JP2673417B2 - Ｂ型肝炎又はｃ型肝炎のウイルス性疾患の予防治療剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】 本発明は、Ｂ型肝炎又はＣ型肝
炎のウイルス性疾患の予防治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎を含むウイ
ルス性疾患に対しては、インターフェロン（以下ＩＦＮ
という）が有効とされているが、有効率が約３０％と低
く且つ高価であり、しかも、副作用が強いという問題が
ある。

【０００３】

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】 Ｂ型肝炎又はＣ型肝
炎のウイルス性疾患の予防治療剤としては、内服により
副作用もなく、免疫力の増強作用により確実にウイルス
抗原を低下せしめることが必要である。

【０００５】ところで、本発明者らは、慢性難治性疾患
予防治療剤として中性プロテアーゼを用い、その有効性
を認め、先に特許出願を行った（特公平２−２３５３２
号及び特公平５−７７６５５号）。

【０００６】そこで、本発明者らがその後さらに研究を
重ねたところによると、中性プロテアーゼ（Metal Neut
ral Protease, 以下、ＭＮＰ₁ という）は、極めて強い
抗炎症作用、抗ウイルス作用、抗エイズ作用、免疫増強
作用とステロイド様作用を持ち、慢性肝炎、Ｂ型肝炎、
Ｃ型肝炎と、殊に驚くべきことにエイズ菌に対しても優
れた効果を認めた。即ち、免疫力の増強作用により確実
にウイルス抗元を低下せしめる効果と、エイズ菌を死滅
させる効果と神経難聴改善作用が見られた。尚、副作用
は全例にわたり全く見られなかった。

【０００７】

【課題を解決するための手段】 本発明は、Ｂ型肝炎又
はＣ型肝炎のウイルス性疾患の予防治療剤を提供するも
のであり、その手段として構成したところは、ストレプ
トミセス属の産生する中性プロテアーゼのうちＭＮＰ_１
を有効成分とする点にある。

【０００８】

【０００９】本発明の予防治療剤は、通常の製剤技術に
より、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などとし
て経口的に、注射剤、坐薬、軟膏剤として非経口的に投
与できる。投与量は、酵素の種類、疾病の程度、投与方
法、剤型によっても異なるが、経口投与の場合は成人１
人当たり１〜５０００mgにより目的を達成できる。酵素
の種類によっては腸溶経口製剤とするのが好ましい。

【００１０】本発明の有効成分であるＭＮＰ₁ は、スト
レプトミセス（streptomyces）属の産生する中性プロテ
アーゼであるが、この中性プロテアーゼについては難治
性慢性疾患予防治療剤に係る上記特許出願中に詳細に製
法、分子量、等電点、基質特異性、酸素活性至適、安定
性、阻害剤、溶解性、電気泳動、アミノ酸分析値などに
ついて述べた通りであるが、このＭＮＰ₁ をバイオテク
ノロジーにより精製することもできる。

【００１１】即ち、本発明の有効成分である中性プロテ
アーゼの一つは、ストレプトミセス（streptomyces）属
の産生する中性プロテアーゼを挙げることができる。こ
の酵素は、Streptomyces griseusの培養液より、カルボ
キシメチル（ＣＭ）セルロースやジエチルアミノエチル
（ＤＥＡＥ）セルロースなどのイオン交換樹脂、そして
カルボベンジルオキシグリシルロイシン（Ｇｂｚ−Ｃｌ
ｙ−Ｌｅｕ）、ロイシンアミド（Ｌｅｕ−ＮＨ₂ ）、フ
エニルアラニン（Ｐｈｅ）などをリガンドとして持つア
フィニティー担体（Sepharose 等）を用いたクロマトグ
ラフィーにより精製され、次の表１のような化学特性を
有する。

【００１２】

【表１】

【００１３】このストレプトミセス属の産生する中性プ
ロテアーゼなどと類似の基質特異性を示すSerratia属の
産生するセラチオ・ペプチダーゼ、Bacillus属の産生す
るサーモライシンなども本発明の有効成分として用いる
ことができる。

【００１４】〔動物実験研究結果〕 ＭＮＰ₁ とステロイドホルモンとの比較 （１） カラゲニン浮腫 Wister系雄性ラットにＭＮＰ₁ 、Predonisolon, Aminop
eptidase, Trypsin, Chymoelastase, と Carboxypeptid
ase を１ml／kgを尾静脉内に投与後、カラゲニン溶液を
投与し経時的にラット足浮腫測定装置にて足容積を測定
した。その結果、ＭＮＰ₁ が最も強くプレドニゾロンよ
り強かった。その結果を表２に示す。

【００１５】

【表２】

【００１６】（２） カラゲニン胸膜炎とChemotaxis
（遊走因子） Wister系雄性ラットの胸腔内に２％カラゲニン 0.1mlを
注入し、ＭＮＰ₁ とプレドニゾロンを股静脉より投与し
た。カラゲニン投与後５時間目にラットを断頭放血し、
開胸して胸腔内の滲出液量、総タンパク量、総白血球の
いずれもがＭＮＰ₁ の用量に依存して抑制され、その抑
制はプレドニゾロンより強かった。また、総白血球数を
測定した、その滲出白血球の９０〜９５％は好中球であ
った。更に胸腔内滲出液中の好中球遊走因子産生もＭＮ
Ｐ₁ がプレドニゾロンより強かった。

【００１７】（３） 肉芽腫抑制作用 ラットの背部にペーパー・デスクを挿入し、肉芽増殖を
ＭＮＰ₁ と Predonisolon を添加しその抑制作用を比較
しＭＮＰ₁ が Predonisolon より遥かに強いことを示し
た。

【００１８】 このように、ストレプトミセス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の産生するＭＮＰ_１は、カラゲ
ニン浮腫、胸膜炎の浮腫、遊走因子の抑制作用、および
肉芽腫の抑制作用につきプレドニゾロンと比較して極め
て優れた効果を示すことが認められた。

【００１９】以上は、従来、急性神経性難聴（突発性難
聴）や顔面神経麻痺、反回神経麻痺にはステロイドホル
モンが投与され、かなりの有効性が認められていたが、
副作用が激しいので、副作用のない本発明のＭＮＰ₁ を
使って有効性を認めたものである。

【００２０】すなわち、前記の動物実験により、ステロ
イドホルモンの代表的薬理作用である抗浮腫作用と肉芽
腫抑制作用について比較検討した場合、その両者とも、
ステロイドホルモンよりも本発明のＭＮＰ₁ が優れてい
ることを証明することができた。

【００２１】本発明の予防治療剤は通常の製剤技術によ
り、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などとして
経口的に投与できる。さらに本剤は注射剤、坐薬、軟膏
剤として非経口的に投与できる。さらに本剤は、他の薬
剤、例えば、他の腎臓薬、肝臓薬、関節リウマチ剤、ス
テロイドホルモン、抗生物質免疫賦活剤、抗腫瘍剤など
と併用できる。

【００２２】種々の炎症疾患の治療剤として使用される
副腎皮質ホルモン、すなわちステロイドホルモンは、劇
的な効果を示すが、一方劇しい副作用を持つことも良く
知られている。本発明の治療剤は、このステロイドホル
モンが示す総ての慢性炎症疾患に対する卓越した有効成
分を有し、しかもステロイドホルモンの示す激しい副作
用を全く示さないことは特記すべきことである。

【００２３】 投与量は、疾病の種類、投与法、剤型な
どによっても異なるが、経口投与の場合は成人１人につ
き１日当たり１〜５０００ｍｇ、胃液にて不安定な場合
は腸溶製剤として、目的を達成することができる。

【００２４】 また、投与量を中性プロテアーゼの活性
単位で表した場合には、腸溶製剤にて、ストレプトミセ
ス属由来の中性プロテアーゼを５０００〜５０００００
チロジン単位で経口投与することにより目的を達するこ
とができる。

【００２５】

【実施例】以下、実施例を説明する。

【００２６】

【００２７】 （実施例１） Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｇｒｉｓｅｕｓ由来の中性プロテアーゼ２ｇ、乳糖
４０ｇを混合し、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ
１．０ｇを加え顆粒に成形した後、酢酸フタール酸セル
ローズを用い均等に被膜した腸溶性顆粒とする。

【００２８】 （実施例２） 実施例１で得た中性プロ
テアーゼ腸溶性顆粒をカプセルに充填し、カプセル剤と
する。

【００２９】 （実施例３） ウイテップゾルＨ−１５
（ダイナマイトノーベル社製：高級飽和脂肪酸トリグリ
セリド）６１５７ｍｇとポリオキシエチレンラウリルエ
ーテル（日光ケミカルズ社製：ＢＬ−２５）３２５ｍｇ
を添加し、加温溶融させる。これにＳｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓの産生する中性プロテアーゼ粉
末５００ｍｇを添加し、分散させ、１３０ｍｇの坐剤型
に注入し、固化後、型から分離する。

【００３０】〔臨床例〕以下、臨床例に基づき更に詳述
する。

【００３１】（調査対象と方法） （１） 調査対象 本発明者らの診療所に平成２年５月から平成３年１２月
までの１年８カ月間に来院した慢性肝炎および肝硬変と
診断された患者で、患者の同意を得られたものを対象と
した。

【００３２】（２） 使用薬剤・投与方法・投与期間 使用薬剤は、前述した中性プロテアーゼのＭＮＰ₁ で１
カプセル中、９０００チロジン単位を含有する薬剤であ
り、投与量はＭＮＰ−１（５４０００単位；６カプセ
ル）、ＭＮＰ−２（１０８０００単位；１２カプセ
ル）、ＭＮＰ−３（１６２０００単位；１８カプセル）
の３群に分けて、毎日三食後の服用として、７カ月間継
続投与した。

【００３３】（成績） （１） 解析対象例 解析対象例は、全部で５８例であり、除外例および中止
例はなかった。性別では、男性が４９例（平均年齢５
７．７歳）であり、女性が９例（平均年齢５８．６歳）
であった。

【００３４】慢性活動性肝炎５８症例にＭＮＰ−１、Ｍ
ＮＰ−２、ＭＮＰ−３を投与し、肝機能検査値と血中の
α₂ ＭＧ濃度とＡ／Ｇ比などを投与開始前および半月
後、以後毎月７カ月後まで測定した。その成績は、表３
（肝機能検査成績の推移）にすべての平均値を示した。
また、慢性活動性肝炎患者の肝機能改善度（軽度改善以
上）について、表４に示した。更に、ＭＮＰ投与量と投
与期間による血中α₂ ＭＧ濃度の消長を表５に示した。

【００３５】

【表３】

【００３６】

【表４】

【００３７】

【表５】

【００３８】投与初期の半カ月後や１カ月後に見られる
改善度の負の効果の割合は、一時的な憎悪を示すもので
ある。すなわち、投与半カ月後にＭＮＰ−１群は−２０
％、ＭＮＰ−２群は−３７％、ＭＮＰ−３群は−４０％
の低下を示すものの、投与１カ月後にはＭＮＰ−１群は
２５％、ＭＮＰ−２群は１８％、ＭＮＰ−３群は−５％
と、投与用量に依存した改善度の変動と回復が見られ、
投与７カ月後にはＭＮＰ−１群は４５％、ＭＮＰ−２群
は６２％、ＭＮＰ−３群は９８％の改善が見られた。こ
のように改善度はＭＮＰの投与用量に依存した効果が見
られた。血液学的な各種検査項目の中でも血清のα₂ Ｍ
Ｇ濃度変化に注目してみると、投与期間の初期では投与
半カ月後のα₂ ＭＧ濃度は、ＭＮＰ−１群は−２０％、
ＭＮＰ−２群は−３７％、ＭＮＰ−３群は−４０％と奇
妙なくらい改善度の変動との一致が見られ、その後α₂
ＭＧ濃度は投与用量に依存した回復を見せ、更に投与開
始時期のα₂ ＭＧ濃度を超える増加が認められた。

【００３９】このように肝機能改善度とα₂ ＭＧの血中
濃度は、投与初期では低下の変動の割合は同等であり、
投与の経過に伴って肝機能改善度とα₂ ＭＧの血中濃度
の変動もほぼ同じ傾向を示すことが明らかになった。こ
の事実は、投与したＭＮＰと血中のα₂ ＭＧが血中で結
合し作用することを示唆する興味深い結果である。

【００４０】本発明者らは、当初、ＫＨＲ−１、ＫＨＲ
−２、ＫＨＲ−３の臨床効果がその用量依存性に比例し
ないことに疑問を持ち、ＫＨＲを更に精製したＭＮＰを
使用し、その臨床効果とα₂ ＭＧの血中濃度を比較検討
したことで、肝機能改善度がα₂ ＭＧの血中濃度の変動
に依存していることが明らかになり、初期の疑問が明ら
かになった。

【００４１】（ウイルス肝炎に対する適用） （１） ウイルス肝炎患者の現状 ウイルス肝炎は１９７０代初期にオーストラリア抗原、
いわゆるＨＢＳ抗原が臨床的に利用されるようになり、
次第に注目されてきた。今日ではＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型
肝炎の血清学的診断法が確率されている。我が国には年
間２００万人近くのウイルス肝炎患者がおり、Ａ型肝炎
は散発性肝炎の３０％ほどを占めていて、１０万人ほど
の発症が見られるが、以前のような井戸水を介しての集
団発生は衛生環境の改善と共に減少している。一方、青
年の海外への渡航の増加に伴って旅行後や滞在中の発症
が見られる。また、急性Ａ型肝炎の慢性化の例はなく、
ワクチンの開発により、撲滅が期待されている。Ｂ型肝
炎はやはり散発性肝炎の中で１０万人ほどを占め、更に
ウイルス・キャリアの発症が見られるが、主要な感染経
路である母子感染による垂直感染の防止によりキャリア
の増加は断たれて、キャリアは２００万人以下になった
と思われる。Ｂ型のキャリアは慢性肝炎患者の３０万人
ほどが、肝硬変患者が肝ガン患者の４０％ほどを占めて
いる。Ｃ型肝炎は主として成人の水平感染が主な感染経
路であり、Ｂ型肝炎に比して、感染性は低い。１００万
人以上のウイルス・キャリアがいると推定され、輸血後
肝炎の９０％以上、散発性肝炎の半分近くを占めてい
る。献血のＨＣＶ抗体検査の実施に伴って、輸血に起因
する患者は激減している。ＤおよびＥ型肝炎は国内では
稀なので主要ではない。

【００４２】Ｃ型急性肝炎は高頻度で慢性肝炎へ移行す
ることが明らかにされていることから、慢性化の防止対
策が必要でありインターフェロン（ＩＦＮ）療法が有効
とされているが、かなりの経済的負担、時間的拘束、副
作用による社会生活の停滞、治療の開始時期、ＩＦＮの
用法や用量、Ｃ型肝炎ウイルスの亜株による相違など検
討すべき問題も残されている。また、Ｃ型肝炎ウイルス
の持続感染により、慢性持続性肝炎になった場合には自
然治癒はあり得ないと判断して良い。病態の進展や肝機
能の差異に個人差があり、患者個々の背景によって差異
が生じることから、期待されているＩＦＮ療法は必ずし
も万能ではない。残念ながら、有効な症例と無効な症例
の違いが解明できていない現状であり、ＩＦＮ療法やホ
ルモン・リバウンド療法に無効な患者に対する有効な治
療法が見当たらないようである。本発明者らは、前述の
ように慢性活動肝炎でＭＮＰが有効な結果を示したの
で、更に、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎にも適用を試み、優れた
効果を確認した。

【００４３】（２） 方法 薬剤 ＭＮＰ₁ を１日５カプセル投与し、安全性を確認しなが
ら経過を観察した。

【００４４】 症例 本発明者らの診療所に平成４年９月より平成５年７月ま
での約１０カ月間に来院したＢ型肝炎患者５例、Ｃ型肝
炎患者６例、軽症３例で、患者の同意を得たものを対象
とした。

【００４５】この場合、ＨＣＶ抗原ＰＣＲ定量（ＲＮＡ
量）値が１０¹⁰〜１０⁷ を重症、１０⁶ 〜１０⁴ を中
症、１０³ 〜１０⁰ を軽症とした。この値は、血液１ml
中のＨＣＶウイルスの数に相当すると判断できる。

【００４６】 投与計画 ＭＥＰ−Ｆ投与は離脱投与方法と持続投与方法によっ
た。すなわち、離脱投与法は表６に示すごとく（Ａ）〜
（Ｄ）の各投与方式の繰り返しによる方法で、持続投与
は薬剤を中止することなく連続投与する方法である。

【００４７】

【表６】

【００４８】今回は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎とも初期には
（Ｂ）方式で経過を観察し、次いで（Ｄ）方式、後期に
は（Ｅ）方式によった。但し、Ｃ型肝炎（軽症）に関し
ては（Ｅ）方式で実施した。

【００４９】 検査項目 の投与方法で内服後、内服中または中止後に採血し、
次のような項目を検査した。

【００５０】一般肝機能検査：α₂ ＭＧ、総ビリルビ
ン、直ビリルビン、ＴＴＴ、ＺＴＴ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、
ＡＬＰ、ＬＤＨ、ＬＡＰ、γ−ＧＴＰ、総コレステロー
ル、コリンエステラーゼ、ＴＰ、Ａ／Ｇ

【００５１】Ｂ型肝炎検査：ＨＢＳ抗原インデックス、
ＨＢＥ抗原インデックス、ＨＢＥ抗体阻害率

【００５２】Ｃ型肝炎検査：ＨＣＶ抗体インデックス、
ＨＣＶ抗体ユニット、ＨＣＶ抗原ＰＣＲ定量（ＲＮＡ）

【００５３】（３） 成績 症例１：Ｔ．Ｈ 男 ８１歳 投与前値はＨＢＳ抗原インデックスが６３．６、ＨＢＥ
抗体阻害率は９９．１と高い値を示した。直ちに、ＭＮ
Ｐ₁ 剤を１日５カプセルを（Ｂ）方式により投与（１２
週間）、その後（Ｄ）方式に変更し観察した。その結
果、副作用はなく、投与８週間後、１６週間後にＨＢＳ
抗原インデックスは７９．８、７４．３と上昇したが、
以後（Ｄ）、（Ｅ）方式に変更したところ、ＨＢＳ抗原
インデックスは３０以下にまで、ＨＢＥ抗体阻害率は１
００弱の値を保ち、ＨＢＥ抗原インデックスは０．２と
下降した。その他の血液検査には全く異常は見られなか
った。本症例におけるＭＮＰ₁ 投与の結果を、表７及び
図１に示す。

【００５４】

【表７】

【００５５】症例２：Ｔ．Ｙ 男 ７６歳 ＧＯＴ、ＧＰＴの肝機能検査値はやや高く、ＨＣＶ抗原
ＲＮＡ量はおそらく１０¹⁰以上あったとものと思われ
る。ＨＣＶ抗体の検査値は高く、α₂ ＭＧの血中濃度も
高く、ＲＮＡ量の低下傾向の持続と肝機能検査値の変化
に期待している。本症例におけるＭＮＰ₁ 投与の結果
を、表８及び図２に示す。

【００５６】

【表８】

【００５７】

【００５８】

【００５９】

【発明の効果】 本発明によれば、Ｂ型肝炎又はＣ型肝
炎のウイルス性疾患の予防治療剤として、中性プロテア
ーゼ（ＭＮＰ_１）のみ又はＭＮＰ_１とその他のプロテア
ーゼにより、インターフェロンよりも経済的且つ有効で
あり、しかも、副作用なく機能する効果がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明を症例１に適用した結果を示すグラフ図
である。

【図２】本発明を症例２に適用した結果を示すグラフ図
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:545） (72)発明者 藤崎 恭大 兵庫県西宮市殿山町３−28 (56)参考文献 特開 昭62−215533（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−26822（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−27026（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−500518（ＪＰ，Ａ)

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ストレプトミセス属の産生する中性プロ
   テアーゼのうちＭＮＰ_１を有効成分とするＢ型肝炎又は
   Ｃ型肝炎のウイルス性疾患の予防治療剤。