JP2614101B2

JP2614101B2 - 新規微生物及びそれを用いた植物病害防除方法

Info

Publication number: JP2614101B2
Application number: JP1006965A
Authority: JP
Inventors: 利男木嶋; 長利峯岸; 貞夫米内; 養二土居; 修一山下; 成任難波; 力有江
Original assignee: Tochigi Prefecture
Current assignee: Tochigi Prefecture
Priority date: 1988-01-16
Filing date: 1989-01-14
Publication date: 1997-05-28
Anticipated expiration: 2012-05-28
Also published as: JPH0235076A

Description

【発明の詳細な説明】［発明の目的］（産業上の利用分野）本発明は、新規微生物を提供し、且つ、その新規微生
物を用いてFusarium属菌、Verticillum属菌等の土壌病
原菌の防除、特にPyricularia属菌によるイネいもち病
の防除に優れた効果を発揮する植物病害の防除法に関す
る。

（従来の技術）従来、萎凋、立枯れ、つる割れ等の弊害を招く土壌病
害に対しては、クロールピクリン及びメチルブロマイド
剤を用いて土壌をくん蒸消毒する方法が一般的である
が、しかし、この方法では経済的に高価なうえ、毒性が
極めて強いので、散布者の健康を害する危険があり、さ
らに散布後も周辺住民に対して安全性が確保できないと
いう重大な問題を抱えている。

又、水稲に対する種々の病害のうちで最も広域で、且
つ、被害が甚大なため早急な防除策が要請されているイ
ネいもち病に対して、従来、カスガマイシン、ブラスト
サイジン等の抗いもち剤で防除する方法が採られている
が、しかし、これら抗いもち剤は対性菌の出現で効果が
不安定となり易く、又、薬害で自然環境を汚染する虞も
ある。

（本発明が解決しようとする問題点）上記実情に鑑み、本発明者は、ランの一種であるバン
ダ、デンドロビウム及びシンビジウムから新規微生物を
見いだし、その菌学的性状を明らかした。そして、さら
に実験を重た結果、該新規微生物が、例えばFusarium属
菌、Verticillum属菌、Pyricularia属菌等の病原菌に有
効な抗菌活性を示すことを確認し、そのなかで駆除の困
難視されているイネいもち病に著効あることを見いだ
し、これら病害の防除を図らんとするものである。

［発明の構成及び効果］本発明の微生物は、例えばランの一種である（ａ）デ
ンドロビウム、（ｂ）バンダ又は（ｃ）シンビジウムの
バルブ又は葉から分離した新規な菌株であって、その分
離はバンダ、デンドロビウム及びシンビジウムのバルブ
又は葉を１％ペプトン水中で磨砕し、ブイヨン寒天に画
線して25℃で約48時間培養して形成されたコロニーを釣
菌した。そして、下記に示す菌学的性質を有し、また後
に詳述する理由からPseudomonas gladioliに属するもの
のその新菌株と同定し、（ａ）デンドロビウムより分離した菌株をPseudomonas
gladioli D−2251と命名し、工業技術院微生物工業技術
研究所に「微工研菌寄第9483号」として寄託し、（ｂ）バンダより分離した菌株をPseudomonas gladioli
V−2400と命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に
「微工研菌寄第9484号」として寄託し、（ｃ）シンビジウムより分離した菌株をPseudomonas gl
adioli C−0620と命名し、工業技術院微生物工業技術研
究所に「微工研菌寄第9963号」として寄託している。

その菌学的性質は以下の通りである。

（ａ）形態的性質（ｂ）各培地における生育状態（ｃ）生理学的性質イ）一般的生理学的性質ロ）糖類から酸及びガスの生成ハ）その他の生理学的性質ニ）利用能試験Ｄ−2251 Ｖ−2400 Ｃ−0620 サッカリン酸陽性同左同左レブリン酸陽性陰性陽性メサコン酸陽性陰性陽性酢酸陰性陽性陽性クエン酸陽性同左同左ギ酸陽性同左同左フマル酸陽性同左同左リンゴ酸陽性同左同左シュウ酸陽性同左同左Ｄ−2251 Ｖ−2400 Ｃ−0620 プロピオン酸陰性同左同左コハク酸陽性同左同左乳酸陽性同左同左Ｄ−酒石酸陽性陰性陰性Ｌ−酒石酸陽性同左同左安息香酸陽性陰性陰性グルコン酸陽性同左同左アルギン酸陽性同左同左パントテン酸陰性同左同左アスパラギン酸陽性同左同左ピメリン酸陽性陰性陽性ｍ−ヒドロキシ陰性同左同左安息香酸 αアミルアミン陰性同左陽性ニコチン酸陽性陰性陽性マロン酸陽性同左同左馬尿酸陽性同左同左Ｄ−2251 Ｖ−2400 Ｃ−0620 トリゴネリン陽性陰性陰性ホモセリン陽性弱陽性陽性ブチルアミン陰性同左陽性ペラルゴン酸陰性同左同左マルガリン酸陰性同左弱陽性トリプタミン陰性同左同左パルミチン酸陽性弱陽性弱陽性ミリスチン酸陽性同左同左ソルビン酸陽性同左同左マレイン酸陽性同左同左アントラニル酸陽性陰性陽性イソ拮草酸陰性同左同左ｎ−カプリン酸陽性同左同左デカン酸陽性陰性陽性グルタール酸陽性同左同左バリン陽性陰性陽性Ｌ−シトルリン陽性陰性陽性 β−アラニン陽性陰性陽性Ｄ−2251 Ｖ−2400 Ｃ−0620 Ｐ−アミノ陰性同左同左安息香酸ベタイン陽性同左同左葉酸陰性同左同左Ｌ−オルニチン陽性同左同左ｎ−ヘプタン酸陽性同左同左酪酸陽性同左同左Ｄ−ガラクツロン酸陽性同左同左スベリン酸陽性同左同左プトレスシン陰性同左同左イソロイシン陽性陰性陽性ブタンジオール陰性陽性陰性アゼライン酸陽性同左同左アジピン酸陽性同左同左イタコン酸陰性同左同左シトラコン酸陽性同左同左スペルミン陰性同左同左２−メルカプトエタノール陰性同左同左以上の性質をBergey′s manual of systematic bacte
riology（第１巻）を参考にして検索すると、グラム陰
性の桿菌であること、好気的に生育すること、オキシダ
ーゼ活性が陽性であること、胞子を形成しないこと、ブ
イヨン寒天での発育状態が良好であること等の点から、
本Ｄ−2251 V−2400及びＣ−0620は明らかにPseudomo
nas属に属する。そしてその近縁種としてPseudomonas c
aryphylli及びPseudomonas cepaciaが存在する。

しかし、Ｄ−2251については、以下の理由によってPs
eudomonas gladioliに属する新菌種とするのが相当であ
る。即ち、イ）アルギニンの加水分解、ゼラチンの液
化、アドニトール、サッカリン酸、レブリン酸、Ｄ−酒
石酸、安息香酸、Ｌ−シトルリン、Ｌ−オルニチン、ｎ
−ヘプタン酸、スベリン酸、ピメリン酸、アジピン酸、
シトラコン酸の利用という点で近縁菌の１つであるPseu
domonas caryophylliとは異なり、ロ）菌の大きさがPse
udomonas cepaciaが0.8〜1.0×1.6〜3.2ミクロンなどに
対して、本菌は1.0〜1.2×1.6〜2.2ミクロンであるこ
と、金属性の紫色色素の産生、硝酸塩の還元、ブチルア
ミン、トリブタミン、α−アミルアミン、ｍ−ヒドロキ
シ安息香酸、ブタンジオール、プトレスシン、スペルミ
ン、Ｄ−酒石酸、メサコン酸の利用の点でPseudomonas
cepaciaとも異なり、結局、本菌はPseudomonas gladiol
iに属すると判断するのが最も妥当と認められる。しか
しながら、本菌はピメリン酸、スベリン酸、レブリン酸
を利用するのに対して、Pseudomonas gladioliの従来菌
は同物質を利用しないこと、又、硝酸塩を還元するのに
対して、Pseudomonas gladioliの従来菌は硝酸塩を還元
しないことの点で異なっている。よって、本菌をそのま
まPseudomonas gladioliの従来菌に属させることは無理
があると考え、その新菌株とするのが相当であり、Pseu
domonas gladioli D−2251と命名した。

又、Ｖ−2400についても、以下の理由によってPseudo
monas gladioliに属する新菌種とするのが相当である。
即ち、イ）アルギニンの加水分解、ゼラチンの液化、ア
ドニトール、サッカリン酸、Ｌ−オルニチン、ｎ−ヘプ
タン酸、スベリン酸、アゼライン酸、アジピン酸、シト
ラコン酸の利用という点で近縁菌の１つであるPseudomo
nas caryophylliとは異なり、ロ）菌の大きさがPseudom
onas cepaciaが0.8〜1.0×1.6〜3.2ミクロンなのに対し
て、本菌は1.0〜1.2×1.6〜2.2ミクロンであること、金
属性の紫色色素の産生、硝酸塩の還元、ブチルアミン、
トリブタミン、ピメリン酸、α−アミルアミン、ｍ−ヒ
ドロキシ安息香酸、ブトレスシン、スベルミン、レブリ
ン酸の利用の点でPseudomonas cepaciaとも異なり、結
局、本菌はPseudomonas gladioliに属すると判断するの
が最も妥当と認められる。しかしながら、本菌はスベリ
ン酸、ブタンジオールを利用し、Ｄ−酒石酸、メサコン
酸を利用せず、硝酸塩を還元するのに対して、Pseudomo
nas gladioliの従来菌はスベリン酸、ブタンジオールを
利用せず、硝酸塩を還元しないことの点で異なってい
る。よって、本菌をそのままPseudomonas gladioliの従
来菌に属させることは無理があると考え、その新菌株と
するのが相当であり、Pseudomonas gladioli V−2400と
命名した。

さらに、Ｃ−0620についても以下の理由によってPseu
domonas gladioliに属する新菌種とするのが相当であ
る。即ち、イ）アルギニンの加水分解、ゼラチンの液
化、シトルリン、アントラニル酸、ヘプタン酸、カプリ
ル酸、アジピン酸、アゼライン酸、シトラコン酸、アド
ニトール、オルニチンの利用という点で近縁菌の１つで
あるPseudomonas caryophlliとは異なり、ロ）菌の大き
さがPseudomonas cepaciaが0.8−1.0×1.6−3.2ミクロ
ンなのに対して本菌は1.0−1.2×1.6−2.2ミクロンであ
ること、金属性の紫色色素の産生、トリブタミン、メタ
ヒドロキシ安息香酸、ビタジオール、ブトレスシン、ス
ペルミン、メサコン酸の利用の点でPseudomonas cepaci
aとも異なり結局、本菌はPseudomonas gladioliに属す
ると判断するのが最も妥当と認められる。しかしなが
ら、本菌は、ブチルアミン、ピメリン酸、α−アミルア
ミン、スベリン酸、レブリン酸、Ｌ−酒石酸、を利用
し、硝酸塩を還元するのに対して、Pseudomonas gladio
liの従来菌はブチルアミン、ピメリン酸、α−アミルア
ミン、スベリン酸、レブリン酸、Ｌ−酒石酸を利用せ
ず、硝酸塩を還元しないことの点で異なっている。よっ
て、本菌をそのままPseudomonas gladioliの従来菌に属
させることは無理があると考え、その新菌株とするのが
相当であり、Pseudomonas gladioli C−0620と命名し
た。

そして、上記Ｄ−2251、Ｖ−2400及びＣ−0620は、従
来のPseudomonas gladioliが硝酸塩を還元せず、且つ、
Ｌ−酒石酸を資化しないのに対し（Bergey′s manual o
fsystemtic bacteriology（第１巻による）、共に硝酸
塩を還元し、且つ、Ｌ−酒石酸を資化する性質を有する
ことから、従来のままのPseudomonas gladioliに含める
のは妥当でなく、異なる新しい系統群を構成するものと
考えられる。

さて、このPseudomonas gladioli D−2251、Ｖ−2400
及びＣ−0620に代表される新しい系統群を構成する新規
微生物（以下これを本新規微生物という）について、さ
らにその抗菌作用の検討を加えた結果、フザリウム属
菌、リゾクトニア属菌、コーテシウム属菌、ピリキュラ
リア属菌、アルタナリア属菌、バーテシリウム属菌、ビ
シウム属菌、スクレロチュウム属菌等に対して極めて顕
著な抗菌活性を示すことが判明した。

尚、その抗菌活性の測定は、直径90mmのシャーレーに
PPGA培地（ペプトン5g、Potato dextrose broth 24g、
寒天15g）を入れたものに病原菌と本菌を25℃，一週間
で対峙培養して検定したものである。

その結果を示すと下表の通りである。

即ち、上記抗菌活性試験表から、本新規微生物は、フ
ザリウム属菌、バーテシリウム属菌、ボトリチス属菌、
アルタナリア属菌、ピリキュラリア属菌、スクレロチュ
ウム属菌、コレトトリクム属菌、コーテシリウム属菌、
ピシウム属菌に強い抗菌活性を示すことが明らかであ
る。

そこで、この抗菌作用に着目して、上記病原菌の防除
法を検討した。先ず、各種植物に本新規微生物の接種を
試みたところ、例えば、シンビジウム、デンドロビウ
ム、バンダ、カトレア、ボワノラ、ビルステケラ、ミル
トニア、ファレノブシス、パフォペディルム、グラジオ
ラス、アイリス、タマネギ、ネギ、ニラ、トウモロコ
シ、イネ、ハイドランジャー、カキ、マサキ、トマト、
ナス、レタスの葉、茎、根、バルブで増殖ができること
が確かめられ、そこで、本新規微生物を約10⁷個/ml程度
の液に調整し、これを上記植物の葉、茎、根、バルブに
接種して、その増殖を図った。この結果、前述の抗菌活
性試験表に示したようなイネ、ユウガオ、トマト、キュ
ウリ、スイカ等の植物に多発するイネいもち病、ユウガ
オつる割れ病、イチゴ萎黄病、トマト萎凋病、ナス半身
萎凋病、イチゴ半身萎凋病、立枯病、白絹病、トマトか
いよう病等を防除できることが明らかとなった。この中
で、駆除が困難視されているイネいもち病に著効あるこ
とは特に注目される点である。且つ、本新規微生物によ
れば、従来の農薬が呈する副作用的薬害の弊も全く皆無
であることが確認された。

尚、この抗菌活性の測定方法は、上記抗菌活性試験表
上欄に記載した方法以外に、ネギ属植物に接種した対峙
培養法、ポット試験法、圃場における試験法によって確
認しても良い。即ち、例えばネギ属植物に接種した対峙
培養法によれば、直径6mmのコルクボーラで無菌的に打
ち抜いたニラの茎盤にＤ−2251、Ｖ−2400及びＣ−0620
の10⁷個/mlに調整した液を接種し、これをPPGA培地に着
床し、Pythium属菌（イチゴ根腐病菌）と25℃，一週間
対峙培養することにより抗菌活性を測定できる。この結
果、下表の如き効果を得た。

ネギ属植物に接種された抗菌活性試験結果処理方法阻止円の大きさニラの好み対峙培養 1mm以下Ｖ−2400のみ対峙培養 16.7mm Ｖ−2400を接種した 19.0mm ニラと対峙培養Ｄ−2251のみ対峙培養 3.3mm Ｄ−2251を接種した 7.0mm ニラと対峙培養Ｃ−0620のみ対峙培養 2.5mm Ｃ−0620を接種した 4.5mm ニラと対峙培養この結果は、本菌はネギ属植物に接種するとその抗菌
活性が増大することを示している。

以上のように本新規微生物は、抗糸状菌として土壌病
害を生物的手段で防除できる点に産業上の利用意義をき
わめて大きく、特にイネいもち病を副作用なく防除でき
る特徴はおおいに注目される点である。

（実施例１）新規微生物を培養する方法についての実施例を説明す
ると、培地について、培地としてK2HPO40.5g、MgSO4.7H
2O 0.2gNaCl 5g、酵母エキス0.8g、アドニトール2g、純
水1000ml、PH6.8の組成のものをフラスコに入れ、Pseud
omonas gladioliのＤ−2251、Ｖ−2400及びＣ−0620を
接種し、25℃の温度で96時間培養すると、それぞれの菌
は10¹⁰CFU/mlに増殖した。

（実施例２）次いで、本新規微生物を用いての病害の防除方法につ
いて説明すると、菌Ｄ−2251を、PPGA（ペプトン5g,Pot
ato dextrose broth 24g、寒天15g）の培地で、25℃の
温度で96時間培養した。そして、これを殺菌水又は水で
溶解し、さらに菌数が10⁷個/mlに調整した。そして、該
調整液にイネの種子又は葉に浸漬又は、散布した。Ｖ−
2400及びＣ−0620も同一条件で実施したところ、下表の
如き結果を得た。

イネいもち病防除試験結果注）Ｄ−2251、Ｖ−2400及びＣ−0620は、イネから再分
離された。

（再分離の条件） NH4H2PO4 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4.7H20 2.0g NaCl 5g 寒天 15g ズルシトール 2g トロポロン 25ppm 純水 1000ml

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き審判番号平7−4289 (72)発明者山下修一東京都江東区越中島１―３ (72)発明者難波成任東京都中野区上鷺宮４丁目８番４号 (72)発明者有江力東京都日野市三沢979番130号

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】Pseudomonas gladioliに属し、硝酸塩を還
元すると共にＬ−酒石酸を資化する新規微生物。
【請求項２】工業技術院微生物工業技術研究所「菌寄第
9483号」と同定される特許請求の範囲第１項記載の新規
微生物。
【請求項３】工業技術院微生物工業技術研究所「菌寄第
9484号」と同定される特許請求の範囲第１項記載の新規
微生物。
【請求項４】工業技術院微生物工業技術研究所「菌寄第
9963号」と同定される特許請求の範囲第１項記載の新規
微生物。
【請求項５】Pseudomonas gladioliに属し、硝酸塩を還
元すると共にＬ−酒石酸を資化し、不完全菌類、子嚢菌
類、担子菌類、鞭毛菌類、細菌のいずれかに抗菌活性を
有する新規微生物によって植物病害を防除する方法。