JP2024507958A - 外因的に導入されたサイトカインを発現する操作された免疫エフェクター細胞 - Google Patents

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Abstract

本出願は、免疫エフェクター細胞を提供し、該免疫エフェクター細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９とＣＣＬ－２１）；及び機能的外因性受容体（例えば、キメラ抗原受容体）であって、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を発現する。

Description

１． 関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月２６日に提出された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０７８２２７の優先権を主張し、その内容は、全体として参照により本明細書に援用される。
２． 配列表
本出願は、テキスト形式として本出願と共に提出された、「１４６５１－０３９－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ」」という名称の、２０２２年２月１８日に作成された１４５，３９５バイトのサイズの配列表を参照により援用する。
３． 分野
本開示は、機能的外因性受容体（例えば、キメラ抗原受容体）を含むポリペプチド、操作された免疫エフェクター細胞、及びその使用方法に関する。本開示は、治療的使用のための細胞の活性化と増大にさらに関し、特にキメラ抗原受容体に基づくＴ細胞免疫療法に関する。
４． 背景
操作された免疫エフェクター細胞の養子移入は、新しい革新的治療戦略を代表する。例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で操作されたＴ細胞は、有効な臨床応答を生じるように誘導し、従来の治療と比較して良好な予後を有することが証明された。しかしながら、インビボでの生存効率が低く、内因性免疫細胞の活性化が不十分であり、免疫抑制微小環境、Ｔ細胞の枯渇、及び疾患組織への浸潤が困難であることは、ＣＡＲ－Ｔ細胞がいくつかの疾患にとって難題であることの一般的な原因である。そのため、疾患又は障害を治療するために、改善されたコンストラクト又は操作された免疫エフェクター細胞、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、当分野において依然として必要とされている。
５． 概要
一態様において、本明細書は、免疫エフェクター細胞を提供し、該免疫エフェクター細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９とＣＣＬ－２１）；及び機能的外因性受容体であって、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を発現する。
いくつかの実施形態において、本明細書は、免疫エフェクター細胞を提供し、該免疫エフェクター細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入されたＣＣＬ－１９；及び機能的外因性受容体であって、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を発現する。
いくつかの実施形態において、本明細書は、免疫エフェクター細胞を提供し、該免疫エフェクター細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入されたＣＣＬ－２１；及び機能的外因性受容体であって、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を発現する。
いくつかの実施形態において、ｐ４０は、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である。いくつかの実施形態において、ｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、分泌されたポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、膜結合性ポリペプチド（例えば、ＭＢ１２）である。
いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ヒトＣＣＬ－１９又はその断片もしくは変異体である。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ヒトＣＣＬ－２１又はその断片もしくは変異体である。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）、又はＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体である。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体はＣＡＲである。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α又はＣＤ２８からのものである。
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、該一次細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζからのものである。
いくつかの実施形態において、該細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、該共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態において、該共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞質ドメイン及び／又はＣＤ１３７の細胞質ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、該ヒンジドメインはＣＤ８αからのものである。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、該シグナルペプチドはＣＤ８αからのものである。
いくつかの実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。
別の態様において、本明細書は、ポリペプチドを提供し、該ポリペプチドは、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９とＣＣＬ－２１）；及び機能的外因性受容体であって、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ポリペプチドを提供し、該ポリペプチドは、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入されたＣＣＬ－１９；及び機能的外因性受容体であって、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を含む。
他の実施形態において、本明細書は、ポリペプチドを提供し、該ポリペプチドは、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット；外因的に導入されたＣＣＬ－２１；及び機能的外因性受容体であって、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該機能的外因性受容体を含む。
いくつかの実施形態において、ｐ４０は、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である。いくつかの実施形態において、ｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、分泌されたポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、膜結合性ポリペプチド（例えば、ＭＢ１２）である。
いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ヒトＣＣＬ－１９又はその断片もしくは変異体である。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ヒトＣＣＬ－２１又はその断片もしくは変異体である。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）、又はＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体である。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体はＣＡＲである。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α又はＣＤ２８からのものである。
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、該一次細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζからのものである。
いくつかの実施形態において、該細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、該共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態において、該共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞質ドメイン及び／又はＣＤ１３７の細胞質ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、該ヒンジドメインはＣＤ８αからのものである。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、該シグナルペプチドはＣＤ８αからのものである。
いくつかの実施形態において、ｐ４０、ＣＣＬ－１９、及び機能的外因性受容体は、ペプチドリンカーを介して互いに連結される。いくつかの実施形態において、ｐ４０、ＣＣＬ－２１、及び機能的外因性受容体は、ペプチドリンカーを介して互いに連結される。いくつかの実施形態において、該ペプチドリンカーは、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びそれらの変異体からなる群から任意に選択される２Ａ自己切断ペプチドである。いくつかの特定の実施形態において、該２Ａ自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＰ２Ａ断片である。いくつかの特定の実施形態において、該２Ａ自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ断片である。
いくつかの実施形態において、ｐ４０とＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含む１つのドメイン内に存在する。他の実施形態において、ｐ４０とＣＣＬ－１９は、１つのドメイン内に存在し、該ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ｐ４０とＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含む１つのドメイン内に存在する。他の実施形態において、ｐ４０とＣＣＬ－２１は、１つのドメイン内に存在し、該ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
さらに別の態様において、本明細書は、単離された核酸を提供し、該単離された核酸は、本明細書によるポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
さらに別の態様において、本明細書は、単離された核酸を提供し、該単離された核酸は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、をコードする第１の領域；外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９とＣＣＬ－２１）、をコードする第２の領域；及び機能的外因性受容体をコードする第３の領域であって、該機能的外因性受容体が、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、該第３の領域を含む。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ７のリガンドはＣＣＬ－１９である。他の実施形態において、ＣＣＲ７のリガンドはＣＣＬ－２１である。
さらに別の態様において、本明細書は、本明細書による単離された核酸を含むベクターを提供する。
さらに別の態様において、本明細書は、免疫エフェクター細胞を作製する方法を提供し、該方法は、免疫細胞に、（ｉ）本明細書による核酸もしくはベクター、又は（ｉｉ）ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、ＣＣＬ－１９、及び機能的外因性受容体のうちの一つもしくは二つをそれぞれがコードする二つもしくはそれ以上の核酸を含む組成物、もしくは、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、ＣＣＬ－２１、及び機能的外因性受容体のうちの一つもしくは二つをそれぞれがコードする二つもしくはそれ以上の核酸を含む組成物を導入することを含む。
別の態様において、本明細書は、本明細書による方法によって産生された免疫エフェクター細胞を提供する。
さらに別の態様において、本明細書は、医薬組成物を提供し、該医薬組成物は、本明細書による免疫エフェクター細胞、ポリペプチド、核酸、又はベクターと、薬学的に許容されるキャリアとを含む。
さらに別の態様において、本明細書は、対象の疾患又は障害を治療する方法を提供し、該方法は、対象に有効量の本明細書による医薬組成物を投与することを含む。
６． 図面の簡単な説明
Ｈ９３ ＣＡＲ、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ及びＨ９３Ｐ ＣＡＲの構造を示す。ＳＰはシグナルペプチドを指す。ＴＭは膜貫通ドメインを指す。ＴＡＡ結合タンパク質は、腫瘍関連抗原の抗原結合ドメイン又は結合タンパク質（即ち抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ）を指す。 ヒト化抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ ＣＡＲを発現するＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の陽性率を示す。ＵｎＴは、ＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞を指す。 図３Ａ～３Ｂは、正常な条件（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２）で培養したＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＬ－２３（図３Ａ）及びＣＣＬ－１９（図３Ｂ）タンパク質の産生を示す。 図３Ａの説明を参照のこと。 図４Ａ～４Ｂは、再チャレンジアッセイにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大を示す。細胞を２日毎に１：１のＥ／Ｔ比のＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞で一晩刺激した。各ラウンドの終了時、Ｔ細胞の増大倍率（図４Ａ）及び生存率（図４Ｂ）を記録した。 図４Ａの説明を参照のこと。 図５Ａ～５Ｃは、再チャレンジアッセイにおける種々の刺激ラウンドによる処理後の１：１のＥ／Ｔ比でのＧＰＣ３陽性細胞株に対するＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性（図５Ａ）、ＴＮＦ－α放出レベル（図５Ｂ）及びＩＦＮ－γ放出レベル（図５Ｃ）を示す。 図５Ａの説明を参照のこと。 図５Ａの説明を参照のこと。 再チャレンジアッセイにおける種々の刺激ラウンドによる処理後のＣＡＲ－Ｔ細胞の陽性率を示す。 図７Ａ～７Ｄは、再チャレンジアッセイにおける刺激ラウンドから２４時間後のＣＡＲ－Ｔ細胞のＰＤ－１（図７Ａ及び図７Ｂ）及びＬＡＧ３（図７Ｃ及び図７Ｄ）の発現を示す。 図７Ａの説明を参照のこと。 図７Ａの説明を参照のこと。 図７Ａの説明を参照のこと。 図８Ａ～８Ｂは、９６ウェルｔｒａｎｓｗｅｌｌチャンバによって実施したＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞遊走アッセイを示す。種々のＣＡＲ－Ｔ細胞をＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と１：１のＥ／Ｆ比で３０時間共培養し、細胞培養上清を回収して下側チャンバに加えた。４、６、８時間後、上側チャンバから遊走した下側チャンバのＴ細胞数（図８Ａ）及び共培養上清中のＣＣＬ－１９の濃度（図８Ｂ）を定量化した。 図８Ａの説明を参照のこと。 図９Ａ～９Ｄは、ＮＣＧマウス異種移植モデルにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効果を示す。ＮＣＧマウスにＨｕｈ７細胞を皮下接種し、０．２ Ｍ投与量及び０．６ Ｍ投与量（ｉ．ｖ．）（各群ｎ＝４匹のマウス）のＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した。腫瘍の体積（図９Ａ及び図９Ｂ）及びＮＣＧマウス末梢血のゲノムＤＮＡ中のＣＡＲコピー数（図９Ｃ及び図９Ｄ）を評価した。 図９Ａの説明を参照のこと。 図９Ａの説明を参照のこと。 図９Ａの説明を参照のこと。 図１０Ａ～１０Ｂは、ＮＣＧマウス異種移植モデルにおける０．２ Ｍ（図１０Ａ）及び０．６ Ｍ（図１０Ｂ）投与量のＣＡＲ－Ｔ細胞で処置したマウス（各群ｎ＝４匹のマウス）の体重変化を示す。 図１０Ａの説明を参照のこと。 図１１Ａ～１１Ｄは、０．２ Ｍ又は０．６ Ｍ投与量（各群ｎ＝３匹のマウス）のＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した後のＮＣＧマウス末梢血におけるＩＬ－２３タンパク質（図１１Ａ及び図１１Ｂ）及びＩＦＮ－γタンパク質（図１１Ｃ及び図１１Ｄ）のレベルを示す。 図１１Ａの説明を参照のこと。 図１１Ａの説明を参照のこと。 図１１Ａの説明を参照のこと。 ＮＣＧマウス異種移植モデルにおける動物実験のエンドポイント（ｎ＝３）時の０．２ Ｍ ＵｎＴ、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞又はＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置したマウスの腫瘍組織中のＴ細胞浸潤を示す。腫瘍組織をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋して免疫組織化学（ＩＨＣ）に使用することにより、３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）で染色されるＴ細胞浸潤を検出した。画像は、３Ｄ ＨＩＳＴＥＣＨ（ＤＲＮＪＩＥＲ）によって入手した。右欄は、黒色の矩形の拡大領域を示している。 ＮＣＧマウス異種移植モデルにおいて０．２ Ｍ ＵｎＴ、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞又はＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した後の腫瘍組織におけるマウスマクロファージ及びマウス樹状細胞の動員を示す。動物実験のエンドポイント時点で、腫瘍組織をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、免疫組織化学（ＩＨＣ）に使用した。ＣＤ６８を有するマクロファージ（左欄）及びＣＤ１１ｃを有する樹状細胞（右欄）を３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）によって染色した。画像は、３Ｄ ＨＩＳＴＥＣＨ（ＤＲＮＪＩＥＲ）によって入手した。 ヒト化抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ ＣＡＲを発現するＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞の陽性率を示す。 図１５Ａ～１５Ｂは、再チャレンジアッセイの結果を示す。各ラウンドの終了時、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増大倍率（図１５Ａ）を記録した。図１５Ｂは、再チャレンジアッセイにおける種々の刺激ラウンドによる処理後の全Ｔ細胞と標的細胞との比が１：２である場合でのＧＰＣ３陽性細胞株に対するＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性を示す。 図１５Ａの説明を参照のこと。 ９６ウェルｔｒａｎｓｗｅｌｌチャンバによって実施したＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞遊走アッセイを示す。種々のＣＡＲ－Ｔ細胞をＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と１：１のＥ／Ｔ比で３０時間共培養し、細胞培養上清を回収して下側チャンバに加えた。２、４及び６時間後、上側チャンバから遊走した下側チャンバのＴ細胞数を定量化した。 図１７Ａ～１７Ｂは、ＮＣＧマウス異種移植モデルにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効果を示す。ＮＣＧマウスにＧＰＣ３＋ Ｈｅｐ３Ｂ細胞を皮下接種し、二つの投与量のＣＡＲ－Ｔ細胞を注入し、０．３ Ｍ ＣＡＲ＋ Ｔ細胞／マウス及び０．８Ｍ ＣＡＲ＋ Ｔ細胞／マウス（ｉ．ｖ．）（各群ｎ＝４匹のマウス）。 図１７Ａの説明を参照のこと。 図１８Ａ～１８Ｃは、ＮＣＧマウス異種移植モデルにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効果を示す。ＮＣＧマウスにＨｅｐ３Ｂ細胞を皮下接種し、０．３ Ｍ投与量のＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０のＣＡＲ－Ｔ細胞又はＨ９３ＣＣＬ１９のＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した（ｉ．ｖ．）（各群ｎ＝４匹のマウス）。腫瘍の体積（図１８Ａ）、ＮＣＧマウス末梢血におけるＣＤ３陽性細胞の比率（図１８Ｂ）及び体重（図１８Ｃ）を評価した。 図１８Ａの説明を参照のこと。 図１８Ａの説明を参照のこと。 図１９Ａ～１９Ｄは、Ｃ５７ＢＬ／６マウス異種移植モデルにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＬＬ／２－ｈＧＰＣ３細胞を皮下接種し、それぞれ１０Ｍ、６Ｍ、６Ｍ及び６Ｍ投与量のｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した（ｉ．ｖ．）（各群ｎ＝５匹のマウス）。腫瘍の体積（図１９Ａ）、Ｃ５７ＢＬ／６マウス末梢血におけるＣＡＲ＋ＣＤ３＋の比率（図１９Ｂ）及び体重（図１９Ｃ）を評価し、生存率（％）（図１９Ｄ）を計算した。 図１９Ａの説明を参照のこと。 図１９Ａの説明を参照のこと。 図１９Ａの説明を参照のこと。 図２０Ａ～２０Ｂは、２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＬＤＮ１８．２＋ＮＵＧＣ４細胞と一晩共培養した後のＩＬ－２３（図２０Ａ）及びＣＣＬ－１９（図２０Ｂ）タンパク質の産生を示す。 図２０Ａの説明を参照のこと。 図２１Ａ～２１Ｃは、２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の再チャレンジアッセイの結果を示す。従来の条件（１０％１６４０＋３００ ＩＵ ＩＬ－２）（図２１Ａ）及び再チャレンジアッセイ（図２１Ｂ）におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大倍率の比較は、ＮＵＧＣ４細胞による複数回のチャレンジ後に２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞が抗原依存性増大を示すことを示唆した。図２１Ｃは、再チャレンジアッセイにおける複数の刺激ラウンドによる処理後のＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞生存率を示す。 図２１Ａの説明を参照のこと。 図２１Ａの説明を参照のこと。 図２２Ａ～２２Ｄは、ＮＣＧマウス異種移植モデルにおける２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効果を示す。ＮＣＧマウスにＮＵＧＣ４細胞を皮下接種し、０．５ Ｍ投与量（ｉ．ｖ．）（各群ｎ＝４匹のマウス）のＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した。腫瘍の体積（図２２Ａ及びＢ）、ＮＣＧマウス末梢血におけるＣＤ３陽性細胞の比率（図２２Ｃ）及び体重（図２２Ｄ）を評価した。 図２２Ａの説明を参照のこと。 図２２Ａの説明を参照のこと。 図２２Ａの説明を参照のこと。 図２３Ａ～２３Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウス異種移植モデルにおけるｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｍｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍効果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＬＬ／２－ｈＣＬＤＮ１８．２細胞を皮下接種し、１０ Ｍ投与量（ｉ．ｖ．）（各群ｎ＝４匹のマウス）のマウスＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した。腫瘍の体積（図２３Ａ）及び体重（図２３Ｂ）を評価した。 図２３Ａの説明を参照のこと。 図２４Ａ～２４Ｂは、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率（図２４Ａ）及びＩＬ１２ｐ４０陽性率（図２４Ｂ）を示す。 図２４Ａの説明を参照のこと。 図２５Ａ～２５Ｂは、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより一晩刺激した後のＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＬ１２ｐ４０（図２５Ａ）、ＩＬ－２３（図２５Ｂ）、ＣＣＬ－１９（図２５Ｃ）、ＩＬ－１２（図２５Ｄ）タンパク質の産生を示す。 図２５Ａの説明を参照のこと。 図２５Ａの説明を参照のこと。 図２５Ａの説明を参照のこと。 図２６Ａ～２６Ｂは、９６ウェルｔｒａｎｓｗｅｌｌチャンバによって実施したＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞遊走アッセイを示す。種々のＣＡＲ－Ｔ細胞をＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と１：１のＥ／Ｆ比で２４時間共培養し、細胞培養上清を回収して下側チャンバに加えた。２、４、６時間後、上側チャンバから遊走した下側チャンバのＴ細胞数（図２６Ａ）、及び共培養上清中のＣＣＬ－１９の濃度（図２６Ｂ）を定量化した。 図２６Ａの説明を参照のこと。 図２７Ａ～２７Ｃは、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の再チャレンジアッセイの結果を示す。図２７Ａ及び図２７Ｂは、従来の条件（１０％ １６４０＋３００ ＩＵ ＩＬ－２）及び再チャレンジアッセイにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大倍率を示す。図２７Ｃは、再チャレンジアッセイにおける複数の刺激ラウンドによる処理後のＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性変化を示す。 図２７Ａの説明を参照のこと。 図２７Ａの説明を参照のこと。 図２８Ａ～２８Ｂは、再チャレンジアッセイにおける種々の刺激ラウンドによる処理後のＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロサイトカイン分泌、ＴＮＦ－α放出レベル（図２８Ａ）及びＩＦＮ－γ放出レベル（図２８Ｂ）を示す。 図２８Ａの説明を参照のこと。
７． 詳細な説明
本開示は部分的に、一つ又は複数の機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ）並びに外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＲ７リガンド（例えば、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１）を発現する操作された免疫細胞の機能と特性が改善されたという驚くべき発見に基づいている。
７．１． 定義
本明細書に記載されるか又は参照される技術及び手順には、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第３版 ２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌらによる編集，２００３）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎによる編集 ２００９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒによる編集 ２０１０）、及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ 第１巻及び第２巻（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ及びＤｕｂｅｌによる編集，第２版 ２０１０）に記載される広く利用されている方法など、概して当業者によって従来の方法を用いて良く理解されているもの及び／又は一般的に採用されているものが含まれる。本明細書において特に定義しない限り、本発明で使用される技術用語と科学用語は、当業者に一般的に理解されている意味を有する。本明細書の解釈上、以下の用語の説明が適用され、且つ任意の適切な場合に、単数形で使用される用語は複数形も含み、逆も同様である。記載される用語のいずれかの説明が、参照により本明細書に援用されるいずれかの文献と矛盾する場合、以下に記載される用語の説明が優先されるべきである。
用語「抗体」、「免疫グロブリン」又は「Ｉｇ」は、本明細書において同義的に使用されてもよく、最も広義に使用され、且つ具体的には、例えば、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、完全長の又はインタクトなモノクローナル抗体を含む）、マルチエピトープ又はモノエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナル又は一価抗体、多価抗体、少なくとも二つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を呈する限り、二重特異性抗体）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）及びその断片（例えば、ドメイン抗体）を包含する。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体及び／又は親和性成熟抗体並びに他の種（例えば、マウス、ウサギ、ラマなど）からの抗体であり得る。用語「抗体」は、免疫グロブリン系ポリペプチドにおけるＢ細胞のポリペプチド生成物を含むことが意図され、それは、特定の分子抗原に結合する能力を有し、且つ二つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、ここで各対のポリペプチド鎖は、一本の重鎖（約５０～７０ｋＤａ）と一本の軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各本の鎖の各アミノ末端部分が約１００～約１３０個又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、且つ各本の鎖の各カルボキシ末端部分が定常領域を含む。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋによる編集，第２版１９９５）、及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版１９９７）を参照されたい。抗体は、合成抗体、組換えにより産生された抗体、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）の種（例えば、ラマ又はアルパカ）由来を含む単一ドメイン抗体又はそれらのヒト化変異体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体及び上記のいずれかの機能性断片（例えば、抗原結合断片）をさらに含むが、それらに限らず、これらの機能性断片は、抗体重鎖又は軽鎖ポリペプチドの一部を指し、該断片の由来となった抗体の結合活性の一部又は全てを保持している。機能性断片（例えば、抗原結合断片）の非限定的な例としては、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合により連結されるＦｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書による抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原結合ドメイン又は抗原に結合する抗原結合部位を含有する分子（例えば、抗体の一つ又は複数のＣＤＲ）を含む。このような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓによる編集，１９９５）、Ｈｕｓｔｏｎら，１９９３，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ２２：１８９－２２４、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ及びＳｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７－５１５、並びにＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第２版，１９９０）を参照することができる。本明細書による抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であり得る。抗体は、アゴニスト抗体又はアンタゴニスト抗体であり得る。抗体は、アゴニストでもアンタゴニストでもないものであり得る。
「抗原」は、抗体が選択的に結合することのできる構造である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン又は他の天然に存在する化合物もしくは合成化合物であり得る。いくつかの実施形態において、標的抗原はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、抗原は細胞と結び付いており、例えば、細胞上又は細胞内に存在する。
「インタクトな」抗体は、抗原結合部位並びにＣＬ及び少なくとも重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む抗体である。定常領域は、ヒト定常領域又はそのアミノ酸配列変異体を含んでもよい。いくつかの実施形態において、インタクトな抗体は、一つ又は複数のエフェクター機能を有する。
「一本鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される）は、単一のポリペプチド鎖に連結されるＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、該ポリペプチドリンカーは、ｓＦｖが抗原結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。ｓＦｖに関する概説は、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅによる編集，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ページ２６９～３１５（１９９４）を参照されたい。
本明細書で使用されるように、「単一ドメイン抗体」又は「ｓｄＡｂ」は、単一のモノマー可変抗体ドメインを指し、且つ抗原に結合することができる。単一ドメイン抗体は、本明細書に記載のＶＨＨドメインを含む。単一ドメイン抗体の例は、例えば、ラクダ科種（例えば、ラマ）からの抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、及び抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場のような、軽鎖を天然に欠いている抗体を含むが、それに限らない。単一ドメイン抗体は、任意の種に由来してもよく、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、それらに限らない。例えば、本明細書に記載されているように、単一ドメイン抗体は、ラクダ科種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコから産生された抗体に由来してもよい。ラクダ科以外の他の種は、軽鎖を天然に欠いている重鎖抗体を産生することができ、このような他の種に由来するＶＨＨは、本開示の範囲内にある。いくつかの実施形態において、本明細書による単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）は、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を有する。単一ドメイン抗体は、本明細書に記載されているように、別の分子（例えば、剤）と遺伝子融合又は化学的にコンジュゲートされることができる。単一ドメイン抗体は、大きい結合分子（例えば、多重特異性抗体又はキメラ抗原受容体）の一部であり得る。
用語「結合（ｂｉｎｄｓ）」又は「結合すること（ｂｉｎｄｉｎｇ）」は、分子間の相互作用を指し、例えば、複合体を形成することを含む。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用及び／又はファンデルワールス相互作用を含む非共有結合性相互作用であり得る。複合体は、共有結合性又は非共有結合性の結合、相互作用又は力によって一体に保持された二つ以上の分子の結合をさらに含んでもよい。抗体上の単一の抗原結合部位と標的分子（例えば、抗原）の単一のエピトープとの間の全体としての非共有結合性相互作用の強度は、該エピトープに対する抗体又は機能性断片の親和性である。結合分子（例えば、抗体）と一価抗原との解離速度（ｋｏｆｆ）と会合速度（ｋｏｎ）との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）は、解離定数ＫＤであり、親和性に反比例する。ＫＤ値が低いほど、抗体の親和性は高くなる。ＫＤの値は、抗体と抗原との複合体毎に異なり、且つｋｏｎとｋｏｆｆに依存する。本明細書による抗体の解離定数ＫＤは、本明細書による任意の方法又は当業者に周知の任意の他の方法を用いて決定することができる。一つの結合部位における親和性が、常に抗体と抗原との間の相互作用の真の強度を反映しているとは限らない。複数の反復する抗原決定基を含有する複合抗原（例えば、多価抗原）が、複数の結合部位を含有する抗体と接触する場合、一つの部位における抗体の抗原との相互作用により、二番目の部位における反応の可能性が増加することになる。多価抗体と抗原との間のこのような複数の相互作用の強度は、アビディティと呼ばれる。
本明細書に記載される結合分子に関連して、「～に結合する」、「～に特異的に結合すること」のような用語及び類似の用語も本明細書で同義的に使用され、抗原（例えば、ポリペプチド）に特異的に結合する抗原結合ドメインの結合分子を指す。抗原に結合するか又は特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）又は当業者に周知の他の技術によって同定することができる。いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、いかなる交差反応性抗原よりも高い親和性で抗原に結合する場合、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）のような実験技術を用いて測定したように、抗原に結合するか又は特異的に結合する。典型的には、特異的又は選択的反応はバックグラウンドシグナル又はノイズの少なくとも２倍になることになり、バックグラウンドの１０倍を超えることもあり得る。結合特異性に関する考察については、例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３２－３６（Ｐａｕｌによる編集，第２版１９８９）を参照されたい。いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインが「非標的」タンパク質に結合する程度は、例えば、ＦＡＣＳ分析又はＲＩＡによって測定したように、結合分子又は抗原結合ドメインのその特定の標的抗原への結合の約１０％未満である。抗原に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、例えば、結合分子が、例えば、抗原を標的とする際に治療剤及び／又は診断剤として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合することができる結合分子又は抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５５０ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、もしくは０．１ｎＭ未満、又は１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５５０ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、もしくは０．１ｎＭの解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、異なる種からの抗原で保存されている抗原エピトープに結合する。
いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、「キメラ」配列を含んでもよく、ここで、重鎖及び／又は軽鎖の一部は、特定の種に由来するから又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である一方、鎖の残りの部分は、別の種に由来するか又は別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体及びこのような抗体の断片における対応する配列と同一又は相同であり、それらが所望の生物学的活性を示すものであればよい（米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎら，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－５５を参照されたい）。キメラ配列は、ヒト化配列を含んでもよい。
いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、非ヒト（例えば、ラクダ科動物、ネズミ、非ヒト霊長類動物）抗体の「ヒト化」形態の部分を含んでもよく、これらの非ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン（例えば、受容体抗体）からの配列を含み、ここで、天然ＣＤＲ残基は、所望の特異性、親和性及び能力を有するラクダ科動物、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類動物のような非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基に置換されている。いくつかの場合に、ヒト免疫グロブリン配列の一つ又は複数のＦＲ領域残基は、対応する非ヒト残基に置換されている。なお、ヒト化抗体は、受容体抗体又はドナー抗体で発見されていない残基を含んでもよい。これらの改変は、抗体性能をさらに改善するために行われる。ヒト化抗体重鎖又は軽鎖は、少なくとも一つ又は複数の可変領域の実質的に全てを含んでもよく、ここで、全て又は実質的に全てのＣＤＲは、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに対応し、且つ全て又は実質的に全てのＦＲは、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むことになる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２９（１９８８）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－９６（１９９２）、Ｃａｒｔｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５－８９（１９９２）、米国特許第６，８００，７３８号、同第６，７１９，９７１号、同第６，６３９，０５５号、同第６，４０７，２１３号、及び同第６，０５４，２９７号を参照されたい。
いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、「完全ヒト抗体」又は「ヒト抗体」の一部を含んでもよく、ここで、これらの用語は、本明細書で同義的に使用され、且つヒト可変領域と、例えばヒト定常領域とを含む抗体を指す。結合分子は、単一ドメイン抗体配列を含んでもよい。具体的な実施形態において、該用語は、ヒト由来の可変領域と定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施形態において、「完全ヒト」抗体は、ポリペプチドに結合し、且つ核酸配列によりコードされる抗体をさらに包含してもよく、これらの核酸配列は、ヒト生殖系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞変異体である。用語「完全ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に対応する可変領域と定常領域を有する抗体を含み、例えば、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ公開番号９１－３２４２を参照されたい）によって記載されているとおりである。「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し及び／又はヒト抗体を作製するための技術のいずれかを用いて産生された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に排除する。ヒト抗体は、当分野の既知の様々な技術を用いて産生することができ、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１））と酵母ディスプレイライブラリー（Ｃｈａｏら，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：７５５－６８（２００６））とを含む。なお、ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５（１９９１）、及びｖａｎ Ｄｉｊｋとｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）に記載される方法も利用可能である。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してこのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効になったトランスジェニック動物（例えば、マウス）に抗原を投与することによって調製され得る（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１－６６（１９９５）、ＢｒｕｇｇｅｍａｎｎとＴａｕｓｓｉｎｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５－５８（１９９７）、及びＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術に関する米国特許第６，０７５，１８１と同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって産生されるヒト抗体は、さらに、例えば、Ｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：３５５７－６２（２００６）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、「組換えヒト抗体」の一部を含んでもよく、ここで、該語句は、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現した抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニック及び／又はトランスクロモソミックである動物（例えば、マウス又はウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７－６２９５（１９９２）を参照されたい）又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングに関わる任意の他の手段によって調製、発現、産生又は単離された抗体など、組換え手段によって調製、発現、産生又は単離されたヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有し得る（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ公開番号９１－３２４２を参照されたい）。しかしながら、いくつかの実施形態において、このような組換えヒト抗体に対してインビトロ変異誘発を行う（又は、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物を用いる場合、インビボ体細胞変異誘発を行う）ため、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来してその近縁であるが、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しないものであり得る配列である。
いくつかの実施形態において、結合分子又は抗原結合ドメインは、「モノクローナル抗体」の一部を含んでもよく、ここで、本明細書で使用される用語は、実質的に均一な抗体の集団から入手された抗体を指し、例えば、少量で存在し得る天然に存在する可能な突然変異又は周知の翻訳後修飾（例えば、アミノ酸異性体化又は脱アミド、メチオニン酸化又はアスパラギン若しくはグルタミン脱アミド）を除いて、該集団を構成する各抗体は同一であり、各モノクローナル抗体が、通常、抗原上の単一のエピトープを認識することになる。具体的な実施形態において、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマ又は他の細胞により産生された抗体である。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法に限定されない。例えば、本開示において有用であるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって調製されてもよいか、又は組換えＤＮＡ方法を用いて細菌又は真核生物の動物若しくは植物細胞において作製されてもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）に記載される技術を用いてファージ抗体ライブラリーからも単離され得る。クローン細胞株及びクローン細胞株が発現するモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当分野において周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌらによる編集，第５版，２００２）を参照されたい。
典型的な４－鎖抗体単位は、二本の同一の軽（Ｌ）鎖と二本の同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合に、４－鎖単位は、通常、約１５０，０００ダルトンである。各本のＬ鎖は、一つの共有結合性ジスルフィド結合を介してＨ鎖に連結される一方、二本のＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに依存して一つ又は複数のジスルフィド結合を介して互いに連結される。各本のＨ鎖とＬ鎖は、規則的に間隔を置いて配置された鎖内ジスルフィド架橋をさらに有する。各本のＨ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、α鎖とγ鎖のうちのそれぞれについて三つの定常ドメイン（ＣＨ）が続く一方、μアイソタイプ及びεアイソタイプについて四つのＣＨドメインが続く。各本のＬ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬはＶＨと整列し、且つＣＬは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の境界面を形成すると考えられる。ＶＨとＶＬのペアリングは、一緒になって単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラス抗体の構造特性については、例えばＢａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７１（Ｓｔｉｔｅｓらによる編集，第８版，１９９４）及びＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊａｎｅｗａｙらによる編集，第５版，２００１）を参照されたい。
用語「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」は、抗原に結合する抗体領域を指す。従来のＩｇＧは、通常、二つのＦａｂ領域を含み、各Ｆａｂ領域は、Ｙ字型ＩｇＧ構造の二つのアームの一方に存在する。各Ｆａｂ領域は、通常、重鎖と軽鎖のそれぞれの一つの可変領域及び一つの定常領域で構成される。より具体的には、Ｆａｂ領域における重鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＨ領域及びＣＨ１領域であり、且つＦａｂ領域における軽鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＬ領域及びＣＬ領域である。Ｆａｂ領域におけるＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ及びＣＬは、本開示に係る抗原結合能を付与するように様々な方法で配列され得る。例えば、従来のＩｇＧのＦａｂ領域に似ているように、ＶＨ領域及びＣＨ１領域は、一つのポリペプチド上にあり得、且つＶＬ領域及びＣＬ領域は、単独のポリペプチドにあり得る。代替的に、ＶＨ領域、ＣＨ１領域、ＶＬ領域及びＣＬ領域は、以下の節でより詳細に記載されるように、全て同じポリペプチド上にあり、且つ異なる順序で配向されてもよい。
用語「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」又は「Ｖドメイン」は、抗体の軽鎖又は重鎖の一部を指し、それは、通常、軽鎖又は重鎖のアミノ末端に位置し、且つ長さが重鎖で約１２０～１３０個のアミノ酸及び軽鎖で約１００～１１０個のアミノ酸であり、且つ各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に用いられる。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と呼ばれてもよい。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と呼ばれてもよい。用語「可変」は、抗体における可変領域のいくつかのセグメントが配列に大きな違いを呈するという事実を指す。Ｖ領域は、抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変領域の１１０個のアミノ酸範囲内に均等に分布しているわけではない。代わりに、Ｖ領域は、約１５～３０個のアミノ酸の、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、変化が小さい（例えば、相対的に変化しない）セグメントで構成され、これらのセグメントは、長さがそれぞれ約９～１２個のアミノ酸である、「超可変領域」と呼ばれる、変化が大きい（例えば、極端的に変化する）短領域によって隔てられている。重鎖と軽鎖の可変領域はそれぞれ、主にβシート構造を用いる四つのＦＲを含み、それらは、三つの超可変領域を介して連結され、この三つの超可変領域は連結されてループを形成し、且ついくつかの場合にβシート構造の一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲによってごく接近して一体に保持されており、且つ他方の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版，１９９１）を参照されたい）。定常領域は、抗体による抗原への結合に直接的には関わらないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与など、様々なエフェクター機能を呈する。可変領域は、種々の抗体間で配列が広く異なる。具体的な実施形態において、可変領域はヒト可変領域である。
用語「Ｋａｂａｔによる可変領域残基の番号付け」又は「Ｋａｂａｔなどの場合のアミノ酸位置の番号付け」及びこれらの変化形は、Ｋａｂａｔら前掲における抗体編成の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮又は挿入に対応するより少ない又は別のアミノ酸を含んでもよい。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び残基８２の後の三つ挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含んでもよい。所与の抗体の残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同性領域におけるアラインメントによって決定されることができる。可変ドメインにおける残基（およそ軽鎖の残基１～１０７及び重鎖の残基１～１１３）に言及する場合、通常、ｋａｂａｔ番号付けシステム（例えば、Ｋａｂａｔら前掲）を用いる。免疫グロブリン重鎖定常領域における残基に言及する場合、通常、「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」（例えば、Ｋａｂａｔら前掲に報告されるＥＵインデックス）を用いる。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ １ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。他の番号付けシステムは、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ及びＡＨｏｎによって記載されている。
抗体に関連して使用される時、用語「重鎖」は、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、ここで、アミノ末端部分は、約１２０～１３０又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。重鎖定常領域に基づくアミノ酸配列は、定常領域が、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）と称される五つの異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）のうちの一つであり得る。別個の重鎖はサイズが異なる：α、δ及びγは約４５０個のアミノ酸を含有するが、μ及びεは約５５０個のアミノ酸を含有する。軽鎖と組み合わせになると、これらの異なるタイプの重鎖はそれぞれ、五つの周知のクラス（例えば、アイソタイプ）の抗体であるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭを産生し、ＩｇＧの四つのサブクラス、即ちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。
抗体に関連して使用される時、用語「軽鎖」は、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、ここで、アミノ末端部分は、約１００～約１１０個又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。軽鎖のおよその長さは２１１～２１７個のアミノ酸である。定常ドメインに基づくアミノ酸配列には、二つの異なるタイプが存在し、カッパ（κ）又はラムダ（λ）と称される。
本明細書で使用されるように、用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」は、同義的に使用される。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の三つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２又はＨ３）の一つ、又は抗体ＶＬ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の三つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２又はＬ３）の一つを指す。ＶＨドメインにおけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とも称される。ＶＬドメインにおけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とも称される。そのため、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列の範囲内に散在する可変領域配列である。
ＣＤＲ領域は当業者に周知であり、周知の番号付けシステムによって定義されている。例えば、Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に用いられている（例えば、Ｋａｂａｔら前掲、Ｎｉｃｋ Ｄｅｓｃｈａｃｈｔら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１０；１８４：５６９６－５７０４）を参照されたい）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造ループの位置を指す（例えばＣｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７（１９８７）を参照されたい）。Ｋａｂａｔの番号付け規則を用いて番号付けした時、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、Ｈ３２とＨ３４との間で変化し、これはループの長さに依存する（これは、Ｋａｂａｔの番号付けレジメンが挿入をＨ３５ＡとＨ３５Ｂに置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループが３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループが３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループが３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案に相当し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアに使用されている（例えばＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ 第２巻（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ及びＤｕｂｅｌによる編集，第２版，２０１０）を参照されたい）。「コンタクト」超可変領域は、利用可能な複合体結晶構造に対する分析に基づく。開発され、広く採用されている別の汎用的な番号付けシステムは、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃら，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３））である。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に特化した総合情報システムである。本明細書では、ＣＤＲは、軽鎖又は重鎖内のアミノ酸配列及び位置を指す。免疫グロブリン可変ドメインの構造内でのＣＤＲの「位置」は種間で保存的であり、且つループと呼ばれる構造中に存在するため、構造的特徴に従い可変ドメイン配列をアラインメントする番号付けシステムを用いることにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基が容易に認識される。該情報は、一つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、通常ヒト抗体からのアクセプターフレームワークに移植化及び置き換えるために用いることができる。Ｈｏｎｅｇｇｅｒ及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－７０（２００１）は、更なる番号付けシステム（ＡＨｏｎ）を開発した。例えば、Ｋａｂａｔ番号付けとＩＭＧＴ独自の番号付けシステムとを含む番号付けシステム間の対応関係は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ前掲、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ前掲、Ｍａｒｔｉｎ前掲、Ｌｅｆｒａｎｃら前掲を参照されたい）。これらの超可変領域又はＣＤＲからの各残基は、以下の表１に例示されている。
（表１）様々な番号付けシステムによる例示的ＣＤＲ
Figure 2024507958000001
所与のＣＤＲの境界は、認識に用いられるレジメンに応じて異なり得る。そのため、特に指定されない限り、所与の抗体又はその領域（例えば、可変領域）の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語並びに抗体又はその領域の各ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２）は、上記の任意の既知のレジメンによって定義される相補性決定領域を包含すると理解されるべきである。いくつかの場合に、一つ又は複数の特定のＣＤＲを認識するためのレジメンを指定し、例えば、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＣｏｎｔａｃｔ方法により定義されたＣＤＲである。他の場合に、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が与えられる。注意すべきことは、ＣＤＲ領域は、様々な番号付けシステムの組み合わせ、例えば、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムの組み合わせ、又はＫａｂａｔ及びＩＭＧＴ番号付けシステムの組み合わせによって定義されてもよいことである。そのため、「特定のＶＨ又はＶＨＨに記載されているようなＣＤＲ」のような用語は、上記例示的なＣＤＲ番号付けシステムにより定義された任意のＣＤＲ１を含むが、それに限らない。可変領域（例えば、ＶＨＨ、ＶＨ又はＶＬ）が与えられると、当業者は、該領域内のＣＤＲが種々の番号付けシステム又はその組み合わせによって定義され得ることを理解するであろう。
超可変領域は、以下のような「拡張された超可変領域」を含んでもよい：ＶＬにおける２４－３６又は２４－３４（Ｌ１）、４６－５６又は５０－５６（Ｌ２）、及び８９－９７又は８９－９６（Ｌ３）、並びに、ＶＨにおける２６－３５又は２６－３５Ａ（Ｈ１）、５０－６５又は４９－６５（Ｈ２）、及び９３－１０２、９４－１０２又は９５－１０２（Ｈ３）。
用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は、軽鎖と重鎖のカルボキシ末端部分を指し、それは、抗体による抗原への結合に直接的には関わらないが、様々なエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体との相互作用を呈する。該用語は、免疫グロブリン分子の一部を指し、該免疫グロブリン分子の一部は、免疫グロブリンの他の部分、即ち可変領域と比べて、より保存的なアミノ酸配列を有し、該アミノ酸配列は、抗原結合部位を含有する。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域並びに軽鎖のＣＬ領域を含有し得る。
用語「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、ＣＤＲの両側に位置する可変領域残基を指す。ＦＲ残基は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体（例えば、単一ドメイン抗体）、ダイアボディ、線形抗体及び二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基又はＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するためのものであり、例えば、天然配列Ｆｃ領域と、組換えＦｃ領域と、変異体Ｆｃ領域とを含む。免疫グロブリン重鎖Ｆｃ領域の境界は異なる場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０位置のアミノ酸残基からそのカルボキシ末端の方向に広がると定義される。例えば、抗体の生産又は精製期間又は抗体重鎖をコードする核酸に対して組換えて操作を行うことによって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムの残基４４７に基づくものである）を除去することができる。そのため、インタクトな抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団及びＫ４４７残基を含む抗体と含まない抗体との混合物を有する抗体集団を含んでもよい。「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）下方制御などが挙げられる。このようなエフェクター機能は、通常、Ｆｃ領域を結合領域又は結合ドメイン（例えば、抗体可変領域又はドメイン）と組み合わせる必要があり、且つ当業者に周知の様々なアッセイを用いて評価することができる。「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも一つのアミノ酸改変（例えば、置換、付加又は欠失）のために天然配列Ｆｃ領域と異なるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比べて少なくとも一つのアミノ酸置換を有し、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域に約１～約１０個のアミノ酸置換、又は約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書の変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域との少なくとも約８０％の相同性を有するか、又はそれとの少なくとも約９０％の相同性を有し、例えば、それとの少なくとも約９５％の相同性を有する。
本明細書で使用されるように、「エピトープ」は、当分野における用語であり、且つ結合分子（例えば、一本鎖抗体配列を含む抗体）が特異的結合できる抗原の局所的領域を指す。エピトープは、線形エピトープ又は立体構造的、非線形的もしくは不連続的エピトープであってもよい。ポリペプチド抗原の場合に、例えば、エピトープは、ポリペプチドの連続したアミノ酸であってもよく（「線形」エピトープ）、又はエピトープは、ポリペプチドの二つ又はそれ以上の非連続領域からのアミノ酸を含んでもよい（「立体的」、「非線形的」又は「不連続的」エピトープ）。当業者によれば、一般に、線状エピトープは、二次、三次又は四次構造に依存することも又はしないこともあると理解されるであろう。例えば、いくつかの実施形態において、結合分子は、一群のアミノ酸に結合するが、それらが天然の三次元タンパク質構造に折り畳まれているかどうかは無関係である。他の実施形態において、結合分子は、エピトープを認識して結合するために、エピトープを構成するアミノ酸残基が特定の立体配座（例えば、屈曲、ねじれ、ターン、又は折り畳み）を呈する必要がある。
ペプチド、ポリペプチド又は抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、最大配列同一性パーセントを実現するために配列アラインメント及び必要な場合にギャップを導入し、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮されない時、候補配列における、特定のペプチド又はポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同じであるアミノ酸残基の割合として定義される。所属分野の技術の範囲内にある様々なやり方で、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを用いて、アラインメントを実現してアミノ酸配列同一性パーセントを決定することができる。当業者は、比較下の配列の完全長にわたって最大限のアラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含め、アラインメントの測定に適切なパラメータを決定することができる。
本明細書で使用されるように、用語「機能的外因性受容体」は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を導入した後に、その生物学的活性を保持する外因性受容体（例えば、組換え又は操作されたＴＣＲ、ｃＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体又はＣＡＲのようなＴＣＲ）を指す。生物学的活性は、外因性受容体による分子への特異的結合、下流シグナルの適切な形質導入、例えば、細胞増殖、サイトカイン産生及び／又は調節性又は細胞溶解性エフェクター機能の実行を誘導する能力を含むが、それらに限らない。
本明細書で使用されるように、「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」は、一つ又は複数の抗原をＴ細胞のような免疫エフェクター細胞に特異的に移植するために用いることができる遺伝子操作された受容体を指す。いくつかのＣＡＲは、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」又は「キメラ免疫受容体」とも呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、一つ又は複数の抗原（例えば、腫瘍抗原）特異的な細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、Ｔ細胞及び／又は他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。「ＣＡＲ－Ｔ細胞」又は「ＣＡＲ－Ｔ」は、ＣＡＲを発現するＴ細胞を指す。
本明細書で使用される用語「組換え又は操作されたＴＣＲ」は、本明細書による機能的外因性受容体として含まれ、且つ免疫細胞で発現されるペプチドを指す。組換え又は操作されたＴＣＲの機能は、例えば、表面に特定のマーカーを有するがん細胞及び感染細胞のような所望のタイプの細胞に対する免疫細胞の免疫活性をリダイレクトすること含んでもよい。それらは、内因性ＴＣＲを置換するか又は内因性ＴＣＲと共発現することができる。いくつかの実施形態において、このような組換えＴＣＲは、オープンリーディングフレームを含む一本鎖ＴＣＲであり、ここで、可変Ｖα及びＶβドメインはタンパク質リンカーとペアリングする。これは、選択された抗原に特異的であることが知られているＴＣＲ遺伝子の分子クローニングに関する。そして、通常、レトロウイルスベクターによってこれらの鎖をＴ細胞に導入する。そのため、クローニングされたＴＣＲα及びＴＣＲβ遺伝子の発現は、形質導入されたＴ細胞に、これらの新たな遺伝子のペアリングにより決定された機能特異性を与える。組換え又は操作されたＴＣＲの構成要素は、組換えＴＣＲα及びＴＣＲβのようなＴＣＲの任意の機能的サブユニットであり、細胞に導入された外因性ポリヌクレオチド配列によりコードされる。
いくつかの実施形態において、本明細書による機能的外因性受容体は、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、抗原結合機能とＴ細胞活性化機能を同時に有する。例えば、ｃＴＣＲは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＧＰＣ３、クローディン１８．２）の一つ又は複数のエピトープを特異的に認識する抗原結合断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメインと、（ｂ）任意選択的なリンカーと、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択的な細胞外ドメイン又はその一部と、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含んでもよく、ここで、第１、第２及び第３のＴＣＲサブユニットは、いずれもＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第１、第２及び第３のＴＣＲサブユニットは同じである（例えば、いずれもＣＤ３εである）。いくつかの実施形態において、第１、第２及び第３のＴＣＲサブユニットは異なる。いくつかの実施形態において、ｃＴＣＲは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、該ヒンジドメインはＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態において、ｃＴＣＲは、ｃＴＣＲのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えば、ＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、例えば、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＧＰＣ３、クローディン１８．２）の一つ又は複数のエピトープを特異的に認識する抗原結合断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメインと、（ｂ）任意選択的な第１のリンカーと、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメインと、（ｄ）任意選択的な第２のリンカーと、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択的な細胞外ドメイン又はその一部と、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択的な細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。ここで、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、且つここで、第１、第２及び第３のＴＣＲ共受容体は、いずれもＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第１、第２及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態において、第１、第２及び第３のＴＣＲ共受容体は異なる。いくつかの実施形態において、ＴＡＣは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、該ヒンジドメインはＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態において、ＴＡＣは、ＴＡＣのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えば、ＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端に位置する。いくつかの実施形態において、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端に位置する。
いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体は、ＴＡＣ様キメラ受容体であり、例えば、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＧＰＣ３、クローディン１８．２）の一つ又は複数のエピトープを特異的に認識する抗原結合断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメインと、（ｂ）任意選択的な第１のリンカーと、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメインと、（ｄ）任意選択的な第２のリンカーと、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択的な細胞外ドメイン又はその一部と、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択的な細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、ここで、第１、第２、第３及び第４のＴＣＲサブユニットは、いずれもＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第２、第３及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態において、第１、第２、第３及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態において、第１、第２、第３及び第４のＴＣＲサブユニットは異なる。いくつかの実施形態において、第２、第３及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なる。いくつかの実施形態において、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端に位置する。いくつかの実施形態において、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端に位置する。いくつかの実施形態において、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、該ヒンジドメインはＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態において、ＴＡＣ様キメラ受容体は、ＴＡＣ様キメラ受容体のＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えば、ＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。
用語「ポリペプチド」及び「ペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書で同義的に使用され、且つ任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖又は分岐鎖であってもよく、それは、改変されたアミノ酸を含んでもよく、且つ非アミノ酸によって分断され得る。これらの用語は、既に天然に改変されたか又は介入によって改変されたアミノ酸ポリマーをさらに包含する。例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作又は改変である。該定義は、例えば、一つ又は複数のアミノ酸類似体（非天然アミノ酸などを含むが、それに限らない）及び当分野の既知の他の改変を含むポリペプチドをさらに含む。理解すべきことは、本開示のポリペプチドが抗体又は免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーに基づいてもよいため、いくつかの実施形態において、「ポリペプチド」は、一本鎖又は二本以上の会合した鎖として存在し得ることである。
本明細書で同義的に使用されるように、「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、且つＤＮＡとＲＮＡとを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変されたヌクレオチド又は塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼ又は合成反応によってポリマーに取り込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、改変されたヌクレオチド、例えば、メチル化されたヌクレオチド及びその類似体を含んでもよい。本明細書で使用されるように、「オリゴヌクレオチド」は、短く、通常一本鎖であり、合成されたポリヌクレオチドを指し、その長さが、通常（必ずしもそうとは限らない）約２００ヌクレオチド未満である。用語「オリゴヌクレオチド」と「ポリヌクレオチド」とは、互いに排他的というわけではない。ポリヌクレオチドについての上記の説明は、オリゴヌクレオチドにも等しく全面的に適用可能である。本開示の結合分子を産生する細胞は、親ハイブリドーマ細胞、並びに抗体をコードする核酸が導入された細菌及び真核宿主細胞を含んでもよい。特に指定のない限り、本明細書に開示される任意の一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と称される。５’から３’への新生ＲＮＡ転写物の付加方向は転写方向と称される。ＤＮＡ鎖においてＲＮＡ転写物と同じ配列を有する、ＲＮＡ転写物の５’末端より５’側にある配列領域は、「上流配列」と称され、ＤＮＡ鎖においてＲＮＡ転写物と同じ配列を有する、ＲＮＡ転写物の３’末端より３’側にある配列領域は、「下流配列」と称される。
「単離された核酸」は、天然では天然配列に付随する他のゲノムＤＮＡ配列並びにリボソーム及びポリメラーゼのようなタンパク質又は複合体と実質的に分離されている核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ又は核酸混合物）である。「単離された」核酸分子は、核酸分子の天然の供給源に存在する他の核酸分子と分離されている核酸分子である。なお、「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、組換え技術によって産生される場合、他の細胞物質又は培地を実質的に含まなくてもよいか、又は化学的に合成される場合、化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に含まない。具体的な実施形態において、本明細書に記載の一本鎖抗体又は抗体をコードする一つ又は複数の核酸分子は、単離又は精製される。該用語は、その天然に存在する環境から除去された核酸配列を含み、且つ組換え又はクローニングされたＤＮＡ単離物及び化学的に合成された類似体又は異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な分子は、該分子の単離された形態を含んでもよい。具体的には、本明細書に記載の、ＣＡＲをコードする「単離された」核酸分子は、少なくとも一つの汚染物の核酸分子から同定され単離された核酸分子であり、該核酸分子は、通常、それが産生された環境において該少なくとも一つの汚染物の核酸分子と会合する。
用語「制御配列」は、特定の宿主生物において、作動可能に連結に連結されたコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適用される制御配列は、例えば、プロモーター、任意選択的なオペロン配列及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。
本明細書で使用されるように、用語「作動可能に連結された」及び同様の語句（例えば、遺伝子融合された）は、核酸又はアミノ酸を指すために用いられる場合、それぞれ核酸配列又はアミノ酸配列の作動可能な連結を指し、それらは互いに機能的関係に置かれている。例えば、プロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ並びにターミネーター配列が作動可能に連結されると、核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の正確な産生が起こる。いくつかの実施形態において、作動可能に連結された核酸エレメントは、オープンリーディングフレームの転写を引き起こし、最終的にポリペプチドの産生（即ち、オープンリーディングフレームの発現）を引き起こす。別の例として、作動可能に連結されたペプチドは、その機能ドメインが互いに適切な距離に置かれており、各ドメインに所期の機能を付与するペプチドである。
用語「ベクター」は、核酸配列を宿主細胞に導入するように、核酸配列を担持するか又は含むための物質を指し、該核酸配列は、例えば、本明細書に記載の結合分子（例えば、抗体）をコードする核酸配列である。適用可能なベクターは、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソーム及び人工染色体を含み、それは、選択配列、又は宿主細胞染色体に安定的に組込むことができるマーカーを含んでもよい。なお、ベクターは、一つ又は複数の選択的マーカー遺伝子と適切な発現制御配列とを含んでもよい。含まれる選択的マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質又は毒素に対する耐性を提供し、栄養欠乏を補充するか又は培地中にない重要栄養素を供給する。発現控制配列は、当分野に周知の構成型及び誘導型プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどを含んでもよい。二つ又はそれ以上の核酸分子を共発現させようとする時（例えば、抗体重鎖及び軽鎖又は抗体ＶＨ及びＶＬ）、二つの核酸分子を、例えば、単一の発現ベクター又は単独の発現ベクターに挿入してもよい。単一のベクター発現について、コード核酸は、一つの共通の発現控制配列に作動可能地連結されるか又は異なる発現控制配列、例えば、一つの誘導型プロモーター及び一つの構成型プロモーターに連結されてもよい。宿主細胞への核酸分子の導入は、当分野に周知の方法を用いて確認することができる。このような方法は、例えば、ｍＲＮＡのＲＮＡブロット又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅のような核酸分析、遺伝子生成物の発現に用いられる免疫ブロット又は導入された核酸配列もしくはそれに対応する遺伝子生成物の発現を試験する他の適切な分析方法を含む。当業者は、核酸分子が所望の生成物を産生するのに十分な量で発現されていることを理解し、さらに、当分野に周知の方法で発現レベルを最適化して十分な発現を得ることができることを理解すべきである。
本明細書で使用されるように、用語「宿主」は、動物、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。
本明細書で使用されるように、用語「宿主細胞」は、核酸分子をトランスフェクトされ得る特定の対象細胞及びこのような細胞の子孫又は潜在的な子孫を指す。このような細胞の子孫は、次世代に起こり得る突然変異もしくは環境の影響又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組込みが原因で、核酸分子をトランスフェクトされる親細胞と同じではないこともある。
本明細書で使用されるように、用語「自己由来」は、同じ個体に由来する任意の材料を指し、ここで、該材料が後に該個体に再導入される。
「同種異系」は、同じ種の異なる個体に由来する移植片を指す。
本明細書で使用される用語「トランスフェクトされた」又は「形質転換された」又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に転移又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」又は「形質転換された」又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸を用いて、トランスフェクト、形質転換、又は形質導入された細胞である。この細胞は、初代対象細胞及びその子孫を含む。
本明細書で使用されるように、用語「薬学的に許容される」は、連邦もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、又は米国薬局方、欧州薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方において列挙されていること、又は動物に、より具体的にはヒトに使用することを意味する。
「賦形剤」は、液体又は固体の充填剤、希釈剤、溶媒又はカプセル化材料のような薬学的に許容される材料、組成物又はビヒクルを指す。賦形剤としては、例えば、カプセル化材料又は添加剤、例えば、吸収促進剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、キャリア、コーティング剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香味剤、保湿剤、潤滑剤、香料、防腐剤、噴射剤、離型剤、滅菌剤、甘味剤、可溶化剤、湿潤剤及びそれらの混合物が挙げられる。用語「賦形剤」はさらに、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全もしくは不完全））又はビヒクルを指してもよい。
いくつかの実施形態において、賦形剤は、薬学的に許容される賦形剤である。薬学的に許容される賦形剤の例としては、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝剤、アスコルビン酸を含む酸化防止剤、低分子量（例えば、約１０アミノ酸残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンのようなタンパク質、ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジンのようなアミノ酸、グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類及び他の炭水化物、ＥＤＴＡのようなキレート剤、マンニトール又はソルビトールのような糖アルコール類、ナトリウムのような塩形成性対イオン、及び／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）のような非イオン性界面活性剤が挙げられる。薬学的に許容される賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ及びＧｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版，１９９０）に記載されている。
一実施形態において、各成分は、医薬製剤の他の成分と適合性があるという意味で「薬学的に許容可能」であり、且つ合理的なリスク対効果比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性又は他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織又は臓器と接触するのに適している。例えば、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第６版、Ｒｏｗｅらによる編集；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，第３版、Ａｓｈ及びＡｓｈによる編集；Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，第２版、Ｇｉｂｓｏｎによる編集；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００９を参照されたい。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される賦形剤は、用いられる投与量及び濃度で、それに曝露される細胞又は哺乳動物にとって非毒性である。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される賦形剤は、水性ｐＨ緩衝溶液である。
いくつかの実施形態において、賦形剤は、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油のような、石油、動物、植物又は合成供給源のものを含む油及び水のような無菌の液体である。組成物（例えば、医薬組成物）が静脈内投与される時、水は例示的賦形剤である。生理食塩水、デキストロース水溶液及びグリセリン溶液も液体賦形剤として、特に注射用溶液に用いることができる。賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、エチレングリコール、水、エタノールなどをさらに含んでもよい。該組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤をさらに含んでもよい。組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸薬、カプセル、散剤、徐放性製剤などの形態をとることができる。経口組成物は、製剤を含み、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムのような標準的な賦形剤を含んでもよい。
医薬化合物を含む組成物は、例えば、単離又は精製された形態の結合分子（例えば、抗体）及び好適な量の賦形剤を含んでもよい。
本明細書で使用されるように、用語「有効量」又は「治療有効量」は、操作された免疫エフェクター細胞、又は作用物質と本明細書による操作された免疫エフェクター細胞とを含む治療用分子、又は医薬組成物、の所望の結果をもたらすのに十分な量を指す。
用語「対象」と「患者」は、同義的に使用され得る。本明細書で使用されるように、いくつかの実施形態において、対象は、非霊長類動物又は霊長類動物（例えば、ヒト）のような哺乳動物である。具体的な実施形態において、対象はヒトである。一実施形態において、対象は、疾患又は障害を発症していると診断される哺乳動物、例えば、ヒトである。別の実施形態において、対象は、疾患又は障害が進行するリスクがある哺乳動物、例えば、ヒトである。
「投与する（Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」又は「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、例えば、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内送達及び／又は本明細書に記載されるもしくは当分野に周知の任意の他の物理的送達方法により、体外に存在する物質を患者に注射するか又はそうでなければ物理的に送達する行為を指す。
本明細書で使用されるように、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、一つ又は複数の療法の投与による疾患又は病態の進行、重症度及び／又は持続時間を低減又は改善することを指す。治療は、患者が潜在的状態を依然として有している可能性があるにもかかわらず、患者の改善が観察されるように、潜在的病態に関連する一つ又は複数の症状が低減されているか、寛解されているか否か及び／又は緩和されているか否かを評価することによって決定され得る。用語「治療」は、疾患の管理及び改善を含む。用語「管理する（ｍａｎａｇｅ）」、「管理すること（ｍａｎａｇｉｎｇ）」及び「管理（ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ）」は、対象が、必ずしも疾患の治癒をもたらすとは限らない療法から得る、有益な効果を指す。
用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、疾患、障害、病態又は関連する症状（例えば、がん）が発生（又は再発）する可能性を低減することを指す。
本明細書で使用されるように、がんの発症を「遅延」させるとは、疾患の発症を遅らせ、抑制し、減速させ、延ばし、安定させ、且つ／又は遅くすることを指す。この遅延は、疾患の病歴及び／又は治療される個体に応じて、異なる時間長を有してもよい。当業者には明らかなように、十分又は有意な遅延は、実際的には、該個体が該疾患を発症していないという点で予防を包含することができる。該方法を用いない場合に比べて、がんの発症を「遅延」させる方法は、所与の時間範囲内で疾患発症の確率を低減し、且つ／又は所与の時間範囲内で疾患の程度を低減する方法である。このような比較は、典型的には、統計学的に有意な数の個体を使用した臨床試験に基づく。がんの発症は、標準的な方法を用いて検出することができ、これらの標準的な方法は、コンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝固検査、動脈造影法又は生検を含むが、それらに限らない。発症は、最初に検出不能であり得るがんの進行を指してもよく、且つ発生、再発及び発作を含む。
用語「約」及び「およそ」は、所定値又は範囲から２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、又はそれ未満を指す。
本開示及び特許請求の範囲で使用されるように、単数形の「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上特に明確に指示されない限り、複数形を含む。
理解すべきことは、本明細書のいずれかの部分において用語「含む」で実施形態を説明し、「～からなる」及び／又は「実質的に～からなる」で説明された類似した実施形態も提供することである。さらに理解すべきことは、本明細書のいずれかの部分において語句「実質的に～からなる」で実施形態を説明し、「～からなる」で説明された類似した実施形態も提供することである。
語句「ＡとＢとの間」又は「Ａ～Ｂの間」で使用される用語「～の間」は、ＡとＢを含む範囲を指す。
本明細書において「Ａ及び／又はＢ」のような語句で使用される用語「及び／又は」は、ＡとＢ、Ａ又はＢ、Ａ（単独）、及びＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」のような語句で使用される用語「及び／又は」は、Ａ、Ｂ及びＣ、Ａ、Ｂ又はＣ、Ａ又はＣ、Ａ又はＢ、Ｂ又はＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、並びにＣ（単独）の実施形態のうちの各々を含むことが意図される。
７．２． 操作された免疫エフェクター細胞
以下のセクション８に示すように、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットとＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１）の特定の組み合わせを、一つ又は複数の機能的外因性受容体を発現する免疫エフェクター細胞に導入することにより、免疫エフェクター細胞の特性／機能を著しく改善することができる。そのため、一態様において、本明細書は、宿主細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）を提供し、該宿主細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットと；ＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１）とを含み、ここで、該宿主細胞は、一つ又は複数の機能的外因性受容体を発現する。
ＣＣＲ７（Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型）は、ヒトにおいてＣＣＲ７遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＣＣＲ７は、ＢＬＲ２、ＣＣ－ＣＫＲ－７、ＣＣＲ－７、ＣＤ１９７、ＣＤｗ１９７、ＣＭＫＢＲ７、ＥＢＩ１及びＣ－Ｃモチーフケモカイン受容体７とも呼ばれる。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＲ７は、ＯＭＩＭ：６００２４２、ＭＧＩ：１０３０１１、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：１３８７、及び／又はＧｅｎｅＣａｒｄｓ：ＣＣＲ７として同定される。該受容体に対して、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１の二つの天然リガンドが同定されている。本明細書によるＣＣＲ７のリガンドは、任意の種のＣＣＲ７の天然リガンドであってもよい。他の実施形態において、本明細書によるＣＣＲ７のリガンドは、任意の種のＣＣＲ７の人工又は合成リガンドであってもよい。
機能的外因性受容体は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）及びＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体であってもよい。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体はＣＡＲである。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体はＴＣＲである。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体はｃＴＣＲである。他の実施形態において、機能的外因性受容体はＴＡＣである。免疫エフェクター機能を実行することができる任意の免疫エフェクター細胞を本発明に使用することができ、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、好中球及び好酸球を含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、本明細書は、本明細書に記載の（例えば、以下のセクションに提供されるような）ポリペプチド、ポリヌクレオチド又はベクターのうちのいずれか一つを含む宿主細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）を提供する。
いくつかの特定の実施形態において、本明細書は、ＣＡＲ－Ｔ細胞を提供し、該細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する。いくつかの特定の実施形態において、本明細書は、ＴＣＲ－Ｔ細胞を提供し、該細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する。いくつかの特定の実施形態において、本明細書は、ＴＡＣ－Ｔ細胞を提供し、該細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する。
いくつかの特定の実施形態において、本明細書は、ＣＡＲ－Ｔ細胞を提供し、該細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現する。いくつかの特定の実施形態において、本明細書は、ＴＣＲ－Ｔ細胞を提供し、該細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現する。いくつかの特定の実施形態において、本明細書は、ＴＡＣ－Ｔ細胞を提供し、該細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現する。
７．２．１． Ｐ４０、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１
いくつかの実施形態において、本発明の操作された免疫エフェクター細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット又はその変異体と、ＣＣＬ－１９又はその変異体との特定の組み合わせを含む。他の実施形態において、本発明の操作された免疫エフェクター細胞は、外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット又はその変異体と、ＣＣＬ－２１又はその変異体との特定の組み合わせを含む。
本明細書で使用されるように、ｐ４０は、インターロイキン１２のサブユニットβであり、ＩＬ－１２Ｂ、ナチュラルキラー細胞刺激因子２、細胞傷害性リンパ球成熟因子ｐ４０又はインターロイキン－１２サブユニットｐ４０とも呼ばれ、且つヒトにおいてＩＬ１２Ｂ遺伝子によりコードされるタンパク質である。Ｐ４０は、インターロイキン１２及びインターロイキン２３の一般的なサブユニットである。いくつかの実施形態において、ｐ４０は、ＯＭＩＭ：１６１５６１、ＭＧＩ：９６５４０、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：１６４８、及び／又はＧｅｎｅＣａｒｄｓ：ＩＬ１２Ｂとして同定される。本明細書で使用されるｐ４０は、任意の種からのｐ４０を含む。本明細書で使用されるｐ４０は、その少なくとも一つの生物学的活性（例えば、その生物学的活性のうちの少なくとも８０％）を実質的に保持する任意のｐ４０変異体をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５との約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むｐ４０の少なくとも８０％の生物学的活性を保持した。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、分泌されたポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、膜結合性ポリペプチド（例えば、ＭＢ１２）である。
本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、当分野の既知の任意の技術で形成された膜結合性ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ｐ４０ポリペプチドは、膜アンカードメインを介して膜に結合される。いくつかの実施形態において、ｐ４０ポリペプチドは、膜貫通ドメインを介して膜に結合される。例示的膜貫通ドメインは、以下の膜貫通ドメインを含むが、それらに限らない：Ｔ細胞受容体のα、βもしくはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、Ｂ７、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤｌ ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒ β、ＩＬ－２Ｒ γ、ＣＤ８α、ＩＬ－７Ｒ ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ ｌａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ及び／又はＮＫＧ２Ｃ。いくつかの実施形態において、ｐ４０ポリペプチドは、膜結合性であり、第２のポリペプチド断片をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチド断片は、ＣＤ２８、ＣＤ８α、ＯＸ４０、及びＢ７からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ｐ４０断片及び第２のポリペプチド断片は、ペプチドリンカーを介して互いに連結される。いくつかの実施形態において、該リンカーペプチドは、フレキシブルリンカーである。例示的なフレキシブルリンカーは、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）、（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）を含み、ここで、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー及び当分野の既知の他のフレキシブルリンカーを含むが、それらに限らない。いくつかの実施形態において、本明細書による膜結合性ｐ４０ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、シグナルペプチド、ｐ４０、ＣＤ８αに由来するヒンジ及び膜貫通ドメイン、並びにＣＤ８αからの任意の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。具体的な実施形態において、本明細書による膜結合性ｐ４０ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、膜結合性ｐ４０ポリペプチドは、第３のポリペプチド断片をさらに含む。いくつかの実施形態において、該第３のポリペプチド断片は、ドミナントネガティブ受容体（ＤＮＲ）である。いくつかの実施形態において、該第３のポリペプチド断片は、ＴＧＦβＲＩＩ ＤＮＲである。いくつかの実施形態において、本明細書による膜結合性ｐ４０ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、シグナルペプチド、ｐ４０、ＴＧＦβＲＩＩ ＤＮＲ、ＣＤ８αに由来するヒンジ及び膜貫通ドメイン、並びにＣＤ８αからの任意の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ－１９）は、ヒトにおいてＣＣＬ１９遺伝子によりコードされるタンパク質であり、ＣＫｂ１１、ＥＬＣ、ＭＩＰ－３ｂ、ＭＩＰ３Ｂ、ＳＣＹＡ１９及びＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド１９とも呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－１９は、ＯＭＩＭ：６０２２２７、ＭＧＩ：５４３４４５９、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：４５６９、及び／又はＧｅｎｅＣａｒｄｓ：ＣＣＬ１９として同定される。本明細書で使用されるＣＣＬ－１９は、任意の種からのＣＣＬ－１９を含む。本明細書で使用されるＣＣＬ－１９は、その少なくとも一つの生物学的活性（例えば、その生物学的活性のうちの少なくとも８０％）を実質的に保持する任意のＣＣＬ－１９変異体をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ヒトＣＣＬ－１９又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６との約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＣＣＬ－１９の少なくとも８０％の生物学的活性を保持した。
ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ－２１）は、ＣＣケモカインファミリーに属するサイトカインである。ＣＣＬ－２１は、６Ｃｋｉｎｅ、ＣＫｂ９、ＥＣＬ、ＳＣＹＡ２１、ＳＬＣ、ＴＣＡ４及びＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド２１とも呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ－２１は、ＯＭＩＭ：６０２７３７、ＭＧＩ：１３４９１８３、ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：２２４７、及び／又はＧｅｎｅＣａｒｄｓ：ＣＣＬ２１として同定される。本明細書で使用されるＣＣＬ－２１は、任意の種からのＣＣＬ－２１を含む。本明細書で使用されるＣＣＬ－２１は、その少なくとも一つの生物学的活性（例えば、その生物学的活性のうちの少なくとも８０％）を実質的に保持する任意のＣＣＬ－２１変異体をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ヒトＣＣＬ－２１又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２との約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＣＣＬ－２１の少なくとも８０％の生物学的活性を保持した。
いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、且つ本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、且つ本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む。
二つの配列（例えば、アミノ酸配列又は核酸配列）の間の同一性パーセントは、数学的アルゴリズムを用いて決定することができる。二つの配列を比較するための数学的アルゴリズムの好ましい非限定的例は、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４ ２２６８（１９９０）のアルゴリズムであり、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３ ５８７７（１９９３）に修正された。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。本明細書に記載の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、例えば、スコア＝１００、ワード長さ＝１２であるＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットを用いて、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施してもよい。本明細書に記載のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア５０、ワード長さ＝３であるＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットを用いて、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施してもよい。比較目的のためのギャップありアライメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９ ３４０２（１９９７）に記載されたＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを使用することができる。代替的に、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴは、分子間の距離関係を検出する反復検索（Ｉｄ．）に用いられてもよい。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ及びＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを用いる場合、（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴの）対応するプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ワールドワイドウェブのアメリカ国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい）を使用することができる。配列を比較するための数学的アルゴリズムの別の非限定的例は、Ｍｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７（１９９８）のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、該プログラムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部である。ＡＬＩＧＮプログラムを用いてアミノ酸配列のアラインメントを行う場合、ＰＡＭ１２０重み残基テーブルを用いることができ、ギャップ長ペナルティは１２であり、且つギャップペナルティは４である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のｐ４０、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１の一つ又は複数のアミノ酸配列改変又は変化が企図される。変化は、元のポリペプチドに対するアミノ酸配列の変更をもたらす、ポリペプチドをコードする一つ又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってもよい。
アミノ酸置換は、セリンでロイシンを置換するように、似ている構造及び／又は化学的特性を有する別のアミノ酸でアミノ酸を置換した結果であってもよく、例えば、保存的アミノ酸置換であってもよい。当業者に周知の標準的技術は、本明細書による分子をコードするヌクレオチド配列に突然変異を導入するために用いられてもよく、例えば、アミノ酸置換を引き起こす部位特異的変異誘発とＰＣＲ媒介性変異誘発とを含む。挿入又は欠失は、任意選択的に、約１～５個のアミノ酸の範囲内であってもよい。いくつかの実施形態において、置換、欠失又は挿入は、元の分子に対して２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５個未満のアミノ酸置換、４個未満のアミノ酸置換、３個未満のアミノ酸置換又は２個未満のアミノ酸置換を含む。具体的な実施形態において、置換は、一つ又は複数の予測された非必須アミノ酸残基において行われた保存的アミノ酸置換である。許容される変化は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に行い、且つ得られた変異体の親ポリペプチドが示す活性を試験することによって決定することができる。
本開示は、保存的アミノ酸置換により産生されたポリペプチドを含む。保存的アミノ酸置換において、アミノ酸残基は、似ている電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基に置換される。以上に記載したように、当分野では、似ている電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーが定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β－分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。代替的に、突然変異は、全て又は一部のコード配列に沿って、例えば、飽和変異誘発によって、ランダムに導入されてもよく、且つ得られた突然変異体の生物学的活性をスクリーニングして、活性を保持する突然変異体を同定することができる。変異誘発後、コードされたタンパク質を発現することができ、且つタンパク質の活性を測定することができる。特性を保持するか又は著しく変えないために、保存的（例えば、似ている特性及び／又は側鎖を有するアミノ酸群内で）置換を行ってもよい。
アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に基づいてグループ分けすることができる（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７３－７５（第２版，１９７５）を参照されたい）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。代替的に、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいてグループ分けすることができる：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。例えば、分子の酸化安定性を向上させ、異常な架橋を防止するために、ペプチドの正確な立体配座の維持に関与しない任意のシステイン残基は、例えば、アラニン又はセリンのような別のアミノ酸で置換されてもよい。非保存的置換は、これらのクラスにおける一つのメンバーを別のクラスに交換する必要がある。
アミノ酸配列の挿入は、長さが一つの残基から百個又はそれ以上の残基を含むポリペプチドの範囲内にあるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端の融合と、単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入とを含む。変化は、オリゴヌクレオチド媒介性（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング及びＰＣＲ変異誘発のような当分野の既知の方法を用いて行ってもよい。ポリペプチド変異体ＤＮＡを産生するために、クローニングされたＤＮＡに対して、部位特異的変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２３７：１－７（１９８６）、及びＺｏｌｌｅｒら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７－５００（１９８２）を参照されたい）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら，Ｇｅｎｅ ３４：３１５－２３（１９８５）を参照されたい）又は他の既知の技術を行ってもよい。
７．２．２． キメラ抗原受容体
本発明の操作された免疫エフェクター細胞は、一つ又は複数の機能的外因性受容体を発現する。いかなる機能的外因性受容体も本開示に含まれている。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、以下で、本明細書による例示的機能的外因性受容体としてより詳しく説明されるが、本開示の範囲を限定するものではない。
いくつかの実施形態において、本発明の免疫エフェクター細胞におけるＣＡＲはポリペプチドを含み、該ポリペプチドは、（ａ）細胞外抗原結合ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、その各及び別の領域は、以下でより詳しく説明される。
細胞外抗原結合ドメイン
本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、一つ又は複数の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは単一特異性である。他の実施形態において、本明細書によるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは多重特異性である。他の実施形態において、本明細書によるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは一価である。他の実施形態において、本明細書によるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは多価である。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、二つ又はそれ以上の抗原結合ドメインを含み、これらの抗原結合ドメインは、直接ペプチド結合又はペプチドリンカーを介して互いと融合される。
いくつかの実施形態において、該細胞外抗原結合ドメインは、抗体又はその断片を含む。例えば、該結合ドメインは、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、完全長の又はインタクトなモノクローナル抗体を含む）、マルチエピトープ又はモノエピトープ特異性を有する抗体、ポリクローナル又は一価抗体、多価抗体、少なくとも二つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を呈する限り、二重特異性抗体）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体及びその断片（例えば、ドメイン抗体）に由来してもよい。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体及び／又は親和性成熟抗体並びに他の種（例えば、マウス、ウサギ、ラマなど）からの抗体であり得る。いくつかの実施形態において、抗体は、免疫グロブリン系ポリペプチドにおけるＢ細胞のポリペプチド生成物を含むことが意図され、それは、特定の分子抗原に結合する能力を有し、且つ二つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、ここで各対のポリペプチド鎖は、一本の重鎖（約５０～７０ｋＤａ）と一本の軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各本の鎖の各アミノ末端部分が約１００～約１３０個又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、且つ各本の鎖の各カルボキシ末端部分が定常領域を含む。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋによる編集，第２版１９９５）、及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版１９９７）を参照されたい。抗体は、合成抗体、組換えにより産生された抗体、ラクダ科種（例えば、ラマ又はアルパカ）由来を含む単一ドメイン抗体又はそれらのヒト化変異体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体及び上記のいずれかの機能性断片（例えば、抗原結合断片）をさらに含むが、それらに限らず、これらの機能性断片は、抗体重鎖又は軽鎖ポリペプチドの一部を指し、該断片の由来となった抗体の結合活性の一部又は全てを保持している。機能性断片（例えば、抗原結合断片）の非限定的な例としては、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合により連結されるＦｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書による抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原結合ドメイン又は抗原に結合する抗原結合部位を含有する分子（例えば、抗体の一つ又は複数のＣＤＲ）を含む。このような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓによる編集，１９９５）、Ｈｕｓｔｏｎら，１９９３，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ２２：１８９－２２４、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ及びＳｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７－５１５、並びにＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第２版，１９９０）を参照することができる。本明細書による抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であり得る。抗体は、アゴニスト抗体又はアンタゴニスト抗体であり得る。抗体は、アゴニストでもアンタゴニストでもないものであり得る。
具体的な実施形態において、本発明ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ又はｓｃＦｖ）を含む。ｓｃＦｖは、単一のポリペプチド鎖に連結されるＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、該ポリペプチドリンカーは、ｓＦｖが抗原結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅによる編集，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ページ２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
別の具体的な実施形態において、本発明ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、一つ又は複数の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。ｓｄＡｂは、同じ又は異なる供給源を有し、且つ同じ又は異なるサイズを有してもよい。例示的ｓｄＡｂは、重鎖のみを有する抗体からの重鎖可変ドメイン（例えば、ＶＨＨ又はＶＮＡＲ）、軽鎖を天然に欠いている結合分子、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン（例えば、ＶＨ又はＶＬ）、重鎖のみを有するヒト化抗体、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウス又はラットから産生されたヒト単一ドメイン抗体、並びに操作されたドメイン及び抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場を含むが、それらに限らない。本開示において上記された単一ドメイン抗体を含めて、当分野の既知又は本開示により開発された任意のｓｄＡｂは、本明細書に記載のＣＡＲの構築に用いることができる。ｓｄＡｂは、任意の種に由来してもよく、これらの種は、マウス、ラット、ヒト、ラクダ、ラマ、カワヤツメ、サカナ、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、それらに限らない。本明細書において企図される単一ドメイン抗体は、ラクダ科及びサメ以外の種からの天然に存在する単一ドメイン抗体分子をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ｓｄＡｂに由来する、天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子は、軽鎖を欠く重鎖抗体と呼ばれる（本明細書において「重鎖のみを有する抗体」とも呼ばれる）。例えば、このような単一ドメイン分子は、ＷＯ ９４／０４６７８及びＨａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．らＮａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）に開示されている。明確にするために、軽鎖を天然に欠く重鎖分子に由来する可変ドメインは、四鎖免疫グロブリンの従来のＶＨ領域と区別するために、本明細書においてＶＨＨと呼ばれる。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科種、例えばラクダ、ラマ、ビクーニャ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコから産生された抗体に由来してもよい。ラクダ科以外の他の種は、軽鎖を天然に欠く重鎖分子を産生することができ、且つこのようなＶＨＨは本開示の範囲内にある。なお、ＶＨＨのヒト化型並びに他の改変及び変異体も企図され、本開示の範囲内にある。いくつかの実施形態において、ｓｄＡｂは、軟骨魚に発見される免疫グロブリンの可変領域に由来する。例えば、ｓｄＡｂは、サメ血清に発見される、新規抗原受容体（ＮＡＲ）と呼ばれる免疫グロブリンアイソタイプに由来してもよい。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域に由来する単一ドメイン分子を産生する方法は、ＷＯ ０３／０１４１６１及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１４：２９０１－２９０９（２００５）に記載されている。
いくつかの実施形態において、天然に存在する、特定の抗原又は標的に対するＶＨＨドメインは、ラクダ科動物ＶＨＨ配列の（ナイーブ又は免疫）ライブラリーから得ることができる。このような方法は、前記抗原もしくは標的、又はその少なくとも一部、断片、抗原決定基又はエピトープ、一つ又は複数の当分野の既知のスクリーニング技術を用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることに関しても又は関しなくてもよい。このようなライブラリー及び技術は、例えば、ＷＯ ９９／３７６８１、ＷＯ ０１／９０１９０、ＷＯ ０３／０２５０２０及びＷＯ ０３／０３５６９４に記載されている。代替的に、（ナイーブ又は免疫）ＶＨＨライブラリーに由来する改善された合成又は半合成ライブラリー、例えば、ランダム変異誘発及び／又はＣＤＲシャッフリングのようなＷＯ ００／４３５０７に記載されている技術によって（ナイーブ又は免疫）ＶＨＨライブラリーから得たＶＨＨライブラリーを用いることができる。
いくつかの実施形態において、ｓｄＡｂは、組換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／又はインビトロで産生される（例えば、ファージディスプレイにより選択される）。いくつかの実施形態において、フレームワーク領域のアミノ酸配列は、フレームワーク領域における特定のアミノ酸残基の「ラクダ化」によって変化することができる。ラクダ化は、従来の４鎖抗体の（天然に存在する）ＶＨドメインからのアミノ酸配列のうちの一つ又は複数のアミノ酸残基が、重鎖抗体のＶＨＨドメインにおける一つ又は複数の対応する位置に存在する一つ又は複数のアミノ酸残基に置き換えられるか又は置換されることを指す。これは、当分野の既知のやり方で実施されてもよく、該やり方は当業者にとって明らかである。このような「ラクダ化」置換は、本明細書で定義されるように、ＶＨ－ＶＬ境界面を形成する及び／又は該ＶＨ－ＶＬ境界面に存在するアミノ酸位置、及び／又はいわゆるラクダ科標識的残基位置に挿入されることが好ましい（例えば、ＷＯ ９４／０４６７８、Ｄａｖｉｅｓ及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３３９：２８５－２９０（１９９４）、Ｄａｖｉｅｓ及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（６）：５３１－５３７（１９９６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５９：９５７－９６９（１９９６）、並びにＲｉｅｃｈｍａｎｎ及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５－３８（１９９９）を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、ｓｄＡｂは、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウス又はラットにより産生されたヒト単一ドメイン抗体である。例えば、ＵＳ ２００９０３０７７８７、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ ２０１５０２８９４８９、ＵＳ ２０１００１２２３５８及びＷＯ ２００４０４９７９４を参照されたい。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、従来の四鎖抗体により産生される。例えば、ＥＰ ０ ３６８ ６８４、Ｗａｒｄら，Ｎａｔｕｒｅ，３４１（６２４２）：５４４－６（１９８９）、Ｈｏｌｔら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１（１１）：４８４－４９０（２００３）、ＷＯ ０６／０３０２２０、及びＷＯ ０６／００３３８８を参照されたい。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又はその断片を含む。ヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域とヒト定常領域配列とを含んでもよい。
ヒト化抗体は、当分野の既知の様々な技術を用いて産生することができ、ＣＤＲ移植（欧州特許番号ＥＰ ２３９，４００、国際公開番号ＷＯ ９１／０９９６７、及び米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号及び同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又は再現化（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許番号ＥＰ ５９２，１０６及びＥＰ ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９－４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４、及びＲｏｇｕｓｋａら，１９９４，ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、及び例えば、以下に開示される技術を含むが、それらに限らない：米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、ＷＯ ９３／１７１０５、Ｔａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９ ２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０（２０００）、Ｍｏｒｅａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７ ７９（２０００）、Ｂａｃａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５ ９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３増刊）：５９７３ｓ－５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（８）：１７１７－２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ，Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０（１９９４）、及びＰｅｄｅｒｓｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５（３）：９５９－７３（１９９４）。さらに、米国特許第ＵＳ ２００５／００４２６６４ Ａ１号（２００５年２月２４日）を参照されたく、そのうちの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法は、当分野の既知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒト由来から導入された一つ又は複数のアミノ酸残基を有してもよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、通常、「インポート」残基と呼ばれ、これらの残基は、典型的に、「インポート」可変ドメインから取られる。例えば、ヒト化は、以下の方法に従って、超可変領域配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって実施され得る：Ｊｏｎｅｓら，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７、及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６。
いくつかの場合に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植により構築され、ここで、親非ヒト抗体（例えば、齧歯動物）の六つのＣＤＲのアミノ酸配列は、ヒト抗体フレームワークに移植される。例えば、Ｐａｄｌａｎらは、抗原に実際に接触するのがＣＤＲ中の残基の約三分の一のみであることを明らかにし、これらを「特異性決定残基」又はＳＤＲ（Ｐａｄｌａｎら，１９９５，ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－３９）と呼んだ。ＳＤＲ移植技術において、ＳＤＲ残基のみがヒト抗体フレームワークに移植される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４を参照されたい）。
抗原性を低減するには、ヒト化抗体を作製するためのヒト（軽鎖及び重鎖）可変ドメインの選択が重要となり得る。例えば、いわゆる「最良適合」方法により、周知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対して非ヒト（例えば、齧歯動物）抗体の可変ドメインの配列をスクリーニングする。齧歯動物に最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワークとして選択してもよい（Ｓｉｍｓら，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６－３０８、及びＣｈｏｔｈｉａら，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７）。別の方法では、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを用いる。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体に用いることができる（Ｃａｒｔｅｒら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９、及びＰｒｅｓｔａら，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３－３２）。いくつかの場合に、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラスＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）及びＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来する。別の方法では、ヒト生殖系列遺伝子は、フレームワーク領域の供給源として用いられる。
ＣＤＲの比較に基づく代替的なパラダイムでは、超ヒト化と呼ばれ、ＦＲの相同性は無関係である。該方法は、非ヒト配列と機能的ヒト生殖系列遺伝子レパートリーとの比較からなる。そして、マウス配列と同じ又は近縁のカノニカル構造をコードする遺伝子を選択する。続いて、非ヒト抗体とカノニカル構造を共有する遺伝子において、ＣＤＲ内で最も高い相同性を有する遺伝子をＦＲドナーとして選択する。最後に、非ヒトＣＤＲをこれらのＦＲに移植する（例えば、Ｔａｎら，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－２５を参照されたい）。
さらに、通常、抗原に対するその親和性及び他の有利に作用する生物学的特性を保持するために抗体をヒト化することが望ましい。該目標を実現するために、一つの方法によれば、親及びヒト化配列の三次元モデルを用いて親配列及び様々な概念的ヒト化生成物を分析する方法によってヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に入手可能であり、且つ当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の三次元立体配座構造を説明し表示するコンピュータプログラムを得ることができる。これらは、例えば、ＷＡＭ（Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ及びＲｅｅｓ，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：８１９－２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Ｓａｌｉ及びＢｌｕｎｄｅｌｌ，１９９３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９－８１５）及びＳｗｉｓｓ ＰＤＢ Ｖｉｅｗｅｒ（Ｇｕｅｘ及びＰｅｉｔｓｃｈ，１９９７，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １８：２７１４－２３）を含む。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な作用の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能にする。このように、受容体及びインポート配列からＦＲ残基を選択し組み合わせることによって、一つ又は複数の標的抗原に対する親和性の増加のような、必要な抗体特徴を得ることができる。通常、抗原結合に影響を与える点では、超可変領域残基は直接且つ最も顕著に関与する。
別の抗体ヒト化方法は、ヒトストリングコンテント（Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒｉｎｇ Ｃｏｎｔｅｎｔ、ＨＳＣ）と呼ばれる抗体ヒト化度の計量に基づく。該方法は、マウス配列をヒト生殖系列遺伝子レパートリーと比較し、その差異をＨＳＣとしてスコア化する。そして、大域的な同一性尺度を用いるのではなく、そのＨＳＣを最大にすることによって、標的配列をヒト化して、複数の異なるヒト化変異体を産生する（Ｌａｚａｒら，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１９８６－９８）。
上記方法に加えて、ヒト化抗体を産生し選択するために経験的方法も使用され得る。これらの方法は、ヒト化変異体の大規模ライブラリーの作成及びエンリッチメント技術又はハイスループットスクリーニング技術を用いた最適なクローンの選択に基づく方法を含む。抗体変異体は、ファージ、リボソーム及び酵母ディスプレイライブラリーから並びに細菌コロニースクリーニングにより単離され得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５－１６、Ｄｕｆｎｅｒら，２００６，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：５２３－２９、Ｆｅｌｄｈａｕｓら，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１６３－７０、及びＳｃｈｌａｐｓｃｈｙら，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７：８４７－６０を参照されたい）。
ＦＲライブラリー方法において、ＦＲ内の特定の位置に一纏まりの残基変異体を導入し、そしてライブラリーのスクリーニングにより、移植されたＣＤＲを最良に支持するＦＲを選択する。置換対象残基は、ＣＤＲ構造に寄与する可能性があると同定される「バーニア」残基の一部又は全部（例えば、Ｆｏｏｔｅ及びＷｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－９９）、又はＢａｃａら（１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－８４）の同定からのより限定的な一組の標的残基を含んでもよい。
ＦＲシャッフリングにおいて、ＦＲ全体は、選択された残基変異体のコンビナトリアルライブラリーを作成することなく、非ヒトＣＤＲと組み合わせる（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０を参照されたい）。ライブラリーは、結合するために２段階のプロセス（まずはＶＬヒト化、次にＶＨ）においてスクリーニングされ得る。代替的に、ワンステップＦＲシャッフリングプロセスを用いてもよい。このような方法は、得られた抗体が、増強した発現、増加した親和性及び熱安定性を含む、改善された生物化学的及び物理化学的特性を示すため、２段階のスクリーニングよりも有効であることが証明される、（例えば、Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒら，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３０４９－６０を参照されたい）。
「ヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）」方法は、必須の最小特異性決定基（ｍｉｎｉｍｕｍ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ、ＭＳＤ）の実験的同定に基づき、ヒトＦＲライブラリーへの非ヒト断片の逐次置き換え及び結合の評価に基づく。それは、非ヒトＶＨ及びＶＬ鎖のＣＤＲ３領域から開始し、ＶＨ及びＶＬのＣＤＲ１及びＣＤＲ２を含む非ヒト抗体の他の領域を次第に置換してヒトＦＲに入る。該方法は、通常、エピトープが、異なるヒトＶセグメントＣＤＲを有する複数のサブクラスからの抗体を保持し同定することを引き起こす。ヒューマニアリングは、ヒト生殖系列遺伝子抗体との９１％～９６％の相同性を有する抗体の単離を可能にする（例えば、Ａｌｆｒｅｉｔｏ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの第３回年度ＰＥＧＳ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｕｍｍｉｔ，２００７を参照されたい）。
「ヒト操作（ｈｕｍａｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）」方法は、抗体のアミノ酸配列に対して特異的な変更を行って非ヒト抗体又は抗体断片（例えば、マウスもしくはキメラ抗体又は抗体断片）を変化させることによって、ヒトにおいて低下した免疫原性を有する改変された抗体を産生することに関し、該改変された抗体は、元の非ヒト抗体の必要な結合特性を依然として保持している。通常、該技術は、非ヒト（例えば、マウス）抗体のアミノ酸残基を「低リスク」、「中間リスク」又は「高リスク」残基に分類することに関する。分類は、全体的リスク／リターン計算を用いて行われ、該計算は、特定の置換（例えば、ヒトの免疫原性に対する）の予測利益、及び置換が得られた抗体の折り畳みに影響を及ぼすリスクを評価する。非ヒト抗体可変領域からのアミノ酸配列を、特定又はコンセンサスヒト抗体の配列の対応する領域とアラインメントすることにより、非ヒト（例えば、マウス）抗体配列の所与の位置（例えば、低リスク又は中間リスク）において置換されることになる特定のヒトアミノ酸残基を選択することができる。非ヒト配列における低リスク又は中間リスク位置のアミノ酸残基は、アラインメントによりヒト抗体配列における対応する残基を置換することができる。ヒト操作タンパク質を作製するための技術については、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５－１４、米国特許第５，７６６，８８６、同第５，７７０，１９６号、同第５，８２１，１２３号及び同第５，８６９，６１９号、並びにＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１１７９４に更に詳細に記載されている。
複合ヒト抗体は、例えば、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（商標）技術（Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を用いて産生され得る。複合ヒト抗体を産生するために、Ｔ細胞エピトープを回避するように複数のヒト抗体可変領域配列の断片から可変領域配列を設計することによって、得られた抗体の免疫原性を最小限する。このような抗体は、ヒト定常領域配列、例えば、ヒト軽鎖及び／又は重鎖定常領域を含んでもよい。
脱免疫化抗体は、その中のＴ細胞エピトープが除去された抗体である。脱免疫化抗体を作製するための方法が記載されている。例えば、Ｊｏｎｅｓら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９；５２５：４０５－２３，ｘｉｖ及びＤｅ Ｇｒｏｏｔら，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４：１４８－１５３（２００６）を参照されたい。脱免疫化抗体は、Ｔ細胞エピトープが欠失している可変領域及びヒト定常領域を含む。簡単に説明すると、抗体のＶＨ及びＶＬをクローニングし、続いてＴ細胞増殖アッセイにおいて抗体ＶＨ及びＶＬに由来するオーバーラップペプチドを試験することによってＴ細胞エピトープを同定する。コンピュータ方法によってＴ細胞エピトープを同定してヒトＭＨＣ ＩＩクラスに結合するペプチドを同定する。ＶＨ及びＶＬに突然変異を導入してヒトＭＨＣ ＩＩクラスとの結合を除去する。そして、突然変異したＶＨ及びＶＬを用いて脱免疫化抗体を産生する。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、複数の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、多重特異性抗体又はその断片を含み、例えば、細胞外抗原結合ドメインは、直列に接続された複数の結合ドメイン（例えば、複数のｓｃＦｖ）を含む。他の実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、多価抗体又はその断片を含む。用語「特異性」は、抗原結合タンパク質による抗原特定エピトープに対する選択的認識を指す。本明細書で使用されるように、用語「多重特異性」は、抗原結合タンパク質が二つ又はそれ以上の抗原結合部位を有することを示し、ここで、少なくとも二つが異なる抗原に結合する。本明細書で使用されるように、用語「価」は、抗原結合タンパク質に指定された数の結合部位が存在することを示す。全長抗体は、二つの結合部位であり、且つ二価である。このように、用語「三価」、「四価」、「五価」及び「六価」はそれぞれ、抗原結合タンパク質に二つの結合部位、三つの結合部位、四つの結合部位、五つの結合部位及び六つの結合部位が存在することを示す。
二重特異性抗体のような多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる抗原に対して結合特異性を有する抗体である。二つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアを共発現するような、多重特異性抗体を作製するための方法は、当分野の既知のものであり、ここで、二つの重鎖は異なる特異性を有する（例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７－４０を参照されたい）。多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）の産生の更なる詳細については、例えば、二重特異性抗体（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎによる編集，２０１１）を参照されたい。
抗体は、二つ又はそれ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）であり、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により該抗体を容易に産生することができる。いくつかの実施形態において、多価抗体は、三個から約八個の抗原結合部位を含む（又は三個から約八個の抗原結合部位で構成される）。このような実施形態において、多価抗体は、四つの抗原結合部位を含む（又は四つの抗原結合部位で構成される）。多価抗体は、少なくとも一本のポリペプチド鎖（例えば、二本のポリペプチド鎖）を含み、ここで、一本又は複数本のポリペプチド鎖は、二つ又はそれ以上の可変ドメインを含む。例えば、一本又は複数本のポリペプチド鎖は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含んでもよく、ここで、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の一本のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸又はポリペプチドを示し、且つｎは０又は１である。例えば、一本又は複数本のポリペプチド鎖は、ＶＨ－ＣＨ１－フレキシブルリンカー－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖、又はＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖を含んでもよい。本明細書における多価抗体は、少なくとも二つ（例えば、四つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含んでもよい。例えば、本明細書における多価抗体は、約二つから約八つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでもよい。本明細書で企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、且つ任意選択的にＣＬドメインを含む。
本発明ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインに複数の結合ドメインが存在する場合に、様々なドメインは、ペプチドリンカーを介して互いと融合されることができる。いくつかの実施形態において、ドメインは、いかなるペプチドリンカーもなしに、直接互いと融合される。ペプチドリンカーは、同じであってもよいか、又は異なってもよい。各ペプチドリンカーは、様々なドメインの構造及び／又は機能的特徴に応じて、同じ又は異なる長さ及び／又は配列を有してもよい。各ペプチドリンカーは、独立して選択され、最適化され得る。ＣＡＲに使用される一つ又は複数のペプチドリンカーの長さ、柔軟度及び／又は他の特性は、特性に何らかの影響を与える可能性があり、一つ又は複数の特定抗原又はエピトープに対する親和性、特異性又はアビディティを含むが、それらに限らない。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、フレキシブル残基（例えば、グリシン及びセリン）を含み、それによって隣接するドメインは、互いに自由に移動する。例えば、グリシン－セリン二剤は、適切なペプチドリンカーであってもよい。
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列又は非天然に存在する配列を有してもよい。例えば、重鎖のみを有する抗体に由来するヒンジ領域の配列は、リンカーとして用いられてもよい。例えばＷＯ １９９６／３４１０３を参照されたい。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、フレキシブルリンカーである。例示的フレキシブルリンカーは、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）、（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）及び（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）を含み、ここで、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー及び当分野の既知の他のフレキシブルリンカーを含むが、それらに限らない。例えば、以下に記載の当分野の既知の他のリンカーは、本明細書によるＣＡＲに含まれていてもよい：ＷＯ ２０１６０１４７８９、ＷＯ ２０１５１５８６７１、ＷＯ ２０１６１０２９６５、ＵＳ ２０１５０２９９３１７、ＷＯ ２０１８０６７９９２、ＵＳ ７７４１４６５、Ｃｏｌｃｈｅｒら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：１１９１－１１９７（１９９０）、及びＢｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）、ここで、各開示内容は、参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態において、本発明のＣＡＲにおいて提供される細胞外抗原結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞における細胞表面マーカーとして作用する抗原を認識する。いくつかの実施形態において、抗原は腫瘍抗原である。腫瘍は、免疫応答（特にＴ細胞媒介性免疫応答）の標的抗原として作用できるタンパク質を発現する。ＣＡＲが標的とする抗原は、単一の病変細胞における抗原、又はそれぞれ疾患に影響を与える異なる細胞で発現する抗原である。ＣＡＲが標的とする抗原は、疾患に直接又は間接的に関与する可能性がある。
いくつかの実施形態において、標的細胞の抗原は、がん細胞表面における抗原である。いくつかの実施形態において、該抗原は、腫瘍特異性抗原、腫瘍関連抗原又は新生抗原である。
いくつかの実施形態において、標的細胞はがん細胞であり、例えば、以下のがんの細胞である：副腎がん、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、食道がん、胆嚢がん、妊娠性絨毛がん、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腸がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、副鼻腔がん、皮膚がん、軟部組織肉腫、脊椎がん、胃がん、精巣がん、咽頭がん、甲状腺がん、子宮がん、子宮内膜がん、膣がん又は外陰がん。いくつかの実施形態において、がんは、副腎がん、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、食道がん、胆嚢がん、妊娠性絨毛がん、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腸がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、副鼻腔がん、皮膚がん、軟部組織肉腫、脊椎がん、胃がん、精巣がん、咽頭がん、甲状腺がん、子宮がん、子宮内膜がん、膣がん又は外陰がんである。いくつかの実施形態において、がんは、副腎がんである。いくつかの実施形態において、がんは、肛門がんである。いくつかの実施形態において、がんは、虫垂がんである。いくつかの実施形態において、がんは、胆管がんである。いくつかの実施形態において、がんは、膀胱がんである。いくつかの実施形態において、がんは、骨がんである。いくつかの実施形態において、がんは、脳がんである。いくつかの実施形態において、がんは、乳がんである。いくつかの実施形態において、がんは、子宮頸がんである。いくつかの実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。いくつかの実施形態において、がんは、食道がんである。いくつかの実施形態において、がんは、胆嚢がんである。いくつかの実施形態において、がんは、妊娠性絨毛がんである。いくつかの実施形態において、がんは、頭頸部がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは、腸がんである。いくつかの実施形態において、がんは、腎臓がんである。いくつかの実施形態において、がんは、白血病である。いくつかの実施形態において、がんは、肝臓がんである。いくつかの実施形態において、がんは、肺がんである。いくつかの実施形態において、がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、がんは、中皮腫である。いくつかの実施形態において、がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。いくつかの実施形態において、がんは、神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、がんは、非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは、口腔がんである。いくつかの実施形態において、がんは、卵巣がんである。いくつかの実施形態において、がんは、膵臓がんである。いくつかの実施形態において、がんは、前立腺がんである。いくつかの実施形態において、がんは、副鼻腔がんである。いくつかの実施形態において、がんは、皮膚がんである。いくつかの実施形態において、がんは、軟部組織肉腫、脊椎がんである。いくつかの実施形態において、がんは、胃がんである。いくつかの実施形態において、がんは、精巣がんである。いくつかの実施形態において、がんは、咽頭がんである。いくつかの実施形態において、がんは、甲状腺がんである。いくつかの実施形態において、がんは、子宮がん、子宮内膜がんである。いくつかの実施形態において、がんは、膣がんである。いくつかの実施形態において、がんは、外陰がんである。
いくつかの実施形態において、副腎がんは、副腎皮質がん（ＡＣＣ）、副腎皮質がん、褐色細胞腫又は神経芽細胞腫である。いくつかの実施形態において、肛門がんは、扁平上皮がん、総排泄腔がん、腺がん、基底細胞がん又は黒色腫である。いくつかの実施形態において、虫垂がんは、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液腺がん、杯細胞カルチノイド、腸腺がん又は印環細胞型腺がんである。いくつかの実施形態において、胆管がんは、肝外胆管がん、腺がん、肝門部胆管がん、肝門領域胆管がん、遠位胆管がん又は肝内胆管がんである。いくつかの実施形態において、膀胱がんは、移行上皮がん（ＴＣＣ）、乳頭状がん、扁平がん、扁平上皮がん、腺がん、小細胞がん又は肉腫である。いくつかの実施形態において、骨がんは、原発性骨がん、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、繊維肉腫、悪性繊維性組織球腫、骨巨細胞腫、脊索腫又は転移性骨がんである。いくつかの実施形態において、脳がんは、星細胞腫、脳幹神経膠腫、膠芽腫、髄膜腫、上衣細胞腫、乏突起神経膠腫、混合神経膠腫、下垂体腺がん、下垂体腺瘤、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髓芽細胞腫又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。いくつかの実施形態において、乳がんは、乳腺がん、浸潤性乳がん、非浸潤性乳がん、乳房肉腫、化生性がん、腺様嚢胞がん、叶状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳がん、トリプルネガティブ乳がん又は炎症性乳がんである。いくつかの実施形態において、子宮頸がんは、扁平上皮がん又は腺がんである。いくつかの実施形態において、結腸直腸がんは、結腸直腸腺がん、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液腺がん、印環細胞型腺がん、消化管カルチノイド腫瘍又は黒色腫である。いくつかの実施形態において、食道がんは、腺がん又は扁平上皮がんである。いくつかの実施形態において、胆嚢がんは、腺がん、乳頭状腺がん、腺扁平上皮がん、扁平上皮がん、小細胞がん又は肉腫である。いくつかの実施形態において、妊娠性絨毛疾患（ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＮ）、絨毛がん、胎盤部トロホブラスト腫瘍（ＰＳＴＴ）又は類上皮性トロホブラスト腫瘍（ＥＴＴ）である。いくつかの実施形態において、頭頸部がんは、喉頭がん、鼻咽頭がん、下咽頭がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、唾液腺がん、口腔がん、中咽頭がん又は扁桃がんである。いくつかの実施形態において、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節性硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型又は結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である。いくつかの実施形態において、腸がんは、小腸がん（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん（ｓｍａｌｌ ｂｏｗｅｌ ｃａｎｃｅｒ）、腺がん、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍又はリンパ腫である。いくつかの実施形態において、腎臓がんは、腎細胞がん（ＲＣＣ）、淡明細胞型ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行上皮がん、尿路上皮がん、腎盂がん又は腎肉腫である。いくつかの実施形態において、白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。具体的な実施形態において、白血病はＡＭＬである。いくつかの実施形態において、肝臓がんは、肝細胞がん（ＨＣＣ）、繊維層板様ＨＣＣ、胆管がん、血管肉腫又は肝転移である。いくつかの実施形態において、肺がんは、小細胞肺がん、小細胞がん、複合小細胞がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、扁平上皮肺がん、大細胞性未分化がん、肺結節、転移性肺がん、腺扁平上皮がん、大細胞神経内分泌がん、唾液腺型肺がん、肺カルチノイド、中皮腫、肺肉腫様がん又は悪性顆粒細胞肺腫瘍である。いくつかの実施形態において、黒色腫は、表在拡大型黒色腫、結節型黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子型、無色素性黒色腫、結合組織増殖性黒色腫、眼黒色腫又は転移性黒色腫である。いくつかの実施形態において、中皮腫は、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫又は精巣中皮腫である。いくつかの実施形態において、多発性骨髄腫は、症候性骨髄腫又はくすぶり型骨髄腫である。いくつかの実施形態において、神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍又は肺神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆体Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、有毛細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞性リンパ腫、中枢神経系原発（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節内性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリバート-バザン（Ａｌｉｂｅｒｔ－Ｂａｚｉｎ）症候群、セザリー症候群（Ｓｅｚａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸疾患関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）又は肝脾γ／δ Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態において、口腔がんは、扁平上皮がん、疣状がん、小唾液腺がん、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫症、繊維腫、顆粒細胞腫、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨瘤、脂肪腫、神経鞘腫、神経繊維腫、乳頭状瘤、尖圭コンジローマ、疣状黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白斑、紅斑、扁平上皮口唇がん、基底細胞口唇がん、口がん、歯肉がん又は舌がんである。いくつかの実施形態において、卵巣がんは、上皮性卵巣がん、粘液性上皮卵巣がん、子宮内膜様上皮卵巣がん、上皮性卵巣淡明細胞がん、未分化上皮性卵巣がん、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜がん、卵管がん、胚細胞腫、奇形腫、未分化胚細胞腫、卵巣胚細胞がん、内胚葉洞腫瘍、性索－間質性腫瘍、性索－性腺間質性腫瘍、卵巣間質性腫瘍、顆粒細胞腫、顆粒－卵胞膜細胞腫、セルトリ－ライデッヒ細胞腫（Ｓｅｒｔｏｌｉ－Ｌｅｙｄｉｇ ｔｕｍｏｒ）、卵巣肉腫、卵巣がん肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣繊維肉腫、クルーケンベルグ腫瘍（Ｋｒｕｋｅｎｂｅｒｇ ｔｕｍｏｒ）又は卵巣嚢胞である。いくつかの実施形態において、膵臓がんは、膵外分泌腺がん、膵内分泌腺がん又は膵臓腺がん、膵島細胞腫又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、前立腺がんは、前立腺腺がん、前立腺肉腫、移行上皮がん、小細胞がん又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、副鼻腔がんは、扁平上皮がん、粘膜細胞がん、腺様嚢胞がん 、腺房細胞がん、鼻副鼻腔未分化がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、上顎洞がん、篩骨洞がん又は鼻咽頭がんである。いくつかの実施形態において、皮膚がんは、基底細胞がん、扁平上皮がん、黒色腫、メルケル細胞がん（Ｍｅｒｋｅｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、カポジ肉腫（ＫＳ）、光線性角化症、皮膚リンパ腫又は角化棘皮瘤である。いくつかの実施形態において、軟部組織がんは、血管肉腫、皮膚繊維肉腫、上皮様肉腫、ユーイング肉腫（Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、繊維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液型／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、脂肪腫様脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性繊維性組織球腫、神経繊維肉腫、肉腫肉腫（ＲＭＳ）又は滑膜肉腫である。いくつかの実施形態において、脊椎がんは、転移性脊椎腫瘍である。いくつかの実施形態において、胃がんは、胃腺がん、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド又はＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである。いくつかの実施形態において、精巣がんは、精上皮腫、非精上皮腫、胎児がん、卵黄嚢がん、絨毛がん、畸胎瘤、性腺間質性腫瘍、精巣ライデッヒ細胞腫又は精巣セルトリ細胞腫である。いくつかの実施形態において、咽頭がんは、扁平上皮がん、腺がん、肉腫、喉頭がん、咽頭がん、鼻咽頭がん、中咽頭がん、下咽頭がん、喉頭がん、喉頭扁平上皮がん、喉頭腺がん、リンパ上皮腫、紡錘細胞がん、疣状がん、未分化がん又はリンパ節がんである。いくつかの実施形態において、甲状腺がんは、乳頭状がん、濾胞がん、ヒュルトレ細胞がん、甲状腺髄様がん又は未分化がんである。いくつかの実施形態において、子宮がんは、子宮内膜がん、子宮内膜腺がん、子宮内膜様がん、漿液性腺がん、腺扁平上皮がん、子宮がん肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫又は未分化肉腫である。いくつかの実施形態において、膣がんは、扁平上皮がん、腺がん、黒色腫又は肉腫である。いくつかの実施形態において、外陰がんは、扁平上皮がん又は腺がんである。
腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞媒介性免疫応答の腫瘍細胞により産生されたタンパク質である。例示的腫瘍抗原は、神経膠腫関連抗原、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、甲状腺グロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺酵素、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ｐ５３、プロスタグランジン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン及びテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体及びメソテリンを含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＣＥＡ、未熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロライドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソテリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー抗原、ＣＡＧＥファミリー抗原、ＧＡＧＥファミリー抗原、ＭＡＧＥファミリー抗原、ＳＡＧＥファミリー抗原、ＸＡＧＥファミリー抗原、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００、ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、Ｐ．ポリペプチド、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異抗原、β－カテニン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ又はＭＵＣ１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＣＥＡである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、未熟ラミニン受容体である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＴＡＧ－７２である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＨＰＶ Ｅ６である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＨＰＶ Ｅ７である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＢＩＮＧ－４である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、カルシウム活性化クロライドチャネル２である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、サイクリン－Ｂ１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、９Ｄ７である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＥｐＣＡＭである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＥｐｈＡ３である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、テロメラーゼである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、メソテリンである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＳＡＰ－１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、サバイビンである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＢＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＣＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＧＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＭＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＳＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＸＡＧＥファミリー抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＰＲＡＭＥである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＳＳＸ－２である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、Ｍｅｌａｎ－Ａである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＭＡＲＴ－１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、Ｇｐ１００である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ｐｍｅｌ１７である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、チロシナーゼである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＴＲＰ－１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＴＲＰ－２である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、Ｐ．ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＭＣ１Ｒである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、前立腺特異抗原である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、β－カテニンである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＢＲＣＡ１である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＢＲＣＡ２である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＣＤＫ４である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＣＭＬ６６である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、フィブロネクチンである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＭＡＲＴ－２である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ｐ５３である。いくつかの実施形態において、がん抗原は、Ｒａｓである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＴＧＦ－βＲＩＩである。いくつかの実施形態において、がん抗原は、ＭＵＣ１である。
いくつかの実施形態において、該腫瘍抗原は、悪性腫瘍に関連する一つ又は複数の抗原がんエピトープである。悪性腫瘍は、免疫チャレンジとして用いられ得る標的抗原の多くのタンパク質を発現する。これらの分子は、組織特異性抗原、例えば、黒色腫におけるＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ及びｇｐ１００、並びに前立腺がんにおける前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を含むが、それらに限らない。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ－２のような形質転換に関連する分子群に属する。標的抗原のさらなる群は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）のようながん胎児性抗原である。
いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、腫瘍特異性抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞に特有のものであり、且つ体内の他の細胞には存在しない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞に特有のものではなく、逆に抗原に対する免疫寛容状態を誘導できない条件下で正常な細胞で発現することもできる。腫瘍での抗原の発現は、免疫系による抗原に対する応答を可能にする条件下で発生し得る。ＴＡＡは、免疫系が未熟で応答不能な胚発生中に正常な細胞で発現する抗原であり得るか、又は正常細胞で通常極めて低いレベルで正常に存在するが、腫瘍細胞で遙かに高いレベルで発現する抗原であり得る。
ＴＳＡ又はＴＡＡ抗原の非限定的例としては、ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－Ｉ）、ｇｐ １００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２のような分化抗原、及びＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５のような腫瘍特異性多重系統抗原、ＣＥＡのような過剰発現の胎児性抗原、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕのような過剰発現のがん遺伝子及び突然変異的した腫瘍抑制遺伝子、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲのような染色体転座により産生された独特の腫瘍抗原、並びにエプスタイン－バールウイルス抗原ＥＢＶＡ及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６とＥ７のようなウイルス抗原が挙げられる。
タンパク質に基づく他の大型の抗原は、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ １９－９、ＣＡ ７２－４、ＣＡＭ １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ １５、ｐ １６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ １２５、ＣＡ １５－３＼ＣＡ ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ １９５、ＣＡ ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ １、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０＼Ｍａｃ－２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ及びＴＰＳを含む。
本明細書によるＣＡＲの他の非限定的例示的標的としては、ＧＰＣ２、ＣＤ２７６、δ様タンパク質リガンド３（ＤＬＬ３）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、黒色腫関連抗原４、サバイビン、滑膜肉腫Ｘブレークポイント２タンパク質、ＣＤ３、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ｅｒｂｂ２チロシンキナーゼ受容体、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＣＤ６６、ＣＤ６６ｅ、ＲＯＲ１、ｎｔｒｋｒ１チロシンキナーゼ受容体、ＧＰＣ３、クローディン１８．２、メソテリン、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ、ＰＭＳＡ、ＰＤ－Ｌ１、葉酸受容体α、ＰＳＣＡ、ムチン１、ＨＬＡ抗原（例えば、ＨＬＡクラスＩ抗原Ａ－２ α、ＨＬＡ クラスＩ抗体Ａ－１１α及びＨＬＡ クラスＩＩ抗原）、ｃ－Ｍｅｔ、肝細胞成長因子受容体、Ｋ－Ｒａｓ ＧＴＰ酵素（ＫＲＡＳ）、ＩＬ－１５受容体、Ｋｉｔチロシンキナーゼ、ＰＤＧＦ受容体β、ＲＥＴチロシンキナーゼ受容体、Ｒａｆ １プロテインキナーゼ、Ｒａｆ Ｂプロテインキナーゼ、チミジル酸合成酵素、トポイソメラーゼＩＩ、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙタンパク質、Ｆｌｔ３チロシンキナーゼ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦ－１受容体、ＶＥＧＦ－２受容体及びＶＥＧＦ－３受容体）、エストロゲン受容体、新生抗原、ヒトパピローマウイルスＥ６及び熱ショックタンパク質が挙げられる。
いくつかの特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ１９である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ２０である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ２２である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＢＣＭＡである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＶＥＧＦＲ２である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＦＡＰである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＥｐＣａｍである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＧＰＣ３である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、クローディン１８．２である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ１３３である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＩＬ１３Ｒａである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＥＧＦＲＩＩＩである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＥｐｈＡ２である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、Ｍｕｃ１である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ７０である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ１２３である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＲＯＲ１である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＰＳＭＡである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ５である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＧＤ２である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＧＡＰである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＤ３３である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＣＥＡである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、ＰＳＣＡである。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、Ｈｅｒ２である。他の特定の実施形態において、本発明ＣＡＲの少なくとも一つの標的抗原は、メソテリンである。
いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＡＲは、Ｂ細胞抗原に結合する。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５０、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ６０ａ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７５Ｓ、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５Ｅ、ＣＤ８５Ｉ、ＣＤ８５Ｊ、ＣＤ８６、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０２、ＣＤ１０８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＣＤ１３２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ１６２、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１８０、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９２、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ２００、ＣＤ２０５、ＣＤ２０１ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ ２１５、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２１８ｂ、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２５２、ＣＤ２５２、ＣＤ２５４、ＣＤ２５５、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２５９、ＣＤ２６０、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７７、ＣＤ２７９、ＣＤ２８３、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３００、ＣＤ３００ｃ、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７ａ、ＣＤ３０７ｂ、ＣＤ３０７ｃ、ＣＤ３０７ｄ、ＣＤ３０７ｅ、ＣＤ３１４、ＣＤ２１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１９、ＣＤ３２１、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３８、ＣＤ３５１、ＣＤ３５２、ＣＤ３５３、ＣＤ３５４、ＣＤ３５５、ＣＤ３５６、ＣＤ３５７、ＣＤ３５８、ＣＤ３６０、ＣＤ３６１、ＣＤ３６２又はＣＤ３６３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ｃ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１ｄ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１ｃ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＡ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＢ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＣ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４５ＲＯ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４９ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４９ｃ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ４９ｄ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６０ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６２Ｌ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ６９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７５Ｓ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７９ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ７９ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８５Ｅ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８５Ｉ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８５Ｊ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ８６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ９９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１００抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１０２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１０８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１１９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２０ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２０ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２１ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１２６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１３９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１４７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１４８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１５０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１５２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１６７ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１７５ｓ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１８５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２００抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２０５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２０１ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤｗ２１０ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１３ａ１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１３ａ２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ ２１５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１８ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１８ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２
２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２２９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２３０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２３２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２５９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２６９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２７９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２８３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２８９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２９８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３００抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３００ｃ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ａ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｂ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｃ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｄ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３０７ｅ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ２１５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３１９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３２９抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３３８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５３抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５４抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５５抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５６抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５７抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３５８抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６０抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６１抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６２抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ３６３抗原である。
一実施形態において、本発明ＣＡＲの標的は病原体である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、病原体を含む細胞である。
いくつかの実施形態において、病原体は、以下からなる群から選択される感染性疾患を引き起こす：急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）、アナプラズマ病、アンスラックス、バベシア症（Ｂａｂｅｓｉｏｓｉｓ）、ボツリヌス中毒（Ｂｏｔｕｌｉｓｍ）、ブルセラ症（Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ）、カンピロバクター感染症（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｏｓｉｓ）、カルバペネム耐性感染症、軟性下疳、チクングニアウイルス感染症（Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、クラミジア疾患、魚からのボツリヌス、ディフィシル感染症（Ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、ウエルシュ菌疾患（Ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、コクシジオイデス真菌感染症、コロナウイルス感染症、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、クロイツフェルト・ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｃｏｂ Ｄｉｓｅａｓｅ）／伝達性海綿状脳症、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）、サイクロスポーラ症、１、２、３又は４型デング熱、ジフテリア、志賀毒素産生性大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ／Ｓｈｉｇａ ｔｏｘｉｎ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ、ＳＴＥＣ）感染症、東部馬脳炎、出血熱（エボラ）、エーリキア症、脳炎、アルボウイルス又は副感染症、非エンテロウイルス、エンテロウイルスＤ６８疾患（ＥＶ－Ｄ６８）、ジアルジア症、鼻疽、淋菌感染症、鼠径部肉芽腫、ヘモフィルスインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）Ｂ型感染症（Ｈｉｂ又はＨ－インフルエンザ）、血球貪食症候群（ＨＰＳ）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）、疱疹、帯状疱疹（Ｈｅｒｐｅｓ Ｚｏｓｔｅｒ）（帯状ヘルペス（Ｓｈｉｎｇｌｅｓ））、ヒストプラスマ症感染、ヒト免疫不全ウイルス／エイズ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザ（Ｆｌｕ）、レジオネラ属菌感染症（レジオネラ症）、癩病（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症（リステリア）、ライム病、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）感染症、マラリア、麻疹、類鼻疽、髄膜炎（ウイルス性）、髄膜炎菌性髄膜炎（髄膜炎（細菌性））、中東呼吸器症候群コロナウイルス疾患（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、耳下腺炎、ノーウォークウイルス疾患、シラミ寄生症、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、百日咳（痙咳）、ペスト（腺ペスト、敗血症型ペスト、肺ペスト）、肺炎球菌感染症（肺炎）、急性灰白随炎（ポリオ（Ｐｏｌｉｏ））、ポーワッサン脳炎、オウム病、ケジラミ寄生症（Ｐｔｈｉｒｉａｓｉｓ）、発疹性膿疱症（天然痘、サル痘、牛痘）、Ｑ熱、狂犬病、リケッチア感染症（ロッキー山紅斑熱）、風疹（三日ばしか（Ｇｅｒｍａｎ Ｍｅａｓｌｅｓ））、サルモネラ胃腸炎（サルモネラ）、疥癬、スコンブロイド食中毒（Ｓｃｏｍｂｒｏｉｄ）、膿毒症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、赤痢菌性胃腸炎（赤痢菌）、天然痘、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染症、ブドウ球菌性食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌性食中毒）、バンコマイシン中間耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＩＳＡ）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）、Ａ群レンサ球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性））、Ｂ群レンサ球菌感染症（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）、レンサ球菌中毒性ショック症候群ＳＴＳＳ中毒性ショック、梅毒（原発性、二次性、早期潜伏性、後期潜伏性、先天性）、破傷風感染症、トリコモナス症、旋毛虫症（Ｔｒｉｃｈｏｎｏｓｉｓ）感染、結核（ＴＢ）、潜在性結核感染症（ＬＴＢＩ）、野兎病、Ｄ群腸チフス、膣症、水痘（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ）（水疱瘡（Ｃｈｉｃｋｅｎｐｏｘ））、コレラ菌感染症（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）（コレラ）、ビブリオ病（ビブリオ）、エボラ出血熱、ラッサウイルス出血熱、マールブルグ出血熱、ウエストナイルウイルス、黄熱病、エルシニア症及びジカウイルス感染症。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、アナプラズマ病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、アンスラックスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、バベシア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ボツリヌス中毒である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ブルセラ症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、カンピロバクター感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、カルバペネム耐性感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、軟性下疳である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、チクングニアウイルス感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、クラミジア疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、魚からのボツリヌスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ディフィシル感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ウエルシュ菌疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、コクシジオイデス真菌感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、コロナウイルス疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、クロイツフェルト・ヤコブ病／伝達性海綿状脳症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、サイクロスポーラ症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、１、２、３又は４型デング熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ジフテリアである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、志賀毒素産生性大腸菌（ＳＴＥＣ）感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、東部馬脳炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、出血熱（エボラ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エーリキア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、脳炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、アルボウイルス又は副感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、非エンテロウイルスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エンテロウイルスＤ６８疾患（ＥＶ－Ｄ６８）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ジアルジア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、鼻疽である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、淋菌感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、鼠径部肉芽腫である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヘモフィルスインフルエンザ菌Ｂ型感染症（Ｈｉｂ又はＨ－インフルエンザ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、血球貪食症候群（ＨＰＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、疱疹である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、帯状疱疹（帯状ヘルペス）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヒストプラスマ症感染である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヒト免疫不全ウイルス／エイズ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、インフルエンザ（Ｆｌｕ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レジオネラ属菌感染症（レジオネラ症）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、癩病（ハンセン病）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レプトスピラ症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、リステリア症（リステリア）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ライム病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、マラリアである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、麻疹である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、類鼻疽である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、髄膜炎（ウイルス性）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、髄膜炎菌性髄膜炎（髄膜炎（細菌性））である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、中東呼吸器症候群コロナウイルス疾患（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、耳下腺炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ノーウォークウイルス疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、シラミ寄生症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、百日咳（痙咳）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ペスト（腺ペストであり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、敗血症型ペストであり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、肺炎性ペスト）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、肺炎球菌感染症（肺炎）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、急性灰白随炎（ポリオ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ポーワッサン脳炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、オウム病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ケジラミ寄生症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、発疹性膿疱症（天然痘であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、サル痘であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、牛痘）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｑ熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、狂犬病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、リケッチア感染症（ロッキー山紅斑熱）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、風疹（三日ばしか）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、サルモネラ胃腸炎（サルモネラ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、疥癬である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、スコンブロイド食中毒である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、膿毒症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、赤痢菌性胃腸炎（赤痢菌）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、天然痘である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ブドウ球菌性食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌性食中毒）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、バンコマイシン中間耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＩＳＡ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ａ群レンサ球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性））である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レンサ球菌病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｂ群疾患（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レンサ球菌中毒性ショック症候群ＳＴＳＳ中毒性ショックである。い
くつかの実施形態において、感染性疾患は、梅毒（原発性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、二次性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、早期潜伏性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、後期潜伏性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、先天性）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、破傷風感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、トリコモナス症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、旋毛虫症感染である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、結核（ＴＢ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、潜在性結核感染症（ＬＴＢＩ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、野兎病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｄ群腸チフスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、膣症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、水痘（水疱瘡））、コレラ菌感染症（コレラ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ビブリオ病（ビブリオ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エボラ出血熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ラッサウイルス出血熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、マールブルグ出血熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ウエストナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、黄熱病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エルシニア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ジカウイルス感染症である。
いくつかの実施形態において、病原体は細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、バシラス属（ｂａｃｉｌｌｕｓ）、バルトネラ属（ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）、ボルデテラ属（ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ボレリア属（ｂｏｒｒｅｌｉａ）、ブルセラ属（ｂｒｕｃｅｌｌａ）、カンピロバクター属（ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、クラミジア属（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、類クラミジア属（ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）、クロストリジウム属（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、コリネバクテリウム属（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロコッカス属（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、エスケリキア属（ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、フランシセラ属（ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、ヘモフィルス属（ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ヘリコバクター属（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、レジオネラ属（ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピラ属（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リステリア属（ｌｉｓｔｅｒｉａ）、マイコバクテリウム属（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコプラズマ属（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ナイセリア属（ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、リケッチア属（ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、サルモネラ属（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、赤痢菌属（ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ブドウ球菌属（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、レンサ球菌属（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トレポネーマ属（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、ウレアプラズマ属（ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）、ビブリオ属（ｖｉｂｒｉｏ）又はエルシニア属（ｙｅｒｓｉｎｉａ）の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、バシラス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、バルトネラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ボルデテラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ボレリア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ブルセラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、カンピロバクター属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、クラミジア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、類クラミジア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、クロストリジウム属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、コリネバクテリウム属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、エンテロコッカス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、エスケリキア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、フランシセラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ヘモフィルス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ヘリコバクター属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、レジオネラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、レプトスピラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、リステリア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、マイコバクテリウム属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、マイコプラズマ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ナイセリア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、シュードモナス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、リケッチア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、サルモネラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、赤痢菌属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ブドウ球菌属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、レンサ球菌属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、トレポネーマ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ウレアプラズマ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ビブリオ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、エルシニア属の細菌である。
いくつかの実施形態において、病原体は寄生虫である。いくつかの実施形態において、寄生虫は、原生動物、蠕虫又は外部寄生虫である。いくつかの実施形態において、原生動物は、エントアメーバ属（ｅｎｔａｍｏｅｂａ）、ジアルジア属（ｇｉａｒｄｉａ）、リーシュマニア属（ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、バランチジウム属（ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ）、マラリア原虫属（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）又はクリプトスポリジウム属（ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）である。いくつかの実施形態において、蠕虫は、吸虫、条虫、鉤頭虫又は回虫である。いくつかの実施形態において、外部寄生虫は、節足動物である。
いくつかの実施形態において、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、アレナウイルス科（ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）、アストロウイルス科（ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、ブニヤウイルス科（ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）、カリシウイルス科（ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、ヘパドナウイルス科（ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ヘペウイルス科（ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、オルトミクソウイルス科（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、パピローマウイルス科（ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、パルボウイルス科（ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）、ピコルナウイルス科（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ポリオーマウイルス科（ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｉｄａｅ）、ポックスウイルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、レトロウイルス科（ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）又はトガウイルス科（ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）のウイルスである。いくつかの実施形態において、科である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アレナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アストロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ブニヤウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、カリシウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、コロナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、フィロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、フラビウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヘパドナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヘペウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、オルトミクソウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パピローマウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パラミクソウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パルボウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ピコルナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポリオーマウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポックスウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、レオウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、レトロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ラブドウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、トガウイルス科のウイルスである。
いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタイン・バーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器多核体ウイルス、風疹ウイルス又は水痘帯状疱疹ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、コロナウイルスである。いくつかの実施形態において、コロナウイルスは、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、コクサッキーウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタイン・バーウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、Ａ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、Ｂ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、単純ヘルペスウイルス２型である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、サイトメガロウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヒトヘルペスウイルス８型である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、麻疹ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、耳下腺炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヒトパピローマウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パラインフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポリオウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、狂犬病ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、呼吸器多核体ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、風疹ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、水痘帯状疱疹ウイルスである。
膜貫通ドメイン
本開示のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと直接又は間接的に融合され得る膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、天然又は合成供給源に由来してもよい。本明細書で使用されるように、「膜貫通ドメイン」は、細胞膜（好ましくは、真核細胞膜）において熱力学的に安定な任意のタンパク質構造を指す。本明細書に記載のＣＡＲに適した膜貫通ドメインは、天然に存在するタンパク質から得ることができる。代替的に、それは、合成された、非天然タンパク質セグメント、例えば、細胞膜において熱力学的に安定なハイドロフォビンセグメントであってもよい。
膜貫通ドメインの三次元構造に基づいて膜貫通ドメインを分類する。例えば、膜貫通ドメインには、α螺旋、二つ以上のα螺旋の複合体、β－バレル構造又は細胞リン脂質二重層に跨ることができる任意の他の安定構造が形成され得る。なお、膜貫通ドメインはさらに、同様に又は代わりに、膜貫通ドメインが膜を通過する回数及びタンパク質の配向を含む膜貫通ドメイントポロジー構造に基づいて分類され得る。例えば、一回膜タンパク質は細胞膜を一回通過するが、複数回膜タンパク質は細胞膜を少なくとも二回（例えば、２、３、４、５、６、７回又はそれ以上）通過する。膜タンパク質は、細胞内側及び外側に対するそれらの末端及び一つ又は複数の膜貫通セグメントのトポロジー構造に依存して、Ｉ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型に定義され得る。Ｉ型膜タンパク質は、単一の膜貫通領域を有し、タンパク質のＮ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に位置し、該タンパク質のＣ末端が細胞質側に存在するように配向される。ＩＩ型膜タンパク質も単一の膜貫通領域を有するが、タンパク質のＣ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、該タンパク質のＮ末端が細胞質側に存在するように配向される。ＩＩＩ型膜タンパク質は、複数の膜貫通セグメントを有し、膜貫通セグメントの数並びにＮ末端及びＣ末端の位置に基づいてさらに分類され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｉ型一回膜タンパク質に由来する。いくつかの実施形態において、複数回膜タンパク質からの膜貫通ドメインは、本明細書に記載のＣＡＲに適応するために用いられてもよい。複数回膜タンパク質は、複合体（少なくとも２、３、４、５、６、７又はそれ以上）α螺旋又はβシート構造を含んでもよい。いくつかの実施形態において、複数回膜タンパク質のＮ末端とＣ末端は、脂質二重層の反対側に存在し、例えば、タンパク質のＮ末端は脂質二重層の細胞質側に存在するが、該タンパク質のＣ末端は細胞外側に存在する。
本明細書に記載のＣＡＲに用いられる膜貫通ドメインは、合成された、非天然タンパク質セグメントの少なくとも一部をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、合成された、非天然α螺旋又はβシートである。いくつかの実施形態において、タンパク質セグメントは、少なくとも約２０個のアミノ酸、例えば、少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個、又はそれ以上のアミノ酸である。合成された膜貫通ドメインの例は、当分野に既知のものであり、例えば、米国特許第７，０５２，９０６号及びＰＣＴ公開番号ＷＯ ２０００／０３２７７６において、その関連開示内容は、参照により本明細書に援用される。
本明細書による膜貫通ドメインは、膜貫通領域と、膜貫通ドメインのＣ末端側に位置する細胞質領域とを含んでもよい。膜貫通ドメインの細胞質領域は、三つ又はそれ以上のアミノ酸を含んでもよく、且ついくつかの実施形態において、膜貫通ドメインの脂質二重層における配向に有利である。いくつかの実施形態において、一つ又は複数のシステイン残基は、膜貫通ドメインの膜貫通領域に存在する。いくつかの実施形態において、一つ又は複数のシステイン残基は、膜貫通ドメインの細胞質領域に存在する。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインの細胞質領域は、正に荷電したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインの細胞質領域は、アミノ酸アルギニンと、セリンと、リジンとを含む。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインの膜貫通領域は、疎水性アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＡＲの膜貫通ドメインは、疎水性人工配列を含む。例えば、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットは、膜貫通ドメインのＣ末端位置に存在し得る。いくつかの実施形態において、膜貫通領域は、主に疎水性アミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はバリンを含む。いくつかの実施形態において、膜貫通領域は疎水性である。いくつかの実施形態において、膜貫通領域は、ポリロイシン－アラニン配列を含む。タンパク質又はタンパク質セグメントの親水性又は疎水性又は親水性特徴は、当分野の既知の任意の方法、例えば、Ｋｙｔｅ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅ親水性分析によって評価され得る。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤｌ ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒ β、ＩＬ－２Ｒ γ、ＩＬ－７Ｒ ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ ｌａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ ｌｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ及び／又はＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択された膜貫通ドメインを含む。
いくつかの特定の実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ８αに由来する。他の特定の実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ２８αに由来する。
細胞内シグナル伝達ドメイン
本明細書によるＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の少なくとも一つの正常なエフェクター機能を活性化する役割を担う。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊な機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性又は補助活性（サイトカインの分泌を含む）であってもよい。そのため、用語「細胞質シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを形質導入し、特定の機能を実行するように細胞に指示するタンパク質部分を指す。通常、細胞質シグナル伝達ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合に鎖全体を使用する必要はない。細胞質シグナル伝達ドメインの短縮部分を使用することについては、エフェクター機能シグナルを形質導入する限り、インタクトな鎖の代わりにこのような短縮部分を使用してもよい。そのため、用語の細胞質シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを形質導入するのに十分な細胞質シグナル伝達ドメインを含む任意の短縮部分を指すことが意図される。
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、実質的に免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインからなる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「一次細胞内シグナル伝達ドメイン」は、刺激的に作用して免疫エフェクターを機能するように誘導する細胞質シグナル伝達配列を指す。いくつかの実施形態において、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ又はＩＴＡＭと呼ばれるシグナル伝達モチーフを含有する。本明細書で使用されるように、「ＩＴＡＭ」は、保存的タンパク質モチーフであり、通常、免疫細胞で発現するシグナル伝達分子の尾部に存在する。モチーフは、６～８個のアミノ酸により隔てられたアミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの二つのリピートを含んでもよく、ここで、各ｘは、独立して、任意のアミノ酸であり、保存的モチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６～８）ＹｘｘＬ／Ｉを産生する。シグナル伝達分子におけるＩＴＡＭは、細胞内シグナル形質導入にとって重要であり、該シグナル形質導入は、少なくとも一部がシグナル伝達分子活性化後のＩＴＡＭにおけるチロシン残基のリン酸化により媒介される。ＩＴＡＭは、シグナル伝達経路に関与する他のタンパク質のドッキング部位としても機能し得る。例示的なＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列は、ＣＤ３ｚ、ＦｃＲ γ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲ β（Ｆｃ ε Ｒｉｂ）、ＣＤ３ γ、ＣＤ３ δ、ＣＤ３ ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ６６ｄに由来するものを含む。
共刺激シグナル伝達ドメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、少なくとも一つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用されるように、用語「共刺激シグナル伝達ドメイン」は、細胞内シグナル形質導入を媒介して免疫応答（例えば、エフェクター機能）を誘導するタンパク質の少なくとも一部を指す。抗原特異性シグナルを刺激することに加えて、多くの免疫エフェクター細胞は、細胞の増殖、分化及び生存を促進し、細胞のエフェクター機能を活性化するために共刺激を必要とする。
本明細書に記載のキメラ受容体の共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激タンパク質からの細胞質シグナル伝達ドメインであってもよく、それは、シグナルを形質導入し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球又は好酸球のような免疫細胞により媒介される反応を調節する。「共刺激シグナル伝達ドメイン」は、共刺激分子の細胞質部分であってもよい。用語「共刺激分子」は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）における相同結合パートナーを指し、それは、共刺激リガンドに特異的に結合することによって、免疫細胞の共刺激応答、例えば、限定されないが、増殖及び生存を媒介する。
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、二つ又はそれ以上（例えば、約２、３、４個又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、二つ又はそれ以上の同じ共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる共刺激タンパク質（例えば、本明細書に記載のいずれか二つ又はそれ以上の共刺激タンパク質）からの二つ又はそれ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚの細胞質シグナル伝達ドメイン）と、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメイン及び一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚの細胞質シグナル伝達ドメイン）は、任意のペプチドリンカーを介して互いと融合される。一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の適切な順序で並べられ得る。いくつかの実施形態において、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ｚの細胞質シグナル伝達ドメイン）との間に位置する。複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、相加的又は相乗的刺激効果を提供することができる。
宿主細胞（例えば、免疫細胞）における共刺激シグナル伝達ドメインの活性化は、サイトカインの産生及び分泌、貪食特性、増殖、分化、生存及び／又は細胞傷害性を増加又は減少させるように細胞を誘導することができる。任意の共刺激分子の共刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載のＣＡＲに適用可能である。共刺激シグナル伝達ドメインの一つ又は複数のタイプは、例えば、エフェクター分子がそれに発現することになる免疫エフェクター細胞のタイプ（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球又は好酸球）及び所望の免疫エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣエフェクター）などの要因に基づいて選択される。ＣＡＲに用いられる共刺激シグナル伝達ドメインの例は、共刺激タンパク質の細胞質シグナル伝達ドメインであってもよく、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（例えば、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－ １、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ及びＰＤＣＤ６）と、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン－α／ＴＮＦ－β、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ－α及びＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）と、ＳＬＡＭファミリーのメンバー（例えば、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６及びＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）と、任意の他の共刺激分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡ クラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）及びＮＫＧ２Ｃとを含むが、それらに限らない。いくつかの実施形態において、一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、共刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載の任意の共刺激シグナル伝達ドメインの変異体であり、それにより共刺激シグナル伝達ドメインが免疫細胞の免疫応答を調節することができる。いくつかの実施形態において、野生型対照物に比べて、共刺激シグナル伝達ドメインは、１０個まで（例えば、１個、２個、３個、４個、５個又は８個）のアミノ酸残基変種を含む。一つ又は複数のアミノ酸変種を含むこのような共刺激シグナル伝達ドメインは、変異体と呼ばれてもよい。突然変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較して、共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の突然変異は、シグナル形質導入の増加及び免疫応答に対する刺激の増強をもたらすことができる。突然変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較して、共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の突然変異は、シグナル形質導入の減少及び免疫応答に対する刺激の低下をもたらすことができる。
シグナルペプチド
いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＡＲは、ポリペプチドのＮ末端位置のシグナルペプチド（シグナル配列とも呼ばれる）を含んでもよい。通常、シグナルペプチドは、ポリペプチドを細胞内の所望の部位にターゲティングするペプチド配列である。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、エフェクター分子を細胞の分泌経路にターゲティングし、脂質二重層へのエフェクター分子の組込み及び繋ぎ留めを可能にする。本明細書に記載のＣＡＲに適用し、天然に存在するタンパク質のシグナル配列又は合成された非天然シグナル配列を含むシグナルペプチドは、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＣＤ８α、ＧＭ－ＣＳＦ受容体α及びＩｇＧ１重鎖からなる群から選択される分子に由来する。
ヒンジ領域
いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置するヒンジドメインを含んでもよい。ヒンジドメインは、通常、タンパク質の二つのドメインの間で発現するアミノ酸セグメントであり、且つタンパク質の一つ又は二つの柔軟なドメインの互いに対する移動を可能にすることができる。エフェクター分子の膜貫通ドメインに対する細胞外抗原結合ドメインのこのような柔軟性及び移動を提供する任意のアミノ酸配列を使用することができる。
抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ又はＩｇＤ抗体）のヒンジドメインは、本明細書に記載のｐＨ依存性キメラ受容体系にも適用可能である。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、抗体の定常ドメインＣＨ１とＣＨ２を連結するヒンジドメインである。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、抗体のヒンジドメインであり、且つ抗体及び該抗体の一つ又は複数の定常領域のヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、抗体及び該抗体のＣＨ３定常領域のヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、抗体及び該抗体のＣＨ２及びＣＨ３定常領域のヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、又はＩｇＤ抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域並びにＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域及びＣＨ３定常領域を含む。
非天然ペプチドは、本明細書に記載のキメラ受容体のヒンジドメインとして用いられてもよい。いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間のヒンジドメインは、（ＧｘＳ）ｎリンカーのようなペプチドリンカーであり、ここで、ｘ及びｎは、独立して、３～１２の整数であってもよく、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２又はそれ以上を含む。
ヒンジドメインは、約１０～１００個のアミノ酸、例えば、約１５～７５個のアミノ酸、２０～５０個のアミノ酸又は３０～６０個のアミノ酸のうちのいずれか一つを含んでもよい。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインの長さは、少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０又は７５個のアミノ酸のうちのいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインである。ヒンジドメインを含む当分野の既知の任意のタンパク質のヒンジドメインは、いずれも本明細書に記載のキメラ受容体に適用可能である。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインの少なくとも一部であり、且つキメラ受容体に柔軟性を与える。
いくつかの特定の実施形態において、ヒンジドメインはＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、ＣＤ８αのヒンジドメインの一部であり、例えば、ＣＤ８αのヒンジドメインの少なくとも１５個（例えば２０、２５、３０、３５又は４０個）の連続したアミノ酸の断片を含む。他の実施形態において、ヒンジドメインはＣＤ２８αに由来する。いくつかの実施形態において、ヒンジドメインは、ＣＤ２８αのヒンジドメインの一部であり、例えば、ＣＤ２８αのヒンジドメインの少なくとも１５個（例えば２０、２５、３０、３５又は４０個）の連続したアミノ酸の断片を含む。
例示的ＣＡＲ
本開示において、任意のＣＡＲを用いてもよく、Ｋｙｍｒｉａ（商標）（ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｅｌ）、Ｙｅｓｃａｒｔ（商標）（ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ）、ＡＬＥＸＩＳ ＡＩＤＴ－２ ＥＯＣ（Ｋｉｒｏｍｉｃ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ）、ＣＩＫ－ＣＡＲ．ＰＳＭＡ（Ｆｏｒｍｕｌａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）、ＡＤＩ－００２（Ａｄｉｃｅｔ Ｂｉｏ Ｉｎｃ）、ＴＳＣ－２００（ＴＳｃａｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＴＳＣ－１００（ＴＳｃａｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＲＢ－Ｈ２１（Ｒｅｆｕｇｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ）、ＡＤＰ－Ａ２ＡＦＰ（Ａｄａｐｉｍｍｕｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｎｉｃｓ ｐｌｃ）、ＣＴ－０７２９（Ｃａｒｉｓｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｓｔｉｃｓ）、ＣＴ－１１１９（Ｃａｒｉｓｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＣＴ－３０１－５９（ＥＸＵＭＡ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ）、ＢＯＸＲ－８８９（Ｕｎｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ｍｅｓｏ－ＣＡＲ－Ｔ＋ＰＤ－７８（ＭｉｒＩｍｍｕｎｅ ＬＬＣ）、ＭＡＧＥ－Ａ１０Ｃ７９６Ｔ（Ａｄａｐｔｉｍｕｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｎｉｃｓ ｐｌｃ）、ＮＫＧ２Ｄ－ＤＡＲＩＣ Ｔ細胞（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ Ｂｉｏ Ｉｎｃ）、ＡＧＥＮｔ－ＮＹ－ＥＳＯ－１ Ｘ（ＡｇｅｎＴｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＭＢ－１０５（Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）、Ｐ－ＭＵＣ１Ｃ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＴＴ－１６（Ｂａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、ＡＣＴＲ－０８７（Ｕｎｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＥＧＦＲ－８０６（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、ＴＡＣ０１－ＲＯＲ１（Ｔｒｉｕｍｖｉｒａ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＣＣＴ－３０１－３８（ＥＸＵＭＡ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ）、ＭＢ－１０３（Ｍｕｓｔａｎｇ Ｂｉｏ Ｉｎｃ）、ＴＡＢ－２８ｚ（ＯｎｃｏＴａｂ Ｉｎｃ）、ＥＴ－１４０２（Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＩＴＩ－１０００（Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＣＩＤｅＣＡＲ（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）、ＭＴ－２０１（Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｎｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＣＴ－０５０８（Ｃａｒｉｓｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｓｔｉｃｓ）、ＡＤＰ－Ａ２Ｍ４（Ａｄａｐｅｉｍｕｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｐｌｃ）、ＡＭＧ－１１９（Ａｍｇｅｎ Ｉｎｃ）、ｉＣａｓｐ９Ｍ２８ｚ Ｔ細胞（Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ－Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、Ｐ－ＰＳＭＡ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＡＣＥ－１７０２（Ａｃｅｐｏｄｉａ Ｉｎｃ）、ＡＩＣ－１００（Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＰＲＧＮ－３００５（Ｐｒｅｃｉｇｅｎ Ｉｎｃ）、ＵｎｉＣＡＲ－Ｔ－ＰＳＭＡ（ＧＥＭｏａＢ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｓ ＧｍｂＨ）、ＩＭＡ－２０４（ＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＤＳＧ３－ＣＡＡＲＴ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、ＬＸＦ－８２１（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、ＭＯｖ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、Ｔｎ ＭＵＣ－１ ＣＡＲ－Ｔ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、ｈｕＭｅｓｏＣＡＲＴ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、ＩＭＡ－２０３（Ｉｍｍａｔｉｃｓ ＮＶ）、ＩＭＡ－２０２（Ｉｍｍａｔｉｃｓ ＮＶ）、ＸＹＰ－３１７（Ｘｙｐｈｏｓ Ｉｎｃ）、ＣＹＡＤ－１０１（Ｃｅｌｙａｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ｈｕＭＮＣ２－ＣＡＲ４４ Ｔ細胞（Ｍｉｎｅｒｖａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ）、ＨＥＲ２Ｂｉ－ａｒｍｅｄ ＡＴＣ（Ｒｏｇｅｒ Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）及びＣＹＡＤ－２００シリーズ（Ｃｅｌｄａｒａ Ｍｅｄｉｃａｌ ＬＬＣ）、Ｌｉｓｏｃａｂｔａｇｅｎｅ Ｍａｒａｌｅｑｕｅｌ（ｌｉｓｏ－ｃｅｌ）、ＦＴ５９６（Ｆａｔｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＫＴＥ－Ｃ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ）、ＫＴＥ－Ｘ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ）、ＫＩＴＥ－７１８（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ）、ＫＩＴＥ－４３９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ）、ＪＣＡＲ－０２４（Ｆｒｅｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＪＣＡＲ－０２３（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ）、ＢＰＸ－２０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）、ＢＰＸ－６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｕｅｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）、ＢＰＸ－６０３（Ｂｅｌｌｉｃｏｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｅｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）、ＭＣＹ－Ｍ１１（ＭａｘＣｙｔｅ Ｉｎｃ）、ＫＵＲ－５０３（Ｂａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、ＩＣＳ－２００（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｌａｂａｍａ ａｔ Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ）、ＡＤＰ－Ａ２Ｍ４ＣＤ８（Ａｄａｐｅｉｍｕｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｐｌｃ）、ＧＬＹＣＡＲ（Ｂａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）を含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＡＲは、上記及び以下のセクション８における例示的ＣＡＲのいずれか一つに対してある特定の同一性パーセントを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書はＣＡＲを提供し、該ＣＡＲは、細胞外ドメインを含むか又は該細胞外ドメインで構成され、該細胞外ドメインは、上記及び以下のセクション８におけるＣＡＲのアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの一つ又は複数のアミノ酸配列改変が企図される。例えば、細胞外ドメインの結合親和性及び／又は他の生物学的特性の最適化が必要とされる場合があり、特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシル化、低下した免疫原性又は溶解性を含むが、それらに限らない。そのため、本明細書に記載の細胞外ドメインに加えて、本明細書に記載のドメインの変異体を調製することも企図される。例えば、適切なヌクレオチド変化をコードＤＮＡに導入することによって及び／又は所望の抗体又はポリペプチドを合成することによってｓｃＦｖ変異体を調製することができる。アミノ酸の変更は抗体の翻訳後プロセスを変化させ得ることが当業者に理解される。
変化は、ポリペプチドをコードする一つ又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってもよく、元の抗体又はポリペプチドに対するアミノ酸配列の変更をもたらす。置換変異誘発の目的部位は、ＣＤＲとＦＲとを含む。
アミノ酸置換は、セリンでロイシンを置換するように、似ている構造及び／又は化学的特性を有する別のアミノ酸でアミノ酸を置換した結果であってもよく、例えば、保存的アミノ酸置換であってもよい。当業者に周知の標準的技術は、本明細書による分子をコードするヌクレオチド配列に突然変異を導入するために用いられてもよく、例えば、アミノ酸置換を引き起こす部位特異的変異誘発とＰＣＲ媒介性変異誘発とを含む。挿入又は欠失は、任意選択的に、約１～５個のアミノ酸の範囲内であってもよい。いくつかの実施形態において、置換、欠失又は挿入は、元の分子に対して２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５個未満のアミノ酸置換、４個未満のアミノ酸置換、３個未満のアミノ酸置換又は２個未満のアミノ酸置換を含む。具体的な実施形態において、置換は、一つ又は複数の予測された非必須アミノ酸残基において行われた保存的アミノ酸置換である。許容される変化は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に行い、且つ得られた変異体の親ポリペプチドが示す活性を試験することによって決定することができる。
本開示は、保存的アミノ酸置換により産生されたポリペプチドを含む。特性を保持するか又は著しく変えないために、保存的（例えば、似ている特性及び／又は側鎖を有するアミノ酸群内で）置換を行ってもよい。
一つのタイプの置換変異体は、本発明ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインにおいて親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の一つ又は複数の超可変領域残基又はその断片を置換することに関する。通常、更なる研究のために選択された、得られた変異は、親抗体に対して、いくつかの生物学的特性（例えば、増加した親和性、低下した免疫原性）における改変（例えば、改善）を有し、かつ／又は親抗体のいくつかの生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換変異体は、親和性が成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されたような、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて、容易に産生することができる。簡単に説明すると、一つ又は複数のＣＤＲ残基は突然変異し、且つ変異体抗体は、ファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）に対してスクリーニングを行う。
ＣＤＲにおいて変更（例えば、置換）を行って、例えば、抗体親和性を向上させることができる。このような変更は、ＣＤＲ「ホットポイント」、即ち、体細胞成熟過程期間に高頻度で突然変異したコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又はＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行われてもよく、ここで、得られた変異体抗体又はその断片の結合親和性を試験する。二次ライブラリーからの構築及び再選択による親和性成熟は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７中（Ｏ’Ｂｒｉｅｎらによる編集，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記述されている。親和性成熟のいくつかの実施形態において、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のうちのいずれか一つによって、多様性を、成熟のために選択された可変遺伝子に導入する。そして、二次ライブラリーを作成する。そして、ライブラリーをスクリーニングし、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入する別の方法は、ＣＤＲ配向方法に関し、ここで、若干のＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）をランダム化する。抗原結合に関与するＣＤＲ残基を特異的に同定することができ、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデル化を用いる。
いくつかの実施形態において、このような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、置換、挿入又は欠失は、一つ又は複数のＣＤＲ内に発生してもよい。例えば、ＣＤＲにおいて、結合親和性を著しく低下させない保存的変更（例えば、本明細書による保存的置換）を行ってもよい。いくつかの実施形態において、各ＣＤＲは、変化していないものであるか、又は、一つ、二つ、もしくは三つ以下のアミノ酸の置換を含むものである。
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５（１９８９）に記載のように、変異誘発の標的とされることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。代替的には、又は付加的には、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。このような接触残基及び隣接残基は、置換候補物としてターゲティングされるか又は除去され得る。変異体は、所望の特性を含むか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列の挿入は、長さが一個の残基から百個又はそれ以上の残基を含むポリペプチドの範囲内にあるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端の融合と、単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入とを含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ末端又はＣ末端を、抗原結合ドメイン抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）又はポリペプチドと融合させることを含む。
変化は、オリゴヌクレオチド媒介性（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング及びＰＣＲ変異誘発のような当分野の既知の方法を用いて行ってもよい。抗体変異体ＤＮＡを産生するために、クローニングされたＤＮＡに対して、部位特異的変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２３７：１－７（１９８６）、及びＺｏｌｌｅｒら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７－５００（１９８２）を参照されたい）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら，Ｇｅｎｅ ３４：３１５－２３（１９８５）を参照されたい）又は他の既知の技術を行ってもよい。
本開示は、免疫エフェクター細胞をさらに含み、該免疫エフェクター細胞は、二つの異なる標的に結合する二重ＣＡＲのような二つ又はそれ以上の機能的外因性受容体を含む。
７．２．３． 免疫エフェクター細胞
「免疫エフェクター細胞」は、免疫エフェクター機能を発揮し得る免疫細胞を指す。いくつかの実施形態において、該免疫エフェクター細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、且つＡＤＣＣエフェクター機能を発揮する。ＡＤＣＣを媒介する免疫エフェクター細胞の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単核細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、好中球、及び好酸球が挙げられる。
いくつかの実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、これらのＴ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８－、ＣＤ４－／ＣＤ８＋、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋、ＣＤ４－／ＣＤ８－、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現し標的細胞に結合した後にＩＬ－２、ＴＦＮ及び／又はＴＮＦを産生する。いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現し標的細胞に結合した後に、抗原特異性標的細胞を溶解する。
いくつかの実施形態において、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。他の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、樹立された細胞株、例えば、ＮＫ－９２細胞であってもよい。
いくつかの実施形態において、免疫エフェクター細胞は、幹細胞（例えば、造血幹細胞、多能性幹細胞、ｉＰＳ、又は胚性幹細胞）から分化したものである。
操作された免疫エフェクター細胞は、本明細書によるポリペプチドをＴ細胞のような免疫エフェクター細胞に導入することによって調製される。いくつかの実施形態において、いずれか一つの単離された核酸又はいずれか一つの上記ベクターをトランスフェクトすることによって、ポリペプチドを免疫エフェクター細胞に導入する。
ベクター又は単離された核酸を哺乳動物細胞に導入する方法は、当分野において既知である。記載されるベクターは、物理的、化学的、又は生物学的方法によって免疫エフェクター細胞に移入させることができる。
ベクターを免疫エフェクター細胞に導入する物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、パーティクルボンバードメント、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクター及び／又は外因性核酸を含む細胞の産生方法は、当分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。いくつかの実施形態において、エレクトロポレーションによってベクターを細胞に導入する。
ベクターを免疫エフェクター細胞に導入する生物学的方法は、ＤＮＡとＲＮＡベクターを用いることを含む。ウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物、例えば、ヒトの細胞に挿入するための最も広く使用されている方法となっている。
ベクターを免疫エフェクター細胞に導入するための化学的方法は、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズなどのコロイド分散系と、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系とを含む。インビトロ送達ビヒクルとしての例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意のポリペプチドをコードするＲＮＡ分子は、従来の方法（例えば、インビトロ転写）によって調製され、そして、ｍＲＮＡエレクトロポレーションのような既知の方法によって免疫エフェクター細胞に導入され得る。例えば、Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １７：１０２７－１０３５（２００６）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、形質導入又はトランスフェクトされた免疫エフェクター細胞を、ベクター又は単離された核酸を導入した後にエキソビボで増殖させる。いくつかの実施形態において、形質導入又はトランスフェクトされた免疫エフェクター細胞を培養して、少なくとも約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、１２日間又は１４日間のいずれかにわたって増殖させる。いくつかの実施形態において、形質導入又はトランスフェクトされた免疫エフェクター細胞は、操作された哺乳動物細胞を選択するために、さらに評価されるか又はスクリーニングされる。
レポーター遺伝子は、トランスフェクト可能な細胞の同定及び調節配列の機能の評価に用いられ得る。通常、レポーター遺伝子は、受容体生物又は組織に不存在しないか又は発現しない遺伝子であり、該レポーター遺伝子はポリペプチドをコードし、該ポリペプチドの発現は、いくつかの容易に検出可能な特性（例えば、酵素活性）によって表される。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡが受容体細胞に導入された後の適切な時間に検出される。適切なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、又は緑色蛍光タンパク質遺伝子を含んでもよい（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉら ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２（２０００））。適切な発現系は、周知のものであり、且つ既知の技術を用いて調製されるか又は商業的に入手され得る。
操作された免疫エフェクター細胞にポリペプチドをコードする核酸が存在することを確認する他の方法は、例えば、ＤＮＡブロット法及びＲＮＡブロット法、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲのような当業者に周知の分子生物学的アッセイと、特定のペプチドの有無を例えば免疫学的方法（例えば、ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロット）によって検出する生物化学的アッセイとを含む。
７．２．４． Ｔ細胞の供給源
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の増大及び遺伝子改変の前に、対象からＴ細胞の供給源を得る。Ｔ細胞は、多くの供給源から得ることができ、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む。いくつかの実施形態において、当分野で利用可能な複数のＴ細胞株を用いることができる。いくつかの実施形態において、当業者に周知の複数の技術（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）単離）を用いて、対象から採取した血液からＴ細胞を得ることができる。いくつかの実施形態において、個体の循環血液からの細胞はアフェレーシス（ａｐｈｅｒｅｓｉｓ）によって入手される。アフェレーシス生成物は、典型的に、リンパ球を含み、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球及び血小板を含む。いくつかの実施形態において、アフェレーシスにより採取された細胞を洗浄して血漿部分を除去し、細胞を適切な緩衝液又は培地において後続の処理ステップに用いてもよい。いくつかの実施形態において、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で細胞を洗浄する。いくつかの実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、且つマグネシウムを欠いている場合があるか、又は多くの（全てではないが）二価カチオンを欠いている場合がある。カルシウムが存在しない場合の初期活性化ステップは、活性化の拡大につながり得る。当業者であれば容易に理解できるように、洗浄ステップは、例えば、メーカーの指示に従って半自動化「フロースルー」遠心機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用するような当分野の既知の方法によって完了され得る。洗浄後、例えば、Ｃａ２＋なし、Ｍｇ２＋なしのＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ又は緩衝液を含むかもしくは含まない他の生理食塩水のような様々な生体適合性緩衝液に細胞を再懸濁してもよい。代替的に、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁してもよい。
いくつかの実施形態において、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配遠心分離又は向流遠心エルトリエーションによって赤血球を溶解させ、且つ単球を消費して、末梢血リンパ球からＴ細胞を単離する。ポジティブ又はネガティブ選択技術によって、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のような、Ｔ細胞の特定の亜集団をさらに単離することができる。例えば、いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞のポジティブ選択のための十分な時間にわたって抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（即ち、３×２８）コンジュゲートビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標） Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ）とインキュベートすることによって単離される。いくつかの実施形態において、該期間は約３０分間である。別の実施形態では、該期間は３０分間～３６時間又はそれ以上及びその間の全ての整数値である。別の実施形態において、該期間は、少なくとも１、２、３、４、５又は６時間である。いくつかの実施形態において、該期間は、１０～２４時間である。いくつかの実施形態において、該インキュベート期間は２４時間である。白血病患者のＴ細胞の単離では、インキュベート時間（例えば、２４時間）を長くとることにより、細胞の収量を増加させることができる。他の細胞タイプに比べて、腫瘍組織又は免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をする場合のようなＴ細胞が少ない任意の場合に、長いインキュベート時間でＴ細胞を単離してもよい。なお、長いインキュベートを用いることにより、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の捕捉効率を向上させることができる。そのため、いくつかの実施形態において、Ｔ細胞とＣＤ３／ＣＤ２８ビーズとの結合を可能にする時間を単純に短縮又は延長するか、及び／又はビーズとＴ細胞との比を増加又は減少することによって、培養開始時又は培養中の他の時点にＴ細胞の亜集団を優先的に選択するか又は選択しないことができる。付加的に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体の比率を増加又は減少させることによって、培養開始時又は他の所望の時点にＴ細胞の亜集団を優先的に選択するか又は選択しないことができる。当業者であれば、複数の選択ラウンドも使用可能であることを認識するであろう。いくつかの実施形態において、選択手順を実施し、活性化及び増大プロセスに「選択されていない」細胞を使用することが望ましい場合もある。「選択されていない」細胞も更なるラウンドの選択に供することができる。
ネガティブ選択によるＴ細胞集団の濃縮は、ネガティブ選択された細胞に特有の表面マーカーに対する抗体との結合によって実現され得る。一つの方法は、ネガティブ磁気免疫付着又はフローサイトメトリーによって細胞選別及び／又は選択を行い、該方法は、ネガティブ選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体の混合物を用いる。例えば、ネガティブ選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮させるために、モノクローナル抗体混合物は、通常、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。いくつかの実施形態において、通常ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を濃縮させるか又はポジティブ選択することが望ましい場合がある。代替的に、いくつかの実施形態において、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズ又は他の類似した選択方法によってＴ調節性細胞を消費する。
ポジティブ又はネガティブ選択によって所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、粒子（例えば、ビーズ））の濃度を変えてもよい。いくつかの実施形態において、細胞とビーズとの接触が最大限となることを確保するために、ビーズ及び細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（即ち、細胞の増加を増加させる）ことが望ましい場合もある。例えば、一実施形態において、２０億個の細胞／ｍＬの濃度を用いる。一実施形態において、１０億個の細胞／ｍＬの濃度を用いる。別の実施形態において、１億個の細胞／ｍＬ超を用いる。別の実施形態において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万個の細胞／ｍＬの細胞濃度を用いる。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億個の細胞／ｍＬの細胞濃度を用いる。他の実施形態において、１．２５又は１．５０億個の細胞／ｍＬの濃度を用いてもよい。高濃度の使用は、細胞収量、細胞活性化及び細胞増大の増加をもたらし得る。なお、高濃度の細胞の使用は、目的の標的抗原を弱発現する可能性のある細胞（例えば、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞）、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（即ち、白血病血液、腫瘍組織など）からの細胞のより有効な捕捉を可能にすることができる。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、入手することが望ましい。いくつかの実施形態において、高濃度の細胞の使用は、通常弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋ Ｔ細胞のより有効な選択を可能にする。
いくつかの実施形態において、より低い濃度の細胞を使用することが望ましい場合がある。Ｔ細胞及び表面（例えば、ビーズのような粒子）の混合物を著しく希釈することによって、粒子と細胞との間の相互作用を最小限にする。これにより、粒子に結合するために所望の抗原を高量で発現する細胞が選択される。例えば、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、より高いレベルのＣＤ２８を発現し、且つ希釈濃度のＣＤ８＋ Ｔ細胞よりも有効に捕捉される。いくつかの実施形態において、用いられる細胞の濃度は、５×１０６個／ｍＬである。いくつかの実施形態において、用いられる濃度は、約１×１０５個／ｍＬ～１×１０６個／ｍＬ、及び両方の間にある任意の整数値であり得る。
いくつかの実施形態において、細胞は、回転器上にて、２℃～１０℃又は室温で様々な速度で様々な長さの時間にわたってインキュベートされ得る。
刺激のためのＴ細胞は、洗浄ステップ後に凍結されてもよい。理論に束縛されるものではないが、凍結及び続く解凍ステップは、細胞集団における顆粒球を除去し単球をある程度で除去することによってより均一な生成物を提供することができる。血漿及び血小板を除去する洗浄ステップ後、細胞を凍結用溶液中に懸濁し得る。多くの凍結用溶液及びパラメータが当分野において既知であり、このような場合に有用であるが、一つの方法は、２０％ ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、又は１０％デキストラン４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ ＤＭＳＯ、又は３１．２５％ ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ ＤＭＳＯを含有する培地、又は例えば、Ｈｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含有する他の適切な細胞凍結培地を使用し、そして細胞を１℃／分間の速度で－８０℃に凍結し液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵することに関する。他の制御された凍結方法及び－２０℃又は液体窒素中での制御されていない即時の凍結が用いられ得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるように、凍結保存された細胞を解凍し洗浄し、活性化前に室温に一時間静置する。
本開示において、本明細書に記載の増大した細胞が必要である可能性がある時よりも前の時点で対象から血液試料又はアフェレーシス生成物を採取することも企図される。そのため、任意の必要な時点で増大対象の細胞供給源を採取し、Ｔ細胞のような必要な細胞を単離し凍結し、それにより後にＴ細胞療法において、本明細書に記載されるような、Ｔ細胞療法から利益を得る複数の疾患又は病態に使用することができる。一実施形態において、血液試料又はアフェレーシス血液成分は、一般の健常な対象から取られる。いくつかの実施形態において、血液試料又はアフェレーシス血液成分は、疾患を発症するリスクがあるが、疾患を発症していない一般の健常な対象から取られ、且つ後の使用のために目的細胞を単離し凍結する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、増大し、凍結され、後に使用され得る。いくつかの実施形態において、試料は、本明細書に記載のような特定の疾患の診断の直後であるが、何らかの治療の前に患者から採取される。別の実施形態において、複数の関連する治療モダリティの前に対象の血液試料又はアフェレーシス血液成分から細胞を単離し、これらの関連する治療モダリティは、ナタリズマブ（ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、抗ウイルス剤、化学療法、放射線照射、免疫阻害剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩及びＦＫ５０６）、抗体又は他の免疫除去剤（ｉｍｍｕｎｏａｂｌａｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８）及び放射線照射のような薬剤で治療することを含むが、それに限らない。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリン（シクロスポリン及びＦＫ５０６）を抑制するか、又は成長因子誘導性シグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼ（ラパマイシン）を抑制する（Ｌｉｕら，Ｃｅｌｌ ６６：８０７－８１５（１９９１）、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら，Ｉｍｍｕｎ ７３：３１６－３２１（１９９１）、Ｂｉｅｒｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３－７７３（１９９３））。別の実施形態において、患者の細胞を単離し、後に骨髓又は幹細胞移植、化学治療剤（例えば、フルダラビン）を使用するＴ細胞除去療法、外照射放射線療法（ＸＲＴ）、シトキサン又は抗体（例えば、ＯＫＴ３又はＣＡＭＰＡＴＨ）と併せて（例えば、その前、それと同時又はその後に）使用するためにそれを凍結する。別の実施形態において、Ｂ細胞除去療法（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）のような、ＣＤ２０と反応する薬剤）の前に細胞を単離し、後の治療に使用するために凍結してもよい。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、治療中に得られるか又は患者から直接得られる。この点で、いくつかのがん治療後、特に免疫系に損傷を与える薬物による治療後、患者が通常であれば治療から回復しているはずの期間に治療直後、得られたＴ細胞の質が最適であり得ること、又は該Ｔ細胞のエクスビボ増大能力を改善し得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法でエクスビボ操作を行った後、これらの細胞は、生着及びインビボ増大を増強する好ましい状態にあり得る。そのため、本開示の文脈において、該回復期間に血液細胞を採取することが企図され、Ｔ細胞、樹状細胞、又は他の造血系細胞を含む。なお、いくつかの実施形態において、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦによる動員）及びコンディショニングレジメンは、対象において、特に治療後に定義された時間ウィンドウの間、細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増大に有利である状態を作り出すために、用いられることができる。説明的細胞型は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
７．２．５． Ｔ細胞の活性化及び増大
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを有するＴ細胞の遺伝子改変の前又は後に、Ｔ細胞は、通常、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を用いて活性化され増大され得る。
通常、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する作用物質及びＴ細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが付着している表面と接触することによって増大することができる。特に、本明細書に記載されるように、表面上に固定される抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片もしくは抗ＣＤ２抗体との接触、又はカルシウムイオンベクターに結合するプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチン）との接触によってＴ細胞集団を刺激することができる。Ｔ細胞表面のヘルパー分子を共刺激するために、ヘルパー分子に結合するリガンドを用いてもよい。例えば、Ｔ細胞の増大を刺激するのに適した条件下で、Ｔ細胞集団を抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させてもよい。ＣＤ４＋ Ｔ細胞又はＣＤ８＋ Ｔ細胞の増大を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用してもよい。抗ＣＤ３抗体の例としては、ＵＣＨＴ１、ＯＫＴ３、ＨＩＴ３ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳ）が挙げられ、当分野に周知の他の方法のように使用されてもよい（Ｇｒａｖｅｓ Ｊら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２１０２（１９９１）、Ｌｉ Ｂら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１６：４８７（２００５）、Ｒｉｖｏｌｌｉｅｒ Ａら，Ｂｌｏｏｄ １０４：４０２９（２００４））。当分野に周知の他の方法のように、抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられる（Ｂｅｒｇら，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７（１９９８）、Ｈａａｎｅｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８（１９９９）、Ｇａｒｌａｎｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３（１９９９））。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、種々のレジメンによって提供され得る。例えば、各シグナルを提供する作用物質は、溶液中に存在するか、又は表面にカップリングされ得る。表面にカップリングされる場合、作用物質は、同一の表面に（即ち、「シス」形式で）カップリングされるか又は単独の表面に（即ち、「トランス」形式で）カップリングされてもよい。代替的に、一つ作用物質は、溶液において表面及び別の作用物質にカップリングすることができる。一実施形態において、共刺激シグナルを提供する作用物質は細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する作用物質は溶液にあるか又は表面にカップリングされる。いくつかの実施形態において、両方の作用物質が溶液中に存在し得る。別の実施形態において、作用物質は、可溶性形態であり得、そしてＦｃ受容体を発現する細胞又は抗体又は作用物質に結合することになる他の結合物質などの表面に架橋結合され得る。この点で、例えば、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号及び同第２００６００３４８１０号の人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を参照されたく、それらは、本開示のいくつかの実施形態においてＴ細胞の活性化及び増大に用いられると企図される。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞を、作用物質をコーティングするビーズと組み合わせ、続いてビーズと細胞を分離し、そして細胞を培養する。別の実施形態において、培養前に、作用物質をコーティングするビーズと細胞とは分離されず、一緒に培養される。別の実施形態では、まず磁力のような力を印加することによりビーズ及び細胞を濃縮させて、細胞表面マーカーの連結を増加させることによって、細胞刺激を誘導する。
例えば、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が付着している常磁性ビーズ（３×２８ビーズ）とＴ細胞との接触を可能にすることによって連結され得る。一実施形態において、細胞（例えば、１０４～４×１０８個のＴ細胞）及びビーズ（例えば、推奨力価が１：１００である抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子）を緩衝液中に組み合わせ、好ましくは、ＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムのような二価カチオンを含まない）である。当業者は、任意の細胞濃度が用いられ得ることを容易に理解し得る。例えば、標的細胞は、試料中で非常に少量であり得、且つ試料の０．０１％しか占めていないか、又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞を含んでもよい。そのため、いかなる細胞数も本開示の範囲内である。いくつかの実施形態において、細胞と粒子との接触が最大限となることを確保するために、粒子及び細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（即ち、細胞の増加を増加させる）ことが望ましい場合もある。例えば、一実施形態において、約２０億個の細胞／ｍＬの濃度を用いる。別の実施形態において、１億個の細胞／ｍＬ超を用いる。別の実施形態において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万個の細胞／ｍＬの細胞濃度を用いる。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億個の細胞／ｍＬの細胞濃度を用いる。他の実施形態において、１．２５又は１．５０億個の細胞／ｍＬの濃度を用いてもよい。高濃度の使用は、細胞収量、細胞活性化及び細胞増大の増加をもたらし得る。なお、高い細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞のような、目的標的抗原を弱発現する可能性のある細胞のより有効な捕捉を可能にすることができる。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、且ついくつかの実施形態において入手することが望ましい。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋ Ｔ細胞のより有効な選択を可能にする。
いくつかの実施形態において、混合物は、数時間（約３時間）から約１４日又は両方の間の任意の時間整数値にわたって培養され得る。別の実施形態において、混合物は２１日培養され得る。一実施形態において、ビーズとＴ細胞は、一緒に約八日培養される。別の実施形態において、ビーズとＴ細胞は、一緒に２～３日培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上となり得るように、数回の刺激サイクルが必要であることもある。Ｔ細胞培養に適した条件は、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ－ｖｉｖｏ １５（Ｌｏｎｚａ））を含み、それは、増大及び生存に必須な因子を含んでもよく、血清（例えば、ウシ胎仔血清又はヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ－α又は当業者に周知の、細胞成長のための任意の他の添加剤を含む。細胞成長のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート並びにＮ－アセチル－システイン及び２－メルカプトエタノールのような還元剤を含むが、それらに限らない。培地は、ＲＰＭＩ １６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５及びＸ－Ｖｉｖｏ ２０、最適化物質（ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ）であって、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム及びビタミンが加えられ、血清がないか又は適切な量の血清（又は血漿）もしくは既定の一組のホルモンが補充される、最適化剤、及び／又はＴ細胞を成長及び増大させるのに十分な量のサイトカインを含んでもよい。抗生物質（例えば、ペニシリン及びストレプトマイシン）は、実験培養物のみに含まれ、対象に注入されることになる細胞培養物に含まれていない。標的細胞を、成長を支持するのに必須な条件、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％のＣＯ２）に維持する。異なる刺激時間に曝露されたＴ細胞は、種々の特徴を呈し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシス血液成分の末梢血単核球生成物は、細胞傷害性又は抑制性Ｔ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８）よりも多くのヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体の刺激によるＴ細胞エクスビボ増大はＴ細胞集団を産生し、該Ｔ細胞集団は、約８～９日目前に主にＴＨ細胞で構成され、約８～９日目後に、Ｔ細胞集団はますます多くなるＴＣ細胞集団を含む。そのため、治療目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異性サブセットが単離された場合、該サブセットをより大きな程度に増大させることが有益であり得る。
なお、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーも有意に異なるが、細胞増大中にかなり再現可能である。そのため、このような再現性により、特定の目的のために活性化されたＴ細胞生成物をカスタマイズすることが可能となる。
７．３． 機能的外因性受容体と一つ又は複数の追加のドメインとを含むポリペプチド
別の態様において、本明細書はポリペプチドを提供し、該ポリペプチドは、少なくとも一つの機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ及びＴＡＣ）、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット及びＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１）のうちの少なくとも一つを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書はポリペプチドを提供し、該ポリペプチドは、少なくとも一つの機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ及びＴＡＣ）、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット及びＣＣＬ－１９のうちの少なくとも一つを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ＣＡＲとｐ４０とを含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書は、ＣＡＲとＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドを提供する。他の実施形態において、本明細書は、ＣＡＲと、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドにおけるＣＡＲは、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。本発明のポリペプチドにおけるｐ４０及びＣＣＬ－１９は、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＣＲとｐ４０とを含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＣＲとＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドを提供する。他の実施形態において、本明細書は、ＴＣＲと、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドにおけるｐ４０及びＣＣＬ－１９は、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＡＣとｐ４０とを含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＡＣとＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドを提供する。他の実施形態において、本明細書は、ＴＡＣと、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドにおけるｐ４０及びＣＣＬ－１９は、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、分泌されたポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、膜結合性ポリペプチド（例えば、ＭＢ１２）である。
いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ヒトＣＣＬ－１９又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－１９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本発明のポリペプチドにおいて、ＣＡＲ、ｐ４０及び／又はＣＣＬ－１９は、任意の順序で並べられ得る。例えば、ＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－１９がいずれもポリペプチドに存在する場合、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＡＲと、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＡＲと、ＣＣＬ－１９と、ｐ４０とを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＣＬ－１９と、ｐ４０と、ＣＡＲとを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９と、ＣＡＲとを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ｐ４０と、ＣＡＲと、ＣＣＬ－１９とを含み、且ついくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＣＬ－１９と、ＣＡＲと、ｐ４０とを含む。
本明細書による様々なポリペプチドのいくつかの実施形態において、ＣＡＲ、ｐ４０及び／又はＣＣＬ－１９はペプチドリンカーを介して互いに連結される。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、２Ａ自己切断ペプチドのような自己切断ペプチドであり、それによりＣＡＲ、ｐ４０及び／又はＣＣＬ－１９が、細胞内で切断された後に単独のポリペプチドになる。
他の実施形態において、本明細書はポリペプチドを提供し、該ポリペプチドは、少なくとも一つの機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ及びＴＡＣ）、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット及びＣＣＬ－２１のうちの少なくとも一つを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ＣＡＲとｐ４０とを含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書は、ＣＡＲとＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドを提供する。他の実施形態において、本明細書は、ＣＡＲと、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドにおけるＣＡＲは、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。本発明のポリペプチドにおけるｐ４０及びＣＣＬ－２１は、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＣＲとｐ４０とを含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＣＲとＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドを提供する。他の実施形態において、本明細書は、ＴＣＲと、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドにおけるｐ４０及びＣＣＬ－２１は、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＡＣとｐ４０とを含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書は、ＴＡＣとＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドを提供する。他の実施形態において、本明細書は、ＴＡＣと、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドにおけるｐ４０及びＣＣＬ－２１は、上記セクション７．２に記載されているいずれか一つであってもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、分泌されたポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本明細書によるｐ４０ポリペプチドは、膜結合性ポリペプチド（例えば、ＭＢ１２）である。
いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ヒトＣＣＬ－２１又はその断片もしくは変異体である。具体的な実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書によるＣＣＬ－２１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本発明のポリペプチドにおいて、ＣＡＲ、ｐ４０及び／又はＣＣＬ－２１は、任意の順序で並べられ得る。例えば、ＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－２１がいずれも本ポリペプチドに存在する場合、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＡＲと、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＡＲと、ＣＣＬ－２１と、ｐ４０とを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＣＬ－２１と、ｐ４０と、ＣＡＲとを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１と、ＣＡＲとを含み、いくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ｐ４０と、ＣＡＲと、ＣＣＬ－２１とを含み、且ついくつかの実施形態において、本明細書によるポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＣＬ－２１と、ＣＡＲと、ｐ４０とを含む。
本明細書による様々なポリペプチドのいくつかの実施形態において、ＣＡＲ、ｐ４０及び／又はＣＣＬ－２１はペプチドリンカーを介して互いに連結される。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、２Ａ自己切断ペプチドのような自己切断ペプチドであり、それによりＣＡＲ、ｐ４０及び／又はＣＣＬ－２１が、細胞内で切断された後に単独のポリペプチドになる。
２Ａペプチドのメンバーは、それらを最初に記述したウイルスにちなんで命名されている。例えば、最初に記述された２ＡペプチドＦ２Ａは口蹄疫ウイルスに由来する。長さが１８～２２個のアミノ酸である自己切断型２Ａペプチドは、プロリンとグリシン残基との間の「リボソームスキッピング」を媒介し、下流翻訳に影響を及ぼすことなくペプチド結合形成を抑制する。これらのペプチドは、複数のタンパク質がポリタンパク質としてコードされることを可能にし、これらのポリタンパク質は翻訳時に解離して成分タンパク質となる。自己切断ペプチドは、ピコルナウイルス科ウイルスファミリーのメンバーに存在し、口蹄疫ウイルス（ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ、ＦＭＤＶ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）、ゾセアアジグナウイルス（ＴａＶ）及びブタテッショウウイルス－１（ＰＴＶ－１）のようなアフトウイルス（ａｐｈｔｈｏｖｉｒｕｓ）（Ｄｏｎｎｅｌｌｙら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８２：１０２７－１０１（２００１）、Ｒｙａｎら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：２７２７－２７３２（２００１）を参照されたい）と、タイロウイルス（例えば、タイラーマウス脳脊髄炎）及び脳心筋炎ウイルスのようなカルジオウイルスとを含む。ＦＭＤＶ、ＥＲＡＶ、ＰＴＶ－１及びＴａＶに由来する２Ａペプチドは、それぞれ「Ｆ２Ａ」、「Ｅ２Ａ」、「Ｐ２Ａ」及び「Ｔ２Ａ」と呼ばれることもあり、且つ、例えば、Ｄｏｎｎｅｌｌｙら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：１３－２１（１９９７）、Ｒｙａｎ及びＤｒｅｗ，ＥＭＢＯ Ｊ．，１３：９２８－９３３（１９９４）、Ｓｚｙｍｃｚａｋら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，５：５８９－５９４（２００４）、Ｈａｓｅｇａｗａら，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，２５（７）：１７０７－１２（２００７）の文献に記載されるように、本開示の内容に含まれる。他の実施形態において、本明細書には、Ｓｈａｈ及びＭｕｉｒ，Ｃｈｅｍ Ｓｃｉ．，５（１）：４４６－４６１（２０１４）並びにＴｏｐｉｌｉｎａ及びＭｉｌｌｓ，Ｍｏｂｉｌｅ ＤＮＡ，５（５）（２０１４）に記載されるように、インテイン媒介性タンパク質スプライシング系が使用される。当分野の既知の他の方法も本発明のコンストラクトに用いることができる。
いくつかの実施形態において、２Ａ自己切断ペプチドは、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、又はそれらの変異体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＰ２Ａ断片である。具体的な実施形態において、自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ断片である。
いくつかの特定の実施形態において、ｐ４０及びＣＣＬ－１９は、第１の自己切断ペプチドを介して連結される。いくつかの実施形態において、第１の自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＴ２Ａ断片である。いくつかの実施形態において、本明細書による、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットとＣＣＬ－１９とを含むドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書による、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットとＣＣＬ－１９とを含むドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ）は、第２の自己切断ペプチドを介してドメインに連結される。いくつかの実施形態において、第２の自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＰ２Ａ断片である。
他の特定の実施形態において、ｐ４０及びＣＣＬ－２１は、第１の自己切断ペプチドを介して連結される。いくつかの実施形態において、第１の自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＴ２Ａ断片である。いくつかの実施形態において、本明細書による、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットとＣＣＬ－２１とを含むドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書による、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットとＣＣＬ－２１とを含むドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ）は、第２の自己切断ペプチドを介してドメインに連結される。いくつかの実施形態において、第２の自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＰ２Ａ断片である。
別の態様において、本明細書は、上記ポリペプチドをコードする核酸を提供し、該ポリペプチドは、本明細書による機能的外因性受容体（例えば、ＣＡＲ）、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、及び／又はＣＣＲ７のリガンド（例えば、ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１）を含み、それは、以下でより詳細に説明される。
７．４． ポリヌクレオチド
別の態様において、本開示は、本明細書によるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、上記セクション７．２及びセクション７．３に記載されるものを含む。
より具体的には、いくつかの実施形態において、本明細書は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、該ポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含み、ここで、該ＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－１９は、ペプチドリンカー（例えば、２Ａ自己切断ペプチドリンカー）を介して互いと融合される。
さらに別の態様において、本明細書はポリヌクレオチドを提供し、該ポリヌクレオチドは、ＣＡＲをコードする領域、ｐ４０をコードする領域及び／又はＣＣＬ－１９をコードする領域を含む。いくつかの実施形態において、二つ又はそれ以上の領域は、同一のプロモーターにより制御される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、これらの領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＡＲをコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする第２のポリヌクレオチドと、ＣＣＬ－１９をコードする第３のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＡＲをコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする領域及びＣＣＬ－１９をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ｐ４０をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＣＡＲをコードする領域及びＣＣＬ－１９をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＣＬ－１９をコードする第１のポリヌクレオチド、ＣＡＲをコードする領域及びｐ４０をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドを含む。
さらに別の態様において、本明細書は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、該ポリペプチドは、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）と、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含み、ここで、該ＴＣＲ（又はそのサブユニット）、ｐ４０及びＣＣＬ－１９は、ペプチドリンカー（例えば、２Ａ自己切断ペプチドリンカー）を介して互いと融合される。
さらに別の態様において、本明細書はポリヌクレオチドを提供し、該ポリヌクレオチドは、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする領域、ｐ４０をコードする領域、及び／又はＣＣＬ－１９をコードする領域を含む。いくつかの実施形態において、二つ又はそれ以上の領域は、同一のプロモーターにより制御される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、これらの領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする第２のポリヌクレオチドと、ＣＣＬ－１９をコードする第３のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする領域及びＣＣＬ－１９をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ｐ４０をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする領域及びＣＣＬ－１９をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＣＬ－１９をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする領域及びｐ４０をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。
さらに別の態様において、本明細書は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、該ポリペプチドは、ＴＡＣ（又はそのドメイン）と、ｐ４０と、ＣＣＬ－１９とを含み、ここで、該ＴＡＣ（又はそのドメイン）、ｐ４０及びＣＣＬ－１９は、ペプチドリンカー（例えば、２Ａ自己切断ペプチドリンカー）を介して互いと融合される。
さらに別の態様において、本明細書提供了ポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドは、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする領域、ｐ４０をコードする領域、及び／又はＣＣＬ－１９をコードする領域を含む。いくつかの実施形態において、二つ又はそれ以上の領域は、同一のプロモーターにより制御される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、これらの領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする第２のポリヌクレオチドと、ＣＣＬ－１９をコードする第３のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする領域及びＣＣＬ－１９をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ｐ４０をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする領域及びＣＣＬ－１９をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＣＬ－１９をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする領域及びｐ４０をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。
他の実施形態において、本明細書は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、該ポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含み、ここで、該ＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－２１は、ペプチドリンカー（例えば、２Ａ自己切断ペプチドリンカー）を介して互いと融合される。
さらに別の態様において、本明細書はポリヌクレオチドを提供し、該ポリヌクレオチドは、ＣＡＲをコードする領域、ｐ４０をコードする領域及び／又はＣＣＬ－２１をコードする領域を含む。いくつかの実施形態において、二つ又はそれ以上の領域は、同一のプロモーターにより制御される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、これらの領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＡＲをコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする第２のポリヌクレオチドと、ＣＣＬ－２１をコードする第３のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＡＲをコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする領域及びＣＣＬ－２１をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ｐ４０をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＣＡＲをコードする領域及びＣＣＬ－２１をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＣＬ－２１をコードする第１のポリヌクレオチド、ＣＡＲをコードする領域及びｐ４０をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドを含む。
さらに別の態様において、本明細書は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、該ポリペプチドは、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）と、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含み、ここで、該ＴＣＲ（又はそのサブユニット）、ｐ４０及びＣＣＬ－２１は、ペプチドリンカー（例えば、２Ａ自己切断ペプチドリンカー）を介して互いと融合される。
さらに別の態様において、本明細書はポリヌクレオチドを提供し、該ポリヌクレオチドは、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする領域、ｐ４０をコードする領域、及び／又はＣＣＬ－２１をコードする領域を含む。いくつかの実施形態において、二つ又はそれ以上の領域は、同一のプロモーターにより制御される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、これらの領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする第２のポリヌクレオチドと、ＣＣＬ－２１をコードする第３のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする領域及びＣＣＬ－２１をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ｐ４０をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする領域及びＣＣＬ－２１をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＣＬ－２１をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＣＲ（又はそのサブユニット）をコードする領域及びｐ４０をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。
さらに別の態様において、本明細書は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供し、該ポリペプチドは、ＴＡＣ（又はそのドメイン）と、ｐ４０と、ＣＣＬ－２１とを含み、ここで、該ＴＡＣ（又はそのドメイン）、ｐ４０及びＣＣＬ－２１は、ペプチドリンカー（例えば、２Ａ自己切断ペプチドリンカー）を介して互いと融合される。
さらに別の態様において、本明細書はポリヌクレオチドを提供し、該ポリヌクレオチドは、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする領域、ｐ４０をコードする領域、及び／又はＣＣＬ－２１をコードする領域を含む。いくつかの実施形態において、二つ又はそれ以上の領域は、同一のプロモーターにより制御される。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、これらの領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする第２のポリヌクレオチドと、ＣＣＬ－２１をコードする第３のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする第１のポリヌクレオチドと、ｐ４０をコードする領域及びＣＣＬ－２１をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ｐ４０をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする領域及びＣＣＬ－２１をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。さらに別の態様において、本明細書は組成物を提供し、該組成物は、ＣＣＬ－２１をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＴＡＣ（又はそのドメイン）をコードする領域及びｐ４０をコードする領域を含有する第２のポリヌクレオチドとを含む。
本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡ形態又はＤＮＡ形態であってもよい。ＤＮＡは、ｃＤＮＡと、ゲノムＤＮＡと、合成ＤＮＡとを含み、且つ二本鎖又は一本鎖であってもよく、且つ一本鎖であれば、コード鎖又は非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドはｃＤＮＡ形態である。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは合成ポリヌクレオチドである。
本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドの変異体にさらに関し、ここで、該変異体は、例えば、本開示のポリペプチド的断片、類似体及び／又は誘導体をコードする。いくつかの実施形態において、本開示はポリヌクレオチドを提供し、該ポリヌクレオチドは、本開示のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも約７５％同一である、少なくとも約８０％同一である、少なくとも約８５％同一である、少なくとも約９０％同一である、少なくとも約９５％同一である、且ついくつかの実施形態においては少なくとも約９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用されるように、語句「参照ヌクレオチド配列と少なくとも例えば９５％「同一である」ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド」は、該ポリヌクレオチド配列が、該参照ヌクレオチド配列の１００ヌクレオチド当たり最大五つの点突然変異を含み得ることを除いて、該ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一性を有することを意味することが意図される。換言すれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列における５％までのヌクレオチドを削除するかもしくは別のヌクレオチドで置換してもよいか、又は参照配列における全ヌクレオチドの５％までの複数のヌクレオチドを参照配列に挿入してもよい。参照配列のこれらの突然変異は、参照ヌクレオチド配列の５’又は３’末端位置又はそれらの末端位置の間にある、参照配列における単一のヌクレオチドの間に散在するか又は参照配列内にある一つ又は複数の連続した基における任意の場所で発生し得る。
ポリヌクレオチド変異体は、コード領域、非コード領域又は両方に変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、サイレント置換、付加、又は欠失を生じさせるが、コードされるポリペプチドの特性又は活性を変化させない変化を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、サイレント置換を含み、それは、（遺伝子コードの縮重に起因して）ポリペプチドのアミノ酸配列の変化を生じさせない。ポリヌクレオチド変異体は、種々の理由、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化する（即ちヒトｍＲＮＡのコドンを大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）のような細菌宿主に好ましいものに変更する）ために産生され得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、配列の非コード又はコード領域において少なくとも一つのサイレント突然変異を含む。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、コードされるポリペプチドの発現（又は発現レベル）を調節するか又は変化させるように産生された。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、コードされるポリペプチドの発現を増加するように産生された。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、ポリペプチドの発現を減少させるように産生された。いくつかの実施形態において、親ポリヌクレオチド配列に比べて、ポリヌクレオチド変異体は、コードされるポリペプチドの発現の増加を示す。いくつかの実施形態において、親ポリヌクレオチド配列に比べて、ポリヌクレオチド変異体はコードされるポリペプチドの発現の減少を示す。
７．５． ベクター
本明細書に記載のポリヌクレオチド又は核酸分子を含むベクターをさらに提供する。一実施形態において、核酸分子を組換え発現ベクターに組込んでもよい。
本開示は、本明細書に記載のポリペプチドのうちのいずれか一つをクローニングし発現するためのベクターを提供する。いくつかの実施形態において、ベクターは、哺乳動物細胞のような真核細胞における複製及び組込みに適する。いくつかの実施形態において、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例は、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、牛痘ベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びその誘導体を含むが、それらに限らない。ウイルスベクター技術は、当分野に周知のものであり、且つ例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）並びに他のウイルス学及び分子生物学的マニュアルに記載されている。
哺乳動物細胞に遺伝子を移入するための多くのウイルスベースのシステムが開発されている。例えば、逆転写ウイルスは遺伝子送達システムのために便利なプラットフォームを提供する。当分野の既知の技術を用いて異種核酸をベクターに挿入し、逆転写ウイルス粒子にパッケージングすることができる。そして組換えウイルスを単離し、操作された哺乳動物細胞にそれをインビトロ又はエクスビボ送達することができる。多くの逆転写ウイルス系は、当分野に既知のものである。いくつかの実施形態において、アデノウイルスベクターを用いる。多くのアデノウイルスベクターは当分野に既知のものである。いくつかの実施形態において、レンチウイルスベクターを用いる。いくつかの実施形態において、自己不活性化型レンチウイルスベクターを用いる。例えば、免疫調節剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）コード配列を担持する自己不活性化型レンチウイルスベクター及び／又はキメラ抗原受容体を担持する自己不活性化型レンチウイルスベクターは、当分野に既知のレジメンパッケージングでパッケージングされ得る。当分野の既知の方法を用いて、得られたレンチウイルスベクターを哺乳動物細胞（例えば、初代ヒトＴ細胞）の形質導入に用いられてもよい。レンチウイルスのような逆転写ウイルスに由来するベクターは、トランスジェニックの長期的かつ安定的な組込み及び子孫細胞での増殖を可能にするため、長期的な遺伝子転移を実現するのに適したツールである。レンチウイルスベクターは、低免疫原性をさらに有し、且つ非増殖性細胞を形質導入することができる。
いくつかの実施形態において、ベクターは、本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸のうちのいずれか一つを含む。核酸は、例えば、制限エンドヌクレアーゼ部位及び一つ又は複数の選択可能マーカーを用いることを含め、当分野における任意の周知の分子クローニング方法を用いてベクターにクローニングされ得る。いくつかの実施形態において、核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。哺乳動物細胞における遺伝子発現のための様々なプロモーターが探索されており、本開示では、当分野に既知のプロモーターのいずれも使用し得る。プロモーターは、構成型プロモーター又は調節型プロモーター、例えば、誘導型プロモーターに大別され得る。
いくつかの実施形態において、ポリペプチドをコードする核酸は、構成型プロモーターに作動可能に連結される。構成型プロモーターは、異種遺伝子（トランスジェニックとも呼ばれる）の宿主細胞での構成的発現を可能にする。本明細書で企図される例示的構成型プロモーターは、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ヒト伸長因子－１ α（ｈＥＦ１α）、ユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、ホスホグリセロキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）及びＣＭＶ初期エンハンサーにカップリングされるニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＡＧＧ）を含むが、それらに限らない。このような構成型プロモーターのトランスジェニック発現ドライブに対する効率は、多くの研究において広く比較されている。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ Ｃ．Ｍｉｌｏｎｅらは、ＣＭＶ、ｈＥＦ１α、ＵｂｉＣ及びＰＧＫが初代ヒトＴ細胞におけるキメラ抗原受容体発現をドライブする効率を比較し、ｈＥＦ１αプロモーターが、最も高いレベルのトランスジェニック発現を誘導するだけでなく、且つＣＤ４及びＣＤ８ヒトＴ細胞において最適に維持されると結論付けた（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，１７（８）：１４５３－１４６４（２００９））。いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、ｈＥＦ１αプロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、ＭＳＣＶプロモーターに作動可能に連結される。
いくつかの実施形態において、ポリペプチドをコードする核酸は、誘導型プロモーターに作動可能に連結される。誘導型プロモーターは、調節型プロモーターのクラスに属する。誘導型プロモーターは、一つ又は複数の条件、例えば、物理的条件、操作された免疫エフェクター細胞の微小環境もしくは操作された免疫エフェクター細胞の生理学的状態、誘導物質（即ち、誘導剤）又はそれらの組み合わせにより誘導され得る。
いくつかの実施形態において、誘導条件は、操作された哺乳動物細胞及び／又は医薬組成物を受けた対象における内因性遺伝子の発現を誘導しない。いくつかの実施形態において、該誘導条件は、誘導物質、照射（例えば、電離放射線、光）、温度（例えば、熱）、酸化還元状態、腫瘍環境及び操作された哺乳動物細胞の活性化状態からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、ベクターは、レンチウイルスベクターを介してトランスフェクトされた宿主細胞集団からポリペプチドを発現する細胞を選択するために、選択マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子を含む。宿主細胞における発現を可能にするために、選択マーカー及びレポーター遺伝子には、両方とも適切な調節配列が隣接され得る。例えば、ベクターは、転写及び翻訳ターミネーター、開始配列並びに核酸配列発現の調節に有用であるプロモーターを含有する。
いくつかの特定の実施形態において、本明細書によるベクターは、ＭＮＤプロモーター（骨髓増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位に置換される（ＭＮＤ）プロモーター）を含む。いくつかの特定の実施形態において、本明細書によるベクターはＭＳＣＶプロモーターを含む。他の特定の実施形態において、本明細書によるベクターはＥＦ１αを含む。
７．６． 作製方法
さらに別の態様において、本明細書は、操作された免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はＴＣＲ－Ｔ細胞又はＴＡＣ－Ｔ細胞）を作製するための方法を提供し、該方法は、本明細書による一つ又は複数のポリヌクレオチド又は一つ又は複数のベクター（例えば、上記セクション７．４及びセクション７．５に記載のとおりである）を免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入することを含む。
より具体的には、いくつかの実施形態において、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、セクション７．３に記載のポリペプチドをコードする一つ又は複数の核酸又はセクション７．４に記載の一つ又は複数の核酸を細胞に導入することによって産生され得る。
ＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－１９は、それぞれ単独のポリペプチドとしてＴ細胞に単独に導入され得る。例えば、本明細書によるＣＡＲをコードする核酸、ｐ４０をコードする核酸、及びＣＣＬ－１９をコードする核酸をそれぞれＴ細胞に導入する。代替的に、三者のうちのいずれか両者又は三者全ては、一つの核酸により単一ポリペプチドとしてＴ細胞に一緒に導入され得、該核酸は細胞内で翻訳されると切断される。例えば、本明細書によるＣＡＲと、自己切断ペプチドリンカーを介して連結されるｐ４０とを含むポリペプチドをコードする核酸をＴ細胞に導入し、ＣＣＬ－１９をコードする核酸をＴ細胞に別々に導入する。同様に、本明細書によるＣＡＲと、自己切断ペプチドリンカーを介して連結されるＣＣＬ－１９とを含むポリペプチドをコードする核酸をＴ細胞に導入し、ｐ４０をコードする核酸をＴ細胞に別々に導入する。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドリンカーを介して互いに連結されるＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－１９のうちの三者全てを含むポリペプチドをコードする核酸をＴ細胞に導入してもよい。以上では、自己切断ペプチドリンカーがより詳細に説明されている。いくつかの実施形態において、２Ａ自己切断ペプチドは、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、又はそれらの変異体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＰ２Ａ断片である。具体的な実施形態において、自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ断片である。
代替的に、本明細書によるＣＡＲ－Ｔ細胞は、複数の領域、例えば、ＣＡＲをコードする領域、ｐ４０をコードする領域及び／又はＣＣＬ－１９をコードする領域を含むポリヌクレオチドから産生され得る。異なる領域は、同じプロモーターにより制御され得る。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、異なる領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は、本明細書による方法によって産生された、操作された免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）を提供する。他の特性に加えて、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を有しないＣＡＲ－Ｔ細胞に比べてより高いレベルのＩＬ－２３を有する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも２０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも３０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも４０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも５０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも６０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも７０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも８０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも９０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍又はそれ以上である。
他の実施形態において、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、セクション７．３に記載のポリペプチドをコードする一つ又は複数の核酸又はセクション７．４に記載の一つ又は複数の核酸を細胞に導入することによって産生され得る。
ＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－２１は、それぞれ単独のポリペプチドとしてＴ細胞に単独に導入され得る。例えば、本明細書によるＣＡＲをコードする核酸、ｐ４０をコードする核酸及びＣＣＬ－２１をコードする核酸をそれぞれＴ細胞に導入する。代替的に、三者のうちのいずれか両者又は三者全ては、一つの核酸により単一ポリペプチドとしてＴ細胞に一緒に導入され得、該核酸は細胞内で翻訳されると切断される。例えば、本明細書によるＣＡＲと、自己切断ペプチドリンカーを介して連結されるｐ４０とを含むポリペプチドをコードする核酸をＴ細胞に導入し、ＣＣＬ－２１をコードする核酸をＴ細胞に別々に導入する。同様に、本明細書によるＣＡＲと、自己切断ペプチドリンカーを介して連結されるＣＣＬ－２１とを含むポリペプチドをコードする核酸をＴ細胞に導入し、ｐ４０をコードする核酸をＴ細胞に別々に導入する。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドリンカーを介して互いに連結されるＣＡＲ、ｐ４０及びＣＣＬ－２１のうちの三者全てを含むポリペプチドをコードする核酸をＴ細胞に導入してもよい。以上では、自己切断ペプチドリンカーがより詳細に説明されている。いくつかの実施形態において、２Ａ自己切断ペプチドは、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、又はそれらの変異体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含む２Ａ自己切断ペプチドＰ２Ａ断片である。具体的な実施形態において、自己切断ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ断片である。
代替的に、本明細書によるＣＡＲ－Ｔ細胞は、複数の領域、例えば、ＣＡＲをコードする領域、ｐ４０をコードする領域及び／又はＣＣＬ－２１をコードする領域を含むポリヌクレオチドから産生され得る。異なる領域は、同じプロモーターにより制御され得る。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）を用いて、一つのプロモーターからの複数の遺伝子を発現する。他の実施形態において、異なる領域は、単独のプロモーターにより制御される。
さらに別の態様において、本明細書は、本明細書による方法によって産生された、操作された免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）を提供する。他の特性に加えて、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を有しないＣＡＲ－Ｔ細胞に比べてより高いレベルのＩＬ－２３を有する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも２０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも３０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも４０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも５０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも６０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも７０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも８０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも９０％高い。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２３のレベルは少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍又はそれ以上である。
ＣＡＲ－Ｔ細胞との関連において記述される上記方法は、他の免疫エフェクター細胞（例えば、ＴＣＲ－Ｔ細胞及びＴＡＣ－Ｔ細胞）の産生にも適用可能である。
７．７． 医薬組成物
一態様において、本開示は、本開示の操作された細胞を含む医薬組成物をさらに提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、治療有効量の本開示の操作されたＴ細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む。
具体的な実施形態において、用語「賦形剤」はさらに、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全もしくは不完全））、キャリア、又はビヒクルを指してもよい。医薬賦形剤は、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油のような、石油、動物、植物又は合成供給源のものを含む油及び水のような無菌の液体であってもよい。生理食塩水、デキストロース水溶液及びグリセリン溶液も液体賦形剤として用いることができる。適切な医薬賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、エチレングリコール、水、エタノールなどを含む。該組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤をさらに含んでもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸薬、カプセル、散剤、徐放性製剤などの形態をとることができる。適切な医薬賦形剤の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに記載されている。このような組成物は、患者への投与に適した形態を提供するために、予防又は治療有効量の、例えば、精製された形態で、本明細書に提供される活性成分、及び適切な量の賦形剤を含むことになる。該製剤は投与様式に適しているべきである。
いくつかの実施形態において、賦形剤の選択は、特定の細胞、及び／又は投与方法により部分的に決定される。そのため、複数の適切な製剤が存在する。
通常、許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤は、用いられる投与量及び濃度で受容体にとって非毒性であり、且つ、緩衝剤、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む酸化防止剤；防腐剤、等張剤、安定剤、金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ＥＤＴＡのようなキレート剤及び／又は非イオン性界面活性剤を含む。
緩衝剤は、特に安定性がｐＨ依存的である場合、治療効果を最適化する範囲内にｐＨを制御するために用いることができる。本開示に適した緩衝剤は、有機酸、無機酸及びそれらの塩を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。なお、緩衝液は、ヒスチジン及びトリメチルアミン塩、例えば、Ｔｒｉｓを含んでもよい。
微生物の増殖を遅らせるため、保存剤を加えてもよい。本開示に適した防腐剤は、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩素、臭素、ヨウ素）、塩化ベンゼトニウム、チメロサール、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール、メチルパラベン又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン類、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール及びｍ－クレゾールを含む。
等張化剤（「安定剤」と呼ばれることもある）は組成物における液体の張力を調節又は維持するために存在してもよい。タンパク質及び抗体のような大きな荷電生体分子と共に使用される場合、それらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用することによって分子間及び分子内相互作用の可能性を低下させることができるため、多くの場合に「安定剤」と呼ばれる。例示的等張化剤は、多価糖アルコール類、三価以上の糖アルコール類、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール及びマンニトールを含む。
別の例示的賦形剤は、（１）充填剤と、（２）溶解度促進剤と、（３）安定剤と、（４）変性又は容器壁への接着を防止する薬剤とを含む。このような賦形剤は、多価糖アルコール類（上記に列挙した）と、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのようなアミノ酸と、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール類（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールのような有機糖又は糖アルコール類と、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウムのような含硫還元剤と、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン又は他の免疫グロブリン低分子量タンパク質と、ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマーと、単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）と、二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）と、ラフィノースのような三糖類と、デキストリン又はデキストランのような多糖類とを含む。
治療剤の溶解を促進し、治療用タンパク質を撹拌誘発性凝集から保護するために、非イオン性界面活性剤又はデタージェント（「湿潤剤」とも呼ばれる）が存在し得、これは、活性治療用タンパク質又は抗体の変性を引き起こすことなく製剤が剪断表面応力に曝露されることも可能にする。適切な非イオン性界面活性剤としては、例えば、ポリソルベート類（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポロキサマー類（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール類、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル類（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０及び６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースが挙げられる。利用可能なアニオン性デタージェントとしては、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム及びジオクチルスルホン酸ナトリウムが挙げられる。カチオン性デタージェントとしては、塩化ベンザルコニウム又は塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
投与経路は、単回又は複数回のボーラス注入又は適切なやり方、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、又は持続放出もしくは遅延放出手段による長時間注入のような、既知かつ許容可能な方法に従って行われる。
別の実施形態において、医薬組成物は、制御放出又は持続放出系として提供され得る。一実施形態において、制御放出又は持続放出を実現するために、ポンプを使用してもよい（例えば、Ｓｅｆｔｏｎ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１－４０（１９８７）、Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７－１６（１９８０）、及びＳａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５６９－７４（１９８９）を参照されたい）。別の実施形態において、ポリマー材料は、予防剤又は治療剤（例えば、本明細書に記載の融合タンパク質）又は本明細書による組成物の制御放出又は持続放出を実現するために用いられてもよい（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅによる編集，１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ及びＢａｌｌによる編集，１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ及びＰｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１－１２６（１９８３）、Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０－９２（１９８５）、Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１－５６（１９８９）、Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５－１２（１９８９）、米国特許第５，６７９，３７７号、同第５，９１６，５９７号、同第５，９１２，０１５号、同第５，９８９，４６３号、及び同第５，１２８，３２６号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／１５１５４及び同ＷＯ ９９／２０２５３を参照されたい）。持続放出製剤に用いられるポリマーの例は、ポリ（２－メタクリル酸ヒドロキシエチル）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－コ－酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド類（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド類（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）類（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステル類を含むが、それらに限らない。一実施形態において、持続放出製剤に使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含まず、貯蔵時に安定性があり、無菌であり、且つ生分解性である。さらに別の実施形態において、制御放出又は持続放出系を特定の標的組織、例えば、鼻道又は肺付近に置いてもよいため、全身用量の一部のみが必要となる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ 第２巻，１１５－３８（１９８４）を参照されたい）。制御放出系は、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－３３（１９９０）によって検討されている。当業者に周知の任意の技術は、本明細書に記載の一つ又は複数の作用物質を含む持続放出製剤を産生するために用いられてもよい（例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９１／０５５４８及び同ＷＯ ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇら，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－８９（１９９６）、Ｓｏｎｇら，ＰＤＡ Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．＆ Ｔｅｃｈ．５０：３７２－９７（１９９５）、Ｃｌｅｅｋら，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－５４（１９９７）、及びＬａｍら，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－６０（１９９７）を参照されたい）。
本明細書に記載の医薬組成物は、治療する特定の適応症の必要に応じて二つ以上の活性化合物又は活性剤をさらに含んでもよい。代替的に又は付加的に、組成物は、細胞傷害性作用物質、化学療法剤、サイトカイン、免疫阻害剤又は増殖阻害剤を含んでもよい。このような分子は、所望の目的に有効な量で適宜組み合わせられて存在する。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノパーティクル及びナノカプセル）又はマクロエマルションにも封入され得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１８版に開示されている。
様々な組成物及び送達システムは、周知であり、且つ本明細書による治療剤と共に使用することができ、該組成物及び送達システムは、リポソーム、マイクロパーティクル、マイクロカプセルに封入され、本明細書による単一ドメイン抗体又は治療用分子を発現することができる組換え細胞、レトロウイルスベクター又は他のベクターの一部として構築される核酸などを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書による医薬組成物は、治療有効量又は予防有効量などの、疾患又は障害を治療又は予防するのに有効な量の結合分子及び／又は細胞を含む。いくつかの実施形態において、治療又は予防効果は、治療される対象を定期的に評価することによってモニタリングされる。数日以上の繰り返し投与については、病態に応じて、疾患症状の所望の抑制が起こるまで治療を繰り返して行う。しかしながら、他の投与量レジメンは、有用であり得、且つ決定され得る。
７．８． 方法と使用
別の態様において、本明細書は、本明細書による操作された細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）の使用方法及び使用を提供する。このような方法及び使用は、治療方法及び使用、例えば、疾患又は障害を有している対象に細胞又は細胞を含有する組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、疾患又は障害の治療を実現するために、細胞は有効量で投与される。使用は、細胞のこのような方法及び治療における使用、並びにこれらの治療方法を実施するための医薬の調製における使用を含む。いくつかの実施形態において、これらの方法は、疾患又は病態を有しているか又は有している疑いがある対象に、細胞又はこれらの細胞を含む組成物を投与することによって実施される。いくつかの実施形態において、これらの方法は、これにより対象の疾患又は障害を治療する。
いくつかの実施形態において、本明細書による治療は、疾患もしくは障害又はそれらに関連する症状、副効用もしくは結果もしくは表現型の完全又は部分的な改善又は減少をもたらす。治療の理想的効果は、疾患の発生又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善又は軽減、及び寛解又は予後の改善を含むが、それらに限らない。これらの用語は、疾患の完治、又は任意の症状又は全ての症状若しくはアウトカムに対する一つ又は複数の影響の完全除去を含むが、これを示唆するものではない。
本明細書で使用されるように、いくつかの実施形態において、本明細書による治療は、疾患又は障害の発症を遅延させ、例えば、疾患（例えば、がん）の発症を遅くし、妨げ、減速させ、阻止し、安定化し、抑制し及び／又は遅らせる。この遅延は、疾患の病歴及び／又は治療される個体に応じて、異なる時間長を有してもよい。当業者には明らかなように、個体が疾患又は障害を発症していないため、十分又は有意な遅延は、実際的には、予防を包含することができる。例えば、進行期がん（例えば、転移の発症）を遅延させる可能性がある。他の実施形態において、本明細書による方法又は使用は、疾患又は障害を予防する。
いくつかの実施形態において、本発明ＣＡＲ－Ｔ細胞療法は、固形腫瘍がんを治療するためのものである。他の実施形態において、本発明ＣＡＲ－Ｔ細胞は、血液がんを治療するためのものである。他の実施形態において、疾患又は障害は、自己免疫性及び炎症性疾患である。他の実施形態において、疾患又は障害は、感染性疾患である。
いくつかの実施形態において、疾患又は障害は、異常な細胞増殖及び／又はアポトーシス失調の疾患である。このような疾患の例は、がん、中皮腫、膀胱がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚又は眼内黒色腫、卵巣がん、乳がん、子宮がん、卵管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、骨がん、結腸がん、直腸がん、肛門領域がん、胃がん、胃腸（胃、結腸直腸及び／又は十二指腸）がん、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、精巣がん、肝細胞（肝及び／又は胆管）がん、原発性又は二次性中枢神経系腫瘍、原発性又は二次性脳腫瘍、ホジキン病（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、慢性又は急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性リンパ腫、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞又はＢ細胞由来のリンパ球性悪性腫瘍、黒色腫、多発性骨髄腫、口腔がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、小細胞肺がん、腎及び／又は尿管がん、腎細胞がん、腎盂がん、中枢神経系腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊柱腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺瘤、副腎皮質がん、胆嚢がん、脾臓がん、胆管がん、繊維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫又はそれらの組み合わせを含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、疾患又は障害は、膀胱がん、脳がん、乳がん、骨髓がん、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、結腸直腸がん、食道がん、肝細胞がん、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ細胞又はＢ細胞由来のリンパ球性悪性腫瘍、黒色腫、髓細胞性白血病、骨髄腫、口腔がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、小細胞肺がん及び脾臓がんからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、該疾患又は障害は、白血病、リンパ腫又は骨髄腫のような血液学的がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、活性化Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、形質転換リンパ腫、中分化型リンパ球性リンパ腫、中間リンパ球性リンパ腫（ＩＬＬ）、びまん性低分化リンパ球性リンパ腫（ＰＤＬ）、中心細胞リンパ腫、びまん性小開裂細胞リンパ腫（ＤＳＣＣＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、外套層状リンパ腫、低レベル濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、急性巨核芽球性白血病、前駆体Ｂ急性リンパ芽球性白血病、前駆体Ｔ急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（バーキットリンパ腫）、急性二重表現型白血病、慢性骨髓性リンパ腫、慢性髓細胞性白血病（ＣＭＬ）及び慢性単球性白血病からなる群から選択される。具体的な実施形態において、該疾患又は障害は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。別の具体的な実施形態において、該疾患又は障害は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。別の具体的な実施形態において、該疾患又は障害は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。さらに別の具体的な実施形態において、該疾患又は障害じゃ多発性骨髄腫（ＭＭ）である。
他の実施形態において、該疾患又は障害は固形腫瘍がんである。いくつかの実施形態において、固形腫瘍がんは、がん、腺がん、副腎皮質がん、結腸腺がん、結腸直腸腺がん、結腸直腸がん、導管細胞がん、肺がん、甲状腺がん、鼻咽頭がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん、肝臓がん及び肺がんからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、副腎がんである。いくつかの実施形態において、がんは、肛門がんである。いくつかの実施形態において、がんは、虫垂がんである。いくつかの実施形態において、がんは、胆管がんである。いくつかの実施形態において、がんは、膀胱がんである。いくつかの実施形態において、がんは、骨がんである。いくつかの実施形態において、がんは、脳がんである。いくつかの実施形態において、がんは、乳がんである。いくつかの実施形態において、がんは、子宮頸がんである。いくつかの実施形態において、がんは、結腸直腸がんである。いくつかの実施形態において、がんは、食道がんである。いくつかの実施形態において、がんは、胆嚢がんである。いくつかの実施形態において、がんは、妊娠性絨毛がんである。いくつかの実施形態において、がんは、頭頸部がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは、腸がんである。いくつかの実施形態において、がんは、腎臓がんである。いくつかの実施形態において、がんは、白血病である。いくつかの実施形態において、がんは、肝臓がんである。いくつかの実施形態において、がんは、肺がんである。いくつかの実施形態において、がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、がんは、中皮腫である。いくつかの実施形態において、がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。いくつかの実施形態において、がんは、神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、がんは、非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは、口腔がんである。いくつかの実施形態において、がんは、卵巣がんである。いくつかの実施形態において、がんは、膵臓がんである。いくつかの実施形態において、がんは、前立腺がんである。いくつかの実施形態において、がんは、副鼻腔がんである。いくつかの実施形態において、がんは、皮膚がんである。いくつかの実施形態において、がんは、軟部組織肉腫、脊椎がんである。いくつかの実施形態において、がんは、胃がんである。いくつかの実施形態において、がんは、精巣がんである。いくつかの実施形態において、がんは、咽頭がんである。いくつかの実施形態において、がんは、甲状腺がんである。いくつかの実施形態において、がんは、子宮がん、子宮内膜がんである。いくつかの実施形態において、がんは、膣がんである。いくつかの実施形態において、がんは、外陰がんである。
いくつかの実施形態において、副腎がんは、副腎皮質がん（ＡＣＣ）、副腎皮質がん、褐色細胞腫又は神経芽細胞腫である。いくつかの実施形態において、肛門がんは、扁平上皮がん、総排泄腔がん、腺がん、基底細胞がん又は黒色腫である。いくつかの実施形態において、虫垂がんは、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液腺がん、杯細胞カルチノイド、腸腺がん又は印環細胞型腺がんである。いくつかの実施形態において、胆管がんは、肝外胆管がん、腺がん、肝門部胆管がん、肝門領域胆管がん、遠位胆管がん又は肝内胆管がんである。いくつかの実施形態において、膀胱がんは、移行上皮がん（ＴＣＣ）、乳頭状がん、扁平がん、扁平上皮がん、腺がん、小細胞がん又は肉腫である。いくつかの実施形態において、骨がんは、原発性骨がん、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、繊維肉腫、悪性繊維性組織球腫、骨巨細胞腫、脊索腫又は転移性骨がんである。いくつかの実施形態において、脳がんは、星細胞腫、脳幹神経膠腫、膠芽腫、髄膜腫、上衣細胞腫、乏突起神経膠腫、混合神経膠腫、下垂体腺がん、下垂体腺瘤、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髓芽細胞腫又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。いくつかの実施形態において、乳がんは、乳腺がん、浸潤性乳がん、非浸潤性乳がん、乳房肉腫、化生性がん、腺様嚢胞がん、叶状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳がん、トリプルネガティブ乳がん又は炎症性乳がんである。いくつかの実施形態において、子宮頸がんは、扁平上皮がん又は腺がんである。いくつかの実施形態において、結腸直腸がんは、結腸直腸腺がん、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液腺がん、印環細胞型腺がん、消化管カルチノイド腫瘍又は黒色腫である。いくつかの実施形態において、食道がんは、腺がん又は扁平上皮がんである。いくつかの実施形態において、胆嚢がんは、腺がん、乳頭状腺がん、腺扁平上皮がん、扁平上皮がん、小細胞がん又は肉腫である。いくつかの実施形態において、妊娠性絨毛疾患（ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛腫瘍（ＧＴＮ）、絨毛がん、胎盤部トロホブラスト腫瘍（ＰＳＴＴ）又は類上皮性トロホブラスト腫瘍（ＥＴＴ）である。いくつかの実施形態において、頭頸部がんは、喉頭がん、鼻咽頭がん、下咽頭がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、唾液腺がん、口腔がん、中咽頭がん又は扁桃がんである。いくつかの実施形態において、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節性硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型又は結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である。いくつかの実施形態において、腸がんは、小腸がん（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん（ｓｍａｌｌ ｂｏｗｅｌ ｃａｎｃｅｒ）、腺がん、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍又はリンパ腫である。いくつかの実施形態において、腎臓がんは、腎細胞がん（ＲＣＣ）、淡明細胞型ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行上皮がん、尿路上皮がん、腎盂がん又は腎肉腫である。いくつかの実施形態において、白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。具体的な実施形態において、白血病はＡＭＬである。いくつかの実施形態において、肝臓がんは、肝細胞がん（ＨＣＣ）、繊維層板様ＨＣＣ、胆管がん、血管肉腫又は肝転移である。いくつかの実施形態において、肺がんは、小細胞肺がん、小細胞がん、複合小細胞がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、扁平上皮肺がん、大細胞性未分化がん、肺結節、転移性肺がん、腺扁平上皮がん、大細胞神経内分泌がん、唾液腺型肺がん、肺カルチノイド、中皮腫、肺肉腫様がん又は悪性顆粒細胞肺腫瘍である。いくつかの実施形態において、黒色腫は、表在拡大型黒色腫、結節型黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子型、無色素性黒色腫、結合組織増殖性黒色腫、眼黒色腫又は転移性黒色腫である。いくつかの実施形態において、中皮腫は、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫又は精巣中皮腫である。いくつかの実施形態において、多発性骨髄腫は、症候性骨髄腫又はくすぶり型骨髄腫である。いくつかの実施形態において、神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍又は肺神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆体Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、有毛細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞性リンパ腫、中枢神経系原発（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節内性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリバート-バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸疾患関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）又は肝脾γ／δ Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態において、口腔がんは、扁平上皮がん、疣状がん、小唾液腺がん、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫症、繊維腫、顆粒細胞腫、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨瘤、脂肪腫、神経鞘腫、神経繊維腫、乳頭状瘤、尖圭コンジローマ、疣状黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白斑、紅斑、扁平上皮口唇がん、基底細胞口唇がん、口がん、歯肉がん又は舌がんである。いくつかの実施形態において、卵巣がんは、上皮性卵巣がん、粘液性上皮卵巣がん、子宮内膜様上皮卵巣がん、上皮性卵巣淡明細胞がん、未分化上皮性卵巣がん、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜がん、卵管がん、胚細胞腫、奇形腫、未分化胚細胞腫、卵巣胚細胞がん、内胚葉洞腫瘍、性索－間質性腫瘍、性索－性腺間質性腫瘍、卵巣間質性腫瘍、顆粒細胞腫、顆粒－卵胞膜細胞腫、セルトリ－ライデッヒ細胞腫（Ｓｅｒｔｏｌｉ－Ｌｅｙｄｉｇ ｔｕｍｏｒ）、卵巣肉腫、卵巣がん肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣繊維肉腫、クルーケンベルグ腫瘍（Ｋｒｕｋｅｎｂｅｒｇ ｔｕｍｏｒ）又は卵巣嚢胞である。いくつかの実施形態において、膵臓がんは、膵外分泌腺がん、膵内分泌腺がん又は膵臓腺がん、膵島細胞腫又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、前立腺がんは、前立腺腺がん、前立腺肉腫、移行上皮がん、小細胞がん又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態において、副鼻腔がんは、扁平上皮がん、粘膜細胞がん、腺様嚢胞がん 、腺房細胞がん、鼻副鼻腔未分化がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、上顎洞がん、篩骨洞がん又は鼻咽頭がんである。いくつかの実施形態において、皮膚がんは、基底細胞がん、扁平上皮がん、黒色腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫（ＫＳ）、光線性角化症、皮膚リンパ腫又は角化棘皮瘤である。いくつかの実施形態において、軟部組織がんは、血管肉腫、皮膚繊維肉腫、上皮様肉腫、ユーイング肉腫、繊維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液型／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、脂肪腫様脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性繊維性組織球腫、神経繊維肉腫、肉腫肉腫（ＲＭＳ）又は滑膜肉腫である。いくつかの実施形態において、脊椎がんは、転移性脊椎腫瘍である。いくつかの実施形態において、胃がんは、胃腺がん、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド又はＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである。いくつかの実施形態において、精巣がんは、精上皮腫、非精上皮腫、胎児がん、卵黄嚢がん、絨毛がん、畸胎瘤、性腺間質性腫瘍、精巣ライデッヒ細胞腫又は精巣セルトリ細胞腫である。いくつかの実施形態において、咽頭がんは、扁平上皮がん、腺がん、肉腫、喉頭がん、咽頭がん、鼻咽頭がん、中咽頭がん、下咽頭がん、喉頭がん、喉頭扁平上皮がん、喉頭腺がん、リンパ上皮腫、紡錘細胞がん、疣状がん、未分化がん又はリンパ節がんである。いくつかの実施形態において、甲状腺がんは、乳頭状がん、濾胞がん、ヒュルトレ細胞がん、甲状腺髄様がん又は未分化がんである。いくつかの実施形態において、子宮がんは、子宮内膜がん、子宮内膜腺がん、子宮内膜様がん、漿液性腺がん、腺扁平上皮がん、子宮がん肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫又は未分化肉腫である。いくつかの実施形態において、膣がんは、扁平上皮がん、腺がん、黒色腫又は肉腫である。いくつかの実施形態において、外陰がんは、扁平上皮がん又は腺がんである。
いくつかの実施形態において、疾患又は障害は、病原体によるものである。いくつかの実施形態において、病原体は、以下からなる群から選択される感染性疾患を引き起こす：急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）、アナプラズマ病、アンスラックス、バベシア症、ボツリヌス中毒、ブルセラ症、カンピロバクター感染症、カルバペネム耐性感染症、軟性下疳、チクングニアウイルス感染症、クラミジア疾患、魚からのボツリヌス、ディフィシル感染症、ウエルシュ菌疾患、コクシジオイデス真菌感染症、コロナウイルス感染症、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、クロイツフェルト・ヤコブ病／伝達性海綿状脳症、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）、サイクロスポーラ症、１、２、３又は４型デング熱、ジフテリア、志賀毒素産生性大腸菌（ＳＴＥＣ）感染症、東部馬脳炎、出血熱（エボラ）、エーリキア症、脳炎、アルボウイルス又は副感染症、非エンテロウイルス、エンテロウイルスＤ６８疾患（ＥＶ－Ｄ６８）、ジアルジア症、鼻疽、淋菌感染症、鼠径部肉芽腫、ヘモフィルスインフルエンザ菌Ｂ型感染症（Ｈｉｂ又はＨ－インフルエンザ）、血球貪食症候群（ＨＰＳ）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）、疱疹、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、ヒストプラスマ症感染、ヒト免疫不全ウイルス／エイズ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザ（Ｆｌｕ）、レジオネラ属菌感染症（レジオネラ症）、癩病（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症（リステリア）、ライム病、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）感染症、マラリア、麻疹、類鼻疽、髄膜炎（ウイルス性）、髄膜炎菌性髄膜炎（髄膜炎（細菌性））、中東呼吸器症候群コロナウイルス疾患（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、耳下腺炎、ノーウォークウイルス疾患、シラミ寄生症、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、百日咳（痙咳）、ペスト（腺ペスト、敗血症型ペスト、肺ペスト）、肺炎球菌感染症（肺炎）、急性灰白随炎（ポリオ）、ポーワッサン脳炎、オウム病、ケジラミ寄生症、発疹性膿疱症（天然痘、サル痘、牛痘）、Ｑ熱、狂犬病、リケッチア感染症（ロッキー山紅斑熱）、風疹（三日ばしか）、サルモネラ胃腸炎（サルモネラ）、疥癬、スコンブロイド食中毒、膿毒症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、赤痢菌性胃腸炎（赤痢菌）、天然痘、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染症、ブドウ球菌性食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌性食中毒）、バンコマイシン中間耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＩＳＡ）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）、Ａ群レンサ球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性））、Ｂ群レンサ球菌感染症（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）、レンサ球菌中毒性ショック症候群ＳＴＳＳ中毒性ショック、梅毒（原発性、二次性、早期潜伏性、後期潜伏性、先天性）、破傷風感染症、トリコモナス症、旋毛虫症感染、結核（ＴＢ）、潜在性結核感染症（ＬＴＢＩ）、野兎病、Ｄ群腸チフス、膣症、水痘（水疱瘡））、コレラ菌感染症（コレラ）、ビブリオ病（ビブリオ）、エボラ出血熱、ラッサウイルス出血熱、マールブルグ出血熱、ウエストナイルウイルス、黄熱病、エルシニア症及びジカウイルス感染症。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、急性弛緩性脊髄炎（ＡＦＭ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、アナプラズマ病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、アンスラックスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、バベシア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ボツリヌス中毒である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ブルセラ症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、カンピロバクター感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、カルバペネム耐性感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、軟性下疳である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、チクングニアウイルス感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、クラミジア疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、魚からのボツリヌスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ディフィシル感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ウエルシュ菌疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、コクシジオイデス真菌感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、コロナウイルス疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、クロイツフェルト・ヤコブ病／伝達性海綿状脳症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、クリプトスポリジウム症（Ｃｒｙｐｔｏ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、サイクロスポーラ症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、１、２、３又は４型デング熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ジフテリアである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、志賀毒素産生性大腸菌（ＳＴＥＣ）感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、東部馬脳炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、出血熱（エボラ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エーリキア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、脳炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、アルボウイルス又は副感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、非エンテロウイルスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エンテロウイルスＤ６８疾患（ＥＶ－Ｄ６８）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ジアルジア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、鼻疽である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、淋菌感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、鼠径部肉芽腫である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヘモフィルスインフルエンザ菌 Ｂ型感染症（Ｈｉｂ又はＨ－インフルエンザ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、血球貪食症候群（ＨＰＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ａ型肝炎（Ｈｅｐ Ａ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｂ型肝炎（Ｈｅｐ Ｂ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｃ型肝炎（Ｈｅｐ Ｃ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｄ型肝炎（Ｈｅｐ Ｄ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｅ型肝炎（Ｈｅｐ Ｅ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、疱疹である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、帯状疱疹（帯状ヘルペス）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヒストプラスマ症感染である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヒト免疫不全ウイルス／エイズ（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、インフルエンザ（Ｆｌｕ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レジオネラ属菌感染症（レジオネラ症）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、癩病（ハンセン病）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レプトスピラ症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、リステリア症（リステリア）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ライム病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、マラリアである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、麻疹である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、類鼻疽である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、髄膜炎（ウイルス性）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、髄膜炎菌性髄膜炎（髄膜炎（細菌性））である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、中東呼吸器症候群コロナウイルス疾患（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、耳下腺炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ノーウォークウイルス疾患である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、シラミ寄生症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、百日咳（痙咳）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ペスト（腺ペストであり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、敗血症型ペストであり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、肺炎性ペスト）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、肺炎球菌感染症（肺炎）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、急性灰白随炎（ポリオ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ポーワッサン脳炎である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、オウム病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ケジラミ寄生症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、発疹性膿疱症（天然痘であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、サル痘であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、牛痘）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｑ熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、狂犬病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、リケッチア感染症（ロッキー山紅斑熱）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、風疹（三日ばしか）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、サルモネラ胃腸炎（サルモネラ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、疥癬である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、スコンブロイド食中毒である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、膿毒症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、赤痢菌性胃腸炎（赤痢菌）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、天然痘である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ブドウ球菌性食中毒エンテロトキシンＢ中毒（ブドウ球菌性食中毒）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、バンコマイシン中間耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＩＳＡ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌感染症（ＶＲＳＡ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ａ群レンサ球菌感染症（侵襲性）（Ｓｔｒｅｐ Ａ（侵襲性））である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レンサ球菌病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｂ群疾患（Ｓｔｒｅｐ－Ｂ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、レンサ球菌中毒性ショック症候群ＳＴＳＳ中毒性ショックである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、梅毒（原発性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、二次性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、早期潜伏性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、後期潜伏性であり、いくつかの実施形態において、感染性疾患は、先天性）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、破傷風感染症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、トリコモナス症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、旋毛虫症感染である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、結核（ＴＢ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、潜在性
結核感染症（ＬＴＢＩ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、野兎病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、Ｄ群腸チフスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、膣症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、水痘（水疱瘡））、コレラ菌感染症（コレラ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ビブリオ病（ビブリオ）である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エボラ出血熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ラッサウイルス出血熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、マールブルグ出血熱である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ウエストナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、黄熱病である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、エルシニア症である。いくつかの実施形態において、感染性疾患は、ジカウイルス感染症である。
いくつかの実施形態において、病原体は細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、バシラス属、バルトネラ属、ボルデテラ属、ボレリア属、ブルセラ属、カンピロバクター属、クラミジア属、類クラミジア属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、エンテロコッカス属、エスケリキア属、フランシセラ属、ヘモフィルス属、ヘリコバクター属、レジオネラ属、レプトスピラ属、リステリア属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ属、ナイセリア属、シュードモナス属、リケッチア属、サルモネラ属、赤痢菌属、ブドウ球菌属、レンサ球菌属、トレポネーマ属、ウレアプラズマ属、ビブリオ属又はエルシニア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、バシラス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、バルトネラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ボルデテラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ボレリア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ブルセラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、カンピロバクター属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、クラミジア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、類クラミジア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、クロストリジウム属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、コリネバクテリウム属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、エンテロコッカス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、エスケリキア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、フランシセラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ヘモフィルス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ヘリコバクター属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、レジオネラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、レプトスピラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、リステリア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、マイコバクテリウム属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、マイコプラズマ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ナイセリア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、シュードモナス属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、リケッチア属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、サルモネラ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、赤痢菌属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ブドウ球菌属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、レンサ球菌属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、トレポネーマ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ウレアプラズマ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、ビブリオ属の細菌である。いくつかの実施形態において、細菌は、エルシニア属の細菌である。
いくつかの実施形態において、病原体は寄生虫である。いくつかの実施形態において、寄生虫は、原生動物、蠕虫又は外部寄生虫である。いくつかの実施形態において、原生動物は、エントアメーバ、ジアルジア、リーシュマニア、バランチジウム、マラリア原虫又はクリプトスポリジウムである。いくつかの実施形態において、蠕虫は、吸虫、条虫、鉤頭虫又は回虫である。いくつかの実施形態において、外部寄生虫は、節足動物である。
いくつかの実施形態において、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アストロウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、コロナウイルス科、フィロウイルス科、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科、ヘペウイルス科、オルトミクソウイルス科、パピローマウイルス科、パラミクソウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポリオーマウイルス科、ポックスウイルス科、レオウイルス科、レトロウイルス科、ラブドウイルス科又はトガウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、科である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アレナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アストロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ブニヤウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、カリシウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、コロナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、フィロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、フラビウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヘパドナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヘペウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、オルトミクソウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パピローマウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パラミクソウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パルボウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ピコルナウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポリオーマウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポックスウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、レオウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、レトロウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ラブドウイルス科のウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、トガウイルス科のウイルスである。
いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、エプスタイン・バーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器多核体ウイルス、風疹ウイルス又は水痘帯状疱疹ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、アデノウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、コロナウイルスである。いくつかの実施形態において、コロナウイルスは、Ｃｏｖｉｄ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、コクサッキーウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタイン・バーウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、Ａ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、Ｂ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、単純ヘルペスウイルス２型である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、サイトメガロウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヒトヘルペスウイルス８型である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、麻疹ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、耳下腺炎ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ヒトパピローマウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、パラインフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポリオウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、狂犬病ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、呼吸器多核体ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、風疹ウイルスである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、水痘帯状疱疹ウイルスである。
他の実施形態において、該疾患又は障害は、免疫性又は自己免疫性障害である。このような障害は、自己免疫性水疱症、無βリポタンパク質血症、後天性免疫不全に関連する疾患、器官移植に関連する急性免疫疾患、後天性肢端チアノーゼ、急性及び慢性寄生又は感染プロセス、急性膵炎、急性腎不全、急性リウマチ熱、急性横断性脊髄炎、腺がん、心房異所性収縮（ａｅｒｉａｌ ｅｃｔｏｐｉｃ ｂｅａｔ）、成人（急性）呼吸窮迫症候群、エイズ認知症複合体、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝臓傷害、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー及びぜんそく、同種移植片拒絶反応、α－ｌ－抗トリプシン欠乏症、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、貧血症、狭心症、強直性脊椎炎関連肺疾患、前角細胞変性、抗体媒介細胞毒性、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏反応、大動脈瘤及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧症、動脈硬化症、動静脈瘻、関節症、無力症、ぜんそく、運動失調、アトピー性アレルギー、心房細動（持続性又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性肝炎又はルポイド肝炎）、自己免疫媒介低血糖症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、閉塞性細気管支炎、脚ブロック、熱傷、悪液質、不整脈、心機能不全症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性症、小脳障害、無秩序型又は多源性心房頻拍、化学療法関連障害、クラミジア、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、慢性アルコール依存症、慢性活動性肝炎、慢性疲労症候群、臓器移植に関連する慢性免疫性疾患、慢性好酸球性肺炎、慢性炎症性疾患、慢性粘膜皮膚カンジダ症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸塩中毒、結腸直腸分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、結膜炎、結合組織病－関連間質性肺疾患、接触皮膚炎Ｃｏｏｍｂｓ陽性溶血性貧血、肺性心、クロイツフェルト－ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ ｄｉｓｅａｓｅ）、原因不明の自己免疫性肝炎、原因不明の繊維化性肺胞炎、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連障害、クローン（Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）病、拳闘家認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚炎強皮症、皮膚病、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）、糖尿病性動脈硬化性疾患、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、びまん性レヴィー小体病、拡張型心筋症、拡張型うっ血性心筋症、円板状紅斑性狼瘡、基底核疾患、播種性血管内凝固、中年におけるダウン症候群、薬物誘発性間質性肺疾患、薬物誘発性肝炎ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される運動障害、薬物過敏、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、腸炎性滑膜炎、喉頭蓋炎、エプスタイン・バーウイルス感染症、先端紅痛症、錐体外路及び小脳障害、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺移植組織拒絶反応、フリードライヒ運動失調症（Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ’ｓ ａｔａｘｉａ）、機能的末梢動脈障害、女性不妊症、繊維症、繊維性肺疾患、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、糸球体腎症（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）、グッドパスチャー症候群、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、痛風性関節炎、任意の臓器又は組織の移植片拒絶反応、移植片対宿主病、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、グレーブス病、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、ヘアリー細胞白血病、ハレルフォルデン－スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、血色素症、造血器悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）、溶血性貧血、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（Ｈｅｎｏｃｈ－Ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎ ｐｕｒｐｕｒａ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、副甲状腺機能低下症、ハンチントン舞踏病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｃｈｏｒｅａ）、運動過多性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、甲状腺機能亢進症、運動低下性運動障害、視床下部－下垂体－副腎軸評価、特発性アジソン病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、特発性白血球減少症、特発性肺繊維症、特発性血小板減少症、特異体質性肝疾患、乳児脊髄性筋萎縮症、感染性疾患、大動脈の炎症、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、間質性肺炎、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再かん流傷害、虚血性脳卒中、若年性悪性貧血、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫（Ｋａｐｏｓｉ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、川崎病、腎臓移植拒絶反応、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、リニアＩｇＡ病、脂肪性浮腫（ｌｉｐｉｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶反応、ライム病（Ｌｙｍｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、リンパ水腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、リンパ球浸潤性肺疾患、マラリア、男性不妊症特発性又はＮＯＳ、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、腎臓の顕微鏡的血管炎、片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合結合組織病、混合結合組織病関連肺疾患、単クローン性免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ型、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ－Ｔｈｏｍａｓ型、Ｓｈｙ－Ｄｒａｇｅｒ型及びＭａｃｈａｄｏ－Ｊｏｓｅｐｈ型）、筋痛性脳炎／ロイヤルリー病（Ｒｏｙａｌ Ｆｒｅｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）、重症筋無力症、腎臓の顕微鏡的血管炎、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、鼻咽腔がん、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、ネフローゼ症候群、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非アルコール性脂肪性肝炎、腹部大動脈及びその分岐動脈の閉塞、閉塞性動脈障害、臓器移植拒絶反応、精巣炎／精巣上体炎（ｅｐｉｄｙｄｉｍｉｔｉｓ）、精巣炎／精管結紮術復元、臓器肥大症、変形性関節症、骨粗しょう症、卵巣不全、膵臓移植拒絶反応、寄生虫病、副甲状腺移植拒絶反応、パーキンソン病、骨盤内炎症性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、水晶体起因性ブドウ膜炎、ニューモシスティス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器肥大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症及び皮膚変化症候群）、かん流後症候群、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ－ｐｕｍｐ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ＭＩ心臓切開術後症候群、感染後間質性肺疾患、早期卵巣不全、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性肝炎、原発性粘液水腫、原発性肺高血圧症、原発性硬化性胆管炎、原発性血管炎、進行性核上麻痺、乾癬、１型乾癬、２型乾癬、乾癬性関節症、結合組織病に続発する肺高血圧症、結節性多発性動脈炎の肺症状、炎症後間質性肺疾患、放射線繊維症、放射線療法、レイノー現象及び疾患（Ｒａｙｎａｕｄ’ｓ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ）、レイノー病、レフサム病（Ｒｅｆｓｕｍ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、規則的な狭いＱＲＳ頻拍、ライター病（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、腎疾患ＮＯＳ、腎血管性高血圧症、再かん流傷害、拘束型心筋症、関節リウマチ関連間質性肺疾患、リウマチ様脊椎炎、サルコイドーシス、シュミット症候群（Ｓｃｈｍｉｄｔ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、強皮症、老年性舞踏病、レヴィー小体型認知症、敗血症候群、敗血症性ショック、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ、高安病（Ｔａｋａｙａｓｕ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）／動脈炎、毛細血管拡張症、Ｔｈ２型及びＴｈｌ型媒介疾患、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、甲状腺炎、毒性、毒素性ショック症候群、移植、外傷／出血、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン耐性、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏、潰瘍性大腸炎性関節症、潰瘍性大腸炎、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、ブドウ膜炎、弁膜心疾患、静脈瘤、血管炎、血管炎性びまん性肺疾患、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、白斑急性肝疾患、ウイルス及び真菌感染症、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェゲナー肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、ウェルニッケコルサコフ症候群（Ｗｅｒｎｉｃｋｅ－Ｋｏｒｓａｋｏｆｆ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウィルソン病（Ｗｉｌｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、任意の臓器又は組織の異種移植片拒絶反応、エルシニア属及びサルモネラ属関連関節症、後天性免疫不全疾患症候群（ＡＩＤＳ）、自己免疫性リンパ球増殖性症候群、溶血性貧血、炎症性疾患、血小板減少症、臓器移植に関連する急性及び慢性の免疫性疾患、アジソン病、アレルギー性疾患、脱毛症、円形脱毛症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、関節炎（変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム病関節炎、乾癬性関節及び反応性関節炎を含む）、シェーグレン病関連肺疾患（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ）、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、皮膚同種異体移植拒絶反応、皮膚異常症候群（ｓｋｉｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、小腸移植拒絶反応、自己免疫性精子形成障害、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳萎縮症、脊柱関節症、Ｉ型散発性多内分泌腺機能低下、ＩＩ型散発性多内分泌腺機能低下、スチル病（Ｓｔｉｌｌ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、連鎖球菌性筋炎、脳卒中、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、交感性眼炎、失神、心臓血管系の梅毒、アナフィラキシー、全身性炎症応答症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、ループス腎炎、全身性強皮症、全身性強皮症関連間質性肺疾患。
いくつかの実施形態において、疾患又は障害は炎症性疾患である。炎症は、宿主防御及び免疫媒介性疾患の進行に重要な役割を果たしている。炎症反応は、損傷（例えば、創傷、虚血及び外因性粒子）及び感染（例えば、細菌又はウイルス感染）に対する反応であり、化学的媒体（例えば、サイトカイン及びプロスタグランジン）と炎症細胞（例えば、白血球細胞）とを含む複雑なカスケード事象によって開始される。炎症反応の特徴は、血流量の増加、毛細血管透過性の増加及び貪食細胞の大量流入である。これらの事象は、創傷又は感染した部位の腫れ、発赤、発熱（熱型の変化）及び膿形成をもたらす。
サイトカイン及びプロスタグランジンは、炎症反応を制御し、規則的且つ自己限定的なカスケードで、血液又は影響を受けた組織に放出される。サイトカイン及びプロスタグランジンのこのような放出は、創傷又は感染した領域への血流量を増加し、発赤及び発熱を引き起こし得る。ここで、いくつかの化学物質は、液体が組織に漏れることを引き起こし、腫れを引き起こす。この保護プロセスは、神経を刺激し、痛みを引き起こし得る。これらの変化は、関連する領域内で発生する時間が限られている場合に、身体に有益である。
炎症反応において、体液と細胞免疫エレメントとの間の微妙なバランスのとれた相互作用は、有害な薬剤を除去し、損傷組織の修復を開始することができる。このような微妙なバランスのとれた相互作用が破壊される場合、炎症反応は、正常な組織にかなりのダメージを与える可能性があり、且つ最初に反応を引き起こしたダメージよりも有害になり得る。これらの炎症反応が暴走した場合には、組織の損傷及び臓器の機能障害を防止するために臨床的介入が必要となる。乾癬、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節症、クローン病、ぜんそく、アレルギー又は炎症性腸疾患などの疾患は慢性炎症と特徴とする。関節症、関連する関節症病態（例えば、変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節症）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎）、膿毒症、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎及び慢性閉塞性肺疾患、慢性炎症性肺疾患のような炎症性疾患も一般的であり、問題のある疾患である。
いくつかの実施形態において、これらの方法は、養子細胞療法を含み、これにより遺伝子操作された細胞を対象に投与する。疾患又は障害の細胞が破壊の標的にされるように、このような投与は細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞活性化）を促進することができる。
いくつかの実施形態において、これらの方法は、これらの細胞又はこれらの細胞を含む組成物を、対象、組織、又は細胞、例えば、疾患又は障害を有している、疾患又は障害のリスクにあるか又は疾患又は障害を有している疑いがある、対象、組織、又は細胞に投与することを含む。いくつかの実施形態において、例えば、養子Ｔ細胞療法のような養子細胞療法によって、治療対象の特定の疾患又は障害を有している対象に細胞、集団、及び組成物を投与する。いくつかの実施形態において、細胞又は組成物を対象、例えば、疾患又は障害を有しているか又は疾患又は障害のリスクにある対象に投与する。いくつかの実施形態において、該方法は、これにより治療し、例えば、疾患又は障害の一つ又は複数の症状を改善する。
養子細胞療法に用いられる細胞投与方法は、周知のものであり、例えば、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号、米国特許第４，６９０，９１５号、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．８（１０）：５７７－８５（２０１１）、Ｔｈｅｍｅｌｉら，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（１０）：９２８－９３３（２０１３）、Ｔｓｕｋａｈａｒａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ４３８（１）：８４－９（２０１３）、及びＤａｖｉｌａら，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（４）：ｅ６１３３８（２０１３）に記載されている。これらの方法は、本明細書による方法及び組成物と併用することができる。
いくつかの実施形態において、細胞療法（例えば、養子Ｔ細胞療法）は、自己伝達によって実施され、ここで、細胞は、細胞療法を受ける対象又はこのような対象に由来する試料から単離され且つ／又はそうでなければ調製される。そのため、いくつかの態様では、細胞は、治療を必要とする対象に由来し、且つ単離され処理された後、同一の対象に投与される。他の実施形態において、細胞療法（例えば、養子Ｔ細胞療法）は、同種異体伝達によって実施され、ここで、細胞は、細胞療法を受けるか又は最終的に受けた対象以外の対象（例えば、第１の対象）から単離され且つ／又はそうでなければ調製される。このような実施形態では、そして細胞を同じ種の異なる対象、例えば、第２の対象に投与する。いくつかの実施形態において、第１の対象と第２の対象は遺伝的に同一である。いくつかの実施形態において、第１の対象と第２の対象は、遺伝的に似ている。いくつかの実施形態において、第２の対象は、第１の対象と同じＨＬＡタイプ又はスーパータイプを発現する。
いくつかの実施形態において、細胞、細胞集団、又は組成物が投与される対象は、ヒトのような霊長類動物である。対象は、男性又は女性であり得、且つ乳児、若年、青年、成人及び老年対象を含め、任意の適切な年齢であり得る。いくつかの例において、対象は、疾患、養子細胞療法のための、及び／又は毒性アウトカムを評価するための検証された動物モデルである。
本明細書による組成物は、任意の適切な手段、例えば、注射、例えば、静脈内又は皮下注射、眼内注射、眼窩周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、球周囲注射又は後部強膜近傍送達によって投与され得る。いくつかの実施形態において、それらは、非経口、肺内及び鼻腔内投与され、且つ局所治療が必要とされる場合、病巣内投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。
疾患又は病態を有効に予防及び／又は治療する、本明細書による予防剤又は治療剤の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。有効投与量は、インビトロ又は動物モデル試験システムから得られた投与量－反応曲線から推定され得る。疾患の予防又は治療について、結合分子又は細胞の適切な投与量は、治療する疾患又は障害のタイプ、結合分子のタイプ、疾患又は障害の重症度及び経過、治療剤が予防又は治療目的で投与されるか否か、過去の療法、患者の臨床病歴及び薬剤に対する反応、並びに主治医の判断に依存してもよい。いくつかの実施形態において、組成物、分子及び細胞は、一回又は一連の治療において患者に適切に投与される。複数の投与量を間欠的に投与することができる。初期のより高い負荷投与量を投与し、その後に一つ又は複数のより低い投与量を投与してもよい。
遺伝子操作された細胞の場合に、いくつかの実施形態において、対象に約一百万から約１千億個の細胞及び／又は体重１キログラム当たり該量の細胞を投与してもよい。いくつかの実施形態において、ここで、該医薬組成物は、本明細書に記載の操作された免疫細胞のうちのいずれか一つを含み、該医薬組成物は、個体の体重１ｋｇ当たり少なくとも約１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、又は１０９個の細胞のうちのいずれか一つの投与量で投与される。投与量は、疾患又は障害及び／又は患者及び／又は他の治療の特定の属性に応じて変化することができる。
いくつかの実施形態において、医薬組成物を一回投与する。いくつかの実施形態において、医薬組成物を複数回（例えば、２、３、４、５、６回又はそれ以上のうちのいずれか一つ）投与する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、投与サイクル中に一回又は複数回投与される。投与サイクルは、例えば１、２、３、４、５週又はそれ以上、又は１、２、３、４、５ヶ月又はそれ以上であってもよい。特定の患者に対する最適な投与量及び治療レジメンは、患者の疾患徴候をモニタリングし、それに応じて治療を調整することによって、医学分野の当業者により決定され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書による組成物は、別の治療介入（例えば、別の抗体又は操作された細胞又は受容体又は作用物質、例えば、細胞傷害性作用物質又は治療剤）と同時に又は任意の順序で逐次的に投与されるように、組み合わせ治療の一部として投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書による組成物は、一つ又は複数の別の治療剤と共に投与されるか、又は別の治療介入と併用投与され、同時にもしくは任意の順序で逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、細胞と別の療法は、十分に近い時点で共に投与され、それにより細胞集団が一つ又は複数の別の治療剤の効果を増強するか、又は逆も同様である。いくつかの実施形態において、本明細書による組成物は、一つ又は複数の別の治療剤の前に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書による組成物は、一つ又は複数の別の治療剤の後に投与される。
いくつかの実施形態において、細胞を哺乳動物（例えば、ヒト）に投与した後、複数の既知の方法のうちのいずれか一つによって、操作された細胞集団の生物学的活性を測定する。評価のパラメータは、インビボ（例えば、イメージングによる）又はエクスビボ（例えば、ＥＬＩＳＡ又はフローサイトメトリーによる）操作又は天然Ｔ細胞もしくは他の免疫細胞と抗原との特異的結合を含む。いくつかの実施形態において、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力は、例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３２（７）：６８９－７０２（２００９）及びＨｅｒｍａｎらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８５（１）：２５－４０（２００４）に記述されている細胞傷害性アッセイのような、当分野の既知の任意の適切な方法を用いて測定され得る。いくつかの実施形態において、細胞の生物学的活性はさらに、ＣＤ１０７ａ、ＩＦＮγ、ＩＬ－２及びＴＮＦのようないくつかのサイトカインの発現及び／又は分泌のアッセイによって測定され得る。いくつかの態様では、生物学的活性は、腫瘍負荷又は負荷の減少のような臨床アウトカムを評価することによって測定される。
７．９． キット及び製品
本明細書に記載の操作された免疫エフェクター細胞のうちのいずれか一つを含むキット、単位投与量及び製品をさらに提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物のうちのいずれか一つを含有し、且つ好ましくは、その取扱説明書を提供する、キットを提供する。
本出願のキットは、適切な包装内にある。適切な包装は、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密封されたポリエステルフィルム（Ｍｙｌａｒ）又はプラスチックバッグ）などを含むが、それらに限らない。キットは、緩衝液及び説明的情報のような他の構成部分を任意に提供することができる。そのため、本出願は製品をさらに提供し、それは、バイアル（例えば、密封されたバイアル）、ボトル、ジャー、フレキシブル包装などを含む。
製品は、容器、及び該容器にあるか又は該容器に関連するラベルもしくは包装インサートを含んでもよい。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどを含む。容器は、様々な材料（例えば、ガラス又はプラスチック）により形成され得る。通常、容器は、本明細書に記載の疾患又は障害（例えば、がん）を有効に治療する組成物を収容し、且つ無菌の入り口を有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって穿刺可能なストッパを有するバイアルであってもよい）。ラベル又は包装インサートは、組成物が個体の特定の病態の治療に使用されることを指示する。ラベル又は包装インサートは、組成物を個体に投与するための説明書をさらに含む。ラベルは、再構成及び／又は使用に関する指図を指示し得る。医薬組成物を収容する容器は、複数回使用のバイアルであってもよく、それは、再構築製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする。包装インサートは、通常治療製品の商業用パッケージに含まれる説明書を指し、これらの説明書には、このような治療製品の使用の適応症、使用法、投与量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報が含まれる。付加的に、製品は、第２の容器をさらに含んでもよく、該容器は、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
キット又は製品は、複数の単位投与量の医薬組成物及び取扱説明書を含んでもよく、それは、薬局（例えば、院内薬局及び調剤薬局）での貯蔵及び使用に十分な量で包装される。
簡潔にするために、本明細書ではいくつかの略語が使用される。一つの例は、アミノ酸残基を示す一文字略語である。アミノ酸及びそれに対応する三文字及び一文字略語は以下のとおりである。
Figure 2024507958000002
本開示は、概して、多くの実施形態を説明する際に肯定的文言を用いて本明細書に開示される。本開示は、具体的には、物質又は材料、方法ステップ及び条件、レジメン、手順、アッセイ又は分析など、特定の主題が完全に又は部分的に除外される実施形態をさらに含む。そのため、本開示が、概して、本開示に含まれていない内容に基づいて本明細書で表されていない場合であっても、本開示に明示的に含まれていない態様は、依然として本明細書で開示される。
本開示の複数の実施形態について説明した。しかしながら、理解すべきことは、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく様々な修正を行うことができることである。そのため、以下の例は、請求項に記載される開示範囲を限定するのではなく、例示することが意図される。
８． 実施例
本明細書に記載の実施例は、以下の実験がいずれも実施されるか又はこれらの実験しか実施されないことを示すように意図するものでもない。使用される数字（例えば、量、温度など）の正確性については正確性を確保するように努力してきたが、実験誤差及び偏差も考慮すべきである。別段の指示がない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、且つ圧力は大気圧であるか又は大気圧に近い。
８．１． 実施例１－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する例示的ＣＡＲ－Ｔ細胞を構築し試験した。例えば、本実施例及び以下の実施例では、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞を構築して本発明を例示して説明する。
８．１．１． キメラ抗原受容体の構築
ヒト化抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ ＣＡＲ（即ち、Ｈ９３ ＣＡＲ）を構築するために、Ｎ末端からＣ末端の方向にＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、ＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）及びＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）を含む、ＣＡＲ主鎖ポリペプチドをコードするＣＡＲ主鎖配列を化学的に合成し、それを下流の予め改変されたレンチウイルスベクター（ｐＬＳＩＮＫ－ＢＢｚＢＢ）にクローニングし、構成型ｈＥＦ１αプロモーターに作動可能に連結してインビトロ転写に用いた。ベクターにおけるマルチクローニングサイト（ＭＣＳ）は、抗ＧＰＣ３ヒト化ｓｃＦｖ断片（即ち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ）のＮ末端と融合されるＣＤ８αシグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）をコードする核酸配列に作動可能に連結されるＫｏｚａｋ配列を含む核酸配列を、ＣＡＲ主鎖配列の上流においてＣＡＲ主鎖配列に作動可能に連結されるように、ＣＡＲ主鎖ベクターに挿入することを可能にする。ＣＤ８αシグナルペプチド及び抗ＧＰＣ３ヒト化ｓｃＦｖ断片をコードする核酸配列を化学的に合成し、当分野の既知の分子クローニング技術によって、ＥｃｏＲＩ（５’－ＧＡＡＴＴＣ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）及びＳｐｅＩ（５’－ＡＣＴＡＧＴ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）制限部位を介して、それをｐＬＳＩＮＫ－ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングした。得られたＨ９３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含む。ＣＡＲコード領域は、図１の上部に表示されている。
Ｈ９３ ＣＡＲ主鎖に基づき、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲベクターにおけるＭＣＳは、ヒトＩＬ１２ｐ４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）及びヒトＣＣＬ－１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）をコードする核酸配列を含む核酸配列の挿入を可能にし、該核酸配列は、別の２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すＰ２Ａ断片）のＣ末端と融合される２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示すＴ２Ａペプチド）に連結することによって、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端上流において、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端に作動可能に連結される。Ｐ２Ａペプチド及びＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－ＣＣＬ－１９ペプチドをコードする核酸配列を化学的に合成し、ＨｐａＩ（５’－ＧＴＴＡＡＣ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）及びＭｌｕＩ（５’－ＡＣＧＣＧＴ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）制限部位を介して、それをｐＬＳＩＮＫ－ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングした。得られたＨ９３Ｍ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２の核酸配列とを含む。Ｈ９３ＭのＣＡＲコード領域は、図１の中部に表示されている。いかなる理論にも拘束されることなく、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞において過剰発現するＩＬ１２ｐ４０は、内因性ＩＬ－２３α ｐ１９サブユニットとＩＬ－２３を形成することができ、報告によると、該内因性ＩＬ－２３α ｐ１９サブユニットは、ＴＣＲ刺激後にＴ細胞により上方制御された。例えばＭａら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２３ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０２０ Ａｐｒ；３８（４）：４４８－４５９を参照されたい。
ｐＭＤＬｇ．ｐＲＲＥ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃１２２５１）、ｐＲＳＶ－ＲＥＶ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃１２２５３）及びｐＭＤ２．Ｇ（Ａｄｄｇｅｎｅ＃１２２５９）を含有するレンチウイルスパッケージングプラスミド混合物と、ＣＡＲコンストラクトを発現するベクターとを、予め最適化された比率でポリエーテルイミド（ＰＥＩ）と予め混合し、そして２５℃で５分間インキュベートした。ＨＥＫ２９３細胞をトランスフェクト混合物内に加えた。そして、細胞を、５％ ＣＯ２を含む細胞インキュベーターボックス中で、３７℃で一晩インキュベートした。４℃及び３０００ｇ下で、１５分間遠心分離してから上清を回収し、０．４５μｍ ＰＥＳフィルタによって濾過し、そして超速度で遠心分離してレンチウイルス濃縮を行った。上清を慎重に捨て、予冷されたＤＰＢＳでウイルス粒子を慎重に洗い流した。ウイルスを適宜液状にし、－８０℃で貯蔵した。ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞株を形質導入する滴定法によってウイルス力価を測定した。
８．１．２． ＣＡＲ－Ｔ細胞調製
ＰＢＭＣはＴＰＣＳ（＃Ａ１９Ｚ２８４０９７）から購入された。Ｐａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０－０９６－５３５）を用いて、以下に記載のメーカーのレジメンに従ってＰＢＭＣからヒトＴ細胞を精製した。細胞数を測定し、細胞懸濁液を３００ｇで１０分間遠心分離した。そして上清を完全に吸い出し、１０7個の総細胞ごとに、４０μＬの緩衝液に細胞粒子を再懸濁させた。Ｐａｎ Ｔ細胞ビオチン－抗体混合物を１０7個の総細胞当たり１０μＬ加え、十分に混合し、冷蔵庫（２℃～８℃）中で約５分間インキュベートした。そして１０7個の細胞当たり３０μＬの緩衝液を加えた。１０7個の細胞当たり２０μＬのＰａｎ Ｔ細胞マイクロビーズ混合物を加えた。細胞懸濁液混合物を十分に混合、冷蔵庫（２℃～８℃）中で１０分間再インキュベートした。磁気分離には少なくとも５００μＬが必要である。磁気分離の場合、ＬＳカラムを適切なＭＡＣＳ分離器の磁場に置いた。３ｍＬの緩衝液で洗い流すことによってカラムを調製した。そして細胞懸濁液をカラムに適用し、標識されていない細胞を含む流出物を回収し、これは濃縮したＴ細胞部分を表す。３ｍＬの緩衝液でカラムを洗浄し、通過した標識されていない細胞を回収することによって別のＴ細胞を回収した。これらの標識されていない細胞は、濃縮したＴ細胞を再び表し、前のステップ流出物と組み合わせた。そして回収された濃縮Ｔ細胞を遠心分離し、ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２中に再懸濁させた。
調製されたＴ細胞を、その後にヒトＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ＃１７０－０７６－１５６）を用いて、メーカーのレジメンに従って４８時間予め活性化し、ここで、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子は、４０μＬ／百万個のビーズ対細胞比で加えられた。
ＣＡＲ－Ｔ細胞調製では、予め活性化されたＴ細胞を２４ウェルプレートに０．５×１０６個の細胞／ウェルの密度で播いた。そして、精製されたウイルスをウェルに加えた。一晩経った後、回収し、遠心分離し、新鮮なＲＰＭＩ－１６４０＋３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２で再懸濁させた後、形質導入された細胞を２４ウェルＧ－Ｒｅｘ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ ＃８０１９２Ｍ）中に置いた。形質導入されていないＴ細胞（ＵｎＴ）を陰性対照として使用した。７日目に、ネイキッドのＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率は、それぞれ３９．３％及び３２．５％であった（図２）。
８．１．３． ＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９発現
Ｈ９３Ｍ ＣＡＲの構造を検証するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞を正常な条件（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２）で培養し、ＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９の分泌状況を分析した。簡単に言うと、６ウェルプレートにおいて、細胞を１×１０６個の細胞／ｍＬで培養し、それぞれ１２、１４及び１７日目に上清を回収した。メーカーのレジメンに従って、ヒトＩＬ－２３キット（ＣＩＳＢＩＯ＃６２ＨＩＬ２３ＰＥＧ）及びＣＣＬ－１９ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１００６０１）を用いてＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９の量を測定した。図３に示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴに比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のみは、ＩＬ－２３（２８６．９ｐｇ／１０６個の細胞～５７０．３ｐｇ／１０６個の細胞）及びＣＣＬ－１９（６５．４ｐｇ／１０６個の細胞～２３７．２ｐｇ／１０６個の細胞）を分泌した（ＩＬ－２３発現もＣＣＬ－１９発現も検出されなかった）。
８．２． 実施例２－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ反復チャレンジアッセイ
ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ持続性及び枯渇を評価するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞反復チャレンジモデルを確立した。ＧＰＣ３陽性腫瘍細胞でＣＡＲ－Ｔ細胞を数ラウンドにわたって何度も刺激することによってＣＡＲ－Ｔ細胞の枯渇表現型を得た。再チャレンジアッセイには、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）及びＵｎＴ（初期Ｔ細胞はＣＡＲで形質導入されていなかった）の三つの処理群があった。再チャレンジの初回ラウンド（ラウンド１）については、６ウェルプレートにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞を１：１のＥ／Ｔ比で共培養した。一晩経った後、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を穏やかに回収し、遠心分離し、新鮮なＣＡＲ－Ｔ培地（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２）に再懸濁させた。そしてＣＡＲ－Ｔ細胞を新しいプレートに加えてさらに２日間培養した。そして、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を回収し、新鮮な培地に再び再懸濁させ、新鮮な腫瘍細胞を播種した新しいプレートに加えた（ラウンド２）。前のラウンドの終了時のＣＡＲ－Ｔ細胞の陽性率によって、加えられた新鮮な腫瘍細胞の数を計算した。残りのＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞数及び生存率に依存して、該プロセスを数ラウンド繰り返すことができる。各ラウンドの腫瘍細胞再チャレンジから２４時間後に、ＣＡＲ＋ Ｔ細胞におけるＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の枯渇マーカーＰＤ－１及びＬＡＧ３を分析した。各ラウンドの終了時にＴ細胞をカウントし、刺激から７２時間後に、ＧＰＣ３陽性ＨＣＣ細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５に対して細胞傷害性アッセイを行った。
８．２．１． Ｔ細胞の増大
Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増大機能の利点を決定するために、各ラウンドの再チャレンジの終了時に全Ｔ細胞の細胞数及び生存率を記録した。
図４Ａに示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（ラウンド６の時点で１０．５倍）及びＵｎＴ群（ラウンド６の時点で０．２倍）に比べて、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞で繰り返して刺激すると、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群細胞（ラウンド６の時点で１３８．４倍）は有意に増大した。それと共に、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群の細胞生存率は依然として高く、比較として、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群及びＵｎＴ群は、毎回の刺激後に徐々に減少した（図４Ｂ）。
８．２．２． 細胞傷害性アッセイ及びサイトカイン放出
さらに、ＣＡＲ－Ｔ再チャレンジアッセイにおいて、２ラウンドが終わるごとにＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性を評価し、全Ｔ細胞：標的細胞の比は１：１であった。標的細胞は、ＧＰＣ３陽性ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞であり、当分野の既知の技術によって操作されてホタルルシフェラーゼを発現する。２ラウンドが終わるごとに細胞を回収し、標的細胞（２×１０３個の細胞／ウェル）を混合し、３８４ウェルプレートにおいて２４時間培養した。ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞への細胞傷害性をアッセイするために、メーカーのレジメンに従ってＯｎｅ－ｇｌｏ発光ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ６１１０）を調製し、ウェル内の残留ルシフェラーゼの活性を検出するために、共培養された細胞に加えた。ルシフェラーゼが腫瘍細胞のみで発現するため、ウェル内の残留ルシフェラーゼの活性は、ウェル内の生存標的細胞の数と直接相関する。エフェクター細胞の非存在下で標的細胞に培地を加えることによって、ルシフェラーゼ活性の最大値を得た。細胞傷害性アッセイを開始する時に最終濃度が１％であるＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を加えることによってルシフェラーゼ活性の最小値を測定した。以下の式によって特異的細胞傷害性を計算した：特異的細胞傷害性％＝１００％×（１－（ＲＬＵ試料－ＲＬＵｍｉｎ）／（ＲＬＵｍａｘ－ＲＬＵｍｉｎ））。
図５Ａに示すように、ラウンド１の後に同じ細胞傷害性（２１．１％対２２．４％）を示したことに加えて、ラウンド３の後に、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群よりも高い細胞傷害性を示した。具体的には、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、ラウンド３の後に７４．４％の平均細胞傷害性を示し、ラウンド５（８０．７％）及びラウンド７（８３．４％）の後にやや増加した。Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群において、低い細胞傷害性を観察し、平均細胞傷害性は、それぞれ５２．７％（ラウンド３）、５７．９％（ラウンド５）及び４７．０％（ラウンド７）であった。Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、ＧＰＣ３陽性ＨＣＣ細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５．Ｌｕｃ細胞に対して、持続的な高レベルの細胞傷害性を有することが示唆された。
再チャレンジアッセイでのＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞との比較におけるＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＧＰＣ３陽性腫瘍細胞に対する持続的な細胞傷害活性をさらに検証するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１：１のＥ／Ｔ比（全Ｔ細胞：標的細胞）でＰＬＣ／ＰＲＦ／５．Ｌｕｃ細胞と２４時間共培養した後、ＥＬＩＳＡによってＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの産生を分析した。結果として、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群のＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ産生能力は、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群に比べて有意高く、且つ全てのラウンドにおいて、いずれも細胞傷害性効力との関連性を示した。図５Ｂ及び５Ｃに示すように、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群細胞が分泌したＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ濃度は、ラウンド３～ラウンド５の後に有意に高くなり、それぞれ４５１．２～１１５１．１ｐｇ／ｍＬ（ＴＮＦ－α）及び１８３５３．７～３７０７２．７ｐｇ／ｍＬ（ＩＦＮ－γ）の範囲内にあるが、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群細胞が分泌したＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γ濃度は、ラウンド３～ラウンド７の後に徐々に低下し、それぞれ１９７．１～１２９．２ｐｇ／ｍＬ（ＴＮＦ－α）及び４９９３．１～１６７２．１ｐｇ／ｍＬ（ＩＦＮ－γ）の範囲内にあった。
８．２．３． 陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞の比率の変化
Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の陽性率は、２ラウンドが終わるごとに計算され、刺激ラウンドに伴って３０％～８６％の範囲内でほぼ同じように増加した。最後に、ラウンド５の後にＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の陽性率は増加しなかった（図６）。ラウンド５の再チャレンジの後に、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、高い細胞傷害性を示し、フラットなＣＡＲ＋％（図６）に比べて細胞傷害性が増加した（図５Ａ）。
８．２．４． Ｔ細胞の枯渇
再チャレンジアッセイにおいて、各ラウンドが終了してから２４時間後にＴ細胞枯渇を評価した。二つの枯渇マーカーとしてのＰＤ－１及びＬＡＧ－３を、それぞれ抗ヒトＰＤ－１抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３２９９０８）及び抗ＬＡＧ－３抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１７－２２３９－４２）を用いて標識し、ＣＤ４＋ＣＡＲ＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ＣＡＲ＋ Ｔ細胞ダブルポジティブサブセットの発現レベルを分析した。図７に示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群に比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、全てのウンドにおいて、いずれも枯渇マーカーＰＤ－１及びＬＡＧ３の発現の低下を示した。特にラウンド３～ラウンド５において、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群におけるＣＤ４＋ＣＡＲ＋ダブルポジティブサブセットのＰＤ－１発現は１３％～１８％である一方、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群は３０％を上回った（図７Ａ）。全てのラウンド（Ｒ２－Ｒ７）では、ＣＤ４＋ＣＡＲ＋ダブルポジティブサブセットにおいて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（３０％～４９％）よりも有意に低いＬＡＧ－３発現（１２％～２５％）を有した（図７Ｃ）。ＣＤ８＋ＣＡＲ＋ダブルポジティブサブセットにおいて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群におけるＰＤ－１の発現レベルは、依然としてＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群より低く（ラウンド３～ラウンド７で１．３％～４．１％対５．６％～９．４％）（図７Ｂ）、且つラウンド３～ラウンド５において、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群のＬＡＧ３発現レベルは、５６．６％～８２．９％であり、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（８２．７％～８８．１％）より低く（図７Ｄ）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞が抗枯渇能力を有することを示唆した。
８．３． 実施例３－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞についての細胞遊走アッセイ
ＣＣＬ－１９の走化機能を評価するために、細胞遊走アッセイを行った。９６ウェルｔｒａｎｓｗｅｌｌチャンバ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）における５－μｍ孔径のポリカーボネートフィルタを通した遊走によってレスポンダーＴ細胞の走化性を測定した。ＧＰＣ３陽性ヒトＨＣＣ細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞でＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴ細胞を刺激し、３０時間後に共培養上清を回収した。そして、１２５μＬの上清を下側チャンバに入れ、７５μＬの処理されていないＴ細胞（０．０７５Ｍ）を上側チャンバでインキュベートした。４、６及び８時間後、上側チャンバから下側チャンバに遊走したＴ細胞を血球計数チャンバによってカウントした。細胞遊走アッセイには、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）及びＵｎＴ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＵｎＴ細胞からのものであった）の三つの処理群があった。
図８Ａに示すように、異なる時点で、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＣＬ－１９の分泌を有する）の上清には、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＵｎＴ細胞の上清よりも多くのＴ細胞が引き込まれた（Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群対Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群：Ｐ＜０．０００１）。具体的には、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、６時間で上側チャンバの全てのＴ細胞を完全に引き込むこができる（０．１０４ Ｍ）一方、ＣＣＬ－１９の産生のないＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群及びＵｎＴ群は、８時間を経っても少数のＴ細胞を遊走させ、それぞれ０．０３２ Ｍ及び０．０２６ Ｍであった。なお、ＣＣＬ－１９ ＥＬＩＳＡ（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１００６０１）によって共培養上清におけるＣＣＬ－１９の濃度を測定した。該結果は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞からの上清がＣＣＬ－１９を分泌したことを示唆し（４５９０．１５±３８０．８５ｐｇ／ｍＬ）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の走化機能がさらに検証された（図８Ｂ）。
８．４． 実施例４－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の、インビボでの養子移入後の抗腫瘍効果
実施例１に開示される方法に従って、ヒトＩＬ１２ｐ４０及びヒトＩＬ－７を発現するＨ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞をさらに調製した。Ｈ９３ ＣＡＲ主鎖に基づき、Ｈ９３Ｃ ＣＡＲベクターにおけるＭＣＳは、ヒトＩＬ１２ｐ４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）及びヒトＩＬ－７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）をコードする核酸配列を含む核酸配列の挿入を可能にし、該核酸配列は、別の２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すＰ２Ａ断片）のＣ末端と融合される２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すＰ２Ａペプチド）に連結することによって、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端上流において、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端に作動可能に連結された。Ｐ２Ａペプチド及びＩＬ１２ｐ４０－Ｐ２Ａ－ＩＬ－７ペプチドをコードする核酸配列を化学的に合成し、ＨｐａＩ（５’－ＧＴＴＡＡＣ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）及びＭｌｕＩ（５’－ＡＣＧＣＧＴ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）制限部位を介して、それをｐＬＳＩＮＫ－ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングした。ＩＬ１２ｐ４０－Ｐ２Ａ－ＩＬ－７ペプチドのアミノ酸配列及び核酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に表示された。
ＮＣＧマウス異種移植モデルにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍効果を評価した。皮下異種移植モデルについて、６～７週齢のＮＣＧマウスの右前肢にＨｕｈ７細胞を皮下接種した（１．５×１０６個の細胞／マウス）。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３近くになった時（異種移植接種後１１日目）に、マウスをいくつかの群にランダムに分け、それぞれＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．２ Ｍ又は０．６ Ｍの投与量）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．２ Ｍ又は０．６ Ｍの投与量）、Ｈ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．２ Ｍの投与量）、ＵｎＴ（２．３ Ｍの投与量、ＣＡＲ－Ｔ群と同じ全Ｔ細胞の細胞数）、及び溶媒（ビヒクル）のみ、で尾静脈注射によって処置した。腫瘍サイズをデジタルノギスで週２回測定した。以下の式に基づいて腫瘍体積を計算した：腫瘍体積＝（（長さ）×（幅）２）／２。養子移入後０、７、１４、２１及び２８日目に、それぞれデジタルＰＣＲによってマウス血液におけるＣＡＲ－Ｔ細胞のコピー数も検出した。
ビヒクル、ＵｎＴ及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置したマウスを２０日目に動物倫理的理由で屠殺し、且つこの三つの群の腫瘍体積は２０００ｍｍ３超に達した。Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置したマウスを、２７日目（投与量：０．２ Ｍ）及び４９日目（投与量：０．６ Ｍ）まで記録し続けた。図９Ａに示すように、ＵｎＴ及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞群に比べて、養子移入のＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与したマウスの腫瘍サイズがそれぞれ７６．８％及び７４．６％減少した（５８４．３ｍｍ３対２５１４．７ｍｍ３、２２９７．３ｍｍ３）ことを２０日目に観察し、且つ２０日目以降も、腫瘍サイズは依然として徐々に減少し、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、低い投与量（０．２ Ｍ／マウス）でＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な治療可能性を有することが示唆された。それとともに、Ｈ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞群は、わずかな抗腫瘍効果しか有しておらず、且つ２０日目に３２．７％の増殖抑制率（１５４６．８ｍｍ３対２２９７．３ｍｍ３）を有し、外因的に導入されＩＬ１２ｐ４０及びＩＬ－７を発現するＨ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞に比べて、外因的に導入されＩＬ１２ｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、インビボでの養子移入後により良好な治療可能性を有することが示唆された。投与量が０．６ Ｍ／マウスに増加した場合、図９Ｂに示すように、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、腫瘍増殖に対して明らかな抑制効果を有し、２０日目にＵｎＴに比べて増殖抑制率は９６．０％（１０１．６ｍｍ３対２５１４．７ｍｍ３）であるが、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群において類似している腫瘍退縮（１０１．６ｍｍ３対１３７．３ｍｍ３）が観察された。３４日目に、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスは、ほぼ無腫瘍であった。
デジタルＰＣＲによってマウス末梢血細胞におけるＣＡＲ遺伝子コピー数を検出し、且つＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、０．２ Ｍの投与量で２１日目に有意な増大を示し、続いて減少した一方、処置プロセス全体において、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴで処置されたマウスには有意な増大がなかった（図９Ｃ）。０．２ Ｍの投与量で、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の２１日目のコピー数は、０日目の３３５．６倍（１３３．４１７５個のコピー対０．３９７５個のコピー）であり、２８日目に１８４．７倍（７３．４２５０個のコピー対０．３９７５個のコピー）まで低下した。Ｈ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、１４日目後に制御不能な増大を示し、且つ２８日目に４８７３．７倍（２３１．５３５０個のコピー対０．０４７５個のコピー）に達した（図９Ｃ）。０．６ Ｍの投与量で、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、７日目後にいずれも有意な増大を示し、且つＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な増大能力を有した（２１日目に２７２．２８５０個のコピー対８３．６２７５個のコピー）（図９Ｄ）。
該実験中、０．２ Ｍの投与量であろうと０．６ Ｍの投与量であろうと、三つの群のいずれにおいてもマウスの体重減少が観察されなかった（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。しかし、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスは、０．２ Ｍの投与量で２０日目に立毛、後弯姿勢及びるい痩といった症状を示す一方、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスは正常であった。０．６ Ｍの投与量で、両群のマウスとも正常な外見を有した。Ｈ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．２ Ｍの投与量）を養子移入した４匹のマウスにおいて、２匹は、２４日目に屠殺され、立毛、後弯姿勢、るい痩、息切れのような症状を示した。Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスのデータ比較により、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｈ９３Ｃ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な抗腫瘍可能性、制御可能な増大及びインビボ安全性を有することが示唆された。
Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞におけるＩＬ－２３の活性化依存的産生を検証するために、ヒトＩＬ－２３キット（ＣＩＳＢＩＯ＃６２ＨＩＬ２３ＰＥＧ）及びヒトＩＦＮ－γキット（ＣＩＳＢＩＯ＃６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）を用いて、ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した後のＮＣＧマウス末梢血におけるＩＬ－２３及びＩＦＮ－γの分泌レベルを分析した。図１１Ａに示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群に比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群は、低い投与量（０．２ Ｍ、２１日目）で３倍までのより高いＩＬ－２３分泌レベルを示した。高い投与量（０．６ Ｍ）でのＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置マウス及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置マウスにおいて、類似した低レベルのＩＬ－２３を観察した（図１１Ｂ）。それとともに、マウス末梢血における活性化依存的産生のＩＦＮ－γの分泌行為は、ＩＬ－２３に似ており（図１１Ｃ及び１１Ｄ）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞におけるＩＬ－２３の活性化依存的産生を示唆した。
Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボでの抗腫瘍効果を研究するために、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて、Ｔ細胞の浸潤状況、腫瘍部位マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）の動員状況を研究した。簡単に言うと、組織パラフィン切片スライドグラスを６０℃で６０分間加熱し、そしてキシレンで３回、各１０分間脱脂し、１００％、１００％、９５％、９０％、８０％、７０％のアルコール及び水で各５分間再水和した。スライドグラスを抗原回復（ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｔｒｉｅｖａｌ）緩衝液中で２０分間煮沸することにより抗原回復を行い、そしてスライドグラスを抗原回復緩衝液に浸漬して室温（ＲＴ）に冷却した後に、３％の過酸化水素のメタノールでスライドグラスを１０分間処理して内因性ペルオキシダーゼの活性を破壊した。非特異的バックグラウンド染色を減少させるために、スライドグラスをブロッキング緩衝液（ＤＰＢＳで希釈した５％ヤギ血清）と共に２℃～８℃で一晩インキュベートした。
一晩経った後、スライドグラスを室温で３０分間インキュベートし、そして希釈された一次抗体と共に３７℃で２時間インキュベートし、二次抗体ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ抗体（Ｆｕｚｈｏｕ Ｍａｉｘｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｃｏ．，Ｌｔｄ．＃ ＫＩＴ－５００２）と共に暗所下室温で１５分間インキュベートした。メーカーの取扱説明書に従ってＤＡＢ基質を調製し、２００～５００μＬのＤＡＢ基質をスライドグラスに加え、暗所で２分間インキュベートした。蒸留水で５分間洗浄することによって染色を停止させた。最後に、スライドグラスに中性バルサムを加え、ヘマトキシリンで再染色し、１％塩酸アルコールで分別し、アルコールで脱水した後にマウントした。
Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞が低い投与量（０．２ Ｍ）で抗腫瘍能力を増強する機序を解明するために、ＴＣＲα（Ｈ－１）（ＳＡＮＴＡ ＣＲＵＺ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ＃ｓｃ－５１５７１９）を用いて、処置されたマウスの腫瘍組織においてＩＨＣによってＴ細胞浸潤を研究した。図１２に示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴ処置群に比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群における全ての三匹のマウスの腫瘍部位のＴ細胞浸潤はいずれも改善された。Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群において、より多くのＴ細胞は腫瘍巣中心部にまで浸潤した一方、三匹のＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置マウスにおいて、一匹のみのマウスの腫瘍境界領域に少ないＴ細胞浸潤があり、他のマウスの腫瘍部位にＴ細胞が非常に少なかった。ＵｎＴ処置群において、三匹のマウスの腫瘍部位にＴ細胞浸潤は観察されなかった。
なお、腫瘍組織におけるマクロファージ及びＤＣ動員を研究した。抗ＣＤ６８抗体（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１２５２１２）及び抗ＣＤ１１ｃ抗体（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ＃９７５８５Ｓ）を用いて、腫瘍組織におけるマウスマクロファージ及びＤＣを検出した。図１３に示すように、ＣＤ６８＋マクロファージ（左欄）及びＣＤ１１ｃ＋ ＤＣ（右欄）はＤＡＢに染色された。マクロファージ及びＤＣの腫瘍部位への動員は、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群において有意に高かった一方、ＵｎＴ及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群は、腫瘍組織境界のみにマクロファージ動員があった。これらのデータにより、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴに比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍組織においてより多くのマクロファージ及びＤＣ動員を誘導することができ、且つ腫瘍組織において自然免疫応答をより有効に引き出し得ることが示唆された。
８．５． 実施例５－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
ＰＢＭＣはＴＰＣＳ（＃Ａ１９Ｋ２６８０３７）から購入された。Ｐａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０－０９６－５３５）を用いて、上記セクション８．１．２に記載のメーカーのレジメンに従ってＰＢＭＣからヒトＴ細胞を精製した。
調製されたＴ細胞を、その後にヒトＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ＃１７０－０７６－１５６）を用いて、メーカーのレジメンに従って４８時間予め活性化し、ここで、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子は、４０μＬ／百万個のビーズ対細胞比で加えられた。ＣＡＲ－Ｔ細胞調製では、予め活性化されたＴ細胞を２４ウェルプレート（ＢＤ）に０．５×１０６個の細胞／ウェルの密度で播いた。そして、精製されたウイルスをウェルに加えた。一晩経った後、回収し、遠心分離し、新鮮なＲＰＭＩ－１６４０＋３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２で再懸濁させた後、形質導入された細胞を２４ウェルＧ－Ｒｅｘ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ ＃８０１９２Ｍ）中に置いた。形質導入されていないＴ細胞（ＵｎＴ）を陰性対照として使用した。Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＨ９３Ｐ ＣＡＲを有するＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞（そのコード領域は図１の底部に示されている）を以上に記載したように調製した。Ｈ９３Ｐ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９の核酸配列とを含む。６日目に、ネイキッドのＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、武装化（ａｒｍｏｒｅｄ）Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９を分泌する）及び武装化Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＩＬ－２３及びＣＣＬ－２１を分泌する）のＣＡＲ陽性率は、それぞれ６３．５２％、４８．５９％及び２５．２４％であった（図１４）。
８．６． 実施例６－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞、並びに外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞についての、再チャレンジアッセイ
上記の実施例２に記載されるように、ＣＡＲ－Ｔ細胞反復チャレンジモデルを確立した。ＧＰＣ３陽性細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞を標的細胞として使用した。再チャレンジの初回ラウンド（ラウンド１）については、６ウェルプレートにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞を１：１のＥ／Ｔ比で共培養した。一晩経った後、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を穏やかに回収し、遠心分離し、新鮮なＣＡＲ－Ｔ培地（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２）に再懸濁させた。そしてＣＡＲ－Ｔ細胞を新しいプレートに加えてさらに２日間培養した。そして、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を回収し、新鮮な培地に再び再懸濁させ、新鮮な腫瘍細胞を播種した新しいプレートに加えた（ラウンド２）。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、合計８ラウンド刺激された。各ラウンドにＴ細胞をカウントし、毎回の刺激から７２時間後、ＧＰＣ３陽性ヒト肝細胞がん（ＨＣＣ）細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５．Ｌｕｃを用いることによって細胞傷害性アッセイを行った。全Ｔ細胞と標的細胞との比を用いて細胞傷害性アッセイを行った。再チャレンジアッセイには、Ｈ９３群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）、Ｈ９３Ｍ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）、Ｈ９３Ｐ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）及びＵｎＴ（初期Ｔ細胞はＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞であった）の四つの処理群があった。
８．６．１． Ｔ細胞の増大
再チャレンジアッセイにおいてＩＬ１２ｐ４０発現を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の増大機能の利点を決定するために、各ラウンドの終了時にＴ細胞の数を記録し、増大倍率を計算した。図１５Ａに示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（ラウンド８の時点で１０９倍）及びＵｎＴ群（ラウンド８の時点で７倍）に比べて、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞で繰り返して刺激すると、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は有意に増大し（ラウンド８の時点で２７５９倍）、且つＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群は、Ｈ９３Ｍ群に類似した強い増大能力を有した。
８．６．２． 細胞傷害性アッセイ
さらに、再チャレンジアッセイにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性を評価し、全Ｔ細胞：標的細胞の比は１：２であった。標的細胞は、ＧＰＣ３陽性ヒト肝細胞がん（ＨＣＣ）細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５．Ｌｕｃであり、当分野の既知の技術によって操作されてホタルルシフェラーゼを発現した。２ラウンドが終わるごとに細胞を回収し、標的細胞（２×１０３個の細胞／ウェル）を混合し、３８４ウェルプレートにおいて２４時間培養した。ＣＡＲ－Ｔによる腫瘍細胞への細胞傷害性をアッセイするために、メーカーのレジメンに従ってＯｎｅ－ｇｌｏ発光ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ６１１０）を調製し、ウェル内の残留ルシフェラーゼの活性を検出するために、共培養された細胞に加えた。以下の式によって特異的細胞傷害性を計算した：特異的細胞傷害性％＝１００％×（１－（ＲＬＵ試料－ＲＬＵｍｉｎ）／（ＲＬＵｍａｘ－ＲＬＵｍｉｎ））。図１５Ｂに示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群及びＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群は、Ｒ０の場合（ＰＬＣ／ＰＲＦ／５刺激の前）に、似ている細胞傷害性を有した。ＰＬＣ／ＰＥＦ／５繰り返して刺激した後、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群及びＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群は、似ている細胞傷害性（全てのラウンドにおいて４７％～６８％である）を有し、且つＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（全てのラウンドにおいて２４％～３９％である）より有意に高く、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群及びＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群は、ＧＰＣ３陽性ＨＣＣ細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５．Ｌｕｃ細胞に対していずれも持続的高レベルの細胞傷害性を有することが示唆された。
８．７． 実施例７－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞、並びに外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞についての、細胞遊走アッセイ
ＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１の走化機能を評価するために、細胞遊走アッセイを行った。９６ウェルｔｒａｎｓｗｅｌｌチャンバ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）における５－μｍ孔径のポリカーボネートフィルタを通した遊走によってレスポンダーＴ細胞の走化性を測定した。ＧＰＣ３陽性ヒトＨＣＣ細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞でＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴ細胞を刺激し、３０時間後に共培養上清を回収した。そして、１２５μＬの上清を下側チャンバに入れ、７５μＬの処理されていないＴ細胞（０．０７５ Ｍ）を上側チャンバでインキュベートした。２、４及び６時間後、上側チャンバから下側チャンバに遊走したＴ細胞を血球計数チャンバによってカウントした。四つの処理群を有する：Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）及びＵｎＴ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＵｎＴ細胞からのものであった）。
図１６に示すように、異なる時点で、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＵｎＴ細胞の上清に比べて、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＣＬ－１９を分泌する）及びＨ９３Ｐ（ＣＣＬ－２１を分泌する）ＣＡＲ－Ｔ細胞の上清には、より多くのＴ細胞が引き込まれた。しかしながら、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群のインビトロでの遊走誘導能力は、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群（Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群対Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群、６時間の時点でＰ＜０．０００１）より有意に優れている。具体的には、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群は、６時間（０．０９５ Ｍ）で上側チャンバの全てのＴ細胞を完全に引き込むことができる一方、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群は、大多数のＴ細胞（０．０６５ Ｍ）を引き込むことができる。ＣＣＬ－１９又はＣＣＬ－２１の産生のないＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群及びＵｎＴ群は、６時間を経っても少数のＴ細胞を遊走させ、それぞれ０．０２８ Ｍ及び０．０２５ Ｍであった。なお、それぞれＣＣＬ－１９ ＥＬＩＳＡ（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１００６０１）及びＣＣＬ－２１ ＥＬＩＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏ＃ＥＨＣＣＬ２１）によって上清におけるＣＣＬ－１９及びＣＣＬ－２１の濃度を測定した。該結果は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ及びＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞からの上清がそれぞれＣＣＬ－１９（２２９２．１０±８５．４８ｐｇ／ｍＬ）及びＣＣＬ－２１（３４８１．０８±１９３．１１ｐｇ／ｍＬ）を分泌したことを示唆し、Ｈ９３Ｍ及びＨ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞の走化機能がさらに検証された。
８．８． 実施例８－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－２１を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞、並びに外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の、インビボでの養子移入後の抗腫瘍効果
ＮＣＧマウス異種移植モデルにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍効果を評価した。皮下異種移植モデルについて、６～７週齢のＮＣＧマウスの右前肢にＨｅｐ３Ｂ細胞を皮下接種した（４．０×１０６個の細胞／マウス）。平均腫瘍体積が１５０ｍｍ３近くになった時（異種移植接種後５日目）に、マウスを８群にランダムに分け、それぞれＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍ及び０．８ Ｍの投与量）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍ及び０．８ Ｍの投与量）、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍ及び０．８ Ｍの投与量）、ＵｎＴ（０．２ Ｍの投与量）、及び溶媒（ビヒクル）のみ、で尾静脈注射によって処置した。腫瘍サイズをデジタルノギスで週２回測定した。以下の式に基づいて腫瘍体積を計算した：
Figure 2024507958000003
。養子移入後７、１４、２１及び２８日目に、ＦＡＣＳ染色抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３００３１６）によってマウス血液におけるＴ細胞の数も検出した。
図１７Ａに示すように、ＵｎＴ及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞群に比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスの腫瘍サイズは、３２日目にそれぞれ９８．２％及び９７．１％減少した（５２．０ｍｍ３対２９４２．０ｍｍ３、１７６６．５ｍｍ３）ことを観察した。これ結果により、低い投与量（０．３ Ｍ／マウス）で、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な治療可能性を有することが示唆された。２２日目前、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群とＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群は、似ている抗腫瘍治療効果を有し、且つ２２日目に、腫瘍サイズがそれぞれ７７．３％及び６５．７％減少したが（３６８．３ｍｍ３対１６２０．８ｍｍ３、１０７２．７ｍｍ３）、続いて腫瘍サイズが増加したことが観察された。投与量が０．８ Ｍ／マウスに増加した場合、図１７Ｂに示すように、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、いずれも腫瘍増殖に対して明らかな抑制効果を有し、３２日目に増殖抑制率は１００％であったが、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与には明らかな腫瘍体積抑制作用が認められなかった。しかしながら、Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ－Ｔ群の異種移植組織は海綿状であることが観察され、他の群と異なり、腫瘍サイズが２０００ｍｍ３を超えるため、２６日目にマウスを安楽死させた。
８．９． 実施例９－ｐ４０及びＣＣＬ－１９により武装化されたＣＡＲと、両方のうちの一つにより別々に武装化されたＣＡＲとの比較
８．９．１． ＮＣＧマウス異種移植モデルにおける、ｐ４０及びＣＣＬ－１９により武装化されたＣＡＲと、両方のうちの一つにより別々に武装化されたＣＡＲとの比較
Ｈ９３ ＣＡＲ主鎖に基づき、Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲベクター又はＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲベクターにおけるＭＣＳは、ヒトＩＬ１２ｐ４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はヒトＣＣＬ－１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）をコードする核酸配列を含む核酸配列の挿入を可能にし、該核酸配列は、２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すＰ２Ａ断片）のＣ末端と融合され、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端上流において、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端に作動可能に連結された。
Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞中の相乗的効果を明らかにするために、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＩＬ１２ｐ４０を分泌する）、Ｈ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＣＬ－１９を分泌する）を調製し、ＮＣＧマウス異種移植モデルにおいて評価した。実施例８に開示されるように、６～７週齢のＮＣＧマウスの右前肢にＨｅｐ３Ｂ細胞を皮下接種した（４．０×１０６個の細胞／マウス）。平均腫瘍体積が１５０ｍｍ３近くになった時（異種移植接種後５日目）に、マウスを６群にランダムに分け、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍの投与量）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍの投与量）、Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍの投与量）、Ｈ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．３ Ｍの投与量）、ＵｎＴ（３．５ Ｍの投与量、ＣＡＲ－Ｔ群と同じ全Ｔ細胞の細胞数）、及び溶媒（ビヒクル）のみ、で尾静脈注射によって処置した。腫瘍サイズをデジタルノギスで週２回測定した。以下の式に基づいて腫瘍体積を計算した：腫瘍体積＝（（長さ）×（幅）２）／２。養子移入後７、１４、２１及び２８日目に、ＦＡＣＳ染色抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３００３１６）によってマウス血液におけるＴ細胞の数を検出した。
図１８Ａに示すように、ＵｎＴ群に比べて、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスの腫瘍サイズが９２．０％減少した（１５０．３ｍｍ３対１８７８．２ｍｍ３）ことを２６日目に観察し、Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスの腫瘍サイズがそれぞれ７２．９％及び１１．７％減少した（５０８．７ｍｍ３対１８７８．２ｍｍ３及び１６５８．７ｍｍ３対１８７８．２ｍｍ３）ことを２６日目に観察した。これらの結果により、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な治療可能性を有することが示唆された。
ＣＤ３＋％のＦＡＣＳを用いてマウス末梢血細胞におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大を検出した。Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、２１日目前に有意な増大を示し、且つ続いて減少した。Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、最適以下の増殖能力を有し、且つＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞と似ており、有意な増大を示さなかった（図１８Ｂ）。具体的には、Ｈ９３Ｍ群の２１日目のＣＤ３比率は４０．２％であり、その後２８日目に腫瘍体積が減少したため、ＣＤ３比率は２９．８％まで低下した。Ｈ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞群におけるＣＤ３の比率は、２１日目に２６．１％であり、且つ２８日目に３８．５％に上昇した。Ｈ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞群は、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴ群と似ており、有意な増大を示さなかった。
該実験中、ＵｎＴ群のマウス体重が２０％超減少した（図１８Ｃ）以外、ＣＡＲ－Ｔ群ではマウス体重の減少が観察されず、且つＣＡＲ－Ｔ細胞処置群の全てのマウスは、いずれも正常な外見を示した。
８．９．２． Ｃ５７ＢＬ／６同系遺伝子モデルにおける、ｐ４０及びＣＣＬ－１９により武装化されたＣＡＲと、両方のうちの一つにより別々に武装化されたＣＡＲとの比較
実施例１に開示される方法に従って、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）及びマウスＣＡＲ主鎖ポリペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）を用いて、マウス抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ ＣＡＲ（即ち、ｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）を発現するベクターを構築し、該ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、マウスＣＤ８αヒンジドメインと、マウスＣＤ８α膜貫通ドメインと、マウスＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメインと、マウスＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインとを含む。
ｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ主鎖に基づき、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲベクターにおけるＭＣＳは、マウスＩＬ１２ｐ４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）及びマウスＣＣＬ－１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）をコードする核酸配列を含む核酸配列の挿入を可能にし、該核酸配列は、別の２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すＰ２Ａ断片）のＣ末端と融合される２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示すＴ２Ａペプチド）に連結することによって、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端上流において、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端に作動可能に連結される。Ｐ２Ａペプチド及びマウスＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－ＣＣＬ－１９ペプチドをコードする核酸配列を化学的に合成し、ＣｌｏｎｅＥＺ方法によってそれをｐＭＳＣＶ ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングした。得られたｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２の核酸配列とを含む。同様に、それぞれマウスＩＬ１２ｐ４０及びマウスＣＣＬ－１９を含むｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）及びｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）をさらに構築した。
ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞中の相乗的効果をより明らかにするために、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞を調製し、Ｃ５７ＢＬ／６同系遺伝子モデルにおいて評価した。皮下異種移植モデルについて、６～７週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの右前肢にＬＬ／２－ｈＧＰＣ３細胞（ｈＧＰＣ３を過剰発現するＬＬ／２細胞）を皮下接種した（１．０×１０６個の細胞／マウス）。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３近くになった時（異種移植接種後９日目）に、マウスを５群にランダムに分け、それぞれｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞（１０ Ｍの投与量）、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（６ Ｍの投与量）、ｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞（６ Ｍの投与量）、ｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（６ Ｍの投与量）、ＵｎＴ（２４．１ Ｍの投与量、ＣＡＲ－Ｔ群と同じ全Ｔ細胞の細胞数）で尾静脈注射によって処置した。腫瘍サイズをデジタルノギスで週２回測定した。以下の式に基づいて腫瘍体積を計算した：腫瘍体積＝（（長さ）×（幅）２）／２。それぞれ養子移入後１、７、１４、２１及び２８日目に、ＦＡＣＳ染色抗マウスＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃１００２３６）及びＣＡＲ陽性率（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ＃ＣＰ０００１）によって末梢血におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大を検出した。
図１９Ａ及び１９Ｄに示すように、腫瘍体積が大きい（＞３０００ｍｍ３）ため、ネイキッドのｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群及びＵｎＴ群の全てのマウスは１９日目前に屠殺された。２９日目に、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスは、ほぼ無腫瘍であった（９１．５ｍｍ３）。１５日目に、ｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスの腫瘍サイズが明らかに減少したが（４３７．２ｍｍ３）、続いて腫瘍が再発したことを観察した。注意すべきことは、ｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスは、実験全体を通じて有意な治療効果を示さなかったことである。これらの結果により、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な治療可能性を有することが示唆され、これは上記ＮＣＧマウス異種移植モデルにおける結果と一致した。
ＦＡＣＳを用いてマウス末梢血細胞におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大を検出した。ＭｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、２８日目前に有意な増大を示した一方、ｍｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、明らかな増殖能力を示さず、且つｍｕｓＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、増大が無視できるｍｕｓＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞と似ていた（図１９Ｂ）。具体的には、ｍｕｓＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞群におけるＣＤ３及びＣＡＲ陽性率は、２１日目に１７．０％であり、且つ２８日目に２１．９％まで増加した。ＭｕｓＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞群は、２１日目に６．９％であり、且つ２８日目に８．７％まで上昇した。
該実験中、ＣＡＲ－Ｔ群ではマウス体重の減少が観察されず（図１９Ｃ）、且つＣＡＲ－Ｔ細胞処置群の全てのマウスは、いずれも正常な外見を示した。
８．１０． 実施例１０－胃がんモデルにおける、ｐ４０及びＣＣＬ－１９により武装化されたＣＡＲの検証
８．１０．１． 外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
実施例１に開示される方法に従って、ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／１３９１４３に開示される抗クローディン１８．２ ＶＨＨ ＣＡＲ（即ち、２６１ ＣＡＲ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）を構築し、それは、抗クローディン１８．２ ＶＨＨドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）とＣＡＲ主鎖ポリペプチドとを含み、該主鎖ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）と、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）と、ＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）と、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）とを含む。さらに、２６１Ｍ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）の構造を構築し、それは、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲと同じであり、ＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－ＣＣＬ－１９を含む。
実施例１に記述される方法を用いて、２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＩＬ１２ｐ４０及びＣＣＬ－１９を分泌する）を調製した。５日目に、形質導入した後、ネイキッドの２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び武装化２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率はそれぞれ５０．７％及び２３．０％であった。
８．１０．２． ＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９発現
２６１Ｍ ＣＡＲの構造を検証するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞をクローディン１８．２陽性細胞株－ＮＵＧＣ４と一晩共培養し、ＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９の分泌状況を分析した。簡単に言うと、ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＮＵＧＣ４細胞を６ウェルプレートにおいてＥ／Ｔ＝１：１で共培養し、且つ一晩経った後に上清を得た。メーカーのレジメンに従って、ヒトＩＬ－２３キット（ＣＩＳＢＩＯ＃６２ＨＩＬ２３ＰＥＧ）及びＣＣＬ－１９ ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１００６０１）を用いてＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９の量を測定した。図２０Ａ及び２０Ｂに示すように、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のみは、高レベルのＩＬ－２３（３７０３．３ｐｇ／ｍＬ）及びＣＣＬ－１９（２６５．１ｐｇ／ｍＬ）分泌を有する。
８．１０．３． 外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ反復チャレンジアッセイ
上記の実施例２に記載されるように、ＣＡＲ－Ｔ細胞反復チャレンジモデルを確立した。ＣＬＤＮ１８．２陽性細胞株ＮＵＧＣ４細胞を標的細胞として使用した。再チャレンジの初回ラウンド（ラウンド１）については、６ウェルプレートにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞を１：１のＥ／Ｔ比で共培養した。一晩経った後、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を穏やかに回収し、遠心分離し、新鮮なＣＡＲ－Ｔ培地（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２）に再懸濁させた。そしてＣＡＲ－Ｔ細胞を新しいプレートに加えてさらに２日間培養した。そして、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を回収し、新鮮な培地に再び再懸濁させ、新鮮な腫瘍細胞を播種した新しいプレートに加えた（ラウンド２）。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、合計５ラウンド刺激された。各ラウンドにおいて、Ｔ細胞の数及び生存率をカウントした。再チャレンジアッセイには、２６１ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞は２６２ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞は２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）及びＵｎＴ（初期Ｔ細胞はＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞であった）の三つの処理群があった。再チャレンジアッセイにおいてＩＬ１２ｐ４０発現を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の増大機能の利点を決定するために、各ラウンドの終了時にＴ細胞の数を記録し、増大倍率を計算した。図２１Ｂに示すように、２６１ ＣＡＲ－Ｔ群（ラウンド５の時点で６．７倍）及びＵｎＴ群（ラウンド５の時点で５．１倍）に比べて、ＮＵＧＣ４細胞で繰り返して刺激すると、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群細胞（ラウンド５の時点で４６．６倍）は有意に増大した。２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞生存率（ラウンド５の時点で６８．７％）は、ネイキッドの２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ラウンド５の時点で４１．７％）及びＵｎＴ細胞（ラウンド５の時点で３８．８％）より高かった（図２１Ｃ）。従来の培養条件（１０％ １６４０＋３００ ＩＵ ＩＬ－２）での三つの群の似ているＴ細胞増大及び生存率に比べて、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ラウンド５の時点で４６．６倍）は、ＮＵＧＣ４細胞により複数回チャレンジされた後に、抗原依存的増大を示した（図２１Ａ及び２１Ｂ）。
８．１０．４． 胃がんモデルにおける、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の、養子移入後の抗腫瘍効果
胃がんモデルにおいて、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、養子移入後の治療効果を評価した。２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びネイキッドの２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞を調製し、ＮＵＧＣ４異種移植モデルにおいて評価した。皮下異種移植モデルについて、６～７週齢のＮＣＧマウスの右前肢にＮＵＧＣ４細胞を皮下接種した（３．０×１０６個の細胞／マウス）。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３近くになった時（異種移植接種後１４日目）に、マウスを３群にランダムに分け、それぞれ２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．５ Ｍの投与量）、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（０．５ Ｍの投与量）及びＵｎＴ細胞（１．９ Ｍの投与量）で尾静脈注射によって処置した。腫瘍サイズをデジタルノギスで週２回測定した。以下の式に基づいて腫瘍体積を計算した：
Figure 2024507958000004
。
図２２Ａ及び２２Ｂに示すように、ＵｎＴ及び２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞群に比べて、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスの腫瘍サイズがそれぞれ５９．０％及び５２．９％減少した（６０９．０ｍｍ３対１４８４．８ｍｍ３、１２９１．８ｍｍ３）ことを２９日目に観察し、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、低い投与量（０．５ Ｍ／マウス）でネイキッドの２６１ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な治療可能性を有することが示唆された。
ＦＡＣＳを用いてマウス末梢血細胞におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の増大を検出した。０．５ Ｍの投与量で、２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５日目後に有意な増大を示し、ＣＤ３陽性Ｔ細胞の比率は、２１日目に最高（７．１％）に達し、続いて２８日目に低下した（５．３％）が、処置期間にわたって、ネイキッドのｍｕｓ２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴで処置されたマウスは有意な増大を示さなかった（図２２Ｃ）。これらのデータは、外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現する２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、インビボで優れた増大能力及びより良好な治療可能性を有することを示唆し（図２２Ａ及び２２Ｃ）、これはＧＰＣ３マウスモデルにおける結果と一致した。
該実験中、全ての三つの群では、マウス体重の減少が観察されず（図２２Ｄ）、且つ各処置群のマウスは、いずれも正常な外見を示した。
８．１１． 実施例１１－外因的に導入されたｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞、並びに外因的に導入されＩＬ－７及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の、インビボでの養子移入後の抗腫瘍効果
実施例１に開示される方法に従って、抗クローディン１８．２ ＶＨＨドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）及びマウスＣＡＲ主鎖ポリペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）を用いて、マウス抗クローディン１８．２ ＶＨＨ ＣＡＲ（即ち、ｍｕｓ２６１ ＣＡＲ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）を構築し、該ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、マウスＣＤ８αヒンジドメインと、マウスＣＤ８α膜貫通ドメインと、マウスＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメインと、マウスＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインとを含む。
ｍｕｓ２６１ ＣＡＲ主鎖に基づき、ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲベクターにおけるＭＣＳは、マウスＩＬ１２ｐ４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）及びマウスＣＣＬ－１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）をコードする核酸配列を含む核酸配列の挿入を可能にし、該核酸配列は、別の２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すＰ２Ａ断片）のＣ末端と融合される２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示すＴ２Ａペプチド）に連結することによって、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端上流において、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達ドメインのＣ末端に作動可能に連結された。Ｐ２Ａペプチド及びマウスＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－マウス ＣＣＬ－１９ペプチドをコードする核酸配列を化学的に合成し、クローニングＥＺ方法によってそれをｐＭＳＣＶ－ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングした。得られたｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５の核酸配列とを含む。同様に、Ｆ２Ａペプチド及びマウスＩＬ７－Ｆ２Ａ－マウスＣＣＬ１９ペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）をコードする核酸配列を化学的に合成し、クローニングＥＺ方法によってそれをｐＭＳＣＶ－ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングしてｍｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲを形成した。
同系遺伝子胃がんモデルにおいて、外因的に導入されＩＬ１２ｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び外因的に導入されＩＬ－７及びＣＣＬ－１９を発現するｍｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、養子移入後の治療効果を評価した。Ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｍｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を調製し、Ｃ５７ＢＬ／６同系遺伝子異種移植モデルにおいて評価した。皮下異種移植モデルについて、６～７週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの右前肢にＬＬ／２－ｈＣＬＤＮ１８．２細胞（ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＬＬ／２細胞）を皮下接種した（１．０×１０６個の細胞／マウス）。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３近くになった時（異種移植接種後９日目）に、マウスを４群にランダムに分け、それぞれｍｕｓ２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞（１０ Ｍの投与量）、ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（１０ Ｍの投与量）、ｍｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（１０ Ｍの投与量）、及び溶媒（ビヒクル）のみ、で尾静脈注射によって処置した。マウスが治療を受ける前日から、腫瘍サイズをデジタルノギスで週２回測定した。以下の式に基づいて腫瘍体積を計算した：腫瘍体積＝（（長さ）×（幅）２）／２。
図２３Ａに示すように、ビヒクル及びｍｕｓ２６１ ＣＡＲ－Ｔ細胞群に比べて、ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞を養子移入したマウスは無腫瘍であり、且つ４２日目まで持続的な効果を有した。１４日目に、ビヒクル群に比べてＭｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群が腫瘍増殖に対して明らかな抑制効果（１９１．９ｍｍ３対９１４．８ｍｍ３）を有することを観察し、増殖抑制率は７９．０％であったが、続いて腫瘍サイズが増加し、且つ腫瘍が２１日目に壊れ、痂皮ができたため全てのマウスを屠殺した。この結果により、ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｍｕｓＩＬ１２ｐ４０及びｍｕｓＣＣＬ－１９を分泌する）は、ｍｕｓ２６１－７１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｍｕｓＩＬ７及びｍｕｓＣＣＬ－１９を分泌する）よりも良好な治療可能性を有することが示唆された。
該実験中、ＣＡＲ－Ｔ群では、マウス体重の減少が観察されなかった（図２３Ｂ）。
８．１２． 実施例１２－膜結合性ＩＬ１２ｐ４０及びＣＣＬ－１９を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製及び特徴づけ
ＩＬ１２ｐ４０及びＣＣＬ－１９武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の機能をさらに改善するために、例示的膜結合形態のＩＬ１２ｐ４０（ＭＢ１２）を構築した。Ｈ９３ ＣＡＲ主鎖に基づき、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲベクターにおけるＭＣＳは、核酸配列の挿入を可能にし、該核酸配列は、膜結合性ＩＬ１２ｐ４０（即ちＭＢ１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）及びヒトＣＣＬ１９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）をコードする核酸配列を含む。具体的には、ヒトＩＬ１２ｐ４０は、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ８α膜貫通ドメイン及びＣＤ８α細胞内細胞質ドメインをコードする核酸配列を介して連結され、それによってＩＬ１２ｐ４０を細胞膜に繋ぎ留めることができる。ＭＢ１２を２Ａ自己切断ペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示されるＴ２Ａ断片）のＮ末端に融合され、ヒトＣＣＬ－１９下流にあり、ヒトＣＣＬ－１９に作動可能に連結された。ＭＢ１２及びＣＣＬ１９をコードする核酸配列を化学的に合成し、ＨｐａＩ（５’－ＧＴＴＡＡＣ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）及びＭｌｕＩ（５’－ＡＣＧＣＧＴ－３’）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）制限部位を介して、それをｐＬＳＩＮＫ－ＢＢｚＢＢ ＣＡＲ主鎖にクローニングした。得られたＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のアミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９の核酸配列とを含む。実施例１に開示されるプログラムに従って、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を調製した。
８．１２．１． ＣＡＲ－Ｔ細胞膜上でのＩＬ１２ｐ４０タンパク質の発現
膜結合戦略を検証するために、ＦＡＣＳ染色抗ヒトＩＬ１２ｐ４０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃５０１８０９）及びＣＡＲ陽性率（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ＃ＣＰ０００１）によって膜上でのＩＬ１２ｐ４０タンパク質の発現を検出した。図２４Ａに示すように、ネイキッドのＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率は、それぞれ６１．５８％、５０．７４％及び３３．９７％であった。図２４Ｂに示すように、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＬ１２ｐ４０タンパク質の膜上での発現はほぼ１００％であり、これは、最初の膜結合戦略の実現可能性を示した。
８．１２．２． ＩＬ１２ｐ４０、ＩＬ－２３、ＣＣＬ－１９及びＩＬ－１２タンパク質の分泌
膜結合戦略の実現可能性をさらに検証するために、ＩＬ１２ｐ４０及びＩＬ－２３の分泌を分析した。簡単に言うと、抗ＣＤ３／ＣＤ２８と共培養された細胞（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２＋抗ＣＤ３／ＣＤ２８）を、６ウェルプレートにおいて、１×１０６個の細胞／ｍＬで培養し、一晩経った後に上清を回収した。メーカーのレジメンに従って、ヒトＩＬ１２ｐ４０キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃４２１５６０８）、ＩＬ－２３キット（Ｃｉｓｂｉｏ＃６２ＨＩＬ２３ＰＥＧ）及びＣＣＬ－１９キット（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１００６０１）を用いて、ＩＬ１２ｐ４０、ＩＬ－２３及びＣＣＬ－１９の量を測定した。図２５Ａ及び図２５Ｂに示すように、ＩＬ１２ｐ４０を分泌するＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８と共培養された後、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞に比べて、ＩＬ１２ｐ４０（１７２８８．６ｐｇ／ｍＬ対４１．１ｐｇ／ｍＬ）及びＩＬ２３（１７７５．１ｐｇ／ｍＬ対０ｐｇ／ｍＬ）分泌が高い一方、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞でのＩＬ１２ｐ４０分泌（２６７．７ｐｇ／ｍＬ）が有意に減少し、且つ抗ＣＤ３／ＣＤ２８と共培養された後に明らかなＩＬ２３分泌がなかった。なお、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、同じレベルのＣＣＬ－１９分泌を有した（図２５Ｃ）。データにより、ＭＢ１２の膜結合性ＩＬ１２ｐ４０構造は実現可能であることが示唆された。図２５Ｄに示すように、抗ＣＤ３／ＣＤ２８と共培養された後、全ての試験細胞には明らかなＩＬ－１２分泌がなく、これは、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞がＩＬ１２ｐ４０を分泌するが、ＩＬ－１２ではなくＩＬ－２３のみを産生することが示唆された。
８．１２．３ ＩＬ１２ｐ４０膜結合ＣＡＲ－Ｔ細胞についての細胞遊走アッセイ
Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞におけるＣＣＬ－１９の走化機能を評価するために、細胞遊走アッセイを行った。９６ウェルｔｒａｎｓｗｅｌｌチャンバ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）における５－μｍ孔径のポリカーボネートフィルタを通した遊走によってレスポンダーＴ細胞の走化性を測定した。ＧＰＣ３陽性ヒトＨＣＣ細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞でＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵｎＴ細胞を刺激し、２４時間後に共培養上清を回収した。そして、１２５μＬの上清を下側チャンバに入れ、７５μＬの処理されていないＴ細胞（０．０７５ Ｍ）を上側チャンバでインキュベートした。２、４及び６時間後、上側チャンバから下側チャンバに遊走したＴ細胞を血球計数チャンバによってカウントした。細胞遊走アッセイには、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞からのものであった）及びＵｎＴ群（下側チャンバにおける上清は、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＵｎＴ細胞であった）の四つの処理群があった。
図２６Ａに示すように、４ｈ及び６ｈの時点で、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＵｎＴ細胞の上清に比べて、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の上清には、より多くのＴ細胞が引き込まれた。具体的には、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ及びＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ群は、６時間（０．０７７ Ｍ及び０．０７５ Ｍ）の時点で上側チャンバの全てのＴ細胞を完全に引き込むことができる一方、ＣＣＬ－１９産生のないＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群及びＵｎＴ群は、６時間を経っても少数のＴ細胞を遊走させ、それぞれ０．０５１ Ｍ及び０．０４８ Ｍであった。なお、ＣＣＬ－１９ ＥＬＩＳＡ（Ａｂｃａｍ＃ａｂ１００６０１）によって共培養上清におけるＣＣＬ－１９の濃度を測定した。ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞と共培養されたＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞からの上清におけるＣＣＬ－１９の濃度は、それぞれ１３８９．１ｐｇ／ｍＬ及び１８０４．７ｐｇ／ｍＬ（ｐ＜０．００５）であった（図２６Ｂ）。この結果により、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、インビトロでＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞と同じ走化機能を有することが示唆された。
８．１２．４． ＩＬ１２ｐ４０膜結合ＣＡＲ－Ｔ細胞についての再チャレンジアッセイ
上記の実施例２に記載されるように、反復チャレンジモデルを確立した。ＧＰＣ３陽性細胞株－Ｈｅｐ３Ｂ細胞を標的細胞として使用した。再チャレンジの初回ラウンド（ラウンド１）については、６ウェルプレートにおいて、ＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞を２：１のＥ／Ｔ比で共培養した。一晩経った後、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を穏やかに回収し、遠心分離し、新鮮なＣＡＲ－Ｔ培地（ＲＰＭＩ－１６４０＋３００ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２）に再懸濁させた。そしてＣＡＲ－Ｔ細胞を新しいプレートに加えてさらに２日間培養した。そして、ウェル中のＣＡＲ－Ｔ細胞を回収し、新鮮な培地に再び再懸濁させ、新鮮な腫瘍細胞を播種した新しいプレートに加えた（ラウンド２）。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、合計５ラウンド刺激された。ラウンドにおいてＴ細胞をカウントし、各刺激後に一晩経ってサイトカインを検出した。再チャレンジアッセイには、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ群（初期ＣＡＲ－Ｔ細胞はＨ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞であった）及びＵｎＴ群（初期Ｔ細胞はＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞であった）の四つの処理群があった。
８．１２．４．１． Ｔ細胞の増大
再チャレンジアッセイにおいて膜結合性ＩＬ１２ｐ４０発現を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の増大機能の利点を決定するために、各ラウンドの終了時にＴ細胞の数を記録し、増大倍率を計算した。図２７Ｂに示すように、Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群（ラウンド５の時点で７０８．１倍）及びＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ群（ラウンド５の時点で１１５．１倍）に比べて、Ｈｅｐ３Ｂ細胞で繰り返して刺激すると、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ群は有意に増大し（ラウンド５の時点で１１５５．７倍）、これは、ＩＬ１２ｐ４０膜結合性ＣＡＲ－Ｔ細胞が、依然としてＣＡＲ－Ｔ細胞の増大機能の利点を有することを示唆した。しかしながら、抗原刺激のない従来の培養条件で、ＩＬ１２ｐ４０膜結合性ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＩＬ２３の抗原依存性発現に起因して、より良好な増大優位性を示さなかった（図２７Ａ）。
各ラウンドの後に、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率を計算した。図２７Ｃに示すように、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率は、刺激ラウンド数の増加に伴ってＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも速く増加し（ラウンド４後に８９．０％対８１．０％）、ネイキッドのＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ陽性率は遅く増加した（ラウンド４後に４８．５％であった）。
８．１２．４．２． サイトカインＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの分泌
再チャレンジアッセイでのＨ９３ ＣＡＲ－Ｔ細胞との比較におけるＨ９３Ｍ－Ｍ１２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＧＰＣ３陽性腫瘍細胞に対する持続的な細胞傷害活性をさらに検証するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞を２：１のＥ／Ｔ比でＨｅｐ３Ｂ細胞と一晩経って共培養した後、ＥＬＩＳＡによってＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの産生を分析した。結果により、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群又はさらにＨ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ群に比べて、Ｈ９３Ｍ－Ｍ１２ ＣＡＲ－Ｔ群は、全てのラウンドにおいてＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γを産生する能力が有意に向上したことが示唆された。図２８Ａ及び２８Ｂに示すように、ラウンド３～ラウンド５の後に、Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ－Ｔ群の細胞が分泌したＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの濃度は、他の群より高く、５９３９．４～１３２８７．２ｐｇ／ｍＬ（ＴＮＦ－α）及び５２８４２．５～５６０７２．５ｐｇ／ｍＬ（ＩＦＮ－γ）範囲内にあった。Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ－Ｔ細胞も高い産生レベルを有し、３１３４．２～７３４３．９ｐｇ／ｍＬ（ＴＮＦ－α）及び４６７９９．６～５３４６２．７ｐｇ／ｍＬ（ＩＦＮ－γ）の範囲内にある一方、Ｈ９３ ＣＡＲ－Ｔ群細胞が分泌したＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの濃度は、ラウンド１～ラウンド５の後に徐々に低下し、５８２３．０～２０６５．３ｐｇ／ｍＬ（ＴＮＦ－α）及び５１２６５．５～２１９９６．２ｐｇ／ｍＬ（ＩＦＮ－γ）の範囲内にあった。
本明細書に援用された全ての特許、開示された出願及び参照文献の教示は、いずれも全体として参照により本明細書に組込まれる。例示的な実施形態が特に示され、説明されたが、当業者であれば理解できるように、添付の特許請求の範囲に包含される実施形態の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細において様々な変更がなされ得る。
以上から理解されるように、本明細書では、例示の目的で具体的な実施形態が説明されているが、本明細書により提供された精神及び範囲から逸脱することなく、様々な修正がなされてもよい。以上で言及された全ての参考文献は、全体として参照により本明細書に組込まれる。
配列一覧表
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１． ヒト化抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖアミノ酸
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＶＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧ ＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＤＰＥＴＧＮＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２． Ｈ９３ ＣＡＲアミノ酸
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱ ＶＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＤＰＥＴＧＮＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲ ＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３． Ｈ９３Ｍ ＣＡＲアミノ酸
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱ ＶＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＤＰＥＴＧＮＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＹＳＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲ ＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＶＮＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤ ＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳ ＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫ ＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＬＬＬＡＬＳＬＬＶＬＷＴＳＰＡＰＴＬＳＧＴＮＤＡＥＤＣＣＬＳＶＴＱＫＰＩＰＧＹＩＶＲＮＦＨＹＬＬＩＫＤ ＧＣＲＶＰＡＶＶＦＴＴＬＲＧＲＱＬＣＡＰＰＤＱＰＷＶＥＲＩＩＱＲＬＱＲＴＳＡＫＭＫＲＲＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４． ＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－ＣＣＬ－１９
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤ ＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳ ＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫ ＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＬＬＬＡＬＳＬＬＶＬＷＴＳＰＡＰＴＬＳＧＴＮＤＡＥＤＣＣＬＳＶＴＱＫＰＩＰＧＹＩＶＲＮＦＨＹＬＬＩＫＤ ＧＣＲＶＰＡＶＶＦＴＴＬＲＧＲＱＬＣＡＰＰＤＱＰＷＶＥＲＩＩＱＲＬＱＲＴＳＡＫＭＫＲＲＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５． ヒトＩＬ１２ｐ４０
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６． ヒトＣＣＬ１９
ＭＡＬＬＬＡＬＳＬＬＶＬＷＴＳＰＡＰＴＬＳＧＴＮＤＡＥＤＣＣＬＳＶＴＱＫＰＩＰＧＹＩＶＲＮＦＨＹＬＬＩＫＤＧＣＲＶＰＡＶＶＦＴＴＬＲＧＲＱＬＣＡＰＰＤＱＰＷＶＥＲＩＩＱＲＬＱＲＴＳＡＫＭＫＲＲＳＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７． ＣＤ８αシグナルペプチド
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８． ＣＤ８αヒンジ
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９． ＣＤ８α膜貫通ドメイン
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０． ４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）細胞質ドメイン
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１． ＣＤ３ζ（ＣＤ３ｚ）細胞質ドメイン
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２． Ｈ９３Ｍ ＣＡＲ核酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９． Ｈ９３Ｐ ＣＡＲ核酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０． ＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－ＣＣＬ２１アミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１． ＩＬ１２ｐ４０－Ｔ２Ａ－ＣＣＬ２１核酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２． ヒトＣＣＬ２１
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３． ＭｌｕＩ制限部位
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４． ヒトＩＬ－７
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５． ＩＬ１２ｐ４０－Ｐ２Ａ－ＩＬ－７アミノ酸
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳ ＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６． ＩＬ１２ｐ４０－Ｐ２Ａ－ＩＬ７核酸
ＡＴＧＴＧＣＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＡＧＴＴＧＧＴＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＧＣＣＴＣＧＣ ＣＡＣＴＴＧＴＴＧＣＣＡＴＡＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＧＧＡＣＧＴＧＴＡＣＧＴＧＧＴＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣＴ ＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＣＧＣＴＣＣＣＧＧＧＧＡＧＡＴＧＧＴＧＧＴＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＴＡＣＴＣＣＧＧＡＧＧ ＡＡＧＡＴＧＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＴＴＧＧＡＴＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＡＧＧＴＡＣＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡ ＡＡＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＧＴＧＡＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＴＧＡＴＧＣＴＧＧＡＣＡＡＴＡＣＡＣＣＴＧＣＣ ＡＴＡＡＧＧＧＣＧＧＣＧＡＧＧＴＴＣＴＴＡＧＣＣＡＴＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＴＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＡＧ ＡＣＧＧＴＡＴＴＴＧＧＴＣＧＡＣＣＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧＧＡＧＣＣＣＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＴＴＴＴＴＴＧＣＧＣＴＧＣＧＡＧＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＴＧＧＴＧＧＣＴＡＡＣＧＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＣＣＧＡＣＣＴＧＡＣＣＴＴＣＴＣＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＣＴＣＧＴＧＧＣＴＣＣＡＧＣＧＡＴＣＣＴＣＡＧＧＧＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＡＧＡＧＣＧＣＧＴＧＡＧＡＧＧＧＧＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＧＡＧＴＡＣＴＣＧＧＴＧＧＡＧＴＧＴＣＡＧＧＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＧＧＣＣＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＧＡＴＧＧＴＡＧＡＣＧＣＣＧＴＣＣＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＣＣＣＧ ＡＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＣＴＴＴＧＡＡＧＡＡＴＴＣＣＣＧＣＣＡＧＧＴＴＧＡＡＧＴＣＡＧＴＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＣＴＧＧＴＣＴＡＣＴＣＣＧＣＡＣＡＧＣＴＡＴＴＴＣＴＣＧＣＴＧＡＣ ＣＴＴＣＴＧＣＧＴＧＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＡＡＧＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＣＡＧＧＧＴＧＴＴＣＡＣＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＴＴＴＧＣＣＧＡＡＡＡＡＡＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＧＴＧＣＧＴＧＣＧＣＡＧＧＡＣＣＧＣＴＡＣＴＡＣＡＧＴＴＣＣＴＣＴＴＧＧＴＣＣＧＡＧＴＧＧＧＣＴＴＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＴＣＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＡＡＡＣＴＴＣＡＧＴＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＡＧＧＣＴＧＧＴＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＴＡＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＧＣＴＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＣＣＴＧＡＴＣＣＴＣＧＴＴＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＧＧＣＡＴＣＴＡＧＣＧＡＴＴＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＧＧＧＣＡ ＡＡＧＡＣＧＧＣＡＡＧＣＡＡＴＡＣＧＡＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＴＧＧＴＧＴＣＧＡＴＴＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧ ＡＴＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＴＣＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＧＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＧＡＧＴＴＣＡＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＣＧＣＣＡＣＡＴＣＴＧＴＧＡＣＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＡＡＧＧＴＡＴＧＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＡＡＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＴＴＣＣＡＣＣＧＧＴＧＡＴＴＴＣＧＡＣＴＴＧＣＡＣＣＴＧＣＴＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＧＡＧＧＧＣＡＣＧＡＣＣＡＴＣＣＴＴＣＴＴＡＡＣＴＧＣＡＣＴＧＧＡＣＡＧＧＴＣＡＡＧＧ ＧＣＣＧＴＡＡＧＣＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＡＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＣＧＡＣＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＡＡＧＴＣＡＣＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＴＣＡＡＣＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＴＴＴＧＡＡＧＣＧＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＣＣＴＧＴＴＧＧＡＡＴＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＡＧＣ ＡＣ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７． ＭｕｓＨ９３ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８． マウスＣＡＲ主鎖（マウスＣＤ８αヒンジ－マウスＣＤ８α膜貫通ドメイン－マウス４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）の細胞質ドメイン－マウスＣＤ３ζ細胞質）
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９． マウスＩＬ１２ｐ４０
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０． マウスＣＣＬ－１９
ＭＡＰＲＶＴＰＬＬＡＦＳＬＬＶＬＷＴＦＰＡＰＴＬＧＧＡＮＤＡＥＤＣＣＬＳＶＴＱＲＰＩＰＧＮＩＶＫＡＦＲＹＬＬＮＥＤＧＣＲＶＰＡＶＶＦＴＴＬＲＧＹＱＬＣＡＰＰＤＱＰＷＶＤＲＩＩＲＲＬＫＫＳＳＡＫＮＫＧＮＳＴＲＲＳＰＶＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１． マウスＨ９３Ｍ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２． マウスＨ９３Ｍ ＣＡＲ核酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３． マウスＨ９３ＩＬ１２ｐ４０ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４． マウスＨ９３ＣＣＬ１９ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５． ｍｕｓ２６１ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６． マウスＩＬ７－Ｆ２Ａ－マウスＣＣＬ１９アミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７． ＭＢ１２アミノ酸（ＩＬ１２ｐ４０－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ８α細胞内細胞質ドメイン）
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８． Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９． Ｈ９３Ｍ－ＭＢ１２ ＣＡＲ核酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０． 抗クローディン１８．２ ＶＨＨドメイン
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１． ２６１ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２． ２６１Ｍ ＣＡＲアミノ酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３． ２６１Ｍ ＣＡＲ核酸
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４． ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲアミノ酸
ＭＡＳＰＬＴＲＦＬＳＬＮＬＬＬＬＧＥＳＩＩＬＧＳＧＥＡＫＰＱＡＱＶＱＬＥＥＳＧＧＧＳＶＱＶＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＲＳＳＶＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＲＶＡＶＩＧＲＤＧＳＴＴＹＩＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＴＬＳＬＱＭＤＮＬＫＰＥＤＴＡＭＹＳＣＡＡＧＬＧＹＷＡＣＥＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＴＳＴＴＴＫＰＶＬＲＴＰＳＰＶＨＰＴＧＴＳＱＰＱＲＰＥＤＣＲＰＲＧＳＶＫＧＴＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＩＣＶＡＬＬＬＳＬＩＩＴＬＩＣＳＶＬＫＷＩＲＫＫＦＰＨＩＦＫＱＰＦＫＫＴＴＧＡＡＱＥＥＤＡＣＳＣＲＣＰＱＥＥＥＧＧＧＧＧＹＥＬＲＡＫＦＳＲＳＡＥＴＡＡＮＬＱＤＰＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＥＫＫＲＡＲＤＰＥＭＧＧＫＱＱＲＲＲＮＰＱＥＧＶＹＮＡＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＴＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＴＬＡＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＣＰＱＫＬＴＩＳＷＦＡＩＶＬＬＶＳＰＬＭＡＭＷＥＬＥＫＤＶＹＶＶＥＶＤＷＴＰＤＡＰＧＥＴＶＮＬＴＣＤＴＰＥＥＤＤＩＴＷＴＳＤＱＲＨＧＶＩＧＳＧＫＴＬＴＩＴＶＫＥＦＬＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＴＬＳＨＳＨＬＬＬＨＫＫＥＮＧＩＷＳＴＥＩＬＫＮＦＫＮＫＴＦＬＫＣＥＡＰＮＹＳＧＲＦＴＣＳＷＬＶＱＲＮＭＤＬＫＦＮＩＫＳＳＳＳＳＰＤＳＲＡＶＴＣＧＭＡＳＬＳＡＥＫＶＴＬＤＱＲＤＹＥＫＹＳＶＳＣＱＥＤＶＴＣＰＴＡＥＥＴＬＰＩＥＬＡＬＥＡＲＱＱＮＫＹＥＮＹＳＴＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＭＫＰＬＫＮＳＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＳＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＫＦＦＶＲＩＱＲＫＫＥＫＭＫＥＴＥＥＧＣＮＱＫＧＡＦＬＶＥＫＴＳＴＥＶＱＣＫＧＧＮＶＣＶＱＡＱＤＲＹＹＮＳＳＣＳＫＷＡＣＶＰＣＲＶＲＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＰＲＶＴＰＬＬＡＦＳＬＬＶＬＷＴＦＰＡＰＴＬＧＧＡＮＤＡＥＤＣＣＬＳＶＴＱＲＰＩＰＧＮＩＶＫＡＦＲＹＬＬＮＥＤＧＣＲＶＰＡＶＶＦＴＴＬＲＧＹＱＬＣＡＰＰＤＱＰＷＶＤＲＩＩＲＲＬＫＫＳＳＡＫＮＫＧＮＳＴＲＲＳＰＶＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５． ｍｕｓ２６１Ｍ ＣＡＲ核酸
ＡＴＧＧＣＣＴＣＡＣＣＧＴＴＧＡＣＣＣＧＣＴＴＴＣＴＧＴＣＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＴＧＡＧＴＣＧＡＴＴＡＴＣＣＴＧＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＡＧＣＴＡＡＧＣＣＡＣＡＧＧＣＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＴＧＧＧＡＧＧＣＴＣＣＣＴＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＧＡＴＣＣＡＧＣＧＴＧＴＧＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＡＧＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＣＡＴＡＴＡＴＣＧＡＴＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＴＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＧＴ ＣＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＧＡＣＡＡＴＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＧＣＣＧ ＣＣＧＧＣＣＴＧＧＧＡＴＡＣＴＧＧＧＣＴＴＧＣＧＡＡＴＡＣＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＴＣＡＧＧ ＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＴＡＣＴＡＧＴＡＣＴＡＣＴＡＣＣＡＡＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＧＡＡＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣ ＴＧＴＧＣＡＣＣＣＴＡＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＴＣＡＧＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＴＧＴＣＧＧＣＣＣＣＧ ＴＧＧＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＧＧＡＣＣＧＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＴＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＡＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＴＧＡＴＣＡＴＣＡＣＴＣＴＣＡＴＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＴＧＧＡＴＣＡＧＧＡＡＡＡＡＡＴＴＣＣＣＣＣＡＣＡＴＡＴＴＣＡＡＧＣＡＡＣＣＡＴＴＴ ＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＣＴＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＧＴＣＣＡＣＡＧＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＡＧＡＧＣＡＡＡＡＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＴＧＣＡＧＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＣＣＣＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＣＡＡＴＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＡＴＧＡＣＧＴＣＴＴＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＧＣＴＣＧＧＧ ＡＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＡＡＡＣＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＧＧＣＧＴＡ ＴＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＣＡＡＡＡＧＧＣＧＡＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧ ＣＡＣＴＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＴＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＧＡＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＡＡＡＣＴＴＣＡＧＴＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＡＧＧＣＴＧＧＴＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＴＡＴＧＴＧＴＣＣＴＣＡＧＡＡＧＣＴＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＧＴＴＴＧＣＣＡＴＣＧＴＴＴＴＧＣＴＧＧＴＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＡＴＧＧＣＣＡＴＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＡＡＡＧＡＣＧＴＴＴＡＴＧＴＴＧＴＡＧＡＧＧＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＣＣＣＧＡＴＧＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＣＧＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＣＡＴＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＴＧＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＴＧＣＴＧＧＣＣＡＧＴＡＣＡＣＣＴＧＣＣＡＣＡＡＡＧＧＡＧＧＣＧＡＧＡＣＴＣＴＧＡＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＡＴＧＧＡＡＴＴＴＧＧＴＣＣＡＣＴＧＡＡＡＴＴＴＴＡＡＡＡＡＡＴＴＴＣＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡ ＣＴＴＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＡＴＴＡＣＴＣＣＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＣＧＴＧＣＴＣＡＴＧＧＣＴＧＧＴＧＣＡＡＡＧＡＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＡＧＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＴＣＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＣＧＧＧＣＡＧＴＧＡＣＡＴＧＴＧＧＡＡＴＧＧＣＧＴＣＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣ ＡＣＴＧＧＡＣＣＡＡＡＧＧＧＡＣＴＡＴＧＡＧＡＡＧＴＡＴＴＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＣＡＣ ＣＴＧＣＣＣＡＡＣＴＧＣＣＧＡＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＡＡＣＴＧＧＣＧＴＴＧＧＡＡＧＣＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＡＡＴＡＴＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＡ ＡＣＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＧＣＣＴＴＴＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＣＡＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＴＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＣＣＡＴＴＣＣＴＡＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣ ＡＡＧＴＴＣＴＴＴＧＴＴＣＧＡＡＴＣＣＡＧＣＧＣＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＧＡ ＧＧＧＧＴＧＴＡＡＣＣＡＧＡＡＡＧＧＴＧＣＧＴＴＣＣＴＣＧＴＡＧＡＧＡＡＧＡＣＡＴＣＴＡＣＣＧＡＡＧＴＣＣＡ ＡＴＧＣＡＡＡＧＧＣＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡＧＧＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＡＡＴＴＣＣＴＣＡ ＴＧＣＡＧＣＡＡＧＴＧＧＧＣＡＴＧＴＧＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＡＧＴＣＴＧＣＴＡＡＣＡＴＧＣＧＧＴＧＡＣＧＴＣＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＴＧＧＣＴ ＣＣＴＡＧＡＧＴＧＡＣＡＣＣＴＴＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＴＣＴＣＴＴＣＴＡＧＴＧＴＴＧＴＧＧＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＣＡＣＣＣＴＧＧＧＴＧＧＡＧＣＧＡＡＴＧＡＴＧＣＡＧＡＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＣＡＣＣＣＡＡＡＧＧＣＣＣＡＴＡＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＴＴＧＴＧＡＡＧＧＣＣＴＴＣＣＧＣＴＡＴＣＴＴＣＴＣＡＡＴＧＡＡＧＡＴＧＧＡＴＧＴＣＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＧＴＣＴＴＣＡＣＴＡＣＴＴＴＡＣＧＣＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＴＧＴＧＴＧ ＣＴＣＣＴＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＣＣＴＧＧＧＴＧＧＡＣＣＧＴＡＴＣＡＴＣＣＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＡＡＣＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＣＣＡＧＴＴＴＣＣＴＡＡ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６． グリシン－セリンポリマーリンカー
（ＧＳＧＧＳ）ｎ［ｎは少なくとも１の整数である］
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７． グリシン－セリンポリマーリンカー
（ＧＧＧＳ）ｎ［ｎは少なくとも１の整数である］
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８． グリシン－セリンポリマーリンカー
（ＧＧＧＧＳ）ｎ［ｎは少なくとも１の整数である］

Claims (54)

  1. 免疫エフェクター細胞であって、
    （ｉ）外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、
    （ｉｉ）外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド、及び
    （ｉｉｉ）機能的外因性受容体であって、
    （ａ）細胞外抗原結合ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと
    を含む、前記機能的外因性受容体
    を発現し、
    ここで、前記ＣＣＲ７のリガンドがＣＣＬ－１９であるか、又は、前記ＣＣＲ７のリガンドがＣＣＬ－２１である、
    前記免疫エフェクター細胞。
  2. 前記ｐ４０が、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である、請求項１に記載の免疫エフェクター細胞。
  3. 前記ｐ４０が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の免疫エフェクター細胞。
  4. 前記ｐ４０が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の免疫エフェクター細胞。
  5. 前記ＣＣＬ－１９が、ヒトＣＣＬ－１９又はその断片もしくは変異体であり、且つ／又は、ＣＣＬ－２１が、ヒトＣＣＬ－２１又はその断片もしくは変異体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  6. 前記ＣＣＬ－１９がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むか、又は、前記ＣＣＬ－１９が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の免疫エフェクター細胞。
  7. 前記ＣＣＬ－２１がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むか、又は、前記ＣＣＬ－２１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の免疫エフェクター細胞。
  8. 前記機能的外因性受容体が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）、又はＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  9. 前記機能的外因性受容体がＣＡＲである、請求項８に記載の免疫エフェクター細胞。
  10. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群から選択される分子に由来する、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  11. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α又はＣＤ２８からのものである、請求項１０に記載の免疫エフェクター細胞。
  12. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  13. 前記一次細胞内シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζからのものである、請求項１２に記載の免疫エフェクター細胞。
  14. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  15. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する、請求項１４に記載の免疫エフェクター細胞。
  16. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８の細胞質ドメイン及び／又はＣＤ１３７の細胞質ドメインを含む、請求項１５に記載の免疫エフェクター細胞。
  17. 前記細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  18. 前記ヒンジドメインがＣＤ８αからのものである、請求項１７に記載の免疫エフェクター細胞。
  19. 前記ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  20. 前記シグナルペプチドがＣＤ８αからのものである、請求項１９に記載の免疫エフェクター細胞。
  21. Ｔ細胞である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞。
  22. ポリペプチドであって、
    （ｉ）外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、
    （ｉｉ）外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド、及び
    （ｉｉｉ）機能的外因性受容体であって、
    （ａ）細胞外抗原結合ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと
    を含む、前記機能的外因性受容体
    を含み、
    ここで、前記ＣＣＲ７のリガンドがＣＣＬ－１９であるか、又は、前記ＣＣＲ７のリガンドがＣＣＬ－２１である、
    前記ポリペプチド。
  23. 前記ｐ４０が、ヒトｐ４０又はその断片もしくは変異体である、請求項２２に記載のポリペプチド。
  24. 前記ｐ４０が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
  25. 前記ｐ４０が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
  26. 前記ＣＣＬ－１９が、ヒトＣＣＬ－１９又はその断片もしくは変異体であり、且つ／又は、前記ＣＣＬ－２１が、ヒトＣＣＬ－２１又はその断片もしくは変異体である、請求項２２～２５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  27. 前記ＣＣＬ－１９がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むか、又は、前記ＣＣＬ－１９が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のポリペプチド。
  28. 前記ＣＣＬ－２１がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むか、又は、前記ＣＣＬ－２１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のポリペプチド。
  29. 前記機能的外因性受容体が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）、又はＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体である、請求項２２～２８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  30. 前記機能的外因性受容体がＣＡＲである、請求項２９に記載のポリペプチド。
  31. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群から選択される分子に由来する、請求項２２～３０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  32. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α又はＣＤ２８からのものである、請求項３１に記載のポリペプチド。
  33. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項２２～３２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  34. 前記一次細胞内シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζからのものである、請求項３３に記載のポリペプチド。
  35. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項２２～３４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  36. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する、請求項３５に記載のポリペプチド。
  37. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８の細胞質ドメイン及び／又はＣＤ１３７の細胞質ドメインを含む、請求項３６に記載のポリペプチド。
  38. 前記細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項２２～３７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  39. 前記ヒンジドメインがＣＤ８αからのものである、請求項３８に記載のポリペプチド。
  40. 前記ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  41. 前記シグナルペプチドがＣＤ８αからのものである、請求項４０に記載のポリペプチド。
  42. 前記ｐ４０、前記ＣＣＬ－１９、及び前記機能的外因性受容体が、ペプチドリンカーを介して互いに連結されているか、又は、前記ｐ４０、前記ＣＣＬ－２１、及び前記機能的外因性受容体が、ペプチドリンカーを介して互いに連結されている、請求項２２～４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  43. 前記ペプチドリンカーが、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びそれらの変異体からなる群から任意に選択される２Ａ自己切断ペプチドである、請求項４２に記載のポリペプチド。
  44. 前記２Ａ自己切断ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＰ２Ａ断片である、請求項４３に記載のポリペプチド。
  45. 前記２Ａ自己切断ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＴ２Ａ断片である、請求項４３に記載のポリペプチド。
  46. 前記ｐ４０と前記ＣＣＬ－１９が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含む１つのドメイン内に存在するか、又は、
    前記ｐ４０と前記ＣＣＬ－１９が、１つのドメイン内に存在し、前記ドメインが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    請求項２２～４５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  47. 前記ｐ４０と前記ＣＣＬ－２１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含む１つのドメイン内に存在するか、又は、
    前記ｐ４０と前記ＣＣＬ－２１が、１つのドメイン内に存在し、前記ドメインが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列との少なくとも７５％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    請求項２２～４５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
  48. 請求項２２～４７のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含む、単離された核酸。
  49. 単離された核酸であって、
    （ｉ）第１の領域であって、
    外因的に導入された、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット
    をコードする、前記第１の領域、
    （ｉｉ）第２の領域であって、
    外因的に導入された、ＣＣＲ７のリガンド
    をコードする、前記第２の領域、及び
    （ｉｉｉ）機能的外因性受容体をコードする第３の領域であって、
    前記機能的外因性受容体が、
    （ａ）細胞外抗原結合ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインと
    を含む、前記第３の領域
    を含み、
    ここで、前記ＣＣＲ７のリガンドがＣＣＬ－１９であるか、又は、前記ＣＣＲ７のリガンドがＣＣＬ－２１である、
    前記単離された核酸。
  50. 請求項４９に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
  51. 免疫エフェクター細胞を作製する方法であって、
    免疫細胞に、
    （ｉ）請求項４８もしくは請求項４９に記載の核酸、又は請求項５０に記載のベクター、又は、
    （ｉｉ）ＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、ＣＣＬ－１９、及び機能的外因性受容体のうちの一つもしくは二つをそれぞれがコードする二つもしくはそれ以上の核酸を含む組成物、又はＩＬ－１２のｐ４０サブユニット、ＣＣＬ－２１、及び機能的外因性受容体のうちの一つもしくは二つをそれぞれがコードする二つもしくはそれ以上の核酸を含む組成物
    を導入することを含む、前記方法。
  52. 請求項５１に記載の方法によって産生された免疫エフェクター細胞。
  53. 請求項１～２１及び５２のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞、請求項２２～４７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項４８もしくは４９に記載の核酸、又は請求項５０に記載のベクターと、薬学的に許容されるキャリアとを含む、医薬組成物。
  54. 対象の疾患又は障害を治療する方法であって、前記対象に有効量の請求項５３に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
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