JP2757946B2 - デキストラナーゼ吸着体およびその製造法 - Google Patents
デキストラナーゼ吸着体およびその製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、デキストラナーゼを吸
着した架橋または不溶化デキストラン、およびその製造
法に関するものである。本発明の１つの態様は、エピク
ロルヒドリン、リン酸などの架橋剤で架橋した架橋デキ
ストランに、デキストラナーゼを含む溶液からデキスト
ラナーゼを吸着させ、デキストラナーゼ吸着架橋デキス
トランを得る方法であり、これは乾燥させた粉末または
粒状の形態でデキストラナーゼ製剤として使用される。
このデキストラナーゼ吸着架橋デキストランはグルタル
アルデヒドなどで固定化することができる。別の態様
は、溶媒添加により不溶化したデキストランにデキスト
ラナーゼを吸着させ、デキストラナーゼ吸着不溶化デキ
ストランを得る方法である。
着した架橋または不溶化デキストラン、およびその製造
法に関するものである。本発明の１つの態様は、エピク
ロルヒドリン、リン酸などの架橋剤で架橋した架橋デキ
ストランに、デキストラナーゼを含む溶液からデキスト
ラナーゼを吸着させ、デキストラナーゼ吸着架橋デキス
トランを得る方法であり、これは乾燥させた粉末または
粒状の形態でデキストラナーゼ製剤として使用される。
このデキストラナーゼ吸着架橋デキストランはグルタル
アルデヒドなどで固定化することができる。別の態様
は、溶媒添加により不溶化したデキストランにデキスト
ラナーゼを吸着させ、デキストラナーゼ吸着不溶化デキ
ストランを得る方法である。
【０００２】
【従来の技術】従来、デキストラナーゼの分離、精製法
としては、アルコール沈澱、硫安沈澱などの通常の方法
の他に、ハイドロキシアパタイト吸着、限外濾過濃縮−
Ｂio−Ｇel Ａ−０.５m、ＣＭ−セルロース、ＣＭ−セ
ファロースのカラムクロマトグラフィーによる分離精
製、イソプロパノール沈澱などの方法が用いられてき
た。架橋デキストランについては、一般に知られていな
いが、本発明者が従来の澱粉の架橋方法をデキストラン
の架橋に適用すること試みた結果では、架橋度を適度に
選択すれば、大部分の方法により、不溶性の架橋デキス
トランを調製できることが判明した。最近、デキストラ
ンの分解による各種イソマルトオリゴ糖の生産用とし
て、また蔗糖の摂取により生成し虫歯の原因となるデキ
ストランを分解して虫歯の発生を予防するための酵素剤
として、デキストラン分解酵素であるデキストラナーゼ
の必要性は著しく高まってきている。
としては、アルコール沈澱、硫安沈澱などの通常の方法
の他に、ハイドロキシアパタイト吸着、限外濾過濃縮−
Ｂio−Ｇel Ａ−０.５m、ＣＭ−セルロース、ＣＭ−セ
ファロースのカラムクロマトグラフィーによる分離精
製、イソプロパノール沈澱などの方法が用いられてき
た。架橋デキストランについては、一般に知られていな
いが、本発明者が従来の澱粉の架橋方法をデキストラン
の架橋に適用すること試みた結果では、架橋度を適度に
選択すれば、大部分の方法により、不溶性の架橋デキス
トランを調製できることが判明した。最近、デキストラ
ンの分解による各種イソマルトオリゴ糖の生産用とし
て、また蔗糖の摂取により生成し虫歯の原因となるデキ
ストランを分解して虫歯の発生を予防するための酵素剤
として、デキストラン分解酵素であるデキストラナーゼ
の必要性は著しく高まってきている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、一般に酵素市
販品は吸湿性粉末または冷凍乾燥品であり、不安定で分
解し易く取扱いが不便であるという欠点があった。そこ
で、このような欠点がなく、酵素活性を充分保持した製
品の開発が望まれていた。
販品は吸湿性粉末または冷凍乾燥品であり、不安定で分
解し易く取扱いが不便であるという欠点があった。そこ
で、このような欠点がなく、酵素活性を充分保持した製
品の開発が望まれていた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、デキスト
ランに架橋処理し不溶性とした架橋デキストランまたは
エタノールなどの有機溶媒を加えて不溶性とした不溶化
デキストランに、デキストラナーゼ酵素を吸着させるこ
とを検討したところ、低温で攪拌するのみで該酵素が効
率的に吸着され、酵素活性を有する安定な製品が得られ
ることを見い出し、本発明を完成した。
ランに架橋処理し不溶性とした架橋デキストランまたは
エタノールなどの有機溶媒を加えて不溶性とした不溶化
デキストランに、デキストラナーゼ酵素を吸着させるこ
とを検討したところ、低温で攪拌するのみで該酵素が効
率的に吸着され、酵素活性を有する安定な製品が得られ
ることを見い出し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、（１） デキストラ
ナーゼを吸着した架橋または不溶化デキストラン、
（２） 架橋デキストランにデキストラナーゼを接触さ
せることを特徴とするデキストラナーゼ吸着架橋デキス
トランの製造法、および（３） 溶媒処理により不溶化
したデキストランに低温でデキストラナーゼを接触させ
吸着させることを特徴とするデキストラナーゼ吸着デキ
ストランの製造法を提供するものである。
ナーゼを吸着した架橋または不溶化デキストラン、
（２） 架橋デキストランにデキストラナーゼを接触さ
せることを特徴とするデキストラナーゼ吸着架橋デキス
トランの製造法、および（３） 溶媒処理により不溶化
したデキストランに低温でデキストラナーゼを接触させ
吸着させることを特徴とするデキストラナーゼ吸着デキ
ストランの製造法を提供するものである。
【０００６】デキストラナーゼは、別名α−１,６−グ
ルカン−６−グルカノヒドロラーゼと称し、デキストラ
ンのα−１,６−グルコシド結合を加水分解する酵素で
ある。デキストラナーゼには、ペニシリウム（Ｐenicill
ium）、アスペルギルス（Ａspergillus）、ベルチシリ
ウム（Ｖerticillium）、スピカリア（Ｓpicaria）、カ
エトミウム（Ｃhaetomium）等の糸状菌が生産するも
の、セルビブリオ・フルバ（Ｃellvibrio fulva）、バ
クテロイデス（Ｂacteroides）、ラクトバチルス・ビフ
ィズス（Ｌactobacillus bifidus）等の細菌が生産する
もの、および動物の内臓（脾臓、腎臓、肝臓等）に含ま
れるもの等があるが、何れも本発明で用いることができ
る。
ルカン−６−グルカノヒドロラーゼと称し、デキストラ
ンのα−１,６−グルコシド結合を加水分解する酵素で
ある。デキストラナーゼには、ペニシリウム（Ｐenicill
ium）、アスペルギルス（Ａspergillus）、ベルチシリ
ウム（Ｖerticillium）、スピカリア（Ｓpicaria）、カ
エトミウム（Ｃhaetomium）等の糸状菌が生産するも
の、セルビブリオ・フルバ（Ｃellvibrio fulva）、バ
クテロイデス（Ｂacteroides）、ラクトバチルス・ビフ
ィズス（Ｌactobacillus bifidus）等の細菌が生産する
もの、および動物の内臓（脾臓、腎臓、肝臓等）に含ま
れるもの等があるが、何れも本発明で用いることができ
る。
【０００７】架橋デキストランは、デキストランに架橋
剤を反応させることにより製造することができる。デキ
ストランとしては、天然のもの（例えば分子量２００〜
４００万）およびその部分加水分解物（例えば分子量４
万、７万、１６万等のもの）がある。架橋剤としては、
デキストランの水酸基と反応してエーテル結合またはエ
ステル結合を形成し得る官能基を２個以上、好ましくは
２個、３個または４個有する低分子無機または有機化合
物が用いられる。このような官能基としては、ハロゲン
（例えば塩素）、ヒドロキシ、エポキシ、オキソ、カル
ボキシ、不飽和結合等が含まれる。また、架橋剤の具体
例としては、エピクロルヒドリン、リン酸、アクロレイ
ン、塩化シアヌル、アジピン酸、クエン酸（無水酢酸等
の脱水縮合剤の存在下）等が含まれる。不溶化デキスト
ランは、デキストランを溶かさない溶媒、例えばメタノ
ール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール、
アセトン等のデキストランを不溶化、沈澱させ得る任意
の有機溶媒でデキストランを処理することにより得られ
る。食品用の製品を目的とする場合は、エタノールを用
いるのが好ましい。
剤を反応させることにより製造することができる。デキ
ストランとしては、天然のもの（例えば分子量２００〜
４００万）およびその部分加水分解物（例えば分子量４
万、７万、１６万等のもの）がある。架橋剤としては、
デキストランの水酸基と反応してエーテル結合またはエ
ステル結合を形成し得る官能基を２個以上、好ましくは
２個、３個または４個有する低分子無機または有機化合
物が用いられる。このような官能基としては、ハロゲン
（例えば塩素）、ヒドロキシ、エポキシ、オキソ、カル
ボキシ、不飽和結合等が含まれる。また、架橋剤の具体
例としては、エピクロルヒドリン、リン酸、アクロレイ
ン、塩化シアヌル、アジピン酸、クエン酸（無水酢酸等
の脱水縮合剤の存在下）等が含まれる。不溶化デキスト
ランは、デキストランを溶かさない溶媒、例えばメタノ
ール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール、
アセトン等のデキストランを不溶化、沈澱させ得る任意
の有機溶媒でデキストランを処理することにより得られ
る。食品用の製品を目的とする場合は、エタノールを用
いるのが好ましい。
【０００８】このように製造された架橋デキストランま
たは不溶化デキストランは、低温でデキストラナーゼを
緩かに吸着する。一例では１日で、２４％、２日で５４
％、３日で９４％の吸着率であった。したがって、高吸
着率を達成するには長時間緩く攪拌すればよいが、短時
間で達成するには、酵素濃度を高めて１日吸着処理した
後、残存酵素を新鮮架橋デキストランに吸着させるなど
の方法が好ましい。吸着酵素は比較的安定であり、凍結
乾燥品は４℃の保存では１カ月以上失活しないが、３０
℃では１週間で活性残存率は５０〜３０％程度に低下す
る。食品、その他のシェルフライフを延長させるために
は、より安定性の高いデキストラナーゼが望まれるが、
固定化することにより安定性は高まり、１週間、３０℃
の保存で残存率は７０〜６０％になるので、本製品は例
えばデキストランからのオリゴ糖製造にも有利に使用で
きる。
たは不溶化デキストランは、低温でデキストラナーゼを
緩かに吸着する。一例では１日で、２４％、２日で５４
％、３日で９４％の吸着率であった。したがって、高吸
着率を達成するには長時間緩く攪拌すればよいが、短時
間で達成するには、酵素濃度を高めて１日吸着処理した
後、残存酵素を新鮮架橋デキストランに吸着させるなど
の方法が好ましい。吸着酵素は比較的安定であり、凍結
乾燥品は４℃の保存では１カ月以上失活しないが、３０
℃では１週間で活性残存率は５０〜３０％程度に低下す
る。食品、その他のシェルフライフを延長させるために
は、より安定性の高いデキストラナーゼが望まれるが、
固定化することにより安定性は高まり、１週間、３０℃
の保存で残存率は７０〜６０％になるので、本製品は例
えばデキストランからのオリゴ糖製造にも有利に使用で
きる。
【０００９】また、デキストラン溶液にエタノールを加
えて、デキストランを不溶性にし、０℃以下とした後、
デキストラナーゼを加えて攪拌した場合にも効果的に該
酵素を吸着することができ、攪拌時間が１２時間以下で
あれば、デキストランの分解を１５％以下に抑えること
ができる。デキストラナーゼ吸着デキストランは濾過ま
たは遠心分離により分離することができた。なお、低温
でデキストランにデキストラナーゼを吸着させる場合、
多量の酵素を吸着させると溶解して、該酵素の単離、濃
縮ができなくなることがある。このような場合には、少
量を吸着させて、固定化しないで、デキストラン分解物
の生産、食品用途に使用できる。
えて、デキストランを不溶性にし、０℃以下とした後、
デキストラナーゼを加えて攪拌した場合にも効果的に該
酵素を吸着することができ、攪拌時間が１２時間以下で
あれば、デキストランの分解を１５％以下に抑えること
ができる。デキストラナーゼ吸着デキストランは濾過ま
たは遠心分離により分離することができた。なお、低温
でデキストランにデキストラナーゼを吸着させる場合、
多量の酵素を吸着させると溶解して、該酵素の単離、濃
縮ができなくなることがある。このような場合には、少
量を吸着させて、固定化しないで、デキストラン分解物
の生産、食品用途に使用できる。
【００１０】さらに、上記のようにして得られた製品に
固定化剤を作用させてデキストランを固定化することが
できる。固定化剤としては一般に固定化酵素の製造に使
用されているものはすべて使用することができるが、グ
ルタルアルデヒドが広く用いられる。しかし、固定化に
よりデキストラナーゼが失活しなければどのような方法
でもよく、必要に応じて固定化基材と混合して固定化す
ることもできる。
固定化剤を作用させてデキストランを固定化することが
できる。固定化剤としては一般に固定化酵素の製造に使
用されているものはすべて使用することができるが、グ
ルタルアルデヒドが広く用いられる。しかし、固定化に
よりデキストラナーゼが失活しなければどのような方法
でもよく、必要に応じて固定化基材と混合して固定化す
ることもできる。
【００１１】
【発明の効果】本発明の方法によって得られるデキスト
ラナーゼ吸着架橋または不溶化デキストランは安定な不
溶性固体で取扱いが容易であるから、特に食品への利用
に有利であり、例えば、蔗糖を含む食品に添加すれば、
虫歯の原因となるデキストランを分解することができる
ので、蔗糖から生成されるデキストランが歯に付着せず
したがって、虫歯の発生を防止できる。このように、本
発明は甘味として最も優れた蔗糖を採取しても虫歯にな
らないというデキストラナーゼ製剤を提供するもので、
その利点は著しく大きくデキストラナーゼ製剤が食品と
して適当な素材であれば蔗糖を含む菓子、キャンディ
ー、ガム類に混合して虫歯防止用とすることもできる。
ラナーゼ吸着架橋または不溶化デキストランは安定な不
溶性固体で取扱いが容易であるから、特に食品への利用
に有利であり、例えば、蔗糖を含む食品に添加すれば、
虫歯の原因となるデキストランを分解することができる
ので、蔗糖から生成されるデキストランが歯に付着せず
したがって、虫歯の発生を防止できる。このように、本
発明は甘味として最も優れた蔗糖を採取しても虫歯にな
らないというデキストラナーゼ製剤を提供するもので、
その利点は著しく大きくデキストラナーゼ製剤が食品と
して適当な素材であれば蔗糖を含む菓子、キャンディ
ー、ガム類に混合して虫歯防止用とすることもできる。
【００１２】リン酸などの毒性の弱い架橋デキストラン
による製剤は虫歯予防用の歯磨きペーストに加えて利用
することができ、毒性試験で安全性が確認できれば食品
への混合使用も可能である。また、本発明の方法はデキ
ストラナーゼの精製法としても優れたものであり、該酵
素は一段階で純化され、精製された酵素蛋白が得られ
る。さらに、本発明のデキストラン・酵素複合体を反応
させることにより、デキストランを分解除去できるの
で、デキストラン除去剤としても使用できる。また、洗
剤に混合して、カビ類が生産する多糖を分解して色素の
沈着を防止することもでき用途は化粧品にも拡げること
ができる。
による製剤は虫歯予防用の歯磨きペーストに加えて利用
することができ、毒性試験で安全性が確認できれば食品
への混合使用も可能である。また、本発明の方法はデキ
ストラナーゼの精製法としても優れたものであり、該酵
素は一段階で純化され、精製された酵素蛋白が得られ
る。さらに、本発明のデキストラン・酵素複合体を反応
させることにより、デキストランを分解除去できるの
で、デキストラン除去剤としても使用できる。また、洗
剤に混合して、カビ類が生産する多糖を分解して色素の
沈着を防止することもでき用途は化粧品にも拡げること
ができる。
【００１３】
【実施例】次に、本発明を実施例により説明する。 製造例１ エピクロルヒドリン架橋デキストランの調製 デキストラン溶液は市販デキストラン５gを３０mlの水
に加え、８０℃で溶解して調製した。一方、アルカリ溶
液は水酸化ナトリウム０.５gおよび硫酸ナトリウム２５
gを２０mlの水に溶解して調製し、本アルカリ溶液中に
デキストラン溶液を緩く攪拌しながら添加し、さらに、
エピクロルヒドリンを２〜２５％濃度に滴下し、２〜３
分間緩く混合し、４０℃で２４時間、緩く攪拌反応し
た。本反応により不溶化したデキストランを水で２〜３
回洗浄し、４℃で保存した。このようにして調製した架
橋デキストランの形状はエピクロルヒドリン添加量によ
って表のように変化し、分子量１６０,０００の市販デ
キストランを用いた場合、１０〜１５％で良好に不溶化
した。また、分子量２,０００,０００のデキストランを
用いた場合、５〜２５％で良好に不溶化して、本架橋デ
キストランは３０分以上、沸騰水中でも溶解しなかっ
た。分子量１６０,０００のデキストランでは２０〜２
５％エピクロルヒドリンの架橋でよりソフトなゲル状に
なり、分子量２,０００,０００のデキストランでは３０
％以上でソフトなゲルとなった。
に加え、８０℃で溶解して調製した。一方、アルカリ溶
液は水酸化ナトリウム０.５gおよび硫酸ナトリウム２５
gを２０mlの水に溶解して調製し、本アルカリ溶液中に
デキストラン溶液を緩く攪拌しながら添加し、さらに、
エピクロルヒドリンを２〜２５％濃度に滴下し、２〜３
分間緩く混合し、４０℃で２４時間、緩く攪拌反応し
た。本反応により不溶化したデキストランを水で２〜３
回洗浄し、４℃で保存した。このようにして調製した架
橋デキストランの形状はエピクロルヒドリン添加量によ
って表のように変化し、分子量１６０,０００の市販デ
キストランを用いた場合、１０〜１５％で良好に不溶化
した。また、分子量２,０００,０００のデキストランを
用いた場合、５〜２５％で良好に不溶化して、本架橋デ
キストランは３０分以上、沸騰水中でも溶解しなかっ
た。分子量１６０,０００のデキストランでは２０〜２
５％エピクロルヒドリンの架橋でよりソフトなゲル状に
なり、分子量２,０００,０００のデキストランでは３０
％以上でソフトなゲルとなった。
【００１４】
【表１】
【００１５】分子量１６０,０００のものを用いた場
合、１０〜１５％架橋デキストラン(Ｄep１０−１５)の
調製において、デキストラン５gから湿潤標品が４０〜
５０g(水分８０％)得られた。
合、１０〜１５％架橋デキストラン(Ｄep１０−１５)の
調製において、デキストラン５gから湿潤標品が４０〜
５０g(水分８０％)得られた。
【００１６】製造例２ 同様にして、従来法により、リン酸架橋デキストランを
調製した。即ち、トリメタリン酸をデキストランの１〜
１０％に加え、pＨを１１に調整した後、４５℃で１〜
６時間緩く攪拌した。反応終了後、不溶化したデキスト
ランを集め、水で洗浄した後、デキストラナーゼ吸着に
用いた。なお、不溶性となったデキストランは低温でデ
キストラナーゼの作用を受け難く、トリメタリン酸の添
加量に関わらずいずれでも本発明の方法に適用できる
が、リン酸架橋不溶性デキストランの収量はトリメタリ
ン酸添加量５％以上で顕著に上がった。また、分子量
２,０００,０００のデキストランを用いた方が高収量で
あった。
調製した。即ち、トリメタリン酸をデキストランの１〜
１０％に加え、pＨを１１に調整した後、４５℃で１〜
６時間緩く攪拌した。反応終了後、不溶化したデキスト
ランを集め、水で洗浄した後、デキストラナーゼ吸着に
用いた。なお、不溶性となったデキストランは低温でデ
キストラナーゼの作用を受け難く、トリメタリン酸の添
加量に関わらずいずれでも本発明の方法に適用できる
が、リン酸架橋不溶性デキストランの収量はトリメタリ
ン酸添加量５％以上で顕著に上がった。また、分子量
２,０００,０００のデキストランを用いた方が高収量で
あった。
【００１７】実施例１ 製造例１で調整した架橋デキストランのうち、分子量１
６０,０００の市販デキストランにエピクロルヒドリン
１０〜１５％を添加して得られた架橋デキストラン(Ｄe
p １０−１５)１０gを基質とし、市販デキストラナー
ゼ［カエトミウム・アラシル(Ｃhaetomium aracile)３
０,０００単位／ml粗酵素溶液］６,０００単位を含む酵
素溶液２００μlと４０mＭ酢酸緩衝液(pＨ５.２)９.８m
lを混合し、４℃で３日間静置したところ、供試酵素溶
液のデキストラナーゼ全活性の９８％がＤep １０−１
５に吸着された酵素複合体(デキストラナーゼ吸着架橋
デキストラン)を得た。上記のデキストラナーゼ活性単
位は、天野製薬(株)の表示単位で下記の測定法によって
いる。
６０,０００の市販デキストランにエピクロルヒドリン
１０〜１５％を添加して得られた架橋デキストラン(Ｄe
p １０−１５)１０gを基質とし、市販デキストラナー
ゼ［カエトミウム・アラシル(Ｃhaetomium aracile)３
０,０００単位／ml粗酵素溶液］６,０００単位を含む酵
素溶液２００μlと４０mＭ酢酸緩衝液(pＨ５.２)９.８m
lを混合し、４℃で３日間静置したところ、供試酵素溶
液のデキストラナーゼ全活性の９８％がＤep １０−１
５に吸着された酵素複合体(デキストラナーゼ吸着架橋
デキストラン)を得た。上記のデキストラナーゼ活性単
位は、天野製薬(株)の表示単位で下記の測定法によって
いる。
【００１８】デキストラナーゼ活性の測定法： 基質；ファルマシア製デキストランＴ−１０の乾燥物
０.５gを蒸留水に溶解し５０mlとする。 活性測定法：基質１０mlと酪酸緩衝液(pＨ５.８)４mlを
３７±０.１℃で５分間放置後、デキストラナーゼ試料
溶液１mlを加え３７±０.１℃で３０分間反応させ、生
成した。イソマルトースを主体とした生成還元糖をＨan
es法により、澱粉液を指示薬として０.０１Ｎ チオ硫
酸ナトリウム溶液で滴定することで活性測定を行う。 力価の算出；１分間に１μmolのチオ硫酸ナトリウムに
相当する還元糖を１単位として算出する。 本酵素複合体を同上の緩衝液で洗浄し、凍結乾燥させて
白色のデキストラナーゼ吸着酵素製剤(Ａ)２.０gを得
た。また上記の酵素複合体を常法によりグルテアルデヒ
ドで固定化し、同上の緩衝液で洗浄し、凍結乾燥させて
白色のデキストラナーゼ吸着固定化酵素製剤(Ｂ)２.２g
を得た。上記(Ａ)、(Ｂ)を３０℃で一週間放置したとこ
ろ、デキストラナーゼ活性の残存率が(Ａ)では約４５％
であるのに対し、(Ｂ)は約７０％であり、(Ｂ)の方が
(Ａ)よりも安定性の高いデキストラナーゼ製剤となって
いることがわかった。
０.５gを蒸留水に溶解し５０mlとする。 活性測定法：基質１０mlと酪酸緩衝液(pＨ５.８)４mlを
３７±０.１℃で５分間放置後、デキストラナーゼ試料
溶液１mlを加え３７±０.１℃で３０分間反応させ、生
成した。イソマルトースを主体とした生成還元糖をＨan
es法により、澱粉液を指示薬として０.０１Ｎ チオ硫
酸ナトリウム溶液で滴定することで活性測定を行う。 力価の算出；１分間に１μmolのチオ硫酸ナトリウムに
相当する還元糖を１単位として算出する。 本酵素複合体を同上の緩衝液で洗浄し、凍結乾燥させて
白色のデキストラナーゼ吸着酵素製剤(Ａ)２.０gを得
た。また上記の酵素複合体を常法によりグルテアルデヒ
ドで固定化し、同上の緩衝液で洗浄し、凍結乾燥させて
白色のデキストラナーゼ吸着固定化酵素製剤(Ｂ)２.２g
を得た。上記(Ａ)、(Ｂ)を３０℃で一週間放置したとこ
ろ、デキストラナーゼ活性の残存率が(Ａ)では約４５％
であるのに対し、(Ｂ)は約７０％であり、(Ｂ)の方が
(Ａ)よりも安定性の高いデキストラナーゼ製剤となって
いることがわかった。
【００１９】実施例２ 実施例１の市販デキストランにpＨ１０に調整したトリ
メタリン酸液を用いてリン酸架橋したもの１０gを基質
として、実施例１と同様条件で白色デキストラナーゼ製
剤(デキストラナーゼ吸着架橋デキストラン)９.８gを得
た。この酵素製剤には、供試酵素溶液のデキストラナー
ゼ全活性の８５％が吸着されていた。
メタリン酸液を用いてリン酸架橋したもの１０gを基質
として、実施例１と同様条件で白色デキストラナーゼ製
剤(デキストラナーゼ吸着架橋デキストラン)９.８gを得
た。この酵素製剤には、供試酵素溶液のデキストラナー
ゼ全活性の８５％が吸着されていた。
【００２０】実施例３ 分子量２,０００,０００の１０％デキストラン溶液５０
mlにエタノールを５０ml加えてデキストランを不溶性に
し、−５℃以下とした後、デキストラナーゼを５０,０
００単位加えて１５時間緩く攪拌し、デキストラナーゼ
吸着不溶化デキストランを得た。本条件での吸着率は６
５％であり、加えたデキストランの９０％は可溶化せ
ず、回収することができた。本酵素複合体を低温遠心分
離機で可溶化したデキストラン溶液と分離した後、５０
％の冷エタノールで洗浄し、凍結乾燥して白色のデキス
トラナーゼ製剤４.５gを得た。
mlにエタノールを５０ml加えてデキストランを不溶性に
し、−５℃以下とした後、デキストラナーゼを５０,０
００単位加えて１５時間緩く攪拌し、デキストラナーゼ
吸着不溶化デキストランを得た。本条件での吸着率は６
５％であり、加えたデキストランの９０％は可溶化せ
ず、回収することができた。本酵素複合体を低温遠心分
離機で可溶化したデキストラン溶液と分離した後、５０
％の冷エタノールで洗浄し、凍結乾燥して白色のデキス
トラナーゼ製剤４.５gを得た。
【００２１】 試験例１ ストレプトコッカス・ミュータンス(Ｓtreptococcus mu
tans)菌株を１lのＢＨＩ培地で３７℃、１２時間培養
し、６,５００rpmで１０分間遠心分離した菌体を蒸留水
で３回水洗し、１０mlの生理食塩水に懸濁した。上記菌
液にはミュータンス菌を２×１０10ＣＦＵ／ｍｌ含んで
いる。上記菌液０.１mlを蔗糖１％を含む０.１Ｍ ＫＰ
Ｂ溶液３０mlに加え、３０度の角度で表面が平滑なガラ
ス板を入れ、３７℃で２４時間反応させ、取り出したガ
ラス板を蒸留水で洗浄したが、ガラス板の接液部のほぼ
全面にグルカンが付着していることがフクシン染色で確
認された。グルカンの付着したガラス板を蒸留水の代り
に、実施例３の製剤０.１％の懸濁液で洗浄したとこ
ろ、グルカンの除去効果が認められた。又、蔗糖１％を
含む０.１Ｍ ＫＰＢ溶液３０mlに、実施例３の製剤０.
１％を加えたものでは、ガラス板へのグルカン付着抑制
効果が明確に認められた。 試験例２ 実施例１で調整した製剤(Ｂ)を、市販の酵素入り洗剤に
対し０.０１％添加したものの洗浄効果を比較テストし
た。試験方法は、汚れた下着(a)、成人病(糖尿)患者着
用のスボン(b)、精糖工場の目詰まり濾布(c)、精糖工場
の黒色汚れ床面(d)、風呂場の黒色に汚れたタイル(e)を
試料とし、(d)、(e)を除いた各試料は１０cm×１０cmに
切断したテストピースを、製剤(Ｂ)を０.０１％添加し
たpＨ５.８、３７℃、１lの温水に約２時間浸潰後、市
販の酵素入り洗剤を使用して電気洗濯機で同一条件の洗
浄を行った。(d)、(e)については、同上の製剤液をふり
かけ、５分間隔で４回ふりかけた後、布でふきとること
で行った。洗浄効果の判定は、各試料の水溶液色見本を
作成し、その色見本の２分の１、５分の１、１０分の１
稀釈色見本との比較を行い、製剤(Ｂ)の０.０１％添加
を行わずに同様テストを行った対照テスト品を１００と
した脱色率で示した。その結果(a)１５０％、(b)２００
％、(c)２６０％、(d)３３０％、(e)２６０％で、いず
れも製剤(Ｂ)を添加したものの効果が明確に認められ
た。
tans)菌株を１lのＢＨＩ培地で３７℃、１２時間培養
し、６,５００rpmで１０分間遠心分離した菌体を蒸留水
で３回水洗し、１０mlの生理食塩水に懸濁した。上記菌
液にはミュータンス菌を２×１０10ＣＦＵ／ｍｌ含んで
いる。上記菌液０.１mlを蔗糖１％を含む０.１Ｍ ＫＰ
Ｂ溶液３０mlに加え、３０度の角度で表面が平滑なガラ
ス板を入れ、３７℃で２４時間反応させ、取り出したガ
ラス板を蒸留水で洗浄したが、ガラス板の接液部のほぼ
全面にグルカンが付着していることがフクシン染色で確
認された。グルカンの付着したガラス板を蒸留水の代り
に、実施例３の製剤０.１％の懸濁液で洗浄したとこ
ろ、グルカンの除去効果が認められた。又、蔗糖１％を
含む０.１Ｍ ＫＰＢ溶液３０mlに、実施例３の製剤０.
１％を加えたものでは、ガラス板へのグルカン付着抑制
効果が明確に認められた。 試験例２ 実施例１で調整した製剤(Ｂ)を、市販の酵素入り洗剤に
対し０.０１％添加したものの洗浄効果を比較テストし
た。試験方法は、汚れた下着(a)、成人病(糖尿)患者着
用のスボン(b)、精糖工場の目詰まり濾布(c)、精糖工場
の黒色汚れ床面(d)、風呂場の黒色に汚れたタイル(e)を
試料とし、(d)、(e)を除いた各試料は１０cm×１０cmに
切断したテストピースを、製剤(Ｂ)を０.０１％添加し
たpＨ５.８、３７℃、１lの温水に約２時間浸潰後、市
販の酵素入り洗剤を使用して電気洗濯機で同一条件の洗
浄を行った。(d)、(e)については、同上の製剤液をふり
かけ、５分間隔で４回ふりかけた後、布でふきとること
で行った。洗浄効果の判定は、各試料の水溶液色見本を
作成し、その色見本の２分の１、５分の１、１０分の１
稀釈色見本との比較を行い、製剤(Ｂ)の０.０１％添加
を行わずに同様テストを行った対照テスト品を１００と
した脱色率で示した。その結果(a)１５０％、(b)２００
％、(c)２６０％、(d)３３０％、(e)２６０％で、いず
れも製剤(Ｂ)を添加したものの効果が明確に認められ
た。
フロントページの続き (72)発明者 小堺 博 茨城県つくば市吾妻１丁目４番３号 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12N 11/00 - 11/18
Claims (3)
- 【請求項１】 デキストラナーゼを吸着した架橋または
不溶化デキストラン。 - 【請求項２】 架橋デキストランにデキストラナーゼを
接触させることを特徴とするデキストラナーゼ吸着架橋
デキストランの製造法。 - 【請求項３】 溶媒処理により不溶化したデキストラン
に低温でデキストラナーゼを接触させ吸着させることを
特徴とするデキストラナーゼ吸着デキストランの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3186992A JP2757946B2 (ja) | 1992-02-19 | 1992-02-19 | デキストラナーゼ吸着体およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3186992A JP2757946B2 (ja) | 1992-02-19 | 1992-02-19 | デキストラナーゼ吸着体およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05227965A JPH05227965A (ja) | 1993-09-07 |
| JP2757946B2 true JP2757946B2 (ja) | 1998-05-25 |
Family
ID=12343053
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3186992A Expired - Fee Related JP2757946B2 (ja) | 1992-02-19 | 1992-02-19 | デキストラナーゼ吸着体およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2757946B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11332547B2 (en) | 2017-02-16 | 2022-05-17 | Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. | Crosslinked dextran and crosslinked dextran-poly alpha-1,3-glucan graft copolymers |
-
1992
- 1992-02-19 JP JP3186992A patent/JP2757946B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05227965A (ja) | 1993-09-07 |
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