JP2850259B2 - 心房の，ナトリウム排出亢進性ペプチドの環式アナログ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、心臓血管系の代謝調節の分野に関する。特
に、ナトリウム排出亢進作用、利尿作用および／あるい
は血管弛緩作用のある化合物のクラスに向けられてい
る。

背景技術 1987年５月７日に公開され、参考のためにここに挙げ
られている本出願人のPCT交開公報WO87/02674には、心
房組織中に発見され、心臓血管系においてテンションを
調節するペプチドに類似する血管に作用するペプチドの
クラスを開示する。これらの化合物は、天然の心房の環
式ナトリウム排出亢進性ペプチド（ANP）の合成環式お
よび合成直鎖アナログである。ナトリウム排出亢進、利
尿および／あるいは血管弛緩作用に役立つ特定のクラス
の環式および直鎖ペプチドの他に、公開公報には、前記
のペプチドを合成し、インビボで塩と水のバランスおよ
び心臓血管のテンションを調節する能力を評価する方法
が開示されている。

公開公報で開示されている様に、心房のペプチドの直
鎖型は合成され得る。その場合、Ｎ末端は、本来、一般
式に疎水性の非ペプチド基で補われる（前記出願の実施
例306および307には、この様なアナログを合成する方法
が説明されている）。

更に、公開公報には、簡単なインビトロ試験で、イン
ビボで心臓血管の調節剤として機能する被試験化合物の
能力を予測し得る、生物学的アッセイが開示されてい
る。培養されたBASM細胞もしくBAE細胞に結合されるた
めの天然のANPとの競合を使用したレセプター結合アッ
セイは、麻酔されたラットおよび犬における哺乳動物の
全身を用いたアッセイの結果との、相関関係が示され
た。単離した組織アッセイでは、それらの化合物は、イ
ンビボでは活性であったが、一般に活性ではなかった
（例えば、単離した灌流したラットの腎臓）。それにも
かかわらず、これらの単離された組織中の天然ANPの効
果を増強することは可能であった。出願人が特定の理論
に縛られるわけではないが、インビボおよびインビトロ
両方でのアッセイの結果から、本発明の合成アナログ
は、天然のANPのクリアランスレセプターの結合によ
り、少なくともいくぶんかは、効果的であり得る。

公開された出願の実験結果は、参考のためにここに引
用され、編入されている。

発明の開示 本発明の合成アナログ化合物の大部分は、アミノ酸残
基のコアペンタペプチド配列を保持する。この配列は、
Nature（1984）309:717−719のAtlasらの同定システム
を用いて、天然ANPの配列AA₈−AA₁₂に対応する。ここ
で、アミノ末端アルギニン残基は、ポジション１にあ
る。既知の天然ANPでは、このコア配列は、ラットにお
いてはRIDRIであり、人においてはRMDRIである。この配
列のある種の確定された交換は、AA₁₂が存在しない場合
を含めて、インビボでの活性を保持し、コアペプチド構
造がペプチドの生物学的活性の重要な要素であることを
示す。しかしながら、ここで説明した様に、これらの化
合物の多数は、利尿もしくはナトリウム排出亢進性活性
のアッセイのインビトロ組織モデル系では、活性ではな
い。これらのアナログは、ペプチドのクリアランスレセ
プターを保護すること、内的なANPの機能を増強するよ
うである。

従って、１つの局面において、本発明は、哺乳類にお
いてナトリウム排出亢進作用、利尿作用および／あるい
は血管弛緩作用を有するペプチド化合物に向けられてお
り、該ペプチド化合物は次式を有する： X₁A_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃A_zX₄ （１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、塩基性／非
環式の；中性／無極性／小型の；あるいは中性／極性／
大型／非芳香族のアミノ酸残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、共有結合であり； AA_yおよびAA_zは，共に架橋結合を形成するアミノ酸残
基であり，該結合はジスルフィド結合，メチレン結合，
スルフィド／メチレン結合，アミド結合およびエステル
結合からなる群から選択され； X₁は,H,1から125のアミノ酸残基のペプチド，または
それらのdesNH₂形，あるいは,6から20の炭素原子の疎水
性脂肪族，芳香族，または混合脂肪族／芳香族有機基で
あり； X₂は，AA₈のアミノ基およびX₁AA_yX₂において発生する
疎水性部の間の距離が，達成可能な立体配座において約
4.5および15Åの間である場合は，結合または１から10
の残基のペプチドであり； X₃は，結合または１から10の残基のペプチドであり，
そして X₄は、OH、NH₂、NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここ
でＲ′，およびＲ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１
〜10のＣ）であり、ここで、１または２個の非隣接Ｃは
Ｎ、ＯもしくはＳで置き換えられ得、あるいはX₄は、そ
のＣ−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態を
有する１から20残基のペプチドであり；あるいは、Ｃ−
末端カルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在
せず； 全環の大きさは,5から15のアルファ−アミノ酸によっ
て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
形成されることによって得られるものと同等である。

もう１つの局面において，本発明は哺乳類において、
ナトリウム排出亢進作用、利尿作用および／あるいは血
管弛緩作用を有するペプチド化合物に向けられており、
該ペプチド化合物は次式を有する： X₁A_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃A_zX₄ （１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して塩基性／非環
式の；中性／無極性／小型の；あるいは中性／極性／大
型／非芳香族のアミノ酸残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族のアミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族のアミノ酸残基または共有結合であり； AA_yおよびAA_zは，共に架橋結合を形成するアミノ酸残
基であり，該結合はジスルフィド結合，メチレン結合，
スルフィド／メチレン結合，アミド結合およびエステル
結合からなる群から選択され； X₁は遺伝子でコードされたアミノ酸またはそのＤ型を
除く６から20の炭素原子の，疎水性脂肪族，芳香族，ま
たは混合脂肪族／芳香族有機基であり； X₂は，AA₈のアミノ基およびX₁AA_yX₂において発生する
疎水性部の間の距離が，達成可能な立体配座において約
4.5おび15Åの間である場合は，結合または１から10の
残基のペプチドであり； X₃は，結合または１から10の残基のペプチドであり，
そして X₄は、OH、NH₂,NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここ
でＲ′およびＲ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１〜
10のＣ）であり、ここで、１または２個の非隣接Ｃは
Ｎ、ＯもしくはＳで置き換えられ得、あるいは、X₄は，
そのＣ−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態
を有する１から20残基のペプチドであり；あるいは,C−
末端カルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在
せず； 全環の大きさは,5から15のアルファ−アミノ酸によっ
て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
形成されることによって得られるものと同等である。

もう１つの局面において，本発明は哺乳類において、
ナトリウム排出亢進作用、利尿作用および／あるいは血
管弛緩作用を有するペプチド化合物に向けられており、
該ペプチド化合物は次式を有する： X₁A_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃A_zX₄ （１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、塩基性／非
環式の；中性／無極性／小型の；あるいは中性／極性／
大型／非芳香族のアミノ酸残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族のアミノ酸残基または共有結合であり； AA_yおよびAA_zは，共に架橋結合を形成するアミノ酸残
基であり，該結合はアミド結合およびエステル結合から
なる群から選択され； X₁は,H,1から125のアミノ酸残基のペプチド，または
それらのdesNH₂形，あるいは,6から20の炭素原子の疎水
性脂肪族，芳香族，または混合脂肪族／芳香族有機基で
あり； X₂は，AA₈のアミノ基およびX₁AA_yX₂において発生する
疎水性部の間の距離が，達成可能な立体配座において約
4.5おび15Åの間である場合は，結合または１から10の
残基のペプチドであり； X₃は，結合または１から10の残基のペプチドであり，
そして X₄は、OH、NH₂,NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここ
でＲ′，および、Ｒ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル
（１〜10のＣ）であり、ここで、１または２個の非隣接
ＣはＮ、ＯもしくはＳで置き換えられ得、あるいは、X₄
は，そのＣ−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド
形態を有する１から20残基のペプチドであり；あるい
は,C−末端カルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄
は存在せず； 全環の大きさは,5から15のアルファ−アミノ酸によっ
て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
形成されるとによって得られるものと同等である。

もう１つの局面において，本発明は哺乳類において、
ナトリウム排出亢進作用、利尿作用および／あるいは血
管弛緩作用を有するペプチド化合物に向けられており、
該ペプチド化合物は次式を有する： X₁A_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃A_zX₄ （１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、塩基性／非
環式の；中性／無極性／小型の；あるいは中性／極性／
大型／非芳香族のアミノ酸残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、ＤまたはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族のアミノ酸残基または共有結合であり； AA_yおよびAA_zは，共に架橋結合を形成するアミノ酸残
基であり，該結合はジスルフィド結合，メチレン結合，
スルフィド／メチレン結合，アミド結合およびエステル
結合からなる群から選択され； X₁は,H,1から125のアミノ酸残基またはペプチド，ま
たはそれらのdesNH₂形，あるいは,6から20の炭素原子の
疎水性脂肪族，芳香族，または混合脂肪族／芳香族有機
基であり； X₂は，AA₈のアミノ基およびX₁AA_yX₂において発生する
疎水性部の間の距離が，達成可能な立体配座において約
4.5おび15Åの間である場合は，結合または１から10の
残基のペプチドであり； X₃は，結合または１から10の残基のペプチドであり，
そして X₄は、OH、NH₂,NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここ
でＲ′、Ｒ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１〜10の
Ｃ）であり、ここで、１または２個の非隣接ＣはＮ、Ｏ
もしくはＳで置き換えられ得、あるいは、X₄は，そのＣ
−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態を有す
る１から20残基のペプチドであり；あるいは,C−末端カ
ルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在せず； 全環の大きさは,5から15のアルファ−アミノ酸によっ
て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
形成されることによって得られるものと同等であり； 隣接するアミノ酸残基の間の１つもしくはそれ以上の
アミド結合は，−CH₂NH−，−CH₂−Ｓ−，−CH₂CH₂−，
−CH＝CH−，−COCH₂−，−CH(OH)CH₂−および−CH₂SO
−からなる群から選択される結合によって置き換えら
れ、A₁₂が結合でない場合，X₂はトリペプチドであると
いう条件で，X₃はヘプタペプチドではない。

本発明の全ての様々な面のペプチド中で、１もしくは
２個のアミノ酸残基は、AA₉、および適用出来るならばA
A₁₂に加えて、もしくはその代わりに、対応するＤ異性
体によって置き換えられ得る。

本発明はまた、マトリウム排出亢進薬、利尿薬、血管
拡張神経薬および／もしくはレニン−アンギオテンシン
−アルドステロン系のモジュレーターとして役立つ薬剤
合成物に向けられている。その組成物は、上記で列挙し
たアナログペプチド化合物を含有し、それらのアミドお
よびエステルとそれらの無毒の添加塩と共に薬剤的に許
容し得る液体、ゲル、もしくは固体担体を含む。前記合
成物の治療上効果的な量の投与は、哺乳類のホストへ上
記に列挙した生物学的活性を効果的に供給し得る。

本発明の更なる面は、この様な化合物および合成物の
製造方法および治療薬としてその化合物および合成物を
使用する方法を提供することである。

図面の簡単な説明 第１図は、ここに用いられるアミノ酸の分類を概説す
る概略図。

第２図は、本発明の様々な化合物のリストである。

第３図は、本発明の化合物に類似しているが、その範
囲外である様々な化合物のリストである。

発明を実施するための形態 本発明により，心房ナトリウム排出亢進作用を有する
天然ペプチド（ANP）化合物の新規なアナログが提供さ
れる。これらのアナログは，インビボにおいて哺乳類の
上記天然ペプチドのナトリウム排出作用，利尿作用およ
び／または血管弛緩作用を示し，もしくはこれらの作用
を調節することができる。

コアペンタペプチドを含む，本発明の，合成による上
記アナログ化合物のアミノ酸残基の配列，およびその好
ましい態様は，特定のサブクラスの，ある特徴と有する
アミノ酸によって定義される。

アミノ酸残基は一般に，以下に述べるとともに第１図
に示す４つの主要サブクラスに分けることができる。

酸性：この残基は生理的pHにおいて水素イオンを失う
ための負の電荷を有し，その残基は，ペプチドが生理的
pHの水性媒体中に存在するとき，この残基が含有される
ペプチドの配座中の表面位置を求めて，水溶液に吸引さ
れる。

塩基性：この残基は生理的pHにおいて水素イオンと結
合するので正の電荷を有し，その残基は，ペプチドが生
理的pHの水性媒体中に存在するとき，この残基が含有さ
れるペプチドの配座中の表面位置を求めて水溶液に吸引
される。

中性／無極性：この残基は生理的pHにおいて電荷をも
たず，この残基は，ペプチドが水性媒体中に存在すると
き，この残基が含有されるペプチドの配座中の内部位置
を求めて，水溶液に反発される。またこれらの残基は，
本明細書においては“疎水性”とも呼ばれる。

中性／極性：この残基は生理的pHにおいて電荷をもた
ないが，この残基は，ペプチドが水性媒体中に存在する
とき，この残基が含有されるペプチドの配座中の外部位
置を求めて水溶液に吸引される。

個々の残基の分子の統計的コレクションでは，いくつ
かの分子は電荷を有し，いくつかは電荷をもっていな
い。従って，大なり小なり，水性媒体の吸引もしくは反
発があることは勿論明らかである。“電荷を有する”と
いう定義に適合するには，有意の割合（少なくとも約25
％）の個々の分子が生理的pHで電荷を持っていることが
必要である。極性もしくは無極性としての分類するのに
必要な吸引もしくは反発の程度は任意的なものであるか
ら，本発明の特定のアミノ酸は，それぞれ特定して分類
されている。特定の名称がないアミノ酸のほとんどのも
のは，公知の挙動に基づいて分類することができる。

アミノ酸残基は，さらに，残基の側鎖の置換基につい
ての，環式もしくは非環式，および芳香族もしくは非芳
香族の自明な分類，ならにび小型もしくは大型という分
類にサブクラス分類することができる。残基は，カルボ
キシル基の炭素原子を含めて合計４個以下の炭素原子し
かない場合，小型とみなしている。小さな残基は，もち
ろん常に非芳香族である。

天然に存在するタンパクのアミノ酸について，先のス
キームによるサブクラス分類は次のとおりである（第１
図もまた参照のこと）。

酸性：アスパラギン酸およびグルタミン酸； 塩基性／非環式：アルギニン，リジン； 塩基性／環式：ヒスチジン； 中性／極性／小型：グリシン，セリンおよびシステイ
ン； 中性／極性／大型／非芳香族：トレオニン，アスパラ
ギン，グルタミン； 中性／極性／大型／芳香族：チロシン； 中性／無極性／小型：アラニン； 中性／無極性／大型／非芳香族：バリン，イソロイシ
ン，ロイシン，メチオニン； 中性／無極性／大型／芳香族：フェニルアラニンおよ
びトリプトファン。

遺伝子がコードするアミノ酸のプロリンは，技術的に
は中性／無極性／大型／環式および非芳香族の群に含ま
れる，ペプチド鎖の二次立体配座に基づいた公知の影響
による特別なケースなので，上記定義の群には含まれな
い。

普通に遭遇するいくつかのアミノ酸で，遺伝コードで
コードされていないものがあり，それには，例えば次の
アミノ酸が含まれる：β−アラニン（β−ala），また
はその他のω−アミノ酸類〔例えば３−アミノプロピオ
ン酸（３−amino proprionic acid）,4−アミノ酪酸な
ど〕，α−アミノイソ酪酸（Aib），サルコシン（Sa
r），オルニチン（Orn），シトルリン（Cit）,t−ブチ
ルアラニン（ｔ−BuA）,t−ブチルグリシン（ｔ−Bu
G）,N−メチルイソロイシン（Ｎ−Melle），フェニルグ
リシン（Phg），およびシクロヘキシルアラニン（Ch
a），ノルロイシン（Nle），システイン酸（Cya），お
よびメチオニンスルホキシド（MSO）。これらのアミノ
酸は特定の区分に入れるのが便利である。

上記定義に基づいて， Sarおよびβ−alaは中性／無極性／小型； ｔ−BuA,t−BuG,N−Melle,NleおよびChaは中性／無極
性／大型／非芳香族； Ornは塩基性／非環式； Cyaは酸性； Cit,アセチルLysおよびMSOは中性／極性／大型／非芳
香族；ならびに Phgは中性／無極性／大型／芳香族である（第１図参
照）。

種々のω−アミノ酸は，その大きさによって，中性／
無極性／小型アミノ酸として（β−アラニンすなわち３
−アミノプロピオン酸,4−アミノ酪酸）または大型アミ
ノ酸といて（残り全部）分類される。

遺伝子内にコードされているその他のアミノ酸置換体
も，この発明の範囲内のペプチド化合物に含まれ，この
一般のスキームに分類することができる。

この発明のANPアナログ化合物を述べるのに用いる命
名法は，アミノ基が，ペプチドの各アミノ酸の左に位置
し，カルボキシル基が右に位置すると仮定するという従
来の慣行に従っている。本発明の選択された特定の態様
を示す式においては，アミノ末端基およびカルボキシ末
端基は，具体的に示さない場合が多いが，特に指示のな
い限り，生理的pH値においてとる形態であると理解され
る。従って，生理的pHにおけるＮ末端H⁺2とＣ末端O^-と
は，特定の実施態様もしくは一般式に必ずしも記載し示
してはいないが，存在することが理解される。示された
ペプチドにおいて，コードされている各残基は，それが
適当な場合には，以下の従来のリストに従って，アミノ
酸の慣用名に対応する単一文字の名称で示される。アミノ酸 一文字記号 アラニン Ａ アルギニン Ｒ アスパラギン Ｎ アスパラギン酸 Ｄ システイン Ｃ グルタミン Ｑ グルタミン酸 Ｅ グリシン Ｇ ヒスチジン Ｈ イソロイシン Ｉ ロイシン Ｌ リジン Ｋ メチオニン Ｍ フェニルアラニン Ｆ プロリン Ｐ セリン Ｓ トレオニン Ｔ トリプトファン Ｗ チロシン Ｙ バリン Ｖ 遺伝子でコードされていないアミノ酸は，上記のよう
に短縮して示す。

本出願で示す特定のペプチドにおいて、光学異性体を
有するいずれのアミノ酸残基も、特に上付きダガー印（
^†）で示されることのない限り、Ｌ型であることを意図
する。本発明のペプチドの残基は通常，天然のＬ光学異
性体形であるが,1もしくは２個，好ましくは１個のアミ
ノ酸が（AA₉および／またはAA₁₂に加えて，もしくはそ
の代わりに），光学異性体であるＤ形で置換されてもよ
い（AA₉およびAA₁₂がともにＬ型である態様を含む）。

遊離の官能基（カルボキシル末端もしくはアミノ酸末
端が遊離であるものを含む）は，アミド化，アシル化も
しくは他の置換反応により修飾され得，その結果，例え
ばその化合物の活性に影響することなしに，化合物の溶
解度を変えることができる。

特に，心房ナトリウム非出亢進性ペプチドのカルボキ
シ末端のアミドを修飾したアナログが特に強力なのでこ
の発明の好ましい態様であることが発見された。一般
に，アミド基の窒素原子は，カルボニル基の炭素原子と
共有結合しており，NH₂，−NHR′もしくはHR′Ｒ″の形
態（式中Ｒ′およびＲ″は，直鎖もしくは分枝鎖であ
り,1C〜10C好ましくは1C〜6Cのアルキルもしくはアルキ
ルアシル基であり，これら基の１〜２個の炭素原子は窒
素，酸素もしくは硫黄原子で置換されているものを含
む）である。このようなアミド基の代表的なものは次の
通りである：−NH₂，−NHCH₃，−N(CH₃)₂，−NHCH₂C
H₃，−NHCH₆CH₅，−NHCH₂CH(CH₃)₂，−NHCH₂CH(CH₃)CH₂
CH₃，−NHCH₂OH，−NHCH₂CH₂OCH₂CH₃および−N(CH₃)CH₂
CH₂SCH₂CH₃。

本発明のアミド化されたアナログを生成するときに，
そのアナログ化合物は，例えばBoc−AA_x−pMBHA−樹脂
もしくはBocAA_x−BHA−樹脂（式中AA_xは，以下に詳述す
る所望のアナログ化合物からの選択されたカルボキシル
末端アミノ酸である）を用いて直接合成することができ
る。あるいは，本発明のアナログ化合物は，当該技術分
野に公知の手段を用いてペプチドを合成した後，化学的
もしくは酵素的にアミド化するか，または標準の溶液相
ペプチド合成法によって製造することができる。

好ましい態様 A.コアペンタペプチド 本発明の化合物はすべて，下記式で表されるペンタペ
プチドのコア配列を有している： AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂ ここで，AA₈−およびAA₁₁は，独立して， 塩基性／非環式の；または， 中性／無極性／小型の；または， 中性／極性／大型／非芳香族のアミノ酸残基； AA₉は,DもしくはＬ配置の中性／無極性／非芳香族の
アミノ酸残基； AA₁₀は酸性アミノ酸残基；そして， AA₁₂は,DもしくはＬ配置の中性／無極性／大型／非芳
香族のアミノ酸残基，または共有結合である。

このコアの最も好ましい配列は,R（I/M）DRIであり，
この式中の残基はすべてＬ配置であり，括弧内のアミノ
酸残基はどちらかが選択される。次に好ましいのは,R
（I/M）DRI残基の１つだけが上記定義内の選択された残
基で置換された配列である。好ましい置換基は，次のと
おりである： AA₈については,Rの代わりにA,Q,N,K,LまたはNle; AA₉については,I/Mの代わりにV,V^†,L,L^†,I^†,M^†,t
−BuA,t−BugまたはCha; A₁₀については,Dの代わりにＥまたはCya; A₁₁については,Rの代わりにA,Q,N,K,OrnまたはCit; AA₁₂についてはＩの代わりに、Ｍ、Ｍ^†,V,V^†,L,
L^†,I^†,N−MeIle,t−BuAまたは共有結合。

特に好ましいのは，この配列が，下記配列でなる群か
ら選択される態様である： Ａ（I/M）DRI RM^†DRI Ｒ（I/M）DRL Ｋ（I/M）DRI RLDRI Ｒ（I/M）DRM Ｑ（I/M）DRI Ｒ（I/M）ERI R(I/M)DRM⁺ RVDRI Ｒ（I/M）DKI R(I/M)DRI⁺ RI⁺DRI Ｒ（I/M）DQI Ｒ（I/M）DRV 天然に存在するRIDRIもしくはRMDRI配列からの１つを越
える変化した配列も本発明の範囲に含まれるが，余り好
ましくはない。この群の中で特に好ましいサブセットに
は，他の置換に加えて，グルタミン酸残基が，AA₁₀とし
て，アスパラギン酸残基の代わりに入ったものが含まれ
る。

B.環の特性；AA_yおよびAA_zの好ましい実施態様 本発明に含まれる環式ジスルフィドは，ジスルフィド
結合を形成するためのスルフィドリル基を提供する２つ
のジステイン残基を含み,17のアミノ酸残基−構成要素
ジスルフィド環を含む天然に存在するANPによく類似し
ている。しかし，環式ジスルフィドを含む本発明の化合
物のこれらの実施態様では，環式構造において17より多
くまたは好ましくは少ないアミノ酸残基を含み得る。

上記のように，本発明の環式化合物は，システムイン
残基またはその代わりにアミノ酸残基AA_yおよびAA_zを，
等価結合または−CH₂−CH₂−等の連結基で結合すること
によって提供され得る。システイン残基上のスルフィド
リル基の代替基による置換によって，効果的にシステイ
ン残基が代替アミノ酸に置換される。例えば,1つのフル
フィドリル用を−CH₂−基と置換するために，システイ
ン残基が類似のアルファ−アミノ酪酸によって置換され
る。これらの環式アナログペプチドは，例えば,Lebl,M.
およびV.J.Hruby,Tetrahedron Lett．（1984）25:2067
−2068の方法または米国特許第4,161,521号に開示され
る手法によって形成され得る。

ジスルフィド，および２つのシステイン,2つのアルフ
ァ−アミノ酪酸残基またはこれらの複合体，すなわち： によって形成されたメチレン架橋に加えてエステルまた
はアミド架橋もまた形成され得る。例えば，エステル架
橋は，セリンまたはスレオニンの−OHおよびアスパラギ
ンまたはグルタミンのカルボキシルを含有し得る。例え
ば， 同様に，アミドは，リシンおよびアスパラギンまたはダ
ルタミンの側鎖を使用して好適に得られ得る。例えば， これらの架橋の合成方法は,Schiller,P.W.,ら，Biochem
Biophys Res Comm（1985）127:558−564;Schiller,P.
W.,ら，Int J Peptide and Protein Res（1985）25:171
−177に見いだされる。

架橋を構成するアミノ酸は，ペプチドを構成する他の
ものと同様に，わずか１または２つの残基（AA₉およびA
A₁₂の１つを除いてまたは代わりに）がこのように形成
される限りにおいて，必要に応じてＤ−型であり得る 従って，A_yは，架橋の形成が可能なすべての残基であ
り得る−−すなわち，A_yは,N−末端部位でなければCly
または直鎖オメガ−アミノ酸であり得ない。しかし、メ
チレン架橋またはメチレン／硫化物架橋に関与するメチ
レンあるいは置換メチレンには，アルファ−アミノ酪
酸,Val,Leu,Ile,および例えば,Phe等の特定芳香族（疎
水性）アミノ酸が供給され得る。ジスルフィド連結原子
は，システインまたはホモシステインによって与えら
え；エステルまたはアミド架橋の構成要素,Ser,Thr,Gl
u,Asp,Cya（スルホンアミドまたはスルホネートエステ
ルのため）,Lys等によって提供される。X₁がＨである場
合，AA_yはＮ−末端アミノ酸であり，架橋の構成要素と
なり得る。

A_zは，AA_yへの架橋を形成することが可能なアミノ酸
残基から選択される。もちろん，アミドまたはエステル
架橋が形成される場合は，A_zによって供給される機能基
はA_yの機能基と相補的でなければならないが，A_zはA_yと
同様の一般基から選択される。また，X₄がOHである場合
は，AA_zはＣ末端残基であり，この部位におけるいかな
る残基のCOOHも架橋の構成要素となり得る。

アミド架橋のカルボキシルがＣ−末端によって提供さ
れる好ましい系列には,C−末端が，H₂N(CH₂)_pCOOHの式
で表され,pが３−６であるGly,beta−Ala,またはオメガ
−アミノ酸であるものが含まれる。アミノ成分は，リシ
ンまたはオルニチンの−NH₂によって提供される。さら
に，これらの基がＣ−末端およびＮ−末端残基の側鎖に
おいて得られる場合は,COOH供与体およびNH₂供与体の部
位はリバース（reverse）され得る。

C.X₁の好ましい実施態様 X₁は，それである必要はないが，疎水性アミノ酸また
は他の疎水基であり得る。X₁が，疎水性部である場合，
A_yX₂は介在連結が約4.5−15オングストロームの間の距
離に一致し得る基である。この実施態様において，X₁と
して特に好ましいものは，特にフェニルアラニンまたは
そのdes−NH₂型および芳香族アセチル，ブチリル，また
はプロピオニル誘導体，特に以下に示すナフチル，ジベ
ンジル，およびインドリルアシル誘導体を含む６−20の
炭素の疎水基である。

従って，現在好ましい１つのクラスの有機置換基が一
般式によって示され得る： R₁−CO− ここで，R₁は有機疎水基である。この式に含まれるの
は,2−置換アセチル,3−置換プロピオニル，および４−
置換ブチリル基であり，これらの基の置換基としては，
一般クラスの中性，疎水性モノ−および多環式芳香族ま
たは飽和環系が含まれる。他のクラスは，一般式R₁−Ｏ
−CO−およびR₁−Ｏ−を有する。好ましい置換基の代表
例には次のような基が包含される： X₁の他の好ましい実施態様には,1−６のアミノ酸残基
のペプチドまたはそのdes−NH₂形が包含される。X₁ペプ
チドは，AA₈から4.5−15オングストロームの間隔を置く
ことが可能な疎水残基を含むことが都合がよい。天然の
配列では，X₁ペプチドはＳ−Ｌ−Ｒ−Ｒ−Ｓ−Ｓまたは
推定によるとＬ−Ｒ−Ｒ−Ｓ−S,R−Ｒ−Ｓ−S,および
Ｒ−Ｓ−Ｓ等のいくつかのＮ−末端欠失形である。これ
らの実施態様においても,1またはそれ以上の残基がそれ
と同等のクラスの他のものと置換され得る。例えば,R
が,Kまたは他の塩基性アミノ酸によって,Lが,Vまたは他
の中性／大型／無極性アミノ酸によって，およびＳが,G
または他の中性／極性／小型アミノ酸またはAlaによっ
て置換され得る。加えて，X₁は，比較可能形態によって
置換可能なＳ−ＳまたはＳ等のＮ−末端欠失のペプチド
であり得，X₁は単に水素であり得る。

D.X₂の好ましい実施態様 本発明のペプチドにおいて，ペンタペプチドコアの上
流部位が，疎水部を含む場合は，その上流部位は，約4.
5−15オングストロームの間隔を置いてAA₈から分離され
なければならない。従って，X₂の好ましい形態の特性
は，疎水残基が上流（X₁においてAA_yまたはX₂におい
て）に存在するかどうかに依存する。疎水残基が存在し
ない場合には，X₂は，好ましくは結合，または残基がAl
a,GlyおよびSerからなる群から選択される１−３のアミ
ノ酸残基のペプチドである。X₁が疎水性隣接Ayを含む場
合には，X₂は，好ましくは，結合または残基が中性／極
性／小型または中性／非極性／小型アミノ酸，特にGly,
Ser,Ala,Aib,およびSarから選択される１−２のアミノ
酸のペプチドである。特に，好ましい形態には，結合,
G,G−G,A−G,S−G,G−A,G−S,G−Aib,およびＧ−Sarが
含まれる。A_yそれ自身が疎水性である場合は，X₂の好ま
しい形態には、さらに上記のように，残基が中性／極性
／小型および中性／非極性／小型から選択されるトリペ
プチドが含まれる。

天然の環式形態において，A_yはＣであり，X₂は配列Ｆ
−Ｇ−Ｇのトリペプチドである。X₂がＦまたは他の疎水
残基を含む場合，X₂の好ましい形態は，X₂ペプチドのＣ
−末端部位が4.5−15オングストロームの必要とされる
間隔を提供するものである。特に，好ましいのは,G−Ｇ
あるいはＧ−Ｇジペプチドが,Ser,Ala、AibまたはSarに
よって置換された１つの残基を有するまたはＧ（または
その置換基）の残基が１つだけ存在するものである。

しかし，これらの環式形態においては，上流疎水性は
必要なく，X₁AA_YX₂の基は単にペプチド延長部であり得
ることは明白である。

E.X₃の好ましい実施態様 X₃は，一般に，環が７−17の残基を含み，AA_yおよびA
A_zがシステインである場合にAA_yおよびAA_zを含むような
長さを有するペプチド残基であり，またはAA_yおよびAA_z
がシステインでない場合にふさわしいサイズの環を形成
する。従って，例えば，X₂がトリペプチドである場合に
は，X₃は、好ましくは結合または１−６のアミノ酸残基
を有するペプチドである。X₃は，好ましくは天然配列Ｇ
−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ−Ｌ−Ｇの変異体またはそれらのトラ
ンケート形であり，ここで１またはそれ以上のGlyまた
はSer残基がその他の中性／極性／小型アミノ酸またはA
laによって,Alaがその他の中性／非極性／小型アミノ
酸,GlyまたはSerによって置換され得る。Glnはその他の
中性／極性／大型／非芳香族アミノ酸で置換され得,Leu
はその他の中性／非極性／大型／非芳香族アミノ酸で置
換され得る。

X₃に含まれるアミノ酸残基は，特にオメガ−アミノ形
態を含む。従って，好適な実施態様では，X₃は，残基の
１つが−HN(CH₂)_bCO−の式で表され,bが３−６であるモ
ノまたはジペプチドである。

典型的なトランケート形態はまた,G−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ
−L,A−Ｑ−Ｓ−Ｇ−Ｌ−G,G−Ａ−Ｑ−Ｓ−G,Q−Ｓ−
Ｇ−Ｌ−G,G−Ａ−Ｑ−S,S−Ｇ−Ｌ−G,G−Ａ−Q,G−Ａ
−A,G−Ｌ−G,L−G,G−A,GおよびdesX₃を含む。

F.X₄の好ましい実施態様 X₄の好ましい実施態様は，(OH)NH₂,NHR′であり，こ
こでＲ′は１−10Cの直鎖または分岐鎖アリルで,1個ま
たは２個のＣは非隣接N,O,またはS,あるいは１−５個，
特に１−２個のアミノ酸残基のペプチドおよびそのアミ
ドまたはアルキルアミド形態，特にＮ−Ｓ−Ｆ−Ｒ−Y,
N−Ｓ−Ｆ−R,N−Ｓ−F,N−S,またはＮおよびそのアミ
ド類，ならびに１またはそれ以上の残基がその他の同様
のクラスによって置換された変異体によって置換され得
る。

G.好ましい化合物 好ましい環式化合物の例には，以下のものが含まれ
る。

（２−ナフチルアセチル）−Ｃ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｇ−Ａ−Ｃ−NH₂ （２−ナフチルアセチル）−Ｃ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｃ−NH₂ （２−ナフチルアセチル）−Ｇ−Ｃ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｃ−NH₂ （２−ナフチルアセチル）−Ｇ−Ｃ^†−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ
−Ｉ−Ｇ−Ｃ−NH₂および （２−ナフチルアセチル）−Ｇ−Ｃ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｇ−Ａ−Ｃ−NH₂ ここで，環を形成するCys残基もまた,D形であり得
る。

本発明の好ましい化合物もまた，ジスルフィドでない
環式化合物を含む。好ましい典型的な化合物には以下の
ものが含まれる。

Ｋアミノ側鎖およびＧカルボキシルの間のアミド連結
を含む,2−ナフチルアセチル−Ｋ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ
−Ｉ−Ｇ−G; Ｋアミノ側鎖およびＥ側鎖カルボキシルの間のアミド
連結を含む,2−ナフチルアセチル−Ｋ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ
−Ｒ−Ｉ−Ｅ−NH₂； Ｋアミノ側鎖およびＤ側鎖カルボキシルの間のアミド
連結を含む,2−ナフチルアセチル−Ｋ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ
−Ｒ−Ｉ−Ｇ−Ｄ−NH₂。

H.非ペプチドの結合 本発明の一実施態様において，コアのペンタペプチド
中のアミド結合（−CO−NH−），またはZ₁および／もし
くはZ₂およびもしくはZ₃内のアミド結合は，当該技術分
野で公知の方法によって，他の種類の結合，例えば−CH
₂NH−，−CH₂S−，−CH₂CH₂−，−CH＝CH−（シスおよ
びトランス），−COCH₂−，−C(OH)CH₂−および−CH₂SO
−で置換され得る。下記の文献には，これらの代替の連
結部分を有するペプチドアナログの調製について記載さ
れている:Spatola,A.F.,Vega Data（1983年３月）１巻,
3頁，“ペプチド主鎖の修飾”（総説）;Spatola,A.F.
“アミノ酸ペプチドとタンパクの化学と生化学",B.Wein
steinら編集,Morcel Dekker,ニューヨーク,267頁（1983
年）（総説）;Marley,J.S.,Trends Pharm Sci（1980
年）,463〜468頁（総説;Hudson,D.ら，Int J Pept Prot
Res，（1979年）14巻,177−185頁（−CH₂NH−，−CH₂C
H₂−）;Spatola,A.F.ら，Life Sci（1986年），38巻,12
43〜1249頁（−CH₂−Ｓ）;Hann,M.M.,J Chem Soc Perki
n Trans I（1982年）307〜314頁，（−CH−CH,シスおよ
びトランス）;Almquist,R.G.ら，J Med Chem（1980年）
23巻,1392〜1398頁（−COCH₂−）;Jennings−White,C.
ら，Tetrahedron Lett（1982年）23巻,2533頁（−COCH₂
−）;Szelke,M.ら，ヨーロッパ特許出願第EP 45665号C
A:97:39?05（1982年）（−C(OH)CH₂−）;Holladay,M.W.
ら，Tetrahedron Lett（1983年）24巻,4401〜4404頁（-
C(OH)CH₂−）；およびHruby,V.J.Life Sci（1982年）31
巻,189−199頁（−CH₂−Ｓ−）である。

I.合成 本発明の範囲に含まれる化合物は，例えば固相ペプチ
ド合成法のような当該技術分野で公知の手段によって化
学的に合成することができる。この合成法は，α−アミ
ノ基が保護されたアミノ酸を用いてペプチドのカルボキ
シル末端から開始される。ｔ−ブチルオキシカルボニル
（Boc）保護基は，他の保護基が適切である場合でも，
全てのアミノ基に対して用いることができる。例えば,B
oc−Asn−OH,Boc−Ser−OH,Boc−Phe−OH,Boc−Arg−OH
またはBoc−Tyr−OH（すなわち選択されたANPアナログ
のカルボキシル末端アミノ酸）は，クロロメチル化ポリ
スチレン樹脂支持体にエステル化することができる。ポ
リスチレン樹脂支持体は，スチレンと約0.5〜２％のジ
ビニルベンゼンとのコポリマーが好ましいが，このジビ
ニルベンゼンは，架橋剤であって，ポリスチレンポリマ
ーをいくつかの有機溶媒に対して完全に不溶性にする
（Stewartら，“固相ペプチド合成”（1969年）W.H.Fre
eman Co.,サンフランシスコ；およびMerrifield,J.Am C
hem Soc（1963年）85巻,2149−2154頁，参照）。これら
および他のペプチド合成法は，米国特許第3,862,925
号，第3,842,067号，第3,972,859号および第4,105,602
号にも例示されている。

上記の合成法は，手動法を用いても，あるいは、例え
ば,Applied BioSystems 430A Peptide Synthesizer（米
国，カリフォルニア州，フォスター・シティ）またはBi
osearch SAM II automatic peptide synthesizer（Bios
earch,Inc.,米国，カリフォルニア州，サン・ラファエ
ル）を用い，メーカーが供給する指示マニュアルに提示
されている指示に従う自動的方法も利用できる。

本発明のアナログ化合物を合成する過程で本発明の開
示にしたがって構築される中間体は，それ自体新規で有
用な化合物なので本発明の範囲に含まれることは、ペプ
チド合成の一般的な技術を有する当業者ならば容易に分
かるであろう。

あるいは，本発明の選択された化合物は，公知の方法
にしたがって調製された組換え体DNA構造体の発現によ
って製造することができる。このような製造法は，大量
生産法もしくはこのような化合物の別の態様を提供する
のに望ましいものであり得る。このペプチド配列は比較
的短いので，組換え製造法が容易である。

J.投与法と用途 本発明の化合物は，健全な哺乳動物内でナトリウム排
出亢進作用，利尿作用および血圧低下作用があることが
判明しており，および血管弛緩作用を有し，すなわちア
ルデステロンとレニンの放出を阻害する。

したがってこれらの化合物と，これを含有する組成物
は，腎臓の灌流が無効なこと，または糸球体の濾過速度
が低下していることが原因の高血圧と腎不全に加えて，
例えば，うっ血心不全，ネフローゼ症候群および肝硬変
のような各種の浮腫状態の治療の治療剤としての用途を
見出すことができる。

したがって，本発明は，単独で上記の治療上の利益を
与える働きがある，本発明の化合物（それには，化合物
の非毒性付加塩，アミドおよびエステルを包含する）の
有効量を含有する組成物を提供するものである。このよ
うな組成物は，生理学的に許容できる液体，ゲルもしく
は固体の希釈剤，アジュバントおよび賦形剤を含有して
いてもよい。

これらの化合物と組成物は，家畜に対するような獣医
学的用途およびヒトの臨床用途に，他の治療剤と同様の
方式で哺乳類に投与するとができる。一般に，治療効果
を得るのに必要な投与量は，被験体の体重1kg当り約0.0
1〜1000mcgの範囲であり,0.1から1000mcgがより一般的
である。あるいは，これらの範囲内の投与量は，所望の
治療利益が得られるまで，長期間にわたって，通常24時
間を越えて，一定の点滴量で投与することができる。

典型的には，上記の組成物は，液体溶液もしくは懸濁
液の注射可能薬剤として調製されるが，注射する前の液
体の溶液もしくは懸濁液に適切な固体形態としても調製
され得る。製剤は乳濁液にしてもよい。活性成分は，生
理学的に許容できる，活性成分と適合する希釈剤もしく
は賦形剤と混合することが多い。適切な希釈剤と賦形剤
としては，例えば水，生理食塩水，デキストロース，グ
リセリンなど，およびその組合せがある。さらに，所望
により，組成物は，湿潤剤もしくは乳化剤，安定化剤も
しくはpH緩衝剤などの補助剤を少量含有していてもよ
い。

組成物は，通常，例えば皮下もしくは静脈に注射する
ことにより非経口投与される。他の方式の投与に適切な
その他の様式には，坐剤，鼻内用エアロゾルおよびある
場合には，経口用製剤がある。坐剤用の伝統的な結合剤
と賦形剤には，例えばポリアルキレングリコール類もし
くはトリグリセリドがあるが，このような坐剤は,0.5〜
10％，好ましくは１〜２％の範囲の活性成分を含有する
混合物で形成される。経口用製剤は，例えば医薬グレー
ドのマンニトール，ラクトース，デンプン。ステアリン
酸マグネシウム，サッカリンナトリウム，セルロース，
炭酸マグネシウムなどの通常用いられる賦形剤を含有し
ている。これらの組成物は，溶液，懸濁液，錠剤，丸
剤，カプセル剤，除放性製剤または散剤の形態をとり，
活性成分を10〜95％含有し，好ましくは25〜70％含有し
ている。

ペプチド化合物は，中性もしくは塩の形態で組成物に
処方され得る。薬理学的に許容できる非毒性塩には，
（遊離のアミノ基で形成された）酸付加塩が含まれ，こ
れら酸付加塩は，例えば塩酸もしくはリン酸のような無
機酸，または塩酸もしくはリン酸あるいは酢酸，シュウ
酸，酒石酸，マンデル酸などの有機酸で形成される。遊
離カルボキシル基で形成された塩は，水酸化ナトリウ
ム，水酸化カリウム，水酸化アンモニウム，水酸化カル
シウムまたは水酸化第二鉄のような無機塩基，およびイ
ソプロピルアミン，トリメチルアミン,2−エチルアミノ
エタノール，ヒスチジン，プロカインなどの有機塩基か
ら誘導することができる。

ナトリウム排出亢進作用，利尿作用および血管弛緩作
用を示す本発明の化合物に加えて，本発明の化合物は，
有用な化合物を合成する際の中間体として利用すること
もできる。あるいは，適切に選択することによって，活
性レベルが減少するか全く消失する本発明の化合物は，
例えば他の受容体に結合し，受容体の代謝回転を刺激
し，また分解酵素活性もしくは分解受容体活性を有する
別の基質を与えて，その結果これらの酵素もしくは受容
体を阻害することによって，本発明の範囲以外の化合物
を含む他の利尿性，ナトリウム排出亢進性もしくは血管
弛緩性化合物の活性を調節するのに利用できる。このよ
うな方法で用いる場合，このような化合物は，他の活性
化合物との混合物として用いるか，または例えばそれ自
体の担体中に入れて別個に用いることもできる。

本発明の化合物は，標識をつけた試薬を利用する免疫
検定法に用いる抗血清，通常は抗体を製造するのに使う
こともできる。ポリペプチドを、必要に応じてジアルデ
ヒド，カルボジイミドにより，もしくは市販のリンカー
を用いる抗原性を付与する担体に，簡便に接合すること
ができる。これらの化合物と免疫試薬には，発色団，例
えばフルオレセインもしくはローダミンのような螢光
体,125I,35S,14C,もしくは3Hのような放射性同位元素，
または磁化粒子のような各種の標識を用いて，当該技術
分野で公知の方法で標識してもよい。

これらの標識化合物と試薬，またはそれらを認識し特
異的に結合することができる標識試薬は，例えば，診断
薬としての用途がある。生物学的試料由来の試料は，本
発明の化合物によって，共通抗原決定基を有する物質の
存在もしくは量を検定することができる。さらにモノク
ローナル抗体を当該技術分野の公知の方法で製造するこ
とができ，この抗体は，例えばインビボでの免疫学的類
緑化合物の過剰産生を中和する治療用途がある。

以下の実施例は，本発明の限定を意味するものではな
く，実例のために提供される。

実施例 以下の実験に基づく開示では，化学合成されたANPア
ナログ化合物のアミノ酸配列は、Nature（1984）309:71
7−719のAtlasらで開示される天然のねずみから誘導さ
れた心房のナトリウム排出亢進性ペプチド配列のポジシ
ョン１に見られるアルギニン残基に対応するアミノ末端
アルギニン残基から番号を付けられている。

I.心房のナトリウム排出亢進性ペプチドアナログ化合物
の化学合成 A.合成手順 本発明の化合物は，手作業で行われるかもしくは、製
造者の指示に従ってｔ−Bocアミノ酸を用いて、アプラ
イドバイオシステムズ430Aペプチドシンセサイザー（Ap
plied BioSystems430A Peptide Synthesizer）（カリフ
ォルニア州フォスターシティー）もしくはバイオサーチ
サムII自動ペプチドシンセサイザー（Biosearch Sam II
automated peptide synthesizer）（バイオサーチ、カ
リフォルニア州サンラフィアル）で行われる固体相技術
によって合成された。

手順Ａ Boc−AA₁…AA_n-1−AA_n−樹脂 ヒドロキシメチルポリスチレンエステルの調製 １グラムの選択されたBoc−AA_n−Ｏ−ポリスチレン樹
脂（0.2−0.6mmole/g樹脂）（例えば、Peninsula Labs,
Inc.より入手可能）を、Boc−AA_n-1−OHの結合のために
計画Ａに従って処理する。

計画Ａ １）ジクロロメタン（CH₂Cl₂）で３回洗浄； ２）TFA:CH₂Cl₂：エタンジチオール（EDT）（体積比45:
50:5）で１分間処理； ３）TFA:CH₂Cl₂:EDT（体積比45:50:5）で20分間処理； ４）CH₂Cl₂で３回洗浄； ５）CH₂Cl₂中のジイソプロピルエチルアミン（DIPEA）
（10％V/V）で１分間処理することを２回繰り返す； ６）CH₂Cl₂で２回洗浄； ７）メタノール（MeOH）で２回洗浄； ８）（５−７）を一度繰り返す； ９）CH₂Cl₂で３回洗浄； 10）あらかじめ調製した適切に保護されたBoc−アミノ
酸の対称の無水物をCH₂Cl₂もしくはジメチルホルムアミ
ド（DMF）／CH₂Cl₂（50:50体積）、中に溶解した溶液の
１〜６当量を添加（Boc−Ｎ−OH,Boc−Ｑ−OHおよびBoc
−Ｒ（TOS）−OHがＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
を用いて活性エステルとして結合された）； 11）CH₂Cl₂で２回洗浄； 12）10％DIPEAで２回洗浄； 13）CH₂Cl₂で２回洗浄； 14）MeOHで２回洗浄； 15）CH₂Cl₂で２回洗浄； 16）段階（11−15）を一度繰り返し； 17）Kaiserら，Anal.Biochem. 34:595（1970）に従って
ニヒドリン反応によって試験。結合反応が不十分な場合
には、段階（10−16）を繰り返すか、Ｎ−アセチルイミ
ダゾール（DMF中、0.30M）、もしくはCH₂Cl₂中で過剰の
無水酢酸を用いてキャップ合成 手順Ｂ Boc−AA_n−ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂の調製 選択されたBoc−AA_n−OHを、以下に示す様に、N,N′
−ジシクロヘキシルカーボジイミドを介してｐ−メチル
ベンズヒドリルアミン（pMBHA）樹脂に結合させた。

計画Ｂ １）pMBHA HCl樹脂を洗浄； ２）上記樹脂をDIPEAのCH₂Cl₂溶液10％（V/V）で２回洗
浄； ３）CH₂Cl₂で２回洗浄； ４）MeOHで２回洗浄； ５）CH₂Cl₂で２回洗浄； ６）反応時間0.5〜24時間でCH₂Cl₂中で溶解した、あら
かじめ調製した適切に保護されたBoc−アミノ酸の対称
も無水物の１〜６の当量を添加； 反応しなかったアミノ群は、0.30M N−アセチルイミ
ダゾール:DMFもしくは無水酢酸：CH₂Cl₂でアセチル化す
る。次の実施例は、典型的なアナログANP化合物（AP＃
として示される）の化学合成を示しており、本発明のあ
る局面を例示する。

実施例１ ＊AP1 R−Ｓ−Ｓ−Ｃ−Ｆ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ−Ｃ−Ｎ−Ｓ−Ｆ−Ｒ−Ｙ 1gmのBoc−Tyr（2BrZ）−Ｏ−樹脂（0.54meg/gm,Peni
nsula Lads Inc.,Belmont,CA）を，必要な配列のアミノ
酸（Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Phe−OH,Boc−Ser（Bz
l）−OH,Boc−Asn−OH,Boc−Cys（４−CH₃Bzl）−OH,Bo
c−Gly−OH,Boc−Ser（Bzl）−OH,Boc−Gln−OH,Boc−A
la−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−Arg
（Tos）−OH,Boc−Asp（OBzl）−OH,Boc−Ile−OH 1/2H
₂O,Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Gly−OH,B
oc−Phe−OH,Boc−Gys（４−CH₃Bzl）−OH,Boc−Ser−
（Bzl）−OH,Boc−Ser−（Bzl）−OH,Boc−Arg（Tos）
−OH）の順に導入されている）と共に手順Ａにかけた。
保護されたペプチジル樹脂を,TFA:CH₂Cl₂:EDT（45:50:5
v/v/v）で１分間，次いで20分間処理し，CH₂Cl₂で３回
洗浄し,MeOHで２回洗浄し，ペプチジル樹脂のTFA塩を生
成し，真空内で乾燥した。

上記ペプチジル樹脂をその後,10％アニソール,2％エ
チルメチルスルフィドを含有する無水HF中で−10℃で30
分間，および０℃で30分間懸濁した。真空下で蒸発させ
ることによりHFを取り除き，ペプチド／樹脂混合物をジ
エチルエーテル中で懸濁した。ペプチド／樹脂混合物
を，ジエチルエーテルで２度，クロロホルムで１度，ジ
エチルエーテルで１度，クロロホルムで１度，そしてジ
エチルエーテルで再度洗浄した。その後，ペプチドを2.
0M酢酸で混合物から抽出し，H₂Oで希釈し，凍結乾燥
し，非酸化SHペプチドを生成した。

粗ペプチドを，酸素分離した0.01Mの酢酸アンモニウ
ム（NH₄OAc）,pH7.9中で0.5mg/mlまで溶解し，次いで0.
01Mのフェリシアン化カルシウム（KCN）溶液をわずかに
過剰量滴下することによって酸化し,20分間かくはん
し，酢酸でpH5に調節した。このペプチド溶液を,DOWEX
AG3X4アニオン交換樹脂で処理し，濾過し，H₂Oで希釈
し，凍結乾燥し，粗環化ペプチドを生成した。

溶出液として0.5MのAcOHを使用し,Sephadex Ｇ−25F
（Pharmacia Fine Chemicals）上で脱塩し，次いで300m
M NH₄OAc,pH6.5を,10mM NH₄OAc,pH4.5の溶液に加えるこ
とによって調製した溶離グラディエントを用いたCM−Se
pharose （Pharmacia Fine Chemicals）またはCM−セ
ルロース（Whatman）でのイオン交換クロマトグラフィ
ーによって，上記ペプチドを精製した。逆相HPLCで判断
し，最低97％の純度を持つ留分を収集してプールし、H₂
Oから数回凍結乾燥して、純粋なAP1アセテート塩を得
た。

実施例２ ＊AP2 R−Ｓ−Ｓ−Ｃ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｇ−
Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ−Ｃ−Ｎ−Ｓ−Ｆ−Ｒ−Ｙ 1gmのBoc−Tyr（2BeZ）−Ｏ−樹脂（0.54meg/gm,Peni
nsula Lads Inc.,Belmont,CA）を，必要な配列のアミノ
酸（Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Phe−OH,Boc−Ser（Bz
l）−OH,Boc−Asn−OH,Boc−Cys（４−CH₃Bzl）−OH,Bo
c−Gly−OH,Boc−Ser（Bzl）−OH,Boc−Gln−OH,Boc−A
la−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−Arg
（Tos）−OH,Boc−Asp（OBzl）−OH,Boc−Ile−OH 1/2H
₂O,Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Gys（４CH
₃Bzl）−OH,Boc−Ser（Bzl）−OH,Boc−Ser（Bzl）−O
H,Boc−Arg（Tos）−OHの順に導入されている）と共に
手順Ａにかけた。保護されたペプチジル樹脂を,TFA:CH₂
Cl₂:EDT（45:50:5 v/v/v）で１分間，次いで20分間処理
し，CH₂Cl₂で３回洗浄し,MeOHで２回洗浄し，真空内で
乾燥し，ペプチジル樹脂のTFA塩を生成した。

上記ペプチジル樹脂をその後,10％アニソール,2％エ
チルメチルスルフィドを含有する無水HF中で−10℃で30
分間，および０℃で30分間懸濁した。真空下で蒸発させ
ることによりHFを取り除き，ペプチド／樹脂混合物をジ
エチルエーテル中で懸濁した。ペプチド／樹脂混合物
を，ジエチルエーテルで２度，クロロホルムで２度，ジ
エチルエーテルで２度洗浄した。その後，ペプチドを2.
0M酢酸で抽出し，凍結乾燥し，非酸化SHペプチドを生成
した。

粗ペプチドを，酸素分離した0.01MのNH₄OAc,pH7.9中
で0.5mg/mlまで溶解し，次いで0.01MのKCN溶液をわずか
に過剰量滴下することによって酸化し,20分間かくはん
し，酢酸でpH5に調節した。このペプチド溶液を,DOWEX
AG3X4アニオン交換樹脂で処理し，濾過し，H₂Oで希釈
し，凍結乾燥し，粗環化ペプチドを生成した。

溶出液として0.5MのAcOHを使用し,Sephadex Ｇ−25F
上で脱塩し，次いで300mM NH₄OAc,pH6.5を,10mM NH₄OA
c,pH4.5の溶液に加えることによって調製した溶離グラ
ディエントを用いたCM−Sepharose またはCM−セルロ
ース（Whatman）でのイオン交換クロマトグラフィーに
よって，上記ペプチドを精製した。逆相HPLCで判断し，
最低97％の純度を持つ留分を収集してプールし、H₂Oか
ら数回凍結乾燥して、純粋なAP2アセテート塩を得た。

実施例３ ＊AP3 R−Ｓ−Ｓ−Ｃ−Ｆ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｃ−Ｎ−Ｓ−Ｆ−Ｒ−Ｙ 1gmのBoc−Tyr（2BeZ）−Ｏ−樹脂（0.54meg/gm,Peni
nsula Labs Inc.,Belmont,CA）を，必要な配列のアミノ
酸（Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Phe−OH,Boc−Ser（Bz
l）−OH,Boc−Asn−OH,Boc−Cys（４−CH₃Bzl）−OH,Bo
c−Ser（Bzl）−OH,Boc−Gln−OH,Boc−Ala−OH,Boc−G
ly−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−Arg（Tos）−OH,Boc
−Asp（OBzl）−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−Arg（To
s）−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Phe−OH,Boc
−Gys（４CH₃Bzl）−OH,Boc−Ser（Bzl）−OH,Boc−Ser
（Bzl）−OH,Boc−Arg（Tos）−OHの順に導入されてい
る）と共に手順Ａにかけた。保護されたペプチジル樹脂
を,TFA:CH₂Cl₂:EDT（45:50:5 v/v/v）で１分間，次いで
20分間処理し，CH₂Cl₂で３回洗浄し,MeOHで２回洗浄
し，ペプチジル樹脂のTFA塩を生成し，真空内で乾燥し
た。

上記ペプチジル樹脂をその後,10％アニソール,2％エ
チルメチルスルフィドを含有する無水HF中で−10℃で30
分間，および０℃で30分間懸濁した。真空下で蒸発させ
ることによりHFを取り除き，ペプチド／樹脂混合物をジ
エチルエーテル中で懸濁した。ペプチド／樹脂混合物
を，ジエチルエーテルで２度，クロロホルムで１度，ジ
エチルエーテルで１度，クロロホルムで１度，そしてジ
エチルエーテルで１度洗浄した。その後，ペプチドを2.
0M酢酸で混合物から抽出し，H₂Oで希釈し，凍結乾燥
し，非酸化SHペプチドを生成した。

粗ペプチドを，酸素分離した0.01MのNH₄OAc,pH8中で
0.5mg/mlまで溶解し，次いで0.01MのKCN溶液をわずかに
過剰量滴下することによって酸化し,20分間かくはん
し，酢酸でpH5に調節した。このペプチド溶液を,DOWEX
AG3X4アニオン交換樹脂で処理し，濾過し，H₂Oで希釈
し，凍結乾燥し，粗環化ペプチドを生成した。

溶出液として0.5MのAcOHを使用し,Sephadex Ｇ−25F
上で脱塩し，次いで300mM NH₄OAcを10mM NH₄OAc,pH4.5
の溶液に加えることによって調製した溶液グラディエン
トを用いたCM−Sepharose またはCM−セルロース（Wha
tman）でのイオン交換クロマトグラフィーによって，上
記ペプチドを精製した。逆相HPLCで判断し，最低97％の
純度を持つ留分を収集してプールし、H₂Oから数回凍結
乾燥して、純粋なAP3アセテート塩を得た。

実施例４ ＊AP4 R−Ｓ−Ｓ−Ｃ−Ｆ−Ｇ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｒ−
Ｉ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｎ−Ｓ−Ｆ−NH₂ 計画Ｂを用いて得られた1gmのBoc−Phe−pMBHA樹脂
を，必要な配列のアミノ酸（Boc−Ser（Bzl）−OH,Boc
−Asn−OH,Boc−Cys（４−CH₃Bzl）−OH,Boc−Ala−OH,
Boc−Gly−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−Arg（Tos）−
OH,Boc−Asp（OBzl）−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−A
rg（Tos）−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Phe−
OH,Boc−Gys（4CH₃Bzl）−OH,Boc−Ser（Bzl）−OH,Boc
−Ser（Bzl）−OH,Boc−Arg（Tos）−OHの順に導入され
ている）と共に手順Ａにかけた。ペプチジル樹脂を，そ
の後,10％アニソール,2％エチルメチルスルフィドを含
有する無水HF中で−10℃で30分間，および０℃で30分間
懸濁した。真空下で蒸発させることによりHFを取り除
き，ペプチド／樹脂混合物をジエチルエーテル中で懸濁
した。ペプチド／樹脂混合物を，ジエチルエーテルで２
度，クロロホルムで１度，ジエチルエーテルで１度，ク
ロロホルムで１度，そしてジエチルエーテルで１度洗浄
した。その後，ペプチドを2.0M酢酸で混合物から抽出
し，H₂Oで希釈し，凍結乾燥し，非酸化SHペプチドを生
成した。

粗ペプチドを，酸素分離した0.01MのNH₄OAc,pH8中で
0.5mg/mlまで溶解し，次いで0.01MのKCN溶液をわずかに
過剰量滴下することによって酸化し,20分間かくはん
し，酢酸でpH5に調節した。このペプチド溶液を,DOWEX
AG3X4アニオン交換樹脂で処理し，濾過し，H₂Oで希釈
し，凍結乾燥し，粗環化ペプチドを生成した。

溶出液として0.5MのAcOHを使用し,Sephadex Ｇ−25F
上で脱塩し，次いで300mM NH₄OAcを10mM NH₄OAc,pH4.5
の溶液に加えることによって調製した溶液グラディエン
トを用いたCM−Sepharose またはCM−セルロース（Wha
tman）でのイオン交換クロマトグラフィーによって，上
記ペプチドを精製した。逆相HPLCで判断し，最低97％の
純度を持つ留分を収集してプールし、H₂Oから数回凍結
乾燥して、純粋なAP4アセテート塩を得た。

以下の実施例は，代表的な有機置換基変性アナログペ
プチド化合物（AP＃として同定される）の化学合成を示
しており，本発明の特定の局面を例示する。

実施例306 ＊AP306 （２−ナフチルアセチル）−Ｇ−Ｇ−Ｒ−Ｉ−
Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｇ−Ａ−NH₂ 計画Ｂを用いて得られた1gmのBoc−Ala−pMBHA樹脂
（0.4meg/gm）を、必要な配列のアミノ酸およびアミノ
末端置換基（Boc−Gly−OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−
Arg（Tos）−OH,Boc−Asp（OBzl）−OH,Boc−Ile−OH 1
/2H₂O,Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Gly−OH,Boc−Gly−O
H,2−ナフチル酢酸の順に導入されている）と共に手順
Ａにかけた。保護されたペプチジル樹脂を，CH₂Cl₂で３
回洗浄し、MeOHで３回洗浄し、真空内で乾燥した。

上記ペプチジル樹脂をその後、10％アニソール,2％エ
チルメチルスルフィドを含有する無水HF中で−10℃で30
分間，および０℃で30分間懸濁した。真空下で蒸発させ
ることによりHFを取り除き，ペプチド／樹脂混合物をエ
チルエーテル中で懸濁した。フリット化したロートに移
動させた後、ペプチド／樹脂混合物を，エチルエーテル
で２度，クロロホルムで１度，エチルエーテルで１度，
クロロホルムで１度，そしてエチルエーテルで再度洗浄
した。その後，ペプチドを2.0M酢酸で混合物から抽出
し，H₂Oで希釈し，凍結乾燥した。

100mM NH₄OAc,pH6.5を、10mM NH₄OAc、pH4.5に加える
ことによって調製した溶離グラディエントを用いたCM−
Sepharose（Pharmacia）でのイオン交換クロマトグラフ
ィーによって、上記ペプチドを精製した。254nmで、留
分をモニターし、逆相HPLCで分析した。最低97％の純度
を持つ留分をプールし、H₂Oから数回凍結乾燥して、純
粋なAP306アセテート塩を得た。

実施例307 ＊AP307 （２−ナフトキシアセチル）−NH(CH₂)₄CO−Ｒ
−Ｉ−Ｄ−Ｒ−Ｉ−NH₂ 計画Ｂを用いて得られた1gmのBoc−Ile−pMBHA樹脂
（0.4meg/gm）を、必要な配列のアミノ酸およびアミノ
末端置換基（Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−Asp（OBzl）−
OH,Boc−Ile−OH 1/2H₂O,Boc−Arg（Tos）−OH,Boc−NH
(CH₂)₄COOH,2−ナフトキシ酢酸の順に導入されている）
と共に手順Ａにかけた。保護されたペプチジル樹脂を，
CH₂Cl₂で３回洗浄し、MeOHで３回洗浄し、真空内で乾燥
した。

上記ペプチジル樹脂をその後、10％アニソール,2％エ
チルメチルスルフィドを含有する無水HF中で−10℃で30
分間，および０℃で30分間、懸濁した。真空下で蒸発さ
せることによりHFを取り除き，ペプチド／樹脂混合物を
エチルエーテルで懸濁した。フリット化したロートに移
動させた後、ペプチド／樹脂混合物を，エチルエーテル
で２度，クロロホルムで１度，エチルエーテルで１度，
クロロホルムで１度，そしてエチルエーテルで再度洗浄
した。その後，ペプチドを2.0M酢酸で混合物から抽出
し，H₂Oで希釈し，凍結乾燥した。

100mM NH₄OAc,pH6.5を、10mM NH₄OAc、pH4.5に加える
ことによって調製した溶離グラディエントを用いたCM−
Sepharose（Pharmacia）でのイオン交換クロマトグラフ
ィーによって、上記ペプチドを精製した。254nmで、留
分をモニターし、逆相HPLCで分析した。最低97％の純度
を持つ留分をプールし、H₂Oから数回凍結乾燥して、純
粋なAP307アセテート塩を得た。

次に挙げるのは、実施例１から６で（アナログペプチ
ドAP1〜４および306および307を生産するために）概説
した手順に適切な改良を加えたものであり，第２図およ
び第３図に示されるANPアナログが合成される。化合物
が２つの“C"残基を含む場合には，ジスルフィドによっ
て形成された環が包含され，さもなければ，環が示され
ている。表のパートＡは，実施例１から４に類似する方
法によって合成された化合物を；パートＢは実施例306
から307に類似する方法によって合成された化合物をそ
れぞれ示す。パートＢにおいて，次に挙げた略語を用い
た。

AA＝アダマンチルアセチル BPA＝ビフェニルアセチル CHA＝シクロヘキシルアセチル DBA＝ジベンジルアセチル DPP＝ジフェニルプロピオニル IB＝インドールブチリル IP＝インドールプロピオニル NA＝ナフチルアセチル NL＝ナフチル NM＝ナフチルメチル NO＝ナフトキシ NOA＝ナフトキシアセチル NTA＝ナフチルチオアセチル NYL＝ナフトイル POP＝フェノキシプロピオニル TPP＝トリフェニルプロピオニル NeONAP＝メトキシナフチルプロピオニル 星印を付けた化合物は，配列分析によって配列が証明さ
れたものである。

II.生物学的試験：レセプター結合アッセイ 上記に開示したように合成された本発明の選択された
心房の、ナトリウム排出亢進性ペプチド（ANPs）アナロ
グの生物学的活性のデータを、レセプター結合アッセイ
の結果として以下に示す。単離した組織のアッセイと、
全体の哺乳類の生物学的アッセイとの、相関関係は、WO
87/02674に記載されている。

どの様な理論にも縛られるものではないが、本発明の
ANPアナログ化合物の活性は、腎臓、および内生的なANP
のクリアランスに影響する責のある他の位置中のレセプ
ターへの親和性に依存すると考えられる。以下のインビ
トロでの生物学的データには、本発明のアナログ化合物
が、培養されたウシ属の大静脈の平滑筋（BASM）細胞お
よびウシ属の内皮（BAE）細胞からのレセプターに結合
するヨウ素化天然ANP分子と競合することが示されてい
る。前記競合は、明らかに、関連したクリアランセレセ
プターへの結合に特徴的である。この相関関係は、上記
記載のWO87/0264のデータで確かめられる。更に、本発
明のアナログは、低減された環式のGMPの活性、つまりA
NPの直接の生物学的な機能の顕著な特徴である活性を示
す。

更に発明者は、ここで開示されたペプチドおよびペプ
チドアナログが、多くはなくとも、いくらかの経口活性
をも有すると考えている。

特定のANPレセプター位置が、腎臓、副腎、血管およ
び培養細胞の様なターゲット組織について同定されてき
た。Napier,M.A.ら、Proc Nat Acad Sci USA（1984）8
1:5946−5940;DeLean,A.ら、Endocrinology（1984）11
5:1636−1638;Schenk,D.B.ら、Biochem Biophys Res Co
mm（1985）127:433−422。前記の特定のレセプター位置
へのANPもしくはANPアナログの結合は、生物学的活性の
先行必須条件と考えられるので、前記レセプターのANP
アナログの結合は、生物学的活性の前兆と考えられてい
る。

一般的に、前出のSchenk、およびScarborough,R.M.
ら、J Biol Chem（1986）261:12960−12964に従って、
アッセイが発達しており、ANPアナログが標識された天
然のANPと競合して培養BASM細胞および培養BAE細胞に結
合する能力を評価する。この天然ANPは： のアミノ酸配列を持ち、アルボキシ末端Ｙ残基でヨウ素
化された。前記ANPは、（¹²⁵I）−rANP（126−150）と
して同定される。類似の「競合置換」レセプター結合ア
ッセイは、特定のリガンドレセプター相互作用を試験す
るには一般的な技術と考えられている。

このアッセイでは、0.5nM（¹²⁵I）−rANP（126−15
0）を、様々な量の標識されていないrANP（126−150）
もしくは試験化合物の存在するBASM細胞の各個別標本で
培養する。最大50％の（¹²⁵I）−rANP（126−150）結合
が置換される標識されていないペプチドの濃度は、Ki
（app）と呼ばれ、レセプター結合親和性を反映する。
従って、Ki（app）＝100nMを持つ仮定のペプチドＡは、
Ki（app）＝100nMを持つ仮定のペプチドＢよりも、レセ
プターと実質的に弱い相互作用を示す。これらのANPア
ナログが、ひとつもしくはそれ以上のANPレセプター位
置で作用すると仮定すると、増加したレセプター親和性
は、増加した生物学的有効性を反映するはずである。

表１は、本発明のアナログ化合物が、BASMもしくはBA
E細胞の特定のレセプター位置から（¹²⁵I）−rANP（126
−150）結合を置換する濃度を比較するデータを示す。

レセプター結合アッセイは、ANPに特異的であること
を示すために、rANP（126−150）と相互作用をするANP
レセプターと、関連のないペプチドホルモンであるアン
ギオテンシンII、グルカゴン、上皮小体のホルモンおよ
びガンマ−MSHと、を比較するデータを示す。ペプチド Ki(app) rANP（126−150） 7.50 アンギオテンシンII ＞500 グルカゴン ＞500 上皮小体ホルモン ＞500 ガンマ−MSH ＞500 上記に示されるように、rANP（126−150）のみが、検
出し得るANPリセプター類似性を示す。このことは、本
レセプターに関連したANP特異性を立証する。

上記の表のデータは、本発明の化合物の多くの典型的
なサンプルは、上記特異的レセプター結合アッセイにお
いて親和性を示すことを証明している。

フロントページの続き (72)発明者 ジョンソン，ロリン ケー. アメリカ合衆国 カリフォルニア 94566 プレザントン，ドロレス ドラ イブ 4979 (56)参考文献 国際公開87／2674（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (14)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】哺乳類において、ナトリウム排出亢進作
   用、利尿作用および／あるいは血管弛緩作用を有する環
   式ペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は次式を
   有する： X₁ AA_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA_zX₄ （１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、非環式の塩基
   性アミノ酸残基、カルボキシル基の炭素原子を含めて合
   計４以下の炭素原子を有する無極性の中性アミノ酸残
   基、あるいはカルボキシル基の炭素原子を含めて合計５
   以上の炭素原子を有する非芳香族の極性の中性アミノ酸
   残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA_yおよびAA_zは、共に架橋結合を形成するアミノ酸残基
   であり、該結合はジスルフィド結合、メチレン結合、ス
   ルフィド／メチレン結合、アミド結合およびエステル結
   合からなる群から選択され； X₁は、Ｈ、１から125のアミノ酸残基のペプチド、また
   はそれらのdesNH₂形、あるいはR₁が有機疎水基である６
   から20の炭素原子のR₁−CO−、またはナフチルもしくは
   ナフトキシルであり； X₂は、結合または１から10の残基のペプチドであり、こ
   こでAA₈のアミノ基とX₁AA_yX₂に存在する疎水性部との間
   の距離が、達成され得る立体配座において約4.5と15Å
   との間であり； X₄は、OH、NH₂、NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここで
   Ｒ′およびＲ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１〜10
   のＣ）であり、ここで、１から２個の非隣接ＣはＮ、
   Ｏ、もしくはＳで置き換えられ得、あるいはX₄は、その
   Ｃ−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態を含
   む１から20残基のペプチドであり；あるいは、Ｃ−末端
   カルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在せ
   ず； 全環の大きさは、５から15のアルファ−アミノ酸によっ
   て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
   形成されることによって得られるものと同等である。
2. 【請求項２】哺乳類において、ナトリウム排出亢進作
   用、利尿作用および／あるいは血管弛緩作用を有する環
   式ペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は次式を
   有する： X₁AA_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃AA_zX₄（１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、非環式の塩基
   性アミノ酸残基、カルボキシル基の炭素原子を含めて合
   計４以下の炭素原子を有する無極性の中性アミノ酸残
   基、あるいはカルボキシル基の炭素原子を含めて合計５
   以上の炭素原子を有する非芳香族の極性の中性アミノ酸
   残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基または共有結合であり； AA_yおよびAA_zは、共に架橋結合を形成するアミノ酸残基
   であり、該結合はジスルフィド結合、メチレン結合、ス
   ルフィド／メチレン結合、アミド結合およびエステル結
   合からなる群から選択され； X₁は、R₁が有機疎水基である６から20の炭素原子のR₁−
   CO−、またはナフチルもしくはナフトキシルであり； X₂は、結合または１から10の残基のペプチドであり、こ
   こでAA₈のアミノ基とX₁AA_yX₂に存在する疎水性部との間
   の距離が、達成され得る立体配座において約4.5と15Å
   との間であり； X₃は、結合または１から10の残基のペプチドであり、そ
   して X₄は、OH、NH₂、NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここで
   Ｒ′およびＲ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１〜10
   のＣ）であり、ここで、１から２個の非隣接ＣはＮ、
   Ｏ、もしくはＳで置き換えられ得、あるいはX₄は、その
   Ｃ−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態を含
   む１から20残基のペプチドであり；あるいは、Ｃ−末端
   カルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在せ
   ず； 全環の大きさは、５から15のアルファ−アミノ酸によっ
   て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
   形成されることによって得られるものと同等である。
3. 【請求項３】哺乳類において、ナトリウム排出亢進作
   用、利尿作用および／あるいは血管弛緩作用を有する環
   式ペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は次式を
   有する： X₁AA_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃AA_zX₄（１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、非環式の塩基
   性アミノ酸残基、カルボキシル基の炭素原子を含めて合
   計４以下の炭素原子を有する無極性の中性アミノ酸残
   基、あるいはカルボキシル基の炭素原子を含めて合計５
   以上の炭素原子を有する非芳香族の極性の中性アミノ酸
   残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基または共有結合であり； AA_yおよびAA_zは、共に架橋結合を形成するアミノ酸残基
   であり、該結合はアミド結合およびエステル結合からな
   る群から選択され； X₁は、Ｈ、１から125のアミノ酸残基のペプチド、また
   はそれらのdesNH₂形、あるいはR₁が有機疎水基である６
   から20の炭素原子のR₁−CO−、またはナフチルもしくは
   ナフトキシルであり； X₂は、結合または１から10の残基のペプチドであり、こ
   こでAA₈のアミノ基とX₁AA_yX₂に存在する疎水性部との間
   の距離が、達成され得る立体配座において約4.5と15Å
   との間であり； X₃は、結合または１から10の残基のペプチドであり、そ
   して X₄は、OH、NH₂、NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここで
   Ｒ′およびＲ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１〜10
   のＣ）であり、ここで、１から２個の非隣接ＣはＮ、
   Ｏ、もしくはＳで置き換えられ得、あるいはX₄は、その
   Ｃ−末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態を含
   む１から20残基のペプチドであり；あるいは、Ｃ−末端
   カルボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在せ
   ず； 全環の大きさは、５から15のアルファ−アミノ酸によっ
   て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
   形成されることによって得られるものと同等である。
4. 【請求項４】哺乳類において、ナトリウム排出亢進作
   用、利尿作用および／あるいは血管弛緩作用を有する環
   式ペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は次式を
   有する： X₁AA_yX₂−AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂−X₃AA_zX₄（１） ここで、各AA₈およびAA₁₁は、独立して、非環式の塩基
   性アミノ酸残基、カルボキシル基の炭素原子を含めて合
   計４以下の炭素原子を有する無極性の中性アミノ酸残
   基、あるいはカルボキシル基の炭素原子を含めて合計５
   以上の炭素原子を有する非芳香族の極性の中性アミノ酸
   残基であり； AA₉は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基であり； AA₁₀は、酸性のアミノ酸残基であり； AA₁₂は、ＤまたはＬ配置のカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計５以上の炭素原子を有する非芳香族の無極性
   の中性アミノ酸残基または共有結合であり； AA_yおよびAA_zは、共に架橋結合を形成するアミノ酸残基
   であり、該結合はジスルフィド結合、メチレン結合、ス
   ルフィド／メチレン結合、アミド結合およびエステル結
   合からなる群から選択され； X₁は、Ｈ、１から125のアミノ酸残基のペプチド、また
   はそれらのdesNH₂形、あるいは、R₁が有機疎水基である
   ６から20の炭素原子のR₁−CO−、またはナフチルもしく
   はナフトキシルであり； X₂は、結合または１から10の残基のペプチドであり、こ
   こでAA₈のアミノ基とX₁AA_yX₂に存在する疎水性部との間
   の距離が、達成され得る立体配座において約4.5と15Å
   との間であり； X₃は、結合または１から10の残基のペプチドであり、そ
   して X₄は、OH、NH₂、NHR′、またはNR′Ｒ″であり、ここで
   Ｒ′およびＲ″は直鎖もしくは分枝鎖アルキル（１〜10
   のＣ）であり、ここで、１から２個の非隣接ＣはＮ、Ｏ
   もしくはＳで置き換えられ得、あるいはX₄は、そのＣ−
   末端アミドまたはそれらのアルキルアミド形態を含む１
   から20残基のペプチドであり；あるいは、Ｃ−末端カル
   ボキシルが架橋の一部である場合にはX₄は存在せず； 全環の大きさは、５から15のアルファ−アミノ酸によっ
   て分離されたシステイン残基の間にジスルフィド架橋が
   形成されることによって得られるものと同等であり； 隣接するアミノ酸残基の間の１つもしくはそれ以上のア
   ミド結合は、−CH₂NH−、−CH₂−Ｓ−、−CH₂CH₂−、−
   CH＝CH−、−COCH₂−、−CH(OH)CH₂−および−CH₂SO−
   からなる群から選択される結合によって置き換えられ
   る。
5. 【請求項５】請求項１から４に記載の化合物であって、
   X₁は、フルオレニルメチルオキシカルボニル、ベンジル
   オキシカルボニル、２−（２′−（６′−メトキシナフ
   チル））プロピオニル、ジフェニルプロピオニル、ビフ
   ェニルアセチル、トリフェニルプロピオニル、シクロヘ
   キシルアセチル、３−インドールプロピオニル、４−イ
   ンドールブチリル、１−アダマンチルアセチル、１−ナ
   フチルアセチル、２−ナフチルアセチル、１−ナフトキ
   シアセチル、２−ナフトキシアセチル、ジベンジルアセ
   チル、ビス（１′−ナフチルメチル）アセチル、２−ナ
   フチルチオアセチル、３−フェノキシプロピオニル、２
   −ナフトイル、２−ナフトキシ、２−ナフチルおよびde
   s−NH₂−フェニルアラニルからなる群から選択される。
6. 【請求項６】請求項１、３または４に記載の化合物であ
   って、X₁は、水素または１から６のアミノ酸残基からな
   るペプチドであり、 該ペプチドは： Ｓ−Ｌ−Ｒ−Ｒ−Ｓ−Ｓ、Ｌ−Ｒ−Ｒ−Ｓ−Ｓ、Ｒ−Ｒ
   −Ｓ−Ｓ、Ｒ−Ｓ−Ｓ、Ｓ−Ｓ、およびＳからなる群か
   ら選択される。
7. 【請求項７】請求項１、３または４に記載の化合物であ
   って、X₂は、結合、およびカルボキシル基の炭素原子を
   含めて合計４以下の炭素原子を有する極性の中性アミノ
   酸残基またはカルボキシル基の炭素原子を含めて合計４
   以下の炭素原子を有する無極性の中性アミノ酸残基のサ
   ブクラスである１から３のアミノ酸のペプチド、あるい
   は、Ｆ−(AA)_aであり、ここでａは１または２であり、
   そしてAAはカルボキシル基の炭素原子を含めて合計４以
   下の炭素原子を有する極性の中性アミノ酸残基またはカ
   ルボキシル基の炭素原子を含めて合計４以下の炭素原子
   を有する無極性の中性アミノ酸残基のサブクラスであ
   る。
8. 【請求項８】請求項１から４に記載の化合物であって、
   X₃は： Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ−Ｌ−Ｇ、Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ−
   Ｌ、 Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ−Ｌ−Ｇ、Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｓ−Ｇ、Ｑ−Ｓ
   −Ｇ−Ｌ−Ｇ、 Ｇ−Ａ−Ｑ−Ｓ、Ｓ−Ｇ−Ｌ−Ｇ、Ｇ−Ａ−Ｑ、Ｇ−Ａ
   −Ａ、Ｇ−Ｌ−Ｇ、 Ｌ−Ｇ、Ｇ−Ａ、Ｇおよび結合からなる群から選択さ
   れ、そしてここで１つの残基が同様のサブクラスのその
   他の残基；およびｂが３から６である−NH(CH₂)_bCOによ
   って置換される。
9. 【請求項９】請求項１から４に記載の化合物であって、
   X₄は(OH)NH₂、NHR′であり、Ｒ′は１〜10のＣの直鎖ま
   たは分岐鎖アリルであり、１から２個の非隣接ＣはＮ、
   Ｏ、またはＳによって置換されるか、あるいはＲ′は１
   から５個のアミノ酸残基のペプチドあるいはアミドまた
   はそれらのアルキルアミドであり、あるいはＣ−末端カ
   ルボキシルが架橋の一部である場合、X₄は存在しない。
10. 【請求項１０】請求項１から４に記載の化合物であっ
    て、AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂はＲ（I/M）DRIであ
    り、多くてもその中の残基１つの残基は、 AA₈としてＲの代わりに、Ａ、Ｑ、Ｎ、Ｋ、ＬもしくはN
    MeIleに、 AA₉としてＩまたはＭの代わりに、Ｖ、Ｖ^†、Ｌ、
    Ｌ^†、Ｉ^†、Ｍ^†、ｔ−BuA、ｔ−BuGもしくはChaに、 AA₁₀としてＤの代わりに、ＥまたはCyaに、 AA₁₁としてＲの代わりに、Ａ、Ｑ、Ｎ、Ｋ、Ornもしく
    はCitに；そして AA₁₂としてＩの代わりに、Ｍ、Ｍ^†、Ｖ、Ｖ^†、Ｌ、Ｌ
    ^†、Ｉ^†、Ｎ−MeIle、ｔ−BuAもしくは共有結合に、 置換することによって置換されている。
11. 【請求項１１】請求項１から４に記載の化合物であっ
    て、AA₈−AA₉−AA₁₀−AA₁₁−AA₁₂は、 Ａ（I/M）DRI RM^†DRI Ｒ（I/M）DRL Ｋ（I/M）DRI RLDRI Ｒ（I/M）DRM Ｑ（I/M）DRI Ｒ（I/M）ERI Ｒ（I/M）DRM^† RVDRI Ｒ（I/M）DKI Ｒ（I/M）DRI^† RI^†DRI Ｒ（I/M）DQI Ｒ（I/M）DRV およびＲ（I/M）DRIでなる群から選択される。
12. 【請求項１２】第２図に示されるものからなる群から選
    択される、請求項１から４に記載の化合物。
13. 【請求項１３】ナトリウム排出亢進薬、利尿薬および／
    あるいは血管拡張薬として有用な組成物であって、該組
    成物は、薬学的に受容され得るキャリアと共に、治療上
    効果のある量の請求項１から４に記載の化合物を有す
    る。
14. 【請求項１４】哺乳類において、ナトリウム排出亢進作
    用、利尿作用および／あるいは血管拡張作用を有する、
    ペプチド化合物の製造方法であって、該ペプチド化合物
    は、請求項１から４に記載の化合物もしくは、その中に
    薬剤的に受容され得る塩の構造を有し、該方法は、次の
    工程を包含する： a.反応混合物中で固体樹脂担体に結合した保護ペプチド
    を調製すること、ここで、該ペプチドは、上記のアミノ
    酸配列を有する； b.該ペプチドから固体樹脂担体を除去し、ペプチドを脱
    保護すること； c.必要に応じて該ペプチドから環化合物を形成するこ
    と； d.必要に応じて、上記の所望の有機置換基が加えられる
    ように、ペプチドを修飾すること；および e.反応混合物からペプチドを単離し、必要に応じて、該
    ポリペプチドを酸添加塩に変換すること。