JP2023509793A - 筋緊張性ジストロフィーを処置するための筋標的化複合体およびその使用 - Google Patents

筋緊張性ジストロフィーを処置するための筋標的化複合体およびその使用 Download PDF

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Abstract

Figure 2023509793000001
本開示の側面は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体に関する。いくつかの態様において、筋標的化剤は、筋細胞上の内在化する細胞表面受容体へ特異的に結合する。いくつかの態様において、分子ペイロードは、疾患関連反復を含むDMPKアレルの発現または活性を阻害する。いくつかの態様において、分子ペイロードは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはRNAiオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドである。

Description

関連出願
本出願は、2020年12月31日出願の「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF」と題する米国仮出願第63/132,856号;2020年8月23日出願の「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する米国仮出願第63/069,063号;2020年7月23日出願の「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する米国仮出願第63/055,499;2020年1月31日出願の「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する米国仮出願No.62/968,383;2020年1月24日出願の「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する米国仮 出願第62/965,712号;および2020年1月10日出願の「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する米国仮出願第62/959,776号の出願日の35 U.S.C§119(e)の下での利益を主張するものである;これら各々の内容はそれら全体が参照されることによって本明細書に組み込まれる。
本発明の分野
本出願は、分子ペイロード(molecular payloads)(例として、オリゴヌクレオチド)を細胞へ送達するための標的化複合体、およびその使用、とくに疾患の処置に関する使用、に関する。
EFS-WEBを介しテキストファイルとして提出された配列表への言及
本出願は配列表を含有する。これはEFS-WebからASCIIフォーマットで提出されており、その全体が参照によってここに組み込まれる。2021年1月8日に作成された該ASCIIコピーはD082470029WO00-SEQ-ZJGという名称であり、サイズは762キロバイトである。
背景
筋強直性ジストロフィー(DM)は、筋強直症、筋肉の喪失または変性、筋肉機能の低下、インスリン抵抗性、心不整脈、平滑筋機能不全、および神経学的異常に特徴付けられる優性遺伝性疾患である。DMは成人発症型筋ジストロフィーの最も一般的な形態であり、世界中で約8000人に1人の世界発生率である。筋緊張性ジストロフィー1型(DM1)および筋緊張性ジストロフィー2型(DM2)の2種類の疾患が報告されている。この疾患のより一般的な形態であるDM1は、19番染色体上のDMPKの3'非コード領域にあるCTGトリヌクレオチド反復の反復拡張に起因し;DM2は、3番染色体上のZNF9の最初のイントロンにあるCCTGテトラヌクレオチド反復の反復拡張に起因する。DM1患者において、約50から約3,000+以上の総反復を含む可能性があるCTGトリヌクレオチド反復の反復拡張は、必須の細胞内タンパク質、例として、muscleblind様タンパク質と高い親和性で結合するヘアピン構造を形成できる有毒なRNA反復の生成に繋がり、これは疾患の特徴である、タンパク質隔離(sequestration)および機能喪失の表現型をもたらす。疾患の症状に対処するための支持療法および処置を除いて、DM1の有効な治療法は現在利用可能ではない。
概要
いくつかの側面において、本開示は、筋細胞を、分子ペイロードをそれらの細胞へ送達することを目的として、標的にする複合体を提供する。いくつかの態様において、本明細書に提供される複合体は、拡張された疾患関連反復を含むDMPKアレルの発現または活性を、例として筋強直性ジストロフィーを有するかまたはこれを有すると疑われる対象において阻害する分子ペイロードを送達するのにとくに有用である。したがって、いくつかの態様において、本明細書に提供される複合体は、分子ペイロードを筋細胞へ送達することを目的として、筋細胞の表面上の受容体へ特異的に結合する筋標的化剤(例として、筋標的化抗体)を含む。いくつかの態様において、複合体は、受容体に媒介される内在化を介して細胞中へ取り入れられ、これを受け分子ペイロードは細胞内部に放出されて機能を果たしてもよい。例えば、オリゴヌクレオチドを送達するように改変された複合体は、オリゴヌクレオチドが筋細胞における突然変異体DMPK発現を阻害し得るように、オリゴヌクレオチドを放出してもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、複合体のオリゴヌクレオチドと筋標的化剤とを接続する共有結合性リンカーのエンドソーム切断によって放出される。
本開示のいくつかの側面は、DMPK発現または活性を阻害するために構成された分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗トランスフェリン受容体抗体を含む複合体を提供する。いくつかの態様において、抗TfR抗体は、表2、4、および7に挙げられる抗TfR抗体のいずれかの重鎖相補性決定領域1(CDR-H1)、重鎖相補性決定領域2(CDR-H2)、重鎖相補性決定領域3(CDR-H3)、軽鎖相補性決定領域1(CDR-L1)、軽鎖相補性決定領域2(CDR-L2)、軽鎖相補性決定領域3(CDR-L3)を含む。
いくつかの態様において、抗体は、配列番号15のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)のCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3、および配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)のCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3、ならびに配列番号205のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号7のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3、ならびに配列番号8のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3、ならびに配列番号24のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、抗体は、配列番号155のCDR-H1、配列番号156のCDR-H2、配列番号157のCDR-H3、配列番号158のCDR-L1、配列番号159のCDR-L2、および配列番号14のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号194のCDR-H1、配列番号195のCDR-H2、配列番号196のCDR-H3、配列番号197のCDR-L1、配列番号198のCDR-L2、および配列番号193のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号145のCDR-H1、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のCDR-H2、配列番号147のCDR-H3、配列番号148のCDR-L1、配列番号149のCDR-L2、および配列番号6のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号165、配列番号736、または配列番号738のCDR-H1、配列番号166のCDR-H2、配列番号167のCDR-H3、配列番号168のCDR-L1、配列番号169のCDR-L2、および配列番号22のCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、抗体はヒトのまたはヒト化されたフレームワーク領域を含み、配列番号15で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号16で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3を有する。いくつかの態様において、抗体はヒトのまたはヒト化されたフレームワーク領域を含み、配列番号204で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号205で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3を有する。いくつかの態様において、抗体はヒトのまたはヒト化されたフレームワーク領域を含み、配列番号7で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号8で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3を有する。いくつかの態様において、抗体はヒトのまたはヒト化されたフレームワーク領域を含み、配列番号23で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号24で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3を有する。
いくつかの態様において、抗体は、配列番号15と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび配列番号16と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号204と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび配列番号205と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含み、ここで任意に、抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHおよび配列番号205のアミノ酸配列を含むVLを含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号7と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび配列番号8と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む。いくつかの態様において、抗体は、配列番号23と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび配列番号24と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、抗体のトランスフェリン受容体への結合の平衡解離定数(KD)は、10-11Mから10-6Mまでの範囲にある。
いくつかの態様において、抗体は、完全長IgG、Fabフラグメント、F(ab')フラグメント、F(ab')2フラグメント、scFv、およびFvからなる群から選択され、任意で、抗体は、Fab'フラグメントである。
いくつかの態様において、分子ペイロードは、オリゴヌクレオチドである。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号727の少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと相補性のある領域を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717のいずれか1つの少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと相補性のある領域を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列の少なくとも15個の一続きのヌクレオチドを含み、ここで任意に、オリゴヌクレオチドは、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個の修飾ヌクレオシド間連結を含む。いくつかの態様において、少なくとも1個の修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオアート連結である。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、1個以上の修飾ヌクレオシドを含み、ここで任意に、1個以上の修飾ヌクレオシドは、2'-修飾ヌクレオシドである。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、DMPK mRNA転写産物のRNAse H媒介切断を指向するgapmerオリゴヌクレオチドである。
いくつかの態様において、gapmerオリゴヌクレオチドは、式5’-X-Y-Z-3’を含む。いくつかの態様において、
Xは、3～5連結ヌクレオシドを含み、ここでX中のヌクレオシドの少なくとも1個は、2'-修飾ヌクレオシドであり;
Yは、6～10連結2'-デオキシリボヌクレオシドを含み、ここでギャップ領域Y中のヌクレオシドの1個以上は、修飾ヌクレオシドであり、ここでギャップ領域Y中の1個以上のシトシンは任意で5-メチルシトシンであり;および
Zは、3～5連結ヌクレオシドを含み、ここでZ中のヌクレオシドの少なくとも1個は、2'-修飾ヌクレオシドである。
いくつかの態様において、XおよびZ中の各ヌクレオシドは、2'-修飾ヌクレオシドである。
いくつかの態様において、2'修飾ヌクレオチドは、以下:2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、および2',4'-二環式ヌクレオシドからなる群から選択され、さらにここで任意に、2',4'-二環式ヌクレオシドは、以下:ロックド核酸(LNA)、エチレン架橋核酸(ENA)、および(S)-拘束エチル架橋核酸(cEt)から選択される。
いくつかの態様において、標的化剤は、分子ペイロードへ、切断可能なリンカーを介して共有結合的に連結されている。いくつかの態様において、切断可能なリンカーは、バリン-シトルリンジペプチド配列を含む。いくつかの態様において、筋標的化剤は、分子ペイロードへ、非切断可能なリンカーを介して共有結合的に連結されている。いくつかの態様において、非切断可能なリンカーは、アルカンリンカーである。
いくつかの態様において、分子ペイロードは、抗体のリジン残基またはシステイン残基への抱合を介して抗体に連結されている。
本開示の他の側面は、細胞中のDMPKの活性を阻害する方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、細胞を本明細書に記載の複合体と、分子ペイロードの細胞への内在化を促進するのに有効な量で接触させることを含む。いくつかの態様において、細胞は、疾患関連反復を含むDMPKアレルを含む。
本開示の他の側面は、筋緊張性ジストロフィー1型(DM1)に関連するDMPKアレルの疾患関連反復の拡張を有する対象を処置するための方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、有効量の、本明細書に記載の複合体を、対象へ投与することを含む。
図面の簡単な記載
図1は、ビヒクルトランスフェクションと比べた、DMPK発現レベルに対する、DMPK(対照DMPK-ASO)を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドでHepa1-6細胞をトランスフェクトした効果を示す、非限定的な概略図を描く;
図2Aは、DMPKアンチセンスオリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結された抗トランスフェリン受容体抗体を含む筋肉標的化複合体の、精製最中に得られたHIL-HPLCトレースを示す非限定的な概略図を描く。
図2Bは、筋肉標的化複合体のSDS-PAGE分析の非限定的な画像を描く。
図3は、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。
図4A～4Eは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のC57Bl/6 WTマウス) 図4A～4Eは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のC57Bl/6 WTマウス) 図4A～4Eは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のC57Bl/6 WTマウス)
図5A～5Bは、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の組織選択性を示す非限定的な概略図を描く。対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)は、ビヒクル実験と比べて、in vivoでマウスの脳または脾臓組織中のDMPK発現レベルを低減しない。(N=3匹のC57Bl/6 WTマウス) 図5A～5Bは、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の組織選択性を示す非限定的な概略図を描く。対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)は、ビヒクル実験と比べて、in vivoでマウスの脳または脾臓組織中のDMPK発現レベルを低減しない。(N=3匹のC57Bl/6 WTマウス)
図6A～6Fは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=5匹のC57Bl/6 WTマウス) 図6A～6Fは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=5匹のC57Bl/6 WTマウス) 図6A～6Fは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=5匹のC57Bl/6 WTマウス) 図6A～6Fは、ビヒクル実験と比べた、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、in vivoでのマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=5匹のC57Bl/6 WTマウス)
図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッド(naked)DMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図7A～7Lは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル)
図8A～8Bは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル平滑筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図8A～8Bは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の、in vivoでのカニクイザル平滑筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。(N=3匹のオスのカニクイザル)
図9A～9Dは、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の組織選択性を示す、非限定的な概略図を描く。DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体は、ビヒクル実験と比べて、in vivoでカニクイザルの肝臓、腎臓、脳、または脾臓組織中のDMPK発現レベルを低減しない。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図9A～9Dは、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の組織選択性を示す、非限定的な概略図を描く。DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体は、ビヒクル実験と比べて、in vivoでカニクイザルの肝臓、腎臓、脳、または脾臓組織中のDMPK発現レベルを低減しない。(N=3匹のオスのカニクイザル) 図9A～9Dは、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の組織選択性を示す、非限定的な概略図を描く。DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体は、ビヒクル実験と比べて、in vivoでカニクイザルの肝臓、腎臓、脳、または脾臓組織中のDMPK発現レベルを低減しない。(N=3匹のオスのカニクイザル)
図10は、カニクイザルにおける数種の組織型にわたって正規化されたDMPK mRNA組織発現レベルを示す。(N=3匹のオスのカニクイザル)
図11A～11Bは、ビヒクル実験と比べ、かつネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-008)の、DTX-C-008投薬後最大28日間in vivoマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く。
図12は、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOを含む筋肉標的化複合体(DTX-C-012)の単回用量がカニクイザルにおいて安全であり、忍容されることを示す。(N=3匹のオスのカニクイザル)
図13A～13Bは、ビヒクル処置と比べ;かつ対照複合体(DTX-C-007)およびネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、対照DMPK-ASOを含む筋標的化複合体(DTX-C-008)の、DTX-C008投薬後最大12週間in vivoマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く(N＝5匹のC57B1/6 WTマウス)。 図13A～13Bは、ビヒクル処置と比べ;かつ対照複合体(DTX-C-007)およびネイキッドDMPK ASO(対照DMPK-ASO)と比較した、対照DMPK-ASOを含む筋標的化複合体(DTX-C-008)の、DTX-C008投薬後最大12週間in vivoマウス筋組織中DMPK発現レベルの低減能を示す非限定的な概略図を描く(N＝5匹のC57B1/6 WTマウス)。
図14A～14Bは、対照DMPK-ASOを含む筋標的化複合体(DTX-C-008)の、マウスモデルにおける核の突然変異体DMPK RNAの標的能を示す非限定的な概略図を描く(N＝6匹のマウス)。 図14A～14Bは、対照DMPK-ASOを含む筋標的化複合体(DTX-C-008)の、マウスモデルにおける核の突然変異体DMPK RNAの標的能を示す非限定的な概略図を描く(N＝6匹のマウス)。
図15A～15Bは、アクチンを標的にするオリゴヌクレオチドを含む筋標的化複合体(DTX-アクチン)の、筋組織中アクチンの発現レベルと筋強直症の機能グレードとの用量依存的低減能を示す非限定的な概略図を描く(N＝2匹のHSALRマウス)。
図16A～16Cは、筋標的化複合体(DTX-C-008)が、DM1心臓モデルにおける不整脈の機能的修正の検証のためのマウスモデルにおける延長されたQTc間隔を有意に低減することが可能であることを示す非限定的な概略図を描く(N＝10匹のマウス)。図16Aは、DM1のマウスモデルを推進するヒトDMPK構築物の概略図を示す。図16Bは、測定されたQRS間隔を示し、図16Cは、測定されたQTc間隔を示す。 図16A～16Cは、筋標的化複合体(DTX-C-008)が、DM1心臓モデルにおける不整脈の機能的修正の検証のためのマウスモデルにおける延長されたQTc間隔を有意に低減することが可能であることを示す非限定的な概略図を描く(N＝10匹のマウス)。図16Aは、DM1のマウスモデルを推進するヒトDMPK構築物の概略図を示す。図16Bは、測定されたQRS間隔を示し、図16Cは、測定されたQTc間隔を示す。
図17A～17Bは、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む筋標的化複合体(DTX-C-012)が、DM1患者からのヒト細胞において、DMPKの発現レベルを低減することと、DMPK特異的標的遺伝子(Bin1)のスプライシングを修正することとが可能であることを示す非限定的な概略図を描く(N＝3)。 図17A～17Bは、抗トランスフェリン受容体抗体(15G11抗体)および対照DMPK-ASOアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む筋標的化複合体(DTX-C-012)が、DM1患者からのヒト細胞において、DMPKの発現レベルを低減することと、DMPK特異的標的遺伝子(Bin1)のスプライシングを修正することとが可能であることを示す非限定的な概略図を描く(N＝3)。
図18A～18Cは、ヒトDM1筋管のDMPKノックダウンにおいて選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応を示す非限定的な概略図を描く。対照DMPK-ASOが対照として使用された。すべての試験されたオリゴヌクレオチドはDMPKノックダウンの活性を示した。統計分析:テューキーのHSD事後検定による一元配置ANOVA vs.対照DMPK-ASO処置;*p＜0.05、**p＜0.01、***p＜0.001、****p＜0.0001。 図18A～18Cは、ヒトDM1筋管のDMPKノックダウンにおいて選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応を示す非限定的な概略図を描く。対照DMPK-ASOが対照として使用された。すべての試験されたオリゴヌクレオチドはDMPKノックダウンの活性を示した。統計分析:テューキーのHSD事後検定による一元配置ANOVA vs.対照DMPK-ASO処置;*p＜0.05、**p＜0.01、***p＜0.001、****p＜0.0001。
図19A～19Bは、霊長目の非ヒト動物(NHP)DM1筋管のDMPKノックダウンにおいて選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量応答を示す非限定的な概略図を描く。対照DMPK-ASOが対照として使用された。すべての試験されたオリゴヌクレオチドはDMPKノックダウンの活性を示した。
図20は、DMPKを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドへ共有結合的に抱合された選択された抗TfR1抗体を含有する抱合体の、霊長目の非ヒト動物(NHP)細胞またはヒトDM1患者からの細胞(DM1)におけるDMPKノックダウン効率を示すグラフである。
図21A～21Bは、ヒト(図21A)またはカニクイ(図21B)トランスフェリン受容体1への、種々の抗TfR1抗体フォーマットの結合を示す。
図22は、ヒトトランスフェリン受容体2への種々の抗TfR1抗体フォーマットの結合を示す。抗TfR2モノクローナル抗体(OTI1B1)が対照として使用された。試験された抗体のいずれもTfR2に結合しない。
図23は、DMPKを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドへ共有結合的に抱合された本明細書に記載の抗TfR1抗体を含有する抱合体の、霊長目の非ヒト動物(NHP)細胞またはヒトDM1患者からの細胞(DM1)におけるDMPKノックダウン効率を示すグラフである。
図24A～24Bは、ELISAによって測定されたとおりの、ヒトTfR1(hTfR1)およびカニクイザルTfR1(cTfR1)への、オリゴヌクレオチド抱合抗TfRまたは非抱合抗TfRの結合を示す。抗TfRは表7の1つである。図24Aは、hTfR1への、抗TfR単独での結合(EC50 26.6nM)またはDMPK標的化オリゴとの抱合体での結合(EC50 8.2nM)を示す。図24Bは、cTfR1への、抗TfR単独での結合(EC50 33.6nM)またはDMPK標的化オリゴとの抱合体での結合(EC50 5.3nM)を示す。
図25は、横紋筋肉腫(RD)細胞内への抗TfR Fab抱合体の定量化された細胞取り込みを示す。試験された抱合体の分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチドであり、抱合体の取り込みは、指し示された抗TfR Fabによって容易になされた。陰性対照Fab(抗マウスTfR)または陽性対照Fab(抗ヒトTfR1)を有する抱合体もまた、このアッセイに包含される。細胞は、指し示された抱合体とともに100nMの濃度にて4時間インキュベートされた。細胞取り込みは、平均のCypher5e蛍光によって測定された。抗TfRは表7に示されるものである。
図26は、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(対照DMPK-ASO)へ抱合された抗TfR抗体(表7の抗TfR)を含有する様々な濃度の抱合体で処置されたRD細胞におけるDMPK発現を示す。処置の継続期間は3日であった。トランスフェクション剤を使用して送達された対照DMPK-ASOが対照として使用された。
図27は、静脈内投与後の様々な生物種における、抗TfR抗体および分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)を連結するのに使用されたリンカーの経時的な血清中安定性を示す。
図28は、PBSで処置された細胞と比べた、DMPK標的化オリゴヌクレオチドで処置されたRD細胞中のDMPK発現を示す。処置の継続期間は3日であった。DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、遊離オリゴヌクレオチド(裸の(gymnotic)取り込み、「遊離」)として、またはトランスフェクション試薬(「トランス」)で細胞へ送達された。
図29は、腓腹筋において測定された、DM1のHSA-LRマウスモデルにおける抗TfR1抗体-オリゴヌクレオチド抱合体(Ab-ASO)によるAtp2a1のスプライシング修正の結果を示す。使用された抗TfRはRI7 217であり、オリゴヌクレオチドは骨格筋系アクチンを標的にする。
図30A～30Cは、抗TfR1抗体-オリゴヌクレオチド(Ab-ASO)抱合体または生理食塩水で処置されたHSA-LRマウスの腓腹筋において測定された、DM1に関して30より多くの種々のRNAのスプライシング修正を示す。使用された抗TfRはRI7 217であり、オリゴヌクレオチドは骨格筋系アクチンを標的にする。 図30A～30Cは、抗TfR1抗体-オリゴヌクレオチド(Ab-ASO)抱合体または生理食塩水で処置されたHSA-LRマウスの腓腹筋において測定された、DM1に関して30より多くの種々のRNAのスプライシング修正を示す。使用された抗TfRはRI7 217であり、オリゴヌクレオチドは骨格筋系アクチンを標的にする。 図30A～30Cは、抗TfR1抗体-オリゴヌクレオチド(Ab-ASO)抱合体または生理食塩水で処置されたHSA-LRマウスの腓腹筋において測定された、DM1に関して30より多くの種々のRNAのスプライシング修正を示す。使用された抗TfRはRI7 217であり、オリゴヌクレオチドは骨格筋系アクチンを標的にする。
図31は、抗TfR1抗体-オリゴヌクレオチド抱合体(Ab-ASO)もしくは生理食塩水で処置された、HSA-LRマウスの四頭筋、腓腹筋、または前脛骨筋におけるスプライシング異常を示す。データは、図30A～30Cに示される30より多くのRNAにおいて測定された複合的なスプライシング異常を表す。
図32は、生理食塩水、非抱合オリゴヌクレオチド(ASO)、または抗TfR1抗体-オリゴヌクレオチド抱合体(Ab-ASO)で処置されたHSA-LRマウスの四頭筋、腓腹筋、および前脛骨筋において測定された筋強直症グレードを示す。筋強直症は、筋電図法(EMG)によって測定され、筋強直性放電(myotonic discharge)の頻度に基づき0、1、2、または3とグレード分けされた。
図33A～33Dは、ヒトTfR1を発現するマウス(hTfR1ノックインマウス)におけるDMPK mRNA発現を低減する、DMPK標的化オリゴヌクレオチドへ抱合された抗TfR Fab'(対照抗TfR Fab'、または配列番号777のHCおよび配列番号212のLCを含む抗TfR Fab')を含有する抱合体のin vivo活性を示す。残りのDMPK mRNAレベルが、第1の用量の14日後、マウスの前脛骨筋(図33A)、腓腹筋(図33B)、心臓(図33C)、および横隔膜(図33D)において測定された。図33A～33Dにおいて、p＜0.05(*);p＜0.01(**);p＜0.001(***);p＜0.0001(****)。 図33A～33Dは、ヒトTfR1を発現するマウス(hTfR1ノックインマウス)におけるDMPK mRNA発現を低減する、DMPK標的化オリゴヌクレオチドへ抱合された抗TfR Fab'(対照抗TfR Fab'、または配列番号308のHCおよび配列番号212のLCを有する抗TfR Fab')を含有する抱合体のin vivo活性を示す。残りのDMPK mRNAレベルが、第1の用量の14日後、マウスの前脛骨筋(図33A)、腓腹筋(図33B)、心臓(図33C)、および横隔膜(図33D)において測定された。図33A～33Dにおいて、p＜0.05(*);p＜0.01(**);p＜0.001(***);p＜0.0001(****)。
図34A～34Cは、DMPK標的化オリゴヌクレオチドへ抱合された抗TfRを含有する抱合体が、380のGTG反復を含有するDMPK突然変異体mRNAを発現するCM-DM1-32F初代細胞において、スプライシングを修正し、かつフォーカス(foci)を低減したことを示す。図34Aは、抱合体が、突然変異体DMPK mRNA発現を低減したことを示す。図34Bは、抱合体が、BIN1エキソン11スプライシングを修正したことを示す。 図34Cは、抱合が、突然変異体DMPK mRNAによって形成された核内フォーカスを低減したことを実証する、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)分析の画像および画像の定量化を示す。
詳細な記載
本開示の側面は、ある分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド、ペプチド、小分子)が筋細胞に有益な効果を有し得るものの、かかる細胞を効果的に標的にすることは難航を極めるという認識に関する。本明細書に記載のとおり、本開示は、かかる課題を克服するために、分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を提供する。いくつかの態様において、複合体は、例として、希少な筋疾患を有するかまたはこれを有すると疑われる対象において、筋細胞における標的遺伝子の発現または活性を阻害する分子ペイロードを送達するのに特に有用である。例えば、いくつかの態様において、複合体は、拡張した疾患関連反復を含むDMPKアレルを標的とし、DM1を有する対象を治療するために提供される。いくつかの態様において、本明細書で提供される複合体は、拡張した疾患関連反復を含むDMPKアレルの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。別の例として、複合体は、疾患関連DMPK mRNAのMuscleblind様タンパク質(例として、MBNL1、2、および/または(例として、および)3)への結合を妨害するオリゴヌクレオチドを含んでいてもよく、それによって、疾患関連DMPKアレルの毒性効果を低減する。いくつかの態様において、疾患関連DMPKアレルの毒性効果を低減する1以上のタンパク質を発現する合成核酸ペイロード(例として、DNAまたはRNAペイロード)を使用することができる。いくつかの態様において、複合体は、例として、１以上のMuscleblind様タンパク質(例として、MBNL1、2、および/または(例として、および)3)またはそのフラグメントを発現する、合成cDNAおよび/または(例として、および)合成mRNAの分子ペイロードを含んでいてもよい。いくつかの態様において、複合体は、核酸をプログラムできるヌクレアーゼ(例として、Cas9)をDMPKの疾患関連反復における配列はまたはその近くの配列を標的とすることができるガイド分子(例として、ガイドRNA)などの分子ペイロードを含んでいてもよい。いくつかの態様において、かかる核酸をプログラムできるヌクレアーゼを使用して、DMPK遺伝子から疾患関連反復配列の一部またはすべてを切断することができる。
定義された用語の記載を含む本開示のさらなる側面は、以下に提供される。
I. 定義
投与する(施す)こと:
本明細書に使用されるとき、用語「投与する(施す)こと」または「投与(施し)」は、生理学的におよび/または薬理学的に有用なやり方で対象へ複合体を提供すること(例として、対象における疾病を処置すること)を意味する。
およそ:
本明細書に使用されるとき、用語「およそ」または「約」は、関心のある1つ以上の値へ適用されるとき、規定された参照値と同様の値を指す。ある態様において、用語「およそ」または「約」は、別様に述べられない限りまたは文脈から明らかでない限り(かかる数字が実行可能な値の100％を超える場合を除く)、規定された参照値のプラスマイナス(超または未満)の15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、またはこれ未満に収まる広範な値を指す。
抗体:
本明細書に使用されるとき、用語「抗体」は、少なくとも1個の免疫グロブリン可変ドメインまたは少なくとも1個の抗原決定基、例として、抗原へ特異的に結合するパラトープを包含するポリペプチドを指す。いくつかの態様において、抗体は、完全長の抗体である。いくつかの態様において、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの態様において、抗体は、ヒト化抗体である。しかしながら、いくつかの態様において、抗体は、Fabフラグメント、F(ab')、F(ab')2フラグメント、Fvフラグメント、またはscFvフラグメントである。いくつかの態様において、抗体は、ラクダ科の動物の抗体に由来するナノボディー、またはサメ抗体に由来するナノボディーである。いくつかの態様において、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの態様において、抗体は、ヒト生殖細胞系配列を有するフレームワークを含む。別の態様において、抗体は、IgG、IgG1、IgG2、IgG2A、IgG2B、IgG2C、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgD、IgM、およびIgEの定常領域からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、抗体は、重(H)鎖可変領域(本明細書中VHと略される)、および/または(例として、および)、軽(L)鎖可変領域(本明細書中VLと略される)を含む。いくつかの態様において、抗体は、定常領域、例としてFc領域を含む。免疫グロブリン定常領域は、重鎖または軽鎖定常領域を指す。ヒトIgG重鎖および軽鎖定常領域アミノ酸配列およびそれらの機能的バリエーションは知られている。重鎖に関し、いくつかの態様において本明細書に記載の抗体の重鎖は、アルファ(α)、デルタ(Δ)、イプシロン(ε)、ガンマ(γ)、またはミュー(μ)重鎖であり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体の重鎖は、ヒトのアルファ(α)、デルタ(Δ)、イプシロン(ε)、ガンマ(γ)、またはミュー(μ)重鎖を含み得る。具体的な態様において、本明細書に記載の抗体は、ヒトのガンマ1 CH1ドメイン、CH2ドメイン、および/または(例として、および)、CH3ドメインを含む。いくつかの態様において、VHドメインのアミノ酸配列は、ヒトガンマ(γ)重鎖定常領域のアミノ酸配列、たとえば当該技術分野において知られているいずれの配列も含む。ヒト定常領域配列の非限定例は当該技術分野において記載されており、例として、米国特許第5,693,780号および上記のKabat E Aら(1991)を参照。いくつかの態様において、VHドメインは、本明細書に提供される可変鎖定常領域のいずれかと少なくとも70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または少なくとも99％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体は修飾されており、例として、グリコシル化、リン酸化、SUMO化、および/または(例として、および)、メチル化を介して修飾されている。いくつかの態様において、抗体は、1個以上の糖または炭水化物分子へ抱合されたグリコシル化抗体である。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、N-グリコシル化、O-グリコシル化、C-グリコシル化、グリピエーション(glypiation)(GPIアンカー付着)、および/または(例として、および)、ホスホグリコシル化を介して抗体へ抱合されている。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、またはグリカンである。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、分枝オリゴ糖類または分枝グリカンである。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、マンノース単位、グルコース単位、N-アセチルグルコサミン単位、N-アセチルガラクトサミン単位、ガラクトース単位、フコース単位、またはホスホ脂質単位を包含する。いくつかの態様において、抗体は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常領域へ連結された本開示の1個以上の抗原結合性フラグメントを含むポリペプチドを含む構築物である。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって結び合わされた2個以上のアミノ酸残基を含み、1個以上の抗原結合部と連結させるために使用される。リンカーポリペプチドの例は報告されている(例として、Holliger,P.,et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448;Poljak,R.J.,et al.(1994)Structure 2:1121-1123を参照)。またさらに、抗体は、1以上の他のタンパク質またはペプチドと、抗体もしくは抗体部分との共有結合または非共有結合の結び付きによって形成される、より大きな免疫接着分子の一部であってもよい。かかる免疫接着分子の例は、四量体scFv分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用(Kipriyanov,S.M.,et al.(1995)Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101)、ならびに二価のおよびビオチン化されたscFv分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチド、およびC末ポリヒスチジンタグの使用(Kipriyanov,S.M.,et al.(1994)Mol.Immunol.31:1047-1058)を包含する。
CDR:
本明細書に使用されるとき、用語「CDR」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域の各々において3つのCDRがあり、これらは可変領域の各々につきCDR1、CDR2、およびCDR3と指定される。用語「CDRセット」は、本明細書に使用されるとき、抗原に結合することが可能な単一の可変領域に生じる3つのCDRの一群を指す。これらのCDRの厳密な境界は、種々の系に従い異なって定義されている。Kabat(Kabat et al.,Sequence of Proteins of Immunological Interest(国立衛生研究所,Bethesda,Md.(1987)および(1991))によって記載される系は、抗体のいずれの可変領域へも適用可能な一義的な残基ナンバリング系を提供するのみならず、3つのCDRを定義する正確な残基境界をも提供する。これらのCDRは、Kabat CDRと称されることもある。CDRの下位部(Sub-portions)は、L1、L2、およびL3、またはH1、H2、およびH3と指定されることがあり、ここで「L」および「H」は夫々、軽鎖および重鎖領域を指定する。これらの領域は、Kabat CDRと重複する境界を有するChothia CDRと称されることもある。Kabat CDRと重複するCDRを定義する他の境界は、Padlan(FASEB J.9:133-139(1995))およびMacCallum(J Mol Biol 262(5):732-45(1996))によって記載されている。さらに他のCDR境界定義は、上の系の1つに厳重に従わなくてもよいが、それでもなおKabat CDRと重複することがあり、具体的な残基もしくは残基の群またはCDR全体でさえも抗原結合に有意に影響を及ぼすものではないという予測あるいは実験的知見を踏まえ、それらは短縮または伸長されてもよい。本明細書に使用される方法は、これらの系のいずれかに従って定義されるCDRを利用してもよいが、好ましい態様はKabatまたはChothiaに定義されるCDRを使用する。
CDR接合(-grafted)抗体:
用語「CDR接合抗体」は、マウス重鎖および軽鎖可変領域を有するがマウスCDRの1以上(例として、CDR3)がヒトCDR配列に置き換えられている抗体などの、ある種からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、そのVHおよび/またはVLのCDR領域の1以上の配列が別の種のCDR配列に置き換えられている抗体を指す。
キメラ抗体:
用語「キメラ抗体」は、ヒト定常領域へ連結されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体などの、ある種からの重鎖および軽鎖可変領域配列と別の種からの定常領域配列を含む抗体を指す。
相補的:
本明細書に使用されるとき、用語「相補的」は、2ヌクレオチド間または2組のヌクレオチド間の正確な対形成のための能力(capacity)を指す。とりわけ、相補的は、2ヌクレオチド間または2組のヌクレオチド間に結合をもたらす水素結合対形成の程度を特徴付ける用語である。例えば、ある位置のオリゴヌクレオチドの塩基が、対応する位置の標的核酸(例として、mRNA)の塩基と水素結合することが可能である場合、そのとき塩基は、その位置にて互いに相補的であると見なされる。塩基対合は、標準的なWatson-Crick塩基対合と非Watson-Crick塩基対合(例として、Wobble塩基対合およびHoogsteen塩基対合)との両方を包含してもよい。例えば、いくつかの態様において、相補的な塩基対合として、アデノシン型塩基(A)は、チミジン型塩基(T)またはウラシル型塩基(U)に相補的であり、シトシン型塩基(C)は、グアノシン型塩基(G)に相補的であり、3-ニトロピロールまたは5-ニトロインドールなどのユニバーサル塩基は、いずれのA、C、U、またはTとハイブリダイズし得、これらと相補的であると見なされる。イノシン(I)はまた、当該技術分野においてユニバーサル塩基であるとも見なされており、いずれのA、C、U、またはTに相補的であると見なされる。
保存アミノ酸置換:
本明細書に使用されるとき、「保存アミノ酸置換」は、アミノ酸置換がなされたタンパク質の相対的な電荷またはサイズの特徴を変更しないアミノ酸置換を指す。バリアントは、当業者に知られているポリペプチド配列を変更するための方法に従って調製され得、たとえば、かかる方法をまとめた参考文献、例として、Molecular Cloning:A Laboratory Manual,J.Sambrook,et al.,eds.,Fourth Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,2012、またはCurrent Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel,et al.,eds.,John Wiley & Sons,Inc.,New Yorkから見出される。アミノ酸の保存的置換は、以下の群:(a)M、I、L、V;(b)F、Y、W;(c)K、R、H;(d)A、G;(e)S、T;(f)Q、N;および(g)E、D内のアミノ酸に対してなされる置換を包含する。
共有結合的に連結された(ている):
本明細書に使用されるとき、用語「共有結合的に連結された(ている)」は、少なくとも1個の共有結合を介して一緒に連結されている2個以上の分子の特徴を指す。いくつかの態様において、2個の分子は一緒に、分子間リンカーとして働く単結合(例として、ジスルフィド結合またはジスルフィド架橋)によって共有結合的に連結され得る。しかしながら、いくつかの態様において、複数の共有結合を通して2個以上の分子を一緒に結び合わせるリンカーとして働く分子を介して、2個以上の分子は一緒に、共有結合的に連結され得る。いくつかの態様において、リンカーは、切断可能なリンカーであってもよい。しかしながら、いくつかの態様において、リンカーは、切断不能なリンカーであってもよい。
交差反応すること:
本明細書に使用されるとき、および標的化剤(例として、抗体)の文脈において、用語「交差反応すること」は、同様のタイプまたはクラスの1種より多くの抗原(例として、複数のホモログ、パラログ、もしくはオルソログの抗原)へ、同様の親和性または結合活性で特異的に結合することが可能な剤の特性を指す。例えば、いくつかの態様において、同様のタイプまたはクラスのヒトおよび霊長目の非ヒト動物の抗原(例として、ヒトトランスフェリン受容体および霊長目の非ヒト動物のトランスフェリン受容体)に対して交差反応する抗体は、ヒト抗原および霊長目の非ヒト動物の抗原へ、同様の親和性または結合活性で結合することが可能である。いくつかの態様において、抗体は、同様のタイプまたはクラスのヒト抗原および齧歯類動物抗原に対して交差反応する。いくつかの態様において、抗体は、同様のタイプまたはクラスの齧歯類動物の抗原および霊長目の非ヒト動物の抗原に対して交差反応する。いくつかの態様において、抗体は、同様のタイプまたはクラスのヒト抗原、霊長目の非ヒト動物の抗原、および齧歯類動物の抗原に対して交差反応する。
疾患関連反復:
本明細書に使用されるとき、用語「疾患関連反復」は、反復ヌクレオチド配列の数ユニットが、遺伝的疾患と相関する、および/または(例として、および)、これに直接的にもしくは間接的に寄与する、またはこれを引き起こす、ゲノムの場所での反復ヌクレオチド配列を指す。疾患関連反復の各反復単位は、長さが、2、3、4、5またはそれ以上のヌクレオチドであってもよい。例えば、いくつかの態様において、疾患関連反復は、ジヌクレオチド反復である。いくつかの態様において、疾患関連反復は、トリヌクレオチド反復である。いくつかの態様において、疾患関連反復は、テトラヌクレオチド反復である。いくつかの態様において、疾患関連反復は、ペンタヌクレオチド反復である。いくつかの態様において、疾患関連反復は、CAG反復、CTG反復、CUG反復、CGG反復、CCTG反復、またはそれらのいずれかのヌクレオチド相補体を含む。いくつかの態様において、疾患関連反復は、遺伝子の非コード部分にある。しかしながら、いくつかの態様において、疾患関連反復は、遺伝子のコード領域にある。いくつかの態様において、疾患関連反復は、正常な状態から、遺伝的疾患に直接的にまたは間接的に寄与するまたはこれを引き起こす長さへ、拡張される。いくつかの態様において、疾患関連反復は、RNA(例として、RNA転写産物)にある。いくつかの態様において、疾患関連反復は、DNA(例として、染色体、プラスミド)にある。いくつかの態様において、疾患関連反復は、生殖細胞系列細胞の染色体において拡張される。いくつかの態様において、疾患関連反復は、体細胞の染色体において拡張される。いくつかの態様において、疾患関連反復は、先天性発症に関連する数多の反復単位へ拡張される。いくつかの態様において、疾患関連反復は、疾患の小児期発症に関連する数多の反復単位へ拡張される。いくつかの態様において、疾患関連反復は、疾患の成人発症に関連する数多の反復単位へ拡張される。
DMPK:
本明細書で使用されるとき、用語「DMPK」は、セリン/スレオニンプロテインキナーゼであるミオトニンプロテインキナーゼ(筋強直性ジストロフィー(myotonic dystrophy)プロテインキナーゼまたは筋強直性ジストロフィー(dystrophia myotonica)プロテインキナーゼとしても知られる)をコードする遺伝子を指す。この酵素の基質には、ミオゲニン、L型カルシウムチャネルのベータサブユニット、およびホスホレンマンが含まれ得る。いくつかの態様において、DMPKは、ヒト(Gene ID:1760)、非ヒト霊長動物(例として、Gene ID:456139、Gene ID:715328)、または齧歯動物遺伝子(例として、Gene ID:13400)であり得る。ヒトにおいて、DMPKの3'非コード非翻訳領域におけるCTG反復拡張拡は、筋緊張性ジストロフィーI型(DM1)に関連している。加えて、受容体の種々のアイソフォームをコードする複数のヒト転写産物バリアント(例として、GenBank RefSeq受託番号:NM_001081563.2、NM_004409.4、NM_001081560.2、NM_001081562.2、NM_001288764.1、NM_001288765.1、およびNM_006128の注釈付きのものであるように)が特徴付けられている。
DMPKアレル:
本明細書で使用されるとき、用語「DMPKアレル」は、DMPK遺伝子の代替形態(例として、野生型または突然変異体形態)のいずれか1つを指す。いくつかの態様において、DMPKアレルは、その正常かつ典型的な機能を保持する野生型ミオトニンプロテインキナーゼをコードし得る。いくつかの態様において、DMPKアレルは、1以上の疾患関連反復拡張を含み得る。いくつかの態様において、正常な対象は、5～37の範囲の反復単位を含む２つのDMPKアレルを有する。いくつかの態様において、DM1を有する対象におけるCTG反復単位の数は、約50～約3,000＋の範囲であり、反復の数が多いほど、疾患の重症度が高くなる。いくつかの態様において、軽症のDM1対象は、50～150の範囲の反復単位を有する少なくとも1つのDMPKアレルを有する。いくつかの態様において、古典的DM1を有する対象は、100～1,000またはそれ以上の範囲の反復単位を有する少なくとも1つのDMPKアレルを有する。いくつかの態様において、先天性発症型のDM1を有する対象は、2,000を超える反復単位を含む少なくとも１つのDMPKアレルを有し得る。
フレームワーク:
本明細書に使用されるとき、用語「フレームワーク」または「フレームワーク配列」は、CDRを差し引いた可変領域の残りの配列を指す。CDR配列の厳密な定義が種々の系によって決定され得ることから、フレームワーク配列の意味は、相応に異なる解釈に依存する。6つのCDR(軽鎖のCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3、ならびに重鎖のCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3)もまた、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の4つの下位領域(FR1、FR2、FR3、およびFR4)に分け、ここでCDR1はFR1とFR2との間に、CDR2はFR2とFR3との間に、CDR3はFR3とFR4との間に位置付けられる。具体的な下位領域をFR1、FR2、FR3、またはFR4と特定しないフレームワーク領域は、他によって言及されるとき、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたFR(複数)を表す。本明細書に使用されるとき、FRは4つの下位領域のうち1つを表し、FR(複数)はフレームワーク領域を含有する4つの下位領域のうち2つ以上を表す。ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、当該技術分野において知られている。一態様において、当該技術分野において知られているアクセプター配列は、本明細書に開示の抗体に使用されていてもよい。
ヒト抗体:
用語「ヒト抗体」は、本明細書に使用されるとき、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を包含することが意図される。本開示のヒト抗体は、例えばCDR、とりわけCDR3において、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基(例として、in vitroでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によってか、またはin vivoでの体細胞変異によって導入された突然変異)を包含していてもよい。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、本明細書に使用されるとき、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するCDR配列がヒトフレームワーク配列上へ接合された抗体を包含することは意図されない。
ヒト化抗体:
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種(例として、マウス)からの重鎖および軽鎖の可変領域配列を含むが、VH配列および/または(例として、および)VL配列の少なくとも一部がより「ヒト様」に、すなわち、ヒト生殖細胞系可変配列とより同様なものに変更された抗体を指す。ヒト化抗体のあるタイプは、ヒトCDR配列が非ヒトVHおよびVL配列上へ導入されて対応する非ヒトCDR配列と置き換えられたCDR接合抗体である。一態様において、ヒト化された抗トランスフェリン受容体抗体および抗原結合部分が提供される。かかる抗体は、既存のハイブリドーマ技術、これに続くin vitroの遺伝子工学を使用するヒト化(KasaianらのPCT刊行物第WO 2005/123126 A2号に開示されたものなど)を使用してマウス抗トランスフェリン受容体モノクローナル抗体を得ることによって生成されてもよい。
内在化する細胞表面受容体:
本明細書に使用されるとき、用語「内在化する細胞表面受容体」は、例として、外部刺激(例として、受容体へ結合するリガンド)の際、細胞によって内在化される細胞表面受容体を指す。いくつかの態様において、内在化する細胞表面受容体は、エンドサイトーシスによって内在化される。いくつかの態様において、内在化する細胞表面受容体は、クラスリン媒介エンドサイトーシスによって内在化される。しかしながら、いくつかの態様において、内在化する細胞表面受容体は、クラスリンに依存しない経路、例えば、食作用、マクロピノサイトーシス、カベオラ-およびラフト-媒介取り込み、またはクラスリンに依存しない構成的エンドサイトーシスなどによって内在化される。いくつかの態様において、内在化する細胞表面受容体は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、および/または(例として、および)、細胞外ドメインを含み、これらは任意にさらにリガンド結合ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、リガンド結合後に細胞によって内在化されるようになる。いくつかの態様において、リガンドは、筋標的化剤または筋標的化抗体であってもよい。いくつかの態様において、内在化する細胞表面受容体は、トランスフェリン受容体である。
単離された抗体:
「単離された抗体」は、本明細書に使用されるとき、異なる抗原特異性を有する他の抗体が実質的にない抗体を指すことが意図される(例として、トランスフェリン受容体に特異的に結合する単離された抗体は、トランスフェリン受容体以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にない)。しかしながら、トランスフェリン受容体複合体に特異的に結合する単離された抗体は、他の種からのトランスフェリン受容体分子などの他の抗原への交差反応性を有していてもよい。その上、単離された抗体は、他の細胞の材料および/または(例として、および)化学物質が実質的になくてもよい。
Kabatナンバリング:
用語「Kabatナンバリング」、「Kabat定義」、および「Kabat標識化」は本明細書中、互換的に使用される。これらの用語は、当該技術分野において認識されているが、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基より可変(すなわち、高可変)であるアミノ酸残基をナンバリングする系を指す(Kabat et al.(1971)Ann.NY Acad,Sci.190:382-391および、Kabat,E.A.,et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。重鎖可変領域において、超可変領域は、CDR1につきアミノ酸位置31～35、CDR2につきアミノ酸位置50～65、およびCDR3につきアミノ酸位置95～102に及ぶ。軽鎖可変領域において、超可変領域は、CDR1につきアミノ酸位置24～34、CDR2につきアミノ酸位置50～56、およびCDR3につきアミノ酸位置89～97に及ぶ。
分子ペイロード:
本明細書に使用されるとき、用語「分子ペイロード」は、生物学的結果(biological outcome)をモジュレートするよう機能する分子または種を指す。いくつかの態様において、分子ペイロードは、筋標的化剤へ連結されているか、または筋標的化剤へ別様に結び付けられている。いくつかの態様において、分子ペイロードは、小分子、タンパク質、ペプチド、核酸、またはオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DNA配列の転写をモジュレートするよう、タンパク質の発現をモジュレートするよう、またはタンパク質の活性をモジュレートするよう機能する。いくつかの態様において、分子ペイロードは、標的遺伝子と相補性のある領域を有する鎖を含むオリゴヌクレオチドである。
筋標的化剤:
本明細書に使用されるとき、用語「筋標的化剤」は、筋細胞上に発現されている抗原へ特異的に結合する分子を指す。筋細胞中または筋細胞上の抗原は、膜タンパク質、例えば、内在性膜タンパク質または表在性膜タンパク質であってもよい。典型的には、筋標的化剤は、筋細胞中への筋標的化剤(および結び付けられたいずれの分子ペイロード)の内在化を容易にさせる筋細胞上の抗原へ特異的に結合する。いくつかの態様において、筋標的化剤は、筋肉上の内在化する細胞表面受容体へ特異的に結合し、受容体媒介内在化を通して筋細胞中へ内在化されることが可能である。いくつかの態様において、筋標的化剤は、小分子、タンパク質、ペプチド、核酸(例として、アプタマー)、または抗体である。いくつかの態様において、筋標的化剤は、分子ペイロードへ連結されている。
筋標的化抗体:
本明細書に使用されるとき、用語「筋標的化抗体」は、筋細胞中または筋細胞上に見出される抗原へ特異的に結合する抗体である筋標的化剤を指す。いくつかの態様において、筋標的化抗体は、筋細胞中への筋標的化抗体(および結び付けられたいずれの分子ペイロード)の内在化を容易にする筋細胞上の抗原へ特異的に結合する。いくつかの態様において、筋標的化抗体は、筋細胞上に存在する、内在化する細胞表面受容体へ特異的に結合する。いくつかの態様において、筋標的化抗体は、トランスフェリン受容体へ特異的に結合する抗体である。
筋強直性ジストロフィー(DM):
本明細書で使用されるとき、用語「筋強直性ジストロフィー(DM)」は、筋肉の喪失、筋肉の衰弱、筋肉の機能に特徴付けられるDMPK遺伝子またはCNBP(ZNF9)遺伝子の突然変異によって引き起こされる遺伝性疾患を指す。筋緊張性ジストロフィー1型(DM1)および筋緊張性ジストロフィー2型(DM2)の2種類の疾患が報告されている。DM1は、DMPKの3'非コード領域のCTGトリヌクレオチド反復の拡張に関連している。DM2は、ZNF9の最初のイントロンにあるCCTGテトラヌクレオチド反復の拡張に関連している。DM1およびDM2の両者において、ヌクレオチド拡張は、重要な細胞内タンパク質、例として、muscleblind様タンパク質に高い親和性で結合するヘアピン構造を形成することができる有毒なRNA反復に繋がる。筋強直性ジストロフィー、疾患の遺伝的根拠、および関連する症状は、当技術分野で報告されている(例として、Thornton, C.A., “Myotonic Dystrophy” Neurol Clin. (2014), 32(3): 705-719.;およびKonieczny et al. “Myotonic dystrophy: candidate small molecule therapeutics” Drug Discovery Today (2017), 22:11を参照)。いくつかの態様において、対象は、先天性筋強直性ジストロフィーと呼ばれるDM1のバリエーションを持って生まれる。先天性筋強直性ジストロフィーの症状は、出生時から存在し、すべての筋肉の衰弱、呼吸障害、内反足、発達遅滞、および知的障害を含む。DM1は、Online Mendelian Inheritance in Man (OMIM)エントリ#160900に関連付けられる。DM2は、OMIMエントリ#602668に関連付けられる。
オリゴヌクレオチド:
本明細書に使用されるとき、用語「オリゴヌクレオチド」は、長さが最大200ヌクレオチドまでのオリゴマーの核酸化合物を指す。オリゴヌクレオチドの例は、これらに限定されないが、RNAiオリゴヌクレオチド(例として、siRNA、shRNA)、マイクロRNA、gapmer、mixmer、ホスホロジアミダイトモルホリノ、ペプチド核酸、アプタマー、ガイド核酸(例として、Cas9ガイドRNA)等々を包含する。オリゴヌクレオチドは一本鎖または二本鎖であってもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、1個以上の修飾ヌクレオチド(例として、2'-O-メチル糖修飾、プリンまたはピリミジン修飾)を含んでいてもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、1個以上の修飾ヌクレオチド間連結を含んでいてもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、RpまたはSpの立体化学配置にあってもよい1個以上のホスホロチオアート連結を含んでいてもよい。
組換え抗体:
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書に使用されるとき、組換え手段によって調製、発現、創出、もしくは単離されたすべてのヒト抗体、たとえば、宿主細胞中へトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体(本開示により詳細に記載される)、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体(Hoogenboom H.R.,(1997)TIB Tech.15:62-70;Azzazy H.,and Highsmith W.E.,(2002)Clin.Biochem.35:425-445;Gavilondo J.V.,and Larrick J.W.(2002)BioTechniques 29:128-145;Hoogenboom H.,and Chames P.(2000)Immunology Today 21:371-378)、ヒト免疫グロブリン遺伝子トランスジェニック動物(例として、マウス)から単離された抗体(例として、Taylor,L.D.,et al.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295;Kellermann S-A.,and Green L.L.(2002)Current Opinion in Biotechnology 13:593-597;Little M.et al(2000)Immunology Today 21:364-370を参照)、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のDNA配列とのスプライシングを伴ういずれの他の手段によって調製、発現、創出、もしくは単離された抗体を包含することが意図される。かかる組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある態様において、かかる組換えヒト抗体は、in vitroでの変異誘発(または、ヒトIg配列トランスジェニック動物が使用されるとき、in vivoでの体細胞変異誘発)へ供され、よって、組換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系のVH配列およびVL配列に由来しかつこれに関するとはいえ、in vivoでのヒト抗体の生殖細胞系列レパートリー内には天然に存在しないこともある配列である。本開示の一態様は、当該技術分野において周知である技法を使用して、たとえば、これらに限定されないが、ヒトIgファージライブラリ(たとえば、JermutusらのPCT刊行物第WO 2005/007699 A2号に開示されたもの)を使用する技法を使用して生成され得るヒトトランスフェリン受容体に結合することが可能な完全ヒト抗体を提供する。
相補性のある領域:
本明細書に使用されるとき、用語「相補性のある領域」は、2つのヌクレオチド配列が生理学的な条件下(例として、細胞中)相互にアニーリングすることが可能であるような、同族の(cognate)ヌクレオチド配列(例として、標的核酸のヌクレオチド配列)に充分に相補的であるヌクレオチド配列(例として、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列)を指す。いくつかの態様において、相補性のある領域は、標的核酸の同族のヌクレオチド配列に完全に相補的である。しかしながら、いくつかの態様において、相補性のある領域は、標的核酸の同族のヌクレオチド配列に部分的に相補的(例として、少なくとも80％、90％、95％、または99％相補性)である。いくつかの態様において、相補性のある領域は、標的核酸の同族のヌクレオチド配列と比較して1個、2個、3個、または4個のミスマッチを含有する。
特異的に結合する:
本明細書に使用されるとき、用語「特異的に結合する」は、結合アッセイまたは他の結合に関する文脈(binding context)において、分子が、適切な対照から結合パートナーを区別するために使用され得る親和性または結合活性の程度での、分子の、結合パートナーへの結合能を指す。抗体に関し、用語「特異的に結合する」は、親和性または結合活性の程度で(例として、本明細書に記載のとおり、抗原への結合を通してある細胞(例として、筋細胞)への優先的な標的化を許容する程度で)、適切な参照抗原、または抗体が他の抗原から特定の抗原を区別するために使用され得る抗原と比較して、抗体が特定の抗原へ結合する能力を指す。いくつかの態様において、抗体が標的へ結合する際少なくとも約10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、またはこれ未満のKDを有する場合、抗体は標的へ特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体が、トランスフェリン受容体、例として、トランスフェリン受容体の先端ドメインのエピトープへ特異的に結合する。
対象:
本明細書に使用されるとき、用語「対象」は、哺乳動物を指す。いくつかの態様において、対象は、霊長目の非ヒト動物または齧歯類動物である。いくつかの態様において、対象は、ヒトである。いくつかの態様において、対象は、疾患を有するかまたは疾患を有すると疑われる患者/患畜(patient)、例として、ヒト患者である。いくつかの態様において、対象は、疾患関連反復拡張、例としてDMPKアレルに起因する疾患を有するかまたはこれを有すると疑われるヒト患者である。
トランスフェリン受容体:
本明細書に使用されるとき、用語「トランスフェリン受容体」(またTFRC、CD71、p90、TFR、またはTFR1としても知られている)は、エンドサイトーシスによる鉄取り込みを容易にするためのトランスフェリンへ結合する、内在化する細胞表面受容体を指す。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体は、ヒト(NCBI Gene ID 7037)、霊長目の非ヒト動物(例として、NCBI Gene ID 711568もしくはNCBI Gene ID 102136007)、または齧歯類の動物(例として、NCBI Gene ID 22042)を起源としていてもよい。加えて、受容体の種々のアイソフォームをコードした複数のヒト転写産物バリアントが(例として、GenBank RefSeq受託番号:NP_001121620.1、NP_003225.2、NP_001300894.1、およびNP_001300895.1の注釈付きのものであるように)特徴付けられている。
2'修飾ヌクレオシド:本明細書に使用されるとき、用語「2'修飾ヌクレオシド」および「2'修飾リボヌクレオシド」は互換的に使用され、2'位にて修飾された糖部分を有するヌクレオシドを指す。いくつかの態様において、2'修飾ヌクレオシドは、2'-4'二環式ヌクレオシドであり、ここで糖の2'および4'位は架橋されている(例として、メチレン、エチレン、または(S)-拘束エチル架橋による)。いくつかの態様において、2'修飾ヌクレオシドは非二環式2'修飾ヌクレオシドであり、例えばここで糖部分の2'位は置換されている。2'修飾ヌクレオシドの非限定例は、以下:2'デオキシ、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、2'-O-アミノプロピル(2'-O-AP)、2'-O-ジメチルアミノエチル(2'-O-DMAOE)、2'-O-ジメチルアミノプロピル(2'-O-DMAP)、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル(2'-O-DMAEOE)、2'-O-N-メチルアセトアミド(2'-O-NMA)、ロックド核酸(LNA、メチレン架橋核酸)、エチレン架橋核酸(ENA)、および(S)-拘束エチル架橋核酸(cEt)を包含する。いくつかの態様において、本明細書に記載の2'修飾ヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオチドであり、2'修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、未修飾のオリゴヌクレオチドと比べて標的配列に対する増大した親和性を有する。2'修飾ヌクレオシドの構造の例は、下に提供される:
Figure 2023509793000002
II. 複合体
本明細書に提供されるのは、標的化剤、例として、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗体を含む複合体である。いくつかの態様において、複合体は、オリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結された筋標的化抗体を含む。複合体は、単一の抗原部位に特異的に結合する抗体、または同じ抗原上もしくは異なる抗原上に存在していてもよい少なくとも2つの抗原部位へ結合する抗体を含んでいてもよい。
複合体は、少なくとも1つの遺伝子、タンパク質、および/または(例として、および)、核酸の活性あるいは機能をモジュレートするために使用されてもよい。いくつかの態様において、複合体とともに存在する分子ペイロードは、遺伝子、タンパク質、および/または(例として、および)、核酸のモジュレーションを担う。分子ペイロードは、細胞中の遺伝子、タンパク質、および/または(例として、および)、核酸の活性あるいは機能をモジュレートすることが可能な、小分子、タンパク質、核酸、オリゴヌクレオチド、あるいはいずれの分子実体であってもよい。いくつかの態様において、分子ペイロードは、筋細胞における疾患関連反復を標的にするオリゴヌクレオチドである。
いくつかの態様において、複合体は、分子ペイロード、例として、疾患関連反復、例としてDMPKアレルを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結された、筋標的化剤、例として、抗トランスフェリン受容体抗体を含む。
Ａ．筋標的化剤
本開示のいくつかの側面は、筋標的化剤、例として、分子ペイロードを筋細胞へ送達するための筋標的化剤を提供する。いくつかの態様において、かかる筋標的化剤は、例として、筋細胞上の抗原への特異的な結合を介して、筋細胞へ結合すること、および結び付けられた分子ペイロードを筋細胞へ送達することが可能である。いくつかの態様において、分子ペイロードは、筋標的化剤へ結合されて(例として、共有結合的に結合されて)おり、筋標的化剤が筋細胞上の抗原へ結合した際、例としてエンドサイトーシスを介して、筋細胞中へ内在化される。様々なタイプの筋標的化剤が本開示に従い使用されてもよいことは解されるはずである。例えば、筋標的化剤は、核酸(例として、DNAまたはRNA)、ペプチド(例として、抗体)、脂質(例として、マイクロベシクル)、または糖部(例として、多糖類)を含んでいてもよく、またはこれらからなっていてもよい。例示の筋標的化剤は本明細書中さらに詳細に記載されているが、しかしながら、本明細書に提供される例示の筋標的化剤が限定されることを意図していないことは解されるはずである。
本開示のいくつかの側面は、骨格筋、平滑筋、または心筋などの筋肉上の抗原へ特異的に結合する筋標的化剤を提供する。いくつかの態様において、本明細書に提供される筋標的化剤のいずれも、骨格筋細胞、平滑筋細胞、および/または(例として、および)、心筋細胞上の抗原へ結合する(例として、特異的に結合する)。
筋肉特異的細胞表面認識要素(例として、細胞膜タンパク質)との相互作用によって、組織局在化と筋細胞への選択的取り込みとの両方が達成され得る。いくつかの態様において、筋肉の取り込みトランスポーターの基質である分子は、分子ペイロードを筋組織中へ送達するのに有用である。筋肉表面認識要素への結合、これに続くエンドサイトーシスは、抗体などの巨大分子さえも筋細胞へ侵入できるようにし得る。別の例として、トランスフェリンまたは抗トランスフェリン受容体抗体へ抱合された分子ペイロードは、トランスフェリン受容体への結合を介し筋細胞によって取り入れられ得、次いで、例としてクラスリン媒介エンドサイトーシスを介し、形質膜陥入され(endocytosed)てもよい。
筋標的化剤の使用は、他の組織において効果に関連する毒性を低減しつつ、筋肉中の分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)を濃縮するのに有用なこともある。いくつかの態様において、筋標的化剤は、対象内の別の細胞型と比較して、筋細胞中の結合された分子ペイロードを濃縮させる。いくつかの態様において、筋標的化剤は、筋細胞(例として、骨格筋細胞、平滑筋細胞、または心筋細胞)中の結合された分子ペイロードを、非筋細胞(例として、肝臓細胞、神経細胞、血液細胞、または脂肪細胞)中の量より少なくとも1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、または100倍多い量で濃縮する。いくつかの態様において、筋標的化剤へ結合された場合の分子ペイロードの対象における毒性は、これが対象へ送達されたとき、少なくとも1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、90％、または95％低減される。
いくつかの態様において、筋肉選択性を獲得するために、筋肉認識要素(例として、筋細胞抗原)が要されることもある。一例として、筋標的化剤は、筋肉特異的取り込みトランスポーターの基質である小分子であってもよい。別の例として、筋標的化剤は、トランスポーター媒介エンドサイトーシスを介して筋細胞へ侵入する抗体であってもよい。別の例として、筋標的化剤は、筋細胞上の細胞表面受容体へ結合するリガンドであってもよい。トランスポーターをベースとしたアプローチが細胞侵入への直通路を提供するのに対し、受容体をベースとした標的化が所望の作用部位に達するために刺激されたエンドサイトーシスを伴うこともあることは解されるはずである。
i. 筋標的抗体
いくつかの態様において、筋標的化剤は、抗体である。一般に、それらの標的抗原に対する抗体の高い特異性は、筋細胞(例として、骨格筋細胞、平滑筋細胞、および/または(例として、および)、心筋細胞)を選択的に標的にする潜在力を提供する。この特異性はまた、オフターゲット毒性(off-target toxicity)を限定することもある。筋細胞の表面抗原を標的にすることが可能である抗体の例は報告されており、かつ本開示の範囲内にある。例えば、筋細胞の表面を標的にする抗体は、Arahata K.,et al.“Immunostaining of skeletal and cardiac muscle surface membrane with antibody against Duchenne muscular dystrophy peptide”Nature 1988;333:861-3;Song K.S.,et al.“Expression of caveolin-3 in skeletal,cardiac,and smooth muscle cells.Caveolin-3 is a component of the sarcolemma and co-fractionates with dystrophin and dystrophin-associated glycoproteins”J Biol Chem 1996;271:15160-5;およびWeisbart R.H.et al.,“Cell type specific targeted intracellular delivery into muscle of a monoclonal antibody that binds myosin IIb”Mol Immunol.2003 Mar,39(13):78309に記載されている;これら各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
a. 抗トランスフェリン受容体抗体
本開示のいくつかの側面は、トランスフェリン受容体、例として抗トランスフェリン受容体抗体へ結合する剤は筋細胞を標的にすることが可能であるという認識に基づく。トランスフェリン受容体は、細胞膜を越えてトランスフェリンを輸送し細胞内鉄レベルの調節およびホメオスタシスに加わる内在化する細胞表面受容体である。本開示のいくつかの側面は、トランスフェリン受容体へ結合することが可能なトランスフェリン受容体結合タンパク質を提供する。結果的に、本開示の側面は、トランスフェリン受容体へ結合する結合タンパク質(例として、抗体)を提供する。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体へ結合する結合タンパク質は、結合されたいずれの分子ペイロードと共に、筋細胞中へ内在化される。本明細書に使用されるとき、トランスフェリン受容体へ結合する抗体は、トランスフェリン受容体抗体、抗トランスフェリン受容体抗体、または抗TfR抗体と互換的に称されることもある。トランスフェリン受容体へ結合する、例として特異的に結合する抗体は、トランスフェリン受容体へ結合した際、例として受容体媒介エンドサイトーシスを通して、細胞中へ内在化されてもよい。
抗トランスフェリン受容体抗体が、知られている数種の方法論、例としてファージディスプレーを使用するライブラリ設計を使用して、産生、合成、および/または(例として、および)、誘導体化されてもよいことは解されるはずである。例示の方法論は当該技術分野において特徴付けられており、参照により組み込まれる(Diez,P.et al.“High-throughput phage-display screening in array format”,Enzyme and microbial technology,2015,79,34-41.;Christoph M.H.and Stanley,J.R.“Antibody Phage Display:Technique and Applications”J Invest Dermatol.2014,134:2.;Engleman,Edgar(Ed.)“Human Hybridomas and Monoclonal Antibodies.”1985,Springer)。他の態様において、抗トランスフェリン受容体抗体はこれまでに特徴付けられているかまたは開示されている。トランスフェリン受容体へ特異的に結合する抗体は当該技術分野において知られている(例として、米国特許第4,364,934号、12/4/1979出願、“Monoclonal antibody to a human early thymocyte antigen and methods for preparing same”;米国特許第8,409,573号、6/14/2006出願、“Anti-CD71 monoclonal antibodies and uses thereof for treating malignant tumor cells”;米国特許第9,708,406号、5/20/2014出願、“Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use”;米国特許第9,611,323号、12/19/2014出願、“Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor”;WO 2015/098989、12/24/2014出願、“Novel anti-Transferrin receptor antibody that passes through blood-brain barrier”;Schneider C.et al.“Structural features of the cell surface receptor for transferrin that is recognized by the monoclonal antibody OKT9.”J Biol Chem.1982,257:14,8516-8522.;Lee et al.“Targeting Rat Anti-Mouse Transferrin Receptor Monoclonal Antibodies through Blood-Brain Barrier in Mouse”2000,J Pharmacol.Exp.Ther.,292:1048-1052を参照)。
本明細書に提供されるは、いくつかの側面において、筋標的化剤としての(例として、筋標的化複合体への)使用のための新しい抗TfR抗体である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、高い特異性および親和性でトランスフェリン受容体に結合する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、トランスフェリン受容体のいずれかの細胞外エピトープまたは抗体に対して暴露されるようになるエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様において、本明細書に提供される抗TfR抗体はヒト、霊長目の非ヒト動物、マウス、ラットなどからのトランスフェリン受容体に特異的に結合する。いくつかの態様において、本明細書に提供される抗TfR抗体はヒトトランスフェリン受容体に結合する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号242～245で提供されるヒトまたは霊長目の非ヒト動物トランスフェリン受容体のアミノ酸セグメントに結合する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、トランスフェリン受容体の頂点ドメインにはない、配列番号242で表されるとおりのヒトトランスフェリン受容体のアミノ酸90～96に対応するアミノ酸セグメントに結合する。
いくつかの態様において、抗TFR抗体は、少なくとも約10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、またはより小さい結合親和性(例として、Kdによって指し示される)によってTfR1(例として、ヒトまたは霊長目の非ヒト動物TfR1)に特異的に結合する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体はサブナノモル範囲のKDによってTfR1に結合する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体はトランスフェリン受容体1(TfR1)に選択的に結合するが、トランスフェリン受容体2(TfR2)には結合しない。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体はヒトTfR1およびカニクイTfR1に結合するが(例として、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、またはより小さいKdによる)、マウスTfR1には結合しない。抗TfR抗体の親和性および結合動態は、バイオセンサ技術(例として、OCTETまたはBIACORE)を包含するがこれらに限定されないいずれか好適な方法を使用して試験され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つの結合は、TfR1へのトランスフェリン結合と競合も阻害もしない。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つの結合は、TfR1に対するHFE-ベータ2-ミクログロブリン結合と競合も阻害もしない。
NCBI配列NP_003225.2(トランスフェリン受容体タンパク質1アイソフォーム1、homo sapiens)に対応する、ヒトトランスフェリン受容体アミノ酸配列の例は、以下のとおりである:
MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLAVDEEENADNNTKANVTKPKRCSGSICYGTIAVIVFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPVREEPGEDFPAARRLYWDDLKRKLSEKLDSTDFTGTIKLLNENSYVPREAGSQKDENLALYVENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKEIKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSGVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQNVKHPVTGQFLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELIERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDVELNLDYERYNSQLLSFVRDLNQYRADIKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFGNAEKTDRFVMKKLNDRVMRVEYHFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLPALLENLKLRKQNNGAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF(配列番号242)。
NCBI配列NP_001244232.1(トランスフェリン受容体タンパク質1、Macaca mulatta)に対応する、霊長目の非ヒト動物トランスフェリン受容体アミノ酸配列の例は、以下のとおりである:
MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLGVDEEENTDNNTKPNGTKPKRCGGNICYGTIAVIIFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPAREEPEEDFPAAPRLYWDDLKRKLSEKLDTTDFTSTIKLLNENLYVPREAGSQKDENLALYIENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGGLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLDSPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVKADLSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSQSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCKMVTSENKSVKLTVSNVLKETKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSSVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQDVKHPVTGRSLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELVERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDTELNLDYERYNSQLLLFLRDLNQYRADVKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFRNAEKRDKFVMKKLNDRVMRVEYYFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLSALLESLKLRRQNNSAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF(配列番号243)
NCBI配列XP_005545315.1(トランスフェリン受容体タンパク質1、Macaca fascicularis)に対応する、霊長目の非ヒト動物トランスフェリン受容体アミノ酸配列の例は、以下のとおりである:
MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLGVDEEENTDNNTKANGTKPKRCGGNICYGTIAVIIFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPAREEPEEDFPAAPRLYWDDLKRKLSEKLDTTDFTSTIKLLNENLYVPREAGSQKDENLALYIENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGGLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLDSPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVKADLSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSQSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCKMVTSENKSVKLTVSNVLKETKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSSVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQDVKHPVTGRSLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELVERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDTELNLDYERYNSQLLLFLRDLNQYRADVKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFRNAEKRDKFVMKKLNDRVMRVEYYFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLSALLESLKLRRQNNSAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF(配列番号244)。
NCBI配列NP_001344227.1(トランスフェリン受容体タンパク質1、mus musculus)に対応する、マウストランスフェリン受容体アミノ酸配列の例は、以下のとおりである:
MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLAADEEENADNNMKASVRKPKRFNGRLCFAAIALVIFFLIGFMSGYLGYCKRVEQKEECVKLAETEETDKSETMETEDVPTSSRLYWADLKTLLSEKLNSIEFADTIKQLSQNTYTPREAGSQKDESLAYYIENQFHEFKFSKVWRDEHYVKIQVKSSIGQNMVTIVQSNGNLDPVESPEGYVAFSKPTEVSGKLVHANFGTKKDFEELSYSVNGSLVIVRAGEITFAEKVANAQSFNAIGVLIYMDKNKFPVVEADLALFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSQSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGKMEGSCPARWNIDSSCKLELSQNQNVKLIVKNVLKERRILNIFGVIKGYEEPDRYVVVGAQRDALGAGVAAKSSVGTGLLLKLAQVFSDMISKDGFRPSRSIIFASWTAGDFGAVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKVVLGTSNFKVSASPLLYTLMGKIMQDVKHPVDGKSLYRDSNWISKVEKLSFDNAAYPFLAYSGIPAVSFCFCEDADYPYLGTRLDTYEALTQKVPQLNQMVRTAAEVAGQLIIKLTHDVELNLDYEMYNSKLLSFMKDLNQFKTDIRDMGLSLQWLYSARGDYFRATSRLTTDFHNAEKTNRFVMREINDRIMKVEYHFLSPYVSPRESPFRHIFWGSGSHTLSALVENLKLRQKNITAFNETLFRNQLALATWTIQGVANALSGDIWNIDNEF
(配列番号245)
いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、以下のとおりの受容体のアミノ酸セグメント:
FVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKE(配列番号730)へ結合し、トランスフェリン受容体とトランスフェリンおよび/または(例として、および)ヒトヘモクロマトーシスタンパク質(またHFEとしても知られている)との間の結合相互作用を阻害しない。いくつかの態様において、抗本明細書に記載のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号730のエピトープには結合しない。
適切な方法論は、例として、組換えDNAプロトコルの使用を通じて、抗体、抗体フラグメント、もしくは抗原結合剤を得るか、および/または(例として、および)、産生するために使用されてもよい。いくつかの態様において、抗体はまた、ハイブリドーマの生成を通しても産生されてよい(例として、Kohler, G and Milstein,C.“Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity”Nature,1975,256:495-497を参照)。関心のある抗原は、いずれの型または実体の、例として、組換え型もしくは天然に存在する型または実体の免疫原として使用されてもよい。ハイブリドーマは、標準的な方法、例としてELISAスクリーニングを使用してスクリーニングされることで、具体的な抗原を標的にする抗体を産生する少なくとも1個のハイブリドーマが見出される。抗体はまた、抗体を発現するタンパク質発現ライブラリ(例として、ファージディスプレーライブラリ)のスクリーニングを通しても産生されてよい。ファージディスプレーライブラリ設計はまた、いくつかの態様において使用されてもよい(例として、米国特許第5,223,409号、3/1/1991出願、“Directed evolution of novel binding proteins”;WO 1992/18619、4/10/1992出願、“Heterodimeric receptor libraries using phagemids”;WO 1991/17271、5/1/1991出願、“Recombinant library screening methods”;WO 1992/20791、5/15/1992出願、“Methods for producing members of specific binding pairs”;およびWO 1992/15679、2/28/1992出願、“Improved epitope displaying phage”を参照)。いくつかの態様において、関心のある抗原は、非ヒト動物、例として、齧歯類の動物またはヤギを免疫するために使用されてもよい。いくつかの態様において、次いで抗体が非ヒト動物から得られたら、任意に数多の方法論を使用し、例として組換えDNA技法を使用し、修飾してもよい。抗体産生および方法論の追加の例も当該技術分野において知られている(例として、Harlow et al.“Antibodies:A Laboratory Manual”,Cold Spring Harbor Laboratory,1988を参照)。
いくつかの態様において、抗体は修飾されている(例として、グリコシル化、リン酸化、SUMO化、および/または(例として、および)、メチル化を介して修飾されている)。いくつかの態様において、抗体は、1個以上の糖または炭水化物分子へ抱合されたグリコシル化抗体である。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、N-グリコシル化、O-グリコシル化、C-グリコシル化、グリピエーション(GPIアンカー付着)、および/または(例として、および)、ホスホグリコシル化を介して、抗体へ抱合されている。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、またはグリカンである。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、分枝オリゴ糖類または分枝グリカンである。いくつかの態様において、1個以上の糖または炭水化物分子は、マンノース単位、グルコース単位、N-アセチルグルコサミン単位、N-アセチルガラクトサミン単位、ガラクトース単位、フコース単位、またはホスホ脂質単位を包含する。いくつかの態様において、糖分子は、約1～10個、約1～5個、約5～10個、約1～4個、約1～3個、または約2個存在する。いくつかの態様において、グリコシル化抗体は、全体的にまたは部分的にグリコシル化されている。いくつかの態様において、抗体は、化学反応によって、または酵素的な手段によってグリコシル化されている。いくつかの態様において、抗体は、in vitroでまたは細胞(任意にN-またはO-グリコシル化経路中の酵素(例として、グリコシルトランスフェラーゼ)を欠乏していてもよい)内部でグリコシル化される。いくつかの態様において、抗体は、“Modified antibody, antibody-conjugate and process for the preparation thereof”と題する2014年5月1日に公開された国際特許出願刊行物WO2014065661に記載のとおりの糖または炭水化物分子で官能化されている。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つのVLドメインおよび/または(例として、および)VHドメインを含み、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、またはIgY免疫グロブリン分子、いずれかのクラス(例として、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)、またはいずれかのサブクラス(例として、IgG2aおよびIgG2b)の免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ヒト定常領域の非限定例は当該技術分野において記載されている。例として、Kabat E A et al.,(1991)上記を参照。
例の抗TfR抗体の重鎖および軽鎖可変ドメインならびにCDR配列が表2に提供される。
表2．抗TfR1抗体の例(CDRはIMGT(登録商標)定義に従う)
Figure 2023509793000003
Figure 2023509793000004
Figure 2023509793000005
Figure 2023509793000006
Figure 2023509793000007
Figure 2023509793000008
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つからのCDR-H(例として、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3)アミノ酸配列の1つ以上を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗体のいずれか1つについて提供されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つからのCDR-L(例として、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3)アミノ酸配列の1つ以上を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つについて提供されるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つに提供されるとおり、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体重鎖および軽鎖CDR3ドメインは、抗体の抗原への結合特異性/親和性において具体的に重要な役割を果たすこともある。結果的に、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つの少なくとも重鎖および/または(例として、および)軽鎖CDR3を包含していてもよい。
いくつかの例において、本開示の抗TfR抗体のいずれも、表2から選択される抗TfR抗体のうち1つからのCDR-H1配列、CDR-H2配列、CDR-H3配列、CDR-L1配列、CDR-L2配列、および/または(例として、および)、CDR-L3配列のいずれかと実質的に同様の1以上のCDR(例として、CDR-HまたはCDR-L)配列を有する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体のVH(例として、CDR-H1、CDR-H2、もしくはCDR-H3)領域、および/またはVL(例として、CDR-L1、CDR-L2、もしくはCDR-L3)領域に沿う1以上のCDRの位置は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つのアミノ酸位置によって変動し得る。例えば、いくつかの態様において、本明細書に記載のいずれの抗体のCDRを定義する位置は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、CDRのN末および/または(例として、および)C末の境界をシフトすることによって、本明細書に記載の抗体のいずれか1つのCDR位置と比べ1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つのアミノ酸位置によって変動し得る。別の態様において、本明細書に記載の抗体のVH(例として、CDR-H1、CDR-H2、もしくはCDR-H3)領域、および/または(例として、および)、VL(例として、CDR-L1、CDR-L2、もしくはCDR-L3)領域に沿う1以上のCDRの長さは、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸によって変動し(例として、より短くまたはより長くなり)得る。
結果的に、いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)、CDR-H3は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)の1以上より、1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸の差で短くてもよい。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)、CDR-H3は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)の1以上より、1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸の差で短くてもよい。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)、CDR-H3のアミノ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)の1以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸の差で伸長され得る。CDR-H2および/またはCDR-H3のカルボキシ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)の1以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸の差で伸長され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)、CDR-H3のアミノ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)の1以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸の差で短縮され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)、CDR-H3のカルボキシ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)の1以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸の差で短縮され得る。いずれの方法も使用されて、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が、例えば、結合アッセイおよび当該技術分野において記載されている条件を使用して、維持されるかどうかが解明され得る。
いくつかの例において、本開示の抗TfR抗体のいずれも、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つと実質的に同様の1以上のCDR(例として、CDR-HまたはCDR-L)配列を有する。例えば、抗体は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)への免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される、例えば、それが由来する元の抗体の結合に対して少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％維持される)限り、本明細書に提供されるCDR(例として、表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからのCDR)のいずれか1つにおいて対応するCDR領域と比較して、最大5、4、3、2、または1アミノ酸残基バリエーションまでを含有する表2から選択される抗TfR抗体のいずれかからの1以上のCDR配列(単数または複数)を包含していてもよい。いくつかの態様において、本明細書に提供されるCDRのいずれかにおけるアミノ酸バリエーションのいずれも、保存的なバリエーションであってもよい。保存的なバリエーションは、その残基が、例えば結晶構造に基づき決定されるとおりの、トランスフェリン受容体タンパク質(例として、ヒトトランスフェリン受容体タンパク質)との相互作用に関与しなさそうな位置にて、CDR中へ導入され得る。本開示のいくつかの側面は、本明細書に提供される重鎖可変(VH)ドメイン、および/または(例として、および)、軽鎖可変(VL)ドメインの1以上を含む抗TfR抗体を提供する。いくつかの態様において、本明細書に提供されるVHドメインのいずれも、本明細書に提供されるCDR-H配列(例として、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3)の(例えば、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つにおいて提供されるCDR-H配列のいずれか)1以上を包含する。いくつかの態様において、本明細書に提供されるVLドメインのいずれも、本明細書に提供されるCDR-L配列(例として、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3)の(例えば、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つにおいて提供されるCDR-L配列のいずれか)1以上を包含する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つの重鎖可変ドメインおよび/または(例として、および)軽鎖可変ドメイン、ならびにそれらのバリアントも包含するいずれの抗体も包含する。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つの重鎖可変および軽鎖可変の対も包含するいずれの抗体も包含する。
本開示の側面は、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれかと相同の重鎖可変(VH)ドメインアミノ酸配列、および/または(例として、および)、軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列を有する抗TfR抗体を提供する。いくつかの態様において、抗TfR抗体は、表2から選択される抗TfR抗体のいずれか1つなどのいずれの抗TfR抗体の重鎖可変配列および/または(例として、および)いずれの軽鎖可変配列と少なくとも75％(例として、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一の重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含む。いくつかの態様において、相同の重鎖可変および/または軽鎖可変アミノ酸配列は、本明細書に提供されるCDR配列のいずれかの範囲内での変動はない。例えば、いくつかの態様において、配列バリエーションの程度(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)は、本明細書に提供されるCDR配列のいずれも除外する重鎖可変配列および/または(例として、および)軽鎖可変配列の範囲内で生じてもよい。いくつかの態様において、本明細書に提供される抗TfR抗体のいずれも、表2から選択される抗TfR抗体のいずれの抗TfR抗体のフレームワーク配列と少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％同一のフレームワーク配列を含む重鎖可変配列および軽鎖可変配列を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号8のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号2のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1;位置5にてアミノ酸置換をもつ配列番号2のアミノ酸配列を有するCDR-H2(例として、位置5でのアスパラギンが、例として、Arg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、His(H)、Ser(S)、Thr(T)、Tyr(Y)、Cys(C)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Ile(I)、Leu(L)、Phe(F)、Val(V)、Pro(P)、Gly(G)のいずれか1つによって置換されている);および配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1;配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2;および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3を含む。いくつかの態様において、配列番号2で表されるとおりのCDR-H2の位置5でのアミノ酸置換は、N5TまたはN5Sである。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1;配列番号731または配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2;および配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1;配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2;および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号2、配列番号731、または配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較したとき、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。「合わせて」は、本開示のどこにでも使用されたとき、3つの重鎖CDRすべてにおけるアミノ酸バリエーションの総数が、定義された範囲内にあることを意味する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR受容体抗体は、配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較したとき、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2または1アミノ酸バリエーション)を含有するCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号2、配列番号731、または配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号2、配列番号731、または配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/あるいは(例として、および)配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号8のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7で表されるとおりのVHと比較したとき、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号8で表されるとおりのVLと比較したとき、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号8で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7で表されるとおりのVHを含み、位置55にてアミノ酸置換をもつ(例として、位置55でのアスパラギンが、例として、Arg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、His(H)、Ser(S)、Thr(T)、Tyr(Y)、Cys(C)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Ile(I)、Leu(L)、Phe(F)、Val(V)、Pro(P)、Gly(G)のいずれか1つによって置換される)。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号8で表されるとおりのVLを含む。いくつかの態様において、配列番号7で表されるとおりのVHの位置55でのアミノ酸置換は、N55TまたはN55Sである。配列番号7で表されるとおりのVHがKabat付番系を使用してアノテートされるとき、配列番号7のアミノ酸位置55は、番号54を割り当てられる。N54TまたはN54Sが本明細書に言及されるとき、それはKabat付番系を使用する突然変異を指している。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7と比べて位置64にてアミノ酸置換を含むVHを含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号7の位置64に対応する位置にてMetを含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号8で表されるとおりのVLと少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、98％、99％、または100％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号15のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号16のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号9のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号10のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号11のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号12のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号9のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号10のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号11のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号12のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号9のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号10のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号11のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号12のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号9のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号10のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号11のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号12のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号15のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号16のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号15で表されるとおりのVHと比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号16で表されるとおりのVLと比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号15で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号16で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号23のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号24のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号17のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:位置8にアミノ酸置換を有する配列番号17のアミノ酸配列を有するCDR-H1(例として、位置8のシステインが例えばArg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、His(H)、Ser(S)、Thr(T)、Tyr(Y)、Asn(N)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Ile(I)、Leu(L)、Phe(F)、Val(V)、Pro(P)、Gly(G)のいずれか1つによって置換される);配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2;および配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1;配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2;および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3を含む。いくつかの態様において、配列番号17で表されるとおりのCDR-H1の位置8のアミノ酸置換はC8DまたはC8Yである。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号735または配列番号737のアミノ酸配列を有するCDR-H1;配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2;および配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1;配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2;および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号17、配列番号735、または配列番号737のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号17、配列番号735、または配列番号737のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号17、配列番号735、または配列番号737のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有する;および/あるいは(例として、および)配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号24のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号23で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号24で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号23で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号24で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、位置33にアミノ酸置換を有する配列番号23で表されるとおりのVHを含む(例として、位置33のシステインが、例えばArg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、His(H)、Ser(S)、Thr(T)、Tyr(Y)、Asn(N)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Ile(I)、Leu(L)、Phe(F)、Val(V)、Pro(P)、Gly(G)のいずれか1つによって置換される)。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号24で表されるとおりのVLを含む。いくつかの態様において、配列番号23で表されるとおりのVHの位置33のアミノ酸置換は、C33DまたはC33Yである。配列番号23で表されるとおりのVHがKabat付番系によってアノテートされるとき、配列番号23のアミノ酸33は番号33を割り当てられる。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号31のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号25のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号26のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号27のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号28のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号30のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号25のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号26のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号27のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号28のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号30のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号25のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号26のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号27のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号28のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号30のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号25のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号26のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号27のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号28のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号30のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号31のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号31で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号32で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号31で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号32で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号40のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号33のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号34のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号35のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号36のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号37のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号38のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号33のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号34のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号35のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号36のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号37のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号38のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号33のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号34のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号35のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号36のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号37のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号38のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号33のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号34のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号35のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号36のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号37のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号38のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号39のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号40のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号39で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号40で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号39で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号40で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号47のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号48のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号41のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号42のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号43のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号44のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号46のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号41のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号42のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号43のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号44のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号46のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号41のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号42のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号43のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号44のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号46のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号41のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号42のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号43のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号44のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号46のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号47のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号48のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号47で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号48で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号47で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号48で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号54のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号55のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号49のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号50のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号51のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号52のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号53のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号49のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号50のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号51のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号52のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号53のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号49のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号50のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号51のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号52のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号53のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号49のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号50のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号51のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号52のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号53のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号54のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号55のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号54で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号55で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号54で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号55で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号62のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号63のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号56のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号57のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号58のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号59のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号61のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号56のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号57のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号58のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号59のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号61のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号56のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号57のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号58のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号59のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号61のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号56のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号57のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号58のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号59のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号61のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号62のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号63のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号62で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号63で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号62で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号63で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号70のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号64のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号65のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号66のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号67のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号68のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号69のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号64のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号65のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号66のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号67のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号68のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号69のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号64のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号65のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号66のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号67のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号68のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号69のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号64のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号65のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号66のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号67のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号68のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号69のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号70のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号71のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号70で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号71で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号70で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号71で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号77のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号78のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号73のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号76のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号73のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号76のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号73のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号76のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号73のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号76のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号77のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号78のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号77で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号78で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号77で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号78で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号85のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号86のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号81のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号84のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号81のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号84のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号81のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号84のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号81のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号84のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号85のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号86のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号85で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号86で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号85で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号86で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号89のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号87のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号88のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号87のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号88のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号87のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号88のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号72のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号87のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号74のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号88のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号89のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号90のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号89で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号90で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号89で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号90で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号97のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号98のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号91のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号92のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号93のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号94のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号95のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号96のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号91のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号92のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号93のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号94のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号95のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号96のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号91のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号92のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号93のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号94のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号95のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号96のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号91のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号92のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号93のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号94のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号95のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号96のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号97のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号98のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号97で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号98で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号97で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号98で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号105のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号99のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号100のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号101のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号102のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号103のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号99のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号100のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号101のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号102のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号103のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号99のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号100のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号101のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号102のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号60のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号103のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号104のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号105のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号104で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号105で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号104で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号105で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号113のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号106のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号107のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号108のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号109のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号110のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号111のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号106のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号107のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号108のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号109のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号110のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号111のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号106のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号107のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号108のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号109のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号110のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号111のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号106のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号107のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号108のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号109のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号110のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号111のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号112のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号113のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号112で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号113で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号112で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号113で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号118のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号114のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号115のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号116のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号114のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号115のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号116のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号114のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号115のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号116のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号114のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号115のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号82のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号83のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号116のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号117のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号118のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号117で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号118で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号117で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号118で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号119のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号120のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号121のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号122のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号123のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号119のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号120のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号121のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号122のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号123のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号119のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号120のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号121のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号122のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号123のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号119のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号120のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号121のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号122のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号123のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号124のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号125のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号124で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号125で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号124で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号125で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号132のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号126のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号127のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号128のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号129のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号130のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号131のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号126のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号127のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号128のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号129のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号130のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号131のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号126のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号127のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号128のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号129のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号130のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号131のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号126のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号127のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号128のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号129のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号130のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号131のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号132のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号133のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号132で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号133で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号132で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号133で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号136のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号2のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号134のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号135のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号2のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号134のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号135のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号2のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号134のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号135のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号79のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号2のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号134のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号75のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号45のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号135のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号136のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号137のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号136で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号137で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号136で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号137で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号143のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号144のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号138のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号139のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号140のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号141のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号142のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号138のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号139のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号140のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号141のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号142のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号138のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号139のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号140のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号141のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号142のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号138のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号139のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号140のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号141のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号29のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号142のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号143のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号144のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号143で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号144で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号143で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号144で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
抗体のCDRは、異なる定義系が使用されたとき、異なるアミノ酸配列を有し得る(例として、IMGT定義、Kabat定義、またはChothia定義)。定義系は、所与の抗体配列(例として、VHまたはVL配列)における各アミノ酸を番号でアノテートするものであって、重鎖および軽鎖CDRに対応する番号は表3に提供される。表2に挙げられるCDRは、IMGT定義に従って定義されている。種々の定義系に従う抗TfR抗体例のCDR配列が表4に提供される。当業者は、表2に提供される抗TfR抗体について、種々の付番系を使用してCDR配列を導出することができる。
表3．CDR定義
Figure 2023509793000009
 1 IMGT(登録商標), the international ImMunoGeneTics information system(登録商標), imgt.org, Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 27:209-212 (1999)
2 Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242
3 Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))
表4．種々の定義系に従う抗TfR1抗体例のCDR配列
Figure 2023509793000010
Figure 2023509793000011
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号145のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号147のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)、配列番号148のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号149のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号145のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号147のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号148のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号149のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号145のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号147のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号148のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号149のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号145のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号146、配列番号732、または配列番号734のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号147のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号148のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号149のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号150のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号152のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)、配列番号153のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号154のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号150のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号152のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号153のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号154のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号150のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号152のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号153のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号154のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号150のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号151、配列番号739、または配列番号740のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/あるいは(例として、および)配列番号152のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号153のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号154のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号155のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号156のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号157のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)、配列番号158のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号159のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号155のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号156のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号157のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号158のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号159のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号155のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号156のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号157のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号158のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号159のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号155のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号156のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号157のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号158のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号159のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号160のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号161のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号162のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)、配列番号163のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号164のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号160のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号161のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号162のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号163のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号164のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号160のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号161のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号162のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号163のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号164のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号160のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号161のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号162のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号163のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号164のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号165、配列番号736、または配列番号738のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号166のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号167のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)、配列番号168のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号169のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号165、配列番号736、または配列番号738のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号166のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号167のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号168のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号169のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号165、配列番号736、または配列番号738のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号166のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号167のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号168のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号169のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号165、配列番号736、または配列番号738のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号166のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/あるいは(例として、および)配列番号167のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号168のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号169のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号170のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号171のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号172のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)、配列番号173のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号174のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号170のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号171のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号172のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号173のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号174のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号170のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号171のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号172のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号173のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号174のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号170のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号171のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号172のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号173のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号174のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体である(例として、表2または表4の1以上のCDRを含有するヒト化バリアント)。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表2または表4に示されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と同じCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、ヒト化された重鎖可変領域および/または(例として、および)ヒト化された軽鎖可変領域を含む。
ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域(CDR)からの残基が、所望の特異性、親和性、および容量を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト生物種(ドナー抗体)のCDRからの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク領域(ER)残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらにまた、ヒト化抗体は、レシピエント抗体上にも移入されるCDRまたはフレームワーク配列上にも見出されないが、抗体性能をさらに改良および最適化するために包含される残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、CDR領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、FR領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである少なくとも1つの、典型的には2つの可変ドメインの実質的にすべてを含むであろう。最適なことには、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域またはドメインの少なくともある部分(Fc)、典型的にはヒト免疫グロブリンのものをもまた含むであろう。抗体は、WO99/58572に記載されているとおり改変されたFc領域を有し得る。ヒト化抗体の他の形態は元の抗体に対して変更されている1以上のCDR(1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ)を有する。これらは元の抗体からの1以上のCDRに由来する1以上のCDRともまた呼称される。ヒト化抗体には親和性成熟もまた関わり得る。
ヒト化抗体およびこれらを作製する方法は知られており、例として、Almagro et al.,Front.Biosci.13:1619-1633(2008);Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988);Queen et al.,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989);米国特許第5,821,337号、第7,527,791号、第6,982,321号、および第7,087,409号;Kashmiri et al.,Methods 36:25-34(2005);Padlan et al.,Mol.Immunol.28:489-498(1991);Dall'Acqua et al.,Methods 36:43-60(2005);Osbourn et al.,Methods 36:61-68(2005);ならびにKlimka et al.,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)に記載されるとおりである。これらすべての内容は参照によって本明細書に組み込まれる。ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、例として、Sims et al.J.Immunol.151:2296(1993);Carter et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:4285(1992);Presta et al.J.Immunol.151:2623(1993);Almagro et al.,Front.Biosci.13:1619-1633(2008));Baca et al.,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997);およびRosok et al.,J Biol.Chem.271:22611-22618(1996)に記載されている。これらすべての内容は参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの態様において、ヒト化は、CDR(例として、表2または表4に示されるとおり)をIGKV1-NL1*01およびIGHV1-3*01ヒト可変ドメイン上にグラフトすることによって達成される。
いくつかの態様において、ヒト化されたVHフレームワークまたはVLフレームワークは、コンセンサスヒトフレームワークである。いくつかの態様において、コンセンサスヒト化フレームワークは、ヒト免疫グロブリンVLまたはVHフレームワーク配列の選択肢において最も一般的に生起するアミノ酸残基を表し得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の重鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVHフレームワーク領域は(サブグループIIIコンセンサス)、以下:
a) VH FR1:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(配列番号741);
b) VH FR2:WVRQAPGKGLEWV(配列番号742);
c) VH FR3:RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(配列番号743);および
d) VH FR4:WGQGTLVTVSS(配列番号744)
を包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の重鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVHフレームワーク領域は(サブグループIコンセンサス)、以下:
a) VH FR1:QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS(配列番号745);
b) VH FR2:WVRQAPGQGLEWM(配列番号746);
c) VH FR3:RVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC(配列番号747);および
d) VH FR4:WGQGTLVTVSS(配列番号744)
を包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の重鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVHフレームワーク領域は(サブグループIIコンセンサス)、以下:
a) VH FR1:QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS(配列番号749);
b) VH FR2:WIRQPPGKGLEWI(配列番号750);
c) VH FR3:RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC(配列番号751);および
d) VH FR4:WGQGTLVTVSS(配列番号744)
を包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の軽鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVLフレームワーク領域は(サブグループIコンセンサス)、以下:
a) VL FR1:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号753);
b) VL FR2:WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号754);
c) VL FR3:GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号756);および
d) VL FR4:FGQGTKVEIK(配列番号748)
を包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の軽鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVLフレームワーク領域は(サブグループIIコンセンサス)、以下:
a) VL FR1:DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(配列番号757);
b) VL FR2:WYLQKPGQSPQLLIY(配列番号758);
c) VL FR3:GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC(配列番号759);および
d) VL FR4:FGQGTKVEIK(配列番号748)
を包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の軽鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVLフレームワーク領域は(サブグループIIIコンセンサス)、以下:
a) VL FR1:DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(配列番号752);
b) VL FR2:WYQQKPGQPPKLLIY(配列番号755);
c) VL FR3:GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDFAVYYC(配列番号760);および
d) VL FR4:FGQGTKVEIK(配列番号748)
を包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のヒト化抗TfR抗体の軽鎖CDRへの使用に好適なコンセンサスヒトVLフレームワーク領域は(サブグループIVコンセンサス)、以下:
a) VL FR1:DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(配列番号752);
b) VL FR2:WYQQKPGQPPKLLIY(配列番号755);
c )VL FR3:GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDFAVYYC(配列番号760);および
d) VL FR4:FGQGTKVEIK(配列番号748)
を包含する。
いくつかの態様において、本開示のヒト化抗TfR抗体は、ヒト化VHフレームワーク領域を含み、これらは、本明細書に記載のコンセンサスヒトVHフレームワーク領域サブグループのいずれか1つと比較して、合わせてわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のヒト化抗TfR抗体は、ヒト化VLフレームワーク領域を含み、これらは、本明細書に記載のコンセンサスヒトVLフレームワーク領域サブグループのいずれか1つと比較して、合わせてわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示のヒト化抗TfR抗体は、ヒト化VHフレームワーク領域を含み、これらは、本明細書に記載のコンセンサスヒトVHフレームワーク領域サブグループのいずれか1つと、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のヒト化抗TfR抗体は、ヒト化VLフレームワーク領域を含み、これらは、本明細書に記載のコンセンサスヒトVLフレームワーク領域サブグループのいずれか1つと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化バリアントであり、表2もしくは表4に挙げられるVHのいずれか1つと比較して1以上のアミノ酸バリエーション(例として、VHフレームワーク領域の)および/または(例として、および)表2もしくは表4に挙げられるVLのいずれか1つと比較して1以上のアミノ酸バリエーション(例として、VLフレームワーク領域の)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、表2に挙げられる抗TfR抗体のいずれかのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、表2に挙げられる抗TfR抗体のいずれか1つのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号7、15、および23のいずれか1つで表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号8、16、および24のいずれか1つで表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号7、15、および23のいずれか1つで表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号8、16、および24のいずれか1つで表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号7、15、および23のいずれか1つで表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号8、16、および24のいずれか1つで表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号7、15、および23のいずれか1つで表されるとおりのVHと比べて、位置1、2、5、9、11、12、13、17、20、23、33、38、40、41、42、43、44、45、48、49、55、67、68、70、71、72、76、77、80、81、82、84、87、88、91、95、112、または115に1以上の(例として、10～25)アミノ酸バリエーションを有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、配列番号8、16、および24のいずれか1つで表されるとおりのVLと比べて、位置4、7、8、9、11、15、17、18、19、22、39、41、42、43、50、62、64、72、75、77、79、80、81、82、83、85、87、89、100、104、または109に1以上の(例として、10～20)アミノ酸バリエーションを有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号2、配列番号731、または配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含み、配列番号7で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含み、配列番号8で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号2、配列番号731、または配列番号80のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号3のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号7で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号4のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号8で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号145のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号147のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含み、配列番号7で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号148のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号149のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含み、配列番号8で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号145のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号147のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号7で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号148のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号149のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号6のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号8で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号150のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号152のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含み、配列番号7で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号153のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号154のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含み、配列番号8で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号150のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号152のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号7で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号153のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号5のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号154のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号8で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号9のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号10のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号11のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含み、配列番号15で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号12のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含み、配列番号16で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号9のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号10のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号11のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号15で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号12のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号16で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号155のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号156のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号157のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含み、配列番号15で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号158のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号159のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含み、配列番号16で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号155のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号156のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号157のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号15で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号158のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号159のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号14のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号16で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号160のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号161のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号162のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含み、配列番号15で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号163のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号164のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含み、配列番号16で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号160のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号161のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号162のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号15で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号163のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号13のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号164のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号16で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号17、配列番号735、または配列番号737のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含み、配列番号23で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含み、配列番号24で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号17、配列番号735、または配列番号737のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号18のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号19のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号23で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号20のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号24で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号165、配列番号736、または配列番号738のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号166のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号167のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含み、配列番号23で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号168のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号169のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含み、配列番号24で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号165、配列番号736、または配列番号738のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号166のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号167のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号23で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号168のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号169のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号22のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号24で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VHを含み、配列番号170のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号171のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号172のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含み、配列番号23で表されるとおりのVHと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化VLを含み、配列番号173のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号174のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含み、配列番号24で表されるとおりのVLと比較して、フレームワーク領域にわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号170のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号171のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号172のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含むヒト化VHを含み、フレームワーク領域において、配列番号23で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号173のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号21のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号174のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含むヒト化VLを含み、フレームワーク領域において、配列番号24で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、キメラ抗体であり、これはヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を包含し得る。キメラ抗体は、第1の生物種からの可変領域または可変領域の一部と第2の生物種からの定常領域とを有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体では、軽および重鎖両方の可変領域は哺乳動物の1つの生物種(例として、非ヒト哺乳動物、例えばマウス、ウサギ、およびラット)に由来する抗体の可変領域を模倣し、定常部分は、別の哺乳動物、例えばヒトに由来する抗体の配列に相同である。いくつかの態様においては、アミノ酸改変が可変領域および/または(例として、および)定常領域になされ得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、キメラ抗体であり、これはヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を包含し得る。キメラ抗体は、第1の生物種からの可変領域または可変領域の一部と第2の生物種からの定常領域とを有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体では、軽および重鎖両方の可変領域は、哺乳動物の1つの生物種(例として、非ヒト哺乳動物、例えばマウス、ウサギ、およびラット)に由来する抗体の可変領域を模倣し、定常部分は、別の哺乳動物、例えばヒトに由来する抗体の配列に相同である。いくつかの態様においては、アミノ酸改変が可変領域および/または(例として、および)定常領域になされ得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれかの重鎖は、重鎖定常領域(CH)またはそのある部分(例として、CH1、CH2、CH3、またはそれらの組み合わせ)を含み得る。重鎖定常領域は、いずれかの好適な起源、例えばヒト、マウス、ラット、またはウサギであり得る。1つの具体的な例では、重鎖定常領域はヒトIgG(ガンマ重鎖)、例えばIgG1、IgG2、またはIgG4からである。ヒトIgG1定常領域の例は、下に与えられる:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号175)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれかの重鎖は、突然変異体ヒトIgG1定常領域を含む。例えば、ヒトIgG1のCH2ドメイン上のLALA突然変異の導入(ヒンジ下部残基Leu234 Leu235をAla234およびAla235によって置き換えるように突然変異させられたmAb b12に由来する突然変異体)は、Fcg受容体結合を低減することが知られている(Bruhns,P.,et al.(2009)およびXu,D.et al.(2000))。突然変異体ヒトIgG1定常領域は、下に提供される(突然変異は太字かつ下線付き):
Figure 2023509793000012
 (配列番号176)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれかの軽鎖はさらに、軽鎖定常領域(CL)を含み得、これは当該技術分野において知られているいずれかのCLであり得る。いくつかの例において、CLはカッパ軽鎖である。他の例では、CLはラムダ軽鎖である。いくつかの態様において、CLはカッパ軽鎖であり、この配列は下に提供される:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号177)
他の抗体の重鎖および軽鎖定常領域は当該技術分野において周知であり、例として、IMGTデータベース(www.imgt.org)において、またはwww.vbase2.org/vbstat.php.にて提供されるものであるが、これらの両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号175または配列番号176と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも99％同一である重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号175または配列番号176と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号175で表されるとおりの重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号176で表されるとおりの重鎖定常領域を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVLまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号177と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも99％同一である軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVLまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号177と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVLまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号177で表されるとおりの軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。
記載される抗TfR抗体のIgG重鎖および軽鎖アミノ酸配列の例は、下の表5に提供される。
表5．抗TfR IgGの例の重鎖および軽鎖配列
Figure 2023509793000013
Figure 2023509793000014
Figure 2023509793000015
 *VH/VL配列に下線を付した
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号769、配列番号770、配列番号771、または配列番号772で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号179、配列番号181、または配列番号183で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号769、配列番号770、配列番号771、または配列番号772と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179、配列番号181、または配列番号183と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号769、配列番号770、配列番号771、または配列番号772のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179、配列番号181、または配列番号183のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号769、または配列番号770で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号179で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、10、11、9、8、7、6、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号769、または配列番号770と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号769、または配列番号770のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号180で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号181で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号180と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号181と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号180のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号181のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号182、配列番号771または配列番号772で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号183で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号182、配列番号771、または配列番号772と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号183と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号182、配列番号771、または配列番号772のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号183のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、抗TfR抗体は、無傷の抗体(全長抗体)のFABフラグメント、F(ab')フラグメント、またはF(ab')2フラグメントである。無傷の抗体(全長抗体)の抗原結合フラグメントは、定型的な方法を介して(例として、組み換え的に、または全長IgGの重鎖定常領域をパパインなどの酵素を使用して消化することによって)調製され得る。例えば、F(ab')2フラグメントは、抗体分子のペプシンまたはパパイン消化によって生じ得、Fabフラグメントは、F(ab')2フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって産生され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR1抗体のF(ab')フラグメント上の重鎖定常領域は、以下:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT(配列番号184)のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号184と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも99％同一である重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号184と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、表2に挙げられるVHまたはそれらのいずれかのバリアントのいずれか1つ、および配列番号184で表されるとおりの重鎖定常領域を含む重鎖を含む。
本明細書に記載の抗TfR抗体のF(ab')アミノ酸配列の例は、表6に提供される。
表6．抗TfR F(ab')の例の重鎖および
軽鎖の配列
Figure 2023509793000016
Figure 2023509793000017
Figure 2023509793000018
 *VH/VL配列に下線を付した
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号185、配列番号186、配列番号187、配列番号773、配列番号774、配列番号775、または配列番号776で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号179、配列番号181、または配列番号183で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号185、配列番号186、配列番号187、配列番号773、配列番号774、配列番号775、または配列番号776と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179、配列番号181、または配列番号183と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号185、配列番号186、配列番号187、配列番号773、配列番号774、配列番号775、または配列番号776のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179、配列番号181、または配列番号183のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号185、配列番号773、または配列番号774で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号179で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号185、配列番号773、または配列番号774と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号185、配列番号773、または配列番号774のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号179のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号186で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号181で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、10、11、9、8、7、6、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号186と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号181と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号186のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号181のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号187、配列番号775、または配列番号776で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号183で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号187、配列番号775、または配列番号776と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号183と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号187、配列番号775、または配列番号776のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号183のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本明細書に記載の抗TfR受容体抗体は、いずれかの抗体形態であり得、無傷の(すなわち全長)抗体、それらの抗原結合フラグメント(例として、Fab、F(ab')、F(ab')2、Fv)、一本鎖抗体、二重特異性抗体、またはナノボディーを包含するが、これらに限定されない。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、scFvである。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、scFv-Fabである(例として、定常領域のある部分に融合されたscFv)。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR受容体抗体は、N末端または(of)C末端どちらかにおいて定常領域(例として、配列番号175もしくは配列番号176で表されるとおりのヒトIgG1定常領域、またはその部分、例えばFc部分)に融合されたscFvである。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR1抗体のいずれか1つは、重鎖および/または(例として、および)軽鎖配列上にシグナルペプチド(例として、N末端シグナルペプチド)を含み得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR1抗体は、VHおよびVL配列のいずれか1つ、IgG重鎖および軽鎖配列のいずれか1つ、または本明細書に記載のF(ab')重鎖および軽鎖配列のいずれか1つを含み、さらにシグナルペプチド(例として、N末端シグナルペプチド)を含む。いくつかの態様において、シグナルペプチドはMGWSCIILFLVATATGVHS(配列番号214)のアミノ酸配列を含む。
本開示は、いくつかの側面において、筋標的化剤として(例として、筋標的化複合体に)使用され得る別の新たな抗TfR抗体を提供する。抗体のCDR配列および可変ドメイン配列は表7に提供される。
表7．種々の定義系に従う抗TfR抗体のCDR配列および可変ドメイン配列
Figure 2023509793000019
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7から選択される抗TfR抗体のいずれか1つからのCDR-H(例として、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3)アミノ酸配列の1つ以上を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される各付番系について提供されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7から選択される抗TfR抗体のいずれか1つからのCDR-L(例として、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3)アミノ酸配列の1つ以上を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される各付番系を教示するために提供されるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される各付番系について提供されるCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体の重鎖および軽鎖CDR3ドメインは、ある抗原についての抗体の結合特異性/親和性に特に重要な役割を演じ得る。したがって、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される抗TfR抗体のいずれか1つの少なくとも重鎖および/または(例として、および)軽鎖CDR3を包含し得る。
いくつかの例において、本開示の抗TfR抗体のいずれかは、表7に提供されるCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、および/または(例として、および)CDR-L3配列のいずれかに実質的に類似の1以上のCDR(例として、CDR-HまたはCDR-L)配列を有する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体のVH(例として、CDR-H1、CDR-H2、またはCDR-H3)および/または(例として、および)VL(例として、CDR-L1、CDR-L2、またはCDR-L3)領域上の1以上のCDRの位置は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、1、2、3、4、5、または6つのアミノ酸位置だけ変動し得る。例えば、いくつかの態様においては、本明細書に記載のいずれかの抗体のCDRを定義する位置は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、CDRのN末端および/または(例として、および)C末端境界を、本明細書に記載の抗体のいずれか1つのCDR位置と比べて1、2、3、4、5、または6アミノ酸だけずらすことによって変動し得る。別の態様においては、本明細書に記載の抗体のVH(例として、CDR-H1、CDR-H2、またはCDR-H3)および/または(例として、および)VL(例として、CDR-L1、CDR-L2、またはCDR-L3)領域上の1以上のCDRの長さは、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ変動し得る(例として、より短いかまたはより長い)。
結果的に、いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表7に提供される)の1つ以上よりも1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多く短くあり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表7に提供される抗TfR抗体からのCDR)の1つ以上よりも1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多く長くあり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のアミノ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表7に提供される抗TfR抗体からのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ延伸され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のカルボキシ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表7に提供される抗TfR抗体からのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ延伸され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のアミノ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表7に提供される抗TfR抗体からのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ短縮され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のカルボキシ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表7に提供される抗TfR抗体からのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ短縮され得る。例えば当該技術分野において記載された結合アッセイおよび条件を使用して、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持されるかどうかを確かめるためのいずれかの方法が使用され得る。
いくつかの例において、本開示の抗TfR抗体のいずれかは、表7に提供される抗TfR抗体のいずれか1つに実質的に類似の1以上のCDR(例として、CDR-HまたはCDR-L)配列を有する。例えば、抗体は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、表7に提供され、本明細書に提供されるCDR(例として、表7に提供される抗TfR抗体からのCDR)のいずれか1つの対応するCDR領域と比較して最大5、4、3、2、または1アミノ酸残基バリエーションまでを含有する抗TfR抗体からの1以上のCDR配列(単数または複数)を包含し得る。いくつかの態様において、本明細書に提供されるCDRのいずれかにおけるアミノ酸バリエーションのいずれかは保存的なバリエーションであり得る。保存的なバリエーションは、例えば結晶構造に基づいて決定されるとおり、残基がトランスフェリン受容体タンパク質(例として、ヒトトランスフェリン受容体タンパク質)との相互作用に関わることが蓋然的ではない位置においてCDRに導入され得る。
本開示のいくつかの側面は、本明細書に提供される重鎖可変(VH)および/または(例として、および)軽鎖可変(VL)ドメインの1つ以上を含む抗TfR抗体を提供する。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される抗TfR1抗体の重鎖可変ドメインおよび/または(例として、および)軽鎖可変ドメインを包含するいずれかの抗体を包含する。
本開示の側面は、本明細書に記載のもののいずれかに相同な重鎖可変(VH)および/または(例として、および)軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列を有する抗TfR抗体を提供する。いくつかの態様において、抗TfR抗体は、表7に提供される重鎖可変配列および/またはいずれかの軽鎖可変配列と少なくとも75％(例として、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含む。いくつかの態様において、相同な重鎖可変および/または(例として、および)軽鎖可変アミノ酸配列は、本明細書に提供されるCDR配列のいずれかにおいては変動しない。例えば、いくつかの態様において、配列バリエーションの程度(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)は、本明細書に提供されるCDR配列のいずれかを排除する重鎖可変および/または(例として、および)軽鎖可変配列内において生起し得る。いくつかの態様において、本明細書に提供される抗TfR抗体のいずれかは、表7に提供されるいずれかの抗TfR抗体のフレームワーク配列と少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％同一であるフレームワーク配列を含む重鎖可変配列および軽鎖可変配列を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号205のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)、配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)、配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。「合わせて」は、3つの重鎖CDRのすべてにおけるアミノ酸バリエーションの全数が、定義された範囲内であることを意味する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)、配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。「合わせて」は、3つの重鎖CDRのすべてにおけるアミノ酸バリエーションの全数が、定義された範囲内であることを意味する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これは、配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらは、配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1、配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2、および配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、これらは、配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2、および配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3と、合わせて少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H1;配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H2;および/または(例として、および)配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、以下:配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L1;配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L2;および/または(例として、および)配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を有するCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号194のアミノ酸配列を含むCDR-H1、配列番号189のアミノ酸配列を含むCDR-H2、配列番号196のアミノ酸配列を含むCDR-H3、配列番号197のアミノ酸配列を含むCDR-L1、配列番号198のアミノ酸配列を含むCDR-L2、および配列番号193のアミノ酸配列を含むCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHを含むヒト抗体である。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号205のアミノ酸配列を含むVLを含むヒト抗体である。いくつかの態様において、本開示は、配列番号204を含むVHのCDR-H1、CDR-H1、CDR-H3ならびに配列番号205を含むVLのCDR-L1、CDR-L1、およびCDR-L3をヒトフレームワーク領域と含む他のヒト化/ヒト抗体を企図する。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号204で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号205で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号204で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号205で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの態様において、ヒト化抗TfR抗体は、配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VHと;配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VLとを含み、ヒト化VHは、配列番号204で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含み、ヒト化VLは、配列番号205で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ヒト化抗TfR抗体は、配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VHと;配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含むヒト化VLとを含み、ヒト化VHは、配列番号204で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有し、ヒト化VLは、配列番号205で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、ヒト化抗TfR抗体はヒト化VHを含み、配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)、配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含み、ヒト化VHは、配列番号204で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含み、ヒト化VLは、配列番号205で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ヒト化抗TfR抗体は、配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)、配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含み、ヒト化VHは、配列番号204で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有し、ヒト化VLは、配列番号205で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、ヒト化抗TfR抗体はヒト化VHを含み、配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)、配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含み、ヒト化VHは、配列番号204で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含み、ヒト化VLは、配列番号205で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ヒト化抗TfR抗体は、配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)、配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含み、ヒト化VHは、配列番号204で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有し、ヒト化VLは、配列番号205で表されるとおりのVLと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、抗TfR抗体は、IgG、Fabフラグメント、F(ab')2フラグメント、scFv、または定常領域に融合されたscFvである(例として、NまたはC末端融合)。異なるフォーマットの抗TfR抗体の非限定例が本明細書に提供される。
いくつかの態様において、抗TfR1抗体は、VHおよびVLを単一のポリペプチド鎖上に含む一本鎖フラグメント可変(scFv)である。いくつかの態様において、scFvは、本明細書に記載の重鎖CDR、軽鎖CDR、VH、および/または(例として、および)VLのいずれか1つを単一のポリペプチド鎖上に含む。いくつかの態様において、scFvはVLのN末端に連結されたVHを含む。いくつかの態様において、scFvはVHのN末端に連結されたVLを含む。いくつかの態様において、VHおよびVLはリンカー(例として、ポリペプチドリンカー)によって連結される。いずれかのポリペプチドリンカーは、scFv上においてVHおよびVLを連結するために使用され得る。リンカー配列の選択は当業者の能力の範囲内である。
いくつかの態様において、scFvは、配列番号188のアミノ酸配列を有するCDR-H1(IMGT定義系に従う)、配列番号189のアミノ酸配列を有するCDR-H2(IMGT定義系に従う)、配列番号190のアミノ酸配列を有するCDR-H3(IMGT定義系に従う)を含むVH(例として、ヒト化VH)と;配列番号191のアミノ酸配列を有するCDR-L1(IMGT定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(IMGT定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(IMGT定義系に従う)を含むVL(例として、ヒト化VL)とを含み、VHおよびVLは単一のポリペプチド鎖上にあり(例として、アミド結合によって連結されるか、またはペプチドリンカーなどのリンカーによって連結される)、VHはVLのN末端またはC末端に連結される。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFvは、配列番号194のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Kabat定義系に従う)、配列番号195のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Kabat定義系に従う)、配列番号196のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Kabat定義系に従う)を含むVH(例として、ヒト化VH)と;配列番号197のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Kabat定義系に従う)、配列番号198のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Kabat定義系に従う)、および配列番号193のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Kabat定義系に従う)を含むVL(例として、ヒト化VL)とを含み、VHおよびVLは単一のポリペプチド鎖上にあり(例として、アミド結合によって連結されるか、またはペプチドリンカーなどのリンカーによって連結される)、VHはVLのN末端またはC末端に連結される。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFvは、配列番号199のアミノ酸配列を有するCDR-H1(Chothia定義系に従う)、配列番号200のアミノ酸配列を有するCDR-H2(Chothia定義系に従う)、配列番号201のアミノ酸配列を有するCDR-H3(Chothia定義系に従う)を含むVH(例として、ヒト化VH)と;配列番号202のアミノ酸配列を有するCDR-L1(Chothia定義系に従う)、配列番号192のアミノ酸配列を有するCDR-L2(Chothia定義系に従う)、および配列番号203のアミノ酸配列を有するCDR-L3(Chothia定義系に従う)を含むVL(例として、ヒト化VL)とを含み、VHおよびVLは単一のポリペプチド鎖上にあり(例として、アミド結合によって連結されるか、またはペプチドリンカーなどのリンカーによって連結される)、VHはVLのN末端またはC末端に連結される。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFVは、配列番号204で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVH(例として、ヒト化VH)、および配列番号205で表されるとおりのVLと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含むVL(例として、ヒト化VL)を含み、VHおよびVLは単一のポリペプチド鎖上にあり(例として、アミド結合によって連結されるか、またはペプチドリンカーなどのリンカーによって連結される)、VHはVLのN末端またはC末端に連結される。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFVは、配列番号204で表されるとおりのVHと比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVH(例として、ヒト化VH)と、配列番号205で表されるとおりのVLと比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するヒト化VL(例として、ヒト化VL)とを含み、VHおよびVLは単一のポリペプチド鎖上にあり(例として、アミド結合によって連結されるか、またはペプチドリンカーなどのリンカーによって連結される)、VHはVLのN末端またはC末端に連結される。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFvは、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHと配列番号205のアミノ酸配列を含むVLとを含み、VHおよびVLは単一のポリペプチド鎖上にあり(例として、アミド結合によって連結されるか、またはペプチドリンカーなどのリンカーによって連結される)、VHはVLのN末端またはC末端に連結される。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFvは、配列番号205のアミノ酸配列を含むVLのN末端に連結された配列番号204のアミノ酸配列を含むVHを含む。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
いくつかの態様において、scFvは、配列番号205のアミノ酸配列を含むVLのC末端に連結された配列番号204のアミノ酸配列を含むVHを含む。いくつかの態様において、VHおよびVLは、EGKSSGSGSESKAS(配列番号215)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
scFVのアミノ酸配列は、下に提供される:
Figure 2023509793000020
 (配列番号206)
いくつかの態様において、本明細書に記載のscFvは、配列番号206で表されるとおりのVHと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載のscFvは、配列番号206と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、scFvは配列番号206のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、定常領域に連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、Fc領域は結晶化可能フラグメント領域(Fc領域)である。Fc領域は、Fc受容体と呼ばれる細胞表面受容体と相互作用する重鎖定常領域のフラグメントである。いずれかの知られているFc領域が本開示に従って使用され得、本明細書に記載のscFvのいずれか1つに融合され得る。Fc領域の例のアミノ酸配列は、下に提供される:
PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号207)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号207で表されるとおりのFc領域と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるFc領域のC末端に、(例として、アミド結合またはペプチドリンカーなどのリンカーによって)連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvまたはそれらのバリアントのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号207と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するFc領域のC末端に、(例として、アミド結合またはペプチドリンカーなどのリンカーによって)連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvまたはそれらのバリアントのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号207で表されるとおりのFc領域のC末端に(例として、アミド結合またはペプチドリンカーなどのリンカーによって)連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvまたはそれらのバリアントのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、scFVおよびFcは、DIEGRMD(配列番号729)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
Fc領域のC末端に連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvのいずれか1つ)を含む抗TfR抗体の例のアミノ酸配列は下で提供される
Figure 2023509793000021
 (配列番号208)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号208と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号208と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗TfR抗体は、配列番号208のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号207で表されるとおりのFc領域と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるFc領域のN末端に、(例として、アミド結合またはペプチドリンカーなどのリンカーによって)連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号207と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するFc領域のN末端に、(例として、アミド結合またはペプチドリンカーなどのリンカーによって)連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号207で表されるとおりのFc領域のN末端に、(例として、アミド結合またはペプチドリンカーなどのリンカーによって)連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvのいずれか1つ)を含む。いくつかの態様において、scFVおよびFcは、DIEGRMD(配列番号729)のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。
Fc領域のN末端に連結されたscFv(例として、本明細書に記載のscFvのいずれか1つ)を含む抗TfR抗体の例のアミノ酸配列は下で提供される
Figure 2023509793000022
 (配列番号209)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号209と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号209と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗TfR抗体は、配列番号209のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体はIgGである。いくつかの態様において、IgGは重鎖および軽鎖を含み、重鎖は本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つのCDR-H1、CDRH2、およびCDR-H3を含み、さらに重鎖定常領域またはその部分(例として、CH1、CH2、CH3、またはそれらの組み合わせ)を含み;軽鎖は本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、さらに軽鎖定常領域を含む。いくつかの態様において、IgGは重鎖および軽鎖を含み、重鎖は本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つのVHを含み、さらに重鎖定常領域またはその部分(例として、CH1、CH2、CH3、またはそれらの組み合わせ)を含み;軽鎖は本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つのVLを含み、さらに軽鎖定常領域を含む。
重鎖定常領域は、いずれかの好適な起源、例えばヒト、マウス、ラット、またはウサギであり得る。1つの具体的な例では、重鎖定常領域はヒトIgG(ガンマ重鎖)、例えばIgG1、IgG2、またはIgG4からである。ヒトIgG1定常領域の例は、下に与えられる:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号175)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれかの重鎖は、突然変異体ヒトIgG1定常領域を含む。例えば、ヒトIgG1のCH2ドメイン上のLALA突然変異の導入(ヒンジ下部残基Leu234 Leu235をAla234およびAla235によって置き換えるように突然変異させられたmAb b12に由来する突然変異体)は、Fcg受容体結合を低減することが公知である(Bruhns,P.,et al.(2009)およびXu,D.et al.(2000))。突然変異体ヒトIgG1定常領域は下で提供される(突然変異は太字かつ下線付き):
Figure 2023509793000023
 (配列番号176)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれかの軽鎖定常領域は、当該技術分野において知られているいずれかの軽鎖定常領域であり得る。いくつかの例では、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖である。いくつかの態様において、軽鎖定常領域はカッパ軽鎖であり、この配列は下に提供される:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号177)
他の抗体の重鎖および軽鎖定常領域は当該技術分野において周知であり、例として、IMGTデータベース(www.imgt.org)において、またはwww.vbase2.org/vbstat.php.にて提供されるものであるが、これらの両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHまたはそのいずれかのバリアント、および配列番号175または配列番号176と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHまたはそのいずれかのバリアント、および配列番号175または配列番号176で表されるとおりの重鎖と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖定常領域を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204で表されるとおりのVHと配列番号175で表されるとおりの重鎖定常領域とを含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204で表されるとおりのVHと配列番号176で表されるとおりの重鎖定常領域とを含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号205のアミノ酸配列を含むVLまたはそのいずれかのバリアント、および配列番号177と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号205のアミノ酸配列を含むVLまたはそのいずれかのバリアント、および配列番号177で表されるとおりの重鎖と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号205で表されるとおりのVLと配列番号177で表されるとおりの軽鎖定常領域とを含む軽鎖を含む。
記載される抗TfR抗体のIgG重鎖および軽鎖アミノ酸配列の例は、下に提供される。
抗TfR IgG重鎖(野生型ヒトIgG1定常領域あり、VHは下線付き)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARFPYDSSGYYSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号210)

抗TfR IgG重鎖(ヒトIgG1定常領域突然変異体L234A/L235Aあり、VHは下線付き)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARFPYDSSGYYSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPRAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号211)

抗TfR IgG軽鎖(カッパ、VLは下線付き)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号212)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号210または配列番号211と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号212のいずれか1つと少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号210または配列番号211で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号212で表されるとおりの軽鎖と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号210または配列番号211のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号212のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、抗TfR抗体は、無傷の抗体(全長抗体)のFABフラグメントまたはF(ab')2フラグメントである。無傷の抗体(全長抗体)の抗原結合フラグメントは定型的な方法によって(例として、組み換え的に、または全長IgGの重鎖定常領域をパパインなどの酵素を使用して消化することによって)調製され得る。例えば、F(ab')2フラグメントは抗体分子のペプシンまたはパパイン消化によって生じ得、FabフラグメントはF(ab')2フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって作出され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR1抗体のF(ab')フラグメント上の重鎖定常領域は、以下:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT(配列番号184)のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHまたはそのいずれかのバリアント、および配列番号184と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHまたはそのいずれかのバリアント、および配列番号184で表されるとおりの重鎖と比較してわずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖定常領域を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号204で表されるとおりのVHと配列番号184で表されるとおりの重鎖定常領域とを含む重鎖を含む。
本明細書に記載の抗TfR抗体の例示のF(ab')アミノ酸配列は、下に提供される。
抗TfR Fab'重鎖(ヒトIgG1定常領域フラグメントあり、VHは下線付き)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARFPYDSSGYYSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP(配列番号213)
または
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYCARFPYDSSGYYSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT(配列番号777)

抗TfR Fab'軽鎖(カッパ、VLは下線付き)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号212)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号213または配列番号777と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号212と少なくとも75％(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、配列番号213または配列番号777で表されるとおりの重鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗TfR抗体は、配列番号212で表されるとおりの軽鎖と比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号213または配列番号777のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗TfR抗体は、配列番号212のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR1抗体のいずれか1つは、重鎖および/または(例として、および)軽鎖配列上にシグナルペプチド(例として、N末端シグナルペプチド)を含み得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR1抗体は、VHおよびVL配列のいずれか1つ、挙げられるIgG重鎖および軽鎖配列のいずれか1つ、または本明細書に記載のF(ab')重鎖および軽鎖配列のいずれか1つを含み、さらにシグナルペプチド(例として、N末端シグナルペプチド)を含む。いくつかの態様において、シグナルペプチドはMGWSCIILFLVATATGVHS(配列番号214)のアミノ酸配列を含む。
他の知られている抗トランスフェリン受容体抗体
当該技術分野において知られているいずれか他の適切な抗トランスフェリン受容体抗体は、本明細書に開示の複合体において筋標的化剤として使用され得る。知られている抗トランスフェリン受容体抗体(関連する参考文献および結合エピトープを包含する)の例は、表8に挙げられる。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、本明細書に提供される抗トランスフェリン受容体抗体、例として、表8に挙げられる抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかの相補性決定領域(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3)を含む。
表8-関連する参考文献および結合エピトープ情報を包含する、抗トランスフェリン受容体抗体クローンのリスト。
Figure 2023509793000024
Figure 2023509793000025
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つからのCDR-H(例として、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3)アミノ酸配列の1つ以上を包含する。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つについて提供されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を包含する。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つについて提供されるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を包含する。いくつかの態様において、抗トランスフェリン抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つについて提供されるCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を包含する。本開示は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つについて提供されるCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、またはCDR-L3を含む分子をコードするいずれかの核酸配列をもまた包含する。いくつかの態様において、抗体の重鎖および軽鎖CDR3ドメインは、ある抗原についての抗体の結合特異性/親和性に特に重要な役割を演じ得る。したがって、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つの少なくとも重鎖および/または(例として、および)軽鎖CDR3を包含し得る。
いくつかの例において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかは、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体の1つからのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、および/または(例として、および)CDR-L3配列のいずれかに実質的に類似の1以上のCDR(例として、CDR-HまたはCDR-L)配列を有する。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体のVH(例として、CDR-H1、CDR-H2、またはCDR-H3)および/または(例として、および)VL(例として、CDR-L1、CDR-L2、またはCDR-L3)領域上の1以上のCDRの位置は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、1、2、3、4、5、または6アミノ酸位置だけ変動し得る。例えば、いくつかの態様において、本明細書に記載のいずれかの抗体のCDRを定義する位置は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、CDRのN末端および/または(例として、および)C末端境界を、本明細書に記載の抗体のいずれか1つのCDR位置と比べて1、2、3、4、5、または6アミノ酸だけずらすことによって変動し得る。別の態様においては、本明細書に記載の抗体のVH(例として、CDR-H1、CDR-H2、またはCDR-H3)および/または(例として、および)VL(例として、CDR-L1、CDR-L2、またはCDR-L3)領域上の1以上のCDRの長さは、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ変動し得る(例として、より短いかまたはより長い)。
従って、いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)の1つ以上よりも1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多く短くあり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)の1つ以上よりも1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多く長くあり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のアミノ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ延伸され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のカルボキシ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ延伸され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のアミノ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ短縮され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、および/または(例として、および)CDR-H3のカルボキシ部分は、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、本明細書に記載のCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)の1つ以上と比較して1、2、3、4、5アミノ酸、またはより多くだけ短縮され得る。例えば当該技術分野において記載された結合アッセイおよび条件を使用して、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持されるかどうかを確かめるためのいずれかの方法が使用され得る。
いくつかの例において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかは、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つに実質的に類似の1以上のCDR(例として、CDR-HまたはCDR-L)配列を有する。例えば、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に対する免疫特異的結合が維持される(例として、実質的に維持される。例えば、それが由来する元の抗体の結合と比べて少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％)限り、抗体は、本明細書に提供されるCDR(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからのCDR)のいずれか1つの対応するCDR領域と比較して最大5、4、3、2、または1アミノ酸残基バリエーションまでを含有する表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかからの1以上のCDR配列(単数または複数)を包含し得る。いくつかの態様において、本明細書に提供されるCDRのいずれかにおけるアミノ酸バリエーションのいずれかは、保存的なバリエーションであり得る。保存的なバリエーションは、例えば結晶構造に基づいて決定されるとおり、残基がトランスフェリン受容体タンパク質(例として、ヒトトランスフェリン受容体タンパク質)との相互作用に関わることが蓋然的ではない位置においてCDRに導入され得る。本開示のいくつかの側面は、本明細書に提供される重鎖可変(VH)および/または(例として、および)軽鎖可変(VL)ドメインの1つ以上を含むトランスフェリン受容体抗体を提供する。いくつかの態様において、本明細書に提供されるVHドメインのいずれかは、本明細書に提供されるCDR-H配列(例として、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3)の1つ以上、例えば、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つで提供されるCDR-H配列のいずれかを包含する。いくつかの態様において、本明細書に提供されるVLドメインのいずれかは、本明細書に提供されるCDR-L配列(例として、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3)の1つ以上、例えば、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つで提供されるCDR-L配列のいずれかを包含する。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどの、いずれかの抗トランスフェリン受容体抗体の重鎖可変ドメインおよび/または(例として、および)軽鎖可変ドメインを包含するいずれかの抗体を包含する。いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれかの抗トランスフェリン受容体抗体の重鎖可変および軽鎖可変ペアを包含するいずれかの抗体を包含する。
本開示の側面は、本明細書に記載のもののいずれかと相同な重鎖可変(VH)および/または(例として、および)軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列を有する抗トランスフェリン受容体抗体を提供する。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれかの抗トランスフェリン受容体抗体の重鎖可変配列および/またはいずれかの軽鎖可変配列と少なくとも75％(例として、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)同一である重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含む。いくつかの態様において、相同な重鎖可変および/または(例として、および)軽鎖可変アミノ酸配列は、本明細書に提供されるCDR配列のいずれかにおいては変動しない。例えば、いくつかの態様において、配列バリエーションの程度(例として、75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％)は、本明細書に提供されるCDR配列のいずれかを排除する重鎖可変および/または(例として、および)軽鎖可変配列内において生起し得る。いくつかの態様において、本明細書に提供される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかは、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれかの抗トランスフェリン受容体抗体のフレームワーク配列と少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％同一であるフレームワーク配列を含む重鎖可変配列および軽鎖可変配列を含む。
いくつかの態様において、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に特異的に結合する抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれかの、本明細書に提供されるCDR-Lドメイン(CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3)またはCDR-Lドメインバリアントのいずれかを含む軽鎖可変VLドメインを含む。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体(例として、ヒトトランスフェリン受容体)に特異的に結合する抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどの、いずれかの抗トランスフェリン受容体抗体のCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む軽鎖可変VLドメインを含む。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどの、いずれかの抗トランスフェリン受容体抗体の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域の1、2、3、または4つを含む軽鎖可変(VL)領域配列を含む。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどの、いずれかの抗トランスフェリン受容体抗体の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域の1、2、3、または4つと少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、または100％同一である軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域の1、2、3、または4つを含む。いくつかの態様において、前記のアミノ酸配列に由来する軽鎖可変フレームワーク領域は、最大10アミノ酸までの置換、欠失、および/または(例として、および)挿入、好ましくは最大10アミノ酸までの置換の存在を除けば、前記のアミノ酸配列からなる。いくつかの態様において、該アミノ酸配列に由来する軽鎖可変フレームワーク領域は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10アミノ酸残基が、対応する霊長目の非ヒト動物またはヒトの軽鎖可変フレームワーク領域中の類似した位置に見出されるアミノ酸と置換された該アミノ酸配列からなる。
いくつかの態様において、トランスフェリン受容体へ特異的に結合する抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれの抗トランスフェリン受容体抗体のCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、抗体はさらに、ヒトもしくは霊長目の動物の抗体のVLに由来する1つ、2つ、3つ、または4つすべてのVLフレームワーク領域を含む。本明細書に記載の軽鎖CDR配列との併用のための選択される抗体の霊長目の動物またはヒトの軽鎖フレームワーク領域は、例えば、非ヒト親抗体の軽鎖フレームワーク領域と、少なくとも70％(例として、少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、98％、または少なくとも99％)の同一性を有し得る。選択される霊長目の動物またはヒトの抗体は、その軽鎖相補性決定領域において、本明細書に提供される抗体のいずれか(例として、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか)の軽鎖相補性決定領域のアミノ酸に対し、同じ数または実質的に同じ数のアミノ酸を有し得る。いくつかの態様において、霊長目の動物またはヒトの軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸残基は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれの抗トランスフェリン受容体抗体の軽鎖フレームワーク領域と少なくとも75％同一性、少なくとも80％同一性、少なくとも85％同一性、少なくとも90％同一性、少なくとも95％同一性、少なくとも98％同一性、少なくとも99％(またはこれを超える)同一性を有する、天然の霊長目の動物またはヒトの抗体軽鎖フレームワーク領域からのものである。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体はさらに、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリーに由来する1つ、2つ、3つ、または4つすべてのVLフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体はさらに、ヒト軽鎖可変ラムダサブファミリーに由来する1つ、2つ、3つ、または4つすべてのVLフレームワーク領域を含む。
いくつかの態様において、本明細書に提供される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれも、軽鎖定常領域をさらに含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの態様において、軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ軽鎖定常領域である。いくつかの態様において、カッパまたはラムダ軽鎖定常領域は、哺乳動物から、例として、ヒト、サル、ラット、またはマウスからのものである。いくつかの態様において、軽鎖定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域である。いくつかの態様において、軽鎖定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域である。本明細書に提供される軽鎖定常領域のいずれも、本明細書に提供される軽鎖定常領域のいずれかのバリアントであってもよいことは解されるはずである。いくつかの態様において、軽鎖定常領域は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれの抗トランスフェリン受容体抗体の軽鎖定常領域のいずれかと少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、98％、または99％同一のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどの、いずれの抗トランスフェリン受容体抗体でもある。
いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、表8から選択される抗トランスフェリン受容体抗体のいずれか1つなどのいずれの抗トランスフェリン受容体抗体のアミノ酸配列を含むVLドメインを含み、ここで定常領域は、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、もしくはIgY免疫グロブリン分子、またはヒトIgG、IgE、IgM、IgD、IgA、もしくはIgY免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、VLドメイン、またはVLドメインのバリアントのいずれか、およびVHドメイン、またはVHドメインバリアントのいずれかを含み、ここでVLおよびVHドメイン、またはそれらのバリアントは、同じ抗体クローンからものであり、ここで定常領域は、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、もしくはIgY免疫グロブリン分子、いずれのクラス(例として、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)またはいずれのサブクラス(例として、IgG2aおよびIgG2b)の免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域の非限定例は当該技術分野において記載されており、例として、上述のKabat E A et al.(1991)を参照。
いくつかの態様において、筋標的化剤は、抗トランスフェリン受容体抗体(例として、国際出願刊行物WO 2016/081643(参照により本明細書に組み込まれる)に記載のとおりの抗体およびそのバリアント)である。
種々の定義系に従う抗体の重鎖および軽鎖CDRは、表9中に提供される。種々の定義系、例として、Kabat定義、Chothia定義、および/またはContact定義は記載されている。例として、(例として、Kabat,E.A.,et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242,Chothia et al.,(1989)Nature 342:877;Chothia,C.et al.(1987)J.Mol.Biol.196:901-917,Al-lazikani et al(1997)J.Molec.Biol.273:927-948;およびAlmagro,J.Mol.Recognit.17:132-143(2004)。またhgmp.mrc.ac.ukおよびbioinf.org.uk/absも参照)を参照。
表9．マウストランスフェリン受容体抗体の重鎖および軽鎖CDR
Figure 2023509793000026
重鎖可変ドメイン(VH)および軽鎖可変ドメイン配列もまた提供される:
VH
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPTNGRTNYIEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGTRAYHYWGQGTSVTVSS(配列番号230)
VL
DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASDNLYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYDATNLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGTYYCQHFWGTPLTFGAGTKLELK(配列番号231)
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と同じであるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示されるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3と同じであるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これは、表9に示されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。「合わせて」は、3つの重鎖CDRのすべてにおけるアミノ酸バリエーションの全数が、定義された範囲内であることを意味する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み得、これは、表9に示されるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3と比較して、合わせてわずか5アミノ酸バリエーション(例として、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、これらの少なくとも1つは、表9に示されるカウンターパート重鎖CDRと比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み得、これらの少なくとも1つは、表9に示されるカウンターパート軽鎖CDRと比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、CDR-L3を含み、これは表9に示されるCDR-L3と比較してわずか3アミノ酸バリエーション(例として、わずか3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する。いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示されるCDR-L3と比較して1つのアミノ酸バリエーションを含有するCDR-L3を含む。いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、QHFAGTPLT(配列番号232)KabatおよびChothia定義系に従う)またはQHFAGTPL(配列番号233)Contact定義系に従う)のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と同じであるCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、およびCDR-L2を含み、QHFAGTPLT(配列番号232)KabatおよびChothia定義系に従う)またはQHFAGTPL(配列番号233)Contact定義系に従う)のCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示される重鎖CDRと、合わせて少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一である重鎖CDRを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示される軽鎖CDRと、合わせて少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一である軽鎖CDRを含む。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号230のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号231のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号230で表されるとおりのVHと比較して、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号231で表されるとおりのVLと比較して、1わずか5アミノ酸バリエーション(例として、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、わずか5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号230で表されるとおりのVHと少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一であるアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号231で表されるとおりのVLと少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一であるアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、ヒト化抗体(例として、抗体のヒト化バリアント)である。いくつかの態様において、本開示のトランスフェリン受容体抗体は、表9に示されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と同じであるCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含み、ヒト化重鎖可変領域および/または(例として、および)ヒト化軽鎖可変領域を含む。
ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域(CDR)からのその残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種(ドナー抗体)のCDRからの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク領域(FR)残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらにまた、ヒト化抗体は、レシピエント抗体から見出されない残基も、移入された(imported)CDRまたはフレームワーク配列から見出されない残基も含んでいてもよいが、抗体の性能をさらに洗練および最適化するために包含される残基を含むこともある。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも1つの、典型的には2つの可変ドメインのすべてを実質的に含むであろうが、前記可変ドメインにおいて、CDR領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのCDR領域に対応し、かつFR領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のFR領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン(典型的には、ヒト免疫グロブリンの)定常領域またはドメイン(Fc)の少なくとも一部も含むであろう。抗体は、WO 99/58572に記載のとおりに修飾されたFc領域を有していてもよい。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に関して変更された1以上のCDR(1、2、3、4、5、6)を有しており、これらはまた、元の抗体からの1以上のCDRに由来する1以上のCDRとも呼ばれる。ヒト化抗体はまた、親和性成熟も伴うことがある。
いくつかの態様において、ヒト化は、CDR(例として、表9に示されるとおりの)をIGKV1-NL1*01およびIGHV1-3*01ヒト可変ドメイン中へ接合させることによって達成される。いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、位置9、13、17、18、40、45、および70での1以上のアミノ酸置換(配列番号231で表されるとおりのVLと比較したとき)、および/または(例として、および)、位置1、5、7、11、12、20、38、40、44、66、75、81、83、87、および108での1以上のアミノ酸置換(配列番号230で表されるとおりのVHと比較したとき)を含むヒト化されたバリアントである。いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、位置9、13、17、18、40、45、および70のすべてでのアミノ酸置換(配列番号231で表されるとおりのVLと比較したとき)、および/または(例として、および)、位置1、5、7、11、12、20、38、40、44、66、75、81、83、87、および108のすべてでのアミノ酸置換(配列番号230で表されるとおりのVHと比較したとき)を含むヒト化されたバリアントである。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号231で表されるとおりのVLの位置43および48での残基を含有する。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、ヒト化抗体であって、配列番号230で表されるとおりのVHの位置48、67、69、71、および73での残基を含有する。
本開示に従い使用されてもよいヒト化抗体の例の、VHおよびVLアミノ酸配列は、以下に提供される:
ヒト化されたVH
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQRLEWIGEINPTNGRTNYIEKFKSRATLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTRAYHYWGQGTMVTVSS(配列番号234)
ヒト化されたVL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASDNLYSNLAWYQQKPGKSPKLLVYDATNLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPLTFGQGTKVEIK(配列番号235)
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号234のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号235のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号234で表されるとおりのVHと比較したとき、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号235で表されるとおりのVLと比較したとき、わずか15アミノ酸バリエーション(例として、わずか20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有するVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号234で表されるとおりのVHと少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一のアミノ酸配列を含むVHを含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号235で表されるとおりのVLと少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一のアミノ酸配列を含むVLを含む。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、位置43および48の1以上でのアミノ酸置換(配列番号231で表されるとおりのVLと比較したとき)、および/または(例として、および)、位置48、67、69、71、および73の1以上でのアミノ酸置換(配列番号230で表されるとおりのVHと比較したとき)を含むヒト化されたバリアントである。いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、S43Aおよび/または(例として、および)V48L突然変異(配列番号231で表されるとおりのVLと比較したとき)、および/または(例として、および)、A67V、L69I、V71R、およびK73T突然変異の1以上(配列番号230で表されるとおりのVHと比較したとき)を含むヒト化されたバリアントである。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、位置9、13、17、18、40、43、48、45、および70の1以上でのアミノ酸置換(配列番号231で表されるとおりのVLと比較したとき)、および/または(例として、および)、位置1、5、7、11、12、20、38、40、44、48、66、67、69、71、73、75、81、83、87、および108の1以上でのアミノ酸置換(配列番号230で表されるとおりのVHと比較したとき)を含むヒト化されたバリアントである。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、ヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を包含し得るキメラ抗体である。キメラ抗体は、第1の種からの可変領域または一部の可変領域、および第2の種からの定常領域を有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖と重鎖との両方の可変領域は、ある種の哺乳動物(例として、マウス、ウサギ、およびラットなどの非ヒト哺乳動物)に由来する抗体の可変領域を模倣する一方で、定常部は、ヒトなどの別の哺乳動物に由来する抗体中の配列と相同である。いくつかの態様において、アミノ酸修飾は、可変領域および/または(例として、および)定常領域においてなされ得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、ヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を包含し得るキメラ抗体である。キメラ抗体は、第1の種からの可変領域または一部の可変領域、および第2の種からの定常領域を有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖と重鎖との両方の可変領域は、ある種の哺乳動物(例として、マウス、ウサギ、およびラットなどの非ヒト哺乳動物)に由来する抗体の可変領域を模倣する一方で、定常部は、ヒトなどの別の哺乳動物に由来する抗体中の配列と相同である。いくつかの態様において、アミノ酸修飾は、可変領域および/または(例として、および)定常領域においてなされ得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載のとおりの抗トランスフェリン受容体抗体のいずれの重鎖も、重鎖定常領域(CH)またはこの一部(例として、CH1、CH2、CH3、またはそれらの組み合わせ)を含んでいてもよい。重鎖定常領域は、いずれの好適な起源、例として、ヒト、マウス、ラット、またはウサギに属し得る。特定の一例において、重鎖定常領域は、ヒトIgG(ガンマ重鎖)、例として、IgG1、IgG2、またはIgG4からのものである。ヒトIgG1定常領域の例は、下に与えられる:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号175)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体のいずれの軽鎖も、軽鎖定常領域(CL)をさらに含んでいてもよいが、これは当該技術分野において知られているいずれのCLでもあり得る。いくつかの例において、CLは、カッパ軽鎖である。他の例において、CLは、ラムダ軽鎖である。いくつかの態様において、CLはカッパ軽鎖であって、その配列は下に与えられる:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号177)
他の抗体の重鎖および軽鎖定常領域は当該技術分野において周知であり、例として、IMGTデータベース(www.imgt.org)において、またはwww.vbase2.org/vbstat.php.にて提供されるものであるが、これらの両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
記載される抗トランスフェリン受容体抗体の重鎖および軽鎖アミノ酸配列の例は、下に提供される:
重鎖(VH+ヒトIgG1定常領域)
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPTNGRTNYIEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGTRAYHYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号236)
軽鎖(VL+カッパ軽鎖)
DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASDNLYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYDATNLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGTYYCQHFWGTPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号237)
重鎖(ヒト化VH+ヒトIgG1定常領域)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQRLEWIGEINPTNGRTNYIEKFKSRATLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTRAYHYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号238)
軽鎖(ヒト化された VL+カッパ軽鎖)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASDNLYSNLAWYQQKPGKSPKLLVYDATNLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGTPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号239)
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号236と少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号237と少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号236のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号237のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号236で表されるとおりの重鎖と比較したとき、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号237で表されるとおりの軽鎖と比較したとき、わずか15アミノ酸バリエーション(例として、わずか20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号238と少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号239と少なくとも80％(例として、80％、85％、90％、95％、または98％)同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号238のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号239のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号238で表されるとおりのヒト化抗体の重鎖と比較したとき、わずか25アミノ酸バリエーション(例として、わずか25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本開示の抗トランスフェリン受容体抗体は、配列番号239で表されるとおりのヒト化抗体の軽鎖と比較したとき、わずか15アミノ酸バリエーション(例として、わずか20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、9、8、7、6、5、4、3、2、または1アミノ酸バリエーション)を含有する軽鎖を含む。
いくつかの態様において、抗トランスフェリン受容体抗体は、無傷の抗体(完全長抗体)の抗原結合性フラグメント(FAB)である。無傷の抗体(完全長抗体)の抗原結合性フラグメントは、定型的な方法を介して調製され得る。例えば、F(ab')2フラグメントは、抗体分子のペプシン消化によって産生され得、Fabフラグメントは、F(ab')2フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって生成され得る。本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体のFABアミノ酸配列の例は、下に提供される:
重鎖FAB(VH+一部のヒトIgG1定常領域)
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPTNGRTNYIEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGTRAYHYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP(配列番号240)
重鎖FAB(ヒト化VH+一部のヒトIgG1定常領域)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQRLEWIGEINPTNGRTNYIEKFKSRATLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTRAYHYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP(配列番号241)
いくつかの態様において、本明細書に記載のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号240のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号237のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号241のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的にまたは加えて(例として、加えて)、本明細書に記載のトランスフェリン受容体抗体は、配列番号239のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、これらに限定されないが、無傷の(すなわち、完全長)抗体、それらの抗原結合性フラグメント(Fab、Fab'、F(ab')2、Fvなどの)、単一鎖抗体、二重特異性抗体、またはナノボディーを包含する、いずれの抗体の形態でもあり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、scFvである。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、scFv-Fab(例として、一部の定常領域と縮合されたscFv)である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗トランスフェリン受容体抗体は、定常領域(例として、配列番号175で表されるとおりのヒトIgG1定常領域)と縮合されたscFvである。
いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、ヒト化抗体であり、表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、IgG1カッパであり、これが、表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、IgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが、表1または表3に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される抗体のCDRを含む。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、表7に提供される抗体の可変領域を含むIgG1カッパである。いくつかの態様において、本開示の抗TfR抗体は、IgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが、表7に提供される抗体の可変領域を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗TfR抗体のいずれか1つは、組み換えDNAテクノロジーによって、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞浮遊培養から、任意にCHO-K1細胞(例として、European Collection of Animal Cell Cultureに由来するCHO-K1細胞Cat.No.85051005)浮遊培養から生ずる。
いくつかの態様において、本明細書に提供される抗体は、1以上の翻訳後修飾を有し得る。いくつかの態様においては、ピログルタミン酸形成(ピロGlu)ともまた呼ばれるN末端環化が、産生の間にN末端グルタミン酸(Glu)および/またはグルタミン(Gln)残基において抗体に生起し得る。いくつかの態様において、ピログルタミン酸形成は、重鎖配列に生起する。いくつかの態様において、ピログルタミン酸形成は軽鎖配列に生起する。
b. 他の筋標的抗体
いくつかの態様において、筋標的化抗体は、ヘモジュベリン(hemojuvelin)、カベオリン-3、デュシェンヌ型筋ジストロフィーペプチド、ミオシンIib、またはCD63に特異的に結合する抗体である。いくつかの態様において、筋標的化抗体は、筋原性前駆体タンパク質に特異的に結合する抗体である。例示の筋原性前駆体タンパク質は、限定せずに、ABCG2、M-カドヘリン/カドヘリン-15、カベオリン-1、CD34、FoxK1、インテグリンアルファ7、インテグリンアルファ7ベータ1、MYF-5、MyoD、ミオゲニン、NCAM-1/CD56、Pax3、Pax7、およびPax9を包含する。いくつかの態様において、筋標的化抗体は、骨格筋タンパク質に特異的に結合する抗体である。例示の骨格筋タンパク質は、限定せずに、アルファ-サルコグリカン、ベータ-サルコグリカン、カルパインインヒビター、クレアチンキナーゼMM/CKMM、eIF5A、エノラーゼ2/ニューロン特異的エノラーゼ、イプシロン-サルコグリカン、FABP3/H-FABP、GDF-8/ミオスタチン、GDF-11/GDF-8、インテグリンアルファ7、インテグリンアルファ7ベータ1、インテグリンベータ1/CD29、MCAM/CD146、MyoD、ミオゲニン、ミオシン軽鎖キナーゼインヒビター、NCAM-1/CD56、およびトロポニンIを包含する。いくつかの態様において、筋標的化抗体は、平滑筋タンパク質に特異的に結合する抗体である。例示の平滑筋タンパク質は、限定せずに、アルファ-平滑筋アクチン、VE-カドヘリン、カルデスモン/CALD1、カルポニン1、デスミン、ヒスタミンH2 R、モチリンR/GPR38、トランスジェリン(Transgelin)/TAGLN、およびビメンチンを包含する。しかしながら、追加の標的への抗体が本開示の範囲内であること、および本明細書に提供される標的の例示のリストが限定することを意図していないことは解されるはずである。
c. 抗体特色/変更
いくつかの態様において、保存的突然変異は、例えば結晶構造に基づき決定されるとき、その残基が標的抗原(例として、トランスフェリン受容体)との相互作用に関与しそうにない位置にて、抗体配列(例として、CDRまたはフレームワーク配列)中へ導入され得る。いくつかの態様において、1、2個以上の突然変異(例として、アミノ酸置換)は、血清半減期、補体結合、Fc受容体結合、および/または(例として、および)細胞への抗原依存的細胞傷害性などの、抗体の1以上の機能特性を変更させるために、本明細書に記載の筋標的化抗体のFc領域中(例として、Kabatナンバリング系(例として、KabatのEUインデックス)に従うナンバリングで、CH2ドメイン(ヒトIgG1の残基231～340)中、および/または(例として、および)CH3ドメイン(ヒトIgG1の残基341～447)中、および/または(例として、および)ヒンジ領域中)へ導入される。
いくつかの態様において、1、2個以上の突然変異(例として、アミノ酸置換)は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が、例として米国特許第5,677,425号に記載のとおり変動(例として、増大または減少)され得るように、Fc領域(CH1ドメイン)のヒンジ領域中へ導入される。CH1ドメインのヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例として、軽鎖および重鎖の会合(assembly)を容易にさせるため、または抗体の安定性を変更(例として、増大もしくは減少)するため、またはリンカー抱合を容易にさせるため、変更され得る。
いくつかの態様において、1、2個以上の突然変異(例として、アミノ酸置換)は、抗体の、エフェクター細胞表面上のFc受容体(例として、活性化されたFc受容体)への親和性を増加または減少させるため、本明細書に記載の筋標的化抗体のFc領域中(例として、Kabatナンバリング系(例として、KabatのEUインデックス)に従うナンバリングで、CH2ドメイン(ヒトIgG1の残基231～340)中、および/または(例として、および)CH3ドメイン(ヒトIgG1の残基341～447)中、および/または(例として、および)ヒンジ領域中)へ導入される。抗体のFc受容体への親和性を増大または減少させる抗体のFc領域中の突然変異、およびかかる突然変異をFc受容体中またはそのフラグメント中へ導入するための技法は、当業者に知られている。抗体のFc受容体への親和性を変更するためになされ得る、抗体のFc受容体中の突然変異の例は、例として、Smith P et al.,(2012)PNAS 109:6181-6186、米国特許第6,737,056号、ならびに国際刊行物第WO 02/060919号;第WO 98/23289号;および第WO 97/34631号(これらは参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。
いくつかの態様において、1、2個以上のアミノ酸突然変異(すなわち、置換、挿入、または欠失)は、in vivoでの抗体の半減期を変更(例として、増加または減少)させるため、IgG定常領域またはそのFcRn-結合フラグメント(好ましくは、Fcまたはヒンジ-Fcドメインフラグメント)中へ導入される。例えば、in vivoでの抗体の半減期を変更(例として、増加または減少)させるであろう突然変異について、例として、国際刊行物第WO 02/060919号;第WO 98/23289号;および第WO 97/34631号;ならびに米国特許第5,869,046号、第6,121,022号、第6,277,375号、および第6,165,745号を参照。
いくつかの態様において、1、2個以上のアミノ酸突然変異(すなわち、置換、挿入、または欠失)は、in vivoでの抗トランスフェリン受容体抗体の半減期を減少させるため、IgG定常領域またはそのFcRn-結合フラグメント(好ましくは、Fcまたはヒンジ-Fcドメインフラグメント)中へ導入される。いくつかの態様において、1、2個以上のアミノ酸突然変異(すなわち、置換、挿入、または欠失)は、in vivoでの抗体の半減期を増加させるため、IgG定常領域またはそのFcRn-結合フラグメント(好ましくは、Fcまたはヒンジ-Fcドメインフラグメント)中へ導入される。いくつかの態様において、抗体は、KabatのEUインデックス(上記のKabat E Aら(1991))に従うナンバリングで第2定常(CH2)ドメイン(ヒトIgG1の残基231～340)中および/または(例として、および)第3定常(CH3)ドメイン(ヒトIgG1の残基341～447)中に、1個以上のアミノ酸突然変異(例として、置換)を有し得る。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体のIgG1定常領域は、KabatにあるようなEUインデックスに従ってナンバリングされた位置252におけるメチオニン(M)からチロシン(Y)への置換、位置254におけるセリン(S)からトレオニン(T)への置換、および位置256におけるトレオニン(T)からグルタミン酸(E)への置換を含む。米国特許第7,658,921(これは、参照により本明細書に組み込まれる)を参照。「YTE突然変異体」と称されるこのタイプの突然変異IgGは、同じ抗体の野生型バージョンと比較して4倍増大した半減期を発揮したことが示されている(Dall'Acqua W F et al.,(2006)J Biol Chem 281:23514-24を参照)。いくつかの態様において、抗体は、KabatにあるようなEUインデックスに従ってナンバリングされた位置251～257、285～290、308～314、385～389、および428～436でのアミノ酸残基の、1、2、3以上のアミノ酸置換を含むIgG定常領域を含む。
いくつかの態様において、1、2以上のアミノ酸置換は、抗トランスフェリン受容体抗体のエフェクター機能(単数または複数)を変更するため、IgG定常領域Fc領域中へ導入される。自身への親和性が変更されたエフェクターリガンドは、例えば、Fc受容体または補体のC1構成要素であり得る。このアプローチは、米国特許第5,624,821号および第5,648,260号においてさらに詳細に記載される。いくつかの態様において、定常領域ドメインの欠失または不活化(点突然変異または他の手段を通して)は、循環抗体のFc受容体への結合を低減し、それによって腫瘍局在化を増大し得る。定常領域を欠失または不活化し、それによって腫瘍局在化を増大させる突然変異の記載については、例として、米国特許第5,585,097号および第8,591,886号を参照。いくつかの態様において、1以上のアミノ酸置換は、Fc領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去するため(これによってFc受容体への結合が低減されることもある)、本明細書に記載の抗体のFc領域中へ導入されてもよい(例として、Shields R L et al.,(2001)J Biol Chem 276:6591-604を参照)。
いくつかの態様において、本明細書に記載の筋標的化抗体の定常領域中の1以上のアミノ酸残基は、抗体が変更されたClq結合および/または(例として、および)低減もしくは消失された補体依存性細胞傷害性(CDC)を有し得るように、異なるアミノ酸残基に置き換えられ得る。このアプローチは、米国特許第6,194,551号(Idusogieら)においてさらに詳細に記載されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体のCH2ドメインのN末領域中の1以上のアミノ酸残基は変更されて、それによって抗体の補体結合能を変更する。このアプローチは、国際刊行物第WO 94/29351号においてさらに記載されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体のFc領域は、抗体の、細胞への抗体依存性細胞傷害性(ADCC)の媒介能を増大させるため、および/または(例として、および)、抗体のFcγ受容体への親和性を増大させるため、修飾されている。このアプローチは、国際刊行物第WO 00/42072号においてさらに記載されている。
いくつかの態様において、本明細書に提供される抗体の重鎖および/または(例として、および)軽鎖可変ドメイン(単数または複数)配列(単数または複数)は、本明細書の他の箇所に記載されるとおり、例えば、CDR接合抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくは複合ヒト抗体、または抗原結合性フラグメントを生成するために使用され得る。当業者によって理解されるとおり、本明細書に提供される抗体のいずれかに由来するいずれのバリアント、CDR接合抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または複合抗体は、本明細書に記載の組成物および方法に有用であってもよく、バリアント、CDR接合抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または複合抗体が、これが由来する元の抗体と比べて、トランスフェリン受容体への少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％以上の結合を有し得るように、トランスフェリン受容体への特異的結合能を維持するであろう。
いくつかの態様において、本明細書に提供される抗体は、所望の特性を抗体へ付与する突然変異を含む。例えば、ネイティブなIgG4 mAbに生じることが知られているFabアーム交換(Fab-arm exchange)に起因する潜在的合併症を回避するため、本明細書に提供される抗体は、安定化「Adair」突然変異を含んでいてもよく(Angal S.,et al.,“A single amino acid substitution abolishes the heterogeneity of chimeric mouse/human (IgG4) antibody”,Mol Immunol 30,105-108;1993)、ここでセリン228(EUナンバリング;残基241 Kabatナンバリング)は、IgG1様ヒンジ配列をもたらすプロリンへ変換されている。結果的に、抗体のいずれも、安定化「Adair」突然変異を包含していてもよい。
本明細書に提供されるとおり、本開示の抗体は、任意に、定常領域またはその一部を含んでいてもよい。例えば、VLドメインは、そのC末端にて、軽鎖定常領域様CκまたはCλへ付着されていてもよい。同様に、VHドメインまたはその一部は、すべてのまたは一部の重鎖様IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgM、およびいずれのアイソタイプのサブクラスへ付着されていてもよい。抗体は、好適な定常領域を包含していてもよい(例えば、Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,No.91-3242,National Institutes of Health Publications,Bethesda,Md.(1991)を参照)。したがって、本開示の範囲内の抗体は、いずれの好適な定常領域と組み合わされて、VHおよびVLドメイン、またはその抗原結合部を包含していてもよい。
ii．筋標的化ペプチド
本開示のいくつかの側面は、筋標的化ペプチドを筋標的化剤として提供する。特定の細胞型へ結合する短いペプチド配列(例として、長さが5～20アミノ酸のペプチド配列)は記載されている。例えば、細胞標的化ペプチドは、Vines e.,et al.,A.“Cell-penetrating and cell-targeting peptides in drug delivery”Biochim Biophys Acta 2008,1786:126-38;Jarver P.,et al.,“In vivo biodistribution and efficacy of peptide mediated delivery”Trends Pharmacol Sci 2010;31:528-35;Samoylova T.I.,et al.,“Elucidation of muscle-binding peptides by phage display screening”Muscle Nerve 1999;22:460-6;米国特許第6,329,501号、2001年12月11日発行、表題“METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETING COMPOUNDS TO MUSCLE”;およびSamoylov A.M.,et al.,“Recognition of cell-specific binding of phage display derived peptides using an acoustic wave sensor.”Biomol Eng 2002;18:269-72に記載されている;これら各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。特定の細胞表面抗原(例として、受容体)と相互作用するようにペプチドを設計することによって、所望される組織、例として、筋肉への選択性が獲得され得る。骨格筋標的化が調査されており、広範な分子ペイロードが送達されることができる。巨大な抗体またはウイルス粒子についての実際上の不利な点の多くが存在しないこれらのアプローチは、筋組織への高選択性を有していてもよい。結果的に、いくつかの態様において、筋標的化剤は、長さが4アミノ酸から50アミノ酸までの筋標的化ペプチドである。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは、長さが4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50アミノ酸である。筋標的化ペプチドは、ファージディスプレーなどの数種の方法のいずれかを使用して生成され得る。
いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは、他のある細胞と比較して、筋細胞において過剰発現されているかまたは相対的に高度に発現されている、内在化する細胞表面受容体(例として、トランスフェリン受容体)へ結合してもよい。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは、トランスフェリン受容体を標的にしてもよい(例として、トランスフェリン受容体へ結合してもよい)。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体を標的にするペプチドは、天然に存在するリガンド、例として、トランスフェリンのセグメントを含んでいてもよい。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体を標的にするペプチドは、米国特許第6,743,893号、11/30/2000出願、「RECEPTOR-MEDIATED UPTAKE OF PEPTIDES THAT BIND THE HUMAN TRANSFERRIN RECEPTOR」に記載のとおりである。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体を標的にするペプチドは、Kawamoto, M. et al,“A novel transferrin receptor-targeted hybrid peptide disintegrates cancer cell membrane to induce rapid killing of cancer cells.”BMC Cancer.2011 Aug 18;11:359に記載のとおりである。いくつかの態様において、トランスフェリン受容体を標的にするペプチドは、米国特許第8,399,653号、5/20/2011出願、「TRANSFERRIN/TRANSFERRIN RECEPTOR-MEDIATED SIRNA DELIVERY」に記載のとおりである。
上述のとおり、筋標的化ペプチドの例は報告されている。例えば、筋肉特異的ペプチドは、表面へプタペプチドを提示するファージディスプレーライブラリを使用して同定された。一例として、アミノ酸配列ASSLNIA(配列番号718)を有するペプチドは、in vitroでC2C12マウス筋管へ結合し、かつin vivoでマウス筋組織へ結合した。結果的に、いくつかの態様において、筋標的化剤は、アミノ酸配列ASSLNIA(配列番号718)を含む。このペプチドは、肝臓、腎臓、および脳への結合が低減された、マウスへの静脈内注射後の心筋組織および骨格筋組織への結合について改善された特異性を発揮した。追加の筋肉特異的ペプチドがファージディスプレーを使用して同定されている。例えば、DMDへの処置という文脈において、12アミノ酸ペプチドが、筋標的化のためのファージディスプレーライブラリによって同定された。Yoshida D.,et al.,“Targeting of salicylate to skin and muscle following topical injections in rats.”Int J Pharm 2002;231:177-84を参照;この内容全体はこれによって参照により組み込まれる。ここで、配列SKTFNTHPQSTP(配列番号719)を有する12アミノ酸ペプチドが同定され、この筋標的化ペプチドは、ASSLNIA(配列番号718)ペプチドと比べてC2C12細胞への改善された結合を示した。
他の細胞型より筋肉(例として、骨格筋)に対して選択的なペプチドを同定するためのいずれの追加の方法はin vitroでの選択を包含し、これはGhosh D.,et al.,“Selection of muscle-binding peptides from context-specific peptide-presenting phage libraries for adenoviral vector targeting”J Virol 2005;79:13667-72に記載されている;この内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。ランダム12-merペプチドファージディスプレーライブラリを非筋細胞型の混合物とプレインキュベートすることによって、非特異的細胞バインダーが選出された。選択ラウンド(rounds of selection)を受けて、12アミノ酸ペプチドTARGEHKEEELI(配列番号720)が最も頻繁に現れた。結果的に、いくつかの態様において、筋標的化剤は、アミノ酸配列TARGEHKEEELI(配列番号720)を含む。
筋標的化剤は、アミノ酸含有分子またはペプチドであってもよい。筋標的化ペプチドは、筋細胞から見出されたタンパク質受容体へ優先的に結合するタンパク質の配列に対応していてもよい。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは、ペプチドが筋細胞を優先的に標的にし得るように、疎水性アミノ酸(例として、バリン)の性質(propensity)を高く含有する。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは、これまでに特徴付けも開示もされていない。これらのペプチドは、数種の方法論のいずれか、例として、ファージディスプレードペプチドライブラリ、1ビーズ・1化合物(one-bead one-compound)ペプチドライブラリ、または位置走査性(positional scanning)合成ペプチドコンビナトリアルライブラリを使用して、想起、産生、合成、および/または(例として、および)、誘導体化されてもよい。例示の方法論は当該技術分野において特徴付けされており、参照により組み込まれる(Gray,B.P.and Brown,K.C.“Combinatorial Peptide Libraries:Mining for Cell-Binding Peptides”Chem Rev.2014,114:2,1020-1081.;Samoylova,T.I.and Smith,B.F.“Elucidation of muscle-binding peptides by phage display screening.”Muscle Nerve,1999,22:4.460-6)。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドはこれまでに開示されている(例として、Writer M.J.et al.“Targeted gene delivery to human airway epithelial cells with synthetic vectors incorporating novel targeting peptides selected by phage display.”J.Drug Targeting.2004;12:185;Cai,D.“BDNF-mediated enhancement of inflammation and injury in the aging heart.”Physiol Genomics.2006,24:3,191-7.;Zhang,L.“Molecular profiling of heart endothelial cells.”Circulation,2005,112:11,1601-11.;McGuire,M.J.et al.“In vitro selection of a peptide with high selectivity for cardiomyocytes in vivo.”J Mol Biol.2004,342:1,171-82を参照)。例示の筋標的化ペプチドは、以下の群のアミノ酸配列を含む:CQAQGQLVC(配列番号721)、CSERSMNFC(配列番号722)、CPKTRRVPC(配列番号723)、WLSEAGPVVTVRALRGTGSW(配列番号724)、ASSLNIA(配列番号718)、CMQHSMRVC(配列番号725)、およびDDTRHWG(配列番号726)。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは、約2～25アミノ酸、約2～20アミノ酸、約2～15アミノ酸、約2～10アミノ酸、または約2～5アミノ酸を含んでいてもよい。筋標的化ペプチドは、天然に存在するアミノ酸、例として、システイン、アラニン、または天然に存在しないアミノ酸、もしくは修飾アミノ酸を含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸は、β-アミノ酸、ホモ-アミノ酸、プロリン誘導体、3-置換アラニン誘導体、線形コアアミノ酸(linear core amino acids)、N-メチルアミノ酸、および当該技術分野において知られているその他のアミノ酸を包含する。いくつかの態様において、筋標的化ペプチドは線状であってもよい;他の態様において、筋標的化ペプチドは環状(例として、二環式)であってもよい(例として、Silvana,M.G.et al.Mol.Therapy,2018,26:1,132-147を参照)。
iii．筋標的化受容体リガンド
筋標的化剤は、リガンド、例として、受容体タンパク質へ結合するリガンドであってもよい。筋標的化リガンドは、筋細胞によって発現される内在化する細胞表面受容体へ結合するタンパク質、例として、トランスフェリンであってもよい。結果的に、いくつかの態様において、筋標的化剤は、トランスフェリン、またはトランスフェリン受容体へ結合するその誘導体である。筋標的化リガンドは、代替的に、小分子、例として、他の細胞型と比べて優先的に筋細胞を標的にする親油性小分子であってもよい。筋細胞を標的にしてもよい例示の親油性小分子は、コレステロール、コレステリル、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、オレイル、リノレン酸、リノール酸、ミリスチン酸、ステロール、ジヒドロテストステロン、テストステロン誘導体、グリセリン、アルキル鎖、トリチル基、およびアルコキシ酸を含む化合物を包含する。
iv．筋標的化アプタマー
筋標的化剤は、他の細胞型と比べて優先的に筋細胞を標的にするアプタマー、例としてRNAアプタマーであってもよい。いくつかの態様において、筋標的化アプタマーはこれまでに特徴付けも開示もされていない。これらのアプタマーは、数種の方法論のいずれか、例として、指数関数的濃縮によるリガンドの体系的進化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)を使用して、想起、産生、合成、および/または(例として、および)、誘導体化されてもよい。例示の方法論は当該技術分野において特徴付けされており、参照により組み込まれる(Yan,A.C. and Levy,M.“Aptamers and aptamer targeted delivery” RNA biology,2009,6:3,316-20.;Germer,K.et al.“RNA aptamers and their therapeutic and diagnostic applications.”Int.J.Biochem.Mol.Biol.2013;4:27-40)。いくつかの態様において、筋標的化アプタマーはこれまでに開示されている(例として、Phillippou,S.et al.“Selection and Identification of Skeletal-Muscle-Targeted RNA Aptamers.”Mol Ther Nucleic Acids.2018,10:199-214.;Thiel,W.H.et al.“Smooth Muscle Cell-targeted RNA Aptamer Inhibits Neointimal Formation.”Mol Ther.2016,24:4,779-87を参照)。例示の筋標的化アプタマーは、A01B RNAアプタマーおよびRNA Apt 14を包含する。いくつかの態様において、アプタマーは、核酸をベースとしたアプタマー、オリゴヌクレオチドアプタマー、またはペプチドアプタマーである。いくつかの態様において、アプタマーは、約5～15kDa、約5～10kDa、約10～15kDa、約1～5Da、約1～3kDa、またはこれより小さいものであってもよい。
ｖ．他の筋標的化剤
筋細胞(例として、骨格筋細胞)を標的にするための1つのストラテジーは、筋線維鞘上に発現されたトランスポータータンパク質などの筋肉トランスポータータンパク質の基質を使用することである。いくつかの態様において、筋標的化剤は、筋組織に特異的な流入トランスポーターの基質である。いくつかの態様において、流入トランスポーターは、骨格筋組織に特異的である。骨格筋の筋線維鞘上に発現されるトランスポーターの二大クラスは、(1)骨格筋組織からの流出に容易にさせる、アデノシン三リン酸(ATP)結合カセット(ABC)スーパーファミリー、および(2)基質の骨格筋中への流入を容易にし得る、溶質輸送体(solute carrier)(SLC)スーパーファミリーである。いくつかの態様において、筋標的化剤は、トランスポーターのABCスーパーファミリーまたはSLCスーパーファミリーへ結合する基質である。いくつかの態様において、トランスポーターのABCまたはSLCスーパーファミリーへ結合する基質は、天然に存在する基質である。いくつかの態様において、トランスポーターのABCまたはSLCスーパーファミリーへ結合する基質は、天然に存在しない基質、例えば、トランスポーターのABCまたはSLCスーパーファミリーへ結合するその合成誘導体である。
いくつかの態様において、筋標的化剤は、トランスポーターのSLCスーパーファミリーの基質である。SLCトランスポーターは、平衡型であるか、または基質の輸送を推進させる膜にわたって創出されたプロトンもしくはナトリウムのイオン勾配を使用するかのいずれかである。骨格筋への高発現を有する例示のSLCトランスポーターは、限定せずに、SATTトランスポーター(ASCT1;SLC1A4)、GLUT4トランスポーター(SLC2A4)、GLUT7トランスポーター(GLUT7;SLC2A7)、ATRC2トランスポーター(CAT-2;SLC7A2)、LAT3トランスポーター(KIAA0245;SLC7A6)、PHT1トランスポーター(PTR4;SLC15A4)、OATP-Jトランスポーター(OATP5A1;SLC21A15)、OCT3トランスポーター(EMT;SLC22A3)、OCTN2トランスポーター(FLJ46769;SLC22A5)、ENTトランスポーター(ENT1;SLC29A1およびENT2;SLC29A2)、PAT2トランスポーター(SLC36A2)、およびSAT2トランスポーター(KIAA1382;SLC38A2)を包含する。これらのトランスポーターは、基質の骨格筋中への流入を容易にさせることで、筋標的化のための好機を提供し得る。
いくつかの態様において、筋標的化剤は、平衡型ヌクレオシドトランスポーター2(ENT2)トランスポーターの基質である。他のトランスポーターと比べて、ENT2は、骨格筋において最高発現するmRNAの1つを有する。ヒトENT2(hENT2)は、脳、心臓、胎盤、胸腺、膵臓、前立腺、および腎臓などのほとんどの体器官に発現されるものの、とくに骨格筋に豊富である。ヒトENT2は、その基質の取り込みを、それらの濃度勾配に応じて容易にさせる。ENT2は、広範なプリンおよびピリミジン核酸塩基を輸送することによってヌクレオシドホメオスタシスを維持する役割を果たす。hENT2トランスポーターは、イノシンを除くすべてのヌクレオシド(アデノシン、グアノシン、ウリジン、チミジン、およびシチジン)に対して低親和性を有する。結果的に、いくつかの態様において、筋標的化剤は、ENT2基質である。例示のENT2基質は、限定せずに、イノシン、2',3'-ジデオキシイノシン、およびクロファラビンを包含する。いくつかの態様において、本明細書に提供される筋標的化剤のいずれも、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチドペイロード)に関連する。いくつかの態様において、筋標的化剤は、分子ペイロードへ共有結合的に連結されている。いくつかの態様において、筋標的化剤は、分子ペイロードへ非共有結合的に連結されている。
いくつかの態様において、筋標的化剤は、ナトリウムイオン依存性の高親和性カルニチントランスポーターである有機カチオン/カルニチントランスポーター(OCTN2)の基質である。いくつかの態様において、筋標的化剤は、カルニチン、ミルドロネート、アセチルカルニチン、またはOCTN2へ結合するそのいずれかの誘導体である。いくつかの態様において、カルニチン、ミルドロネート、アセチルカルニチン、またはそれらの誘導体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチドペイロード)へ共有結合的に連結されている。
筋標的化剤は、筋細胞を標的にする少なくとも1つの可溶性形態で存在するタンパク質であるタンパク質であってもよい。いくつかの態様において、筋標的化タンパク質は、鉄過剰およびホメオスタシスに関与するタンパク質ヘモジュベリン(またrepulsive guidance molecule Cまたはヘモクロマトーシスタイプ2タンパク質としても知られている)であってもよい。いくつかの態様において、ヘモジュベリンは、完全長もしくはフラグメントであっても、または機能的ヘモジュベリンタンパク質と少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、もしくは少なくとも99％配列同一性をもつ突然変異体であってもよい。いくつかの態様において、ヘモジュベリン突然変異体は、可溶性フラグメントであってもよく、N末シグナリングを欠いていてもよく、および/または(例として、および)、C末アンカードメイン(anchoring domain)を欠いていてもよい。いくつかの態様において、ヘモジュベリンは、GenBank RefSeq受託番号NM_001316767.1、NM_145277.4、NM_202004.3、NM_213652.3、またはNM_213653.3の注釈付きのものであってもよい。ヘモジュベリンがヒト、霊長目の非ヒト動物、または齧歯類の動物を起源とするものであってもよいことは解されるはずである。
Ｂ．分子ペイロード
本開示のいくつかの側面は、分子ペイロード、例として、生物学的結果(例として、DNA配列の転写、タンパク質の発現、またはタンパク質の活性)をモジュレートするための分子ペイロードを提供する。いくつかの態様において、分子ペイロードは、筋標的化剤へ連結されているか、または別様に結び付けられている。いくつかの態様において、かかる分子ペイロードは、例として、結び付けられた筋標的化剤による筋細胞への送達を受けた筋細胞中の核酸またはタンパク質への特異的結合を介して、筋細胞を標的にすることが可能である。様々なタイプの筋標的化剤が本開示に従って使用されてもよいことは解されるはずである。例えば、分子ペイロードは、オリゴヌクレオチド(例として、アンチセンスオリゴヌクレオチド)、ペプチド(例として、疾患に関連する筋細胞中の核酸もしくはタンパク質に結合するペプチド)、タンパク質(例として、疾患に関連する筋細胞中の核酸もしくはタンパク質に結合するタンパク質)、または小分子(例として、疾患に関連する筋細胞中の核酸もしくはタンパク質の機能をモジュレートする小分子)を含んでいてもよく、またはこれらからなっていてもよい。いくつかの態様において、分子ペイロードは、疾患関連反復拡張を含むDMPKアレルに相補性のある領域を有する鎖を含むオリゴヌクレオチドである。例示の分子ペイロードは本明細書にさらに詳細に記載されているが、しかしながら、本明細書に提供される例示の分子ペイロードが限定されることを意図していないことは解されるはずである。
ｉ．オリゴヌクレオチド
いずれの好適なオリゴヌクレオチドも、分子ペイロードとして、本明細書に記載のとおり使用されてよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、mRNAの分解を引き起こすよう設計されていてもよい(例として、オリゴヌクレオチドは、分解を引き起こすgapmer、siRNA、リボザイム、またはアプタマーであってもよい)。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、mRNAの翻訳を遮断するよう設計されていてもよい(例として、オリゴヌクレオチドは、翻訳を遮断するmixmer、siRNA、またはアプタマーであってもよい)。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、mRNAの分解を引き起こしてその翻訳を遮断するよう設計されていてもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、酵素(例として、遺伝子編集酵素)の活性に向かわせるためのガイド核酸(例として、ガイドRNA)であってもよい。オリゴヌクレオチドの他の例は本明細書に提供されている。いくつかの態様において、一方のフォーマット(format)からの機能的配列(例として、アンチセンス鎖配列)を他方のフォーマットへ組み込むことによって、あるフォーマットのオリゴヌクレオチド(例として、アンチセンスオリゴヌクレオチド)が、別のフォーマット(例として、siRNAオリゴヌクレオチド)へ好適に適応されてもよいことは解されるはずである。
DMPKを標的にするために有用なオリゴヌクレオチドの例は、Compound And Method For Treating Myotonic Dystrophyと題する2010年1月1日に公開された米国特許出願刊行物20100016215A1号;Modulation Of Dystrophia Myotonica-Protein Kinase(DMPK)Expressionと題する2010年7月19日に公開された米国特許出願刊行物20130237585A1号;「Antisense Conjugates For Decreasing Expression Of Dmpk」と題する2015年3月5日に公開された米国特許出願刊行物20150064181A1号;「Peptide-Linked Morpholino Antisense Oligonucleotides For Treatment Of Myotonic Dystrophy」と題する2015年8月27日に公開された米国特許出願刊行物20150238627A1号;および「Compounds And Methods For Modulation Of Dystrophia Myotonica-Protein Kinase (Dmpk) Expression」と題する2016年10月20日に公開された米国特許出願刊行物20160304877A1に提供され、これら各々の内容全体は本明細書に組み込まれる。
DMPK遺伝子編集を促進するためのオリゴヌクレオチドの例は、「Genetic Correction Of Myotonic Dystrophy Type 1」と題する2017年3月3日に公開された米国特許出願刊行物20170088819A1号;および、「Materials And Methods For Treatment Of Myotonic Dystrophy Type 1 (DM1) And Other Related Disorders」と題する2018年4月1日に公開された国際特許出願刊行物WO18002812A1号を包含し、これら各々の内容全体は本明細書に組み込まれる。
複合体および分子ペイロード(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)のさらなる例は、「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する2020年2月6日に公開された国際特許出願刊行物WO2020/028861号;および「MUSCLE-TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF」と題する2020年2月6日に公開された国際特許出願刊行物WO2020/028857号に提供され、これら各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、ヒトDMPK遺伝子配列(Gene ID 1760; NM_001081560.2)の例である、以下に表される配列に相補性のある領域を有していてもよい:
AGGGGGGCTGGACCAAGGGGTGGGGAGAAGGGGAGGAGGCCTCGGCCGGCCGCAGAGAGAAGTGGCCAGAGAGGCCCAGGGGACAGCCAGGGACAGGCAGACATGCAGCCAGGGCTCCAGGGCCTGGACAGGGGCTGCCAGGCCCTGTGACAGGAGGACCCCGAGCCCCCGGCCCGGGGAGGGGCCATGGTGCTGCCTGTCCAACATGTCAGCCGAGGTGCGGCTGAGGCGGCTCCAGCAGCTGGTGTTGGACCCGGGCTTCCTGGGGCTGGAGCCCCTGCTCGACCTTCTCCTGGGCGTCCACCAGGAGCTGGGCGCCTCCGAACTGGCCCAGGACAAGTACGTGGCCGACTTCTTGCAGTGGGCGGAGCCCATCGTGGTGAGGCTTAAGGAGGTCCGACTGCAGAGGGACGACTTCGAGATTCTGAAGGTGATCGGACGCGGGGCGTTCAGCGAGGTAGCGGTAGTGAAGATGAAGCAGACGGGCCAGGTGTATGCCATGAAGATCATGAACAAGTGGGACATGCTGAAGAGGGGCGAGGTGTCGTGCTTCCGTGAGGAGAGGGACGTGTTGGTGAATGGGGACCGGCGGTGGATCACGCAGCTGCACTTCGCCTTCCAGGATGAGAACTACCTGTACCTGGTCATGGAGTATTACGTGGGCGGGGACCTGCTGACACTGCTGAGCAAGTTTGGGGAGCGGATTCCGGCCGAGATGGCGCGCTTCTACCTGGCGGAGATTGTCATGGCCATAGACTCGGTGCACCGGCTTGGCTACGTGCACAGGGACATCAAACCCGACAACATCCTGCTGGACCGCTGTGGCCACATCCGCCTGGCCGACTTCGGCTCTTGCCTCAAGCTGCGGGCAGATGGAACGGTGCGGTCGCTGGTGGCTGTGGGCACCCCAGACTACCTGTCCCCCGAGATCCTGCAGGCTGTGGGCGGTGGGCCTGGGACAGGCAGCTACGGGCCCGAGTGTGACTGGTGGGCGCTGGGTGTATTCGCCTATGAAATGTTCTATGGGCAGACGCCCTTCTACGCGGATTCCACGGCGGAGACCTATGGCAAGATCGTCCACTACAAGGAGCACCTCTCTCTGCCGCTGGTGGACGAAGGGGTCCCTGAGGAGGCTCGAGACTTCATTCAGCGGTTGCTGTGTCCCCCGGAGACACGGCTGGGCCGGGGTGGAGCAGGCGACTTCCGGACACATCCCTTCTTCTTTGGCCTCGACTGGGATGGTCTCCGGGACAGCGTGCCCCCCTTTACACCGGATTTCGAAGGTGCCACCGACACATGCAACTTCGACTTGGTGGAGGACGGGCTCACTGCCATGGAGACACTGTCGGACATTCGGGAAGGTGCGCCGCTAGGGGTCCACCTGCCTTTTGTGGGCTACTCCTACTCCTGCATGGCCCTCAGGGACAGTGAGGTCCCAGGCCCCACACCCATGGAACTGGAGGCCGAGCAGCTGCTTGAGCCACACGTGCAAGCGCCCAGCCTGGAGCCCTCGGTGTCCCCACAGGATGAAACAGCTGAAGTGGCAGTTCCAGCGGCTGTCCCTGCGGCAGAGGCTGAGGCCGAGGTGACGCTGCGGGAGCTCCAGGAAGCCCTGGAGGAGGAGGTGCTCACCCGGCAGAGCCTGAGCCGGGAGATGGAGGCCATCCGCACGGACAACCAGAACTTCGCCAGTCAACTACGCGAGGCAGAGGCTCGGAACCGGGACCTAGAGGCACACGTCCGGCAGTTGCAGGAGCGGATGGAGTTGCTGCAGGCAGAGGGAGCCACAGCTGTCACGGGGGTCCCCAGTCCCCGGGCCACGGATCCACCTTCCCATCTAGATGGCCCCCCGGCCGTGGCTGTGGGCCAGTGCCCGCTGGTGGGGCCAGGCCCCATGCACCGCCGCCACCTGCTGCTCCCTGCCAGGGTCCCTAGGCCTGGCCTATCGGAGGCGCTTTCCCTGCTCCTGTTCGCCGTTGTTCTGTCTCGTGCCGCCGCCCTGGGCTGCATTGGGTTGGTGGCCCACGCCGGCCAACTCACCGCAGTCTGGCGCCGCCCAGGAGCCGCCCGCGCTCCCTGAACCCTAGAACTGTCTTCGACTCCGGGGCCCCGTTGGAAGACTGAGTGCCCGGGGCACGGCACAGAAGCCGCGCCCACCGCCTGCCAGTTCACAACCGCTCCGAGCGTGGGTCTCCGCCCAGCTCCAGTCCTGTGATCCGGGCCCGCCCCCTAGCGGCCGGGGAGGGAGGGGCCGGGTCCGCGGCCGGCGAACGGGGCTCGAAGGGTCCTTGTAGCCGGGAATGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGGGGGATCACAGACCATTTCTTTCTTTCGGCCAGGCTGAGGCCCTGACGTGGATGGGCAAACTGCAGGCCTGGGAAGGCAGCAAGCCGGGCCGTCCGTGTTCCATCCTCCACGCACCCCCACCTATCGTTGGTTCGCAAAGTGCAAAGCTTTCTTGTGCATGACGCCCTGCTCTGGGGAGCGTCTGGCGCGATCTCTGCCTGCTTACTCGGGAAATTTGCTTTTGCCAAACCCGCTTTTTCGGGGATCCCGCGCCCCCCTCCTCACTTGCGCTGCTCTCGGAGCCCCAGCCGGCTCCGCCCGCTTCGGCGGTTTGGATATTTATTGACCTCGTCCTCCGACTCGCTGACAGGCTACAGGACCCCCAACAACCCCAATCCACGTTTTGGATGCACTGAGACCCCGACATTCCTCGGTATTTATTGTCTGTCCCCACCTAGGACCCCCACCCCCGACCCTCGCGAATAAAAGGCCCTCCATCTGCCCAAAGCTCTGGA(配列番号727)。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、マウスDMPK遺伝子配列(Gene ID 13400;NM_001190490.1)の例である、以下に表される配列に相補性のある領域を有していてもよい:
GAACTGGCCAGAGAGACCCAAGGGATAGTCAGGGACGGGCAGACATGCAGCTAGGGTTCTGGGGCCTGGACAGGGGCAGCCAGGCCCTGTGACGGGAAGACCCCGAGCTCCGGCCCGGGGAGGGGCCATGGTGTTGCCTGCCCAACATGTCAGCCGAAGTGCGGCTGAGGCAGCTCCAGCAGCTGGTGCTGGACCCAGGCTTCCTGGGACTGGAGCCCCTGCTCGACCTTCTCCTGGGCGTCCACCAGGAGCTGGGTGCCTCTCACCTAGCCCAGGACAAGTATGTGGCCGACTTCTTGCAGTGGGTGGAGCCCATTGCAGCAAGGCTTAAGGAGGTCCGACTGCAGAGGGATGATTTTGAGATTTTGAAGGTGATCGGGCGTGGGGCGTTCAGCGAGGTAGCGGTGGTGAAGATGAAACAGACGGGCCAAGTGTATGCCATGAAGATTATGAATAAGTGGGACATGCTGAAGAGAGGCGAGGTGTCGTGCTTCCGGGAAGAAAGGGATGTATTAGTGAAAGGGGACCGGCGCTGGATCACACAGCTGCACTTTGCCTTCCAGGATGAGAACTACCTGTACCTGGTCATGGAATACTACGTGGGCGGGGACCTGCTAACGCTGCTGAGCAAGTTTGGGGAGCGGATCCCCGCCGAGATGGCTCGCTTCTACCTGGCCGAGATTGTCATGGCCATAGACTCCGTGCACCGGCTGGGCTACGTGCACAGGGACATCAAACCAGATAACATTCTGCTGGACCGATGTGGGCACATTCGCCTGGCAGACTTCGGCTCCTGCCTCAAACTGCAGCCTGATGGAATGGTGAGGTCGCTGGTGGCTGTGGGCACCCCGGACTACCTGTCTCCTGAGATTCTGCAGGCCGTTGGTGGAGGGCCTGGGGCAGGCAGCTACGGGCCAGAGTGTGACTGGTGGGCACTGGGCGTGTTCGCCTATGAGATGTTCTATGGGCAGACCCCCTTCTACGCGGACTCCACAGCCGAGACATATGCCAAGATTGTGCACTACAGGGAACACTTGTCGCTGCCGCTGGCAGACACAGTTGTCCCCGAGGAAGCTCAGGACCTCATTCGTGGGCTGCTGTGTCCTGCTGAGATAAGGCTAGGTCGAGGTGGGGCAGACTTCGAGGGTGCCACGGACACATGCAATTTCGATGTGGTGGAGGACCGGCTCACTGCCATGGTGAGCGGGGGCGGGGAGACGCTGTCAGACATGCAGGAAGACATGCCCCTTGGGGTGCGCCTGCCCTTCGTGGGCTACTCCTACTGCTGCATGGCCTTCAGAGACAATCAGGTCCCGGACCCCACCCCTATGGAACTAGAGGCCCTGCAGTTGCCTGTGTCAGACTTGCAAGGGCTTGACTTGCAGCCCCCAGTGTCCCCACCGGATCAAGTGGCTGAAGAGGCTGACCTAGTGGCTGTCCCTGCCCCTGTGGCTGAGGCAGAGACCACGGTAACGCTGCAGCAGCTCCAGGAAGCCCTGGAAGAAGAGGTTCTCACCCGGCAGAGCCTGAGCCGCGAGCTGGAGGCCATCCGGACCGCCAACCAGAACTTCTCCAGCCAACTACAGGAGGCCGAGGTCCGAAACCGAGACCTGGAGGCGCATGTTCGGCAGCTACAGGAACGGATGGAGATGCTGCAGGCCCCAGGAGCCGCAGCCATCACGGGGGTCCCCAGTCCCCGGGCCACGGATCCACCTTCCCATCTAGATGGCCCCCCGGCCGTGGCTGTGGGCCAGTGCCCGCTGGTGGGGCCAGGCCCCATGCACCGCCGTCACCTGCTGCTCCCTGCCAGGATCCCTAGGCCTGGCCTATCCGAGGCGCGTTGCCTGCTCCTGTTCGCCGCTGCTCTGGCTGCTGCCGCCACACTGGGCTGCACTGGGTTGGTGGCCTATACCGGCGGTCTCACCCCAGTCTGGTGTTTCCCGGGAGCCACCTTCGCCCCCTGAACCCTAAGACTCCAAGCCATCTTTCATTTAGGCCTCCTAGGAAGGTCGAGCGACCAGGGAGCGACCCAAAGCGTCTCTGTGCCCATCGCGCCCCCCCCCCCCCCCCACCGCTCCGCTCCACACTTCTGTGAGCCTGGGTCCCCACCCAGCTCCGCTCCTGTGATCCAGGCCTGCCACCTGGCGGCCGGGGAGGGAGGAACAGGGCTCGTGCCCAGCACCCCTGGTTCCTGCAGAGCTGGTAGCCACCGCTGCTGCAGCAGCTGGGCATTCGCCGACCTTGCTTTACTCAGCCCCGACGTGGATGGGCAAACTGCTCAGCTCATCCGATTTCACTTTTTCACTCTCCCAGCCATCAGTTACAAGCCATAAGCATGAGCCCCCTATTTCCAGGGACATCCCATTCCCATAGTGATGGATCAGCAAGACCTCTGCCAGCACACACGGAGTCTTTGGCTTCGGACAGCCTCACTCCTGGGGGTTGCTGCAACTCCTTCCCCGTGTACACGTCTGCACTCTAACAACGGAGCCACAGCTGCACTCCCCCCTCCCCCAAAGCAGTGTGGGTATTTATTGATCTTGTTATCTGACTCACTGACAGACTCCGGGACCCACGTTTTAGATGCATTGAGACTCGACATTCCTCGGTATTTATTGTCTGTCCCCACCTACGACCTCCACTCCCGACCCTTGCGAATAAAATACTTCTGGTCTGCCCTAAA (配列番号728)。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、例として、ヒト、マウスおよび非ヒト種から選択される、複数の種のDMPK遺伝子配列に相補性のある領域を有していてもよい。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、DMPKの突然変異型、例えば、Botta A. et al.“The CTG repeat expansion size correlates with the splicing defects observed in muscles from myotonic dystrophy type 1 patients.”J Med Genet.2008 Oct;45(10):639-46.;およびMachuca-Tzili L. et al.“Clinical and molecular aspects of the myotonic dystrophies: a review.”Muscle Nerve.2005 Jul;32(1):1-18.(これら各々の内容全体は本明細書に組み込まれる)で報告された突然変異型と、相補性のある領域を有してもよい。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、lncRNAまたはmRNAを、例として分解のために、標的にしてもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、例として分解のために、ミスマッチ修復経路に関与するタンパク質をコードする核酸、例として、MSH2、MutLアルファ、MutSベータ、MutLアルファを標的にしてもよい。ミスマッチ修復経路に関与するタンパク質(かかるタンパク質をコードするmRNAは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドによって標的にされてもよい)の非限定例は、Iyer,R.R.et al.,“DNA triplet repeat expansion and mismatch repair”Annu Rev Biochem.2015;84:199-226;およびSchmidt M.H. and Pearson C.E.,“Disease-associated repeat instability and mismatch repair”DNA Repair(Amst).2016 Feb;38:117-26に記載されている。
いくつかの態様において、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、DMPKを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチド標的化は、参照により本明細書に組み込まれる「Compounds And Methods For Modulation Of Dystrophia Myotonica-Protein Kinase (DMPK) Expression」と題する2016年10月20日に公開された米国特許出願刊行物US20160304877A1号に記載された、DMPKを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチド(例として、Gapmer)のいずれか1つである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、Genbank受託番号NM_001081560.2(配列番号727)で表されるまたはGenbank受託番号NG_009784.1で表されるDMPK遺伝子配列の領域を標的にする。
いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号727中の少なくとも10個の連続的なヌクレオチド(例として、少なくとも10個、少なくとも12個、少なくとも14個、少なくとも16個、またはそれ以上の連続的なヌクレオチド)である標的領域に相補的な領域を含むヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、gapmerモチーフを含む。「gapmer」は、RNase H切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域が、1個以上のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置されるキメラのアンチセンス化合物を意味し、ここで内部領域を含むヌクレオチドは、ヌクレオチドまたは外部領域を含むヌクレオチドとは化学的に別個である。内部領域は「gapセグメント」と称され得、および外部領域は「wingセグメント」と称され得る。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、1個以上の修飾ヌクレオチド、および/または(例として、および)1個以上の修飾ヌクレオチド間連結を含む。いくつかの態様において、ヌクレオチド間連結は、ホスホロチオアート連結である。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、完全なホスホロチオアート主鎖を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、cET末端を伴うDNA gapmer(例として、3-10-3;cET-DNA-cET)である。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、1以上の6'-(S)-CH3二環式ヌクレオチド、1以上のβ-D-2'-デオキシリボヌクレオチド、および/または(例として、および)1以上の5メチル-シトシンヌクレオチドを含む。
いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、式5'-X-Y-Z-3'を有するgapmerであり、ウイングセグメントとしてXおよびZ、ならびにギャップセグメントYを有する。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、式5'-4-8-4-3'を有するgapmerである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、式5'-5-10-5-3'を有するgapmerである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、式5'-3-10-3-3'を有するgapmerである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、5-メチルシトシンヌクレオチド、2'OMeヌクレオチド、2'フルオロヌクレオチド、LNA、および/または(例として、および)2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)ヌクレオチドの1以上を含むgapmerである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、1以上の修飾ヌクレオチド間連結(例として、ホスホロチオアート連結)を含むgapmerである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、完全なホスホロチオアート主鎖を含むgapmerである。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオアート連結およびホスホジエステル連結の混合を含むgapmerである。
いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチドから選択される。いくつかの態様において、DMPK標的化オリゴヌクレオチドのいずれか1つは、例として、ナトリウム、カリウム、またはマグネシウム塩としての塩形態であり得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチド)のいずれか1つの5'または3'ヌクレオシド(例として、末端ヌクレオシド)は、任意にスペーサーを介してアミン基に抱合される。いくつかの態様において、スペーサーは脂肪族部分を含む。いくつかの態様において、スペーサーはポリエチレングリコール部分を含む。いくつかの態様においては、ホスホジエステル連結がスペーサーとオリゴヌクレオチドの5'または3'ヌクレオシドとの間に存在する。いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチド)のいずれかの5'または3'ヌクレオシド(例として、末端ヌクレオシド)はスペーサーに抱合され、これが置換もしくは非置換の脂肪族、置換もしくは非置換のヘテロ脂肪族、置換もしくは非置換のカルボシクリレン、置換もしくは非置換のヘテロシクリレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレン、-O-、-N(RA)-、-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRA-、-NRAC(＝O)-、-NRAC(＝O)RA-、-C(＝O)RA-、-NRAC(＝O)O-、-NRAC(＝O)N(RA)-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)O-、-OC(＝O)N(RA)-、-S(O)2NRA-、-NRAS(O)2-、またはそれらの組み合わせであり;各RAは独立して水素または置換もしくは非置換のアルキルである。ある種の態様において、スペーサーは置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクリレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレン、-O-、-N(RA)-、または-C(＝O)N(RA)2、あるいはそれらの組み合わせである。
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチド)のいずれか1つの5'または3'ヌクレオシドは、式-NH2-(CH2)n-の化合物に抱合され、nは1～12の整数である。いくつかの態様において、nは6、7、8、9、10、11、または12である。いくつかの態様においては、ホスホジエステル連結が式NH2-(CH2)n-の化合物とオリゴヌクレオチドの5'または3'ヌクレオシドとの間に存在する。いくつかの態様において、式NH2-(CH2)6-の化合物は6-アミノ-1-ヘキサノール(NH2-(CH2)6-OH)とオリゴヌクレオチドの5'リン酸との間の反応によってオリゴヌクレオチドに抱合される。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、標的化薬剤、例えば抗TfR抗体などの筋標的化剤に例えばアミン基を介して抱合される。
ａ．オリゴヌクレオチドサイズ/配列
オリゴヌクレオチドは、例としてフォーマットに応じて、様々な異なる長さのものであってもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、長さが7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、75ヌクレオチドであるか、またはこれより長い。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、長さが8～50ヌクレオチド、長さが8～40ヌクレオチド、長さが8～30ヌクレオチド、長さが10～15ヌクレオチド、長さが10～20ヌクレオチド、長さが15～25ヌクレオチド、長さが21～23ヌクレオチド等々である。
いくつかの態様において、本開示の目的上オリゴヌクレオチドの相補的な核酸配列は、前記配列の標的分子(例として、mRNA)への結合が標的(例として、mRNA)の正常な機能に干渉して活性の喪失(例として、翻訳の阻害)または発現の喪失(例として、標的mRNAの分解)を引き起こしたとき、かつ非特異的結合の回避が所望される条件下、例として、in vivoアッセイまたは治療処置のケースおよびin vitroアッセイのケースにおける生理学的な条件下、アッセイがストリンジェンシー(stringency)の好適な条件下で実施される条件下で、前記配列の非標的配列への非特異的結合を回避するのに充分な程度の相補性があるとき、標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能であるか、または標的核酸に特異的である。よって、いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸の連続したヌクレオチドに少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、または100％相補的であってもよい。いくつかの態様において、相補的なヌクレオチド配列は、標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能であるか、または標的核酸に特異的であるその標的の配列に100％相補的である必要はない。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、長さが8～15、8～30、8～40、または10～50、または5～50、または5～40ヌクレオチドの範囲にある標的核酸と相補性のある領域を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドの、標的核酸と相補性のある領域は、長さが5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50ヌクレオチドである。いくつかの態様において、相補性のある領域は、標的核酸の少なくとも連続した8ヌクレオチドと相補的である。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸の一部の連続したヌクレオチドと比較して1、2または3塩基ミスマッチを含有していてもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、15塩基にわたり最大3ミスマッチまで、または10塩基にわたり最大2ミスマッチまで有していてもよい。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号246～481および778～795のいずれか1つの少なくとも12または少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと少なくとも70％、75％、80％、85％、90％、95％、または97％配列同一性を共有する配列を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717のいずれか1つを含むDMPK配列を標的にする配列を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717のいずれか1つを含むDMPK配列に対して相補的である少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20ヌクレオチド(例として、一続きのヌクレオチド)を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717のいずれか1つの少なくとも12または少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと少なくとも70％、75％、80％、85％、90％、95％、または97％相補的である配列を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号796～2328のいずれか1つを含む配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号796～2328のいずれか1つを含む配列を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号796～2328のいずれか1つの少なくとも12または少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと少なくとも70％、75％、80％、85％、90％、95％、または97％配列同一性を共有する配列を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号2329～3861のいずれか1つを含むDMPK配列を標的にする配列を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号2329～3861のいずれか1つを含むDMPK配列に対して相補的である少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20ヌクレオチド(例として、一続きのヌクレオチド)を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号2329～3861のいずれか1つの少なくとも12または少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと少なくとも70％、75％、80％、85％、90％、95％、または97％相補的である配列を含む。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列に対する相補性の領域を含む。いくつかの態様において、相補性の領域は、長さが少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも16、少なくとも17、少なくとも19、または少なくとも20ヌクレオチドである。いくつかの態様において、相補性の領域は、長さが8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20ヌクレオチドである。いくつかの態様において、相補性の領域は、長さが8～20、10～20、または15～20ヌクレオチドの範囲である。いくつかの態様において、相補性の領域はその標的配列のすべてまたは部分と完全に相補性である。いくつかの態様において、相補性の領域は1、2、3、またはより多くのミスマッチを包含する。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチド)のいずれか1つの標的配列に対して相補的である(例として、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または100％)。いくつかの態様において、かかる標的配列は、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチドに対して100％相補的である。
いくつかの態様において、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるオリゴヌクレオチド)のいずれか1つの上のチミン塩基(T)のいずれか1つ以上は任意にウラシル塩基(U)であり得、および/またはUのいずれか1つ以上は任意にTであり得る。
ｂ．オリゴヌクレオチド修飾:
本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、修飾されていてもよく、例として、修飾された糖部、修飾されたヌクレオシド間連結、修飾ヌクレオチド、および/またはそれらの組み合わせを含む。加えて、いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、以下の特性の1以上を呈してもよい:選択的スプライシングを媒介しない;免疫刺激性ではない;ヌクレアーゼ抵抗性である;非修飾オリゴヌクレオチドと比較して改善された細胞取り込みを有する;細胞または哺乳動物への毒性がない;改善されたエンドソームの内部への出口(exit)を細胞中に有する;TLR刺激を最小限に抑える;または、パターン認識受容体を回避する。本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの修飾された化学的性質またはフォーマットのいずれも、互いに組み合わせられ得る。例えば、1、2、3、4、5、またはこれより多くの異なるタイプの修飾が、同じオリゴヌクレオチド内に包含され得る。
いくつかの態様において、修飾が組み込まれるオリゴヌクレオチドを、ネイティブなオリゴデオキシヌクレオチド分子またはオリゴリボヌクレオチド分子よりヌクレアーゼ消化に耐性があるようにさせる、特定のヌクレオチド修飾が使用されてもよい;これらの修飾されたオリゴヌクレオチドは、非修飾オリゴヌクレオチドより長時間無傷で存続する。修飾されたオリゴヌクレオチドの特定例は、修飾された主鎖、例えば、ホスホロチオアート、ホスホトリエステル、メチルホスホナート、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間連結、または短鎖ヘテロ原子のもしくは複素環式の糖間連結などの修飾されたヌクレオシド間連結を含むものを包含する。結果的に、本開示のオリゴヌクレオチドは、修飾、例として、ヌクレオチド修飾の組み込みなどによる核酸分解に対して安定化され得る。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの2～10、2～15、2～16、2～17、2～18、2～19、2～20、2～25、2～30、2～40、2～45ヌクレオチド、またはこれより多いヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、長さが最大50ヌクレオチドまでまたは最大100ヌクレオチドまでのオリゴヌクレオチドであってもよい。オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの2～10、2～15、2～16、2～17、2～18、2～19、2～20、2～25、2～30ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、長さが8～30ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドであってもよい。オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの2～4、2～5、2～6、2～7、2～8、2～9、2～10、2～11、2～12、2～13、2～14ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、長さが8～15ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドであってもよい。任意に、オリゴヌクレオチドは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10ヌクレオチドを除き、どのヌクレオチドも修飾されていてもよい。オリゴヌクレオチド修飾は本明細書にさらに記載されている。
ｃ．修飾ヌクレオシド
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、糖の2'位において修飾された少なくとも1つのヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは少なくとも1つの2'修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチド上のヌクレオシドのすべては2'修飾ヌクレオシドである。
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、1以上の非二環式2'-修飾ヌクレオチド、例として、2'-デオキシ、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-O-メトキシエチル(2'-O-MOE)、2'-O-アミノプロピル(2'-O-AP)、2'-O-ジメチルアミノエチル(2'-O-DMAOE)、2'-O-ジメチルアミノプロピル(2'-O-DMAP)、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル(2'-O-DMAEOE)、または2'-O--N-メチルアセトアミド(2'-O--NMA)の修飾ヌクレオシドを包含する。
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、1以上の2'-4'二環式ヌクレオシドを含むが、前記ヌクレオシド中リボース環は、その環中2個の原子を接続する(例として、メチレン(LNA)架橋、エチレン(ENA)架橋、または(S)-拘束エチル(cEt)架橋を介して、2'-O原子を4'-C原子へ接続する)架橋部分を含む。LNAの例は、2008年4月17日に公開され「RNA Antagonist Compounds For The Modulation Of PCSK9」と題する国際特許出願刊行物WO/2008/043753(この内容は、その全体が参照されることによって本明細書に組み込まれる)に記載されている。本明細書に開示のオリゴヌクレオチドに使用されてもよい他の修飾は、エチレン架橋核酸(ENA)を包含する。ENAは、これらに限定されないが、2'-O,4'-C-エチレン架橋核酸を包含する。ENAの例は、2005年5月12日に公開され「APP/ENA Antisense」と題する国際特許刊行物第WO 2005/042777号;Morita et al.,Nucleic Acid Res.,Suppl 1:241-242,2001;Surono et al.,Hum.Gene Ther.,15:749-757,2004;Koizumi,Curr.Opin.Mol.Ther.,8:144-149,2006;およびHorie et al.,Nucleic Acids Symp.Ser(Oxf),49:171-172,2005に提供されており、これらの開示はそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。cEtの例は、米国特許7,101,993;7,399,845および7,569,686に提供されており、これら各々はそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる。。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、以下の米国特許または特許出願刊行物のうち1つに開示された修飾ヌクレオシドを含む:米国特許7,399,845、2008年7月15日発行、表題「6-Modified Bicyclic Nucleic Acid Analogs」;米国特許7,741,457、2010年6月22日発行、表題「6-Modified Bicyclic Nucleic Acid Analogs」;米国特許8,022,193、2011年9月20日発行、表題「6-Modified Bicyclic Nucleic Acid Analogs」;米国特許7,569,686、2009年8月4日発行、表題「Compounds And Methods For Synthesis Of Bicyclic Nucleic Acid Analogs」;米国特許7,335,765、2008年2月26日発行、表題「Novel Nucleoside And Oligonucleotide Analogues」;米国特許7,314,923、2008年1月1日発行、表題「Novel Nucleoside And Oligonucleotide Analogues」;米国特許7,816,333、2010年10月19日発行、表題「Oligonucleotide Analogues And Methods Utilizing The Same」および米国刊行物第2011/0009471号、現在米国特許8,957,201、2015年2月17日発行、表題「Oligonucleotide Analogues And Methods Utilizing The Same」、すべての用途において(for all purposes)、これら各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個の修飾ヌクレオシドも有さないオリゴヌクレオチドと比較して、1℃、2℃、3℃、4℃、または5℃の範囲にあるオリゴヌクレオチドのTmの増大をもたらす少なくとも1個の修飾ヌクレオシドを含む。オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシドを有さないオリゴヌクレオチドと比較して、合計で2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、またはこれを超える温度の範囲にあるオリゴヌクレオチドのTmの増大をもたらす複数の修飾ヌクレオシドを有していてもよい。
オリゴヌクレオチドは、異なる種類のヌクレオシドのミックスを含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、2'-デオキシリボヌクレオシドまたはリボヌクレオシドおよび2'-フルオロ修飾ヌクレオシドのミックスを含み得る。オリゴヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオシドまたはリボヌクレオシドおよび2'-O-Me修飾ヌクレオシドのミックスを含み得る。オリゴヌクレオチドは、2'-フルオロ修飾ヌクレオシドおよび2'-O-Me修飾ヌクレオシドのミックスを含み得る。オリゴヌクレオチドは、2'-4'二環式ヌクレオシドおよび2'MOE、2'-フルオロ、または2'-O-Me修飾ヌクレオシドのミックスを含み得る。オリゴヌクレオチドは、非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOE、2'-フルオロ、または2'-O-Me)および2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNA、ENA、cEt)のミックスを含み得る。
オリゴヌクレオチドは、異なる種類の交互のヌクレオシドを含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、交互の2'-デオキシリボヌクレオシドまたはリボヌクレオシドおよび2'-フルオロ修飾ヌクレオシドを含み得る。オリゴヌクレオチドは、交互のデオキシリボヌクレオシドまたはリボヌクレオシドおよび2'-O-Me修飾ヌクレオシドを含み得る。オリゴヌクレオチドは、交互の2'-フルオロ修飾ヌクレオシドおよび2'-O-Me修飾ヌクレオシドを含み得る。オリゴヌクレオチドは、交互の2'-4'二環式ヌクレオシドおよび2'-MOE、2'-フルオロ、または2'-O-Me修飾ヌクレオシドを含み得る。オリゴヌクレオチドは、交互の非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOE、2'-フルオロ、または2'-O-Me)および2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNA、ENA、cEt)を含み得る。
いくつかの態様においては、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、5'-ビニルホスホン酸修飾、1以上の無塩基残基、および/または1以上の逆向きの無塩基残基を含む。
ｄ．ヌクレオシド間連結/主鎖
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオアートまたは他の修飾ヌクレオシド間連結を含有していてもよい。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間連結を、少なくとも2個のヌクレオチド間に含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間連結を、すべてのヌクレオチド間に含む。例えば、いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間連結を、ヌクレオチド配列の5'または3'末端の、第1の、第2の、および/または(例として、および)、第3のヌクレオシド間連結にて含む。
使用されてもよい、リンを含有する連結は、これらに限定されないが、正常な3'-5'連結、これらの2'-5'連結類似体を有する、ホスホロチオアート、キラルのホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルホスホナート(3'アルキレンホスホナートおよびキラルのホスホナートを含む)、ホスフィナート、ホスホロアミダート(3'-アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含む)、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにボラノホスファートと、逆方向の極性を有するこれら(ここでヌクレオシド単位の隣接する対は3'-5'から5'-3'へまたは2'-5'から5'-2'へ連結されている)とを包含する;米国特許第3,687,808号;第4,469,863号;第4,476,301号;第5,023,243号;第5,177,196号;第5,188,897号;第5,264,423号;第5,276,019号;第5,278,302号;第5,286,717号;第5,321,131号;第5,399,676号;第5,405,939号;第5,453,496号;第5,455,233号;第5,466,677号;第5,476,925号;第5,519,126号;第5,536,821号;第5,541,306号;第5,550,111号;第5,563,253号;第5,571,799号;第5,587,361号;および第5,625,050号を参照。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、メチレン(メチルイミノ)またはMMI主鎖;アミド主鎖(De Mesmaeker et al.Ace.Chem.Res.1995,28:366-374を参照);モルホリノ主鎖(SummertonおよびWeller、米国特許第5,034,506号を参照);またはペプチド核酸(PNA)主鎖(ここでオリゴヌクレオチドのホスホジエステル主鎖がポリアミド主鎖に置き換えられており、ヌクレオチドがポリアミド主鎖のアザ窒素原子へ直接的または間接的に結合されている、Nielsen et al.,Science 1991,254,1497を参照)などのヘテロ原子主鎖を有していてもよい。
ｅ．立体特異的オリゴヌクレオチド
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間のリン原子はキラルであり、およびオリゴヌクレオチドの特性はキラルのリン原子の立体配置に基づき調整される。いくつかの態様において、適切な方法は、立体制御されたやり方(例として、Oka N, Wada T, Stereocontrolled synthesis of oligonucleotide analogs containing chiral internucleotidic phosphorus atoms.Chem Soc Rev.2011 Dec;40(12):5829-43に記載のとおりの)でP-キラルオリゴヌクレオチド類似体を合成するために使用されてもよい。いくつかの態様において、実質的にすべてのSpホスホロチオアート糖間連結または実質的にすべてのRpホスホロチオアート糖間連結のいずれかによって一緒に結び合わされたヌクレオシド単位を含む、ホスホロチオアート含有オリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの態様において、実質的にキラル純粋な糖間連結を有するかかるホスホロチオアートオリゴヌクレオチドは、例えば、1996年12月12日に発行された米国特許5,587,261(この内容は全体が参照されることによって本明細書に組み込まれる)に記載されるとおり、酵素合成または化学合成によって調製される。いくつかの態様において、キラル制御されたオリゴヌクレオチドは、標的核酸の選択的切断パターンを提供する。例えば、いくつかの態様において、キラル制御されたオリゴヌクレオチドは、例えば、2017年2月2日に公開された表題「CHIRAL DESIGN」の米国特許出願刊行物20170037399 A1(この内容は全体が参照されることによって本明細書に組み込まれる)に記載のとおり、核酸の相補的な配列内に単一の切断部位を提供する。
ｆ．モルホリノ
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、モルホリノをベースとした化合物であってもよい。モルホリノをベースとしたオリゴマー化合物は、Dwaine A.Braasch and David R.Corey,Biochemistry,2002,41(14),4503-4510);Genesis,volume 30,issue 3,2001;Heasman,J.,Dev.Biol.,2002,243,209-214;Nasevicius et al.,Nat.Genet.,2000,26,216-220;Lacerra et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,2000,97,9591-9596;および1991年7月23日発行の米国特許第5,034,506号に記載されている。いくつかの態様において、モルホリノをベースとしたオリゴマー化合物は、ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー(PMO)(例として、Iverson,Curr.Opin.Mol.Ther.,3:235-238,2001;およびWang et al.,J.Gene Med.,12:354-364,2010に記載のとおり;これらの開示はこれら全体が参照により本明細書に組み込まれる)。
ｇ．ペプチド核酸(PNA)
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位の糖とヌクレオシド間連結(主鎖)との両方とも、新規な基に置き換えられている。いくつかの態様において、塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持されている。かかるオリゴマー化合物の1つである、優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されているオリゴヌクレオチド模倣物は、ペプチド核酸(PNA)と称される。PNA化合物中のオリゴヌクレオチドの糖-主鎖は、アミド含有主鎖、例えば、アミノエチルグリシン主鎖に置き換えられている。核酸塩基は保持されており、主鎖のアミド部分のアザ窒素原子へ直接的または間接的に結合されている。PNA化合物の調製を報告する代表的な刊行物は、これらに限定されないが、米国特許第5,539,082号;第5,714,331号;および第5,719,262号(これら各々は参照により本明細書に組み込まれる)を包含する。PNA化合物のさらなる教示は、Nielsen et al.,Science,1991,254,1497-1500から見出され得る。
ｈ．Gapmer
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、gapmerである。gapmerオリゴヌクレオチドは一般に、ギャップ領域Yを囲むフランキング(flanking)領域としてXおよびZをもつ式5'-X-Y-Z-3'を有する。いくつかの態様において、式5'-X-Y-Z-3'のフランキング領域Xは、X領域、フランキング配列X、5'ウイング領域X、または5'ウイングセグメントともまた言われる。いくつかの態様において、式5'-X-Y-Z-3'のフランキング領域ZはZ領域、フランキング配列Z、3'ウイング領域Z、または3'ウイングセグメントともまた言われる。いくつかの態様において、式5'-X-Y-Z-3'のギャップ領域YはY領域、Yセグメント、またはギャップセグメントYともまた言われる。いくつかの態様において、ギャップ領域Yの各ヌクレオシドは2'-デオキシリボヌクレオシドであり、5'ウイング領域Xも3'ウイング領域Zもいずれかの2'-デオキシリボヌクレオシドを含有しない。
いくつかの態様において、Y領域は、RNAse HなどのRNAseをリクルートすることができる一続きのヌクレオチド、例えば6つ以上のDNAヌクレオチドの領域である。いくつかの態様において、gapmerは標的核酸に結合し、この点において、RNAseがリクルートされ、それから標的核酸を切断し得る。いくつかの態様において、Y領域は、高親和性修飾ヌクレオシド、例えば1から6つの高親和性修飾ヌクレオシドを含む領域XおよびZによって5'および3'両方をフランキングされる。高親和性修飾ヌクレオシドの例は、2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOE、2'O-Me、2'-F)または2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNA、cEt、ENA)を包含するが、これらに限定されない。いくつかの態様において、フランキング配列XおよびZは長さが1～20ヌクレオチド、1～8ヌクレオチド、または1～5ヌクレオチドであり得る。フランキング配列XおよびZは類似の長さまたは非類似の長さであり得る。いくつかの態様において、ギャップセグメントYは、長さが5～20ヌクレオチド、5～15、12ヌクレオチド、または6～10ヌクレオチドのヌクレオチド配列であり得る。
いくつかの態様において、gapmerオリゴヌクレオチドのギャップ領域は、DNAヌクレオチドに加えて、効率的なRNase H作用にとって許容されることが知られている修飾ヌクレオチド、例えばC4'置換ヌクレオチド、非環状ヌクレオチド、およびアラビノ型ヌクレオチドを含有し得る。いくつかの態様において、ギャップ領域は1以上の未修飾のヌクレオシド間を含む。いくつかの態様において、一方または両方のフランキング領域は、各々独立して、1以上のホスホロチオアートヌクレオシド間連結(例として、ホスホロチオアートヌクレオシド間連結または他の連結)を少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、またはより多くのヌクレオチド間に含む。いくつかの態様において、ギャップ領域および2つのフランキング領域は、各々が独立して、修飾されたヌクレオシド間連結(例として、ホスホロチオアートヌクレオシド間連結または他の連結)を少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、またはより多くのヌクレオチド間に含む。
gapmerは適切な方法を使用して生じ得る。gapmerの調製を教示する代表的な米国特許、米国特許公開、およびPCT公開は、米国特許第5,013,830号;第5,149,797号;第5,220,007号;第5,256,775号;第5,366.878号;第5,403,711号;第5,491,133号;第5,565,350号;第5,623,065号;第5,652,355号;第5,652,356号;第5,700,922号;第5,898,031号;第7,015,315号;第7,101,993号;第7,399,845号;第7.432,250号;第7,569,686号;第7,683,036号;第7,750,131号;第8,580,756号;第9,045,754号;第9,428.534号;第9,695,418号;第10,017,764号;第10,260,069号;第9.428,534号;第8,580,756号;米国特許公開第US20050074801号、第US20090221685号;第US20090286969号、第US20100197762号、および第US20110112170号;PCT公開第W02004069991号;第W02005023825号;第W02008049085号および第W02009090182号;ならびに欧州特許第EP2,149,605号を包含するが、これらに限定されない。これら各々はその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、gapmerは長さが10～40ヌクレオシドである。例えば、gapmerは長さが10～40、10～35、10～30、10～25、10～20、10～15、15～40、15～35、15～30、15～25、15～20、20～40、20～35、20～30、20～25、25～40、25～35、25～30、30～40、30～35、または35～40ヌクレオシドであり得る。いくつかの態様において、gapmerは長さが10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、または40ヌクレオシドである。
いくつかの態様において、gapmer上のギャップ領域Yは長さが5～20ヌクレオシドである。例えば、ギャップ領域Yは長さが5～20、5～15、5～10、10～20、10～15、または15～20ヌクレオシドであり得る。いくつかの態様において、ギャップ領域Yは長さが5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20ヌクレオシドである。いくつかの態様において、ギャップ領域Yの各ヌクレオシドは2'-デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、ギャップ領域Yのすべてのヌクレオシドが2'デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、ギャップ領域Yのヌクレオシドの1つ以上は修飾ヌクレオシドである(例として、2'修飾ヌクレオシド、例えば本明細書に記載のもの)。いくつかの態様において、ギャップ領域Yの1以上のシトシンは任意に5-メチルシトシンである。いくつかの態様において、ギャップ領域Yの各シトシンは5-メチルシトシンである。
いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は、独立して1～20ヌクレオシドの長さである。例えば、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は、独立して1～20、1～15、1～10、1～7、1～5、1～3、1～2、2～5、2～7、3～5、3～7、5～20、5～15、5～10、10～20、10～15、または15～20ヌクレオシドの長さであり得る。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は、独立して1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20ヌクレオシドの長さである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は同じ長さである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は異なる長さである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)はgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)よりも長い。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)はgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)よりも短い。
いくつかの態様において、gapmerは、5-10-5、4-12-4、3-14-3、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、4-6-4、3-6-3、2-6-2、4-7-4、3-7-3、2-7-2、4-8-4、3-8-3、2-8-2、1-8-1、2-9-2、1-9-1、2-10-2、1-10-1、1-12-1、1-16-1、2-15-1、1-15-2、1-14-3、3-14-1、2-14-2、1-13-4、4-13-1、2-13-3、3-13-2、1-12-5、5-12-1、2-12-4、4-12-2、3-12-3、1-11-6、6-11-1、2-11-5、5-11-2、3-11-4、4-11-3、1-17-1、2-16-1、1-16-2、1-15-3、3-15-1、2-15-2、1-14-4、4-14-1、2-14-3、3-14-2、1-13-5、5-13-1、2-13-4、4-13-2、3-13-3、1-12-6、6-12-1、2-12-5、5-12-2、3-12-4、4-12-3、1-11-7、7-11-1、2-11-6、6-11-2、3-11-5、5-11-3、4-11-4、1-18-1、1-17-2、2-17-1、1-16-3、1-16-3、2-16-2、1-15-4、4-15-1、2-15-3、3-15-2、1-14-5、5-14-1、2-14-4、4-14-2、3-14-3、1-13-6、6-13-1、2-13-5、5-13-2、3-13-4、4-13-3、1-12-7、7-12-1、2-12-6、6-12-2、3-12-5、5-12-3、1-11-8、8-11-1、2-11-7、7-11-2、3-11-6、6-11-3、4-11-5、5-11-4、1-18-1、1-17-2、2-17-1、1-16-3、3-16-1、2-16-2、1-15-4、4-15-1、2-15-3、3-15-2、1-14-5、2-14-4、4-14-2、3-14-3、1-13-6、6-13-1、2-13-5、5-13-2、3-13-4、4-13-3、1-12-7、7-12-1、2-12-6、6-12-2、3-12-5、5-12-3、1-11-8、8-11-1、2-11-7、7-11-2、3-11-6、6-11-3、4-11-5、5-11-4、1-19-1、1-18-2、2-18-1、1-17-3、3-17-1、2-17-2、1-16-4、4-16-1、2-16-3、3-16-2、1-15-5、2-15-4、4-15-2、3-15-3、1-14-6、6-14-1、2-14-5、5-14-2、3-14-4、4-14-3、1-13-7、7-13-1、2-13-6、6-13-2、3-13-5、5-13-3、4-13-4、1-12-8、8-12-1、2-12-7、7-12-2、3-12-6、6-12-3、4-12-5、5-12-4、2-11-8、8-11-2、3-11-7、7-11-3、4-11-6、6-11-4、5-11-5、1-20-1、1-19-2、2-19-1、1-18-3、3-18-1、2-18-2、1-17-4、4-17-1、2-17-3、3-17-2、1-16-5、2-16-4、4-16-2、3-16-3、1-15-6、6-15-1、2-15-5、5-15-2、3-15-4、4-15-3、1-14-7、7-14-1、2-14-6、6-14-2、3-14-5、5-14-3、4-14-4、1-13-8、8-13-1、2-13-7、7-13-2、3-13-6、6-13-3、4-13-5、5-13-4、2-12-8、8-12-2、3-12-7、7-12-3、4-12-6、6-12-4、5-12-5、3-11-8、8-11-3、4-11-7、7-11-4、5-11-6、6-11-5、1-21-1、1-20-2、2-20-1、1-20-3、3-19-1、2-19-2、1-18-4、4-18-1、2-18-3、3-18-2、1-17-5、2-17-4、4-17-2、3-17-3、1-16-6、6-16-1、2-16-5、5-16-2、3-16-4、4-16-3、1-15-7、7-15-1、2-15-6、6-15-2、3-15-5、5-15-3、4-15-4、1-14-8、8-14-1、2-14-7、7-14-2、3-14-6、6-14-3、4-14-5、5-14-4、2-13-8、8-13-2、3-13-7、7-13-3、4-13-6、6-13-4、5-13-5、1-12-10、10-12-1、2-12-9、9-12-2、3-12-8、8-12-3、4-12-7、7-12-4、5-12-6、6-12-5、4-11-8、8-11-4、5-11-7、7-11-5、6-11-6、1-22-1、1-21-2、2-21-1、1-21-3、3-20-1、2-20-2、1-19-4、4-19-1、2-19-3、3-19-2、1-18-5、2-18-4、4-18-2、3-18-3、1-17-6、6-17-1、2-17-5、5-17-2、3-17-4、4-17-3、1-16-7、7-16-1、2-16-6、6-16-2、3-16-5、5-16-3、4-16-4、1-15-8、8-15-1、2-15-7、7-15-2、3-15-6、6-15-3、4-15-5、5-15-4、2-14-8、8-14-2、3-14-7、7-14-3、4-14-6、6-14-4、5-14-5、3-13-8、8-13-3、4-13-7、7-13-4、5-13-6、6-13-5、4-12-8、8-12-4、5-12-7、7-12-5、6-12-6、5-11-8、8-11-5、6-11-7、または7-11-6の5'-X-Y-Z-3'を含む。数は5'-X-Y-Z-3'gapmerのX、Y、およびZ領域のヌクレオシド数を指し示す。
いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)またはgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)の1以上のヌクレオシドは、修飾ヌクレオチドである(例として、高親和性修飾ヌクレオシド)。いくつかの態様において、修飾ヌクレオシド(例として、高親和性修飾ヌクレオシド)は2'修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、2'修飾ヌクレオシドは2'-4'二環式ヌクレオシドまたは非二環式2'修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、高親和性修飾ヌクレオシドは、2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNA、cEt、またはENA)または非二環式2'-修飾ヌクレオシド(例として、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、2'-O-アミノプロピル(2'-O-AP)、2'-O-ジメチルアミノエチル(2'-O-DMAOE)、2'-O-ジメチルアミノプロピル(2'-ODMAP)、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル(2'-O-DMAEOE)、または2'-O-N-メチルアセトアミド(2'-O-NMA))である。
いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)の1以上のヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)の各ヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)の1以上のヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)の各ヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)の1以上のヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドであり、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)の1以上のヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)の各ヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドであり、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)の各ヌクレオシドは高親和性修飾ヌクレオシドである。
いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)は、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)と同じ高親和性ヌクレオシドを含む。例えば、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は、1以上の非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)を含み得る。別の例では、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は、1以上の2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)を含み得る。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-XY-Z-3'式のZ)の各ヌクレオシドは、非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)である。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)の各ヌクレオシドは、2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)である。
いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが1～7(例として、1、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、XおよびZの各ヌクレオシドは非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)であり、Yの各ヌクレオシドは2'デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが1～7(例として、1、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、XおよびZの各ヌクレオシドは2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)であり、Yの各ヌクレオシドは2'デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)はgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)とは(as)異なる高親和性ヌクレオシドを含む。例えば、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)は1以上の非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)を含み得、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は1以上の2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)を含み得る。別の例では、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は1以上の非二環式2'-修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)を含み得、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)は1以上の2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)を含み得る。
いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが1～7(例として、1、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、Xの各ヌクレオシドは非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)であり、Zの各ヌクレオシドは2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)であり、Yの各ヌクレオシドは2'-デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが1～7(例として、1、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、Xの各ヌクレオシドは2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)であり、Zの各ヌクレオシドは非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'MOEまたは2'-O-Me)であり、Yの各ヌクレオシドは2'-デオキシリボヌクレオシドである。
いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)は1以上の非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-OMe)および1以上の2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)を含む。いくつかの態様において、gapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)は1以上の非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)および1以上の2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)を含む。いくつかの態様において、gapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)およびgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)両方は、1以上の非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-OMe)および1以上の2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)を含む。
いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが2～7(例として、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、X(最も5'の位置は位置1である)の位置1、2、3、4、5、6、または7のすべてではないが少なくとも1つ(例として、1、2、3、4、5、または6)は非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)であり、XおよびZ両方のヌクレオシドの残りは2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)であり、Yの各ヌクレオシドは2'デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが2～7(例として、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、Z(最も5'の位置は位置1である)の位置1、2、3、4、5、6、または7のすべてではないが少なくとも1つ(例として、1、2、3、4、5、または6)は、非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)であり、XおよびZ両方のヌクレオシドの残りは2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)であり、Yの各ヌクレオシドは2'デオキシリボヌクレオシドである。いくつかの態様において、gapmerは5'-X-Y-Z-3'構成を含み、XおよびZは独立して長さが2～7(例として、2、3、4、5、6、または7)ヌクレオシドであり、Yは長さが6～10(例として、6、7、8、9、または10)ヌクレオシドであり、Xの位置1、2、3、4、5、6、または7のすべてではないが少なくとも1つ(例として、1、2、3、4、5、または6)およびZ(最も5'の位置は位置1である)のすべてではないが位置(例として、1、2、3、4、5、または6)1、2、3、4、5、6、または7の少なくとも1つが、非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)であり、XおよびZ両方のヌクレオシドの残りは2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)であり、Yの各ヌクレオシドは2'デオキシリボヌクレオシドである。
非二環式2'修飾ヌクレオシド(例として、2'-MOEまたは2'-O-Me)および2'-4'二環式ヌクレオシド(例として、LNAまたはcEt)のミックスをgapmerの5'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のX)および/またはgapmerの3'ウイング領域(5'-X-Y-Z-3'式のZ)に有するgapmer構成の非限定例は、以下:BBB-(D)n-BBBAA;KKK-(D)n-KKKAA;LLL-(D)n-LLLAA;BBB-(D)n-BBBEE;KKK-(D)n-KKKEE;LLL-(D)n-LLLEE;BBB-(D)n-BBBAA;KKK-(D)n-KKKAA;LLL-(D)n-LLLAA;BBB-(D)n-BBBEE;KKK-(D)n-KKKEE;LLL-(D)n-LLLEE;BBB-(D)n-BBBAAA;KKK-(D)n-KKKAAA;LLL-(D)n-LLLAAA;BBB-(D)n-BBBEEE;KKK-(D)n-KKKEEE;LLL-(D)n-LLLEEE;BBB-(D)n-BBBAAA;KKK-(D)n-KKKAAA;LLL-(D)n-LLLAAA;BBB-(D)n-BBBEEE;KKK-(D)n-KKKEEE;LLL-(D)n-LLLEEE;BABA-(D)n-ABAB;KAKA-(D)n-AKAK;LALA-(D)n-ALAL;BEBE-(D)n-EBEB;KEKE-(D)n-EKEK;LELE-(D)n-ELEL;BABA-(D)n-ABAB;KAKA-(D)n-AKAK;LALA-(D)n-ALAL;BEBE-(D)n-EBEB;KEKE-(D)n-EKEK;LELE-(D)n-ELEL;ABAB-(D)n-ABAB;AKAK-(D)n-AKAK;ALAL-(D)n-ALAL;EBEB-(D)n-EBEB;EKEK-(D)n-EKEK;ELEL-(D)n-ELEL;ABAB-(D)n-ABAB;AKAK-(D)n-AKAK;ALAL-(D)n-ALAL;EBEB-(D)n-EBEB;EKEK-(D)n-EKEK;ELEL-(D)n-ELEL;AABB-(D)n-BBAA;BBAA-(D)n-AABB;AAKK-(D)n-KKAA;AALL-(D)n-LLAA;EEBB-(D)n-BBEE;EEKK-(D)n-KKEE;EELL-(D)n-LLEE;AABB-(D)n-BBAA;AAKK-(D)n-KKAA;AALL-(D)n-LLAA;EEBB-(D)n-BBEE;EEKK-(D)n-KKEE;EELL-(D)n-LLEE;BBB-(D)n-BBA;KKK-(D)n-KKA;LLL-(D)n-LLA;BBB-(D)n-BBE;KKK-(D)n-KKE;LLL-(D)n-LLE;BBB-(D)n-BBA;KKK-(D)n-KKA;LLL-(D)n-LLA;BBB-(D)n-BBE;KKK-(D)n-KKE;LLL-(D)n-LLE;BBB-(D)n-BBA;KKK-(D)n-KKA;LLL-(D)n-LLA;BBB-(D)n-BBE;KKK-(D)n-KKE;LLL-(D)n-LLE;ABBB-(D)n-BBBA;AKKK-(D)n-KKKA;ALLL-(D)n-LLLA;EBBB-(D)n-BBBE;EKKK-(D)n-KKKE;ELLL-(D)n-LLLE;ABBB-(D)n-BBBA;AKKK-(D)n-KKKA;ALLL-(D)n-LLLA;EBBB-(D)n-BBBE;EKKK-(D)n-KKKE;ELLL-(D)n-LLLE;ABBB-(D)n-BBBAA;AKKK-(D)n-KKKAA;ALLL-(D)n-LLLAA;EBBB-(D)n-BBBEE;EKKK-(D)n-KKKEE;ELLL-(D)n-LLLEE;ABBB-(D)n-BBBAA;AKKK-(D)n-KKKAA;ALLL-(D)n-LLLAA;EBBB-(D)n-BBBEE;EKKK-(D)n-KKKEE;ELLL-(D)n-LLLEE;AABBB-(D)n-BBB;AAKKK-(D)n-KKK;AALLL-(D)n-LLL;EEBBB-(D)n-BBB;EEKKK-(D)n-KKK;EELLL-(D)n-LLL;AABBB-(D)n-BBB;AAKKK-(D)n-KKK;AALLL-(D)n-LLL;EEBBB-(D)n-BBB;EEKKK-(D)n-KKK;EELLL-(D)n-LLL;AABBB-(D)n-BBBA;AAKKK-(D)n-KKKA;AALLL-(D)n-LLLA;EEBBB-(D)n-BBBE;EEKKK-(D)n-KKKE;EELLL-(D)n-LLLE;AABBB-(D)n-BBBA;AAKKK-(D)n-KKKA;AALLL-(D)n-LLLA;EEBBB-(D)n-BBBE;EEKKK-(D)n-KKKE;EELLL-(D)n-LLLE;ABBAABB-(D)n-BB;AKKAAKK-(D)n-KK;ALLAALLL-(D)n-LL;EBBEEBB-(D)n-BB;EKKEEKK-(D)n-KK;ELLEELL-(D)n-LL;ABBAABB-(D)n-BB;AKKAAKK-(D)n-KK;ALLAALL-(D)n-LL;EBBEEBB-(D)n-BB;EKKEEKK-(D)n-KK;ELLEELL-(D)n-LL;ABBABB-(D)n-BBB;AKKAKK-(D)n-KKK;ALLALLL-(D)n-LLL;EBBEBB-(D)n-BBB;EKKEKK-(D)n-KKK;ELLELL-(D)n-LLL;ABBABB-(D)n-BBB;AKKAKK-(D)n-KKK;ALLALL-(D)n-LLL;EBBEBB-(D)n-BBB;EKKEKK-(D)n-KKK;ELLELL-(D)n-LLL;EEEK-(D)n-EEEEEEEE;EEK-(D)n-EEEEEEEEE;EK-(D)n-EEEEEEEEEE;EK-(D)n-EEEKK;K-(D)n-EEEKEKE;K-(D)n-EEEKEKEE;K-(D)n-EEKEK;EK-(D)n-EEEEKEKE;EK-(D)n-EEEKEK;EEK-(D)n-KEEKE;EK-(D)n-EEKEK;EK-(D)n-KEEK;EEK-(D)n-EEEKEK;EK-(D)n-KEEEKEE;EK-(D)n-EEKEKE;EK-(D)n-EEEKEKE;およびEK-(D)n-EEEEKEKを包含し;「A」ヌクレオシドは2'修飾ヌクレオシドを含み;「B」は2'-4'二環式ヌクレオシドを表し;「K」は-拘束エチルヌクレオシド(cEt)を表し;「L」はLNAヌクレオシドを表し;「E」は2'-MOE修飾リボヌクレオシドを表し;「D」は2'デオキシリボヌクレオシドを表し;「n」はギャップセグメント(5'-X-Y-Z-3'構成のY)の長さを表し、1～20の間の整数である。
いくつかの態様において、本明細書に記載のgapmerのいずれか1つは、1以上の修飾されたヌクレオシド連結(例として、ホスホロチオアート連結)をX、Y、およびZ領域の各々に含む。いくつかの態様において、本明細書に記載のgapmerのいずれか1つにおける各ヌクレオシド間連結はホスホロチオアート連結である。いくつかの態様において、X、Y、およびZ領域の各々は、独立して、ホスホロチオアート連結およびホスホジエステル連結のミックスを含む。いくつかの態様において、ギャップ領域Yの各ヌクレオシド間連結はホスホロチオアート連結であり、5'ウイング領域Xはホスホロチオアート連結およびホスホジエステル連結のミックスを含み、3'ウイング領域Zはホスホロチオアート連結およびホスホジエステル連結のミックスを含む。
ｉ．Mixmer
いくつかの態様において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、mixmerであってもよく、またはmixmer配列パターンを含んでいてもよい。一般に、mixmerは、天然に存在するヌクレオシドと天然に存在しないヌクレオシドとの両方を含むオリゴヌクレオチドであるか、または2つの異なるタイプの天然に存在しないヌクレオシドを、典型的には互い違いなパターンで含むオリゴヌクレオチドである。Mixmerは一般に、非修飾オリゴヌクレオチドより高い結合親和性を有し、標的分子に特異的に結合する、例として、標的分子上の結合部位を遮断するために使用されてもよい。一般に、mixmerは、RNaseを標的分子へ動員させず、よって標的分子の切断を促進しない。RNase Hを動員することが可能ではない、かかるオリゴヌクレオチドは記載されており、例えば、WO2007/112754またはWO2007/112753を参照。
いくつかの態様において、mixmerは、ヌクレオシド類似体と天然に存在するヌクレオシドとの反復パターン、もしくは1タイプのヌクレオシド類似体ともう1タイプのヌクレオシド類似体との反復パターンを含むか、またはこれらからなる。しかしながら、mixmerは、反復パターンを含む必要がなく、その代わりに、修飾ヌクレオシドと天然に存在するヌクレオシドとのいずれの配置も、または1タイプの修飾ヌクレオシドともう1タイプの修飾ヌクレオシドとのいずれの配置も含むことができる。反復パターンは、実例として、2ヌクレオシド毎または3ヌクレオシド毎に、LNAなどの修飾ヌクレオシドであってもよく、残りのヌクレオシドは、DNAなどの天然に存在するヌクレオシドであるか、あるいは2'MOEもしくは2'フルオロ類似体などの2'置換ヌクレオシド類似体、または本明細書に記載のいずれの他の修飾ヌクレオシドである。LNA単位などの修飾ヌクレオシドの反復パターンが、固定された位置にて-例として5'末または3'末にて、修飾ヌクレオシドと組み合わされてもよいことは認識されている。
いくつかの態様において、mixmerは、5個より多く、4個より多く、3個より多く、または2個より多く連続した、DNAヌクレオシドなどの天然に存在するヌクレオシドの領域を含まない。いくつかの態様において、mixmerは、少なくとも2個連続したLNAなどの、少なくとも2個連続した修飾ヌクレオシドからなる領域を少なくとも含む。いくつかの態様において、mixmerは、少なくとも3個連続したLNAなどの、少なくとも3個連続した修飾ヌクレオシドからなる領域を少なくとも含む。
いくつかの態様において、mixmerは、7個より多く、6個より多く、5個より多く、4個より多く、3個より多く、または2個より多く連続した、LNAなどのヌクレオシド類似体の領域を含まない。いくつかの態様において、LNA単位は、本明細書に言及されたヌクレオシド類似体などの他のヌクレオシド類似体に置き換えられていてもよい。
Mixmerは、非限定例におけるLNAヌクレオシドおよび2'-O-Me ヌクレオシドなどの親和性増強修飾ヌクレオシドの混合物を含むよう設計されていてもよい。いくつかの態様において、mixmerは、修飾ヌクレオシド間連結(例として、ホスホロチオアートヌクレオシド間連結または他の連結)を、少なくとも2個の、少なくとも3個の、少なくとも4個の、少なくとも5個の、またはこれより多くのヌクレオシド間に含む。
mixmerは、いずれの好適な方法を使用しても産生されてよい。mixmerの調製を教示する代表的な米国特許、米国特許刊行物、およびPCT刊行物は、米国特許刊行物第US20060128646号、第US20090209748号、第US20090298916号、第US20110077288号、および第US20120322851号、および米国特許第7687617号を包含する。
いくつかの態様において、mixmerは、1以上のモルホリノヌクレオシドを含む。例えば、いくつかの態様において、mixmerは、1以上の他のヌクレオシド(例として、DNA、RNAヌクレオシド)または修飾ヌクレオシド(例として、LNA、2'-O-Me ヌクレオシド)と(例として、互い違いなやり方で)混合されたモルホリノヌクレオシドを含んでいてもよい。
いくつかの態様において、mixmerは、例えば、Touznik A.,et al.,LNA/DNA mixmer-based antisense oligonucleotides correct alternative splicing of the SMN2 gene and restore SMN protein expression in type 1 SMA fibroblasts Scientific Reports,volume 7,Article number:3672(2017),Chen S.et al.,Synthesis of a Morpholino Nucleic Acid (MNA)-Uridine Phosphoramidite, and Exon Skipping Using MNA/2'-O-Methyl Mixmer Antisense Oligonucleotide,Molecules 2016,21,1582(これら各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる)に報告されるとおり、スプライス修正(splice correcting)またはエキソンスキッピングに有用である。
ｊ．RNA干渉(RNAi)
いくつかの態様において、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、低分子干渉RNAまたはサイレンシングRNAとしても知られている、低分子干渉RNA(siRNA)の形態であってもよい。siRNAは、二本鎖RNA分子の類であって、細胞中のRNA干渉(RNAi)経路を介した分解のために核酸(例として、mRNA)を標的にする、典型的には長さが約20～25塩基対である。siRNA分子の特異性は、アンチセンス鎖分子のその標的RNAへの結合によって決定されてもよい。有効なsiRNA分子は一般に、より長いsiRNAもまた有効であり得るが、細胞中の非特異的なRNA干渉経路の引き金を、インターフェロン応答を介して引くことを防止するため、長さが30～35個未満の塩基対である。いくつかの態様において、siRNA分子は長さが7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50塩基対、またはより多くである。いくつかの態様において、siRNA分子は長さが8～30塩基対、長さが10～15塩基対、長さが10～20塩基対、長さが15～25塩基対、長さが19～21塩基対、長さが21～23塩基対である。
適切な標的RNA配列の選択を受けて、すべてのまたは一部の標的配列に相補的なヌクレオチド配列、すなわちアンチセンス配列を含むsiRNA分子は、適切な方法(例として、PCT刊行物第WO2004/016735号;および米国特許刊行物第2004/0077574号および第2008/0081791号を参照)を使用して設計および調製され得る。siRNA分子は、二本鎖(すなわち、アンチセンス鎖と、相補的センス鎖とを含むdsRNA分子)または一本鎖(すなわち、アンチセンス鎖だけを含むssRNA分子)であり得る。siRNA分子は、自己相補的センスおよびアンチセンス鎖を有する、二重鎖、非対称二重鎖、ヘアピン、または非対称ヘアピン2次構造を含み得る。
いくつかの態様において、siRNA分子のアンチセンス鎖は長さが7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50ヌクレオチド、またはより多くである。いくつかの態様において、アンチセンス鎖は長さが8～50ヌクレオチド、長さが8～40ヌクレオチド、長さが8～30ヌクレオチド、長さが10～15ヌクレオチド、長さが10～20ヌクレオチド、長さが15～25ヌクレオチド、長さが19～21ヌクレオチド、長さが21～23ヌクレオチドである。
いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖は長さが7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50ヌクレオチド、またはより多くである。いくつかの態様において、センス鎖は長さが8～50ヌクレオチド、長さが8～40ヌクレオチド、長さが8～30ヌクレオチド、長さが10～15ヌクレオチド、長さが10～20ヌクレオチド、長さが15～25ヌクレオチド、長さが19～21ヌクレオチド、長さが21～23ヌクレオチドである。
いくつかの態様において、siRNA分子は、標的mRNA上の標的領域に対する相補性の領域を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの態様において、相補性の領域は、標的mRNA上の標的領域に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、または100％相補的である。いくつかの態様において、標的領域は、標的mRNA上の一続きのヌクレオチドの領域である。いくつかの態様において、標的RNA配列について特異的にハイブリダイゼーション可能または特異的であるためには、相補的なヌクレオチド配列は、その標的のものに対して100％相補的である必要はない。
いくつかの態様において、siRNA分子は標的RNA配列に対する相補性の領域を含むアンチセンス鎖を含み、相補性の領域は長さが8～15、8～30、8～40、または10～50、または5～50、または5～40ヌクレオチドの範囲である。いくつかの態様において、相補性の領域は長さが5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50ヌクレオチドである。いくつかの態様において、相補性の領域は、標的RNA配列の少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも16、少なくとも17、少なくとも18、少なくとも19、少なくとも20、少なくとも21、少なくとも22、少なくとも23、少なくとも24、少なくとも25、またはより多くの一続きのヌクレオチドと相補的である。いくつかの態様において、siRNA分子は、標的RNA配列の一続きのヌクレオチドの部分と比較して1、2、3、4、またはわずか5塩基ミスマッチを含有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、siRNA分子は、15塩基につき最大3つまでのミスマッチ、または10塩基につき最大2つまでのミスマッチを有するヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様において、siRNA分子は、本明細書に(例として、表10および表16に)提供されるオリゴヌクレオチド(oligonculeotide)の標的RNA配列に対して相補的である(例として、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または100％)ヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの態様において、siRNA分子は、本明細書に(例として、表10および表16に)提供されるオリゴヌクレオチドと少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または100％同一であるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの態様において、siRNA分子は、本明細書に(例として、表10および表16に)提供されるオリゴヌクレオチドの少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも16、少なくとも17、少なくとも18、少なくとも19、少なくとも20、少なくとも21、少なくとも22、少なくとも23、少なくとも24、少なくとも25、またはより多くの一続きのヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含む。
二本鎖siRNAは、同じ長さまたは異なる長さのセンスRNA鎖およびアンチセンスRNA鎖を含んでいてもよい。二本鎖siRNA分子はまた、ステムループ構造の単一オリゴヌクレオチド(ここでsiRNA分子の自己相補的センスおよびアンチセンス領域は、核酸ベースのまたは非核酸ベースのリンカー(単数または複数)を用いて連結されている)、ならびに2以上のループ構造と自己相補的センスおよびアンチセンス鎖を含むステムとを有する環状一本鎖RNA(ここで環状RNAは、in vivoまたはin vitroのいずれかで処理されてRNAiを媒介することが可能な活性siRNA分子を生成し得る)からも会合され得る。よって小さいヘアピンRNA(shRNA)分子もまた、本明細書に企図される。これらの分子は、逆相補的(センス)配列に加えて、特定のアンチセンス配列を含み、典型的にはスペーサーまたはループ配列によって分離されている。スペーサーまたはループの切断は、(任意に、片鎖または両鎖の3'末端および/または(例として、および)5'末端から1、2、3個以上のヌクレオチドの付加または除去をもたらすこともある追加のプロセシングステップにより)一本鎖RNA分子およびその逆相補体を、それらがアニールしてdsRNA分子を形成し得るように提供する。スペーサーは、スペーサーの切断(および任意に、これに続く、片鎖または両鎖の3'末端および/または(例として、および)5'末端から1、2、3、4、もしくはこれより多いヌクレオチドの付加または除去をもたらすこともあるプロセシングステップ)に先立ちアンチセンス配列とセンス配列とをアニールさせて二本鎖構造体(またはステム)を形成させるのに充分な長さであり得る。スペーサー配列は、2つの相補的ヌクレオチド配列領域間に置かれた無関係なヌクレオチド配列であってもよく、前記領域はアニールして二本鎖核酸になったらshRNAを含むことになる。
siRNA分子の全体的な長さは、設計されたsiRNA分子のタイプに応じて、約14ヌクレオチドから約100ヌクレオチドまで変動し得る。一般に、これらのヌクレオチドの約14個と約50個との間は、RNA標的配列に相補的である、すなわちsiRNA分子の特定のアンチセンス配列を構成する。例えば、siRNAが二本鎖siRNAまたは一本鎖siRNAであるとき、長さは約14ヌクレオチドから約50ヌクレオチドまで変動し得るが一方、siRNAがshRNAまたは環状分子であるとき、長さは約40ヌクレオチドから約100ヌクレオチドまで変動し得る。
siRNA分子は、分子の一方の末端にて3'突出を含んでいてもよく、他方の末端は平滑末端であっても、または突出(5'または3')も有していてよい。siRNA分子が分子の両末端にて突出を含むとき、突出の長さは、同じであっても、または異なっていてもよい。一態様において、本開示のsiRNA分子は、分子の両末端上に約1～約3ヌクレオチドの3'突出を含む。いくつかの態様において、siRNA分子は約1～約3ヌクレオチドの3'突出をセンス鎖に含む。いくつかの態様において、siRNA分子は約1～約3ヌクレオチドの3'突出をアンチセンス鎖に含む。いくつかの態様において、siRNA分子は約1～約3ヌクレオチドの3'突出をセンス鎖およびアンチセンス鎖両方に含む。
いくつかの態様において、siRNA分子は1以上の修飾ヌクレオチド(例として、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはより多く)を含む。いくつかの態様において、siRNA分子は1以上の修飾ヌクレオチドおよび/または(例として、および)1以上の修飾されたヌクレオチド間連結を含む。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは修飾された糖部分(例として、2'修飾ヌクレオチド)である。いくつかの態様において、siRNA分子は、1以上の2'修飾ヌクレオチド、例えば2'-デオキシ、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、2'-O-アミノプロピル(2'-O-AP)、2'-O-ジメチルアミノエチル(2'-O-DMAOE)、2'-O-ジメチルアミノプロピル(2'-O-DMAP)、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル(2'-O-DMAEOE)、または2'-O-N-メチルアセトアミド(2'-O-NMA)を含む。いくつかの態様において、siRNA分子の各ヌクレオチドは修飾ヌクレオチド(例として、2'修飾ヌクレオチド)である。いくつかの態様において、siRNA分子は1以上のホスホロジアミダートモルホリノを含む。いくつかの態様において、siRNA分子の各ヌクレオチドはホスホロジアミダートモルホリノである。
いくつかの態様において、siRNA分子はホスホロチオアートまたは他の修飾されたヌクレオチド間連結を含有する。いくつかの態様において、siRNA分子はホスホロチオアートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの態様において、siRNA分子はホスホロチオアートヌクレオシド間連結を少なくとも2つのヌクレオチド間に含む。いくつかの態様において、siRNA分子はホスホロチオアートヌクレオシド間連結をすべてのヌクレオチド間に含む。例えば、いくつかの態様において、siRNA分子は、修飾されたヌクレオチド間連結をsiRNA分子の5'または3'端の第1の、第2の、および/または(例として、および)第3のヌクレオシド間連結に含む。
いくつかの態様において、修飾されたヌクレオチド間連結はリン含有連結である。いくつかの態様において、使用され得るリン含有連結は、正常な3'-5'連結を有するホスホロチオアート、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、3'アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含むメチルおよび他のアルキルホスホナート、ホスフィナート、3'-アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスファート、これらの2'-5'連結アナログ、ならびにヌクレオシド単位の隣接するペアが3'-5'対5'-3'または2'-5'対5'-2'で連結される逆向きの極性を有するものを包含するが、これらに限定されない;US特許no.3,687,808;4,469,863;4,476,301;5,023,243;5,177,196;5,188,897;5,264,423;5,276,019;5,278,302;5,286,717;5,321,131;5,399,676;5,405,939;5,453,496;5,455,233;5,466,677;5,476,925;5,519,126;5,536,821;5,541,306;5,550,111;5,563,253;5,571,799;5,587,361;および5,625,050を参照。
本明細書に記載のsiRNA分子の修飾されたケミストリーまたはフォーマットのいずれかは、互いと組み合わせられ得る。例えば、1、2、3、4、5、またはより多くの異なる型の修飾が同じsiRNA分子上に包含され得る。
いくつかの態様において、アンチセンス鎖は1以上の修飾ヌクレオチド(例として、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはより多く)を含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖は1以上の修飾ヌクレオチドおよび/または(例として、および)1以上の修飾されたヌクレオチド間連結を含む。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは修飾された糖部分(例として、2'修飾ヌクレオチド)を含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖は、1以上の2'修飾ヌクレオチド、例えば2'-デオキシ、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、2'-O-アミノプロピル(2'-O-AP)、2'-O-ジメチルアミノエチル(2'-O-DMAOE)、2'-O-ジメチルアミノプロピル(2'-O-DMAP)、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル(2'-O-DMAE0E)、または2'-O-N-メチルアセトアミド(2'-O-NMA)を含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖の各ヌクレオチドは修飾ヌクレオチド(例として、2'修飾ヌクレオチド)である。いくつかの態様において、アンチセンス鎖は1以上のホスホロジアミダートモルホリノを含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖はホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー(PMO)である。
いくつかの態様において、アンチセンス鎖はホスホロチオアートまたは他の修飾されたヌクレオチド間連結を含有する。いくつかの態様において、アンチセンス鎖はホスホロチオアートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖はホスホロチオアートヌクレオシド間連結を少なくとも2つのヌクレオチド間に含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖はホスホロチオアートヌクレオシド間連結をすべてのヌクレオチド間に含む。例えば、いくつかの態様において、アンチセンス鎖は、修飾されたヌクレオチド間連結をsiRNA分子の5'または3'端の第1の、第2の、および/または(例として、および)第3のヌクレオシド間連結に含む。いくつかの態様において、修飾されたヌクレオチド間連結はリン含有連結である。いくつかの態様において、使用され得るリン含有連結は、正常な3'-5'連結を有するホスホロチオアート、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、3'アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含むメチルおよび他のアルキルホスホナート、ホスフィナート、3'-アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスファート、これらの2'-5'連結アナログ、ならびにヌクレオシド単位の隣接するペアが3'-5'対5'-3'または2'-5'対5'-2'で連結される逆向きの極性を有するものを包含するが、これらに限定されない;米国特許第3,687,808号;第4,469,863号;第4,476,301号;第5,023,243号;第5,177,196号;第5,188,897号;第5,264,423号;第5,276,019号;第5,278,302号;第5,286,717号;第5,321,131号;第5,399,676号;第5,405,939号;第5,453,496号;第5,455,233号;第5,466,677号;第5,476,925号;第5,519,126号;第5,536,821号;第5,541,306号;第5,550,111号;第5,563,253号;第5,571,799号;第5,587,361号;および第5,625,050号を参照。
本明細書に記載のアンチセンス鎖の修飾されたケミストリーまたはフォーマットのいずれかは、互いと組み合わせられ得る。例えば、1、2、3、4、5、またはより多くの異なる型の修飾が同じアンチセンス鎖上に包含され得る。
いくつかの態様において、センス鎖は1以上の修飾ヌクレオチド(例として、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはより多く)を含む。いくつかの態様において、センス鎖は1以上の修飾ヌクレオチドおよび/または(例として、および)1以上の修飾されたヌクレオチド間連結を含む。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは修飾された糖部分(例として、2'修飾ヌクレオチド)である。いくつかの態様において、センス鎖は、1以上の2'修飾ヌクレオチド、例えば2'-デオキシ、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'O-メトキシエチル(2'-MOE)、2'-O-アミノプロピル(2'-O-AP)、2'-O-ジメチルアミノエチル(2'-O-DMAOE)、2'-O-ジメチルアミノプロピル(2'-O-DMAP)、2'-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル(2'-O-DMAEOE)、または2'-O-N-メチルアセトアミド(2'-O-NMA)を含む。いくつかの態様において、センス鎖の各ヌクレオチドは修飾ヌクレオチド(例として、2'修飾ヌクレオチド)である。いくつかの態様において、センス鎖は1以上のホスホロジアミダートモルホリノを含む。いくつかの態様において、アンチセンス鎖はホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー(PMO)である。いくつかの態様において、センス鎖はホスホロチオアートまたは他の修飾されたヌクレオチド間連結を含有する。いくつかの態様において、センス鎖はホスホロチオアートヌクレオシド間連結を含む。いくつかの態様において、センス鎖はホスホロチオアートヌクレオシド間連結を少なくとも2つのヌクレオチド間に含む。いくつかの態様において、センス鎖はホスホロチオアートヌクレオシド間連結をすべてのヌクレオチド間に含む。例えば、いくつかの態様において、センス鎖は、修飾されたヌクレオチド間連結をセンス鎖の5'または3'端の第1の、第2の、および/または(例として、および)第3のヌクレオシド間連結に含む。
いくつかの態様において、修飾されたヌクレオチド間連結はリン含有連結である。いくつかの態様において、使用され得るリン含有連結は、正常な3'-5'連結を有するホスホロチオアート、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、3'アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含むメチルおよび他のアルキルホスホナート、ホスフィナート、3'-アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスファート、これらの2'-5'連結アナログ、ならびにヌクレオシド単位の隣接するペアが3'-5'対5'-3'または2'-5'対5'-2'で連結される逆向きの極性を有するものを包含するが、これらに限定されない;米国特許第3.687.808号;第4.469.863号;第4,476,301号;第5,023.243号;第5,177,196号;第5,188,897号;第5,264,423号;第5,276,019号;第5,278,302号;第5,286,717号;第5,321,131号;第5,399,676号;第5,405,939号;第5,453,496号;第5,455,233号;第5,466,677号;第5,476,925号;第5,519,126号;第5,536,821号;第5,541,306号;第5,550,111号;第5,563,253号;第5,571,799号;第5,587,361号;および第5,625,050号を参照。
本明細書に記載のセンス鎖の修飾されたケミストリーまたはフォーマットのいずれかは、互いと組み合わせられ得る。例えば、1、2、3、4、5、またはより多くの異なる型の修飾が同じセンス鎖上に包含され得る。
いくつかの態様において、siRNA分子のアンチセンスまたはセンス鎖は、RNA誘導サイレンシング複合体(RISC)ローディングを増強または低減する修飾を含む。いくつかの態様において、siRNA分子のアンチセンス鎖はRISCローディングを増強する修飾を含む。いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖は、RISCローディングを低減およびオフターゲット効果を低減する修飾を含む。いくつかの態様において、siRNA分子のアンチセンス鎖は2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)修飾を含む。その全体が参照によって本明細書に組み込まれるSong et al.,(2017)Mol Ther Nucleic Acids 9:242-250に記載されているとおり、切断部位における2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)基の追加は、修飾鎖の指向的なRNA誘導サイレンシング複合体(RISC)ローディングを容易化することによって、siRNAの特異性およびサイレンシング活性両方を改善する。いくつかの態様において、siRNA分子のアンチセンス鎖は2'-OMe-ホスホロジチオアート修飾を含み、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるWu et al.(2014)Nat Commun 5:3459に記載されているとおり、RISCローディングを増大させる。
いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖は5'モルホリノを含み、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるKumar et al.,(2019)Chem Commun(Camb)55(35):5139-5142に記載されているとおり、センス鎖のRISCローディングを低減ならびにアンチセンス鎖選択およびRNAi活性を改善する。いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖は、合成RNA様高親和性ヌクレオチドアナログのロックド核酸(LNA)によって修飾される。これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるElman et al.,(2005)Nucleic Acids Res.33(1):439-447に記載されているとおり、センス鎖のRISCローディングを低減し、RISCへのアンチセンス鎖組み込みをさらに増強する。いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖は5'アンロックド核酸(UNA)修飾を含み、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるSnead et al.,(2013)Mol Ther Nucleic Acids 2(7):e103に記載されているとおり、センス鎖のRISCローディングを低減し、アンチセンス鎖のサイレンシング力価(potentcy)を改善する。いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖は5-ニトロインドール修飾を含み、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるZhang et al.,(2012)Chembiochem 13(13):1940-1945に記載されているとおり、センス鎖のRNAi力価を減少させ(descresed)、オフターゲット効果を低減する。いくつかの態様において、センス鎖は2'-O'メチル(2'-O-Me)修飾を含み、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるZheng et al.,FASEB (2013)27(10):4017-4026に記載されているとおり、センス鎖のRISCローディングおよびオフターゲット効果を低減する。いくつかの態様において、siRNA分子のセンス鎖はモルホリノ、2'-MOE、または2'-O-Me残基によって完全に置換され、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるKole et al.,(2012)Nature reviews.Drug Discovery 11(2):125-140に記載されているとおり、RISCによって認識されない。いくつかの態様において、siRNA分子のアンチセンス鎖は2'-MOE修飾を含み、センス鎖は2'-O-Me修飾を含む(例として、Song et al.,(2017)Mol Ther Nucleic Acids 9:242-250を参照)。いくつかの態様においては、少なくとも1つの(例として、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも10)siRNA分子が(例として、共有結合的に)筋標的化剤に連結される。いくつかの態様において、筋標的化剤は、核酸(例として、DNAまたはRNA)、ペプチド(例として、抗体)、脂質(例として、マイクロベシクル)、または糖部分(例として、多糖)を含み得るか、またはそれからなり得る。いくつかの態様において、筋標的化剤は抗体である。いくつかの態様において、筋標的化剤は抗トランスフェリン受容体抗体である(例として、本明細書に提供される抗TfR抗体のいずれか1つ)。いくつかの態様において、筋標的化剤はsiRNA分子のセンス鎖の5'端に連結され得る。いくつかの態様において、筋標的化剤はsiRNA分子のセンス鎖の3'端に連結され得る。いくつかの態様において、筋標的化剤はsiRNA分子のセンス鎖に内部で連結され得る。いくつかの態様において、筋標的化剤はsiRNA分子のアンチセンス鎖の5'端に連結され得る。いくつかの態様において、筋標的化剤はsiRNA分子のアンチセンス鎖の3'端に連結され得る。いくつかの態様において、筋標的化剤はsiRNA分子のアンチセンス鎖に内部で連結され得る。
ｋ．マイクロRNA(miRNA)
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、マイクロRNA(miRNA)であってもよい。マイクロRNA(「miRNA」と称される)は、標的RNA転写産物上の相補的な部位へ結合することによって遺伝子発現を制御する調節性分子の類に属する、小さいノンコーディングRNAである。典型的には、miRNAは、巨大なRNA前駆体(pri-miRNAと呼ばれる)から生成されるが、前記前駆体は核中で処理されておよそ70ヌクレオチドpre-miRNAになり、これが折り畳まれて不完全なステムループ構造体になる。これらのpre-miRNAは、典型的には、細胞質内で追加のプロセシングステップを経るが、前記細胞質内の長さが18～25ヌクレオチドの成熟miRNAは、RNase III酵素であるDicerによってpre-miRNAヘアピンの片側から切除される。
本明細書に使用されるとき、miRNAは、pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、そのバリアントのフラグメントを包含するmiRNAは、または成熟miRNAの生物活性を保持するそのバリアントのフラグメントを包含する。一態様において、miRNAのサイズ範囲は、21ヌクレオチドから170ヌクレオチドまでであり得る。一態様において、miRNAのサイズ範囲は、長さが70ヌクレオチドから170ヌクレオチドまでである。別の態様において、長さが21ヌクレオチドから25ヌクレオチドまでの成熟miRNAが使用され得る。
ｌ．アプタマー
いくつかの態様において、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、アプタマーの形態であってもよい。一般に、分子ペイロードの文脈において、アプタマーは、細胞中の小分子、タンパク質、核酸などの標的へ特異的に結合するいずれの核酸でもある。いくつかの態様において、アプタマーは、DNAアプタマーまたはRNAアプタマーである。いくつかの態様において、核酸アプタマーは、一本鎖のDNAまたはRNA(ssDNAまたはssRNA)である。一本鎖核酸アプタマーが、ヘリックスおよび/または(例として、および)ループ構造を形成してもよいことは理解されるべきである。核酸アプタマーを形成する核酸は、天然に存在するヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、炭化水素リンカー(例として、アルキレン)もしくはポリエーテルリンカー(例として、PEGリンカー)が1以上のヌクレオチド間に挿入された天然に存在するヌクレオチド、炭化水素もしくはPEGリンカーが1以上のヌクレオチド間に挿入された修飾ヌクレオチド、またはそれらの組み合わせを含んでいてもよい。アプタマーおよびアプタマーを産生する方法を記載する例示の刊行物および特許は、例として、Lorsch and Szostak,1996;Jayasena,1999;米国特許第5,270,163号;第5,567,588号;第5,650,275号;第5,670,637号;第5,683,867号;第5,696,249号;第5,789,157号;第5,843,653号;第5,864,026号;第5,989,823号;第6,569,630号;第8,318,438号およびPCT出願WO 99/31275を包含するが、これら各々は参照により本明細書に組み込まれる。
ｍ．リボザイム
いくつかの態様において、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、リボザイムの形態であってもよい。リボザイム(リボ核酸酵素)は、タンパク質酵素の作用と同様の特定の生化学的反応を実施することが可能な分子、典型的にはRNA分子である。リボザイムは、これらがハイブリダイズしているRNA分子(mRNA、RNA含有基質、lncRNA、およびリボザイム自体など)中の特定のホスホジエステル連結での切断能を包含する酵素活性をもつ分子である。
リボザイムは、数種の物理的構造の1つを取り得、これらの1つが「ハンマーヘッド」と呼ばれる。ハンマーヘッド型リボザイムは、保存された9塩基を含有する触媒コア、二本鎖ステムおよびループ構造(ステムループII)、ならびに触媒コアを囲む標的RNAフランキング領域に相補的な2つの領域から構成される。フランキング領域によって、リボザイムは、二本鎖ステムIおよびIIIを形成することによって標的RNAへ特異的に結合することができる。切断は、3',5'-リン酸ジエステルから2',3'-環状リン酸ジエステルへのエステル交換反応による特定のリボヌクレオチド三塩基(triplet)の次に、cis(すなわち、ハンマーヘッドモチーフを含有する同じRNA分子の切断)で、またはtrans(リボザイムを含有するもの以外のRNA基質の切断)で生じる。理論によって拘束されることは望まないが、この触媒活性は、リボザイムの触媒領域中に高度に保存された特定の配列が存在することを要すると考えられている。
リボザイム構造中の修飾はまた、様々な分子の非コア部分の、非ヌクレオチド分子との置換または置き換えも包含する。例えば、Benselerら(J.Am.Chem.Soc.(1993)115:8483-8484)は、ハンマーヘッド様分子を開示しており、ここでステムIIの2塩基対およびループIIの4ヌクレオチドすべてが、ヘキサエチレングリコール、プロパンジオール、ビス(トリエチレングリコール)ホスファート、トリス(プロパンジオール)ビスホスファート、またはビス(プロパンジオール)ホスファートを基にする非ヌクレオシドリンカーに置き換えられていた。Maら(Biochem.(1993)32:1751-1758;Nucleic Acids Res.(1993)21:2585-2589)は、TARリボザイムヘアピンの6ヌクレオチドループを、エチレングリコールに関する非ヌクレオチドリンカーに置き換えた。Thomsonら(Nucleic Acids Res.(1993)21:5600-5603)は、ループIIを、長さが13、17、および19原子の線状の非ヌクレオチドリンカーに置き換えた。
リボザイムオリゴヌクレオチドは、周知の方法(例として、PCT刊行物WO9118624;WO9413688;WO9201806;およびWO92/07065;ならびに米国特許5436143および5650502を参照)を使用して調製され得るか、または商業的供給源(例として、US Biochemicals)から購入され得、所望の場合、細胞中ヌクレアーゼによる分解に対するオリゴヌクレオチドの耐性を増大させるためにヌクレオチド類似体を組み込み得る。リボザイムは、例として、市販の合成機(例として、Applied Biosystems,Inc.またはMilligenによって製造された)の使用による、いずれの知られているやり方で合成されてもよい。リボザイムはまた、従来の手段によって、組換えベクターにおいても産生されてよい。Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory(Current edition)を参照。リボザイムRNA配列は、例えば、T7またはSP6などのRNAポリメラーゼを使用することによる従来法で、合成されてもよい。
ｎ．ガイド核酸
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、ガイド核酸、例として、ガイドRNA(gRNA)分子である。一般に、ガイドRNAは、(1)Cas9などの、核酸をプログラムできるDNA結合タンパク質(napDNAbp)へ結合する骨格(scaffold)配列、および(2)gRNAが、核酸をプログラムできるDNA結合タンパク質をDNA標的配列に近づけるために結合するDNA標的配列(例として、ゲノムDNA標的)を定義するヌクレオチドスペーサー部分から構成される低分子合成RNAである。いくつかの態様において、napDNAbpは、核酸をプログラムできるタンパク質に、標的DNA配列(例として、標的ゲノムDNA配列)を標的にさせる1以上のRNA(単数または複数)と(例として、これと結合して、またはこれと結び付いて)複合体を形成する、核酸をプログラムできるタンパク質である。いくつかの態様において、核酸プログラム可能なヌクレアーゼは、RNAとの複合体にあるとき、ヌクレアーゼ:RNA複合体と称されることもある。ガイドRNAは、2以上のRNAの複合体として、または単一のRNA分子として存在し得る。
単一のRNA分子として存在するガイドRNA(gRNA)は、単一のガイドRNA(sgRNA)と称されることもあるが、gRNAはまた、単一分子または2以上の分子の複合体のいずれかとして存在するガイドRNAを指すためにも使用される。典型的には、単一のRNA種として存在するgRNAは、2つのドメインを含む:(1)標的核酸(すなわち、Cas9複合体の標的への結合に向かわせる)との相同性を共有するドメイン;および(2)Cas9タンパク質に結合するドメイン。いくつかの態様において、ドメイン(2)は、tracrRNAとして知られている配列に対応し、ステムループ構造を含む。いくつかの態様において、ドメイン(2)は、Jinek et al.,Science 337:816-821(2012)(この内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる)に提供されるとおり、tracrRNAと同一または相同である。
いくつかの態様において、gRNAは、ドメイン(1)および(2)の2以上を含み、伸長(extended)gRNAと称されることもある。例えば、伸長gRNAは、本明細書に記載のとおり、2以上のCas9タンパク質に結合し、および2以上の別個の領域での標的核酸に結合するであろう。gRNAは、ヌクレアーゼ/RNA複合体の該標的部位への結合を媒介する標的部位に相補的なヌクレオチド配列を含み、ヌクレアーゼ:RNA複合体の配列特異性を提供する。いくつかの態様において、RNAをプログラムできるヌクレアーゼは、(CRISPR関連系)Cas9エンドヌクレアーゼ、例えば、Streptococcus pyogenesからのCas9(Csn1)である(例として、“Complete genome sequence of an M1 strain of Streptococcus pyogenes.”Ferretti J.J.,McShan W.M.,Ajdic D.J.,Savic D.J.,Savic G.,Lyon K.,Primeaux C.,Sezate S.,Suvorov A.N.,Kenton S.,Lai H.S.,Lin S.P.,Qian Y.,Jia H.G.,Najar F.Z.,Ren Q.,Zhu H.,Song L.,White J.,Yuan X.,Clifton S.W.,Roe B.A.,McLaughlin R.E.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98:4658-4663(2001);“CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III.”Deltcheva E.,Chylinski K.,Sharma C.M.,Gonzales K.,Chao Y.,Pirzada Z.A.,Eckert M.R.,Vogel J.,Charpentier E.,Nature 471:602-607(2011);および“A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.”Jinek M.,Chylinski K.,Fonfara I.,Hauer M.,Doudna J.A.,Charpentier E.Science 337:816-821(2012)(これら各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる)を参照。
o．マルチマー
いくつかの態様において、分子ペイロードは、リンカーによって接続された2以上のオリゴヌクレオチドのマルチマー(例として、コンカテマー)を含んでいてもよい。このように、いくつかの態様において、複合体/抱合体のオリゴヌクレオチドの負荷(loading)は、標的化剤上の利用可能な連結部位(例として、抗体上の利用可能なチオール部位)を超えて増大され得るか、または具体的なペイロード負荷量に達するよう別様に整え得る。マルチマー中のオリゴヌクレオチドは、同じかまたは異なり得る(例として、異なる遺伝子、もしくは同じ遺伝子上の異なる部位、またはそれらの産物を標的にする)。
いくつかの態様において、マルチマーは、切断可能なリンカーによって一緒に連結された2以上のオリゴヌクレオチドを含む。しかしながら、いくつかの態様において、マルチマーは、切断不能なリンカーによって一緒に連結された2以上のオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、マルチマーは、一緒に連結された2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはこれより多くのオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、マルチマーは、一緒に連結された2～5、2～10、または4～20オリゴヌクレオチドを含む。
いくつかの態様において、マルチマーは、(線状配置において)末端間(end-to-end)で連結された2以上のオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、マルチマーは、オリゴヌクレオチドベースのリンカー(例として、ポリ-dTリンカー、塩基性リンカー)を介して、末端間で連結された2以上のオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、マルチマーは、あるオリゴヌクレオチドの3'末端へ連結された、別のオリゴヌクレオチドの5'末端を含む。いくつかの態様において、マルチマーは、あるオリゴヌクレオチドの3'末端へ連結された、別のオリゴヌクレオチドの3'末端を含む。いくつかの態様において、マルチマーは、あるオリゴヌクレオチドの5'末端へ連結された、別のオリゴヌクレオチドの5'末端を含む。またさらに、いくつかの態様において、マルチマーは、分枝リンカーによって一緒に連結された複数のオリゴヌクレオチドを含む分枝構造を含み得る。
本明細書に提供される複合体に使用されてもよいマルチマーのさらなる例は、例えば、2015年11月5日に公開され、Methods of delivering multiple targeting oligonucleotides to a cell using cleavable linkersと題する米国特許出願第2015/0315588 A1号;2015年9月3日に公開され、Multimeric Oligonucleotide Compoundsと題する米国特許出願第2015/0247141 A1号;2011年6月30日に公開され、Immunostimulatory Oligonucleotide Multimersと題する米国特許出願第US 2011/0158937 A1号;および1997年12月2日に発行され、Triplex-Forming Antisense Oligonucleotides Having Abasic Linkers Targeting Nucleic Acids Comprising Mixed Sequences Of Purines And Pyrimidinesと題する米国特許第5,693,773号に開示されており、これら各々の内容はそれら全体が参照されることにより本明細書に組み込まれる。
ii．小分子:
いずれの好適な小分子も、本明細書に記載のとおり、分子ペイロードとして使用されてもよい。いくつかの態様において、小分子は、「Compounds And Methods For Myotonic Dystrophy Therapy」と題する2016年2月25日に公開された米国特許出願刊行物2016052914A1に記載されたとおりである。小分子ペイロードのさらなる例は、Lopez-Morato M,et al.,Small Molecules Which Improve Pathogenesis of Myotonic Dystrophy Type 1,(Review) Front.Neurol.,18 May 2018に提供される。例えば、いくつかの態様において、小分子は、フェニルブタゾン、ケトプロフェン、ISOX、またはボリノスタットなどのMBNL1上方調節因子である。いくつの態様において、小分子は、マニュマイシンAなどのH-Ras経路インヒビターである。いくつかの態様において、小分子は、Ro-318220、C16、C51、メトホルミン、AICAR、塩化リチウム、TDZD-8またはBioなどのプロテインキナーゼモジュレーターである。いくつかの態様において、小分子は、ハルミンなどの植物性アルカロイドである。いくつかの態様において、小分子は、ペンタミジン、プロパミジン、へプタミジン(heptamidiine)またはアクチノマイシンDなどの転写インヒビターである。いくつかの態様において、小分子は、例えば、Jones K,et al.,GSK3β mediates muscle pathology in myotonic dystrophy.J Clin Invest.2012 Dec;122(12):4461-72;およびWei C,et al.,GSK3β is a new therapeutic target for myotonic dystrophy type 1.Rare Dis.2013;1:e26555;およびPalomo V,et al.,Subtly Modulating Glycogen Synthase Kinase 3 β:Allosteric Inhibitor Development and Their Potential for the Treatment of Chronic Diseases.J Med Chem.2017 Jun 22;60(12):4983-5001(これら各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる)に開示されたとおり、グリコーゲンシンターゼキナーゼ3ベータ(GSK3B)のインヒビターである。いくつかの態様において、小分子は、Gonzalez AL,et al.,In silico discovery of substituted pyrido[2,3-d]pyrimidines and pentamidine-like compounds with biological activity in myotonic dystrophy models.PLoS One.2017 Jun 5;12(6):e0178931(この内容全体は参照により本明細書に組み込まれる)に開示されたとおり、置換ピリド[2,3-d]ピリミジンおよびペンタミジン様化合物である。いくつかの態様において、小分子は、例えば、Zhange F,et al.,A flow cytometry-based screen identifies MBNL1 modulators that rescue splicing defects in myotonic dystrophy type I.Hum Mol Genet.2017 Aug 15;26(16):3056-3068(この内容全体は参照により本明細書に組み込まれる)に開示されたとおり、MBNL1モジュレーターである。
iii．ペプチド
いずれの好適なペプチドまたはタンパク質も、本明細書に記載のとおりの分子ペイロードとして使用されてもよい。ペプチドまたはタンパク質ペイロードは、核酸(例として疾患関連反復)またはタンパク質(例として筋細胞中に見られるMBNL1)へ優先的に結合するタンパク質の配列に相当してもよい。いくつかの態様において、ペプチドまたはタンパク質は、数種の方法論、例として、ファージディスプレードペプチドライブラリ、1ビーズ・1化合物ペプチドライブラリ、または位置走査性合成ペプチドコンビナトリアルライブラリを使用して産生、合成、および/または(例として、および)、誘導体化されてもよい。例示の方法論は、当該技術分野において特徴づけられてきており、参照により組み込まれる(Gray, B.P. and Brown,K.C.“Combinatorial Peptide Libraries:Mining for Cell-Binding Peptides”Chem Rev.2014,114:2,1020-1081.;Samoylova,T.I.and Smith,B.F.“Elucidation of muscle-binding peptides by phage display screening.”Muscle Nerve,1999,22:4.460-6.)。
いくつかの態様において、ペプチドは、米国特許出願2018/0021449、1/25/2018公開、「Antisense conjugates for decreasing expression of DMPK」に記載されたとおりである。いくつかの態様において、ペプチドは、Garcia-Lopez et al.,“In vivo discovery of a peptide that prevents CUG-RNA hairpin formation and reverses RNA toxicity in myotonic dystrophy models”,PNAS July 19,2011.108(29)11866-11871に記載されたとおりである。いくつかの態様において、ペプチドまたはタンパク質は、疾患関連反復、例としてRNA CUG反復拡張を、標的に(例として、結合)してもよい。
いくつかの態様において、ペプチドまたはタンパク質は、MBNLタンパク質、例として、MBNL1のフラグメントを含む。いくつかの態様において、ペプチドまたはタンパク質は、少なくとも1つのジンクフィンガーを含む。いくつかの態様において、ペプチドまたはタンパク質は、約2～25アミノ酸、約2～20アミノ酸、約2～15アミノ酸、約2～10アミノ酸、または約2～5アミノ酸を含んでいてもよい。ペプチドまたはタンパク質は、天然に存在するアミノ酸、例として、システイン、アラニン、または非天然に存在しないか、もしくは修飾されたアミノ酸を含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸は、β-アミノ酸、ホモ-アミノ酸、プロリン誘導体、3-置換アラニン誘導体、線形コアアミノ酸、N-メチルアミノ酸、および当該技術分野において知られているその他のアミノ酸を包含する。いくつかの態様において、ペプチドは、線状であってもよい;他の態様において、ペプチドは、環状、例として二環式であってもよい。
iv．核酸構築物
いずれの好適な遺伝子発現コンストラクトも、本明細書に記載のとおりの分子ペイロードとして使用されてもよい。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、ベクターまたはcDNAフラグメントであってもよい。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、メッセンジャーRNA(mRNA)であってもよい。いくつかの態様において、本明細書に使用されるmRNAは、修飾されたmRNA、例として、2014年4月24日に発行の米国特許8,710,200、表題「Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression」に記載されるとおりのものであってもよい。いくつかの態様において、mRNAは、5'メチルcapを含んでいてもよい。いくつかの態様において、mRNAは、ポリAテール、任意に長さが最大160ヌクレオチドまでのものを含んでいてもよい。遺伝子発現コンストラクトは、核酸(例として疾患関連反復)またはタンパク質(例として筋細胞中に見られるMBNL1)へ優先的に結合するタンパク質の配列をコードしていてもよい。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、筋細胞の核内に発現されていてもよく、例として、過剰発現されていてもよい。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、MBNLタンパク質、例としてMBNL1をコードしていてもよい。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、少なくとも1つのジンクフィンガーを含むタンパク質をコードする。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、疾患関連反復に結合するタンパク質をコードする。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、疾患関連反復の発現の低減へ繋がるタンパク質をコードする。いくつかの態様において、遺伝子発現コンストラクトは、遺伝子編集酵素をコードする。分子ペイロードとして使用されてもよい核酸構築物の追加例は、2017年9月19日に公開の国際特許出願刊行物WO2017152149A1、表題「Closed-Ended Linear Duplex Dna For Non-Viral Gene Transfer」;2014年10月7日に発行の米国特許8,853,377B2、表題「mRNA For Use In Treatment Of Human Genetic Diseases」;および2014年9月2日に発行の米国特許US8822663B2、「Engineered Nucleic Acids And Methods Of Use Thereof」に提供されており、これら各々の内容はこれらの全体を参照により本明細書に組み込まれる。
複合体および分子ペイロードのさらなる例(例として、筋肉遺伝子を標的にするために有用なオリゴヌクレオチド)は、「MUSCLE TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF FOR TREATING MYOTONIC DYSTROPHY」と題する2020年2月6日公開の国際特許出願公開W02020/028861;および「MUSCLE-TARGETING COMPLEXES AND USES THEREOF」と題する2020年2月6日公開の国際特許出願公開W02020/028857で提供され、これら各々の内容は参照によって本明細書に組み込まれる。
Ｃ．リンカー
本明細書に記載の複合体は一般に、筋標的化剤を分子ペイロードへ接続するリンカーを含む。リンカーは、少なくとも1つの共有結合を含む。いくつかの態様において、リンカーは、筋標的化剤を分子ペイロードへ接続する単結合、例として、ジスルフィド結合またはジスルフィド架橋であってもよい。しかしながら、いくつかの態様において、リンカーは、複数の共有結合を通して、筋標的化剤を分子ペイロードへ接続していてもよい。いくつかの態様において、リンカーは、切断可能なリンカーであってもよい。しかしながら、いくつかの態様において、リンカーは、切断不能なリンカーであってもよい。リンカーは一般に、in vitroおよびin vivoで安定しており、ある細胞環境において安定していてもよい。加えて、一般にリンカーは、筋標的化剤または分子ペイロードのいずれかの機能特性に負の影響を及ぼさない。リンカー合成の例および方法は、当該技術分野において知られている(例として、Kline,T.et al.“Methods to Make Homogenous Antibody Drug Conjugates.”Pharmaceutical Research,2015,32:11,3480-3493.;Jain,N.et al.“Current ADC Linker Chemistry”Pharm Res.2015,32:11,3526-3540.;McCombs,J.R. and Owen,S.C.“Antibody Drug Conjugates:Design and Selection of Linker,Payload and Conjugation Chemistry”AAPS J.2015,17:2,339-351.を参照)。
リンカーの前駆体は、典型的には、筋標的化剤と分子ペイロードとの両方へ付着できる2つの異なる反応性の高い種を含有しているであろう。いくつかの態様において、2つの異なる反応性の高い種は、求核試薬および/または(例として、および)求電子試薬であってもよい。いくつかの態様において、リンカーは、筋標的化剤のリジン残基またはシステイン残基への抱合を介して、筋標的化剤へ接続されている。いくつかの態様において、リンカーは、マレイミド含有リンカーを介して筋標的化剤のシステイン残基へ接続されており、ここで任意に、マレイミド含有リンカーは、マレイミドカプロイルまたはマレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシラート基を含む。いくつかの態様において、リンカーは、3-アリールプロピオニトリル官能基を介して、筋標的化剤のシステイン残基またはチオール官能化分子ペイロードへ接続されている。
いくつかの態様において、リンカーは、抗TfR抗体のリジン残基へ接続されている。いくつかの態様において、リンカーは、アミド結合、カルバマート結合、ヒドラジド、トリアゾール、チオエーテル、またはジスルフィド結合を介して、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続されている。
ｉ．切断可能なリンカー
切断可能なリンカーは、プロテアーゼ感受性リンカー、pH感受性リンカー、またはグルタチオン感受性リンカーであってもよい。これらのリンカーは一般に、細胞内のみで切断可能であって、好ましくは、細胞外環境において、例として、筋細胞の細胞外において安定している。
プロテアーゼ感受性リンカーは、プロテアーゼ酵素活性によって切断可能である。これらのリンカーは、典型的にはペプチド配列を含んでおり、長さが2～10アミノ酸、約2～5アミノ酸、約5～10アミノ酸、約10アミノ酸、約5アミノ酸、約3アミノ酸、または約2アミノ酸であってもよい。いくつかの態様において、ペプチド配列は、天然に存在するアミノ酸、例として、システイン、アラニン、または天然に存在しないかもしくは修飾されたアミノ酸を含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸は、β-アミノ酸、ホモ-アミノ酸、プロリン誘導体、3-置換アラニン誘導体、線形コアアミノ酸、N-メチルアミノ酸、および当該技術分野において知られているその他のアミノ酸を包含する。いくつかの態様において、プロテアーゼ感受性リンカーは、バリン-シトルリンまたはアラニン-シトルリンのジペプチド配列を含む。いくつかの態様において、プロテアーゼ感受性リンカーは、リソソームのプロテアーゼ、例として、カテプシンB、および/またはエンドソームのプロテアーゼによって切断され得る。
pH感受性リンカーは、高または低pH環境において容易に分解される共有結合の連結である。いくつかの態様において、pH感受性リンカーは、4～6の範囲にあるpHにて切断されてもよい。いくつかの態様において、pH感受性リンカーは、ヒドラゾンまたは環状アセタールを含む。いくつかの態様において、pH感受性リンカーは、エンドソームまたはリソソーム内で切断される。
いくつかの態様において、グルタチオン感受性リンカーは、ジスルフィド部を含む。いくつかの態様において、グルタチオン感受性リンカーは、細胞内部でのグルタチオン種とのジスルフィド交換反応によって切断される。いくつかの態様において、ジスルフィド部はさらに、少なくとも1アミノ酸、例としてシステイン残基を含む。
いくつかの態様において、リンカーは、Val-citリンカー(例として、US米国特許6,214,345(参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるとおり)である。いくつかの態様において、抱合前のval-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000027
 を有する。
いくつかの態様において、抱合後のval-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000028
 を有する。
いくつかの態様において、Val-citリンカーは、反応性の化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着される。いくつかの態様においては、クリックケミストリー抱合前に、反応性の高い化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着されるval-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000029
 を有し、ここでnは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、nは3である。
いくつかの態様において、反応性の高い化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着されるval-citリンカーは、(例として、異なる化学的部分を介して)分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ抱合される。いくつかの態様において、反応性の高い化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着され、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ抱合されるval-citリンカーは(クリックケミストリー抱合前に)、以下の構造:
Figure 2023509793000030
 を有し、ここでnは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、nは3である。
いくつかの態様においては、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へのの抱合後、val-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000031
 を有し、ここでnは0～10のいずれかの数であり、およびここでmは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、nは3であり、およびmは4である。
ii．切断不能リンカー
いくつかの態様において、切断不能なリンカーが使用されてもよい。一般に、切断不能なリンカーは、細胞環境または生理環境において容易に分解され得ない。いくつかの態様において、切断不能なリンカーは、任意に置換されていてもよいアルキル基を含むが、ここで置換は、ハロゲン、ヒドロキシル基、酸素種、および他の一般的な置換を包含していてもよい。いくつかの態様において、リンカーは、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアルキレン、任意に置換されていてもよいアリーレン、ヘテロアリーレン、少なくとも1個の非天然アミノ酸を含むペプチド配列、トランケートされたグリカン、酵素的に分解され得ない糖(単数もしくは複数)、アジド、アルキン-アジド、LPXTG配列(配列番号733)を含むペプチド配列、チオエーテル、ビオチン、ビフェニル、反復単位のポリエチレングリコールもしくは等価な化合物、酸エステル、酸アミド、スルファミド、および/または(例として、および)、アルコキシ-アミンリンカーを含んでいてもよい。いくつかの態様において、ソルターゼ媒介ライゲーションは、LPXTG配列(配列番号733)を含む筋標的化剤を(G)n配列を含む分子ペイロードへ連結するために利用されるであろう(例として、Proft T.Sortase-mediated protein ligation:an emerging biotechnology tool for protein modification and immobilization.Biotechnol Lett.2010,32(1):1-10を参照)。いくつかの態様において、リンカーは、LPXTG配列(配列番号733)を含み、ここでXは、いずれのアミノ酸である。
いくつかの態様において、リンカーは、置換されたアルキレン、任意に置換されていてもよいアルケニレン、任意に置換されていてもよいアルキニレン、任意に置換されていてもよいシクロアルキレン、任意に置換されていてもよいシクロアルケニレン、任意に置換されていてもよいアリーレン、N、O、およびSから選択される少なくとも1個のヘテロ原子をさらに含む任意に置換されていてもよいヘテロアリーレン;N、O、およびSから選択される少なくとも1個のヘテロ原子をさらに含む任意に置換されていてもよいヘテロシクリレン;イミノ、任意に置換されていてもよい窒素種、任意に置換されていてもよい酸素種O、任意に置換されていてもよい硫黄種、またはポリ(アルキレンオキシド)、例として、ポリエチレンオキシドまたはポリプロピレンオキシドを含んでいてもよい。
iii．リンカー抱合
いくつかの態様において、リンカーは、ホスファート、チオエーテル、エーテル、炭素-炭素、カルバマート、もしくはアミド結合を介して筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続されている。いくつかの態様において、リンカーは、リン酸塩またはホスホロチオアート基、例として、オリゴヌクレオチド主鎖の末端のホスファートを通してオリゴヌクレオチドへ接続されている。いくつかの態様において、リンカーは、筋標的化剤上に存在するリジン残基またはシステイン残基を通して、筋標的化剤、例として抗体へ接続されている。
いくつかの態様において、リンカーは、トリアゾールを形成するアジドとアルキンとの間のシクロ付加反応によって、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続されており、ここでアジドおよびアルキンは、筋標的化剤、分子ペイロード、またはリンカー上に位置付けられていてもよい。いくつかの態様において、アルキンは、環状アルキン、例としてシクロオクチンであってもよい。いくつかの態様において、アルキンは、ビシクロノニン(またビシクロ[6.1.0]ノニンまたはBCNとしても知られている)または置換ビシクロノニンであってもよい。いくつかの態様において、シクロオクタンは、2011年11月3日に公開の国際特許出願刊行物WO2011136645、表題「Fused Cyclooctyne Compounds And Their Use In Metal-free Click Reactions」に記載のとおりである。いくつかの態様において、アジドは、アジドを含む糖または炭水化物分子であってもよい。いくつかの態様において、アジドは、6-アジド-6-デオキシガラクトースまたは6-アジド-N-アセチルガラクトサミンであってもよい。いくつかの態様において、アジドを含む糖または炭水化物分子は、2016年10月27日に公開の国際特許出願刊行物WO2016170186、表題「Process For The Modification Of A Glycoprotein Using A Glycosyltransferase That Is Or Is Derived From A β(1,4)-N-Acetylgalactosaminyltransferase」に記載のとおりである。いくつかの態様において、トリアゾールを形成するアジドとアルキンとの間のシクロ付加反応(ここでアジドおよびアルキンは、筋標的化剤、分子ペイロード、またはリンカー上に位置付けられていてもよい)は、2014年5月1日に公開の国際特許出願刊行物WO2014065661、表題「Modified antibody, antibody-conjugate and process for the preparation thereof」;または2016年10月27日に公開の国際特許出願刊行物WO2016170186、表題「Process For The Modification Of A Glycoprotein Using A Glycosyltransferase That Is Or Is Derived From A β(1,4)-N-Acetylgalactosaminyltransferase」に記載のとおりである。
いくつかの態様において、リンカーはさらに、スペーサー、例として、ポリエチレングリコールスペーサーまたはアシル/カルバモイルスルファミドスペーサー、例として、HydraSpace(商標)スペーサーを含む。いくつかの態様において、スペーサーは、Verkade,J.M.M.et al.,“A Polar Sulfamide Spacer Significantly Enhances the Manufactur能力, St能力, and Therapeutic Index of Antibody-Drug Conjugates”,Antibodies,2018,7,12に記載のとおりである。
いくつかの態様において、リンカーは、求ジエン体とジエン/ヘテロ-ジエンとの間のディールス・アルダー反応によって、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続されるが、ここで求ジエン体およびジエン/ヘテロ-ジエンは、筋標的化剤、分子ペイロード、またはリンカー上に位置付けられていてもよい。いくつかの態様において、リンカーは、他のペリ環状反応、例として、エン反応によって、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続される。いくつかの態様において、リンカーは、アミド、チオアミド、またはスルホンアミド結合反応によって、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続される。いくつかの態様において、リンカーは、リンカーと筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードとの間に存在するオキシム基、ヒドラゾン基、またはセミカルバジド基を形成する縮合反応によって、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続される。
いくつかの態様において、リンカーは、求核試薬(例として、アミン基またはヒドロキシル基)と求電子試薬(例として、カルボン酸、カーボナート、またはアルデヒド)との間の抱合体付加反応によって、筋標的化剤および/または(例として、および)分子ペイロードへ接続される。いくつかの態様において、リンカーと筋標的化剤または分子ペイロードとの間の反応に先立ち、求核試薬はリンカー上に存在していてもよく、求電子試薬は筋標的化剤または分子ペイロード上に存在していてもよい。いくつかの態様において、リンカーと筋標的化剤または分子ペイロードとの間の反応に先立ち、求電子試薬はリンカー上に存在していてもよく、求核試薬は筋標的化剤または分子ペイロード上に存在していてもよい。いくつかの態様において、求電子試薬は、アジド、ペンタフルオロフェニル、ケイ素中心、カルボニル、カルボン酸、無水物、イソシアナート、チオイソシアナート、スクシニミジルエステル、スルホスクシニミジルエステル、マレイミド、アルキルハロゲン化物、アルキル擬ハロゲン化物、エポキシド、エピスルフィド、アジリジン、アリール、活性化リン中心、および/または(例として、および)、活性化硫黄中心であってもよい。いくつかの態様において、求核試薬は、任意に置換されていてもよいアルケン、任意に置換されていてもよいアルキン、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいヘテロシクリル、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、アニリド基、またはチオール基であってもよい。
いくつかの態様において、反応性の高い化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着されるval-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000032
 によって抗TfR抗体へ抱合されており、ここでmは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、mは4である。
いくつかの態様において、反応性の高い化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着されるval-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000033
 を有する抗TfR抗体に抱合されており、ここでmは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、mは4である。
いくつかの態様において、反応性の高い化学的部分(例として、クリックケミストリー抱合のためのSPAAC)へ付着され、抗TfR抗体へ抱合されるval-citリンカーは、以下の構造:
Figure 2023509793000034
 を有し、ここでnは0～10のいずれかの数であり、ここでmは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、nは3であり、および/または(例として、および)mは4である。
いくつかの態様において、抗TfR抗体および分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)は、以下の構造:
Figure 2023509793000035
 を介して連結され、ここでnは0～10のいずれかの数であり、ここでmは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、nは3であり、および/または(例として、および)mは4である。いくつかの態様において、XはNH(例として、リジンのアミン基からのNH)である。いくつかの態様において、XはSであり、抗体は抱合を介して抗体のシステインへ連結される。いくつかの態様において、XはOであり、抗体は抱合を介して抗体のセリン、トレオニン、またはチロシンのヒドロキシル基へ連結される。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000036
 を有し、ここでnは0～10のいずれかの数であり、ここでmは0～10のいずれかの数である。いくつかの態様において、nは3であり、および/または(例として、および)mは4である。
構造式(A)、(B)、(C)、および(D)中、L1は、いくつかの態様において、置換もしくは非置換の脂肪族、置換もしくは非置換のヘテロ脂肪族、置換もしくは非置換のカルボシクリレン、置換もしくは非置換のヘテロシクリレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレン、-O-、-N(RA)-、-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRA-、-NRAC(＝O)-、-NRAC(＝O)RA-、-C(＝O)RA-、-NRAC(＝O)O-、-NRAC(＝O)N(RA)-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)O-、-OC(＝O)N(RA)-、-S(O)2NRA-、-NRAS(O)2-、またはそれらの組み合わせであるスペーサーであり、ここで各RAは、独立して、水素または置換もしくは非置換のアルキルである。いくつかの態様において、L1は、以下:
Figure 2023509793000037
 であり、ここでピペラジン部分は、オリゴヌクレオチドへ連結し、ここでL2は、
Figure 2023509793000038
 である。
いくつかの態様において、L1は、以下:
Figure 2023509793000039
 であり、ここでピペラジンは、オリゴヌクレオチドへ連結する。
いくつかの態様において、L1は、オリゴヌクレオチドの5'ホスファートへ連結される。いくつかの態様において、L1は、オリゴヌクレオチドの5'ホスホロチオアートに連結される。いくつかの態様において、L1は、オリゴヌクレオチドの5'ホスホロアミダートへ連結される。
いくつかの態様において、L1は、任意である(例として、存在する必要はない)。
Ｄ．抗体-分子ペイロード複合体の例
他の本開示の側面は、本明細書に記載の分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)のいずれかへ共有結合的に連結された、本明細書に記載のいずれか1つの筋標的化剤(例として、抗トランスフェリン受容体抗体)を含む複合体を提供する。いくつかの態様において、筋標的化剤(例として、抗トランスフェリン受容体抗体)は、リンカーを介して分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結されている。本明細書に記載のリンカーのいずれも、使用されてもよい。いくつかの態様において、リンカーは、オリゴヌクレオチドの5'末端、3'末端、または内部へ連結されている。いくつかの態様において、リンカーは、チオール反応性の連結を介して(例として、抗体中のシステインを介して)抗体へ連結されている。いくつかの態様において、リンカー(例として、Val-citリンカー)は、抗体(例として、本明細書に記載の抗TfR抗体)へアミン基を介して(例として、抗体中のリジンを介して)連結されている。
Val-citリンカーを介してオリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結された抗トランスフェリン受容体抗体を含む複合体の構造の例は、下に提供される:
Figure 2023509793000040
 ここでリンカーは、オリゴヌクレオチドの5'末端、3'末端、または内部へ連結されており、およびここでリンカーは、チオール反応性の連結を介して(例として、抗体中のシステインを介して)抗体へ連結されている。
Val-citリンカーを介して分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含む複合体の構造の別の例は、下に提供される:
Figure 2023509793000041
 ここでnは0～10の間の数であり、ここでmは0～10の間の数であり、ここでリンカーはアミン基(例として、リジン残基上の)を介して抗体へ連結され、および/または(例として、および)リンカーはオリゴヌクレオチドへ(例として、5'端、3'端にて、または内部に)連結される。いくつかの態様において、リンカーはリジンを介して抗体へ連結され、リンカーはオリゴヌクレオチドに5'端にて連結され、nは3であり、mは4である。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、L1は、以下:
Figure 2023509793000042
 である。
抗体は、種々の化学量論でオリゴヌクレオチドへ連結され得ることが解されるはずであって、前記特性は薬物抗体比(DAR)と称されることもあり、ここで「薬物」はオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、1つのオリゴヌクレオチドが抗体へ連結されている(DAR=1)。いくつかの態様において、2つのオリゴヌクレオチドが抗体へ連結されている(DAR=2)。いくつかの態様において、3つのオリゴヌクレオチドが抗体へ連結されている(DAR=3)。いくつかの態様において、4つのオリゴヌクレオチドが抗体へ連結されている(DAR=4)。いくつかの態様において、各々が異なるDARを有する異なる複合体の混合物が提供される。いくつかの態様において、かかる混合物中の複合体の平均DARは、1～3、1～4、1～5以上の範囲にあってもよい。DARは、オリゴヌクレオチドを抗体上の種々の部位へ抱合させることによって、および/または(例として、および)、マルチマーを抗体上の1以上の部位へ抱合させることによって、増大されてもよい。例えば、2のDARは、単一オリゴヌクレオチドを抗体上の2つの異なる部位へ抱合させることによって、または二量体オリゴヌクレオチドを抗体の単一部位へ抱合させることによって、達成されてもよい。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、オリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結された抗トランスフェリン受容体抗体(例として、本明細書に記載のとおりの抗体またはそのいずれのバリアント)を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リンカー(例として、Val-citリンカー)を介してオリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結された抗トランスフェリン受容体抗体(例として、本明細書に記載のとおりの抗体またはそのいずれのバリアント)を含む。いくつかの態様において、リンカー(例として、Val-citリンカー)は、オリゴヌクレオチドの5'末端、3'末端、または内部へ連結されている。いくつかの態様において、リンカー(例として、Val-citリンカー)は、チオール反応性の連結を介して(例として、抗体中のシステインを介して)、抗体(例として、本明細書に記載のとおりの抗体またはそのいずれのバリアント)へ連結されている。いくつかの態様において、リンカー(例として、Val-citリンカー)は、抗体(例として、本明細書に記載の抗TfR抗体)へアミン基を介して(例として、抗体中のリジンを介して)連結されている。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体の例のいずれか1つにおいて、分子ペイロードは、本明細書に記載の遺伝子標的配列のいずれか1つと少なくとも15ヌクレオチドの相補性のある領域を含むオリゴヌクレオチドであり、ここで任意に、標的配列は、表10に挙げられる配列である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、表2、表4、表7、または表9に示されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と同じであるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と;表2、表4、表7、または表9に示されるCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3と同じCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3とを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、以下:
(i) 配列番号1のCDR-H1、配列番号2、配列番号731、または配列番号80のCDR-H2、配列番号3のCDR-H3、配列番号4のCDR-L1、配列番号5のCDR-L2、および配列番号6のCDR-L3;
(ii) 配列番号145のCDR-H1、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のCDR-H2、配列番号147のCDR-H3、配列番号148のCDR-L1、配列番号149のCDR-L2、および配列番号6のCDR-L3;あるいは
(iii) 配列番号150のCDR-H1、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のCDR-H2、配列番号152のCDR-H3、配列番号153のCDR-L1、配列番号5のCDR-L2、および配列番号154のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、以下:
(i) 配列番号9のCDR-H1、配列番号10のCDR-H2、配列番号11のCDR-H3、配列番号12のCDR-L1、配列番号13のCDR-L2、および配列番号14のCDR-L3;
(ii) 配列番号155のCDR-H1、配列番号156のCDR-H2、配列番号157のCDR-H3、配列番号158のCDR-L1、配列番号159のCDR-L2、および配列番号14のCDR-L3;または
(iii) 配列番号160のCDR-H1、配列番号161のCDR-H2、配列番号162のCDR-H3、配列番号163のCDR-L1、配列番号13のCDR-L2、および配列番号164のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、以下:
(i) 配列番号17、配列番号735、または配列番号737のCDR-H1、配列番号18のCDR-H2、配列番号19のCDR-H3、配列番号20のCDR-L1、配列番号21のCDR-L2、および配列番号22のCDR-L3;
(ii) 配列番号165、配列番号736、または配列番号738のCDR-H1、配列番号166のCDR-H2、配列番号167のCDR-H3、配列番号168のCDR-L1、配列番号169のCDR-L2、および配列番号22のCDR-L3;あるいは
(iii) 配列番号170のCDR-H1、配列番号171のCDR-H2、配列番号172のCDR-H3、配列番号173のCDR-L1、配列番号21のCDR-L2、および配列番号174のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、以下:
(i) 配列番号188のCDR-H1、配列番号189のCDR-H2、配列番号190のCDR-H3、配列番号191のCDR-L1、配列番号192のCDR-L2、および配列番号193のCDR-L3;
(ii) 配列番号194のCDR-H1、配列番号195のCDR-H2、配列番号196のCDR-H3、配列番号197のCDR-L1、配列番号198のCDR-L2、および配列番号193のCDR-L3;または
(iii) 配列番号199のCDR-H1、配列番号200のCDR-H2、配列番号201のCDR-H3、配列番号202のCDR-L1、配列番号192のCDR-L2、および配列番号203のCDR-L3を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は表2または表7に示されるVH;および表2または表7に示されるVLを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号7のアミノ酸配列を有するVHおよび配列番号8のアミノ酸配列を有するVLを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号15のアミノ酸配列を有するVHおよび配列番号16のアミノ酸配列を有するVLを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号23のアミノ酸配列を有するVHおよび配列番号24のアミノ酸配列を有するVLを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を有するVHおよび配列番号205のアミノ酸配列を有するVLを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号178、配列番号185、配列番号769、配列番号770、配列番号773、または配列番号774のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号179のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号180、配列番号186のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号181のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号182、配列番号187、配列番号771、配列番号772、配列番号775、または配列番号776のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号183のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗TfR抗体は、配列番号210、配列番号211、配列番号213、または配列番号777のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号212のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はヒト化抗体であり、これが、表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVHと、表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVLとを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体は、配列番号7で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVHと、配列番号8で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVLとを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体は、配列番号15で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVHと、配列番号16で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVLとを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体は、配列番号23で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVHと、配列番号24で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を有するヒトフレームワーク領域を含有するVLとを含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はIgG1カッパであり、これが、表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はIgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はIgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの態様において、分子ペイロードは、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、表10および表16に挙げられるDMPK標的化オリゴヌクレオチドまたは表10に挙げられる標的配列を標的とするDMPK標的化オリゴヌクレオチド)である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチドの5'端へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はIgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが、表2または表4に挙げられるマウス抗体(例として、3A4、3M12、または5H12)のCDRを有するヒトフレームワーク領域を含み、ここで複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000043
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000044
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチドの5'端へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はIgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが、配列番号777のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号212のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、ここで複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000045
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000046
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチドの5'端へ共有結合的に連結された抗TfR抗体を含み、抗体はIgG1カッパのFab'フラグメントであり、これが、配列番号213のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号212のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000047
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000048
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号1で表されるとおりのCDR-H1、配列番号2で表されるとおりのCDR-H2、配列番号3で表されるとおりのCDR-H3、配列番号4で表されるとおりのCDR-L1、配列番号5で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号6で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000049
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000050
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号1で表されるとおりのCDR-H1、配列番号731で表されるとおりのCDR-H2、配列番号3で表されるとおりのCDR-H3、配列番号4で表されるとおりのCDR-L1、配列番号5で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号6で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000051
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000052
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号1で表されるとおりのCDR-H1、配列番号80で表されるとおりのCDR-H2、配列番号3で表されるとおりのCDR-H3、配列番号4で表されるとおりのCDR-L1、配列番号5で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号6で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000053
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000054
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号145で表されるとおりのCDR-H1、配列番号146で表されるとおりのCDR-H2、配列番号147で表されるとおりのCDR-H3、配列番号148で表されるとおりのCDR-L1、配列番号149で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号6で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000055
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000056
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号145で表されるとおりのCDR-H1、配列番号732で表されるとおりのCDR-H2、配列番号147で表されるとおりのCDR-H3、配列番号148で表されるとおりのCDR-L1、配列番号149で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号6で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000057
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000058
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号145で表されるとおりのCDR-H1、配列番号734で表されるとおりのCDR-H2、配列番号147で表されるとおりのCDR-H3、配列番号148で表されるとおりのCDR-L1、配列番号149で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号6で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000059
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000060
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号150で表されるとおりのCDR-H1、配列番号151で表されるとおりのCDR-H2、配列番号152で表されるとおりのCDR-H3、配列番号153で表されるとおりのCDR-L1、配列番号5で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号154で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000061
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000062
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号150で表されるとおりのCDR-H1、配列番号739で表されるとおりのCDR-H2、配列番号152で表されるとおりのCDR-H3、配列番号153で表されるとおりのCDR-L1、配列番号5で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号154で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000063
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000064
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号150で表されるとおりのCDR-H1、配列番号740で表されるとおりのCDR-H2、配列番号152で表されるとおりのCDR-H3、配列番号153で表されるとおりのCDR-L1、配列番号5で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号154で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000065
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000066
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号9で表されるとおりのCDR-H1、配列番号10で表されるとおりのCDR-H2、配列番号11で表されるとおりのCDR-H3、配列番号12で表されるとおりのCDR-L1、配列番号13で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号14で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000067
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000068
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号155で表されるとおりのCDR-H1、配列番号156で表されるとおりのCDR-H2、配列番号157で表されるとおりのCDR-H3、配列番号158で表されるとおりのCDR-L1、配列番号159で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号14で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000069
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000070
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号160で表されるとおりのCDR-H1、配列番号161で表されるとおりのCDR-H2、配列番号162で表されるとおりのCDR-H3、配列番号163で表されるとおりのCDR-L1、配列番号13で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号164で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000071
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000072
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号17で表されるとおりのCDR-H1、配列番号18で表されるとおりのCDR-H2、配列番号19で表されるとおりのCDR-H3、配列番号20で表されるとおりのCDR-L1、配列番号21で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号22で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000073
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000074
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号735で表されるとおりのCDR-H1、配列番号18で表されるとおりのCDR-H2、配列番号19で表されるとおりのCDR-H3、配列番号20で表されるとおりのCDR-L1、配列番号21で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号22で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000075
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000076
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号737で表されるとおりのCDR-H1、配列番号18で表されるとおりのCDR-H2、配列番号19で表されるとおりのCDR-H3、配列番号20で表されるとおりのCDR-L1、配列番号21で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号22で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000077
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000078
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号165で表されるとおりのCDR-H1、配列番号166で表されるとおりのCDR-H2、配列番号167で表されるとおりのCDR-H3、配列番号168で表されるとおりのCDR-L1、配列番号169で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号22で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000079
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000080
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号736で表されるとおりのCDR-H1、配列番号166で表されるとおりのCDR-H2、配列番号167で表されるとおりのCDR-H3、配列番号168で表されるとおりのCDR-L1、配列番号169で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号22で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000081
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000082
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号738で表されるとおりのCDR-H1、配列番号166で表されるとおりのCDR-H2、配列番号167で表されるとおりのCDR-H3、配列番号168で表されるとおりのCDR-L1、配列番号169で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号22で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000083
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000084
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号170で表されるとおりのCDR-H1、配列番号171で表されるとおりのCDR-H2、配列番号172で表されるとおりのCDR-H3、配列番号173で表されるとおりのCDR-L1、配列番号21で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号174で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000085
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000086
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号188で表されるとおりのCDR-H1、配列番号189で表されるとおりのCDR-H2、配列番号190で表されるとおりのCDR-H3、配列番号191で表されるとおりのCDR-L1、配列番号192で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号193で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000087
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000088
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号194で表されるとおりのCDR-H1、配列番号195で表されるとおりのCDR-H2、配列番号196で表されるとおりのCDR-H3、配列番号197で表されるとおりのCDR-L1、配列番号198で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号193で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000089
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000090
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、リジンを介してオリゴヌクレオチド(例として、DMPK標的化オリゴヌクレオチド)の5'端へ共有結合的に連結された抗TfR Fabを含み、抗TfR Fabは、配列番号199で表されるとおりのCDR-H1、配列番号200で表されるとおりのCDR-H2、配列番号201で表されるとおりのCDR-H3、配列番号202で表されるとおりのCDR-L1、配列番号192で表されるとおりのCDR-L2、および配列番号203で表されるとおりのCDR-L3を含み;複合体は、以下の構造:
Figure 2023509793000091
 を有し、ここでnは3であり、mは4であり、ここでL1は、
Figure 2023509793000092
 であり、ここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号482～717および2329～3861のいずれか1つで表されるとおりの標的配列と少なくとも16ヌクレオチドの相補性のある領域を含み、さらにここで任意に、DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、gamper)は、配列番号246～481および778～795のいずれか1つ(例として、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346、および362のいずれか1つ)のヌクレオチド配列の少なくとも10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド(例として、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の一続きのヌクレオチド)を含む。
いくつかの態様において、L1は、オリゴヌクレオチドの5'ホスファートへ連結される。いくつかの態様において、L1は、オリゴヌクレオチドの5'ホスホロチオアートへ連結される。いくつかの態様において、L1は、オリゴヌクレオチドの5'ホスホロアミダートへ連結される。
いくつかの態様において、L1は、任意である(例として、存在する必要はない)。
III．製剤
本明細書に提供される複合体は、いずれの好適なやり方でも製剤化されていてよい。一般に、本明細書に提供される複合体は、医薬への使用に好適なやり方で製剤化されている。例えば、複合体は、分解を最小限に抑え、送達および/または(例として、および)取り込みを容易にする製剤を使用して、対象へ送達され得るか、あるいは、製剤中の複合体へ別の有益な特性を提供する。いくつかの態様において、本明細書に提供されるのは、複合体および薬学的に許容し得る担体を含む組成物である。かかる組成物は、対象の標的細胞周囲の環境中または対象の全身のいずれかへ投与されたとき充分量の複合体が標的筋細胞に侵入できるように、好適に製剤化され得る。いくつかの態様において、複合体は、リン酸緩衝生理食塩溶液などの緩衝溶液中、リポソーム中、ミセル構造体中、およびカプシド中に製剤化される。
いくつかの態様において、組成物が、本明細書に提供される複合体の1以上の構成要素(例として、筋標的化剤、リンカー、分子ペイロード、またはこれらのいずれか1つの前駆体分子)を個別に包含していてもよいことは解されるはずである。
いくつかの態様において、複合体は、水中または水性溶液(例として、pH調整された水)中に製剤化される。いくつかの態様において、複合体は、塩基性緩衝水性溶液(例として、PBS)中に製剤化される。いくつかの態様において、本明細書に開示のとおりの製剤は、賦形剤を含む。いくつかの態様において、賦形剤は、組成物へ、改善された安定性、改善された吸収、改善された可溶性、および/または(例として、および)、活性成分の治療増強を付与する。いくつかの態様において、賦形剤は、緩衝剤(例として、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基、もしくは水酸化ナトリウム)、またはビヒクル(例として、緩衝溶液、ワセリン、ジメチルスルホキシド、または鉱油)である。
いくつかの態様において、複合体またはその構成要素(例として、オリゴヌクレオチドまたは抗体)は、その貯蔵寿命を延長するため凍結乾燥され、次いで使用(例として、対象への投与)前に溶液にさせられる。結果的に、本明細書に記載の複合体またはその構成要素を含む組成物中の賦形剤は、凍結保護剤(lyoprotectant)(例として、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、もしくはポリビニルピロリドン)、または崩壊温度修飾因子(例として、デキストラン、フィコール、もしくはゼラチン)であってもよい。
いくつかの態様において、医薬組成物は、その意図された投与ルートに適合するよう製剤化されている。投与ルートの例は、非経口投与、例として、静脈内投与、皮内投与、皮下投与を包含する。典型的には、投与ルートは、静脈内投与または皮下投与である。
注射剤への使用に好適な医薬組成物は、滅菌水性溶液(ここで水に可溶性である)または分散溶液、および滅菌注射剤溶液または分散溶液の即時調製のための滅菌粉末を包含する。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等)、および好適なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒体であり得る。いくつかの態様において、製剤は、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、および塩化ナトリウムを包含する。滅菌注射剤溶液は、要求量の複合体を、上に列挙された成分の1つまたはそれらの組み合わせとともに、選択された溶媒に組み込むこと、要求に応じ、これに続き濾過滅菌することによって調製され得る。
いくつかの態様において、組成物は、活性成分(単数または複数)のパーセンテージが組成物全体の重量または体積の約1％と約80％以上との間であってもよいが、少なくとも約0.1％の複合体もしくはその構成要素を含有していてもよい。可溶性、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与ルート、産物の貯蔵寿命などの因子、ならびに他の薬理学的留意事項は、かかる医薬製剤を調製する当業者によって企図されるであろう。そのため様々な投薬量および処置計画が所望されることもある。
IV．使用の方法/処置
本明細書に記載のとおりの分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体は、筋緊張性ジストロフィーを処置するのに有効である。いくつかの態様において、複合体は、筋緊張性ジストロフィー1型(DM1)を処置するのに有効である。いくつかの態様において、DM1は、DMPKの3'非コード領域にあるCTGトリヌクレオチド反復の拡張に関連する。いくつかの態様において、ヌクレオチド拡張は、重要な細胞内タンパク質、例として、muscleblind様タンパク質に高い親和性で結合するヘアピン構造を形成することができる有毒なRNA反復に繋がる。
いくつかの態様において、対象は、ヒト対象、霊長目の非ヒト動物対象、齧歯類動物対象、またはいずれの好適な哺乳類の動物対象であってもよい。いくつかの態様において、対象は、筋緊張性ジストロフィーを有していてもよい。いくつかの態様において、対象は、任意で、疾患関連反復を含有していてもよいDMPKアレルを有する。いくつかの態様において、対象は、約2～10反復単位、約2～50反復単位、約2～100反復単位、約50～1,000反復単位、約50～500反復単位、約50～250反復単位、約50～100反復単位、約500～10,000反復単位、約500～5,000反復単位、約500～2,500反復単位、約500～1,000反復単位、または約1,000～10,000反復単位を含む、拡張した疾患関連反復を有するDMPKアレルを有していてもよい。いくつかの態様において、対象は、DM1の症状、例として筋委縮または筋肉の喪失を患っている。いくつかの態様において、対象は、DM1の症状を患っていない。いくつかの態様において、対象は、先天性筋緊張性ジストロフィーを有する。
本開示の側面は、本明細書に記載のとおりの有効量の複合体を対象へ投与することを伴う方法を包含する。いくつかの態様において、分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む有効量の医薬組成物は、処置を必要とする対象へ投与され得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のとおりの複合体を含む医薬組成物は、静脈内投与を包含してもよい好適なルートによって、例として、ボーラスとして、またはある期間にわたる連続注入によって、投与されてもよい。いくつかの態様において、静脈内投与は、筋肉内の、腹腔内の、脳脊髄内の(intracerebrospinal)、皮下の、関節内の、滑液嚢内の、または髄腔内のルートによって実施されてもよい。いくつかの態様において、医薬組成物は、固体形態、水性形態、または液体形態であってもよい。いくつかの態様において、水性または液体形態は、噴霧されてもよく、または凍結乾燥されてもよい。いくつかの態様において、噴霧形態または凍結乾燥形態は、水性または液体溶液で再構成されてもよい。
静脈内投与のための組成物は、植物油、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、およびポリオール(グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等)などの様々な担体を含有していてもよい。静脈内注射のための水可溶性抗体は点滴法によって投与され得、これによって抗体および薬学的に許容し得る賦形剤を含有する医薬製剤が注入される。薬学的に許容し得る賦形剤は、例えば、5％デキストロース、0.9％生理食塩水、リンガー溶液、または他の好適な賦形剤を包含していてもよい。筋肉内用調製物、例として、抗体の好適な可溶性の塩形態の滅菌製剤は、注射用水、0.9％生理食塩水、または5％グルコース溶液などの医薬賦形剤に溶解されて投与され得る。
いくつかの態様において、分子ペイロードへ共有結合的に連結されたた筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、部位特異的または局部的な送達技法を介して投与される。これらの技法の例は、複合体の埋め込み型デポー供給源、局部送達カテーテル、部位特異的担体、直接注射、または直塗り(direct application)を包含する。
いくつかの態様において、分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、治療効果を対象に付与する有効濃度にて投与される。有効量は、当業者によって認識されるとおり、疾患の重症度、処置される対象の特有な特徴、例として、年齢、体調、健康状態、または重量、処置時間、いずれの併用治療の性質、投与ルート、および関連因子に応じて変動する。これらの関連因子は当業者に知られており、わずかな定型的実験法で対処され得る。いくつかの態様において、有効濃度は、患者に安全であるとみなされる最大用量である。いくつかの態様において、有効濃度は、最大限の効き目を提供する、実行可能な最低濃度であろう。
経験的考察、例として、対象における複合体の半減期は一般に、処置のために使用される医薬組成物の濃度の決定に寄与するであろう。投与頻度は、処置の効き目を最大化するために経験的に決定かつ調整されてもよい。
一般に、本明細書に記載の複合体のいずれかの投与について、当初の候補投薬量は、上に記載の因子、例として、安全性または効き目に応じて、約1～100mg/kgであってもよく、またはこれより多くてもよい。いくつかの態様において、処置は、一度施されるであろう。いくつかの態様において、処置は、毎日、隔週、毎週、隔月、毎月、または対象へ最大の効き目を提供しつつ安全性へのリスクを最小に抑えるいずれの時間間隔にて、施されるであろう。一般に、効き目ならびに処置および安全性へのリスクは、処置過程を通してずっと監視されることもある。
いくつかの態様において、当初の候補投薬量は、約1～50、1～25、1～10、1～5、5～100、5～50、5～25、5～10、10～100、10～75、10～50、10～25、10～20、25～100、25～75、または25～50mg/kgである。いくつかの態様において、当初の候補投薬量は、約1～20、1～15、1～10、1～5、1～3、1～2、5～20、5～15、または5～10mg/kgである。いくつかの態様において、当初の候補投薬量は、約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、または20mg/kgである。
処置の効き目は、いずれか好適な方法を使用して査定されてもよい。いくつかの態様において、処置の効き目は、DM1に関連する症状、例として、筋萎縮または筋力衰弱、被験者の自己申告結果の測定、例として、可動性、セルフケア、通常の活動、疼痛/不快感、および不安/抑うつを通して、または生活の質の指標、例として寿命により、所見の評価によって査定されてもよい。
いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、対照(例として、処置に先立つ遺伝子発現のベースラインレベル)と比べて、標的遺伝子の活性または発現を少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、または少なくとも95％阻害するのに充分な有効濃度にて、対象へ投与される。
いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1～5日間、1～10日間、5～15日間、10～20日間、15～30日間、20～40日間、25～50日間、またはこれより長い期間、標的遺伝子の活性または発現を阻害するのに充分である。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、または24週間、標的遺伝子の活性または発現を阻害するのに充分である。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1～5、1～10、2～5、2～10、4～8、4～12、5-10、5～12、5～15、8～12、8～15、10～12、10～15、10～20、12～15、12～20、15～20、または15-25週間、標的遺伝子の活性または発現を阻害するのに充分である。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1、2、3、4、5、または6カ月間、標的遺伝子の活性または発現を阻害するのに充分である。
いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1～5、1～10、5～15、10～20、15～30、20～40、25～50、またはこれより日にち、対象において持続または残存する。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、または24週間、対象において持続または残存する。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1～5、1～10、2～5、2～10、4～8、4～12、5-10、5～12、5～15、8～12、8～15、10～12、10～15、10～20、12～15、12～20、15～20、または15-25週間、対象において持続または残存する。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の対象への単回用量または投与は、少なくとも1、2、3、4、5、または6カ月間、対象において持続または残存する。
いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物の複数回用量または投与は、対象に送達される。いくつかの態様において、医薬組成物の複数回用量は、対象へ2、3、4、5、6、7、8、9、または10用量を送達することを含む。いくつかの態様において、医薬組成物の複数回用量は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、または16週間毎に対象へ用量を送達することを含む。いくつかの態様において、医薬組成物の複数回用量は、4週間毎に1回、対象へ用量を送達することを含む。いくつかの態様において、医薬組成物の複数回用量は、1～10、2～5、2～10、4～8、4～12、5～10、5～12、5～15、8～12、8～16、10～12、10～15、10～20、12～15、12～20、15～20、または15～25週間毎に1回、対象へ用量を送達することを含む。いくつかの態様において、医薬組成物の複数回用量は、2週に1回(すなわち、2週間毎)、2ヶ月に1回(すなわち、2ヶ月毎)、または4半期に1回(すなわち、12週間毎)対象へ用量を送達することを含む。
いくつかの態様において、単回用量または投与は、約1～50、1～25、1～10、1～15、1～5、5～100、5～50、5～25、5～10、10～100、10～75、10～50、10～25、10～20、25～100、25～75、または25～50mg/kgである。いくつかの態様において、単回用量または投与は、約1～20、1～15、1～10、1～5、1～3、1～2、5～20、5～15、または5～10mg/kgである。いくつかの態様において、単回用量または投与は、約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、または20mg/kgである。
いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、または16週間毎に対象へ送達される。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、1～10、2～5、2～10、4～8、4～12、5～10、5～12、5～15、8～12、8～16、9～15、10～12、10～14、10～15、10～20、11～13、11～15、12～15、12～16、12～20、15～20、または15～25週間毎に、対象へ送達される。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、2週に1回(すなわち、2週間毎)、2ヶ月に1回(すなわち、2ヶ月毎)、または4半期に1回(すなわち、12週間毎)対象へ送達される。
いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、1～15mg/kgのRNAの濃度で、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、または16週間毎に対象へ送達される。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、1～15mg/kgのRNAの濃度で、1～10、2～5、2～10、4～8、4～12、5～10、5～12、5～15、8～12、8～16、9～15、10～12、10～14、10～15、10～20、11～13、11～15、12～15、12～16、12～20、15～20、または15～25週間毎に、対象へ送達される。いくつかの態様において、本明細書に記載の分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体を含む医薬組成物は、1～15mg/kgのRNAの濃度で、2週に1回(すなわち、2週間毎)、2ヶ月に1回(すなわち、2ヶ月毎)、または4半期に1回(すなわち、12週間毎)対象へ送達される。
いくつかの態様において、医薬組成物は、分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む、1種より多くの複合体を含んでいてもよい。いくつかの態様において、医薬組成物は、対象、例として、DM1を有するヒト対象の処置のためのいずれか他の好適な治療剤をさらに含んでいてもよい。いくつかの態様において、他の治療剤は、本明細書に記載の複合体の有効性を増強または補完するものであってもよい。いくつかの態様において、他の治療剤は、本明細書に記載の複合体とは異なる症状または疾患を処置するよう機能してもよい。
例
例1:トランスフェクトされたアンチセンスオリゴヌクレオチドでのDMPKの標的化
DMPK(対照DMPK-ASO)の野生型および突然変異アレルの両方を標的にするgapmerアンチセンスオリゴヌクレオチドを、不死化細胞株中DMPKの発現レベル低減能について、in vitroで試験した。手短に言えば、Hepa1-6細胞に、リポフェクタミン2000で製剤化された対照DMPK-ASO(100nM)をトランスフェクトした。DMPK発現レベルを、トランスフェクションを受けてから72時間評価した。ビヒクル(リン酸緩衝生理食塩水)を培養中Hepa1-6細胞へ送達して細胞を72時間維持した、対照実験もまた実施した。図1に示されるとおり、対照DMPK-ASOはDMPK発現レベルを対照と比較して～90％低減させたことがわかった。
例2:筋標的化複合体でのDMPKの標的化
カテプシン切断可能なリンカーを介して、抗トランスフェリン受容体抗体であるDTX-A-002(RI7 217 (Fab))へ共有結合的に連結された、例1(対照DMPK-ASO)に使用されたDMPK ASOを含む筋標的化複合体を生成した。
手短に言えば、マレイミドカプロイル-L-バリン-L-シトルリン-p-アミノベンジルアルコールp-ニトロフェニルカーボナート(MC-Val-Cit-PABC-PNP)リンカー分子を、アミドカップリング反応を使用して、NH2-C6-対照DMPK-ASOへカップリングした。過剰なリンカーおよび有機溶媒をゲル浸透クロマトグラフィーによって除去した。次いで、精製されたVal-Cit-リンカー-対照DMPK-ASOを、チオール-反応性の抗トランスフェリン受容体抗体(DTX-A-002)へカップリングした。
抗体カップリング反応の産物をその後疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC-HPLC)へ供した。図2Aは、SDS-PAGEによって決定されたとおり、クロマトグラムの画分B7-C2 (垂直線によって示される)が、DTX-A-002に共有結合的に付着している1個または2個のDMPK ASO分子を含む抗体オリゴヌクレオチド複合体(DTX-C-008としても称される)を含有した、結果のHIC-HPLCクロマトグラムを示す。これらのHIC-HPLC画分は合わされ、濃度測定は、DTX-C-008複合体のこの試料が、1.48の平均ASO対抗体比を有していることを確認した。SDS-PAGE分析は、DTX-C-008のこの試料の86.4％が、1個または2個のいずれかのDMPK ASO分子に連結したDTX-A-002を含んでいることを実証した(図2B)。
上記の同じ方法を使用して、Val-Citリンカーを介して、IgG2a (Fab)抗体(DTX-C-007)へ共有結合的に連結された例1(対照DMPK-ASO)で使用されたDMPK ASOを含む対照複合体を生成した。
次いで、精製されたDTX-C-008を細胞内在化およびDMPKの阻害について試験した。トランスフェリン受容体の相対的に高い発現レベルを有するHepa1-6細胞を、ビヒクル対照、DTX-C-008(100nM)、またはDTX-C-007(100nM)の存在下で72時間インキュベートした。72時間インキュベーションの後、細胞を単離してDMPKの発現レベルについてアッセイした(図3)。DTX-C-008で処置された細胞は、ビヒクル対照で処置された細胞と比べて、DMPK発現の～65％の低減を実証した。その一方で、DTX-C-007で処置された細胞は、ビヒクル対照(DMPK発現における低減無し)に匹敵するDMPK発現レベルを有した。これらのデータは、DTX-C-008の抗トランスフェリン受容体抗体が複合体の細胞内在化を可能にし、それによってDMPK ASOがDMPKの発現を阻害できることを示唆する。
例3:筋標的化複合体でのマウス筋組織中DMPKの標的化
例2に記載の筋標的化複合体であるDTX-C-008を、マウス組織中DMPKの阻害について試験した。C57BL/6野生型マウスに、単回用量のビヒクル対照、対照DMPK-ASO(3mg/kgのRNA)、DTX-C-008(3mg/kgのRNA、抗体抱合体20mg/kgに相当する)、またはDTX-C-007(3mg/kgのRNA、抗体抱合体20mg/kgに相当する)を静脈内注射した。例1に記載の対照DMPK-ASO、DMPK ASOを対照として使用した。各実験条件を3匹の個々のC57BL/6野生型マウスにおいて再現した。注射から7日後にマウスを安楽死させ、細分して単離された組織型とした。続いて個々の組織試料をDMPKの発現レベルについてアッセイした(図4A～4Eおよび5A～5B)。
DTX-C-008複合体で処置されたマウスは、様々な骨格、心、および平滑筋組織におけるDMPK発現の低減を実証した。例えば、図4A～4Eに示されるとおり、DMPK発現レベルは、ビヒクル対照で処置されたマウスと比べて、腓腹筋(50％低減)、心臓(30％低減)、食道(45％低減)、前脛骨筋(47％低減)、およびヒラメ筋(31％低減)組織において有意に低減された。その一方で、DTX-C-007複合体で処置されたマウスは、アッセイされたすべての筋組織型について、ビヒクル対照(DMPK発現における低減無し)に匹敵するDMPK発現レベルを有した。
DTX-C-008複合体で処置されたマウスは、脾臓および脳組織などの非筋組織においてDMPK発現の無変化を実証した(図5Aおよび5B)。
これらのデータは、DTX-C-008の抗トランスフェリン受容体抗体がin vivoマウスモデルで複合体の筋肉特異的組織中への細胞内在化を可能にし、それによってDMPK ASOが阻害するDMPKの発現を阻害できることを示唆している。これらのデータは、DTX-C-008複合体が、筋組織を特異的に標的にすることが可能であることをさらに実証する。
例4:筋標的化複合体でのマウス筋組織中DMPKの標的化
例2に記載の筋標的化複合体であるDTX-C-008を、マウス組織中DMPKの用量依存性阻害について試験した。C57BL/6野生型マウスに、単回用量のビヒクル対照(リン酸緩衝生理食塩水、PBS)、対照DMPK-ASO(10mg/kgのRNA)、DTX-C-008(3mg/kgまたは10mg/kgのRNA、ここで3mg/kgは、抗体抱合体20mg/kgに相当する)、またはDTX-C-007(3mg/kgまたは10mg/kgのRNA、ここで3mg/kgは、抗体抱合体20mg/kgに相当する)を静脈内注射した。例1に記載の対照DMPK-ASOであるDTX-P-060を対照として使用した。各実験条件を5匹の個々のC57BL/6野生型マウスにおいて再現した。注射から7日の期間後に、マウスを安楽死させ、細分して単離された組織型とした。続いて個々の組織試料をDMPKの発現レベルについてアッセイした(図6A～6F)。
DTX-C-008複合体で処置されたマウスは、様々な骨格筋組織におけるDMPK発現の低減を実証した。図6A～6Fに示されるとおり、DMPK発現レベルは、ビヒクル対照で処置されたマウス、前脛骨筋(3mg/kgおよび10mg/kgのDTX-C-008について夫々、58％および75％低減)、ヒラメ筋(3mg/kgおよび10mg/kgのDTX-C-008について夫々、55％および66％低減)、長指伸筋(EDL)(3mg/kgおよび10mg/kgのDTX-C-008について夫々、52％および72％低減)、腓腹筋(3mg/kgおよび10mg/kgのDTX-C-008について夫々、55％および77％低減)、心臓(3mg/kgおよび10mg/kgのDTX-C-008について夫々、19％および35％低減)、および横隔膜(3mg/kgおよび10mg/kgのDTX-C-008について夫々、53％および70％低減)組織において、優位に低減された。注目すべきことに、アッセイされたすべての筋組織型は、3mg/kg抗体抱合体と比べて、10mg/kg抗体抱合体でDMPKレベルのより大きな低減を伴う、DMPKの用量依存性阻害を経験した。
その一方で、対照DTX-C-007複合体で処置されたマウスは、アッセイされたすべての筋組織型について、ビヒクル対照(DMPK発現における低減無し)に匹敵するDMPK発現レベルを有した。これらのデータは、DTX-C-008の抗トランスフェリン受容体抗体がin vivoマウスモデルで複合体の筋肉特異的組織中への細胞内在化を可能にし、それによってDMPK ASOがDMPKの発現を阻害できることを示唆している。これらのデータは、DTX-C-008複合体が、DMPKの用量依存性阻害のために、筋組織を特異的に標的にすることが可能であることをさらに実証する。
例5:筋標的化複合体でのカニクイザル筋組織中DMPKの標的化
対照DMPK-ASO(DTX-C-012)を含む筋標的化複合体を、例2に記載の方法を使用して生成および精製した。DTX-C-012は、DMPKを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドである対照DMPK-ASOへ、カテプシン切断可能なVal-Citリンカーを介して共有結合的に連結された、ヒトトランスフェリン受容体およびカニクイザルトランスフェリン受容体へ結合するヒト抗トランスフェリン受容体抗体(配列番号240のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号237のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む15G11抗体)を含む複合体である。HIC-HPLC精製に続き、濃度測定は、DTX-C-012が1.32というASO:抗体の平均比率を有したことを確認し、SDS-PAGEは92.3％という純度を明らかにした。
DTX-C-012をオスのカニクイザル組織中DMPKの用量依存性阻害について試験した。オスのカニクイザル(19-31月齢;2～3kg)に、0日目に単回用量の生理食塩水対照、対照DMPK-ASO(ネイキッドDMPK ASO)(10mg/kgのRNA)、またはDTX-C-012(10mg/kgのRNA)を静脈内注射した。各実験条件を3匹の個々のオスのカニクイザルにおいて再現した。注射から7日目に、組織生検材料(筋組織を含有する)を採取した。DMPK mRNA発現レベル、ASO検出アッセイ、血清臨床化学、組織組織学、臨床所見、および体重を分析した。サルを14日目に安楽死させた。
生理食塩水対照と比べて、DTX-C-012を使用するDMPK mRNA発現の有意なノックダウン(KD)がヒラメ筋、深指屈筋、および咬筋において夫々、39％KD、62％KD、および41％KDで観察された(図7A～7C)。DMPK mRNA発現DTX-C-012の堅固なノックダウンが、腓腹筋(62％KD;図7D)、EDL(29％KD;図7E)、前脛骨筋筋肉(23％KD;図7F)、横隔膜(54％KD;図7G)、舌(43％KD;図7H)、心臓筋肉(36％KD;図7I)、四頭筋(58％KD;図7J)、上腕二頭筋(51％KD;図7K)、および三角筋(47％KD;図7L)においてさらに観察された。平滑筋におけるDMPK mRNA発現DTX-C-012のノックダウンが、腸においてもまた、空腸十二指腸末端で63％KD(図8A)および回腸で70％KDを伴って、観察された(図8B)。注目すべきことに、ネイキッドDMPK ASO(すなわち、筋標的化剤へ連結されていない)である対照DMPK-ASOは、アッセイされたすべての筋組織型について、ビヒクル対照(すなわち、DMPK発現がほとんどまたはまったく低減されない)と比べて、DMPK発現レベルにおいて最小限の効果を有した。DTX-C-012複合体で処置されたサルは、肝臓、腎臓、脳、および脾臓組織などの非筋組織においてDMPK発現の無変化を実証した(図9A～9D)。追加の組織を、カニクイザルにおける数個の組織型にわたって正規化されたDMPK mRNA組織発現レベルを示す図10において描かれたとおり、調べた。(N=3匹のオスのカニクイザル)
安楽死に先立ち、すべてのサルを、網状赤血球レベル、血小板レベル、ヘモグロビン発現、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)発現、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ(AST)発現、および血液尿素窒素(BUN)レベルについて、投薬後2、7、および14日目に試験した。図12に示されるとおり、抗体-オリゴヌクレオチド複合体を投与したサルは、実験の全期間を通して、正常な網状赤血球レベル、血小板レベル、ヘモグロビン発現、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)発現、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ(AST)発現、および血液尿素窒素(BUN)レベルを有した。これらのデータは、対照DMPK-ASOを含む複合体の単回用量が、カニクイザルにおいて安全で許容されることを示す。
これらのデータは、DTX-C-012複合体の15G11がin vivoカニクイザルモデルで複合体の筋肉特異的組織中への細胞内在化を可能にし、それによってDMPK ASO(対照DMPK-ASO)がDMPKの発現を阻害できることを示唆している。これらのデータは、DTX-C-012複合体が、DMPKの用量依存性阻害のために、非筋組織に実質的な影響を与えることなく、筋組織を特異的に標的にすることが可能であることをさらに実証する。これは、ネイキッドDMPK ASO(筋標的化剤へ連結されていない)である対照DMPK-ASOの、in vivoカニクイザルモデルの筋組織中DMPKの発現の限定的な阻害能との直接的な対比である。
例6:筋標的化複合体でのマウス筋組織中DMPKの標的化
例2に記載の筋標的化複合体、DTX-C-008を、マウス組織中DMPKの時間依存性阻害について試験した。C57BL/6野生型マウスに、表1に記載されたとおり、単回用量のビヒクル対照(生理食塩水)、対照DMPK-ASO(10mg/kgのRNA)、またはDTX-C-008(10mg/kgのRNA)を静脈内注射し、所定期間後に安楽死させた。安楽死に続き、マウスを細分し単離された組織型とし、続いて組織試料をDMPKの発現レベルについてアッセイした(図11A～11B)。
表1．実験条件
Figure 2023509793000093
DTX-C-008複合体で処置されたマウスは、群9～12(注射および安楽死の間3～28日)のすべてについて、ビヒクルと比べて、腓腹筋(図11A)および前脛骨筋(図11B)において、DMPK発現のおよそ50％低減を実証した。対照DMPK-ASOネイキッドオリゴヌクレオチドで処置されたマウスは、DMPK発現における有意な低減を実証しなかった。
これらのデータは、DTX-C-008複合体が、該DTX-C-008複合体でのマウスの投与後、２８日まで、DMPK発現の持続的な低減を提供できたことを示す。
例7:不死化筋芽細胞のDMPKを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの評価
インシリコ分析を使用して、DMPKを標的とする236個のオリゴヌクレオチドを生成した。各個々のオリゴヌクレオチドを、in celluloでDMPKを標的とするそれらの能力について、2つの用量－0.5nM(低用量)および50nM(高用量)で評価した。
手短に言えば、DM1 Cl5不死化筋芽細胞をT-75フラスコ中でコンフルエントに近くなるまで(約80%コンフルエント)培養した。筋芽細胞を、その後トリプシンで破壊し、50,000細胞/ウェルの密度で96ウェルマイクロプレートに播種した。増殖培地を洗い流し、無血清培地と交換して筋管への分化を誘導する前に、細胞を一晩回復(recover)させた。DMPK標的化オリゴヌクレオチドでの処理に先立ち、分化を7日間進行させた。
分化の誘導後7日目に、ウェルあたり0.3μLのLipofectamine MessengerMaxを使用して、DM1 Cl5筋管に個々のオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。すべてのオリゴヌクレオチドを、0.5nMおよび50nM最終濃度の両方で、生物学的に三重に試験した。オリゴヌクレオチドでの処理後、全RNAを収穫する前に、細胞を72時間インキュベートした。cDNAを全RNA抽出物から合成し、qPCRを実施して、DMPKの発現レベルを技術的に四重に決定した。すべてのqPCRデータを、従来のΔΔCT法を使用して分析し、ビヒクル対照(いずれのオリゴヌクレオチドもなしで0.3μL/ウェル Lipofectamine MessengerMax)で処理された細胞を含むプレートベースの陰性対照に対して正規化した。これらの実験からの結果を表10に示す。表10の各アンチセンスオリゴヌクレオチドの「正規化されたDMPK残存」は、ビヒクル対照で処理した細胞を含む陰性対照と比較した、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理した細胞におけるDMPKの発現レベルを指す(陰性対照の発現レベルを正規化して、1.00にしている)。
試験されたDMPK標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドの大部分は、低および高用量濃度(夫々0.5nMおよびと50nM)の両方で、分化した筋管におけるDMPK発現の低減を実証した。これらのデータは、表10に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドがin celluloでDMPKを標的とすることができることを実証しており、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む筋肉標的化複合体が、筋肉組織においてin vivoでDMPKを標的とすることができることを示唆している。
表 10. in celluloでDMPKの発現を低減させるDMPK標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドの能力
Figure 2023509793000094
Figure 2023509793000095
Figure 2023509793000096
Figure 2023509793000097
Figure 2023509793000098
Figure 2023509793000099
Figure 2023509793000100
Figure 2023509793000101
Figure 2023509793000102
例8:選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、不死化筋芽細胞におけるDMPK発現の用量依存的低減を提供した
例７からの18個のオリゴヌクレオチドを選択して、用量応答的様式でDMPK発現を低減させるそれらの能力について評価した。DM1 C15筋芽細胞を例7のように調製して、96ウェルマイクロプレートで分化した筋管を得た。7日間の分化後、Lipofectamine MessengerMaxを使用して、細胞を個々のオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。各オリゴヌクレオチドは、0.046nM、0.137nM、0.412nM、1.235nM、3.704nM、11.11nM、33.33nM、および100nMの濃度で、ウェルあたり0.3μLのLipofectamine MessengerMaxを使用して3倍連続希釈によって、三重に試験した。
オリゴヌクレオチドの添加後、全RNAの収穫に先立ち、採取した細胞を72時間インキュベートした。cDNAを全RNA抽出物から合成し、qPCRを実施し、市販のTaqmanプローブセットを使用してDMPKの発現レベルを、技術的に四重に決定した。すべてのqPCRデータを、従来のΔΔCT法を使用して分析し、ビヒクル対照(いずれのオリゴヌクレオチドもなしで0.3μL/ウェルLipofectamine MessengerMax)で処理された細胞を含むプレートベースの陰性対照に対して正規化した。各オリゴヌクレオチドのデータを、半最大応答(EC-50)を提供する各オリゴヌクレオチドの有効濃度を決定するために、シグモイド曲線に適合させた。これらの実験からの結果を表11に示す。
用量依存的実験のために選択された18個のアンチセンスオリゴヌクレオチドの各々は、分化した筋管においてDMPKを用量依存的に低減させることができた。さらに、試験したアンチセンスオリゴヌクレオチドの夫々は、25nM未満のEC－50値でDMPKを低減させた。例えば、配列番号362、313、320、288および310を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、夫々3.27nM、3.59nM、5.45nM、6.04nMおよび24.59nMのEC-50値をもたらした。これらのデータは、表11に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドがin celluloでDMPKの用量依存的低減が可能であり、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む筋肉標的化複合体が筋肉組織においてin vivoでDMPKを標的化することができることを示唆している。
表11. in celluloで用量依存的様式でDMPKの発現を低減させるDMPK標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドの能力
Figure 2023509793000103
Figure 2023509793000104
例9:筋標的化複合体によってマウス筋組織のDMPKを標的にする
例2に記載の筋標的化複合体DTX-C-008を、in vivoでのマウス組織におけるDMPKの時間依存的な阻害について試験した。C57BL/6野生型マウスに、単回用量のビヒクル対照(リン酸緩衝生理食塩水(PBS))、対照DMPK-ASOアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)(10mg/kgのRNA)、DTX-C007対照複合体(10mg/kgのRNA)、またはDTX-C-008(10mg/kgのRNA)を第0日に静脈注射し、表12に記載されるとおり、所定の時間の期間後に安楽死させた。各実験条件のマウスの1つの群は4週(第28日)に第2の用量(複数回用量群)に付した。安楽死後マウスを単離された組織型にセグメンテーションし、続いて前脛骨筋および腓腹筋組織の試料をDMPKの発現レベルについてアッセイした(図13A～13B)。
表12．実験条件
Figure 2023509793000105
ビヒクルと比べて、DTX-C-008複合体で処置されたマウスは、前脛骨筋のDMPK発現の約50～60％低減(図13A)および腓腹筋のDMPK発現の約30～50％低減(図13B)を群16～20のすべて(注射および安楽死の間は2～12週)について実証した。これらのデータは、筋標的化複合体DTX-C-008の単回用量が、複合体の投与後少なくとも12週間DMPKの発現を阻害することを示す。
対照的に、ネイキッドアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは対照複合体で処置されたマウスは、すべての実験群および組織においてDMPK発現の有意な阻害を実証しなかった。
これらのデータは、本明細書に記載のとおりの筋標的化複合体が、該筋標的化複合体の単回の投薬または投与後、最大12週間までin vivoでのDMPK発現の持続的阻害を提供することが可能であることを実証する。
例10:筋標的化複合体は、核内の遺伝子発現を標的にし得る
例2に記載の筋標的化複合体DTX-C-008を、マウス筋組織において核保持されたDMPK RNAの阻害について試験した。この例に使用されたマウスは、ヒト突然変異体DMPK遺伝子-Cに代えてGの1ヌクレオチド多型を有するDMPKCUG380ヘテロ-を発現するように改変されている。図14Aに示されるとおり、ヒト突然変異体DMPK RNAは核に保持され、マウス野生型DMPK RNAは細胞質および核内に所在する。
マウスに単回用量のビヒクル対照(生理食塩水)、対照複合体DTX-C-007(10mg/kgのASO)、対照DMPK-ASO(10mg/kgのRNA)、DTX-C-008(10mg/kgのASO)を静脈注射し、14日後に安楽死させた。6匹のマウスを各実験条件において処置した。安楽死後マウスを、単離された組織型にセグメント化し、続いて組織試料を突然変異体および野生型DMPKの発現レベルについてアッセイした(図14B)。
筋標的化複合体DTX-C-008で処置されたマウスは、核保持された突然変異体DMPKと野生型DMPKとの両方の統計的に有意な低減を実証した(p値＜0.05)。これらのデータは、本明細書に記載のとおりの筋標的化複合体が核内DMPKを標的にすることが可能であることを実証している。
例11:筋標的化複合体は、HSALRマウスモデルにおいて筋強直症を退行させる
抗トランスフェリン受容体抗体DTX-A-002(RI7 217 (Fab))へ共有結合的に連結されたアクチンを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチド(アクチン-gapmer-1)を含む筋標的化複合体(DTX-アクチン)を生成した。
アクチン-gapmer-1は2'-MOE 5-10-5gapmerであり、これは、以下:5'-NH2-(CH2)6dA*oC*oC*oA*oT*oT*dT*dT*dC*dT*dT*dC*dC*dA*dC*dA*oG*oG*oG*oC*oT-3(配列番号761)を含む;ここで「*」はPS連結を表す;「d」はデオキシ核酸を表す;および「o」は2'-MOEを表す。
次いで、ヒトDM1患者で観察されるものに類似の機能的な筋強直症表現型を有するマウスモデルのHSALRマウスにおいて、DTX-アクチンを、標的遺伝子発現(hACTA1)を低減および筋強直症を低減するその能力について試験した。HSALRマウスモデルの詳細はMankodi,A.et al.Science.289:1769,2000に記載されているとおりである。HSALRマウスに単回用量のPBSまたはDTX-アクチン(10mg/kgまたは20mg/kg ASOどちらか)を静脈注射した。これらの3つの実験条件の各々は2匹の個々のマウスにおいて反復した。注射後の第14日に、マウスを安楽死させ、特異的な筋肉の四頭筋(quad)、腓腹筋(gastroc)、および前脛骨筋(TA)を収集した。筋組織をhACTA1の発現について分析した。ビヒクル対照と比べて、DTX-アクチンはhACTA1発現の低減をすべての3つの筋組織において実証した(図15A)。
注射後の第14日に、上に記載の安楽死および組織収集に先立って、筋電図法(EMG)を特定の筋肉について行った。EMG筋強直性放電は盲検化された評価者によって4点スケールでグレード分類された:0、筋強直症なし;1、針刺入の50％未満において時たまの筋強直性放電;2、針刺入の50％超において筋強直性放電;および3:ほとんど刺入毎に筋強直性放電である。ビヒクル対照と比べて、DTX-アクチンはすべての3つの筋組織においてグレード分類された筋強直症の低減を実証した(図15B)。20mg/kg DTX-アクチンで処置されたマウスは四頭筋および腓腹筋においては筋強直症なしからほとんどなしを実証した。
これらのデータは、筋標的化複合体の単回用量が、ヒトDM1患者で観察されるものに類似の機能的な筋強直症表現型を有するマウスモデルのHSALRマウスにおいて、遺伝子特異的な標的化および機能的な筋強直症の低減が可能であることを実証している。
例12:筋標的化複合体は、DM1マウスモデルの不整脈を機能的に修正し得る
例2に記載の筋標的化複合体DTX-C-008を、DM1マウスモデルの不整脈を機能的に修正するその能力について試験した。この例に使用されたマウスは、ミオシン重鎖リバースtetトランス活性化因子(MHC rtTA)を発現するマウスおよびヒトDMPKの突然変異体形態(CUG960)を発現するマウスの産仔である。図16Aは突然変異体DMPK構築物の構造を示す。
生後第1日に始まるドキシサイクリン含有の固形飼料(chow)(2gドキシサイクリン/kg固形飼料、Bio-Serv)を、当初は授乳する母獣(dam)から、続いて離乳後には固形飼料からマウスに提供して、心臓における突然変異体DMPKの選択的発現を誘導した。「Doxオフ対照」群を例外として、すべてのマウスは研究の過程全体においてドキシサイクリンを含有する固形飼料によって維持した。12週齢で、すべてのマウスはベースラインの投薬前ECG評価を経過した。次いでマウスを、単回用量のビヒクル(生理食塩水)、対照DMPK-ASO(10mg/kg)、DTX-C-008(10mg/kg)、またはDTX-C-008(20mg/kg)どちらかによって静脈内処置した。ベースラインの投薬前ECG評価後に、「Doxオフ対照」群のマウスはドキシサイクリンなしの固形飼料に切り替えた。投薬後ECG評価を、すべてのマウスにおいて、処置の7日後および14日後に、または「Doxオフ対照」群のケースではドキシサイクリンなしの固形飼料への復帰の7日後および14日後に行った。各ECGスペクトルについて、QRS(図16B)およびQTc(図16C)間隔を測定した。
このモデルでは、ドキシサイクリンで処置されたマウスは、DM1患者で報告されたものに類似であり、心臓不整脈の増大した傾向と整合する心臓における突然変異体DMPKの発現によって推進されるQRSおよびQTC間隔の延長を見せる。「Doxオフ対照」群の食餌でのドキシサイクリンの除去は、突然変異体DMPKの発現をオフにし、QRSおよびQTC間隔の正常化をもたらす。ドキシサイクリンによって維持および20mg/kgの筋標的化複合体DTX-C-008で処置されたマウスは、心臓における突然変異体DMPKの継続した発現にもかかわらず、14日後にはそれらのQTc間隔の統計的に有意な低減を実証した(図16C)。QTc間隔のこの低減はDM1マウスモデルにおける心臓不整脈の修正を表している。これらのデータは、本明細書に記載の筋標的化複合体がDM1モデルにおいて表現型上のおよび治療上の利益を提供できることを実証している。
例13:筋標的化複合体は、DMPKを標的化およびDM1関係遺伝子スプライシングを修正し得る
ヒトDM1患者に由来する単離された筋肉の細胞において、15G11抗体を含む例5に記載の筋標的化複合体DTX-C-012を、DMPK発現の低減と、DMPKの下流遺伝子Bin1のスプライシング欠陥のその後の修正とについて試験した。
手短には、一晩回復することを許される前に、患者細胞が10k細胞/ウェルの密度で播種された。次いで、細胞をPBS(ビヒクル対照)、対照DMPK-ASO、またはDTX-C-012(500nM;55.5nM ASOに相当)によって処置した。細胞が14日にわたって分化することを許した。DMPKの発現レベルおよび％Bin1エキソン11包含を分化後の第10、11、12、13、および14日に決定した。
DTX-C-012複合体によるDM1患者細胞の処置は、分化後の第10日ほども早くDMPKレベルの低減に至る(図17A)。DTX-C-012複合体によるDM1患者細胞の処置は、Bin1スプライシングの統計的に有意な時間依存的変化にもまた至る(図17B)(**p＜0.01、***p＜0.001)。これらのデータは、本明細書に記載の15G11抗体を含む筋標的化複合体が、表現型上のおよび治療上の利益(DM1遺伝子特異的なスプライシングの増大した修正)をDM1モデルにおいて提供できることを実証している。
例14:選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、DM1およびNHP筋管におけるDMPK発現の用量依存的な低減を提供した
in vivoで安全である(例として、サイトカイン誘導によって測定される低い免疫原性によって指し示される)オリゴを同定するために、さらに、製造性および二次構造の考慮に基づいて、表11に列挙したアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらに査定した。表11からの3つのアンチセンスオリゴヌクレオチド
GCGUAGAAGGGCGUCUGCCC(配列番号310、DMPK-ASO-1)、
CCCAGCGCCCACCAGUCACA(配列番号320、DMPK-ASO-2)、および
CCAUCUCGGCCGGAAUCCGC(配列番号278、DMPK-ASO-3)を選択した。次いで、これらのオリゴヌクレオチドを、用量応答性の様式でDM1筋管およびNHP筋管におけるDMPK発現を低減するそれらの能力についてさらに評価した。ツール化合物の対照DMPK-ASOを対照として使用した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの各々はDM1およびNHP筋管のDMPKを用量依存的に低減することができた(夫々、図18A～18Cおよび図19A～19Bを参照)。
これらのデータは、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドがin vivoで安全であり、in celluloでDMPKの用量依存的な低減ができることを実証し、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む筋標的化複合体がin vivoの筋組織においてDMPKを標的にできるであろうことを示唆する。
例15:ヒトTfR1に対する表2の選択された抗TfR1抗体の結合親和性
Ka(会合速度定数)、Kd(解離速度定数)、およびKD(親和性)の測定のために、選択された抗TfR1抗体を、ヒトTfR1に対するそれらの結合親和性について試験した。2つの知られている抗TfR1抗体15G11およびOKT9を対照として使用した。結合実験は25℃においてCarterra LSAによって行った。抗マウスIgGおよび抗ヒトIgG抗体の「芝生」をアミンカップリングによってHC30Mチップ上に調製した。59個のIgG(58個のマウスmAbおよび1個のヒトmAb)はチップ上に捕捉された。hTfR1、cyTfR1、およびhTfR2の希釈系列を結合のためにチップに注入した(1000nMから出発、1:3希釈、8つの濃度)。
結合データは、緩衝液分析物注入からの応答を差し引くことと、Ka(会合速度定数)、Kd(解離速度定数)、およびKD(親和性)の概算のための1:1ラングミュア結合モデルに対してグローバルフィッティングすることとによって参照した。Carterra(商標)Kineticsソフトウェアを使用した。5～6つの濃度を曲線フィッティングに使用した。
結果は、マウスmAbが13pM～50nMの範囲であるKD値によってhTfR1に対する結合を実証することを示した。マウスmAbの大多数は一桁ナノモル～サブナノモル範囲のKD値を有した。試験されたマウスmAbはcyTfR1に対する交差反応性の結合を示し、16pM～22nMの範囲であるKD値を有した。
抗TfR1抗体のKa値、Kd値、およびKD値は、表13に提供される。
表13．抗TfR1抗体のKa値、Kd値、およびKD値
Figure 2023509793000106
例16:オリゴヌクレオチドとの抗TfR1抗体の抱合
ツールオリゴ(tool oligo)(対照DMPK-ASO)へ共有結合的に抱合された、表2に列挙した抗TfR1抗体を含有する複合体を生成した。第1に、抗TfR抗体クローン3-A4、3-M12、5-H12、8-K6、9-K23、3-E5、6-D3、4-012、4-C5、10-P5、2-H19、3-F3、8-017、3-M9、10-H2、4-J22、9-D4、8-D15、4-H4、および9-C4のFab'フラグメントを、マウスモノクローナル抗体を酵素によって全長IgGのヒンジ領域においてまたはその下で切ること、次に部分的な還元によって調製した。Fab'は結合力または親和性がmAbと同等であることが確認された。
抗TfR mAbをカテプシン切断可能なリンカーを介して対照DMPK-ASOに共有結合的に連結することによって、筋標的化複合体を生成した。手短には、ビシクロ[6.1.0]ノニン-PEG3-L-バリン-L-シトルリン-ペンタフルオロフェニルエステル(BCN-PEG3-ValCit-PFP)リンカー分子をカルバメート結合によって対照DMPK-ASOにカップリングした。過剰なリンカーおよび有機溶媒をタンジェント流ろ過(TFF)によって除去した。次いで、精製されたVal-Citリンカー-ASOを、リジン上のε-アミンをアジド-PEG4-PFPによって修飾することによって生成されたアジド官能化抗トランスフェリン受容体抗体にカップリングした。陽性対照の筋標的化複合体をもまた15G11を使用して生成した。
次いで、抗体カップリング反応の産物を2つの精製方法に付して、遊離の抗体および遊離のペイロードを除去した:1)疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC-HPLC)および2)サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)である。HICカラムは、減少していく塩勾配を利用して、遊離の抗体を抱合体から分離した。SECの間には、A260/A280トレースに基づいて分画を行って、抱合された材料を特異的に収集した。抱合体の濃度をNanodrop A280またはBCAタンパク質アッセイどちらか(抗体)およびQuant-It Ribogreenアッセイ(ペイロード)によって決定した。対応する薬物-抗体比(DAR)を計算した。DARは0.8と2.0との間の範囲にあり、すべての試料が等量のペイロードを受けるようにして標準化された。
次いで、精製された複合体を細胞内在化および標的遺伝子であるDMPKの阻害について試験した。霊長目の非ヒト動物(NHP)またはDM1(DM1患者から提供)細胞を96ウェルプレート上で成長させ、7日にわたって筋管に分化させた。次いで、細胞を漸増していく濃度(0.5nM、5nM、50nM)の各複合体によって72時間にわたって処置した。細胞を収穫し、RNAを単離し、逆転写を行ってcDNAを生成した。qPCRをPpib(対照)およびDMPKに特異的なTaqManキットを使用してQuantStudio 7によって行った。処置されたvs無処置の細胞の残りのDMPK転写産物の相対量を計算し、結果は表14および図20に示されている。
結果は、抗TfR1抗体が筋細胞を標的化し、筋細胞によって分子ペイロード(ツールオリゴ 対照DMPK-ASO)と共に内在化される能力があることと、分子ペイロード(DMPK ASO)は標的遺伝子(DMPK)を標的化およびノックダウンする能力があることとを実証した。
表14．抗TfR1抗体の結合親和性および抱合体の有効性
Figure 2023509793000107
 *発現/抱合からの極めて低い収率
興味深いことに、DMPKノックダウン結果は、トランスフェリン受容体に対する抗TfRの結合親和性とDMPKノックダウンのために細胞にDMPK ASOを送達することにおける有効性との間の相関の欠如を示した。驚くべきことに、本明細書に提供される抗TfR抗体(例として、少なくとも3-A4、3-M12、5-H12、8-K6、3-E5、10-P5、3-M9、および9-D4)は、これらの抗体および対照抗体15G11の間のヒトまたはカニクイトランスフェリン受容体に対する同等の結合親和性(または、5-H12などのある種の事例では、より低い結合親和性)にもかかわらず、対照抗体15G11と比較して、カニクイ細胞またはヒトDM1患者細胞どちらかにおいて、標的細胞にペイロード(例として、DMPK ASO)を送達することおよび分子ペイロードの生物学的効果(例として、DMPKノックダウン)を達成することにおいて優れた活性を実証した。
上位の属性、例えば高いhuTfR1親和性、NHPおよびDM1患者細胞株におけるDMPKの＞50％ノックダウン、3つの固有配列による同定されたエピトープ結合、低い/ない予測されるPTM部位、ならびに良好な発現および抱合効率が、ヒト化のためのクローンの選択について考慮された。
例16．抗TfR1抗体の結合活性
スクリーニングは1つのscFvクローンを同定し(表7に示されている)、これは異なるフォーマットに再フォーマットされた。選択されたフォーマットの結合活性をヒトTfR1、カニクイTfR1、およびヒトTfR2に対してELISAアッセイによって試験した。15G11を対照としてこの実験に使用した。結果は、すべての試験された抗体がヒトTfR1およびカニクイTfR1に結合するが(図21Aおよび21B、ヒトTfR2には結合しない(図22)ことを示している。各試験された抗体のEC50値は表15に提供される。
表15．抗TfR抗体のEC50(nM)値
Figure 2023509793000108
例17:オリゴヌクレオチドとの抗TfR1抗体の抱合
(DMPKを標的とする)ツールオリゴである対照DMPK-ASOへ共有結合的に抱合された抗TfR1 Fab(表7)を含有する複合体を生成した。試験されたTfR Fabは、配列番号204のVHおよび配列番号205のVLを含む。知られている抗TfR抗体15G11のFab'フラグメントを生成し、陽性対照としての複合体を生ずるために使用した。
カテプシン切断可能なリンカーを介して対照DMPK-ASOに抗TfR抗体を共有結合的に連結することによって、筋標的化複合体を生成した。精製されたVal-Citリンカー-ASOを、抗体のリジン上のε-アミンを修飾することによって生成された官能化抗トランスフェリン受容体抗体にカップリングした。
次いで、抗体カップリング反応の産物を2つの精製方法に付して、遊離の抗体および遊離のペイロードを除去した:1)疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC-HPLC)および2)サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)である。HICカラムは、減少していく塩勾配を利用して、遊離の抗体を抱合体から分離した。SECの間には、A260/A280トレースに基づいて分画を行って、抱合された材料を特異的に収集した。抱合体の濃度をNanodrop A280またはBCAタンパク質アッセイどちらか(抗体)およびQuant-It Ribogreenアッセイ(ペイロード)によって決定した。対応する薬物-抗体比(DAR)を計算した。DARは約2.05であった。
次いで、精製された複合体を細胞内在化およびDMPKの阻害について試験した。霊長目の非ヒト動物(NHP)またはDM1(DM1患者から提供)細胞を96ウェルプレート上で成長させ、7日にわたって筋管に分化させた。次いで、細胞を、漸増していく濃度(0.5nM、5nM、50nM)の各複合体によって72時間にわたって処置した。細胞を収穫し、RNAを単離し、逆転写を行ってcDNAを生成した。qPCRをPpib(対照)およびDMPKに特異的なTaqManキットを使用してQuantStudio 7によって行った。処置されたvs無処置の細胞の残りのDMPK転写産物の相対量を計算し、結果は図23に示されている。本明細書に記載の抗TfR Fabを含有する複合体は、15G11を含有する複合体と同等のDMPKノックダウンを達成した。
結果は、抗TfR1抗体が筋細胞を標的化し、筋細胞によって分子ペイロード(ツールオリゴ対照DMPK ASO)と共に内在化される能力があることと、分子ペイロード(DMPK ASO)は標的遺伝子(DMPK)を標的化およびノックダウンする能力があることとを実証した。
例18．抗TfR-オリゴヌクレオチド抱合体の結合および生物活性
本明細書に記載の抗TfR抗体(例として、表7のとおり)を、単独で、または抗体がDMPK標的化オリゴヌクレオチド(対照DMPK-ASO)へ抱合された抱合体として、ヒト(図24A)およびカニクイザル(図24B)TfR1に対する結合について試験した。結果は、hTfR1およびカニクイTfR1両方に対する抗TfR抗体の結合が、DMPK標的化オリゴヌクレオチドへの抱合によって3～6倍増大することを実証している。
抱合体は、TfR1によって媒介される内在化を評価するための細胞取り込み実験によってもまた試験した。抗体によって媒介されるかかる細胞取り込みを測定するために、抗TfR抗体をいくつかの異なるDMPK標的化オリゴヌクレオチドに抱合し、抱合体をpH感受性色素のCypher5eによって標識した。横紋筋肉腫(RD)細胞を4時間にわたって100nMの抱合体によって処置し、トリプシン処理し、2回洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。平均のCypher5e蛍光(取り込みを表す)をAttune NxTソフトウェアを使用して計算した。図25に示されるとおり、抗TfR抗体はエンドソーム取り込みを示す。類似の内在化効率が異なるオリゴヌクレオチドペイロードで観察された。抗マウスTfR抗体を陰性対照として使用した。コールドな(非内在化)条件は陽性対照抗体抱合体の蛍光シグナルを廃し(データは示さない)、陽性対照およびヒト化抗TfR Fab抱合体における陽性シグナルがFab抱合体の内在化を原因とすることを指し示した。
RD細胞のDMPK mRNAレベルをノックダウンすることにおける抗TfR抗体とDMPK標的化オリゴヌクレオチド(対照DMPK-ASO)とを含有する抱合体の活性をもまた試験した。結果は、抱合されたものがDMPK mRNAレベルの用量依存的なノックダウンを達成することを示した(図26)。
結果は、抗TfR1抗体が高い親和性で筋肉上のTfR1に結合し、抱合された分子ペイロード(例として、オリゴヌクレオチド)の内在化(internalized)を媒介し得ることと、分子ペイロード(DMPK標的化オリゴヌクレオチド)が標的遺伝子(DMPK)を標的化およびノックダウンする能力があることとを実証している。他の遺伝子を標的にする分子ペイロードもまた本明細書に記載の抗TfR抗体に抱合され得、他の遺伝子を筋細胞において特異的に標的化するために使用され得る。
例19．抗TfR抗体および分子ペイロードを連結するリンカーの血清中安定性
例において抗体に連結されたオリゴヌクレオチドは、式(C)に示される切断可能なリンカーを介して抱合された。リンカーは血清中において安定性を維持し、標的化された筋細胞における十分なペイロード蓄積を利する放出動態を提供することが重要である。この血清中安定性は、静脈内全身投与、血流中における抱合されたオリゴヌクレオチドの安定性、筋組織への送達、および筋細胞における治療薬ペイロードの内在化にとって重要である。リンカーは、Fabへの複数の型のペイロード(ASO、siRNA、およびPMOを包含する)の正確な抱合を容易化することが確認されている。このフレキシビリティは、各筋疾患の遺伝学的な基礎に対処するための適当な型のペイロードの合理的選択を可能化した。加えて、リンカーおよび抱合ケミストリーは、各型のペイロードについて、各Fabに取り付けられるペイロード分子の比の最適化を許し、種々の筋疾患適用への使用を可能化するための分子の迅速な設計、産生、およびスクリーニングを可能化した。
図27は、in vivoのリンカーの血清中安定性を示す。これは静脈内投薬後の72時間の過程において複数の生物種間で同等であった。少なくとも75％の安定性が各ケースにおいて投薬後の72時間に測定された。
例20．in vitroのオリゴヌクレオチド抱合体によって容易化されるDMPK mRNAレベルのノックダウン
DMPK標的化オリゴヌクレオチド(例として、ASO)を、DMPK転写産物発現のノックダウンについて横紋筋肉腫(RD)細胞で試験した。RD細胞を、10％FBSおよびペニシリン/ストレプトマイシンを補ったグルタミンありのDMEMの成長培地によってほとんどコンフルエントまで培養した。次いで、細胞を96ウェルプレートにウェル当たり20K細胞で播種し、24時間にわたって回復することを許した。次いで、細胞を遊離のDMPK標的化オリゴヌクレオチドによってまたはウェル当たり0.3μLのLipofectamine Messenger MAXトランスフェクション試薬を使用するオリゴヌクレオチドのトランスフェクションによって処置した。3日後に、全RNAを細胞から収集し、cDNAを合成し、DMPK発現をqPCRによって測定した。
図28の結果は、PBS処置された細胞における発現と比べて、DMPK発現レベルが、各所与のDMPK標的化オリゴヌクレオチドで処置された細胞では低減されたことを示す。いくつかのDMPKオリゴヌクレオチドはDMPK発現レベルの用量依存的な低減を示した。図28において、DMPK-ASO-1は配列GCGUAGAAGGGCGUCUGCCC(配列番号310)を有する。DMPK-ASO-2は配列CCCAGCGCCCACCAGUCACA(配列番号320)を有する。DMPK-ASO-3は配列CCAUCUCGGCCGGAAUCCGC(配列番号278)を有する。対照DMPK-ASOをもまたこの実験に使用した。
例21．DM1のHSA-LRマウスモデルにおけるスプライシング修正および機能的な有効性
ヒト骨格筋系アクチン(ACTA1)を標的にする(target)オリゴヌクレオチドへ抱合された抗TfR抗体を含有する抱合体によって、DM1のHSA-LRマウスモデルにおけるスプライシングの修正が実証された。この研究に使用された抗TfR1はRI7 217であった。ACTA1を標的にするオリゴヌクレオチドは2'-MOE 5-10-5gapmerであり、これは、以下:5'-NH2-(CH2)6-dA*oC*oC*oA*oT*oT*dT*dT*dC*dT*dT*dC*dC*dA*dC*dA*oG*oG*oG*oC*oT-3(配列番号761)を含み;「*」はPS連結を表し;「d」はデオキシ核酸を表し;「o」は2'-MOEを表す。
HSA-LR DM1マウスモデルはDM1の良く検証されたモデルであり、これはヒトDM1患者に非常に類似である病理を見せる。HSA-LRモデルはヒト骨格筋系アクチン(ACTA1)プロモーターを使用してCUGの長い反復(LR)の発現を推進する。このモデルでは、有毒なDMPK RNAが核内に蓄積し、Muscleblind様タンパク質(MBNL)などのスプライシングを担うタンパク質を隔離し、CLCN1(塩素チャネル)、ATP2a1(カルシウムチャネル)、および他を包含する複数のRNAのミススプライシングをもたらす。このミススプライシングは、マウスがヒトのDM1臨床像のホールマークである筋強直症をもまた見せることを引き起こす。
静脈内送達された抗TfR-オリゴヌクレオチド抱合体は、複数のRNAおよび複数の筋肉におけるスプライシングの用量依存的な修正の活性を有することが先に示されており、HSA-LRマウスによって良く忍容された。この研究では、抱合体が30よりも多くの異なるRNAのスプライシングを修正する能力を評価した。DM1では、これらのRNAの有意なRNAミススプライシングが複数の筋肉の機能の能力を低減する。モニタリングされたRNAはHSA-LRマウスにおける筋肉の収縮および弛緩にとって重大である。スプライシングの用量依存的な修正が観察された。
図29はAtp2a1の結果を示す。これはカルシウムチャネルをコードし、筋肉収縮および弛緩に寄与する。X軸はスプライス異常を表し、1.00は重症のミススプライシングを表し、0.00は野生型(WT)スプライスパターンを表す。図における右から左への進行は、スプライシングの修正を表す。Y軸は、～のスプライシングされた遺伝子のパーセント(PSI)を表す。ATP2a1の重症のミススプライシングはATP2a1 RNAのエキソン22の排除によって引き起こされる。WTスプライシングはエキソン22の完全に近い包含を反映する。結果は、抱合体が腓腹筋において用量依存的な様式でATP2a1のスプライシングを修正したことを実証している。
この研究で試験された30よりも多くの異なるRNAのデータを図30A～30Cに示す。スプライシングの類似の用量依存的な修正が、試験されたRNAのすべてについて腓腹筋で達成された。これらのRNAのいくつかでは、スプライシングの修正は図29のようにPSIの減少によって反映され、他のRNAでは、修正はPSIの増大によって反映される。
RNAのセットにおけるスプライシングの類似の用量依存的な改善は、抱合体による処置後に四頭筋および前脛骨筋で観察された。図31は、各筋肉型において試験された30よりも多くのRNA間で生理食塩水および異なる用量のAb-ASOについて観察された複合的なレベルのスプライシング異常を示す。10mg/kgおよび20mg/kgの用量がこの研究で投与された。
HSA-LRモデルのいくつかの筋肉における複数の遺伝子のスプライシング異常の低減に加えて、疾患修飾がHSA-LRモデルで観察された。図32の結果は、筋強直症のほぼ完全な退行が抱合体の単回用量後に達成されたことを示す。4点スケールによる筋強直症の重症度を生理食塩水(PBS)、ネイキッドオリゴヌクレオチド、または抱合体の投薬の14日後に評価した。グレード0は筋強直症が観察されなかったことを指し示し、グレード1は筋強直性放電が筋電図法(EMG)によって針刺入の50％未満で測定されたことを指し示し、グレード2は筋強直性放電が針刺入の50％超で測定されたことを指し示し、グレード3は筋強直性放電がほとんど針刺入毎に測定されたことを指し示する。
例22．DMPK標的化PMO
追加のDMPK標的化オリゴヌクレオチド(PMO)を設計し、初代ヒト筋管におけるDMPK発現を低減するそれらの活性について試験した。野生型初代筋芽細胞を、5％FBSおよびペニシリン/ストレプトマイシンありのPromoCell骨格筋成長培地によってほとんどコンフルエントまで培養した。次いで、細胞を96ウェルプレートにウェル当たり50000細胞で播種し、24時間にわたって回復することを許した。次いで、細胞をグルタミンおよびペニシリン/ストレプトマイシンありのDMEMの分化培地によって7日にわたって分化させた。次いで、細胞を非抱合PMOによって3日にわたって処置した。全RNAを細胞から収集し、cDNAを合成し、DMPK発現をqPCRによって測定した。PMOの配列とin vitroでDMPKをノックダウンするそれらの活性とが表16に示される。
表16．DMPK標的化PMOおよびin vitroでDMPKをノックダウンする活性
Figure 2023509793000109
Figure 2023509793000110
例23:hTfR1マウスにおける抗TfR抱合体のin vivo活性
DM1では、正常よりも高い数のCUG反復が大きいヘアピンループを形成し、これらが核にトラップされたままに残り、核のフォーカスを形成する。これらはスプライシングタンパク質に結合し、スプライシングタンパク質がそれらの正常な機能を果たす能力を阻害する。有毒な核DMPKレベルが低減されるときには、核のフォーカスは逓減し、スプライシングタンパク質を放出し、正常なmRNAプロセシングの復元を許し、可能性としては疾患進行を停止または退行させる。
マウスにおける静脈内全身投与後に複数の筋組織のDMPK mRNAレベルを低減するDMPK標的化オリゴヌクレオチド対照DMPK-ASOへ抱合された抗TfR Fab'(対照抗TfR Fab'、または配列番号777のHCおよび配列番号212のLCを含む抗TfR Fab')を含有する抱合体のin vivo活性を評価した。
1つのTfR1アレルがヒトTfR1アレルによって置き換えられた雄および雌C57BL/6マウスに、5および15週齢の間で表17に概説されている投薬スケジュールに従って投与した。マウスを第1の注射の14日後に屠殺し、選択された筋肉を表18に指し示されているとおり収集した。
Figure 2023509793000111
Figure 2023509793000112
全RNAを製造者(Promega)によって提供されるキットを使用してMaxwell Rapid Sample Concentrator(RSC)装置によって抽出した。精製されたRNAを逆転写し、DmpkおよびPpib転写産物のレベルを特異的なTaqManアッセイ(ThermoFisher)によるqRT-PCRによって決定した。Dmpk発現のLogの倍率変化を2-ΔΔCT法に従って計算した。Ppibを参照遺伝子として、ビヒクルを注射されたマウスを対照群として使用した。対照マウスおよび抱合体を投与されたマウスの間のDmpk発現の違いの統計的有意性は多重比較のためのダネットの補正による一元配置ANOVAによって決定した。図33A～33Dに示されるとおり、試験された抱合体は、種々の筋組織においてin vivoのDMPK mRNAレベルを低減する堅実な活性を示した。
例24:患者由来細胞における抗TfR抱合体のin vitro活性
380個のGTG反復を含有する突然変異体DMPK mRNAを発現するCM-DM1-32F初代細胞において、DMPK mRNA発現を低減、BIN1スプライシングを修正、および核のフォーカスを低減する抗TfR抱合体の活性を決定するためのin vitro実験を執り行った。CM-DM1-32F初代細胞はDM1患者から単離された不死化筋芽細胞株である(CL5細胞;Arandel et al.,Dis Model Mech.2017 Apr 1;10(4):487-497に記載)。抱合体1はDMPK標的化オリゴヌクレオチドである対照DMPK-ASOへ抱合された抗TfR mAbを含有する。抱合体2はDMPK-ASO-1(GCGUAGAAGGGCGUCUGCCC;配列番号310)へ抱合された抗TfR Fab'を含有する。
CL5細胞を156,000細胞/cm2の密度で播種し、24時間にわたって回復することを許し、記載されたとおり(Arandel et al.)分化培地に移して筋管形成を誘導し、続いて500nMのペイロード濃度で抱合体1および抱合体2に暴露した。ビヒクルPBSに暴露された並行培養が対照として働いた。細胞を10日の培養後に収穫した。
遺伝子発現の分析には、細胞をQiagen miRNAeasyキットによる全RNA抽出のためにQiazolによって収集した。精製されたRNAを逆転写し、DMPK、PPIB、BIN1転写産物、およびエキソン11を含有するBIN1 mRNAアイソフォームのレベルを、特異的なTaqManアッセイ(ThermoFisher)によるqRT-PCRによって決定した。DMPK発現のLogの倍率変化を2-ΔΔCT法に従って計算した。PPIBを参照遺伝子として、ビヒクルへ暴露された細胞を対照群として使用した。エキソン11を含有するBIN1アイソフォームレベルのLogの倍率変化を2-ΔΔCT法に従って計算した。BIN1を参照遺伝子として、ビヒクルへ暴露された細胞を対照群として使用した。
突然変異体DMPKの核のフォーカスの面積を測定するために、細胞を4％ホルマリンによって固定し、0.1％Triton X-100によって透過処理し、Cy5フルオロフォアへ抱合されたCAGペプチド核酸プローブと70℃でハイブリダイゼーションした。ハイブリダイゼーション緩衝液および2×SSC溶液による複数の洗浄後に、核をDAPIによって対比染色した。画像を400×の拡大率で共焦点顕微鏡法によって収集し、フォーカス面積を、DAPIシグナルの面積内に含有されるCy5シグナルの面積として測定した。データは核面積によって補正されたフォーカス面積として表現された。
結果は、もたらされたDMPK標的化オリゴヌクレオチド(対照DMPK-ASOまたはDMPK ASO-1(配列番号310))へ抱合された抗TfR(IgGまたはFab')を含有する抱合体の単回用量が、突然変異体DMPK発現を低減し(図34A)、BIN1スプライシングを修正し(図34B)、核のフォーカスをおよそ40％だけ低減した(図34C)をいうことを示している。
追加の態様
1．疾患関連反復を含むDMPKアレルの発現または活性を阻害ために構成された分子ペイロードへ共有結合的に連結された筋標的化剤を含む複合体であり、筋標的化剤は、筋細胞上の内在化する細胞表面受容体へ特異的に結合し、
ここで筋標的化剤が、抗体であり、これが、トランスフェリン受容体に結合し、表2、表4、もしくは表7に挙げられる抗体のいずれか1つのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む重鎖可変領域(VH)ならびに/または表2、表4、もしくは表7に挙げられる抗体のいずれか1つのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む軽鎖可変領域(VL)を含む。
2．態様1の複合体であって、抗体が、表2もしくは表7に挙げられる抗体のいずれか1つのVHと少なくとも85％同一であるVH、および/または表2もしくは表7に挙げられる抗体のいずれか1つのVLと少なくとも85％同一であるVLを含む。
3．態様1の複合体であって、抗体が、以下:
(i) 配列番号7のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3ならびに/または配列番号8のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む抗体;
(ii) 配列番号15のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3ならびに/または配列番号16のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む抗体;
(iii) 配列番号23のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3ならびに/または配列番号24のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む抗体;ならびに
(iv) 配列番号204のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3ならびに/または配列番号205のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む抗体
から選択される。
4．態様1の複合体であって、抗体が、以下:
(i) 配列番号1のCDR-H1、配列番号2、配列番号731、または配列番号80のCDR-H2、配列番号3のCDR-H3、配列番号4のCDR-L1、配列番号5のCDR-L2、および配列番号6のCDR-L3;
(ii) 配列番号145のCDR-H1、配列番号146、配列番号732、または配列番号734のCDR-H2、配列番号147のCDR-H3、配列番号148のCDR-L1、配列番号149のCDR-L2、および配列番号6のCDR-L3;あるいは
(iii) 配列番号150のCDR-H1、配列番号151、配列番号739、または配列番号740のCDR-H2、配列番号152のCDR-H3、配列番号153のCDR-L1、配列番号5のCDR-L2、および配列番号154のCDR-L3
を含む。
5．態様1の複合体であって、抗体が、以下:
(i) 配列番号9のCDR-H1、配列番号10のCDR-H2、配列番号11のCDR-H3、配列番号12のCDR-L1、配列番号13のCDR-L2、および配列番号14のCDR-L3;
(ii) 配列番号155のCDR-H1、配列番号156のCDR-H2、配列番号157のCDR-H3、配列番号158のCDR-L1、配列番号159のCDR-L2、および配列番号14のCDR-L3;または
(iii) 配列番号160のCDR-H1、配列番号161のCDR-H2、配列番号162のCDR-H3、配列番号163のCDR-L1、配列番号13のCDR-L2、および配列番号164のCDR-L3
を含む。
6．態様1の複合体であって、抗体が、以下:
(i) 配列番号17、配列番号735、または配列番号737のCDR-H1、配列番号18のCDR-H2、配列番号19のCDR-H3、配列番号20のCDR-L1、配列番号21のCDR-L2、および配列番号22のCDR-L3;
(ii) 配列番号165、配列番号736、または配列番号738のCDR-H1、配列番号166のCDR-H2、配列番号167のCDR-H3、配列番号168のCDR-L1、配列番号169のCDR-L2、および配列番号22のCDR-L3;あるいは
(iii) 配列番号170のCDR-H1、配列番号171のCDR-H2、配列番号172のCDR-H3、配列番号173のCDR-L1、配列番号21のCDR-L2、および配列番号174のCDR-L3
を含む。
7．態様8の複合体であって、抗体が、以下:
(i) 配列番号188のCDR-H1、配列番号189のCDR-H2、配列番号190のCDR-H3、配列番号191のCDR-L1、配列番号192のCDR-L2、および配列番号193のCDR-L3;
(ii) 配列番号194のCDR-H1、配列番号195のCDR-H2、配列番号196のCDR-H3、配列番号197のCDR-L1、配列番号198のCDR-L2、および配列番号193のCDR-L3;または
(iii) 配列番号199のCDR-H1、配列番号200のCDR-H2、配列番号201のCDR-H3、配列番号202のCDR-L1、配列番号192のCDR-L2、および配列番号203のCDR-L3
を含む。
8．態様1～7のいずれか1つの複合体であって、抗体が、以下:
(i) 配列番号7と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび/または配列番号8と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体;
(ii) 配列番号15と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび/または配列番号16と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体;
(iii) 配列番号23と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび/または配列番号24と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体;
(iv) 配列番号204と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVHおよび/または配列番号205と少なくとも85％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体
から選択される。
9．態様1～8のいずれか1つの複合体であって、トランスフェリン受容体に対する抗体の結合の平衡解離定数(KD)が、10-11Mから10-6Mまでの範囲にある。
10．態様1～9のいずれか1つの複合体であって、抗体が、トランスフェリン受容体のトランスフェリン結合部位へ特異的に結合せず、および/または抗体が、トランスフェリン受容体に対するトランスフェリンの結合を阻害しない。
11．態様1～10のいずれか1つの複合体であって、抗体が、ヒト、霊長目の非ヒト動物、および齧歯類の動物トランスフェリン受容体の2以上の細胞外エピトープと交差反応性である。
12．態様1～11のいずれか1つの複合体であって、複合体が、筋細胞内への分子ペイロードのトランスフェリン受容体によって媒介される内在化を促進するように構成される。
13．態様1～12のいずれか1つの複合体であって、抗体が、キメラ抗体であって、ここで任意にキメラ抗体がヒト化モノクローナル抗体である。
14．態様1～13のいずれか1つの複合体であって、抗体が、scFv、Fabフラグメント、Fab'フラグメント、F(ab')2フラグメント、またはFvフラグメントの形態である。
15．態様1～14のいずれか1つの複合体であって、分子ペイロードが、オリゴヌクレオチドである。
16．態様15の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列の少なくとも15個の一続きのヌクレオチドを含む。
17．態様16の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列を含む。
18．態様17の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、配列番号257、260、270、272、278、280、286、288、293、294、299、301、310、313、316、320、346および362のいずれか1つを含む配列を含む。
19．態様18の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、配列番号278、310および320のいずれか1つを含む配列を含む。
20．態様1～14のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、配列番号482～717のいずれか1つと相補性のある領域を含む。
21．態様20の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、配列番号482～717のいずれか1つの少なくとも15個の一続きのヌクレオチドと相補性のある領域を含む。
22．態様15～21のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、疾患関連反復を含むDMPKアレルと相補性のある領域を含む。
23．態様1～14のいずれか1つの複合体であって、分子ペイロードがポリペプチドである。
24．態様23の複合体であって、ポリペプチドが、muscleblind様(MBNL)ポリペプチドである。
25．態様15～22のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、細胞中において、アレルによりコードされる野生型DMPK mRNA転写産物とハイブリダイズするアンチセンス鎖を含み、ここでDMPK mRNA転写産物は、CUGトリヌクレオチド配列の反復単位を含む。
26．態様15～22のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、細胞中において、アレルによりコードされる突然変異体DMPK mRNA転写産物とハイブリダイズするアンチセンス鎖を含み、ここでDMPK mRNA転写産物は、CUGトリヌクレオチド配列の反復単位を含む。
27．態様1～26のいずれか1つの複合体であって、疾患関連反復は、長さが38～200反復単位である。
28．態様27の複合体であって、疾患関連反復が遅発性の筋緊張性ジストロフィーに関連する。
29．態様1～26のいずれか1つの複合体であって、疾患関連反復は、長さが100～10,000反復単位である。
30．態様29の複合体であって、疾患関連反復が先天性の筋緊張性ジストロフィーに関連する。
31．態様15～22および25～30の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの修飾されたヌクレオチド間連結を含む。
32．態様31の複合体であって、少なくとも1つの修飾されたヌクレオチド間連結が、ホスホロチオアート連結である。
33．態様32の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、立体化学的なRp立体配座のおよび/または立体化学的なSp立体配座のホスホロチオアート連結を含む。
34．態様33の複合体であって、オリゴヌクレオチドが、すべてが立体化学的なRp立体配座であるかまたはすべてが立体化学的なSp立体配座であるホスホロチオアート連結を含む。
35．態様15～22および25～34のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、1以上の修飾ヌクレオチドを含む。
36．態様35の複合体であって、1以上の修飾ヌクレオチドが、2'修飾ヌクレオチドである。
37．態様15～22および25～36のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、gapmerオリゴヌクレオチドであり、これが細胞のDMPK mRNA転写産物のRNAse H媒介切断を導く。
38．態様37の複合体であって、gapmerオリゴヌクレオチドが、2～8修飾ヌクレオチドのウイングによってフランキングされた5～15デオキシリボヌクレオチドの中央部分を含む。
39．態様38の複合体であって、ウイングの修飾ヌクレオチドが、2'修飾ヌクレオチドである。
40．態様15～22および25～36のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、mixmerオリゴヌクレオチドである。
41．態様40の複合体であって、mixmerオリゴヌクレオチドが、DMPK mRNA転写産物へのmuscleblind様タンパク質1、muscleblind様タンパク質2、またはmuscleblind様タンパク質3の結合を阻害する。
42．態様40または41の複合体であって、mixmerオリゴヌクレオチドが、2以上の異なる2'修飾ヌクレオチドを含む。
43．態様15～22および25～36のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、RNAiオリゴヌクレオチドであり、これが、DMPK mRNA転写産物のRNAi媒介切断を促進する。
44．態様43の複合体であって、RNAiオリゴヌクレオチドが、長さが19～25ヌクレオチドの二本鎖オリゴヌクレオチドである。
45．態様43または44の複合体であって、RNAiオリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの2'修飾ヌクレオチドを含む。
46．態様36、39、42または45のいずれか1つの複合体であって、各2'修飾ヌクレオチドが、以下:2'-O-メチル、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、および2',4'架橋ヌクレオチドからなる群から選択される。
47．態様35の複合体であって、1以上の修飾ヌクレオチドが、架橋ヌクレオチドである。
48．態様36、39、42または45のいずれか1つの複合体であって、少なくとも1つの2'修飾ヌクレオチドが、以下:2',4'-拘束2'-O-エチル(cEt)およびロックド核酸(LNA)ヌクレオチドから選択される2',4'架橋ヌクレオチドである。
49．態様15～22および25～36のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、ゲノム編集ヌクレアーゼのためのガイド配列を含む。
50．態様15～22および25～36のいずれか1つの複合体であって、オリゴヌクレオチドが、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマーである。
51．態様1～50のいずれか1つの複合体であって、筋標的化剤が、切断可能なリンカーを介して分子ペイロードへ共有結合的に連結されている。
52．態様51の複合体であって、切断可能なリンカーが、以下:プロテアーゼ感受性リンカー、pH感受性リンカー、およびグルタチオン感受性リンカーから選択される。
53．態様52の複合体であって、切断可能なリンカーが、プロテアーゼ感受性リンカーである。
54．態様53の複合体であって、プロテアーゼ感受性リンカーが、リソソームプロテアーゼおよび/またはエンドソームプロテアーゼによって切断可能な配列を含む。
55．態様53の複合体であって、プロテアーゼ感受性リンカーが、バリン-シトルリンジペプチド配列を含む。
56．態様52の複合体であって、リンカーが、4～6の範囲のpHにおいて切断されるpH感受性リンカーである。
57．態様1～50のいずれか1つの複合体であって、筋標的化剤が、非切断可能なリンカーを介して分子ペイロードへ共有結合的に連結されている。
58．態様57の複合体であって、非切断可能なリンカーがアルカンリンカーである。
59．態様2～58のいずれか1つの複合体であって、抗体が、非天然アミノ酸を含み、これにオリゴヌクレオチドが共有結合的に連結されている。
60．態様2～58のいずれか1つの複合体であって、抗体が、抗体のリジン残基またはシステイン残基への抱合を介してオリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結されている。
61．態様60の複合体であって、抗体が、マレイミド含有リンカーを介してシステインに抱合され、任意にマレイミド含有リンカーが、マレイミドカプロイルまたはマレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート基を含む。
62．態様2～61のいずれか1つの複合体であって、抗体が、グリコシル化抗体であり、これが、オリゴヌクレオチドが共有結合的に連結されている少なくとも1つの糖部分を含む。
63．態様62の複合体であって、糖部分が、分岐型マンノースである。
64．態様62または63の複合体であって、抗体が、グリコシル化抗体であり、これが1～4つの糖部分を含み、これら各々が別個のオリゴヌクレオチドへ共有結合的に連結されている。
65．態様62の複合体であって、抗体が、完全グリコシル化抗体である。
66．態様62の複合体であって、抗体が、部分グリコシル化抗体である。
67．態様66の複合体であって、部分グリコシル化抗体が、化学的または酵素的手段によって生ずる。
68．態様66の複合体であって、部分グリコシル化抗体が、細胞、N-またはO-グリコシル化経路の酵素を欠乏している細胞において生ずる。
69．トランスフェリン受容体を発現する細胞に分子ペイロードを送達する方法であって、方法が、態様1～68のいずれか1つの複合体と細胞を接触させることを含む。
70．細胞のDMPKの活性を阻害する方法であって、方法が、細胞への分子ペイロードの内在化を促進するのに有効な量で態様1～68のいずれか1つの複合体と細胞を接触させることを含む。
71．態様70の方法であって、細胞が、in vitroである。
72．態様70の方法であって、細胞が、対象にある。
73．態様72の方法であって、対象が、ヒトである。
74．態様70～73のいずれか1つの方法であって、複合体が、DMPKの発現を阻害する。
75．態様70～74のいずれか1つの方法であって、細胞を、単回用量の複合体と接触させる。
76．態様75の方法であって、単回用量の複合体が、少なくとも2、4、8または12週間、DMPKの発現を阻害する。
77．態様76の方法であって、複合体が、対照と比較して、少なくとも30%、40%、50%または60%、DMPKの発現を阻害する。
78．態様76または77の方法であって、複合体が、対照と比較して、単回用量の投与後、少なくとも12週間、筋肉組織におけるDMPKの発現を40～60％阻害する。
DMPKの発現を阻害する。
79．筋緊張性ジストロフィーに関連するDMPKアレルの疾患関連反復の拡張を有する対象を処置する方法であって、方法が、態様1～68のいずれか1つの有効量の複合体を対象へ投与することを含む。
80．態様79の方法であって、疾患関連反復が、トリヌクレオチド配列の反復単位を含む。
81．態様79の方法であって、トリヌクレオチド配列が、CTGトリヌクレオチド配列である。
82．態様79～81のいずれか1つの方法であって、疾患関連反復は、長さが38～200反復単位である。
83．態様82の方法であって、疾患関連反復が遅発性の筋緊張性ジストロフィーに関連する。
84．態様79～81のいずれか1つの方法であって、疾患関連反復は、長さが100～10,000反復単位である。
85．態様84の方法であって、疾患関連反復が先天性の筋緊張性ジストロフィーに関連する。
86．態様79～85のいずれか1つの方法であって、複合体の投与が、筋肉組織においてDMPKの発現の阻害をもたらす。
87．態様79～86のいずれか1つの方法であって、複合体が、対象に静脈内投与される。
88．態様79～87のいずれか1つの方法であって、複合体の有効量が、1～15mg/kgのRNAを含む。
89．態様79～88のいずれか1つの方法であって、複合体が、対象に単回用量で投与される。
90．態様89の方法であって、複合体の単回用量の投与が、少なくとも2、4、8または12週間、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
91．態様90の方法であって、複合体の単回用量の投与が、対照と比較して、少なくとも30%、40%、50%または60%、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
92．態様90または91の方法であって、複合体の単回用量の投与が、単回用量の投与後、少なくとも12週間、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
93．態様92の方法であって、複合体の単回用量の投与が、単回用量の投与後、少なくとも12週間、対照と比較して、40%～60%、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
94．態様90または91の方法であって、複合体の単回用量の投与が、単回用量の投与後、4～8、5～10、8～12、10～14、または8～16週間の範囲の期間、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
95．態様94の方法であって、複合体の単回用量の投与が、単回用量の投与後、4～8、5～10、8～12、10～14、または8～16週間の範囲の期間、対照と比較して、40-60%、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
96．態様90または91の方法であって、複合体の単回用量の投与が、単回用量の投与後、12週において、対照と比較して、40%～60%、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
97．態様79～88のいずれか1つの方法であって、複合体が、4～8、5～10、8～12、または8～16週間毎に1回、単回投与で対象に投与される。
98．態様97の方法であって、複合体が、12週間毎に1回、単回投与で対象に投与される。
99．態様89～98のいずれか1つの方法であって、単回投与が、1～15mg/kgのRNAの濃度で複合体を含む。
100．態様99の方法であって、単回投与が、10mg/kgのRNAの濃度で複合体を含む。
101．筋緊張性ジストロフィーに関連するDMPKアレルの疾患関連反復の拡張を有する対象を処置するための方法であって、方法は、態様1～68のいずれか1つの複合体を対象に投与することを含み、
ここで投与は、複合体の投与後、4～8、5～10、8～12、10～14、または8～16週間の範囲の期間、対照と比較して、40-60%、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
102．対象におけるDMPK発現を阻害する方法であって、方法は、態様1～68のいずれか1つの複合体を対象に投与することを含み、
ここで投与は、複合体の投与後、4～8、5～10、8～12、10～14、または8～16週間の範囲の期間、対照と比較して、40-60%、筋肉組織におけるDMPKの発現の阻害をもたらす。
103．態様101または102の方法であって、分子ペイロードが、オリゴヌクレオチドである。
104．態様103の方法であって、複合体の濃度が、1～15mg/kgのRNAである。
等価物および専門用語
例証的に本明細書に記載された開示は、好適には、本明細書に具体的には開示されないいずれかの要素(単数または複数)、限定(単数または複数)の非存在下において実施され得る。それゆえに、例えば、本出願の各事例において、用語「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」のいずれかは、他の2つの用語のどちらかによって置き換えられ得る。採用された用語および表現は、限定ではなく記載の用語として使用され、かかる用語および表現の使用には(that in)、示されるおよび記載される特徴のいずれかの等価物またはそれらの部分を排除する意図はなく、種々の改変が本開示の範囲内で可能であることが認識される。それゆえに、本開示は好ましい態様によって具体的に開示されたが、本明細書に開示される概念の任意の特徴、改変、および変形が当業者によって頼られ得ることと、かかる改変および変形は本開示の範囲内であると考慮されることとは理解されるべきである。
加えて、本開示の特徴または側面がマーカッシュ群または代替物の他の群分けとして記載されるところでは、当業者は、本開示がそれによってマーカッシュ群または他の群のいずれかの個々の構成員または構成員のサブグループとしてもまた記載されることを認識するであろう。
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドまたは他の核酸の構造を記載する際には、配列表で提示される配列が参照され得ることは了解されるべきである。かかる態様において、実際のオリゴヌクレオチドまたは他の核酸は、指定された配列と本質的に同じかまたは類似の相補的な特性を保持しながら、指定された配列と比較して、1以上の代替的なヌクレオチド(例として、DNAヌクレオチドのRNAカウンターパート、またはRNAヌクレオチドのDNAカウンターパート)および/または(例として、および)1以上の修飾ヌクレオチドおよび/または(例として、および)1以上の修飾されたヌクレオチド間連結および/または(例として、および)1以上の他の改変を有し得る。
本発明を記載する文脈における(特に次の請求項の文脈における)用語「a」および「an」および「the」ならびに類似のレファレントの使用は、本明細書に別様に指し示されないかまたは文脈によって明瞭に否定されない限り、単数および複数両方をカバーすると解釈されるべきである。用語「含む」、「有する」、「包含する」、および「含有する」は、別様に指摘されない限り、開放型の用語として解釈されるべきである(すなわち、「包含するが、これらに限定されない」を意味する)。本明細書における値の範囲の記載は、本明細書に別様に指し示されない限り、単に、範囲内に収まる各別個の値を個々に参照する簡略な方法として働くことを意図され、各別個の値は、それが本明細書に個々に記載される場合のように本明細書に組み込まれる。本明細書に別様に指し示されないかまたは別様には文脈によって明瞭に否定されない限り、本明細書に記載のすべての方法はいずれかの好適な順序で行われ得る。別様に請求されない限り、本明細書に提供されるいずれかのおよびすべての例または例示的な文言(例として、「などの」)の使用は、単に本発明をより良く解き明かすことを意図され、本発明の範囲に限定を課さない。本明細書のいかなる文言も、いずれかの請求されない要素を本発明の実施にとって必須であると指し示すものと解釈されるべきではない。
本発明の態様が本明細書に記載されている。それらの態様の変形は、先述の記載を読むことによって当業者には明らかになり得る。
本発明者は当業者がかかる変形を適当に採用することを予期し、本発明者は本発明が本明細書に具体的に記載されるとおりとは別様に実施されることを意図する。したがって、本発明は、然るべき法律によって許可される本明細書に添付される請求項に記載される主題のすべての改変および等価物を包含する。その上、それらのすべての可能な変形における上に記載された要素のいずれかの組み合わせは、本明細書に別様に指し示されないかまたは別様に文脈によって明瞭に否定されない限り、本発明によって包摂される。当業者は、本明細書に記載の本発明の具体的な態様の多くの等価物を認識するか、またはせいぜい定型的な実験作業によって確かめる能力があるであろう。かかる等価物は次の請求項によって包摂されることを意図される。

Claims (20)

  1. DMPKの発現または活性を阻害するために構成された分子ペイロードへ共有結合的に連結された抗トランスフェリン受容体抗体を含む複合体であって、ここで:
    (i) 抗体が、配列番号15のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)の重鎖相補性決定領域1(CDR-H1)、重鎖相補性決定領域2(CDR-H2)、重鎖相補性決定領域3(CDR-H3)、および配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)の軽鎖相補性決定領域1(CDR-L1)、軽鎖相補性決定領域2(CDR-L2)、軽鎖相補性決定領域3(CDR-L3)を含む;
    (ii) 抗体が、配列番号204のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と、配列番号205のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3とを含む;
    (iii) 抗体が、配列番号7のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と、配列番号8のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3とを含む;または
    (iv) 抗体が、配列番号23のアミノ酸配列を含むVHのCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3と、配列番号24のアミノ酸配列を含むVLのCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3とを含む、
    前記複合体。
  2. 抗体が、以下:
    (i) 配列番号155のCDR-H1、配列番号156のCDR-H2、配列番号157のCDR-H3、配列番号158のCDR-L1、配列番号159のCDR-L2、および配列番号14のCDR-L3;
    (ii) 配列番号194のCDR-H1、配列番号195のCDR-H2、配列番号196のCDR-H3、配列番号197のCDR-L1、配列番号198のCDR-L2、および配列番号193のCDR-L3;
    (iii) 配列番号145のCDR-H1、配列番号146、配列番号732、もしくは配列番号734のCDR-H2、配列番号147のCDR-H3、配列番号148のCDR-L1、配列番号149のCDR-L2、および配列番号6のCDR-L3;または
    (iv) 配列番号165、配列番号736、もしくは配列番号738のCDR-H1、配列番号166のCDR-H2、配列番号167のCDR-H3、配列番号168のCDR-L1、配列番号169のCDR-L2、および配列番号22のCDR-L3
    を含む、請求項1に記載の複合体。
  3. 抗体が、以下:
    (i) 配列番号15で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号16で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3;
    (ii) 配列番号204で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号205で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3;
    (iii) 配列番号7で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号8で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3;または
    (iv) 配列番号23で表されるとおりのVHのCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、および配列番号24で表されるとおりのVLのCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3
    とともに、ヒトのまたはヒト化されたフレームワーク領域を含む、請求項1または2に記載の複合体。
  4. 抗体が、以下:
    (i) 配列番号15と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号16と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体;
    (ii) 配列番号204と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号205と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体、ここで任意に、抗体は、配列番号204のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号205のアミノ酸配列を含むVLを含む;
    (iii) 配列番号7と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号8と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体;ならびに
    (iv) 配列番号23と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号24と少なくとも80％同一のアミノ酸配列を含むVLを含む抗体
    から選択される、請求項1～3のいずれか一項に記載の複合体。
  5. トランスフェリン受容体に対する抗体の結合の平衡解離定数(KD)が、10-11Mから10-6Mまでの範囲にある、請求項1～4のいずれか一項に記載の複合体。
  6. 抗体が、全長IgG、Fabフラグメント、F(ab')フラグメント、F(ab')2フラグメント、scFv、およびFvからなる群から選択され、ここで任意に、抗体が、Fab'フラグメントである、請求項1～5のいずれか一項に記載の複合体。
  7. 分子ペイロードが、オリゴヌクレオチドである、請求項1～6のいずれか一項に記載の複合体。
  8. オリゴヌクレオチドが、配列番号727の少なくとも15個の一続きのヌクレオチドに相補性のある領域を含む、請求項7に記載の複合体。
  9. オリゴヌクレオチドが、配列番号482～717のいずれか1つの少なくとも15個の一続きのヌクレオチドに相補性のある領域を含む、請求項7または8に記載の複合体。
  10. オリゴヌクレオチドが、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列の少なくとも15個の一続きのヌクレオチドを含み、ここで任意に、オリゴヌクレオチドが、配列番号246～481および778～795のいずれか1つを含む配列を含む、請求項7～9のいずれか一項に記載の複合体。
  11. オリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの修飾されたヌクレオシド間連結を含み、ここで任意に、少なくとも1つの修飾されたヌクレオシド間連結が、ホスホロチオアート連結である、請求項7～10のいずれか一項に記載の複合体。
  12. オリゴヌクレオチドが1つ以上の修飾ヌクレオシドを含み、ここで任意に、1つ以上の修飾ヌクレオシドが、2'修飾ヌクレオシドである、請求項7～11のいずれか一項に記載の複合体。
  13. オリゴヌクレオチドが、DMPK mRNA転写産物のRNAse H媒介切断を導くgapmerオリゴヌクレオチドである、請求項7～12のいずれか一項に記載の複合体。
  14. gapmerオリゴヌクレオチドが、式5’-X-Y-Z-3’を含み、ここで
    Xは、3～5連結ヌクレオシドであり、ここで、X中のヌクレオシドの少なくとも1つは、2'-修飾ヌクレオシドであり;
    Yは、6～10連結2'-デオキシリボヌクレオシドであり、ここで、ギャップ領域Y中のヌクレオシドの1つ以上は、修飾ヌクレオシドであり;およびここで、ギャップ領域Y中の1つ以上のシトシンは任意で5-メチルシトシンであり;および
    Zは、3～5連結ヌクレオシドであり、ここで、Z中のヌクレオシドの少なくとも1つは、2'-修飾ヌクレオシドである、
    請求項13に記載の複合体。
  15. XおよびZ中の各ヌクレオシドが、2'修飾ヌクレオシドである、請求項14に記載の複合体。
  16. 2'修飾ヌクレオチドが、以下:2'-O-メチル(2'-O-Me)、2'-フルオロ(2'-F)、2'-O-メトキシエチル(2'-MOE)、および2',4'-二環式ヌクレオシドからなる群から選択され、さらにここで任意に、2',4'-二環式ヌクレオシドが、以下:ロックド核酸(LNA)、エチレン架橋核酸(ENA)、および(S)-拘束エチル架橋核酸(cEt)から選択される、請求項12～15のいずれか一項に記載の複合体。
  17. 筋標的化剤が、
    (i) 切断可能なリンカー、ここで任意に、切断可能なリンカーは、バリン-シトルリンジペプチド配列を含む;または
    (ii) 非切断可能なリンカー、ここで任意に、非切断可能なリンカーは、アルカンリンカーである、
    を介して分子ペイロードへ共有結合的に連結されている、請求項1～17のいずれか一項に記載の複合体。
  18. 分子ペイロードが、抗体のリジン残基またはシステイン残基への抱合を介して抗体へ連結されている、請求項1～17のいずれか一項に記載の複合体。
  19. 細胞中のDMPKの活性を阻害する方法であって、方法が、細胞を請求項1～18のいずれか一項に記載の複合体と、細胞への分子ペイロードの内在化を促進するのに有効な量で接触させることを含み、ここで任意に、細胞が、疾患関連反復を含むDMPKアレルを含む、前記方法。
  20. 筋緊張性ジストロフィー1型(DM1)に関連するDMPKアレルの疾患関連反復の拡張を有する対象を処置する方法であって、方法が、有効量の請求項1～18のいずれか一項に記載の複合体を対象へ投与することを含む、前記方法。
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