DK175757B1 - Fremstilling og anvendelse af et DNA til forhöjelse af udbyttet ved ekspression af rekombinante gener - Google Patents
Fremstilling og anvendelse af et DNA til forhöjelse af udbyttet ved ekspression af rekombinante gener Download PDFInfo
- Publication number
- DK175757B1 DK175757B1 DK198905618A DK561889A DK175757B1 DK 175757 B1 DK175757 B1 DK 175757B1 DK 198905618 A DK198905618 A DK 198905618A DK 561889 A DK561889 A DK 561889A DK 175757 B1 DK175757 B1 DK 175757B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- expression
- dna
- sequence
- oligonucleotide
- gene
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
DK 175757 B1
Den foreliggende opfindelse angår anvendelse af et ekspressionsforstærkende DNA til forhøjelse af udbyttet ved ekspression af et rekombineret gen ved transformation af egnede værtsceller med en ekspressionsvektor, som indeholder det rekombinerede gen.
5 Garcia et al. (Cell bind 45 (1986), 453-459) beskrives at omhandle E. Coli DNAY-genproduktet arginin-t-RNA. Dennes 77 nucleotid lange sekvens kan foldes til en typisk kløverbladsstruktur med et UCU-antikodon, der svarer til de sjældne AGA-argininkodon. Et DNA -plasmid fører til overproduktion fra i det mindste én argininaccepterende specie af tRNAArg.
10 GB-A-21 35 677 omhandler den ekstrakromosomale ekspression af t-RNA, specielt af tRNATRP, samt virkningen af disse på supplementationen af nonsense-kodon-mutationer.
15 Ved ekspression af rekombinerede gener, og frem for alt eukaryote gener i E.coli, viser der sig ofte det problem med en manglende ekspression af det ønskede genprodukt Dette kan ifølge forskerne, som er beskæftigede inden for dette område, tilbageføres til forskellige årsager, blandt andet en kun ringe fermenteringshastighed af E. coli-celler, som er transformeret med bestemte rekombinerede gener. Ganske vist fremviser disse 20 celler delvis en ret god ekspression af det rekombinerede gen, men væksten er ikke desto mindre ringe, hvorved der kun opnås en ringe biomasse og dermed også kun et ringe udbytte af det ønskede genprodukt Opfindelsen har derfor til formål at anvise en fremgangsmåde og tilvejebringe et middel til forhøjelse af udbyttet af et ønsket genprodukt ved ekspression i E. coli.
25
Dette opnås ifølge opfindelsen ved anvendelse af et ekspressionsforstærkende DNA, som efter transkription udvikler en t-RNA-kløverbladstruktur, og som i det DNA-om-råde, som efter transkription i kløverbladsstrukturen danner antikodonsløjfen, hybridiserer med et oligonukleotid med sekvensen 5'-GACTTAGAAGGTCGTT-3', 30 eller den dertil komplementære sekvens (5'-AACGACCTTCTAAGTC-3’), til forhøjelse af udbyttet ved ekspression af et rekombinant gen, ved transformation af E. coli
I DK 175757 B1 I
I I
I værtsceller med en ekspressionsvektor, der indeholder det rekombinante gen, I
I kendetegnet ved, at man ligeledes indfører det ekspressionsforstærkende DNA i I
I exprimerbar form i værtscellen og exprimerer. I
5 Kløverbladstrukturen af t-RNA-molekyler fremkaldes ved base- parringer i bestemte I
I områder af det enkeltstrengede RNA-molekyle, hvorved bestemte regelmæssigheder I
I hos alle t-RNA-molekyler forekommer. I hver af disse kløverbladstrukturer finder man I
I en venstre-sløjfe, den såkaldte dihydrouridinsløjfe, samt en anden sløjfe, den såkaldte I
I antikodonsløjfe, hvilken kan indgå hos t-RNA-molekyler med en komplementær triplet I
I 10 fra mRNA-baseparingeme og dermed bestemme specificiteten af t-RNA, samt en til I
I højre beliggende sløjfe, den såkaldte pseudouridinsløjfe, og mellem antikodonsløjfen I
I og pseudouridinsløjfen ofte en ekstra sløjfe, som er variabel. Det ekspressionsforstær- I
kende DNA ifølge opfindelsen har en DNA-struktur, hvis RNA efter transkriptionen I
I kan danne en sådan kløverbladstruktur. Ifølge opfindelsen er der derfor indbefattet I
15 naturlige og syntetiske gener, som er i stand til at danne kløverbladstrukturen, hvorved I
også DNA-sekvenser ligger inden for opfindelsens rammer, hvilke sekvenser ud over I
I den til udvikling af kløverbladstrukturen egnede DNA-sekvens kan indeholde I
yderligere sekvenser, og hvilke kan forarbejdes under dannelse af en RNA med I
I kløverbladstruktur. Karakteristisk for det ekspressionsforstærkende DNA ifølge I
20 opfindelsen er dog, at den ved antikodonsløjfen hybridiserer med det det nævnte I
oligonukleotid. I en foretrukken udførelsesform for opfindelsen hybridiserer en I
ekspressionsforstærker med et oligonukleotid med sekvensen I
I 5'-CACGACTTAGAAGGTCGTTG-3' eller den dertil komplementære sekvens I
I (5'-CAACGACCTTCTAAGTCGTG-3'). I
I 25 I
En sådan ekspressionsforstærker-DNA kan fremstilles syntetisk, men også f.eks. I
isoleres ud fra E.coli-celler. Til fremstiling af et ekspressionsforstærkende DNA ifølge I
en foretrukken udførelsesform for opfindelsen anbringes en genbank af kromosomalt I
E.coli-DNA, som er delvis fordøjet med PstI, i en egnet vektor, hvorefter man I
30 cotransficerer E.coli-celler med genbankvektorerne og et ekspressionsplasmid, som I
indeholder et rekombineret gen, ved hvilken ekspression E.coli-celleme vokser dårligt I
3 DK 175757 B1 (hvor der med udtrykket "vokser dårligt" i rammerne af opfindelsen skal forstås, at cellerne ved ekspression af det rekombinerede gen alene vokser dårligere end ved yderligere ekspression af det ekspressionsforstærkende DNA), cotransficerer, selekterer og inducerer, dyrker, isolerer kloner, som er vokset til store kolonier, og isolerer 5 genbankvektoreme fra disse kloner. Ved hybridisering med et oligonukleotid med sekvensen 5'-GACTTAG-AAGGTCGTT-3' eller den dertil komplementære sekvens (5'-AACGACCTTC-TAAGTC-3') kan tilstedeværelsen af det ekspressionsforstærkende DNA efterprøves. I en særligt foretrukken udførelsesform for opfindelsen anvender man et oligonukleotid med sekvensen 5'-CACGACTTAGAAGGTCGTTG-3' 10 eller det dertil komplementære oligonukleotid (5'-CAACGACCTTCTAAGTCGTG-3').
Den ifølge opfindelsen foretrukne fremstillingsfremgangsmåde kan gennemføres med ekspressionsplasmider, som indeholder et rekombineret gen, ved hvis ekspression i E.coli cellerne kun vokser dårligt. Hertil anvendes fortrinsvis et inducerbart eks-15 pressionsplasmid, således at der indtil induktionen kan finde en normal fermentering af E.coli-celleme sted. Efter induktionen vokser sådanne kloner, som indeholder en genbankvektor, som igen indeholder et ekspressionsforstærker-DNA, til store kolonier.
Disse kan efterprøves ved hybridisering med et oligonukleotid med den ovennævnte sekvens. Ud fra klonerne, som indeholder den genbankvektor, som indeholder 20 ekspressionsforstærker-DNA'et, kan således forstærkeren isoleres ved fordøjelse med de til fremstilling af genbanken anvendte restriktionsenzymer.
I en foretrukken udførelsesform for opfindelsen anvender man som ekspressions-plasmid et t-PA-ekspressionsplasmid og særligt foretrukket plasmidet pUBS98.sl (se 25 eksempel 3).
Det ifølge opfindelsen anvendte inducerbare ekspressionsplasmid induceres fortrinsvis ved hjælp af isopropyl-B-D-thioga-lactopyranosid, særligt foretrukket i en mængde på 5 til 20 mmol/1.
30
DK 175757 B1 I
Til fremstilling af genbanken anvender man ifølge opfindelsen fortrinsvis vektoren I
pACYC177, DSM 3693P. I
En yderligere genstand for opfindelsen er anvendelse af en ekspressionsforstærker- I
5 DNA ifølge opfindelsen til forhøjelse af udbyttet ved ekspression af et rekombineret I
gen ved transformation af E.coli-celler med en ekspressionsvektor, som indeholder det I
rekombinerede gen, hvorved man ligeledes indfører ekspressionsforstærker-DNA'et i I
eksprimerbar form i værtscellerne og fremkalder ekspression heraf før eller samtidig
med ekspressionsvektorens. I
I en foretrukken udførelsesfonn for opfindelsen indfører man ekspressionsforstærker- I
DNA'et i ekspressionsvektoren, som indeholder det rekombinerede gen. Dette sker I
ifølge opfindelsen således, at ekspressionsforstærker-DNA'et enten står under kontrol I
af en egnet separat promotor eller sammen med det rekombinerede gen står under
15 kontrol af den samme promotor. I
I en anden foretrukken udførelsesform for opfindelsen indfører man det ' I
ekspressionsforstærkende DNA på en vektor, som er forligelig med ekspressionsvek- I
toren, som indeholder det rekombinerede gen. Med en forligelig vektor skal ifølge H
20 opfindelsens ånd forstås en vektor, som besidder et replikationsudspring, som er for- I
skelligt fra ekspressions vektoren. Herved muliggøres en samtidig replikation og
transkription af begge plasmider i en celle. H
Fortrinsvis anvender man som den vektor, som indeholder ekspressionsforstærker- ! I
25 DNA'et, plasmidet pUBS 100 og som ekspressionsvektor, som indeholder det I
rekombinerede gen, en dermed forligelig vektor, f.eks. plasmidet pUBS 98.sl, som I
udtrykker t-PA. 1 en foretrukken udførelsesform for opfindelsen udtrykker man som I
rekombineret gen, genet henholdsvis cDNA for t-PA eller et t-PA-derivat, urokinase I
eller et HIV-protein. I
30 I
DK 175757 B1 5
Ekspressionen af ekspressionsforstærker-DNA'et kan ifølge opfindelsen finde sted før eller samtidig med ekspressionsvektoren, som indeholder det rekombinerede gen, hvorved ekspressionen dog ikke må finde sted, så lang tid før den af ekspressions- | vektoren, at genproduktet af ekspressionsforstærker-DNA'et i væsentligt omfang . 5 nedbrydes af nukleaser i værtscellen. Det foretrækkes dermed ifølge opfindelsen, at ekspressionen fremkaldes samtidig med den af ekspressionsvektoren og særligt foretrukket ved konstitutiv ekspression eller induktion. Hertil kan ekspressionsforstærker-DNA'et ifølge opfindelsen f.eks. stå under kontrol af en inducerbar promotor, fortrinsvis lac-promotoren.
10
De følgende eksempler belyser opfindelsen yderligere.
Eksempel 1 15 Kloning og udvælgelse af et ekspressionsforstærker-DNA:
Ved hjælp af alment kendte molekylærbiologiske metoder, sammenfattende se bl.a.
E.L. Winnacker, Gene und Klone, VCH- Verlag 1985), blev en genbank af delvis med restriktionsenzymet PstI fordøjet E.coli-DNA anbragt i pACYC177, DSM 3693P, 20 (Chang und Cohen, J. Bacteriol. 134 (1978), 1141-1156). Dertil iigeredes Pstl-afskåret pACYC177-plasmid-DNA med delvis Pst- I-fordøjet kromosomalt E.coli-DNA.
Kloner, som indeholder et inserat i Pstl-stedet af pACYC177, kan identificeres ved . hjælp af ampicillinfølsomhed, såvel som ved hjælp af en forstørret molekylvægt om inseratets længde. Plasmid-DNA'en af sådanne kloner kan adskilles fra plasmid-DNA 25 uden inserat ved gelelektroforese/geleluering og isoleres. Fra denne genbank blev plasmidet pUBSI00 isoleret ved cotransformation af genbankplasmideme med t-PA-ekspressionsplasmidet pUBS98.sl (fremstilling se eksempel 3) og udvælgelse fra LB-kanamycin/ ampicillin-plader, som indeholdt 10 mmol/I IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactopyranosid). Dette plasmid pUBSI00 indeholder et ca. 3000 baser langt 30 stykke af kromosomalt E.coli-DNA, hvilket bevirker, at E.coli-celleme, DSM 3689, som bærer plasmidet pUBSI00 og ekspressionsplasmidet pUBS98.sl og ved hjælp af
DK 175757 B1 I
IPTG-induktion producerer t-PA, i modsætning til E.coli-celler med pUBS98.sl og I
pACYC 177 efter induktion kan vokse til store kolonier. I
Eksempel 2 I
Ekspression af t-PA i E.coli ved cotransformation med et plasmid, som indeholder I
ekspressionsforstærker-DNA'et. I
I dette eksempel anvendtes som det ekspressionsforstærker-DNA-holdige plasmid I
10 plasmidet pUBS 100. Ekspressionen ved cotransformation af E.coli DSM 3689, med
pUBSI 00 og t-PA-ekspressionsplasmidet pUBS98.sl blev sammenlignet med H
ekspressionshastigheden i de samme værtsceller ved transformation med plasmidet H
pUBS98.sl alene. Endvidere blev ekspressionshastigheden sammenlignet med den for H
plasmidet pePa98.1 (DE 36 13 401) i den samme stamme. Resultaterne af disse H
15 sammenligninger er vist i tabel 1. Endvidere blev ekspressionen af t-PA under an- I
vendelse af et plasmid, som indeholder ekspressionsforstærker-DNA'et og t-PA-genet, I
nemlig plasmidet pUBS98.sky, DSM 4898, undersøgt. Resultatet heraf er også vist i I
tabel 1. I
20 Tabel 1 I
E. coli, DSM 3689 % t-PA ubeskadiget/ vitalitet I
_helt protein_ I
+ pePa98.1 3% indskrænket I
25 +puBS98.sl 10% meget dårlig I
+ pUBS 98.si + pUBS 100 30% meget god I
+ pUBS 98.sky 30% meget god I
30 Ud fra de i tabel 1 viste resultater kan det tydeligt ses, at ekspressionshastigheden af H
t-PA, som udtrykkes i E.coli-celler, som endvidere indeholder ekspressionsforstærker- H
DK 175757 B1 7 DNA'et, er tydeligt forhøjet i forhold til celler, som ikke indeholder ek-spressionsforstærker-DNA'et. Dette korrelerer med de opnåede kloners vitalitet.
Eksempel 3 5
Som udgangsplasmid til konstruktion af plasmidet pUBS98.sl anvendtes plasmidet pePa98.l (ΕΡΆ-242 836). Den ca. 400 basepar lange 3'-ikke-hranslaterede region af t-PA-cDNA i dette plasmid blev forkortet til ca. 40 basepar ved deletion af et 361 basepar langt XhoII-fragment. Det resulterende plasmid fik navnet pePal26.1 og kan 10 skelnes fra pePa98.1 f.eks. derved, at der ved en dobbeltfordøjelse af disse plasmider med restriktionsendonuklease BamHI og Hindlll hos pePa98.1 kan påvises to fragmenter med længden 2234 basepar og 4372 basepar, hos plasmid pePal26.1 derimod to fragmenter med længden 1873 basepar og 4372 basepar. Dette plasmid pePal 26.1 blev lineariseret ved det enkelte Hindlll-skæringssted, og de fremstående 15 ender blev fuldstændigt suppleret op med Klenow-enzym og dNTP'er. Endvidere isoleredes ligeledes et 472 basepar langt EcoRlfragment fra plasmidet pePal26.1 og behandledes med Sl-nuklease. Ved ligering af begge fragmenterne fra plasmidet pePal26.1 opnåedes plasmidet pUBS98.sl. pUBS98.sl kan skelnes fra pePal26.1 ved restriktionsanalyse: Banll-fordøjet pePal26.1-DNA defineres ved fragmenter med 20 længden 1175 basepar, 393 basepar, 14 basepar, 165 basepar og 4560 basepar; pUBS98,sl-DNA er karakteriseret derved, at Banll-fragmenter udviser længder på ca.
1175 basepar, 393 basepar, 14 basepar, 165 basepar, 470 basepar og 4540 basepar.
•
Claims (9)
1. Anvendelse af et ekspressionsforstærkende DNA, kendetegnet ved, at den H 5 udviser en DNA-sekvens, som er egnet til efter transkription at udtrykke en I t-RNA-kløverbladstruktur, og at den i det DNA-område, som efter transkription i I kløverbladstrukturen danner antikodonsløjfen, hybridiserer med et oligonukleotid med H sekvensen 5'-GACTTAGAAGGTCGTT-3' eller den dertil komplementære sekvens I (5’-AACGACCTTCTAAGTC-3'). I
2. Anvendelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at ekspressionsforstærker-DNA’et I hybridiserer med oligonukleotidet med sekvensen 5’-CACGACTTAGAAGGTCG- I TTG-3' eller det dertil komplementære oligonukleotid (5'-CAACGACCTTCTAAGT- I CGTG-3’). I
3. Anvendelse ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at man som rekombineret gen I udtrykker genet for t-PA eller et t*PA-derivat, urokinase eller et HIV-protein. I
4. Fremgangsmåde til fremstilling af et ekspressionsforstærker-DNA, der udviser en H
20 DNA-sekvens, som er egnet til efter transskriptionen at udtrykke en t-RNA- I kløverbladsstruktur, og at den i det DNA-område, som efter transskriptionen i I kløberbladsstrukturen danner antikodonsløjfen, hybridiserer med et oligonukleotid med I sekvensen 5’-GACTTAGAAGGTCGTT-3’ eller den dertil komplementære sekvens I (5VAACGACCTTCTAAGTC-3’) til forhøjelse af udbyttet ved ekspression af et I 25 rekombineret gen ved transformation af E.coli-værtsceller med en ekspressionsvektor, - I som indeholder det rekombinerede gen, kendetegnet ved, at man anbringer en genbank I af med PstI delvist fordøjet kromosomalt E.coli-DNA i en egnet vektor, cotransficerer E.coli-celler med genbankvektoreme og et ekspressionsplasmid, som indeholder et I rekombineret gen, ved hvis ekspression E.coli-celleme vokser dårligt, dyrker under I 30 selektionsbetingelser, isolerer kloner, som er vokset til store kolonier, fra disse kloner I isolerer genbankvektoreme, som undersøges for tilstedeværelse af ekspressionsfor- DK 175757 B1 stærker-DNA'et ved hybridisering med et oligonukleotid med sekvensen 5'-GACTTAGAAGGTCGTT-3' eller dennes komplementære sekvens (5'-AACGACCTTCTAAGTC-3') og isolere disse.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at man anvender et (r oligonukleotid med sekvensen 5'-CACGACTTAGAAGGTCGTTG-3' eller dennes komplementære oligonukleotid (5’-CAACGACCTTCTAAGTCGTG-3').
6. Fremgangsmåde ifølge krav 4 eller 5, kendetegnet ved, at man anvender et 10 inducerbart ekspressionsplasmid.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 4, 5 eller 6, kendetegnet ved, at man anvender et t-PA-ekspressionspl asmid.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 6 elle 7, kendetegnet ved, at man inducerer med isopropyl-Ø-D-thiogalactopyranosid, fortrinsvis i en mængde på 5 til 20 mmol/1.
9. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 4 til 8, kendetegnet ved, at man anvender pACYC177 (DSM 3693P) eller et beslægtet derivat, som vektor til at opstarte 20 genbanken. 4 A
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3838377 | 1988-11-11 | ||
| DE3838377A DE3838377A1 (de) | 1988-11-11 | 1988-11-11 | Expressions-enhancer und dessen verwendung zur erhoehung der ausbeute bei der expression von rekombinanten genen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK561889D0 DK561889D0 (da) | 1989-11-09 |
| DK561889A DK561889A (da) | 1990-05-12 |
| DK175757B1 true DK175757B1 (da) | 2005-02-14 |
Family
ID=6367027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198905618A DK175757B1 (da) | 1988-11-11 | 1989-11-09 | Fremstilling og anvendelse af et DNA til forhöjelse af udbyttet ved ekspression af rekombinante gener |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5336602A (da) |
| EP (1) | EP0368342B1 (da) |
| JP (1) | JP2667261B2 (da) |
| AT (1) | ATE111527T1 (da) |
| AU (1) | AU608180B2 (da) |
| CA (1) | CA2002515C (da) |
| DE (2) | DE3838377A1 (da) |
| DK (1) | DK175757B1 (da) |
| ES (1) | ES2060725T3 (da) |
| IL (1) | IL92265A (da) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997038123A1 (en) * | 1996-04-05 | 1997-10-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for producing soluble, biologically-active disulfide bond-containing eukaryotic proteins in bacterial cells |
| US6083715A (en) * | 1997-06-09 | 2000-07-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for producing heterologous disulfide bond-containing polypeptides in bacterial cells |
| CN100480848C (zh) * | 2003-07-11 | 2009-04-22 | 株式会社可乐丽 | 叠层片和其设计方法以及背面投影型屏幕及其制造方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4654307A (en) * | 1983-02-17 | 1987-03-31 | The Research Foundation Of State University Of New York | Novel bacteria containing a plasmid having a tRNA code |
| AU618640B2 (en) * | 1988-11-11 | 1992-01-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the expression of a recombinant gene |
-
1988
- 1988-11-11 DE DE3838377A patent/DE3838377A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-11-06 AU AU44445/89A patent/AU608180B2/en not_active Ceased
- 1989-11-08 CA CA002002515A patent/CA2002515C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-09 DK DK198905618A patent/DK175757B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-11-09 IL IL9226589A patent/IL92265A/en unknown
- 1989-11-10 ES ES89120894T patent/ES2060725T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 DE DE58908358T patent/DE58908358D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 EP EP89120894A patent/EP0368342B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 AT AT89120894T patent/ATE111527T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-11-13 JP JP1292538A patent/JP2667261B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-01-22 US US08/007,405 patent/US5336602A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2002515A1 (en) | 1990-05-11 |
| CA2002515C (en) | 1996-03-19 |
| ES2060725T3 (es) | 1994-12-01 |
| DE3838377A1 (de) | 1990-05-23 |
| JPH02182191A (ja) | 1990-07-16 |
| DK561889D0 (da) | 1989-11-09 |
| EP0368342A3 (de) | 1991-10-16 |
| ATE111527T1 (de) | 1994-09-15 |
| EP0368342B1 (de) | 1994-09-14 |
| IL92265A (en) | 1995-08-31 |
| DK561889A (da) | 1990-05-12 |
| DE58908358D1 (de) | 1994-10-20 |
| EP0368342A2 (de) | 1990-05-16 |
| US5336602A (en) | 1994-08-09 |
| AU4444589A (en) | 1990-05-17 |
| JP2667261B2 (ja) | 1997-10-27 |
| AU608180B2 (en) | 1991-03-21 |
| IL92265A0 (en) | 1990-07-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU565352B2 (en) | Dna vectors and there use in recombinant dna technology | |
| Carninci et al. | Balanced-size and long-size cloning of full-length, cap-trapped cDNAs into vectors of the novel λ-FLC family allows enhanced gene discovery rate and functional analysis | |
| JP2619077B2 (ja) | 組み換え遺伝子の発現法、発現ベクター及び発現補助ベクター | |
| Heitzer et al. | Construction of modular tandem expression vectors for the green alga Chlamydomonas reinhardtii using the Cre/lox-system | |
| NO172595B (no) | Fremgangsmaate og ekspresjonsplasmid for fremstilling av hemagglutinin under kontroll av drosophila hsp-promoter | |
| EP0109150B1 (en) | Plasmids with conditional uncontrolled replication behaviour | |
| CA2622710C (en) | Hybrid portable origin of replication plasmids | |
| US9012226B2 (en) | Bacterial strains with improved plasmid stability | |
| DK175757B1 (da) | Fremstilling og anvendelse af et DNA til forhöjelse af udbyttet ved ekspression af rekombinante gener | |
| JPS61257189A (ja) | 新規プラスミドベクタ− | |
| DK175068B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af proteiner ved hjælp af værtsorganismer, fortrinsvis mælkesyrebakterier | |
| JP3549210B2 (ja) | プラスミド | |
| Petersen et al. | A missense mutation in the rpoC gene affects chromosomal replication control in Escherichia coli | |
| CN110628799A (zh) | 一种细菌启动子报告载体的构建方法及其应用 | |
| Blanco et al. | The use of gene fusions to study the expression of uidR, a negative regulatory gene of Escherichia coli K-12 | |
| KR20210057751A (ko) | 관심 단백질의 무 플라스미드 생산을 위한 유도성 발현 시스템 | |
| JP2004321013A (ja) | Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属細菌における組換えタンパク質を生産する方法 | |
| EP0141362A2 (en) | Novel plasmid vector | |
| Liang et al. | Autogenous regulation of the regA gene of bacteriophage T4: derepression of translation. | |
| KR101920036B1 (ko) | 대장균 및 앰피실린 저항성 유전자를 이용한 해독틀 이동 변이 및 종결 돌연변이가 없는 유전자의 선별 방법 | |
| US6391641B1 (en) | Translationally-coupled reporter gene | |
| EP1737955B1 (en) | Novel temperature regulated promoters and expression vectors from s.pombe | |
| NO870630L (no) | Stabilisering av ustabilt nedarvede replikoner. | |
| CA1272143A (en) | Dna vector comprising a low copy number and a high copy number origin of replication and their use in recombinant dna technology | |
| CN113416735A (zh) | 一种烟草生殖细胞特异高表达基因及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |