JP2023538524A - スプライシングを調節する組成物 - Google Patents

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ルーカス，ブライアン
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Abstract

遺伝子によってコードされるプレｍＲＮＡなどのｍＲＮＡのスプライシングを調節する小分子スプライシング調節因子化合物、並びにスプライシングを調節し、かつ疾患及び状態を治療するための小分子スプライシング調節因子化合物の使用方法が本明細書に記載される。【選択図】なし

Description

[0001]
本願は、２０２０年８月５日に出願された米国仮出願第６３／０６１，７４２号の利益を主張し、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
[0002] ヒトゲノム中のタンパク質コード遺伝子の大半は、イントロン（非コード領域）によって分離される複数のエクソン（コード領域）で構成されている。遺伝子発現により、単一のメッセンジャーＲＮＡ前駆体（プレｍＲＮＡ）が生じる。その後、イントロン配列がスプライシングと呼ばれるプロセスによってプレｍＲＮＡから除去され、結果として成熟メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）が生じる。エクソンの様々な組合せを包含することにより、選択的スプライシングが別個のタンパク質アイソフォームをコードする複数のｍＲＮＡを生じさせる。スプライシングは、複数のタンパク質及びリボ核タンパク質の細胞内複合体であるスプライセオソームが触媒する。
[0003] ｍＲＮＡ発現を誘導して制御する現在の治療的アプローチは、遺伝子療法、ゲノム編集、又は広範なオリゴヌクレオチド技術（アンチセンス、ＲＮＡｉなど）などの方法を必要とする。遺伝子治療及びゲノム編集は、ＤＮＡコードに影響を及ぼし、それにより、ｍＲＮＡ発現を変化させることによって、ｍＲＮＡの転写の上流で作用する。オリゴヌクレオチドは、基準塩基／塩基ハイブリダイゼーションによりＲＮＡの作用を調節する。このアプローチの魅力は、オリゴヌクレオチドの基本的なファーマコフォアの設計にあり、これは、標的配列対象との既知の塩基対合によって直接的な様式で規定することができる。これらの治療法は各々、実質的な技術的、臨床的、及び制御上の課題に晒されている。治療剤としてのオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ）のいくつかの制限としては、好ましくない薬物動態、経口バイオアベイラビリティの欠如、及び血液脳関門透過の欠如が挙げられ、後者は、疾患（例えば、神経疾患、脳がん）の治療用の非経口薬剤の投与後の脳又は脊髄への送達を妨げる。加えて、オリゴヌクレオチドは、脂質ナノ粒子などの複雑な送達系なしでは、固形腫瘍に効果的に取り込まれない。さらに、細胞及び組織に取り込まれたオリゴヌクレオチドの大半が、非機能的区画（例えば、エンドソーム）に留まり、標的が位置するサイトゾル及び／又は核へ接近しない。
[0004] 加えて、ある標的に対するアニーリングのために、オリゴヌクレオチド療法では、その標的の相補的塩基対への接近を必要とする。このアプローチでは、プレｍＲＮＡ配列が細胞内の直鎖状ＲＮＡとして存在すると仮定する。しかしながら、プレｍＲＮＡが直鎖状であることは稀であり、複雑な２次構造及び３次構造を有する。さらに、シス作用エレメント（例えば、タンパク質結合エレメント）及びトランス作用因子（例えば、スプライシング複合体構成成分）は、さらなる２次元的及び３次元的な複雑性を生じさせる（例えば、プレｍＲＮＡへの結合によって）という可能性がある。これらの特徴は、オリゴヌクレオチド療法に対する効力及び有効性の制限である可能性がある。
[0005] 本明細書に記載の新規の小分子スプライシング調節因子（ＳＭＳＭ）は、上記の制限にも、オリゴヌクレオチド療法を大いに制限する構造的及び立体障害にも（例えば、プレｍＲＮＡ標的へのハイブリダイゼーションを遮断することによって）、晒されることがない。小分子は、ＤＮＡの複製、転写、及び翻訳を含む多くの細胞プロセスの機序、制御、及び機能を明らかにするのに不可欠とされてきた。いくつかの最近の報告がスプライシングの小分子エフェクターに関するスクリーニングについて説明しているが、わずかな数の構成的スプライシング調節因子又は選択的スプライシング調節因子しか特定されておらず、小分子阻害剤の多くは特異性を欠くか、選択性を欠くか、効力を欠くか、毒性を呈するか、又は経口利用可能でない。小分子調節因子を用いてＲＮＡトランスクリプトームを標的とすることは、様々なＲＮＡ媒介性疾患を治療するための未開発の治療的アプローチを意味する。したがって、治療剤として有用な小分子ＲＮＡ調節因子の開発が依然として要望されている。スプライシングプロセス又はスプライシング依存性プロセスの新規の調節因子が当技術分野で要望されている。この要望を満たす小分子スプライシング調節因子及びその使用が本明細書に提供される。
[0006] １態様では、本明細書において、式（Ｉ）の化合物：
式中、Ｑは、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ７アルキレン、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ７ヘテロアルキレンであり、Ｘは水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルであり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、又はＣＨ３であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立して水素又はハロゲンであり、Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４はそれぞれ独立してＮ、－ＮＲＹ１－、－Ｏ－、－Ｓ－、又はＣＲＡ１であり、
はそれぞれ独立して単結合又は２重結合であり、ＲＡ１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、＝Ｏ、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、またＲＹ１はそれぞれ独立して水素又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである、当該化合物、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは薬学的に許容可能な溶媒和化合物、を記載する。
[0007] また本明細書において、本明細書に開示する化合物又はその薬学的に許容可能な塩若しくは薬学的に許容可能な溶媒和化合物と、薬学的に許容可能な賦形剤又は担体とを含む医薬組成物も提供する。
[0008] また本明細書において、スプライシングを調節する方法であって、本明細書に開示の化合物を細胞と接触させることを含み、該化合物が、ｍＲＮＡをコードするプレｍＲＮＡのスプライス部位配列においてのスプライシングを調節し、該ｍＲＮＡが標的タンパク質又は機能性ＲＮＡをコードするものである方法も提供する。
[0009] また本明細書において、疾患又は状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に開示の化合物又はその薬学的に許容可能な塩若しくは薬学的に許容可能な溶媒和化合物を投与することを含む方法も提供する。
[0010] また本明細書において、状態又は疾患の治療のための医薬の製造における、本明細書に開示の化合物又はその薬学的に許容可能な塩若しくは薬学的に許容可能な溶媒和化合物の使用も提供する。
参照による組み込み
[0011] 本明細書で述べられる全ての刊行物、特許、及び特許出願は、個々の刊行物、特許、又は特許出願が各々、参照により組み込むように具体的かつ個別に示した場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
[0012] 本明細書のある特定の詳細は、様々な実施形態の完全な理解を提供するために記載される。しかしながら、当業者であれば、本開示がこれらの詳細なくとも実施され得ることを理解するであろう。他の事例では、周知の構造は、実施形態の説明を不必要に不明瞭にするのを避けるために詳細には示されておらず、説明されていない。
[0013] 別途規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の方法及び材料が本開示の実施又は試験に使用され得るが、好適な方法及び材料を以下に記載する。
定義
[0014] 「この開示の化合物」、「本開示の化合物」、「小分子立体調節因子」、「小分子スプライシング調節因子」、「立体調節因子」、「スプライシング調節因子」、「スプライシングを改変する化合物」及び「スプライシングを改変している化合物」、「ＳＭＳＭ」、又は「標的ＲＮＡに結合する小分子」という用語は、本明細書で区別なく使用されて、本明細書に開示される化合物、並びにその立体異性体、互変異性体、溶媒和化合物、及び塩（例えば、薬学的に許容可能な塩）を指す。「この開示の化合物」、「本開示の化合物」、「小分子立体調節因子」、「小分子スプライシング調節因子」、「立体調節因子」、「スプライシング調節因子」、「スプライシングを改変する化合物」及び「スプライシングを改変している化合物」、「ＳＭＳＭ」、又は「標的ＲＮＡに結合する小分子」という用語は、細胞構成成分（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、タンパク質、ＲＮＰ、ｓｎＲＮＡ、炭水化物、脂質、補因子、栄養素、及び／又は代謝物）に結合して、かつ例えばプレｍＲＮＡである標的ポリヌクレオチドのスプライシングを調節する小分子を意味する。例えば、ＳＭＳＭは、標的ポリヌクレオチドに、例えば、変異の、非変異の、突出した（bulged）、及び／又は異常なスプライス部位を有するＲＮＡ（例えば、プレｍＲＮＡ）に直接又は間接的に結合することができ、結果として標的ポリヌクレオチドのスプライシングの調節をもたらす。例えば、ＳＭＳＭは、例えばスプライセオソームタンパク質又はリボ核タンパク質（ribonuclear protein）であるタンパク質に直接又は間接的に結合することができ、結果としてタンパク質の立体調節及び標的ＲＮＡのスプライシングの調節をもたらす。例えば、ＳＭＳＭは、例えばスプライセオソームタンパク質又はｓｎＲＮＡであるスプライセオソーム構成成分に直接又は間接的に結合することができ、結果としてスプライセオソームタンパク質又はｓｎＲＮＡの立体調節及び標的ポリヌクレオチドのスプライシングの調節をもたらす。これらの用語は、オリゴヌクレオチドからなる化合物を明確に除外する。これらの用語は、標的ＲＮＡの１以上の２次構造エレメント又は３次構造エレメントに結合し得る小分子化合物を含む。これらの部位には、ＲＮＡ３本鎖、３ＷＪ、４ＷＪ、平行Ｙ接合部、ヘアピン、バルジループ、シュードノット、内部ループ、及び他のより高次のＲＮＡ構造モチーフが含まれる。
[0015] 本明細書で使用される「ＲＮＡ」（リボ核酸）という用語は、天然に存在するオリゴリボヌクレオチド又は合成オリゴリボヌクレオチドを意味し、これは源（例えばこのＲＮＡが、ヒト、動物、植物、ウイルス、若しくは細菌によって産生されてもよく、又は合成由来であってもよい）、生物学的背景（例えばこのＲＮＡが、核内にあってもよく、血液中を循環していてもよく、インビトロ、細胞溶解物中にあっても、又は単離された若しくは純粋な形態であってもよい）、又は物理的形態（例えばこのＲＮＡが、１本鎖、２本鎖、又は３本鎖形態（ＲＮＡ－ＤＮＡハイブリッドを含む）であり得るか、エピジェネティックな修飾、天然の転写後修飾、人工的な修飾（例えば、化学修飾若しくはインビトロ修飾によって得られるもの）、若しくは他の修飾を含み得るか、又は例えば金属イオン、小分子、シャペロンなどのタンパク質、若しくは補因子に結合し得るか、又は例えば４本鎖、ヘアピン、３本鎖、３方向接合部（３ＷＪ）、４方向接合部（４ＷＪ）、平行Ｙ接合部、ヘアピン、バルジループ、シュードノット、及び内部ループなどの任意の天然若しくは非天然の２次構造若しくは３次構造をはじめとする、変性した、部分的に変性した、若しくは折り畳まれた状態であってもよく、またＲＮＡによって採用される任意の一過性形態又は構造であり得る）、に依存しないものである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオチド長が、２０、２２、５０、７５、又は１００以上である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオチド長が、２５０以上である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオチド長が、３５０、４５０、５００、６００、７５０、又は１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、７，５００、１０，０００、１５，０００、２５，０００、５０，０００又はそれ以上である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ヌクレオチド長が、２５０～１，０００である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、プレＲＮＡ、プレｍｉＲＮＡ、又は転写物前駆体である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、リボスイッチ、ｌｎｃＲＮＡ、ｌｉｎｃＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｓｃａＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、ｃｅＲＮＡ、偽遺伝子、ウイルスＲＮＡ、真菌性ＲＮＡ、寄生虫性ＲＮＡ、又は細菌性ＲＮＡである。
[0016] 本明細書における「立体改変」、「立体修飾」、又は「立体調節」とは、互いに対する化学的部分の空間的配向上の変化を指す。当業者であれば、立体障害、立体遮蔽、立体誘引、鎖交差、立体反発、共鳴の立体阻害、及びプロトン化の立体阻害を含むがこれらに限定されない立体的機構を認識するであろう。
[0017] 本明細書における構造中の炭素、酸素、硫黄、又は窒素原子上に現れる空白の原子価はいずれも、別途示されない限り、水素が存在していることを示す。
[0018] 本明細書に記載の定義は、問題となっている用語が単独で現れるか組み合わせて現れるかにかかわらず適用される。本明細書に記載の定義は、例えば「ヘテロシクロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクロアルキル」、又は「アルコキシアルキル」など、化学的に関連性のある結合を形成するために付加され得ることが企図される。結合の最後の成員が、その分子の残りの部分に結合している基である。結合の他の成員は、文字の配列に対して逆の順で結合基に結合しており、例えば、アリールアルキルヘテロシクロアルキルという結合は、アリールによって置換されたアルキルによって置換されたヘテロシクロアルキル基を指す。
[0019] 置換基の数を示す場合、「１以上の」という用語は、１つの置換基から可能な最大数の置換基までの範囲を指し、すなわち置換基による１つの水素の置換から全ての水素の置換までの範囲を指す。
[0020] 「置換基」という用語は、親分子上の水素原子を置換する原子又は原子の基を意味する。
[0021] 「置換（された）」という用語は、特定された基が１以上の置換基を有することを意味する。任意の基が複数の置換基を有することができ、かつ様々な可能な置換基が提供される場合、それら置換基は独立して選択され、同じである必要はない。「非置換」という用語は、その特定された基が置換基を有しないことを意味する。「任意に置換された」という用語は、その特定された基が、置換されないか、又は可能な置換基の群から独立して選択される１以上の置換基によって置換されることを意味する。
[0022] 以下の略語が本明細書を通して使用される：酢酸（ＡｃＯＨ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、ブチルアルコール（ｎ－ＢｕＯＨ）、１，２－ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＣＭ）、ジイソプロピルエチルアミン（Ｄｉｉｐｅａ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、塩化水素（ＨＣｌ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、メトキシメチルブロミド（ＭＯＭＢｒ）、Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）、ヨウ化メチル（ＭｅＩ）、ｎ－プロパノール（ｎ－ＰｒＯＨ）、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、ナトリウムエタンチオラート（ＥｔＳＮａ）、酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）、水素化ナトリウム（ＮａＨ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、テトラヒドロピラン（ＴＨＰ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）。
[0023] 本明細書で使用される場合、Ｃ１～Ｃｘは、Ｃ１～Ｃ２、Ｃ１～Ｃ３・・・Ｃ１～Ｃｘを含む。ほんの１例として、「Ｃ１～Ｃ４」と示す基は、その部分内に１から４個の炭素原子が存在することを示し、すなわち１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、又は４個の炭素原子を含む基である。したがって、ほんの１例として、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」は、アルキル基内に１から４個の炭素原子が存在することを示し、すなわち該アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、及びｔ－ブチルから選択される。
[0024] 「オキソ」という用語は、＝Ｏ置換基を指す。
[0025] 「チオキソ」という用語は、＝Ｓ置換基を指す。
[0026] 「ハロ」、「ハロゲン」、及び「ハロゲン化物」という用語は、本明細書で区別なく使用され、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードを意味する。
[0027] 「アルキル」という用語は、１～２０個の炭素原子を有し、かつ単結合によって分子の残りの部分に結合している直鎖又は分枝の炭化水素鎖の基を指す。最大１０個の炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１～Ｃ１０アルキルと称され、同様に、例えば、最大６個の炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキルである。他の数の炭素原子を含むアルキル（及び本明細書で規定される他の部分）は、同様に表される。アルキル基には、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ９アルキル、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ７アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ５アルキル、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ２～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ８アルキル、及びＣ４～Ｃ８アルキルが含まれるが、これらに限定されない。代表的なアルキル基には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（ｉ－プロピル）、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｓ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、３－メチルヘキシル、２－メチルヘキシル、１－エチル－プロピルなどが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキルは、メチル又はエチルである。いくつかの実施形態では、アルキルは、－ＣＨ（ＣＨ３）２又は－Ｃ（ＣＨ３）３である。本明細書に別途明確に記載されない限り、アルキル基は、任意に置換されてもよい。疑義を避けるために付言すると、用語「アルキル」はアルケニル基又はアルキニル基を包含しない。「アルキレン」又は「アルキレン鎖」とは、分子の残りをラジカル基に結合する直鎖又は分枝の２価炭化水素鎖を指す。いくつかの実施形態では、アルキレンは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、又は－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、アルキレンは、－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、アルキレンは、－ＣＨ２ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、アルキレンは、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である。本明細書に別途明確に記載されない限り、アルキレン基は、任意に置換されてもよい。疑義を避けるために付言すると、用語「アルキレン」は、アルケニレン基又はアルキニレン基を包含しない。
[0028] 用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素２重結合が存在する、１から２０個の炭素原子を有する直鎖又は分枝の炭化水素鎖の基を指す。１実施形態では、アルケニル基は、式－Ｃ（Ｒ）＝ＣＲａ ２を有し、式中、Ｒａは、同じであっても異なっていてもよいアルケニル基の残りの部分を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａは、Ｈ又はアルキルである。いくつかの実施形態では、アルケニルは、エテニル（すなわち、ビニル）、プロペニル（すなわち、アリル）、ブテニル、ペンテニル、ペンタジエニルなどから選択される。アルケニル基の非限定的な例としては、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、－ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨＣＨ３、及び－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２が挙げられる。用語「アルケニレン」は、２価アルケニル基を指す。
[0029] 用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素３重結合が存在する、１～２０個の炭素原子を有する直鎖又は分枝の炭化水素鎖の基を指す。１実施形態では、アルケニル基は、式－Ｃ≡Ｃ－Ｒａを有し、式中、Ｒａは、アルキニル基の残りの部分を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａは、Ｈ又はアルキルである。いくつかの実施形態では、アルキニルは、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどから選択される。アルキニル基の非限定的な例としては、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－Ｃ≡ＣＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨが挙げられる。用語「アルキニレン」は、２価アルキニル基を指す。
[0030] 「アルコキシ」という用語は、式－ＯＲａ基を指し、式中、Ｒａは、規定されるようなアルキル基である。本明細書に別途明確に記載されない限り、アルコキシ基は、任意に置換されてもよい。代表的なアルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルコキシは、メトキシである。いくつかの実施形態では、アルコキシは、エトキシである。
[0031] 「芳香族」という用語は、ｎは整数である４ｎ＋２個の電子を含む非局在化π－電子系を有する平面環を指す。π芳香族は、任意に置換され得る。「芳香族」という用語は、アリール基（例えば、フェニル、ナフタレニル）及びヘテロアリール基（例えば、ピリジニル、キノリニル）の両方を含む。
[0032] 「アリール」という用語は、芳香族環であって、当該環を形成する原子の各々が炭素原子である芳香族環を指す。アリール基は、任意に置換され得る。アリール基の例としては、フェニル及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アリールは、フェニルである。構造に応じて、アリール基は、モノラジカル又はジラジカル（すなわち、アリレン基）であり得る。本明細書に別途明確に記載されない限り、「アリール」という用語又は接頭辞「ａｒ－」（例えば、「アラルキル（aralkyl）」がもつものなど）は、任意に置換されるアリール基を含むことを意味する。いくつかの実施形態では、アリール基は、本明細書で定める部分的に還元されたシクロアルキル基（例えば、１，２－ジヒドロナフタレン）を含む。いくつかの実施形態では、アリール基は、本明細書で定める完全に還元されたシクロアルキル基（例えば、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン）を含む。アリールがシクロアルキル基を含む場合、アリールは、芳香族環の炭素原子を介して分子の残りの部分に結合される。
[0033] 「ハロアルキル」という用語は、アルキル基であって該アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つが同じ又は異なるハロゲン原子、具体的にはフルオロ原子によって置換されているアルキル基を意味する。ハロアルキルの例としては、モノフルオロ－、ジフルオロ－、又はトリフルオロ－である－メチル、－エチル、又は－プロピル、例えば、３，３，３－トリフルオロプロピル、２－フルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、フルオロメチル、又はトリフルオロメチルが挙げられる。「過ハロアルキル（ｐｅｒｈａｌｏａｌｋｙｌ）」という用語は、アルキル基であって該アルキル基の全ての水素原子が同じ又は異なるハロゲン原子によって置換されているアルキル基を意味する。
[0034] 「２環式環系」という用語は、共通の単結合又は２重結合を介して（縮合した（annelated）２環式環系）、３個以上の共通の原子の配列を介して（架橋した２環式環系）、又は共通の単一原子を介して（スピロ２環式環系）、互いに縮合している２つの環を意味する。２環式環系は、飽和、部分不飽和、不飽和、又は芳香族とすることができる。２環式環系は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子を含み得る。
[0035] 「炭素環式」又は「炭素環」という用語は、環の骨格を形成する原子が全て炭素原子である環又は環系を指す。すなわち、この用語は、炭素環式環を、環骨格に炭素とは異なる少なくとも１つの原子を含むものである「複素環式」環又は「複素環」と区別させる。いくつかの実施形態では、２環式炭素環の２つの環の少なくとも一方が芳香族である。いくつかの実施形態では、２環式炭素環の両方の環が芳香族である。炭素環には、シクロアルキル及びアリールが含まれる。
[0036] 「シクロアルキル」という用語は、単環式又は多環式の非芳香族基であって当該環を形成する原子（すなわち、骨格原子）の各々が炭素原子である単環式又は多環式の非芳香族基を指す。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、飽和又は部分不飽和である。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、スピロ環式化合物又は架橋化合物である。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、芳香族環と縮合している（この場合、シクロアルキルは、非芳香族環炭素原子を介して結合されている）。シクロアルキル基には、３～１０個の環原子を有する基が含まれる。代表的なシクロアルキルには、３～１０個の炭素原子、３～８個の炭素原子、３～６個の炭素原子、又は３～５個の炭素原子を有するシクロアルキルが含まれるが、これらに限定されない。単環式シクロアルキル基には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが含まれる。いくつかの実施形態では、単環式シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシルである。いくつかの実施形態では、単環式シクロアルキルは、シクロペンテニル又はシクロヘキセニルである。いくつかの実施形態では、単環式シクロアルキルは、シクロペンテニルである。多環式基には、例えば、アダマンチル、１，２－ジヒドロナフタレニル、１，４－ジヒドロナフタレニル、テトライニル、デカリニル、３，４－ジヒドロナフタレニル－１（２Ｈ）－オン、スピロ［２．２］ペンチル、ノルボルニル、及び２環式［１．１．１］ペンチルが含まれる。本明細書に別途明確に記載されない限り、シクロアルキル基は、任意に置換されてよい。
[0037] 「架橋」という用語は、２個の橋頭原子を結合する架橋を含む２つ以上の環を有する任意の環構造を指す。橋頭原子は、分子の骨格フレームワークの一部であり、かつ３以上の他の骨格原子に結合している原子として規定される。いくつかの実施形態では、橋頭原子は、Ｃ、Ｎ、又はＰである。いくつかの実施形態では、架橋は、２つの橋頭原子を結合する単一原子又は原子鎖である。いくつかの実施形態では、架橋は、２個の橋頭原子を結合する原子価結合である。いくつかの実施形態では、架橋環系は、シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、架橋環系は、ヘテロシクロアルキルである。
[0038] 「フルオロアルキル」という用語は、１つ以上の水素原子がフッ素原子によって置換されるアルキルを指す。１態様では、フルオロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルである。いくつかの実施形態では、フルオロアルキルは、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、１－フルオロメチル－２－フルオロエチルなどから選択される。
[0039] 「ヘテロアルキル」という用語は、直鎖又は分枝の炭化水素鎖の基であって、該炭化水素鎖の１以上の骨格原子が、炭素以外の原子、例えば、酸素、窒素（例えば、－ＮＨ－、－Ｎ（アルキル）－、又は－Ｎ（アリール）－）、硫黄（例えば、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、又は－Ｓ（＝Ｏ）２－）、又はそれらの組合せから選択される、直鎖又は分枝の炭化水素鎖の基を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキルは、ヘテロアルキルの炭素原子において当該分子の残りの部分に結合している。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキルは、ヘテロアルキルのヘテロ原子において当該分子の残りの部分に結合している。いくつかの実施形態では、ヘテロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキルである。代表的なヘテロアルキル基としては、－ＯＣＨ２ＯＭｅ、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅ、又は－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２が挙げられるが、これらに限定されない。
[0040] 「ヘテロアルキレン」又は「ヘテロアルキレン鎖」という用語は、当該分子の残りの部分をあるラジカル基に連結させる直鎖又は分枝の２価炭化水素鎖であって、該炭化水素鎖の１以上の骨格原子が、炭素以外の原子、例えば、酸素、窒素（例えば、－ＮＨ－、－Ｎ（アルキル）－、又は－Ｎ（アリール）－）、硫黄（例えば、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、又は－Ｓ（＝Ｏ）２－）、又はそれらの組合せから選択される、直鎖又は分枝の２価炭化水素鎖を指す。本明細書に別途明確に記載されない限り、ヘテロアルキレン基は、任意に置換されてもよい。代表的なヘテロアルキレン基には、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ－、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ－、又は－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ－が含まれるが、これらに限定されない。
[0041] 「ヘテロシクロアルキル」という用語は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含むシクロアルキル基を指す。本明細書に別途明確に記載されない限り、ヘテロシクロアルキル基は、縮合環系（アリール環又はヘテロアリール環と縮合した場合、ヘテロシクロアルキルは非芳香族環原子を介して結合される）又は架橋環系を含み得る単環式又は２環式環系であり得る。ヘテロシクリル基中の窒素、炭素、又は硫黄原子は、任意に酸化されてもよい。窒素原子は、任意に４級化されてもよい。ヘテロシクロアルキル基は、部分飽和又は完全飽和である。ヘテロシクロアルキル基の例としては、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、デカヒドロキノリル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２－オキソピペラジニル、２－オキソピペリジニル、２－オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４－ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１－オキソ－チオモルホリニル、１，１－ジオキソ－チオモルホリニルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルという用語は、単糖、二糖、及びオリゴ糖を含むが、これらに限定されない、炭水化物の全ての環形態も含む。別途記載されない限り、ヘテロシクロアルキルは、環内に２～１２個の炭素を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環内に２～１０個の炭素を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環内に２～１０個の炭素及び１個又は２個のＮ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環内に２～１０個の炭素及び３個又は４個のＮ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環内に２～１２個の炭素、０～２個のＮ原子、０～２個のＯ原子、０～２個のＰ原子、及び０～１個のＳ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環内に２～１２個の炭素、１～３個のＮ原子、０～１個のＯ原子、及び０～１個のＳ原子を有する。ヘテロシクロアルキル中の炭素原子の数について言及する場合、ヘテロシクロアルキル中の炭素原子の数が、ヘテロシクロアルキルを構成する原子（すなわち、ヘテロシクロアルキル環の骨格原子）の総数（ヘテロ原子を含む）と同じではないことが理解される。本明細書に別途明確に記載されない限り、ヘテロシクロアルキル基は、任意に置換されてもよい。
[0042] 「複素環」又は「複素環式」という用語は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族複素環（別名、ヘテロアリール）及びヘテロシクロアルキル環（別名、ヘテロ脂環式基）を指し、複素環式基が各々、その環系内に３～１２個の原子を有するが、但し、いずれの環も２つの隣接するＯ又はＳ原子を含まないことを条件とする。非芳香族複素環式基（別名、ヘテロシクロアルキル）は、その環系内に３～１２個の原子を有する環を含み、芳香族複素環式基は、その環系に５～１２個の原子を有する環を含む。複素環式基は、ベンゾ縮合環系を含む。非芳香族複素環式基の例は、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、オキサゾリジノニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオキサニル、ピペラジニル、アジリジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、１，２，３，６－テトラヒドロピリジニル、ピロリン－２－イル、ピロリン－３－イル、インドリニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、３ｈ－インドリル、インドリン（indolin）－２－オニル（onyl）、イソインドリン－１－オニル、イソインドリン（isoindoline）－１，３－ジオニル（dionyl）、３，４－ジヒドロイソキノリン－１（２Ｈ）－オニル、３，４－ジヒドロキノリン－２（１Ｈ）－オニル、イソインドリン－１，３－ジチオニル、ベンゾ［ｄ］オキサゾール－２（３Ｈ）－オニル、１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（３Ｈ）－オニル、ベンゾ［ｄ］チアゾール－２（３Ｈ）－オニル、及びキノリジニルである。芳香族複素環式基の例は、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。前述の基は、可能な場合、Ｃ結合（若しくはＣ連結）又はＮ結合のいずれかである。例えば、ピロール由来の基は、ピロール－１－イル（Ｎ結合）又はピロール－３－イル（Ｃ結合）の両方を含む。さらに、イミダゾール由来の基は、イミダゾール－１－イル若しくはイミダゾール－３－イル（いずれもＮ結合）又はイミダゾール－２－イル、イミダゾール－４－イル、若しくはイミダゾール－５－イル（全てＣ結合）を含む。複素環式基は、ベンゾ縮合環系を含む。非芳香族複素環は、ピロリジン－２－オンなどの１つ又は２つのオキソ（＝Ｏ）部分で任意に置換される。いくつかの実施形態では、２環式複素環の２つの環の少なくとも一方が芳香族である。いくつかの実施形態では、２環式複素環の両方の環が芳香族である。
[0043] 「ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上の環上ヘテロ原子を含むアリール基を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、単環式又は２環式である。単環式ヘテロアリールの例示的な例としては、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、ピリダジニル、トリアジニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、インドリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、プリン、キノリジン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、１，８－ナフチリジン、及びプテリジンが挙げられる。単環式ヘテロアリールの例示的な例には、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、ピリダジニル、トリアジニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、及びフラザニルが挙げられる。２環式ヘテロアリールの例示的な例には、インドリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、プリン、キノリジン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、１，８－ナフチリジン、及びプテリジンが挙げられる。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、チエニル、チアジアゾリル、又はフリルである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、環内に０～６個のＮ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、環内に１～４個のＮ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、環内に４～６個のＮ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、環内に０～４個のＮ原子、０～１個のＯ原子、０～１個のＰ原子、及び０～１個のＳ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、環内に１～４個のＮ原子、０～１個のＯ原子、及び０～１個のＳ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｃ１－Ｃ９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、単環式ヘテロアリールは、Ｃ１－Ｃ５ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、単環式ヘテロアリールは、５員又は６員のヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、本明細書で定める、部分的に還元されたシクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基（例えば、７，８－ジヒドロキノリン）を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、本明細書で定める、完全に還元されたシクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基（例えば、５，６，７，８－テトラヒドロキノリン）を含む。ヘテロアリールがシクロアルキル基又はヘテロシクロアルキル基を含む場合、ヘテロアリールは、芳香族複素環の炭素原子又はヘテロ原子を介して分子の残りの部分に結合される。
[0044] 「部分」という用語は、分子の特定のセグメント又は官能基を指す。化学的部分は、多くの場合、分子内に包埋されるか、又は分子に付加される化学的実体として認識される。
[0045] 「互変異性体」という用語は、分子の１原子から同じ分子の別の原子へのプロトン移動を指す。本明細書に提示される化合物は、互変異性体として存在し得る。互変異性体は、水素原子の移動によって相互変換可能な化合物であり、それは単結合及び隣接する２重結合の切り替えを伴う。互変異性化が可能である結合の立体配置では、互変異性体の化学平衡が存在するであろう。本明細書に開示される化合物の全ての互変異性形態が企図される。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒、及びｐＨを含むいくつかの因子に依存する。互変異性体相互変換のいくつかの例には、以下が挙げられる。
[0046] 本明細書で使用される「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、所望の生物学的作用部位への化合物又は組成物の送達を可能にするために使用され得る方法を指す。これらの方法には、経口経路（ｐ．ｏ．）、十二指腸内経路（ｉ．ｄ．）、非経口注射（静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、血管内又は注入（ｉｎｆ．）を含む）、局所（ｔｏｐ．）、及び直腸（ｐ．ｒ．）への投与が含まれるが、これらに限定されない。当業者であれば、本明細書に記載の化合物及び方法とともに用いられ得る投与技法に精通している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物及び組成物は、経口投与される。
[0047] 本明細書で使用される「同時投与」などの用語は、単一の患者への選択された治療薬の投与を包含するよう意図されており、治療薬が同じ若しくは異なる投与経路によって、又は同時に若しくは異なる時点で投与される治療レジメンを含むよう意図されている。
[0048] 本明細書で使用される「有効量」又は「治療有効量」という用語は、治療される疾患又は状態の症状のうちの１以上をある程度緩和するであろう、例えば、疾患の１以上の兆候、症状、若しくは原因の軽減及び／又は緩和、又は生物学的系の任意の他の望ましい変化をもたらすであろう、投与される薬剤又は化合物の十分な量を指す。例えば、治療的使用に関する「有効量」は、１以上の疾患症状の臨床的に有意な減少をもたらす薬剤の量とすることができる。適切な「有効」量は、個々の症例における用量漸増試験などの技法を使用して決定され得る。
[0049] 本明細書で使用される「増強する」又は「増強すること」という用語は、望ましい効果の量、効力、又は持続時間のいずれかの増加又は延長を意味する。例えば、標的のスプライシングの増強に関して、「増強すること」という用語は、標的の量、効力、又は持続時間のいずれかの点でスプライシングを増加させる又は延長する能力を指すことができる。
[0050] 「対象」又は「患者」という用語は、哺乳動物を包含する。哺乳動物の例には、哺乳類分類のあらゆる構成員である、ヒト、例えばチンパンジーなどの非ヒト霊長類、並びに他の類人猿及びサル種、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜、例えばウサギ、イヌ、及びネコなどの飼育動物、例えばラット、マウス、及びモルモットなどのげっ歯類をはじめとする実験動物が挙げられるが、これらに限定されない。１態様では、哺乳動物は、ヒトである。本明細書で使用される「動物」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を含む。１実施形態では、「非ヒト動物」は、哺乳類、例えば、ラット又はマウスなどのげっ歯類である。１実施形態では、非ヒト動物は、マウスである。
[0051] 「医薬組成物」及び「医薬製剤」（又は「製剤」）という用語は、区別なく使用され、例えばそれを必要とするヒトである対象に対して投与しようとする薬学的活性成分の治療有効量を１以上の薬学的に許容可能な賦形剤とともに含む混合物又は溶液を意味する。
[0052] 本明細書で使用される「薬学的配合」という用語は、複数の活性成分の混合又は配合によって生じる産物を意味し、当該活性成分の固定の配合及び固定でない配合の両方を含む。「固定の配合」という用語は、活性成分、例えば、本明細書に記載の化合物及び助剤の両方が、単一の実体又は投薬量の形態で同時に患者に投与されることを意味する。「固定でない配合」という用語は、活性成分、例えば、本明細書に記載の化合物及び助剤が、特定の介在時間制限なしで、同時に、同時発生的に、又は順次にのいずれかで別個の実体として患者に投与されることを意味し、かかる投与は、患者の体内においてこれらの２つの化合物の有効レベルを提供する。後者は、カクテル療法、例えば３以上の活性成分の投与、にも適用される。
[0053] 「薬学的に許容可能」という用語は、概して安全であり、非毒性であり、また生物学的にもその他であっても望ましくないものではなく、かつ獣医学並びにヒトへの薬学的使用に許容される医薬組成物の調製に有用な材料の属性を意味する。「薬学的に許容可能」とは、化合物の生物学的活性又は特性を抑止せず、かつ比較的非毒性である担体又は希釈剤などの材料を指すことができ、すなわち、この材料は、望ましくない生物学的影響を引き起こすことなく、又はそれが含まれる組成物の構成成分のうちのいずれかと有害な様式で相互作用することなく個体に投与することができる。
[0054] 「薬学的に許容可能な賦形剤」、「薬学的に許容可能な担体」、及び「治療的に不活性な賦形剤」という用語は、区別なく使用され得、治療活性を有しておらず、かつ投与された対象に非毒性である医薬組成物中の任意の薬学的に許容可能な成分を意味し得、例えば、医薬品の製剤化に使用される崩壊剤、結合剤、充填剤、溶媒、緩衝液、等張化剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、担体、希釈剤、賦形剤、防腐剤、又は滑沢剤である。
[0055] 「薬学的に許容可能な塩」という用語は、生物学的に又はその他にとっても望ましくないものではない塩を示す。薬学的に許容可能な塩には、酸付加塩及び塩基付加塩の両方が含まれる。「薬学的に許容可能な塩」とは、投与される生物に著しい刺激を引き起こさない化合物の製剤、及び／又はその化合物の生物学的活性及び特性を抑止しない化合物の製剤を指すことができる。いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な塩は、式（Ｉ）～（Ｉｏ）のうちのいずれか１つのＳＭＳＭ化合物を酸と反応させることによって得られる。薬学的に許容可能な塩は、式（Ｉ）～（Ｉｏ）のうちのいずれか１つの化合物を塩基と反応させて、塩を形成することによっても得られる。
[0056] 本明細書で使用される「核酸」という用語は、概して、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、又はヌクレオチドを指し、この用語は、ポリ核酸塩基、ポリヌクレオシド、及びポリヌクレオチドを含む。
[0057] 本明細書で使用される場合、「低分子量化合物」は、「小分子」又は「小有機分子」と区別なく使用され得る。小分子とは、ペプチド又はオリゴヌクレオチド以外の化合物を指し、典型的には、約２０００ダルトン未満、例えば、約９００ダルトン未満の分子量を有する。
[0058] リボ核タンパク質（ＲＮＰ）とは、ＲＮＡを含む核タンパク質を指す。ＲＮＰは、リボ核酸とＲＮＡ結合タンパク質との複合体とすることができる。かかる組合せは、タンパク質－ＲＮＡ複合体とも称し得る。これらの複合体は、ＤＮＡ複製、遺伝子発現、ＲＮＡ代謝、及びプレｍＲＮＡスプライシングを含むが、これらに限定されない、いくつかの生物学的機能において機能することができる。ＲＮＰの例には、リボソーム、酵素テロメラーゼ、ヴォールトリボ核タンパク質、ＲＮａｓｅ Ｐ（リボヌクレアーゼＰ）、ヘテロ核ＲＮＰ（ｈｎＲＮＰ）、及び核内低分子ＲＮＰ（ｓｎＲＮＰ）が挙げられる。
[0059] タンパク質をコードする遺伝子及びｍＲＮＡプロセシング中間体由来の新生ＲＮＡ転写物は、まとめてプレｍＲＮＡと称し、概して、真核細胞の核内のタンパク質によって結合されている。新生転写物が最初にＲＮＡポリメラーゼ（例えば、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ）から出現したときから、成熟ｍＲＮＡが細胞質に輸送されるまで、ＲＮＡ分子は、スプライシング複合体構成成分の大量なセット（例えば、核タンパク質及びｓｎＲＮＡ）と会合している。これらタンパク質は、様々なサイズのヘテロ核ＲＮＡ（ｈｎＲＮＡ）（例えば、プレｍＲＮＡと核内ＲＮＡとの複合体）を含み得るｈｎＲＮＰの構成成分であり得る。
[0060] スプライシング複合体構成成分は、スプライシング及び／又はスプライシング制御において機能する。スプライシング複合体構成成分には、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）、スプライシングタンパク質、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核内低分子リボ核タンパク質（ｓｎＲＮＰ）、及びヘテロ核リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）が含まれ得るが、これらに限定されない。スプライシング複合体構成成分には、構成的スプライシング、選択的スプライシング、制御されたスプライシング、及び特定のメッセージ又はメッセージ群のスプライシングなどのスプライシングに必要とされ得るものが含まれるが、これらに限定されない。関連タンパク質の一群であるセリンアルギニンリッチタンパク質（ＳＲタンパク質）は、構成的プレｍＲＮＡスプライシングにおいて機能することができ、濃度依存的様式で選択的スプライス部位選択を制御することもできる。ＳＲタンパク質は、典型的には、１つ又は２つのＲＮＡ認識モチーフ（ＲＲＭ）と、アルギニン残基及びセリン残基が豊富なＣ末端（ＲＳドメイン）とからなるモジュール構造を有する。選択的スプライシングにおけるそれらの活性は、タンパク質のｈｎＲＮＰ Ａ／Ｂファミリーのメンバーによって拮抗され得る。スプライシング複合体構成成分には、１つ以上のｓｎＲＮＡと会合しているタンパク質も含まれ得る。ヒトにおけるＳＲタンパク質には、ＳＣ３５、ＳＲｐ５５、ＳＲｐ４０、ＳＲｍ３００、ＳＦＲＳ１０、ＴＡＳＲ－１、ＴＡＳＲ－２、ＳＦ２／ＡＳＦ、９Ｇ８、ＳＲｐ７５、ＳＲｐ３０ｃ、ＳＲｐ２０、及びＰ５４／ＳＦＲＳ１１が含まれるが、これらに限定されない。スプライス部位選択に関与し得るヒトにおける他のスプライシング複合体構成成分には、Ｕ２ ｓｎＲＮＡ補助因子（例えば、Ｕ２ＡＦ６５、Ｕ２ＡＦ３５）、Ｕｒｐ／Ｕ２ＡＦ１－ＲＳ２、ＳＦ１／ＢＢＰ、ＣＢＰ８０、ＣＢＰ２０、ＳＦ１、及びＰＴＢ／ｈｎＲＮＰ１が含まれるが、これらに限定されない。ヒトにおけるｈｎＲＮＰタンパク質には、Ａ１、Ａ２／Ｂ１、Ｌ、Ｍ、Ｋ、Ｕ、Ｆ、Ｈ、Ｇ、Ｒ、Ｉ、及びＣ１／Ｃ２が含まれるが、これらに限定されない。ｈｎＲＮＰをコードするヒト遺伝子には、ＨＮＲＮＰＡ０、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＮＲＮＰＡ１Ｌ１、ＨＮＲＮＰＡ１Ｌ２、ＨＮＲＮＰＡ３、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＨＮＲＮＰＡＢ、ＨＮＲＮＰＢ１、ＨＮＲＮＰＣ、ＨＮＲＮＰＣＬ１、ＨＮＲＮＰＤ、ＨＮＲＰＤＬ、ＨＮＲＮＰＦ、ＨＮＲＮＰＨ１、ＨＮＲＮＰＨ２、ＨＮＲＮＰＨ３、ＨＮＲＮＰＫ、ＨＮＲＮＰＬ、ＨＮＲＰＬＬ、ＨＮＲＮＰＭ、ＨＮＲＮＰＲ、ＨＮＲＮＰＵ、ＨＮＲＮＰＵＬ１、ＨＮＲＮＰＵＬ２、ＨＮＲＮＰＵＬ３、及びＦＭＲ１が含まれる。スプライシング複合体構成成分は、ｓｎＲＮＰ又は転写物と安定的に又は一過性的に会合していてもよい。
[0061] 「イントロン」という用語は、遺伝子内のＤＮＡ配列と、プロセシングされていないＲＮＡ転写物中の対応する配列との両方を指す。ＲＮＡプロセシング経路の一部として、イントロンは、転写の直後に又は転写と同時にのいずれかでＲＮＡスプライシングによって除去され得る。イントロンは、大半の生物及び多くのウイルスの遺伝子で見られる。これらは、タンパク質、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、及びトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）を生成する遺伝子を含む、広範な遺伝子内に位置し得る。
[0062] 「エクソン」とは、イントロンがＲＮＡスプライシングによって除去された後に最終成熟ＲＮＡの一部をコードする遺伝子によって産生されるその遺伝子の任意の部分であり得る。「エクソン」という用語は、遺伝子内のＤＮＡ配列と、ＲＮＡ転写物中の対応する配列との両方を指す。
[0063] 「スプライセオソーム」は、ｓｎＲＮＡとタンパク質との複合体から構築され得る。スプライセオソームは、転写されたプレｍＲＮＡからイントロンを除去することができる。
[0064] 小分子スプライシング調節因子（ＳＭＳＭ）
[0065] 本開示は、ある特定の小化学分子が、本明細書で小分子スプライシング調節因子（ＳＭＳＭ）と称するプレｍＲＮＡ分子におけるスプライシング事象を改変することができるという予期しない発見を提供する。これらのＳＭＳＭは、特定のプレｍＲＮＡ分子において特定のスプライシング事象を調節することができ、したがって、特定のＲＮＡに関連する疾患又は状態を治療、予防、又は改善する際に有用である。これらのＳＭＳＭは、スプライシング事象を改変するための様々な機序によって動作することができる。例えば、本開示のＳＭＳＭは、１）スプライシング複合体、スプライセオソーム、及び／又はそれらの構成成分、例えば、ｈｎＲＮＰ、ｓｎＲＮＰ、ＳＲ－タンパク質、及び他のスプライシング因子若しくはエレメントの形成及び／又は機能及び／又は他の特性に干渉し、結果的にプレｍＲＮＡ分子におけるスプライシング事象の防止又は誘導をもたらすことができる。別の例として、２）遺伝子産物、例えば、ｈｎＲＮＰ、ｓｎＲＮＰ、ＳＲタンパク質、及び他のスプライシング因子の転写後調節（例えば、スプライシング）を防止及び／又は改変し、その後、スプライセオソーム又はスプライシング複合体構成成分の形成及び／又は機能に関与することができ、３）ｈｎＲＮＰ、ｓｎＲＮＰ、ＳＲタンパク質、及び他のスプライシング因子を含むが、これらに限定されない遺伝子産物のリン酸化、グリコシル化、及び／又はその他の修飾を防止及び／又は改変し、その後、スプライセオソーム又はスプライシング複合体構成成分の形成及び／又は機能に関与することができ、４）例えば、配列特異的様式でＲＮＡと塩基対形成することを含まない機構を介して特定のスプライシング事象が防止又は誘導されるように特定のプレｍＲＮＡに結合する及び／又はそうでなければ影響を及ぼすことができる。本開示の小分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はアンチジーンオリゴヌクレオチドとは異なるものであり、またこれらに関連していない。
[0066] 疾患又は状態の治療、予防、及び／又はその進行の遅延に使用するための遺伝子産物のスプライシングを改変する化合物を本明細書に記載する。
[0067] １態様では、本明細書において、式（Ｉ）の構造を有する化合物：
式中、Ｑは、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ７アルキレン、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ７ヘテロアルキレンであり、Ｘは水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルであり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、又はＣＨ３であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立して水素又はハロゲンであり、Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４はそれぞれ独立してＮ、－ＮＲＹ１－、－Ｏ－、－Ｓ－、又はＣＲＡ１であり、
はそれぞれ独立して単結合又は２重結合であり、ＲＡ１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、＝Ｏ、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、またＲＹ１はそれぞれ独立して水素又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである、当該化合物、又はその薬学的に許容可能な塩若しくは薬学的に許容可能な溶媒和化合物、を記載する。
[0068] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）の構造を有する。
[0069] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａａ）の構造を有する。
[0070] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａａ＊）の構造を有する。
[0071] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａａａ）の構造を有する。
[0072] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａａａ＊）の構造を有する。
[0073] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）の構造を有する。
[0074] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂｂ）の構造を有する。
[0075] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂｂ＊）の構造を有する。
[0076] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂｂｂ）の構造を有する。
[0077] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂｂｂ＊）の構造を有する。
[0078] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｃ）の構造を有する。
[0079] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｃｃ）の構造を有する。
[0080] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｄ）の構造を有する。
[0081] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｄｄ）の構造を有する。
[0082] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｅ）の構造を有する。
[0083] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｅｅ）の構造を有する。
[0084] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｅｅｅ）の構造を有する。
[0085] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｆ）の構造を有する。
[0086] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｆｆ）の構造を有する。
[0087] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｇ）の構造を有する。
[0088] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｈ）の構造を有する。
[0089] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｈｈ）の構造を有する。
[0090] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｉ）の構造を有する。
[0091] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｊ）の構造を有する。
[0092] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｋ）の構造を有する。
[0093] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｌ）の構造を有する。
[0094] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｍ）の構造を有する。
[0095] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｎ）の構造を有する。
[0096] 式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（Ｉｄ）、式（Ｉｅ）、式（Ｉｆ）、式（Ｉｇ）、式（Ｉｈ）、式（Ｉｊ）、式（Ｉｊ）、式（Ｉｋ）、式（Ｉｌ）、式（Ｉｍ）、又は式（Ｉｎ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｘ基を有する窒素原子は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４置換基を有する複素環に対してエクアトリアルな位置にある。
[0097] 式（Ｉａａ）、式（Ｉａａａ）、式（Ｉｂｂ）、式（Ｉｂｂｂ）、式（Ｉｃｃ）、式（Ｉｄｄ）、式（Ｉｅｅ）、式（Ｉｅｅｅ）、式（Ｉｆｆ）、又は式（Ｉｈｈ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｘ基を有する窒素原子は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４置換基を有する複素環に対してエクアトリアルな位置にある。
[0098] 式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（Ｉｄ）、式（Ｉｅ）、式（Ｉｆ）、式（Ｉｇ）、式（Ｉｈ）、式（Ｉｊ）、式（Ｉｊ）、式（Ｉｋ）、式（Ｉｌ）、式（Ｉｍ）、式（Ｉｎ）、式（Ｉａａ）、式（Ｉａａａ）、式（Ｉｂｂ）、式（Ｉｂｂｂ）、式（Ｉｃｃ）、式（Ｉｄｄ）、式（Ｉｅｅ）、式（Ｉｅｅｅ）、式（Ｉｆｆ）、又は式（Ｉｈｈ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｘ基を有する窒素原子とＮ－Ｈ基とは、ある面の同一面側にある。式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（Ｉｄ）、式（Ｉｅ）、式（Ｉｆ）、式（Ｉｇ）、式（Ｉｈ）、式（Ｉｊ）、式（Ｉｊ）、式（Ｉｋ）、式（Ｉｌ）、式（Ｉｍ）、式（Ｉｎ）、式（Ｉａａ）、式（Ｉａａａ）、式（Ｉｂｂ）、式（Ｉｂｂｂ）、式（Ｉｃｃ）、式（Ｉｄｄ）、式（Ｉｅｅ）、式（Ｉｅｅｅ）、式（Ｉｆｆ）、又は式（Ｉｈｈ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｘ基を有する窒素原子とＱ基とは、ある面に対して反対側にある。
[0099] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｏ）の構造を有する。
[0100] いくつかの実施形態では、Ｒ３又はＲ４の少なくとも１つがフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３はフッ素であり、またＲ４は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は水素であり、またＲ４はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、水素又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｆである。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｆである。
[0101] いくつかの実施形態では、Ａ１は、ＣＨ、ＣＦ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、Ｏ、又はＣ（＝Ｏ）である。いくつかの実施形態では、Ａ１は、ＣＨである。いくつかの実施形態では、Ａ１は、ＣＦである。いくつかの実施形態では、Ａ１は、Ｃ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ１はＮである。いくつかの実施形態では、Ａ１はＯである。いくつかの実施形態では、Ａ１はＣ（＝Ｏ）である。いくつかの実施形態では、Ａ１はＳである。いくつかの実施形態では、Ａ１はＣＲＡ１である。いくつかの実施形態では、Ａ１はＣＲＡ１であり、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ１はＣＲＡ１であり、ＲＡ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はハロゲンである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＦである。いくつかの実施形態では、Ａ１はＮＲＹ１である。いくつかの実施形態では、Ａ１はＮＲＹ１であり、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ１はＮＲＹ１であり、ＲＹ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。
[0102] いくつかの実施形態では、Ａ２は、ＣＨ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、又はＣ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ２は、ＣＨである。いくつかの実施形態では、Ａ２は、Ｃ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ２は、Ｎである。いくつかの実施形態では、Ａ２は、Ｃ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ２はＳである。いくつかの実施形態では、Ａ２はＣＲＡ１である。いくつかの実施形態では、Ａ２はＣＲＡ１であり、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ２はＣＲＡ１であり、ＲＡ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はハロゲンである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＦである。いくつかの実施形態では、Ａ２はＮＲＹ１である。いくつかの実施形態では、Ａ２はＮＲＹ１であり、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ２はＮＲＹ１であり、ＲＹ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。
[0103] いくつかの実施形態では、Ａ３は、ＣＨ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、又はＣ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ３は、ＣＨである。いくつかの実施形態では、Ａ３は、Ｃ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ３は、Ｎである。いくつかの実施形態では、Ａ３は、Ｃ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ３はＳである。いくつかの実施形態では、Ａ３はＣＲＡ１である。いくつかの実施形態では、Ａ３はＣＲＡ１であり、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ３はＣＲＡ１であり、ＲＡ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はハロゲンである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＦである。いくつかの実施形態では、Ａ３はＮＲＹ１である。いくつかの実施形態では、Ａ３はＮＲＹ１であり、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ３はＮＲＹ１であり、ＲＹ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ａ３は、Ｎ（ＣＨ３）である。
[0104] いくつかの実施形態では、Ａ４は、ＣＨ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、Ｏ、又はＣ（＝Ｏ）である。いくつかの実施形態では、Ａ４は、ＣＨである。いくつかの実施形態では、Ａ４は、Ｃ（ＣＨ３）である。いくつかの実施形態では、Ａ４はＮである。いくつかの実施形態では、Ａ４はＯである。いくつかの実施形態では、Ａ４はＣ（＝Ｏ）である。いくつかの実施形態では、Ａ４はＳである。いくつかの実施形態では、Ａ４はＣＲＡ１である。
[0105] いくつかの実施形態では、Ａ４はＣＲＡ１であり、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ４はＣＲＡ１であり、ＲＡ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はハロゲンである。いくつかの実施形態では、ＲＡ１はＦである。いくつかの実施形態では、Ａ４はＮＲＹ１である。いくつかの実施形態では、Ａ４はＮＲＹ１であり、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、Ａ４はＮＲＹ１であり、ＲＹ１は置換又は非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のハロゲン（Ｆなど）で任意に置換されるＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、任意で置換されたＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１～Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１中の１つ以上の水素は重水素で置換される。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＹ１は、メチル、エチル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、又はＣＨ２ＣＦ３である。いくつかの実施形態では、ＲＹ１はＣＤ３又はＣＤ２ＣＤ３である。
[0106] いくつかの実施形態では、Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４のうちの１つは、Ｃ（＝Ｏ）である。
[0107] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも２０個の炭素原子、５個の窒素原子、及び１個のフッ素原子を含む。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１８個の炭素原子（例えば、１８個、１９個、又は２０個の炭素原子）、６個の窒素原子、及び１個のフッ素原子を含む。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１８個の炭素原子（例えば、１８個、１９個、又は２０個の炭素原子）、７個の窒素原子、及び１個のフッ素原子を含む。
[0108] いくつかの実施形態では、Ｘは、水素である。いくつかの実施形態では、Ｘは、－ＣＨ３である。一部の実施形態では、Ｘは、－ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、Ｘは、置換又は非置換Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｘは、置換若しくは非置換シクロプロピル、置換若しくは非置換シクロブチル、又は置換若しくは非置換シクロペンチルである。いくつかの実施形態では、Ｘは、シクロプロピル、シクロブチル、又はシクロペンチルであり、各々が、フッ素、ＯＨ、ＣＨ３、及びＯＣＨ３からそれぞれ独立に選択される１、２又は３の置換基で置換されている。いくつかの実施形態では、Ｘは、シクロプロピルである。
[0109] いくつかの実施形態では、Ｒ１は、水素又はＣＨ３である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ＣＨ３である。
[0110] いくつかの実施形態では、Ｒ２は、水素又はＣＨ３である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、ＣＨ３である。
[0111] いくつかの実施形態では、Ｑは、置換又は非置換Ｃ１～Ｃ７アルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、置換又は非置換Ｃ１～Ｃ７ヘテロアルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、Ｃ１～Ｃ３アルキル及びハロゲンから選択される１つ以上の置換基によって任意に置換される。いくつかの実施形態では、Ｑは、置換又は非置換Ｃ２～Ｃ４アルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、置換又は非置換Ｃ２～Ｃ４アルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、フッ素、ＯＨ、ＣＨ３、及びＯＣＨ３から各々独立して選択される１、２、３、又は４の置換基で置換されるＣ２～Ｃ４アルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＣＨ２ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＣＨ２ＯＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｑは、ハロゲンによって任意に置換されるＣ２～Ｃ４アルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ２～Ｃ４アルキレンである。いくつかの実施形態では、Ｑは、１つ以上のＦで任意に置換されるＣ２～Ｃ３ヘテロアルキレンである。
[0112] いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。
[0113] いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。
[0114] いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、
からなる群から選択される。
[0115] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
からなる群から選択される。
[0116] いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、表１の化合物から選択される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、表２の化合物から選択される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－１，２－ジヒドロイソキノリン－１－オン；７－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチル－３，４－ジヒドロキナゾリン－４－オン；７－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン；６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－１，２－ジヒドロフタラジン－１－オン；７－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－４Ｈ－クロメン－４－オン；又は６－（６－｛［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－［［（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ］－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルフタラジン－１－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－［［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ］－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルフタラジン－１－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４（３Ｈ）－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４（３Ｈ）－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）イソキノリン－６－オールである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）イソキノリン－６－オールである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１－オンである。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、２－エチル－４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシイソキノリン－１－オンである。いくつかの実施形態では、本明細書において、記載の化合物のいずれかの塩又は溶媒和化合物を記載する。いくつかの実施形態では、本明細書において、記載の化合物のいずれかの薬学的に許容可能な塩又は溶媒和化合物を記載する。
[0117] １態様では、本明細書において、スプライシングを調節する方法であって、先に記載の請求項のいずれか１項に記載の化合物を細胞と接触させることを含み、該化合物が、ｍＲＮＡをコードするプレｍＲＮＡのスプライス部位配列においてスプライシングを調節し、該ｍＲＮＡが標的タンパク質又は機能性ＲＮＡをコードするものである、上記方法を開示する。
[0118] １態様では、本明細書において、疾患又は状態を治療する方法であって、本発明の化合物を投与することを含むものである、上記方法を開示する。
[0119] いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、１つ以上の立体中心を保有し、各立体中心は独立して、Ｒ配置又はＳ配置のいずれかで存在する。本明細書に提示される化合物は、全てのジアステレオマー形態、エナンチオマー形態、及びエピマー形態、並びにそれらの適切な混合物を含む。本明細書に提供される化合物及び方法は、シス、トランス、シン、アンチ、エントゲーゲン（Ｅ）、及びツザメン（Ｚ）の異性体の全て、並びにそれらの適切な混合物を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の化合物は、化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分解剤と反応させて、ジアステレオ異性体化合物／塩のペアを形成することと、ジアステレオマーを分離することと、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することとによって、それらの個々の立体異性体として調製される。いくつかの実施形態では、エナンチオマーの分割は、本明細書に記載の化合物の共有結合性ジアステレオ誘導体を使用して行われる。別の実施形態では、ジアステレオマーは、溶解度の差に基づく分離／分割技法によって分離される。他の実施形態では、立体異性体の分離は、クロマトグラフィーによって、又はジアステレオマー塩の形成、及び再結晶又はクロマトグラフィー又はそれらの任意の組合せによる分離によって、行われる。Ｊｅａｎ Ｊａｃｑｕｅｓ，Ａｎｄｒｅ Ｃｏｌｌｅｔ，Ｓａｍｕｅｌ Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ Ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１。１態様では、立体異性体は、立体選択的合成によって得られる。
[0120] いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、プロドラッグとして調製される。「プロドラッグ」とは、インビボで親薬物に変換される薬剤を指す。プロドラッグは、いくつかの状況では親薬物よりも投与しやすい場合があるため、有用であることが多い。プロドラッグは、例えば、経口投与によって生物学的に利用可能であり得るが、その親薬物はそうではない。プロドラッグは、親薬物よりも、医薬組成物において可溶性が改善されている場合もある。いくつかの実施形態では、プロドラッグの設計により有効な水溶性が高まる。限定されるものではないが、プロドラッグの１例は、エステル（「プロドラッグ」）として投与されて、水溶性が可動性にとって有害である細胞膜を横断する伝達を促進するが、その後、水溶性が有益である細胞内に入ると、活性実体であるカルボン酸に代謝的に加水分解される、本明細書に記載の化合物である。プロドラッグのさらなる例は、ペプチドが代謝されて活性部分が露出されるものである、ある酸性基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）であり得る。ある特定の実施形態では、インビボ投与時に、プロドラッグは、本化合物の生物学的、薬学的、又は治療的に活性な形態に化学的に変換される。ある特定の実施形態では、プロドラッグは、１以上のステップ又はプロセスによって、本化合物の生物学的、薬学的、又は治療的に活性な形態へと酵素的に代謝される。
[0121] １態様では、プロドラッグは、薬物の代謝安定性若しくは輸送特性を変えるように、副作用若しくは毒性を遮蔽するように、薬物の風味を改善するように、又は薬物の他の特徴若しくは特性を変えるように設計される。薬物動態学の知識、薬力学的プロセス、及びインビボでの薬物代謝により、薬学的に活性な化合物がわかることで、本化合物のプロドラッグの設計が可能になる。（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５）Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、第３８８－３９２頁、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ（１９９２），Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、第３５２－４０１頁、Ｒｏｏｓｅｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，５６：５３－１０２，２００４、Ａｅｓｏｐ Ｃｈｏ，“Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｏｒａｌ Ｐｒｏｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ”，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４１，３９５－４０７，２００６、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏ－ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ 第１４巻を参照）。
[0122] いくつかの場合では、本明細書に記載の化合物のうちのいくつかは、別の誘導体又は活性化合物のためのプロドラッグであり得る。
[0123] いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物の芳香族環部分上の部位は、様々な代謝反応の影響を受けやすいため、芳香族環構造上に適切な置換基を組み込むことにより、この代謝経路が低減、最小化、又は除去されるであろう。具体的な実施形態では、芳香族環の代謝反応への影響の受けやすさを低減させる又は除去するための適切な置換基は、ほんの１例としては、ハロゲン又はアルキル基である。
[0124] 別の実施形態では、本明細書に記載の化合物は、同位体的に（例えば、放射性同位体を用いて）、又は発色団若しくは蛍光部分、生物発光標識若しくは化学発光標識の使用を含むがこれらに限定されない別の他の手段によって、標識される。
[0125] 本明細書に記載の化合物は、本明細書に提示される様々な式及び構造に列挙されるものと同一であるが、１以上の原子が通常自然界に見られる原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子によって置換されるという事実のために、同位体標識化合物を含む。本化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌなどの水素、炭素、窒素、酸素、硫黄、フッ素、及び塩素の同位体が挙げられる。１態様では、本明細書に記載の同位体標識化合物、例えば３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれるものが、薬物及び／又は基質組織分布アッセイに有用である。１態様では、重水素などの同位体での置換により、より大きい代謝安定性から生じるある特定の治療的利点、例えば、インビボでの半減期の増加又は必要投薬量の減少などがもたらされる。
[0126] 追加の又はさらなる実施形態では、本明細書に記載の化合物は、代謝物を産生する必要のある生物への投与時に代謝され、その後、その代謝物は、所望の治療効果を含む所望の効果をもたらすために使用される。
[0127] 本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容可能な塩として形成されてもよく、及び／又は薬学的に許容可能な塩として使用されてもよい。薬学的に許容可能な塩の種類としては、（１）化合物の遊離塩基形態を、薬学的に許容可能な無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタリン酸などと、又は薬学的に許容可能な有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、４－メチルビシクロ－［２．２．２］オクタ－２－エン－１－カルボン酸、グルコヘプトン酸、４，４’－メチレンビス－（３－ヒドロキシ－２－エン－１－カルボン酸）、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ－ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、酪酸、フェニル酢酸、フェニル酪酸、バルプロ酸などと、反応させることによって形成される酸付加塩、（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類イオン（例えば、マグネシウム若しくはカルシウム）、又はアルミニウムイオンによって置換された場合に形成される塩が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの場合では、本明細書に記載の化合物は、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどであるが、これらに限定されない有機塩基と配位し得る。他の場合では、本明細書に記載の化合物は、アルギニン、リジンなどであるが、これらに限定されないアミノ酸と塩を形成し得る。酸性プロトンを含む化合物と塩を形成するために使用される許容される無機塩基には、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどが含まれるが、これらに限定されない。
[0128] 薬学的に許容可能な塩への言及が、溶媒付加形態、具体的には溶媒和化合物を含むことを理解されたい。溶媒和化合物は、化学量論的量又は非化学量論的量のいずれかの溶媒を含有し、また水、エタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒を用いた結晶化プロセス中に形成され得る。溶媒が水である場合、水和物が形成され、又は溶媒がアルコールである場合、アルコラートが形成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物の溶媒和化合物は、本明細書に記載のプロセス中に好都合に調製又は形成される。加えて、本明細書に提供される化合物は、非溶媒和形態及び溶媒和形態で存在し得る。概して、溶媒和形態は、本明細書に提供される化合物及び方法の目的のために、非溶媒和形態と同等であるとみなされる。
[0129] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭは、最大約２０００ダルトン、１５００ダルトン、１０００ダルトン、又は９００ダルトンの分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭは、少なくとも１００ダルトン、２００ダルトン、３００ダルトン、４００ダルトン、又は５００ダルトンの分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭは、ホスホジエステル結合を含まない。
化合物を作製する方法
[0130] 本明細書に記載の化合物は、標準の合成技術を使用して、又は本明細書に記載の方法と組み合わせて当技術分野で公知の方法を使用して合成することができる。別途示されない限り、質量分析法、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡの技術、及び薬理学の従来の方法を用いることができる。化合物は、標準の有機化学分野の技術、例えば、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．に記載のものなどを使用して調製することができる。溶媒、反応温度、反応時間の変動、並びに様々な化学試薬及び他の反応条件など、本明細書に記載の合成による変換の代替的な反応条件が用いられてもよい。出発物質は、商業的供給元から入手可能であり得るか、又は容易に調製することができる。ほんの１例として、例示的なＳＭＳＭを調製するためのスキームを提供する。
[0131] いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭを調製するためのスキームは、スキーム１である。
式中、ＰＧ１は適切な保護基１であり、ＰＧ２は適切な保護基２である。いくつかの実施形態では、ＰＧ１及びＰＧ２は、実施例に記載されるとおりである。
[0132] いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭ化合物は、表１又は表２から選択される。表１及び表２の化合物を、上記の全般スキーム１及び以下の実施例１～８に概説される手順を使用して作製することができる。
[0133] いくつかの実施形態では、本明細書において、表１又は表２からのＳＭＳＭ化合物の薬学的に許容可能な塩又は薬学的に許容可能な溶媒和化合物を開示する。
医薬組成物
[0134] いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、医薬組成物に製剤化される。医薬組成物は、薬学的に使用され得る調製物への活性化合物のプロセシングを促進する１以上の薬学的に許容可能な不活性成分を使用して従来の様式で製剤化される。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書に記載の医薬組成物の概要は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９７５、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ，Ｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０、及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）で見ることができ、これらは、かかる開示のために参照により本明細書に組み込まれる。
[0135] 医薬組成物は、本明細書に記載のＳＭＳＭと、１以上の他の化学成分（すなわち、薬学的に許容可能な成分）、例えば担体、賦形剤、結合剤、充填剤、懸濁剤、香味剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、滑沢剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、湿潤剤（moistening agent）、可塑剤、安定剤、浸透促進剤、湿潤剤（wetting agent）、消泡剤、抗酸化剤、防腐剤、又はそれらの１以上の組合せとの混合物とすることができる。医薬組成物は、化合物の生物への投与を容易にする。
[0136] 本明細書に記載の組成物は、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、結腸内（colonically）、直腸、又は腹腔内を含む様々な方法で対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、小分子スプライシング調節因子又はその薬学的に許容可能な塩は、対象の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、又は静脈内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非経口、静脈内、筋肉内、又は経口投与することができる。小分子スプライシング調節因子を含む経口薬剤は、液剤、錠剤、カプセル剤などの経口投与に好適な任意の形態とすることができる。経口製剤は、胃内での溶解を防止又は低減するためにさらにコーティング又は処理することができる。本開示の組成物は、当技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して対象に投与することができる。本開示における使用に好適な製剤及び送達方法は、概して、当技術分野で周知である。例えば、本明細書に記載の小分子スプライシング調節因子は、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、又は賦形剤とともに医薬組成物として製剤化することができる。本組成物は、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなど、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、湿潤剤などを含む生理学的条件に近づけるのに必要な薬学的に許容可能な補助物質を含み得る。
[0137] 本明細書に記載の医薬製剤は、経口、非経口（例えば、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、髄内注射、髄腔内注射、直接の心室内注射、腹腔内注射、リンパ管内注射、鼻腔内注射）、鼻腔内、頬側、局所、又は経皮投与経路を含むが、これらに限定されない複数の投与経路によって、様々な方法で対象に投与可能であり得る。本明細書に記載の医薬製剤には、水性液体分散剤、自己乳化分散剤、固体溶液（solid solution）、リポソーム分散剤、エアロゾル、固形剤形、粉末剤、即時放出剤、徐放性製剤、速溶性製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出型製剤、持続放出型製剤、パルス放出製剤、多粒子性製剤、及び即時放出と徐放性との混合製剤が含まれるが、これらに限定されない。
[0138] いくつかの実施形態では、医薬製剤は、錠剤の形態である。他の実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭを含む医薬製剤は、カプセル剤の形態である。１態様では、経口投与用の液体製剤剤形は、水性経口分散剤、エマルション、溶液、エリキシル剤、ゲル剤、及びシロップ剤を含む群から選択されるが、これらに限定されない水性懸濁液又は溶液の形態である。
[0139] 吸入による投与の場合、本明細書に記載のＳＭＳＭは、エアロゾル、ミスト、又は粉末剤として使用するために製剤化することができる。頬側又は舌下投与の場合、本組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤、トローチ剤、又はゲル剤の形態をとり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、経皮剤形として調製することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、筋肉内、皮下、又は静脈内注射に好適な医薬組成物に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、局所投与することができ、溶液、懸濁剤、ローション剤、ゲル剤、ペースト剤、薬用スティック剤、香膏剤、クリーム剤、又は軟膏などの様々な局所投与可能な組成物に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、直腸組成物、例えば、浣腸剤、直腸ゲル剤、直腸泡剤、直腸エアロゾル、座薬、ゼリー座薬、又は停留浣腸剤などに製剤化することができる。
スプライシング調節
[0140] 本開示は、標的ＲＮＡのスプライシングの活性を調節する好ましい薬物特性を有する小分子の使用を企図する。標的ポリヌクレオチドのスプライシングを調節する小分子スプライシング調節因子（ＳＭＳＭ）が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭは、標的ＲＮＡに結合し、それを調節する。いくつかの実施形態では、１以上の標的ＲＮＡに結合し、調節するＳＭＳＭのライブラリが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡ、非コードＲＮＡである。いくつかの実施形態では、標的ＲＮＡは、プレｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、標的ＲＮＡは、ｈｎＲＮＡである。いくつかの実施形態では、小分子が、標的ＲＮＡのスプライシングを調節する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される小分子は、標的ＲＮＡの配列においてスプライシングを調節する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される小分子は、標的ＲＮＡの潜在スプライス部位配列においてスプライシングを調節する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される小分子は、標的ＲＮＡに結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される小分子は、スプライシング複合体構成成分に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される小分子は、標的ＲＮＡ及びスプライシング複合体構成成分に結合する。
[0141] したがって、プレｍＲＮＡ分子におけるスプライシング事象を防止又は誘導する方法であって、（例えば、細胞内の）スプライシング機構のプレｍＲＮＡ分子及び／又は他の要素を本明細書に提供される化合物と接触させて、プレｍＲＮＡ分子におけるスプライシング事象を防止又は誘導することを含むものである方法が本明細書に提供される。防止又は誘導されたスプライシング事象は、例えば、異常なスプライシング事象、構成的スプライシング事象、又は選択的スプライシング事象であり得る。
[0142] 本明細書においては、プレｍＲＮＡ分子におけるスプライシング事象を防止又は誘導することができる化合物を特定する方法であって、プラスの効果（スプライシングの防止若しくは誘導）又はマイナスの効果（スプライシングの防止若しくは誘導がない）がもたらされ、かつそれが検出されるという条件下で、その化合物を、（例えば、細胞内の）本明細書に記載の選択的スプライシング、異常なスプライシング、及び／又は構成的スプライシングに関与するスプライシング要素及び／又は因子と接触させることと、スプライシング事象を防止又は誘導することができる化合物としてプラスの効果をもたらす化合物を特定することとを含むものである方法がさらに提供される。
[0143] いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な担体中の本明細書に記載の小分子化合物は、プレｍＲＮＡ分子における選択的スプライシング事象又は異常なスプライシング事象を防止又は誘導する。上述のように、本明細書に提供される小分子化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はアンチジーンオリゴヌクレオチドではない。
[0144] いくつかの実施形態では、疾患又は状態を有する対象を治療する方法は、疾患又は状態を有する対象に、小分子スプライシング調節因子化合物（ＳＭＳＭ）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、プレｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、方法は、対象に追加の治療用分子を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭは、本明細書に記載の化合物である。
[0145] 本明細書に記載の化合物及び製剤は、異常なスプライシング及び／又は選択的スプライシングを伴う疾患の治療における治療剤としても有用である。したがって、いくつかの実施形態では、プレｍＲＮＡ分子中の選択的スプライシング事象又は異常なスプライシング事象に関連する状態又は障害を有する対象を治療する方法は、対象に本明細書に記載の化合物の治療有効量を投与して、選択的スプライシング事象を調節するか、又は異常なスプライシング事象を防止し、それにより、対象を治療することを含む。本方法は、例えば、プレｍＲＮＡ分子中に正しいスプライシング事象を回復させることができる。本方法は、例えば、薬学的に許容可能な担体中で本明細書に記載の小分子化合物を利用することができる。
[0146] 本明細書に記載の小分子を含む製剤は、水性担体などの生理学的又は薬学的に許容可能な担体を含むことができる。したがって、本明細書に記載の方法に使用するための製剤には、例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、及び動脈内投与、並びに局所投与（例えば、嚢胞性線維症又は肺癌に罹患している患者の肺への呼吸域粉塵のエアロゾル化製剤の投与、又は乾癬患者の経皮投与用のクリーム若しくはローション製剤の投与）を含む、経口投与、非経口投与に好適なものが含まれるが、これに限定されない。これらの製剤は、単位剤形で簡便にもたらされ得、当技術分野で周知の方法のうちのいずれかによって調製され得る。任意の所与の場合での最も好適な投与経路は、当業者によって容易に決定されるであろう、治療される対象、性質、及び状態の重症度、並びに使用されている特定の活性化合物に依存し得る。
[0147] 本明細書においては、上で述べたように、プレｍＲＮＡ分子の異常なスプライシング又は選択的スプライシングに関連する障害を有する患者におけるＲＮＡ発現を発現増加又は発現減少させるための医薬の調製のために上に記載された特性を有する本明細書に記載の化合物を使用するための方法も提供される。いくつかの実施形態では、医薬は、遺伝子発現を増加させる。他の実施形態では、医薬は、遺伝子発現を減少させる。本開示による医薬の製造において、本化合物は、特に、薬学的に許容可能な担体と混合され得る。担体は、固体又は液体であり得る。１以上の化合物が本明細書に記載の製剤に任意の組合せで組み込まれてもよく、これは、構成成分の混合及び／又は１以上の補助治療成分の包含などの周知の調剤技法のうちのいずれかによって調製され得る。
[0148] 本開示は、ｍＲＮＡスプライシングを遮断する、及び／又はｍＲＮＡスプライシングを増強（促進、増大）するものである、（本明細書では小分子と称されることもある低分子量化合物を特定する。本明細書に記載の方法によって調節され得るスプライシングには、選択的スプライシングが含まれ、例えば、エクソンスキッピング、イントロン保持、偽エクソンスキッピング、エクソン排除、部分的イントロン排除、及び他のものである。関与するスプライシング配列及びＲＮＡ（又はＲＮＡをコードする遺伝子）又はエクソンなどの因子に応じて、スプライシングの調節は、目的とするスプライシング配列に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯ）の存在下又は不在下で達成され得る。いくつかの実施形態では、小分子及びＡＯは、相乗的に作用する。
[0149] いくつかの実施形態では、本開示は、プレｍＲＮＡの異常スプライシングに関連する疾患又は状態に罹患している対象を治療する方法を提供する。本方法は、対象に、ＳＭＳＭ又はＳＭＳＭを含む組成物を投与することを含むことができるものであり、該ＳＭＳＭが、プレｍＲＮＡ又はスプライシング複合体構成成分に結合し、そしてプレｍＲＮＡのスプライシングを調節して、転写物の１以上のアイソフォームの発現を阻害する。本方法は、対象に、ＳＭＳＭ又はＳＭＳＭを含む組成物を投与することを含むことができるものであり、該ＳＭＳＭが、プレｍＲＮＡ又はスプライシング複合体構成成分に結合し、そしてプレｍＲＮＡのスプライシングを調節して、転写物の１以上のアイソフォームの発現を増加させる。
[0150] いくつかの疾患は、ある遺伝子の異常な遺伝子産物（例えば、ＲＮＡ転写物又はタンパク質）の発現と関連している。例えば、異常量のＲＮＡ転写物により、対応するタンパク質発現の変化に起因して疾患を引き起こす場合がある。特定のＲＮＡ転写物の量の変化は、いくつかの因子の結果である可能性がある。第１に、転写因子又は転写プロセスの一部の混乱などによる、ＲＮＡ転写物の量の変化は、特定の遺伝子の異常な転写レベルに起因する場合があり、これが結果として特定のＲＮＡ転写物の発現レベルの変化をもたらす。第２に、特定のスプライシングプロセスの混乱又は修飾スプライシングをもたらす遺伝子の変異などによる、特定のＲＮＡ転写物のスプライシングの変化は、特定のＲＮＡ転写物のレベルを変化させる可能性がある。特定のＲＮＡ転写物の安定性の変化、又は例えば、ポリＡ尾部組み込みプロセス若しくはＲＮＡ転写物に結合して安定化するある特定の因子若しくはタンパク質への影響など、ＲＮＡ転写物の安定性を維持する構成成分の変化は、特定のＲＮＡ転写物のレベルの変化につながり得る。特定のＲＮＡ転写物の翻訳レベルもそれらの転写物の量に影響を与え、ＲＮＡ転写物の崩壊プロセスに影響を与える又はそれを上方制御する可能性がある。最後に、異常なＲＮＡ輸送又はＲＮＡ隔離もＲＮＡ転写物の機能レベルの変化につながる可能性があり、そしてＲＮＡ転写物の安定性、さらなるプロセシング、又は翻訳に影響を与え得る。
[0151] いくつかの実施形態では、プレｍＲＮＡによってコードされる１、２、３、又はそれ以上のＲＮＡ転写物の量を調節するための方法であって、細胞を、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩と接触させることを含む方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、細胞を、細胞培養下でＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩と接触させる。他の実施形態では、細胞を、対象（例えば、非ヒト動物対象又はヒト対象）において、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩と接触させる。
[0152] いくつかの実施形態では、疾患又は状態を治療する、予防する、及び／又はその進行を遅延させるための方法であって、対象、具体的には哺乳動物に、本明細書に記載の小分子スプライシング調節因子の有効量を投与することを含む方法が本明細書に提供される。
[0153] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩のプレｍＲＮＡへの結合は、プレｍＲＮＡの集団由来の１つ以上のエクソン及び／若しくはイントロン並びに／又はそれらのタンパク質からのスプライシングを防止して、標的タンパク質又は機能性ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを産生する。いくつかの実施形態では、細胞は、標的タンパク質又は機能性ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたプレｍＲＮＡの集団を含むものであり、該プレｍＲＮＡの集団は、１つ以上のエクソンからのスプライシングを引き起こす変異を含み、またＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、プレｍＲＮＡの集団における１つ以上のエクソンからのスプライシングを引き起こす変異に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の、１つ以上のエクソンからのスプライシングを引き起こす変異への結合は、プレｍＲＮＡの集団由来の１つ以上のエクソンからのスプライシングを防止して、標的タンパク質又は機能性ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを産生する。いくつかの実施形態では、状態は、疾患又は障害である。いくつかの実施形態では、本方法は、タンパク質発現を評価することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、プレｍＲＮＡの標的部分に結合する。
[0154] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の結合は、欠損しているエクソンの包含又は望ましくない保持イントロン若しくはその一部の除去を触媒し、結果として健常ｍＲＮＡ及びタンパク質をもたらす。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の結合は、非疾患細胞にほとんど又は全く影響しない。
ＳＭＳＭ標的
[0155] プレｍＲＮＡなどのｍＲＮＡの異常なスプライシングは、欠陥タンパク質をもたらす可能性があり、対象に疾患又は障害を引き起こす可能性がある。本明細書に記載の組成物及び方法は、プレｍＲＮＡなどのｍＲＮＡのこの異常なスプライシングを減少させ、この異常なスプライシングによって引き起こされる疾患又は障害を治療することができる。
[0156] ＲＮＡ転写物の量の変化に関連する疾患は、多くの場合、異常なタンパク質発現に焦点を当てて治療される。しかしながら、スプライシングプロセスの構成成分又は関連の転写因子若しくは関連の安定性因子など、ＲＮＡレベルの異常な変化に関与するプロセスが、小分子での治療によって標的とすることができるのであれば、ＲＮＡ転写物又は関連タンパク質の異常なレベルの発現の望ましくない影響であるようなタンパク質発現レベルを回復させることが可能であろう。したがって、ＲＮＡ転写物又は関連タンパク質の異常な発現に付随する疾患を予防又は治療する方法として、ある特定の遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写物の量を調節する方法が要望されている。
治療方法
[0157] 本明細書に記載の組成物及び方法は、異常なプレｍＲＮＡスプライシングなどの異常なスプライシングに関連するヒトの疾患又は障害を治療するために使用することができる。本明細書に記載の組成物及び方法は、プレｍＲＮＡなどのｍＲＮＡを調節することによってヒトの疾患又は障害を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、核酸が、治療される疾患又は障害の病因において異常にスプライシングされていない場合であっても、その核酸のスプライシングを調節することによってヒトの疾患又は障害を治療するために使用することができる。
[0158] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩又はその組成物若しくは医薬の投与の文脈での有効量とは、治療効果及び／又は有益な効果を有する、患者へのＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の量を指す。ある特定の具体的な実施形態では、患者へのＳＭＳＭ化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩又はその組成物若しくは医薬の投与の文脈での有効量が、以下の効果：（ｉ）疾患の重症度を軽減又は改善すること、（ｉｉ）疾患の発症を遅延させること、（ｉｉｉ）疾患の進行を阻止すること、（ｉｖ）対象の入院を減らすこと、（ｖ）対象の入院期間を短縮すること、（ｖｉ）対象の生存率を増加させること、（ｖｉｉ）対象の生活の質を向上すること、（ｖｉｉｉ）疾患に関連する症状の数を減少させること、（ｉｘ）疾患に関連する症状の重症度を軽減又は改善すること、（ｘ）関連する疾患に関連する症状の持続期間を短縮すること、（ｘｉ）疾患に関連する症状の再発を予防すること、（ｘｉｉ）疾患の症状の出現又は発症を阻止すること、及び／又は（ｘｉｉｉ）疾患に関連する症状の進行を阻止すること、のうちの１、２、又はそれ以上を結果としてもたらす。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、遺伝子のＲＮＡ転写物の量を、健常患者又は健常患者由来の細胞における検出可能なＲＮＡ転写物の量まで回復させるのに有効な量である。他の実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、遺伝子のＲＮＡアイソフォーム及び／又はタンパク質アイソフォームの量を、健常患者又は健常患者由来の細胞における検出可能なＲＮＡアイソフォーム及び／又はタンパク質アイソフォームの量まで回復させるのに有効な量である。
[0159] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、疾患に関連する遺伝子のＲＮＡ転写物の異常量を減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、遺伝子のアイソフォームの異常な発現量を減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、ＲＮＡ転写物（例えば、ｍＲＮＡ転写物）、選択的スプライスバリアント、又はアイソフォームの量に実質的な変化をもたらすのに有効な量である。
[0160] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、疾患の予防及び／又は治療に有益な遺伝子のＲＮＡ転写物（例えば、ｍＲＮＡ転写物）の量を増加又は減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、疾患の予防及び／又は治療に有益な遺伝子のＲＮＡ転写物の選択的スプライスバリアントの量を増加又は減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭ化合物又はその薬学的に許容可能な塩の有効量は、疾患の予防及び／又は治療に有益な遺伝子のアイソフォームの量を増加又は減少させるのに有効な量である。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＳＭＮ２である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのスプライシングを調節することは、エクソン７のスキッピングを阻害することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭ化合物及びそれらの使用方法は、ＳＭＮ２のプレｍＲＮＡのスプライシングを調節することができる。例えば、本明細書に記載のＳＭＳＭ化合物及びそれらの使用方法は、ＳＭＮ２のプレｍＲＮＡのエクソン７のスプライシングを調節することができる。いくつかの実施形態では、このＳＭＳＭ化合物及び方法は、表３に開示されたスプライシング配列を介してポリヌクレオチドのスプライシングを調節し、開示された疾患を治療する。
[0161] １実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、本明細書に記載の疾患又は状態の治療用の医薬の調製に使用することができる。加えて、かかる治療を必要とする対象における本明細書に記載の疾患又は状態のうちのいずれかを治療するための方法は、対象に、治療有効量で、本明細書に記載の少なくとも１つのＳＭＳＭ又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することを含み得る。
[0162] ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、予防的及び／又は治療的治療のために投与することができる。ある特定の治療用途では、本組成物は、疾患又は状態にすでに罹患している患者に、その疾患又は状態の症状のうちの少なくとも１つを治癒する又は少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で投与される。この使用に有効な量は、疾患又は状態の重症度及び経過、それまでの療法、患者の健康状態、体重、及び薬物への応答、並びに治療担当医の判断に依存する。治療有効量は、用量漸増臨床試験を含むが、これに限定されない方法によって任意に決定される。予防的用途では、本明細書に記載のＳＭＳＭを含む組成物は、特定の疾患、障害、又は状態にかかりやすいか、又はそうでなければそのリスクがある患者に投与することができる。ある特定の実施形態では、投与される薬物の用量は、ある特定の期間にわたって一時的に減らされてもよく、又は一時的に中断されてもよい（すなわち、「休薬期間」）。成人ヒト治療に用いられる用量は、典型的には、０．０１ｍｇ～５０００ｍｇ／日又は約１ｍｇ～約１０００ｍｇ／日の範囲である。いくつかの実施形態では、所望の用量は、単回用量又は分割用量で好都合に提示される。
[0163] 本明細書に記載の併用療法の場合、同時投与される化合物の投薬量は、用いられる共薬の種類、用いられる特定の薬物、治療される疾患又は状態などに応じて変動し得る。さらなる実施形態では、１以上の他の治療剤と同時投与される場合、本明細書に提供される化合物は、１つ以上の他の治療剤と同時に投与されるか、又は順次投与されるかのいずれかである。投与が同時である場合、複数の治療剤は、ほんの１例として、単一の統合した形態で又は複数の形態で提供され得る。
投与方法
[0164] 本明細書に記載の組成物は、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、結腸内（colonically）、直腸、又は腹腔内を含む様々な方法で対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、小分子スプライシング調節因子又はその薬学的に許容可能な塩は、対象の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、又は静脈内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非経口、静脈内、筋肉内、又は経口投与することができる。小分子スプライシング調節因子を含む経口薬剤は、液剤、錠剤、カプセル剤などの経口投与に好適な任意の形態とすることができる。経口製剤は、胃内での溶解を防止又は低減するためにさらにコーティング又は処理することができる。本開示の組成物は、当技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して対象に投与することができる。本開示における使用に好適な製剤及び送達方法は、概して、当技術分野で周知である。例えば、本明細書に記載の小分子スプライシング調節因子は、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、又は賦形剤とともに医薬組成物として製剤化することができる。本組成物は、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなど、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、湿潤剤などを含む生理学的条件に近づけるのに必要な薬学的に許容可能な補助物質を含み得る。
[0165] 本明細書に記載の医薬製剤は、経口、非経口（例えば、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、髄内注射、髄腔内注射、直接の心室内注射、腹腔内注射、リンパ管内注射、鼻腔内注射）、鼻腔内、頬側、局所、又は経皮投与経路を含むが、これらに限定されない複数の投与経路によって、様々な方法で対象に投与可能であり得る。本明細書に記載の医薬製剤には、水性液体分散剤、自己乳化分散剤、固体溶液（solid solution）、リポソーム分散剤、エアロゾル、固形剤形、粉末剤、即時放出剤、徐放性製剤、速溶性製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出型製剤、持続放出型製剤、パルス放出製剤、多粒子性製剤、及び即時放出と徐放性との混合製剤が含まれるが、これらに限定されない。
[0166] いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、経口投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、局所投与される。かかる実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、溶液、懸濁剤、ローション剤、ゲル剤、ペースト剤、シャンプー剤、スクラブ剤、塗擦剤（rub）、塗布剤（smear）、薬用スティック剤、薬用絆創膏、バーム剤、クリーム剤、又は軟膏などの様々な局所投与可能な組成物に製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮膚に局所投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、吸入によって投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、鼻腔内投与用に製剤化される。かかる製剤には、鼻腔スプレー、鼻腔ミストなどが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、点眼薬として製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、（ａ）哺乳動物に全身投与される、及び／又は（ｂ）哺乳動物に経口投与される、及び／又は（ｃ）哺乳動物に静脈内投与される、及び／又は（ｄ）哺乳動物に吸入によって投与される、及び／又は（ｅ）哺乳動物に経鼻投与によって投与される、又は、及び／又は（ｆ）哺乳動物に注射によって投与される、及び／又は（ｇ）哺乳動物に局所投与される、及び／又は（ｈ）眼投与によって投与される、及び／又は（ｉ）哺乳動物に直腸投与される、及び／又は（ｊ）哺乳動物に非全身投与若しくは局部投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、哺乳動物に経口投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、全身様式ではなく局部様式で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、局所投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＭＳＭは、全身投与される。
[0167] 経口組成物は、概して、不活性希釈剤又は食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル内に封入することができるか、又は錠剤に圧縮することができる。治療的経口投与のために、活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれて、錠剤、トローチ剤、又はカプセル剤の形態で使用することができる。薬学的に適合性の結合剤及び／又はアジュバント材料は、本組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の構成成分、例えば微結晶性セルロース、トラガカントガム、又はゼラチンなどの結合剤、デンプン又はラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、又はトウモロコシデンプンなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム又はステロテスなどの滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤、スクロース又はサッカリンなどの甘味剤、又はペパーミント、サルチル酸メチル、オレンジ香味などの香味剤のうちのいずれか、又は類似の性質の化合物、を含むことができる。
[0168] 吸入による投与の場合、本化合物は、好適な噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガス、又はネブライザーを含む圧力容器又はディスペンサーからのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
[0169] 全身投与は、経粘膜手段又は経皮手段によるものである場合もある。経粘膜投与又は経皮投与の場合、透過されるバリアに適切な浸透剤が製剤中に使用される。かかる浸透剤は、当技術分野で概して公知であり、これらには、例えば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻腔スプレー又は座薬の使用によって達成することができる。経皮投与の場合、本活性化合物は、当技術分野で概して公知の軟膏、軟膏剤、ゲル剤、又はクリーム剤に製剤化される。
[0170] 注射用途に好適なＳＭＳＭには、滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用の滅菌水溶液（水溶性である場合）又は分散液及び滅菌粉末剤が含まれる。静脈内投与の場合、好適な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ社、ニュージャージー州パーシッパニー）、又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。いずれの場合にも、本組成物は、滅菌でなければならず、容易な通針性（syringability）が存在する程度に流動性であるべきである。本組成物は、製造及び保管条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌などの微生物からの汚染に対して保存されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒体とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合には必要な粒子サイズの維持によって、かつ界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合、本組成物中に、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。
投薬及びスケジュール
[0171]
本開示の方法で利用されるＳＭＳＭは、例えば、対象の要件、治療される及び／若しくは画像化される状態の重症度、並びに／又は用いられるＳＭＳＭに応じて変動し得る投薬量で投与することができる。例えば、投薬量は、特定の対象において診断された疾患の種類及び病期、並びに／又はＳＭＳＭとともに使用される画像化法の種類を考慮して経験的に決定することができる。本開示の文脈では、対象に投与される用量は、対象における有益な診断又は治療応答に影響を与えるのに十分であるべきである。用量のサイズは、特定の対象におけるＳＭＳＭの投与に伴う任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度によって決定することもできる。
[0172] 投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、組成物を単位剤形で製剤化することが有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、治療される対象に単位投薬量として適している物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形の仕様は、本活性化合物の特有の特徴及び達成される特定の治療効果、並びに個体の治療のためのかかる活性化合物を配合する技術に固有の制限によって決定され、かつそれらに直接依存する。かかる化合物の毒性及び治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養物又は実験動物における手順によって決定することができる。毒作用と治療効果との間の用量比が治療指数となり、これは、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表すことができる。大きい治療指標を呈する化合物が好ましい。毒性副作用を呈する化合物が使用され得るが、かかる化合物を罹患組織の部位に標的させる送達系を設計して、非感染細胞への潜在的な損傷を最小限に抑え、それにより、副作用を軽減するように注意が払われなければならない。
[0173] 細胞培養アッセイ及び／又は動物試験から得られた治療指数データは、インビボでの治療指数を予測する際、及びヒト対象などの対象における使用のためのある範囲の投薬量を処方する際に使用することができる。細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータは、ヒトにおける使用のためのある範囲の投薬量を処方する際に使用することができる。かかる化合物の投薬量は、好ましくは、ほとんど又は全く毒性のないＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。本開示の方法で使用されるいずれの化合物の場合にも、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。用量は、細胞培養下で決定される症状の半数阻害を達成する試験化合物の濃度を含む血中血漿濃度範囲を達成するために動物モデルで処方され得る。かかる情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。疾患又は状態を予防又は軽減する際に特定のＳＭＳＭの有効性を評価するための様々な動物モデル及び臨床アッセイが本開示で使用され得る。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。正確な製剤、投与経路、及び投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。（例えば、Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ，１９７５，Ｉｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｃｈ．１ ｐｉを参照されたい）。
[0174] 本開示の組成物は、必要に応じて、毎時、毎日、毎週、又は毎月を含めて、必要な頻度で投与することができる。
[0175] 前述の態様のうちのいずれにおいても、（ｉ）本化合物が１回投与される、（ｉｉ）本化合物が１日にわたって哺乳動物に複数回投与される、（ｉｉｉ）継続的に投与される、又は（ｉｖ）連続的に投与されるといったさらなる実施形態を含めて、本明細書に記載のＳＭＳＭの有効量の単回投与を含むさらなる実施形態が存在する。
[0176] 前述の態様のうちのいずれにおいても、（ｉ）本化合物が単回用量として連続的又は間欠的に投与される、（ｉｉ）複数回投与間の時間が６時間毎である、（ｉｉｉ）本化合物が哺乳動物に８時間毎に投与される、（ｉｖ）本化合物が哺乳動物に１２時間毎に投与される、（ｖ）本化合物が哺乳動物に２４時間毎に投与されるといったさらなる実施形態を含めて、本明細書に記載のＳＭＳＭの有効量の複数回投与を含むさらなる実施形態が存在する。さらなる又は代替の実施形態では、本方法は、休薬期間を含み、ここで、本明細書に記載のＳＭＳＭの投与が一時的に中断されるか、又は投与される本化合物の用量が一時的に減少され、休薬期間の終了時に、本化合物の投与が再開される。１実施形態では、休薬期間の長さは、２日間～１年間と変動する。
併用療法
[0177] ある特定の例では、本明細書に記載の少なくとも１のＳＭＳＭを別の治療薬と併用して投与するのが適切である。例えば、本明細書に記載の化合物ＳＭＳＭは、第２の治療薬と同時投与することができ、ここで、ＳＭＳＭと第２の治療剤は、治療しようとする疾患、障害、又は状態の様々な態様を調節し、それにより、いずれかの治療薬単独での投与よりも大きい全体的な利益をもたらす。
[0178] いくつかの実施形態では、ＳＭＳＭは、１以上の他のＳＭＳＭと併用で投与され得る。
[0179] ＳＭＳＭは、他の治療薬の投与前に、それと同時に、又はその後に、必要とする対象に投与され得る。例えば、ＳＭＳＭは、他の治療薬の投与開始時間の少なくとも８時間前、７時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１．５時間前、１時間前、又は３０分前に、対象に投与され得る。ある特定の実施形態では、それらは、他の治療薬の投与と同時に投与され得る。言い換えれば、これら実施形態では、ＳＭＳＭは、他の治療薬の投与を開始する時に同時に投与される。他の実施形態では、ＳＭＳＭは、他の治療薬の投与開始時間の後（例えば、他の治療薬の投与開始時間の少なくとも３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、又は８時間後）に投与され得る。あるいは、ＳＭＳＭは、他の治療薬の投与完了の少なくとも３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、又は８時間後に投与され得る。概して、これらＳＭＳＭは、疾患又は状態が予防又は軽減されるように、十分な期間にわたって投与される。かかる十分な期間は、他の治療薬が投与される期間と同一であってもよく、又は異なっていてもよい。ある特定の実施形態では、ＳＭＳＭの複数回用量は、別の治療薬の投与毎に、又は複数の他の治療薬の併用の投与毎に投与される。
[0180] ある特定の実施形態では、ＳＭＳＭの適切な投薬量は、疾患又は状態を予防又は軽減するのに最適な効果を達成するために、特定のタイミング及び／又は特定の経路と組み合わせられる。例えば、ＳＭＳＭは、別の治療薬又は他の治療薬の併用の投与の開始又は完了よりも、少なくとも、１時間前若しくは１時間後、２時間前若しくは２時間後、３時間前若しくは３時間後、４時間前若しくは４時間後、５時間前若しくは５時間後、６時間前若しくは６時間後、７時間前若しくは７時間後、８時間前若しくは８時間後、９時間前若しくは９時間後、１０時間前若しくは１０時間後、１１時間前若しくは１１時間後、又は１２時間前若しくは１２時間後、又は少なくとも、１日前若しくは１日後、２日前若しくは２日後、３日前若しくは３日後、４日前若しくは４日後、５日前若しくは５日後、６日前若しくは６日後、７日前若しくは７日後、８日前若しくは８日後、９日前若しくは９日後、１０日前若しくは１０日後、１１日前若しくは１１日後、１２日前若しくは１２日後、又は少なくとも、１週間前若しくは１週間後、２週間前若しくは２週間後、３週間前若しくは３週間後、又は４週間前若しくは４週間後、又は少なくとも、１ヶ月前若しくは１ヶ月後、２ヶ月前若しくは２ヶ月後、３ヶ月前若しくは３ヶ月後、４ヶ月前若しくは４ヶ月後、５ヶ月前若しくは５ヶ月後、６ヶ月前若しくは６ヶ月後、７ヶ月前若しくは７ヶ月後、８ヶ月前若しくは８ヶ月後、９ヶ月前若しくは９ヶ月後、１０ヶ月前若しくは１０ヶ月後、１１ヶ月前若しくは１１ヶ月後、又は１２ヶ月前若しくは１２ヶ月後に、ヒトに経口投与され得る。
対象
[0181] 本明細書に記載のＳＭＳＭ及び方法で治療することができる対象は、選択的スプライシングを受けるｍＲＮＡを産生する任意の対象とすることができ、例えば、対象は、植物又は動物などの真核生物対象であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト動物である。いくつかの実施形態では、対象は、胎児（fetus）、胚（embryo）、又は小児である。いくつかの実施形態では、対象は、チンパンジーなどの非ヒト霊長類、並びに他の類人猿及びサル種、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜、例えばウサギ、イヌ、及びネコなどの飼育動物、例えばラット、マウス、及びモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物などである。いくつかの実施形態では、対象は、出生前（例えば、胎児）、小児（例えば、新生児、乳児、幼児、青年期前小児）、青年期児、思春期児、又は成人（例えば、成人早期、中年成人、高齢者）である。
[0182] これら実施例は、例示のみを目的として提供されており、本明細書に提供される特許請求の範囲を限定するものではない。本明細書に記載の化合物は、標準の合成技術を使用して、又は本明細書に記載の方法と組み合わせて当技術分野で公知の方法を使用して合成することができる。別途示されない限り、質量分析法、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡの技術、及び薬理学の従来の方法を用いることができる。化合物は、標準の有機化学分野の技術、例えば、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．に記載のものなどを使用して調製することができる。溶媒、反応温度、反応時間の変動、並びに様々な化学試薬及び他の反応条件など、本明細書に記載の合成による変換の代替的な反応条件が用いられてもよい。本明細書に記載の化合物の合成に使用される出発物質及び試薬は、合成してもよく、又はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ社、Ｆｌｕｋａ社、及びＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社などが挙げられるがこれらに限定されない商業的供給元から入手することもできる。出発物質は、商業的供給元から入手可能であり得るか、又は容易に調製することができる。ほんの１例として、本明細書に記載の実施例を準備するためのスキームを提供する。
[0183] 以下の略語を使用する：ＤＣＭ － ジクロロメタン；ＤＩＰＥＡ － Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＳＯ － ジメチルスルホキシド；ＤＭＦ － Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；ＥＤＣＩ － Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド；Ｅｔ２Ｏ － ジエチルエーテル；ＥｔＯＡｃ － 酢酸エチル；ＥｔＯＨ － エチルアルコール；ＨＯＢｔ － １－ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＬＣＭＳ － 液体クロマトグラフィー質量分析計；ＭｅＣＮ － アセトニトリル；ＭｅＯＨ － メチルアルコール；Ｍｓ － メシラート；ＭＴＢＥ － メチル ｔｅｒｔ－ブチルエーテル；セレクトフルオル（Selectfluor） － １－クロロメチル－４－フルオロ－１，４－ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタン ビス（テトラフルオロボラート）；ＳＦＣ － 超臨界流体クロマトグラフィー；ＴＨＦ － テトラヒドロフラン；ＴＭＳＣｌ － トリメチルシリルクロリド；ｈ － 時間；ｍｉｎ － 分；ｒｔ － 室温（２２～２５℃）；ｇ － グラム；ｍＬ － ミリリットル；ｍｇ － ミリグラム；ｍｍｏｌ － ミリモル。
[0184] 本明細書に記載の化合物の調製に有用な反応物の合成について詳述しているか、又は調製について記載している記事の参考文献を提供する好適な参考文献及び論文としては、例えば、“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｓ．Ｒ．Ｓａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，”２ｎｄ Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８３、Ｈ．Ｏ．Ｈｏｕｓｅ，“Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ”，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉｎｃ．Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．１９７２、Ｔ．Ｌ．Ｇｉｌｃｈｒｉｓｔ，“Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２、Ｊ．Ｍａｒｃｈ，“Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ”，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２、が挙げられる。本明細書に記載の化合物の調製に有用な反応物の合成について詳述しているか、又は調製について記載している記事の参考文献を提供するさらなる好適な参考文献及び論文としては、例えば、Ｆｕｈｒｈｏｐ，Ｊ．ａｎｄ Ｐｅｎｚｌｉｎ Ｇ．“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ”，Ｓｅｃｏｎｄ，Ｒｅｖｉｓｅｄ ａｎｄ Ｅｎｌａｒｇｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ ＩＳＢＮ：３ ５２７－２９０７４－５、Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ．Ｖ．“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｎ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｔｅｘｔ”（１９９６）Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ ０－１９－５０９６１８－５、Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．Ｃ．“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ” ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９９）Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，ＩＳＢＮ：０－４７１－１９０３１－４、Ｍａｒｃｈ，Ｊ．“Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ” ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９２）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＩＳＢＮ：０－４７１－６０１８０－２；Ｏｔｅｒａ，Ｊ．（ｅｄｉｔｏｒ）“Ｍｏｄｅｒｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（２０００）Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，ＩＳＢＮ：３－５２７－２９８７１－１、Ｐａｔａｉ，Ｓ．“Ｐａｔａｉ’ｓ １９９２ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐｓ”（１９９２）Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ ＩＳＢＮ：０－４７１－９３０２２－９、Ｓｏｌｏｍｏｎｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇ．“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ” ７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０００）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＩＳＢＮ：０－４７１－１９０９５－０、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｃ．，“Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９３）Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＩＳＢＮ：０－４７１－５７４５６－２、“Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ：Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ：Ａｎ Ｕｌｌｍａｎｎ’ｓ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ”（１９９９）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＩＳＢＮ：３－５２７－２９６４５－Ｘ、全８巻、“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ”（１９４２－２０００）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、全５５巻超、及び“Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐｓ”Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、全７３巻、が挙げられる。
[0185] 記載されている反応では、反応への望ましくない関与を避けるために、最終生成物中において必要な場合、反応性官能基、例えば、ヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオ基、又はカルボキシ基を保護することが必要であり得る。保護基の生成及びそれらの除去に適用可能な技術についての詳細な説明は、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９９、及びＫｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ，Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９４に記載されており、これらは、かかる開示のために参照により本明細書に組み込まれる。
[0186] 実施例は、既知の技術を使用してなされ得、いくつかの実施形態では、例えば、スプライシング複合体構成成分、スプライセオソーム、又はプレｍＲＮＡ分子への核内移行を促進するように、さらに化学修飾することができる。当業者であれば、核内移行のための化学修飾（例えば、電荷の減少、サイズの最適化、及び／又は親油性の改変）のための標準の医薬化学的アプローチを理解するであろう。
立体化学：
[0187] （±）、又はラセミ（の）とは、生成物がエナンチオマーのラセミ混合物であることを示す。例えば、（±）（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）又はラセミ（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）とは、示される生成物の相対立体化学が同様の化合物及び／又は反応物の既知の立体化学に基づいており、またこの生成物は、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）及び（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）の両立体異性体のエナンチオマーのラセミ混合物である。分離したエナンチオマーの絶対立体化学が未決定である化合物は、単一のエナンチオマーのいずれか、例えば（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）又は（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）のいずれかとして表されるか、又はいずれかの可能性のある単一のエナンチオマーとして表される。このような場合、生成物は純粋かつ単一のエナンチオマーであるが、絶対立体化学は特定されないが、相対立体化学はわかっているので示されている。
[0188] 実施例１： ６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン及び６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン（化合物１Ａ及び１Ｂ）の調製。
[0189] ステップ１： ラセミの（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0190] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、６－ブロモ－３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン（２４．００ｇ、１１６．５ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（４３．０ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（６０ｍＬ、３４４．５ｍｍｏｌ）並びにｎ－ＢｕＯＨ（３６０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、室温に冷却し、水（７００ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。混合物を濾過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１））により精製し、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物を、黄色固体（２４ｇ、５５．８％）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７０、として得た。
[0191] ステップ２： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物の調製。
[0192] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ、５６．８４ｍｍｏｌ）、並びにジメチルホルムアミド（４２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、その後、窒素下で、内部温度を０℃に維持しながら、水素化ナトリウム（４．５４ｇ、１１３．５１ｍｍｏｌ、６０％）をいくつかに分けて加えた。冷浴を外し、混合物をさらに０．５時間攪拌し、窒素下で室温に自然昇温させた。ヨウ化メチル（７．２０ｍＬ、１１５．６６ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温でさらに１時間撹拌した。次いで反応混合物を、０℃に冷却して水（１Ｌ）でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、水（２×２５０ｍＬ）及び飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１９：１））により精製し、１７ｇ（７８％）の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを、ラセミの黄色固体、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８４、として得た。
[0193] ステップ３： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのキラル分離。
[0194] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（１１．００ｇ、２８．６８４ｍｍｏｌ）を、分取－ＳＦＣで個々の異性体へと精製した。以下の条件を使用し（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ－－ＨＰＬＣ；流量：４０ｍＬ／分；グラジエント：５０％Ｂ；２５０ｎｍ；ＲＴ１：３．９９分；ＲＴ２：６．１９分；注入量：４ｍｌ；実行数：８０）、異性体１（５．０ｇ）を黄色固体として、異性体２（５．２ｇ）を黄色固体として得た。
[0195] ステップ４： １－（５－ブロモ－２，４－ジヒドロキシフェニル）エテノンの調製。
[0196] ２０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、２，４－ジヒドロキシアセトフェノン（３５．００ｇ、２３０．０４ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムトリブロミド（１２２．０１ｇ、２５３．０４ｍｍｏｌ）、及びＣＨＣｌ３（６００ｍＬ）を加えた。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。次いで反応を、水（４００ｍＬ）でクエンチした。有機相を分離して、得られた水相を２×３００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。その有機相をまとめて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル：酢酸エチル／石油エーテル（２０／８０））にかけ、単離後、３７ｇの１－（５－ブロモ－２，４－ジヒドロキシフェニル）エタノンを白色固体として得た。
[0197] ステップ５： １－［５－ブロモ－２－ヒドロキシ－４－（メトキシメトキシ）フェニル］エテノンの調製。
[0198] ２０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、１－（５－ブロモ－２，４－ジヒドロキシフェニル）エタノン（３７ｇ、１６０．１４ｍｍｏｌ）、アセトン（５００ｍＬ）、炭酸カリウム（３５．４１ｇ、２５６．２３ｍｍｏｌ）、及びブロモメチルメチルエーテル（２５．８１ｇ、２０８．１９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。固体を濾過し、次いで濾液を濃縮した。得られた残渣を、４００ｍＬのＨ２Ｏと合わせて、２×５００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。有機相をまとめて、硫酸ナトリウム無水物で乾燥し、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲルカラム：石油エーテル／酢酸エチル（２０／１））にかけ、単離後、約３０ｇの１－［５－ブロモ－２－ヒドロキシ－４－（メトキシメトキシ）フェニル］エタノンを白色固体として得た。
[0199] ステップ６： １－［５－ブロモ－２－ヒドロキシ－４－（メトキシメトキシ）フェニル］ブタン－１，３－ジオンの調製。
[0200] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、１－［５－ブロモ－２－ヒドロキシ－４－（メトキシメトキシ）フェニル］エタノン（２８ｇ、１０１．７８ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）を加えた。この混合物に、乾燥窒素雰囲気下で、０℃で攪拌しながら、水素化ナトリウム（９．７７ｇ、４０７．１３ｍｍｏｌ）をいくつかに分けて加えた。得られた混合物を、０℃で１時間攪拌し、続いて乾燥酢酸エチル（１７．９４ｇ、２０３．５７ｍｍｏｌ）を加えた。酢酸エチル添加後、冷浴を外し、次いで得られた混合物を２時間攪拌した。その後、反応を、１００ｍＬの水を加えて慎重にクエンチした。得られた混合物を、２×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機相をまとめ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、約２５ｇの１－［５－ブロモ－２－ヒドロキシ－４－（メトキシメトキシ）フェニル］ブタン－１，３－ジオンを淡黄色固体として直接得た。
[0201] ステップ７： ６－ブロモ－７－ヒドロキシ－２－メチルクロメン－４－オンの調製。
[0202] １０００ｍＬの丸底フラスコに、１－［５－ブロモ－２－ヒドロキシ－４－（メトキシメトキシ）フェニル］ブタン－１，３－ジオン（２５ｇ、７８．８３ｍｍｏｌ）、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ－１５（２０．００ｇ）、ｉ－ＰｒＯＨ（３００ｍＬ）を合わせた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、還流で２時間攪拌した。反応物の加熱をやめ、自然冷却させた。固体を濾過し、３×２００ｍｌのＭｅＯＨで洗浄した。濾液をまとめて、濃縮し、乾燥により固化した残渣を得た。残渣を、メタノール（約２００ｍＬ）からの結晶化により精製し、単離後、１５ｇの６－ブロモ－７－ヒドロキシ－２－メチルクロメン－４－オンを灰色固体として得た。
[0203] ステップ８： ６－ブロモ－７－（メトキシメトキシ）－２－メチルクロメン－４－オンの調製。
[0204] 窒素でパージした５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、６－ブロモ－７－ヒドロキシ－２－メチルクロメン－４－オン（１５ｇ、５８．８１ｍｍｏｌ、１．００）、テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）、及びジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、その後、窒素雰囲気下で、水素化ナトリウム（２．１２ｇ、８８．２１ｍｍｏｌ）を慎重にいくつかに分けて加えた。得られた混合物を、０℃で１時間攪拌し、続いてメトキシメチルブロミド（１１．０２ｇ、８８．２１２ｍｍｏｌ）を加えた。冷浴を外し、次いで得られた混合物を周囲温度でさらに１時間撹拌した。反応を、水（１００ｍＬ）の添加によりクエンチし、得られた溶液を２×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。まとめた有機相を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物を固化させ、酢酸エチル／石油エーテル（４：１）からの再結晶により精製し、単離後、１５ｇ（８５．２７％）の６－ブロモ－７－（メトキシメトキシ）－２－メチルクロメン－４－オンを淡桃色固体として得た。
[0205] ステップ９： ７－（メトキシメトキシ）－２－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）クロメン－４－オンの調製。
[0206] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１００ｍＬの丸底フラスコに、６－ブロモ－７－（メトキシメトキシ）－２－メチルクロメン－４－オン（３．００ｇ、１０．０３ｍｍｏｌ）、ジオキサン（３０ｍＬ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）（３．０６ｇ、１２．０３５ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．３７ｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）、及び酢酸カリウム（１．９７ｇ、２０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、１００℃で１２時間攪拌した。反応物の加熱をやめ、冷却し、その後、５０ｍＬの水を加えてクエンチした。得られた混合物を３×５０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層をまとめた。まとめた有機層を１×５０ｍＬのブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル（０～８０％グラジエント）により精製して、単離後、０．８ｇ（２３．０４％）の７－（メトキシメトキシ）－２－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）クロメン－４－オンを黄色固体として得た。
[0207] ステップ１０： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（７－（メトキシメトキシ）－２－メチル－４－オキソ－４Ｈ－クロメン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（７－（メトキシメトキシ）－２－メチル－４－オキソ－４Ｈ－クロメン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0208] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した８ｍＬのバイアルに、異性体１（１５０ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３．００ｍＬ）、７－（メトキシメトキシ）－２－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）クロメン－４－オン（４０６．２３ｍｇ、１．１７３ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（copper(I)-3-methylsalicylate）（２５１．９２ｍｇ、１．１７３ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２２．６０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、窒素下、７０℃で、１２時間攪拌した。次いで反応混合物の加熱をやめ、自然冷却させた。その後、反応を、２０ｍＬの水を加えてクエンチした。得られた溶液を３×２０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層をまとめた。得られた有機混合物をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル（０～８０％）グラジエント）により精製し、単離後、８０ｍｇ（３６．８％）の中間体１０Ａを黄色固体として得た。
[0209] 上記の手順に従うが、異性体２（１５０ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）から出発して、単離後、８１ｍｇの中間体１０Ｂを黄色固体として得た。
[0210] ステップ１１： ６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン及び６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンの調製。
[0211] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した８ｍＬの丸底フラスコに、中間体１０Ａ（８０．００ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）及びジオキサン（２．００ｍＬ）中のＨＣｌを加えた。得られた混合物を室温で３時間撹拌した。その後、反応を、２０ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクエンチした。得られた混合物をジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめた。得られた混合物を、次いで飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機混合物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。得られた残渣を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（カラム、Ｃ１８；移動相、０．０１％ ＮＨ４ＨＣＯ３／Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ＝２０％を３０分以内に０．０１％ ＮＨ４ＨＣＯ３／Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ＝６０％に増加；検出器、２５４ｎｍ）で精製し、単離後、２５ｍｇの化合物１Ａ ６を黄色固体、（ＥＳ，ｍ／ｚ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２．２０、として得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．９１－８．８０（ｍ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），６．４０－５．９１（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄｄ，Ｊ＝４９．２，７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），３．１８－２．９２（ｍ，３Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝３１．４Ｈｚ，３Ｈ），２．１１（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），１．８５－１．７２（ｍ，４Ｈ），１．３４（ｓ，１Ｈ）。
[0212] 上記の手順に従うが、中間体１０Ｂから出発して、２５ｍｇの化合物１Ｂを、黄色固体、（ＥＳ，ｍ／ｚ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２．２０、として得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．８５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），６．３９－５．９３（ｍ，１Ｈ），５．３４－４．９０（ｍ，１Ｈ），４．８６－４．５５（ｍ，１Ｈ），３．６１（ｄ，Ｊ＝２８．７Ｈｚ，２Ｈ），３．１９－２．９２（ｍ，３Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝３１．８Ｈｚ，３Ｈ），２．２３（ｓ，１Ｈ），１．８８－１．５０（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝２９．６Ｈｚ，１Ｈ）。
[0213] 実施例２： ６－（６－［［（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ］－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルフタラジン－１－オン及び６－（６－［［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ］－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルフタラジン－１－オン（化合物２Ａ及び２Ｂ）の調製。
[0214] ステップ１： ラセミの（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0215] ６－ブロモ－３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン（２４．００ｇ、１１６．５ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（４３．０ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（６０ｍＬ、３４４．５ｍｍｏｌ）並びにｎ－ＢｕＯＨ（３６０ｍＬ）を、１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で加えた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、室温に冷却し、水（７００ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。混合物を濾過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１））により精製し、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物を、黄色固体（２４ｇ、５５．８％）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７０、として得た。
[0216] ステップ２： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物の調製。
[0217] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ、５６．８４ｍｍｏｌ）、並びにジメチルホルムアミド（４２０ｍＬ）を、１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、その後、窒素下で、内部温度を０℃に維持しながら、水素化ナトリウム（４．５４ｇ、１１３．５１ｍｍｏｌ、６０％）をいくつかに分けて加えた。冷浴を外し、混合物をさらに０．５時間攪拌し、窒素下で室温に自然昇温させた。ヨウ化メチル（７．２０ｍＬ、１１５．６６ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温でさらに１時間撹拌した。次いで反応混合物を、０℃に冷却して水（１Ｌ）でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、水（２×２５０ｍＬ）及び飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１９：１））により精製し、１７ｇ（７８％）の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを、ラセミの黄色固体、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８４、として得た。
[0218] ステップ３： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのキラル分離。
[0219] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（１１．００ｇ、２８．６８４ｍｍｏｌ）を、分取－ＳＦＣで個々の異性体へと精製した。以下の条件を使用し（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ－－ＨＰＬＣ；流量：４０ｍＬ／分；グラジエント：５０％Ｂ；２５０ｎｍ；ＲＴ１：３．９９分；ＲＴ２：６．１９分；注入量：４ｍｌ；実行数：８０）、異性体１（５．０ｇ）を黄色固体として、異性体２（５．２ｇ）を黄色固体として得た。
[0220] ステップ４： ４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－メチルベンゾヒドラジドの調製。
[0221] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下、０℃で、４－ブロモ－３－メトキシ安息香酸（１５．００ｇ、６５ｍｍｏｌ）、メチルヒドラジン（１１．９６ｇ、２６０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１５０ｍＬ）、ＥＤＣＩ（１４．９３ｇ、７８ｍｍｏｌ、及びＨＯＢＴ（１０．５３ｇ、７８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を、窒素下で４時間攪拌し、室温に自然昇温させた。次いで反応を、３００ｍＬの水でクエンチした。混合物を、３×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層をまとめて、３×５００ｍｌの飽和ブラインで洗浄した。次いで、混合物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１：カラム：Ｃ１８カラム；移動相Ａ：水（１０ＭＭＯＬ／Ｌ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：８０ｍＬ／分；グラジエント：２５分で２０Ｂから８０Ｂ）により精製し、１２．０ｇの４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－メチルベンゾヒドラジドを淡黄色油状物として得た。
[0222] ステップ５： ４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－メチル－Ｎ’－メチリデンベンゾヒドラジドの調製。
[0223] 窒素でパージした２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－メチルベンゾヒドラジド（１２．００ｇ、４６ｍｍｏｌ）、ヒドロキシメチリデン（１．６７ｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）、及びトルエン（１５０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、１２０℃で予熱した油浴に入れ、１６時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、水／氷浴中で冷却した。次いで、混合物を残渣に濃縮し、クロマトグラフィー（シリカゲルカラム：酢酸エチル／石油エーテル（１：３））にかけ、１２ｇ（９５．５７％）の４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－メチル－Ｎ’－メチリデンベンゾヒドラジドを白色固体として得た。
[0224] ステップ６： ６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルフタラジン－１－オンの調製。
[0225] 乾燥窒素でパージした５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－メチル－Ｎ（１０ｇ、３６．８９ｍｍｏｌ）、キノン（５．９８ｇ、５５．３３ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（０．８３ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）、及び酢酸（２００ｍＬ）を入れた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で１２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、水／氷浴で冷却した。得られた混合物を濃縮し、残渣のｐＨをＮａＨＣＯ３で８に調節した。得られた混合物を３×１５０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層をまとめて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。混合物を濾過、濃縮、及び精製（シリカゲル：酢酸エチル／石油エーテル（１：３））し、６ｇ（６０．４５％）の６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルフタラジン－１－オンを淡黄色固体として得た。
[0226] ステップ７： ７－メトキシ－２－メチル－１－オキソフタラジン－６－イルボロン酸の調製。
[0227] 乾燥窒素でパージした５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルフタラジン－１－オン（６ｇ、２２ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）（８．５ｇ、３３ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．９１ｇ、１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４．３８ｇ、４４ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（１２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１００℃で、２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、水／氷浴中で冷却した。得られた混合物を濃縮し、シリカゲルでのクロマトグラフィー（１：２酢酸エチル／石油エーテル）にかけた。固体残渣を単離し、エーテル－石油から再結晶して、単離後、３．５ｇの７－メトキシ－２－メチル－１－オキソフタラジン－６－イルボロン酸を白色固体として得た。
[0228] ステップ８： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（７－メトキシ－２－メチル－１－オキソ－１，２－ジヒドロフタラジン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（７－メトキシ－２－メチル－１－オキソ－１，２－ジヒドロフタラジン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0229] 窒素でパージした４０ｍＬの密封管に、異性体１（１５０ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）、７－メトキシ－２－メチル－１－オキソフタラジン－６－イルボロン酸（１８３．１ｍｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２２．６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（１６８ｍｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）、及びテトラヒドロフラン（３．００ｍＬ）を入れた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、窒素下、７０℃で、３時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、水／氷浴中で冷却した。粗反応物を濃縮し、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：カラム：Ｃ１８カラム；移動相Ａ：水（１０ＭＭＯＬ／Ｌ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：８０ｍＬ／分；グラジエント：２５分で２０Ｂから７０Ｂ）により直接精製し、１００ｍｇの中間体８Ａを黄色固体として得た。
[0230] 上記の手順に従うが、異性体２（１５０ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）から出発して、１００ｍｇ（４８．６４％）の中間体８Ｂを黄色固体として得た。
[0231] ステップ９： ６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルフタラジン－１（２Ｈ）－オン及び６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルフタラジン－１（２Ｈ）－オン（化合物２Ａ及び２Ｂ）の調製。
[0232] 窒素でパージした４０ｍＬの密封管に、中間体８Ａ（１２０ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン（５ｍＬ）と合わせて攪拌した。三臭化ホウ素（３ｍＬ）を０℃で滴下して加え、得られた溶液を室温で２時間攪拌した。その後、反応を、１００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えてクエンチした。得られた溶液を４×１５０ｍＬのジクロロメタン／アセトニトリル（１０：１）で抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８カラム、２１．２×１５０、５ｕｍ；移動相Ａ：水（１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；グラジエント：３０分で５Ｂから５０Ｂ；２５４／２２０ｎｍ）により精製し、単離後、４６．９ｍｇの化合物２Ａを黄色固体、（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２．２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ １３．２１（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），４．９７－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．７６－４．６３（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．６４－３．５６（ｍ，２Ｈ），３．１８（ｓ，３Ｈ），２．３３－２．２５（ｍ，１Ｈ），１．８１－１．６０（ｍ，５Ｈ）。
[0233] 上記の手順に従うが、中間体８Ｂから出発して、２１．１ｍｇ（１６．９５％）の化合物２Ｂを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２．２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ １３．２３（ｓ，１Ｈ），８．９１（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），４．９９－４．８２（ｍ，１Ｈ），４．７８－４．６１（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．６４－３．５５（ｍ，２Ｈ），３．１８（ｓ，３Ｈ），２．３１－２．２５（ｍ，１Ｈ），１．８１－１．５８（ｍ，５Ｈ）。
[0234] 実施例３： ７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン及び７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン（化合物３Ａ及び３Ｂ）の調製。
[0235] ステップ１： ラセミの（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0236] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、６－ブロモ－３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン（２４．００ｇ、１１６．５ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（４３．０ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（６０ｍＬ、３４４．５ｍｍｏｌ）、並びにｎ－ブタノール（３６０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、室温に冷却し、水（７００ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。混合物を濾過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１））により精製し、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物を、黄色固体（２４ｇ、５５．８％）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７０、として得た。
[0237] ステップ２： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物の調製。
[0238] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ、５６．８４ｍｍｏｌ）、並びにジメチルホルムアミド（４２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、その後、窒素下で、内部温度を０℃に維持しながら、水素化ナトリウム（４．５４ｇ、１１３．５１ｍｍｏｌ、６０％）をいくつかに分けて加えた。冷浴を外し、混合物をさらに０．５時間攪拌し、窒素下で室温に自然昇温させた。ヨウ化メチル（７．２０ｍＬ、１１５．６６ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温でさらに１時間撹拌した。次いで反応混合物を、０℃に冷却して水（１Ｌ）でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、水（２×２５０ｍＬ）及び飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１９：１））により精製し、１７ｇ（７８％）の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを、ラセミの黄色固体、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８４、として得た。
[0239] ステップ３： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのキラル分離。
[0240] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（１１．００ｇ、２８．６８４ｍｍｏｌ）を、分取－ＳＦＣで個々の異性体へと精製した。以下の条件を使用し（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ－－ＨＰＬＣ；流量：４０ｍＬ／分；グラジエント：５０％Ｂ；２５０ｎｍ；ＲＴ１：３．９９分；ＲＴ２：６．１９分；注入量：４ｍｌ；実行数：８０）、異性体１（５．０ｇ）を黄色固体として、異性体２（５．２ｇ）を黄色固体として得た。
[0241] ステップ４： ４－ブロモ－５－メトキシ－２－ニトロ安息香酸メチルの調製。
[0242] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４－ブロモ－５－フルオロ－２－ニトロ安息香酸メチル（６０．００ｇ、２１５．８ｍｍｏｌ）、メタノール（６００ｍＬ）、及びカリウム ｔｅｒｔ－ブトキシド（２９．０６ｇ、２５８．９７４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、ジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめて、次いで濃縮し、単離後、５９ｇ（９４．２５％）の４－ブロモ－５－メトキシ－２－ニトロ安息香酸メチルを固体として得た。
[0243] ステップ５： ２－アミノ－４－ブロモ－５－メトキシ安息香酸メチルの調製。
[0244] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４－ブロモ－５－メトキシ－２－ニトロ安息香酸メチル（５９．００ｇ、２０３．４ｍｍｏｌ）、エタノール、水、酢酸、及び亜鉛金属粉末（２６．６１ｇ、４０６．８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、６０℃で３時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。得られた溶液を、６０℃で３時間攪拌した。混合物の加熱をやめ、自然冷却させ、濾過した。得られた濾液を濃縮し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、次いでジクロロメタン（３×３００ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめて、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、固体に濃縮して、単離後、４０ｇ（７５．６１％）の２－アミノ－４－ブロモ－５－メトキシ安息香酸メチルを固体として得て、次の反応で直接使用した。
[0245] ステップ６： ７－ブロモ－６－メトキシ－３Ｈ－キナゾリン－４－オンの調製。
[0246] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、２－アミノ－４－ブロモ－５－メトキシ安息香酸メチル（３４．００ｇ、１３０．７２５ｍｍｏｌ）、エタノール（３４０．００ｍＬ）、酢酸、及びホルムアミジン（１３．６１ｇ、１３０．７２８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、８０℃で３時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。次いで、反応を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で慎重にクエンチした。得られた混合物を濃縮して、次いでジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめて、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、単離後、３２ｇ（９５．９７％）の７－ブロモ－６－メトキシ－３Ｈ－キナゾリン－４－オンを固体として得て、次の反応で直接使用した。
[0247] ステップ７： ７－ブロモ－６－メトキシ－３－メチルキナゾリン－４－オンの調製。
窒素の不活性雰囲気でパージして維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）及び水素化ナトリウム（０．５６ｇ、２３．５２３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、続いて７－ブロモ－６－メトキシ－３Ｈ－キナゾリン－４－オン（５ｇ、１９．６０２ｍｍｏｌ）をセ氏温度で加えた。混合物を３０分間攪拌させ、続いてヨウ化メチル（２．７８ｇ、１９．５８６ｍｍｏｌ）を加えた。冷浴を外し、混合物を室温でさらに２時間撹拌した。反応を、氷／水（３０ｍＬ）で慎重にクエンチした。混合物を酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、飽和ブライン（３×５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮して、単離後、４ｇ（７５．８３％）の７－ブロモ－６－メトキシ－３－メチルキナゾリン－４－オンを固体として得て、次の反応で直接使用した。
[0248] ステップ８： ６－メトキシ－３－メチル－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）キナゾリン－４－オンの調製。
[0249] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した４０ｍＬのバイアルに、７－ブロモ－６－メトキシ－３－メチルキナゾリン－４－オン（１．２０ｇ、４．４５９ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）（１．３６ｇ、５．３５１ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．１６ｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（０．８８ｇ、８．９１９ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（１０ｍＬ）を入れた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、１００℃で１２時間攪拌した。反応物の加熱をやめ、自然冷却させ、真空下で濃縮した。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル（１：３））により精製し、単離後、４００ｍｇ（２８．３７％）の６－メトキシ－３－メチル－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）キナゾリン－４－オンを固体として得た。
[0250] ステップ９： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（６－メトキシ－３－メチル－４－オキソ－３，４－ジヒドロキナゾリン－７－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（６－メトキシ－３－メチル－４－オキソ－３，４－ジヒドロキナゾリン－７－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0251] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した８ｍＬのバイアルに、異性体１（１２０ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（１６７．９５ｍｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）、６－メトキシ－３－メチル－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）キナゾリン－４－オン（１９７．８６ｍｇ、０．６２６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１８．０８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１．２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、窒素下、６０℃で２時間攪拌した。得られた混合物を濃縮し、粗生成物を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、ＡＣＮ／５ＭＭＮＨ４ＣＯ３＝０．２、１５分以内でＡＣＮ／５ＭＭＮＨ４ＣＯ３＝１に増加；検出器、２５４ｎｍ）により精製し、単離後、１２０ｍｇ（７２．９６％）の中間体９Ａ を固体として得た。
[0252] 上記の手順に従うが、異性体２（１２０ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）から出発して、単離後、８６ｍｇ（５２．２９％）の中間体９Ｂを黄色固体として得た。
[0253] ステップ１０： ７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン及び７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－３－メチルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン（化合物３Ａ及び３Ｂ）の調製。
[0254] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した２５ｍＬの丸底フラスコに、中間体９Ａ（１１０．００ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２．００ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（２．００ｍＬ）中の三臭化ホウ素を滴下して加えた。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。その後、反応を、２ｍＬのＮａＨＣＯ３水溶液を加えてクエンチした。混合物をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめ、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、ＡＣＮ／５ＭＭＮＨ４ＣＯ３＝０．１、２０分以内でＡＣＮ／５ＭＭＮＨ４ＣＯ３＝０．５に増加；検出器、２５４ｎｍ）により精製し、単離後、３１．９ｍｇ（３７．０５％）の化合物３Ａを、固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１２．６７（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝３０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝５２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），１．８５－１．５１（ｍ，６Ｈ）。
上記の手順に従うが、中間体９Ｂから出発して、２９．３ｍｇ（４３．５２％）の化合物３Ｂを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１２．６７（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝３０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝５２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），１．９１－１．５０（ｍ，６Ｈ）。
[0255] 実施例４： ６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン及び６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン（化合物４Ａ及び４Ｂ）の調製。
[0256] ステップ１： ラセミの（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0257] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、６－ブロモ－３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン（２４．００ｇ、１１６．５ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（４３．０ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（６０ｍＬ、３４４．５ｍｍｏｌ）、並びにｎ－ブタノール（３６０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、室温に冷却し、水（７００ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。混合物を濾過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１））により精製し、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物を、黄色固体（２４ｇ、５５．８％）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７０、として得た。
[0258] ステップ２： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物の調製。
[0259] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ、５６．８４ｍｍｏｌ）、並びにジメチルホルムアミド（４２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、その後、窒素下で、内部温度を０℃に維持しながら、水素化ナトリウム（４．５４ｇ、１１３．５１ｍｍｏｌ、６０％）をいくつかに分けて加えた。冷浴を外し、混合物をさらに０．５時間攪拌し、窒素下で室温に自然昇温させた。ヨウ化メチル（７．２０ｍＬ、１１５．６６ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温でさらに１時間撹拌した。次いで反応混合物を、０℃に冷却して水（１Ｌ）でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、水（２×２５０ｍＬ）及び飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１９：１））により精製し、１７ｇ（７８％）の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを、ラセミの黄色固体、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８４、として得た。
[0260] ステップ３： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのキラル分離。
[0261] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（１１．００ｇ、２８．６８４ｍｍｏｌ）を、分取－ＳＦＣで個々の異性体へと精製した。以下の条件を使用し（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ－－ＨＰＬＣ；流量：４０ｍＬ／分；グラジエント：５０％Ｂ；２５０ｎｍ；ＲＴ１：３．９９分；ＲＴ２：６．１９分；注入量：４ｍｌ；実行数：８０）、異性体１（５．０ｇ）を黄色固体として、異性体２（５．２ｇ）を黄色固体として得た。
[0262] ステップ４： ４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－（ピバロイルオキシ）ベンズアミドの調製。
[0263] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４－ブロモ－３－メトキシ安息香酸（２０．００ｇ、８６．５６３ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１００．０２ｍＬ）、ジイソプロピルエチルアミン（８９．５０ｇ、６９２．５０６ｍｍｏｌ）、プロパンホスホン酸無水物（４１．３１ｇ、１２９．８ｍｍｏｌ）、及びＯ－ピバロイルヒドロキシルアミン（１５．２１ｇ、１２９．８４５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、反応を、水でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（５×３００ｍＬ）で抽出した。有機物をまとめ、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。粗生成物を、分取ＨＰＬＣにより精製し、単離後、９．７ｇ（３３．９４％）の４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－（ピバロイルオキシ）ベンズアミドを、褐色油（ＥＳ、ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３０．１として得た。
[0264] ステップ５： ６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オンの調製。
[0265] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４－ブロモ－３－メトキシ－Ｎ－（ピバロイルオキシ）ベンズアミド（９．００ｇ、２７．２５８ｍｍｏｌ）、メタノール（１００．００ｍＬ）、ペンタメチルシクロペンタジエニルロジウムジクロリド（０．１７ｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）、酢酸ビニル（３．５２ｇ、４０．８８７ｍｍｏｌ）、及び酢酸セシウム（１．５７ｇ、８．１７７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、４５℃で、予熱した油浴に入れ、１６時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。得られた混合物を真空下で濃縮して固体を得た。粗生成物をＭＴＢＥからの再結晶により精製した。固体を濾過により回収し、真空下で乾燥させて、５．３ｇ（７６．５３％）の６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オンを、灰白色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５４．０として得た。
[0266] ステップ６： ６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オンの調製。
[0267] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（３０．００ｍＬ、３７０．２９０ｍｍｏｌ）、及び６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オン（２．６０ｇ、１０．２３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、氷／水浴中で冷却し、続いて水素化ナトリウム（０．６１ｇ、２５．４１９ｍｍｏｌ）を加えた。次いでヨウ化メチル（２．１８ｇ、１５．３５０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を０℃でさらに１時間攪拌した。次いで、反応を、５０ｍＬの水／氷を加えることによりクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機物をまとめて、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／石油エーテル）により精製し、単離後、２．２ｇ（８０．１９％）の６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オンを白色固体として得た。
[0268] ステップ７： ７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イルボロン酸の調製。
[0269] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、ビス（ピナコラート）ジボロン（２．７３ｇ、１０．７４２ｍｍｏｌ）、６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（２．４０ｇ、８．９５２ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（０．３３ｇ、０．４４８ｍｍｏｌ、０．０５）、ジオキサン（３０ｍＬ）、及び酢酸カリウム（１．７６ｇ、１７．９０３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、１００℃で２時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製し、分離後、９５０ｍｇ（４５．５４％）の７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イルボロン酸を、灰白色固体として得た。
[0270] ステップ８： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（７－メトキシ－２－メチル－１－オキソ－１，２－ジヒドロイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（７－メトキシ－２－メチル－１－オキソ－１，２－ジヒドロイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
窒素の不活性雰囲気でパージして維持した８ｍＬのバイアルに、異性体１（１２０ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）、７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イルボロン酸（１４５．８４ｍｇ、０．６２６ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（１４７．７９ｍｇ、０．６８９ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１８．０８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、７０℃で、予熱した油浴に入れ、２時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製し、単離後、１１１ｍｇ（６７．６２％）の中間体８Ａを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５２５．３として得た。
[0271] 上記の手順に従うが、異性体２（１２０ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）から出発して、単離後、１１２ｍｇ（６８．２３％）の中間体８Ｂを黄色固体として得た。
[0272] ステップ９： ６－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オン及び６－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１（２Ｈ）－オンの調製。
[0273] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した８ｍＬのバイアルに、中間体８Ａ（１１１．００ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）、及び三臭化ホウ素（１．００ｍＬ、１０．５７８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。その後、反応を、水／氷を加えてクエンチした。溶液のｐＨを、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で８に調整した。得られた混合物をジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機物をまとめ、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で残渣へと濃縮乾固させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、単離後、５１．３ｍｇの化合物４Ａ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１１．２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ１２．３４（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），６．９８－６．９０（ｍ，１Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４４－５．１８（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝５１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ），３．２７－３．１５（ｍ，３Ｈ），２．３６－２．２１（ｍ，１Ｈ），２．１５－１．９７（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．８１（ｍ，２Ｈ）。
[0274] 上記の手順に従うが、中間体８Ｂ（１１２．００ｍｇ、０．２１３ｍｍｏｌ）から出発して、２９．３ｍｇの化合物４Ｂを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１１．２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ１２．３４（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝３７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝５１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，３Ｈ），２．３６－２．２１（ｍ，１Ｈ），２．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．９１－１．８０（ｍ，２Ｈ）。
[0275] 実施例５： ７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）イソキノリン－６－オール及び７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）イソキノリン－６－オール（化合物５Ａ及び５Ｂ）の調製。
[0276] ステップ１： ラセミの（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0277] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、６－ブロモ－３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン（２４．００ｇ、１１６．５ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（４３．０ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（６０ｍＬ、３４４．５ｍｍｏｌ）、並びにｎ－ブタノール（３６０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、室温に冷却し、水（７００ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。混合物を濾過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１））により精製し、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物を、黄色固体（２４ｇ、５５．８％）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７０、として得た。
[0278] ステップ２： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物の調製。
[0279] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ、５６．８４ｍｍｏｌ）、並びにジメチルホルムアミド（４２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、その後、窒素下で、内部温度を０℃に維持しながら、水素化ナトリウム（４．５４ｇ、１１３．５１ｍｍｏｌ、６０％）をいくつかに分けて加えた。冷浴を外し、混合物をさらに０．５時間攪拌し、窒素下で室温に自然昇温させた。ヨウ化メチル（７．２０ｍＬ、１１５．６６ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温でさらに１時間撹拌した。次いで反応混合物を、０℃に冷却して水（１Ｌ）でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、水（２×２５０ｍＬ）及び飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１９：１））により精製し、１７ｇ（７８％）の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを、ラセミの黄色固体、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８４、として得た。
[0280] ステップ３： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのキラル分離。
[0281] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（１１．００ｇ、２８．６８４ｍｍｏｌ）を、分取－ＳＦＣで個々の異性体へと精製した。以下の条件を使用し（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：ＥｔＯＨ－－ＨＰＬＣ；流量：４０ｍＬ／分；グラジエント：５０％Ｂ；２５０ｎｍ；ＲＴ１：３．９９分；ＲＴ２：６．１９分；注入量：４ｍｌ；実行数：８０）、異性体１（５．０ｇ）を黄色固体として、異性体２（５．２ｇ）を黄色固体として得た。
[0282] ステップ４： １－（３－ブロモ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２，２－ジメトキシエチル）メタンイミンの調製。
[0283] ５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、３－ブロモ－４－メトキシベンズアルデヒド（２５ｇ、１１６．０００ｍｍｏｌ）、トルエン（２５０ｍＬ）、及び２，２－ジメトキシエタン－１－アミン（１９ｍＬ、１７４．１ｍｍｏｌ、１．５０）を加えた。反応フラスコにＤｅａｎ－Ｓｔａｒｋトラップを取り付け、混合物を、１２０℃で、予熱した油浴に入れ、６時間攪拌した、加熱をやめ、自然冷却させた。次いで、得られた混合物を、真空下で一定重量まで濃縮し、単離後、３７ｇの１－（３－ブロモ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２，２－ジメトキシエチル）メタンイミンを得て、これを次のステップで直接使用した。ｍ／ｚ：３０２（Ｍ＋Ｈ＋）。
[0284] ステップ５： ７－ブロモ－６－メトキシイソキノリンの調製。
[0285] １０００ｍＬの１つ口丸底フラスコに、１－（３－ブロモ－４－メトキシフェニル）－Ｎ－（２，２－ジメトキシエチル）メタンイミン（３７ｇ、１２２．４５ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３７０ｍＬ）を加えた。次いで、混合物を０℃に冷却し、クロロギ酸イソプロピル（１５．０１ｇ、１２２．４５ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。５分間攪拌した後、亜リン酸トリエチル（２４．４２ｇ、１４６．９７０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間攪拌し、次いで冷浴を外した。次いで、得られた混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで溶媒を除去し、残りの残渣を１００ｍｌのトルエンと共沸させた。得られた混合物に、四塩化チタン（９４．１６ｇ）及びクロロホルム（３７５ｍＬ）を加え、混合物を４８時間加熱還流した。混合物の加熱をやめ、次いで氷／水に注いだ。次いで、ｐＨを水酸化アンモニウムを用いて９に調整した。反応混合物を酢酸エチル（４×２００ｍＬ）で抽出した。有機物をまとめ、減圧下で濃縮乾固し、これをシリカゲルカラム（酢酸エチル：石油エーテル３：７）により精製し、単離後、６．１ｇの７－ブロモ－６－メトキシイソキノリンを、固体として得た。ｍ／ｚ：２３８（Ｍ＋Ｈ＋）。
[0286] ステップ６： ６－メトキシ－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリンの調製。
[0287] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した４０ｍＬのバイアルに、７－ブロモ－６－メトキシイソキノリン（１．５０ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１．９２ｇ、７．５６１ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリド ジクロロメタン錯体（０．５１ｇ、０．６２５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１．２４ｇ、１２．６３５ｍｍｏｌ）及びジオキサン（３０ｍＬ、３５４．１２３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、１００℃で４時間攪拌した後、加熱をやめ、自然冷却させた。得られた混合物を、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、セライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ９：１）により精製し、赤褐色固体を得て、これをさらに分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８；移動相：ＮＨ４ＨＣＯ３（水溶液）／ＭｅＣＮ；グラジエント：３０分で１０％Ｂから５０％Ｂ；検出器：２５４ｎｍ）により精製し、単離後、１．４ｇの６－メトキシ－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリンを、固体ｍ／ｚ：２８６（Ｍ＋Ｈ＋）として得た。
[0288] ステップ７： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（６－メトキシイソキノリン－７－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（６－メトキシイソキノリン－７－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0289] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した４０ｍＬのバイアルに、異性体１（３００ｍｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）、６－（メトキシ）－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン（６７０ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１３５ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ、０．１５）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（５０４ｍｇ、２．３４８ｍｍｏｌ）、及びテトラヒドロフラン（７．５０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、７０℃で、予熱した油浴に入れ、１２時間攪拌した後、加熱をやめ、自然冷却させた。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を３×２５ｍＬの水酸化アンモニウム（１０％）及び５０ｍＬのブラインで洗浄した。まとめた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：１００％）により精製し、単離後、２７８ｍｇの中間体７Ａを、淡黄色固体として得た。ｍ／ｚ：４９５（Ｍ＋Ｈ＋）。
[0290] 上記の手順に従うが、異性体２（３５０ｍｇ、０．９１３ｍｍｏｌ）から出発して、単離後、３５０ｍｇの中間体７Ｂを、黄色固体、ｍ／ｚ：４９５（Ｍ＋Ｈ＋）として得た。
[0291] ステップ８： ７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）イソキノリン－６－オール及び７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）イソキノリン－６－オール（化合物５Ａ及び５Ｂ）の調製。
[0292] １００ｍＬの丸底フラスコに、中間体７Ａ（１５０ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５ｍＬ、７８．６５ｍｍｏｌ）、及び三臭化ホウ素（７５９．８２ｍｇ、３．０３３ｍｍｏｌ）を入れた。得られた溶液を、室温で４時間攪拌し、その後炭酸水素ナトリウム水溶液でクエンチして、最終ｐＨを９とした。混合物をジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ、（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：カラム：Ｃ１８；移動相：ＮＨ４ＨＣＯ３（水溶液）／ＭｅＣＮ；グラジエント：３０分で１０％Ｂから５０％Ｂ；検出器２５４ｎｍ、で精製し、単離後、３０ｍｇの化合物５Ａを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋１］＋＝３８１．２として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ １２．９６（ｓ，１Ｈ），９．３１（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝２４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝５２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．３５－２．１９（ｍ，１Ｈ），１．８７－１．５２（ｍ，５Ｈ）。
[0293] 上記の手順に従うが、中間体７Ｂ（１５０ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）から出発して、２５ｍｇの化合物５Ｂを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋１］＋＝３８１．２として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ １２．９６（ｓ，１Ｈ），９．３１（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝２４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝５２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．３５－２．１９（ｍ，１Ｈ），１．８７－１．５２（ｍ，５Ｈ）。
[0294] 実施例６： ７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン及び７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン（化合物６Ａ及び６Ｂ）の調製。
[0295] ステップ１： ラセミの（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0296] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、６－ブロモ－３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン（２４．００ｇ、１１６．５ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（４３．０ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（６０ｍＬ、３４４．５ｍｍｏｌ）、並びにｎ－ブタノール（３６０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、予熱した油浴に入れ、窒素下、１２０℃で２時間攪拌した。反応混合物の加熱をやめ、室温に冷却し、水（７００ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。混合物を濾過し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１））により精製し、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物を、黄色固体（２４ｇ、５５．８％）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７０、として得た。
[0297] ステップ２： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物の調製。
[0298] １０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、窒素下で、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ、５６．８４ｍｍｏｌ）、並びにジメチルホルムアミド（４２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、その後、窒素下で、内部温度を０℃に維持しながら、水素化ナトリウム（４．５４ｇ、１１３．５１ｍｍｏｌ、６０％）をいくつかに分けて加えた。冷浴を外し、混合物をさらに０．５時間攪拌し、窒素下で室温に自然昇温させた。ヨウ化メチル（７．２０ｍＬ、１１５．６６ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温でさらに１時間撹拌した。次いで反応混合物を、０℃に冷却して水（１Ｌ）でクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、水（２×２５０ｍＬ）及び飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１９：１））により精製し、１７ｇ（７８％）の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを、ラセミの黄色固体、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８４、として得た。
[0299] ステップ３： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのキラル分離。
[0300] （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（メチル（３－（メチルチオ）－１，２，４－トリアジン－６－イル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルのラセミ混合物（１１．００ｇ、２８．６８４ｍｍｏｌ）を、分取－ＳＦＣで個々の異性体へと精製した。以下の条件を使用し（カラム： ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ、２×２５ｃｍ、５μｍ；移動相Ａ： ＣＯ２、移動相Ｂ： ＥｔＯＨ－－ＨＰＬＣ；流量： ４０ｍＬ／分；グラジエント： ５０％Ｂ；２５０ｎｍ；ＲＴ１： ３．９９分；ＲＴ２： ６．１９分；注入量： ４ｍｌ；実行数： ８０）、異性体１（５．０ｇ）を黄色固体として、異性体２（５．２ｇ）を黄色固体として得た。
[0301] ステップ４： １－（４－ブロモ－２，５－ジメトキシフェニル）エタン－１－オンの調製。
[0302] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、２－ブロモ－１，４－ジメトキシベンゼン（６０ｇ、２７６．４１９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５００ｍＬ、７８６５．０２３ｍｍｏｌ）、及び無水塩化アルミニウム（５５．２９ｇ、４１４．６２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、その後、１０分間にわたって塩化アセチル（２９．５９ｍＬ、４１４．６３７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。次いで冷浴を外し、得られた溶液を室温で２時間撹拌した。その後、反応混合物に、２００ｍＬの水／氷をゆっくりと加えて、慎重にクエンチした。得られた混合物を、ジクロロメタン（３×３００ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、単離後、４５ｇの未精製１－（４－ブロモ－２，５－ジメトキシフェニル）エタン－１－オンを、黄色固体（ｍ／ｚ：２５９（Ｍ＋Ｈ＋））として得て、次のステップで直接使用した。
[0303] ステップ５： １－（４－ブロモ－２，５－ジヒドロキシフェニル）エタン－１－オンの調製。
[0304] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した１０００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、１－（４－ブロモ－２，５－ジメトキシフェニル）エタノン（４５ｇ、１７３．６７９ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（３００ｍＬ）を入れ、次いで０℃に冷却し、続いて、三臭化ホウ素（ジクロロメタン中１Ｍ、６９４ｍＬ、６９４ｍｍｏｌ）を、内部温度を０℃に維持しながら、撹拌しながら滴下して加えた。次いで、冷浴を外し、得られた溶液を室温で一晩攪拌した。その後、混合物を０℃に冷却し、次いで２００ｍＬの水／氷をゆっくりと加えて慎重にクエンチした。得られた混合物を、ジクロロメタン（３×３００ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、１６ｇの１－（４－ブロモ－２，５－ジメトキシフェニル）エタン－１－オンを、黄色固体（ｍ／ｚ：２３１（Ｍ＋Ｈ＋））として得て、次のステップで直接使用した。
[0305] ステップ６： １－（４－ブロモ－２－ヒドロキシ－５－（メトキシメトキシ）フェニル）エタン－１－オンの調製。
[0306] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、１－（４－ブロモ－２，５－ジヒドロキシフェニル）エタン－１－オン（１６ｇ、６９．２５１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１９．１４ｇ、１３８．４８９ｍｍｏｌ）、及びアセトン（１５０ｍＬ）を加えた。次いで、混合物を０℃に冷却し、続いてブロモ（メトキシ）メタン（８．６５ｇ、６９．２５１ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。冷浴を外し、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を、濾過し、真空下で濃縮して、単離後、１５ｇの１－（４－ブロモ－２－ヒドロキシ－５－（メトキシメトキシ）フェニル）エタン－１－オンを、黄色固体、ｍ／ｚ：２７５（Ｍ＋Ｈ＋）として得て、次のステップで直接使用した。
[0307] ステップ７： ７－ブロモ－２－ヒドロキシ－６－（メトキシメトキシ）－２－メチルクロマン－４－オンの調製。
[0308] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、１－（４－ブロモ－２－ヒドロキシ－５－（メトキシメトキシ）フェニル）エタン－１－オン（１５ｇ、５４．５２６ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（２００ｍＬ、２４６８．５９８ｍｍｏｌ）、及び水素化ナトリウム（５．２３ｇ、２１８．１ｍｍｏｌ、４．００）を加えた。混合物を０℃に冷却し、続いて乾燥酢酸エチル（９．６１ｇ、１０９．０７４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。冷浴を外し、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、混合物を、５０ｍＬの水／氷で慎重にクエンチした。次いで、混合物を酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出し、有機物をまとめて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、１２ｇの７－ブロモ－２－ヒドロキシ－６－（メトキシメトキシ）－２－メチルクロマン－４－オンを黄色固体、ｍ／ｚ：３１７（Ｍ＋Ｈ＋）として得て、次のステップで直接使用した。
[0309] ステップ８： ７－ブロモ－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンの調製。
[0310] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、７－ブロモ－２－ヒドロキシ－６－（メトキシメトキシ）－２－メチルクロマン－４－オン（１２ｇ）、プロパン－２－オール（１００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、６５℃で攪拌し、続いてＡｍｂｅｒｌｙｓｔ－１５（１５ｇ）を滴下して加えた。得られた混合物を、６５℃でさらに２時間攪拌した後、加熱をやめ、自然冷却させた。混合物を濾過し、得られた濾液を真空下で濃縮して乾燥し、単離後、９ｇの７－ブロモ－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンを黄色固体、ｍ／ｚ：２５５（Ｍ＋Ｈ＋）として得て、次のステップで直接使用した。
[0311] ステップ９：７－ブロモ－６－（メトキシメトキシ）－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンの調製。
[0312] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、７－ブロモ－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン（９．００ｇ、３５．２８５ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、続いて０℃で水素化ナトリウム（１．６９ｇ、７０．４２３ｍｍｏｌ）をいくつかに分けて添加した。この混合物に、メトキシメチルブロミド（８．８２ｇ、７０．５７ｍｍｏｌ）を滴下して加え、その後、冷浴を外し、得られた混合物を室温で２時間攪拌した。その後、反応を、５０ｍＬの水／氷を加えてクエンチした。得られた混合物を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、７ｇの７－ブロモ－６－（メトキシメトキシ）－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オンを黄色固体、ｍ／ｚ：２９９（Ｍ＋Ｈ＋）として得て、次のステップで直接使用した。
[0313] ステップ１０： ６－（メトキシメトキシ）－２－メチル－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－４Ｈ－クロメン－４－オンの調製。
[0314] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、７－ブロモ－６－（メトキシメトキシ）－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン（５．００ｇ、１６．７１６ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（８．４９ｇ、３３．４３３ｍｍｏｌ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１．２２ｇ、１．６６７ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１００ｍＬ）、及び酢酸カリウム（３．２８ｇ、３３．４２１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、予熱した油浴に入れ、１００℃で２時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。得られた溶液を、酢酸エチル（５００ｍＬ）及び洗浄水（３×５０）で希釈した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、次いで真空下で濃縮乾固した。残渣を、シリカゲルでのクロマトグラフィー［（酢酸エチル／ヘキサン：１：１）、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：カラム：Ｃ１８；移動相：ＡＣＮ（５０％）、Ｈ２Ｏ；検出器：２５４ｎｍ］にかけ、単離後、２ｇの６－（メトキシメトキシ）－２－メチル－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－４Ｈ－クロメン－４－オンを黄色固体、ｍ／ｚ：２６５（Ｍ＋Ｈ＋）として得た。
[0315] ステップ１１： （１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－３－（（３－（６－メトキシ－２－メチル－４－オキソ－４Ｈ－クロメン－７－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル及び（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－（（３－（６－メトキシ－２－メチル－４－オキソ－４Ｈ－クロメン－７－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル）（メチル）アミノ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0316] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した４０ｍＬの丸底フラスコに、異性体１（１５０ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（２５０．７４ｍｇ、１．１７３ｍｍｏｌ）、６－（メトキシメトキシ）－２－メチル－７－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－４Ｈ－クロメン－４－オン（３０９．８３ｍｇ、１．１７３ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４５．２０ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）、及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を入れた。得られた混合物を、７０℃で、予熱した油浴に入れ、２時間攪拌し、次いで加熱をやめ、自然冷却させた。反応混合物を、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（３×３０）で洗浄した。混合物を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製し、単離後、６０ｍｇの中間体１１Ａを黄色固体、ｍ／ｚ：５５６（Ｍ＋Ｈ＋）、として得た。
[0317] 上記の手順に従うが、異性体２（１５０ｍｇ、０．３９１ｍｍｏｌ）から出発して、単離後、６１ｍｇの中間体１１Ｂを、黄色固体、ｍ／ｚ：５５６（Ｍ＋Ｈ＋）、として得た。
[0318] ステップ１２： ７－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン及び７－（６－（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）（メチル）アミノ）－１，２，４－トリアジン－３－イル）－６－ヒドロキシ－２－メチル－４Ｈ－クロメン－４－オン（化合物６Ａ及び６Ｂ）の調製。
[0319] 乾燥窒素でパージして維持した１００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、中間体１１Ａ（１００ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（５ｍＬ）、及びＨＣｌ（１，４－ジオキサン中４Ｍ、５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、混合物のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液（１Ｍ）で９に調節した。得られた混合物をジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュ－分取－ＨＰＬＣ（ＩｎｔｅｌＦｌａｓｈ－１）：カラム：カラムＣ１８；移動相：ＮＨ４ＨＣＯ３（水溶液）／ＭｅＣＮ；グラジエント：３０分で１０％Ｂから５０％Ｂ；検出器 ２５４ｎｍ、で精製し、単離後、１０．６ｍｇの化合物６Ａを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋１］＋＝４１２．２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ １２．４６（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），６．２３（ｓ，１Ｈ），５．０３－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝５２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．４１（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｄ，Ｊ＝２５．２Ｈｚ，１Ｈ），１．８７－１．５０（ｍ，５Ｈ）。
[0320] 上記の手順に従うが、中間体１１Ｂ（１００ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）から出発して、２９．３ｍｇの化合物６Ｂを、黄色固体（ＥＳ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２．２、として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ １２．４６（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），６．２３（ｓ，１Ｈ），５．０３－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝５２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．４１（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｄ，Ｊ＝２５．２Ｈｚ，１Ｈ），１．８７－１．５０（ｍ，５Ｈ）。
[0321] 実施例７： ４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（化合物６６）の調製。
[0323] ステップ１： （ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ２，２－ジメチルプロパノアートの調製。
[0324] １０Ｌの４つ口丸底フラスコに、Ｎ－ヒドロキシカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２５０．００ｇ、１８７７．６ｍｍｏｌ）及びＡＣＮ（５Ｌ）を添加した。次いで、ピバル酸無水物（３８４．６８ｇ、２０６５．４ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られた混合物を一晩加熱還流した。反応物を周囲温度に自然冷却させ、次いで真空下で濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ（７Ｌ）と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５Ｌ）との間で分配した。有機層を分液し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３×２Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、３５０ｇ（８５．８％）の（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ ２，２－ジメチルプロパノアートを灰白色固体として得た。
[0325] ステップ２： ［（２，２－ジメチルプロパノイル）オキシ］アザニウムトリフラートの調製。
[0326] １０Ｌの４つ口丸底フラスコ中、０℃で、ジエチルエーテル（７．０Ｌ）中の（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ２，２－ジメチルプロパノアート（３５０．００ｇ、１６１０．９ｍｍｏｌ）に、２，２，２－トリフルオロエタンスルホン酸（２４１．７５ｇ、１６１０．９ｍｍｏｌ）を加えた（記載した気体が激しく発生）。反応混合物を、０℃で５分間攪拌し、次いで室温に加温させた。１時間後、ヘキサン（３Ｌ）を加え、混合物を１０分間攪拌した。得られた固体を濾過し、ヘキサン（３×１Ｌ）で洗浄し、真空オーブンで乾燥し、３００ｇ（６９．６９％）の［（２，２－ジメチルプロパノイル）オキシ］アザニウムトリフラートを灰白色固体として得た。
[0327] ステップ３： ４－ブロモ－３－メトキシベンゾイルクロリドの調製。
[0328] ５Ｌの４つ口丸底フラスコ中、ＤＣＭ（３Ｌ）中の４－ブロモ－３－メトキシ安息香酸（３００ｇ、１２９８．４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３０．１５ｍＬ、３８９．５ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、塩化オキサリル（１９７．７７ｇ、１５５８．１ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、周囲温度で滴下して加えた。得られた溶液を室温で３時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、４－ブロモ－３－メトキシベンゾイルクロリド（３８０ｇ、未精製）を、灰白色固体として得て、次のステップで直接使用した。［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４８．９。
[0329] ステップ４： ブロモ－３－メトキシフェニル）ホルムアミド ２，２－ジメチルプロパノアートの調製。
[0330] ３Ｌの４つ口丸底フラスコ中、ＥＡ（５００ｍＬ）中の［（２，２－ジメチルプロパノイル）－オキシ］アザニウムトリフラート（１５２．００ｇ、５６８．８ｍｍｏｌ）に、水（５００ｍＬ）中の炭酸水素ナトリウム（８８．００ｇ、１０４７．５ｍｍｏｌ）水溶液を０℃で滴下して加えた。３０分間攪拌した後、ＥＡ（１．２０Ｌ）中の４－ブロモ－３－メトキシベンゾイルクロリド（１２０．００ｇ、４８１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下して加えた。次いで、得られた混合物を室温で２時間攪拌した。有機相を分液し、水相を酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×５００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（５／１）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、１２６ｇ（７９．６％）の（４－ブロモ－３－メトキシフェニル）ホルムアミド２，２－ジメチルプロパノアートを白色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３１．０２。
[0331] ステップ５： ６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オンの調製。
[0332] ３Ｌの４つ口丸底フラスコに、（４－ブロモ－３－メトキシフェニル）ホルムアミド２，２－ジメチルプロパノアート（２５０．００ｇ、７５７．２ｍｍｏｌ）、酢酸ビニル（９９．７３ｇ、１１５８．５ｍｍｏｌ）、酢酸セシウム（４５．０５ｇ、２３４．７ｍｍｏｌ）、ビス［（ペンタメチルシクロペンタジエニル）ジクロロロジウム］（４．６８ｇ、７．６ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（２．５Ｌ）を加えた。得られた混合物を、窒素雰囲気下、４０℃で１６時間攪拌した。混合物を室温に自然冷却させた。沈殿した固体を濾過により回収し、冷却したジエチルエーテル（３×１０００ｍＬ）で洗浄した。これにより、６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オン（１２０ｇ、６２．３８％）を灰白色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５４．９７。
[0333] ステップ６： ６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オンの調製。
[0334] １Ｌの３つ口丸底フラスコ中、ＴＨＦ（１．２Ｌ）及びＤＭＦ（０．５Ｌ）中の６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オン（１２０ｇ、４７２．３ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、鉱油中６０％の懸濁液として水素化ナトリウム（２８．７１ｇ、７１７．９ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、０℃で分割して加えた。得られた溶液を、０℃で３０分間攪拌した。ヨウ化メチル（８１．７６ｇ、５２４．２ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、０℃で滴下して加えた。得られた溶液を室温に加温した。１時間後、反応混合物を冷水（２Ｌ）中に注いで、１５分間攪拌した。沈殿した固体を、濾過により回収し、冷水（３×１Ｌ）で洗浄した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（３：１）で溶離されるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（１０２ｇ、８５．５５％）を灰白色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６８。
[0335] ステップ７： ６－ブロモ－４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オンの調製。
[0336] ３つ口丸底フラスコ中、アセトニトリル（２Ｌ）中の６－ブロモ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（１０２ｇ、３８０．４ｍｍｏｌ）に、セレクトフルオル（１３４．７７ｇ、３８０．４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を、窒素雰囲気下、８０℃で１時間攪拌した。混合物を室温に自然冷却させた。反応を、水（１０００ｍｌ）でクエンチした。得られた混合物を、ジクロロメタン（３×１０００ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層をブライン（１×１０００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で残渣に濃縮し、該残渣を、ＰＥ／ＥＡ（１：０１）で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、６－ブロモ－４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（３０ｇ、２７．５６％）を白色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８５．９。
[0337] ステップ８： ４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン－１－オンの調製。
[0338] ジオキサン（３００ｍＬ）中、６－ブロモ－４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（３０ｇ、１０４．９ｍｍｏｌ）、４，４，５，５－テトラメチル－２－（テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロラン（５３．２６ｇ、２０９．７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３．８４ｇ、５．２４３ｍｍｏｌ）、及び酢酸カリウム（１５．４４ｇ、１５７．３ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で２時間攪拌した。室温に冷却した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン／メタノール（２０：０１）で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン－１－オン（１９ｇ、５４．３９％）を、白色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３４．２。
[0339] ステップ９： （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0340] 窒素の不活性雰囲気でパージして維持した４０ｍＬの３つ口丸底フラスコ中、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－［メチル［３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］アミノ］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１．００ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン－１－オン（１．７４ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（１．４０ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．３０ｇ、０．３ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（１０．００ｍＬ）を入れた。得られた溶液を７０℃で２時間撹拌した。反応を、３０ｍＬの１０重量％のアンモニア水を加えてクエンチし、固体を濾過した。得られた溶液を３×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出した。まとめた有機相を、５０ｍｌのブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。残渣を、以下の条件下の逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、ＡＣＮ水溶液（０．５％ ＮＨ４ＨＣＯ３）、３０分で２５％から８５％へのグラジエント；検出器、ＵＶ２５４ｎｍ。これにより、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（８００ｍｇ、５６．５４％）を淡黄色固体として得た。
[0341] この手順を並行して１３回繰り返して、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２ｇ）を黄色固体として得た。ＴＨＦ（２４０ｍＬ）中の、まとめた（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２ ）を、スルフヒドリル官能基化シリカＰＳＢ－２０（１．２ｇ）と室温で混合した。得られた混合物を窒素雰囲気下、５０℃で０．５時間撹拌し、室温に冷却した。濾過、ＴＨＦ（３×１００ｍＬ）による洗浄、濃縮により、生成物を得た。この手順を８回繰り返して、濾液を減圧下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２ｇ）を黄色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝５４３．１。
[0342] ステップ１０： （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－ヒドロキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0343] ３つ口丸底フラスコ中、ＤＭＦ（１２０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－メトキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）に、ナトリウムメタンチオラート（７．７５ｇ、１１０．６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、窒素雰囲気下、１００ｏＣで２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温に自然冷却し、水（１００ｍｌ）でクエンチした。水層を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件を用いた逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、ＣＨ３ＣＮ水溶液、３０分で２５％から８５％へのグラジエント；検出器、ＵＶ２５４ｎｍ。これにより、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－ヒドロキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（８ｇ、６８．４４％）を淡黄色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝５２９．４。
[0344] ステップ１１： ４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（化合物６６）の調製。
[0345] 酢酸エチル（１００ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－｛［３－（４－フルオロ－７－ヒドロキシ－２－メチル－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（８ｇ）の攪拌溶液に、酢酸エチル（８０ｍＬ）中の飽和ＨＣｌを、窒素雰囲気下、室温で滴下して加えた。得られた混合物を、窒素雰囲気下、室温で１．５時間攪拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ８～９に塩基性化した。水層を、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。これにより、４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシ－２－メチルイソキノリン－１－オン（化合物６６）（５．３ｇ、８０．１８％）を淡黄色固体として得た。ＬＣ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２９．２。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ１２．５７（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｄｄｄｄ，Ｊ＝３４．３，１２．８，５．８，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄｔ，Ｊ＝５１．８，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），２．２９（ｔｄ，Ｊ＝１２．７，３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．１２－１．９９（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．７９（ｍ，２Ｈ），１．７７－１．６７（ｍ，１Ｈ）。
[0346] 実施例８： ２－エチル－４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシイソキノリン－１－オン（化合物１６３）の調製。
[0347] ステップ１： ６－ブロモ－７－メトキシ－２－エチルイソキノリン－１－オンの調製。
[0348] １Ｌの３つ口丸底フラスコ中、ＴＨＦ（２．５Ｌ）及びＤＭＦ（１Ｌ）中の６－ブロモ－７－メトキシ－２Ｈ－イソキノリン－１－オン（２４５．００ｇ、９６４．６ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、水素化ナトリウム（鉱油中６０％）（５７．８７ｇ、１４４６．９ｍｍｏｌ）を窒素下、０℃で分割して加えた。０℃で３０分後、ヨウ化エチル（１８０．５７ｇ、１１５７．５ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加えた。得られた溶液を周囲温度に加温させ、１時間撹拌した。反応混合物を、冷水（２Ｌ）中に注いで、１５分間攪拌した。沈殿した固体を、濾過により回収し、冷水（３×１Ｌ）で洗浄した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（３：０１）で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、６－ブロモ－７－メトキシ－２－エチルイソキノリン－１－オン（２３０ｇ、８４．５６％）を灰白色固体として得た。
[0349] ステップ２： ６－ブロモ－２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシイソキノリン－１－オンの調製。
[0350] アセトニトリル（４５６０ｍｌ）中の６－ブロモ－２－エチル－７－メトキシイソキノリン－１－オン（２３０ｇ、８１５．２ｍｍｏｌ）に、セレクトフルオル（２８８．８０ｇ、８１５．２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を、窒素下、８０℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応を、水（８００ｍｌ）でクエンチした。得られた混合物を、ジクロロメタン（３×１０００ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を、ブライン（１×１０００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。濾過及び濃縮により残渣を得て、該残渣を、ＰＥ／ＥＡ（１：０１）で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、６－ブロモ－２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシイソキノリン－１－オン（１２０ｇ、未精製）を得た。粗生成物を、以下の条件、カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、ＡＣＮ水溶液（０．１％ＮＨ４ＨＣＯ３）、３０分で２５％から８５％へのグラジエント；検出器、ＵＶ２５４ｎｍ、での逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、６－ブロモ－２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシイソキノリン－１－オン（７５ｇ、３０．６５％）を白色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝３００。
[0351] ステップ３： ２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン－１－オンの調製。
[0352] ジオキサン（７５０ｍＬ）中の６－ブロモ－２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシイソキノリン－１－オン（７５ｇ、２４９．９ｍｍｏｌ）、４，４，５，５－テトラメチル－２－（テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロラン（１２６．９２ｇ、４９９．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９．１４ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３６．７９ｇ、３７４．８ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で２時間撹拌した。冷却後、得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン／メタノール（２０：１）で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン－１－オン（６５ｇ、７４．９２％）を黄色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４８。
[0353] ステップ４： （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0354] ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－３－［メチル［３－（メチルスルファニル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］アミノ］－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１．００ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）イソキノリン－１－オン（１．８１ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、３－メチルサリチル酸銅（Ｉ）（１．４０ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．３０ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素（Ｎ）下、７０℃で２時間攪拌した。反応を、３０ｍＬの１０％アンモニア／水を加えることによりクエンチし、固体を濾過して除去した。得られた溶液を、３×５０ｍＬのジクロロメタンで抽出した。まとめた有機相を５０ｍＬのブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。残渣を、以下の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相：ＡＣＮ水溶液（０．５％ ＮＨ４ＨＣＯ３）、３０分で２５％から８５％へのグラジエント；検出器、ＵＶ２５４ｎｍ、での逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。これにより、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、０．８０ ｇ（５５．１２％）、を淡黄色固体として得た。
[0355] この手順を並行して２０回繰り返して、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２２ｇ）を黄色固体として得た。まとめた（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２２ｇ、３９．５５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２４０ｍＬ）中で、スルフヒドリル官能基化シリカＰＳＢ－２０（２．２ｇ）と室温で混合した。得られた混合物を、窒素（Ｎ）下、５０℃で０．５時間攪拌し、室温に冷却し、濾過し、濾過ケーキをＴＨＦ（３×１０ｍＬ）で洗浄した。この手順を８回繰り返して、濾液を減圧下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２１ｇ）を黄色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５６．２６。
[0356] ステップ５： （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－ヒドロキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの調製。
[0357] ＤＭＦ（１８２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－メトキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２０ｇ、３５．９３１ｍｍｏｌ）に、ナトリウムメタンチオラート（１２．５９ｇ、１７９．７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１００℃で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳで観察した。混合物を室温に自然冷却し、水（２００ｍｌ）でクエンチした。水層を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。減圧留去により残渣を得て、該残渣を、以下の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相：ＣＨ３ＣＮ水溶液、３０分で２５％から８５％へのグラジエント；検出器、ＵＶ２５４ｎｍ、での逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。これにより、（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－ヒドロキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１５ｇ、７６．９４％）を淡黄色固体として得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝５４２．２。
[0358] ステップ６： ２－エチル－４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシイソキノリン－１－オン（化合物１６３）の調製。
[0359] 酢酸エチル（１５０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［３－（２－エチル－４－フルオロ－７－ヒドロキシ－１－オキソイソキノリン－６－イル）－１，２，４－トリアジン－６－イル］（メチル）アミノ｝－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１５ｇ）の攪拌溶液に、ＥＡ（１５０ｍＬ）中のＨＣｌ（気体）を、窒素（Ｎ）下、室温で滴下により加えた。得られた混合物を、室温下で１．５時間攪拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ８～９に塩基性化した。水層を、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出し、減圧下で濃縮した。これにより、２－エチル－４－フルオロ－６－（６－｛［（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－２－フルオロ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］（メチル）アミノ｝－１，２，４－トリアジン－３－イル）－７－ヒドロキシイソキノリン－１－オン（化合物１７１）（１１．６ｇ）を淡黄色固体として得た。Ｍ＋Ｈ］＋＝４４３．２５。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ １２．５６（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３１（ｄｄｄｄ，Ｊ＝３４．３，１２．８，５．８，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８６－４．６１（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），３．２２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，３Ｈ），２．３０（ｔｄ，Ｊ＝１２．７，３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．９３－１．７９（ｍ，２Ｈ），１．７１（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，５．３Ｈｚ，１Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
[0360] 実施例９： ＳＭＮ定量スプライシングアッセイ．
[0361] 脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）患者の線維芽細胞（ＧＭ０３８１３、Ｃｏｒｉｅｌｌ社）を、９６ウェルプレート中に５０，０００細胞／ウェルでプレーティングした。プレーティング直後に、細胞に、２．５μＭ～０．６ｎＭ（０．１％ＤＭＳＯ）の範囲の濃度で２４時間にわたって化合物を投与した。処理細胞を溶解させ、ｃＤＮＡを、製造業者の指示に従ってＦａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｅｌｌｓ－ｔｏ－Ｃｔキット（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ社Ａ３５３７８）を使用して合成した。２μＬの各ｃＤＮＡをｑＰＣＲ反応で使用した。ｑＰＣＲ反応物を、以下の表４に示すプライマー及びプローブを用いて、ＴａｑＭａｎ（商標）Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社；４４４４９６５）を使用して、１０μＬ量で３８４ウェルプレート中で調製した。反応を、初期設定にしたＱｕａｎｔ Ｓｔｕｄｉｏ ６ ｑＰＣＲ機器内で走査した。
[0363] 実施例１０： ＳＭＮタンパク質アッセイ．
[0364]
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）患者の線維芽細胞を、９６ウェルプレート中に７，０００細胞／ウェルでプレーティングした。化合物を、０．６ｎＭから２．５μＭの範囲の濃度で加えて、４８時間インキュベートし、そして細胞を１００μＬの溶解バッファーで溶解させた。２０μＬの溶解産物を、ＰｈａｒｍＯｐｔｉｍａ社（ミシガン州）開発のＭｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイによるＳＭＮタンパク質測定に使用した。１μｇ／ｍＬ～１９．５ｐｇ／ｍＬの範囲のＳＭＮタンパク質で調製した標準曲線を、各ＭＳＤプレートで使用して、各試料中のＳＭＮタンパク質絶対量を計算した。
[0365] ＳＭＮ定量的スプライシングアッセイ及びタンパク質アッセイの両方の結果を、以下の表５に示す。

Claims (42)

  1. 式（Ｉ）の化合物：
    であって、
    式中、
    Ｑは、置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ７アルキレン、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ７ヘテロアルキレンであり、
    Ｘは、水素、ＣＨ３、又は置換若しくは非置換Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルであり、
    Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、又はＣＨ３であり、
    Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、
    Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４はそれぞれ独立して、Ｎ、－ＮＲＹ１－、－Ｏ－、－Ｓ－、又はＣＲＡ１であり、
    はそれぞれ独立して、単結合又は２重結合であり、
    ＲＡ１はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、＝Ｏ、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
    ＲＹ１はそれぞれ独立して、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ１～Ｃ６アルキルである、前記化合物。
  2. 前記化合物が、式（Ｉａ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  3. 前記化合物が、式（Ｉｂ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  4. 前記化合物が、式（Ｉｃ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  5. 前記化合物が、式（Ｉｄ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  6. 前記化合物が、式（Ｉｅ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  7. 前記化合物が、式（Ｉｆ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  8. 前記化合物が、式（Ｉｇ）
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  9. 前記化合物が、式（Ｉｈ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  10. 前記化合物が、式（Ｉｉ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  11. 前記化合物が、式（Ｉｊ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  12. 前記化合物が、式（Ｉｋ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  13. 前記化合物が、式（Ｉｌ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  14. 前記化合物が、式（Ｉｍ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  15. 前記化合物が、式（Ｉｎ）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  16. 前記化合物が、式（Ｉａａ＊）：
    の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
  17. Ｒ３又はＲ４のうちの少なくとも１つが、フッ素である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の化合物。
  18. Ｒ３がフッ素であり、またＲ４が水素である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の化合物。
  19. Ｒ３が水素であり、またＲ４がフッ素である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の化合物。
  20. Ａ１がＣＨ、ＣＦ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、Ｏ、又はＣ（＝Ｏ）である、請求項１、２、５、６、又は９のいずれか１項に記載の化合物。
  21. Ａ２がＣＨ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、又はＣ（ＣＨ３）である、請求項１～５、８、又は１１～１３のいずれか１項に記載の化合物。
  22. Ａ３がＣＨ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、又はＣ（ＣＨ３）である、請求項１～４、６、７、１０、１２、又は１４のいずれか１項に記載の化合物。
  23. Ａ４がＣＨ、Ｃ（ＣＨ３）、Ｎ、Ｏ、又はＣ（＝Ｏ）である、請求項１、３、１０、１１、又は１５のいずれか１項に記載の化合物。
  24. 前記化合物が、少なくとも２０個の炭素原子、５個の窒素原子、及び１個のフッ素原子を含む、請求項１に記載の化合物。
  25. Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４のうちの１つがＣ（＝Ｏ）である、請求項１に記載の化合物。
  26. Ｒ１が水素又はＣＨ３である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の化合物。
  27. Ｒ２が水素又はＣＨ３である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の化合物。
  28. Ｑが、置換又は非置換Ｃ１～Ｃ７アルキレンである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の化合物。
  29. Ｑが、置換又は非置換Ｃ２～Ｃ４アルキレンである、請求項２８に記載の化合物。
  30. Ｑが－ＣＨ２ＣＨ２－である、請求項２９に記載の化合物。
  31. Ｑが－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である、請求項２９に記載の化合物。
  32. からなる群から選択される、請求項１～２９のいずれか１項に記載の化合物。
  33. Ｘが水素である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の化合物。
  34. Ｘが－ＣＨ３である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の化合物。
  35. Ｘが、置換又は非置換Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである、請求項１～３２のいずれか１項に記載の化合物。
  36. Ｘがシクロプロピルである、請求項３５に記載の化合物。
  37. 前記化合物が、表１又は表２から選択される、請求項１に記載の化合物。
  38. 請求項１～３７のいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容可能な塩又は溶媒和化合物。
  39. 請求項１～３７のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩若しくは薬学的に許容可能な溶媒和化合物と、薬学的に許容可能な賦形剤又は担体と、を含む、医薬組成物。
  40. スプライシングを調節する方法であって、請求項１～３８のいずれか１項に記載の化合物又は請求項３９の医薬組成物を細胞に施与することを含み、前記化合物が、ｍＲＮＡをコードするプレｍＲＮＡのスプライス部位配列においてのスプライシングを調節し、前記ｍＲＮＡが標的タンパク質又は機能性ＲＮＡをコードするものである、前記方法。
  41. 疾患又は状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３８のいずれか１項に記載の化合物又は請求項３９に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  42. 状態又は疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１～３８のいずれか１項に記載の化合物又は請求項３９に記載の医薬組成物の使用。
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