JP2023518538A - ヒトｃｄ４５ｒｃに特異的なキメラ抗原受容体およびその使用 - Google Patents

ヒトｃｄ４５ｒｃに特異的なキメラ抗原受容体およびその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、免疫療法の分野に関する。特に、本発明は、ヒトＣＤ４５ＲＣに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、前記ＣＡＲを発現する免疫細胞および特にＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患（自己免疫疾患、望ましくない免疫応答、単原性疾患、リンパ腫もしくは癌を含む）または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防または治療するための医薬としてのその使用に関する。

Description

本発明は、免疫療法の分野に関する。特に、本発明は、ヒトＣＤ４５ＲＣに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、前記ＣＡＲを発現するＴ細胞および特にＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患（自己免疫疾患、望ましくない免疫応答、単原性疾患、リンパ腫もしくは癌を含む）または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防または治療するための医薬としてのその使用に関する。
ＣＤ４５（白血球共通抗原（ＬＣＡ）、ＥＣ３．１．３．４８、Ｔ２００、Ｌｙ５およびＰＴＰＲＣとしても公知）は、最初のプロトタイプの受容体様タンパク質チロシンホスファターゼ（ＲＰＴＰ）を構成する。その発現は、すべての有核造血細胞に制限され、最も豊富な細胞表面糖タンパク質のうちの１つであり、細胞表面のほぼ１０パーセントを構成し、原形質膜中に約２５μＭ存在すると推定される（Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ＆Ｔｈｏｍａｓ，１９９４．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：８５－１１６；Ｈｅｒｍｉｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００３．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１０７－３７；Ｈｏｌｍｅｓ，２００６．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１１７（２）：１４５－５５）。
ＣＤ４５は、細胞外ドメイン、単一の膜貫通ドメインおよび大きな細胞質ドメインを含む。膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインは、種間で高度に保存されている。特に、ＣＤ４５の細胞質ドメインは、タンデムに複製された２つのホスファターゼドメインを含み、そのうちの膜近位ドメインのみが酵素活性を有する（Ｄｅｓａｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４．ＥＭＢＯ Ｊ．１３（１７）：４００２－１０）。第１のドメインを安定化することによって間接的にＣＤ４５活性に寄与し得ることが示唆されているが、ＣＤ４５におけるよりＣ末端側の第２のホスファターゼドメインの機能は、依然として不確実である。この細胞質ドメインを介して、ＣＤ４５は、チロシン－タンパク質キナーゼ（Ｔ細胞におけるＬｃｋ、またはＢ細胞におけるＬｙｎ、ＦｙｎおよびＬｃｋなど）のＳｒｃファミリーの活性を調節することによって、造血細胞におけるホスホチロシンレベルの中心的調節因子として機能する（Ｐａｌａｃｉｏｓ＆Ｗｅｉｓｓ，２００４．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２３（４８）：７９９０－８０００；Ｌｏｗｅｌｌ，２００４．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１（６－７）：６３１－４３）。
膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインとは対照的に、ＣＤ４５の細胞外ドメインは、異なる白血球系統間でより高い多型を示す。実際、この細胞外ドメインは、高度にグリコシル化されており、Ｏ結合型グリコシル化およびシアル化の両方である３つの選択的にスプライシングされたエクソン（４、５および６－それぞれＡ、ＢおよびＣ決定基をコードする）を含有する（Ｈｅｒｍｉｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００３．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１０７－３７；Ｈｏｌｍｅｓ，２００６．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１１７（２）：１４５－５５）。したがって、サイズ、形状および電荷が異なるＣＤ４５アイソフォームは、白血球分化および細胞活性化の両方において動的に制御された選択的スプライシングによって生成され、分子の細胞外ドメインの変化をもたらすことができる（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１（８）：２７８１－７；Ｌｙｎｃｈ，２００４．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（１２）：９３１－４０）。
３つの選択的にスプライシングされたエクソンすべてを含有する最大のＣＤ４５アイソフォームであるＣＤ４５ＲＡＢＣは、約２３５ｋＤａであり、３つのエクソンすべてを欠く最小のアイソフォームであるＣＤ４５ＲＯは、約１８０ｋＤａである。その間に、３つのエクソンのうちの２つのみ（例えば、ＣＤ４５ＲＡＢ、ＣＤ４５ＲＢＣ）または１つのみ（例えば、ＣＤ４５ＲＢ）を含むアイソフォームが可能である。
異なるＣＤ４５アイソフォームの機能は、明らかではないが、これらのアイソフォームの差次的発現は、Ｔ細胞の活性化レベルと関連しており、ナイーブＴ細胞対メモリーＴ細胞の解離を可能にする（Ｂｉｒｋｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．８６（１７）：６７３４－８）。例えば、ＣＤ４５ＲＡは、末梢ナイーブ成熟ＣＤ４＋Ｔ細胞上に存在し、ＣＤ４５ＲＯは、活性化およびメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞上に発現される。ＣＤ４５ＲＡＢＣは、Ｂ細胞およびその前駆体上、樹状細胞および他の抗原提示細胞のサブグループ上に発現される。最終分化メモリーＴ細胞のサブタイプであるエフェクターメモリーＲＡＴ細胞（ＴＥＭＲＡ）もまた、ナイーブＴ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを再発現する（Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｉｍｍｕｎ Ａｇｅｉｎｇ．５：６）。重要なことに、アイソフォーム発現のこのパターンは、その機能的役割および重要性を強調して種間で高度に保存されている（Ｈｅｒｍｉｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００３．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１０７－３７）。
ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ４５ＲＣアイソフォームの特定の発現パターンは、増殖およびサイトカイン分泌に関して異なる挙動を示す機能的に異なるアロ反応性Ｔ細胞サブセット間の分化を可能にする。例えば、げっ歯類では、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方のＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈが、移植拒絶および臓器炎症を促進する能力がある強力なＴｈ１エフェクター細胞である（Ｓｐｉｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９８３．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１５８（３）：７９５－８１０；Ｘｙｓｔｒａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４（２）：４０８－１７）一方で、検出不能または低レベルのＣＤ４５ＲＣを発現するＴ細胞は、Ｔｈ２および調節性Ｔ細胞であり、同種移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）および細胞媒介性自己免疫疾患を阻害することが示されている（Ｘｙｓｔｒａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｂｌｏｏｄ．１０４（１０）：３２９４－３０；Ｇｕｉｌｌｏｎｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．，２００７．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１１７（４）：１０９６－１０６；Ｐｏｗｒｉｅ＆Ｍａｓｏｎ，１９９０．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１７２（６）：１７０１－８）。ヒトでは、移植前のＣＤ４５ＲＣ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の高い割合が、腎臓移植患者における移植片生存率の低下と相関している（Ｏｒｄｏｎｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０１３．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．８（７）：ｅ６９７９１）。
したがって、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞集団の排除は、ヒトにおいて免疫寛容を誘導するための、したがって移植拒絶（特にＧＶＨＤ）および自己免疫疾患を予防、低減および／または治療するための有望なアプローチを表す。
ＧＶＨＤは、幹細胞移植患者における罹患率および死亡率の重要な原因である。それは、ドナー細胞がレシピエント細胞に対して反応するＴ細胞媒介性免疫反応性プロセスである。現在、コルチコステロイドなどの免疫調節薬による免疫抑制がＧＶＨＤ予防の主流である。長期にわたる生存転帰の改善を伴って進行がなされてきたが、コルチコステロイドは、高い割合の患者（初期疾患重症度に応じて、急性ＧＶＨＤ患者の５０％未満および慢性ＧＶＨＤ患者の４０～５０％未満－Ｇａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０１３．Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ．４（６）：３６６－３７８）においてＧＶＨＤを予防せず、重大な毒性に関連し、現在利用可能な救済療法の多くは、免疫抑制の増加および感染性合併症に関連する。したがって、移植後の長期成績を改善するためのＧＶＨＤのための新しい治療戦略の開発に対する満たされていない必要性が依然として存在する。
本発明者らは、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞の枯渇が、寛容原性調節性Ｔ細胞を増加させながら、攻撃的エフェクターＴ細胞を減少させることによって移植拒絶を予防または低減する潜在的な新しい治療法になり得ることを以前に記載した。実際、一過性抗ＣＤ４５ＲＣｍＡｂ治療は、記憶免疫を維持しながら、急速なＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞アポトーシスを引き起こす。さらに、本発明者らは、短期間の抗ＣＤ４５ＲＣ抗体治療が、慢性拒絶の徴候を伴わずに永久的な同種移植片生存をもたらすことを示した（国際特許第２０１６０１６４４２号、Ｐｉｃａｒｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１７．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２（３）：ｅ９００８８）。
ここで、本発明者らは、ヒトＣＤ４５ＲＣに対する抗原結合フラグメントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を開発した。この抗原結合フラグメントは、現在市販されている抗ヒトＣＤ４５ＲＣ抗体（ＭＴ２クローンなど）と競合し、同程度の反応性パターンを示すが、Ｔ細胞に対する細胞傷害活性は、最低濃度で有意に優れている。実際、本発明による抗ｈＣＤ４５ＲＣ抗原結合フラグメントは、現在利用可能な他の抗原結合フラグメントよりも良好な親和性を示し、それによってより良好な治療効果を有する。
興味深いことに、本発明によるＣＡＲはまた、免疫応答が病態に関与する特定の単一遺伝子疾患の予防または治療に有用であり得る。単遺伝子疾患は、単一遺伝子欠陥によって引き起こされる。４０００を超えるヒト疾患が、ある特定の遺伝子に関連するこれらの欠陥によって引き起こされる。これまで、ほとんどの治療選択肢は、患者の生活の質を改善する試みにおいて、障害の症状を治療することを中心としている。遺伝子治療は、この種の疾患の永続的な治療に対する主な希望である。しかしながら、導入遺伝子産物またはベクターに対する免疫応答が治療有効性を制限するという事実だけではなく、障害によって影響を受ける適切な細胞への遺伝子の送達のための技術の開発中に大きな障害に遭遇している。
単一遺伝子疾患の中には、免疫系に関与する遺伝子（Ｔ細胞および／もしくはＢ細胞の原発性免疫不全症および多腺性内分泌不全症・カンジダ症・外胚葉ジストロフィー［ＡＰＥＣＥＤ］など）、または免疫機能に関連しないが、その欠損が炎症および／または免疫反応に関連する遺伝子［デュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）など］に関連するものがある。
自己免疫性多腺性症候群Ｉ型（ＡＰＳ１）としても公知のＡＰＥＣＥＤは、髄内上皮胸腺細胞（ｍＴＥＣ）における組織拘束性抗原（ＴＲＡ）の発現および自己反応性Ｔ細胞欠失を可能にする転写調節因子であるＡＩＲＥ遺伝子における突然変異によって引き起こされる稀な多臓器常染色体劣性自己免疫疾患である。ヒトでは、１～９：１００００００の有病率でＡＰＥＣＥＤを引き起こす１００を超える突然変異がＡＩＲＥ遺伝子に記載されている（Ｏｒｐｈａｎｅｔ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｒｐｈａ．ｎｅｔ）。ＡＰＥＣＥＤの臨床表現型は、通常、３つの主要な症状：副甲状腺機能低下症、副腎機能不全（アジソン病）および慢性粘膜皮膚カンジダ症（ＣＭＣ）のうちの２つの存在によって定義される。この疾患はまた、１型糖尿病、エナメル質形成不全、白斑、早発卵巣不全、角膜炎、悪性貧血、脱毛症、外分泌性膵炎、間質性肺疾患、腎炎および他の障害などの複数の自己免疫性および外胚葉性の特徴に関連する。
ＤＭＤは、タンパク質ジストロフィンをコードするＤＭＤ遺伝子の突然変異が重度のＸ連鎖性筋ジストロフィーをもたらし、これは後の段階ですべての随意筋ならびに心臓および呼吸筋に影響を及ぼす、単一遺伝子疾患である。免疫応答は、ＤＭＤ患者およびｍｄｘマウスの両方において疾患の病態生理学に関与する（総説については、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．７（２９９）：２９９ｒｖ４を参照されたい）。ＤＭＤの標準治療は、プレドニゾロンなどのコルチコイドである。ｍｄｘマウスでは、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を増幅するために、静脈内免疫グロブリン、トラニラスト、ヘムオキシゲナーゼ－１誘導剤、ＩＬ－１受容体アンタゴニストおよびＩＬ－２などのエフェクター免疫応答または炎症を減少させる処置も採用されている（Ｖｉｌｌａｌｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１４．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．６（２５８）：２５８ｒａ１４２；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．７（２９９）：２９９ｒｖ４）。しかしながら、最近の有望な新しい治療法にもかかわらず、ＤＭＤ患者の平均余命は、依然として著しく低下している。
驚くべきことに、本発明者らは、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を特異的に枯渇させる抗ＣＤ４５ＲＣ抗体によるＤｍｄ－／－ラット（Ｄｍｄｍｄｘ）の処置が筋力を高めることを実証した（Ｏｕｉｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．９；１０：２１３１）。彼らはまた、抗ＣＤ４５ＲＣモノクローナル抗体のＡｉｒｅ－／－ラットへの投与がＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞の強力な枯渇をもたらし、ＡＰＥＣＥＤの症状特徴の除去をもたらすことを実証した（国際特許出願第２０１９１１５７９１号）。
したがって、本発明によるＣＡＲは、ＤＭＤおよびＡＰＥＣＥＤなどの単一遺伝子疾患を予防および／または治療するための有望なアプローチを表す。
本発明者らはまた、免疫細胞が、その細胞表面に形質導入ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを発現するように操作され得ることを実証した。本発明者らはまた、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを形質導入された細胞がヒトＴ細胞においてアポトーシスを誘導し、ヒトＴ細胞との接触後に活性化され得ることを示した。
国際特許第２０１６０１６４４２号 国際特許出願第２０１９１１５７９１号
Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ ＆ Ｔｈｏｍａｓ，１９９４．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：８５－１１６ Ｈｅｒｍｉｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００３．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１０７－３７ Ｈｏｌｍｅｓ，２００６．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１１７（２）：１４５－５５ Ｄｅｓａｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４．ＥＭＢＯ Ｊ．１３（１７）：４００２－１０ Ｐａｌａｃｉｏｓ ＆ Ｗｅｉｓｓ，２００４．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２３（４８）：７９９０－８０００ Ｌｏｗｅｌｌ，２００４．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１（６－７）：６３１－４３ Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１（８）：２７８１－７ Ｌｙｎｃｈ，２００４．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（１２）：９３１－４０ Ｂｉｒｋｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．８６（１７）：６７３４－８ Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｉｍｍｕｎ Ａｇｅｉｎｇ．５：６ Ｓｐｉｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９８３．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１５８（３）：７９５－８１０ Ｘｙｓｔｒａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４（２）：４０８－１７ Ｘｙｓｔｒａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｂｌｏｏｄ．１０４（１０）：３２９４－３０ Ｇｕｉｌｌｏｎｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．，２００７．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１１７（４）：１０９６－１０６ Ｐｏｗｒｉｅ ＆ Ｍａｓｏｎ，１９９０．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１７２（６）：１７０１－８ Ｏｒｄｏｎｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０１３．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．８（７）：ｅ６９７９１ Ｇａｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０１３．Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ．４（６）：３６６－３７８ Ｐｉｃａｒｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１７．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２（３）：ｅ９００８８ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．７（２９９）：２９９ｒｖ４ Ｖｉｌｌａｌｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１４．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．６（２５８）：２５８ｒａ１４２ Ｏｕｉｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．９；１０：２１３１
本発明は、ヒトＣＤ４５ＲＣに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関し、前記ＣＡＲは、
（ａ）少なくとも１つの細胞外結合ドメインであって、前記結合ドメインが、前記ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する、少なくとも１つの細胞外結合ドメイン、
（ｂ）任意選択で、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメイン、
（ｃ）少なくとも１つの膜貫通ドメイン、および
（ｄ）少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインであって、細胞内ドメインが、少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達ドメインおよび任意選択で、少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達ドメインを含む、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４、５、６、８、１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５（ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ）および１８（ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ）（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６、１１１および１２０の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４および５の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５（Ｘ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４の配列のＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５（Ｘ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４、６および１００の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５および１８（Ｘ１２は存在しない）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６、１１１および１２０の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、
１）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８１の配列のＬＣＶＲ、
２）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
３）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
４）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
５）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
６）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
７）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
８）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
９）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
１０）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
１１）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１２）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
１３）配列番号６５の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１４）配列番号６５の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
１５）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１６）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
１７）配列番号１２１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１８）配列番号１２２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１９）配列番号１２３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２０）配列番号１２４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２１）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２２）配列番号６７の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２３）配列番号６７の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
２４）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１１３の配列のＬＣＶＲ、
２５）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１２６の配列のＬＣＶＲ、または
２６）１）～２３）に記載のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、を含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４、５、６、８、１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５および１８（配列番号１５および１８中のＸ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含み、
好ましくは、ＬＣＶＲのＫａｂａｔ位置Ｌ７１のアミノ酸残基は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに対するｓｃＦｖフラグメントを含む。
一実施形態では、ヒンジドメインは、好ましくは配列番号１４５の配列またはそれと少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＤ８αのヒンジ領域である。
一実施形態では、膜貫通ドメインは、好ましくは配列番号１５３の配列またはそれと少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＤ８αに由来する膜貫通ドメインである。
一実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、好ましくは配列番号１５７の配列またはそれと少なくとも７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＤ３ゼータのＴ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞質シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞質シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞質シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞質シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞質シグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１０細胞質シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。
一実施形態では、本発明によるＣＡＲは、
（ｉ）好ましくは配列番号６１の配列を有するＨＣＶＲおよび好ましくは配列番号１３４の配列を有するリンカーによって結合された、配列番号８１の配列を有するＬＣＶＲを含む抗ヒトＣＤ４５ＲＣ ｓｃＦｖ、
（ｉｉ）好ましくは配列番号１４５の配列を有するＣＤ８αに由来するヒンジドメイン、
（ｉｉｉ）好ましくは配列番号１５３の配列を有するヒトＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに
（ｉｖ）好ましくは配列番号１６７の配列を有するヒトＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよび好ましくは配列番号１５７の配列を有するヒトＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
本発明はまた、本発明によるＣＡＲをコードする核酸に関する。
本発明はまた、本発明による核酸を含む発現ベクターに関する。
本発明はさらに、本発明によるＣＡＲを細胞表面で発現するように操作された免疫細胞集団に関する。
一実施形態では、前記免疫細胞集団は、ＣＤ４５ＲＣｎｅｇ細胞集団である。
一実施形態では、前記免疫細胞集団は、調節性Ｔ細胞集団、エフェクターＴ細胞集団、メモリーＴ細胞集団、ＮＫＴ細胞集団またはＭＡＩＴ細胞集団である。
一実施形態では、前記免疫細胞集団は、調節性Ｔ細胞集団であり、好ましくは、前記調節性Ｔ細胞集団は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ－β分泌Ｔｈ３細胞、調節性ＮＫＴ細胞、調節性γδ Ｔ細胞、調節性ＣＤ８＋Ｔ細胞および二重陰性調節性Ｔ細胞からなる群から選択される。
本発明はまた、本発明によるＣＡＲを細胞表面に発現するように操作された少なくとも１つの免疫細胞集団を含む組成物に関し、前記組成物は、好ましくは、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤または担体をさらに含む医薬組成物である。
本発明はさらに、医薬として使用するための本発明による免疫細胞集団または本発明による医薬組成物に関する。
本発明はまた、免疫寛容の誘導、移植拒絶の予防もしくは低減、または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防もしくは治療をそれを必要とする対象に使用するための、本発明による免疫細胞集団または本発明による組成物に関する。
本発明はさらに、自己免疫疾患、望ましくない免疫応答、単原性疾患、リンパ腫および癌からなる群から選択されるＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連症状の予防、低減および／または治療に使用するための本発明による免疫細胞集団または本発明による組成物に関する。
定義
「抗体」または「免疫グロブリン」
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」という用語は、それが任意の関連する特異的免疫反応性を有するかどうかにかかわらず、２つの重鎖と２つの軽鎖との組み合わせを有するタンパク質を指す。「抗体」は、目的の抗原（例えば、ヒトＣＤ４５ＲＣ）に対する有意な公知の特異的免疫反応性活性を有するそのようなアセンブリを指す。「抗ｈＣＤ４５ＲＣ抗体」という用語は、本明細書では、ヒトＣＤ４５ＲＣタンパク質に対して免疫学的特異性を示す抗体を指すために使用される。本明細書の他の箇所で説明されるように、ヒトＣＤ４５ＲＣに対する「特異性」は、ｈＣＤ４５ＲＣの種ホモログとの交差反応を除外しない。
抗体および免疫グロブリンは、軽鎖および重鎖を含み、それらの間に鎖間共有結合があってもなくてもよい。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的よく理解されている。「免疫グロブリン」という一般用語は、生化学的に区別することができる５つの異なるクラスの抗体を含む。以下の考察は、一般に免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスを対象とするものであるが、５つのクラスの抗体はすべて本発明の範囲内である。ＩｇＧに関して、免疫グロブリンは、分子量約２３ｋＤａの２つの同一の軽ポリペプチド鎖および分子量約５３～７０ｋＤａの２つの同一の重鎖を含む。４つの鎖は、軽鎖が「Ｙ」の口から開始し可変領域を通って続く重鎖を支持する「Ｙ」構成のジスルフィド結合によって結合されている。抗体の軽鎖は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、κまたはλ軽鎖のいずれかと結合していてもよい。一般に、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞または遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって生成される場合、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合し、２つの重鎖の「テール」領域は、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合する。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ構成の分枝した末端のＮ末端から各鎖の底部のＣ末端まで延びる。当業者は、重鎖がガンマ（γ）、ミュー（μ）、アルファ（α）、デルタ（δ）またはイプシロン（ε）に分類され、それらの中にいくつかのサブクラスがあることを理解するであろう（例えば、γ１－γ４）。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡＩｇＤまたはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラスまたは「アイソタイプ」（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１など）は、十分に特徴付けられており、機能的特殊化を付与することが公知である。これらのクラスおよびアイソタイプの各々の改変バージョンは、本開示を考慮して当業者に容易に識別可能であり、したがって、本発明の範囲内である。上記のように、抗体の可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識し、特異的に結合することを可能にする。すなわち、抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）と重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）とが組み合わされて、三次元抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この四次抗体構造は、「Ｙ」の各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖の各々の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって定義される。
「抗体フラグメント」
本明細書で使用される場合、「抗体フラグメント」という用語は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）能力を保持する、インタクト抗体の少なくとも一部、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を指す。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨＩドメインからなるＦｄフラグメント、線状抗体、単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン、抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体、例えばヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、ならびに抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合フラグメントが含まれるが、これらに限定されない。抗原結合フラグメントはまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびビス－ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照されたい）。抗原結合フラグメントはまた、フィブロネクチンＩＩＩ型などのポリペプチドに基づく足場にグラフトすることができる（フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６、７０３、１９９号を参照されたい）。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントおよび容易に結晶化する能力を反映する名称である残留「Ｆｃ」フラグメントを産生する。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とともにＬ鎖全体からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合Ｆａｂフラグメントにほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にさらなる少数の残基を有することによってＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも公知である。
「結合フラグメント」または「抗原結合フラグメント」
本明細書で使用される場合、「結合フラグメント」という用語は、抗体全体よりも少ないアミノ酸残基を含む本発明による抗体の一部または領域を指す。「結合フラグメント」は、抗原に結合し、および／または抗原結合についてそれが由来する抗体全体と競合する（例えば、ヒトＣＤ４５ＲＣへの特異的結合）。抗体結合フラグメントは、いかなる単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆｄ、脱フコシル化抗体、ダイアボディ、トリアボディおよびテトラボディも限定することなく包含する。
「［．．．］アミノ酸が異なるアミノ酸で置換されていることを特徴とする」
本明細書で使用される場合、所与の配列に関して「［．．．］アミノ酸が異なるアミノ酸で置換されていることを特徴とする」という語句は、前記配列において「保存的アミノ酸改変」が生じることを指す。
「保存的アミノ酸改変」
本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸改変」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体またはその結合フラグメントの結合特性に有意に影響を及ぼさないかまたは変更させない改変を指す。そのような保存的改変には、アミノ酸の置換、付加および欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発などの当技術分野で公知の標準的な技術によって、抗体またはその結合フラグメントに導入することができる。
保存的アミノ酸置換は、典型的には、アミノ酸残基が類似の物理化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられたものである。特定の可変領域およびＣＤＲ配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４以上のアミノ酸の挿入、欠失および／または置換を含み得る。置換が行われる場合、好ましい置換は、保存的改変である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。したがって、本発明による抗体またはその結合フラグメントのＣＤＲおよび／または可変領域内の１以上のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、変更した抗体を、本明細書に記載されるアッセイを使用して、保持された機能（すなわち、例えば、ｈＣＤ４５ＲＣへの結合などの本明細書中に記載される特性）について試験することができる。別の実施形態では、本発明による抗体またはその結合フラグメントのＣＤＲおよび／または可変領域内の一連のアミノ酸は、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似したストリングと置き換えることができる。
「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部位を指す。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版）．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：米国保健福祉省；およびＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６（４）：９０１－１７から推論される表１の規則に従って同定した。
Figure 2023518538000001
Figure 2023518538000002
「操作された」
本明細書で使用される場合、「操作された」または「改変された」という用語は、トランスフェクト、形質転換または形質導入された細胞を指す。
「エピトープ」
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体またはその結合フラグメントが結合する１つまたは複数のタンパク質上に位置するアミノ酸の特定の配置を指す。エピトープは、多くの場合、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループからなり、特定の三次元構造特性および特定の電荷特性を有する。エピトープは、線状（もしくは連続的）または立体配座であり得る、すなわち、必ずしも連続していなくてもよい抗原の様々な領域のアミノ酸の２つ以上の配列を伴う。
「フラグメント」
本明細書で使用される場合、抗原の「フラグメント」という用語は、より短いペプチドとしての抗原の任意のサブセットを指す。いくつかの実施形態では、抗原のフラグメントは、少なくとも６アミノ酸長のペプチドである。いくつかの実施形態では、抗原のフラグメントは、６～５０アミノ酸長、６～３０アミノ酸長または６～２０アミノ酸長のペプチドである。
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」または「非ＣＤＲ領域」
本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」、「ＦＲ」または「非ＣＤＲ領域」という用語は、可変領域の一部であるがＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基（例えば、ＣＤＲのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａの定義を使用する）を含む。したがって、可変領域フレームワークは、約１００～１２０アミノ酸長であるが、ＣＤＲの外側のアミノ酸のみを含む。
ＨＣＶＲの具体例およびＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲについて：
－ＦＲ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭの定義によるアミノ酸１～２５、またはＫａｂａｔの定義による後の５残基を包含する可変領域のドメインに対応し得る、
－ＦＲ２は、アミノ酸３６～４９を包含する可変領域のドメインに対応し得る、
－ＦＲ３は、アミノ酸６７～９８を包含する可変領域のドメインに対応し得る、および
ＦＲ４は、アミノ酸１０４～１１０から可変領域の末端までの可変領域のドメインに対応し得る。
軽鎖のフレームワーク領域は、ＬＣＶＲのＣＤＲの各々によって同様に分離されている。天然に存在する抗体では、各単量体抗体上に存在する６つのＣＤＲは、抗体が水性環境でその三次元構成をとるときに抗原結合部位を形成するように特異的に位置付けられるアミノ酸の短い不連続配列である。重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの残りの部分は、アミノ酸配列においてより少ない分子間可変性を示し、フレームワーク領域と称される。フレームワーク領域は、主にβシート立体配座をとり、ＣＤＲは、βシート構造を接続し、場合によってはその一部を形成するループを形成する。したがって、これらのフレームワーク領域は、鎖間の非共有結合性相互作用によって６つのＣＤＲを正しい向きに位置付ける足場を形成するように作用する。位置付けられたＣＤＲによって形成される抗原結合部位は、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を画定する。この相補的な表面は、免疫反応性抗原エピトープへの抗体の非共有結合を促進する。ＣＤＲの位置は、当業者によって容易に特定され得る。
「重鎖領域」
本明細書で使用される場合、「重鎖領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖の定常ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。重鎖領域を含むタンパク質は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部ヒンジ領域、中間ヒンジ領域および／もしくは下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの変異体もしくはフラグメントのうちの少なくとも１つを含む。一実施形態では、本発明による抗体またはその結合フラグメントは、免疫グロブリン重鎖（例えば、ヒンジ部分、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）のＦｃ領域を含み得る。別の実施形態では、本発明による抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも定常ドメイン（例えば、ＣＨ２ドメインのすべてまたは一部）の領域を欠く。特定の実施形態では、定常ドメインの少なくとも１つ、好ましくはすべては、ヒト免疫グロブリン重鎖に由来する。例えば、好ましい一実施形態では、重鎖領域は、完全ヒトヒンジドメインを含む。他の好ましい実施形態では、重鎖領域は、完全ヒトＦｃ領域（例えば、ヒト免疫グロブリンからのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン配列）を含む。特定の実施形態では、重鎖領域の構成定常ドメインは、異なる免疫グロブリン分子からのものである。例えば、タンパク質の重鎖領域は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ３またはＩｇＧ４分子に由来するヒンジ領域を含み得る。他の実施形態では、定常ドメインは、異なる免疫グロブリン分子の領域を含むキメラドメインである。例えば、ヒンジは、ＩｇＧ１分子からの第１の領域およびＩｇＧ３またはＩｇＧ４分子からの第２の領域を含み得る。上記のように、重鎖領域の定常ドメインは、天然に存在する（野生型）免疫グロブリン分子とアミノ酸配列が異なるように改変され得ることが当業者によって理解されるであろう。すなわち、本発明による抗体またはその結合フラグメントは、１つ以上の重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２もしくはＣＨ３）および／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に対する変化または改変を含み得る。例示的な改変には、１つ以上のドメインにおける１つ以上のアミノ酸の付加、欠失または置換が含まれる。
「ヒンジ領域」
抗体内で、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子の領域を含む。このヒンジ領域は、約２５残基を含み、柔軟であり、したがって２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ領域は、３つの異なるドメイン、すなわち上部、中央および下部ヒンジドメインに細分することができる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９９８．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（８）：４０８３－９０）。
ＣＡＲ分子内で、「ヒンジ領域」という用語は、細胞外結合ドメインを膜貫通ドメインと接続する領域を指す。
「超可変ループ」
超可変ループ（ＨＶ）は、構造に基づいて定義されるが、ＣＤＲは、配列可変性に基づいて定義され（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版）．Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ：米国保健福祉省）、ＨＶおよびＣＤＲの限界は、いくつかのＶＨおよびＶＬドメインで異なり得るので、「超可変ループ」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と厳密に同義ではない。ＶＬドメインおよびＶＨドメインのＣＤＲは、典型的には、本明細書の上で既に説明したようにＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａの定義によって定義することができる。
「同一性」または「同一」
本明細書で使用される場合、「同一性」または「同一」という用語は、２つ以上のアミノ酸配列または２つ以上の核酸配列の配列間の関係で使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基または核酸残基のストリング間のマッチ数によって決定される、アミノ酸配列または核酸配列間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップアラインメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列のうちの小さい方の配列間の同一のマッチのパーセントを測定する。
関連するアミノ酸配列または核酸配列の同一性は、公知の方法によって容易に計算することができる。そのような方法には、ＬｅｓｋＡ．Ｍ．（１９８８）．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓｍｉｔｈ Ｄ．Ｗ．（１９９３）．Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ ｐｒｏｊｅｃｔｓ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｒｉｆｆｉｎ Ａ．Ｍ．＆Ｇｒｉｆｆｉｎ Ｈ．Ｇ．（１９９４）．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １．Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ Ｇ．（１９８７）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｒｅａｓｕｒｅ ｔｒｏｖｅ ｏｒ ｔｒｉｖｉａｌ ｐｕｒｓｕｉｔ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ；Ｇｒｉｂｓｋｏｖ Ｍ．Ｒ．＆Ｄｅｖｅｒｅｕｘ Ｊ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｒｉｍｅｒ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ：Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｃａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，１９８８．ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌ Ｍａｔｈ．４８（５）：１０７３－８２に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。
同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間で最大の一致を与えるように設計される。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法には、ＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ；Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９８４．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２（１ Ｐｔ １）：３８７－９５），ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，ａｎｄ ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３－１０）を含むＧＣＧプログラムパッケージが含まれる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）および他の情報源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４）から公開されている。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも使用して、同一性を決定し得る。
「免疫細胞」
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は、一般に、骨髄で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ））を含む。免疫細胞の例には、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）ならびに骨髄由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）が含まれるが、これらに限定されない。
「免疫特異的」、「特異的」または「特異的に結合する」
本明細書で使用される場合、抗体またはその結合フラグメントは、検出可能なレベルで抗原（例えば、ｈＣＤ４５ＲＣ）と、好ましくは約１０６Ｍ－１以上、好ましくは約１０７Ｍ－１、１０８Ｍ－１、５×１０８Ｍ－１、１０９Ｍ－１、５×１０９Ｍ－１以上を超える親和定数（ＫＡ）で反応する場合、前記抗原に「免疫特異的」、「特異的」または「特異的に結合する」と言われる。
抗体またはその結合フラグメントのその同族抗原に対する親和性はまた、一般的に、平衡解離定数（ＫＤ）として表される。抗体またはその結合フラグメントは、検出可能なレベルで抗原（例えば、ｈＣＤ４５ＲＣ）と、好ましくは１０－６Ｍ以下、好ましくは１０－７Ｍ、５×１０－８Ｍ、１０－８Ｍ、５×１０－９Ｍ、１０－９Ｍ以下のＫＤで反応する場合、前記抗原に「免疫特異的」、「特異的」または「特異的に結合する」と言われる。
抗体またはその結合フラグメントの親和性は、従来の技術、例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９．Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．５１：６６０－６７２によって記載されている技術を使用して容易に決定することができる。抗体またはその結合フラグメントの抗原、細胞または組織への結合特性は、一般に、例えばＥＬＩＳＡを含む免疫検出法、免疫組織化学（ＩＨＣ）および／もしくは蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光ベースのアッセイを使用して、または表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）を使用）によって決定および評価することができる。
「単離された抗体」
本明細書で使用される場合、「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体（例えば、ｈＣＤ４５ＲＣに特異的に結合する単離された抗体は、ｈＣＤ４５ＲＣ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）を実質的に含まない抗体を指すことを意図している。しかしながら、ｈＣＤ４５ＲＣに特異的に結合する単離された抗体は、他の種からのＣＤ４５ＲＣ分子などの他の抗原に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質、特に、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性成分を含むが、これらに限定されない、抗体の診断的または治療的使用を妨げるものを実質的に含まなくてもよい。
「単離された核酸」
本明細書で使用される場合、「単離された核酸」という用語は、天然の配列に天然に付随する他のゲノムＤＮＡ配列ならびにリボソームおよびポリメラーゼなどのタンパク質または複合体から実質的に分離された核酸を指すことを意図している。この用語は、その天然に存在する環境から除去された核酸配列を包含し、組換えまたはクローニングされたＤＮＡ単離物および化学合成された類似体または異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な核酸には、単離された形態の核酸が含まれる。もちろん、これは、最初に単離された核酸を指し、人の手によって単離された核酸に後で付加される遺伝子または配列を除外するものではない。
「リガンド」
本明細書で使用される場合、「リガンド」という用語は、リガンド／受容体対のメンバーを指し、対の他のメンバーに結合する。
「モノクローナル抗体」
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原部位に向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。モノクローナル抗体は、それらの特異性に加えて、他の抗体によって汚染されずに合成され得るという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明によるモノクローナル抗体またはその結合フラグメントは、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５．Ｎａｔｕｒｅ．２５６（５５１７）：４９５－７によって最初に記載されたハイブリドーマ方法論によって調製され得るか、または細菌、真核動物もしくは植物細胞において組換えＤＮＡ法を使用して作製され得る（特許ＵＳ４，８１６，５６７）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｎａｔｕｒｅ．３５２（６３３６）：６２４－８およびＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２２２（３）：５８１－９７に記載された技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
「ＭＡＩＴ細胞」
本明細書で使用される場合、「ＭＡＩＴ細胞」という用語は、粘膜関連インバリアントＴ細胞を指す。ＭＡＩＴ細胞は、それらのＴＣＲおよびＴＣＲ非依存性シグナル（例えば、サイトカイン）を介して活性化することができる。ＭＡＩＴ細胞は、細菌またはウイルス感染を感知し、これらのシグナルに応答してエフェクターサイトカインを産生し、および／または脱顆粒することができる。
「ＮＫ細胞」
本明細書で使用される場合、「ＮＫ細胞」または「ナチュラルキラー細胞」は、自然免疫において重要な役割を果たす細胞傷害性リンパ球を指す。ＮＫ細胞は、常に他の細胞と接触している。ＮＫ細胞は、その細胞表面に活性化および阻害受容体を発現する。この機構により、ＮＫ細胞は、細胞が「正常」である（したがって、排除されない）かどうか、または細胞が腫瘍細胞もしくは感染細胞などの「異常」である（したがって、死滅する）かどうかを認識することが可能である。
「ＮＫＴ細胞」
本明細書で使用される場合、「ＮＫＴ細胞」または「ナチュラルキラーＴ細胞」は、Ｔリンパ球マーカーおよびＮＫリンパ球マーカーを示す細胞傷害性リンパ球を指す。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞は、自然免疫において重要な２種類の細胞である。ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞はいずれも細胞傷害性細胞であり、病原性細胞ならびに腫瘍細胞の細胞死を誘導する。ＮＫ細胞とＮＫＴ細胞との主な違いは、ＮＫ細胞は、大きな顆粒状リンパ球であるのに対して、ＮＫＴ細胞は、Ｔ細胞の一種であることである。
「核酸」または「ポリヌクレオチド」
本明細書で使用される場合、「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖または二本鎖形態のいずれかで、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）などのホスホジエステル結合によって共有結合したヌクレオチドのポリマーを指す。具体的に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される天然ヌクレオチドの公知の類似体を含有する核酸を包含する。別段示されない限り、特定の核酸配列は、その保存的に改変された変異体（例えば縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰおよび相補的配列、ならびに明示的に示された配列も暗黙的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。
「予防する」または「予防すること」または「予防」
本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」および「予防」という用語は、予防的および予防手段を指し、目的は、対象が所与の期間にわたって病的状態または障害を発症する可能性を低減することである。そのような低減は、例えば、対象における病的状態または障害の少なくとも１つの症状の発症の遅延に反映され得る。
「プロモーター」
本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要な細胞の合成機構または導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
「対象」
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち温血動物、より好ましくはヒトであってもよく、対象は、医療ケアの受領を待っているか、医療ケアを受けているか、医療処置の対象であったか、医療処置の対象であるか、または疾患の発症について監視されている。「哺乳動物」という用語は、本明細書では、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、スポーツ、またはペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む任意の哺乳動物を指し、好ましくは、哺乳動物は、霊長類であり、より好ましくはヒトである。
「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」
本明細書で使用される場合、「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換または形質導入された細胞である。細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。
「治療する」または「治療」または「緩和」
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」または「緩和」という用語は、予防的または予防手段を除外する治療的処置を指し、この目的は、標的とされる病的状態または障害を減速させる（軽減する）ことである。治療を必要とする者には、既に障害を有する者および障害を有すると疑われる者が含まれる。治療量の本発明による単離された抗体またはその結合フラグメント、核酸、発現ベクター、組成物、医薬組成物または医薬を受けた後、前記対象が、以下のうちの１つ以上の観察可能なおよび／または測定可能な減少を示す場合、対象は、標的病理学的状態または障害について首尾よく「治療」される：ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞の数の減少、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈである全細胞のパーセントの減少、特定の疾患もしくは状態に関連する症状のうちの１つ以上のある程度の軽減、罹患率および死亡率の低下、および／または生活の質の問題の改善。疾患の成功した治療および改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られている日常的な手順によって容易に測定可能である。
「Ｔｒｅｇ細胞」
本明細書で使用される場合、「Ｔｒｅｇ細胞」という用語は、例えば自己免疫またはアレルギー反応などの過剰なまたは望ましくない炎症応答を抑制、阻害または予防することができる細胞を指す。一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、抑制活性が可能である。一実施形態では、前記抑制活性は、接触非依存性である。別の実施形態では、前記抑制活性は、接触依存性である。一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、エフェクターＴ細胞に対する抑制作用を示し、好ましくは前記抑制作用は、ＴＣＲ発現および／または活性化に依存する。
「Ｔｅｆｆ細胞」
本明細書で使用される場合、「Ｔｅｆｆ細胞」という用語は、Ｔエフェクター細胞を指す。Ｔｅｆｆ細胞は、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を含む。Ｔｅｆｆ細胞は、抗原チャレンジ後の細胞媒介性免疫において中心的な役割を果たす。Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔｅｆｆ細胞の重要な調節因子である。
「メモリーＴ細胞」
本明細書で使用される場合、「メモリーＴ細胞」という用語は、以前に遭遇し、それらの同族抗原に応答したＴ細胞のサブセットを指す。Ｔ細胞がまだ抗原に曝露されていないナイーブＴ細胞と比較して、メモリーＴ細胞は、より速くより強い免疫応答を高めることができる。
「可変領域」または「可変ドメイン」
本明細書で使用される場合、「可変」という用語は、可変ドメインＶＨおよびＶＬの特定の領域が抗体間で配列が大きく異なり、その標的抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性に使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一に分布していない。これは、抗原結合部位の一部を形成するＶＬドメインおよびＶＨドメインの各々において「超可変ループ」と呼ばれる３つのセグメントに集中している。
Ｖλ軽鎖ドメインの第１、第２および第３の超可変ループは、本明細書ではＬ１（λ）、Ｌ２（λ）およびＬ３（λ）と呼ばれ、ＶＬドメインに残基２４～３３（Ｌ１（λ）９、１０または１１アミノ酸残基からなる）、４９～５３Ｌ２（λ）、３残基からなる）および９０～９６（Ｌ３（λ）、６残基からなる）を含むものとして定義され得る（Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０（３）：２６７－７９）。
Ｖκ軽鎖ドメインの第１、第２および第３の超可変ループは、本明細書ではＬ１（κ）、Ｌ２（κ）およびＬ３（κ）と呼ばれ、ＶＬドメインに残基２５～３３（Ｌ１（κ）、６、７、８、１１、１２または１３残基からなる）、４９～５３（Ｌ２（κ）、３残基からなる）および９０～９７（Ｌ３（κ）、６残基からなる）を含むものとして定義され得る（Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０（３）：２６７－７９）。
ＶＨドメインの第１、第２および第３の超可変ループは、本明細書ではＨ１、Ｈ２およびＨ３と呼ばれ、ＶＨドメインに残基２５～３３（Ｈ１、７、８または９残基からなる）、５２～５６（Ｈ２、３または４残基からなる）および９１～１０５（Ｈ３、長さが非常に可変）を含むものとして定義され得る（Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０（３）：２６７－７９）。
別段示されない限り、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３という用語はそれぞれ、ＶＬドメインの第１、第２および第３の超可変ループを指し、ＶκアイソタイプおよびＶλアイソタイプの両方から得られる超可変ループを包含する。Ｈ１、Ｈ２およびＨ３という用語は、それぞれＶＨドメインの第１、第２および第３の超可変ループを指し、ガンマ（γ）、ミュー（μ）、アルファ（α）、デルタ（δ）またはイプシロン（ε）を含む公知の重鎖アイソタイプのいずれかから得られる超可変ループを包含する。超可変ループＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３は各々、本明細書の上で定義されるように、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」の一部を含み得る。
「変異体」
抗原の「変異体」という用語は、本明細書では、天然抗原とほぼ同一であり、同じ生物学的活性を共有する抗原を指す。天然抗原とその変異体との間の最小差は、例えば、アミノ酸の置換、欠失および／または付加にあり得る。そのような変異体は、例えば、保存的アミノ酸置換を含有し得る。
いくつかの実施形態では、抗原の変異体は、天然抗原の配列と少なくともまたは約７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の配列同一性を示す。
本発明の第１の態様は、ヒトＣＤ４５ＲＣに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関し、前記ＣＡＲは、前記ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの細胞外結合ドメインを含む。一実施形態では、細胞外結合ドメインは、例えば、以下に記載される抗体またはその結合フラグメントなどの抗原結合ドメインである。
ヒトＣＤ４５ＲＣ（ｈＣＤ４５ＲＣ）に結合する単離された抗体またはその結合フラグメントが本明細書中に開示される。単離された抗体またはその結合フラグメントは、精製されてもよい。
好ましくは、単離された抗体またはその結合フラグメントは、
（１）Ｌｏｗｒｙ法により決定される抗体またはその結合フラグメントの８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％以上を超える重量、最も好ましくは９６％、９７％、９８％または９９％を超える重量、
（２）紡糸カップシークエンサーを用いてＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度、または
（３）還元条件下もしくは非還元条件下で、クーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を使用してＳＤＳ－ＰＡＧＥによって示される均一性、に精製される。
本明細書に記載の抗体またはその結合フラグメントは、ヒトＣＤ４５ＲＣ（ｈＣＤ４５ＲＣ）に結合する。
本明細書で使用される場合、「ＣＤ４５」（ＣＤ４５ＲまたはＰＴＰＲＣとしても公知）という用語は、異なるアイソフォームに存在する膜貫通糖タンパク質を指す。ＣＤ４５のこれらの異なるアイソフォームは、それぞれＣＤ４５細胞外領域のＡ、ＢおよびＣ決定基をコードする３つの可変エクソン（エクソン４、５および６）の選択的スプライシングから生じるそれらの細胞外ドメイン構造が異なる。制限されたエピトープと反応する抗体は、「ＣＤ４５Ｒ」としてクラスター化される。したがって、抗ＣＤ４５ＲＡ、抗ＣＤ４５ＲＢおよび抗ＣＤ４５ＲＣ抗体は、それぞれＡ、ＢおよびＣ決定基の発現を含むＣＤ４５アイソフォームを認識する。ＣＤ４５の様々なアイソフォームは、異なる細胞外ドメインを有するが、膜に近い同一の細胞外配列、ならびに膜貫通ドメインおよび約３００残基のタンデムに相同な高度に保存された２つのホスファターゼドメインを含有する大きな細胞質尾部セグメントを有する。ＣＤ４５およびそのアイソフォームは、ＴおよびＢリンパ球上のリンパ球ホスファターゼ関連ホスホタンパク質（ＬＰＡＰ）と非共有結合する。ＣＤ４５は、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３およびＣＤ４を含むいくつかの他の細胞表面抗原に関連することが報告されている。ＣＤ４５は、シグナル伝達リンパ球活性化に関与する。文字「ｈ」（例えば、ｈＣＤ４５）が先行する場合、ＣＤ４５がヒト起源であることを含意する。
本明細書で使用される場合、「ＣＤ４５ＲＣ」という用語は、当業者に周知の２００～２２０ｋＤａの一本鎖Ｉ型膜糖タンパク質を指す。ＣＤ４５ＲＣは、Ｃ決定基（したがって、ＣＤ４５ＲＣという専門用語、すなわち、Ｃ決定基に制限されたＣＤ４５）をコードするエクソン６を含むが、ＡおよびＢ決定基をそれぞれコードするエクソン４および５を欠く、ＣＤ４５の選択的スプライシングアイソフォームである。ヒトＣＤ４５ＲＣのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｐ０８５７５－１０（バージョン１０、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：Ｆ９２Ｃ８７４Ｃ９Ａ１１４８９０）に対応して配列番号１０４で与えられる。このＣＤ４５ＲＣアイソフォームは、Ｂ細胞、ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞のサブセット上で発現されるが、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔｒｅｇ、ＣＤ１４＋単球またはＰＭＮ上では発現されない（Ｐｉｃａｒｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１７．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２（３）：ｅ９００８８）。いくつかのモノクローナル抗体は、すべての異なるアイソフォームに共通のＣＤ４５の部分のエピトープを認識することができるが（これらは、抗ＣＤ４５抗体と称される）、他のモノクローナル抗体は、それらが認識する決定基に応じて、所与のアイソフォームに対する制限された特異性を有する（Ａ、ＢまたはＣ）。文字「ｈ」が先行する場合（例えば、ｈＣＤ４５ＲＣ）、ＣＤ４５ＲＣがヒト起源であることを含意する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＣの細胞外ドメインに結合する。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＣの細胞外ドメイン上に存在する少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５のエクソン６によってコードされるＣ決定基に結合する。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５のエクソン６によってコードされるＣ決定基上の少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、ｈＣＤ４５のエクソン６によってコードされるＣ決定基のアミノ酸配列は、配列番号２３を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ｈＣＤ４５のＣ決定基をコードするエクソン６の核酸配列は、配列番号２４を含むか、またはそれからなる。
配列番号２３
ＤＶＰＧＥＲＳＴＡＳＴＦＰＴＤＰＶＳＰＬＴＴＴＬＳＬＡＨＨＳＳＡＡＬＰＡＲＴＳＮＴＴＩＴＡＮＴＳ
配列番号２４
ＧＡＴＧＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＧＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＡＣＣＣＡＧＴＴＴＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＡＡＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＣＴＴＧＣＡＣＡＣＣＡＣＡＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＣＴＴＡＣＣＴＧＣＡＣＧＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＧＡＡＣＡＣＣＴＣＡ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号２３もしくはそのフラグメントを含むか、またはそれからなる少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号２３もしくはそのフラグメントと少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する配列を含むか、またはそれからなる少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号２４もしくはそのフラグメントを含むか、またはそれからなる核酸配列によってコードされる少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号２４もしくはそのフラグメントと少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する配列を含むか、またはそれからなる核酸配列によってコードされる少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号２３の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６もしくは４７個のアミノ酸もしくはそのフラグメント、または配列番号２３もしくはそのフラグメントと少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する配列を含むか、またはそれらからなる少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号２３の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６もしくは４７個の連続アミノ酸もしくはそのフラグメント、または配列番号２３もしくはそのフラグメントと少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する配列を含むか、またはそれらからなる少なくとも１つのエピトープに結合する。
一実施形態では、配列番号２３を含むか、またはそれからなる少なくとも１つのエピトープのフラグメントは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６または４７個のアミノ酸残基を含むか、またはそれからなる。
一実施形態では、配列番号２３を含むか、またはそれからなる少なくとも１つのエピトープのフラグメントは、配列番号２３を含むか、またはそれからなる配列の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１０１０、１０２０、１０３０、１０４０、１０５０、１０６０、１０７０、１０８０、１０９０、１１００以上の連続アミノ酸残基のスパンにわたって広がる１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６または４７個のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなる。
一実施形態では、配列番号２３を含む配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＰ０８５７５－３（バージョン３、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：６Ｅ９４２Ｅ２ＢＦ６Ｂ１７ＡＣ５）に対応する配列番号９９に記載されるｈＣＤ４５の配列である。
配列番号９９（配列番号２３には下線が引かれている）
ＭＴＭＹＬＷＬＫＬＬＡＦＧＦＡＦＬＤＴＥＶＦＶＴＧＱＳＰＴＰＳＰＴＧＬＴＴＡＫＭＰＳＶＰＬＳＳＤＰＬＰＴＨＴＴＡＦＳＰＡＳＴＦＥＲＥＮＤＦＳＥＴＴＴＳＬＳＰＤＮＴＳＴＱＶＳＰＤＳＬＤＮＡＳＡＦＮＴＴＧＶＳＳＶＱＴＰＨＬＰＴＨＡＤＳＱＴＰＳＡＧＴＤＴＱＴＦＳＧＳＡＡＮＡＫＬＮＰＴＰＧＳＮＡＩＳＤＶＰＧＥＲＳＴＡＳＴＦＰＴＤＰＶＳＰＬＴＴＴＬＳＬＡＨＨＳＳＡＡＬＰＡＲＴＳＮＴＴＩＴＡＮＴＳＤＡＹＬＮＡＳＥＴＴＴＬＳＰＳＧＳＡＶＩＳＴＴＴＩＡＴＴＰＳＫＰＴＣＤＥＫＹＡＮＩＴＶＤＹＬＹＮＫＥＴＫＬＦＴＡＫＬＮＶＮＥＮＶＥＣＧＮＮＴＣＴＮＮＥＶＨＮＬＴＥＣＫＮＡＳＶＳＩＳＨＮＳＣＴＡＰＤＫＴＬＩＬＤＶＰＰＧＶＥＫＦＱＬＨＤＣＴＱＶＥＫＡＤＴＴＩＣＬＫＷＫＮＩＥＴＦＴＣＤＴＱＮＩＴＹＲＦＱＣＧＮＭＩＦＤＮＫＥＩＫＬＥＮＬＥＰＥＨＥＹＫＣＤＳＥＩＬＹＮＮＨＫＦＴＮＡＳＫＩＩＫＴＤＦＧＳＰＧＥＰＱＩＩＦＣＲＳＥＡＡＨＱＧＶＩＴＷＮＰＰＱＲＳＦＨＮＦＴＬＣＹＩＫＥＴＥＫＤＣＬＮＬＤＫＮＬＩＫＹＤＬＱＮＬＫＰＹＴＫＹＶＬＳＬＨＡＹＩＩＡＫＶＱＲＮＧＳＡＡＭＣＨＦＴＴＫＳＡＰＰＳＱＶＷＮＭＴＶＳＭＴＳＤＮＳＭＨＶＫＣＲＰＰＲＤＲＮＧＰＨＥＲＹＨＬＥＶＥＡＧＮＴＬＶＲＮＥＳＨＫＮＣＤＦＲＶＫＤＬＱＹＳＴＤＹＴＦＫＡＹＦＨＮＧＤＹＰＧＥＰＦＩＬＨＨＳＴＳＹＮＳＫＡＬＩＡＦＬＡＦＬＩＩＶＴＳＩＡＬＬＶＶＬＹＫＩＹＤＬＨＫＫＲＳＣＮＬＤＥＱＱＥＬＶＥＲＤＤＥＫＱＬＭＮＶＥＰＩＨＡＤＩＬＬＥＴＹＫＲＫＩＡＤＥＧＲＬＦＬＡＥＦＱＳＩＰＲＶＦＳＫＦＰＩＫＥＡＲＫＰＦＮＱＮＫＮＲＹＶＤＩＬＰＹＤＹＮＲＶＥＬＳＥＩＮＧＤＡＧＳＮＹＩＮＡＳＹＩＤＧＦＫＥＰＲＫＹＩＡＡＱＧＰＲＤＥＴＶＤＤＦＷＲＭＩＷＥＱＫＡＴＶＩＶＭＶＴＲＣＥＥＧＮＲＮＫＣＡＥＹＷＰＳＭＥＥＧＴＲＡＦＧＤＶＶＶＫＩＮＱＨＫＲＣＰＤＹＩＩＱＫＬＮＩＶＮＫＫＥＫＡＴＧＲＥＶＴＨＩＱＦＴＳＷＰＤＨＧＶＰＥＤＰＨＬＬＬＫＬＲＲＲＶＮＡＦＳＮＦＦＳＧＰＩＶＶＨＣＳＡＧＶＧＲＴＧＴＹＩＧＩＤＡＭＬＥＧＬＥＡＥＮＫＶＤＶＹＧＹＶＶＫＬＲＲＱＲＣＬＭＶＱＶＥＡＱＹＩＬＩＨＱＡＬＶＥＹＮＱＦＧＥＴＥＶＮＬＳＥＬＨＰＹＬＨＮＭＫＫＲＤＰＰＳＥＰＳＰＬＥＡＥＦＱＲＬＰＳＹＲＳＷＲＴＱＨＩＧＮＱＥＥＮＫＳＫＮＲＮＳＮＶＩＰＹＤＹＮＲＶＰＬＫＨＥＬＥＭＳＫＥＳＥＨＤＳＤＥＳＳＤＤＤＳＤＳＥＥＰＳＫＹＩＮＡＳＦＩＭＳＹＷＫＰＥＶＭＩＡＡＱＧＰＬＫＥＴＩＧＤＦＷＱＭＩＦＱＲＫＶＫＶＩＶＭＬＴＥＬＫＨＧＤＱＥＩＣＡＱＹＷＧＥＧＫＱＴＹＧＤＩＥＶＤＬＫＤＴＤＫＳＳＴＹＴＬＲＶＦＥＬＲＨＳＫＲＫＤＳＲＴＶＹＱＹＱＹＴＮＷＳＶＥＱＬＰＡＥＰＫＥＬＩＳＭＩＱＶＶＫＱＫＬＰＱＫＮＳＳＥＧＮＫＨＨＫＳＴＰＬＬＩＨＣＲＤＧＳＱＱＴＧＩＦＣＡＬＬＮＬＬＥＳＡＥＴＥＥＶＶＤＩＦＱＶＶＫＡＬＲＫＡＲＰＧＭＶＳＴＦＥＱＹＱＦＬＹＤＶＩＡＳＴＹＰＡＱＮＧＱＶＫＫＮＮＨＱＥＤＫＩＥＦＤＮＥＶＤＫＶＫＱＤＡＮＣＶＮＰＬＧＡＰＥＫＬＰＥＡＫＥＱＡＥＧＳＥＰＴＳＧＴＥＧＰＥＨＳＶＮＧＰＡＳＰＡＬＮＱＧＳ
一実施形態では、配列番号２３を含む配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＰ０８５７５－１０（バージョン１０、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：Ｆ９２Ｃ８７４Ｃ９Ａ１１４８９０）に対応する配列番号１０４に記載されるｈＣＤ４５ＲＣの配列である。
配列番号１０４（配列番号２３には下線が引かれている）
ＭＴＭＹＬＷＬＫＬＬＡＦＧＦＡＦＬＤＴＥＶＦＶＴＧＱＳＰＴＰＳＰＴＤＶＰＧＥＲＳＴＡＳＴＦＰＴＤＰＶＳＰＬＴＴＴＬＳＬＡＨＨＳＳＡＡＬＰＡＲＴＳＮＴＴＩＴＡＮＴＳＤＡＹＬＮＡＳＥＴＴＴＬＳＰＳＧＳＡＶＩＳＴＴＴＩＡＴＴＰＳＫＰＴＣＤＥＫＹＡＮＩＴＶＤＹＬＹＮＫＥＴＫＬＦＴＡＫＬＮＶＮＥＮＶＥＣＧＮＮＴＣＴＮＮＥＶＨＮＬＴＥＣＫＮＡＳＶＳＩＳＨＮＳＣＴＡＰＤＫＴＬＩＬＤＶＰＰＧＶＥＫＦＱＬＨＤＣＴＱＶＥＫＡＤＴＴＩＣＬＫＷＫＮＩＥＴＦＴＣＤＴＱＮＩＴＹＲＦＱＣＧＮＭＩＦＤＮＫＥＩＫＬＥＮＬＥＰＥＨＥＹＫＣＤＳＥＩＬＹＮＮＨＫＦＴＮＡＳＫＩＩＫＴＤＦＧＳＰＧＥＰＱＩＩＦＣＲＳＥＡＡＨＱＧＶＩＴＷＮＰＰＱＲＳＦＨＮＦＴＬＣＹＩＫＥＴＥＫＤＣＬＮＬＤＫＮＬＩＫＹＤＬＱＮＬＫＰＹＴＫＹＶＬＳＬＨＡＹＩＩＡＫＶＱＲＮＧＳＡＡＭＣＨＦＴＴＫＳＡＰＰＳＱＶＷＮＭＴＶＳＭＴＳＤＮＳＭＨＶＫＣＲＰＰＲＤＲＮＧＰＨＥＲＹＨＬＥＶＥＡＧＮＴＬＶＲＮＥＳＨＫＮＣＤＦＲＶＫＤＬＱＹＳＴＤＹＴＦＫＡＹＦＨＮＧＤＹＰＧＥＰＦＩＬＨＨＳＴＳＹＮＳＫＡＬＩＡＦＬＡＦＬＩＩＶＴＳＩＡＬＬＶＶＬＹＫＩＹＤＬＨＫＫＲＳＣＮＬＤＥＱＱＥＬＶＥＲＤＤＥＫＱＬＭＮＶＥＰＩＨＡＤＩＬＬＥＴＹＫＲＫＩＡＤＥＧＲＬＦＬＡＥＦＱＳＩＰＲＶＦＳＫＦＰＩＫＥＡＲＫＰＦＮＱＮＫＮＲＹＶＤＩＬＰＹＤＹＮＲＶＥＬＳＥＩＮＧＤＡＧＳＮＹＩＮＡＳＹＩＤＧＦＫＥＰＲＫＹＩＡＡＱＧＰＲＤＥＴＶＤＤＦＷＲＭＩＷＥＱＫＡＴＶＩＶＭＶＴＲＣＥＥＧＮＲＮＫＣＡＥＹＷＰＳＭＥＥＧＴＲＡＦＧＤＶＶＶＫＩＮＱＨＫＲＣＰＤＹＩＩＱＫＬＮＩＶＮＫＫＥＫＡＴＧＲＥＶＴＨＩＱＦＴＳＷＰＤＨＧＶＰＥＤＰＨＬＬＬＫＬＲＲＲＶＮＡＦＳＮＦＦＳＧＰＩＶＶＨＣＳＡＧＶＧＲＴＧＴＹＩＧＩＤＡＭＬＥＧＬＥＡＥＮＫＶＤＶＹＧＹＶＶＫＬＲＲＱＲＣＬＭＶＱＶＥＡＱＹＩＬＩＨＱＡＬＶＥＹＮＱＦＧＥＴＥＶＮＬＳＥＬＨＰＹＬＨＮＭＫＫＲＤＰＰＳＥＰＳＰＬＥＡＥＦＱＲＬＰＳＹＲＳＷＲＴＱＨＩＧＮＱＥＥＮＫＳＫＮＲＮＳＮＶＩＰＹＤＹＮＲＶＰＬＫＨＥＬＥＭＳＫＥＳＥＨＤＳＤＥＳＳＤＤＤＳＤＳＥＥＰＳＫＹＩＮＡＳＦＩＭＳＹＷＫＰＥＶＭＩＡＡＱＧＰＬＫＥＴＩＧＤＦＷＱＭＩＦＱＲＫＶＫＶＩＶＭＬＴＥＬＫＨＧＤＱＥＩＣＡＱＹＷＧＥＧＫＱＴＹＧＤＩＥＶＤＬＫＤＴＤＫＳＳＴＹＴＬＲＶＦＥＬＲＨＳＫＲＫＤＳＲＴＶＹＱＹＱＹＴＮＷＳＶＥＱＬＰＡＥＰＫＥＬＩＳＭＩＱＶＶＫＱＫＬＰＱＫＮＳＳＥＧＮＫＨＨＫＳＴＰＬＬＩＨＣＲＤＧＳＱＱＴＧＩＦＣＡＬＬＮＬＬＥＳＡＥＴＥＥＶＶＤＩＦＱＶＶＫＡＬＲＫＡＲＰＧＭＶＳＴＦＥＱＹＱＦＬＹＤＶＩＡＳＴＹＰＡＱＮＧＱＶＫＫＮＮＨＱＥＤＫＩＥＦＤＮＥＶＤＫＶＫＱＤＡＮＣＶＮＰＬＧＡＰＥＫＬＰＥＡＫＥＱＡＥＧＳＥＰＴＳＧＴＥＧＰＥＨＳＶＮＧＰＡＳＰＡＬＮＱＧＳ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５のエクソン４によってコードされるＡ決定基に結合しない。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５のエクソン４によってコードされるＡ決定基上の少なくとも１つのエピトープに結合しない。
一実施形態では、ｈＣＤ４５のエクソン４によってコードされるＡ決定基のアミノ酸配列は、配列番号１０５を含むか、またはそれからなる。
配列番号１０５
ＧＬＴＴＡＫＭＰＳＶＰＬＳＳＤＰＬＰＴＨＴＴＡＦＳＰＡＳＴＦＥＲＥＮＤＦＳＥＴＴＴＳＬＳＰＤＮＴＳＴＱＶＳＰＤＳＬＤＮＡＳＡＦＮＴＴ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５のエクソン５によってコードされるＢ決定基に結合しない。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５のエクソン５によってコードされるＢ決定基上の少なくとも１つのエピトープに結合しない。
一実施形態では、ｈＣＤ４５のエクソン５によってコードされるＢ決定基のアミノ酸配列は、配列番号１０６を含むか、またはそれからなる。
配列番号１０６
ＧＶＳＳＶＱＴＰＨＬＰＴＨＡＤＳＱＴＰＳＡＧＴＤＴＱＴＦＳＧＳＡＡＮＡＫＬＮＰＴＰＧＳＮＡＩＳ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＡに結合しない。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つのエピトープに結合しない。
一実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＡのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＰ０８５７５－８（バージョン８、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：Ｆ４２Ｃ１ＦＥＣ９ＥＤＥ４ＢＣ０）に対応する配列番号１０７を含むか、またはそれからなる。
配列番号１０７
ＭＴＭＹＬＷＬＫＬＬＡＦＧＦＡＦＬＤＴＥＶＦＶＴＧＱＳＰＴＰＳＰＴＧＬＴＴＡＫＭＰＳＶＰＬＳＳＤＰＬＰＴＨＴＴＡＦＳＰＡＳＴＦＥＲＥＮＤＦＳＥＴＴＴＳＬＳＰＤＮＴＳＴＱＶＳＰＤＳＬＤＮＡＳＡＦＮＴＴＤＡＹＬＮＡＳＥＴＴＴＬＳＰＳＧＳＡＶＩＳＴＴＴＩＡＴＴＰＳＫＰＴＣＤＥＫＹＡＮＩＴＶＤＹＬＹＮＫＥＴＫＬＦＴＡＫＬＮＶＮＥＮＶＥＣＧＮＮＴＣＴＮＮＥＶＨＮＬＴＥＣＫＮＡＳＶＳＩＳＨＮＳＣＴＡＰＤＫＴＬＩＬＤＶＰＰＧＶＥＫＦＱＬＨＤＣＴＱＶＥＫＡＤＴＴＩＣＬＫＷＫＮＩＥＴＦＴＣＤＴＱＮＩＴＹＲＦＱＣＧＮＭＩＦＤＮＫＥＩＫＬＥＮＬＥＰＥＨＥＹＫＣＤＳＥＩＬＹＮＮＨＫＦＴＮＡＳＫＩＩＫＴＤＦＧＳＰＧＥＰＱＩＩＦＣＲＳＥＡＡＨＱＧＶＩＴＷＮＰＰＱＲＳＦＨＮＦＴＬＣＹＩＫＥＴＥＫＤＣＬＮＬＤＫＮＬＩＫＹＤＬＱＮＬＫＰＹＴＫＹＶＬＳＬＨＡＹＩＩＡＫＶＱＲＮＧＳＡＡＭＣＨＦＴＴＫＳＡＰＰＳＱＶＷＮＭＴＶＳＭＴＳＤＮＳＭＨＶＫＣＲＰＰＲＤＲＮＧＰＨＥＲＹＨＬＥＶＥＡＧＮＴＬＶＲＮＥＳＨＫＮＣＤＦＲＶＫＤＬＱＹＳＴＤＹＴＦＫＡＹＦＨＮＧＤＹＰＧＥＰＦＩＬＨＨＳＴＳＹＮＳＫＡＬＩＡＦＬＡＦＬＩＩＶＴＳＩＡＬＬＶＶＬＹＫＩＹＤＬＨＫＫＲＳＣＮＬＤＥＱＱＥＬＶＥＲＤＤＥＫＱＬＭＮＶＥＰＩＨＡＤＩＬＬＥＴＹＫＲＫＩＡＤＥＧＲＬＦＬＡＥＦＱＳＩＰＲＶＦＳＫＦＰＩＫＥＡＲＫＰＦＮＱＮＫＮＲＹＶＤＩＬＰＹＤＹＮＲＶＥＬＳＥＩＮＧＤＡＧＳＮＹＩＮＡＳＹＩＤＧＦＫＥＰＲＫＹＩＡＡＱＧＰＲＤＥＴＶＤＤＦＷＲＭＩＷＥＱＫＡＴＶＩＶＭＶＴＲＣＥＥＧＮＲＮＫＣＡＥＹＷＰＳＭＥＥＧＴＲＡＦＧＤＶＶＶＫＩＮＱＨＫＲＣＰＤＹＩＩＱＫＬＮＩＶＮＫＫＥＫＡＴＧＲＥＶＴＨＩＱＦＴＳＷＰＤＨＧＶＰＥＤＰＨＬＬＬＫＬＲＲＲＶＮＡＦＳＮＦＦＳＧＰＩＶＶＨＣＳＡＧＶＧＲＴＧＴＹＩＧＩＤＡＭＬＥＧＬＥＡＥＮＫＶＤＶＹＧＹＶＶＫＬＲＲＱＲＣＬＭＶＱＶＥＡＱＹＩＬＩＨＱＡＬＶＥＹＮＱＦＧＥＴＥＶＮＬＳＥＬＨＰＹＬＨＮＭＫＫＲＤＰＰＳＥＰＳＰＬＥＡＥＦＱＲＬＰＳＹＲＳＷＲＴＱＨＩＧＮＱＥＥＮＫＳＫＮＲＮＳＮＶＩＰＹＤＹＮＲＶＰＬＫＨＥＬＥＭＳＫＥＳＥＨＤＳＤＥＳＳＤＤＤＳＤＳＥＥＰＳＫＹＩＮＡＳＦＩＭＳＹＷＫＰＥＶＭＩＡＡＱＧＰＬＫＥＴＩＧＤＦＷＱＭＩＦＱＲＫＶＫＶＩＶＭＬＴＥＬＫＨＧＤＱＥＩＣＡＱＹＷＧＥＧＫＱＴＹＧＤＩＥＶＤＬＫＤＴＤＫＳＳＴＹＴＬＲＶＦＥＬＲＨＳＫＲＫＤＳＲＴＶＹＱＹＱＹＴＮＷＳＶＥＱＬＰＡＥＰＫＥＬＩＳＭＩＱＶＶＫＱＫＬＰＱＫＮＳＳＥＧＮＫＨＨＫＳＴＰＬＬＩＨＣＲＤＧＳＱＱＴＧＩＦＣＡＬＬＮＬＬＥＳＡＥＴＥＥＶＶＤＩＦＱＶＶＫＡＬＲＫＡＲＰＧＭＶＳＴＦＥＱＹＱＦＬＹＤＶＩＡＳＴＹＰＡＱＮＧＱＶＫＫＮＮＨＱＥＤＫＩＥＦＤＮＥＶＤＫＶＫＱＤＡＮＣＶＮＰＬＧＡＰＥＫＬＰＥＡＫＥＱＡＥＧＳＥＰＴＳＧＴＥＧＰＥＨＳＶＮＧＰＡＳＰＡＬＮＱＧＳ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＢに結合しない。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＢの少なくとも１つのエピトープに結合しない。
一実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＢのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＰ０８５７５－９（バージョン９、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：７４５８７００３７９１０Ｃ５７５）に対応する配列番号１０８を含むか、またはそれからなる。
配列番号１０８
ＭＴＭＹＬＷＬＫＬＬＡＦＧＦＡＦＬＤＴＥＶＦＶＴＧＱＳＰＴＰＳＰＴＧＶＳＳＶＱＴＰＨＬＰＴＨＡＤＳＱＴＰＳＡＧＴＤＴＱＴＦＳＧＳＡＡＮＡＫＬＮＰＴＰＧＳＮＡＩＳＤＡＹＬＮＡＳＥＴＴＴＬＳＰＳＧＳＡＶＩＳＴＴＴＩＡＴＴＰＳＫＰＴＣＤＥＫＹＡＮＩＴＶＤＹＬＹＮＫＥＴＫＬＦＴＡＫＬＮＶＮＥＮＶＥＣＧＮＮＴＣＴＮＮＥＶＨＮＬＴＥＣＫＮＡＳＶＳＩＳＨＮＳＣＴＡＰＤＫＴＬＩＬＤＶＰＰＧＶＥＫＦＱＬＨＤＣＴＱＶＥＫＡＤＴＴＩＣＬＫＷＫＮＩＥＴＦＴＣＤＴＱＮＩＴＹＲＦＱＣＧＮＭＩＦＤＮＫＥＩＫＬＥＮＬＥＰＥＨＥＹＫＣＤＳＥＩＬＹＮＮＨＫＦＴＮＡＳＫＩＩＫＴＤＦＧＳＰＧＥＰＱＩＩＦＣＲＳＥＡＡＨＱＧＶＩＴＷＮＰＰＱＲＳＦＨＮＦＴＬＣＹＩＫＥＴＥＫＤＣＬＮＬＤＫＮＬＩＫＹＤＬＱＮＬＫＰＹＴＫＹＶＬＳＬＨＡＹＩＩＡＫＶＱＲＮＧＳＡＡＭＣＨＦＴＴＫＳＡＰＰＳＱＶＷＮＭＴＶＳＭＴＳＤＮＳＭＨＶＫＣＲＰＰＲＤＲＮＧＰＨＥＲＹＨＬＥＶＥＡＧＮＴＬＶＲＮＥＳＨＫＮＣＤＦＲＶＫＤＬＱＹＳＴＤＹＴＦＫＡＹＦＨＮＧＤＹＰＧＥＰＦＩＬＨＨＳＴＳＹＮＳＫＡＬＩＡＦＬＡＦＬＩＩＶＴＳＩＡＬＬＶＶＬＹＫＩＹＤＬＨＫＫＲＳＣＮＬＤＥＱＱＥＬＶＥＲＤＤＥＫＱＬＭＮＶＥＰＩＨＡＤＩＬＬＥＴＹＫＲＫＩＡＤＥＧＲＬＦＬＡＥＦＱＳＩＰＲＶＦＳＫＦＰＩＫＥＡＲＫＰＦＮＱＮＫＮＲＹＶＤＩＬＰＹＤＹＮＲＶＥＬＳＥＩＮＧＤＡＧＳＮＹＩＮＡＳＹＩＤＧＦＫＥＰＲＫＹＩＡＡＱＧＰＲＤＥＴＶＤＤＦＷＲＭＩＷＥＱＫＡＴＶＩＶＭＶＴＲＣＥＥＧＮＲＮＫＣＡＥＹＷＰＳＭＥＥＧＴＲＡＦＧＤＶＶＶＫＩＮＱＨＫＲＣＰＤＹＩＩＱＫＬＮＩＶＮＫＫＥＫＡＴＧＲＥＶＴＨＩＱＦＴＳＷＰＤＨＧＶＰＥＤＰＨＬＬＬＫＬＲＲＲＶＮＡＦＳＮＦＦＳＧＰＩＶＶＨＣＳＡＧＶＧＲＴＧＴＹＩＧＩＤＡＭＬＥＧＬＥＡＥＮＫＶＤＶＹＧＹＶＶＫＬＲＲＱＲＣＬＭＶＱＶＥＡＱＹＩＬＩＨＱＡＬＶＥＹＮＱＦＧＥＴＥＶＮＬＳＥＬＨＰＹＬＨＮＭＫＫＲＤＰＰＳＥＰＳＰＬＥＡＥＦＱＲＬＰＳＹＲＳＷＲＴＱＨＩＧＮＱＥＥＮＫＳＫＮＲＮＳＮＶＩＰＹＤＹＮＲＶＰＬＫＨＥＬＥＭＳＫＥＳＥＨＤＳＤＥＳＳＤＤＤＳＤＳＥＥＰＳＫＹＩＮＡＳＦＩＭＳＹＷＫＰＥＶＭＩＡＡＱＧＰＬＫＥＴＩＧＤＦＷＱＭＩＦＱＲＫＶＫＶＩＶＭＬＴＥＬＫＨＧＤＱＥＩＣＡＱＹＷＧＥＧＫＱＴＹＧＤＩＥＶＤＬＫＤＴＤＫＳＳＴＹＴＬＲＶＦＥＬＲＨＳＫＲＫＤＳＲＴＶＹＱＹＱＹＴＮＷＳＶＥＱＬＰＡＥＰＫＥＬＩＳＭＩＱＶＶＫＱＫＬＰＱＫＮＳＳＥＧＮＫＨＨＫＳＴＰＬＬＩＨＣＲＤＧＳＱＱＴＧＩＦＣＡＬＬＮＬＬＥＳＡＥＴＥＥＶＶＤＩＦＱＶＶＫＡＬＲＫＡＲＰＧＭＶＳＴＦＥＱＹＱＦＬＹＤＶＩＡＳＴＹＰＡＱＮＧＱＶＫＫＮＮＨＱＥＤＫＩＥＦＤＮＥＶＤＫＶＫＱＤＡＮＣＶＮＰＬＧＡＰＥＫＬＰＥＡＫＥＱＡＥＧＳＥＰＴＳＧＴＥＧＰＥＨＳＶＮＧＰＡＳＰＡＬＮＱＧＳ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＡＢに結合しない。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５ＲＡＢの少なくとも１つのエピトープに結合しない。
一実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＡＢのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＰ０８５７５－５（バージョン５、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：ＥＡ４０ＢＥ９９５ＣＤ９８Ｆ７Ｃ）に対応する配列番号１０９を含むか、またはそれからなる。
配列番号１０９
ＭＴＭＹＬＷＬＫＬＬＡＦＧＦＡＦＬＤＴＥＶＦＶＴＧＱＳＰＴＰＳＰＴＧＬＴＴＡＫＭＰＳＶＰＬＳＳＤＰＬＰＴＨＴＴＡＦＳＰＡＳＴＦＥＲＥＮＤＦＳＥＴＴＴＳＬＳＰＤＮＴＳＴＱＶＳＰＤＳＬＤＮＡＳＡＦＮＴＴＧＶＳＳＶＱＴＰＨＬＰＴＨＡＤＳＱＴＰＳＡＧＴＤＴＱＴＦＳＧＳＡＡＮＡＫＬＮＰＴＰＧＳＮＡＩＳＤＡＹＬＮＡＳＥＴＴＴＬＳＰＳＧＳＡＶＩＳＴＴＴＩＡＴＴＰＳＫＰＴＣＤＥＫＹＡＮＩＴＶＤＹＬＹＮＫＥＴＫＬＦＴＡＫＬＮＶＮＥＮＶＥＣＧＮＮＴＣＴＮＮＥＶＨＮＬＴＥＣＫＮＡＳＶＳＩＳＨＮＳＣＴＡＰＤＫＴＬＩＬＤＶＰＰＧＶＥＫＦＱＬＨＤＣＴＱＶＥＫＡＤＴＴＩＣＬＫＷＫＮＩＥＴＦＴＣＤＴＱＮＩＴＹＲＦＱＣＧＮＭＩＦＤＮＫＥＩＫＬＥＮＬＥＰＥＨＥＹＫＣＤＳＥＩＬＹＮＮＨＫＦＴＮＡＳＫＩＩＫＴＤＦＧＳＰＧＥＰＱＩＩＦＣＲＳＥＡＡＨＱＧＶＩＴＷＮＰＰＱＲＳＦＨＮＦＴＬＣＹＩＫＥＴＥＫＤＣＬＮＬＤＫＮＬＩＫＹＤＬＱＮＬＫＰＹＴＫＹＶＬＳＬＨＡＹＩＩＡＫＶＱＲＮＧＳＡＡＭＣＨＦＴＴＫＳＡＰＰＳＱＶＷＮＭＴＶＳＭＴＳＤＮＳＭＨＶＫＣＲＰＰＲＤＲＮＧＰＨＥＲＹＨＬＥＶＥＡＧＮＴＬＶＲＮＥＳＨＫＮＣＤＦＲＶＫＤＬＱＹＳＴＤＹＴＦＫＡＹＦＨＮＧＤＹＰＧＥＰＦＩＬＨＨＳＴＳＹＮＳＫＡＬＩＡＦＬＡＦＬＩＩＶＴＳＩＡＬＬＶＶＬＹＫＩＹＤＬＨＫＫＲＳＣＮＬＤＥＱＱＥＬＶＥＲＤＤＥＫＱＬＭＮＶＥＰＩＨＡＤＩＬＬＥＴＹＫＲＫＩＡＤＥＧＲＬＦＬＡＥＦＱＳＩＰＲＶＦＳＫＦＰＩＫＥＡＲＫＰＦＮＱＮＫＮＲＹＶＤＩＬＰＹＤＹＮＲＶＥＬＳＥＩＮＧＤＡＧＳＮＹＩＮＡＳＹＩＤＧＦＫＥＰＲＫＹＩＡＡＱＧＰＲＤＥＴＶＤＤＦＷＲＭＩＷＥＱＫＡＴＶＩＶＭＶＴＲＣＥＥＧＮＲＮＫＣＡＥＹＷＰＳＭＥＥＧＴＲＡＦＧＤＶＶＶＫＩＮＱＨＫＲＣＰＤＹＩＩＱＫＬＮＩＶＮＫＫＥＫＡＴＧＲＥＶＴＨＩＱＦＴＳＷＰＤＨＧＶＰＥＤＰＨＬＬＬＫＬＲＲＲＶＮＡＦＳＮＦＦＳＧＰＩＶＶＨＣＳＡＧＶＧＲＴＧＴＹＩＧＩＤＡＭＬＥＧＬＥＡＥＮＫＶＤＶＹＧＹＶＶＫＬＲＲＱＲＣＬＭＶＱＶＥＡＱＹＩＬＩＨＱＡＬＶＥＹＮＱＦＧＥＴＥＶＮＬＳＥＬＨＰＹＬＨＮＭＫＫＲＤＰＰＳＥＰＳＰＬＥＡＥＦＱＲＬＰＳＹＲＳＷＲＴＱＨＩＧＮＱＥＥＮＫＳＫＮＲＮＳＮＶＩＰＹＤＹＮＲＶＰＬＫＨＥＬＥＭＳＫＥＳＥＨＤＳＤＥＳＳＤＤＤＳＤＳＥＥＰＳＫＹＩＮＡＳＦＩＭＳＹＷＫＰＥＶＭＩＡＡＱＧＰＬＫＥＴＩＧＤＦＷＱＭＩＦＱＲＫＶＫＶＩＶＭＬＴＥＬＫＨＧＤＱＥＩＣＡＱＹＷＧＥＧＫＱＴＹＧＤＩＥＶＤＬＫＤＴＤＫＳＳＴＹＴＬＲＶＦＥＬＲＨＳＫＲＫＤＳＲＴＶＹＱＹＱＹＴＮＷＳＶＥＱＬＰＡＥＰＫＥＬＩＳＭＩＱＶＶＫＱＫＬＰＱＫＮＳＳＥＧＮＫＨＨＫＳＴＰＬＬＩＨＣＲＤＧＳＱＱＴＧＩＦＣＡＬＬＮＬＬＥＳＡＥＴＥＥＶＶＤＩＦＱＶＶＫＡＬＲＫＡＲＰＧＭＶＳＴＦＥＱＹＱＦＬＹＤＶＩＡＳＴＹＰＡＱＮＧＱＶＫＫＮＮＨＱＥＤＫＩＥＦＤＮＥＶＤＫＶＫＱＤＡＮＣＶＮＰＬＧＡＰＥＫＬＰＥＡＫＥＱＡＥＧＳＥＰＴＳＧＴＥＧＰＥＨＳＶＮＧＰＡＳＰＡＬＮＱＧＳ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５Ｒ０に結合しない。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ｈＣＤ４５Ｒ０の少なくとも１つのエピトープに結合しない。
一実施形態では、ｈＣＤ４５Ｒ０のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＰ０８５７５－４（バージョン４、２０１８年３月２８日修正－チェックサム：Ｄ３ＣＢ３６４ＥＦ４２４３３８４）に対応する配列番号１１０を含むか、またはそれからなる。
配列番号１１０
ＭＴＭＹＬＷＬＫＬＬＡＦＧＦＡＦＬＤＴＥＶＦＶＴＧＱＳＰＴＰＳＰＴＤＡＹＬＮＡＳＥＴＴＴＬＳＰＳＧＳＡＶＩＳＴＴＴＩＡＴＴＰＳＫＰＴＣＤＥＫＹＡＮＩＴＶＤＹＬＹＮＫＥＴＫＬＦＴＡＫＬＮＶＮＥＮＶＥＣＧＮＮＴＣＴＮＮＥＶＨＮＬＴＥＣＫＮＡＳＶＳＩＳＨＮＳＣＴＡＰＤＫＴＬＩＬＤＶＰＰＧＶＥＫＦＱＬＨＤＣＴＱＶＥＫＡＤＴＴＩＣＬＫＷＫＮＩＥＴＦＴＣＤＴＱＮＩＴＹＲＦＱＣＧＮＭＩＦＤＮＫＥＩＫＬＥＮＬＥＰＥＨＥＹＫＣＤＳＥＩＬＹＮＮＨＫＦＴＮＡＳＫＩＩＫＴＤＦＧＳＰＧＥＰＱＩＩＦＣＲＳＥＡＡＨＱＧＶＩＴＷＮＰＰＱＲＳＦＨＮＦＴＬＣＹＩＫＥＴＥＫＤＣＬＮＬＤＫＮＬＩＫＹＤＬＱＮＬＫＰＹＴＫＹＶＬＳＬＨＡＹＩＩＡＫＶＱＲＮＧＳＡＡＭＣＨＦＴＴＫＳＡＰＰＳＱＶＷＮＭＴＶＳＭＴＳＤＮＳＭＨＶＫＣＲＰＰＲＤＲＮＧＰＨＥＲＹＨＬＥＶＥＡＧＮＴＬＶＲＮＥＳＨＫＮＣＤＦＲＶＫＤＬＱＹＳＴＤＹＴＦＫＡＹＦＨＮＧＤＹＰＧＥＰＦＩＬＨＨＳＴＳＹＮＳＫＡＬＩＡＦＬＡＦＬＩＩＶＴＳＩＡＬＬＶＶＬＹＫＩＹＤＬＨＫＫＲＳＣＮＬＤＥＱＱＥＬＶＥＲＤＤＥＫＱＬＭＮＶＥＰＩＨＡＤＩＬＬＥＴＹＫＲＫＩＡＤＥＧＲＬＦＬＡＥＦＱＳＩＰＲＶＦＳＫＦＰＩＫＥＡＲＫＰＦＮＱＮＫＮＲＹＶＤＩＬＰＹＤＹＮＲＶＥＬＳＥＩＮＧＤＡＧＳＮＹＩＮＡＳＹＩＤＧＦＫＥＰＲＫＹＩＡＡＱＧＰＲＤＥＴＶＤＤＦＷＲＭＩＷＥＱＫＡＴＶＩＶＭＶＴＲＣＥＥＧＮＲＮＫＣＡＥＹＷＰＳＭＥＥＧＴＲＡＦＧＤＶＶＶＫＩＮＱＨＫＲＣＰＤＹＩＩＱＫＬＮＩＶＮＫＫＥＫＡＴＧＲＥＶＴＨＩＱＦＴＳＷＰＤＨＧＶＰＥＤＰＨＬＬＬＫＬＲＲＲＶＮＡＦＳＮＦＦＳＧＰＩＶＶＨＣＳＡＧＶＧＲＴＧＴＹＩＧＩＤＡＭＬＥＧＬＥＡＥＮＫＶＤＶＹＧＹＶＶＫＬＲＲＱＲＣＬＭＶＱＶＥＡＱＹＩＬＩＨＱＡＬＶＥＹＮＱＦＧＥＴＥＶＮＬＳＥＬＨＰＹＬＨＮＭＫＫＲＤＰＰＳＥＰＳＰＬＥＡＥＦＱＲＬＰＳＹＲＳＷＲＴＱＨＩＧＮＱＥＥＮＫＳＫＮＲＮＳＮＶＩＰＹＤＹＮＲＶＰＬＫＨＥＬＥＭＳＫＥＳＥＨＤＳＤＥＳＳＤＤＤＳＤＳＥＥＰＳＫＹＩＮＡＳＦＩＭＳＹＷＫＰＥＶＭＩＡＡＱＧＰＬＫＥＴＩＧＤＦＷＱＭＩＦＱＲＫＶＫＶＩＶＭＬＴＥＬＫＨＧＤＱＥＩＣＡＱＹＷＧＥＧＫＱＴＹＧＤＩＥＶＤＬＫＤＴＤＫＳＳＴＹＴＬＲＶＦＥＬＲＨＳＫＲＫＤＳＲＴＶＹＱＹＱＹＴＮＷＳＶＥＱＬＰＡＥＰＫＥＬＩＳＭＩＱＶＶＫＱＫＬＰＱＫＮＳＳＥＧＮＫＨＨＫＳＴＰＬＬＩＨＣＲＤＧＳＱＱＴＧＩＦＣＡＬＬＮＬＬＥＳＡＥＴＥＥＶＶＤＩＦＱＶＶＫＡＬＲＫＡＲＰＧＭＶＳＴＦＥＱＹＱＦＬＹＤＶＩＡＳＴＹＰＡＱＮＧＱＶＫＫＮＮＨＱＥＤＫＩＥＦＤＮＥＶＤＫＶＫＱＤＡＮＣＶＮＰＬＧＡＰＥＫＬＰＥＡＫＥＱＡＥＧＳＥＰＴＳＧＴＥＧＰＥＨＳＶＮＧＰＡＳＰＡＬＮＱＧＳ
一実施形態では、少なくとも１つのエピトープは、立体構造エピトープである。別の実施形態では、少なくとも１つのエピトープは、連続エピトープである。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、約５×１０－７Ｍ以下、好ましくは約２．５×１０－７Ｍ以下、約１×１０－７Ｍ以下、約７．５×１０－８Ｍ以下、約５×１０－８Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋｄ）でｈＣＤ４５ＲＣに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、約１×１０４Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、好ましくは約５×１０４Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、約１×１０５Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、約２．５×１０５Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、約５×１０５Ｍ－１ｓｅｃ－１以上の会合速度（Ｋｏｎ）でｈＣＤ４５ＲＣに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、約５×１０－２ｓｅｃ－１以下、好ましくは約４×１０－２ｓｅｃ－１以下、約３×１０－２ｓｅｃ－１以下、約２×１０－２ｓｅｃ－１以下、約１．５×１０－２ｓｅｃ－１以下の解離速度（Ｋｏｆｆ）でｈＣＤ４５ＲＣに結合する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－約５×１０－７Ｍ以下、好ましくは約２．５×１０－７Ｍ以下、約１×１０－７Ｍ以下、約７．５×１０－８Ｍ以下、約５×１０－８Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋｄ）、
－約１×１０４Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、好ましくは約５×１０４Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、約１×１０５Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、約２．５×１０５Ｍ－１ｓｅｃ－１以上、約５×１０５Ｍ－１ｓｅｃ－１以上の会合速度（Ｋｏｎ）、および
－約５×１０－２ｓｅｃ－１以下、好ましくは約４×１０－２ｓｅｃ－１以下、約３×１０－２ｓｅｃ－１以下、約２×１０－２ｓｅｃ－１以下、約１．５×１０－２ｓｅｃ－１以下の解離速度（Ｋｏｆｆ）、のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つでｈＣＤ４５ＲＣに結合する。
抗体またはその結合フラグメントのそのリガンドに対する親和性（例えば、Ｋｄ、ｋｏｆｆ、およびｋｏｎを決定することを含む）を決定するための方法は、当技術分野で周知であり、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡおよびＫｉｎＥｘＡを含むが、これらに限定されない。
好ましい方法は、抗体またはその結合フラグメントの親和性を決定するために固定化ＣＤ４５ＲＣを使用するＳＰＲに依存するＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）である。この方法を実施する方法は、実施例の節でさらに説明される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ポリクローナル抗体またはその結合フラグメントである。
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその結合フラグメントである。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、抗体全体、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆｄ、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディおよびテトラボディを含むか、またはそれらからなる群から選択される分子である。
抗体結合フラグメントは、標準的な方法を使用して得ることができる。例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントは、従来の技術に従って、単離された抗体のプロテアーゼ消化によって産生され得る。抗体またはその結合フラグメントを、公知の方法を使用して改変することができることも理解されよう。例えば、インビボでのクリアランスを遅らせ、より望ましい薬物動態学的プロファイルを得るために、抗体またはその結合フラグメントは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で改変され得る。ＰＥＧを抗体またはその結合フラグメントに連結および部位特異的にコンジュゲート化するための方法は、例えば、Ｌｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．１６（３）：１０６－１９；Ｄｅｌｇａｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９９６．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．７３（２）：１７５－８２に記載されている。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ユニボディ、ドメイン抗体およびナノボディを含むか、またはそれらからなる群から選択される分子である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アデクチン、アトマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、バーサボディおよびデュオカリンを含むか、またはそれらからなる群から選択される模倣物である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントはまた、多重特異性抗体またはその結合フラグメント、すなわち、その１つが本発明によるｈＣＤ４５ＲＣである、２つ以上、例えば少なくとも２つの異なる抗原に対して免疫特異性である多重特異性抗体またはその結合フラグメントを包含する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントはまた、抗体のポリマーまたはその結合フラグメント、すなわち同一であるか異なるかにかかわらず、直接的または間接的に共有結合している２つ以上、例えば少なくとも２つの抗体またはその結合フラグメントを包含する。
以下では、特に明記しない限り、ＣＤＲの番号付けおよび定義は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａの定義に従う。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）を含み：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：Ｘ１－ＩＦ－Ｘ２－ＧＧ－Ｘ３－Ｙ－Ｘ４－Ｎ－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｇ（配列番号２）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）、
Ｘ１は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｉｌｅ（Ｉ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ２は、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ３は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ４は、Ａｌａ（Ａ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ５は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｙｒ（Ｙ）から選択され、
Ｘ６は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｌａ（Ａ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ７は、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ８は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ９は、Ｐｈｅ（Ｆ）およびＶａｌ（Ｖ）から選択され、
Ｘ１０は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：Ｘ１－ＩＦ－Ｘ２－ＧＧ－Ｘ３－Ｙ－Ｘ４－Ｎ－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｇ（配列番号２）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）、
ＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧ
Ｘ１は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｉｌｅ（Ｉ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ２は、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ３は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ４は、Ａｌａ（Ａ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ５は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｙｒ（Ｙ）から選択され、
Ｘ６は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｌａ（Ａ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ７は、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ８は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ９は、Ｐｈｅ（Ｆ）およびＶａｌ（Ｖ）から選択され、
Ｘ１０は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧ（配列番号４）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧ（配列番号４）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＶＫＧ（配列番号５）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＶＫＧ（配列番号５）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号６）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号６）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＳＥＳＦＱＧ（配列番号７）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＳＥＳＦＱＧ（配列番号７）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＲＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号９）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＲＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号９）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＩＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧ（配列番号１０）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＩＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧ（配列番号１０）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＳＧＧＳＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＳＧＧＳＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＤＹＴＮＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号１００）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＤＹＴＮＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号１００）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＡＮＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号１１６）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＡＮＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号１１６）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＥＫＦＫＧ（配列番号１１７）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＥＫＦＫＧ（配列番号１１７）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号１１８）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号１１８）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＳＡＥＫＦＱＧ（配列番号１１９）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＳＡＥＫＦＱＧ（配列番号１１９）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）を含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：Ｘ１１－ＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１２）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮ－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６（配列番号１３）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：Ｘ１７－ＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１４）、
Ｘ１１は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｓｎ（Ｎ）およびＡｌａ（Ａ）から選択され、またはＸ１３は、Ａｌａ（Ａ）もしくはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１４は、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１５は、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ１６は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ１７は、Ｇｌｎ（Ｑ）およびＨｉｓ（Ｈ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：Ｘ１１－ＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１２）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮ－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６（配列番号１３）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：Ｘ１７－ＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１４）、
Ｘ１１は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｓｎ（Ｎ）およびＡｌａ（Ａ）から選択され、またはＸ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１４は、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１５は、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ１６は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ１７は、Ｇｌｎ（Ｑ）およびＨｉｓ（Ｈ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：Ｘ１１－ＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１２）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮ－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６（配列番号１３）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：Ｘ１７－ＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１４）、
Ｘ１１は、Ｓｅｒ（Ｓ）であり、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｓｎ（Ｎ）であり、またはＸ１３は、Ａｌａ（Ａ）もしくはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１４は、Ｌｅｕ（Ｌ）であり、
Ｘ１５は、Ｐｒｏ（Ｐ）であり、
Ｘ１６は、Ｓｅｒ（Ｓ）であり、
Ｘ１７は、Ｇｌｎ（Ｑ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：Ｘ１１－ＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１２）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮ－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６（配列番号１３）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：Ｘ１７－ＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１４）、
Ｘ１１は、Ｓｅｒ（Ｓ）であり、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｓｎ（Ｎ）であり、またはＸ１３は、Ａｌａ（Ａ）もしくはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１４は、Ｌｅｕ（Ｌ）であり、
Ｘ１５は、Ｐｒｏ（Ｐ）であり、
Ｘ１６は、Ｓｅｒ（Ｓ）であり、
Ｘ１７は、Ｇｌｎ（Ｑ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＬＰＳ（配列番号１６）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＱＳ（配列番号２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＱＳ（配列番号２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＱＳ（配列番号２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＱＳ（配列番号２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＱＳ（配列番号２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＱＳ（配列番号２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号２１）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号２１）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号２１）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号２１）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号２１）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＳＰＳ（配列番号１９）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号２１）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＲＡＴ（配列番号２２）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＲＡＴ（配列番号２２）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＲＡＴ（配列番号２２）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＲＡＴ（配列番号２２）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＲＡＴ（配列番号２２）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＳＮＲＡＴ（配列番号２２）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＰＳ（配列番号１１１）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＰＳ（配列番号１１１）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＰＳ（配列番号１１１）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＰＳ（配列番号１１１）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＰＳ（配列番号１１１）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＡＴＳＮＬＰＳ（配列番号１１１）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＡＮＬＰＳ（配列番号１２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＡＮＬＰＳ（配列番号１２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＡＮＬＰＳ（配列番号１２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含む：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＡＮＬＰＳ（配列番号１２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＡＮＬＰＳ（配列番号１２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１５）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＮＴＡＮＬＰＳ（配列番号１２０）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳ（配列番号１２７）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳ（配列番号１２７）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳ（配列番号１２７）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳ（配列番号１２７）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳ（配列番号１２７）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、以下の３つのＣＤＲを含み：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１８）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳ（配列番号１２７）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１７）、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：Ｘ１－ＩＦ－Ｘ２－ＧＧ－Ｘ３－Ｙ－Ｘ４－Ｎ－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｇ（配列番号２）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）、ならびに
－少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
ＶＬ－ＣＤＲ１：Ｘ１１－ＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１２）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮ－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６（配列番号１３）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：Ｘ１７－ＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１４）、を含み、
Ｘ１は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｉｌｅ（Ｉ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ２は、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ３は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ４は、Ａｌａ（Ａ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ５は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｙｒ（Ｙ）から選択され、
Ｘ６は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｌａ（Ａ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ７は、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ８は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ９は、Ｐｈｅ（Ｆ）およびＶａｌ（Ｖ）から選択され、
Ｘ１０は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ１１は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｓｎ（Ｎ）およびＡｌａ（Ａ）から選択され、またはＸ１３は、Ａｌａ（Ａ）もしくはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１４は、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１５は、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ１６は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ１７は、Ｇｌｎ（Ｑ）およびＨｉｓ（Ｈ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＮＹＹＩＧ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：Ｘ１－ＩＦ－Ｘ２－ＧＧ－Ｘ３－Ｙ－Ｘ４－Ｎ－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｇ（配列番号２）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＲＮＦＤＹ（配列番号３）、ならびに
－以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
ＶＬ－ＣＤＲ１：Ｘ１１－ＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ（配列番号１２）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：Ｘ１３－ＴＳＮ－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６（配列番号１３）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：Ｘ１７－ＱＲＳＳＹＰＬＴＦ（配列番号１４）、を含み、
Ｘ１は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｉｌｅ（Ｉ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ２は、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ３は、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ４は、Ａｌａ（Ａ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ５は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｙｒ（Ｙ）から選択され、
Ｘ６は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｌａ（Ａ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ７は、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｐｒｏ（Ｐ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ８は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＳｅｒ（Ｓ）から選択され、
Ｘ９は、Ｐｈｅ（Ｆ）およびＶａｌ（Ｖ）から選択され、
Ｘ１０は、Ｌｙｓ（Ｋ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ１１は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、
Ｘ１３は、Ａｓｎ（Ｎ）およびＡｌａ（Ａ）から選択され、またはＸ１３は、Ａｌａ（Ａ）もしくはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１４は、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＡｒｇ（Ｒ）から選択され、
Ｘ１５は、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）およびＧｌｎ（Ｑ）から選択され、
Ｘ１６は、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＴｈｒ（Ｔ）から選択され、
Ｘ１７は、Ｇｌｎ（Ｑ）およびＨｉｓ（Ｈ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される通りである。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義されている通りである。
表２．ＨＣＶＲのＣＤＲとＬＣＶＲのＣＤＲとの好ましい組み合わせ。ＣＤＲは、それらの配列番号（該当する場合はいつでも、Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、Ｘ１３はＡｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸）によって定義される。
Figure 2023518538000003
Figure 2023518538000004
Figure 2023518538000005
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２および／またはＶＬ－ＣＤＲ３のいずれかは、１、２、３、４、５つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されていることを特徴とすることができる。
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２および／またはＶＬ－ＣＤＲ３のいずれかは、本明細書の上で定義される特定のＣＤＲまたはＣＤＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とすることができる。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃１、＃２、＃７、＃１４、＃２０、＃２６、＃４９、＃５０、＃６３、＃６５、＃７２、＃７９、＃８６および＃９２から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃１、＃２、＃７、＃１４、＃２０、＃２６、＃４９、＃５０、＃６３、＃６５、＃７２、＃７９、＃８６および＃９２から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
配列番号４、５、６、７、８，１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含むか、またはそれらからなる群から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２、および
配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
－以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
配列番号１５および１８（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は存在しない）の配列を含むか、またはそれらからなる群から選択されるＶＬ－ＣＤＲ１、
配列番号１６、１１１および１２０の配列を含むか、またはそれらからなる群から選択されるＶＬ－ＣＤＲ２、および
配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
配列番号４および５の配列を含むか、またはそれからなる群から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２、および
配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
－以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
配列番号１５（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
配列番号４、５、６および１００の配列を含むか、またはそれらからなる群から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２、および
配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
－以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
配列番号１５および１８（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は存在しない）の配列を含むか、またはそれらからなる群から選択されるＶＬ－ＣＤＲ１、
配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
配列番号４、６および１００の配列を含むか、またはそれからなる群から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２、および
配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
－以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
配列番号１５および１８（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は存在しない）の配列を含むか、またはそれからなる群から選択されるＶＬ－ＣＤＲ１、
配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃１である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃１である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、４および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１５、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１５のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃２である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃２である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、４および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃７である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃７である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、５および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１５、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１５のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃１４である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃１４である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、６および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃２０である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃２０である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、７および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃２６である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃２６である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、８および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃４９である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃４９である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１００および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１５、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１５のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃５０である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃５０である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１００および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃６３である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃６３である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１００および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１１１および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃６５である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃６５である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１１６および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃７２である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃７２である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１１７および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃７９である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃７９である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１１８および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃８６である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃８６である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、１１９および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１８、１６および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１８のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃９２である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表２に定義される組み合わせ＃９２である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１、４および３として記載される３つのＨＣＶＲのＣＤＲと（ｉｉ）配列番号１５、１２０および１７として記載される３つのＬＣＶＲのＣＤＲとの組み合わせを含み、配列番号１５のＸ１２は、存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、好ましくはＸ１２は、存在しない。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のフレームワーク領域（ＦＲ）を含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＶＴＳＶＫＭＳＣＫＡＡＧＹＴＦＴ（配列番号２５）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧ（配列番号２６）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＫＡＴＬＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＶＲ（配列番号２７）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２８）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＶＴＳＶＫＭＳＣＫＡＡＧＹＴＦＴ（配列番号２５）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧ（配列番号２６）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＫＡＴＬＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＶＲ（配列番号２７）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２８）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２９）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号３０）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲ（配列番号３１）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２９）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号３０）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲ（配列番号３１）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号３３）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３４）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲ（配列番号３５）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号３３）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３４）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲ（配列番号３５）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号３６）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３７）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ（配列番号３８）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号３６）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３７）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ（配列番号３８）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴ（配列番号３９）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３４）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲ（配列番号３５）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴ（配列番号３９）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３４）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲ（配列番号３５）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号４０）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３７）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ（配列番号４１）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号４０）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３７）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ（配列番号４１）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴ（配列番号４２）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３４）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲ（配列番号３５）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴ（配列番号４２）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３４）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲ（配列番号３５）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号４０）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号４３）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ（配列番号４１）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＨＣＶＲを含む：
ＶＨ－ＦＲ１：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号４０）、
ＶＨ－ＦＲ２：ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号４３）、
ＶＨ－ＦＲ３：ＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲ（配列番号４１）、
ＶＨ－ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣ（配列番号４４）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹ（配列番号４５）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳ－Ｘ１８－ＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号４６）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号４７）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣ（配列番号４４）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹ（配列番号４５）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳ－Ｘ１８－ＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号４６）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号４７）
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号４９）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号４９）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣ（配列番号５２）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹ（配列番号５３）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号５４）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣ（配列番号５２）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹ（配列番号５３）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号５４）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号５５）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹ（配列番号５６）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５７）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号５５）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹ（配列番号５６）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５７）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号５８）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号５８）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくは、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号５８）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号５８）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣ（配列番号５２）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹ（配列番号５９）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号５４）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣ（配列番号５２）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹ（配列番号５９）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号５４）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号５５）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹ（配列番号６０）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５７）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号５５）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹ（配列番号６０）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５７）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号４９）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、４つの以下のＦＲを含むＬＣＶＲを含み：
ＶＬ－ＦＲ１：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号４８）、
ＶＬ－ＦＲ２：ＷＦＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ（配列番号４９）、
ＶＬ－ＦＲ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥ－Ｘ１８－ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号５０）、
ＶＬ－ＦＲ４：ＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５１）、
Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択され、好ましくはＸ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントが、（ｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つのＨＣＶＲのＦＲと（ｉｉ）少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、さらにより好ましくは４つのＬＣＶＲのＦＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表３に定義される通りである。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、（ｉ）４つのＨＣＶＲのＦＲと（ｉｉ）４つのＬＣＶＲのＦＲとの組み合わせを含み、前記組み合わせは、表３に定義される通りである。
表３．ＨＣＶＲのＦＲとＬＣＶＲのＦＲとの好ましい組み合わせ。ＦＲは、それらの配列番号（該当する場合はいつでも、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択される）によって定義される。
Figure 2023518538000006
Figure 2023518538000007
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＶＨ－ＦＲ１、ＶＨ－ＦＲ２、ＶＨ－ＦＲ３、ＶＨ－ＦＲ４、ＶＬ－ＦＲ１、ＶＬ－ＦＲ２、ＶＬ－ＦＲ３および／またはＶＬ－ＦＲ４のいずれかは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上のアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されていることを特徴とすることができる。
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＶＨ－ＦＲ１、ＶＨ－ＦＲ２、ＶＨ－ＦＲ３、ＶＨ－ＦＲ４、ＶＬ－ＦＲ１、ＶＬ－ＦＲ２、ＶＬ－ＦＲ３および／またはＶＬ－ＦＲ４のいずれかは、本明細書の上で定義される特定のＦＲまたはＦＲのセットと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とすることができる。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－本明細書で上記されるＶＨ－ＦＲ１、
－本明細書で上記されるＶＨ－ＣＤＲ１、
－本明細書で上記されるＶＨ－ＦＲ２、
－本明細書で上記されるＶＨ－ＣＤＲ２、
－本明細書で上記されるＶＨ－ＦＲ３、
－本明細書で上記されるＶＨ－ＣＤＲ３、および
－本明細書で上記されるＶＨ－ＦＲ４、を含むか、またはそれらからなるＨＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－配列番号２５、２９、３３、３６、３９、４０および４２から選択されるＶＨ－ＦＲ１、
－配列番号１から選択されるＶＨ－ＣＤＲ１、
－配列番号２６、３０、３４、３７および４３から選択されるＶＨ－ＦＲ２、
－配列番号２から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２、
－配列番号２７、３１、３５、３８および４１から選択されるＶＨ－ＦＲ３、
－配列番号３から選択されるＶＨ－ＣＤＲ３、および
－配列番号２８および３２から選択されるＶＨ－ＦＲ４、を含むか、またはそれらからなるＨＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－配列番号２５、２９、３３、３６、３９、４０および４２から選択されるＶＨ－ＦＲ１、
－配列番号１から選択されるＶＨ－ＣＤＲ１、
－配列番号２６、３０、３４、３７および４３から選択されるＶＨ－ＦＲ２、
－配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１００、１１６、１１７、１１８および１１９から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２、
－配列番号２７、３１、３５、３８および４１から選択されるＶＨ－ＦＲ３、
－配列番号３から選択されるＶＨ－ＣＤＲ３、および
－配列番号２８および３２から選択されるＶＨ－ＦＲ４、を含むか、またはそれらからなるＨＣＶＲを含む。
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ＶＨ－ＦＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＦＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＦＲ３、ＶＨ－ＣＤＲ３およびＶＨ－ＦＲ４の組み合わせを含むか、またはそれらからなるＨＣＶＲを含み、前記組み合わせは、表４に定義される通りである。
表４．好ましいＨＣＶＲ。ＣＤＲおよびＦＲは、それらの配列番号によって定義される。最後から２番目の列は、ＨＣＶＲ全体の配列番号を指す。
Figure 2023518538000008
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６１の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６１
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＭＳＣＫＡＡＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６２の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６３の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６３
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６４の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＶＫＧＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６５の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６５
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６６の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６６
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＳＥＳＦＱＧＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６７の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６７
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＹＩＧＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６８の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６８
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号６９の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号６９
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＦＰＧＧＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＬＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＬＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号７０の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号７０
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＹＩＧＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＦＳＧＧＳＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＬＳＡＤＴＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号１０１の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号１０１
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＴＮＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号１２１の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号１２１
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＧＹＡＮＹＡＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号１２２の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号１２２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＡＥＫＦＫＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号１２３の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号１２３
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、または配列番号１２４の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲを含む。
配列番号１２４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＧＹＴＮＳＡＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＶＶＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－本明細書で上記されるＶＬ－ＦＲ１、
－本明細書で上記されるＶＬ－ＣＤＲ１、
－本明細書で上記されるＶＬ－ＦＲ２、
－本明細書で上記されるＶＬ－ＣＤＲ２、
－本明細書で上記されるＶＬ－ＦＲ３、
－本明細書で上記されるＶＬ－ＣＤＲ３、および
－本明細書で上記されるＶＬ－ＦＲ４、を含むか、またはそれらからなるＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－配列番号４４、４８、５２および５５から選択されるＶＬ－ＦＲ１、
－配列番号１２から選択されるＶＬ－ＣＤＲ１、
－配列番号４５、４９、５３、５６、５８、５９および６０から選択されるＶＬ－ＦＲ２、
－配列番号１３から選択されるＶＬ－ＣＤＲ２、
－配列番号４６、５０、５４および５７から選択されるＶＬ－ＦＲ３、
－配列番号１４から選択されるＶＬ－ＣＤＲ３、ならびに
－配列番号４７および５１から選択されるＶＬ－ＦＲ４、を含むか、またはそれらからなるＨＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－配列番号４４、４８、５２および５５から選択されるＶＬ－ＦＲ１、
－配列番号１５および１８から選択されるＶＬ－ＣＤＲ１、
－配列番号４５、４９、５３、５６、５８、５９および６０から選択されるＶＬ－ＦＲ２、
－配列番号１６、１９、２０、２２，１１１および１２０から選択されるＶＬ－ＣＤＲ２、
－配列番号４６、５０、５４および５７から選択されるＶＬ－ＦＲ３、
－配列番号１７および２１から選択されるＶＬ－ＣＤＲ３、ならびに
－配列番号４７および５１から選択されるＶＬ－ＦＲ４、を含むか、またはそれらからなるＨＣＶＲを含む。
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、ＶＬ－ＦＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＦＲ２、ＶＬ－ＣＤＲ２、ＶＬ－ＦＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ３およびＶＬ－ＦＲ４の組み合わせを含むか、またはそれらからなるＬＣＶＲを含み、前記組み合わせは、表５に定義される通りである。
表５．好ましいＬＣＶＲ。ＣＤＲおよびＦＲは、それらの配列番号によって定義される。最後から２番目の列は、ＬＣＶＲ全体の配列番号を指す（Ｘ１２が存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、Ｘ１８がＴｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択される第１の配列番号、ならびに好ましいＸ１２およびＸ１８が定義されている場合、第２の配列番号を有する）。
Figure 2023518538000009
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、本明細書の上で定義されるＶＬ－ＦＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＦＲ２、ＶＬ－ＣＤＲ２、ＶＬ－ＦＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ３およびＶＬ－ＦＲ４の組み合わせを含むか、またはそれらからなるＬＣＶＲを含み、Ｘ１２が存在しない場合（すなわち、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）またはＧｌｙ（Ｇ）のいずれかである場合）、Ｘ１８は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、本明細書の上で定義されるＶＬ－ＦＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＦＲ２、ＶＬ－ＣＤＲ２、ＶＬ－ＦＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ３およびＶＬ－ＦＲ４の組み合わせを含むか、またはそれらからなるＬＣＶＲを含み、Ｘ１２が存在しない場合、Ｘ１８は、Ｔｙｒ（Ｙ）およびＰｈｅ（Ｆ）から選択される。
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７１の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７１の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７１
ＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＦＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７２の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７２の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７２
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７３の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７３の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７４の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７４の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７４
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７５の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７５の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７５
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７６の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７６の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７６
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹＮＴＳ ＮＳＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７７の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７７の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７８の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７８の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７８
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＡＴＳ ＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号７９の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号７９の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号７９
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹＮＴＳ ＮＳＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号８０の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８０の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８０
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＮＴＳ ＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号１０２の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１０２の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１０２
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＮＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号１１２の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを、または配列番号１１２の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１１２
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＡＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される配列番号１２５の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１２５の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１２５
ＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹＮＴＡ ＮＬＰＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＦＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、Ｘ１３がＡｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である配列番号１２８の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１２８の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１２８
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ－Ｘ１３－ＴＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７１～８０、１０２、１１２、１２５または１２８を含むか、またはそれらからなるＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、存在しない。
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８１の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８１の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８１
ＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８２の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８２の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８２
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８３の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８３の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８４の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８４の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８４
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８５の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８５の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８５
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８６の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８６の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８６
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹＮＴＳＮＳＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８７の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８７の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８８の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８８の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８８
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＡＴＳＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号８９の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号８９の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号８９
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＷＩＹＮＴＳＮＳＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号９０の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号９０の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号９０
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹＮＴＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０３の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１０３の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１０３
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１１３の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１１３の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１１３
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＡＴＳＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２６の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１２６の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１２６
ＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹＮＴＡＮＬＰＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
好ましい実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、Ｘ１３がＡｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である配列番号１２９の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲ、または配列番号１２９の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
配列番号１２９
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹ－Ｘ１３－ＴＳ ＮＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－本明細書の上で定義されるＨＣＶＲ、および
－本明細書の上で定義されるＬＣＶＲ、を含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－配列番号６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、１０１、１２１、１２２、１２３および１２４から選択されるＨＣＶＲ、または配列番号６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、１０１、１２１、１２２、１２３もしくは１２４の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、ならびに
－Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択され、Ｘ１３がＡｌａ（Ａ）もしくはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である配列番号７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、１０２、１１２、１２５および１２８から選択されるＬＣＶＲ、または配列番号７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、１０２、１１２、１２５もしくは１２８の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、
－配列番号６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、１０１、１２１、１２２、１２３および１２４から選択されるＨＣＶＲ、または配列番号６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、１０１、１２１、１２２、１２３もしくは１２４の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＨＣＶＲ、ならびに
－Ｘ１３がＡｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、１０３、１１３、１２６および１２９から選択されるＬＣＶＲ、または配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、１０３、１１３、１２６もしくは１２９の非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むか、もしくはそれからなるＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７１のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７３のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７４のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７６のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７７のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７８のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号７９のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８０のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号１０２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号１１２のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号１２５のＬＣＶＲを含み、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６１のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６２のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６３のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６４のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６５のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６６のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６７のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６８のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号６９のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号７０のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１０１のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２１のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２２のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２３のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８１のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８２のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８４のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８５のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８７のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８８のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号８９のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号９０のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号１０３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号１１３のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントは、配列番号１２４のＨＣＶＲおよび配列番号１２６のＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲのいずれも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個以上のアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されていることを特徴とすることができる。
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲのいずれかの非ＣＤＲ領域の配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個以上のアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されていることを特徴とすることができる。
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲのいずれかは、本明細書の上で定義される特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とすることができる。
一実施形態では、本明細書の上で定義されるＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲのいずれかの非ＣＤＲ領域の配列は、本明細書の上で定義される特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲの非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とすることができる。
本明細書はまた、「抗体または抗原結合フラグメント」の節で上に開示したｈＣＤ４５ＲＣに結合する抗体またはその結合フラグメントをコードする単離された核酸を記載する。
一実施形態では、単離された核酸が精製される。
一実施形態では、単離された核酸は、
（１）吸光度法または蛍光法（例えば、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍでの吸光度比（Ａ２６０／２８０）を測定するなどによって）によって決定される核酸の８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％以上を超える重量、最も好ましくは９６％、９７％、９８％もしくは９９％を超える重量、または
（２）アガロースゲル電気泳動および挿入剤、例えば臭化エチジウム、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ、ＧｅｌＧｒｅｅｎなどを使用することによって示される均一性、に精製される。
一実施形態では、抗原結合フラグメントをコードする核酸は、「抗体または抗原結合フラグメント」の節に開示される抗体またはその結合フラグメントのＨＣＶＲをコードする配列を含むか、またはそれからなる。
一実施形態では、抗原結合フラグメントをコードする核酸は、配列番号９５の配列、または配列番号９５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有し、配列番号６１とマウス抗体もしくはキメラ抗体またはその結合フラグメントのＨＣＶＲをコードする任意の配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号９５
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＧＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＡＧＧＴＴＧＧＧＴＡＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＴＴＴＴＣＣＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＡ
一実施形態では、抗原結合フラグメントをコードする核酸は、「抗体または抗原結合フラグメント」の節に開示される抗体またはその結合フラグメントのＬＣＶＲをコードする配列を含むか、またはそれからなる。
一実施形態では、抗原結合フラグメントをコードする核酸は、配列番号９６の配列、または配列番号９６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有し、配列番号８１のマウスもしくはキメラ抗体またはその結合フラグメントのＬＣＶＲをコードする任意の配列を含むか、またはそれらからなる。
配列番号９６
ＣＡＡＡＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＧＧＣＡＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＣＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＣＧＡＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＡＡＧＧＡＧＴＡＧＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
一実施形態では、抗原結合フラグメントをコードする核酸は、
－「抗体または抗原結合フラグメント」の節で開示される抗体またはその結合フラグメントのＨＣＶＲをコードする配列、および
－「抗体または抗原結合フラグメント」の節で開示される抗体またはその結合フラグメントのＬＣＶＲをコードする配列、を含むか、またはそれらからなる。
一実施形態では、抗原結合フラグメントをコードする核酸は、
－配列番号９５の配列、または配列番号９５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する任意の配列、および
－配列番号９６の配列、または配列番号９６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性を共有する任意の配列、を含むか、またはそれらからなる。
当業者は、本明細書に開示される他のすべてのＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、特に「抗体または抗原結合フラグメント」の節に開示されるヒト化抗体またはその結合フラグメントをコードする核酸配列を設計できることは容易に理解されよう。
当業者は、例えば、コドン最適化などによって組換え産生速度を改善するために核酸配列を改変することを目的とする分子生物学的方法に精通していることがさらに理解される。最終的に、本出願は、本明細書に開示される任意のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲをコードする任意の核酸を包含する。
本発明は、ヒトＣＤ４５ＲＣに特異的なキメラ受容体を提供し、前記ＣＡＲは、
（ａ）少なくとも１つの細胞外結合ドメインであって、前記結合ドメインが、前記ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する、少なくとも１つの細胞外結合ドメイン、
（ｂ）任意選択で、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメイン、
（ｃ）少なくとも１つの膜貫通ドメイン、ならびに
（ｄ）少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインであって、細胞内ドメインが、少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達ドメインおよび任意選択で、少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達ドメインを含む、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
本明細書で使用される場合、「キメラ受容体」（ＣＲ）または「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）という用語は、１つのポリペプチドまたはポリペプチドのセット、典型的には最も単純な実施形態では２つのポリペプチドを指し、免疫細胞内にある場合、細胞に標的リガンドに対する特異性および細胞内シグナル生成を提供する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、互いに連続している。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ポリペプチドのセットを含むキメラ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、二量体化分子の存在下で、ポリペプチドを互いに連結することができる、例えばリガンド結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに連結することができる二量体化スイッチを含む。一実施形態では、キメラ受容体は、キメラ受容体融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ－ｔｅｒ）に任意選択のリーダー配列を含む。一実施形態では、キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＮ末端にリーダー配列をさらに含み、リーダー配列は、任意選択で、細胞プロセシングおよび細胞膜へのキメラ受容体の局在化中にリガンド結合ドメインから切断される。
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、１つ以上のポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、抗原結合ドメインであり、したがってキメラ受容体は、キメラ抗原受容体（またはＣＡＲ）とも呼ばれ得る。
本発明のキメラ受容体またはキメラ抗原受容体は、少なくとも１つの細胞外結合ドメインを含み、前記結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞外ドメインは少なくとも１つのリガンド結合ドメインまたは抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ヒトＣＤ４５ＲＣに対する抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、「抗体または抗原結合フラグメント」の節に上述した任意の抗体またはその抗原結合フラグメントなどを含む。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞外結合ドメインは、「抗体または抗原結合フラグメント」の節に上述したヒトＣＤ４５ＲＣに対する抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞外結合ドメインは、「抗体または抗原結合フラグメント」の節に上述したヒトＣＤ４５ＲＣに対する抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４、５、６、８、１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５（ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ）および１８（ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ）（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４および５の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５（Ｘ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４のＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５（Ｘ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４、６および１００の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５および１８（Ｘ１２は存在しない）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、
１）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８１の配列のＬＣＶＲ、
２）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
３）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
４）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
５）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
６）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
７）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
８）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
９）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
１０）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
１１）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１２）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
１３）配列番号６５の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１４）配列番号６５の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
１５）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１６）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
１７）配列番号１２１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１８）配列番号１２２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
１９）配列番号１２３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２０）配列番号１２４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２１）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２２）配列番号６７の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
２３）配列番号６７の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、または
２４）１）～２３）に記載のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号４、５、６、８、１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
（ｉ）配列番号１５および１８（配列番号１５および１８中のＸ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、
好ましくは、ＬＣＶＲのＫａｂａｔ位置Ｌ７１のアミノ酸残基は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
本発明のＣＡＲに含まれる抗体またはその抗原結合フラグメントは、リガンド結合ドメインが、例えば、単一ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体または二重特異性抗体（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８））を含む連続ポリペプチド鎖の一部として発現される種々の形態で存在し得る。いくつかの態様では、本発明のキメラ受容体の抗原結合ドメインは、抗体フラグメントまたは抗原結合フラグメントを含む。いくつかの態様では、キメラ受容体は、ｓｃＦｖを含む抗原結合フラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、前記抗体または抗原結合フラグメントは、ヒト化抗体、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディおよびテトラボディからなる群から選択される抗体分子である。
「一本鎖抗体」とは、連続アミノ酸残基の１つの中断されていない配列を含むか、またはそれからなる一次構造を有するタンパク質である任意の抗体またはそのフラグメントを指し、（１）一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含有する単鎖タンパク質、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有し、関連する重鎖部分を含まないそのフラグメント、および（３）１つの重鎖可変領域のみを含有する一本鎖タンパク質、または関連する軽鎖部分を有さない重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有するそのフラグメント、が含まれるが、これらに限定されない。
「一本鎖Ｆｖ」は、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略され、単一のアミノ酸鎖に接続されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントを指す。好ましくは、ｓｃＦｖアミノ酸配列は、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，１９９４．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ．Ｉｎ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ＆Ｍｏｏｒｅ（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１１３：２６９－３１５．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ：Ｂｅｒｌｉｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含有する最小の抗体フラグメントを指す。このフラグメントは、１つのＨＣＶＲと１つのＬＣＶＲとが密接に非共有結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（各々重鎖および軽鎖からの３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
「ダイアボディ」とは、可変ドメインの鎖内ではなく鎖間対合が達成され、二価フラグメント、すなわち２つの抗原結合部位を有するフラグメントをもたらすように、ＨＣＶＲとＬＣＶＲとの間に短いリンカー（約５～１０残基）を有するｓｃＦｖフラグメントを構築することによって調製される小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓｃＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。ダイアボディは、特許ＥＰ０４０４０９７、特許出願ＷＯ１９９３０１１１６１およびＨｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９０（１４）：６４４４－８でより完全に記載されている。
いくつかの実施形態では、前記抗体は、ユニボディ、単一ドメイン抗体およびナノボディからなる群から選択される抗体フラグメントである。
「ユニボディ」は、当技術分野で周知であり、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠く抗体フラグメントを指す。ヒンジ領域の欠失は、伝統的なＩｇＧ４抗体のサイズの本質的に半分であり、ＩｇＧ４抗体の二価結合領域ではなく一価結合領域を有する分子をもたらす。
「ドメイン抗体」は、当技術分野で周知であり、抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変領域に対応する抗体の最小機能的結合単位を指す。
「単一ドメイン抗体」は、当技術分野で周知であり、天然に存在する重鎖抗体の独特の構造的および機能的特性を含有する抗体由来タンパク質を指す（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，２０１３．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．８２：７７５－９７）。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）－そのような一例は、ナノボディ（登録商標）－、または単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）ならびに２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）－例えばラクダ抗体－、または単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）ならびに５つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４およびＣＨ５）－例えばサメ抗体を含有し得る。
いくつかの実施形態では、前記抗体は、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アデクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、バーサボディおよびデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣物である。
「アフィボディ」は、当技術分野で周知であり、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインのうちの１つに由来する、５８個のアミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づく親和性タンパク質を指す（Ｆｒｅｊｄ＆Ｋｉｍ，２０１７．Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．４９（３）：ｅ３０６；特許ＵＳ５，８３１，０１２）。
「ＤＡＲＰｉｎｓ」（設計アンキリンリピートタンパク質）は、当技術分野で周知であり、非抗体タンパク質の結合能力を利用するために開発された抗体模倣ＤＲＰ（設計リピートタンパク質）技術を指す（Ｂｉｎｚ ｅｔ ａｌ．，２００３．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３３２（２）：４８９－５０３；Ｐｌｕｃｈｔｈｕｎ，２０１５．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．５５：４８９－５１１）。
「抗カリン」は、当技術分野で周知であり、結合特異性がリポカリンに由来する別の抗体模倣技術を指す（Ｓｋｅｒｒａ，２００８．ＦＥＢＳ Ｊ．２７５（１１）：２６７７－８３）。抗カリンはまた、「デュオカリン」と呼ばれる二重標的化タンパク質としてフォーマットされ得る（Ｓｃｈｌｅｈｕｂｅｒ＆Ｓｋｅｒｒａ，２００１．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．３８２（９）：１３３５－４２）。
「アビマー」は、当技術分野で周知であり、別の抗体模倣技術を指す（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（１２）：１５５６－６１）。
「Ｖｅｒｓａｂｏｄｉｅｓ」は、当技術分野で周知であり、別の抗体模倣技術を指す（特許出願ＵＳ２００７０１９１２７２）。それらは、典型的なタンパク質が有する疎水性コアに置き換わる、高いジスルフィド密度の足場を形成する、＞１５％のシステインを有する３～５ｋＤａの小さなタンパク質である。疎水性コアを含む多数の疎水性アミノ酸を少数のジスルフィドで置き換えると、ＭＨＣ提示に最も寄与する残基が疎水性であるため、より小さく、より親水性であり（より少ない凝集および非特異的結合）、プロテアーゼおよび熱に対してより耐性であり、Ｔ細胞エピトープの密度がより低いタンパク質をもたらす。これらの特性の４つはすべて免疫原性に影響を及ぼすことが周知であり、それらは、一緒になって免疫原性の大きな減少を引き起こすと予想される。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントはまた、多重特異性抗体またはその結合フラグメント、すなわち、その１つが本発明によるｈＣＤ４５ＲＣである、２つ以上、例えば少なくとも２つの異なる抗原に対して免疫特異性である多重特異性抗体またはその結合フラグメントを包含する。
一実施形態では、抗体またはその結合フラグメントはまた、抗体のポリマーまたはその結合フラグメント、すなわち同一であるか異なるかにかかわらず、直接的または間接的に共有結合している２つ以上、例えば少なくとも２つの抗体またはその結合フラグメントを包含する。
抗体のフラグメントおよび誘導体（特に明記しない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、本出願で使用される「抗体」という用語に包含される）は、当技術分野で公知の技術によって産生することができる。「フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、一般に抗原結合部位または可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ、（１）一本鎖Ｆｖ分子、（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含有する一本鎖ポリペプチド、または関連する重鎖部分を含まない、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するそのフラグメント、および（３）１つの重鎖可変領域のみを含有する一本鎖ポリペプチド、または関連する軽鎖部分を含まない、重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有するそのフラグメントを含むが、これらに限定されない、連続アミノ酸残基の１つの中断されていない配列からなる一次構造を有するポリペプチド（本明細書では「一本鎖抗体フラグメント」または「一本鎖ポリペプチド」と呼ばれる）である任意の抗体フラグメント、ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が含まれる。本抗体のフラグメントは、標準的な方法を使用して得ることができる。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔら、（１９９１）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，ＪＭＢ ２７３：９２７－９４８（１９９７）（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）によって記載されているものを含む、多くの周知のスキームのいずれか、またはそれらの組み合わせを使用して決定することができる。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、例えばｓｃＦｖなどの抗体フラグメントを含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、第１の抗原に対する細胞外結合ドメイン、ｈＣＤ４５ＲＣ、および別の抗原に対する少なくとも１つの他の細胞外結合ドメインを含む。そのようなＣＡＲは、少なくとも２つの異なる抗原に結合することができる。
一実施形態では、前記少なくとも１つの他の細胞外結合ドメインは、特異的抗原に対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。
一実施形態では、前記少なくとも１つの他の細胞外結合ドメインは、例えば、ｓｃＦｖなどの抗体フラグメントを含むか、またはそれからなる。
一実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ鎖とＶＬ鎖とを連結するリンカーを含む。
一実施形態では、リンカーは、好ましくは２～１０アミノ酸の範囲の長さを有する短いオリゴまたはポリペプチドである。
例えば、グリシン－セリン二重鎖は、特に好適なリンカー（ＧＳリンカー）を提供する。Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーの例には、ＧＳリンカー、Ｇ２Ｓリンカー、Ｇ３Ｓリンカー、Ｇ４Ｓリンカーが含まれるが、これらに限定されない。
Ｇ２Ｓリンカーの非限定的な例は、ＧＧＳである。
Ｇ３Ｓリンカーは、（ＧＧＧＳ）ｎまたは（配列番号１３０）ｎとも呼ばれるアミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎを含み、ｎは、１以上の正の整数である（例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９またはｎ＝１０など）。Ｇ３Ｓリンカーの例には、ＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１３１）が含まれるが、これらに限定されない。
Ｇ４Ｓリンカーの例には、ＧＧＧＧＳ（配列番号１３２）に対応する（Ｇｌｙ４ Ｓｅｒ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３３）に対応する（Ｇｌｙ４ Ｓｅｒ）２、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３４）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３５）に対応する（Ｇｌｙ４ Ｓｅｒ）４が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態では、リンカーは、配列番号１３６の配列によってコードされ得る（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１３４）である。
配列番号１３６
ＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＡＧＴＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＴ
一実施形態では、リンカーは、配列番号１３７の配列によってコードされ得る（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１３４）である。
配列番号１３７
ＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＴＣＧＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴ
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３８のアミノ酸配列をコードする配列番号１７３の核酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１３８
ＡＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＧＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＡＧＧＴＴＧＧＧＴＡＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＴＴＴＴＣＣＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＴＣＧＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＧＧＣＡＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＣＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＣＧＡＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＡＡＧＧＡＧＴＡＧＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
配列番号１７３
ＫＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＭＳＣＫＡＡＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれる抗体は、多重特異性抗体分子であり、例えば、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、複数の第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数の第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つの抗原に対する特異性を有し、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列および第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、本明細書の「抗体または抗原結合フラグメント」の節に記載される抗原結合ドメイン（例えば、抗原結合フラグメント）を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、ヒンジドメインによって膜貫通ドメインに接続される。
一実施形態では、ヒンジドメインは、本明細書で上記されるように、好ましくは２～１０アミノ酸の範囲の長さを有する短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーである。
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、上記のＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。
本発明で使用され得るヒンジドメインの別の例は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２／１３８４７５に記載されている。
一実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＡＧＳＳＳＳＧＧＳＴＴＧＧＳＴＴ（配列番号１３９）、アミノ酸配列ＧＴＴＡＡＳＧＳＳＧＧＳＳＳＧＡ（配列番号１４０）、アミノ酸配列ＳＳＡＴＡＴＡＧＴＧＳＳＴＧＳＴ（配列番号１４１）、およびアミノ酸配列ＴＳＧＳＴＧＴＡＡＳＳＴＳＴＳＴ（配列番号１４２）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ヒンジドメインは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣ（配列番号１４３）のヌクレオチド配列によってコードされる。
別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＫＩＲＲＤＳＳ（配列番号１４４）に対応するＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジである。
一実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジのアミノ酸配列（配列番号１４５）または配列番号１４５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ヒンジドメインは、核酸配列（配列番号１４６）または配列番号１４６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ８ヒンジである。
配列番号１４５
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
配列番号１４６
ＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴ
別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジのアミノ酸配列（配列番号１４７）、または配列番号１４７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１４７
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＭ
一実施形態では、ヒンジドメインは、核酸配列（配列番号１４８）または配列番号１４８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＩｇＧ４ヒンジである。
配列番号１４８
ＧＡＧＡＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＡＧＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＡＴＧ
別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＤヒンジのアミノ酸配列（配列番号１４９）、または配列番号１４９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１４９
ＲＷＰＥＳＰＫＡＱＡＳＳＶＰＴＡＱＰＱＡＥＧＳＬＡＫＡＴＴＡＰＡＴＴＲＮＴＧＲＧＧＥＥＫＫＫＥＫＥＫＥＥＱＥＥＲＥＴＫＴＰＥＣＰＳＨＴＱＰＬＧＶＹＬＬＴＰＡＶＱＤＬＷＬＲＤＫＡＴＦＴＣＦＶＶＧＳＤＬＫＤＡＨＬＴＷＥＶＡＧＫＶＰＴＧＧＶＥＥＧＬＬＥＲＨＳＮＧＳＱＳＱＨＳＲＬＴＬＰＲＳＬＷＮＡＧＴＳＶＴＣＴＬＮＨＰＳＬＰＰＱＲＬＭＡＬＲＥＰＡＡＱＡＰＶＫＬＳＬＮＬＬＡＳＳＤＰＰＥＡＡＳＷＬＬＣＥＶＳＧＦＳＰＰＮＩＬＬＭＷＬＥＤＱＲＥＶＮＴＳＧＦＡＰＡＲＰＰＰＱＰＧＳＴＴＦＷＡＷＳＶＬＲＶＰＡＰＰＳＰＱＰＡＴＹＴＣＶＶＳＨＥＤＳＲＴＬＬＮＡＳＲＳＬＥＶＳＹＶＴＤＨ
一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１５０の核酸配列、または配列番号１５０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＩｇＤヒンジである。
配列番号１５０
ＡＧＧＴＧＧＣＣＣＧＡＡＡＧＴＣＣＣＡＡＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＴＣＴＡＧＴＧＴＴＣＣＴＡＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＧＣＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＡＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＣＡＣＴＡＣＧＣＧＣＡＡＴＡＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＡＴＡＣＣＣＡＧＣＣＧＣＴＧＧＧＣＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＣＴＣＣＣＧＣＡＧＴＡＣＡＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＣＴＴＡＧＡＧＡＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＴＴＴＡＣＡＴＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＧＧＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＧＣＣＣＡＴＴＴＧＡＣＴＴＧＧＧＡＧＧＴＴＧＣＣＧＧＡＡＡＧＧＴＡＣＣＣＡＣＡＧＧＧＧＧＧＧＴＴＧＡＧＧＡＡＧＧＧＴＴＧＣＴＧＧＡＧＣＧＣＣＡＴＴＣＣＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＴＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＧＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧＡＡＣＧＣＣＧＧＧＡＣＣＴＣＴＧＴＣＡＣＡＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＣＡＧＣＧＴＣＴＧＡＴＧＧＣＣＣＴＴＡＧＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＴＴＡＡＧＣＴＴＡＧＣＣＴＧＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＣＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＣＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＧＧＣＴＣＴＴＡＴＧＣＧＡＡＧＴＧＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡＴＣＴＴＧＣＴＣＡＴＧＴＧＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＡＡＧＴＧＡＡＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＧＣＴＣＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＧＧＧＴＴＣＴＡＣＣＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣＴＴＡＡＧＧＧＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＣＡＣＣＴＧＴＧＴＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＧＣＡＧＧＡＣＣＣＴＧＣＴＡＡＡＴＧＣＴＴＣＴＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＴＴＴＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＴ
別の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８ヒンジのアミノ酸配列（配列番号１５１）、または配列番号１５１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１５１
ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ
一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１５２の核酸、または配列番号１５２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ２８ヒンジである。
配列番号１５２
ＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣ
本発明のキメラ受容体において使用され得る膜貫通ドメインの例には、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖もしくはゼータ鎖の膜貫通ドメイン、またはＣＤ２８、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＰＤ１、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄおよび／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、それが由来する分子の膜貫通ドメイン全体を含み得るか、またはその機能的フラグメントもしくは変異体を含み得る。
一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン（配列番号１５３）のアミノ酸配列、または配列番号１５３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５３のアミノ酸配列の少なくとも１、２もしくは３つの改変を有するが、２０、１０もしくは５個以下の改変を有するアミノ酸配列、または配列番号１５３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１５３
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ
別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン（配列番号１５４）のヌクレオチド配列、または配列番号１５４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
配列番号１５４
ＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣ
別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（配列番号１５５）のアミノ酸配列、または配列番号１５５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１５５
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ
一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１５６の核酸配列、または配列番号１５６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ２８膜貫通ドメインである。
配列番号１５６
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは組換えであり得る。特定の実施形態では、組換え膜貫通ドメインは、バリンまたはロイシンなどの主に疎水性アミノ酸を含む。
本明細書で使用される場合、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、キメラ受容体含有細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。キメラ受容体－Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例には、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性、抑制活性、調節活性およびヘルパー活性が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内ドメインは、少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達ドメイン（またはそれに由来する配列）、および任意選択でＴ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメイン（またはそれに由来する配列）を含む。
本明細書で使用される場合、「共刺激分子」または「共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによってＴ細胞による共刺激応答、例えば限定されないが増殖を媒介するＴ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーで表すことができる：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）および活性化ＮＫ細胞受容体。
いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、または天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその機能的フラグメントもしくは変異体を含み得る。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン）またはそのフラグメントもしくは変異体からなる。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞共刺激分子細胞内ドメイン）またはそのフラグメントもしくは変異体からなる。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子またはそのフラグメントもしくは変異体の１つ以上の細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子またはそのフラグメントもしくは変異体の１つ以上の細胞内ドメインからなる。
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体および少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つの共刺激ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体および１つの一次シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体からなる。
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体および１つの一次シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体を含み、組換えタンパク質の発現を可能にする発現系をさらに含む。一実施形態では、組換えタンパク質は、ＩＬ－１２などの炎症促進性サイトカインである。一実施形態では、前記炎症促進性サイトカインは、ＣＡＲ操作細胞によって放出される。
本明細書で使用される場合、「発現系」は、系の転写のための追加のフラグメントに作動可能に結合された目的の組換えペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする核酸配列をコードするフラグメントで構成される直鎖または環状ＤＮＡ分子を指す。
いくつかの実施形態では、発現系は、炎症誘発性サイトカインをコードする核酸配列を含む。一実施形態では、発現系は、ＩＬ－１２をコードする核酸配列を含む。
さらなるフラグメントは、プロモーターおよび終止コドン配列を含み得る。発現系は、１つ以上の複製起点、１つ以上の選択マーカーおよびリボソーム結合部位をコードする配列をさらに含有し得る。
「作動可能に結合された」とは、フラグメントが本来機能するように配置されていることを意味し、例えば、一旦転写がプロモーターで開始すると、コードされたフラグメントを通過して終止コドンに至る。
本発明の意味における「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼの結合および転写の開始を可能にする発現制御エレメントである。
本発明の一実施形態では、核酸配列は、「強力な」プロモーターの制御下にある。強力なプロモーターは、一方ではＲＮＡポリメラーゼ、通常は天然に存在する対応するＲＮＡポリメラーゼに対するプロモーター配列の高い結合親和性によって特徴付けられ、他方ではそのＲＮＡポリメラーゼによるｍＲＮＡの速い形成速度によって特徴付けられる。
別の実施形態では、核酸配列は「誘導性プロモーター」の制御下にある。「誘導性プロモーター」は、外部因子、例えば誘導因子（「誘導因子」とも称される）分子の存在もしくはリプレッサー分子の非存在、または温度、浸透圧もしくはｐＨ値の上昇もしくは低下などの物理的因子によって調節され得るプロモーターである。
本発明の一実施形態では、プロモーターはまた、構成的であってもよく、すなわち、一方では誘導を必要とせず、他方では抑制の可能性なしに発現を制御するプロモーターであり得る。したがって、一定のレベルで連続的で安定した発現が存在する。
有利には、目的の組換えペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の発現は、例えば選択下などの特定の条件で誘導される。
一実施形態では、発現系は、構成的発現系である。別の実施形態では、発現系は、誘導性発現系である。
一実施形態では、発現系は、発現カセットである。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つまたは２つの共刺激ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体および少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体を含む。特定の実施形態では、共刺激ドメインの１つ以上は、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインである。特定の実施形態では、少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つまたは２つの共刺激ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体、および少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体、および組換え炎症促進性サイトカインの発現を可能にする少なくとも１つの発現系を含む。
したがって、一実施形態では、ＣＡＲ操作細胞は、ＩＬ－１２などの組換え炎症促進性サイトカインを発現する。
本発明のいくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２、ならびにそれらに由来する配列からなる群から選択されるタンパク質のシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータまたはそのフラグメントもしくは変異体の少なくとも１つの機能的シグナル伝達ドメインを含むか、またはそれからなるＴ細胞一次シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５７のＣＤ３ゼータアミノ酸配列、または配列番号１５７に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
配列番号１５７
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５７のアミノ酸配列、または配列番号１５７と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つまたは３つの改変を有するが、２０、１０もしくは５個以下の改変を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１６２のＣＤ３ゼータドメイン核酸配列、または配列番号１６２と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１５７の配列からの、または配列番号１５７と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からの少なくとも２、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０もしくは１１２個のアミノ酸、例えば、配列番号１５７からの少なくとも２、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０もしくは１１２個の連続アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１６２の配列からの、または配列番号１６２と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する配列からの少なくとも６、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０もしくは３３６個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、例えば配列番号１６２からの少なくとも６、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０もしくは３３６個の連続ヌクレオチドによってコードされる。
配列番号１６２
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣ
いくつかの実施形態では、刺激的に作用するＴ細胞一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭＳ）として公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有Ｔ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインの例には、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２のもの（またはそれらに由来するもの）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、改変ＩＴＡＭドメイン、例えばネイティブＩＴＡＭドメインと比較して変化した（例えば、増加または減少した）活性を有する突然変異ＩＴＡＭドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、改変ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化されたおよび／または切形のＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ以上のＩＴＡＭモチーフを含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと組み合わされたＴ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体など）を含み、前記共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはそのフラグメントもしくは変異体である。
いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内または細胞質ドメインである。
いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子のシグナル伝達ドメインである。
共刺激シグナル伝達ドメインの例には、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＰＤ－１、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＡＲＨＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２ｒａ、ＩＬ６Ｒａ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＬ－１３ＲＡ１／ＲＡ２、ＩＬ－３３Ｒ（ＩＬ１ＲＬ１）、ＩＬ－１０ＲＡ／ＲＢ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ（ＣＳＦ２ＲＢ）、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ９５、ＴＧＦＢＲ１／２／３、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、共通ガンマ鎖、ＣＤ８３、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄと特異的に結合するリガンド、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるタンパク質の細胞内または細胞質シグナル伝達ドメインが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７およびＤＡＰ１０からなる群から選択されるＴ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインまたは細胞質シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン全体またはそのフラグメントもしくは変異体である。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）のアミノ酸配列、または配列番号１６３と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つまたは３つの改変を有するが、２０、１０または５個以下の改変を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１６３
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヌクレオチド配列（例えば、配列番号１６４の配列を含むか、もしくはそれからなる）、または配列番号１６４と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
配列番号１６４
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ
いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３の配列からの、または配列番号１６３と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列からの少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９または４２個のアミノ酸、例えば配列番号１６３からの少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９または４２個の連続アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６４の配列からの、または配列番号１６４と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列からの少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７または１２６個ヌクレオチド配列、例えば、配列番号１６４からの少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７または１２６個の連続ヌクレオチドによってコードされる。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる）のアミノ酸配列、または配列番号１６７と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１６７のアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つ、２つまたは３つの改変を有するが、２０、１０または５個以下の改変を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１６７
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインヌクレオチド配列（例えば、配列番号１６８の配列を含むか、もしくはそれからなる）、または配列番号１６８と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
配列番号１６８
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６７の配列からの、または配列番号１６７と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する配列からの少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９もしくは４１個のアミノ酸、例えば配列番号１６７からの少なくとも２、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９もしくは４１個の連続アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６８の配列からの、または配列番号１６８と少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する配列からの少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７もしくは１２３個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、例えば配列番号１６８からの少なくとも６、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９６、９９、１０８、１１７もしくは１２３個の連続ヌクレオチドによってコードされる。
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの細胞内ドメインは、４－１ＢＢの細胞内ドメインおよびＣＤ２８の細胞内ドメインから選択され得る。特定の実施形態では、前記共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはそのフラグメントもしくは変異体である。
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも２つの細胞内ドメインの組み合わせを含む。特定の実施形態では、前記共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはそのフラグメントもしくは変異体である。
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなる）またはそのフラグメントもしくは変異体のアミノ酸配列、およびＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６７のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなる）またはそのフラグメントもしくは変異体のアミノ酸配列を含む。
本発明のいくつかの実施形態では、キメラ受容体は、少なくとも３つの共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含み得、前記ドメインは、共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはそのフラグメントもしくは変異体である。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、
－配列番号１６３のアミノ酸配列を有する４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体、および／または配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに／または
－配列番号１５７のアミノ酸配列を有するＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体、を含み、
細胞内ドメインに含まれる配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現される。
したがって、いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、
－配列番号１６４の４－１ＢＢ共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン核酸配列またはそのフラグメントもしくは変異体、および／または配列番号１６８のＣＤ２８共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン核酸配列またはそのフラグメントもしくは変異体、ならびに／または
－配列番号１６２のＣＤ３ゼータ一次細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体、を含み、
細胞内ドメインに含まれる配列は、同じフレームで単一のポリペプチド鎖として発現される。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ランダムにまたは指定された順序で互いに結合され得る少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、一次シグナル伝達ドメインまたはそのフラグメントもしくは変異体およびＴ細胞共刺激分子またはそのフラグメントもしくは変異体の少なくとも１つの細胞内ドメイン）を含む。
任意選択で、短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカー、例えば、２～１０アミノ酸長（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸）は、異なるシグナル伝達ドメイン間の連結を形成し得る。いくつかの実施形態では、グリシン－セリン二重鎖（ＧＳ）は、好適なリンカーとして使用される。いくつかの実施形態では、単一アミノ酸、例えばアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）は、好適なリンカーとして使用される。リンカーの他の例を本明細書中に記載する。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上（例えば、２、３、４、５つ以上）の共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、２、３、４、５つ以上）の共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかまたはすべては、リンカー分子、例えば本明細書に記載されるリンカー分子によって分離されている。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１５７および４－１ＢＢの共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６３）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１５７およびＣＤ２８の共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号１６７）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、本明細書に記載される細胞外結合ドメイン、本明細書に記載される膜貫通ドメイン、本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメイン、および任意選択で、本明細書に記載されるスペーサーまたはヒンジドメインの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲは、タグ、例えば、品質管理、濃縮、インビボ追跡などのためのタグなどをさらに含む。前記タグは、Ｎ末端、Ｃ末端および／または内部に局在し得る。本発明のＣＡＲに使用され得るタグの例は、当業者に周知である。
第１の実施形態によれば、本発明のＣＡＲは、少なくとも１つの細胞外ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、任意選択で細胞外ヒンジドメイン、少なくとも１つの膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
第２の実施形態によれば、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、任意選択で細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、Ｔ細胞共刺激分子の単一細胞内ドメインおよびＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
第３の実施形態によれば、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、任意選択で細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、Ｔ細胞共刺激分子の２つの細胞内ドメインおよびＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４５）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４７）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１４９）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５３）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号１５１）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号１５５）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６３）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号１６７）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号１５７）を含む。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、（ｉｉ）ヒトＣＤ８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよび（ｖ）ヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含む。
一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分は、配列番号１６９のアミノ酸配列または配列番号１６９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号１６９のアミノ酸配列、または配列番号１６９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する配列もしくはアミノ酸配列に結合されたＣＤ４５ＲＣ結合ドメインを含む。
配列番号１６９
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分は、配列番号１７０のヌクレオチド配列、または配列番号１７０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列に対応する。
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、（ｉｉ）ヒトＣＤ８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよび（ｖ）ヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。
一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分は、配列番号１６９のアミノ酸配列、または配列番号１６９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣ結合ドメイン、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分は、配列番号１７１のアミノ酸配列、または配列番号１７１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
配列番号１７０
ＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣ
配列番号１７１
ＫＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＭＳＣＫＡＡＧＹＴＦＴＮＹＹＩＧＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＤＩＦＰＧＧＤＹＡＮＳＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＶＲＲＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰＴＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＴＧＴＳＰＲＬＷＩＹＮＴＳＮＬＰＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
本発明はまた、本発明のＣＡＲをコードする核酸に関する。
したがって、本発明はさらに、本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸配列に関し、前記核酸配列は、
－細胞外結合ドメインの少なくとも１つの核酸配列であって、前記結合ドメインが、前記ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する、細胞外結合ドメインの少なくとも１つの核酸配列、
－任意選択で、細胞外ヒンジドメインの少なくとも１つの核酸配列、
－膜貫通ドメインの少なくとも１つの核酸配列、ならびに
－細胞内ドメインの少なくとも１つの核酸配列であって、細胞内ドメインの少なくとも１つの核酸配列が、一次細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つの核酸配列および任意選択で共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つの核酸配列を含む、細胞内ドメインの少なくとも１つの核酸配列、を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインの少なくとも１つの核酸配列は、「抗体または抗原結合フラグメント」の節で上に開示したｈＣＤ４５ＲＣに結合する抗体またはその結合フラグメントをコードする核酸を含むか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、本発明によるＣＡＲをコードする核酸配列は、配列番号１７２の配列、または配列番号１７２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有する配列を有する。
配列番号１７２
ＡＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＧＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＡＧＧＴＴＧＧＧＴＡＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＴＡＴＴＴＴＣＣＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＴＣＧＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＧＧＣＡＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＡＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＣＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＣＧＡＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＡＡＧＧＡＧＴＡＧＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣ
一実施形態では、本発明の核酸は、単離された核酸である。一実施形態では、本発明の単離された核酸は、精製される。
一実施形態では、単離された核酸は、
（１）吸光度法または蛍光法（例えば、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍでの吸光度比（Ａ２６０／２８０）を測定するなどによって）によって決定される核酸の８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％以上を超える重量、最も好ましくは９６％、９７％、９８％もしくは９９％を超える重量、または
（２）アガロースゲル電気泳動および挿入剤、例えば臭化エチジウム、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ、ＧｅｌＧｒｅｅｎなどを使用することによって示される均一性、に精製される。
当業者は、例えば、コドン最適化などによって組換え産生速度を改善するために核酸配列を改変することを目的とする分子生物学的方法に精通していることがさらに理解される。
本発明はまた、本明細書中に記載されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを提供する。
本発明で使用され得るベクターの例には、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、ウイルスおよびコスミドが含まれるが、これらに限定されない。
ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染することができるという点でレトロウイルスの中で独特であり、それらは、宿主細胞のＤＮＡにかなりの量の遺伝情報を送達することができるので、それらは遺伝子送達ベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶおよびＦＩＶは、すべてレンチウイルスの例である。
一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位および１つ以上の選択可能なマーカー（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ特許公開ＷＯ０１／９６５８４およびＷＯ０１／２９０５８および米国特許第６、３２６、１９３号を参照されたい）を含有する。
哺乳動物細胞への遺伝子移入のために、いくつかのウイルスベースのシステムが開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムのための便利なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子をベクターに挿入し、当該分野で公知の技術を使用してレトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。次いで、組換えウイルスを単離し、インビボまたはエクスビボのいずれかで対象の細胞に送達することができる。多くのレトロウイルス系は、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。さらに、多くのアデノウイルスベクターが当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。
さらなる転写活性要素、例えばプロモーターおよびエンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、コアプロモーター、これらは、開始部位の３０～１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、最近、開始部位の下流にも機能的エレメントを含有することが示されており、エンハンサーエレメントは、一般に、開始部位の５００～２０００ｂｐ上流に位置する。プロモーターエレメント間の間隔は、しばしば柔軟であり、その結果、エレメントが互いに反転または移動した場合にプロモーター機能が保存される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔を５０ｂｐまで広げることができる。プロモーターに応じて、個々のエレメントは、転写を活性化するために協調的または独立して機能し得るようである。
好適なプロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作動可能に結合された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。好適なプロモーターの別の例は、伸長成長因子－Ｉａ（ＥＦ－Ｉａ）である。好適なプロモーターの別の例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。しかしながら、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス前初期プロモーター、およびラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターなどであるが、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターが含まれるが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列も使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、そのような発現が望まれる場合に作動可能に結合されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにすることができるか、または発現が望まれない場合に発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリンプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。加えて、２つ以上の遺伝子の効率的かつ協調的な発現を可能にする双方向プロモーターも、本発明において興味深いものであり得る。双方向プロモーターの例には、ｉ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはマウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）ゲノムに由来する第１の最小プロモーター配列およびｉｉ）動物遺伝子に由来する完全に効率的なプロモーター配列を含む双方向プロモーターを開示する、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／２００８６９号にＬｕｉｇｉ Ｎａｌｄｉｎｉによって記載されるプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。
ＣＡＲポリペプチドまたはその一部の発現を評価するために、Ｔ細胞に導入される発現ベクターはまた、ＣＤ３４、ＣＤ２７１またはレポーター遺伝子などの選択可能なマーカー遺伝子のいずれか、またはその両方を含有して、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染されることが求められる細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を容易にすることができる。他の態様では、選択可能なマーカーは、別個のＤＮＡ片に担持され、同時トランスフェクション手順で使用され得る。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方は、宿主細胞における発現を可能にするために適切な調節配列の側面に位置し得る。有用な選択可能なマーカーには、例えば、ネオマイシンなどのような抗生物質耐性遺伝子が含まれる。
本発明のいくつかの実施形態では、自殺遺伝子技術が使用され得る。異なる自殺遺伝子技術は、それらの作用機序に応じて当技術分野で記載されている（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：２５４（２０１４）を参照されたい）。非毒性薬物を毒性薬物に変換する遺伝子指向型酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）の例には、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）およびシトシンデアミナーゼ（ＣＤ）が含まれる。他の例は、例えば誘導性Ｆａｓ（ｉＦａｓ）または誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）系などのアポトーシス成分に結合された薬物結合ドメインで構成されるキメラタンパク質である。他の例には、抗ｃ－ｍｙｃ抗体の投与によって操作された細胞の表面でｃ－ｍｙｃの過剰発現を誘導してその欠失を誘導するなどの治療抗体によって媒介される系が含まれる。ＥＧＦＲの使用は、ｃ－ｍｙｃ系と比較して同様の系として記載されている。
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定し、調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物もしくは組織に存在しないか、またはレシピエント生物もしくは組織によって発現されず、その発現が何らかの容易に検出可能な特性、例えば酵素活性によって明らかにされるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時点でアッセイされる。好適なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼまたは緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２（２０００）を参照されたい）。好適な発現系は、周知であり、公知の技術を使用して調製され得るか、または商業的に入手され得る。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物がプロモーターとして同定される。そのようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に結合され、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用され得る。
遺伝子を細胞に導入および発現させる方法は、当技術分野で公知である。発現ベクターに関連して、ベクターは、当技術分野における任意の方法によって、宿主細胞、例えば哺乳動物、細菌、酵母または昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的または生物学的手段によって宿主細胞に移入することができる。
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、パーティクルボンバード、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。本発明のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、リン酸カルシウムトランスフェクションを使用して宿主細胞に導入される。
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用されている方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および同第５，５８５，３６２号を参照されたい。
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段には、高分子複合体、ナノカプ細胞、ミクロスフェア、ビーズなどのコロイド分散系、ならびに水中油型エマルジョン、ミ細胞、混合ミ細胞およびリポソームを含む脂質ベースの系が含まれる。インビトロおよびインビボで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。宿主細胞（インビトロ、エクスビボまたはインビボ）への核酸の導入のために、脂質製剤の使用が企図される。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質と会合した核酸は、リポソームの水性内部にカプセル化されていてもよく、リポソームの脂質二重層内に散在していてもよく、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と会合した結合分子を介してリポソームに付着していてもよく、リポソームに封入されていてもよく、リポソームと複合体を形成していてもよく、脂質を含有する溶液中に分散されていてもよく、脂質と混合されていてもよく、脂質と組み合わされていてもよく、脂質中に懸濁液として含有されていてもよく、ミセルと含有もしくは複合体を形成していてもよく、またはそうでなければ脂質と会合していてもよい。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター関連組成物は、溶液中のいかなる特定の構造にも限定されない。例えば、それらは、二重層構造、ミセルとして、または「崩壊した」構造で存在し得る。それらはまた、溶液中に単に散在してもよく、場合によってはサイズまたは形状が均一でない凝集体を形成する。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質には、細胞質に天然に存在する脂肪滴、ならびに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコールおよびアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体を含有する化合物のクラスが含まれる。
使用に好適な脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから入手することができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆ＫＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）から入手され得る。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質の保存溶液は、約－２０℃で保存することができる。クロロホルムは、メタノールよりも容易に蒸発するので、唯一の溶媒として使用される。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成された種々の単層および多層脂質ビヒクルを包含する総称である。リポソームは、リン脂質二重層膜および内部水性媒体を有する小胞構造を有することを特徴とすることができる。多層リポソームは、水性媒体によって分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されると自然に形成する。脂質成分は、閉じた構造の形成前に自己再配置を受け、脂質二重層の間に水および溶解した溶質を捕捉する（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５：５０５－１０）。しかしながら、溶液中で通常の小胞構造とは異なる構造を有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造をとるか、または単に脂質分子の不均一な凝集体として存在し得る。リポフェクタミン－核酸複合体も企図される。
外因性核酸を宿主細胞に導入するために使用される方法にかかわらず、宿主細胞における組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、種々のアッセイが実行され得る。そのようなアッセイには、例えば、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、例えば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲ、「生化学的」アッセイ、例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によって、または本発明の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書に記載されるアッセイによって、特定のペプチドの存在または非存在を検出することなどが含まれる。
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、ＲＮＡの導入によって改変される。いくつかの実施形態では、インビトロ転写ＲＮＡ ＣＡＲは、一過性トランスフェクションの形態として細胞に導入することができる。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）生成鋳型を使用したインビトロ転写によって産生される。任意の供給源からの目的のＤＮＡを、適切なプライマーおよびＲＮＡポリメラーゼを使用して、ＰＣＲによってインビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型に直接変換することができる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列または任意の他の適切なＤＮＡ供給源であり得る。特定の実施形態では、インビトロ転写のための鋳型は、本発明のＣＡＲである。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含有する。ＤＮＡは、例えば、生物のゲノムからの天然に存在するＤＮＡ配列からであり得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、目的の全長遺伝子または遺伝子の一部である。遺伝子は、５’および／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の一部またはすべてを含み得る。遺伝子は、エクソンおよびイントロンを含み得る。いくつかの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、ヒト遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、５’および３’ＵＴＲを含むヒト遺伝子である。あるいは、ＤＮＡは、天然に存在する生物において通常発現されない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために一緒にライゲートされる遺伝子の部分を含有するものである。一緒にライゲートされるＤＮＡの部分は、単一の生物または２つ以上の生物からであり得る。
ＰＣＲを使用して、トランスフェクションに使用されるｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を生成し得る。ＰＣＲを実行するための方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲに使用するためのプライマーは、ＰＣＲの鋳型として使用されるＤＮＡの領域と実質的に相補的な領域を有するように設計されている。本明細書で使用される「実質的に相補的」は、プライマー配列中の塩基の大部分もしくはすべてが相補的であるか、または１つ以上の塩基が非相補的であるか、またはミスマッチであるヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用されるアニーリング条件下で、意図するＤＮＡ標的とアニーリングまたはハイブリダイズすることができる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分に実質的に相補的であるように設計することができる。例えば、プライマーは、５’および３’ＵＴＲを含み得る、細胞内で通常転写される遺伝子の部分（オープンリーディングフレーム）を増幅するように設計することができる。プライマーは、目的の特定のドメインをコードする遺伝子の一部を増幅するように設計することもできる。いくつかの実施形態では、プライマーは、５’および３’ＵＴＲのすべてまたは一部を含むヒトｃＤＮＡのコーディング領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成方法によって生成される。
「フォワードプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流にあるＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含有するプライマーである。「上流」は、本明細書では、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列の場所５’を指すために使用される。「リバースプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流にある二本鎖ＤＮＡ鋳型に実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含有するプライマーである。「下流」は、本明細書では、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列の場所３’を指すために使用される。
ＰＣＲに有用な任意のＤＮＡポリメラーゼを、本明細書中に開示される方法において使用することができる。試薬およびポリメラーゼは、いくつかの供給元から市販されている。
安定性および／または翻訳効率をプロモートする能力を有する化学構造も使用され得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、５’および３’ＵＴＲを有し得る。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、ゼロ～３０００ヌクレオチド長である。コーディング領域に付加される５’および３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの異なる領域にアニーリングするＰＣＲのプライマーを設計することを含むが、これらに限定されない異なる方法によって変更することができる。このアプローチを使用して、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクション後に最適な翻訳効率を達成するために必要な５’および３’ＵＴＲの長さを改変することができる。５’および３’ＵＴＲは、目的の遺伝子の天然に存在する内因性の５’および３’ＵＴＲであり得る。あるいは、目的の遺伝子に対して内因性ではないＵＴＲ配列は、ＵＴＲ配列をフォワードプライマーおよびリバースプライマーに組み込むことによって、または鋳型の任意の他の改変によって加えることができる。目的の遺伝子に対して内因性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を改変するために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列中のＡＵリッチエレメントがｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが公知である。したがって、３’ＵＴＲは、当技術分野で周知のＵＴＲの特性に基づいて転写ＲＮＡの安定性を増加させるように選択または設計することができる。
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含有し得る。あるいは、目的の遺伝子に対して内因性ではない５’ＵＴＲが上記のようにＰＣＲによって付加されている場合、コンセンサスなＫｏｚａｋ配列は、５’ＵＴＲ配列を付加することによって再設計することができる。Ｋｏｚａｋ配列は、いくつかのＲＮＡ転写物の翻訳効率を高めることができるが、効率的な翻訳を可能にするためにすべてのＲＮＡに必要であるとは思われない。多くのｍＲＮＡに対するＫｏｚａｋ配列の必要性は、当技術分野で公知である。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞内で安定であるＲＮＡウイルスに由来し得る。他の実施形態では、様々なヌクレオチド類似体を３’または５’ＵＴＲにおいて使用して、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げることができる。
遺伝子クローニングを必要とせずにＤＮＡ鋳型からＲＮＡを合成することを可能にするために、転写のプロモーターを、転写される配列の上流でＤＮＡ鋳型に結合させるべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの５’末端に付加されると、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に組み込まれる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載されるように、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターには、Ｔ３およびＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３およびＳＰ６プロモーターについてのコンセンサスなヌクレオチド配列は、当技術分野で公知である。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳の開始および細胞中のｍＲＮＡの安定性を決定する５’末端のキャップおよび３’ポリ（Ａ）尾部の両方を有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡでは、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞での発現に好適ではない長いコンカテマー産物を産生する。３’ＵＴＲの終わりに線状化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後にポリアデニル化されたとしても真核生物トランスフェクションにおいて有効ではない正常なサイズのｍＲＮＡをもたらす。
線状ＤＮＡ鋳型では、ファージＴ７ＲＮＡポリメラーゼは、鋳型の最後の塩基を越えて転写物の３’末端を伸長させることができる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ ａｎｄ Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３：６２２３－３６（１９８５）；Ｎａｃｈｅｖａ ａｎｄ Ｂｅｒｚａｌ－Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５－６５（２００３）。
ＤＮＡ鋳型にポリＡ／Ｔストレッチを統合する従来の方法は、分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミド不安定性を引き起こす可能性があり、これが細菌細胞から得られたプラスミドＤＮＡ鋳型がしばしば欠失および他の異常で高度に汚染される理由である。これにより、クローニング手順が面倒で時間がかかるだけでなく、しばしば信頼性が低くなる。それが、クローニングなしでポリＡ／Ｔ３’伸長を有するＤＮＡ鋳型の構築を可能にする方法が非常に望ましい理由である。
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００Ｔテール（サイズは５０～５０００Ｔであり得る）などのポリＴテールを含有するリバースプライマーを使用することによってＰＣＲ中に、またはＤＮＡライゲーションもしくはインビトロ組換えを含むが、これらに限定されない任意の他の方法によるＰＣＲ後に産生することができる。ポリ（Ａ）テールはまた、ＲＮＡに安定性を提供し、それらの分解を低減する。一般に、ポリ（Ａ）尾部の長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）尾部は、１００～５０００個のアデノシンである。
ＲＮＡのポリ（Ａ）尾部は、大腸菌ポリＡポリメラーゼ（Ｅ－ＰＡＰ）などのポリ（Ａ）ポリメラーゼの使用を伴うインビトロ転写後にさらに伸長することができる。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）尾部の長さを１００ヌクレオチドから３００～４００ヌクレオチドに増加させると、ＲＮＡの翻訳効率が約２倍増加する。さらに、３’末端への異なる化学基の結合は、ｍＲＮＡ安定性を増加させることができる。そのような結合は、改変／人工ヌクレオチド、アプタマーおよび他の化合物を含有することができる。例えば、ＡＴＰ類似体は、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）尾部に組み込むことができる。ＡＴＰ類似体は、ＲＮＡの安定性をさらに増加させることができる。
ＲＮＡ上の５’キャップはまた、ＲＮＡ分子に安定性を提供し得る。いくつかの実施形態では、本明細書中に開示される方法によって産生されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野で公知であり、本明細書に記載される技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２９：４３６－４４４（２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ ７：１４６８－９５（２００１）；Ｅｌａｎｇｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３３０：９５８－９６６（２００５））。
本明細書中に開示される方法によって産生されるＲＮＡはまた、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含有することができる。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存性リボソーム結合を開始し、翻訳の開始を促進する任意のウイルス、染色体または人工的に設計された配列であり得る。細胞の透過性および生存性を促進する因子、例えば、糖、ペプチド、脂質、タンパク質、酸化防止剤および界面活性剤を含有することができる、細胞エレクトロポレーションに好適な任意の溶質を含むことができる。
ＲＮＡは、いくつかの異なる方法のいずれか、例えば、エレクトロポレーション（例えば、Ａｍａｘａ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ－ＩＩ（Ａｍａｘａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＣＭ ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）、Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、もしくはＭｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，Ｈａｍｂｕｒｇ Ｇｅｒｍａｎｙ））、リポフェクションを使用したカチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、ポリマーカプセル化、ペプチド媒介トランスフェクション、または「遺伝子銃」などの生物学的粒子送達系を含むが、これらに限定されない市販の方法を使用して標的細胞に導入することができる（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１２（８）：８６１－７０（２００１）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ配列は、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターを使用することによって本発明の免疫細胞に送達される。ＣＡＲ発現レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターは、形質導入された細胞をキャリアとして使用して、またはカプセル化されたベクター、結合したベクターもしくは裸のベクターの無細胞局所送達もしくは全身送達を使用して、異なる種類の真核細胞ならびに組織および生物全体に送達することができる。使用される方法は、安定した発現が必要または十分である任意の目的のためであり得る。
本明細書で使用される場合、「レンチウイルスベクター」という用語は、特にＭｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）で提供される自己不活化レンチウイルスベクターを含む、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部に由来するベクターを指す。診療所で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例には、Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが含まれるが、これらに限定されない。非臨床型のレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ配列は、インビトロ転写ｍＲＮＡを使用することによって本発明の免疫細胞に送達される。インビトロ転写されたｍＲＮＡ ＣＡＲは、トランスフェクトされた細胞をキャリアとして使用して、またはカプセル化されたｍＲＮＡ、結合したｍＲＮＡもしくは裸のｍＲＮＡの無細胞局所送達もしくは全身送達を使用して、異なる種類の真核細胞ならびに組織および生物全体に送達することができる。使用される方法は、一過性発現が必要または十分である任意の目的のためであり得る。
いくつかの実施形態では、所望のＣＡＲは、トランスポゾンによって細胞内で発現させることができる。
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、例えばＴ細胞である。本明細書に記載されるＴ細胞（Ｔｒｅｇ、Ｔｅｆｆ、メモリーＴ細胞、ＮＫＴまたはＭＡＩＴ細胞など）の拡大および遺伝子改変の前に、細胞は、対象から得られる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む多くの供給源から得ることができる。本発明の特定の実施形態では、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞株が使用され得る。本発明の特定の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離、赤血球溶解および単球枯渇後のＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離、向流遠心分離溶出、白血球アフェレーシス、ならびにその後の細胞表面マーカーに基づく磁気またはフローサイトメトリー単離などの当業者に公知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液単位から得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球および血小板を含むリンパ球を含有する。いくつかの実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、白血球搬出法によって得られる。
いくつかの実施形態では、白血球搬出法によって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、その後のプロセシングステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れてもよい。本発明のいくつかの実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、洗浄液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠いていてもよく、またはすべてではないにしても多くの二価カチオンを欠いていてもよい。洗浄後、細胞は、例えば、Ｃａ２＋フリー、Ｍｇ２＋フリーＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液を含むもしくは含まない他の生理食塩水などの種々の生体適合性緩衝液のいずれかに再懸濁されてもよい。あるいは、白血球除去試料の望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁してもよい。
別の実施形態では、Ｔ細胞は、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離または向流遠心溶出によって、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離することができる。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズとのインキュベーションによって単離される。いくつかの実施形態では、期間は、約３０分である。さらなる実施形態では、期間は、３０分～３６時間以上の範囲であり、その間のすべての整数値である。さらなる実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５または６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０～２４時間である。特定の実施形態では、インキュベーション期間は、２４時間である。他の細胞型と比較してＴ細胞が少ない任意の状況では、より長いインキュベーション時間を使用してＴ細胞を単離し得る。したがって、Ｔ細胞が抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズに結合することを可能にする時間を単純に短縮もしくは延長することによって、および／またはビーズとＴ細胞との比を増加もしくは減少させることによって（本明細書にさらに記載されるように）、Ｔ細胞の亜集団を、培養開始時またはプロセス中の他の時点で優先的に選択することができる。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比を増加または減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団を、培養開始時または他の所望の時点で優先的に選択することができる。当業者は、本発明の文脈において複数回の選択も使用できることを認識するであろう。
いくつかの実施形態では、選択手順を実行し、活性化および拡大プロセスにおいて「選択されていない」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されていない」細胞は、さらなる選択ラウンドに供することもできる。陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて成し遂げることができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、負磁気免疫接着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲおよびＣＤ８に対する抗体を含む。特定の実施形態では、調節性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズまたは他の同様の選択方法によって枯渇化される。
陽性または陰性選択による細胞の所望の集団の単離のために、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変動させることができる。特定の実施形態では、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とが一緒に混合される体積を有意に減少させることが望ましい場合がある（すなわち、細胞の濃度を増加させる）。例えば、いくつかの実施形態では、２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、１０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億細胞／ｍＬ超が使用される。さらなる実施形態では、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００または５０００万細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍＬの濃度を使用することができる。高濃度の使用は、細胞収量の増加、細胞活性化および細胞拡大をもたらすことができる。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕捉を可能にする。そのような細胞集団は、治療的価値を有し得、得ることが望ましい場合がある。
刺激のためのＴ細胞は、洗浄ステップ後に凍結することもできる。理論に拘束されないことを望むが、凍結およびその後の解凍ステップは、細胞集団中の顆粒球およびある程度単球を除去することによって、より均一な生成物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄ステップの後、細胞を凍結溶液に懸濁してもよい多くの凍結溶液および凍結パラメータが当技術分野で公知であり、これに関連して有用であるが、１つの方法は、２０％のＤＭＳＯおよび８％のヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、または１０％のデキストラン４０および５％のデキストロース、２０％のヒト血清アルブミンおよび７．５％のＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％のＰｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％のデキストロース５％、０．４５％のＮａＣｌ、１０％のデキストラン４０および５％のデキストロース、２０％のヒト血清アルブミン、ならびに７．５％のＤＭＳＯを含有する培養培地、または例えばＨｅｓｐａｎおよびＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含有する他の好適な細胞凍結培地を使用することを伴い、次いで、細胞を１分あたり１℃の速度で－８０℃に凍結し、液体窒素貯蔵タンクの気相中で貯蔵する。制御された凍結の他の方法、および－２０℃または液体窒素中で直ちに制御されない凍結を使用してもよい。
特定の実施形態では、凍結保存された細胞は、本明細書に記載されるように解凍され、洗浄され、活性化の前に室温で１時間静置される。
本発明の文脈において、本明細書中に記載されるような拡大された細胞が必要とされるかもしれないときよりも前の期間における対象からの血液試料または白血球除去産物の収集も企図される。したがって、拡大させる細胞の供給源は、必要な任意の時点で収集することができ、Ｔ細胞などの所望の細胞を単離し、本明細書に記載されるものなどのＴ細胞療法から利益を得る任意の数の疾患または状態のためのＴ細胞療法で後に使用するために凍結することができる。いくつかの実施形態では、血液試料または白血球アフェレーシス産物は、一般に健康な対象から採取される。特定の実施形態では、血液試料または白血球除去療法産物は、疾患を発症するリスクがあるが、まだ疾患を発症していない一般に健康な対象から採取され、目的の細胞は、後の使用のために単離され、凍結される。特定の実施形態では、Ｔ細胞を拡大させ、凍結し、後で使用し得る。
望ましいＣＡＲを発現するためのＴ細胞の遺伝子改変の前であろうと後であろうと、Ｔ細胞は、一般に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号および同第６，８６７，０４１号、ならびに参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／０１２１００５号に記載される方法を使用して活性化および拡大培養することができる。
一般に、本発明のＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ、Ｔｅｆｆ、メモリーＴ細胞、ＮＫＴまたはＭＡＩＴ細胞）は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤および細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが付着した表面との接触によって拡大される。特に、Ｔ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ、Ｔｅｆｆ、メモリーＴ細胞、ＮＫＴまたはＭＡＩＴ細胞）は、本明細書に記載されるように、例えば表面に固定化された抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合フラグメントもしくは抗ＣＤ２抗体との接触によって、またはカルシウムイオノフォアと組み合わせたプロテインキナーゼＣアクチベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触によって刺激され得る。Ｔ細胞の表面上の補助分子の共刺激のために、補助分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、Ｔ細胞の集団を抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が使用され得る。抗ＣＤ２８抗体の例には、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）が含まれるが、これらに限定されない。当技術分野で一般的に公知の他の拡大方法を使用することができる（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７（１９９８）；Ｈａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９－１３２８（１９９９）；Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ．２２７（ｌ－２）：５３－６３（１９９９））。
特定の実施形態では、本発明のＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ、Ｔｅｆｆ、メモリーＴ、ＮＫＴまたはＭＡＩＴ細胞）の一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、異なるプロトコルによって提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中にあってもよく、および／または表面に連結されていてもよい。表面に連結される場合、薬剤は、同じ表面（すなわち、「シス」形成では）または別個の表面（すなわち、「トランス」形成）に連結され得る。あるいは、一方の薬剤を表面に連結させ、他方の薬剤を溶液中に結合させてもよい。いくつかの実施形態では、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合しており、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中にあるか、または表面に連結している。特定の実施形態では、両方の薬剤を溶液中に存在させることができる。いくつかの実施形態では、薬剤は、可溶性形態であり、次いでＦｃ受容体を発現する細胞または薬剤に結合する抗体もしくは他の結合剤などの表面に架橋され得る。これに関して、本発明においてＴ細胞の活性化および拡大での使用が意図されている人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００４／０１０１５１９号および同第２００６／００３４８１０号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、２つの薬剤は、同じビーズ、すなわち「シス」上、または別々のビーズ、すなわち「トランス」上のいずれかのビーズ上に固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、両方の薬剤は、同じビーズに等量の分子量で共固定化される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞拡大およびＴ細胞成長のためのビーズに結合した各抗体の１：１の比が使用される。本発明の特定の態様では、ビーズに結合した抗ＣＤ３：抗ＣＤ２８抗体の比は、１：１の比を使用して観察される拡大と比較してＴ細胞拡大の増加が観察されるように使用される。いくつかの実施形態では、１：１の比を使用して観察される拡大と比較して、約１～約３倍の増加が観察される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合した抗ＣＤ３：抗ＣＤ２８抗体の比は、１００：１～１、１００およびそれらの間のすべての整数値の範囲である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体よりも多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合している、すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比は、１未満である。本発明の特定の実施形態では、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体の比は、２：１より大きい。特定の一実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。さらなる実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。特定の実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：１０のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：３のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。いくつかの実施形態では、ビーズに結合した抗体の３：１のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。
１：５００～５００：１およびその間の任意の整数値の細胞に対する粒子の比を使用して、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激し得る。当業者が容易に理解することができるように、粒子対細胞の比は、標的細胞に対する粒径に依存し得る。例えば、小さなサイズのビーズは、少数の細胞にしか結合し得ず、一方、より大きなビーズは、多数に結合し得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、１：１００～１００：１の範囲の細胞対粒子の比およびその間の任意の整数値で刺激することができる。特定の実施形態では、比は、１：９～９：１およびその間の任意の整数値を含む。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８連結粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変動し得るが、値の特定の実施形態は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１および１５：１を含み、１つの特定の比は、Ｔ細胞あたり少なくとも１：１の粒子である。いくつかの実施形態では、１：１以下の粒子対細胞の比が使用される。特定の実施形態では、粒子：細胞比は、１：５である。さらなる実施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の日に応じて変動し得る。例えば、いくつかの実施形態では、粒子対細胞の比は、１日目では１：１～１０：１であり、追加の粒子は、（追加日の細胞数に基づいて）１：１～１：１０の最終比で、最大１０日間、毎日またはその後１日おきに細胞に加えられる。特定の一実施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の１日目では１：１であり、刺激の３日目および５日目では１：５に調整される。いくつかの実施形態では、粒子は、刺激の１日目では１：１、刺激の３日目および５日目では１：５の最終比まで毎日または１日おきに加えられる。いくつかの実施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の１日目では２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。いくつかの実施形態では、粒子は、刺激の１日目では１：１であり、刺激の３日目および５日目では１：１０の最終比まで毎日または１日おきに加えられる。当業者は、種々の他の比率が本発明での使用に好適であり得ることを理解するであろう。特に、比率は、粒径ならびに細胞のサイズおよび種類に応じて変動する。
本発明のさらなる実施形態では、免疫細胞を薬剤コーティングされたビーズと組み合わせ、続いてビーズと細胞を分離し、次いで細胞を培養する。代替の実施形態では、培養の前に、薬剤コーティングされたビーズおよび細胞は分離されず、一緒に培養される。いくつかの実施形態では、ビーズおよび細胞は、最初に磁力などの力の印加によって濃縮され、細胞表面マーカーのライゲーションの増加をもたらし、それによって細胞刺激を誘導する。
例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体が付着した常磁性ビーズ（３×２８ビーズ）を本発明の免疫細胞と接触させることによってライゲートされ得る。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、１０４個～１０９個のＴ細胞）およびビーズ（例えば、１：１の比のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔ常磁性ビーズ）は、ＰＢＳ（例えば、カルシウムおよびマグネシウムなどの二価カチオンを含まない）などの緩衝液中で組み合わされる。ここでも、当業者は、状況に応じて任意の細胞濃度が使用され得ることを容易に理解することができる。例えば、標的細胞は、試料中で非常に希少であり得、試料の０．０１％のみを構成し得るか、または試料全体（すなわち、１００％）が目的の標的細胞を含み得る。したがって、任意の細胞数が本発明の文脈内にある。特定の実施形態では、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子と細胞とが一緒に混合される体積を有意に減少させることが望ましい場合がある（すなわち、細胞の濃度を増加させる）。例えば、一実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。別の実施形態では、１億細胞／ｍＬ超が使用される。さらなる実施形態では、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００または５０００万細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍＬの濃度を使用することができる。高濃度の使用は、細胞収量、細胞活性化および／または細胞拡大の増加をもたらし得る。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕捉を可能にする。そのような細胞集団は、治療的価値を有し得、特定の実施形態では得ることが望ましい場合がある。
本発明のいくつかの実施形態では、混合物を数時間（例えば、約３時間）～約１４日間またはその間の任意の時間毎の整数値で培養し得る。いくつかの実施形態では、混合物は、２１日間培養され得る。本発明のいくつかの実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、約８日間一緒に培養される。いくつかの実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、２～３日間一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上であり得るように、数サイクルの刺激も所望され得る。Ｔ細胞培養に適切な条件には、血清（例えば、ウシ胎児血清またはヒト胎児血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβおよびＴＮＦ－αまたは当業者に公知の細胞成長のための任意の他の添加剤を含む、増殖および生存に必要な因子を含有し得る適切な培地（例えば、最小必須培地もしくはＲＰＭＩ培地１６４０、またはＸ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ））が含まれる。細胞の成長のための他の添加剤には、界面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールなどの還元剤が含まれるが、これらに限定されない。培地には、ＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ１５、およびＸ－Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒが含まれ得、これらには、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加されており、無血清であるか、または適切な量の血清（もしくは血漿）もしくは所定のホルモンのセット、ならびに／またはＴ細胞の成長および拡大に十分な量のサイトカインが補充されている。抗生物質、例えばペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験培養物にのみ含まれ、対象に注入される細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、成長を支援するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液またはアフェレーズされた末梢血単核細胞産物は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（Ｔｃ、ＣＤ８＋）よりも大きいヘルパーＴ細胞集団（Ｔｈ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞のエクスビボ拡大は、約８～９日前には主にＴｈ細胞からなるＴ細胞の集団を産生し、約８～９日後には、Ｔ細胞の集団はＴｃ細胞のますます大きな集団を含む。治療の目的に応じて、いくつかの実施形態では、主にＴｈ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利であり得る。いくつかの実施形態では、Ｔｃ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットをより高度に拡大することが有益であり得る。
さらに、ＣＤ４マーカーおよびＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、有意に変動するが、大部分は、細胞拡大プロセスの過程中に再現性よく変動する。そのような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物を合わせる能力を可能にする。
本発明のいくつかの実施形態では、例えばＰＣＴ特許公開ＷＯ２００７／１１０７８５（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、調節性Ｔ細胞を得るために、Ｔ細胞は、ラパマイシンの存在下で培養され得る。調節性Ｔ細胞を生成する別の方法は、米国特許出願公開第２０１６／０２４４７０号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、Ｔ細胞は、例えばＴＣＲ／ＣＤ３抗体、ＴＣＲ共刺激因子活性化因子、例えばＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＧＩＴＲ、Ｂ７－１／２、ＣＤ５、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ４０またはＣＤ１３７抗体、およびラパマイシンなどのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３活性化因子とともに培養される。
本発明のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの発現によって遺伝子改変されたＴ細胞はまた、ＲＯＲ－Ｃ、ＦｏｘＰ３、Ｆｏｘｏ１、Ｔ－ｂｅｔまたはＧａｔａ３、ｃ－ＭａｆまたはＡｈＲなどの少なくとも１つの細胞内因子の発現によって遺伝子改変されていてもよい。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子組換え免疫細胞は、ＦｏｘＰ３を発現する。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子組換え免疫細胞は、Ｆｏｘｏ１を発現する。
一実施形態では、本発明の遺伝子組換え免疫細胞は、同種異系Ｔｒｅｇ、Ｔｅｆｆ、メモリーＴ細胞、またはＮＫＴもしくはＭＡＩＴ細胞であり得る。例えば、同種異系Ｔ細胞は、機能的ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩの発現を欠くＴ細胞であり得る。
一実施形態では、本明細書に記載されるＴ細胞は、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作することができる。例えば、本明細書に記載されるＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラス１および／またはＨＬＡクラスＩＩまたは非古典的ＨＬＡ分子がダウンレギュレートされるように操作することができる。
機能的ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現を欠く改変された免疫細胞は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウトまたはノックダウンを含む任意の好適な手段によって得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ（ｍｎ、ホーミングエンドヌクレアーゼとしても公知）、またはメガＴＡＬ（ＴＡＬエフェクターをｍｎ切断ドメインと組み合わせる）を使用したＴＣＲおよび／またはＨＬＡのノックダウンを含むことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸は、例えば、欠失される遺伝子の遺伝子座などの免疫細胞のゲノムの特定の遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子座内に挿入され、それによってＴＣＲおよび／またはＨＬＡ発現の阻害をもたらす。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ発現は、Ｔ細胞においてＴＣＲおよび／またはＨＬＡをコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを使用して阻害することができる。Ｔ細胞におけるｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡの発現は、例えばレンチウイルス発現系などの任意の従来の発現系を使用して達成することができる。ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩ遺伝子の発現をダウンレギュレートする例示的なｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許出願公開第２００７／００３６７７３号に記載されている。ＴＣＲの成分の発現をダウンレギュレートする例示的なｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許出願公開第２０１２／０３２１６６７号に記載されている。
本明細書で使用される「ＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するＣＲＩＳＰＲ」は、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピートのセット、またはそのようなリピートのセットを含む系を指す。本明細書で使用される「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子をサイレンシングまたは突然変異させるために使用することができるＣＲＩＳＰＲおよびＣａｓ由来の系を指す。
天然に存在するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、配列決定された真正細菌ゲノムの約４０％および配列決定された古細菌の９０％に見られる。例えば、Ｇｒｉｓｓａ ｅｔ ａｌ．（ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ８：１７２（２００７））を参照されたい。この系は、プラスミドおよびファージなどの外来遺伝要素に対する耐性を付与し、獲得免疫の形態を提供する原核生物免疫系の一種である。例えば、Ｂａｒｒａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１５：１７０９－１７１２（２００７）；Ｍａｒｒａｇｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２２：１８４３－１８４５（２００８）を参照されたい。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、マウスまたは霊長類などの真核生物における遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、増強または変化）での使用のために改変されている。例えば、Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４８２：３３１－８（２０１２）を参照されたい。これは、特異的に設計されたＣＲＩＳＰＲおよび１つ以上の適切なＣａｓコード配列を含有するプラスミドを真核細胞に導入することによって成し遂げられる。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座と呼ばれることもあるＣＲＩＳＰＲ配列は、交互のリピートおよびスペーサーを含む。天然に存在するＣＲＩＳＰＲでは、スペーサーは通常、プラスミドまたはファージ配列などの細菌にとって外来の配列を含み、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系において、スペーサーは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子配列に由来する。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からのＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質によって構成的に発現され、低分子ＲＮＡにプロセシングされる。これらは、反復配列の側面に位置するスペーサーを含む。ＲＮＡは、ＲＮＡまたはＤＮＡレベルで外因性遺伝要素をサイレンシングするように他のＣａｓタンパク質を誘導する。例えば、Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２７：１６７－１７０（２０１０）；Ｍａｋａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｄｉｒｅｃｔ １：７（２００６）を参照されたい。したがって、スペーサーは、ｓｉＲＮＡと同様に、ＲＮＡ分子の鋳型として機能する。例えば、Ｐｅｎｎｉｓｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８３３－８３６（２０１３）を参照されたい。したがって、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集する（塩基対を付加もしくは欠失させる）か、またはＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡの発現を減少させる早期停止を導入することができる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、代替的または追加的に、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を可逆的にオフにするＲＮＡ干渉のように使用することができる。例えば、哺乳動物細胞では、ＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質をＴＣＲおよび／またはＨＬＡプロモーターに導き、ＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断することができる。
当技術分野で公知の技術、例えば米国特許出願公開第２０１４／００６８７９７号およびＣｏｎｇ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９－８２３（２０１３）に記載されている技術を使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を生成することができる。当技術分野で公知の他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、例えば、Ｔｓａｉ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：６５６９－５７６（２０１４）および米国特許第８，８７１，４４５号、同第８，８６５，４０６号、同第８，７９５，９６５号、同第８，７７１，９４５号および同第８，６９７，３５９号に記載されているものもまた、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するために生成され得る。
「ＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するＴＡＬＥＮ」は、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用することができる人工ヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合することによって人工的に産生される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子の一部を含む任意の所望のＤＮＡ配列に結合するように操作することができる。操作されたＴＡＬＥをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ配列を含む任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を産生することができる。次いで、これらを細胞に導入することができ、それらは、ゲノム編集に使用することができる。例えば、Ｂｏｃｈ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５－６（２０１１）；Ｂｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：１５０９－１２（２００９）；およびＭｏｓｃｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：３５０１（２００９）を参照されたい。
ＴＡＬＥは、キサントモナス細菌によって分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目および１３番目のアミノ酸を除いて高度に保存された３３～３４反復アミノ酸配列を含有する。これらの２つの位置は、非常に可変的であり、特異的ヌクレオチド認識との強い相関を示す。したがって、それらは、所望のＤＮＡ配列に結合するように操作することができる。ＴＡＬＥＮを産生するために、ＴＡＬＥタンパク質は、野生型または突然変異型のフォックルエンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）に融合される。ＴＡＬＥＮでの使用のために、Ｆｏｋｌに対するいくつかの突然変異が行われ、これらは、例えば、切断特異性または活性を改善する。例えば、Ｃｅｒｍａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３９：ｅ８２（２０１１）；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８（２０１１）；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１－７３４（２０１１）；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３：３０７（２０１１）；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７４－７９（２０１０）；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６－７９３（２００７）；およびＧｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６（２０１０）を参照されたい。Ｆｏｋｌドメインは、二量体として機能し、適正な配向および間隔を有する標的ゲノム内の部位に固有のＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋｌ切断ドメインとの間のアミノ酸残基の数、および２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基の数の両方が、高レベルの活性を達成するための重要なパラメータであるようである（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８（２０１１））。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡＴＡＬＥＮを細胞内部で使用して、二本鎖切断（ＤＳＢ）を産生することができる。修復機構が非相同末端結合を介して破壊を不適切に修復する場合、破壊部位に突然変異を導入することができる。例えば、不適切な修復は、フレームシフト突然変異を導入し得る。あるいは、ＴＡＬＥＮとともに外来ＤＮＡを細胞に導入することができ、外来ＤＮＡおよび染色体配列の配列に応じて、このプロセスを使用して、ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡ遺伝子の欠陥を修正するか、またはそのような欠陥をｗｔ ＨＬＡ遺伝子に導入して、ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡの発現を減少させることができる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュール構成要素を使用する様々なスキームを含む、当技術分野で公知の任意の方法を使用して構築することができる（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９－５３（２０１１）；Ｇｅｉｂｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６：ｅｌ９５０９（２０１１））。
「ＺＦＮ」または「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＺＦＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するＺＦＮ」は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用することができる人工ヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合したＦｏｋｌヌクレアーゼドメイン（またはその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つ以上のジンクフィンガーを含む。例えば、Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １８８：７７３－７８２（２０１１）；およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１１５６－１１６０（１９９６）を参照されたい。ジンクフィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンによって安定化された小さなタンパク質構造モチーフである。ジンクフィンガーは、例えばＣｙｓ２Ｈｉｓ２を含むことができ、約３ｂｐの配列を認識することができる。約６、９、１２、１５または１８ｂｐの配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを産生するために、公知の特異性の様々なジンクフィンガーを組み合わせることができる。ファージディスプレイ、酵母１ハイブリッドシステム、細菌１ハイブリッドおよび２ハイブリッドシステム、ならびに哺乳動物細胞を含む、特定の配列を認識するジンクフィンガー（およびそれらの組み合わせ）を生成するための様々な選択およびモジュール式アセンブリ技術が利用可能である。
ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡを切断するために二量体化しなければならない。したがって、非パリンドロームＤＮＡ部位を標的とするには、一対のＺＦＮが必要である。２つの個々のＺＦＮは、それらのヌクレアーゼが適正に離間した状態でＤＮＡの反対鎖に結合しなければならない（Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：１０５７０－５（１９９８））。また、ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡに二本鎖切断を生じさせることができ、不適切に修復された場合、フレームシフト突然変異を生じさせ、細胞におけるＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらすことができる。ＺＦＮを相同組換えとともに使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を突然変異させることもできる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して構築することができる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１８：８０７－８１５（２０１１）；Ｔｏｒｉｋａｉ，Ｂｌｏｏｄ １２２：１３４１－１３４９（２０１３）；Ｃａｔｈｏｍｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００－７（２００８）；Ｑｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６（２０１０）；ならびに米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号および同第２０１２／００６０２３０号を参照されたい。
「メガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するメガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するメガヌクレアーゼ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用することができる大きな（＞１４塩基対）認識部位を有するモノマーエンドヌクレアーゼを指す。メガヌクレアーゼ（ｍｎ）は、細菌ホーミングエンドヌクレアーゼに由来し、ユニークな標的部位のために操作された自然ヌクレアーゼ活性を有する単量体タンパク質である。ホーミングエンドヌクレアーゼは、それらの宿主ゲノムの個々の遺伝子座で二本鎖切断を生成し、それによって部位特異的遺伝子変換事象を駆動することができるＤＮＡ切断酵素である（Ｓｔｏｄｄａｒｄ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １９（１）：７－１５（２０１１））。小さいサイズにもかかわらず、ホーミングエンドヌクレアーゼは、長いＤＮＡ配列（典型的には２０～３０個の塩基対）を認識する。ホーミングエンドヌクレアーゼは、非常に普及しており、微生物ならびにファージおよびウイルスに見られる。ＬＡＧＬＩＤＡＤＧおよびＨｉｓ－Ｃｙｓボックス酵素（これらの酵素の最も配列特異的である）は、それらのＤＮＡ標的部位の主溝にドッキングする逆平行βシートに依存する（Ｆｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３９４（６６８８）：９６－１０１（１９９８）；Ｊｕｒｉｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．２（４）：４６９－７６（１９９８）。そこで、それらは、複数の連続する塩基対にわたって不均一に分布する配列特異的および非特異的接触の集合を確立する（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２９（２）：２５３－２６９（２００３）；Ｓｃａｌｌｅｙ－Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３７２（５）：１３０５－１９（２００７）。
ＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）ファミリーは、遺伝子ターゲティング用途に使用される操作された酵素の主要な供給源である。ＬＨＥファミリーは、主に古細菌内ならびに藻類および真菌の葉緑体およびミトコンドリアゲノムにコードされる（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｈｏｍｉｎｇ Ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｉｎｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１６（２００５）；Ｄａｌｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（２２）：４６２６－３８（１９９７）；Ｓｅｔｈｕｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｅｖｏｌ．２６（１０）：２２９９－３１５（２００９）。タンパク質鎖あたり単一の保存されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号１７４）を有するメガヌクレアーゼは、パリンドロームＤＮＡ標的配列およびほぼパリンドロームＤＮＡ標的配列を切断するホモ二量体タンパク質を形成するが、タンパク質鎖あたり２つのそのようなモチーフを含有するメガヌクレアーゼは、完全に非対称なＤＮＡ配列を標的とすることができるより大きな擬似対称モノマーを形成する。
メガヌクレアーゼは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを標的とし、したがってＤＮＡに二本鎖切断を生じさせるように操作することができ、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト突然変異を生じさせ、細胞におけるＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらし得る。
「ＭｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するｍｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのｍｅｇａＴＡＬ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を編集するために使用することができる人工ヌクレアーゼを指す。ＭｅｇａＴＡＬは、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼファミリーに由来するメガヌクレアーゼのＮ末端への最小ＴＡＬ（転写活性化因子様）エフェクタードメインの融合によって得られるハイブリッドモノマーヌクレアーゼである（Ｂｏｉｓｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４２（４）：２５９１－６０１（２０１４）；Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１２３９：１０５－３２（２０１５））。したがって、ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインによって提供されるさらなる親和性および特異性を有する部位特異的メガヌクレアーゼ切断ヘッドからなる。
ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを標的とし、したがってＤＮＡに二本鎖切断を生じさせるように操作することができ、これは不適切に修復された場合にフレームシフト突然変異を生じさせ、細胞におけるＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、テロメラーゼ遺伝子によるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを長くし、患者におけるＴ細胞の持続性を改善することができる。例えば、Ｊｕｎｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １１７：１４６６－１４７６（２００７）を参照されたい。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子組換え免疫細胞は、テロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを異所性に発現する。いくつかの態様では、本開示は、細胞を、テロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と接触させることを含む、本発明のキメラ受容体発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、キメラ受容体（例えば、本明細書中に記載されるＣＡＲ）をコードする構築物と接触させる前、接触させると同時に、または接触させた後に、核酸と接触させ得る。
本発明はさらに、本発明の免疫細胞を得るための方法に関し、前記方法は、少なくとも１つの免疫細胞に本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸を形質導入し、任意選択で形質導入された細胞を拡大させることを含む。いくつかの実施形態では、方法は、エクスビボ法である。
一実施形態では、本発明の免疫細胞を得るための方法は、
－ＰＢＭＣ集団（例えば、白血球アフェレーシスによって回収される）からの免疫細胞の単離ステップと、
－本明細書で上記されるＣＡＲをコードする核酸配列が免疫細胞内に導入または移入される遺伝子改変ステップと、
－任意選択で、拡大ステップと、
－任意選択で、洗浄ステップと、
－任意選択で、凍結ステップと、を含む。
一実施形態では、遺伝子改変ステップは、遺伝子破壊ステップ、遺伝子修正ステップまたは遺伝子付加ステップ、好ましくは遺伝子付加ステップに対応する。一実施形態では、遺伝子改変ステップは、トランスフェクション、形質導入または遺伝子編集を含むが、これらに限定されない群から選択される方法によって実施される。
本発明において使用され得る遺伝子編集の方法の例には、操作されたヌクレアーゼに基づく方法、組換えアデノ随伴ウイルス（またはＡＡＶ）に基づく方法、トランスポゾンに基づく方法（例えば、スリーピングビューティートランスポゾンシステム）、相同組換えに基づく方法、部位特異的リコンビナーゼを使用した条件付きターゲティング（例えば、Ｃｒｅ－ＬｏｘＰおよびＦｌｐ－ＦＲＴ系）、ならびにマルチプレックス自動ゲノムエンジニアリング（ＭＡＧＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
操作されたヌクレアーゼの非限定的な例には、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ（ｍｎ、ホーミングエンドヌクレアーゼとしても公知）、またはメガＴＡＬ（ＴＡＬエフェクターとｍｎ切断ドメインとを組み合わせる）が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の免疫細胞を得るための方法は、
－ＰＢＭＣ集団（例えば、白血球アフェレーシスによって回収される）からの免疫細胞の単離ステップと、
－本明細書で上記されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターによる形質導入またはトランスフェクションステップと、
－任意選択で、拡大ステップと、
－任意選択で、洗浄ステップと、
－任意選択で、凍結ステップと、を含む。
本発明はさらに、本明細書に記載されるＣＡＲを発現する免疫細胞、およびそのような免疫細胞の集団に関する。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸を免疫細胞に導入し、それによって細胞表面にＣＡＲを発現する操作された細胞を生成する。したがって、本発明はまた、本発明のＣＡＲをコードする核酸に関する。
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞は、哺乳動物免疫細胞、例えばヒト免疫細胞、家畜（例えば、ウシ、ブタもしくはウマ）からの免疫細胞、またはペット（例えば、ネコもしくはイヌ）からの免疫細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、リンパ球、骨髄由来細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、免疫細胞は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるリンパ球である。特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞であり、これは、特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、二重陰性（ＤＮ）Ｔ細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、免疫細胞は、例えばＴヘルパー細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞およびそれらの任意の組み合わせなどのＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋調節性Ｔ細胞などのＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、γδ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、定義されたガンマデルタＴＣＲ（ＴＥＧγδ）細胞を発現するように操作されたＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＤＮＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば細胞療法での使用に好適な任意の調節性免疫細胞などの調節性免疫細胞である。特定の実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｔ細胞、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋調節性Ｔ細胞、調節性γδ Ｔ細胞、調節性ＤＮＴ細胞、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、調節性樹状細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、特に胸腺由来Ｔｒｅｇまたは適応型もしくは誘導型Ｔｒｅｇである。特定の実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。一定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、胸腺由来Ｔｒｅｇまたは適応型もしくは誘導型Ｔｒｅｇである。特定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＦｏｘＰ３－調節性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）である。特定の実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ８＋調節性Ｔ細胞である。ＣＤ８＋調節性Ｔ細胞の例には、ＣＤ８＋ＣＤ２８－調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１０３＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋調節性Ｔ細胞およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性γδＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性ＤＮＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性ＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば細胞療法での使用に好適な任意のエフェクター免疫細胞などのエフェクター免疫細胞である。特定の実施形態では、エフェクター免疫細胞は、エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、エフェクターγδ Ｔ細胞、エフェクターＤＮＴ細胞、エフェクターＮＫ細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＴ細胞である。特定の実施形態では、エフェクター免疫細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の例には、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔｈ２２細胞、ＣＤ４＋Ｔ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、エフェクター免疫細胞は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の例には、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７－ＣＤ６２Ｌ－エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７－ＣＤ６２Ｌ－エフェクターＴ細胞およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態では、免疫細胞は、エフェクターγδＴ細胞である。
一実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＤＮＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エフェクターＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、γδ Ｔ細胞、二重陰性（ＤＮ）細胞、調節性免疫細胞、調節性Ｔ細胞、エフェクター免疫細胞、エフェクターＴ細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸は、ゲノム編集後にＴｒｅｇ細胞に分化する非Ｔｒｅｇリンパ系細胞に導入される。編集された非Ｔｒｅｇ細胞は、上記のように患者に移植する前にＴｒｅｇ細胞に分化され得る。あるいは、編集された非Ｔｒｅｇ細胞は、患者に移植された後、Ｔｒｅｇ細胞に分化するように誘導され得る。
いくつかの実施形態では、分子の発現レベルは、フローサイトメトリー、免疫蛍光または画像分析、例えば高含有量分析によって決定される。特定の実施形態では、分子の発現レベルは、フローサイトメトリーによって決定される。特定の実施形態では、フローサイトメトリー分析を行う前に、細胞を固定し、透過処理し、それによって細胞内タンパク質の検出を可能にする。
いくつかの実施形態では、細胞集団中の分子の発現レベルを決定することは、分子を発現する細胞集団の細胞のパーセンテージ（すなわち、分子についての細胞「＋」）を決定することを含む。特定の実施形態では、分子を発現する細胞の前記パーセンテージは、ＦＡＣＳによって測定される。
「発現する」、「陽性」または「＋」および「発現しない」、「陰性」または「－」という用語は、当技術分野で周知であり、「＋」に対応する細胞マーカーの発現レベルが高いまたは中間（「＋／－」とも呼ばれる）であり、「－」に対応する細胞マーカーの発現レベルがゼロであるという点で、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。
「低」または「ｌｏ」または「ｌｏ／－」という用語は、当技術分野で周知であり、細胞マーカーの発現レベルが全体として分析されている細胞の集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して低いという点で、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。より具体的には、「ｌｏ」という用語は、１つ以上の他の異なる細胞集団よりも低いレベルで細胞マーカーを発現する異なる細胞集団を指す。
「高」または「ｈｉ」または「明るい」という用語は、当技術分野で周知であり、全体として分析されている細胞の集団における細胞マーカーの発現レベルと比較して細胞マーカーの発現レベルが高いという点で、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。
一般に、染色強度のトップ２、３、４または５％の細胞は、「ｈｉ」と示され、集団の上位半分に入るものは「＋」として分類される。蛍光強度の５０％を下回る細胞は、「ｌｏ」細胞と呼ばれ、５％を下回る細胞は、「－」細胞と示される。
目的の細胞マーカーの発現レベルは、このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色した細胞集団からの細胞の中央蛍光強度または平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、無関係な特異性を有するが同じアイソタイプ、同じ蛍光プローブを有し、同じ種に起源がある蛍光標識抗体で染色した同じ細胞集団からの細胞の蛍光強度（ＦＩ）と比較することによって決定される（アイソタイプコントロールと呼ばれる）。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色され、アイソタイプコントロールで染色された細胞と同等のＭＦＩまたはより低いＭＦＩを示す集団からの細胞は、このマーカーを発現していないと見なされ、（－）または陰性と示される。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色され、アイソタイプコントロールで染色された細胞よりも優れたＭＦＩ値を示す集団からの細胞は、このマーカーを発現していると見なされ、（＋）または陽性と示される。
本発明はまた、本明細書で定義される免疫細胞の単離されたおよび／または実質的に精製された集団に関する。
したがって、本発明は、免疫細胞の単離された集団および／または実質的に精製された集団を提供し、その集団の細胞は、本明細書中に記載されるようなＣＡＲを含む。
本明細書で使用される場合、「単離された集団」は、その天然環境（末梢血など）から取り出され、単離され、精製され、または分離され、それが天然に存在するが、それに基づいて細胞が単離された細胞表面マーカーを欠く他の細胞から少なくとも約７５％遊離、８０％遊離、８５％遊離、および特定の実施形態では約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％遊離している細胞集団を指す。
本発明はさらに、本明細書で定義される免疫細胞の濃縮集団に関する。
いくつかの実施形態では、本発明の単離された、精製された、および／または濃縮された免疫細胞集団は、凍結および解凍されている。
いくつかの実施形態では、本発明の調節性免疫細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ－β分泌Ｔｈ３細胞、調節性ＮＫＴ細胞、調節性γδ Ｔ細胞、調節性ＣＤ８＋Ｔ細胞および二重陰性調節性Ｔ細胞からなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、自己細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、異種細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、同種異系細胞である。
いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、その細胞表面に本発明のＣＡＲ（本明細書では「第１の受容体」と呼ばれる）、およびヒトＣＤ４５ＲＣとは異なる別のリガンドに結合する別の受容体（本明細書では「第２の受容体」と呼ばれる）を発現する。特定の実施形態では、第２の受容体は、例えば本明細書に記載されるように、細胞外リガンド結合ドメイン、任意選択でヒンジドメイン、少なくとも１つの膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第２の受容体は、内因性である（例えば、内因性ＴＣＲなど）。いくつかの実施形態では、第２の受容体は、外因性であり、その発現は、それをコードする核酸の形質転換または形質導入によって本発明の免疫細胞集団において誘導される。前記外因性受容体は、外因性ＴＣＲまたはＣＡＲであり得る。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、２つのＣＡＲを発現し、第１のＣＡＲは、ヒトＣＤ４５ＲＣを認識し、第２のＣＡＲは、異なるリガンドを認識する。いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、２つのＣＡＲを発現し、第１のＣＡＲは、ヒトＣＤ４５ＲＣ上の第１のエピトープを認識し、第２のＣＡＲは、ヒトＣＤ４５ＲＣ上の第２の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、本発明の免疫細胞集団は、２つのＣＡＲを発現し、第１のＣＡＲは、ヒトＣＤ４５ＲＣを認識し、第２のＣＡＲは、第２の異なる抗原（例えば、ヒトＣＤ４５ＲＣの抗原変異体など）を認識する。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲおよび第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）の少なくとも１つは、誘導可能である、すなわち、細胞表面でのその発現は、誘導され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲおよび第２の受容体（例えば、第２のＣＡＲ）の少なくとも１つの発現は、他方の受容体の活性化によって誘導される。特定の実施形態では、本発明のＣＡＲの発現は、第２の受容体の活性化によって誘導される。特定の実施形態では、第２の受容体の発現は、本発明のＣＡＲの活性化によって誘導される。誘導性ＣＡＲは、例えば、Ｒｏｙｂａｌ ｅｔ ａｌ（Ｃｅｌｌ，２００６）などによって当技術分野で記載されている。
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２の受容体は、異なる第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。第１の実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータなど）を含み、第２の受容体は、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、または４－１ＢＢおよびＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインの組み合わせなど）を含む。第２の実施形態では、本発明のＣＡＲは共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、または４－１ＢＢおよびＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインの組み合わせなど）を含み、第２の受容体は、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータなど）を含む。
したがって、これらの実施形態によれば、本発明の免疫細胞集団の完全な活性化は、本発明のＣＡＲのヒトＣＤ４５ＲＣへの結合および第２の受容体が向けられているリガンドへの第２の受容体の結合の両方を必要とする。
一実施形態では、第２の受容体によって認識されるリガンドは、疾患組織もしくは器官、または自己免疫応答の部位に発現または存在する。その結果、ヒトＣＤ４５ＲＣを発現する細胞に対する抑制活性は、前記リガンドが存在し、免疫細胞集団の細胞上の第２の受容体によって認識される場合、疾患組織もしくは器官において、または自己免疫応答の部位においてのみ誘導されるであろう。
一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、キメラ受容体によって認識されるヒトＣＤ４５ＲＣとは異なるリガンドを認識する細胞外リガンド結合ドメインをさらに含む。一実施形態では、前記リガンド結合ドメインは、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ヒトＣＤ４５ＲＣ結合ドメインおよび前記ヒトＣＤ４５ＲＣとは異なるリガンドを認識する別のリガンド結合ドメインを含む細胞外リガンド結合ドメインを含む。一実施形態では、前記リガンド結合ドメインは、ヒトＣＤ４５ＲＣおよび異なるリガンドの両方を認識する二機能性抗体である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣに結合する、ＣＡＲを発現する単離されたＴ細胞集団を含む組成物である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣへのＣＡＲ結合を発現する単離Ｔ細胞集団をコードする少なくとも１つの核酸を含む組成物である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣに結合するＣＡＲを発現する単離Ｔ細胞集団をコードする少なくとも１つの核酸を含む少なくとも１つの発現ベクターを含む組成物である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣに結合する、ＣＡＲを発現する単離されたＴ細胞集団、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣへのＣＡＲ結合を発現する単離されたＴ細胞集団をコードする少なくとも１つの核酸、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣに結合するＣＡＲを発現する単離されたＴ細胞集団をコードする少なくとも１つの核酸、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤またはビヒクルを含む少なくとも１つの発現ベクターを含む医薬組成物である。
「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。前記賦形剤は、動物、好ましくはヒトに投与した場合、有害なアレルギー反応または他の不都合な反応を生じない。ヒトへの投与のために、調製物は、例えばＦＤＡ ＯｆｆｉｃｅまたはＥＭＡなどの規制当局によって要求される無菌性、発熱原性、ならびに一般的な安全性および純度の基準を満たすべきである。
これらの組成物に使用され得る薬学的に許容され得る賦形剤には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、細胞ロース系物質（例えば、カルボキシメチル細胞ロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、対象に注射することができる製剤に対して薬学的に許容されるビヒクルを含む。これらは、特に等張性の滅菌生理食塩水（リン酸一ナトリウムもしくは二ナトリウム、塩化ナトリウム、カリウム、カルシウムもしくはマグネシウムなど、またはそのような塩の混合物）、または場合に応じて滅菌水または生理食塩水を添加すると注射可能な溶液の構成を可能にする乾燥組成物、特に凍結乾燥組成物であり得る。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣに結合する、ＣＡＲを発現する単離されたＴ細胞集団を含む医薬である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣへのＣＡＲ結合を発現する単離されたＴ細胞集団をコードする少なくとも１つの核酸を含む医薬である。
本発明のさらなる目的は、本発明によるｈＣＤ４５ＲＣに結合するＣＡＲを発現する単離Ｔ細胞集団をコードする少なくとも１つの核酸を含む少なくとも１つの発現ベクターを含む医薬である。
本発明はさらに、本発明によるＣＡＲ、組成物または医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団を投与することによって、それを必要とする対象において免疫寛容を誘導する方法に関する。それはまた、免疫寛容を誘導する際にそれを必要とする対象に使用するための、本発明によるＣＡＲ、組成物または医薬組成物を発現するＴ細胞集団に関する。
本明細書で使用される「免疫寛容」という用語は、他の物質または組織に対する免疫応答を維持しながら免疫応答を引き出す能力を有する特定の物質または組織に対する免疫系の不応答性の状態に関する。
本明細書で使用される「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介性および／またはＢ細胞媒介性の免疫応答を含む。例示的な免疫応答には、Ｔ細胞応答（例えば、サイトカイン産生および細胞傷害性）だけでなく、Ｔ細胞活性化（例えば、マクロファージ）によって間接的に影響を受ける免疫応答も含まれるが、これらに限定されない。免疫応答に関与する免疫細胞には、リンパ球（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞を含むＢ細胞およびＴ細胞など）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞）、ナチュラルキラー細胞、骨髄系細胞（マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球および顆粒球など）が含まれる。
本発明はさらに、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団を投与することによって、それを必要とする対象においてＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させる方法に関する。それはまた、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させる際に、それを必要とする対象に使用するための、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団に関する。
ｈＣＤ４５ＲＣの相対的な発現レベルは、サイトメトリーを使用して測定される。３つのタイプの細胞を区別することができる：高レベル、中間レベルまたは陰性レベルのｈＣＤ４５ＲＣ発現を示す細胞。
一実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞を枯渇させる。
「ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞抗原」または「ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞表面マーカー」
本明細書で使用される場合、「ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞抗原」または「ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞表面マーカー」という用語は、それに結合する抗ＣＤ４５ＲＣ剤（抗体またはアプタマーなど）で標的とすることができるＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む）の表面に発現または提示される、配列番号２３の配列の抗原（またはエピトープ）を指す。例示的なＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞表面マーカーには、前述のＣＤ４５ＲＣまたはＴ細胞の前記集団を特徴付ける他の抗原が含まれるが、これらに限定されない。特定の目的のＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞と比較して、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞上に優先的に発現される。
次いで、上記のようにＣＤ４５ＲＣ細胞表面マーカーに対する抗体を育てた後、当業者は、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞に作用し、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、または抗体の直接結合後のＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈであるがＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－細胞死ではない誘導（例えば、アポトーシスを介して）を介してＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させるために使用することができる抗体を容易に選択することができる（Ｐｉｃａｒｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１７．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２（３）：ｅ９００８８）。
「ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞」は、上記に定義されるように、ＣＤ４５ＲＣマーカーを高レベルで発現するＴ細胞である。ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞を枯渇させる本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団はまた、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＮＫ細胞またはＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＢ細胞などの他のタイプのＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させることができることが当業者によって容易に理解される。
本明細書で使用される場合、ＣＤ４５ＲＣを発現する細胞に関して、「枯渇する」または「枯渇すること」という用語は、対象の細胞数の測定可能な減少を指す。低減は、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上であり得る。いくつかの実施形態では、この用語は、対象または試料中のＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞の数が検出可能な限界未満の量まで減少することを指す。本発明によれば、ＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、ＣＤ４５ＲＣを強く発現するエフェクター細胞、特にＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴｅｆｆとして設計されたエフェクター細胞の枯渇を特異的に媒介する。
特に、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する前記単離されたＴ細胞集団は、ｈＣＤ４５ＲＣに結合し、プロアポトーシスシグナルを伝達することによって、および／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）もしくは抗体依存性食作用を活性化することによって、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞を枯渇させる。
いくつかの実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、補体依存性細胞傷害性を媒介する。
特定の実施形態では、本発明による単離されたＣＡＲは、細胞傷害剤または成長阻害剤にコンジュゲートされ得る。
本発明はさらに、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団を投与することによって、それを必要とする対象において調節性Ｔ細胞を拡大および／または増強する方法に関する。本発明はまた、調節性Ｔ細胞を拡大および／または増強する際に、それを必要とする対象に使用するための本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団に関する。
本明細書で使用される場合、「拡大する」という用語は、所与の細胞集団（例えば、Ｔｒｅｇなどの免疫細胞）を変換および／または増幅するプロセスを指す。細胞集団の拡大は、インビボ、インビトロまたはエクスビボで起こり得る。
本明細書で使用される場合、「増強する」という用語は、所与の細胞集団（例えば、Ｔｒｅｇ細胞の抑制能の増大）の機能を増加させるプロセスを指す。細胞集団の増強は、インビボ、インビトロまたはエクスビボで起こり得る。
「調節性Ｔ細胞」または「Ｔｒｅｇ」は、異常なまたは過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容において役割を果たすＴ細胞である。Ｔｒｅｇは、典型的には「フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３＋）調節性Ｔ細胞」および／または「ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－細胞」である。
本明細書で使用される場合、「フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３＋）調節性Ｔ細胞」および「ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－細胞」という用語は、その特徴的なマーカーが転写因子Ｆｏｘｐ３であるヒトおよびげっ歯類におけるＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の０．１～１０％を指す。
一実施形態では、方法および使用は、Ｆｏｘｐ３＋および／またはＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇを拡大および／または増強するためのものである。
一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、刺激によって拡大される。一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、ＩＬ－２およびＩＬ－１５の存在下での刺激によって拡大される。一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体および／または同種抗原提示細胞（ＡＰＣ）および／または特異的抗原による刺激によって拡大される。
追加的または代替的に、本発明は、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇを精製するインビトロまたはエクスビボ方法に関する。
一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、ＣＤ８＋／ＣＤ４－Ｔ細胞である。
一実施形態では、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、ＣＤ８－／ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
一実施形態では、精製ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔｒｅｇは、それを必要とする対象への投与前、投与と同時に、または投与後にさらに拡大および／または増強することができる。
本発明はさらに、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団をそれを必要とする対象に投与することによって、移植拒絶を予防および／または低減する方法に関する。それはまた、移植拒絶の予防および／または低減する際に、それを必要とする対象に使用するための本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団に関する。
「移植拒絶を予防すること」および「移植拒絶を低減すること」」という用語は、免疫移植拒絶の予防または阻害、および免疫移植拒絶の発症または進行の遅延を包含することを意味する。これらの用語はまた、対象における移植器官の生存の延長、または対象における移植器官の不全の食い止めを包含することを意味する。さらに、これらの用語は、例えば、間質性線維症、慢性移植動脈硬化症または血管炎などの免疫拒絶に関連する免疫学的合併症の改善を含む、免疫移植拒絶の症状の改善を包含することを意味する。
「移植」という用語およびその変形例は、移植器官（移植片とも呼ばれる）のレシピエントへの挿入を指し、移植は、同系（ドナーとレシピエントとが遺伝的に同一である場合）、同種（ドナーとレシピエントとが異なる遺伝的起源であるが同じ種である場合）、または異種（ドナーとレシピエントとが異なる種からのものである場合）である。したがって、典型的なシナリオでは、宿主は、ヒトであり、移植片は、同じまたは異なる遺伝的起源のヒトに由来する同種移植片である。別のシナリオでは、移植片は、系統発生的に広く分離された種からの動物、例えば、ヒト宿主に移植されているヒヒの心臓を含む、移植片が移植される種とは異なる種に由来する。
本明細書で使用される「移植拒絶」という用語は、急性および慢性の両方の移植拒絶を包含する。
「急性拒絶」は、移植された組織が免疫学的に外来性である場合の組織移植レシピエントの免疫系による拒絶である。急性拒絶は、そのエフェクター機能を実施し、移植組織を破壊するレシピエントの免疫細胞による移植組織の浸潤によって特徴付けられる。急性拒絶の発症は、急速であり、一般にヒトでは移植手術後数週間以内に起こる。一般に、急性拒絶は、ラパマイシン、シクロスポリン、抗ＣＤ４０Ｌモノクローナル抗体などの免疫抑制薬で阻害または抑制することができる。
「慢性拒絶」は、一般に、急性拒絶の免疫抑制の成功の存在下であっても、生着後数ヶ月～数年以内にヒトにおいて起こる。線維化は、あらゆるタイプの臓器移植の慢性拒絶における一般的な因子である。
一実施形態では、移植拒絶は、同種移植拒絶である。したがって、一実施形態では、移植器官のドナーは、ヒトである。移植器官のドナーは、生体ドナーまたは死亡ドナー、すなわち死後ドナーであり得る。
一実施形態では、移植器官は、臓器、組織または細胞である。
本明細書で使用される場合、「器官」という用語は、生物内で特定の機能または機能群を実行する固体の血管新生器官を指す。臓器という用語には、心臓、肺、腎臓、肝臓、膵臓、皮膚、子宮、骨、軟骨、小腸または大腸、膀胱、脳、乳房、血管、食道、卵管、胆嚢、卵巣、膵臓、前立腺、胎盤、脊髄、上下を含む四肢、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿管、尿道、子宮が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「組織」という用語は、ヒトまたは動物の任意の種類の組織を指し、血管組織、皮膚組織、肝臓組織、膵臓組織、神経組織、泌尿生殖組織、胃腸組織、骨および軟骨を含む骨格組織、脂肪組織、腱および靭帯を含む結合組織、羊膜組織、絨毛膜組織、硬膜、周皮、筋肉組織、腺組織、顔組織、眼組織を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「細胞」という用語は、目的の細胞が濃縮された組成物、好ましくは前記細胞の少なくとも３０％、好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６５％を含む組成物を指す。
一実施形態では、「細胞」は、骨髄、末梢血または臍帯血に由来する多能性造血幹細胞、または心筋細胞、β－膵臓細胞、肝細胞、ニューロンなどを含むが、これらに限定されない異なる細胞系統の多能性（すなわち、胚性幹細胞［ＥＳ］もしくは人工多能性幹細胞［ｉＰＳ］）もしくは多能性幹細胞由来分化細胞を含むか、またはそれからなる群から選択される。
移植が同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）である一実施形態では、「細胞」は、通常骨髄、末梢血または臍帯血に由来する多能性造血幹細胞を含むか、またはそれからなる群から選択される。
「ＨＳＣＴ」または「造血幹細胞移植」は、白血病およびリンパ腫（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性症候群、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および多発性骨髄腫を含むが、これらに限定されない）に罹患した患者に治癒的であり得る移植療法である。しかしながら、同種ＨＳＣＴの重要な制限は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症であり、これは、この治療を受けたヒトの約３０～５０％において重篤な形態で起こる。
したがって、一実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、ＧＶＨＤを予防および／または低減するために使用される。
さらなる実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、白血病ならびに／またはリンパ腫（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性症候群、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および多発性骨髄腫を含むが、これらに限定されない）を予防および／または治療するために多能性造血幹細胞と組み合わせて使用され得る。
追加的または代替的に、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、移植片操作のために使用され得る。
一実施形態では、グラフトされる移植片は、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させるために、移植前に本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団で処理される。
好ましい実施形態では、移植器官は、骨髄であり、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞を枯渇させるために、移植前に本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団で処置される。一実施形態では、骨髄は、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞およびＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔ細胞を含有するＣＤ３４＋細胞を含む。
本発明はさらに、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団をそれを必要とする対象に投与することによって、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連の疾患、障害または状態を予防、低減および／または治療する方法に関する。本発明はまた、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患、障害または状態の予防および／または治療に使用するための、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団に関する。
本明細書で使用される場合、「ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連の疾患、障害または状態」という用語は、対象においてｈＣＤ４５ＲＣ細胞を発現する細胞の割合の増加および／または対象の細胞におけるｈＣＤ４５ＲＣの発現レベルの増加によって引き起こされるか、または増強される疾患、障害もしくは状態を指す。
「対象におけるＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞の割合の増加」とは、例えば、実質的に健康な対象におけるＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞の数など、基準と比較した場合の所与の対象におけるＣＤ４５ＲＣを発現する細胞（すなわち、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞）の数の約５％、好ましくは約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％以上の増加を意味する。
「対象の細胞におけるｈＣＤ４５ＲＣの発現レベルの増加」とは、例えば、実質的に健康な対象の細胞におけるｈＣＤ４５ＲＣの発現レベルなど、基準と比較した場合の所与の対象の細胞における、ｍＲＮＡレベルであろうとタンパク質レベルであろうとなかろうと、ｈＣＤ４５ＲＣの発現レベルの約５％、好ましくは約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％以上の増加を意味する。
一実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患、障害または状態は、自己免疫疾患、望ましくない免疫応答、単原性疾患およびリンパ腫または癌を含むか、またはそれらからなる群から選択される。
一実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患、障害または状態は、自己免疫疾患、望ましくない免疫応答および単一遺伝子疾患を含むか、またはそれらからなる群から選択される。
本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」という用語は、免疫系が正常な宿主の一部である抗原（すなわち自己抗原）に対して免疫応答（例えば、Ｂ細胞応答またはＴ細胞応答）を生じ、その結果、組織が損傷する疾患を指す。自己免疫疾患では、宿主の免疫系が特定の抗原を「自己」として認識することができず、免疫反応が抗原を発現する宿主の組織に対して高められる。
本発明で企図される例示的な自己免疫疾患には、関節リウマチ、若年性関節炎、コラーゲン誘発性関節炎、アジュバント誘発性関節炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、自己免疫性胃萎縮症、尋常性天疱瘡、乾癬、白斑、１型糖尿病、非肥満性糖尿病、重症筋無力症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、硬化性胆管炎、硬化性唾液腺炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性血小板減少症紫斑病、グッドパスチャー症候群、アジソン病、全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、後天性血友病、血栓性紫斑病、ブドウ膜炎、ＩｇＧ４関連自己免疫疾患（例えば、表が参照により組み込まれるＫｌｅｇｅｒら、２０１５．Ｄｔｓｃｈ Ａｒｚｔｅｂｌ Ｉｎｔ．１１２（８）：１２８－１３５の表１に記載されている疾患など）などが含まれるが、これらに限定されない。
好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデスである。
好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患である。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、クローン病である。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、潰瘍性大腸炎である。
本明細書で使用される場合、「望ましくない免疫応答」という用語は、任意の望ましくない免疫反応、好ましくは（ｉ）遺伝子治療の過程で発現されるタンパク質、（ｉｉ）遺伝子治療の過程で使用されるベクター（例えばウイルスベクターなど）および／または（ｉｉｉ）治療用タンパク質を対象とする任意の望ましくない免疫反応を指す。そのようなタンパク質には、例えば、第ＶＩＩＩ因子（血友病Ａ）および他の凝固因子、酵素補充療法、モノクローナル抗体（例えば、ナタリズマブ、リツキシマブ、インフリキシマブ）、ポリクローナル抗体、酵素およびサイトカイン（例えば、ＩＦＮβ）が含まれる。「望ましくない免疫応答」という用語はまた、アレルギーおよびアレルギー反応を指す。
一実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、免疫応答を抑制するために、特に対応する遺伝的欠損を有する対象において遺伝子療法によって発現が回復した場合に特定のタンパク質に対する免疫反応を予防するために、対象に投与され得る。したがって、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、突然変異のために対象に通常存在しないタンパク質に対する免疫反応性を予防するために使用され得るが、その再構成は、遺伝子療法によって達成される。さらに、タンパク質療法は、より普及しつつある医学的革新の一分野であり、酵素、抗体またはサイトカインなどのタンパク質を治療製品として直接対象に適用することを伴う。そのような医薬の送達における主要な障害のうちの１つは、治療用タンパク質自体に対する免疫応答を伴う。タンパク質ベースの治療薬の投与は、免疫抑制剤の投与を伴うことが多く、免疫抑制剤は、タンパク質のより長い寿命、したがって生物の細胞および組織へのタンパク質の取り込みの増加を促進するために使用される。しかしながら、一般的な免疫抑制剤は、実施される免疫抑制の非特異的な性質のために不利であり得、患者において望ましくない副作用をもたらす。したがって、このアプローチは、患者に投与される治療用抗体、サイトカイン、酵素または任意の他のタンパク質などの治療用タンパク質およびペプチドに対する免疫応答を抑制するために適用することができる。
一実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団は、免疫応答を抑制するために、特に遺伝子療法に使用されるベクター、特に遺伝子療法に使用されるウイルスベクターに対する免疫反応を予防するために、対象に投与され得る。そのようなウイルスベクターには、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター、レンチウイルスベクターなどが含まれる。総説については、Ｎａｙａｋ＆Ｈｅｒｚｏｇ、２０１０．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７（３）：２９５－３０４を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「アレルギー（ａｌｌｅｒｇｙ）」または「アレルギー（ａｌｌｅｒｇｉｅｓ）」という用語は、免疫系の不適切な反応を指す。アレルゲンとして公知の通常は無害な環境物質に対してアレルギー反応が起こり、これらの反応は、獲得され、予測可能であり、迅速である。厳密には、アレルギーは、過敏症の４つの形態のうちの１つであり、Ｉ型（または即時型）過敏症と呼ばれる。それは、ＩｇＥとして公知の抗体の一種による肥満細胞および好塩基球と呼ばれる特定の白血球の過剰な活性化によって特徴付けられ、極端な炎症反応をもたらす。一般的なアレルギー反応には、湿疹、蕁麻疹、花粉症、喘息、食物アレルギー、ならびにスズメバチおよびハチなどの刺す昆虫の毒液に対する反応が含まれる。
本明細書で使用される「単遺伝子性疾患」という用語は、以下の遺伝子の中から選択される単一の遺伝子の突然変異に起因する疾患を指す：
（ｉ）免疫機能に関連しないが、その欠損が炎症および／または免疫反応に関連する遺伝子、例えば以下の疾患で欠損している遺伝子：デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、嚢胞性線維症、リソソーム病およびα１－抗トリプシン欠損症、ならびに
（ｉｉ）免疫系に関与し、その欠損が炎症および／または自己免疫反応を生じさせる遺伝子、例えば以下の疾患で欠損している遺伝子：ＩＰＥＸ（免疫調節異常多腺性内分泌不全症・腸症・Ｘ連鎖症候群）などのＴ細胞原発性免疫不全、ＡＰＥＣＥＤ（自己免疫性多腺性内分泌不全症・カンジダ症・外胚葉ジストロフィー）、Ｂ細胞原発性免疫不全、マックル・ウェルズ症候群、自己炎症性・自己免疫混合症候群、ＮＬＲＰ１２関連遺伝性周期性発熱症候群、および腫瘍壊死因子受容体１関連周期性症候群。
好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、ＡＰＥＣＥＤ（自己免疫性多腺性内分泌不全症・カンジダ症・外胚葉ジストロフィー）である。
好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。
本明細書で使用される「リンパ腫または癌」という用語は、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞に関連するリンパ腫または癌を包含する。ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞に関連する例示的なリンパ腫または癌には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）／骨髄増殖性症候群、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫など）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）ならびに多発性骨髄腫が含まれるが、これらに限定されない。
したがって、本発明は、それを必要とする対象においてＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させ、それによって調節性Ｔ細胞、好ましくはＦｏｘｐ３＋および／もしくはＣＤ４５ＲＣｌｏｗＴｒｅｇを消費および／もしくは増強し、それによって移植拒絶を予防および／もしくは低減する、または本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現するＴ細胞集団を投与することによって、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連の疾患、障害もしくは状態を予防、低減および／もしくは治療する方法に関する。
好ましい実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患、障害または状態は、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、ＡＰＥＣＥＤ（自己免疫性多腺性内分泌不全症・カンジダ症・外胚葉ジストロフィー）またはデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。
好ましい実施形態では、ｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患、障害または状態は、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、またはＡＰＥＣＥＤ（自己免疫性多腺性内分泌不全症・カンジダ症・外胚葉ジストロフィー）である。
それはまた、それを必要とする対象においてＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞を枯渇させ、それによって調節性Ｔ細胞、好ましくはＦｏｘｐ３＋および／もしくはＣＤ４５ＲＣｌｏｗＴｒｅｇを消費および／もしくは増強し、それによって移植拒絶を予防および／もしくは低減するか、またはｈＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連疾患、障害もしくは状態を予防、低減および／もしくは治療するのに使用するための本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現するＴ細胞集団に関する。
本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、単独で、または本明細書中に記載される医薬組成物（例えば、希釈剤および／またはＩＬ－２もしくは他のサイトカインもしくは細胞集団を含むが、これらに限定されない他の成分と組み合わせて）として投与され得る。
本発明の医薬組成物は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、インプランテーションまたは移植を含む任意の好適な方法で対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、非経口投与によって対象に投与され得る。特定の実施形態では、本明細書中に記載される医薬組成物は、対象に皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、胸骨内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、注入技術または腹腔内投与され得る。特定の実施形態では、本発明のＣＡＲ改変免疫細胞組成物は、皮内または皮下注射によって対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ改変免疫細胞組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ改変免疫細胞の組成物は、リンパ節、感染部位、炎症部位または組織もしくは臓器拒絶部位に直接注射され得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ改変免疫細胞の組成物は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の部位に直接注射され得る。
いくつかの実施形態では、対象は、自己細胞が投与される（または投与されることになる）。
いくつかの実施形態では、対象は、同種異系細胞が投与される（または投与されることになる）。
いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物であり得る。特定の実施形態では、対象は、ヒトであり得る。
本発明の医薬組成物は、予防または治療される疾患に適切な方法で投与され得る。投与の量および頻度は、対象の状態ならびに対象の疾患の種類および重症度などの要因によって決定されるが、適切な投与量は、臨床試験によって決定され得る。
「有効量」または「治療量」が示される場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、対象の年齢、体重、抗体価および状態の個体差を考慮して決定され得る。本明細書中に記載されるようなＣＡＲ操作された免疫細胞を含む医薬組成物は、これらの範囲内のすべての整数値を含む少なくとも１×１０２、１×１０３、１×１０４、１×１０５、１×１０６、１×１０７、１×１０８もしくは１×１０９細胞／ｋｇ体重、または１×１０５～１００×１０５細胞／ｋｇ体重の投与量で投与され得ると一般に述べることができる。ＣＡＲ操作免疫細胞組成物はまた、これらの投与量のいずれかまたはそれらの任意の組み合わせで複数回投与され得る。ＣＡＲ操作された免疫細胞は、免疫療法において一般に公知である注入技術を使用することによって投与することができる。特定の対象に対する最適な投与量および治療レジメンは、疾患の徴候について対象をモニタリングし、それに応じて治療を調整することによって容易に決定することができる。
一実施形態では、本発明によるＣＡＲ、組成物または医薬組成物を発現する単離された免疫細胞集団は、治療薬の前、治療薬と同時に、または治療薬の後に投与されるべきである。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、免疫抑制剤、細胞毒素、化学療法剤、サイトカイン、免疫刺激剤、溶解性ペプチドおよび放射性同位体などの薬剤による治療を含むが、これらに限定されない任意の数の関連する治療様式と併せて（例えば、前に、同時に、または後に）対象に投与され得る。
本発明によるＣＡＲ、組成物、医薬組成物を発現する単離されたＴ細胞集団と、本明細書に列挙されるものの中から選定され得るが、これらに限定されない特定の治療薬との同時投与は、予防および／または治療される疾患または状態に依存することが当業者によって理解されるであろう。
免疫抑制剤の例には、例えば、シロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、テムシロリムス、ウミロリムスおよびゾタロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤；例えば、アナキンラなどのＩＬ－１受容体アンタゴニスト；例えば、アザチオプリン、レフルノミド、メトトレキサート、ミコフェノール酸およびテリフルノミドなどの代謝拮抗剤；例えば、アプレミラスト、レナリドマイド、ポマリドマイドおよびサリドマイドなどのＩＭｉＤ；ならびに例えば、エクリズマブ、アダリムマブ、アベリモマブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムマブ、インフリキシマブ、ネレモマブ、メポリズマブ、オマリズマブ、ファラリモマブ、エルシリモマブ、レブリキズマブ、ウステキヌマブ、セキヌマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、オテリキシズマブ、テプリズマブ、ビシリズマブ、クレノリキシマブ、ケリキシマブ、ザノリムマブ、エファリズマブ、エルリズマブ、オビヌツズマブ、リツキシマブ、オクレリズマブ、パスコリズマブ、ゴミリキシマブ、ルミリキシマブ、テネリキシマブ、トラリズマブ、アセリズマブ、ガリキシマブ、ガビリモマブ、ルプリズマブ、ベリムマブ、ブリシビモド、イピリムマブ、トレメリムマブ、ベルチリムマブ、レルデリムマブ、メテリムマブ、ナタリズマブ、トシリズマブ、オデュリモマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、イノリモマブ、ゾリモマブアリトックス、アトロリムマブ、セデリズマブ、フォントリズマブ、マスリモマブ、モロリムマブ、ペキセリズマブ、レスリズマブ、ロベリズマブ、シプリズマブ、タリズマブ、テリモマブアリトックス、バパリキシマブ、ベパリモマブ、アバタセプト、ベラタセプト、エタネルセプト、ペグスネルセプト、アフリベルセプト、アレファセプトおよびリロナセプトなどの抗体が含まれるが、これらに限定されない。
細胞毒の例には、放射性核種（例えば、３５Ｓ、１４Ｃ、３２Ｐ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、２０１Ｔｌ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、５７Ｃｕ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ）、複合放射性核種および化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。細胞毒のさらなる例には、代謝拮抗物質（例えば、５－フルオロウリシル（５－ＦＵ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、フルダラビンなど）、抗微小管剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、タキサン（パクリタキ細胞およびドセタキ細胞など）など）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン、ビスクロロエチルニトロソウレア（ＢＣＮＵ）など）、白金剤（例えば、シスプラチン（ｃＤＤＰとも称される）、カルボプラチン、オキサリプラチン、ＪＭ－２１６、ＣＩ－９７３など）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシンなど）、抗生物質剤（例えば、マイトマイシン－Ｃ）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド、テノポシドおよびカンプトテシン）、またはリシン、ジフテリア毒素（ＤＴ）、シュードモナス外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、サポリン、アメリカヤマゴボウウイルスタンパク質、臭化エチジウム、グルココルチコイド、炭疽毒素などの他の細胞毒性剤などが含まれるが、これらに限定されない。
化学療法剤の例には、白金配位化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチンまたはオキサリプラチンなど）；タキサン化合物（例えば、パクリタキ細胞またはドセタキ細胞など）；トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、イリノテカンまたはトポテカンなど）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシドまたはテニポシドなど）；ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチンまたはビノレルビンなど）；抗腫瘍ヌクレオシド誘導体（例えば、５－フルオロウラシル、ゲムシタビンまたはカペシタビンなど）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタードまたはニトロソウレア、シクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチンまたはロムスチンなど；抗腫瘍アントラサイクリン誘導体（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシンまたはミトキサントロンなど）；抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブなど）；エストロゲン受容体アンタゴニストまたは選択的エストロゲン受容体モジュレーター（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ドロロキシフェン、ファスロデックスまたはラロキシフェンなど）；アロマターゼ阻害剤（例えば、エキセメスタン、アナストロゾール、レトラゾールまたはボロゾールなど）；分化誘導剤（例えば、レチノイド、ビタミンＤおよびアキュタンなどのレチノイン酸代謝阻害剤［ＲＡＭＢＡ］など）；ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（例えば、アザシチジンなど）；キナーゼ阻害剤（例えば、フラボピリドール、メシル酸イマチニブまたはゲフィチニブなど）；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびにＨＤＡＣ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。
サイトカインの例には、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２／ＭＣＰ１、ＣＣＬ３／ＭＩＰ１α、ＣＣＬ４／ＭＩＰ１β、ＣＣＬ５／ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８／ＰＡＲＣ／ＤＣＣＫ１／ＡＭＡＣ１／ＭＩＰ４、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１／ＫＣ、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８／ＩＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１およびＸＣＬ２など）、腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦＡ、リンホトキシン、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５／ＣＤ４０ＬＧ、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ７、ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３ＢおよびＥＤＡなど）、ならびにインターロイキン（例えば、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３４、ＩＬ－３５、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－３６Ｒａ、ＩＬ－３７、ＩＬ－３８、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮκ、ＩＦＮωおよびＧＭ－ＣＳＦなど）が含まれるが、これらに限定されない。
免疫刺激薬の例には、フィルグラスチム、ペグフィルグラスチム、レノグラスチム、モルグラモスチム、サルグラモスチム、アンセスチム、アルブミンインターフェロン、インターフェロンアルファ、ペグインターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、ペグインターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、アルデスロイキン、オプレルベキン、成長ホルモン、イムノシアニン、ペガデマーゼ、プロラクチン、タソネルミン、ヒスタミン二塩酸塩、ポリＩＣＬＣ、ビタミンＤ、レンチナン、プレリキサフォル、ロキニメックス、ミファムルチド、酢酸グラチラマー、チモペンチン、チモシンα１、チムリン、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸、ピドチモド、バチルス・カルメット－ゲリンワクチン、悪性黒色腫ワクチンおよびシプロイ細胞Ｔワクチンが含まれるが、これらに限定されない。
溶解性ペプチドの例には、毒素（例えば、ジプテリア毒素またはシュードモナス外毒素など）が含まれるが、これらに限定されない。
放射性同位元素の例には、テクネチウム（例えば、Ｔｃ－９９およびＴｃ－９７）、カリウム（例えば、Ｋ－４０）、ルビジウム（例えば、Ｒｂ－８２）、ヨウ素（例えば、Ｉ－１２３、Ｉ－１２４、Ｉ－１２５、Ｉ－１２９、Ｉ－１３１）、セシウム（例えば、Ｃｓ－１３５、Ｃｓ－１３７）、コバルト（例えば、Ｃｏ－６０）、パラジウム（例えば、Ｐｄ－１０３、Ｐｄ－１０７）、カドミウム（例えば、Ｃｄ－１１３）、ストロンチウム（例えば、Ｓｒ－８９、Ｓｒ－９０）、ユーロピウム（例えば、Ｅｕ－５５）、スズ（例えば、Ｓｎ－１２１、Ｓｎ－１２６）、リン（例えば、Ｐ－３２、Ｐ－３３）、タリウム（例えば、Ｔｌ－２０１）、インジウム（例えば、Ｉｎ－１１１）、ガリウム（例えば、Ｇａ－６７、Ｇａ－６８）、イットリウム（例えば、Ｙ－９０）、イリジウム（例えば、Ｉｒ－１９２）、ビスマス（例えば、Ｂｉ－２１３）、ラジウム（例えば、Ｒａ－２２３、Ｒａ－２２５）、およびルテニウム（例えば、Ｒｕ－１０６）の放射性核種が含まれるが、これらに限定されない。
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、免疫抑制剤の前、後またはそれと同時に対象に投与され得る。
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植後に対象に投与され得る。あるいは、または加えて、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植前に対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植手術中に対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ操作された免疫細胞の対象への投与は、免疫抑制療法が開始された後で実施される。
いくつかの実施形態では、方法は、例えば、移植器官レシピエントを経時的に、および適用可能な場合は異なる免疫抑制療法レジメンで監視するために、複数回実施される。
いくつかの実施形態では、免疫抑制療法は、移植器官レシピエントが移植器官に耐性であると予測される場合に低減される。いくつかの実施形態では、移植器官レシピエントが移植器官に耐性であると予測される場合、免疫抑制療法は、処方されず、例えば免疫抑制療法は、中止される。
本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、移植臓器または組織の拒絶の診断後に投与され得、その後、臓器または組織の拒絶の症状が鎮静するまで、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞および免疫抑制剤の両方の用量が投与され得る。
さらなる実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞組成物は、骨髄移植と併せて（例えば、前に、同時に、または後に）対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ操作された免疫細胞は、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えばリツキシマブなどのＢ細胞除去療法の後に投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、高用量化学療法による標準的な治療を受け、その後、末梢血幹細胞移植を受けてもよい。特定の実施形態では、移植後、対象は、本発明の拡大されたＣＡＲ操作された免疫細胞の注入を受けてもよい。特定の実施形態では、拡大されたＣＡＲ操作免疫細胞は、手術の前または後に投与され得る。
いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、本発明の免疫細胞または免疫集団の初回投与、および１回以上の後続の投与を受け、１回以上の後続の投与は、前の投与の１５日未満、例えば、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３または２日後に投与される。
いくつかの実施形態では、治療有効量の本発明の免疫細胞を対象に投与するか、または投与する予定である。
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、少なくとも１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８または１０９細胞である。
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、約１０２～約１０９、約１０３～約１０８、約１０４～約１０７、または約１０５～約１０６細胞の範囲である。
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、約１０２～約１０９、約１０２～１０８、約１０２～１０７、約１０２～１０６、約１０２～１０５、約１０２～１０４または約１０２～１０３細胞の範囲である。いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫集団の免疫細胞の数は、約１０２、約１０３、約１０４、約１０５、約１０６、約１０７、約１０８または約１０９細胞である。
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、少なくとも１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８または１０９細胞／ｋｇ体重である。
いくつかの実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞集団の免疫細胞の数は、約１０２～１０９細胞／ｋｇ体重または１０３～１０８細胞／ｋｇ体重の範囲であり、これらの範囲内のすべての整数値を含む。
いくつかの実施形態では、対象は、１週間に２回以上の本発明の免疫細胞集団の投与、例えば、１週間に対象に投与される本発明の免疫細胞集団の２、３または４回の投与を受ける。
いくつかの実施形態では、免疫細胞集団は、活性剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態によれば、免疫細胞集団は、活性剤の投与前、投与と同時に、または投与後に投与される。
いくつかの実施形態では、本発明の活性化免疫細胞を対象に投与し、その後、血液を再採血し（またはアフェレーシスを実行し）、そこから本発明に従って免疫細胞を活性化し、これらの活性化され拡大した免疫細胞を対象に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回実施することができる。特定の実施形態では、免疫細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化することができる。特定の実施形態では、免疫細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化される。理論に拘束されるものではないが、この複数回の採血／複数回の再注入プロトコルを使用することは、免疫細胞の特定の集団を選択するのに役立ち得る。
本明細書中に記載されるＣＡＲ、細胞集団および組成物は、本明細書中に記載されるような治療方法において使用され得ること、本明細書中に記載されるような医薬として使用するためのものであり得ること、本明細書中に記載されるような治療において使用するためのものであり得ること、および／または本明細書中に記載されるような治療のための医薬の製造において使用するためのものであり得ることが理解される。
本明細書から明らかなように、本発明のＣＡＲ、または前記ＣＡＲに含まれる抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、多くの利点を提示する。
一実施形態では、本発明のＣＡＲ、または前記ＣＡＲに含まれる抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、約５×１０－７Ｍ以下、好ましくは約２．５×１０－７Ｍ以下、約１×１０－７Ｍ以下、約７．５×１０－８Ｍ以下、約５×１０－８Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋｄ）でヒトＣＤ４５ＲＣに結合する。
一実施形態では、本発明のＣＡＲ、または前記ＣＡＲに含まれる抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞に対する細胞傷害活性を有する。
一実施形態では、その標的抗原に結合すると、本発明のＣＡＲは、ＣＡＲ形質導入細胞活性化を誘導する。
一実施形態では、その標的抗原に結合すると、本発明のＣＡＲは、ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞活性化を誘導する。一実施形態では、その標的抗原に結合すると、本発明のＣＡＲは、ＣＡＲ形質導入Ｔｒｅｇ活性化を誘導する。一実施形態では、その標的抗原に結合すると、本発明のＣＡＲは、ＣＡＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ活性化を誘導する。別の実施形態では、その標的抗原に結合すると、本発明のＣＡＲは、ＣＡＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔｒｅｇ活性化を誘導する。
一実施形態では、本発明の前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、標的細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＣ＋Ｔ細胞）に対してアポトーシス促進活性を有する。
一実施形態では、本発明の前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの集団であり、前記ＣＡＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔｒｅｇは、標的細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＣ＋Ｔ細胞）に対してアポトーシス促進活性を有する。一実施形態では、本発明の前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、ＣＤ８＋Ｔｒｅｇの集団であり、前記ＣＡＲを形質導入されたＣＤ８＋Ｔｒｅｇは、標的細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＣ＋Ｔ細胞）に対してアポトーシス促進活性を有する。
一実施形態では、本発明のＣＡＲ、または前記ＣＡＲに含まれる抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前記ＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞集団は、移植片拒絶（例えば、皮膚移植片拒絶）およびＧＶＨＤを減少させるかまたは抑止する。
Ａ１（１）～Ｂ（２）は、ヒト血液中の異なる白血球型に対するＣＤ４５ＲＣの発現レベル（ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたは市販のＭＴ２抗体によって検出される）を示す図である。ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはＭＴ２による染色は、健常志願者からの全血（ＥＤＴＡ）中の異なる細胞型で実現された。次いで、サイトメーター分析（Ｎａｖｉｏｓ、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ）の前に赤血球を溶解した（Ｖｅｒｓａｌｙｓｅ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）。最初に、細胞を形態学的にゲートし、ダブレット細胞および生細胞をゲーティングした。（Ａ（１）～Ａ（３））異なる白血球型で分析された３人の健常志願者のうち１人からのＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはＭＴ２によって検出されたＣＤ４５ＲＣ発現の代表的なドットプロット分析。ＡＢＩＳ－４５ＲＣが左パネルに示され、ＭＴ２が右パネルに示されている。ｘ軸は、示されるように、白血球の各タイプについて標識された細胞系統マーカーの蛍光強度を示し、ｙ軸は、抗ＣＤ４５ＲＣ抗体標識の蛍光強度を表す。水平線は、左上のドットプロットに示されるように、高レベル、中レベル／低レベルおよび負レベルのＣＤ４５ＲＣ発現を有する細胞を定義し、数字は、各カテゴリーにおける細胞のパーセンテージを表す。（Ｂ（１）およびＢ（２））ＡＢＩＳ－４５ＲＣ（Ｂ（１））またはＭＴ２（Ｂ（２））で標識された３人のドナーの異なる白血球タイプに対するＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ、ＣＤ４５ＲＣｌｏｗおよびＣＤ４５ＲＣ－の平均発現＋／－ＳＥＭ。 ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体および市販の抗ＣＤ４５ＲＣＭＴ２抗体の両方が同じエピトープについて競合することを示す図である。ＰＢＭＣを健常志願者の血液から単離し、Ｔ細胞を抗ＣＤ３標識ｍＡｂで標識し、キメラＡＢＩＳ－４５ＲＣ（表示濃度）および１．３３ｍｇ／ｍＬで標識した抗ＣＤ４５ＲＣ（マウスクローンＭＴ２）－ＦＩＴＣで標識した。ＡＢＩＳ－４５ＲＣ反応性は、ビオチンロバ抗ヒトＩｇＧ＋ストレプトパＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５二次抗体を使用して明らかにした。上段のドットプロットの窓内の数字は、両方の抗体によって共標識された細胞のパーセンテージを表す。 Ａ～Ｆは、ＡＢＩＳ－４５ＲＣによって誘導される細胞傷害性が市販の抗ＣＤ４５ＲＣＭＴ２と比較して高いことを示す図である。健常志願者のＰＢＭＣ（ｎ＝３）を、培地、アイソタイプ陰性対照（２．５もしくは１０ｍｇ／ｍＬ）、ＡＢＩＳ－ＣＤ４５ＲＣ（２．５または１０ｍｇ／ｍＬ）または陽性対照としてのデキサメタゾン（１０ｍｇ／ｍＬ）とともに表示の時点について３７℃でインキュベートし、次いで、アネキシンＶ－ＰＥで標識することによって細胞を抗ＣＤ３－ＦＩＴＣマウス抗体およびアポトーシス細胞で標識した。（Ａ～Ｅ）グラフは、示された細胞集団におけるアネキシンＶ＋細胞の％を示す。（Ｆ）アネキシンＶ＋（初期アポトーシス）細胞およびＤＡＰＩ＋（後期アポトーシス）細胞の代表的なドットプロット。数字は、各カテゴリー内の細胞のパーセンテージを示す。 Ａ～Ｃは、免疫ヒト化ＮＳＧ免疫不全マウスにおいてＧＶＨＤを処置するためのＡＢＩＳ－４５ＲＣの使用を示す図である。（Ａ）健常ドナーボランティアからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、以前（－１日目）の視床下（２Ｇｙ）照射されたＮＳＧ免疫不全マウスに静脈内（ｉｖ）（０日目）注入したことを示す実験手順。ＡＢＩＳ－４５ＲＣを、０日目～２０日目までの間に示されたプロトコルで腹腔内（ｉｐ）投与した。アイソタイプコントロールは、ヒトＩｇＧ（ＩＶＩｇ調製物）であり、ＡＢＩＳ－４５ＲＣと同じプロトコルを使用して投与した。（Ｂ～Ｃ）ＮＳＧマウスの生存曲線および統計を、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ分析（＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１）を使用して分析した。 Ａ～Ｊは、２つの濃度（左パネルでは２μｇ／ｍＬ、右パネルでは１μｇ／ｍＬ）でのヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体変異体およびマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体のヒトＴ細胞に対する反応性を示す、フローサイトメトリードットプロットの組み合わせである。（Ａ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ、（Ｂ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｂ、（Ｃ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｃ、（Ｄ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｄ、（Ｅ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｅ、（Ｆ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｆ、（Ｇ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｇ、（Ｈ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｈ、（Ｉ）ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ｉ、（Ｊ）マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ。 ＡＢＩＳ－４５ＲＣ（左パネル）および操作されたＡｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣ（右パネル）の両方がヒトＴ細胞に対する反応性の同等のパターンを有することを示すフローサイトメトリーの２つのドットプロットを示す図である。 Ａ～Ｃは、３人の健常志願者からのヒト血液中のＣＤ３＋白血球上のＣＤ４５ＲＣの発現レベルを示す図である。最初に、細胞を形態学的にゲートし、ダブレット細胞および生細胞をゲーティングした。（Ａ）分析した３人の健常志願者のうち１人からのマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣによって検出されたＣＤ４５ＲＣ発現の代表的なドットプロット分析、（Ｂ）分析された３人の健常志願者のうち１人からのヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ１によって検出されたＣＤ４５ＲＣ発現の代表的なドットプロット分析、（Ｃ）分析した３人の健常志願者のうち１人からのヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ３によって検出されたＣＤ４５ＲＣ発現の代表的なドットプロット分析。ｘ軸は、ＦＳＣを示し、ｙ軸は、抗ＣＤ４５ＲＣ抗体標識の蛍光強度を表す。四角は、示されるように、高レベル、中レベル／低レベルおよび負レベルのＣＤ４５ＲＣ発現を有する細胞を定義し、数字は、各カテゴリーにおける細胞のパーセンテージを表す。 Ａ～Ｂは、ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはヒト化変異体Ａ１およびＡ３によって誘導されるアポトーシスが同等であることを示す図である。健常志願者からのＰＢＭＣを、アイソタイプ陰性対照（１０μｇ／ｍＬ）、マウスＡＢＩＳ－ＣＤ４５ＲＣ（１０μｇ／ｍＬ）、ヒト化変異体Ａ１（１０μｇ／ｍＬ）またはヒト化変異体Ａ３（１０μｇ／ｍＬ）とともに、指示された時点で３７℃でインキュベートし、次いで、アネキシンＶ－ＰＥで標識することによって、細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ４５ＲＡ抗体ならびにアポトーシス細胞で標識した。グラフは、アイソタイプコントロール条件と比較して、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＡｈｉ細胞（Ａ）およびＣＤ３－細胞（Ｂ）におけるアポトーシス倍数を示す。 抗ヒトＣＤ４５ＲＣ処置により処置されたヒト化マウスの皮膚移植片生存を示す図である。ヒト皮膚拒絶を誘導するために全ヒトＰＢＭＣを移入したＮＳＧマウスを、ラパマイシン（Ｒａｐａ）とともにマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはヒト化変異体Ａ１で処置した。結果を皮膚移植片生存スコアで表す。 ＣＡＲ構造およびＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲの例示的な構造の概略図を示す。ＣＡＲは、細胞外ドメイン（例えば、ｓｃＦｖＣＤ４５ＲＣ）、任意選択でヒンジドメイン（例えば、ＣＤ８ａに由来する）、膜貫通（ＴＭ）ドメイン（例えば、ＣＤ８に由来する）、共刺激細胞内ドメイン（例えば、ＣＤ２８に由来する）および一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζに由来する）を含む。同じプラスミドにおいて、ＧＦＰコード配列は、任意選択でＴ２Ａ自己スプライシング配列（図示せず）によってそれらから分離されたＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ配列のすぐ３’に存在していてもよい。したがって、ＧＦＰは、ＣＡＲ－ＣＤ４５ＲＣ発現の代用マーカーとして使用され得る。 ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲおよびＧＦＰをコードするプラスミドでトランスフェクトしたＨＥＫ（ヒト胎児腎臓２９３細胞）細胞が、トランスフェクションの３日後にＧＦＰを発現することを示す図である（左パネル）。トランスフェクションの陽性対照として、ＧＦＰのみをコードするプラスミドでＨＥＫ細胞をトランスフェクトした（右パネル）。 非形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞と比較して、６日間の培養後にＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲおよびＧＦＰをコードするレンチウイルスベクターをＪｕｒｋａｔ細胞に形質導入できることを示す図である。 Ｊｕｒｋａｔ細胞が形質導入されたＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを細胞表面で発現し（プロテインＬ染色によって示されるように）、ＣＡＲの発現がＧＦＰの発現と相関することを示す図である。 ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲレンチウイルスベクターで形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞がヒトＴ細胞においてアポトーシスを誘導できることを示す図である。ヒトＴ細胞を、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲまたはＣｔｒｌ－ＣＡＲ（異なる抗原特異性を有する対照ＣＡＲ）で形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞とともに、異なる細胞比条件で培養した。１８時間の培養後、フローサイトメトリーによってアポトーシスを評価した。ＣＡＲを作製するために使用される抗ＣＤ４５ＲＣモノクローナル抗体（キメラヒトＩｇＧ１）を陽性対照として使用し、ヒト非反応性ＩｇＧ１をアイソタイプコントロールとして使用し、このアッセイで発現されない標的を認識するＣＡＲを発現するＣｔｒｌ－ＣＡＲＪｕｒｋａｔを使用し、非形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞を陰性対照として使用した。 ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲレンチウイルスベクターで形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞が、ヒトＴ細胞との接触後に活性化され得ることを示す図である。ヒトＴ細胞を、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ（選別された、もしくはＧＦＰの発現に基づいていない）またはＣｔｒｌ－ＣＡＲで形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞とともに、異なる細胞比条件で培養した。Ｔ細胞活性化のマーカーであるＣＤ６９の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、１８時間の培養後にフローサイトメトリーによって評価した。Ｃｔｒｌ－ＣＡＲＪｕｒｋａｔを選別または選別せず、非形質導入Ｊｕｒｋａｔを陰性対照として使用した。 ＣＤ４５ＲＣ標的へのＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ結合を示す図である。ＨＥＫ ２９３ＴにＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲレンチウイルスベクターを形質導入せず、または形質導入し、５日間培養した。次いで、細胞をビオチン化ＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質とインキュベートし、次いでストレプトアビジン－ＡＰＣ－Ｃｙ７で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。 Ａ～Ｂは、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲレンチウイルスベクターで形質導入されたＣＤ４＋Ｔｒｅｇの拡大を示す図である。ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを０日目と１日目との間で活性化し、次いで、１日目および２日目にＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲで２回形質導入した。ＧＦＰ＋細胞を７日目に選別した。ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを拡大の７または１４日後にＧＦＰ発現について分析した：（Ａ）７および１４日目のＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ形質導入ＣＤ４＋ＴｒｅｇにおけるＧＦＰ発現の代表的なヒストグラムおよびドットプロット、（Ｂ）７および１４日目にＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを発現する細胞のパーセンテージ。 ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ ＣＤ４＋ＴｒｅｇがＣＡＲを介して特異的に活性化されることを示す図である。１４日間拡大させたＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ ＣＤ４＋ＴｒｅｇおよびＣｔｒｌ－ＣＡＲ ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを、被覆ＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質とともに、ブレフェルジンＡの存在下で最後の４時間２４時間培養し、次いで、活性化マーカーについてフローサイトメトリーによって分析した。各マーカーのＭＦＩは、非刺激細胞に対する比として表される。 Ａ～Ｃは、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲＣＤ４＋Ｔｒｅｇがアポトーシスを介してＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞の細胞死を誘導することを示す図である。ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ（平均６０％ＧＦＰ＋形質導入細胞）、Ｃｔｒｌ－ＣＡＲ（＞９０％ＬＮＧＦＲ＋形質導入細胞）または非形質導入ＣＤ４＋Ｔｒｅｇで形質導入された同種異系ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ、ならびに抗ＣＤ４５ＲＣｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬのＡＢＩＳ－４５ＲＣ）で４時間インキュベートし、引き続いてアネキシンＶおよびＤＡＰＩで染色したＰＢＭＣでアポトーシスを分析した。結果を、（Ａ）Ｔ細胞、（Ｂ）ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／ｎｅｇＴ細胞、（Ｃ）ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞の中のアネキシンＶ＋細胞の相対的割合として表す。灰色ひし形の単離点は、抗ＣＤ４５ＲＣｍＡｂの存在下でのアポトーシスを表す。
本発明を以下の実施例によってさらに説明する。
実施例を通して、以下の命名法が適用される。
「ＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：本発明のマウス抗ｈＣＤ４５ＲＣ抗体であって、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－配列番号８１の軽鎖可変領域、および
－配列番号９４の軽鎖定常領域、を含む、抗ｈＣＤ４５ＲＣ抗体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６２の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８２の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｂ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６２の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｃ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６２の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８４の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｄ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６３の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８２の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｅ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６３の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｆ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６３の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８４の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｇ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６４の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｈ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６４の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８４の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｉ」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６４の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８２の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ１」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１０１の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ２」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１０１の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号１０３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ３」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６５の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ４」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６５の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号１０３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ５」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６２の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ６」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１０１の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８２の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ７」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１２１の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ８」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１２２の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ９」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１２３の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ａ１０」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号１２４の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｄ１」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６３の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｉ１」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６７の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号８５の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「抗４５ＲＣ変異体Ｉ２」：ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体であって、
－配列番号６７の重鎖可変領域、
－配列番号９１の重鎖定常領域、
－配列番号１０３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化変異体。
「ＭＴ２」：参照ＡＭ３９０２２ＰＵ－ＮによりＯｒｉＧｅｎｅで市販されているマウス抗ｈＣＤ４５ＲＣ抗体。
「操作されたＡｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：ＣＤＲ１への１つの残基の挿入およびＦＲ３への１つの残基の置換によってそのＬＣＶＲを操作することによってキメラ化されたマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ（実施例８に記載）。操作されたＡｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣは、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－Ｘ１２がＡｓｎ（Ｎ）である、配列番号７１の軽鎖可変領域、および
－配列番号９４の軽鎖定常領域、を含む。
「操作されたＳｅｒ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：ＣＤＲ１への１つの残基の挿入およびＦＲ３への１つの残基の置換によってそのＬＣＶＲを操作することによってキメラ化されたマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ（実施例８に記載）。操作されたＳｅｒ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣは、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－Ｘ１２がＳｅｒ（Ｓ）である、配列番号７１の軽鎖可変領域、および
－配列番号９４の軽鎖定常領域、を含む。
「操作されたＧｌｙ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：ＣＤＲ１への１つの残基の挿入およびＦＲ３への１つの残基の置換によってそのＬＣＶＲを操作することによってキメラ化されたマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ（実施例８に記載）。操作されたＧｌｙ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣは、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－Ｘ１２がＧｌｙ（Ｇ）である、配列番号７１の軽鎖可変領域、および
－配列番号９４の軽鎖定常領域、を含む。
「キメラＮ５０ＡＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ重鎖およびヒト化軽鎖を含む、マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣのキメラ変異体。キメラＮ５０ＡＡＢＩＳ－４５ＲＣは、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－配列番号１１３の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む。
「キメラＳ５２ＡＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ重鎖およびヒト化軽鎖を含む、マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣのキメラ変異体。キメラＳ５２ＡＡＢＩＳ－４５ＲＣは、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－配列番号１２６の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む。
「キメラＮ５０ＸＡＢＩＳ－４５ＲＣ」：マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ重鎖およびヒト化軽鎖を含む、マウスＡＢＩＳ－４５ＲＣのキメラ変異体。キメラＮ５０ＸＡＢＩＳ－４５ＲＣは、
－配列番号６１の重鎖可変領域、
－配列番号９３の重鎖定常領域、
－Ｘ１３がＡｌａ（Ａ）またはＡｓｎ（Ｎ）以外の任意のアミノ酸である、配列番号１２９の軽鎖可変領域、および
－配列番号９２の軽鎖定常領域、を含む。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣの反応性
材料および方法
ＰＢＭＣ染色およびデータ取得
５０μＬまたは１００μＬの新鮮ＥＤＴＡ全血を、適切なモノクローナル抗体（Ａｂ）の組み合わせで染色し、続いて赤血球溶解を行った（ｖｅｒｓａｌｙｓｅ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）。洗浄後、細胞をＮａｖｉｏｓフローサイトメーターで分析し、Ｋａｌｕｚａソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）およびＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用してデータを分析した。
抗体およびフローサイトメトリー
表６．フローサイトメトリー分析に使用される抗体。左列の各抗体について、使用したクローンを右列に示す。
Figure 2023518538000010
結果
第１のスクリーニングとして、ＡＢＩＳ－４５ＲＣは、市販の抗ＣＤ４５ＲＣｍＡｂＭＴ２クローンを使用して選別されたＣＤ４５ＲＣ－細胞に対して反応せず、ＡＢＩＳ－４５ＲＣがＣＤ４５ＲＣを認識できることを示唆した（データは示さず）。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣをさらに特徴付けるために、本発明者らは、ヒトＰＢＭＣとのその反応性を分析した。図１Ａおよび図１Ｂに示すように、Ｔ ＣＤ４＋およびＴ ＣＤ８＋細胞の画分は、ＡＢＩＳ－４５ＲＣｈｉｇｈであり、残りは、ＡＢＩＳ－４５ＲＣｌｏｗまたはＡＢＩＳ－４５ＲＣ－である。ほとんどのＢおよびＮＫ細胞ならびにｐＤＣは、ＡＢＩＳ－４５ＲＣｈｉｇｈであった。ＮＫＴ、ｉＮＫＴ ＭＡＩＴ、ＩＬＣ２、ＩＬＣ３およびＣＤ１４ｉｎｔＣＤ１６＋単球の大部分は、ＡＢＩＳ－４５ＲＣｈｉｇｈまたはＡＢＩＳ－４５ＲＣｌｏｗであった。ＣＤ１４ｈｉｇｈＣＤ１６－単球、ｍＤＣ、好塩基球および好中球は、主にＡＢＩＳ－４５ＲＣ－であった。ＣＤ４＋ＴｒｅｇおよびＣＤ８＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは、主にＡＢＩＳ－４５ＲＣｌｏｗ／－であった。
主要ＰＢＭＣ集団の分析は、ＡＢＩＳ－４５ＲＣが市販の抗ＣＤ４５ＲＣマウスＭＴ２抗体に匹敵する反応性のパターンを有することを示した（図１およびＰｉｃａｒｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１７．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２（３）：ｅ９００８８）。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣと市販の抗ＣＤ４５ＲＣ抗体「ＭＴ２」との比較
材料および方法
ＰＢＭＣの単離
血液健常ボランティアを収集し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって単離し、これにより顆粒球、血小板およびリーミング赤血球汚染物質などの血液製剤の望ましくない画分の除去が可能になる。
抗体およびフローサイトメトリー
ヒトＰＢＭＣを、１．３３ｍｇ／ｍＬで標識したＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体（マウスクローンＭＴ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ４５ＲＣ－ＦＩＴＣで標識した。ＡＢＩＳ－４５ＲＣ反応性は、ビオチンロバ抗ヒトＩｇＧ＋ストレプトアビジンＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５二次抗体を使用して明らかにした。
Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して蛍光強度を測定し、データをＦＬＯＷＪＯソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。細胞を最初にそれらの形態によってゲートし、死細胞をＤＡＰＩ陰性細胞を選択することによって除外した。
細胞傷害性分析
ヒトＰＢＭＣを、培地とともに３７℃、アイソタイプコントロール抗体（ＭｓＩｇＧ１、クローン１０７．３、１０μｇ／ｍｌ）、ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたは抗ＣＤ４５ＲＣ（マウスクローンＭＴ２）とともに２．５または１０μｇ／ｍｌで１０分～１８時間インキュベートした。次いで、細胞を抗ＣＤ３（クローンＳＫ７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、アネキシンＶおよびＤＡＰＩで染色した。フローサイトメトリーによってＴ細胞または非Ｔ細胞の中でアネキシンＶ＋およびＤＡＰＩ＋細胞をゲーティングすることによって、アポトーシスのパーセンテージを得た。
結果
ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体および市販の抗ＣＤ４５ＲＣＭＴ２抗体の両方が同じエピトープについて競合する
図２に示すように、市販の抗ＣＤ４５ＲＣＭＴ２クローンとの共標識は、両方の抗体が競合し、したがってヒトＣＤ４５ＲＣの同じまたは近いエピトープを認識することを示した。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣによって誘導される細胞傷害性は、市販の抗ＣＤ４５ＲＣと比較して高い
図３に示すように、ＡＢＩＳ－４５ＲＣはＴ細胞に対して細胞傷害性であったが、非Ｔ細胞に対しては細胞傷害性でなかった。さらに、Ｔ細胞の細胞傷害性は、ＣＤ４５ＲＣ発現のレベルと直接相関しており、重要なことに、ＡＢＩＳ－４５ＲＣは、１０μｇ／ｍＬのＭＴ２クローンと比較して、２．５μｇ／ｍＬでより良好に機能した。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣの親和性
材料および方法
手短に言えば、プラスミドトランスフェクション後にＣＤ４５ＲＣを発現する１×１０７個のＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＰＢＭＣまたはＣＨＯ細胞を、Ｍｅｍ－ＰＥＲ膜単離キット（Ｔｈｅｒｍｏ－ｆｉｓｈｅｒ）を使用して可溶化した。ＡＢＩＳ－４５ＲＣをバイオチップＣＭ５に固定化し、細胞膜を２５℃でインキュベートして、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００およびＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００での単一サイクル速度論および較正遊離濃度分析を使用して親和定数を測定した。
結果
ＣＤ４５ＲＣ抗体の親和性の測定を、抗体－抗原相互作用を特徴付けるための技術である表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価し、５×１０－８Ｍの親和性（ＫＤ）、２．９１×１０５Ｍ－１．ｓｅｃ－１のＫｏｎおよび１．４４×１０－２ｓｅｃ－１のＫｏｆｆを明らかにした。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣによる移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の処置
材料および方法
ＰＢＭＣの単離
健康な個体からＥｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ Ｆｒａｎｃａｉｓ ｄｕ Ｓａｎｇ（Ｎａｎｔｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）で血液を収集した。書面によるインフォームドコンセントを施設のガイドラインに従って提供した。ＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離（Ｅｕｒｏｂｉｏ，Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ，Ｆｒａｎｃｅ）によって単離した。残りの赤血球および血小板を低張液および遠心分離で排除した。
動物
８～１２週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ２Ｒγ－／－（ＮＳＧ）マウスをＳＰＦ条件で本発明者ら自身の動物施設で飼育した（認定番号Ｃ４４－２７８）。
ＧＶＨＤモデル
成体ＮＳＧ免疫不全マウスを、ＧＶＨＤの発症に有利に働く組織における病変を誘導するために全身亜致死照射した（－１日目に２Ｇｙの照射線量）。翌日（０日目）、健常志願者からの１．５×１０７個のＰＢＭＣ（ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈおよびＣＤ４５ＲＣｌｏｗ／－Ｔ細胞を含む）をこれらのマウスに静脈内注射した。ヒトＰＢＭＣ、特にＴ細胞は、病変を誘発するマウス組織に反応し、これを攻撃する。これらのＴ細胞ならびに肝臓、腸、肺および皮膚において認められる病変は、ヒトにおける骨髄移植後に認められるＧＶＨＤ、またはドナーおよびレシピエントとしてげっ歯類を使用する他のＧＶＨＤ実験系を模倣する。特に、これらの組織病変は、典型的には、注射されたＰＢＭＣの数に応じて、および本発明者らの実験系において、ＰＢＭＣの注射後１３日目頃に始まる体重減少を誘発する。体重減少を毎日監視し、不必要な苦痛を避けるために、元の体重の２０％に低下したときに動物を屠殺する。
処置
ＮＳＧマウスを、０日目から２．５日ごとに２０日間、０．８ｍｇ／ｋｇの精製ＡＢＩＳ－４５ＲＣ、ＭＴ２抗ＣＤ４５ＲＣ抗体または無関係な対照（ヒト精製ＩｇＧを含み、主にＩｇＧ１抗体を含有する、臨床的に使用されるＩＶＩｇ調製物）で腹腔内処置した。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたは対照抗体で処置したＮＳＧマウスにも、０日目～１０日目まで０．４ｍｇ／日の最適以下の用量のラパマイシンを腹腔内投与した。
実験手順を図４Ａに要約する。
結果
ＰＢＭＣでの処置は体重減少のみを誘発し、１４日目頃に開始し、図４に示すように、３３日目までにすべてのマウスが死亡した（生存期間中央値：１１日間（図４Ｂ）～１５日間（図４Ｃ））。
対照抗体およびラパマイシンによる処置は、統計学的有意性に達することなく生存を延長しただけであった（生存期間中央値：２１日間（図４Ｃ））。
ＭＴ２による処置は、マウスの生存を有意に延長したが（生存期間中央値：１９日（図４Ｂ））、ＡＢＩＳ－４５ＲＣによる処置はマウスの生存のこの延長を最大７２日間有意に増加させた（生存期間中央値：３５日（図４Ｂ））。
最後に、ラパマイシンとのＡＢＩＳ－４５ＲＣの併用投与は、ＧＶＨＤの結果としての死を完全に予防した（１００％生存、図４Ｃ）。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化
ＣＤＲをヒト生殖系列抗体配列に移植することによるＡＢＩＳ－４５ＲＣのヒト化のための設計を行った。ＡＢＩＳ－４５ＲＣを、ＬＣＶＲからの３つのＣＤＲ（配列番号１５、１６および１７）を、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲと可能な限り相同であるヒト生殖細胞系ＬＣＶＲに移植することによってヒト化した。同様に、ＨＣＶＲからの３つのＣＤＲ（配列番号１、４および３を有する）を、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと可能な限り相同であるヒト生殖系列ＨＣＶＲにグラフトした。
加えて、選択されたヒト生殖系列可変領域のフレームワーク領域（ＦＲ）中の少数のアミノ酸残基を、マウス可変領域中に存在するアミノ酸残基に変化させた（いわゆる復帰突然変異）。免疫グロブリン可変領域の構造に関する情報に基づいて、およびＡＢＩＳ－４５ＲＣのＦｖの相同性分子モデルのガイダンスを用いて、ＦＲ中のこれらの少数の残基は、ＣＤＲを正しい立体配座で、またはＨＣＶＲ／ＬＣＶＲパッキングで維持することにおいて重要な役割を有すると同定され、したがって、それらは、第１のヒト化バージョン（バージョンＡ）で保持されるか、または可能であれば、その後のヒト化バージョン（バージョンＢおよびＣ）でそれらのヒト生殖系列対応物で置換された。相同性分子モデルの指針の下で、バージョンＢおよびＣでは、可能であると判断された場合、ＣＤＲ残基もそれらのヒト生殖系列対応物に置換された。
相同モデル構築
確立されたプロトコル（Ｒａｍｏｓ，２０１２．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．９０７：３９－５５）に従って、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのモデルを構築した。
軽鎖
本節において、別段の指定がない限り、アミノ酸番号付けは、配列番号８１に基づく。
ＬＣＶＲのフレームワーク残基を使用して、タンパク質ＢＬＡＳＴを介して解明された抗体構造の配列を検索した。トップヒットは、８９個のうち８３個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲと同一のＦＲ残基、および８９個のうち８５個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲと類似のＦＲ残基を有するタンパク質データバンク（ＰＤＢ）ＩＤ：４ＮＣＣ（分解能２．５０Å）、ならびに８７個のうち８３個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲと同一のフレームワーク残基、および８７個のうち８４個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲと類似のフレームワーク残基を有するＰＤＢ ＩＤ：１ＱＯＫ（分解能２．４０Å）であった。
これらの２つの構造の配列は両方とも、置換Ｔ９Ａ、Ｔ３９Ｐ、Ｒ４４Ｋ、Ｎ４９ＳおよびＰ５４Ａを有するＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲ（配列番号８１）の配列とは異なっていた。加えて、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣは、置換Ｌ９５Ｆ、Ａ９９ＧおよびＬ１０５Ｉを有するＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲと配列が異なっていた。
２つの構造の比較は、高い相同性を示した。しかしながら、炭素鎖は、領域Ａ１３－Ｅ１７およびＥ１０４－Ｋ１０６においてわずかに異なる立体配座を採用した。
その後のＣＤＲ検索の結果および２つのＮ末端残基の存在に基づいて、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣの構造のＬＣＶＲをＬＣＶＲフレームワーク鋳型として選択し、ＰＤＢＩＤ：１ＱＯＫを参照してＬ１０５Ｉの回転異性体コンフォメーションを選択した（ＰｙＭｏｌにおいて）。
続いて、ＡＢＩＳ－４５ＲＣＬＣＶＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を、各末端に２つの残基を付加して使用して、タンパク質ＢＬＡＳＴを介して解明された抗体構造の配列を検索した。
ＣＤＲ１の場合、トップヒットは、９個のうち９個の同一の残基を有する配列のクラスターからなっていた。これらの中には、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣおよびＰＤＢＩＤ：１ＱＯＫがあった。したがって、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣ構造をＣＤＲ１の鋳型として採用した。
ＣＤＲ２の場合、トップヒットは、７個のうち６個の同一の残基を有する配列のクラスターからなっていた。これらの中には、再びＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣおよびＰＤＢＩＤ：１ＱＯＫがあった。したがって、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣ構造もＣＤＲ２の鋳型として採用した。
ＣＤＲ３について、ギャップを含有しないトップヒットは、１３個のうち１３個の同一の残基を有する、ＰＤＢＩＤ：１ＱＯＫであった。しかしながら、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣは、僅差の２番目であり、１３個のうち１２個の同一の残基を有していた。２つの構造の比較は、Ｌ９５Ｆ置換を除いて、本質的に同一の立体配座を示した。したがって、ＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣ構造をＣＤＲ３の鋳型として採用し、Ｌ９５Ｆの回転異性体立体配座をＰＤＢＩＤ：１ＱＯＫを参照して選択した（ＰｙＭｏｌにおいて）。
したがって、すべてのＬＣＶＲのＣＤＲの一次鋳型としてＰＤＢＩＤ：４ＮＣＣが選択されたため、ＣＤＲ鋳型をＬＣＶＲフレームワーク鋳型に適合させる必要はなかった。
最後に、ＡＢＩＳ－４５ＲＣＬＣＶＲ配列と一致させるために、最適な回転異性体を選択して、ＬＣＶＲ部分モデルを手動で８つの位置で突然変異誘発に供した（ＰｙＭｏｌにおいて）。
重鎖
本節において、別段の指定がない限り、アミノ酸番号付けは、配列番号６１に基づく。
次に、ＨＣＶＲのフレームワーク残基を使用して、タンパク質ＢＬＡＳＴを介して溶解した抗体構造の配列を検索した。トップヒットは、９０個のうち８４個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと同一のフレームワーク残基、および９０個のうち８５個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと類似のフレームワーク残基を有するＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺ（３．４０Å分解能）であった。
ＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺは、Ｎ末端残基を欠落しており、かなり低い分解能で分解されたので、最も高い同一性／類似性スコアを有する追加のヒットも調査した。これらの中でトップは、９１個のうち７８個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと同一のフレームワーク残基、および９１個のうち８７個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと類似のフレームワーク残基を有するＰＤＢＩＤ：４ＣＡＤ（解像度２．５０Å）、ならびに９１個のうち７５個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと同一のフレームワーク残基、および９１個のうち８７個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと類似のフレームワーク残基を有するＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲ（１．５０Å分解能）であった。
ＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺおよびＰＤＢＩＤ：４ＣＡＤ構造の比較は、代替の残留回転異性体が主な違いであることと高い相同性を示した。
ＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺおよびＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲ構造の比較は、同様に高い相同性を示したが、ＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺおよびＰＤＢＩＤ：４ＣＡＤ構造と比較して、ＶＨ－ＦＲ２ループＬ４５－Ｇ４９に有意な立体配座変化があった。
さらに、配列に基づいて、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲおよびＰＤＢＩＤ：４ＣＡＤは、６位にグルタミンが存在するため、Ｎ末端鎖５－１２のＨｏｎｅｇｇｅｒ ＩＩＩ型（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ＆Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６８７－９９）立体配座を示すと予測された。しかしながら、ＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲは、６位にグルタミン酸が存在するため、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ Ｉ型立体配座を示すと予測された。それにもかかわらず、３つの構造は、５－１２鎖の同一の立体配座を示した。また、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲ、ＰＤＢＩＤ：４ＣＡＤおよびＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲの配列は、改訂されたＳｈｉｒａｉのＨＣＶＲのＣＤＲ３に関する規則によって定義されたＫ型（ねじれ塩基配座）を採用すると予測された（Ｋｕｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．７３（３）：６０８－２０）。
その後のＣＤＲ検索の結果、より高い全体的な配列類似性、ＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺとの構造的一致、およびより高い実験分解能に基づいて、構造ＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲのＨＣＶＲをＨＣＶＲフレームワーク鋳型として選択したが、ループ鋳型フラグメントをフレームワーク鋳型にアンカーするために、４５－４９末端の２つの残基ＮおよびＣ末端オーバーハングを使用して、ＨＣＶＲ鋳型においてＰＤＢＩＤ：４ＣＡＤ（ＰＤＢＩＤ：３ＯＰＺと同じ立体配座を有する）の４５－４９ループをＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲのループに置換した。
続いて、各末端に２つの残基を付加したＨＣＶＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を使用して、タンパク質ＢＬＡＳＴを介して解明された抗体構造の配列を検索した。
ＣＤＲ１については、１２個のうち９個の同一の残基を有する配列ヒットのクラスターが存在した。これらの中にはＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲがあった。したがって、ＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲ構造をＣＤＲ１の鋳型として選択した。
ＣＤＲ２については、トップヒットは、１２個のうち８個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと同一の残基、および１２個のうち９個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと類似の残基を有するＰＤＢＩＤ：３ＮＴＣ（１．５５Å分解能）であった。しかしながら、ＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲは、僅差の２番目であり、１２個のうち７個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと同一の残基、および１２個のうち９個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと類似の残基を有していた。２つの構造の比較は、本質的に同一の立体配座を示し、ＰＤＢＩＤ：３ＮＴＣのより高い同一性は、ＢＬＡＳＴ検索の目的でＣＤＲ２配列に付加された２つのＣ末端残基に起因した。したがって、ＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲ構造がＣＤＲ２の鋳型として好ましかった。
ＣＤＲ３については、ギャップを含有しない２つのトップヒットは、ＰＤＢＩＤ：１ＮＧＹ（分解能２．２０Å）およびＰＤＢＩＤ：１ＮＧＺ（分解能１．６０Å）であり、いずれも１１個のうち８個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと同一の残基、および１１個のうち９個のＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲと類似の残基を有していた。２つの構造の比較は、有意に異なる主鎖立体配座を示した。理論に束縛されるつもりはないが、本発明者らは、この差は１０１位の残基に起因し得ると仮定した。ＰＤＢＩＤ：１ＮＧＹでは、より大きなメチオニンは、ＰＤＢＩＤ：１ＮＧＺのより小さなセリンの配向を採用することができず、これはタンパク質のコアにその側鎖を誘導する。ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲ配列と一致するための所望の置換は、Ｆ１０１であるので、ＰＤＢＩＤ：１ＮＧＹ構造をＣＤＲ３の鋳型として採用した。次に、ＨＣＶＲ部分モデルを完成させるために、ＣＤＲ鋳型フラグメントをフレームワーク鋳型にアンカーするために、その末端に２つの残基オーバーハングを使用して、ＣＤＲ３鋳型を改変ＰＤＢＩＤ：１ＲＵＲＨＣＶＲ鋳型にグラフトした（ＰｙＭｏｌにおいて）。
最後に、ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲ配列と一致させるために、最適な回転異性体を選択して、ＨＣＶＲ部分モデルを手動で２３個の位置で突然変異誘発に供した（ＰｙＭｏｌにおいて）。
最終モデルアセンブリ
続いて、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ部分モデルの最良の三次配置を選択して、最終モデルを組み立てた。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ鋳型配列をパッキング角度予測サーバー（ＰＡＰＳ）（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ＆Ｍａｒｔｉｎ，２０１０．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２３（９）：６８９－９７）に提出して、予測される最良適合三次配置を見つけた。ＰＡＰＳサーバーは、－４５．６°の相対充填角を有する解明された抗体構造ＰＤＢＩＤ：１ＭＮＵが、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの最良の三次配置を提供すると予測した。したがって、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ部分モデルの保存されたアンカーセグメントの主鎖座標をＰＤＢＩＤ：１ＭＮＵに適合させることによって、最終モデルを組み立てた（ＰｙＭｏｌにおいて）。
最後に、この最終モデルの座標は、ＧＲＯＭＯＳ９６力場（Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｊ Ｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ Ａ．１０３（１９）：３５９６－３６０７）を用いて、ＧＲＯＭＡＣＳ（Ｖａｎ ｄｅｒ Ｓｐｏｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００５．Ｊ Ｃｏｍｐｕｔ Ｃｈｅｍ．２６（１６）：１７０１－１８）を用いて一連のエネルギー最小化に供した。
ヒト生殖系列
ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲグラフトバージョンの設計のために、３つのヒト生殖系列の２倍を選択した：
－ＨＣＶＲについては、ＩＧＨＶ１－２＊０１、ＩＧＨＶ５－５１＊０１およびＩＧＨＶ３－１１＊０５、ならびに
－ＬＣＶＲの場合、ＩＧＫＶ１－９＊０１、ＩＧＫＶ６－２１＊０２およびＩＧＫＶ３－１１＊０１。
ヒト化ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの設計
ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方のヒト化バージョンＡは、ＣＤＲ残基の変化を明示的に最小化および／または回避する保存的バージョンである。したがって、これらのバージョンは、キメラ抗体（ヒト定常領域［配列番号９１および９２］に融合したＡＢＩＳ－４５ＲＣのＨＣＶＲ［配列番号６１］ならびにＬＣＶＲ［配列番号８１］）と同様またはより良好な結合および／または効力活性を与えると予想される。
ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方のヒト化バージョンＢは、少なくとも８５％の最も近いヒト生殖細胞系との配列同一性のパーセンテージに達するように設計されている。これは、ＦＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸残基を生殖細胞化（すなわち、マウス残基を対応するヒト生殖系列残基で置換すること）することによって達成することができる。８５％は、抗体の国際一般名（ＩＮＮ）に関する２０１４年世界保健機関（ＷＨＯ）ガイダンスによる「ヒト化」単位のサブステム－ｚｕ－を得るために必要なカットオフパーセンテージの同一性である。
ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方のヒト化バージョンＣは、ヒトらしさの最高度（すなわち、対応するヒト生殖細胞系との配列同一性の最高度）に達するように設計されている。相同性分子モデルの検査に続いて、いくつかの残基が生殖細胞系の候補として同定された。したがって、合理的に生殖系列化され得るすべての残基が考慮されている。
ＩＧＨＶ１－２＊０１を使用したＨＣＶＲ
ＩＧＨＶ１－２＊０１からヒト化ＨＣＶＲバージョンＡを設計するために、マウスＣＤＲ（配列番号１、４および３を有する）をＩＧＨＶ１－２＊０１にグラフトし、ＦＲ２およびＦＲ３の４残基を親マウス残基に復帰突然変異させて、抗体の完全な活性を維持した。これらの残基は、配列番号６１のＩ４８、Ｌ７０、Ａ７２およびＶ９７である。得られたＨＣＶＲは、配列番号６２に記載される通りであり、ＩＧＨＶ１－２＊０１ヒト生殖細胞系と８１．６％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ１－２＊０１からヒト化ＨＣＶＲバージョンＢを設計するために、バージョンＡに加えて、ＣＤＲ２中の５アミノ酸残基をさらに生殖系列化した（すなわち、対応するＩＧＨＶ１－２＊０１ヒト生殖系列残基によって置換された）。これらの残基は、配列番号６１のＤ５６Ｇ、Ａ５８Ｔ、Ｓ６０Ｙ、Ｎ６１ＡおよびＫ６５Ｑである。得られたＨＣＶＲは、配列番号６５に記載される通りであり、ＩＧＨＶ１－２＊０１ヒト生殖細胞系と８６．７％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ１－２＊０１からヒト化ＨＣＶＲバージョンＣを設計するために、バージョンＢに加えて、ＣＤＲ２中の２つのアミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号６１のＤ５０ＲおよびＥ６２Ｑである。得られたＨＣＶＲは、配列番号６８に記載される通りであり、ＩＧＨＶ１－２＊０１ヒト生殖細胞系と８８．８％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ１－２＊０１からのＨＣＶＲの様々な他のヒト化バージョンを、バージョンＢから開始してさらに設計した。実際、十分にヒト化されたモノクローナル抗体を得るためには、８５％が十分であると考えられる（ＩＧＨＶ１－２＊０１からのバージョンＢは、ＩＧＨＶ１－２＊０１ヒト生殖細胞系と８６．７％の配列同一性を共有する）。したがって、突然変異を導入するリスクを低減するために、バージョンＤ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨは、８５％に達し、それ以上にならないように設計された。
ＩＧＨＶ１－２＊０１から得られたＨＣＶＲバージョンＤ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨは、それぞれ配列番号１０１、１２１、１２２、１２３および１２４に記載される通りであり、すべてＩＧＨＶ１－２＊０１ヒト生殖細胞系と８５．７％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ５－５１＊０１を使用したＨＣＶＲ
ＩＧＨＶ５－５１＊０１からヒト化ＨＣＶＲバージョンＡを設計するために、マウスＣＤＲ（配列番号１、４および３を有する）をＩＧＨＶ５－５１＊０１にグラフトし、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３の６残基を親マウス残基に復帰突然変異させて、抗体の完全な活性を維持した。これらの残基は、配列番号６１のＡ２４、Ｔ２８、Ｉ４８、Ｌ７０、Ｌ８３およびＶ９７である。得られたＨＣＶＲは、配列番号６３に記載される通りであり、ＩＧＨＶ５－５１＊０１ヒト生殖細胞系と７９．６％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ５－５１＊０１からヒト化ＨＣＶＲバージョンＢを設計するために、バージョンＡに加えて、ＦＲ１中の１アミノ酸残基およびＣＤＲ２中の６アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号６１のＡ２４Ｇ、Ｄ５６Ｓ、Ａ５８Ｔ、Ｓ６０Ｙ、Ｎ６１Ｓ、Ｋ６３ＳおよびＫ６５Ｑである。得られたＨＣＶＲは、配列番号６６に記載される通りであり、ＩＧＨＶ５－５１＊０１ヒト生殖細胞系と８６．７％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ５－５１＊０１からヒト化ＨＣＶＲバージョンＣを設計するために、バージョンＢに加えて、ＦＲ１中の１アミノ酸残基およびＣＤＲ２中の２アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号６１のＴ２８Ｓ、Ｄ５０ＩおよびＥ６２Ｐである。得られたＨＣＶＲは、配列番号６９に記載される通りであり、ＩＧＨＶ５－５１＊０１ヒト生殖細胞系と８９．８％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ３－１１＊０５を使用したＨＣＶＲ
ＩＧＨＶ３－１１＊０５からヒト化ＨＣＶＲバージョンＡを設計するために、マウスＣＤＲ（配列番号１、４および３を有する）をＩＧＨＶ３－１１＊０５にグラフトし、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３中の９残基を親マウス残基に復帰突然変異させて、抗体の完全な活性を維持した。これらの残基は、配列番号６１のＹ２７、Ｔ３０、Ｉ４８、Ｇ４９、Ｌ７０、Ａ７２、Ｔ７４、Ａ７９およびＶ９７である。得られたＨＣＶＲは、配列番号６４に記載される通りであり、ＩＧＨＶ３－１１＊０５ヒト生殖細胞系と７６．５％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ３－１１＊０５からヒト化ＨＣＶＲバージョンＢを設計するために、バージョンＡに加えて、ＦＲ１中の２アミノ酸残基、ＣＤＲ２中の６アミノ酸残基およびＦＲ３中の１アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号６１のＹ２７Ｆ、Ｔ３０Ｓ、Ｄ５６Ｓ、Ａ５８Ｔ、Ｓ６０Ｙ、Ｎ６１Ａ、Ｅ６２Ｄ、Ｋ６３ＳおよびＡ７９Ｌである。得られたＨＣＶＲは、配列番号６７に記載される通りであり、ＩＧＨＶ３－１１＊０５ヒト生殖細胞系と８９．８％の配列同一性を共有する。
ＩＧＨＶ３－１１＊０５からのヒト化ＨＣＶＲバージョンＣを設計するために、バージョンＢに加えて、ＦＲ２中の１アミノ酸残基およびＣＤＲ２中の１アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号６１のＩ４８ＶおよびＰ５３Ｓである。得られたＨＣＶＲは、配列番号７０に記載される通りであり、ＩＧＨＶ３－１１＊０５ヒト生殖細胞系と８７．８％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ１－９＊０１を使用したＬＣＶＲ
ＩＧＫＶ１－９＊０１からヒト化ＬＣＶＲバージョンＡを設計するために、マウスＣＤＲ（Ｘ１２は、存在しない配列番号１５、１６および１７）をＩＧＫＶ１－９＊０１にグラフトし、ＦＲ２およびＦＲ３の３残基を親マウス残基に復帰突然変異させて、抗体の完全な活性を維持した。これらの残基は、配列番号８１のＦ３５、Ｗ４６およびＹ７０である。得られたＬＣＶＲは、配列番号８２に記載される通りであり、ＩＧＫＶ１－９＊０１ヒト生殖細胞系と８３．２％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ１－９＊０１からヒト化ＬＣＶＲバージョンＢを設計するために、バージョンＡに加えて、ＣＤＲ１中の１アミノ酸残基およびＦＲ２中の１アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号８１のＳ２４ＲおよびＦ３５Ｙである。得られたＬＣＶＲは、配列番号８５に記載される通りであり、ＩＧＫＶ１－９＊０１ヒト生殖細胞系と８５．３％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ１－９＊０１からヒト化ＬＣＶＲバージョンＣを設計するために、バージョンＢに加えて、ＣＤＲ２中の２アミノ酸残基およびＦＲ３中の１アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号８１のＮ４９Ａ、Ｐ５４ＱおよびＹ７０Ｆである。得られたＬＣＶＲは、配列番号８８に記載される通りであり、ＩＧＫＶ１－９＊０１ヒト生殖細胞系と８８．４％の配列同一性を共有する。
ヒト生殖細胞系ＩＧＫＶ１－９＊０１に見られるような余分な残基（Ｓｅｒ、Ｓ）をＣＤＲ１に導入するために、ＩＧＫＶ１－９＊０１からのＬＣＶＲバージョンＤをさらに設計した。ＣＤＲ１ループへの余分な残基の導入は、結合活性が保存されたことを示した（データは示さず）。バージョンＢのＣＤＲ１にセリン残基を導入すると、配列同一性が８６．３％になるので、突然変異を導入するリスクを低減するために、Ｋａｂａｔ残基Ｌ３６を元のマウス残基Ｐｈｅ（Ｆ）に戻すバージョンＤを設計した。得られたＬＣＶＲは、配列番号１０３に記載される通りである。
ＩＧＫＶ６－２１＊０２を使用したＬＣＶＲ
ＩＧＫＶ６－２１＊０２からヒト化ＬＣＶＲバージョンＡを設計するために、マウスＣＤＲ（Ｘ１２は、存在しない配列番号１５、１６および１７）をＩＧＫＶ６－２１＊０２にグラフトし、ＦＲ２およびＦＲ３中の４残基を親マウス残基に復帰突然変異させて、抗体の完全な活性を維持した。これらの残基は、配列番号８１のＦ３５、Ｗ４６、Ｙ４８およびＹ７０である。得られたＬＣＶＲは、配列番号８３に記載される通りであり、ＩＧＫＶ６－２１＊０２ヒト生殖細胞系と８１．１％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ６－２１＊０２からヒト化ＬＣＶＲバージョンＢを設計するために、バージョンＡに加えて、ＣＤＲ１中の１アミノ酸残基、ＦＲ２中の１アミノ酸残基、ＣＤＲ２中の１アミノ酸残基およびＦＲ３中の１アミノ酸残基をさらに生殖細胞系化した。これらの残基は、配列番号８１のＳ２４Ｒ、Ｆ３５Ｙ、Ｌ５３ＳおよびＹ７０Ｆである。得られたＬＣＶＲは、配列番号８６に記載される通りであり、ＩＧＫＶ６－２１＊０２ヒト生殖細胞系と８５．３％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ６－２１＊０２からヒト化ＬＣＶＲバージョンＣを設計するために、バージョンＢに加えて、ＣＤＲ３中の１アミノ酸残基をさらに生殖細胞系化した。この残基は、配列番号８１のＱ８８Ｈである。得られたＬＣＶＲは、配列番号８９に記載される通りであり、ＩＧＫＶ６－２１＊０２ヒト生殖細胞系と８６．３％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ３－１１＊０１を使用したＬＣＶＲ
ＩＧＫＶ３－１１＊０１からヒト化ＬＣＶＲバージョンＡを設計するために、マウスＣＤＲ（Ｘ１２は、存在しない配列番号１５、１６および１７）をＩＧＫＶ３－１１＊０１にグラフトし、ＦＲ２およびＦＲ３中の３残基を親マウス残基に復帰突然変異させて、抗体の完全な活性を維持した。これらの残基は、配列番号８１のＦ３５、Ｗ４６およびＹ７０である。得られたＬＣＶＲは、配列番号８４に記載される通りであり、ＩＧＫＶ３－１１＊０１ヒト生殖細胞系と８４．２％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ３－１１＊０１からヒト化ＬＣＶＲバージョンＢを設計するために、バージョンＡに加えて、ＣＤＲ１中の１アミノ酸残基をさらに生殖細胞系化した。この残基は、配列番号８１のＳ２４Ｒである。得られたＬＣＶＲは、配列番号８７に記載される通りであり、ＩＧＫＶ３－１１＊０１ヒト生殖細胞系と８５．３％の配列同一性を共有する。
ＩＧＫＶ３－１１＊０１からヒト化ＬＣＶＲバージョンＣを設計するために、バージョンＢに加えて、ＦＲ２中の１アミノ酸残基、ＣＤＲ２中の３アミノ酸残基およびＦＲ３中の１アミノ酸残基をさらに生殖系列化した。これらの残基は、配列番号８１のＦ３５Ｙ、Ｌ５３Ｒ、Ｐ５４Ａ、Ｓ５５およびＹ７０Ｆである。得られたＬＣＶＲは、配列番号９０に記載される通りであり、ＩＧＫＶ３－１１＊０１ヒト生殖細胞系と９０．５％の配列同一性を共有する。
ヒト化抗４５ＲＣ抗体の産生、精製および特徴付け
分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、９つのヒト化抗４５ＲＣ変異体Ａ～Ｉのプロファイルおよび熱安定性をそれぞれ比較した。これらの変異体は、実施例５に記載される「バージョンＡ」ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗体に対応する。分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）も使用して、４つの他のヒト化抗４５ＲＣ変異体Ａ１、Ａ２、Ｉ１およびＩ２のプロファイルおよび熱安定性をそれぞれ比較した。
材料および方法
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ５／１５０ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ＨＰＬＣシステムを使用した。カラムは、試料分析中に使用したのと同じ緩衝液および条件（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの分子量ＳＥＣ較正キットを使用して、ＰＢＳ １Ｘ中、０．２５ｍＬ／分で、カラムオーブンを３０℃に設定）で事前に較正した。
すべての試料を遠心分離し（２０．０００ｇ、５分、４℃）、ＳＥＣ分析の前に、ＩｇＧ分析プログラムを備えたＮａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ－１０００分光光度計によってそれらのタンパク質含有量を定量した。
アイソクラティックプログラムは、各試料約１５μｇを０．２５ｍＬ／分で１８分間注射するように設定した。ＳＥＣ分析後、２８０ｎｍクロマトグラムを生データから抽出し、ピーク積分によって分析した。
ＤＳＣ
Ｍｉｃｒｏｃａｌ（商標）ＶＰ－キャピラリーＤＳＣシステムを使用して、示差走査熱量測定実験を実行した。
１×ＰＢＳ緩衝液中の試料を遠心分離し（２０．０００ｇ、５分、４℃）、ＤＳＣ分析の前に、それらのタンパク質含有量をＩｇＧ分析プログラムを用いてＮａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ－１０００分光光度計で定量した。次いで、試料をＰＢＳで希釈して１ｍｇ／ｍＬの最終濃度にした。
予備平衡時間は３分であり、その後に続くサーモグラムは、６０℃／時間の走査速度、２５秒のフィルタリング時間および培地フィードバックで２０℃～１１０℃の間で取得した。
試料分析の前に、５回の緩衝液／緩衝液スキャンを測定して装置を安定化し、各タンパク質／緩衝液スキャンの間に緩衝液／緩衝液スキャンを実行した。
データを非２状態アンフォールディングモデルに当てはめ、移行前後の調整されたベースラインを差し引いた。熱量エンタルピー（ΔＨ）は、遷移のピーク下の面積として決定する一方、ｖａｎ’ｔ Ｈｏｆｆエンタルピー（ΔＨｖ）は、使用されるモデルから決定する。
結果
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ
ＳＥＣパラメータの概要を以下の表７に示す。
表７．ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ－Ｉ、Ａ１、Ａ２、Ｉ１およびＩ２のＳＥＣパラメータ。
Figure 2023518538000011
上記の表７は、抗ＣＤ４５ＲＣ抗体（変異体Ａ～Ｈ、Ｉ１およびＩ２の各々についてのピーク３、ならびに変異体Ｉ、Ａ１およびＡ２の各々についてのピーク２）に対応するピークを太字で示し、ＲＴおよび計算されたＭＷは、単量体抗体、非沈殿抗体および非解離抗体について予想される。
ＤＳＣ
ＤＳＣパラメータの概要を以下の表８に示す。
表８．ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ－Ｉ、Ａ１、Ａ２、Ｉ１およびＩ２のＤＳＣパラメータ。抗体の変性は、２つのステップで起こり、したがって２つの融解温度が各ステップのうちの１つに与えられる。
Figure 2023518538000012
ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ－Ｉの反応性
材料および方法
ＰＢＭＣの単離
血液健常ボランティアを収集し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって単離し、これにより顆粒球、血小板およびリーミング赤血球汚染物質などの血液製剤の望ましくない画分の除去が可能になる。
抗体およびフローサイトメトリー
ヒトＰＢＭＣをマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体またはヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体変異体Ａ－Ｉの各々（２μｇ／ｍＬおよび１μｇ／ｍＬ）、ならびに抗ＣＤ３抗体で標識した。マウスおよびヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体の反応性は、ビオチンロバ抗ヒトＩｇＧ＋ストレプトアビジンＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５二次抗体を使用して明らかにした。
Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して蛍光強度を測定し、データをＦＬＯＷＪＯソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。細胞を最初にそれらの形態によってゲートし、死細胞をＤＡＰＩ陰性細胞を選択することによって除外した。
結果
ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体および市販の抗ＣＤ４５ＲＣＭＴ２抗体の両方が同じエピトープについて競合する
ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体（変異体Ａ、図５Ａ、変異体Ｂ、図５Ｂ、変異体Ｃ、図５Ｃ、変異体Ｄ、図５Ｄ、変異体Ｅ、図５Ｅ、変異体Ｆ、図５Ｆ、変異体Ｇ、図５Ｇ、変異体Ｈ、図５Ｈ、変異体Ｉ、図５Ｉ）またはマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ（図５Ｊ）のいずれかによる標識は、抗体が同様の方法でヒトＣＤ４５ＲＣを認識したことを示す。
操作された抗体
ＡＢＩＳ－４５ＲＣのＬＣＶＲのＣＤＲ１は、マウス抗体に固有のカノニカル構造を有し、１０アミノ酸残基の長さを有する（Ｘ１２が存在しない配列番号１５、すなわち、ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ）。
実施例５に記載されるＬＣＶＲのヒト化バージョンＡ、ＢおよびＣの設計のために、この１０アミノ酸残基のＣＤＲ１を、復帰突然変異および／または生殖系列を有するが、残基の付加または欠失がないヒト生殖系列にグラフトした。しかしながら、ヒト生殖系列では、ＬＣＶＲのＣＤＲ１は、１１アミノ酸残基の最小長を有する。
したがって、ヒト化抗体のヒトらしさを増大させるために、本発明者らは、ＡＢＩＳ－４５ＲＣＶＬ－ＣＤＲ１「ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ」を操作して、それを１つの余分な残基だけ伸長させようと努めてきた。１つの候補位置は、配列番号１５の８位（Ｘ１２と示される）、すなわち配列番号８１のＳ３０とＹ３１との間である。ヒト化設計の候補生殖系列のすべてにおいて、この位置は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）またはＧｌｙ（Ｇ）で占められ、マウス生殖系列では、この位置は空である。
そのような挿入の構造的関連性および安定性を調べるために、ＡＢＩＳ－４５ＲＣＶＬ－ＣＤＲ１を、アスパラギン、すなわち配列番号１５の挿入によって拡大し、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、すなわちＳＡＳＳＳＶＳＮＹＭＨであった。次いで、タンパク質ＢＬＡＳＴを介して、解明された抗体構造の配列の検索を行った。トップヒットは、構造ＰＤＢＩＤ：５ＣＭＡのＬＣＶＲ ＣＤＲ１であった。続いて、この構造セグメントを、その末端にある２残基オーバーハングを使用してＡＢＩＳ－４５ＲＣモデルにグラフトして、ＣＤＲ鋳型フラグメントをモデルにアンカーした。さらなる残基を収容するために、隣接残基をシフトさせる配座変化があり、それによってＹ７０とのわずかな立体衝突を呈することが観察された。しかしながら、すべてのヒト生殖系列において、この残基は、より適応性の高いフェニルアラニンである。
操作されたマウス抗体
上記に基づいて、本発明者らは、ＶＬ－ＣＤＲ１にアスパラギン残基（Ａｓｎ、Ｎ）を挿入し、配列番号８１のＹ７０をフェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）にさらに突然変異させることによって、ＡＢＩＳ－ＲＣ４５抗体を操作した。得られた「人工Ａｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－ＲＣ４５」ＬＣＶＲは、配列番号７１に記載され、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）である。
他の２つのマウス抗体も同様に、ＶＬ－ＣＤＲ１にセリン残基（Ｓｅｒ、Ｓ）またはグリシン残基（Ｇｌｙ、Ｇ）を挿入し、さらに配列番号８１のＹ７０をフェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）に突然変異させることによって産生された。得られた２つの「人工Ｓｅｒ／ＰｈｅＡＢＩＳ－ＲＣ４５」および「人工Ｇｌｙ／ＰｈｅＡＢＩＳ－ＲＣ４５」ＬＣＶＲは、配列番号７１に記載され、Ｘ１２は、それぞれＳｅｒ（Ｓ）またはＧｌｙ（Ｇ）である。
操作されたヒト化抗体
上記に基づいて、配列番号７２～８０に記載されるように、操作されたヒト化ＬＣＶＲバージョンＡ、ＢおよびＣ（実施例５に記載）をさらに設計することができ、Ｘ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）またはＧｌｙ（Ｇ）であり、７０位の残基は、Ｐｈｅ（Ｆ）である。
操作されたＡｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣの反応性
材料および方法
健常志願者からの血液を採取し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、顆粒球、血小板およびリーミング赤血球汚染物質などの血液製剤の望ましくない画分の除去を可能にするＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって単離した。
ヒトＰＢＭＣを、ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたは操作されたＡｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣおよび抗ＣＤ３抗体で標識した。ビオチンロバ抗ヒトＩｇＧ＋ストレプトアビジンＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５二次抗体を使用して反応性を明らかにした。
Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して蛍光強度を測定し、データをＦＬＯＷＪＯソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。細胞を最初にそれらの形態によってゲートし、死細胞をＤＡＰＩ陰性細胞を選択することによって除外した。
結果
図６に示されるように、ＡＢＩＳ－４５ＲＣ（左パネル）または操作されたＡｓｎ／ＰｈｅＡＢＩＳ－４５ＲＣ（右パネル）のいずれかによる標識化は、両方の抗体が同様の様式でヒトＣＤ４５ＲＣを認識したことを示す。
ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣの反応性
材料および方法
健常志願者からの血液を採取し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、顆粒球、血小板およびリーミング赤血球汚染物質などの血液製剤の望ましくない画分の除去を可能にするＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって単離した。
ヒトＰＢＭＣを、２０、５、１．２５または０．３μｇ／ｍＬのＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣおよび抗ＣＤ３抗体で標識した。ビオチンロバ抗ヒトＩｇＧ＋ストレプトアビジンＰｅｒｃｐＣｙ５．５二次抗体を使用して反応性を明らかにした。
Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して蛍光強度を測定し、データをＦＬＯＷＪＯソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。細胞を最初にそれらの形態によってゲートし、死細胞をＤＡＰＩ陰性細胞を選択することによって除外した。
結果
様々な濃度のマウスＡＢＩＳ－４５ＲＣ（図７Ａ）またはヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体Ａ１（図７Ｂ）または変異体Ａ３（図７Ｃ）のいずれかによる標識化は、両方の抗体が同様の方法でヒトＣＤ４５ＲＣを認識したことを示す。
ヒト化ＡＢＩＳ－４５ＲＣ変異体による細胞死誘導
材料および方法
ヒトＰＢＭＣを培地、アイソタイプコントロールＡｂまたは抗ＣＤ４５ＲＣ変異体（１０μｇ／ｍＬ）とともに６時間インキュベートした。次いで、細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ４５ＲＡ、アネキシンＶおよびＤＡＰＩで染色した。総アポトーシスのパーセンテージを、フローサイトメトリーによってＴ細胞または非Ｔ細胞の中のＤＡＰＩ＋アネキシンＶ＋＋ＤＡＰＩ－アネキシンＶ＋細胞をゲーティングすることによって得た。
結果
ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはヒト化変異体Ａ１またはＡ３は、ＣＤ３＋細胞の細胞死を効率的に誘導したが（図８Ａ）、ＣＤ３－細胞の細胞死を誘導しなかった（図８Ｂ）。
ＡＢＩＳ－４５ＲＣおよびヒト化変異体Ａ１によるヒト皮膚拒絶の治療
材料および方法
ＰＢＭＣの単離
健康な個体からＥｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ Ｆｒａｎｃａｉｓ ｄｕ Ｓａｎｇ（Ｎａｎｔｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）で血液を収集した。書面によるインフォームドコンセントを施設のガイドラインに従って提供した。ＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離（Ｅｕｒｏｂｉｏ，Ｃｏｕｒｔａｂｏｅｕｆ，Ｆｒａｎｃｅ）によって単離した。残りの赤血球および血小板を低張液および遠心分離で排除した。
動物
８～１２週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ２Ｒγ－／－（ＮＳＧ）マウスをＳＰＦ条件で本発明者ら自身の動物施設で飼育した（認定番号Ｃ４４－２７８）。
ヒト皮膚移植モデル
ヒトの皮膚を、腹部形成術の健常志願者から得て、移植を以前に記載されたように実行した（Ｂｅｚｉｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：２０１４）。１ヶ月後、同種異系健常志願者からの５×１０６個のＰＢＭＣに、抗体の有無にかかわらず静脈内注射した。
移植片拒絶を、乾燥（スコア１）、剛性（スコア２）、痂皮（スコア３）、部分的喪失（スコア４）および肉眼的観察による皮膚の完全喪失（スコア５）に基づいて０～５までスコア化した。
ヒトＰＢＭＣの生着をフローサイトメトリーによって血液中で監視した。
処置
ＮＳＧマウスを、０日目～２０日間にわたって２．５日ごとに０．８ｍｇ／ｋｇの精製ＡＢＩＳ－４５ＲＣ抗体またはヒト化変異体Ａ１抗体で腹腔内処置するとともに、０日目～１０日目までラパマイシンを０．４ｍｇ／日の最適以下の用量で腹腔内投与した。
結果
ＰＢＭＣによる処置は体重減少のみを誘発し、１４日目頃に開始し、図９に示すように、３３日目までにすべてのマウスが死亡した。
本発明者らは以前に、ラパマイシンのみによる処置は生存期間を延長しなかったことを示した（生存期間中央値：２１日（Ｂｅｚｉｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：２０１４））。ここで、ＡＢＩＳ－４５ＲＣまたはヒト化変異体Ａ１による処置は、皮膚移植片拒絶を完全に無効にした。
ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを用いた細胞操作
材料および方法
レンチウイルスベクター
ＣＡＲ－ＣＤ４５Ｒをコードする自己不活性化第二世代レンチウイルスベクターを生成した。このベクターにおいて、ＥＦ１αプロモーターは、以下の配列を指示された順序で制御する：シグナルペプチド、リンカーによって融合された抗ＣＤ４５ＲＣｍＡｂ（ＡＢＩＳ－４５ＲＣ）の重鎖および軽鎖の可変領域、ＣＤ８－ＣＤ２８共刺激シグナル領域の膜貫通領域、ＣＤ３ゼータ形質導入シグナル領域、Ｐ２Ａ自己スプライシング配列、ＧＦＰ。レンチウイルスベクターをＶＳＶ－Ｇでシュードタイプ化した。対照として使用したＣｔｒｌ－ＣＡＲは、ＥＦ１αプロモーターの制御下にあるＣＤ４５ＲＣ（ＣＤ８－ＣＤ２８共刺激シグナル領域の膜貫通領域およびＣＤ３ゼータ形質導入シグナル）ならびにＣＭＶプロモーターの制御下にあるＬＮＧＦＲ以外の抗原特異性を有するモノクローナル抗体の可変重鎖および可変軽鎖をコードする。このＣｔｒｌ－ＣＡＲレンチウイルスベクターもＶＳＶ－Ｇシュードタイプ化した。
細胞形質導入
ＨＥＫ（２９３）またはＪｕｒｋａｔ細胞を回収し、１日目に計数し、次いで、２ｍＬのＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ、１０μｇ／ｍＬペニシリン－ストレプトマイシン、２ｎＭ Ｌ－グルタミン中５０００００細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種した。２日目に、培地をピペッティングによって除去し、２ｍＬの新鮮な培地（３７℃で予熱）を加える。並行して、１ウェルあたり５００μＬの以下の調製物を加えた：
－室温（ＲＴ）で５分間、－２．５μｇのＤＮＡを２５０μＬのＯｐｔｉｍｅｍ（Ｇｉｂｃｏ，ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で希釈する
－１０μＬのリポフェクタミン（商標）２０００（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を２５０μＬのＯｐｔｉｍｅｍ中で室温にて５分間希釈する
－ＤＮＡとリポフェクタミンとを室温で２０分間混合する。
ＧＦＰ検出
Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して蛍光強度を測定し、データをＦＬＯＷＪＯソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。細胞をそれらの形態によってゲートし、次いで、ＤＡＰＩ陰性細胞を選択することによって死細胞を除外した。細胞をプロテインＬ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）で染色した後、フローサイトメトリーによってＧＦＰを分析した。
結果
ＣＡＲは、少なくとも１つの細胞外ドメイン、任意選択でヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメインおよび少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメインを有するように設計された（図１０）。本発明の１つのＣＡＲ構築物は、ｓｃＦｖＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ８ａヒンジドメインおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメインおよびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲである。任意選択で、ＧＦＰコード配列は、Ｔ２Ａ自己スプライシング配列（図示せず）によってそれらから分離されたＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ配列のすぐ３’に存在し得る。この場合、ＧＦＰは、ＣＡＲ－ＣＤ４５ＲＣ発現の代用マーカーとして使用され得る。
本発明者らは、ＧＦＰ染色によって示されるように、ＨＥＫ細胞がＧＦＰモックプラスミドと比較してＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲでトランスフェクトされ得ることを示した（図１１）。加えて、このＣＡＲ構築は、ヒト不死化Ｔ細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）においてレンチウイルスベクターで形質導入することもできる。実際、ＣＡＲの存在を示すＧＦＰのレベルは、ＣＤ４５ＲＣＣＡＲを形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞では５８．７％であり、形質導入されていないＪｕｒｋａｔ細胞ではわずか１．２５％である（図１２）。特に、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＡＲの表面発現は、プロテインＬ染色によって確認され、ＧＦＰ染色との良好な相関を実証し、レンチウイルスが機能的であることを全体的に実証した（図１３）。
標的Ｔ細胞アポトーシスのＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ誘導
材料および方法
全Ｔ細胞を、ヒトＰＢＭＣから磁気選別（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して陰性選別した。細胞をＣＰＤ ６７０で標識し、完全培地ＲＰＭＩ中の１ウェルあたり（２０，０００細胞の９６ウェルボトムＶプレートに播種した（１０％ＳＶＦ、アミノ酸、ペニシリン／ストレプトマイシン、グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ）。１００，０００個のＪｕｒｋａｔ細胞を完全ＤＭＥＭ培地中９６ウェル底プレートに播種し、実施例１３に記載される１０ｕＬのＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲまたはＣｔｒｌ－ＣＡＲ対照レンチウイルスベクターで形質導入し、３７℃で２日間インキュベートした。次いで、ジャーカット細胞を計数し、完全ＲＰＭＩ培地（比１：０－１：１－１：５－１：１０）中の異なる比のＴ：ジャーカット細胞でＴ細胞に加えた。細胞を３７℃で１８時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をアネキシン緩衝液中のアネキシンＶで２０分間標識した。ＤＡＰＩをアネキシン緩衝液に加え、細胞をＣａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で直接分析した。
結果
ヒトＴ細胞を、Ｃｔｒｌ－ＣＡＲのＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを予め形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞の存在下で１８時間培養し、次いで、アポトーシスをフローサイトメトリーによって評価した。ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを有するＪｕｒｋａｔ細胞の存在下では、Ｔ細胞は１５％アポトーシスであり、Ｃｔｒｌ－ＣＡＲまたは形質導入されていない細胞ではわずか７～８％であった（図１４）。観察されたアポトーシスのレベルは、抗ＣＤ４５ＲＣ抗体で得られたレベルと同等であった。したがって、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞は、ヒトＴ細胞においてアポトーシスを誘導することができる。
Ｔ細胞活性化のＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ誘導
材料および方法
全Ｔ細胞を、ヒトＰＢＭＣから磁気選別（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して陰性選別した。細胞をＣＰＤ ６７０で標識し、完全培地ＲＰＭＩ中の１ウェルあたり（２０，０００細胞の９６ウェルボトムＶプレートに播種した（１０％ＳＶＦ、アミノ酸、ペニシリン／ストレプトマイシン、グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ）。１００，０００個のＪｕｒｋａｔ細胞を完全ＤＭＥＭ培地中９６ウェル底プレートに播種し、実施例１３に記載される１０ｕＬのＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲまたはＣｔｒｌ－ＣＡＲ対照レンチウイルスベクターで形質導入し、３７℃で２日間インキュベートした。次いで、ジャーカット細胞を計数し、完全ＲＰＭＩ培地（比１：０－１：１－１：５－１：１０）中の異なる比のＴ：ジャーカット細胞でＴ細胞に加えた。細胞を３７℃で１８時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗ＣＤ６９ ｍＡｂで２０分間標識した。ＤＡＰＩを加え、細胞をＣａｎｔｏ ＩＩサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で直接分析した。
結果
ヒトＴ細胞を、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲまたはＣｔｒｌ－ＣＡＲを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞の存在下で１８時間培養し、その後、Ｔ細胞活性化を、ＣＤ６９活性化マーカーを使用するフローサイトメトリーによって測定した。
本発明者らは、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲが、Ｃｔｒｌ－ＣＡＲおよび形質導入されていないＪｕｒｋａｔ細胞と比較して、Ｔ細胞活性化（ＣＤ６９発現によって示される）を誘導することを観察した。興味深いことに、細胞が選別される場合、すなわち、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲがすべての細胞によって発現される場合、活性化は、選別されていないＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ細胞と比較してさらに良好である（図１５）。全体として、これはＣＡＲが機能的であることを示した。
ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ活性化および標的Ｔ細胞アポトーシスのＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ誘導
材料および方法
ＣＤ４＋Ｔｒｅｇレンチウイルス形質導入および拡大プロトコル
０日目に、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗ ＣＤ２５＋ＣＤ４５ＲＣ－ＴｒｅｇをＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）で選別し、１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３モノクローナル抗体（クローンＯＫＴ３）で予めコーティングした９６ウェル平底プレート中に１００μＬの培地あたり１０５細胞で播種した。０日目に使用した培地は、ペニシリン、ストレプトマイシン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ緩衝液、アミノ酸、グルタミン、５％ＣＴＳ血清、抗ＣＤ２８ ｍＡｂ（１μｇ／ｍＬのクローンＣＤ２８．２）および１０００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２を補充したＲＰＭＩ１６４０であった。１日目および２日目に、抗ＣＤ４５ＲＣキメラ抗原受容体（ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ）およびＧＦＰ、または異なる抗原特異性を有する対照ＣＡＲ（Ｃｔｒｌ－ＣＡＲ）およびＬＮＧＦＲをコードする、実施例１３に記載されるレンチウイルスベクター１０μＬを細胞に形質導入した。３日目に、１０％ＣＴＳの血清最終濃度に達するように培地を加えた。７日目に、細胞を回収し、ＧＦＰまたはＬＮＧＦＲに基づくＣＡＲ発現に基づいて選別し、次いで、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ ｍＡｂで新たに刺激して、２回目の７日間の拡大を行った。サイトカインを２日ごとに培地に新たに加え、必要に応じて新鮮な培地を加えた。
ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ検出
ＨＥＫ ２９３Ｔ細胞にも、１日目に１回、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲをコードするレンチウイルスを形質導入した。ＣＤ４＋Ｔｒｅｇに、上記で説明したようにレンチウイルスを形質導入した。ＨＥＫ ２９３ＴおよびＣＤ４＋Ｔｒｅｇを最後の形質導入の５日後に分析した。細胞をヒトＦｃブロック（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で処理し、次いで、ＰＢＳＢＳＡ１％に希釈した社内でビオチン化した２μｇ／ｍＬのＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質（Ｒ＆Ｄ）とともに４℃で１時間インキュベートした。４μｇ／ｍＬのストレプトアビジン－ＡＰＣ－Ｃｙ７を用いてＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣ－ビオチンタンパク質を明らかにした。死細胞を除外するためにＤＡＰＩを加え、細胞をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）で分析した。
ＣＡＲ媒介活性化アッセイ
全部で１０５個のＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ ＣＤ４＋ＴｒｅｇまたはＣｔｒｌ－ＣＡＲ ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを、完全培地ＲＰＭＩ（１０％ＣＴＳ血清、アミノ酸、ペニシリン／ストレプトマイシン、グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ）中でＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質（ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ、３７℃で１時間３０分）で予めコーティングした９６ウェルＵ底プレートに播種した。細胞を３７℃で２４時間インキュベートし、ブレフェルジンＡを培養の最後の４時間に加えた。インキュベーション後、細胞を生存色素でマークし、抗ＣＤ６９、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ７１ｍＡｂで３０分間細胞外染色した。細胞を固定し、透過処理し、抗ＣＴＬＡ－４ｍＡｂで１時間細胞内染色した。細胞をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）で分析した。
アポトーシスアッセイ
ヒトＰＢＭＣをＣＰＤ６７０で標識し、完全培地ＲＰＭＩ（１０％ヒトＡＢ血清、アミノ酸、ペニシリン／ストレプトマイシン、グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ）中の９６ウェルＶ底プレート（５０，０００細胞／ウェル）に播種した。ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲまたはＣｔｒｌ－ＣＡＲを形質導入されていないまたは形質導入されたＣＤ４＋Ｔｒｅｇを拡大の１５日後に計数し、完全ＲＰＭＩ培地中でＰＢＭＣ：Ｔｒｅｇの異なる比で同種ＰＢＭＣに加えた（比１：０－１：１－１：２－１：５）。細胞を３７℃で４時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗ＣＤ３、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ５６および抗ＣＤ４５ＲＡｍＡｂで染色し、次いで、細胞をアネキシン緩衝液中のアネキシンＶで２０分間標識した。ＤＡＰＩをアネキシン緩衝液に加え、細胞をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）で迅速に分析した。抗ＣＤ４５ＲＡｍＡｂを、各細胞サブセットにおけるＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ細胞の同定のための代用マーカーとして使用した。アポトーシスの対照として、ＡＢＩＳ－４５ＲＣをＰＢＭＣと１０μｇ／ｍＬでインキュベートした。全アポトーシス細胞のパーセンテージを、アネキシン＋ＤＡＰＩ＋細胞およびアネキシン＋ＤＡＰＩ－細胞の合計によって計算した。
結果
ヒトＨＥＫ２９３に、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲおよびＧＦＰをコードするレンチウイルスベクターを形質導入し、細胞蛍光定量法によって分析した（図１６）。ビオチンで標識され、ストレプトアビジン－ＡＰＣ－Ｃｙ７で明らかにされたＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質を使用するＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ検出は、形質導入されていない細胞と比較して、明確な陽性シグナルおよびＧＦＰとの共発現を示し、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲが発現され、ＣＤ４５ＲＣに対するその特異性において機能的であることを実証した。
ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲによるＣＤ４＋Ｔｒｅｇの形質導入、および７日目にＧＦＰを使用した細胞選別選択、引き続いて１４日間のインビトロ拡大により、形質導入細胞の７４．３８％＋／－１７．３％の集団の獲得が可能になり（図１７）、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを形質導入することができること、およびＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを拡大させることができることが実証された。
次いで、本発明者らは、細胞をＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質とインキュベートし、細胞蛍光定量法によって活性化マーカーを分析することによって、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを形質導入され拡大されたＣＤ４＋Ｔｒｅｇの活性化を分析した（図１８）。それらは、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲによって形質導入されたがＣｔｒｌ－ＣＡＲによって形質導入されなかったＣＤ４＋Ｔｒｅｇにおいて、ＣＤ４５Ｒ－ＡＢＣタンパク質と２４時間インキュベートしたときにＣＤ６９、ＣＤ２５、ＣＤ７１およびＣＴＬＡ－４のタンパク質発現の増加を観察し、ＣＡＲがＴｒｅｇをシグナル伝達し、直接活性化していることを実証した。
１４日間の拡大後の同種ＣＡＲを形質導入したまたは形質導入していないＣＤ４＋ＴｒｅｇによるＰＢＭＣの異なる細胞集団でのアポトーシスを分析し、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを作製するために使用した抗ＣＤ４５ＲＣ ｍＡｂで得られたアポトーシスと比較した（図１９）。本発明者らは、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを形質導入されたＣＤ４＋Ｔｒｅｇが、アポトーシスを誘導しなかったＣｔｒｌ－ＣＡＲおよび形質導入されていないＣＤ４＋Ｔｒｅｇとは対照的に、抗ＣＤ４５ＲＣ ｍＡｂと同等のＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞のアポトーシスを誘導したことを観察した。ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ ＣＤ４＋Ｔｒｅｇのこのアポトーシス効果は用量依存的であり、ＰＢＭＣ：ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの比率が高いほど増加した。
まとめると、これらの結果は、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲがＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲ形質導入ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの活性化を誘導したので、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲが機能的であることを示した。さらに、ＣＤ４５ＲＣ－ＣＡＲを形質導入されたＣＤ４＋Ｔｒｅｇは、ＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈＴ細胞のアポトーシスを誘導した。

Claims (15)

  1. ヒトＣＤ４５ＲＣに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記ＣＡＲが、
    （ａ）少なくとも１つの細胞外結合ドメインであって、前記結合ドメインが、前記ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する、少なくとも１つの細胞外結合ドメイン、
    （ｂ）任意選択で、少なくとも１つの細胞外ヒンジドメイン、
    （ｃ）少なくとも１つの膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｄ）少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインであって、前記細胞内ドメインが、少なくとも１つのＴ細胞一次シグナル伝達ドメインおよび任意選択で少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達ドメインを含む、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  2. 前記細胞外結合ドメインが、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、前記抗原結合フラグメントが、
    （ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号４、５、６、８、１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
    （ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１５（ＳＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ）および１８（ＲＡＳＳＳＶＳ－Ｘ１２－ＹＭＨ）（Ｘ１２は存在しないか、またはＡｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号１６、１１１および１２０の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
  3. 前記細胞外結合ドメインが、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、前記抗原結合フラグメントが、
    （ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号４および５の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
    （ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１５（Ｘ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む、請求項１または２に記載のＣＡＲ。
  4. 前記細胞外結合ドメインが、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、前記抗原結合フラグメントが、
    （ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号４のＶＨ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
    （ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１５（Ｘ１２は存在しない）の配列のＶＬ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  5. 前記細胞外結合ドメインが、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、前記抗原結合フラグメントが、
    （ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号４、６および１００の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
    （ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１５および１８（Ｘ１２は存在しない）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号１６、１１１および１２０の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  6. 前記細胞外結合ドメインが、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、前記抗原結合フラグメントが、
    １）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８１の配列のＬＣＶＲ、
    ２）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
    ３）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
    ４）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
    ５）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
    ６）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
    ７）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
    ８）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
    ９）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８３の配列のＬＣＶＲ、
    １０）配列番号６４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８４の配列のＬＣＶＲ、
    １１）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    １２）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
    １３）配列番号６５の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    １４）配列番号６５の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
    １５）配列番号６２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    １６）配列番号１０１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８２の配列のＬＣＶＲ、
    １７）配列番号１２１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    １８）配列番号１２２の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    １９）配列番号１２３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    ２０）配列番号１２４の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    ２１）配列番号６３の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    ２２）配列番号６７の配列のＨＣＶＲおよび配列番号８５の配列のＬＣＶＲ、
    ２３）配列番号６７の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１０３の配列のＬＣＶＲ、
    ２４）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１１３の配列のＬＣＶＲ、
    ２５）配列番号６１の配列のＨＣＶＲおよび配列番号１２６の配列のＬＣＶＲ、または
    ２６）１）～２３）に記載のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの非ＣＤＲ領域の配列と少なくとも７０％の同一性を共有する非ＣＤＲ領域の配列を含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ、を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  7. 前記細胞外結合ドメインが、ヒトＣＤ４５ＲＣに結合する少なくとも１つの抗原結合フラグメントを含み、前記抗原結合フラグメントが、
    （ａ）以下の３つのＣＤＲを含むＨＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１の配列のＶＨ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号４、５、６、８、１００、１１６、１１７、１１８および１１９の配列を含む群から選択される配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号３の配列のＶＨ－ＣＤＲ３、ならびに
    （ｂ）以下の３つのＣＤＲを含むＬＣＶＲ：
    （ｉ）配列番号１５および１８（配列番号１５および１８中のＸ１２は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｓｅｒ（Ｓ）およびＧｌｙ（Ｇ）から選択される）の配列を含む群から選択される配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
    （ｉｉ）配列番号１６の配列のＶＬ－ＣＤＲ２、および
    （ｉｉｉ）配列番号１７の配列のＶＬ－ＣＤＲ３、を含み、
    好ましくは、前記ＬＣＶＲのＫａｂａｔ位置Ｌ７１のアミノ酸残基が、Ｐｈｅ（Ｆ）である、請求項１～６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  8. （ｉ）好ましくは配列番号６１の配列を有するＨＣＶＲおよび好ましくは配列番号１３４の配列を有するリンカーによって結合された、配列番号８１の配列を有するＬＣＶＲを含む抗ヒトＣＤ４５ＲＣ ｓｃＦｖ、
    （ｉｉ）好ましくは配列番号１４５の配列を有するＣＤ８αに由来するヒンジドメイン、
    （ｉｉｉ）好ましくは配列番号１５３の配列を有するヒトＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｉｖ）好ましくは配列番号１６７の配列を有するヒトＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよび好ましくは配列番号１５７の配列を有するヒトＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  9. 請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸。
  10. 請求項９に記載の核酸を含む発現ベクター。
  11. 免疫細胞集団であって、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＡＲを細胞表面に発現するように操作された、免疫細胞集団。
  12. 前記免疫細胞集団が、調節性Ｔ細胞集団であり、好ましくは、前記調節性Ｔ細胞集団が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ－β分泌Ｔｈ３細胞、調節性ＮＫＴ細胞、調節性γδ Ｔ細胞、調節性ＣＤ８＋Ｔ細胞および二重陰性調節性Ｔ細胞からなる群から選択される、請求項１１に記載の免疫細胞集団。
  13. 組成物であって、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＡＲを細胞表面に発現するように操作された少なくとも１つの免疫細胞集団を含み、前記組成物が、好ましくは少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤または担体をさらに含む医薬組成物である、組成物。
  14. 医薬として使用するための、請求項１１もしくは請求項１２に記載の免疫細胞集団、または請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 免疫寛容の誘導、移植拒絶の予防もしくは低減、または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防もしくは治療における使用、あるいは、それを必要とする対象における自己免疫疾患、望まれない免疫応答、単一遺伝子疾患、リンパ腫および癌からなる群から選択されるＣＤ４５ＲＣｈｉｇｈ関連状態の予防、低減および／または治療における使用のための、請求項１１もしくは請求項１２に記載の免疫細胞集団、または請求項１３に記載の組成物。

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