JP2024037032A - ポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法およびポリヒドロキシ酪酸共重合体粉体 - Google Patents

Abstract

【課題】遠心分離の際のＰＨＢ共重合体粒子の不可逆性の凝集を抑制し、かつ、含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体を得る製造方法を提供する。【解決手段】ＰＨＢ共重合体を製造する方法であり、ＰＨＢ共重合体は、３ＨＢ単位／３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、（ａ）ＰＨＢ共重合体を含有する菌体を含む培養液に、アルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、菌体を酵素処理する工程、（ｂ）アルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整し、界面活性剤を添加する工程、（ｃ）水性懸濁液を遠心分離し、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を回収する工程、（ｄ）グルコシダーゼを添加して、水性懸濁液を酵素処理する工程、および（ｇ）水性懸濁液をデッドエンドろ過する工程、を含む、製造方法。【選択図】なし

Description

本発明はポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法およびポリヒドロキシ酪酸共重合体粉体に関する。

ポリヒドロキシ酪酸共重合体（以下、「ＰＨＢ共重合体」）は、生分解性を有することが知られている。

微生物が生成するＰＨＢ共重合体は、微生物の菌体内に蓄積されるため、ＰＨＢ共重合体をプラスチックとして利用するためには、微生物の菌体内からＰＨＢ共重合体を分離・精製する工程が必要となる。ＰＨＢ共重合体を分離・精製する工程では、ＰＨＢ共重合体以外の生物由来成分を可溶化した後、得られた水性懸濁液からＰＨＢ共重合体を取り出す。このとき、例えば、遠心分離、ろ過、乾燥等の分離操作が行われる。乾燥としては、例えば、噴霧乾燥機、流動層乾燥機、ドラムドライヤー等が用いられるが、操作が簡便であることから、好ましくは、噴霧乾燥機が用いられる。

このようなＰＨＢ共重合体の製造方法の一例として、特許文献１には、ＰＨＢを含有する菌体を含む培養液のｐＨを調整し、培養液に酵素を添加して酵素処理した後に、液を遠心分離することが記載されている。

国際公開第２０２２／１１３５３０Ａ１

しかしながら、ＰＨＢ共重合体の中でも、特定の組成を有するＰＨＢ共重合の精製については、改善の余地があった。

そこで、本発明の目的は、遠心分離の際のＰＨＢ共重合体粒子の不可逆性の凝集を抑制し、かつ、含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体を得る製造方法、および含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体粉体を提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、特定のＰＨＢ共重合体の製造工程において、従来技術では遠心分離の前に行っていた溶菌するための酵素処理工程を、遠心分離の後に行うことにより、遠心分離の際のＰＨＢ共重合体粒子の不可逆性の凝集を抑制し、含有窒素量が低いＰＨＢ共重合体を簡便に製造し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。

したがって、本発明の一態様は、ＰＨＢ共重合体を製造する方法であって、前記ＰＨＢ共重合体は、３－ヒドロキシブチレート（３ＨＢ）単位／３－ヒドロキシブチレート（３ＨＢ）単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、（ａ）前記ＰＨＢ共重合体を含有する菌体を含む培養液に、アルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記菌体を酵素処理する工程、（ｂ）前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整し、該調整前、該調整と同時、または該調整後のいずれかにおいて界面活性剤を添加する工程、（ｃ）前記工程（ｂ）で得られた界面活性剤添加後の水性懸濁液を遠心分離し、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を回収する工程、（ｄ）前記工程（ｃ）で得られた水性懸濁液にグルコシダーゼを添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程、および（ｇ）前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液をデッドエンドろ過する工程、を含む、ＰＨＢ共重合体の製造方法（以下、「本製造方法」と称する。）である。以下において、「３－ヒドロキシブチレート」は、「３ＨＢ」と称する場合がある。

また、本発明の一態様は、ＰＨＢ共重合体と、窒素化合物と、を含み、分散剤の含有量が０～５０ｐｐｍであり、前記ＰＨＢ共重合体が、３ＨＢ単位／３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、前記ＰＨＢ共重合体中の全窒素量が１００～６２０ｐｐｍである、ＰＨＢ共重合体粉体（以下、「本ＰＨＢ共重合体粉体」と称する。）である。

本発明の一態様によれば、遠心分離の際のＰＨＢ共重合体粒子の不可逆性の凝集を抑制し、かつ、含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体を得る製造方法、および含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体粉体を提供することができる。

本発明の実施の一形態について、以下に詳細に説明する。なお、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ～Ｂ」は、「Ａ以上、Ｂ以下」を意味する。また、本明細書中に記載された文献の全てが、本明細書中において参考文献として援用される。

〔１．本発明の概要〕
従来、ＰＨＢ共重合体である、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－コ－３－ヒドロキシヘキサノエート）（Ｐ３ＨＢ３ＨＨ）の精製において、純度の高い（含有窒素量の低い）Ｐ３ＨＢ３ＨＨを得るために、溶菌酵素処理を行っていた（特許文献１）。また、前記溶菌酵素処理後に、分解された菌体細胞壁を除去するために、遠心分離を行っていた。しかしながら、上述のような従来技術は、特定のＰＨＢ共重合体の精製に適用した場合には、ＰＨＢ共重合体粒子が遠心分離の際に不可逆性の凝集化を起こし、純度の高い（含有窒素量の低い）ＰＨＢ共重合体が得られない場合がある、という問題があることを、本発明者は見出した。また、遠心分離の際の不可逆性の凝集化を起こした凝集体は、例えば、ディスクスタック型遠心分離機のノズル孔を閉塞させてしまうために、操作不可能となる、という問題も挙げられる。

そこで、本発明者は、本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、特定のＰＨＢ共重合体（具体的には、３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が高いＰＨＢ共重合体）の製造工程において、従来技術では遠心分離の前に行っていたグルコシダーゼ酵素処理工程を、遠心分離の後に行い、ろ過脱水することで、遠心分離の際に不可逆性の凝集化が発生することを抑制でき、かつ、含有窒素量が低いＰＨＢ共重合体を簡便に製造し得ることを見出すことに成功した。

本製造方法によれば、３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が高いＰＨＢ共重合体において、含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体を得ることができる。また、ろ過脱水により含水率の低い湿潤粉体を得ることができるので、効率的に含有窒素量の低いＰＨＢ共重合体を得る製造方法を提供することができる。

また、上述したような構成によれば、プラスチックゴミの発生量を低減でき、これにより、例えば、目標１２「持続可能な消費生産形態を確保する」や目標１４「持続可能な開発のために、海・海洋資源を保全し、持続可能な形で利用する」等の持続可能な開発目標（ＳＤＧｓ）の達成に貢献できる。以下、本製造方法の構成について詳説する。

〔２．ＰＨＢ共重合体の製造方法〕
本製造方法は、下記の工程（ａ）～工程（ｄ）および工程（ｇ）を必須の工程として含む方法である。また、本製造方法におけるＰＨＢ共重合体は、３ＨＢ単位／３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）である。
・工程（ａ）：ＰＨＢ共重合体を含有する菌体を含む培養液に、アルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記菌体を酵素処理する工程
・工程（ｂ）：前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整し、該調整前、該調整と同時、または該調整後のいずれかにおいて界面活性剤を添加する工程
・工程（ｃ）：前記工程（ｂ）で得られた界面活性剤添加後の水性懸濁液を遠心分離し、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を回収する工程
・工程（ｄ）：前記工程（ｃ）で得られた水性懸濁液にグルコシダーゼを添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程、および
・工程（ｇ）：前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液をデッドエンドろ過する工程
また、本発明の一実施形態において、本製造方法は、上記工程（ａ）～工程（ｄ）および工程（ｇ）に加えて、以下の工程の少なくとも一つを含むことが好ましい。
・工程（ｅ）：前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液にアルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程
・工程（ｆ）：前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液、または前記工程（ｅ）で得られた水性懸濁液のｐＨを３．０～５．０に調整する工程
・工程（ｈ）：前記工程（ｇ）の途中のポリヒドロキシ酪酸共重合体、または前記工程（ｇ）で得られたポリヒドロキシ酪酸共重合体を洗浄する工程
・工程（ｉ）：前記工程（ｈ）で得られたポリヒドロキシ酪酸共重合体を脱水および／または乾燥する工程
本製造方法において、上記の各工程は、工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）の順に行われることが好ましいが、目的に応じて、適宜順番を入れ替えることも可能である。

本製造方法により、最終的に、不可逆性のＰＨＢ共重合体の凝集体が得られる。

本発明の一実施形態において、ＰＨＢ共重合体を含む水性懸濁液では、ＰＨＢ共重合体は水性媒体中に分散した状態で存在している。本明細書では、少なくともＰＨＢ共重合体を含む水性懸濁液を、「ＰＨＢ共重合体水性懸濁液」と略して表記する場合がある。

＜工程（ａ）＞
工程（ａ）は、ＰＨＢ共重合体を含有する菌体を含む培養液に、アルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記菌体を酵素処理する工程である。

（ＰＨＢ共重合体）
本製造方法におけるＰＨＢ共重合体は、３ＨＢと３ＨＢ以外のヒドロキシアルカノエートとの共重合体である。

３ＨＢ以外のヒドロキシアルカノエートとしては、例えば、３－ヒドロキシヘキサノエート）（３ＨＨ）、３－ヒドロキシバリレート（３ＨＶ）、４－ヒドロキシブチレート（４ＨＢ）、３－ヒドロキシオクタノエート（３ＨＯ）、３－ヒドロキシオクタデカノエート（３ＨＯＤ）、３－ヒドロキシデカノエート（３ＨＤ）等が挙げられる。

ＰＨＢ共重合体として、例えば、Ｐ３ＨＢ３ＨＨを好ましく例示し得るが、これに限定されない。以下では、説明の便宜上、主として、Ｐ３ＨＢ３ＨＨを代表例として説明する。

Ｐ３ＨＢ３ＨＨは、３ＨＢと３ＨＨとの繰り返し単位の組成比を変えることで、融点、結晶化度を変化させ、結果として、ヤング率、耐熱性等の物性を変化させることができ、ポリプロピレンとポリエチレンとの間の物性を付与することが可能である。

本製造方法におけるＰＨＢ共重合体は、３ＨＢ単位／３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、８１／１９～８７／１３（ｍｏ１／ｍｏ１）であることが好ましく、８２／１８～８６／１４（ｍｏ１／ｍｏ１）であることがより好ましい。３ＨＢ単位／３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が、８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）以下であると、十分な硬度が得られ、８０／２０（ｍｏｌ／ｍｏｌ）以上であると、十分な柔軟性が得られる。

本発明の一実施形態において、ＰＨＢ共重合体の重量平均分子量（以下、「Ｍｗ」と称する場合がある。）は、特に限定されないが、１５万～８０万が好ましく、２０万～７０万がより好ましく、２５万～６０万がさらに好ましい。重量平均分子量が１５万以上であると、十分な機械物性等が得られ、８０万以下であると、十分な結晶化速度が得られ、良好な成形加工性が達成される。Ｐ３ＨＢ系樹脂の重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）（昭和電工製「Ｓｈｏｄｅｘ ＧＰＣ－１０１」）によって、カラムにポリスチレンゲル（昭和電工製「Ｓｈｏｄｅｘ Ｋ－８０４」）を用い、クロロホルムを移動相とし、ポリスチレン換算した場合の分子量として求めることができる。

（菌体）
工程（ａ）で用いられる菌体は、細胞内にＰＨＢ共重合体を生成し得る微生物である限り、特に限定されない。例えば、天然から単離された微生物および菌株の寄託機関（例えば、ＩＦＯ、ＡＴＣＣ等）に寄託されている微生物、またはそれらから調製し得る変異体および形質転換体等を使用できる。例えば、ＰＨＢ共重合体の一例であるＰ３ＨＢを生成する菌体としては、１９２５年に発見されたＢａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍが最初で、他にもカプリアビダス・ネカトール（Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ ｎｅｃａｔｏｒ）（旧分類：アルカリゲネス・ユートロファス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）、ラルストニア・ユートロフア（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａ））、アルカリゲネス・ラタス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｌａｔｕｓ）等の天然微生物が挙げられる。これらの微生物ではＰＨＢ共重合体が菌体内に蓄積されることが知られている。

また、ＰＨＢ共重合体の一例である、ヒドロキシブチレートとその他のヒドロキシアルカノエートとの共重合体を生成する菌体としては、Ｐ３ＨＢ３ＨＶおよびＰ３ＨＢ３ＨＨ生産菌であるアエロモナス・キヤビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ）、Ｐ３ＨＢ４ＨＢ生産菌であるアルカリゲネス・ユートロファス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）等が挙げられる。特に、Ｐ３ＨＢ３ＨＨに関し、Ｐ３ＨＢ３ＨＨの生産性を上げるために、ＰＨＢ共重合体合成酵素群の遺伝子を導入したアルカリゲネス・ユートロファス ＡＣ３２株（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ ＡＣ３２， ＦＥＲＭ ＢＰ－６０３８）（Ｔ．Ｆｕｋｕｉ，Ｙ．Ｄｏｉ，Ｊ．Ｂａｔｅｒｉｏｌ．，１７９，ｐ４８２１－４８３０（１９９７））等がより好ましい。また、菌体は、上記以外にも、生産したいＰＨＢ共重合体に合わせて、各種ＰＨＢ共重合体合成関連遺伝子を導入した遺伝子組換え微生物であっても良い。

また、ＰＨＢ共重合体は、例えば、国際公開第２０１０／０１３４８３号公報に記載された方法によっても製造され得る。

（アルカリ性タンパク質分解酵素）
本明細書において、「アルカリ性タンパク質分解酵素」とは、アルカリ環境下（例えばｐＨ８．５の溶液中）でタンパク質を分解する活性を有するタンパク質分解酵素を意図する。

本発明の一実施形態において、アルカリ性タンパク質分解酵素は、アルカリ環境下でタンパク質を分解する活性を有する限り特に限定されず、例えば、セリン特異的タンパク質分解酵素（例えば、サブチリシン、キモトリプシン）、システイン特異的タンパク質分解酵素（例えば、パパイン、ブロメライン）等が挙げられる。汎用性・経済性の観点から、セリン特異的タンパク質分解酵素、とりわけ、サブチリシンを含むアルカラーゼが好ましい。これらの１種類を単独で使用してもよく、２種類以上を組み合わせて使用してもよい。

アルカリ性タンパク質分解酵素としては、市販品を用いることもでき、例えば、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ社製「アルカラーゼ」および「エスペラーゼ」；天野エンザイム株式会社社製「プロチンＳＤ－ＡＹ１０」および「プロテアーゼＰ「アマノ」３ＳＤ」；ダニスコジャパン株式会社製「マルチフェクトＰＲ６Ｌ」および「オプチマーゼＰＲ８９Ｌ」；新日本化学工業株式会社製「スミチームＭＰ」；ディー・エス・エムジャパン株式会社製「デルボラーゼ」；ナガセケムテックス株式会社製「ビオプラーゼＯＰ」、「ビオプラーゼＳＰ－２０ＦＧ」および「ビオプラーゼＳＰ－４ＦＧ」；ＨＢＩ株式会社製「オリエンターゼ２２ＢＦ」；ヤクルト薬品工業株式会社製「アロアーゼＸＡ－１０」等が挙げられる。

工程（ａ）において、アルカリ性タンパク質分解酵素による菌体の酵素処理を行う際には、使用するアルカリ性タンパク質分解酵素の至適ｐＨおよび至適温度に合わせて前記培養液のｐＨおよび温度を調整することが好ましい。また、工程（ａ）におけるｐＨは、工程（ｂ）でアルカリ水溶液の添加により調整されるｐＨよりも低いｐＨであることが好ましい。前記培養液のｐＨおよび温度の調整方法は特に限定されず、公知の方法を用いることができる。

本発明の一実施形態において、アルカリ性タンパク質分解酵素の至適ｐＨは、当該アルカリ性タンパク質分解酵素がアルカリ環境下で活性を有する限り特に限定されないが、例えば８．０～１２．０であり、好ましくは８．０～１１．０であり、より好ましくは８．０～１０．０であり、さらに好ましくは８．０～９．０であり、最も好ましくは８．５である。

本発明の一実施形態において、アルカリ性タンパク質分解酵素の至適温度は、特に限定されないが、過度の加温を必要とせず、ＰＨＢ共重合体の熱変化（熱分解）を防ぐことができるとの観点から、７０℃以下が好ましく、６０℃以下がさらに好ましい。至適温度の下限は、特に限定されないが、過度の冷却操作が必要なく、経済的であるとの観点から、室温（例えば、２５℃）以上であることが好ましい。

本発明の一実施形態において、アルカリ性タンパク質分解酵素の添加量は、特に限定されないが、例えば、０．０５～１．０ｐｈｒであり、０．１～０．５ｐｈｒが好ましく、０．１５～０．３ｐｈｒがより好ましい。アルカリ性タンパク質分解酵素の添加量が、上記の範囲であれば、適度に菌体を分解することができる。

工程（ａ）は、アルカリ性タンパク質分解酵素と同時に、グルコシダーゼを実質的に添加しないことが好ましい。本明細書において、「グルコシダーゼ」とは、菌体の細胞壁（例えば、ペプチドグリカン）を分解する（溶菌する）活性を有する酵素を意図する。また、本明細書において、「グルコシダーゼを実質的に添加しない」とは、グルコシダーゼを０．０００５ｐｈｒ以下で添加することを意図し、０ｐｈｒであってもよい。グルコシダーゼとしては、上記の定義の範囲に含まれるものであれば特に限定されないが、例えば、リゾチーム、ラビアー、β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、エンドリシン、オートリシン等が挙げられる。

工程（ａ）において、ＰＨＢ共重合体を含有する菌体は、不活化されていることが好ましい。不活化の方法は特に限定されないが、例えば、実施例に記載するように、ＰＨＢ共重合体を含有する菌体を含む培養液を、６０～７０℃で７時間、加熱および攪拌処理する方法が挙げられる。加熱および攪拌処理後の培養液は、さらに、工程（ａ）に適した温度まで、冷却されることが好ましい。

＜工程（ｂ）＞
工程（ｂ）は、前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整し、該調整前、該調整と同時、または該調整後のいずれかにおいて界面活性剤を添加する工程である。

工程（ｂ）は、下記の工程（ｂ１）および工程（ｂ２）を含む。
・工程（ｂ１）：前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整する工程
・工程（ｂ２）：界面活性剤を添加する工程
（工程（ｂ１））
工程（ｂ１）は、上述の通り、前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整する工程である。当該工程によれば、菌体由来の不純物（核酸、タンパク質等）を分散および溶解することで、高純度のＰＨＢ共重合体を菌体から分離することができる。

本発明の一実施形態において、アルカリ水溶液は、塩基性化合物を含む水溶液である。アルカリ水溶液に含まれる塩基性化合物としては、特に限定されないが、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の金属炭酸塩；リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸水素カリウム等の金属リン酸塩または金属リン酸水素塩等が挙げられる。

本発明の一実施形態において、アルカリ水溶液に含まれる塩基性化合物は、アルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物が好ましく、水酸化ナトリウムがより好ましい。塩基性化合物は、１種を単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。

工程（ｂ１）において、アルカリ水溶液を添加することにより、ｐＨを１０．０～１２．０に調整することが好ましく、ｐＨを１０．２～１１．８に調整することがより好ましく、１０．４～１１．６に調整することがさらに好ましい。ｐＨを１０．０以上に調整することで、菌体成分の分解および溶解ができるという利点を有する。また、ｐＨを１２．０以下に調整することで、意図しない菌体の損傷を防ぐことができる。

工程（ｂ１）における温度は、１００℃未満であることが好ましく、８０℃未満であることがより好ましい。下限は特に限定されないが、例えば、４０℃以上であることが好ましい。

（工程（ｂ２））
工程（ｂ２）は、前記工程（ａ）で得られた培養液に界面活性剤を添加する工程である。当該工程によれば、特に細胞膜を効率的に処理することができ、前記菌体由来の不純物をより多く除去できるため、より高純度のＰＨＢ共重合体を菌体から分離することができる。

本発明の一実施形態において、界面活性剤としては、特に限定されないが、例えば、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤等が挙げられる。このうち、細胞膜の除去能力が高いとの観点から、陰イオン界面活性が好ましい。これらの１種類を単独で使用してもよく、２種類以上を組み合わせて使用してもよい。

陰イオン界面活性剤としては、例えば、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルケニル硫酸エステル塩、アルキルエーテル硫酸エステル塩、アルケニルエーテル硫酸エステル塩、α－オレフィンスルホン酸塩、α－スルホ脂肪酸塩、α－スルホ脂肪酸塩のエステル、アルキルエーテルカルボン酸塩、アルケニルエーテルカルボン酸塩、アミノ酸型界面活性剤、Ｎ－アシルアミノ酸型界面活性剤等が挙げられる。この中でも、アルキル硫酸エステル塩が好ましく、細胞膜の除去能力が高く、安価であるとの観点から、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が特に好ましい。これらの１種類を単独で使用してもよく、２種類以上を組み合わせて使用してもよい。

工程（ｂ２）において、添加する界面活性剤の量は特に限定されず、前記培養液に対して、例えば、０．１～５．０重量％であり、０．３～２．５重量％が好ましい。

工程（ｂ２）は、工程（ｂ１）の前に行ってもよいし、同時に行ってもよいし、後に行ってもよい。好ましくは、工程（ｂ２）は、工程（ｂ１）の前に行われる。

本発明の一実施形態において、分散剤は、環境問題の観点から、生分解性を有する物質であることが好ましい。

本製造方法の工程（ｂ）により得られるＰＨＢ共重合体水性懸濁液におけるＰＨＢ共重合体の体積メジアン径（以下、単に「ＰＨＢ共重合体の体積メジアン径」と称する場合もある。）は、当該ＰＨＢ共重合体の一次粒子の体積メジアン径（以下、「一次粒子径」と称する。）の３０倍以下が好ましく、２０倍以下がより好ましく、１０倍以下がさらに好ましい。ＰＨＢ共重合体の体積メジアン径が一次粒子径の３０倍以下であることにより、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液がより優れた流動性を示すため、その後の工程（ｃ）を高効率で実施することができ、ＰＨＢ共重合体の生産性が一層向上する傾向がある。ＰＨＢ共重合体の体積メジアン径は、例えば、ＨＯＲＩＢＡ製レーザ回折／散乱式粒子径分布測定装置ＬＡ－９５０を用いて測定される。

なお、上記のＰＨＢ共重合体の体積メジアン径は、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液におけるＰＨＢ共重合体の分散状態の指標とすることができる。上記のＰＨＢ共重合体の体積メジアン径を調整する方法は、特に限定されず、公知の手段（攪拌等）を適用できる。例えば、酸性条件下に曝される等して分散状態が崩れてしまったＰＨＢ共重合体水性懸濁液に対して、当業者が考え得る物理的処理、化学的処理、生物学的処理等を施し、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液におけるＰＨＢ共重合体を再度分散状態（例えば、上記のＰＨＢ共重合体の体積メジアン径を有する状態）に復帰させることもできる。

＜工程（ｃ）＞
本製造方法における工程（ｃ）では、工程（ｂ）で得られた界面活性剤添加後の水性懸濁液を遠心分離し、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を回収する。工程（ｃ）後のＰＨＢ共重合体水性懸濁液中には、まだ菌体由来の不純物（細胞壁、タンパク質等）が含まれている。

工程（ｃ）において、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液の回収は、当技術分野で公知である任意の遠心分離法により行われる。遠心分離の方法は、特に限定されないが、例えば、遠心沈降機、遠心脱水機等を用いた遠心分離が挙げられる。

工程（ｃ）において、前記水性懸濁液を遠心分離し、上清を除去した後、沈降物に溶液を添加し、再度遠心分離および上清を除去する工程を繰り返し行うことが好ましい。この操作により、より濃縮および精製されたＰＨＢ共重合体水性懸濁液を得ることができる。ここで、上清を除去した後に添加する溶液は、前記培養液と同じｐＨに調整されたアルカリ水溶液であることが好ましい。

遠心沈降機としては、例えば、分離板型（例えば、ディスク型、セルフクリーニング型、ノズル型、スクリューデカンター型、スキミング型等）、円筒型、デカンター型の遠心沈降機が挙げられる。それぞれ沈降成分の排出の方法により、回文式と連続式がある。また遠心脱水機についても回文式と連続式とが挙げられる。これらの機器を用いることにより、比重差により、ＰＨＢを含む沈降物と、培養液成分とを分離することが可能である。

工程（ｃ）において、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を構成する溶媒（「溶媒」は、「水性媒体」とも称する。）は、特に限定されず、水、または水と有機溶媒との混合溶媒であってもよい。また、当該混合溶媒において、有機溶媒の濃度は、使用する有機溶媒の水への溶解度以下であれば特に限定されない。また、有機溶媒は特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｉｓｏ－ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール等のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類；ジメチルホルムアミド、アセトアミド等のアミド類；ジメチルスルホキシド、ピリジン、ピペリジン等が挙げられる。中でも、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｉｓｏ－ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、プロピオニトリル等が、除去しやすい点から好ましい。また、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、ブタノール、アセトン等が、入手容易であることからより好ましい。さらに、メタノール、エタノール、アセトンが、特に好ましい。

ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を構成する水性媒体中の水の含有量は、５重量％以上が好ましく、より好ましくは、１０重量％以上であり、さらに好ましくは、３０重量％以上であり、特に好ましくは、５０重量％以上である。

なお、工程（ｃ）におけるＰＨＢ共重合体水性懸濁液体は、本発明の本質を損なわない限り、他の溶媒、菌体由来の成分、精製時に発生する化合物等を含んでいても構わない。

＜工程（ｄ）＞
本製造方法における工程（ｄ）では、工程（ｃ）で得られた水性懸濁液にグルコシダーゼを添加して、水性懸濁液を酵素処理する。

工程（ｄ）では、前記工程（ｃ）で得られたＰＨＢ共重合体水性懸濁液にグルコシダーゼを添加する前に、水を添加して、水性懸濁液の固形分濃度を調整してもよい。この時の水性懸濁液の固形分濃度は、好ましくは、１０～４０重量％であり、より好ましくは、２０～４０重量％である。水性懸濁液の固形分濃度が上記範囲内であると、水性懸濁液の濃度が高すぎず、グルコシダーゼと均一に混合される。

また、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液は、グルコシダーゼを添加する前に、ｐＨが調整されてもよい。この場合の調整方法は、特に限定されず、例えば、酸を添加する方法等が挙げられる。酸は特に限定されず、有機酸、無機酸のいずれでもよく、揮発性の有無は問わない。より具体的には、酸としては、例えば、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸等が使用できる。

添加するグルコシダーゼの種類は特に限定されないが、工程（ａ）についての説明にて記載したグルコシダーゼであってもよい。

なお、工程（ｄ）の前には、水性懸濁液を噴霧乾燥する工程を実施しないことが好ましい。すなわち、本発明の一実施形態に係るポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法において、工程（ｄ）の前において、水性懸濁液を噴霧乾燥する工程を行わないことが好ましい。ここで、噴霧乾燥は、後述する工程（ｉ）についての説明にて記載した乾燥方法であってもよい。工程（ｄ）の前に、水性懸濁液を噴霧乾燥しないことによって、ＰＨＢ共重合体粒子が、不可逆的に凝集することを抑制することができる。

＜工程（ｇ）＞
本製造方法における工程（ｇ）では、工程（ｄ）で得られた水性懸濁液をデッドエンドろ過する。デッドエンドろ過は、通気度が０．０１～５．０ｃｍ^３／ｃｍ^２／ｓｅｃであるろ材を用いて行われることが好ましい。本明細書では、１秒あたりにろ材の単位面積（ｃｍ^２）を通過する空気量（ｃｍ^３）を通気度と称する。通気度が上記の範囲内であると、ろ液へのＰＨＢの漏洩率が低いという利点を有する。

工程（ｇ）で使用されるろ材としては、特に限定されないが、例えば、紙、ろ布（織布、不織布）、スクリーン、焼結板、素焼、高分子膜、パンチングメタル、ウェッジワイヤー等、種々の素材から選択可能である。価格、洗浄の容易さの観点から、好ましくは、ろ布が使用される。

工程（ｇ）におけるろ過の方法は、デッドエンドろ過であればよく、特に限定されないが、例えば、吸引ろ過、加圧ろ過、遠心ろ過、重力式ろ過等が挙げられる。中でも、機器の大きさの観点から、好ましくは、吸引ろ過、加圧ろ過、遠心ろ過が用いられる。更に、構造の容易さから、より好ましくは、吸引ろ過、加圧ろ過が用いられる。

また、工程（ｇ）で使用されるろ材としては、特に限定されないが、例えば、紙、ろ布（織布、不織布）、スクリーン、焼結板、素焼、高分子膜、パンチングメタル、ウェッジワイヤー等、種々の素材から選択可能である。価格、洗浄の容易さの観点から、好ましくは、ろ布が使用される。

本製造方法における工程（ｇ）の前に、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液中のＰＨＢは、不可逆性の凝集体となっている。すなわち、工程（ｇ）に供されるＰＨＢ共重合体水性懸濁液中のＰＨＢは、不可逆性の凝集体である。工程（ｇ）に供されるＰＨＢ共重合体水性懸濁液中のＰＨＢが不可逆性の凝集体であることにより、デッドエンドろ過が可能となる。

＜工程（ｅ）＞
本製造方法における工程（ｅ）は、工程（ｄ）で得られた水性懸濁液にアルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、水性懸濁液を酵素処理する工程である。工程（ｅ）により、菌体由来のタンパク質を分解することができる。

工程（ｅ）におけるアルカリ性タンパク質分解酵素は、工程（ａ）で用いたアルカリ性タンパク質分解酵素と同じであってもよく、異なっていてもよい。

＜工程（ｆ）＞
本製造方法における工程（ｆ）は、前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液、または工程（ｅ）で得られた水性懸濁液のｐＨを３．０～５．０に調整する工程である。

本製造方法の工程（ｆ）に付される前のＰＨＢ共重合体水性懸濁液は、通常、工程（ｅ）を経ることにより、７．０を超えるｐＨを有する。そこで、本製造方法の工程（ｆ）により、上記ＰＨＢ共重合体水性懸濁液のｐＨを３．０～５．０に調整する。その調製方法は、特に限定されず、例えば、酸を添加する方法が挙げられる。酸は、特に限定されず、有機酸、無機酸のいずれでもよく、揮発性の有無は問わない。より具体的には、酸としては、例えば、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸等が使用できる。

ＰＨＢ共重合体水性懸濁液のｐＨが３．０～５．０であることによって、加熱溶融時の着色が低減され、加熱時および／または乾燥時の分子量低下が抑制されたＰＨＢ共重合体が得られる。

＜分散剤＞
本発明の一実施形態における前記水性懸濁液は、分散剤を含有していてもよい。すなわち、本発明の一実施形態における前記工程（ｆ）は、ＰＨＢ共重合体に加えて、分散剤をさらに含む水性懸濁液を調製する工程であってもよい。本発明の一実施形態において、前記分散剤を使用する場合は、ｐＨ７．０以下になるように調整する前に、前記分散剤を前記ＰＨＢ共重合体水性懸濁液に添加することが好ましい。本発明の一実施形態における前記ＰＨＢ共重合体水性懸濁液が、分散剤を含有することによって、ＰＨＢ共重合体の生産性および熱安定性を好適に向上させることができる。

分散剤としては、特に限定されず、例えば、国際公開第２０２２／０９１６８５号公報に記載のものが挙げられる。

本製造方法の工程（ｆ）における水性懸濁液に対する前記分散剤の添加量は、特に限定されないが、水性懸濁液に含まれる前記ＰＨＢ共重合体の合計１００重量部に対して、０～０．０５重量部が好ましく、０～０．０２重量部がより好ましく、０～０．０１重量部がさらに好ましい。前記分散剤の添加量を上記の範囲とすることにより、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液におけるＰＨＢ共重合体の分散安定性がより向上する。また、前記分散剤の添加量を上記の範囲とすることにより、最終生成物であるＰＨＢ共重合体の純度が向上する。

＜工程（ｈ）＞
工程（ｈ）は、工程（ｇ）の途中のＰＨＢ共重合体粉体、または工程（ｇ）で得られたＰＨＢ共重合体粉体を洗浄する工程である。工程（ｈ）は、前記工程（ｇ）の途中または工程（ｇ）の後で行われてよい。

工程（ｈ）は、工程（ｇ）におけるデッドエンドろ過を行っている途中において、例えば、イオン交換水を通水することで行われてもよい。また、工程（ｈ）は、工程（ｇ）のデッドエンドろ過後のろ過ケーキに対して、１次圧搾を実施した後、イオン交換水の通水することで行われてもよい。イオン交換水は、ろ液のｐＨが４．５～５．５の範囲になるまで通水できる。また、イオン交換水の通水の後、さらに２次圧搾を行ってもよい。圧搾工程では、圧搾によりＰＨＡケーキを絞り、ＰＨＡケーキから水分を絞り出す。

１次圧搾および２次圧搾の圧力は、０．２～１．０ＭＰａが好ましく、０．２５～０．９ＭＰａがより好ましく、０．３～０．８ＭＰａがさらに好ましい。圧搾の圧力が０．２～１．０ＭＰａであることにより、少ない洗浄水でもＰＨＡろ過ケーキを良好に洗浄できる。

また、圧搾工程の後に、エアブロー工程を含んでもよい。エアブロー工程では、前記ＰＨＡケーキからエアブロー空気により水を押し出す。圧搾工程およびエアブロー工程の二段階の脱水工程を経ることにより、含水率の低いＰＨＡ凝集塊を得ることができる。

エアブロー工程におけるエアブロー圧力は、特に限定されないが、例えば、０．０１～１．５Ｍｐａであり、０．０５～１．３Ｍｐａであることが好ましく、０．１０～１．０Ｍｐａであることがより好ましい。エアブロー圧力が上記の範囲内であると、ＰＨＡ凝集
塊の含水率が低下するという利点を有する。

また、工程（ｈ）は、前記工程（ｇ）で得られたＰＨＢ共重合体粉体を所定の濃度になるように純水に分散させて分散スラリーを調製した後、アルカリ水溶液を加えて、該分散スラリーｐＨを調整し、該分散スラリーをアルカリ性タンパク質分解酵素および／またはグルコシダーゼを含む洗浄液と共に撹拌することで行われてもよい。

＜工程（ｉ）＞
工程（ｉ）は、前記工程（ｈ）で得られたＰＨＢ粉体を脱水および／または乾燥する工程である。脱水は、例えば、遠心分離、ろ過脱水等で行うことができる。乾燥には、例えば、噴霧乾燥機、流動層乾燥機、ドラムドライヤー等が用いられるが、操作が簡便であることから、好ましくは、ドラムドライヤーが用いられる。

ドラムドライヤーを用いた乾燥方法としては、例えば、ＰＨＢ共重合体湿潤粉体をドラムドライヤーに供給し、当該乾燥機内で１００～１４０℃のロールと接触させることで乾燥させる。

また、噴霧乾燥の方法としては、例えば、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を微細な液滴の状態として乾燥機内に供給し、当該乾燥機内で熱風と接触させながら乾燥する方法等が挙げられる。ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を微細な液滴の状態で乾燥機内に供給する方法（アトマイザー）は、特に限定されず、回転ディスクを用いる方法、ノズルを用いる方法等の公知の方法が挙げられる。乾燥機内における液滴と熱風の接触方式は、特に限定されず、並流式、向流式、これらを併用する方式等が挙げられる。

〔３．ＰＨＢ共重合体粉体〕
本発明の一実施形態に係るＰＨＢ共重合体粉体は、ＰＨＢ共重合体と、窒素化合物と、を含み、分散剤の含有量が０～５０ｐｐｍであり、ＰＨＢ共重合体が、３－ヒドロキシブチレート単位／３－ヒドロキシブチレート単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）である。また、本ＰＨＢ共重合体粉体は、ＰＨＢ共重合体中の全窒素量が１００～６２０ｐｐｍである。本ＰＨＢ共重合体粉体は、３－ヒドロキシブチレート単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が高いＰＨＢ共重合体であるとともに、かつ、含有窒素量が低く、純度が高いため、種々の分野において極めて有用である。

本明細書において、「窒素化合物」とは、少なくとも窒素を含有する化合物を意味する。窒素化合物は、ＰＨＢ共重合体粉体に残存するタンパク質や細胞壁の成分であるペプチドグリカンの分解物である。

本実施形態において、「ＰＨＢ共重合体」、「窒素化合物」、および「分散剤」については、上記したものが援用される。

本ＰＨＢ共重合体粉体は、窒素化合物を含む。本ＰＨＢ共重合体粉体中の全窒素量は、ＰＨＢ共重合体粉体を構成するＰＨＢ共重合体１００重量部に対して、１００～６２０ｐｐｍであること好ましく、１００～５５０ｐｐｍであることがより好ましく、１００～５００ｐｐｍであることがさらに好ましい。全窒素量を上記範囲とすることにより、ＰＨＢ共重合体粉体の純度が向上する傾向がある。本ＰＨＢ共重合体粉体中の全窒素量は、実施例に記載の方法により測定される。

また、本ＰＨＢ共重合体粉体に含まれる分散剤の含有量は、０～５０ｐｐｍであり、０～３０ｐｐｍであることが好ましく、０～１０ｐｐｍであることがより好ましい。分散剤の含有量が、上記範囲であることにより、ＰＨＢ共重合体粉体の純度が向上する。

本発明の一実施形態において、本ＰＨＢ共重合体粉体は、上記した本製造方法（例えば、工程（ａ）～（ｄ）および工程（ｇ））により製造される。

本ＰＨＢ共重合体粉体は、紙、フィルム、シート、チューブ、板、棒、容器（例えば、ボトル容器等）、袋、部品等、種々の用途に利用できる。

本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。

すなわち、本発明の一実施形態は、以下である。
＜１＞ポリヒドロキシ酪酸共重合体を製造する方法であって、
前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体は、３－ヒドロキシブチレート単位／３－ヒドロキシブチレート単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、
（ａ）前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体を含有する菌体を含む培養液に、アルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記菌体を酵素処理する工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整し、該調整前、該調整と同時、または該調整後のいずれかにおいて界面活性剤を添加する工程、
（ｃ）前記工程（ｂ）で得られた界面活性剤添加後の水性懸濁液を遠心分離し、ポリヒドロキシ酪酸共重合体水性懸濁液を回収する工程、
（ｄ）前記工程（ｃ）で得られた水性懸濁液にグルコシダーゼを添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程、および
（ｇ）前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液をデッドエンドろ過する工程、
を含む、ポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
＜２＞前記工程（ｄ）の後に、
（ｅ）前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液にアルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程
をさらに含む、＜１＞に記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
＜３＞前記工程（ｅ）の後に、
（ｆ）＜１＞に記載の工程（ｄ）で得られた水性懸濁液、または＜２＞に記載の工程（ｅ）で得られた水性懸濁液のｐＨを３．０～５．０に調整する工程
をさらに含む、＜１＞または＜２＞に記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
＜４＞（ｈ）前記工程（ｇ）の途中のポリヒドロキシ酪酸共重合体、または前記工程（ｇ）で得られたポリヒドロキシ酪酸共重合体を洗浄する工程、および
（ｉ）前記工程（ｈ）で得られたポリヒドロキシ酪酸共重合体を脱水および／または乾燥する工程、
をさらに含む、＜１＞～＜３＞のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
＜５＞前記工程（ｄ）の前に、水性懸濁液を噴霧乾燥する工程を実施しない、
＜１＞～＜４＞のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
＜６＞ポリヒドロキシ酪酸共重合体と、窒素化合物と、を含み、
分散剤の含有量が０～５０ｐｐｍであり、
前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体が、３－ヒドロキシブチレート単位／３－ヒドロキシブチレート単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、
前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体中の全窒素量が１００～６２０ｐｐｍである、ポリヒドロキシ酪酸共重合体粉体。

以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

〔測定および評価方法〕
実施例および比較例における測定および評価を、以下の方法で行った。

（通気度）
通気度はＪＩＳＬ１０９６に記載の方法で測定した。具体的には、フラジール型通気性試験機（パーミヤメーターＰ２ 東洋精機製作所株式会社製）を用いて、傾斜型気圧計が１２５Ｐａを示すように、空気の吸い込み量を調節し、そのときの空気流量を測定した。

（ＰＨＢろ過ケーキの含水率）
ろ過後に得られるＰＨＢろ過ケーキを、加熱乾燥式水分計ＭＬ－５０（株式会社Ａ＆Ｄ製）を用いて測定した。ＰＨＢろ過ケーキを１０５℃で加熱し、重量変化速度が０．０５％（Ｗ．Ｂ．）／分を下回るまで加熱し、加熱前後の重量変化からＰＨＢろ過ケーキの含水率を割り出した。

（全窒素量測定）
ＰＨＢ共重合体紛体の全窒素量は、微量全窒素分析装置ＴＮ－２１００Ｈ（日東精工アナリテック社）を用いて測定した。

〔実施例１〕
（菌体培養液の調製）
国際公開第ＷＯ２０１９／１４２７１７号に記載のラルストニア・ユートロファを、同文献の段落〔００４１〕～〔００４８〕に記載の方法で培養し、ＰＨＢを含有する菌体を含む菌体培養液を得た。なお、ラルストニア・ユートロファは、現在では、カプリアビダス・ネカトールに分類されている。ＰＨＢ共重合体の繰り返し単位の組成比（３ＨＢ単位／３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比）は８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であった。

（不活化）
前記で得られた菌体培養液を、内温６０～７０℃で７時間加熱および攪拌処理することにより滅菌処理を行い、不活化培養液を得た。

（粘度低下処理）
前記で得られた不活化培養液に対して、１重量％となるように、３５重量％過酸化水素（富士フイルム和光純薬製）を添加した。次いで、３０％水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨを１１．０に調整した。溶液を６０℃で維持しつつ、３０％水酸化ナトリウム水溶液を添加し続けることにより、ｐＨを１１．０で１８０分間維持し、ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を得た。

（酵素処理１）
前記で得られたＰＨＢ共重合体水性懸濁液に対し、１０％硫酸を添加してｐＨを８．５に調整した。硫酸を添加したＰＨＢ水性懸濁液の固形分濃度を測定したところ、３０重量％であった。その後、アルカリ性タンパク質分解酵素であるアルカラーゼ２．５Ｌ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ社製）を、液中濃度が３００ｐｐｍとなるように添加し、５０℃で２時間維持した（工程（ａ））。

（アルカリ処理）
前記酵素処理液に対して、０．３重量％になるようにドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ、花王製）を添加した（工程（ｂ２））。その後、水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨが１１．０±０．２となるように調整した（工程（ｂ１））。次いで、前記酵素処理液を遠心分離（４０００Ｇ、１０分間）した後、上清を除去して２倍濃縮したＰＨＢ共重合体水性懸濁液を得た（工程（ｃ））。前記濃縮ＰＨＢ共重合体水性懸濁液に、除去した上清と同量の水酸化ナトリウムを添加して再度遠心分離（４０００Ｇ、１０分間）して、上清を除去することを４回繰り返した。ＰＨＢの体積メジアン径は、２．２μｍであった。

（酵素処理２）
得られたＰＨＢ共重合体水性懸濁液に水を添加し、水性懸濁液の固形分濃度を１５重量％に調整し、１０％硫酸を添加してｐＨを７．０±０．２に調整した。さらに硫酸ナトリウムを７０００ｐｐｍになるよう添加し、細胞壁中の糖鎖（ペプチドグリカン）を分解する酵素であるリゾチーム（富士フイルム和光純薬製）を、液中濃度が１０ｐｐｍとなるように添加して、５０℃で２時間保持した（工程（ｄ））。その後、アルカリ性タンパク質分解酵素であるアルカラーゼ２．５Ｌ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ社製）を、液中濃度が３００ｐｐｍとなるように添加し（工程（ｅ））、次いで、５０℃で３０％水酸化ナトリウムを添加して、ｐＨ８．５に調整しながら２時間維持した。

（ｐＨ調整）
前記で得られたＰＨＢ共重合体水性懸濁液中を６０℃で保持した。次いで、１０％硫酸を添加してｐＨを４．０に調整した（工程（ｆ））。液密度は１．０１ｇ／ｍＬであった。

（ろ過）
前記ＰＨＢ共重合体水性懸濁液を６３℃のウォーターバスに入れ、液温が６０℃になるように加温し、フィルタープレス機（日立造船製）を用いてろ過を行った（工程（ｇ））。ろ布は通気度０．３ｃｍ^３／ｃｍ^２／ｍｉｎのろ布（ＰＪ３、日立造船製）を使用した。ろ過後の１次圧搾を圧力０．４Ｍｐａで実施し、その後イオン交換水を通水した（工程（ｈ））。ｐＨが５．３となったら通水を止め、２次圧搾を圧力０．７Ｍｐａで実施した。その後、エアブロー圧力を０．３Ｍｐａに調整してエアブローを実施した。得られたろ過ケーキの含水率（Ｗ．Ｂ．）は２０．７ｗｔ％だった。得られたろ過ケーキを乾燥機（ＥＹＥＬＡ製、ＷＦＯ－７００）に入れ、６０℃で２４時間乾燥させ（工程（ｉ））、ＰＨＢ共重合体粉体を得た。得られたＰＨＢ共重合体粉体に含まれる全窒素量は４７６ｐｐｍだった。また、ＰＨＢ共重合体粉体には、分散剤が含有されていなかった。

〔実施例２〕
酵素処理２において、アルカラーゼを添加しなかった以外は、実施例１と同じ方法でろ過ケーキを得た。すなわち、実施例２においては、工程（ｄ）の後に工程（ｅ）を行わなかった。得られたろ過ケーキの含水率（Ｗ．Ｂ．）は１６．６ｗｔ％だった。ろ過ケーキを乾燥させ、ＰＨＢ共重合体粉体に含まれる全窒素量を測定したところ６００ｐｐｍだった。また、ＰＨＢ共重合体粉体には、分散剤が含有されていなかった。

〔比較例１〕
酵素処理２を実施しなかった以外は、実施例１と同じ方法でろ過ケーキを得た。得られたろ過ケーキの含水率（Ｗ．Ｂ．）は２０．２ｗｔ％だった。ろ過ケーキを乾燥させ、ＰＨＢ共重合体粉体に含まれる全窒素量を測定したところ６６０ｐｐｍだった。また、ＰＨＢ共重合体粉体には、分散剤が含有されていなかった。

（まとめ）
以上より、本製造方法によると、全窒素量の少ない、３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の比率が高いＰＨＢ共重合体を簡便に製造できることが分かった。

本発明によれば、３ＨＢ単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が高いＰＨＢを製造することができる。また、本発明の製造方法により得られたＰＨＢ共重合体は純度が高いため、農業、漁業、林業、園芸、医学、衛生品、衣料、非衣料、包装、自動車、建材、その他の分野に好適に利用することができる。

Claims (6)

1. ポリヒドロキシ酪酸共重合体を製造する方法であって、
   前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体は、３－ヒドロキシブチレート単位／３－ヒドロキシブチレート単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、
   （ａ）前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体を含有する菌体を含む培養液に、アルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記菌体を酵素処理する工程、
   （ｂ）前記工程（ａ）で得られた培養液にアルカリ水溶液を添加してｐＨを１０．０～１２．０に調整し、該調整前、該調整と同時、または該調整後のいずれかにおいて界面活性剤を添加する工程、
   （ｃ）前記工程（ｂ）で得られた界面活性剤添加後の水性懸濁液を遠心分離し、ポリヒドロキシ酪酸共重合体水性懸濁液を回収する工程、
   （ｄ）前記工程（ｃ）で得られた水性懸濁液にグルコシダーゼを添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程、および
   （ｇ）前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液をデッドエンドろ過する工程、
   を含む、ポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
2. 前記工程（ｄ）の後に、
   （ｅ）前記工程（ｄ）で得られた水性懸濁液にアルカリ性タンパク質分解酵素を添加して、前記水性懸濁液を酵素処理する工程
   をさらに含む、請求項１に記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
3. 前記工程（ｇ）の前に、
   （ｆ）請求項１に記載の工程（ｄ）で得られた水性懸濁液、または請求項２に記載の工程（ｅ）で得られた水性懸濁液のｐＨを３．０～５．０に調整する工程をさらに含む、請求項１または２に記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
4. （ｈ）前記工程（ｇ）の途中のポリヒドロキシ酪酸共重合体、または前記工程（ｇ）で得られたポリヒドロキシ酪酸共重合体を洗浄する工程、および
   （ｉ）前記工程（ｈ）で得られたポリヒドロキシ酪酸共重合体を脱水および／または乾燥する工程、
   をさらに含む、請求項１に記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
5. 前記工程（ｄ）の前に、水性懸濁液を噴霧乾燥する工程を実施しない、
   請求項１に記載のポリヒドロキシ酪酸共重合体の製造方法。
6. ポリヒドロキシ酪酸共重合体と、窒素化合物と、を含み、
   分散剤の含有量が０～５０ｐｐｍであり、
   前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体が、３－ヒドロキシブチレート単位／３－ヒドロキシブチレート単位以外のヒドロキシアルカノエート単位の組成比が８０／２０～８８／１２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）であり、
   前記ポリヒドロキシ酪酸共重合体中の全窒素量が１００～６２０ｐｐｍである、ポリヒドロキシ酪酸共重合体粉体。