søylefiltratet fra EMA-chymotrypsinsøylen til-stedeværende spesifikke trypsininhibitor renses deretter over en EMA-trypsinsøyle (jfr. A.2. og A.3.). Ved hjelp av denne fremgangsmåte lykkes den nesten kvantitative fraskillelse og rensning av Kunitz-inhibitor og spesifikk trypsininhibitor i ett arbeidstrinn, da søylefiltratet fra EMA-chymotrypsinsøylen overføres direkte på trypsinsøylen. Etter eluering av søylene med sur oppløsning fore-ligger begge inhibitorer i ren form.
C. EMA- kallikrein:
400 mg EMA homogeniseres i kort tid i 200 ml 0,2 molar fosfatpuffer med pH = 7,5 ved 0°C og 2 ml l$'s heksametylendiamin-oppløsning settes til blandingen som omrøres i 3 min. ved 0°C. Deretter tilsettes det 100.000 KE kallikrein (2 y protein/KE), oppløst i 20 ml 0,2 molar fosfatpuffer med pH = 7,5 og suspensjonen omrøres natten over ved 0-4°C. EMA-kallikreinen (99-500 KE bundet til EMA) blandes med ca. det firedobbelte volum cellulosepulver og fylles på en vannavkjølt og med et 1 cm høyt lag av dextrangel fylt søyle.
Cl.) Etter vasking av EMA-kallikreinsøylen med
0,1 molar trietanolaminpuffer (+ 0,2 molar NaCl) med pH = 7,8 adsorberes 75.000 KIE av den anvendte 80.000 KIE kallikrein-inaktivator på søylen. 40.000 KIÉ elueres igjen med ammonium-acetatpuffer med pH = 2. Ved mindre søyler er utbyttet av eluert kallikrein-inaktivator 100$. EMA-kallikreinsøylen kan ved pH =
7,8 på ny fylles med kallikrein-inaktivator, og den bundne kallikrein beskadiges altså ikke av elueringspufferen med pH = 2. Kallikrein-inaktivatoren kan dessuten elueres fra EMA-kallikreinsøylen ved hjelp av en 8 molar urinstoffoppløsning (+ 0,1 molar trietanolamin-puf f er med pH = 7,8) ved en nøytral pH-verdi. Utbyttet av kallikrein-inaktivator er herved etter fraskillelse av urinstoffet ved hjelp av en dextrangelsøyle opptil 100$.
Claims (1)
- Fremgangsmåte til konsentrering av inhibitorer for kallikrein, trypsin, plasmin og chymotrypsin, karakterisert ved at et vannuoppløselig enzympolymeraddisjonsprodukt hvor enzymet er trypsin, chymotrypsin eller kallikrein, bringes i kontakt med en oppløsning av den angjeldende inhibitor for dannelse av et vann-uoppløselig enzympolymeraddisj onsprodukt-inhibitor-kompleks, hvorfra alle ledsagerstoffer utvaskes med vandige pufferoppløsninger, hvoretter komplekset bringes til dissosiasjon i sur oppløsning eller spaltes med urinstoffoppløsning og den konsentrerte inhibitorholdige oppløsning skilles fra det uoppløselige enzympolymeraddisjonsprodukt .
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR8516919A FR2590398B1 (fr) | 1985-11-15 | 1985-11-15 | Dispositif de protection d'un capot d'isolateur electrique de suspension contre la corrosion |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO861242L NO861242L (no) | 1987-05-18 |
NO168218B true NO168218B (no) | 1991-10-14 |
NO168218C NO168218C (no) | 1992-01-22 |
Family
ID=9324858
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO861242A NO168218C (no) | 1985-11-15 | 1986-03-26 | Elektrisk hengeisolator |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4670624A (no) |
EP (1) | EP0226474B1 (no) |
JP (1) | JPH0685285B2 (no) |
AT (1) | ATE92208T1 (no) |
AU (1) | AU591392B2 (no) |
BR (1) | BR8601626A (no) |
CA (1) | CA1253225A (no) |
DE (1) | DE3688777T2 (no) |
ES (1) | ES296682Y (no) |
FR (1) | FR2590398B1 (no) |
MX (1) | MX161729A (no) |
NO (1) | NO168218C (no) |
NZ (1) | NZ215657A (no) |
ZA (1) | ZA862421B (no) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62274510A (ja) * | 1986-05-22 | 1987-11-28 | 日本碍子株式会社 | 懸垂碍子 |
GB2225176A (en) * | 1988-11-18 | 1990-05-23 | Sp Kt Bjuro Izolyatoram I Arma | High-voltage suspension insulator |
FR2680041B1 (fr) * | 1991-07-31 | 1996-07-12 | Saint Gobain Emballage | Piece dielectrique en verre pour isolateur electrique. |
FR3057697B1 (fr) * | 2016-10-18 | 2020-02-14 | Sediver Sa | Isolateur pour lignes electriques aeriennes avec un detecteur de courant de fuite protege |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB135667A (no) * | 1900-01-01 | |||
US1659183A (en) * | 1921-10-20 | 1928-02-14 | Ohio Brass Co | Insulator |
US1730232A (en) * | 1927-04-28 | 1929-10-01 | Westinghouse Electric & Mfg Co | Insulator structure |
US2023808A (en) | 1933-02-16 | 1935-12-10 | Locke Insulator Corp | Shielded cemented type insulator |
DE966717C (de) * | 1940-11-15 | 1957-09-05 | Porzellanfabrik Kahla | Lichtbogenschutzeinrichtung an den Kappen von Isolatoren, Durchfuehrungen od. dgl. |
US3832482A (en) * | 1972-07-17 | 1974-08-27 | Westinghouse Electric Corp | Ehv rain-shield and voltage grading ring for high-voltage equipment |
GB1451071A (en) * | 1973-02-17 | 1976-09-29 | Trans Dev Ltd | High voltage electric insulator termination constructions |
JPS5269598U (no) * | 1975-11-19 | 1977-05-24 | ||
US4016358A (en) | 1976-03-11 | 1977-04-05 | Richards Clyde N | Electrical insulator with contamination and flash-over eliminator |
US4185161A (en) * | 1977-08-22 | 1980-01-22 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Modular guyline insulator |
-
1985
- 1985-11-15 FR FR8516919A patent/FR2590398B1/fr not_active Expired
-
1986
- 1986-01-10 US US06/817,651 patent/US4670624A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-21 AT AT86400607T patent/ATE92208T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-03-21 EP EP86400607A patent/EP0226474B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-21 DE DE86400607T patent/DE3688777T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-26 CA CA000505212A patent/CA1253225A/fr not_active Expired
- 1986-03-26 NO NO861242A patent/NO168218C/no unknown
- 1986-04-02 NZ NZ215657A patent/NZ215657A/xx unknown
- 1986-04-02 ZA ZA862421A patent/ZA862421B/xx unknown
- 1986-04-03 ES ES1986296682U patent/ES296682Y/es not_active Expired
- 1986-04-04 MX MX2084A patent/MX161729A/es unknown
- 1986-04-10 BR BR8601626A patent/BR8601626A/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-04-14 AU AU56058/86A patent/AU591392B2/en not_active Ceased
- 1986-04-16 JP JP61087859A patent/JPH0685285B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS62119813A (ja) | 1987-06-01 |
CA1253225A (fr) | 1989-04-25 |
MX161729A (es) | 1990-12-20 |
AU5605886A (en) | 1987-05-21 |
EP0226474A1 (fr) | 1987-06-24 |
DE3688777D1 (de) | 1993-09-02 |
FR2590398A1 (fr) | 1987-05-22 |
ES296682U (es) | 1987-12-01 |
NZ215657A (en) | 1989-02-24 |
AU591392B2 (en) | 1989-11-30 |
FR2590398B1 (fr) | 1988-09-09 |
EP0226474B1 (fr) | 1993-07-28 |
ZA862421B (en) | 1986-09-29 |
NO861242L (no) | 1987-05-18 |
ATE92208T1 (de) | 1993-08-15 |
ES296682Y (es) | 1988-06-01 |
NO168218C (no) | 1992-01-22 |
BR8601626A (pt) | 1987-11-03 |
US4670624A (en) | 1987-06-02 |
JPH0685285B2 (ja) | 1994-10-26 |
DE3688777T2 (de) | 1993-11-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Favel et al. | Protease inhibitors from Ecballium elaterium seeds | |
Jollès et al. | Analogy between fibrinogen and casein: Effect of an undecapeptide isolated from K‐casein on platelet function | |
Plummer Jr et al. | Human plasma carboxypeptidase N. Isolation and characterization. | |
Skeggs Jr et al. | The amino acid sequence of hypertensin II | |
AU666854B2 (en) | ATP-dependent protease and use of inhibitors for same in the treatment of cachexia and muscle wasting | |
Fondy et al. | The comparative enzymology of lactic dehydrogenases. II. Properties of the crystalline HM3 hybrid from chicken muscle and of H2M2 hybrid and H4 enzyme from chicken liver | |
Kieliszewski et al. | A repetitive proline-rich protein from the gymnosperm Douglas fir is a hydroxyproline-rich glycoprotein | |
Skeggs Jr et al. | The chemistry of renin substrate | |
Chao et al. | The porcine sperm motility inhibitor is identical to β-microseminoprotein and is a competitive inhibitor of Na+, K+-ATPase | |
HIRAO et al. | Purification and characterization of a calcium-activated neutral protease from monkey brain and its action on neuropeptides | |
Depierre et al. | Dipeptidyl carboxypeptidase from human seminal plasma | |
Mitz et al. | Isolation of proteolytic enzymes from solution as dry stable derivatives of cellulosic ion exchangers | |
Fioretti et al. | Heterogeneity of the basic pancreatic inhibitor (Kunitz) in various bovine organs | |
Liem et al. | Mechanism of action of thrombin on fibrinogen. II. Kinetics of hydrolysis of fibrinogen-like peptides by thrombin and trypsin | |
Matsushima et al. | Structural and immunological evidence for the identity of prolyl aminopeptidase with leucyl aminopeptidase | |
NO168218B (no) | Elektrisk hengeisolator | |
Gustchina et al. | Post X‐ray crystallographic studies of chymosin: the existence of two structural forms and the regulation of activity by the interaction with the histidine‐proline cluster of κ‐casein | |
JPH0586933B2 (no) | ||
NO122030B (no) | ||
Rodenburg et al. | Arg-27, Arg-127 and Arg-155 in the β-trefoil protein barley α-amylase/subtilisin inhibitor are interface residues in the complex with barley α-amylase 2 | |
US3951939A (en) | Polypeptides, process for their manufacture and their use as polyvalent isoinhibitors | |
Michon | Preparation of Orosomucoid (α1-Acid Seromucoid) | |
NO161684B (no) | Endoproteinase-lys-c fra lysobacterales og fremgangsmaate for utvinning av enzymet, samt anvendelse av enzymet til sekvensbestemmelse av proteiner og peptider. | |
Nakano et al. | Studies on a protamine (galline) from fowl sperm. 4. Degradation of galline by trypsin‐like protease of fowl sperm heads | |
Tsuru et al. | Inactivation of Scytalidium lignicolum Acid Protease B with l, 2-Epoxy-3-(4′-azido-2/-nitrophenoxy) propane |