EA046402B1

EA046402B1 - Двухрежимная радиоактивная метка и радиотерапевтическое средство

Info

Publication number: EA046402B1
Application number: EA202090370
Authority: EA
Inventors: Александер Йозеф Вурцер; Ханс-Йюрген Вестер; Маттиас Иоганнес Айбер
Original assignee: Технише Универзитет Мюнхен; Технише Универзитет Мюнхен - Клиникум Рехтс Дер Изар
Priority date: 2017-07-28
Filing date: 2018-07-30
Publication date: 2024-03-08

Description

Настоящее изобретение относится к конъюгату лигандАКЛ-хелатор (SIFA -кремнефторидный акцептор), содержащему в одной молекуле: (а) один или более лигандов, которые способны связываться с молекулой-мишенью, соответствующей заболеванию, (b) фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA), который содержит ковалентную связь между кремнием и атомом фтора и который может быть помечен ¹⁸F путем изотопного обмена ¹⁹F на ¹⁸F или который мечен ¹⁸F, и (с) одну или более хелатирующую группу, необязательно содержащую хелатированный нерадиоактивный или радиоактивный катион.

В настоящем описании цитируется ряд документов, в том числе патентные заявки и руководства производителя. Раскрытие данных документов, хотя и не считается значимым для патентоспособности настоящего изобретения, полностью включено в настоящее описание посредством ссылки. Более конкретно, все указанные документы включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждый отдельный документ был конкретно и индивидуально включен посредством ссылки.

Рак предстательной железы

Рак предстательной железы (РПЖ) оставался на протяжении последних десятилетий наиболее распространенным злокачественным заболеванием с низкой частотой выживания у мужчин. Вследствие сверхэкспрессии при раке предстательной железы (Silver et al., Clinical Cancer Research 3, 81-85 (1997)) простатспецифический мембранный антиген (PSMA) или глутаматкарбоксипептидаза II (GCP II) доказали свою пригодность в качестве превосходной мишени для разработки высокочувствительных радиомеченных агентов для эндорадиотерапии и визуализации РПЖ (Afshar-Oromieh et al., European journal of nuclear medicine and molecular imaging 42, 197-209 (2015), Benesova et al., Journal of Nuclear Medicine 56, 914-920 (2015), Robu et al., Journal of Nuclear Medicine, jnumed. 116.178939(2016), Weineisen et al., Journal of Nuclear Medicine 55, 1083-1083 (2014), Rowe et al., Prostate cancer and prostatic diseases (2016), Maurer et al., Nature Reviews Urology (2016)). Простатспецифический мембранный антиген представляет собой внеклеточную гидролазу, каталитический центр которой содержит два иона цинка (II) с мостиковым гидроксидо-лигандом. Он сильно повышен при метастатическом и гормонально-рефрактерном раке предстательной железы, но его физиологическая экспрессия также отмечена в почках, слюнных железах, тонком кишечнике, мозге и, в меньшей степени, также в здоровой ткани предстательной железы. В кишечнике PSMA способствует абсорбции фолата путем превращения птероилполи-у-глутамата в птероилглутамат(фолат). В мозге он гидролизует Н-ацетил-ласпартил-Г-глуламат (NAAG) до Н-ацетил-Гаспартата и глутамата.

Простатспецифический мембранный антиген (PSMA)

Простатспецифический мембранный антиген (PSMA) представляет собой трансмембранный гликопротеин типа II, который высоко сверхэкспрессируется в эпителиальных клетках рака предстательной железы. Несмотря на свое название, PSMA также в разной степени экспрессируется в новообразованных сосудах большого числа видов рака, не относящихся к предстательной железе. К числу наиболее распространенных видов рака, не относящихся к предстательной железе, демонстрирующих экспрессию PSMA, относятся рак молочной железы, легких, колоректальный и почечно-клеточный рак.

Общие необходимые структуры молекул, обеспечивающих целенаправленное воздействие на PSMA, содержат связывающую единицу, которая включает цинк-связывающую группу (такую как мочевина (Zhou et al., Nature Reviews Drug Discovery 4, 1015-1026 (2005)), фосфинат или фосфорамидат), связанные с фрагментом Р1'-глутамат, который гарантирует высокую аффинность и специфичность к PSMA и, как правило, дополнительно связан с эффекторной функциональной группой (Machulkin et al., Journal of drug targeting, 1-15 (2016)). Эффекторная часть более гибкая и в некоторой степени устойчива к структурным изменениям. Входной туннель вмещает две другие важные структурные характеристики, которые важны для связывания лиганда. Первая представляет собой пэтч аргинина, положительно заряженный участок на стенке входного туннеля и механистическое объяснение предпочтения отрицательно заряженных функциональных групп в положении P1 PSMA. По-видимому, это является причиной предпочтительного включения отрицательно заряженных остатков в каркас лиганда. Насколько известно авторам изобретения, углубленный анализ влияния положительных зарядов на лиганды PSMA до сих пор не был проведён. При связывании, согласованное перемещение боковых цепей аргинина может привести к открытию гидрофобного вспомогательного кармана S1, второй важной структуры, которая, как было показано, вмещает йодобензильную группу из более ингибиторов на основе мочевины, тем самым способствуя их высокой аффинности к PSMA (Barinka et al., Journal of medicinal chemistry 51, 7737-7743 (2008)).

Zhang и соавторы обнаружили удаленный сайт связывания PSMA, который можно применять для режима бидентатного связывания (Zhang et al., Journal of the American Chemical Society 132, 12711-12716 (2010)). Так называемый сайт связывания арена представляет собой простой структурный мотив, образованный боковыми цепями Arg463, Arg511 и Trp541, и является частью входной крышки GCPII. Вовлечение сайта связывания арена дистальным ингибиторным фрагментом может привести к значительному увеличению аффинности ингибитора к PSMA вследствие эффектов авидности. PSMA I&T разработали специально для взаимодействия с PSMA таким образом, хотя анализ кристаллической структуры режима связывания недоступен. Необходимая характеристика, в соответствии с Zhang и соавторами, представляет собой линкерную единицу (субериновая кислота в случае PSMA I&T), которая способствует открытой

- 1 046402 конформации входной крышки GCPII и, таким образом, обеспечивает доступность сайта связывания арена. Далее было показано, что структурный состав линкера оказывает значительное влияние на направленную доставку терапевтического препарата в область опухоли и биологическую активность, а также на контрастность изображения и фармакокинетику (Liu et al., Bioorganic & medicinal chemistry letters 21, 7013-7016 (2011)), свойства, которые имеют решающее значение как для высокого качества изображения, так и для эффективной направленной эндорадиотерапии.

В настоящее время в клинических условиях применяют две категории ингибиторов, обеспечивающих целенаправленное воздействие на PSMA. С одной стороны, существуют радиоактивные метки с хелатирующими звеньями для комплексообразования с радионуклидами, такими как PSMA I&T или родственными соединениями (Kiess et al., The quarterly journal of nuclear medicine and molecular imaging 59, 241 (2015)). С другой стороны, существуют небольшие молекулы, включающие элемент, обеспечивающий целенаправленное воздействие, и эффекторные молекулы.

Наиболее часто применяемые агенты для селективной визуализации PSMA представляют собой PSMA HBED-CC (Eder et al., Bioconjugate chemistry 23, 688-697 (2012)), PSMA-617 (Benesova et al., Journal of Nuclear Medicine 56, 914-920 (2015)) и PSmA I&T (Weineisen et al., Journal of Nuclear Medicine 55, 1083-1083 (2014)), которые преимущественно мечены ⁶⁸Ga (88,9% β+, Εβ+, макс = 1,89 МэВ, t1/₂ = 68 мин). Среди указанных, ⁶⁸Ga-PSMA-HBED-CC (также известен как ⁶⁸Ga-PSMA-11) до сих пор считается золотым стандартом для ПЭТ-визуализации (ПЭТ - позитронно-эмиссионная томография) РПЖ.

Мечение ¹⁸F

В последнее время несколько групп сосредоточились на разработке новых ингибиторов, меченных ¹⁸F, на основе мочевины для диагностики РПЖ. В отличие от радиометалла ⁶⁸Ga, который можно получить из коммерчески распространяемых генераторов радионуклидов ⁶⁸Ge/6⁸Ga (⁶⁸Ge, t1/2 = 270,8 д), радиоизотоп ¹⁸Г-фторид (96,7% β+, Εβ+, макс = 634 кэВ) требует наличия циклотрона для его получения. Несмотря на это ограничение, ¹⁸F обладает из-за своего более длительного периода полураспада (t1/2 = 109,8 мин) и более низкой энергии позитронов, значительными преимуществами с точки зрения рутинной обработки и качества изображения. Кроме того, существует возможность крупномасштабного производства в циклотроне, что было бы выгодно для более высокой пропускной способности пациентов и снижения производственных затрат. ^-меченный ингибитор PSMA на основе мочевины ¹⁸F-DCFPyl продемонстрировал многообещающие результаты в обнаружении первичного и метастатического РПЖ (Rowe et al., Molecular Imaging and Biology, 1-9 (2016)) и превосходство над ⁶⁸Ga-PSMA-HBED-CC в сравнительном исследовании (Dietlein et al., Molecular Imaging and Biology 17, 575-584 (2015)). На основе структуры PSMA-617 недавно был разработан ^-меченный аналог PSMA-1007, который показал сравнимые соотношения опухоли к органам (Cardinale et al., Journal of nuclear medicine: official publication, Society of Nuclear Medicine 58, 425-431 (2017), Giesel et al., European journal of nuclear medicine and molecular imaging 43, 1929-1930 (2016)). Сравнительное исследование с ⁶⁸Ga-PSMA-HBED-CC выявило сходную диагностическую точность обеих радиоактивных меток и сниженный мочевой клиренс ¹⁸FPSMA-1007, что позволило улучшить оценку предстательной железы (Giesel et al., European journal of nuclear medicine and molecular imaging 44, 678-688 (2017)).

Привлекательным подходом для введения меток ¹⁸F является применение кремнефторидных акцепторов (SIFA). Кремнефторидные акцепторы описаны, например, в Lindner et al., Bioconjugate Chemistry 25, 738-749 (2014). Чтобы сохранить связь кремний-фторид, применение кремнефторидных акцепторов приводит к необходимости введения стерически требовательных групп вокруг атома кремния. Это, в свою очередь, делает кремнефторидные акцепторы высоко гидрофобными. Что касается связывания с молекулой-мишенью, в частности с молекулой-мишенью, которая представляет собой PSMA, гидрофобный фрагмент, обеспечиваемый кремнефторидным акцептором, можно применять для установления взаимодействий радиодиагностического или терапевтического соединения с гидрофобным карманом, как описано в Zhang et al., Journal of American Chemical Society 132, 12711-12716 (2010). Тем не менее, до связывания более высокая степень липофильности, введенная в молекулу, представляет серьезную проблему для разработки радиофармацевтических средств с подходящим биораспределением in vivo, то есть с низким неспецифическим связыванием в нецелевой ткани.

Невозможность решить проблему гидрофобности

Несмотря на многочисленные попытки, проблема гидрофобности, вызываемая кремнефторидными акцепторами, не была удовлетворительно решена в предшествующем уровне техники.

Более подробно, Schirrmacher E. и соавторы (Bioconjugate Chem. 2007, 18, 2085-2089) синтезировали различные ¹⁸Г-меченные пептиды с применением высокоэффективного меченого синтона р-(ди-третбутилфторсилил) бензальдегида ([¹⁸F]SIFA-A), который является одним из примеров кремнефторидного акцептора. Метод SIFA привел к неожиданно эффективному изотопному обмену ¹⁹F-¹⁸F и дал ¹⁸Г-синтон с почти количественным выходом при высокой удельной активности между 225 и 680 ГБк/мкмоль (608118 378 Ки/ммоль) без применения очистки ВЭЖХ (высоко эффективная жидкостная хроматография). [¹⁸F]SIFA-бензальдегид был наконец применен для мечения N-концевых аминоокси (N-AO) дериватизированных пептидов AO-Tyr3-октреотат (АО-ТАТЕ), цикло(fK(АО-N)RGD) и N-AO-PEG₂-[D-Tyr-Gln

- 2 046402

Trp-Ala-Val-Ala-His-Thi-Nle-NH₂](AO-BZH3, производное бомбезина) с высокими радиохимическими выходами. Тем не менее, меченые пептиды являются высоко липофильными (что может быть взято из времени удержания ВЭЖХ с применением условий, описанных в указанном документе) и, таким образом, не подходят для дальнейшей оценки на моделях животных или на людях.

У Wangler С. и соавторов (Bioconjugate Chem., 2009, 20 (2), стр. 317-321), было описано первое основанное на SIFA Kit-подобное радиофторирование белка (сывороточный альбумин крысы, RSA). В качестве маркирующего агента, 4-(ди-трет-бутил[%]фторсилил)бензолтиол (Si[¹⁸F]FA-SH) получали простым изотопным обменом с радиационно-химическим выходом (РХВ) от 40 до 60% и связывали продукт непосредственно с дериватизированным малеимидом сывороточным альбумином с общим РХВ 12% в течение от 20 до 30 мин. Технически простой способ мечения не требует каких-либо сложных процедур очистки и является прямым примером успешного применения химического состава Si-¹⁸F для визуализации in vivo с помощью ПЭТ. Зависимости время-активность и изображения μПЭТ у мышей показали, что большая часть активности была локализована в печени, что свидетельствует о том, что маркирующий агент является слишком липофильным и направляет зонд in vivo к выведению гепатобилиарной системой и интенсивному метаболизму в печени.

Wangler С. и соавторы (см. Bioconjug Chem. 2010 Dec 15, 21 (12): 2289-96) впоследствии попытались преодолеть главный недостаток методики SIFA, высокую липофильность получаемых радиофармацевтических средств, путем синтеза и оценки новых аналогов SIFA-октреотата (SIFA-ТугЗ-октреотат, SIFA-Asn(AcNH-β-Glc)-Tyr3-окmреотат и SIFA-Asn(AcNH-β-Glc)-PEG-Tyr3-окmреотат). В данных соединениях гидрофильные линкеры и фармакокинетические модификаторы были введены между пептидом и фрагментом SIFA, то есть углеводом и линкером PEG плюс углевод. В качестве меры липофильности конъюгатов было определено, что log P(ow) составляет 0,96 для SIFA-Asn(AcNH-e-Glc)-PEG-Tyr3октреотата и 1,23 для SIFA-Asn(AcNH-e-Glc)-Tyr3-octreotate. Данные результаты показывают, что высокая липофильность фрагмента SIFA может быть лишь незначительно компенсирована применением гидрофильных фрагментов. Первое исследование изображений показало чрезмерный печёночный клиренс/эффективность всасывания в печени и, следовательно, дальнейшее первое исследование на людях не осуществляли.

Bernard-Gauthier и соавторы (Biomed Res Int. 2014, 2014:454503) рассматривают большое количество различных видов SIFA, о которых сообщалось в литературе, от небольших простетических групп и других соединений с низкой молекулярной массой до меченых пептидов и совсем недавно описанных молекул аффител. Основываясь на этих данных, проблема липофильности простетрических групп на основе SIFA не была решена, то есть способ, который снижал бы общую липофильность конъюгированного с SIFA пептида до log D ниже приблизительно минус 2,0, не был описан.

У Lindner S. и соавторов (Bioconjug Chem. 2014 Apr 16, 25 (4):738-49) описано, что производные пегилированного бомбезина (PESIN) в качестве специфических лигандов рецептора GRP и пептидов RGD (однобуквенные коды для аргинин-глицин-аспарагиновой кислоты) в качестве специфических ανβ3 связующих веществ были синтезированы и мечены фрагментом кремнефторидного акцептора (SIFA). Чтобы компенсировать высокую липофильность фрагмента SIFA, были введены различные модификации гидрофильной структуры, что привело к снижению значений logD. SIFA-Asn(AcNH-e-Glc)-PESIN, SIFASer(e-Lac)-PESIN, SIFA-Cya-PESIN, SIFA-LysMe3-PESIN, SIFA-γ-карбокси-d-Glu-PESIN, SIFA-Cya2PESIN, SIFA-LysMe3-γ-карбокси-d-Glu-PESIN, SIFA-(γ-карбокси-d-Glu)2-PESIN, SIFA-RGD, SIFA-γкарбокси-d-Glu-RGD, SIFA-(γ-карбокси-d-Glu)2-RGD, SIFA-LysMe3-γ-карбокси-d-Glu-RGD. Все эти пептиды, уже улучшенные и дериватизированные с целью снижения липофильности, показали значение logD в диапазоне от плюс 2 до минус 1,22.

Niedermoser S. и соавторы (J Nucl Med. 2015 Jul, 56 (7): 1100-5) сравнивали недавно разработанные ¹⁸F-SIFA- и ¹⁸F-SIFA1in- (SIFA - кремнефторидный акцептор) модифицированные производные ТАТЕ с текущим клиническим золотым стандартом ⁶⁸Ga-DOTATATE для высококачественной визуализации опухолей, несущих рецептор соматостатина. Для этой цели были разработаны ¹⁸F-SIFA-TATE и два довольно сложных аналога, ¹⁸F-SIFA-Glc-PEG1-TATE, ¹⁸F-SIFA1in-Glc-Asp2-PEG1-TATE. Ни один из агентов не показал logD менее минус 1,5.

Ввиду вышесказанного, техническая задача, лежащая в основе настоящего изобретения, может быть определена в обеспечении радиодиагностических и радиотерапевтических средств, которые содержат кремнефторидный акцептор и в то же время характеризуются благоприятными свойствами in vivo.

Как станет ясно далее, в настоящем изобретении раскрыты проверка и подтверждение принципа применения специфических конъюгатов, которые связываются с высокой аффинностью с простатспецифическим антигеном (PSMA) в качестве мишени. Соответственно, еще одна техническая задача, лежащая в основе настоящего изобретения, заключается в создании улучшенных радиотерапевтических и радиодиагностических средств для медицинских показаний, которые представляют собой рак, предпочтительно рак предстательной железы.

Решение указанных технических задач обеспечено заявленным предметом настоящего изобретения. Соответственно, в первом аспекте настоящее изобретение относится к конъюгату лиганд-SIFA-хелатор,

- 3 046402 содержащему в одной молекуле: (а) один или более лигандов, которые могут связываться с молекулоймишенью, соответствующей заболеванию, (b) фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA), который содержит ковалентную связь между кремнием и атомом фтора и который может быть мечен ¹⁸F путем изотопного обмена ¹⁹F на ¹⁸F или который мечен ¹⁸F, и (с) одну или более хелатирующую группу, необязательно содержащую хелатированный нерадиоактивный или радиоактивный катион.

Конъюгат лиганд-SIFΆ-хелатор включает три отдельных фрагмента. Три отдельных фрагмента представляют собой: а) один или более лигандов, которые способны связываться с молекулой-мишенью, соответствующей заболеванию, (b) кремнефторидный акцептор (SIFA), который содержит ковалентную связь между кремнием и атомом фтора, и (с) одну или более хелатирующую группу, необязательно содержащую хелатированный нерадиоактивный или радиоактивный катион

Атом фтора в фрагменте SIFA может представлять собой ¹⁹F или ¹⁸F.

Хотя определенные лиганды, которые могут связываться с молекулой-мишенью, относящейся к заболеванию, могут представлять собой циклические пептиды, такие циклические пептиды не являются хелатирующими группами, как предусмотрено в настоящем документе, поскольку задача гидрофобного фрагмента SIFA не решается в отсутствие дополнительного хелатирующего фрагмента. Таким образом, соединения по настоящему изобретению требуют гидрофильной хелатирующей группы в дополнение к лигандам, которые способны связываться с молекулой-мишенью, соответствующей заболеванию. Гидрофильная хелатирующая группа необходима для уменьшения гидрофобной природы соединений, вызванной присутствием фрагмента SIFA.

Лиганд, соответствующий первому аспекту изобретения, определен в функциональном отношении. Это тот случай, потому что настоящее изобретение не зависит от конкретной природы лиганда в структурном отношении. Скорее, ключевым аспектом изобретения является комбинация, в пределах одной молекулы, кремнефторидного акцептора и хелатора или хелата. Данные два структурных элемента, SIFA и хелатор, демонстрируют пространственную близость. Предпочтительно кратчайшее расстояние между двумя атомами двух элементов составляет менее или равно 25 А, более предпочтительно менее 20 А и еще более предпочтительно менее 15 А. В качестве альтернативы или в дополнение, предпочтительно, чтобы не более 25 ковалентных связей отделяли атом фрагмента SIFA и атом хелатора, предпочтительно не более 20 химических связей и еще более предпочтительно не более 15 химических связей.

Катион в соответствии с пунктом (с) первого аспекта представляет собой радиоактивный или нерадиоактивный катион. Это предпочтительно катион радиоактивного или нерадиоактивного металла и более предпочтительно катион радиоактивного металла. Примеры приведены ниже.

Как следствие, входят в объем первого аспекта конъюгаты, которые являются радиоактивно меченными как на фрагменте SIFA, так и на хелатирующей группы, молекулы, которые являются радиоактивно меченными только на одной из двух сторон, а также молекулы, которые вовсе не являются радиоактивно мечеными. В последнем случае, хелатирующая группа может быть либо комплексом холодного (нерадиоактивного) иона, либо может не содержать никакого иона.

Авторами настоящего изобретения неожиданно обнаружено, что размещение кремнефторидного акцептора вблизи гидрофильного хелатора, такого как, но не ограничиваясь ими, DOTAGA ((1-(1,3карбоксипропил)4,7,10(карбоксиметил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан) или DOTA (тетраксетан), экранирует или эффективно компенсирует липофильность фрагмента SIFA до степени, которая сдвигает общую гидрофобность радиотерапевтического или радиодиагностического соединения в диапазоне, который делает соединение пригодным для введения in vivo.

Кроме того, сочетание применения хелатора и изотопного обмена на SIFA с помощью ¹⁸Г-фторида также приводит к спаренным диагностическим радиоактивным меткам, которые можно применять в качестве [¹⁸F][^natIon]меток в центрах с локальным циклотроном или центрах, которые получают ¹⁸Fфторид путем отгрузки из циклотронных центров, тогда как в центрах, которые не имеют доступа к ¹⁸Fфториду, но имеют доступ к радиоизотопным генераторам, таким как генератор Ge-68/Ga-68, можно применять соответствующие версии, например |'Г||⁶⁸Са|метки.

Важно, что в обоих случаях вводят химически идентичное радиофармацевтическое средство, и, следовательно, не ожидают никаких различий в поведении in vivo. При том, что в настоящее время вследствие химических различий, клинические данные по соединению, меченному ¹⁸F, предоставленные на группе пациентов в одном месте, нельзя напрямую сравнивать с клиническими данными аналога ⁶⁸Ga, предоставленными на другой группе в другом месте, радиофармацевтическое и/или радиодиагностическое средство по настоящему изобретению можно сравнивать напрямую и, таким образом, можно связывать такие данные (например, данные из европейского центра, работающего с F-18, и другого центра в Индии, работающего с Ga-68).

Кроме того, при подходящем выборе хелат можно также применять для мечения терапевтическим изотопом, таким как бета-излучающие изотопы Lu-177, Y-90 или альфа-излучающий изотоп Ас-225, что позволяет расширить концепцию спаренных радиофармацевтических средств для соединения диагностических (|¹⁸Е||'Ги|меток) и терапевтических радиофармацевтических средств ([^natF][¹⁷⁷Lu].

Еще одним преимуществом соединений, особенно соединений, обеспечивающих целенаправленное воздействие на PSMA, по настоящему изобретению является их удивительно низкое накопление в почках

- 4 046402 мышей по сравнению с другими радиофармацевтическими средствами, обеспечивающими целенаправленное воздействие на PSMA, такими как PSMA I&T. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, подразумевают, что причина в комбинации структурного элемента SIFA с хелатором, который обеспечивает неожиданное уменьшение накопления в почках.

С точки зрения липофильности/гидрофильности значение logP (иногда также называемое значением logD) является общепринятой величиной в уровне техники.

Термин липофильность относится к силе растворения или поглощения в липидных растворах или адсорбции на липидоподобной поверхности или матриксе. Он обозначает предпочтение для липидов (буквальное значение) или для органических или неполярных жидкостей, или для жидкостей, растворов или поверхностей с небольшим дипольным моментом по сравнению с водой. Термин гидрофобность применяют здесь с эквивалентным значением. Прилагательные липофильные и гидрофобные применяют в значении, соответствующем существительным, описанным выше.

Массовая скорость молекулы на границе раздела двух несмешивающихся или практически несмешивающихся растворителей определяется ее липофильностью. Чем более липофильна молекула, тем более она растворима в липофильной органической фазе. Коэффициент распределения молекулы, который наблюдается между водой и н-октанолом, был принят в качестве стандартной меры липофильности. Коэффициент распределения Р вида А определяли, как отношение Р = [А]_{н-октанол}/[А]_вода. Типичное значение представляет собой значение logP, которое является логарифмом коэффициента распределения. В случае, если молекула является ионизируемой, в обеих фазах, в принципе, будет присутствовать множество различных микровидов (ионизированных и неионизированных форм молекулы). Величина, характеризующая общую липофильность ионизируемого вида, представляет собой коэффициент разделения D, определяемый как отношение D = [сумма концентраций всех микровидов]_{н-октанол}/[сумма концентраций всех микровидов]_вода. Аналогично logP, часто употребляют logD, логарифм коэффициента разделения. Часто буферную систему, такую как фосфатно-солевой буфер, применяют в качестве альтернативы воде в вышеописанном определении logP.

Если липофильный характер заместителя в первой молекуле должен быть оценен и/или определен количественно, можно оценить вторую молекулу, соответствующую этому заместителю, где указанная вторая молекула получена, например, путем разрыва связи, соединяющей указанный заместитель с остальной частью первой молекулы и присоединение полученной таким образом свободной валентности(ей) к водороду(ам).

В качестве альтернативы, может быть определен вклад заместителя в logP молекулы. Вклад п_{Х х} заместителя X в logP молекулы R-X определяют как п_{Х х} = logP_R-X -logP_R-H, где R-H представляет собой незамещенное исходное соединение.

Значения P и D больше единицы, а также значения logP, logD и п_{Х х} больше нуля указывают на липофильный/гидрофобный характер, тогда как значения P и D меньше единицы, а значения logP, logD и п_{Х х} меньше нуля указывают гидрофильный характер соответствующих молекул или заместителей.

Вышеописанные параметры, характеризующие липофильность липофильной группы или всей молекулы по настоящему изобретению, могут быть определены экспериментальными способами и/или предсказаны с помощью вычислительных способов, известных в данной области техники (см., например, Sangster, Octanol-water Partition Coefficients: fundamentals and physical chemistry, John Wiley & Sons, Chichester. (1997)).

В предпочтительном варианте осуществления, значение logP для соединений по настоящему изобретению составляет от минус 5 до минус 1,5. Особенно предпочтительно, чтобы значение logP составляло от минус 3,5 до минус 2,0.

В предпочтительном варианте осуществления лиганд по настоящему изобретению содержит или состоит из пептида, пептидомиметика или замещенной мочевины, заместителей, включая аминокислоты. Понятно, что лиганд, который содержит пептид или пептидомиметик, также содержит непептидную и непептидомиметическую часть. С точки зрения молекулярной массы предпочтение отдают молекулярным массам ниже 15 кДа, ниже 10 кДа или ниже 5 кДа. Соответственно, небольшие белки входят в определение термина лиганд. Молекулы-мишени конкретно не ограничены и включают ферменты, рецепторы, эпитопы, транспортеры, молекулы клеточной поверхности и белки внеклеточного матрикса. Предпочтительными являются мишени, которые имеют отношение к заболеванию. Особенно предпочтительными являются мишени, которые причинно связаны с данным заболеванием или которые высоко сверхэкспрессируются при данном заболевании и/или ингибирование которых может вызывать положительный эффект у пациента, страдающего данным заболеванием. Лиганды предпочтительно представляют собой лиганды с высокой аффинностью, с предпочтительной аффинностью, выраженной как IC₅₀, составляющей менее 50 нМ, менее 20 нМ или менее 5 нМ.

Особенно предпочтительными являются те лиганды, которые связываются с высокой аффинностью с молекулами-мишенями, относящимися к заболеванию, или биомолекулами, относящимися к заболеванию, включая, но не ограничиваясь ими, рецепторы соматостатина, рецепторы бомбезина, хемокиновые рецепторы, рецепторы интегрина, рецепторы холецистокинина, рецепторы меланокортина, рецепторы

- 5 046402 вазоактивного интестинального пептида, рецепторы нейротензина, рецепторы нейропептида Y, рецепторы нейрокинина, рецепторы глюкаконоподобного пептида 1, рецепторы Her2, PD-L1, PD-1, рецепторы гонадотропин-рилизинг-гормона и простатспецифический мембранный антиген (PSMA).

Термин относящийся к заболеванию относится предпочтительно к причинно-следственной вовлеченности в заболевание.

Предпочтительно фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA) имеет структуру, представленную формулой (I)

где R^1S и R^2S независимо представляют собой линейную или разветвленную C3-C10-алкильную группу, предпочтительно R^1S и R^2S выбраны из изопропила и трет-бутила и более предпочтительно R^1S и R^2S представляют собой трет-бутил, R^3S представляет собой C1-C₂₀-углеводородную группу, которая может содержать одну или более ароматических и одну или более алифатических звеньев и/или до 3 гетероатомов, выбранных из О и S, предпочтительно R^3S представляет собой C₆-C₁₀-углеводородную группу, которая содержит ароматическое кольцо, и которая может содержать одну или более алифатических звеньев, более предпочтительно R^3S представляет собой фенильное кольцо, и наиболее предпочтительно R^3Sпредставляет собой фенильное кольцо, где Si-содержащий заместитель и связь, обозначенную как *«***, находятся в пара-положении, и где фрагмент SIFA присоединен к остальной части конъюгата через связь, обозначенную как '/wwvw.

Более предпочтительно фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA) имеет структуру, представленную формулой (Ia)

где t-Bu обозначает трет-бутильную группу.

Предпочтительная хелатирующая группа содержит по меньшей мере одно из следующего (i), (ii) или (iii).

(i) Макроциклическая кольцевая структура с кольцевыми атомами в количестве от 8 до 20, из которых 2 или более, более предпочтительно 3 или более, выбраны из атомов кислорода или атомов азота. Предпочтительно 6 или менее кольцевых атомов выбраны из атомов кислорода или атомов азота. Особенно предпочтительным является то, что 3 или 4 атома кольца представляют собой атомы азота или атомы кислорода. Среди атомов кислорода и азота предпочтение отдают атомам азота. В сочетании с макроциклической кольцевой структурой предпочтительная хелатирующая группа может содержать 2 или более, например от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4, карбоксильных групп и/или гидроксильных групп. Среди карбоксильных групп и гидроксильных групп предпочтение отдают карбоксильным груп пам.

(ii) Ациклическая хелатирующая структура с открытой цепью с атомами главной цепи (остов) в количестве от 8 до 20, из которых 2 или более, более предпочтительно 3 или более представляют собой гетероатомы, выбранные из атомов кислорода, или атомов азота. Предпочтительно 6 или менее атомов остова выбраны из атомов кислорода или атомов азота. Среди атомов кислорода и азота предпочтение отдают атомам азота. Более предпочтительно, хелатирующая структура с открытой цепью представляет собой структуру, которая содержит комбинацию из 2 или более, более предпочтительно 3 или более гетероатомов, выбранных из атомов кислорода или атомов азота, и 2 или более, например от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4 карбоксильных групп и/или гидроксильных групп. Среди карбоксильных групп и гидроксильных групп предпочтение отдают карбоксильным группам.

(iii) Разветвленная хелатирующая структура, содержащая четвертичный атом углерода. Предпочтительно четвертичный атом углерода замещен 3 одинаковыми хелатирующими группами в дополнение к фрагменту SIFA/лиганд. Замещенные хелатирующие группы могут содержать амид. Замещенные хелатирующие группы могут содержать ароматическую группу. Замещенные хелатирующие группы могут содержать гидроксипиридинон.

В предпочтительных конкретных примерах, хелатирующая группа представляет собой остаток хелатирующего агента, выбранного из бис(карбоксиметил)-1,4,8,11-тетраазабицикло[6.6.2]гексадекана

- 6 046402 (СВТЕ2а), циклогексил-1,2-диаминтетрауксусной кислоты (CDTA), 4-(1,4,8,11-тетраазациклотетрадец-1ил)-метилбензойной кислоты (СРТА), К'-[5-[ацетил(гидрокси)амино]пентил]-К-[5-[[4-[5-аминопентил(гидрокси)амино]-4-оксобутаноил]амино]пентил]-К-гидроксибутандиамида (DFO), 4,11-бис(карбоксиметил)-1,4,8,11-тетраазабицикло[6.6.2]гексадекана (DO2A), 1,4,7,10-тетрациклододекан-К,К',КК'тетрауксусной кислоты (DOTA), а-(2-карбоксиэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10тетрауксусной кислоты (DOTAGA), 1,4,7,10-тетраазациклододекан-Н№,№',№-1,4,7,10-тетра(метилен)фосфоновой кислоты (DOTMP), К,К'-дипиридоксилэтилендиамин-К,К'-диацетат-5,5'-бис(фосфат) (DPDP), диэтилентриамин-М,№,№’-пента(метилен)фосфоновой кислоты (DTMP), диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA), этилендиамин-К,К'-тетрауксусной кислоты (EDTA), этиленгликоль-О,Обис(2-аминоэтил)-К,К,К',К'-тетрауксусной кислоты (EGTA), К,К-бис(гидроксибензил)-этилендиаминК,К'-диуксусной кислоты (HBED), гидроксиэтилдиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), 1-(пнитробензил)-1,4,7,10-тетраазациклодекан-4,7,10-триацетата (HP-DOA3), 6-гидразинил-К-метилпиридин-3-карбоксамида (HYNIC), тетра-3-гидрокси-М-метил-2-пиридинона хелаторов (4-((4-(3-(бис(2(3-гидрокси-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-карбоксамидо)этил)амино)-2-((бис(2-(3-гидрокси-1метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-карбоксамидо)этил)амино)метил)пропил)фенил)амино)-4-оксобутановой кислоты), сокращенно Ме-3,2-НОРО, 1,4,7-триазациклононан-1-янтарная кислота-4,7диуксусной кислоты (NODASA), 1-(1-карбокси-3-карбоксипропил)-4,7-(карбоокси)-1,4,7-триазациклононан (NODAGA), 1,4,7-триазациклононантриуксусной кислоты (NOTA), 4,11бис(карбоксиметил)-1,4,8,11-тетраазабицикло[6.6.2]гексадекана (ТЕ2А), 1,4,8,11-тетраазациклододекан1,4,8,11-тетрауксусной кислоты (ТЕТА), трис(гидроксипиридинон) (ТНР), терпиридинбис(метиленаминтетрауксусной кислоты (ТМТ), 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-трис[метилен(2карбоксиэтил)фосфиновая кислота] (TRAP), 1,4,7,10-тетраазациклотридекан-Н№,№',№''-тетрауксусной кислоты (TRITA), 3-[[4,7-бис[[2-карбоксиэтил(гидрокси)фосфорил]метил]-1,4,7-триазонан-1-ил]метилгидрокси-фосфорил]пропановой кислоты и триэтилентетраамин-гексауксусной кислоты (ТТНА), где остаток получают путем ковалентного связывания карбоксильной группы, содержащейся в хелатообразующем агенте, с остальной частью конъюгата посредством сложноэфирной или амидной связи.

Конкретные хелаторы представлены ниже:

но

ТНР

HBED Ме-3,2-НОРО.

Среди приведенных выше примеров хелатирующих агентов, особое предпочтение отдается хелатирующему агенту, выбранному из TRAP, DOTA и DOTAGA.

Макроциклические и ациклические соединения, хелатирующие металлы или катионы хорошо известны в данной области техники и доступны от ряда производителей. Хотя хелатирующий фрагмент по настоящему изобретению конкретно не ограничен, понятно, что многочисленные фрагменты могут быть применены специалистом в данной области техники без изменений.

Хелатирующая группа может содержать хелатированный катион, который может быть радиоактивным или нерадиоактивным, предпочтительно, хелатированный катион металла, который может быть радиоактивным или нерадиоактивным. Более предпочтительным является хелатированный изотоп радиоактивного металла.

Предпочтительными примерами катионов, которые могут быть хелатированы хелатирующей груп- 7 046402 пой, являются катионы ⁴³Sc, ⁴⁴Sc, ⁴⁷Sc, ⁵¹Cr, ⁵²mMn, ⁵⁸Co, ⁵²Fe, ⁵⁶Ni, ⁵⁷Ni, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁶Ga, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁸⁹Zr, ⁹⁰Y, ⁸⁹Y, <Tc, ⁹⁹mTc, ⁹⁷Ru, ¹⁰⁵Rh, ¹⁰⁹Pd, ¹¹¹Ag, ¹¹⁰mIn, ¹¹¹In, ¹¹³mIn, ¹¹⁴mln, ¹¹⁷mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁴⁹Tb, ¹⁵²Tb, ¹⁵⁵Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁶Ho, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁹Er, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷²Tm, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁹¹Pt, ¹⁹⁷Hg, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ²¹²Pb, ²⁰³Pb, ²¹¹At, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²²³Ra, ²²⁵Ac, ²²⁷Th, катионная молекула, содержащая ¹⁸F или катион, такой как ¹⁸F-[AlF]²+, более предпочтительно катионы ⁴⁴Sc, ⁴⁷Sc, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁸Ga, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re, ²¹²Pb, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²²⁵Ac и ²²⁷Th.

Применяя агенты, связывающие PSMA, в качестве примера, авторы настоящего изобретения применили раскрытое выше изобретение на практике. Это является предметом предпочтительных аспектов и вариантов осуществления, раскрытых ниже. Тем не менее, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что компенсация липофильности фрагмента SIFA в неожиданной степени не ограничивает ся молекулами, содержащими агенты, связывающие PSMA.

Соответственно, лиганд предпочтительно способен связываться с простатспецифическим мембранным антигеном (PSMA).

Более предпочтительно, лиганд имеет структуру, представленную формулой (II)

НООС R^ .R³L ДСН₂)р—i

Y Г γ ' * _иг_/<^СН2)т О СООН nUUL (П), где m представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4, более предпочтительно 2, n представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4, более предпочтительно от 2 до 3, R^1l представляет собой СН2, NH или О, предпочтительно NH, R^3L представляет собой СН2, NH или О, предпочтительно NH, R^2L представляет собой С или Р(ОН), предпочтительно С, и где лиганд присоединен к остальной части конъюгата через связь, обозначенную как лллллллл .

Лиганд может иметь структуру, представленную формулой (IIa)

НООС ΝγΝγ,(ΟΗ₂)_η^ ⁰ соон соон _(Па), где n представляет собой целое число от 2 до 6, и где лиганд присоединен к остальной части конъюгата через связь, обозначенную как^{ллллллл}'‘

В данной области техники известно несколько агентов, связывающих PSMA, которые все подходят в соответствии с настоящим изобретением. Вышеупомянутый предпочтительный вариант осуществления является структурным определением предпочтительной группы агентов, связывающих PSMA.

Особенно предпочтительно конъюгат по первому аспекту настоящего изобретения представляет собой соединение формулы (III)

SIFA

1з

X

НООС 2L-R^3L ДСН₂)п—х¹—l¹—х—r —х—r^ch γ RV *н I (CH₂)_m о СООН

НООС(III) или его фармацевтически приемлемую соль, где

SIFA представляет собой фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA), содержащего ковалентную связь между кремнием и атомом фтора и который может быть мечен ¹⁸F путем изотопного обмена ¹⁹F на ¹⁸F или который мечен ¹⁸F, предпочтительно SIFA представляет собой фрагмент SIFA формулы (I) и более предпочтительно формулы (Ia), определенной выше;

m представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно 2 или 3, более предпочтительно 2;

n представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно 2 или 3, более предпочтительно 2 или 4;

R^1L представляет собой СН₂, NH или О, предпочтительно NH;

R^3L представляет собой СН₂, NH или О, предпочтительно NH;

R^2L представляет собой С или Р(ОН), предпочтительно С;

X¹ выбран из амидной связи, простоэфирной связи, простой тиоэфирной связи, сложноэфирной связи, сложной тиоэфирной связи, мочевинного мостика и аминной связи, предпочтительно амидной связи;

X² выбран из амидной связи, простоэфирной связи, простой тиоэфирной связи, сложноэфирной связи, сложной тиоэфирной связи, мочевинного мостика и аминной связи, предпочтительно амидной связи;

L¹ представляет собой двухвалентную связующую группу, структура которой выбрана из олигоамида, простого олигоэфира, простого олиготиоэфира, сложного олигоэфира, сложного олиготиоэфира, олигомочевины, олиго(простой эфир-амида), олиго(простой тиоэфир-амида), олиго(сложный эфирамида), олиго(сложный тиоэфир-амида), олиго(мочевина-амида), олиго(простой эфир-простого тиоэфира), олиго(простой эфир-сложного эфира), олиго(простой эфир-сложного тиоэфира), олиго(простой эфир-мочевины), олиго(простой тиоэфир-сложного эфира), олиго(простой тиоэфир-сложного тиоэфира),

- 8 046402 олиго(простой тиоэфир-мочевины), олиго(сложный эфир-простого тиоэфира), олиго(сложный эфирмочевины) и олиго(сложный тиоэфир-мочевины), предпочтительно структура выбрана из олигоамида и олиго(сложный эфир-амида).

L¹ может быть необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из -ОН, -ОСНз, -СООН, -СООСН3, -NH2 и -NHC(NH)NH2.

X³ выбран из амидной связи и сложноэфирной связи, простого эфира, амина и связующей группы формулы

где связь, обозначенная как '^{ллллллл/}‘, в группе NH, связана с R^B, а другая связь, обозначенная как мсвяз, связана с SIFA, предпочтительно X³ представляет собой амидную связь, R^B представляет собой трехвалентную связующую группу, X⁴ выбран из амидной связи, простоэфирной связи, простой тиоэфирной связи и сложноэфирной связи, сложной тиоэфирной связи, мочевинного мостика, аминной связи, связующей группы формулы:

где амидная связь, обозначенная как ***», образована с хелатирующей группой, а другая связь, обозначенная как ****, связана с R^B, и связующей группы формулы

где связь, обозначенная как , на карбонильном конце, образована с хелатирующей группой, а другая связь, обозначенная как *»*«*, связана с R^B, предпочтительно X⁴ представляет собой амидную связь,

R^CH представляет собой хелатирующую группу, необязательно содержащую хелатированный радиоактивный или нерадиоактивный катион, предпочтительно радиоактивный или нерадиоактивный катион металла, где предпочтительные варианты осуществления указанной хелатирующей группы и необязательного хелатированного катиона являются такими, как определено выше.

Термин олиго, в таких выражениях как, олигоамид, простой олигоэфир, простой олиготиоэфир, сложный олигоэфир, сложный олиготиоэфир, олигомочевина, олиго(простой эфир-амида), олиго(простой тиоэфир-амида), олиго(сложный эфир-амида), олиго(сложный тиоэфир-амида), олиго(мочевина-амида), олиго(простой эфир-простого тиоэфира), олиго(простой эфир-сложного эфира), олиго(простой эфир-сложного тиоэфира), олиго(простой эфир-мочевины), олиго(простой тиоэфирсложного эфира), олиго(простой тиоэфир-сложного тиоэфира), олиго(простой тиоэфир-мочевины), олиго(сложный эфир-сложного тиоэфира), олиго(сложный эфир-мочевины) и олиго(сложный тиоэфирмочевины) предпочтительно следует понимать как относящиеся к группе, в которой от 2 до 20, более предпочтительно от 2 до 10 субъединиц связаны типами связей, указанных в тех же условиях. Как будет понятно специалисту в данной области техники, когда в скобках указаны два различных типа связей, оба типа связей содержатся в соответствующей группе (например, в олиго(сложный эфир-амид) содержатся сложноэфирные и амидные связи).

Предпочтительно, чтобы L¹ содержал в общей сложности от 1 до 5, более предпочтительно от 1 до 3, и наиболее предпочтительно всего 1 или 2 амидные и/или сложноэфирные связи, предпочтительно амидные связи, в своем остове.

Таким образом, термин олигоамид описывает группу, имеющую цепь из групп СН2 или CHR, чередующихся с группами, выбранными из NHCO или CONH. В каждом случае фрагмент R представляет собой необязательный заместитель, выбранный из -ОН, -ОСН₃, -СООН, -СООСН₃, -NH₂ и -NHC(NH)NH2.

Также предпочтительно, чтобы -X¹-L¹-X²- представлял собой одну из следующих структур (L-1) и (L-2):

-NH-C(O)-R⁶C(O)-NH-R⁷-NH-C(O)- (L-1),

-C(O)-NH-R⁸-NH-C(O)-R⁹-C(O)-NH-R¹⁰-NH-C(O)- (L-2) где R⁶-R¹⁰ независимо выбраны из C₂-C₁₀-αлкилена, предпочтительно линейного C₂-C₁₀-алкилена, каждая алкиленовая группа которого может быть замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из -ОН, -OCH3, -СООН, -СООСН3, -NH2 и -NHC(NH)NH2.

Особенно предпочтительным является то, что общее число атомов углерода в R⁶ и R⁷ составляет от 4 до 20, более предпочтительно от 4 до 16, без атомов углерода в необязательных заместителях. Особенно предпочтительным является то, что общее число атомов углерода в R⁸-R¹⁰ составляет от 6 до 20, более

- 9 046402 предпочтительно от 6 до 16, без атомов углерода в необязательных заместителях.

Особенно предпочтительно, чтобы -X¹-L¹-X²- представлял собой одну из следующих структур (L-3) и (L-4):

-NH-C(O)-Rⁿ-C(O)-NH-R¹²-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-3),

-C(O)-NH-CH(COOH)-R¹³-NH-C(O)-R¹⁴-C(O)-NH-R¹⁵-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-4) где R11-R¹⁵ независимо выбраны из ^-^-алкилена, предпочтительно линейного ^-С^лкилена.

Особенно предпочтительным является то, что общее число атомов углерода в R¹¹ и R¹² или в R¹³R¹⁵, соответственно, составляет от 8 до 18, более предпочтительно от 8 до 12, еще более предпочтительно от 9 до 10.

Предпочтительно R^B имеет структуру, представленную формулой (IV) (СН₂)_Ь

--(СН₂)_а--A—(CH₂)^U

16 ^(IV)’ где А выбран из N, CR¹⁶, где R¹⁶ представляет собой Н или ^-^-алкил и 5-7-членную карбоциклическую или гетероциклическую группу, предпочтительно А выбран из N и СН и более предпочтительно А представляет собой СН, связь, обозначенная как ***** при (СН2)а, образована с помощью Х², и а представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно 0 или 1 и наиболее предпочтительно 0, связь, обозначенная как '^/wvww‘ при (CH2)_b, образована с помощью X³, и b представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно от 0 до 2 и более предпочтительно 0 или 1, и связь, обозначенная как ***** при (СН₂)_с, образована с помощью X⁴, и с представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно от 0 до 2 и более предпочтительно 0 или 1.

Еще более предпочтительным в качестве конъюгата по настоящему изобретению является соединение формулы (IIIa:

или его фармацевтически приемлемая соль, где m, n, R^1L, R^2L, R^3L, X¹, L¹, b, с, Х⁴ и R^CH являются та кими, как определено выше, включая все их предпочтительные варианты осуществления.

Для соединения формулы (IIIa) предпочтительно b + с более или рвно 1.

Для соединения формулы (IIIa) также предпочтительно b + с менее или равно 3.

Для соединения формулы (IIIa) более предпочтительно b равно 1 и с равно 0.

Для соединения формулы (III) также предпочтительно -X⁴-R^CH представляет собой остаток хелатирующего агента, выбранного из DOTA и DOTAGA, связанный с одной из его карбоксильных групп через амидную связь с остальной частью конъюгата.

В предпочтительном варианте осуществления соединения формулы (III) указанное соединение представляет собой соединение формулы (IIIb) ноос ноос

R^CH (nib) или его фармацевтически приемлемую соль, где m, n, R^1L, R^2L, R^3L, X¹, L¹, b, с, Х⁴ и R^CH являются такими, как определено выше, и r равно 0 или 1.

Особенно предпочтительным является то, что -N(H)-R^CH представляет собой остаток хелатирующего агента, выбранного из DOTA и DOTAGA, связанный с одной из его карбоксильных групп через амидную связь с остальной частью конъюгата.

Наиболее предпочтительные соединения по настоящему изобретению представляют собой

- 10 046402 и его изомеры и его изомеры

PSMA-SIFAl (5)

он

- 11 046402 и его изомеры

- 12 046402

- 13 046402

- 14 046402

- 15 046402 и его изомеры

- 16 046402

PSMA-SIFA5 (9) и его изомеры

- 19 046402

- 20 046402 и его изомеры

- 22 046402

- 23 046402 и его изомеры

PSMA-SIFA 11

- 24 046402

- 25 046402

Предпочтительные схемы мечения для этих наиболее предпочтительных соединений являются такими, как определено в настоящем документе выше.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей или состоящей из одного или более конъюгатов или соединений по настоящему изобретению, как раскрыто в данном документе выше.

- 26 046402

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к диагностической композиции, содержащей или состоящей из одного или более конъюгатов или соединений по настоящему изобретению, как раскрыто в данном документе выше.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к терапевтической композиции, содержащей или состоящей из одного или более конъюгатов или соединений по настоящему изобретению, как раскрыто в данном документе выше.

Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты и/или разбавители. Примеры подходящих фармацевтических носителей, эксципиентов и/или разбавителей хорошо известны в данной области техники и включают растворы фосфатносолевого буфера, воду, эмульсии, такие как масляно-водные эмульсии, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и т.д. Композиции, содержащие такие носители, могут быть получены хорошо известными общепринятыми способами. Такие фармацевтические композиции можно вводить субъекту в подходящей дозе. Введение подходящих композиций может осуществляться различными способами, например, внутривенным, внутрибрюшинным, подкожным, внутримышечным, местным, внутрикожным, интраназальным или внутрибронхиальным введением. Особенно предпочтительно, чтобы указанное введение осуществляли путем инъекции и/или доставки, например, в участок в поджелудочной железе или в мозговую артерию или непосредственно в ткань головного мозга. Композиции также можно вводить непосредственно в целевой сайт, например, путем биолистической доставки к внешнему или внутреннему целевому сайту, такому как поджелудочная железа или мозг. Режим дозирования будет определен лечащим врачом и клиническими факторами. Как хорошо известно в области медицины, дозировки для любого одного пациента зависят от многих факторов, включая размер пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное соединение, подлежащее введению, пол, время и способ введения, общее состояние здоровья и другие препараты, которые вводят в то же время. Фармацевтически активное вещество может присутствовать в количествах от 0,1 нг до 10 мг/кг массы тела на дозу, однако предусмотрены дозы ниже или выше этого примерного диапазона, особенно с учетом вышеупомянутых факторов.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к одному или более соединениям по изобретению, как описано в данном документе выше, для применения в медицине.

Предпочтительными применениями в медицине являются ядерная медицина, такая как ядернодиагностическая визуализация, также называемая ядерной молекулярной визуализацией, и/или направленная радиотерапия заболеваний, связанных со сверхэкспрессией, предпочтительно PSMA на пораженной ткани.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению, как определено в данном описании выше, для применения в способе диагностики и/или определения стадии рака, предпочтительно рака предстательной железы. Рак предстательной железы не единственный рак, характеризующийся экспрессией PSMA. Рак, не относящийся к предстательной железе, демонстрирующий экспрессию PSMA, включает рак молочной железы, легких, колоректальный и почечноклеточный рак. Таким образом, любое соединение, описанное в настоящем документе, имеющее PSMAсвязывающий фрагмент, может быть применено для диагностики, визуализации или лечения рака, характеризующегося экспрессией PSMA.

Предпочтительными показаниями являются обнаружение или определение стадии рака, такого как, но не ограничиваясь ими, глиомы высокой степени тяжести, рак легких и особенно рак предстательной железы и метастазирующий рак предстательной железы, обнаружение метастатического заболевания у пациентов с первичным раком предстательной железы от промежуточного до высокого риска и обнаружение метастатических участков, даже при низких значениях PSA в сыворотке у пациентов с биохимически рецидивирующим раком предстательной железы. Другим предпочтительным показанием является визуализация и получение изображения неоангиогенеза.

С точки зрения медицинских показаний к терапии, особенно радиотерапии, рак является предпочтительным показанием. Рак предстательной железы является особенно предпочтительным показанием.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к конъюгату или соединению по настоящему изобретению, как определено в данном документе выше, для применения в способе диагностики и/или определения стадии рака, предпочтительно рака предстательной железы.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к следующим пунктам.

1. Конъюгат лиганд-SIFA-хелаτор, содержащий в одной молекуле:

(a) один или более лигандов, которые способны связываться с молекулой-мишенью, соответствующей заболеванию, (b) фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA), который содержит ковалентную связь между кремнием и атомом фтора и который может быть помечен ¹⁸F путем изотопного обмена ¹⁹F на ¹⁸F или который мечен ¹⁸F и (c) одну или более хелатирующую группу, необязательно содержащую хелатированный нерадиоактивный или радиоактивный катион.

2. Конъюгат по п.1, где фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA) имеет структуру, представ-

- 27 046402 ленную формулой (I) _r<v^r2S

R^3S где R^1S и R^2S независимо представляют собой линейную или разветвленную С3-С₁₀-алкильную группу, предпочтительно R^1S и R^2S выбраны из изопропила и трет-бутила и более предпочтительно R^1S и R^2S представляют собой трет-бутил;

R^3S представляет собой C1-C20-углеводородную группу, которая может содержать одну или более ароматических и одну или более алифатических звеньев и/или до 3 гетероатомов, выбранных из О и S, предпочтительно R^3S представляет собой C6-C₁₀-углеводородную группу, которая содержит ароматическое кольцо, и которая может содержать одну или более алифатических звеньев, более предпочтительно R^3S представляет собой фенильное кольцо, и наиболее предпочтительно, R^3S представляет собой фенильное кольцо, где Si-содержащий заместитель и связь, обозначенная как '^{ΛΛΛΛΛΛΛΖ}', находятся в параположении и где фрагмент SIFA присоединен к остальной части конъюгата через связь, обозначенную как άλλαλλλλ.

3. Конъюгат по п.2, где фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA) имеет структуру, представленную формулой (Ia)

где t-Bu обозначает трет-бутильную группу.

4. Конъюгат по любому из пп.1-3, где хелатирующая группа содержит по меньшей мере одну из:

(i) макроциклической кольцевой структуры с кольцевыми атомами в количестве от 8 до 20, из которых 2 или более, более предпочтительно 3 или более, выбраны из атомов кислорода или атомов азота и (ii) ациклической хелатирующей структуры с открытой цепью с атомами главной цепи в количестве от 8 до 20, из которых 2 или более, более предпочтительно 3 или более представляют собой гетероатомы, выбранные из атомов кислорода или атомов азота.

5. Конъюгат по любому из пп.1-3, где хелатирующая группа представляет собой остаток хелатирующего агента, выбранного из бис(карбоксиметил)-1,4,8,11-тетраазабицикло[6.6.2]гексадекана (СВТЕ2а), циклогексил-1,2-диаминтетрауксусной кислоты (CDTA), 4-(1,4,8,11-тетраазациклотетрадец-1ил)-метилбензойной кислоты (СРТА), №-[5-[ацетил(гидрокси)амино]пентил]-М-[5-[[4-[5-аминопентил(гидрокси)амино]-4-оксобутаноил]амино]пентил]-М-гидроксибутандиамида (DFO), 4,11-бис(карбоксиметил)-1,4,8,11 -тетраазабицикло[6.6.2]гексадекана (DO2A), 1,4,7,1 О-тетрациклододекан-Ν,Ν',Ν'',Ν'тетрауксусной кислоты (DOTA), ^№-дипиридоксилэтилендиамин-М,№-диацетат-5,5'-бис(фосфат) (DPDP), диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA), этияендиамин-МК-тетрауксусной кислоты (EDTA), этиленгликоль-О,О-бис(2-аминоэтил)-НН№,№-тетрауксусной кислоты (EGTA), N,Nбис(гидроксибензил)-этилендиамин-М,№-диуксусной кислоты (HBED), гидроксиэтилдиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), 1-(п-нитробензил)-1,4,7,10-тетраазациклодекан-4,7,10-триацетата (HP-DOA3), 6гидразинил-М-метилпиридин-3 -карбоксамида (HYNIC), 1,4,7-триазациклононан-1 -янтарная кислота-4,7диуксусной кислоты (NODASA), 1-(1-карбокси-3-карбоксипропил)-4,7-(карбоокси)-1,4,7триазациклононан (NODAGA), 1,4,7-триазациклононантриуксусной кислоты (NOTA), 4,11бис(карбоксиметил)-1,4,8,11-тетраазабицикло[6.6.2]гексадекана (ТЕ2А), 1,4,8,11-тетраазациклододекан1,4,8,11-тетрауксусной кислоты (ТЕТА), терпиридин-бис(метиленаминтетрауксусной кислоты (ТМТ), 1,4,7,10-тетраазациклотридекан-М,№,№',№-тетрауксусной кислоты (TRITA) и триэтилентетраамингексауксусной кислоты (ТТНА), где остаток получают путем ковалентного связывания карбоксильной группы, содержащейся в хелатирующем агенте, с остальной частью конъюгата посредством сложноэфирной или амидной связи, предпочтительно через амидную связь.

6. Конъюгат по п.5, где хелатирующий агент выбран из DOTA и DOTAGA.

7. Конъюгат по любому из пп.1-6, где хелатирующая группа содержит хелатированный катион, предпочтительно хелатированный радиоактивный катион, выбранный из ⁴⁴Sc, ⁴⁷Sc, ⁵¹Cr, ^52mMn, ⁵⁸Co, ⁵²Fe, ⁵⁶Ni, ⁵⁷Ni, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁶Ga, ⁶⁸Ga, ⁶⁷Ga, ⁸⁹Zr, ⁹⁰Y, ⁸⁹Y, <Tc, ^99mTc, ⁹⁷Ru, ¹⁰⁵Rh, ¹⁰⁹Pd, ¹¹¹Ag, ^110mIn, ¹¹¹In, ^113mIn, ^114mIn, ^117mSn, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁴⁹Tb, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁷Gd, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁶Ho, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁹Er, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷²Tm, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁹¹Pt, ¹⁹⁷Hg, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ²¹²Pb, ²⁰³Pb, ²¹¹At., ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²²³Ra, ²²⁵Ac, ²²⁷Th, катионной молекулы, содержащей ¹⁸F или катиона, такого как ¹⁸F-[AlF]²+, более предпочтительно катионов ⁴⁴Sc, ⁴⁷Sc, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁸Ga, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re, ²¹²Pb, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²²⁵Ac и ²²⁷Th или кати

- 28 046402 онной молекулы, содержащей ¹⁸F.

8. Конъюгат по любому из пп.1-8, где лиганд может связываться с PSMA.

9. Конъюгат по любому из пп.1-8, где лиганд имеет структуру, представленную формулой (II) ноос.

ноос ^1L 3L

II (CH₂)_m о , _Ч\(СН₂)_П--соон (II), где m представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4, более предпочтительно 2;

n представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4, более предпочтительно 2 или 3;

R^2L представляет собой С или Р(ОН), предпочтительно С и где лиганд присоединен к остальной части конъюгата через связь, обозначенную как

10. Конъюгат по любому из пп.1-9, представляющий собой соединение формулы (III)

SIFA

1₃

X³

НООС^ ,R¹J: _2L,R³^ X¹ L¹—х²—R^B—X—R^CH

Ίί h I hooc-^(CH2^° ^C00H ноос _(IIIX или его фармацевтически приемлемую соль, где SIFA представляет собой фрагмент кремнефторидного акцептора (SIFA), который содержит ковалентную связь между кремнием и атомом фтора и который может быть мечен ¹⁸F путем изотопного обмена ¹⁹F на ¹⁸F или который мечен ¹⁸F, предпочтительно SIFA представляет собой фрагмент SIFA по п.2;

m представляет собой целое число от 2 до 6, предпочтительно от 2 до 4, более предпочтительно 2;

L¹ представляет собой двухвалентную связующую группу, структура которой выбрана из олигоамида, простого олигоэфира, простого олиготиоэфира, сложного олигоэфира, сложного олиготиоэфира, олигомочевины, олиго(простой эфир-амид), олиго(простой тиоэфир-амид), олиго(сложный эфир-амид), олиго(сложный тиоэфир-амид), олиго(мочевина-амид), олиго(простой эфир-простой тиоэфир), олиго(простой эфир-сложный эфир), олиго(простой эфир-сложный тиоэфир), олиго(простой эфирмочевина), олиго(простой тиоэфир-сложный эфир), олиго(простой тиоэфир-сложный тиоэфир), олиго(простой тиоэфир-мочевина), олиго(сложный эфир-простой тиоэфир), олиго(сложный эфир-мочевина) и олиго(сложный тиоэфир-мочевина), предпочтительно структура выбрана из олигоамида и олиго(сложный эфир-амид);

X³ выбран из амидной связи, сложноэфирной связи, простого эфира, амина и связующей группы формулы

где связь, обозначенная как *****, в группе NH, связана с R^B, а другая связь, обозначенная как *****, связана с SIFA, предпочтительно X представляет собой амидную связь;

R^B представляет собой трехвалентную связующую группу;

X⁴ выбран из амидной связи, простоэфирной связи, простой тиоэфирной связи, сложноэфирной связи, сложной тиоэфирной связи, мочевинного мостика, аминной связи и связующей группы формулы

где амидная связь, обозначенная как «^, образована с хелатирующей группой, а другая связь,

- 29 046402 обозначенная как ^^^. связана с R^B, предпочтительно X⁴ представляет собой амидную связь;

R^CH представляет собой хелатирующую группу, необязательно содержащую хелатированный радиоактивный или нерадиоактивный катион, предпочтительно радиоактивный или нерадиоактивный катион металла, предпочтительно хелатирующую группу по п.4, более предпочтительно хелатирующую группу по п.5 и наиболее предпочтительно хелатирующую группу по п.6.

11. Конъюгат по п.10, где L¹ содержит всего от 1 до 5, более предпочтительно всего от 1 до 3 и наиболее предпочтительно всего 1 или 2 амидных и/или сложноэфирных связей, предпочтительно амидных связей, в остове.

12. Конъюгат по п.10, где -X¹-L¹-X²- представляет собой одну из следующих структур (L-1) и (L-2): -NH-C(O)-R⁶-C(O)-NH-R⁷-NH-C(O)- (L-1)

-C(O)-NH-R⁸-NH-C(O)-R⁹-C(O)-NH-R¹⁰-NH-C(O)- (L-2), где R6-R¹⁰ независимо выбраны из С₂-С₁₀-алкилена, предпочтительно линейного С₂-С₁₀-алкилена, причем каждая алкиленовая группа может быть замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из -ОН, -OCH₃, -СООН, -СООСН₃, -NH₂ и -NHC(NH)NH₂.

13. Конъюгат по п.12, где общее число атомов углерода в R⁶ и R⁷ или в R8-R¹⁰ соответственно составляет от 8 до 20, более предпочтительно от 8 до 14, без атомов углерода в необязательных заместите лях.

14. Конъюгат по п.10, где -X¹-L¹-X²- представляет собой одну из следующих структур (L-3) и (L-4):

-NH-C(O)-Rⁿ-C(O)-NH-R¹²-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-3),

-C(O)-NH-CH(COOH)-R¹³-NH-C(O)-R¹⁴-C(O)-NH-R¹⁵-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-4), где R¹¹-R¹⁵ независимо выбраны из С₂-С₈-алкилена, предпочтительно линейного С₂-С₈-алкилена.

15. Конъюгат по п.14, где общее число атомов углерода в R¹¹ и R¹² или в R¹³-R¹⁵, соответственно, составляет от 8 до 18, более предпочтительно от 8 до 12, еще более предпочтительно от 9 до 10.

16. Конъюгат по любому из пп.10-15, где R^B имеет структуру, представленную формулой (IV)

где А выбран из N, CR¹⁶, где R¹⁶ представляет собой Н или С1-С₆-алкил и 5-7-членную карбоциклическую или гетероциклическую группу, предпочтительно А выбран из N и СН и более предпочтительно А представляет собой СН;

связь, обозначенная как mvww при (СН₂)_а, образована с помощью X², и а представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно 0 или 1 и наиболее предпочтительно 0;

связь, обозначенная как ллллмл/>при (СЩ^, образована с помощью X³, и b представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно от 0 до 2 и более предпочтительно 0 или 1, и связь, обозначенная как лллллллл при (С11₂)_c, образована с помощью X⁴, и с представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно от 0 до 2 и более предпочтительно 0 или 1.

17. Конъюгат по любому из пп.10-16, представляющий собой соединение формулы (IIIa)

или его фармацевтически приемлемая соль, где m, n, R^1L, R^2L, R^3L, X¹, L¹, b, с, X⁴ и Rdl являются такими, как определено в пп.10-16.

18. Конъюгат по п.17, где b + с более или равно 1.

19. Конъюгат по п.17 или п.18, где b + с менее или равно 3.

20. Конъюгат по любому из пп.17-19, где b равно 1, а с равно 0.

21. Конъюгат по любому из пп.10-20, где -X^R^ представляет собой остаток хелатирующего агента, выбранного из DOTA и DOTAGA, связанный с одной из его карбоксильных групп через амидную связь с остальной частью конъюгата.

22. Конъюгат по любому из пп.10-20, представляющий собой соединение формулы (IIIb)

- 30 046402

или его фармацевтически приемлемую соль, где m, n, R^1l, R^2L, R^3L, X¹, L¹, b, с, X⁴ и R^CH являются такими, как определено в пп.10-20, и r равно 0 или 1.

23. Конъюгат по п.22, где -N(H)-R^CH представляет собой остаток хелатирующего агента, выбранного из DOTA и DOTAGA, связанный с одной из его карбоксильных групп через амидную связь с осталь ной частью конъюгата.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1. Иллюстративная корреляция определения связывания девяти эталонных веществ с человеческим сывороточным альбумином (OriginPro 2016G).

Фиг. 2. Иллюстративное ПЭТ-изображение (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ⁶⁸Ga-^natF-5 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественная оценка ROI выбранных органов. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положение опухоли указано стрелкой.

Фиг. 3. Иллюстративное ПЭТ-изображение (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ⁶⁸Ga-^natF-6 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественное определение ROI выбранных органов. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положение опухоли указано стрелкой.

Фиг. 4. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ⁶⁸Ga-^natF-7 и ⁶⁸Ga-^natF-7, совместно инъецированного с РМРА (8 мг/кг) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественное определение ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 2). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 5. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ВД/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантатной опухоли LNCaP ⁶⁸Ga^natF-7 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 6. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ¹⁸F-7 (со свободным хелатом) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч. после введения, время экспозиции 15 мин) и количественное определение ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 7. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ВД/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантатной опухоли LNCaP ¹⁸F-7 (со свободным хелатом) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 8. Биораспределение (в % ВД/г) ⁶⁸Ga-^natF-7 (серые столбцы) и ¹⁸F-7 (со свободным хелатом) (белые столбцы) через 1 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3).

Фиг. 9. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ⁶⁸Ga-^natF-8 и ⁶⁸Ga-^natF-8, совместно инъецированного с РМРА (8 мг/кг) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественное определение ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 2). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 10. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ВД/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантатной опухоли LNCaP ⁶⁸Ga^natF-8 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 11. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная

- 31 046402 рамка) ¹⁸F-8 (свободный хелат) и ¹⁸F-8 (свободный хелат), совместно инъецированного с РМРА (8 мг/кг) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественная оценка ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками. Обратите внимание на различное масштабирование (0-10 слева, 0-20 справа)

Фиг. 12. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ВД/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантатной опухоли LNCaP ¹⁸F-8 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 13. Биораспределение (в % ВД/г) ⁶⁸Ga-^natF-8 (свободный хелат), (серые столбцы) и ¹⁸F-8 (белые столбцы) через 1 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3).

Фиг. 14. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ⁶⁸Ga-^natF-9 (свободный хелат) и ⁶⁸Ga-^natF-9 (свободный хелат), совместно инъецированного с РМРА (8 мг/кг) мышам линии SCID, несущим опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин), и количественное определение ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 15. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ID/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантате опухоли LNCaP ⁶⁸Ga-^natF-9 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 16. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ¹⁸F-9 (свободный хелат) и ¹⁸F-9 (свободный хелат), совместно инъецированного с РМРА (8 мг/кг) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественная оценка ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 17. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ВД/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантатной опухоли LNCaP ¹⁸F-9 (свободный хелат) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 18. Биораспределение (в % ВД/г) ⁶⁸Ga-^natF-9 (серые столбцы) и ¹⁸F-9 (свободный хелат) (белые столбцы) через 1 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3).

Фиг. 19. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ¹⁸F-^natGa-7 (свободный хелат) и ¹⁸F-^natGa-7 (свободный хелат), совместно инъецированного с РМРА (8 мг/кг) у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественное определение ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 20. Биораспределение (в % ВД/г) ¹⁸F-^natGa-7 (свободный хелат) (белые столбцы) по сравнению со структурно идентичным соединением ⁶⁸Ga-^natF-7 (свободный хелат) (серые столбцы) через 1 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3).

Фиг. 21. Изображение слева демонстрирует проекцию максимальной интенсивности (MIR) от ПЭТ субъекта с нормальным биораспределением (опухолевые поражения не обнаружены). Изображения были получены через 76 мин после введения 272 МБк PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F. На фиг. 21 справа изображена проекция максимальной интенсивности (MIP) от ПЭТ субъекта с умеренно распространенным заболеванием, демонстрирующим множественные опухолевые поражения с высоким отношением поражения к фону. Изображения получены через 102 мин после введения 312 МБк PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F.

Фиг. 22. Графическое представление табл. 6.

Фиг. 23. Графическое представление табл. 7.

Фиг. 24. Графическое представление табл. 8.

Фиг. 25. Графическое представление табл. 9.

Фиг. 26. Показывает: MIR (А) и трансаксиальные изображения (B-D) пациента 70 лет с биохимическим рецидивом через 1,5 года после радикального удаления предстательной железы (Gleason 8, рТ2с, pN1). Присутствует единичное типичное поражение рака предстательной железы диаметром 5 мм с правой стороны таза с высоким поглощением PSMA-SIFA3 (7), меченного F. Злокачественная природа по

- 32 046402 ражения была подтверждена гистопатологией.

Фиг. 27. Набор изображений пациента 80 лет с прогрессирующим кастрационно-резистентным раком предстательной железы (PSA 66,4 нг/мл). Изображения показывают высокое поглощение PSMASIFA3 (7), меченного ¹⁸F в различных классах поражений рака предстательной железы (локальная опухоль, метастазы в лимфатических узлах, метастазы в кости, метастазы в печени). Показанные поражения находятся в пределах 2 мм (стрелки указывают на характерные, а не на все опухолевые очаги).

Фиг. 28. Показано доказательство экспериментальной проверки концепции действия ПЭТ метки, меченной ⁶⁸Ga, SiFA замещенной, на основе хелатора.

Фиг. 29. Иллюстративные ПЭТ-изображения (проекция максимальной интенсивности, дорсальная рамка) ¹⁸F-^natLu-rh-7 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP (1 ч после введения, время экспозиции 15 мин) и количественная оценка ROI выбранных органов при сканировании ПЭТ без блокирования. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 3). % ВД/мл представляет собой % введенной дозы на мл. Положения опухоли указаны стрелками.

Фиг. 30. Кривые зависимости активности от времени (логарифмический график) в % ВД/мл, полученные из динамических данных ПЭТ (время экспозиции 90 мин, пространственная реконструкция OSEM) в пуле крови (сердце), мышцах, почках, печени и ксенотрансплантатной опухоли LNCaP ¹⁸F^natLu-rh-7 у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP.

Фиг. 31. Биораспределение (в % ВД/г) ¹⁷⁷Lu-^natF-7, ¹⁷⁷Lu-^natF-8 и ¹⁷⁷Lu-^natF-10 через 24 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4).

Фиг. 32. Биораспределение (в % ВД/г) ¹⁷⁷Lu-^natF-10 через 1 и 24 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4).

Фиг. 33. Сравнительное биораспределение (в % ВД/г) установленных и новых rhPSMA-лигандов через 24 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4-5).

Фиг. 34. Биораспределение (в % ВД/г) ¹⁷⁷Lu-^natF-10 и ⁶⁸Ga-^natF-10 через 1 ч после введения у мышей линии SCID, несущих опухоль LNCaP. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (n равно 4).

Далее изобретение проиллюстрировано примерами.

Пример 1. Материалы и способы

Общее.

Fmoc-(9-флуоренилметоксикарбонил-) и все другие защищенные аналоги аминокислот были приобретены у Bachem (Бубендорф, Швейцария) или Iris Biotech (Марктредвиц, Германия). Тритилхлорид полистирольная смола (TCP) была получена от PepChem (Тюбинген, Германия). От Chematech (Дижон, Франция) получены хелаторы DOTAGA-ангидрид и NOTA. Хелатор TRAP (1,4,7-триазациклононан1,4,7-трис[метилен(2-карбоксиэтил)фосфиновая кислота]) получали, как описано ранее (Notni et al., Chemistry (Weinheim an der Bergstrasse, Germany) 16), 7174-85 (2010)). Получение кремнефторидного акцептора SIFA-бензойной кислоты проводят в соответствии с ранее опубликованным способом (Iovkova et al., Chemistry (Weinheim an der Bergstrasse, Germany) 15, 2140-7 (2009)). Все необходимые растворители и другие органические реагенты были приобретены у Alfa Aesar (Карлсруэ, Германия), Sigma-Aldrich (Мюнхен, Германия) или VWR (Дармштадт, Германия). Твердофазный синтез пептидов осуществляли вручную, с применением шприц-шейкера Intelli-Mixer (Neolab, Гейдельберг, Германия). Аналитическую и препаративную обращенно-фазовую высокоэффективную жидкостную хроматографию (ОФ-ВЭЖХ) выполняют с применением градиентных систем Shimadzu (Shimadzu Deutschland GmbH, Нойфарн, Германия), каждая из которых оборудована детектором SPD-20A UV/Vis (220 нм, 254 нм). Колонку Nucleosil 100 С18 (125x4,6 мм, размер частиц 5 мкм) (CS GmbH, Лангервеэ, Германия) применяют для аналитических измерений при скорости потока 1 мл/мин. В тексте приводятся как конкретные градиенты, так и соответствующее время удержания t_R. Очистку препаративной ВЭЖХ проводят на колонке Multospher 100 RP 18 (250x10 мм, размер частиц 5 мкм) (CS GmbH, Лангервеэ, Германия) при постоянной скорости потока 5 мл/мин. Аналитическую и препаративную ОФ-ВЭЖХ с радиометрическим детектированием проводят с применением колонки Nucleosil 100 С18 (5 мкм, 125x4,0 мм) (CS GmbH, Лангервеэ, Германия). Элюентами для всех операций ВЭЖХ были вода (растворитель А) и ацетонитрил (растворитель В), оба из которых содержали 0,1% трифторуксусной кислоты. Масс-спектры при электрораспылительной ионизация для характеристики веществ получают на масс-спектрометре Expression¹' CMS (Advion Ltd., Харлоу, Великобритания). Радиоактивность детектируют через соединение выхода УФ-фотометра с сцинтилляционным детектором типа NaI(Tl) от EG&G Ortec (Мюнхен, Германия). Гель-проникающую хроматографию (ГПХ) проводили на Sephadex GP-10 (100 г, размер слоя приблизительно 30x3 см) с водой в качестве элюента, разделяя элюат на фракции по 20 мл. Спектры ЯМР регистрируют на спектрометрах Bruker AVHD-300 или AVHD-400 при 300 К. Значения рН измеряют с помощью рН-метра SevenEasy (Mettler Toledo, Гисен, Germany).

- 33 046402

Протоколы получения

1) Твердофазный синтез пептидов по Fmoc-стратегии.

Загрузка смолы TCP.

Загрузку тритилхлорид полистирольной смолы (TCP) с Fmoc-защищенной аминокислотой (АА) осуществляют путем перемешивания раствора смолы TCP (1,95 ммоль/г) и Fmoc-AA-OH (1,5 экв.) в безводном ДХМ (Дихлорметан) с DIPEA (Диизопропилэтиламин) (4,5 экв.) При комнатной температуре в течение 2 часов. Оставшийся тритилхлорид закрывают добавлением метанола (2 мл/г смолы) в течение 15 мин. Затем смолу отфильтровывали и отмывают ДХМ (2x5 мл/г смолы), ДФМА (Диметилформамид) (2x5 мл/г смолы), метанолом (5 мл/г смолы) и сушат в вакууме. Конечную загрузку 1 Fmoc-AA-OH определяют по следующему уравнению:

?η?ηοί1 _ (?η₂-?η₁)χ1000 9 -I (Mw-Mhci) ^т2 m₂ представляет собой массу загруженной смолы [г];

m1 представляет собой массу незагруженной смолы [г];

MW представляет собой молекулярную массу АА [г/моль];

MHCl представляет собой молекулярную массу HCl [г/моль].

Формирование пептида на смоле

Соответствующий защищенный боковой цепью Fmoc-AA-OH (1,5 экв.) растворяют в ДМФА (8 мл/г смолы) и предварительно активируют путем добавления TBTU (2-(Ш-Бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметиламиний тетрафторборат 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate) (1,5 экв.), HOBt (Гидроксибензотриазол) (1,5 экв.) и DIPEA (4,5). э.). Предварительную активацию для SIFA-BA проводят аналогично. Для азидозамещенных аминокислот (2,0 экв.) применяют HATU (1[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний 3-оксид гексафторфосфата) (3,0 экв.), HOAt (1-гидрокси-7-азабензотриазол) (3,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.). После активации в течение 15 мин раствор добавляют к связанному со смолой свободному аминопептиду TCP-AA-NH2 и встряхивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем смолу промывают ДМФА (смола 6x5 мл/г) и после снятия защиты с Fmoc следующую аминокислоту связывают аналогичным образом.

Удаление защиты Fmoc на смоле

Связанный со смолой Fmoc-пептид обрабатывают 20% пиперидином в ДМФА (об./об., 8 мл/г смолы) в течение 5 мин и затем в течение 15 мин. Затем смолу тщательно отмывают ДМФА (8x5 мл/г смолы).

Удаление защиты Dde (2-ацетилмедон) на смоле

Dde-защищенный пептид (1,0 экв.) растворяют в растворе 2% моногидрата гидразина в ДМФА (об./об., 5 мл/г смолы) и встряхивалют в течение 15 мин. В случае присутствия Fmoc-групп, удаление защиты с Dde проводят путем добавления раствора имидазола (0,46 г), гидрохлорида гидроксиламина (0,63 г) в н-метил-2-пирролидоне (2,5 мл) и ДМФА (0,5 мл) в течение 3 ч при комнатной температуре. После снятия защиты смолу отмывали ДМФА (6x5 мл/г смолы).

Удаление защиты Alloc (аллилоксикарбонил) на смоле

Аллилокси-защитную группу удаляют добавлением триизопропилсилана (TIPS) (50,0 экв.) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (Pd(PPh₃)₄) (0,3 экв.), растворенного в ДХМ (6 мл). Через 1,5 ч при комнатной температуре смолу отмывают ДХМ (6x5 мл/г смолы).

Снятие защиты tBu/Boc

Удаление защитных групп tBu/tBoc осуществляют путем растворения неочищенного продукта в ТФУ и перемешивания в течение 40 мин при комнатной температуре. После удаления ТФУ в потоке азота остаток растворяют в смеси трет-бутанола и воды. После лиофилизации получают неочищенный пептид.

Отщепление пептида от смолы

a) Сохранение лабильных кислотных защитных групп: связанный со смолой пептид растворяют в смеси ДХМ/ТФЭ/АсОН (ТФЭ - тетрафторэтилен, АсОН - уксусная кислота) (об./об., 6/3/1, 8 мл/г смолы) и встряхивают в течение 30 мин. Раствор, содержащий полностью защищенный пептид, отфильтровывают и смолу обрабатывают другой порцией раствора для расщепления в течение 30 мин. Обе фракции объединяют и уксусную кислоту удаляют при пониженном давлении путем последовательного добавления толуола и воды. После лиофилизации оставшейся воды получают неочищенный полностью защищенный пептид.

b) Снятие защиты со всех лабильных кислотных защитных групп: полностью защищенный связанный со смолой пептид растворяют в смеси ТФУ/TIPS/вода (ТФУ -трифторукусусная кислота, TIPS - триизопропилсилил) (об./об./об. 95/2,5/2,5) и встряхивают в течение 30 мин. Раствор отфильтровывают и смолу обрабатывают таким же образом в течение еще 30 мин. Оба фильтрата объединяют и концентрируют в потоке азота. После растворения остатка в смеси трет-бутанола и воды, и последующей лиофилизации получают неочищенный пептид.

2) Синтез связующих мотивов Lys-мочевина-Glu ((tBuO)KuE(OtBu)₂) (1)

- 34 046402

Синтез tBu-защищенного связующего мотива Lys-MO4eeuHa-Glu (EuK) проводят, как описано ранее, с помощью синтеза в фазе раствора (Weineisen et al., EJNMMI исследование 4, 63 (2014)). Продукт получают в виде воскообразного твердого вещества (91,5%). ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 12,6 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₂₄H₄₅N₃O₇): 487,6, найдено: m/z составляет 488,3 [М+Н]+, 510,3 [M+Na]+.

Glu-мочевинa-Glu ((tBuO)EuE(OtBu)₂) (2)

tBu-защищенный связующий мотив Glu-мочевинa-Glu (EuE) получают в соответствии с ранее опубликованным способом (Weineisen et al., EJNMMI исследование 4, 63 (2014)). Продукт получают в виде гигроскопичного твердого вещества (84%). ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 11,3 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₂₃H₄₉N₂O₉): 488,3, найдено: m/z составляет 489,4 [М+Н]+, 516,4 [M+Na]+.

PfpO-Sub-(tBuO)KuE(OtBu)₂ (Pfp - пентафторфенил, Sub - субериновая кислота) (3) θ Н н ?

®-_Ό ^ΛΤ^Νγ^Ν-^ΛοιΒυ

Г ° Ί ®^ичЛо %о

HN

ОF .

Конъюгирование EuK со спейсером субериновой кислоты проводят, как описано ранее (Weineisen et al., EJNMMI исследование 4, 63 (2014)). Продукт получают в виде бесцветного масла (72%). ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 15,5 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₃₈H₅₆F₅N₃O₁₀): 809,4, найдено: m/z составляет 810,6 [М+Н]+, 832,4 [M+Na]+.

Конъюгирование EuK-субъединицы мотива (3) с пептидом

Пептид с N-концевой защитой (1,0 экв.) добавляют к раствору 3 (1,2 экв.) в ДМФА и добавляли ТЭА (8 экв.). После перемешивания раствора в течение 2 ч при комнатной температуре, ДМФА удаляют в вакууме. Для расщепления сложных эфиров tBu добавляют ТФУ и раствор перемешивают в течение 45 мин при комнатной температуре. После удаления ТФУ в потоке азота неочищенный продукт очищают с помощью ОФ-вэжх.

3) Получение пропаргил-TRAP (4) он но-Но

Получение пропаргил-TRAP осуществляют, как описано ранее (Reich et al., Chemical Communications (Cambridge, England) 53, 2586-2589 (2017)). Окончательную очистку осуществляют препаративной ВЭЖХ, получая 60,2 мг (82,4 мкмоль, 46%) пропаргил-TRAP в виде бесцветного твердого вещества. ВЭЖХ (от 2 до 40% В через 20 мин): t_R составляет 6,0 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₂₁H₃₉N₄O11P₃): 616,5, найдено: m/z составляет 617,5 [М+Н]+.

1Н-ЯМР (300 МГц, D₂O, 300 K) δ = 1,96-2,08 (m, 6Н, С(О)-СН₂), 2,46-2,55 (m, 2Н, Р^В-СН2-С), 2,592,70 (m, 4Н, Р^а-СН2-С), 3,36 (d, 2H, ²JPH=6 Гц, P^B-CH2-N), 3,41 (d, 4H, ²JPH=6 Гц, PA-CH2-N), 3,47-3,48 (m, 12Н, кольцо-СН2), 3,95 (d, 2H, СН2-С=СН, ⁴Jhh= 3 Гц) м.д.*, 13С{1Н}-ЯМР (101 МГц, D2O, 300 K) δ = 24,61 (d, 1JPP=95 Гц, PB-C-C), 25,07 (d, 1J_PP=94 Гц, РА-С-С), 26,71 (d, ²JPP=4 Гц, РВ-С-С), 27,82 (d, ²JPP=3 Гц, РА-С-С), 28,89 (С-С^С), 51,29/51,41/51,50 (три разных кольца-С), 53,66 (d, 1J_PP=91 Гц, N-C-PA), 53,66 (d, 1J_PP=90 Гц, N-C-PB), 71,79 (С-С^С), 79,65 (С-С^С), 174,46 (d, ³JPP=14 Гц, N(H)-C=O^B), 177,24 (d, ³JPP=13 Гц, C=O^A) м.д.*, 31Р{1Н}-ЯМР (162 МГц, D₂O, 300 K) δ = 37,99 (Р^А), 38,68(Р^В) м.д.*. *: индексы А и В указывают на атомы Р и О, принадлежащие неокрашенному боковому плечу А и окрашенному В соответственно.

- 35 046402

Связывание пропаргил-TRAP (4) с пептидом

Для конъюгирования функционализированных азидом пептидов с пропаргил-TRAP через катализируемое медью (I) алкиназидное циклоприсоединение был применен ранее разработанный способ (Reich et al., Chemical communications (Cambridge, England) 53, 2586-2589 (2017)). Кратко, пропаргил-TRAP (1,0 экв.) растворяют в воде (40 мМ раствор) и объединяют с раствором пептида (1,1 экв.) в смеси 1:1 (об./об.) tBuOH (2-метилпропанол-2) и воды. Затем добавляют раствор аскорбата натрия (0,5 М, 50 экв.) d воде. Чтобы начать реакцию, добавляют водный раствор Cu(OAc)2 (ацетат меди)-Н₂О (0,05 М, 1,2 экв.), что приводило к получению коричневого осадка, который растворялся после перемешивания в прозрачном зеленом растворе. Для деметаллирования TRAP добавляют водный раствор 1,4,7-триазациклононан1,4,7-триуксусной кислоты (NOTA, 8 мМ, 12 экв.) и значение рН регулируют до 2,2 с помощью 1 М водн. HCl. Через либо 1 ч при 60°C, либо 48 ч при комнатной температуре смесь непосредственно подвергают очистке с помощью препаративной ВЭЖХ.

4) Конъюгирование DOTAGA.

Конденсация пептидов и соответствующего хелатора DOTAGA-ангидрида описана в нескольких публикациях и суммирована следующим образом: пептид с незащищенным N-концом (1,0 экв.) растворяли вместе с DOTAGA-ангидридом (1,5 экв.) и DIPEA (10,0 экв.) в сухом ДМФА. После перемешивания реакционной смеси в течение ночи, ДМФА удаляли в вакууме, получая неочищенный продукт.

5) Получение ингибиторов PSMA-SIFA на основе EuK PSMA-SIFA1 (5)

PSMA-SIFA1 получают в соответствии со стандартным Fmoc-твердофазным пептидным синтезом (SPPS) на тритилхлоридной полистирольной смоле (TCP), применяя вышеупомянутые способы. Кратко, связанный со смолой Fmoc-D-Lys(Boc) (^)-6-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-2-[[(9Н-флуорен-9ил)метокси]карбонил]амино]гексановая кислота) подвергают снятию защиты с Fmoc с помощью 20% пиперидина в ДФМА и Fmoc-D-Dap(Dde)-OH ((2R)-3-{[1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этил]амино}-2-({[(9Н-флуорен-9-ил)метокси]карбонил}амино)пропановая кислота) (2,0 экв.) конъюгируют с применением HOBt (2,0 экв.), TBTU (2,0). экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в ДМФА. После ортогонального снятия защиты с Dde (2-Ацетилдимедон) имидазолом и гидрохлоридом гидроксиламина в смеси н-метил-2-пирролидона и ДФМА, SIFA-BA (1,5 экв.) конъюгируют аналогичным образом. Последующее снятие защиты с Fmoc и мягкое отщепление от смолы с помощью ТФЭ и АсОН в ДХМ приводило к образованию Вос-защищенного пептидного остова. Конденсацию DOTAGA-ангидрида (1,5 экв.) проводят путем добавления DIPEA (10 экв.) в ДМФА. После снятия защиты с Вос в ТФУ, добавляют фрагмент PfpO-Sub-(tBuO)KuE(OtBu)₂ (1,2 экв.) в смеси ТЭА (8 экв.) и ДМФА. Конечное расщепление сложных эфиров tBu при очистке ТФУ и ОФ-ВЭЖХ давало PSMA-SIFA1 (70%) в виде бесцветного твердого вещества. ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 9,1 мин. Расчетная моноизотопная масса (C63H102FN11O22Si): 1411,7, найдено: m/z составляет 1412,3 [М+Н]+, 706,8[М+2Н]2⁺.

Схема 1. Получение PSMA-SIFA1: а) 20% пиперидин (ДМФА), b) Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), с) имидазол, гидрохлорид гидроксиламина, (н-метил-2-пирролидон, ДФМА), d) SIFA-BA, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), е) ТФЭ, AcOH (ДХМ), f) DOTAGA-ангидрид, DIPEA (ДМФА), g) ТФУ, h) PfpO-Sub-(tBuO)KuE(OtBu)2, ТЭА (ДМФА).

PSMA-SIFA2 (6)

- 36 046402

Получение PSMA-SIFA2 осуществляют, применяя общие способы и процедуры, упомянутые выше. Кратко, связанный со смолой Fmoc-D-Lys(Boc)-OH подвергают снятию защиты с Fmoc с помощью 20% пиперидина в ДМФА и конъюгируют с N3-L-Dap(Fmoc)-OH (А)-2-азидо-3-[(9флуоренилметилоксикарбонил)амино]пропановая кислота) (2,0 экв.) с HATU (3,0 экв.), HOAt (3,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в ДМФА. После расщепления Fmoc-группы добавляли SIFA-BA (1,5 экв.) с HOBt (1,5 экв.), TBTU (1,5 экв.) и DIPEA (4,5 экв.) в ДМФА. Последующее отщепление от смолы с помощью ТФУ давало пептидный остов с полностью снятой защитой. Для конъюгирования EuK-фрагмента, PfpO-Sub(tBuO)KuE(OtBu)₂ (1,2 экв.) добавляли в смесь ТЭА (8 экв.) и ДФМА. Расщепление tBu-сложных эфиров проводят путем добавления ТФУ. На последней стадии очищенный пептид (1,1 экв.) подвергают взаимодействию с пропаргил-TRAP (1,0 экв.) в циклоприсоединении алкиназида, катализируемого медью (I), как указано выше. После очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ PSMA-SIFA2 (4%) получают в виде бесцветного твердого вещества. ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 8,5 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₆₅H₁0₉FN₁3O24P₃Si): 1595,7, найдено: m/z составляет 1596,5 [М+Н]+, 799,1[М+2Н]²⁺.

Схема 2. Получение PSMA-SIFA2: а) 20% пиперидин (ДМФА), b) N₃-L-Dap(Fmoc)-OH, HATU, HOAt, DIPEA (ДФМА), с) SIFA-BA, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), d) ТФУ, e) PfpO-Sub-(tBuO)KuE(OtBu)₂, ТЭА (ДМФА), f) пропаргил-TRAP, Cu(OAc)₂-H₂O, аскорбат натрия (tBuOH, H₂O).

6) Получение ингибиторов PSMA-SIFA на основе EuE.

PSMA-SIFA3 (7):

PSMA-SIFA3 получают с применением стандартного протокола Fmoc-SPPS, описанного выше. Кратко, связанный со смолой Fmoc-D-Orn(Dde)-OH (D-Orn Д-орнитин) подвергают снятию защиты Fmoc с помощью 20% пиперидина в ДФМА и (tBuO)EuE(OtBu)₂ (2,0 экв.) конъюгируют с HOBt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в ДМФА. После расщепления Dde-группы смесью 2% гидразина в ДМФА, добавляют раствор янтарного ангидрида (7,0 экв.) и DIPEA (7,0 экв.) в ДМФА. Конъюгирования Fmoc-D-Lys-OAll-HCl (1,5 экв.) достигают путем добавления смеси HOBt (1,5 экв.), TBTU (1,5 экв.) и DIPEA (4,5 экв.) в ДМФА. После расщепления Fmoc-группы 20% пиперидином в ДМФА, свободный амин конъюгируют с Fmoc-D-Dap(Dde)-ОН (2,0 экв.) после предварительной активации аминокислоты в смеси HOBt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в ДФМА. Последующее ортогональное снятие защиты с Dde проводят с применением имидазола и гидрохлорида гидроксиламина, растворенных в смеси н-метил-2-пирролидона и ДФМА. SIFA-BA (1,5 экв.) реагировал со свободным амином боковой цепи с HOBt (1,5 экв.), TBTU (1,5 экв.) и DIPEA (4,5 экв.) в качестве активирующих реагентов в ДМФА. Ал

- 37 046402 лилоксизащитную группу удаляют добавлением TIPS (50,0 экв.) и Pd(PPh₃)₄ (0,3 экв.), растворенных в ДХМ. После снятия защиты с Fmoc пиперидином, пептид отщепляют от смолы с сохранением лабильных кислотных защитных групп с применением смеси ТФЭ и АсОН в ДХМ. Конечная конденсация DOTAGA-ангидрида (1,5 экв.) была достигнута с помощью пиперидина (10 экв.) в ДМФА После расщепления tBu-сложных эфиров EuE-фрагмента с помощью ТФУ, неочищенный пептид очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ, получая PSMA-SIFA3 (24%) в виде бесцветного твердого вещества. ВЭЖХ (от 10 до 70% В через 15 мин): t_R составляет 10,4 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₆₃H₉₉FN₁₂O₂₅Si): 1470,7, найдено: m/z составляет 1471,8 [М+Н]+, 736,7 [М+2Н]²⁺.

Схема 3. Получение PSMA-SIFA3: а) 20% пиперидин (ДМФА), b) (tBuO)EuE(OtBu)₂, HOBt, TBTU, DIPEA, (ДФМА), с) 2% гидразин (ДМФА), d) янтарный ангидрид, DIPEA (ДМФА), е) Fmoc-D-LysOAll-HCl (All - аллил), HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), f) Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), g) имидазол, гидроксиламин гидрохлорид, (н-метил-2-пирролидон, ДФМА), h) SIFA-BA, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), i) TIPS, Pd(PPh3)4 (ДХМ), j) ТФЭ, АсОН (ДХМ), k) DOTAGA-ангидрид, DIPEA (ДМФА), l) ТФУ.

PSMA-SIFA4 (8):

PSMA-SIFA4 получают посредством SPPS в виде соединения 7 с одним отступлением, после конъюгирования Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, защитную группу Fmoc сначала расщепляют 20% пиперидином в ДМФА, и SIFA-BA подвергают взаимодействию со свободным N-концом пептида. Оставшуюся группу Dde отщепляют после удаления аллилокси-защитной группы с применением имидазола и гидрохлорида гидроксиламина, растворенных в смеси н-метил-2-пирролидона и ДФМА. Последующие стадии реакции идентичны получению PSMA-SIFA3. После очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ, PSMA-SIFA4 (11%) получают в виде бесцветного твердого вещества. ВЭЖХ (от 10 до 70% В через 15 мин): t_R составляет 10,4 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₆₃H₉₉FN₁₂O₂₅Si): 1470,7, найдено: m/z составляет 1471,7 [М+Н]+, 736,8 [М+2Н]²⁺.

- 38 046402

Схема 4: Получение PSMA-SIFA4: а) 20% пиперидин (ДМФА), b) Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), с) SIFA-BA, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), d) TIPS, Pd(PPh3)4 (ДХМ), е) имидазол, гидроксиламин гидрохлорид (н-метил-2-пирролидон, ДФМА), f) ТФЭ, АсОН (ДХМ), g) DOTAGAангидрид, DIPEA (ДМФА), h) ТФУ.

PSMA-SIFA5 (9):

получают аналогично лиганду 7 и 8. Разница заключалась в примеПептидный остов PSMA-SIFA5 нении N₃-L-Dap(Fmoc)-OH вместо Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, что было необходимо для окончательной кликреакции с пропаргил-TRAP. Азидозамещенную аминокислоту (2,0 экв.) конъюгируют с HATU (3,0 экв.), HOAt (3,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в ДМФА. После снятия защиты Fmoc с его боковой цепи 20% пиперидином, SIFA-ВА (1,5 экв.) подвергают реакции, как указано выше. До конъюгирования хелаторного фрагмента, все оставшиеся стадии реакции идентичны пептидам 7 и 8. После отщепления от смолы с помощью ТФУ при одновременном снятии защиты всех лабильных кислотных защитных групп, очищенный ЕиЕ-азидоконъюгат (1,1 экв.) подвергали реакции с пропаргил-TRAP (1,0 экв.) в катализируемом медью (I) алкиназидном циклоприсоединении. Очистка с помощью ОФ-ВЭЖХ давала PSMA-SIFA5 (9%) в виде бесцветного твердого вещества. ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 8,7 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₆₅H₁₀₆FN₁₄O₂₇P₃Si): 1654,6, найдено: m/z составляет 1655,6 [М+Н]+, 828,4 [М+2Н]²⁺.

Схема 5. Получение PSMA-SIFA5: а) 20% пиперидин (ДМФА), b) N₃-L-Dap(Fmoc)-OH, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), с) SIFA-BA, HOBt, TBTU, DIPEA (ДФМА), d) TIPS, Pd(PPh3)4 (ДХМ), е) ТФУ, f) пропаргил-TRAP, Cu(OAc)₂-H₂O, аскорбат натрия (tBuOH, H₂O).

Эксперименты по комплексообразованию

Получение комплексов ^natGa-TRAP: 500 мкл 2 мМ стокового раствора предшественника PSMA в ДМСО объединяют с 750 мкл 2 мМ раствора Ga(NO₃)₃ в воде. Комплексообразование происходило мгновенно при комнатной температуре. Полноту реакции контролируют с помощью ОФ-ВЭЖХ и последующей масс-спектрометрии.

^natGa-PSMA-SIFA2: ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 9,5 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₆₅H₁₀₆FGaN₁₃O₂₄P₃Si): 1661,6 найдено: m/z составляет 1663,9 [М+Н]⁺, 832,6 [М+2Н]²⁺.

^natGa-PSMA-SIFA5: ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 9,0 мин. Рассчитанная моноизотопная масса (C₆₅H₁₀₃FGaN₁₄O₂₇P₃Si): 1720,5 найдено: m/z составляет 1720,8 [М+Н]⁺, 861,1

- 39 046402

[М+2Н]2+.

Получение комплексов 'Ga-DOTAGA: 500 мкл 2 мМ стокового раствора предшественника PSMA в ДМСО объединяют с 1500 мкл 2 мМ раствора Ga(NO3)3 в воде. Реакционную смесь нагревают в течение 30 мин при 60°C. Результат реакции контролируют с помощью ОФ-ВЭЖХ и последующей массспектрометрии. Для радиоактивного ¹⁸Е-мечения лигандов [^natGa]PSMA-SIFA, комплексное соединение очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ перед реакцией мечения.

^natGa-PSMA-SIFA1: ВЭЖХ (от 10 до 90% В через 15 мин): t_R составляет 9,1 мин. Рассчитанная моноизотопная масса (C₆₃H₉₉FGaN_nO₂₂Si): 1477,6 найдено: m/z составляет 1479,5 [М+Н]+, 740,2[М+2Н]2+.

^natGa-PSMA-SIFA3: ВЭЖХ (от 10 до 70% В через 15 мин): t_R составляет 10,4 мин. Рассчитанная моноизотопная масса (C₆₃H₉₆FGaN₁₂O₂₅Si): 1536,6 найдено: m/z составляет 1539,4 [М+Н]+, 770,3 [М+2Н]²⁺.

^natGa-PSMA-SIFA4: ВЭЖХ (от 10 до 70% В через 15 мин): ВЭЖХ (от 10 до 70% В через 15 мин): t_Rсоставляет 10,4 мин. Расчетная моноизотопная масса (C₆₃H₉₆FGaN₁₂O₂₅Si): 1536,6 найдено: m/z составляет 1539,1 [М+Н]+, 770,5 [М+2Н]²⁺.

Комплексообразование ^natLu: соответствующие комплексы ^natLu^nI получают из 2 мМ водного раствора ингибитора PSMA с 2,5 молярным избытком LuCl3 (20 мМ раствор), нагревают до 95°C в течение 30 мин. После охлаждения образование '“^^хелата подтверждают с помощью ВЭЖХ и МС. Полученные 1 мМ водные растворы соответствующих комплексов ^natLu затем разбавляют и применяют в исследованиях IC50 in vitro без дальнейшей обработки.

Радиомечение ⁶⁸Ga-мечение: ⁶⁸Ga-мечение проводят с применением автоматизированной системы (GallElut⁺ от Scintomics, Германия), как описано ранее (Notni et al., исследование EJNMMI, 28 (2012)). Кратко, генератор ⁶⁸Ge/6⁸Ga с матрицей SnO₂ (IThemba LABS) элюируют 1,0 М водной HCl, из которой фракцию (1,25 мл), составляющую приблизительно 80% активности (500-700 МБк), переносят в реакционный флакон (ALLTECH, 5 мл). Перед элюцией реактор загружают 2-5 нмоль соответствующего хелаторного конъюгата в водном 2,7 М растворе HEPES (DOTAGA-конъюгаты: 900 мкл, TRAP-конъюгаты: 400 мкл). После элюирования флакон нагревают в течение 5 мин при 95°C. Очистку проводят путем пропускания реакционной смеси через твердофазный экстракционный картридж (С 8 light, SepPak), который продувают водой (10 мл) и продукт элюируют 50% водным этанолом (2 мл), фосфатно-солевым буфером (PBS, 1 мл) и снова водой (1 мл). После удаления этанола в вакууме, чистоту радиоактивно меченных соединений определяют с помощью радио-ТСХ (хроматографическая бумага ITLC-SG, подвижная фаза: 0,1 М тринатрийцитрат и смесь 1:1 (об./об.) 1 М ацетата аммония и метанола).

¹⁸Р-мечение: Для осуществления ¹⁸Р-мечения применяют ранее опубликованный способ (Wangler et al., Nat Protoc 7, 1946-55 (2012)), который немного изменили. Кратко, водный ^-пропускают через SAXкартридж (Sep-Pak Accell Plus QMA Carbonate light), который предварительно обрабатывают 10 мл воды. После сушки с помощью 10 мл воздуха воду удаляют, промывая картридж 10 мл безводного ацетонитрила, а затем 20 мл воздуха. ¹⁸F элюируют 100 мкмоль [K+c2.2.2]OH^-, растворенного в 500 мкл безводного ацетонитрила. Перед мечением добавляют 25 мкмоль щавелевой кислоты в безводном ацетонитриле (1 М, 25 мкл). Эту смесь применяют как целое или аликвоту для фторирования 10-25 мкмоль PSMA-SIFA (1 М в безводном ДМСО). Полученную реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин при комнатной температуре. Для очистки меченого вещества применяют светлый картридж Sep-Pak С18, предварительно обработанный 10 мл EtOH (этиловый спирт), а затем 10 мл Н₂О. Смесь для введения радиоактивной метки разбавляют 9 мл 0,1 М буфера HEPES (рН составляет 3) и пропускают через картридж, а затем 10 мл Н₂О. Пептид элюируют 500 мкл смеси 4:1 (об./об.) EtOH в воде. Радиохимическую чистоту меченого соединения определяют ОФ-ВЭЖХ с радиометрическим детектированием и радио-ТСХ (силикагель 60 RP-18 F254s, подвижная фаза: смесь 3:2 (об./об.) MeCN в Н₂О с добавлением 10% 2М NaOAc (ацетат натрия) раствора и 1% ТФУ).

^|25[-мечение: эталонный лиганд для исследований in vitro ([¹²⁵I]I-BA)KuE получают в соответствии с ранее опубликованным способом (Weineisen et al., EJNMMI исследование, 4, 63 (2014)). Кратко, 0,1 мг станнилированного предшественника (SnBu3-BA)(OtBu)KuE(OtBu)2 растворяют в растворе, содержащем 20 мкл перуксусной кислоты, 5,0 мкл (21 МБк) [¹²⁵I]NaI (74 ТБк/ммоль, 3,1 ГБк/мл, 40 мМ NaOH, Hartmann Analytic, Брауншвейг, Германия), 20 мкл MeCN (Ацетонитрил) и 10 мкл уксусной кислоты. Реакционный раствор инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре, загружают в картридж и промывают 10 мл воды (картридж С18 Sep Pak Plus, предварительно обработанный 10 мл МеОН (Метанол) и 10 мл воды). После элюирования 2,0 мл смеси 1:1 (об./об.) EtOH/MeCN радиоактивный раствор упаривают досуха в слабом потоке азота и обрабатывают 200 мкл ТФУ в течение 30 мин с последующим выпариванием ТФУ. Неочищенный продукт ([¹²⁵I]I-BA)KuE очищают ОФ-ВЭЖХ (от 20 до 40% В в течение 20 мин): t_R составляет 13,0 мин.

^^щмечение: к объёму реакционной смеси 10 мкл 1,0 М буфера NH₄OAc (Ацетат аммония), рН составляет 5,9, добавляют меченое вещество от 0,75 до 1,0 нмоль (от 7,5 до 10 мкл), от 10 до 40 МБк ¹⁷⁷LuCl3 (удельная активность (AS) > 3000 ГБк/мг, 740 МБ к/мл, 0,04 М HCl, ITG, Гархинг, Германия) и, наконец, заполняют до 100 мкл водой без меченого вещества (Merck, Дармштадт, Германия). Реакцион

- 40 046402 ную смесь нагревают в течение 30 мин при 95°C и радиохимическую чистоту определяют с применением радио-ТСХ (силикагель 60 RP-18 F_254S, смесь 3:2 (об./об.) MeCN в Н2О с добавлением 10% 2 М раствора NaOAc и 1% ТФУ, Rf составляет 0,5).

Эксперименты in vitro Определение IC₅₀

PSMA-позитивные клетки LNCaP выращивают в среде Игла, модифицированной по Дульбекко/питательной среде F-12 с Glutamax-I (1:1) (Invitrigon), дополненной 10% эмбриональной телячьей сывороткой, и выдерживают при 37°C в увлажненной атмосфера 5% СО₂. Для определения аффинности PSMA (IC₅₀) клетки собирают за 24 ± 2 ч до эксперимента и высевают в 24-луночные планшеты (1,5x105 клеток в 1 мл/лунку). После удаления культуральной среды клетки обрабатывают один раз 500 мкл HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнка, Biochrom, Берлин, Германия, с добавлением 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA)) и оставляют на 15 мин на льду для уравновешивания в 200 мкл HBSS (1% BSA). Затем добавляют 25 мкл на лунку растворов, содержащих либо HBSS (1% BSA, контроль), либо соответствующий лиганд в возрастающей концентрации (от 10^-10 до 10^-4 М в HBSS, с последующим добавлением 25 мкл ([¹²⁵I]I-BA)KuE (2,0 нМ) в HBSS (1% BSA). Все эксперименты проводят по меньшей мере три раза для каждой концентрации. После 60-минутной инкубации на льду эксперимент прекращают путем удаления среды и последующего промывания 200 мкл HBSS. Среды обеих стадий объединяют в одну фракцию и представляли количество свободного радиолиганда. После этого клетки лизируют 250 мкл 1М NaOH и объединяют с 200 мкл HBSS на следующей стадии промывки. Количественную оценку связанного и свободного радиолиганда осуществляют в γ-счетчике.

Интернализация

Для исследований интернализации клетки LNCaP собирают за 24 ± 2 ч до эксперимента и высевают в 24-луночные планшеты (1,25x105 клеток в 1 мл/лунку). После удаления культуральной среды клетки промывают один раз 500 мкл DMEM-F12 (5% BSA) и оставляют для уравновешивания в течение по меньшей мере 15 мин при 37°C в 200 мкл DMEM-F12 (5% BSA). Каждую лунку обрабатывают либо 25 мкл либо DMEM-F12 (5% BSA), либо 100 мкМ раствора РМРА для блокады. Затем добавляют 25 мкл ингибитора PSMA, меченного ⁶8Ga/18F (5,0 нМ) и клетки инкубируют при 37°C в течение 60 мин. Эксперимент прекращают путем помещения 24-луночного планшета на лед на 3 мин и последующего удаления среды. Каждую лунку промывают 250 мкл HBSS и фракции с этих первых двух стадий объединяют, представляя количество свободного радиолиганда. Удаление поверхностно-связанной активности осуществляют инкубацией клеток с 250 мкл охлажденного льдом раствора РМРА (10 мкМ в PBS) в течение 5 мин и снова промывают еще 250 мкл охлажденного льдом PBS. Интернализованную активность определяют путем инкубации клеток в 250 мкл 1 М NaOH и комбинации с фракцией последующей стадии промывки 250 мкл 1,0 М NaOH. Каждый эксперимент (контроль и блокада) проводят в трех повторах. Свободную, поверхностную и интернализованную активность определяют количественно в γ-счетчике. Все исследования интернализации сопровождались контрольными исследованиями с применением ([¹²⁵I]I-BA)KuE (с составляет 0,2 нМ), которые проводят аналогично. Данные были скорректированы с учетом неспецифической интернализации и нормализованы с учетом специфической интернализации, наблюдаемой для радиоактивного йодированного эталонного соединения.

Коэффициент распределения октанол-вода

Приблизительно 1 МБк метки растворяют в 1 мл смеси 1:1 (по объему) фосфатно-солевого буфера (PBS, рН 7,4) и н-октанола в пробирке Эппендорфа. После интенсивного перемешивания суспензии в течение 3 мин при комнатной температуре флакон центрифугируют при 15000 g в течение 3 мин (Biofuge 15, Heraus Sepatech, Остероде, Германия) и аликвоты по 100 мкл обоих слоев измеряют в счетчике гамма-излучения. Эксперимент повторяют не менее шести раз.

HSA связывание

Для определения связывания HSA применяют колонку Chiralpak HSA (50x3 мм, 5 мкм, Н13Н-2433) при постоянной скорости потока 0,5 мл/мин. Подвижная фаза (А: NH₄OAc, 50 мМ в воде, рН 7 и В: изопропанол) была свежеприготовленной для каждого эксперимента и ее применяют только в течение одного дня. Колонку хранят при комнатной температуре, и каждый прогон останавливают после обнаружения сигнала, чтобы уменьшить время сбора данных. Все вещества растворяют в концентрации 0,5 мг/мл в 50% 2-пропаноле и 50% 50 мМ ацетат-аммонийном буфере со значением рН 6,9. Выбранные эталонные вещества демонстрируют диапазон связывания HSA от 13 до 99%, так как предполагалось широкое разнообразие связывания альбумина с пептидами. Все девять эталонных веществ (см. табл. 1) вводят последовательно для установления нелинейной регрессии с OriginPro 2016G, см. фиг. 1.

- 41 046402

Таблица 1. Эталонные вещества (Yamazaki et al., Journal of pharmaceutical sciences 93, 1480-94 (2004)), применяемые для калибровки колонки HSA

Эталон	tR	Logt_R	Лит. HSA %	Log К HSA
п-бензиловый спирт	2,40	0,38	13,15	минус 0,82
Анилин	2,72	0,43	14,06	минус 0,79
Фенол	3,28	0,52	20,69	минус 0,59
Бензойная кислота	4,08	0,61	34,27	минус 0,29
Карбамазепин	4,15	0,62	75,00	0,46
п-нитрофенол	5,62	0,75	77,65	0,52
Эстрадиол	8,15	0,91	94,81	1,19
Пробенецид	8,84	0,95	95,00	1,20
Глибенкламид	29,18	1,47	99,00	1,69

Время удержания показано в качестве примера для проведенного эксперимента, t_R время удержания, Лит. HSA литературное значение связывания человеческого сывороточного альбумина в [%], Log K HAS логарифмический К связывания человеческого сывороточного альбумина.

Эксперименты in vivo

Все эксперименты на животных проводят в соответствии с общими правилами содержания животных в Германии и правилами, принятыми в учреждении по уходу и применению животных. Для установления опухолевых ксенотрансплантатов, клетки LNCaP (10⁷ клеток/200 мкл) суспендируют в смеси 1:1 (об./об.) среды Игла, модифицированной по Дульбекко/питательной смеси F-12 с Glutamax-I (1:1) и Matrigel (BD Biosciences, Германия) и инокулируют подкожно в правое плечо мышам CB17-SCID в возрасте 6-8 недель (Charles River, Зульцфельд, Germany). Мышей применяют для случаев, когда опухоли вырастали до диаметра 5-8 мм (через 3-4 недели после инокуляции).

Изображение μПЭТ

Визуальные исследования проводят на ПЭТ-системе для мелких животных Siemens Inveon. Данные были реконструированы как отдельные кадры с применением алгоритма трехмерно-упорядоченного максимума ожидаемого подмножества (OSEM3D) с последующим анализом данных (количественная оценка на основе ROI) с применением программного обеспечения Inveon Research Workplace. Для исследования ПЭТ, мышей анестезируют изофлураном и вводят от 0,15 до 0,25 нмоль (2-20 МБк) вещества, меченного ⁶⁸Ga или ¹⁸F в хвостовую вену. Динамическое изображение было выполнено после инъекции на постели в течение 90 мин. Статические изображения были записаны через час после инъекции с временем получения 15 мин. Для блокады вводят 8 мг/кг РМРА непосредственно перед инъекцией метки.

Биораспределение

Приблизительно от 2 до 20 МБк (0,2 нмоль) ингибиторов PSMA, меченных ⁶⁸Ga или ¹⁸F, инъецируют в хвостовую вену самцов мышей линии SCID СВ-17, несущих опухоль LNCaP, и умерщвляют через 1 ч после инъекции (n составляет 3). Отобранные органы удаляют, взвешивают и измеряли в γ-счетчике.

В экспериментах на людях.

Экспериментальная проверка концепции действия у людей была проведена в рамках благотворительно-испытательного использования. Агент применяют в соответствии с Законодательством Германии о лекарственных средствах, AMG §13 2b, и в соответствии с ответственным регулирующим органом (правительство Обербайерна).

Все объекты исследуют на сканере Biograph mCT (Siemens Medical Solutions, Эрланген, Германия) или сканере Biograph mMR (Siemens Medical Solutions, Эрланген, Германия). Все ПЭТ-сканы были получены в пространственном режиме с временем получения 2-4 мин на положение. Данные о выбросах были скорректированы по случайностям, мертвому времени, разбросу и затуханию и итерационно восстановлены с помощью алгоритма максимизации ожидания упорядоченных подмножеств (четыре итерации, восемь подмножеств) с последующим сглаживающим фильтром Гаусса после реконструкции (полная ширина 5 мм на половине максимум). Изображения у 53 пациентов с раком предстательной железы были получены после введения в среднем 324 (диапазон от 236 до 424) МБк PSQ-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F, в среднем через 84 (диапазон от 42 до 166) мин после инъекции. 47 субъектов прошли визуализацию на ПЭТ/КТ (Позитронно-эмиссионная томография/компьютерная томография), 6 субъектов на ПЭТ/МР (Позитронно-эмиссионная томография/магнитно-резонансная томография) сканере. У 33 субъектов фуросемид применяют во время инъекции метки, 20 пациентам фуросемид не вводят.

Анализируют среднее и максимальное стандартизированные значения накопления (SUVсред/SUVмакс) околоушных желез, поднижнечелюстных желез, легких, медиастинального пула крови, печени, селезенки, головки поджелудочной железы, двенадцатиперстной кишки, почек, мочевого пузыря и не пораженной болезнью кости. Для расчета SUV циклические области интереса рисуют вокруг областей с очаговым повышенным поглощением в трансаксиальных срезах и автоматически адаптированы к пространственному исследуемому объёму (VOI) при 50% изоконтура. Подсчитывают повреждения, которые визуально рассматривются как свидетельство рецидивов или метастазов рака предстательной

- 42 046402 железы. Одно или два поражения одного и того же типа (локальная опухоль, метастазы в лимфатических узлах, метастазы в кости, метастазы во внутренние органы) анализируют на пациенте с применением SUVмакс и SUVсред, как описано выше. В качестве фона использовали ягодичную мышцу.

Пример 2. Результаты

Обзор полученных лигандов PSMA-SIFA

PSMA-SIFA1 (5)

он

PSMA-SIFA 10

- 43 046402

Липофильность

Определенные коэффициенты распределения октанол/вода (log D) для соединений, меченных ⁶⁸Ga или ¹⁸F, представлены в табл. 2. В пределах ингибиторов на основе EuK, меченных ⁶⁸Ga, обнаружили, что TRAP-функционализированное соединение (5) является более гидрофильным, чем 6, где DOTAGA был использован в качестве хелатора. Этот результат был также показан для агентов на основе EuE, меченных ⁶⁸Ga, где TRAP-производное (9) показало наибольшую липофильность. Все соединения, меченые ¹⁸F показали более низкую гидрофильность по сравнению с веществами, меченными ⁶⁸Ga.

Таблица 2. Значения log D полученных радиоактивно меченных лигандов PSMA-SIFA (n составляет 6)

Лиганд	logD ⁶⁸Ga-^natF-L	logD ¹⁸f-l	logD ¹⁷⁷Lu-^natF-L
5	минус 2,75 ± 0,07	Не обнаружено
6	минус 3,00 ± 0,09	Не обнаружено
7	минус 3,18 ± 0,05	минус 1,98 ± 0,04	минус 4,20 ± 0,09
8	минус 2,59 ± 0,04	минус 2,25 ± 0,07	минус 3,75 ± 0,06
9	минус 3,26 ± 0,06	минус 2,23 ± 0,07
10			минус 3,59 ± 0,05
11			минус 3,62 ± 0,06

Определение аффинности PSMA

Полученные соединения, несущие EuE-связующий мотив (7, 8, 9), показали более высокую аффинность к PSMA по сравнению с агентами на основе EuK (5, 6). Соединения с TRAP-хелатором (6 и 9) показали слегка сниженную аффинность по сравнению с их аналогами DOTAGA (5 и 7 соответственно). Между комплексообразующими агентами ^natGa, и соответствующим некомплексообразующим соединением не наблюдают существенных различий в отношении аффинности к PSMA (табл. 3).

- 44 046402

Таблица 3.

Аффинность связывания (IC50 в нМ) лигандов PSMA-SIFA с PSMA. Аффинность определяют, с применением клеток LNCaP (150000 клеток/лунку) и ([¹²⁵I]I-BA)KuE (с составляет 0,2 нМ) в качестве радиолиганда (1 ч, 4°C, HBSS + 1% BSA). Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение (n составляет 3 в 3 различных экспериментах).

Эталоны:	(I-BA)KuE DCFPyL PSMA-1007	IC₅₀ = 7,l ± 2,4 hM IC₅₀ = 12,3 ± 1,2 hM IC₅₀ = 4,2 ± 0,5 hM
Лиганд	1С₅₀ [нМ] ^Ga-^F-L	IC₅₀ [hM] ^mtF-L	IC₅₀ [hM] ^Lu-^F-L
5	7,3 ± 0,2	6,4 ± 0,2
6	10,8 ±2,5	8,5 ± 1,7
7	3,0 ±0,7	3,5 ±0,2	3,9 ±0,5
8	3,8 ±0,7	2,5 ± 0,2	3,0 ±0,2
9	4,5 ± 0,3	4,3 ± 0,2
10			2,8 ± 0,7
И			4,8 ± 0,7

Интернализация

По аналогии с аффинностью связывания, соединения на основе EuE (7, 8, 9) показали значительно более высокие значения интернализации по сравнению с пептидами, несущими EuK-связывающий мотив (5, 6). Что касается влияния хелатора, TRAP показал положительный эффект на интернализацию (5 и 9 по сравнению с 6 и 7 соответственно), хотя аффинность связывания была более высокой для аналогов

DOTAGA (табл. 3). Все соединения, меченные ¹⁸F показали более высокие значения интернализации по сравнению с соответствующими метками, меченными ⁶⁸Ga (табл. 4).

Таблица 4.

Суммарная интернализованная активность (с составляет 0,5 нМ) в течение 1 ч в виде % от эталонного лиганда ([¹²⁵I]I-BA)KuE (с составляет 0,2 нМ), определенная на клетках LNCaP (37°C, DMEM F12 + 5% BSA, 125000 клеток/лунку). Данные корректируют на неспецифическое связывание (10 мкмоль РМРА) и выражали как среднее значение ± стандартное отклонение (n составляет 3).

Эталоны: [%]	DCFPyL PSMA-1007	118 ± 5 118 ± 4
Лиганд	Интернализация [%] ⁶⁸Ga-^natF-L	Интернализация [%] ¹⁸f-l	Интернализация [%] ¹⁷⁷Lu-^m‘F-L
5	33,0 ±2,1	He обнаружено
6	43,0 ±3,4	He обнаружено
7	126,0 ± 13,1	164,8 ±4,5	185,8 ±4,5
8	98,2 ± 12,4	130,3 ±5,5	165,9 ±8,5
9	176,9 ± 11,7	211,6 ± 5,3
10			184,1 ± 16
И			134,5 ± 18,5

- 45 046402

Связывание человеческого сывороточного альбумина

Таблица 5. HSA связывание полученных лигандов PSMA-SIFA, определенное на колонке

см. фиг. 2.

2. [⁶⁸Ga][^natF]PSMA-SIFA2 (⁶⁸Ga-^natF-6) см. фиг. 3.

3. PSMA-SIFA3 (7)

a) статическое изображение ⁶⁸Ga-H)T см. фиг. 4;

b) динамическое изображение ⁶⁸Ga-H)T см. фиг. 5;

с) статическое изображение ¹⁸F-n)T см. фиг. 6;

d) динамическое изображение ^l8F-l Г)Т см. фиг. 7;

е) исследования биораспределения см. фиг. 8.

4. PSMA-SIFA4 (8)

а) статическое изображение ⁶⁸Ga-H)T см. фиг. 9;

b) динамическое изображение ⁶⁸Ga-H)T см. фиг. 10;

с) статическое изображение ¹⁸F-l)T см. фиг. 11;

d) динамическое изображение ¹⁸F-H)T см. фиг. 12;

е) исследования биораспределения см. фиг. 13.

5. PSMA-SIFA5 (9)

а) статическое изображение ⁶⁸Ga-H)T см. фиг. 14;

b) динамическое изображение ⁶⁸Ga-H)T см. фиг. 15;

с) статическое изображение ¹⁸F-l)T см. фиг. 16;

d) статическое изображение ¹⁸F-l)T см. фиг. 17;

е) исследования биораспределения см. фиг. 18.

6. Доказательство экспериментальной проверки концепции ^natGa-PSMA-SIFA3 (^natGa-7)

а) статическое изображение ¹⁸F-l)T см. фиг. 19;

b) исследования биораспределения см. фиг. 20.

7. Изображение 1 ГЭГ мелких животных с применением лигандов лютения-rhPSMA

а) статическое l)T изображение: ¹⁸F-^natLu-rh-7 см. фиг. 29;

b) динамическое l)T изображение: ¹⁸F-^natLu-rh7 см. фиг. 30;

с) исследования биораспределения ¹⁷⁷Lu-^natF-7, ¹⁷⁷Lu-^natF-8 и ¹⁷⁷Lu-^natF-10 через 24 ч

- 46 046402 см. фиг. 31;

d) биораспределение ¹⁷⁷Lu-^natF-10 через 1 и 24 ч см. фиг. 32;

e) сравнительное биораспределение установленных и новых rhPSMA-лигандов через 24 ч см. фиг. 33;

f) сравнительное биораспределение ¹⁷⁷Lu-^natF-rhPSMA-10 и ⁶⁸Ga-^natF-rhPSMA-10 в течение 1 ч см. фиг. 34.

Биораспределение и поглощение PSMA-SIFA3 (7) при опухолевых поражениях человека

Никаких побочных эффектов или клинически обнаруживаемых фармакологических эффектов отмечено не было.

Фиг. 21 демонстрирует проекцию максимальной интенсивности (MIR) от ПЭТ субъекта с нормальным биораспределением (опухолевые поражения не обнаружены). Изображения получены через 76 мин после введения 272 МБк PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F. На фиг. 21 справа показана проекция максимальной интенсивности (MIP) от ПЭТ субъекта с умеренно распространенным заболеванием, демонстрирующим множественные опухолевые поражения с высоким отношением поражения к фону. Изображения были получены через 102 мин после введения 312 МБк PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F.

Параметры поглощения отражают фоновую экспрессию PSMA для разных типов тканей. Значительное поглощение радиоактивной метки выявлено только для слюнных желез, почек, печени, селезенки и двенадцатиперстной кишки. Поглощение в фоновой ткани было низким. Поглощение при опухолевом поражении было значительно выше, чем в ткани с низкой экспрессией PSMA.

Таблица 6.

Среднее SUVмакс (слева) и SUVсред (справа) в разных тканях (ткани/органы: n составляет 53, опухолевые поражения: n составляет 72) со стандартной ошибкой. См. фиг. 22 для графического представления.

	Среднее SUVMaKC	минимум	максимум	Среднее SUVcpcg	минимум	максимум
Фон	ι,θ	0,6	1,9	0,6	0,4	1,2
Пул крови	2,4	1,6	3,9	2,0	1,1	17,0
Околоушная железа	23,5	8,2	42,3	16,8	5,5	32,7
Подчелюстная железа	26,7	10,1	43,8	19,6	7,0	29,7
Легкие	1,0	0,5	3,1	0,7	о,з	2,0
Печень	9,5	4,5	25,2	7,0	3,2	17,7
Селезенка	11,8	4,7	21	9,1	3,4	17,1
Поджелудочная железа	3,9	1,8	9,2	2,7	1,3	7,4
Двенадцатиперстная кишка	14,2	2,8	32,7	10,5	1,9	23,9
Кость	1,7	0,8	3,1	1,1	0,6	2,1
Почка	44,3	19,1	75,2	32,1	13,2	54,7
Мочевой пузырь	8,3	0,5	112,0	6,1	о,з	85,7
Опухолевые поражения	26,6	4,0	95,4	19,2	2,7	71,7

Из-за низкого отношения фоновой активности SUV к фону органов и опухолевых поражений, он благоприятен для клинической визуализации. Повреждения опухоли отображаются с высокой контрастностью по сравнению с фоном.

- 47 046402

Таблица 7.

Среднее отношение SUVMaKC (слева) и SUVcpeg (справа) со стандартной ошибкой в различных тканях (ткани/органы: n составляет 53, опухолевые поражения: n составляет 72) со стандартной ошибкой. См. фиг. 23 для графического представления._________________________________________

	Отношение SUVmbkc к фону	Отношение SUVcpeg к фону
	Среднее	минимум	максимум	Среднее	минимум	максимум
Пул крови	2,5	1,3	4,8	3,1	1,5	21,3
Околоушная железа	24,3	8,2	45,3	27,5	9,2	54,5
Подчелюстная железа	27,8	10,1	54,7	32,5	И,7	61,8
Легкие	1,1	0,4	з,з	1,1	0,4	4,0
Печень	10,1	2,9	42,0	11,7	3,7	44,3
Селезенка	12,3	4,7	35,0	14,9	5,7	39,5
Поджелудочная железа	4,0	1,5	и,з	4,3	1,9	10,8
Двенадцатиперстная кишка	14,8	2,8	31,3	17,3	3,2	35,3
Кость	1,7	0,9	2,9	1,8	1,0	3,2
Почка	46,7	16,9	98,7	53,8	19,8	109,3
Мочевой пузырь	8,3	0,6	112,0	9,8	0,5	142,8
Опухолевые поражения	28,6	5,0	83,4	31,9	5,4	83,2

Поглощение опухолевых поражений и контрастность по отношению к фону были относительно одинаковыми между различными типами опухолей (локальная опухоль [n составляет 24], метастазы в лимфатических узлах [n составляет 23], метастазы в кости [n составляет 21], метастазы во внутренние органы [n составляет 4]).

Таблица 8.

Среднее SUVмакс, SUVсред, отношение SUVмакс к фону и отношение SUVсред к фону при различных типах опухолей со стандартной ошибкой. См. фиг. 24 для графического представления.

Локальная опухоль		SUVMaKC	Отношение SUVmhkc	SUVcpeg	Отношение SUVcpeg
	Среднее	26,9	29,6	19,3	32,4
	минимум	4	5	2,7	5,4
	максимум	75,1	83,4	19,3	83,2
Метастазы в лимфатических узлах		SUVMaKC	Отношение SUVmbkc	SUVcpeg	Отношение SUVcpeg
	Среднее	22,2	23,7	16,6	27,3
	минимум	8,1	5,8	6,4	7,1
	максимум	67,5	63,6	44,6	70,7
Метастазы в кости		SUVmbkc	Отношение SUVmbkc	SUVcpeg	Отношение SUVcpeg
	Среднее	31,2	32,8	22,2	36,6
	минимум	7,9	7,9	5,3	8,8
	максимум	95,4	73,4	71,7	80
Метастазы во внутренние органы		SUVMaKC	Отношение SUVmbkc	SUVcpeg	Отношение SUVcpeg
	Среднее	26,1	28,9	17,4	30,2
	минимум	20,4	18,5	15,5	22,1
	максимум	32,5	40,6	19,1	38,2

Задержка метки PSMA-SIFA3 (7) у человека в мочевом пузыре

Задержка метки в выделительной мочевой системе является общим недостатком визуализации лиганда PSMA. PSF-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F, в качестве потенциального соединения-прототипа, ПЭТ агент, меченный ⁶⁸Ga, SiFA замещенный, на основе хелатора, выводится через выделительную мочевую систему, но в гораздо меньшей степени, чем большинство других агентов ПЭТ. Кроме того, на его за

- 48 046402 держку в мочевом пузыре может значительно влиять применение фуросемида во время инъекции метки. Т-тест 8 показал статистически значимо более низкую задержку метки при применении фуросемида (р составляет 0,018 как для SUVмакс, так и для SUVсред).

Таблица 9.

Среднее SUVмакс (слева) и SUVсред (справа) задержки метки в мочевом пузыре у субъектов с и без введения фуросемида со стандартной ошибкой. См. фиг. 25 , для графического представления.

	ЗиУмакс	SUVcpeg
	Среднее	минимум	максимум	Среднее	минимум	максимум
С фуросемидом	4,8	1,6	32	3,4	1,1	26,6
Без фуросемида	13,9	0,5	112	10,5	0,3	85,7

Клинические результаты для выявления PSMA-SIFA3 (7) опухолевых очагов и гистопатологическое подтверждение

Субъекты визуализируют по первичной стадии (n составляет 6) и рецидивирующему заболеванию (n составляет 47). Поражения, характерные для рака предстательной железы, были обнаружены у 39 пациентов. Были проанализированы 72 поражения. 21 из 72 поражений не имели корреляции на морфологическом изображении. 14 из 72 измеренных поражений имели размер равный или менее 5 мм на морфологическом изображении. Оба демонстрируют высокую клиническую ценность PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F для выявления повреждении, которые в противном случае скрыты при морфологической визуализации. Параметры поглощения 35 поражений без корреляции или малого размера при морфологической визуализации показали благоприятные параметры поглощения.

Таблица 10. Среднее SUVмакс, SUVсред, отношение SUVмакс к фону и отношение SUVсред к фону при опухолях рака предстательной железы со стандартной ошибкой

	SUVmhkc	Отношение ЗиУмакс	SUVcpcg	Отношение SUVcpcg
Среднее	16,7	18,3	13,3	22,9
минимум	9,2	5,8	6,4	7,1
максимум	25	43,8	28,3	56,6

Примеры визуализации показывают благоприятные характеристики. Показаны как небольшие субсантиметровые поражения, так и диффузное метастатическое заболевание с участием различных типов тканей.

На фиг. 26 показаны: MIR (А) и трансаксиальные изображения (B-D) пациента 70 лет с биохимическим рецидивом через 1,5 года после радикального удаления предстательной железы (Gleason 8, рТ2с, pN1). Присутствует единичное типичное поражение рака предстательной железы диаметром 5 мм с правой стороны таза с высоким поглощением PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F. Злокачественная природа поражения была подтверждена гистопатологией.

На фиг. 27 показаны: набор изображений пациента 80 лет с прогрессирующим кастрационнорезистентным раком предстательной железы (PSA 66,4 нг/мл).

Изображения показывают высокое поглощение PSMA-SIFA3 (7), меченного ¹⁸F, в различных классах поражений рака предстательной железы (локальная опухоль, метастазы в лимфатических узлах, метастазы в кости, метастазы в печени). Показанные поражения находятся в пределах 2 мм (стрелки указывают на характерные, а не на все опухолевые очаги).

Клиническое применение PSMA-SIFA3 (7), меченного ⁶⁸Ga

В качестве экспериментальной проверки концепции действия ПЭТ метки, меченной ⁶⁸Ga, SiFA замещенной, на основе хелатора, одного субъекта с биохимическим рецидивом после радикального удаления предстательной железы (PSA 0,44 нг/мл, рТ2с, pNO, Gleason 7b) подвергают ПЭТ/МР через 66 мин после введения 144 МБк PSMA-SIFA3 (7), меченного ⁶⁸Ga. Поглощение, типичное для рецидивирующего рака предстательной железы, продемонстрировано в лимфатическом узле 2 мм.

На фиг. 28 показано доказательство экспериментальной проверки концепции действия ПЭТ метки, меченной ⁶⁸Ga, SiFA замещенной, на основе хелатора, меченной ⁶⁸Ga.

Исследования PSMA-SIFA3 (7) человека

1. Распределение и поглощение при опухолевых поражениях.

(a) Максимальная интенсивность проекции ПЭТ субъекта с нормальным биораспределением.

См. фиг. 21.

(b) Средние стандартизированные значения поглощения в разных тканях.

См. фиг. 22.

(c) Среднее соотношение стандартизированных значений поглощения в разных тканях.

См. фиг. 23.

(d) Средние стандартизированные значения поглощения при различных типах опухолей.

См. фиг. 24.

-

Claims

2. Задержка метки в мочевом пузыре.

(а) Средние стандартизированные значения поглощения задержки метки в мочевом пузыре.

См. фиг. 25.
3. Клинические результаты для выявления опухолевых поражений и гистопатологического подтверждения.

См. фиг. 26 и 27.
4. Клиническое применение меченного ⁶⁸Ga PSMA-SIFA3 (7). См. фиг. 28.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, выбранное из

он

- 50 046402

и их фармацевтически приемлемых солей и отдельных изомеров, необязательно содержащих хелатированный нерадиоактивный или радиоактивный катион, и где атом фтора необязательно представляет собой ¹⁸F.

2. Соединение по п.1, представляющее собой

или его фармацевтически приемлемую соль или отдельный изомер, необязательно содержащие хелатированный нерадиоактивный или радиоактивный катион, и где атом фтора необязательно представляет собой ¹⁸F.

3. Соединение по п.1, представляющее собой

-