JP2023523652A - ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防のための組成物並びに方法を提供する。本発明はさらに、そのような治療に対する対象の感受性を決定する方法及び有効な治療に必要な前記組成物の量を決定する方法に関する。

Description

本発明は、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防のための組成物並びに方法を提供する。本発明はさらに、そのような治療に対する対象の感受性を決定する方法及び有効な治療に必要な前記組成物の量を決定する方法に関する。
例えばコロナウイルスなどのウイルスは、世界中の動物及びヒトに疾患を引き起こす。コロナウイルスはＲＮＡウイルスである。
ヒトコロナウイルス（ＨＣｏＶ）は、主に上気道及び下気道の感染症を引き起こすことが知られている。ヒトコロナウイルスの例には、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）を引き起こすβコロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶと命名）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を引き起こすβコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１と命名）、コロナウイルス病２０１９又はＣＯＶＩＤ－１９を引き起こす新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と命名）、αコロナウイルス２９９Ｅ、αコロナウイルスＮＬ６３、βコロナウイルスＯＣ４３、及びβコロナウイルスＨＫＵ１が挙げられる。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって引き起こされる疾患又は症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９とも称される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、無症候性であるか、軽度又は重度の症状に関連する疾患又は症候群に至る場合がある。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１９とも称される）感染に関連する疾患又は症候群の最も一般的な症状は、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化である。その他の症状には、食欲不振、体重減少、胃痛、結膜炎、皮膚発疹、リンパ腫、無関心、及び傾眠が挙げられる。
重症患者は、肺炎を発症する場合がある。かなりの数の肺炎患者が受動的酸素療法を必要とする。非侵襲的換気及び高流量鼻酸素療法は、軽度及び中等度の非高二酸化炭素血症性肺炎の症例に適用され得る。重症急性呼吸器症候群又は急性呼吸窮迫症候群（ＳＡＲＳ／ＡＲＤＳ）及び人工呼吸器を使用している患者では、肺における省力換気戦略を実施する必要がある。
コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の主な合併症は呼吸不全であるが、かなりの数の患者が、末梢神経系（ＰＮＳ）及び中枢神経系（ＣＮＳ）の両方に影響を及ぼす神経学的症状を呈していると報告されている（Ｎｉａｚｋａｒ， Ｚｉｂａｅｅ ｅｔ ａｌ． ２０２０ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ ４１（７）：１６６７－１６７１； Ｎｏｒｄｖｉｇ， Ｆｏｎｇ ｅｔ ａｌ． ２０２１， Ｎｅｕｒｏｌ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ １１（２）：ｅ１３５－ｅ１４６）。造血経路、末梢神経に沿った逆行性輸送／順行性輸送、及び稀な直接侵入は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む神経向性ウイルスの潜在的な神経侵入メカニズムと考えられている（Ｂａｒｒａｎｔｅｓ ２０２１ Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ Ｉｍｍｕｎ Ｈｅａｌｔｈ １４：１００２５１； Ｔａｖｃａｒ， Ｐｏｔｏｋａｒ ｅｔ ａｌ． ２０２１， Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １５：６６２５７８）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の重症例は、サイトカイン、ケモカイン、及び炎症性キュー（ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｕｅ）の全身性のアップレギュレーションを含む、不均衡かつ異常な炎症反応を示すことがよくある（Ｎａｊｊａｒ， Ｎａｊｊａｒ ｅｔ ａｌ． ２０２０， Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ １７（１）：２３１）。このような全身性過炎症は、神経血管内皮機能を損ない、血液脳関門（ＢＢＢ）を損傷し、最終的にＣＮＳ免疫系を活性化し、ＣＮＳ合併症に寄与する可能性がある（Ａｍｒｕｔａ， Ｃｈａｓｔａｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０２１， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ ５８：１－１５）。
ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックが最近注目を集めてはいるが、他のいくつかのウイルスは、アルツハイマー病、パーキンソン病、及び多発性硬化症などの主要な脳障害に関連している。ウイルス感染に関連する疾患又は症候群には、さらに炎症性疾患などの広範な疾患又は症候群が含まれ、社会にとって大きな負担となっている。したがって、ウイルスに関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を改善する必要がある。
上記の技術的問題は、本明細書に開示され、特許請求の範囲で定義される態様によって解決される。
本発明は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシンタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物を提供する。α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、特に、ヒト血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片であり得る。あるいは、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、好ましくは、前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。コロナウイルス感染などのウイルス感染は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染であることが好ましい。ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする目的の対象が、ｉ）より低いレベルの内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）、ｉｉ）より高いレベルの少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ｉｉｉ）より高いレベルのアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体、及び／又はｉｖ）無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、より高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）を有し得る。
本発明はまた、本発明の使用のための組成物を使用して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群を効果的に治療及び／又は予防するための目的の対象の感受性を決定する方法に関する。
本発明はさらに、本発明の使用のための組成物を使用して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群を効果的に治療及び／又は予防するためのα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）の治療有効量を決定する方法を提供する。
ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象における治療及び／又は予防方法であって、α１－アンチトリプシンタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を投与することを含む、方法も提供される。α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、特に、ヒト血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片であり得る。あるいは、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、好ましくは、前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。
したがって、本発明は、とりわけ、以下の態様に関する。
１．ウイルス感染症に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物。
２．前記必要とする対象が、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染症中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染症前又はウイルス感染症中の内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
４．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベル、
からなる群から選択される少なくとも１つを有する、態様１に記載の使用のための組成物。
３．前記ウイルス感染前又はウイルス感染中の内因性ＡＡＴのより低いレベルが、ＡＡＴ欠乏によって引き起こされる、態様２に記載の使用のための組成物。
４．前記スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼが、膜貫通プロテアーゼセリンサブタイプ２（ＴＭＰＲＳＳ２）、膜貫通プロテアーゼサブタイプ６（ＴＭＰＲＳＳ６）、カテプシンＬ、カテプシンＢ、プロプロテインコンバターゼ１（ＰＣ１）、トリプシン、エラスターゼ、好中球エラスターゼ、マトリプターゼ、及びフーリン、好ましくはカテプシンＬ及びフーリン、からなる群から選択される少なくとも１つである、態様２又は３に記載の使用のための組成物。
５．前記少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベルが、年齢及び／又は遺伝的素因によって引き起こされる、態様２～４のいずれかに記載の使用のための組成物。
６．前記ＡＣＥ２受容体のより高いレベルが、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされる、態様２～５のいずれかに記載の使用のための組成物。
７．前記ＩＦＮ－γのより高いレベルが、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされる、態様２～６のいずれかに記載の使用のための組成物。
８．前記必要とする対象が、
ｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ、及び
ｉｉ）より高いレベルの少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼを有する、態様２～７のいずれかに記載の使用のための組成物。
９．前記必要とする対象が、
ｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ及び
ｉｉｉ）より高いレベルのＡＣＥ２受容体を有する、態様２～８のいずれかに記載の使用のための組成物。
１０．前記必要とする対象が、
ｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ及び
ｉｖ）より高いレベルのＩＦＮ－γを有する、態様２～９のいずれかに記載の使用のための組成物。
１１．前記より高いレベルのＩＦＮ－γが、ＡＡＴ欠乏症、非アルコール性脂肪肝疾患などの肝疾患、糖尿病、肥満、及び心血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患又は状態によって引き起こされる、態様１０に記載の使用のための組成物。
１２．前記必要とする対象が、
ｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ、
ｉｉ）より高いレベルの少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、並びに
ｉｉｉ）より高いレベルのＡＣＥ２受容体を有する、及び／又はｉｖ）より高いレベルのＩＦＮ－γを有する、態様２～１１のいずれかに記載の使用のための組成物。
１３．前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片が、ヒト血漿抽出物である、態様１～１２のいずれかに記載の使用のための組成物。
１４．前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片が、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である、態様１～１２のいずれかに記載の使用のための組成物。
１５．前記α１－アンチトリプシンタンパク質が、配列番号１に記載されている、態様１４に記載の使用のための組成物
１６．前記α１－アンチトリプシン断片が、Ｃ末端配列フラグメント又はその任意の組み合わせである、態様１４に記載の使用のための組成物。
１７．前記α１－アンチトリプシンバリアントが、配列番号２に記載のＣ末端配列に由来する短環状ペプチドを含む群から選択される、態様１４に記載の使用のための組成物。
１８．α１－アンチトリプシンの前記Ｃ末端配列に由来する短環状ペプチドが、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＭ）－ＳＨ、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＥ）－ＳＨ、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＲ）－ＳＨ、及びシクロ－（ＣＰＥＶＦＬＭ）－ＳＨ、又はそれら任意の組み合わせを含む群から選択される、態様１７に記載の使用のための組成物。
１９．前記組成物が、薬学的に許容される賦形剤又は担体をさらに含む、態様１～１８のいずれかに記載の使用のための組成物。
２０．前記組成物が、ヌクレオシド類似体、プロテアーゼ阻害剤、免疫抑制剤（例えば、サリルマブ又はトシリズマブ）、抗生物質、ウイルスの構造成分に対する抗体又はその断片（例えば、受動免疫療法）、インターフェロンβ（例えば、インターフェロンβ－１ａ）、及び／又はワクチンをさらに含む、態様１～１９のいずれかに記載の使用のための組成物。
２１．前記組成物が、静脈内注射、静脈内注入、Ｄｏｓａｔｏｒ型ポンプによる注入、吸入鼻スプレー、点眼薬、皮膚パッチ、徐放製剤、又はエクスビボ遺伝子治療若しくはエクスビボ細胞治療によって、好ましくは静脈内注射によって投与される、態様１～２０のいずれかに記載の使用のための組成物。
２２．態様１～２１のいずれかにおいて定義されるα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む組成物を用いて、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防のための目的の対象の感受性を測定するための方法であって、
ａ）ウイルス感染前又はウイルス感染中の前記目的の対象における、内因性α１－アンチトリプシン、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びインターフェロン－γを含む群の少なくとも１つのレベルを測定すること、
ｂ）ウイルス感染中の少なくとも１人の参照対象における、内因性α１－アンチトリプシン、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びインターフェロン－γを含む群の少なくとも１つのレベルを測定することであって、前記参照対象は無症候性であるか軽度の症状を有すること、並びに
ｃ）工程ａ）で測定された目的のレベルを、工程ｂ）で測定された参照レベルと比較する工程であって、
前記目的の対象が、
１．内因性ＡＡＴの参照レベルと比較して、内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低い目的のレベル、
２．少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼの参照レベルと比較して、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高い目的のレベル、
３．ＡＣＥ２受容体の参照レベルと比較して、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高い目的のレベル、及び
４．ＩＦＮ－γの参照レベルと比較して、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高い目的のレベル
からなる群から選択される少なくとも１つを有する場合、前記目的の対象は、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防に対する感受性があること、を含む、方法。
２３．態様１～２１のいずれか一項に記載の組成物を使用して、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群を効果的に治療及び／又は予防するためのα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ及び／又はｒｈＡＡＴ）の治療有効量を決定する方法であって、
ａ）ウイルス感染前又はウイルス感染中の目的の対象における内因性α１－アンチトリプシンのレベルを決定すること、及び
ｂ）前記対象において少なくとも１０μＭ、好ましくは少なくとも２０μＭ、より好ましくは少なくとも５０μＭ、さらにより好ましくは少なくとも１００μＭ、最も好ましくは少なくとも２００μＭであるＡＡＴレベルを達成するために必要である、前記組成物中のＡＡＴの量を決定する工程を含む、方法。
２４．前記ウイルスがコロナウイルスである、態様１～２１のいずれかに記載の組成物、又は態様２２及び２３に記載の使用のための方法。
２５．前記ウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、態様２４に記載の使用のための組成物、又は態様２４に記載の方法。
２６．前記疾患又は症候群が、呼吸器症候群又は重症急性呼吸器症候群である、態様１～２５のいずれかに記載の使用のための組成物、又は態様２２～２５のいずれかに記載の方法。
２７．前記疾患又は症候群が、神経系の炎症性疾患又は症候群である、請求項１～２５のいずれかに記載の使用のための組成物、又は態様２２～２５のいずれかに記載の方法。
２８．前記神経系の炎症性疾患又は症候群が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、及びハンチントン病の群から選択される疾患又は症候群である、態様１～２７のいずれかに記載の使用のための組成物、又は態様２７に記載の方法。
本明細書に記載のものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、参照によりその全体が援用される。本明細書で論じる刊行物及び出願は、単にこれらの開示が本出願の出願日より以前であるために提供される。本明細書のいかなる内容も、先行発明であるとの理由で本発明がそのような公開に先行する権利を有しないことの承認と解釈されるべきではない。また、材料、方法、及び実施例は、例示のみを目的としており、限定を意図するものではない。
矛盾する場合は、定義を含む本明細書が優先される。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、発明の内容が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用されるように、以下の定義は、本発明の理解を容易にするために提供される。
用語「含む（備える）／含むこと（備えること）（ｃｏｍｐｒｉｓｅ／ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、概して、含む／含むこと（ｉｎｃｌｕｄｅ／ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、すなわち、１又は複数の特徴又は構成要素の存在を許容するという意味で使用される。
明細書及び特許請求の範囲で使用されるように、単数形の「１（つ）（ａ／ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に指示しない限り、複数の言及を含む。
本明細書で使用される場合、「少なくとも１つ」は、「１つ以上」、「２つ以上」、「３つ以上」などを意味する。
本明細書で使用される「対象」／「必要とする対象」、又は「患者」／「（それを）必要とする患者」という用語は、当技術分野で充分に認識されており、本明細書では互換的に使用され、イヌ、ネコ、ラット、マウス、サル、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ラクダ、そして最も好ましくはヒトを含む哺乳動物を指す。場合によっては、前記対象は、治療を必要とする対象又は疾患若しくは障害を有する対象である。しかしながら、他の態様において、前記対象は正常な対象であり得る。この用語は、特定の年齢や性別を示すものではない。したがって、成人、小児、新生児の対象は、男性か女性かを問わず包含される。好ましくは、前記対象はヒトである。最も好ましくは、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患又は症候群を患っているヒトである。
本明細書で使用される「ペプチド」、「タンパク質」、「ポリペプチド」、「ポリペプチド性」、及び「ペプチド性」という用語は、隣接する残基のα－アミノ基とカルボキシ基との間のペプチド結合によって互いに連結された一連のアミノ酸残基を示すために交換可能に使用される。
「核酸」、「ポリヌクレオチド」、及び「オリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、線状又は環状コンフォメーション及び一本鎖又は二本鎖のいずれかである、任意の種類のデオキシリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ）若しくはリボヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ）ポリマー又はデオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ／ＲＮＡ）ポリマーとの組み合わせを指す。これらの用語は、ポリマーの長さに関して限定するものと解釈されるべきではなく、天然のヌクレオチドの公知の類似体、並びに塩基、糖、及び／又はリン酸部分（例えば、ホスホロチオエート骨格）が修飾されたヌクレオチドを包含し得る。概して、特定のヌクレオチドの類似体は同じ塩基対特異性を有する、すなわち、Ａの類似体はＴと塩基対を形成する。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、本発明の１又は複数の異種核酸配列を含み、及び好ましくは、異なる宿主細胞間の転移のために設計される、ウイルスベクター又はプラスミド若しくは他のビヒクルなどの核酸（ＤＮＡ／ＲＮＡ）分子を指す。「発現ベクター」、「遺伝子送達ベクター」、及び「遺伝子治療ベクター」という用語は、細胞内で、好ましくはプロモーターの制御下で、本発明の１又は複数の核酸を細胞に組み込み、発現させるのに有効な任意のベクターを指す。クローニング又は発現ベクターは、プロモーターに加えて、追加の要素、例えば、調節要素及び／又は転写後調節要素を含んでいてもよい。
「約」という用語は、特に所与の量に関して、±１０パーセント、好ましくは５パーセント、さらにより好ましくは２パーセント、最も好ましくは１パーセントの偏差を包含することを意味する。
本発明は、任意のウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシンタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物に関する。
前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、特に、ヒト血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片であり得る。あるいは、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、好ましくは、前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。前記ウイルス感染は、ＤＮＡウイルス（二本鎖又は一本鎖）、ＲＮＡウイルス（一本鎖又は二本鎖、陽性か陰性かに関わらず）、逆転写ウイルス、又は任意の新興ウイルス（エンベロープ化又は非エンベロープ化に関わらず）が原因となり得る。
本発明のいくつかの態様において、前記組成物は、呼吸器ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防において使用される。いくつかの態様では、本明細書に記載の呼吸器ウイルスは、ライノウイルス、ＲＳＶ、パラインフルエンザ、メタニューモウイルス、コロナウイルス、エンテロウイルス、アデノウイルス、ボカウイルス、ポリオーマウイルス、単純ヘルペスウイルス、及びサイトメガロウイルスの群から選択されるウイルスである。
本発明のいくつかの態様では、前記組成物は、ＤＮＡウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防において使用される。
いくつかの態様では、本明細書に記載のＤＮＡウイルスは、アデノウイルス、ライノウイルス、ＲＳＶ、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、メタニューモウイルス、コロナウイルス、エンテロウイルス、アデノウイルス、ボカウイルス、ポリオーマウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ボカウイルス、ポリオーマウイルス、及びサイトメガロウイルスからなる群から選択される。
本発明のいくつかの態様において、前記組成物は、ＲＮＡウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防において使用される。前記ＲＮＡウイルスは、エンベロープ化若しくはコーティングされたウイルス、又は非エンベロープ化若しくは裸のＲＮＡウイルスであり得る。前記ＲＮＡウイルスは、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）ウイルス又は二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）ウイルスであり得る。前記一本鎖ＲＮＡウイルスは、ポジティブセンス（プラス鎖）ｓｓＲＮＡウイルス又はネガティブコントロールセンス（マイナス鎖）ｓｓＲＮＡウイルスであり得る。
いくつかの態様では、本明細書に記載のＲＮＡウイルスは、ライノウイルス、ＲＳＶ、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、メタニューモウイルス、コロナウイルス、エンテロウイルス、アデノウイルス、ボカウイルス、ポリオーマウイルス、単純ヘルペスウイルス、及びサイトメガロウイルスからなる群から選択される。
本発明のいくつかの態様において、前記組成物は、コロナウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象におけるでの治療及び／又は予防において使用される。いくつかの態様では、本明細書に記載のコロナウイルスは、α－ＣｏＶ、β－ＣｏＶ、γ－ＣｏＶ、又はδ－ＣｏＶの群から選択される属のコロナウイルスである。別の特定の態様では、本明細書に記載のコロナウイルスは、α－ＣｏＶ又はβ－ＣｏＶ属である。いくつかの態様では、本明細書に記載のコロナウイルスは、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ニューヘブン（Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ）コロナウイルス）、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ又は「新規コロナウイルス２０１２」）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又は「ＳＡＲＳ－Ｃｌａｓｓｉｃ」）、及び重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又は「新規コロナウイルス２０１９」）からなる群から選択される。好ましくは、ウイルス感染は、ＲＮＡウイルス感染であり、最も好ましくは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む非限定的な群から選択されるコロナウイルスによるコロナウイルス感染である。最も好ましくは、ウイルス感染はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染である。
本発明は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する全ての疾患又は症候群を含むことを理解されたい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－感染症に関連する疾患又は症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９とも称される。一態様では、ウイルス感染に関連する疾患又は症候群は、例えば、全身の血管の炎症（例えば、川崎病）、免疫疾患（例えば、グレーブス病（バセドウ病））、及び／又は呼吸器症候群、特に重度の急性呼吸器症候群である。前記疾患又は症候群は、ウイルス感染が、疾患又は症候群の前に、疾患又は症候群に関連し、疾患又は症候群に寄与し、及び／又は疾患若しくは症候群を引き起こすという点で、ウイルス感染に関連し得る。例えば、ウイルス感染は、疾患又は症候群を直接的若しくは間接的に誘発する炎症を誘発し得る。ウイルス感染に関連する炎症は、急性又は慢性の炎症であり得る。ウイルス感染に関連する炎症は、その後、全身性及び／又は特定の臓器、例えば、脳において持続し、及び／又は永続的な損傷を誘発し得る。本発明のいくつかの態様において、前記組成物は、ウイルス感染に関連する神経系の炎症性疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防において使用される。
本明細書で使用される「神経系の炎症性疾患又は（若しくは）症候群」という用語は、健康な参照対象と比較して神経系における炎症の増加を特徴とする疾患、症候群、及び／又は状態を指す。神経系の疾患又は症候群を含む本明細書に記載の疾患又は症候群は、ウイルスに関連する。炎症は、炎症マーカーの調節不全によって、及び／又は血液及び／又は脳における免疫細胞の浸潤、活性化、増殖、及び／又は分化の増加によって特徴付けられる。炎症マーカーは、対象における炎症を示すマーカーである。特定の態様では、本明細書に記載の炎症マーカーは、ＣＲＰ、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、又はＩＬ－３６）、腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）、インターフェロン（例えば、インターフェロンγ）、ＭＩＰ－Ｉ、ＭＣＰ－Ｉ、ＲＡＮＴＥＳ、その他のケモカイン、及び／又はその他のサイトカインの群から選択されるマーカーである。炎症マーカーはまた、例えば、炎症マーカーの阻害因子（例えば、結合因子及び／又はアンタゴニスト）の検出によって、間接的に検出可能であり得る。いくつかの態様では、炎症マーカーは、炎症に関与する細胞、炎症に関与する細胞によって影響を受ける細胞、脳脊髄液、及び／又は血液で測定される。いくつかの態様では、炎症マーカーは、免疫細胞の浸潤、活性化、増殖、及び／又は分化を示す。炎症マーカーが検出される又は２つ以上の炎症マーカーの比率が正常範囲外で検出される。炎症マーカーの正常範囲、及び炎症を示すためにマーカー（比率）が閾値を下回るか上回る必要があるかどうかは、当業者に公知である。いくつかの態様では、少なくとも１つの炎症マーカーの遺伝子発現レベル、ＲＮＡ転写レベル、タンパク質発現レベル、タンパク質活性レベル、及び／又は酵素活性レベルが検出される。いくつかの態様では、治療及び／又は予防を必要とする対象における神経系の炎症性疾患又は症候群を決定するために、少なくとも１つの炎症マーカーが定量的及び／又は定性的に検出される。
いくつかの態様では、本明細書に記載の神経系の炎症性疾患又は症候群は、典型的には約数分（例えば、２分、５分、１０分、１５分、３０分、又は４５分）～数日（例えば、２日、３日、５日、７日、１０日、又は１４日）分かかる炎症症状の持続時間である急性炎症を特徴とする。急性炎症は典型的には、ウイルス感染などの刺激の直接的な結果として発生する。いくつかの態様では、神経系の炎症性疾患又は症候群は慢性炎症を特徴とし、炎症の症状の持続期間は典型的には、少なくとも約数日（例えば、２日、３日、５日、７日、１０日、又は１４日）かかり、炎症の症状が少なくとも１回再発する（例えば、１回以上、２回以上、又は３回以上）。いくつかの態様では、神経系の炎症性疾患又は症候群は、慢性の軽度の炎症を特徴としている。慢性の軽度の炎症は、臨床症状がなくても発生する場合がある。
特定の態様では、治療及び／又は予防を必要とする対象は、ウイルス感染の病歴を有する。したがって、治療及び／又は予防を必要とする対象は、少なくとも１回ウイルスに感染したことがある。特定の態様では、治療及び／又は予防を必要とする対象は、少なくとも１回ウイルスに感染したことがある。特定の態様では、治療及び／又は予防を必要とする対象は、幼少期に少なくとも１回ウイルスに感染したことがある。特定の態様では、治療及び／又は予防を必要とする対象は、少なくとも１回ウイルスに感染していた。特定の態様では、治療及び／又は予防を必要とする対象は、過去３０年、２９年、２８年、２７年、２６年、２５年、２４年、２３年、２２年、２１年、２０年、１９年、１８年、１７年、１６年、１５年、１４年、１３年、１２年、１１年、１０年、９年、８年、７年、６年、５年、４年、３年、２年、１年、又は０．５年の間に少なくとも１回ウイルスに感染したことがある。特定の態様では、ウイルス感染は、治療及び／又は予防を必要とする対象における神経系の炎症性疾患又は症候群の診断の時点で活動的である（例えば、検出可能である）。
ウイルス感染を検出する方法は、当業者に公知である。いくつかの態様では、本発明は、ウイルス単離、核酸に基づく方法、顕微鏡に基づく方法、宿主抗体検出、電子顕微鏡、及びび宿主細胞表現型の群から選択されるウイルスを検出する方法に関する。
いくつかの態様では、本明細書に記載のウイルス感染は、鼻咽頭スワブ、血液、組織（例えば、皮膚）、喀痰、うがい液、気管支洗浄液、尿、精液、糞便、脳脊髄液、乾燥血斑、鼻粘液の群から選択される試料などの試料で検出される。
いくつかの態様では、本明細書に記載のウイルス感染は、患者の病歴から検索された情報として得られる。
（以前の）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の検出の例には、ヒトＩＦＮ－γ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＥＬＩＳｐｏｔＰＬＵＳキット（ＡＬＰ）、ストリッププレート（Ｍａｂｔｅｃｈ社、３４２０－４ＡＳＴ－Ｐ１－１）、又はＴ細胞応答測定が挙げられる（Ｚｕｏ， Ｊ．， Ｄｏｗｅｌｌ， Ａ．Ｃ．， Ｐｅａｒｃｅ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， ２０２１， Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ）。
いくつかの態様では、本明細書に記載の神経系の炎症性疾患又は症候群は、交感神経系の炎症性疾患又は症候群である。いくつかの態様では、本明細書に記載の神経系の炎症性疾患又は症候群は、副交感神経系の炎症性疾患又は症候群である。いくつかの態様では、本明細書に記載の神経系の炎症性疾患又は症候群は、中枢神経系の炎症性疾患又は症候群である。いくつかの態様では、本明細書に記載の神経系の炎症性疾患又は症候群は、末梢神経系の炎症性疾患又は症候群である。
特定の態様では、ウイルスに関連する神経系の炎症性疾患又は症候群は、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、及びハンチントン病の群から選択される。
本明細書で使用される「多発性硬化症」という用語は、炎症、脱髄、オリゴデンドロサイト死、膜損傷及び軸索死によって特徴付けられる疾患又は障害を指す。いくつかの態様では、本明細書に記載の多発性硬化症は、再発／寛解する多発性硬化症又は進行性多発性硬化症を指す。いくつかの態様では、多発性硬化症は、神経科医の国際調査で定義された４つの主要な多発性硬化症の種類の少なくとも１つであり（Ｌｕｂｌｉｎ ａｎｄ Ｒｅｉｎｇｏｌｄ， １９９６， Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４６（４）：９０７－１１）、すなわち、再発性／寛解性多発性硬化症、二次進行性多発性硬化症、進行性／再発性多発性硬化症、又は原発性進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）である。
いくつかの態様では、本明細書に記載の多発性硬化症は、視覚障害、めまい、回転性めまい、感覚障害、衰弱、協調障害、平衡感覚の喪失、疲労、痛み、神経認知障害、精神障害、膀胱機能障害、腸機能障害、性機能障害、熱過敏を含む多発性硬化症の症状を指す。
本明細書で使用される「ハンチントン病」という用語は、病原性突然変異ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ又はｍＨＴＴ）の産生をもたらす、ＨＴＴ遺伝子におけるトリヌクレオチド反復伸長（例えば、ポリグルタミンに翻訳されるＣＡＧ、又はポリＱトラクト）によって引き起こされる神経変性疾患を指す。いくつかの態様では、変異ハンチンチンタンパク質は、脳の特定の領域で神経細胞死の速度を速める。いくつかの態様では、本明細書に記載のハンチントン病は、ハンチントン病の症状を指し、運動機能障害、認知障害、うつ病、不安、運動障害、舞踏病、硬直、筋拘縮（ジストニア）、眼球運動の遅延又は異常眼球運動、歩行障害、姿勢の変化、バランス障害、意図しない体重減少、睡眠リズムの乱れ、概日リズムの乱れ、及び自律神経系の機能障害を含む。
本明細書で使用される「筋萎縮性側索硬化症」という用語は、上位運動ニューロン（脳内の運動ニューロン）及び／又は下位運動ニューロン（脊髄内の運動ニューロン）に影響を及ぼし、運動ニューロン死をもたらす進行性神経変性疾患を指す。いくつかの態様では、筋萎縮性側索硬化症には、当技術分野で公知の筋萎縮性側索硬化症の全ての分類が含まれ、古典的筋萎縮性側索硬化症（典型的には下部及び上部運動ニューロンの両方に影響を与える）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ、典型的には上部運動ニューロンのみに影響を与える）、進行性球麻痺（ＰＢＰ又は延髄発症（Ｂｕｌｂａｒ Ｏｎｓｅｔ）、典型的には嚥下、咀嚼、及び発話の困難から始まる筋萎縮性側索硬化症のバージョン）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ、典型的には下位運動ニューロンのみに影響を与える）、及び家族性筋萎縮性側索硬化症（筋萎縮性側索硬化症の遺伝的バージョン）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの態様では、「筋萎縮性側索硬化症」という用語は、筋萎縮性側索硬化症の症状を指し、進行性衰弱、萎縮、線維束性攣縮、反射亢進、構音障害、嚥下障害、及び／又は呼吸機能の麻痺が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「アルツハイマー病」（ＡＤ）という用語は、特定の変性脳疾患は、老人斑、神経突起のもつれ、及び進行性の神経細胞の喪失を特徴とし、進行性の記憶障害、混乱、行動上の問題、自分で身の回りのことができないこと、及び／又は徐々に身体が悪化することで臨床的に現れる、特定の変性脳疾患に関連する精神的悪化を指す。
いくつかの態様では、アルツハイマー病に罹患している対象は、ＮＩＮＣＤＳ－ＡＤＲＤＡ（アメリカ国立神経障害・脳卒中研究所（ＮＩＮＤＳ）及びアルツハイマー病・関連障害協会（ＡＤＲＤＡ））基準を使用して特定される。
１）臨床認知症評価（ＣＤＲ）＝１、－１６～２４ポイントのミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）及び内側側頭萎縮（磁気共鳴画像法、ＭＲＩによって決定）＞シェルテンススケールで３ポイント。いくつかの態様では、アルツハイマー病という用語には、１９８４年にＮＩＮＣＤＳ－ＡＤＲＤＡアルツハイマー病診断基準によって定義された以下の段階を含む、疾患の全ての段階が含まれる。
２）確実なアルツハイマー病患者はおそらくアルツハイマー病の基準を満たし、剖検又は生検によるＡＤの組織病理学的エビデンスを有する。
確からしい又は前駆アルツハイマー病認知症は、臨床的及び神経心理学的検査によって確立されている。認知障害も進行性で、２つ以上の認知領域に存在する必要がある。認知欠損の発症は４０歳～９０歳の間であり、そして認知症症候群を引き起こし得る他の病気が存在しなくなる。
３）可能性のある又は非前駆期のアルツハイマー病：非定型を発症又は呈する認知症症候群があり、既知の病因なしに、認知症を引き起こし得る併存疾患が、その起源にあるとは考えられていない。いくつかの態様では、アルツハイマー病という用語は、アルツハイマー病の１つの段階を指す。いくつかの態様では、アルツハイマー病という用語は、アルツハイマー病の２つの段階を指す。いくつかの態様では、「アルツハイマー病」という用語は、記憶喪失、混乱、思考困難、言語の変化、行動の変化、及び／又は性格の変化を含むがこれらに限定されないアルツハイマー病の症状を指す。
本明細書で使用される「パーキンソン病」という用語は、黒質の大脳基底核における退行性、血管性、又は炎症性変化に起因するドーパミン欠乏を特徴とする神経学的症候群を指す。パーキンソン病の症状には、以下が含まれるが、これらに限定されない：安静時振戦、歯車様強剛、運動緩慢、姿勢反射障害、１－ドーパ治療に対する良好な反応、顕著な動眼神経麻痺の欠如、小脳又は錐体徴候、筋萎縮、運動障害、及び／又は失語症。特定の態様では、本発明は、ドーパミン作動性機能障害関連症候群の治療に利用される。いくつかの態様では、パーキンソン病には、パーキンソン病のあらゆる段階が含まれる。いくつかの態様では、パーキンソン病という用語には、パーキンソン病の初期段階が含まれ、パーキンソン病の初期段階を広く指し、この疾患に罹患した人は、体の片側のみに影響を及ぼす、一方の手足（例えば、手）の一時的な振戦などの障害をもたらさない軽度の症状を呈する。
いくつかの態様では、パーキンソン病という用語には、パーキンソン病のより進行した段階を指すパーキンソン病の進行期が含まれ、この疾患に罹患した人は、典型的には重度で、何らかの障害につながる可能性のある症状を示す（例えば、身体の両側にわたる振戦、バランスの問題など）。進行期のパーキンソン病に関連する症状は、人によって大きく異なる場合があり、病気の最初の出現から顕著になるまでに数年かかる場合がある。
いくつかの態様では、「パーキンソン病」という用語は、パーキンソン病の症状を指し、振戦（例えば、安静時に最も顕著になる振戦）、震え（例えば、手、腕、脚、顎、及び顔の震え）、筋肉のこわばり、姿勢反射の欠如、随意運動の鈍化、後退、仮面様表情、前屈姿勢、バランスの悪さ、調整の悪さ、運動緩慢、姿勢の不安定さ、及び／又は歩行異常を含むが、これらに限定されない。
神経系の炎症性疾患又は症候群とウイルス感染との確立された関連の例：
Figure 2023523652000001
前記疾患又は症候群は、好ましくは、コロナウイルス感染に関連し、より好ましくは、前記疾患又は症候群は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疾患又は症候群に関連する症候群又は疾患は、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化、食欲不振、体重減少、胃痛、結膜炎、皮膚発疹、リンパ腫、無関心、及び傾眠、好ましくは、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化からなる群から選択される少なくとも１つであることが好ましい。
本発明は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物に関する。コロナウイルスは、好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
本発明者らは、ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴがいくつかのウイルスのウイルス侵入を阻害し（図１１、図２１、図２２を参照）、特に神経系のミクログリアにおける炎症を軽減することを見出した（図１９、図２０）。さらに、神経起源であり、パーキンソン病を含む神経変性疾患の研究に頻繁に使用されるＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞（Ｘｉｃｏｙ， Ｈ．， Ｗｉｅｒｉｎｇａ， Ｂ． ＆ Ｍａｒｔｅｎｓ， Ｇ．Ｊ． Ｔｈｅ ＳＨ－ＳＹ５Ｙ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｉｎ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ． Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ １２， １０， ２０１７）は、スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼｍＲＮＡ、すなわちトリプシン及びカテプシンＢの非常に高いコピー数を示す（図１５ｅ）。ＳＨ－ＳＹ５Ｙにおける比較的高レベルのＡＣＥ２発現と相まって（図３ａ）、これらの神経組織（Ｂｉｅｌａｒｚ Ｖ， Ｗｉｌｌｅｍａｒｔ Ｋ， Ａｖａｌｏｓｓｅ Ｎ， ｅｔ ａｌ． Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ａｎｄ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｔｏ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． ２０２１ Ｍａｙ １）及び同様の起源の細胞は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染に対して感受性になる。
本発明の使用のための組成物を脳を含む神経系に送達し、血液脳関門を通過させるために、様々な戦略を使用することができる（Ｓａｌａｍｅｈ， Ｔ． Ｓ．， ＆ Ｂａｎｋｓ， Ｗ． Ａ．， ２０１４， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ７１， ２７７－２９９； Ｔａｓｈｉｍａ， Ｔ．， ２０２０， Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ． Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ， ６８（４）， ３１６－３２； Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ， Ｗ． Ｍ．， ２０２０， Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ａｇｉｎｇ ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， １１， ３７３； Ｕｐａｄｈｙａｙ， Ｒ． Ｋ．， ２０１４， ＢｉｏＭｅｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）。
いくつかの態様では、本発明の使用のための組成物は、血液脳関門増強タンパク質に融合される。いくつかの態様では、本明細書に記載の血液脳関門増強タンパク質は、トランスフェリン、インスリン、インスリン様増殖因子、及び低密度リポタンパク質の群から選択されるタンパク質の少なくとも１つの完全なタンパク質、バリアント、アイソフォーム、及び／又は断片である。
トロイの木馬戦略を使用してもよい（例えば、Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ， Ｗ．Ｍ．， ２０１７， ＢｉｏＤｒｕｇｓ ３１， ５０３－５１９を参照）。いくつかの態様では、本発明の使用のための組成物は、インスリン受容体又はトランスフェリン受容体などの内因性ＢＢＢ受容体トランスポーターに結合する抗体又はその断片に連結される。
本発明の使用のための組成物はまた、親油性を増加させ、続いてＢＢＢ交差特性を改善するために改変され得る（例えば、Ｕｐａｄｈｙａｙ， Ｒ． Ｋ．， ２０１４，． ＢｉｏＭｅｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ８６９２６９， ３７ ｐａｇｅｓ参照）。いくつかの態様では、本発明の使用のための組成物は、親油性を増加させる改変を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載の親油性を増加させる改変は、少なくとも１つの親水性ペプチドの付加、少なくとも１つの親水性ペプチドによる配列部分の置換、脂質部分の付加、及び／又は脂質部分による非脂質部分の置換を含む。
したがって、本発明は、ウイルス感染に関連する疾患又は症候群に対するＡＡＴの広範な効果に少なくとも部分的に基づく。
特定の対象は、ＡＡＴ及び／又はｒｈＡＡＴタンパク質による治療及び／又は予防に特に適している可能性がある。
よって、本発明はまた、ウイルス感染症、好ましくはコロナウイルス感染症、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物であって、前記必要とする対象は、少なくとも１人の参照対象と比較して、ｉ）内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）、及びインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）から選択される少なくとも１つのレベルの変化を有する、組成物に関する。前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、特に、ヒト血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片であり得、あるいは、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、好ましくは、前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。
前記「必要とする対象」は、目的の対象とも称される。前記必要とする対象は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の又はそれらを有する対象であり得る対象（すなわち、罹患対象）であり、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患又は症候群を有する。罹患対象は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とし得る。スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼを阻害することにより、ＡＡＴ及び／又はｒｈＡＡＴによる治療は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの細胞への侵入を阻害又は減少させ、体内のウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの伝播を減少させる、及び／又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染への応答として炎症を減少させることができる。治療及び／又は予防を必要とする対象は、呼吸器症候群、より好ましくは急性呼吸器症候群、さらにより好ましくは重度の急性呼吸器症候群を有する可能性がある。前記治療及び／又は予防を必要とする対象は、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化、食欲不振、体重減少、胃痛、結膜炎、皮膚発疹、リンパ腫、無関心、及び傾眠からなる群から選択される、好ましくは、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化からなる群から選択される少なくとも１つの症状を有し得る。治療及び／又は予防を必要とする対象は、集中治療及び／又は人工換気を必要とする場合がある。治療及び／又は予防を必要とする対象は、上記の定義の１又はそれらの任意の組み合わせによって定義することができる。
前記必要とする対象は、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前の、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の後に疾患又は症候群を発症しやすい対象でもあり得る。そのような対象は、感染前に、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び又は予防を必要とし得る。
少なくとも１人の参照対象は、参照対象の群であり得る。好ましくは、参照対象は、無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の又はそれらを有する対象（すなわち、感染対象）であり、より好ましくは、無症候性である、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の又はそれらを有する対象である。
本発明にかかる無症候性とは、前記（参照）対象が症状を有さない、好ましくは発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化、食欲不振、体重減少、胃痛、結膜炎、皮膚発疹、リンパ腫、無関心、及び傾眠からなる群から選択される症状を有さず、より好ましくは、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化を有さない。無症候性の（参照）対象は、呼吸器症候群、より好ましくは急性呼吸器症候群、さらにより好ましくは重度の急性呼吸器症候群を有さない。無症候性の（参照）対象は、集中治療及び／又は人工換気を必要としない。無症候性の（参照）対象は、上記の定義の１つ又はそれらの任意の組み合わせによって定義することができる。
本発明にかかる軽度の症状を有する（参照）対象は、呼吸器症候群、より好ましくは急性呼吸器症候群、さらにより好ましくは重度の急性呼吸器症候群を有さない。軽度の症状を有する（参照）対象は、集中治療及び／又は人工呼吸を必要としないことが好ましい。軽度の症状を有する（参照）対象は、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化、食欲不振、体重減少、胃痛、結膜炎、皮膚発疹、リンパ腫、無関心、及び傾眠からなる群から選択される少なくとも１つの症状を有していてもよく、より好ましくは、発熱、咳嗽、倦怠感、呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）、悪寒、関節痛又は筋肉痛、喀痰、痰、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、筋肉痛、関節痛又は喉の痛み、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、副鼻腔痛、鼻閉、嗅覚又は味覚の低下又は変化を有さず、前記軽度の症状を有する（参照）対象は、集中治療及び／又は人工呼吸を必要としない。軽度の症状を有する（参照）対象は、上記の定義の１つ又はそれらの任意の組み合わせによって定義することができる。
参照対象は子供、特に１０歳未満、好ましくは５歳未満の子供であり得る。参照対象は、１～１０歳、好ましくは２～５歳の年齢であり得る。
ウイルス感染、特にコロナウイルス感染、より詳細にはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中又はそれらを有する（参照）対象は、好ましくはウイルス、特にコロナウイルス、より詳細にはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した（参照）対象である。感染（参照）対象とは、ウイルス、特にコロナウイルス、より詳細にはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスが（参照）対象の体の細胞に侵入し、好ましくはその（参照）対象の身体の細胞内で増殖していることを意味する。
ウイルス、特にコロナウイルス、より詳細にはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した後、感染対象のインターフェロン－γレベルが上昇する。インターフェロン－γレベルの上昇は、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２ 受容体）のレベル上昇に至る。アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のレベルの増加は、プロテアーゼによるスパイクタンパク質の活性及びプライミングの増加を刺激する。次いで、ＡＡＴの内因性レベルは、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼの活性レベルの増加に応答して減少する。その後、ＡＡＴが活性スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼに結合（及び阻害）するにつれて、ＡＡＴの内因性レベルはさらに枯渇する。以下の群から選択される少なくとも１つを有する対象は、ウイルス、特にコロナウイルス、より詳細にはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に応答して疾患又は症候群を発症する可能性が特に高くなる：ｉ）より低いレベルの内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）、ｉｉ）より高いレベルの少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ｉｉｉ）より高いレベルのアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体）、及びｉｖ）少なくとも１人の参照対象と比較して、より高いレベルのインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）。よって、これらの目的の対象は、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む組成物を用いた、治療及び／又は予防に特に関連性があり、それらを受けるのに適している。前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、特に、ヒト血漿抽出ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片であり得、あるいは、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、好ましくは、前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。最も好ましくは、ＡＡＴタンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及び／又はヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞で産生される組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質である。
本発明はまた、ウイルス感染症、好ましくはコロナウイルス感染症、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質及び／又は組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物であって、前記必要とする対象が、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性αアンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
４．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルからなる群から選択される少なくとも１つを有する、組成物に関する。
無症候性であるか軽度の症状を有する、少なくとも１人の対象は、少なくとも１人の参照対象とも称される。前記参照対象は、本明細書に記載されるように定義される。
前記「必要とする対象」は、目的の対象とも称される。ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象は、本明細書に記載されるように定義される。
ｉ）～ｉｖ）で定義されるレベルは、タンパク質レベル及び／又はｍＲＮＡレベル、好ましくはタンパク質又はｍＲＮＡレベルであり得る。タンパク質レベルは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの抗体ベースのアッセイ、及び／又は光ファイバーバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標））に基づくバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して測定される。
スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのレベルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質由来の蛍光発生ペプチドを使用してスパイクタンパク質プロテアーゼの活性を測定することによって決定され得る。この方法は、Ｊａｉｍｅｓ ｅｔ． ａｌ（Ｊａｖｉｅｒ Ａ． Ｊａｉｍｅｓ， Ｊｅａｎ Ｋ． Ｍｉｌｌｅｔ， Ｇａｒｙ Ｒ． Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖｅｌ Ｓ１／Ｓ２ Ｓｉｔｅ， ＣＥＬＬ， ｉＳｃｉｅｎｃｅ ２３， １０１２１２， Ｊｕｎｅ ２６， ２０２０）に記載されている。透過的方法におけるペプチド：それぞれＨＴＶＳＬＬＲＳＴＳＱ配列（配列番号１１）及びＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡ配列（配列番号１２）で構成され、（７－メトキシクマリン－４－イル）アセチル／２，４－ジニトロフェニル（ＭＣＡ／ＤＮＰ）ＦＲＥＴ対を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）Ｓ１／Ｓ２部位に由来する蛍光性ペプチドは、Ｂｉｏｍａｔｉｋ社（米国デラウェア州ウィルミントン）により合成された。組換えフーリンは、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社（米国マサチューセッツ州イプスウィッチ）から購入可能である。組換えＬ－１－トシルアミド－２－フェニルエチルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）処理トリプシンは、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社（米国ミズーリ州セントルイス）から入手可能である。組換えＰＣ１、マトリプターゼ、カテプシンＢ、及びカテプシンＬは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社（米国ミネソタ州ミネアポリス）から購入可能である。蛍光ペプチドアッセイ：各蛍光ペプチドに対して、それぞれ以下から構成される１００μＬ容量の緩衝液及び５０μＭに希釈した各ペプチドで反応を行った：フーリンの場合は、１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００、１ｍＭ塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、及び１ｍＭ ２－メルカプトエタノール（ｐＨ７．５）（１０Ｕ／ｍＬに希釈）、ＰＣ１の場合は、２５ｍＭ ＭＥＳ、５ｍＭ塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、及び１％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ－３５（ｐＨ ６．０）（２．２ｎｇ／μＬに希釈）、トリプシンの場合は、ＰＢＳ（８ｎＭに希釈）、マトリプターゼの場合は、５０ｍＭトリス、５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、及び０．０１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（ｐＨ９．０）（２．２ｎｇ／μＬに希釈）、カテプシンＢの場合は、２５ｍＭ ＭＥＳ（ｐＨ５．０）（２．２ｎｇ／μＬに希釈）、カテプシンＬの場合は、５０ｍＭ ＭＥＳ、５ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．００５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ－３５（ｐＨ６．０）（２．２ｎｇ／μＬに希釈）。反応は３０℃で３連で実行し、蛍光発光は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）蛍光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社、米国カリフォルニア州サニーベール）を使用して４５分間毎分測定し、λｅｘ３３０ｎｍ及びλｅｍ３９０ｎｍの波長設定で、経時的な蛍光強度の追跡及び反応の最大反応速度（Ｖｍａｘ）の計算が可能となる。アッセイは、３回の独立した実験からのＶｍａｘの平均を表す結果で３連で実行する必要がある。
ＩＦＮ－γタンパク質のレベルは、フローサイトメトリー、粒子ベースのイムノアッセイを使用して測定できる。この方法は、ＢＤ Ｈｕｍａｎ Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカイン又はケモカインビーズアレイ（ＣＢＡ）キットを使用した、Ｈｕａｎｇ ｅｔ． ａｌ．（Ｈｕａｎｇ ＫＪ， Ｓｕ ＩＪ， Ｔｈｅｒｏｎ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｔｏｒｍ ｉｎ ＳＡＲＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ． ２００５；７５（２）：１８５－１９４． ｄｏｉ：１０．１００２／ｊｍｖ．２０２５５）からの出典であってもよい。ＢＤ Ｈｕｍａｎ Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインＣＢＡキット（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ社、カリフォルニア州サンディエゴ）は、粒子ベースのイムノアッセイでフローサイトメトリーによりＩＦＮ－γレベルを測定するものである。このキットで、５０ｍＬの患者血清試料から６つのサイトカインを同時に測定することができた。これらのイムノアッセイの検出限界は、ＩＦＮ－γで７．１ｐｇ／ｍＬである。
好ましくは、本明細書に記載のＡＡＴの内因性レベルはタンパク質レベルである。本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プロテアーゼのレベルは、好ましくはｍＲＮＡレベルである。本明細書に記載のＡＣＥ２受容体のレベルは、好ましくはｍＲＮＡレベルである。本明細書に記載のＩＦＮ－γのレベルは、好ましくはタンパク質レベルである。タンパク質及び／又はｍＲＮＡレベルは、血液、尿、又は唾液中、好ましくは血液中、より好ましくは血漿中、最も好ましくはヒト血漿中において測定することができる。
ウイルス、特にコロナウイルス、より詳細にはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの細胞への侵入及び細胞内での増殖のいくつかの要因はすでに理解されているが、他の要因はまだ調査中である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの侵入は、スパイクタンパク質、スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、及びＡＣＥ２受容体によって媒介される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、スパイクタンパク質Ｓとも称される。スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質を切断し、それによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が細胞に侵入するようにプライミングする。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、プライミングされたスパイクタンパク質とＡＣＥ受容体との相互作用によって細胞に侵入する。したがって、少なくとも１又は複数のプライミングプロテアーゼが目的の対象に存在する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの細胞への侵入がより容易かつ迅速になる。また、ＡＣＥ２受容体が多いほど、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞への侵入がより容易かつ迅速になる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染は炎症を引き起こし、したがってＩＦＮ－γ発現が上昇する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に応答したＩＦＮ－γ発現は、ＡＣＥ２受容体の発現増加につながる可能性がある。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖中、ＩＦＮ－γレベルがさらに上昇し、スパイクタンパク質とのＡＣＥ２相互作用の増加を刺激し、その後スパイクタンパク質のプライミングが促進され、ＡＡＴレベルが低下し、ウイルスが細胞に侵入すると、炎症が増加する。これはより高いレベルのＩＦＮ－γに至る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後、まずＩＦＮ－γレベルが上昇し、次にＡＡＴレベルが低下し、カテプシンＬのレベルが上昇し、及び／又は他のスパイクタンパク質プライミング（Ｓプライミング）プロテアーゼが増加する。図１を参照。
よって、本発明は、ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、ウイルスの侵入（例えば、図６、図７、図８、図１１、図１２、図２１、図２２を参照）及びウイルス関連の炎症（例えば、図１９、図２０を参照）、特に高ＩＦＮーγレベルによるウイルス関連の炎症を同時に低減させるという知見に少なくとも部分的に基づいている。この併用効果は、本明細書に記載の患者集団において特に有用である。
特定の態様では、本発明は、本発明にかかる使用のための組成物であって、前記スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼが、膜貫通プロテアーゼセリンサブタイプ２（ＴＭＰＲＳＳ２）、膜貫通プロテアーゼサブタイプ６（ＴＭＰＲＳＳ６）、カテプシンＬ、カテプシンＢ、プロプロテインコンバターゼ１（ＰＣ１）、トリプシン、エラスターゼ、好中球エラスターゼ、マトリプターゼ、及びフーリンからなる群から選択される少なくとも１つである、組成物に関する。
特定の態様では、本発明は、本発明にかかる使用のための組成物であって、前記スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼが、カテプシンＬ及び／又はフーリンである、組成物に関する。
ＡＡＴは人体で内因的に発現する。ＡＡＴは、α－１－プロテイナーゼ阻害剤とも称される。ＡＡＴは、プロテアーゼ、特にスパイクタンパク質プロテアーゼ、例えば、膜貫通プロテアーゼセリンサブタイプ２（ＴＭＰＲＳＳ２）、膜貫通プロテアーゼサブタイプ６（ＴＭＰＲＳＳ６／マトリプターゼ－２）、カテプシンＬ、カテプシンＢ、プロプロテインコンバターゼ１（ＰＣ１）、トリプシン、エラスターゼ、好中球エラスターゼ、マトリプターゼ、及びフーリンを阻害することができる。目的の感染対象における本発明の４つのプレーヤー（ＡＡＴ、スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びＩＦＮ－γ）のレベルが、参照対象と比較して対象の感染対象において変化する場合、目的の感染対象は、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防から恩恵を受け得る。内因性ＡＡＴレベルが低いと、目的の対象がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する疾患又は症候群を発症する可能性が高くなり、特にＣＯＶＩＤ－１９を発症する可能性がある。
特定の態様では、本発明は、前記ウイルス感染前又はウイルス感染中の内因性ＡＡＴのより低いレベルが、ＡＡＴ欠乏によって引き起こされる、本発明にかかる使用のための組成物に関する。
α１－アンチトリプシン（以下、「ＡＡＴ」）は、人体に自然に存在するタンパク質であり、肝臓、好ましくは肝細胞で産生される。Ｊａｎｃｉａｕｓｋｉｅｎｅ ｅｔ． ａｌ．，（Ｊａｎｃｉａｕｓｋｉｅｎｅ ＳＭ， Ｂａｌｓ Ｒ， Ｋｏｃｚｕｌｌａ Ｒ， Ｖｏｇｅｌｍｅｉｅｒ Ｃ， Ｋｏｈｎｌｅｉｎ Ｔ， Ｗｅｌｔｅ Ｔ． Ｔｈｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ α１－ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ． ２０１１；１０５（８）：１１２９－１１３９． ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｒｍｅｄ．２０１１．０２．００２）によると、ＡＡＴの正常な血漿濃度は、０．９～１．７５ｇ／Ｌの範囲内である。分子量（ＭＷ）が５２，０００（Ｂｒａｎｔｌｙ Ｍ， Ｎｕｋｉｗａ Ｔ， Ｃｒｙｓｔａｌ ＲＧ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ａｌｐｈａ－１－ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ． Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ． １９８８；８４（６Ａ）：１３－３１． ｄｏｉ：１０．１０１６／０００２－９３４３（８８）９０１５４－４）であることを考慮すると、これは、１６～３２μＭの正常な血漿濃度に相当する。Ｃｒｙｓｔａｌ １９９０（Ｃｒｙｓｔａｌ ＲＧ． Ａｌｐｈａ １－ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ， ｅｍｐｈｙｓｅｍａ， ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． １９９０ Ｍａｙ；８５（５）：１３４３－５２． ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ１１４５７８． ＰＭＩＤ：２１８５２７２； ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ２９６５７９）には、１１μＭが、ＡＡＴ欠乏症の臨床症状の閾値レベルであることが記載されている。ほとんどの健康な個人の場合、肝臓でのＡＡＴの２ｇ／日の発現は、この１１μＭの重要な血清レベルに到達するのに充分であり、次に内因性ＡＡＴレベルは、好中球エラスターゼ（ＮＥ）による破壊から下気道を保護し、肺気腫に至る肺胞の進行性破壊を阻害するのに充分である。Ｃｒｙｓｔａｌ １９９０はさらに、健康な個人のＡＡＴの正常な内因性レベルは、２０～５３μＭの間で異なることを指摘している。ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前の健康なヒト対象の血漿中のＡＡＴタンパク質の内因性レベルは、５～６０μＭ、好ましくは１０～４０μＭ、より好ましくは２５～３０μＭ、さらにより好ましくは１６～３２μＭの範囲内である。あるいは、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前の健康なヒト対象の血漿中のＡＡＴタンパク質の内因性レベルは、好ましくは３０μＭより高く、より好ましくは４０μＭより高く、最も好ましくは５０μＭより高い。ＡＡＴタンパク質は、血漿ＡＡＴタンパク質又は組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡＴ）タンパク質であり得る。いくつかの態様では、血漿ＡＡＴタンパク質は血漿に由来する。いくつかの態様では、組換えＡＡＴタンパク質は、例えば、ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、又は大腸菌細胞において組換え的に産生される。世界中の製薬会社は、遺伝性疾患であるＡＡＴ欠乏症の治療のために、ヒト血漿からＡＡＴタンパク質を抽出している。血漿由来ＡＡＴは、米国及びＥＵで、それぞれ食品医薬品局（ＦＤＡ）及び欧州医薬品庁（ＥＭＡ）によって承認されている。好ましくは、本発明のＡＡＴタンパク質はヒトアミノ酸配列、最も好ましくは配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する（表１を参照）。
本発明の図６ａ及び図６ｃに示されるように、１０μＭのＡＡＴは、ＡＣＥ２受容体を過剰発現するＡ５４９細胞における偽型ウイルス侵入を２０％～３０％減少させる。
Ａｚｏｕｚ ｅｔ． ａｌ．（Ｎｕｒｉｔ Ｐ． Ａｚｏｕｚ， Ａｎｄｒｅａ Ｍ． Ｋｌｉｎｇｌｅｒ ａｎｄ Ｍａｒｃ Ｅ． Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇによると、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２プライミングプロテアーゼＴＭＰＲＳＳ２の阻害剤であり（ｂｉｏＲｘｉｖ ｐｒｅｐｒｉｎｔ ｏｎｌｉｎｅ， ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２０．０５．０４．０７７８２６， ｐｏｓｔｅｄ ｏｎ Ｍａｙ ５， ２０２０）、濃度１～１００μＭのＡＡＴは、ＴＭＰＲＳＳ２タンパク質分解活性の用量依存的阻害を達成する。
本発明の図７に示されるように、１００μＭのＡＡＴは、ＡＣＥ２受容体のみを過剰発現するＡ５４９細胞における偽型ウイルス侵入を５０％～７５％減少させる。
本発明の図８に示されるように、１００μＭのＡＡＴは、ＡＣＥ２受容体及びスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼＴＭＰＲＳＳ２の両方を過剰発現するＡ５４９細胞においてのみ、偽型ウイルス侵入を最大４５％減少させる。
本発明の図６及び図７の両方において、ウイルスの侵入がＴＭＰＲＳＳ２とは無関係に観察されることに注意することが重要である。フーリン及び／又はカテプシンＬなどのプライミングプロテアーゼが、おそらく特にＴＭＰＲＳＳ２を置換できることを示している。この点で、ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、カテプシンＢ、カテプシンＬ、トリプシン、フーリン、ＰＣ１、マトリプターゼ、エラスターゼ、及び好中球エラスターゼのプロテアーゼの活性を低下させる（図１６）。
よって、ウイルス侵入に対するＡＡＴ及びｒｈＡＡＴの阻害効果は、他のＴＭＰＲＳＳ２阻害剤の効果を超えていることから（図７、図８、図１１、図１２、図２１、図２２）、ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、いくつかのプライミングプロテアーゼ（図１６）（例えば、ＴＭＰＲＳＳ２機能を置換できるプロテアーゼ）及びその後のＡＣＥ２媒介ウイルス侵入（図７、図８、図１１、図１２、図２１、図２２）を効果的に阻害する。
よって、ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、プライミングプロテアーゼ活性を低下させることによって、特にプライミングプロテアーゼ活性を広範かつ効率的に低下させることによってウイルス侵入を低下させる。
したがって、本発明は、ＡＡＴ及び／又はｒｈＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片を含む組成物が、特に、本明細書に記載の前提条件の１又は複数を有する対象におけるウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防に特に有効であるという驚くべき知見に少なくとも部分的に基づいている。
本発明において、ｉ）による内因性ＡＡＴのより低いレベルは、好ましくは、ヒト血漿中のタンパク質レベルである。ｉ）によるヒト血漿中の内因性ＡＡＴタンパク質のレベルは、好ましくは２００μＭ未満、好ましくは１５０μＭ未満、好ましくは１００μＭ未満、９０μＭ未満、好ましくは８０μＭ未満、好ましくは７０μＭ、６０μＭ、５０μＭ未満、好ましくは４０μＭ未満、好ましくは３０μＭ未満、好ましくは２５μＭ未満、好ましくは２０μＭ未満、好ましくは１５μＭ未満、好ましくは１１μＭ未満、又は１０μＭ未満である。より好ましくは、２００μＭ未満、１００μＭ未満、２５μＭ未満、１５μＭ未満、又は１１μＭ未満である。低レベルのＡＡＴは、スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼを問題なく阻害するのに充分ではない。したがって、低レベルの内因性ＡＡＴは、ウイルスの増殖、特にコロナウイルスの増殖、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖及び／又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する症候群の疾患の発症を促進する可能性がある。ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前、又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性ＡＡＴのより低いレベルは、ＡＡＴ欠乏症によって引き起こされる可能性があり、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前の内因性ＡＡＴのより低いレベルは、ＡＡＴ欠乏症によって引き起こされることが好ましい。ＡＡＴ欠乏症は、常染色体共優性形式で遺伝する状態である。共優性とは、遺伝子の２つの異なるバージョンが活性（発現される）であり得、両方のバージョンが遺伝形質に寄与することを意味する。「Ｍ」と呼ばれるＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子の最も一般的なバージョン（対立遺伝子）は、正常なレベルのα－１アンチトリプシンを産生する。通常の集団のほとんどの人は、各細胞にＭ対立遺伝子（ＭＭ）のコピーを２つ有する。ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子の他のバージョンは、α－１アンチトリプシンのレベルを低下させる。例えば、Ｓ対立遺伝子はこのタンパク質を適度に低レベルで産生し、Ｚ対立遺伝子はα－１アンチトリプシンをほとんど産生しない。各細胞にＺ対立遺伝子（ＺＺ）のコピーを２つ有する人は、α－１アンチトリプシン欠乏症である可能性がある。ＳＺの組み合わせを有する人は、特に喫煙する場合、肺疾患（肺気腫など）を発症するリスクが高くなる。世界中で、１億６，１００万人が各細胞（ＭＳ又はＭＺ）にＳ又はＺ対立遺伝子の１つのコピーとＭ対立遺伝子の１つのコピーとを有していると推定される。ＭＳ（又はＳＳ）の組み合わせを有する個人は、通常、肺を保護するのに充分なα－１アンチトリプシンを産生する。ただし、ＭＺ対立遺伝子を有する人は、肺又は肝機能障害のリスクがわずかに高くなる。本発明におけるＡＡＴ欠乏症の対象は、好ましくは、ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子のＺＺ変異、ＳＺ変異、ＭＳ変異、ＭＺ変異、又はＳＳ変異、好ましくはＺＺ変異を有する。ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子のＺＺ変異におけるＡＡＴ分泌のより低いレベルは、ＡＡＴのミスフォールディング及びそれに続く肝細胞の小胞体（ＥＲ）への蓄積によるものであり（Ｃｒｙｓｔａｌ １９９０）、ミスフォールディングされたＡＡＴの蓄積は、肝細胞の健康に悪影響を及ぼし、肝細胞の最終的な死に至るため、結果として進行性肝疾患となる。
ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性ＡＡＴのより低いレベルは、それぞれウイルス感染、コロナウイルス感染、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によっても引き起こされる可能性がある。すなわち、健康な肝細胞は、内因性ＡＡＴレベルの低下を過剰に補おうとするため、参照対象の内因性ＡＡＴのレベルは、ウイルス感染中に一時的に増加し得るが、遺伝的ＡＡＴ欠乏症の対象における内因性ＡＡＴのレベルは、ウイルス感染による増加の欠如又は不完全さ（健康な肝細胞の欠如）により低くなる。
内因性ＡＡＴのより低いレベルは、非アルコール性脂肪肝疾患、１型又は２型糖尿病（好ましくは１型）、肥満、及び心血管疾患などの肝疾患によっても引き起こされ得る。肝臓に脂肪酸が蓄積すると、ストレスの増加（ＩＦＮ－γの増加）、組織の炎症、及びその後の肝細胞への損傷につながり、ＡＡＴの健康な分泌レベルが低下する。他のタイプの肝疾患と同様に、肝細胞の小胞体（ＥＲ）にミスフォールディングされたＡＡＴが蓄積すると最終的に肝不全を引き起こすため、ＡＡＴ欠乏症は時間経過とともに肝疾患に至ることに注意することが重要である。
本発明において、スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、ウイルス、好ましくはコロナウイルス、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質をプライミングできる任意のプロテアーゼであり得る。このましくは、前記スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、膜貫通プロテアーゼセリンサブタイプ２（ＴＭＰＲＳＳ２）、膜貫通プロテアーゼサブタイプ６（ＴＭＰＲＳＳ６）、カテプシンＬ、カテプシンＢ、プロプロテインコンバターゼ１（ＰＣ１）、トリプシン、エラスターゼ、好中球エラスターゼ、マトリプターゼ、及びフーリン、より好ましくはＴＭＰＲＳＳ２、カテプシンＬ、及びフーリン、さらにより好ましくはカテプシンＬ又はフーリンからなる群から選択される少なくとも１つである。スパイクタンパク質のプライミングプロテアーゼであるフーリンは、対塩基性アミノ酸切断（ＰＡＣＥ）酵素とも称される。
本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、好ましくはカテプシンＬのより高いレベルは、好ましくは、ヒト血漿中のｍＲＮＡレベル、又はヒト血漿中のタンパク質レベルである。健康な対象におけるカテプシンＬの血漿中濃度は、０．２～１ｎｇ／ｍＬである（すなわち、分子量約２３～２４ｋＤａの場合、１０～５０ｐＭ）（Ｋｉｒｓｃｈｋｅ １９７７ ｈｔｔｐｓ：／／ｆｅｂｓ．ｏｎｌｉｎｅｌｉｂｒａｒｙ．ｗｉｌｅｙ．ｃｏｍ／ｄｏｉ／１０．１１１１／ｊ．１４３２－１０３３．１９７７．ｔｂ１１３９３．ｘ）。さらに、免疫細胞は、脳を含む炎症における細胞外システインカテプシンの主要な供給源であることが公知である（Ｈａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， ｖｏｎ Ｂｅｒｎｈａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１５， Ｗｅｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， ２００８， Ｗｅｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， ２００７）。本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼタンパク質のレベルは、好ましくは、ヒト血漿中で０．２、０．５、又は１ｎｇ／ｍＬより高い。本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングタンパク質プロテアーゼのレベルは、好ましくは１０、２０、３０、４０、５０、７５、又は１００ｐＭより高く、好ましくは１０又は５０ｐＭより高く、さらにより好ましくは５０ｐＭより高い。本態様では、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、好ましくはカテプシンＬである。特定の態様では、本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、又は少なくとも９つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼである。特定の態様では、本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、ＴＭＰＲＳＳ２、カテプシンＢ、カテプシンＬ、トリプシン、フーリン、ＰＣ１、マトリプターゼ、エラスターゼ、及び好中球エラスターゼからなる群から選択される少なくとも１つのプロテアーゼである。特定の態様では、本明細書に記載の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼは、ＴＭＰＲＳＳ２、カテプシンＢ、カテプシンＬ、トリプシン、フーリン、ＰＣ１、及びマトリプターゼからなる群から選択される少なくとも１つのプロテアーゼである。
特定の態様では、本発明は、本発明にかかる使用のための組成物であって、前記少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベルが、年齢及び／又は遺伝的素因によって引き起こされる、組成物に関する。
少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベルが、年齢及び／又は遺伝的素因によって引き起こされ得る。特に、カテプシンＢ及びカテプシンＬ、好ましくはカテプシンＢのより高いレベルは、年齢によって引き起こされ得る。より高いレベルのスパイクプロテアーゼタンパク質、特にカテプシンＢ及びカテプシンＬ、より好ましくはカテプシンＢがリソソームに蓄積する可能性がある。スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのレベルは、目的の対象でより高く、年齢は、好ましくは５０歳超、好ましくは６０歳超、より好ましくは７０歳超、さらに好ましくは８０歳超、最も好ましくは９０歳超である。アフリカ系アメリカ人の対象は、高レベルのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、特にフフーリンに対する遺伝的素因を有する場合がある。図２（ａ）に示すように、ＨｅＬａ細胞は、Ａ５４９細胞と比較して、フーリン及びカテプシンＬの相対的なｍＲＮＡ速度が異なる。ＨｅＬａ細胞はアフリカ系アメリカ人起源である。Ａ５４９細胞は白色人種由来の気道上皮細胞である。図２（ｂ）に示すように、ＨｅＬａ細胞はＡ５４９細胞よりもＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の侵入を受けやすく（図６）、ＡＡＴ処理に対する反応性が低くなる。遺伝的素因は、目的の個々の対象の遺伝子プロファイリングによって決定され得る。
特定の態様では、本発明は、前記ＡＣＥ２受容体のより高いレベルが、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされる、本発明にかかる使用のための組成物に関する。
本明細書に記載のＡＣＥ２受容体のより高いレベルは、好ましくは、ヒト血漿中のｍＲＮＡレベルである。ＡＣＥ２受容体のより高いレベルは、感染、炎症（例えば、ＩＦＮ－γ）、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされ得る。感染は、ウイルス感染及び／又は細菌感染、好ましくはウイルス感染、より好ましくはコロナウイルス感染、さらにより好ましくはＳＡＲＳ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染であり得る。感染のさらなる例は、リーシュマニア症である。図４及び図５に示すように、ＡＣＥ２受容体の発現は、より高いレベルのＩＦＮ－γに応答してアップレギュレートされ、炎症に対する免疫応答としてレベルが上昇します。炎症は、例えば、細菌及び／又はウイルス感染、癌、遅発型過敏症、自己免疫疾患（自己免疫性脳脊髄炎、関節リウマチ、自己免疫性インスリン炎（１型糖尿病とも称される）など）、同種移植拒絶及び移植片対宿主反応、並びに非特異的炎症及びサイトカイン放出によって引き起こされ得る。年齢は、好ましくは５０歳超、好ましくは６０歳超、より好ましくは７０歳超、さらに好ましくは８０歳超、最も好ましくは９０歳超である。高レベルのＩＦＮ－γに対する遺伝的素因の例は、家族性地中海熱である。遺伝的素因は、目的の個々の対象の遺伝子プロファイリングによって決定され得る。本明細書に記載のより高いレベルのＡＣＥ２受容体は、ｑＰＣＲによって確認され、本発明の図３ａに示されているように、肺（Ｃａｌｕ３）、結腸（ＣａＣｏ２）、肝臓（ＨＥＰＧ２）、腎臓（ＨＥＫ－２９３Ｔ）、及び脳（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）からなる群から選択される組織にも存在し得る。
特定の態様では、本発明は、前記ＩＦＮ－γのより高いレベルが、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされる、本発明にかかる使用のための組成物に関する。
ｉｖ）によるインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルは、好ましくはヒト血漿中のタンパク質又はｍＲＮＡレベルであり、より好ましくはヒト血漿中のタンパク質レベルである。健康なヒトでは、前記ＩＦＮ－γレベルはアッセイの検出限界より低い又はその付近である（例えば、３０～５０ｐｇ／ｍＬより低い）（Ｂｉｌｌａｕ １９９６； Ｋｉｍｕｒａ ２００１）。ＩＦＮ－γは、ほぼ独占的にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ４＋リンパ球、及び一部のＣＤ８＋リンパ球によって産生される。ＮＫ細胞又はＴ細胞のいずれかによるＩＦＮ－γの産生には、補助細胞、主に単核食細胞の協力が必要であり、これらの細胞も何らかの活性化状態にある必要がある（Ｂｉｌｌｉａｕ Ａ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ：ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｏｌｅ ｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９６；６２：６１－１３０． ｄｏｉ：１０．１０１６／ｓ００６５－２７７６（０８）６０４２８－９）。したがって、ＮＫ細胞の活性化及びＴ細胞の活性化につながる炎症状態は、ＩＦＮ－γレベルの増加につながる。ＮＫ細胞又はＴ細胞の循環が関与する炎症状態（感染症や癌）は、より高い血漿レベルにつながると予想される。
以下の表は、いくつかの状態におけるＩＦＮ－γの血漿レベルの値を示している。
Figure 2023523652000002
ｉｖ）によるヒト血漿中のＩＦＮ－γタンパク質のレベルは、好ましくは、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、２００、３００、４００、又は５００ｐｇ／ｍＬより高い。前記ＩＦＮ－γのより高いレベルが、好ましくは、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つ、より好ましくは、炎症によって引き起こされる。感染は、ウイルス感染及び／又は細菌感染、好ましくはウイルス感染、より好ましくはコロナウイルス感染、さらにより好ましくはＳＡＲＳ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染であり得る。感染のさらなる例は、リーシュマニア症である。炎症は、例えば、細菌及び／又はウイルス感染、癌、遅発型過敏症、自己免疫疾患（自己免疫性脳脊髄炎、関節リウマチ、自己免疫性インスリン炎（１型糖尿病とも称される）など）、同種移植拒絶及び移植片対宿主反応、並びに非特異的炎症及びサイトカイン放出によって引き起こされ得る。年齢は、好ましくは５０歳超、好ましくは６０歳超、より好ましくは７０歳超、さらに好ましくは８０歳超、最も好ましくは９０歳超である。高レベルのＩＦＮ－γに対する遺伝的素因の例は、家族性地中海熱である。遺伝的素因は、目的の個々の対象の遺伝子プロファイリングによって決定され得る。
したがって、本発明は、ＡＡＴ並びにｒｈＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片を含む組成物が、ウイルス増殖及び炎症、特にＩＦＮ－γ関連炎症の両方を低減するという驚くべき知見に少なくとも部分的に基づく。
一態様では、前記「必要とする対象」、すなわち、目的の対象が、以下からなる群から選択される２つを有する：
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性αアンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
４．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベル。
よって、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性α―アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、及び
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベルを有し得る。
好ましくは、本態様では、本明細書に記載のヒト血漿中のＡＡＴタンパク質レベルは５２μＭより低く、ヒト血漿中のカテプシンＬタンパク質レベルは１０ｐＭより高い。
別の態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、及び
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベルを有し得る。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性αアンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、及び
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルを有し得る。
これらの態様では、１及び４は、ＡＡＴ欠乏症、非アルコール性脂肪肝疾患などの肝疾患、糖尿病、肥満、及び心血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患又は状態であり得る。いくつかの態様では、本発明は、前記より高いレベルのＩＦＮ－γが、ＡＡＴ欠乏症、非アルコール性脂肪肝疾患などの肝疾患、糖尿病、肥満、及び心血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患又は状態によって引き起こされる、本発明にかかる使用のための組成物に関する。いくつかの態様では、本発明は、前記より低いレベルのＡＡＴが、ＡＡＴ欠乏症、非アルコール性脂肪肝疾患などの肝疾患、糖尿病、肥満、及び心血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患又は状態によって引き起こされる、本発明にかかる使用のための組成物。糖尿病は、１型糖尿病又は２型糖尿病であり得る。肝疾患は、アセトアミノフェン誘発性肝障害、重度の慢性肝炎、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）である場合があり、単純脂肪症、脂肪性肝炎、肝線維症、及び肝硬変、さらにはＨＣＣ（肝細胞癌）を含む幅広い表現型を含み得る。心血管疾患は、急性心筋梗塞の患者にも見られる、心臓への血流の突然の減少又は遮断、心筋梗塞、急性冠症候群（ＡＣＳ）によって引き起こされる任意の状態であり、それによって左心室駆出率は、血清中のＡＡＴ濃度と逆相関しており、収縮機能障害が炎症反応に関連していることを示唆している。
好ましくは、本態様では、本明細書に記載のヒト血漿中のＡＡＴタンパク質レベルは５２μＭより低く、本明細書に記載のヒト血漿中のＩＦＮ－γタンパク質レベルは０．１９ｐＭより高い。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」、すなわち、目的の対象が、以下からなる群から選択される２つを有する：
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベル。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、及び
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベルを有し得る。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、及び
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルを有し得る。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルを有し得る。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」、すなわち、目的の対象が、以下からなる群から選択される３つを有する：
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
４．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベル。
よって、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性αアンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、及び
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベルを有し得る。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、及び
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルを有し得る。
好ましくは、本態様では、本明細書に記載のヒト血漿中のＡＡＴタンパク質レベルは３６μＭより低く、本明細書に記載のヒト血漿中のカテプシンＬタンパク質レベルは１０ｐＭよりも高く、本明細書に記載のヒト血漿中のＩＦＮ－γタンパク質レベルは０．１９ｍＭより高い。
さらに好ましくは、本態様では、本明細書に記載のヒト血漿中のＡＡＴタンパク質レベルは５２μＭより低く、本明細書に記載のヒト血漿中のカテプシンＬタンパク質レベルは１０ｐＭよりも高く、本明細書に記載のヒト血漿中のＩＦＮ－γタンパク質レベルは０．１９ｍＭより高い。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルを有し得る。
さらなる態様では、前記「必要とする対象」、すなわち、目的の対象は、
１．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
４．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベルを有する。
本発明の使用のための組成物中のＡＡＴタンパク質は、血漿ＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、あるいは組換えＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片であり得る。好ましくは、前記ＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。血漿ＡＡＴタンパク質は、好ましくは血漿ＡＡＴタンパク質に由来し、より好ましくはヒト血漿（ヒト血漿抽出ＡＡＴとも称される）に由来する。特定の態様では、本発明は、本発明にかかる使用のための組成物に関し、前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴとも称される）、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である。
組換えＡＡＴタンパク質は、例えば、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞（ＨＥＫ２９３及び／又はＨＥＫ２９３Ｔ）又は大腸菌細胞において組換え的に産生される。世界中の製薬会社は、遺伝性疾患であるＡＡＴ欠乏症の治療のために、ヒト血漿からＡＡＴタンパク質を抽出している。血漿由来ＡＡＴは、ＦＤＡ及びＥＭＡの承認を受けている。好ましくは、本発明のＡＡＴタンパク質はヒトアミノ酸配列、最も好ましくは配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する（表１を参照）。組換えＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、好ましくは、Ｆｃドメイン及び／又はヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）を含まない。
本発明者らは、組換えＡＡＴ（ＣＨＯで産生されたｒｈＡＡＴ）が異なる親和性でＡＡＴ抗体に結合し（図１７）、血漿由来ＡＡＴよりも顕著な生物学的効果を有することを見出した。特に、組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡＴ）は、血漿由来ＡＡＴよりも効果的にＡＣＥ２／スパイクタンパク質媒介細胞融合（図１４）を阻害し、異なる酵素阻害プロファイルを有する（図１６）。
したがって、本発明は、ＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡＴ）が、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防における使用に特に有効であるという驚くべき知見に少なくとも部分的に基づいている。
特定の態様では、本発明は、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片が、ヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３又はＨＥＫ２９３Ｔ細胞、実施例２３を参照）において産生される組換えα１－アンチトリプシンである、本発明にかかる使用のための組成物に関する。
本発明者らは、ヒト細胞、特にＨＥＫ２９３（ＨｉｓタグのないｒｈＡＡＴ）で産生された組換えＡＡＴが、ＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡＴ）並びに血漿由来ＡＡＴと比較と比較して、カテプシンＬ（図１６ｂ）、トリプシン（図１６ｃ）、フーリン（図１６ｄ）、及び好中球エラスターゼ（図１６ｉ）の酵素活性の低下に特に有効であることを見出した。
したがって、本発明は、ヒト細胞、特にＨＥＫ２９３で産生された組換えＡＡＴが、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防における使用に特に有効であるという驚くべき知見に少なくとも部分的に基づいている。
特定の態様では、本発明は、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片が、より多くの非ヒトグリカンプロファイルを有する組換えα１－アンチトリプシン（ＣＨＯで産生されたｒｈＡＡＴ）である、本発明にかかる使用のための組成物に関する。特定の態様では、本明細書に記載の非ヒトグリカンプロファイルは、哺乳動物細胞由来のグリカンプロファイル及び／又は糖操作されたグリカンプロファイルである。例えば、糖タンパク質のフコシル化を低減及び／又はシアリル化を増強するために使用される糖工学戦略は、当業者に公知である。特定の態様では、本明細書に記載の非ヒトグリカンプロファイルは、ＣＨＯ細胞由来のグリカンプロファイルである。ＣＨＯ 細胞は、ヒト細胞とは異なるグリコシル化機構を発現するため、組換えタンパク質の表面のグリカン組成が異なる結果となる（図２４）（Ｌａｌｏｎｄｅ， Ｍ． Ｅ．， ＆ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ， Ｙ．， ２０１７， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２５１， １２８－１４０）。
特定の態様では、本発明は、本発明にかかる使用のための組成物に関し、前記ＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片は、ｐＸＣ－１７．４（ＧＳシステム（登録商標）、Ｌｏｎｚａ社）によって産生される組換えＡＡＴ、バリアント、アイソフォーム、及び／又はその断片である。
本発明者らは、ｐＸＣ－１７．４（ＧＳシステム（登録商標）、Ｌｏｎｚａ社）によってＣＨＯで産生された組換えＡＡＴ（組換えＡＡＴ１）は、エラスターゼ（図１６ｈ）及び好中球エラスターゼ（図１６ｉ）の活性に対して、血漿由来α１－プロテイナーゼ阻害剤（血漿由来ＡＡＴ）及びＣＨＯでＰＬ１３６／ＰＬ１３７（ｐＣＧＳ３、Ｍｅｒｃｋ社）によって産生された組換えＡＡＴ（組換えＡＡＴ２）と比較して、より顕著な阻害効果を誘導することを見出した。
したがって、本発明は、組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡＴ）の特定の形態が、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防における使用に特に有効であるという驚くべき知見に少なくとも部分的に基づいている。
本明細書で使用される場合、本発明のＡＡＴタンパク質、ペプチド、又はポリペプチドの「断片」は、本発明のＡＡＴタンパク質、ペプチド、又はポリペプチドよりも長さが少ないアミノ酸、特に、配列番号１に記載のＡＡＴの配列よりも少ないアミノ酸を含む配列を指す。前記断片は、好ましくは、機能的断片、例えば、配列番号１に記載のＡＡＴタンパク質と同じ生物学的活性を有する断片である。前記機能的断片は、好ましくは、配列番号１に記載のＡＡＴタンパク質に由来する。由来する天然のＡＡＴ配列と同じ特性を示す、すなわち生物学的に活性である限り、任意のＡＡＴ断片を使用することができる。
好ましくは、前記（機能的）断片は、ｓｈａｒｅｓ ａｂｏｕｔ 配列番号１に記載の天然のヒトＡＡＴアミノ酸配列の５連続アミノ酸、少なくとも約７連続アミノ酸、少なくとも約１５連続アミノ酸、少なくとも約２０連続アミノ酸、少なくとも約２５連続アミノ酸、少なくとも約２０連続アミノ酸、少なくとも約３０連続アミノ酸、少なくとも約３５連続アミノ酸、少なくとも約４０連続アミノ酸、 少なくとも約４５連続アミノ酸、少なくとも約５０連続アミノ酸、少なくとも約５５連続アミノ酸、少なくとも約６０連続アミノ酸、少なくとも約１００連続アミノ酸、少なくとも約１５０連続アミノ酸、少なくとも約２００連続アミノ酸、少なくとも約３００連続アミノ酸、・・・など以上を共有する。いくつかの態様では、本明細書に記載の（機能的）断片は、発現が最適化されたシグナルタンパク質を含む（例えば、実施例２４）
前記機能的ＡＡＴ断片は、配列番号２に記載のＡＡＴのＣ末端断片を含むか、又はそれからなり得る。配列番号２のＣ末端断片は、配列番号１のアミノ酸３７４～４１８からなる。
より好ましくは、前記ＡＡＴ断片は、Ｃ末端ＡＡＴ配列のアミノ酸３７４～４１８（配列番号２）よりも長さが少ないアミノ酸を含む断片である。あるいは、前記ＡＡＴ断片は、本質的に配列番号２からなる。
Figure 2023523652000003
「変異体」という用語は、ＡＡＴ天然配列ペプチドとはある程度異なるアミノ酸配列を有するタンパク質、ペプチド、又はポリペプチドであって、アミノ酸置換によって１又は複数のアミノ酸が同じ特徴及び配座上の役割を有する別のアミノ酸に置換されている、ＡＡＴ天然配列とは異なるアミノ酸配列を指す。好ましくは、本発明のバリアントは、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、又は８５％相同である。前記バリアントはまた、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、又は８５％の配列同一性を有し得る。アミノ酸配列バリアントは、天然のアミノ酸配列のアミノ酸配列内の特定の位置で、例えば、Ｎ又はＣ末端配列において又はアミノ酸配列内において、置換、欠失、及び／又は挿入を有し得る。置換は保存的でもあり得、この場合、保存的アミノ酸置換は、本明細書において、以下の５つの群のうちの１つにおける交換として定義される。
Ｉ．小さな脂肪族の非極性又はわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ
ＩＩ．極性のある正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ
ＩＩＩ．極性のある負荷電残基及びそのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ
ＩＶ．大きな芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
Ｖ．大きな脂肪族の非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ
「相同性」とは、２つのポリヌクレオチド又は２つのポリペプチド部分の間のパーセント同一性を指す。２つの核酸又は２つのポリペプチド配列は、それらの配列が、規定された長さの分子にわたって少なくとも約５０％の配列同一性、好ましくは少なくとも約７５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約８０％又は少なくとも約８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９５％～９８％の配列同一性を示す場合、互いに「実質的に相同」である。本明細書で使用される場合、実質的に相同とは、特定の配列と完全な同一性を示す配列も指す。
概して、「同一性」は、それぞれ２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の正確なヌクレオチド対ヌクレオチド又はアミノ酸対アミノ酸の対応を指す。パーセント同一性は、配列を整列させ、２つの整列配列間の正確な一致数を数え、短い方の配列の長さで割り、結果を１００倍することにより、２つの分子間の配列情報を直接比較することによって決定され得る。
あるいは、相同性は、容易に入手可能なコンピュータープログラムによって、又は相同領域間に安定した二重鎖を形成する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション後に一本鎖特異的ヌクレアーゼによる消化及び消化されたフラグメントのサイズ決定することによって決定され得る。実質的に相同なＤＮＡ配列は、例えばその特定の系について定義されたストリンジェントな条件下でのサザンハイブリダイゼーション実験で同定することができる。適切なハイブリダイゼーション条件を定義することは、当業者の技術範囲内である。
いくつかの態様では、本発明は、前記α１－アンチトリプシン断片が、Ｃ末端配列フラグメント又はその任意の組み合わせである、本発明にかかる使用のための組成物に関する。
前記ペプチドバリアントは、線状ペプチド又は環状ペプチドであってもよく、配列番号２に記載のＣ末端配列に由来する短環状ペプチドを含む群から選択されてもよい。好ましくは、α１－アンチトリプシンの前記Ｃ末端配列に由来する短環状ペプチドが、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＭ）－ＳＨ、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＥ）－ＳＨ、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＲ）－ＳＨ、及びシクロ－（ＣＰＥＶＦＬＭ）－ＳＨ、又はそれら任意の組み合わせを含む非限定的な群から選択される。
本明細書で使用される場合、本発明のＡＡＴタンパク質、ペプチド、又はポリペプチドの「アイソフォーム」は、ＡＡＴ ｍＲＮＡの選択的スプライシングから生じるスプライスバリアントを指す。
いくつかの態様では、本明細書に記載のＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、又はその断片のアミノ酸配列は、配列番号１の対応するアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。いくつかの態様では、ＡＡＴ、そのバリアント、そのアイソフォーム、又はその断片のアミノ酸配列は、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、配列番号１の対応するアミノ酸配列と同一である。
本発明のペプチド、そのアイソフォーム、その断片、又はそのバリアントは、好ましくは、標的細胞、好ましくは気道の細胞におけるペプチド、アイソフォーム、断片、又はバリアントの蓄積を増加させる薬剤にコンジュゲートされ得る。そのような薬剤は、例えば、治療薬に結合したトランスフェリンの膜トランスフェリン受容体媒介エンドサイトーシスなどの受容体媒介エンドサイトーシスを誘導する化合物（Ｑｉａｎ Ｚ． Ｍ． ｅｔ ａｌ．， “Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｖｉａ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ” Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ， ５４， ５６１， ２００２）又はプロテインキナーゼＣのペプチド阻害剤の細胞内送達にすでに使用されている、例えば、デカン酸、ミリスチン酸、及びステアリン酸などの脂肪酸の群の中から選択され得る細胞膜透過性担体（Ｉｏａｎｎｉｄｅｓ Ｃ．Ｇ． ｅｔ ａｌ．， “Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ＩＬ－２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｊｕｒｋａｔ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ” Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １３１， ２４２， １９９０）、及びタンパク質チロシンホスファターゼ（Ｋｏｌｅ Ｈ．Ｋ． ｅｔ ａｌ．， “Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｂａｓｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｔａｃｔ ｃｅｌｌｓ” Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７１， １４３０２， １９９６）、又はペプチドのいずれかであり得る。好ましくは、細胞膜透過性担体が使用される。より好ましくは、細胞膜透過性担体ペプチドが使用される。
細胞膜透過性担体がペプチドである場合、それは正荷電アミノ酸リッチペプチドであることが好ましい。
好ましくは、そのような正荷電アミノ酸リッチペプチドは、アルギニンリッチペプチドである。Ｆｕｔａｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｆｕｔａｋｉ Ｓ． ｅｔ ａｌ．， “Ａｒｇｉｎｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ． Ａｎ ａｂｕｎｄａｎｔ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｅｒｍｅａｂｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ” Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７６， ５８３６， ２００１）は、細胞膜透過性担体ペプチドのアルギニン残基の数は、内部移行の方法に大きな影響を与えること、並びに内部移行に最適な数のアルギニン残基があると考えられ、好ましくは６つ以上のアルギニンを含み、より好ましくは９つのアルギニンを含むことを示している。アルギニンリッチペプチドは、好ましくは少なくとも６個のアルギニン、より好ましくは少なくとも９個のアルギニンを含む。
ペプチド、そのアイソフォーム、断片、又はバリアントは、スペーサー（例えば、２つのグリシン残基）によって細胞膜透過性担体に結合され得る。この場合、細胞膜透過性担体はペプチドであることが好ましい。
通常、アルギニンリッチペプチドは、ＨＩＶ－ＴＡＴ（４８－５７）ペプチド（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ、配列番号７）、ＦＨＶ－ｃｏａｔ（３５－４９）ペプチド（ＲＲＲＲＮＲＴＲＲＮＲＲＲＶＲ、配列番号８）、ＨＴＬＶ－ＩＩ Ｒｅｘ（４－１６）ペプチド（ＴＲＲＱＲＴＲＲＡＲＲＮＲ、配列番号９）、及びＢＭＶ ｇａｇ（７－２５）ペプチド（配列番号１０）を含む非限定的な群から選択される。
当業者によって決定される任意の細胞膜透過性担体を使用することができる。
天然ペプチド（Ｌ型）に固有の問題は、天然プロテアーゼによる分解であるため、本発明のペプチド、そのアイソフォーム、その断片、又はその変異体、並びに細胞膜透過性ペプチドは、ペプチドのＤ型及び／又は「レトロインベルソ（ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒｓｏ）異性体」を含むように調製され得る。この場合、本発明のペプチド並びに細胞膜透過性ペプチドの断片及びバリアントのレトロインベルソ異性体が調製される。
細胞内でのペプチドの蓄積を増加させる薬剤に所望により結合される、本発明のペプチド、そのアイソフォーム、その断片、又はそのバリアントは、当技術分野で公知の様々な方法及び技術、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ． １９８２， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに記載されている化学合成又は組換え技術によって調製することができる。
本明細書に記載される細胞内でのペプチドの蓄積を増加させる薬剤に所望により結合される、本発明のペプチド、そのアイソフォーム、その断片、又はそのバリアントは、好ましくは、細胞発現系で組換え的に産生される。多種多様な単細胞宿主細胞が、本発明のＤＮＡ配列を発現するのに有用である。これらの宿主には、周知の真核生物及び原核生物の宿主、例えば、大腸菌、シュードモナス、バチルス、ストレプトマイセスの菌株、酵母などの菌類、並びに組織培養におけるＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳＯ、ＳＰ２／０、Ｒ１－１、Ｂ－Ｗ、及びＬ－Ｍ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＣＯＳ １、ＣＯＳ ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、及びＢＭＴ１Ｏ）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９）、及びヒト細胞などの動物細胞、並びに植物細胞が含まれ得る。
本発明のα１－アンチトリプシンタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の「治療上有効な用量又は量」とは、投与された場合に、コロナウイルス感染に関連する疾患又は症候群の対象の治療に関する陽性の治療又は予防反応をもたらす量を意味する。
「コロナウイルス感染」という用語は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、並びにその任意のバリアントを含む群から選択されるコロナウイルスによって引き起こされる感染を指し得る。いくつかの態様では、本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントは、系統Ｂ．１．１．２０７、系統Ｂ．１．１．７、クラスター５， ５０１．Ｖ２バリアント、系統Ｐ．１、系統Ｂ．１．４２９／ＣＡＬ．２０Ｃ、系統Ｂ．１．４２７、系統Ｂ．１．５２６、系統Ｂ．１．５２５、系統Ｂ．１．１．３１７、系統Ｂ．１．１．３１８、系統Ｂ．１．３５１、系統Ｂ．１．６１７、及び系統Ｐ．３．の群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントである。いくつかの態様では、本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントは、１９Ａ、２０Ａ、２０Ｃ、２０Ｇ、２０Ｈ、２０Ｂ、２０Ｄ、２０Ｆ、２０Ｉ、及び２０Ｅの群から選択されるネクストストレインクレード（Ｎｅｘｔｓｔｒａｉｎ ｃｌａｄｅ）に記載のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントである。いくつかの態様では、本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、Ｄ６１４Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｓ４７７Ｇ／Ｎ、Ｐ６８１Ｈ、Ｅ４８４Ｑ、Ｌ４５２Ｒ、及びＰ６１４Ｒの群から選択される少なくとも１つの変異を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントである。いくつかの態様では、本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントは、本明細書に記載されるバリアント由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントである。いくつかの態様では、本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、本明細書に記載される少なくとも１つのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントのウイルスゲノム配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、又は９９．９％の配列同一性を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントである。
コロナウイルス感染は、呼吸器症候群である疾患又は症候群を引き起こす気道感染症を引き起こす場合がある。呼吸器症候群は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である場合がある。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、以下の感染症の３つの臨床経過のうち少なくとも１つとして区別され得る：（１）上気道症状を伴う軽症、（２）非致死性肺炎、（３）肺炎を伴う重篤な状態、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重度の全身性炎症、臓器不全、心血管合併症。
本発明の使用のための組成物は、１又は複数の薬学的に許容される希釈剤又は担体をさらに含んでいてもよい。
「薬学的に許容される希釈剤又は担体」は、概して安全で、無毒で、望ましい薬学的組成物を調製するのに有用な担体又は希釈剤を意味し、ヒトの薬学的使用に許容される担体又は希釈剤を含む。
そのような薬学的に許容される担体には、水及び油などの無菌液体であり得、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油、及び同種のものなどの石油、動物、植物、合成起源のものが挙げられる。医薬組成物が静脈内投与される場合、水は好ましい担体である。生理食塩水、水性デキストロース、及びグリセロール溶液も、液体担体として、特に注射用溶液として使用することができる。
薬学的に許容される希釈剤又は担体には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、及び同種のものが挙げられる。
薬学的組成物は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩及び酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸の塩の１又は複数の薬学的に許容される塩をさらに含んでいてもよい。さらに、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝物質、ゲル又はゲル化材料、香料、着色剤、ミクロスフェア、ポリマー、懸濁剤などの補助物質も本明細書において存在し得る。また、剤形が再構成可能な形態である場合、防腐剤、湿潤剤、懸濁剤、界面活性剤、酸化防止剤、固化防止剤、充填剤、キレート剤、コーティング剤、化学安定剤などの１又は複数の他の従来の医薬成分も存在し得る。適切な例示的な成分には、微晶質セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリソルベート８０、フェニルエチルアルコール、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、パラクロロフェノール、ゼラチン、アルブミン、及びそれらの組み合わせが含まれる。薬学的に許容される賦形剤の詳細な検討は、参照により本明細書に援用されるＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ．， Ｎ．Ｊ． １９９１）で得られる。
あるいは、本発明の薬学的組成物は、１又は複数の追加の治療剤をさらに含む。好ましくは、１又は複数の治療剤は、治療有効量の１又は複数のヌクレオシド類似体、プロテアーゼ阻害剤、免疫抑制剤（例えば、サリルマブ又はトシリズマブ）、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、抗生物質、ウイルスの構造成分に対する抗体又はその断片（例えば、受動免疫療法）、インターフェロンβ（例えば、インターフェロンβ－１ａ）、及び／又はワクチンを含む。
特定の他の態様において、本発明の薬学的組成物及び１又は複数の追加の治療剤は、実質的に同時に又は並行して投与される。例えば、対象は、１又は複数の追加の治療剤による一連の治療を受けている間に、本発明の使用のための薬学的組成物を与えられてもよい。さらに、前記対象は、他の形態の抗ウイルス療法をすでに受けているか、又は並行して受けていてもよいことが企図される。
いくつかの態様では、前記追加の治療剤は、本発明の抗体又はその抗原結合断片の投与に関連する可能性のある副作用を軽減するのに有用であり得る。
いくつかの態様では、前記追加の治療剤は、本発明の抗体又はその抗原結合断片の投与に関連する効果をサポートするのに有用であり得る。
いくつかの態様では、本発明のさらなる治療剤及び抗体又はその抗原結合断片の投与は、所望の効果及び／又は副作用に関する相乗効果をもたらす。
いくつかの態様では、本明細書に記載の追加の治療剤は、ヌクレオシド類似体、プロテアーゼ阻害剤、及び免疫抑制剤などの免疫調節剤の群から選択される少なくとも１つの薬剤である。
いくつかの態様では、本明細書に記載の追加の治療剤は、ヌクレオシド類似体、プロテアーゼ阻害剤、免疫抑制剤（例えば、サリルマブ又はトシリズマブ）、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、抗生物質、ウイルスの構造成分に対する抗体又はその断片（例えば、受動免疫療法）、インターフェロンβ（例えば、インターフェロンβ－１ａ）、及び／又はワクチンの群から選択される。
ヌクレオシド類似体の非限定的な例には、リバビリン、レムデシビル、β－ｄ－Ｎ４－ヒドロキシシチジン、ＢＣＸ４４３０、ゲムシタビン塩酸塩、６－アザウリジン、ミゾリビン、アシクロビルフレキシマー、及びそれらの１又は複数の組み合わせが挙げられる。
プロテアーゼ阻害剤の非限定的な例には、ＨＩＶ及び／又はＨＣＶプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
いくつかの態様では、本明細書に記載の免疫調節剤はインターフェロンβである。いくつかの態様では、本明細書に記載の免疫調節剤はインターフェロンβ－１ａである。免疫抑制剤の非限定的な例には、インターロイキン阻害剤、例えばＩＬ－６（例えば、サリルマブ又はトシリズマブ）、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、及びＴＮＦ－α阻害剤が挙げられる。
前記追加の治療剤は、本明細書に記載の組成物及び方法の治療効果を改善又は補完することができる（例えば、図２０及び図１１ｄを参照）。
したがって、本発明は、特定の組み合わせ（ＡＡＴとのＩＦＮ－β－１ａなど）がウイルス侵入及び炎症に対するＡＡＴの効果を改善するという知見に少なくとも部分的に基づく。
本発明はまた、遺伝子送達ベクター及びそれを含む薬学的組成物を企図する。好ましくは、遺伝子送達ベクターは、本発明のＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片をコード化する１又は複数の核酸を含むプラスミド又はベクターの形態である。前記遺伝子送達ベクターの例には、例えば、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、微粒子担体、及びリポソームが挙げられる。遺伝子送達は、好ましくはインビトロ又はエクスビボで実施される。
したがって、本発明は、ＡＡＴ遺伝子送達（遺伝子治療）が炎症の影響を減少させるという知見に少なくとも部分的に基づく（例えば、図１９ｂを参照）。
一態様では、前記ウイルスベクターは、エクスビボ及びインビボ遺伝子送達、好ましくはエクスビボ遺伝子送達に適したベクターである。さらに好ましくは、前記ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）及びレンチウイルス、例えば、第１世代、第２世代、第３世代のレンチウイルスを含む群であって、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターなどの他のウイルスベクターを排除しない群から選択される。送達又はビヒクルの他の手段が公知であり（酵母系、マイクロベシクル、遺伝子銃／金ナノ粒子にベクターを付着させる手段など）、提供されている。いくつかの態様では、リポソーム、ナノ粒子、エキソソーム、マイクロベシクル、又は遺伝子銃を介してウイルスベクター又はプラスミドベクターの１又は複数を送達することができる。
本発明の他の態様では、本発明の医薬組成物は、持続放出製剤、又は持続放出デバイスを使用して投与される製剤である。このようなデバイスは、当技術分野で周知であり、例えば、非徐放性医薬組成物を含む、持続放出効果を達成するために様々な用量で連続的な定常状態の様式で経時的に薬物送達を提供できる、経皮パッチ及び小型の移植可能なポンプを含む。
本発明の薬学的組成物は、異なる経路によって対象に投与されてもよく、経口、非経口、舌下、経皮、直腸、経粘膜、局所、吸入、口腔投与、胸腔内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、髄腔内、及び関節内投与、又はそれらの組み合わせが挙げられる。ヒトでの使用のために、前記組成物は、通常のヒトでの実施に従って、適切に許容される製剤として投与され得る。当業者は、特定の患者に最も適した投与計画及び投与経路を容易に決定するであろう。本発明の組成物は、従来の注射器、無針注射装置、「微粒子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ ｇｏｎｅ ｇｕｎ）」、又はエレクトロポレーション（「ＥＰ」）、「流体力学的方法」、若しくは超音波などの他の物理的方法によって投与されてもよい。前記組成物はまた、静脈内注射、静脈内注入、Ｄｏｓａｔｏｒ型ポンプによる注入、吸入鼻スプレー、点眼薬、皮膚パッチ、徐放製剤、又はエクスビボ遺伝子治療若しくはエクスビボ細胞治療によって、好ましくは静脈内注射によって投与され得る。
本発明の医薬組成物は、インビボエレクトロポレーションを伴う又は伴わない本発明のＡＡＴタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片をコード化する核酸のＤＮＡ注入（ＤＮＡワクチン接種とも称される）、並びに本明細書に記載の組換えレンチウイルス、組換えアデノウイルス、及び組換えアデノウイルス関連ウイルスなどのリポソーム媒介性、ナノ粒子促進性、組換えベクターを含むいくつかの技術によって患者に送達されてもよい。
前記組成物は、肺又は気道に静脈内注射又は局所注射するか、目的の組織にエレクトロポレーションしてもよい。
本発明はさらに、コロナウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防方法であって、ｉ）本明細書に記載のα１－アンチトリプシンタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、又はｉｉ）本明細書に記載の本発明の使用のための医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。
さらに、コロナウイルスに曝露された又は曝露が疑われる対象におけるコロナウイルス感染の発症を調節する方法であって、そのような治療を必要とする対象に、ｉ）本明細書に記載のα１－アンチトリプシンタンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片、又はｉｉ）本明細書に記載の本発明の使用のための医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。
本発明はまた、本明細書において定義されるα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む組成物を用いて、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防のための目的の対象の感受性を測定するための方法であって、
ａ）ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の目的の対象における、内因性α１－アンチトリプシン、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びインターフェロン－γからなる群の少なくとも１つのレベルを決定すること、
ｂ）ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の少なくとも１人の参照対象における、内因性α１－アンチトリプシン、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びインターフェロン－γからなる群の少なくとも１つのレベルを測定することであって、前記参照対象は無症候性であるか軽度の症状を有すること、並びに
ｃ）工程ａ）で測定された目的のレベルを、工程ｂ）で測定された参照レベルと比較する工程であって、
前記目的の対象が、
１．内因性ＡＡＴの参照レベルと比較して、内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低い目的のレベル、
２．少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼの参照レベルと比較して、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高い目的のレベル、
３．ＡＣＥ２受容体の参照レベルと比較して、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高い目的のレベル、及び
４．ＩＦＮ－γの参照レベルと比較して、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高い目的のレベル
からなる群から選択される少なくとも１つを有する場合、前記目的の対象は、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防に対する感受性があること、を含む、方法。
本明細書で提供される全ての定義及び組み合わせは、該当する場合、及び特に明記されていない限り、本態様に適用される。
本発明はさらに、本発明の使用のための組成物を使用して、ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する疾患若しくは症候群を効果的に治療及び／又は予防するためのα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）の治療有効量を決定する方法であって、
ａ）ウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前又はウイルス感染、好ましくはコロナウイルス感染、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中の目的の対象における内因性α１－アンチトリプシンのレベルを決定すること、及び
ｂ）前記対象において少なくとも１０μＭ、好ましくは少なくとも２０μＭ、より好ましくは少なくとも５０μＭ、さらにより好ましくは少なくとも１００μＭ、最も好ましくは少なくとも２００μＭであるＡＡＴレベルを達成するために必要である、前記組成物中のＡＡＴの量を決定する工程を含む、方法に関する。
本明細書で提供される全ての定義及び組み合わせは、該当する場合、及び特に明記されていない限り、本態様に適用される。
いくつかの態様では、本発明は、前記ウイルスがコロナウイルスである、本発明にかかる方法に関する。いくつかの態様では、本発明は、前記ウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、本発明にかかる方法に関する。いくつかの態様では、本発明は、前記疾患又は症候群が、呼吸器症候群又は重症急性呼吸器症候群である、本発明にかかる方法に関する。いくつかの態様では、本発明は、前記疾患又は症候群が、神経系の炎症性疾患又は症候群である、本発明にかかる方法に関する。いくつかの態様では、本発明は、前記神経系の炎症性疾患又は症候群が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、及びハンチントン病の群から選択される疾患又は症候群である、本発明にかかる方法に関する。
本明細書で提供される全ての定義及び組み合わせは、該当する場合、及び特に明記されていない限り、これらの態様に適用される。
当業者は、本明細書に記載された本発明が、具体的に記載されたもの以外の変形及び変更を受け入れる余地があることを理解するであろう。本発明は、その精神又は本質的な特徴から逸脱することなく、全てのそのような変形及び変更を含むことを理解されたい。本発明はまた、本明細書で個別に又は集合的に参照又は記載される工程、特徴、組成物、及び化合物の全て、並びに前記工程又は特徴の任意の及び全ての組み合わせ又は任意の２つ以上を含む。したがって、本開示は、例示された全ての態様において限定的ではないと見なされるべきであり、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって示され、均等の意味及び範囲内にある全ての変更はそこに含まれることが意図されている。本明細書全体を通して様々な参考文献が引用されており、その各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。上記の説明は、以下の実施例を参照してより完全に理解されるであろう。
図１は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染サイクル及び宿主細胞へのウイルス侵入をブロックするＡＡＴの役割の模式図。 図２ａは、Ａ５４９及びＨｅＬａ細胞におけるカテプシンＬ、フーリン、ＡＣＥ２、及びＴＭＰＲＳＳ２の内因性ｍＲＮＡレベルは、ＨｅＬａ細胞及びＡ５４９細胞のいずれも相当量のＡＣＥ２ ｍＲＮＡ及びＴＭＰＲＳＳ２のいずれも発現しないことを示す図である。どちらの細胞株もフーリン及びカテプシンＬ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来のスパイクタンパク質のプライミングプロテアーゼ）を発現している。 図２ｂは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＤ６１４Ｇ偽型ウイルスバリアントは、感染性の増加を示していることを示す図である。ルシフェラーゼを発現し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－スパイク野生型（Ｄ６１４）又はＤ６１４Ｇ変異体（Ｇ６１４）で偽型化されたレンチウイルスを使用して、ＡＣＥ２及び／又はＴＭＰＲＳＳ２を過剰発現するＨｅＬａ細胞に形質導入した。結果は、ＴＭＰＲＳＳ２を過剰発現するＨｅＬａ細胞ではＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス細胞侵入に対する１０マイクロモル（１０μＭ）濃度の血漿由来ＡＡＴによる阻害効果はなく、ＡＣＥ２のみを発現するＨｅＬａ細胞では最大２５％であることを示している。 図３は、ａ）異なる細胞株におけるＡＣＥ２遺伝子発現、ｂ）異なる細胞株（組織）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現。 図３は、ａ）異なる細胞株におけるＡＣＥ２遺伝子発現、ｂ）異なる細胞株（組織）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現。 図４は、ＩＦＮ－γによる処理に応答したＡ５４９でのＡＣＥ２発現。 図４は、ＩＦＮ－γによる処理に応答したＡ５４９でのＡＣＥ２発現。 図４は、ＩＦＮ－γによる処理に応答したＡ５４９でのＡＣＥ２発現。 図４は、ＩＦＮ－γによる処理に応答したＡ５４９でのＡＣＥ２発現。 図５は、ＩＦＮ－γによる処理に応答したＨｅＬａでのＡＣＥ２発現。 図６は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイ。ａ）～ｂ）Ａ５４９細胞－野生型（ＷＴ）偽型ウイルス。ａ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２細胞。ｂ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。ｃ）～ｄ）Ａ５４９細胞－スパイクＧ４１６変異偽型ウイルス。ｃ）変異体Ｇ４１６偽型ウイルスを含むＡ５４９ ＡＣＥ２細胞。ｄ）変異体Ｇ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。Ｒｅｓｐｉｋａｍ（登録商標）＝ＦＤＡ承認の血漿由来ＡＡＴであるＧＬＡＳＳＩＡ（臨床グレード）、Ｓｉｇｍａ＝Ｓｉｇｍａ社より購入した血漿由来ＡＡＴ（非ＧＭＰグレード）。 図６は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイ。ａ）～ｂ）Ａ５４９細胞－野生型（ＷＴ）偽型ウイルス。ａ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２細胞。ｂ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。ｃ）～ｄ）Ａ５４９細胞－スパイクＧ４１６変異偽型ウイルス。ｃ）変異体Ｇ４１６偽型ウイルスを含むＡ５４９ ＡＣＥ２細胞。ｄ）変異体Ｇ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。Ｒｅｓｐｉｋａｍ（登録商標）＝ＦＤＡ承認の血漿由来ＡＡＴであるＧＬＡＳＳＩＡ（臨床グレード）、Ｓｉｇｍａ＝Ｓｉｇｍａ社より購入した血漿由来ＡＡＴ（非ＧＭＰグレード）。 図６は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイ。ａ）～ｂ）Ａ５４９細胞－野生型（ＷＴ）偽型ウイルス。ａ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２細胞。ｂ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。ｃ）～ｄ）Ａ５４９細胞－スパイクＧ４１６変異偽型ウイルス。ｃ）変異体Ｇ４１６偽型ウイルスを含むＡ５４９ ＡＣＥ２細胞。ｄ）変異体Ｇ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。Ｒｅｓｐｉｋａｍ（登録商標）＝ＦＤＡ承認の血漿由来ＡＡＴであるＧＬＡＳＳＩＡ（臨床グレード）、Ｓｉｇｍａ＝Ｓｉｇｍａ社より購入した血漿由来ＡＡＴ（非ＧＭＰグレード）。 図６は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイ。ａ）～ｂ）Ａ５４９細胞－野生型（ＷＴ）偽型ウイルス。ａ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２細胞。ｂ）ＷＴ Ｄ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。ｃ）～ｄ）Ａ５４９細胞－スパイクＧ４１６変異偽型ウイルス。ｃ）変異体Ｇ４１６偽型ウイルスを含むＡ５４９ ＡＣＥ２細胞。ｄ）変異体Ｇ６１４偽型ウイルスを含むＡ５４９－ＡＣＥ２－ＴＭＰＲＳＳ２細胞。Ｒｅｓｐｉｋａｍ（登録商標）＝ＦＤＡ承認の血漿由来ＡＡＴであるＧＬＡＳＳＩＡ（臨床グレード）、Ｓｉｇｍａ＝Ｓｉｇｍａ社より購入した血漿由来ＡＡＴ（非ＧＭＰグレード）。 図７は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２増強Ａ５４９細胞で５０％～７５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図７は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２増強Ａ５４９細胞で５０％～７５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図７は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２増強Ａ５４９細胞で５０％～７５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図７は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２増強Ａ５４９細胞で５０％～７５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図８は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２＋ＴＭＰＲＳＳ２増強Ａ５４９細胞で最大で４５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図８は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２＋ＴＭＰＲＳＳ２増強Ａ５４９細胞で最大で４５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図８は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２＋ＴＭＰＲＳＳ２増強Ａ５４９細胞で最大で４５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図８は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルスの侵入は、１００及び２００マイクロモル濃度のＡＡＴの両方で、ＡＣＥ２＋ＴＭＰＲＳＳ２増強Ａ５４９細胞で最大で４５％ブロックされることを示す図である（５×ＰＢＳ中１００μＭのＲｅｓｐｉｋａｍ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＳｉｇｍａ、２．５×ＰＢＳ中２００μＭのＳｉｇｍａ、５×ＰＢＳ中１００μＭのＰｏｒｔｌａｎｄ、５×ＰＢＳ中のＧｅｎｆａｘｏｎ、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのカモスタット、０．２％ＤＭＳＯ中の１０μＭ及び１００μＭのブロムヘキシン、０．２％ＤＭＳＯ中１０μＭ及び１００μＭのベンゼンスルホニル）。 図９は、ＡＣＥ－２が、コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の原因となる新規コロナウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染を媒介する宿主細胞受容体であることを示す図である。薬剤化合物（ＡＡＴ）による治療は、ウイルスと受容体との間の相互作用を撹乱する。（出典：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ａｃｅ－２－ｓａｒｓ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ）。 図１０は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイプロトコル。 図１１は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果であって、ベクターｐＸＣ１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ＰＬＣ）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ１では、２００μＭで最も顕著な阻害効果（９３．４％）が観察されること、ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果、並びにｄ）２５μＭ血漿由来ＡＡＴ及びＣＨＯ 細胞で産生された組換えＡＡＴ（組換えＡＡＴ１、組換えＡＡＴ２）と組み合わせた１０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－β－１ａは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイで相加的な阻害効果を示すことを示す図である。 図１１は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果であって、ベクターｐＸＣ１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ＰＬＣ）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ１では、２００μＭで最も顕著な阻害効果（９３．４％）が観察されること、ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果、並びにｄ）２５μＭ血漿由来ＡＡＴ及びＣＨＯ 細胞で産生された組換えＡＡＴ（組換えＡＡＴ１、組換えＡＡＴ２）と組み合わせた１０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－β－１ａは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイで相加的な阻害効果を示すことを示す図である。 図１１は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果であって、ベクターｐＸＣ１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ＰＬＣ）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ１では、２００μＭで最も顕著な阻害効果（９３．４％）が観察されること、ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果、並びにｄ）２５μＭ血漿由来ＡＡＴ及びＣＨＯ 細胞で産生された組換えＡＡＴ（組換えＡＡＴ１、組換えＡＡＴ２）と組み合わせた１０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－β－１ａは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイで相加的な阻害効果を示すことを示す図である。 図１１は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果であって、ベクターｐＸＣ１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ＰＬＣ）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ１では、２００μＭで最も顕著な阻害効果（９３．４％）が観察されること、ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果、並びにｄ）２５μＭ血漿由来ＡＡＴ及びＣＨＯ 細胞で産生された組換えＡＡＴ（組換えＡＡＴ１、組換えＡＡＴ２）と組み合わせた１０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－β－１ａは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入アッセイで相加的な阻害効果を示すことを示す図である。 図１２は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果、並びにｃ）ＡＣＥ２過剰発現ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果。 図１２は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果、並びにｃ）ＡＣＥ２過剰発現ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果。 図１２は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果、並びにｃ）ＡＣＥ２過剰発現ＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果。 図１３は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク融合アッセイの模式図。 図１４は、ＡＣＥ２及びＳｍａｌｌ ＢｉＴ（ＳｍＢｉＴ）ルシフェラーゼ、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク及びＬａｒｇｅ ＢｉＴ（ＬｇＢｉＴ）ルシフェラーゼのいずれかを過剰発現するＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク融合アッセイ。ＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡＴ）（組換えＡＡＴ１及び組換えＡＡＴ２）は、血漿由来ＡＡＴと比較して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクを介した細胞融合に対してより優れた阻害効果を示す。 図１５は、ａ）ヒト肺細胞株におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現のｑＰＣＲ分析、ｂ）ヒト肺細胞株（Ｃａｌｕ３及びＡ５４９）におけるＡＣＥ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＡＣＥ２の内因性発現を示さないこと、ｃ）ヒト肺細胞株（Ａ５４９）対結腸直腸細胞株（Ｃａｃｏ２）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＴＭＰＲＳＳ２の内因性発現を示さないこと、並びにｄ）及びｅ）様々なヒト細胞株（組織）におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現の相対定量的ｑＰＣＲ分析を示す図である。明らかに、肺に由来する細胞は、Ｃａｌｕ３細胞及びＡ５４９細胞で、それぞれトリプシン及びカテプシンＢの最大コピー数を示す。特に、神経組織由来の細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）も、トリプシン及びカテプシンＢの両方で比較的高いコピー数を示す。 図１５は、ａ）ヒト肺細胞株におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現のｑＰＣＲ分析、ｂ）ヒト肺細胞株（Ｃａｌｕ３及びＡ５４９）におけるＡＣＥ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＡＣＥ２の内因性発現を示さないこと、ｃ）ヒト肺細胞株（Ａ５４９）対結腸直腸細胞株（Ｃａｃｏ２）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＴＭＰＲＳＳ２の内因性発現を示さないこと、並びにｄ）及びｅ）様々なヒト細胞株（組織）におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現の相対定量的ｑＰＣＲ分析を示す図である。明らかに、肺に由来する細胞は、Ｃａｌｕ３細胞及びＡ５４９細胞で、それぞれトリプシン及びカテプシンＢの最大コピー数を示す。特に、神経組織由来の細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）も、トリプシン及びカテプシンＢの両方で比較的高いコピー数を示す。 図１５は、ａ）ヒト肺細胞株におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現のｑＰＣＲ分析、ｂ）ヒト肺細胞株（Ｃａｌｕ３及びＡ５４９）におけるＡＣＥ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＡＣＥ２の内因性発現を示さないこと、ｃ）ヒト肺細胞株（Ａ５４９）対結腸直腸細胞株（Ｃａｃｏ２）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＴＭＰＲＳＳ２の内因性発現を示さないこと、並びにｄ）及びｅ）様々なヒト細胞株（組織）におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現の相対定量的ｑＰＣＲ分析を示す図である。明らかに、肺に由来する細胞は、Ｃａｌｕ３細胞及びＡ５４９細胞で、それぞれトリプシン及びカテプシンＢの最大コピー数を示す。特に、神経組織由来の細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）も、トリプシン及びカテプシンＢの両方で比較的高いコピー数を示す。 図１５は、ａ）ヒト肺細胞株におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現のｑＰＣＲ分析、ｂ）ヒト肺細胞株（Ｃａｌｕ３及びＡ５４９）におけるＡＣＥ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＡＣＥ２の内因性発現を示さないこと、ｃ）ヒト肺細胞株（Ａ５４９）対結腸直腸細胞株（Ｃａｃｏ２）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＴＭＰＲＳＳ２の内因性発現を示さないこと、並びにｄ）及びｅ）様々なヒト細胞株（組織）におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現の相対定量的ｑＰＣＲ分析を示す図である。明らかに、肺に由来する細胞は、Ｃａｌｕ３細胞及びＡ５４９細胞で、それぞれトリプシン及びカテプシンＢの最大コピー数を示す。特に、神経組織由来の細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）も、トリプシン及びカテプシンＢの両方で比較的高いコピー数を示す。 図１５は、ａ）ヒト肺細胞株におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現のｑＰＣＲ分析、ｂ）ヒト肺細胞株（Ｃａｌｕ３及びＡ５４９）におけるＡＣＥ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＡＣＥ２の内因性発現を示さないこと、ｃ）ヒト肺細胞株（Ａ５４９）対結腸直腸細胞株（Ｃａｃｏ２）におけるＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現のｑＰＣＲ分析は、Ａ５４９細胞株におけるＴＭＰＲＳＳ２の内因性発現を示さないこと、並びにｄ）及びｅ）様々なヒト細胞株（組織）におけるスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ遺伝子発現の相対定量的ｑＰＣＲ分析を示す図である。明らかに、肺に由来する細胞は、Ｃａｌｕ３細胞及びＡ５４９細胞で、それぞれトリプシン及びカテプシンＢの最大コピー数を示す。特に、神経組織由来の細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）も、トリプシン及びカテプシンＢの両方で比較的高いコピー数を示す。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１６は、ａ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＢプロテアーゼ活性を阻害すること、ｂ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはカテプシンＬプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、 ｃ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはトリプシンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を用いてＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｄ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはフーリンプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、ｅ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＰＣ１プロテアーゼ活性を阻害すること、ｆ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはマトリプターゼプロテアーゼ活性を阻害すること、ｇ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害すること、ｈ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴはエラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐＸＣ１７．４（組換えＡＡＴ１）を使用してＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたこと、並びにｉ）ＡＡＴ及びｒｈＡＡＴは、好中球エラスターゼプロテアーゼ活性を阻害し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（組換えＡＡＴ４）を使用してＨＥＫ２９３細胞で産生された組換えＡＡＴで最も顕著な阻害効果が観察されたことを示す図である。 図１７は、ａ）血漿由来ＡＡＴ及びｂ）Ｏｃｔｅｔ（登録商標）法を使用して測定した組換えＡＡＴの結合の標準曲線。血漿由来ＡＡＴとベクターＰＬ１３６及びベクター１３７を用いてＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴとの間には、異なる結合親和性が観察される。 図１７は、ａ）血漿由来ＡＡＴ及びｂ）Ｏｃｔｅｔ（登録商標）法を使用して測定した組換えＡＡＴの結合の標準曲線。血漿由来ＡＡＴとベクターＰＬ１３６及びベクター１３７を用いてＣＨＯ細胞で産生された組換えＡＡＴとの間には、異なる結合親和性が観察される。 図１８は、ａ）実験タイムラインの模式図及びｂ）ＩＦＮγを介したミクログリアの活性化（炎症）。 図１８は、ａ）実験タイムラインの模式図及びｂ）ＩＦＮγを介したミクログリアの活性化（炎症）。 図１９は、ａ）実験タイムラインの模式図及びｂ）ＡＡＴによるＩＦＮγを介したミクログリアの活性化（炎症）の低下。効果は、血漿由来ＡＡＴ、組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡ）、及びＡＡＴを発現する遺伝子で形質導入された細胞（遺伝子治療）で観察される。 図１９は、ａ）実験タイムラインの模式図及びｂ）ＡＡＴによるＩＦＮγを介したミクログリアの活性化（炎症）の低下。効果は、血漿由来ＡＡＴ、組換えＡＡＴ（ｒｈＡＡ）、及びＡＡＴを発現する遺伝子で形質導入された細胞（遺伝子治療）で観察される。 図２０は、ａ）実験タイムラインの模式図及びｂ）ＩＦＮβによるＡＡＴで得られる抗炎症効果の向上。 図２０は、ａ）実験タイムラインの模式図及びｂ）ＩＦＮβによるＡＡＴで得られる抗炎症効果の向上。 図２１は、ａ）及びｂ）Ｃａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌細胞におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルスの侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果。ｃ）Ｃａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌細胞におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルスの侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果。 図２１は、ａ）及びｂ）Ｃａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌細胞におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルスの侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果。ｃ）Ｃａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌細胞におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルスの侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果。 図２１は、ａ）及びｂ）Ｃａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌細胞におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルスの侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果。ｃ）Ｃａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌細胞におけるＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルスの侵入に対する他のセリンプロテアーゼ阻害剤の効果。 図２２は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果。ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する他のプロテアーゼ阻害剤の効果。 図２２は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果。ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する他のプロテアーゼ阻害剤の効果。 図２２は、ａ）及びｂ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する血漿由来ＡＡＴ及び組換えＡＡＴの効果。ｃ）ＡＣＥ２過剰発現Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ偽型ウイルス侵入に対する他のプロテアーゼ阻害剤の効果。 図２３は、ａ）ＡＤＡＭ１７活性化及びタンパク質排出に対するＡＡＴの影響並びにｂ）スパイクタンパク質／ＩｇＧ免疫複合体による単球／マクロファージの活性化に対するＡＡＴの影響。 図２３は、ａ）ＡＤＡＭ１７活性化及びタンパク質排出に対するＡＡＴの影響並びにｂ）スパイクタンパク質／ＩｇＧ免疫複合体による単球／マクロファージの活性化に対するＡＡＴの影響。 図２４は、異なる供給源由来のＡＡＴの分子量の違い。 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２５は、ａ）ｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）のベクターマップｂ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｃ）ｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｄ）ＰＬ１３６（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｅ）ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）のベクターマップｆ）空のｐＣＧＳ３ベクターのベクターマップｇ）ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）のベクターマップ 図２６は、ＡＡＴアフィニティーの検出のために開発されたＯｃｔｅｔ（登録商標）法。
全図：「Ｒｅｓｐｉｋａｍ」（登録商標）は、血漿由来ＡＡＴ（臨床グレード）を指し、「Ｓｉｇｍａ」は、血漿由来ＡＡＴを指し、「組換えＡＡＴ１」は、ｐＸＣ－１７．４（ＧＳシステム（登録商標）、Ｌｏｎｚａ社）によってＣＨＯで産生されたＡＡＴを指し、「組換えＡＡＴ２」は、ＰＬ１３６／ＰＬ１３７（Ｍｅｒｃｋ社）によってＣＨＯで産生されたＡＡＴを指し、「組換えＡＡＴ３」は、ＨＥＫ２９３Ｔで生成されたＡＡＴを指し、「組換えＡＡＴ４」は、ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）によってＨＥＫ２９３で産生されたＡＡＴを指す。
材料及び方法
α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対するＡＡＴの影響は、２つのレベルで示される。
１．第一に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のプロテアーゼ依存性の細胞への侵入。
２．第二に、重症ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疾患におけるオーバーシュート炎症。
重要なことに、これはＣＯＶＩＤ－１９（すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる疾患）の３つの段階を表している。
１．第１段階のＣＯＶＩＤ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる疾患、インフルエンザ様症状、通常は１週間以内に消失）は治療を必要としない。
２．典型的にはウイルス性肺炎を特徴とする第２段階の疾患は入院を必要とし、抗ウイルス治療（すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞への侵入の阻害）は、さらなる進行を防ぐためにこの段階で大きな関心となる。
３．第３段階のＣＯＶＩＤ疾患は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）及び重度の全身性炎症を特徴としている。この段階では、抗炎症治療及び抗ウイルス治療が必要である。
本発明者らの分析によると、ＡＡＴはステージＩＩ及びステージＩＩＩのＣＯＶＩＤ－１９の治療に有用であるが、ステージＩからステージＩＩ及びステージＩＩＩへの進行を防ぐためにＡＡＴの予防的投与が想定される。
実施例１―ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞への侵入
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の侵入は、ウイルスのスパイクタンパク質と宿主細胞のアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体との結合によって媒介される。インビトロでこの生物学的事象を再現するために、レポーター（ＧＦＰ又はルシフェラーゼ）をコード化し、その表面にスパイクタンパク質を発現するレンチベクターが生成される。レンチベクターの細胞への侵入は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２メカニズムによって媒介され、その有効性は、標的細胞におけるレポーター（ＧＦＰ又はルシフェラーゼ）の発現によって測定される（Ｏｕ， Ｘ．， Ｌｉｕ， Ｙ．， Ｌｅｉ， Ｘ． ｅｔ ａｌ． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｉｋｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｏｎ ｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｍｕｎｅ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ １１， １６２０， ２０２０）。ＡＡＴは、ＧＦＰシグナル及び／又はルシフェラーゼシグナルを読み取ることによってウイルス侵入の阻害を定量化するために添加される。
膜貫通型セリンプロテアーゼ ＴＭＰＲＳＳ２ は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染（Ｔｏｓｈｉｏ Ｈｉｒａｎｏ， Ｍａｓａａｋｉ Ｍｕｒａｋａｍｉ ＣＯＶＩＤ－１９：Ａ Ｎｅｗ Ｖｉｒｕｓ， ｂｕｔ ａ Ｆａｍｉｌｉａｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２２ Ａｐｒｉｌ ２０２０）及びＣ型肝炎感染（Ｅｓｕｍｉ Ｍ， Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ Ｍ， Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｈ， Ｎａｋａｊｉｍａ Ｓ， Ｔａｉ Ｙ， Ｋｉｋｕｔａ Ｓ， Ｓｕｇｉｔａｎｉ Ｍ， Ｔａｋａｙａｍａ Ｔ， Ｔａｈａｒａ Ｍ， Ｔａｋｅｄａ Ｍ， ＷａｋｉｔａＴ－ Ｔｒａｎｓ－ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ＴＭＰＲＳＳ２ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ． ２０１５ Ｆｅｂ； ６１（２）：４３７－４６）に不可欠である。Ｃ型肝炎感染はＡＡＴ（おそらくＴＭＰＲＳＳ２阻害を介して － Ｅｓｕｍｉ ｅｔ ａｌ．， ２０２０）でブロックされ得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（及び一部の高病原性インフルエンザウイルス）は、プロテアーゼフーリンによる切断を可能にする配列を有する。この切断部位はＳＡＲＳコロナウイルス及びＭＥＲＳコロナウイルスには存在せず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の病原性にとって重要であることを示唆している（Ｂ． Ｃｏｕｔａｒｄ， Ｃ． Ｖａｌｌｅ， Ｘ． ｄｅ Ｌａｍｂａｌｌｅｒｉｅ， Ｂ． Ｃａｎａｒｄ， Ｎ．Ｇ． Ｓｅｉｄａｈ， Ｅ． Ｄｅｃｒｏｌｙ， Ｔｈｅ ｓｐｉｋｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｗ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ２０１９－ｎＣｏＶ ｃｏｎｔａｉｎｓ ａ ｆｕｒｉｎ－ｌｉｋｅ ｃｌｅａｖａｇｅ ｓｉｔｅ ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ＣｏＶ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｌａｄｅ， Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ １７６， ２０２０）。α１－アンチトリプシンポートランドは、フーリンに対して強力かつ選択的な活性を有する（Ｊｅａｎ Ｆ， Ｓｔｅｌｌａ Ｋ， Ｔｈｏｍａｓ Ｌ， ｅｔ ａｌ． ａｌｐｈａ１－Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ Ｐｏｒｔｌａｎｄ， ａ ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｓｅｒｐｉｎ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｆｏｒ ｆｕｒｉｎ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｓ ａｎ ａｎｔｉｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｇｅｎｔ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １９９８；９５（１３）：７２９３－７２９８． ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．９５．１３．７２９３）。したがって、野生型ＡＡＴ（血漿由来）並びに組換え体（哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞及び／又はＨＥＫ細胞で産生される）はフーリン活性を示すと考えられる。
実験
１．１． 組換えスパイクタンパク質の細胞切断に対するＡＡＴの影響
組換えスパイクタンパク質を、関連する細胞型（当技術分野で公知の任意のＡＣＥ２発現細胞）に添加し、ウエスタンブロッティングによってタンパク質分解切断を評価する。任意のＡＣＥ２発現細胞株を使用可能である。複数の標的細胞株は、様々な量のＡＣＥ２受容体を発現する。Ｃａｌｕ－３、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＨＥＫ、ＨＴ１０８０、Ａ５４９、ＭＲＣ５、Ｈｕｈ７、Ｖｅｒｏ８１、ＶｅｒｏＥ６、ＨｅＬａ、ＲＳ、及びＬＬＣＭＫ２が挙げられるが、これらに限定されない
１．２．偽型ウイルスの侵入に対するＡＡＴの影響
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をウイルス付着／融合タンパク質として使用する偽型ウイルス（すなわち、偽型化したウイルスベクター）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞へのメカニズムを正しく表現する。この侵入は、プロテアーゼ阻害剤ＡＡＴによって阻害される２つのタンパク質分解ステップに依存している。したがって、種々の異なる細胞株、好ましくはＡＣＥ２発現細胞株における偽型ウイルスの侵入を検討する。
１．３．活性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による細胞感染に対するＡＡＴの影響（生ウイルス試験）：
ＡＡＴを、スイス連邦政府保健庁（ＯＦＳＰ）の推奨に従って、バイオセキュリティレベル３で操作された生ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスで試験する。ウイルスは、ＡＡＴ又はその任意の断片、バリアント、及びアイソフォームで処理された細胞にインビトロで接種され、細胞毒性及びウイルス力価の低下を含む効率を評価するために複数のパラメーターが測定される。より具体的には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による細胞感染は、ウイルスタンパク質による免疫蛍光法及び細胞死の定量化によって評価される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は神経組織に感染する（Ｈｅｌｍｓ Ｊ， Ｋｒｅｍｅｒ Ｓ， Ｍｅｒｄｊｉ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ Ｆｅａｔｕｒｅｓ ｉｎ Ｓｅｖｅｒｅ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ［ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ， ２０２０ Ａｐｒ １５］． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． ２０２０； Ｐｌｅａｓｕｒｅ ＳＪ， Ｇｒｅｅｎ ＡＪ， Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ＳＡ． Ｔｈｅ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ２ Ｐａｎｄｅｍｉｃ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ： Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｓｔｓ Ｍｏｖｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｆｒｏｎｔｌｉｎｅｓ． ＪＡＭＡ Ｎｅｕｒｏｌ． Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ Ａｐｒｉｌ １０， ２０２０）ことから、神経組織（例えば、Ｍｉｎｉｂｒａｉｎ（商標））及び神経芽細胞腫細胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）の感染は、ＡＡＴを用いた併用治療として実施され、ウイルスの細胞毒性又は向性を改変すると予想される。
実施例２―「サイトカインストーム」としても知られる重度のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疾患におけるオーバーシュート炎症（Ｆｕ Ｙ， Ｃｈｅｎｇ Ｙ， Ｗｕ Ｙ． Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔｏｏｌｓ ［ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ， ２０２０ Ｍａｒ ３］． Ｖｉｒｏｌ Ｓｉｎ． ２０２０；１－６． ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２２５０－０２０－００２０７－４）：
Figure 2023523652000004
実験
２．１．ＡＤＡＭ１７（ＴＡＣＥ）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２活性化：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２病理のＡＤＡＭ１７活性化部分（例えば、Ｖａｎｅｓａ Ｐａｌａｕ， Ｍａｒｔａ Ｒｉｅｒａ， Ｍａｒｉａ Ｊｏｓｅ Ｓｏｌｅｒ， ＡＤＡＭ１７ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｍａｙ ｅｘｅｒｔ ａ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ＣＯＶＩＤ－１９， Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ， ｇｆａａ０９３， ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｎｄｔ／ｇｆａａ０９３； ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌａｆｆａｉｒｓ．ｕｍｎ．ｅｄｕ／ｕｍｎ－ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ－ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ａｃｅ２－ａｄａｍ１７； Ｈａｇａ Ｓ， Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｎ， Ｎａｋａｉ－Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｂｙ ｔｈｅ ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ ａｎｄ ＡＣＥ２ ｉｎｄｕｃｅｓ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｖｉｒａｌ ｅｎｔｒｙ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． ２００８；１０５（２２）：７８０９－７８１４． ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．０７１１２４１１０５を参照）。ＡＡＴはＡＤＡＭ１７を阻害する（例えば、Ｂｅｒｇｉｎ ＤＡ， Ｒｅｅｖｅｓ ＥＰ， Ｍｅｌｅａｄｙ Ｐ， ｅｔ ａｌ． α－１ Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｕｍａｎ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｓｏｌｕｂｌｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ａｎｄ ＩＬ－８． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２０１０；１２０（１２）：４２３６－４２５０． ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ４１１９６； Ｓｅｒｂａｎ ＫＡ， Ｐｅｔｒｕｓｃａ ＤＮ， Ｍｉｋｏｓｚ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ａｌｐｈａ－１ ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｅｆｆｅｒｏｃｙｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ ｅｘｐｏｓｕｒｅ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． ２０１７；１２（４）：ｅ０１７６０７３． Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１７ Ａｐｒ ２７． ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１７６０７３を参照）。
細胞を曝露した後のＡＤＡＭ１７活性化及びタンパク質排出（特にＡＣＥ２）に対するＡＡＴの影響を検討する（図２３ａ）：
ｉ）スパイクタンパク質
ｉｉ）偽型ウイルス
ｉｉｉ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（生ウイルス）。
使用される最も関連性の高い細胞は、任意のＡＣＥ２発現細胞である（上記のとおり）。
２．２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２／ＩｇＧ免疫複合体によるＦｃ受容体の活性化（抗体依存性増強、例えば、Ｆ． Ｎｅｇｒｏ， Ｓｗｉｓｓ Ｍｅｄ Ｗｋｌｙ． ２０２０；１５０：ｗ２０２４９ “Ｉｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ＣＯＶＩＤ－１９ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ？”を参照）。トリプシン様プロテアーゼによるタンパク質分解は、ＴＮＦ放出の誘導など、単球のＦｃγＲＪＩを介した機能を強化する（Ｊ Ｍ Ｄｅｂｅｔｓ， Ｊ Ｇ Ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｊ Ｌ Ｃｅｕｐｐｅｎｓ， Ｉ Ｅ Ｄｉｅｔｅｒｅｎ， Ｗ Ａ Ｂｕｕｒｍａｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｆｅｂｒｕａｒｙ １５， １９９０， １４４ （４） １３０４－１３１０）。
スパイクタンパク質／ＩｇＧ免疫複合体による単球／マクロファージの活性化に対するＡＡＴの影響を検討する（図２３ｂ）。
実施例３―ウイルス増殖の減少におけるＡＡＴの有効性を裏付ける追加の実験
３．ウイルスポリメラーゼアッセイ
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスポリメラーゼは、ウイルスの遺伝物質の複製における重要な要素である。マルチサブユニットウイルスポリメラーゼ（少なくとも３つのコアサブユニットＮＳＰ７、ＮＳＰ８、及びＮＳＰ１２で構成される）を発現する細胞株をトランスフェクトして、ウイルスポリメラーゼ活性によってのみ活性化できるルシフェラーゼレポーターも過剰発現させる。
ルシフェラーゼレポーターシグナルは、ウイルスのポリメラーゼ活性に比例する。ＡＡＴを、ウイルスのポリメラーゼ阻害活性を評価するために試験する。
宿主細胞に侵入すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は宿主細胞機構を使用して自身の複製を強化する。これは、本質的にＮＳＰ１ウイルスタンパク質によって媒介される、宿主細胞に対する毒性反応を誘発する。
この生物学的事象を模倣するために、テトラサイクリン誘導性プロモーターによって制御されるウイルスＮＳＰ１タンパク質を発現する細胞株が生成される。細胞をテトラサイクリンで処理すると、毒性のあるＮＳＰ１タンパク質が発現される。ＡＡＴの添加は、ウイルスタンパク質によって媒介されるこの毒性効果を阻害すると推定される。
実験４
序論
新たに出現したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルスによって引き起こされた最近のパンデミックは、世界を驚愕させた。ＳＡＲＳ及びＭＥＲＳなどの以前のコロナウイルスの発生とは対照的に、この新しいウイルスは、特に高い致死率ではなく、前例のない疫学的達成によって特徴付けられる。実際、世界中の多くの国で厳格な対策が講じられているにもかかわらず、前記ウイルスはこれまで根絶のあらゆる試みにほとんど抵抗してきた。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２はＲＮＡウイルスであるが、コロナウイルスはいくつかの点で他のＲＮＡウイルスとは異なる。それらは、まだ充分に理解されていない大きなゲノム及び高度なライフサイクルを有する。また、コロナウイルスには、他のタイプのＲＮＡウイルスと比較して、比較的安定したゲノムを付与するプルーフリーディング（校正）機構がある。実際、パンデミックの規模を考えると、これまでのところ、アミノ酸の変化につながる変異は比較的少数しか報告されていない。
スパイクとしても知られるコロナウイルスＳタンパク質は、ウイルスエンベロープの主要なタンパク質である。これは、宿主細胞表面受容体へのウイルスの付着及びその後のウイルス膜と宿主細胞膜との融合を媒介して、宿主細胞へのウイルスの侵入を促進する。これは、２つの主要なサブユニット、すなわちＳ１及びＳ２に分割された準安定な融合前コンフォメーションで存在する三量体のクラスＩ融合タンパク質である。宿主細胞表面受容体に結合するために、Ｓ１ドメイン内に含まれる受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）はヒンジ様のコンフォメーション変化を起こし、２つの異なる状態を定義する［１］。このコンフォメーション変化は、タンパク質分解プロセシング及び／又は宿主細胞膜とのＳ２ドメインの融合に必要である。現在、プロテアーゼのＰＣファミリー、トリプシン様プロテアーゼ、及びカテプシンを含む様々なプロテアーゼがスパイクタンパク質を切断できると考えられている［２］。
スパイクタンパク質Ｄ６１４Ｇ変異は、ウイルスの付着、融合性、及び／又は免疫原性を潜在的に変化させる可能性があるため、注目されている。Ｄ６１４Ｇ変異は、感染性（参照）、伝染性［３］、及び／又は致死率を増加させることが示唆されている［４］。最近の研究では、Ｇ６１４バリアントが実際に細胞へのウイルスの侵入を促進することが直接実証されている［５及び６］。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、マルチサブユニットの複製／転写機構を採用している［７］。ＯＲＦ１ａウイルスポリタンパク質及びＯＲＦ１ｂウイルスポリタンパク質の切断産物として生成される一連の非構造タンパク質（ｎｓｐ）が集合してウイルスの複製及び転写を促進するため、この機構はＣＯＶＩＤ－１９ウイルス感染に対する治療的介入の潜在的な標的となる［８］。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ、ｎｓｐ１２としても公知）は、ウイルスＲＮＡの合成における重要な役割を果たす。最近解明されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｎｓｐ１２の結晶構造は、そのｎｓｐ７補因子及びｎｓｐ８補因子と複合体を形成しており、これらの非構造タンパク質がＣＯＶＩＤ－１９ウイルスの複製及び転写サイクルにおいて中心的な役割を果たしていることが強調されている［８及び９］。ＲｄＲｐのＰ３１４Ｌ変異はあまり注目されていないが、この変異がウイルスのプルーフリーディングを変化させ、それによって下流の変異率の増加につながる可能性があることが示唆されている［１０］。
本研究では、Ｓタンパク質及びＲｄＲポリメラーゼにおいて付随する変異を伴うＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの出現を調べる。両方の変異は、それぞれのタンパク質の戦略的に関連する部位にあるため、ウイルスの生態を変化させる候補である。Ｇ６２４／Ｌ３２３バリアントは、個々のＧ６２４又はＬ３２３変異体ではなく、疫学的に非常に成功しており、過去数か月で元のＤ６２４／Ｐ３２３ バリアントの大部分が置換された。
方法：
細胞株及び培養
本研究で使用したヒト細胞株は、ＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞（ヒト腎臓、ＡＴＣ Ｃ＃ＣＲＬ－１１２６８）、Ａ５４９細胞、ＨｅＬａ細胞、及びＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞であった。主要組織適合遺伝子複合体ＩＩプロモーター（ＭＨＣＩＩ）の下でルシフェラーゼレポーターをコード化するＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞株は、ヒトミクログリアの活性化を研究するための貴重なツールとして記載されており、ジュネーヴ大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｖａ）のＫａｒｌ－Ｈｅｉｎｚ Ｋｒａｕｓｅ教授から入手した。ＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞をレンチウイルスベクターで形質導入して、ＡＡＴ産生ＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ；ＵｂｉＡＡＴ細胞株を得た（レンチウイルス産生を参照）。細胞は、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００μｇ／ｍＬのペニシリン及びストレプトマイシン、２ｍＭのｌ－グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、及び１％非必須アミノ酸を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で維持した。ＨＭＣ３細胞株には、非必須アミノ酸を添加しなかった。培養物を、５％ＣＯ２雰囲気で３７℃に維持した。
スパイク融合アッセイ
処理の適切な濃度は、培養培地で事前に希釈した。この混合物上に、ヒトＡＣＥ２受容体とＳｍａｌｌ ＢｉＴ（ＳｍＢｉＴ）スプリットルシフェラーゼ断片とを安定的に過剰発現するＨｅＬａ細胞株を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質とＬａｒｇｅ ＢｉＴ（ＬｇＢｉＴ）スプリットルシフェラーゼ断片とを安定的に過剰発現するＨｅＬａ細胞株と共に加えて、２７℃で２４時間培養した。ＡＣＥ２及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク間の相互作用は、両方の細胞株の融合を媒介し、それにより機能性ルシフェラーゼに至るＬｇＢｉＴ及びＳｍＢｉＴのスプリットルシフェラーゼ断片間の相互作用を媒介する。発光は、Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用して製造元の指示に従って測定した。
ＡＣＥ２及びＴＭＰＲＳＳ２を発現する細胞株の生成。
ＨｅＬａ細胞及びＡ５４９細胞を、１２ウェルプレートにウェルあたり２Ｅ０５細胞の密度で播種した。細胞をＡＣＥ２／ピューロマイシン及び／又はＴＭＰＲＳＳ２／ブラストサイジンレンチウイルスのいずれかで共形質導入した翌日。形質導入の４日後、５μｇ／ｍＬでブラストサイジン及びピューロマイシンを用いて細胞を選択した。細胞はポリクローナル集団として維持された。
プラスミド
ＡＣＥ２及びＴＭＰＲＳＳ２のｃＤＮＡのＯＲＦをＧｅｎＳｒｉｐｔ社から購入し、標準的なクローニング方法を使用して、ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ－ＥＦ１α－Ｐｕｒｏ（配列番号１３）レンチベクター及びｐＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ－ＥＦ１α－Ｂｌａｓｔ（配列番号１４）レンチベクターにそれぞれクローニングした。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－Ｓｐｉｋｅタンパク質をコード化するｐＣＧ１＿ＳＣｏＶ２－Ｓプラスミド（配列番号１５）は、Ｓｔｅｆａｎ Ｐｏｈｌｍａｎｎ教授（ゲッティンゲン大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ）、ゲッティンゲン、ドイツ）から提供された。Ｇ６１４スパイクを、部位特異的突然変異誘発を使用して、以下のプライマーでクローニングした：５’－ＧＣＧＴＧＡＡＣＴＧＴＡＣＣＧＡＡＧＴＧ－３’（配列番号１６）及び５’－ＣＣＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＣＴＧＣＣ－３’（配列番号１７）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＳｐｉｋｅのＣ末端１９アミノ酸切断バージョンは、５’－ＡＧＣＧＡＡＴＴＣＧＧＡＴＣＣＧＣＣ－３’（配列番号１８）及び５’－ＡＣＡＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１９）のプライマーを使用したＰＣＲ増幅によって生成し、ｐＣＧ１プラスミドへクローニングした。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞で産生されたＡＡＴの精製
ヒトＡＡＴ－Ｈｉｓタグ付きタンパク質を過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞からの上清をサンプリングし、Ｎｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｅｘｃｅｌヒスチジンタグ付きタンパク質精製樹脂（Ｃｙｔｉｖａ社）と共に振盪しながら４℃で一晩インキュベートした。上清：樹脂の体積比は２００：１である。その後、上清を廃棄し、ビーズをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１回洗浄した。ビーズを、１０％（ｖ／ｖ）溶出緩衝液を添加したＰＢＳ（５００ｍＭイミダゾールを補充したＰＢＳ、ｐＨ７．５）で１回、２０％溶出緩衝液を添加したＰＢＳで１回洗浄した。そして精製されたＡＡＴ－Ｈｉｓタグ付きタンパク質を、１００％溶出緩衝液で溶出した。イミダゾールを透析により除去して、ＰＢＳ緩衝液中にＡＡＴ－Ｈｉｓを得た。
レンチウイルス産生
組換えレンチウイルス産生のために、プラスミドをリン酸カルシウム法を用いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。簡潔には、４．５×１０６細胞１０ｃｍディッシュに播種し、１６時間後に１５μｇのＡＣＥ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＡＡＴ、又は空の発現レンチウイルスベクターのいずれか、１０μｇのパッケージングプラスミド（Ｄｉｄｉｅｒ Ｔｒｏｎｏ氏から供与されたｐｓＰＡＸ２［Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド１２２６０］）、及び５μｇのエンベロープ（Ｄｉｄｉｅｒ Ｔｒｏｎｏ氏から供与されたｐＭＤ２Ｇ［Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド１２２５９］）を用いてトランスフェクトした。トランスフェクションの８時間後に培地を交換した。４８時間後、ウイルス上清を回収し、４５μｍのＰＶＤＦフィルターを使用してろ過し、－８０℃で保存した。
コロナウイルススパイク偽型レンチウイルス産生
スパイク偽型レンチウイルスは、上記のリン酸カルシウム法を使用して、２９３Ｔ細胞と、ｐｓＰＡＸ２、ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｇｌｕｃ－ＥＦ１α－ＧＦＰ、並びにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＤ６１４全長（ＦＬ）（配列番号１５）、スパイクＧ６１４全長（ＦＬ）（配列番号２０）、スパイクＤ６１４ＤｅｌｔａＣｔｅｒ（配列番号２１）、スパイクＧ６１４ＤｅｌｔａＣｔｅｒ（配列番号２２）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｕｒｏｐｅ ＧｍｂＨ社、カタログ番号ＶＧ４０１５０－Ｇ－Ｎ）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｕｒｏｐｅ ＧｍｂＨ社、カタログ番号ＶＧ４００６９－Ｇ－Ｎ）、又は空のベクター（配列番号２３）のいずれかをコード化するプラスミドとの同時トランスフェクションによって産生した。
コロナウイルススパイク偽型レンチウイルス感染性アッセイ
ヒトＡＣＥ２受容体を安定して過剰発現するＨｅＬａ細胞、ヒトＡＣＥ２受容体を安定して過剰発現するＡ５４９細胞、又はＣａｃｏ２細胞を９６ウェルプレートに播種した。プレーティングの３時間後、化合物処理を行うか、実験の設定に応じて省略した。２４時間後、細胞にコロナウイルス偽型ウイルスを６時間形質導入した。その後、培地を交換し、細胞を３７℃に維持した。３日間のインキュベーション後、ガウシア（Ｇａｕｓｓｉａ）ルシフェラーゼ活性は、１０μＬの細胞上清を４μＭセレンテラジンを添加した５０μＬのリン酸緩衝生理食塩水［ＰＢＳ］に添加し、直ちにルミノメーター（Ｇｌｏｍａｘ、Ｐｒｏｍｅｇａ社）で発光を測定することによって測定した。並行して、細胞をトリプシン処理し、１０％ＦＢＳを添加したＰＢＳに再懸濁し、Ａｔｔｕｎｅ（商標）ＮｘＴ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用してフローサイトメトリーで分析した。ＦｌｏｗＪｏ １１（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ社、オレゴン州アシュランド）を使用してデータを分析した。
無細胞アッセイ（スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ阻害）
反応は、トリプシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）に対して１００μＬ、カテプシンＢ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）に対して７５μＬ、並びにＰＣ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）、マトリプターゼ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）、フーリン（ＮＥＢ社）、カテプシンＬ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）、及びＴＭＰＲＳＳ２（Ｃｒｅａｔｉｖｅ ＢｉｏＭａｒｔ社）に対して５０μＬで行った。緩衝液は、トリプシンの場合はＰＢＳ（ｐＨ７．４）（６．４ｎＭに希釈）、カテプシンＢの場合は２５ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ５）（１．７６ｎｇ／μＬに希釈）、ＰＣ１の場合は２５ｍＭのＭＥＳ、５ｍＭ塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、及び１％Ｂｒｉｊ－３５（ｐＨ６）（１．７６ｎｇ／μＬに希釈）、マトリプターゼの場合は５０ｍＭトリス、５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、及び０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ９）（１．７６ｎｇ／μＬに希釈）、フーリンの場合は１００ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭ塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ×１００、及び１ｍＭの２－メルカプトエタノール（ｐＨ７．５）（１０Ｕ／ｍＬに希釈）、カテプシンＬの場合は０．００５％Ｂｒｉｊ－３５、１ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＤＴＴ、及び５０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ６）（１．７６ｎｇ／μＬに希釈）、ＴＭＰＲＳＳ２の場合は５０ｍＭのトリスＨＣｌ、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、及び０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ８）（０．５μＭに希釈）から構成される。特に明記しない限り、全ての試薬はＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から提供された。トリプシン、カテプシンＢ、ＰＣ１、マトリプターゼ、フーリン、及びカテプシンＬアッセイでは、修飾ＭＣＡ／Ｌｙｓ（ＤＮＰ）ＦＲＥＴ対（Ｂｉｏｍａｔｉｋ社）を有するＴＮＳＰＲＲＡＲＳＶＡ配列で構成されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチドを使用した。ＴＭＰＲＳＳ２アッセイでは、Ｂｏｃ－ＱＡＲ－ＡＭＣ配列（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）から構成されるペプチドを使用した。ブタ膵臓由来エラスターゼＥＬＡ１には、アッセイキット（Ｅ－１２０５６）は分子プローブをＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、好中球エラスターゼＥＬＡ２には、アッセイキット（ＢＭＬ－ＡＫ４９７）はＥｎｚｏ社から購入し、製造元の指示に従って試験を実施した。蛍光又は吸光度をプレートリーダーで４５分間毎分測定した。Ｖｍａｘは各条件について１分当たりの蛍光単位として決定され、酵素活性は未処理条件の百分率（％）で表される。
遺伝子発現解析
製造元の指示に従って、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を使用して全ＲＮＡを単離した。各試料からの５００ｎｇの全ＲＮＡを、ＴａＫａＲａ社のＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）キットを使用して、総量１０μＬで３７℃で１５分間逆転写した。相対ｍＲＮＡレベルは、２ΔＣｔ法によるＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用した定量的ＲＴ－ｑＰＣＲによって評価した。内部対照としてＧＡＰＤＨを使用した。
遺伝子コピー数推定
コピー数については、制限酵素消化を使用して各特定のプラスミドの線形化を実施した。製造業者の指示に従って、ＰＣＲクリーンアップキット（ＧｅｎｅＪＥＴ社）を使用して、消化産物を洗浄した。次に、光学密度を測定し、コピー数を決定した。消化されたプラスミドからの１／１０連続希釈をｑＰＣＲに使用した。
フーリン、カテプシンＬ、マトリプターゼ（ｓｔｌ４）、トリプシン（ＰＲＳＳ１）、ＰＣ１（ＰＣＳＫ１）のプラスミドはＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から提供され、カテプシンＢのプラスミドはＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社から提供された。
Figure 2023523652000005
結果：Ｓタンパク質Ｄ６１４Ｇ変異が偽型レンチベクターによる細胞形質導入に与える影響
本発明者らの目的は、ウイルス受容体ＡＣＥ２を一貫して発現する細胞株と、スパイクタンパク質を切断できる関連プロテアーゼとを確立することであった。図３Ａ及び図３Ｂに見られるように、ＨｅＬａ細胞もＡ５４９細胞も相当量のＡＣＥ２ ｍＲＮＡを発現しなかった。同様に、ＴＭＰＲＳＳ２のｍＲＮＡレベルはほとんど検出されなかった。両方の細胞型は、フーリンの低～中程度の遺伝子発現を示すが、カテプシンＬ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２両方からスパイクタンパク質を切断できるプロテアーゼ）の比較的高レベルの遺伝子発現を示している。したがって、スパイクタンパク質偽型レンチベクターを許容する細胞株を確立するために、ＨｅＬａ細胞及びＡ５４９細胞の両方を個別に、又はＡＣＥ２（配列番号２４）及びＴＭＰＲＳＳ２（配列番号２５）と組み合わせて形質導入した。
予想どおり、野生型（模擬形質導入）ＨｅＬａ細胞又はＡ５４９細胞を上記のレンチベクターに曝露しても、ＧＦＰ又はルシフェラーゼの発現には至らなかった（図３ｃ～図３ｆ）。同様に、ＴＭＰＲＳＳ２自体の過剰発現は有意な形質導入率には至らなかった。上記Ｄ６１４偽型レンチベクターを使用すると、ＡＣＥ２及びＡＣＥ２／ＴＭＰＲＳＳ２を発現するＨｅＬａ細胞のわずかではあるが明らかに検出可能な形質導入があったが、Ａ５４９細胞の形質導入は非常にわずかであった。これは、Ｇ６１４偽型ベクターが使用された場合に著しく変化した。両方のＡＣＥ２発現系統で、はるかに強い形質導入があった。但し、ＡＣＥ２発現ＨｅＬａ細胞の形質導入は、ＡＣＥ２発現Ａ５４９細胞の形質導入よりもはるかに強力であった。一方、ＡＣＥ２に加えてＴＭＲＰＳＳ２の過剰発現は、ＨｅＬａ細胞には当てはまらない形質導入の強力なさらなる増強に至る。したがって、ほとんどの場合、ＨｅＬａ細胞は既にスパイク切断プロテアーゼを強く発現しており、効率的な形質導入にはＴＭＲＰＳＳ２の過剰発現は必要ない。対照的に、Ａ５４９細胞では、タンパク質分解による切断が律速段階であるように思われるため、ＴＭＲＰＳＳ２の過剰発現は形質導入を促進する。
検討（ウイルス感染に対するＨｅＬａ細胞株及びＡ５４９細胞株の感受性）
ある細胞株（ＨｅＬａ、子宮頸部、女性、アフリカ系アメリカ人由来）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽型ウイルス感染に対する感受性の増加は、別の細胞株（Ａ５４９、肺、男性、白人由来）と比較して特に興味深い観察結果であり、それは、患者集団の特徴付けが、ＣＯＶＩＤ－１９と診断された患者又は予防目的で患者に最大の影響を与えるように調整された治療戦略を決定するための鍵であるという概念の根底にある。人種自体は、考慮すべき二次的な役割を呈する可能性があるが、例えば、低内因性ＡＡＴ又は高レベルの慢性炎症（より高いＩＦＮ－γ及び／又はカテプシンＬ）のいずれかに対する遺伝的素因は、活性治療物質（ＡＡＴ）のより高い用量及び／又はより定期的な投与を必要とする。
実験４
異なる細胞株におけるＡＣＥ２及びＴＭＰＲＳＳ２遺伝子発現の内因性レベルを検出することを目的とした。
方法：ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を使用して、Ｃａｌｕ３、ＣａＣｏ２、ＶｅｒｏＥ６、ＨｅｐＧ２、Ａ５４９、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＨＥＫ２９３－１１７Ｔ、及びＨｅＬａの細胞株から全ＲＮＡを抽出した。ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（ＴａＫａＲａ社）を使用して、全ＲＮＡから相補的ＤＮＡを合成した。ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用して、ｃＤＮＡのリアルタイムＰＣＲ測定を行い、コントロールのハウスキーピング遺伝子としてＧＡＰＤＨの発現に対して正規化した。プライマーを以下に挙げる：
ＡＣＥ２フォワード：ｃａｔｔｇｇａｇｃａａｇｔｇｔｔｇｇａｔｃｔｔ（配列番号２６）
ＡＣＥ２リバース：ｇａｇｃｔａａｔｇｃａｔｇｃｃａｔｔｃｔｃａ（配列番号２７）
ＴＭＰＲＳＳ２フォワード：ｃａｃｇｇａｃｔｇｇａｔｔｔａｔｃｇａｃａａ（配列番号２８）
ＴＭＰＲＳＳ２リバース：ｃｇｔｃａａｇｇａｃｇａａｇａｃｃａｔｇｔ（配列番号２９）
ＧＡＰＤＨフォワード：ｇｃａｃａａｇａｇｇａａｇａｇａｇａｇａｃｃ（配列番号３０）
ＧＡＰＤＨリバース：ａｇｇｇｇａｇａｔｔｃａｇｔｇｔｇｇｔｇ（配列番号３１）
結果を図３に示す。
実験５
インターフェロンγ治療がＡ５４９細胞株でＡＣＥ２発現を誘導するかどうかを判断することを目的とした。
プロトコル：Ａ５４９細胞を１２ウェルプレートに播種し、インターフェロンγの添加を細胞分裂の２４時間後に行った。処理を４８時間続け、前述のようにＲＮＡ抽出、逆転写酵素反応、及びｑＰＣＲを実行した（実験４の方法セクションを参照）。
結果を図４に示す。
実験６
インターフェロンγ治療が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２融合タンパク質を発現するＨｅＬａ細胞でＡＣＥ２発現を誘導するかどうかを判断することを目的とした。
プロトコル：ＨｅＬａスパイク細胞を１２ウェルプレートに播種し、インターフェロンγの添加を細胞分裂の２４時間後に行った。処理を４８時間続け、前述のようにＲＮＡ抽出、逆転写酵素反応、及びｑＰＣＲを実行した（実験４の方法セクションを参照）。
結果を図５に示す。
実験７：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス侵入アッセイ
結果を図７及び図８に示す。ルシフェラーゼレポーターをコード化する、Ｄ６１４Ｇ変異を含む表面タンパク質ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクを発現する偽型レンチベクターでアッセイを行った（図７及び図８）。
ＡＣＥ２受容体（図７）又はＡＣＥ２及びＴＭＰＲＳＳ２の両方（図８）を構成的に過剰発現するＡ５４９細胞に偽型レンチベクターを添加する。化合物処理は、偽型レンチベクターの添加の２４時間前（パネルＡ及びパネルＢ）又は１時間前（パネルＣ及びパネルＤ）に行う。偽型ウイルスアッセイプロトコルに関する詳細な概略情報は、図９及び図１０に記載されている。
実施例４
ＡＣＥ２を過剰発現するＡ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞（図１１及び図２２）又はＣａｃｏ２ヒト結腸直腸腺癌（図２１）を用いたウイルス侵入阻害試験を、複数の供給源からのＡＡＴ（図１１ａ、図１１ｂ、図２１ａ、図２１ｂ、図２２ａ、及び図２２ｂ）又は阻害剤化合物（図１１ｃ、図２１ｃ、及び図２２ｃ）で２４時間処理した。次に、ルシフェラーゼレポーターをコード化し、Ｄ６１４Ｇ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質（図１１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質（図２２）、又はＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質（図２１）を発現するレンチベクターを６時間かけて添加した。そして、培地を交換し、細胞を測定前にさらに３日間インキュベートした。ウイルス侵入は、レンチウイルス媒介ルシフェラーゼシグナル（図１１、図２１、及び図２２の濃い灰色）によって測定し、薄い灰色で表示されたＷＳＴ８細胞の生存率で正規化した。全ての条件について、ＤＭＳＯ／ＰＢＳの濃度を正規化した（緩衝液）。全ての条件は３連で行われ、エラーバーは標準偏差を表す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例５
ＡＣＥ２を過剰発現するＨｅＬａヒト子宮頸癌を用いたウイルス侵入阻害試験を、複数の供給源からのＡＡＴ（図１２ａ及び図１２ｂ）又は阻害剤化合物（図１２ｃ）で２４時間処理した。次に、ルシフェラーゼレポーターをコード化し、Ｄ６１４Ｇ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するレンチベクターを６時間かけて添加した。そして、培地を交換し、細胞を測定前にさらに３日間インキュベートした。ウイルス侵入は、レンチウイルス媒介ルシフェラーゼシグナル（濃い灰色）によって測定し、薄い灰色で表示されたＷＳＴ８細胞の生存率で正規化した。全ての条件について、ＤＭＳＯ／ＰＢＳの濃度を正規化した（緩衝液）。全ての条件は３連で行われ、エラーバーは標準偏差を表す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例６
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク融合アッセイ試験の原理を図１３に示す。ＡＣＥ２及びＳｍａｌｌ ＢｉＴ（ＳｍＢｉＴ）ルシフェラーゼ、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク及びＬａｒｇｅ ＢｉＴ（ＬｇＢｉＴ）ルシフェラーゼのいずれかを過剰発現するＨｅＬａヒト子宮頸癌細胞を、適切な濃度の処理と同数で混合した。２４時間後、細胞融合をルシフェラーゼレポーターシグナルの量によって測定した。ルシフェラーゼシグナルは、対照緩衝液の機能で観察される。血清は１／１６の最終濃度で希釈した。全ての条件について、Ｓｅｒａ／ＰＢＳの濃度を正規化した（緩衝液）。全ての条件は３連で行われ、エラーバーは標準偏差を表す（図１４）。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例７
Ａ５４９細胞におけるプロテアーゼの遺伝子コピー数を決定するために、定量的ＰＣＲ分析を行った。コピー数は、対照として各遺伝子の線形プラスミドを使用して計算した（図１５ａ）。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例８
Ａ５４９細胞におけるプロテアーゼＡＣＥ２（図１５ｂ）及びＴＭＰＲＳＳ２（図１５ｃ）の相対的遺伝子発現を決定するために、定量的ＰＣＲ分析を実施した。Ｃａｌｕ３細胞株及びＣａｃｏ２細胞株は、それぞれＡＣＥ２発現及びＴＭＰＲＳＳ２発現の参照として使用した。Ｇａｐｄｈ遺伝子を使用して正規化した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例９
５０μＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド、１．７６ｎｇ／μＬのカテプシンＢ組換えタンパク質、及び１μＭのＡＡＴを共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３３０ｎｍで励起、３９０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ａ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１０
５０μＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド、１．７６ｎｇ／μＬのカテプシンＬ組換えタンパク質、及び１０μＭのＡＡＴを共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３３０ｎｍで励起、３９０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｂ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１１
５０μＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド、６．４ｎＭのトリプシン組換えタンパク質、及び２つの濃度のＡＡＴ（０．１μＭ及び１μＭ）を共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３３０ｎｍで励起、３９０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｃ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１２
５０μＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド、１０Ｕ／ｍＬのフーリン組換えタンパク質、及び１μＭのＡＡＴを共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３３０ｎｍで励起、３９０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｄ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１３
５０μＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド、１．７６ｎｇ／μＬのＰＣＩ組換えタンパク質、及びいくつかの濃度のＡＡＴ（１μＭ、１０μＭ、４０μＭ、及び１００μＭ）を共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３３０ｎｍで励起、３９０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｅ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１４
５０μＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド、１．７６ｎｇ／μＬのマトリプターゼ組換えタンパク質、及びいくつかの濃度のＡＡＴ（１μＭ、１０μＭ、４０μＭ、及び１００μＭ）を共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３３０ｎｍで励起、３９０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｆ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１５
ＡＡＴはＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼ活性を阻害する。３０μＭのＢｏｃ－ＱＡＲ－ＡＭＣペプチド、０．５μＭのＴＭＰＲＳＳ２組換えタンパク質、及び５μＭのＡＡＴを共に４５分間インキュベートした。蛍光をＵＶ分光光度計（３８０ｎｍで励起、４６０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｇ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１６
２５μｇ／ｍＬのＤＱ（商標）エラスチン基質、０．２５Ｕ／ｍＬのブタ膵臓由来エラスターゼ（ＥＬＡ１）、及びいくつかの濃度のＡＡＴ（１０ｎＭ、５０ｎＭ、及び１００ｎＭ）を共に４５分間インキュベートした。蛍光を蛍光リーダー（４８５ｎｍで励起、５３０ｎｍで発光検出）で毎分測定した（図１６ｈ）。Ｖｍａｘ値は、傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１７
１００μＭのＭｅＯＳｕｃ－ＡＡＰＶ－ｐＮＡ基質、２．２μＵ／μＬの精製ヒト好中球エラスターゼ（ＥＬＡ２）、及びいくつかの濃度のＡＡＴ（１ｎＭ及び１０ｎＭ）を共に４５ 分間インキュベートした。吸光度を分光光度計リーダー（Ａ４０５ｎｍ）で毎分測定した（図１６ｉ）。Ｖｍａｘ値は、２０分間の傾向線の傾きで決定した。実験は２連で実施した。エラーバーは標準偏差を示す。技術情報については、材料及び方法のセクションを参照。
実施例１８
図２６に示されるように、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６）法、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、参照番号１８－５０１０及び１８－５０１２）、Ｍｏｕｓｅ Ｍｃ ａｎｔｉ ｈＡＡＴ ＩｇＧ２Ａ（ａｂｃａｍ社、ａｂ１１６６０４）、中和緩衝液（ＭＢＤ、０，０２％Ｔｗｅｅｎ２０、１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、１×ＰＢＳ）、及び再生緩衝液（ＭＢＤ、１０ｍＭグリシン塩酸塩（ｐＨ２））結合を用いて力価測定を行った血漿由来ＡＡＴ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、ＳＲＰ６３１２）とＰＬ１３６／ＰＬ１３７プールによってＣＨＯで産生された組換えＡＡＴとの比較（図１７）。
Figure 2023523652000006
実施例１９
ヒトミクログリア細胞（ＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞）を０日目にプレーティングし、１日目から２日目までＩＦＮγで活性化し、ルシフェラーゼ活性及び細胞生存率の測定を４日目に行った（図１８ａ）。活性化は、ＭＨＣＩＩ駆動ルシフェラーゼの活性によって測定し、細胞生存率に対して正規化した。全ての条件でのルシフェラーゼ活性は、未処理の対照細胞の倍数として表される（図１８ｂ）。全ての条件は３連で行われ、エラーバーは標準偏差を表す。
実施例２０
ヒトミクログリア細胞（ＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞及びＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞）及びＵｂｉＡＡＴ細胞を０日目にプレーティングし、１日目から２日目までＩＦＮγで活性化し、ルシフェラーゼ活性及び細胞生存率の測定を４日目に行った。血漿由来のＡＡＴは、ＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞に０日目から４日目まで適用した（図１９ａ）。活性化は、ＭＨＣＩＩ駆動ルシフェラーゼの活性によって測定し、細胞生存率に対して正規化した。全ての条件のルシフェラーゼ活性は、ＩＦＮγ活性化対照の百分率（％）で表される（図１９ｂ）。全ての条件は３連で行われ、エラーバーは標準偏差を表す。
実施例２１
ヒトミクログリアＨＭＣ３－ＭＨＣＩＩＬｕｃ細胞を０日目に播種し、１日目から２日目までＩＦＮγ及び／又はＩＦＮβに曝露し、４日目にルシフェラーゼ活性及び細胞生存率の測定を行った。血漿由来のＡＡＴは、０日目から４日目まで適用した（図２０ａ）。活性化は、ＭＨＣＩＩ駆動ルシフェラーゼの活性によって測定し、細胞生存率に対して正規化した。全ての条件のルシフェラーゼ活性は、ＩＦＮγ活性化対照の百分率（％）で表される（図２０ｂ）。血漿由来ＡＡＴ（１μＭ、１０μＭ、２５μＭ）のバーは、比較目的で実施例２０を繰り返したものである。全ての条件は３連で行われ、エラーバーは標準偏差を表す。
実施例２２
クマシー染色図の凡例：複数の供給源由来ＡＡＴのＳＤＳ－ＰＡＧＥクマシー染色。ＮｕＰａｇｅ ４×ＬＤＳ試料緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及びＮｕＰａｇｅ １０×試料還元剤（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）と混合することにより、還元試料を分析用に調製し、７０℃で１０分間インキュベートした。非還元試料の場合、還元剤及び熱インキュベーションは省略した。レーンあたり５μｇのタンパク質をロードした。試料は、ＴＧＳ緩衝液を含む４～２０％Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）プレキャストゲル（ＢｉｏＲａｄ社）上で電気泳動した。次いで、ゲルを固定緩衝液（５０％メタノール＋１０％酢酸＋４０％水（Ｈ２Ｏ））中で室温で３０分間固定した。クマシーブルー（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社）を最終濃度０．２５％で添加し、さらに１５分間インキュベートした。そして、固定緩衝液で複数回洗浄してゲルを一晩脱色し、Ｇ：Ｂｏｘ イメージャー（Ｓｙｎｇｅｎｅ社）で画像化した（図２４）。
実施例２３
ＨＥＫ２９３細胞における組換えヒトＡＡＴの発現。ＨＥＫ２９３については配列番号４６、又はＨＥＫ２９３Ｔについては配列番号４７に基づく。ＨＥＫ２９３については、ＳＥＲＰＩＮＡ１＿ＯＨｕ２２１４１Ｃ＿ｐｃＤＮＡ３．１（＋）プラスミドを含むｒｈＡＡＴ発現クローンを図２５ｇのベクターから生成した。プラスミドを含むクローンの配列を確認し、ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－１５７３）のトランスフェクションに充分な量のプラスミドを調製した。ＨＥＫ２９３細胞にプラスミドをトランスフェクトし、ｒｈＡＡＴの発現及び６ウェルプレートの３セットの培養液への分泌を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号ＥＨ４１１ＲＢＸ５）を使用して確認した。模擬（Ｍｏｃｋ）トランスフェクト細胞並びにｐＣＭＶ－Ｔｄ Ｔｏｍａｔｏ蛍光マーカー及びＥＧＦＰ蛍光マーカーでトランスフェクトした細胞を対照として使用した。
Figure 2023523652000007
手順
ＨＥＫ２９３細胞でのｒｈＡＡＴの産生は、以下の２段階で実行された。
１．ｒｈＡＡＴ発現細胞の調製。
２．ｒｈＡＡＴの産生。
ｒｈＡＡＴ発現細胞の調製
ｒｈＡＡＴ発現細胞の調製には、以下の作業が含まれた。
―発現可能な状態の（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ－ｒｅａｄｙ）プラスミドの構築及び検証
―宿主細胞のトランスフェクション
―ｒｈＡＡＴ発現（安定）プールの生成
―クローン選択
発現可能な状態の（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ－ｒｅａｄｙ）プラスミドの構築及び検証
配列番号４６に示される配列に基づいて、ＳＥＲＰＩＮＡ１＿ＯＨｕ２２１４１Ｃ＿ｐｃＤＮＡ３．１（＋）プラスミドを含むｒｈＡＡＴ発現クローンは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）によって調製された。
プラスミドを含むクローンは、配列の検証及びＨＥＫ２９３細胞のトランスフェクションに充分な量のプラスミドの調製のために、ＲＴＩ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ社、ノースカロライナ州）に発送された。
宿主細胞の一過性トランスフェクション
ＨＥＫ２９３細胞に ＳＥＲＰＩＮＡ１＿ＯＨｕ２２１４１Ｃ＿ｐｃＤＮＡ３．１（＋）プラスミドをトランスフェクトし、ｒｈＡＡＴの発現及び６ウェルプレートの３セットの培養液への分泌を、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して確認した。模擬（Ｍｏｃｋ）トランスフェクト細胞並びにｐＣＭＶ－Ｔｄ Ｔｏｍａｔｏ蛍光マーカー及びＥＧＦＰ蛍光マーカーでトランスフェクトした細胞を対照として使用した。
Figure 2023523652000008
ｒｈＡＡＴ発現（安定）プールの生成
一過性トランスフェクションの成功を確認して、抗生物質選択によりＴ－１５０で安定したプールの生成を行った。細胞を抗生物質選択下で最大２週間維持して、プラスミドのない細胞を排除した。その後、ＥＬＩＳＡを用いて培養上清のタンパク質発現を試験した。
プールした細胞を、さらなる細胞増殖及び振盪フラスコ内でのｒｈＡＡＴ産生のために移す前に、－８０℃で凍結した。
クローン選択
細胞を希釈して回収し、単一クローンを単離するために１０ｃｍ２ディッシュに移した。導入遺伝子の挙動に応じて、５０個～９６個のコロニーから３個～６個のクローンを同定し、その後のＥＬＩＳＡによるｒｈＡＡＴ発現の確認を行った。
ｒｈＡＡＴの産生
ｒｈＡＡＴの産生には、セルスタックでの細胞増殖及びｒｈＡＡＴ産生、アフィニティークロマトグラフィーによるｒｈＡＡＴの精製、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １５（１０ｋＤａ）チューブを利用した製品の濃縮及び製剤化（緩衝液交換）が含まれる。
セルスタックでの細胞増殖及びｒｈＡＡＴ産生
組換え足場依存性ＨＥＫ－２９３細胞を、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＨｙＣｌｏｎｅ（商標））を含み、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ（商標））、ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ（商標））、及びジェネティシン選択的抗生物質Ｇ４１８硫酸塩（Ｇｉｂｃｏ（商標））を添加した、培養処理済みＴフラスコ及びセルスタックボトルで増殖させた。培養物を、３７．０℃及び５％ＣＯ２の加湿培養器で培養し、２．５ｒｐｍで回転させながらローラーボトルで培養し、その後回収した。
アフィニティークロマトグラフィーによるｒｈＡＡＴの精製
清澄化培養上清のｐＨ及び導電率を試験し、必要に応じて、１Ｍトリス（ｐＨ ７．４及び±５ｍＳ／ｃｍ）の平衡化緩衝液を使用して、それぞれ１Ｍ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を使用して７．４±０．１に滴定した。ｐＨ及び導電率の調整後、清澄化上清を０．２μｍフィルターでろ過した後で精製した。
アフィニティークロマトグラフィー
ｒｈＡＡＴ Ｓｅｌｅｃｔ Ｒｅｓｉｎを充填したアフィニティークロマトグラフィーカラムを３ＣＶの精製水でリンスし、３ＣＶ（流量係数）の０．５Ｍ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）で消毒した（２ＣＶ後３０分保持）後、３ＣＶの精製水で再度リンスし、１０ＣＶの２０ｍＭトリス－１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）（ｐＨ７．４）緩衝液で平衡化した。ｒｈＡＡＴ Ｓｅｌｅｃｔカラムに、振盪フラスコ培養終了時のｒｈＡＡＴ力価、清澄化上清の容量、及び１０ｍｇ／ｍＬ樹脂の最大カラムロード容量に基づいて計算された清澄化上清の最大容量をロードした。必要に応じて、樹脂のオーバーローディングを避けるために、清澄化上清をｒｈＡＡＴ Ｓｅｌｅｃｔカラムで複数回処理した。ロードしたタンパク質を４ＣＶの２０ｍＭトリス－１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ７．４）緩衝液で洗浄し、ｒｈＡＡＴを４ＣＶの２０ｍＭトリス－２Ｍ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ）（ｐＨ７．４）緩衝液で溶出してＰＥＴＧ回収ボトルに入れた。カラムを４ＣＶのＰＢＳ（ｐＨ２．０）緩衝液でストリッピングし、必要に応じて３ＣＶの２０ｍＭトリス－１５０ｍＭ塩化ナトリウム（７．４）緩衝液で平衡化して、追加のサイクルを実施した。
実施例２４
ベクターＰＬ１３６（ｐＣＧＳ３＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ、図２５ｄ）（元のシグナルペプチドをＨｉｎｄＩＩＩ／ＸｈｏＩ制限部位に挿入（ＬＣ ＭＣＳ））及びベクターＰＬ１３７（ｐＣＧＳ３＿ＡＡＴ＿ＳＰ５、図２５ｅ）（配列番号１のシグナルペプチドは、アミノ酸１～アミノ酸２４をＡＴＵＭ社（カリフォルニア州ニューアーク）の最適化シグナルペプチドで置換することにより最適化した）の構築
コード化配列は、ＤＮＡ２．０独自のアルゴリズム（ＧｅｎｅＧＰＳ（登録商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｎａ２０．ｃｏｍ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｇｅｎｅｇｐｓ）を使用して、チャイニーズハムスター卵巣細胞での発現用に最適化されたコドンであった。開始コドンの前に標準的なコザック配列（ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ）を追加した。ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位及びＸｈｏＩ制限部位は、合成されたコード化配列の５’及び３’に追加した。
得られたＤＮＡ断片をベクターｐＪ２０１にクローニングした。クローンｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ（図２５ｂ）及びｐＪ２０１＿ＡＡＴ＿ＳＰ５（図２５ｃ）の完全なプラスミドマップ及び配列を提示する。
ｐＣＧＳ３＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ及びｐＣＧＳ３＿ＡＡＴ＿ＳＰ５は、以下のクローニングスキームに従って得た（空のｐＣＧＳ３ベクター、１図２５ｆ）。
Figure 2023523652000009
Figure 2023523652000010
Figure 2023523652000011
Figure 2023523652000012
全ての消化物を、３７℃２時間インキュベートした。目的の断片を、アガロースゲル電気泳動（１．２％アガロースゲル）によって分離した。予想されるサイズの断片を切り出し、ゲル精製し、以下のライゲーションに使用した。
Figure 2023523652000013
ライゲーション混合物（１μＬ）を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社からの大腸菌Ｓｔｂｌ２（商標）細胞に形質転換した。形質転換された大腸菌細胞を、５０ｍｇ／Ｌカルベニシリンを含むアニマルフリーのＬＢ寒天培地レノックス（Ｌｅｎｎｏｘ）上で培養した。大腸菌コロニーを、５０ｍｇ／Ｌアンピシリンを含むアニマルフリーの４ｍＬのＬＢブロスレノックスに移し、振盪培養器で３３℃及び３００ｒｐｍで一晩インキュベートした。プラスミドＤＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ ＢｉｏＲｏｂｏｔ ９６００及びＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ社のＮｕｃｌｅｏ Ｓｐｉｎ（登録商標）Ｒｏｂｏｔ－８プラスミドキットを使用して大腸菌培養物から単離した。次いで、クローニング部位をカバーする鎖特異的配列決定プライマーを使用して、ＤＮＡを配列決定した。
以下のクローン配列は、予想されるものであるＰＬ１３６（ｐＣＧＳ３＿ＡＡＴ＿ｎａｔｉｖｅ＿ＳＰ、図２５ｄ）及びＰＬ１３７（ｐＣＧＳ３＿ＡＡＴ＿ＳＰ５、図２５ｅ）と同一であることが確認された。ＣＨＯ中のＰＬ１３６及びＣＨＯ中のＰＬ１３７から得られたＡＡＴをプールした。
実施例２５
遺伝子合成及び単一遺伝子構築
遺伝子産物をベクターｐＸＣ－１７．４（Ｌｏｎｚａ社）にサブクローニングすることにより、ｒｈＡＡＴ単一遺伝子ベクターを構築した（図２５ａ）。
ＤＮＡ増幅
１μＬのベクターＤＮＡを使用して、Ｏｎｅ Ｓｈｏｔ（登録商標）Ｓｔｂｌ３ケミカルコンピテント大腸菌細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｃ７３７３－０３）を製造元の指示に従ってヒートショック法で形質転換した。細胞をアンピシリン含有（５０μｇ／ｍＬ）ＬＢ寒天プレート（ＬＢブロス（Ｂｒｏｔｈ Ｂａｓｅ）、Ｓｅｌｅｃｔ ＡＰＳ（商標）及びＢａｃｔｏ－Ａｇａｒ、それぞれ２９２４３８及び２１４０１０、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）に広げ、細菌コロニーが明らかになるまで３７℃で一晩インキュベートした。
ギガプレップ（Ｇｉｇａｐｒｅｐ）では、単一細菌培養物を使用してスターター培養物を接種し、その後、５０μｇのアンピシリンを含む１．０ＬのＰｌａｓｍｉｄ Ｐｌｕｓ培地（Ｔｈｏｍｓｏｎ社、４４６３００）に接種し、振盪しながら３７℃で一晩インキュベートした。ベクターＤＮＡは、ＱＩＡＧＥＮギガプレップ（Ｇｉｇａｐｒｅｐ）（Ｑｉａｇｅｎ社、１２２９１）を使用して単離した。全ての場合において、ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）１０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用してＤＮＡ濃度を測定し、１ｍｇ／ｍＬに調整した。２６０ｎｍ及び２８０ｎｍでの吸光度比を測定することにより、ＤＮＡの品質を評価した。
ＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ－ＫＯ細胞の定期培養
ＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ－ＫＯ細胞は、６ｍＭのＬ－グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、２５０３０－１２３）を添加したＣＤ－ＣＨＯ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、１０７４３－０２９）で培養した。細胞を、３６．５℃、５％ＣＯ２、８５％湿度、及び１４０ｒｐｍの条件で振盪培養器で培養した。細胞を定期的に３～４日ごとに継代培養し、０．２×１０６細胞／ｍＬで播種し、トランスフェクションに利用可能な細胞を充分得るために増殖させた。細胞は継代２０回目までに廃棄した。
安定化組換えＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ－ＫＯ細胞を、５０μＭのＭＳＸ（Ｌ－メチオニンスルホキシミン、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｍ５３７９）及びＳＰ４を添加したＣＤ－ＣＨＯ培地で培養した。細胞を、３６．５℃、５％ＣＯ２、８５％湿度、及び１４０ｒｐｍの条件で振盪培養器で培養した。細胞を定期的に３～４日ごとに継代培養し、０．２×１０６細胞／ｍＬで播種し、大規模な流加培養による過増殖に利用可能な細胞を充分得るために増殖させた。
ＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ－ＫＯ細胞の安定したプールのトランスフェクション
単一遺伝子ベクターＤＮＡプラスミドを、トランスフェクションのために、ＰｖｕＩで線状化した後、エタノール沈殿及びＥＢ緩衝液に再懸濁することによって最終濃度４００μｇ／ｍＬに調製した。Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅ ＸＣｅｌｌ（商標）を用いたエレクトロポレーションによりトランスフェクションを行った。各トランスフェクションについて、生細胞を予熱したＣＤ－ＣＨＯ培地に再懸濁して１．４３×１０７細胞／ｍＬにした。４００μｇ／ｍＬの濃度の１００μＬの線状化ＤＮＡを０．４ｃｍギャップのエレクトロポレーションキュベットに等分し、７００μＬの細胞懸濁液を加えた。細胞及びＤＮＡの３つのキュベットを、３００Ｖ及び９００μＦでエレクトロポレーションし、直ちに１０ｍＬ／ＬのＳＰ４（Ｌｏｎｚａ社、ＢＥＳＰ１０７６Ｅ）を添加した３０ｍＬの予熱したＣＤ－ＣＨＯに回収して、安定したプールを生成した。トランスフェクタントを、３６．５℃、５％ＣＯ２、８５％湿度、及び１４０ｒｐｍの条件で振盪培養器で培養した。
合計３つの安定したプールトランスフェクタントを確立した。トランスフェクションの２４時間後、培養物を遠心分離し、５０μＭのＭＳＸ及び１０ｍＬ／ＬのＳＰ４を添加した予熱したＣＤ－ＣＨＯに再懸濁した。トランスフェクション後、細胞増殖及び生存率を定期的に確認した。
生細胞密度が＞０．６×１０６細胞／ｍＬの場合、トランスフェクタント培養は進行に適していた。細胞を、５００ｍＬの通気三角フラスコ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））、１０３５２７４２）に５０μＭのＭＳＸ／１０ｍｌ／ＬのＳＰ４を添加したＣＤ－ＣＨＯ培地に、最終容量１００ｍＬで０．２×１０６細胞／ｍＬで播種し、３６．５℃、５％ＣＯ２、湿度８５％、及び１４０ｒｐｍの条件で振盪培養器で培養した。細胞培養物をモニタリングし、培養物が指数関数的増殖に順応したら増殖させた。培養物を、５０μＭのＭＳＸ／１０ｍＬ／ＬのＳＰ４を添加したＣＤ－ＣＨＯで０．２×１０６細胞／ｍＬの濃度で、５００ｍＬの通気三角フラスコにおいて、２００ｍＬの培養容積に拡大し、上記の条件下でインキュベートした（セクション０を参照）。次に、培養物を適切な産生量に拡大した。
流加培養による過増殖の要約
細胞を、確立した安定したプールから４ｍＬ／ＬのＳＰＥを添加したＬｏｎｚａ社のＣＭ４２基本培地に０．２×１０６細胞／ｍＬの適切な培養量を播種することにより、産物あたり２Ｌの産生量まで増殖させた。産生量は、５Ｌ（Ｇｅｎｅｒｏｎ社、９３１１１６）振盪フラスコで確立し、３６．５℃、５％ＣＯ２、８５％湿度、及び１４０ｒｐｍの条件で振盪培養器で培養した。細胞数及び生存率は、４日目にフィード培地投与を開始する前にモニタリングし、１１日目に培養物を回収するまで定期的にモニタリングした。４日目及び８日目に、Ｌｏｎｚａ社独自のフィード培地の混合物からなるボーラスのフィード培地を投与した。
産生培養物の回収及び濃縮
３０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によって培養物を回収し、０．２２μｍのＰＥＳ膜を使用して濾過して、清澄な上清を得た。
α１－アンチトリプシンアフィニティークロマトグラフィー
清澄化細胞上清を、自家充填した５０ｍＬのα１－アンチトリプシンセレクトカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用して精製した。産物適用前及び適用後に、カラムを２０ｍＭトリス及び１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ７．４）で平衡化し、２０ｍＭトリス及び２Ｍ塩化マグネシウム（ｐＨ７．４）で溶出を行った。この手順は、ＡＫＴＡ精製装置で１０ｍＬ／分で実施した。アフィニティークロマトグラフィー溶出液からの産物含有画分をプールし、１０ｋＤａのＭＷＣＯ（Ｄ０２－Ｅ０１０－０５－Ｎ）を含むＳｐｅｃｔｒｕｍ ＫｒｏｓＦｌｏ（登録商標）ＴＦＦシステムを使用したタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）により、５０ｍＭトリス及び７５ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ８．０）に緩衝液を交換した。
陰イオン交換クロマトグラフィー
プールした緩衝液交換画分を、１０ｍＬ／分でＡＫＴＡ精製装置で２５ｍＬのＣａｐｔｏ（商標）Ｑカラム（タンデム接続した５×５ｍＬカラム）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用してさらに精製した。前記カラムは、５０ｍＭトリス及び７５ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ８．０）を使用して、産物適用前及び適用後に平衡化した。前記産物を１０ＣＶの直線勾配で５０ｍＭトリス及び１Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ８．０）で溶出した。陰イオン交換クロマトグラフィー溶出液からの産物含有画分をプールし、１ｍｇ／ｍＬに希釈し、品質を分析した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ
内径９．４ｍＭ×２５ｃｍのＺｏｒｂａｘ（登録商標）ＧＦ－２５０カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣシステムでサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）により複製試料を分析した。１ｍｇ／ｍＬ試料（試料が＜１ｍｇ／ｍＬの場合は原液濃度）の８０μＬアリコートを注入し、５０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、及び５００ｍＭアルギニン（ｐＨ６．０）で１ｍＬ／分で１５分間分析を実行した。Ｅｍｐｏｗｅｒ（商標）ソフトウェアを使用して、可溶性凝集体レベルを分析した。緩衝液成分から生じるシグナルは、ブランク緩衝液注入によって分析され、特に明記されていない限り、データ分析では省略されている。
産物濃度
精製産物を、Ｖｉｖａｓｐｉｎ（登録商標）Ｔｕｒｂｏ－１５遠心ろ過ユニット（３０ＫＤａ分子量カットオフ）（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社、ＶＳ１５Ｔ０２）を使用して、２５ｍｇ／ｍＬの目標値まで濃縮した。
参考文献
１． Ｗｒａｐｐ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｙｏ－ＥＭ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ２０１９－ｎＣｏＶ ｓｐｉｋｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｆｕｓｉｏｎ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０２０． ３６７（６４８３）：ｐ． １２６０－１２６３．
２． Ｊａｉｍｅｓ， Ｊ．Ａ．， Ｊ．Ｋ． Ｍｉｌｌｅｔ， ａｎｄ Ｇ．Ｒ． Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ， Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖｅｌ Ｓ１／Ｓ２ Ｓｉｔｅ． ｉＳｃｉｅｎｃｅ， ２０２０． ２３（６）：ｐ． １０１２１２．
３． Ｋｏｒｂｅｒ， Ｂ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｐｉｋｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｐｉｐｅｌｉｎｅ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ａ ｍｏｒｅ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２． ｂｉｏＲｘｉｖ， ２０２０：ｐ． ２０２０．０４．２９．０６９０５４．
４． Ｂｅｃｅｒｒａ－Ｆｌｏｒｅｓ， Ｍ． ａｎｄ Ｔ． Ｃａｒｄｏｚｏ， ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｖｉｒａｌ ｓｐｉｋｅ Ｇ６１４ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｈｉｇｈｅｒ ｃａｓｅ ｆａｔａｌｉｔｙ ｒａｔｅ． Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ， ２０２０．
５． Ｌｉ， Ｑ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ ｏｎ Ｖｉｒａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ． Ｃｅｌｌ， ２０２０．
６． Ｏｇａｗａ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｄ６１４Ｇ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｎ ＡＣＥ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ． ｂｉｏＲｘｉｖ， ２０２０．
７． Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ， Ｉ． Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ， ａｎｄ Ｓ．Ｉ． Ｔａｕｂｅ， Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｖｉｒａｌ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ． ２０１６：ｐ． ３５５－３７８．
８． Ｙｉｎ， Ｗ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＲＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｂｙ ｒｅｍｄｅｓｉｖｉｒ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０２０．
９． Ｇａｏ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ＲＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ＣＯＶＩＤ－１９ ｖｉｒｕｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０２０．３６８（６４９２）：ｐ． ７７９－７８２．
１０． Ｐａｃｈｅｔｔｉ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｈｏｔ ｓｐｏｔｓ ｉｎｃｌｕｄｅ ａ ｎｏｖｅｌ ＲＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ－ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｖａｒｉａｎｔ． Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ， ２０２０． １８（１）：ｐ． １７９．

Claims (28)

  1. ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防を必要とする対象での治療及び／又は予防における使用のための組成物であって、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む、組成物。
  2. 前記必要とする対象が、
    １．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低いレベル、
    ２．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベル、
    ３．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の対象におけるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高いレベル、及び
    ４．無症候性であるか軽度の症状を有する、ウイルス感染中の少なくとも１人の対象と比較して、ウイルス感染前又はウイルス感染中の対象におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高いレベル、
    からなる群から選択される少なくとも１つを有する、請求項１に記載の使用のための組成物。
  3. 前記ウイルス感染前又はウイルス感染中の内因性ＡＡＴのより低いレベルが、ＡＡＴ欠乏によって引き起こされる、請求項２に記載の使用のための組成物。
  4. 前記スパイクタンパク質プライミングプロテアーゼが、膜貫通プロテアーゼセリンサブタイプ２（ＴＭＰＲＳＳ２）、膜貫通プロテアーゼサブタイプ６（ＴＭＰＲＳＳ６）、カテプシンＬ、カテプシンＢ、プロプロテインコンバターゼ１（ＰＣ１）、トリプシン、エラスターゼ、好中球エラスターゼ、マトリプターゼ、及びフーリン、好ましくはカテプシンＬ及びフーリン、からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項２又は３に記載の使用のための組成物。
  5. 前記少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高いレベルが、年齢及び／又は遺伝的素因によって引き起こされる、請求項２～４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  6. 前記ＡＣＥ２受容体のより高いレベルが、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされる、請求項２～５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  7. 前記ＩＦＮ－γのより高いレベルが、感染症、炎症、年齢、及び遺伝的素因の群から選択される少なくとも１つによって引き起こされる、請求項２～６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  8. 前記必要とする対象が、
    ｉｉｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ、及び
    ｉｖ）より高いレベルの少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼを有する、請求項２～７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  9. 前記必要とする対象が、
    ｉｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ及び
    ｉｉｉ）より高いレベルのＡＣＥ２受容体を有する、請求項２～８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  10. 前記必要とする対象が、
    ｉｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ及び
    ｉｖ）より高いレベルのＩＦＮ－γを有する、請求項２～９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  11. 前記より高いレベルのＩＦＮ－γが、ＡＡＴ欠乏症、非アルコール性脂肪肝疾患などの肝疾患、糖尿病、肥満、及び心血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患又は状態によって引き起こされる、請求項１０に記載の使用のための組成物。
  12. 前記必要とする対象が、
    ｉ）より低いレベルの内因性ＡＡＴ、
    ｉｉ）より高いレベルの少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、並びに
    ｉｉｉ）より高いレベルのＡＣＥ２受容体を有する、及び／又はｉｖ）より高いレベルのＩＦＮ－γを有する、請求項２～１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  13. 前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片が、ヒト血漿抽出物である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  14. 前記α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片が、組換えα１－アンチトリプシン（ｒｈＡＡＴ）、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  15. 前記α１－アンチトリプシンタンパク質が、配列番号１に記載されている、請求項１４に記載の使用のための組成物。
  16. 前記α１－アンチトリプシン断片が、Ｃ末端配列フラグメント又はその任意の組み合わせである、請求項１４に記載の使用のための組成物。
  17. 前記α１－アンチトリプシンバリアントが、配列番号２に記載のＣ末端配列に由来する短環状ペプチドを含む群から選択される、請求項１４に記載の使用のための組成物。
  18. α１－アンチトリプシンの前記Ｃ末端配列に由来する短環状ペプチドが、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＭ）－ＳＨ、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＥ）－ＳＨ、シクロ－（ＣＰＦＶＦＬＲ）－ＳＨ、及びシクロ－（ＣＰＥＶＦＬＭ）－ＳＨ、又はそれら任意の組み合わせを含む群から選択される、請求項１７に記載の使用のための組成物。
  19. 前記組成物が、薬学的に許容される賦形剤又は担体をさらに含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  20. 前記組成物が、ヌクレオシド類似体、プロテアーゼ阻害剤、免疫抑制剤（例えば、サリルマブ又はトシリズマブ）、抗生物質、ウイルスの構造成分に対する抗体又はその断片（例えば、受動免疫療法）、インターフェロンβ（例えば、インターフェロンβ－１ａ）、及び／又はワクチンをさらに含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  21. 前記組成物が、静脈内注射、静脈内注入、Ｄｏｓａｔｏｒ型ポンプによる注入、吸入鼻スプレー、点眼薬、皮膚パッチ、徐放製剤、又はエクスビボ遺伝子治療若しくはエクスビボ細胞治療によって、好ましくは静脈内注射によって投与される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  22. 請求項１～２１のいずれか一項において定義されるα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）タンパク質、そのバリアント、そのアイソフォーム、及び／又はその断片の治療有効量を含む組成物を用いて、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防のための目的の対象の感受性を測定するための方法であって、
    ａ）ウイルス感染前又はウイルス感染中の前記目的の対象における、内因性α１－アンチトリプシン、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びインターフェロン－γを含む群の少なくとも１つのレベルを測定すること、
    ｂ）ウイルス感染中の少なくとも１人の参照対象における、内因性α１－アンチトリプシン、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼ、ＡＣＥ２受容体、及びインターフェロン－γを含む群の少なくとも１つのレベルを測定することであって、前記参照対象は無症候性であるか軽度の症状を有すること、並びに
    ｃ）工程ａ）で測定された目的のレベルを、工程ｂ）で測定された参照レベルと比較する工程であって、
    前記目的の対象が、
    １．内因性ＡＡＴの参照レベルと比較して、内因性α－アンチトリプシン（ＡＡＴ）のより低い目的のレベル、
    ２．少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼの参照レベルと比較して、少なくとも１つのスパイクタンパク質プライミングプロテアーゼのより高い目的のレベル、
    ３．ＡＣＥ２受容体の参照レベルと比較して、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２受容体）のより高い目的のレベル、及び
    ４．ＩＦＮ－γの参照レベルと比較して、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）のより高い目的のレベル
    からなる群から選択される少なくとも１つを有する場合、前記目的の対象は、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群の治療及び／又は予防に対する感受性があること、を含む、方法。
  23. 請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物を使用して、ウイルス感染に関連する疾患若しくは症候群を効果的に治療及び／又は予防するためのα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）の治療有効量を決定する方法であって、
    ａ）ウイルス感染前又はウイルス感染中の目的の対象における内因性α１－アンチトリプシンのレベルを決定すること、及び
    ｂ）前記対象において少なくとも１０μＭ、好ましくは少なくとも２０μＭ、より好ましくは少なくとも５０μＭ、さらにより好ましくは少なくとも１００μＭ、最も好ましくは少なくとも２００μＭであるＡＡＴレベルを達成するために必要である、前記組成物中のＡＡＴの量を決定する工程を含む、方法。
  24. 前記ウイルスがコロナウイルスである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の使用のための組成物、又は請求項２２及び２３に記載の方法。
  25. 前記ウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項２４に記載の使用のための組成物、又は請求項２４に記載の方法。
  26. 前記疾患又は症候群が、呼吸器症候群又は重症急性呼吸器症候群である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の使用のための組成物、又は請求項２２～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記疾患又は症候群が、神経系の炎症性疾患又は症候群である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の使用のための組成物、又は請求項２２～２５のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記神経系の炎症性疾患又は症候群が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、及びハンチントン病の群から選択される疾患又は症候群である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の使用のための組成物、又は請求項２７に記載の方法。
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