KR20230048106A - 스플라이싱을 조절하는 조성물 - Google Patents

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KR20230048106A
KR20230048106A KR1020237007640A KR20237007640A KR20230048106A KR 20230048106 A KR20230048106 A KR 20230048106A KR 1020237007640 A KR1020237007640 A KR 1020237007640A KR 20237007640 A KR20237007640 A KR 20237007640A KR 20230048106 A KR20230048106 A KR 20230048106A
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마이클 루치오
브라이언 루카스
티엔셩 왕
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스카이호크 테라퓨틱스, 인코포레이티드
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Abstract

유전자에 의해 암호화된 pre-mRNA와 같은 mRNA의 스플라이싱을 조절하는 소분자 스플라이싱 조절 화합물 및 스플라이싱을 조절하고 질환 및 병태를 치료하기 위한 소분자 스플라이싱 조절 화합물의 사용 방법이 본원에 개시된다.

Description

스플라이싱을 조절하는 조성물
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 8월 5일에 출원된 미국 특허 가출원 제63/061,742호의 이익을 주장하며, 이의 개시 내용은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
인간 게놈 내의 단백질 암호화 유전자의 대부분은 인트론(비암호화 영역)에 의해 분리되는 다수의 엑손(암호화 영역)으로 구성된다. 유전자 발현은 단일 전구체 전령 RNA(pre-mRNA)를 생성한다. 인트론 서열은 이어서 스플라이싱(splicing)이라 불리는 과정에 의해 pre-mRNA로부터 제거되고, 이는 성숙한 전령 RNA(mRNA)를 생성한다. 엑손의 상이한 조합을 포함함으로써, 대안적인 스플라이싱은 구별되는 단백질 동형을 암호화하는 다수의 mRNA를 생성한다. 다수의 단백질 및 리보핵산단백질의 세포내 복합체인 스플라이소좀은 스플라이싱을 촉매한다.
mRNA 발현을 유도하고 제어하기 위한 현재의 치료적 접근법은 유전자 요법, 게놈 편집, 또는 광범위한 올리고뉴클레오티드 기술(안티센스, RNAi 등)과 같은 방법을 필요로 한다. 유전자 요법 및 게놈 편집은 DNA 코드에 영향을 미쳐 mRNA 발현을 변화시킴으로써 mRNA 전사의 상류에 작용한다. 올리고뉴클레오티드는 표준 염기/염기 혼성화를 통해 RNA의 작용을 조절한다. 이러한 접근법의 매력은 올리고뉴클레오티드의 염기성 약물작용발생단(pharmacophore)의 설계에 있으며, 이는 표적 서열 대상에 대한 공지된 염기쌍 형성에 의해 간단한 방식으로 정의될 수 있다. 이들 치료 기법 각각은 실질적인 기술적, 임상적, 규제적 어려움을 겪는다. 치료제(예를 들어, 안티센스, RNAi)로서 올리고뉴클레오티드의 일부 제한사항은 바람직하지 않은 약동학, 경구 생체이용률의 결여, 및 혈액-뇌-장벽 침투의 결여를 포함하며, 후자는 질환(예를 들어, 신경 질환, 뇌암)의 치료를 위한 비경구 약물 투여 후 뇌 또는 척수로의 전달을 불가능하게 한다. 또한, 올리고뉴클레오티드는 지질 나노입자와 같은 복합 전달 시스템 없이 고형 종양으로 효과적으로 흡수되지 않는다. 또한, 세포 및 조직으로 흡수된 대부분의 올리고뉴클레오티드는 비기능성 구획(예를 들어, 엔도솜)에 남아 있고, 표적이 위치한 시토졸 및/또는 핵에 접근할 수 없다.
또한, 표적에 어닐링하기 위해, 올리고뉴클레오티드 요법은 표적의 상보적 염기쌍에 대한 접근을 필요로 한다. 이러한 접근법은 pre-mRNA 서열이 세포에서 RNA의 선형 가닥으로서 존재한다고 가정한다. 그러나, pre-mRNA는 선형인 경우는 드물고 복잡한 이차 및 삼차 구조를 갖는다. 또한, 시스-작용 요소(예를 들어, 단백질 결합 요소) 및 트랜스-작용 인자(예를 들어, 스플라이싱 복합체 성분)는 추가적인 2차원 및 3차원 복잡도를 (예를 들어, pre-mRNA에 결합함으로써) 생성할 수 있다. 이러한 특징은 올리고뉴클레오티드 요법에 대해 효력 및 효능을 제한할 수 있다.
본원에 기술된 신규한 소분자 스플라이싱 조절자(SMSM)는 (예를 들어, pre-mRNA 표적에 대한 혼성화를 차단함으로써) 전술한 제한사항들, 또는 올리고뉴클레오티드 요법을 크게 제한하는 구조적 입체적 장애를 겪지 않는다. 소분자는 DNA 복제, 전사 및 번역을 포함하는 많은 세포 과정의 메커니즘, 조절 및 기능을 밝혀내는 데 필수적이었다. 몇몇 최근의 보고서는 스플라이싱의 소분자 효과기에 대한 스크린을 기술하였지만, 단지 소수의 지속적(constitutive) 또는 선택적 스플라이싱 조절자만이 식별되었고, 많은 소분자 억제제는 특이성이 결여되거나, 선택성이 결여되거나, 효력이 결여되거나, 독성을 나타내거나, 경구적으로 이용할 수 없다. 소분자 조절자로 RNA 전사체를 표적화하는 것은 다양한 RNA 매개 질환을 치료하기 위한 미개척된 치료 접근법을 나타낸다. 따라서, 치료제로서 유용한 소분자 RNA 조절자를 개발할 필요가 있다. 스플라이싱 또는 스플라이싱-의존적 과정의 신규한 조절자에 대한 필요가 당업계에 존재한다. 이러한 필요를 충족시키는 소분자 스플라이싱 조절자 및 이의 용도가 본원에 제공된다.
일 양태에서, 다음의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물이 본원에서 기술된다:
Figure pct00001
식 중, Q는 치환 또는 미치환 C1-C7 알킬렌 또는 치환 또는 미치환 C1-C7 헤테로알킬렌이고; X는 수소, CH3, 또는 치환 또는 미치환 C3-C6 시클로알킬이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 CH3이고; 각각의 R3 및 R4는 독립적으로 수소 또는 할로겐이고; 각각의 A1, A2, A3, 및 A4는 독립적으로 N, -NRY1-, -O-, -S-, 또는 CRA1이고; 각각의
Figure pct00002
는 독립적으로 단일 또는 이중 결합이고; 각각의 RA1은 독립적으로 수소, 할로겐, =O, 또는 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이고; 각각의 RY1은 독립적으로 수소이거나 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다.
본원에 개시된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물이 또한 본원에 제공된다.
스플라이싱을 조설하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 본원에 개시된 화합물을 세포에 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 화합물은 mRNA를 암호화하는 pre-mRNA의 스플라이스 부위 서열에서 스플라이싱을 조절하고, mRNA는 표적 단백질 또는 기능성 RNA를 암호화한다.
질환 또는 병태를 치료하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 본원에 개시된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
병태 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 본원에 개시된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 용도가 또한 본원에 제공된다.
참조로서의 포함
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 구체적 개별적으로 참조로서 포함되도록 표시된 것과 동일한 정도로 본원에 참조로서 포함된다.
이러한 설명의 특정 세부 사항은 다양한 구현예의 완전한 이해를 제공하기 위해 기술된다. 그러나, 당업자는 본 개시가 이들 세부 사항 없이 실시될 수 있음을 이해할 것이다. 다른 경우에, 공지의 구조는 구현예의 설명을 불필요하게 모호하게 하는 것을 피하기 위해 도시되거나 상세히 설명되지 않았다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 과학적 용어는 본 개시가 속하는 당업계의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 개시의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적절한 방법 및 물질이 이하에 기술된다.
정의
용어 "이 개시의 화합물(들)", "본 개시의 화합물(들)", "소분자 입체 조절자(들)", "소분자 스플라이싱 조절자(들)" "입체 조절자(들)", "스플라이싱 조절자(들)", "스플라이싱을 조절하는 화합물(들)" 및 "스플라이싱을 조정하는 화합물(들)", "SMSM" 또는 "표적 RNA에 결합하는 소분자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고 본원에 개시된 화합물 및 이의 입체이성질체, 호변이성질체, 용매화물, 및 염(예를 들어, 약학적으로 허용 가능한 염)을 지칭한다. 용어 "이 개시의 화합물(들)", "본 개시의 화합물(들)", "소분자 입체 조절자(들)", "소분자 스플라이싱 조절자(들)" "입체 조절자(들)", "스플라이싱 조절자(들)", "스플라이싱을 조절하는 화합물(들)" 및 "스플라이싱을 조정하는 화합물(들)", "SMSM" 또는 "표적 RNA에 결합하는 소분자"는 세포 성분(예를 들어, DNA, RNA, pre-mRNA, 단백질, RNP, snRNA, 탄수화물, 지질, 보조인자, 영양 물질, 및/또는 대사물질)에 결합하고, 표적 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, pre-mRNA의 스플라이싱을 조절하는 소분자를 의미한다. 예를 들어, SMSM은 변이된, 변이되지 않은, 팽창된 및/또는 비정상적인 스플라이스 부위로 표적 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, RNA(예를 들어, pre-mRNA)에 직접 또는 간접적으로 결합하여, 표적 폴리뉴클레오티드의 스플라이싱을 조절할 수 있다. 예를 들어, SMSM은 단백질, 예를 들어, 스플라이소좀 단백질 또는 리보핵단백질에 직접 또는 간접적으로 결합하여, 단백질을 입체 조절할 수 있고 표적 RNA의 스플라이싱을 조절할 수 있다. 예를 들어, SMSM은 스플라이소좀 성분, 예를 들어, 스플라이소좀 단백질 또는 snRNA에 직접 또는 간접적으로 결합하여, 스플라이소좀 단백질 또는 snRNA를 입체 조절할 수 있고 표적 폴리뉴클레오티드의 스플라이싱을 조절할 수 있다. 이들 용어는 올리고뉴클레오티드로 이루어진 화합물은 분명히 배제한다. 이들 용어는 표적 RNA의 하나 이상의 이차 또는 삼차 구조 요소에 결합할 수 있는 소분자 화합물을 포함한다. 이들 부위는 RNA 삼중체(triplex), 3WJ, 4WJ, 병렬-Y 연접부, 헤어핀, 팽출(bluge) 루프, 유사매듭, 내부 루프, 및 기타 고차 RNA 구조 모티프를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "RNA"(리보핵산)는 공급원(예를 들어, 상기 RNA는 인간, 동물, 식물, 바이러스, 또는 박테리아에서 생성될 수 있거나, 기원이 합성일 수 있음), 생물학적 맥락(예를 들어, RNA는 핵 내에 있거나, 혈액 내에 순환 중이거나, 시험관 내에서, 세포 용해물, 또는 단리된 형태 또는 순수한 형태일 수 있음), 또는 물리적 형태(예를 들어, RNA는 단일-, 이중-, 또는 삼중-가닥 형태(RNA-DNA 하이브리드 포함)일 수 있거나, 후성유전적 변형, 고유 전사후 변형, 인공 변형(예를 들어, 화학적 또는 시험관 내 변형에 의해 수득), 또는 기타 변형을 포함할 수 있거나, 예를 들어, 금속 이온, 소분자, 샤페론과 같은 단백질, 또는 보조인자에 결합할 수 있거나, 또는 변성된 상태, 부분적으로 변성된 상태, 또는 접힌 상태일 수 있는데, 이는 임의의 천연 또는 비천연 이차 또는 삼차 구조, 예컨대 사중체(quadruplex), 헤어핀, 삼중체, 3방향 연접부(3WJ), 4방향 연접부(4WJ), 병렬-Y 연접부, 헤어핀, 팽출 루프, 유사매듭, 및 내부 루프 등을 포함하며, 및 RNA에 의해 채택된 임의의 일시적인 형태 또는 구조를 포함)에 관계 없이 자연 발생 또는 합성 올리고리보뉴클레오티드를 의미한다. 일부 구현예에서, RNA는 20, 22, 50, 75, 또는 100개 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, RNA는 250개 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, RNA는 350, 450, 500, 600, 750, 또는 1,000, 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 7,500, 10,000, 15,000, 25,000, 50,000개 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, RNA는 250개 내지 1,000개의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, RNA는 pre-RNA, pre-miRNA, 또는 전구전사체(pretranscript)이다. 일부 구현예에서, RNA는 비암호화 RNA(ncRNA), 전령 RNA(mRNA), 마이크로-RNA(miRNA), 리보자임, 리보스위치, lncRNA, lincRNA, snoRNA, snRNA, scaRNA, piRNA, ceRNA, 유사 유전자, 바이러스 RNA, 진균 RNA, 기생 RNA, 또는 박테리아 RNA이다.
본원에서의 "입체 변경", "입체 변형" 또는 "입체 조절"은 서로에 대한 화학적 모이어티의 공간 배향의 변화를 지칭한다. 당업자는 입체적 메커니즘이 이에 입체 장애, 입체 차폐(steric shielding), 입체 인력(steric attraction), 사슬 교차, 입체 반발, 입체 공명 억제, 및 입체 양성자화 억제를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않음을 인식할 것이다.
본원의 구조에서 탄소, 산소, 황 또는 질소 원자 상에 나타나는 임의의 개방 원자가는 달리 명시되지 않는 한, 수소의 존재를 나타낸다.
본원에 기술된 정의는 문제의 용어가 단독으로 나타나는지 또는 조합하여 나타나는지 여부와 관계없이 적용된다. 본원에 기술된 정의는 화학적으로 관련 있는 조합, 예를 들어, "헤테로시클로알킬아릴", "할로알킬헤테로아릴", "아릴알킬헤테로시클로알킬", 또는 "알콕시알킬"을 형성하기 위해 부가될 수 있는 것으로 고려된다. 조합의 마지막 구성원은 분자의 나머지에 결합하는 라디칼이다. 조합의 다른 구성원은 문자의 순서에 관해서 역순으로 결합 라디칼에 부착되는데, 예를 들어 조합 아릴알킬헤테로시클로알킬은 헤테로시클로알킬-라디칼이 알킬로 치환되고 아릴로 치환된 것을 지칭한다.
치환기의 수를 표시할 때, 용어 "하나 이상"은 하나의 치환기로부터 가능한 가장 높은 치환 수까지의 범위, 즉 치환기에 의한 하나의 수소의 치환에서 최대 모든 수소의 치환까지를 지칭한다.
용어 "치환기"는 모분자 상의 수소 원자를 치환하는 원자 또는 원자단을 나타낸다.
용어 "치환된"은 특정 기가 하나 이상의 치환기를 갖는 것을 나타낸다. 임의의 기가 다수의 치환기를 지닐 수 있고 다양한 가능한 치환기가 제공되는 경우, 치환기는 독립적으로 선택되고 반드시 동일할 필요는 없다. 용어 "비치환된"은 특정 기가 치환기를 갖지 않음을 의미한다. 용어 "선택적으로 치환된"은 특정 기가 치환되지 않거나 하나 이상의 치환기에 의해 치환되고, 가능한 치환기의 군으로부터 독립적으로 선택되는 것을 의미한다.
다음의 약어가 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된다: 아세트산(AcOH); 에틸 아세테이트(EtOAc); 부틸 알코올(n-BuOH); 1,2-디클로로에탄(DCE); 디클로로메탄(CH2Cl2, DCM); 디이소프로필에틸아민(Diipea); 디메틸포름아미드(DMF); 염화수소(HCl); 메탄올(MeOH); 메톡시메틸 브로마이드(MOMBr); N-메틸-2-피롤리돈(NMP); 요오드화메틸(MeI); n-프로판올(n-PrOH); p-메톡시벤질(PMB); 트리에틸아민(Et3N); [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센] 디클로로팔라듐(II); (Pd(dppf)Cl2); 에탄 티올레이트 나트륨(EtSNa); 아세트산나트륨(NaOAc); 수소화나트륨(NaH); 수산화나트륨(NaOH); 테트라히드로피란(THP); 테트라히드로푸란(THF).
본원에서 사용된 바와 같이, C1-Cx는 C1-C2, C1-C3... C1-Cx를 포함한다. 단지 예로서, "C1-C4"로 지정된 기는 모이어티 내에 1개 내지 4개의 탄소 원자, 즉 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자 또는 4개의 탄소 원자를 함유하는 기가 있음을 나타낸다. 따라서, 단지 예로서, "C1-C4 알킬"은 알킬기에 1개 내지 4개의 탄소 원자가 있음을 나타내며, 즉, 알킬기는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, 및 t-부틸 중에서 선택된다.
용어 "옥소"는 =O 치환기를 지칭한다.
용어 "티옥소"는 =S 치환기를 지칭한다.
용어 "할로", "할로겐", 및 "할로겐화"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오드를 나타낸다.
용어 "알킬"은 1개 내지 20개의 탄소 원자를 가지며 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착되는 직선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 라디칼을 지칭한다. 최대 10개의 탄소 원자를 포함하는 알킬은 C1-C10 알킬로 지칭되며, 마찬가지로, 예를 들어, 최대 6개의 탄소 원자를 포함하는 알킬은 C1-C6 알킬이다. 다른 수의 탄소 원자를 포함하는 알킬(및 본원에서 정의된 다른 모이어티)은 유사하게 표시된다. 알킬기는 C1-C10 알킬, C1-C9 알킬, C1-C8 알킬, C1-C7 알킬, C1-C6 알킬, C1-C5 알킬, C1-C4 알킬, C1-C3 알킬, C1-C2 알킬, C2-C8 알킬, C3-C8 알킬 및 C4-C8 알킬을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 대표적인 알킬기는 메틸, 에틸, n-프로필, 1-메틸에틸(i-프로필), n-부틸, i-부틸, s-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸에틸(t-부틸), 3-메틸헥실, 2-메틸헥실, 1-에틸-프로필 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 알킬은 메틸 또는 에틸이다. 일부 구현예에서, 알킬은 -CH(CH3)2 또는 -C(CH3)3이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 알킬기는 선택적으로 치환될 수 있다. 의심의 여지를 피하기 위해, 용어 "알킬"은 알케닐기 또는 알키닐기를 포함하지 않는다. "알킬렌" 또는 "알킬렌 사슬"은 분자의 나머지를 라디칼기에 연결하는 직선형 또는 분지형 2가 탄화수소 사슬을 지칭한다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 -CH2-, -CH2CH2-, 또는 -CH2CH2CH2-이다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 -CH2-이다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 -CH2CH2-이다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 -CH2CH2CH2-이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 알킬렌기는 선택적으로 치환될 수 있다. 의심의 여지를 피하기 위해, 용어 "알킬렌"은 알케닐렌기 또는 알키닐렌기를 포함하지 않는다.
용어 "알케닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합이 존재하는, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 라디칼을 지칭한다. 일 구현예에서, 알케닐기는 화학식 -C(R)=CRa 2를 가지며, 여기에서 Ra는 동일하거나 상이할 수 있는 알케닐기의 나머지 부분을 지칭한다. 일부 구현예에서, Ra는 H 또는 알킬이다. 일부 구현예에서, 알케닐은 에테닐(즉, 비닐), 프로페닐(즉, 알릴), 부테닐, 펜테닐, 펜타디에닐 등에서 선택된다. 알케닐기의 비제한적인 예는 -CH=CH2, -C(CH3)=CH2, -CH=CHCH3, -C(CH3)=CHCH3, 및 -CH2CH=CH2를 포함한다. 용어 "알케닐렌"은 2가 알케닐기를 지칭한다.
용어 "알키닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합이 존재하는, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직선형 또는 분지형 탄화수소 사슬 라디칼을 지칭한다. 일 구현예에서, 알케닐기는 화학식 -C≡C-Ra를 가지며, 여기서 Ra는 알키닐기의 나머지 부분을 지칭한다. 일부 구현예에서, Ra는 H 또는 알킬이다. 일부 구현예에서, 알키닐은 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐 등에서 선택된다. 알키닐기의 비제한적인 예는 -C≡CH,-C≡CCH3-C≡CCH2CH3, -CH2C≡CH를 포함한다. 용어 "알키닐렌"은 2가 알키닐기를 지칭한다.
용어 "알콕시"는 화학식 -ORa의 라디칼을 지칭하며, 여기서 Ra는 정의된 알킬 라디칼이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 알콕시기는 선택적으로 치환될 수 있다. 대표적인 알콕시기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 펜톡시를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 알콕시는 메톡시이다. 일부 구현예에서, 알콕시는 에톡시이다.
용어 "방향족"은 4n+2 p 전자를 함유하는 비국소 p-전자계를 갖는 평면형 고리를 지칭하며, 여기서 n은 정수이다. 방향족은 선택적으로 치환될 수 있다. 용어 "방향족"은 아릴기(예를 들어, 페닐, 나프탈레닐) 및 헤테로아릴기(예를 들어, 피리디닐, 퀴놀리닐)를 둘 다 포함한다.
용어 "아릴"은 고리를 형성하는 원자 각각이 탄소 원자인 방향족 고리를 지칭한다. 아릴기는 선택적으로 치환될 수 있다. 아릴기의 예는 페닐 및 나프틸을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 아릴은 페닐이다. 구조에 따라, 아릴기는 단일 라디칼 또는 이중 라디칼(즉, 아릴렌기)일 수 있다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 용어 "아릴" 또는 접두어 "ar-"(예컨대 "아랄킬(ar알킬)")는 선택적으로 치환된 아릴 라디칼을 포함하는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 아릴기는 본원에 정의된 부분적으로 환원된 시클로알킬기(예를 들어, 1,2-디히드로나프탈렌)를 포함한다. 일부 구현예에서, 아릴기는 본원에서 정의된 완전히 환원된 시클로알킬기(예를 들어, 1,2,3,4-테트라히로나프탈렌)를 포함한다. 아릴이 시클로알킬기를 포함하는 경우, 아릴은 방향족 고리 탄소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 결합된다.
용어 "할로알킬"은 알킬기를 나타내며, 여기서 알킬기의 수소 원자 중 적어도 하나는 동일하거나 상이한 할로겐 원자, 특히 플루오르 원자로 치환되어 있다. 할로알킬의 예는 모노플루오로-, 디플루오로- 또는 트리플루오로-메틸, -에틸 또는 -프로필, 예를 들어 3,3,3-트리플루오로프로필, 2-플루오로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 플루오로메틸, 또는 트리플루오로메틸을 포함한다. 용어 "퍼할로알킬"은 알킬기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자로 치환된 알킬기를 나타낸다.
용어 "이환 고리 시스템"은 공통 단일 결합 또는 이중 결합을 통해(추가 고리형(annelated) 이환 고리 시스템), 3개 이상의 공통 원자의 서열을 통해(다리결합(bridged) 이환 고리 시스템), 또는 공통 단일 원자를 통해(스피로 이환 고리 시스템) 서로 융합된 2개의 고리를 나타낸다. 이환 고리 시스템은 포화, 부분 불포화, 불포화 또는 방향족일 수 있다. 이환 고리 시스템은 N, O 및 S에서 선택된 헤테로원자를 포함할 수 있다.
용어 "탄소환식(carbocyclic)" 또는 "탄소고리(carbocycle)"는 고리의 골격을 형성하는 원자가 모두 탄소 원자인 고리 또는 고리 시스템을 지칭한다. 따라서, 상기 용어는 고리 골격이 탄소와 상이한 적어도 하나의 원자를 함유하는 "복소환식(heterocyclic)" 고리 또는 "헤테로고리(heterocycle)"와 탄소환식을 구별한다. 일부 구현예에서, 이환 탄소고리의 2개의 고리 중 적어도 하나는 방향족이다. 일부 구현예에서, 이환 탄소고리의 두 고리는 모두 방향족이다. 탄소고리는 시클로알킬 및 아릴을 포함한다.
용어 "시클로알킬"은 단환 또는 다환 비방향족 라디칼을 지칭하며, 여기서 고리를 형성하는 원자(즉, 골격 원자) 각각은 탄소 원자이다. 일부 구현예에서, 시클로알킬은 포화되거나 부분적으로 불포화된다. 일부 구현예에서, 시클로알킬은 스피로시클릭 또는 다리결합 화합물이다. 일부 구현예에서, 시클로알킬은 방향족 고리와 융합된다(이 경우, 시클로알킬은 비방향족 고리 탄소 원자를 통해 결합됨). 시클로알킬기는 3개 내지 10개의 고리 원자를 갖는 기를 포함한다. 대표적인 시클로알킬은 3개 내지 10개의 탄소 원자, 3개 내지 8개의 탄소 원자, 3개 내지 6개의 탄소 원자, 또는 3개 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 시클로알킬을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 단환 시클로알킬 라디칼은, 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 및 시클로옥틸을 포함한다. 일부 구현예에서, 단환 시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실이다. 일부 구현예에서, 단환 시클로알킬은 시클로펜테닐 또는 시클로헥세닐이다. 일부 구현예에서, 단환 시클로알킬은 시클로펜테닐이다. 다환 라디칼은, 예를 들어 아다만틸, 1,2-디히드로나프탈레닐, 1,4-디히드로나프탈레닐, 테트라이닐, 데칼리닐, 3,4-디히드로나프탈레닐-1(2H)-온, 스피로[2.2]펜틸, 노보닐 및 이환[1.1.1]펜틸을 포함한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 시클로알킬기는 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "다리결합"은 2개의 다리목(bridgehead) 원자를 연결하는 다리를 함유하는 2개 이상의 고리를 갖는 임의의 고리 구조를 지칭한다. 다리목 원자는 분자의 골격 뼈대의 일부이고 3개 이상의 다른 골격 원자에 결합된 원자로서 정의된다. 일부 구현예에서, 다리목 원자는 C, N, 또는 P이다. 일부 구현예에서, 다리는 2개의 다리목 원자를 연결하는 단일 원자 또는 원자 사슬이다. 일부 구현예에서, 다리는 2개의 다리목 원자를 연결하는 원자가 결합이다. 일부 구현예에서, 다리결합 고리 시스템은 시클로알킬이다. 일부 구현예에서, 다리결합 고리 시스템은 헤테로시클로알킬이다.
용어 "플루오로알킬"은 하나 이상의 수소 원자가 불소 원자로 치환되는 알킬을 지칭한다. 일 양태에서, 플루오로알킬은 C1-C6 플루오로알킬이다. 일부 구현예에서, 플루오로알킬은 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1-플루오로메틸-2-플루오로에틸 등에서 선택된다.
용어 "헤테로알킬"은 알킬의 하나 이상의 골격 원자가 탄소 이외의 원자, 예를 들어, 산소, 질소(예를 들어, -NH-, -N(알킬)-, 또는 -N(아릴)-), 황(예를 들어, -S-, -S(=O)-, 또는 -S(=O)2-), 또는 이들의 조합에서 선택되는 알킬기를 지칭한다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 헤테로알킬의 탄소 원자에서 분자의 나머지 부분에 부착된다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 헤테로알킬의 헤테로원자에서 분자의 나머지 부분에 부착된다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 C1-C6 헤테로알킬이다. 대표적인 헤테로알킬기는 -OCH2OMe, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2OMe, 또는 -OCH2CH2OCH2CH2NH2를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
용어 "헤테로알킬렌" 또는 "헤테로알킬렌 고리"는, 탄화수소 사슬의 알킬의 하나 이상의 골격 원자가 탄소 이외의 원자, 예를 들어, 산소, 질소(예를 들어, -NH-, -N(알킬)-, 또는 -N(아릴)-), 황(예를 들어, -S-, -S(=O)-, 또는 -S(=O)2-), 또는 이들의 조합에서 선택되는 라디칼 기에 분자의 나머지 부분을 연결하는 직쇄 또는 분지쇄 2가 탄화수소 사슬을 지칭한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 헤테로알킬렌기는 선택적으로 치환될 수 있다. 대표적인 헤테로알킬렌기는 -OCH2CH2O-, -OCH2CH2OCH2CH2O-, 또는 -OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2O-를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
용어 "헤테로시클로알킬"은 질소, 산소 및 황에서 선택된 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 시클로알킬기를 지칭한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 헤테로시클로알킬 라디칼은 단환 또는 이환 고리 시스템일 수 있으며, 이는 융합된(아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합되는 경우, 헤테로시클로알킬은 비방향족 고리 원자를 통해 결합됨) 또는 다리결합 고리 시스템을 포함할 수 있다. 헤테로시클릴 라디칼 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있다. 질소 원자는 선택적으로 사차화될 수 있다. 헤테로시클로알킬 라디칼은 부분적으로 또는 완전히 포화된다. 헤테로시클로알킬 라디칼의 예는, 디옥솔라닐, 티에닐[1,3]디티아닐, 테트라히드로퀴놀릴, 테트라히드로이소퀴놀릴, 데카히드로퀴놀릴, 데카히드로이소퀴놀릴, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 옥사졸리디닐, 모르폴리닐, 옥타히드로인돌릴, 옥타히드로이소인돌릴, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피페리디닐, 2-옥소피롤리디닐, 옥사졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 퀴누클리디닐, 티아졸리디닐, 테트라히드로푸릴, 트리티아닐, 테트라히드로피라닐, 티오모르폴리닐, 티아모르폴리닐, 1-옥소-티오모르폴리닐, 1,1-디옥소-티오모르폴리닐을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 용어 헤테로시클로알킬은 단당류, 이당류 및 올리고당을 포함하지만 이에 한정되지 않는 모든 고리 형태의 탄수화물을 또한 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 헤테로시클로알킬은 고리에 2개 내지 12개의 탄소를 갖는다. 일부 구현예에서, 헤테로시클로알킬은 고리에 2개 내지 10개의 탄소를 갖는다. 일부 구현예에서, 헤테로시클로알킬은 고리에 2개 내지 10개의 탄소를 가지며 1개 또는 2개의 N 원자를 갖는다. 일부 구현예에서, 헤테로시클로알킬은 고리에 2개 내지 10개의 탄소를 가지며 3개 또는 4개의 N 원자를 갖는다. 일부 구현예에서, 헤테로시클로알킬은 고리에 2개 내지 12개의 탄소, 0 내지 2개의 N 원자, 0 내지 2개의 O 원자, 0 내지 2개의 P 원자, 및 0 또는 1개의 S 원자를 갖는다. 일부 구현예에서, 헤테로시클로알킬은 고리에 2개 내지 12개의 탄소, 1 내지 3개의 N 원자, 0 또는 1개의 O 원자, 및 0 또는 1개의 S 원자를 갖는다. 헤테로시클로알킬 중의 탄소 원자의 수를 지칭할 때, 헤테로시클로알킬 중의 탄소 원자의 수는 헤테로시클로알킬을 구성하는 원자(즉, 헤테로시클로알킬 고리의 골격 원자) (헤테로원자 포함)의 총 수와 동일하지 않은 것으로 이해된다. 본 명세서에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 헤테로시클로알킬기는 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로고리" 또는 "헤테로시클릭"은 질소, 산소 및 황에서 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 헤테로방향족 고리(헤테로아릴로도 알려짐) 및 헤테로시클로알킬 고리(헤테로알리시클릭기로도 알려짐)를 지칭하며, 여기에서 각각의 헤테로고리기는 고리 시스템에 3개 내지 12개의 원자를 가지며, 단, 임의의 고리는 2개의 인접한 O 또는 S 원자를 함유하지 않는다. 비방향족 헤테로고리기(또한 헤테로시클로알킬로도 알려짐)는 고리 시스템에 3개 내지 12개의 원자를 갖는 고리를 포함하고, 방향족 헤테로고리기는 고리 시스템에 5개 내지 12개의 원자를 갖는 고리를 포함한다. 헤테로고리기는 벤조-융합 고리 시스템을 포함한다. 비방향족 헤테로시클릭 기의 예는 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 디히드로푸라닐, 테트라히드로티에닐, 옥사졸리디노닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 티옥사닐, 피페라지닐, 아지리디닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 1,2,3,6-테트라히드로피리디닐, 피롤린-2-일, 피롤린-3-일, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디히드로피라닐, 디히드로티에닐, 디히드로푸라닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자비시클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자비시클로[4.1.0]헵타닐, 3 h-인돌릴, 인돌린-2-오닐, 이소인돌린-1-오닐, 이소인돌린-1,3-디오닐, 3,4-디히드로이소퀴놀린-1(2H)-오닐, 3,4-디히드로퀴놀린-2(1H)-오닐, 이소인돌린-1,3-디티오닐, 벤조[d]옥사졸-2(3H)-오닐, 1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-오닐, 벤조[d]티아졸-2(3H)-오닐, 및 퀴놀리지닐이다. 방향족 헤테로고리기의 예는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이소옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤조옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐, 및 푸로피리디닐이다. 전술한 기는 가능한 경우 C-부착(또는 C-연결) 또는 N-부착 중 하나이다. 예를 들어, 피롤에서 유래된 기는 피롤-1-일(N-부착) 또는 피롤-3-일(C-부착)를 둘 다 포함한다. 또한, 이미다졸에서 유래된 기는 이미다졸-1-일 또는 이미다졸-3-일(둘 다 N-부착) 또는 이미다졸-2-일, 이미다졸-4-일 또는 이미다졸-5-일(모두 C-부착)을 포함한다. 헤테로고리기는 벤조-융합 고리 시스템을 포함한다. 비방향족 헤테로고리는 1개 또는 2개의 옥소(=O) 모이어티, 예컨대 피롤리딘-2-온으로 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, 이환 헤테로고리의 2개의 고리 중 적어도 하나는 방향족이다. 일부 구현예에서, 이환 헤테로고리의 두 고리는 모두 방향족이다.
용어 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 아릴기를 지칭한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 단환 또는 이환이다. 단환식 헤테로아릴의 실례는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이소옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 피리다지닐, 트리아지닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 인돌리진, 인돌, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인다졸, 벤즈이미다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 시놀린, 프탈라진, 퀴나졸린, 퀴녹살린, 1,8-나프티리딘, 및 프테리딘을 포함한다. 단환식 헤테로아릴의 실례는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이소옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 피롤일, 피리다지닐, 트리아지닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 및 푸라자닐을 포함한다. 이환 헤테로아릴의 실례는 인돌리진, 인돌, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인다졸, 벤즈이미다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 신놀린, 프탈라진, 퀴나졸린, 퀴녹살린, 1,8-나프티리딘, 및 프테리딘을 포함한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 티아졸릴, 티에닐, 티아디아졸릴 또는 푸릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 고리에 0 내지 6개의 N 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 고리에 1 내지 4개의 N 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 고리에 4 내지 6개의 N 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 고리에 0 내지 4개의 N 원자, 0 또는 1개의 O 원자, 0 또는 1개의 P 원자, 및 0 또는 1개의 S 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 고리에 1 내지 4개의 N 원자, 0 또는 1개의 O 원자, 및 0 또는 1개의 S 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 C1-C9 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, 단환 헤테로아릴은 C1-C5 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, 단환 헤테로아릴은 5원 또는 6원 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 본원에 정의된 부분적으로 환원된 시클로알킬기 또는 헤테로시클로알킬기(예를 들어, 7,8-디히드로퀘놀린)를 포함한다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 본원에 정의된 완전히 환원된 시클로알킬기 또는 헤테로시클로알킬기(예를 들어, 5,6,7,8-테트라디히드로퀘놀린)를 포함한다. 헤테로아릴이 시클로알킬기 또는 헤테로시클로알킬기를 포함하는 경우, 헤테로아릴은 헤테로방향족 고리 탄소 또는 헤테로 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 결합된다.
용어 "모이어티"는 분자의 특정 분절 또는 작용기를 지칭한다. 화학적 모이어티는 종종 분자에 매립되거나 분자에 첨부된 것으로 인식되는 화학적 엔티티(entity)이다.
용어 "호변이성질체(tautomer)"는 분자의 하나의 원자에서 동일한 분자의 또 다른 원자로의 양성자 이동을 지칭한다. 본원에 제시된 화합물은 호변이성질체로서 존재할 수 있다. 호변이성질체는 수소 원자의 이동에 의해 상호 변환될 수 있고, 단일 결합 및 인접한 이중 결합의 전환을 수반하는 화합물이다. 호변이성질체화가 가능한 결합 배열에서, 호변이성질체의 화학적 평형이 존재할 것이다. 본원에 개시된 화합물의 모든 호변이성질체 형태가 고려된다. 호변이성질체의 정확한 비율은 온도, 용매 및 pH를 포함하는 여러 인자에 따라 달라진다. 호변이성질체 상호변환의 일부 예는 다음을 포함한다:
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본원에서 사용되는 용어 "투여하다", "투여하는", "투여" 등은 원하는 생물학적 작용 부위로 화합물 또는 조성물을 전달하는 데 사용될 수 있는 방법을 지칭한다. 이러한 방법은 경구 경로(p.o.), 십이지장내 경로(i.d.), 비경구 주사(정맥 내(i.v.), 피하(s.c.), 복강내(i.p.), 근육내(i.m.), 혈관내 또는 주입(inf.) 포함), 국소(top.) 및 직장(p.r.) 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 당업자는 본원에 기술된 화합물 및 방법에 사용될 수 있는 투여 기술에 익숙하다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 및 조성물은 경구 투여된다.
본원에서 사용되는, 용어 "병용 투여" 등은 선택된 치료제를 단일 환자에게 투여하는 것을 포함하도록 의되되고, 제제가 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 또는 동일하거나 상이한 시간에 투여되는 치료 요법을 포함하도록 의도된다.
본원에서 사용되는, 용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은, 치료되는 질환 또는 병태의 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시키는, 예를 들어, 질환의 하나 이상의 징후, 증상 또는 원인의 감소 및/또는 완화, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경을 할 수 있는 충분한 양의 제제 또는 화합물을 지칭한다. 예를 들어, 치료 용도를 위한 "유효량"은 하나 이상의 질환 증상의 임상적으로 유의한 감소를 제공하는 제제의 양일 수 있다. 적절한 "유효량"은 개별적인 경우에 투여량 증량 연구와 같은 기술을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "향상하다" 또는 "향상"은 원하는 효과의 양, 효력 또는 지속 기간을 증가시키거나 연장시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 표적의 스플라이싱을 향상시키는 것과 관련하여, 용어 "향상"은 표적의 양, 효력 또는 지속시간에서 스플라이싱을 증가시키거나 연장시키는 능력을 지칭할 수 있다.
용어 "대상" 또는 "환자"는 포유류를 포함한다. 포유류의 예는 포유류의 임의의 구성원: 인간, 침팬지 및 기타 유인원과 같은 비인간 영장류, 및 원숭이 종; 소, 말, 양, 염소, 돼지와 같은 가축; 토끼, 개, 및 고양이와 같은 가축; 랫트, 마우스, 및 기니피그와 같은 설치류를 포함하는 실험 동물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일 양태에서, 포유류는 인간이다. 본원에서 사용되는 용어 "동물"은 인간 및 비인간 동물을 포함한다. 일 구현예에서, "비인간 동물"은 포유류, 예를 들어 랫트 또는 마우스와 같은 설치류이다. 일 구현예에서, 비인간 동물은 마우스이다.
용어 "약학적 조성물" 및 "약학적 제제"(또는 "제제")는 상호 교환적으로 사용되고, 활성 약학적 성분의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 대상, 예를 들어 인간에게 함께 투여하는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 혼합물 또는 용액을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "약학적 복합치료(pharmaceutical combination)"는 하나 초과의 활성 성분을 혼합하거나 조합하여 얻어진 약학적 요법을 의미하고, 활성 성분들의 고정 복합치료 및 비고정 복합치료 모두를 포함한다. 용어 "고정복합치료(fixed combination)"는 활성 성분, 예를 들어, 본원에 기술된 화합물 및 공동약제 둘 모두가 단일체(single entity) 또는 제형으로 동시에 환자에게 투여되는 것을 의미한다. 용어 "비고정복합치료(non-fixed combination)"는 활성 성분, 예를 들어, 본원에 기술된 화합물 및 공동 약제가 특정 시간 간격의 제한 없이 동시에, 동시 발생적으로 또는 순차적으로 별개의 단일체로서 환자에게 투여되는 것을 의미하며, 여기서 이러한 투여는 환자의 체내에서 두 개의 화합물의 유효 수준을 제공한다. 후자는 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3개 이상의 활성 성분의 투여에도 적용된다.
용어 "약학적으로 허용 가능한"은 일반적으로 안전하고, 비독성이며, 생물학적으로도 달리 바람직하지 않고, 수의학적 용도뿐만 아니라 인간 대상의 약학적 용도로도 허용 가능한 약학적 조성물을 제조하는 데 유용한 물질의 속성을 나타낸다. "약학적으로 허용 가능한"은 담체 또는 희석제와 같은 물질을 지칭할 수 있는데, 상기 물질은 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 제거하지 않으며, 비교적 비독성이다. 즉, 해당 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 야기하지 않거나 또는 해당 물질을 함유하는 조성물의 임의의 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않고 개체에게 투여될 수 있다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 부형제", "약학적으로 허용 가능한 담체" 및 "치료적으로 불활성인 부형제"는 상호 교환적으로 사용될 수 있고, 투여되는 대상에게 치료 활성 및 독성을 나타내지 않는 약학 조성물 중의 임의의 약학적으로 허용가능한 성분, 예컨대, 약품 제제하는 데 사용되는 붕해제, 결합제, 충전제, 용매, 완충제, 등장화제, 안정화제, 항산화제, 계면활성제, 담체, 희석제 부형제, 보존제, 또는 윤활제를 의미한다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 염을 나타낸다. 약학적으로 허용 가능한 염은 산 및 염기 부가염을 둘 다 포함한다. "약학적으로 허용 가능한 염"은 그것이 투여되는 유기체에 유의한 자극을 일으키지 않고/않거나 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 않는 화합물의 제제를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 염은 화학식 (I) 내지 (Io) 중 어느 하나의 SMSM 화합물을 산과 반응시켜 수득된다. 약학적으로 허용 가능한 염은 또한 화학식 (I) 내지 (Io) 중 어느 하나의 화합물을 염기와 반응시켜 염을 형성하여 수득된다.
본원에서 사용되는 용어 "핵산"은 일반적으로 하나 이상의 핵염기, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드를 지칭하며, 상기 용어는 폴리뉴클레오염기, 폴리뉴클레오시드, 및 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본원에서 사용되는 "소분자량 화합물"은 "소분자" 또는 "소유기 분자"와 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 소분자는 펩티드 또는 올리고뉴클레오티드 이외의 화합물을 지칭하며; 통상적으로 약 2000 달톤 미만, 예를 들어 약 900 달톤 미만의 분자량을 갖는다.
리보핵단백질(RNP)은 RNA를 함유하는 핵단백질을 지칭한다. RNP는 리보핵산 및 RNA-결합 단백질의 복합체일 수 있다. 이러한 조합은 단백질-RNA 복합체로 지칭될 수도 있다. 이들 복합체는 DNA 복제, 유전자 발현, RNA의 대사, 및 pre-mRNA 스플라이싱을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다수의 생물학적 기능으로 기능할 수 있다. RNP의 예는 리보솜, 효소 텔로머라제, 볼트(vault) 리보핵단백질, RN아제 P, 이종 핵 RNP(hnRNP) 및 소핵 RNP(snRNP)를 포함한다.
pre-mRNA로 총칭되는, 단백질 암호화 유전자 및 mRNA 처리 중간체로부터의 초기 RNA 전사체는 진핵 세포의 핵 내의 단백질에 의해 일반적으로 결합된다. 초기 전사체가 RNA 중합효소(예를 들어, RNA 중합효소 II)에서 처음 나와서 성숙한 mRNA가 세포질 내로 수송될 때까지, RNA 분자는 많은 세트의 스플라이싱 복합체 성분(예를 들어, 핵 단백질 및 snRNA)과 결합되어 있다. 이들 단백질은 다양한 크기의 이종 핵 RNA(hnRNA)(예를 들어, pre-mRNA 및 핵 RNA 복합체)를 함유할 수 있는 hnRNP의 성분일 수 있다.
스플라이싱 복합체 성분은 스플라이싱 및/또는 스플라이싱 조절 기능을 한다. 스플라이싱 복합체 성분은, 리보핵 단백질(RNP), 스플라이싱 단백질, 소핵 RNA(snRNA), 소핵 리보핵단백질(snRNP), 및 이종 핵 리보핵단백질(hnRNP)을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 스플라이싱 복합체 성분은, 지속적 스플라이싱, 선택적 스플라이싱, 조절 스플라이싱, 특정 메시지 또는 메시지 그룹의 스플라이싱과 같은 스플라이싱에 필요할 수 있는 것들을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 관련 단백질의 그룹인 세린 아르기닌 풍부 단백질(SR 단백질)은 지속적 pre-mRNA 스플라이싱 기능을 할 수 있고, 농도 의존적 방식으로 선택적인 스플라이스 부위 선택을 조절할 수도 있다. SR 단백질은 통상적으로 한 개 또는 두 개의 RNA 인식 모티프(RRM) 및 아르기닌 및 세린 잔기가 풍부한 C-말단(RS 도메인)으로 이루어진 모듈형 구조를 갖는다. 선택적 스플라이싱에서의 이들의 활성은 hnRNP A/B 단백질 계열의 구성원에 의해 길항될 수 있다. 스플라이싱 복합체 성분은 또한 하나 이상의 snRNA와 결합된 단백질을 포함할 수 있다. 인간에서의 SR 단백질은 SC35, SRp55, SRp40, SRm300, SFRS10, TASR-1, TASR-2, SF2/ASF, 9G8, SRp75, SRp30c, SRp20 및 P54/SFRS11을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 스플라이스 부위 선택에 관여할 수 있는 인간에서의 다른 스플라이싱 복합체 성분은 U2 snRNA 보조 인자(예를 들어, U2AF65, U2AF35), Urp/U2AF1-RS2, SF1/BBP, CBP80, CBP 20, SF1 및 PTB/hnRNP1을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 인간에서의 hnRNP 단백질은 A1, A2/B1, L, M, K, U, F, H, G, R, I 및 C1/C2를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. hnRNP를 암호화하는 인간 유전자는 HNRNPA0, HNRNPA1, HNRNPA1L1, HNRNPA1L2, HNRNPA3, HNRNPA2B1, HNRNPAB, HNRNPB1, HNRNPC, HNRNPCL1, HNRNPD, HNRPDL, HNRNPF, HNRNPH1, HNRNPH2, HNRNPH3, HNRNPK, HNRNPL, HNRPLL, HNRNPM, HNRNPR, HNRNPU, HNRNPUL1, HNRNPUL2, HNRNPUL3,FMR1을 포함한다. 스플라이싱 복합체 성분은 snRNP 또는 전사체와 안정적으로 또는 일시적으로 결합될 수 있다.
용어 "인트론"은 유전자 내의 DNA 서열 및 미처리된 RNA 전사체 내의 상응하는 서열 둘 다를 지칭한다. RNA 처리 경로의 일부로서, 인트론은 전사 직후에 또는 전사와 동시에 RNA 스플라이싱에 의해 제거될 수 있다. 인트론은 대부분의 유기체 및 많은 바이러스의 유전자에서 발견된다. 이들은 단백질, 리보솜 RNA(rRNA) 및 운반 RNA(tRNA)를 생성하는 유전자를 포함하는 광범위한 유전자에 위치할 수 있다.
"엑손"은 인트론이 RNA 스플라이싱에 의해 제거된 후 그 유전자에 의해 생성된 최종 성숙 RNA의 일부를 암호화하는 유전자의 임의의 부분일 수 있다. 용어 "엑손"은 유전자 내의 DNA 서열 및 RNA 전사체 내의 상응하는 서열 둘 다를 지칭한다.
"스플라이소좀"은 snRNA 및 단백질 복합체로부터 조립될 수 있다. 스플라이소좀은 전사된 pre-mRNA에서 인트론을 제거할 수 있다.
소분자 스플라이싱 조절자(SMSM)
본 개시는 본원에서 소분자 스플라이싱 조절자(SMSM)로 지칭되는, 특정한 작은 화학 분자가 pre-mRNA 분자에서의 스플라이싱 이벤트를 변형시킬 수 있다는 예상치 못한 발견을 제공한다. 이들 SMSM은 특정 pre-mRNA 분자에서 특정 스플라이싱 이벤트를 조절할 수 있으므로, 특정 RNA와 연관된 질환 또는 병태를 치료, 예방 또는 완화하는 데 유용하다. 이들 SMSM은 스플라이싱 이벤트를 변형하기 위한 다양한 메커니즘에 의해 작동할 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 SMSM은 1) 스플라이싱 복합체, 스플라이소좀, 및/또는 이들의 성분, 예컨대 hnRNP, snRNP, SR-단백질 및 다른 스플라이싱 인자 또는 요소의 형성 및/또는 기능 및/또는 다른 특성을 방해하여, pre-mRNA 분자에서 스플라이싱 이벤트를 예방하거나 유도할 수 있다. 또 다른 예로서, 2) 스플라이소좀 또는 스플라이싱 복합체 성분의 형성 및/또는 기능에 후속하여 관여할 수 있는, 유전자 산물, 예컨대 hnRNP, snRNP, SR-단백질 및 기타 스플라이싱 인자의 전사 후 조절(예를 들어, 스플라이싱)을 방지하고/하거나 변형하고; 3) 스플라이소좀 또는 스플라이싱 복합체 성분의 형성 및/또는 기능에 후속하여 관여할 수 있는, hnRNP, snRNP, SR-단백질 및 기타 스플라이싱 인자를 포함하지만 이에 한정되지 않는 유전자 산물의 인산화, 글리코실화 및/또는 다른 변형을 방지하고/하거나 변형하고; 4) 예를 들어, 서열 특이적 방식으로 RNA와의 염기쌍 형성을 수반하지 않는 메커니즘을 통해, 특이적 스플라이싱 이벤트가 예방되거나 유도되도록 특이적 pre-mRNA에 결합하고/하거나 달리 특이적 pre-mRNA에 영향을 미친다. 본 개시의 소분자는 안티센스 또는 항원 올리고뉴클레오티드와 상이하고 이와 관련되지 않는다.
질환 또는 병태의 치료, 예방 및/또는 진행의 지연에 사용하기 위해 유전자 산물의 스플라이싱을 변형시키는 화합물이 본원에 기술된다.
일 양태에서, 다음의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물이 본원에서 기술된다:
Figure pct00004
식 중, Q는 치환 또는 미치환 C1-C7 알킬렌 또는 치환 또는 미치환 C1-C7 헤테로알킬렌이고; X는 수소, CH3, 또는 치환 또는 미치환 C3-C6 시클로알킬이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 CH3이고; 각각의 R3 및 R4는 독립적으로 수소 또는 할로겐이고; 각각의 A1, A2, A3, 및 A4는 독립적으로 N, -NRY1-, -O-, -S-, 또는 CRA1이고; 각각의
Figure pct00005
는 독립적으로 단일 또는 이중 결합이고; 각각의 RA1은 독립적으로 수소, 할로겐, =O, 또는 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이고; 각각의 RY1은 독립적으로 수소이거나 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다.
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ia)의 구조를 가진다:
Figure pct00006
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Iaa)의 구조를 가진다:
Figure pct00007
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Iaa*)의 구조를 가진다:
Figure pct00008
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Iaaa)의 구조를 가진다:
Figure pct00009
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Iaaa*)의 구조를 가진다:
Figure pct00010
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ib)의 구조를 가진다:
Figure pct00011
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ibb)의 구조를 가진다:
Figure pct00012
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ibb*)의 구조를 가진다:
Figure pct00013
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ibbb)의 구조를 가진다:
Figure pct00014
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ibbb*)의 구조를 가진다:
Figure pct00015
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ic)의 구조를 가진다:
Figure pct00016
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Icc)의 구조를 가진다:
Figure pct00017
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Id)의 구조를 가진다:
Figure pct00018
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Idd)의 구조를 가진다:
Figure pct00019
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ie)의 구조를 가진다:
Figure pct00020
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Iee)의 구조를 가진다:
Figure pct00021
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ieee)의 구조를 가진다:
Figure pct00022
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (If)의 구조를 가진다:
Figure pct00023
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Iff)의 구조를 가진다:
Figure pct00024
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ig)의 구조를 가진다:
Figure pct00025
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ih)의 구조를 가진다:
Figure pct00026
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ihh)의 구조를 가진다:
Figure pct00027
일부 구현예에서, 화학식 (II)의 화합물은 화학식 (Ii)의 구조를 갖는다:
Figure pct00028
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ij)의 구조를 가진다:
Figure pct00029
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ik)의 구조를 가진다:
Figure pct00030
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Il)의 구조를 가진다:
Figure pct00031
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Im)의 구조를 가진다:
Figure pct00032
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (In)의 구조를 가진다:
Figure pct00033
화학식 (I), 화학식 (Ia), 화학식 (Ib), 화학식 (Ic), 화학식 (Id), 화학식 (Ie), 화학식 (If), 화학식 (Ig), 화학식 (Ih), 화학식 (Ij), 화학식 (Ij), 화학식 (Ik), 화학식 (Il), 화학식 (Im), 또는 화학식 (In)의 화합물의 일부 구현예에서, X기를 보유하는 질소 원자는 R1, R2, R3 및 R4 치환기를 보유하는 헤테로시클릭 고리에 대해 적도 위치에 있다.
화학식 (Iaa), 화학식 (Iaaa), 화학식 (Ibb), 화학식 (Ibbb), 화학식 (Icc), 화학식 (Idd), 화학식 (Iee), 화학식 (Ieee), 화학식 (Iff), 또는 화학식 (Ihh)의 화합물의 일부 구현예에서, X기를 보유하는 질소 원자는 R1, R2, R3, and R4 치환기를 보유하는 헤테로시클릭 고리에 대해 적도 위치에 있다.
화학식 (I), 화학식 (Ia), 화학식 (Ib), 화학식 (Ic), 화학식 (Id), 화학식 (Ie), 화학식 (If), 화학식 (Ig), 화학식 (Ih), 화학식 (Ij), 화학식 (Ij), 화학식 (Ik), 화학식 (Il), 화학식 (Im), 화학식 (In), 화학식 (Iaa), 화학식 (Iaaa), 화학식 (Ibb), 화학식 (Ibbb), 화학식 (Icc), 화학식 (Idd), 화학식 (Iee), 화학식 (Ieee), 화학식 (Iff), 또는 화학식 (Ihh)의 화합물의 일부 구현예에서, X기를 보유하는 질소 원자 및 N-H기는 평면의 동일한 면에 있다. 화학식 (I), 화학식 (Ia), 화학식 (Ib), 화학식 (Ic), 화학식 (Id), 화학식 (Ie), 화학식 (If), 화학식 (Ig), 화학식 (Ih), 화학식 (Ij), 화학식 (Ij), 화학식 (Ik), 화학식 (Il), 화학식 (Im), 화학식 (In), 화학식 (Iaa), 화학식 (Iaaa), 화학식 (Ibb), 화학식 (Ibbb), 화학식 (Icc), 화학식 (Idd), 화학식 (Iee), 화학식 (Ieee), 화학식 (Iff), 또는 화학식 (Ihh)의 화합물의 일부 구현예에서, X기를 보유하는 질소 원자 및 Q기는 평면의 반대 면에 있다.
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Io)의 구조를 가진다:
Figure pct00034
일부 구현예에서, R3 또는 R4 중 적어도 하나는 불소이다. 일부 구현예에서, R3은 불소이고, R4는 수소이다. 일부 구현예에서, R3은 수소이고, R4는 불소이다. 일부 구현예에서, R3은 수소 또는 F이다. 일부 구현예에서, R3은 수소이다. 일부 구현예에서, R3은 F이다. 일부 구현예에서, R4은 수소 또는 F이다. 일부 구현예에서, R4는 수소이다. 일부 구현예에서, R4는 F이다.
일부 구현예에서, A1은 CH, CF, C(CH3), N, O, 또는 C(=O)이다. 일부 구현예에서, A1은 CH이다. 일부 구현예에서, A1은 CF이다. 일부 구현예에서, A1은 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A1은 N이다. 일부 구현예에서, A1은 O이다. 일부 구현예에서, A1은 C(=O)이다. 일부 구현예에서, A1은 S이다. 일부 구현예에서, A1은 CRA1이다. 일부 구현예에서, A1은 CRA1이고, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, A1은 CRA1이고, RA1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RA1은 CD3 또는 CD2CD3이다. 일부 구현예에서, RA1은 할로겐이다. 일부 구현예에서, RA1은 F이다. 일부 구현예에서, A1은 NRY1이다. 일부 구현예에서, A1은 NRY1이고, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, A1은 NRY1이고, RY1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RY1은 CD3 또는 CD2CD3이다.
일부 구현예에서, A2는 CH, C(CH3), N, 또는 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A2는 CH이다. 일부 구현예에서, A2는 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A2는 N이다. 일부 구현예에서, A2는 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A2는 S이다. 일부 구현예에서, A2는 CRA1이다. 일부 구현예에서, A2는 CRA1이고, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, A2는 CRA1이고, RA1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RA1은 CD3 또는 CD2CD3이다. 일부 구현예에서, RA1은 할로겐이다. 일부 구현예에서, RA1은 F이다. 일부 구현예에서, A2는 NRY1이다. 일부 구현예에서, A2는 NRY1이고, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, A2는 NRY1이고, RY1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RY1은 CD3 또는 CD2CD3이다.
일부 구현예에서, A3은 CH, C(CH3), N, 또는 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A3은 CH이다. 일부 구현예에서, A3은 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A3은 N이다. 일부 구현예에서, A3은 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A3은 S이다. 일부 구현예에서, A3은 CRA1이다. 일부 구현예에서, A3은 CRA1이고, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, A3은 CRA1이고, RA1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RA1은 CD3 또는 CD2CD3이다. 일부 구현예에서, RA1은 할로겐이다. 일부 구현예에서, RA1은 F이다. 일부 구현예에서, A3은 NRY1이다. 일부 구현예에서, A3은 NRY1이고, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, A3은 NRY1이고, RY1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RY1은 CD3 또는 CD2CD3이다. 일부 구현예에서, A3은 N(CH3)이다.
일부 구현예에서, A4는 CH, C(CH3), N, O, 또는 C(=O)이다. 일부 구현예에서, A4는 CH이다. 일부 구현예에서, A4는 C(CH3)이다. 일부 구현예에서, A4는 N이다. 일부 구현예에서, A4는 O이다. 일부 구현예에서, A4는 C(=O)이다. 일부 구현예에서, A4는 S이다. 일부 구현예에서, A4는 CRA1이다.
일부 구현예에서, A4는 CRA1이고, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, A4는 CRA1이고, RA1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RA1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RA1은 H이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RA1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RA1은 CD3 또는 CD2CD3이다. 일부 구현예에서, RA1은 할로겐이다. 일부 구현예에서, RA1은 F이다. 일부 구현예에서, A4는 NRY1이다. 일부 구현예에서, A4는 NRY1이고, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, A4는 NRY1이고, RY1은 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 할로겐(예컨대 F)으로 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1은 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, RY1 중의 하나 이상의 수소는 중수소로 치환된다. 일부 구현예에서, RY1은 H이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸이다. 일부 구현예에서, RY1은 메틸, 에틸, CF3, CHF2, 또는 CH2CF3이다. 일부 구현예에서, RY1은 CD3 또는 CD2CD3이다.
일부 구현예에서, A1, A2, A3, 및 A4 중 하나는 C(=O)이다.
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 적어도 20개의 탄소 원자, 5개의 질소 원자 및 1개의 불소 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 적어도 18개의 탄소 원자(예를 들어, 18, 19, 또는 20개의 탄소 원자), 6개의 질소 원자 및 1개의 불소 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 적어도 18개의 탄소 원자(예를 들어, 18, 19, 또는 20개의 탄소 원자), 7개의 질소 원자 및 1개의 불소 원자를 포함한다.
일부 구현예에서, X는 수소이다. 일부 구현예에서, X는 -CH3이다. 일부 구현예에서, X는 -CD3이다. 일부 구현예에서, X는 치환 또는 미치환 C3-C6 시클로알킬이다. 일부 구현예에서, X는 치환 또는 미치환 시클로프로필, 치환 또는 미치환 시클로부틸, 또는 치환 또는 미치환 시클로펜틸이다. 일부 구현예에서, X는 시클로프로필, 시클로부틸, 또는 시클로펜틸이고, 각각은 불소, OH, CH3, 및 OCH3으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 치환기로 치환된다. 일부 구현예에서, X는 시클로프로필이다.
일부 구현예에서, R1은 수소 또는 CH3이다. 일부 구현예에서, R1은 수소이다. 일부 구현예에서, R1은 CH3이다.
일부 구현예에서, R2는 수소 또는 CH3이다. 일부 구현예에서, R2는 수소이다. 일부 구현예에서, R2는 CH3이다.
일부 구현예에서, Q는 치환 또는 미치환 C1-C7 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 치환 또는 미치환 C1-C7 헤테로알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 C1-C3 알킬 및 할로겐으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, Q는 치환 또는 미치환 C2-C4 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 치환 또는 미치환 C2-C4 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 불소, OH, CH3, 및 OCH3으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 3, 또는 4개의 치환기로 치환된 C2-C4 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 -CH2CH2-이다. 일부 구현예에서, Q는 -CH2CH2CH2-이다. 일부 구현예에서, Q는 -CH2OCH2-이다. 일부 구현예에서, Q는 할로겐으로 선택적으로 치환된 C2-C4 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C2-C4 알킬렌이다. 일부 구현예에서, Q는 하나 이상의 F로 선택적으로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌이다.
일부 구현예에서,
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
일부 구현예에서,
Figure pct00038
Figure pct00039
일부 구현예에서,
Figure pct00040
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서,
Figure pct00041
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서,
Figure pct00042
Figure pct00043
일부 구현예에서,
Figure pct00044
Figure pct00045
일부 구현예에서,
Figure pct00046
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서,
Figure pct00047
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서,
Figure pct00048
Figure pct00049
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은,
Figure pct00050
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 (I)은 표 1의 화합물로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)은 표 2의 화합물로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 다음과 같다: 6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-1,2-디히드로이소퀴놀린-1-온; 7-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸-3,4-디히드로퀴나졸린-4-온; 7-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온; 6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-1,2-디히드로프탈라진-1-온; 7-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-4H-크로멘-4-온; 또는 6-(6-{[(1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 6-(6-[[(1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노] -1,2,4-트리아진-3-일) -7-히드록시-2-메틸프탈라진-1-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 6-(6-[[(1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노]-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸프탈라진-1-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸퀴나졸린-4(3H)-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸퀴나졸린-4(3H)-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)이소퀴놀린-6-올이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)이소퀴놀린-6-올이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1-온이다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 2-에틸-4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시이소퀴놀린-1-온이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 중 어느 하나의 염 또는 용매화물이 기술된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 중 어느 하나의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이 기술된다.
일 양태에서, 스플라이싱을 조절하는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 전술한 것 중 어느 하나의 화합물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 화합물은 mRNA를 암호화하는 pre-mRNA의 스플라이스 부위 서열에서 스플라이싱을 조절하고, mRNA는 표적 단백질 또는 기능성 RNA를 암호화한다.
일 양태에서, 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 방법은 본 발명의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 하나 이상의 입체 중심을 가지며, 각각의 입체 중심은 R 배열 또는 S 배열로 독립적으로 존재한다. 본원에 제시된 화합물은 모든 부분 입체 이성질체, 거울상 이성질체, 및 에피머 형태뿐만 아니라 이들의 적절한 혼합물을 포함한다. 본원에 제공된 화합물 및 방법은 모든 시스, 트랜스, 신(syn), 안티(anti), 엔트게겐(entgegen) (E), 및 쓰사먼(zusammen) (Z) 이성질체 뿐만 아니라 이들의 적절한 혼합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 화합물의 라세미 혼합물을 광학 활성 분할제(resolving agent)와 반응시켜 한 쌍의 부분 입체이성질체 화합물/염을 형성하고, 부분 입체 이성질체를 분리하고, 광학적으로 순수한 거울상 이성질체를 회수함으로써 이들의 개별적인 입체이성질체로서 제조된다. 일부 구현예에서, 거울상 이성질체의 분할(resolution)은 본원에 기술된 화합물의 공유 부분 입체 이성질체 유도체를 사용하여 수행된다. 또 다른 구현예에서, 부분 입체 이성질체는 용해도의 차이에 기초하여 분리/분할 기술에 의해 분리된다. 다른 구현예에서, 입체이성질체의 분리는 크로마토그래피에 의해 또는 부분 입체이성질체 염의 형성에 의해 수행되고, 재결정화에 의한 분리, 또는 크로마토그래피, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 수행된다. Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen의 문헌["Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981] 참조. 일 양태에서, 입체이성질체는 입체선택적 합성에 의해 수득된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 전구약물로서 제조된다. "전구약물"은 생체내에서 모약물로 전환되는 제제를 지칭한다. 전구약물은 종종 유용한데, 이는 일부 상황에서 모약물보다 투여가 더 용이할 수 있기 때문이다. 전구약물은, 예를 들어, 경구 투여에 의해 생체 이용 가능할 수 있는 반면, 모약물은 그렇지 않다. 전구약물은 또한 모약물에 비해 약학적 조성물에서 용해도가 개선될 수 있다. 일부 구현예에서, 전구약물의 설계는 유효 수용성(water solubility)을 증가시킨다. 전구약물의 예는, 제한 없이, 본원에 기술된 화합물이며, 이는 수 용성이 이동성에 불리한 세포막을 통한 전달을 용이하게 하는 에스테르("전구약물")로서 투여되지만, 이어서 수용성이 유리한 세포 내부에서 활성 엔티티인 카르복시산으로 대사적으로 가수분해된다. 전구약물의 추가 예는 산기(acidic group)에 결합된 짧은 펩티드(폴리아미노산)일 수 있으며, 여기서 펩티드는 대사되어 활성 모이어티를 나타낸다. 특정 구현예에서, 생체내 투여 시, 전구약물은 화합물의 생물학적, 약학적 또는 치료적 활성 형태로 화학적으로 변환된다. 특정 구현예에서, 전구약물은 하나 이상의 단계 또는 과정에 의해 효소적으로 대사되어 화합물의 생물학적, 약학적 또는 치료적 활성 형태가 된다.
일 양태에서, 전구약물은 약물의 대사 안정성 또는 수송 특성을 변경시키거나, 부작용 또는 독성을 차폐하거나, 약물의 향미를 개선하거나, 약물의 기타 특성 또는 성질을 변경하도록 설계된다. 생체내 약동학, 약력학적 과정 및 약물 대사에 대한 지식 덕분에, 일단 약학적 활성 화합물이 공지인 경우, 화합물의 전구약물의 설계가 가능하다. (예를 들어, 문헌[Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392; Silverman (1992), The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academic Press, Inc., San Diego, pages 352-401, Rooseboom et al., Pharmacological Reviews, 56:53-102, 2004; Aesop Cho, "Recent Advances in Oral Prodrug Discovery", Annual Reports in Medicinal Chemistry, Vol. 41, 395-407, 2006; T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series] 참조).
일부 경우에, 본원에 기술된 화합물 중 일부는 또 다른 유도체 또는 활성 화합물에 대한 전구약물일 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물의 방향족 고리 부분 상의 부위는 다양한 대사 반응에 민감하므로, 방향족 고리 구조 상에 적절한 치환기를 포함시킴으로써 이러한 대사 경로를 감소시키거나 최소화하거나 제거하게 된다. 특정 구현예에서, 대사 반응에 대한 방향족 고리의 민감성을 감소시키거나 제거하기 위한 적절한 치환기는 단지 예로서 할로겐 또는 알킬기이다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 동위원소로(예를 들어, 방사성 동위원소로) 표지되거나, 발색단 또는 형광 모이어티, 생물발광 표지, 또는 화학발광 표지의 사용을 포함하지만 이에 한정되지 않는 또 다른 다른 수단에 의해 표지된다.
본원에 기술된 화합물은, 하나 이상의 원자가 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량 수와 상이한 원자 질량 또는 질량 수를 갖는 원자로 대체된다는 사실을 제외하고는, 본원에 제시된 다양한 화학식 및 구조에 인용된 화합물과 동일한 동위원소 표지된 화합물을 포함한다. 본 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 황, 불소 및 염소의 동위원소, 예를 들어, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 18F, 및 36Cl을 포함한다. 일 양태에서, 본원에 기술된 동위원소-표지된 화합물, 예를 들어 3H 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 화합물은 약물 및/또는 기질 조직 분포 분석에 유용하다. 일 양태에서, 중수소와 같은 동위원소로 치환하는 것은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로 인한 특정한 치료 이점을 제공한다.
추가 또는 다른 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 원하는 치료 효과를 포함하여 원하는 효과를 생성하는 데 사용되는 대사산물을 생산할 필요가 있는 유기체에 투여 시 대사된다.
본원에 기술된 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염으로서 형성될 수 있고/있거나 사용될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염의 유형은 다음을 포함하되 이에 한정되지는 않는다: (1) 산 부가염(유리 염기 형태의 화합물을 약학적으로 허용 가능한 무기산, 예를 들어, 염산, 히드로브롬산, 황산, 인산, 메타 인산 등, 또는 유기산, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 시클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 트리플루오로아세트산, 타르타르산, 구연산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 1,2-에탄다이설폰산, 2-히드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-메틸비시클로-[2.2.2]옥트-2-엔-1-카르복시산, 글루코헵톤산, 4,4'-메틸렌비스-(3-히드록시-2-엔-1-카르복시산), 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 삼차 부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산, 부티르산, 페닐아세트산, 페닐부티르산, 발프로산 등과 반응시켜 형성됨); (2) 모체 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어, 알칼리 금속 이온(예를 들어, 리튬, 나트륨, 칼륨), 알칼리 토류 이온(예를 들어, 마그네슘, 또는 칼슘), 또는 알루미늄 이온으로 치환될 때 형성되는 염. 일부 경우에, 본원에 기술된 화합물은 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민, 디시클로헥실아민, 트리스(히드록시메틸)메틸아민과 같은 유기 염기와 배위 결합할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 다른 경우에, 본원에 기술된 화합물은 아르기닌, 리신 등과 같은 아미노산과 염을 형성할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 산성 양성자를 포함하는 화합물과 염을 형성하기 위해 사용되는 허용 가능한 무기 염기는 수산화알루미늄, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
약학적으로 허용 가능한 염에 대한 언급은 용매 첨가 형태, 특히 용매화물을 포함한다는 것을 이해해야 한다. 용매화물은 화학량론적 또는 비화학량론적 양의 용매를 함유하며, 물, 에탄올 등과 같은 약학적으로 허용 가능한 용매로 결정화하는 공정 중에 형성될 수 있다. 수화물은 용매가 물일 때 형성되거나, 또는 용매가 알코올일 때 알코올레이트가 형성된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물의 용매화물은 본원에 기술된 공정 중에 간편하게 제조되거나 형성된다. 또한, 본원에서 제공된 화합물은 비용매화된 형태뿐만 아니라 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 본원에 제공된 화합물 및 방법의 목적을 위해 비용매화된 형태와 균등한 것으로 간주된다.
일부 구현예에서, SMSM은 최대 약 2000 달톤, 1500 달톤, 1000 달톤 또는 900 달톤의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, SMSM은 적어도 100 달톤, 200 달톤, 300 달톤, 400 달톤 또는 500 달톤의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, SMSM은 인산디에스테르 결합을 포함하지 않는다.
화합물 제조 방법
본원에 기술된 화합물은 표준 합성 기술을 사용하거나 본원에 기술된 방법과 조합하여 당업계에 공지된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 종래의 질량 분광법, NMR, HPLC, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 방법이 이용될 수 있다. 화합물은, 예를 들어, 문헌[March's Advanced Organic Chemistry, 6th Edition, John Wiley and Sons, Inc.]에 기술된 것과 같은 표준 유기 화학 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 기술된 합성 변환을 위한 대안적인 반응 조건, 예컨대 용매의 변화, 반응 온도, 반응 시간뿐만 아니라 상이한 화학 시약 및 기타 반응 조건이 이용될 수 있다. 출발 물질은 상업적 공급원으로부터 입수할 수 있거나 즉석에서 제조될 수 있다. 단지 예시로서, 예시적인 SMSM을 제조하기 위한 반응식이 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM을 제조하기 위한 반응식은 반응식 1이다.
반응식 1.
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여기에서, PG1은 적합한 보호기 1이고, PG2는 적합한 보호기 2이다. 일부 구현예에서, PG1 PG2는 실시예에 기술된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM 화합물은 표 1 또는 표 2로부터 선택된다. 표 1 및 표 2의 화합물은 전술한 일반 반응식 1 및 아래의 실시예 1 내지 8에 개략된 절차를 사용하여 제조할 수 있다.
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일부 구현예에서, 표 1 또는 표 2의 SMSM 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물이 본원에 개시된다.
약학적 조성물
일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 약학적 조성물로 제제된다. 약학적 조성물은 활성 화합물을 약학적으로 사용될 수 있는 제제로 처리하는 것을 용이하게 하는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 비활성 성분을 사용하여 종래의 방식으로 제제된다. 적절한 제제는 선택된 투여 경로에 따라 달라진다. 본원에 기술된 약학적 조성물의 요약은, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; and Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)]에서 찾을 수 있고, 이러한 개시를 위해 참조로서 본원에 포함된다.
약학적 조성물은 본원에 기술된 SMSM과 하나 이상의 다른 화학적 성분(즉, 약학적으로 허용 가능한 성분), 예를 들어, 담체, 부형제, 결합제, 충진제, 현탁제, 향미제, 감미제, 붕해제, 분산제, 계면활성제, 윤활제, 착색제, 희석제, 가용화제, 습윤제, 가소제, 안정화제, 경피흡수 촉진제, 습윤제, 소포제, 항산화제, 보존제, 또는 이들의 하나 이상의 조합과의 혼합물일 수 있다. 약학적 조성물은 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 한다.
본원에 기술된 조성물은 비경구, 정맥내, 피내, 근육내, 결장, 직장 또는 복강내를 포함하는 다양한 방식으로 대상에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 소분자 스플라이싱 조절자 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 복강내 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 또는 정맥내 주사에 의해 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 비경구적으로, 정맥내로, 근육내로 또는 경구로 투여될 수 있다. 소분자 스플라이싱 조절자를 포함하는 경구 제제는, 액체, 정제, 캡슐 등과 같은, 경구 투여에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 경구 제제는 위에서의 용해를 방지하거나 감소시키기 위해 추가로 코팅되거나 처리될 수 있다. 본 개시의 조성물은 당업계에 공지된 임의의 적절한 방법을 사용하여 대상에게 투여될 수 있다. 본 개시에 사용하기에 적절한 제형 및 전달 방법은 일반적으로 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 소분자 스플라이싱 조절자는 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제와 함께 약학적 조성물로서 제형화될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 등장성 조절제, 습윤제 등, 예를 들어, 아세트산 나트륨, 젖산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 소르비탄 모노라우레이트, 올레산 트리에탄올아민 등을 포함하는 생리학적 조건에 근접하기 위해 필요한 약학적으로 허용 가능한 보조 물질을 함유할 수 있다.
본원에 기술된 약학적 제제는 경구, 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 근육내, 골수내 주사, 경막내, 직접 심실내, 복강내, 림프내, 비강내 주사), 비강내, 구강, 국소 또는 경피 투여 경로를 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 방식으로 대상에게 투여될 수 있다. 본원에 기술된 약학적 제제는 수성 액체 분산액, 자가 유화 분산액, 고용체, 리포좀 분산액, 에어로졸, 고체 제형, 분말, 속방성(immediate release) 제제, 제어방출(controlled release) 제제, 급속 용융 제제, 정제, 캡슐, 알약, 지연 방출(delayed release) 제제, 연장 방출(extended release) 제제, 박동성 방출(pulsatile release) 제제, 다중미립자 제제, 및 혼합된 속방성 및 조절 방출 제제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 약학적 제제는 정제의 형태이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM을 함유하는 약학적 제제는 캡슐의 형태이다. 일 양태에서, 경구 투여용 액상 제제의 제형은 수성 경구 분산액, 유화액, 용액, 엘릭서, 겔, 및 시럽을 포함하지만 이에 한정되지 않는 군으로부터 선택된 수성 현탁액 또는 용액의 형태이다.
흡입에 의한 투여를 위해, 본원에 기술된 SMSM은 에어로졸, 미스트 또는 분말로서 사용하기 위해 제제될 수 있다. 구강 또는 설하 투여의 경우, 조성물은 통상적인 방식으로 제제된 정제, 로젠지(lozenge) 또는 겔의 형태를 취할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 경피 제형으로 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 근육내, 피하 또는 정맥내 주사에 적합한 약학적 조성물로 제제될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 국소적으로 투여될 수 있고, 용액, 현탁액, 로션, 겔, 페이스트, 약용 스틱, 밤(balm), 크림 또는 연고와 같은 다양한 국소 투여 가능 조성물로 제제될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 관장제, 직장 겔, 직장 발포제, 직장 에어로졸, 좌제, 젤리 좌제, 또는 정체 관장제와 같은 직장용 조성물로 제제될 수 있다.
스플라이싱 조절
본 개시는 표적 RNA의 스플라이싱 활성을 조절하는 양호한 약물 특성을 갖는 소분자의 용도를 고려한다. 표적 폴리뉴클레오티드의 스플라이싱을 조절하는 소분자 스플라이싱 조절자(SMSM)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, SMSM은 표적 RNA에 결합하고 이를 조절한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 표적 RNA에 결합하고 이를 조절하는 SMSM의 라이브러리가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 표적 RNA는 mRNA이다. 일부 구현예에서, 표적 RNA는 mRNA 비암호화 RNA이다. 일부 구현예에서, 표적 RNA는 pre-mRNA이다. 일부 구현예에서, 표적 RNA는 hnRNA이다. 일부 구현예에서, 소분자는 표적 RNA의 스플라이싱을 조절한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 소분자는 표적 RNA의 서열에서 스플라이싱을 조절한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 소분자는 표적 RNA의 잠재 스플라이스 부위 서열에서 스플라이싱을 조절한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 소분자는 표적 RNA에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 소분자는 스플라이싱 복합체 성분에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 소분자는 표적 RNA 및 스플라이싱 복합체 성분에 결합한다.
따라서, pre-mRNA 분자에서 스플라이싱 이벤트를 방지하거나 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 이는 pre-mRNA 분자 및/또는 스플라이싱 기구의 다른 요소(예를 들어, 세포 내)를 본원에 제공된 화합물과 접촉시켜 pre-mRNA 분자에서 스플라이싱 이벤트를 방지하거나 유도하는 단계를 포함한다. 방지되거나 유도되는 스플라이싱 이벤트는, 예를 들어, 비정상적인 스플라이싱 이벤트, 지속적 스플라이싱 이벤트 또는 선택적 스플라이싱 이벤트일 수 있다.
pre-mRNA 분자에서 스플라이싱 이벤트를 방지하거나 유도할 수 있는 화합물을 식별하는 방법이 본원에 추가로 제공되며, 이는 양성(스플라이싱의 예방 또는 유도) 효과 또는 음성(스플라이싱의 예방 또는 유도 없음) 효과가 생성되고 검출되며, 스플라이싱 이벤트를 예방하거나 유도할 수 있는 화합물로서 양성 효과를 생성하는 화합물을 식별하는 조건하에서 본원에 기술된 (예를 들어, 세포 내에서) 선택적, 비정상적, 및/또는 지속적 스플라이싱에 관여하는 스플라이싱 요소 및/또는 인자와 상기 화합물을 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 담체에 있는 본원에 기술된 소분자 화합물은 pre-mRNA 분자에서 선택적이거나 비정상적인 스플라이싱 이벤트를 방지하거나 유도한다. 전술한 바와 같이, 본원에 제공된 소분자 화합물은 안티센스 또는 항유전자(antigene) 올리고뉴클레오티드가 아니다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태가 있는 대상을 치료하는 방법은 질환 또는 병태가 있는 대상에게 소분자 스플라이싱 조절자 화합물(SMSM)을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상은 포유류이다. 일부 구현예에서, 포유류는 인간이다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 pre-mRNA이다. 일부 구현예에서, 방법은 추가 치료 분자를 대상에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, SMSM은 본원에 기술된 화합물이다.
본원에 기술된 화합물 및 제제는 비정상적 및/또는 선택적 스플라이싱을 수반하는 질환의 치료에 있어서 치료제로서도 유용하다. 따라서, 일부 구현예에서, pre-mRNA 분자에서 선택적 또는 비정상적 스플라이싱 이벤트와 관련된 병태 또는 장애를 갖는 대상을 치료하는 방법은 치료 유효량의 본원에 기술된 화합물을 상기 대상에게 투여하여 선택적 스플라이싱 이벤트를 조절하거나 비정상적 스플라이싱 이벤트를 방지함으로써, 상기 대상을 치료하는 단계를 포함한다. 이 방법은, 예를 들어, pre-mRNA 분자에서 정확한 스플라이싱 이벤트를 회복시킬 수 있다. 이 방법은 예를 들어, 약학적으로 허용 가능한 담체에 있는 본원에 기술된 소분자 화합물을 이용할 수 있다.
본원에 기술된 소분자를 함유하는 제제는 생리학적으로 또는 약학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대, 수성 담체를 포함할 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 방법에서 사용하는 제제는 경구 투여; 피하, 피내, 근육내, 정맥내 및 동맥내 투여를 비롯한 비경구 투여; 및 국소 투여(예를 들어, 낭성 섬유증 또는 폐암을 앓고 있는 환자의 폐에 흡입될 수 있는 입자의 에어로졸화된 제제, 또는 건선이 있는 환자의 경피 투여를 위한 크림 또는 로션 제제의 투여)에 적합한 제제들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 제제는 단위 제형으로 간편하게 제공될 수 있고, 당해 기술 분야에 잘 알려져 있는 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 임의의 소정의 경우에서 가장 적합한 투여 경로는 대상, 치료되는 병태의 성질 및 중증도, 및 당분야에서 숙련된 자에 의해 용이하게 결정될, 사용되는 특정한 활성 화합물에 의존할 수 있다.
전술한 바와 같이, pre-mRNA 분자의 비정상적 또는 선택적 스플라이싱과 관련된 장애가 있는 환자에서 RNA 발현을 상향 조절하거나 하향 조절하기 위한 의약의 제조를 위해 전술한 특성을 갖는, 본원에 기술된 화합물을 사용하는 방법도 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 의약은 유전자 발현을 상향 조절한다. 다른 구현예에서, 의약은 유전자 발현을 하향 조절한다. 본 개시에 따른 의약의 제조에서, 화합물은, 특히, 약학적으로 허용 가능한 담체와 혼합될 수 있다. 담체는 고체 또는 액체일 수 있다. 하나 이상의 화합물은 본원에 기술된 제제에 임의의 조합으로 도입될 수 있으며, 성분의 혼합 및/또는 하나 이상의 보조 치료 성분을 포함하는 것과 같은 공지된 제약 기술 중 어느 하나에 의해 제조될 수 있다.
본 개시는 저 분자량 화합물(mRNA 스플라이싱을 차단하고/하거나 mRNA 스플라이싱을 증폭(촉진, 증강)하는 소분자로 때때로 본원에서 지칭됨)을 본원에서 확인한다. 본원에 기술된 방법에 의해 조절될 수 있는 스플라이싱은 선택적 스플라이싱, 예를 들면, 엑손 건너뛰기, 인트론 유지, 가성 엑손 건너뛰기, 엑손 배제, 부분적 인트론 배제 등을 포함한다. 스플라이싱 서열 및 관련된 RNA(또는 RNA를 암호화하는 유전자) 또는 엑손과 같은 인자에 따라, 스플라이싱의 조절은 목적 스플라이싱 서열에 특이적인 안티센스 올리고뉴클레오티드(AO)의 존재 또는 부재 하에 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 소분자와 AO는 상승적으로 작용한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 pre-mRNA의 비정상적인 스플라이싱과 관련된 질환 또는 병태를 앓는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 이 방법은 SMSM, 또는 SMSM을 포함하는 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 SMSM은 pre-mRNA 또는 스플라이싱 복합체 성분에 결합하고, 전사체의 하나 이상의 동형의 발현을 억제하도록 pre-mRNA의 스플라이싱을 조절한다. 이 방법은 SMSM, 또는 SMSM을 포함하는 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 SMSM은 pre-mRNA 또는 스플라이싱 복합체 성분에 결합하고, 전사체의 하나 이상의 동형의 발현을 증가시키도록 pre-mRNA의 스플라이싱을 조절한다.
다수의 질환이 유전자의 비정상적인 유전자 산물(예를 들어, RNA 전사체 또는 단백질)의 발현과 연관된다. 예를 들어, RNA 전사체의 비정상적인 양은 단백질 발현의 상응하는 변화로 인해 질환을 유발할 수 있다. 특정 RNA 전사체의 양의 변화는 여러 인자의 결과일 수 있다. 첫째, RNA 전사체의 양의 변화는, 전사 인자 또는 전사 과정의 일부의 교란으로 특정 RNA 전사체의 발현 수준을 변화시키는 것에 의한 것과 같은, 특정 유전자의 비정상적 수준의 전사에 기인할 수 있다. 둘째, 변형된 스플라이싱을 유발하는 유전자 내의 돌연변이 또는 특정 스플라이싱 과정의 교란에 의한 것과 같은 특정 RNA 전사체의 스플라이싱의 변화는 특정 RNA 전사체의 수준을 변화시킬 수 있다. 특정 RNA 전사체의 안정성 또는 RNA 전사체 안정성을 유지하는 성분에 대한 변화, 예컨대, 폴리-A 테일 도입 과정, 또는 RNA 전사체에 결합하여 이를 안정화시키는 특정 인자 또는 단백질에 대한 효과는 특정 RNA 전사체의 수준의 변화를 유발할 수 있다. 특정 RNA 전사체의 번역 수준도 이 전사체의 양에 영향을 미침으로써, RNA 전사체 붕괴 과정에 영향을 미치거나 이를 상향 조절할 수 있다. 마지막으로, 비정상적 RNA 수송 또는 RNA 격리도 RNA 전사체의 기능적 수준의 변화를 유발할 수 있고, RNA 전사체의 안정성, 추가 가공 또는 번역에 영향을 미칠 수 있다.
일부 구현예에서, pre-mRNA에 의해 암호화된 1개, 2개, 또는 3개 이상의 RNA 전사체의 양을 조절하는 방법이 본원에 제공되며, 이 방법은 세포를 SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 세포 배양물에서 SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 접촉된다. 다른 구현예에서, 세포는 대상(예를 들어, 비인간 동물 대상 또는 인간 대상)에서 SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 접촉된다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태의 치료, 예방 및/또는 진행의 지연을 위한 방법이 본원에 제공되며, 이 방법은 본원에 기술된 바와 같은 소분자 스플라이싱 조절자의 유효량을 대상, 특히 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 pre-mRNA의 결합은 하나 이상의 엑손 및/또는 인트론 및/또는 이들의 단백질이 pre-mRNA의 집단으로부터 스플라이싱 아웃되는 것을 방지하여, 표적 단백질 또는 기능성 RNA를 암호화하는 mRNA를 생산한다. 일부 구현예에서, 세포는 표적 단백질 또는 기능성 RNA를 암호화하는 유전자로부터 전사된 pre-mRNA의 집단을 포함하고, 여기서 pre-mRNA의 집단은 하나 이상의 엑손의 스플라이싱 아웃을 유발하는 돌연변이를 포함하고, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 pre-mRNA의 집단에서 하나 이상의 엑손의 스플라이싱 아웃을 유발하는 돌연변이에 결합한다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과, 하나 이상의 엑손의 스플라이싱 아웃을 유발하는 돌연변이의 결합은 하나 이상의 엑손이 pre-mRNA의 집단으로부터 스플라이싱 아웃되는 것을 방지하여, 표적 단백질 또는 기능성 RNA를 암호화하는 mRNA를 생산한다. 일부 구현예에서, 병태는 질환 또는 장애이다. 일부 구현예에서, 방법은 단백질 발현을 평가하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 pre-mRNA의 표적화된 부분에 결합한다.
일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 결합은 누락 엑손의 포함 또는 원하지 않는 유지된 인트론 또는 이의 부분의 제거를 촉매하여, 건강한 mRNA 및 단백질을 생성한다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 결합은 비질환 세포에 최소한으로 영향을 미치거나 영향을 미치지 않는다.
SMSM 표적
mRNA, 예컨대 pre-mRNA의 비정상적인 스플라이싱은 결함 단백질을 초래할 수 있고 대상에서 질환 또는 장애를 유발할 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 mRNA, 예컨대 pre-mRNA의 이러한 비정상적인 스플라이싱을 감소시킬 수 있고, 이러한 비정상적인 스플라이싱에 의해 유발된 질환 또는 장애를 치료할 수 있다.
RNA 전사체의 양 변화와 관련된 질환은 종종 비정상적인 단백질 발현에 초점을 맞추어 치료된다. 그러나, 스플라이싱 과정의 성분 또는 관련된 전사 인자 또는 관련된 안정성 인자와 같은 RNA 수준에서의 비정상적 변화의 원인이 되는 과정이 소분자를 사용한 치료에 의해 해결될 수 있는 경우, RNA 전사체 또는 관련된 단백질의 원치 않는 효과를 나타내는 비정상적 수준의 발현과 같은 단백질 발현 수준을 회복시킬 수 있을 것이다. 따라서, RNA 전사체 또는 관련된 단백질의 비정상적 발현과 관련된 질환을 예방하거나 치료하는 한 방식으로서 특정 유전자에 의해 암호화된 RNA 전사체의 양을 조절하는 방법에 대한 필요가 있다.
치료 방법
본원에 기술된 조성물 및 방법은 비정상적 pre-mRNA 스플라이싱과 같은 비정상적 스플라이싱과 관련된 인간 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 pre-mRNA와 같은 mRNA를 조절함으로써 인간 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 치료받는 질환 또는 장애의 발병에 있어서 핵산이 비정상적으로 스플라이싱되지 않을 때조차도 해당 핵산의 스플라이싱을 조절함으로써 인간 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 조성물 또는 의약의 투여 맥락에서 유효량은 치료 효과 및/또는 유익한 효과를 갖는, 환자에게 투여되는 SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 양을 지칭한다. 특정 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 조성물 또는 의약을 환자에게 투여하는 맥락에서 유효량은 하기 효과들 중 하나 또는 둘 이상의 효과를 일으킨다: (i) 질환의 중증도를 감소시키거나 완화시키는 효과; (ii) 질환의 발병을 지연시키는 효과; (iii) 질환의 진행을 억제하는 효과; (iv) 대상의 입원을 감소시키는 효과; (v) 대상의 입원 기간을 감소시키는 효과; (vi) 대상의 생존을 증가시키는 효과; (vii) 대상의 삶의 질을 개선하는 효과; (viii) 질환과 관련된 증상의 수를 감소시키는 효과; (ix) 질환과 관련된 증상의 중증도를 감소시키거나 완화시키는 효과; (x) 관련된 질환과 관련된 증상의 지속시간을 감소시키는 효과; (xi) 질환과 관련된 증상의 재발을 예방하는 효과; (xii) 질환의 증상의 발생 또는 발병을 억제하는 효과; 및/또는 (xiii) 질환과 관련된 증상의 진행을 억제하는 효과. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 유전자의 RNA 전사체의 양을 건강한 환자 또는 건강한 환자로부터 얻은 세포에서 검출될 수 있는 RNA 전사체의 양까지 회복시키기에 효과적인 양이다. 다른 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 유전자의 RNA 동형 및/또는 단백질 동형의 양을 건강한 환자 또는 건강한 환자로부터 얻은 세포에서 검출될 수 있는 RNA 동형 및/또는 단백질 동형의 양까지 회복시키기에 효과적인 양이다.
일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 질환과 관련된 유전자의 RNA 전사체의 비정상적 양을 감소시키기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 유전자의 동형의 비정상적 발현의 양을 감소시키기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 RNA 전사체(예를 들어, mRNA 전사체), 선택적 스플라이스 변이체 또는 동형의 양이 실질적으로 변화하기에 효과적인 양이다.
일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 질환의 예방 및/또는 치료에 유익한 유전자의 RNA 전사체(예를 들어, mRNA 전사체)의 양을 증가시키거나 감소시키기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 질환의 예방 및/또는 치료에 유익한 유전자의 RNA 전사체의 선택적 스플라이스 변이체의 양을 증가시키거나 감소시키기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 질환의 예방 및/또는 치료에 유익한 유전자의 동형의 양을 증가시키거나 감소시키기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, 유전자는 SMN2이다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드의 스플라이싱을 조절하는 단계는 엑손 7의 건너뛰기(skipping)를 억제하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM 화합물 및 이의 사용 방법은 SMN2의 pre-mRNA의 스플라이싱을 조절할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 SMSM 화합물 및 이의 사용 방법은 SMN2의 pre-mRNA의 엑손 7의 스플라이싱을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, SMSM 화합물 및 방법은 표 3에 개시된 질환을 치료하기 위해 개시된 스플라이싱 서열을 통해 폴리뉴클레오티드의 스플라이싱을 조절한다.
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일 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 본원에 기술된 질환 또는 병태의 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다. 또한, 본원에 기술된 질환들 또는 병태들 중 어느 하나의 치료를 필요로 하는 대상에서 이러한 질환 또는 병태를 치료하는 방법은 본원에 기술된 적어도 하나의 SMSM 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 치료 유효량으로 대상에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 예방적 및/또는 치료적 치료를 위해 투여될 수 있다. 특정 치료적 적용에 있어서, 조성물은 질환 또는 병태의 증상들 중 적어도 하나를 치유하거나 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 양으로 질환 또는 병태를 이미 앓고 있는 환자에게 투여된다. 이러한 용도에 효과적인 양은 질환 또는 병태의 중증도 및 경과, 선행 요법, 환자의 건강 상태, 체중 및 약물에 대한 반응, 및 치료하는 의사의 판단에 따라 달라진다. 치료 유효량은 용량 증량 임상 시험을 포함하나, 이에 한정되지 않는 방법에 의해 임의로 결정된다. 예방적 적용에 있어서, 본원에 기술된 SMSM을 함유하는 조성물은 특정 질환, 장애 또는 병태에 취약하거나 그렇지 않으면 위험이 있는 환자에게 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 투여되는 약물의 투여량은 일정 길이의 시간 동안 일시적으로 감소될 수 있거나 일시적으로 중단될 수 있다(즉, "휴약기"). 성인 치료를 위해 사용되는 투여량은 전형적으로 하루에 0.01 내지 5000 mg, 또는 하루에 약 1 mg 내지 약 1000 mg이다. 일부 구현예에서, 원하는 투여량은 단회 투여량 또는 분할 투여량으로 편리하게 제공된다.
본원에 기술된 조합 요법의 경우, 함께 투여되는 화합물들의 투여량은 함께 사용된 약물(들)의 유형, 사용된 구체적인 약물(들), 치료되는 질환 또는 병태 등에 따라 달라질 수 있다. 추가의 구현예에서, 하나 이상의 다른 치료제와 함께 투여될 때, 본원에서 제공된 화합물은 하나 이상의 다른 치료제와 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 투여가 동시에 이루어지는 경우, 단지 예로써, 다수의 치료제들은 통합된 단일 형태 또는 다수의 형태로 제공될 수 있다.
투여 방법
본원에 기술된 조성물은 비경구, 정맥내, 피내, 근육내, 결장, 직장 또는 복강내를 포함하는 다양한 방식으로 대상에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 소분자 스플라이싱 조절자 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 복강내 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 또는 정맥내 주사에 의해 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 비경구적으로, 정맥내로, 근육내로 또는 경구로 투여될 수 있다. 소분자 스플라이싱 조절자를 포함하는 경구 제제는, 액체, 정제, 캡슐 등과 같은, 경구 투여에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 경구 제제는 위에서의 용해를 방지하거나 감소시키기 위해 추가로 코팅되거나 처리될 수 있다. 본 개시의 조성물은 당업계에 공지된 임의의 적절한 방법을 사용하여 대상에게 투여될 수 있다. 본 개시에 사용하기에 적절한 제형 및 전달 방법은 일반적으로 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 소분자 스플라이싱 조절자는 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제와 함께 약학적 조성물로서 제형화될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 등장성 조절제, 습윤제 등, 예를 들어, 아세트산 나트륨, 젖산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 소르비탄 모노라우레이트, 올레산 트리에탄올아민 등을 포함하는 생리학적 조건에 근접하기 위해 필요한 약학적으로 허용 가능한 보조 물질을 함유할 수 있다.
본원에 기술된 약학적 제제는 경구, 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 근육내, 골수내 주사, 경막내, 직접 심실내, 복강내, 림프내, 비강내 주사), 비강내, 구강, 국소 또는 경피 투여 경로를 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 방식으로 대상에게 투여될 수 있다. 본원에 기술된 약학적 제제는 수성 액체 분산액, 자가 유화 분산액, 고용체, 리포좀 분산액, 에어로졸, 고체 제형, 분말, 속방성 제제, 제어방출 제제, 급속 용융 제제, 정제, 캡슐, 알약, 지연 방출 제제, 연장 방출 제제, 박동성 방출 제제, 다중미립자 제제, 및 혼합된 속방성 및 조절 방출 제제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 경구 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 국소 투여된다. 이러한 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 다양한 국소 투여 가능 조성물, 예컨대 용액, 현탁액, 로션, 겔, 페이스트, 샴푸, 스크럽제(scrubs), 마찰제(rubs), 도말제(smears), 약물처리된 스틱, 약물처리된 붕대, 향유연고, 크림 또는 연고로 제제된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 피부에 국소 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 흡입에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 비내투여용으로 제제된다. 이러한 제제는 비강 분무제, 비강 미스트제 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 점안제로서 제제된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 약학 조성물은 (a) 포유류에게 전신 투여되고/되거나; (b) 포유류에게 경구 투여되고/되거나; (c) 포유류에게 정맥내로 투여되고/되거나; (d) 포유류에게 흡입에 의해 투여되고/되거나; (e) 포유류에게 코 투여에 의해 투여되고/되거나; (f) 포유류에게 주사에 의해 투여되고/되거나; (g) 포유류에게 국소 투여되고/되거나; (h) 안 투여에 의해 투여되고/되거나; (i) 포유류에게 직장 투여되고/되거나; (j) 포유류에게 비전신 또는 국소 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 약학적 조성물은 포유류에게 경구 투여된다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 전신 방식보다는 국소 방식으로 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 국소 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 SMSM은 전신 투여된다.
경구 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 이들은 젤라틴 캡슐에 봉입될 수 있거나 정제로 타정될 수 있다. 경구 치료제 투여를 위해, 활성 화합물은 부형제와 함께 혼합될 수 있고, 정제, 트로키제 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 약학적으로 상용 가능한 결합제 및/또는 보조제 물질은 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키제 등은 다음 성분 또는 유사한 성질의 화합물 중 어느 하나를 함유할 수 있다: 결합제, 예컨대, 미세결정 셀룰로스, 검 트라가칸스 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대, 전분 또는 락토스; 붕해제, 예컨대, 알긴산, 프리모겔(Primogel) 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대, 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테스(Sterotes); 활택제, 예컨대, 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대, 수크로스 또는 사카린; 또는 착향제, 예컨대, 페퍼민트, 메틸살리실레이트 또는 오렌지 향료.
흡입에 의한 투여를 위해, 화합물은 적절한 추진제, 예를 들어, 이산화탄소와 같은 기체를 함유하는 가압된 용기 또는 분배기, 또는 분무기로부터 에어로졸 분무의 형태로 전달된다.
전신 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의한 것일 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 침투 대상 장벽에 적절한 침투제가 제제에 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 경점막 투여의 경우, 세제, 담즙산염, 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강 분무제 또는 좌제의 사용을 통해 달성될 수 있다. 경피 투여의 경우, 활성 화합물은 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이 연고, 고약(salve), 겔 또는 크림으로 제제된다.
주사 용도에 적합한 SMSM은 멸균 수용액(수용성인 경우) 또는 분산액, 및 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리식염수, 정균수, 크레모포르(Cremophor) EL??(BASF, 뉴욕주 파시파니 소재) 또는 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균 상태여야 하며, 쉽게 주입할 수 있는 정도로 유동적이어야 한다. 이는 제조 및 보관 조건하에서 안정해야 하며, 박테리아 및 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염으로부터 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산매일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 조성물에 등장화제, 예를 들어, 당, 폴리알코올 예컨대, 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다.
투약 및 일정
본 개시의 방법에 사용되는 SMSM은, 예를 들어, 대상의 요구 사항, 치료 및/또는 촬영되는 병태의 중증도, 및/또는 이용되는 SMSM에 따라 달라질 수 있는 투여량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 용량은 특정 대상에서 진단된 질환의 유형 및 병기, 및/또는 SMSM과 함께 사용되는 영상기법의 유형을 고려하여 경험적으로 결정될 수 있다. 본 개시의 맥락에서, 대상에게 투여되는 투여량은 대상에서 유익한 진단 또는 치료 반응에 영향을 미치기에 충분해야 한다. 투여량의 크기는 또한 특정 대상에서 SMSM의 투여를 수반하는 임의의 유해 부작용의 존재, 성질 및 정도에 의해 결정될 수 있다.
용이한 투여 및 투여량의 균일성을 위해 단위 제형으로 조성물을 제제하는 것이 유리하다. 본원에서 사용된 단위 제형은 치료되는 대상을 위한 단위 투여량으로서 맞추어진 물리적으로 구분된 단위를 지칭하고, 각각의 단위는 요구된 약학적 담체와 함께 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 개시의 단위 제형에 대한 세부사항은 활성 화합물의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 개체의 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 분야에 내재한 한계에 의해 조정되고 직접적으로 좌우된다. 이러한 화합물의 독성 및 치료 효능은 예를 들어, LD50(집단의 50%에 치명적인 투여량) 및 ED50(집단의 50%에 치료적으로 효과적인 투여량)을 측정하기 위한 세포 배양 또는 실험 동물에서의 절차에 의해 측정될 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 투여량비는 치료 계수이고 비 LD50/ED50으로서 표현될 수 있다. 큰 치료 계수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 화합물이 사용될 수 있지만, 감염되지 않은 세포에 대한 잠재적 손상을 최소화함으로써 부작용을 감소시키기 위해 이러한 화합물을 병에 걸린 조직의 부위로 표적화하는 전달 시스템을 설계하도록 주의를 기울여야 한다.
세포 배양 검정 및/또는 동물 연구로부터 수득된 치료 계수 데이터는 생체내 치료 계수를 예측하고 인간 대상과 같은 대상에서 사용하기 위한 투여량의 범위를 공식화하는 데 사용될 수 있다. 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에게 사용하기 위한 투여량의 범위를 공식화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 독성을 거의 또는 전혀 갖지 않으면서 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 제형 및 이용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 본 개시의 방법에서 사용되는 임의의 화합물에 대한 치료 유효 투여량은 세포 배양 검정으로부터 처음에 추정될 수 있다. 투여량은 세포 배양에서 결정된 증상의 반수 최대 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도를 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 공식화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정하는 데 사용될 수 있다. 플라즈마에서의 수준은, 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 질환 또는 병태를 예방하거나 감소시키는 데 있어서 특정 SMSM의 효과를 평가하기 위한 다양한 동물 모델 및 임상 검정이 당업계에 공지되어 있으며 본 개시에서 사용될 수 있다. 투여량은 사용된 제형 및 이용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 정확한 제제, 투여 경로 및 투여량은 환자의 상태를 고려하여 개별 의사에 의해 선택될 수 있다(예를 들면, 문헌[Fingl et al, 1975, In: The Pharmacological Basis of Therapeutics. Ch. 1 pi] 참조).
본 개시의 조성물은 매시간, 매일, 매주 또는 매월을 포함하여, 필요에 따라 자주 투여될 수 있다.
전술한 양태들 중 어느 하나에, (i) 화합물이 한 번 투여되거나; (ii) 화합물이 1일의 기간에 걸쳐 포유류에게 다회 투여되거나; (iii) 반복적으로 투여되거나; (iv) 연속적으로 투여되는 추가 구현예를 포함하여, 본원에 기술된 SMSM의 유효량의 단회 투여를 포함하는 추가 구현예가 있다.
전술한 양태들 중 어느 하나에, (i) 화합물이 단회 투여량으로서 연속적으로 또는 간헐적으로 투여되거나; (ii) 다회 투여 사이의 시간이 6시간이거나; (iii) 화합물이 8시간마다 포유류에게 투여되거나; (iv) 화합물이 12시간마다 포유류에게 투여되거나; (v) 화합물이 24시간마다 포유류에게 투여되는 추가 구현예를 포함하여, 본원에 기술된 SMSM의 유효량의 다회 투여를 포함하는 추가 구현예가 있다. 추가의 또는 대안적인 구현예에서, 방법은 본원에 기술된 SMSM의 투여가 일시적으로 중단되거나 투여되는 화합물의 투여량이 일시적으로 감소되는 휴약기를 포함하고; 휴약기의 말기에 화합물의 투약이 재개된다. 일 구현예에서, 휴약기의 길이는 2일 내지 1년으로 다양하다.
병용 요법
특정 경우에, 본원에 기술된 적어도 하나의 SMSM을 다른 치료제와 병용하여 투여하는 것이 적절하다. 예를 들어, 본원에 기술된 화합물 SMSM은 제2 치료제와 함께 공동 투여될 수 있으며, 여기서 SMSM 및 제2 치료제는 치료되는 질환, 장애 또는 병태의 상이한 양태를 조절함으로써, 어느 하나의 치료제 단독의 투여보다 더 큰 전체 이익을 제공한다.
일부 구현예에서, SMSM은 하나 이상의 다른 SMSM과 병용하여 투여될 수 있다.
SMSM은 다른 치료적 제제의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 이를 필요로 하는 대상에게 투여될 수 있다. 예를 들어, SMSM은 다른 치료적 제제(들)의 투여 시작 시간 전 적어도 8시간, 7시간, 6시간, 5시간, 4시간, 3시간, 2시간, 1.5시간, 1시간, 또는 30분에 대상에게 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 이들은 다른 치료적 제제(들)의 투여와 동시에 투여될 수 있다. 즉, 이들 구현예에서, SMSM은 다른 치료적 제제(들)의 투여가 시작될 때 동시에 투여된다. 다른 구현예에서, SMSM은 다른 치료적 제제(들)의 투여 시작 시간 후에 (예를 들어, 다른 치료적 제제의 투여 시작 시간 후 적어도 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간 또는 8시간에) 투여될 수 있다. 또는, SMSM은 다른 치료적 제제의 투여 완료 후 적어도 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간 또는 8시간에 투여될 수 있다. 일반적으로, 이들 SMSM은 질환 또는 병태가 예방되거나 감소되도록 충분한 기간 동안 투여된다. 이러한 충분한 기간은 다른 치료적 제제(들)가 투여되는 기간과 동일하거나 상이할 수 있다. 특정 구현예에서, 다른 치료적 제제 또는 다수의 다른 치료적 제제의 조합의 각각의 투여에 대해 다회 투여량의 SMSM이 투여된다.
특정 구현예에서, SMSM의 적절한 투여량은 질환 또는 병태를 예방하거나 감소시키는 데 있어서 최적의 효과를 달성하기 위해 특정 시기 및/또는 특정 경로와 조합된다. 예를 들어, SMSM은 다른 치료적 제제 또는 다른 치료적 제제의 조합의 투여를 시작하거나 완료하기 전 또는 후 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간 또는 12시간; 또는 적어도 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일; 또는 적어도 1주, 2주, 3주 또는 4주; 또는 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월에 인간에게 경구 투여될 수 있다.
대상
본원에 기술된 SMSM 및 방법에 의해 치료될 수 있는 대상은 선택적 스플라이싱이 적용되는 mRNA를 생산하는 임의의 대상일 수 있고, 예를 들어, 상기 대상은 식물 또는 동물과 같은 진핵생물 대상일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상은 포유류, 예컨대 인간이다. 일부 구현예에서, 대상은 인간이다. 일부 구현예에서, 대상은 비인간 동물이다. 일부 구현예에서, 대상은 태아, 배아, 또는 소아이다. 일부 구현예에서, 대상은 침팬지 및 기타 유인원과 같은 비인간 영장류, 및 원숭이 종; 소, 말, 양, 염소, 돼지와 같은 가축; 토끼, 개, 및 고양이와 같은 가축; 랫트, 마우스, 및 기니피그와 같은 설치류를 포함하는 실험 동물 등이다. 일부 구현예에서, 대상은 출생전(예를 들어, 태아), 소아(예를 들어, 신생아, 유아, 영아, 사춘기 전), 청소년, 사춘기, 또는 성인(예를 들어, 초년 성인, 중년 성인, 노인)이다.
실시예
이 실시예들은 단지 예시적인 목적을 위해 제공되며, 본원에 제공된 청구범위를 한정하기 위한 것이 아니다. 본원에 기술된 화합물은 표준 합성 기술을 사용하거나 본원에 기술된 방법과 조합하여 당업계에 공지된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 종래의 질량 분광법, NMR, HPLC, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 방법이 이용될 수 있다. 화합물은, 예를 들어, 문헌[March's Advanced Organic Chemistry, 6th Edition, John Wiley and Sons, Inc.]에 기술된 것과 같은 표준 유기 화학 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 기술된 합성 변환을 위한 대안적인 반응 조건, 예컨대 용매의 변화, 반응 온도, 반응 시간뿐만 아니라 상이한 화학 시약 및 기타 반응 조건이 이용될 수 있다. 본원에 기술된 화합물의 합성에 사용되는 출발 물질 및 시약은 합성될 수 있거나, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 아크로스 오가닉스(Acros Organics), 플루카(Fluka) 및 피셔 사이언티픽(Fischer Scientific)과 같은 상업적 공급원으로부터 수득될 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 출발 물질은 상업적 공급원으로부터 입수할 수 있거나 즉석에서 제조될 수 있다. 단지 예시로서, 본원에 기술된 실시예를 제조하기 위한 반응식이 제공된다.
다음의 약어를 사용한다: DCM - 디클로로메탄; DIPEA - N,N-디이소프로필에틸아민; DMSO - 디메틸 설폭시드; DMF - N,N-디메틸포름아미드; EDCI - N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드; Et2O - 디에틸 에테르; EtOAc - 에틸 아세테이트; EtOH - 에틸 알코올; HOBt - 1-히드록시벤조트리아졸; LCMS - 액체 크로마토그래피 질량 분석기; MeCN - 아세토니트릴; MeOH - 메틸 알코올; Ms - 메실레이트; MTBE - 메틸 터트-부틸 에테르; 셀렉트플루오르 - 1-클로로메틸-4-플루오로-1,4-디아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 비스(테트라플루오로보레이트); SFC - 초임계 유체 크로마토그래피; THF- 테트라히드로푸란; TMSCl - 트리메틸실릴 염화물; h - 시간; min - 분; rt - 실온(22 내지 25℃ - 그램; mL - 밀리리터; mg - 밀리그램; mmol - 밀리몰.
본원에 기술된 화합물의 제조에 유용한 반응물의 합성을 상세히 기술하거나, 제조를 기술하는 논문에 대한 참조를 제공하는 적절한 참고 서적 및 논문은, 예를 들어, 문헌들["Synthetic Organic Chemistry", John Wiley & Sons, Inc., New York; S. R. Sandler et al., "Organic Functional Group Preparations," 2nd Ed., Academic Press, New York, 1983; H. O. House, "Modern Synthetic Reactions", 2nd Ed., W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif. 1972; T. L. Gilchrist, "Heterocyclic Chemistry", 2nd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1992; J. March, "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure", 4th Ed., Wiley Interscience, New York, 1992]을 포함한다. 본원에 기술된 화합물의 제조에 유용한 반응물의 합성을 상세히 기술하거나, 제조를 기술하는 논문에 대한 참조를 제공하는 추가의 적절한 참고 서적 및 논문은, 예를 들어, 문헌들[Fuhrhop, J. and Penzlin G. "Organic Synthesis: Concepts, Methods, Starting Materials", Second, Revised and Enlarged Edition (1994) John Wiley & Sons ISBN: 3 527-29074-5; Hoffman, R.V. "Organic Chemistry, An Intermediate Text" (1996) Oxford University Press, ISBN 0-19-509618-5; Larock, R. C. "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" 2nd Edition (1999) Wiley-VCH, ISBN: 0-471-19031-4; March, J. "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure" 4th Edition (1992) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-60180-2; Otera, J. (editor) "Modern Carbonyl Chemistry" (2000) Wiley-VCH, ISBN: 3-527-29871-1; Patai, S. "Patai's 1992 Guide to the Chemistry of Functional Groups" (1992) Interscience ISBN: 0-471-93022-9; Solomons, T. W. G. "Organic Chemistry" 7th Edition (2000) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-19095-0; Stowell, J.C., "Intermediate Organic Chemistry" 2nd Edition (1993) Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-57456-2; "Industrial Organic Chemicals: Starting Materials and Intermediates: An Ullmann's Encyclopedia" (1999) John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, in 8 volumes; "Organic Reactions" (1942-2000) John Wiley & Sons, in over 55 volumes; and "Chemistry of Functional Groups" John Wiley & Sons, in 73 volumes]을 포함한다.
기술된 반응에서, 반응성 작용기, 예를 들어, 히드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카르복시기를 보호하는 것이 필요할 수 있으며, 최종 생성물에서 이들이 반응에 원하지 않는 참여를 피하기 위해 이들 작용기가 바람직하다. 보호기의 생성 및 이들의 제거에 적용되는 기술에 대한 상세한 설명은 문헌[Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999, and Kocienski, Protective Groups, Thieme Verlag, New York, NY, 1994]에 기술되어 있으며, 이는 이러한 개시를 위해 참조로서 본원에 포함된다.
실시예는 공지된 기법을 사용하여 제조될 수 있고, 일부 구현예에서는, 예를 들어, 스플라이싱 복합체 성분, 스플라이소좀 또는 pre-mRNA 분자로의 핵내 전달을 용이하게 하기 위해 추가로 화학적으로 변형될 수 있다. 당업자는 핵내 전달을 위한 화학적 변형(예를 들어, 전하 감소, 크기 최적화 및/또는 친유성 변형)을 위한 표준 의약 화학 접근법을 이해할 것이다.
입체화학:
(±) 또는 라세믹은 생성물이 거울상 이성질체의 라세미 혼합물임을 나타낸다. 예를 들어, (±) (1S,2S,3R,5R) 또는 라세믹(1S,2S,3R,5R)은 도시된 상대 생성물 입체화학이 이와 유사한 화합물 및/또는 반응물의 알려진 입체화학에 기초하고, 해당 생성물이 (1S,2S,3R,5R) 및 (1R,2R,3S,5S) 입체이성질체 둘 모두의 거울상 이성질체의 라세미 혼합물임을 나타낸다. 개별 거울상 이성질체의 절대 입체화학이 결정되지 않은 화합물은 단일 거울상 이성질체, 예를 들어, (1S,2S,3R,5R) 또는 (1R,2R,3S,5S) 중 하나이거나 가능한 단일 거울상 이성질체 중 하나로서 도시된다. 이러한 경우에, 생성물은 순수하고 단일 거울상 이성질체이지만, 절대 입체화학은 식별되지 않지만, 상대 입체화학은 알려져 있고 표시되어 있다.
실시예 1: 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온 및 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온의 제조(화합물 1A & 1B).
Figure pct00084
단계 1: 라세믹 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진(24.00 g, 116.5 mmol), 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(43.0 g, 176 mmol), DIEA(60 mL, 344.5 mmol) 및 n-BuOH(360 mL)의 라세믹 혼합물을 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하 120℃에서 2시간 동안 교반한 예열된 오일 조 내에 두었다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고 실온으로 냉각하고 물(700mL)로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(4:1))로 정제하여, 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 황색 고형분으로서 수득하였다. (24g, 55.8%) [M+H]+=370.
단계 2: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 라세믹 혼합물의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g, 56.84 mmol) 및 디메틸포름아미드(420 mL)를 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(4.54 g, 113.51 mmol, 60%)을 나누어 첨가하였고, 내부 온도를 질소 하에 0℃로 유지하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 실온이 되게 하였다. 메틸 요오드(7.20 mL, 115.66 mmol)를 교반하면서 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고 물(1 L)로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(2 x 250 mL) 및 포화 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(19:1))로 정제하여, 17 g(78%)의 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 라세믹 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=384.
단계 3: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 키랄 분리.
터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(11.00 g, 28.684 mmol)의 라세믹 혼합물을 Prep-SFC를 사용하여 개별 이성질체로 정제하였다. 다음의 조건(컬럼: CHIRALPAK IG, 2 * 25 cm, 5 um; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유속: 40 mL/분; 구배: 50% B; 250 nm; RT1: 3.99분; RT2: 6.19 분; 주입 부피: 4 ml; 실행 회수: 80;)을 사용하여 황색 고형분으로서 이성질체 1(5.0 g) 및 황색 고형분으로서 이성질체 2(5.2 g)을 수득하였다.
단계 4: 1-(5-브로모-2,4-디히드록시페닐)에테논의 제조.
2000-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 2,4-디히드록시아세토페논(35.00 g, 230.04 mmol), 테트라부틸암모늄 트리브로마이드(122.01 g, 253.04 mmol), 및 CHCl3(600 mL)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물(400 ml)로 ??칭하였다. 유기상을 분리하고, 생성된 수성상을 2 x 300 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 합치고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축하였다. 잔류물을 크로마토그래피(실리카 겔:에틸 아세테이트/석유 에테르(20/80)) 처리하였고, 단리 후, 37 g의 1-(5-브로모-2,4-디히드록시페닐)에타논을 백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 5: 1-[5-브로모-2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐]에테논의 제조.
2000-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 1-(5-브로모-2,4-디히드록시페닐)에타논(37 g, 160.14 mmol), 아세톤(500 mL), 탄산칼륨(35.41 g, 256.23 mmol), 및 브로모메틸 메틸 에테르(25.81 g, 208.19 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 고형분을 여과하고, 여과액을 진공 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 400 mL의 H2O와 합치고 2 x 500 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기상을 합치고, 황산나트륨-무수물로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 크로마토그래피(실리카 겔 컬럼:석유 에테르/에틸 아세테이트(20/1)) 처리하여, 단리 후, 약 30 g의 1-[5-브로모-2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐]에타논을 백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 6: 1-[5-브로모-2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐]부탄-1,3-디온의 제조.
1000-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 1-[5-브로모-2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐] 에타논(28 g, 101.78 mmol), 테트라히드로푸란(300 mL)을 첨가하였다. 건조 질소 분위기 하 0℃에서, 이 혼합물에 수소화 나트륨(9.77 g, 407.13 mmol)을 교반하면서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 건조 에틸 아세트산(17.94 g, 203.57 mmol)을 첨가하였다. 에틸 아세테이트를 첨가한 후, 냉각조를 제거하고, 이어서 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 100 mL의 물을 첨가하여 반응물을 조심스럽게 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 2 x 200 mL의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 합치고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜, 약 25 g의 1-[5-브로모-2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐]부탄-1,3-디온을 연황색 고형분으로서 직접 수득하였다.
단계 7: 6-브로모-7-히드록시-2-메틸크로멘-4-온의 제조.
1000 mL 둥근 바닥 플라스크에 1-[5-브로모-2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐]부탄-1,3-디온(25 g, 78.83 mmol), Amberlyst-15(20.00 g), i-PrOH(300 mL)를 합쳤다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 환류 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 고형분을 여과하고 3 x 200 ml MeOH로 세척하였다. 여과물을 합치고 농축시켜 건조 시 고형화된 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 메탄올(약 200 mL)로부터의 결정화로 정제하여, 단리 후, 15 g의 6-브로모-7-히드록시-2-메틸크로멘-4-온을 회색 고형분으로서 수득하였다.
단계 8: 6-브로모-7-(메톡시메톡시)-2-메틸크로멘-4-온의 제조.
질소로 퍼징된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-7-히드록시-2-메틸크로멘-4-온(15 g, 58.81 mmol, 1.00), 테트라히드로푸란(150 mL), 및 디메틸포름아미드(15 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음 질소 대기 하에서 수소화 나트륨(2.12 g, 88.21 mmol)을 조심스럽게 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 메톡시메틸 브로마이드(11.02 g, 88.212 mmol)을 첨가하였다. 냉각조를 제거하고, 이어서 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 물(100 mL)을 첨가하여 반응물을 ??칭하고, 생성된 용액을 2 x 200 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 고형화시키고 에틸 아세테이트/석유 에테르(4:1)로부터의 재결정화로 정제하여, 단리 후, 15 g(85.27%)의 6-브로모-7-(메톡시메톡시)-2-메틸크로멘-4-온을 연분홍색 고형분으로서 수득하였다.
단계 9: 7-(메톡시메톡시)-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)크로멘-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 100-mL 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-7-(메톡시메톡시)-2-메틸크로멘-4-온(3.00 g, 10.03 mmol), 디옥산(30 mL), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란)(3.06 g, 12.035 mmol), 1,1 -비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(0.37 g, 0.501 mmol), 및 칼륨 아세테이트(1.97 g, 20.06 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 열로부터 제거하고, 냉각시킨 후, 50 mL의 물을 첨가하여 반응물을 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 3 x 50 mL의 에틸 아세테이트로 추출하고 유기층을 합쳤다. 합쳐진 유기층을 1 x 50 mL의 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켰다. 잔루물을 실리카 겔 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에테르(0 내지 80% 구배)로 정제하여, 단리 후, 0.8 g(23.04%)의 7-(메톡시메톡시)-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)크로멘-4-온을 황색 고형분으로서 수득하였다.
단계 10: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(7-(메톡시메톡시)-2-메틸-4-옥소-4H-크로멘-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(7-(메톡시메톡시)-2-메틸-4-옥소-4H-크로멘-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 8-mL 바이알에 이성질체 1(150 mg, 0.391 mmol), 테트라히드로푸란(3.00 mL), 7-(메톡시메톡시)-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)크로멘-4-온(406.23 mg, 1.173 mmol), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(251.92 mg, 1.173 mmol), 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(22.60 mg, 0.020 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 질소 하 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 이어서, 20 mL의 물을 첨가하여 반응물을 ??칭하였다. 생성된 용액을 3 x 20 mL의 에틸 아세테이트로 추출하고 유기층을 합쳤다. 생성된 유기 혼합물을 염수(20 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고. 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에테르(0 내지 80%) 구배)로 정제하여, 단리 후, 80 mg(36.8%)의 중간체 10A를 황색 고형분으로서 수득하였다.
전술한 절차에 따라, 이성질체 2(150 mg, 0.391 mmol)로 시작하여, 단리 후, 81 mg의 중간체 10B를 황색 고형분으로서 수득하였다.
단계 11: 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온 및 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 8-mL 둥근 바닥 플라스크에 중간체 10A(80.00 mg, 0.144 mmol) 및 디옥산 중 HCl(2.00 mL)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 20 mL의 포화 수성 중탄산나트륨을 첨가하여 반응물을 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 20 mL)으로 추출하고 유기층을 합쳤다. 이어서, 생성된 혼합물을 포화 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 생성된 여액을 플래쉬-분취-HPLC(컬럼, C18; 이동상 0.01% NH4HCO3/H2O:ACN = 20%에서 30분 내에 0.01% NH4HCO3/H2O:ACN = 60%로 증가함; 검출기, 254 nm)로 정제하여, 단리 후, 25 mg의 화합물 1A 6을 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z) [M+H]+=412.20. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.91 - 8.80 (m, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.40 - 5.91 (m, 1H), 5.30 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.75 (dd, J = 49.2, 7.7 Hz, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.18 - 2.92 (m, 3H), 2.33 (d, J = 31.4 Hz, 3H), 2.11 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 1.85 - 1.72 (m, 4H), 1.34 (s, 1H).
전술한 절차를 따라, 중간체 10B로 시작하여, 25 mg의 화합물 1B를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z) [M+H]+=412.20. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.85 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.39 - 5.93 (m, 1H), 5.34 - 4.90 (m, 1H), 4.86 - 4.55 (m, 1H), 3.61 (d, J = 28.7 Hz, 2H), 3.19 - 2.92 (m, 3H), 2.33 (d, J = 31.8 Hz, 3H), 2.23 (s, 1H), 1.88 - 1.50 (m, 4H), 1.29 (d, J = 29.6 Hz, 1H).
실시예 2: 6-(6-[[(1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노] -1,2,4-트리아진-3-일) -7-히드록시-2-메틸프탈라진-1-온 및 6-(6-[[(1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노]-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸프탈라진-1-온의 제조(화합물 2A & 2B).
Figure pct00085
단계 1: 라세믹 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
6-브로모-3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진(24.00 g, 116.5 mmol), 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(43.0 g, 176 mmol), DIEA(60 mL, 344.5 mmol) 및 n-BuOH(360 mL)의 라세믹 혼합물을 1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하 120℃에서 2시간 동안 교반한 예열된 오일 조 내에 두었다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고 실온으로 냉각하고 물(700mL)로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(4:1))로 정제하여, 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 황색 고형분으로서 수득하였다. (24g, 55.8%) [M+H]+=370.
단계 2: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 라세믹 혼합물의 제조.
터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g, 56.84 mmol) 및 디메틸포름아미드(420 mL)를 1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(4.54 g, 113.51 mmol, 60%)을 나누어 첨가하였고, 내부 온도를 질소 하에 0℃로 유지하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 실온이 되게 하였다. 메틸 요오드(7.20 mL, 115.66 mmol)를 교반하면서 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고 물(1 L)로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(2 x 250 mL) 및 포화 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(19:1))로 정제하여, 17 g(78%)의 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 라세믹 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=384.
단계 3: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 키랄 분리.
터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(11.00 g, 28.684 mmol)의 라세믹 혼합물을 Prep-SFC를 사용하여 개별 이성질체로 정제하였다. 다음의 조건(컬럼: CHIRALPAK IG, 2 * 25 cm, 5 um; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유속: 40 mL/분; 구배: 50% B; 250 nm; RT1: 3.99분; RT2: 6.19 분; 주입 부피: 4 ml; 실행 회수: 80;)을 사용하여 황색 고형분으로서 이성질체 1(5.0 g) 및 황색 고형분으로서 이성질체 2(5.2 g)을 수득하였다.
단계 4: 4-브로모-3-메톡시-N-메틸벤조히드라지드의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에, 4-브로모-3-메톡시벤조산(15.00 g, 65 mmol), 메틸 히드라진(11.96 g, 260 mmol), DMF(150 mL), EDCI(14.93 g, 78 mmol) 및 HOBT(10.53 g, 78 mmol)를 질소 하 0℃에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하에서 4시간 동안 교반하고 실온에 이르도록 방치하였다. 이어서, 반응물을 300 mL의 물로 ??칭하였다. 혼합물을 3 x 200 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합치고 3 x 500 mL의 포화 염수로 세척하였다. 이어서, 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래쉬-분취-HPLC(IntelFlash-1: 컬럼: C18 컬럼; 이동상 A: 물(10 MMOL/L NH4HCO3), 이동상 B: ACN; 유속: 80 mL/분; 구배: 25분 이내 20 B에서 80 B)로 정제하여 12.0 g의 4-브로모-3-메톡시-N-메틸벤조히드라지드를 연황색 오일로서 수득하였다.
단계 5: 4-브로모-3-메톡시-N-메틸-N'-메틸리덴벤조히드라지드의 제조.
질소 퍼징된 250 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-3-메톡시-N-메틸벤조히드라지드(12.00 g, 46 mmol), 히드록시메틸리덴(1.67 g, 0.055 mmol), 및 톨루엔(150 mL)을 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃로 예열된 오일 수조에 넣고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고, 물/얼음조에서 냉각시켰다. 이어서, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 크로마토그래피(실리카 겔 컬럼: 에틸 아세테이트/석유 에테르(1:3)) 처리하여, 12 g(95.57%)의 4-브로모-3-메톡시-N-메틸-N'-메틸리덴벤조히드라지드를 백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 6: 6-브로모-7-메톡시-2-메틸프탈라진-1-온의 제조.
건조 질소로 퍼징된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-3-메톡시-N-메틸-N(10 g, 36.89 mmol), 퀴논(5.98 g, 55.33 mmol), 팔라듐 아세테이트(0.83 g, 3.69 mmol), 및 아세트산(200 mL)을 넣었다. 생성된 용액을 예열된 오일 조 내에 두고 질소 하 120℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고, 물/얼음조로 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 농축시키고, NaHCO3으로 잔류물의 pH를 8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 3 x 150 mL의 에틸 아세테이트로 추출하고 유기층을 합치고 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고, 농축시키고, 정제하여(실리카 겔:에틸 아세테이트/석유 에테르(1:3)), 6 g(60.45%)의 6-브로모-7-메톡시-2-메틸프탈라진-1-온을 연황색 고형분으로서 수득하였다.
단계 7: 7-메톡시-2-메틸-1-옥소프탈라진-6-일보론산의 제조.
건조 질소로 퍼징된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-7-메톡시-2-메틸프탈라진-1-온(6 g, 22 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란)(8.5 g, 33 mmol), 1,1 -비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(0.91 g, 1 mmol), 칼륨 아세테이트(4.38 g, 44 mmol), 및 디옥산(120 mL)을 넣었다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 질소 하 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고, 물/얼음조에서 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 농축시키고 실리카 겔(1:2 에틸 아세테이트/석유 에테르) 상에서 크로마토그래피 처리하였다. 고형분 잔기를 단리하고 에테르-석유로부터 재결정화시키고, 단리 후, 3.5 g의 7-메톡시-2-메틸-1-옥소프탈라진-6-일보론산을 백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 8: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(7-메톡시-2-메틸-1-옥소-1,2-디히드로프탈라진-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(7-메톡시-2-메틸-1-옥소-1,2-디히드로프탈라진-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소로 퍼징된 40-mL 밀봉 튜브에 이성질체 1(150 mg, 0.391 mmol), 7-메톡시-2-메틸-1-옥소프탈라진-6-일보론산(183.1 mg, 0.782 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(22.6 mg, 0.02 mmol), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(168 mg, 0.782 mmol), 및 테트라히드로푸란(3.00 mL)을 넣었다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 질소 하 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고, 물/얼음조에서 냉각시켰다. 미정제 반응물을 농축시키고 직접적으로 플래쉬-분취-HPLC((IntelFlash-1): 컬럼: C18 컬럼; 이동상 A: 물(10 MMOL/L NH4HCO3), 이동상 B: ACN; 유속: 80 mL/분; 구배: 25분 이내 20 B에서 70 B)로 정제하여 100 mg의 중간체 8A를 황색 고형분으로서 수득하였다.
전술한 절차에 따라, 이성질체 2(150 mg, 0.391 mmol)로 시작하여, 100 mg(48.64%)의 중간체 8B를 황색 고형분으로서 수득하였다.
단계 9: 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸프탈라진-1(2H)-온 및 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸프탈라진-1(2H)-온의 제조(화합물 2A & 2B).
질소로 퍼징된 40-mL 밀봉 튜브에 중간체 8A(120 mg, 0.228 mmol)를 넣고, 디클로로메탄(5 mL)과 합치고, 교반하였다. 보론 트리브로마이드(3 mL)를 0℃에서 적가하고, 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 100 mL의 포화 중탄산나트륨을 첨가하여 반응물을 ??칭하였다. 생성된 용액을 4 x 150 mL의 디클로로메탄/아세토니트릴(10:1)으로 추출하고 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래쉬-분취-HPLC((IntelFlash-1): Kinetex EVO C18 컬럼, 21.2 * 150,5 um; 이동상 A: 물(10 mmol/L NH4HCO3), 이동상 B: ACN; 유속: 25 mL/분; 구배: 30분 내 5 B에서 50 B; 254/220 nm)로 정제하고, 단리 후, 46.9 mg의 화합물 2A를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+H]+=412.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.21 (s, 1H)8.90 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 4.97-4.80 (m, 1H), 4.76-4.63 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.64-3.56 (m, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.33-2.25 (m, 1H), 1.81 - 1.60 (m, 5H).
전술한 절차를 따라, 중간체 8B로 시작하여, 21.1 mg(16.95%)의 화합물 2B를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+H]+=412.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.23 (s, 1H)8.91 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 4.99-4.82 (m, 1H), 4.78-4.61 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.31-2.25 (m, 1H), 1.81 - 1.58 (m, 5H).
실시예 3: 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸퀴나졸린-4(3H)-온 및 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸퀴나졸린-4(3H)-온의 제조(화합물 3A & 3B).
Figure pct00086
단계 1: 라세믹 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진(24.00 g, 116.5 mmol), 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(43.0 g, 176 mmol), DIEA(60 mL, 344.5 mmol) 및 n-부탄올(360 mL)의 라세믹 혼합물을 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하 120℃에서 2시간 동안 교반한 예열된 오일 조 내에 두었다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고 실온으로 냉각하고 물(700mL)로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(4:1))로 정제하여, 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 황색 고형분으로서 수득하였다. (24g, 55.8%) [M+H]+=370.
단계 2: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 라세믹 혼합물의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g, 56.84 mmol) 및 디메틸포름아미드(420 mL)를 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(4.54 g, 113.51 mmol, 60%)을 나누어 첨가하였고, 내부 온도를 질소 하에 0℃로 유지하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 실온이 되게 하였다. 메틸 요오드(7.20 mL, 115.66 mmol)를 교반하면서 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고 물(1 L)로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(2 x 250 mL) 및 포화 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(19:1))로 정제하여, 17 g(78%)의 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 라세믹 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=384.
단계 3: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 키랄 분리.
터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(11.00 g, 28.684 mmol)의 라세믹 혼합물을 Prep-SFC를 사용하여 개별 이성질체로 정제하였다. 다음의 조건(컬럼: CHIRALPAK IG, 2 * 25 cm, 5 um; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유속: 40 mL/분; 구배: 50% B; 250 nm; RT1: 3.99분; RT2: 6.19 분; 주입 부피: 4 ml; 실행 회수: 80;)을 사용하여 황색 고형분으로서 이성질체 1(5.0 g) 및 황색 고형분으로서 이성질체 2(5.2 g)을 수득하였다.
단계 4: 메틸 4-브로모-5-메톡시-2-니트로벤조에이트의 제조.
1000-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 메틸 4-브로모-5-플루오로-2-니트로벤조에이트(60.00 g, 215.8 mmol), 메탄올(600 mL), 및 칼륨 터트 부톡시드(29.06 g, 258.974 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시키고, 물(300 mL)로 세척하고, 디클로로메탄(2 x 200 mL)으로 추출하고, 유기층을 합친 다음 농축시키고, 단리 후, 59 g(94.25%)의 메틸 4-브로모-5-메톡시-2-니트로벤조에이트를 고형분으로서 수득하였다.
단계 5: 메틸 2-아미노-4-브로모-5-메톡시벤조에이트의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 1000-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 메틸 4-브로모-5-메톡시-2-니트로벤조에이트(59.00 g, 203.4 mmol), 에탄올, 물, 아세트산, 및 아연 금속 분말(26.61 g, 406.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 60℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 생성된 용액을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 열로부터 제거하고, 냉각시키고 여과하였다. 생성된 여과물을 농축시키고 포화 수성 중탄산 나트륨(200 mL)으로 세척한 다음 디클로로메탄(3 x 300 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합치고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 단리 후, 40 g(75.61%)의 메틸 2-아미노-4-브로모-5-메톡시벤조에이트를 고형분으로서 수득하였고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
단계 6: 7-브로모-6-메톡시-3H-퀴나졸린-4-온의 제조.
질소의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 1000-mL의 3구형 둥근 바닥 플라스크에 메틸 2-아미노-4-브로모-5-메톡시벤조에이트(34.00 g, 130.725 mmol), 에탄올(340.00 mL), 아세트산; 및 포름아미딘(13.61 g, 130.728 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 80℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 이어서, 포화 수성 중탄산나트륨(100 mL)으로 반응물을 조심스럽게 ??징하였다. 생성된 혼합물을 농축시킨 다음, 디클로로메탄(3 x 200 mL)으로 농축시켰다. 유기층을 합치고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시키고, 이를 단리한 후 32 g(95.97%)의 7-브로모-6-메톡시-3H-퀴나졸린-4-온을 고형분으로서 수득하였고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
단계 7: 7-브로모-6-메톡시-3-메틸퀴나졸린-4-온의 제조.
질소의 불황성 분위기로 퍼징되고 유지된 250 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드(50 mL), 및 수소화 나트륨(0.56 g, 23.523 mmol)을 넣었다. 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 7-브로모-6-메톡시-3H-퀴나졸린-4-온(5 g, 19.602 mmol)을 C에서 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 메틸 요오드(2.78 g, 19.586 mmol)를 첨가하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 얼음/물(30 ml)로 조심스럽게 ??칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 80 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 포화 염수(3 x 50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 단리 후 4 g(75.83%)의 7-브로모-6-메톡시-3-메틸퀴나졸린-4-온을 고형분으로서 수득하였고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
단계 8: 6-메톡시-3-메틸-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)퀴나졸린-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 40-mL의 바이럴에, 7-브로모-6-메톡시-3-메틸퀴나졸린-4-온(1.20 g, 4.459 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란)(1.36 g, 5.351 mmol), 1,1 -비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(0.16 g, 0.219 mmol), 칼륨 아세테이트(0.88 g, 8.919 mmol), 및 디옥산(10 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 열로부터 제거하고, 냉각시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(에틸 아세테이트/석유 에테르(1:3))로 정제하고, 단리 후, 400 mg(28.37%)의 6-메톡시-3-메틸-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)퀴나졸린-4-온을 고형분으로서 수득하였다.
단계 9: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(6-메톡시-3-메틸-4-옥소-3,4-디히드로퀴나졸린-7-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(6-메톡시-3-메틸-4-옥소-3,4-디히드로퀴나졸린-7-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 8-mL 바이알에, 이성질체 1(120 mg, 0.313 mmol), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(167.95 mg, 0.782 mmol), 6-메톡시-3-메틸-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)퀴나졸린-4-온(197.86 mg, 0.626 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(18.08 mg, 0.016 mmol), 및 테트라히드로푸란(1.20 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 질소 하 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시키고 미정제 생성물을 플래쉬-분취-HPLC((IntelFlash-1): 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, ACN/5MMNH4CO3 = 0.2에서 15분 이내에 ACN/5MMNH4CO3 = 1로 증가함; 검출기, 254 nm)로 정제하여, 단리 후, 120 mg(72.96%)의 중간체 9A를 고형분으로서 수득하였다.
전술한 절차에 따라, 이성질체 2(120 mg, 0.313 mmol)로 시작하여, 단리 후, 86 mg(52.29%)의 중간체 9B를 황색 고형분으로서 수득하였다.
단계 10: 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸퀴나졸린-4(3H)-온 및 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-3-메틸퀴나졸린-4(3H)-온의 제조(화합물 3A & 3B).
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 25-mL의 둥근 바닥 플라스크에 중간체 9A(110.00 mg, 0.209 mmol), 디클로로메탄(2.00 mL)을 첨가하고, 디클로로메탄(2.00 mL) 중 붕소 트리브로마이드를 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 2 mL의 NaHCO3 수용액을 첨가하여 반응물을 ??칭하였다. 혼합물을 디클로로메탄(3 x 10 mL)으로 추출하고, 유기층을 합치고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래쉬-분취-HPLC((IntelFlash-1): 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, ACN/5MMNH4CO3 = 0.1에서 20분 이내에 ACN/5MMNH4CO3 = 0.5까지 증가시킴; 검출기, 254 nm)로 정제하여, 단리 후, 31.9 mg(37.05%)의 화합물 3A를 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z):[M+H]+=412. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.67 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 4.91 (d, J = 30.9 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 52.3 Hz, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.17 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.28 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 1.85 - 1.51 (m, 6H).
전술한 절차를 따라, 중간체 9B로 시작하여, 29.3 mg(43.52%)의 화합물 3B를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z) [M+H]+=412. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.67 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 4.91 (d, J = 30.9 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 52.3 Hz, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.17 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.28 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 1.91 - 1.50 (m, 6H).
실시예 4: 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온 및 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온의 제조(화합물 4A & 4B).
Figure pct00087
단계 1: 라세믹 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진(24.00 g, 116.5 mmol), 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(43.0 g, 176 mmol), DIEA(60 mL, 344.5 mmol) 및 n-부탄올(360 mL)의 라세믹 혼합물을 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하 120℃에서 2시간 동안 교반한 예열된 오일 조 내에 두었다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고 실온으로 냉각하고 물(700mL)로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(4:1))로 정제하여, 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 황색 고형분으로서 수득하였다. (24g, 55.8%) [M+H]+=370.
단계 2: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 라세믹 혼합물의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g, 56.84 mmol) 및 디메틸포름아미드(420 mL)를 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(4.54 g, 113.51 mmol, 60%)을 나누어 첨가하였고, 내부 온도를 질소 하에 0℃로 유지하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 실온이 되게 하였다. 메틸 요오드(7.20 mL, 115.66 mmol)를 교반하면서 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고 물(1 L)로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(2 x 250 mL) 및 포화 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(19:1))로 정제하여, 17 g(78%)의 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 라세믹 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=384.
단계 3: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 키랄 분리.
터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(11.00 g, 28.684 mmol)의 라세믹 혼합물을 Prep-SFC를 사용하여 개별 이성질체로 정제하였다. 다음의 조건(컬럼: CHIRALPAK IG, 2 * 25 cm, 5 um; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유속: 40 mL/분; 구배: 50% B; 250 nm; RT1: 3.99분; RT2: 6.19 분; 주입 부피: 4 ml; 실행 회수: 80;)을 사용하여 황색 고형분으로서 이성질체 1(5.0 g) 및 황색 고형분으로서 이성질체 2(5.2 g)을 수득하였다.
단계 4: 4-브로모-3-메톡시-N-(피발로일옥시)벤즈아미드의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-3-메톡시벤조산(20.00 g, 86.563 mmol), 디메틸포름아미드(100.02 mL), 디이소프로필에틸아민(89.50 g, 692.506 mmol), 프로판포스폰산 무수물(41.31 g, 129.8 mmol), 및 O-피발로일히드록시아민(15.21 g, 129.845 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(5 x 300mL)로 추출하였다. 유기물을 합치고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 건조될 때까지 농축시켰다. 미정제 생성물을 분취 HPLC에 의해 정제하여, 단리 후, 9.7 g(33.94%)의 4-브로모-3-메톡시-N-(피발로일옥시)벤즈아미드에서 갈색 오일로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+H]+=330.1.
단계 5: 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 250-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-3-메톡시-N-(피발로일옥시)벤즈아미드(9.00 g, 27.258 mmol), 메탄올(100.00 mL), 펜타메틸시클로펜타디에닐 로듐 디클로라이드(0.17 g, 0.273 mmol), 비닐 아세테이트(3.52 g, 40.887 mmol), 및 세슘 아세테이트(1.57 g, 8.177 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 45℃로 예열된 오일 수조에 넣고, 16시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 진공 하에서 농축시켜 고형분을 수득하였다. 미정제 생성물을 재결정화에 의해 MTBE로부터 정제하였다. 고형분을 여과하여 수집하고 진공 하에 건조시켜, 5.3 g(76.53%)의 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온을 회백색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+H]+=254.0.
단계 6: 6-브로모-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징하고 유지한 100 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에, 테트라히드로푸란(30.00 mL, 370.290 mmol) 및 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온(2.60 g, 10.233 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 얼음/물 조에서 냉각시킨 다음 수소화 나트륨(0.61 g, 25.419 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 메틸 요오드(2.18 g, 15.350 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 이어서, 반응물에 50 mL의 물/얼음을 첨가하여 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)으로 추출하고, 유기물을 합치고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 건조될 때까지 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(디클로로메탄/석유 에테르)로 정제하여, 단리 후, 2.2 g(80.19%)의 6-브로모-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온을 백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 7: 7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일보론산의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 100-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 비스(피나콜라토)디보론(2.73 g, 10.742 mmol), 6-브로모-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온(2.40 g, 8.952 mmol), 1,1 -비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(0.33 g, 0.448 mmol, 0.05), 디옥산(30 mL), 및 칼륨 아세테이트(1.76 g, 17.903 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 100℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 혼합물을 농축시키고, 분취-HPLC로 정제하여, 단리 후, 950 mg(45.54%)의 7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일보론산을 회백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 8: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(7-메톡시-2-메틸-1-옥소-1,2-디히드로이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(7-메톡시-2-메틸-1-옥소-1,2-디히드로이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 8-mL 바이알에, 이성질체 1(120 mg, 0.313 mmol), 7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일보론산(145.84 mg, 0.626 mmol), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(147.79 mg, 0.689 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(18.08 mg, 0.016 mmol), 테트라히드로푸란(2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 70℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 혼합물을 분취 HPLC로 정제하여, 단리 후 111 mg(67.62%) 중간체 8A를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+H]+=525.3.
전술한 절차에 따라, 이성질체 2(120 mg, 0.313 mmol)로 시작하여, 단리 후, 112 mg(68.23%)의 중간체 8B를 황색 고형분으로서 수득하였다.
단계 9: 6-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온 및 6-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 8-mL 바이알에 중간체 8A(111.00 mg, 0.212 mmol), 디클로로메탄(1 mL), 및 보론 트리브로마이드(1.00 mL, 10.578 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 물/얼음을 첨가하여 반응을 종료시켰다. 용액의 pH를 포화 수성 중탄산나트륨으로 8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 30 ml)으로 추출하였다. 유기물을 합치고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 잔류물로 건조될 때까지 농축시켰다. 미정제 생성물을 분취-HPLC로 정제하여, 단리 후 51.3 mg의 화합물 4A를 수득하였다. (ES, m/z): [M+H]+=411.2. 1H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 12.34 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.40 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.98 - 6.90 (m, 1H), 6.53 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.44 - 5.18 (m, 1H), 4.74 (d, J = 51.9 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.62 (d, J = 0.9 Hz, 3H), 3.27 - 3.15 (m, 3H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.15 - 1.97 (m, 2H), 1.92 - 1.81 (m, 2H).
전술한 절차를 따라, 중간체 8B(112.00 mg, 0.213 mmol)로 시작하여, 29.3 mg의 화합물 4B를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z):[M+H]+=411.2. 1H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 12.34 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.94 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.32 (d, J = 37.0 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 51.6 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.22 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.06 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.91 - 1.80 (m, 2H).
실시예 5: 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)이소퀴놀린-6-올 및 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)이소퀴놀린-6-올의 제조(화합물 5A 및 5B).
Figure pct00088
단계 1: 라세믹 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진(24.00 g, 116.5 mmol), 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(43.0 g, 176 mmol), DIEA(60 mL, 344.5 mmol) 및 n-부탄올(360 mL)의 라세믹 혼합물을 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하 120℃에서 2시간 동안 교반한 예열된 오일 조 내에 두었다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고 실온으로 냉각하고 물(700mL)로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(4:1))로 정제하여, 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 황색 고형분으로서 수득하였다. (24g, 55.8%) [M+H]+=370.
단계 2: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 라세믹 혼합물의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g, 56.84 mmol) 및 디메틸포름아미드(420 mL)를 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(4.54 g, 113.51 mmol, 60%)을 나누어 첨가하였고, 내부 온도를 질소 하에 0℃로 유지하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 실온이 되게 하였다. 메틸 요오드(7.20 mL, 115.66 mmol)를 교반하면서 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고 물(1 L)로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(2 x 250 mL) 및 포화 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(19:1))로 정제하여, 17 g(78%)의 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 라세믹 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=384.
단계 3: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 키랄 분리.
터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(11.00 g, 28.684 mmol)의 라세믹 혼합물을 Prep-SFC를 사용하여 개별 이성질체로 정제하였다. 다음의 조건(컬럼: CHIRALPAK IG, 2 * 25 cm, 5 um; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유속: 40 mL/분; 구배: 50% B; 250 nm; RT1: 3.99분; RT2: 6.19 분; 주입 부피: 4 ml; 실행 회수: 80;)을 사용하여 황색 고형분으로서 이성질체 1(5.0 g) 및 황색 고형분으로서 이성질체 2(5.2 g)을 수득하였다.
단계 4: 1-(3-브로모-4-메톡시페닐)-N-(2,2-디메톡시에틸)메탄이민의 제조.
500 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 3-브로모-4-메톡시벤즈알데히드(25 g, 116,000 mmol), 톨루엔(250 mL) 및 2,2-디메톡시에탄-1-아민(19 mL, 174.1 mmol, 1.50)을 첨가하였다. 반응 플라스크에 딘-스타크(Dean-Stark) 트랩을 장착하고, 혼합물을 120℃의 예열된 오일 수조에 넣고, 6시간 동안 교반하고, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 이어서, 생성된 혼합물을 진공 하에 일정 중량까지 농축시켜, 단리 후, 37 g의 1-(3-브로모-4-메톡시페닐)-N-(2,2-디메톡시에틸)메탄이민을 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다. m/z: 302(M+H+).
단계 5: 7-브로모-6-메톡시이소퀴놀린의 제조.
1000 mL의 1구 둥근 바닥 플라스크에 1-(3-브로모-4-메톡시페닐)-N-(2,2-디메톡시에틸)메탄이민(37 g, 122.45 mmol), 테트라히드로푸란(370 mL)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 이소프로필 클로로포르메이트(15.01 g, 122.45 mmol)를 적가하였다. 5분 동안 교반한 후, 트리에틸 포스파이트(24.42 g, 146.970 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 냉각조를 제거하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 제거하고, 나머지 잔류물을 100 ml의 톨루엔으로 공비화하였다. 생성된 혼합물에, 티타늄 테트라클로라이드(94.16 g) 및 클로로포름(375 mL)을 첨가하고, 혼합물을 48시간 동안 가열하여 환류시켰다. 혼합물을 열로부터 제거한 다음 얼음/물 위에 부었다. 이어서, 수산화암모늄으로 pH를 9로 조정하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(4 x 200 mL)로 추출하였다. 유기물을 합치고 감압 하에서 건조될 때까지 농축시키고, 이를 실리카 겔 컬럼(에틸 아세테이트:석유 에테르 3:7)으로 정제하여, 단리 후, 6.1 g의 7-브로모-6-메톡시이소퀴놀린을 고형분으로서 수득하였다. m/z: 238(M+H+).
단계 6: 6-메톡시-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 40 mL 바이알에 7-브로모-6-메톡시이소퀴놀린(1.50 g, 6.3 mmol), 비스(피나콜라토)디보론(1.92 g, 7.561 mmol), 1,1 -비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(0.51 g, 0.625 mmol), 칼륨 아세테이트(1.24 g, 12.635 mmol) 및 디옥산(30 mL, 354.123 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 100℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/MeOH 9:1)로 정제하여 적갈색 고형분을 수득하고, 이를 분취-HPLC(C18; 이동상: NH4HCO3(수성)/MeCN; 구배: 30분 내에 10% B에서 50% B, 검출기: 254 nm)로 추가로 정제하여, 단리 후, 1.4 g의 6-메톡시-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린을 고형분으로서 수득하였다. m/z: 286(M+H+).
단계 7: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(6-메톡시이소퀴놀린-7-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(6-메톡시이소퀴놀린-7-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 40 mL 바이알에 이성질체 1(300 mg, 0.782 mmol), 6-메톡시-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일소퀴놀린(670 mg, 2.35 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(135 mg, 0.117 mmol, 0.15), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(504 mg, 2.348 mmol) 및 테트라히드로푸란(7.50 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃로 예열된 오일 수조에 넣고, 12시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2(100mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 3 x 25 mL의 수산화암모늄(10%) 및 50 mL 및 염수로 세척하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트 100%)로 정제하여, 단리 후, 278 mg의 중간체 7A를 황색 고형분으로서 수득하였다. m/z:495(M+H+).
전술한 절차에 따라, 이성질체 2(350 mg, 0.913 mmol)로 시작하여, 단리 후, 350 mg의 중간체 7B를 황색 고형분으로서 수득하였다. m/z:495(M+H+).
단계 8: 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)이소퀴놀린-6-올 및 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)이소퀴놀린-6-올의 제조(화합물 5A 및 5B).
100-mL 둥근 바닥 플라스크에 중간체 7A(150 mg, 0.303 mmol), 디클로로메탄(5 mL, 78.65 mmol), 및 보론 트리브로마이드(759.82 mg, 3.033 mmol)를 넣었다. 생성된 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 수성 중탄산 나트륨으로 최종 pH 9로 켄칭하였다. 혼합물을 디클로로메탄(3 x 50 mL)으로 추출하고, 유기층을 합치고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켰다. 미정제 생성물을 다음 조건의 플래시-분취-HPLC(IntelFlash-1)로 정제하였다: 컬럼: C18; 이동상: NH4HCO3(수성)/ MeCN; 구배: 30분 내에 10% B에서 50% B; 검출기 254 nm, 이를 통해, 단리 후, 30 mg의 화합물 5A를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+1]+ = 381.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.96 (s, 1H), 9.31 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.39 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.94 (d, J = 24.8 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 52.0 Hz, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.18 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.35 - 2.19 (m, 1H), 1.87 - 1.52 (m, 5H).
전술한 절차를 따라, 중간체 7B(150 mg, 0.303 mmol)로 시작하여, 25 mg의 화합물 5B를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+1]+ = 381.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.96 (s, 1H), 9.31 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.39 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.94 (d, J = 24.8 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 52.0 Hz, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.18 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.35 - 2.19 (m, 1H), 1.87 - 1.52 (m, 5H).
실시예 6: 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온 및 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온의 제조(화합물 6A 및 6B).
Figure pct00089
단계 1: 라세믹 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 6-브로모-3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진(24.00 g, 116.5 mmol), 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-3-아미노-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(43.0 g, 176 mmol), DIEA(60 mL, 344.5 mmol) 및 n-부탄올(360 mL)의 라세믹 혼합물을 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하 120℃에서 2시간 동안 교반한 예열된 오일 조 내에 두었다. 반응 혼합물을 열로부터 제거하고 실온으로 냉각하고 물(700mL)로 희석한 다음, 에틸 아세테이트(3 x 250 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(4:1))로 정제하여, 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 황색 고형분으로서 수득하였다. (24g, 55.8%) [M+H]+=370.
단계 2: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 라세믹 혼합물의 제조.
1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 터트-부틸(1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g, 56.84 mmol) 및 디메틸포름아미드(420 mL)를 질소 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(4.54 g, 113.51 mmol, 60%)을 나누어 첨가하였고, 내부 온도를 질소 하에 0℃로 유지하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 실온이 되게 하였다. 메틸 요오드(7.20 mL, 115.66 mmol)를 교반하면서 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고 물(1 L)로 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(2 x 250 mL) 및 포화 염수(250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/EtOAc(19:1))로 정제하여, 17 g(78%)의 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트, 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트를 라세믹 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=384.
단계 3: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 키랄 분리.
터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-(메틸(3-(메틸티오)-1,2,4-트리아진-6-일)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(11.00 g, 28.684 mmol)의 라세믹 혼합물을 Prep-SFC를 사용하여 개별 이성질체로 정제하였다. 다음의 조건(컬럼: CHIRALPAK IG, 2 * 25 cm, 5 um; 이동상 A: CO2, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유속: 40 mL/분; 구배: 50% B; 250 nm; RT1: 3.99분; RT2: 6.19 분; 주입 부피: 4 ml; 실행 회수: 80;)을 사용하여 황색 고형분으로서 이성질체 1(5.0 g) 및 황색 고형분으로서 이성질체 2(5.2 g)을 수득하였다.
단계 4: 1-(4-브로모-2,5-디메톡시페닐)에탄-1-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 1000 mL의 3구형 둥근 바닥 플라스크에 2-브로모-1,4-디메톡시벤젠(60 g, 276.419 mmol), 디클로로메탄(500 mL, 7865.023 mmol), 및 무수 알루미늄 염화물(55.29 g, 414.628 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 10분에 걸쳐 아세틸 클로라이드(29.59 mL, 414.637 mmol)를 적가하였다. 이어서, 냉각조를 제거하고, 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 200 mL의 물/얼음을 천천히 첨가하여 반응물을 조심스럽게 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 300 mL)으로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켜, 단리 후, 45 g의 미정제 1-(4-브로모-2,5-디메톡시페닐)에탄-1-온을 황색 고형분(m/z:259 (M+H+))으로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 5: 1-(4-브로모-2,5-디히드록시페닐)에탄-1-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 1000 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에, 1-(4-브로모-2,5-디메톡시페닐)에타논(45 g, 173.679 mmol), 및 디클로로메탄(300 mL)을 넣고, 이어서 이를 0℃까지 냉각시킨 다음, 내부 온도를 0℃로 유지하며 교반하면서 보론 트리브로마이드(디클로로메탄 중 1 M, 694 mL, 694 mmol)를 적가하였다. 이어서, 냉각조를 제거하고, 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고, 200 mL의 물/얼음을 천천히 첨가하여 조심스럽게 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 300 mL)으로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켜, 16 g의 1-(4-브로모-2,5-디히드록시페닐)에탄-1-온을 황색 고형분(m/z:231 (M+H+))으로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 6: 1-(4-브로모-2-히드록시-5-(메톡시메톡시)페닐)에탄-1-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 1-(4-브로모-2,5-디히드록시페닐)에탄-1-온(16 g, 69.251 mmol), 탄산칼륨(19.14 g, 138.489 mmol), 및 아세톤(150 mL)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 브로모(메톡시)메탄(8.65 g, 69.251 mmol)을 적가하였다. 냉각조를 제거하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축시켜, 단리 후, 15 g의 1-(4-브로모-2-히드록시-5-(메톡시메톡시)페닐)에탄-1-온을 황색 고형분(m/z:275(M+H+))으로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 7: 7-브로모-2-히드록시-6-(메톡시메톡시)-2-메틸크로만-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 500 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 1-(4-브로모-2-히드록시-5-(메톡시메톡시)페닐)에탄-1-온(15 g, 54.526 mmol), 테트라히드로푸란(200 mL, 2468.598 mmol), 및 수소화 나트륨(5.23 g, 218.1 mmol, 4.00)을 넣었다. 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 건조 에틸 아세테이트(9.61 g, 109.074 mmol)을 적가하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 50 mL의 물/얼음으로 조심스럽게 ??칭하였다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 200 mL)로 추출하고, 유기물을 합치고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축시켜, 12 g의 7-브로모-2-히드록시-6-(메톡시메톡시)-2-메틸크로만-4-온을 황색 고형분(m/z:317(M+H+))로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 8: 7-브로모-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 500-mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 7-브로모-2-히드록시-6-(메톡시메톡시)-2-메틸크로만-4-온(12 g), 프로판-2-올(100 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 배스에 넣고 65℃에서 교반한 다음, Amberlyst-15(15 g)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 65℃에서 추가로 2시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고 냉각시켰다. 혼합물을 여과하고, 생성된 여과물을 진공 하에서 건조될 때까지 농축시키고, 단리 후, 9 g의 7-브로모-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온을 황색 고형분(m/z: 255(M+H+))으로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 9: 7-브로모-6-(메톡시메톡시)-2-메틸-4H-크로멘-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 500-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 7-브로모-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온(9.00 g, 35.285 mmol), 테트라히드로푸란(100 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 다음, 수소화 나트륨(1.69 g, 70.423 mmol)을 0℃에서 나누어 첨가하였다. 이 혼합물에 메톡시메틸 브로마이드(8.82g, 70.57mmol)를 적가한 후, 냉각 조를 제거하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 50 mL의 물/얼음을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 200 mL)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 농축시켜 7 g의 7-브로모-6-(메톡시메톡시)-2-메틸-4H-크로멘-4-온을 황색 고형분(m/z:299(M+H+))로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 10: 6-(메톡시메톡시)-2-메틸-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-4H-크로멘-4-온의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 250-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 7-브로모-6-(메톡시메톡시)-2-메틸-4H-크로멘-4-온(5.00 g, 16.716 mmol), 비스(피나콜라토)디보론(8.49 g, 33.433 mmol), 1,1 -비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(1.22 g, 1.667 mmol), 디옥산(100 mL), 및 칼륨 아세테이트(3.28 g, 33.421 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 100℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트(500 mL)로 희석시키고 물(3 x 50)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔[(에틸 아세테이트/헥산: 1:1), 플레쉬-분취-HPLC(IntelFlash-1): 컬럼: C18; 이동상: ACN(50%), H2O ; 검출기: 254 nm] 상에서 크로마토그래피 처리하고, 단리 후, 2 g의 6-(메톡시메톡시)-2-메틸-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-4H-크로멘-4-온을 황색 고형분으로서 수득하였다. m/z: 265(M+H+).
단계 11: 터트-부틸 (1S,2R,3R,5R)-2-플루오로-3-((3-(6-메톡시-2-메틸-4-옥소-4H-크로멘-7-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 및 터트-부틸 (1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-((3-(6-메톡시-2-메틸-4-옥소-4H-크로멘-7-일)-1,2,4-트리아진-6-일)(메틸)아미노)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 40-mL 둥근 바닥 플라스크에 이성질체 1(150 mg, 0.391 mmol), 구리(I)-3-살리실레이트(250.74 mg, 1.173 mmol), 6-(메톡시메톡시)-2-메틸-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-4H-크로멘-4-온(309.83 mg, 1.173 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(45.20 mg, 0.039 mmol) 및 테트라히드로푸란(10 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 예열된 오일 수조에 넣고, 70℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 열로부터 제거하고, 냉각시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 물(3 x 30)로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시키고, 분취 HPLC로 정제하여, 단리 후, 60 mg의 중간체 11A를 황색 고형분으로서 수득하였다. m/z: 556(M+H+).
전술한 절차에 따라, 이성질체 2(150 mg, 0.391 mmol)로 시작하여, 단리 후, 61 mg의 중간체 11B를 황색 고형분으로서 수득하였다. m/z:556(M+H+).
단계 12: 7-(6-(((1S,2S,3R,5R)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온 및 7-(6-(((1R,2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)(메틸)아미노)-1,2,4-트리아진-3-일)-6-히드록시-2-메틸-4H-크로멘-4-온의 제조(화합물 6A 및 6B).
건조 질소로 퍼징되고 유지된 100-mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에 중간체 11A(100 mg, 0.180 mmol), 디클로로메탄(5 mL), 및 HCl(1,4-디옥산 중 4 M, 5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물의 pH를 수성 중탄산나트륨(1 M)으로 9로 조정하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 30 mL)으로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제 생성물을 다음 조건의 플래시-분취-HPLC(IntelFlash-1)로 정제하였다: 컬럼: 컬럼 C18; 이동상: NH4HCO3(수성)/ MeCN; 구배: 30분 내에 10% B에서 50% B; 검출기: 254 nm, 이를 통해, 단리 후, 10.6 mg의 화합물 6A를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z): [M+1]+ = 412.2 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.46 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.03 - 4.80 (m, 1H), 4.68 (d, J = 52.1 Hz, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.17 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.41 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 2.28 (d, J = 25.2 Hz, 1H), 1.87 - 1.50 (m, 5H).
전술한 절차를 따라, 중간체 11B(100 mg, 0.180 mmol)로 시작하여, 29.3 mg의 화합물 6B를 황색 고형분으로서 수득하였다. (ES, m/z):[M+H]+=412.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.46 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.03 - 4.80 (m, 1H), 4.68 (d, J = 52.1 Hz, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.17 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.41 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 2.28 (d, J = 25.2 Hz, 1H), 1.87 - 1.50 (m, 5H).
실시예 7: 4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1-온의 제조(화합물 66).
Figure pct00090
단계 1: (터트-부톡시카르보닐)아미노 2,2-디메틸프로파노에이트의 제조.
10-L의 4구 둥근 바닥 플라스크에 터트-부틸 N-히드록시카르바메이트(250.00 g, 1877.6 mmol) 및 ACN(5 L)을 첨가하였다. 이어서, 피발산 무수물(384.68 g, 2065.4 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 밤새 가열하며 환류시켰다. 반응물을 주변 온도로 냉각시킨 다음, 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc(7 L)와 포화 수성 중탄산나트륨 용액(5 L) 사이에서 분리시켰다. 유기층을 분리하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액(3 x 2 L)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켜, 350 g(85.8%)의 (터트-부톡시카르보닐)아미노 2,2-디메틸프로파노에이트를 회백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 2: [(2,2-디메틸프로파노일)옥시]아자늄 트리플레이트의 제조.
10 L의 4구 둥근 바닥 플라스크 중, 0℃의 디에틸 에테르(7.0 L) 중 (터트-부톡시카르보닐)아미노 2,2-디메틸프로파노에이트(350.00 g, 1610.9 mmol)에 2,2,2-트리플루오로에탄설폰산(241.75 g, 1610.9 mmol)을 첨가하였다(격렬한 가스 발생이 관찰됨). 반응 혼합물을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음 실온까지 가온시켰다. 1시간 후, 헥산(3 L)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 생성된 고형분을 여과하고, 헥산(3 x 1 L)으로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 300 g(69.69%)의 [(2,2-디메틸프로파노일)옥시] 아자늄 트리플레이트를 회백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 3: 4-브로모-3-메톡시벤조일 염화물의 제조.
5 L의 4구 둥근 바닥 플라스크 중, DCM(3 L) 및 DMF(30.15 mL, 389.5 mmol) 중 4-브로모-3-메톡시벤조산(300 g, 1298.4 mmol)의 교반된 현탁액에 옥살릴 염화물(197.77 g, 1558.1 mmol)을 질소 대기 하 실온에서 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 이를 통해 4-브로모-3-메톡시벤조일 염화물(380 g, 미정제)를 회백색 고형분으로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. [M+H]+=248.9.
단계 4: 브로모-3-메톡시페닐)포름아미도 2,2-디메틸프로파노에이트의 제조.
3 L의 4구 둥근 바닥 플라스크 중, EA (500 mL) 중 [(2,2-디메틸프로파노일)-옥시] 아자늄 트리플레이트(152.00 g, 568.8 mmol)에 물(500 mL) 중 중탄산나트륨(88.00 g, 1047.5 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, EA(1.20 L) 중 4-브로모-3-메톡시벤조일 염화물(120.00 g, 481 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트(2 x 500 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 포화 수성 중탄산나트륨 용액(2 x 500 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 용리액으로서 PE/EA(5/1)를 사용하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 126 g(79.6%)의 (4-브로모-3-메톡시페닐)포름아미도 2,2-디메틸프로파노에이트를 백색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=331.02.
단계 5: 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온의 제조.
3 L의 4구 둥근 바닥 플라스크에 (4-브로모-3-메톡시페닐)포름아미도 2,2-디메틸프로파노에이트(250.00 g, 757.2 mmol), 비닐 아세테이트(99.73 g, 1158.5 mmol), 세숨 아세테이트(45.05 g, 234.7 mmol), 비스[(펜타메틸시클로펜타디에닐)디클로로-로듐](4.68 g, 7.6 mmol) 및 MeOH(2.5 L)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 침전된 고형분을 여과로 수집하고 차가운 디에틸 에테르(3 x 1000 mL)로 세척하였다. 이를 통해 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온(120 g, 62.38%)을 회백색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=254.97.
단계 6: 6-브로모-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온의 제조.
1-L의 3구 둥근 바닥 플라스크 중, THF(1.2 L) 및 DMF(0.5 L) 중 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온(120 g, 472.3 mmol)의 교반 현탁액에 광유 중 60%로서의 수소화 나트륨(28.71 g, 717.9 mmol)을 질소 분위기 하 0℃에서 적가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 메틸 요오드(81.76 g, 524.2 mmol)를 질소 분위기 하 0℃에서 적가하였다. 생성된 용액을 실온까지 가온시켰다. 1시간 후, 반응 혼합물을 차가운 물(2 L)에 붓고 15분 동안 교반하였다. 침전된 고형분을 여과로 수집하고 차가운 물(3 x 1 L)로 세척하였다. 잔류물을 PE/EA(3:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6-브로모-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온(102 g, 85.55%)을 회백색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+ =268.
단계 7: 6-브로모-4-플루오로-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온의 제조.
3구 둥근 바닥 플라스크 중, 아세토니트릴(2 L) 중 6-브로모-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온(102 g, 380.4 mmol)에 셀렉트플루오르(134.77 g, 380.4 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 물(1000 ml)로 반응물을 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 1000 ml)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(1 x 1000 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하였다. 여과물을 감압 하에서 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 PE/EA(1:01)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 6-브로모-4-플루오로-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온(30 g, 27.56%)을 백색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=285.9.
단계 8: 4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-1-온의 제조
디오산(300 mL) 중 6-브로모-4-플루오로-7-메톡시-2-메틸이소퀴놀린-1-온(30 g, 104.9 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(53.26 g, 209.7 mmol), Pd(dppf)Cl2(3.84 g, 5.243 mmol), 및 칼륨 아세테이트(15.44 g, 157.3 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/메탄올(20:01)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-1-온 (19 g, 54.39%)를 백색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=334.2.
단계 9: 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
질소의 불활성 분위기로 퍼징되고 유지된 40 mL의 3구 둥근 바닥 플라스크에, 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-[메틸[3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진-6-일]아미노]-8-아지비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(1.00 g, 2.6 mmol), 4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-1-온(1.74 g, 5.2 mmol), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(1.40 g, 6.5 mmol), Pd(PPh3)4(0.30 g, 0.3 mmol) 및 THF(10.00 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 30 mL의 10중량% 암모니아-물을 첨가하여 반응물을 ??칭하고, 고형분을 여과하였다. 생성된 용액을 3 x 50 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 50 ml의 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다음의 조건을 갖는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.5% NH4HCO3), 30분 내에 25%에서 85% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이를 통해, 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(800 mg, 56.54%)를 황색 고형분으로서 수득하였다.
이 절차를 병렬로 13회 반복하여, 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(12 g)를 황색 고형분으로서 수득하였다. THF(240 mL) 중 합쳐진 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(12 g)를 설프히드릴 작용화된 실리카 PSB-20(1.2 g)과 실온에서 혼합하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하 50℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 이를 여과하고, THF(3 x 100 mL)로 세척하고, 농축시켜 생성물을 수득하였다. 이 절차를 8회 반복하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(12 g)를 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=543.1.
단계 10: 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-히드록시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
3구 둥근 바닥 플라스크 중, DMF(120 mL) 중 터트-부틸 (2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-메톡시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(12 g, 22.1 mmol)에 나트륨 메탄티오레이트(7.75 g, 110.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 LCMS로 모니터링하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 물(100 ml)로 켄칭하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(3 x 200 mL)로 추출하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다음의 조건을 갖는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 CH3CN, 30분 내에 25%에서 85% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이를 통해 터트-부틸(2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-히드록시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(8 g, 68.44%)를 연황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=529.4.
단계 11: 4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1-온의 제조(화합물 66)
에틸 아세테이트(100 mL) 중 터트-부틸(2S,3S,5S)-2-플루오로-3-{[3-(4-플루오로-7-히드록시-2-메틸-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(8 g)의 교반된 용액에 에틸 아세테이트(80 mL) 중 포화 HCl을 질소 대기 하 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨으로 pH 8 내지 9까지 염기화하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(3 x 300 mL)로 추출하고 감압 하에서 농축시켰다. 이를 통해 4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시-2-메틸이소퀴놀린-1-온(화합물 66)(5.3 g, 80.18%)를 연황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=429.2. 1H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 12.57 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.03 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.29 (dddd, J = 34.3, 12.8, 5.8, 2.8 Hz, 1H), 4.74 (dt, J = 51.8, 3.4 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.22 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 2.29 (td, J = 12.7, 3.2 Hz, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 2H), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 1H).
실시예 8: 2-에틸-4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시이소퀴놀린-1-온의 제조(화합물 163).
Figure pct00091
단계 1: 6-브로모-7-메톡시-2-에틸이소퀴놀린-1-온의 제조.
1 L의 3구 둥근 바닥 플라스크 중 THF(2.5 L) 및 DMF( 1 L) 중 6-브로모-7-메톡시-2H-이소퀴놀린-1-온(245.00 g, 964.6 mmol)의 교반된 현탁액에 수소화 나트륨(광유 중 60%)(57.87 g, 1446.9 mmol)을 질소 하 0℃에서 나누어 첨가하였다. 0℃에서 30분 후, 에틸 요오드화물(180.57 g, 1157.5 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 차가운 물(2 L)에 붓고 15분 동안 교반하였다. 여과에 의해 침전된 고형분을 수집하고 차가운 물(3 x 1 L)로 세척하였다. 잔류물을 PE/EA(3:01)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6-브로모-7-메톡시-2-에틸이소퀴놀린-1-온(230 g, 84.56%)을 회백색 고형분으로서 수득하였다.
단계 2: 6-브로모-2-에틸-4-플루오로-7-메톡시이소퀴놀린-1-온의 제조.
아세토니트릴(4560 ml) 중 6-브로모-2-에틸-7-메톡시이소퀴놀린-1-온(230 g, 815.2 mmol)에 셀렉트플루오르(288.80 g, 815.2 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 하 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물(800 ml)로 퀀칭하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(3 x 1000 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(1 x 1000 mL)로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 및 농축을 통해 잔류물을 수득하고, 이를 PE/EA(1:01)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6-브로모-2-에틸-4-플루오로-7-메톡시이소퀴놀린-1-온(120 g, 미정제)을 수득하였다. 미정제 생성물을 다음의 조건을 갖는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% NH4HCO3), 30분 내에 25%에서 85% 구배; 검출기, UV 254 nm, 이를 통해 6-브로모-2-에틸-4-플루오로-7-메톡시이소퀴놀린-1-온(75 g, 30.65%)을 백색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=300.
단계 3: 2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-1-온의 제조.
디옥산(750 mL) 중 6-브로모-2-에틸-4-플루오로-7-메톡시이소퀴놀린-1-온(75 g, 249.9 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(126.92 g, 499.8 mmol), Pd(dppf)Cl2(9.14 g, 12.5 mmol), 칼륨 아세테이트(36.79 g, 374.8 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/메탄올(20:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-1-온(65 g, 74.92%)를 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=348.
단계 4: 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
THF(10 mL) 중 터트-부틸(1R,2S,3S,5S)-2-플루오로-3-[메틸[3-(메틸설파닐)-1,2,4-트리아진-6-일]아미노]-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(1.00 g, 2.6 mmol), 2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-1-온(1.81 g, 5.2 mmol), 구리(I)-3-메틸살리실레이트(1.40 g, 6.5 mmol), Pd(PPh3)4(0.30 g, 0.26 mmol)의 혼합물을 N 분위기 하 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 30 mL의 10% 암모니아/물을 첨가하여 ??칭하고 고형분을 여과하였다. 생성된 용액을 3 x 50 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 50 ml의 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다음의 조건을 갖는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.5% NH4HCO3), 30분 내에 25%에서 85% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이를 통해, 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 0.80 g(55.12%)을 황색 고형분으로서 수득하였다.
이 절차를 20회 병렬로 반복하여 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(22 g)를 황색 고형분으로서 수득하였다. THF(240 mL) 중 합쳐진 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(22 g, 39.55 mmol)를 설프히드릴 작용화된 실리카 PSB-20(2.2 g)과 실온에서 혼합하였다. 생성된 혼합물을 N 분위기 하 50℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 필터 케이크를 THF(3 x 10 mL)로 세척하였다. 이 절차를 8회 반복하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(21 g)를 황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=556.26.
단계 5: 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-히드록시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트의 제조.
DMF(182 mL) 중 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-메톡시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(20 g, 35.931 mmol)에 나트륨 메탄티올레이트(12.59 g, 179.7 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물(200 ml)로 켄칭하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(3 x 200 mL)로 추출하였다. 증발을 통해 잔류물을 수득하고, 이를 다음의 조건을 갖는 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 CH3CN, 30분 내에 25%에서 85% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이를 통해 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-히드록시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(15 g, 76.94%)를 연황색 고형분으로서 수득하였다.[M+H]+=542.2.
단계 6: 2-에틸-4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시이소퀴놀린-1-온의 제조(화합물 163).
에틸 아세테이트(150 mL) 중 터트-부틸 (2S,3S,5S)-3-{[3-(2-에틸-4-플루오로-7-히드록시-1-옥소이소퀴놀린-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일](메틸)아미노}-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트(15 g)의 교반된 용액에 EA(150 mL) 중 HCl(가스)을 N 분위기 하 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨으로 pH 8 내지 9까지 염기화하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(3 x 300 mL)로 추출하고 감압 하에서 농축시켰다. 이를 통해 2-에틸-4-플루오로-6-(6-{[(2R,3S,5S)-2-플루오로-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일](메틸)아미노}-1,2,4-트리아진-3-일)-7-히드록시이소퀴놀린-1-온(화합물 171)(11.6 g)를 연황색 고형분으로서 수득하였다. [M+H]+=443.25. 1H- NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 12.56 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.06 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 5.31 (dddd, J = 34.3, 12.8, 5.8, 2.8 Hz, 1H), 4.86 - 4.61 (m, 1H), 4.03 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.22 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.30 (td, J = 12.7, 3.2 Hz, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.93 - 1.79 (m, 2H), 1.71 (dd, J = 12.2, 5.3 Hz, 1H), 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 9. SMN 정량적 스플라이싱 검정
척수근위축증(SMA) 환자 섬유아세포(GM03813, Coriell)를 96-웰 플레이트에 50,000개 세포/웰로 도말하였다. 도말 직후, 세포에 2.5 μM 내지 0.6 nM(0.1% DMSO) 범위의 농도로 24시간 동안 화합물을 투여하였다. 처리된 세포를 용해시키고, 제조사의 지침에 따라 Fast Advanced Cells-to-Ct 키트(Thermofisher A35378)를 사용하여 cDNA를 합성하였다. qPCR 반응에서 2 uL의 각각의 cDNA를 사용하였다. 아래의 표 4에 나타낸 프라이머와 프로브와 함께 TaqMan?? Fast Advanced 마스터 혼합물[ThermoFisher; 4444965]을 사용해 10 uL 부피의 384-웰 플레이트에서 qPCR 반응물을 제조하였다. Quant Studio 6 qPCR 기기에서 기본 설정으로 반응을 실행하였다.
Figure pct00092
실시예 10. SMN 단백질 검정
척수근위축증(SMA) 환자 섬유아세포를 96-웰 플레이트에 7,000개 세포/웰로 도말하였다. 화합물을 0.6 nM 내지 2.5 mM 범위의 농도로 첨가하고, 48시간 동안 인큐베이션하고, 세포를 100 μL의 용해 완충제로 용해시켰다. 20 μL의 용해물을 PharmOptima(Michigan)에 의해 개발된 Mesoscale Discovery(MSD) 검정에 의한 SMN 단백질 측정에 사용하였다. 1 μg/ml 내지 19.5 pg/ml 범위의 SMN 단백질로 제작된 표준 곡선을 각각의 MSD 플레이트에서 사용하여 각각의 샘플에서 절대 SMN 단백질 양을 계산하였다.
SMN 정량적 스플라이싱 검정 및 단백질 검정 둘 모두에 대한 결과를 아래 표 5에 나타냈다.
Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
SEQUENCE LISTING <110> SKYHAWK THERAPEUTICS, INC. <120> COMPOSITIONS FOR MODULATING SPLICING <130> 51503-740.601 <140> PCT/US2021/044528 <141> 2021-08-04 <150> 63/061,742 <151> 2020-08-05 <160> 9 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 1 gctcacattc cttaaattaa ggagaaa 27 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic probe <400> 2 ctggcataga gcagcactaa atgacaccac 30 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 3 tccagatctg tctgatcgtt tctt 24 <210> 4 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 4 tggctatcat actggctatt atatggaa 28 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic probe <400> 5 ctggcataga gcagcactaa atgacaccac 30 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 6 tccagatctg tctgatcgtt tctt 24 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 7 tcggagagtt ctgggatt 18 <210> 8 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic probe <400> 8 ccgcagctgc aaaatattgt atccaca 27 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 9 aagtgcaatg gtctttaggt 20

Claims (42)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물로서,
    Figure pct00099

    식 중
    Q는 치환 또는 미치환 C1-C7 알킬렌 또는 치환 또는 미치환 C1-C7 헤테로알킬렌이고;
    X는 수소, CH3, 또는 치환 또는 미치환 C3-C6 시클로알킬이고;
    각각의 R1 및 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 CH3이고;
    각각의 R3 및 R4는 독립적으로 수소 또는 할로겐이고;
    각각의 A1, A2, A3, 및 A4는 독립적으로 N, -NRY1-, -O-, -S-, 또는 CRA1이고;
    각각의
    Figure pct00100
    는 독립적으로 단일 또는 이중 결합이고;
    각각의 RA1은 독립적으로 수소, 할로겐, =O, 또는 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬이고;
    각각의 RY1은 독립적으로 수소이거나 치환 또는 미치환 C1-C6 알킬인, 화합물.
  2. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00101
  3. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ib)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00102
  4. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ic)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00103
  5. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Id)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00104
  6. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ie)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00105
  7. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (If)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00106
  8. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ig)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00107
  9. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ih)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00108
  10. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ii)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00109
  11. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ij)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00110
  12. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Ik)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00111
  13. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Il)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00112

  14. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Im)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00113
  15. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (In)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00114
  16. 제1항에 있어서, 화합물은 하기 화학식 (Iaa*)의 구조를 갖는, 화합물.
    Figure pct00115

  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, R3 또는 R4 중 적어도 하나는 불소인, 화합물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 불소이고, R4는 수소인, 화합물.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 수소이고, R4는 불소인, 화합물.
  20. 제1항, 제2항, 제5항, 제6항 또는 제9항 중 어느 한 항에 있어서, A1은 CH, CF, C(CH3), N, O, 또는 C(=O)인, 화합물.
  21. 제1항 내지 제5항, 제8항, 또는 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, A2는 CH, C(CH3), N, 또는 C(CH3)인, 화합물.
  22. 제1항 내지 제4항, 제6항, 제7항, 제10항, 제12항, 또는 제14항 중 어느 한 항에 있어서, A3은 CH, C(CH3), N, 또는 C(CH3)인, 화합물.
  23. 제1항, 제3항, 제10항, 제11항 또는 제15항 중 어느 한 항에 있어서, A4는 CH, C(CH3), N, O, 또는 C(=O)인, 화합물.
  24. 제1항에 있어서, 화합물은 적어도 20개의 탄소 원자, 5개의 질소 원자 및 1개의 불소 원자를 포함하는, 화합물.
  25. 제1항에 있어서, A1, A2 , A3, 및 A4 중 하나는 C(=O)인, 화합물.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 수소 또는 CH3인, 화합물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 수소 또는 CH3인, 화합물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 치환 또는 미치환 C1-C7 알킬렌인, 화합물.
  29. 제28항에 있어서, Q는 치환 또는 미치환 C2-C4 알킬렌인, 화합물.
  30. 제29항에 있어서, Q는 -CH2CH2-인, 화합물.
  31. 제29항에 있어서, Q는 -CH2CH2CH2-인, 화합물.
  32. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00116
    는,
    Figure pct00117

    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, X는 수소인, 화합물.
  34. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, X는 -CH3인, 화합물.
  35. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, X는 치환 또는 미치환 C3-C6 시클로알킬인, 화합물.
  36. 제35항에 있어서, X는 시클로프로필인, 화합물.
  37. 제1항에 있어서, 화합물은 표 1 또는 표 2로부터 선택되는, 화합물.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물.
  39. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는, 약학적 조성물.
  40. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제39항의 약학적 조성물을 세포에 투여하는 단계를 포함하는 스플라이싱을 조절하는 방법으로서, 상기 화합물은 mRNA를 암호화하는 pre-mRNA의 스플라이스 부위 서열에서 스플라이싱을 조절하며, 상기 mRNA는 표적 단백질 또는 기능성 RNA를 암호화하는, 방법.
  41. 질환 또는 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제39항의 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  42. 병태 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제39항의 약학적 조성물의, 용도.
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