JP2024515536A - 抗ネクチン－４抗体エキサテカンコンジュゲート - Google Patents

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Abstract

本発明は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤、特にエキサテカンである、抗体－薬物コンジュゲートに関する。【選択図】なし

Description

本発明は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤、特にエキサテカンまたはデルクステカンである、抗体－薬物コンジュゲートに関する。
発明の背景
ネクチンは、上皮および内皮の接合部を組織化するのを助ける接着分子であり、単純ヘルペスウイルス、麻疹ウイルスおよびポリオウイルスの進入のための受容体として役立つ。
それらは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ／ＣＤ１５５）のホモログであり、このため、ポリオウイルス受容体結合タンパク質（ＰＲＲ）とも呼ばれてきた。現在までに、ＰＶＲ／ＣＤ１５５、ネクチン－１／ＰＲＲ１／ＣＤ１１１、ネクチン－２／ＰＲＲ２／ＣＤ１１２、ネクチン－３／ＰＲＲ３およびネクチン－４／ＰＲＲ４の５個のメンバーが述べられている。それらの細胞外ドメインは、それらのアミノ酸配列において３０％と５５％との間の同一性を共有する、３個の免疫グロブリン様（Ｉｇ）－タイプＶ、Ｃ、Ｃドメインで構成されている。
ネクチン／ＰＲＲ分子の発現は一般に、より限定された発現プロファイルを示すネクチン－３および－４を例外として、造血細胞、神経細胞、内皮細胞および上皮細胞を含む組織において広範囲に及ぶ。
ネクチン－４は、特に興味深い標的である。それは、胎児の発育中に発現するが、その発現は、ネクチンファミリーの他のメンバーの発現と比較して、成体組織においては減少し、非常に制限されている。ネクチン－４は、膀胱がんの８３％、乳がん（主にトリプルネガティブおよびＥＲＢＢ２＋）の７８％、膵臓がんの７１％、肺がんの５５％、卵巣がんの５７％、頭頸部がんの５９％、および食道がんの５５％において、腫瘍関連抗原である。
これらの病態におけるネクチン－４の発現は、おそらくは、遊走、増殖および転移の形成のより高い能力をインビトロで腫瘍細胞に付与するネクチン－４の能力の結果として、予後不良と関連している。正常組織においては、ネクチン－４は、皮膚、唾液腺、膀胱および食道において検出されるのみである。進行性尿路上皮がんの二次治療についてのエンホルツマブベドチンの保健当局による最近の承認は、がんの治療についての標的としてのネクチン－４の検証を完了した。
本発明の第１の態様は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤、特にエキサテカンまたはデルクステカンである、抗体－薬物コンジュゲートである。
本発明のさらなる態様は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤、特にエキサテカンである、抗体－薬物コンジュゲートである活性剤、並びに薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物である。
本発明のさらなる態様は、薬剤における、特にヒトの薬剤における、上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物の使用である。
本発明のさらなる態様は、ネクチン－４関連障害の予防および／または治療のための、特にネクチン－４陽性がんの予防および／または治療のための方法における、上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物の使用である。
本発明のさらなる態様は、がんの予防および／または治療のための、特に、膀胱がん、尿路上皮がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肝臓がん、甲状腺がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん頭頸部がんおよび／または食道がんから選択されるがんの予防および／または治療のための方法における、上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物の使用である。
本発明のさらなる態様は、それを必要とする対象に治療的に有効な量の上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物を投与することを含む、ネクチン－４関連障害の予防および／または治療のための、特にネクチン－４陽性がんの予防および／または治療のための方法である。
本発明のさらなる態様は、それを必要とする対象に治療的に有効な量の上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物を投与することを含む、がんの予防および／または治療のための、特に、膀胱がん、尿路上皮がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肝臓がん、甲状腺がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん頭頸部がんおよび／または食道がんから選択されるがんの予防および／または治療のための方法である。
発明の詳細な説明
本発明者らは、抗ネクチン－４抗体のエキサテカンなどのトポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤とのコンジュゲートが、抗ネクチン－４抗体およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）のコンジュゲートである市販の抗体エンホルツマブベドチンと比較して、改善された抗がん活性を実証することを見出した。従って、本発明の抗ネクチン－４抗体コンジュゲートは、ネクチン－４陽性がんなどのネクチン－４関連障害の改善された治療を可能にする。
特定の実施態様においては、本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、ヒトケラチノサイト、例えば、インビトロで分化したネクチン－４発現ケラチノサイトが発現するネクチン－４と比較して、腫瘍が発現するネクチン－４に対してより高い親和性で特異的に結合する、新規な抗ネクチン－４抗体を含む。好ましい例は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）１５Ａ７．５、９Ａ２．７、３Ａ１．４および／または８Ｆ０６である。
特に好ましい例は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）１５Ａ７．５またはそれに由来する抗体である。インビトロでは、この選択性は、腫瘍細胞と比較して、および同じアッセイにおけるＨＡ２２ ｍＡｂ（エンホルツマブ）の活性を参照して、ｍＡｂ １５Ａ７．５に、ケラチノサイトに対するより低い結合親和性、内部移行および／または細胞毒性活性を提供する。
特に、本発明のコンジュゲートは、モノクローナル抗ネクチン－４抗体１５Ａ７．５ ｍＡｂに由来するヒト化抗体を含む。
インビボでは、ケラチノサイトに対するこの低い結合能は、皮膚におけるより低い吸収率のため、ｍＡｂ １５Ａ７．５に、より長い半減期を与える。
異種移植マウスモデルにおいては、樹立した腫瘍の、エキサテカンと結合させた４ｍｇ／ｋｇのｍＡｂの単回静脈内投与での治療は、迅速かつ長続きする退縮に至った。
より具体的には、本発明者らは、そのような構成において、抗体－エキサテカンコンジュゲートが、エンホルツマブベドチンのサロゲート、すなわち、市販のエンホルツマブベドチンと区別することができない第三者によって非ＧＭＰ法を使用して製造されたエンホルツマブベドチン製品よりも効率的であることを実証する。
抗体
本発明のコンジュゲートの抗体は、特定のアミノ酸配列を特徴とするモノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはモノクローナル抗体断片である。別に示さなければ、用語「モノクローナル」は、単一種、すなわち、単一アミノ酸組成の抗体または抗体断片を指す。
本明細書において提供する抗体は、好ましくは、ネクチン－４に対する特異的な結合を示し、ヒトネクチンファミリーの他のタンパク質、特にネクチン－１、並びに／またはラットおよび／若しくはマウスからのネクチン－４などのげっ歯類のネクチン－４に対しては本質的な反応性または交差反応性を何ら示さない。
本発明の抗体の抗原結合部位は、重鎖可変ドメイン／領域（ＶＨ）および／若しくは抗体軽鎖可変ドメイン／領域（ＶＬ）、またはＶＨ／ＶＬの対を含む。
用語「抗原結合部位」は、リガンド（例えば、抗原、すなわち、ネクチン－４、またはその抗原断片）が実際に結合する、抗体由来の抗体分子の領域（複数可）を意味する。
可変ドメイン／領域は、抗体を抗原に結合させることに直接関与する、軽鎖および重鎖の対のそれぞれを意味する。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と略し、軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と略す。
本発明に係る抗体の抗原結合部位は、抗原に対する結合部位の親和性にさまざまな程度で寄与する６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有し得る。３個の重鎖可変ドメインＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３）および３個の軽鎖可変ドメインＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３）がある。また、より少ないＣＤＲで構成される（すなわち、結合特異性が３個、４個または５個のＣＤＲによって決定される）機能的抗原結合部位も本発明の範囲内に含まれる。例えば、６個のＣＤＲの完全なセットより少なくても、結合については十分であり得る。いくつかの場合においては、ＶＨドメインまたはＶＬドメインは、十分であろう。
本発明によれば、ＶＨ領域またはそのＣＤＲのみで、完全な抗原結合部位を構成し得る。特定の実施態様においては、抗体は、本明細書において定義するＶＨ領域またはそのＣＤＲのみを含む。他の実施態様においては、抗体は、ＶＬ領域またはそのＣＤＲと、特に本明細書において定義するＶＬ領域またはそのＣＤＲと一緒に、本明細書において定義するＶＨ領域またはそのＣＤＲを含む。
ＶＨ領域またはＶＬ領域内のＣＤＲの位置は、その両方が当業者に公知である、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）またはＩＭＧＴ付番システムに従って定義し得る。ＩＭＧＴ付番は、抗原受容体、鎖のタイプ、または種が何でも、可変ドメインを比較するために定義されてきた（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．，“Ｕｎｉｑｕｅ ｄａｔａｂａｓｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ”Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１８，５０９（１９９７）；Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．，“Ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ”Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９））。別途明記しなければ、本明細書においては、Ｋａｂａｔシステムを使用する。
本明細書において使用する用語「結合」および「特異的結合」は、ネクチン－４抗原のエピトープに対する本発明の抗体またはその断片の結合を指す。抗体の結合強度の尺度を、親和性と称する。インビトロアッセイを使用してそのような結合および／または親和性を決定する方法は、当業者に公知である。本発明によれば、フローサイトメトリー、免疫組織化学および／または蛍光での検出が、本明細書において記載され、特に好ましい。
抗原に対する抗体の結合の親和性は、用語Ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合速度定数）、ＫＤ（解離定数）、およびＫｄｉｓ（ｋＤ／ｋａ）によって定義される。
特定の実施態様においては、本発明のコンジュゲートの抗体は、キメラ抗体、多重特異性抗体、特に二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはそれらの抗原結合断片であり得る。
本発明によれば、「キメラ」抗体は、重鎖および／または軽鎖の一部は特定の起源または種に由来し、一方、重鎖および／または軽鎖の残りは異なる起源または種に由来する抗体を指す。
「多重特異性抗体」は、２個以上の異なるエピトープに結合する。エピトープは、同じまたは異なる抗原上にあり得る。多重特異性抗体の好ましい例は、２個の異なるエピトープに結合する「二重特異性抗体」である。
好ましい実施態様においては、本発明の抗体は、ヒト化抗体である。
用語「ヒト化抗体」または「抗体のヒト化バージョン」は、重鎖および軽鎖の両方が抗体工学の結果としてヒト化されている抗体を指す。ヒト化鎖は典型的には、全体として分析したときに原種の生殖系列配列よりもヒト生殖系列配列に相同性においてより近いように、Ｖ領域のアミノ酸配列が変化している鎖である。例えば、マウスＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域中に移植して、「ヒト化抗体」を調製し得る。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２（１９８８）３２３－３２７；およびＮｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１４（１９８５）２６８－２７０を参照されたい。本発明によって包含されるヒト化抗体の他の形態は、本発明に係る特性を生じさせるために定常領域が元の抗体のものからさらに修飾または変更されたものである。ヒト化の評価は、結果として生じるアミノ酸配列に基づき、方法論自体に基づくものではない。
別の好ましい実施態様は、ヒト抗体を含むコンジュゲートに関連する。
本明細書において使用する用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことを意図する。ヒト抗体は、最先端の技術において周知である（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。ヒト抗体はまた、免疫時に、内因性免疫グロブリン産生なしにヒト抗体の全レパートリーまたは選択されたものを産生することができる、トランスジェニック動物（例えば、マウス）において産生させることができる。
本発明のコンジュゲートの抗体は、任意の好適なクラスのものであり得る。用語「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。本明細書において使用する「定常ドメイン」または「定常領域」は、可変領域以外の抗体のドメインの総体を意味する。定常領域は、抗原の結合に直接は関与しないが、さまざまなエフェクター機能を示す。抗体は、抗体の５個の主要クラス、特に、ヒト抗体の５個の主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、またはそれらの任意のサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２のいずれでもあり得る。免疫グロブリンのさまざまなクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。本発明によれば、クラス、特にヒトのクラスＩｇＧ、ＩｇＡ若しくはＩｇＭの抗体またはその断片が、特に好適である。
好ましい実施態様によれば、本発明のコンジュゲートの抗体は、クラスＩｇＧ、特にヒトＩｇＧのクラス、例えば、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくは（ｏｆ）ＩｇＧ４、クラスＩｇＭ、クラスＩｇＡまたはそれらの抗原結合断片から選択される。
特定の実施態様においては、抗体は、同じサブクラスの野生型配列と比較して低下したエフェクター機能を有する、例えば、Ｆｃ受容体への低下した結合を有する、定常ドメイン、具体的には重鎖定常ドメイン、より具体的にはクラスＩｇＧ、特にクラスヒトＩｇＧ、例えば、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくは（ｏｆ）ＩｇＧ４、クラスＩｇＭ、クラスＩｇＡの重鎖定常ドメインを含む。低下したエフェクター機能を有する重鎖定常ドメインの例は、ヒトＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４配列の変異Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４ＱおよびＬ２３５Ｆの少なくとも１個を含有し得る。
抗体の「抗原結合断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する該インタクトな抗体の一部を含む分子を指す。抗体断片の例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体断片から形成される多重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。該用語はまた、融合タンパク質、例えば、非免疫グロブリンペプチドまたはポリペプチドとの融合タンパク質、および非タンパク質性構造、例えば、標識または毒素とのコンジュゲートを包含する。用語「抗体の（その）抗原結合断片」および「抗体の（その）断片は、本明細書において互換的に使用し得る。
抗体または抗原結合断片は、一価または多価であり得、すなわち、それは、単一の抗原結合部位または複数の抗原結合部位を含み得る。例えば、Ｆａｂ断片は、単一の抗原結合部位を有し、ＩｇＧクラスの抗体またはＦｖ断片若しくはｓｃＦｖ断片は、２個の抗原結合部位を有し、ＩｇＭクラスの抗体は、５個の抗原結合部位を有する。用語「抗体」はまた、異なる抗原結合部位を有するヘテロ特異性抗体、例えばヘテロ二重特異性抗体、特に抗原上の２つの異なるエピトープに向けられた抗体を包含する。本明細書において使用する「エピトープ」は、抗体が結合する抗原の領域である。用語「エピトープ」は、抗体に特異的に結合することができる任意のポリペプチド決定基を含む。
腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体
特定の実施態様においては、コンジュゲートの抗体は、ヒトケラチノサイト、例えば、インビトロで分化したネクチン－４発現ケラチノサイトが発現するネクチン－４と比較して、腫瘍が発現するネクチン－４に対してより高い親和性で特異的に結合する腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体、例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）１５Ａ７．５、９Ａ２．７、３Ａ１．４および／または８Ｆ０６に由来するモノクローナル抗体である。ｍＡｂ １５Ａ７．５が、特に好ましい。
比較のために、結合親和性は、フローサイトメトリー、免疫組織化学および／または蛍光によって検出し得る。そのような特異的結合が、とりわけ、本発明の抗体に基づく治療中のより少ない副作用を可能にする。
従って、抗体１５Ａ７．５、９Ａ２．７、３Ａ１．４および／または８Ｆ０６、特にそれらに由来するヒト化バリアントを含む抗体－薬物コンジュゲートは、より低い関連皮膚毒性並びにより高い抗腫瘍選択性および有効性を通して、ネクチン－４陽性がん治療の治療指標を改善する新しい方法を表す。
腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体およびその抗原結合断片は好ましくは、少なくとも４０、好ましくは少なくとも４５、より好ましくは少なくとも５０および最も好ましくは少なくとも５５（ｎＭ）の解離定数ＫＤを示す。
より低い結合親和性に加えて、本発明において提供する腫瘍選択的抗体および断片はまた好ましくは、腫瘍細胞と比較して、ケラチノサイトに対してより低い内部移行および／または細胞毒性活性を示す。
特に好ましい実施態様によれば、腫瘍選択的抗体および断片は、腫瘍細胞と比較して、ケラチノサイトに対してより低い結合親和性、より低い内部移行、およびより低い細胞毒性活性を示す。
もちろん、腫瘍が発現するネクチン－４に対する特異的な結合が、好ましい。
さらなる態様によれば、本発明はまた、ヒトケラチノサイトが発現するネクチン－４と比較して、腫瘍が発現するネクチン－４に対してより高い親和性で結合することを特徴とするモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートに関する。比較のために、結合親和性は、フローサイトメトリー、免疫組織化学および／または蛍光によって検出し得る。
特定の実施態様においては、腫瘍選択的モノクローナル抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１、７、８８、９６、若しくは１０４に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２、８、８９、９７若しくは１０５に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３、９、９０、９８若しくは１０６に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
並びに任意に
（ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４、１０、９２、１００若しくは１０８に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５、１１、９３、１０１若しくは１０９に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６、１２、９４、１０２若しくは１１０に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
を含む。
配列番号１～６は、ＩＭＧＴ付番システムに従って本発明の親抗体１５Ａ７．５の６個のＣＤＲ配列を定義する。配列番号７～１２は、Ｋａｂａｔに従って本発明の親抗体の６個のＣＤＲ配列を定義する。
本明細書において使用する配列番号についての具体的なアミノ酸配列は、添付の配列表に提供する。
配列番号８８～９５は、ｍＡｂ ９Ａ２．７を特徴付ける。
配列番号９６～１０３は、ｍＡｂ ３Ａ１．４を特徴付ける。
配列番号１０４～１１１は、ｍＡｂ ８Ｆ０６を特徴付ける。
本発明によれば、これらのＣＤＲ配列における少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個または２個のアミノ酸の置換または挿入が、可能である。特定の実施態様においては、保存的アミノ酸置換、すなわち類似の生化学的特性を有する別のアミノ酸によるアミノ酸の置換、例えば、脂肪族アミノ酸、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ若しくはＩｌｅの別の脂肪族アミノ酸についての置換、塩基性アミノ酸、例えば、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ若しくはＡｒｇの別の塩基性アミノ酸に対する置換、酸性アミノ酸若しくはそのアミド、例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ若しくはＧｌｎの別の酸性アミノ酸若しくはそのアミドに対する置換、芳香族アミノ酸、例えば、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ若しくはＴｒｐの別の芳香族アミノ酸に対する置換、またはヒドロキシ若しくは硫黄含有アミノ酸、例えば、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ若しくはＣｙｓの別のヒドロキシ若しくは硫黄含有アミノ酸に対する置換が、好ましい。さらなる特定の実施態様においては、少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個または２個のヒスチジン残基を、重鎖または軽鎖の１個以上のＣＤＲ配列、例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に挿入する。これが、中性ｐＨ、例えば、ｐＨ７．０から７．５に対して低ｐＨ、例えば、ｐＨ５．５から６．５の間での優先的な結合をもたらし得るであろう。
さらなる好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＭＧＴ付番システムに従って
（ｉ）配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含む。
別の好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔに従って
（ｉ）配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号９のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１１のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１２のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含む。
別の好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号８８のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８９のＣＤＲ－、および配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号９２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９３のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号９４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含む。
別の好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号９６のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９７のＣＤＲ－、および配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含む。
別の好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号１０４のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号１０６のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号１０８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０９のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１１０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含む。
より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号１３、９１、９９若しくは１０７に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号１４、９５、１０３若しくは１１１に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号１３に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号１４に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号９１に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号９５に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号９９に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号１０３に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
好ましい実施態様によれば、抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号１０７に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号１１１に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
ペプチドまたはポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、候補配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入して最大配列同一性パーセントを達成した後の、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である該配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴなどの公に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者の技能の範囲内にあるさまざまな方法で達成することができる。
特定の実施態様においては、本発明のヒト化抗体またはヒト抗体は、少なくとも３個、好ましくは６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）の組合せによって定義される、すなわち、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２１、３５、４９若しくは６３に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２２、３６、５０若しくは６４に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号２３、３７、５１若しくは６５に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
並びに任意に
（ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２４、３８、５２若しくは６６に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２５、３９、５３若しくは６７に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号２６、４０、５４若しくは６８に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
を含む抗体またはその抗原結合断片に関する。
本発明に係る特定のヒト化抗体またはヒト抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｂ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｃ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｄ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｅ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｆ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｇ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｈ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｊ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｋ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｌ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｍ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｎ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｏ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｐ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｑ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含み得る。
特に好ましいのは、上記で定義したヒト化抗体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｎ）および（ｑ）である。
特定の実施態様においては、本発明のヒト化抗体またはヒト抗体は、少なくとも３個、好ましくは６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）の組合せによって定義される、すなわち、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２１、３５、４９若しくは６３に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２２、３６、５０若しくは６４に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号２３、３７、５１若しくは６５に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
並びに任意に
（ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２４、３８、５２若しくは６６に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２５、３９、５３若しくは６７に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号２６、４０、５４若しくは６８に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
を含む抗体またはその抗原結合断片に関する。
本発明に係る特定のヒト化抗体またはヒト抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｂ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｃ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｄ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｅ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｆ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｇ）（ｉ）配列番号２１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号２３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｈ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｊ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｋ）（ｉ）配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３６のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３７のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｌ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｍ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｎ）（ｉ）配列番号４９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｏ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号２４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号２６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｐ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号４０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
または
（ｑ）（ｉ）配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号５２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含み得る。
特に好ましいのは、上記で定義したヒト化抗体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｎ）および（ｑ）である。
もちろん、本発明に係るヒト化抗体またはヒト抗体はまた、それらのＶＨ領域および／またはＶＬ領域によって定義し得る。
そのような抗体は、
（ｉ）配列番号２７、４１、５５若しくは６９から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号２８、４２、５６、７０若しくは７１から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
本発明に係る特定のヒト化抗体またはヒト抗体は、それらのＶＨ領域および／またはＶＬ領域によって定義し得、ここで、そのような抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号２７に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号２８に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｂ）（ｉ）配列番号４１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号４２に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｃ）（ｉ）配列番号５５に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号５６に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｄ）（ｉ）配列番号６９に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号７０若しくは７１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｅ）（ｉ）配列番号２７に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号４２に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｆ）（ｉ）配列番号２７に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号５６に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｇ）（ｉ）配列番号２７に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号７０若しくは７１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｈ）（ｉ）配列番号４１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号２８に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｊ）（ｉ）配列番号４１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号５６に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｋ）（ｉ）配列番号４１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号７０若しくは７１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｌ）（ｉ）配列番号５５に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号２８に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｍ）（ｉ）配列番号５５に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号４２に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｎ）（ｉ）配列番号５５に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号７０若しくは７１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｏ）（ｉ）配列番号６９に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号２８に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｐ）（ｉ）配列番号６９に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号４２に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
あるいは
（ｑ）（ｉ）配列番号６９に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号５６に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む。
特に好ましいのは、上記で定義したヒト化抗体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｎ）および（ｑ）である。
さらなる抗ネクチン－４抗体
さらなる実施態様においては、本発明のコンジュゲートの抗体は、抗体５Ａ１２．２またはその抗原結合断片である。
配列番号８０～８７は、ｍＡｂ ５Ａ１２．２を特徴付ける。
好ましい実施態様によれば、５Ａ１２．２抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号８０のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ－、および配列番号８２のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、
並びに任意に
（ｉｉ）配列番号８４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８５のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
を含む。
別の好ましい実施態様によれば、５Ａ１２．２抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号８３に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号８７に係るアミノ酸配列、または該配列の全長にわたって少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含み得る。
さらなる実施態様においては、本発明のコンジュゲートの抗体は、市販されている抗体－薬物コンジュゲートであるエンホルツマブベドチンの抗体である抗体ＨＡ２２、またはＨＡ２２由来の抗体である。
ＨＡ２２は、その内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２／０４７７２４号に記載されているヒトモノクローナル抗ネクチン－４抗体である。ＨＡ２２抗体またはＨＡ２２由来抗体は特に、上記の低下したエフェクター機能を有する定常領域、例えば、ＴＭ変異：Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４ＱおよびＬ２３５Ｆ、またはＬＡＬＡ変異：Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを任意に有する重鎖Ｇ１ｍ１７またはＧ１ｍ３ハプロタイプ配列、およびカッパ軽鎖配列を含むＩｇＧ１抗体を指す。特に、ＨＡ２２のＶＨ配列およびそのヒトＩｇＧ１定常領域を国際公開第２０１２／０４７７２４号の図３Ａに示し、ＨＡ２２のＶＬ配列およびそのヒトカッパ定常領域を国際公開第２０１２／０４７７２４号の図３Ｂに示す。
特定の実施態様においては、ＨＡ２２由来のモノクローナル抗ネクチン－４抗体またはその抗原結合断片は、そのＣＤＲ配列によって定義され、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号７２に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号７３に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号７４に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
並びに任意に
（ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
（ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号７５に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号７６に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号７７に係るアミノ酸配列、
または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
を含む。
配列番号７２～７７は、ＩＭＧＴ付番システムに従って親抗体ＨＡ２２の６個のＣＤＲ配列を定義する。
特定の実施態様においては、ＨＡ２２由来抗体は、そのＶＨ領域および／またはＶＬ領域によって定義し得、ここで、そのような抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号７８に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および任意に
（ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号７９に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む。
さらにより特定の実施態様においては、ＨＡ２２由来抗体は、
（ａ）（ｉ）配列番号７８に係るアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
および
（ｉｉ）配列番号７９に係るアミノ酸配列を含むＶＨ領域
を含む。
トポイソメラーゼＩ阻害剤
本発明の抗体コンジュゲートの薬物は、トポイソメラーゼＩ阻害剤である。トポイソメラーゼＩ阻害剤は、トポイソメラーゼＩおよびＤＮＡと三元複合体を形成することができ、それによって、ＤＮＡの再ライゲーションを防ぎ、細胞ゲノムにおいてＤＮＡ鎖切断を導入する化合物である。トポイソメラーゼＩ阻害剤は、例えば、カンプトテシンまたはその類似体であるインデノイソキノリンおよびインドロカルバゾールから選択し得る。
特定の実施態様においては、トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤は、カンプトテシンまたはその類似体、すなわちカンプトテシンの五環式基本構造、および任意にさらなる環の存在をもたらす修飾された置換基を含む化合物である。具体例は、デルクステカン、ルルトテカンまたはアチラテカンなどのそれらの誘導体を含む、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、ＳＮ－３８、ベロテカン、エキサテカンである。
特定の実施態様においては、トポイソメラーゼＩ阻害剤は、エキサテカンである。
エキサテカンは典型的には、そのＮＨ２基を介して抗体にコンジュゲートする。
コンジュゲーション
トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤、特にエキサテカンは、抗体またはその抗原結合断片に共有結合的にコンジュゲートする。
原則として、トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤、例えば、エキサテカンは、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片の任意の好適な位置、特に該抗体のネクチン－４への結合を廃止しない任意の位置にコンジュゲートさせ得る。例えば、トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤、例えば、エキサテカンは、抗体上の反応性アミノ酸残基、例えば、アミノ基、ヒドロキシ基若しくはチオール基を含む側鎖を有するアミノ酸残基、または抗体グリカン構造中の反応性基にコンジュゲートさせ得る。特定の実施態様においては、トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤、例えば、エキサテカンを、抗体上のアクセス可能なシステイン残基の側鎖中の反応性チオール基にコンジュゲートさせる。
特定の実施態様においては、抗体薬物コンジュゲートは、１よりも大きい薬物－抗体／抗体断片モル比（ＤＡＲ）を有する、すなわち、１個を超える薬物分子が抗体／抗体断片に結合している。典型的には、コンジュゲートは、約２：１から約１６：１、具体的には約４：１から約１０：１およびより具体的には約６：１から約８：１のＤＡＲを有する。ＤＡＲは、公知の方法に従って統計的分布から計算し得る。
特定の実施態様においては、トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤を、リンカーを介して抗体または抗原結合断片にコンジュゲートさせる。特定の実施態様においては、リンカーは、切断可能なリンカー、すなわち、生理学的条件下で、例えば、生理学的酵素によって切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーの具体例は、プロテアーゼによる切断を受け得るペプチドベースのリンカー、またはグリコシダーゼによる切断を受け得るグリコシドベースのリンカーである。
特定の実施態様においては、リンカーは、例えば、Ｃｏｎｉｌｈ ｅｔ ａｔ．“Ｅｘａｔｅｃａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｐｏｌｙｓａｒｃｏｓｉｎｅ ｄｒｕｇ－ｌｉｎｋｅｒ ｐｌａｔｆｏｒｍ”（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ １４（２０２１），２４７）によって記載されている、親水性ポリサルコシンリンカーである。さらに好ましいリンカーは、少なくとも１個のエチレングリコール単位、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個またはそれ以上のエチレングリコール単位を含むリンカー、例えば、抗体－薬物コンジュゲートＭＥＤＩ７２４７のリンカー、Ｔｒｏｄｅｌｖｙ（登録商標）からのｍｃｃ－トリアゾールスペーサー－ＰＥＧ７－ｘ－Ｌｙｓ－ＰＡＢＣグリコールリンカーを含む。さらに好ましいリンカーは、オリゴペプチド、特にジ－からデカ－ペプチド、例えば、Ｅｎｈｅｒｔｕ（登録商標）からのグリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシンなどのテトラペプチド配列を含む。さらに好ましいリンカーは、少なくとも少なくとも１個のエチレングリコール単位、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個またはそれ以上のエチレングリコール単位に付加されたアシル基、カルバモイル基および／またはスルファミド基などの高い極性のスペーサー、例えば、Ｈｙｄｒａｓｐａｃｅ（商標）と呼ばれるリンカー技術を含む。
特定の実施態様においては、リンカーは、例えば、１５個までのサルコシン単位、および少なくとも１個のエチレングリコール単位、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個またはそれ以上のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、ここで、該リンカーは、グリコシダーゼによる切断を受け、特にグルクロニダーゼによる切断を受ける。
特定の実施態様においては、リンカーは、例えば、約８～１２個のサルコシン単位、および少なくとも１個のエチレングリコール単位、例えば、１０個までのエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、ここで、該リンカーは、グリコシダーゼによる切断を受け、特にグルクロニダーゼによる切断を受ける。
特定の実施態様においては、リンカーは、１０個のサルコシン単位、および２個のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、ここで、該リンカーは、グルクロニダーゼによる切断を受ける。
本発明の抗体薬物コンジュゲートは、公知の方法によって調製し得る。
抗体またはその抗原結合断片は、抗体ＶＨ領域、若しくは抗体ＶＬ領域をコードする、または完全抗体若しくは抗体断片をコードする核酸分子、例えば、ＤＮＡ分子、あるいは好ましくは発現制御配列、特に異種発現制御配列と機能的に連結している前記核酸分子（複数可）を含むベクターまたはベクター系、すなわち複数のベクターを含む好適な宿主細胞中で産生させ得る。宿主細胞は、抗体または抗体断片を産生するための任意の公知の宿主細胞、例えば、大腸菌細胞などの原核細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ細胞若しくはハイブリドーマ細胞であり得る。
抗体またはその抗原結合断片をリンカー－薬物コンジュゲートと反応させて、抗体－薬物コンジュゲートを取得し得る。リンカー－薬物コンジュゲートは、例えば、それに結合している好適なリンカーを有する、薬物分子を含み、ここで、該リンカーは、抗体またはその抗原結合断片上の所望の結合位置と反応することができる反応性基を含む。システイン残基への結合については、リンカー－薬物コンジュゲートは、チオール反応性基、例えばマレイミド基を含む。
本発明のさらなる態様は、
（ｉ）例えば、約８～１２個のサルコシン単位、および少なくとも１個のエチレングリコール単位、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個またはそれ以上のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであって、該リンカーが、グリコシダーゼによる切断を受け、特にグルクロニダーゼによる切断を受け、および該リンカーが、抗体またはその抗原結合断片上のシステイン残基と反応することができるチオール反応性基、例えば、マレイミド基を含む、リンカー、
並びに
（ｉｉ）該リンカーに共有結合しているトポイソメラーゼＩ阻害剤、特にエキサテカン
を含むリンカー－薬物コンジュゲートに関する。
特定の実施態様においては、リンカー－薬物コンジュゲートは、
（ｉ）１０個のサルコシン単位、および２個のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであって、該リンカーが、グリコシダーゼによる切断を受け、特にグルクロニダーゼによる切断を受け、および該リンカーが、抗体またはその抗原結合断片上のシステイン残基と反応することができるマレイミド基を含む、リンカー、
並びに
（ｉｉ）該リンカーに共有結合しているエキサテカン
を含む。
リンカー－薬物コンジュゲートは、本明細書において記載する抗ネクチン－４抗体への結合について特に好適である。しかしながら、リンカー－薬物コンジュゲートはまた、任意の抗体またはその抗原結合断片、例えば、腫瘍抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片への結合についても好適であることに留意すべきである。
医薬組成物
本発明のさらなる態様は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤、特にエキサテカンである抗体－薬物コンジュゲートである活性剤、並びに薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物である。
抗体薬物コンジュゲートを製剤化するのに好適な担体および賦形剤の例は、生理食塩水および水性緩衝液を含み、当技術分野において周知である。典型的には、医薬組成物は、非経口投与用、例えば、皮下、筋肉内、若しくは静脈内への注射用または注入用に適合させる。さらなる実施態様においては、医薬組成物は、局所投与用、例えば、膀胱中への膀胱内注入用に適合させる。
障害の段階および重症度に依存して、医薬組成物は、治療的に有効な用量でそれを必要とする対象、特にヒト対象に１回または数回投与し得る。例えば、それは、例えば、少なくとも１週間、または少なくとも１ヶ月の好適な期間、１日１回若しくは数回、１日おき、週２回または週１回投与し得る。
医療用途
本発明のさらなる態様によれば、上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物は、ヒトおよび動物の薬剤を含む薬剤において、特にヒトの薬剤において使用する。
特定の実施態様においては、上記の抗体－薬物コンジュゲートまたは医薬組成物は、ネクチン－４関連障害の予防および／または治療のための、具体的にはネクチン－４陽性がんの予防および／または治療のための、より具体的にはネクチン－４過剰発現に関連するがんの予防および／または治療のための方法において使用する。
予防および／または治療するがんは、任意の種類のがんであり得、ここで、用語「がん」は、本明細書においては増殖性疾患を指すために使用する。本発明に従って予防および／または治療するがんは好ましくは、膀胱がん、尿路上皮がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肝臓がん、甲状腺がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん頭頸部がんおよび／または食道がんからなる群から選択される。
治療用途においては、活性剤は、それを必要とする対象、特にヒト対象に対して有効な量で投与する。用量は、剤の具体的なタイプ、例えば、抗体または抗体断片のタイプ、疾患のタイプ、および投与の様式、例えば、局所または全身に依存するであろう。
がんの予防および／または治療においては、抗体薬物コンジュゲートの治療用量は典型的には、約０．３ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇである。
抗体薬物コンジュゲートは、単独で投与し得るか、または化学療法剤、例えば、代謝拮抗剤、アルキル化剤、挿入剤、または抗有糸分裂剤）、特異的キナーゼの阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤またはホスホイノシチドキナーゼ阻害剤、免疫療法化合物、例えば、免疫チェックポイント阻害剤、ＣＡＲ－Ｔ細胞、治療用ワクチンまたは腫瘍溶解性ウイルスから選択し得るさらなる活性剤と一緒に投与し得る。
さらに、本発明は、以下の表、図面および実施例によってより詳細に説明する。
図
Ｃｈ－１５Ａ７．５およびＣｈ－５Ａ１２．２は、ヒトネクチン－４を認識する。フローサイトメトリーによる検出。 Ｃｈ－１５Ａ７抗体またはＣｈ－５Ａ１２．２抗体の用量範囲（０．３ｎｇ／ｍＬ～５μｇ／ｍＬ）を使用した、ネクチン－４のＮ末端Ｆｌａｇタグ付きエピトープをトランスフェクトしたＭＤＡ－ＭＢ２３１のフローサイトメトリー解析。親ＭＤＡ－ＭＢ２３１細胞を、コントロールとして含める。細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ抗体で染色した。正規化した平均蛍光強度を示す。インレイ：抗ネクチン－１、－２および－３ ｍＡｂ（５μｇ／ｍＬ）での親ＭＤＡ－ＭＢ２３１細胞の染色。平均蛍光強度を表す。 Ｃｈ－１５Ａ７．５は、ヒトネクチン－４のＩｇＶ様ドメインを認識する。ＥＬＩＳＡによる検出。 ９６ウェルプレートを、示されるとおり、５μｇ／ｍＬのネクチン－１細胞外ドメインＦｃ融合組換えタンパク質（Ｎｅｃ１－ＶＣＣ）、またはネクチン－４ ＩｇＶ様ドメインＦｃ融合組換えタンパク質（Ｎｅｃ４－Ｖ）、またはネクチン－４細胞外ドメインＦｃ融合組換えタンパク質（Ｎｅｃ４－ＶＣＣ）で、４℃で一晩コーティングした。Ｃｈ１５Ａ７．５は、ネクチン－４細胞外ドメイン、より正確にはネクチン－４ ＩｇＶ様ドメインを認識し、ネクチン－１細胞外ドメインは認識しない。 Ｃｈ－１５Ａ７．５エピトープの特性評価。競合アッセイを、ＥＬＩＳＡによって実施した。 ９６ウェルプレートを、５μｇ／ｍＬのネクチン－４細胞外ドメインＦｃ融合組換えタンパク質（Ｎｅｃ４－ＶＣＣ）で、４℃で一晩コーティングした。ペルオキシダーゼコンジュゲートＣｈ－１５Ａ７．５ ｍＡｂ（５μｇ／ｍＬ）の結合を、漸増濃度（２．７５ｎｇ／ｍＬ～６μｇ／ｍＬ）のリツキシマブ、Ｃｈ－１５Ａ７ ｍＡｂ、エンホルツマブ（ＨＡ２２）、Ｃｈ－Ｎ４１ ｍＡｂおよびＣｈ－１４Ａ５ ｍＡｂの存在下で測定した。ＨＡ２２、Ｃｈ－Ｎ４１およびＣＨ－１４Ａ５は、ネクチン－４のＩｇＶドメインを認識する。 ネクチン－４結合についてのＣｈ－１５Ａ７．５ ｍＡｂおよびＣｈ－５Ａ１２．２ ｍＡｂのネクチン－１との競合。競合を、フローサイトメトリーによって評価した。 ヒトネクチン－４ ｃＤＮＡをトランスフェクトした５０，０００個のＣＨＯ細胞を、９６ウェルプレートに播種した。細胞を、漸増濃度（８ｎｇ／ｍＬ～５μｇ／ｍＬ）のアイソタイプコントロール、Ｃｈ－１５Ａ７．５ ｍＡｂまたはＣｈ－５Ａ１２．２ ｍＡｂと４５分間インキュベートした。洗浄後、プレートを、２０μｇ／ｍＬのネクチン－１細胞外ドメインＦｃ融合組換えタンパク質（Ｎｅｃ１－ＶＣＣ）とインキュベートした。ネクチン－１結合が、フィコエリトリンに結合したヤギ抗ヒトＦｃ抗体とのインキュベート後に明らかになった。 カニクイザル、ラットおよびマウス由来のネクチン－４との交差反応性。フローサイトメトリーによる検出。 Ｃｈ－１５Ａ７（Ａ）、Ｃｈ－３Ａ１．４（Ｂ）、Ｃｈ－５Ａ１２．２（Ｃ）、Ｃｈ－９Ａ２．７（Ｄ）またはエンホルツマブ（ＨＡ２２、Ｂ）抗体の用量範囲（０．０５ｎｇ／ｍＬ～５μｇ／ｍＬ）を使用した、カニクイザル、ラットまたはマウスのネクチン－４をトランスフェクトしたＣＨＯ細胞のフローサイトメトリー解析。細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ抗体で染色した。正規化した平均蛍光強度を示す。表は、非線形曲線当てはめ（４パラメータ）を使用してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアによって決定した推定ＥＣ５０値を報告する。～記号は、不十分な曲線当てはめのため、報告した値があいまいであることを示す。 腫瘍細胞株および正常分化ヒトケラチノサイトが発現したネクチン－４への異なる結合。フローサイトメトリーによる検出。 エンホルツマブ（ＨＡ２２、四角）、Ｃｈ－１５Ａ７．５（丸）、Ｃｈ－３Ａ１．４（三角）およびＣｈ－９Ａ２．７（菱形）の用量範囲（１．２ｎｇ／ｍＬ～５μｇ／ｍＬ）を使用した、ＴＮＢＣ細胞株（ＳＵＭ１９０、黒色記号）および正常分化（０．１ｍＭ ＣａＣｌ２）ヒトケラチノサイト（ＮＨＥＫ、白抜き記号）のフローサイトメトリー解析。細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ抗体で染色した。正規化した平均蛍光強度を示す。非線形曲線当てはめ（４パラメータ）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアを用いて行った。水平バーは、ＳＵＭ１９０細胞上のＨＡ２２抗体で得られた最大染色強度の５０％に置いている。 腫瘍細胞株および正常分化ヒトケラチノサイトが発現したネクチン－４への異なる結合。フローサイトメトリーによる検出。 ５μｇ／ｍＬのＨＡ２２（エンホルツマブ）、Ｃｈ－５Ａ１２．２、Ｃｈ－１５Ａ７．５、およびＣｈ－８Ｆ０６を使用した、ＴＮＢＣ細胞株（ＳＵＭ１９０、Ａ）および正常分化（０．１ｍＭ ＣａＣｌ２）ヒトケラチノサイト（ＮＨＥＫ、Ｂ）のフローサイトメトリー解析。細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ抗体で染色した。正規化した平均蛍光強度を示す。 腫瘍細胞株およびヒトケラチノサイトが発現したネクチン－４への異なる結合。免疫組織化学による検出。 高発現レベルのネクチン－４腫瘍細胞株（ＳＵＭ１９０）、低発現レベルのネクチン－４腫瘍細胞株（ＳＵＭ１４９）、ヒトおよびカニクイザルの皮膚の凍結保存ＯＣＴ包埋ブロックを、１５Ａ７．５ ｍＡｂ（Ａ）および９Ａ２．７ ｍＡｂ（Ｂ）で染色するために加工した。各ｍＡｂについて報告されたクイックスコアを示す（Ａ、Ｂ）。Ｃ、ヒト皮膚上のクイックスコアＳＵＭ１９０の比。 腫瘍細胞株およびヒトケラチノサイトにおける異なる内部移行。蛍光による検出 エンホルツマブ（ＨＡ２２）、Ｃｈ－１５Ａ７．５およびアイソタイプコントロールｍＡｂを、４．５８と５．５５との間の色素抗体比に達するようにｐＨＡＢチオール反応性色素に結合させた。これらの抗体色素コンジュゲートのそれぞれの用量範囲（１．６ｎｇ／ｍＬ～５μｇ／ｍＬ）を、ＳＵＭ１９０ＰＴネクチン－４発現細胞株（Ａ）正常ヒト分化（０．１ｍＭ ＣａＣｌ２）ケラチノサイト（Ｂ）とデュープリケートでインキュベートした。細胞内蛍光を、２４時間後に蛍光マイクロプレートリーダー（ＣｌａｒｉｏＳｔａｒ）で記録した。蛍光強度を、色素抗体コンジュゲート濃度の関数の形で報告する。 腫瘍細胞および正常分化ヒトケラチノサイトに対する異なるインビトロ細胞毒性活性。ＭＴＴアッセイによって測定した細胞生存率。 エンホルツマブ（ＨＡ２２、菱形）、Ｃｈ－１５Ａ７．５（三角形）およびＣｈ－９Ａ２．７（四角形）のｍＡｂをα－アマニチンと結合させて、抗体薬物コンジュゲートを生成させ、用量範囲（７．７ｐｇ／ｍＬ～１５μｇ／ｍＬ）のその細胞毒性活性を、ＳＵＭ１９０ＰＴネクチン－４発現細胞株（Ａ、Ｄ）または正常ヒト分化（０．１ｍＭ ＣａＣｌ２）ケラチノサイト（Ｂ、Ｅ）に対して比較評価した。５日間のインキュベーション期間後の生存率（ＭＴＴアッセイ）を報告する。ＥＣ５０値は、非線形曲線当てはめ（４パラメータ）を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアによって決定した。各条件について、Ｃｈ－１５Ａ７．５ ＡＤＣ（Ｃ）またはＣｈ－９Ａ２．７ ＡＤＣ（Ｆ）のＥＣ５０のＨＡ２２－ＡＤＣのＥＣ５０に対する比を、計算し、報告した。示すデータは、２つの異なるネクチン－４発現腫瘍細胞株（ＳＵＭ１９０ＰＴおよびＭＤＡ－ＭＢ４６８）およびヒトケラチノサイトについての３人の独立したドナーを代表する。 ＳＵＭ１９０を移植したＮＳＧマウスのＣｈ－１５Ａ７．５－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカンＡＤＣでの治療は、長続きする腫瘍退縮期間を誘導する。 ＮＳＧマウス（ｎ＝５／群）に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に包埋したＳＵＭ１９０ＰＴ細胞を両側に同所的に異種移植した。３個の異なるＡＤＣを試験した：アイソタイプコントロールであるＩＣＴ－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカンおよびＣｈ－１５Ａ７．５－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン並びにエンホルツマブベドチンサロゲートであるＨＡ２２－ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ。マウスの治療（単回静脈内注射）を、腫瘍が約１５０ｍｍ３に達したときに開始した。Ｃｈ－１５Ａ７．５－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン（Ｃｈ－１５Ａ７．５－Ｅｘ）およびＣｈ－５Ａ１２．２－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン（Ｃｈ－５Ａ１２．２－Ｅｘ）は２用量（４または８ｍｇ／ｋｇ）で評価し、ＩＣＴ－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン（ＩＣＴ－Ｅｘ）は８ｍｇ／ｋｇで与え、エンホルツマブベドチン（ＥＶ）サロゲートは４ｍｇ／ｋｇで与えた。腫瘍サイズ（ｎ＝１０／群）を、その後１週間に２回ノギスでモニタリングし、サイズを、以下の式（Ｌ×ｌ×ｈ×Ｐｉ／６）を用いて報告した。 腫瘍細胞に対するヒト化バリアントの見かけの親和性。フローサイトメトリーによる検出。 ネクチン－４を発現するＴ４７Ｄヒト腫瘍細胞を、付番し、Ｃｈ－１５Ａ７．５または示されるヒト化バリアントの用量範囲（１６９ｐｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬ）とインキュベートした。ＨおよびＬと関連する数字は、導入された逆変異の数を指す。細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ抗体で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。平均蛍光強度を報告する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアは、非線形曲線当てはめ（４パラメータ）を使用した。 ＳＵＭ１９０を移植したＮＳＧマウスのＨＡ２２－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－ＥエキサテカンＡＤＣでの治療は、長続きする腫瘍退縮期間を誘導する。 ＮＳＧマウス（ｎ＝５／群）に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に包埋したＳＵＭ１９０ＰＴ細胞を両側に同所的に異種移植した。３個の異なるＡＤＣを試験した：アイソタイプコントロールであるＩＣＴ－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカンおよびＨＡ２２－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン並びにエンホルツマブベドチンサロゲートであるＨＡ２２－ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ。マウスの治療（単回静脈内注射）を、腫瘍が約１５０ｍｍ３に達したときに開始した。ＨＡ２２ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン（ＨＡ２２－Ｅｘ）は２用量（４または８ｍｇ／ｋｇ）で評価し、ＩＣＴ－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン（ＩＣＴ－Ｅｘ）は８ｍｇ／ｋｇで与え、エンホルツマブベドチン（ＥＶ）サロゲートは４ｍｇ／ｋｇで与えた。腫瘍サイズ（ｎ＝１０／群）を、その後１週間に２回ノギスでモニタリングし、サイズを、以下の式（Ｌ×ｌ×ｈ×Ｐｉ／６）を用いて報告した。 ＳＵＭ１９０を移植したＮＳＧマウスのＨＡ２２－ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－ＥエキサテカンおよびＨＡ２２－ＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸ８９５１ ＡＤＣでの治療は、長続きする腫瘍退縮期間を誘導する。 ＮＳＧマウス（ｎ＝５／群）に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に包埋したＳＵＭ１９０ＰＴ細胞を両側に同所的に異種移植した。５個の異なるＡＤＣを試験した：アイソタイプコントロールである、ＭＡ－ＰＳ－βＧｌｕ－エキサテカン（ＩＣＴ－ＥｘおよびＨＡ２２－Ｅｘ）またはＭＣ－ＧＧＦＧ－ＤＸ８９５１（ＩＣＴ－およびＨＡ２２－Ｄｘｄ）のいずれかと結合したＩＣＴ－およびＨＡ２２並びにエンホルツマブベドチンサロゲートであるＨＡ２２－ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ＥＶ）。マウスの治療（単回静脈内注射）を、腫瘍が約１５０ｍｍ３に達したときに開始した。ＨＡ２２－ＥｘおよびＨＡ２２－Ｄｘｄは２用量（４または８ｍｇ／ｋｇ）で評価し、ＩＣＴ－ＥＸおよびＩＣＴ－Ｄｘｄは８ｍｇ／ｋｇで与え、エンホルツマブベドチン（ＥＶ）サロゲートは４ｍｇ／ｋｇで与えた。腫瘍サイズ（ｎ＝１０／群）を、その後１週間に２回ノギスでモニタリングし、サイズを、以下の式（Ｌ×ｌ×ｈ×Ｐｉ／６）を用いて報告した。 腫瘍細胞株および正常分化ヒトケラチノサイトが発現したネクチン－４へのＣｈ－１５Ａ７．５およびそのヒト化バリアントの異なる結合。フローサイトメトリーによる検出。 Ｃｈ－５Ａ１２．２、Ｃｈ－１５Ａ７．５およびそのヒト化バリアント１５Ａ７．５－Ｈ１Ｌ２、－Ｈ１Ｌ３、－Ｈ２Ｌ２、－Ｈ２Ｌ３、－Ｈ３Ｌ０、－Ｈ３Ｌ２、－Ｈ３Ｌ３の用量範囲（８ｐＭ～３３ｎＭ）を使用した、ＴＮＢＣ細胞株（ＳＵＭ１９０、上部パネル）および正常分化（０．１ｍＭ ＣａＣｌ２）ヒトケラチノサイト（ＮＨＥＫ、下部パネル）のフローサイトメトリー解析。細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ抗体で染色した。正規化した平均蛍光強度を示す。非線形曲線当てはめ（４パラメータ）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアを用いて行った。Ｃｈ－５Ａ１２．２のＥＣ５０と比較した、Ｃｈ－１５Ａ７．５およびそのヒト化バリアントのケラチノサイトに対するはるかに低い見かけのＥＣ５０（下部パネル）に留意されたい。 親抗体クローン５Ａ１２．２の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＫ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲ配列およびＬ－ＣＤＲ配列には、下線を引いている。 ９Ａ２．７のヒト化バリアントの可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＫ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲ配列およびＬ－ＣＤＲ配列には、下線を引いている。 ３Ａ１．４のヒト化バリアントの可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＫ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲ配列およびＬ－ＣＤＲ配列には、下線を引いている。 ８Ｆ０６のヒト化バリアントの可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＫ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲ配列およびＬ－ＣＤＲ配列には、下線を引いている。 １５Ａ７．５のヒト化バリアントの可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲ配列およびＬ－ＣＤＲ配列は、灰色で影付けしている。 ヒト化１５Ａ７．５バリアントの親和性値。 親抗体クローン１５Ａ７．５の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＫ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲおよびＬ－ＣＤＲの配列は、灰色で影付けしている。 抗体ＨＡ２２の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽カッパ鎖（ＶＫ）のアミノ酸配列。ＩＭＴＧ命名法によるＨ－ＣＤＲおよびＬ－ＣＤＲの配列は、灰色で影付けしている。
材料および方法
細胞株：
ヒト乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ２３１（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）は、１０％ウシ胎児血清、５０ＩＵ／ｍＬペニシリン、５０μｇ／ｍＬストレプトマイシンおよび２ｍＭグルタミンを補充したＤＭＥＭ中で培養した。細胞に、ＰＶＲＬ４ ｃＤＮＡを含有する発現ベクターｐ３ＸＦＬＲ４．Ｃ１をトランスフェクトした。ヒトトリプルネガティブ乳がん細胞株ＳＵＭ１９０ＰＴ（ＢｉｏＩＶＴ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）は、５％ウシ胎児血清、１％非必須アミノ酸、１％Ｈｅｐｅｓ、１％インスリン、１μｇ／ｍＬヒドロコルチゾン、６．８ｎｇ／ｍＬトリヨードＬ－チロシン、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンおよび２ｍＭグルタミンを有するＨａｍ’ｓ Ｆ１２培地中で培養した。チャイニーズハムスター卵巣ＣＨＯ細胞株は、１０％ウシ胎児血清、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンおよび２ｍＭグルタミンを補充したＤＭＥＭ中で培養した。ヒト乳がんＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞株およびＴ４７Ｄ細胞株は、１０％ウシ胎児血清、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ中で培養した。
ＥＬＩＳＡ：
サンドイッチ酵素結合免疫吸着法を使用して、Ｃｈ－１５Ａ７．５抗体の特異性を制御し、異なるｍＡｂ間の競合アッセイを実施した。９６ウェルプレートを、１０ｎＭのネクチン－４－ＶＣＣ－Ｆｃ、ネクチン－１－ＶＣＣ－Ｆｃ（細胞外部分全体）またはネクチン－４－Ｖ－Ｆｃ（ＩｇＶドメインのみを含む）で、＋４℃で一晩コーティングした。洗浄およびＰＢＳ １％ＢＳＡでの飽和後、細胞を、１０ｎＭのペルオキシダーゼコンジュゲートＣｈ－１５Ａ７．５ ｍＡｂと２５℃で２時間インキュベートした。競合の場合においては、０．５ｎＭのペルオキシダーゼコンジュゲートＣｈ－１５Ａ７．５ ｍＡｂの結合を、可変濃度（０．０１８ｎＭ～４０ｎＭ）の「冷」ｍＡｂの存在下で測定した。１００μＬのペルオキシダーゼ基質を添加し（Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＡＢＳＴ、Ｐｉｅｒｃｅ）、ＯＤを４０５ｎｍで読み取った。
フローサイトメトリー：
（天然のまたはトランスフェクトされた）ネクチン－４を発現する細胞または細胞株（１０，０００～５０，０００）を、示された抗体の用量範囲とインキュベートした。洗浄後、細胞を次いで、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒト抗体（５μｇ／ｍＬ）Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で染色した。固定後、細胞を、フローサイトメトリー取得前に、生存率色素（ｅ７８０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。
免疫組織化学：
－８０℃で保存していた凍結サンプルを、ドライアイス上で維持し、引き続く切片の数を最大化することを可能にするであろうようにプラスチック製クライオモールド中に置き、Ｏｐｔｉｍａｌ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（ＯＣＴ）培地中に包埋した。ＯＣＴの凍結ブロックをＯＣＴとディスク上に載せ、凍結切片法を、ＮＸ７０クライオスタット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で、－２０℃で実施した。凍結切片（７μｍ）を、スーパーフロストプラススライド（ＶＷＲ）上に載せた。各一連の試験について必要とされる数のスライドだけを、準備し、使用まで－８０℃で保存した。残りのブロックは、さらなる使用まで－８０℃で保存した。切片を、スライド上に配置し、アセトン中－２０℃で１０分間固定した。Ｒｏｃｈｅ ＤＡＢキットのプロトコルの一部として、内因性ペルオキシダーゼを、スライドを過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）中に浸すことによって阻害した。各ｍＡｂのいくつかの希釈物を、ノイズ対シグナル比を最適化するために試験し、０．５μｇ／ｍＬのマウス１５Ａ７．５ ｍＡｂおよび１０μｇ／ｍＬのマウス９Ａ２．７ｍＡｂを、最適として決定した。二次抗体のマウス組織への非特異的結合を軽減するために、ウサギ抗マウスＩｇＧ（４μｇ／ｍＬ、Ａｂｃａｍ）を、一次Ａｂインキュベーション後に添加した。ｏｍｎｉ－ｍａｐ抗ウサギＨＲＰ（Ｒｏｃｈｅ）を次いで使用して、製造業者（Ｖｅｎｔａｎａ ａｕｔｏｍａｔ）の指示書に従ってＤＡＢ染色を実施した。染色強度および染色された細胞の比率の両方の評価を、実施した。訓練を受けた２人の技術者が、同じ顕微鏡視野を独立して順次観察した。染色された細胞の比率および染色強度の両方を、各視野について評価した。各染色について、１０個の視野を、組織の最善の可視化を可能にする倍率で無作為に選択した。採点手順は以下のとおりであった：（ｉ）陽性に染色された細胞の比率を推定し、０～４のスコアを各視野について割り付けた（０＝０～５％；１＝５～２５％；２＝２５～５０％；３＝５０～７５％；および４＝７５～１００％）；並びに（ｉｉ）染色強度は、陰性の、弱い、中間の、および強い褐色染色の存在に対応して、それぞれ０、１、２、または３として採点した。各視野および各観察者についての最終スコアは、２個の値の掛け算であった（０＝組織中に何ら染色なし；１２＝組織が、強く染色された細胞を含有する）。各組織型について、各スライドセットの５枚のスライドのそれぞれに対して、１０個の独立した観察野を、染色強度および標識された細胞の比率の両方について並行して採点した。技術者は同時に、所与の視野（仮想スライド、コンピューター画面上）を観察し、他の観察者の結果がわからないように独立して採点した。各スライドについて、各技術者の１０個の得点を平均して、各観察者についての最終スコアを設定した。２人の観察者の最終スコアを平均し、所与のスライドの組織スコアを得た。ヒトの皮膚については、再現性の最初のセットの結果のみを提示する。
内部移行アッセイ
１万個のＳＵＭ１９０ＰＴまたはヒト分化ケラチノサイト（０．１ｍＭ ＣａＣｌ２）を、９６ウェルプレート中に播種し、引き続きｐＨＡＢチオール反応性色素をコンジュゲートした抗ネクチン－４ｍＡｂおよびアイソタイプコントロールの用量範囲（１．６ｎｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬ）と３７℃で２４時間インキュベートした。内部移行およびエンドリソソーム処理の後、酸性環境は、色素に蛍光を発せさせる。蛍光強度を、プレートリーダー上で５３２ｎｍの励起波長および５６０ｎｍの発光波長でモニタリングした。
インビトロ細胞毒性アッセイ
ＡＤＣのインビトロ細胞毒性活性を分析するために、細胞生存率を、製造業者（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ、ＣＡ，ＵＳＡ）が推奨するＡｌａｍａｒＢｌｕｅ染色プロトコルを使用して評価した。該試験は、蛍光酸化還元指示薬を組み込む。蛍光強度は、細胞の代謝低下に比例する。実験は、９６ウェルプレート中で０日目に３０００細胞／ウェル（ＳＵＭ１９０ＰＴまたは分化ＮＨＥＫ）をＡＤＣの連続希釈液とトリプリケートでインキュベートすることによって行った。１／１０体積のａｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液を３７℃で２時間インキュベートし、５９５ｎｍ（ＦＬＵＯｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａ、ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取ることによって、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅを、５日目に測定した。
マウス実験
ＮＯＤ／ＳＣＩＤ（非肥満糖尿病／重症複合免疫不全）／ｇｃヌルマウス（ＮＳＧ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｍａｒｇａｔｅ，ＵＫ）から入手した。６～７週齢の雌（ｎ＝５／群）に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に包埋したＳＵＭ１９０ＰＴ（０．５×１０６個）細胞を両側に同所的に異種移植した。ＡＤＣでの治療を、それぞれの実験において言及するとおり実施した。腫瘍サイズ（ｎ＝１０／群）を、その後１週間に２回ノギスでモニタリングし、サイズを、以下の式（Ｌ×ｌ×ｈ×Ｐｉ／６）を用いて報告した。
ハイブリドーマのシーケンシング
ハイブリドーマのシーケンシングのために、ＲＮＡをまず、ハイブリドーマ細胞ペレットから抽出した。ｃＤＮＡを逆転写により生成させ、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを、Ｐｒｉｍｅ ＳＴＡＲＭａｘ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｔａｋａｒａ）を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応により増幅した。ＰＣＲ産物を引き続き、専用の重鎖および軽鎖発現ベクター中にクローニングし、次いでシーケンシングした。
キメラ抗体の生成、産生、精製、および制御
軽鎖発現ベクターは、Ｖカッパ鎖をコードしている。使用するペイロードに依存して、Ｄ２６５Ｃ（ＴｈｉｏｍＡｂ）Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの変異を有するＦｃ断片をコードするもの、Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４ＱおよびＬ２３５Ｆの変異を有するＦｃ断片をコードするものの２つの異なる重鎖発現ベクターを使用した。両方のＦｃ断片とも、「Ｆｃサイレント」である。抗ネクチン－４エンホルツマブ（ＨＡ２２）の配列もまた、同じベクター中にクローニングした。
軽鎖ベクターおよび重鎖ベクターを、１．２／１の比で播種したＨＥＫ２９３中にトランスフェクトした。６日間の産生後、培養上清を清澄化し、ｍＡｂを、製造業者の指示書に従ってＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＰｒｉｓｍＡ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。０．５Ｍグリシン、３Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ８．９を結合バッファとして使用し、０．１Ｍクエン酸ｐＨ３を溶出について使用した。即座の中和を、１０％（Ｖ／Ｖ）１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ９を用いて行った。モノクローナルキメラ抗体を次いで、ＰＢＳ １×ｐＨ７．４（Ｍｉｎｉ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｄｅｖｉｃｅｓ、２ｍＬ－１０ｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に対して透析し、その後、０．２２μｍフィルタ（Ｍｉｌｅｌｅｘ ＧＶ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ＰＶＤＦ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上で濾過した。濃度は、各モノクローナル抗体の比吸光係数（Ｅ１％ ２８０ｎｍ）を考慮して、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ２０００ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて決定した。純度は、１０％イソプロパノールを補充した０．２Ｍ ＮａＰＯ４、０．３Ｍ ＮａＣｌ ｐＨ６．９中で平衡化したＰｒｏｔｅｉｎ－ＢＥＨ ２００Ａカラムを使用する、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ－ＨＣｌａｓｓ Ｂｉｏ（Ｗａｔｅｒｓ）を使用して、ＵＰＬＣ－ＳＥＣによって決定した。抗体の質量は、逆相カラム（ＰＬＲＰ－Ｓ ４０００Ａ、Ａｇｉｌｅｎｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、Ｘｅｖｏ Ｇ２－Ｓ Ｑ－Ｔｏｆ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ）において決定した。全てのサンプルを、製造業者の指示書に従って、３７℃でのＰＮＧａｓｅ Ｆグリコシダーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いた脱グリコシル化後、分析した。最終物質の断片化および／または凝集は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。エンドトキシン負荷は、ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ＬＡＬ－ｋｉｎｅｔｉｃ ａｓｓａｙ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｅｎｄｏｓａｆｅ）を使用して決定した。
抗体コンジュゲーション
チオール反応性色素ｐＨＡＢ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、製造業者の指示書に従ってマレイミド化学を使用して、選択した抗ネクチン－４ ＴｈｉｏｍＡｂ（Ｄ２６５Ｃ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）抗体のシステインにコンジュゲートさせた。簡単に言うと、抗体を、０．１Ｍリン酸バッファｐＨ７．０に対して透析した後、穏やかな攪拌下室温で１時間２．５ｍＭで還元した。引き続き、ＤＴＴを、Ｚｅｂａスピン脱塩カラム（７ＭＷＣＯ）上で２回洗浄／遠心分離することによって除去した。１．２ＬのｐＨｄｙｅ試薬（１０μｇ／ｍＬ ＤＭＳＯ）を１００μｇの抗体に添加し、遮光して室温で１時間インキュベートした。Ｚｅｂａ脱塩カラムでの過剰な色素の除去後、色素抗体比を、異なる抗体間の同等のコンジュゲーションを確認するために計算した。
システイン反応性リンカー－エキサテカン化合物マレイミド－Ｇｌｙ－ＰＳＡＲ１０－グルクロニド－エキサテカン（ＭａｂＬｉｎｋ）を、選択した抗ネクチン－４ｍＡｂ（Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４ＱおよびＬ２３５Ｆ）のシステイン残基にコンジュゲートさせた。簡単に言うと、ＰＢＳ １×、１ｍＭ ＥＤＴＡ中のｍＡｂを３７℃で２時間１４モル当量のＴＣＥＰで還元し、その後、バッファを１００ｍＭ ＫＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ７．４に交換した（Ａｍｉｃｏｎ ｕｌｔｒａ ３０ｋＤａ）。１２モル当量のシステイン反応性リンカー－エキサテカン化合物を使用して、室温で３５分間、反応性システインとコンジュゲートさせた。バッファを次いで、１００ｍＭ ＫＰＯ４ ｐＨ８．０に交換した後、酸素の非存在下３７℃で２４時間インキュベートして、マレイミドを自己加水分解させた。最後のバッファ交換を、２０ｍＭ Ｈｉｓ ｐＨ６．０中で実施した後、０．２２μＭフィルタで濾過した。ＬＣ－ＭＳ分析による薬物－抗体比（ＤＡＲ）は、コンジュゲートしたｍＡｂあたり７．７７個と７．８２個との間の毒素であった。ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって決定したところ、８％未満の物質が凝集していた。

Claims (22)

  1. モノクローナル抗体またはその抗原結合断片および薬物を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤である、抗体－薬物コンジュゲート。
  2. キメラ抗体、多重特異性抗体、特に二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはそれらの抗原結合断片から選択される抗体を含む、請求項１の抗体－薬物コンジュゲート。
  3. クラスＩｇＧ、例えば、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４、クラスＩｇＭ、クラスＩｇＡの抗体から選択される抗体、またはその抗原結合断片、または一本鎖抗体、または抗体Ｆｖ断片を含む請求項１または２の抗体－薬物コンジュゲートであって、該抗体が任意に、低下したエフェクター機能を有する、例えば、Ｆｃ受容体への低下した結合を有する、重鎖定常ドメインを有する、抗体－薬物コンジュゲート。
  4. ヒト分化ケラチノサイトが発現するネクチン－４と比較して、腫瘍が発現するネクチン－４に対してより高い親和性で特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片を含む、請求項１～３のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  5. （ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
    （ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１若しくは７、８８、９６若しくは１０４に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２若しくは８、８９、９７若しくは１０５に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３若しくは９、９０、９８若しくは１０６に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
    並びに任意に
    （ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
    （ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４若しくは１０、９２、１００若しくは１０８に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５若しくは１１、９３、１０１若しくは１０９に係るアミノ酸配列、または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６若しくは１２、９４、１０２若しくは１１０に係るアミノ酸配列、または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
    を含む、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１～４のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  6. （ａ）（ｉ）配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、並びに任意に
    （ｉｉ）配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
    または
    （ｂ）（ｉ）配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号９のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、並びに任意に
    （ｉｉ）配列番号１０のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１１のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号１２のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
    または
    （ｃ）（ｉ）配列番号８８のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、並びに任意に
    （ｉｉ）配列番号９２のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９３のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号９４のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
    または
    （ｄ）（ｉ）配列番号９６のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９７のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、並びに任意に
    （ｉｉ）配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域、
    または
    （ｅ）（ｉ）配列番号１０４のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０５のＣＤＲ－Ｈ２、および配列番号１０６のＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、並びに任意に
    （ｉｉ）配列番号１０８のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０９のＣＤＲ－Ｌ２、および配列番号１１０のＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域
    を含む、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１～５のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  7. （ａ）配列番号１３、９１、９９若しくは１０７に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
    および任意に
    （ｂ）ＶＬ領域、特に配列番号１４、９５、１０３若しくは１１１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
    を含む、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１～６のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  8. （ａ）（ｉ）配列番号１３に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
    および任意に
    （ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号１４に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    あるいは
    （ｂ）（ｉ）配列番号９１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
    および任意に
    （ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号９５に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    あるいは
    （ｃ）（ｉ）配列番号９９に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
    および任意に
    （ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号１０３に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、
    あるいは
    （ｄ）（ｉ）配列番号１０７に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、
    および任意に
    （ｉｉ）ＶＬ領域、特に配列番号１１１に係るアミノ酸配列、または少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％のその同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
    を含む、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１～７のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  9. （ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
    （ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号２１、３５、４９若しくは６３に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２２、３６、５０若しくは６４に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号２３、３７、５１若しくは６５に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
    並びに任意に
    （ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
    （ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号２４、３８、５２若しくは６６に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号２５、３９、５３若しくは６７に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号２６、４０、５４若しくは６８に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
    を含む、抗体またはそれに由来する抗原結合断片を含む、先行する請求項のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  10. （ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３を含む可変重鎖（ＶＨ）領域であって、
    （ｉ）該ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号７２若しくは８０に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号７３若しくは８１に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号７４若しくは８２に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、
    並びに任意に
    （ｂ）可変軽鎖（ＶＬ）領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域であって、
    （ｉ）該ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号７５若しくは８４に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号７６若しくは８５に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含み、
    （ｉｉｉ）該ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号７７若しくは８６に係るアミノ酸配列、
    または置換若しくは挿入、特に少なくとも１個のアミノ酸、例えば、１個若しくは２個のアミノ酸の、保存的置換および／若しくはヒスチジン挿入を含むアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域
    を含む、抗体またはそれに由来する抗原結合断片を含む、請求項１～３のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  11. トポイソメラーゼＩ阻害剤が、カンプトテシンまたはその類似体であり、該トポイソメラーゼＩ阻害剤が、特にエキサテカンまたはデルクステカンである、請求項１～１０のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  12. 約２：１から約１６：１、具体的には約４：１から約１０：１およびより具体的には約６：１から約８：１の薬物－抗体／抗体断片モル比（ＤＡＲ）を有する、請求項１～１１のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  13. 薬物が、抗体上の反応性アミノ酸残基、例えば、アミノ基、ヒドロキシ基若しくはチオール基を含む側鎖を有するアミノ酸残基、または抗体グリカン構造中の反応性基とコンジュゲートしており、該薬物が特に、該抗体またはその抗原結合断片上のシステイン残基の側鎖中の反応性チオール基とコンジュゲートしている、請求項１～１２のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  14. 薬物が、リンカーを介して抗体またはその抗原結合断片にコンジュゲートしており、特に、該リンカーが、特に切断可能なリンカーである、および／または該リンカーが、特に親水性ポリサルコシンリンカー、少なくとも１個のエチレングリコール単位を含む親水性リンカー、高極性スペーサーを含むリンカー、またはオリゴペプチドリンカーである、請求項１～１３のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  15. リンカーが、親水性ポリサルコシンリンカーおよび少なくとも１個のエチレングリコール単位であり、ここで、該リンカーが、グリコシダーゼによる切断を受け、特にグルクロニダーゼによる切断を受ける、請求項１４の抗体－薬物コンジュゲート。
  16. リンカーが、例えば、約８～１２個のサルコシン単位、および少なくとも１個のエチレングリコール単位、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個またはそれ以上のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、ここで、該リンカーが、グリコシダーゼによる切断を受け、特にグルクロニダーゼによる切断を受ける、請求項１４または１５の抗体－薬物コンジュゲート。
  17. リンカーが、１０個のサルコシン単位および２個のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーである、請求項１４～１６のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート、
  18. リンカーが、グルクロニダーゼによる切断を受ける、請求項１４～１７のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  19. リンカーが、チオール反応性基、特にマレイミド基を介して抗体またはその抗原結合断片上のシステイン残基に結合している、請求項１４～１８のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲート。
  20. モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、該モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がネクチン－４に結合し、該薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤である、抗体－薬物コンジュゲートである活性剤、並びに薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物。
  21. 薬剤における、特にヒトの薬剤における、請求項１～１９のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲートまたは請求項１９の医薬組成物の使用。
  22. ネクチン－４関連障害の予防および／または治療のための、特にネクチン－４陽性がんの予防および／または治療のための、特に膀胱がん、尿路上皮がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肝臓がん、甲状腺がん、乳がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん、頭頸部がんおよび／または食道がんから選択されるがんの予防および／または治療のための方法における、請求項１～１９のいずれか一項の抗体－薬物コンジュゲートまたは請求項１９の医薬組成物の使用。
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