JP2710627B2

JP2710627B2 - 非特異的炎症の治療法

Info

Publication number: JP2710627B2
Application number: JP63109819A
Authority: JP
Inventors: キャロルアンダーソンドナルド; ロースレインロバート; ウェインスミスクリントン; ウィルバーバートンランダル
Original assignee: ベイラーカレッジオヴメディシン; ベーリンガーインゲルハイムファーマシューティカルズインコーポレーテッド
Priority date: 1987-11-02
Filing date: 1988-05-02
Publication date: 1998-02-10
Anticipated expiration: 2013-02-10
Also published as: DE3852374T2; DK239388D0; EP0314863A2; ATE114972T1; DE3852374D1; AU2633388A; CA1331132C; JPH01135724A; AU622120B2; DK175491B1; GR3015298T3; AU1550988A; DK239388A; ZA883160B; EP0314863A3; ES2064327T3; EP0314863B1

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、細胞間接着分子、例えばICAM-1、ICAM-1に
結合し得るアンタゴニスト、またはICAM-1の天然結合対
のかたわれに結合できるICAM-1由来のアンタゴニスト
を、顆粒球またはマクロファージ系の細胞の細胞間接着
の防止のために使用することに係る。このような分子の
使用により、非特異的炎症の治療法が与えられる。

（従来の技術）炎症性応答を起こすためには、顆粒球が細胞物質に付
着する必要がある。この事実は２系統の相互に同一の結
果に収束する研究から明らかになってきた。

第１の系統の研究は白血球膜蛋白の研究〔ワリス（Wa
llis）,W.J.等、J.Immunol.,1985,135,2323−2330;メン
ツァー（Mentzer）,S.J.等、J.Cell.Physiol.,1986,12
6,285-290;ハスカード（Haskard）,D.O.等、J.Immuno
l.,1986,137,2901−2906;ハーラン（Harlan）,J.M.等、
Blood,1985,66,167-178〕を包含する。細胞接着過程に
特に重要なのは“CD18"群または錯体として知られる一
群の白血球膜蛋白である。この群は３種のヘテロダイマ
（“Mac-1"、“LFA-1"および“P150、90"として知られ
ている）からなり、そのすべてが共通のサブユニット
（βサブユニットとして知られている）と固有のサブユ
ニット（αサブユニットとして公知）とを有している
〔スプリンガー（Springer）,A.T.等、Immunol.Rev.,19
82,68,111-135;スプリンガーT.等、Fed.Proc.,1985,44,
2660-2663;カイザー（Keizer）,G.等、Eur.J.Immunol.,
1985,15,1142-1147;サンシェズマドリッド（Sanchez-Ma
drid）F.等、J.Exper.Med.1983,158,1785-1803〕。Mac-
1はマクロファージ、顆粒球および他の白血球に存在す
る。

白血球膜蛋白のCD18群に対するモノクローナル抗体
は、これら蛋白のアンタゴニストとして作用することに
より、インビトロでの白血球接着依存事象の殆どを阻害
する。これは、顆粒球の適当な刺激に応答して凝集する
能力、顆粒球の蛋白被覆プラスチックに付着する能力、
顆粒球の２次元アガロースアッセイにおける移動能力お
よび顆粒球の内皮細胞に付着する能力を含む。

第２系統の研究は、白血球付着分子のCD18群の共通の
サブユニットをコードする遺伝子における遺伝欠陥のた
めに、細胞表面にこれら接着分子のいずれかを表現でき
ない人々に関する研究成果である。かかる個々人は“白
血球接着欠乏症（laukocyte adherence deficiency dis
ease;LAD）”にかかっているといわれる〔アンダーソン
（Anderson）D.C.等、Fed.Proc.,1985,44、2671-2677;
アンダーソン、D.C.等、J.Infect.Dis.,1985,152,668-6
89〕。

LADにかかった患者の特徴は壊死性軟組織（soft tiss
ue）病変、悪化膿（impaired pus）形成および創傷癒合
ならびにインビトロでの接着−依存性白血球機能異常を
含む。これらLAD患者からの顆粒球は、抗−CD18モノク
ローナル抗体の存在下で、その正常なかたわれと同様に
インビトロで不完全に振るまう。即ち、これらは接着に
関連する機能、例えば凝集または内皮細胞への付着を遂
行し得ない。しかし、より重要なことはこれら患者が、
その顆粒球の細胞基質への付着不能の故に、正常な炎症
応答を行い得ないことである。最も顕著なことは、顆粒
球が炎症病変部近傍の血管中の内皮細胞に到達し得ない
ことから、これらのLAD患者からの顆粒球が皮膚感染な
どの炎症部位に達し得ないことである。このような付着
は浸潤にとって必要な段階である。

顆粒球接着分子が付着した内皮上の分子は、かくして
同定するに至っていない。Mac-1の天然リガンドを同定
することの真価は、該分子自体あるいはかかる分子のア
ンタゴニストが顆粒球と内皮との相互作用を阻害し、そ
の結果LAD患者を擬製し、このことは炎症応答が該個体
にとって有害である場合には望ましい特徴である。

こうして、一般に動物の健康並びに生存能力を維持す
るという顆粒球の能力は、これらが他の細胞、例えば内
皮細胞に接着することが可能であることを要求する。顆
粒球−内皮細胞接着は細胞−細胞接触を必要とすること
がわかっており、該接触には該顆粒球細胞表面上に存在
する特異的レセプタ分子が関与する。これらのレセプタ
は白血球が他の白血球あるいは内皮並びに他の血管以外
の細胞に付着することを可能ならしめる。これらレセプ
タ分子に自然状態で結合しているかたわれは未知であ
る。

白血球の細胞表面レセプタ分子は相互に強い関連性を
有していることがわかっている。このような細胞表面レ
セプタ分子の欠乏している白血球をもつヒトは慢性かつ
再発性の感染並びに他の臨床上の症状群を呈する。炎症
反応は、白血球がCD18錯体の官能性接着分子の欠乏のた
めに通常の様式で付着し得ない場合には緩和される。白
血球接着は組織炎症を生じる過程に関与し、この白血球
接着過程を理解することは非特異的炎症の治療を規定す
る上で極めて大きな意味がある。

（発明が解決しようとする課題）本発明はヒト並びに他の哺乳動物の非特異的炎症の治
療法を提供することを目的とする。

（課題を解決するための手段）詳しくいえば、本発明は、哺乳類の対象における非特
異的防禦系の応答に起因する炎症の治療を要する対象
に、顆粒球と結合できる抗炎症剤を、該炎症を抑制する
に十分な量で投与する該炎症の治療法を提供するもので
あり、該方法の特徴は該抗炎症剤がICAM-1およびICAM-1
の官能性誘導体からなる群から選ばれることにある。

本発明は、更に哺乳類の対象における非特異的防禦系
の応答に起因する炎症の治療を要する対象に、内皮細胞
と結合し得る抗炎症剤を、該炎症を抑制するのに十分な
量で投与する該炎症の治療法に係り、この方法はICAM-1
に結合し得る抗体、抗体断片（これはICAM-1に結合し得
る）およびICAM-1の非免疫グロブリンアンタゴニストか
らなる群から選ばれる抗炎症剤を用いることを特徴とす
る。

本発明は、更に上記ICAM-1の非免疫グロブリンアンタ
ゴニストがLFA-1以外のICAM-1の非免疫グロブリンアン
タゴニストであるような上記方法をも包含する。

本発明は、更に上記炎症の治療法において、該炎症が
成人呼吸障害症候群、敗血症に対して二次的な多発性器
官損傷症候群（multiple organ injury syndrome）、外
傷に対して二次的な多発性器官損傷症候群、心筋または
他の組織の再灌流損傷（reperfusion injury）、急性糸
球体腎炎、反応性関節炎（reactive arthritis）、急性
炎症成分をもつ皮膚病、急性化膿性髄膜炎または他の中
枢神経系炎症性疾患、熱損傷、血液透析、白血球除去血
輸血、潰瘍性大腸炎、クローン病、壊死性全腸炎、顆粒
球輸注関連症候群およびサイトキン（cytokine）誘発性
毒性からなる群から選ばれる一状態に関連するものであ
るような該治療法を含む。

白血球細胞接着はCD18錯体の細胞表面糖蛋白の相互作
用の結果生ずる。このような分子はMac-1、LFA-1および
p150、95などの糖蛋白を含む。このような糖蛋白の重要
な寄与は、これら分子が細胞接着にある役割を果たすこ
とである。このような糖蛋白は、本明細書において全く
同様に“CD18錯体の構成員”あるいは“分子のCD18群の
構成員”とも呼ばれる。本発明は、内皮細胞上のICAM-1
が、顆粒球−内皮細胞接着の媒介に応答性の顆粒球上の
分子のCD18群の構成員に結合すること、およびICAM-1の
アンタゴニストがこのような接着を阻害する能力をもつ
という発見に基くものである。この阻害は一般的な非特
異的組織炎症の治療手段を与える。

本発明は、部分的には、顆粒球−内皮細胞接着がCD18
群の糖蛋白とICAM−１との相互作用の結果生ずるとの知
見に基くものである。白血球が炎症部位に移動しおよび
／または炎症に寄与する種々のエフェクタ機能を行うに
は細胞接着を必要とするので、細胞接着を阻害する薬剤
は炎症を低下もしくは防止するであろう。“非特異的防
禦系反応”は免疫的に記憶し得ない白血球により媒介さ
れる応答である。このような細胞は顆粒球およびマクロ
ファージを含む。ここでは、炎症とは、該炎症が非特異
的な防禦系の反応によって生じ、これにより媒介されも
しくはこれと関連している場合には、該非特異的防禦系
の応答の結果生ずるといわれる。少なくとも部分的に非
特異的防禦系の反応の結果生ずる炎症の例は成人呼吸障
害症候群（ARDS）あるいは敗血症または外傷に対して二
次的な多発性器官損傷症候群、心筋もしくは他の組織の
再灌流損傷、急性糸球体腎炎、反応性関節炎、急性炎症
性成分をもつ皮膚病、急性化膿性髄炎または他の中枢神
経系炎症性疾患、熱損傷、血液透析、白血球除去血輸
血、潰瘍性大腸炎、クローン病、壊死性全腸炎、顆粒球
輸注関連症候群およびサイトキン−誘発性毒性などの各
種状態と関連する炎症を包含する。

本発明の抗炎症剤は、内皮細胞上で、顆粒球上のCD18
錯体とICAM-1との相互作用と特異的に拮抗することので
きる化合物である。かかるアンタゴニストはICAM-1、IC
AM-1の官能性誘導体、ICAM-1の非免疫グロブリンアンタ
ゴニスト、ICAM-1に結合し得る抗体、および抗体断片
（該断片はICAM-1と結合できる）を含む。

本発明の天然状態で結合しているリガンドは“細胞間
接着分子−１（ICAM-1）”として公知である。ICAM-1は
76-97Kdの糖蛋白である。ICAM-1はヘテロダイマではな
い。本発明はICAM-1およびその“官能性誘導体”を意図
する。ICAM-1の“官能性誘導体”はICAM-1の生物学的活
性と実質的に類似の生物学的活性（官能性であれ、構造
性であれ）を有する化合物である。ICAM-1およびその官
能性誘導体はCD18錯体の構成員に結合し得るので、本発
明の抗炎症剤として使用できる。“官能性誘導体”なる
用語は分子の“断片”、“変異体”、“同族体”または
“化学的誘導体”を包含するものとする。ICAM-1などの
分子の“断片”は該分子の任意のポリペプチドサブセッ
トを意味する。ICAM-1などの分子の“変異体”とは完全
な該分子またはその断片と実質的に類似する構造並びに
機能をもつ分子を意味する。２種の分子が実質的に類似
の構造を有するか、あるいはこれら両分子が類似の生物
学的活性をもつ場合に、これら分子は“実質的に類似”
といわれる。かくして、２種の分子が類似の活性を示す
場合、これらは変異体であると考えられ、この用語は該
分子の一方が他方にはみられない付随的なアミノ酸残基
を含む場合、あるいはアミノ酸残基配列が同一でない場
合に、本明細書において使用される。ICAM-1などの分子
の“同族体”とは完全な分子またはその断片と機能の点
で実質的に類似する分子を意味する。本明細書における
ように、通常は分子の一部でないような追加の化学的部
分を含む場合に、該分子は他の分子の“化学的誘導体”
であるといわれる。このような部分はかかる分子の溶解
性、吸収性、生物学的半減期などを改善することを可能
とする。これら部分は、また分子の毒性を低下させ、該
分子の望ましからぬあらゆる副作用を排除すること、な
どを可能とする。このような作用を媒介できる部分はRe
mington's Pharmaceutical Sciences（1980）に記載さ
れている。“毒素−誘導性（toxin-derivatized）”分
子は“化学的誘導体”の特殊な組を構成する。“毒素−
誘導性”分子は毒素部分を含む分子、例えばICAM-1また
は抗体である。このような分子の細胞との結合は、該毒
素部分を該細胞に接近させ、結果として細胞の死を早め
る。任意の適当な毒素部分を使用し得るが、例えばリチ
ン毒素、ジフテリア毒素、放射性毒素、膜−チャンネル
形成毒素などの毒素を用いることが好ましい。かかる部
分を分子に結合する手順は当分野で周知である。

顆粒球−内皮細胞接着はICAM-1およびCD18錯体両者を
必要とするので、ICAM-1に結合できる抗体（またはその
断片）を、本発明に従って抗炎症剤として使用すること
ができる。ICAM-1はいくつかの細胞表面上に自然に表現
されるので、腹腔内注射などによりこのような細胞を適
当な動物中に導入することにより、ICAM-1結合性抗体を
生産できる。必要ならば、このような動物の血清を取出
し、かつICAM-1に結合できるポリクローナル抗体源とし
て使用できる。しかし、かかる動物の脾細胞を取出し、
該脾細胞をミエローマ細胞系と融合し、該融合細胞に、
ICAM-1に結合できるモノクローナル抗体を分泌するハイ
ブリドーマ細胞を形成せしめることが好ましい。

上記のような方法で得られるハイブリドーマ細胞の種
々の方法でスクリーニングして、ICAM-1に結合し得る抗
体を分泌する所定のハイブリドーマ細胞を同定できる。
好ましいスクリーニングアッセイにおいて、このような
分子はエプスタイン−バ−ウィルスにより形質転換され
た細胞の凝集を阻害する能力に基き同定される。このよ
うな凝集を阻害する抗体を更にスクリーニングして、こ
れらがICAM-1に対する結合あるいはCD18錯体の構成員に
結合することにより、かかる凝集を阻害するか否かを決
定する。ICAM-1をCD18錯体の構成員から識別し得る任意
の手段をこのようなスクリーニングで用いることが可能
である。かくして、例えば抗体と結合した抗原を、免疫
沈降およびポリアクリルアミドゲル電気泳動法などによ
って分析できる。この結合した抗原がCD18錯体の構成員
である場合には、該免疫沈降抗原はダイマであることが
わかり、一方該結合抗原がICAM-1である場合には、単一
の分子量種が免疫沈降されるであろう。更に、ICAM-1で
はなくLFA-1を表現する、顆粒球などの細胞に結合する
抗体の能力についてスクリーニングすることにより、分
子のCD18群の構成員に結合する抗体と、ICAM-1に結合す
る抗体とを識別することができる。抗体（細胞凝集を阻
害することが知られている）の顆粒球に対する結合能
は、該抗体がLFA-1を結合できることを示す。このよう
な結合がないことは、ICAM-1を認識できる抗体であるこ
とを示す。抗体の、顆粒球などの細胞に対する結合能
は、当業者が通常使用している手段により検知できる。
このような手段はイムノアッセイ、細胞凝集、フィルタ
結合（filter binding）研究、抗体沈殿法などを含む。

本発明の抗凝集抗体は、更にそのICAM-1を表現する細
胞（例えば活性化内皮細胞）に対する差次的結合能およ
びICAM-1を表現できない細胞（例えば顆粒球）に対する
非結合能を測定することにより同定できる。当業者には
容易に理解されるように、上記のアッセイは変更もしく
は異なる順序で実施でき、その結果様々な可能なスクリ
ーニングアッセイが提供され、その各々はICAM-1に結合
できる抗体とCD18錯体の構成員の同定並びにこれらの間
の識別を可能とする。

本発明の抗炎症剤は天然の過程（例えば、動物、植
物、細菌、菌類などにICAM-1の非免疫グロブリンアンタ
ゴニスト産生を誘発させるか、ああるいは動物にICAM-1
結合性ポリクローナル抗体産生を誘発させる）により、
合成法（例えば、メリフィールド（Merrifield）のポリ
ペプチド合成法を利用してICAM-1、その官能性誘導体あ
るいは（免疫グロブリンまたは非−免疫グロブリン性
の）ICAM-1の蛋白アンタゴニストを合成する）により、
ハイブリドーマ技術（例えば、ICAM-1に結合できるモノ
クローナル抗体産生ハイブリドーマの製造）により、あ
るいは組換え技術〔例えば、種々の宿主（例えば酵母、
細菌、菌類、培養哺乳動物細胞など）、もしくは組換え
プラスミドまたはウィルスベクターなどに本発明の抗炎
症剤を生産させる〕ことにより得ることができる。どの
方法を用いるかは便利さ、所定の収率などといった諸フ
ァクタに依るであろう。上記方法、工程または技術の一
つだけを用いて特定の抗炎症剤を生産する必要はない。
即ち、上記方法、工程および技術を組合せて、特定の抗
炎症剤を得ることができる。

A.細胞間接着分子−１（ICAM-1）新規細胞間接着分子、ICAM-1、をまずロスライン（Ro
thlein）,R.等の手順（J.Immunol.,1986,137,1270-127
4;これを本発明の参照文献とする）に従って同定し、か
つ部分的に特徴付けを行った。ICAM-1分子を検出するた
めに、モノクローナル抗体を、遺伝的にLFA-1表現能の
ない対象からの細胞で免疫処理したマウスの脾細胞から
調製した。得られた抗体を、LFA-1表現細胞の凝集阻害
能につきスクリーニングした。

詳しくいえば、マウスを、IFA-1抗原を表現しないLAD
患者からのEBV-形質転換Ｂ細胞で免疫した。次いで、こ
の動物からの脾細胞を取出し、ミエローマ細胞と融合
し、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞とし
た。LFA-1を表現する正常な個体からのEBV-形質転換Ｂ
細胞を、次に該ハイブリドーマ細胞のモノクローナル抗
体の存在下でインキュベーションして、どのモノクロー
ナル抗体がEBV-形質転換Ｂ細胞の、ホルボールエステル
媒介、LFA-1依存かつ自発的な凝集を阻害するかを同定
した。このハイブリドーマ細胞はかつてLFA-1抗原と遭
遇したことのない細胞を由来とするので、LFA-1に対す
るモノクローナル抗体を産生しなかった。従って、凝集
を阻害することがわかった抗体はいずれも、LFA-1では
ないが、LFA-1接着過程に関与した抗原に結合し得るも
のである。このようなモノクローナル抗体を得るための
任意の方法を利用できるが、ICAM-1−結合モノクローナ
ル抗体を、ロスライン,R.等の経路およびスケジュール
（J.Immunol.,1986,137,1270-1274）を利用してBALB/c
系マウスをLFA-1−欠乏個体からのエプスタイン−バ−
ウィルス−形質転換末梢血単核細胞で免疫することによ
り得ることが好ましい。このような細胞はスプリンガー
（Springer）,T.A.等（J.Exper.Med.,1984、160,1901-1
918）により記載されている。

好ましいICAM-1に結合できる抗体の生成並びに検出法
においては、ICAM-1およびLFA-1両者を表現するEBV−形
質転換Ｂ細胞またはより好ましくはICAM-1を表現し、か
つLFA-1を表現しないTNF-活性化内皮細胞でマウスを免
疫する。このような細胞はスプリンガー等の方法（J.Ex
per.Med.,1984,160,1901-1918;これを本発明の参考文献
とする）に従って調製できる。本発明では任意のこの種
の細胞を利用し得るが、JY細胞系〔ターホスト（Terhos
t）,C.T.等、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1976,73,910〕の
細胞を使用することが好ましい。抗−ICAM-1抗体を産生
するハイブリドーマ細胞を得るための最も好ましい方法
では、BALB/c系マウスを繰返しエプスタイン−バ−ウィ
ルス形質転換細胞系、JY（ターホストの上記文献）で免
疫し、細胞系U937（ATCC CRL-1593）を分画した。この
細胞は任意の適当な培地で培養できるが、10％の仔牛血
清および50μg/mlのゲンタマイシン〔ギブコラボラトリ
ーズ（Gibco Laboratories）〕を補充したRPMI1640培地
で該細胞を培養することが最も好ましい。この細胞は哺
乳動物細胞の増殖に適した条件下で培養すべきである
（即ち、ほぼ37℃の温度にて、５％CO₂雰囲気下で、95
％という相対湿度等といった条件下で培養）。

免疫動物の脾細胞を取出し、ミエローマ細胞と融合
し、抗体産生ハイブリドーマ細胞とする。この抗体のス
クリーニングは、LFA-1レセプタおよびICAM-1両方を表
現するEBV形質転換細胞系、例えばJY細胞の、LFA-1依存
性、ホルボールエステル誘起凝集の阻害能について行
う。ロスライン等の上記文献に示されているように、こ
のような凝集を阻害し得る抗体は、次いで細胞系、例え
ばSKW3〔ダスティン（Dustin）,M.等、J.Exper.Med.,19
87,165,672-692;この細胞系の、ホルボールエステルの
存在下での自発的凝集能はLFA-1を結合することのでき
る抗体により阻害されるが、抗−ICAM-1抗体によっては
阻害されない〕のホルボールエステル誘起凝集を阻害す
る能力についてテストされる。JY細胞などの細胞のホル
ボールエステル誘起凝集を阻害できるが、SKW3細胞など
の細胞のホルボールエステル誘起凝集を阻害できない抗
体は恐らく抗−ICAM-1抗体である。また、ICAM-1に結合
し得る抗体は以下の如くしてスクリーニングすることで
同定できる。即ち、LFA−表現細胞（例えばJY細胞）のL
FA-1依存性凝集を阻害でき、かつLFA-1を表現し、わず
かにICAM-1を表現するかあるいは全くICAM-1を表現しな
い細胞（例えば正常顆粒球）に結合できないか、あるい
はICAM-1を表現するがLFA-1を表現しない細胞（例えばT
NF−活性化内皮細胞）に結合し得る抗体についてスクリ
ーニングする。更に別の方法は、細胞、例えばJY細胞の
LFA-1依存性凝集を阻害する抗体を用いて、ICAM-1また
はLFA-1もしくはこれら両者を表現する細胞から免疫沈
降すること、およびSDS-PAGEあるいは同等な方法で該抗
体と共に沈降した分子のいくつかの分子特性を決定する
ことである。この特性がICAM-1と同じである場合には、
該抗体は抗−ICAM-1抗体であると推定できる。

ICAM-1に結合と得るモノクローナル抗体産生ハイブリ
ドーマ細胞系を得る上記の最も好ましい方法を利用し
て、好ましいIgG2a抗−ICAM-1抗体産生ハイブリドーマ
細胞系を単離することができる。この抗体は“R6・５・
D6・E9・B2"（以下R6-5-D6という）と命名した。抗体R6
-5-D6産生ハイブリドーマ細胞系を“R6・５・D6・E9・B
2"とした。この細胞系はATCCにブタペスト条約に基き19
87年10月30日付で寄宅され、番号HB9580号として登録さ
れた。

B.LFA-1依存凝集アッセイの利用 CD18錯体依存凝集もしくは接着の測定を可能とする上
記アッセイは、細胞凝集または接着の拡大を阻害するア
ンタゴニストとして機能する薬剤を同定するのに利用で
きる。このようなアンタゴニストはICAM-1の凝集または
接着媒介能を低下するように機能できる。かくして、こ
のような薬剤は免疫グロブリン、例えばICAM-1に結合し
得る抗体などを含む。また、上記アッセイを利用して、
非免疫グロブリン性薬剤（即ち、ICAM-1、その官能性誘
導体またはICAM-1と結合できる化学薬品）を調べて、こ
れらがCD18-ICAM-1相互作用に対するアンタゴニストで
あるかどうか決定できる。次いで、このような薬剤を、
適当なアッセイ、例えば以下に述べるような顆粒球−内
皮細胞接着のアッセイを用いて、顆粒球−内皮細胞接着
阻害能についてテストすることができる。

このようにして同定されたアンタゴニストを、ICAM-1
に対する抗体と同じ目的で用いることができる。かかる
アンタゴニストのすべてが本発明の抗炎症剤として使用
できる。

C.顆粒球−内皮細胞接着のアッセイ多形核性白血球（PMNL）の、ヒト臍帯静脈内皮細胞
（HUVEC）に対する接着能力は、可視的な接着アッセイ
をもたらし、該アッセイは本発明による細胞接着測定に
利用できる。好ましくは、このようなアッセイはスミス
（Smith）、C.W.等の方法（J.Clin.Invest.,1979、63、
221-229）を利用して実施される。尚、HUVEC単層への接
着を蛋白被覆ガラスへの付着の代りに行った。好ましい
アッセイにおいて、HUVEC単層、好ましくは25mmの丸い
ガラスカバースリップ上の単層を調製し、即座に反転顕
微鏡（inverted microscope）および位相差光学系と共
に使用するべく特別にあつらえた接着チャンバに挿入す
る。このようなチャンバは、サイクス−ムーア（Sykes-
Moore）チャンバＯ−リング（ベルコ（Bellco）社製）
によって隔てられた２枚の25mmの丸いカバーガラスを支
持するように工夫された２枚の金属板からなっているこ
とが好ましい。PMNLを該チャンバに導入してHUVEC単層
と接触させる。該単層と接触するPMNLの数は顕微鏡実験
により決定できる。洗浄後に該単層と接触した状態で残
される細胞の割合は細胞接着の尺度を与える。更に、接
着PMNLがHUVEC単層を通って移動するのをモニタでき
る。

ある薬剤が潜在的抗炎症性化合物であるか否かを決定
するためには、HUVECおよび／またはPMNLは該薬剤で前
処理（好ましくは１〜60分間）し、細胞接着の程度を測
定することができる。炎症を阻害し得る薬剤は、このよ
うなアッセイにおいて細胞接着を遮断する能力を調べる
ことにより同定される。

D.細胞間接着分子−１（ICAM-1）の使用 ICAM-1はCD18錯体の構成員の結合しているかたわれで
ある。ICAM-1自体またはその官能性誘導体を使用して、
内皮細胞が顆粒球表面上のCD18分子に結合することによ
り該顆粒球に接着するのを防止でき、またこのようにし
て該顆粒球のCD18分子が内皮細胞のICAM-1結合するのを
防止できる。

ICAM-1またはその官能性誘導体は哺乳類の対象におけ
る抗炎症剤として著しく適している。重要なのは、この
ような薬剤が従来の薬剤についてみられた腎毒性などの
他の副作用を示さない点で、従来の抗炎症剤とは異なっ
ていることである。

E.ICAM-1のアンタゴニストの利用 ICAM-1の非免疫グロブリンアンタゴニストまたは抗体
（特にモノクローナル抗体）は、顆粒球が内皮細胞のIC
AM-1に結合することを通して該内皮細胞に接着するのを
防止、結果として内皮細胞のICAM-1が該顆粒球の表面上
のCD18分子に結合するのを防止するのに用いることがで
きる。Mac-1およびLFA-1はICAM-1に結合し得る。従っ
て、これら分子はICAM-1の非免疫グロブリン性アンタゴ
ニストの例である。上記アッセイを利用することによ
り、付随的なICAM-1の非免疫グロブリン性アンタゴニス
ト依存性顆粒球接着を同定できる。顆粒球は非特異的防
禦系により媒介された炎症状態（例えば、成人呼吸障害
症候群など）にみられる組織損傷を媒介するのに関連し
ており、かつ顆粒球は内皮細胞に付着して炎症部位を移
動させるはずであるので、抗−ICAM-1抗体またはICAM-1
の非免疫グロブリンアンタゴニストによる顆粒球−内皮
細胞接着の遮断は顆粒球−誘発性組織損傷を防止するで
あろう。

ICAM-1に結合できるICAM-1の非免疫グロブリンアンタ
ゴニストまたは抗体（特にモノクローナル抗体）は哺乳
類対象における抗−炎症剤として極めて適している。重
要なことは、公知の薬剤についてわかっている腎毒性な
どの他の副作用をもたないという点において、これら薬
剤は公知の抗炎症剤とは異っていることである。

F.本発明の抗炎症剤の投与 ICAM-1の抗炎症作用は、患者に完全なICAM-1分子もし
くは任意の治療上活性な該分子のペプチド断片を投与す
ることにより達成できる。

ICAM-1およびその官能性誘導体は合成、組換えDNA技
術あるいは蛋白分解などによって得ることができる。IC
AM-1の治療上の利点は付加的なアミノ酸残基を有するIC
AM-1分子の官能性誘導体を用いることにより増進でき、
該アミノ酸残基はキャリヤに対する結合性を高め、ある
いはICAM-1の活性を高める目的で付加される。本発明の
範囲は、更にあるいくつかのアミノ酸残基をもたない
か、あるいは変更されたアミノ酸残基を含む、ICAM-1の
官能性誘導体をも包含する。但し、これら誘導体は細胞
接着を行う能力を示す必要がある。

本発明の抗体およびここに開示したICAM-1分子両者
は、これらを含む処方物が正常な状態でかつ自然の状態
で見出される物質を実質的に含まない場合には、“実質
的に天然不純物を含まない”といわれる。

本発明はICAM-1に結合できる抗体およびその生物学的
に活性な断片（これらがポリクロナールであろうとモノ
クローナルであろうとも）をも包含する。このような抗
体は動物からあるいは組織培養により、もしくは組換え
DNA手段によって生産できる。

患者に、ICAM-1に結合できる抗体またはその断片を投
与する際、あるいはICAM-1（あるいはその官能性誘導
体）をレシピエント患者に投与する場合、投与薬剤の服
用量は患者の年令、体重、身長、性別、一般的医学的状
態、以前の医学的病歴などの諸ファクタによって変動す
る。一般に、レシピエントには約1pg/kg〜10mg/kg（薬
剤の量／患者の体重）の範囲の投与量の抗体を与えるこ
とが好ましいが、これよりも低いあるいは高い投与量で
与えることも可能である。ICAM-1分子またはその官能性
誘導体を患者に投与する場合、同様に約1pg/kg〜10mg/k
g（薬剤の量／患者の体重）の範囲内の投与量でこの分
子を投与することが好ましい。この場合にも、該範囲以
下あるいはそれ以上の投与量で投与してもよい。

本発明の抗炎症剤は炎症を抑制するのに十分な量でレ
シピエント対象に与える。この量は、該薬剤の用量、投
与経路などが炎症を低下もしくは防止するのに十分であ
る場合に、炎症を“抑制”するのに十分であるといわれ
る。

本発明の抗炎症剤は炎症の発症前（関連炎症を抑制す
るために）にあるいは炎症の発症後に投与できる。

所定の抗体およびICAM-1自体両者とも、静脈内、筋肉
内、皮下、腸管内、または非腸管投与経路で患者に投与
できる。注射により抗体またはICAM-1を投与する場合、
投与は連続的注入または単一もしくは複数回の丸剤（Bo
luses）で行うことができる。

組成物は、その投与がレシピエント患者に許容される
場合に“薬理学的に許容される”といわれる。このよう
な薬剤は、投与量が生理的に十分である時に“治療上有
効量”で投与されたといわれる。薬剤は、その存在がレ
シピエント患者の生理に検出し得る変化を生じる場合
に、生理学的に十分である。

本発明の抗体およびICAM-1分子を公知の方法で処方し
て、製薬上有用な組成物を調製することができ、かくし
てこれら物質またはその官能性誘導体は製薬上許容され
るキャリヤ、賦形剤と組合わされて混合物とされる。適
当な賦形剤およびその処方（他のヒト蛋白、例えば血清
アルブミンを含む）は、例えばRemington's Pharmaceut
ical Sciences（第16版、オーゾル（Osol）、A.編、マ
ック、イーストン（Mack、Easton）刊、1980）に記載さ
れている。有効な投与に適した製薬上許容される組成物
を得るためには、このような組成物は有効量の抗体、IC
AM-1分子またはその官能性誘導体と適当量のキャリヤ賦
形剤とを含む。

付随的な製薬法を利用して、作用期間を調節できる。
制御放出型製剤はポリマーを用い、これに抗体またはIC
AM-1もしくはその官能性誘導体を錯化または吸収させる
ことにより得ることができる。放出量の制御は適当な巨
大分子（例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビ
ニル、ピロリドン、エチレンビニルアセテート、メチル
セルロース、カルボキシメチルセルロースまたはプロタ
ミン硫酸塩）を選び、その濃度並びに放出制御のための
配合法を選択することにより可能となる。制御放出製剤
による作用の持続性を調節するもう一つの可能な方法
は、ポリマー材料、例えばポリエステル、ポリアミノ
酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）またはエチレンビニルア
セテートコポリマーの粒子中に抗体、またはICAM-1分子
もしくはその官能性誘導体を配合することである。ま
た、これら薬剤をポリマー粒子中に配合する代りに、コ
アセルベーション法、または界面重合法などによって調
製されるマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセ
ルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ
（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどに、あ
るいはコロイド状薬剤放出系、例えばリポゾーム、アル
ブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子および
ナノカプセルなどに、あるいは更にマクロエマルション
中にこれら薬剤物質を封入することも可能である。この
ような技術はRemington's Pharmaceutical Sciences（1
980）に記載されている。

（実施例）以上、本発明を一般的に記載してきたが、本発明は以
下の実施例を参照することにより更に容易に理解されよ
う。以下の実施例は本発明を例示するものであり、特に
述べない限りこれを限定するものではない。以下の実施
例で提示する結果は平均値±１標準偏差で表示され、Ｎ
は別々に行った実験の回数である。統系的評価は分散の
解析、およびダネットのｔテスト（Dunnett's t Test）
またはスチューデントのｔテスト（Student's t Test）
を利用して行った。

実施例1:PMNLのHUVECへの接着 ○多形核性白血球（PMNL）の単離健康な成人固体および２人の重度のCD18欠乏症患者か
ら得たPMNL〔アンダーソン（Anderson）、D.C.等、J.In
fect.Dis.,1985,152,668-689〕を、シトレート抗凝固、
デキストラン−沈降静脈血サンプルから、フィコール−
ハイパック（Ficoll-Hypaque）勾配で精製し、pH7.4
で、0.2％のデキストロースを含むドゥルベコ（Dulbecc
o）燐酸緩衝塩水（PBS;ギブコ（GIBCO）製）中に、J.In
fect.Dis.,1981,143,447-459（アンダーソン、D.C.）に
記載されたように懸濁させた。PMNLはPBS中で４℃にて
４時間、濃度10⁷/mlで維持した。

○モノクローナル抗体これらの研究で用いるCD18錯体に対するモノクローナ
ル抗体は腹水の希釈液、または培養上澄、およびIgGお
よびＦ（ab）断片の処方物を含んでいた。

○ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）の調製 HUVECを収穫し（ギンブロン（Gimbrone）、M.A.,Pro
g.Hemostas.Thromb.,1976、３、1-28）、アセチル化低
密度リポ蛋白（acLDL）結合〔ボイタ（Voyta）、J.C.
等、J.Cell.Biol.,1984,99,2034-2040〕および第VIII因
子表現〔ヤッフェ（Jaffe）、E.A.等、J.Clin.Invest.,
1973,52,2745-2757〕につき特徴付けを行った。５〜10
臍帯からの細胞をプールし、20％の仔牛血清（FCS）、
抗生物質、ヘパリン（0.1mg/ml）および内皮細胞成長因
子（0.05mg/ml）を含むRPMI1640に接種し、37℃にて、
５％CO₂湿潤雰囲気中に３〜４日保った。ゼラチン（0.1
％）およびフィブロネクチン（５μg/cm²）を被覆し
た、25mmの丸いガラス（blass）カバースリップ上に肉
眼的に一面に広った単層を、PBS中で0.05％トリプシン
および0.02％のEDTAとともに培養した細胞を一度通すこ
とにより調製した。単層を、フィブロネクチン（５μg/
cm²）を被覆した96ウェルのマイクロタイタプレート中
に、これを細胞に第１および第２通過させ、一面に成長
するまで１〜３日育生することにより調製した。HUVEC
を、種々の濃度のLPS〔シグマ（Sigma）社、Ｅ．コリ02
6:B6）またはIL-1〔ゲンジム（Genzyme）；細胞由来の
もの〕で、時間を換えて前処理した。

○接着アッセイ肉眼による接着アッセイを、J.Clin.Invest.,1979,6
3,231-229（スミス（Smith）,C.W.）に記載のように利
用した。但し、蛋白被覆ガラスへの接着の代りにHUVEC
単層への接着を検定した。25mmの丸型眞鍮（blass）カ
バースリップ上のHUVEC単層を２度交換するPBSに３度浸
漬することにより洗浄し、即座に、反転顕微鏡および位
相差光学系と共に用いるべく特別にあつらえた接着チャ
ンバに挿入した。このチャンバはサイクス−ムーア（Sy
kes-Moore）チャンバＯ−リング〔ベルコ（Bellco）〕
て分離された２つの25mmの丸型カバーガラスを支持する
ように設計された２枚の金属板からなっていた。閉じら
れた隔室内において、PMNLがHUVEC単層と接触するのを
観測できた。10⁶細胞/mlなる濃度でPBS中に懸濁させたP
MNLを該チャンバ内に注入し、500秒間単層上に沈降させ
た。該単層と接触するPMNLの数は少なくとも10個の顕微
鏡視野（対物:50X）で計数して決定し、該チャンバを更
に500秒間転倒させた。単層と接触したままの細胞の割
合を決定し、これを以下の結果において接着（％）で表
示した。この単層を通って移動する細胞（接着細胞のサ
ブセット）の割合も決定した。阻止実験では、HUVECお
よび／またはPMNLをモノクローナル抗体で15分間前処理
し、次いで接着の評価を行う前に洗浄した。いくつかの
実験では、モノクローナル抗体は接着アッセイ中ずっと
細胞に保持されていた。

○モノクローナル抗体の細胞との結合の評価モノクローナル抗体およびフルオレセインイソチオシ
アネート（FITC）複合抗体（マウスIgGに対する）を用
いてJ.Clin.Invest.,1984,74,536-551（アンダーソン
（Anderson）,D.C.等）に記載のように螢光抗体法流動
細胞計測法を実施した。表面が染色された細胞を１％パ
ラホルムアルデヒドで固定し、流動細胞計測計〔オル
ト、サイトフルオログラフ（Ortho,Cytofluorograp
h）〕で分析した。バックグラウンド螢光は非免疫腹水
またはX63IgG1対照抗体のいずれかを用いてインキュベ
ーションした後に測定した。

螢光顕微鏡法を、パラホルムアルデヒドで固定（１
％、15分、室温）し、PBSで洗浄し、２％のヒト血清ア
ルブミン（HSA）および１％のグリシンを含むPBS中で30
分間インキュベートした細胞について実施した。モノク
ローナル抗体の結合はFITCまたはローダミンイソチオシ
アネート（RITC）と複合化したマウスIgGに対する第２
の抗体を用いて検出した。ライツジアプラン（Leitz Di
aplan）螢光顕微鏡を用いて細胞を調べた。バックグラ
ウンドの螢光は非免疫腹水またはX631IgG1対照抗体のい
ずれかと共に細胞をインキュベーションした後測定し
た。

酵素イムノアッセイ（EIA）を利用して、モノクロー
ナル抗体の細胞単層への結合を評価した。フィブロネク
チンで被覆（５μg/mm²）した96ウェルプレート内で一
面に成長したHUVECを、１％パラホルムアルデヒドのPBS
溶液を加えて室温にて15分保って固定した。このウェル
をPBSで３回洗浄し、２％牛血清アルブミン（BSA）中で
30分インキュベートした。BSAの除去後、モノクローナ
ル抗体を加え、37℃にて１時間インキュベートし、PBS
中で３回洗い、次いでアルカリホスファターゼと複合化
した山羊−抗マウスIgG、IgM、IgA（ジメッド;Zymed）
（希釈率1:500）中で１時間インキュベートした。洗浄
後、基質（緩衝液中の二ナトリウムｐ−ニトロフェニル
ホスフェート、1mg/ml、pH＝9.8）を加え、室温にて30
分間インキュベートした。プレートをタイタテック（フ
ロー）リーダーで、405nmの吸収を読み取った。

実施例2:接着に及ぼすfMLPの影響 fMLP（f-Met-Leu-Phe）は、濃度0.5〜2.0mMにおい
て、細胞接着を減ずることがわかっている〔カロ（Char
o）,I.F.等、J.Immunol.,1986,136,3412-3419;トネセン
（Tonnesen）,M.G.等、J.Clin.Invest.,1984,74,1581-1
592〕。

走化性因子（CF）は、蛋白被覆ガラスまたはプラスチ
ックに対するPMNLの接着を増加もしくは減少できること
が示されている〔アンダーソン（Anderson）、D.C.等、
J.Infect.Dis.,1981,143,447-459;スミス（Smith）,C.
W.等、J.Clin.Invest.,1980,65,804-812;アンダーソ
ン、D.C.等、J.Lab.Clin.Med.,1983,101,881−895;アン
ダーソン、D.C.等、J.Clin.Invest.,1981,68,863−87
4〕。CFの観測された作用はCFの濃度および白血球をCF
に前もって曝露したか否かに依存する。形状変化を誘起
する〔ハスレット（Haslett）,C.等、Amer.J.Pathol.,1
985,119,101−110〕fMLPの濃度（0.5〜2.0nM）は、細胞
が以前に低濃度の走化性因子に曝されている場合には、
蛋白被覆ガラスへの接着を減ずる。このような“感作
（priming）”は0.01nMfMLP程度の低い濃度で可能であ
り〔スミス（Smith）,C.W.等、J.Clin.Invest.,1980、6
5、804−812〕、かつ後に走化性物質に曝露した場合に
は細胞の“接着部位”の再分布を起こす。単離の際に
は、細心の注意を払って、活性化または感作を起こさな
いようにしなければならない〔ハスレット（Haslett）,
C.等、Amer.J.Patho1.,1985,119、101−110〕。走化性
刺激に対するPMNLの生理的応答の他に、接着の程度に影
響を与えるもう一つ因子が接着アッセイで見つかった。
本発明で利用する手段では剪断応力を利用しない。むし
ろ簡単に付着が評価される。剪断応力は明らかにインビ
ボにおいて重要である〔シュミット−シューンバイン
（Schmid-Schoenbein）,G.W.等、Circ.Res.,1975,36,17
3-181;同、Microvas.Res.,1980,19,45-58〕が、インビ
ボでの接着アッセイでのその存在は情況を注意深く制御
することを要求し〔フォレスタ（Forrester）、J.V.
等、J.Cell.Sci.,1984,70,93-105〕、単なる洗浄法では
不可能である。かくして、本アッセイでは、CD18糖蛋白
錯体を、PMNLのHUVECへの接着におけるその重要性につ
いて評価した。また、注意深く制御した剪断応力に対す
る接着PMNLの耐性に係るCD18錯体の役割〔ガリック（Ga
llik）、S.等、Fed.Proc.,1987,46,1043a〕を評価する
アッセイは行わなかった。

カロ（Charo）、I.F.等の知見〔J.Immunol.,1986、13
6、3412-3419）およびトネセン（Tonnesen）、M.G.等の
知見（J.Clin.Invest.,1984,74,1581-1592）に反して、
本発明の一特徴は、極めて低濃度のfMLPが、好中球のHU
VECに対する接着を増大できるという発見にある。

実施例3:時間および投与量依存性 ○炎症メディエータによる接着の増進 PMNLのHUVECへの付着のベースラインは、HUVECの各処
方物毎に、単層に接着されたPMNL3.5±1.0％という低い
値から35.5±１％という高い値まで変化した。HUVECの2
4個の処方物に対する平均値±１標準偏差は16.9±7.5％
であった。接着は、PMNLをfMLPで刺激することにより著
しく増大した（第１図参照）。

第１図において、IL-1の影響は以下のように実施し
た。HUVECを、指示した濃度のIL-1の存在下で、37℃に
て４時間インキュベートし、次いで２度交換されるPBS
で３回浸漬洗浄した。未感作PMNLのPBS懸濁液の接着
を、次に室温で行う可視的アッセイを利用して測定し
た。fMLPの作用はPMNLを指示した濃度のfMLP中に懸濁
し、室温にて15分間インキュベートし、次いで室温で行
う可視的アッセイを利用して未感作HUVECに対する接着
を測定することにより決定した。エラーバー：±1s.d.
（標準偏差）;n＝4;p＜0.01（0.05nMのfMLPおよび0.01U
/mlIL-1を起えるすべての点に対して）。

統系的に意味のある増加は0.1nMfMLP（第１図）でみ
られ、最大接着（62.5±5.3％;n、8;10nMfMLP）は濃度
0.5nM（53.8±9.8％;n、23）にまで達した。HUVECをIL-
1で刺激すると、0.05U/mlにてPMNLの接着を大巾に増大
させ、濃度0.5U/mlでほぼ最大の接着を与える（第１図;
81.2±7.4％;n、21）。ほぼ最大の接着は10ng/mlのLPS
で達成された（80.1±7.6％;n、25）。後の２者の刺激
のいずれも、HUVECと共に４時間インキュベートした後
には100％接着を達成した。但し、濃度は2U/mlIL-1また
は30ng/mlLPSを越える。HUVEC媒介接着に与えるIL-1お
よびLPSの作用の速度は極めて類似している（第２図参
照）。3.5〜４時間で各ピークに達し、７時間で約50％
に減ずる。

第２図において、HIVEC単層は、LPS（10ng/ml）また
はIL-1（0.05U/ml）の存在下で37℃にてインキュベート
し、次いで２度交換して行われるPBSでの浸漬洗浄を３
回行った。PBSに懸濁した未刺激PMNLの接着は可視的ア
ッセイにより評価した。図中の各点は３回の測定の平均
値である。各点における１標準偏差は平均の10％を越え
なかった。

実施例4:モノクローナル抗体のPMNLおよびHUVECに対す
る結合−−fMLP、IL-1およびLPS刺激の影響 TS1/18（共通でない、CD18分子のサブユニット
（β）、TS1/22（抗−LFA-1αサブユニット）〔サンシ
ェズ−マドリッド（Sanchez-Madrid）,F.等、J.Exper.M
ed.,1983,158,586-602〕、OKM1〔抗−Mas-1αサブユニ
ット；オルトダイアグノスティックス（Ortho Diagnost
ics）〕およびW6/32（ATCC株HB95により産生される抗−
HLA骨格抗体）はすべて末梢単核白血球（PMNL）に結合
した。フルオレセインイソチオシアネート（FITC）で標
識した抗マウス抗体を用いた流動細胞計測法は、αMac-
1およびβサブユニットと反応性のモノクローナル抗体
はPMNLを10nMのfMLPで刺激することにより３〜５倍高い
結合性を示すことを明らかにした。αLFA-1サブユニッ
トと反応性のモノクローナル抗体とクラスI MHC抗原と
の結合は走化性刺激により増加しなかった（アンダーソ
ン（Anderson）、D.C.等、J.Immunol.,1986,137,15〜2
7〕。R6-5-D6およびW6/32はHUVECに結合した。アルカリ
ホスファターゼで標識した抗マウス抗体を用いた酵素イ
ムノアッセイ（EIA）は、HUVECを20ng/mlのLPSに曝露す
ることにより、R6-5-D6の結合が４時間で４〜５倍に、
また７時間で５〜７倍に増すことを示した。W6/32の結
合は４時間では増加せず、LPSで刺激した24時間後に20
％以下の増加を示した。

螢光抗体（IF）顕微鏡法は、パラホルムアルデヒドに
よる同定後に、各内皮細胞の表面全体にR6-5-D6が均一
に分布していることを明らかにした。未刺激単層におい
て、すべての細胞がその平均よりも明らかに約20％高い
螢光を呈していた。IL-1（0.5U/ml）またはLPS（10ng/m
l）で刺激後４時間で、染色の全体としての強度はすべ
ての細胞につき増大し、かつ約50％が明瞭に輝いてい
た。最高の解像度（1200×：倍率）の下で、螢光は0.5
μｍ未満の均一な間隔で存在する点として見えた。接着
したPMNLを有する単層のIF顕微鏡法はPMNLの染色を全く
示さず、内皮細胞の表面上の未染色領域は好中球で占め
られていた。PMNLに対する結合がないことは流動細胞計
測法で確認された。即ち、螢光強度は非免疫腹水コント
ロールを越えるものではなかった。これとは著しく対照
的に、TS1/18の分布は付着されたPMNLに制限され、HUVE
Cの染色はなかった。

実施例5:接着に与えるモノクローナル抗体の作用−−PM
NLの前処理種々のモノクローナル抗体とPMNLの予備インキュベー
ションは、TS1/18の強い作用を示した。TS1/18による接
着の最大阻害は腹水の1:800なる希釈率およびIgG1の５
μg/ml処方物で達成された。第３図に示すように、この
モノクローナル抗体はベースライン接着を著しく減じ、
かつPMNLをfMLPで刺激することにより生ずる増大を完全
に抑制した。

第３図において、PMNLはPBS中で、指示したモノクロ
ーナル抗体の存在下もしくは不在下で（粗い斜線を施し
た棒）、あるいは0.5nM fMLP中で指定したモノクローナ
ル抗体の存在下または不在下で（細い斜線を施した
棒）、室温にて15分間予備インキュベートし、その後室
温で行う可視的接着アッセイを利用して未刺激HUVEC単
層への接着を評価した。TS1/18、1:400希釈率の腹水;R6
-5-6D、1:400希釈率の腹水;fMLP、0.5nM;OKM1、1:200希
釈率の腹水;TS1/22、1:200希釈率の腹水。括弧内の数値
は実験回数であり、エラーバーは±S.d.であり、＊はｐ
＜0.01または＊＊はｐ＜0.001を示す。

逆に、OKM1はfMLPで強化された接着を阻止する上で部
分的に有効であった。また、TS1/22およびR6-5-D6はベ
ースラインおよびfMLP増強接着のいずれに対しても作用
しなかった。LPSおよびIL-1刺激HUVECを用いた実験（第
４図参照）は、PMNLを種々のモノクローナル抗体で前処
理することにより定量的に異る結果が得られることを示
した。TS1/18は約50％だけ、LPSおよびIL-1で強化され
た接着を阻害した。未刺激HUVEC同様に、TS1/18でのPMN
Lの前処理は、LPS刺激実験に対して、fMLP増強PMNL接着
を完全に抑制し、TS1/18と各モノクローナル抗体との組
合せは、TS1/18単独で達成される以上には接着の減少を
示さなかった。腹水または単離IgG1としてTS1/18の濃度
を高くしても、LPS刺激接着は更に減じられることはな
かった。

第４図において、PMNLは指定した試薬中で室温にて15
分間予備インキュベートし、次いで室温で行う可視的接
着アッセイを利用してHUVEC単層に対する接着を評価し
た。HUVECは10ng/mlのLPSの存在下（粗く斜線を施した
棒）または不在下（白抜きの棒）あるいは0.5U/mlのIL-
1の存在下（細く斜線を施した棒）で、37℃にて４時間
インキュベートした後、接着アッセイで用いた。TS1/1
8、1:400希釈率の腹水;R6-5-D6、1:200の希釈率の腹水;
fMLP、0.5nM;OKM1、1:200希釈率の腹水;TS1/22、1:200
希釈率の腹水。括弧内の数は別々に行った実験回数であ
り、エラーバーは±S.d.であり、＊＊はｐ＜0.001を示
す。

実施例6:接着に及ぼすモノクローナル抗体の作用−−HU
VECの前処理 HUVECを種々のモノクローナル抗体と予備インキュベ
ーションすることにより、定性的に異る結果が得られ
た。第５図に示すように、IL-1またはLPS刺激により生
ずる強化された接着を減ずる上で有効な唯一のモノクロ
ーナル抗体はR6-5-D6であった。この図に示した実験に
おいて、阻害は完全ではなく、平均して73％であった。
R6-5-D6によるこの作用は腹水の希釈率1:800および腹水
のIgG2aの画分４μg/mlにて最大であった。（12μg/ml
での阻害（％）＝59.2;n、3:4μg/mlで60.1;n、6:およ
び２μg/mlで38.3;n、３）。Ｆ（ab）断片は48μg/mlで
最高に活性であった（48μg/mlでの阻害率（％）＝56.
6;n、3:24μg/mlで34.0;n、３）。

第５図において、HUVECは0.5U/mlのIL-1（微細な斜線
を施した棒）、または10ng/mlのLPS（粗な斜線を施した
棒）の存在下で37℃にて４時間インキュベートし、PBS
で３回浸漬洗浄（２度PBSを交換）し、次いで指定した
モノクローナル抗体に37℃にて15分間曝露し、再度洗浄
し、接着チャンバに挿入した。未刺激ヒトPMNLの接着は
肉眼的に室温で行うアッセイを利用して評価した。TS1/
18、腹水の1:400希釈率のもの;R6-5-D6、1:400希釈率の
腹水;OKM1、1:200希釈率の腹水;W6/32、1:200腹水。括
弧内の数は別々に行った実験の回数であり、エラーバー
は±s.d.であり、＊＊はｐ＜0.001を示す。

fMLP活性化PMNLを使用する場合（第６図）、R6-5-D6
はTS1/18と同程度に、走化性刺激により生ずる接着の増
加を阻止する上で有効であった。更に、これはIL-1およ
びLPS刺激HUVECへのPMNL接着のfMLPによる増加を阻止し
た。

第６図において、HUVECは10ng/mlのLPS（粗い斜線を
施した棒）の存在下、または不在下（白抜きの棒）、あ
るいは0.5U/mlのIL-1の存在下（細い斜線を施した棒）
で、37℃にて４時間インキュベートし、PBS（２度交
換）で３回浸漬洗浄し、次いで37℃で15分間R6-5-D6
（1:400希釈率の腹水）に曝露した。洗浄後、fMLP（0.5
nM）と（15分間、室温で）予備インキュベートしたPMNL
の接着を、室温で行う可視接着アッセイを用いて評価し
た。括弧内の数値は別々に行った実験回数であり、エラ
ーバーは±s.d.を示し、＊＊はｐ＜0.001を示す。

実施例7:パラホルムアルデヒドで固定したHUVECに対す
る接着に与えるモノクローナル抗体の作用上記実験は生きたHUVEC単層を37℃にて15分間モノク
ローナル抗体と接触させることを含む。従って、この実
験の結果の一解釈は、R6-5-D6が、接着特性の変えられ
た内皮細胞中に応答を誘発したという事実である。この
ような結論は以下の観測（第１表）により否定される。
即ち、R6-5-D6はPMNLのパラホルムアルデヒド−固定HUV
EC単層への接着を阻害したが、これは生存HUVEC単層へ
のPMNLの接着の阻害と同程度であった。PMNLのLPS刺激
内皮細胞に対する強い接着があり、かつfMLPによるPMNL
の刺激によりこの接着は強化された。R6-5-D6はこの接
着を大巾に減じた。

HUVECは10μg/mlのLPSの存在下または不在下（コント
ロール）で、37℃にて４時間インキュベートし、PBSで
洗浄し、次いで１％パラホルムアルデヒド中で室温にて
15分間固定した。この単層をPBSで洗浄し、次いで１％H
SA（ヒト血清アルブミン）および１％グリランを含むPB
Sで15分インキュベートした。この単層を再洗浄し、30
分PBS、R6-5-D6（1:400希釈率の腹水）またはW6/32（1:
200希釈率の腹水）と共にインキュベートした。その
後、fMLP（0.5nM）活性化PMNLのコントロールの接着を
測定した。

＊、ｐ＜0.01; ＊＊、ｐ＜0.001（モノクローナル抗体のない状態と比
較して）。

接着（％）＝平均値±1s.d.。別々に行った実験回数を
“n"で示した。

実施例8:TS1/18およびR6-5-D6の阻害作用の直接的比較 R6-5-D6は、PMNLをfMLPで刺激することにより生ずる
接着増加を完全に阻止し、かつNUVECをLPSまたはIL-1で
刺激することにより生ずる接着増加を部分的に阻止する
点で、TS1/18に定性的に類似する結果を与えたので、こ
れら２種のモノクローナル抗体を、PMNLおよびHUVECの
同一の処方物について直接比較を試みた。第２表の結果
は、殆ど同じ結果をこれら２種のモノクローナル抗体が
与えることを示している。更に、PMNLをTS1/18で阻止
し、HUVECをR6-5-D6で阻止する実験においては、LPS増
強接着の阻害はいずれか単独のモノクローナル抗体程大
ききはなかった。この比較をCD18錯体に欠乏する患者か
らのPMNLを使用して更に進めた。TS1/18もR6-5-D6も、
該欠乏PMNLの正常なHUVECに対する、IL-1で増強された
接着に対し阻害作用を何等示さなかった（第７図参
照）。このように、CD18欠乏PMNLの、LPS刺激HUVECに対
する接着について同様な作用の欠落が見られた。LPSお
よびIL-1強化に対するCD18−独立成分はモノクローナル
抗体およびCD18-欠乏白血球により明確に示される。

上記第７図においては、モノクローナル抗体であるR6
-5-D6およびTS1/18の効果が示されている。ここで、HUV
ECはIL-1の存在下（0.5U/ml）または不在下で37℃にて
４時間インキュベートし、PBS（２度交換）で３回浸漬
洗浄し、次いでR6-5-D6（1:400希釈率の腹水）に37℃に
て15分接触させた。洗浄後、PBSまたはTS1/18（1:400希
釈率の腹水）で前処理した正常な（粗い斜線を施した
棒）および欠乏PMNL（密な斜線を施した棒）の接着を、
室温で行われる可視接着アッセイを利用して評価した。
２人のLAD患者からのPMNLについて４回行った実験の結
果を平均して示し、エラーバーは±1s.d.である。

HUVCをIL-1（0.5U/ml）の存在下および不在下で37℃
にて４時間インキュベートし、次いでR6-5-D6（1:400希
釈率の腹水）またはPBSに15分間曝した。次いで、この
単層を洗浄し、PBSまたはTS1/18（1:400希釈率の腹水）
で予めインキュベートしたPMNLの接着を評価した。＊、
ｐ＜0.01（モノクローナル抗体のない状態と比較）；別
々に行った実験の回数を“n"で示す。

実施例9:CD18−依存およびCD18−独立接着の速度 HUVECに対するR6-5-D6の結合に及ぼすLPSおよびIL-1
の効果の時間依存性を評価した。R6-5-D6のHUVECへの結
合量は初めの３時間に亘り顕著に増加し、EIA法により
示された（第８図）ように観察した８時間の亘り高い値
に維持された。これは同一の期間に亘る未刺激PMNLの接
着にみられた変化（第２図）とは対照的である。

第８図において、HUVEC単層は図示した時間LPS（10ng
/ml）に曝露され、次いでPBS（２度交換）で３回浸漬し
て洗浄された。TS1/18（1:200希釈率の腹水）またはPBS
で予めインキュベート（15分、室温）したPMNLの接着
を、室温で行う可視的アッセイを用いて評価した。R6-5
-D6の結合はEIA法を用いて評価した（結果は代表的な実
験結果として示されている）。エラーバー、±1s.d.;
n、４。白抜き棒と密な斜線を施した棒の和は、PBSに懸
濁したPMNLの接着を示し、密な斜線を施した棒はTS1/18
でPMNLを予備インキュベートした後にも残される接着を
表す。TS1/18はこの接着アッセイ中ずっと細胞と共に残
留する。

HUVECをIL-1またはLPSで刺激した４時間後にみられる
接着の減少は、R6-5-D6により認識された内皮細胞表面
因子の量の減少により説明できなかった。従って、PMNL
接着のCD18独立決定子の寄与を評価した。飽和濃度のTS
1/18で前処理したPMNLの、LPS（第８図）またはIL-1刺
激HUVECに対する接着は４時間でピークに達し、６時間
で70％だけ下がり、８時間で79.8％だけ減じた。TS1/18
で処理したおよび処理してないPMNLの接着における差異
に反映されるように、この時間の亘るCD18の接着に対す
る寄与は６時間で9.5％、８時間で26.0％低下した。か
くして、４時間後の、接着減少に対する最大の寄与はCD
18−独立因子であると思われる。刺激HUVECのR6-5-D6前
処理およびCD18−欠乏PMNLは、PMNLのTS1/18前処理につ
いてみられたものに匹敵する時間及び接着量の変化を示
した（第３表） HUVECは指示した時間LPS（10ng/ml）とインキュベー
トし、PBS（２度交換）で３回浸漬洗浄し、次いでPBSま
たはR6-5-D6IgG（12μg/ml）に15分曝露した。このHUVE
C単層を再度洗浄した。PBSまたはTS1/18（1:400希釈率
の腹水）に懸濁した成人PMNLまたはCD18−欠乏PMNLの接
着を、室温で行う可視アッセイで測定した。接着（％）
＝平均値±1s.d.。別々に行った実験回数を“n"で示
す。

実施例10:HUVEC単層を通るPMNL移動の要件 HUVECに接着するPMNLの一部はその単層を貫通して移
動し、HUVECと基質との間を移動することが観測され
た。これについてはトネセン（Tonnesen）、M.G.等の文
献（J.Clin.Invest.,1984,74,1581-1592;スメドリ（Sme
dly）、L.A.等の文献（Fed.Proc.,1983、42、386a;ギン
ブロン（Gimbrone）、M.A.等の文献（J.Clin.Invest.,1
984、74、1552-1555）；ビースレイ（Beesley）、J.E.
等の文献（J.Cell.Sci.,1979、38、237-248）；および
アームストロング（Armstrong）、P.B.等の文献（J.Cel
l.Biol.,1975、65、439-462）を参照のこと。これらの
好中球は、この空間内で著しく平坦であると思われる
が、可動性PMNLに典型的な双極構造であると思われた。
この挙動を示すPMNLの割合は、ベースライン条件（＜１
％;n、45）下およびPMNLがfMLP（第９図）に曝露された
状態のいずれにおいても極めて低かった。しかし、HUVE
CがIL-1またはLPSで刺激された場合、この単層を通って
移動する割合は大幅に増加した（33.3±10.3％;n、25;1
0ng/mlLPS、第９図）。

第９図において、IL-1の効果は以下のように測定し
た。即ち、HUVEC単層を指示したIL-1濃度下で37℃にて
４時間インキュベートし、次いでPBS（２度交換）にて
３回浸漬洗浄した。この単層を通しておよび内皮細胞と
基質との間で移動する細胞の割合は、該単層上に未刺激
PMNLを沈降させた後1,000秒経過後に室温にて測定し
た。未刺激HUVECを貫通して移動するPMNLに与えるfMLP
の影響は、室温で指示された濃度のfMLPと共にPMNLを15
分間予備インキュベートした後に測定した。

接着アッセイを37℃で行った場合、LPS刺激単層上で
のこの移動は著しく大きな比率の細胞数を示した（78.4
±4.2％;n、8;p＜0.01）。しかし、接着（％）は温度上
昇による値よりも幾分低い増加率を示す（第10図）。

第10図の結果は以下のようにして得た。

HUVECを10ng/mlのLPSと37℃で４時間およびモノクロー
ナル抗体またはPBSと37℃で15分間インキュベートした
後、洗浄し、接着チャンバに入れた。予備インキュベー
ションで用いた濃度のR6-5-D6IgGおよびFab（夫々８μg
/mlおよび48μg/ml）を白血球懸濁液に加え、その後該
チャンバに注入した。全接着工程は37℃または室温（Rm
Temp.）で行った。各実験条件に対するｐ＜0.01（ｎ＝
４）は、モノクローナル抗体を含まない正常な成人の細
胞と比較した。移動（％）±1s.d.は初めに単層と接触
させた細胞全数に対する内皮細胞と基質との間を移動す
る細胞の割合；接着（％）±1s.d.;白抜き棒＝モノクロ
ーナル抗体を含まない成人PMNL;1つの粗いメッシュを施
した棒＝Fab処方物；細いメッシュを施した棒＝IgG処方
物；黒塗りの棒＝CD18−欠乏PMNL;＊＝移動は観測され
ず。

R6-5-D6およびTS1/18はいずれもHUVEC単層を介しての
PMNLの移動を阻止する上で同程度に有効であった。室温
で行った接着実験によれば、細胞がIL-1刺激（0.5U/m
l）単層を介して移動する割合は30.6±12.6％（ｎ＝1
7）であり、これに対してPMNLをTS1/18（1:400希釈率の
腹水）あるいはOKM1（1:200希釈率の腹水）で夫々予備
インキュベートした場合には1.6±1.6％（ｎ＝17;p＜0.
01）または5.0±1.2％（ｎ＝3;p＜0.05）であり、またH
UVEC単層をR6-5-D6（1:400希釈率の腹水）で予備インキ
ュベートした場合には2.5±1.7％（ｎ＝6;p＜0.01）で
あった。TS1/22およびW6/32は移動阻害効果を示さず、
移動細胞（％）は夫々36.0±11.5％（ｎ＝３）および3
2.2±7.9％（ｎ＝３）であった。R6-5-D6IgGおよびＦ
（ab）処方物については37℃で評価した。両者ともに37
℃および室温いずれにおいても、大きな移動および接着
阻害効果をもたらした。R6-5-D6F（ab）およびIgG処方
物による37℃での接着阻害率（％）は夫々51および60で
あり、一方移動阻害率（％）は81および86であった、室
温でのR6-5-D6IgGによる接着阻害率（％）は59であり、
かつ移動阻害率（％）は92であった。

インビトロでの内皮細胞透過移動におけるCD18錯体の
重要性はCD18−欠乏細胞に関する結果によって更に証明
された。第10図に示したように、これらは室温で移動せ
ず、かつ37℃で極くわずかに移動した。

実施例11:Mac-1およびP150,95の細胞内位置正常な未刺激PMNLおよび単球において、Mac-1およびP
150,95は細胞内小胞室並びに細胞表面に存在する〔ジョ
ーンズ（Jones）、D.H.,等、Pedi.Res.,1987、21、312
a;ミラー（Miller）,L.J.等、L.Clin.Invest.,1987,80,
185-191〕。走化性刺激への曝露、例えばC5aおよびfML
P、ホルボールミリステートアセテート（PMA）またはカ
ルシウムイオノフォア（A23187）への曝露は、Mac-1ま
たはP150,95に対するモノクローナル抗体の表面結合の
５〜10倍の増加を引き起こす〔アンダーソン（Anderso
n）、D.C.等、J.Infect.Dis.,1985,152,668-689〕。ま
た、PMNL接着性の２〜３倍の増加をも引起こす〔アンダ
ーソンD.C.等、J.Clin.Invest.,1984、74、536-551〕。
この表面蛋白の“アップレギュレーション（up-regulat
ion）”は37℃で約８分間インキュベートした後に最大
となり、かつ蛋白合成の阻害剤によって阻害されない。
これらの観察結果は、Mac-1およびP150,59が免疫刺激に
よって潜在的細胞内プールから細胞表面への移動を生ず
ることを示唆する。LAD患者はCD18錯体のサブユニット
に対するモノクローナル抗体の結合の増加あるいは人工
的基質またはインビトロでの内皮細胞への、走化性因
子、PMAまたはA23187に曝露後の付着の増加を示さない
〔アンダーソンD.C.等、J.Clin.Invest.,1984、74 536-
551〕。かくして、PMNLおよび単球の大幅に減じられたL
AD患者の炎症組織への侵入は損われたCD18表現および通
常炎症刺激により誘発される血管内皮への接着増加の結
果としての欠乏を反映する。

実施例12:モノクローナル抗体R6-5-D6の性質 HUVECに対するCD18−依存性PMNL接着の直接的かつ信
頼性ある証拠は、放射性標識されたヒト好中球およびHU
VECを用いた３つの型の実験に明確に示されている〔ハ
ーラン（Harlan）、J.M.等、Blood,1985,66,167-178;ポ
ールマン（Pohlman）,T.H.等J.Immunol.,1986,136,4548
-4553〕。またはヒト微小血管内皮を用いた実験によっ
ても示されている〔トネセン（Tonneson）、M.G.等、Cl
in.Res.,1986、34、419a;同、Fed.Proc.,1986、45、379
a〕。

（１）CD18と反応性のモノクローナル抗体（モノクロー
ナル抗体60.3）は未刺激HUVECおよびIL-1、LPSおよびrT
NF−αで刺激されたHUVECに対するヒトPMNLの接着を部
分的に阻害する〔ポールマン（Pohlman）、T.H.等、198
6、136、4548-4553〕。

（２）CD18に欠乏する患者からのPMNLは低い接着を示
し、かつ走化性因子による刺激後にも増加を示さなかっ
た〔トネセン（Tonneson）、M.G.等、Clin.Res.、198
6、34、419a;ポールマン（Pohlman）、T.H.等、J.Immun
ol.,1986、136、4548-4553〕。

（３）分泌促進物質〔ポールマン（Pohlman）、T.H.
等、J.Immuenol.,1986,136,4548-4553〕または走化性因
子C5a、fMLP、LTB₄およびPAF〔トネセン（Tonnesen）、
M.G.等、Fed.Proc.,1986,45,379aおよびClin.Res.,198
6,34,419a〕に正常PMNLを曝露後の接着増加は、抗−β
モノクローナル抗体（60.3およびTS1/18）およびCD11b
に反応性のモノクローナル抗体60.1〔ワリス（Walli
s）、W.J.等、J.Immunol.,1985、135、2323-2330;ポー
ルマン（Pohlman）、T.H.等、J.Immunol.,1986、136、4
548-4553〕により著しく阻害された。

実施例13:PMNLとHUVECとのCD18−依存接着蛋白被覆ガラスまたはプラスチック基質上で育成した
内皮細胞背後へのPMNLの移動を繰返し観察した〔トネセ
ン（Tonnesen）、M.G.等、J.Clin.Invest.,74、1581-15
92;スメドリ（Smedly）L.A.等、Fed.Proc.、1983、42、
386a;ギンブロン（Gimbrone）、M.A.等、J.Clin.Inves
t.,1984、74、1552-1555;ビースリー（Beesley）、J.E.
等、J.Cell.Sci.,1979、38、237-248;アームストロング
（Armstrong）、P.B.等、J.Cell.Biol.,1975、65、439-
462〕。この移動は走化性刺激のない状態で起こり、か
つ内皮と基質との間の相対的接着性によって説明するこ
とはできない〔ビースレイ（Beesley）、J.E.等、J.Cel
l.Sci.,1979、38、237-248〕。本発明で用いた接着アッ
セイは移動PMNLの割合を直接測定することを可能とする
ので、この現象は各実験操作でモニタすることができ
る。HUVEC単層と基質との間の位置に対する未刺激PMNL
の移動は、HUVEC単層がLPSまたはIL-1で刺激された場合
にのみ、PMNLの高い割合で生じた。この割合はこの接着
アッセイを37℃で行った場合には、室温での結果と比較
して実質的に増加した。化学運動性（chemokinetic）刺
激（即ち、接着チャンバ中での均一濃度のfMLPの存在）
はPMNLにおけるこの挙動を促進しなかった。LPSまたはI
L-1刺激単層背後への未刺激正常PMNL移動は、観測期間
中細胞と共にTS1/18を存在させることにより完全に阻害
された。この結果と、CD18−欠乏PMNLが極めて低い内皮
透過移動を示したという事実とはCD18−依存機序に関与
する。これらの結果はCD18−欠乏PMNLの極めて低い接着
−依存性移動によって支持される〔アンダーソン（Ande
rson）、D.C.等、Ann.Rev.Med.,1987、38、175-194〕。
R6-5-D6は刺激HUVEC単層背後へのPMNLの移動阻止の点で
TS1/18に類似していた。これら実験条件の全てにおい
て、R6-5-D6と同じイソタイプのモノクローナル抗体コ
ントロール（W6/32）はR6-5-D6よりも多量でHUVEC表面
に結合するものの、PMNLの接着または移動には何の変化
も生じなかった。上記の観測は内皮細胞がインビトロで
のPMNLの内皮横断移動において有効な役割を演じている
ことを示している。また、R6-5-D6により認識される決
定基がこの現象に臨界的であることをも示している。

実施例15:抗−ICAM-1抗体の、好中球が炎症兎肺に移動
するのを阻止する能力抗−ICAM-1抗体の、好中球が炎症を起こしている兎肺
に移動するのを阻止する能力につき研究した。i.v.経路
で抗−ICAM-1抗体R6-5-D6を注射（0.015mg/kg;0.15mg/k
gまたは1.5mg/kg）した１時間後に、兎にi.v.経由でホ
ルボール12−ミリステート13−アセテート（PMA）を40
μg/kg注射して急性肺炎症反応を誘発した。これは20〜
24時間でピークに達する。この時点で気管支胞洗液中に
存在する好中球の数をクールターカウンタ（Coulter Co
unter）で定量し、PMAを投与し、かつ抗−ICAM-1を投与
しなかった兎と比較した。この実験の結果を第11図に示
す。このデータは1.5mg/kgでの抗−ICAM-1が72％の好中
球移動を阻止することを示している。

実施例16:心筋再潅流に及ぼす抗−ICAM-1抗体の影響インビボでの兎の心筋における再潅流損傷に与える抗
ICAM-1抗体R6-5-D6の作用を決定するために、抗体を左
前下行冠状動脈の１時間の閉塞前15分の時点でi.v.（丸
剤）経由で2.0mg/kg投与し、次いで同動脈の再潅流を行
った。九回の実験の平均を第４表に示す。

以上、本発明を特定の態様に関連して記載してきた
が、更に変更が可能であると理解すべきであり、本出願
は一般に本発明の原理に従う発明の任意の変更、用途も
しくは改作をも包含するものであり、本発明が関与する
技術の範囲内の公知もしくは通常の実務の範囲内にはい
り、および本発明の上記本質的特徴に適用し得るような
本開示からの逸脱および上記特許請求の範囲に従うよう
な逸脱をも包含する。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）に対するヒ
ト末梢血多形核白血球（PMNL）の付着に与えるインタロ
イキン−１（IL-1）およびf-met-leu-phe（fMLP）の作
用を示す図であり、第２図はHUVEC接着性のIL-1およびLPS刺激の時間依存挙
動を比較して示した図であり、第３図は、ヒトPMNLの未刺激HUVEC単層への付着に与え
るモノクローナル抗体の作用を示す図であり、第４図は、ヒトPMNLのリポ多糖（LPS）およびIL-1刺激H
UVEC単層への付着に与えるモノクローナル抗体の効果を
示す図であり、第５図はIL-1およびLPS増強HUVEC接着性に及ぼすモノク
ローナル抗体の影響を示す図であり、第６図はfMLP増強PMNLのHUVECへの付着に及ぼすモノク
ローナル抗体、R6-5-D6、の作用を示す図であり、第７図はCD18欠乏PMNLのHUVECへの付着を示す図であ
り、第８図はR6-5-D6結合およびHUVEC単層へのPMNLの付着に
おける時間変化を示す図であり、第９図はHUVEC単層を介して移動するPMNLに及ぼすIL-1
およびfMLPの影響を示す図であり、第10図は、LPS刺激HUVECを通るPMNLの移動の、R6-5-D6I
gGおよびFab処方物による阻害をCD18−欠乏PMNLに対す
る結果と比較して示した図であり、および第11図は炎症を生じた兎の肺における好中球流入に及ぼ
す抗−ICAM-1抗体の影響を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ドナルドキャロルアンダーソンアメリカ合衆国テキサス州 77478 シュガーランドワイルドフォレスト 13811 (72)発明者ロバートロースレインアメリカ合衆国コネチカット州 06811 ダンバリータマニートレイル 32 (72)発明者クリントンウェインスミスアメリカ合衆国テキサス州 77478 シューガーランドワイルドフォレスト 13927 (72)発明者ランダルウィルバーバートンアメリカ合衆国コネチカット州 06032 ファーミントンファーブルレーン４ (56)参考文献特開平１−110700（ＪＰ，Ａ) Ａｎｎ．Ｒｅｒ．Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．38 （1987）Ｐ．175−194，Ｃｅｌｌ. Ｖｏｌ．51 （1987）Ｐ．813−819

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】哺乳類の対象における非特異的防禦系の反
応に起因する炎症の治療に用いる、顆粒球に結合し得る
抗炎症剤を含む組成物であって、該抗炎症剤がICAM-1およびICAM-1の官能性誘導体からな
る群から選ばれることを特徴とする組成物。
【請求項２】上記抗炎症剤がICAM-1である請求項１記載
の組成物。
【請求項３】上記抗炎症剤がICAM-1の官能性誘導体であ
る請求項１記載の組成物。
【請求項４】哺乳類対象における非特異的防禦系の応答
に起因する炎症の治療に用いる、内皮細胞に結合できる
抗炎症剤を含む組成物であって、該抗炎症剤がICAM-1に結合できる抗体、ICAM-1に結合で
きる、抗体の断片およびICAM-1の非免疫グロブリンアン
タゴニストからなる群から選ばれることを特徴とする上
記組成物。
【請求項５】上記抗炎症剤がICAM-1に結合できる抗体で
ある請求項４記載の組成物。
【請求項６】上記抗炎症剤が抗体断片であり、該断片は
ICAM-1に結合し得る請求項４記載の組成物。
【請求項７】該抗体がモノクローナル抗体である請求項
５または６記載の組成物。
【請求項８】該モノクローナル抗体がモノクローナル抗
体R6-5-D6である請求項７記載の組成物。
【請求項９】上記抗炎症剤がICAM-1の非免疫グロブリン
アンタゴニストである請求項４記載の組成物。
【請求項１０】該ICAM-1の非免疫グロブリンアンタゴニ
ストがLFA-1以外のICAM-1の非免疫グロブリンアンタゴ
ニストである請求項９記載の組成物。
【請求項１１】上記抗炎症剤が上記対象に、上記炎症が
生ずる前に投与される請求項１または４記載の組成物。
【請求項１２】上記抗炎症剤が腸内投与手段および腸管
外投与手段からなる群から選ばれる手段によって投与さ
れる請求項１または４記載の組成物。
【請求項１３】該腸管外投与手段が筋肉内、静脈内およ
び皮下投与手段からなる群から選ばれる請求項12記載の
組成物。
【請求項１４】上記炎症が、成人呼吸障害症候群、敗血
症に二次的な多発性器官損傷症候群、外傷に対して二次
的な多発性器官損傷症候群、組織の再灌流損傷、急性糸
球体腎炎、反応性関節炎、急性炎症性成分をもつ皮膚
病、中枢神経系炎症性疾患、熱損傷、血液透析、白血球
除去血輸血、潰瘍性大腸炎、クローン病、壊死性全腸
炎、顆粒球輸注関連症候群および細胞分裂誘起性毒性か
らなる群から選ばれる一状態に関連するものである請求
項１または４記載の組成物。
【請求項１５】上記再灌流損傷が心筋組織の再灌流損傷
である請求項14記載の組成物。
【請求項１６】上記中枢神経系炎症性疾患が急性化膿性
髄膜炎である請求項14記載の組成物。