JP2024014567A

JP2024014567A - 刺激感緩和剤

Info

Publication number: JP2024014567A
Application number: JP2022117490A
Authority: JP
Inventors: 智大白井; Tomohiro Shirai; 堅太郎組橋; Kentaro Kumihashi; 和樹木下; Kazuki Kinoshita
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2022-07-22
Filing date: 2022-07-22
Publication date: 2024-02-01

Abstract

【課題】皮膚や粘膜による刺激を緩和できるＴＲＰＡ１活性抑制剤、及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤の提供。【解決手段】（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤、皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。【選択図】なし

Description

本発明は、ＴＲＰＡ１活性抑制剤及び刺激感緩和剤に関する。

感覚は、外部から受けた刺激が電気信号に変換され、神経細胞を通じて脳に伝達されることで生じる。外部刺激を電気信号に変換するには、その外部刺激を感知する受容体の存在が必要である。
ＴＲＰＡ１は、一過性受容器電位（ＴＲＰ）イオンチャネルのスーパーファミリーに属する非選択性陽イオンチャネルであり、侵害受容ニューロンにおいて低温受容器（１７℃）として見出された（非特許文献１）。その後、ＴＲＰＡ１は、マスタードオイルやそれに含まれるアリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、シナモン、ガーリック、メチルサリチレート、オイゲノール、アルコール類等に反応する化学受容体であること、更には低温と機械刺激、化学刺激に応答する痛み受容体であることが報告されている（非特許文献２及び３）。

また、パラベン類やアルカリ剤がＴＲＰＡ１に応答し、ＴＲＰＡ１で形質転換させた細胞を用いてパラベン類やアルカリ剤の刺激を抑制する物質をスクリーニングできること（特許文献１及び２）が報告されている。

斯様に、ＴＲＰＡ１は皮膚や粘膜の侵害受容器であり、様々な刺激によって活性化されることから、ＴＲＰＡ１の活性を抑制することは、刺激による痛みの軽減に有効であると考えられ、これまでに、被験物質とＡＩＴＣを、ＴＲＰＡ１を発現する細胞に接触させて、ＡＩＴＣによりＴＲＰＡ１を介して引き起こされる細胞内カルシウムイオン濃度の変化を測定することにより、刺激（痛み）抑制物質の探索・評価がなされ、刺激抑制物質が見出されている（非特許文献４、特許文献３）。

特開２００８－７９５２８号公報特開２００９－８２０５３号公報特開２０１３－１５５１７２号公報

Story et al. 2003, Cell 112, 819-829 Kwan et al. 2006, Neuron 50, 277-289 日本薬理学雑誌、第１２４巻、第２１９頁－第２２７頁、２００４年、社団法人日本薬理学会発行 Molecular Pain 2008, 4:48

本発明者は、これまでに、ＴＲＰＡ１の活性を抑制し、刺激感原因物質による皮膚や粘膜に対する刺激感の緩和に有用である物質として、下記式（１）で表される化合物を見出している（前記特許文献３）。

〔式中、Ｒ¹及びＲ³はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１～３のアルキル基を示し、Ｒ²は炭素数１～６のアルキル基を示し、Ｒ⁴は水素原子、メチル基又はエチル基を示し、点線と実線の二重線は単結合又は二重結合を示す。〕

本発明は、より効果の高いＴＲＰＡ１活性抑制剤、及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を提供することに関する。

本発明者は、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ¹及びＲ³が共に水素原子であり、Ｒ²及びＲ⁴が共にメチル基であり、点線と実線の二重線が単結合である化合物、すなわち２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールについて、立体異性体を分離して検討したところ、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールにのみ高いＴＲＰＡ１活性抑制作用があり、皮膚や粘膜に対する刺激感の緩和に有用であることを見出した。

すなわち本発明は、以下の１）～３）に係るものである。
１）（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤。
２）（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とする皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。
３）（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを、刺激感原因物質を含有する組成物と配合するか、又は組み合わせる、当該刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激を緩和する方法。

本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤の有効成分である（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、他の立体異性体とは異なって、ＴＲＰＡ１の活性化を効果的に抑制する作用を有する。したがって、本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤、皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を、防腐剤、防腐助剤、アンモニア等の刺激感原因物質を含有する各種組成物や、低温刺激、機械刺激などの物理刺激と共に使用することにより、当該刺激感原因物質や物理刺激による刺激感や痛みを緩和することができる。また、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、他の立体異性体や立体異性体混合物とは異なって、良好なにおいを有し、香粧品における適合性が高い。

化合物１の各立体異性体のキラルカラム分析結果。化合物１の各立体異性体のＴＲＰＡ１活性抑制率を示すグラフ（棒グラフは３回の独立した実験より算出された値の平均値を示し、エラーバーは標準誤差（ＳＥＭ）を示す）。

本発明における（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、例えば、２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールから分離することができる。２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、２つの不斉炭素を有し、（２Ｓ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｒ）体、（２Ｒ，４Ｓ）体及び（２Ｓ，４Ｓ）体の４種類の立体異性体が存在する。２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールとしては、４種類の立体異性体の混合物であることが知られている市販のＰａｍｐｌｅｆｌｅｕｒ（ＩＦＦ社）などを使用することができる。例えば、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、後記実施例に詳述するように、Ｐａｍｐｌｅｆｌｅｕｒをヘキサンに溶解し、移動相にヘキサン／エタノール（９９／１）を用い、キラルカラム（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（登録商標）ＯＪ－Ｈ、ＤＡＩＣＥＬ）を備えるＨＰＬＣシステムに供してピークを分離し、全４本のピークのうち２番目のピークを回収することで得ることができる。

本発明の（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、後記実施例に示すように、ＴＲＰＡ１刺激物質と共に、ＴＲＰＡ１を形質導入した細胞（ＴＲＰＡ１発現細胞）に接触させた場合に、刺激物質による細胞内の陽イオン量の流入を抑制するというＴＲＰＡ１活性抑制作用を有する（実施例１）。他の３種類の立体異性体はＴＲＰＡ１活性抑制作用を示さず、意外にも（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールのみがＴＲＰＡ１活性抑制作用を有する。よって、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、該化合物を含む立体異性体混合物に比して少量で優れたＴＲＰＡ１活性抑制作用を有する。また、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、良好なにおいを有する（実施例２）。
したがって、本発明の（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールはＴＲＰＡ１活性抑制剤、及びＴＲＰＡ１を介して引き起こされる皮膚や粘膜に対する刺激感や痛みの緩和に有用な、皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤となり得る。

ここで、「ＴＲＰＡ１の活性抑制」とは、受容体であるＴＲＰＡ１の活性を抑制すること、具体的にはＴＲＰＡ１刺激物質（アゴニスト）がＴＲＰＡ１に結合することによって発現する活性や、低温刺激、機械刺激などの物理刺激がＴＲＰＡ１の構造を変化させることによって発現する活性、例えばイオン流束の調節能（例えば、細胞外から細胞内へのカルシウムイオン、ナトリウムイオンなどの陽イオンの輸送能など）、膜電位の調節能（例えば、電流の発生能など）を抑制或いは阻害することを云う。
ここで、ＴＲＰＡ１刺激物質としては、例えば、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、アンモニア、ブラジキニン、シンナムアルデヒド、４－ヒドロキシノネナール、アリシン、アクロレイン、メントール、メチルサリチレート、オイゲノール、メチルパラベンやブチルパラベンなどのパラベン類、フェノキシエタノール、ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル（ＩＰＢＣ）、トリクロサン、ベンジルアルコール、グリセリンモノ２－エチルヘキシルエーテル、カンナビジオール、硫化水素、ポリスルフィド、一価アルコール、多価アルコール等のアルコール類などが挙げられる。低温刺激としては、例えば、１７℃以下、好ましくは１０℃以下の周囲温度に暴露されることによる刺激、１７℃以下、好ましくは１０℃以下の固体表面又は液体に接触することによる刺激が挙げられる。機械刺激としては、接触、振動などの物理的な力による刺激が挙げられる。

尚、本発明の（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールによるＴＲＰＡ１の活性の抑制効果は、例えば、ＴＲＰＡ１発現細胞を用い、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの存在下にＴＲＰＡ１刺激物質（例えばＡＩＴＣ）と接触させたＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度と、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの非存在下でＴＲＰＡ１刺激物質と接触させたＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度との差異を比較すること等によって評価することができる。あるいは、本発明の（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールによるＴＲＰＡ１の活性の抑制効果は、例えば、ＴＲＰＡ１発現細胞を用い、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの存在下で物理刺激に暴露させたＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度と、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの非存在下で物理刺激に暴露させたＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度との差異を比較すること等によって評価することができる。

また、「皮膚又は粘膜の刺激感緩和」とは、ＴＲＰＡ１を介して引き起こされる皮膚や粘膜に対する刺激感や痛みを抑制又は低減することを意味し、皮膚又は粘膜の刺激感はＴＲＰＡ１の活性を抑制することにより緩和される。より具体的には、皮膚又は粘膜の刺激感緩和としては、上述したＴＲＰＡ１刺激物質とされる化学物質や物理刺激によって引き起こされる、感覚刺激を抑制又は低減することが挙げられる。ここでいう好適なＴＲＰＡ１刺激物質としては、皮膚や粘膜に対して刺激感を与える可能性がある化学物質（「刺激感原因物質」という）、例えば、メチルパラベンやブチルパラベンなどのパラベン類、フェノキシエタノール、ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル（ＩＰＢＣ）、トリクロサン等の防腐剤、ベンジルアルコール、グリセリンモノ２－エチルヘキシルエーテル等の防腐助剤、ブラジキニン、４－ヒドロキシノネナール、硫化水素、ポリスルフィド等のシグナル伝達関連分子、アンモニア、アクロレイン、メントール、メチルサリチレート、オイゲノール、カンナビジオール、一価アルコール、多価アルコール等のアルコール類等が挙げられる。ここで、一価アルコールとしては、例えば、エチルアルコール、プロピルアルコール、ブチルアルコール、ペンチルアルコール、ヘキシルアルコール、ヘプチルアルコール、オクチルアルコール、ノニルアルコール、デシルアルコールなどの炭素数２～１０の直鎖または分岐鎖の脂肪族一価アルコールなどが挙げられ、多価アルコールとしては、例えば、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ペンチレングリコール、ヘキシレングリコールなどの炭素数２～６の脂肪族二価アルコールなどが挙げられる。
なお、ここでいう、「粘膜」としては、口腔、咽喉、鼻腔、耳腔、結膜嚢等が挙げられる。
刺激感緩和効果は、上記のＴＲＰＡ１発現細胞を用いた細胞内カルシウムイオン濃度の変化を以て評価することができ、又は被験者に対し（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールと刺激感原因物質を塗布した場合の違和感（痛み）の程度と、同被験者に対し刺激感原因物質のみを塗布した場合の違和感（痛み）の程度を官能評価により比較することによって評価してもよい。あるいは、被験者に対し（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを塗布し、物理刺激を与えた場合の違和感（痛み）の程度と、同被験者に対し物理刺激のみを与えた場合の違和感（痛み）の程度を官能評価により比較することによって評価してもよい。

本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤は、例えば、上述した刺激感原因物質を含有する組成物（皮膚洗浄剤、頭髪洗浄剤、メイクアップ剤、入浴剤、パーマネントウェーブ用剤、染毛剤、石鹸類、台所用洗剤、洗濯用洗剤、歯磨類等の化粧品、医薬部外品、医薬品、生活用品等）に配合すること、或いは組み合わせること、例えば、刺激感原因物質を含有する組成物と別個に調製して同時或いは順次組み合わせることにより使用され、それにより当該刺激感原因物質により引き起こされる感覚刺激を緩和できる。また、上述した内因性の刺激感原因物質であるシグナル伝達関連分子を誘導する組成物においても同様に使用することができる。

ＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤は、本発明の（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを単独で用いたものであってもよく、あるいは油分、色素、香料、防腐剤、キレート剤、顔料、酸化防止剤、ビタミン、ミネラル、甘味料、調味料、保存料、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、被膜剤、担体、希釈剤等の、医薬品、化粧品、医薬部外品、生活用品等の各種製剤に用いられる添加剤や賦形剤等と組み合わせた組成物であってもよい。またそれらの形態も特に限定されず、例えば溶液、エマルジョン、サスペンジョン、ゲル、固形、粉体、粒体、エアゾールなど、任意の形態に調製できる。

本発明のＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を、刺激感原因物質を含有する組成物と共に用いる場合、ＴＲＰＡ１活性抑制剤及び皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤の使用量は、刺激感緩和効果を有する限り特に限定されないが、例えば、刺激感原因物質１質量部に対し、本発明の（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを好ましくは０．００２５質量部以上、より好ましくは０．０２５質量部以上、そして好ましくは２．５質量部以下、より好ましくは０．２５質量部以下の割合とすることができる。例えば、刺激感原因物質１質量部に対し、好ましくは０．００２５～２．５質量部、より好ましくは０．０２５～０．２５質量部の割合とすることができる。

上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤。
＜２＞（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とする皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。
＜３＞ＴＲＰＡ１活性抑制剤を製造するための（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの使用。
＜４＞皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤を製造するための（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの使用。
＜５＞ＴＲＰＡ１活性抑制に使用するための（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノール。
＜６＞皮膚又は粘膜の刺激感緩和に使用するための（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノール。
＜７＞（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを用いることを特徴とする、ＴＲＰＡ１活性抑制方法。
＜８＞（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを用いることを特徴とする、皮膚又は粘膜の刺激感緩和方法。
＜９＞（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを、刺激感原因物質を含有する組成物と配合するか、又は組み合わせる、当該刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激を緩和する方法。
＜１０＞上記＜２＞、＜４＞、＜６＞又は＜８＞において、刺激感緩和は、皮膚又は粘膜の刺激感のＴＲＰＡ１活性抑制による緩和である。
＜１１＞上記＜２＞、＜４＞、＜６＞又は＜８＞において、刺激感緩和は、刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激の緩和である。
＜１２＞上記＜９＞又は＜１１＞において、刺激感原因物質は、防腐剤、防腐助剤、アルコール類又はアンモニアである。
＜１３＞上記＜５＞、＜６＞、＜７＞又は＜８＞において、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールは、刺激感原因物質を含有する組成物に配合すること、又は当該組成物と組み合わせることにより使用するものである。
＜１４＞上記＜９＞又は＜１３＞において、（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを、刺激感原因物質１質量部に対し、好ましくは０．００２５質量部以上、より好ましくは０．０２５質量部以上、そして好ましくは２．５質量部以下、より好ましくは０．２５質量部以下の割合で使用するものである。

製造例
以下に、２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノール（Ｐａｍｐｌｅｆｌｅｕｒ）（化合物１）の立体異性体の製造例を示す。
¹Ｈ－ＮＭＲスペクトルは、ＣＨＣｌ₃（７．２４）を内部標準物質として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社製Ａｖａｎｃｅ－６００により測定し、¹³ＣＮＭＲスペクトルは、ＣＨＣｌ₃（７７．０）を内部標準物質として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社製Ａｖａｎｃｅ－６００により測定した。

（１）２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールの立体異性体の分離
２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノール（化合物１）は、ＩＦＦ社より購入したものを使用した。同化合物は２つの不斉炭素を有しており、４種類の立体異性体が存在しうるが、ＩＦＦ社販売のＰａｍｐｌｅｆｌｅｕｒは４種類の立体異性体混合物であることが既に文献にて開示されている（A. Abate et al, J. Org. Chem. (2005) 70, 1281-1290）。
４種の立体異性体が混在した化合物１について、キラルカラムを用いて各立体異性体を単離した。単離には分取ＨＰＬＣシステムを用い、カラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＪ－Ｈ（１０ｍｍ×２５０ｍｍ，ＤＡＩＣＥＬ）を用いた。化合物１はヘキサンに２０ｍｇ／ｍＬに溶解し、８０μＬをインジェクトした。移動相はＨｅｘａｎｅ／Ｅｔｈａｎｏｌ（９９／１）を用い、５ｍＬ／ｍｉｎで流した。カラムオーブンは４０℃に設定した。検出はＵＶ（２１０ｎｍ）を指標にした。本条件にて４本のピーク全てを分離可能であり、各ピークを回収した。同分取を繰り返し、移動相を減圧濃縮によって除去したところ、ピーク溶出の順番に、Ｆｒ．１（３．６ｍｇ）、Ｆｒ．２（４．１ｍｇ）、Ｆｒ．３（２．８ｍｇ）、Ｆｒ．４（４．２ｍｇ）を得た。¹ＨＮＭＲ分析より、Ｆｒ．１及びＦｒ．３がｓｙｎ体、Ｆｒ．２及びＦｒ．４がａｎｔｉ体であった。

ｓｙｎ－化合物１のＮＭＲデータ：¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.27 (m, 2H), 7.17 (m, 3H), 3.39 (dd, J = 10.6, 5.7 Hz, 1H), 3.33 (dd, J = 10.6, 6.4 Hz, 1H), 2.80 (m, 1H), 1.75 (ddd, J = 13.2, 10.4, 4.1 Hz, 1H), 1.40―1.35 (m, 1H), 1.31 (ddd, J = 13.2, 9.4, 5.0 Hz, 1H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 147.0, 128.4, 127.0, 125.9, 68.7, 41.6, 37.3, 33.5, 23.7, 16.3.
ａｎｔｉ－化合物１のＮＭＲデータ：¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.28 (m, 2H), 7.18 (m, 3H), 3.49 (dd, J = 10.6, 5.1 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 10.6, 6.1 Hz, 1H), 2.78 (m, 1H), 1.61 (m, 2H), 1.41 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.8 Hz, 3H); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 147.9, 128.4, 126.9, 125.9, 68.1, 41.9, 37.1, 33.4, 22.2, 16.9.

（２）各立体異性体の立体配置の決定
エナンチオピュアな化合物１の文献報告はなく、比旋光度値等を基にした立体配置の決定が困難であったため、光学活性原料を用いた標品合成によって立体配置の決定を行った。（Ｒ）－（＋）－２－フェニル－１－プロパノール（化合物２Ｒ）及び（Ｓ）－（－）－２－フェニル－１－プロパノール（化合物２Ｓ）をそれぞれ出発物質として用い（どちらも和光純薬より購入）、４工程の合成によって４位の立体配置が特定された化合物１をそれぞれ得た。

（ｉ）α，β－不飽和エステル（化合物３）の合成
化合物２Ｒ（２９６ｍｇ，２．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２２ｍＬ）に溶解し、ヨードベンゼンジアセテート（１．４０ｇ，４．３５ｍｍｏｌ）及びＴＥＭＰＯ（６７．９ｍｇ，０．４３５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１１時間攪拌後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液の１：１混合物及び酢酸エチルを添加した。有機相を分離後、水相を酢酸エチルによって抽出した。有機相を集め、ｂｒｉｎｅによって洗浄し、硫酸ナトリウムによって乾燥後、濾過して得た濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製（酢酸エチル／ヘキサン）し、アルデヒドを得た。
別の反応容器にて、窒素雰囲気下、水素化ナトリウム（２３７ｍｇ，５．４３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１１ｍＬ）に懸濁し、２－ホスホノプロピオン酸トリエチル（１．４１ｍＬ，６．５１ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、３０ｍｉｎ攪拌した。そこに、先ほど得られたアルデヒドをＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解したものを添加し、室温で８時間攪拌後、飽和塩化アンモニウム水溶液を添加した。有機相を分離後、水相を酢酸エチルによって抽出した。有機相を集め、ｂｒｉｎｅによって洗浄し、硫酸ナトリウムによって乾燥後、濾過して得た濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製（酢酸エチル／ヘキサン）し、（Ｓ）－（Ｚ）－α，β－不飽和エステル（化合物３ＳＺ、１５８ｍｇ，３３％ｆｏｒ２ｓｔｅｐｓ）及び（Ｓ）－（Ｅ）－α，β－不飽和エステル（化合物３ＳＥ、８６．３ｍｇ，１８％ｆｏｒ２ｓｔｅｐｓ）を得た。

化合物３ＳＺのＮＭＲデータ：¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.31-7.25 (m, 4H), 7.18 (m, 1H), 5.95 (dq, J = 10.2, 1.4 Hz, 1H), 4.50 (dq, J = 10.2, 7.0 Hz, 1H), 4.21 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.35 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.0, 146.5, 145.4, 128.5, 127.0, 126.2, 125.6, 60.2, 38.5, 21.3, 20.8, 14.3.
化合物３ＳＥのＮＭＲデータ：¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.32-7.28 (m, 2H), 7.24-7.18 (m, 3H), 6.84 (dq, J = 9.8, 1.5 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.78 (dq, J = 9.8, 6.9 Hz, 1H), 1.89 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.38 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.3, 145.8, 144.5, 128.6, 127.0, 126.6, 126.4, 60.5, 38.9, 21.3, 14.3, 12.5.

一方、化合物２Ｓ（２９９ｍｇ，２．１９ｍｍｏｌ）を用い、同様の工程にて、（Ｒ）－（Ｚ）－α，β－不飽和エステル（化合物３ＲＺ、１４２ｍｇ，３０％ｆｏｒ２ｓｔｅｐｓ）及び（Ｒ）－（Ｅ）－α，β－不飽和エステル（化合物３ＲＥ、７７．１ｍｇ，１６％ｆｏｒ２ｓｔｅｐｓ）を得た。ＮＭＲデータはＳ体と一致した。

（ｉｉ）アリルアルコール（化合物４）の合成
ＬｉＡｌＨ₄（７３．３ｍｇ，１．９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に懸濁し、窒素雰囲気下、０℃で化合物３ＳＺ（１４１ｍｇ，０．６４４ｍｍｏｌ，ＴＨＦ１ｍＬに溶解）を滴下した。０℃で３０ｍｉｎ攪拌した後、水（０．１ｍＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍＬ）、水（０．３ｍＬ）を添加して反応を停止した。混合液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製（酢酸エチル／ヘキサン）し、（Ｓ）－（Ｚ）－アリルアルコール（化合物４ＳＺ、９７．３ｍｇ，８６％）を得た。

化合物４ＳＺのＮＭＲデータ：¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.28 (m, 2H), 7.21 (m, 1H), 7.17 (m, 1H), 5.45 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.17 (br, 2H), 3.76 (dq, J = 9.5, 6.9 Hz, 1H), 1.79 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 3H); ¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 146.7, 133.7, 133.3, 128.5, 126.8, 126.0, 61.9, 37.6, 22.8, 21.4.

一方、化合物３ＲＺ（１２７ｍｇ，０．５８４ｍｍｏｌ）を用い、同様の工程にて、（Ｒ）－（Ｚ）－アリルアルコール（化合物４ＲＺ、８３．６ｍｇ，８１％）を得た。ＮＭＲデータはＳ体と一致した。

（ｉｉｉ）２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノール（化合物１）の合成
化合物４ＳＺ（７６．０ｍｇ，０．４３１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（４ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、１０％Ｐｄ／Ｃ（７０ｍｇ）を添加した。系中を水素雰囲気下に置換し、室温で３時間攪拌した。溶液をセライト濾過した後、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製（酢酸エチル／ヘキサン）し、（２ＲＳ，４Ｓ）－化合物１（３２．０ｍｇ，４２％）を得た。
一方、化合物４ＲＺ（５９．４ｍｇ，０．３３７ｍｍｏｌ）を用い、同様の工程にて、（２ＲＳ，４Ｒ）－化合物１（３４．４ｍｇ，５７％）を得た。

（ｉｖ）各立体異性体の立体配置の決定
（ｉｉｉ）で得た４位の立体配置が明らかな標品をキラルカラム分析することにより、単離した各フラクションの立体配置を決定した。分析にはＨＰＬＣシステムを用い、カラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＪ－Ｈ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，ＤＡＩＣＥＬ）を用いた。化合物はヘキサンに２ｍｇ／ｍＬに溶解し、５μＬをインジェクトした。移動相はヘキサン／エタノール（９９／１）を用い、１ｍＬ／ｍｉｎで流した。カラムオーブンは４０℃に設定した。検出はＵＶ（２１０ｎｍ）を指標にした。キラルカラム分析の結果（図１）、（２ＲＳ，４Ｓ）－化合物１は（１）のＦｒ．３及び４に該当し、（２ＲＳ，４Ｒ）－化合物１はＦｒ．１及び２に該当することが分かった。Ｆｒ．１及び３がｓｙｎ体、Ｆｒ．２及び４がａｎｔｉ体であることと総合し、Ｆｒ．１が（２Ｓ，４Ｒ）体、Ｆｒ．２が（２Ｒ，４Ｒ）体、Ｆｒ．３が（２Ｒ，４Ｓ）体、Ｆｒ．４が（２Ｓ，４Ｓ）体とそれぞれ立体配置を決定した。（１）で単離した各化合物の比旋光度を測定した（ＪＡＳＣＯＰ－１０２０旋光度計を使用）。

Ｆｒ．１：（２Ｓ，４Ｒ）－化合物１の比旋光度：[α]_D ²³ -37.6 (c 0.42, CHCl₃).
Ｆｒ．２：（２Ｒ，４Ｒ）－化合物１の比旋光度：[α]_D ²³ -2.5 (c 0.20, CHCl₃).
Ｆｒ．３：（２Ｒ，４Ｓ）－化合物１の比旋光度：[α]_D ²³ +36.1 (c 0.38, CHCl₃).
Ｆｒ．４：（２Ｓ，４Ｓ）－化合物１の比旋光度：[α]_D ²³ +2.7 (c 0.21, CHCl₃).

実施例１各立体異性体のＴＲＰＡ１活性阻害効果の検証
（１）ヒトＴＲＰＡ１安定発現株の作製
ヒトＴＲＰＡ１遺伝子は、その全長をＯｐｅｎｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社よりｐＥＮＴＲ２２３．１に挿入された状態で購入した。購入したエントリーベクターよりＴＲＰＡ１遺伝子を発現用ベクターｐｃＤＮＡ３．２－Ｖ５／ＤＥＳＴ（インビトロジェン社）へサブクローニングし、リポフェクトアミン２０００（インビトロジェン社）によりＨＥＫ２９３細胞へ形質導入した。形質導入された細胞をＧ－４１８（４５０μｇ／ｍＬ；プロメガ社）を含有するＤＭＥＭ培地中で増殖させることにより選抜した。なおＨＥＫ２９３細胞は内在性ＴＲＰＡ１を発現しないため、ＴＲＰＡ１形質導入株に対する対照（コントロール）として使用できる。

（２）カルシウムイメージング
蛍光カルシウムイメージング法を用いてＨＥＫ２９３細胞へ形質導入したＴＲＰＡ１活性の測定を行った。まず培養したＴＲＰＡ１発現細胞をポリ－Ｄ－リジンコートされた９６ウェルプレート（ＢＤファルコン社）に播種（３００００細胞／ウェル）し、３７℃で一晩、インキュベートした後、培養液を除去し、リンガー液に溶解させたＦｌｕｏ４－ＡＭ（２μｇ／ｍＬ；同仁化学社）を添加し、３７℃で６０分間インキュベートした。その後、Ｆｌｕｏ４－ＡＭ液を除去し、ウェルにリンガー液を添加して蛍光プレートリーダー（ＦＤＳＳ３０００；浜松ホトニクス社）にセットした。装置庫内温度２４℃にした状態で励起波長４８０ｎｍで励起させたときの蛍光イメージを検出波長５２０ｎｍにてＣＣＤカメラで検出した。測定は１秒毎に４分間行い、測定開始１５秒後にＦＤＳＳ３０００内蔵の分注器により、各濃度に調製したＴＲＰＡ１刺激物質であるアリルイソチオシアネート及び試験素材を添加し、その後の蛍光強度の変化によりＴＲＰＡ１活性を評価した。ＴＲＰＡ１活性は刺激物質添加後の蛍光強度のピーク（Ｆ_peak）を刺激物質添加前の蛍光強度（Ｆ₀）で除算した蛍光強度比（Ｒａｔｉｏ；Ｆ_peak／Ｆ₀）で表した。対照としてＴＲＰＡ１を形質導入していないＨＥＫ２９３細胞に同様の物質を添加し、その際の蛍光強度比（Ｒａｔｉｏ₂₉₃）を算出し、刺激物質による活性がＴＲＰＡ１活性化に由来することを確認した。

（３）アリルイソチオシアネートに対するＴＲＰＡ１活性抑制評価
アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）によるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１の各立体異性体の効果を検証するため、ＡＩＴＣ（１０μＭ）及びエタノール（０．０１％；溶媒コントロール）を添加した際のＴＲＰＡ１活性に対する試験素材の抑制作用（活性抑制率；％）を評価した。ＡＩＴＣ（刺激物質）と試験素材を混合し添加することによるＴＲＰＡ１活性抑制作用は下記の式により算出した。
〔数１〕
ＴＲＰＡ１活性抑制率（％）＝（１－（（刺激物質＋試験素材添加によるＲａｔｉｏ）－（試験物質＋試験素材添加によるＲａｔｉｏ₂₉₃））／（（試験物質＋エタノール添加によるＲａｔｉｏ）－（試験物質＋エタノール添加によるＲａｔｉｏ₂₉₃）））×１００

（４）アリルイソチオシアネートに対するＴＲＰＡ１活性化抑制作用
ＡＩＴＣ（１０μＭ）によるＴＲＰＡ１活性化に対する化合物１の各立体異性体の効果（活性抑制率）について、用量依存性を含めて検証した。図２に示すように、３．３－１００μＭの範囲では、（２Ｒ，４Ｒ）体のみがＴＲＰＡ１活性抑制効果を示し、その作用は用量依存的であった。

実施例２各立体異性体のにおい評価
文献（A. Abate et al, J. Org. Chem. (2005) 70, 1281-1290）において、化合物１の各立体異性体の匂いが評価されており、その記述を引用する。
" (2R,4S): natural fruity odor in the direction of grapefruit and rhubarb, close to gardenol (methyl phenylcarbinyl acetate) and 2,5-dimethyloct-2-en-6-one, slightly metallic."
"(2S,4S): floral-fruity odor in the direction of grape-fruit and linalool with earthy, woody, and bitter nuances, also reminiscent of 2,5-dimethyloct-2-en-6-one and of some aspects of vetiver oil."
"(2S,4R): fruity-citric odor, with some harsh, animalic, and slightly woody nuances, also is a bit rubbery."
"(2R,4R): floral-fruity odor in the direction of rhubarb with a touch of grapefruit, reminiscent of gardenol (methylphenyl carbinyl acetate)."
（２Ｒ，４Ｓ）体、（２Ｓ，４Ｓ）体及び（２Ｓ，４Ｒ）体はｍｅｔａｌｉｃ、ｅａｒｔｈｙ、ａｎｉｍａｌｉｃなど、香粧品においてネガティブとなりうる匂いの質を呈する一方、（２Ｒ，４Ｒ）体は受入性の高い匂いの質を呈する傾向にあることが示唆される。また、本発明者らの評価においても（２Ｒ，４Ｒ）体は、立体異性体混合物が呈するｍｅｔａｌｉｃな匂いの要素がなく、爽やかなシトラス臭を呈しており、香粧品における適合性の高い匂いであった。さらに、（２Ｒ，４Ｒ）体は、立体異性体混合物よりも臭気強度が弱く、（２Ｒ，４Ｒ）体の使用は、化合物１が香粧品使用において抱える匂いの課題を解決しうることを見出した。

Claims

（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とするＴＲＰＡ１活性抑制剤。
（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを有効成分とする皮膚又は粘膜の刺激感緩和剤。
皮膚又は粘膜の刺激感をＴＲＰＡ１活性抑制により緩和する請求項２記載の刺激感緩和剤。
刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激を緩和する請求項２又は３記載の刺激感緩和剤。
刺激感原因物質が防腐剤、防腐助剤、アルコール類又はアンモニアである請求項４記載の刺激感緩和剤。
（２Ｒ，４Ｒ）－２－メチル－４－フェニル－１－ペンタノールを、刺激感原因物質を含有する組成物と配合するか、又は組み合わせる、当該刺激感原因物質による皮膚又は粘膜の感覚刺激を緩和する方法。
刺激感原因物質が防腐剤、防腐助剤、アルコール類又はアンモニアである請求項６記載の方法。