JP2667261B2 - 発現エンハンサーおよび組換え遺伝子発現時の収量を増大させる方法 - Google Patents
発現エンハンサーおよび組換え遺伝子発現時の収量を増大させる方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、発現促進DNA（以下発現エンハンサーとい
う）および組換え遺伝子を有する発現ベクターを含む適
当な宿主細胞の形質転換によつて組換え遺伝子の発現時
の収量を増大させる方法に関する。
う）および組換え遺伝子を有する発現ベクターを含む適
当な宿主細胞の形質転換によつて組換え遺伝子の発現時
の収量を増大させる方法に関する。
従来の技術 組換え遺伝子、就中E.coli中の真核遺伝子の発現時に
は、しばしば、所望の遺伝子生成物の発現が不十分であ
る、という難点が生じる。これは、当該分野において従
事する研究者によつて種々の原因に帰せられているが、
就中特定の組換え遺伝子で形質転換されたE.coli細胞の
極めて小さい発酵速度に原因があるとされている。成程
E.coli細胞は部分的には組換え遺伝子の極めて良好な発
現を示すが、細胞成長は不良であつて、そのためにバイ
オマスが僅かしか得られず、その結果また所望の遺伝子
生成物の収量も極めて少なくなる。
は、しばしば、所望の遺伝子生成物の発現が不十分であ
る、という難点が生じる。これは、当該分野において従
事する研究者によつて種々の原因に帰せられているが、
就中特定の組換え遺伝子で形質転換されたE.coli細胞の
極めて小さい発酵速度に原因があるとされている。成程
E.coli細胞は部分的には組換え遺伝子の極めて良好な発
現を示すが、細胞成長は不良であつて、そのためにバイ
オマスが僅かしか得られず、その結果また所望の遺伝子
生成物の収量も極めて少なくなる。
発明が解決しようとする課題 したがつて本発明は、E.coliにおける発現時の所望の
遺伝子生成内の収量を増大させる方法および手段を提供
するという課題を基礎にしている。
遺伝子生成内の収量を増大させる方法および手段を提供
するという課題を基礎にしている。
課題を解決するための手段 前記課題は本発明により、発現エンハンサーが、転写
後にtRNAのクローバー葉構造を形成する能力のあるDNA
配列を有しかつ転写後にクローバー葉構造においてアン
チコドンループを形成するDNA領域で、配列５′−GACTT
AGAAGGTCGTT−３′またはこの配列と相補的な配列５′
−AACGACCTTCTAAGTC−３′、好ましくは５′−CACGACTT
AGAAGGTCGTTG−３′または同配列と相補的なオリゴ５′
−CAACGACCTTCTAAGTCGTG−３′とハイブリツドを形成し
ていることによつて解決される。
後にtRNAのクローバー葉構造を形成する能力のあるDNA
配列を有しかつ転写後にクローバー葉構造においてアン
チコドンループを形成するDNA領域で、配列５′−GACTT
AGAAGGTCGTT−３′またはこの配列と相補的な配列５′
−AACGACCTTCTAAGTC−３′、好ましくは５′−CACGACTT
AGAAGGTCGTTG−３′または同配列と相補的なオリゴ５′
−CAACGACCTTCTAAGTCGTG−３′とハイブリツドを形成し
ていることによつて解決される。
tRNA分子のクローバー葉構造は、一本鎖RNA分子の特
定領域の塩基対によつて形成され、すべてのtRNA分子に
おいて特定の規則性が生じる。クローバー葉構造のそれ
ぞれには、左のループ、すなわち所謂ジヒドロウリジン
ループ；第２番目のループ、すなわち相補的なトリプレ
ツトを有するtRNA分子の場合にはmRNAの塩基対を引受け
ることができ、それによつてtRNAの特異性を決める所謂
アンチコドンループおよび右に配置されたループ、すな
わち所謂プソイドウリジンループが存在し、アンチコド
ンループとプソイドウリジンループとの間にはしばしば
可変のエキストラループがある。
定領域の塩基対によつて形成され、すべてのtRNA分子に
おいて特定の規則性が生じる。クローバー葉構造のそれ
ぞれには、左のループ、すなわち所謂ジヒドロウリジン
ループ；第２番目のループ、すなわち相補的なトリプレ
ツトを有するtRNA分子の場合にはmRNAの塩基対を引受け
ることができ、それによつてtRNAの特異性を決める所謂
アンチコドンループおよび右に配置されたループ、すな
わち所謂プソイドウリジンループが存在し、アンチコド
ンループとプソイドウリジンループとの間にはしばしば
可変のエキストラループがある。
本発明による発現エンハンサーは、転写後にこのよう
なクローバー葉構造を形成することができるRNAを与え
るDNA構造を有する。従つて本発明は、クローバー葉構
造を形成する能力のある天然および合成遺伝子を包含し
ており、本発明の範囲内にはまた、クローバー葉構造を
形成する能力のあるDNA配列の他に別の配列を有しかつ
クローバー葉構造を有するRNAの形成下にプロセツシン
グされうるDNA配列も入る。しかし本発明による発現エ
ンハンサーは、アンチコドンループで前記オリゴヌクレ
オチドとハイブリツトを形成することを特徴としてい
る。本発明の好ましい実施態様においては、発現エンハ
ンサーは配列５′−CACGACTTAGAAGGTCGTTG−３′または
これと相補的な配列５′−CAACGACCTTCTAAGTCGTG−３′
のオリゴヌクレオチドとハイブリツドを形成する。
なクローバー葉構造を形成することができるRNAを与え
るDNA構造を有する。従つて本発明は、クローバー葉構
造を形成する能力のある天然および合成遺伝子を包含し
ており、本発明の範囲内にはまた、クローバー葉構造を
形成する能力のあるDNA配列の他に別の配列を有しかつ
クローバー葉構造を有するRNAの形成下にプロセツシン
グされうるDNA配列も入る。しかし本発明による発現エ
ンハンサーは、アンチコドンループで前記オリゴヌクレ
オチドとハイブリツトを形成することを特徴としてい
る。本発明の好ましい実施態様においては、発現エンハ
ンサーは配列５′−CACGACTTAGAAGGTCGTTG−３′または
これと相補的な配列５′−CAACGACCTTCTAAGTCGTG−３′
のオリゴヌクレオチドとハイブリツドを形成する。
このような発現エンハンサーは合成することもできる
し、また例えばE.coli細胞から分離することもできる。
本発明の好ましい実施態様においては、発現エンハンサ
ーを製造するために、Pst Iで部分的に消化された染色
体E.coli DNAから成る遺伝子バンク（Genbank）を適当
なベクターに導入し、この遺伝子バンクベクターおよび
その発現時にE.coli細胞の成長を不良にする組換え遺伝
子を有する発現プラスミド（ここで“成長を不良にす
る”という表現は本発明の範囲では、細胞の成長を組換
え遺伝子のみの発現の場合には、発現エンハンサーの付
加的発現の場合よりも不良にすることを意味する）を含
むE.coli細胞が共同形質転換され、選択され、誘導さ
れ、培養され、増殖して大きなコロニーになつたクロー
ンを分離し、これらのクローンから遺伝子バンクベクタ
ーを分離する。配列５′−GACTTAGAAGGTCGTT−３′また
はこれと相補的な配列５′−AACGACCTTCTAAGTC−３′の
オリゴヌクレオチドとのハイブリツド形成によつて、発
現エンハンサーの存在を検べることができる。本発明の
特に好ましい実施態様においては配列５′−CACGACTTAG
AAGGTCGTTG−３′のオリゴヌクレオチドまたはこれと相
補手なオリゴヌクレオチド５′−CAACGACCTTCTAAGTCGTG
−３′を使用する。
し、また例えばE.coli細胞から分離することもできる。
本発明の好ましい実施態様においては、発現エンハンサ
ーを製造するために、Pst Iで部分的に消化された染色
体E.coli DNAから成る遺伝子バンク（Genbank）を適当
なベクターに導入し、この遺伝子バンクベクターおよび
その発現時にE.coli細胞の成長を不良にする組換え遺伝
子を有する発現プラスミド（ここで“成長を不良にす
る”という表現は本発明の範囲では、細胞の成長を組換
え遺伝子のみの発現の場合には、発現エンハンサーの付
加的発現の場合よりも不良にすることを意味する）を含
むE.coli細胞が共同形質転換され、選択され、誘導さ
れ、培養され、増殖して大きなコロニーになつたクロー
ンを分離し、これらのクローンから遺伝子バンクベクタ
ーを分離する。配列５′−GACTTAGAAGGTCGTT−３′また
はこれと相補的な配列５′−AACGACCTTCTAAGTC−３′の
オリゴヌクレオチドとのハイブリツド形成によつて、発
現エンハンサーの存在を検べることができる。本発明の
特に好ましい実施態様においては配列５′−CACGACTTAG
AAGGTCGTTG−３′のオリゴヌクレオチドまたはこれと相
補手なオリゴヌクレオチド５′−CAACGACCTTCTAAGTCGTG
−３′を使用する。
本発明による好ましい製造方法は、E.coliでその遺伝
子が発現する際同細胞の成長を極めて不良にする組換え
遺伝子を有する発現プラスミドを用いて行なうことがで
きる。このために好ましくは誘導可能な発現プラスミド
を使用すると、誘導までE.coli細胞の通常の発酵が起こ
りうる。誘導後に、再び本発明による発現エンハンサー
を有する遺伝子バンクベクターを含むようなクローンが
増殖して大きなコロニーになる。これは、前記配列のオ
リゴヌクレオチドとのハイブリツド形成によつて検べる
ことができる。次に、発現エンハンサーを有する遺伝子
バンクベクターを含むクローンから、遺伝子バンクの製
造のために使用した制限酵素による消化によつて該エン
ハンサーを分離することができる。
子が発現する際同細胞の成長を極めて不良にする組換え
遺伝子を有する発現プラスミドを用いて行なうことがで
きる。このために好ましくは誘導可能な発現プラスミド
を使用すると、誘導までE.coli細胞の通常の発酵が起こ
りうる。誘導後に、再び本発明による発現エンハンサー
を有する遺伝子バンクベクターを含むようなクローンが
増殖して大きなコロニーになる。これは、前記配列のオ
リゴヌクレオチドとのハイブリツド形成によつて検べる
ことができる。次に、発現エンハンサーを有する遺伝子
バンクベクターを含むクローンから、遺伝子バンクの製
造のために使用した制限酵素による消化によつて該エン
ハンサーを分離することができる。
本発明の好ましい実施態様においては、発現プラスミ
ドとしてはｔ−PA発現プラスミドを使用し、特に好まし
くはプラスミドpUBS 98.slを使用する（例３参照）。
ドとしてはｔ−PA発現プラスミドを使用し、特に好まし
くはプラスミドpUBS 98.slを使用する（例３参照）。
本発明により使用される誘導可能の発現プラスミド
は、好ましくはイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピ
ラノジドによつて、極めて好ましくは５〜20mmol/の
量で誘導される。
は、好ましくはイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピ
ラノジドによつて、極めて好ましくは５〜20mmol/の
量で誘導される。
遺伝子バンクを製造するためには、本発明により好ま
しくはベクターpACYC 177（DSM3693P）を使用する。
しくはベクターpACYC 177（DSM3693P）を使用する。
本発明の他の対象は、組換え遺伝子の発現時の収量
を、同組換え遺伝子を有する発現ベクターを含むE.coli
細胞の形質転換によつて増大させる方法であり、この際
本発明による発現エンハンサーを発現可能な形で同様に
宿主細胞に導入し、同エンハンサーの発現を前記発現べ
クターの発現前にまたはこの発現と同時に生起させる。
を、同組換え遺伝子を有する発現ベクターを含むE.coli
細胞の形質転換によつて増大させる方法であり、この際
本発明による発現エンハンサーを発現可能な形で同様に
宿主細胞に導入し、同エンハンサーの発現を前記発現べ
クターの発現前にまたはこの発現と同時に生起させる。
本発明による好ましい実施態様では、該発現エンハン
サーを組換え遺伝子を有する発現ベクター中に導入す
る。これは、本発明によれば、発現エンハンサーが特有
の別個のプロモーターに制御されるか、または組換え遺
伝子と一緒に同プロモーターに制御されるように行なわ
れる。
サーを組換え遺伝子を有する発現ベクター中に導入す
る。これは、本発明によれば、発現エンハンサーが特有
の別個のプロモーターに制御されるか、または組換え遺
伝子と一緒に同プロモーターに制御されるように行なわ
れる。
本発明の他の好ましい実施態様においては、発現ベク
ターを組換え遺伝子を有する発現ベクターに適合するベ
クターに導入する。適合するベクターとは、本発明の範
囲では、発現ベクターとは異なる複製源を有するベクタ
ーのことである。これによつて両プラスミドの細胞にお
ける同時的複製および転写が可能になる。
ターを組換え遺伝子を有する発現ベクターに適合するベ
クターに導入する。適合するベクターとは、本発明の範
囲では、発現ベクターとは異なる複製源を有するベクタ
ーのことである。これによつて両プラスミドの細胞にお
ける同時的複製および転写が可能になる。
好ましくは、発現エンハンサーを有するベクターとし
ては、プラスミドpUBS 100を使用し、組換え遺伝子を有
する発現ベクターとしてはこれに適合するベクター、例
えばｔ−PA発現プラスミドpUBS 98.slを使用する。本発
明の好ましい実施態様においては、組換え遺伝子とし
て、ｔ−PAまたはｔ−PA誘導体、ウロキナーゼまたはHI
Vタンパク質の遺伝子もしくはcDNAを使用する。
ては、プラスミドpUBS 100を使用し、組換え遺伝子を有
する発現ベクターとしてはこれに適合するベクター、例
えばｔ−PA発現プラスミドpUBS 98.slを使用する。本発
明の好ましい実施態様においては、組換え遺伝子とし
て、ｔ−PAまたはｔ−PA誘導体、ウロキナーゼまたはHI
Vタンパク質の遺伝子もしくはcDNAを使用する。
発現エンハンサーの発現は本発明によれば、組換え遺
伝子を有する発現ベクターの発現前にまたはその発現と
同時に行なつてよい。しかしこの発現エンハンサーの発
現は、発現ベクターの発現前に発現エンハンサーの遺伝
子生成物が宿主細胞でヌクレアーゼによつて著しく分解
されるように長時間で起つてはならない。従つて本発明
によれば該発現を発現ベクターの発現と同時に、極めて
好ましくは構成性発現または誘導によつて行なうのが有
利である。このために発現エンハンサーは本発明によれ
ば誘導性プロモーター、好ましくはlacプロモーターに
制御されてもよい。
伝子を有する発現ベクターの発現前にまたはその発現と
同時に行なつてよい。しかしこの発現エンハンサーの発
現は、発現ベクターの発現前に発現エンハンサーの遺伝
子生成物が宿主細胞でヌクレアーゼによつて著しく分解
されるように長時間で起つてはならない。従つて本発明
によれば該発現を発現ベクターの発現と同時に、極めて
好ましくは構成性発現または誘導によつて行なうのが有
利である。このために発現エンハンサーは本発明によれ
ば誘導性プロモーター、好ましくはlacプロモーターに
制御されてもよい。
次に本発明を実施例により詳述する。
例１ 発現エンハンサーのクローニングおよび選択： 制限酵素Pst Iで部分的に消化されたE.coli DNAの遺
伝子バンクを、周知の分子生物学的手段（特にWinnacke
v E.L.,Gane und Klonp,VCH−Verlag 1985）を用いて、
pACYC 177,DSM 3693p（Chanq und Cohen,J.Bacteriol.1
34（1978）,1141〜1156）中に導入した。このためにpst
Iで切断されたpACYC 177プラスミドDNAを、部分的にPs
t Iで消化された染色体E.coli DNAと結合した。pACYC 1
77のPst I位置に挿入断片を含むクローンを、アンピシ
リン感受性によつて、および挿入断片の長さだけ増大さ
れた分子量によつて固定することができる。このような
クローンのプラスミドDNAは、ゲル電気泳動法／ゲル溶
離によつて挿入断片を含まないプラスミドDNAから分離
し、単離することができる。この遺伝子バンクから、遺
伝子バンクプラスミドとｔ−PA発現プラスミドpUBS98.s
l（この製造は例３に記載する）との共同形質転換およ
びIPTG（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシ
ド）10mmol/を含有するLB−カナマイシン／アンピシ
リン培地での選択によつて、プラスミドpUBS 100を分離
した。このプラスミドpUBS 100は、約3000塩基の長さを
有する染色体E.coli DNAの部分を含む。該プラスミドpU
BS 100は、同プラスミドpUBS 100および発現プラスミド
pUBS 98.slを有しかつIPTGの誘導によつてｔ−PAを産生
する。E.coli細胞（DSM 3689）が、pUBS 98.slおよびpA
CYC 177を有するE.coli細胞とは対照的に、誘導後に大
きなコロニーに増殖しうるという効果をもたらす。
伝子バンクを、周知の分子生物学的手段（特にWinnacke
v E.L.,Gane und Klonp,VCH−Verlag 1985）を用いて、
pACYC 177,DSM 3693p（Chanq und Cohen,J.Bacteriol.1
34（1978）,1141〜1156）中に導入した。このためにpst
Iで切断されたpACYC 177プラスミドDNAを、部分的にPs
t Iで消化された染色体E.coli DNAと結合した。pACYC 1
77のPst I位置に挿入断片を含むクローンを、アンピシ
リン感受性によつて、および挿入断片の長さだけ増大さ
れた分子量によつて固定することができる。このような
クローンのプラスミドDNAは、ゲル電気泳動法／ゲル溶
離によつて挿入断片を含まないプラスミドDNAから分離
し、単離することができる。この遺伝子バンクから、遺
伝子バンクプラスミドとｔ−PA発現プラスミドpUBS98.s
l（この製造は例３に記載する）との共同形質転換およ
びIPTG（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシ
ド）10mmol/を含有するLB−カナマイシン／アンピシ
リン培地での選択によつて、プラスミドpUBS 100を分離
した。このプラスミドpUBS 100は、約3000塩基の長さを
有する染色体E.coli DNAの部分を含む。該プラスミドpU
BS 100は、同プラスミドpUBS 100および発現プラスミド
pUBS 98.slを有しかつIPTGの誘導によつてｔ−PAを産生
する。E.coli細胞（DSM 3689）が、pUBS 98.slおよびpA
CYC 177を有するE.coli細胞とは対照的に、誘導後に大
きなコロニーに増殖しうるという効果をもたらす。
例２ 発現エンハンサーを含むプラスミドを用いる共同形質転
換によるE.coliにおけるｔ−PAの発現： この例では、発現エンハンサーを含むプラスミドとし
てプラスミドpUBS 100を使用た。pUBS 100およびｔ−PA
発現プラスミドを含むE.coli（DSM 3689）の共同形質転
換を、プラスミドpUBS 98.slのみによる形質転換の際の
宿主細胞における発現率と比較した。さらにこの発現率
を同一菌株におけるプラスミドpe Pa 98.1（DE 361340
1）の発現率と比較した。この比較の結果を表１に記載
する。さらに、発現エンハンサーおよびｔ−PA遺伝子を
含むプラスミド、つまりプラスミドpUBS 98.sky １
（DSM 4898）を使用したｔ−PAの発現も実験した。これ
に関する結果も表１に記載する。
換によるE.coliにおけるｔ−PAの発現： この例では、発現エンハンサーを含むプラスミドとし
てプラスミドpUBS 100を使用た。pUBS 100およびｔ−PA
発現プラスミドを含むE.coli（DSM 3689）の共同形質転
換を、プラスミドpUBS 98.slのみによる形質転換の際の
宿主細胞における発現率と比較した。さらにこの発現率
を同一菌株におけるプラスミドpe Pa 98.1（DE 361340
1）の発現率と比較した。この比較の結果を表１に記載
する。さらに、発現エンハンサーおよびｔ−PA遺伝子を
含むプラスミド、つまりプラスミドpUBS 98.sky １
（DSM 4898）を使用したｔ−PAの発現も実験した。これ
に関する結果も表１に記載する。
表１で示した結果から、発現エンハンサーを含むE.co
li細胞で発現されるｔ−PAの発現率は、発現エンハンサ
ーを含まない細胞の場合と比べると明らかに高くなつた
ことがわかる。これは得られたクローンの生存能力と相
関している。
li細胞で発現されるｔ−PAの発現率は、発現エンハンサ
ーを含まない細胞の場合と比べると明らかに高くなつた
ことがわかる。これは得られたクローンの生存能力と相
関している。
例３ プラスミドpUBS 98.slを構成するための出発プラスミ
ドとしてプラスミドpePa 98.1（ヨーロツパ特許出願公
開第242836号）を使用した。このプラスミドにおけるｔ
−PAのcDNAの、約400塩基対の長さの３′−未翻訳領域
を、361塩基対の長さXho II断片の欠失によつて約40塩
基対に短縮した。この結果生じるプラスミドはpePa 12
6.1命名した。
ドとしてプラスミドpePa 98.1（ヨーロツパ特許出願公
開第242836号）を使用した。このプラスミドにおけるｔ
−PAのcDNAの、約400塩基対の長さの３′−未翻訳領域
を、361塩基対の長さXho II断片の欠失によつて約40塩
基対に短縮した。この結果生じるプラスミドはpePa 12
6.1命名した。
このプラスミドは、例えば、プラスミドpePa 98.1の
場合には同プラスミドを制限エンドヌクレアーゼBamH I
およびHind IIIで二重消化する際、2234塩基対および43
72塩基対の長さの２個の断片を検出することができる
が、プラスミドpePa 126.1の場合には1873塩基対および
4372塩基対の長さを有する２個の断片が得られることに
よつて区別されうる。
場合には同プラスミドを制限エンドヌクレアーゼBamH I
およびHind IIIで二重消化する際、2234塩基対および43
72塩基対の長さの２個の断片を検出することができる
が、プラスミドpePa 126.1の場合には1873塩基対および
4372塩基対の長さを有する２個の断片が得られることに
よつて区別されうる。
該プラスミドrePa 126.1を単一のHind III切断位置で
線状化し、残つている両末端をクレノウ酵素およびdNTP
で充填する。また同様にプラスミドpePa 126.1から、47
2塩基対の長さのEcoR I断片を分離し、S1ヌクレアーゼ
で処理した。プラスミドpePa 126.1から得られた２つの
断片を結合することによつてプラスミドpUBS 98.slが得
られた。
線状化し、残つている両末端をクレノウ酵素およびdNTP
で充填する。また同様にプラスミドpePa 126.1から、47
2塩基対の長さのEcoR I断片を分離し、S1ヌクレアーゼ
で処理した。プラスミドpePa 126.1から得られた２つの
断片を結合することによつてプラスミドpUBS 98.slが得
られた。
pUBS 98.slは制限解析によつてpePa 126.1から区別さ
れうる:Ban II消化pePa 126.1 DNAは、1175塩基対、393
塩基対、165塩基対および4560塩基対の長さの断片によ
つて定義される;pUBS 98.sl DNAは、Ban II断片が約117
5塩基対、393塩基対、14塩基対、165塩基対、470塩基対
および4540塩基対の長さを有することを特徴としてい
る。
れうる:Ban II消化pePa 126.1 DNAは、1175塩基対、393
塩基対、165塩基対および4560塩基対の長さの断片によ
つて定義される;pUBS 98.sl DNAは、Ban II断片が約117
5塩基対、393塩基対、14塩基対、165塩基対、470塩基対
および4540塩基対の長さを有することを特徴としてい
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ラルフ・マツテス ドイツ連邦共和国シユツツトガルト75・ フリートリツヒ‐ツンデル‐シユトラー セ 14 (72)発明者 ペーター・ブツケル ドイツ連邦共和国ベルンリート・アイヒ エンシユトラーセ 19
Claims (6)
- 【請求項１】遺伝子でコードされたアルギニン含有タン
パク質の収量を増大させる方法において、この方法は、 （ａ）E.コリー宿主細胞を （１）アルギニンtRNA分子をコードするDNA配列（ここ
で、前記DNA配列のセグメントは、配列５′−GACTTAGAA
GGTCGTT−３′を有するオリゴヌクレオチドに相補的で
ある前記アルギニンtRNA分子のアンチコドンループを暗
号化する） 及び （２）前記タンパク質をコードしている前記遺伝子を有
する発現ベクターで形質転換させ、 （ｂ）前記E.コリー宿主細胞を、前記タンパク質の発現
に好適な条件下で培養して、同じ条件で培養された前記
E.コリー中の前記アルギニンtRNAをコードする前記DNA
配列の不存在での発現と比べて、前記タンパク質の発現
を高めることを特徴とする、アルギニン含有タンパク質
の収量を増大させる方法。 - 【請求項２】前記DNA配列を、前記発現ベクター中に導
入する、特許請求の範囲１に記載の方法。 - 【請求項３】前記DNA配列を、前記発現ベクターと相容
性である第２のベクター中に導入する、特許請求の範囲
１に記載の方法。 - 【請求項４】前記第２のベクターは、前記DNA配列を有
し、プラスミドpUBS 100である、特許請求の範囲３に記
載の方法。 - 【請求項５】前記タンパク質は、ｔ−PA、ｔ−PA誘導
体、ウロキナーゼ又はヒト免疫欠損ウイルスタンパク質
である、特許請求の範囲１に記載の方法。 - 【請求項６】前記発現ベクターは、プラスミドpUBS 98.
s1である、特許請求の範囲４に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| DE3838377.2 | 1988-11-11 | ||
| DE3838377A DE3838377A1 (de) | 1988-11-11 | 1988-11-11 | Expressions-enhancer und dessen verwendung zur erhoehung der ausbeute bei der expression von rekombinanten genen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02182191A JPH02182191A (ja) | 1990-07-16 |
| JP2667261B2 true JP2667261B2 (ja) | 1997-10-27 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5336602A (ja) |
| EP (1) | EP0368342B1 (ja) |
| JP (1) | JP2667261B2 (ja) |
| AT (1) | ATE111527T1 (ja) |
| AU (1) | AU608180B2 (ja) |
| CA (1) | CA2002515C (ja) |
| DE (2) | DE3838377A1 (ja) |
| DK (1) | DK175757B1 (ja) |
| ES (1) | ES2060725T3 (ja) |
| IL (1) | IL92265A (ja) |
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| US6083715A (en) * | 1997-06-09 | 2000-07-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for producing heterologous disulfide bond-containing polypeptides in bacterial cells |
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-
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- 1989-11-09 IL IL9226589A patent/IL92265A/en unknown
- 1989-11-09 DK DK198905618A patent/DK175757B1/da not_active IP Right Cessation
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-
1993
- 1993-01-22 US US08/007,405 patent/US5336602A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
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| JPH02182191A (ja) | 1990-07-16 |
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