JP2940990B2 - 全血からの血漿または血清の分離装置および方法 - Google Patents

全血からの血漿または血清の分離装置および方法

Info

Publication number
JP2940990B2
JP2940990B2 JP2092958A JP9295890A JP2940990B2 JP 2940990 B2 JP2940990 B2 JP 2940990B2 JP 2092958 A JP2092958 A JP 2092958A JP 9295890 A JP9295890 A JP 9295890A JP 2940990 B2 JP2940990 B2 JP 2940990B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
matrix
plasma
serum
sample
blood cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP2092958A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH03205563A (ja
Inventor
ダイアン・エル・オーネット
クリスチン・ディ・エルモア
グラディミール・ジー・ジョージヴィッチ
ツァイ―ウェン・ジェン
ゲリー・エム・ウースタ
テリー・エイ・プライ
ニール・エイ・シーゲル
キャシー・アール・シルバーマン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Abbott Laboratories
Original Assignee
Abbott Laboratories
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US07/335,064 external-priority patent/US4933092A/en
Priority claimed from US07/499,864 external-priority patent/US5064541A/en
Application filed by Abbott Laboratories filed Critical Abbott Laboratories
Publication of JPH03205563A publication Critical patent/JPH03205563A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2940990B2 publication Critical patent/JP2940990B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
    • B01D39/16—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres
    • B01D39/1607—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous
    • B01D39/1623—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous of synthetic origin
    • B01D39/163—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous of synthetic origin sintered or bonded
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
    • B01D39/16—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres
    • B01D39/1638—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being particulate
    • B01D39/1653—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being particulate of synthetic origin
    • B01D39/1661—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being particulate of synthetic origin sintered or bonded
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
    • B01D39/16—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres
    • B01D39/18—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being cellulose or derivatives thereof
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
    • B01D39/20—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of inorganic material, e.g. asbestos paper, metallic filtering material of non-woven wires
    • B01D39/2003—Glass or glassy material
    • B01D39/2006—Glass or glassy material the material being particulate
    • B01D39/201—Glass or glassy material the material being particulate sintered or bonded by inorganic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
    • B01D39/20—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of inorganic material, e.g. asbestos paper, metallic filtering material of non-woven wires
    • B01D39/2027—Metallic material
    • B01D39/2031—Metallic material the material being particulate
    • B01D39/2034—Metallic material the material being particulate sintered or bonded by inorganic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
    • B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
    • B01D39/20—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of inorganic material, e.g. asbestos paper, metallic filtering material of non-woven wires
    • B01D39/2068—Other inorganic materials, e.g. ceramics
    • B01D39/2072—Other inorganic materials, e.g. ceramics the material being particulate or granular
    • B01D39/2075—Other inorganic materials, e.g. ceramics the material being particulate or granular sintered or bonded by inorganic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood
    • G01N33/491—Blood by separating the blood components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/525—Multi-layer analytical elements
    • G01N33/526—Multi-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0403—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces
    • B01L2400/0406—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces capillary forces

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Geology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Ceramic Engineering (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、一般に、全血から血漿または血清を分離す
るための方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、少
なくとも１種の赤血球凝集剤を組み込んだ親水性焼結多
孔質物質からなる、全血から血漿または血清を分離する
ことのできる装置に関する。凝集した血球は、焼結多孔
質物質のマトリックスのふるい分け作用、およびさらに
任意のフィルター手段により全血から除かれる。
本発明はまた、所定量の血漿または血清試料を診断ア
ッセイにおける分析のために回収する装置および方法に
も関する。さらに詳しくは、本発明は、再生可能な流体
取り込み能を供する焼結多孔質物質のマトリックスに関
する。
さらに、本発明は、試薬放出システムに関し、さらに
詳しくは、焼結多孔質マトリックス中に含有され、結合
形で凍結乾燥され、液体との接触により回復可能な１種
または２種以上の試薬に関する。
（従来の技術および発明が解決しようとする課題） 近代の臨床的診断法は、通常、血液試料で行なわれて
いる。残念ながら、全血中に存在する赤血球は、光を散
乱および吸収するため反射光または透過光のいずれかを
測定するアッセイ法を妨害する。他の細胞は特定の測定
を妨害するかもしれない。たとえば、コレステロールの
測定は細胞膜中に存在するコレステロールにより影響を
受け得る。この理由のため、多くのアッセイ法は血漿ま
たは血清で行なわれ、これらを全血から分離しなければ
ならないことになる。
全血から血漿（凝固前）および血清（凝固後）を分離
するために当該技術分野でよく知られた方法は遠心分離
である。しかしながら、遠心分離により全血を層状にす
るのは、時間がかかり、面倒な実験室装置を必要とす
る。バン・オス（Van Oss）らのVox.Sang.,Vol.34、351
〜361（1978）に開示されているような赤血球凝集剤を
使用することは、遠心分離や赤血球分離法を行うのに有
用である。
ドジュキ（Dojki）らの米国特許第4,464,254号明細書
（1984年８月７日発行）には、すでに層状にされた血液
試料から血清を分離することのできるピストン装置が開
示されている。この装置は、解放末端のサンプリングチ
ューブに連結したピストンヘッドからなる。このピスト
ンヘッドは一方向バルブからできており、その下に多孔
質プラスチックフィルターボディーを含む空洞がある。
ピストンヘッド−サンプリングチューブを血液の層状試
料を入れた試験管中に挿入すると、血清がフィルターボ
ディーおよびバルブを通ってサンプリングチューブ内に
入っていく。全血から分離することのできる血清の容量
および純度は、血液の層状性の完全さによる。
フォーゲル（Vogel）らの米国特許第4,477,575号明細
書（1984年10月16日発行）には、直径が0.2〜５ミクロ
ンで密度が0.1〜0.5g/cm3のガラス繊維の層に全血を通
すことにより血清を分離するための装置および該装置を
用いた方法が開示されている。この装置により全血から
分離することのできる血漿または血清の容量は、ガラス
繊維層の吸着容量の50％未満であると開示されている。
ズク（Zuk）らの米国特許第4,594,327号明細書（1988
年６月10日発行）には、全血試料を赤血球結合剤と混合
し、ついでこの混合物を、凝集した赤血球を除くことが
できるように少なくとも１種の特異的結合成分ペアを結
合させた固体の吸湿性成分で濾過することによる分析法
が開示されている。該特許は、全血中の赤血球の凝集を
引き起こすための適当な赤血球結合剤として、抗赤血球
抗体、ポリマー性アミノ酸（ポリリジンなど）、および
レクチン（コムギはい芽凝集素）を開示している。
ヒルマン（Hillman）らの米国特許第4,753,776号明細
書（1988年６月28日発行）には、毛管作用を利用し全血
をガラスミクロファイバーフィルターに通すことにより
全血から血清を分離するための装置および該装置を用い
た方法が開示されている。この特許には、赤血球凝集素
を付着させたフィルターに全血を通す別の態様が開示さ
れている。しかしながら、開示されたフィルターは赤血
球を保持するよりも、単にその流れを遅らせるだけであ
り、その結果、赤血球を逃れさすことになる。
トラシュ（Trasch）らのヨーロッパ特許公開第133,89
5号公報（1985年３月13日公開）には、赤血球保持基
体、および該基体を用いた、フィルター上に赤血球を保
持し全血から血漿を回収するための方法が開示されてい
る。この発明の赤血球保持基体は、血漿は通過させなが
ら血球成分はフィルター上に除くことができるように、
凝集を引き起こしはするが溶血は起こさないと記憶され
ている。この公報はまた、保持基体をフィルター中また
はプレフィルター層中に組み込む別の態様を開示してい
る。この公報は、保持ゾーンのための吸収性物質とし
て、セルロース、羊毛、ガラス繊維、アスベスト、合成
繊維、ポリマーまたはその混合物からなり、ペーパー、
フリーズ、ゲルまたは組織の形態の吸収性の多孔質液体
透過性担体またはフィルターを用いることができると記
載している。
血清または血漿の分離のための最も簡便な方法は、ス
ピードおよび血清収量効率の観点で制限されている。た
とえば、ガラス繊維膜を利用した血液分離装置は比較的
ゆっくりしたスピードで血清を分離する傾向があり、か
なりの量の血清または血漿が膜の間隙中に保持される傾
向がある。従って、血清および血漿を分離するための迅
速で効率的な方法を提供する改良装置に対する必要性が
存在する。
血液試料を試験するに際して直面する他の困難さは、
診断アッセイにおいて使用するには一般に血漿または血
清の正確な試料容量を測定する必要があることである。
この正確さの必要性は、一般に、熟練した技術者が精巧
なピペット装置を使用するとき、または高価な自動装置
を使用するときに直面する。また、血漿試料を回収し該
試料を反応ゾーンへ移動させるための膜またはペーパー
マトリックスを使用した試験ストリップ装置が存在す
る。しかしながら、一般に試験ストリップ装置は、毛管
作用によって試料を該ストリップを通して反応ゾーンへ
移動させるのに必要な試料容量能しか有しておらず、そ
れゆえ低レベルの正確さしか必要とされない。試験スト
リップ装置において、血漿受容成分は該ストリップを充
填するのに必要な量の試料しか回収せず、そのため、試
料が該ストリップ中をそれ以上移動しなくなってしま
う。なぜなら、試料を試験ストリップ装置中で分析に供
させるために試料を牽引する力が限られ、該ストリップ
が満たされる前に該試験ストリップ上の定められた検出
ゾーンを通過する量に限られることになるからである。
また、選択した反応のみが混合により起こるように混
合物の種々の反応成分を互いに分離することが臨床およ
び研究実験室において望まれる。これらの成分は、乾燥
状態または液体で供給されてよい。液体の試薬は乾燥状
態で保存されている試薬と比較して活性な寿命が短く限
られていることが知られている。
過去においては試薬は凍結乾燥して提供されてきた。
たとえば、米国特許第4,447,526号明細書には、２種ま
たはそれ以上の試薬の溶液または懸濁液のそれぞれに担
体マトリックスを順番に浸漬し各浸漬の間に乾燥工程を
行うか、または担体物質の２またはそれ以上の層を重層
的に結合させて試験ストリップのための多相担体マトリ
ックスを製造することにより、試薬を組み込んだ試験ス
トリップのための担体マトリックスか教示されている。
担体マトリックスの例としては、フェルト、織物のガラ
ス繊維またはマットのガラス繊維、紙およびポリマー性
のマイクロカプセルが挙げられ、これらは試料または液
体と接触したときに崩壊する。しかしながら、この特許
は試薬を溶液中に送り出すための結合形態を教示してい
ない。
英国特許出願第GB2216258A号明細書には、空気乾燥し
後で溶液中で回復可能な化学試薬を前以て決定した量で
含ませた不活性な多孔質マトリックスが教示されてい
る。この特許出願は、凍結乾燥の欠点には、使用の時点
または使用の時点頃に試薬の測定可能な必要量を可溶化
し、希釈し、調製することに伴う問題点が含まれること
を教示している。
短時間の間に溶液中に実質的に回復可能な凍結乾燥試
薬を保持させた多孔質担体を供することは有利なことで
ある。そのような担体には、互いに反応しない２種また
はそれ以上の試薬を組み込むことができる。さらに、そ
のような担体は、生物学的に活性な分子や化合物などの
ような試薬を含ませ、ついで凍結乾燥状態で長期間保存
させ、所望のときに溶液中に実質的に回復させることが
できる。他の観点において、そのような担体は、生物学
的に活性な分子や化合物などのような試薬を化学試薬と
ともに含ませることができる。
（課題を解決するための手段） 本発明は、少なくとも１種の赤血球凝集剤を組み込ん
だ親水性焼結多孔質物質のマトリックスからなることを
特徴とする、全血から血漿または血清を分離するための
装置であって、該マトリックスは、個々の赤血球は該マ
トリックスを通過するが凝集した赤血球は該マトリック
スによって保持されるように選択された孔径を有するこ
とを特徴とする装置； 全血から血漿または血清を分離する方法であって、 （ａ）上記装置の入り口に全血試料を加え、ついで該装
置の出口から血漿または血清を回収することを特徴とす
る方法； 血漿または血清試料の測定用装置であって、（ａ）焼結
多孔質物質のマトリックスであって、 （ｉ）該マトリックスの所定の大きさに比例する再生
可能な流体取り込み能、 （ii）血漿または血清成分との最小の反応性、および （iii）親水性の内部表面 を有することを特徴とし、それにより、該マトリックス
が、所定量の分析用試料を回収し保持することができる
もの、および （ｂ）該マトリックスへの入り口を定めるハウジング手
段 からなることを特徴とする測定用装置； 分析のために血清または血漿試料を回収する方法であっ
て、 （ａ）焼結多孔質物質のマトリックスであって、 （ｉ）該マトリックスの所定の大きさに比例する再生
可能な流体取り込み能、 （ii）血漿または血清成分との最小の反応性、および （iii）親水性の内部表面 を有することを特徴とし、それにより、該マトリックス
が、所定量の分析用試料を回収し保持することのできる
ものを用意し、 （ｂ）一定量の血清または血漿を該マトリックスに加
え、ついで （ｃ）所定量の血漿または血清を該マトリックス中で回
収する ことを特徴とする方法； 少なくとも１種の試薬を含有し凍結乾燥した親水性焼結
多孔質物質のマトリックスからなり、該マトリックス
は、液体と接触したときに含有試薬が該マトリックスか
ら放出されるように選択した孔径を有することを特徴と
する、多孔質試薬放出システム； 少なくとも１種の試薬を含有し凍結乾燥した疎水性焼結
多孔質物質のマトリックスからなり、該マトリックス
は、液体と接触したときに含有試薬が該マトリックスか
ら放出されるように選択した孔径を有することを特徴と
する、多孔質試薬放出システム；および 多孔質試薬放出システムの製造方法であって、 （ａ）少なくとも１種の試薬成分の溶液を調製し、 （ｂ）上記工程（ａ）の溶液に既知量の焼結多孔質マト
リックスを加え、 （ｃ）上記工程（ｂ）のマトリックスを凍結し、ついで （ｄ）該凍結マトリックスを凍結乾燥して、少なくとも
１種の試薬を含有するマトリックスを得ることを特徴と
する方法を提供する。
本発明は、全血から血漿または血清を分離するための
改良された方法、装置およびキットに関する。さらに詳
しくは、本発明の装置は、少なくとも１種の赤血球凝集
剤を組み込んだ親水性の焼結多孔質物質のマトリックス
からなる。本発明のマトリックスはさらに、個々の血球
は該マトリックスを通過するが凝集した血球は該マトリ
ックスにより保持されるように選択した孔径を有するこ
とを特徴とする。本発明の装置は、該マトリックスの間
隙内には最小量の血清または血漿を保持しながら、全血
からの血清または血漿の迅速な分離を行うことができ
る。
本発明の一態様に従えば、本発明の装置は、少なくと
も１種の赤血球凝集剤を組み込んだ親水性の焼結多孔質
物質のマトリックスからなる。全血試料を該マトリック
スの入り口に加えると、試料内の血球は該マトリックス
中に存在する凝集剤と接触する。血球は凝集し、該マト
リックスの入り口近くの間隙中に捕捉されるが、実質的
に血球を含まない血清または血漿は該マトリックスの出
口近くに集積する。受容手段（濾紙や別の多孔質マトリ
ックスなどの物質を含む）を、該マトリックスの出口と
液体受容関係にあるように組み込んでもよい。受容手段
は、実質的に血球を含まない血清または血漿を該マトリ
ックスの出口から毛管作用により運ぶ働きをし、得られ
た血清や血漿を分析または他の目的のために利用するこ
とができるようにする。
本発明の別の態様によれば、全血試料から血球をより
効率的かつより迅速に分離するために、マトリックスの
出口と液体受容関係にあるようにフィルター手段を組み
込む。フィルター手段には、血球の保持を助けるために
少なくとも１種の赤血球凝集剤を組み込むことができ
る。本発明はまた、本発明の第一の多孔質マトリックス
を別のマトリックスまたはフィルター手段と組み合わせ
てなり、選択した成分との反応のために選択した分析試
薬をこれらマトリックス中に組み込んだものである、血
液血漿または血清の選択成分の分析のための装置および
方法をも提供する。
すでに述べたように、赤血球を除くことは視覚的なア
ッセイにおいて特別の重要性を有する。にもかかわら
ず、他の血球を除くこともまた望ましく、本明細書にお
いて使用する「赤血球」なる語は、全血球をマトリック
ス中に保持し、または除去する意味であることを理解し
なければならない。
本発明はまた、所定量の血漿または血清試料を焼結多
孔質物質のマトリックスを用いて回収する装置および方
法にも関し、該焼結多孔質物質のマトリックスは、該マ
トリックスの所定の大きさに比例する再生可能な流体取
り込み能、血漿または血清成分との最小の反応性、およ
び親水性の内部表面を有することを特徴とし、該マトリ
ックスはハウジング手段中に入れられ該マトリックスの
入り口が定められる。これらの特徴によって、マトリッ
クスは所定量の試料を分析のために回収し保持すること
ができる。場合により、マトリックスからの出口もまた
容器手段で定めてもよい。
本発明の回収マトリックス装置を製造するのに使用す
る焼結多孔質物質といては、焼結ガラス、焼結鋼、焼結
セラミックス、焼結プラスチックおよびそれらの同等の
ものが挙げられる。特に好ましい物質はポリエチレンで
ある。
回収マトリックスは、場合により、全血から血漿また
は血清を分離するための血液分離手段と組み合わせて用
いることができる。一般に、マトリックスは血液分離手
段と液体受容関係にあり、このため、マトリックスが血
液分離手段から所定量の血漿または血清を回収すること
が可能になる。回収マトリックスはまた、試料受容手段
とともに用いることができ、該マトリックスは所定量の
分析用試料を該試料受容手段へ移動させる。別のやり方
として、マトリックス自体の中の血漿または血清試料で
分析を行うこともできる。
適当な試料受容手段としては、キュベット、試験管、
スライドおよび反応ウエルなどの反応または検出容器が
挙げられる。溶離バッファーをマトリックスに加えるこ
とにより、試料を検出容器から溶出させる。他の試料受
容手段としては、毛管作用により試料をマトリックスか
ら流入させるように選択した孔径を有する吸収固相物質
が挙げられる。試料受容手段は、場合によって１種また
はそれ以上の分析試薬を含んでいてよく、該試薬は試料
が該手段へ移動したときに可溶化される。
分析用血清または血漿試料の回収は、一定量の血清ま
たは血漿を回収マトリックスに加え、所定量の血漿また
は血清を回収することにより行う。
本発明はまた、凍結乾燥した結合形にある試薬を放出
するための改良システムをも提供する。さらに詳しく
は、該システムは、少なくとも１種の試薬を組み込んだ
焼結多孔質物質のマトリックスからなる。このマトリッ
クスはさらに、試薬が乾燥状態ではマトリックスによっ
て保持されているが、液体と接触したときにマトリック
スから放出されるように選択した孔径によって特徴付け
られる。該システムは、該マトリックスの間隙内には最
小量の試薬のみを保持させながら、液体へ試薬を放出す
ることができる。
本発明の他の態様によれば、該システムは、少なくと
も１種の試薬を組み込んだ焼結物質のマトリックスから
なる。多孔質マトリックスを試薬溶液の容器中に入れ、
飽和させる。飽和後、当業者に知られた方法により、こ
の多孔質マトリックスを凍結させ、凍結乾燥させる。
本発明は、全血から血漿または血清を分離するための
改良装置および該装置を用いた分離方法を提供する。本
発明の装置は、少なくとも１種の赤血球凝集剤を組み込
んだ親水性の焼結多孔質物質のマトリックスからなる。
このマトリックスは、個々の血球は該マトリックスを通
過するが凝集した細胞は該マトリックスによって保持さ
れるような孔径を特徴とする。該装置は、該多孔質物質
の間隙内には最小残留量の血清または血漿のみを保持し
ながら、全血からの血清または血漿の迅速な分離を行う
ことができる。
本発明は、試薬を含ませ放出させるための改良された
システムを提供する。本発明のシステムは、少なくとも
１種の試薬を含ませた焼結多孔質物質のマトリックスか
らなる。このマトリックスは、試薬が凍結乾燥状態では
該マトリックス内に保持されるが液体と該マトリックス
とが互いに接触したときには該マトリックスを通過する
ことができるような孔径を特徴とする。
本発明のマトリックスとして適当と思われる物質とし
ては、焼結ガラス、焼結鋼、焼結セラミックス、および
プラスチックの焼結ポリマーなどが挙げられ、好ましい
物質は、英国特許第2,186,205号明細書に記載されてい
るような焼結ポリエチレンとして知られているものであ
る。ポレックス（Porex,Inc.,）（フェアバーン、ジョ
ージア）またはジェネラル・ポリメリック・コーポレー
ション（General Polymeric Corp.）（ウエストリーデ
ィング・ペンシルベニア）から市販されている焼結ポリ
エチレンマトリックスを、約10ミクロン〜約70ミクロン
の孔径を有するものとして入手することができる。その
ような孔径により、個々の赤血球はマトリックスを通過
するが、凝集した赤血球はマトリックス内に保持される
ようになる。
本発明のマトリックスは、水性液体の流入を促進する
ため親水性である。市販のマトリックスは、その性質が
親水性か疎水性のいずれかである。疎水性のマトリック
スは、種々の知られた方法により親水性を付与すること
ができる。利用できるそのような方法としては、マトリ
ックスをプラズマ処理または界面活性剤処理することが
挙げられる。プラズマ処理は、疎水性のマトリックスを
荷電ガス（プラズマ）にさらし、固体表面に電子荷電を
付与して該表面を湿潤性にすることを含む。界面活性剤
処理は、疎水性のマトリックスを界面活性剤中に浸漬
し、乾燥させることを含む。この処理は、マトリックス
の表面および内部を湿らせるのを助け、その結果、水性
液体のマトリックス中への流入を促進する。広範囲の市
販の界面活性剤物質が本発明の使用に適していることが
考えられる。下記実施例において記載したアッセイで
は、界面活性剤とともに成形した市販のマトリックスを
用いたが、これは市販の界面活性剤中に浸漬したマトリ
ックスに比べて好ましいものである。下記試薬放出シス
テムの実施例の幾つかでも、界面活性剤とともに成形し
た市販のマトリックスを用いたが、これは市販の界面活
性剤中に浸漬したマトリックスに比べて好ましいもので
ある。試薬放出システムの他の実施例では、界面活性剤
を含まない市販のマトリックスを用いた。
一般に、界面活性剤は、好ましい活性を妨害しないよ
うに、マトリックス内に置かれた反応物または試薬と相
溶するように選択しなければならない。加えて、界面活
性剤は、赤血球の溶血を引き起こすような濃度では存在
してはならない。加えて、血漿試料の血液希釈を防ぐた
めに注意が必要である。血液希釈とは、高浸透圧条件の
ため赤血球の内部液が血漿中に抽出されることである。
全血試料中に抗凝集剤を加えることは、装置中の血漿
の流れを促進するために特に好ましい。血液を装置に加
える前に血液に抗凝集剤を混合することにより、血液が
凝固するのが防がれる。抗凝集剤で処理した血液試料か
ら血球を分離すると血漿が得られる。これらの抗凝集剤
はまた、マトリックス中に組み込むことにより、血液試
料を装置に加えたときに血液試料の凝固を防ぐようにす
ることも考えられる。たとえば、１本の指からの血液の
１滴を装置に直接加え、該装置内に組み込んだ抗凝集剤
が血液と接触することによって血液の凝固を防ぐように
することができる。別のやり方として、前以て抗凝集剤
で処理した毛細管中に血液を回収し、この方法で装置に
移すことができる。好ましい抗凝集剤物質としては、ヘ
パリン、EDTAおよびクエン酸塩などが挙げられる。
本発明に従って、赤血球凝集剤を多孔質マトリックス
中に組み込む。凝集剤は、個々の赤血球を互いに付着さ
せて凝集塊を生成させる物質である。凝集剤は、少なく
ともそのある量がマトリックス中に吸収されて血液試料
の存在下で可溶化されるようにするのが好ましいが、吸
着、吸収または金属−有機染料錯体などの手段によりマ
トリックス中に組み込むことができる。
適当な凝集剤としては、天然または合成の水溶性ポリ
マーが挙げられ、すでに述べたものが含まれるがこれら
に限られるものではない。入手可能な凝集素のうち、好
ましい凝集素としては、ヘキサジメトリンブロミド（he
xadimethrine bromide）が挙げられ、これはアルドリッ
チ・ファイン・ケミカルズ（Aldrich Fine Chemicals）
からポリブレン（Polybrene）、ポリリジン、および抗
赤血球抗体として入手できる。ポリブレンやポリリジン
などの正に荷電した多価電界質は、荷電の中和、水和で
の荷重、ポリマー架橋および浸透相互作用により赤血球
を凝集させると思われる。赤血球抗原に特異的なIgG−
またはIgM−クラスの抗体は、それらが２つの別の赤血
球の表面上に存在する類似の抗原決定基に結合し、この
ことが赤血球を互いに付着させることによって凝集を引
き起こす。凝集過程はまた、別の促進手段によっても、
ポリビニルピロリドン（PVP）のような二価電界質とし
て明らかに機能する物質を組込み、荷電した細胞を相互
に接近させ、抗体および／または他の凝集素によって架
橋を起こさせることによっても行うことができる。
高い凝集剤濃度では血液試料のマトリックス内での滞
留時間が長くなり、マトリックス内での赤血球の凝集の
効率が増大する。しかしながら、このことは血漿の大部
分をマトリックス内に捕捉するという好ましくない作用
を有する。逆に凝集剤の濃度が低いほど血漿の放出がよ
くなるが、マトリックスによって捕捉される試料中の赤
血球が少なくなる。凝集剤の濃度に加えて、マトリック
スの長さ、容量、および多孔性、およびマトリックスに
よって濾過される血液試料の容量が、マトリックス内で
の赤血球の捕捉またはマトリックスによる血漿の溶出量
に影響を与える。
本発明の第一の態様に従えば、マトリックスの孔径
は、マトリックスの長さおよび容量、処理する血液試料
の容量、および凝集剤が赤血球を凝塊させる能力をも考
慮に入れた上で、全血中に存在する実質的にすべての赤
血球が凝集を引き起こし、マトリックス中に保持される
ように選択する。血液試料中に存在する「実質的にすべ
ての」赤血球を除去するとは、選択した血液分析対象物
の臨床的測定が妨害なく行えるように試料から充分な量
の赤血球が除かれることを意味する。全血中に存在する
「実質的にすべての」赤血球の除去とは、試料から少な
くとも90％の赤血球が除かれることを意味するのが好ま
しい。
本発明の装置の第一の態様を利用する一つの方法に従
い、全血をマトリックスの入り口または第一末端に加え
る。血液は速やかにマトリックスの間隙を通過してい
き、その内部に組み込まれた赤血球凝集剤と速やかに接
触するよになる。これらの凝集剤は赤血球の凝集を促進
し、ついで凝集した赤血球はマトリックスの間隙内に捕
捉される。このように凝集した血球がマトリックス内に
捕捉されることにより、赤血球からの血漿または血清の
迅速で効率的な分離が可能となる。加えて、マトリック
スは最小量の血漿または血清しか保持しないので、大量
の血漿または血清が連続的に全血試料から回収できる。
場合により、血清または血漿をマトリックスから毛管作
用により移動させるために、濾紙や別の多孔質マトリッ
クスなどのフィルター手段を、マトリックスの出口と液
体受容関係にあるように置いてもよい。
第１図〜第２図は、本発明の第一の態様に従って全血
から血漿を分離するための装置を図式したものである。
第１図に示すように、装置（10）は、入り口（13）およ
び出口孔（16）を有するハウジング（12）を含む。ハウ
ジング（12）内には装置（17）が置かれており、該装置
（17）は、多孔質ポリエチレンマトリックス（18）を含
んでおり、該マトリックスは凝集剤を含み直径が3.5mm
で高さが5mmの円筒状に成形してある。正確な形状およ
び大きさは本発明にとって重要ではないが、上記のよう
に滞留時間や効率に影響を与える。ハウジング（12）内
にはまた、ペーパーマトリックス（20）が置かれてい
る。マトリックス（18）は入り口（14）および出口（1
5）を有し、該ペーパーマトリックス（20）と液体受容
関係にある。ペーパーマトリックス（20）およびマトリ
ックス（18）は、選択した血液分析対象物の分析に必要
な試薬を含有していてもよい。この装置の態様は、米国
特許出願の明細書中に記載されている。
第２図に示すように、装置（30）はハウジング（32）
を含み、該ハウジングは入り口（33）および出口孔（3
6）を有している。ハウジング（32）内には装置（37）
が含まれ、該装置は第一の多孔質ポリエチレンマトリッ
クス（38）を含んでいる。ハウジング（32）内にはま
た、該第一のマトリックスと液体受容関係にある第二の
多孔質ポリエチレンマトリックス（40）および該第二の
マトリックスと液体受容関係にあるペーパーマトリック
ス（42）が含まれている。第一のマトリックス（38）は
凝集剤を含んでおり、入り口（34）および出口（35）を
有している。第二のマトリックス（40）は、特定の血液
分析対象物の測定に必要な試薬の幾つかを含んでおり、
ペーパーマトリックス（42）は試薬システムの他の成分
を含んでいる。第一のマトリックス（38）はまた、選択
した血液分析対象物の分析に必要な試薬を含んでいても
よいことが考えられる。染料紙試薬システムの例は、米
国特許出願第204,443号明細書（1988年６月９日出願）
に記載されており、該文献を参照のため本明細書中に引
用する。
赤血球のより迅速な分離が可能な装置の第二の好まし
い態様によれば、マトリックスの孔径は、マトリックス
の長さおよび大きさ、処理する血液試料の容量、凝集剤
が赤血球の凝塊を引き起こす能力などを考慮に入れた上
で、全血中に存在する赤血空のすべて未満が凝集しマト
リックス中に保持されるように選択する。比較的大きな
孔径のマトリックスを選択して流速を大きくすることが
好ましいがすべての赤血球がマトリックスによって保持
されるわけではないこれらの場合においては、血漿また
は血清中に残留する赤血球は、赤血球凝集剤を含浸させ
たまたは単独の第二のマトリックスまたはフィルターを
用いた濾過工程に引き続き供することにより、「透明
な」血漿または血清が得られるようにする。試料から少
なくとも97％の赤血球が除去されたときに「透明な」血
漿または血清が得られたものと解する。
凝集した赤血球を通さないような孔径を特徴とする濾
紙は、血清または血漿をさらに精製するために用いるこ
とができる。加えて、この濾紙は、残留する赤血球の保
持を助けるために凝集剤をその中に組み込んでいる。マ
トリックス流から流れてきた血清または血漿から赤血球
を保持するための分離バリアーとして濾紙を使用するこ
とにより、凝集剤で処理した一連のマトリックスにフィ
ルター物質の小片を散在させた種々の濾過態様が可能と
なる。そのような使用のために考えられるフィルターの
タイプとしては、誘導または非誘導セルロース、ナイロ
ン、天然または合成膜、または個々のまたは凝集した赤
血球が保持されるような孔径を特徴とする多孔質ポリエ
チレンマトリックスからなるフィルターが挙げられる。
２個以上のマトリックスを使用する場合は、一方の領域
から他方の領域への流れを促進するように孔径を選択す
る。
第３図〜第５図は、本発明の第二の態様に従って全血
から血漿を分離するために使用する装置を模式的に示し
たものである。第３図に示すように、装置（50）はハウ
ジング（52）を含み、該ハウジングは入り口（53）およ
び出口孔（56）を有している。ハウジング（52）内には
装置（57）が含まれ、該装置は多孔質ポリエチレンマト
リックス（58）およびペーパーマトリックス（66）を含
んでいる。マトリックス（58）は凝集剤を含有してお
り、入り口（54）および出口（55）を有しており、該ペ
ーパーマトリックス（66）と液体受容関係にある。ペー
パーマトリックスは最終赤血球濾過領域（60）、分析対
象物試薬領域（62）、および定量分析対象物領域（64）
を含んでいる。
本発明はまた、診断アッセイにおいて分析用の所定量
の血漿または血清を回収し保持するための新規な手段を
も提供する。この新規な方法は、別個の量の血漿または
血清の再生可能な回収を可能にする測定マトリックスを
用いることを含む。この方法は、下記特徴を有するよう
に選択した焼結多孔質マトリックスを使用することによ
り行うことができる。すなわち、マトリックスの所定の
大きさに比例する再生可能な流体取り込み能、血漿また
は血清成分との最小な反応性、および親水性の内部表面
である。これらの特徴により、マトリックスは診断アッ
セイにおいて分析に適した所定量の試料を回収し保持す
ることができる。取り扱いを容易にするためにマトリッ
クス物質は剛体であるのが好ましく、場合によっては、
所定のマトリックスの大きさに対して最大のボイド容積
を有するように選択するのが好ましい。そのようなマト
リックスを用いることにより、試料の回収は使用者の熟
練度とは関係がなくなり、精巧な測定装置を用いる必要
もなくなる。
本発明の利点としてさらに、本発明のマトリックスを
フロースルー（flow−through）装置や試験ストリップ
装置などの診断装置の成分として使用することができる
ことが挙げられ、そのような装置に通常使用される紙、
繊維およびニトロセルロースの吸収能や装置成分の総合
的な吸収能に依存することなく所定量の試料を回収する
ことができる。たとえば試験ストリップ装置において
は、ストリップの長さは一般に吸収することのできる試
料の容量を決定し、試験ストリップの大きさは該試験ス
トリップ上の反応ゾーンおよび検出ゾーンを通る試料の
量を決定する。しかしながら、本発明のマトリックス装
置は、分析しようとする全試料容量を測定マトリックス
により回収した後に、マトリックスそれ自身の内かまた
は試料が移動した試料受容手段の内で、所定量の試料の
回収および保持並びに全試料容量の分析を可能とする。
容量測定特性を供し得る幾つかの異なる物質がある。
これらの物質としては、紙、誘導セルロース、多孔質プ
ラスチック膜および焼結多孔質物質が挙げられる。しか
しながら、これらのすべての物質が診断装置において測
定マトリックスとしての使用に同じように適していると
はいえない。たとえば、ペーパーマトリックスは充分な
容量の試料を回収する能力があるが、該試料容量を回収
するに際して低い再生性しか示さなかった。ナイロンも
また再生性が許容できるものではない。そのようなマト
リックスの再生性が低いことは、そのような物質が操作
応力への抵抗が弱く回復力が小さいという性質によるも
のであった。逆に、ニトロセルロース「ミクロン・セパ
レイテッド（Micron Separated Inc.,）、ウエストバロ
ー、マサチューセッツ］およびウルトラビント（Ultrab
ind）［ジャーマン・サイエンシズ（German Science
s）、アンアーバー、ミシガン］から製造したマトリッ
クスは容量測定において適当な再生性を示したが、これ
らの物質は一般に分析に必要な量の試料を回収し保持す
るのに充分な厚みのマトリックスを製造するには適して
いない。しかしながら、多孔質焼結物質はこれらの要求
を満足する構造上の剛性およびボイド容量を有してい
る。
回収または測定マトリックスを行うために重要な選択
した物質の他の性質としては、マトリックスを生成する
ために用いた焼結物質の粒径および孔径が挙げられる。
たとえば、適当な測定マトリックスの孔径は、該マトリ
ックスを使用する装置の態様と関連があることがわかっ
た。測定マトリックスが血液分離手段の下に接触して位
置している態様においては、マトリックス中の流れの動
力学は余り関係がない。マトリックスが血液分離手段の
側面に位置しており、毛管層またはストリップなどの移
動物質を用いて血漿を分離手段からマトリックスへ移動
させるときは、マトリックスの孔径は、マトリックス内
での試料の分布を均一に保ちながら該マトリックスによ
り試料の回収を行うのに充分な大きさを有していなけれ
ばならない。しかしながら、マトリックスの孔径は、ス
トリップの孔径に比べて余り大きすぎてはならない。毛
管直径が大きく異なることは、流れの抵抗の主要な因子
となる。試料は、細かい孔の通路ではそれに沿って毛管
作用により進んでいくが、粗い通路では迂回することが
ある。毛管作用を有するストリップ物質がセルロースま
たはセルロース誘導体である場合は、一般に約５μｍ〜
約100μｍの範囲の孔径の測定マトリックスを用いる。
約10μｍ〜約25μｍの範囲の孔径を用いるのが好まし
い。最も好ましい孔径は、水銀侵入（mercury intrusio
n）法で評価して約15μｍのものであり、これは「細」
孔の等級とされる。約５μｍ〜約10μｍの範囲の孔径
は、測定マトリックス物質において超細孔径として使用
することができる。加えて、そのような側面態様を毛管
作用を有するストリップとともに用いて試料を血液分離
手段から回収または測定マトリックスへ移動させる場合
には、試料の流れをマトリックスの方へ向けさせること
によってマトリックスの充填を最大にすることができ
る。「流れを向けさせる」なる語は、マトリックスの全
隣接表面が毛管作用を有するストリップ物質に直接接触
しない、すなわちマトリックス表面の実質部分が該スト
リップと物理的に接触しないように、マトリックスを該
ストリップの末端部または該ストリップ中の細隙または
空間の上部に置くことを意味する。このように流れを向
けさせる態様を用いることにより、試料がマトリックス
を迂回してストリップ物質中へ連続していくのを防ぐこ
とができる。
本発明の別の態様において、測定マトリックス物質を
修飾してその製造された孔径を変えることができる。た
とえば、ある名目上の孔径を有するように製造した焼結
ポリエチレンの多孔質マトリックスを処理物質（デキス
トラン、ポリエチレングリコールまたはカルボキシラテ
ックス）でコーティングして、一層細かい孔径のマトリ
ックスとしての試料回収および流れ属性を有するマトリ
ックスを製造することができる。マトリックスを処理す
ることにより、マトリックスのボイド容量を減少させ、
マトリックス中の流速を変えて一層小さな孔径を有する
マトリックスの特性を擬態することができる。
本発明の回収マトリックスの他の望ましい属性は、マ
トリックスの親水性である。しかしながら、焼結物質は
一般に親水性ではないので、上記血液分離手段の処理に
おいて記載したように、焼結物質でできたマトリックス
を界面活性剤で処理することにより親水性を付与するこ
とができる。焼結ポリエチレンのマトリックスを処理す
るのに約0.1％〜約0.5％の濃度の界面活性剤溶液を用
い、マトリックスの性能を向上させる。過剰の界面活性
剤を使用すると、試料の添加によって界面活性剤が溶解
して泡を生成し、これがマトリックスの孔および毛管作
用を妨害する。界面活性剤が不充分であったり分布が不
均一であると、マトリックス内に疎水性のポケットがで
きて血漿が容易に流れなくなる。
本発明の別の態様において、マトリックスによって回
収され保持された血漿または血清試料は、バッファーを
加えることによりマトリックスから溶出することができ
る。溶出した試料およびバッファーは、あらゆる適当な
受容手段により集めることができる。たとえば、試験
管、キュベットまたは反応ウエル中、またはスライド上
に溶出することができる。場合により、受容手段は、試
料の診断アッセイを行うのに必要な試薬のすべてまたは
いくらかを含んでいてよい。別々のやり方として、マト
リックスよりも小さな孔径を有する吸収物質などの受容
手段にマトリックスを接触させて該マトリックスからの
試料の移動を引き起こすことができる。クロマトグラフ
ィー物質、吸湿性物質、多孔質物質または毛管作用を有
する物質または当業者によく知られた他の従来の吸湿物
質などのあらゆる適当な吸収物質を用いることができ、
またこの物質は場合により診断アッセイを行うのに必要
な試薬のすべてまたはいくらかを含んでいてもよい。診
断装置の試料受容手段は、使用の間中、回収マトリック
スと直接接触させることができるし、またはマトリック
スが所定量の試料を回収した後にマトリックスと接触す
るようにしてもよい。
一般に、測定マトリックスは、マトリックスの入り口
および場合により出口が定められるように、非吸収性の
ケーシング物質内に内包もしくは収容される。そのよう
な装置は、第４図および第５図に記載してある。第４図
および第５図はまた、回収マトリックスを血液分離手段
とともに使用することも示している。第４図および第５
図に示す垂直装置の態様において、血液分離手段から回
収または測定マトリックスへの試料の移動に及ぼす重力
の影響を最小にするようにハウジング物質を選択する。
重力の影響は、本発明において血漿または血清との相互
反応が最小の物質からハウジングを成形することにより
最小となる。適当なハウジング物質としては、ポリスチ
レン、アクリルポリカーボネート、テフロン、ポリプロ
ピレン、ポリエチレンおよびシリコーンが挙げられる。
血漿との相互作用が最小であることによって特に好まし
いハウジング物質は、KR003樹脂、スチレン−ブタジエ
ンコポリマー［フィリップス66（Phillps 66）、バート
レフビル、テキサス］が挙げられる。そのようなハウジ
ングはまた、回収マトリックスとハウジングとの間の血
漿の接触を最小にすることにより回収マトリックスの過
剰充填をも防ぐ。ハウジングを使用することにより、下
記実施例に示すように、所定の大きさおよび名目上の孔
径を有するマトリックスが再生性のボイド容量および再
生性の流れの結果をもたらすであろう。
第４図に示すように、装置（70）はハウジング（72）
を含んでおり、該ハウジングは入り口（73）および出口
（76）を有している。該ハウジング（72）内には装置
（77）が位置しており、該装置は第一の多孔質ポリエチ
レンマトリックス（78）、第一のフィルター手段（8
0）、第二の多孔質ポリエチレンマトリックス（82）お
よび第二のフィルター手段（84）を含んでいる。第一の
マトリックス（78）は凝集素を含んでおり、入り口（7
4）および出口（75）を有している。第一のフィルター
手段（80）は第一のマトリックス（78）と第二のマトリ
ックス（82）との間にはさまれているので、第一のフィ
ルター手段（80）の頂部は第一のマトリックス（78）の
出口（75）と液体受容関係にあり、第一のフィルター手
段（80）の底部は第二のマトリックス（82）の頂部と液
体受容関係にある。第二の多孔質ポリエチレンマトリッ
クス（82）の底部は第二のフィルター手段（84）の頂部
と液体受容関係にある。血液試料を装置に加える前に、
それを第三の多孔質ポリエチレンマトリックス（86）の
頂部に液体受容関係にあるように置かれる。この第三の
マトリックス（86）は、そのボイド空間内に選択した所
定量の血漿を保持および受容するように設計され、つい
で血漿は受容キュベット（88）中に洗浄される。第三の
マトリックス（86）は特定の血液分析対象物の測定に必
要な試薬の幾つかを含んでいてもよく。キュベット（8
8）は試薬システムの他の成分を含んでいてもよい。
第５図に示すように、装置（90）はハウジング（92）
を含み、該ハウジングは入り口（93）および出口（96）
を有している。ハウジング（92）内には装置（97）が位
置しており、該装置は多孔質ポリエチレンマトリックス
（98）およびフィルター手段（100）を含んでいる。こ
のマトリックス（98）は凝集剤を含んでおり、入り口
（94）および出口（95）を有している。フィルター手段
（100）の頂部はマトリックス（98）の出口（95）と液
体受容関係にある。血液試料を装置（90）に加える前
に、それを第二の多孔質ポリエチレンマトリックス（10
2）の頂部に液体受容関係にあるように置く。第二のマ
トリックス（102）は、所定量の血漿を保持および受容
するように設計され、ついで血漿は受容キュベット（10
4）中に洗浄される。第二のマトリックス（102）は特定
の血液分析対象物の測定に必要な試薬の幾つかを含んで
いてもよく、キュベット（104）は試薬システムの他の
成分を含んでいてもよい。
本発明の装置から流れ出る血漿または血清は、受容マ
トリックス中へ直接流れていってよい。装置からの血漿
または血清を受容するために利用できる異なるタイプの
マトリックスとしては、分析試薬を付着させた染料ペー
パーマトリックス（上記米国特許出願第204,443号明細
書を参照）または焼結物質（ガラス、鋼、セラミック
ス、またはプラスチックポリマーなど）で製造した多孔
質物質が挙げられ、これらマトリックスは選択した容量
の血漿または血清を保持することができる。染料ペーパ
ーマトリックスの使用によれば、血漿または血清はペー
パー内に入りペーパー中をフロントとして流れていく。
血漿または血清はペーパー中に組み込まれた分析試薬と
接触し、所望の血液成分のアッセイをペーパー上で行
う。
該装置から血清または血漿の流れを授与し得る好まし
い焼結マトリックスは、処理多孔質ポリエチレンマトリ
ックスである。血清または血漿は該装置から流出し、選
ばれた量が受容マトリックスに入る。受容マトリックス
のボイド容量は、受容マトリックスに入る血清または血
漿の量を決定する。血清または血漿は、溶出バッファー
を加えることにより受容マトリックスからキュベットに
溶出される。所望の血液成分は、所望の分析試薬を含む
キュベット中で分析される。多孔質ポリエチレンマトリ
ックスは、血清または血漿の溶出後、分析物の分析に必
要な試薬を含んでいてもよい。そのような分析は、ポリ
エチレンマトリックス中で行ってもよく、あるいは、試
料および試薬をキュベット中に溶出させ、その後に行っ
てもよい。
本発明の装置は、一般に、血清または血漿を他の診断
法に用いる手段として利用されるが、種々の分析試薬
を、選ばれた血清または血漿の成分の分析を行なうのに
適するように該装置に加えることもできる。血液中のコ
レステロール・トリグリセライドおよびグルコースなど
の分析物の酵素分析に利用されるような試薬が挙げられ
る。種々のアッセイに用いられる試薬を、本発明の装置
に用いてもよい。本発明の他の態様におけるマトリック
スに用いられる試薬として、たとえば、バッファー、酸
類、塩基類、酵素類、酵素基質、アッセイ用試薬および
化学的分析用試薬などが挙げられる。生物学的活性分子
または成分、たとえば、抗原類、抗体類、組換えタンパ
ク、プラスミド、これらのフラグメントなどもマトリッ
クスに含み得る。
本発明の多孔質マトリックスは、多孔質マトリックス
の容量に比例して、それらの間隙に血清または血漿を保
留する。血清または血漿を含まない赤血球は、一般に、
外的手段で除かない限り多孔質マトリックスの間隙に残
留する。そのような外的手段としては静水圧の使用があ
り、たとえばマトリックスに追加の血液試料または溶質
バッファーを適用した場合に得られる。別法として、濾
紙またはマトリックスと液体受容関係にある他の多孔質
マトリックスのようなフィルター手段を、マトリックス
の毛管作用により、血清または血漿の流れを誘引するた
めに使ってもよい。したがって、血清または血漿の収量
を最少にするために、流れおよび純度の点で適合するよ
うな最も小さいマトリックスを使用するのが望ましい。
血清および血漿の多孔質マトリックス中の流速は、接触
するフィルター手段の多孔性および流れ特性を変えるこ
とによりコントロールできる。フィルター手段を多孔質
マトリックス中の流速を高めるように選定してもよい。
別法として、血液サンプルの多孔質マトリックス中によ
り長く残留させたい場合には、多孔質マトリックスの流
体流速を比較的緩やかにするようなフィルター手段を選
定してもよい。多孔質マトリックス中の流速を低くする
ことにより、マトリックス中での凝集効果を高めること
もできる。さらに、液体流速を比較的低くするフィルタ
ー手段を用いれば、より大きな凝集効果が得られる利点
があり、また、より小さい多孔質マトリックスを使用す
ることにより、血清または血漿収量を最少にし得る利点
も得られる。
本発明の好ましい態様によれば、マトリックスの孔径
は、マトリックスの長さおよび容量、マトリックスのボ
イド容量、試薬放出システム用の溶液の容量および濃度
に合わせて選択される。これらのファクターは、各マト
リックスに含まれる回収され得る乾燥試薬の量を決定す
る。試薬放出システムを得る１つの方法では、既知容量
の成分を既知濃度の試薬溶液と混合する。pH適合や濾過
性などを最終的に調整する。次いで、既知量のマトリッ
クスを溶液に加えて混合する。成分溶液で飽和されたマ
トリックスの量を下記のように測定する。まず、マトリ
ックスの容量、いわゆるマトリックスのボイド容量を乾
燥試薬の回収し得る量を測定することによって決定す
る。この方法は、当該分野で既知のものである。つい
で、成分溶液で飽和されたマトリックスの量を算出す
る。マトリックスは、飽和させる試薬成分のマトリック
スへの負荷を確実に完了させるために、吸引すべきであ
る。次にマトリックスをドライアイスの容器に入れ凍結
させる。凍結後、既知の方法により凍結乾燥させる。本
発明は、試薬が液体と接触して回復されるようなユニッ
ト形式で含まれるような試薬システムを提供するもので
ある。試薬は、回復に最も適した条件でマトリックスに
加えられる。
以下に本発明のいくつかの態様について実施例で説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１ 寸法が5mm×4mm×3mmである第１マトリックスを有す
る第２図に描かれた装置を、湿潤剤で処理し、pH5.6の
クエン酸100mM中の抗赤血球抗体5mg/mlの溶液30μを
吸着させる。第１マトリックスの孔径およびそれに吸着
される凝集剤は、実質的に全ての赤血球が該マトリック
ス中に保有されるように選択する。第１マトリックスを
抗体溶液で飽和させて負荷を完了する。負荷が終われ
ば、そのマトリックスを凍結乾燥する。寸法が6mm×4mm
×0.8mmである第２マトリックスは湿潤剤で処理され、
血漿中の分析物の定量に必要な試薬を含む。入口から全
血液を加え、それが第１マトリックスを通るときに、試
料中の赤血球は抗赤血球抗体で凝集され、凝集塊は濾去
される。その赤血球を含まない血漿が第１マトリックス
から第２マトリックスへ流れ、酵素およびここに存在す
る試薬系の色素成分を可溶化する。次いでこの混合物
を、染色ペーパーマトリックス中を流通させて、血液分
析物と他の酵素と試薬系の色素成分の反応によって分析
物の定量を行なう。
実施例２ 寸法が6mm×4mm×0.8mmである第３図に描かれた装置
を、湿潤剤で処理し、pH5.6の100mMクエン酸バッファー
中の抗赤血球抗体（IgG画分（Organon Teknika Corp.
製、Cappel Division）5mg/mlの溶液８μを吸着させ
る。抗体溶液を減圧下にマトリックスに適用することに
より負荷を完了する。負荷か終われば、そのマトリック
スを凍結乾燥する。入口から全血液を加え、それがマト
リックスを通るときに、試料中の赤血球は抗赤血球抗体
で凝集され、赤血球が部分的に濾別される。最終的な赤
血球濾過を、染色ペーパーマトリックスの濾過部で行
う。血漿は染色ペーパーマトリックスを上昇しつづける
ので、分析物定量用の試薬が凍結乾燥されている分析物
試薬部に接触する。血漿はこれらの試薬を可溶化し、試
料と試薬の反応による分析物の定量が定量分析分析部で
行なわれる。
実施例３ 本具体例において、血液コレステロール検定を行える
ように、実施例２に記載の装置を用いて全血液から血漿
を分離する。マトリックスをpH5.6にて、100mMのクエン
酸中の抗赤血球抗体（IgG画分（Organon Teknika Corp.
製、Cappel Division））5mg/mlの溶液８μ、10mg/ml
のコレステロールエステラーゼ、10mg/ml西洋ワサビペ
ルオキシダーゼおよび5mg/mlの４−アミノアンチピリン
で負荷させる。装置を染色ペーパーマトリックスのトッ
プに接触して設置し、全血液を入口から装置に注入す
る。血液を多孔質マトリックスで濾過するときに、抗赤
血球抗体で赤血球を凝集し、赤血球を該マトリックスに
よって部分的に濾過する。染色ペーパーマトリックスが
装置と接触している端部から５〜6mmの位置で最終的な
赤血球濾過が行なわれる。ペーパー端部から５〜6mmの
位置において、100mg/mlのコレステロールオキシダー
ゼ、１％（w/v）トリトンＸ−100、および100mMのNaPO4
からなるpH6.8の溶液を含有する、幅3mmの領域である分
析物定量部に血漿が接触する。血漿はペーパーマトリッ
クスを上昇しながら、凍結乾燥試薬を可溶化する。血漿
の流れは染色ペーパーマトリックスへと移動し、そこで
分析物（コレステロール）の定量が行なわれる。
実施例４ 第１図に描かれた装置においては、マトリックスを湿
潤剤で処理し、pH5.6の20mMクエン酸バッファー中の抗
赤血球抗体（IgG画分（Organon Teknika Corp.製、Capp
el Division））溶液25μを種々吸着させる。本装置
について、下記第１表に示すデータは、2mg/mlの抗体濃
度で減圧下に負荷させたものが、ヘマトクリットが30〜
60％であり、25μの試料から少なくとも５μの血漿
を放出する全血液から赤血球を濾別するのに最も適して
いることを示している。ヘマトクリットとは血液試料中
に占める赤血球の容量パーセントである。たとえば、ヘ
マトクリット30の血液試料25μは、赤血球7.5μと
血漿17.5μを含有している。全血液試料を抗凝固剤で
あるヘパリンで処理する。この抗体濃度では、まだ実質
的に試料のすべての赤血球がマトリックス中に保有され
ているが、血漿はほどよい時間内にフィルターペーパー
の端から12mm流れる。より高い抗体濃度では、より大き
な凝集となり、マトリックス内の孔をブロックし、血漿
の流れを妨げる。実質的にすべての赤血球がマトリック
ス内に保有されるようにマトリックスの孔サイズと吸着
される凝集剤を選択する。飽和（溶液にマトリックスを
浸漬する）または減圧（マトリックスを溶液に浸漬し、
10分間減圧する）により、マトリックスに抗体溶液を加
えて負荷を完了する。減圧負荷の方が飽和負荷より優れ
ていることが判る。なぜならば、減圧負荷は負荷後にマ
トリックス内にエアポケットが存在しないことが確実な
のである。飽和負荷はこの点において不確かである。負
荷が終わればマトリックスを凍結乾燥する。試験は６
回、各試験で、濾過ステップ後にマトリックスから液体
を受容する濾紙上に赤血球が無いという視覚的な決定に
より、「赤血球が実質的にない状態（No RBCsと表示す
る）」であるかどうかを検定する。表中、「端までの秒
数」とは、血液試料をマトリックスの入口から添加して
から血漿がフィルター部分の端に到達するまでの経過時
間を意味する。
低血液ヘマトクリット（たとえば30）の場合、２分間
程度で、15μ以下の血漿が全血液試料25mlから放出さ
れるが、高血液ヘマトクリット（たとえば60）の場合、
15分間程度で約５μの血漿が全血液試料25mlから放出
される。
実施例５ 本実施例においては、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）
に対する抗体を検出する検定を行うために、実施例３に
記載の装置を、全血液と血漿の分離に用いる。マトリッ
クスを抗赤血球抗体（IgG画分（Organon Teknika Corp.
製、Cappel Division））5mg/mlの溶液８μ、co−own
edおよびco−pendingの米国特許出願第248858号（1988
年９月23日出願）の記載に準じて、10mg/mlのHIV抗体を
0.05％ブラックラテックスと結合させて調製した検出標
識５μ、ポリ（ピロール）の懸濁水溶液（pH7）で負
荷する。装置を孔径５μｍのニトロセルロース（Ｓ＆S,
Keene,NH）の３×30mm片のトップに接触して設置し、全
血液30μを装置の入口から添加する。血液を多孔質マ
トリックスで濾過するときに、抗赤血球抗体で赤血球を
凝集し、赤血球を該マトリックスによって部分的に濾過
する。試料中の血漿をマトリックス内の標識懸濁物と混
合し、次いでニトロセルロース片を入れ、ここで最終的
な赤血球濾過と分離した血漿の分析が行なわれる。
実施例６ 第４図に描かれた装置に入口から全血液を添加する。
血液を多孔質マトリックスで濾過するときに、抗赤血球
抗体で赤血球を凝集し、赤血球を該マトリックスによっ
て部分的に濾過する。残りの赤血球および凝集した赤血
球の小さな固まりを第１フィルターに通し、赤血球から
血漿をさらに分離する。第１フィルターに保有されない
赤血球を第２マトリックスに通し、赤血球から血漿をさ
らに分離する。最終的に、第２マトリックスに保有され
ない赤血球を、少なくとも１種の赤血球凝集剤を吸着さ
せた第２フィルターに通し、血漿中の残りの赤血球を凝
集する。次いで血漿を受容マトリックスに流し、血漿量
を定量する。赤血球濾過スタックを受容マトリックスか
ら分離し、選択された容量の血漿に溶離バッファーを添
加して、付属キュベットに流し入れる。キュベットは種
々の分析試薬を含有している。キュベットを２度転回し
て血漿と溶離バッファーの混合を完了する。指定の待機
時間後、溶液の色を標準チャートと比較して試験結果が
得られる。
特に、第４図に描かれた装置においては、第１マトリ
ックス（Porex4897）の孔径とそれに吸着させる凝集剤
を、第１マトリックス内の赤血球の大部分（全部ではな
い）が凝集し、保有されるように選択する。第１マトリ
ックスは直径0.2インチ、長さ0.07インチの円柱型に成
形し、0.35mMクエン酸バッファー（pH7.4）中の0.44％
（w/v）の抗赤血球抗体（IgG画分（Organon Teknika Co
rp.製、Cappel Division））、4.4（w/v）％のポリブレ
ン（アルドリッヒ・ファイン・ケミカルズ製）、および
4.4（w/v）％のPVP（アルドリッヒ・ファイン・ケミカ
ルズ製）の溶液15.0μを吸着させる。コートした第１
マトリックスをホットエアオーブンで乾燥する。溶液の
組成および第１マトリックス内に負荷する量を、赤血球
の細胞溶解や血液希釈をおこさずに非常に急速に赤血球
凝集が起こるように選択する。残りの赤血球を第１フィ
ルター部分（ワットマン31ET）、第２多孔質ポリエチレ
ンマトリックス（Porex4932）、および第２フィルター
部分（ワットマン31ET）を通して血漿から除去する。こ
の最後のフィルター部分は内部に赤血球に対する抗血清
1mg/ml溶液36.1μを保持している。コートした最終フ
ィルターをホットエアオーブンで乾燥する。第２表に示
すように、この装置は血液50μから、99％ヘモグロビ
ンなしの清澄な血漿15μを３分以内で生成する。赤血
球濾過スタック、すなわち第１マトリックス、第１フィ
ルター部分、第２マトリックスおよび第２フィルター部
分を移動し、溶離バッファーを加えてキュベットの中へ
溶離する。
実施例７ 第５図に描かれた装置に入口から全血液を添加する。
血液を多孔質マトリックスで濾過するときに、抗赤血球
抗体で赤血球を凝集し、赤血球を該マトリックスによっ
て部分的に濾過する。残りの赤血球および凝集した赤血
球の小さな固まりをフィルターに通し、赤血球から血漿
をさらに分離する。次いで血漿を受容マトリックスに流
し、血漿量を定量する。赤血球濾過スタックを受容マト
リックスから分離し、選択された容量の血漿に溶離バッ
ファーを添加して、付属キュベットに流し入れる。キュ
ベットは種々の分析試薬を含有している。キュベットを
２度転回して血漿と溶離バッファーの混合を完了する。
指定の待機時間後、溶液の色を標準チャートと比較して
試験結果が得られる。
特に、第５図に描かれた装置においては、マトリック
ス（Porex4897）の孔径とそれに吸着させる凝集剤を、
マトリックス内の赤血球の大部分（全部ではない）が凝
集し、保有されるように選択する。マトリックスに、0.
397mMクエン酸バッファー（pH7.4）中の0.88％（w/v）
の抗赤血球抗体（IgG画分（Organon Teknika Corp.製、
Cappel Division））、1.76（w/v）％のポリブレン（ア
ルドリッヒ・ファイン・ケミカルズ製）、および1.76
（w/v）％のPVP（アルドリッヒ・ファイン・ケミカルズ
製）の溶液15.0μを吸着させる。コートしたマトリッ
クスをホットエアオーブンで乾燥する。溶液の組成およ
びマトリックス内にロードする量を、赤血球の細胞溶解
や血液希釈をおこさずに非常に急速に赤血球凝集が起こ
るように選択する。残りの赤血球をフィルター部分（ワ
ットマン1CHR）を通して血漿から除去する。このフィル
ター部分は内部に赤血球に対する抗血清1mg/ml溶液15.0
μを保持している。コートした最終フィルターをホッ
トエアオーブンで乾燥する。第３表に示すように、この
装置は血液40μから、99％ヘモグロビンなしの清澄な
血漿10μを32以内で生成する。赤血球濾過スタック、
すなわちマトリックスおよびフィルター部分を移動し、
溶離バッファーを加えてキュベットの中へ溶離する。
実施例８ いくつかの方法が回収マトリックスのボイド容量およ
び測定容量の評価に使用できる。材料が薄くて、それが
乾燥している時と湿潤している時とで異なる形態をもっ
ている場合は、拡散扱い取り（diffusion wicking）法
が用いられた。この方法では、一定量の試料を精密ピペ
ットを用いてマトリックスの表面に置いた。マトリック
ス表面のウェットスポット（wet spot）の直径は拡散過
程により、マトリックス物質の容積容量と再現性のある
試料回収に関する情報を与えた。
クロマトグラフィーペーパーマトリックス（31ETセル
ロースペーパー、ホァットマンアプライドテクノロジー
ビジネス社製、ケント州、英国）はニトロセルロース
（5.0μｍポア、ミクロンセパレイテッド、インク製）
とほぼ同じ容積容量を持っていたが、しかし試料回収の
再現性はニトロセルロース（3.4％偏差）に比べてペー
パーマトリックス（２％偏差）が良好だった。ウルトラ
バインドメンブラン（ultrabind membrane）マトリック
ス（ゲルマン）は良好な再現性（２％偏差）を示した
が、これらのマトリックスは材料の薄さのための低い容
積容量を示した。さらに厚いマトリックス物質を作るた
めに、ニトロセルロースを被膜することは可能である
が、そのようなマトリックスは非常に破損しやすい。
当該物質が半透明でない場合で、その物質の総飽和容
量の測定が望まれる場合は、試料回収の前後にマトリッ
クスを秤量する方法を用いた。マトリックスを均一の面
積（表面積1.13cm2のディスク形）に切り取り、秤量
し、マトリックスを試料に浸した。ついでマトリックス
を試料から除き、過剰の試料をセルロース（キムワイ
プ、キンバリークラーク、GA）のようなきめの荒いポア
の物質を用いて急速吸い取りでマトリックス表面から除
いた。湿潤したマトリックスと乾燥したマトリックス物
質の重量差がマトリックスのボイド容量を示した。第４
表は焼結ポリエチレン（ポレックス4897、ポレックステ
クノロジーインク製、フェアバーン、GA）やナイロン
（ナイロンメッシュ、スペクトラムメディカルインダス
トリーインク製、ロサンゼルス、カルホォルニア）を含
めたいくつかの異なるマトリックス物質のボイド容量測
定結果を示す。
第４表の結果を比較して、焼結ポリエチレンマトリッ
クスマテリヤルがマトリックスサイズに対し最大のボイ
ド容量と最小の測定偏差を示すことが判明した。ナイロ
ンマトリックスは容認できない再現性を示した。ニトロ
セルロースとウルトラバインドマトリックスは多容量の
試料に対しては不十分な容量を示した。後者の物質をボ
イド容量を希望の範囲にするように多層に積層すること
が出来るが、そのような積層体で測定する場合その容量
再現性はさらに調整しにくい。
実施例９ 本実験はマトリックスの孔径の変更のための方法を示
す。変更はマトリックスをデキストラン溶液（2.5％／
水）で処理して行った。マトリックスの内表面をデキス
トランで被膜する効果は、異なるヘマトクリット値の血
漿試料をマトリックスに用いて測定した。実験の結果は
第５表に示す。結果から、第４図および第５図で示した
垂直配置装置あるいは類似のハウジングを用いての血漿
回収に対する孔径とデキストラン被膜の効果を示す。数
値は45％ヘマトクリット血液試料から得た血漿に対する
パーセントで表す。
実施例10 異なる物質を用いて回収マトリックス用ハウジングを
作った。最も好ましいハウジング物質は血漿や血清とハ
ウジングの相互反応が最小のものである。物質には最小
流動抵抗があるために、回収マトリックスは血液試料が
低いヘマトクリット値を有するときはオーバーフィル
（over fill）する傾向がある。また回収マトリックス
の径をふさぐ試料では物質の量が増加するため、血液試
料が高いヘマトクリット値を有するときは、回収マトリ
ックスは、アンダーフィル（under fill）の傾向があ
る。第６表は受取血漿容量と異なる物質で出来たハウジ
ング内の回収マトリックスから回収した血漿容量をパー
セントで比較している。血漿試料を試験試料として用
い、湿潤吸い取り秤量法で測定した場合焼結ポリエチレ
ン回収マトリックスのボイド容量は8.5μであった。
この希望の8.5μは45％ヘマトクリットの血液試料を
用いて血漿重量を測定することにより得た。ハウジング
はスチレン−ブタジエンコポリマー（KR003、フィリッ
プス66）、スチレン−アクリル酸アロイ（Q886、モンサ
ント、MO）、アクリロ−ブチルスチレン（ABS,モンサン
ト、MO）、ポリメチルペンテン（TPX、三井石油化学社
製、ニューヨーク、NY）、ポリプロピレン（PD213、ハ
イモント社製、ブルーミングトン、DE）あるいはポリエ
チレン（PE、GEプラスチックス社製、ビッツフィール
ド、MA）から調製した。
第７表は異なる物質で調製したハウジング内の回収マ
トリックスと32％ヘマトクリットの全血液を用いた血漿
回収結果を示す。回収パーセントは32％ヘマトクリット
の全血液試料から回収した血漿と43％ヘマトクリット血
液を試料として用いて回収した値と比較して、43％ヘマ
トクリットでの結果を100％値として計算した。
KR003樹脂で作ったハウジングは種々のヘマトクリッ
ト値の試料での最も少ない血漿回収偏差を示した。
鋳型プラスチックハウジングを洗浄剤で被膜して疎水
性表面を作ったり、また硬化性シリコン（MDX4−4159、
ダウコーニング社製、ミッドランド、ミシガン）を用い
てシリコン化工程により、血漿回収に対するオーバーフ
ィリング作用とヘマトクリット作用を最小化することは
可能である。
実施例11 本実験では診断用装置における直接流出と非直接流出
の効果を比較した。血液分離部は長さ0.074インチ、直
径0.194インチの焼結ポリエチレンシリンダーである。
血液分離部の孔径および分離部内に吸収された凝集剤は
迅速に凝集するように、また血液希釈や細胞溶解を起こ
すことなくマトリックス内に赤血球の大部分を保持する
ように選んだ。分離部は、界面活性剤（0.1％トリトン
Ｘ−405、シグマ社製、セントルイス、MO）を含む抗赤
血球抗血清（オルガノンテクニカコーポレーション製、
ダーハム、NC）のクエン酸緩衝液（0.397mM、pH7.4、フ
ッシャーケミカルズ社製、ファアーヘブン、PA）溶液
（8.89光学濃度（280nm）/ml）で飽和しておいた。つい
で分離部はホットエヤーオーブンで乾燥した。
測定あるいは血漿回収用マトリックスとして長さ0.07
0インチで直径0.150インチの大きさの焼結ポリエチレン
シリンダーを用いた。シリンダーは５ミクロンの表示孔
径は焼結ポリエチレン（ゼネラルポリメリック）のスト
ックシートから均一サイズのマトリックスを除くために
中空パンチを用いて作った。血漿回収マトリックスはシ
ートをカルボキシラテックス（セラダイン社製、インジ
アナポリス、IN）の３％メタノール懸濁液で前処理しつ
いで真空下一夜乾燥することにより親水性にしておい
た。
吸い取りストリップはセルロースペーパー（シュレイ
チャーアンドシュエル410番、ケーン、NH）で調製し
た。
測定マトリックスの底表面全部が吸い取り層の上部表
面に接して配置した非直接流出装置と、測定マトリック
スの底表面の実質的部分が吸い取り層あるいはストリッ
プの上部表面にすき間をあけて位置している直接流出装
置を用いて比較した。血液試料を装置の血液分離部に加
え、そこで赤血球を除き、得られた血漿を毛細作用によ
り吸い取り層に導入させた。血漿は吸い取りストリップ
を通って回収マトリックスに連続的に導入され、吸い取
りストリップの流出部上まで達する。血漿の流出部でそ
れ以上動きが視覚的に見られなくなった時点で回収マト
リックスを除きその重量を測定した。使用したマトリッ
クスの重量をマトリックスの使用前の既知の重量と比較
することにより、血漿回収による重量の真の増加量を計
算した。結果を第８表に示す。その結果から、側面流出
配置の場合には、直接流出配列の方が広範囲のヘマトク
リット値にわたって回収ヘマトリックスの良い均一充填
を与えることが分かった。非直接流出配列ではマトリッ
クスのアンダーフィリングが55％ヘマトクリットで見ら
れた。
実施例12 以下の実験では、回収マトリックスと血液分離部の精
度、測定結果と参考測定法との相関関係および測定装置
の使用におけるヘマトクリットの影響を調べた。第４図
および第５図に示した垂直積層血液分離器を用いた。
血液分離部は焼結ポリエチレン（ポレックス4897）で
調製した。その材料は抗ヒト赤血球抗血清（光学濃度8.
89（280nm）ml、ケッペル0101−1322、オルガノンテク
ニカコーポレーション製）の界面活性剤（0.1％トリト
ンＸ−405）を含有したクエン酸緩衝液（0.573mM、pH7.
4、フッシャーケミカルズ社製）溶液で飽和し、ついで
室温で低空気層流で乾燥した。
回収マトリックスは約５μｍの孔径の焼結ポリエチレ
ンシートストック（ゼネラルボリメリックス）から調製
した。シートはカルボキシラテックス（セラダイン）の
３％メタノール懸濁液で飽和した。ついでシートを真空
デシケーター中で一夜放置して溶媒を除去した。
それぞれ直径0.200インチ、長さ0.064インチの２つの
ディスクを血液分離部の物質からくりぬき、第４図およ
び第５図に示したようにシリンダー状ハウジングに挿入
した。さらに抗ヒト赤血球IgG（オルガノテクニカ社
製、ケッペル0201−1322）のクエン酸ナトリウム緩衝液
（2.0mM、pH7.4）溶液であらかじめ被膜したクロマトグ
ラフィー用ペーパー（直径0.200インチ、ホアットマン1
CHR）のディスク１つをハウジング内に置いた。回収マ
トリックスのディスク１つ（直径0.138インチ、長さ0.0
64インチ）をくりぬいた。ディスク面積は回収マトリッ
クスが約５マイクロリットルのボイド容量になるように
選んだ。第４図に示したように、回収マトリックスをペ
ーパーディスクの底表面が回収マトリックスの上部表面
に接するようにハウジングに挿入した。
測定試薬をコレステロール測定用に調製した。血漿コ
レステロールの測定に必要な試薬は単位用量試薬（unit
dose reagent）と呼ばれている単位形式で放出させ
た。この単位用量試薬は、測定試薬が可溶塊に成形され
ている放出型式である。適当な緩衝液に接したときに、
単位用量試薬は色素の分光度測定を阻害する不溶性物質
を残すことなく成分試薬を遊離して溶解する。
コレステロール測定用単位用量試薬はコレステロール
エステルヒドロラーゼ（6660単位、アマノ製、トロイ、
VA）、コレステロールオキシダーゼ（940単位、ベーリ
ンガーマンハイムバイオケミカル社製、インジアナポリ
ス、IN）、ペルオキシダーゼ（136,000単位、アマノ社
製）、４−アミノアンチピリン（677mg）および3,5−ジ
クロロヒドロキシベンゼンスルホン酸（2922mg）を含
む。成分試薬は血漿試料と反応し赤色反応生成物を生成
し、これを分光度計（515nm）で読み取る。
単位用量試薬を、上述および第４図および第５図で示
した診断用装置の試料受容器として使用されるキュベッ
トに入れた。
全血液試料（50μ）を血液分離部装置の最上部に置
いて測定を行った。約２分後、細胞血漿分離が完了し、
回収マトリックスは血漿で満たされた。血液分離部装置
を装置から除き、血漿を溶出緩衝液（0.5ml）を加えて
回収マトリックスからキュベット中へ溶出した。コレス
テロール測定に必要な試薬を遊離させるために、単位用
量試薬をキュベット中で血漿試料と緩衝液に溶解した。
得られた反応液の吸光度を分光度計で読み取った。
試験は68人の患者からの全血液試料を用いて２回繰り
返して行った。測定の結果はビジョンコレステロールア
ッセイ（アボット・ラボラトリーズ社製、アボットパー
ク、IL）で得た測定結果と比較した。このシステム、つ
まり血液分離部、測定マトリックスおよび単位用量試薬
のシステムの総体的精度は個々の測定値の変異係数（％
CV）の平均値で計算した。この測定の総体的精度は3.3
％CVとなった。本発明で測定した各患者のコレステロー
ルレベルとビジョンアッセイで決定したそれとの傾き、
切片および相関係数は、傾き0.93、切片14および相関係
数0.96であった。従って、本発明の試験装置は参考測定
法の結果に比較しても許容できる精度の測定結果を示し
た。
実施例13 グルコースオキシダーゼ含有マトリックスの製法 250mg/mlのグルコースオキシダーゼ（シグマケミカル
コーポレーション製、セントルイス、MO）と19mg/mlの
４−アミノアンチピリン（シグマケミカルコーポレーシ
ョン製、セントルイス、MO）を含有した成分溶液を調製
した。約6.5μの表示マトリックス容積を持つ多量の
焼結ポリエチレン、Porexo LC06 WW5.3マトリックス
（ポレックスインク製、フェアーバーン、ジョージア）
を本発明に従って、この成分溶液で飽和し、凍結し、凍
結乾燥した。
実施例14 ペルオキシダーゼ試薬含有マトリックスの製法 7.5mg/mlのペルオキシターゼ（シグマケミカルコーポ
レーション製、セントルイス、MO）と100mg/mlの3,5−
ジクロロ−２−ベンゼンスルホン酸（DCHBS）（シグマ
ケミカルコーポレーション製、セントルイス、MO）を含
有した成分溶液を調製した。約6.5μの表示マトリッ
クス容積を持つ多量の焼結ポリエチレン、Porexo LC06
WW5.3マトリックス（ポレックスインク製、フェアーバ
ーン、ジョージア）を本発明に従って、この成分溶液で
飽和し、凍結し、凍結乾燥した。
実施例15 グルコース測定法 実施例13および実施例14に従って調製したマトリック
スを容器中20mMクエン酸ナトリウム（pH5.6）3mlに加え
た。その容器を約３〜５分間渦巻き撹拌して含有試薬を
溶解した。５μのグルコース標準（シグマケミカルコ
ーポレーション製、セントルイス、MO）、（表示上で約
100mg/dl）を緩衝液とマトリックスの混合物に加えた。
容器を30分間37℃でインキュベートした。450、512およ
び560nmの吸光度を、対照として蒸留水を用いて測定し
た。各標準は８回測定し、平均値と標準偏差を計算し
た。
実施例16 グルコース測定法 実施例13および実施例14に従って調製したマトリック
スを容器中20mMクエン酸ナトリウム（pH5.6）3mlに加え
た。５μの標準グルコース（シグマケミカルコーポレ
ーション製、セントルイス、MO）、（表示上で約300mg/
dl）を緩衝液とマトリックスの混合物に加えた。その容
器を約３〜５分間渦巻き撹拌して含有試薬を溶解した。
容器を30分間37℃でインキュベートした。450、512およ
び560nmの吸光度を、対照として蒸留水を用いて測定し
た。各標準は８回測定し、平均値と標準偏差を計算し
た。
実施例17 グルコース測定法 実施例13および実施例14に従って調製したマトリック
スを容器中20mMクエン酸ナトリウム（pH5.6）3mlに加え
た。その容器を約３〜５分間渦巻き撹拌し含有試薬を溶
解した。５μの標準グルコース（シグマケミカルコー
ポレーション製、セントルイス、MO）、（表示上で約80
0mg/dl）を緩衝液とマトリックスの混合物に加えた。容
器を30分間37℃でインキュベートした。450、512および
560nmの吸光度を、対照として蒸留水を用いて測定し
た。各標準は８回測定し、平均値と標準偏差を計算し
た。
実施例18 コレステロールエステルヒドラーゼとコレステロールオ
キシダーゼ含有マトリックスの製法 0.374gの４−アミノアンチピリン（シグマケミカルコ
ーポレーション製、セントルイス、MO）、0.299gのコレ
ステロールエステルヒドロラーゼ（ミツビシの子会社、
アマノ社製、トロイ、VA）および0.139gのコレステロー
ルオキシダーゼ（ベーリンガーマンハイム社製、インジ
アナポリス、IN）を20.4mlの50mM MOPSO緩衝液（３−
［Ｎ−モルホリノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン
酸、シグマケミカルコーポレーション製、セントルイ
ス、MO）pH7.0に加えた。
異なる量の界面活性剤を含有する４種のポレキソ（Po
rexo）マトリックスを試験した。これらのマトリックス
はポレックスインク（フェアーバーン、ジョージア）製
で、0.3％の界面活性剤WW5含有の製品番号LC06 WW5.3、
0.2％の界面活性剤WW5含有の製品番号LC06 WW5.2、0.1
％の界面活性剤WW5含有の製品番号LC06 WW5.1および界
面活性剤を含まない製品番号LC06であった。
マトリックスを本発明の方法に従ってこの成分溶液で
飽和し、凍結し、凍結乾燥した。
実施例19 実施例18のマトリックスの安定性はマトリックスをバ
イヤルに入れ、そのバイヤルを乾燥することなく45℃で
３日間インキュベートし（強調）、コレステロールエス
テルヒドロラーゼ（CEH）、コレステロールオキシダー
ゼ（CO）および４−アミノアンチピリン（４ AAP）の
回収パーセントを測定し、あわせてこれらの結果を実施
例18のマトリックスを４℃に３日間乾燥保存して得た結
果（対照）と比較して調べた。これらの結果は第12表に
示す。
実施例20 コレステロール試薬含有マトリックスの製法 以下の成分を総量10.2mlの250mM MOPSO（pH7.0）に加
えた。
0.0113gの塩化マグネシウム（試薬級、フィッシャー
製） 0.0276gの塩化カルシウム（試薬級、フィッシャー
製） 0.5100gの乳糖（シグマケミカルコーポレーション
製、セントルイス、MO） 1.0200gのウシ血清アルブミン（脂肪酸不含、シグマ
ケミカルコーポレーション製、セントルイス、MO） 0.3060gのグリセロール（シグマケミカルコーポレー
ション製、セントルイス、MO） 0.1868gの４−アミノアンチピリン（シグマケミカル
コーポレーション製、セントルイス、MO） 2200単位のコレステロールエステルヒドロラーゼ（ミ
ツビシの子会社アマノ製、トロイ、VA） 260単位のコレステロールオキシダーゼ（ベーリンガ
ーマンハイム社製、インジアナポリス、IN） 試薬を本発明の方法により8.5μの表示上のボイド
用量を持つポレックスLC06マトリックスに負荷した。マ
トリックス−溶液混合物に25インチ水銀圧を３回加え溶
液のマトリックスへの進入を高めた。ついで容器を凍結
し本発明に従って凍結乾燥した。完全なフリット負荷を
確実にするために必要な過剰の溶液から得た粉末は、凍
結乾燥したマトリックスを10番のふるいで15分間振とう
することにより除いた。
実施例21 ペルオキシダーゼ/DCHBS含有マトリックスの製法 西洋ワサビペルオキシダーゼ（POD）とDCHBSを含有し
たマトリックスを以下の方法で調製した。0.8064gのDCH
BSをpH7.0の50mM MOPSO約8.5mlに溶解した。pHは12NHC1
でpH7.0に調整し、37,500単位の西洋ワサビペルオキシ
ダーゼ（ミツビシの子会社アマノ製、トロイ、VA）をこ
の溶液に溶解した。最終容量はpH7.0の50mMMOPSOで10.2
mlに調整した。
表示上のボイド容量がマトリックス当たり8.5μで
ある1,000のマトリックスををこの溶液に添加した。混
合物を本発明に従って撹拌、凍結、凍結乾燥した。過剰
の溶液は負荷したマトリックスを10番ふるいで15分間振
とうして除いた。
実施例22 グリセロール−リン酸オキシダーゼとグリセロールキナ
ーゼ含有マトリックスの製法 0.0297g/mlのアデノシン三リン酸二ナトリウム塩（AT
P、シグマケミカルコーポレーション製、セントルイ
ス、MO）、0.0094g/mlの塩化マグネシウム（ジグマケミ
カルコーポレーション製、セントルイス、MO）、0.0047
g/mlの４−アミノアンチピリン（シグマケミカルコーポ
レーション製、セントルイス、MO）、0.0500g/mlのショ
糖（シグマケミカルコーポレーション製、セントルイ
ス、MO）、0.0731g/mlのウシ血清アルブミン（BSA、脂
肪酸不含、シグマケミカルコーポレーション製、セント
ルイス、MO）、0.0146g/mlのポリエチレングリコール
（PEG）（シグマケミカルコーポレーション製、セント
ルイス、MO）、769U/mlのグリセロ−３−ホスフェート
オキシダーゼ（コダック社製、ロチェスター、NY）、10
2540U/mlのリパーゼ（東洋醸造、東京、日本）および39
U/mlのグリセロキナーゼ（コダック社製、ロチェスタ
ー、NY）をpH7.0の50mMリン酸緩衝液6.5mlに溶解して成
分溶液を調製した。ついで新鮮なフェロシアン酸溶液
（1.2672gのフェロシアン酸カリウム三水和物を100mlの
蒸留水に溶解、シグマケミカルコーポレーション製、セ
ントルイス、MO）100μを混合物に添加した。マトリ
ックス当たり約6.5μの表示上のマトリックス体積を
持つ多量の焼結ポリエチレンのポレックスLC06 WW5.3マ
トリックスをこの成分溶液で飽和し、本発明の方法に従
って凍結、凍結乾燥した。
実施例23 ペルオキシダーゼとリパーゼ含有マトリックスの製法 0.1041g/mlのDCHBS、102540U/mlのリパーゼ（東洋醸
造社製、東京、日本）および808U/mlの西洋ワサビペル
オキシダーゼを6.5mlのリン酸緩衝液に溶解して成分溶
液を調製した。約6.5μの表示上のマトリックス容積
をもつ多量の焼結ポリエチレンのポーレックスLC06 WW
5.3をこの成分溶液で飽和し、本発明の方法に従って凍
結、凍結乾燥した。
実施例24 トリグリセライド測定法 実施例22および実施例23に従って調製したマトリック
スをキュベットに入れた。界面活性剤、ゲナポール（Ge
napol）（ヘキスト社製、西ドイツ）とトリトンＸ−100
（Totiono Ｘ−100）（シグマケミカル社製、セントル
イス、MO）を含有したpH7.0のリン酸緩衝液500μをキ
ュベットに加えた。０、63.44、161.08および879.12mg/
dlの各トリグリセライド標準（Abbott Visiono用トリグ
リセライド標準として、アボット社製、アボットパー
ク、IL）（保存剤不含）６μをキュベットに加えイン
キュベートした。各標準は６回試験し、読み取った吸光
度を平均して平均吸光度とした。これらの結果は第13表
に示した。
第９表、第10表および第11表はグルコース標準品０、
100、300および800mg/dl濃度での450nm、512nmおよび56
0nmにおける測定吸光度から得た結果を示す。各標準品
は８回ずつ試験した（Ｎ＝８）。グルコース標準品の各
濃度における平均値および標準偏差を示した。この結果
からごくわずかな偏差のみが試料間で見られ、従ってこ
れはこの測定システムの再現性と信頼性を示している。
第12表の結果はコレステロールオキシダーゼ活性の回
収がマトリックスLC06、疎水性マトリックスで最大であ
ることを示す。
第13表の結果はトリグリセライド測定に対する用量反
応直線を示す。
第６図のグラフは異なる濃度のグルコース標準品で得
られた吸光度と波長をプロットしたスペクトルを示す。
最大ピークは800mg/dlのグルコース濃度において約512n
mで得られた。２番目に高いピークは300mg/dlのグルコ
ース濃度において約512nmで得られた。３番目に高いピ
ークは100mg/dlのグルコース濃度において得られた。グ
ルコース標準品0mg/dl（蒸留水）を測定した時は平たん
な線が得られた。
第７図のグラフは一定の波長において吸光度と標準グ
ルコース濃度との直線関係を示す。異なる波長で得られ
た各線は離れており、従って種々の波長で吸光度スペク
トルに沿った値が得られるということは注目すべきこと
である。
第８図のグラフは512nmでの吸光度と標準トリグリセ
ライド濃度との直線関係を示す。
本発明の概念は本明細書で特に説明した測定法のみで
なく他の種種の形式の測定法や物質にも応用できる。当
分野の技術者であれば本発明の概念が応用できる多くの
他の測定法や物質を想定することは容易であろう。ここ
で説明した態様や紹介した他の態様は例でありそれに限
定されるものではない。従って、本発明の説明は本発明
を開示した特別な態様に限定するものではなく、上記の
ごとく本発明の精神および範囲内のすべての同等物と主
題を包含するものである。
【図面の簡単な説明】
第１図は、多孔質マトリックスおよび受容濾紙マトリッ
クスからなる装置を示す。 第２図は、第一多孔質マトリックス、第二多孔質マトリ
ックス、および受容濾紙マトリックスからなる装置を示
す。 第３図は、多孔質マトリックス、および試薬含有ゾーン
を有する受容濾紙マトリックスからなる装置を示す。 第４図は、第一多孔質マトリックス、第一フィルター手
段、第二多孔質マトリックス、第二フィルター手段、お
よび受容多孔質マトリックスからなる装置を示す。 第５図は、多孔質マトリックス、フィルター手段、およ
び受容多孔質マトリックスからなる装置を示す。 第６図は、反応生成物の吸収スペクトルを示すグラフで
あり、その吸収は、吸収／波長に関して0,100,300およ
び800mg/dLのグルコース標準品についてプロットしたも
のであり、最も高いピークのものは、800mg/dLのグルコ
ース標準品で得られたもの、第二に高いピークのもの
は、100mg/dLのグルコース標準品で得られたもの、平坦
線のものは0mg/dLのグルコース標準品で得られたもので
ある。 第７図は、グルコースの分析における、用量応答曲線を
示すグラフであり、100,300および800mg/dLのグルコー
ス標準品について波長512,450および560nmにおける平均
吸収値（Ｎ＝８）をプロットしたもので、波長512nmの
曲線は四角マーク付の線、波長450nmの曲線は丸マーク
付の線、波長560nmの曲線は菱形マーク付の線で示され
る。 第８図は、トリグリセライド標準品についての回帰線を
示し、吸収／トリグリセライド濃度に関して波長512nm
における平均吸収をプロットしたものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 グラディミール・ジー・ジョージヴィッ チ アメリカ合州国イリノイ 60060、マン デリン、ダブリン 813番 (72)発明者 ツァイ―ウェン・ジェン アメリカ合衆国イリノイ 60061、バー ノン・ヒルズ、アップルトン・ドライブ 311番 (72)発明者 ゲリー・エム・ウースタ アメリカ合衆国イリノイ 60031、ガー ニー、アッシュウッド・レイン 5377番 (72)発明者 テリー・エイ・プライ アメリカ合衆国イリノイ 60048、リバ ティビル、アーサー 820番 (72)発明者 ニール・エイ・シーゲル アメリカ合衆国イリノイ 60015、ディ アフィールド、マラード・レイン 531 番 (72)発明者 キャシー・アール・シルバーマン アメリカ合衆国イリノイ 60031、ガー ニー、アプト．７ フィンチ・コート 4369番 (56)参考文献 特開 昭56−130656（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−138758（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 33/48 G01N 33/49

Claims (10)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】少なくとも１種の赤血球凝集剤を組み込ん
    だ親水性焼結多孔質物質のマトリックスからなることを
    特徴とする、全血から血漿または血清を分離するための
    装置であって、該マトリックスは、個々の赤血球は該マ
    トリックスを通過するが凝集した赤血球は該マトリック
    スによって保持されるように選択された孔径を有するこ
    とを特徴とする装置。
  2. 【請求項２】焼結多孔質物質が、焼結ガラス、焼結鋼、
    焼結セラミックおよび焼結プラスチックよりなる群から
    選ばれたものである請求項（１）に記載の装置。
  3. 【請求項３】マトリックスの孔径が約10ミクロン〜約70
    ミクロンであり、凝集剤の量および型が、該装置に加え
    た血液試料に含有される赤血球の少なくとも95％が該マ
    トリックスによって保持されるように選択されたもので
    ある請求項（１）に記載の装置。
  4. 【請求項４】マトリックスと液体受容関係にあるフィル
    ター手段をさらに含み、該フィルター手段は該マトリッ
    クスを通過する血球を保持することができ、誘導または
    非誘導セルロースフィルターおよび多孔質ポリエチレン
    マトリックスよりなる群から選ばれたものである請求項
    （１）に記載の装置。
  5. 【請求項５】第一のマトリックスと液体受容関係にある
    第二の親水性焼結多孔質物質のマトリックスをさらに含
    み、該第二のマトリックスは該第一のマトリックスから
    の選択された所定量の血漿または血清を受容することが
    できるものである請求項（１）に記載の装置。
  6. 【請求項６】第一のマトリックスと液体受容関係にある
    マトリックスまたはフィルター手段をさらに含み、選択
    された成分との反応のために選択された分析試薬が、該
    マトリックスおよび該フィルター手段よりなる群から選
    ばれたもの中に組み込まれており、該装置を利用する方
    法が、分析しようとする全血試料を該第一のマトリック
    スに加え、ついで該選択された成分を分析するために少
    なくとも１つの化学的または免疫学的反応を行うことを
    特徴とするものである請求項（１）に記載の装置。
  7. 【請求項７】全血から血漿または血清を分離する方法で
    あって、 （ａ）請求項（１）に記載の装置の入り口に全血試料を
    加え、ついで （ｂ）該装置の出口から血漿または血清を回収する ことを特徴とする方法。
  8. 【請求項８】マトリックスの孔径および凝集剤の量およ
    び型が、該血液試料に含有される赤血球の少なくとも95
    ％が該マトリックスによって保持されるように選択され
    たものである請求項（７）に記載の方法。
  9. 【請求項９】マトリックスの入り口に加えた血液試料
    が、該マトリックスの出口と液体受容関係にあるフィル
    ター手段中を通過し、該フィルター手段は、該マトリッ
    クスを通過した血球を保持する機能を果たすものである
    請求項（７）に記載の方法。
  10. 【請求項１０】血漿または血清が、該第一のマトリック
    スと液体受容関係にある第二の親水性焼結物質のマトリ
    ックスにより回収され、溶離バッファーにより該第二の
    マトリックスから溶出される請求項（７）に記載の方
    法。
JP2092958A 1989-04-07 1990-04-07 全血からの血漿または血清の分離装置および方法 Expired - Fee Related JP2940990B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/335,064 US4933092A (en) 1989-04-07 1989-04-07 Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood
US335064 1989-04-07
US49992890A 1990-03-27 1990-03-27
US499928 1990-03-27
US07/499,864 US5064541A (en) 1989-04-07 1990-03-27 Devices and methods for the collection of a predetermined volume of plasma or serum
US499864 1990-03-27

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP10341703A Division JPH11230963A (ja) 1989-04-07 1998-12-01 血漿または血清試料の測定用装置

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH03205563A JPH03205563A (ja) 1991-09-09
JP2940990B2 true JP2940990B2 (ja) 1999-08-25

Family

ID=27407026

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2092958A Expired - Fee Related JP2940990B2 (ja) 1989-04-07 1990-04-07 全血からの血漿または血清の分離装置および方法
JP10341703A Pending JPH11230963A (ja) 1989-04-07 1998-12-01 血漿または血清試料の測定用装置
JP2000116527A Pending JP2000329761A (ja) 1989-04-07 2000-04-18 多孔質試薬放出システムおよびその製法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP10341703A Pending JPH11230963A (ja) 1989-04-07 1998-12-01 血漿または血清試料の測定用装置
JP2000116527A Pending JP2000329761A (ja) 1989-04-07 2000-04-18 多孔質試薬放出システムおよびその製法

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP0392377B1 (ja)
JP (3) JP2940990B2 (ja)
KR (1) KR910016365A (ja)
AT (1) ATE118615T1 (ja)
AU (1) AU630942B2 (ja)
CA (1) CA2014119C (ja)
DE (1) DE69016813T2 (ja)
ES (1) ES2070942T3 (ja)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GR1001410B (el) * 1991-08-02 1993-11-30 Ortho Pharma Corp Επινόημα & μέ?οδος διεξαγωγής βιολογικών δοκιμασιών περιέχοντας σύστημα μοριακής διαλογής.
FI940823A0 (fi) * 1994-02-22 1994-02-22 Orion Yhtymae Oy Analysatorkyvett foer turbidimetriska och nefelometriska bestaemningar av helblodsprov
GB9422504D0 (en) 1994-11-08 1995-01-04 Robertson Patricia M B Blood testing
WO1998040735A1 (fr) * 1997-03-12 1998-09-17 Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. Instrument d'analyse d'echantillon liquide
US6248542B1 (en) 1997-12-09 2001-06-19 Massachusetts Institute Of Technology Optoelectronic sensor
JP2000187032A (ja) * 1998-12-21 2000-07-04 Nagase & Co Ltd 血清分離方法及び装置
US7947236B2 (en) 1999-12-03 2011-05-24 Becton, Dickinson And Company Device for separating components of a fluid sample
JP3418374B2 (ja) * 2000-11-06 2003-06-23 株式会社いかがく 乾燥型試料搬送容器
US7422860B2 (en) 2001-02-07 2008-09-09 Massachusetts Institute Of Technology Optoelectronic detection system
US8216797B2 (en) 2001-02-07 2012-07-10 Massachusetts Institute Of Technology Pathogen detection biosensor
US7214346B2 (en) 2001-02-07 2007-05-08 Massachusetts Institute Of Technology Optoelectronic detection system
WO2003073095A1 (fr) * 2002-02-27 2003-09-04 Sanko Junyaku Co., Ltd. Instrument de separation de plasma ou de serum, procede de collecte de plasma ou de serum, procede de separation de plasma ou de serum, support d'essai et fibre de verre
WO2005012557A1 (ja) * 2003-08-04 2005-02-10 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. 赤血球採取方法及びソルビトール測定方法
FI20040825A0 (fi) 2004-06-15 2004-06-15 Ani Biotech Oy Suodatinväline, sen käyttö, menetelmä ja kitti
EP1782067A1 (en) * 2004-06-15 2007-05-09 Ani Biotech Oy Filter device, the method, kit and use thereof
US20080070308A1 (en) * 2004-06-28 2008-03-20 Thomas Ruhland Portous Article For Delivering Chemical Substances
JP4621862B2 (ja) * 2005-02-17 2011-01-26 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 化学センサ
AU2006350038B2 (en) * 2005-11-30 2011-09-15 Massachusetts Institute Of Technology Pathogen detection biosensor
US20100264099A1 (en) * 2007-11-26 2010-10-21 Atonomics A/S Separation device comprising a physical barrier
EP2227269B1 (en) * 2007-12-12 2021-04-28 Micropoint Bioscience Inc. Rapid and efficient filtering whole blood in a capillary flow device
CN102149473B (zh) 2008-07-21 2014-12-31 贝克顿·迪金森公司 密度相分离装置
PL3821980T3 (pl) 2009-05-15 2023-02-20 Becton, Dickinson And Company Urządzenie do rozdzielania faz gęstości
US9198609B2 (en) 2011-04-19 2015-12-01 Porex Corporation Cards for sample storage and delivery comprising sintered porous plastic
EP2721407B1 (en) * 2011-06-15 2017-09-20 Pfaff, Tim Plasma or serum separator
EP2751575B1 (en) * 2011-11-11 2018-09-12 Axis-Shield AS Blood sample assay method
WO2013147308A1 (ja) 2012-03-30 2013-10-03 積水メディカル株式会社 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法
US9885707B2 (en) 2012-03-30 2018-02-06 Sekisui Medical Co., Ltd. Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting object in red blood cell-containing sample
FR3012972A1 (fr) * 2013-11-14 2015-05-15 Biomerieux Sa Nouveau milieu filtrant pour l'obtention de plasma, dispositif et procede de filtration associes
WO2015085066A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 BacterioScan Inc. Optical measurement cuvette having sample chambers
US9694359B2 (en) 2014-11-13 2017-07-04 Becton, Dickinson And Company Mechanical separator for a biological fluid
CN110780066A (zh) 2014-12-16 2020-02-11 积水医疗株式会社 用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱
CN108473932B (zh) 2015-09-09 2022-07-15 集联健康有限公司 用于样品收集、稳定化和保存的系统、方法和装置
CN111220431A (zh) * 2016-10-26 2020-06-02 上海万承生物科技有限公司 一种检测血浆活性成分方法及应用该方法的血浆卡
TW202425920A (zh) 2017-01-10 2024-07-01 美商集聯健康有限公司 筒匣組裝件
JP7110360B2 (ja) 2017-10-09 2022-08-01 テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー 凍結乾燥方法
CN110018301B (zh) * 2018-01-09 2024-06-25 上海八通生物科技股份有限公司 一种组合式免疫层析装置
CN108872220B (zh) * 2018-07-11 2020-03-24 深圳华创生物医药科技有限公司 一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用
CN109529958A (zh) * 2018-12-14 2019-03-29 上海艾瑞德生物科技有限公司 全血过滤和血浆定量微流控芯片
JP7495426B2 (ja) 2019-03-14 2024-06-04 テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー 凍結乾燥容器用充填治具、システム及び使用方法
CN112569686B (zh) * 2019-09-30 2022-08-09 成都易态科技有限公司 复合多孔薄膜的制备方法
WO2021171378A1 (ja) * 2020-02-25 2021-09-02 Ｂｌｕｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ株式会社 分離装置、検出装置、保存装置及びセンサ
WO2021188594A1 (en) * 2020-03-18 2021-09-23 Drawbridge Health, Inc. Systems and methods for sample collection
WO2023154110A1 (en) * 2022-02-11 2023-08-17 Abbott Point Of Care Inc. Apparatus and devices for processing fluid samples

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4310430A (en) * 1979-09-11 1982-01-12 Terumo Corporation α-Olefin-dialkylmaleate-based liquid separating agent
DE3323973A1 (de) * 1983-07-02 1985-01-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Erythrozyten-rueckhaltesubstrate
DE3686474T2 (de) * 1985-10-11 1993-02-11 Abbott Lab Diagnostische probe.
US4753776A (en) * 1986-10-29 1988-06-28 Biotrack, Inc. Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter
DE3729001A1 (de) * 1987-08-31 1989-03-09 Behringwerke Ag Vorrichtung und verfahren zur abtrennung von blutzellen aus koerperfluessigkeiten, die erythrozyten enthalten, und deren verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
JP2000329761A (ja) 2000-11-30
AU630942B2 (en) 1992-11-12
EP0392377A2 (en) 1990-10-17
KR910016365A (ko) 1991-11-05
JPH11230963A (ja) 1999-08-27
EP0392377B1 (en) 1995-02-15
CA2014119A1 (en) 1990-10-07
DE69016813D1 (de) 1995-03-23
EP0392377A3 (en) 1990-11-22
CA2014119C (en) 2000-11-21
ES2070942T3 (es) 1995-06-16
DE69016813T2 (de) 1995-09-07
JPH03205563A (ja) 1991-09-09
ATE118615T1 (de) 1995-03-15
AU5306290A (en) 1990-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2940990B2 (ja) 全血からの血漿または血清の分離装置および方法
US5064541A (en) Devices and methods for the collection of a predetermined volume of plasma or serum
US4933092A (en) Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood
US4906439A (en) Biological diagnostic device and method of use
US4774192A (en) A dry reagent delivery system with membrane having porosity gradient
US4956302A (en) Lateral flow chromatographic binding assay device
US5296192A (en) Diagnostic test strip
US6106779A (en) Lysis chamber for use in an assay device
US5652148A (en) Method and apparatus for red blood cell separation
US7896167B2 (en) Blood separator and method of separating a fluid fraction from whole blood
JP4379588B2 (ja) 高密度リポタンパク質アッセイのデバイスおよび方法
EP0345781A2 (en) Defined volume test device
JP2011509404A (ja) 糖化ヘモグロビンの定量的測定のためのシステムおよびこれを用いた糖化ヘモグロビン含有量の測定方法
JPH0627738B2 (ja) 特異的結合アッセイ装置および方法
US4965187A (en) Method and apparatus for assaying whole blood
EP0373863A2 (en) Analytical test device
WO2001092886A1 (fr) Biocapteur et procede d'analyse de composantes du sang
US4939096A (en) Method and apparatus for assaying whole blood
EP0239174B1 (en) Biological diagnostic device
JPH03130662A (ja) 血液から血漿を分離するための装置と方法および血液中の分析対象物の測定法
JP3285451B2 (ja) 全血試料の分析方法および分析要素
WO1994012879A1 (en) Dry reagent three element analyte detection system
JP3722255B2 (ja) 血漿または血清分離フィルター
JP3569714B2 (ja) 全血対応分析要素
JPH0526875A (ja) 一体型多層分析要素

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Cancellation because of no payment of annual fees