JP2866872B2 - 血圧降下剤 - Google Patents
血圧降下剤Info
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- JP2866872B2 JP2866872B2 JP1059549A JP5954989A JP2866872B2 JP 2866872 B2 JP2866872 B2 JP 2866872B2 JP 1059549 A JP1059549 A JP 1059549A JP 5954989 A JP5954989 A JP 5954989A JP 2866872 B2 JP2866872 B2 JP 2866872B2
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- Japan
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- peptide
- leu
- val
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はトウモロコシタンパク質由来のオリゴペプチ
ドを有効成分として含有する血圧降下剤に関する。
ドを有効成分として含有する血圧降下剤に関する。
高血圧症の発症にはレニン−アンジオテンシン系が深
いかかわりを有していることがよく知られているが、こ
のレニン−アンジオテンシン系にはアンジオテンシン変
換酵素（EC3.4.15.1,以下ACEとも言う）が重要な役割を
果たしている。この場合ACEは、肝で分泌されるアンジ
オテンシノーゲンが腎で産生される酵素レニンにより分
解されたアンジオテンシンＩ（Asp−Arg−Val−Tyr−Il
e−His−Pro−Phe−His−Leu）に対して作用し、このも
のをアンジオテンシンII（Asp−Arg−Val−Tyr−Ile−H
is−Pro−Phe）に変換させる。そして、このアンジオテ
ンシンIIは血管壁平滑筋を収縮させて血圧を高め、さら
に副腎皮質に作用してアルドステロンの分泌を促進させ
るなどの作用を有する。また、血漿に存在する酵素カリ
クレインはキニノーゲンと呼ばれる蛋白質を分解し、血
管を拡張させ降圧させるブラジキニンを産生するが、こ
のブラジキニンはACEの作用により分解され、不活性化
されてしまう。このように、ACEは一方で昇圧性ペプチ
ド（アンジオテンシンII）を生じさせるとともに、他方
で降圧性ペプチド（ブラジキニン）を分解し、結果とし
て、血圧を上昇の方向に進める。したがってこの酵素活
性を抑制することによって血圧上昇を防ぐこと（降圧）
が可能である。
いかかわりを有していることがよく知られているが、こ
のレニン−アンジオテンシン系にはアンジオテンシン変
換酵素（EC3.4.15.1,以下ACEとも言う）が重要な役割を
果たしている。この場合ACEは、肝で分泌されるアンジ
オテンシノーゲンが腎で産生される酵素レニンにより分
解されたアンジオテンシンＩ（Asp−Arg−Val−Tyr−Il
e−His−Pro−Phe−His−Leu）に対して作用し、このも
のをアンジオテンシンII（Asp−Arg−Val−Tyr−Ile−H
is−Pro−Phe）に変換させる。そして、このアンジオテ
ンシンIIは血管壁平滑筋を収縮させて血圧を高め、さら
に副腎皮質に作用してアルドステロンの分泌を促進させ
るなどの作用を有する。また、血漿に存在する酵素カリ
クレインはキニノーゲンと呼ばれる蛋白質を分解し、血
管を拡張させ降圧させるブラジキニンを産生するが、こ
のブラジキニンはACEの作用により分解され、不活性化
されてしまう。このように、ACEは一方で昇圧性ペプチ
ド（アンジオテンシンII）を生じさせるとともに、他方
で降圧性ペプチド（ブラジキニン）を分解し、結果とし
て、血圧を上昇の方向に進める。したがってこの酵素活
性を抑制することによって血圧上昇を防ぐこと（降圧）
が可能である。
ACEの活性阻害物質としては蛇毒より得られた数種の
ペプチド性阻害剤を初めとして、カプトプリル（Ｄ−２
−メチル−３−メルカプトプロパノイルーＬ−プロリ
ン）などの合成物質が多数知られており、このうちカプ
トプリルは経口降圧剤として既に実用に供されている。
また、近年、微生物あるいは種々の食品中にもACE阻害
物質が見出され、降圧剤としての実用化が検討されてい
る（発酵と工業46（No.3）、179〜182（1988））。
ペプチド性阻害剤を初めとして、カプトプリル（Ｄ−２
−メチル−３−メルカプトプロパノイルーＬ−プロリ
ン）などの合成物質が多数知られており、このうちカプ
トプリルは経口降圧剤として既に実用に供されている。
また、近年、微生物あるいは種々の食品中にもACE阻害
物質が見出され、降圧剤としての実用化が検討されてい
る（発酵と工業46（No.3）、179〜182（1988））。
本出願人は本発明のオリゴペプチドと一部重複するオ
リゴペプチド及びそれを含有するACE阻害剤について出
願をした（特願昭63−185467、63−185468）。
リゴペプチド及びそれを含有するACE阻害剤について出
願をした（特願昭63−185467、63−185468）。
新規有用な血圧降下剤は常にもとめられており、技術
の豊富化をもたらすものである。
の豊富化をもたらすものである。
本発明の優れた血圧降下作用を有するオリゴペプチド
またはその酸付加塩を有効成分とする安全性が極めて高
い血圧降下剤を提供することを目的とする。
またはその酸付加塩を有効成分とする安全性が極めて高
い血圧降下剤を提供することを目的とする。
本発明の上記課題はトウモロコシタンパク質の一種で
あるγ−ゼインに由来するペプチドであるＬ−Leu−Ｌ
−Pro−Ｌ−Pho、Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Pro−Ｌ
−Proもしくはその酸付加塩、またはＬ−Val−Ｌ−His
−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Proもしくはその酸
付加塩を有効成分として含有する血圧降下剤によって達
成された。ここで酸付加塩は、製薬上許容される酸（無
機酸及び有機酸）付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸
塩、硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、マレイン酸
塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、
シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸
塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等を包含する。
あるγ−ゼインに由来するペプチドであるＬ−Leu−Ｌ
−Pro−Ｌ−Pho、Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Pro−Ｌ
−Proもしくはその酸付加塩、またはＬ−Val−Ｌ−His
−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Proもしくはその酸
付加塩を有効成分として含有する血圧降下剤によって達
成された。ここで酸付加塩は、製薬上許容される酸（無
機酸及び有機酸）付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸
塩、硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、マレイン酸
塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、
シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸
塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等を包含する。
本発明で用いるペプチドは主として有機化学的な合成
方法によりアミノ酸を段階的に導入する方法によって製
造される。また、加水分解酵素の逆反応を利用したペプ
チド合成法、遺伝子工学的方法、天然蛋白質の酵素加水
分解法等によっても製造することもできる。
方法によりアミノ酸を段階的に導入する方法によって製
造される。また、加水分解酵素の逆反応を利用したペプ
チド合成法、遺伝子工学的方法、天然蛋白質の酵素加水
分解法等によっても製造することもできる。
有機化学的合成法としては液相法、固相法の２種があ
り、前者ではBoc（ターシャリーブチルオキシカルボニ
ル）基などで保護したアミノ酸をDMF（ジメチルホルム
アミド）に溶解し、DCC（ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド）及びHOBt（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）
の存在下で一昼夜反応させ、カルボキシ末端側から順次
結合させる。また、後者ではアプライド・バイオシステ
ムズ社製ペプチド合成装置（430A型）などで、PAM（フ
ェニアセタミドメチル）樹脂にアミノ酸を順次伸長さ
せ、フッ化水素などにより樹脂及び各種保護基を切断
し、目的とするオリゴペプチドを得る。
り、前者ではBoc（ターシャリーブチルオキシカルボニ
ル）基などで保護したアミノ酸をDMF（ジメチルホルム
アミド）に溶解し、DCC（ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド）及びHOBt（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）
の存在下で一昼夜反応させ、カルボキシ末端側から順次
結合させる。また、後者ではアプライド・バイオシステ
ムズ社製ペプチド合成装置（430A型）などで、PAM（フ
ェニアセタミドメチル）樹脂にアミノ酸を順次伸長さ
せ、フッ化水素などにより樹脂及び各種保護基を切断
し、目的とするオリゴペプチドを得る。
本ペプチドの酸付加塩は常法により製造することがで
きる。
きる。
本ペプチド及びその酸付加塩は血圧降下作用を有し、
ヒトをはじめとする哺乳動物の高血圧症の治療、予防に
有効であると期待される。
ヒトをはじめとする哺乳動物の高血圧症の治療、予防に
有効であると期待される。
本ペプチド及びその酸付加塩はそのまま、または通常
少なくとも１つの製薬補助剤と製薬組成物にして使用す
る。
少なくとも１つの製薬補助剤と製薬組成物にして使用す
る。
本ペプチド及びその酸付加塩は非経口的（すなわち、
静脈注射、直腸投与等）または経口的に投与し、各投与
方法に適した形態に製剤することができる。
静脈注射、直腸投与等）または経口的に投与し、各投与
方法に適した形態に製剤することができる。
注射剤としての製剤形態は、通常滅菌水水溶液を包含
する。上記形態の製剤はまた緩衝剤pH調節剤（リン酸水
素ナトリウム、クエン酸等）、等張化剤（塩化ナトリウ
ム、グルコース等）、保存剤（パラオキシ安息香酸メチ
ル、Ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル等）等の水以外の
他の製薬補助剤を含有することができる。該製剤は細菌
保持フィルターを通す濾過、組成部への殺菌剤の混入、
組成物の照射や加熱によって滅菌することができる。該
製剤はまた殺菌固体組成物として製造し、用時滅菌水等
に溶解して使用することもできる。
する。上記形態の製剤はまた緩衝剤pH調節剤（リン酸水
素ナトリウム、クエン酸等）、等張化剤（塩化ナトリウ
ム、グルコース等）、保存剤（パラオキシ安息香酸メチ
ル、Ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル等）等の水以外の
他の製薬補助剤を含有することができる。該製剤は細菌
保持フィルターを通す濾過、組成部への殺菌剤の混入、
組成物の照射や加熱によって滅菌することができる。該
製剤はまた殺菌固体組成物として製造し、用時滅菌水等
に溶解して使用することもできる。
経口投与剤は胃腸器官による吸収に適した形に製剤す
る。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤は常用
の製薬補助剤、例えば結合剤（シロップ、アラビアゴ
ム、ゼラチン、ソルビット、トラガカント、ポリビニル
ピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）、賦形
剤（ラクトース、シュガー、コーンスターチ、リン酸カ
ルシウム、ソルビット、グリシン等）、滑沢剤（ステア
リン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコー
ル、シリカ等）、崩壊剤（ポテトスターチ、カルボキシ
メチルセルロース等）、湿潤剤（ラウリル硫酸ナトリウ
ム等）を包含することができる。錠剤は常法によりコー
ティングすることができる。経口液剤は水溶液等にした
り、ドライプロダクトにすることができる。そのような
経口液剤は常用の添加剤例えば保存剤（ｐ−ヒドロキシ
安息香酸メチルもしくはプロピル、ソルビン酸等）を包
含していてもよい。
る。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤は常用
の製薬補助剤、例えば結合剤（シロップ、アラビアゴ
ム、ゼラチン、ソルビット、トラガカント、ポリビニル
ピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）、賦形
剤（ラクトース、シュガー、コーンスターチ、リン酸カ
ルシウム、ソルビット、グリシン等）、滑沢剤（ステア
リン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコー
ル、シリカ等）、崩壊剤（ポテトスターチ、カルボキシ
メチルセルロース等）、湿潤剤（ラウリル硫酸ナトリウ
ム等）を包含することができる。錠剤は常法によりコー
ティングすることができる。経口液剤は水溶液等にした
り、ドライプロダクトにすることができる。そのような
経口液剤は常用の添加剤例えば保存剤（ｐ−ヒドロキシ
安息香酸メチルもしくはプロピル、ソルビン酸等）を包
含していてもよい。
本血圧降下剤中の本ペプチドまたはその酸付加塩の量
は種々かえることができるが、通常５〜100％（w/w）、
特に10〜60％（w/w）が適当である。本血圧降下剤の投
与量は有効成分して10〜200mg/kg/dayが適当である。な
お、本ペプチドの急性毒性はいずれもLD50（ICR系マウ
ス、経口投与）＞3g/kgである。
は種々かえることができるが、通常５〜100％（w/w）、
特に10〜60％（w/w）が適当である。本血圧降下剤の投
与量は有効成分して10〜200mg/kg/dayが適当である。な
お、本ペプチドの急性毒性はいずれもLD50（ICR系マウ
ス、経口投与）＞3g/kgである。
また、本ペプチドは多量に摂取しても生体に悪影響を
与えない利点を有することから、そのまま、または種々
の栄養分等を加えて、もしくは飲食品中に含有せしめて
血圧降下作用、高血圧予防の機能をもたせた機能性食
品、健康食品として食してもよい。すなわち、例えば各
種ビタミン類、ミネラル類等の栄養分を加えて、例えば
栄養ドリンク、豆乳、スープ等の液状の食品や各種形状
の固形食品、さらには粉末状としてそのままあるいは各
種食品へ添加して用いることもできる。かかる機能性食
品、健康食品としての本血圧降下剤中の有効成分の含有
量、摂取量はそれぞれ上記製薬における含有量、投与量
と同様でよい。
与えない利点を有することから、そのまま、または種々
の栄養分等を加えて、もしくは飲食品中に含有せしめて
血圧降下作用、高血圧予防の機能をもたせた機能性食
品、健康食品として食してもよい。すなわち、例えば各
種ビタミン類、ミネラル類等の栄養分を加えて、例えば
栄養ドリンク、豆乳、スープ等の液状の食品や各種形状
の固形食品、さらには粉末状としてそのままあるいは各
種食品へ添加して用いることもできる。かかる機能性食
品、健康食品としての本血圧降下剤中の有効成分の含有
量、摂取量はそれぞれ上記製薬における含有量、投与量
と同様でよい。
次に本発明を実施例により説明する。
実施例 １ Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ
−Proの合成 アプライド・バイオシステムズ社製ペプチド合成装置
（430A型）に0.5ミリモルのBoc−Ｌ−Pro−Ｏ−CH2−PA
M樹脂及び各２ミリモルのBoc−Ｌ−Pro、Boc−Ｌ−Le
u、Boc−Ｌ−His（Tos）、Boc−Ｌ−Valを装填し、DCC
による無水対称法により、Ｌ−Val−Ｌ−His（Tos）−
Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−OCH2PAMを合成した。な
お、Tosはトシル基を示す。次に、ペプチド研究所製フ
ッ化水素処理装置に上記合成ペプチド樹脂を導入し、ア
ニソール1.5mlを添加後、液体フッ化水素10mlを導入し
た。−20℃30分、０℃30分の反応後、フッ化水素を減圧
下に除去し、ペプチドを無水エーテル、クロロホルムで
交互に３回洗浄し、2N酢酸60mlにペプチドを溶解させ、
凍結乾燥した。この方法によりＬ−Val−Ｌ−His−Ｌ−
Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Proの白色粉末130mgを得た。
−Proの合成 アプライド・バイオシステムズ社製ペプチド合成装置
（430A型）に0.5ミリモルのBoc−Ｌ−Pro−Ｏ−CH2−PA
M樹脂及び各２ミリモルのBoc−Ｌ−Pro、Boc−Ｌ−Le
u、Boc−Ｌ−His（Tos）、Boc−Ｌ−Valを装填し、DCC
による無水対称法により、Ｌ−Val−Ｌ−His（Tos）−
Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−OCH2PAMを合成した。な
お、Tosはトシル基を示す。次に、ペプチド研究所製フ
ッ化水素処理装置に上記合成ペプチド樹脂を導入し、ア
ニソール1.5mlを添加後、液体フッ化水素10mlを導入し
た。−20℃30分、０℃30分の反応後、フッ化水素を減圧
下に除去し、ペプチドを無水エーテル、クロロホルムで
交互に３回洗浄し、2N酢酸60mlにペプチドを溶解させ、
凍結乾燥した。この方法によりＬ−Val−Ｌ−His−Ｌ−
Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Proの白色粉末130mgを得た。
本ペプチドはHPLC（高速液体クロマトグラフィー）で
溶出時間1.8分の位置に単一のピークを示した。HPLCの
溶出条件を下記に示す。
溶出時間1.8分の位置に単一のピークを示した。HPLCの
溶出条件を下記に示す。
カラム：ウォーターズ社製ラジアルバックカートリッジ
C8 溶出液：燐酸緩衝液（10mMKH2PO4,50mMNa2SO4,pH2.
5）：アセトニトリル＝4:6 流 速:2ml/min 検 出:210nmの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
C8 溶出液：燐酸緩衝液（10mMKH2PO4,50mMNa2SO4,pH2.
5）：アセトニトリル＝4:6 流 速:2ml/min 検 出:210nmの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
アミノ酸分析:Val（1.00）,His（0.97）,Leu（1.18）,P
ro（1.95） （）はValを１としたモル比。
ro（1.95） （）はValを１としたモル比。
分析は6N塩酸110℃24時間の加水分解後行った。
比施光度：▲〔α〕25 D▼＝−155゜（Ｃ＝0.34,H2O） 質量分析:562（Ｍ＋１）＋ 日本電子Ｈ×110,FAB−MSにて測定 実施例 ２ Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Proの合成 アプライド・バイオシステムズ社製ペプチド合成装置
（430A型）に0.5ミリモルのBoc−Ｌ−Pro−Ｏ−CH2−PA
M樹脂及び各２ミリモルのBoc−Ｌ−Pro、Boc−Ｌ−Leu
を装填し、DCCによる無水対称法により、Ｌ−Leu−Ｌ−
Pro−Ｌ−Pro−OCH2PAMを合成した。次に、ペプチド研
究所製フッ化水素処理装置に上記合成ペプチド樹脂を導
入し、アニソール1.5mlを添加後、液体フッ化水素10ml
を導入した。−20℃30分、０℃30分の反応後、フッ化水
素を減圧下に除去し、ペプチドを無水エーテル、クロロ
ホルムで交互に３回洗浄し、2N酢酸60mlにペプチドを溶
解させ、凍結乾燥した。この方法によりＬ−Leu−Ｌ−P
ro−Ｌ−Proの白色粉末90mgを得た。
（430A型）に0.5ミリモルのBoc−Ｌ−Pro−Ｏ−CH2−PA
M樹脂及び各２ミリモルのBoc−Ｌ−Pro、Boc−Ｌ−Leu
を装填し、DCCによる無水対称法により、Ｌ−Leu−Ｌ−
Pro−Ｌ−Pro−OCH2PAMを合成した。次に、ペプチド研
究所製フッ化水素処理装置に上記合成ペプチド樹脂を導
入し、アニソール1.5mlを添加後、液体フッ化水素10ml
を導入した。−20℃30分、０℃30分の反応後、フッ化水
素を減圧下に除去し、ペプチドを無水エーテル、クロロ
ホルムで交互に３回洗浄し、2N酢酸60mlにペプチドを溶
解させ、凍結乾燥した。この方法によりＬ−Leu−Ｌ−P
ro−Ｌ−Proの白色粉末90mgを得た。
本ペプチドはHPLC（高速液体クロマトグラフィー）で
溶出時間1.8分の位置に単一のピークを示した。HPLCの
溶出条件を下記に示す。
溶出時間1.8分の位置に単一のピークを示した。HPLCの
溶出条件を下記に示す。
カラム：ウォーターズ社製ラジアルバックカートリッジ
C18 溶出液：燐酸緩衝液（10mMKH2PO4,50mMNa2SO4,pH2.
5）：アセトニトリル＝4:6 流 速:2ml/min 検 出:210nmの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
C18 溶出液：燐酸緩衝液（10mMKH2PO4,50mMNa2SO4,pH2.
5）：アセトニトリル＝4:6 流 速:2ml/min 検 出:210nmの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
アミノ酸分析:Leu（1.00）,Pro（1.92） 分析は6N塩酸110℃24時間の加水分解後行った。
比施光度：▲〔α〕25 D▼＝−165゜（Ｃ＝0.2） 質量分析:326（Ｍ＋Ｈ）＋ 日本電子Ｈ×110,FAB−MSにて測定 実施例 ３ Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ
−Pro−Ｌ−Proの合成 アプライド・バイオシステムズ社製ペプチド合成装置
（430A型）に0.5ミリモルのBoc−Ｌ−Pro−Ｏ−CH2−PA
M樹脂及び各２ミリモルのBoc−Ｌ−Pro、Boc−Ｌ−Pr
o、Boc−Ｌ−Leu、Boc−Ｌ−His（Tos）、Boc−Ｌ−Val
を装填し、DCCによる無水対称法により、Ｌ−Val−Ｌ−
His（Tos）−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−OC
H2PAMを合成した。なお、Tosはトシル基を示す。次に、
ペプチド研究所製フッ化水素処理装置に上記合成ペプチ
ド樹脂を導入し、アニソール1.5mlを添加後、液体フッ
化水素10mlを導入した。−20℃30分、０℃30分の反応
後、フッ化水素を減圧下に除去し、ペプチドを無水エー
テル、クロロホルムで交互に３回洗浄し、2N酢酸60mlに
ペプチドを溶解させ、凍結乾燥した。この方法によりＬ
−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro
の白色粉末189mgを得た。
−Pro−Ｌ−Proの合成 アプライド・バイオシステムズ社製ペプチド合成装置
（430A型）に0.5ミリモルのBoc−Ｌ−Pro−Ｏ−CH2−PA
M樹脂及び各２ミリモルのBoc−Ｌ−Pro、Boc−Ｌ−Pr
o、Boc−Ｌ−Leu、Boc−Ｌ−His（Tos）、Boc−Ｌ−Val
を装填し、DCCによる無水対称法により、Ｌ−Val−Ｌ−
His（Tos）−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−OC
H2PAMを合成した。なお、Tosはトシル基を示す。次に、
ペプチド研究所製フッ化水素処理装置に上記合成ペプチ
ド樹脂を導入し、アニソール1.5mlを添加後、液体フッ
化水素10mlを導入した。−20℃30分、０℃30分の反応
後、フッ化水素を減圧下に除去し、ペプチドを無水エー
テル、クロロホルムで交互に３回洗浄し、2N酢酸60mlに
ペプチドを溶解させ、凍結乾燥した。この方法によりＬ
−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro
の白色粉末189mgを得た。
本ペプチドはHPLC（高速液体クロマトグラフィー）で
溶出時間1.9分の位置に単一のピークを示した。HPLCの
溶出条件を下記に示す。
溶出時間1.9分の位置に単一のピークを示した。HPLCの
溶出条件を下記に示す。
カラム：ウォーターズ社製ラジアルバックカートリッジ
C8 溶出液：燐酸緩衝液（10mMKH2PO4,50mMNa2SO4,pH2.
5）：アセトニトリル＝4:6 流 速:2ml/min 検 出:210nmの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
C8 溶出液：燐酸緩衝液（10mMKH2PO4,50mMNa2SO4,pH2.
5）：アセトニトリル＝4:6 流 速:2ml/min 検 出:210nmの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
アミノ酸分析:Val（1.00）,His（0.98）,Leu（1.04）,P
ro（3.11） 分析は6N塩酸110℃24時間の加水分解後行った。
ro（3.11） 分析は6N塩酸110℃24時間の加水分解後行った。
比施光度：▲〔α〕25 D▼＝−192゜（Ｃ＝0.4） 質量分析:659（Ｍ＋Ｈ）＋ 日本電子Ｈ×110,FAB−MSにて測定 実施例 ４ 合成ペプチドの腹腔内投与による血圧降下
作用 試料として実施例２及び３で得られたペプチド及び実
験動物として10週令の雄性自然発症高血圧ラット（SH
R、日本ラット（株））を１群５匹として用いた。各ペ
プチドを生理食塩水に溶解し、投与量がＬ−Leu−Ｌ−P
ro−Ｌ−Pro 80mg/kg体重、Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu
−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro 120mg/kg体重となるよう
腹腔内に投与した。投与直前及び投与１、３、５、７時
間後の血圧を非観血血圧計TK−350（ユニコム社製）を
用いてテイルカッフ（Tail−Cuff）法により測定した。
対照としてSHRに同様に生理食塩水を投与し血圧を測定
した。
作用 試料として実施例２及び３で得られたペプチド及び実
験動物として10週令の雄性自然発症高血圧ラット（SH
R、日本ラット（株））を１群５匹として用いた。各ペ
プチドを生理食塩水に溶解し、投与量がＬ−Leu−Ｌ−P
ro−Ｌ−Pro 80mg/kg体重、Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu
−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro 120mg/kg体重となるよう
腹腔内に投与した。投与直前及び投与１、３、５、７時
間後の血圧を非観血血圧計TK−350（ユニコム社製）を
用いてテイルカッフ（Tail−Cuff）法により測定した。
対照としてSHRに同様に生理食塩水を投与し血圧を測定
した。
測定された最大血圧を表１に示す。Ｌ−Leu−Ｌ−Pro
−Ｌ−Pro及びＬ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−
Ｌ−Pro−Ｌ−Proは投与１時間後に顕著な血圧降下作用
を示し、その降下は７時間後もなお持続していた。
−Ｌ−Pro及びＬ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−
Ｌ−Pro−Ｌ−Proは投与１時間後に顕著な血圧降下作用
を示し、その降下は７時間後もなお持続していた。
なお、本出願人による特願昭63−185468によるとＬ−
Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Proの
ACE阻害活性は極めて低かったので、本動物実験におけ
る該ペプチドの顕著な血圧降下作用は予期せざる事実で
あった。
Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ−Proの
ACE阻害活性は極めて低かったので、本動物実験におけ
る該ペプチドの顕著な血圧降下作用は予期せざる事実で
あった。
実施例 ５ Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ
−Proの血圧降下作用 体重200gのWistar系雄性ラット（日本ラット（株）、
１群６〜８匹）をウレタン1.5g/kg腹腔内投与により麻
酔し、常法に従って総頚動脈圧をトランスデューサー
（SKU−590,日本光電（株））を介して連続的に記録し
た。下褪静脈より、生理食塩水に溶解したＬ−Val−Ｌ
−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Proを投与し、その５、
15及び35分後にアンジオテンシンＩ（ヒト配列、シグマ
社）100 ng/kgを繰り返し投与して、前後の最高血圧及
び平均血圧の変化を測定した。対照としては生理食塩水
を投与したものを用いた。結果を表２に示す。
−Proの血圧降下作用 体重200gのWistar系雄性ラット（日本ラット（株）、
１群６〜８匹）をウレタン1.5g/kg腹腔内投与により麻
酔し、常法に従って総頚動脈圧をトランスデューサー
（SKU−590,日本光電（株））を介して連続的に記録し
た。下褪静脈より、生理食塩水に溶解したＬ−Val−Ｌ
−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Proを投与し、その５、
15及び35分後にアンジオテンシンＩ（ヒト配列、シグマ
社）100 ng/kgを繰り返し投与して、前後の最高血圧及
び平均血圧の変化を測定した。対照としては生理食塩水
を投与したものを用いた。結果を表２に示す。
表２から明らかなごとく本ペプチドは投与５分後のア
ンジオテンシンＩによる昇圧を効果的に抑制し、その作
用は35分後にもなお持続していた。
ンジオテンシンＩによる昇圧を効果的に抑制し、その作
用は35分後にもなお持続していた。
実施例 ６ 静脈注射剤 Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Proを20〜100倍（容量／重
量）の滅菌生理食塩水に溶解し、無菌的フィルター（孔
径0.45μｍ）で濾過した濾液を注射剤とする。
量）の滅菌生理食塩水に溶解し、無菌的フィルター（孔
径0.45μｍ）で濾過した濾液を注射剤とする。
実施例 ７ 錠剤 Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ−Pro−Ｌ
−Pro ７部 ヒドロキシプロピルセルロース １部 ラクトース 10.9部 ポテトスターチ １部 ステアリン酸マグネシウム 0.1部 ヒドロキシプロピルセルロース１部を含む60％エタノ
ール水溶液20部を調製し、本ペプチド７部およびラクト
ース10.9部を加えて充分に混練した後、減圧下で乾燥
し、得られた乾燥物にポテトスターチ１部およびステア
リン酸マグネシウム0.1部を加えて混和し、打錠機によ
り製錠する。
−Pro ７部 ヒドロキシプロピルセルロース １部 ラクトース 10.9部 ポテトスターチ １部 ステアリン酸マグネシウム 0.1部 ヒドロキシプロピルセルロース１部を含む60％エタノ
ール水溶液20部を調製し、本ペプチド７部およびラクト
ース10.9部を加えて充分に混練した後、減圧下で乾燥
し、得られた乾燥物にポテトスターチ１部およびステア
リン酸マグネシウム0.1部を加えて混和し、打錠機によ
り製錠する。
なお、上記で部は重量部で表す。
トウモロコシタンパク質のγ−ゼイン由来の特定オリ
ゴペプチドを含有する血圧効果剤が提供される。
ゴペプチドを含有する血圧効果剤が提供される。
フロントページの続き (72)発明者 福井 史生 千葉県成田市中台１丁目２番117号 審査官 田村 聖子 (56)参考文献 特開 平２−36127（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−141997（ＪＰ，Ａ) 特許2626682（ＪＰ，Ｂ２) 丸山進ほか「トウモロコシ蛋白質から のレニン・アンジオテンシン系酵素阻害 ペプチドの生産について」日本▲醗酵▼ 工学会大会講演要旨集昭和63年10月. ｐ．23 ＭＡＲＵＹＡＭＡ，Ｓ．ｅｔ ａ ｌ．，Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｉ−Ｃ ｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉ ｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｄｅｒｉｖｅｄ ｆ ｒｏｍ ａｎ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｈ ｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ ｏｆ Ｃａｓｅ ｉｎ．▲ＩＩ▼．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ−ｐｏｔ ｅｎｔｉａｔｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｕｔｅｒｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｌｅｕｍ ｏｆ Ｒａｔ ｓ，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ ｍ．，1985，49（５），ｐｐ．1405− 1409 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 38/04 - 38/09 C07K 5/00 - 7/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】Ｌ−Val−Ｌ−His−Ｌ−Leu−Ｌ−Pro−Ｌ
−Pro−Ｌ−Proもしくはその酸付加塩を有効成分として
含有する血圧降下剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1059549A JP2866872B2 (ja) | 1989-03-14 | 1989-03-14 | 血圧降下剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1059549A JP2866872B2 (ja) | 1989-03-14 | 1989-03-14 | 血圧降下剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02240027A JPH02240027A (ja) | 1990-09-25 |
| JP2866872B2 true JP2866872B2 (ja) | 1999-03-08 |
Family
ID=13116449
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1059549A Expired - Lifetime JP2866872B2 (ja) | 1989-03-14 | 1989-03-14 | 血圧降下剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2866872B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2121842A1 (en) * | 1991-11-12 | 1993-05-27 | John W. Shultz | Non-radioactive enzyme assay |
-
1989
- 1989-03-14 JP JP1059549A patent/JP2866872B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ＭＡＲＵＹＡＭＡ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｉ−Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ ｏｆ Ｃａｓｅｉｎ．▲ＩＩ▼．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ−ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｕｔｅｒｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｌｅｕｍ ｏｆ Ｒａｔｓ，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９８５，４９（５），ｐｐ．１４０５−１４０９ |
| 丸山進ほか「トウモロコシ蛋白質からのレニン・アンジオテンシン系酵素阻害ペプチドの生産について」日本▲醗酵▼工学会大会講演要旨集昭和６３年１０月．ｐ．２３ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02240027A (ja) | 1990-09-25 |
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