JP2024506700A - 診断上および治療上の使用のためのｃｘｃｒ４－リガンドならびにその前駆体 - Google Patents

診断上および治療上の使用のためのｃｘｃｒ４－リガンドならびにその前駆体 Download PDF

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Abstract

本発明は、式（Ｉ）：TIFF2024506700000214.tif26149［式中、ａは０または１であり、ｂは０または１であり、ｃは０または１であり、かつｄは０または１であり、但し、ｃおよびｄのうち少なくとも１つは１であり、ｅは１～４の整数であり、ＲＣＰは、この化合物をＣＸＣＲ４受容体に結合させる結合モチーフであり、ＲＬ１はＨまたはアルキルであり、ＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２から選択される少なくとも１つの基で置換されている置換アルキルであり、ＸはＮＨおよびＯから選択され、ＲＬ３は、－ＣＨ２－ＮＨ２または－ＣＨ２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）であり、ＲＬ４は－ＮＨ２であり、Ｘ１はカップリング基であり、ＲＳは二価のスペーサー基であり、およびＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する部分を含む官能基である］のＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物またはその塩を提供する。本発明の化合物は、ＣＸＣＲ４受容体を遮断することによって処置もしくは予防されることが可能な疾患もしくは障害、またはＣＸＣＲ４受容体の発現の増加もしくは異常に関連する疾患もしくは障害の、処置、予防、および／または診断に使用するのに適している。

Description

本発明は、７回膜貫通型Ｇタンパク質共役ケモカイン受容体サブタイプ（ＣＸＣＲ４）に高親和性で結合することができ、したがってＣＸＣＲ４リガンドと考えられる化合物に関する。それは、好ましくはアゴニストとして作用するか、またはアンタゴニスト、逆アゴニストもしくは部分アゴニストとしても作用することができる。本化合物は、診断上および治療上の適用において使用するのに適している。
ストロマ細胞由来因子１（ＳＤＦ－１）（以下、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）と呼ぶ）がＣＸＣＲ４に結合すると（１）、下流のプロテインキナーゼＢ（ＡＫＴ）／マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル経路を活性化し、遺伝子発現の変化、アクチン重合、細胞骨格の再構成および細胞遊走をもたらす。ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４軸の生理機能は、胚形成、免疫応答、造血、脳発生および血管新生を含む（２～６）。生理的プロセスへのＣＸＣＲ４の基本的な関与に加えて、ＣＸＣＲ４発現の上昇は、様々な悪性腫瘍に関連する。ＣＸＣＲ４は、補助受容体としてＨＩＶ－１のＴ細胞への侵入を媒介し、この点においてＣＸＣＲ４は初めて同定された（３）。ＣＸＣＲ４は、慢性白血病患者におけるＢ細胞輸送および組織局在（７）、ならびに様々な乳がんモデルにおける器官特異的転移の制御（８）に関与する。したがって、ＣＸＣＲ４の過剰発現は、造血器悪性腫瘍、脳新生物、消化管がんおよび他のがん型を含む、２０を超えるヒト腫瘍型において知られている（２、８～１０）。ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４軸は、腫瘍細胞とストロマ細胞との間の重要なコミュニケーションブリッジとして機能し、許容状態の微小環境を作ることを示すエビデンスが増えている（１１）。したがって、ＣＸＣＲ４の異常な発現は、様々ながん型の増殖、遊走および浸潤を強力に促進するため、サイトカインＣＸＣＬ１２およびその受容体ＣＸＣＲ４は、治療戦略にとって有望で実行可能な標的となる（１２）。
ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４軸を標的とするペプチド性および非ペプチド性のＣＸＣＲ４アンタゴニストが、医薬の用途に使用できる可能性があるため、いくつか開発された。最も定評のある例は、ＦＤＡによって非ホジキンリンパ腫および多発性骨髄腫の処置用に認可されたビシクラムＡＭＤ３１００（Ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ（登録商標）、テトラザシクロテトラデカ－１－イルメチル）フェニル］メチル｝－１，４，８，１１－テトラザシクロ－テトラデカン）である。さらなるペプチド性ＣＸＣＲ４アンタゴニスト、例えば、１つまたは２つの環化部位を含有する側鎖環化ペプチドであるＴ１４０およびその誘導体が開発された（１３～１５）。細胞傷害性がより低く、生物学的に安定したＴ１４０の誘導体は、ＴＮ１４００３である（１６）。４－フルオロベンゾイル基の導入は、Ｔ１４０系ＣＸＣＲ４アンタゴニストであるＴＦ１４０１６に新規のファルマコフォアを構成し、サブナノモル濃度の結合親和性をもたらした（１６）。このペプチドＣＸＣＲ４アンタゴニストは、さらに、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＸＣＲ４発現の１８Ｆ系または６８Ｇａ系の陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに使用された（１７～１９）。Ｔ１４０系ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、がんおよび慢性関節リウマチの予防および／または治療に既に使用されている（ＵＳ８４１００５９Ｂ２、ＵＳ８７６５６８３Ｂ２）。
強力なＣＸＣＲ４アンタゴニストであるＬＹ２５１０９２４（シクロ［Ｐｈｅ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ｉＰｒ）－Ｄ－Ａｒｇ－２－Ｎａｌ－Ｇｌｙ－Ｄ－Ｇｌｕ］－Ｌｙｓ（ｉＰｒ）－ＮＨ２）は、固形腫瘍モデルおよび乳がん転移モデルにおいて良好な抗腫瘍活性を示すことが立証され、現在、第ＩＩ相臨床試験中である（ＮＣＴ０１３９１１３０およびＮＣＴ１４３９５６８）（２０）。
さらに、ＣＸＣＬ１２のＮ末端配列に基づく３つの環状ペンタペプチド（ペプチドＲ、ＩおよびＳ）は、腎がん細胞の皮下増殖を有意に阻害する。腎がん細胞は、肺転移および原発腫瘍増殖も引き起こす（２１）。加えて、ラクタム環化ヘプタペプチドは、がん、関節リウマチ、肺線維症、およびＨＩＶ感染症の処置において有用な、強力なＣＸＣＲ４アンタゴニストであることが報告された（ＷＯ２００８／１５０６８９Ａ１）。
Ｔ１４０から誘導された、シクロ（Ｄ－Ｔｙｒ１－Ａｒｇ２－Ａｒｇ３－Ｎａｌ４－Ｇｌｙ５）に基づく環状ペンタペプチド（以下、Ｆｃ－１３１と呼ぶ）は、がんの治療および抗炎症に使用される（２２）。アラニンスキャニング、Ｎ－メチルアミノ酸スキャニング、アミノ酸残基の最適化およびレトロインベルソ配列のペプチドのデザインを含むＳＡＲ研究はすべて、Ｆｃ－１３１と比較して、結合親和性または抗ＨＩＶ活性を改善することができず（２３～２５）、Ｆｃ－１３１の高度に最適化された結合足場を立証した。しかしながら、アミジンタイプのジペプチドの等価物の導入は、ＣＸＣＲ４に対処する環状ペンタペプチドの新規なリード構造をもたらした（ＷＯ２０１２／１１８１２４Ａ１）。加えて、Ｆｃ－１３１のペプチド結合のＮ－メチル化は、その活性に著しく影響を及ぼし、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト活性の著しい増強を示す、環状ペンタペプチド系ＣＸＣＲ４アンタゴニストであるＦｃ－１２２をもたらした（２６～２８）。
ＣＸＣＲ４に対する分子イメージングプローブの開発の範囲の中で、結合親和性を増強するためにＮ－メチル化手法が使用され、一方、Ｆｃ－１３１のすべての側鎖がその交換の実行可能性について試験された。Ａｒｇ２をＤ－オルニチンで置換し、続いてＮ末端をメチル化すると、ＣＰＣＲ４（シクロ（Ｄ－Ｔｙｒ１－Ｄ－［ＮＭｅ］Ｏｒｎ２－Ａｒｇ３－Ｎａｌ４－Ｇｌｙ５））が得られた。これは、ＣＸＣＲ４に対する良好な結合親和性を示す。このリード構造は、さらなる修飾のためのアンカーポイントとして役に立った（２９）（ＷＯ２００７／０９６６６２）。ＣＰＣＲ４の二量体の誘導体が記載されたが、ｉｎ ｖｉｖｏ診断への適用は、肝臓内のＣＸＣＲ４リガンドの蓄積が上昇したことにより、阻まれた（ＷＯ２００９／０２７７０６）（２９、３０）。
最近、最小主義の手法が使用され、その中で、テクネチウムキレーターであるヒドラジノ－ニコチン酸がＤ－Ｏｒｎ２側鎖に直接結合され、ＣＸＣＲ４ ＳＰＥＣＴイメージング剤がもたらされた（３１）。この化合物は、現在、ヒトにおける概念研究の最初の実証において調査中である（３２）。
それでもなお、さらなる構造修飾、例えば、シクロ（Ｄ－Ｔｙｒ１－Ｄ－［ＮＭｅ］Ｏｒｎ２－Ａｒｇ３－Ｎａｌ４－Ｇｌｙ５）の［ＮＭｅ］Ｏｒｎ２の側鎖に結合した芳香族スペーサーの導入は、標識部分としての１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）の導入（ＷＯ２０１１／１３１７３５）を、医薬の用途のために（３３～３５）容易にした。
大抵の場合、検出可能な標識に対して追加の構造変化を行うと（３６）、結合親和性の重大な損失が起こる。シクロ（Ｄ－Ｔｙｒ１－Ｄ－［ＮＭｅ］（ＤＯＴＡ）－Ｏｒｎ２Ａｒｇ３－Ｎａｌ４－Ｇｌｙ５）（ペンチキサフォル（ｐｅｎｔｉｘａｆｏｒ））の環状ペンタペプチド足場における追加の修飾（（３－ヨード）チロシンの導入）が記載され、それは、ｈＣＸＣＲ４に対する結合親和性を著しく増加させた。したがって、得られた１７７Ｌｕ－ペンチキサテル（ｐｅｎｔｉｘａｔｈｅｒ）および９０Ｙ－ペンチキサテルは、ＣＸＣＲ４関連の悪性腫瘍の治療手法に利用された（ＷＯ２０１５／１８５１６２）（３７）。
これらの臨床的に適用されたペプチドの成功を基盤に、ペプチドスコープの親和性および多用途性を増強するために、さらなる最適化が企てられた。短い芳香族スペーサーをテーラーメイドのペプチド性リンカーユニットに置換すると、最終的に、新たに誘導されたペプチド足場の半アゴニスト性（ｓｅｍｉ－ａｇｏｎｉｓｔｉｃ）の性質のため、親和性が増強し、内在化率が著しく増加したＣＸＣＲ４結合モチーフをもたらした（３８）。これらの修飾により、得られたペプチドの親和性を大きく損なうことのない、１８Ｆ標識ユニットとしてのｍａｓ３系テクネチウムキレーターまたはＡｍＢＦ３などの種々の機能様式の導入が可能になった（ＷＯ２０２０／０５３２５５）。
ＣＸＣＲ４リガンドの診断上および治療上の可能性は、多くの様々な場合において、例えば、ＨＩＶ感染症およびがんの処置のため、または患者におけるＣＸＣＲ４発現の可視化のために示されてきた。特に、環状ペンタペプチドは、ＣＸＣＲ４の結合空洞における化合物の完全な相互作用および小さな修飾、例えば、ＣＸＣＲ４リガンドの薬物動態に影響を及ぼすための標識部分または標識残基の導入のために最適化され、その結果、かなりの高親和性の損失があり（３６）、したがって、所望の各適用のために構造的に最適化されなければならない。結果として、新規なＣＸＣＲ４を標的とする化合物のデザインおよび開発は、入念な構造活性相関の研究（ＳＡＲ研究）を必要とする。
この理由のため、ヒトＣＸＣＲ４受容体に対する高親和性を確保し、同時に診断上または治療上の有用性を有する多種多様な官能基の結合を可能にする、普遍的に適用できるリガンドデザインが必要である。本発明は、そのような新規なリガンド化合物ならびに医学的および科学的な適用におけるその使用を提供する。本発明の化合物は、ヒトＣＸＣＲ４受容体を高親和性で、およびマウス受容体を中親和性で結合することができ、したがって、ＣＸＣＲ４リガンドとして適している。これらのリガンドは、アゴニスト、逆アゴニスト、部分アゴニストまたはアンタゴニストとして機能することができる。本発明によって提供されるリガンド化合物中のリンカーの構造は、驚くべきことに、種々の官能部分の結合に対する本化合物の高い適応性をもたらし、同時にＣＸＣＲ４の親和性を保存または増強さえする。さらに、親和性がより高く、内在化を増強するような有利なｉｎ ｖｉｔｒｏ特性に基づき、より高くより一貫した腫瘍の取り込みに到達することが多い。したがって、本発明の化合物は、前臨床および臨床のイメージングなどの医学的適用、ならびに内部放射線治療などの治療上の適用に特に適している。
上記の背景を前に、本発明は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体タイプ４リガンド化合物、または短く言うとＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物である、式（Ｉ）：
Figure 2024506700000002
［式中、
ａは０または１、好ましくは０であり、
ｂは０または１であり、
ｃは０または１であり、かつ
ｄは０または１であり、但し、ｃおよびｄのうち少なくとも１つは１であり、
ｅは１～４、好ましくは２～４の整数であり、
ＲＣＰは式（ＩＩ）：
Figure 2024506700000003
（ここで、式（ＩＩ）において、
ＲＢ１はＨまたはＩ、好ましくはＨであり、
ＲＢ２はアルカンジイル鎖であり、
破線は、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す）
のシクロペプチド基であり、
ＲＬ１はＨまたはアルキルであり、
ＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２から選択される少なくとも１つの基で置換されている置換アルキルであり、ＸはＮＨおよびＯから選択され、
ＲＬ３は、－ＣＨ２－ＮＨ２または－ＣＨ２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）であり、
ＲＬ４は－ＮＨ２であり、
Ｘ１はカップリング基であり、
ＲＳは二価のスペーサー基であり、および
ＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する部分を含む官能基である］
の化合物またはその塩を提供する。
図１は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－６注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図２は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－９注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図３は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１１注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図４は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１２注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図５は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１３注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図６は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１４注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図７は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１４注射後２時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図８は、多発性骨髄腫に罹患している女性患者のＳＰＥＣＴおよびＰＥＴイメージングから取得した最大値投影（ＭＩＰ）画像を示す。Ａ）［１８Ｆ］ＦＤＧのＰＥＴ ＭＩＰ（注射後１時間、１８９ＭＢｑの［１８Ｆ］ＦＤＧ）、Ｂ）［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４のＳＰＥＣＴ ＭＩＰ（注射後３時間、６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４）。直線矢印は腫瘍病変を示し、点線矢印は、心臓における［１８Ｆ］ＦＤＧの生理学的取り込み、および脾臓における［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の生理学的取り込みを示す。 図９Ａ）は、多発性骨髄腫に罹患している患者における６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の注射後３時間での軸断面のＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を示し、図９Ｂ）は、同じ患者における１８９ＭＢｑの［１８Ｆ］ＦＤＧの注射後１時間での軸断面のＰＥＴ／ＣＴ画像を示し、直線矢印は膀胱を示し、破線矢印は溶骨性病変を示す。 図１０は、同じ患者における［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の注射後５分～２１時間の間の生体内分布を示す。図１０Ａ）は、多発性骨髄腫に罹患している女性患者における、６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の注射後５分、６０分、１２０分、５時間および２１時間でのＳＰＥＣＴイメージングから取得したＭＩＰ画像を示し、図１０Ｂ）は、同じ患者の選択した器官および組織について計算した特異的線量［μＧｙ／ＭＢｑ］を示す。 図１１は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図１２は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図１３は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図１４は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図１５は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４注射後６時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。 図１６は、Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスにおける、［１８Ｆ、ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－０７注射後１時間の生体内分布プロファイルを示す。異なる量の放射性リガンド、すなわち、３６ｐｍｏｌ、１，０００ｐｍｏｌおよび２，０００ｐｍｏｌを適用した。データは％ｉＤ／ｇ値で表され、３６ｐｍｏｌでの実験については動物５匹の平均±ＳＤである。他の両方の実験には動物各１匹を使用した。 図１７は、Ｒａｊｉ細胞（左側）およびＵ２９３２細胞（右側）を使用しての細胞生存率のフローサイトメトリー分析の結果を示す。細胞を、０、２４、４８、７２および９６時間、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭのＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともにインキュベートし、その後、ヨウ化プロピジウムで染色し、フローサイトメトリー分析をした。細胞の全数に対する生存細胞数が、細胞生存率である。 図１８は、Ｒａｊｉ細胞およびＵ２９３２細胞を使用した細胞生存率のフローサイトメトリー分析の結果を示す。細胞を、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭのＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともに９６時間インキュベートし、その後、ヨウ化プロピジウムで染色し、死滅細胞のフローサイトメトリー分析をした。 図１９は、Ｕ２９３２細胞を使用しての細胞周期プロファイリング実験の結果を示す。細胞を、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭのＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともに７２時間インキュベートし、固定し、透過処理し、ヨウ化プロピジウムで染色した。Ｇ０／Ｇ１期、Ｓ期またはＧ２／Ｍ期の細胞の割合を決定した。 図２０は、Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスにおける、［１７７Ｌｕ］ＣＸＣＲ４－ＯＩ－０３注射後１時間の生体内分布プロファイルを示す。異なる量の放射性リガンド、すなわち５９ｐｍｏｌおよび１，０００ｐｍｏｌを適用した。データは％ｉＤ／ｇ値として表され、５９ｐｍｏｌでの実験では動物５匹の平均±ＳＤであり、他方の実験では動物１匹を使用した。
本発明のＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物において、結合モチーフＲＣＰおよび官能基ＲＡは、次の構造のリンカーによって結合されている。
Figure 2024506700000004
式（Ｉ）の化合物の一部を形成するこのリンカーは、ＲＬ３、ＲＬ４として、またはＲＬ３およびＲＬ４として提供される、サイズの小さい置換基、および通常、生理的条件下で正電荷を帯びる官能基の存在を特徴とする。本発明に関連して、このリンカー構造は、有益な性質の中でも特に、官能基ＲＡの悪影響がなく、またはほとんどなく、ＣＸＣＲ４の高親和性が本発明の化合物に保持されることを可能にすることが判明した。したがって、本発明による化合物中に含有される結合モチーフとリンカーとの組合せに頼れば、結合モチーフによってもたらされる親和性の著しい損失に関する懸念はなく、多種多様な官能基を有するＣＸＣＲ４受容体リガンドが提供され得る。
さらに関連する態様によれば、本発明は、式（Ｉ）のＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物またはその塩を含む、治療上または診断上の組成物を提供する。
上で述べたように、式（Ｉ）の化合物の塩、典型的には薬学的に許容される塩は、本発明に包含される。したがって、相反する記載のない限り、本明細書における本発明による化合物への言及はいずれも、式（Ｉ）の化合物および本明細書に開示されるこの式の好ましい実施形態、ならびにその塩の両方を包含する。さらに、検討中の化合物の特定の立体化学が特定の文脈に示されていない限り、式（Ｉ）の化合物の任意のラセミ体、エナンチオマー、またはジアステレオマーが包含される。
ＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物としての式（Ｉ）の化合物への言及によって説明されるように、本化合物は、ＣＸＣＲ４受容体に結合するリガンド化合物として作用することができる。その分、式（Ｉ）の化合物およびその塩は、本明細書で式（Ｉ）のＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物の「結合モチーフ」とも呼ばれ得るシクロペプチド基ＲＣＰを含む。なぜなら、シクロペプチド基ＲＣＰは、本発明による化合物またはその塩とＣＸＣＲ４受容体との間の結合相互作用を確保し、それにより、ＣＸＣＲ４受容体に対する化合物の親和性アンカーとして役立つからである。
ＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物の結合モチーフは、好ましくは、ＣＸＣＲ４受容体に特異的に結合することができる。これに関連して、特異的に結合するとは、好ましくは、ＣＸＣＲ４受容体リガンド化合物の結合モチーフは、ＣＸＣＲ４受容体以外の他のタンパク質に結合しないか、または実質的に結合しないこと、特に、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーの他のメンバーに結合しないか、または実質的に結合しないことを意味する。「実質的に結合しない」という用語は、好ましくは、例えばＩＣ５０値によって決定される結合モチーフのＣＸＣＲ４への結合親和性が、他のタンパク質、特に、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーの他のメンバーへの結合親和性より少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、最も好ましくは少なくとも１００００倍強いことを意味する。
式（Ｉ）中の結合モチーフとしてのシクロペプチド基ＲＣＰは、式（ＩＩ）：
Figure 2024506700000005
［式中、
ＲＢ１はＨまたはＩ、好ましくはＨであり、および
ＲＢ２はアルカンジイル鎖である］
の基である。
熟練した読者には理解されるであろうが、式（ＩＩ）の破線で示された結合は、窒素原子と反対側の末端にメチル基を有さず、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部、すなわちこの場合、式（Ｉ）のＲＣＰの結合点に結合させる結合を表す。換言すると、式（ＩＩ）の破線で示された結合は、本発明による化合物中に存在する、式（ＩＩ）に示された－ＮＨ－基の窒素原子と、式（Ｉ）の左側に示されたＲＣＰが結合しているカルボニル基の炭素原子との間の共有結合を表す。このように、アミド結合は、式（ＩＩ）に示されたＲＣＰの－ＮＨ－基、および式（Ｉ）に示されたカルボニル基を使用して提供される。
式（ＩＩ）の基において、－ＲＢ２－は、アルカンジイル鎖、好ましくはＣ２～Ｃ６アルカンジイル鎖、より好ましくはＣ２～Ｃ３アルカンジイル鎖、最も好ましくは－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－である。したがって、ＲＣＰは、好ましくは式（ＩＩａ）：
Figure 2024506700000006
の基であり、式中、ＲＢ１は、式（ＩＩ）について定義されており、本明細書においてさらに定義されるこの変数の任意の好ましい実施形態を含み、破線は、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す。
ＲＣＰは、式（ＩＩｂ）：
Figure 2024506700000007
の基であることがさらに一層好ましく、式中、ＲＢ１は、式（ＩＩ）について定義されており、本明細書においてさらに定義されるこの変数の任意の好ましい実施形態を含み、破線は、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す。
式（Ｉ）の変数ａは、０または１のいずれかであり、これにより、式（Ｉ）のリンカー構造中のフェニレン環に結合している－ＣＨ２－基は、存在することもしないこともできる任意選択の基である。当然のことながら、それが存在しない場合、すなわち、ａが０である場合、－ＣＨ２－基は、式（Ｉ）中のこの基に隣接する原子間の直接結合に置換される。
式（Ｉ）のＲＬ１基は、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキル、より好ましくはＨまたはＣ１～３アルキル、より一層好ましくはＨまたはメチル、最も好ましくはメチルである。
式（Ｉ）のＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２から選択される少なくとも１つの基で置換されている置換アルキルである。ＸはＮＨおよびＯから選択される。置換アルキルのアルキル部分は、好ましくはＣ１～Ｃ６アルキル、より好ましくはＣ１～Ｃ４アルキル、より一層好ましくはＣ２～Ｃ４アルキルである。アルキル部分は、好ましくは直鎖アルキル部分である。アルキル部分は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２基から選択される、少なくとも１つ、好ましくは正確に１つの置換基を有する。Ｘは、好ましくはＮＨであり、その場合、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２基は、グアニジノ基である。上記に伴って、ＲＬ２は、好ましくは、－（ＣＨ２）Ａ－ＮＨ２および－（ＣＨ２）Ａ－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２から選択される基であり、Ａは、１～６、好ましくは１～４、より好ましくは２～４の整数である。最も好ましくは、ＲＬ２は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２である。
式（Ｉ）および本明細書において定義されるその好ましい実施形態のＲＬ３は、－ＣＨ２－ＮＨ２または－ＣＨ２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）であり、好ましくは－ＣＨ２－ＮＨ２である。－ＣＨ２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）基は、次式：
Figure 2024506700000008
で表すことができ、式中、破線は、この基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す。
式（Ｉ）および本明細書において定義されるその好ましい実施形態のＲＬ４は、－ＮＨ２である。
式（Ｉ）および本明細書において定義されるその好ましい実施形態の変数ｅは、１～４、好ましくは２～４の整数であり、より好ましくは２である。
式（Ｉ）のＸ１は、カップリング基である。熟練した読者には理解されるであろうが、カップリング基Ｘ１は、ＲＳまたはＲＡが式（Ｉ）の化合物の残部に、Ｘ１基とＲＳ基との間、またはＸ１基とＲＡ基との間に形成される共有結合を介してカップリングされることを可能にする官能基である。カップリング基は、１つまたは複数の原子からなることができる。好ましいカップリング基Ｘ１は、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－、および－Ｓ－から選択される。典型的には、カップリング基Ｘ１は、ＲＳまたはＲＡに含まれるさらなる相補的なカップリング基と共有結合しており、それにより、２つのカップリング基が組み合わさって、アミド結合－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、エステル結合－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、または次式
Figure 2024506700000009
（式中、各破線は、この基を式（Ｉ）の化合物中の隣接する原子または基に結合させる結合を示す）で表すことができるチオスクシンイミジル基などの結合ユニットを形成する。
例えば、カップリング基Ｘ１＝－ＮＨ－は、ＲＳまたはＲＡに含まれる相補的な基－Ｃ（Ｏ）－とアミド結合－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－を形成することができ、カップリング基Ｘ１＝－Ｃ（Ｏ）－は、ＲＳもしくはＲＡに含まれる相補的な基－ＮＨ－とアミド結合－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－を形成することができるか、またはＲＳもしくはＲＡに含まれる相補的な基－Ｏ－とエステル結合－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－を形成することができ、カップリング基Ｘ１＝－Ｏ－は、ＲＳもしくはＲＡに含まれる相補的な基－Ｃ（Ｏ）－とエステル結合－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－を形成することができるか、またはＲＳもしくはＲＡに含まれる炭素原子とエーテル結合－Ｏ－を形成することができ、カップリング基Ｘ１＝－Ｓ－は、ＲＳもしくはＲＡに含まれる相補的な基－Ｃ（Ｏ）－とチオエステル結合－Ｓ－Ｃ（Ｏ）－を形成することができるか、またはＲＳもしくはＲＡに含まれる炭素原子とチオエーテル結合－Ｓ－を形成することができる。好ましい実施形態によれば、Ｘ１は、硫黄原子－Ｓ－であり、ＲＳまたはＲＡに含まれる相補的なスクシンイミジル基と共有結合を形成する。後者の組合せは、チオール基を有する化合物を、マレイミジル基を含有する化合物と反応させることによって簡便に実現することができることが理解されよう。
式（Ｉ）の変数ｃは、０または１のいずれかであり、これにより、指数ｃを有する括弧［・・・］内に含有される置換基ＲＬ３を有する基は、存在することもしないこともできる。当然のことながら、それが存在しない場合、すなわち、ｃが０である場合、その基は直接結合に置換される。好ましくは、ｃは１である。同様に、式（Ｉ）の変数ｄは、０または１のいずれかであり、これにより、指数ｄを有する括弧［・・・］内に含有される置換基ＲＬ４を有する基は、存在することもしないこともできる。当然のことながら、それが存在しない場合、すなわち、ｄが０である場合、その基は直接結合に置換される。しかしながら、本発明による化合物において、ｃおよびｄのうち少なくとも１つは１でなければならない。
したがって、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）：
Figure 2024506700000010
を有することが好ましく、式中、変数ＲＣＰ、ａ、ＲＬ１、ＲＬ２、ＲＬ３、ＲＳ、ｂ、ＲＬ４、ｅ、Ｘ１およびＲＡは、式（Ｉ）について定義されており、本明細書においてさらに定義されるこれらの変数の任意の好ましい実施形態を含む。
式（Ｉ）の化合物のこれらの好ましい式の中で、さらなる優先度が、式（Ｉａ）：
Figure 2024506700000011
に与えられる。
式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａａ）：
Figure 2024506700000012
の化合物であることが特に好ましく、式中、変数ＲＣＰ、ａ、ＲＬ１、ＲＬ２、ＲＬ３、ＲＳ、ｂおよびＲＡは、式（Ｉ）について定義されており、本明細書においてさらに定義されるこれらの変数の任意の好ましい実施形態を含む。
式（Ｉ）および本明細書において定義されるその好ましい実施形態のＲＳは、二価のスペーサー基である。変数ｂは０または１であり、これにより、スペーサー基ＲＳは、存在することもしないこともできる任意選択の基である。当然のことながら、それが存在しない場合、すなわち、ｅが０である場合、ＲＳ基は、式（Ｉ）のＲＳに隣接する原子間の直接結合に置換される。ＲＳ基は、好ましくは、３～１０個、好ましくは４～６個の炭素原子の直鎖を含む。この炭素原子の直鎖は、ＮＨ基とＲＡ基との間（ｂが１であり、ｄが０である場合）またはＸ１基とＲＡ基との間（ｂが１であり、ｄが１である場合）にわたる。３～１０個、好ましくは４～６個の炭素原子の直鎖に加えて、ＲＳは、炭素原子の鎖がＮＨ基およびＲＡ基に、またはＸ１基およびＲＡ基に、それぞれ結合されることを可能にする、１つまたは２つ、好ましくは２つのカップリング基を含んでもよい。典型的には、スペーサー基ＲＳは、非分岐鎖であり、荷電基を含まない。
より好ましくは、ＲＳ基は、３～１０個の炭素原子を有する、好ましくは４～６個の炭素原子を有する直鎖アルカンジイル鎖を含む。このアルカンジイル鎖は、ＮＨ基とＲＡ基との間（ｂが１であり、ｄが０である場合）またはＸ１基とＲＡ基との間（ｂが１であり、ｄが１である場合）にわたる。３～１０個の炭素原子を有する、好ましくは４～６個の炭素原子を有する直鎖アルカンジイル鎖に加えて、Ｒ６Ｌは、アルカンジイル鎖がＮＨ基およびＲＡ基、またはＸ１基およびＲＡ基に、それぞれ結合されることを可能にする１つまたは２つ、好ましくは２つのカップリング基を含んでもよい。
したがって、ＲＳ基は、式
－Ｘ２－（ＣＨ２）Ｂ－Ｘ３－
［式中、
Ｘ２は、ｄが０である場合、式（Ｉ）のＮＨ基に、またはｄが１である場合、式（Ｉ）のＸ１基に結合するカップリング基であり、
Ｂは、３～１０、好ましくは４～６の整数であり、および
Ｘ３は、ＲＡに結合するカップリング基である］
の基であることが好ましい。
カップリング基Ｘ２およびＸ３について、上記のカップリング基Ｘ１の場合のように、同様の考察が適用される。したがって、カップリング基Ｘ２は、ＲＳが、Ｘ２基とＮＨ基との間に形成される共有結合を介してＮＨ基に、またはＸ２基とＸ１基との間に形成される共有結合を介してＸ１基に、のいずれかに結合されることを可能にする官能基である。カップリング基Ｘ２は、１つまたは複数の原子からなることができる。好ましいカップリング基は、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－、および－Ｓ－から選択される。Ｘ２がＮＨに結合する場合、それは好ましくは－Ｃ（Ｏ）－であり、これにより、Ｘ２およびＸ１は、アミド結合－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－を形成する。Ｘ２がＸ１に結合する場合、カップリング基Ｘ２およびＸ１は、典型的には、組み合わさって、アミド結合－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、エステル結合－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、またはチオスクシンイミジル基
Figure 2024506700000013
などの結合ユニットを形成する相補的なカップリング基である。
特に好ましいＲＳ基は、式－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）Ｂ－ＮＨ－の基であり、Ｂは上記に定義されたとおりであり、Ｎ末端の結合はＲＡに結合している。
上記に伴って、式（Ｉ）の化合物の変数の好ましい組合せは、ＲＣＰ中のＲＢ２は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、ＲＬ１はメチルであり、ＲＬ２は－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２であり、ｃは１であり、残りの変数は、式（Ｉ）および（ＩＩ）について定義されており、本明細書においてさらに定義されるこれらの変数の任意の好ましい実施形態を含むものであることが理解されよう。式（Ｉ）の化合物の変数のより一層好ましい組合せは、ＲＣＰ中のＲＢ２は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－であり、ＲＬ１はメチルであり、ＲＬ２は－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２であり、ｃは１であり、ｄは０であり、ｂは０または１であり、ＲＳは、存在する場合、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）Ｂ－ＮＨ－であり（その場合、Ｂは上記のとおりであり、Ｎ末端の結合はＲＡに結合している）、残りの変数は、式（Ｉ）および（ＩＩ）について定義されており、本明細書においてさらに定義されるこれらの変数の任意の好ましい実施形態を含むものである。
したがって、特に好ましい式（Ｉ）の化合物は、次式（Ｉａｂ）または次式（Ｉａｃ）
Figure 2024506700000014
［式中、ＲＢ１、ａ、ＲＳおよびＲＡは、式（Ｉ）および（ＩＩ）についてそれぞれ定義されており、本明細書においてさらに定義されるこれらの変数の任意の好ましい実施形態を含む］
を有する。
ＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する部分、例えば標識基を含む官能基である。当業者には理解されるであろうが、診断上の有用性を有する部分は、患者への投与後に、または本発明によるリガンド化合物がｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで生理学的試料に接触させられた後に、本発明によるリガンド化合物の検出を容易にする基またはそのような基の前駆体である。そのような前駆体の例は、検出されることが可能な放射性元素を有することができるが、そのような元素がまだ含有されていない基、例えば、ＳｉＦＡ部分またはキレート化部分である。好ましくは、診断上の有用性を有する部分は、本発明による化合物が、患者への投与後に患者の身体中で検出され、位置特定されることを可能にする基またはその前駆体である。診断上の有用性を有する部分を含む本発明の化合物は、ＣＸＣＲ４に対するその親和性のため、特にＣＸＣＲ４のトレーサーとして機能することができる。治療上の有用性を有する部分は、本発明の化合物が、患者への投与後に、疾患または障害を、特に、ＣＸＣＲ４受容体を遮断することによって処置もしくは予防され得る疾患もしくは障害またはＣＸＣＲ４の発現の増加もしくは異常発現に関連する疾患もしくは障害を、処置もしくは予防することを可能にする基、またはそのような基の前駆体である。そのような前駆体の例は、治療上の効果を有する放射性元素を有することができるが、そのような元素がまだ含有されていない基、例えばキレート化部分である。
ＲＡ基は、診断上または治療上の有用性を有する部分を含む。好ましくは、それは、このような部分のうち１つまたは２つを含む。２つの部分の組合せは、例えば、診断上および治療上の有用性を併せもつ本発明の化合物を提供するために有用であり得る。
好ましくは、式（Ｉ）の化合物および本明細書において定義されるその好ましい実施形態のＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する次の部分：
（ｉ）キレート化部分、
（ｉｉ）キレート化された放射性または非放射性の陽イオンまたは陰イオン、好ましくはキレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともに、キレート化部分（ｉ）によって形成されるキレート、
（ｉｉｉ）ケイ素原子およびフッ素原子を含むフッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分であって、フッ素原子が共有結合を介して直接ケイ素原子に結合しており、ＳｉＦＡ部分が、１９Ｆの１８Ｆによる同位体交換によって１８Ｆで標識されることが可能であるか、または１８Ｆによって標識されている、フッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分、
（ｉｖ）細胞傷害性部分、および
（ｖ）蛍光部分
のうち少なくとも１つを含むか、またはそれらからなる。
より好ましくは、ＲＡは、部分（ｉ）～（ｖ）のうち１つ、またはキレート化部分（ｉ）およびキレート（ｉｉ）から選択される１つの部分と１つのＳｉＦＡ部分（ｉｉｉ）との組合せを含むか、またはそれらからなる。
（ｉ）および（ｉｉ）のキレート化部分は、放射性または非放射性の陽イオンまたは陰イオン、好ましくは放射性陽イオンとともにキレートを形成するのに適している。種々の陽イオンおよび陰イオンについてキレート化部分を提供する適切なキレート化剤は、当技術分野において周知であり、本発明に関連して使用することができる。キレート化部分を提供するのに適切な、金属キレート化剤または陽イオンキレート化剤、例えば大環状化合物または非環式化合物は、複数の製造元から入手可能である。多数のキレート化剤が、当業者によってさほど苦労なく市販品で使用され得ることが理解されよう。所与の陰イオンまたは陽イオンとともにキレートを形成するためのキレート化部分の適性は、そのキレート化部分が、検討中の陰イオンまたは陽イオンを含むキレート錯体においてキレート配位子を提供することが可能であることを必要とするが、そのキレート化部分が、キレート錯体において陰イオンまたは陽イオンの配位子のみを形成することは必要としないことも、さらに理解されよう。したがって、上記の選択肢（ｉｉ）に従うキレートは、キレート化された陽イオンまたは陰イオン、キレート化配位子としてのキレート化部分（ｉ）、およびキレート化された陽イオンまたは陰イオンと配位する追加の配位子を含むことができる。
例えば、キレート化部分は、
８～２０個の環原子（そのうち２個以上、好ましくは３個以上が、酸素原子、硫黄原子および窒素原子から選択される）を有する大環状環構造、および
８～２０個の主鎖原子（そのうち２個以上、好ましくは３個以上が、酸素原子、硫黄原子および窒素原子から選択されるヘテロ原子である）を有する非環式の開鎖キレート化構造
のうち少なくとも１つを含むことができる。
好ましくは、上記の（ｉ）または（ｉｉ）に記載のキレート化部分は、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５２ｍＭｎ、５８Ｃｏ、５２Ｆｅ、５６Ｎｉ、５７Ｎｉ、ｎａｔＣｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６６Ｇａ、ｎａｔＧａ、６８Ｇａ、６７Ｇａ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、８６Ｙ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、９７Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１０ｍＩｎ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１４ｍＩｎ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４７Ｎｄ、１４９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５６Ｅｕ、１５７Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６４Ｔｂ、１６１Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１５７Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１６０Ｅｒ、１６５Ｅｒ、１６９Ｅｒ、１７１Ｅｒ、１６６Ｙｂ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１６７Ｔｍ、１７２Ｔｍ、ｎａｔＬｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８８Ｗ、１９１Ｐｔ、１９５ｍＰｔ、１９４Ｉｒ、１９７Ｈｇ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、ｎａｔＰｂ、２１２Ｐｂ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２５Ａｃおよび２２７Ｔｈの陽イオンから、ならびに１８Ｆ－［ＡｌＦ］２＋などの１８Ｆを含む陽イオン性分子から選択される陽イオンに対するキレート配位子として適しているキレート化部分である。
したがって、上記の（ｉ）または（ｉｉ）のキレート化部分を提供するために使用され得る好ましいキレート化剤は、ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＣＢＴＥ２ａ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、４－（１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカ－１－イル）－メチル安息香酸（ＣＰＴＡ）、Ｎ’－［５－［アセチル（ヒドロキシ）アミノ］ペンチル］－Ｎ－［５－［［４－［５－アミノペンチル－（ヒドロキシ）アミノ］－４－オキソブタノイル］アミノ］ペンチル］－Ｎ－ヒドロキシブタンジアミド（ＤＦＯ）、４，１１－ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクレ［６．６．２］ヘキサデカン（ＤＯ２Ａ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）、２－［１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－４，７，１０－三酢酸］－ペンタン二酸（ＤＯＴＡＧＡまたはＤＯＴＡ－ＧＡ）、Ｎ，Ｎ’－ジピリドキシルエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジアセテート－５，５’－ビス（ホスファト）（ＤＰＤＰ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１－（ｐ－ニトロベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロデカン－４，７，１０－トリアセテート（ＨＰ－ＤＯＡ３）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－コハク酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＳＡ）、１－（１－カルボキシ－３－カルボキシプロピル）－４，７－（カルボキシ）－１，４，７－トリアザシクロノナン（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、４，１１－ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＴＥ２Ａ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、テルピリジン－ビス（メチレンアミン）四酢酸（ＴＭＴ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロトリデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＲＩＴＡ）、およびトリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｈ２マクロパ（Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ））、４－アミノ－４－｛２－［（３－ヒドロキシ－１，６－ジメチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバモイル］－エチル｝ヘプタン二酸ビス－［（３－ヒドロキシ－１，６－ジメチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロ－ピリジン－２－イルメチル）－アミド］（ＴＨＰ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリス［メチレン（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸（ＴＲＡＰ）、２－（４，７，１０－トリス（２－アミノ－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯ３ＡＭ）、および１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７、１０－テトラキス［メチレン（２－カルボキシエチルホスフィン酸）］（ＤＯＴＰＩ）、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン四酢酸、メルカプトアセチル－トリセリン（ｍａｓ３）、ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）ならびに３－（２－アミノエチルアミノ）－２－［（２－アミノエチルアミノ）メチル］プロパン酸（Ｎ４キレーター、６－カルボキシ－１，４，８，１１－テトラアザウンデカン）から選択される。さらに好ましい例として、セリン残基のうち１つまたは複数が親水性側鎖を含有する別のアミノ酸に置換されている修飾メルカプトアセチルセリンキレート化剤（修飾ｍａｓ３）が挙げられ得る。
上記の（ｉ）または（ｉｉ）のキレート化部分を提供するために使用されることが可能なこれらの好ましいキレート化剤の中で、特に好ましいのは、ｍａｓ３、修飾ｍａｓ３、ＨＹＮＩＣ、Ｎ４キレーター、ＤＯＴＡおよびＤＯＴＡＧＡから選択されるキレート化剤である。
熟練した読者には理解されるであろうが、上に挙げた好ましいキレート化剤および特に好ましいキレート化剤は、キレート化剤中に含有される官能基を使用して、キレート化部分を化合物の残部に結合させる結合ユニットを提供することによって、本発明による化合物中にキレート化部分を簡便に提供することができる。そのような結合ユニットの例として、例えば、キレート化剤中に官能基として含有され得るカルボキシル基またはアミノ基を使用して提供され得るアミド結合（－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－）またはエステル結合（－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）が挙げられ得る。
上記に伴って、上記の（ｉｉ）に言及されているキレート化された陽イオンは、好ましくは、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５２ｍＭｎ、５８Ｃｏ、５２Ｆｅ、５６Ｎｉ、５７Ｎｉ、ｎａｔＣｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６６Ｇａ、ｎａｔＧａ、６８Ｇａ、６７Ｇａ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、８６Ｙ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、９７Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１０ｍＩｎ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１４ｍＩｎ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４７Ｎｄ、１４９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５６Ｅｕ、１５７Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６４Ｔｂ、１６１Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１５７Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１６０Ｅｒ、１６５Ｅｒ、１６９Ｅｒ、１７１Ｅｒ、１６６Ｙｂ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１６７Ｔｍ、１７２Ｔｍ、ｎａｔＬｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８８Ｗ、１９１Ｐｔ、１９５ｍＰｔ、１９４Ｉｒ、１９７Ｈｇ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、ｎａｔＰｂ、２１２Ｐｂ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２５Ａｃおよび２２７Ｔｈの陽イオンから、ならびに１８Ｆ－［ＡｌＦ］２＋などの１８Ｆを含む陽イオン性分子から選択される。そのような陽イオンで形成されるキレートは、式（Ｉ）の化合物またはその塩によって提供されるキレート化部分に加えて、キレート化された陽イオンと配位する配位子であって、式（Ｉ）の化合物またはその塩の一部ではない、１つまたは複数の追加の配位子、例えば、９９ｍＴｃ（Ｖ）－オキソコアを含むキレート中のオキソ－配位子などを含んでもよい。
ＲＡ基として特に好ましいのは、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、６７Ｇａおよび６８Ｇａの陽イオンから選択される陽イオンとともにキレートを形成することができるキレート化部分を含む基である。同様に、ＲＡ基として好ましいのは、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、６７Ｇａおよび６８Ｇａの陽イオンから選択されるキレート化された陽イオンを有するキレートを含む基である。
上に述べたとおり、本発明の化合物の一部を形成するリンカーの構造は、ＣＸＣＲ４の高親和性を保持しながら、多種多様な官能基ＲＡがこの化合物中に使用されることを可能にする。上記の選択肢（ｉ）および（ｉｉ）に言及されているキレート化部分を含む官能基ＲＡの場合、リンカーの好ましい影響は、ＲＡが、ＤＯＴＡもしくはＤＯＴＡＧＡ残基からなる基以外の基、または一般にＭ３＋（すなわち三価の金属陽イオン）のキレーターの残基からなる基以外の基である、式（Ｉ）の化合物およびその塩の場合に特に明白である。
上記の選択肢（ｉｉｉ）に即したフッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分は、好ましくは、式（Ｓ－１）の基：
Figure 2024506700000015
［式中、
ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、直鎖または分岐鎖Ｃ３～Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、イソプロピルおよびｔｅｒｔ－ブチルから選択され、より好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、両者ともｔｅｒｔ－ブチルであり、破線で示された結合は、式（Ｓ－１）の基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる］を含む。好ましくは、式（Ｓ－１）の基は、置換基としてフェニル環に結合される。
より好ましくは、ＳｉＦＡ部分は、式（Ｓ－２）の基および式（Ｓ－３）の基
Figure 2024506700000016
［式中、
ｎは、１、２、または３であり、好ましくは１であり、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、直鎖または分岐鎖Ｃ３～Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、イソプロピルおよびｔｅｒｔ－ブチルから選択され、より好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、両者ともｔｅｒｔ－ブチルであり、破線で示された結合は、式（Ｓ－２）の基または式（Ｓ－３）の基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる］から選択される基である。２つのメチル置換基を有する、式（Ｓ－３）に示された正電荷の四級窒素原子に適切な対イオンは、陰イオンを含み（陰イオンは、式（Ｉ）の化合物の、形成される塩に関して本明細書で述べられているため）、例えば、トリフルオロ酢酸陰イオンまたは酢酸陰イオンを含んでもよい。
熟練した読者には理解されるであろうが、式（Ｓ－２）および（Ｓ－３）の破線で示されたカルボニル基での結合は、カルボニル基の反対側の末端にメチル基を有さず、ＳｉＦＡ部分を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を表す。換言すると、破線で示された結合は、式（Ｓ－２）および（Ｓ－３）に示されたカルボニル基の炭素原子と、本発明による化合物中の、（Ｓ－２）基または（Ｓ－３）基に隣接する原子または基との間に存在する共有結合を表す。例えば、アミド結合（－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－）またはエステル結合（－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、好ましくはアミド結合は、式（Ｓ－２）および（Ｓ－３）に示されたカルボニル基ならびにこれらの基に隣接する－ＮＨ－基または－Ｏ－基を使用して提供される。例えば、そのような－ＮＨ－基または－Ｏ－基は、ＲＡのリンカー形成部分に含まれてもよい。
さらに理解されるであろうが、式（Ｓ－１）～（Ｓ－３）に含有されるフッ素原子は、１８Ｆ原子、または１９Ｆの１８Ｆによる同位体交換によって１８Ｆを提供するために交換されることが可能な１９Ｆ原子であってもよい。
上記の選択肢（ｉｖ）の細胞傷害性部分は、例えば、細胞傷害性化合物、例えばアウリスタチン類似体、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、またはＰＦ－０６３８０１０１などの残基によって提供されてもよい。残基は、細胞傷害性部分を本発明による化合物の残部に結合させる結合ユニットを形成するための、細胞傷害性化合物中に含有される官能基を使用して提供されてもよい。任意選択により、代謝的に切断可能なリンカーが、細胞傷害性部分を本発明による化合物の残部に結合させるリンカーとして、さらに提供されてもよい。
上記の選択肢（ｖ）の蛍光部分は、例えば、蛍光色素の残基によって提供されてもよい。そのような蛍光色素は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｃｙ５－系およびＣｙ７－系のシアニン色素を含む。残基は、細胞傷害性部分を本発明による化合物の残部に結合させる結合ユニットを提供するための、蛍光色素中に含有される官能基を使用して提供されてもよい。
上記の診断上または治療上の有用性を有する部分に加えて、ＲＡは、異なる目的を対象とする１つまたは複数のさらなる部分を含むことができる。例えば、ＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する１つまたは複数の部分が、化合物の残部に結合されることを可能にする二価またはそれより高原子価のリンカーを含むことができる。別の例として、本発明による化合物の親水性／疎水性特性を調整するためにＲＡに含まれる部分、例えば、１つまたは複数の極性基を有する部分が挙げられ得る。
当業者には理解されるであろうが、ＲＡは、ＲＡが、－ＮＨ－基に（式（Ｉ）の化合物中、ｄが０であり、ｂが０である場合）、－Ｘ１－基に（式（Ｉ）の化合物中、ｄが１であり、ｂが０である場合）、または－ＲＳ－の終端に（式（Ｉ）の化合物中、ｂが１である場合）共有結合されることを可能にするカップリング基を含む。適切なカップリング基は、確立した合成化学の原理に依拠して選択および提供され得る。例えば、カップリング基は、ＲＡによって任意選択により含まれるリンカー中に含有されることが可能であるか、またはＲＡに含まれる診断上または治療上の有用性を有する部分の一部であることが可能である。例えば、式（Ｉ）の化合物中、ｄが０であり、ｂが０である場合、ＲＡは、アミド結合を提供するために－ＮＨ－に結合するためのカップリング基－Ｃ（Ｏ）－を含むことが好ましい。そのようなカップリング基は、例えば、カルボキシル基から簡便に誘導されることが可能である。同様に、式（Ｉ）の化合物中、ｂが１であり、ＲＳが式－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）Ｂ－ＮＨ－の基である場合、ＲＡは、アミド結合を提供するために－ＮＨ－に結合するためのカップリング基－Ｃ（Ｏ）－を含むことが好ましい。別の例として、式（Ｉ）の化合物中、ｄが１であり、ｂが０であり、Ｘ１が－Ｓ－である場合、ＲＡは、チオスクシンイミジル基を得るために－Ｓ－に結合するためのカップリング基としてスクシンイミジル基を含むことができる。そのようなカップリング基は、例えば、マレイミジル基から簡便に誘導されることが可能である。
上記に伴って、ＲＡの特に好ましい実施形態が以下に例示され得る。
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるメルカプトアセチルトリセリン（ｍａｓ３）キレート化剤によって提供されるキレート化部分である、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるメルカプトアセチルトリセリン（ｍａｓ３）キレート化剤によって提供されるキレート化部分と、９９ｍＴｃ陽イオンなどのキレート化された陽イオンとを含むキレートである、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合される修飾メルカプトアセチルトリセリン（ｍａｓ３）キレート化剤によって提供されるキレート化部分であり、この場合、セリン残基のうち１つまたは複数が、親水性側鎖を有する別のアミノ酸残基、例えばシトルリンによって、またはグリコシル化側鎖を有するアミノ酸残基によって置換されている、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合される修飾メルカプトアセチルトリセリン（ｍａｓ３）キレート化剤によって提供されるキレート化部分（この場合、セリン残基のうち１つまたは複数が、親水性側鎖を有する別のアミノ酸残基、例えばシトルリンによって、またはグリコシル化側鎖を有するアミノ酸残基によって置換されている）と、９９ｍＴｃ陽イオンなどのキレート化された陽イオンとを含むキレートである、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）キレート化剤によって提供されるキレート化部分である、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）キレート化剤によって提供されるキレート化部分と、９９ｍＴｃ陽イオンなどのキレート化された陽イオンとを含むキレートである、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合される３－（２－アミノエチルアミノ）－２－［（２－アミノエチルアミノ）メチル］プロパン酸（Ｎ４）キレート化剤によって提供されるキレート化部分であるか、またはＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるＮ４キレート化剤によって提供されるキレート化部分を含む、
－ ＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合される３－（２－アミノエチルアミノ）－２－［（２－アミノエチルアミノ）メチル］プロパン酸（Ｎ４）キレート化剤によって提供されるキレート化部分と、９９ｍＴｃ陽イオンなどのキレート化された陽イオンとを含むキレートであるか、またはＲＡは、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるＮ４キレート化剤によって提供されるキレート化部分と、９９ｍＴｃ陽イオンなどのキレート化された陽イオンとを含むキレートを含む、
－ ＲＡは、ＳｉＦＡ部分およびキレート化部分、例えば、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物の残部に結合されるＤＯＴＡまたはＤＯＴＡＧＡキレート化剤によって提供されるキレート化部分を含む、
－ ＲＡは、ＳｉＦＡ部分、およびキレート化部分、例えば、ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡＧＡキレート化剤によって提供されるキレート化部分と、キレート化された陽イオン、例えば、１７７Ｌｕ陽イオン、６８Ｇａ陽イオンまたは６９Ｇａ陽イオンとを含むキレートを含む、
－ ＲＡは、ＭＭＡＥによって提供される細胞傷害性部分を含む、または
－ ＲＡは、蛍光色素Ｃｙ５．５によって提供される蛍光部分を含む。
ＲＳの存在（すなわち、式（Ｉ）においてｂの選択が１）は、特に、ＲＡ基が高分子量を有する場合、ＲＡ基が式（Ｉ）の化合物の残部への結合点の付近に大型の基を含有する場合、またはＲＡ基が負電荷の官能基を含む（キレート錯体の形成によって負電荷が中和される官能基を考慮しない）場合、本発明の化合物のＣＸＣＲ４の高親和性に鑑みて、追加の有益性をもたらすことができる。したがって、方向として、任意選択によるスペーサー基ＲＳの存在は、次の３つの要件のうち２つを満たすＲＡ基を含有する化合物に対する親和性をさらに向上させることが期待される。
ｉ）ＲＡの分子量は３００ｇ／ｍｏｌを超える、
ｉｉ）式（Ｉ）の化合物が、中性ｐＨで溶液中に維持されている（キレート錯体の形成によって中和されるキレート化剤中の荷電基を考慮しない）場合、ＲＡは、＜－１の電荷を有する、
ｉｉｉ）ＲＡは、ＲＡの式（Ｉ）の化合物の残部への結合点の付近（例えばＲＡが結合される原子から７未満の共有結合（Ｃ－Ｃ結合、Ｃ－Ｏ－結合、またはＣ－Ｎ結合）分、離れている）に、フェニル環またはより大きい芳香族基を含む。
上に述べたとおり、本発明によるリガンド化合物は、式（Ｉ）の化合物およびその塩、好ましくは薬学的に許容される塩を包含する。そのような塩は、例えば、プロトン化しやすい孤立電子対を有する原子、例えば窒素原子の、無機酸または有機酸でのプロトン化によって、またはカルボン酸基などの酸性基からプロトンを分離することによって、例えば塩基での中和によって、形成され得る。本発明による化合物中に存在し得る他の荷電基は、持続的に荷電している基、例えば、４つのオルガニル基で置換された第四級アンモニウム陽イオンまたは荷電キレート錯体を含む。
本発明の化合物の塩形態で存在することができる例示的な陰イオンとして、その塩形態が式（Ｉ）の化合物の正電荷形態を含む場合、例えば、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、リン酸イオン（例えば、リン酸塩、リン酸水素塩、またはリン酸二水素塩など）、炭酸イオン、炭酸水素イオンまたは過塩素酸イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、プロピオン酸イオン、酪酸イオン、ペンタン酸イオン、ヘキサン酸イオン、ヘプタン酸イオン、オクタン酸イオン、シクロペンタンプロピオン酸イオン、ウンデカン酸イオン、乳酸イオン、マレイン酸イオン、シュウ酸イオン、フマル酸イオン、酒石酸イオン、リンゴ酸イオン、クエン酸イオン、ニコチン酸イオン、安息香酸イオン、サリチル酸イオンまたはアスコルビン酸イオン、スルホン酸イオン、例えば、メタンスルホン酸イオン、エタンスルホン酸イオン、２－ヒドロキシエタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ－トルエンスルホン酸イオン（トシル酸イオン）、２－ナフタレンスルホン酸イオン、３－フェニルスルホン酸イオン、またはカンファースルホン酸イオンから選択される陰イオンを挙げることができる。トリフルオロ酢酸は、ペプチドの合成中に頻用されるため、ペプチド構造を含む化合物が形成される場合、トリフルオロ酢酸塩は、提供される典型的な塩である。そのようなトリフルオロ酢酸塩は、そのワークアップ中に酢酸塩に変換されてもよい。本発明の化合物の塩形態で存在することができる例示的な陽イオンとして、その塩形態が式（Ｉ）の化合物の負電荷形態を含む場合、例えば、リチウムイオン、ナトリウムイオンまたはカリウムイオンなどのアルカリ金属陽イオン、カルシウムイオンまたはマグネシウムイオンなどのアルカリ土類金属陽イオン、およびアンモニウムイオン（有機基で置換されたアンモニウムイオンを含む）から選択される陽イオンを挙げることができる。
本発明によるリガンド化合物は、好ましくは、１００ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下、より一層好ましくは５ｎＭ以下のＩＣ５０値によって反映される親和性で、ヒトＣＸＣＲ４に結合することができる。
本発明による例示的な化合物として、以下が挙げられる。
次式：
Figure 2024506700000017
の化合物、式中に示されたｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000018
の化合物、式中に示されたｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000019
の化合物、式中に示されたｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000020
の化合物、式中に示されたｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000021
の化合物、式中に示された修飾ｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000022
の化合物、式中に示された修飾ｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000023
の化合物、式中に示された修飾ｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000024
の化合物、式中に示された修飾ｍａｓ３キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000025
の化合物、式中に示されたＨＹＮＩＣキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000026
の化合物、式中に示されたＮ４キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000027
の化合物、式中に示されたＮ４キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000028
の化合物、式中に示されたＮ４キレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000029
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000030
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000031
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000032
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000033
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000034
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡＧＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000035
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡＧＡキレート化部分のうちいずれかが、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000036
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡＧＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000037
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡＧＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000038
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡＧＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000039
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000040
の化合物またはその塩、
次式：
Figure 2024506700000041
の化合物またはその塩、
次式：
Figure 2024506700000042
の化合物またはその塩、
次式：
Figure 2024506700000043
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡＧＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩、
次式：
Figure 2024506700000044
の化合物またはその塩、
次式：
Figure 2024506700000045
の化合物またはその塩、および
次式：
Figure 2024506700000046
の化合物、式中に示されたＤＯＴＡキレート化部分が、キレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともにキレートを形成する化合物、またはこれらのうちいずれかの塩。
さらなる態様において、本発明は、１つまたは複数のタイプ、好ましくは１つのタイプの本発明によるリガンド化合物、すなわち、式（Ｉ）の化合物（本明細書に記載される任意のその好ましい実施形態を含む）、またはその塩を、含むかまたはそれらからなる医薬組成物（治療組成物とも呼ばれる）を提供する。関連する態様において、本発明によるリガンド化合物は、治療において使用するため、または薬剤として使用するために提供される。したがって、本発明のリガンド化合物は、治療方法において使用されることが可能であり、当該方法は、当該リガンド化合物を対象に投与するステップを含むことができる。対象は、ヒトまたは動物とすることができ、好ましくはヒトである。本発明のこれらの医学的態様によれば、官能基ＲＡは、一般に、治療上の有用性を有する部分、例えば、治療上の効果を有する放射性元素を有する基、または細胞傷害性部分を含むことが理解されるべきである。
上記の治療または治療方法は、一般に、ＣＸＣＲ４受容体を遮断することによって処置もしくは予防されることが可能な疾患もしくは障害、またはＣＸＣＲ４受容体の発現の増加もしくは異常に関連する疾患もしくは障害、例えば、がん、心血管障害または炎症性障害などの、ヒトまたは動物体の疾患または障害の処置または予防を狙いとする。したがって、治療上の適用の観点から、本発明の化合物は、好ましくは、がん、炎症性障害もしくは心血管障害、例えば、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、または卒中などの処置または予防において使用するために提供される。
式（Ｉ）のＲＡ基の選択という観点から本発明によって提供される多用途性のため、本発明の化合物は、種々の治療手法に好都合に適応されることが可能である。例えば、放射性構成成分、例えば放射性金属陽イオンとともにキレートを形成することができるキレート化部分を含む本発明による化合物、またはそのようなキレートを含む化合物は、放射線療法、特に、標的放射性リガンド療法（ＲＬＴ）のために使用されることが可能である。放射線療法の場合、キレート化された放射性陽イオンは、好ましくは、ガンマまたはベータ放射体である。なぜなら、それらは、標的部位において特定の標的細胞を衰弱させるかまたは破壊する放射線量を放射することができるからである。ガンマまたはベータ放射体の例は、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒおよび１８６Ｒｅである。別の例として、細胞傷害性部分を含む本発明による化合物は、細胞、例えばがん細胞の化学療法的破壊に関与する治療において使用するために提供され得る。
別の態様において、本発明は、１つまたは複数のタイプ、好ましくは１つのタイプの本発明によるリガンド化合物、すなわち、式（Ｉ）の化合物（本明細書に記載される任意のその好ましい実施形態を含む）、またはその塩を、含むかまたはそれらからなる診断上の組成物を提供する。関連する態様において、本発明によるリガンド化合物は、疾患または障害のｉｎ ｖｉｖｏでの診断の方法において使用するために提供される。したがって、本発明によるリガンド化合物は、診断の方法において使用されることが可能であり、当該方法は、リガンド化合物を対象に投与し、対象においてリガンド化合物を検出するステップ、または対象におけるリガンド化合物の分布をモニターし、それにより、診断されようとする疾患を検出またはモニターするステップを含むことができる。対象は、ヒトまたは動物とすることができ、好ましくはヒトである。代替として、診断の方法は、リガンド化合物を、試料、例えば対象から得られた生理学的試料にｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで添加し、試料中のリガンド化合物を検出するステップを含むこともできる。本発明のこれらの診断上の態様によれば、官能基ＲＡは、一般に、診断上の有用性を有する部分、例えば、検出可能な放射性元素を有する基、または蛍光部分を含むことが理解されるべきである。
上記の診断の方法は、一般に、ＣＸＣＲ４受容体を遮断することによって処置もしくは予防されることが可能な疾患もしくは障害、またはＣＸＣＲ４受容体の発現の増加に関連する疾患もしくは障害、例えば、がん、心血管障害または炎症性障害などの、ヒトまたは動物体の疾患または障害の同定を狙いとする。したがって、診断上の適用の観点から、本発明の化合物は、好ましくは、がん、心血管障害もしくは炎症性障害、例えば、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、または卒中などの障害のｉｎ ｖｉｖｏでの診断の方法において使用するために提供される。
式（Ｉ）のＲＡ基の選択という観点から本発明によって提供される多用途性のため、本発明の化合物は、種々の診断手法に好都合に適応されることが可能である。例えば、放射性構成成分、例えば放射性金属陽イオンとともにキレートを形成することができるキレート化部分を含む本発明による化合物、そのようなキレートを含む化合物、または１８Ｆ原子を含む化合物は、核画像診断のために使用されることが可能である。例えば、本発明による化合物が、陽電子放射体、例えば、キレート化された６４Ｃｕ陽イオン、キレート化された６８Ｇａ陽イオン、またはＳｉＦＡ部分中に結合された１８Ｆ原子を含む場合、化合物は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングによる診断のために使用されることが可能である。本発明による他の化合物、例えば、キレート化された９９ｍＴｃ陽イオンを含む化合物は、単一光子放出型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングによる診断のために使用され得る。さらなる例として、ＳｉＦＡ部分を含む本発明による化合物は、１９Ｆ ＭＲＩによる診断のために使用されることが可能であり、または蛍光部分を含む本発明による化合物は、光学イメージングに関与する診断方法において使用されることが可能である。
治療上および診断上の適用についての適性は、相互排他的ではないことが理解されよう。すなわち、本発明による化合物は、両方の適用に好適であり得、したがって、官能基ＲＡは、診断上および治療上の有用性の両方を有する部分を、または診断上の有用性を有する部分および治療上の有用性を有する部分を別々の部分として、含むことができる。例えば、本発明による化合物は、放射線療法および画像診断において活性な放射性種を含むことができる。さらに、本発明の化合物は、ＳｉＦＡ部分と、治療的に活性な放射性陽イオンとともにキレートを形成するのに適したキレート化部分との両方を含む放射ハイブリッド化合物を包含する。そのような放射ハイブリッド化合物は、ＳｉＦＡ部分が１８Ｆ原子を有し、キレート化部分が非放射性（ｃｏｌｄ）陽イオンとともにキレートを形成する場合、診断目的のために使用されてもよく、ＳｉＦＡ部分が１９Ｆ原子を有し、キレート化部分が対応する放射性（ｈｏｔ）陽イオンとともにキレートを形成する場合、治療目的のために使用されてもよい。有利なことには、放射性および非放射性の陽イオンが同じ化学種の異なる同位体である場合、診断上および治療上の変形の放射ハイブリッド化合物の薬物動態学的性質は、依然として同じである。診断および治療において使用するための例示的な放射ハイブリッドリガンド化合物は、１８Ｆ原子／ｎａｔＧａ陽イオンを組み合わせる化合物および１９Ｆ原子／６８Ｇａ陽イオンを組み合わせる化合物、１８Ｆ原子／ｎａｔＹ陽イオンを組み合わせる化合物および１９Ｆ原子／９０Ｙ陽イオンを組み合わせる化合物、または１８Ｆ原子／ｎａｔＬｕ陽イオンを組み合わせる化合物および１９Ｆ原子／１７７Ｌｕ陽イオンを組み合わせる化合物である。
医薬のまたは診断上の組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤をさらに含むことができる。適切な医薬の担体、賦形剤および／または希釈剤の例は、当技術分野において周知であり、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルション、例えば、油／水エマルション、種々のタイプの湿潤剤、滅菌溶液などを含む。そのような担体を含む組成物は、周知の従来方法によって製剤化されることが可能である。これらの組成物は、対象に適切な用量で投与されることが可能である。適切な組成物の投与は、様々な方法で、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、皮内、鼻腔内または気管支内の投与によって実現され得る。前記投与は、注射および／または送達によって行われるのが特に好ましい。組成物は、標的部位に直接投与されてもよい。投与計画は、主治医および臨床的要因によって決定されることになる。医学分野において周知であるように、任意の１人の患者の投与量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与されようとする特定の化合物、性別、時間および投与経路、全身の健康、ならびに併用で投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。薬学的に活性な物質は、例えば、１用量当たり０，１ｎｇ～１０ｍｇ／ｋｇ体重の間の量で存在し得るが、特に上記の要因を考慮すると、この例示的な範囲未満またはこの例示的な範囲を超える用量が想定される。
以下の項目は、本発明の態様の要約である。これらの項目は、上記の説明部分に密接に関連すること、およびこれらの項目において提供される情報は、上記の説明部分を補足することができ、その逆もまた同様であることが理解されよう。
１．式（Ｉ）：
Figure 2024506700000047
［式中、
ａは０または１、好ましくは０であり、
ｂは０または１であり、
ｃは０または１であり、かつ
ｄは０または１であり、但し、ｃおよびｄのうち少なくとも１つは１であり、
ｅは１～４、好ましくは２～４の整数であり、
ＲＣＰは、式（ＩＩ）：
Figure 2024506700000048
（ここで、式（ＩＩ）において、
ＲＢ１はＨまたはＩ、好ましくはＨであり、
ＲＢ２はアルカンジイル鎖であり、
破線は、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す）
のシクロペプチド基であり、
ＲＬ１はＨまたはアルキルであり、
ＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２から選択される少なくとも１つの基で置換されている置換アルキルであり、ＸはＮＨおよびＯから選択され、
ＲＬ３は、－ＣＨ２－ＮＨ２または－ＣＨ２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）であり、
ＲＬ４は－ＮＨ２であり、
Ｘ１はカップリング基であり、
ＲＳは二価のスペーサー基であり、および
ＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する部分を含む官能基である］
の化合物またはその塩。
２．式（Ｉ）のＲＣＰは、式（ＩＩａ）：
Figure 2024506700000049
［式中、ＲＢ１は、項目１において定義されており、破線は、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す］
の基である、項目１に記載の化合物または塩。
３．式（Ｉ）のＲＬ１基は、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキル、より好ましくはＨまたはＣ１～３アルキルである、項目１または２に記載の化合物または塩。
４．式（Ｉ）のＲＬ１基はメチルである、項目３に記載の化合物または塩。
５．式（Ｉ）のＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２基から選択される１つの置換基を有する、Ｃ１～Ｃ６アルキル、より好ましくはＣ１～Ｃ４アルキル、より一層好ましくはＣ２～Ｃ４アルキルであり、ＸはＮＨまたはＯである、項目１～４のいずれかに記載の化合物または塩。
６．式（Ｉ）のＲＬ２は、－（ＣＨ２）Ａ－ＮＨ２および－（ＣＨ２）Ａ－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２から選択される基であり、Ａは、１～６、好ましくは１～４、より好ましくは２～４の整数である、項目５に記載の化合物または塩。
７．式（Ｉ）のＲＬ２は、－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２である、項目６に記載の化合物または塩。
８．式（Ｉ）のＲＬ３は、－ＣＨ２－ＮＨ２である、項目１～７のいずれかに記載の化合物または塩。
９．式（Ｉ）のｅは２である、項目１～８のいずれかに記載の化合物または塩。
１０．式（Ｉ）のＸ１は－Ｓ－である、項目１～９のいずれかに記載の化合物または塩。
１１．式（Ｉ）のｃは１であり、かつ式（Ｉ）のｄは０であるか、または式（Ｉ）のｃは０であり、かつ式（Ｉ）のｄは１である、項目１～１０のいずれかに記載の化合物または塩。
１２．式（Ｉ）のｃは１であり、式（Ｉ）のｄは０である、項目１～１０のいずれかに記載の化合物または塩。
１３．式（Ｉ）のｂは０である、項目１～１２のいずれかに記載の化合物または塩。
１４．式（Ｉ）のＲＳは、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）Ｂ－ＮＨ－であり、Ｂは、３～１０、好ましくは４～６の整数であり、Ｎ末端の結合はＲＡに結合している、項目１～１２のいずれかに記載の化合物または塩。
１５．式（Ｉ）のＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する１つまたは２つの部分を含む、項目１～１４のいずれかに記載の化合物または塩。
１６．式（Ｉ）のＲＡに含まれる診断上または治療上の有用性を有する部分は、
（ｉ）キレート化部分、
（ｉｉ）キレート化された放射性または非放射性の陽イオンまたは陰イオン、好ましくはキレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともに、キレート化部分（ｉ）によって形成されるキレート、
（ｉｉｉ）ケイ素原子およびフッ素原子を含むフッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分であって、フッ素原子が共有結合を介して直接ケイ素原子に結合しており、ＳｉＦＡ部分が、１９Ｆの１８Ｆによる同位体交換によって１８Ｆで標識されることが可能であるか、または１８Ｆによって標識されている、フッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分、
（ｉｖ）細胞傷害性部分、および
（ｖ）蛍光部分
から選択される、項目１～１５のいずれかに記載の化合物または塩。
１７．式（Ｉ）のＲＡは、部分（ｉ）～（ｖ）のうち１つを含むか、またはキレート化部分（ｉ）およびキレート（ｉｉ）から選択される１つの部分と１つのＳｉＦＡ部分（ｉｉｉ）との組合せを含む、項目１６に記載の化合物または塩。
１８．（ｉ）および（ｉｉ）に記載のキレート化部分は、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５２ｍＭｎ、５８Ｃｏ、５２Ｆｅ、５６Ｎｉ、５７Ｎｉ、ｎａｔＣｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６６Ｇａ、ｎａｔＧａ、６８Ｇａ、６７Ｇａ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、８６Ｙ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、９７Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１０ｍＩｎ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１４ｍＩｎ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４７Ｎｄ、１４９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５６Ｅｕ、１５７Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６４Ｔｂ、１６１Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１５７Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１６０Ｅｒ、１６５Ｅｒ、１６９Ｅｒ、１７１Ｅｒ、１６６Ｙｂ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１６７Ｔｍ、１７２Ｔｍ、ｎａｔＬｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８８Ｗ、１９１Ｐｔ、１９５ｍＰｔ、１９４Ｉｒ、１９７Ｈｇ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、ｎａｔＰｂ、２１２Ｐｂ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２５Ａｃおよび２２７Ｔｈの陽イオンから、ならびに１８Ｆ－［ＡｌＦ］２＋などの１８Ｆを含む陽イオン性分子から選択される陽イオンに対するキレート配位子として適しているキレート化部分である、項目１６または１７に記載の化合物または塩。
１９．（ｉ）および（ｉｉ）に記載のキレート化部分は、ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＣＢＴＥ２ａ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、４－（１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカ－１－イル）－メチル安息香酸（ＣＰＴＡ）、Ｎ’－［５－［アセチル（ヒドロキシ）アミノ］ペンチル］－Ｎ－［５－［［４－［５－アミノペンチル－（ヒドロキシ）アミノ］－４－オキソブタノイル］アミノ］ペンチル］－Ｎ－ヒドロキシブタンジアミド（ＤＦＯ）、４，１１－ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクレ［６．６．２］ヘキサデカン（ＤＯ２Ａ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）、２－［１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－４，７，１０－三酢酸］－ペンタン二酸（ＤＯＴＡＧＡまたはＤＯＴＡ－ＧＡ）、Ｎ，Ｎ’－ジピリドキシルエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジアセテート－５，５’－ビス（ホスファト）（ＤＰＤＰ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１－（ｐ－ニトロベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロデカン－４，７，１０－トリアセテート（ＨＰ－ＤＯＡ３）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－コハク酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＳＡ）、１－（１－カルボキシ－３－カルボキシプロピル）－４，７－（カルボキシ）－１，４，７－トリアザシクロノナン（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、４，１１－ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＴＥ２Ａ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、テルピリジン－ビス（メチレンアミン）四酢酸（ＴＭＴ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロトリデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＲＩＴＡ）、およびトリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｈ２マクロパ）、４－アミノ－４－｛２－［（３－ヒドロキシ－１，６－ジメチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバモイル］－エチル｝ヘプタン二酸ビス－［（３－ヒドロキシ－１，６－ジメチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロ－ピリジン－２－イルメチル）－アミド］（ＴＨＰ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリス［メチレン（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸（ＴＲＡＰ）、２－（４，７，１０－トリス（２－アミノ－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯ３ＡＭ）、および１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７、１０－テトラキス［メチレン（２－カルボキシエチルホスフィン酸）］（ＤＯＴＰＩ）、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン四酢酸、メルカプトアセチル－トリセリン（ｍａｓ３）、ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）、ならびに３－（２－アミノエチルアミノ）－２－［（２－アミノエチルアミノ）メチル］プロパン酸（Ｎ４キレーター、６－カルボキシ－１，４，８，１１－テトラアザウンデカン）から選択されるキレート化剤によって、またはセリン残基のうち１つまたは複数が親水性側鎖を含有する別のアミノ酸に置換されている修飾メルカプトアセチルセリンキレート化剤によって提供される、項目１６～１８のいずれかに記載の化合物または塩。
２０．ＲＡは、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕおよび６８Ｇａの陽イオンから選択される陽イオンとともにキレートを形成することができるキレート化部分を含むか、またはＲＡは、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕおよび６８Ｇａの陽イオンから選択されるキレート化された陽イオンを有するキレートを含む、項目１６～１９のいずれかに記載の化合物または塩。
２１．ＳｉＦＡ部分（ｉｉｉ）は、式（Ｓ－１）の基：
Figure 2024506700000050
［式中、
ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、直鎖または分岐鎖Ｃ３～Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、イソプロピルおよびｔｅｒｔ－ブチルから選択され、より好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、両者ともｔｅｒｔ－ブチルであり、破線の結合は、式（Ｓ－１）の基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる］
を含む、項目１６～２０のいずれかに記載の化合物または塩。
２２．ＳｉＦＡ部分（ｉｉｉ）は、式（Ｓ－２）の基および式（Ｓ－３）の基
Figure 2024506700000051
［式中、
ｎは、１、２、または３であり、好ましくは１であり、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、直鎖または分岐鎖Ｃ３～Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、イソプロピルおよびｔｅｒｔ－ブチルから選択され、より好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、両者ともｔｅｒｔ－ブチルであり、破線で示された結合は、式（Ｓ－２）の基または式（Ｓ－３）の基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる］
から選択される、項目２１に記載の化合物または塩。
２３．細胞傷害性部分（ｉｖ）は、好ましくはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）およびモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）から選択されるアウリスタチン類似体の残基によって、またはＰＦ－０６３８０１０１の残基によって提供される、項目１６～２２のいずれかに記載の化合物または塩。
２４．蛍光部分（ｖ）は、蛍光色素、好ましくはＣｙ５－系またはＣｙ７－系のシアニン色素の残基によって提供される、項目１６～２３のいずれかに記載の化合物または塩。
２５．項目１～２４のいずれかに記載の化合物または塩を含む、またはそれらからなる医薬組成物。
２６．薬剤として使用するための項目１～２４のいずれかに記載の化合物または塩。
２７．ＣＸＣＲ４受容体を遮断することによって処置もしくは予防されることが可能な疾患もしくは障害、またはＣＸＣＲ４受容体の発現の増加もしくは異常に関連する疾患もしくは障害の、処置または予防において使用するための、項目１～２４のいずれかに記載の化合物または塩。
２８．がん、心血管障害または炎症性障害の処置または予防において使用するための、項目１～２４および２７のいずれかに記載の化合物または塩。
２９．項目１～２４のいずれかに記載の化合物または塩を含むか、またはそれらからなる、診断上の組成物。
３０．疾患または障害のｉｎ ｖｉｖｏでの診断の方法において使用するための、項目１～２４のいずれかに記載の化合物または塩。
３１．ＣＸＣＲ４受容体を遮断することによって処置もしくは予防されることが可能な疾患もしくは障害、またはＣＸＣＲ４受容体の発現の増加もしくは異常に関連する疾患もしくは障害の、ｉｎ ｖｉｖｏでの診断の方法において使用するための、項目１～２４のいずれかに記載の化合物または塩。
３２．がん、心血管障害または炎症性障害のｉｎ ｖｉｖｏでの診断の方法において使用するための、項目１～２４および３１のいずれかに記載の化合物または塩。
本明細書において、特許出願および製造元のマニュアルを含む複数の文書が引用されている。これらの文書の開示は、本発明の特許性に関連するとは考えられないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。より具体的には、個々の文書が参照により組み込まれることが明確におよび個別に示されているかのような場合と同程度まで、すべての参考文書が参照により組み込まれる。
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使用される略語のリスト
％ｉＤ／ｇ １グラム当たりの注入量のパーセント
２－ＣＴＣ ２－クロロトリチルクロリド
ＡＡ アミノ酸
Ａｂｚ パラ－アミノ安息香酸
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＫＴ プロテインキナーゼＢ
Ａｍｂｚ パラ－アミノメチル安息香酸
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
ＣＤＩ カルボニルジイミダゾール
ＣＰＣＲ４ シクロ（Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－［ＮＭｅ］Ｏｒｎ－Ａｒｇ－２－Ｎａｌ－Ｇｌｙ）
ＣＴ コンピューター断層撮影
ＣＸＣＲ４ Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体タイプ４
ｄａｐ ２，３－ジアミノプロピオン酸
ＤＢＵ １，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン
ＤＣＥ ジクロロエタン
ＤＣＭ ジクロロメタン
Ｄｄｅ Ｎ－（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）エチル）
ＤＩＡＤ ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４－（ジメチルアミノ）－ピリジン
ＤＭＥＭ ダルベッコ改変イーグル培地
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＧ ジメチルグリシン
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＯＴＡ １，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸
ＤＯＴＡ－ＧＡ ５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－５－オキソ－４－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）ペンタン酸
ＤＰＰＡ ジフェニルホスホリルアジド
ＥＤＤＡ エチレンジアミン二酢酸
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥＵＥ （Ｒ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－４－（３－（（Ｒ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）ウレイド）－５－オキソペンタン酸
ＦＢＳ ウシ胎仔血清、ウシ胎仔血清
ＨＡＴＵ ［Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム－ヘキサフルオルホスファト］
ＨＢＳＳ ハンクス緩衝塩溶液
ＨＦＩＰ １，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノール
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＨＯＡｔ １－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ 高圧液体クロマトグラフィー
ＨＳＡ ヒト血清アルブミン
ＨＹＮＩＣ ヒドラジノニコチン酸
ＭＡＰＫ マイトジェン活性化プロテインキナーゼ
ｍａｓ３ メルカプトアセチル－トリセリン
ＭＭＡＥ モノメチルアウリスタチン
ＮＥＡ 非必須アミノ酸
ＮＩＳ Ｎ－ヨードスクシンイミド
ＮＭＰ Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＯＩ 光学イメージング
Ｏ－ＮＢＳ－Ｃｌ ２－ニトロベンゼンスルホニルクロリド
ｐ．ｉ． 注射後
Ｐｂｆ ２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＣＣ クロロクロム酸ピリジニウム
ＰｅｎＳｔｒｅｐ ペニシリン－ストレプトマイシン混合物
ＰＥＴ 陽電子放出断層撮影
ｒ．ｔ． 室温
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高圧液体クロマトグラフィー
ＲＰＭＩ ローズウェルパーク記念研究所（Ｒｏｓｅｗｅｌｌ ｐａｒｋ ｍｅｍｏｒｉａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）
ＳＡＲ 構造活性相関
ｓａｔ． 飽和
ＳＣＩＤ 重症複合免疫不全症
ＳＤＦ－１ ストロマ細胞由来因子１
ＳｉＦＡ フッ化ケイ素アクセプター
ＳｉＦＡ－ＢＡ ＳｉＦＡ－安息香酸
ＳｉＦＡ－Ｂｒ ＳｉＦＡ－臭化物
ＳＰＥＣＴ 単一光子放出型断層撮影
ＳＰＰＳ 固相ペプチド合成
ｔ．ｂ．ｄ． 未定
ＴＢＤＭＳＣｌ ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＢＴＵ ２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレート
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＩＰＳ トリイソプロピルシラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ｔＲ 保持時間
Ｔｒｔ トリチル
Ｉ．材料および方法
１．概説
１．１ 試薬および溶媒
購入した試薬を、それ以上精製せずに使用した。Ｆｍｏｃ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル－）および他のすべての保護アミノ酸類似体を、Ｂａｃｈｅｍ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ、スイス）、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ、ドイツ）、Ｃａｒｂｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＧｍｂＨ（Ｓｔ．Ｉｎｇｂｅｒｔ、ドイツ）およびＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）から購入した。２－クロロトリチルクロリド（２－ＣＴＣ）樹脂を、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ、ドイツ）またはＣＥＭ（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、米国）から入手した。ペプチド合成用の試薬を、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ、ドイツ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）およびＭｏｌｅｋｕｌａ ＧｍＢＨ（Ｇａｒｃｈｉｎｇ、ドイツ）から購入した。有機合成用の溶媒および試薬を、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ（Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、ドイツ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）またはＶＷＲ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）のいずれかから購入した。
Ｃｈｅｍａｔｅｃｈ（Ｄｉｊｏｎ、フランス）は、使用するＤＯＴＡ－ＧＡキレーターを送達し、ＤＯＴＡ誘導体は、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ（Ｐｌａｎｏ、米国）によって提供された。Ｃｙ５－カルボン酸を、Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅ（Ｈｕｎｔ Ｖａｌｌｅｙ、米国）から入手した。細胞傷害性ＭＭＡＥ誘導体を、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ、米国）から購入した。
生化学製品、例えば、ＤＭＥＭ（ハムＦ－１２、安定なＧｌｎ含有）およびＲＰＭＩ１６４０（Ｇｌｎ含有）培地、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ上級）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳダルベッコ、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋不含）、トリプシン／ＥＤＴＡ（ＰＢＳ中０．０５％／０．０２％、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋不含）ならびにハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ、０．３５ｇ／Ｌ ＮａＨＣＯ３およびＣａ２＋、Ｍｇ２含有）などをＢｉｏｃｈｒｏｍ ＧｍｂＨ（Ｂｅｒｌｉｎ、ドイツ）またはＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）から入手した。
ＲＰ－ＨＰＬＣ溶媒用の水を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．（Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ、米国）の構内Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅシステムから入手した。標識実験用Ｔｒａｃｅｐｕｒｅ水を、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）から入手した。
１．２ 放射性同位体
１２５Ｉでの標識を、Ｈａｒｔｍａｎｎ Ａｎａｌｙｔｉｋ ＧｍｂＨ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、ドイツ）製ＮａＯＨ中［１２５Ｉ］ＮａＩ溶液（４０ｍＭ、７４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）を用いて行った。
［９９ｍＴｃ］－ペルテクネテートを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）製Ｄｒｙｔｅｃｈ（商標）テクネチウムジェネレーターの、生理ＮａＣｌ溶液（０．９％；ｖ／ｖ）を用いる溶離によって入手した。このジェネレーターは、Ｋｌｉｎｉｋｕｍ Ｒｅｃｈｔｓ ｄｅｒ Ｉｓａｒ（ミュンヘン工科大学：Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｕｎｉｃｈ、Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）によって提供された。
［１７７Ｌｕ］ＬｕＣｌ３の溶液（ＨＣｌ（０．０４Ｍ）；ＳＡ＞３ＴＢｑ／ｍｇ、７４０ＭＢｑ／ｍＬ）は、ＩＴＭ ＧｍｂＨ（Ｇａｒｃｈｉｎｇ、ドイツ）によって提供され、これを標識実験に直接使用した。
標的水中［１８Ｆ］－フルオリドは、Ｋｌｉｎｉｋｕｍ Ｒｅｃｈｔｓ ｄｅｒ Ｉｓａｒ（ミュンヘン工科大学：Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｕｎｉｃｈ、Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）によって提供された。
放射性合成用の［６８Ｇａ］ＧａＣｌ３を、ｉＴｈｅｍｂａ ＬＡＢＳ（Ｃａｐｅ Ｔｏｗｎ、南アフリカ共和国）製６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレーターの、ＨＣｌ水溶液（１．００Ｍ）を用いる溶離によって入手した。合成は、Ｓｃｉｎｔｏｍｉｃｓ ＧｍｂＨ（Ｆｕｅｒｓｔｅｎｆｅｌｄｂｒｕｃｋ、ドイツ）製自動ＧａｌｌＥｌｕｔ＋シテムで行った。
［６７Ｇａ］クエン酸Ｇａは、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｄｕｂｌｉｎ、アイルランド）によって送達され、これを放射性合成の前に［６７］ＧａＣｌ３に変換した。
１．３ 機器および分析
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、Ｎｅｏｌａｂ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）製Ｉｎｔｅｌｌｉ－Ｍｉｘｅｒシリンジ振盪機を使用して手動操作で行った。
すべてのＲＰ－ＨＰＬＣ操作用の溶離液は、水（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）とし、両者とも０．１ｖｏｌ％トリフルオロ酢酸を含有していた。セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣの実行の場合、溶媒Ｂを５ｖｏｌ％Ｈ２Ｏとともに使用した。分析用およびセミ分取逆相高圧クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）の実行は、ＳＰＤ－２０Ａ ＵＶ／Ｖｉｓ検出器（λ＝２２０ｎｍ、２５４ｎｍ）をそれぞれ備えたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ（Ｎｅｕｆａｈｒｎ、ドイツ）製Ｓｈｉｍａｄｚｕ勾配システムを使用して行った。ＣＳ ＧｍｂＨ（Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、ドイツ）によって提供されたＭｕｌｔｏｋｒｏｍ１００Ｃ１８（１２５×４．６ｍｍ、５μｍ粒径）カラムを、１ｍＬ／分の流速での分析用ＲＰ－ＨＰＬＣの実行に使用した。特定の勾配および対応する保持時間ｔＲの両方が本文に引用される。セミ分取ＨＰＬＣ精製は、ＣＳ ＧｍｂＨ（Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、ドイツ）製Ｍｕｌｔｏｋｒｏｍ１００ ＲＰ１８（２５０×１０ｍｍ、５μｍ粒径）カラムを用いて５ｍＬ／分の一定流速で実行した。
分析用およびセミ分取放射性ＲＰ－ＨＰＬＣは、ＣＳ ＧｍｂＨ（Ｌａｎｇｅｒｗｅｈｅ、ドイツ）製Ｍｕｌｔｏｋｒｏｍ１００Ｃ１８（５μｍ、１２５×４．０ｍｍ）カラムを使用して実行した。放射活性は、ＵＶ光度計の出口をＥＧ＆Ｇ Ｏｒｔｅｃ（Ｍｕｎｉｃｈ、ドイツ）製ＮａＩ（Ｔｌ）ウェル型シンチレーションカウンターに連結することによって検出した。
マウスの器官または細胞の試験バイアルなどの放射性プローブは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ、米国）製ＷＩＺＡＲＤ２（登録商標）２４８０自動γカウンターで測定した。
放射性ＴＬＣ測定は、ＬａｂＬｏｇｉｃ Ｓｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．（Ｂｒｏｏｍｈｉｌｌ、英国）製Ｓｃａｎ－ＲＡＭ（商標）で行った。そのクロマトグラムを、ＬａｂＬｏｇｉｃ Ｓｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．（Ｂｒｏｏｍｈｉｌｌ、英国）製Ｌａｕｒａ（商標）ソフトウェアを使用して分析した。
ＲＰ－ＨＰＬＣクロマトグラムを、島津製作所（京都、日本）製ＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎソフトウェアを使用して評価した。
有機物質の特性決定のための質量スペクトルを、Ａｄｖｉｏｎ Ｌｔｄ．（Ｈａｒｌｏｗ、英国）製ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＬ ＣＭＳ四重極質量分析計で取得した。ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、米国）製Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＨＤ－３００またはＡＶＨＤ－４００分光計にて、３００Ｋで記録した。
ｐＨ値を、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ（Ｇｉｅｓｓｅｎ、ドイツ）製ＳｅｖｅｎＥａｓｙ ｐＨメーターで測定した。
フラッシュクロマトグラフィーによる精製は、Ｂｉｏｔａｇｅ（Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）製Ｉｓｏｌｅｒａ（商標）Ｐｒｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍで、Ｂｉｏｔａｇｅ０９４７４Ｒｅｖ．Ｅ Ｂｉｏポンプを作動させて行った。Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）ＳＮＡＰ ＫＰ－Ｃ１８カートリッジ（１２ｇ、９３Å孔径、３８２ｍ２／ｇ表面）を使用し、溶媒Ａ（Ｈ２Ｏ、０．１ｖｏｌ％ＴＦＡ）中溶媒Ｂ（ＡＣＮ、０．１ｖｏｌ％ＴＦＡ、２ｖｏｌ％Ｈ２Ｏ）の直線勾配を適用した。
ペプチドの凍結乾燥を、Ｃｈｒｉｓｔ（Ｏｓｔｅｒｏｄｅ ａｍ Ｈａｒｚ、ドイツ）製Ａｌｐｈａ１－２ ＬＤｐｌｕｓ凍結乾燥機を使用し、Ｖａｃｕｂｒａｎｄ ＧｍｂＨ（Ｗｅｒｔｈｅｉｍ、ドイツ）製ＲＺ－２真空ポンプを使用して行った。
ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．（ＳａｎＤｉｅｇｏ、米国）製ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６を使用して計算した。
２．合成
２．１ Ｆｍｏｃ戦略に従う固相ペプチド合成
ＧＰ１：２－ＣＴＣ－樹脂のローディング
２－ＣＴＣ樹脂へのＦｍｏｃ－保護アミノ酸（ＡＡ）のローディングを、２－ＣＴＣ－樹脂（１．６ｍｍｏｌ／ｇ）とＦｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨ（１．５当量）とのＤＭＦ中懸濁液をＤＩＰＥＡ（３．０当量）とともに室温で２～５時間撹拌することによって行った。残ったトリチルクロリドに、メタノール（５ｍＬ／ｇ樹脂）を添加することによってキャップをし、１５分間インキュベートした。次いで、樹脂を濾別し、ＤＭＦ（５×５ｍＬ／ｇ樹脂）およびメタノール（３×５ｍＬ／ｇ樹脂）で洗浄し、真空中で乾燥した。樹脂へのＦｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨの最終ローディングｌは、次式によって決定した。
Figure 2024506700000052
ＧＰ２：樹脂上のペプチドカップリング
それぞれの側鎖を保護したＦｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨ（１．５当量）をＤＭＦ（８ｍＬ／ｇ樹脂）に溶解し、ＴＢＴＵ（１．５当量）、ＨＯＢｔ（１．５当量）およびＤＩＰＥＡ（３当量）を添加することによって予備活性化した。低反応性のアミノ酸またはペプチドフラグメント縮合については、ＴＢＴＵおよびＨＯＢｔではなく、ＨＡＴＵ（１．５当量）、ＨＯＡｔ（１．５当量）を使用した。１５分間活性化した後、溶液を、樹脂に結合した遊離アミンペプチド２－ＣＴＣ－ＡＡ－ＮＨ２に添加し、室温で２時間振盪した。ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨおよびｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、ならびにこれらのアミノ酸をＣ末端に有するフラグメントについては、予備活性化を２～５分に短縮し、２，４，６－コリジンを塩基として使用した。ペプチドフラグメントについては、反応時間の延長が、室温で４８時間まで必要な場合が多かった。次いで、樹脂をＤＭＦ（６×５ｍＬ／ｇ樹脂）で洗浄し、Ｆｍｏｃ脱保護した後、次のアミノ酸を同様にカップリングした。
ＧＰ３：樹脂上のＦｍｏｃ脱保護
樹脂に結合したＦｍｏｃ－ペプチドを、ＤＭＦ（ｖ／ｖ、８ｍＬ／ｇ樹脂）中２０％ピペリジンで５分間、次いで１５分間処理した。その後、樹脂をＤＭＦ（８×５ｍＬ／ｇ樹脂）で完全に洗浄した。
ＧＰ４：樹脂上のＤｄｅ－脱保護：
Ｄｄｅで保護されたペプチド（１．０当量）を、２％ヒドラジン一水和物のＤＭＦ（ｖ／ｖ、５ｍＬ／ｇ樹脂）中溶液で処理し、１５分間振盪した。このＦｍｏｃ－基の場合、Ｄｄｅ－脱保護は、イミダゾール（０．４６ｇ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．６３ｇ）のＮＭＰ（２．５ｍＬ）およびＤＭＦ（０．５ｍＬ）中溶液を添加することによって、室温で３時間実行した。脱保護した後、樹脂をＤＭＦ（６×５ｍＬ／ｇ樹脂）で洗浄した。
ＧＰ５：ｔＢｕ／Ｂｏｃ／Ｐｂｆ／Ｔｒｔの脱保護
ｔＢｕ／Ｂｏｃ／Ｐｂｆ－保護基の除去は、粗生成物をＴＦＡに溶解し、室温で９０分間撹拌することによって行った。Ｔｒｔ保護基の除去の場合には、ＴＩＰＳを混合物に添加した。ＴＦＡを窒素流下で除去した後、残留物をｔ－ブタノールと水との混合物に溶解した。凍結乾燥した後、粗製脱保護ペプチドを得た。
ＧＰ６：Ｎ－アセチル化
アミン官能基のアセチル化は、それぞれのペプチドを、ＤＩＰＥＡ（５．００当量）とＡｃ２Ｏ（５．００当量）とのＤＭＦ中混合物と２時間反応させることによって実現した。
ＧＰ７：ＣＰＣＲ４のヨウ素化
ＣＰＣＲ４チロシンのヨウ素化は、公開された手順（３９）に従って行った。手短に言えば、完全に脱保護され、精製されたペプチドを、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（１／１（Ｖ／Ｖ）、１．００ｍＭ）に溶解し、０．３０～０．５０当量のＮＩＳを添加した。室温で５分後、反応混合物をＨＰＬＣ精製に供した。
ＧＰ８：溶液中のフラグメントの縮合
ＣＰＣＲ４結合モチーフと機能的フラグメントとの連結は、少モル量の合成フラグメント（１．１０～１．３０当量）およびカップリング試薬としてＨＯＡｔ／ＨＡＴＵを使用して、ＤＭＦ中で行った。活性化したアミノ酸がｄａｐである場合、２，４，６－コリジンを塩基として使用し、他の場合はすべてＤＩＰＥＡを使用した。
ＧＰ９：樹脂からのペプチドの切断
酸に不安定な保護基の保存
樹脂に結合したペプチドを、ＤＣＭ／ＨＦＩＰ（４／１（ｖ／ｖ）、８ｍＬ／ｇ樹脂）の混合物で処理し、６０分間振盪した。完全に保護されたペプチドを含有する溶液を濾別し、樹脂を切断溶液の別の部分で６０分間処理した。両方の画分を合わせ、溶媒を減圧下で留去した。凍結乾燥した後、粗製の完全に保護されたペプチドを得た。
酸に不安定な保護基の切断
完全に保護された、樹脂に結合したペプチドを、ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ２Ｏ（９５／２．５／２．５（ｖ／ｖ／ｖ））の混合物で処理し、３０分間振盪した。溶液を濾別し、樹脂を同様にさらに３０分間処理した。両方の濾液を合わせ、窒素流下で濃縮した。残留物をｔ－ブタノールと水との混合物に溶解し、次いで凍結乾燥した後、粗製ペプチドを得た。
ＧＰ１０：スルフヒドリル－マレイミドカップリング
システインまたはホモシステインを有するペプチドを、以下の手順によって、マレイミド官能基とカップリングした。完全非保護のＨＳ－ペプチドを、ＤＭＦ（１．００ｍｇ／ｍＬ）に溶解し、ＤＭＦ（１．１０ｍｇ／ｍＬ）中マレイミドを有する物質に添加した。ＤＩＰＥＡ（０．５０μＬ／ｍｇペプチド）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＲＰ－ＨＰＬＣによって確認し、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製を行った。
２．２ ＮＡＴＧＡ／ＮＡＴＬＵ錯体形成
ＤＯＴＡを有するペプチドおよびＤＯＴＡ－ＧＡを有するペプチドとｎａｔＧａおよびｎａｔＬｕとの錯体形成については、完全に脱保護され、精製されたペプチドを使用した。ペプチドをＤＭＳＯ、ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ混合物またはＨ２Ｏに溶解し、理想的に１ｍＭの濃度にした。必要な量のペプチド（３０～５００ｎｍｏｌ）をエッペンドルフチューブ中に入れ、Ｈ２Ｏ中ｎａｔＧａＮＯ３またはｎａｔＬｕＣｌ３（各３．００当量）を添加した。バイアルを９５℃に３０分間加熱し、量的変換をＲＰ－ＨＰＬＣおよびＥＳＩ－ＭＳによってチェックした。追跡可能な抽出物がない場合、反応混合物を、それ以上精製せずに使用した。
２．３ 構成要素の合成
２．３．１ シクロ（Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－［ＮＭｅ］Ｏｒｎ－Ａｒｇ－２－Ｎａｌ－Ｇｌｙ）（＝ＣＰＣＲ４）の合成
Figure 2024506700000053
ＣＸＣＲ４結合モチーフＣＰＣＲ４の合成は、上記の手順と同様に実現した（４０）。手短に言えば、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨを２－ＣＴＣ樹脂に固定化し、Ｆｍｏｃ－２－Ｎａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨおよびＦｍｏｃ－Ｄ－Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）－ＯＨを、ＧＰ２およびＧＰ３に従ってカップリングした。次いで、Ｎ末端をＦｍｏｃ脱保護し、Ｏ－ＮＢＳ－Ｃｌ（４．００当量）と２，４，６－コリジン（１０．０当量）とをＮＭＰ中で１５分間反応させることによって新たに保護した。Ｎ末端のメチル化を、光延条件（ＴＨＦ中Ｐｈ３Ｐ（５．００当量）、ＭｅＯＨ（１０．０当量）、ＤＩＡＤ（５．００当量）、１０分）または硫酸ジメチル（ＮＭＰ中Ｍｅ２ＳＯ４（１０．０当量）、ＤＢＵ（３．００当量）、２×２分）のいずれかを使用することによって実現した（４１）。メチル化された終端の脱保護を、ペプチドのＤＢＵ（５．００当量）での５分間のインキュベートによって実現し、その後、メルカプトエタノール（１０．００当量）を添加した。３０分後、樹脂を完全に洗浄した。次のＦｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨのカップリングを、カップリング試薬としてＨＯＡｔおよびＨＡＴＵを使用することによって実現した。最終Ｆｍｏｃ脱保護をした後、酸に不安定な保護基を保持して樹脂からペプチドを切断した（ＧＰ９）。環化を、ペプチドのＤＭＦ中１ｍＭ溶液の中でＤＰＰＡ（３．００当量）およびＮａＨＣＯ３（５．００当量）を使用して行った。ＲＰ－ＨＰＬＣによってモニターした反応の完了後、生成物溶液を減圧下で濃縮した。得られた粗生成物をＴＦＡでの処理によって完全に脱保護し、その後、Ｅｔ２Ｏ中に沈殿させた。フラッシュクロマトグラフィーによりペプチドを精製して、オフホワイト色固体を得た。
ＣＰＣＲ４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝６．４９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ３６Ｈ４７Ｎ９Ｏ６）：７０１．３６、実測値：７０１．８［Ｍ＋Ｈ］＋、３５１．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
２．３．２ （Ｒ）－５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－４－（３－（（Ｒ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）ウレイド）－５－オキソペンタン酸（＝Ｄ－（ｔＢｕ）ｅ（ＯＨ）ｕ－Ｄ－ｅ（ｔＢｕ）２）の合成［３］
Figure 2024506700000054
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）－Ｄ－グルタメート［１］
合成は、公開された手順（４２）に従い、軽微な変更を加えて行った。手短に言えば、Ｄ－ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕ（１．００当量）をＤＣＭに溶解し、氷上にてＴＥＡ（２．５０当量）およびＤＭＡＰ（０．０４当量）で処理した。ＣＤＩ（１．１０当量）を添加し、この混合物を、それ以上冷却せずに終夜撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３の添加によって反応を停止し、有機層をＨ２Ｏおよびブラインでそれぞれ２回洗浄した。溶媒を蒸発させ、粗生成物［１］を無色油状物として得た（収率９１％）。生成物を、それ以上精製せずに次の反応に使用した。
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－（１Ｈ－イミダゾール－１－カルボニル）－Ｄ－グルタメート［１］：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１４．５０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１７Ｈ２７Ｎ３Ｏ５）：３５３．２、実測値：３７６．３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
５－ベンジル－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－（（（Ｒ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）カルバモイル）－ｄ－グルタメート［２］
抽出物［１］（１．００当量）をＤＣＥに溶解し、氷上で冷却し、その後、ＴＥＡ（２．００当量）およびＤ－ｇｌｕ（ＯＢｎ）－ＯｔＢｕ（１．００当量）を添加した。この混合物を４０℃に終夜加熱した。次いで、溶媒を真空中で濃縮し、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサン／ＴＥＡ（５００／５００／０．８（ｖ／ｖ／ｖ））を使用するシリカフラッシュクロマトグラフィーに供した。減圧下で溶媒を留去した後、所望の生成物［２］を無色油状物として得た（収率８４％）。
５－ベンジル－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－（（（Ｒ）－１，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１，５－ジオキソペンタン－２－イル）カルバモイル）－ｄ－グルタメート［２］：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（２０分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．４３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２Ｏ９）：５７８．３、実測値：６０１．５［Ｍ＋Ｎａ］＋、５２３．３［Ｍ－ｔＢｕ＋Ｈ］＋、４６７．３［Ｍ－２ｔＢｕ＋Ｈ］＋、４１１．３［Ｍ－３ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
（ｔＢｕ）ｅ（ＯＨ）ｕｅ（ｔＢｕ）２［３］
ベンジルで保護された抽出物［２］（１．００当量）をＥｔＯＨに溶解し、パラジウム（活性炭上１０％、０．１０当量）を添加した。Ｈ２雰囲気を室温で終夜維持して、脱保護反応を促進した。混合物をセライトパッドに通過させることによって触媒を濾別した。得られた透明溶液の溶媒を減圧下で蒸発させて、所望の生成物［３］を、凝固する無色油状物として得た（収率８２％）。
ｅ（ｔＢｕ）ｕｅ（ｔＢｕ）２［３］：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１２．００分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ２３Ｈ４９Ｎ２Ｏ９）：４８８．３、実測値：４８９．４［Ｍ＋Ｈ］＋、５１６．４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
２．３．３ Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｈｃｙ（グリコシル／ラクトシル）－ＯＨ
糖部分のＦｍｏｃ－Ｄ－Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）－ＯＨへの組み入れのために、それぞれのペルアセチル化前駆体（β－Ｄ－グルコースペンタアセテート／β－Ｄ－ラクトースオクタアセテート）を使用した。糖（１．００当量）および保護アミノ酸（１．２０当量）をアルゴン流中で丸底フラスコに添加し、ＤＣＭａｂｓに溶解した。ＴＩＰＳ（１．３０当量）を捕捉剤として添加し、ＳｎＣｌ４（２．４０当量、ＤＣＭ中１．００Ｍ）を反応混合物に滴下した。初期は黄色であったが、その後、混合物は無色になり、室温で終夜撹拌した後に沈殿物が形成した。混合物をＤＣＭで希釈し、ＨＣｌ（１．００Ｍ）で酸性化した。有機層を、ＨＣｌおよびＨ２Ｏでそれぞれ２回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を真空中で蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
Figure 2024506700000055
Ｆｍｏｃ－Ｄ－ＨＣｙ－（β－Ｄ－Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）４）－ＯＨ：ＨＰＬＣ（１５分で３０～８０％Ｂ）：ｔＲ＝９．９０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ３３Ｈ３７ＮＯ１３Ｓ）：６８７．２０、実測値：６８８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｆｍｏｃ－Ｄ－ＨＣｙ－（β－Ｄ－Ｌａｃ（ＯＡｃ）７）－ＯＨ：ＨＰＬＣ（１５分で３０～８０％Ｂ）：ｔＲ＝１０．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４５Ｈ５３ＮＯ２１Ｓ）：９７５．２８、実測値：９７６．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
２．３．４ ４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）安息香酸（＝ＳｉＦＡ－ＢＡ、［８］）
Figure 2024506700000056
フッ化ケイ素アクセプター部分［８］の合成は、公開された手順（４３）に依拠し、若干の変更を加えて実現した。反応は、乾燥したフラスコ中で、アルゴン雰囲気下にて行った。４－ブロモベンジルアルコールで出発し、５つの反応ステップの後に所望の生成物を得た。
（（４－ブロモベンジル）オキシ）（ｔｅｒｔ－ブチル）ジメチルシラン［４］
４－ブロモベンジルアルコール（１．００当量）をＤＭＦａｂｓ．（１５ｍＬ／ｇ抽出物）に溶解し、イミダゾール（１．２０当量）およびＴＢＤＭＳＣｌ（１．２０当量）を激しく撹拌しながら添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、冷Ｈ２Ｏに注ぎ入れ、水性相をＥｔ２Ｏで５回抽出した。有機相を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで２回洗浄し、
Figure 2024506700000057
ＭｇＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。シリカフラッシュクロマトグラフィーにより、石油エーテル中５％ＥｔＯＡｃ（ｖ／ｖ）を使用して、粗生成物を精製した。減圧下で溶媒を留去した後、保護されたアルコール［４］を無色油状物として得た（収率９５％）。
（（４－ブロモベンジル）オキシ）（ｔｅｒｔ－ブチル）ジメチルシラン［４］：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で５０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝１５．０分。1H-NMR (400 MHz, CDCl3, 300 K): δ = 0.10 (6H, s, SiMe2tBu), 0.95 (9H, s, SiMe2tBu), 4.69 (2H, s, CH2OSi), 7.21 (2H, d), 7.46 (2H, d) ppm.
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）フェニル）フルオロシラン［５］
Figure 2024506700000058
［４］（１．００当量）をＴＨＦａｂｓ．（１０ｍＬ／ｇ抽出物）に溶解し、－７８℃に冷却し、その後、ペンタン（ｃ＝１．７０ｍｏｌ／Ｌ）中ｔＢｕＬｉ（２．４０当量）を添加した。－７８℃で３０分間撹拌した後、反応混合物を、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジフルオロシラン（１．２０当量）のＴＨＦａｂｓ．（１０ｍＬ／ｇ）中溶液に－７８℃で滴下添加した。この溶液を終夜撹拌し、室温に加温し、その後、ブラインを添加した。粗生成物をＥｔ２Ｏで３回抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、溶媒を真空中で蒸発させて、帯黄色油状物を得た（収率９５％）。粗生成物［５］を、それ以上精製せずに使用した。
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）フェニル）フルオロシラン［５］：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（２０分で５０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝１９．０分。
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシラニル）ベンジルアルコール［６］
Figure 2024506700000059
［５］の脱保護を、ＭｅＯＨ（２５ｍＬ／ｇ抽出物）中に懸濁させ、触媒量の濃ＨＣｌ（０．２５ｍＬ／ｇ）を使用することによって実現した。混合物を室温で終夜撹拌した後、溶媒を減圧下で留去した。残留物をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ／ｇ抽出物）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。次いで、水性層をＥｔ２Ｏで３回抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、溶媒を真空中で蒸発させて、帯黄色油状物を得た（収率９８％）。粗生成物［６］を、それ以上精製せずに使用した。
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシラニル）ベンジルアルコール［６］：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で５０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝８．２分。
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）ベンズアルデヒド［７］
Figure 2024506700000060
アルデヒドへの酸化を、Ｃｏｒｅｙ－Ｓｕｇｇｓ条件を使用して行った。抽出物［６］（１．００当量）をＤＣＭａｂｓ．（１５ｍＬ／ｇ抽出物）に溶解し、ＰＣＣ（２．５０当量）のＤＣＭａｂｓ．（２０ｍＬ／ｇＰＣＣ）中氷冷懸濁液に滴下添加した。０℃で３０分間、続いて室温で２．５時間撹拌した後、Ｅｔ２Ｏを添加し、上清を固体からデカントした。黒色残留物をＥｔ２Ｏで洗浄し、合わせた有機相をシリカゲルのパッド（１０ｃｍ／ｇ生成物）に通して濾過した。溶媒を真空中で蒸発させ、［７］を帯黄色油状物として得た（収率９６％）。
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）ベンズアルデヒド［７］：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で５０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝１０．５分。
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）安息香酸（＝ＳｉＦＡ－ＢＡ）［８］
Figure 2024506700000061
アルデヒド［７］（１．００当量）をｔＢｕＯＨ（２３ｍＬ／ｇ抽出物）、ＤＣＭ（２．５ｍＬ／ｇ抽出物）に溶解し、ＮａＨ２ＰＯ４×Ｈ２Ｏ（１．２５Ｍ、ｐＨ＝４．０～４．５、１５ｍＬ／ｇ抽出物）およびＫＭｎＯ４水溶液（１Ｍ、２３ｍＬ／ｇ抽出物）を添加した。２５分間撹拌した後、混合物を５℃に冷却した。ＫＭｎＯ４（１．００当量）を添加し、直後に飽和ＮａＨＣＯ３を添加することによって反応を停止した。混合物をＭｇＳＯ４で脱水し、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗生成物［８］を、Ｅｔ２Ｏ／ｎ－ヘキサン（１／３、ｖ／ｖ）から再結晶させることによって精製し、無色固体を得た（収率６０％）。
４－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルフルオロシリル）安息香酸（＝ＳｉＦＡ－ＢＡ［８］）：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で５０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝８．５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１５Ｈ２３ＦＯ２Ｓｉ）：２８２．４；実測値：ｍ／ｚ＝２８１．１［Ｍ－Ｈ］－、２３５．１［Ｍ－ＣＯＯＨ］－。
２．３．５ （４－ブロモメチルフェニル）－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－フルオロシラン（＝ＳｉＦＡ－Ｂｒ［９］）
Figure 2024506700000062
［９］の合成を、文献（４４）に従って実行した。手短に言えば、ＳｉＦＡベンジルアルコール［６］をＤＣＭに溶解し、この溶液を０℃に冷却した。ＣＢｒ４（１．１０当量）を添加し、その後、ＰＰｈ３を３０分にわたって少量ずつ添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、溶媒を真空中で留去し、残留物をｎ－ヘキサンで洗浄した。沈殿物を濾別し、液体を真空中で濃縮した。次なるシリカフラッシュクロマトグラフィーにより、ｎ－ペンタンを移動相として使用して、所望の生成物［９］を無色油状物として得た（収率３２～３９％）。
（４－ブロモメチルフェニル）－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－フルオロシラン（＝ＳｉＦＡ－Ｂｒ［９］）：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で５０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝１５．１０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１５Ｈ２４ＢｒＦＳｉ）：３３０．０８；実測値：ｍ／ｚ＝３３１．３［Ｍ－Ｈ］－。
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 293 K) δ 7.63 - 7.54 (m, 2H, 2x-CH-), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 2H, 2x-CH-), 4.50 (s, 2H, -CH2-), 1.06 (d, J = 1.2 Hz, 18H, 2xtBu).
13C NMR (75 MHz, CDCl3, 293 K) δ 139.50 (-CH-), 135.00 (-CH-), 134.95 (-CH-), 134.84 (-CH-), 134.66 (-CH-), 128.72 (-CH-), 33.88 (-CH2-), 27.88 (6xtBu C), 20.92 (第三級C), 20.75 (第三級C).
２．３．６ リンカー構造の合成
２．３．６．１ Ａｂｚ－系リンカーおよびＡｍｂｚ－系リンカー
Figure 2024506700000063
－Ａｍｂｚ－系リンカーおよび－Ａｂｚ－系リンカーの全体を同じように合成した（ＧＰ１、ＧＰ２、ＧＰ３を参照）が、違いは、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨのカップリングであった。－Ａｂｚ－系リンカーの場合、－Ａｂｚ－のアミン官能基の反応性が－Ａｍｂｚ－と比較して低いことを考慮して、ＨＯＡｔおよびＨＡＴＵを使用し、同時に反応時間を４時間に延長した。第２または第３のアミノ酸を挿入した後、保護基を保持して、それぞれのリンカーを固体支持体から切断した（ＧＰ９を参照）。アセチル化されたリンカーユニットについては、追加のＦｍｏｃ脱保護、およびそれに続く記載されたとおりのアセチル化（ＧＰ６を参照）を固体支持体上で行った。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000064
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１５．３３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４４Ｈ５０Ｎ６Ｏ９Ｓ）：８３８．３４、実測値：８３９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000065
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で５０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１３．５２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５２Ｈ６４Ｎ８Ｏ１２Ｓ）：１０２４．４４、実測値：１０２５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000066
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１０．８６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ３９Ｈ４７Ｎ７Ｏ１０）：７７３．３４、実測値：７７４．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000067
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．１５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６９Ｈ７１Ｎ９Ｏ１０Ｓ）：１２１７．５０、実測値：１２１８．０［Ｍ＋Ｈ］＋、９７７．３［Ｍ－Ｔｒｔ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｃ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000068
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｃ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．７７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６６Ｈ６９Ｎ７Ｏ１０Ｓ２）：１１８３．４５、実測値：１１８４．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000069
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．７９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６７Ｈ７１Ｎ７Ｏ１０Ｓ２）：１１９７．４７、実測値：１１９８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｆ－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000070
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｆ－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１６．３０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５３Ｈ５９Ｎ７Ｏ１０Ｓ）：９８５．４０、実測値：９８６．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000071
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１６．８２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６３Ｈ７８Ｎ１０Ｏ１３Ｓ２）：１２４６．５２、実測値：１２４８．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000072
ＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１２．５１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４５Ｈ５２Ｎ６Ｏ９Ｓ）：８５２．３５、実測値：６０１．４［Ｍ－Ｐｂｆ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000073
ＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で３０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１３．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５３Ｈ６６Ｎ８Ｏ１２Ｓ）：１０３８．４５、実測値：１０３９．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000074
ＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．９５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７０Ｈ７３Ｎ９Ｏ１０Ｓ）：１２３１．５２、実測値：１２３３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｃ
Figure 2024506700000075
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１０．４３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ３９Ｈ５６Ｎ８Ｏ１１Ｓ）：８４４．３８、実測値：８４５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－４－ＡＰｉｐＡｃ－Ａｃ
Figure 2024506700000076
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－４－ＡＰｉｐＡｃ－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝８．１３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ３８Ｈ５４Ｎ８Ｏ９Ｓ）：７９８．３７、実測値：７９９．７［Ｍ＋Ｈ］＋、４００．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｃ
Figure 2024506700000077
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝６．６１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ２６Ｈ３９Ｎ７Ｏ９）：５９３．２８、実測値：５９４．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－４－ＡＰｉｐＡｃ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｃ
Figure 2024506700000078
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－４－ＡＰｉｐＡｃ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝６．６２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ２７Ｈ４０Ｎ６Ｏ８）：５７６．２９、実測値：５７７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＡＨＸ－系リンカー
Figure 2024506700000079
Ａｈｘ－系ペプチドリンカーの合成を、ＧＰ１、ＧＰ２、ＧＰ３およびＧＰ４に従い、標準的なＳＰＰＳによって実現した．手短に言えば、Ａｈｘを２－ＣＴＣ樹脂に固定化し、Ｆｍｏｃを脱保護し、Ｆｍｏｃ－Ｄ－ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨとカップリングした。イミダゾールおよびヒドロキシルアミンを使用して側鎖を脱保護し、その後、所望のキレーター、すなわち、ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３、Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４またはＮ４（Ｂｏｃ）４をカップリングした。次なるＦｍｏｃ脱保護は、さらなる誘導体化の可能性を開いた。Ａｈｘ－系リンカー構造をさらに誘導体化した。詳細は２．３．８．２を参照されたい。
２．３．７ ＣＰＣＲ４－リンカーの連結体
ＣＰＣＲ４－リンカーの連結体は、ＧＰ８の実行の下で、ＣＰＣＲ４とそれぞれのＦｍｏｃ－保護されたリンカーユニットとの間のフラグメント縮合によって合成した。反応混合物を真空中で濃縮し、その後、ＤＭＦ中２０ｖｏｌ％ピペリジンに溶解することによってＦｍｏｃ脱保護した。次なるセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣにより、所望の生成物を得た。
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２
Figure 2024506700000080
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２の合成を、ＧＰ８に従い、フラグメント縮合によって促進した。ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）とを縮合し、得られたペプチドをＦｍｏｃ脱保護した。粗生成物を、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝８．８３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７３Ｈ９９Ｎ１７Ｏ１５Ｓ）：１４８５．７２、実測値：７４４．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２
Figure 2024506700000081
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２の合成を、ＧＰ８に従い、フラグメント縮合によって実現した。ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）とを縮合し、得られたペプチドをＦｍｏｃ脱保護した。粗生成物を、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝７．０３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６０Ｈ８２Ｎ１６Ｏ１３）：１２３４．６２、実測値：６１８．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２
Figure 2024506700000082
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２を、ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２と同様に合成することにより、ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）との縮合、ならびに次なるＦｍｏｃ脱保護および精製によって得た。
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝８．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７４Ｈ１０１Ｎ１７Ｏ１５Ｓ）：１４９９．７４、実測値：７５０．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ＮＨ２
Figure 2024506700000083
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ＮＨ２の合成を、ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）との縮合によって実現した（ＧＰ８）。Ｆｍｏｃ脱保護およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製によって所望の生成物を得た。
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝７．９４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８６Ｈ８７Ｎ１５Ｏ１２Ｓ）：１３１３．６４、実測値：６５８．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－ＮＨ２
Figure 2024506700000084
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ＮＨ２を、ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）との縮合によって合成した（ＧＰ８）。Ｆｍｏｃ脱保護およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製によって所望の生成物を得た。
ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１３．４３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９１Ｈ１０８Ｎ１８Ｏ１３Ｓ）：１６９２．８１、実測値：８４８．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
２．３．８ キレーターの合成
２．３．８．１ 修飾ｍａｓ３から誘導されるキレーター
ｍａｓ３から誘導される複数のキレーターを、すべて標準的なＦｍｏｃペプチド合成戦略およびＧＰ１、２、３、９に従って合成した。
Figure 2024506700000085
得られたキレーターを、ＣＸＣＲ４－結合ペプチドとのフラグメント縮合または事前の脱アセチル化のいずれかに使用した。
ＨＯ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000086
ＨＯ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１４．８５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４２Ｈ５７Ｎ３Ｏ８Ｓ）：７６３．３９、実測値：７６４．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）４））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000087
ＨＯ－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）４））３－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１２．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７５Ｈ９３Ｎ３Ｏ３２Ｓ４）：１６７５．４６、実測値：１６７７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）４））２－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000088
ＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）４））２－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１３．０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６４Ｈ８１Ｎ３Ｏ２４Ｓ３）：１３７１．４４、実測値：１３７２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ｃｉｔ－Ｈｃｙ（Ｌａｃ（ＯＡｃ）７）－ｃｉｔ－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000089
ＨＯ－ｃｉｔ－Ｈｃｙ（Ｌａｃ（ＯＡｃ）７）－ｃｉｔ－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝７．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６３Ｈ８１Ｎ７Ｏ２４Ｓ２）：１３８３．４８、実測値：１１４１．１［Ｍ－Ｔｒｔ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－Ｈｃｙ（Ｌａｃ（ＯＡｃ）７）－ｓ（ｔＢｕ）－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000090
ＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－Ｈｃｙ（Ｌａｃ（ＯＡｃ）７）－ｓ（ｔＢｕ）－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝８．４７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６５Ｈ８５Ｎ３Ｏ２４Ｓ２）：１３５５．５０、実測値：１００１．８［Ｍ－Ｔｒｔ、－２ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
脱アセチル化
樹脂から切断した後、キレーターをＭｅＯＨ（２ｍＬ／５０ｍｇ）に溶解し、ｐＨをＫＣＮで１０～１１に調整した。周囲温度で少なくとも４時間後、脱アセチル化したキレーターをＥｔ２Ｏ中に沈殿させた。
ＨＯ－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）１２））３－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１２．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７５Ｈ９３Ｎ３Ｏ３２Ｓ４）：１６７５．４６、実測値：１６７７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ））２－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝８．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４８Ｈ６５Ｎ３Ｏ１６Ｓ３）：１０３５．３５、実測値：１０３６．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ｃｉｔ－Ｈｃｙ（Ｌａｃ）－ｃｉｔ－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝７．９０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４９Ｈ６７Ｎ７Ｏ１７Ｓ２）：１０８９．４０、実測値：１０８９．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－Ｈｃｙ（Ｌａｃ）－ｓ（ｔＢｕ）－ＴＭＡＡ：ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１１．５９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５１Ｈ７１Ｎ３Ｏ１７Ｓ２）：１０６１．４２、実測値：１０６１．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ａ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000091
ＨＯ－ａ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で４０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝１６．５４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ４５Ｈ６２Ｎ４Ｏ９Ｓ）：８３４．４２、実測値：８３５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000092
ＨＯ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で４０～１００％Ｂ）：ｔＲ＝１７．６０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５０Ｈ７１Ｎ５Ｏ１１Ｓ）：９４９．４９、実測値：９５０．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
２．３．８．２ リンカー－キレーター－コンストラクト
リンカー－キレーター－コンストラクトは、ＧＰ１、ＧＰ２、ＧＰ３、ＧＰ９を使用し、樹脂上線形合成によって調製した。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｒ（Ｐｂｆ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000093
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｒ（Ｐｂｆ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１８．４１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９０Ｈ１２３Ｎ１３Ｏ１８Ｓ３）：１７６９．８３、実測値：１７７１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｆ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000094
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｆ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．４４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８０Ｈ１０４Ｎ１０Ｏ１５Ｓ２）：１５０８．７１、実測値：１５０９．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ
Figure 2024506700000095
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１７．８０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９６Ｈ１１６Ｎ１２Ｏ１５Ｓ２）：１７４０．８１、実測値：１７４２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｎ４（Ｂｏｃ）４）ｕｅ（ｔＢｕ）２
Figure 2024506700000096
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｎ４（Ｂｏｃ）４）ｕｅ（ｔＢｕ）２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１６．５７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６０Ｈ１０７Ｎ９Ｏ２０）：１２７３．７６、実測値：１２７４．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４－ｄａｐ（ＳｉＦａ－ＢＡ）ｕｅ（ｔＢｕ）２
Figure 2024506700000097
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４－ｄａｐ（ＳｉＦａ－ＢＡ）ｕｅ（ｔＢｕ）２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１５．６２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８５Ｈ１４６ＦＮ１１Ｏ２２Ｓｉ）：１７２０．０４、実測値：１７２１．３［Ｍ＋Ｈ］＋、８６１．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ＳｉＦａｌｉｎ
Figure 2024506700000098
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ＳｉＦａｌｉｎ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１１．６４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６３Ｈ１１２ＦＮ８Ｏ１２Ｓｉ＋）：１２３５．８１、実測値：１２３５．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－Ｄ－ＨＣｙ（ラクトシル）－ＳｉＦａｌｉｎ
Figure 2024506700000099
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－Ｄ－ＨＣｙ（ラクトシル）－ＳｉＦａｌｉｎ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝９．５５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１２７ＦＮ９Ｏ２２ＳＳｉ＋）：１５４８．８６、実測値：１５５０．３［Ｍ＋Ｈ］＋、７７５．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－Ｄ－ＨＣｙ（Ｔｒｔ）－Ａｃ
Figure 2024506700000100
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－Ｄ－ＨＣｙ（Ｔｒｔ）－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１２．４９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６９Ｈ１０４Ｎ８Ｏ１４Ｓ）：１３００．７４、実測値：１３０１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－Ｆｍｏｃ
Figure 2024506700000101
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）４）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１６．６６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５２Ｈ７９Ｎ７Ｏ１２Ｓ）：９９３．５８、実測値：９３８．７［Ｍ－ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
２．３．８．３ ＨＯ－ＨＹＮＩＣ（ＢＯＣ）
Figure 2024506700000102
ＨＯ－ＨＹＮＩＣ（Ｂｏｃ）の合成を、公開された手順（４５、４６）に従って実現した。手短に言えば、ヒドラジノ－ニコチン酸を、ＤＭＦ中でＢｏｃ２Ｏ（１．００当量）およびトリエチルアミン（１．３０当量）と終夜反応させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ、次いでＥｔＯＡｃ＋１ｖｏｌ％ＡｃＯＨを使用するシリカフラッシュクロマトグラフィーに供した。溶媒を留去した後、所望の生成物を白色粉末として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ：モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１Ｈ１５Ｎ３Ｏ４）：２５３．１１、実測値：２５４．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
２．３．８．４ ３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）アミノ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）アミノ）メチル）プロパン酸（＝Ｎ４キレーター［１１］）
Figure 2024506700000103
ｔｅｒｔ－ブチル－（２－アミノエチル）－カルバメート（４．００当量）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中３－ブロモ－２－（ブロモメチル）プロパン酸（１．００当量）に激しく撹拌しながらゆっくりと添加した。
Figure 2024506700000104
この混合物を周囲温度で４時間撹拌し、その後、溶媒を減圧下にて室温で留去した。粗生成物［１０］をアセトン：Ｈ２Ｏ（１：１、２５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解し、０℃に冷却し、ＮＥｔ３（３．００当量）を添加した。５分予備活性化した後、Ｂｏｃ２Ｏ（４．００当量）を添加した。この混合物を１５時間撹拌し（０℃～室温）、溶媒を減圧下で留去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ中３５～９５％ＭｅＣＮ、１５分）によって精製した。
Ｒｆ（ＥｔＯＡｃ＋０．５％ＡｃＯＨ）＝０．６５。
ＭＳ（ＥＳＩ、陽イオン）：Ｃ２８Ｈ５２Ｎ４Ｏ１０のモノアイソトピック質量計算値：６０４．３７；ＥＳＩ－ＭＳによる実測値：ｍ／ｚ＝６０５．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.17-6.19 (m, 2H, NH), 3.28-3.17 (m, 6H, CH2), 3.10-2.95 (m, 6H, CH2), 2.94- 2.90 (m, 1H, CH), 1.38 (s, 18H, CH3), 1.36 (s, 18H, CH3).
３．合成されたペプチド
この試験内の大多数のペプチドを、フラグメント縮合によって合成した。ＣＰＣＲ４結合モチーフを、ほとんどの場合におけるリンカーユニットと同様に（２．３．６を参照）、別々に合成し、精製した（２．３．１を参照）。これらのフラグメントをＧＰ８に従って縮合し、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（ｖ／ｖ）に溶解することによってＦｍｏｃを脱保護し、ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。得られたＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトを、対応するキレーター、または標識部分などの官能基で誘導体化するための出発材料として使用した。得られたペプチドは、それぞれの分析データとともに以下に列挙される。
Figure 2024506700000105
３．１ テクネチウム－９９Ｍ ＳＰＥＣＴトレーサー
３．１．１ ｍａｓ３コンジュゲートペプチド
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１
Figure 2024506700000106
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１の合成を、ＧＰ８に従い、フラグメント縮合によって促進した。ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）とを縮合し、得られたペプチドをＦｍｏｃ脱保護し、その後、ＨＯ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）とさらにカップリングした。粗生成物を脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝９．８２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６３Ｈ８６Ｎ１８Ｏ１６Ｓ）：１３８２．６２、実測値：６９２．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－２
Figure 2024506700000107
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－２の合成を、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１と同様に行った。ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）とを縮合し、得られたペプチドをＦｍｏｃ脱保護し、その後、ＨＯ－ａ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）とさらにカップリングした。粗生成物を脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１５～４５％Ｂ）：ｔＲ＝９．１０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６６Ｈ９１Ｎ１９Ｏ１７Ｓ）：１４５３．６６、実測値：７２８．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－３
Figure 2024506700000108
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－３を、ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカー－キレーターコンストラクトＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｒ（Ｐｂｆ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．２を参照）とをカップリングすることによって合成した。粗生成物を脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝９．００分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６９Ｈ９８Ｎ２２Ｏ１７Ｓ）：１５３８．７２、実測値：７７０．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－４
Figure 2024506700000109
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－４を、ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカー－キレーターコンストラクトＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｆ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．２を参照）とをカップリングすることによって、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－３と同様に合成した。粗生成物を脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝１０．２０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ９５Ｎ１９Ｏ１７Ｓ）：１５２９．６９、実測値：７６６．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－５
Figure 2024506700000110
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－５を、ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカー－キレーターコンストラクトＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．２を参照）とをカップリングすることによって、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－３および－４と同様に合成した。粗生成物を脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝９．５３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６９Ｈ９３Ｎ２１Ｏ１７Ｓ）：１５１９．６８、実測値：７６１．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－６
Figure 2024506700000111
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－６の合成を、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１と同様に実現した。ＣＰＣＲ４（２．３．１を参照）とリンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）とを縮合し、得られたペプチドをＦｍｏｃ脱保護し、その後、ＨＯ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）とさらにカップリングした。粗生成物を脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－６：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で３５～６５％Ｂ）：ｔＲ＝８．８５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６６Ｈ９２Ｎ２０Ｏ１７Ｓ）：１４６８．６７、実測値：７３５．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－７
Figure 2024506700000112
合成を、ＣＰＣＲ４－リンカー－コンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）とキレーターＨＯ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）とのフラグメント縮合（ＧＰ８）によって実現した。次なるペプチドの脱保護（ＧＰ５）およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製により、所望の生成物を得た。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－８
Figure 2024506700000113
合成を、ＣＰＣＲ４－リンカー－コンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）と修飾キレーターＨＯ－ａ－（ｓ（ｔＢｕ））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）とのフラグメント縮合（ＧＰ８）によって実現した。次なるペプチドの脱保護（ＧＰ５）およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製によって、所望の生成物を得た。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－８：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝７．２６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６７Ｈ９４Ｎ２０Ｏ１７Ｓ）：１４８２．６８、実測値：７４２．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
３．１．２ 修飾ｍａｓ３コンジュゲートペプチド
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－９
Figure 2024506700000114
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－９を、フラグメント縮合（ＧＰ８を参照）によって合成した。ＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）を、保護されたキレーターＨＯ－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ（ＯＡｃ）４））３－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）と反応させた。記載したとおりの脱アセチル化および次なる酸に不安定な保護基の除去（ＧＰ５を参照）により、所望の粗生成物が得られ、これをセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－９：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で５～５５％Ｂ）：ｔＲ＝９．５１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８７Ｈ１２８Ｎ２０Ｏ２９Ｓ４）：２０４４．８０、実測値：１０２３．７［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１０
Figure 2024506700000115
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１０を、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－９と同様に合成したが、違いは、キレーターＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－（Ｈｃｙ（Ｇｌｕｃ））２－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）を脱アセチル化し、その後、ＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトとカップリングしたことであった。粗生成物を、完全に脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１０：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝９．００分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８０Ｈ１１６Ｎ２０Ｏ２５Ｓ３）：１８５２．７６、実測値：９２７．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６１８．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１１
Figure 2024506700000116
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１１を、脱アセチル化したキレーターＨＯ－ｓ（ｔＢｕ）－Ｈｃｙ（Ｌａｃ）－ｓ（ｔＢｕ）－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）を用いて、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１０と同様に合成した。粗生成物を、完全に脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝７．９０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７９Ｈ１１４Ｎ２０Ｏ２６Ｓ２）：１８２２．７７、実測値：９２０．４［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋２Ｈ］２＋、６１４．１［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋３Ｈ］３＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１２
Figure 2024506700000117
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１２を、脱アセチル化したキレーターＨＯ－ｃｉｔ－Ｈｃｙ（Ｌａｃ）－ｃｉｔ－ＴＭＡＡ（２．３．８．１を参照）を用いて、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１０および－１１と同様に合成した。粗生成物を、完全に脱保護し（ＧＰ５を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．００分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８５Ｈ１２６Ｎ２４Ｏ２６Ｓ２）：１９６２．８７、実測値：９８２．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６５５．５［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
３．１．３ 固定されたキレーター系ペプチド
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１３
Figure 2024506700000118
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１３の合成は、ＧＰ８に従って、ＨＯ－ＨＹＮＩＣ（Ｂｏｃ）（２．３．８．３を参照）をＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）にカップリングすることによって実現し、その後、ＧＰ５によって脱保護し、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で５～５５％Ｂ）：ｔＲ＝７．８８分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６１Ｈ８０Ｎ２０Ｏ１１）：１２６８．６３、実測値：６３５．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１４
Figure 2024506700000119
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１４を、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１３と同様に合成した。ＧＰ８に従って、ＨＯ－Ｎ４（Ｂｏｃ）４（２．３．８．４を参照）をＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）にカップリングし、その後、ＧＰ５によって脱保護し、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．０３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６３Ｈ９３Ｎ２１Ｏ１１）：１３１９．７４、実測値：６６０．７［Ｍ＋２Ｈ］２＋、４４１．０［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１５
Figure 2024506700000120
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１５を、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１３および－１４と同様に合成した。ＧＰ８に従って、キレーターを有する足場（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－ｄａｐ（Ｎ４（Ｂｏｃ）４））ｕｅ（ｔＢｕ）２を、ＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）にカップリングし、その後、ＧＰ５によって脱保護し、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Figure 2024506700000121
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－ｄａｐ（Ｎ４（Ｂｏｃ）４））ｕｅ（ｔＢｕ）２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１６．７５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５４Ｈ９６Ｎ８Ｏ１９）：１１６０．６８、実測値：１１６２．２［Ｍ＋Ｈ］＋、５３１［Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ］２＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．０３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７７Ｈ１１３Ｎ２５Ｏ２０）：１７０７．８６、実測値：８５５．５［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５７０．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋、４２７．１［Ｍ＋４Ｈ］４＋。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１６
Figure 2024506700000122
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１６を、Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１５と同様に合成した。ＧＰ８に従って、キレーターを有するＡｈｘ－系足場（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｎ４（Ｂｏｃ）４））ｕｅ（ｔＢｕ）２（０を参照）をＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）にカップリングし、その後、ＧＰ５によって脱保護し、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１６：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝７．８３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８３Ｈ１２４Ｎ２６Ｏ２１）：１８２０．９４、実測値：１８２１．５［Ｍ＋Ｈ］＋、９１０．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６０７．４［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
３．２ ＤＯＴＡコンジュゲートペプチド
ＤＯＴＡの、それぞれＡｍｂｚまたはＡｂｚを有する足場（２．３．７を参照）へのコンジュゲートを、最近公開された手順（４７）に従って行った。手短に言えば、ＤＯＴＡ（４．００当量）を、ＮＨＳ（５．００当量）、ＥＤＣＩ（５．００当量）および２，４，６－コリジン（６．００当量）を用いてＨ２Ｏ中で３０分間、予備活性化した。Ｆｍｏｃ脱保護したペプチドをＤＭＦ（３０μＬ／ｍｇ）に溶解し、これを混合物に加え、室温で２～４時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、粗生成物をＴＦＡで１～２時間処理した（ＧＰ５を参照）。Ｎ２流中でＴＦＡを除去した後、生成物をセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
ｔｙｒを有する結合モチーフのヨウ素化を、精製され、完全に脱保護されたペプチドを基材として、一般手順ＧＰ７に従って実現した。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１
Figure 2024506700000123
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１の合成を、一般合成手順ＧＰ１、ＧＰ２、ＧＰ３を適用して実現し、ＣＰＣＲ４－Ａｍｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）を得た。ＤＯＴＡを上記のようにカップリングし、ＧＰ５に従ってペプチドを脱保護した。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝７．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１０３Ｎ２１Ｏ１７）：１５３３．７８、実測値：７６８．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５１２．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝７．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１０１ＧａＮ２１Ｏ１７）：１６００．６９、実測値：８０１．０［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５３４．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝７．９９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１００ＬｕＮ２１Ｏ１７）：１７０５．７０、実測値：５７０．１［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２
Figure 2024506700000124
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２の合成を、完全に脱保護され、精製されたＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１を基材として、ＧＰ７によるヨウ素化によって実現した。所望の生成物を、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって単離した。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．８５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１０２ＩＮ２１Ｏ１７）：１６５９．６８、実測値：１６６０．６［Ｍ＋Ｈ］＋、８３０．７［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５５３．９［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．７３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１００ＧａＩＮ２１Ｏ１７）：１７２６．５９、実測値：８６３．９［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５７６．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．８０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ９９ＩＬｕＮ２１Ｏ１７）：１８３１．６０、実測値：９１６．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６１１．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３
Figure 2024506700000125
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３をＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１と同様に合成したが、違いは、使用したリンカーであった。この場合、ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ－（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）をＣＰＣＲ４にカップリングし、その後、Ｆｍｏｃ脱保護し、精製し、ＤＯＴＡカップリングをした。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～７５％Ｂ）：ｔＲ＝５．３６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ１０１Ｎ２１Ｏ１７）：１５１９．７７、実測値：１５２１．０［Ｍ＋Ｈ］＋、７６０．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５０７．９［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～７５％Ｂ）：ｔＲ＝６．６５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ９９ＧａＮ２１Ｏ１７）：１５８６．６８、実測値：１５６９．５［Ｍ＋Ｈ］＋、７９５．０［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５２９．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～７５％Ｂ）：ｔＲ＝６．６２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ９８ＬｕＮ２１Ｏ１７）：１６９１．６９、実測値：１６９１．９［Ｍ＋Ｈ］＋、８４６．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５６５．１［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４
Figure 2024506700000126
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４の合成を、ＧＰ７に従って、完全に脱保護され、精製されたＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３をヨウ素化することによって実現した。所望の生成物を、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって単離した。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～８０％Ｂ）：ｔＲ＝５．７２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ１００ＩＮ２１Ｏ１７）：１６４５．６７、実測値：１６４７．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８２４．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５５０．０［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～８０％Ｂ）：ｔＲ＝５．５２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ９８ＧａＩＮ２１Ｏ１７）：１７１２．５８、実測値：８５７．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５７２．２［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～８０％Ｂ）：ｔＲ＝５．５５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ９７ＩＬｕＮ２１Ｏ１７）：１８１７．５８、実測値：９１０．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６０７．１［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－５
Figure 2024506700000127
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－５の合成を、ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３と同様に実現したが、違いは、ＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｃｉｔ－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）であった。Ｆｍｏｃ脱保護の後、ＤＯＴＡを上記のようにカップリングし、得られたペプチドを脱保護し（ＧＰ５）、その後、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．４０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ１００Ｎ２０Ｏ１８）：１５２０．７５、実測値：１５２２．０［Ｍ＋Ｈ］＋、７６１．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．３３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ９８Ｎ２０ＧａＯ１８）：１５８７．６６、実測値：７９４．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５２９．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．４２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７１Ｈ９７ＬｕＮ２０Ｏ１８）：１６９２．６７、実測値：８４７．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５６５．１［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ペンチキサフォル
Figure 2024506700000128
ペンチキサフォルの合成を、既刊文献（４８）に従って行った。手短に言えば、ＨＯ－Ａｍｂｚ－ＦｍｏｃをＣＰＣＲ４にカップリングし（ＧＰ８）、生成物をＦｍｏｃ脱保護した。セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した後、ＤＯＴＡを、文献に従って上記のように（４７）カップリングした。得られたペプチドを脱保護し（ＧＰ５）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
ペンチキサフォル：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１５～４５％Ｂ）：ｔＲ＝１４．９６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６０Ｈ８０Ｎ１４Ｏ１４）：１２２０．６０、実測値：１２２０．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
［ｎａｔＧａ］ペンチキサフォル：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．７３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６０Ｈ７８ＧａＮ１４Ｏ１４）：１２８７．５１、実測値：８６３．９［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５７６．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ペンチキサテル
Figure 2024506700000129
ペンチキサテルを、完全に脱保護され、精製されたペプチドを基材として、文献（３９）およびＧＰ７に従い、ペンチキサフォルのヨウ素化によって得た。得られた混合物を、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣに供した。
ペンチキサテル：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１５～４５％Ｂ）：ｔＲ＝１０．６０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６０Ｈ７９ＩＮ１４Ｏ１４）：１３４６．５９、実測値：１３４７．７［Ｍ＋Ｈ］＋、６７６．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
［ｎａｔＬｕ］ペンチキサテル：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝９．３４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６０Ｈ７９ＩＬｕＮ１４Ｏ１４）：１５１８．４１、実測値：１５１９．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７６０．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
３．３ フッ素－１８ＰＥＴトレーサー／放射ハイブリッド
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－１
Figure 2024506700000130
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－１を、ＣＰＣＲ４と、ＳｉＦＡを有するリンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ）－Ｆｍｏｃとのフラグメント縮合（ＧＰ８を参照）によって合成した。次なるＦｍｏｃ脱保護およびＤＯＴＡ－ＧＡ無水物とのカップリング、それに続く脱保護およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製によって、所望の生成物を得た。
Figure 2024506700000131
Figure 2024506700000132
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ－（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で５０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１７．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６２Ｈ７７ＦＮ８Ｏ１１ＳＳｉ）：１１８８．５２、実測値：１１８９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝８．９８分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８９Ｈ１２４ＦＧａＮ２１Ｏ２０Ｓｉ）：１９２２．８３、実測値：１９２４．０［Ｍ＋Ｈ］＋、９６２．９［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝９．７７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８９Ｈ１２４ＦＬｕＮ２１Ｏ２０Ｓｉ）：２０２８．８５、実測値：１０１５．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－２
Figure 2024506700000133
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－２を、ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－１と同様に合成した。Ａｂｚ－系リンカーユニットを、Ｆｍｏｃ－ｈ（Ｔｒｔ）－ＯＨを伴わせて伸長させ、その後、Ｆｍｏｃ－ｄａｐ（Ｄｄｅ）－ＯＨを伴わせて伸長させた。次なるＤｄｅ脱保護、ＳｉＦａ－ＢＡカップリングおよび樹脂切断により、ＳｉＦａを有するリンカーを得た。ＣＰＣＲ４とのカップリング、Ｆｍｏｃ脱保護、ＤＯＴＡ－ＧＡの連結および全体的な脱保護を同様に行った。
Figure 2024506700000134
ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ－（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で７０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１９．０４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８７Ｈ９８ＦＮ１１Ｏ１２ＳＳｉ）：１５６７．６９、実測値：１５６８．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝８．４３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９５Ｈ１３３ＦＮ２４Ｏ２１Ｓｉ）：１９９２．９８、実測値：９９７．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６６５．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝５．４０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９５Ｈ１３１ＦＧａＮ２４Ｏ２１Ｓｉ）：２０５９．８９、実測値：１０３１．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６８８．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝５．８９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９５Ｈ１３０ＦＬｕＮ２４Ｏ２１Ｓｉ）：２１６４．９０、実測値：１０８４．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋、７２３．１［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－３
Figure 2024506700000135
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－３の合成を、ＳｉＦＡを有するフラグメントＨＯ－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ）－ｋ（（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４）－（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４とＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２との縮合によって実現した（２．３．７、ＧＰ８を参照）。得られたペプチドを１２時間脱保護し（ＧＰ５）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Figure 2024506700000136
ＨＯ－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ）－ｋ（（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４）－（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２５～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１２．３２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ９４Ｈ１６５ＦＮ１２Ｏ２２Ｓｉ）：１８６１．１９、実測値：９３１．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．７７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１７Ｈ１７４ＦＮ２９Ｏ３１Ｓｉ）：２５２８．２７、実測値：８４４．５［Ｍ＋３Ｈ］３＋、６３３．４［Ｍ＋４Ｈ］４＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．８２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１７Ｈ１７０ＦＧａ２Ｎ２９Ｏ３１Ｓｉ）：２６６２．０９、実測値：１３３３．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８８９．５［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝９．７１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１７Ｈ１６８ＦＬｕＮ２９Ｏ３１Ｓｉ）：２８７２．１０、実測値：１４３８．５［Ｍ＋２Ｈ］２＋、９５８．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－４
Figure 2024506700000137
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－４を、ＧＰ８に従い、ＳｉＦＡを有する部分（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ））ｕｅ（ｔＢｕ）２とＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）とを連結させて合成した。次なる１２時間の脱保護（ＧＰ５）およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣにより、所望の生成物を得た。
Figure 2024506700000138
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ））ｕｅ（ｔＢｕ）２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１５．９７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７９Ｈ１３５ＦＮ１０Ｏ２１Ｓｉ）：１６０６．９６、実測値：１６０９．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８０５．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０６Ｈ１５２ＦＮ２７Ｏ３０Ｓｉ）：２３３０．１０、実測値：１１６７．２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、７７８．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋、５８４．３［Ｍ＋４Ｈ］４＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１２．３２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０６Ｈ１５０ＦＧａＮ２７Ｏ３０Ｓｉ）：２３９７．０１、実測値：１２００．７［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８０１．０［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．７２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０６Ｈ１４９ＦＬｕＮ２７Ｏ３０Ｓｉ）：２５０２．０１、実測値：８３５．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－５
Figure 2024506700000139
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－５の合成をＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－４と同様に行ったが、違いは、ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）とカップリングされた、ＳｉＦＡを有する部分（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ））ｕｅ（ｔＢｕ）２（０を参照）であった。それに続く１２時間の脱保護（ＧＰ５）およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣにより、所望の生成物を得た。
Figure 2024506700000140
（ｔＢｕ）ｅ（ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ｄａｐ（ＳｉＦＡ－ＢＡ））ｕｅ（ｔＢｕ）２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１５．６２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８５Ｈ１４６ＦＮ１１Ｏ２２Ｓｉ）：１７２０．０４、実測値：１７２１．３［Ｍ＋Ｈ］＋、８６１．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１２Ｈ１６３ＦＮ２８Ｏ３１Ｓｉ）：２４４３．１８、実測値：１２２１．９［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８１４．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋、６１１．３［Ｍ＋４Ｈ］４＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．８２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１２Ｈ１６０ＦＧａＮ２８Ｏ３１Ｓｉ）：２５０９．０８、実測値：１２５５．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８３７．０［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－５：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１２．７２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１２Ｈ１５９ＦＬｕＮ２８Ｏ３１Ｓｉ）：２６１４．０９、実測値：１３０７．８［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８７２．１［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－６
Figure 2024506700000141
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－６を、ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）とＳｉＦＡを有するＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ＳｉＦＡｌｉｎ（０を参照）とのフラグメント縮合によって合成した（ＧＰ８）。ＳｉＦＡ－臭化ベンジルが、ＳｉＦＡ－ＢＡシントンの合成（２．３．４を参照）中に得られ、これをＤＣＭ中でＤＭＧ Ｎ末端に終夜カップリングした（３．００当量ＳｉＦＡ－臭化ベンジル、３．００当量ＤＩＰＥＡ）。ペプチドの最終脱保護（ＧＰ５）およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製により、所望の生成物を得た。
Figure 2024506700000142
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－ＳｉＦＡｌｉｎ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１１．６４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６３Ｈ１１２ＦＮ８Ｏ１３Ｓｉ＋）：１２３５．８１、実測値：１２３５．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－６：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．７０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０２Ｈ１５３ＦＮ２５Ｏ２２Ｓｉ＋）：２１２７．１４、実測値：１０６３．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋、７０９．２［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－６：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．７３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０２Ｈ１５０ＦＧａＮ２５Ｏ２２Ｓｉ＋）：２１９３．０４、実測値：１０９６．７［Ｍ＋２Ｈ］２＋、７３１．３［Ｍ＋３Ｈ］３＋、５４８．７［Ｍ＋４Ｈ］４＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－６：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１２．７１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０２Ｈ１４９ＦＬｕＮ２５Ｏ２２Ｓｉ＋）：２２９８．０５、実測値：１１４９．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋、７６６．４［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－７
Figure 2024506700000143
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－７を、ＳｉＦＡを有するＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－Ｄ－ＨＣｙ（ラクトシル）－ＳｉＦＡｌｉｎ（０を参照）を使用して、ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－６と同様に合成した（ＧＰ８）。ペプチドの最終脱保護（ＧＰ５）およびセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製により、所望の生成物を得た。
Figure 2024506700000144
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－Ｄ－ＨＣｙ（ラクトシル）－ＳｉＦａｌｉｎ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝９．５５分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ７２Ｈ１２７ＦＮ９Ｏ２２ＳＳｉ＋）：１５４８．８６、実測値：１５５０．３［Ｍ＋Ｈ］＋、７７５．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－７：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝７．６１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１０２Ｈ１５３ＦＮ２５Ｏ２２Ｓｉ＋）：２４９６．２５、実測値：８３８．８［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－７：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．２３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１５Ｈ１７４ＦＧａＮ２６Ｏ３１ＳＳｉ＋）：２５６３．１６、実測値：８６１．５［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－７：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝１１．４７分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１５Ｈ１７３ＦＬｕＮ２６Ｏ３１ＳＳｉ＋）：２６６８．１６、実測値：８９６．３［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋３Ｈ］３＋。
３．４ 細胞傷害性物質を結合したペプチド
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－１
Figure 2024506700000145
システインを有する結合足場ＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｃ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃの合成（２．３．６を参照）を、記載されたとおりに実現した。ＣＰＣＲ４足場（２．３．１を参照）とリンカー部分との縮合、次なるＦｍｏｃ脱保護および酸に不安定な保護基の脱保護を、ＧＰ５、ＧＰ８を使用して実現した。スルフヒドリル－マレイミドカップリングを上記のように行い（ＧＰ１０を参照）、得られたペプチドをセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Figure 2024506700000146
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ－ｃ－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で１０～９０％Ｂ）：ｔＲ＝９．８０分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１６Ｏ１０Ｓ）：１１５０．５５、実測値：１１５１．３［Ｍ＋Ｈ］＋、５７６．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で２５～７０％Ｂ）：ｔＲ＝９．３１分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１２３Ｈ１７９Ｎ２７Ｏ２５Ｓ）：２４６６．３３、実測値：１２３４．０［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８２３．２［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－２
Figure 2024506700000147
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－２を、ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－１と同様に合成したが、違いは、Ｎ末端がｃ（Ｔｒｔ）－ＮＨ２ではなくＤ－Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）－ＮＨ２であることであった（２．３．６を参照）。脱保護された中間生成物ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ－Ｈｃｙ（ＳＨ）－ＮＨ２を同様にＶｃＭＭＡＥにカップリングし（ＧＰ１０を参照）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Figure 2024506700000148
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ：（１５分で２５～７０％Ｂ）：ｔＲ＝９．３９分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１２４Ｈ１８１Ｎ２７Ｏ２５Ｓ）：２４８０．３４、実測値：１２４１．０［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８２７．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
１２５Ｉ－ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－２：ＨＰＬＣ（２分間０％Ｂ、１分で０～３５％Ｂ、１５分で３５～５０％Ｂ）：ｔＲ＝１４．１９分。
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－３
Figure 2024506700000149
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－３を、ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－１および－２と同様に合成した。リンカーＨＯ－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｈ（Ｔｒｔ）－Ｆｍｏｃ（２．３．６を参照）をＣＰＣＲ４にカップリングし（ＧＰ８）、Ｆｍｏｃ脱保護し、ペプチドをＦｍｏｃ－Ｄ－Ｈｃｙ（Ｔｒｔ）－ＯＨとカップリングした。完全に脱保護した後、スルフヒドリル－マレイミドカップリングを、記載されたとおりに実現し（ＧＰ１０を参照）、ペプチドをセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Figure 2024506700000150
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で３０～７０％Ｂ）：ｔＲ＝５．９３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１３０Ｈ１８８Ｎ３０Ｏ２６Ｓ）：２６１７．４０、実測値：１３１０．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８７３．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
１２５Ｉ－ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－３：ＨＰＬＣ（２分間０％Ｂ、１分で０～３５％Ｂ、１５分で３５～５０％Ｂ）：ｔＲ＝１５．１８分。
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－４
Figure 2024506700000151
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－４を、ＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）とＡｈｘ－系キレーターを有する部分ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（Ｒ－ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４）－Ｄ－ＨＣｙ（Ｔｒｔ）－Ａｃ（０を参照）とのフラグメント縮合によって合成した。ペプチドを全体的に脱保護し、傷害性物質をＧＰ１０に従ってカップリングし、ペプチドをセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
Figure 2024506700000152
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ（ｔＢｕ）４）－Ｄ－ＨＣｙ（Ｔｒｔ）－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１２．６４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ６９Ｈ１０４Ｎ８Ｏ１４Ｓ）：１３００．７４、実測値：１０６０．２［Ｍ－Ｔｒｔ＋Ｈ］＋、６５１．６［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ－ｄａｐ－Ａｈｘ－ｄａｐ（（Ｒ）－ＤＯＴＡ－ＧＡ）－Ｄ－ＨＣｙ（ＶｃＭＭＡＥ）－Ａｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝６．２２分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８９Ｈ１３１Ｎ２５Ｏ２３Ｓ）：１９４９．９６、実測値：６５２．３［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～７０％Ｂ）：ｔＲ＝９．６３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１５７Ｈ２３６Ｎ３６Ｏ３８Ｓ）：３２６５．７４、実測値：１６３４．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋、１０８９．８［Ｍ＋３Ｈ］３＋、８１７．７［Ｍ＋４Ｈ］４＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－４：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～７０％Ｂ）：ｔＲ＝１０．４６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１５７Ｈ２３３Ｎ３６Ｏ３８Ｓ）：３４３７．６５、実測値：１７２０．１［Ｍ＋２Ｈ］２＋、１１４６．９［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
３．５ 光学イメージング化合物
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－１
Figure 2024506700000153
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－１の合成は、ＣＰＣＲ４－リンカーコンストラクトＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２（２．３．７を参照）とスルホ－Ｃｙ５－カルボン酸とのフラグメント縮合に基づいたものとした（ＧＰ８）。得られたペプチドをＴＦＡで処理し（ＧＰ５）、セミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－１：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で５～５５％Ｂ）：ｔＲ＝８．７３分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８７Ｈ１１１Ｎ１９Ｏ１７Ｓ２）：１７５７．７８、実測値：８８０．５［Ｍ＋２Ｈ］２＋、５８７．３［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－２
Figure 2024506700000154
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－２を、完全に脱保護され、精製されたＣＸＣＲ４－ＯＩ－１を基材として、記載された方法に従い、ヨウ素化によって合成した（ＧＰ７を参照）。混合物をセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣに供して、所望の生成物を得た。
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で５～５５％Ｂ）：ｔＲ＝１１．００分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ８７Ｈ１１０ＩＮ１９Ｏ１７Ｓ２）：１８８３．６８、実測値：９４２．７［Ｍ＋２Ｈ］２＋、６３０．４［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－３
Figure 2024506700000155
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－３を、ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＮＨ２とＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－Ｆｍｏｃ（０を参照）とのフラグメント縮合によって合成した。ＧＰ３、ＧＰ５およびＧＰ８に従う次なるＦｍｏｃ脱保護およびＣｙ５．５の標準的なカップリングにより、所望の生成物を得た。
ＨＯ－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）４）－Ｆｍｏｃ：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝１６．６６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ５２Ｈ７９Ｎ７Ｏ１２Ｓ）：９９３．５８、実測値：９３８．７［Ｍ－ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
ＣＰＣＲ４－Ａｂｚ－ａ－ｒ（Ｐｂｆ）－ｄａｐ（Ｂｏｃ）－Ａｈｘ－ｄａｐ（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）－ＮＨ２：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～９５％Ｂ）：ｔＲ＝９．１４分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１０Ｈ１６６Ｎ２４Ｏ２４Ｓ）：２２３９．２２、実測値：１１２０．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＣＸＣＲ４－ＯＩ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．８６分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１２Ｈ１５４Ｎ２６Ｏ２６Ｓ２）：２３４３．１０、実測値：１１７３．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋、７８２．７［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
［ｎａｔＬｕ］ＣＸＣＲ４－ＯＩ－３：ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で１０～６０％Ｂ）：ｔＲ＝８．７８分。モノアイソトピック質量計算値（Ｃ１１２Ｈ１５１Ｎ２６Ｏ２６Ｓ２）：２５１５．０１、実測値：１２５８．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋、８３９．３［Ｍ＋３Ｈ］３＋。
４．放射標識
４．１ １２５Ｉ標識／１２５Ｉ－ＦＣ－１３１
およそ５０～１５０μｇの非標識前駆体をＤＭＳＯ（２０μＬ）に溶解し、トリス緩衝液２８０μＬ（２５ｍＭトリス－ＨＣｌ、０．４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．５）を添加した。［１２５Ｉ］ＮａＩ溶液（１５～２０ＭＢｑ、１．２を参照）５μＬを添加した後、この混合物を反応チューブに移し、Ｉｏｄｏｇｅｎ（登録商標）１５０μｇでコーティングした。室温で１５分間インキュベートした後、混合物を酸化体から除去し、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製に供した。
１２５Ｉ－Ｆｃ－１３１
Figure 2024506700000156
１２５Ｉ－Ｆｃ－１３１を、上記のように調製し、ＲＰ－ＨＰＬＣ手順：
ＲＰ－ＨＰＬＣ（１５分で２０～５５％Ｂ）：ｔＲ＝９．３５分
に従って精製した。
４．２ ９９ＭＴＣ標識
ペプチドの９９ｍＴｃＯ４ －での標識を、使用したキレーターに依存して行った。ペプチドおよびそれぞれの混合材料（水溶液から新たに得るか、または予め配合し、凍結乾燥したキットとして使用するかのいずれか）を、新たに溶離した９９ｍＴｃ－ペルテクネテートと反応させた（１．２を参照）。
４．２．１ ｍａｓ３から誘導されるキレーター
標識混合物は、溶液中でも、凍結乾燥製剤を用いる場合でも、同じ成分を含有していた（４９）：
ストック１：ナトリウム－ホスフェート－二塩基性二水和物１．７８ｇをＨ２Ｏ（５０．０ｍＬ）に溶解した（＝溶液１）。ナトリウム－ホスフェート－一塩基性一水和物１．３８ｇをＨ２Ｏ（５０．０ｍＬ）に溶解した（＝溶液２）。溶液１（４７．３５ｍＬ）および溶液２（２．６５ｍＬ）を混合して、ストック１を得た。
ストック２：ストック１（５．００ｍＬ）を、Ｈ２Ｏ（５．００ｍＬ）で希釈して、ストック２を得た。
ストック３：それぞれのペプチドを、ＤＭＳＯもしくはＨ２Ｏまたはそれらの混合物に溶解して、通常１．００ｍＭの濃度にした。
ストック４：酒石酸二ナトリウム無水物（ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）２．５０ｇを、ストック１に溶解して、ストック４を得た。
ストック５：アスコルビン酸３０．０ｍｇをＨＣｌ水溶液１０．０ｍＬ（１０．０ｍＭ）と混合した。
ストック６：塩化スズ（ＩＩ）二水和物４．００ｍｇを、ストック５（１．０ｍＬ）に溶解した。この溶液を、すべての標識実験毎に新たに調製した。
標識混合物またはキットを、次の指示に従い、ストック溶液を混合することによって調製した。
ストック１：６．７６μＬ
ストック２：１０．０μＬ
ストック３：５．００μＬ
ストック４：８．００μＬ
ストック６：２．００μＬ
新たに溶離した９９ｍＴｃ－ペルテクネテート（０．１０～５．００μＬ、５０．０～８５０ＭＢｑ）を添加し、この混合物を９５℃で３０分間加熱した。品質管理を、反応混合物から直接、放射性ＴＬＣおよび放射性ＲＰ－ＨＰＬＣによって実行した。
放射性ＲＰ－ＨＰＬＣ：Ｒｔ（９９ｍＴｃＯ４ －）＝ｔ０、Ｒｔ（９９ｍＴｃ－コロイド）＝ｔ０、Ｒｔ（９９ｍＴｃ－タルトレート）＝２～３分、Ｒｔ（９９ｍＴｃ－ペプチド）＝＞３分。
異なる移動相を使用するシリカをコーティングした６０ＲＰ－１８Ｆ２５４ｓ片での放射性ＴＬＣ：
ＮＨ４ＯＡｃ／ＤＭＦ（１／１、ｖ／ｖ）：Ｒｆ（９９ｍＴｃＯ４ －）＝１、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－コロイド）＝０、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－タルトレート）＝０．５～０．８分、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－ペプチド）＝０．８～１。
２－ブタノン：Ｒｆ（９９ｍＴｃＯ４ －）＝１、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－コロイド）＝０、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－タルトレート）＝０分、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－ペプチド）＝０。
ＮａＣｌ（Ｈ２Ｏ中２５ｖｏｌ％）：Ｒｆ（９９ｍＴｃＯ４ －）＝０、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－コロイド）＝１、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－タルトレート）＝０．５～０．８分、Ｒｆ（９９ｍＴｃ－ペプチド）＝０。
４．２．２ キレーターとしてのＨＹＮＩＣ
標識混合物は、溶液中でも、凍結乾燥製剤を用いる場合でも、同じ成分を含有していた（５０）。
ストック１：エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）をＮａＯＨ水溶液（０．１０Ｍ）に溶解して、１０．０ｇ／Ｌの濃度にした。
ストック２：酒石酸二ナトリウム二水和物をＮａＨ２ＰＯ４緩衝液（４０．０ｇ／Ｌ）に溶解して、４０．０ｇ／Ｌの濃度にした。
ストック３：塩化スズ（ＩＩ）二水和物をアスコルビン酸ナトリウム水溶液（０．０１Ｍ ＨＣｌ中３．００ｇ／Ｌ）に溶解して、１．５０ｇ／Ｌの濃度にした。この混合物を、すべての標識実験毎に新たに調製した。
ストック４：それぞれのペプチドを、ＤＭＳＯもしくはＨ２Ｏまたはそれらの混合物に溶解して、通常１．００ｍＭの濃度にした。
標識混合物またはキットを、次の指示に従い、ストック溶液を混合することによって調製した。
ストック１：５０．０μＬ
ストック２：５０．０μＬ
ストック３：５．３３μＬ
ストック４：５．００μＬ
新たに溶離した９９ｍＴｃ－ペルテクネテート（０．１０～５．００μＬ、５０．０～８５０ＭＢｑ）を添加し、この混合物を９５℃で２０分間加熱した。品質管理を、上記のように、反応混合物から直接、放射性ＴＬＣおよび放射性ＲＰ－ＨＰＬＣによって実行した（４．２．１を参照）。
４．２．３ キレーターとしてのＮ４
標識混合物は、溶液中でも、凍結乾燥製剤を用いる場合でも、同じ成分を含有していた。
ストック１：Ｎａ２ＨＰＯ４をＨ２Ｏに溶解して、０．０５Ｍの濃度（ｐＨ＝１１．５）にした。
ストック２：クエン酸二ナトリウムセスキ水和物をＨ２Ｏに溶解して、０．１０Ｍの濃度にした。
ストック３：塩化スズ（ＩＩ）二水和物をアスコルビン酸ナトリウム水溶液（０．０１Ｍ ＨＣｌ中３．００ｇ／Ｌ）に溶解して、１．００ｇ／Ｌの濃度にした。この混合物を、すべての標識実験毎に新たに調製した。
ストック４：それぞれのペプチドを、ＤＭＳＯもしくはＨ２Ｏまたはそれらの混合物に溶解して、通常１．００ｍＭの濃度にした。
標識混合物またはキットを、次の指示に従い、ストック溶液を混合することによって調製した。
ストック１：２５．０μＬ
ストック２：３．００μＬ
ストック３：５．００μＬ
ストック４：７．５０μＬ
新たに溶離した９９ｍＴｃ－ペルテクネテート（０．１０～５．００μＬ、５０．０～８５０ＭＢｑ）を添加し、この混合物を９０℃で１０分間加熱した。品質管理は、上記のように、反応混合物から直接、放射性ＴＬＣおよび放射性ＲＰ－ＨＰＬＣによって実行した（４．２．１を参照）。
４．３ １７７ＬＵ標識
ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡ－ＧＡを有するペプチドの１７７Ｌｕ標識のために、０．５～２ｎｍｏｌのそれぞれのペプチド（ストック、ＤＭＳＯもしくはＨ２Ｏまたはそれらの混合物から直接）を、酢酸ナトリウム水溶液緩衝液（１．００Ｍ、ｐＨ＝５．５０）１０μＬと混合した。通常５～８０ＭＢｑの間の所望の放射能量の［１７７Ｌｕ］ＬｕＣｌ３（ＨＣｌ中０．０４Ｍ）を添加し、この混合物をＨＣｌ（０．０４Ｍ）で希釈して、総体積を１００μＬにした。９５℃で３０分後、アスコルビン酸ナトリウム１０μＬ（０．１０Ｍ）を添加して放射線分解を防止し、放射性ＲＰ－ＨＰＬＣおよび放射性ＴＬＣによる反応制御を実行した。
シリカをコーティングした６０ＲＰ－１８Ｆ２５４ｓおよび移動相ＮＨ４ＯＡｃ／ＤＭＦ（１／１；ｖ／ｖ）：
Ｒｆ（１７７ＬｕＣｌ３）＝０、Ｒｆ（１７７Ｌｕ－コロイド）＝０、Ｒｆ（１７７Ｌｕ－ペプチド）＝１．
セルロースＩＴＬＣ－ＳＧ紙および移動相クエン酸三ナトリウム（０．１０Ｍ）：
Ｒｆ（１７７ＬｕＣｌ３）＝１、Ｒｆ（１７７Ｌｕ－コロイド）＝０、Ｒｆ（１７７Ｌｕ－ペプチド）＝０。
４．４ １８Ｆ標識
ＳｉＦＡを有するペプチドの標識を、近刊の文献（５１）に従って実現した。手短に言えば、ＳＡＸカートリッジ（Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ Ｃａｒｂｏｎａｔｅライト）を、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）でコンディショニングし、その後、１８Ｆ－フルオリド水溶液を通過させた。カートリッジを空気１０ｍＬでパージし、ＡＣＮ１０ｍＬで乾燥させ、次いで、さらに空気２０ｍＬでパージして微量の水を除去した。１８Ｆ－フルオリドを１００μｍｏｌ［Ｋ＋⊂２．２．２］ＯＨ－（５００μＬＡＣＮ中）で溶離し、シュウ酸（ＡＣＮ中１．００Ｍ）２５μＬを添加することによってｐＨを調整した。
この混合物を、１つまたは複数の標識実験に使用した。所望の放射能量（通常３０～５００ＭＢｑ）を１０～２５μｍｏｌの、それぞれのＳｉＦＡを有するペプチド（ＤＭＳＯ中ストックから直接）と混合し、この混合物を室温で５分間インキュベートした。次いで、反応混合物をＨＥＰＥＳ緩衝液（０．１０Ｍ、ｐＨ＝３）９ｍＬで希釈した。この混合物をＳｅｐ－ＰａｋＣ１８ライトカートリッジに通過させることによって、未反応の１８Ｆ－フルオリドから生成物を単離した。カートリッジをＨ２Ｏ（１０ｍＬ）でパージした後、ペプチドをＥｔＯＨ／ＰＢＳ混合物（１／１；ｖ／ｖ）５００μＬで溶離した。放射化学的純度を、放射性ＲＰ－ＨＰＬＣおよび放射性ＴＬＣを使用して決定した。
シリカをコーティングした６０ＲＰ－１８Ｆ２５４ｓおよび移動相ＡＣＮ／ＰＢＳ（１／１；ｖ／ｖ；＋１０ｖｏｌ％ＮａＯＡｃ（Ｈ２Ｏ中２．００Ｍ）；＋１ｖｏｌ％ＴＦＡ）：
Ｒｆ（１８Ｆ－フルオリド）＝０、Ｒｆ（１８Ｆ－ペプチド）＝０．８～１。
４．５ ６８ＧＡ標識
ＤＯＴＡを有するペプチドおよびＤＯＴＡ－ＧＡを有するペプチドの６８Ｇａ標識を、文献（３４）に従って実現した。Ｓｃｉｎｔｏｍｉｃｓ製自動ＧａｌｌＥｌｕｔ＋シテムを使用した。手短に言えば、ＩＴｈｅｍｂａ ＬＡＢＳ製６８Ｇｅ／６８ＧａジェネレーターをＨＣｌ水溶液（１．００Ｍ）で溶離し、画分（通常１．２５ｍＬ、５００～７００ＭＢｑ）を、２～５ｎｍｏｌのそれぞれのペプチドを予め充填しておいた反応バイアル（ＡＬＬＴＥＣＨ、５ｍＬ）に移した。反応混合物を９５℃で５分加熱し、その後、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）でプレコンディショニングしたＳｅｐ－Ｐａｋ Ｃ８ライトカートリッジに通過させた。生成物を、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（１／１；ｖ／ｖ）２ｍＬで溶離し、カートリッジをＰＢＳ（１ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１ｍＬ）でパージし、その後、ＥｔＯＨを真空中で留去した。放射化学的純度を放射性ＴＬＣによって査定した。
シリカをコーティングした６０ＲＰ－１８Ｆ２５４ｓおよび移動相ＮＨ４ＯＡｃ／ＤＭＦ（１／１；ｖ／ｖ）：
Ｒｆ（６８ＧａＣｌ３）＝０、Ｒｆ（６８Ｇａ－コロイド）＝０、Ｒｆ（６８Ｇａ－ペプチド）＝１。
セルロースＩＴＬＣ－ＳＧ紙および移動相クエン酸三ナトリウム（０．１０Ｍ）：
Ｒｆ（６８ＧａＣｌ３）＝１、Ｒｆ（６８Ｇａ－コロイド）＝０、Ｒｆ（６８Ｇａ－ペプチド）＝０。
４．６ ６７ＧＡ標識
ＤＯＴＡを有するペプチドの６７Ｇａでの標識を、文献（５２）に記載された方法と同様に行った。手短に言えば、［６７Ｇａ］クエン酸ＧａをＳＥＰ－Ｐａｋシリカライトカートリッジに固定化し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄し、所望の体積のＨＣｌ（０．１Ｍ）で溶離した。次いで、得られた６７ＧａＣｌ３溶液の画分をＨＥＰＥＳで希釈して、総体積を２００μＬにし、ペプチド（５ｎｍｏｌ、Ｈ２Ｏ）に加えた。次いで、この混合物を９５℃に３０分間加熱し、ＰＢＳで希釈して、体積を少なくとも３ｍＬにし、ＳＥＰ Ｐａｋ Ｃ８ライトカートリッジに通過させて過剰な６７ＧａＣｌ３を除去した。標識したペプチドをＥｔＯＨ／ＰＢＳ（１／１；ｖ／ｖ）混合物０．５ｍＬで溶離した。放射化学的収率および純度を放射性ＴＬＣによって査定した。
シリカをコーティングした６０ＲＰ－１８Ｆ２５４ｓおよび移動相ＮＨ４ＯＡｃ／ＤＭＦ（１／１；ｖ／ｖ）：
Ｒｆ（６７ＧａＣｌ３）＝０、Ｒｆ（６７Ｇａ－コロイド）＝０、Ｒｆ（６７Ｇａ－ペプチド）＝１。
セルロースＩＴＬＣ－ＳＧ紙および移動相クエン酸三ナトリウム（０．１０Ｍ）：
Ｒｆ（６７ＧａＣｌ３）＝１、Ｒｆ（６７Ｇａ－コロイド）＝０、Ｒｆ（６７Ｇａ－ペプチド）＝０。
５．ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験
５．１ ＩＣ５０の決定
ＣＸＣＲ４陽性Ｊｕｒｋａｔ Ｔリンパ球細胞を、１０ｖｏｌ％ＦＢＳを添加したＧｉｂｃｏのＲＰＭＩ１６４０ＧｌｕｔａＭＡＸ培地中で増殖させ、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験では、細胞を、血球計算盤で、コントラスト剤としてトリパンブルーを使用して計数した。細胞懸濁液を遠心分離し、ペレットをＨＢＳＳ（＋１ｗｔ％ＢＳＡ）中に再懸濁させ、２百万細胞／ｍＬの濃度にした。８×３ポリスチレンチューブに、標準的なリガンド１２５Ｉ－Ｆｃ－１３１（４．１を参照、ＨＢＳＳ中１．００ｎＭ）２５μＬ、および調査するためのリガンド２５μＬをそれぞれの濃度で（１０－４～１０－１０Ｍ、各濃度につきｎ＝３）入れた。細胞懸濁液（４００．０００細胞／ウェル）２００μＬを添加して、１０－５～１０－１１Ｍの最終ペプチド濃度範囲を得た。チューブを８℃で２時間冷却して、内在化を防止した。上清を除去することによって実験を停止した。ＨＢＳＳ（２００μＬ）を細胞に添加し、懸濁液を遠心分離し、上清をそれぞれの最初の画分とともにプールした。このステップを再度繰り返し、その後、上清を含有するチューブおよび細胞ペレットを含有するものをγカウンター中で放射能量測定をした。
５．２ ｉｎｖＩＣ５０の決定
逆ＩＣ５０（ｉｎｖＩＣ５０）値の決定については、通常のＩＣ５０値の決定のためのプロトコルを、軽微な変更を加えて再開した。調査中のペプチドを放射性標識し、ストック溶液をＨＢＳＳ（２．００ｎＭ）中に調製した。標準的なリガンドＦｃ－１３１の濃度勾配をＨＢＳＳ（１０－４～１０－１０Ｍ）中に調製した。次いで、細胞チューブに、放射性ペプチド溶液２５μＬ、それぞれのＦｃ－１３１溶液２５μＬ、および細胞懸濁液（４００．０００細胞）２００μＬを含有させた。実験を上記のように行った。
５．３ 内在化の決定
ＣＸＣＲ４を発現するＣｈｅｍ＿１細胞を、１０ｖｏｌ％ＦＢＳ、１ｖｏｌ％ＮＥＡ、１ｖｏｌ％ＰｅｎＳｔｒｅｐおよび１ｖｏｌ％ＨＥＰＥＳ（１．００Ｍ）を添加したＤＭＥＭ－Ｆ１２培地中で増殖させた。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験では、培地を除去し、細胞をトリプシン／ＥＤＴＡ（０．０５％／０．０２％；ｗ／ｖ）で３７℃にて３０分インキュベートすることによって、細胞を回収した。細胞を計数し、実験の２４±２時間前に２４ウェルプレートに播種した（１００．０００細胞／ウェル）。
培地を除去し、細胞を、ＤＭＥＭ－Ｆ１２（＋５ｗｔ％ＢＳＡ）２００μＬ中で、３７℃にて１５分間インキュベートした。受容体を遮断するために、各ウェル（各時点でｎ＝３）をＤＭＥＭ－Ｆ１２（＋５ｗｔ％ＢＳＡ）２５μＬまたはＡＭＤ３１００ストック（Ｈ２Ｏ中１ｍＭ）２５μＬのいずれかで処理した。実験は二重トレーサー法として行ったため、標準的なリガンド１２５Ｉ－Ｆｃ－１３１および調査中の放射性標識したペプチドを各々２．００ｎＭの濃度で含有する放射性トレーサー溶液を調製した。このストック２５μＬを、ウェルに添加し（１２５Ｆｃ－１３１の最終濃度：０．２０ｎＭ；調査中のペプチドの最終濃度：０．２０ｎＭ）、細胞を３７℃でそれぞれの時間、インキュベートした。
ウェルプレートを氷上に置き、上清を除去することによって実験を停止した。細胞を、非放射性ＨＢＳＳ（２５０μＬ）で洗浄し、各ウェルにつき、一定量の未結合の放射性リガンドを含む両方の画分を合わせた。
冷酸洗浄剤（酢酸水溶液中０．０２Ｍ ＮａＯＡｃ、ｐＨ＝５）２５０μＬを添加し、細胞を氷上で１５分間インキュベートした。上清を除去し、細胞を冷ＨＢＳＳで洗浄し、それぞれの画分を合わせて、一定量の表面に結合した放射性リガンドを得た。
次いで、細胞を、ＮａＯＨ（Ｈ２Ｏ中１．００Ｍ）３００μＬで室温にて少なくとも３０インキュベートし、その後、上清を除去した。ウェルを別のＮａＯＨ（３００μＬ）で洗浄し、一定量の内在化した放射性リガンドを含有する画分を合わせた。
３つの異なる画分を、γカウンター中で放射能量測定し、調査中のペプチドの標識化に使用した放射性核種の放射能量を最初に測定した。最初の放射性核種の半減期に応じて適切な時間をおいた後、１２５Ｉの放射能量を調べるため、同じ画分を再度測定した。データを非特異的内在化について補正し、標準的なリガンド１２５Ｉ－Ｆｃ－１３１の特異的内在化を参照とした。
５．４ オクタノール／ＰＢＳ分配係数の決定
調査中のリガンド（通常、放射性同位体に依存して０．５０～３．００ＭＢｑ）をＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）中に希釈して総体積を１．００ｍＬにし、低吸着エッペンドルフチューブ中でｎ－オクタノール１．００ｍＬと混合した（ｎ＝８）。チューブを最高速度で３分間ボルテックスして平衡を確保し、その後、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＧｍｂＨ（Ｏｓｔｅｒｏｄｅ、ドイツ）製Ｂｉｏｆｕｇｅ１５にて、１５．０００×ｇで５分間遠心分離した。各画分の１００μＬのアリコートをγカウンター中で測定し、ｌｏｇＤ７．４を次のように計算した。
Figure 2024506700000157
６．ｉｎ ｖｉｖｏ実験
６．１ マウスモデルおよび腫瘍モデル
すべての動物実験は、ドイツの一般動物福祉規制、ならびに動物の飼育および使用の組織的ガイドラインに従って行った。腫瘍異種移植を確立するため、Ｊｕｒｋａｔ細胞（２～３×１０７細胞）を、ＧｉｂｃｏのＲＰＭＩ１６４０培地とＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）製Ｍａｔｒｉｇｅｌ（１／１；ｖ／ｖ）との混合物中に懸濁させ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＧｍｂＨ（Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）または社内マウス飼育設備のいずれかから調達した６～１０週齢のＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスの右肩に皮下接種した。マウスは、腫瘍が直径５～８ｍｍに成長したときに（接種後４～１０週間）使用した。
６．２ μＳＰＥＣＴ／μＰＥＴ／ＣＴイメージング
イメージング実験を、ＭＩＬａｂｓ ＢＶ．（Ｕｔｒｅｃｈｔ、オランダ）製ＶＥＣＴｏｒ４小動物ＳＰＥＣＴ／ＰＥＴ／ＯＩ／ＣＴで行った。結果のデータを付属のＰＭＯＤ（バージョン４．０）ソフトウェアで分析した。マウスをイソフルランで麻酔し、放射性標識化合物を尾静脈経由で注射した。それぞれの距離に行き渡った後、マウスを安楽死させ、後の生体内分布試験用の血液試料を心穿刺によって採取し、その後、画像を取得した。静態像は、４５分の撮像時間で、ＳＰＥＣＴ同位体についてはＨＥ－ＧＰ－ＲＭコリメーターおよび段階的多断面ベッド移動を使用し、ＰＥＴ同位体についてはＨＥ－ＵＨＲ－Ｍコリメーターおよび段階的らせん状ベッド移動を使用して取得した。すべての画像は、ＭＩＬａｂｓ－Ｒｅｃソフトウェア（バージョン１０．０２）およびピクセルベースの類似性制御サブセット化期待値最大化法（Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ－Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｏｒｄｅｒｅｄ Ｓｕｂｓｅｔｓ Ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ Ｍａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ：ＳＲＯＳＥＭ）アルゴリズムをウインドウベースの錯乱補正（それぞれ光電ピークの２０％未満および２０％超）とともに使用して再構築した。（ボクセルサイズＣＴ：８０μｍ、ボクセルサイズＳＰＥＣＴ／ＰＥＴ：０．８ｍｍ、１．６ｍｍ（ＦＷＨＭ）Ｇａｕｓｓｉａｎぼかし後処理フィルター、校正係数（単位ｋＢｑ／ｍＬ）および減衰補正有り、吸収補正なし）
６．３ 生体内分布試験
およそ０．５～２０ＭＢｑ（０．０２～０．２０ｎｍｏｌ）の、１２５Ｉ標識、１７７Ｌｕ標識、９９ｍＴｃ標識、１８Ｆ標識または６８Ｇａ標識したリガンドを、Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスの尾静脈に注射し、それぞれの生体内に分布する時間をおいた後に動物を処分した。選択した器官を除去し、秤量し、γカウンター中で測定した。
ＩＩ．結果
１．テクネチウム－９９Ｍ ＳＰＥＣＴトレーサー
１．１ ｍａｓ３コンジュゲートペプチド
１．１．１ 化学構造
ｍａｓ３コンジュゲート化合物Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－１～－８の化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000158
Figure 2024506700000159
１．１．２ ｉｎ－ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000160
１．１．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000161
Figure 2024506700000162
Figure 2024506700000163
Figure 2024506700000164
１．１．４ マウスイメージング試験
図１は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－６注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
１．１．５ 内在化試験
Figure 2024506700000165
１．２ 修飾ｍａｓ３コンジュゲートペプチド
１．２．１ 化学構造
修飾ｍａｓ３コンジュゲート化合物Ｔｃ－ＣＸＣＲ４－９～－１２の化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000166
Figure 2024506700000167
１．２．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000168
１．２．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000169
Figure 2024506700000170
１．２．４ マウスイメージング試験
図２は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－９注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図３は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１１注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図４は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１２注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
１．２．５ 内在化試験
Figure 2024506700000171
Figure 2024506700000172
１．３ 固定されたキレーター系ペプチド
１．３．１ 化学構造
ＨＹＮＩＣおよびＮ４を含む固定されたキレーターを伴うペプチドであるＴｃ－ＣＸＣＲ４－１３～－１６の化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000173
Figure 2024506700000174
１．３．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000175
１．３．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000176
Figure 2024506700000177
１．３．４ マウスイメージング試験
図５は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１３注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図６は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１４注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図７は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、９９ｍＴｃ－ＣＸＣＲ４－１４注射後２時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、１～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
１．３．５ 内在化試験
Figure 2024506700000178
Figure 2024506700000179
１．３．６ ｉｎ ｖｉｖｏ試験
［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４について良好な前臨床データが得られたため、このリガンドを、多発性骨髄腫に罹患している患者における最初の概念実証試験用に選択した。［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の放射性合成を、上記の章４．２．３に記載されているとおりに手作業で実行した。４３０～６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４を注射した後、注射後５分～２１時間で画像を取得した。スキャニング手順の詳細は以下に記載される。
図８は、多発性骨髄腫に罹患している女性患者のＳＰＥＣＴおよびＰＥＴイメージングから取得した最大値投影（ＭＩＰ）画像を示す。Ａ）［１８Ｆ］ＦＤＧのＰＥＴ ＭＩＰ（注射後１時間、１８９ＭＢｑの［１８Ｆ］ＦＤＧ）、Ｂ）［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４のＳＰＥＣＴ ＭＩＰ（注射後３時間、６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４）。直線矢印は腫瘍病変を示し、点線矢印は、心臓における［１８Ｆ］ＦＤＧの生理学的取り込み、および脾臓における［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の生理学的取り込みを示す。
［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の生体内分布は、確立したＰＥＴトレーサー［６８Ｇａ］ペンチキサフォルの生体内分布に類似している（Ｌａｐａ Ｃ、Ｓｃｈｒｅｄｅｒ Ｍ、Ｓｃｈｉｒｂｅｌ Ａら、６８ＧａＰｅｎｔｉｘａｆｏｒ－ＰＥＴ／ＣＴ ｆｏｒ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣＸＣＲ４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ－Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｔｏ １８ＦＦＤＧ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｖａｌｕｅｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７：２０５～２１２．ｄｏｉ：１０．７１５０／ｔｈｎｏ．１６５７６）。健常な器官では、著しい取り込みが腎臓において認められる。脾臓における相対的に高い取り込みは、ヒトにおける既知のＣＸＣＲ４の発現およびＣＸＣＲ４に向かうリガンドの取り込みを反映する。著しい取り込みはまた、肝臓および骨髄においても認められ、この両者は、ＣＸＣＲ４を生理学的状態で発現するが、病的状態では一層多く発現することが知られている（Ｐｈｉｌｉｐｐ－Ａｂｂｒｅｄｅｒｉｓ Ｋ、Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｋ、Ｋｎｏｐ Ｓら、Ｉｎ ｖｉｖｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣＸＣＲ４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１５；７：４７７～４８７．ｄｏｉ：１０．１５２５２／ｅｍｍｍ．２０１４０４６９８；Ｖａｇ Ｔ、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ Ｃ、Ｈｅｒｈａｕｓ Ｐら、Ｆｉｒｓｔ Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｗｉｔｈ Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣＸＣＲ４－Ｔａｒｇｅｔｅｄ ＰＥＴ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｓｏｌｉｄ Ｃａｎｃｅｒｓ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．２０１６；５７：７４１～７４６．ｄｏｉ：１０．２９６７／ｊｎｕｍｅｄ．１１５．１６１０３４）。血液プールの取り込みの低さ、および非標的組織からのトレーサーのクリアランスの速さは、前臨床実験で確認されたトレーサーの顕著な標的潜在力（ＩｎｖＩＣ５０＝１０．２ｎＭ、内在化（１２５Ｉ－ＦＣ－１３１の％で）＝７４２％）と組み合わされた［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の適切な親水性（ｌｏｇＤ７．４＝－１．７５）の結果であることはほぼ確実である。腫瘍病変においてトレーサーの取り込みが高く、同時に背景組織において蓄積が低いことにより、複数転移の可視化が高コントラストで可能になる（図８、Ｂ）。軸断面のＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像は、［１８Ｆ］ＦＤＧを使用したＰＥＴ／ＣＴスキャンと一致して、病変の取り込みの高さ、および骨盤内の溶骨性病変における［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の有益な解像度を表示することによって、トレーサーの潜在能力をさらに認めるものである（図９）。［１８Ｆ］ＦＤＧ陽性の病変のうち、ＣＸＣＲ４を標的とする［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４を用いたＳＰＥＣＴスキャンにおいて陰性と判明したものはなかった。図９Ａ）は、多発性骨髄腫に罹患している患者における６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の注射後３時間での軸断面のＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を示し、図９Ｂ）は、同じ患者における１８９ＭＢｑの［１８Ｆ］ＦＤＧの注射後１時間での軸断面のＰＥＴ／ＣＴ画像を示し、直線矢印は膀胱を示し、破線矢印は溶骨性病変を示す。
担腫瘍マウスでの前臨床試験において得られた知見とは反対に、ヒトの肝臓および肺においてリガンドの取り込みの実質的な上昇は検出されず、このことは、マウスの肝臓および肺における取り込みの上昇がリガンドのｍＣＸＣＲ４親和性に起因することを確証した。
胃および甲状腺における生理学的な取り込みは低く、他の正常器官と同等であり、このことは、［９９ｍＴｃ］－ペルテクネテートの汚染がないこと、または放射性金属のｉｎ ｖｉｖｏ消失を示した（Ｆｒａｎｋｅｎ ＰＲ、Ｇｕｇｌｉｅｌｍｉ Ｊ、Ｖａｎｈｏｖｅ Ｃら、Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ（９９ｍ）Ｔｃ－ｐｅｒｔｅｃｈｎｅｔａｔｅ ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｙｒｏｉｄ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｏｒｇａｎｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ－ｐｈｏｔｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｍｉｃｅ．Ｔｈｙｒｏｉｄ．２０１０；２０：５１９～５２６．ｄｏｉ：１０．１０８９／ｔｈｙ．２００９．０２１３）。
図１０は、同じ患者における［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の注射後５分～２１時間の間の生体内分布を示す。［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の、目的の様々な組織および器官における特異的線量を決定した。
図１０Ａ）は、多発性骨髄腫に罹患している女性患者における、６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の注射後５分、６０分、１２０分、５時間および２１時間でのＳＰＥＣＴイメージングから取得したＭＩＰ画像を示し、図１０Ｂ）は、同じ患者の選択した器官および組織について計算した特異的線量［μＧｙ／ＭＢｑ］を示す。
［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の時間分解生体内分布は、注射後５分などの早い時点でさえ、迅速なバックグラウンドクリアランス、ならびに病変ならびに脾臓および骨髄内の取り込みを再確認するものである。それより遅い時点で、胆汁を介するクリアランスの遅延は検出できず、このことは、腎臓を介するトレーサーのクリアランスを示す。しかしながら、腎臓および膀胱内の取り込みは、観察時間全体にわたって低いことが判明し、このことは、ＣＸＣＲ４を発現する組織においてリガンドの維持が長いことを示唆する（図１０ １０、Ｂ）。これは、前臨床実験において決定された、高い標的親和性およびＣＸＣＲ４を発現するがん細胞内への顕著な内在化の直接的な結果と思われる。
最高特異的線量が、脾臓（４７μＧｙ／ＭＢｑ）について、続いて肝臓（１４μＧｙ／ＭＢｑ）、骨形成原細胞（１３μＧｙ／ＭＢｑ）、赤色骨髄（１１μＧｙ／ＭＢｑ）および腎臓（１０μＧｙ／ＭＢｑ）について決定される（図１０ １０、Ｂ）。全身実効線量は、注射される６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４では６．３μＳｖ／ＭＢｑと計算され、これは送達される全身線量が３．８ｍＳｖであることを表す。器官に送達される特異的線量および全身実効線量は、ＰＳＭＡを標的とする［９９ｍＴｃ］ＰＳＭＡ Ｉ＆ＳまたはＣＸＣＲ４を標的とする［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｌなどの他のテクネチウム－９９ｍ標識リガンドと類似していることが判明している（Ｐ．Ｖａｌｌｅｊｏ－Ａｒｍｅｎｔａら、Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｅｄｉａ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ、２０２０、論文ＩＤ２５２５０３７、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５５／２０２０／２５２５０３７；Ｓ．Ｕｒｂａｎら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２０２１、６２（８）、１０７５～１０８１）。多発性骨髄腫の患者における［６８Ｇａ］ペンチキサフォルについて得られた線量測定データと比較して、［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４は、全身の吸収線量は高いが、特異的器官線量は低いことを示す（Ｋ．Ｈｅｒｒｍａｎｎら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２０１５、５６（３）、４１０～４１６）。
この概念実証試験は、臨床状況において［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４をさらに評価することの十分な根拠となる。
臨床ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージング
患者における［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４の臨床評価を、人道的使用（ｃｏｍｐａｓｓｉｏｎａｔｅ ｕｓｅ）の下、ドイツ薬事法（Ｇｅｒｍａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ａｃｔ：ＡＭＧ）１３条２ｂを遵守し、責任当局（Ｏｂｅｒｂａｙｅｒｎの政府）に従って行った。最初の概念実証試験は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｓｋｌｉｎｉｋｕｍ Ａｕｇｓｂｕｒｇ（Ａｕｇｓｂｕｒｇ、ドイツ）で行われた。
対象全員を、Ｏｐｔｉｍａ５４０ＣＴを備えたＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ＭＮ ＣＴ６７０Ｐｒｏ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｏｌｉｎｇｅｎ、ドイツ）で検査した。トレーサー注射後５分および６０分の全身のＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンを３０ｃｍ／分のスキャン速度で取得し、１２０分および３００分のスキャンを１２ｃｍ／分のスキャン速度で取得し、２１時間のスキャンを５ｃｍ／分のスキャン速度で取得した。ダブルヘッド技術を使用し、１２８×１２８のマトリックス（ズーム１）で、スキャンを６０サブセット取得した。トレーサー注射後６０分および１８０分のＳＰＥＣＴスキャンは、サブセット当たり８秒の曝露時間で取得し、２１時間のスキャンは、サブセット当たり１６秒の曝露時間で取得した。排出データにバターワースフィルター（０．４８）を適用して滑らかにし、サブセット化期待値最大化法アルゴリズム（２反復回数、１０サブセット）によって反復的に再構築した。４３０～６０４ＭＢｑの［９９ｍＴｃ］ＣＸＣＲ４－Ｔｃ－１４を注射した後、注射後５分～２１時間で画像を取得した。
選択した器官における特異的線量および実効線量を分析した。線量の計算のために、目的のボクセルを、全身の画像において取り込みの多い領域周辺で定義した。それぞれの器官の時間放射能曲線を自動的に決定し、トレーサーの滞留時間を、ＳＰＥＣＴカメラの特定の校正および標準的な放射能量値を使用して計算した。滞留時間を、Ｏｌｉｎｄａ／ＥＸＭソフトウェアにインプットデータとして使用した。この計算のアウトプットを、国際放射線防護委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）の線量測定ガイドラインに照らし合わせた。
臨床ＰＥＴ／ＣＴイメージング
患者における［１８Ｆ］ＦＤＧの臨床評価を、責任当局（Ｏｂｅｒｂａｙｅｒｎの政府）に従って行った。臨床試験は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｓｋｌｉｎｉｋｕｍ Ａｕｇｓｂｕｒｇ（Ａｕｇｓｂｕｒｇ、ドイツ）で行われた。
対象全員を、Ｂｉｏｇｒａｐｈ ｍＣＴ－Ｓ４０（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｉｎｅｅｒｓ、Ｅｒｌａｎｇｅｎ、ドイツ）で検査した。［１８Ｆ］ＦＤＧの注射後１時間の全身のＰＥＴ／ＣＴスキャンを、ベッドポジション当たり２分のスキャン速度で取得した。排出データを反復的に再構築した。低線量ＣＴを、吸収補正および解剖学的相関のために行った。１８９ＭＢｑの［１８Ｆ］ＦＤＧを注射した後、注射後１時間で画像を取得した。
２．ルテチウム－１７７／ガリウム－６８セラノスティクス
２．１ 化学構造
ＤＯＴＡを有するペプチドＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１～－５の化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000180
Figure 2024506700000181
２．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000182
２．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000183
Figure 2024506700000184
Figure 2024506700000185
Figure 2024506700000186
Figure 2024506700000187
Figure 2024506700000188
Figure 2024506700000189
２．４ マウスイメージング試験
図１１は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－１注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図１２は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－２注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図１３は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－３注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図１４は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４注射後１時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし（左）および有り（右、１００ｎｍｏｌ ＡＭＤ３１００）、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
図１５は、雌Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍マウスにおける、１７７Ｌｕ－ＣＸＣＲ４－ＤＯＴＡ－４注射後６時間の、ＣＴとＳＰＥＣＴとの両方のスキャンのＭＩＰを示す。競合物質なし、２～１０％ｉＤ／ｍＬ。白矢印は目的の器官を示す：実線＝腫瘍、点線＝腎臓、破線＝肝臓。
２．５ 内在化試験
Figure 2024506700000190
Figure 2024506700000191
３．フッ素－１８ＰＥＴトレーサー／放射ハイブリッド
３．１ 化学構造
ＳｉＦＡを有するペプチドおよび放射ハイブリッドの化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000192
Figure 2024506700000193
３．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000194
３．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000195
後で、２つの追加の生体内分布試験を行い、１および２ナノモルの非放射性物質をそれぞれ同時注射することによってこの問題を再調査した。この手法の狙いは、非放射性物質によるマウスＣＸＣＲ４受容体の部分的および完全な遮断であった。
図１６は、Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスにおける、［１８Ｆ、ｎａｔＧａ］ＣＸＣＲ４－ＳｉＦＡ－０７注射後１時間の生体内分布プロファイルを示す。異なる量の放射性リガンド、すなわち、３６ｐｍｏｌ、１，０００ｐｍｏｌおよび２，０００ｐｍｏｌを適用した。データは％ｉＤ／ｇ値で表され、３６ｐｍｏｌでの実験については動物５匹の平均±ＳＤである。他の両方の実験には動物各１匹を使用した。
動物の命を救うために、追加の試験はそれぞれ、マウス１匹のみを使用して行った。したがって、これらの実験で得られたデータは典型ではない。しかしながら、ある特定の傾向は推定され得る。１，０００ｐｍｏｌの非放射性物質の同時注射によって、循環放射性リガンドのレベルの上昇が認められる。血液中放射能量レベルは３１０％上昇し、膵臓（１９６％）および筋肉（２２６％）などのＣＸＣＲ４－組織における取り込みの増加につながる。この血液循環の拡大は、ＣＸＣＲ４＋器官である肝臓（１２１％）および脾臓（１１４％）において特に過小に示されており、これは初期受容体飽和を示唆する。リガンドの循環がより多いと、補充しない注射と比較してほぼ２倍の腫瘍取り込み（１８０％）が認められる。
２，０００ｐｍｏｌの非放射性物質が同時注射されると、著しい受容体飽和に到達する。３６ｐｍｏｌのリガンドのみでの初期生体内分布と比較して、器官取り込みにおける最も注目すべき変化がＣＸＣＲ４＋器官である脾臓（６１％）および肝臓（７０％）に見られ、より一層顕著な変化が腫瘍（４０％）に見られる。これらのデータセットは、腫瘍における取り込みがＣＸＣＲ４＋器官におけるｍＣＸＣＲ４受容体の利用能に依存するという上記の考え方を支持する。
３．４ 内在化試験
Figure 2024506700000196
Figure 2024506700000197
Figure 2024506700000198
４．細胞傷害性物質を結合したペプチド
４．１ 化学構造
細胞傷害性物質を結合した化合物ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－１～－４の化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000199
Figure 2024506700000200
４．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000201
４．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000202
４．４ 内在化試験
Figure 2024506700000203
細胞傷害効果
細胞傷害性の有効性の評価は、ＭｕｎｉｃｈのＫｌｉｎｉｋｕｍ Ｒｅｃｈｔｓ ｄｅｒ Ｉｓａｒ（ＴＵＭ）で、現在、Ｍｙｃに関連するがんの生物学的調査を率いるＵｌｒｉｃｈ Ｋｅｌｌｅｒ医学博士教授のグループと協力して行った。このグループは、ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２のｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞傷害性能力の分析のため、この化合物を受け取った。
それぞれの実験のために２つの細胞株を選択した。Ｂ細胞リンパ腫細胞株Ｕ２９３２およびＣＸＣＲ４をより高発現するリンパ芽球様Ｒａｊｉ細胞株。両方の細胞株を、ＰＤＣとともに、２４、４８、７２および９６時間、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭの様々な濃度でインキュベートした。次に、細胞生存率を、フローサイトメトリー実験において、死滅細胞について、マーカーとしてヨウ化プロピジウムを使用して査定した（図１７）。
図１７は、Ｒａｊｉ細胞（左側）およびＵ２９３２細胞（右側）を使用しての細胞生存率のフローサイトメトリー分析の結果を示す。細胞を、０、２４、４８、７２および９６時間、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭのＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともにインキュベートし、その後、ヨウ化プロピジウムで染色し、フローサイトメトリー分析をした。細胞の全数に対する生存細胞数が、細胞生存率である。
両方の細胞株での実験は、ＰＤＣの濃度を高くしてインキュベートした細胞の細胞生存率が減少したことを示す。さらに、インキュベート時間が長くなると細胞生存率が全体的に降下したため、時間依存的な効果が認められ得る。換言すると、ＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２を用いるインキュベートによって誘導される細胞死は、使用されるＰＤＣの量およびインキュベート時間と一致する。逸脱したデータ点は、サンプルサイズが小さいことに原因があり得、したがって実験の失敗である可能性がある。図１８は、１８の結果を示し、ＰＤＣを用いたインキュベートで死滅したがん細胞の量を可視化するものである。
図１８は、Ｒａｊｉ細胞およびＵ２９３２細胞を使用した細胞生存率のフローサイトメトリー分析の結果を示す。細胞を、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭのＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともに９６時間インキュベートし、その後、ヨウ化プロピジウムで染色し、死滅細胞のフローサイトメトリー分析をした。
１０、２０および４０ｎＭの濃度については、Ｕ２９３２細胞と比較してかなり高い割合の死滅Ｒａｊｉ細胞が検出され得る。この知見は、Ｕ２９３２細胞と比較して、Ｒａｊｉ細胞のＣＸＣＲ４発現がより高いこと、およびＰＤＣの取り込みがおそらくより効率的であることと一致する。この場合も、１００ｎＭデータ点の逸脱した結果はサンプルサイズの小ささに起因するものと思われる。
Ｕ２９３２細胞の細胞周期プロファイリング実験を、様々な濃度のＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともに７２時間インキュベートした後に実行した。この目的のため、細胞を固定し、透過処理し、ヨウ化プロピジウムで処理した。次に、Ｇ０／Ｇ１期、Ｓ期およびＧ２／Ｍ期の細胞数を、使用されたＰＤＣの量に関して測定した。
図１９は、Ｕ２９３２細胞を使用しての細胞周期プロファイリング実験の結果を示す。細胞を、０（ブランク）、１０、２０、４０および１００ｎＭのＣＸＣＲ４－ＭＭＡＥ－０２とともに７２時間インキュベートし、固定し、透過処理し、ヨウ化プロピジウムで染色した。Ｇ０／Ｇ１期、Ｓ期またはＧ２／Ｍ期の細胞の割合を決定した。
図１９は、１９の結果を示し、ＰＤＣの量を増加させてインキュベートすることにより、Ｇ２／Ｍ期（有糸分裂／細胞分裂期）に留まる細胞数がより多くなることを示す。このデータは、ＭＭＡＥが細胞の内部に放出され、微小管重合を阻害し、複製前に細胞の停止を導くことを示唆する。この誘導された細胞周期停止は、次に、がん細胞のアポトーシスを操作するキナーゼなどのチェックポイントセンチネル（ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｓｅｎｔｉｎｅｌ）の活性化をもたらすと思われる。
５．光学イメージング化合物
５．１ 化学構造
光学イメージング化合物ＣＸＣＲ４－ＯＩ－１～－３の化学構造が、以下に図示される。
Figure 2024506700000204
Figure 2024506700000205
５．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏデータ
Figure 2024506700000206
５．３ 生体内分布試験
Figure 2024506700000207
Figure 2024506700000208
ＣＸＣＲ４＋器官の部分的遮断が、いかに腫瘍取り込みに便益を与えるかについて、別の生体内分布試験において、放射性リガンドを低モル活性で使用して試験した。動物の命を救うために、この試験にはマウス１匹のみを使用した。したがって、得られた生体内分布は典型ではない。しかしながら、ある特定の傾向は推定され得る。図２０は、実験の結果の概要である。
図２０は、Ｊｕｒｋａｔ担腫瘍雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスにおける、［１７７Ｌｕ］ＣＸＣＲ４－ＯＩ－０３注射後１時間の生体内分布プロファイルを示す。異なる量の放射性リガンド、すなわち５９ｐｍｏｌおよび１，０００ｐｍｏｌを適用した。データは％ｉＤ／ｇ値として表され、５９ｐｍｏｌでの実験では動物５匹の平均±ＳＤであり、他方の実験では動物１匹を使用した。
１，０００ｐｍｏｌの非放射性ペプチドを注射すると、ＣＸＣＲ４＋器官である肺（－２３％）、肝臓（－１０％）および脾臓（－２３％）における取り込みの減少が認められる。したがって、腫瘍取り込みは１．６倍に増加し、これは、循環中のより多い量のペプチドが腫瘍内に蓄積することを示す。したがって、腫瘍取り込みが低い場合、それは、ＣＸＣＲ４＋器官におけるリガンドの捕捉に起因し、標的潜在力の欠如の結果ではないと思われる。
５．４ 内在化試験
Figure 2024506700000209

Claims (15)

  1. 式（Ｉ）：
    Figure 2024506700000210
     ［式中、
    ａは０または１であり、
    ｂは０または１であり、
    ｃは０または１であり、および
    ｄは０または１であり、但し、ｃおよびｄのうち少なくとも１つは１であり、
    ｅは１～４の整数であり、
    ＲＣＰは式（ＩＩ）：
    Figure 2024506700000211
     （ここで、式（ＩＩ）において、
    ＲＢ１はＨまたはＩであり、
    ＲＢ２はアルカンジイル鎖であり、
    破線は、ＲＣＰ基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる結合を示す）
    のシクロペプチド基であり、
    ＲＬ１はＨまたはアルキルであり、
    ＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２から選択される少なくとも１つの基で置換されている置換アルキルであり、ＸはＮＨおよびＯから選択され、
    ＲＬ３は、－ＣＨ２－ＮＨ２または－ＣＨ２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）であり、
    ＲＬ４は－ＮＨ２であり、
    Ｘ１はカップリング基であり、
    ＲＳは二価のスペーサー基であり、および
    ＲＡは、診断上または治療上の有用性を有する部分を含む官能基である］
    の化合物またはその塩。
  2. 式（Ｉ）のＲＬ１基は、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキル、より好ましくはＨまたはＣ１～３アルキルである、請求項１に記載の化合物または塩。
  3. 式（Ｉ）のＲＬ２は、－ＮＨ２および－ＮＨ－Ｃ（＝Ｘ）－ＮＨ２基から選択される１つの置換基を有する、Ｃ１～Ｃ６アルキル、より好ましくはＣ１～Ｃ４アルキル、より一層好ましくはＣ２～Ｃ４アルキルであり、ＸはＮＨまたはＯである、請求項１または２に記載の化合物または塩。
  4. 式（Ｉ）のＸ１は－Ｓ－である、請求項１から３のいずれかに記載の化合物または塩。
  5. 式（Ｉ）のｃは１であり、かつ式（Ｉ）のｄは０である、請求項１から４のいずれかに記載の化合物または塩。
  6. 式（Ｉ）のＲＳは、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）Ｂ－ＮＨ－であり、Ｂは、３～１０、好ましくは４～６の整数であり、Ｎ末端の結合はＲＡに結合している、請求項１から５のいずれかに記載の化合物または塩。
  7. 式（Ｉ）のＲＡに含まれる診断上または治療上の有用性を有する部分は、
    （ｉ）キレート化部分、
    （ｉｉ）キレート化された放射性または非放射性の陽イオンまたは陰イオン、好ましくはキレート化された放射性または非放射性の陽イオンとともに、キレート化部分（ｉ）によって形成されるキレート、
    （ｉｉｉ）ケイ素原子およびフッ素原子を含むフッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分であって、前記フッ素原子が共有結合を介して直接前記ケイ素原子に結合しており、前記ＳｉＦＡ部分が、１９Ｆの１８Ｆによる同位体交換によって１８Ｆで標識されることが可能であるか、または１８Ｆによって標識されている、フッ化ケイ素アクセプター（ＳｉＦＡ）部分、
    （ｉｖ）細胞傷害性部分、および
    （ｖ）蛍光部分
    から選択される、請求項１から６のいずれかに記載の化合物または塩。
  8. （ｉ）および（ｉｉ）に記載のキレート化部分は、４３Ｓｃ、４４Ｓｃ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５２ｍＭｎ、５８Ｃｏ、５２Ｆｅ、５６Ｎｉ、５７Ｎｉ、ｎａｔＣｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６６Ｇａ、ｎａｔＧａ、６８Ｇａ、６７Ｇａ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、８６Ｙ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、９７Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１０ｍＩｎ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１４ｍＩｎ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４７Ｎｄ、１４９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５６Ｅｕ、１５７Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６４Ｔｂ、１６１Ｈｏ、１６６Ｈｏ、１５７Ｄｙ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１６０Ｅｒ、１６５Ｅｒ、１６９Ｅｒ、１７１Ｅｒ、１６６Ｙｂ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１６７Ｔｍ、１７２Ｔｍ、ｎａｔＬｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８８Ｗ、１９１Ｐｔ、１９５ｍＰｔ、１９４Ｉｒ、１９７Ｈｇ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、ｎａｔＰｂ、２１２Ｐｂ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２５Ａｃおよび２２７Ｔｈの陽イオンから、ならびに１８Ｆ－［ＡｌＦ］２＋などの１８Ｆを含む陽イオン性分子から選択される陽イオンに対するキレート配位子として適しているキレート化部分である、請求項７に記載の化合物または塩。
  9. （ｉ）および（ｉｉ）に記載のキレート化部分は、ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＣＢＴＥ２ａ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、４－（１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカ－１－イル）－メチル安息香酸（ＣＰＴＡ）、Ｎ’－［５－［アセチル（ヒドロキシ）アミノ］ペンチル］－Ｎ－［５－［［４－［５－アミノペンチル－（ヒドロキシ）アミノ］－４－オキソブタノイル］アミノ］ペンチル］－Ｎ－ヒドロキシブタンジアミド（ＤＦＯ）、４，１１－ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクレ［６．６．２］ヘキサデカン（ＤＯ２Ａ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）、２－［１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－４，７，１０－三酢酸］－ペンタン二酸（ＤＯＴＡＧＡまたはＤＯＴＡ－ＧＡ）、Ｎ，Ｎ’－ジピリドキシルエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ジアセテート－５，５’－ビス（ホスファト）（ＤＰＤＰ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１－（ｐ－ニトロベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロデカン－４，７，１０－トリアセテート（ＨＰ－ＤＯＡ３）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－コハク酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＳＡ）、１－（１－カルボキシ－３－カルボキシプロピル）－４，７－（カルボキシ）－１，４，７－トリアザシクロノナン（ＮＯＤＡＧＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、４，１１－ビス（カルボキシメチル）－１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＴＥ２Ａ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、テルピリジン－ビス（メチレンアミン）四酢酸（ＴＭＴ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロトリデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＲＩＴＡ）、およびトリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（Ｈ２マクロパ）、４－アミノ－４－｛２－［（３－ヒドロキシ－１，６－ジメチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバモイル］－エチル｝ヘプタン二酸ビス－［（３－ヒドロキシ－１，６－ジメチル－４－オキソ－１，４－ジヒドロ－ピリジン－２－イルメチル）－アミド］（ＴＨＰ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリス［メチレン（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸（ＴＲＡＰ）、２－（４，７，１０－トリス（２－アミノ－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯ３ＡＭ）、および１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７、１０－テトラキス［メチレン（２－カルボキシエチルホスフィン酸）］（ＤＯＴＰＩ）、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン四酢酸、メルカプトアセチル－トリセリン（ｍａｓ３）、ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）、ならびに３－（２－アミノエチルアミノ）－２－［（２－アミノエチルアミノ）メチル］プロパン酸（Ｎ４キレーター、６－カルボキシ－１，４，８，１１－テトラアザウンデカン）から選択されるキレート化剤によって、またはセリン残基のうち１つまたは複数が親水性側鎖を含有する別のアミノ酸に置換されている修飾メルカプトアセチルセリンキレート化剤によって提供される、請求項７または８に記載の化合物または塩。
  10. ＳｉＦＡ部分（ｉｉｉ）は、式（Ｓ－１）の基：
    Figure 2024506700000212
     ［式中、
    ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、直鎖または分岐鎖Ｃ３～Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、イソプロピルおよびｔｅｒｔ－ブチルから選択され、より好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、両者ともｔｅｒｔ－ブチルであり、破線で示された結合は、式（Ｓ－１）の基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる］
    を含む、請求項７から９のいずれかに記載の化合物または塩。
  11. ＳｉＦＡ部分（ｉｉｉ）は、式（Ｓ－２）の基および式（Ｓ－３）の基：
    Figure 2024506700000213
     ［式中、
    ｎは、１、２、または３であり、好ましくは１であり、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、直鎖または分岐鎖Ｃ３～Ｃ１０アルキル基であり、好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、独立して、イソプロピルおよびｔｅｒｔ－ブチルから選択され、より好ましくは、ＲＳ１およびＲＳ２は、両者ともｔｅｒｔ－ブチルであり、破線で示された結合は、式（Ｓ－２）の基または式（Ｓ－３）の基を式（Ｉ）の化合物の残部に結合させる］
    から選択される、請求項１０に記載の化合物または塩。
  12. 細胞傷害性部分（ｉｖ）は、好ましくはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）およびモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）から選択されるアウリスタチン類似体の残基によって、またはＰＦ－０６３８０１０１の残基によって提供される、請求項７から１１のいずれかに記載の化合物または塩。
  13. 蛍光部分（ｖ）は、蛍光色素、好ましくはＣｙ５－系またはＣｙ７－系のシアニン色素の残基によって提供される、請求項７から１２のいずれかに記載の化合物または塩。
  14. 請求項１から１３のいずれかに記載の化合物または塩を含む、または前記化合物もしくは塩からなる、医薬のまたは診断上の組成物。
  15. がん、心血管障害もしくは炎症性障害の処置もしくは予防において使用するための、またはがん、心血管障害もしくは炎症性障害のｉｎ ｖｉｖｏでの診断の方法において使用するための、請求項１から１３のいずれかに記載の化合物または塩。
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