JP2023546121A - 抗ｃｃｒ８モノクローナル抗体およびその使用 - Google Patents

抗ｃｃｒ８モノクローナル抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

ヒトケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはフラグメントが提供される。これらの抗体は、ＣＣＲ８に対して、高い親和性で結合することができ、かつ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することができる。一実施形態では、ヒトケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントが提供される。抗体またはそのフラグメントは、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域軽鎖を含む。

Description

背景
ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体８（ＣＣＲ８）は、βケモカイン受容体ファミリーのメンバーであり、また、Ｇタンパク質共役型受容体と類似の７回膜貫通型タンパク質である。ケモカインおよびその受容体は、炎症部位への種々の細胞種の遊走のために重要である。この受容体タンパク質は、胸腺において選択的に発現する。ＣＣＲ８のリガンドは、ＣＣＬ１である。ＣＣＬ８もまた、ＣＣＲ８アゴニストとして機能する。
ＣＣＲ８は、主として制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上に発現し、また、ＣＣＲ８＋Ｔｒｅｇ媒介性免疫抑制のために重要である。最近の研究によって、ＣＣＲ８は、がん患者のヒト腫瘍常在性Ｔｒｅｇによってユニークにアップレギュレートされることが示されている。また、がんの患者におけるＣＣＲ８＋ミエロイド細胞の増加も示された。
ＣＣＲ８を標的とする抗体は、動物モデルにおいて、腫瘍成長を有意に抑制し、長期生存率を改善することが示されている。この抗腫瘍活性は、腫瘍特異的Ｔ細胞の増加、ならびにＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤の亢進と関連していた。この抗体による処置によって、ＣＤ８＋Ｔ細胞に影響を及ぼすことなく、Ｔｒｅｇの誘導および抑制機能が阻害された。したがって、ＣＣＲ８の標的化は、有望ながん免疫療法のアプローチである。
概要
本明細書において、ヒトＣＣＲ８タンパク質に対して高い結合親和性を有し、かつ抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を効率的に媒介する、抗ＣＣＲ８抗体が開示されている。
一実施形態では、ヒトケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントが提供される。抗体またはそのフラグメントは、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域軽鎖を含む。一実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５または２８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＣＤＲＨ１は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５または２８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、前記抗体またはそのフラグメントおよび医薬的に許容され得るキャリアを含む組成物も提供される。いくつかの実施形態において、前記組成物は、腫瘍抗原に対する特異性を有する二次抗体をさらに含む。いくつかの実施形態において、前記二次抗体は、腫瘍オプソニン化抗体である。
疾患および状態の処置のための方法および使用もまた提供される。一つの実施形態において、がんを処置することを必要とする患者においてがんを処置する方法であって、本開示の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む方法が提供される。
図１は、マウスＶＨ／ＶＬを有するキメラ抗体のＣＣＲ８結合親和性を示す。
図２は、３つのキメラ抗体のＡＤＣＣ活性を示す。
図３は、高い親和性を有するヒト化８８Ｄ２Ｃ６抗体を示す。
図４は、高い親和性を有するヒト化１３７Ｄ１Ｈ１０抗体を示す。
図５は、ヒト化抗体が、キメラ抗体と比較して、有意に高いＡＤＣＣ活性を有することを示す。
図６は、フローサイトメトリーによる、ヒトＣＣＲ８に対する、ＬＭ－１０８および参照抗体の細胞ベースの結合の結果を示す。上側の図：ＦＡＣＳにおける、ヒトＣＣＲ８発現ＨＥＫ２９３上へのＬＭ－１０８の結合。下側の図：ＦＡＣＳにおける、ＨＥＫ２９３細胞上へのＬＭ－１０８の結合。
図７は、フローサイトメトリーによる、ヒトＣＣＲ８高発現Ｕ２ＯＳ細胞に対する、ＬＭ－１０８の細胞ベースの結合を示す。
図８は、フローサイトメトリーによる、ヒトＣＣＲ８低発現Ｊｕｒｋａｔ細胞に対する、ＬＭ－１０８の細胞ベースの結合を示す。
図９は、ＣＣＲ８高発現Ｕ２ＯＳ細胞を標的とする、Ｊｕｒｋａｔ／ＣＤ１６ａ（１５８ｖ）／ＮＦＡＴ－ｌｕｃ細胞を用いたＬＭ－１０８のＡＤＣＣレポーター遺伝子アッセイの結果を示す。
図１０は、ＣＣＲ８低発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を標的とする、Ｊｕｒｋａｔ／ＣＤ１６ａ（１５８ｖ）／ＮＦＡＴ細胞を用いた、ＬＭ－１０８のＡＤＣＣレポーター遺伝子アッセイの結果を示す。
図１１は、ＣＣＲ８発現細胞（上側の図）または対照細胞（下側の図）を標的とする、ｈＰＢＭＣを用いた、ＬＭ－１０８のＡＤＣＣ試験の結果を示す。
図１２は、ＦＡＣＳによる、単球由来マクロファージを用いた、ＬＭ－１０８のＡＤＣＰを示す。上側の図：ＬＭ－１０８のＡＤＣＰ（ヒトＣＣＲ８過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対するＬＭ－１０８）。下側の図：ＬＭ－１０８のＡＤＣＰ（対照ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対するＬＭ－１０８）。
図１３は、Ｏｐｅｒｅｔｔａによる、単球由来マクロファージを用いた、ＬＭ－１０８のＡＤＣＰのイメージング結果を示す。
図１４は、ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いたＣＴ２６シンジェニックモデルにおけるＬＭ－１０８ｍのｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究における、ＬＭ－１０８ｍおよび抗ｍＰＤ－１ Ａｂを投与した後のＣＴ２６腫瘍担持マウスの腫瘍成長曲線を示す。
図１５は、ｈＣＣＲ８ ｋｉマウスを用いたＭＣ３８シンジェニックモデルにおけるＬＭ－１０８のｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究における、ＬＭ－１０８ｍおよびビヒクルを投与した後の、ＭＣ３８腫瘍担持マウスの腫瘍成長曲線を示す。
図１６は、ｈＣＣＲ８発現細胞におけるＬＭ－１０８－ｖｃ－ＭＭＡＥの細胞傷害性評価の結果を示す。
詳細な説明
定義
用語「ａ（１つの、ある）」または「ａｎ（１つの、ある）」実体は、１つまたはそれを超えるその実体を指す。例えば、「１つの抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つまたはそれを超える抗体を表すものと理解すべきである。従って、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたはそれを超える（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、および「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」は、本明細書において、互換的に使用され得る。
本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」は、単数の「ポリペプチド」、ならびに複数の「ポリペプチド」を包含することが意図されており、および、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直鎖状に連結されたモノマー（アミノ酸）で構成される分子を指す。用語「ポリペプチド」は、２つまたはそれを超えるアミノ酸の任意の単数の鎖または複数の鎖を指し、その産物の特定の長さを指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つまたはそれを超えるアミノ酸の単数の鎖または複数の鎖を指すために使用される任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義の中に含まれ、また、用語「ポリペプチド」は、これらの用語のいずれかの代わりに、またはこれらの用語のいずれかと互換的に使用され得る。用語「ポリペプチド」は、また、ポリペプチドの発現後修飾（限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、または非天然起源アミノ酸による修飾が含まれる）の産物を指すことも意図されている。ポリペプチドは、天然の生物源由来であってもよく、組換え技術によって生成されてもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されなくてもよい。ポリペプチドは、化学合成を含む、いかなる方法で生成されてもよい。
「相同性」、または「同一性」、または「類似性」は、２つのペプチド間、または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、各配列（比較の目的でアラインされてもよい）における位置を比較することによって決定することができる。比較される配列における位置が、同じ塩基またはアミノ酸によって占められている場合、その分子は、その位置において相同である。配列間の相同性の程度は、その配列によって共有されている、マッチした、または相同な位置の数の関数である。「無関係な」または「非相同」配列は、本開示の配列の１つと、４０％未満の同一性（好ましくは２５％未満の同一性であるが）を共有する。
ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）は、他の配列とある特定のパーセンテージ（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）の「配列同一性」を有し、これは、アラインされた場合、２つの配列の比較において、そのパーセンテージの塩基（またはアミノ酸）が同一であることを意味する。
用語「同等の核酸またはポリヌクレオチド」は、核酸またはその相補体のヌクレオチド配列に対して、ある程度の相同性または配列同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を指す。二本鎖核酸のホモログは、その相補体とまたはその相補体と（ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒｅｏｆ）ある程度の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を含むことが意図されている。１つの態様において、核酸のホモログは、核酸またはその相補体とハイブリダイズすることが可能である。同様に、「同等のポリペプチド」は、参照ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、ある程度の相同性または配列同一性を有するポリペプチドを指す。いくつかの態様において、配列同一性は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％である。いくつかの態様において、同等のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較して、１、２、３、４、または５つの付加、欠失、置換、およびそれらの組み合わせを有する。いくつかの態様において、前記同等の配列は、前記参照配列の活性（例えば、エピトープ結合）または構造（例えば、塩橋）を保持している。
本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識し、結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体、およびその任意の抗原結合フラグメントまたは単鎖であり得る。よって、用語「抗体」は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む分子を含む、任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのようなものの例には、限定されないが、重鎖または軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはそれらの任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも一部分があげられる。
用語「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」は、本明細書で使用される場合、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの、抗体の一部分である。構造にかかわらず、抗体フラグメントは、インタクトな抗体によって認識される、同じ抗原と結合する。用語「抗体フラグメント」は、アプタマー、スピーゲルマー、およびダイアボディーを含む。用語「抗体フラグメント」は、また、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように働く、任意の合成または遺伝子操作タンパク質も含む。
「単鎖可変領域フラグメント」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖の可変領域（ＶＨ）および軽鎖の可変領域（ＶＬ）の融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、この領域は、１０～約２５アミノ酸のショートリンカーペプチドによって連結される。このリンカーは、柔軟性のためにグリシンが、さらに溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり得、ならびにＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端と連結するか、またはその逆のいずれかであり得る。このタンパク質は、定常領域が除去され、リンカーが導入されているにもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。ＳｃＦｖ分子は、当該技術分野において知られており、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。
用語抗体は、生物学的に識別し得る、種々の幅広いクラスのポリペプチドを包含する。当業者は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ，μ，α，δ，ε）に分類され、その中にいくつかのサブクラス（例えば、γ１～γ４）があることを理解する。抗体の「クラス」を、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５などは、十分に特徴付けされ、機能特化をもたらすことが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾形態は、本開示を考慮して当業者に容易に識別可能であり、したがって、本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明確に本開示の範囲内であり、以下の考察は、一般に、ＩｇＧクラスの免疫グロブリン分子に向けられる。ＩｇＧに関し、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量がおよそ２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量５３，０００～７０，０００の２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。これら４つの鎖は、典型的には、ジスルフィド結合によって連結されて「Ｙ」の配置にあり、前記軽鎖は、「Ｙ」の口で始まり可変領域を通して続く前記重鎖を挟む。
本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、バリアント、またはそれらの誘導体としては、それらに限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、もしくはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書に開示のＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）があげられる。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスであり得る。
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合され得る。一般に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合し、２つの重鎖の「テイル」部分は、免疫グロブリンが、ハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作宿主細胞のいずれかによって生成される場合、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ配置のフォーク端におけるＮ末端から、各鎖の底部におけるＣ末端まで及ぶ。
軽鎖および重鎖は、両方とも、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」および「可変」は、機能的に使用される。この点について、軽鎖部分の可変ドメイン（ＶＫ）および重鎖部分の可変ドメイン（ＶＨ）は、両方とも、抗原認識および特異性を決定する。逆に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＫ）および重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）は、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣習により、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠ざかるにつれて増える。Ｎ末端部分は、可変領域であり、Ｃ末端部分は、定常領域であり；ＣＨ３とＣＫドメインは、実際に、それぞれ重鎖と軽鎖のカルボキシ末端を含む。
上に示したように、可変領域は、抗体が、抗原のエピトープを選択的に認識し、特異的に結合することを可能にする。すなわち、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが組み合わさり、三次元抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この抗体の四次構造は、前記Ｙの各腕の末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＫ鎖それぞれの３つのＣＤＲ（すなわちＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）によって規定される。いくつかの例、例えば、ラクダ科の種に由来する、またはラクダ科免疫グロブリンに基づいて操作されたある特定の免疫グロブリン分子において、完全な免疫グロブリン分子は、軽鎖を有さず、重鎖のみからなり得る。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）を参照のこと。
天然起源抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６個の「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が、水性環境において三次元配置をとった場合に抗原結合ドメインを形成するように特異的な位置を占める、短く、非連続的なアミノ酸配列である。抗原結合ドメインの残りのアミノ酸（「フレームワーク」領域と呼ばれる）は、より小さい分子間変動性を示す。フレームワーク領域は、主としてβシート構造をとり、ＣＤＲは、βシート構造を連結し、かつ、いくつかのケースではβシート構造の一部を形成する、ループを形成する。よって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合相互作用によって正しい方向のＣＤＲの配置を提供する足場を形成する役割を果たす。配置されたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに対する表面相補性を決定する。この相補的表面が、抗体の、その同族エピトープに対する非共有結合を促進する。ＣＤＲとフレームワーク領域をそれぞれ含むアミノ酸は、正確に規定されている（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，’’Ｋａｂａｔ，Ｅ．ら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；およびＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照のこと）ため、当業者によって、任意の所与の重鎖または軽鎖可変領域について、容易に決定することができる。
当該技術分野において使用および／または受け入れられている用語の２つまたはそれを超える定義があるケースにおいて、本明細書において使用されるその用語の定義は、別段の明確な指示がある場合を除き、それらの意味の全てを含むことが意図されている。具体的な例は、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域の中に見いだされる非連続的な抗原結合部位を記述するための用語「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，’’Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ’’（１９８３）、およびＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）（これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される）によって記述されている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義は、相互に比較した場合、アミノ酸残基のオーバーラップまたはサブセットを含む。にもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためのどちらかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図されている。上で引用された参考文献のそれぞれで定義されたＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基は、比較として、下記の表に記載されている。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、そのＣＤＲの配列およびサイズに応じて異なる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列が与えられた場合、どの残基が特定のＣＤＲを含むかを日常的に決定することができる。
Figure 2023546121000001
Ｋａｂａｔらは、また、任意の抗体に適用できる、可変ドメイン配列のためのナンバリングシステムも定義した。当業者は、その配列自体以外、いかなる実験データに依拠することなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」システムを、任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔナンバリング」は、Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，’’Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ’’（１９８３）に記述されたナンバリングシステムを指す。
上記の表に加えて、Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、以下のようにＣＤＲ領域を記述する：ＣＤＲ－Ｈ１は、およそアミノ酸３１（すなわち、最初のシステイン残基の後およそ９残基）において始まり、およそ５～７アミノ酸を含み、次のトリプトファン残基において終わる。ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の末端の後の１５番目の残基において始まり、およそ１６～１９アミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリジン残基において終わる。ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の末端の後のおよそ３３番目のアミノ酸残基において始まり；３～２５アミノ酸を含み；および配列Ｗ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（ここで、Ｘは、任意のアミノ酸である）において終わる。ＣＤＲ－Ｌ１は、およそ残基２４（すなわち、システイン残基の後）において始まり；およそ１０～１７残基を含み；および次のトリプトファン残基において終わる。ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の末端の後のおよそ１６番目の残基において始まり、およそ７残基を含む。ＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の末端の後のおよそ３３番目の残基（すなわち、システイン残基の後）において始まり；およそ７～１１残基を含み；配列ＦまたはＷ－Ｇ－Ｘ－Ｇ（ここで、Ｘは、任意のアミノ酸である）において終わる。
本明細書に開示されている抗体は、鳥類および哺乳類を含む、任意の動物起源であり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリ抗体である。別の実施形態において、可変領域は、起源が軟骨魚（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）（例えば、サメ起源）であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「重鎖定常領域」は、免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中央部、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそのバリアントまたはフラグメントの少なくとも１つを含む。例えば、本開示で使用するための抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、少なくともヒンジドメインの一部、およびＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、少なくともヒンジドメインの一部、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、またはＣＨ１ドメイン、少なくともヒンジドメインの一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含み得る。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示において使用するための抗体は、少なくともＣＨ２ドメインの一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全て、または一部）を欠いていてもよい。上記のように、当業者によって、重鎖定常領域は、天然起源の免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾されていてもよいことが理解されよう。
本明細書に開示されている抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来していてもよい。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含んでいてもよい。別の例において、重鎖定常領域は、部分的にＩｇＧ１分子に由来し、部分的にＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子に由来し、部分的にＩｇＧ４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。
本明細書で使用される場合、用語「軽鎖定常領域」は、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインの少なくとも１つを含む。
「軽鎖－重鎖ペア」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインの間のジスルフィド結合によってダイマーを形成し得る、軽鎖と重鎖の集合を指す。
先に示したように、種々の免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元配置はよく知られている。本明細書で使用される場合、用語「ＶＨドメイン」は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端を含み、用語「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブリン重鎖の最初の（最もアミノ末端）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに近接し、かつ免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端である。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＨ２ドメイン」は、慣習的なナンバリングスキームを使用して、抗体の約残基２４４から残基３６０（残基２４４～３６０、Ｋａｂａｔナンバリングシステム；および残基２３１～３４０、ＥＵナンバリングシステム；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，’’Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ’’（１９８３）参照）まで伸びる重鎖分子の部分を含む。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合しないという点でユニークである。寧ろ、２つのＮ結合型分枝炭水化物鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入されている。また、ＣＨ３ドメインが、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで伸び、およそ１０８残基を含むことも十分に証明されている。
本明細書で使用される場合、用語「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結する重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、かつフレキシブルであり、よって２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことが可能になる。ヒンジ領域は、３つの別個のドメイン、すなわち上部、中央部、および下部ヒンジドメインに細分することができる（Ｒｏｕｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。
本明細書で使用される場合、用語「ジスルフィド結合」は、２つの硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成することができるチオール基を含む。ほとんどの天然起源のＩｇＧ分子において、ＣＨ１およびＣＫ領域は、ジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して２３９および２４２（位置２２６または２２９、ＥＵナンバリングシステム）に対応する位置において、２つのジスルフィド結合によって連結される。
本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性領域または部位が、第１の種から得られるか、またはそれに由来し、定常領域（これは、インタクトであり得るか、一部分であり得るか、または本開示に従って修飾され得る）が、第２の種から得られる、任意の抗体を意味する。ある特定の実施形態において、標的結合領域または部位は、非ヒト源（例えば、マウスまたは霊長類）に由来し、定常領域は、ヒトである。
本明細書で使用される場合、「パーセントヒト化」は、ヒト化ドメインと生殖系列ドメインの間のフレームワークアミノ酸の相異（すなわち、非ＣＤＲの相異）の数を決定し、この数をアミノ酸の総数から差し引き、次いでそれをアミノ酸の総数で割り、１００を掛けることによって算出する。
「特異的に結合する」または「に対して特異性を有する」は、抗体がその抗原結合ドメインによってエピトープに結合すること、およびその結合が抗原結合ドメインとエピトープの間にいくらかの相補性を要することを一般的に意味する。この定義にしたがって、抗体は、その抗原結合ドメインによって、ランダムで無関係なエピトープに結合するであろう場合と比較して、あるエピトープにより容易に結合する場合、そのエピトープに対して「特異的に結合する」と言われる。用語「特異性」は、本明細書において、ある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対的親和性を認定するために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも、所定のエピトープに対して、より高い特異性を有するとみなされ得、または抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」に対して有する特異性よりも、より高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われ得る。
本明細書で使用される場合、用語「処置する」または「処置」は、治療的処置と、予防的または防止的手段の両方を指し、ここで、目的は、望まれない生理学的変化または障害（例えば、がんの進行）を予防または減速（軽減）させることである。有益または望まれる臨床結果は、それらに限定されないが、検出可能にせよ、検出不可能にせよ、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延または減速、疾患の状態の改善または緩和、および寛解（部分寛解にせよ、完全寛解にせよ）を含む。「処置」は、また、処置を受けなかった場合に予期される生存期間と比較して、生存期間を延長させることも意味し得る。処置を必要とする対象には、状態または障害をすでに有する対象、ならびに状態または障害を有する傾向がある対象、または状態または障害を予防すべき対象が含まれる。
「対象」、または「個体」、または「動物」、または「患者」、または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が所望される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象は、ヒト、飼育動物、農場動物、および動物園動物、スポーツ動物、またはペット動物（例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ（ｃａｔｔｌｅ）、ウシ（ｃｏｗ）など）を含む。
本明細書で使用される場合、「処置を必要とする患者に対して」または「処置を必要とする対象」のような表現は、例えば、検出のために、診断手順のために、および／または処置のために使用される、本開示の抗体または組成物の投与から利益を受けるであろう対象（例えば、哺乳動物対象）を含む。
抗ＣＣＲ８抗体
本開示は、ヒトＣＣＲ８タンパク質に対して高い親和性を有し、ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰを強力に媒介し、かつｉｎ ｖｉｖｏの強力な腫瘍阻害剤有効性を示す、抗ＣＣＲ８抗体およびフラグメントを提供する。興味深いことに、抗ＣＣＲ８抗体（ＷＯ２０２０１３８４８９からのもの）をベンチマークとして使用した場合、本明細書において開示されている抗体はＣＣＲ８非発現細胞に対する結合を示さないのに対し、ベンチマーク抗体は、それらの対照細胞に対しても同様に結合する。したがって、本抗体は、臨床的な使用において、望ましくない副作用がより少ないことが期待され得る。したがって、これらの抗体は、ＣＣＲ８の過剰発現を特徴とする種々の疾患、例えばがんなどを処置するための適切な薬剤である。
本開示の一つの実施形態によれば、したがって、ＣＣＲ８に結合する能力がある抗体およびその抗原結合フラグメントが提供される。例示的な抗体としては、表１（例えば、１３７Ｄ１Ｈ１０、８８Ｄ２Ｃ６、８９Ｂ６Ｆ８、１３２Ｈ８Ｅ１０、１０Ｆ１１Ｂ２、４０Ｈ１０Ｆ３、５３Ｄ６Ａ９、３５２Ｈ１１Ｃ１１、３６２Ｇ７Ｄ３、３６２Ｈ１０Ａ３、３６７Ｄ１０Ｅ７、３７０Ｄ２Ｃ１０）に示すマウス抗体、ならびに表２～３のヒト化抗体があげられる。また、本明細書に記載されたものと同じＣＤＲを含む抗体も含まれる。いくつかの実施形態において、本開示の抗体およびフラグメントは、本明細書に例証されたものと同じエピトープに結合する抗体およびフラグメント、ならびにＣＣＲ８に対する結合について本明細書で開示されたものと競合する抗体およびフラグメントを含む。
本開示の一つの実施形態によれば、本明細書で開示されているＣＤＲ領域を有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体またはそのフラグメント、ならびにそれらの生物学的同等物が提供される。
一つの実施形態において、ＣＤＲは、表２Ｂおよび２Ｄに例示されているように、８８Ｄ２Ｃ６のものまたはそのヒト化した対応物である。一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号２２のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２３のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号２４のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５または２８のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含む。
一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号２２のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２３のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号２４のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含む。
一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５または２８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
また、いくつかの実施形態において、８８Ｄ２Ｃ６と同じＣＤＲを含むものまたはヒト化されたその対応物も提供される。いくつかの実施形態において、開示されている抗体およびフラグメントは、８８Ｄ２Ｃ６と同じエピトープに結合するものまたはヒト化されたその対応物、ならびにＣＣＲ８に対する結合について、それらのいずれかと競合するものを含む。
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号３（マウスまたはキメラ）および２９～３１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３（マウスまたはキメラ）および２９～３１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号２（マウスまたはキメラ）、３２～３４および４１～４３（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号（マウスまたはキメラ）２、３２～３４および４１～４３（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域は、配列番号３２～３４および４１～４３のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３２～３４および４１～４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３２～３４および４１～４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。
一つの実施形態において、ＣＤＲは、表３Ｂおよび３Ｄに例示されているように、１３７Ｄ１Ｈ１０のものまたはそのヒト化した対応物である。一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号３５のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号３６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５または２８のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含む。
一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号３５のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号３６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列、または１つ、２つ、もしくは３つの欠失、付加、置換、もしくはそれらの組み合わせを有するそれらのバリアントを含む。
一つの実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号２５または２８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、およびＣＤＲＬ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
また、いくつかの実施形態において、１３７Ｄ１Ｈ１０と同じＣＤＲを含むものまたはヒト化されたその対応物も提供される。いくつかの実施形態において、開示されている抗体およびフラグメントは、１３７Ｄ１Ｈ１０と同じエピトープに結合するものまたはヒト化されたその対応物、ならびにＣＣＲ８に対する結合について、それらのいずれかと競合するものを含む。
いくつかの実施形態において、前記重鎖可変領域は、配列番号１（マウスまたはキメラ）および３８～４０（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号３（マウスまたはキメラ）および２９～３１（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、前記軽鎖可変領域は、配列番号２（マウスまたはキメラ）、３２～３４および４１～４３（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号（マウスまたはキメラ）２、３２～３４および４１～４３（ヒト化）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３２～３４および４１～４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３２～３４および４１～４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３２～３４および４１～４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
これらのＣＤＲ領域（マウスにせよ、ヒト化にせよ、またはキメラにせよ）を含む抗体は、強力なＣＣＲ８結合および阻害活性を有した。実施例４に示すように、ＣＤＲ内のある特定の残基を改変して、その特性を維持または改善すること、または翻訳後修飾（ＰＴＭ）を有するそれらの潜在性を低減させることができる。このような修飾ＣＤＲは、親和性成熟または脱リスクＣＤＲと呼ばれ得る（例えば、配列番号２５）。
修飾ＣＤＲは、１、２、または３つのアミノ酸付加、欠失、および／または置換を有するものを含み得る。いくつかの実施形態において、この置換は、保存的置換であり得る。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において規定されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。よって、免疫グロブリンポリペプチドにおける非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えられる。別の実施形態において、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似するストリングで置き換えられ得る。
保存的アミノ酸置換の非限定的な例は、以下の表に示されており、ここで、類似性スコアが０またはそれより高いことは、２つのアミノ酸の間が保存的置換であることを示す。
Figure 2023546121000002
Figure 2023546121000003
また、当業者は、本明細書で開示されている抗体は、それらが由来する天然起源の結合ポリペプチドとアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも理解する。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、類似であり得、例えば、出発配列に対してある特定のパーセント同一性を有し、例えば、出発配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であり得る。
ある特定の実施形態において、抗体は、通常は抗体と関連しないアミノ酸配列、もしくは１つまたはそれを超える部分を含む。例示的な修飾は、以下により詳細に記載されている。例えば、本開示の抗体は、フレキシブルなリンカー配列を含み得、または機能的部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、または標識）を付加するように修飾され得る。
本開示の抗体、そのバリアント、または誘導体は、修飾された、すなわち、共有結合がその抗体のエピトープに対する結合を妨げないように、抗体に対して任意の種類の分子が共有結合することによって修飾された誘導体を含む。例えば、限定としてではないが、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、リン酸化、アミド化、知られている保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質に対する結合などによって修飾され得る。多数の化学的修飾のいずれも、知られている技術（それらに限定されないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝性合成などを含む）によって実施され得る。さらに、抗体は、１つまたはそれを超える非古典的アミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態において、抗体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節剤、医薬品、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。
抗体は、治療剤（放射性標識のような検出可能な標識を含んでいてもよい）、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療または診断剤、細胞傷害性薬剤（薬物または毒素であり得る）、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および当該技術分野において知られている他のこのような作用物質にコンジュゲートまたは融合され得る。
抗体は、化学発光化合物に対してカップリングすることによって、検出可能に標識され得る。化学発光タグ付け抗原結合ポリペプチドの存在は、次いで、化学反応の過程の間に生じる発光の存在を検出することによって判定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、テロマティックアクリジニウムエステル（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルである。
抗体は、また、１５２Ｅｕ、またはランタン系列の他の金属のような蛍光放射金属を使用して検出可能に標識し得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を使用して抗体に結合させ得る。種々の部分を抗体にコンジュゲートするための技術はよく知られている（例えば、Ａｒｎｏｎら、’’Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ’’，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、’’Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ’’，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（ｅｄｓ．）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、’’Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ’’，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；’’Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ’’，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（ｅｄｓ．）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、’’Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ’’，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））を参照のこと）。
二官能性分子および併用療法
ＣＣＲ８は、ケモカインであり、かつ、腫瘍抗原である。腫瘍抗原標的化分子として、ＣＣＲ８に対して特異的な抗体もしくは抗原結合フラグメントは、免疫細胞に対して特異的な第２の抗原結合フラグメント、または免疫チェックポイントに対して特異的な抗原結合フラグメントと組み合わされ、併用療法もしくは二重特異性抗体をもたらし得る。
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、貪食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞からなる群から選択される。標的化され得る免疫細胞上の分子としては、例えば、ＣＣＬ１、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、およびＣＤ６４があげられる。他の例としては、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３としても知られる）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られる）、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても知られる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、およびＣＤ４７があげられる。
免疫チェックポイント阻害剤として、ＣＣＲ８に対して特異的な抗体または抗原結合フラグメントは、腫瘍抗原に対して特異的な第２の抗原結合フラグメントと組み合わされ、二重特異性抗体をもたらし得る。「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞内で産生される抗原性の物質である。すなわち、腫瘍抗原は、宿主における免疫応答を引き起こす。腫瘍抗原は、腫瘍細胞の同定に有用であり、また、がん治療における使用のための有望な候補である。体内の正常なタンパク質は、抗原性ではない。しかしながら、ある特定のタンパク質は、腫瘍形成の間に産生されるか、または過剰発現され、よって、身体には「異物」に見える。これには、免疫系から十分に隔離された正常なタンパク質、通常は非常に少量産生されるタンパク質、通常は発生のある特定の段階にのみ生成されるタンパク質、または変異によって構造が変化したタンパク質が含まれ得る。
腫瘍抗原の存在量は当該技術分野において知られており、新たな腫瘍抗原は、スクリーニングによって容易に同定され得る。腫瘍抗原の非限定的な例としては、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ－７２、ＣＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン、αＶβ３、α５β１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰおよびテネイシンがあげられる。
いくつかの態様において、１価のユニットは、対応する非腫瘍細胞と比較して、腫瘍細胞上に過剰発現されているタンパク質に対して特異性を有する。「対応する非腫瘍細胞」は、本明細書で使用される場合、腫瘍細胞の起源と同じ細胞型である非腫瘍細胞を指す。このようなタンパク質は、必ずしも腫瘍抗原と異なるわけではないことが指摘される。非限定的な例としては、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）（これは、ほとんどの結腸癌、直腸癌、乳癌、肺癌、膵臓癌および消化管癌において過剰発現される）；ヘレグリン受容体（ＨＥＲ－２、ｎｅｕまたはｃ－ｅｒｂＢ－２）（これは、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、前立腺がんおよび子宮頸がんにおいてしばしば過剰発現される）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）（これは、乳、頭頚部、非小細胞肺および前立腺の固形腫瘍を含む様々な固形腫瘍において高発現される）；アシアロ糖タンパク質受容体；トランスフェリン受容体；セルピン酵素複合体受容体（これは、肝細胞上に発現される）；線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）（これは、膵管腺癌（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｄｕｃｔａｌ ａ ｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）細胞上に過剰発現される）；血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）（血管新生抑制遺伝子治療のための）；葉酸受容体（これは、粘液非産生性の卵巣がんの９０％において選択的に過剰発現される）；細胞表面グリコカリックス；炭水化物受容体；および多量体免疫グロブリン受容体（これは、呼吸上皮細胞への遺伝子送達に有用であり、また、嚢胞性線維症などの肺疾患の処置のために魅力的である）があげられる。
二重特異性抗体の異なるフォーマットも提供される。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１フラグメントおよび第２のフラグメントの各々は、それぞれ独立して、Ｆａｂフラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から選択される。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、Ｆｃフラグメントをさらに含む。
単に抗体または抗原結合フラグメントだけを含むものではない二官能性分子もまた提供される。腫瘍抗原標的化分子として、ＣＣＲ８に対して特異的な抗体または抗原結合フラグメント（例えば、本明細書に記載されているものなど）は、免疫サイトカインまたはリガンドと、必要に応じてペプチドリンカーによって、連結され得る。連結される免疫サイトカインまたはリガンドとしては、それらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴおよびＧＩＴＲＬがあげられる。このような二官能性分子は、免疫チェックポイント遮断効果を、腫瘍部位の局所的な免疫モジュレーションと組み合わせ得る。
抗体－薬物コンジュゲート
いくつかの実施形態において、抗体またはフラグメントは、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節剤、医薬品、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。
一つの実施形態において、本開示の抗体またはフラグメントは、薬物部分に共有結合で付着される。前記薬物部分は、抗体上のコンジュゲーションポイントと反応性の基であってもよく、または抗体上のコンジュゲーションポイントと反応性の基を含むように改変されてもよい。例えば、薬物部分は、（例えば、抗体のリジンのε－アミノ基またはＮ末端における）アルキル化、酸化された炭水化物の還元的アミノ化、ヒドロキシル基とカルボキシル基の間のエステル交換反応、アミノ基またはカルボキシル基におけるアミド化、およびチオールへのコンジュゲーションによって結合され得る。
いくつかの実施形態において、コンジュゲートされる薬物部分の数ｐは、一つの抗体分子につき、平均で１～８；１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、平均で２～８、２～７，２～６、２～５、２～４または２～３の範囲である。他の実施例において、ｐは、平均で１、２、３、４、５、６、７または８である。いくつかの実施形態において、ｐは、平均で約１～約２０、約１～約１０、約２～約１０、約２～約９、約１～約８、約１～約７、約１～約６、約１～約５、約１～約４、約１～約３、または約１～約２の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、約２～約８、約２～約７、約２～約６、約２～約５、約２～約４または約２～約３の範囲である。
例えば、タンパク質の化学的活性化によって遊離チオール基が形成された場合、そのタンパク質は、スルフヒドリル反応性試薬とコンジュゲートされ得る。一つの態様において、前記試薬は、遊離チオール基に実質的に特異的なものである。そのような試薬としては、例えば、マレイミド（ｍａｌｅｍｉｄｅ）、ハロアセトアミド（例えば、ヨウ素、臭素または塩素）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ベンジルハライド（例えば、ヨウ化物、臭化物または塩化物）、ビニルスルホンおよびピリジルチオがあげられる。
薬物は、抗体またはフラグメントと、リンカーによって連結され得る。適切なリンカーとしては、例えば、切断可能リンカーおよび非切断可能リンカーがあげられる。切断可能リンカーは、典型的には、細胞内条件において切断されやすい。適切な切断可能リンカーとしては、例えば、細胞内プロテアーゼ、例えばリソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼなどによって切断され得るペプチドリンカーがあげられる。例示的な実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）、フェニルアラニン－リジン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカー、またはマレイミドカプロニック－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｎｉｃ－ｖａｌｉｎｅ－ｃｉｔｒｕｌｉｎｅ－ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ）リンカーなどであり得る。別のリンカーは、スルホスクシンイミジル－４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓｍｃｃ）である。Ｓｕｌｆｏ－ｓｍｃｃコンジュゲーションは、スルフヒドリル（チオール、－ＳＨ）と反応するマレイミド基によって起こり、一方で、そのＳｕｌｆｏ－ＮＨＳエステルは、（リジンおよびタンパク質またはペプチドのＮ末端に見出されるような）第一級アミンに対して反応性である。さらに別のリンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）である。他の適切なリンカーとしては、ヒドラゾンリンカーなどの特定のｐＨまたはｐＨ範囲において加水分解され得るリンカーがあげられる。さらなる適切な切断可能リンカーとしては、ジスルフィドリンカーがあげられる。リンカー、例えば前記ｍｃリンカーなどは、薬物が放出されるために、抗体が細胞内で分解されなければならない程度に、抗体に共有結合され得る。
リンカーは、抗体に対する連結のための基を含み得る。例えば、リンカーは、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシルまたはスルフヒドリル反応性基（例えば、マレイミド（ｍａｌｅｍｉｄｅ）、ハロアセトアミド（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロエステル（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ハロメチルケトン（例えば、ヨード、ブロモまたはクロロ）、ベンジルハライド（例えば、ヨウ化物、臭化物または塩化物）、ビニルスルホンおよびピリジルチオ）を含み得る。
いくつかの実施形態において、薬物部分は、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤、免疫抑制剤、放射性同位体、毒素などである。コンジュゲートは、腫瘍細胞またはがん細胞の分裂増殖（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を阻害するため、腫瘍またはがん細胞におけるアポトーシスを引き起こすため、または患者におけるがんを処置するために使用され得る。コンジュゲートは、動物のがんの処置のための種々の状況において、適切に使用され得る。コンジュゲートは、薬物を腫瘍細胞またはがん細胞に送達するために使用され得る。理論に拘束されるものではないが、いくつかの実施形態において、コンジュゲートは、クローディン１８．２を発現するがん細胞と結合または会合し、また、コンジュゲートおよび／または薬物は、受容体介在性エンドサイトーシスによって腫瘍細胞またはがん細胞の内部に取り込まれ得る。
ひとたび細胞内に入ると、コンジュゲートの中の（例えば、リンカー中の）１つまたはそれを超える特定のペプチド配列が、１つまたはそれを超える腫瘍細胞またはがん細胞関連プロテアーゼによって加水分解的に切断され、その結果、薬物が放出される。放出された薬物は、次いで、細胞内を自由に移動し、そして、細胞傷害活性もしくは細胞増殖抑制活性、またはその他の活性を誘導する。いくつかの実施形態において、薬物は、腫瘍細胞またはがん細胞の外部で抗体から切断され、その後、その薬物は、細胞内に侵入するか、または細胞表面で作用する。
薬物部分またはペイロードの例は、ＤＭ１（マイタンシン、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－またはＮ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－マイタンシン）、ｍｃ－ＭＭＡＤ（６－マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＤまたはＮ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－メトキシ－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソ－３－［［（１Ｓ）－２－フェニル－１－（２－チアゾリル）エチル］アミノ］プロピル］－１－ピロリジニル］－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－（９Ｃｌ）－Ｌ－バリンアミド）、ｍｃ－ＭＭＡＦ（マレイミドカプロイル－モノメチルアウリスタチンＦまたはＮ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｌ－バリル－（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３－メトキシ－５－メチル－４－（メチルアミノ）ヘプタノイル－（αＲ，βＲ，２Ｓ）－β－メトキシ－α－メチル－２－ピロリジンプロパノイル－Ｌ－フェニルアラニン）およびｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥ（６－マレイミドカプロイル－ＶａｌｃＣｉｔ－（ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）－モノメチルアウリスタチンＥまたはＮ－［［［４－［［Ｎ－［６－（２，５－ジヒドロ－２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１－オキソヘキシル］－Ｌ－バリル－Ｎ５－（アミノカルボニル）－Ｌ－オルニチル］アミノ］フェニル］メトキシ］カルボニル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリル－Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－４－［（２Ｓ）－２－［（１Ｒ，２Ｒ）－３－［［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－２－フェニルエチル］アミノ］－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル］－１－ピロリジニル］－２－メトキシ－１－［（１Ｓ）－１－メチルプロピル］－４－オキソブチル］－Ｎ－メチル－Ｌ－バリンアミド）からなる群から選択される。ＤＭ１は、チューブリン阻害剤マイタンシンの誘導体であり、一方で、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥ、およびＭＭＡＦは、アウリスタチン誘導体である。いくつかの実施形態において、薬物部分は、ｍｃ－ＭＭＡＦおよびｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＡ－ＭＭＡＥからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、薬物部分は、マイタンシノイドまたはアウリスタチンである。
抗体またはフラグメントは、治療剤（放射性標識のような検出可能な標識を含んでいてもよい）、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療もしくは診断剤、細胞傷害性薬剤（薬物または毒素であり得る）、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および当該技術分野において知られている他のこのような作用物質にコンジュゲートまたは融合され得る。
抗体は、化学発光化合物に対してそれをカップリングすることによって、検出可能に標識され得る。化学発光タグ付け抗原結合ポリペプチドの存在は、次いで、化学反応の過程の間に生じる発光の存在を検出することによって決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルである。
抗体は、また、１５２Ｅｕ、またはランタン系列の他の金属のような蛍光放射金属を使用して検出可能に標識し得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を使用して抗体に結合させ得る。種々の部分を抗体にコンジュゲートするための技術はよく知られている（例えば、Ａｒｎｏｎら、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（ｅｄｓ．）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．６２３－５３（１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（ｅｄｓ．）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ．３０３－１６（１９８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（５２：１１９－５８（１９８２））を参照のこと）。
抗体をコードするポリヌクレオチド、および抗体の調製方法
本開示は、また、本開示の抗体、そのバリアントまたは誘導体をコードする、単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子も提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別々のポリヌクレオチド分子上に、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域全体をコードしていてもよい。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別々のポリヌクレオチド分子上に抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の部分をコードしていてもよい。
抗体を作製する方法は、当該技術分野においてよく知られており、また、本明細書に記載されている。ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域と定常領域は、両方とも、完全にヒトのものである。完全ヒト抗体は、当該技術分野において記載されている技術を使用して、および本明細書に記載されているようにして作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原曝露に応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内在的遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物に、抗原を投与することによって調製することができる。このような抗体を作製するために使用することができる例示的な技術は、米国特許第６，１５０，５８４号；第６，４５８，５９２号；第６，４２０，１４０号（これらは、参照によりその全体が援用される）に記載されている。
処置方法
本明細書に記載されているように、本開示の抗体、バリアント、または誘導体は、ある特定の処置および診断方法において使用され得る。
本開示は、また、本明細書に記載されている障害または状態の１つまたはそれより多くを処置するための、動物、哺乳動物、およびヒトなどの患者に本開示の抗体を投与することを含む、抗体ベースの治療にも向けられている。本開示の治療用化合物としては、それらに限定されないが、本開示の抗体（本明細書に記載されているそれらのバリアントおよび誘導体を含む）、および本開示の抗体をコードする核酸またはポリヌクレオチド（本明細書に記載されているそれらのバリアントおよび誘導体を含む）があげられる。
本開示の抗体は、また、がんを処置または阻害するために使用することもできる。いくつかの実施形態において、患者のがん細胞は、ＣＣＲ８を発現または過剰発現する。上記の通り、ＣＣＲ８は、腫瘍細胞、特に胃腫瘍、膵臓腫瘍、食道腫瘍、卵巣腫瘍、および肺腫瘍において過剰発現され得る。ＣＣＲ８の阻害は、前記腫瘍の処置に有用であることが示されている。
したがって、いくつかの実施形態において、それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法が提供される。この方法は、一つの実施形態において、有効量の本開示の抗体を患者に投与することを要する。いくつかの実施形態において、患者において、少なくとも１つのがん細胞（例えば、間質細胞）が、ＣＣＲ８を過剰発現する。
細胞治療（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療）もまた、本開示において提供される。本開示の抗ＣＣＲ８抗体と接触させた（または、代わりに、本開示の抗ＣＣＲ８抗体を発現するように操作した）適切な細胞が使用され得る。いくつかの実施形態において、抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）において提示される。そのような接触または操作をしたら、次いで、処置を必要とするがん患者に細胞が導入され得る。がん患者は、本明細書に開示されている任意の型のがんを有し得る。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、限定されないが、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。
いくつかの実施形態において、細胞は、そのがん患者自身から単離された。いくつかの実施形態において、細胞は、ドナーにより、または細胞バンクから提供された。細胞ががん患者から単離される場合、望まれない免疫反応が最小化され得る。
がんの非限定的な例としては、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、メラノーマ、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんがあげられる。いくつかの実施形態において、がんは、胃がん、膵臓がん、食道がん、卵巣がん、および肺がんの１つまたはそれを超えるものである。
細胞の生存期間の増加に関連する、本開示の抗体もしくはそのバリアント、または誘導体によって処置、予防、診断、および／または予後判定され得る、さらなる障害または状態としては、それらに限定されないが、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病を含む）を含む）、および慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、および固形腫瘍（それらに限定されないが、肉腫および癌（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、へパトーマ、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーム、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、メラノーマ、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫など）を含む）などの、悪性腫瘍および関連する障害の進行、および／または転移があげられる。
任意の特定の患者のための特定の投与および処置レジメンは、様々な因子（使用される特定の抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、一般的健康、性別、および食事、ならびに投与の時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、処置される特定の疾患の重症度を含む）に依存する。医療介護者によるこのような因子の判断は、当業者の範囲内である。量は、また、処置される個々の患者、投与経路、製剤の種類、使用される化合物の性質、疾患の重症度、および所望の効果にも依存する。使用される量は、当該技術分野においてよく知られている薬理学的および薬物動態学的原理によって決定され得る。
抗体、バリアントの投与方法としては、それらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路があげられる。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、任意の慣習的な経路、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を通した吸収によって投与され得、また、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。よって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含む医薬組成物は、経口で、直腸に、非経口で、大槽内に（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、腟内に、腹腔内に、局所に（粉末、軟膏、ドロップ、または経皮吸収パッチによって）、頬側に（ｂｕｃａｌｌｙ）に、または口腔もしくは鼻スプレーとして投与され得る。
用語「非経口」は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、ならびに関節内注射および注入を含む、投与モードを指す。
投与は、全身または局部であり得る。さらに、本開示の抗体を、任意の適切な経路（脳室内および髄腔内注射を含む）によって、中枢神経系内に導入することが望ましいことがあり得る；脳室内注射は、（例えば、レザバー（例えば、オマヤレザバー）に取り付けられた）脳室内カテーテルによって容易になり得る。肺投与もまた、（例えば、インへラーまたはネビュライザー、およびエアロゾル化剤を用いた製剤を使用することによって）採用することができる。
本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、処置を必要とする範囲に局部に投与することが望ましいことがあり得る；これは、例えば（そして限定としてではないが）、手術の間の局部注入によって、手術後の創傷被覆を用いた（例えば、組み合わせた）局所適用によって、注射によって、カテーテルによって、坐剤によって、またはインプラント（前記インプラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン質材料（シラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）のような膜、または繊維を含む）である）によって、実現され得る。好ましくは、本開示のタンパク質（抗体を含む）を投与する場合、タンパク質が吸収されない材料の使用には注意しなければならない。
炎症性、免疫性、または悪性の疾患、障害、または状態の処置、阻害、および予防において有効である本開示の抗体の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、最適な投与量範囲の確認を助けるために、必要に応じて採用され得る。製剤において採用されるべき正確な用量は、また、投与経路ならびに疾患、障害、または状態の重篤度に依存し、また、医師の判断および各患者の状況に従って決定すべきである。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導かれる用量反応曲線から推定され得る。
一般的な提案として、患者に投与される本開示の抗原結合ポリペプチドの投与量は、典型的には、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）、または１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）である。一般に、ヒト抗体は、外来性ポリペプチドに対する免疫応答のために、他の種に由来する抗体よりも、ヒトの体内で半減期が長い。よって、より低投与量のヒト抗体およびより低頻度の投与が可能になることが多い。さらに、修飾（例えば、脂質化など）による抗体の（例えば、脳の中への）取り込みおよび組織通過の増強によって、本開示の抗体の投与の投与量および頻度が低減され得る。
追加の実施形態において、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得るサイトカインとしては、それらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αがあげられる。
追加の実施形態において、本開示の組成物は、他の治療または予防レジメン（例えば、放射線治療など）と組み合わせて投与される。
診断方法
ＣＣＲ８の過剰発現は、ある特定の腫瘍サンプルにおいて観察され、ＣＣＲ８過剰発現細胞を有する患者は、本開示の抗ＣＣＲ８抗体による処置に対して応答性である可能性がある。したがって、本開示の抗体は、また、診断および予後判定目的のために使用され得る。
好ましくは細胞を含むサンプルは、患者（がん患者または診断を望む患者であり得る）から取得され得る。細胞は、患者からの腫瘍組織もしくは腫瘍塊、血液サンプル、尿サンプル、または任意のサンプルの細胞であり得る（ｂｅ ａ ｃｅｌｌ）。必要に応じてサンプルの前処理をしたら、サンプルは、本開示の抗体と共に、サンプル中に潜在的に存在するＣＣＲ８タンパク質と抗体の相互作用を可能にする条件下でインキュベートされ得る。サンプル中のＣＣＲ８タンパク質の存在を検出するために、抗ＣＣＲ８抗体を利用して、ＥＬＩＳＡなどの方法が使用され得る。
サンプル中のＣＣＲ８タンパク質の存在（必要に応じて、量または濃度と共に）は、患者が抗体による処置に適していることの指標として、または患者ががん処置に応答した（または応答しなかった）ことの指標として、がんの診断のために使用され得る。予後判定方法のために、検出は、がん処置を開始したら、処置の進展を示すために、ある特定のステージにおいて、１回、２回、またはそれを超える回数実施され得る。
組成物
本開示は、また、医薬組成物も提供する。このような組成物は、有効量の抗体、および許容され得るキャリアを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。
特定の実施形態において、用語「医薬的に許容され得る」は、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または米国薬局方もしくは動物、およびより具体的にはヒトにおいて使用するための一般的に認識されている薬局方に収載されていることを意味する。さらに、「医薬的に許容され得るキャリア」は、一般的には、非毒性の固体、半固体、もしくは液体フィラー、希釈剤、封入材料、または任意の種類の製剤化補助材料である。
用語「キャリア」は、それと共に医薬品が投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬品キャリアは、滅菌液体、例えば、水および油（石油、動物、植物、または合成起源のもの（例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）を含む）であり得る。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合、好ましいキャリアである。食塩溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた、特に注射用液剤のために、液体キャリアとして採用され得る。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどがあげられる。組成物は、必要であれば、また、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、または酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩のようなｐＨ緩衝剤も含み得る。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような浸透圧調節のための剤もまた想定される。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤・散剤（ｐｏｗｄｅｒ）、徐放性製剤などの形態を取り得る。組成物は、慣用の結合剤およびトリグリセリドのようなキャリアを用いる、坐剤として製剤化され得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準的なキャリアを含み得る。適切な医薬品キャリアの例が、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（参照により本明細書に援用される）に記載されている。このような組成物は、患者に対する適切な投与のための形態を提供するために適切な量のキャリアと共に、治療有効量の抗原結合ポリペプチドを、好ましくは精製された形態で含む。製剤は、投与モードに適しているべきである。非経口製剤（ｐａｒｅｎｔａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）は、ガラスまたはプラスチック製の、アンプル、ディスポーザブルシリンジ、または複数回投与バイアルに封入され得る。
ある実施形態において、組成物は、ヒトに対する静脈内投与に適合した医薬組成物として通例の手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の液剤である。必要な場合、組成物は、また、可溶化剤、および注射部位の痛みを緩和するためにリグノカインのような局所麻酔薬も含み得る。一般に、成分は、個別に供給されてもよく、単位剤形で一緒に混合して（例えば、活性薬剤の量を表示したアンプルまたはサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器に入った乾燥凍結乾燥粉末または無水濃縮物として）供給されてもよい。組成物が注入によって投与されるものである場合、滅菌医薬品グレードの水または生理食塩水を含むインフュージョンボトルで投薬され得る。組成物が注射によって投与されるものである場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
本開示の化合物は、中性形態または塩形態で製剤化され得る。医薬的に許容され得る塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどのアニオンと形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイなどに由来するものなどのカチオンと形成される塩を含む。
実施例１：ヒトＣＣＲ８に対するマウスモノクローナル抗体の生成
ヒトＣＣＲ８タンパク質を、異なる系統のマウスを免役するために使用し、それによってハイブリドーマを生成させた。ＣＣＲ８陽性バインダーを選択し、サブクローニングした。その後、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合および機能的スクリーニングを行い、最も高い結合親和性および最も強い機能的能力を有するリード抗体を同定した。
リードマウス抗体のＶＨ／ＶＬ配列を以下の表に示す。
Figure 2023546121000004
Figure 2023546121000005
 実施例２．Ｕ２ＯＳ細胞上のＣＣＲ８に対する結合
この実施例において、Ｕ２ＯＳ細胞上に発現したヒトＣＣＲ８タンパク質に対する結合における、抗体の活性を試験した。
上記の同定されたマウス抗体のいくつかのキメラ抗体（ヒトＩｇＧ１定常領域に融合させたもの）を、ｃＤＮＡから発現させた。この抗体を、ヒトＣＣＲ８を発現しているＵ２ＯＳ細胞とインキュベートした。試験した抗体の中で、８８Ｄ２Ｃ６および１３７Ｄ１Ｈ１０は、用量依存的な様式で、その他の抗体よりも著しく高い親和性を示した（図１）。
実施例３．ＡＤＣＣの測定
ＡＤＣＣの媒介における８８Ｄ２Ｃ６および１３７Ｄ１Ｈ１０の効力を、３７０Ｄ２Ｃ１０と共に（全て、Ｆｃ中にＡＤＣＣ活性化変異を有するヒトＩｇＧ１定常領域に融合させたもの）、ＣＣＲ８過剰発現ＣＨＯ Ｋ１細胞およびＵ２ＯＳ細胞を用いて測定した。これら３つの抗体は、全て、高いＡＤＣＣ活性を示した（図２）。
３つの抗体は、全て、強力なＡＤＣＣ活性を示した。しかしながら、それらの中でも、８８Ｄ２Ｃ６は、著しく高い効力を有していた（ＥＣ５０：ＣＨＯ細胞で０．０１７４３ｎＭ、およびＵ２ＯＳ細胞については０．１１０８）。
実施例４．マウスｍＡｂのヒト化
８８Ｄ２Ｃ６および３５２Ｈ１１Ｃ１１のマウス抗体可変領域遺伝子を、ヒト化ｍＡｂを作り出すために利用した。ｍＡｂのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列は、全体的に最もよくマッチするヒト生殖系Ｉｇ遺伝子配列を見出すために、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較した。次いで、マウス抗体のＣＤＲを、マッチしたヒト配列の中にグラフトした。ヒト化抗体を産生させるために、ｃＤＮＡを合成し、使用した。次いで、マウス抗体由来のある特定の復帰変異を、ヒト化抗体に導入して復帰させた。ある特定のアミノ酸は、翻訳後修飾の機会が減少するような変異を受けた。
ヒト化抗体のアミノ酸配列を以下に示す。
ヒト化配列
Ａ．８８Ｄ２Ｃ６
Figure 2023546121000006
Figure 2023546121000007
Figure 2023546121000008
Figure 2023546121000009
Figure 2023546121000010
 Ｂ．１３７Ｄ１Ｈ１０
Figure 2023546121000011
Figure 2023546121000012
Figure 2023546121000013
Figure 2023546121000014
Figure 2023546121000015
 実施例５．ヒト化抗体の試験
この実施例において、いくつかのヒト化抗体の、ＣＣＲ８に対する結合親和性、およびＡＤＣＣを誘導する能力について試験した。
実験手順は、実施例２～３と同様である。図３は、８８Ｄ２Ｃ６のヒト化抗体の親和性を示す。明らかに、それらの抗体の全てが、高い親和性を有していた（表４も参照のこと）。
Figure 2023546121000016
Figure 2023546121000017
図４は、１３７Ｄ１Ｈ１０のヒト化抗体の親和性を示す（データは表５）。
Figure 2023546121000018
Figure 2023546121000019
ＡＤＣＣに関して（図５）、驚くべきことに、全てのヒト化抗体が、キメラの対応物よりも、はるかに高い（約５～１０倍）ＡＤＣＣ誘導活性を示した。
実施例６．細胞ベースの抗体結合
この実施例において、細胞ベースの結合について、１３７－Ｈ３Ｌ２（ＬＭ－１０８）を参照抗体と比較した。
ヒトＣＣＲ８過剰発現細胞（ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＣＣＲ８）に対する、ＬＭ－１０８および参照Ａｂ（ＷＯ２０２０１３８４８９に従って合成した）の細胞ベースの結合を、フローサイトメトリーを使用して評価した。ヒトＣＣＲ８過剰発現ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＣＣＲ８）および親であるＨＥＫ２９３細胞を、用量設定したＬＭ－１０８、参照Ａｂおよびそのアイソタイプ対照（２００ｎＭから、４倍希釈、１２点）と、４℃で６０分間インキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳバッファーで２回洗浄し、次いで、蛍光標識二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｊａｃｋｓｏｎ、１０９－６０５－０９８）で、４℃で６０分間染色した。細胞を、２回洗浄した後、フローサイトメトリーで分析した。
ＬＭ－１０８と参照Ａｂは、両方とも、用量依存的な様式で、ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＣＣＲ８細胞に効率的に結合し、ＥＣ５０は、それぞれ１．０３ｎＭと０．９９ｎＭであった（図６ａおよび表６Ａ）。ＬＭ－１０８については非特異的な結合は観察されなかったが、参照Ａｂは、親であるＨＥＫ２９３細胞に対して、わずかな非特異的な結合を示した（図６ｂおよび表６Ｂ）。
Figure 2023546121000020
Figure 2023546121000021
ＣＣＲ８発現が高レベルである細胞上へのＬＭ－１０８の細胞ベースの結合を、フローサイトメトリーを使用して評価した。使用した細胞は、Ｕ２ＯＳ（Ｕ２ＯＳ／Ｈ＿ＣＣＲ８）であった。図７および表７に示すように、ＬＭ－１０８は、用量依存的な様式で、Ｕ２ＯＳ／Ｈ＿ＣＣＲ８細胞に対して効率的に結合することができ、ＥＣ５０は０．２５ｎＭであった。
Figure 2023546121000022
ＣＣＲ８を低レベルで発現する細胞上へのＬＭ－１０８の細胞ベースの結合もまた、フローサイトメトリーを使用して評価した。使用した細胞は、Ｊｕｒｋａｔ改変細胞（Ｊｕｒｋａｔ／Ｈ＿ＣＣＲ８）であった。図８および表８に示すように、ＬＭ－１０８は、用量依存的な様式で、Ｊｕｒｋａｔ／Ｈ＿ＣＣＲ８細胞に対して効率的に結合することができ、ＥＣ５０は０．２１ｎＭであった。
Figure 2023546121000023
 実施例７．ＡＤＣＣレポーター遺伝子アッセイ
この実施例は、異なるＣＣＲ８発現細胞を標的とするＡＤＣＣレポーター遺伝子アッセイの結果を示す。
Ｕ２ＯＳ／Ｈ＿ＣＣＲ８を標的とするＡＤＣＣレポーター遺伝子アッセイ
エフェクター細胞としてＣＤ１６ａ（１５８ｖ）発現Ｊｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞を使用して、ＬＭ－１０８のＡＤＣＣ活性を、レポーター遺伝子アッセイによって評価した。ヒトＣＣＲ８過剰発現Ｕ２ＯＳ細胞を標的細胞として使用した。Ｕ２ＯＳ／Ｈ＿ＣＣＲ８細胞を、９６ウェルプレート中に、終夜、１×１０４細胞／ウェルの密度で播種し、次いで、各ウェル１．５×１０５個のエフェクター細胞、ならびに用量設定したＬＭ－１０８およびアイソタイプ対照（１０μｇ／ｍｌから最終濃度まで、５倍希釈、および１０点）と共培養した。３７℃で６時間インキュベートした後、発光検出のために、Ｏｎｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えた。
結果を図９に示す。Ｕ２ＯＳ／Ｈ＿ＣＣＲ８細胞を標的とするＪｕｒｋａｔ／ＣＤ１６ａ／ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞によって、ＬＭ－１０８は、強力なＡＤＣＣ効果（ＥＣ５０＝０．００６０５ｎＭ）を示した。
Ｊｕｒｋａｔ／Ｈ＿ＣＣＲ８を標的とするＡＤＣＣレポーター遺伝子アッセイ
エフェクター細胞としてＣＤ１６ａ（１５８ｖ）発現Ｊｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴ－ｌｕｃレポーター細胞を使用して、ＬＭ－１０８のＡＤＣＣ活性を、レポーター遺伝子アッセイによって評価した。ヒトＣＣＲ８低発現Ｊｕｒｋａｔ細胞は、腫瘍関連Ｔｒｅｇ上の発現レベルを模倣するために、標的細胞として生成した。
エフェクター細胞（Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞）と標的細胞（Ｊｕｒｋａｔ／Ｈ＿ＣＣＲ８）を、３：１の比率で、用量設定したＬＭ－１０８およびアイソタイプ対照（２００ｎＭから最終濃度、５倍希釈、１１点）と混合した。３７℃で６時間インキュベートした後、発光検出のために、Ｏｎｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えた。図１０に示すように、ＬＭ－１０８は、用量依存的なＡＤＣＣ効果を有しており、ＥＣ５０＝０．１４ｎＭであった。
初代ヒトＰＢＭＣを用いた、ヒトＣＣＲ８過剰発現ＨＥＫ２９３（ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＣＣＲ８）およびＨＥＫ２９３細胞に対するＬＭ－１０８のＡＤＣＣ効果
エフェクター細胞（ｈＰＢＭＣ）と標的細胞（ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＣＣＲ８またはＨＥＫ２９３）を、５０：１の比率で、用量設定したＬＭ－１０８およびアイソタイプ対照（１０ｎＭから最終濃度、７倍希釈、１２点）と混合した。３７℃で６時間インキュベートした後、各ウェルからの５０μｌの上清を、細胞傷害性検出キット（Ｒｏｃｈｅ、０４７４４９３４００１）によって分析した。
図１１Ａに示すように、ＬＭ－１０８は、用量依存的な様式で、ＣＣＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞に対する特異的かつ強力なＡＤＣＣ効果を示し、ＥＣ５０は０．００２ｎＭであった（図６ａ）。親であるＨＥＫ２９３細胞について、非特異的な殺傷は観察されなかった（図１１Ｂ）。
実施例８．抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）の試験
この実施例において、ヒトＣＣＲ８過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対するＬＭ－１０８の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）効果を、単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）を用いて、ＦＡＣＳによって評価した。
エフェクター細胞であるＭＤＭを、ヒトＰＢＭＣから単離した単球から、１００ｎｇ／ｍＬのヒトＭ－ＣＳＦ存在下で、７日間誘導した。標的細胞は、ＣＦＳＥで標識されたＣＨＯ－Ｋ１（陰性対照）およびヒトＣＣＲ８を過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞であった。前記エフェクター細胞、ＣＦＳＥ標識標的細胞、および用量設定した試験抗体ＬＭ－１０８またはそのアイソタイプ対照を、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーター内で、２時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳバッファー（１×ＤＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、次いで、ＡＰＣコンジュゲートヒトＣＤ１４抗体で染色して、マクロファージを同定した。ＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した後、サンプルをフローサイトメトリーによって分析した。ファゴサイトーシスインデックスを、全ＣＤ１４＋陽性細胞中のＣＤ１４－ＡＰＣ＋／ＣＦＳＥ＋ダブルポジティブ細胞の割合として決定した。
図１２Ａ～Ｂに示すように、ＬＭ－１０８は、ヒトＣＣＲ８過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞に対して特異的かつ用量依存的にファゴサイトーシスを生じさせたが、対照細胞に対しては生じさせなかった。
単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）を用いたＬＭ－１０８のＡＤＣＰもまた、Ｏｐｅｒｅｔｔａによって測定した。エフェクター細胞であるＭＤＭを、ヒトＰＢＭＣから単離した単球から、１００ｎｇ／ｍＬのヒトＭ－ＣＳＦ存在下で、６日間誘導した。次いで、エフェクター細胞を、黒色透明底９６ウェルプレートの中に２×１０４細胞／ウェルで播種し、接着させるために、さらに２日間培養した。標的細胞は、Ｊｕｒｋａｔ（陰性対照）およびヒトＣＣＲ８過剰発現Ｊｕｒｋａｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ／Ｈ＿ＣＣＲ８）であった。ＣＦＳＥ標識標的細胞および試験抗体ＬＭ－１０８またはそのアイソタイプ対照を、マクロファージと共にプレートに加え、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーター内で、２時間インキュベートした。エフェクター細胞：標的細胞比は１：２である。細胞を洗浄し、ＡＰＣコンジュゲートヒトＣＤ１４抗体で染色して、マクロファージを同定した。２回洗浄した後、４％パラホルムアルデヒ（ＰＦＡ）希釈液を使用して細胞を固定し、Ｏｐｅｒｅｔｔａによって撮影するまで、４℃フリーザー内で暗所保存した。
図１３に示すように、ＬＭ－１０８は、ヒトＣＣＲ８過剰発現Ｊｕｒｋａｔ細胞に対するＡＤＣＰを誘導したが、そのアイソタイプ対照は誘導しなかった。ＬＭ－１０８とアイソタイプ対照のどちらも、Ｊｕｒｋａｔ細胞に対する明確なファゴサイトーシスを誘導しなかった。
実施例９．ｉｎ ｖｉｖｏ有効性
この実施例において、ＬＭ－１０８またはそのマウス代替物のｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究を行った。
第１の実験を、ＣＴ２６シンジェニックモデルに対して、ＬＭ－１０８の代替抗体であるＬＭ－１０８ｍを使用して行った。この研究において、各マウスは、腫瘍を生じさせるために、右腋窩（側方）に、０．１ｍｌのＰＢＳ中のＣＴ２６腫瘍細胞（５×１０５）の皮下接種を受けた。このマウスは、細胞接種後３日目にランダムに４つの群（ｎ＝７）にグループ分けした後、処置を開始した。ＰＢＳ群はビヒクルとし、ＬＭ－１０８ｍおよびｍＰＤ－１抗体を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で、単剤として、または組み合わせて、０日目、３日目、７日目、１０日目、１４日目および１７日目に腹腔内（ｉｎｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）（ｉ．ｐ．）を介して投与した。実験は、対照群の平均腫瘍体積が２０００ｍｍ３超に達したため、１８日目に終了した。
腫瘍サイズは、毎週３回、ノギスを使用して２次元で測定し、体積は、式Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａおよびｂは、それぞれ、腫瘍の長径および短径である）を使用して、立方ミリメートル（ｍｍ３）で表した。次いで、この腫瘍サイズを、Ｔ／Ｃ（％）値を算出するために使用した。Ｔ／Ｃ（％）は、式Ｔ／Ｃ％＝（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）×１００（Ｔｉは、所与の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は、処置の最初の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、Ｔｉと同じ日におけるビヒクル対照群の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は、処置の最初の日におけるビヒクル群の平均腫瘍体積である）を使用して算出した。ＴＧＩは、各群について、式ＴＧＩ（％）＝［１００－Ｔ／Ｃ］を使用して算出した。
図１４は、ＬＭ－１０８ｍおよび抗ｍＰＤ－１ Ａｂを投与した後の、ＣＴ２６腫瘍担持Ｂａｌｂ／ｃマウスの腫瘍成長曲線を示す。単剤としてのＬＭ－１０８ｍ、またはｍＰＤ－１抗体と組み合わせたＬＭ－１０８ｍは、強い抗腫瘍活性を示した（表９）。データポイントは、群（ｎ＝７）の平均を示し、エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。ｐ値は、ＰＢＳを使用したビヒクル対照と比較して、腫瘍サイズに基づいて、ｔ検定によって算出した。
Figure 2023546121000024
第２の実験では、ＢＩＯＣＹＴＯＧＥＮから購入したヒトＣＣＲ８ ｋｉマウスを使用した。各ｈＣＣＲ８ ｋｉマウスは、腫瘍を生じさせるために、右腋窩（側方）に、０．１ｍｌのＰＢＳ中のＭＣ３８腫瘍細胞（１×１０６）の皮下接種を受けた。このマウスは、細胞接種後３日目にランダムにグループ分けした後、有効性研究のために処置を開始した。ＬＭ－１０８を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で、０日目、３日目、７日目、１０日目に腹腔内（ｉｎｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）（ｉ．ｐ．）を介して投与した。実験は、対照群の腫瘍体積が２０００ｍｍ３に達したときに終了した。
腫瘍サイズは、毎週３回、ノギスを使用して２次元で測定し、体積は、式Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａおよびｂは、それぞれ、腫瘍の長径および短径である）を使用して、立方ミリメートル（ｍｍ３）で表した。次いで、この腫瘍体積を、Ｔ／Ｃ（％）値を算出するために使用した。Ｔ／Ｃ（％）は、式Ｔ／Ｃ％＝（Ｔｉ－Ｔ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）×１００（Ｔｉは、所与の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は、処置の最初の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、Ｔｉと同じ日におけるビヒクル対照群の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は、処置の最初の日におけるビヒクル群の平均腫瘍体積である）を使用して算出した。ＴＧＩは、各群について、式ＴＧＩ（％）＝［１００－Ｔ／Ｃ］を使用して算出した。データポイントは、群（ｎ＝８）の平均を示し、エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。ｐ値は、ビヒクル対照と比較して、腫瘍サイズに基づいて、ｔ検定によって算出した。
図１５は、ＬＭ－１０８を投与した後のＭＣ３８腫瘍担持マウスの腫瘍成長曲線を示し、そのデータを表１０にまとめる。ＬＭ－１０８は、強力な腫瘍抑制効果を示した。
Figure 2023546121000025
 実施例１０．細胞傷害性の評価
この実施例において、ヒトＣＣＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞に対する、抗体－薬物コンジュゲートであるＬＭ－１０８－ｖｃ－ＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）の細胞傷害性を評価した。
ＬＭ－１０８をＡＤＣ発生のために使用できるかどうかを評価するために、ＭＭＡＥをコンジュゲートしたＬＭ－１０８の細胞傷害性を、ヒトＣＣＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞との共培養、およびＬＭ－１０８－ｖｃ－ＭＭＡＥの用量設定したＡＤＣによって評価した。
ＨＥＫ２９３／Ｈ＿ＣＣＲ８細胞を、９６ウェルプレート中に、終夜、１．５×１０４細胞／ウェルの密度で播種し、次いで、用量設定したＬＭ－１０８－ｖｃ－ＭＭＡＥ（１００ｎｍから最終濃度まで、３倍希釈、９点）と共培養した。３７℃で９６時間インキュベートした後、細胞生存率評価のためにＣｅｌｌ－Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えた。
図１６に示すように、ＭＭＡＥをコンジュゲートしたＬＭ－１０８は、ヒトＣＣＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞に対して、強力な細胞傷害性（ＩＣ５０＝０．５２８５ｎＭ）を有していた。
＊ ＊ ＊
本開示は、範囲において、記載されている特定の実施形態（それらは、本開示の個別の態様の１つの例証であることが意図されている）によって限定されるものではなく、機能的に同等の任意の組成物および方法は、本開示の範囲内である。本開示の趣旨および範囲を逸脱することなく、本開示の方法および組成物に種々の改変および変形を行い得ることは、当業者には明白である。よって、本開示の改変および変形が、添付の特許請求の範囲またはその均等物の範囲内であることを条件として、本開示は、そのような改変および変形を包含することが意図されている。
本明細書において言及された全ての刊行物および特許出願は、個別の刊行物または特許出願が、それぞれ具体的かつ個別に参照により援用されるものと示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用される。

Claims (17)

  1. ヒトヒトケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、前記抗体またはそのフラグメントが、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域軽鎖を含み、ここで
    （ａ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２５または２８のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、および
    前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む；あるいは
    （ｂ）前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２５または２８のアミノ酸配列を含み、
    前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、および
    前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、
    抗体またはそのフラグメント。
  2. 前記ＣＤＲＨ１が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３が、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
  3. 前記重鎖可変領域が、配列番号３８～４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域が、配列番号３２～３４および４１～４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。
  4. 前記重鎖可変領域が、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、および前記軽鎖可変領域が、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。
  5. 前記ＣＤＲＨ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ２が、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＨ３が、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ１が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤＲＬ２が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、および前記ＣＤＲＬ３が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
    抗体またはそのフラグメント。
  6. 前記重鎖可変領域が、配列番号２９～３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号３２～３４および４１～４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
  7. 前記重鎖可変領域が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
  8. ヒト化される、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント。
  9. ヒトケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して結合特異性を有し、かつ請求項１に記載の抗体またはそのフラグメントと同じ前記ＣＣＲ８タンパク質上のエピトープに結合するか、または前記ＣＣＲ８タンパク質に対する結合について、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメントと競合する、抗体またはそのフラグメント。
  10. 抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することができる、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはフラグメント。
  11. 脱フコシル化されていない、請求項１０に記載の抗体またはフラグメント。
  12. 第２の標的タンパク質に対する結合特異性をさらに有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント。
  13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント、および医薬的に許容され得るキャリアを含む、組成物。
  14. 腫瘍抗原に対する特異性を有する二次抗体をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
  15. がんを処置することを必要とする患者においてがんを処置する方法であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む、方法。
  16. がんを処置するための医薬品を調製するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
  17. 前記がんが、膀胱がん、肝臓がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、白血病、リンパ腫、膵臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、乳がん、尿道がん、頭頸部がん、胃腸がん、胃がん、食道がん、卵巣がん、腎臓がん、メラノーマ、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法または請求項１６に記載の使用。
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