JP2587770B2

JP2587770B2 - 形質転換細胞

Info

Publication number: JP2587770B2
Application number: JP5148343A
Authority: JP
Inventors: 藤忠須; 田士郎茂; 田保福; 岩保幸黒; 谷弘明奥
Original assignee: Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Current assignee: Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Priority date: 1993-05-28
Filing date: 1993-05-28
Publication date: 1997-03-05
Anticipated expiration: 2012-03-05
Also published as: JPH06339372A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、形質転換細胞に関する
ものであり、更に詳細には、本発明は緑膿菌感染症の予
防治療に有効性を示す、ヒト由来のモノクローナル抗体
を産生する形質転換細胞に関するものである。

【０００２】

【従来の技術及び発明の背景】緑膿菌（以下、シュード
モナス・アエルギノーサということがある）は自然界に
広く存在し、水、下水等又ヒト、動物の口腔、腸内から
も高率に見い出される。この菌が病原性を発揮するのは
この菌自体の菌力による一般感染患者におけるよりもむ
しろ感染抵抗の低下した患者、即ち癌患者、免疫抑制療
法下の人、移植患者、熱傷患者および新生児等である。

【０００３】現在、緑膿菌感染症は最も治療の困難な感
染症と考えられている。すなわち、緑膿菌はこれまで常
用されて来た抗生物質のほとんどすべてに対して耐性を
示すばかりでなく、近年開発された抗生物質に対しても
容易に緑膿菌が耐性型に誘導される症例が多いからであ
る。又、抗生物質療法の限界に立って、宿主側の緑膿菌
処理能力の増強をめざした菌体成分による感染防御剤す
なわちワクチンの開発、例えば、１３種類以上ある血清
型別緑膿菌の表在抗原をそれぞれ精製して混合した緑膿
菌多価ワクチンや緑膿菌の血清学的共通抗原としてタン
パクを主成分とするＯＥＰ、あるいはＯＥＰに本菌から
調製したプロテアーゼトキソイド、エラスターゼトキソ
イドあるいはエクソトキソイドを加えた３種あるいは４
種混合ワクチン等がある。しかしながら、いずれのワク
チンも感染防御能あるいは安全性が不十分で、実用性の
あるすぐれたものが待望されていると言っても過言でな
い。さらに、健常人の血清から製造したヒト血清免疫グ
ロブリン製剤の受動免疫による免疫グロブリン療法も研
究されているが実際の製剤中には緑膿菌に対する抗体価
が低いものが多く、その予防・治療効果を疑問視する向
きも少なくない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、緑膿菌の血
清型別抗原に対して特異的な親和性を有するヒトモノク
ローナル抗体を産生する形質転換細胞を新たに開発する
こと、をその目的とするものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するためになされたものである。以下、本発明につい
て詳述する。

【０００６】Ｉ．発明の概要

【０００７】１．要旨本発明は、緑膿菌血清型別抗原に対して特異的な親和性
をもち、グロブリンクラスがＩｇＧあるいはＩｇＭから
なるヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞の
創製を目的としてなされたものであり、本発明に係る形
質転換細胞を利用すれば、上記した新規なヒトモノクロ
ーナル抗体を効率的に作製することができ、これを単品
で又は組み合せることにより緑膿菌の予防及び／又は治
療剤を創製することができる。

【０００８】目的とする緑膿菌に対するヒトモノクロー
ナル抗体産生細胞は、ヒト由来Ｂ細胞をＥＢウィルス
（Ｅｐｓｔｅｉｎ−ＢａｒｒＶｉｒｕｓ）でトランス
フォームさせたりして作製するものであって、それが産
生する抗体の中から血清型別抗原に対して特異的に反応
するもので、グロブリンクラスがＩｇＧまたはＩｇＭク
ラスからなる抗体を選択すれば、上記した緑膿菌に対す
るヒトモノクローナル抗体が作製される。

【０００９】２．効果本発明に係る形質転換細胞によって得られるヒトモノク
ローナル抗体は、これを単剤又は２剤以上組み合せるこ
とにより、緑膿菌感染症に対するすぐれた予防治療効果
が達成される。

【００１０】本発明で注目すべきことは、緑膿菌の血清
型別抗原に対して特異的に反応するモノクローナル抗体
として、マウス等の動物ではなくヒト由来のモノクロー
ナル抗体を産生する形質転換細胞を作製するのにはじめ
て成功した点で非常に特徴的であり、しかも該細胞が産
生するヒト由来のモノクローナル抗体の中で、特にグロ
ブリンクラスがＩｇＧ及びＩｇＭである抗体が有効であ
り、更に、これらのグロブリンクラスがＩｇＧ、ＩｇＭ
であって且つ緑膿菌菌体に直接凝集活性をもつ抗体は、
その抗体と反応する緑膿菌に対して極めて低濃度・低用
量で予防、および治療効果を発揮することを本発明者ら
がはじめて見い出したことである。

【００１１】II．発明の具体的説明

【００１２】１．使用緑膿菌本発明では使用緑膿菌の分類を緑膿菌研究会主催の血清
型別検討委員会の決定（１９７５）による血清学的分類
に従った（下記表１に示される第１表）。

【００１３】

【表１】

【００１４】２．ヒトモノクローナル抗体産生細胞の作
製本発明による緑膿菌に対するヒトモノクローナル抗体産
生細胞はヒトＢ細胞をＥＢウィルスでトランスフォーム
することにより作られる。

【００１５】一般にヒトモノクローナル抗体作製法とし
ては、ヒト−ヒトハイブリドーマ法マウス−ヒ
トハイブリドーマ法ＥＢウィルスによるトランス
フォーメーション法等がある。

【００１６】の方法は現在までのところ、すぐれたヒ
トミエローマ細胞が存在していないため目的とするハイ
ブリドーマ増殖性の悪さや遺伝子の欠落等があり完成度
の低い技術となっている。の方法はマウス−ヒトのた
め遺伝子が組み込まれても直ちに遺伝子の欠落現象が起
きて安定な株の樹立がむずかしいという問題を含んでい
る。そこで本発明者らは比較的安定な抗体産生細胞株を
作製することが出来るといわれているＥＢウィルストラ
ンスフォーメーション法でヒト由来の本発明のモノクロ
ーナル抗体を作製した。ヒトＢ細胞の材料は血清中に抗
緑膿菌抗体の産生がみられる健常人の末梢血や不要にな
った患者の摘出リンパ節（例えば扁桃腺）を使用し、出
来るだけＢ細胞濃度を高めるためファイルコール・コン
レイ比重遠心法などによりＢ細胞を含む単核細胞画分を
濃縮して用いた。

【００１７】ＥＢウィルスによるヒトＢ細胞のトランス
フォーメーション法の基本術式は公知の方法（たとえば
Ｎａｔｕｒｅ２６７，５２，１９７７，第４回日本免
疫学会総会記録３９９頁、１９７４）に準拠し、ＥＢウ
ィルス持続産生細胞株の培養上清をウィルス源としてヒ
トＢ細胞に感染させ、増殖型に変異した細胞集団の中か
ら既知のアッセイ法にしたがってモノクローナル抗体の
検出を行うことにより目的抗体産生細胞集団をスクリー
ニングし、さらに公知の抗原感作ヒツジ赤血球を用いた
ロゼット形成法および軟寒天コロニー形成法によりモノ
クローンになった本発明のモノクローナル抗体産生クロ
ーン細胞株を取得した。

【００１８】モノクローナル抗体の検出のためのアッセ
イ方法としては以下のような方法がある。１つはプロテ
インＡを結合させた赤血球を用いる方法で、特異抗体を
検出する方法の中で優れた鋭敏度、特異性を示す方法で
ある。また凝集の程度を観察し抗体価を決める凝集反応
法、グロブリンクラスあるいはサブクラスを決めるのに
最も簡単な方法で、一般に培養上清を１０倍程度濃縮し
なければならないが、放射能標識された上清を抗体で沈
降させ、それをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルなどで
展開し確認することも出来るオクタロニー法である。ま
た、ポリビニルクロライド製のＵ字型マイクロタイター
プレートに抗原もしくは細胞を固定しておき、そこへ培
養上清を加えインキュベートして抗原−抗体反応させた
後 ¹²⁵Ｉ又は酵素で標識した抗マウス抗体あるいはＰｒ
ｏｔｅｉｎＡを加え洗浄後、各ウエル中の放射活性又
は酵素活性を調べるラジオイムノアッセイ法や酵素免疫
測定法（ＥＩＡ法）もある。種々のアッセイ法の中で目
的に合った方法を選択すればよい。基本的には短時間
で、感度がよく安価であることが重要なことである。本
発明者らは、次のようなＥＩＡ法を用いている。

【００１９】すなわち、緑膿菌菌体を抗原としてメンブ
ランフィルターに一定量ドットして用い、これにハイブ
リドーマの培養上清を反応させた後、ペルオキシダーゼ
標識ヤギ抗ヒトイムノグロブリン抗体（カッペル社）を
作用させ酵素反応の呈色割合により抗体産生量を測定で
きるドットイムノバインディングアッセイ法（ＤＩＢＡ
法、ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍ．，１１
０，１４２，１０８２）を用いている。

【００２０】このようにして目的とするヒトモノクロー
ナル抗体産生クローン細胞株、つまり緑膿菌に対するヒ
トモノクローナル抗体を産生するＥＢウィルス形質転換
細胞が樹立された。

【００２１】３．ヒトモノクローナル抗体の製造このようにして本発明の目的とする形質転換細胞が得ら
れるが、該細胞を利用すれば、効率的に緑膿菌に対する
ヒトモノクローナル抗体を製造することができる。

【００２２】つまり、得られた該抗体産生クローン細胞
株からのヒトモノクローナル抗体の大量調製は、例えば
スピンナーフラスコ、ローラーボトルを用いた大量培養
等により培養液を集め、これを以下に述べるような非特
異的精製法及び／又は特異的精製法によって精製するこ
とにより、目的とするヒトモノクローナル抗体が精製さ
れた状態で得られる。

【００２３】非特異的精製：培養上清等からの目的とす
るモノクローナル抗体の精製はゲル濾過法、イオン交換
セルロースクロマトグラフィー、硫酸アンモニウムによ
る塩析法などの公知の方法の組み合わせにより行うこと
が出来る。

【００２４】特異的精製：臭化シアンで活性化したセフ
ァロース４Ｂ（ファルマシア社）あるいはアフィゲル−
１０（バイオラッド社）に抗原を結合させ不溶化したカ
ラムに免疫グロブリン画分又は培養上清を流入し抗体を
結合させた後、尿素溶液などで吸着抗体を溶出させて精
製するアフィニテイクロマトグラフィーも必要に応じて
使用出来る。また、目的とするヒトモノクローナル抗体
がＩｇＧの場合、プロテインＡを固定化したアフィニテ
ィカラムを用いると精製が容易であるという点で推奨さ
れる。

【００２５】また、目的とするヒトモノクローナル抗体
がＩｇＭの場合、例えばセファクリルＳ３００（ファル
マシア社）を用いるゲル濾過による精製法のほか、ハイ
ドロキシアパタイトカラムを用いたりして、更に精製度
を上げる精製方法も利用される。

【００２６】なお、本発明の細胞から得られるモノクロ
ーナル抗体は、上述のようにヒト由来のものであって、
緑膿菌の血清型別抗原に対して特異的な親和性を有し、
かつ緑膿菌菌体に対して直接凝集活性を持つグロブリン
クラスがＩｇＧ又はＩｇＭからなるものであるが、これ
らの性質は下記に示す方法により規定することが出来
る。すなわち、緑膿菌の血清型別抗原に対する特異的な
親和性とは第１表のＡ〜Ｍ群の緑膿菌の血清型別菌のう
ち、１つの群に属する菌株とのみ反応し、他の群に属す
菌株とは反応しないこと（例えばＡ群の菌とのみ反応
し、他のＢ〜Ｍ群とは反応しないこと）を意味してい
る。

【００２７】また、本発明の細胞から得られるヒトモノ
クローナル抗体の緑膿菌菌体に対する直接凝集活性とは
実施例１に示すように、９６ウエルのＵ底マイクロプレ
ート中で緑膿菌のホルマリン処理又は加熱処理による死
菌体をそれぞれ直接凝集する抗体活性を意味する。

【００２８】さらに本発明の細胞から得られるヒトモノ
クローナル抗体のグロブリンクラスは、該精製抗体のセ
ファクリルＳ−３００によるゲル濾過パターンおよびパ
ーオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ又はＩｇＭ抗体
（カッペル社）によるＤＩＢＡ法でそれぞれＩｇＧ又は
ＩｇＭと同定されたものを意味している。

【００２９】本発明の細胞から得られるヒトモノクロー
ナル抗体が緑膿菌感染に対してすぐれた予防および治療
効果を示すことは試験例に例示する如くであるが、該抗
体を緑膿菌感染症の予防、治療剤として用いる場合は注
射剤の型で用いるのが好ましい。尚、ヒトへの投与量は
０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇで、皮下注、筋注及び静脈内
投与等の投与方法が選択できる。以下に実施例、製造
例、応用例及び試験例を例示し、本発明をさらに具体的
に説明する。

【００３０】

【実施例１】各血清型緑膿菌に対するヒトモノクローナ
ル抗体の作製とその性質

【００３１】１）ＥＢウィルスＥＢウィルス（以下ＥＢＶ）を産生放出しているＢ９５
−８細胞をＲＰＭＩ−１６４０に２０％ＦＣＳを加えた
培地で培養し、静止期に近い７日目の培養上清を分離し
てウィルス源とした。

【００３２】２）リンパ球の分離健常人であらかじめ抗緑膿菌抗体価の高い人から採血し
たヘパリン加末梢血を生理食塩水あるいはＰＢＳ（−）
で２倍に希釈後、１／４〜１／３量のリンフォプレップ
上に界面がみだれないようにゆっくりと重層した。重層
後、１５５０ｒｐｍ、３０分間、室温で遠心した。遠沈
後、界面層の白く濁った細胞層をパスツールピペットで
とり出し、細胞はＰＢＳ（−）で１４００ｒｐｍ、１０
分間（１回目）、次に１０００ｒｐｍ、１０分間（２、
３回目）で遠心洗浄した。細胞はＲＰＭＩ１６４０液
に５×１０⁶個／ｍｌで再浮遊した。

【００３３】３）Ｔリンパ球の除去（Ｂリンパ球濃縮）０．５％ＡＥＴ処理のＳＲＢＣ１容、単核球細胞浮遊
液（５×１０⁶個／ｍｌ）１容、ＳＲＢＣ吸収ＦＣＳ
０．２容を遠心管（尖底）内で混和し、５分間、室温に
放置後、次いで１０００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心し
た。遠沈後、氷中に１時間静置した。反応後、細胞ペレ
ットをパスツールピペットで静かに攪拌し、浮遊液を作
りリンフォプレップ上にのせ、１５５０ｒｐｍ、３０分
間、４℃で遠心した。遠沈後、界面上のロゼットを作ら
なかった細胞（Ｂリンパ球）をとり出し、ＰＢＳ（−）
で上記２と同様に３回遠心洗浄した。細胞は１×１０⁷
個／ｍｌ（多い時）〜２．５×１０⁶個／ｍｌ（少ない
時）となる様に培養液に浮遊した。

【００３４】４）ＥＢＶ感染による細胞株の樹立培養プレート（２４穴）の１穴に対し、Ｂリンパ球浮遊
液（１×１０⁷〜２．５×１０⁶個／ｍｌ）０．１ｍｌに
ＥＢＶ液０．１ｍｌを加え、炭酸ガス培養器で３７℃、
６０分間インキュベーションした。インキュベーション
後、０．８ｍｌの培養液を加え全量を１ｍｌとし、ＣＯ
₂ガス培養器で３７℃、静置培養を行った。ＥＢＶ感染
後４〜５日目に１ｍｌの培養液を加えた。その後４〜５
日毎に１／２量の培養液交換を行ない培養を継続し、そ
して６週間後、旺盛な細胞増殖が認められる培養プレー
トについて培養上清の抗緑膿菌モノクローナル抗体の存
在の有無を、酵素免疫測定法であるドットイムノバイン
ディングアッセイ法で測定した。

【００３５】ＤＩＢＡ法は、９６穴Ｕ底マルチプレート
を用い、１ドット当たり０．４μｇの０．３％ホルマリ
ン処理各血清型緑膿菌の全菌体を抗原として固定したメ
ンブランフィルター（３．１ｍｍ角）と上記の培養上清
１００μｌを室温で３０分、ついでパーオキシダーゼ標
識ヤギ抗ヒトイムノグロブリン抗体（カッペル社製）と
３０分反応後、クロルナフトールを基質として発色さ
せ、抗原を固定したメンブランフィルター上に肉眼観察
で発色を認めたものを抗体産生が陽性と判定した。

【００３６】尚、緑膿菌の血清型別抗原に対する特異的
な親和性は、第１表のＡ〜Ｍの１３種の血清型菌を抗原
として固定したメンブランフィルターそれぞれについて
試験し、単一の血清型菌の抗原とのみ反応することによ
り確認した。

【００３７】該抗体産生がみられた細胞集団はロゼット
形成法および軟寒天コロニー形成法でクローニングし
た。クローニングにより増殖能が旺盛なクローンは、ス
ターリングシステム（インターメット社製）にて拡大培
養し、培養上清を各型緑膿菌を抗原としたアフィニティ
ーカラム（ＩｇＧ向）およびセファクリルＳ３０００
（ＩｇＭ向）にて精製した。得られた抗体培養液はポア
サイズ０．２２ミクロンのメンブランフィルターで濾過
し、動物実験使用時まで４℃で保存した。

【００３８】本発明者らは緑膿菌の血清学的分類各型に
特異的に反応するヒトモノクローナル抗体を産生する形
質転換細胞を１４株見い出した。このうちＥ型、Ｂ型、
Ｇ型、Ｉ型に特異的に反応する形質転換細胞はそれぞれ
４株、５株、２株、３株であった。

【００３９】それぞれの細胞から得られた抗体のうち、
Ｅ血清型緑膿菌特異反応抗体の性質を下記表２に示され
る第２表に、Ｂ血清型緑膿菌特異反応抗体の性質を下記
表３に示される第３表に、Ｇ血清型緑膿菌特異反応抗体
の性質を下記表４に示される第４表に、Ｉ血清型緑膿菌
特異反応抗体の性質を下記表５に示される第５表に、そ
れぞれ示す。

【００４０】

【表２】

【００４１】

【表３】

【００４２】

【表４】

【００４３】

【表５】

【００４４】なお、緑膿菌菌体に対するヒトモノクロー
ナル抗体の直接凝集活性の測定は、次の方法で行った。

【００４５】９６穴Ｕ底マルチプレート（ファルコン
社）に各血清型の緑膿菌の０．３％ホルマリン処理ある
いは１２０℃加熱処理による死菌体の懸濁液（ＰＢＳ
（−）に懸濁、ＯＤ₅₄₀が０．４）を５０μｌずつ分注
した。ついでこれにヒトモノクローナル抗体のＰＢＳ
（−）による希釈系列を５０μｌずつ分注し、プレート
表面をシーラー（リンブロ社プレートシーラー）でカバ
ーし、室温で１０分間振とうし３７℃で１時間静置し
た。さらにこれを４℃〜１０℃で１５時間以上放置した
後プレートを室温にもどしプレートの裏面より透かして
菌体の凝集反応像を観察し判定した。

【００４６】

【試験例１】各血清型緑膿菌に特異的に反応するヒトモ
ノクローナル抗体の緑膿菌感染に対する防御活性

【００４７】実施例１で得られた各型に特異的に反応す
るヒトモノクローナル抗体の緑膿菌感染に対する防御効
果について検討した。

【００４８】先ず、生後、１０週令のＢＡＬＢ／Ｃ雌性
マウス１群５匹に各菌型に特異的に反応するヒトモノク
ローナル抗体をマウス１匹当り５０ｎｇ、５００ｎｇ、
５μｇ、５０μｇ、５ｍｇをそれぞれ腹腔内へ投与し
た。

【００４９】２時間後にそれぞれの菌型に特異的な菌株
を（ＩＩＤ１１３０（Ｅ型）、ＩＩＤ１００２（Ｂ
型）、ＡＴＣＣ１０１４５（Ｇ型）、ＩＩＤ１０１０
（Ｉ型））１×１０⁶腹腔内へチャレンジした。対照群
はモノクローナル抗体のかわりに生理食塩液のみ投与し
た。緑膿菌感染後、７日目に各投与群のマウスの生存率
から５０％有効投与量（ＥＤ₅₀値）を求めた。結果は第
２〜５表に示すとおりで、グロブリンクラスがＩｇＧ及
びＩｇＭのヒトモノクローナル抗体はいずれも有効であ
り、また上記の結果からみると、ヒト由来のモノクロー
ナル抗体の中でグロブリンクラスがＩｇＧで、強い凝集
能活性をもつ抗体に極めて、強力な緑膿菌感染防御効果
が認められた。

【００５０】

【製造例１】モノクローナル抗体Ｉおよびモノクローナ
ル抗体Ｙを産生する細胞を実施例１の方法に従って培養
し、これをハイドロキシアパタイトカラムで精製した。
得られたＩｇＭ溶液は、ポアサイズ０．２２ミクロンの
メンブランフィルターで濾過し、動物実験使用時まで−
８０℃で凍結保存した。試験例１の方法に従って緑膿菌
に対する感染予防活性を調べた。ただし、ヒトモノクロ
ーナル抗体Ｉは０．４μｇ、２μｇ、１０μｇ含む溶液
を、ヒトモノクローナル抗体Ｙは１．２５μｇ、５μ
ｇ、２０μｇ含む溶液を投与した。

【００５１】結果を下記表６に示される第６表に示し
た。

【００５２】

【表６】

【００５３】上記から明らかなように、実施例１とは精
製法を変えて更に抗体の精製度を上げて夾雑物を除去
し、それとともに、精製抗体の動物実験までの保存温度
を更に低下せしめて−８０℃として抗体活性の減少を防
止したところ、試験例１の場合に比してＩｇＭも極めて
強力な緑膿菌防御効果が認められ、その値はＩｇＧより
も高い場合も認められた。

【００５４】

【応用例１】Ｅ血清型緑膿菌に特異的に反応するヒトモ
ノクローナル抗体の液剤および凍結乾燥製剤

【００５５】１）ヒトモノクローナル抗体の大量調製

【００５６】（ａ）大量培養実施例１で得られたモノクローナル抗体Ｎｏ．３を産生
する株を３〜４ケ月の長時間をかけて無血清培地に（Ｈ
Ｂ１０１ＴＭ培地富士レビオ社製）馴化した。次に馴
化した細胞を５ｌのスターリングシステム（インターメ
ッド社製）で培養して下記の精製に供与した。

【００５７】（ｂ）大量精製ＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ（フ
ァルマシア社製）又はＤＥＡＥＳｅｐｈａｃｅｌを使
用してグロブリン画分を約１５ｍｇ得た。

【００５８】２）液剤上記によって得たモノクローナル抗体を３／１０Ｍアミ
ノ酢酸液で溶かし、グロブリン画分濃度が１００μｇ／
ｍｌになるようにした。このようにして得られたもの
を、メンブランフィルター（ニュクリポアーＮｏ．２
０、ヌクリポア社製）を用いて無菌濾過して１ｍｌずつ
バイアルに無菌的に分注して本発明物質の液剤を得た。

【００５９】３）凍結乾燥製剤上記方法にて大量精製して得られたグロブリン画分を最
終濃度３／１０Ｍになるようにアミノ酢酸を加えた生理
食塩に溶かし、１００μｇ／ｍｌとし、さらにマンニト
ールを５０ｍｇ／ｍｌ濃度になるように添加して、メン
ブランフィルター（ニュクリポアーＮｏ．２０、ヌクリ
ポア社製）を用いて無菌濾過し、２ｍｌずつバイアルに
無菌的に分注して凍結乾燥して本発明物質の凍結乾燥製
剤を得た。

【００６０】

【試験例２】各血清型緑膿菌特異ヒトモノクローナル抗
体を利用した治療効果

【００６１】試験例１で予防効果の認められたモノクロ
ーナル抗体Ｎｏ．３、IV、Ａ、Ｘにつき、それぞれ治療
効果の実験を行った。

【００６２】すなわち、生後１０週令のＢＡＬＢ／Ｃ雌
性マウス１群５匹に試験例１と同様にそれぞれのモノク
ローナル抗体に反応する菌を１×１０⁶腹腔内へチャレ
ンジして２時間後に、上記のモノクローナル抗体を各々
１００ｎｇ〜１０ｍｇ腹腔内に投与し、７日目でＥＤ₅₀
値を求めた。結果を下記表７に示される第７表に示し
た。

【００６３】

【表７】

【００６４】上記から明らかなように、これらのモノク
ローナル抗体はいずれも強い予防効果を示すことが認め
られた。また、試験例２で強い予防効果を示した各々の
モノクローナル抗体の治療効果は約１／１０に低下する
ものの治療効果も認められた。

【００６５】尚、最大投与量７０ｍｇ／ｋｇでもマウス
の行動には何の変化も認められなかった。

【００６６】

【発明の効果】本発明によりはじめて、緑膿菌の血清型
別抗原に対して特異的な親和性を有するヒトモノクロー
ナル抗体を産生する形質転換細胞が得られた。

【００６７】この細胞を培養することによって、緑膿菌
に対する新規なヒトモノクローナル抗体を効率的に得る
ことが可能となり、緑膿菌感染症に対する予防及び／又
は治療にこの抗体を利用することができる。

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】緑膿菌のＢ・Ｅ・Ｇ又はＩ型の血清型別
抗原に対して特異的な親和性を有し、前記一つの型の緑
膿菌に対して直接凝集性を持つグロブリンクラスがＩｇ
ＧもしくはＩｇＭであるヒトモノクローナル抗体を産生
するＥＢウィルス形質転換細胞。