JP2023529841A

JP2023529841A - キメラ抗原受容体のための新規コンストラクト

Info

Publication number: JP2023529841A
Application number: JP2022574461A
Authority: JP
Inventors: マイケルクリチンスキー，; ニコラスミヌートロ，; ニコラスアンダーソン，
Original assignee: カリスマセラピューティクスインコーポレイテッド
Priority date: 2020-06-04
Filing date: 2021-06-04
Publication date: 2023-07-12
Also published as: US20220002675A1; US20220000918A1; IL298693A; CA3184807A1; US20220000917A1; CN115867294A; BR112022024228A2; US11312939B2; KR20230042691A; WO2021248061A1; MX2022015062A; EP4161536A1; US11739297B2; AU2021285992A1

Abstract

本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞、及びＣＡＲを含む免疫細胞を使用する方法に関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６３／０３４，８７３号（２０２０年６月４日出願）、同第６３／０４４，９３４号（２０２０年６月２６日出願）、及び同第６３／０８２，５８４号（２０２０年９月２４日出願）の優先権及び利益を主張し、これらの内容は参照により全体として本明細書に援用される。

免疫療法は、がん、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、全身性アミロイドーシス、プリオン病、心疾患、アテローム動脈硬化症、線維症を含めた多くの疾患及び障害に対し検討されているが、これまでに遭遇した機能的制限の対処が依然必要とされている。

そのため、特定の抗原を標的とするために最適化された新たな治療モダリティを開発するニーズが存在する。

１つの態様において、本開示は、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）細胞内ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、修飾免疫細胞を提供し、当該免疫細胞は、マクロファージ、単球、または樹状細胞を含む。様々なＣＡＲが、複数の細胞タイプで複数の適応症の治療用に開発されてきたが、本開示は、単球、マクロファージ、及び／または樹状細胞でＣＡＲ及び／またはエフェクター活性を最大化するには、カスタマイズされたＣＡＲ成分の使用が求められるという認識を包含する。したがって、本開示は、様々な状態（例えば、様々ながん、中枢神経系の疾患または障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、及び／またはＡＬＳ）、心血管疾患、線維症などを含む）のいずれかの治療に特に有用なＣＡＲ、ならびに支持薬剤、部分、及び補助的組成物のいくつかの例を提供する。

別の態様において、本開示は、マクロファージ、単球、または樹状細胞を修飾する方法を提供し、当該方法は、マクロファージ、単球、または樹状細胞に、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）細胞内ドメインとをコードする１つ以上の核酸配列を含む、ウイルスベクターを送達することを含み、当該ウイルスベクターは、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされており、当該修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、（ａ）～（ｃ）を含むキメラ操作受容体（ＣＡＲ）を含み、当該修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクターが送達された当該ＣＡＲを含む修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、ＣＡＲの発現の増加を示す。

いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、感染多重度（ＭＯＩ）：約１～約５０で送達される。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、ＭＯＩ：約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、または約１０で送達される。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクターが送達されたＣＡＲを含む修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、約２０％、約３０％、約４０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上のＣＡＲの発現の増加を示す。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて長い時間期間にわたるＣＡＲ発現を示す。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現の長い時間期間は、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、またはそれ以上ある。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、エフェクター活性の増加を示す。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、腫瘍殺傷能力または食作用の増加を示す。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベクター（例えば、Ａｄ５ベクター、例えば、Ａｄ５ｆ３５））が送達された当該ＣＡＲを含むマクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、Ｍ１表現型への分極化の増加を示さない。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベクター（例えば、Ａｄ５ベクター、例えばＡｄ５ｆ３５））が送達されたＣＡＲを含むマクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、Ｍ１表現型の１つ以上のマーカーの発現の増加を示さない。いくつかの実施形態において、Ｍ１表現型の１つ以上のマーカーは、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＭＨＣＩＩ、ＩＬ－１Ｒ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ｉＮＯＳ、ＳＯＣＳ３、ＣＤ８３、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ６９、ＭＨＣＩ、ＣＤ６４、ＣＤ３２、ＣＤ１６、ＩＬ１Ｒ、ＩＦＩＴファミリーメンバー、またはＩＳＧファミリーメンバーのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、もしくは１８個を含むか、またはそれらである。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、１つ以上の炎症性サイトカインの産生の増加を示す。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症性サイトカインは、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－８、ＩＬ－２、ＩＬ－２３、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＩＬ－８、ＩＬ３３、ＣＣＬ３、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１０、またはＣＣＬ２のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２個を含むか、またはそれらである。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、ＳＩＲＰα活性の低減を示す。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上のエンドヌクレアーゼを用いたＳＩＲＰαの欠失を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のエンドヌクレアーゼは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはメガヌクレアーゼのうちの１つ以上を含むか、またはそれらのうちの１つである。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ、またはＣ２ｃ２を含む。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上の抗ＳＩＲＰα抗体で処置されている。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上の抗ＳＩＲＰα抗体を含む。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、ＳＩＲＰαを下方調節する１つ以上のｓｉＲＮＡを含む。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインは、１つ以上の抗原結合ドメイン及びＦｃＲ細胞外ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＦｃＲ膜貫通ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの細胞内ドメインは、ＦｃＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上は、ヒトＦｃＲドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインは、一緒になって完全長ＦｃＲを構成する。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞膜貫通ドメインは、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞細胞内ドメインは、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインは、１つ以上の抗原結合ドメイン及びトール様受容体（ＴＬＲ）細胞外ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ膜貫通ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの細胞内ドメインは、ＴＬＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上は、ヒトＴＬＲドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインは、一緒になって完全長ＴＬＲを構成する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらに、（ｄ）１つ以上の細胞外リーダードメイン、（ｅ）１つ以上の細胞外ヒンジドメイン、及び（ｆ）１つ以上の細胞内共刺激ドメイン、のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞外リーダードメインは、ＣＤ８細胞外リーダードメインを含む。

いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、ｃｅｎｔｙｒｉｎ、またはｄａｒｐｉｎを含む。

いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞外ヒンジドメインは、ＣＤ２８細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８ａ細胞外ヒンジドメイン、またはＩｇＧ４細胞外ヒンジドメインを含む。

いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ８ａ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＲＬ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＲＬ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲγ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１、ＩＮＳＲ、ｃＭＥＴ、ＭＵＳＫ、ＰＤＧＦＲ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＴＩＥ２、ＴＲＫ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＲＥＭ－１、ＴＲＥＭ－２、ＤＡＰ１２、ＭＲ、ＩＣＯＳ、ＭｙＤ８８、Ｖ／Ｉ／ＬｘＹｘｘＬ／Ｖ、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４５、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、ＰＤ１、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＫＩＲ－２ＤＬ、ＫＩＲ－３ＤＬ、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ３３、ＢＴＬＡ、ＣＤ３２ｂ、ＳＩＲＰｂ、ＣＤ２２、ＰＩＲ－Ｂ、ＬＩＬＲＢ１、４１ＢＢＬ（ＴＮＦＳＦ９）、ＣＤ２７、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、ＣＤ２０９、Ｄｅｃｔｉｎ－２、ＩＬ１Ｒ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ３Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８Ｒ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０Ｒ、ＩＬ１１Ｒ、ＩＬ１２Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ１４Ｒ、ＩＬ１５Ｒ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＦＮａＲ、ＩＦＮｇＲ、ＴＮＦＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２Ｒ、Ｄａｐ１０、ＣＤ３６、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＩＣＯＳＬ、及び／またはＳｙｋ細胞内情報伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの細胞内共刺激ドメインを含む。

別の態様において、本開示は、本明細書に記載の任意の態様または実施形態の免疫細胞を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は医薬的に許容される担体を含む。

別の態様において、本開示は、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）細胞内ドメインとをコードする１つ以上の核酸配列を含む、核酸コンストラクト（例えば、ウイルスベクター）を提供し、当該核酸コンストラクトは、（ａ）～（ｃ）を含むキメラ型抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。いくつかの実施形態において、核酸コンストラクトはさらに、（ｅ）１つ以上の細胞外リーダードメインと、（ｆ）１つ以上の細胞外ヒンジドメインと、（ｇ）１つ以上の細胞内共刺激ドメインと、（ｈ）切断ペプチドと、（ｉ）１つ以上のペプチド薬剤とをコードする、１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、切断ペプチドは、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、もしくはＴ２Ａペプチドであるか、またはそれを含む。

別の態様において、本開示は、本明細書に記載の任意の態様または実施形態の核酸コンストラクトを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は医薬的に許容される担体を含む。

別の態様において、本開示は、本明細書に記載の任意の態様または実施形態の方法によって修飾されたマクロファージ、単球、または樹状細胞を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は医薬的に許容される担体を含む。

別の態様において、本開示は、対象における疾患または障害を治療する方法を提供し、当該方法は、本明細書に記載の任意の態様または実施形態の医薬組成物の治療有効量を対象に送達することを含む。

別の態様において、本開示は、免疫細胞を修飾する方法を提供し、当該方法は、当該免疫細胞に、（ａ）細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）細胞内ドメインとをコードする１つ以上の核酸配列を含む核酸コンストラクトを送達することを含み、修飾免疫細胞は、（ａ）～（ｃ）を含むキメラ操作受容体を含み、修飾免疫細胞はマクロファージ、単球、または樹状細胞を含む。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、ＳＩＲＰα活性の低減を示す。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジ、ＣＤ８膜貫通ドメイン、またはＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインのうちの１、２、３、または４個を含む少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＣＡＲは、ＣＤ８ａシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、（ａ）～（ｃ）をコードする核酸コンストラクトを修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に送達することは、ウイルスベクターで形質導入することを含む。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクターもしくはガンマレトロウイルスベクター）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、アデノ随伴ウイルスベクターは、Ａｄ５ベクター（例えば、Ａｄ５ｆ３５ウイルスベクター）を含むか、またはそれである。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上のエンドヌクレアーゼを用いたＳＩＲＰαの欠失を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のエンドヌクレアーゼは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはメガヌクレアーゼのうちの１つ以上を含むか、またはそれらのうちの１つである。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ、またはＣ２ｃ２のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上の抗ＳＩＲＰα抗体で処置されている。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上の抗ＳＩＲＰα抗体を含む。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、ＳＩＲＰαを下方調節する１つ以上のｓｉＲＮＡを含む。

図面は例示のためのものに過ぎず、限定するためのものではない。

本明細書に記載のコンストラクトを形質移入したマクロファージからのＨＥＲ２発現を示すグラフである（図８～図４４を参照）。生細胞パーセンテージ及びＣＡＲ：ＨＥＲ２発現が、選択された試料についてドットプロットで示されている。本明細書に記載のコンストラクトを形質移入したマクロファージからのＨＥＲ２発現を示すグラフである（図８～図４４を参照）。生細胞パーセンテージ及びＣＡＲ：ＨＥＲ２発現が、全ての試料（図１Ｂ）についてドットプロットで示されている。

本明細書に記載のコンストラクトを形質移入した単球からのＨＥＲ２発現を示すグラフである（図８～図４４参照）。選択された試料における生細胞パーセンテージ及びＣＡＲ：ＨＥＲ２発現がドットプロットで示されている。本明細書に記載のコンストラクトを形質移入した単球からのＨＥＲ２発現を示すグラフである（図８～図４４参照）。全ての試料における生細胞パーセンテージ及びＣＡＲ：ＨＥＲ２発現がドットプロットで示されている。本明細書に記載のコンストラクトを形質移入した単球からのＨＥＲ２発現を示すグラフである（図８～図４４参照）。全ての試料における生細胞パーセンテージ及びＣＡＲ：ＨＥＲ２発現がドットプロットで示されている。

ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ発現、ＣＡＲ＋パーセンテージ、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ発現、ＣＡＲ＋パーセンテージ、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ発現、ＣＡＲ＋パーセンテージ、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ発現、ＣＡＲ＋パーセンテージ、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。

キメラＦｃＲ（ＣＦＲ）及びトール様抗原受容体（ＴＡＲ）の発現、ＣＦＲ＋及びＴＡＲ＋のパーセンテージ、ならびにＣＦＲ及びＴＡＲマクロファージの生存パーセンテージを示すグラフである。キメラＦｃＲ（ＣＦＲ）及びトール様抗原受容体（ＴＡＲ）の発現、ＣＦＲ＋及びＴＡＲ＋のパーセンテージ、ならびにＣＦＲ及びＴＡＲマクロファージの生存パーセンテージを示すグラフである。キメラＦｃＲ（ＣＦＲ）及びトール様抗原受容体（ＴＡＲ）の発現、ＣＦＲ＋及びＴＡＲ＋のパーセンテージ、ならびにＣＦＲ及びＴＡＲマクロファージの生存パーセンテージを示すグラフである。

マクロファージ及びＣＡＲマクロファージをＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）とともにインキュベートした後の腫瘍殺傷能力を示すグラフである。マクロファージ及びＣＡＲマクロファージをＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）とともにインキュベートした後のＭ１マーカー及びＭ２マーカーの発現の誘導を示すグラフである。

マクロファージ及びＣＡＲマクロファージを４－１ＢＢとともにインキュベートした後の腫瘍殺傷能力を示すグラフである。マクロファージ及びＣＡＲマクロファージを４－１ＢＢとともにインキュベートした後のＭ１マーカー及びＭ２マーカーの発現の誘導を示すグラフである。

マクロファージ及びＣＡＲマクロファージを４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）とともにインキュベートした後の殺傷能力を示すグラフである。マクロファージ及びＣＡＲマクロファージを４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）とともにインキュベートした後のＭ１マーカー及びＭ２マーカーの発現の誘導を示すグラフである。

上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。上記の図に示されているものを含めた例示的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの模式図である。

ＣＡＲ０２９、ＣＡＲ０６１、ＣＡＲ０６２、ＣＡＲ０６３、ＣＡＲ０６４、ＣＡＲ０７１、ＣＡＲ０７２、ＣＡＲ０７４、ＣＡＲ０７４、ＣＡＲ０７７、ＣＡＲ０７８、ＣＡＲ０７９、ＣＡＲ０８０、及びＣＡＲ０８１を発現するＣＡＲマクロファージの生存パーセンテージを示すグラフである。

ＣＡＲ０２９、ＣＡＲ０６１、ＣＡＲ０６２、ＣＡＲ０６３、ＣＡＲ０６４、ＣＡＲ０７１、ＣＡＲ０７２、ＣＡＲ０７４、ＣＡＲ０７４、ＣＡＲ０７７、ＣＡＲ０７８、ＣＡＲ０７９、ＣＡＲ０８０、及びＣＡＲ０８１を形質移入したマクロファージのＣＡＲ発現のパーセンテージを示すグラフである。

ＣＡＲ０２９、ＣＡＲ０６１、ＣＡＲ０６２、ＣＡＲ０６３、ＣＡＲ０６４、ＣＡＲ０７１、ＣＡＲ０７２、ＣＡＲ０７４、ＣＡＲ０７４、ＣＡＲ０７７、ＣＡＲ０７８、ＣＡＲ０７９、ＣＡＲ０８０、及びＣＡＲ０８１を形質移入したマクロファージのＣＡＲ発現の強度（ＭＦＩ）を示すグラフである。

サイトカインで処置した後のＣＡＲマクロファージの生存率を説明する例示的なグラフを示している。サイトカインで処置した後の示された表面マーカー平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。サイトカインで処置した後のＣＡＲマクロファージの生存率を説明する例示的なグラフを示している。サイトカインで処置した後の示された表面マーカー平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。サイトカインで処置した後の示された表面マーカー平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。サイトカインで処置した後の示された表面マーカー平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。

インターフェロンサイトカインで処置したマクロファージにおけるＣＡＲ発現の持続性を説明する例示的なグラフを示している。

ＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し様々なＩＦＮ－β濃度で処置した後のＣＡＲマクロファージの生存率、ＣＡＲ発現、及び平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し様々なＩＦＮ－β濃度で処置した後のＭ１マーカーの誘導を説明する例示的なグラフを示している。

ＣＡＲｍＲＮＡを用いてエレクトロポレーションしＩＦＮ－βで処置してから２日後のＣＡＲマクロファージＭ２及びＭ１マーカー平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡを用いてエレクトロポレーションしＩＦＮ－βで処置してから７日後のＣＡＲマクロファージＭ２及びＭ１マーカー平均蛍光強度を説明する例示的なグラフを示している。

ＣＡＲマクロファージの抗腫瘍機能を説明する例示的なグラフを示している。様々な濃度のＩＦＮ－βによるプライミングありまたはなしでＣＡＲｍＲＮＡを形質移入したマクロファージの結果を示している。ＣＡＲマクロファージの抗腫瘍機能を説明する例示的なグラフを示している。様々な修飾を含むＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し、ＩＦＮ－βで処置したマクロファージからの結果を示している。ＣＡＲマクロファージの抗腫瘍機能を説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し、インターフェロンサイトカインで処置したマクロファージからの結果を示している。

ＣＡＲマクロファージをインターフェロンで処置することがサイトカイン分泌に及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。

マクロファージにおけるＣＡＲｍＲＮＡの持続性及びＣＡＲマクロファージが機能する持続時間にインターフェロンによる処置が及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。インターフェロンサイトカインで処置したＣＡＲマクロファージにおける生存率及びＣＡＲ発現の試験結果を示している。マクロファージにおけるＣＡＲｍＲＮＡの持続性及びＣＡＲマクロファージが機能する持続時間にインターフェロンによる処置が及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたマクロファージとともに培養し、インターフェロンサイトカインで処置したがん細胞における腫瘍成長結果を示している。マクロファージにおけるＣＡＲｍＲＮＡの持続性及びＣＡＲマクロファージが機能する持続時間にインターフェロンによる処置が及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたマクロファージとともに培養し、インターフェロンサイトカインで処置したがん細胞における腫瘍成長結果を示している。

マクロファージの生存率、ＣＡＲ発現、Ｍ１マーカー発現、及びＣＡＲマクロファージの機能性に及ぼすインターフェロンによる処置の効果について説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し、インターフェロンで処置したマクロファージの生存率、ＣＡＲ発現、及びＭ１マーカー発現を示している。マクロファージの生存率、ＣＡＲ発現、Ｍ１マーカー発現、及びＣＡＲマクロファージの機能性に及ぼすインターフェロンによる処置の効果について説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたマクロファージとともに培養し、インターフェロンサイトカインで処置したがん細胞における腫瘍殺傷結果を示している。マクロファージの生存率、ＣＡＲ発現、Ｍ１マーカー発現、及びＣＡＲマクロファージの機能性に及ぼすインターフェロンによる処置の効果について説明する例示的なグラフを示している。ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたマクロファージとともに培養し、インターフェロンサイトカインで処置したがん細胞における腫瘍殺傷結果を示している。

ＩＦＮ－γが形質移入マクロファージに及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。

ＲＮａｓｅＬ阻害剤がＣＡＲマクロファージに及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。ＩＦＮ－γ及びＲＮａｓｅＬ阻害剤スニチニブで処置した後の形質移入マクロファージにおけるｍＣｈｅｒｒｙ発現を示している。ＲＮａｓｅＬ阻害剤がＣＡＲマクロファージに及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。スニチニブで処置したＣＡＲマクロファージで培養したがん細胞における腫瘍成長曲線を示している。ＲＮａｓｅＬ阻害剤がＣＡＲマクロファージに及ぼす効果について説明する例示的なグラフを示している。スニチニブで処置したＣＡＲマクロファージの腫瘍殺傷活性を示している。

ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡ及びＲＮａｓｅＬ阻害剤ＡＢＣＥ１をコードするｍＲＮＡを同時形質移入したマクロファージの生存率及びｍＣｈｅｒｒｙ発現について説明する例示的なグラフを示している。

ＣＤ２８ヒンジドメインを含む例示的なＣＡＲコンストラクトの模式図である。

ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ＋パーセンテージ、ＣＡＲ発現、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ＋パーセンテージ、ＣＡＲ発現、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ＋パーセンテージ、ＣＡＲ発現、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ＋パーセンテージ、ＣＡＲ発現、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。ＣＡＲマクロファージのＣＡＲ＋パーセンテージ、ＣＡＲ発現、生存パーセンテージ、及び腫瘍殺傷能力を示すグラフである。

ＣＡＲマクロファージによるＴＮＦα及びＩＬ６の分泌を示すグラフである。

例示的なＣＡＲコンストラクトの模式図である。

ＭＯＩ：０～５０においてＶＰＸレンチウイルスのありまたはなしで形質導入したマクロファージにおけるＣＡＲコンストラクト（抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８膜貫通ドメインと、及びＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとを含むＣＴＸ＿００１；図８）の発現を示すグラフである。非形質導入（ＵＴＤ）マクロファージを対照として用いた。

ＭＯＩ：１、ＭＯＩ：５、及びＭＯＩ：１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおける３０日間にわたるＣＴＸ＿００１の生存率（生存％）及びＣＡＲ発現（ＣＡＲ％）を示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：１、ＭＯＩ；５、及びＭＯＩ：１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおける、形質導入から４、７、１５、２２、及び２９日後のαトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いたＣＴＸ＿００１の表面タンパク質発現を示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：１、ＭＯＩ：５、及びＭＯＩ：１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおける、３０日にわたるＣＴＸ＿００１の生存率（生存）及びＣＡＲ発現（ＣＡＲ＋）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：１、ＭＯＩ：５、及びＭＯＩ：１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおける、４日後及び７日後のＣＴＸ＿００１の殺傷機能を示す一連のグラフである。エフェクターマクロファージ：標的腫瘍細胞の異なる比（Ｅ：Ｔ）は、４：１、２：１、１：１、及び１：２とした。積算強度は腫瘍負荷を示す。腫瘍細胞及びマクロファージの共培養から７２時間後の結果をグラフにしている。ＵＴＤマクロファージ及びマクロファージなしのＡＵ５６５ＨＥＲ２＋乳癌細胞を対照とした。

ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおけるＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３（抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８膜貫通ドメインとを含むＣＡＲ；図１０）の表面タンパク質発現を、αトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いた評価において示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで導入したマクロファージにおけるＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３（抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８膜貫通ドメインとを含むＣＡＲ；図１０）の生存率（生存％）及びＣＡＲ発現（ＣＡＲ％）を示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおけるＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３の生存率（生存）及びＣＡＲ発現（ＣＡＲ＋）（αトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いて評価）を示すＭＦＩの一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージにおける、Ｍ２マクロファージマーカー（ＣＤ１６３及びＣＤ２０６）ならびにＭ１マクロファージマーカー（ＣＤ８０及びＣＤ８６）のＭＦＩの一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＣＤ８０及びＣＤ８６を用いた評価において、ＶＰＸ－レンチウイルスを形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージのＭ１分極化を、Ａｄ５ｆ３５を形質導入したものと比べて示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＳＫＯＶ３卵巣癌細胞に対しＶＰＸレンチウイルスまたはＡｄ５ｆ３５で形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージにおける、形質導入から７日後及び形質導入から２１日後の殺傷機能を示す一連のグラフである。Ｅ：Ｔの比は４：１とした。ＵＴＤマクロファージ及びマクロファージなしのＳＫＯＶ３細胞を対照として使用した。

ＡＵ５６５細胞に対し、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージの７２時間にわたる殺傷機能を示す一連のグラフである。Ｅ：Ｔの異なる比は４：１及び１：２とした。ＵＴＤマクロファージ及びマクロファージなしのＡＵ５６５細胞を対照として使用した。

ＳＫＯＶ３卵巣癌細胞に対し、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージの殺傷機能を示す一連のグラフである。Ｅ：Ｔの比は４：１とした。ＵＴＤマクロファージ及びマクロファージなしのＳＫＯＶ３細胞を対照として使用した。

ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入し、プレート結合ＨＥＲ２のありまたはなしで２４時間培養したＣＴＸ００１またはＣＴＸ＿００３マクロファージによるＴＮＦα及びＩＬ－６の産生を示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおける、２１日にわたるＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３の生存率（生存％）及びＣＡＲ発現（ＣＡＲ＋％）を示す一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したマクロファージにおける、２１日にわたるＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３の生存率（生存）及びＣＡＲ発現（ＣＡＲ＋）（αトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いて評価）を示すＭＦＩの一連のグラフである。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＡＵ５６５細胞に対し、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージにおける、形質導入の２１日後から７２時間にわたる殺傷機能を示す一連のグラフである。異なるＥ：Ｔの比は４：１及び１：２とした。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＳＫＯＶ３細胞に対し、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージにおける、形質導入の２１日後から７２時間にわたる殺傷機能を示す一連のグラフである。Ｅ：Ｔの比は４：１とした。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

ＭＯＩ：２、５、または１０においてＶＰＸレンチウイルスを用いて、ＣＴＸ＿００１によりＣＤ１４＋単球を形質導入した後の生存率を示す一連のグラフである。Ａｄ５ｆ３５形質導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを比較対象として示している。ＵＴＤマクロファージもＣＡＲ発現ヒストグラムの対照として使用した。ＭＯＩ：２、５、または１０においてＶＰＸレンチウイルスを用いて、ＣＴＸ＿００１によりＣＤ１４＋単球を形質導入した後のＣＡＲ発現パーセンテージを示す一連のグラフである。Ａｄ５ｆ３５形質導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを比較対象として示している。ＵＴＤマクロファージもＣＡＲ発現ヒストグラムの対照として使用した。ＭＯＩ：２、５、または１０においてＶＰＸレンチウイルスを用いて、ＣＴＸ＿００１によりＣＤ１４＋単球を形質導入した後のＣＡＲ発現のＭＦＩを示す一連のグラフである。Ａｄ５ｆ３５形質導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを比較対象として示している。ＵＴＤマクロファージもＣＡＲ発現ヒストグラムの対照として使用した。ＭＯＩ：２、５、または１０においてＶＰＸレンチウイルスを用いて、ＣＴＸ＿００１によりＣＤ１４＋単球を形質導入した後のＣＡＲ発現ヒストグラムを示す一連のグラフである。Ａｄ５ｆ３５形質導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを比較対象として示している。ＵＴＤマクロファージもＣＡＲ発現ヒストグラムの対照として使用した。

ＳＩＲＰα－ＡＰＣ％ＰＯＳによって評価した２例のドナーのＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。リボ核タンパク質（ＲＮＰ）濃度は、フローサイトメトリー以外は１６５、３１２、６２５及び１２５０ｎＭとし、フローサイトメトリーでは３１２及び１２５０ｎｍとした。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージまたはＣａｓ９のみを対照として使用した。ＭＦＩによって評価した２例のドナーのＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。リボ核タンパク質（ＲＮＰ）濃度は、フローサイトメトリー以外は１６５、３１２、６２５及び１２５０ｎＭとし、フローサイトメトリーでは３１２及び１２５０ｎｍとした。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージまたはＣａｓ９のみを対照として使用した。フローサイトメトリーによって評価した２例のドナーのＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。リボ核タンパク質（ＲＮＰ）濃度は、フローサイトメトリー以外は１６５、３１２、６２５及び１２５０ｎＭとし、フローサイトメトリーでは３１２及び１２５０ｎｍとした。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージまたはＣａｓ９のみを対照として使用した。細胞生存率によって評価した２例のドナーのＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。リボ核タンパク質（ＲＮＰ）濃度は、フローサイトメトリー以外は１６５、３１２、６２５及び１２５０ｎＭとし、フローサイトメトリーでは３１２及び１２５０ｎｍとした。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージまたはＣａｓ９のみを対照として使用した。

フローサイトメトリーを用いて、ＳＩＲＰαを標的とするＣａｓ９及びｇＲＮＡによるＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。フローサイトメトリーを用いて、ＳＩＲＰαノックアウトマクロファージにおけるＣＴＸ＿００１の発現を示す一連のグラフである。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。ＳＩＲＰαノックアウトＣＴＸ＿００１マクロファージによる１２時間にわたるＳＫＯＶ－３卵巣癌細胞の食作用を示すグラフである。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。曲線下面積として定量化し、１２時間にわたり測定した合計食作用を示すグラフである。無処置（ＮＴ）ＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

フローサイトメトリーを用いて、Ｃａｓ９及びＳＩＲＰαを標的とするｇＲＮＡによるＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。フローサイトメトリーを用いて、ＳＩＲＰαノックアウトマクロファージにおけるＣＴＸ＿００１の発現を示す一連のグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。ＳＩＲＰαノックアウトＣＴＸ＿００１マクロファージによる１２時間にわたるＨＣＣ－１９５４ヒト乳癌細胞の食作用を示す一連のグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。曲線下面積として定量化し、１２時間にわたり測定した合計食作用を示す一連のグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

フローサイトメトリーを用いて、ＳＩＲＰαを標的とするＣａｓ９及びｇＲＮＡによる異なるドナー細胞からのＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示す一連のグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。フローサイトメトリーを用いて、ＳＩＲＰαノックアウトマクロファージにおけるＣＴＸ＿００１の発現を示す一連のグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。ＳＩＲＰαノックアウトＣＴＸ＿００１マクロファージが、ｎｕｃｌｉｇｈｔ緑色蛍光タンパク質を発現するＳＫＯＶ－３細胞を殺傷していることを正規化腫瘍負荷によって２４時間にわたり示すグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。標的腫瘍細胞の５０％クリアランスに要する時間に基づく腫瘍殺傷動態を示すグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。１２時間にわたる合計食作用を示すグラフである。ＮＴＣＡＲマクロファージ、ｇＲＮＡのみ、及びＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

定義
本発明をより容易に理解するため、最初に、ある特定の用語を以下で定義する。以下の用語及びその他の用語のさらなる定義については、本明細書全体にわたって記載されている。本発明の背景を説明し、その実施に関しさらなる詳細を提供するために本明細書で参照されている刊行物及びその他の参考資料は、参照により本明細書に援用される。

本明細書では、冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法的目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「エレメント（ａｎｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つのエレメントまたは複数のエレメントを意味する。

およそまたは約：本明細書で使用する場合、関心対象の１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記述された参照値と同等の値を意味する。ある特定の実施形態において、「およそ」または「約」という用語は、別段の明記がない限り、または文脈から明らかでない限り、記載された基準値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）に２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下に入る値の範囲（このような数字が可能な値の１００％を超える場合を除く）を指す。

活性化：本明細書で使用する場合、「活性化」という用語は、検出可能な細胞増殖を誘導するために十分に刺激された、またはエフェクター機能を発揮するために刺激された、細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）の状態を指す。また、活性化は、誘導されたサイトカイン産生、サイトカイン分泌、食作用、細胞シグナル伝達（例えば、遺伝子発現の変化）、標的細胞殺傷、代謝変化、炎症メディエーターの産生、増殖、エピジェネティック再プログラミング、マクロファージの表現型スイッチング（例えば、Ｍ１分極化）、腫瘍促進もしくはＭ２マクロファージの抑制、腫瘍促進もしくはＭ２マクロファージの表現型スイッチング、及び／または抗原のプロセシング及び提示にも関連し得る。

活性化単球／マクロファージ／樹状細胞：本明細書で使用する場合、「活性化単球／マクロファージ／樹状細胞」という用語は、とりわけ、細胞分裂を経ているか、またはエフェクター機能を発揮している単球／マクロファージ／樹状細胞を指す。「活性化単球／マクロファージ／樹状細胞」という用語は、とりわけ、エフェクター機能を実施しているか、または静止状態では見られない任意の活性（食作用、サイトカイン分泌、増殖、遺伝子発現の変化、代謝変化、炎症メディエーターの産生、増殖、エピジェネティック再プログラミング、マクロファージの表現型スイッチング（例えば、Ｍ１分極化）、腫瘍促進またはＭ２マクロファージの抑制、腫瘍促進またはＭ２マクロファージの表現型スイッチング、及びその他の機能を含む）を発揮している細胞を指す。

薬剤：本明細書で使用する場合、「薬剤」（または「生物学的薬剤」または「治療薬剤」）という用語は、本明細書に記載の修飾細胞によって発現、放出、分泌、または標的に送達することができる分子を指す。薬剤としては、限定されるものではないが、核酸、抗生物質、抗炎症剤、抗体またはそのフラグメント、抗体薬剤またはそのフラグメント、成長因子、サイトカイン、酵素、タンパク質、ペプチド、融合タンパク質、合成分子、有機分子（例えば、小分子）、炭水化物、脂質、ホルモン、ミクロソーム、これらの誘導体またはバリエーション、これらのうちの１つ以上を含む製剤または組成物、及びこれらの任意の組合せを含む。薬剤は、標的または標的細胞上に存在する任意の細胞部分、例えば、受容体、抗原決定基、または他の結合部位に結合することができる。薬剤は、細胞内に拡散または輸送することができ、細胞内で作用することができる。

抗体：本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、特定の標的抗原に対する特異的結合を付与するのに十分なカノニカル免疫グロブリン配列エレメントを含むポリペプチドを指す。当技術分野で知られているように、自然界で産生されるインタクトな抗体は、２つの同一な重鎖ポリペプチド（それぞれ約５０ｋＤ）と、２つの同一な軽鎖ポリペプチド（それぞれ２５ｋＤ）とを含むおよそ１５０ｋＤの四量体の作用物質であり、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは互いに会合して、一般に「Ｙ字型」構造と称される構造をもたらす。各重鎖は、少なくとも４つのドメイン（それぞれ約１１０アミノ酸長）を含み、アミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ構造の先端に位置する）の次に３つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びカルボキシ末端側のＣＨ３（Ｙ字の幹部分の底部にある）が続く。「スイッチ」として知られている短い領域は、重鎖可変領域及び定常領域を接続する。「ヒンジ」は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを抗体の残部に接続する。このヒンジ領域における２つのジスルフィド結合は、インタクトな抗体内の２つの重鎖ポリペプチドを相互に接続する。各軽鎖は２つのドメインを含み、アミノ末端側の可変（ＶＬ）ドメインの次にカルボキシ末端側の定常（ＣＬ）ドメインが続き、これらは別の「スイッチ」により互いから分離されている。インタクトな抗体の四量体は２つの重鎖－軽鎖二量体を含み、重鎖及び軽鎖は１つのジスルフィド結合によって互いに結合し、２つの他のジスルフィド結合は重鎖ヒンジ領域を互いに接続し、その結果二量体が互いに接続して四量体が形成される。また、天然に産生された抗体は、典型的にはＣＨ２ドメイン上で、グリコシル化もされている。天然抗体内の各ドメインは、「免疫グロブリンフォールド」によって特徴付けられる構造を有し、この免疫グロブリンフォールドは、圧縮された逆平行ベータバレル内で互いに対し詰め込まれた２つのベータシート（例えば、３、４、または５ストランドシート）から形成されている。各可変ドメインは、「相補性決定領域」（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）として知られている３つの超可変ループと、ある程度インバリアントな４つの「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）とを含む。天然抗体がフォールディングするとき、ＦＲ領域は、ドメインに構造フレームワークをもたらすベータシートを形成し、重鎖及び軽鎖の両方からのＣＤＲループ領域は三次元空間内で一緒になって、Ｙ構造の先端に位置する１つの超可変抗原結合部位を創出する。天然存在の抗体のＦｃ領域は、補体システムのエレメントに結合し、さらにエフェクター細胞（例えば、細胞傷害性を媒介するエフェクター細胞を含む）上の受容体にも結合する。Ｆｃ領域のＦｃ受容体に対する親和性及び／または他の結合特性は、グリコシル化または他の修飾によって調節することができる。いくつかの実施形態において、本発明に従って（例えば、ＣＡＲの成分として）産生及び／または利用される抗体は、グリコシル化Ｆｃドメイン（修飾または操作グリコシル化を伴うＦｃドメインを含む）を含む。いくつかの実施形態において、天然抗体に見られるような十分な免疫グロブリンドメイン配列を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体は、このようなポリペプチドが天然に産生される（例えば、抗原に反応する生物により生成される）か、あるいは組換え操作、化学合成、または他の人工システムもしくは方法論によって産生されるかにかかわらず、「抗体」と称することができ、及び／または「抗体」として使用することができる。いくつかの実施形態において、抗体はポリクローナルである。いくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナルである。いくつかの実施形態において、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類、またはヒトの抗体に特徴的な定常領域配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体配列エレメントは、当技術分野で知られているように、ヒト化、霊長類化、キメラなどである。さらに、本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、適切な実施形態において、（別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り）代替的提示における抗体の構造的及び機能的特徴を利用するための、当技術分野で知られているか、または開発されたコンストラクトまたはフォーマットのいずれかを指すことができる。例えば、いくつかの実施形態において、本発明に従って利用される抗体は、限定されるものではないが、インタクトなＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体；二重または多重特異的抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）；抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、及び単離されたＣＤＲまたはそのセット；単鎖Ｆｖ；ポリペプチド－Ｆｃ融合体；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメントなどのサメ単一ドメイン抗体）；ラクダ様（ｃａｍｅｌｏｉｄ）抗体；マスク抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））；ＳｍａｌｌＭｏｄｕｌａｒＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（「ＳＭＩＰ（商標）」）；単鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される形式をとる。いくつかの実施形態において、抗体は、天然産生された場合に有するであろう共有結合的修飾（例えば、グリカンの付着）が欠如している場合がある。いくつかの実施形態において、抗体は、共有結合的修飾（例えば、グリカンの付着）、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療部分、触媒的部分等］、または他のペンダント基［例えば、ポリ－エチレングリコール等］を含むことができる。

抗体薬剤：本明細書で使用する場合、「抗体薬剤」という用語は、特定の抗原に特異的に結合する薬剤を指す。いくつかの実施形態において、当該用語は、特異的結合を付与するのに十分な免疫グロブリン構造エレメントを含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。例示的な抗体薬剤としては、限定されるものではないが、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、マウス、ウサギ、霊長類、またはヒト抗体に特徴的な１つ以上の定常領域配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、当技術分野で知られているように、ヒト化、霊長類化、キメラ等の１つ以上の配列エレメントを含むことができる。多くの実施形態において、「抗体薬剤」という用語は、代替的提示における抗体の構造的及び機能的特徴を利用するための、当技術分野で知られているか、または開発されたコンストラクトまたはフォーマットのうちの１つ以上を指すために使用される。例えば、いくつかの実施形態において、本発明に従って利用される抗体薬剤は、限定されるものではないが、インタクトなＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体；二重または多重特異的抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）；抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、及び単離されたＣＤＲまたはそのセット；単鎖Ｆｖ；ポリペプチド－Ｆｃ融合体；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメントなどのサメ単一ドメイン抗体）；ラクダ様（ｃａｍｅｌｏｉｄ）抗体；マスク抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））；ＳｍａｌｌＭｏｄｕｌａｒＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（「ＳＭＩＰ（商標）」）；単鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される形式をとる。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、天然産生された場合に有するであろう共有結合的修飾（例えば、グリカンの付着）が欠如していることがある。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など］、または他のペンダント基［例えば、ポリ－エチレングリコールなど］を含むことができる。多くの実施形態において、抗体薬剤は、当業者により相補性決定領域（ＣＤＲ）と認識される１つ以上の構造的レメントを含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、またはこのようなポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、参照抗体に見出されるＣＤＲと実質的に同一である少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ及び／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、またはこのようなポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、配列が同一である点において、または参照ＣＤＲに比べて１～５個のアミノ酸置換を含むという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲに対し少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を示すという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲに対し少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を示すという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲに比べて、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１個のアミノ酸が欠失、付加、または置換されているが、それ以外では含まれるＣＤＲが参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲに比べて、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が欠失、付加、または置換されているが、それ以外では含まれるＣＤＲが参照ＣＤＲと同一のアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲに比べて、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１個のアミノ酸が置換されているが、それ以外では含まれるＣＤＲが参照ＣＤＲと同一のアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲに実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲに比べて、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が欠失、付加、または置換されているが、それ以外では含まれるＣＤＲが参照ＣＤＲと同一のアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、当業者により免疫グロブリン可変ドメインと認識される構造エレメントを含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、またはこのようなポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であるか、または大部分が相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、当業者により免疫グロブリン可変ドメインと認識される構造エレメントを含むアミノ酸配列を有するポリペプチドではない、及び／またはこのようなポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、免疫グロブリン構造エレメント（例えば、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む受容体または他の天然に存在する分子）を含まない分子または組成物であるか、またはそれを含むことができる。

抗体フラグメント：本明細書で使用する場合、「抗体フラグメント」という用語は、インタクトな抗体の一部を指し、またインタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、線状抗体、ｓｃＦｖ抗体、ならびに抗体フラグメント及びそのヒト化バージョンから形成される多特異性抗体が挙げられる。

抗体重鎖：本明細書で使用する場合、「抗体重鎖」という用語は、天然の立体構造で全ての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうちの大きい方を指す。

抗体軽鎖：本明細書で使用する場合、「抗体軽鎖」という用語は、天然の立体構造で全ての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。

合成抗体：本明細書で使用する場合、「合成抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技術を用いて生成される抗体（例えば、本明細書に記載のバクテリオファージが発現する抗体）を指す。また、この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成された抗体を意味するように解釈されるべきであり、このＤＮＡ分子は、抗体タンパク質、または抗体を特定するアミノ酸配列を発現し、このＤＮＡまたはアミノ酸配列は、当技術分野で入手可能であり周知されている合成ＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。

抗原：本明細書で使用する場合、「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘発可能な分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、特定の免疫適格細胞の活性化のいずれかまたは両方に関係し得る。当業者であれば、実質的に全てのタンパク質またはペプチドを含む、任意の巨大分子が抗原として機能し得ることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えＤＮＡまたはゲノムＤＮＡから導出することができる。当業者は、免疫応答を引き出すタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、当該用語が本明細書で使用されるように「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、抗原は遺伝子の完全長ヌクレオチド配列のみによってコードされなくてもよいことを理解するであろう。本発明が、限定されるものではないが、複数の遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用を含むこと、及びこれらのヌクレオチド配列が、所望の免疫応答を引き出すように様々な組合せで配置されることは容易に明らかである。さらに、当業者であれば、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原が、合成により生成することも、生物学的試料から導出することもできることは容易に明らかである。このような生物学的試料としては、限定されるものではないが、組織試料、腫瘍試料、細胞、または生体液を挙げることができる。

抗腫瘍効果：本明細書で使用する場合、「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、余命の増加、またはがん性状態に関連する様々な生理学的症状の改善によって明示され得る生物学的効果を指す。また「抗腫瘍効果」は、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、及び抗体の腫瘍の発生を初めから予防するという能力によっても明示され得る。

自己由来：本明細書で使用する場合、「自己由来」という用語は、ある個体に由来する任意の材料であって、後に同じ個体に再導入される材料を指す。

同種異系：本明細書で使用する場合、「同種異系」という用語は、同じ種の異なる動物に由来する移植片（例えば、細胞の集団）を指す。

異種：本明細書で使用する場合、「異種」という用語は、異なる種の動物に由来する移植片（例えば、細胞の集団）を指す。

がん：本明細書で使用する場合、「がん」という用語は、異常な細胞の急速かつ無制御な成長を特徴とする疾患を指す。がん細胞は局所的に拡散する場合も、血流及びリンパ系を介して身体の他の部位に拡散する場合もある。様々ながんの例としては、限定されるものではないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵臓癌、大腸癌、腎臓癌、肝臓癌、脳腫瘍、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。ある特定の実施形態において、がんは髄様甲状腺癌である。

保存的配列の修飾：本明細書で使用する場合、「保存的配列の修飾」という用語は、そのアミノ酸配列を含む抗体の結合特性に顕著に影響を及ぼさないか、またはそれを変更しないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾としては、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が挙げられる。修飾は、当技術分野で知られている標準的な技法（例えば、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発）により、様々な実施形態に適合する抗体に導入することができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野で定義されている。このようなファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、及びヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）、極性無電荷側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、及びトリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、及びメチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、及びイソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置換することができ、変更された抗体は、本明細書に記載の機能アッセイを用いて抗原を結合する能力について試験することができる。

共刺激リガンド：本明細書で使用する場合、「共刺激リガンド」という用語は、単球／マクロファージ／樹状細胞上の同族共刺激分子に特異的に結合し、それにより、単球／マクロファージ／樹状細胞の応答（限定されるものではないが、増殖、活性化、分化などを含む）を媒介するシグナルをもたらす、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上の分子を指す。共刺激リガンドとしては、限定されるものではないが、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンパトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、トールリガンド受容体に結合するアゴニストまたは抗体、及びＢ７－Ｈ３に特異的に結合するリガンドを挙げることができる。また、共刺激リガンドは、とりわけ、単球／マクロファージ／樹状細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体、例えば、限定されるものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドも包含する。

細胞傷害性：本明細書で使用する場合、「細胞傷害性の」または「細胞傷害性」という用語は、細胞を殺傷または損傷することを指す。１つの実施形態において、代謝的に強化された細胞の細胞傷害性が改善され、例えば、マクロファージの細胞溶解活性が増加する。

有効量：本明細書で使用する場合、「有効量」及び「治療有効量」は交換可能であり、これらは、特定の生物学的結果を達成するか、または治療上もしくは予防上の利益を提供するのに有効な、本明細書に記載の化合物、製剤、材料、または組成物の量を指す。このような結果としては、限定されるものではないが、当技術分野に適している任意の手段によって定量される抗腫瘍活性を挙げることができる。

エフェクター機能：本明細書で使用する場合、「エフェクター機能」または「エフェクター活性」とは、免疫細胞の刺激に応答して免疫細胞が行う特定の活性を指す。例えば、マクロファージのエフェクター機能は、食作用によって細胞細片、外来物質、微生物、がん細胞、及び他の不健康な細胞を貪食し消化することである。

コードする：本明細書で使用する場合、「コードする」とは、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド内の特定のヌクレオチド配列が、生物学的プロセスにおいて、定義されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列を有する他のポリマー及び巨大分子の合成のための鋳型として機能する固有の特性、ならびにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞または他の生物系においてタンパク質をもたらす場合、タンパク質をコードする。コード鎖（ｍＲＮＡの塩基配列と同一であり、通常、配列表で示されるヌクレオチド配列）及び非コード鎖（遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される）はいずれも、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると称することができる。

内在性：本明細書で使用する場合、「内在性」とは、特定の生物、細胞、組織、またはシステムからの、またはその内部で産生された物質を指す。

外来性：本明細書で使用する場合、「外来性」という用語は、特定の生物、細胞、組織、またはシステムの外部から導入された、または産生された任意の材料を指す。

拡大する：本明細書で使用する場合、「拡大する」という用語は、単球／マクロファージの数の増加におけるように数が増加することを指す。１つの実施形態において、ｅｘｖｉｖｏで拡大した単球、マクロファージ、または樹状細胞は、培養物中に元来存在する数に比べて数が増加する。別の実施形態において、ｅｘｖｉｖｏで拡大した単球、マクロファージ、または樹状細胞は、培養物中の他の細胞タイプに比べて数が増加する。本明細書で使用する場合、「ｅｘｖｉｖｏ」という用語は、生物（例えば、ヒト）から取り出し、生物の外部（例えば、培養皿、試験管、またはバイオリアクター）で増殖させた細胞を指す。

発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」という用語は、核酸配列から任意の遺伝子産物を生成することを指す。いくつかの実施形態において、遺伝子産物は、転写物であり得る。いくつかの実施形態において、遺伝子産物は、ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態において、核酸配列の発現は、以下のうちの１つ以上を含む：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生（例えば転写による産生）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端形成によるもの）；（３）ＲＮＡからポリペプチドまたはタンパク質への翻訳；及び／または（４）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾。

発現ベクター：本明細書で使用する場合、「発現ベクター」という用語は、発現させるべきヌクレオチド配列に作用可能に結合している発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用性エレメントを含み、発現に必要な他のエレメントは、宿主細胞により、またはｉｎｖｉｔｒｏ発現系で供給することができる。発現ベクターとしては、当技術分野で知られている全てのもの、例えば、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸またはリポソームに含まれるもの）、ならびにウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｄ５ベクター、例えば、Ａｄ５ｆ３５））が挙げられる。

相同性：本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子間（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子間）、及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一の場合、互いに「相同」であるとみなされる。いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％類似している（例えば、対応する位置に関連する化学特性を有する残基を含む）場合、互いに「相同」であるとみなされる。当業者には理解されるように、相同性の程度を決定するための配列比較を可能にする様々なアルゴリズムが利用可能であり、これには、異なる配列においてどの残基が互いに「対応」するか検討する際に、ある配列内の別の配列に対する指示された長さのギャップを許容することにより行われるものが含まれる。２つの核酸配列間の相同性パーセントの計算は、例えば、２つの配列を最適な比較目的のためにアラインメントすることにより実施することができる（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２の核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、また、対応しない配列は、比較目的のために無視することができる）。ある特定の実施形態において、比較目的のためにアラインメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％である。次に、対応するヌクレオチド位置におけるヌクレオチドを比較する。第１の配列内のある位置が、第２の配列内の対応位置と同じヌクレオチドにより占有されている場合、その位置における分子は同一であり、第１の配列内のある位置が、第２の配列内の対応位置と類似するヌクレオチドにより占有されている場合、その位置における分子は類似している。２つの配列間の相同性パーセントは、配列が共有する同一及び同様の位置の数の関数であり、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れている。

同一性：本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、２つのポリマー分子間、特に２つのアミノ酸分子間、例えば、２つのポリペプチド分子間のサブユニット配列の同一性を指す。２つのアミノ酸配列が同じ位置に同じ残基を有する場合、例えば、２つのポリペプチド分子の各々の位置がアルギニンに占有されている場合、これらの配列はその位置において同一である。２つのアミノ酸配列がアラインメントで同じ位置に同じ残基を有する同一性またはその程度は、しばしばパーセンテージとして表現される。２つのアミノ酸配列間の同一性は、一致するまたは同一である位置の数の一次関数であり、例えば、２つのアミノ酸配列の半分（例えば、１０アミノ酸長のポリマー内の５つの位置）が一致する場合、２つのアミノ酸配列は５０％同一であり、位置の９０％（例えば、１０中９）が一致するまたは同一である場合、２つのアミノ酸配列は９０％同一である。

実質的な同一性：本明細書で使用する場合、「実質的な同一性」という用語は、アミノ酸または核酸配列間の比較を指す。当業者であれば理解するように、２つの配列は、対応する位置に同一の残基を含む場合、概して「実質的に同一」であるとみなされる。当技術分野で周知されているように、アミノ酸または核酸配列は、様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較することができる。このようなアルゴリズムには市販のコンピュータープログラムで利用可能なものが含まれ、例えば、ヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、アミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－ＢＬＡＳＴがある。いくつかの実施形態において、２つの配列は、対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が、該当する残基の連なりにわたって同一である場合に実質的に同一とみなされる。いくつかの実施形態において、該当する連なりは完全配列である。いくつかの実施形態において、該当する連なりは、少なくとも１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個、またはそれ以上の残基である。ＣＤＲの文脈において、「実質的な同一性」に言及された場合、典型的には、参照ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。

免疫グロブリン：本明細書で使用する場合、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」という用語は、抗体として機能するタンパク質のクラスを指す。Ｂ細胞が発現する抗体は、場合によってはＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）または抗原受容体と称される。このタンパク質のクラスに含まれる５つのメンバーは、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥである。ＩｇＡは、身体の分泌物（例えば、唾液、涙液、母乳、胃腸管分泌物、ならびに気道及び泌尿器官の粘液分泌物）中に存在する一次抗体である。ＩｇＧは、最も一般的な循環抗体である。ＩｇＭは、ほとんどの対象の一次免疫応答で産生される主要な免疫グロブリンである。これは、凝集、補体固定、及び他の抗体応答において最も効率的な免疫グロブリンであり、細菌及びウイルスに対する防御において重要である。ＩｇＤは、抗体機能は知られていないが、抗原受容体として機能し得る免疫グロブリンである。ＩｇＥは、アレルゲンに曝露されたときにマスト細胞及び好塩基球からメディエーターを放出させることによって即時型過敏症を媒介する免疫グロブリンである。

免疫応答：本明細書で使用する場合、「免疫応答」という用語は、抗原に対する細胞応答を指し、これは、リンパ球が抗原分子を異質なものと識別し、抗体の形成を誘導する、及び／またはリンパ球を活性化して抗原を除去するときに発生する。

単離された：本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、自然の状態から変化したか、または除去されたものを指す。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは、「単離」されていないが、その天然状態の共存材料から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは、「単離」されている。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在する場合もあれば、例えば宿主細胞のような非ネイティブの環境に存在する場合もある。

レンチウイルス：本明細書で使用する場合、「レンチウイルス」という用語はＲｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染することができるレトロウイルスの中でも独特なウイルスであり、宿主細胞のＤＮＡに顕著な量の遺伝情報を送達することができるため、遺伝子送達ベクターの最も効率的な方法の１つとなっている。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。レンチウイルスに由来するベクターは、ｉｎｖｉｖｏで顕著なレベルの遺伝子移入を達成するための手段を提供する。

修飾：本明細書で使用する場合、「修飾」という用語は、本発明の分子または細胞の変化した状態または構造を指す。分子は、化学的、構造的、及び機能的なものを含めて、多くの方法で修飾することができる。細胞は、核酸の導入によって修飾することができる。

調節する：本明細書で使用する場合、「調節する」という用語は、対象における応答レベルが、治療または化合物が存在しない場合の対象における応答レベルに比べて、及び／または他の点では同一であるが治療していない対象における応答レベルに比べて、検出可能に増加または減少するのを媒介することを指す。この用語は、ネイティブなシグナルまたは応答に対し混乱させ及び／または影響を及ぼし、それにより、対象、好ましくはヒトにおいて有益な治療応答を媒介することを包含する。

作用可能に結合している：本明細書で使用する場合、「作用可能に結合している」という用語は、調節配列と異種核酸配列との間の機能的結合を指し、その結果後者が発現する。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係に置かれるとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作用可能に結合している。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列と作用可能に結合している。概して、作用可能に結合したＤＮＡ配列は連続しており、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合には、同じリーディングフレーム内にある。

過剰発現した腫瘍抗原：本明細書で使用する場合、「過剰発現した」腫瘍抗原または腫瘍抗原の「過剰発現」という用語は、患者の特定の組織または器官内の固形腫瘍のような疾患領域からの細胞内での腫瘍抗原の発現が、その組織または器官からの正常細胞内での発現レベルに比べて異常なレベルであることを指す。腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする固形腫瘍または血液悪性腫瘍を有する患者は、当技術分野で知られている標準的なアッセイによって判定することができる。

ポリヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドの鎖を指す。さらに、核酸はヌクレオチドのポリマーである。したがって、本明細書で使用する場合、核酸及びポリヌクレオチドは交換可能である。当業者は、核酸がポリヌクレオチドであり、これが加水分解して単量体の「ヌクレオチド」となり得るという一般知識を有する。単量体のヌクレオチドは、加水分解してヌクレオシドとなり得る。本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドには、限定されるものではないが、当技術分野で利用可能な任意の手段（限定されるものではないが、組換え手段、すなわち、通常のクローニング技術及びＰＣＲ（商標）を用いた組換えライブラリーまたは細胞ゲノムからの核酸配列のクローニングなど、ならびに合成手段を含む）によって得られる全ての核酸配列が含まれる。

ポリペプチド：本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、典型的にはペプチド結合によって結合している、残基（例えば、アミノ酸）の任意のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、自然界に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、自然界に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、人手の行為によって設計及び／または産生されるという点において操作されているアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはその両方を含むか、またはそれらからなることができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみまたは非天然アミノ酸のみを含むか、またはそれからなることができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸、Ｌ－アミノ酸、またはその両方を含むことができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸のみを含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸のみを含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、１つ以上のペンダント基または他の修飾（例えば、１つ以上のアミノ酸側鎖の修飾またはそれに対する結合）を含むことができる。いくつかの実施形態において、このようなペンダント基または修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ペグ化など（これらの組合せを含む）からなる群より選択することができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは環状であってもよい、及び／または環状部分を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは環状ではない、及び／またはいかなる環状部分も含まない。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは線状である。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、ステープルポリペプチドであるか、またはそれを含むことができる。いくつかの実施形態において、「ポリペプチド」という用語は、参照ポリペプチド、活性、または構造の名称に付加することができ、このような場合、本明細書では、当該用語は、関連する活性または構造を共有するポリペプチドを指すように使用され、したがって、同じクラスまたはファミリーのポリペプチドのメンバーであるとみなすことができる。各々のこのようなクラスについて、本明細書は、アミノ酸配列及び／または機能が既知であるクラス内の例示的なポリペプチドを提供し、及び／または当業者はこれらを認識するであろう。いくつかの実施形態において、このような例示的なポリペプチドは、ポリペプチドクラスまたはファミリーにおける参照ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドクラスまたはファミリーのメンバーは、クラスの参照ポリペプチド（いくつかの実施形態では、クラス内の全てのポリペプチド）に対し、顕著な配列相同性もしくは同一性を示す、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列エレメント）を共有する、及び／または共通の活性（いくつかの実施形態では、同等のレベルもしくは指定された範囲内での活性）を共有する。例えば、いくつかの実施形態において、メンバーポリペプチドは、参照ポリペプチドとの少なくとも約３０～４０％、しばしば約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の全体的な配列相同性の程度を示し、及び／または非常に高い配列同一性、しばしば９０％超、もしくは９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％超を示す少なくとも１つの領域（例えば、いくつかの実施形態では特徴的な配列エレメントであるか、またはそれを含んでもよい保存領域）を含む。このような保存領域は、通常、少なくとも３～４個、しばしば最大２０個またはそれ以上のアミノ酸を包含し、いくつかの実施形態において、保存領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上の連続した少なくとも１つのアミノ酸の連なりを包含する。いくつかの実施形態において、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドのフラグメントを含むか、またはそれらからなることができる。いくつかの実施形態において、有用なポリペプチドは、複数のフラグメントを含むか、またはそれらからなることができ、それらの各々は、関心対象のポリペプチドがその親ポリペプチドの誘導体であるように、同じ親ポリペプチド内で、関心対象のポリペプチド内で見られるのとは互いに異なる空間的配置で見られる（例えば、親内で直接結合しているフラグメントが、関心対象のポリペプチド内で空間的に離れていてもよく、その逆であってもよく、及び／またはフラグメントが関心対象のポリペプチド内で親と異なる順序で存在していてもよい）。

タンパク質：本明細書で使用する場合、「タンパク質」という用語は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに結合している少なくとも２つのアミノ酸の連なり）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなど）を含んでもよく、及び／または他のプロセシングもしくは修飾が行われてもよい。当業者は、「タンパク質」が、細胞によって産生される完全なポリペプチド鎖（シグナル配列の有無は問わない）であっても、その特徴的な部分であってもよいことを理解するであろう。当業者は、タンパク質が、場合により、（例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって結合するか、または他の手段によって関連付けられる）複数のポリペプチド鎖を含んでもよいことを理解するであろう。ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、または両方を含むことができ、当技術分野で知られている様々なアミノ酸修飾または類似体のいずれかを含むことができる。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びこれらの組合せを含むことができる。「ペプチド」という用語は、概して、長さが約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、または１０アミノ酸未満のポリペプチドを指すために使用する。いくつかの実施形態において、タンパク質は、抗体、抗体フラグメント、その生物学的活性部分、及び／またはその特徴的な部分である。

シグナル伝達経路：本明細書で使用する場合、「シグナル伝達経路」という用語は、細胞のある部分から別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす様々なシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。「細胞表面受容体」という表現は、シグナルを受け取り、細胞の細胞膜を越えてシグナルを伝達することが可能な分子及び分子の複合体を含む。

一本鎖抗体：本明細書で使用する場合、「一本鎖抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技法によって形成される、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖フラグメントが操作されたアミノ酸のスパンを介しＦｖ領域に結合している抗体を指す。様々な一本鎖抗体の生成方法が知られており、これには米国特許第４，６９４，７７８号；Ｂｉｒｄ（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４４２；Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３；Ｗａｒｄｅｔａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３３４：５４４５４；Ｓｋｅｒｒａｅｔａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：１０３８－１０４１に記載されているものが含まれる。

特異的に結合する：本明細書で使用する場合、抗原結合ドメイン（例えば、抗体薬剤）に関する「特異的に結合する」という用語は、特定の抗原を認識するが、試料中の他の分子に対しては実質的に認識または結合しない、抗原結合ドメインまたは抗体薬剤を指す。例えば、１つの種の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインまたは抗体薬剤は、１つ以上の種からのその抗原にも結合する可能性がある。しかし、このような異種間反応性自体は、抗原結合ドメインまたは抗体薬剤の特異性の分類を変化させない。別の例において、抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインまたは抗体薬剤は、抗原の異なるアレル形態にも結合する可能性がある。しかし、このような交差反応性自体は、抗原結合ドメインまたは抗体薬剤の特異性の分類を変化させない。いくつかの場合において、「特異的な結合」または「特異的に結合すること」という用語は、抗原結合ドメインまたは抗体薬剤、タンパク質、もしくはペプチドと第２の化学種との相互作用に関して使用することができ、相互作用が化学種上の特定の構造（例えば、抗原性決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味し、例えば、抗原結合ドメインまたは抗体薬剤がタンパク質全般ではなく特定のタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗原結合ドメインまたは抗体薬剤がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」及び抗原結合ドメインまたは抗体薬剤を含む反応においてエピトープＡを含む分子（または遊離状態の標識されていないＡ）が存在すると、標識Ａが抗体に結合する量が低減する。

刺激：本明細書で使用する場合、「刺激」という用語は、刺激分子（例えば、ＦｃＲ複合体、ＴＬＲ複合体、またはＴＣＲ／ＣＤ３複合体）が同族リガンドに結合することにより誘導され、それにより、シグナル伝達事象（例えば、限定されるものではないが、Ｆｃ受容体機構または合成ＣＡＲによるシグナル伝達）を媒介する一次応答を指す。刺激は、ある特定の分子の発現の変化（例えば、ＴＧＦベータの下方調節、及び／または細胞骨格構造の再編成など）を媒介することができる。本明細書で使用する場合、「刺激分子」という用語は、抗原提示細胞上に存在する同族刺激リガンドに特異的に結合する単球、マクロファージ、または樹状細胞の分子を指す。いくつかの実施形態において、刺激分子は、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含むＦｃＲ細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、刺激分子は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含むＴＬＲ細胞外ドメインを含む。本明細書で使用する場合、「刺激リガンド」という用語は、抗原提示細胞（例えば、ａＡＰＣ、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞など）または腫瘍細胞上に存在するときに、単球、マクロファージ、または樹状細胞上の同族結合パートナー（本明細書では「刺激分子」と称される）に特異的に結合し、それにより、免疫細胞による応答（限定されるものではないが、活性化、免疫応答の開始、増殖など）を媒介することができるリガンドを指す。刺激リガンドは当技術分野で周知されており、特に、トール様受容体（ＴＬＲ）リガンド、抗トール様受容体抗体、アゴニスト、及び単球／マクロファージ受容体に対する抗体を包含する。さらに、サイトカイン（例えば、インターフェロン－ガンマ）は、マクロファージの強力な刺激物質である。

対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、生物、例えば、哺乳類（例えば、ヒト、非ヒト哺乳類、非ヒト霊長類、霊長類、実験動物、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、ネコ、イヌ）を指す。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、成人、青年、または小児の対象である。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態（例えば、本明細書に示されているように治療することができる疾患、障害、または状態、例えば、本明細書で挙げられているがんまたは腫瘍）を患っている。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態に感受性を有し、いくつかの実施形態において、感受性を有する対象は、（参照対象または集団で観察される平均リスクに比べて）疾患、障害、または状態を発症する素因を有する、及び／またはそのリスクの増加を示す。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態の１つ以上の症状を示す。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態の特定の症状（例えば、疾患の臨床所見）または特性を示さない。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態のいかなる症状も特徴も示さない。いくつかの実施形態において、対象は患者である。いくつかの実施形態において、対象は、診断及び／または治療が管理されている及び／または管理されてきた個体である。

実質的に精製された：本明細書で使用する場合、例えば細胞に適用される「実質的に精製された」という用語は、他の細胞種を本質的に含まない細胞を指す。また、実質的に精製された細胞は、通常は天然に存在する状態で関連している他の細胞タイプから分離した細胞も指す。いくつかの場合において、実質的に精製された細胞の集団は、均質な細胞の集団を指す。他の場合においては、この用語は、単に、天然の状態で結合している細胞から分離した細胞を指す。いくつかの実施形態において、細胞は、ｉｎｖｉｔｒｏで培養される。他の実施形態において、細胞は、ｉｎｖｉｔｒｏで培養されない。

標的：本明細書で使用する場合、「標的」という用語は、治療を必要とする、または、例えば抗体（またはそのフラグメント）もしくはＣＡＲが優先的に結合する、体内の細胞、組織、器官、または部位を指す。

標的部位：本明細書で使用する場合、「標的部位」または「標的配列」という用語は、結合分子が結合の発生に十分な条件下で特異的に結合することができる核酸の一部分を定義するゲノム核酸配列を指す。

Ｔ細胞受容体：本明細書で使用する場合、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、抗原の提示に応答してＴ細胞の活性化に関与する膜タンパク質の複合体を指す。ＴＣＲは、主要組織適合性複合体分子に結合した抗原を認識する役割を担う。ＴＣＲは、アルファ（ａ）鎖及びベータ（β）鎖のヘテロ二量体を含むが、一部の細胞においては、ＴＣＲは、ガンマ及びデルタ（γ／δ）鎖を含む。ＴＣＲはアルファ／ベータ形態及びガンマ／デルタ形態で存在することができ、これらは構造的に類似するが、解剖学的な位置及び機能は異なる。各鎖は、可変ドメイン及び定常ドメインという２つの細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲを含む任意の細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びガンマデルタＴ細胞を含む）細胞上で修飾することができる。

療法：本明細書で使用する場合、「療法（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、治療及び／または予防を指す。治療効果は、疾患状態の抑制、寛解、または根絶によって得られる。

形質移入：本明細書で使用する場合、「形質移入」または「形質導入」または「形質転換」という用語は、外来核酸が宿主細胞内に移入または導入されるプロセスを指す。「形質移入」または「形質転換」または「形質導入」細胞は、外来の核酸で形質移入、形質転換、または形質導入された細胞である。細胞には、初代主題細胞及びその後代が含まれる。

治療する：本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状または特徴の部分的または完全な緩和、改善、発症の遅延、抑制、予防、軽減、及び／または発生率及び／または重症度の低減を指す。いくつかの実施形態において、治療は、疾患、障害、及び／または状態の徴候または特徴を示さない対象に投与することができる（例えば、予防的であってもよい）。いくつかの実施形態において、治療は、初期または軽度の疾患、障害、及び／または状態の徴候または特徴を示すに過ぎない対象に、例えば、疾患、障害、及び／または状態に関連する病態の発症リスクを減少させる目的で投与することができる。いくつかの実施形態において、治療は、確立した、重度の、及び／または後期の疾患、障害、または状態の徴候を示す対象に投与することができる。

腫瘍：本明細書で使用する場合、「腫瘍」という用語は、細胞または組織の異常な成長を指す。いくつかの実施形態において、腫瘍は、前がん性（例えば、良性）、悪性、前転移性、転移性、及び／または非転移性である細胞を含むことができる。いくつかの実施形態において、腫瘍は、がんに関連しているか、またはがんの発現である。いくつかの実施形態において、腫瘍は、散発性腫瘍または液体腫瘍であり得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は固形腫瘍であり得る。

ベクター：本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語は、単離核酸を含み、この単離核酸を細胞の内部に送達するのに使用することができる物質組成物を指す。多数のベクターが当技術分野で知られており、限定されるものではないが、これには線状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物に結合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスが含まれる。したがって、「ベクター」という用語は、自己複製プラスミドまたはウイルスを含む。また、この用語は、細胞内への核酸の移行を容易にする非プラスミド及び非ウイルス化合物（例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど）を含むと解釈されるべきでもある。ウイルスベクターの例としては、限定されるものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。

本開示全体において、本発明の様々な態様は範囲形式で提示され得る。範囲形式での記述は、単に便宜及び簡潔性のためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の記述は、考えられ得る全ての部分範囲に加えて、その範囲内の個々の数値を具体的に開示したものとみなされるべきである。例えば、「１～６」といった範囲の記述は、「１～３」、「１～４」、「１～５」、「２～４」、「２～６」、「３～６」などの部分範囲に加えて、その範囲内の個々の数字、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を具体的に開示したものとみなされるべきである。これは、範囲の幅にかかわらず適用される。

免疫細胞
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む修飾免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を提供する。したがって、いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＣＡＲを含む免疫細胞は、（ａ）細胞外ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞外ドメイン）と、（ｂ）膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）と、（ｃ）細胞内ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内ドメイン）とを含む。

本明細書で使用する場合、「免疫細胞」という用語は、免疫応答（例えば、免疫応答の促進）に関与する細胞を指す。免疫細胞の例としては、限定されるものではないが、マクロファージ、単球、樹状細胞、好中球、好酸球、マスト細胞、血小板、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ－リンパ球、またはＢ－リンパ球が挙げられる。免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）の供給源は、対象から得ることができる。対象の例としては、ヒト、サル、チンパンジー、イヌ、ネコ、マウス、ラット、及びこれらのトランスジェニック種が挙げられる。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞の集団は、単球、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはこれらの前駆体を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞の集団は、単球、マクロファージ、もしくは樹状細胞の精製された集団、または細胞株を含む。

いくつかの実施形態において、免疫細胞は活性化され、例えば免疫細胞は、例えば不活性な細胞に比べて、サイトカイン産生、ケモカイン産生、食作用、細胞シグナル伝達、標的細胞殺傷、及び／または抗原提示の増加を示す。いくつかの実施形態において、活性化された免疫細胞は、例えば不活性細胞に比べて、遺伝子発現の変化、例えば、炎症促進性遺伝子発現（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１２、ＩＦＮ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＩＬ－１のうちの１、２、３、４、５、６、または７個）の誘導を示す。ある特定の実施形態において、活性化された免疫細胞は、細胞分裂を経ている。いくつかの実施形態において、免疫細胞の標的エフェクター活性は、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰα活性の阻害によって強化される。ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰα活性は、免疫細胞を抗ＣＤ４７もしくは抗ＳＩＲＰα抗体で処置することにより、または当業者に知られている任意の方法によって阻害することができる。

いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、対象から得られる（例えば、単離される）。免疫細胞は、自己由来とするか、または同種異系もしくは汎用ドナーから調達することができる。細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、脾臓組織、臍帯、腫瘍、及び／または人工多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞（ＥＳＣ））を含めた多くの供給源から得ることができる。ある特定の実施形態において、細胞は、当業者に知られている任意の数の分離技法（例えば、フィコール分離）を用いて、対象から採取した血液単位から得ることができる。いくつかの実施形態において、対象の循環血液からの細胞は、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスによって得られる。アフェレーシスによって採取した細胞は、洗浄して血漿画分を取り出し、様々なバッファー（例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ））または培養基に再懸濁することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、単球）の濃縮は、プラスチック付着を含む。いくつかの実施形態において、濃縮に続いて、免疫細胞（例えば、単球）の分化は、ＧＭ－ＣＳＦによる刺激を含む。いくつかの実施形態において、血球（例えば、単球、リンパ球、血小板、血漿、及び／または赤血球）を含む組成物、例えば、白血球アフェレーシス組成物（例えば、ｌｅｕｋｏｐａｋ）が濃縮に使用される。いくつかの実施形態において、白血球アフェレーシス組成物（例えば、ｌｅｕｋｏｐａｋ）は、健康なヒトドナーからの試料を含む。ある特定の実施形態において、免疫細胞（例えば、単球）のアフェレーシスの次に、ＧＭ－ＣＳＦによる動員が行われる。ある特定の実施形態において、免疫細胞（例えば、単球）の選択は、マイクロビーズ（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳＰｒｏｄｉｇｙデバイス上のＭＡＣＳ（登録商標）ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ）を用いたＣＤ１４陽性選択を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞前駆体（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞の前駆体）が、本明細書に記載の組成物及び方法で使用される。免疫細胞前駆体は、ｉｎｖｉｖｏまたはｅｘｖｉｖｏで免疫細胞に分化させることができる。前駆免疫細胞の非限定的な例としては、造血幹細胞、骨髄系共通前駆細胞、骨髄芽球、単芽球、前単球、またはこれらの中間体が挙げられる。例えば、誘導多能性幹細胞を使用して、単球、マクロファージ、及び／または樹状細胞を生成することができる。誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）は、正常なヒト組織（例えば、末梢血、線維芽細胞、皮膚、ケラチノサイト、または腎上皮細胞）から導出することができる。自家、同種異系、または汎用ドナーｉＰＳＣは、骨髄系統（例えば、単球、マクロファージ、樹状細胞、またはその前駆体）に向かって分化させることができる。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を通じた遠心分離により、赤血球を溶解し、リンパ球及び赤血球を枯渇させることによって末梢血から単離することができる。代替的に、免疫細胞は、臍帯組織から単離してもよい。免疫細胞の特定の亜集団は、ポジティブまたはネガティブ選択技法によってさらに単離することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ある特定の抗原（限定されるものではないが、ＣＤ３４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０を含む）を発現する細胞から枯渇させることができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞集団の濃縮は、例えばネガティブ選択による場合、ネガティブ選択された細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組合せを用いて達成することができる。非限定的な例として、細胞選択は、ネガティブ磁気免疫付着またはフローサイトメトリーも含むことができ、これは、ネガティブ選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）の所望の集団をポジティブまたはネガティブ選択によって単離する間に、免疫細胞の濃度及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）を変化させることができる。ビーズ及び細胞の接触面積を確実に最大にするために、ビーズ及び細胞が混合される体積を大きく減らすことが望ましい場合がある。

いくつかの実施形態において、投与の前に、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含む）を炎症促進剤で処置する。いくつかの実施形態において、炎症促進剤による処置は、本明細書に記載の免疫細胞の抗腫瘍活性を増加させる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの炎症促進剤による処置は、本明細書に記載の免疫細胞においてＭ１表現型（例えば、Ｍ２からＭ１表現型へのスイッチ）を促進する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの炎症促進剤は、４１ＢＢ－リガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）及び４１ＢＢリガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含むか、またはそれらである。

いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、１つ以上の細胞外ドメインと、１つ以上の膜貫通ドメインと、１つ以上の細胞内ドメインとを含むＣＡＲ）を含む。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、１つ以上の炎症促進剤で処置されている。いくつかの実施形態において、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞は、同じタイプの修飾されていない細胞に比べて、抗腫瘍活性の増加を示す。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症促進剤は、４１ＢＢ－リガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）及び４１ＢＢリガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含むか、またはそれらである。本開示は、対象における疾患または障害を治療する方法を提供し、当該方法は、当該対象に、本明細書に記載の修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞を含む医薬組成物の治療有効量を送達することを含む。

また、本開示は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、１つ以上の細胞外ドメインと、１つ以上の膜貫通ドメインと、１つ以上の細胞内ドメインとを含むＣＡＲ）を含むマクロファージ、単球、または樹状細胞を修飾する方法も提供し、当該方法は、マクロファージ、単球、または樹状細胞を、１つ以上の炎症促進剤で処置することを含み、それにより、同じタイプの非修飾細胞に比べて、抗腫瘍活性の増加を示す修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞を産生する。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症促進剤は、４１ＢＢ－リガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、１つ以上の炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）及び４１ＢＢリガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含むか、またはそれらである。本開示は、対象における疾患または障害を治療する方法を含み、当該方法は、当該対象に、本明細書に記載の方法により、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞を含む医薬組成物の治療有効量を送達することを含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含むもの）は、炎症促進剤と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含むもの）は、炎症促進剤と実質的に同時に、その前に、またはその後に対象に投与される。いくつかの実施形態において、炎症促進剤による投与は、本明細書に記載の免疫細胞の抗腫瘍活性を増加させる。いくつかの実施形態において、炎症促進剤による投与は、本明細書に記載の免疫細胞においてＭ１表現型（例えば、Ｍ２からＭ１表現型へのスイッチ）を促進する。いくつかの実施形態において、炎症促進剤は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、炎症促進剤は、４１ＢＢ－リガンドアゴニスト（例えば、４－１ＢＢ）を含む、またはそれである。

マクロファージ
マクロファージは、標的細胞（例えば、病原体または腫瘍細胞）の検出、食作用、及び破壊に特化した免疫細胞である。マクロファージは自然免疫系の強力なエフェクターであり、少なくとも３つの異なる抗腫瘍機能：死細胞及び瀕死細胞、微生物、がん細胞、細胞破片、またはその他の外来物質の食作用；腫瘍細胞に対する細胞傷害性；ならびに適応抗腫瘍免疫応答を編成するための腫瘍抗原の提示が可能である。

蓄積するエビデンスにより、マクロファージが、多くのがんの腫瘍微小環境内に豊富に存在し、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）と総称される多くの表現型をとり得ることが示唆されている。腫瘍微小環境の免疫抑制的な性質によって、典型的には、より多くのＭ２様ＴＡＭがもたらされ、これが抗腫瘍免疫応答の全般的な抑制にさらに寄与している。しかし、最近の研究では、ＴＡＭが炎症促進性シグナルによって「再プログラム」できること、そしてＭ２表現型からさらなるＭ１表現型へのスイッチが生産的な抗腫瘍免疫応答に結び付くことが明らかになっている。内在性ＴＡＭがＭ１タイプにスイッチするように誘導し、Ｍ２に弱体化できないマクロファージを操作すれば、抗腫瘍免疫療法を大きく強化し、この分野における顕著な進歩に相当するものとなるであろう。

いくつかの実施形態において、マクロファージは、未分化またはＭ０マクロファージを含むか、またはそれである。ある特定の実施形態において、マクロファージは、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ７１、またはＣＣＲ５のうちの１、２、３、４、５、または６個を含むか、またはそれを発現する。様々な刺激に曝露することで、Ｍ０マクロファージをいくつかの異なる集団に分極化するように誘導することができ、この集団は、マクロファージ表現型マーカー、サイトカイン産生、及び／またはケモカイン分泌によって識別することができる。

いくつかの実施形態において、マクロファージは、分極化マクロファージを含むか、またはそれである。古典的な活性化条件下では、Ｍ０マクロファージを炎症促進性シグナル（例えば、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、及びＧＭ－ＣＳＦ）に曝露し、Ｍ１マクロファージに分極化することができる。一般に、Ｍ１マクロファージは、炎症促進性免疫応答（Ｔｈ１及びＴｈ１７Ｔ細胞応答）に関連する。他の刺激に曝露することで、マクロファージを「代替的に活性化された」多様な集団またはＭ２マクロファージに分極化することができる。

いくつかの実施形態において、マクロファージは、Ｍ１マクロファージを含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、マクロファージは、Ｍ１マクロファージの１つ以上のマーカー（例えばＣＤ８６、ＣＤ８０、ＭＨＣＩＩ、ＩＬ－１Ｒ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ｉＮＯＳ、ＳＯＣＳ３、ＣＤ８３、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ６９、ＭＨＣＩ、ＣＤ６４、ＣＤ３２、ＣＤ１６、ＩＬ１Ｒ、ＩＦＩＴファミリーメンバー、またはＩＳＧファミリーメンバーのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個）を発現する。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、比較的高いレベルの１つ以上の炎症性サイトカイン（例えばＩＬ－１、ＴＮＦ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、もしくはＩＬ３３のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個）、またはケモカイン（例えば、ＣＣもしくはＣＸＣケモカインの一方もしくは両方）（例えば、ＣＸＣケモカインのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６個；例えば、ＣＣケモカインのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、もしくは２８個；例えば、ＣＸ３Ｃケモカインのうちの１つ、例えば、Ｃケモカインのうちの一方もしくは両方）を分泌する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、免疫応答及び／または炎症を刺激する。いくつかの実施形態において、マクロファージは、Ｍ２マクロファージ（例えば、Ｍ２ａ、Ｍ２ｂ、Ｍ２ｃ、及びＭ２ｄマクロファージ）を含むか、またはそれである。Ｍ２ａマクロファージは、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、及び／または真菌感染によって誘導することができる。Ｍ２ｂマクロファージは、ＩＬ－１Ｒリガンド、免疫複合体、及び／またはＬＰＳによって誘導することができる。Ｍ２ｃマクロファージは、ＩＬ－１０及び／またはＴＧＦβによって誘導することができる。Ｍ２ｄマクロファージは、ＩＬ－６及び／またはアデノシンによって誘導することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、対象における免疫応答を低下させる。いくつかの実施形態において、マクロファージは、Ｍ２マクロファージの１つ以上のマーカー（例えば、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、またはＣＤ２０９のうちの１、２、または３個）を発現する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、１つ以上の抗炎症サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０またはＴＧＦβの一方または両方）の分泌の増加を示す。

いくつかの実施形態において、マクロファージは、少なくとも１つの上方調節されたＭ１マーカー及び／または少なくとも１つの下方調節されたＭ２マーカーを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＭ１マーカー（例えば、ＨＬＡＤＲ、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８３、ＣＤ６９、ＭＨＣＩ、ＣＤ６４、ＣＤ３２、ＣＤ１６、ＩＬ１Ｒ、ＩＦＩＴファミリーメンバー、及び／またはＩＳＧファミリーメンバー）がマクロファージ内で上方調節される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＭ２マーカー（例えば、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、及び／またはＣＤ２０９）は、マクロファージ内で下方調節される。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、食作用の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、腫瘍細胞に対する細胞傷害性の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、腫瘍抗原提示（例えば、食作用後の提示）の増加及び／または抗原プロセシングの増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、腫瘍殺傷（例えば、食作用、溶解、アポトーシス、または腫瘍殺傷サイトカイン（例えば、ＴＮＦα）の産生による）の増加を示す。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、好都合な遺伝子（例えばＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣ－Ｉ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ４０、４１ＢＢＬ、ＴＮＦ、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＩＦＮｇ、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１ｂ、及び／またはＣＸＣＬ１２）の発現の増加、あるいは不都合な遺伝子（例えばＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＴＧＦｂ、ＩＬ１０、及び／またはＩＬ４）の発現の減少の一方または両方を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、ＲＯＳの産生の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、代謝再プログラミング（例えば、インターフェロンシグナル伝達経路、ＴＨ１経路、ＰＴＥＮシグナル伝達、ＰＩ３Ｋシグナル伝達、ＭＴＯＲシグナル伝達、ＴＬＲシグナル伝達、ＣＤ４０シグナル伝達、４１ＢＢシグナル伝達、４１ＢＢＬシグナル伝達、マクロファージ成熟シグナル伝達、樹状細胞成熟シグナル伝達、ＣＤ３ゼータシグナル伝達、ＦｃＲ γシグナル伝達、ＣＤ６４シグナル伝達、ＣＤ３２ａシグナル伝達、ＣＤ３２ｃシグナル伝達、ＣＤ１６ａシグナル伝達、ＴＬＲ１シグナル伝達、ＴＬＲ２シグナル伝達、ＴＬＲ３シグナル伝達、ＴＬＲ４シグナル伝達、ＴＬＲ５シグナル伝達、ＴＬＲ６シグナル伝達、ＴＬＲ７シグナル伝達、ＴＬＲ８シグナル伝達、ＴＬＲ９シグナル伝達、ＡＬＫシグナル伝達、ＡＸＬシグナル伝達、ＤＤＲ２シグナル伝達、ＥＧＦＲシグナル伝達、ＥｐｈＡ１シグナル伝達、ＩＮＳＲシグナル伝達、ｃＭＥＴシグナル伝達、ＭＵＳＫシグナル伝達、ＰＤＧＦＲシグナル伝達、ＰＴＫ７シグナル伝達、ＲＥＴシグナル伝達、ＲＯＲ１シグナル伝達、ＲＯＳ１シグナル伝達、ＲＹＫシグナル伝達、ＴＩＥ２シグナル伝達、ＴＲＫシグナル伝達、ＶＥＧＦＲシグナル伝達、ＣＤ４０シグナル伝達、ＣＤ１９シグナル伝達、ＣＤ２０シグナル伝達、４１ＢＢシグナル伝達、ＣＤ２８シグナル伝達、ＯＸ４０シグナル伝達、ＧＩＴＲシグナル伝達、ＴＲＥＭ－１シグナル伝達、ＴＲＥＭ－２シグナル伝達、ＤＡＰ１２シグナル伝達、ＭＲシグナル伝達、ＩＣＯＳシグナル伝達、ＭｙＤ８８シグナル伝達、Ｖ／Ｉ／ＬｘＹｘｘＬ／Ｖシグナル伝達、ＳＩＲＰａシグナル伝達、ＣＤ４５シグナル伝達、Ｓｉｇｌｅｃ－１０シグナル伝達、ＰＤ１シグナル伝達、ＳＨＰ－１シグナル伝達、ＳＨＰ－２シグナル伝達、ＫＩＲ－２ＤＬシグナル伝達、ＫＩＲ－３ＤＬシグナル伝達、ＮＫＧ２Ａシグナル伝達、ＣＤ１７０シグナル伝達、ＣＤ３３シグナル伝達、ＢＴＬＡシグナル伝達、ＣＤ３２ｂシグナル伝達、ＳＩＲＰｂシグナル伝達、ＣＤ２２シグナル伝達、ＰＩＲ－Ｂシグナル伝達、及び／またはＬＩＬＲＢ１シグナル伝達の代謝再プログラミング）を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、細胞生存機構の誘導を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、細胞死機構の誘導を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むまたは発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを有しないマクロファージに比べて、食作用チェックポイントに対する抵抗性の増加、トラフィッキングを補助するケモカイン受容体の発現増加、他の免疫細胞を動員するケモカインの発現増加、ＥＣＭ分解酵素（例えば、腫瘍ＥＣＭを分解する及び／または抗線維化活性を示すＭＭＰ）の発現増加、あるいは増殖の増加のうちの１、２、３、４、または５つを示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、ＣＡＲ発現期間の改善、細胞表面上のＣＡＲの安定性の改善、ＣＡＲ発現レベルの増加、またはＣＡＲのバックグラウンド活性の低下のうちの１、２、３、または４つを示す。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、対象における感染（例えば、感染性病原体の感染）を減少させる。いくつかの実施形態において、感染病原体は、ウイルス、原虫（例えば、トリパノソーマ、マラリア、もしくはトキソプラズマ）、細菌（例えば、マイコバクテリウム、サルモネラ、もしくはリステリア）、真菌（例えば、カンジダ）、またはこれらの組合せを含むか、あるいはそれらのいずれかである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、肝炎ウイルス（例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、もしくはＥ型肝炎）、レトロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ１もしくはＨＩＶ２）、Ｔ細胞白血病ウイルス、リンパ球向性ウイルス（例えば、ＨＴＬＶ１もしくはＨＴＬＶ２）、単純ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型もしくは２型）、エプスタイン－バーウイルス、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、日本脳炎ウイルス、ムンプスウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）ウイルス、もしくはコロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９））、エボラウイルス、西ナイルウイルス、またはそのバリアントもしくは組合せを含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するマクロファージは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、対象（例えば、神経変性疾患、炎症性疾患、心血管疾患、線維性疾患、アミロイドーシス、またはこれらの組合せを有する対象）において、少なくとも１つのタンパク質凝集体の食作用によって既存の凝集体の形成を減少させる及び／または分解する。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、タウオパチー、ａ－シヌクレイン症、初老期認知症、老人性認知症、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ピック病、原発性進行性失語症、前頭側頭型認知症、大脳皮質基底核認知症、パーキンソン病、レビー小体型認知症、ダウン症候群、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ－Ｓｐａｔｚ症候群、ポリグルタミン病、三塩基反復病、及びプリオン病からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、炎症性疾患は、全身性エリテマトーデス、血管炎、関節リウマチ、歯周病、潰瘍性大腸炎、副鼻腔炎、喘息、結核、クローン病、慢性感染症、遺伝性周期熱、悪性腫瘍、全身性血管炎、嚢胞性線維症、気管支拡張症、表皮水疱症、周期性好中球減少症、免疫不全、マックル－ウエルズ（ＭＷＳ）病、家族性地中海熱（ＦＭＦ）からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、アミロイドーシスは、原発性アミロイドーシス（ＡＬ）、続発性アミロイドーシス（ＡＡ）、家族性アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）、ベータ２ミクログロブリンアミロイドーシス、限局性アミロイドーシス、重鎖アミロイドーシス（ＡＨ）、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）、原発性全身性アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、アポリポタンパクＣ２アミロイドーシス、アポリポタンパクＣ３アミロイドーシス、角膜ラクトフェリンアミロイドーシス、トランスサイレチン関連アミロイドーシス、透析アミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、Ｌｅｃｔ２アミロイドーシス（ＡＬＥＣＴ２）、及びリゾチームアミロイドーシスからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、心血管疾患は、アテローム動脈硬化症、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、高血圧性心疾患、メタボリックシンドローム、高血圧、脳血管疾患、及び心不全からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、線維性疾患は、肺線維症、特発性肺線維症、肝硬変、嚢胞性線維症、強皮症、心臓線維症、放射線誘発性肺損傷、脂肪性肝炎、糸球体硬化症、間質性肺疾患、肝線維症、縦隔線維症、後腹膜腔線維症、骨髄線維症、及び皮膚線維症からなる群より選択される。

単球
単球は、血液、骨髄、及び脾臓内で循環する多能性細胞であり、概して定常状態では増殖しない。単球のサイズは、直径約１０～３０μｍの範囲で大きく変化し得る。単球の核：細胞質の比は、約２：１から約１：１の範囲であり得る。概して、単球は、ケモカイン受容体及び病原体認識受容体を含み、これは感染時などに血液から組織への移動を媒介する。単球は、炎症性サイトカインを産生し、細胞及び／または毒性分子を取り込み、樹状細胞またはマクロファージに分化することができる。

いくつかの実施形態において、単球は、１つ以上の表現型マーカーを含むか、またはそれを発現する。ヒト単球の例示的な表現型マーカーとしては、限定されるものではないが、ＣＤ９、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１５、ＣＤｗ１７、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４３、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５ｓ、ＣＤ６８、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８９、ＣＤ９１、ＣＤｗ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９８、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１９、ＣＤｗｌ２ｌｂ、ＣＤｗ１２３、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１２８、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６ａ、ＣＤ１５７、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２ａ、ＣＤ１８０、ＣＤ２０６、ＣＤ１３１ａ１、ＣＤ２１３２、ＣＤｗ２１０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８４、及びＣＤ２８６が挙げられる。マウス単球の例示的な表現型マーカーとしては、限定されるものではないが、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ２９、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、Ｃｄｗ１３１、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８４、ＣＤ２８６、Ｆ４／８０、及びＣＤ４９ｂが挙げられる。ある特定の実施形態において、単球は、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、またはＣＤ１６のうちの１、２、または３個を含む。ある特定の実施形態において、単球は、ＣＤ１４＋ＣＤ１６－単球、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球、またはＣＤ１４－ＣＤ１６＋単球を含む。

いくつかの実施形態において、単球は、マクロファージに分化する。いくつかの実施形態において、単球は、樹状細胞（ＤＣ）に分化する。単球は、当技術分野で知られている任意の技法により、マクロファージまたはＤＣに分化させることができる。例えば、単球のマクロファージへの分化は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）によって誘導することができる。単球からＤＣへの分化は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）とＩＬ－４との組合せによって誘導することができる。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１２、ＩＦＮ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＩＬ－１のうちの１、２、３、４、５、６または７個）の分泌の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、食作用の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、生存の強化を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、マクロファージ（例えば、Ｍ１またはＭ２マクロファージ）への分化の強化を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、ＤＣ（例えば、常駐ＤＣもしくは遊走ＤＣ及び／またはリンパ系及び非リンパ系組織内のもの）への分化の強化を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、腫瘍細胞に対する細胞傷害性の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、腫瘍抗原提示（例えば、食作用後の提示）の増加及び／または抗原プロセシングの増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、腫瘍殺傷（例えば、食作用、溶解、アポトーシス、または腫瘍殺傷サイトカイン（例えば、ＴＮＦα）の産生による）の増加を示す。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、好都合な遺伝子の発現の増加または不都合な遺伝子の発現の減少の一方または両方を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、ＲＯＳの産生の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、代謝再プログラミングを示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、細胞生存機構の誘導を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、細胞死機構の誘導を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含まない単球に比べて、食作用チェックポイントに対する抵抗性の増加、トラフィッキングを補助するケモカイン受容体の発現の増加、他の免疫細胞を動員するケモカインの発現の増加、ＥＣＭ分解酵素（例えば、腫瘍ＥＣＭを分解する及び／または抗線維化活性を示すＭＭＰ）の発現の増加、あるいは増殖の増加のうちの１、２、３、４、または５つを示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現する単球は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わない単球に比べて、ＣＡＲ発現期間の改善、細胞表面上のＣＡＲの安定性の改善、ＣＡＲ発現レベルの増加、またはＣＡＲのバックグラウンド活性の低下のうちの１、２、３、または４つを示す。

樹状細胞
樹状細胞（ＤＣ）は、骨髄由来の特殊な抗原提示細胞であり、免疫応答の開始及び自己抗原に対する免疫系の寛容性の維持に関与する。樹状細胞は、リンパ系及び非リンパ系の器官に見出すことができ、概してリンパ系または骨髄系統から発生すると考えられている。

いくつかの実施形態において、ＤＣは、１つ以上の表現型マーカーを含むか、またはそれを発現する。ＤＣの例示的な表現型マーカーとしては、限定されるものではないが、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１４１、ＣＤ２０７、ＣＬＥＣ９ａ、ＣＤ１２３、ＣＤ８５、ＣＤ１８０、ＣＤ１８７、ＣＤ２０５、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８４、ＣＤ２８６、及び部分的にはＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、及びＣＤ２０９が挙げられる。

未熟ＤＣは、抗原捕捉能力は高いが、Ｔ細胞刺激能力が比較的低いことによって特徴付けることができる。炎症性メディエーターはＤＣの成熟を促進する。ＤＣが成熟段階に達すると、未熟なＤＣに比べて劇的な特性の変化（例えば、抗原捕捉能力の低下及び／またはＴ細胞を刺激する能力の増加）が生じる。いくつかの実施形態において、ＤＣは、未熟ＤＣを含むか、またはそれである。他の実施形態において、ＤＣは、成熟ＤＣを含むか、またはそれである。

理論に拘束されることは望まないが、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するようにＤＣ細胞を修飾することにより、成熟ＤＣが、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、抗原捕捉能力及びＴ細胞刺激の増加を同時に示すことができると考えられている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、腫瘍抗原提示、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて増加した腫瘍抗原提示を媒介する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、腫瘍Ｔ細胞刺激、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて増加したＴ細胞刺激を媒介する。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１２、ＩＦＮ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＩＬ－１のうちの１、２、３、４、５、６または７個）の分泌の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、食作用の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、腫瘍抗原提示（例えば、食作用後の提示）の増加、抗原プロセシングの増加、抗原交差提示の増加、Ｔ細胞プライミングの増加、及び／またはＴ細胞の刺激を示す。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、好都合な遺伝子の発現の増加または不都合な遺伝子の発現の減少の一方または両方を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むかまたは発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、ＲＯＳの産生の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、代謝再プログラミングを示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、細胞生存機構の誘導を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、細胞死機構の誘導を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含まないＤＣに比べて、食作用チェックポイントに対する抵抗性の増加、トラフィッキングを補助するケモカイン受容体の発現の増加、他の免疫細胞を動員するケモカインの発現の増加、ＥＣＭ分解酵素（例えば、腫瘍ＥＣＭを分解する及び／または抗線維化活性を示すＭＭＰ）の発現の増加、あるいは増殖の増加のうちの１、２、３、４、または５つを示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを含むか、またはそれを発現するＤＣは、例えば本明細書に記載のＣＡＲを伴わないＤＣに比べて、ＣＡＲ発現期間の改善、細胞表面上のＣＡＲの安定性の改善、ＣＡＲ発現レベルの増加、またはＣＡＲのバックグラウンド活性の低下のうちの１、２、３、または４つを示す。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書で使用する場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞上に発現するように操作され、細胞を特異的に標的とし、及び／または抗原と結合する人工細胞表面受容体を指す。ＣＡＲは、例えば、養子細胞移植を用いた治療法として使用することができる。例えば、いくつかの実施形態において、単球、マクロファージ、及び／または樹状細胞は、患者から（例えば、血液、腫瘍、または腹水から）取り出し、特定の抗原形態に特異的な受容体を発現するように修飾される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、抗原、例えば、腫瘍関連抗原に特異的に発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含む。

いくつかの実施形態において、修飾免疫細胞（例えば、修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、その中でＣＡＲを発現させることによって生成される。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含むＣＡＲを含み、免疫細胞は、マクロファージ、単球、または樹状細胞を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらに、１つ以上の細胞外リーダードメイン、１つ以上の細胞外ヒンジドメイン、及び１つ以上の細胞内共刺激ドメインのうちの１つ以上を含むことができる。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサードメインまたはヒンジを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサードメインまたはヒンジを含む。本明細書で使用する場合、「スペーサードメイン」または「ヒンジ」という用語は、ポリペプチド鎖内で膜貫通ドメインを細胞外ドメインまたは細胞内ドメインのいずれかに結合するように機能する、任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、スペーサードメインまたはヒンジは、最大３００アミノ酸、好ましくは１０～１００アミノ酸、最も好ましくは２５～５０アミノ酸を含むことができる。いくつかの実施形態において、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカー（好ましくは２～１０アミノ酸長）が、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞内ドメインとの間の結合を形成することができる。リンカーの一例として、グリシン－セリンダブレットが挙げられる。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含む免疫細胞は、限定されるものではないが、安全スイッチ（例えば、オンスイッチ及びオフスイッチ、自殺スイッチ）、論理ゲート、例えば、ＡＮＤゲート（例えば、２つ以上のＣＡＲにおいて、これらの各々が１つ以上のシグナル伝達ドメインを欠いており、その結果、両方／全てのＣＡＲの活性化が、完全な免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）の活性化または機能に求められる）、ＯＲゲート（例えば、２つ以上のＣＡＲにおいて、各々がＣＤ３ζなどの細胞内ドメイン及び共刺激ドメインを有する）、及び／またはＮＯＴゲート（例えば、２つ以上のＣＡＲにおいて、そのうちの１つが、他のＣＡＲ（複数可）の機能をアンタゴナイズする阻害ドメインを含む）を含むことができる。

また、本開示は、ＣＡＲをコードする核酸配列（例えば、単離核酸配列）を含む免疫細胞を提供し、当該核酸配列は、細胞外ドメインをコードする核酸配列と、膜貫通ドメインをコードする核酸配列と、細胞内ドメインをコードする核酸配列とを含み、当該細胞は、ＣＡＲを発現する単球、マクロファージ、または樹状細胞である。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、免疫細胞内での発現のために、ＣＡＲの別のドメイン（膜貫通ドメインまたは細胞内ドメイン）に作用可能に結合している。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインをコードする核酸は、膜貫通ドメインをコードする核酸に作用可能に結合し、膜貫通ドメインをコードする核酸は、細胞内ドメインをコードする核酸に作用可能に結合している。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含む免疫細胞のエフェクター活性は、ＣＡＲの抗原結合ドメインに特異的に結合する抗原を含む標的細胞に対し向けられる。いくつかの実施形態において、標的細胞に対し向けられる標的エフェクター活性は、食作用、標的細胞細胞傷害性、抗原提示、またはサイトカイン分泌であるか、またはそれを含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）において抗食作用シグナル伝達を阻害する少なくとも１つのドメイン（例えば、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び／または細胞内ドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、例えば、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰα活性の阻害を強化することにより、ＣＡＲを伴わない同じタイプの細胞に比べて、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）のエフェクター活性を改善する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、ＣＤ４７と結合し、例えば、ドミナントネガティブ受容体として機能し、ＳＩＲＰα活性を阻害する（例えば、ＣＤ４７シンク）。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰαに結合する本明細書に記載のＣＡＲは、例えば、活性化受容体を含む（例えば、ＣＤ３ｚ細胞内ドメインを含む）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαの少なくとも１つの相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、食作用論理ゲートであるか、またはそれを含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含むか、または発現するもの）は、以下のうちの少なくとも１つのバリアントまたはフラグメントを含むか、または発現する：ＳＩＲＰα（例えば、ドミナントネガティブＳＩＲＰαもしくはＳＩＲＰαの高親和性操作バリアント（例えば、ＣＶ１））、５Ｆ９ｓｃＦｖ、Ｂ６Ｈ１２ｓｃＦｖ（例えば、ヒト化Ｂ６Ｈ１２ｓｃＦｖ）、ＰＤ１（例えば、ドミナントネガティブＰＤ１もしくはＨＡＣ－Ｉ）、抗ＰＤ１ｓｃＦｖ（例えば、Ｅ２７もしくはデュルバルマブ）、Ｓｉｇｌｅｃ（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、Ｓｉｇｌｅｃ－９、及び／またはＳｉｇｌｅｃ－１１）、及び／またはＳＨＰ－１。いくつかの実施形態において、バリアントまたはフラグメントは、変異した細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、バリアントまたはフラグメントは、少なくとも１つの細胞内ドメインを含まないか、またはそれを発現しない（例えば、免疫細胞は、抗ＣＤ４７ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジドメイン、及びＣＤ８膜貫通を含むか、またはそれを発現する）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含むか、またはそれを発現するもの）は、例えば阻害性チェックポイントをブロックする、ドミナントネガティブ受容体を含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲはさらに、切断ペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、及び／またはＴ２Ａペプチド）及び抗食作用シグナリングの少なくとも１つの阻害ドメインを含む少なくとも１つの第２のＣＡＲを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの第２のＣＡＲは、ＳＩＲＰα（例えば、ＳＩＲＰαの高親和性操作バリアント（例えば、ＣＶ１））、５Ｆ９ｓｃＦｖ、Ｂ６Ｈ１２ｓｃＦｖ（例えば、ヒト化Ｂ６Ｈ１２ｓｃＦｖ）、もしくはＣＤ４７結合細胞外ドメイン、またはこれらのフラグメントを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの第２のＣＡＲは、ＳＩＲＰα膜貫通ドメインまたはそのフラグメントを含む。ある特定の実施形態において、第２のＣＡＲはさらに、ヒンジドメイン（例えば、ＣＤ８ヒンジドメイン）を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも１つの第２のＣＡＲは、（ｉ）リーダー配列（例えば、ＣＤ８リーダー）と、ｉｉ）細胞外ドメイン（例えば、ＳＩＲＰα、ＣＶ１、５Ｆ９ｓｃＦｖ、またはＢ６Ｈ１２ｓｃＦｖ（例えば、ヒト化Ｂ６Ｈ１２ｓｃＦｖ）細胞外ドメイン）と、ｉｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＳＩＲＰαの膜貫通ドメイン）とを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲはさらに、切断ペプチド（例えば、Ｐ２Ａペプチド）及び少なくとも１つのマーカータンパク質（例えば、ＣＤ２０もしくはそのフラグメント、ＣＤ１９もしくはそのフラグメント、ＮＧＦＲもしくはそのフラグメント、合成ペプチド、及び／または蛍光タンパク質）を含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲを含むか、またはそれを発現するもの）は、１つ以上のホスファターゼ死ドメイン（例えば、ホスファターゼ死Ｓｈｐ１、ホスファターゼ死７２－５ｐｔａｓｅ（ＩＮＰＰ５Ｅ）、ホスファターゼ死Ｓｈｐ２、及び／またはホスファターゼ死ＳＨＩＰ－１ドメイン）、及び／または恒常活性型キナーゼ領域（例えば、恒常活性型ＬＹＮドメイン）を含むか、またはそれを発現する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲはさらに、切断ペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、及び／またはＴ２Ａペプチド）、ならびに１つ以上のホスファターゼ死ドメイン（例えば、ホスファターゼ死Ｓｈｐ１、ホスファターゼ死７２－５ｐｔａｓｅ（ＩＮＰＰ５Ｅ）、ホスファターゼ死Ｓｈｐ２、及び／またはホスファターゼ死ＳＨＩＰ－１ドメイン）、及び／または恒常活性型キナーゼ領域（例えば、恒常活性型ＬＹＮドメイン）を含む。

細胞外ドメイン
本開示は、細胞外ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、トール様受容体（ＴＬＲ）細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、リーダードメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ細胞外ドメイン、リーダードメイン、抗原結合ドメイン、及びヒンジドメインのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。

ＦｃＲ細胞外ドメイン
いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、完全長ＦｃＲ細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、完全長ＦｃＲ細胞外ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメイン（またはその一部分）は、ヒトＦｃＲ細胞外ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む。

ＴＬＲ細胞外ドメイン
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、完全長ＴＬＲ細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、完全長ＴＬＲ細胞外ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメイン（またはその一部分）は、ヒトＴＬＲ細胞外ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む。

リーダードメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の細胞外リーダードメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、細胞外リーダードメインをコードする核酸配列を含むが、細胞外リーダードメインは、ＣＡＲが免疫細胞内で発現する前にＣＡＲから切断される。いくつかの実施形態において、細胞外リーダードメインは、ヒト細胞外リーダードメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、細胞外リーダードメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、細胞外リーダードメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、細胞外リーダードメインは、ＣＤ８細胞外リーダードメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外リーダードメインは、刺激または共刺激ドメイン（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１、ＩＮＳＲ、ｃＭＥＴ、ＭＵＳＫ、ＰＤＧＦＲ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＴＩＥ２、ＴＲＫ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＲＥＭ－１、ＴＲＥＭ－２、ＤＡＰ１２、ＭＲ、ＩＣＯＳ、ＭｙＤ８８ドメイン）からのリーダードメインを含む。

抗原結合ドメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（例えば、標的細胞上の）抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、自己免疫疾患、及び／またはがん細胞に関連する抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして作用する抗原を認識する。

いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、腫瘍抗原（例えば、関心対象の腫瘍またはがんに特異的な抗原）に結合する。いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、１つ以上の抗原性がんエピトープを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１もしくはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）もしくは（ＧａｌＮＡｃα－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；がん胎児抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットアルファ２（ＩＬ－１３Ｒａ２もしくはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ－１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＴｅｓｔｉｓｉｎもしくはＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）；ステージ特異的胚性抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシンプロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２変異（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（Ｐｒｏｓｏｍｅ、Ｍａｃｒｏｐａｉｎ）サブユニット、ベータタイプ、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；ブレイクポイントクラスター領域（ＢＣＲ）及びアベルソンマウス白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）からなるがん遺伝子融合タンパク質（ｂｃｒ－ａｂｌ）；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体ベータ；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；ｐａｎｎｅｘｉｎ３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、座位Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；がん／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）；がん／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）；染色体１２ｐに位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；黒色腫がん精巣抗原１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；黒色腫がん精巣抗原２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３変異体；ｐｒｏｓｔｅｉｎ；ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原１（ＰＣＴＡ－１もしくはガレクチン８）、Ｔ細胞１認識黒色腫抗原（ＭｅｌａｎＡもしくはＭＡＲＴ１）；Ｒａｔ肉腫（Ｒａｓ）変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレイクポイント；アポトーシスの黒色腫阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃ鳥類骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）；シトクロムＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ；ＢｒｏｔｈｅｒｏｆｔｈｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｏｆＩｍｐｒｉｎｔｅｄＳｉｔｅｓ）、Ｔ細胞３認識扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；キナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫Ｘブレイクポイント２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ－１）；腎ユビキタス１（ＲＵ１）；腎ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒト乳頭腫ウイルスＥ６（ＨＰＶＥ６）；ヒト乳頭腫ウイルスＥ７（ＨＰＶＥ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０－２変異（ｍｕｔｈｓｐ７０－２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲもしくはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）。ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；あるいは免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）を含む。ある特定の実施形態において、腫瘍抗原は、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）を含む。ある特定の実施形態において、腫瘍抗原は、ＰＳＭＡを含む。ある特定の実施形態において、腫瘍抗原はメソセリンを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ミスフォールドしたタンパク質抗原またはタンパク質凝集体のタンパク質（例えば、関心対象の疾患／障害に特異的なタンパク質）に結合する。いくつかの実施形態において、疾患／障害は、神経変性疾患／障害、炎症性疾患／障害、心血管疾患／障害、線維性疾患／障害、またはアミロイドーシス（例えば、免疫グロブリン軽鎖もしくはトランスサイレチンのタンパク質凝集体によって媒介されるもの）である。いくつかの実施形態において、神経変性疾患／障害は、タウオパチー、ａシヌクレイン症、初老期認知症、老人性認知症、アルツハイマー病（ベータアミロイドのタンパク質凝集体が媒介）、１７番染色体に関連するパーキンソン病（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、ピック病、原発性進行性失語症、前頭側頭型認知症、大脳皮質基底核認知症、パーキンソン病、認知症を伴うパーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ－Ｓｐａｔｚ症候群、ポリグルタミン病、三塩基反復病、家族性英国型認知症、致死性家族性不眠症、Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ－Ｓｔｒａｕｓｓｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｎｋｅｒ症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（アイスランド）（ＨＣＨＷＡ－Ｉ）、散発性致死性不眠症（ｓＦＩ）、可変プロテアーゼ感受性プリオン病（ＶＰＳＰｒ）、家族性デンマーク型認知症、及びプリオン病（クロイツフェルト－ヤコブ病、ＣＪＤ、及びバリアントクロイツフェルト－ヤコブ病（ｖＣＪＤ）など）からなる群より選択される。

いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、抗原に結合する任意のドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、合成抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、非ヒト抗体、またはこれらの任意のフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、アプタマー、ｄａｒｐｉｎ、ｃｅｎｔｙｒｉｎ、天然または合成の受容体、アフィボディ、または他の操作タンパク質認識分子であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、哺乳類抗体もしくはそのフラグメントであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、全体または一部において、ＣＡＲが最終的に使用される種と同じ種に由来する。例えば、ヒトで使用する場合、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、２つ以上の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、二重特異性ＣＡＲである。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、１つ以上の抗原結合ドメインを含む２つ以上の異なるＣＡＲを含む。いくつかの実施形態において、二重特異性ＣＡＲを含む、及び／または１つ以上の抗原結合ドメインを含む２つ以上の異なるＣＡＲを含む、免疫細胞は、２つの抗原が存在することを要件とすることにより、オフターゲット及び／またオンターゲットの組織外作用を低減することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、二重特異性ＣＡＲを含み、及び／または１つ以上の抗原結合ドメインを含む２つ以上の異なるＣＡＲを含み、このときＣＡＲは異なるシグナルを提供し、これらは、単独では修飾細胞の活性化を媒介するのに不十分であるが、一緒にすれば相乗的であり、修飾細胞の活性化を刺激する。いくつかの実施形態において、このようなコンストラクトは、「ＡＮＤ」論理ゲートと称されることがある。

いくつかの実施形態において、二重特異性ＣＡＲを含む、及び／または１つ以上の抗原結合ドメインを含む２つ以上の異なるＣＡＲを含む、免疫細胞は、細胞の活性が刺激される前に、１つの抗原が存在し、第２の正常なタンパク質抗原が存在しないことを要件とすることにより、オフターゲット及び／またはオンターゲットの組織外作用を低減することができる。いくつかの実施形態において、このようなコンストラクトは、「ＮＯＴ」論理ゲートと称されることがある。ＡＮＤゲートとは対照的に、ＮＯＴゲートのＣＡＲ修飾細胞は、１つの抗原に結合することによって活性化される。しかし、第２の受容体が第２の抗原に結合すると、ＣＡＲを介して持続する活性化シグナルを無効化するように機能する。典型的には、このような阻害性受容体は、正常組織には豊富に発現するが腫瘍組織には存在しない抗原を標的とすると考えられる。

ヒンジドメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の細胞外ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ヒンジドメインは、ヒト細胞外ヒンジドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ヒンジドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、細胞外ヒンジドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞外ヒンジドメインは、ＣＤ８ａ細胞外ヒンジドメイン、またはＩｇＧ４もしくはＣＤ２８細胞外ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞外ヒンジドメインは、ＣＤ２８細胞外ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ヒンジドメインは、ＣＡＲの物理化学的パラメーター、例えば、腫瘍抗原に対する最適なサイズ（例えば、阻害分子の排除を可能にするサイズ）、最適な柔軟性、最適なタンパク質フォールディング、最適なタンパク質安定性、最適な結合、最適なホモ二量化、及び／またはホモ二量化の欠如を最適化する。

膜貫通型ドメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、例えば、細胞外ドメインを細胞内ドメインに接続する、膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの１つ以上の他のドメイン（複数可）と天然に関連している。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小にするため、他の表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとの結合を回避するように修飾することができる。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、天然または合成の供給源のいずれに由来してもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、天然の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ヒト膜貫通ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ８ａ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＲＬ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＲＬ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１、ＩＮＳＲ、ｃＭＥＴ、ＭＵＳＫ、ＰＤＧＦＲ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＴＩＥ２、ＴＲＫ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＲＥＭ－１、ＴＲＥＭ－２、ＤＡＰ１２、ＭＲ、ＩＣＯＳ、ＭｙＤ８８、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲγ、Ｖ／Ｉ／ＬｘＹｘｘＬ／Ｖ、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４５、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、ＰＤ１、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＫＩＲ－２ＤＬ、ＫＩＲ－３ＤＬ、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ３３、ＢＴＬＡ、ＣＤ３２ｂ、ＳＩＲＰｂ、ＣＤ２２、ＰＩＲ－Ｂ、ＬＩＬＲＢ１、ＣＤ３６、またはＳｙｋ膜貫通ドメインを含む。

ＦｃＲ膜貫通ドメイン
いくつかの実施形態において、ＦｃＲ膜貫通ドメインは、完全長ＦｃＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ膜貫通ドメインは、完全長ＦｃＲ膜貫通ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ膜貫通ドメインは、ヒトＦｃＲ膜貫通ドメインもしくはその一部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ膜貫通ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ膜貫通ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞膜貫通ドメインは、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む。

ＴＬＲ膜貫通ドメイン
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、完全長ＴＬＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、完全長ＴＬＲ膜貫通ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、ヒトＴＬＲ膜貫通ドメインもしくはその一部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む。

細胞内ドメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ヒト細胞内ドメインもしくはその一部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメイン及び／または他の細胞質ドメインは、ＣＡＲが発現する細胞（例えば、免疫細胞）の活性化を担う。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメインは、当該ＣＡＲを含む免疫細胞内でのシグナルの活性化及び／または伝達を担う。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメインは、シグナルの活性化及び／または伝達を担う少なくとも１つのドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、共刺激分子及びシグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメインは、二重シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメインは、２つを超えるシグナル伝達ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、表面受容体の細胞質部分を含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、共刺激分子を含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、免疫細胞内でシグナル伝達を開始するように作用する分子を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメインは、１つ以上の共刺激分子の任意の部分（例えば、ＣＤ３からの少なくとも１つのシグナル伝達ドメイン、ＦｃイプシロンＲＩγ鎖、その任意の誘導体またはバリアント、同じ機能的能力を有するその任意の合成配列、及びこれらの任意の組合せ）を含む。

ＦｃＲ細胞内ドメイン
いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞内ドメインは、完全長ＦｃＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞内ドメインは、完全長ＦｃＲ細胞内ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞内ドメインは、ヒトＦｃＲ細胞内ドメインもしくはその一部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞内ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞内ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞細胞内ドメインは、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ（ＦｃガンマＲＩＩｃ）、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む。

ＴＬＲ細胞内ドメイン
いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、完全長ＴＬＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、完全長ＴＬＲ細胞内ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、ヒトＴＬＲ細胞内ドメインもしくはその一部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む。

シグナル伝達ドメイン
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒト細胞内シグナル伝達ドメインもしくはその一部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。

いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲγ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１、ＩＮＳＲ、ｃＭＥＴ、ＭＵＳＫ、ＰＤＧＦＲ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＴＩＥ２、ＴＲＫ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＲＥＭ－１、ＴＲＥＭ－２、ＤＡＰ１２、ＭＲ、ＩＣＯＳ、ＭｙＤ８８、Ｖ／Ｉ／ＬｘＹｘｘＬ／Ｖ、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４５、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、ＰＤ１、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＫＩＲ－２ＤＬ、ＫＩＲ－３ＤＬ、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ３３、ＢＴＬＡ、ＣＤ３２ｂ、ＳＩＲＰｂ、ＣＤ２２、ＰＩＲ－Ｂ、ＬＩＬＲＢ１、Ｓｙｋ、４１ＢＢＬリガンド（４１ＢＢＬ；ＴＮＦＳＦ９）、ＣＤ２７、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、ＣＤ２０９、Ｄｅｃｔｉｎ－２、または１つ以上のサイトカイン受容体シグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＬ１Ｒ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ３Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８Ｒ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０Ｒ、ＩＬ１１Ｒ、ＩＬ１２Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ１４Ｒ、ＩＬ１５Ｒ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＦＮａＲ、ＩＦＮｇＲ、ＴＮＦＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２Ｒ、Ｄａｐ１０、ＣＤ３６、Ｄｅｃｔｉｎ－１、もしくはＩＣＯＳＬ細胞内情報伝達ドメイン）を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞内ドメインは、二重シグナル伝達ドメイン、例えば、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＣＤ１１６受容体ベータ鎖、ＣＳＦ１－Ｒ、ＬＲＰ１／ＣＤ９１、ＳＲ－Ａ１、ＳＲ－Ａ２、ＭＡＲＣＯ、ＳＲ－ＣＬ１、ＳＲ－ＣＬ２、ＳＲ－Ｃ、ＳＲ－Ｅ、ＣＲ１、ＣＲ３、ＣＲ４、ｄｅｃｔｉｎ１、ＤＥＣ－２０５、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＣＤ１４、ＣＤ３６、ＬＯＸ－１、ＣＤ１１ｂを上記段落に挙げられたシグナル伝達ドメインとともに、任意の組合せで含む。

共刺激ドメイン
本明細書で使用する場合、「共刺激分子」または「共刺激ドメイン」とは、初期刺激を強めるか、または弱めるために使用される免疫細胞内の分子を指す。例えば、ＴＬＲまたはＣＤ４７／ＳＲＰα軸のような病原体関連パターン認識受容体は、免疫細胞上の分子であり、それぞれ初期刺激を高めたり弱めたりする。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、ＴＣＲ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ８６、共通ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１２７、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（触覚）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、本明細書に記載の他の共刺激分子、その誘導体、バリアント、またはフラグメント、同じ機能的能力を有する共刺激分子の任意の合成配列、及びこれらの任意の組合せを含む。

いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性であるドメインとすることができる。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、特定の免疫細胞タイプ（例えば、本明細書で提供される修飾免疫細胞）に対し内在性でないドメインとすることができる。

本明細書で使用する場合、「共刺激シグナル」とは、一次シグナル（例えば、免疫細胞上のＣＡＲの活性化）との組合せで免疫細胞の活性化をもたらすシグナルを指す。

切断ペプチド
本明細書で使用する場合、切断ペプチドとは、細胞内で組換えタンパク質の切断を誘導することができるペプチドを指す。いくつかの実施形態において、切断ペプチドは、２Ａペプチドである。いくつかの実施形態において、切断ペプチドは、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、もしくはＴ２Ａペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の核酸は、１つ以上の切断ペプチドをコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、切断ペプチドをコードする核酸配列を含む核酸は、１つ以上の細胞内ドメインをコードする１つ以上の核酸配列及び１つ以上のペプチド薬剤を含む１つ以上の核酸配列も含み、核酸を翻訳することで、切断ペプチドによって１つ以上のペプチド薬剤から分離された１つ以上の細胞内ドメインを含むタンパク質がもたらされる。いくつかの実施形態において、第１のプロモーターは、ＣＡＲをコードする１つ以上の核酸に作用可能に結合し、第２のプロモーターは、ペプチド薬剤をコードする１つ以上の核酸に作用可能に結合している。いくつかの実施形態において、ＣＡＲと、任意選択で１つ以上のペプチド薬剤とを含む核酸配列はさらに、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む。ＩＲＥＳ配列は、翻訳の開始を促進するｍＲＮＡとのキャップ非依存性リボソーム結合を開始する、任意のウイルス、染色体、または人工的に設計された配列とすることができる。

ペプチド薬剤
本明細書で使用する場合、ペプチド薬剤とは、免疫細胞内でＣＡＲと同時発現するペプチドを指す。いくつかの実施形態において、ペプチド薬剤は、化学量論的バランス及びＣＡＲの最適なシグナル伝達を確実にするためにＣＡＲと同時発現する。ある実施形態において、ペプチド薬剤は、同一のペプチド薬剤とホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、ペプチド薬剤は、異なるペプチド薬剤とヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の核酸は、１つ以上のペプチド薬剤をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド薬剤は、ＦｃＲガンマ鎖であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド薬剤は、任意のペプチド、タンパク質、受容体、分泌抗体、またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、またはナノボディ）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド薬剤は、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＩＦＮ－ｙ、ＧＭＣＳＦ、またはＭＣＳＦのうちの１つ以上）、ＣＤ４０－Ｌ、ドミナントネガティブＳＩＲＰａ、ドミナントネガティブＰＤ１、ドミナントネガティブＣＤ４５、ドミナントネガティブＳＩＧＬＥＣ１０、またはドミナントネガティブＬＩＬＲＢを含む。

Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の抗原結合ドメイン及びＦｃＲ細胞外ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＦｃＲ膜貫通ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの細胞内ドメインは、ＦｃＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上は、ヒトＦｃＲドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインは、一緒になって完全長ＦｃＲを構成する。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインは、一緒になって完全長ＦｃＲの一部分を構成する。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、完全長ＦｃＲ細胞外ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ膜貫通ドメインは、完全長ＦｃＲ膜貫通ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲ細胞内ドメインは、完全長ＦｃＲ細胞内ドメインの一部分を含む。

トール様抗原受容体（ＴＬＲ）
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の抗原結合ドメイン及びトール様受容体（ＴＬＲ）細胞外ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ膜貫通ドメインを含む、及び／またはＣＡＲの細胞内ドメインは、ＴＬＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上は、ヒトＴＬＲドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインは、一緒になって完全長ＴＬＲを構成する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン及びＴＬＲ細胞内ドメインは、一緒になって完全長ＴＬＲの一部分を構成する。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞外ドメインは、完全長ＴＬＲ細胞外ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ膜貫通ドメインは、完全長ＴＬＲ膜貫通ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ細胞内ドメインは、完全長ＴＬＲ細胞内ドメインの一部分を含む。

核酸コンストラクト
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲまたはそのフラグメントをコードする核酸分子を提供する。免疫細胞は、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、外来核酸分子）を含むことができる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＣＡＲをコードする核酸分子は、（ａ）細胞外ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞外ドメイン）と、（ｂ）膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）と、（ｃ）細胞内ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内ドメイン）とを含む。

別段の明記がない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という表現は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンでイントロン（複数可）を含み得る範囲内で、イントロンも含むことができる。「コードする」という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド内の特定のヌクレオチド配列が、生物学的プロセスにおいて、定義されたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列を有する他のポリマー及び巨大分子の合成のための鋳型として機能する固有の特性、ならびにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞または他の生物系においてタンパク質をもたらす場合、タンパク質をコードする。コード鎖（ｍＲＮＡの塩基配列と同一であり、通常、配列表で示されるヌクレオチド配列）及び非コード鎖（遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される）はいずれも、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると称することができる。

「作用可能に結合した」または「転写制御」という用語は、異種核酸配列の発現をもたらす制御配列と異種核酸配列との間の機能的結合を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係に置かれるとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作用可能に結合している。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列と作用可能に結合している。作用可能に結合したＤＮＡ配列は、互いに連続することができ、例えば、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合、これらは同じリーディングフレーム内にある。

本明細書で使用する場合、「フラグメント」または「部分」という用語は、全体の離散的な部分を含み、ただし全体の構造に見られる１つ以上の部分が欠如した構造を指す。いくつかの実施形態において、フラグメントは、このような離散的な部分を含む。いくつかの実施形態において、フラグメントは、全体に見られる特徴的な構造エレメントまたは部分からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドフラグメントは、全体のヌクレオチドに見られる少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、またはそれ以上の単量体単位（例えば、核酸）を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドフラグメントは、全ヌクレオチドに見られる単量体単位（例えば、残基）の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上を含むか、またはそれからなる。全体の材料または実体は、いくつかの実施形態では全体の「親」と称されることがある。

本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲまたはそのフラグメントをコードする核酸分子は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、またはこれらの組合せであり得る。いくつかの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲもしくはそのフラグメントをコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物を含むか、またはそれである。いくつかの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲもしくはそのフラグメントをコードするＤＮＡコンストラクトを含むか、またはそれである。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの全てまたはフラグメントは、例えば、細胞（例えば、哺乳類細胞）内での発現のために、コドン最適化された核酸分子によってコードされる。様々なコドン最適化法が当技術分野で知られており、例えば、米国特許第５，７８６，４６４号及び同第６，１１４，１４８号に開示されている（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される）。

いくつかの実施形態において、ベクターは、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲまたはそのフラグメントをコードする核酸分子を含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、プラスミド、ウイルスベクター、ファージミド、レトロトランスポゾン（例えば、ｐｉｇｇｙｂａｃｋもしくはｓｌｅｅｐｉｎｇｂｅａｕｔｙ）、部位特異的挿入ベクター（例えば、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲをコードする核酸配列を含む鋳型ドナーＤＮＡの挿入のためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ、もしくはＣ２ｃ２のうちの１つ以上を含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）、Ｚｎフィンガーヌクレアーゼ、またはＴＡＬＥＮ）、自殺発現ベクター、あるいは当該分野で知られている他のベクターが挙げられる。ベクターは、真核生物における複製及び組込みに適していると考えられる。ベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、シークエンシングベクターを挙げることができる。

ベクターは、複製起点、プロモーター配列（例えば、構成的または誘導的プロモーター）、及び／または好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位（例えば、ＷＯ０１／９６５８４、ＷＯ０１／２９０５８、及び米国特許第６，３２６，１９３号を参照（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される））を含むことができる。また、ベクターとしては、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化シグナル）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にするエレメント（例えば、ＳＶ４０オリジン及び／またはＣｏｌＥ１）、選択を可能にするエレメント（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／またはゼオシンマーカー）、及び／またはレポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質）も挙げることができる。

本明細書に記載の核酸の発現は、ＣＡＲポリペプチドまたはそのフラグメントをコードする核酸を発現ベクター中のプロモーターに作用可能に結合することにより、達成することができる。例示的なプロモーター（例えば、構成的プロモーター）としては、限定されるものではないが、伸長因子１αプロモーター（ＥＦ－１α）プロモーター、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ユビキチンＣプロモーター、ホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）プロモーター、鳥類白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、またはクレアチンキナーゼプロモーターが挙げられる。誘導的プロモーターの例としては、限定されるものではないが、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、及びテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。ベクターは、転写開始の頻度を調節するために、追加のプロモーターエレメント、例えば、エンハンサーも含むことができる。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲまたはそのフラグメントをコードする核酸分子を含むベクターは、ウイルスベクターを含むか、またはそれである。ウイルスベクター技術は当技術分野で周知されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ１－４，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＮＹ）で説明されている。ウイルスベクターの例としては、限定されるものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクターもしくはガンマレトロウイルスベクター）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ベクターは、レンチウイルスベクター（例えば、米国特許第９，１４９，５１９号または国際公開第ＷＯ２０１７／０４４４８７号で説明されているもの（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される））を含む。

いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターを含む。アデノウイルスは、二重鎖ＤＮＡを含む大きなウイルス科である。アデノウイルスは、宿主細胞の核内で複製し、宿主の細胞機構を使用してウイルスＲＮＡ、ＤＮＡ、及びタンパク質を合成する。アデノウイルスは、当技術分野において、複製細胞及び非複製細胞の両方に影響を及ぼし、大きな導入遺伝子を収容し、宿主細胞ゲノムへの統合なしでタンパク質をコードすることが知られている。いくつかの実施形態において、アデノウイルスベクターは、Ａｄ２ベクターまたはＡｄ５ベクター（例えば、Ａｄ５ｆ３５アデノウイルスベクター、例えば、ヘルパー依存性Ａｄ５Ｆ３５アデノウイルスベクター）を含む。

いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。ＡＡＶシステムは、当技術分野で周知されている（例えば、ＫｅｌｌｅｈｅｒａｎｄＶｏｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１７（６）：１１１０－１７（１９９４）；Ｃｏｔｔｅｎｅｔａｌ．，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８９（１３）：６０９４－９８（１９９２）；Ｃｕｒｉｅｌ，ＮａｔＩｍｍｕｎ，１３（２－３）：１４１－６４（１９９４）；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，ＣｕｒｒＴｏｐＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，１５８：９７－１２９（１９９２）；及びＡｓｏｋａｎＡ，ｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０（４）：６９９－７０８（２０１２）を参照）。組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターを生成し、使用するための方法は、例えば、米国特許第５，１３９，９４１号及び第４，７９７，３６８号に記載されている。

いくつかのＡＡＶ血清型（ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（例えば、ＡＡＶ３Ｂ）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、及びＡＡＶ１１、ならびにこれらのバリアントを含む）が特性評価されている。概して、任意のＡＡＶ血清型は、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲを送達するために使用することができる。いくつかの実施形態において、ＡＡＶ血清型は、特定の組織に対する向性を有する。

いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、最近、相同組換え（ＨＲ）中にドナー鋳型ＤＮＡとして機能するためのアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを用いた高レベルの精密なゲノム編集を容易にすることが示されている。

いくつかの実施形態において、ベクターは、（例えば、ＴｏｂｉａｓＭａｅｔｚｉｇｅｔａｌ．，“ＧａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１Ｊｕｎ；３（６）：６７７－７１３（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載のように）ガンマレトロウイルスベクターを含む。例示的なガンマレトロウイルスベクターとしては、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾限局巣形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、ならびにこれらから誘導されるベクターが挙げられる。

いくつかの実施形態において、ベクターは、ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲ）及び第２のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載の異なるＣＡＲ）をコードする２つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ及び第２のＣＡＲをコードする２つ以上の核酸配列は、単一の核分子により、例えば、同じフレーム内で単一のポリペプチド鎖として、コードされる。いくつかの実施形態において、２つ以上のＣＡＲは、１つ以上の切断ペプチド部位（例えば、自動切断部位または細胞内プロテアーゼの基質）によって分離されている。ある特定の実施形態において、切断ペプチドは、ブタテシオウイルスＩ（Ｐ２Ａ）ペプチド、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａ型ウイルス（Ｅ２Ａ）ペプチド、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）ペプチド、またはこれらのバリアントを含む。

いくつかの実施形態において、ベクターは、ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲ）をコードする少なくとも１つの核酸配列と、ＣＡＲと同時発現する少なくとも１つの遺伝子（例えば、本明細書に記載のサイトカイン（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１２、ＩＦＮ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、及び／またはＩＬ－１）、あるいは本明細書に記載の刺激リガンド（例えば、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＣＡＭ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンパトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、トールリガンド受容体に結合するアゴニストもしくは抗体、及び／またはＢ７－Ｈ３リガンド））をコードする少なくとも１つの核酸とを含む。

医薬組成物
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）と、１つ以上の医薬的または生理的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤との組合せを含む、医薬組成物を提供する。

「治療有効量」、「免疫有効量」、「抗免疫応答有効量」、または「免疫応答阻害有効量」が示される場合、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物の正確な量は、医師により、患者（対象）の年齢、体重、免疫応答、及び状態の個々の差を考慮して決定することができる。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物は、バッファー（中性緩衝食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む）；炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、デキストラン、またはマンニトール）；タンパク質、ポリペプチド、またはアミノ酸（例えばグリシン）；抗酸化剤；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含むことができる。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、混入物を実質的に含まず、例えば、検出可能なレベルの混入物（例えば、エンドトキシン）が存在しない。

本明細書に記載の医薬組成物は、治療または予防されるべき疾患、障害、または状態に適切な方法で投与することができる。投与の量及び頻度は、患者の状態、ならびに患者の疾患、障害、または状態のタイプ及び重症度といった因子によって決定されるが、臨床試験によって適切な投与量が決定されることもある。

本明細書に記載の医薬組成物は、様々な形態をとることができる。このような形態としては、例えば、液体、半固体、及び固体の投与形態、例えば、溶液（例えば、注射液及び点滴液）、分散液または懸濁液、リポソーム、ならびに坐剤が挙げられる。好ましい組成物は、注射液または点滴溶液であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内、皮下、皮内、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、経動脈、または腹腔内の投与用に製剤化することができる。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内）投与用に製剤化される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内点滴または注射用に製剤化される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、筋肉内または皮下注射用に製剤化される。本明細書に記載の医薬組成物は、免疫療法で一般的に知られている点滴技法を使用することによって投与するために製剤化することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，ＮｅｗＥｎｇ．Ｊ．ｏｆＭｅｄ．３１９：１６７６，１９８８（参照により全体として本明細書に援用される）を参照）。

本明細書で使用する場合、「非経口投与」及び「非経口投与される」という用語は、経腸投与及び局所投与以外の投与様式を指し、通常は注射または点滴によるものであり、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、腫瘍内、及び胸骨内の注射及び点滴が含まれる。

本明細書に記載の免疫細胞を含む医薬組成物は、約１０^４～約１０^９細胞／ｋｇ体重（例えば、約１０^５～約１０^６細胞／ｋｇ体重）（これらの範囲内の全ての整数値を含む）で投与することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）の用量は、少なくとも約１×１０^６、約１．１×１０^６、約２×１０^６、約３．６×１０^６、約５×１０^６、約１×１０^７、約１．８×１０^７、約２×１０^７、約５×１０^７、約１×１０^８、約２×１０^８、約５×１０^８、約１×１０^９、約２×１０^９、または約５×１０^９細胞を含む。本明細書に記載の医薬組成物は、ある特定の投与量で複数回投与することもできる。特定の患者に対する最適な投与量及び治療レジメンは、当業者が、患者の疾患、障害、または状態の徴候をモニターし、それに応じて治療を調整することにより、容易に決定することができる。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物を対象に投与し、続いて再採血し（またはアフェレーシスを実施し）、採取した免疫細胞を活性化し、活性化した免疫細胞を対象に再注射することが所望されることがある。このプロセスは、複数回（例えば、数週間ごとに）実施され得る。免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、約１０ｃｃ～約４００ｃｃの採血から活性化することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、約２０ｃｃ、約３０ｃｃ、約４０ｃｃ、約５０ｃｃ、約６０ｃｃ、約７０ｃｃ、約８０ｃｃ、約９０ｃｃ、または約１００ｃｃの採血から活性化される。理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載の複数の採血及び再注入を含む方法は、ある特定の免疫細胞集団を選択し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物は、第２の療法と組み合わせて（例えば、その前、同時、または後に）投与される。例えば、第２の療法としては、限定されるものではないが、抗ウイルス療法（例えば、シドホビル、インターロイキン－２、シタラビン（ＡＲＡ－Ｃ）、もしくはナタリズマブ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）－Ｔ細胞療法、化学療法、放射線照射、免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、ＦＫ５０６抗体、もしくはグルココルチコイド）、アンタゴニスト（例えば、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、ＣＤ４７アンタゴニスト、ＳＩＲＰａアンタゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒアンタゴニスト、もしくはＳＴＩＮＧアゴニストのうちの１つ以上）、または免疫切除（ｉｍｍｕｎｏａｂｌａｔｉｖｅ）剤（例えば、抗ＣＤ５２抗体（例えば、アレムツズマブ）、抗ＣＤ３抗体、サイトキシン、フルダリビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、もしくは放射線照射）を挙げることができる。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物は、骨髄移植または化学療法剤（例えば、フルダラビン、外部ビーム照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはリツキサン）を用いたリンパ球切除療法と組み合わせて（例えば、その前、同時、または後に）投与される。ある特定の実施形態において、対象は、高用量化学療法による標準的な治療を受け、次に末梢血幹細胞移植を受ける。ある特定の実施形態において、移植後、対象は、本明細書に記載の免疫細胞を含む医薬組成物の点滴を受ける。本明細書に記載の医薬組成物は、手術の前または後に投与することができる。

対象に投与されるべき任意の前述の治療薬の投与量は、治療される疾患、障害、または状態によって、及び特定の対象に基づいて変化する。ヒトの投与のための投与量のスケーリングは、当分野で受け入れられている方法に従って実施することができる。例えば、アレムツズマブの用量は、概して、成人に対し約１ｍｇ～約１００ｍｇとなり、通常、約１日～約３０日の期間に毎日投与され、例えば、１日用量は１日当たり約１ｍｇ～約１０ｍｇとなる（例えば、米国特許第６，１２０，７６６号（参照により全体として本明細書に援用される）に記載の通りである）。

治療方法
本開示は、とりわけ、対象における疾患または障害（例えば、本明細書に記載の疾患または障害）を治療する方法を提供し、当該方法は、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物を送達することを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量が、疾患または障害を有する対象に投与される。本明細書に記載の医薬組成物は、対象における疾患もしくは障害を治療するための、または対象における免疫応答を刺激するための、医薬の製造で使用するためのものとすることができる。

本明細書に記載の方法で治療される対象は、哺乳類、例えば、霊長類、例えば、ヒト（例えば、本明細書に記載の疾患または障害を有するか、またはそれを有するリスクのある患者）とすることができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、対象に対し自己由来、同種異系、または異種異系であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載の投与レジメンに従って、単独で、または１つ以上の治療薬剤、手順、もしくはモダリティと組み合わせて、対象に投与することができる。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物は、腫瘍またはがん、神経変性疾患または障害、炎症性疾患または障害、心血管疾患または障害、線維性疾患または障害、アミロイドーシスに関連する疾患、及びこれらの組合せを治療または予防するために使用することができる。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物を用いて、対象におけるがんまたは腫瘍を治療する（例えば、その進行の低減、阻害、または遅延のうちの１つ以上を行う）方法が提供される。対象は、成人形態または小児形態のがんを有し得る。がんは、初期、中期、もしくは後期にあるか、または転移性がんであり得る。がんとしては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、もしくは骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫）、または転移性病変を挙げることができる。固形腫瘍の例としては、様々な器官系の悪性腫瘍、例えば、肉腫及び癌腫（例えば、腺癌）、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ系、胃腸（例えば、結腸）、肛門、生殖器、及び尿生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、中枢神経系（例えば、脳、神経、またはグリア細胞）、頭頚部、皮膚（例えば、黒色腫、例えば、皮膚黒色腫）、膵臓、及び骨（例えば、脊索腫）に影響を及ぼすものが挙げられる。

いくつかの実施形態において、がんは、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平上皮及び／または非扁平上皮組織像を有する非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、またはＮＳＣＬＣ腺癌）、または小細胞肺癌（ＳＣＬＣ））、皮膚癌（例えば、メルケル細胞癌または黒色腫（例えば、進行性黒色腫））、卵巣癌、中皮腫、膀胱癌、軟部組織肉腫（例えば、血管外皮腫（ＨＰＣ））、骨癌（骨肉腫）、腎臓癌（例えば、腎細胞癌など）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌など）、胆管癌、肉腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、前立腺癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つ、または全てを発現しない乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌））、大腸癌（例えば、再発大腸癌または転移性大腸癌、例えば、マイクロサテライト不安定性大腸癌、マイクロサテライト安定性大腸癌、ミスマッチ修復機構熟達（ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｔ）大腸癌、またはミスマッチ修復機構欠損大腸癌）、上咽頭癌、十二指腸癌、子宮内膜癌、膵臓癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、肛門癌、胃食道癌、甲状腺癌（例えば、未分化甲状腺癌）、子宮頸癌（例えば、子宮頸部扁平上皮癌）、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）（例えば、非定型肺カルチノイド腫瘍）、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）、リンパ腫（例えば、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、あるいは白血病（例えば、骨髄性白血病またはリンパ性白血病）から選択される。

いくつかの実施形態において、がんは、脳腫瘍（例えば、膠芽腫、膠肉腫、または再発性脳腫瘍）である。いくつかの実施形態において、がんは、膵臓癌（例えば、進行性膵臓癌）である。いくつかの実施形態において、がんは、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、ＩＩ～ＩＶ期黒色腫、ＨＬＡ－Ａ２陽性黒色腫、切除不能黒色腫、もしくは転移性黒色腫）、またはメルケル細胞癌）である。いくつかの実施形態において、がんは、腎臓癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、転移性腎細胞癌））である。いくつかの実施形態において、がんは、乳癌（例えば、転移性乳癌またはＩＶ期乳癌、例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ））である。いくつかの実施形態において、がんは、ウイルス関連癌である。いくつかの実施形態において、がんは、肛門管癌（例えば、肛門管の扁平上皮癌）である。いくつかの実施形態において、がんは、子宮頸癌（例えば、子宮頸部の扁平上皮癌）である。いくつかの実施形態において、がんは、胃癌（例えば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）陽性胃癌、または胃癌もしくは胃－食道接合部癌）である。いくつかの実施形態において、がんは、頭頸部癌（例えば、ＨＰＶ陽性及び陰性の頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ））である。いくつかの実施形態において、がんは、上咽頭癌（ＮＰＣ）である。いくつかの実施形態において、がんは、大腸癌（例えば、再発性大腸癌、転移性大腸癌、例えば、マイクロサテライト不安定性大腸癌、マイクロサテライト安定性大腸癌、ミスマッチ修復機構熟達大腸癌、またはミスマッチ修復機構欠損大腸癌）である。

いくつかの実施形態において、がんは、血液癌である。いくつかの実施形態において、がんは、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性白血病、または急性白血病）である。いくつかの実施形態において、がんは、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫、リンパ球性リンパ腫、またはびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（例えば、再発性または難治性のＨＬまたはＤＬＢＣＬ））である。いくつかの実施形態において、がんは、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）である。

本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）を含む医薬組成物は、対象における免疫応答を強化または調節するために使用することができる。１つの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、対象（例えば、本明細書に記載の疾患または障害を有するか、またはそのリスクがある対象）における免疫応答を強化、刺激、または増加させる。ある特定の実施形態において、対象は、免疫低下状態にあるか、またはそのリスクがある。例えば、対象は、化学療法及び／または放射線療法を受けているか、または受けたことがある。

いくつかの実施形態において、対象は、炎症性障害（例えば、慢性または急性の炎症性障害）を有するか、またはそれを発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は、自己免疫疾患または障害を有するか、またはそれを発症するリスクがある。本明細書に記載の方法で治療することができる例示的な自己免疫疾患としては、限定されるものではないが、アルツハイマー病、喘息（例えば、気管支喘息）、アレルギー（例えば、アトピー性アレルギー）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、アテローム動脈硬化症、ベーチェット病、セリアック、心筋症、クローン病、肝硬変、糖尿病、糖尿病性網膜症、湿疹、線維筋痛症、線維筋炎、糸球体腎炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ギラン－バレー症候群、溶血性貧血、多発性硬化症、重症筋無力症、変形性関節炎、多発性軟骨炎、乾癬、関節リウマチ、敗血症、脳卒中、血管炎、人工呼吸器誘発性肺損傷、移植拒絶反応、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、白斑、またはウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。

本明細書に記載の医薬組成物の投与は、任意の好都合な方法（例えば、注射、摂取、輸血、吸入、植込み、または移植）で行うことができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、注射または点滴によって投与される。本明細書に記載の医薬組成物は、患者に、経動脈、皮下、静脈内、皮内、腫瘍内、節内、筋肉内、または腹腔内投与することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内注入または注射によって投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、筋肉内または皮下注射によって投与される。本明細書に記載の医薬組成物は、対象の炎症部位、局所疾患部位、リンパ節、器官、腫瘍、または感染部位に直接注射することができる。

免疫細胞修飾の方法
諸方法は、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）に、（ａ）細胞外ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞外ドメイン）と、（ｂ）膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）と、（ｃ）細胞内ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内ドメイン）とをコードする１つ以上の核酸配列を送達することを含み、免疫細胞が（ａ）～（ｃ）を含むＣＡＲを含むようにすることができる。いくつかの実施形態において、１つ以上の核酸配列を含む核酸コンストラクトはさらに、（ｄ）細胞外リーダードメイン（例えば、本明細書に記載の細胞外リーダードメイン）、（ｅ）細胞外ヒンジドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞外ヒンジドメイン）、または（ｆ）細胞内共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内共刺激ドメイン）のうちの１、２、または３つをコードする。

本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲをコードする１つ以上の核酸配列を含む核酸コンストラクトは、物理的、化学的、または生物学的方法によって免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）に導入することができる。本明細書に記載の核酸コンストラクトを免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）に導入するための物理的方法は、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、またはこれらの組合せを含むことができる。核酸コンストラクトは、エレクトロポレーションを含めた市販の方法（ＡｍａｘａＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ－ＩＩ（登録商標）（ＡｍａｘａＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＣＭ８３０ＢＴＸ（ＨａｒｖａｒｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）、ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒＩＩ（登録商標）（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、またはＭｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（登録商標）（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，ＨａｍｂｕｒｇＧｅｒｍａｎｙ））を用いて、免疫細胞に導入することができる。また、核酸コンストラクトは、ｍＲＮＡ形質移入、例えば、カチオン性リポソーム媒介形質移入、リポフェクション、ポリマーカプセル化、ペプチド媒介形質移入、または「遺伝子銃」などのバイオリスティック粒子送達システム（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔａｌ．ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ．，１２（８）：８６１－７０（２００１）（参照により全体として本明細書に援用される）を参照）を用いても、免疫細胞に導入することができる。

本明細書に記載の核酸コンストラクトを免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡベクター及びＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）に遺伝子を挿入するのに広く利用されるようになっている。また、ウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス（例えば、Ａｄｆ５３５）、またはアデノ随伴ウイルス（例えば、米国特許第５，３５０，６７４号及び同第５，５８５，３６２号を参照（参照により全体として本明細書に援用される））に由来してもよい。レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルス）は、導入遺伝子を長期間安定的に組み込み、娘細胞に伝播させることを可能にする長期の遺伝子導入を達成するのに適したツールである。

本明細書に記載の核酸コンストラクトを免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）に導入するための化学的手段としては、コロイド分散システム、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフィア、ビーズ、及び脂質ベースのシステム（例えば、水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、ナノ粒子、リポソーム、及びリポフェクタミン－核酸複合体）が挙げられる。

本明細書に記載の核酸コンストラクトを送達するための例示的なシステムとして、脂質ベースのシステムがある。本明細書に記載の核酸コンストラクトは、リポソームの水性内部でカプセル化したり、脂質二重層内に散在させたり、結合分子を介してリポソームに付着させたり、リポソームに封入したり、リポソームと複合体化させたり、脂質を含む溶液または懸濁液に分散させたり、脂質と混合したり、ミセルと複合体化させたり、別の方法で脂質と結合させたりすることができる。本明細書に記載の方法で使用するための脂質は、天然の脂質であっても合成の脂質であってもよい。脂質は、市販の供給源から入手することもできる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリンはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手することができ、ジセチルリン酸はＫ＆ＫＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から入手することができ、コレステロールはＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから入手することができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロールはＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．）から入手することができる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質のストック溶液は、約－２０℃で保存することができる。

本明細書に記載の核酸コンストラクトが免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）中に存在することを確認するために様々なアッセイを実施することができる。例えば、このようなアッセイとしては、当業者に周知されている分子生物学的アッセイ（例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ、及びＰＣＲ）、ならびに生化学的アッセイ（例えば、特定のペプチドの有無を検出するアッセイ（例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）によるもの））が挙げられる。

ＣＡＲをコードする核酸のＶＰＸ媒介ウイルス送達
本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）は、制限因子ＳＡＭＨＤ１が発現し、逆転写に利用可能なヌクレオチド三リン酸を枯渇させることから、レンチウイルス形質導入に抵抗性を有し得る。例えば、ＳＡＭＨＤ１は、デオキシヌクレオシド三リン酸の細胞内プールを枯渇させることにより、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ－１）の複製を制限することができる。サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）及びＨＩＶ－２に関連するアクセサリータンパク質であるウイルスタンパク質Ｘ（Ｖｐｘ）は、ＳＡＭＨＤ１の分解を誘導する。Ｖｐｘの使用により、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルス）が、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、マクロファージ、単球、または樹状細胞）に対する少なくとも１つのＣＡＲをコードする１つ以上の核酸配列を含むことが可能になり得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＣＡＲをコードし、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされた１つ以上の核酸配列を含むウイルスベクターは、例えば、少なくとも１つのＣＡＲをコードし、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかった１つ以上の核酸配列を含むウイルスベクターが形質移入された同じタイプの免疫細胞に比べて、本明細書に記載の免疫細胞（例えばマクロファージ、単球、または樹状細胞）の形質移入を増加させることができる。いくつかの実施形態において、Ｖｐｘレンチウイルスは、ＣＡＲ配列をゲノムに組み込み、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の長期の持続的な発現を可能にし得る。ＣＡＲが、一定の間隔で細胞内空間にリサイクルされる膜貫通タンパク質であることを考えると、Ｖｐｘ－レンチウイルスによるＣＡＲの細胞表面への持続性発現を実証したことは、当分野における注目すべき発展である。Ｖｐｘ－レンチウイルスで形質導入したマクロファージは、ウイルス形質導入による表現型上の影響を受けない。これは、表現型の可塑性を備えたＣＡＲマクロファージの産生を可能にする知見である。他のウイルスベクター（例えば、Ａｄ５ｆ３５）がＭ１、炎症促進性表現型を誘導するのに対し、Ｖｐｘ－レンチウイルスはＭ１／Ｍ２表現型に影響を及ぼさないため、ベースラインで炎症促進機能／毒性を有しない可能性のあるＭ０ＣＡＲマクロファージ産物が可能となる。Ｖｐｘ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲマクロファージは表現型の可塑性を保持しており、サイトカイン、アゴニスト、ペプチド、培養基、及び他の因子を用いてＭ１またはＭ２表現型にさらに分極化することができる。Ｖｐｘ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲマクロファージは、炎症促進性シグナル（例えば、１つ以上の炎症促進性サイトカイン、例えば、ＬＰＳ、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＩＦＮγ、ＣｐＧ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦａ、ＩＬ－６、またはＳＴＩＮＧリガンド（ＳＴＩＮＧ－Ｌ）のうちの１つ以上）に曝露し、Ｍ１マクロファージに分極化することができる。Ｖｐｘ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲマクロファージは、免疫抑制性シグナル（例えば、１つ以上の免疫抑制サイトカイン（例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、もしくはＴＧＦｂのうちの１つ以上）及び／または少なくとも１つのプロスタグランジンもしくは少なくとも副腎皮質ホルモンのうちの一方または両方）に曝露し、Ｍ２マクロファージに分極化することができる。

いくつかの実施形態において、レンチウイルスベクターは、Ｖｐｘタンパク質（例えば、国際公開番号第２０１７／０４４４８７号（参照により全体として本明細書に援用される）に記載のもの）でパッケージングされる。いくつかの実施形態において、Ｖｐｘは、ビリオン関連タンパク質（例えば、ウイルス複製のためのアクセサリータンパク質）を含む。いくつかの実施形態において、Ｖｐｘタンパク質は、ヒト免疫不全ウイルス２型（ＨＩＶ－２）によってコードされる。いくつかの実施形態において、Ｖｐｘタンパク質は、シミアン免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）によってコードされる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）は、Ｖｐｘタンパク質でパッケージングされたレンチウイルスベクターで形質移入される。いくつかの実施形態において、Ｖｐｘは、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）の少なくとも１つの抗ウイルス因子を阻害する。

いくつかの実施形態において、Ｖｐｘタンパク質でパッケージングされたレンチウイルスベクターは、例えば、Ｖｐｘタンパク質でパッケージングされなかったレンチウイルスベクターに比べて、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）の形質移入効率の増加を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクター、例えば、Ａｄ２ベクターまたはＡｄ５ベクター（例えば、Ａｄ５ｆ３５アデノウイルスベクター、例えば、ヘルパー依存性Ａｄ５Ｆ３５アデノウイルスベクター））による形質移入の前に、少なくとも１つのＶＰＸｍＲＮＡでエレクトロポレーションまたは形質移入の一方または両方が行われる。

修飾中の免疫細胞の処置及び培養
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、免疫細胞を修飾するプロセス中に免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）を処置する１つ以上のステップを含む。

いくつかの実施形態において、本開示の方法は、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）を、ｉｎｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡによって活性化される経路のモジュレーターで処置するステップを含む。ｉｎｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）されたｍＲＮＡは、様々なエンドソーム自然免疫受容体（トール様受容体３（ＴＬＲ３）、ＴＬＲ７、及びＴＬＲ８）、ならびに細胞質自然免疫受容体（プロテインキナーゼＲＮＡ活性化（ＰＫＲ）、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉタンパク質（ＲＩＧ－Ｉ）、黒色腫分化関連タンパク質５（ＭＤＡ５）、ならびに２’－５’－オリゴアデニル酸合成酵素（ＯＡＳ））によって認識される。これらの異なる経路を介したシグナル伝達は、１型インターフェロン（ＩＦＮ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、ＩＬ－１２、及び転写プログラムのカスケードの活性化に関連する炎症を引き起こす。全体的に見ると、これらにより、特異的免疫応答を誘導する準備ができた炎症促進性微小環境が創出される。さらに、下流の作用（例えば、真核生物翻訳開始因子２α（ｅＩＦ２α）のリン酸化による翻訳のスローダウン、リボヌクレアーゼＬ（ＲＮａｓｅＬ）によるＲＮＡ分解の強化、ならびに自己増幅ｍＲＮＡの複製の過剰発現及び阻害）は、ＩＶＴｍＲＮＡの薬物動態及び薬力学に関連するものである。

いくつかの実施形態において、ｉｎｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡによって活性化される経路のモジュレーターは、ＲＮａｓｅ阻害剤を含む。いくつかの実施形態において、ｉｎｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡによって活性化される経路のモジュレーターは、ＲＮａｓｅＬ、ＲＮａｓｅＴ２、またはＲＮａｓｅ１阻害剤を含む。いくつかの実施形態において、ｉｎｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡによって活性化される経路のモジュレーターは、ＲＮａｓｅＬ阻害剤を含む。いくつかの実施形態において、ＲＮａｓｅＬ阻害剤は、スニチニブを含む。いくつかの実施形態において、ＲＮａｓｅＬ阻害剤は、ＡＢＣＥ１を含む。

いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をＲＮａｓｅＬ阻害剤で処置することで、修飾免疫細胞におけるｍＲＮＡの安定性は、ＲＮａｓｅＬ阻害剤で処置しなかった同じタイプの修飾免疫細胞におけるｍＲＮＡの安定性に比べて増加する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をＲＮａｓｅＬ阻害剤で処置することで、修飾免疫細胞におけるＣＡＲの発現は、ＲＮａｓｅＬ阻害剤で処置しなかった同じタイプの修飾免疫細胞におけるＣＡＲの発現に比べて増加する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をＲＮａｓｅＬ阻害剤で処置することで、修飾免疫細胞におけるエフェクター活性は、ＲＮａｓｅＬ阻害剤で処置しなかった同じタイプの修飾免疫細胞におけるエフェクター活性に比べて増加する。

本開示のいくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）を処置するステップは、免疫細胞にｍＲＮＡを送達するステップの前に行われる。

いくつかの実施形態において、本開示の方法は、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をサイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養するステップを含む。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＳＦＮＧＬ、ＬＰＳ、ＣＤ４０アゴニスト、４－１ＢＢリガンド、組換え４－１ＢＢ、ＣＤ１９アゴニスト、ＴＬＲアゴニスト（例えば、ＴＬＲ－１、ＴＬＲ－２、ＴＬＲ－３、ＴＬＲ－４、ＴＬＲ－５、ＴＬＲ－６、ＴＬＲ－７、ＴＬＲ－８、もしくはＴＬＲ－９）、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、もしくはＴＧＦ－β３）、グルココルチコイド、免疫複合体、インターロイキン－１アルファ（ＩＬ－１α）、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２０、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、ＴＮＦ－β、ＣＤ１５４、リンパトキシンβ（ＬＴ－β）、Ａ増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、グルココルチコイド誘導ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＴＡＬＬ－１（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ））、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、ＴＮＦ関連活性化誘導サイトカイン（ＴＲＡＮＣＥ）、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）、甲状腺ペルオキシダーゼ前駆体（Ｔｐｏ）、ＦＭＳ関連チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、メロゾイト表面タンパク質（ＭＳＰ）、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン含有タンパク質（ＮＯＤ）リガンド（例えば、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、もしくはＮＯＤ１／２アゴニスト）、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）リガンド（例えば、５’ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、３ｐ－ｈｐＲＮＡ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、またはポリ（ｄＡ：ｄＴ））、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）リガンド（例えば、カードラン、βグルカン、ＨＫＣＡ、ラミナリン、ｐｕｓｔｕｌａｎ、スクレログルカン、ＷＧＰ分散性、ＷＧＰ可溶性、ザイモサン、ザイモサン枯渇、ｆｕｒｆｕｒｍａｎ、ｂ－ＧｌｃＣｅｒ、ＧｌｃＣ１４Ｃ１８、ＨＫＭＴ、ＴＤＢ、ＴＤＢ－ＨＤ１５、もしくはＴＤＭ）、環状ジヌクレオチドセンサーリガンド（例えば、Ｃ－Ｇａｓアゴニストもしくはインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）リガンド）、インフラマソーム誘導物質（例えば、ミョウバン、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘモゾイン、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、もしくはＴＤＢ）、アリール炭化水素（ＡｈＲ）リガンド（例えば、ＦＩＣＺ、インジルビン、ＩＴＥ、もしくはＬ－キヌレニン）、アルファプロテインキナーゼ１（ＡＬＰＫ１）リガンド、マルチＰＲＲリガンド、ＮＦＫＢ／ＮＦＡＴ活性化物質（例えば、ｃｏｎｃａｖａｌｉｎＡ、イオノマイシン、ＰＨＡ－Ｐ、もしくはＰＭＡ）、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＦＮ－βを含む。

本開示のいくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）を培養するステップは、免疫細胞にｍＲＮＡを送達するステップの後に行われる。

いくつかの実施形態において、修飾免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をサイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養することで、修飾免疫細胞の生存率は、サイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養しなかった同じタイプの修飾免疫細胞に比べて増加する。いくつかの実施形態において、修飾免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をサイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養することで、修飾免疫細胞のタンパク質（例えば、ＣＡＲ）の発現は、サイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養されなかった同じタイプの修飾免疫細胞に比べて増加する。いくつかの実施形態において、修飾免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をサイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養することで、タンパク質（例えば、ＣＡＲ）発現の寿命は、サイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養されなかった同じタイプの修飾免疫細胞に比べて増加する。いくつかの実施形態において、修飾免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をサイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養することで、修飾免疫細胞のエフェクター活性は、サイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養されなかった同じタイプの修飾免疫細胞に比べて増加する。いくつかの実施形態において、修飾免疫細胞（例えば、単球、マクロファージ、または樹状細胞）をサイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養することで、修飾免疫細胞のＭ１分極化は、サイトカインまたは免疫刺激性組換えタンパク質とともに培養されなかった同じタイプの修飾免疫細胞に比べて増加する。

本明細書で言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号を含めて、参照により全体として援用される。さらに、材料、方法、及び例は、例示的なものに過ぎず、限定的であるようには意図されてない。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本発明の実施または試験を行う際は本明細書に記載の方法及び材料と同様または同等のものを使用することができるが、好適な方法及び材料を本明細書に記載する。

以下の実施例によって本開示をさらに例示する。実施例は、例示目的で示されるに過ぎないものである。これを、いかなる形においても本開示の範囲または内容を限定するものと解釈すべきではない。

以下の実施例は、本明細書に記載の方法及び組成物の作製及び使用方法を当業者に説明するために示すものであり、本開示の範囲を限定することは意図されていない。

実施例１：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）マクロファージ及び単球
ＣＡＲ導入遺伝子は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、もしくは化学修飾ｍＲＮＡによるエレクトロポレーションもしくは形質移入、またはレンチウイルス、アデノウイルス、もしくは代替ウイルスベクターを用いたウイルス形質導入により、単球またはマクロファージに導入することができる。ＣＡＲの発現は、フローサイトメトリー、リアルタイムＰＣＲ、または蛍光顕微鏡による抗原特異的染色を用いて確認する。また、これらの技法は、ＣＡＲ発現の強度及び動態を定量するためにも使用される。

マクロファージの表面に発現するＣＡＲコンストラクトは、標的陽性細胞株に対する腫瘍食作用アッセイ及び／または腫瘍殺傷アッセイで活性について試験する。標的細胞の食作用及び／または殺傷を引き起こすコンストラクトは、サイトカイン分泌、ケモカイン分泌、免疫細胞動員能力、表現型の変化（Ｍ１／Ｍ２への自己分極化）、及びＴ細胞刺激／抗原提示機能について試験する。

表１は、本明細書に記載のＣＡＲ成分で使用される例示的なｍＲＮＡ及びポリペプチドの配列を示す。例示的なＣＡＲ成分のＣＡＲコンストラクトを図８～１１７及び１３５に示す。

実施例２：初代ヒトマクロファージ及び単球のウイルス形質導入
レンチウイルスを産生するため、ＤＭＥＭ培地１０ｍＬに１０％ＦＢＳ及び１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐを追加したものに、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を３．５ｘ１０６細胞／１０ｃｍプレートでプレーティングした。一晩成長させた後、リン酸カルシウム形質移入を用いて、ｐＶＳＶ－Ｇ（２．５μｇ）、ＲＳＶ－Ｒｅｖ（２．５μｇ）、ＰＭＤＬ－Ｃｈｐ６（１０μｇ）、ｐＶＰＸ（１μｇ）、及び所望の挿入配列を含むレンチウイルス導入プラスミド（１４μｇ）をプレートに形質移入した。形質移入から１６時間後に上清を廃棄し、次に６ｍＬのＤＭＥＭを加えた。形質移入から４８時間後に上清を採取し、次に１，２００ｘｇで５分間遠心分離し、０．４５ｍｍフィルターで濾過した。ウイルスを後で使用するために－８０℃で保存した。

初代ヒトマクロファージのレンチウイルス形質導入のため、初代ヒトマクロファージを所与の密度でプレーティングし、３７℃で２時間インキュベートした。次いでレンチウイルスを、マクロファージ培養物に指定の感染多重度（ＭＯＩ）で加えた。４８～７２時間後、培地を交換し、形質導入したマクロファージを各種アッセイに使用した。

実施例３：単球及びマクロファージからの受容体発現
ＣＤ１４＋単球由来のマクロファージを培養基（１０～２０％ＦＢＳ－ＴＥＸ－ＭＡＣＳ及び１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ）でプレーティングし、一晩培養した。１２０ｎＭのＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し、培養基中で３７℃で１日インキュベートし、ＣＡＲ発現をフローサイトメトリーによりｒＨＥＲ２結合を用いて検出した。ＣＡＲ及びキメラＦｃＲ（ＣＦＲ）導入細胞の約６０～７０％、及びトール様抗原受容体（ＴＡＲ）形質移入細胞の４０～６０％が生存していた（図１Ａ）。ＣＡＲ：ＨＥＲ２の発現は、ＣＡＲ形質移入細胞では４０～６０％、ＣＦＲ及びＴＡＲ形質移入細胞では３０～４０％陽性であった（図１Ｂ）。初代ヒトマクロファージでは、ＣＡＲ１及びＣＡＲ１３の発現が他のコンストラクトの中で突出していた。

ＭＡＣＳビーズで精製したＣＤ１４＋単球を培養基中に一晩静置する。４０ｎＭのＣＡＲｍＲＮＡを形質移入し、細胞を３７℃で３日間インキュベートし、フローサイトメトリーによりＣＡＲ発現をｒＨＥＲ２結合で検出した。Ａｄ５ｆ３５を陽性対照として使用した。ＣＡＲ及びＴＡＲ形質移入細胞の約５０～８０％、ＣＦＲ形質移入細胞の約４０～６０％が生存していた（図２Ａ）。ＣＡＲ：ＨＥＲ２発現は、ＣＡＲ、ＣＦＲ、及びＴＡＲ形質移入単球では１５～３０％陽性であった（図２Ｂ）。これらの結果は、ＣＡＲ、ＣＦＲ、及びＴＡＲのｍＲＮＡは、初代ヒト単球で発現することができるものの、発現強度はマクロファージの場合よりはるかに低いことを示している。

実施例４：ＣＡＲマクロファージの受容体発現及び腫瘍細胞殺傷
受容体発現マクロファージを生成するため、初代ヒトマクロファージを５０～５００ｎＭｍＲＮＡ（またはｍＲＮＡストックに基づく可能な限り高い濃度）を含むＥＰバッファーに１．０ｘ１０^５～１．０ｘ１０^９細胞／ｍＬの濃度で懸濁し、エレクトロポレーションを行った。カセットから細胞を取り出し、２０％ＦＢＳを含むＴｅｘＭＡＣＳ培地にプレーティングし、３７℃及び５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。ＣＡＲ、ＣＦＲ、及びＴＡＲ発現のＭＦＩ及びパーセンテージを、２４時間後、フローサイトメトリーによりｒＨＥＲ２結合を用いて検出した。Ｌｉｖｅ／ＤｅａｄＡｑｕａを用いて生存パーセンテージを検出した。殺傷のために、マクロファージをＨｅｒ２＋ＣＲＬ２３５１－ＮｕｃＧＦＰ腫瘍細胞とともに２：１のＥ：Ｔ比で共培養し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）により７２時間モニターした。時間０に対するウェルごとのＧＦＰ積算強度により、腫瘍細胞死を計算した。

発現及びＣＡＲ＋のパーセンテージは、ＣＡＲコンストラクト間で変動が見られた（図３Ａ及びＢならびに図１１９及び１２０）。ｍＲＮＡエレクトロポレーションは、生存パーセンテージに影響を及ぼさないように思われた（図３Ｃ及び１１８）。いずれのＣＦＲ及びＴＡＲコンストラクトも、腫瘍細胞殺傷の効果を有しないように思われた。コンストラクトＣＡＲ００１（ＣＤ８リーダーと、ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８ＴＭと、ＣＤ３ｚＩＣとを含むＣＡＲ）、ＣＡＲ００３（ＣＤ８リーダーと、ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８ＴＭとを含むＣＡＲ）、ＣＡＲ００７（ＣＤ８リーダーと、４Ｄ５ｓｃＦｖと、ＩｇＧ４ヒンジと、ＣＤ８ＴＭと、ＣＤ３ｚＩＣとを含むＣＡＲ）、ＣＡＲ０１３（ＣＤ８リーダーと、ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ６４ＴＭと、ＣＤ６４ＩＣＤとを含むＣＡＲ）、ＣＡＲ０１７（ＣＤ８リーダーと、ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ６４ＴＭと、ＣＤ６４ＩＣＤと、Ｐ２Ａと、ＦＣＥＲ１Ｇとを含むＣＡＲ）、及びＣＡＲ０３９（ＣＤ８リーダーと、ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＴＬＲ４ＴＭと、ＴＬＲ４ＩＣＤとを含むＣＡＲ）は、初代ヒトマクロファージ内で発現し、殺傷機能を示した（図３Ｄ）。

発現ならびにＣＦＲ及びＴＡＲ＋パーセンテージは、コンストラクト間で変動が見られた（図４Ａ及びＢ）。ｍＲＮＡエレクトロポレーションは、生存パーセンテージに影響を及ぼさないように思われた（図４Ｃ）。

実施例５：ＣＡＲ発現の評価
ＣＡＲ発現の期間は、フローサイトメトリーによって評価することができる。ＣＡＲマクロファージは、９６ウェルプレートのウェルにプレーティングすることができる。抗Ｈｅｒ２ＣＡＲの発現を測定するには、Ｈｉｓタグ付き組換えＨｅｒ２タンパク質を、バッファー（例えば、ＢＳＡを追加したＰＢＳ）とともに細胞に加え、１５分間インキュベートする。次いで細胞を３００ｘｇで５分間スピンダウンし、上清を除去する。次いでＦｃ受容体を、Ｆｃブロッキング溶液（例えば、ＨｕｍａｎＴｒｕＳｔａｉｎＦｃＸ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；カタログ番号４２２３０２））を用いて、ＰＢＳ中で５分間ブロッキングする。Ｆｃブロッキングの後、細胞生存率及び他の表面マーカーについて染色することができる。例えば、細胞生存率は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）ＦｉｘａｂｌｅＡｑｕａＤｅａｄＣｅｌｌＳｔａｉｎＫｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｌ３４９５７）を用いて定量することができる。さらに、抗Ｈｉｓ抗体（例えば、ＨｉｓＴａｇＡＰＣ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄＡｎｔｉｂｏｄｙ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号ＩＣ０５０Ａ））を加える。ＣＡＲの発現は、フローサイトメトリーにより、最初に単一の細胞集団にゲーティングを行い、次に生細胞を選択し、最後に細胞のＡＰＣ蛍光を測定することによって定量する。ＣＡＲを発現する細胞は、ＡＰＣチャネルにおいて、抗Ｈｉｓ抗体に曝露していない対照細胞よりも明るくなる。ＣＡＲ陽性細胞の明るさによって発現の程度が判断され、一方、経時的に繰り返し測定することで、経時的なＣＡＲの発現のトラッキングが可能である。

免疫蛍光法のために、細胞を適宜スライドガラス上で培養することができる。次いで培地を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄する。次いで細胞を、４％パラホルムアルデヒドまたはメタノールを用いて固定することができる。固定液中での正確なインキュベート時間は、その内容に依存する。妥当な時間が経過したら、固定液を除去し、細胞を再びＰＢＳで３回洗浄する。細胞内染色が所望される場合、細胞を今度はＰＢＳ中１％トリトンＸ－１００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ；カタログ番号ＢＰ１５１－１００）でインキュベートし、次いでＰＢＳで３回洗浄する。今度はブロッキング溶液（例えば、ＰＢＳ中ＢＳＡ）を細胞に加え、６０分間ブロッキングさせる。次いでブロッキング溶液を除去し、細胞を洗浄する。蛍光色素結合体化抗体をメーカーの指示に従って希釈し、細胞に一晩結合させる。次いで抗体溶液を除去し、細胞を洗浄する。最後に、マウント溶液（例えば、ＰｒｏＬｏｎｇ（商標）Ｄｉａｍｏｎｄ褐色防止用封入剤（ＤＡＰＩ含有）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｐ３６９６６））を細胞に適用し、カバーガラスをかぶせる。これを２４時間乾燥した後にイメージングする。イメージングは、蛍光顕微鏡を用いて実施する。ＣＡＲを発現する細胞は、蛍光色素に適したチャネルにおいて、ＣＡＲを発現しない細胞よりも明るくなる。

ＲＴＰＣＲのために、マクロファージを溶解し、１ステップのＲＴＰＣＲキット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩＩＰｌａｔｉｎｕｍ（商標）Ｏｎｅ－ＳｔｅｐｑＲＴ－ＰＣＲＫｉｔ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号１１７３２－０２０）をメーカーの指示に従って使用することにより、ＲＮＡを採取することができる。ＣＡＲに特異的なプライマーをアッセイに使用する。ＣＡＲのｍＲＮＡを有するマクロファージはＲＴＰＣＲアッセイでシグナルを示すが、非形質導入マクロファージはシグナルを示さない。

実施例６：ＣＡＲの機能性の評価
細胞のフロー食作用アッセイのために、標的陽性及び標的陰性の腫瘍細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＫｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｃ３４５５４）を用いてメーカーの指示に従って標識するか、細胞を、ＧＦＰのような蛍光タンパク質を発現するように操作しておく。次いで、ＣＡＲ発現マクロファージ及び対照マクロファージを、１：１のマクロファージ：腫瘍細胞比でＵ底９６ウェルプレートにプレーティングし、４時間培養する。インキュベートが終了したら細胞をウェルから取り出し、フローサイトメトリー用に染色する。パネルには、生存率色素及びマクロファージ特異的マーカー（例えば、ＣＤ１１ｂ）が含まれている。生細胞でゲーティングすると、ＣＤ１１ｂ／ＣＦＳＥ二重陽性である細胞が、細胞を食作用したことが推定されるマクロファージとなる。ＣＡＲマクロファージは、標的陽性腫瘍細胞とともに培養した場合、ＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、二重陽性細胞のパーセンテージが増加するはずである。さらに、マクロファージを標的陰性細胞とともに培養した場合に食作用量に顕著な変化がないことにより、食作用の特異性が示される。

ビーズを用いたフロー食作用アッセイのために、ポリスチレンビーズをＣＡＲの標的タンパク質または無関係のタンパク質で機能化することができる。さらに、このビーズを、ｐＨ反応性色素であるｐＨｒｏｄｏ（商標）Ｒｅｄ、ＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｐ３６６００）で標識する。酸性化すると、色素はその蛍光レベルを増加させる。次いで、ビーズをＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージとともに培養する。一定の時間期間後にマクロファージを取り出し、生存率色素及びマクロファージ特異的マーカー（例えば、ＣＤ１１ｂ）を用いてフローサイトメトリー用に染色することができる。生細胞でゲーティングすると、ＣＤ１１ｂ／ｐＨｒｏｄｏ二重陽性である細胞が、ビーズを食作用したことが推定されるマクロファージとなる。ＣＡＲマクロファージは、標的陽性ビーズとともに培養した場合、ＣＡＲを伴わないマクロファージに比べて、二重陽性細胞のパーセンテージが増加するはずである。さらに、マクロファージを標的陰性ビーズとともに培養した場合に食作用量に顕著な変化がないことにより、食作用の特異性が示される。

細胞のＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）解析のために、ＧＦＰのような蛍光タンパク質を発現する標的陽性腫瘍細胞を、ＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージとともに９６ウェルプレートで培養する。エフェクターマクロファージ及び標的腫瘍細胞の比は１０：１Ｅ：Ｔから１：１０Ｅ：Ｔまで変化させ、０：１Ｅ：Ｔの標的細胞のみの対照も伴う。マクロファージの数は、ウェル当たり１０ｅ３マクロファージで一定に保つ。４時間ごとに測定する蛍光の経時的な変化を測定して、培養中に発生した腫瘍細胞の殺傷量を定量することができる。さらに、画像解析技法を使用して、培養物中のマクロファージの位置を特定し、腫瘍細胞の食作用も行ったマクロファージの数を定量することができる。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージまたは腫瘍細胞のみの対照に比べて、マクロファージ及び腫瘍細胞の共存の増加ならびに殺傷の増加を示すはずである。

ビーズのＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）解析のために、ＣＡＲのタンパク質標的を有するｐＨｒｏｄｏ機能化ビーズを、９６ウェルプレートのウェル内でＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージの両方に加える。マクロファージをウェルあたり２０ｅ３の濃度でプレーティングし、ビーズを５：１のビーズ：マクロファージ比で加える。ｐＨｒｏｄｏの蛍光を、３０分ごとに測定しながら５時間測定する。最初の時点と１時間時点との間の蛍光の増加比率を使用して、食作用が発生した量を定量する。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入対照に比べて蛍光の変化が大きいと予想される。

食作用後の抗原のプロセシング及び提示のため、Ｔ細胞拡大、ＩＬ２放出、ＩＦＮｇ放出、ＴＮＦａ放出、及び／またはＣＤ６９上方調節について解析することができる。特定の抗原（例えば、オバルブミン）に反応することが知られているＴ細胞クローンを入手し、培養することができる。多くの場合、これらのクローンはマウス細胞である。Ｔ細胞にＭＨＣをマッチさせたマウスＣＡＲマクロファージを、ＣＡＲ標的受容体及び既知の抗原の両方を発現するがん細胞とともに培養する。次いでマクロファージを単離し、Ｔ細胞と共培養することができる。マクロファージによって抗原提示が行われると、Ｔ細胞はＩＬ２を分泌し（これは、サイトカイン測定技法によって測定することができる）、増殖する（これは、細胞数のカウントまたはＣＦＳＥ希釈によって測定することができる）。加えて、Ｔ細胞を抗原発現細胞株と共培養することにより、活性化Ｔ細胞の細胞傷害性機能を確認することができる。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージ対照に比べて、Ｔ細胞内でのさらなる増殖及びサイトカイン産生の増加を引き起こすと予想される。

また、食作用以外の方法での腫瘍殺傷についても評価することができる。条件培地中で、ＣＡＲマクロファージ及び標的陽性細胞を一定の時間期間（例えば、２４時間）共培養して、マクロファージが標的細胞を感知し応答できるようにすることができる。腫瘍細胞数の比率は、腫瘍細胞内での標的タンパク質の発現レベルに応じて変化させることができる。所望の時間量が経過した後に、ＣＡＲマクロファージから上清を除去し、上清に残った任意の細胞を０．２２ミクロンフィルターによる濾過または遠心分離によって除去する。濾過した上清を、ＣＡＲマクロファージとともに培養していない他のがん細胞に載せる。得られた腫瘍細胞の生存率及び増殖の変化を、細胞カウント、フローサイトメトリー、ＭＴＴ／ＸＴＴアッセイ、または顕微鏡検査によって測定することができる。ＣＡＲマクロファージは、同じ標的陽性細胞株とともに培養した非形質導入マクロファージの上清に比べて、上清とともに培養した腫瘍細胞を死滅させるか、成長速度を低減させるはずである。

標的＋／標的－／ＣＡＲマクロファージの共培養のために、ＣＡＲマクロファージ、標的陽性細胞、及び標的陰性細胞を一緒に共培養する。標的陽性細胞及び標的陰性細胞を区別する何らかの方法（例えば、異なる蛍光タンパク質の発現）が存在するはずである。経時的に、異なる細胞タイプの相対数を、顕微鏡またはフローサイトメトリーのいずれかによって定量することができる。標的陽性細胞のありまたはなしで標的陰性細胞の成長をＣＡＲマクロファージと比較することにより、食作用を用いない腫瘍細胞殺傷についていくらかの洞察が得られる。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージに比べて、標的陰性細胞株の死滅の増加または成長速度の低減を示すと予想されるであろう。さらに、標的陽性細胞が存在するかによって、ＣＡＲマクロファージとともに培養した標的陰性細胞間で差が生じることも予想される。

好都合なサイトカインをフローサイトメトリーによって産生するために、ＣＡＲマクロファージを標的陽性細胞または標的陽性ビーズ及び標的陰性対照と共培養することができる。特定の時間量後、培養の上清を採取し、濾過または遠心分離により、散らばった細胞を除去することができる。フローサイトメトリーに基づくサイトカインビーズアッセイを使用して、上清中の各種サイトカイン濃度を測定することにより、所望のサイトカインを測定することができる。ビーズをメーカーの指示に従って染色する。このようなシステムの一例として、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘシステムがある。さらに、培養システムからＣＡＲマクロファージを採取し、フローサイトメトリーを用いた細胞内サイトカイン染色を使用することによって、サイトカイン産生について染色することができる。細胞は、例えば、Ｆｉｘａｔｉｏｎ／ＰｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎＳｏｌｕｔｉｏｎＫｉｔ（ＢＤ；カタログ番号５５４７１４）について、メーカーの指示に従って固定、透過処理、及び染色を行うことができる。標的陽性の細胞またはビーズとともに培養したＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージまたは標的タンパク質で刺激されていないＣＡＲマクロファージに比べて、より高いレベルの炎症促進性サイトカインを示すはずである。

ＥＬＩＳＡ／ＭＳＤ解析のために、ＣＡＲマクロファージを、標的陽性細胞または標的陽性ビーズ及び標的陰性対照と共培養することができる。特定の時間量後、培養の上清を採取し、濾過または遠心分離により、散らばった細胞を除去することができる。一例として、８：１のマクロファージ：標的比で２４時間行う例が考えられる。培養期間後、上清を除去し、ＥＬＩＳＡサイトカインキット（例えば、ＩＬ－１ｂｅｔａＨｕｍａｎＩｎｓｔａｎｔＥＬＩＳＡ（商標）Ｋｉｔ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号ＢＭＳ２２４ＩＮＳＴ）をメーカーの指示に従って用いて、溶液中に存在するサイトカインの量を測定することができる。さらに、ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙＱｕｉｃｋＰｌｅｘシステムをメーカーの指示に従って使用することにより、サイトカインを測定することができる。標的陽性の細胞またはビーズとともに培養したＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージまたは標的タンパク質で刺激されていないＣＡＲマクロファージに比べて、より高いレベルの炎症促進性サイトカインを示すはずであると予想される。

ＲＯＳをフローサイトメトリーによって産生するために、ＣＡＲマクロファージを標的陽性細胞または標的陽性ビーズ及び標的陰性対照と共培養することができる。非形質導入マクロファージも同じ条件下で培養することができる。活性酸素種（ＲＯＳ）の産生量の測定は、フローサイトメトリーに基づくキット（例えば、ＴｏｔａｌＲｅａｃｔｉｖｅＯｘｙｇｅｎＳｐｅｃｉｅｓ（ＲＯＳ）ＡｓｓａｙＫｉｔ５２０ｎｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号８８－５９３０－７４））を使用することによって測定することができる。細胞をメーカーの指示に従って調製することができる。標的陽性の細胞またはビーズとともに培養したＣＡＲマクロファージは、標的陰性の細胞またはビーズとともに培養したＣＡＲマクロファージ、及び標的陽性または陰性の細胞またはビーズのいずれかとともに培養した非形質導入マクロファージよりも、高いレベルのＲＯＳを示すと予想される。さらなる方法については、Ｄｉｋａｌｏｖ＆Ｈａｒｒｉｓｏｎ．ＡｎｔｉｏｘｉｄＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ．２０１４；２０（２）：３７２－３８２（参照により全体として本明細書に援用される）で説明されている。

食作用チェックポイントに対する抵抗性を高めるために、ＣＡＲマクロファージを、様々なレベルのＣＤ４７または他の抗食作用リガンドを有する標的陽性のビーズまたは細胞と共培養することができる。ビーズは、機能化に使用するタンパク質の量の差によって、ＣＤ４７または他の抗食作用リガンドのレベルを容易に変更させることができる。細胞における抗食作用リガンドのレベルを変更するには、遺伝子操作（例えば、ｓｈＲＮＡまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システム）が必要となる。食作用量は、上記セクションで概説したように、顕微鏡またはフローサイトメトリーのいずれかによって定量化することができる。ＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージの両方が、ＣＤ４７または他の抗食作用リガンドの量が増加するに伴って食作用が低下すると予想される。ドミナントネガティブ受容体（例えば、切断ＳＩＲＰａ）を発現するように操作されたマクロファージは、ＣＡＲタイプ及び非形質導入タイプの両方において、このようなドミナントネガティブ受容体が欠如したマクロファージに比べて、食作用レベルの増加を示すはずである。

ＣＤ４７ブロックとの比較のため、ブロッキング抗体（例えば、マウスクローンＢ６Ｈ１２）を使用することによってＣＤ４７の作用をブロックすることができる。標的陽性または陰性細胞の表面上のＣＤ４７の量を変化させることにより、異なるレベルの食作用が可能になる。標的陽性細胞及び標的陰性細胞を様々な量のブロッキング抗体とともに培養することにより、ＣＤ４７ブロッキング抗体の用量滴定曲線を決定することができる。ＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージの両方を用いた食作用アッセイでは、ＣＡＲマクロファージは、所与のＣＤ４７ブロックレベルでより低い阻害レベルを示すことにより、ＣＤ４７に対する感受性が非形質導入細胞に比べて低いことが示されるはずである。これに対し、標的陰性細胞は、ＣＡＲマクロファージと非形質導入マクロファージとの間に差を示さない。

トラフィッキングを補助するケモカイン受容体の発現において、ケモカイン受容体の発現は、特定の抗体をＣＡＲマクロファージに結合させることによって測定することができ、次いでこれをフローサイトメーターを用いて測定することができる。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージに比べて高いレベルの多様なケモカイン受容体を示すと予想される。

ＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージを溶解し、ＲＮＡシークエンシング技法のためにＲＮＡを採取することができる。細胞内の発現ＲＮＡ転写産物を比較することで、どのような受容体が細胞で発現しているかを判断することができる。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージに比べて高いレベルの多様なケモカイン受容体を示すと予想される。

ウェスタンブロッティングのために、ＣＡＲマクロファージ及び非形質導入マクロファージを培養し、溶解し、総タンパク質を採取することができる。次いでこのタンパク質を、電場内でのゲル移動によってサイズごとに分画し、次いで膜上に移す。ある特定のタンパク質に特異的な抗体を用いて膜を染色し、タンパク質の有無をこの染色によって判定することができる。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージに比べて高いレベルの多様なケモカイン受容体を示すと予想される。

他の免疫細胞を動員するケモカインを発現させるために、ＣＡＲマクロファージを標的陽性細胞または標的陽性ビーズ及び標的陰性対照と共培養することができる。特定の時間量後、培養の上清を採取し、濾過または遠心分離により、散らばった細胞を除去することができる。フローサイトメトリーに基づくサイトカインビーズアッセイを使用して、上清中の各種サイトカイン濃度を測定することにより、所望のサイトカインを測定することができる。ビーズをメーカーの指示に従って染色する。このようなシステムの一例として、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘシステムがある。さらに、培養システムからＣＡＲマクロファージを採取し、フローサイトメトリーを用いた細胞内サイトカイン染色を使用することによって、サイトカイン産生について染色することができる。細胞は、例えば、Ｆｉｘａｔｉｏｎ／ＰｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎＳｏｌｕｔｉｏｎＫｉｔ（ＢＤ；カタログ番号５５４７１４）について、メーカーの指示に従って固定、透過処理、及び染色を行うことができる。標的陽性の細胞またはビーズとともに培養したＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージまたは標的タンパク質で刺激されていないＣＡＲマクロファージに比べて、より高いレベルの炎症促進性サイトカインを示すはずである。

ＥＬＩＳＡ／ＭＳＤの場合、ＣＡＲマクロファージは標的陽性細胞または標的陽性ビーズと、標的陰性対照と共培養することができる。特定の時間量後、培養の上清を採取し、濾過または遠心分離により、散らばった細胞を除去することができる。一例として、８：１のマクロファージ：標的比で２４時間行う例が考えられる。培養期間後、上清を除去し、ＥＬＩＳＡサイトカインキット（例えば、ＩＬ－１ｂｅｔａＨｕｍａｎＩｎｓｔａｎｔＥＬＩＳＡ（商標）Ｋｉｔ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号ＢＭＳ２２４ＩＮＳＴ）をメーカーの指示に従って用いて、溶液中に存在するサイトカインの量を測定することができる。さらに、ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙＱｕｉｃｋＰｌｅｘシステムをメーカーの指示に従って使用することにより、サイトカインを測定することができる。標的陽性の細胞またはビーズとともに培養したＣＡＲマクロファージは、非形質導入マクロファージまたは標的タンパク質で刺激されていないＣＡＲマクロファージに比べて、より高いレベルの炎症促進性サイトカインを示すはずであると予想される。

トランスウェルアッセイのために、ＣＡＲマクロファージを、標的陽性細胞または標的陽性ビーズ及び標的陰性対照と共培養することができる。さらに、マクロファージ及び標的細胞を、対照として別々に培養してもよい。十分なインキュベート（例えば４８時間）後、上清を採取することができ、残存する細胞は濾過によって除去することができる。精製された免疫細胞（例えば、ＣＤ３陽性Ｔ細胞）の亜集団を、ＣＦＳＥをメーカーの指示に従って用いて標識することができる。トランスウェルインサート（例えば、ＨＴＳＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）－９６ＰｅｒｍｅａｂｌｅＳｕｐｐｏｒｔ（３．０μｍ孔ポリカーボネート膜）；Ｃｏｒｎｉｎｇ；カタログ番号３３８６）を細胞外マトリックスタンパク質（例えば、フィブロネクチンまたはコラーゲン）で機能化することができる。マトリックスタンパク質を溶液にし、３７℃で３０分間膜に適用する。次いで残りの溶液を除去し、膜をＰＢＳで洗浄する。次いでＣＦＳＥ標識細胞を無血清培地に再懸濁し、インサートの上面に置く。これらの細胞を２０分間定着及び接着させる。次いでインサートを、膜の底面を採取した上清に曝露するように移動させる。細胞を少なくとも２時間移動させる。インキュベート期間後、インサートを除去し、上清が入った底プレートのウェルの蛍光を測定する。ＣＡＲマクロファージは、非形質導入対照に比べて高い程度の動員を示すと予想される。さらに、標的陽性細胞とともに培養したＣＡＲマクロファージは、標的陰性細胞とともに培養したＣＡＲマクロファージよりも良好に標識免疫細胞を動員すると予想される。

ＣＦＳＥ希釈による増殖のために、ＣＦＳＥ染色をメーカーの指示に従って用いてマクロファージを標識することができる。次いで、これらの標識マクロファージを適切な期間、培養することができる。細胞内のＣＦＳＥの希釈レベルを使用して、マクロファージの増殖の程度を定量することができる。

ＭＴＴ／ＸＴＴアッセイのために、細胞をプレーティングし、ＭＴＴ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ；カタログ番号Ｖ１３１５４）またはＸＴＴ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ；カタログ番号Ｘ１２２２３）アッセイについて、メーカーの指示に従ってアッセイを実行する。

誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）からマクロファージを産生するために、Ａｃｋｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ．２０１８；９（１）：５０８８；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．ＣｉｒｃＲｅｓ．２０１５；１１７（１）：１７－２８；Ｍｕｃｃｉｅｔａｌ．ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ．２０１８；１１（３）：６９６－７１０；Ｓｈｉｅｔａｌ．ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＳｔｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ．２０１９；４８（１）：ｅ７４；及びＴａｋａｔａｅｔａｌ．２０１７；４７（１）：１８３－１９８．ｅ６；Ｃａｏｅｔａｌ．ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ．２０１９；１２（６）：１２８２－１２９７（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される）に記載の方法を使用することができる。ＩＰＳＣを調製するために、レンチウイルスによる形質導入を分化の前に行うことができる。

実施例７：マクロファージのプライミング
Ｈｅｒ２ゼータＣＡＲ発現マクロファージを作製するために、初代ヒトマクロファージを３００ｎＭｍＲＮＡ（ＴｒｉＬｉｎｋ）を含むＥＰバッファー（ＭａｘＣｙｔｅ）に９０ｘ１０^６細胞／ｍＬの濃度で懸濁した。１００μＬの細胞混合物をエレクトロポレーションカセット（ＯＣ１００ｘ２；ＭａｘＣｙｔｅ）に加え、ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｃｅｌｌ１の設定を用いてエレクトロポレーションを行った。カセットから細胞を取り出し、ＵｐＣｅｌｌプレート（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上の２０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含む３ｍＬのＴｅｘＭＡＣＳ培地（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃｈ）にプレーティングし、３７℃及び５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。

組換えＣＤ４０リガンド（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、４－１ＢＢリガンド（ＥｎｚｏＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）、及び４－１ＢＢ受容体（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を分子グレードの水に再懸濁してストック濃度を１００μｇ／ｍＬとした。次いでストック溶液を使用して、２～０．００２μｇ／ｍＬの範囲のＰＢＳ中作業溶液を作出した。９６ウェルプレートのウェルに１００ｕＬの作業溶液を加え、室温で４時間放置した。

プレートをインキュベーターから取り出し、室温で３０分間放置した。細胞をプレートから剥離し、ＮＣ－２００自動セルカウンター（Ｃｈｅｍｏｍｔｅｃｈ）を用いてカウントし、１０％ＦＢＳを含むＴｅｘＭＡＣＳ培地に再懸濁した。タンパク質コーティングプレートをＰＢＳで２回洗浄し、次に、最終体積１００ｕＬの１０％ＦＢＳを含むＴｅｘＭＡＣＳ培地中でマクロファージを加えた。プレートを３７℃及び５％ＣＯ_２で３時間インキュベートした。３時間後、核ＧＦＰを発現する１０，０００個のＣＲＬ－２３５１細胞を各ウェルに加えた。ＧＭ－ＣＳＦの最終濃度を全てのウェルで１０ｎｇ／ｍＬとした。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）解析（ＥｓｓｅｎＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて細胞溶解を検出した。時間０に対するウェルごとのＧＦＰ積算強度により、腫瘍細胞死を計算した。

細胞表面タンパク質を検出するため、マクロファージを、最終体積２００ｕＬのＴｅｘＭＡＣＳ培地＋１０％ＦＢＳ＋１０ｎｇ／ｍＬＧＭ－ＣＳＦにおいてアゴニスト分子でコーティングしたウェルにプレーティングし、３７℃及び５％ＣＯ_２で３日間インキュベートした。細胞を３００μＬＡｃｃｕｔａｓｅ（Ｓｉｇｍａ）で３０分間インキュベートし、染色のために９６ウェル丸底プレートに移した。細胞を、２０μｇ／ｍＬＨｅｒ２－Ｈｉｓを含むＦＡＣＳバッファー中で、室温で２０分間インキュベートし、次にＨｕｍａｎＴｒｕＳｔａｉｎＦｃＸ中で、室温で１０分間インキュベートした。表面タンパク質の染色を、以下のパネルを用いて行った。ＣＤ８０－ＦＩＴＣ、ＣＤ８６－ＰＥ、ＣＤ１６３－ＡＰＣ－Ｃｙ７、ＣＤ２０６－ＢＶ４２１、抗Ｈｉｓ－ＡＰＣ、ＡｑｕａＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ。ＡｔｔｕｎｅＮｘＴフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）を用いて、表面タンパク質発現の検出を完了した。

ＣＡＲマクロファージをＣＤ４０Ｌで処置したところ、マクロファージ及びＣＡＲマクロファージの腫瘍殺傷能力が顕著に向上した（図５Ａ）。また、ＣＤ４０Ｌによるプライミングは、ｍＲＮＡ形質導入ＣＡＲマクロファージにおいてＭ１表現型も誘導した（図５Ｂ）。４－１ＢＢ及び４－１ＢＢＬによる処置も同様の結果をもたらしたが、ＣＤ４０Ｌより効力は低かった（図６Ａ～６Ｂ及び７Ａ～７Ｂ）。これらの結果は、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＤ４０Ｌ）によるＣＡＲマクロファージの前処置またはプライミングが有効性を増加させ得ることと、ＣＡＲマクロファージ及びＣＤ４０アゴニストを含む併用療法が有効性を増加させ得ることとを示すものである。

実施例８：Ｍ１分極化は、ｍＲＮＡの持続性及びマクロファージ／ＣＡＲ－マクロファージの機能を強化する
ヒトマクロファージに、ｍ６ＡＧＣａｐ１及びＰｓＵ修飾を含むＨＥＲ２ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションした。細胞を、Ｍ１表現型を誘導するサイトカイン（例えば、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＩＦＮガンマ、及びリポ多糖（ＬＰＳ）、ＴＮＦアルファ、ＩＬ－６、またはＳＴＩＮＧリガンド（ＳＴＩＮＧ－Ｌ））とともに最大４８時間培養し、次いでサイトカインを洗い流し、新鮮な培地を加えた。形質移入から２日後及び７日後にＣＡＲ発現及びＭ１マーカー発現を測定した。マクロファージに形質移入してから２日後、蛍光標識ＨＥＲ２＋乳癌細胞（ＣＲＬ２３５１）をＨＥＲ２ＣＡＲマクロファージと共培養した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）ライブイメージング顕微鏡で、がん細胞の成長をその蛍光によって４時間ごとにモニターした。エフェクター（ＣＡＲマクロファージ）：標的（がん細胞）比は５：１とした。

図１２１Ａに示されているように、試験したインターフェロンサイトカインは、２日目のＣＡＲ形質移入マクロファージの生存率を低下させなかった。驚くべきことに、ＩＦＮ－βで処置したマクロファージは、対照培地、ＩＦＮ－α、またはＩＦＮ－γで処置したマクロファージよりも高いＣＡＲ発現を示した（図１２１Ｂ）。図１２１Ｃに示されているように、マクロファージをインターフェロンサイトカインで処置しても、７日目のＣＡＲ形質移入マクロファージの生存率が低下しなかった。驚くべきことに、ＩＦＮ－βで処置したマクロファージは、対照培地、ＩＦＮ－α、またはＩＦＮ－γで処置したマクロファージよりも高いＣＡＲ発現を示した。これは、ＩＦＮ－βが、ヒトマクロファージにおけるｍＲＮＡコード導入遺伝子（例えば、ＣＡＲ）の発現期間を改善することを実証している（図１２１Ｄ）。さらに、ｍＲＮＡを形質移入したＣＡＲマクロファージをＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、またはＩＦＮ－γで処置したところ、Ｍ１表現型の誘導（ＣＤ８６発現に基づく；図１２１Ｅ）及びＭ２マーカーの低減（ＣＤ１６３発現に基づく；図１２１Ｆ）がもたらされた。ＩＦＮ－βは、評価したインターフェロンの中で最も強力なＭ１表現型をもたらし、このＭ１表現型は処置後少なくとも７日間持続した（図１２１Ｅ）。

実施例９：ＩＦＮ処置がＣＡＲ発現、ＣＡＲマクロファージ機能、Ｍ１表現型マーカー、及びサイトカイン産生にもたらす効果
５つの異なるｍＲＮＡ修飾についても試験を行って、インターフェロン処置が、異なる修飾を含むｍＲＮＡを形質移入したマクロファージに異なる影響を及ぼすかを判定した。ヒトマクロファージに、異なるｍＲＮＡ修飾を含むＨＥＲ２ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションから４日後に、フローサイトメトリー（Ａｔｔｕｎｅ）によってＣＡＲの発現及びＭ１マーカーを検出した。次いで、４日目のＣＡＲマクロファージを、Ｎｕｃ－Ｌｉｇｈｔで標識したＨＥＲ２＋乳癌細胞株（ＣＲＬ２３５１）とともに、５：１のエフェクター（ＣＡＲマクロファージ）：標的（がん細胞）比において共培養した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）ライブイメージング顕微鏡で、がん細胞の成長をその蛍光によって４時間ごとにモニターした。

ＩＦＮ－βがＣＡＲの持続性に及ぼす影響についてさらに評価するため、ＨＥＲ２ＣＡＲをコードするｍ６ＡＧＣａｐ１／ＰｓＵｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたヒトマクロファージを、２日目及び７日目に評価した。ＩＦＮ－β処置により、ＩＦＮ－βで処置しなかったＣＡＲマクロファージに比べて、７日目のＣＡＲ発現率が顕著に改善された（図１２２）。

ＩＦＮ－β処置がＣＡＲ発現の改善に及ぼす効果を検証し、ＩＦＮ－β濃度を最適化するために、Ｍ６ＡＧＣａｐ１／ＰｓＵ修飾ｍＲＮＡを形質移入したマクロファージを０、３、１０、３０、１００ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－βで４時間処置し、エレクトロポレーションから４日後及び７日後に、生存率、ＣＡＲパーセンテージ、及びＣＡＲＭＦＩを評価した。ＩＦＮ－βの用量依存的な効果が、ヒトマクロファージによるＣＡＲの発現に対し観察された（図１２３Ａ）。実施例４に記載のように、ＣＡＲマクロファージをＩＦＮ－βで処置するとＭ１表現型が誘導される。そこで、この効果が用量依存的であるかを判断するためにさらなる実験を実施した。図１２３Ｂに示されているように、Ｍ１マーカーＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ－ＤＲの誘導は、ＩＦＮ－β用量依存的であった。

マクロファージの表現型が可塑的と考えられ、ＩＬ－１０などの免疫抑制サイトカインがＭ２表現型を誘導することが知られていることを考慮し、ＩＬ－１０処置がＩＦＮ－β処置または無処置のＨＥＲ２ＣＡＲｍＲＮＡ形質移入マクロファージに及ぼす影響について評価した。ＩＦＮ－β処置ＣＡＲマクロファージは、ＩＬ－１０の効果に抵抗を示し、Ｍ２マーカーＣＤ１６３を発現せず、その代わりにＭ１マーカーＣＤ８６の発現をＩＬ－１０処置から４８時間後（図１２４Ａ）及び７日後（図１２４Ｂ）に保持した。ＩＦＮ－βプライミングＣＡＲマクロファージは、他のＭ２誘導因子にも抵抗を示した。

ＩＦＮ－βによるプライミングのありまたはなしの場合で、ＨＥＲ２ＣＡＲをコードするｍＲＮＡを形質移入したマクロファージの抗腫瘍機能を評価するため、非形質導入（ＵＴＤ）またはＣＡＲマクロファージを０、３、１０、３０、１００ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－βで４時間または２０時間プライミングした。これらのエフェクター細胞をＨＥＲ２＋乳癌細胞株ＣＲＬ２３５１－ＧＦＰとともに、３：１または１．５：１のエフェクター：標的比において共培養し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）ライブイメージング顕微鏡を用いて抗腫瘍活性をＧＦＰ発現に基づき測定した。ＩＦＮ－βプライミングにより、ＣＡＲマクロファージががん細胞を殺傷する能力が改善した（図１２５Ａ）。ＩＦＮ－β処置が、修飾を含むｍＲＮＡを有するＣＡＲマクロファージの抗腫瘍活性を改善するかについて評価するため、ＩＦＮ－β処置のありまたはなしの場合で、ユニークな修飾を含むｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたマクロファージの抗腫瘍活性を評価した。ＩＦＮ－β処置により、５ｍｏＵｍＲＮＡを形質移入したマクロファージ以外の全てのＣＡＲマクロファージで抗腫瘍活性が改善された（図１２５Ｂ）。ｍＲＮＡ形質移入ＣＡＲマクロファージの抗腫瘍効果の改善が、全てのインターフェロンに普遍的なのか、またはインターフェロンベータのみなのかについて評価するため、Ｍ６ＡＧＣａｐ１／ＰｓＵｍＲＮＡをエレクトロポレーションしたマクロファージをＩＦＮアルファ、ベータ、またはガンマで処置し、がん細胞の殺傷能力を評価した。ＩＦＮ－βで処置したＣＡＲマクロファージは、ＩＦＮ－αまたはＩＦＮ－γの場合よりも大きな効果を有し、最も良好ながん細胞殺傷をもたらした（図１２５Ｃ）。

マクロファージのインターフェロン処置が他の抗腫瘍機能を改善するかについて評価するため、インターフェロン処置または無処置のｍＲＮＡ形質移入ＨＥＲ２ＣＡＲマクロファージにおいて、ＨＥＲ２＋乳癌細胞と共培養した後のサイトカイン分泌を評価した。ヒトマクロファージに、ｍ６ＡＧＣａｐ１及びＰｓＵ修飾を含む１５０ｎＭのＨＥＲ２ＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションした。ＨＥＲ２＋乳癌細胞（ＣＲＬ２３５１）をＣＡＲｍＲＮＡを形質移入したマクロファージとともに、３：１のエフェクター（ＣＡＲマクロファージ）：標的（がん細胞）比において共培養した。がん細胞及びマクロファージを共培養してから４８時間後に上清を採取し、ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）装置を用いてサイトカインレベルを測定した。図１２６に示されているように、マクロファージをＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、またはＩＦＮ－γで処置したことにより、マクロファージからのサイトカインＩＬ－６、ＩＬ－８、及びＴＮＦαの分泌が増加した。

インターフェロンによる処置がマクロファージ内でのＣＡＲｍＲＮＡ持続性をさらに改善するか、及びＣＡＲマクロファージの機能性が拡張されるかを判断するため、追加試験を実施した。ヒトマクロファージに、ｍ６ＡＧＣａｐ１及びＰｓＵ修飾を含む３００ｎＭＣＡＲｍＲＮＡをエレクトロポレーションした。細胞を２０ｎｇ／ｍＬＩＦＮとともに２４時間培養し、次いで細胞を洗浄してサイトカインを除去した。形質移入から２日後にフローサイトメトリー（Ａｔｔｕｎｅ）によってＣＡＲ発現を検出した。次いで細胞を、Ｎｕｃ－Ｌｉｇｈｔ標識ＨＥＲ２＋乳癌細胞株（ＣＲＬ２３５１）とともに、３：１のエフェクター：標的比において共培養した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）ライブイメージング顕微鏡で、がん細胞の成長をその蛍光によってモニターした。形質移入から７日後に、フローサイトメトリー（Ａｔｔｕｎｅ社）によってマクロファージ内でのＣＡＲの発現及びＭ１マーカーを検出した。

図１２７Ａに示されているように、ＣＡＲｍＲＮＡの形質移入から２日後、ＣＡＲマクロファージの生存率及びＣＡＲの発現は、ＩＦＮ－γで処置したマクロファージを除いて非常に高かった。さらに、図１２７Ｂ及び図１２７Ｃに示されているように、ＩＦＮ処置により、ＣＡＲマクロファージの標的細胞殺傷活性が強化された。図１２７Ｃは、がん細胞及びマクロファージを７２時間共培養した後の標的細胞殺傷を示している。ＩＦＮによる処置は、マクロファージの生存率、ＣＡＲの発現、Ｍ１マーカーの発現、及びＣＡＲマクロファージの機能性にも影響を及ぼした。図１２８Ａに示されているように、形質移入マクロファージをＩＦＮ－βで処置したことにより、後の７日目時点において、インターフェロンで処置しなかったマクロファージに比べて、細胞生存率、ＨＥＲ２ＣＡＲ発現、ならびにＭ１マーカーＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＨＬＡ－ＤＲの発現が増加した。図１２８Ａは、７日目に全てのマクロファージが高い生存率を有するが、ＩＦＮ－β処置マクロファージは、顕著なマージンによって最も高いレベルでＣＡＲを発現したことを示している。図１２８Ｂは、エレクトロポレーションから７日後にがん細胞殺傷アッセイで試験した全てのＣＡＲマクロファージのうち、ＩＦＮ－βで処置したマクロファージが最も高いレベルでがん殺傷（腫瘍成長における最も大きな減少）をもたらしたことを示している。マクロファージにエレクトロポレーションしてから７日後に、これらを標的がん細胞と７２時間共培養した。図１２８Ｃに示されているように、全てのインターフェロンは、インターフェロンで処置しなかったＣＡＲマクロファージに比べて、ＣＡＲマクロファージのがん細胞殺傷活性を改善した。

実施例１０：形質移入マクロファージはＩＦＮγに対し感受性を有する
ｍ６ＡＧＣａｐ１とＰｓＵまたはＮ１ｍＰｓＵ修飾を含むｍＣｈｅｒｒｙｍＲＮＡをヒトマクロファージに形質移入し、異なる用量のＩＦＮ－γを用いて１日間培養した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）ライブイメージング顕微鏡でｍＣｈｅｒｒｙ発現をモニターした。図１２９に示されているように、マクロファージにｍＲＮＡを形質移入すると、ＩＦＮ－γはｍＣｈｅｒｒｙｍＲＮＡ発現を低減した。

ｉｎｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡが、様々なエンドソーム自然免疫受容体（例えば、トール様受容体（ＴＬＲ）３、ＴＬＲ７、及びＴＬＲ８）、ならびに細胞質自然免疫受容体（プロテインキナーゼＲＮＡ活性化（ＰＫＲ）、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉタンパク質（ＲＩＧ－Ｉ）、黒色腫分化関連タンパク質５（ＭＤＡ５）、ならびに２’－５’－オリゴアデニル酸合成酵素（ＯＡＳ））によって認識されることが以前に示されている。これらの異なる経路を介したシグナル伝達は、１型インターフェロン（ＩＦＮ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、ＩＬ－１２、及び転写プログラムのカスケードの活性化に関連する炎症を引き起こす。全体的に見ると、これらにより、特異的免疫応答を誘導する準備ができた炎症促進性微小環境が創出される。さらに、下流の作用（例えば、真核生物翻訳開始因子２α（ｅＩＦ２α）のリン酸化による翻訳の減少、リボヌクレアーゼＬ（ＲＮａｓｅＬ）によるＲＮＡ分解の強化、自己増幅ｍＲＮＡ複製の過剰発現及び阻害）はいずれも、ＩＶＴｍＲＮＡの薬物動態及び薬力学に関連するものである。

ＴＬＲ経路を介したＩＦＮ－γの活性化は、２’－５’－オリゴアデニル酸合成酵素（ＯＡＳ）を活性化することができ、これにより２’－５’－オリゴアデニル酸（２－５Ａ）が産生され、これにより今度はＲＮａｓｅＬが活性化されて、ＲＮＡ分解及びアポトーシスがもたらされ得る。

実施例１１：ＲＮａｓｅＬ阻害剤、スニチニブ、及びＡＢＣＥ１がＣＡＲマクロファージにもたらす効果
ＲＮａｓｅＬ阻害剤が形質移入ｍＲＮＡのＩＦＮ－γ誘導不安定性を救済できるかどうかを調べるため、ヒトマクロファージを１μＭスニチニブ（ＲＮａｓｅＬ阻害剤）で処置し、その２時間後にｍ６ＡＧＣａｐ１及びＰｓＵ修飾を含むｍＣｈｅｒｒｙｍＲＮＡの形質移入を行った。次いで形質移入細胞を異なる投与量のＩＦＮ－γとともに１日間培養した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）ライブイメージング顕微鏡でｍＣｈｅｒｒｙの発現をモニターした。図１３０Ａに示されているように、スニチニブは、ｍＲＮＡのＩＦＮ－γ誘導分解を救済した。

ＲＮＡｓｅＬ阻害がｍＲＮＡ形質移入ＣＡＲマクロファージの抗腫瘍機能を改善し得るかについて評価するため、マクロファージに対し、修飾を含むｍＲＮＡを形質移入し、スニチニブで前処置した後に、エフェクター細胞としてがん細胞殺傷アッセイで評価を行った。１ｎＭスニチニブで前処置したＣＡＲマクロファージは、スニチニブで前処置していないＣＡＲマクロファージ、またはスニチニブ処置もしくは無処置の非形質移入対照マクロファージよりも、高いがん細胞殺傷をもたらした（図１３０Ｂ）。４８時間のＣＲＬ２３５１乳癌細胞殺傷アッセイにおける、スニチニブプライミングＣＡＲマクロファージのがん殺傷能力の改善を図１３０Ｃに示す。

別のＲＮａｓｅＬ阻害剤（ＲＬＩまたはＡＢＣＥ１）の効果についても試験して、さらに概念を検証した。ヒトマクロファージに、ｍ６ＡＧＣａｐ１及びＰｓＵ修飾を含むｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡと、ＡＢＣＥ１をコードするｍＲＮＡとを同時形質移入した。

図１３１に示されているように、ＡＢＣＥ１の同時発現により、エレクトロポレーションから４８時間後に、関心対象のｍＲＮＡコード導入遺伝子の発現が顕著に改善された。ＡＢＣＥ１を同時形質移入したマクロファージの生存率は影響を受けず、高いまま保たれた。ＡＢＣＥ１同時形質移入によってｍＣｈｅｒｒｙの発現はほぼ２倍増加し、スニチニブによる前処置により、この効果はさらに強化された。

実施例１２：ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲマクロファージの受容体発現及び腫瘍細胞殺傷
この実施例では、ＣＤ８リーダーと、４Ｄ５ｓｃＦｖと、ＣＤ２８ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメイン（ＣＴＸ＿２１９）とを含むＣＡＲコンストラクトを生成した（図１３２）。次いで、ＣＴＸ＿２１９の発現を、ＣＤ２８ヒンジドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインの代わりにＣＤ８ヒンジドメイン及びＣＤ８膜貫通ドメインを有する同一のＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿００１；図８）と比較した。ＣＴＸ＿２１９の腫瘍殺傷能力をＣＴＸ＿００１と比較し、さらに、ＣＴＸ＿００１と同一であり、ただし細胞内シグナル伝達ドメインが欠如したＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿００３）とも比較した。

初代ヒトマクロファージを５０～５００ｎＭのｍＲＮＡを含むＥＰバッファーに１．０×１０^５～１．０×１０^９細胞／ｍＬの濃度で懸濁し、エレクトロポレーションを行った。細胞をカセットから取り出し、プレーティングし、３７℃及び５％ＣＯ_２で一晩培養した。ＣＡＲ発現ＭＦＩ及びパーセンテージを、２４時間後、フローサイトメトリーによりｒＨＥＲ２結合を用いて検出した。２４時間後、Ｌｉｖｅ／ＤｅａｄＡｑｕａを用いて生存パーセンテージを検出した。殺傷については、マクロファージを、Ｈｅｒ２＋ＣＲＬ２３５１－ＮｕｃＧＦＰ腫瘍細胞とともに２：１のＥ：Ｔ比または１：１のＥ：Ｔ比で共培養し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）によって７２時間モニターした。時間０に対するウェルごとのＧＦＰ積算強度により、腫瘍細胞死を計算した。

発現及びＣＡＲ＋パーセンテージは、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿２１９）、ＣＤ８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿００１）、及び細胞内シグナル伝達ドメインが欠如したＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿００３；図１３３Ａ～１３３Ｃを参照）において同等であった。生存パーセンテージもＣＴＸ＿２１９及びＣＴＸ＿００１において同等であった（図１３３Ｄ）。驚くべきことに、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿２１９）は、ＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３対照に比べて殺傷機能の強化を示した（図１３３Ｅ）。これらのデータは、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクトが、ＣＤ８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクトに比べて、マクロファージによる腫瘍細胞殺傷の改善をもたらしたことを示している。

ＣＴＸ＿２１９を含むマクロファージによるＴＮＦα及びＩＬ６分泌を、ＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３の場合と比べて定量した。エフェクター細胞をＨＥＲ２＋標的細胞とともに、１：１のＥ：Ｔ比において２４時間共培養した。上清を採取し、ＭＳＤＰｒｏ－ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＰａｎｅｌ１（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）をメーカーの指示に従って用いてＴＮＦα及びＩＬ６の濃度を測定した。驚くべきことに、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿２１９）は、ＩＬ６産生をさらに増加させることなくＴＮＦα分泌の顕著な増加（ＣＴＸ＿００１の約５倍）を示した（図１３４）。これらのデータは、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクトが、炎症性サイトカインＩＬ６の産生を増加させることなく、ＣＤ８ヒンジドメインを含むＣＡＲコンストラクトに比べて腫瘍殺傷サイトカインＴＮＦαの分泌の改善をもたらすことを示している。

実施例１３：ＣＡＲを含むマクロファージのＶＰＸ媒介レンチウイルス形質導入
ＣＡＲ発現のためのマクロファージのレンチウイルス形質導入のために、マクロファージを解凍し、１０ｍＬ完全培地（ＣＭ）においてプレートに１０ｃｍ当たり５－１０ｅ６細胞の密度でプレーティングした。２～３時間静置した後、ＶＰＸレンチウイルス粒子をＣＭに希釈し、指定のＭＯＩでマクロファージに加えた。レンチウイルスを加えてから２４時間後に培地を完全に交換した。

本明細書に記載の実験用のマクロファージを採取するために、１０ｃｍプレートをインキュベーターから取り出し、４℃で３０分間静置した。細胞をプレートから取り出し、ペレット化し、ＣＭに再懸濁した。細胞カウントを行い、マクロファージを実験に使用するか、または後の時点用に再プレーティングした。

ＣＡＲマクロファージ評価のための機能アッセイ
殺傷アッセイのために、マクロファージを、特定のマクロファージ：標的比（Ｅ：Ｔ）を達成するための定義された密度で、１００ｕＬのＣＭにおいて９６ウェルプレートにプレーティングした。１～２時間の静置時間後、ｎｕｃＬｉｇｈｔＧＦＰを発現する１０，０００個の腫瘍細胞を１００ｕＬのＣＭに再懸濁し、各ウェルに加えた。プレートをＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）に入れ、腫瘍細胞を加えてから約１時間後から開始して４時間ごとにイメージングを行った。殺傷を、時間０スキャンに対するＧＦＰ積算強度として定義した。これらのアッセイに使用した腫瘍細胞は、ＡＵ５６５ＨＥＲ２＋乳癌細胞及びＳＫＯＶ３卵巣癌細胞であった。

サイトカイン分泌試験のために、可溶性Ｈｅｒ２－Ｈｉｓを０．２ｕｇ／ｕＬの濃度で分子グレードの水に溶解した。次いでＨｅｒ２－Ｈｉｓを指定の濃度でＰＢＳに希釈した。１００ｕＬのＨｅｒ２－Ｈｉｓ希釈液を９６ウェルプレートのウェルに加えた。プレートを４℃で一晩保存し、続いてＰＢＳで２回洗浄した。５０，０００個のマクロファージを最終体積２００ｕＬのＣＭにおいて各ウェルに加えた。マクロファージを加えてから約２４時間後に上清を採取し、さらなる評価用に－２０℃で保存した。ＭＳＤＵ－Ｐｌｅｘキットを用いてサイトカインの検出を行った。

細胞表面タンパク質及びＣＡＲの発現を検出するために、細胞をＨｕｍａｎＴｒｕＳｔａｉｎＦｃＸを含むＦＡＣＳバッファー中で、室温で１０分間インキュベートした。表面タンパク質の染色を、以下のパネルを用いて行った。ＣＤ８０－ＦＩＴＣ、ＣＤ８６－ＰＥ、ＣＤ１６３－ＡＰＣ－Ｃｙ７、ＣＤ２０６－ＢＶ４２１、抗トラスツズマブ－ＡＰＣ、及びＡｑｕａＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ。ＡｔｔｕｎｅＮｘＴフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）を用いて表面タンパク質の発現の検出を完了し、ＦｌｏｗＪｏで解析した。

ＶＰＸ及び非ＶＰＸレンチウイルスを比較するＣＡＲ発現の検出のために、細胞を２０μｇ／ｍＬＨｅｒ２－Ｈｉｓを含むＦＡＣＳバッファー中で、室温で２０分間インキュベートし、次にＨｕｍａｎＴｒｕＳｔａｉｎＦｃＸ中で、室温で１０分間インキュベートした。表面タンパク質の染色を、以下のパネルを用いて行った。ＣＤ８０－ＦＩＴＣ、ＣＤ８６－ＰＥ、ＣＤ１６３－ＡＰＣ－Ｃｙ７、ＣＤ２０６－ＢＶ４２１、抗Ｈｉｓ－ＡＰＣ、ＡｑｕａＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ。ＡｔｔｕｎｅＮｘＴフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）を用いて表面タンパク質の発現の検出を完了し、ＦｌｏｗＪｏで解析した。

ＣＡＲマクロファージのＶＰＸを用いたレンチウイルス形質導入の結果
ＶＰＸを加えた結果、マクロファージ内でのＣＡＲコンストラクト（ＣＴＸ＿００１）の発現が顕著に増加した（図１３６）。ＣＴＸ＿００１は、抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８膜貫通ドメインと、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインとを含む（図８）。ＶＰＸベースの形質導入により、ＣＡＲ（％）は、ＭＯＩ：５で４０％超、ＭＯＩ：１０で６０％超、ＭＯＩ：５０で８０％以上、ＭＯＩ：５０で９０％超増加し、これに対しＶＰＸなしで形質導入した同じＣＡＲ（ＣＴＸ＿００１）は、５～５０のＭＯＩで約２０％のＣＡＲ（％）増加であった。

次に、ＭＯＩ滴定を用いたＶＰＸ－レンチウイルス形質導入のために、生存率及びＣＡＲ発現を経時的に評価した。ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲ－Ｍは、生存率が高く３０日超にわたりＣＴＸ－００１を発現することが示された（図１３７）。ＭＯＩ：１、５、及び１０においてＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲ－Ｍは、約８０％～約１００％の範囲の生存％で約３０日の時間期間にわたって生存した。ＣＡＲ発現％は、ＭＯＩ：１からＭＯ１：５及び１０にかけて増加した。非形質導入（ＵＴＤ）マクロファージを対照として用いた。

また、ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したマクロファージ内でのＣＴＸ＿００１におけるＣＡＲ発現を、経時的な表面タンパク質の解析のためにαトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いて評価した。ＭＯＩ：１、ＭＯＩ：５、及びＭＯＩ：１０におけるＣＡＲ細胞表面発現が示され、ＭＯＩ：５及び１０では４、７、１５、２２、及び２９日目で発現が増加した（図１３８）。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。

また、ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したマクロファージ内でのＣＴＸ＿００１におけるＣＡＲ発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、経時的な表面タンパク質の解析のためにαトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いて評価した。ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲマクロファージは、３０日の時間期間にわたって非常に生存力が高く、ＣＴＸ－００１を発現することが示された（図１３９）。したがって、ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＡＲマクロファージは、ＣＡＲの発現を少なくとも２９日間維持した。

また、ＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージの殺傷機能も評価した。エフェクターマクロファージ：標的腫瘍細胞の比（Ｅ：Ｔ）は、４：１、２：１、１：１、及び１：２とした。積算強度は腫瘍負荷を示す。ＵＴＤマクロファージ及びマクロファージなしのＡＵ５６５細胞（ＨＥＲ２＋乳癌細胞株）を対照として使用した。ＣＴＸ＿００１マクロファージの殺傷機能は、４日後に全てのＥ：Ｔ比ならびにＭＯＩ：１、５、及び１０において明らかになり、７日後も維持された（図１４０）。注目すべきことに、ＭＯＩ：５及びＭＯＩ：１０のＣＴＸ＿００１マクロファージは、全てのＥ：Ｔ比において同様のレベルの殺傷機能を示した。共培養から７２時間後の抗腫瘍活性をプロットした。

次に、臨床形質導入のためのＭＯＩ範囲について検討した。ＣＤ３ゼータドメインあり（ＣＴＸ＿００１）及びＣＤ３ゼータドメインなしのＣＡＲ（ＣＴＸ＿００３；抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８膜貫通ドメインとを含むＣＡＲ；図１０）について検討した。ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５の場合、ＶＰＸレンチウイルスで形質導入されたマクロファージにおいて、ＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３のＣＡＲ細胞表面発現が得られた（図１４１Ａ）。ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージは、ＵＴＤマクロファージに比べて、生存可能であること及び各ＣＡＲを発現することが示された（図１４１Ｂ）。ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージは、ＭＯＩ：２よりもＭＯＩ：５の方がより高いＣＡＲレベルを発現することが示された（図１４２）。また、ＶＰＸレンチウイルスによる形質導入は、ＣＤ８０及びＣＤ８６の発現と、ＣＤ１６３及びＣＤ２０６の発現の低減とに基づく、ＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージの中程度の用量依存的なＭ１分極化ももたらした（図１４３）。

また、ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージの分極化を、Ａｄ５ｆ３５によるアデノ随伴ウイルス形質導入に対し比較するための実験も実施した。ＶＰＸ－レンチウイルスではなくＡｄ５ｆ３５で形質導入すると、Ｍ１マーカーであるＣＤ８０及びＣＤ８６が誘導された（図１４４）。また、ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージは、形質導入から７日後及び形質導入から２１日後に、Ａｄ５ｆ３５で形質導入したＣＴＸ＿００１マクロファージに比べて持続的な抗腫瘍活性も示した（図１４５）。これらの結果は、場合によっては、ＶＰＸ－レンチウイルスを使用する際に、Ｍ１誘導なしでマクロファージ内で同等にＣＡＲを発現させるのに異なるウイルスベクターを使用してもよく、これにより、マクロファージの可塑性の維持及びその後の表現型の制御が可能になることを示すものである。したがって、ＶＰＸ－レンチウイルスはＭ０ＣＡＲマクロファージの作製に使用することができる。続いて、Ｖｐｘレンチウイルス由来Ｍ０ＣＡＲマクロファージをＭ１またはＭ２に分極化させて、Ｍ１またはＭ２分極化操作マクロファージまたはＣＡＲマクロファージを作製することができる。このようなＣＡＲマクロファージは、ＣＡＲコンストラクト内でシグナル伝達ドメインをコードして、表現型シフトを誘導することもできると考えられる。このようなＣＡＲマクロファージは、Ｍ１サイトカイン（例えば、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＩＦＮｇ、ＬＰＳ、もしくはＴＬＲアゴニスト）またはＭ２サイトカイン（例えば、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１３、もしくはＴＧＦｂ）でプライミングして、選択された表現型を有するＣＡＲマクロファージを作製することができると考えられる。このようなＣＡＲマクロファージは、転写因子、免疫リガンド、または分泌サイトカインを用いて、Ｍ１またはＭ２表現型を誘導するように操作することができると考えられる。

また、ＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージの殺傷機能を、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＡＵ５６５及びＳＫＯＶ３細胞内で評価した。Ｅ：Ｔの比は４：１、ＡＵ５６５については１：２とした。ＶＰＸレンチウイルスで形質導入してから７日後、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５の形質導入ＣＴＸ＿００１マクロファージは、４：１及び２：１のＥ：Ｔ比において、対照のＵＴＤ及びＡＵ５６５細胞と同様の殺傷能力を示した（図１４６）。ＳＫＯＶ３については、Ｅ：Ｔの比は４：１とした。ＶＰＸレンチウイルスで形質導入してから７日後、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５の形質導入ＣＴＸ＿００１マクロファージは、４：１のＥ：Ｔ比において、対照のＵＴＤ及びＳＫＯＶ３細胞と同様の殺傷能力を示した（図１４７）。

また、ＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージにＶＰＸレンチウイルスで形質導入した後の炎症性サイトカイン産生についても検討した。ＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージにＶＰＸレンチウイルスで形質導入し、プレート結合ＨＥＲ２のありまたはなしで２４時間培養した。ＶＰＸレンチウイルスで形質導入してから７日後、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５の形質導入ＣＴＸ＿００１マクロファージは、ＨＥＲ２の存在下ではＴＮＦα及びＩＬ－６の産生が増加し、炎症性サイトカイン分泌の差を示した（図１４８）。

次に、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５のＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージのＶＰＸ－レンチウイルス形質導入について、生存率及びＣＡＲ発現を経時的に評価した。ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージは、２１日の時間期間にわたり、高い生存率ならびにＣＴＸ－００１及びＣＴＸ＿００３の発現が示された（図１４９）。ＵＴＤマクロファージを対照として使用した。また、ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したマクロファージ内でのＣＴＸ－００１及びＣＴＸ＿００３におけるＣＡＲ発現のＭＦＩを、経時的な細胞表面タンパク質の解析のためにαトラスツズマブ－ＡＦ６４７を用いて評価した。ＶＰＸ－レンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージは、２１日の時間期間にわたり、高い生存率ならびにＣＴＸ－００１及びＣＴＸ－００３の発現が示された（図１５０）。

また、ＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＴＸ＿００１及びＣＴＸ＿００３マクロファージの殺傷機能を、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５においてＡＵ５６５及びＳＫＯＶ３細胞内で経時的に評価した。形質導入から２１日後に殺傷アッセイを開始した。Ｅ：Ｔの比は４：１、ＡＵ５６５については１：２とした。ＶＰＸレンチウイルスで形質導入してから２１日後、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５の形質導入ＣＴＸ＿００１マクロファージは、４：１及び２：１のＥ：Ｔ比において７２時間にわたり、対照のＵＴＤ及びＡＵ５６５細胞と同様の殺傷能力を示した（図１５１）。ＳＫＯＶ３については、Ｅ：Ｔの比は４：１とした。ＶＰＸレンチウイルスで形質導入してから２１日後、ＭＯＩ：２及びＭＯＩ：５の形質導入ＣＴＸ＿００１マクロファージは、４：１のＥ：Ｔ比において、対照のＵＴＤ及びＳＫＯＶ３細胞と同様の殺傷能力を示した（図１５２）。
また、ＶＰＸレンチウイルスで形質導入した後の単球内のＣＴＸ＿００１（図８）の発現及び生存率についても検討した。ＣＤ１４＋ヒト単球を解凍し、洗浄し、カウントした。細胞を、ＵＴＤで、または適切なＭＯＩでレンチウイルスを加えて、３ｅ６細胞／ウェルで６ウェルＵｐｃｅｌｌプレートにプレーティングした。５日目に細胞に栄養供給し、７日目にフローサイトメトリー解析に採取した。Ａｄ５ｆ３５形質導入を用いて形質導入したＣＡＲマクロファージ及びＣＡＲ単球を対照として使用した。ＣＡＲ単球は、Ａｄ５ｆ３５導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを生存率の比較対象として使用した場合、ＭＯＩ：２、５、または１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入した後に生存可能であった（図１５３Ａ）。ＭＯＩ：２、５、及び１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＡＲ単球は、Ａｄ５ｆ３５形質導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを生存率の比較対象として使用した場合に、ＭＯＩ：２で２７．６％、ＭＯＩ：５で５１．３％、及びＭＯＩ：１０で６６．３％とＣＡＲ発現のパーセンテージ（％）増加を示した（図１５３Ｂ）。また、ＭＯＩ：２、５、及び１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＡＲ単球は、Ａｄ５ｆ３５形質導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを比較対象として使用した場合に、ＭＯＩの増加とともにＣＡＲ発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加も示した（図１５３Ｃ）。ＭＯＩ：２、５、及び１０においてＶＰＸレンチウイルスで形質導入したＣＤ１４＋単球のＣＡＲ発現ヒストグラムも、Ａｄ５ｆ３５導入ＣＡＲ単球及びＣＡＲマクロファージを比較対象として使用した場合に、ＭＯＩの増加とともにＣＡＲ発現の増加を示した（図１５３Ｄ）。ＵＴＤマクロファージもＣＡＲ発現ヒストグラムの対照として使用した。これらの結果は、単球がＶＰＸレンチウイルス形質導入後にＣＡＲを発現したことを示し、また単球がマクロファージ段階でＣＡＲ発現を維持することを示している。

実施例１４：ＣＡＲマクロファージの食作用の強化のためのＳＩＲＰαノックアウト
免疫チェックポイントＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用は、マクロファージの食作用を阻害する。したがって、ＣＡＲを発現するマクロファージは、相反する食作用促進及び抑制シグナルを腫瘍から受信する。本明細書で提示する結果は、ＳＩＲＰαのノックアウトがＣＡＲマクロファージの殺傷及び食作用を改善したことを示すものである。

リボ核タンパク質（ＲＮＰ）形成を実施し、マクロファージを解凍してから１日後にマクロファージと混合した。精製したＣａｓ９タンパク質を、３種のｇＲＮＡのカクテルとともに室温で１０～２０分間インキュベートした。使用したｇＲＮＡ配列は、ＳｙｎｔｈｅｇｏのヒトＳＩＲＰα用「遺伝子ノックアウトキット」からの配列であった（表２）。１：３のＣａｓ９：全ｇＲＮＡ比（そのため、Ｃａｓ９：カクテル内の個々のｇＲＮＡの比は１：１）を使用した。ＥＰバッファー中でマクロファージと混合したＲＮＰを、３ｅ７～８ｅ７細胞／ｍＬに対し２．５μＭＣａｓ９ＲＮＰの最終濃度とした。ＭａｘＣｙｔｅエレクトロポレーションカセットでマクロファージにエレクトロポレーションした。回復培養後、遺伝子ノックアウトがタンパク質発現レベルで効果を発揮するようにエレクトロポレーションから少なくとも３日後に細胞を解析した。次いでＳＩＲＰα発現を解析し、機能アッセイを実施した。

２例の異なるドナー（ＨＣＣ１６３２６４とＨＣＣ１５１５６０）からの新鮮なマクロファージを実験開始の１日前に取得し、０日目に指示ＲＮＰ濃度のＣａｓ９をマクロファージにエレクトロポレーションし、３日目にＳＩＲＰαの発現を評価した。ＳＩＲＰαの免疫染色は、フローサイトメトリーを用いてマクロファージ表面で実施した。結果からは、２例のドナーにおいて、マクロファージにおいてＳＩＲＰαを用量依存的にノックアウトできることが示された（図１５４Ａ～Ｂ）。結果からは、３１２ｎＭのＲＮＰにおけるフローサイトメトリープロット内で２つの異なるＣＡＲマクロファージ集団が示された（図１５４Ｃ）。これは、ＳＩＲＰα遺伝子がノックアウトされているか否かといった、Ｃａｓ９による遺伝子ノックアウトにおける全か無か（ａｌｌｏｒｎｏｔｈｉｎｇ）の性質を支持し、ＳＩＲＰα発現の勾配ではなく二元集団につながるものである。重要なことに、ＳＩＲＰαノックアウトは細胞生存率に影響を及ぼさなかった（図１５４Ｄ）。

また、ＳＩＲＰαノックアウトが、ＳＫＯＶ－３卵巣癌細胞内でＣＡＲマクロファージの食作用を促進することも示された。マクロファージを解凍し、Ｃａｓ９ＲＮＰによるエレクトロポレーションの１日前に、ＣＴＸ＿００１（抗ＨＥＲ２ｓｃＦｖと、ＣＤ８ヒンジと、ＣＤ８膜貫通ドメインと、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＡＲ；図８）をコードするアデノウイルスで形質導入した。３日後、ＳＩＲＰαの発現を評価し、ＳＫＯＶ－３を用いた食作用アッセイを開始した。これらの結果は、ＳＩＲＰαを標的とするＣａｓ９及びｇＲＮＡを伴うＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示すものである（図１５５Ａ）。ＣＴＸ＿００１を形質導入マクロファージ内で発現させた（図１５５Ｂ）。ＣＴＸ＿００１マクロファージは１２時間にわたって食作用を示した。これは、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）解析によりｐＨｒｏｄｏ－ｇｒｅｅｎシグナルを用いて測定したものである（図１５５Ｃ）。１２時間にわたって測定した合計食作用を曲線下面積として定量化した（図１５５Ｄ）。マクロファージにおいてはＳＩＲＰαノックアウト及びＣＡＲ発現の結果、食作用が最大化されたが、ＳＩＲＰαノックアウト単独では、ＵＴＤマクロファージにおける食作用は大きく強化されなかった。

またＳＩＲＰα ＫＯは、ＨＣＣ－１９５４ヒト乳癌細胞においてＣＡＲマクロファージの食作用を強化することも示された。マクロファージを解凍し、ＣＴＸ＿００１をコードするアデノウイルスで形質導入し、１日後にＣａｓ９ＲＮＰをエレクトロポレーションした。３日後、ＳＩＲＰαの発現を評価し、ＨＣＣ－１９５４を用いた食作用アッセイを開始した。これらの結果は、ＳＩＲＰαを標的とするＣａｓ９及びｇＲＮＡを伴うＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示すものである（図１５６Ａ）。ＣＴＸ＿００１を形質導入マクロファージ内で発現させた（図１５６Ｂ）。ＣＴＸ＿００１マクロファージは１２時間にわたって食作用を示した。これは、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）解析によりｐＨｒｏｄｏ－ｇｒｅｅｎシグナルを用いて測定したものであり、Ｙ軸上で再スケーリングした下方のプロットは、ＣＴＸ＿００１マクロファージが全てのＵＴＤ群よりも多くの食作用を示したことを示す（図１５６Ｃ）。１２時間にわたって測定した合計食作用を曲線下面積として定量化した（図１５６Ｄ）。これらの結果は、対照ｇＲＮＡが食作用を増加させたものの、マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウト及びＣＡＲ発現が依然として食作用シグナルの最大の産生者であることを示すものである。

また、ＳＩＲＰαノックアウトは、上記の実験とは異なるドナー細胞のマクロファージを用いたＳＫＯＶ－３卵巣癌細胞においてＣＡＲマクロファージの殺傷を強化することも示された。マクロファージを、Ｃａｓ９ＲＮＰによるエレクトロポレーションの１日前に解凍し、エレクトロポレーションの３日後にＣＴＸ＿００１をコードするアデノウイルスで形質導入した。２日後、ＳＩＲＰαの発現を評価し、ＳＫＯＶ－３を用いた食作用アッセイを開始した。これらの結果は、ＳＩＲＰαを標的とするＣａｓ９及びｇＲＮＡを伴うＣＴＸ＿００１マクロファージにおけるＳＩＲＰαノックアウトを示すものである（図１５７Ａ）。ＣＴＸ＿００１を形質導入マクロファージ内で発現させた（図１５７Ｂ）。ＳＫＯＶ－３殺傷は、ｎｕｃｌｉｇｈｔ緑色蛍光タンパク質を発現するＳＫＯＶ－３細胞の成長として測定し、これは２４時間にわたるＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）解析によって測定した（図１５７Ｃ）。ヒトＣＡＲマクロファージのＳＩＲＰαノックアウトは、標的腫瘍細胞の５０％のクリアランスに要する時間に基づいて腫瘍殺傷の動態を増加させた（図１５７Ｄ）。合計食作用を１２時間にわたって測定した（図１５７Ｅ）。マクロファージにおいてはＳＩＲＰαノックアウト及びＣＡＲ発現の結果、食作用が最大化されたが、ＳＩＲＰαノックアウト単独では、ＵＴＤマクロファージにおける食作用は大きく強化されなかった。第２のドナーを用いた食作用の結果も一貫していた。ＳＩＲＰαノックアウトＣＡＲマクロファージは、ＳＩＲＰαノックアウトなしのＣＡＲマクロファージよりも迅速に殺傷するように思われた。
本明細書に提示するこれらの結果は、初代ヒトＣＡＲマクロファージにおいてＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムによる高効率のＳＩＲＰαノックアウトを実証し、また、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを用いたＳＩＲＰαノックアウトが一貫して初代ヒトＣＡＲマクロファージで実施することができることを実証するものである。これらの結果は、ＳＩＲＰαノックアウトＣＡＲマクロファージによる食作用及び殺傷が、ＳＩＲＰαノックアウトなしのＣＡＲマクロファージに比べて増加を示す機能的データと対をなしている。２つの別々のドナー及び実験ランにおいて、ＳＩＲＰαノックアウトは、ＣＡＲマクロファージによるＳＫＯＶ－３細胞の食作用を増加させた。注目すべきことに、ＣＡＲを発現しないマクロファージ内でのＳＩＲＰαノックアウトは、食作用または腫瘍殺傷を増加させなかった。したがって、この効果は相乗的と考えることができる。

等価物
本開示に対する様々な変更、修正、及び改良が当業者に容易に相当されることは、当業者に理解されるべきである。このような変更、修正、及び改良は、本開示の一部であり、本発明の趣旨及び範囲内にあるものと意図されている。したがって、上記の説明及び図面は例示に過ぎず、本開示に記載の任意の発明は、以下の特許請求の範囲によってさらに詳細に説明される。

当業者であれば、本明細書に記載のアッセイまたは他のプロセスで得られた値に起因するずれまたは誤差の典型的な基準を理解するであろう。本発明の背景を説明し、その実施に関しさらなる詳細を提供するために本明細書で参照されている刊行物、ウェブサイト、及びその他の参考資料は、参照により全体として本明細書に援用される。

Claims

（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）膜貫通ドメインと、
（ｃ）細胞内ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、免疫細胞であって、
前記免疫細胞が、マクロファージ、単球、または樹状細胞を含む、前記免疫細胞。
前記ＣＡＲの前記細胞外ドメインが１つ以上の抗原結合ドメイン及びＦｃＲ細胞外ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記膜貫通ドメインがＦｃＲ膜貫通ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記細胞内ドメインがＦｃＲ細胞内ドメインを含む、請求項１に記載の免疫細胞。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインを含む、請求項２に記載の免疫細胞。
前記ＦｃＲ細胞外ドメイン、前記ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＦｃＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上が、ヒトＦｃＲドメインであるか、またはそれを含む、請求項２または請求項３に記載の免疫細胞。
前記ＦｃＲ細胞外ドメイン、前記ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＦｃＲ細胞内ドメインが一緒になって完全長ＦｃＲを構成する、請求項２～４のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＦｃＲ細胞外ドメインが、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む、請求項２～５のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＦｃＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む、請求項２～６のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＦｃＲ細胞内ドメインが、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む、請求項２～７のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＣＡＲの前記細胞外ドメインが１つ以上の抗原結合ドメイン及びトール様受容体（ＴＬＲ）細胞外ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ膜貫通ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記細胞内ドメインがＴＬＲ細胞内ドメインを含む、請求項１に記載の免疫細胞。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインを含む、請求項９に記載の免疫細胞。
前記ＴＬＲ細胞外ドメイン、前記ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＴＬＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上が、ヒトＴＬＲドメインであるか、またはそれを含む、請求項９または請求項１０に記載の免疫細胞。
前記ＴＬＲ細胞外ドメイン、前記ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＴＬＲ細胞内ドメインが一緒になって完全長ＴＬＲを構成する、請求項９～１１のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＴＬＲ細胞外ドメインが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む、請求項９～１２のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＴＬＲ膜貫通ドメインが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む、請求項９～１３のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記ＴＬＲ細胞内ドメインが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む、請求項９～１４のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記キメラ抗原受容体が、
（ｄ）１つ以上の細胞外リーダードメイン、
（ｅ）１つ以上の細胞外ヒンジドメイン、及び
（ｆ）１つ以上の細胞内共刺激ドメインのうちの１つ以上をさらに含む、請求項１に記載の免疫細胞。
前記１つ以上の細胞外リーダードメインが、ＣＤ８細胞外リーダードメインを含む、請求項１６に記載の免疫細胞。
前記１つ以上の細胞外抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖ、ｃｅｎｔｙｒｉｎ、またはｄａｒｐｉｎを含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記１つ以上の細胞外ヒンジドメインが、ＣＤ２８細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８ａ細胞外ヒンジドメイン、またはＩｇＧ４細胞外ヒンジドメインを含む、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ８ａ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＲＬ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＲＬ４、ＴＬＲ５、
ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記細胞内ドメインが、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の免疫細胞。
前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲγ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１、ＩＮＳＲ、ｃＭＥＴ、ＭＵＳＫ、ＰＤＧＦＲ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＴＩＥ２、ＴＲＫ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＲＥＭ－１、ＴＲＥＭ－２、ＤＡＰ１２、ＭＲ、ＩＣＯＳ、ＭｙＤ８８、Ｖ／Ｉ／ＬｘＹｘｘＬ／Ｖ、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４５、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、ＰＤ１、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＫＩＲ－２ＤＬ、ＫＩＲ－３ＤＬ、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ３３、ＢＴＬＡ、ＣＤ３２ｂ、ＳＩＲＰｂ、ＣＤ２２、ＰＩＲ－Ｂ、ＬＩＬＲＢ１、４１ＢＢＬ（ＴＮＦＳＦ９）、ＣＤ２７、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、ＣＤ２０９、Ｄｅｃｔｉｎ－２、ＩＬ１Ｒ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ３Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８Ｒ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０Ｒ、ＩＬ１１Ｒ、ＩＬ１２Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ１４Ｒ、ＩＬ１５Ｒ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＦＮａＲ、ＩＦＮｇＲ、ＴＮＦＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２Ｒ、Ｄａｐ１０、ＣＤ３６、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＩＣＯＳＬ、及び／またはＳｙｋ細胞内情報伝達ドメインを含む、請求項２１に記載の免疫細胞。
前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの細胞内共刺激ドメインを含む、請求項２２に記載の免疫細胞。
先行請求項のいずれか１項に記載の免疫細胞を含む、医薬組成物。
前記医薬組成物が医薬的に許容される担体を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
核酸コンストラクトであって、
（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）膜貫通ドメインと、
（ｃ）細胞内ドメインとをコードする１つ以上の核酸配列を含み、
（ａ）～（ｃ）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、前記核酸コンストラクト。
（ｅ）１つ以上の細胞外リーダードメインと、
（ｆ）１つ以上の細胞外ヒンジドメインと、
（ｇ）１つ以上の細胞内共刺激ドメインと、
（ｈ）切断ペプチドと、
（ｉ）１つ以上のペプチド薬剤とをコードする１つ以上の核酸をさらに含む、請求項２６に記載の核酸コンストラクト。
前記切断ペプチドが、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＴ２Ａペプチドである、請求項２７に記載の核酸コンストラクト。
請求項２６～２８のいずれか１項に記載の核酸コンストラクトを含む、医薬組成物。
前記医薬組成物が医薬的に許容される担体を含む、請求項２９に記載の医薬組成物。
対象における疾患または障害を治療する方法であって、前記方法が、
請求項２４、２５、２９、または３０に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に送達することを含む、前記方法。
免疫細胞を修飾する方法であって、前記方法が、
前記免疫細胞に、
（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）膜貫通ドメインと、
（ｃ）細胞内ドメインとをコードする１つ以上の核酸配列を含む、核酸コンストラクトを送達することを含み、
修飾免疫細胞が、（ａ）～（ｃ）を含むキメラ操作受容体を含み、
前記修飾免疫細胞が、マクロファージ、単球、または樹状細胞を含む、前記方法。
マクロファージ、単球、または樹状細胞を修飾する方法であって、
前記マクロファージ、単球、または樹状細胞に、
（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）膜貫通ドメインと、
（ｃ）細胞内ドメインとをコードする１つ以上の核酸配列を含む、ウイルスベクターを送達することを含み、
前記ウイルスベクターが、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされており、
修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、（ａ）～（ｃ）を含むキメラ操作受容体（ＣＡＲ）を含み、
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクターが送達された前記ＣＡＲを含む修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、ＣＡＲの発現の増加を示す、前記方法。
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターであるか、またはそれを含む、請求項３３に記載の方法。
前記ウイルスベクターが、感染多重度（ＭＯＩ）：約１～約５０で送達される、請求項３３または３４に記載の方法。
前記ウイルスベクターが、ＭＯＩ：約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、または約１０で送達される、請求項３５に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクターが送達された前記ＣＡＲを含む修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、約２０％、約３０％、約４０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上のＣＡＲの発現の増加を示す、請求項３３～３６のいずれか１項に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、長い時間期間にわたるＣＡＲ発現を示す、請求項３３～３７のいずれか１項に記載の方法。
ＣＡＲ発現の前記長い時間期間が、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、またはそれ以上である、請求項３８に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べてエフェクター活性の増加を示す、請求項３３～３９のいずれか１項に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、腫瘍殺傷能力または食作用の増加を示す、請求項３９に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクターが送達された前記ＣＡＲを含むマクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、Ｍ１表現型への分極化の増加を示さない、請求項３３～４１のいずれか１項に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、少なくとも１つのＶｐｘタンパク質でパッケージングされなかったＣＡＲをコードするウイルスベクターが送達された前記ＣＡＲを含むマクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、Ｍ１表現型の１つ以上のマーカーの発現の増加を示さない、請求項４２に記載の方法。
Ｍ１表現型の前記１つ以上のマーカーが、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＭＨＣＩＩ、ＩＬ－１Ｒ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ｉＮＯＳ、ＳＯＣＳ３、ＣＤ８３、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ６９、ＭＨＣＩ、ＣＤ６４、ＣＤ３２、ＣＤ１６、ＩＬ１Ｒ、ＩＦＩＴファミリーメンバー、またはＩＳＧファミリーメンバーのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、もしくは１８個を含むか、またはそれらである、請求項４３に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べて、１つ以上の炎症性サイトカインの産生の増加を示す、請求項３３～４４のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上の炎症性サイトカインが、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－８、ＩＬ－２、ＩＬ－２３、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＩＬ－８、ＩＬ３３、ＣＣＬ３、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１０、またはＣＣＬ２のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２個を含むか、またはそれらである、請求項４５に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、非修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞に比べてＳＩＲＰα活性の低下を示す、請求項３２～４６のいずれか１項に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、１つ以上のエンドヌクレアーゼを用いたＳＩＲＰαの欠失を含む、請求項４７に記載の方法。
前記１つ以上のエンドヌクレアーゼが、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはメガヌクレアーゼのうちの１つ以上を含むか、またはそれらのうちの１つである、請求項４８に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ、またはＣ２ｃ２を含む、請求項４９に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、１つ以上の抗ＳＩＲＰα抗体で処置されている、請求項４７に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、１つ以上の抗ＳＩＲＰα抗体を含む、請求項４７に記載の方法。
前記修飾マクロファージ、単球、または樹状細胞が、ＳＩＲＰαを下方調節する１つ以上のｓｉＲＮＡを含む、請求項４７に記載の方法。
前記ＣＡＲの前記細胞外ドメインが、１つ以上の抗原結合ドメイン及びＦｃＲ細胞外ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記膜貫通ドメインがＦｃＲ膜貫通ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記細胞内ドメインがＦｃＲ細胞内ドメインを含む、請求項３３～５３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＦｃＲ細胞外ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及びＦｃＲ細胞内ドメインを含む、請求項５４に記載の方法。
前記ＦｃＲ細胞外ドメイン、前記ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＦｃＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上が、ヒトＦｃＲドメインであるか、またはそれを含む、請求項５４または５５に記載の方法。
前記ＦｃＲ細胞外ドメイン、前記ＦｃＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＦｃＲ細胞内ドメインが一緒になって完全長ＦｃＲを構成する、請求項５４～５６のいずれか１項に記載の方法。
前記ＦｃＲ細胞外ドメインが、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む、請求項５４～５７のいずれか１項に記載の方法。
前記ＦｃＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む、請求項５４～５８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＦｃＲ細胞内ドメインが、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）、ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ、またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）ドメインを含む、請求項５４～５９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＡＲの前記細胞外ドメインが１つ以上の抗原結合ドメイン及びトール様受容体（ＴＬＲ）細胞外ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ膜貫通ドメインを含む、及び／または前記ＣＡＲの前記細胞内ドメインがＴＬＲ細胞内ドメインを含む、請求項３３～５３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端→Ｃ末端の方向に、１つ以上の細胞外結合ドメイン、ＴＬＲ細胞外ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及びＴＬＲ細胞内ドメインを含む、請求項６１に記載の方法。
前記ＴＬＲ細胞外ドメイン、前記ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＴＬＲ細胞内ドメインのうちの１つ以上が、ヒトＴＬＲドメインであるか、またはそれを含む、請求項６１または６２に記載の方法。
前記ＴＬＲ細胞外ドメイン、前記ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び前記ＴＬＲ細胞内ドメインが一緒になって完全長ＴＬＲを構成する、請求項６１～６３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＬＲ細胞外ドメインが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む、請求項６１～６４のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＬＲ膜貫通ドメインが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む、請求項６１～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＬＲ細胞内ドメインが、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９ドメインを含む、請求項６１～６６のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＡＲが、
（ｄ）１つ以上の細胞外リーダードメイン、
（ｅ）１つ以上の細胞外ヒンジドメイン、及び
（ｆ）１つ以上の細胞内共刺激ドメインのうちの１つ以上をさらに含む、請求項３３～６７のいずれか１項に記載の方法：
前記１つ以上の細胞外リーダードメインが、ＣＤ８細胞外リーダードメインを含む、請求項６８に記載の方法。
前記１つ以上の細胞外結合ドメインが、ｓｃＦｖ、ｃｅｎｔｙｒｉｎ、またはｄａｒｐｉｎを含む、請求項３３～６９のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上の細胞外ヒンジドメインが、ＣＤ２８細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８ａ細胞外ヒンジドメイン、またはＩｇＧ４細胞外ヒンジドメインを含む、請求項６８～７０のいずれか１項に記載の方法。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ８ａ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＲＬ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＲＬ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９を含む、請求項３３～７１のいずれか１項に記載の方法。
前記細胞内ドメインが、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項３３～７２のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲγ、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１、ＩＮＳＲ、ｃＭＥＴ、ＭＵＳＫ、ＰＤＧＦＲ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＴＩＥ２、ＴＲＫ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＲＥＭ－１、ＴＲＥＭ－２、ＤＡＰ１２、ＭＲ、ＩＣＯＳ、ＭｙＤ８８、Ｖ／Ｉ／ＬｘＹｘｘＬ／Ｖ、ＳＩＲＰａ、ＣＤ４５、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、ＰＤ１、ＳＨＰ－１、ＳＨＰ－２、ＫＩＲ－２ＤＬ、ＫＩＲ－３ＤＬ、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ３３、ＢＴＬＡ、ＣＤ３２ｂ、ＳＩＲＰｂ、ＣＤ２２、ＰＩＲ－Ｂ、ＬＩＬＲＢ１、４１ＢＢＬ（ＴＮＦＳＦ９）、ＣＤ２７、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、ＣＤ２０９、Ｄｅｃｔｉｎ－２、ＩＬ１Ｒ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ３Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８Ｒ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０Ｒ、ＩＬ１１Ｒ、ＩＬ１２Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ１４Ｒ、ＩＬ１５Ｒ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＦＮａＲ、ＩＦＮｇＲ、ＴＮＦＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２Ｒ、Ｄａｐ１０、ＣＤ３６、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＩＣＯＳＬ、及び／またはＳｙｋ細胞内情報伝達ドメインを含む、請求項７３に記載の方法。
前記１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの細胞内共刺激ドメインを含む、請求項７４に記載の方法。
前記ウイルスベクターが、
（ｅ）１つ以上の細胞外リーダードメインと、
（ｆ）１つ以上の細胞外ヒンジドメインと、
（ｇ）１つ以上の細胞内共刺激ドメインと、
（ｈ）切断ペプチドと、
（ｉ）１つ以上のペプチド薬剤とをコードする１つ以上の核酸をさらに含む、請求項３３～７５のいずれか１項に記載の方法。
前記切断ペプチドが、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＴ２Ａペプチドである、請求項７６に記載の方法。
請求項３３～７７のいずれか１項に記載の方法によって修飾されたマクロファージ、単球、または樹状細胞を含む、医薬組成物。
前記医薬組成物が医薬的に許容される担体を含む、請求項７８に記載の医薬組成物。
対象における疾患、障害、または状態を治療する方法であって、
前記対象に、請求項７８または７９に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、前記方法。