JP2023508948A - 酵素組成物およびその作製方法 - Google Patents

酵素組成物およびその作製方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023508948A
JP2023508948A JP2022538938A JP2022538938A JP2023508948A JP 2023508948 A JP2023508948 A JP 2023508948A JP 2022538938 A JP2022538938 A JP 2022538938A JP 2022538938 A JP2022538938 A JP 2022538938A JP 2023508948 A JP2023508948 A JP 2023508948A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
composition
consumable
rfpe
gfpe
food
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022538938A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021133852A5 (ja
Inventor
フランク ダグラス アイビー，
ジョエル アンドリュー クレプス，
ハーシャル クシルサガー，
Original Assignee
クララ フーズ カンパニー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by クララ フーズ カンパニー filed Critical クララ フーズ カンパニー
Publication of JP2023508948A publication Critical patent/JP2023508948A/ja
Publication of JPWO2021133852A5 publication Critical patent/JPWO2021133852A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/06—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/20—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
    • A23L29/269—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of microbial origin, e.g. xanthan or dextran
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/20—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
    • A23L29/269—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of microbial origin, e.g. xanthan or dextran
    • A23L29/27—Xanthan not combined with other microbial gums
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
    • A23L31/10—Yeasts or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C12P19/06—Xanthan, i.e. Xanthomonas-type heteropolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/18—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/54—Proteins
    • A23V2250/542—Animal Protein
    • A23V2250/5428—Egg protein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2300/00—Processes
    • A23V2300/24—Heat, thermal treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01017—Lysozyme (3.2.1.17)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

組換え産生され、タンパク質含量が向上した酵素的に活性な酵素を有する組成物およびその調製方法を本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、組換え食物保存酵素（ｒＦＰＥ）を含む消費可能な組成物を本明細書中に記載する。一部の例では、ＦＰＥは、ガチョウ型ＦＰＥ（ｇＦＰＥ）であり得る。一部の例では、組成物は、半固体またはゲル状の組成物であり得る。いくつかの実施形態では、消費可能な組成物は、細菌不純物を含まない場合がある。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１２月２４日出願の米国仮特許出願第６２／９５３，３６１号の優先権を主張する。前述の特許出願の内容全体が、本明細書中で参考として援用される。
背景
タンパク質は重要な食事性栄養素である。タンパク質は、燃料源および／またはアミノ酸（体内で合成することができない必須アミノ酸が挙げられる）の供給源としての役割を果たすことができる。健康な成人のタンパク質の１日当たりの推奨摂取量は、必要とされる総摂取カロリーの１０％～３５％であり、現在、ほとんどのヒトにとってのタンパク質摂取量の大半は、動物性供給源に由来する。さらに、運動選手およびボディビルダーは、筋肉量の増強およびパフォーマンスの向上のために補助タンパク質消費に依存し得る。組換え産生されたタンパク質は、動物性の供給源を含まず、消費者に代替のタンパク質源を提供する。世界人口の増加およびそれに伴う世界的な食料需要の増加により、食事性および補助タンパク質の代替の持続可能な非動物性供給源に対する要求は満たされていない。
概要
本開示の方法および組成物は、この満たされていない要求を満たす。
いくつかの実施形態では、組換え食物保存酵素（ｒＦＰＥ）を含む消費可能な組成物を本明細書中に記載する。一部の例では、ＦＰＥは、ガチョウ型ＦＰＥ（ｇＦＰＥ）であり得る。一部の例では、組成物は、半固体またはゲル状の組成物であり得る。
いくつかの実施形態では、消費可能な組成物は、細菌不純物を含まない場合がある。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号１に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号２に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号２に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号３に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、配列番号４に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、消費可能な組成物は、熱処理され得る。いくつかの実施形態では、消費可能な組成物は、ｇＦＰＥを含まないほぼ同一の消費可能な組成物より貯蔵寿命が長い。いくつかの実施形態では、消費可能な組成物は、ｇＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含むほぼ同一の消費可能な組成物の貯蔵寿命より貯蔵寿命が長い。いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥは、Ｐｉｃｈｉａ細胞中で産生され得る。
いくつかの実施形態では、組換え食料品保存酵素（ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ）（ＦＰＥ）を含む組成物であって、前述のＦＰＥが、９０，０００シュガー（ｓｈｕｇａｒ）Ｕ／ｍｇを超える活性を有し得る、組成物を本明細書中に記載する。
一部の例では、ＦＰＥは、１５０，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。ＦＰＥは、２００，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。ＦＰＥは、２５０，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。ＦＰＥは、３００，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。ＦＰＥは、３５０，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。ＦＰＥは、４００，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。ＦＰＥは、４５０，０００Ｕ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有し得る。
組換えＦＰＥは、Ｐｉｃｈｉａ細胞中で産生され得る。
組成物は、食物組成物であり得る。食物組成物は、１またはそれを超える消費可能な成分を含み得る。食物組成物は、組換えＦＰＥを含まないほぼ同一の食物組成物より長い貯蔵寿命を有し得る。食物組成物は、組換えＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含み得るほぼ同一の製品の貯蔵寿命より長い貯蔵寿命を有し得る。
組成物は、ｒＦＰＥを含む粉末組成物であり得る。
組換えＦＰＥは、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
１シュガー単位は、Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ細胞の懸濁物を消化し、それにより、３７℃、ｐＨ７．０にて０．００１／分の速度で溶液の吸光度を低下させる酵素の量であり得る。
組成物は、ニワトリ卵白ムラミダーゼを含む組成物と比較して低アレルゲン性であり得る。
組換えＦＰＥは、非組換えＦＰＥと比較して同程度の活性を有する場合があり、そして／または配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を含むＦＰＥは、天然の供給源からさらに単離され得る。
いくつかの実施形態では、組換え食料品保存酵素（ＦＰＥ）を含む消費可能な組成物であって、前述のＦＰＥが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る、消費可能な組成物を本明細書中に記載する。
消費可能な組成物は、食物組成物であり得る。食物組成物は、ゲル様のテクスチャーまたは粘稠度（ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｌｙ）を有し得る。食物組成物は、焼成製品の形態であり得る。食物組成物は、卵白様製品の形態であり得る。ＦＰＥは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞中で組換え産生され得る。食物組成物は、液体の形態であり得る。食物組成物は、固体の形態であり得る。
組成物は、組換えＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含み得るほぼ同一の製品の貯蔵寿命より長い貯蔵寿命を有し得る。
食物組成物は、少なくとも０．１重量％のＦＰＥを有し得る。食物組成物は、最大で１０重量％のＦＰＥを含み得る。ＦＰＥは、食物組成物中で酵素的に活性であり得る。組成物は成分であり得る。食物組成物は、微生物や細胞デブリを実質的に含まない場合がある。食物組成物は、プロバイオティック配合物であり得る。組換えＦＰＥは、少なくとも９５％純粋であり得る。
食物組成物は、組換えＦＰＥに加えて、１またはそれを超える組換えタンパク質を含み得る。組換えＦＰＥは、食品にゲル固体性（ｇｅｌ ｓｏｌｉｄｉｔｙ）または増大した粘度を提供し得る。食物組成物は、組換えＦＰＥに加えて１つを超える組換えタンパク質を含み得る。
いくつかの実施形態では、消費可能な組成物を調製する方法であって、組換え産生された単離食料品保存酵素（ＦＰＥ）を提供する工程、および前述の組換え産生されたＦＰＥを１またはそれを超える消費可能な成分と組み合わせる工程を含む、方法を本明細書中に記載する。一部の例では、ＦＰＥはガチョウ型ＦＰＥである。
組換え産生されたＦＰＥは、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。
組換え産生されたＦＰＥは、酵母細胞中で組換え産生され得る。酵母細胞は、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓであり得る。
組換え産生されたＦＰＥは、組換え産生されたＦＰＥを欠くほぼ同一の消費可能な組成物と比較して、消費可能な組成物の貯蔵寿命を増大させる。
組換え産生されたＦＰＥは、消費可能な組成物にゲル様のテクスチャーをもたらす。
消費可能な組成物は、ヒト／動物による消費のために準備され得る食品であり得る。
いくつかの実施形態では、キサンタンガム製品を産生する方法であって、Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ細胞を発酵培地に提供する工程；前述の細胞を、４５～６０℃の間の温度、ｐＨ８～１０の間のｐＨにてアルカリプロテアーゼで熱処理し、それにより、細胞デブリを含む溶液を産生する工程；細胞デブリを含む溶液に、組換え産生され得る食料品保存酵素（ＦＰＥ）および／または配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む組換え産生されたＦＰＥを添加し、それにより、キサンタンガム溶液を産生する工程を含む、方法を本明細書中に記載する。この方法は、イソプロパノールをキサンタンガム溶液に添加し、それにより、キサンタンガムを沈殿させる工程；前述の沈殿したキサンタンガムを単離および乾燥させ、それにより、キサンタンガム製品を得る工程も含み得る。
添加されるＦＰＥの量は、他の点は同一の条件下で等量のキサンタンガム製品を産生するのに必要と考えられるニワトリ卵白ＦＰＥの量よりも少ない場合がある。
キサンタンガムを産生する方法は、細胞デブリを含む溶液を産生した後に組成物のｐＨを調整する工程をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する組換え産生された食物保存酵素（ＦＰＥ）を含む食品防腐剤を本明細書中に記載する。
本開示のさらなる態様および利点は、以下の詳細な説明から、当業者に容易に明らかとなり、以下の説明において、本開示の例示的な実施形態のみを示し、説明する。理解されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、種々の自明な点を修正することができ、これらの全てが本開示から逸脱しない。したがって、図面および説明は、事実上例示と見なされ、本発明を制限すると解釈されないものとする。
図面の簡単な説明
本発明の新規の特徴を、添付の特許請求の範囲に具体的に記載する。本発明の特徴および利点は、以下の詳細な説明を参照することによってより深く理解され、説明な説明には例示的な実施形態が記載されており、例示的な実施形態には本発明の原理が利用されており、添付の図面（本明細書中で、「図」および「ＦＩＧ．」とも称される）については、以下に説明する。
図１Ａ～図１Ｅは、一般的な食品を腐敗させる細菌に対する組換え食料品保存酵素（ｒＦＰＥ）の殺菌活性を示す。 同上。
図２Ａ～図２Ｅは、種々の温度および濃度でのｒＦＰＥのゲル化を示す。 同上。
図３は、ｒＦＰＥに対するｒＦＰＥ１ａｎ抗ニワトリムラミダーゼ抗体（ｒＦＰＥ１ａｎ ａｎｔｉ－ｃｈｉｃｋｅｎ ｍｕｒａｍｉｄａｓｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）の活性の欠如を示す。
詳細な説明
本発明の種々の実施形態を本明細書中に提示および記載しているが、かかる実施異形態がほんの一例として提供されていることが当業者に自明であろう。当業者は、本発明を逸脱すること無く、数値の変動、変化、および置換を思いつくであろう。本明細書中に記載の発明の実施形態の種々の代替形態が使用され得ることが理解されるべきである。
本開示は、現在市販されている酵素製品と比較して優れた性質を提供する組換え食料品保存酵素（ｒＦＰＥ）に関する。食品産業において、微生物による腐敗を軽減するために、食品に薬剤が添加されている。抗菌食品防腐剤の一般例としては、安息香酸ナトリウム、安息香酸、亜硝酸塩、亜硫酸塩、ソルビン酸ナトリウム、およびソルビン酸カリウムなどの化合物が挙げられる。あるいは、抗菌活性を保有する酵素を食品に添加してよく；その利点は、酵素が抗菌活性と食品のタンパク質含量の増加の両方をもたらすことである。本開示は、抗菌活性を保有し、タンパク質含量を増加させ、さらに、食品に好ましい品質（例えば、固体または半固体の食品への増大されたゲル化もしくは堅固さまたは液体食品への増大した粘度）を提供するｒＦＰＥに関する。本明細書中に開示のように、本開示のｒＦＰＥは、市販の酵素よりも予想外に優れた品質を実証し、食品におけるその抗菌活性のために使用される。
食料品保存酵素（ＦＰＥ）を含む消費可能な組成物を本明細書中に提供する。かかる消費可能な組成物を、食品、飲料品、栄養補助食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）、医薬、化粧品中で、または最終製品の成分として使用することができる。本明細書中の多くの実施形態では、消費可能な組成物は、液体の形態または半固体の形態（例えば、ゲル）である。好ましくは、かかる組成物中のＦＰＥは、組換え作製され、本明細書中で組換えＦＰＥ（ｒＦＰＥ）と称され得る。
別段の指示がない限り、ＦＰＥという用語としては、ＦＰＥとｒＦＰＥとの両方が挙げられる。本明細書中の消費可能な組成物中のＦＰＥまたはｒＦＰＥは、消費可能な組成物のタンパク質含量を増加させ、１またはそれを超えるさらなる特徴（高い清澄性、低下した濁度、または実質的な感覚上の中立性など）も維持する濃度で提供される。
本明細書中の消費可能な組成物のいずれかにおいてｒＦＰＥを使用すると、消費者が好む感覚上のプロフィールを維持しながら、非動物性のタンパク質源を得ることが可能である。かかる組成物、その作製方法、およびその使用方法の種々の実施形態を、本明細書中に提供する。
本開示のいくつかの例示的な実施形態を本明細書中に提供する。一例として、食料品保存酵素（ＦＰＥ）（ｇ型ＦＰＥ（ｇＦＰＥ）など）は、宿主細胞中で組換え産生され得る。宿主細胞は、細菌もしくは酵母、または別の真菌宿主細胞であってよい。ｇＦＰＥは、宿主細胞によって分泌され、培養培地から回収され、精製され得る。精製されたｇＦＰＥは、凍結乾燥され、消費可能な組成物中の成分として使用され得る。一部の例では、最終使用者は、主にｇＦＰＥタンパク質を含む凍結乾燥した粉末組成物を提供され得る。最終使用者は、食物組成物中の成分としてｇＦＰＥを使用してよい。一例として、使用者は、５０℃～１２０℃の範囲の温度での熱処理によってｇＦＰＥを含むゲルを産生することができる。抗菌薬としての消化酵素としてＦＰＥを使用することを意図するか意図せずにゲルを産生することができる。例えば、本明細書中に記載のように、ｇＦＰＥは、さらなるゲル化剤を必要とせずに溶液中にゲルを形成するという予期せぬ効果がある。したがって、使用者は、熱処理のみによってｇＦＰＥ含有組成物をゲル化することが可能な場合がある。
別の例として、使用者は、他のゲル化剤（植物繊維、他のタンパク質、結合剤など）を含む消費可能な組成物中の一成分としてｇＦＰＥを使用してよい。
食品／消費可能な組成物は、ｇＦＰＥを０．０５％ｗ／ｗしか含まないか、またはｇＦＰＥを３０％ｗ／ｗも含み得る。より少ない量で液体の消費可能な組成物の粘度が増加し得るのに対して、より大量で消費可能な組成物が固体または半固体の状態に変化し得る。
別の例として、使用者により、ｇＦＰＥを使用して微生物の細胞壁を分解して、キサンタンガムなどのゴム様物質が形成され得る。次いで、キサンタンガムを食物組成物に添加してよい。
一例を挙げれば、配列番号１を有するｒＦＰＥ（ｒＦＰＥ１）は、酵母宿主細胞中で組換え産生され得る。ｒＦＰＥ１は、宿主細胞によって分泌され、培養ブロスから回収され、単離され得る。これを、精製および凍結乾燥してもよい。次いで、ｒＦＰＥ１は、その抗菌活性に起因したより長い貯蔵寿命または消費可能な組成物中でのその低温ゲル化プロフィールに起因するゲル化などの機能を提供するために使用され得る。ｒＦＰＥ１は、機能的性質を提供することに加えて、組成物の栄養含量を増加させ得る。
食物保存酵素
ＦＰＥは、ペプチドグリカンのＮ－アセチルムラミン酸とＮ－アセチルグルコサミンとの間のβ－１，４－グリコシド結合の切断によって細菌細胞壁のペプチドグリカンを有効に加水分解することができる酵素を含み得る。ＦＰＥは、場合によっては、ムラミダーゼであり得る。ＦＰＥは、場合によっては、リゾチームであり得る。ＦＰＥは、場合によっては、ガチョウ型リゾチームであり得、「ｇＦＰＥ」と称され得る。
ＦＰＥは、場合によっては、配列番号１のアミノ酸配列を有する酵素またはその酵素的に活性な断片または配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素であり得る。ＦＰＥは、配列番号２のアミノ酸配列を有する酵素またはその酵素的に活性な断片または配列番号２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素であり得る。ＦＰＥは、配列番号３のアミノ酸配列を有する酵素またはその酵素的に活性な断片または配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素であり得る。ＦＰＥは、配列番号４のアミノ酸配列を有する酵素またはその酵素的に活性な断片または配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素であり得る。配列番号１～配列番号４のうちのいずれか１つを有するｒＦＰＥ（例えば、「本明細書中に記載のｒＦＰＥ」）またはその酵素的に活性な断片または配列番号１～配列番号４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素は、本明細書中でｇＦＰＥと称され得る。
ｇＦＰＥなどの組換えＦＰＥの酵素比活性は、天然の供給源から単離された未変性ムラミダーゼ（すなわち、非組換えムラミダーゼ）またはニワトリムラミダーゼの酵素比活性より高い場合がある。ＦＰＥの酵素比活性を、シュガーアッセイなどの従来のアッセイを使用して測定してよく、このアッセイは、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓなどの微生物を含む溶液の吸光度の減少を測定する。１シュガー単位は、Ｍ．ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ溶液中の細胞壁の構造的完全性を破壊し、したがって、２５℃で０．０００１／分の吸光度の低下をもたらす酵素の量として定義され得る。
本明細書中に記載のｒＦＰＥ（例えば、ｇＦＰＥ）の酵素比活性は、少なくとも３５，０００シュガー単位／ｍｇ（Ｕ／ｍｇ）であり得る。ｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）の比活性は、少なくとも５０，０００シュガーＵ／ｍｇ、６０，０００シュガーＵ／ｍｇ、７０，０００シュガーＵ／ｍｇ、８０，０００シュガーＵ／ｍｇ、９０，０００シュガーＵ／ｍｇ、１００，０００シュガーＵ／ｍｇ、１１０，０００シュガーＵ／ｍｇ、１２０，０００シュガーＵ／ｍｇ、１３０，０００シュガーＵ／ｍｇ、１４０，０００シュガーＵ／ｍｇ、１５０，０００シュガーＵ／ｍｇ、１７０，０００シュガーＵ／ｍｇ、２００，０００シュガーＵ／ｍｇ、２２０，０００シュガーＵ／ｍｇ、２５０，０００シュガーＵ／ｍｇ、２７０，０００シュガーＵ／ｍｇ、３００，０００シュガーＵ／ｍｇ、３５０，０００シュガーＵ／ｍｇ、４００，０００シュガーＵ／ｍｇ、４５０，０００シュガーＵ／ｍｇ、５００，０００シュガーＵ／ｍｇ、５５０，０００シュガーＵ／ｍｇ、６００，０００シュガーＵ／ｍｇ、または７００，０００シュガーＵ／ｍｇであり得る。
ｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）の酵素比活性は、３５，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇタンパク質であり得る。ｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）の比活性は、３５，０００Ｕ／ｍｇ～５０，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～７５，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～１００，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～１５０，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～１７５，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～２００，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、３５，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～７５，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～１００，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～１５０，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～１７５，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～２００，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、５０，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～１００，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～１５０，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～１７５，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～２００，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～１５０，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～１７５，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～２００，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ～１７５，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ～２００，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、１７５，０００Ｕ／ｍｇ～２００，０００Ｕ／ｍｇ、１７５，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、１７５，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、１７５，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、１７５，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、２００，０００Ｕ／ｍｇ～２５０，０００Ｕ／ｍｇ、２００，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、２００，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、２００，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、２５０，０００Ｕ／ｍｇ～３００，０００Ｕ／ｍｇ、２５０，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、２５０，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、３００，０００Ｕ／ｍｇ～５００，０００Ｕ／ｍｇ、３００，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇ、または５００，０００Ｕ／ｍｇ～６００，０００Ｕ／ｍｇタンパク質であり得る。ｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）の比活性は、最大で５０，０００Ｕ／ｍｇ、７５，０００Ｕ／ｍｇ、１００，０００Ｕ／ｍｇ、１５０，０００Ｕ／ｍｇ、１７５，０００Ｕ／ｍｇ、２００，０００Ｕ／ｍｇ、２５０，０００Ｕ／ｍｇ、３００，０００Ｕ／ｍｇ、５００，０００Ｕ／ｍｇ、または６００，０００Ｕ／ｍｇタンパク質であり得る。
ｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）の比活性は、天然の供給源（卵白など）から単離したムラミダーゼの比活性と同程度であり得るか、それを超え得る。ｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）の比活性は、卵白から単離したか、組換え産生されたニワトリムラミダーゼの比活性と同程度であり得るか、それを超え得る。
本明細書中に記載のｒＦＰＥ（ｇＦＰＥなど）は、抗菌活性を有し得る。組換え産生されたＦＰＥ（ｇＦＰＥ／ｒＦＰＥ１など）の抗菌活性は、市販のムラミダーゼおよび／または非組換えムラミダーゼの抗菌活性と同程度であり得るか、それより高い場合がある。ｇＦＰＥの抗菌活性は、ニワトリムラミダーゼの抗菌活性と同程度であり得るか、それより高い場合がある。
本明細書中に記載のｇＦＰＥの比活性が高いので、ｇＦＰＥを含む食品は、ｇＦＰＥを用いずに作製した食品の貯蔵寿命と同程度であるか、それより長い貯蔵寿命を有し得る。ｇＦＰＥを含む食品の貯蔵寿命は、市販のムラミダーゼおよび／または非組換えムラミダーゼを用いて作製した食品の貯蔵寿命と同程度であり得るか、それより長い場合がある。
本明細書中に記載のｇＦＰＥは、組換え産生された場合、天然の供給源から単離されたムラミダーゼと比較して、低アレルゲン性であり得る。一部の例では、ｒＦＰＥ１は、ニワトリムラミダーゼと比較して低アレルゲン性であり得る。
消費可能な組成物
本明細書中に開示の消費可能な組成物としては、ＦＰＥ、好ましくはｒＦＰＥまたはｇＦＰＥを含むか、これから本質的になるか、これからなる製品が挙げられる。消費可能な組成物は、ｒＦＰＥ１に加えて、天然に単離されたＦＰＥ１またはｇＦＰＥを含み得る。
本明細書中に開示の消費可能な組成物は、約０．５％～約２５％のｒＦＰＥ濃度を有することができる。本明細書中に開示の消費可能な組成物は、約０．５％～約１％、約０．５％～約２％、約０．５％～約５％、約０．５％～約７％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約２５％、約１％～約２％、約１％～約５％、約１％～約７％、約１％～約１０％、約１％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約２５％、約２％～約５％、約２％～約７％、約２％～約１０％、約２％～約１５％、約２％～約２０％、約２％～約２５％、約５％～約７％、約５％～約１０％、約５％～約１５％、約５％～約２０％、約５％～約２５％、約７％～約１０％、約７％～約１５％、約７％～約２０％、約７％～約２５％、約１０％～約１５％、約１０％～約２０％、約１０％～約２５％、約１５％～約２０％、約１５％～約２５％、または約２０％～約２５％のｒＦＰＥ濃度を有することができる。本明細書中に開示の消費可能な組成物は、約０．５％、約１％、約２％、約５％、約７％、約１０％、約１５％、約２０％、または約２５％のｒＦＰＥ濃度を有することができる。本明細書中に開示の消費可能な組成物は、少なくとも約０．５％、約１％、約２％、約５％、約７％、約１０％、約１５％、または約２０％のｒＦＰＥ濃度を有することができる。本明細書中に開示の消費可能な組成物は、最大で約１％、約２％、約５％、約７％、約１０％、約１５％、約２０％、または約２５％のｒＦＰＥ濃度を有することができる。
消費可能な製品は、１またはそれを超える他のタンパク質（非ＦＰＥタンパク質または非組換えタンパク質など）を含むことができる。ｒＦＰＥは、消費可能な製品中のタンパク質含量を増加させることができる。例えば、消費可能な組成物は、ホエイタンパク質、エンドウマメタンパク質、ダイズタンパク質、アーモンドタンパク質、燕麦タンパク質、亜麻仁タンパク質、植物性タンパク質、または卵白タンパク質を含むことができる。一部の例では、１またはそれを超える他のタンパク質は、鳥類（ａｖｉａｎ）、魚類、両生類、または爬虫類供給源由来のｒＦＰＥを含むことができる。
消費可能な組成物は、最終製品または完成品の成分であり得る。ＦＰＥ組成物は、その後に他の成分と混合されて最終使用者用の最終製品を作製する成分であり得る。最終製品または完成品は、最終使用者の消費または使用のために準備ができたものである。完成品は、加工製品（加工食品または加工飲料など）であり得る。消費可能な組成物の非限定的な例としては、食品、飲料製品、健康補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、食品添加物、栄養補助食品、ヘルスケア製品、および化粧品が挙げられる。
本明細書中に開示の消費可能な組成物は、液体または半固体であり得る。消費可能な組成物は、ゲル様のテクスチャーを有し得る。本明細書中に開示の液体または半固体の消費可能な組成物のいずれかを、粉末ｒＦＰＥを溶液に混合物ことによって作出することができる。溶液は、最終製品であり得るか、またはその後さらに改変して最終製品を生成する中間溶液であり得る。
液体の消費可能な組成物または飲料の例としては、以下が挙げられる：ソーダ、ビタミン飲料、プロテインシェーク、代用食シェーク（ｍｅａｌ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｓｈａｋｅ）、ジュース、リフレッシュ用飲料（ｒｅｆｒｅｓｈｍｅｎｔ ｄｒｉｎｋ）、ミルクベースの飲料または非乳製品ベースの飲料、フレーバーウォーター、炭酸飲料、コーヒー、カフェイン含有飲料、茶、ビール、アルコール飲料（ｌｉｑｕｏｒ）、およびスポーツドリンク。液体の消費可能な組成物では、ｒＦＰＥは、液体組成物に増大した粘度を提供する。
半透明性の欠如によって清澄性を決定することができる。また、半透明性を欠く材料は、乳白色、白色、または不透明な外観を有し得る。ｒＦＰＥを有する消費可能な組成物は、乳白色、白色、または不透明な外観を欠如し得る。
また、ｒＦＰＥを有する消費可能な組成物は、ｒＦＰＥを用いないか、ｒＦＰＥと等濃度で存在する異なる酵素を用いた組成物と比較して、感覚上の訴求（ｓｅｎｓｏｒｙ ａｐｐｅａｌ）が改善され得る。
本明細書中に記載のように、消費可能な組成物は、液体の形態であり得る。液体の形態は、可溶性ｒＦＰＥ溶液などの中間生成物であり得る。一部の例では、液体の形態は、最終製品（ｒＦＰＥを含む飲料など）であり得る。本明細書中で意図される異なるタイプの飲料の例としては、以下が挙げられる：ジュース、ソーダ、清涼飲料、フレーバーウォーター、プロテインウォーター（ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｔｅｒ）、栄養強化した水（ｆｏｒｔｉｆｉｅｄ ｗａｔｅｒ）、炭酸水、栄養ドリンク、エナジードリンク、スポーツドリンク、疲労回復用飲料（ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｄｒｉｎｋ）、ヒートドリンク（ｈｅａｔｅｄ ｄｒｉｎｋ）、コーヒーベースの飲料、茶ベースの飲料、植物ベースのミルク、ミルクベースの飲料、非乳製品の、植物ベースの乳飲料、調製粉乳飲料（ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ ｄｒｉｎｋ）、アルコール飲料（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｄｒｉｎｋ）、および代用食飲料。
いくつかの実施形態では、消費可能な食物組成物は、半固体の形態であり得る。食品は、ゼリー、キャンディー、ブイヨン、スープ、ゼラチン含有製品、ゲル化製品、およびグミ製品（ｇｕｍｍｙ ｐｒｏｄｕｃｔ）であり得る。ｒＦＰＥを添加することができるさらなる例示的な食品カテゴリーとしては、ソース、ドレッシング、調味料が挙げられる。
いくつかの実施形態では、消費可能な食物組成物は、固体の形態であり得る。組成物は、焼いた食品、パン、グルテン含有製品、無グルテン製品、ソース、ドレッシング、調味料、香辛料ブレンド、シーズニングミックス（ｓｅａｓｏｎｉｎｇ ｍｉｘ）、衣（ｃｏａｔｉｎｇ）、パン粉（ｂｒｅａｄｉｎｇ）、果実スナック、野菜スナック、冷凍乳製品、冷凍「乳様」製品、調製済みの食事（ｐｒｅｐａｒｅｄ ｍｅａｌ）、肉製品、肉を含まない製品、ハンバーガー（ｂｕｒｇｅｒ）、パティ、タンパク質補助食品（ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、栄養バー、デザート、または「卵様」製品であり得る。
いくつかの実施形態では、消費可能な食物組成物およびかかる組成物の作製方法は、加熱条件を含む。例えば、消費可能な食物組成物は、加熱済み飲料または熱い飲料（温かいドリンクまたはホットドリンクなど）、スープ、またはブイヨンであり得る。一部の例では、消費可能な食物組成物は、成分または完成品を産生するための加熱工程を有し得る。他の例としては、鍋での炒め物（ｐａｎ ｆｒｙｉｎｇ）および焼成が挙げられる。
本明細書中のいくつかの実施形態では、ｇＦＰＥを含む消費可能な食物組成物は、完成品を作出するために他の成分（複数可）または構成要素（複数可）と共に１つの成分として使用される組成物である。例えば、ｇＦＰＥを、水または他の液体と混合し、次いで、この混合物を１つの成分として使用して、飲料、食品、健康補助食品、または栄養補助食品を作出することができる。一部の例では、ｇＦＰＥを、他の液体（例えば、ナッツミルク、フルーツジュース、野菜抽出物、または炭酸溶液）などの他の成分と混合する。この溶液は、その後の他の成分と混合して最終使用者のための最終製品を作製する成分であり得る；例えば、溶液は、濃縮されたｇＦＰＥを含むシロップであり得る。最終製品または完成品は、最終使用者の消費のために準備ができたものである。完成品は、加工製品（加工食品または加工飲料など）であり得る。いくつかの例では、ｇＦＰＥは、最終使用者が混合して最終製品にするための別個の容器中に提供される。一部の例では、ｇＦＰＥを、他の成分（ゲル化剤など）と混合して、キャンディー、グミ製品、ゲル化製品（Ｊｅｌｌｏ（商標）など）またはスポーツゲルを作製する。
調製中または調製後に、ｇＦＰＥを含む消費可能な食品は、液体、固体、シロップ、または粉末として配合され得る。組成物は、冷蔵されるか、冷凍されるか、加温して保存されるか、室温で保存されるか、高温で保持され得る。食品の調製は、加熱過程を含むことができるか、あるいは食品は高温で保存されるか提供される。
液体の消費可能な組成物または飲料の例としては、以下が挙げられる：ソーダ、ビタミン飲料、プロテインシェーク、代用食シェーク、ジュース、リフレッシュ用飲料、ミルクベースの飲料または非乳製品ベースの飲料、フレーバーウォーター、炭酸飲料、コーヒー、カフェイン含有飲料、茶、花ベースの飲料、ビール、アルコール飲料、およびスポーツドリンク。
本明細書中の液体または半固体の消費可能な組成物のいずれかを、粉末ｇＦＰＥを溶液に混合することによって作出することができる。溶液は、最終製品であり得るか、またはその後さらに改変して最終製品を生成する中間溶液であり得る。
ｇＦＰＥ溶液を調製するために使用することができる溶媒の例としては、炭酸の入っていない水（ｓｔｉｌｌ ｗａｔｅｒ）、炭酸水、アルコール、ジュース、および任意の他の市販の飲料（本明細書中でより詳細に記載しているものが含まれる）が挙げられる。
ｇＦＰＥを含む消費可能な組成物を生成する方法は、ｇＦＰＥを、溶媒と、必要に応じて１またはそれを超える他の成分と混合する工程を含み得る。任意の従来より使用されている混合方法（乳鉢と乳棒、機械的グラインダー、ブレンド、均質化プロセス、または超音波処理プロセスが挙げられる）によって混合され得る。
溶液に添加されるｇＦＰＥの量は、（最終製品または中間生成物のいずれかにおいて）本明細書中で導かれたｇＦＰＥ濃度が得られる量であり得る。
好ましくは、ｇＦＰＥを溶液に添加すると、室温でほとんどまたはほぼ全てのｇＦＰＥがその溶液に可溶化される。一例として、溶解度は、清澄性または濁度の欠如の程度に基づいて決定される。
本明細書中の消費可能な組成物を、加熱工程に供することもできる。かかる工程は、ｇＦＰＥの溶解度を改変するか増加させることができる。例えば、製品の作製プロセスにおいてレトルト処理（ｒｅｔｏｒｔｉｎｇ）、加熱充填、または低温殺菌などの加熱工程を行うことによって本明細書中のｇＦＰＥ溶液の溶解度が増加し、それにより、清澄性を増加させることができることが見出された。
ｇＦＰＥを含む消費可能な食品の調製は、乾燥および／または濃縮を含み得る。一部の例では、乾燥により、乾燥された、脱水された、濃縮された、および／または固体のタンパク質または組成物が形成される。乾燥方法のいくつかの非限定的な例としては、熱乾燥、蒸発（例えば、真空または空気による）、蒸留、煮沸、オーブン中での加熱、真空乾燥、噴霧乾燥、フリーズドライ、および凍結乾燥、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
ｇＦＰＥを含む消費可能な食品の調製は、希釈および／または湿潤化（ｈｙｄｒａｔｉｎｇ）を含み得る。一部の例では、希釈は、水または別の液体の形態であり得る液体の添加を含み得る。例えば、組成物を、希釈することができる（例えば、２０％の水分から９９．９％の水分まで）。別の例では、乾燥組成物を、湿潤化することができる（例えば、乾燥固体から９９．９％の水分まで）。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥを含む消費可能な食物組成物は、粉末形態であり、粉末組成物を溶液に配合した場合、ｇＦＰＥは実質的に完全に可溶性である。いくつかの実施形態では、粉末組成物を溶液に配合した場合、ｇＦＰＥは実質的に完全に可溶性であり、溶液は実質的に透明である。いくつかの実施形態では、粉末組成物を溶液に配合した場合、ｇＦＰＥは実質的に完全に可溶性であり、溶液は実質的に透明であり、溶液は、ホエイタンパク質、ダイズタンパク質、エンドウマメタンパク質、卵白タンパク質、全卵タンパク質などの他の粉末タンパク質を用いて作製された溶液と比較して、本質的に感覚上中立であるか、感覚上の訴求が改善される。いくつかの実施形態では、粉末組成物は水中で可溶化され、ｇＦＰＥの濃度は、１％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、または４０％あるいは約１％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％の組成物の総重量あたりの重量（ｗ／ｗ）および／または総体積あたりの重量（ｗ／ｖ）である。
本明細書中に記載の消費可能な食物組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、動物由来の成分、ホエイタンパク質、カゼイン塩、脂肪、ラクトース、加水分解ラクトース、ダイズタンパク質、コラーゲン、加水分解コラーゲン、もしくはゼラチン、またはこれらの任意の組み合わせを本質的に含まない。本明細書中に記載の組成物は、コレステロール、グルコース、脂肪、飽和脂肪、トランス脂肪、またはこれらの任意の組み合わせを本質的に含まない場合がある。一部の例では、本明細書中に記載の組成物は、乾燥重量で１０％、５％、４％、３％、２％、１％、または０．５％未満の脂肪を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、脂肪含有組成物であってよく（例えば、マヨネーズなど）、かかる組成物は、約６０％までの脂肪を含み得るか、あるいは低脂肪組成物（例えば、低脂肪マヨネーズ）であってよく、かかる組成物は、より低い比率の脂肪を含み得る。動物由来の成分を含まない組成物は、ベジタリアンおよび／またはビーガン向けと見なすことができる。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥ粉末組成物は、５％未満の灰分を含む。用語「灰分」は、当該分野で公知の用語であり、１またはそれを超えるイオン、元素、ミネラル、および／または化合物などの無機物を表す。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物は、５％、４．５％、４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．７５％、０．５％、０．２５％、または０．１％未満の総重量あたりの重量（ｗ／ｗ）および／または総体積あたりの重量（ｗ／ｖ）の灰分を含む。
いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥ粉末組成物の含水量は、１５％未満であり得る。ｇＦＰＥ粉末組成物は、１５％、１２％、１０％、８％、６％、５％、３％、２％、または１％未満の総重量あたりの重量（ｗ／ｗ）および／または総体積あたりの重量（ｗ／ｖ）の水分を有し得る。いくつかの実施形態では、ｇＦＰＥ粉末組成物の炭水化物含量は、３０％未満であり得る。ｇＦＰＥ粉末組成物は、３０％、２７％、２５％、２２％、２０％、１７％、１５％、１２％、１０％、８％、５％、３％、または１％未満の炭水化物含量（ｗ／ｗまたはｗ／ｖ）を有し得る。
一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、３０％～９９％の総重量あたりの重量（ｗ／ｗ）および／または総体積あたりの重量（ｗ／ｖ）であり得る。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、少なくとも３０％のｗ／ｗまたはｗ／ｖであり得る。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、最大で９９％のｗ／ｗまたはｗ／ｖであり得る。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、３０％～４０％、３０％～５０％、３０％～６０％、３０％～７０％、３０％～７５％、３０％～８０％、３０％～８５％、３０％～９０％、３０％～９５％、３０％～９９％、４０％～５０％、４０％～６０％、４０％～７０％、４０％～７５％、４０％～８０％、４０％～８５％、４０％～９０％、４０％～９５％、４０％～９９％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～７５％、５０％～８０％、５０％～８５％、５０％～９０％、５０％～９５％、５０％～９９％、６０％～７０％、６０％～７５％、６０％～８０％、６０％～８５％、６０％～９０％、６０％～９５％、６０％～９９％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７０％～９０％、７０％～９５％、７０％～９９％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、７５％～９５％、７５％～９９％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８０％～９９％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～９９％、９０％～９５％、９０％～９９％、または９５％～９９％のｗ／ｗまたはｗ／ｖであり得る。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のｗ／ｗまたはｗ／ｖであり得る。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のｗ／ｗまたはｗ／ｖであり得る。一部の例では、ｇＦＰＥ粉末組成物のタンパク質含量は、最大で４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のｗ／ｗまたはｗ／ｖであり得る。
ｒＦＰＥのゲル化
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＦＰＥは、半固体組成物を形成し得る。一部の例では、半固体組成物は、本明細書中に記載のＦＰＥの熱処理の際に産生され得る。ｇＦＰＥは、食品に対してゲル化を提供し得る。ｇＦＰＥを使用して、細菌などのある特定の微生物の細胞壁ペプチドグリカンを分解または消化してゲルが形成され得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、微生物細胞壁の分解や消化を用いずにゲルを形成することが可能な場合がある。一部の例では、ｇＦＰＥの熱処理の際に形成されたゲル組成物は、いかなる微生物不純物も含まない場合がある。一部の例では、ｇＦＰＥなどのＦＰＥの熱処理の際に形成されたゲル組成物は、いかなる細菌不純物も含まない場合がある。一部の例では、ｇＦＰＥの熱処理の際に形成されたゲル組成物は、いかなる他のゲル化剤や結合剤も含まない場合がある。一部の例では、ｇＦＰＥは、ニワトリムラミダーゼによって得られるゲル化と比較して、組成物に改善されたゲル化を提供し得る。
一部の例では、ｇＦＰＥは、５０℃から１３０℃までの範囲の温度での熱処理の際にゲルを形成する。一部の例では、ｇＦＰＥは、５０℃から１３０℃までの温度範囲での熱処理の際に０．０５％もの低いｗ／ｗタンパク質濃度でゲルを形成する。一部の例では、ｇＦＰＥは、いかなる他のゲル化剤の非存在下であっても、５０℃から１３０℃までの温度範囲での熱処理の際に０．０５％もの低いｗ／ｗタンパク質濃度でゲルを形成する。
一部の例では、ｇＦＰＥは、５０℃～１３０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、少なくとも５０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、最大で１３０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、５０℃～６０℃、５０℃～７０℃、５０℃～７５℃、５０℃～８０℃、５０℃～９０℃、５０℃～９５℃、５０℃～１００℃、５０℃～１１０℃、５０℃～１２０℃、５０℃～１３０℃、６０℃～７０℃、６０℃～７５℃、６０℃～８０℃、６０℃～９０℃、６０℃～９５℃、６０℃～１００℃、６０℃～１１０℃、６０℃～１２０℃、６０℃～１３０℃、７０℃～７５℃、７０℃～８０℃、７０℃～９０℃、７０℃～９５℃、７０℃～１００℃、７０℃～１１０℃、７０℃～１２０℃、７０℃～１３０℃、７５℃～８０℃、７５℃～９０℃、７５℃～９５℃、７５℃～１００℃、７５℃～１１０℃、７５℃～１２０℃、７５℃～１３０℃、８０℃～９０℃、８０℃～９５℃、８０℃～１００℃、８０℃～１１０℃、８０℃～１２０℃、８０℃～１３０℃、９０℃～９５℃、９０℃～１００℃、９０℃～１１０℃、９０℃～１２０℃、９０℃～１３０℃、９５℃～１００℃、９５℃～１１０℃、９５℃～１２０℃、９５℃～１３０℃、１００℃～１１０℃、１００℃～１２０℃、１００℃～１３０℃、１１０℃～１２０℃、１１０℃～１３０℃、または１２０℃～１３０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、５０℃、６０℃、７０℃、７５℃、８０℃、９０℃、９５℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、または１３０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、少なくとも５０℃、６０℃、７０℃、７５℃、８０℃、９０℃、９５℃、１００℃、１１０℃、または１２０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、最大で６０℃、７０℃、７５℃、８０℃、９０℃、９５℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、または１３０℃の温度での熱処理の際にゲルを形成し得る。
一部の例では、ｇＦＰＥは、０．０５％～３０％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、少なくとも０．０５％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、最大で３０％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、０．０５％～１％、０．０５％～２％、０．０５％～５％、０．０５％～８％、０．０５％～１０％、０．０５％～１５％、０．０５％～２０％、０．０５％～２５％、０．０５％～３０％、１％～２％、１％～５％、１％～８％、１％～１０％、１％～１５％、１％～２０％、１％～２５％、１％～３０％、２％～５％、２％～８％、２％～１０％、２％～１５％、２％～２０％、２％～２５％、２％～３０％、５％～８％、５％～１０％、５％～１５％、５％～２０％、５％～２５％、５％～３０％、８％～１０％、８％～１５％、８％～２０％、８％～２５％、８％～３０％、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～３０％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、または２５％～３０％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、０．０５％、１％、２％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、少なくとも０．０５％、１％、２％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、または２５％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、最大で１％、２％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％ｗ／ｗの濃度でゲルを形成し得る。
一部の例では、ｇＦＰＥは、低濃度（０．０５％～２％ｗ／ｗの濃度など）でゲル化し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、少なくとも０．０５％ｗ／ｗの濃度でゲル化し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、最大で２％ｗ／ｗの濃度でゲル化し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、０．０５％～０．０６％、０．０５％～０．１２５％、０．０５％～０．２５％、０．０５％～０．５％、０．０５％～１％、０．０５％～１．５％、０．０５％～２％、０．０６％～０．１２５％、０．０６％～０．２５％、０．０６％～０．５％、０．０６％～１％、０．０６％～１．５％、０．０６％～２％、０．１２５％～０．２５％、０．１２５％～０．５％、０．１２５％～１％、０．１２５％～１．５％、０．１２５％～２％、０．２５％～０．５％、０．２５％～１％、０．２５％～１．５％、０．２５％～２％、０．５％～１％、０．５％～１．５％、０．５％～２％、１％～１．５％、１％～２％、または１．５％～２％ｗ／ｗの濃度でゲル化し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、０．０５％、０．０６％、０．１２５％、０．２５％、０．５％、１％、１．５％、または２％ｗ／ｗの濃度でゲル化し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、少なくとも０．０５％、０．０６％、０．１２５％、０．２５％、０．５％、１％、または１．５％ｗ／ｗの濃度でゲル化し得る。一部の例では、ｇＦＰＥは、最大で０．０５％、０．０６％、０．１２５％、０．２５％、０．５％、１％、１．５％、または２％ｗ／ｗの濃度でゲル化し得る。
食料品などの半固体またはゲル状の消費可能な組成物は、０．０５％～２５％ｗ／ｗのｇＦＰＥを含み得る。食料品などの半固体またはゲル状の消費可能な組成物は、少なくとも０．０５％ｗ／ｗのｇＦＰＥを含み得る。食料品などの半固体またはゲル状の消費可能な組成物は、最大で２５％ｗ／ｗのｇＦＰＥを含み得る。食料品などの半固体またはゲル状の消費可能な組成物は、０．０５％～０．１％、０．０５％～１％、０．０５％～２％、０．０５％～５％、０．０５％～１０％、０．０５％～１５％、０．０５％～２０％、０．０５％～２５％、０．１％～１％、０．１％～２％、０．１％～５％、０．１％～１０％、０．１％～１５％、０．１％～２０％、０．１％～２５％、１％～２％、１％～５％、１％～１０％、１％～１５％、１％～２０％、１％～２５％、２％～５％、２％～１０％、２％～１５％、２％～２０％、２％～２５％、５％～１０％、５％～１５％、５％～２０％、５％～２５％、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１５％～２０％、１５％～２５％、または２０％～２５％ｗ／ｗのｇＦＰＥを含み得る。食料品などの半固体またはゲル状の消費可能な組成物は、０．０５％、０．１％、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、または２５％ｗ／ｗのｇＦＰＥを含み得る。
ｇＦＰＥを含む組成物は、ｃ型リゾチームまたはニワトリムラミダーゼを含む組成物のゲル強度よりも高いゲル強度を有し得る。一部の例では、ｇＦＰＥ組成物は、ニワトリムラミダーゼまたはｃ型リゾチームを含む組成物と比較して、約または少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％のゲル強度を有する。一部の例では、ｇＦＰＥ組成物は、ニワトリムラミダーゼまたはｃ型リゾチームを含む組成物と比較して、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％までのゲル強度を有する。
ｇＦＰＥを含む液体組成物は、ｃ型リゾチームまたはニワトリムラミダーゼを含む組成物の粘度より高い粘度を有し得る。一部の例では、液体ｇＦＰＥ組成物は、ニワトリムラミダーゼまたはｃ型リゾチームを含む組成物と比較して、約または少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％の粘度を有する。一部の例では、液体ｇＦＰＥ組成物は、ニワトリムラミダーゼまたはｃ型リゾチームを含む組成物と比較して、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％までの粘度を有する。
ガム産生におけるｇＦＰＥ／ＦＰＥ１の使用
ｇＦＰＥを使用して、食品中の成分として使用される透明なビーガンゲル（ｖｅｇａｎ ｇｅｌ）およびガムが産生され得る。例えば、ｇＦＰＥを使用して、細菌ポリサッカリド（キサンタンガム、ジェランガム、またはジウタンガム（ｄｉｕｔａｎ ｇｕｍ）など）が作製され得る。ｇＦＰＥを使用して産生されたガムを含む溶液の透過率は、従来より使用されているムラミダーゼ（ニワトリムラミダーゼなど）を使用して産生されたガムの透過率より高い場合があり、したがって、ｇＦＰＥを使用して形成されたゲルの清澄性が増加し得る。ｇＦＰＥを使用して産生されたガムを含む溶液の清澄性は、従来より使用されているムラミダーゼ（ニワトリムラミダーゼなど）を使用して産生されたガムの清澄性よりも高い場合がある。
本明細書中に記載のｒＦＰＥの活性が予想外に高いので、本明細書中に記載のガムおよびゲルの産生には、天然の供給源から単離されたムラミダーゼまたはニワトリムラミダーゼを使用した場合に必要とされるよりも少量の酵素を必要とし得る。一部の例では、ガムまたはゲルの産生に必要な量または酵素単位は、天然に得られるムラミダーゼ（ニワトリムラミダーゼなど）を使用した同一のガムまたはゲルの産生に必要な量または酵素単位の１／２、１／３、１／５、１／７、または１／１０であり得る。
本明細書中に記載のガムおよびゲルは、細菌培養物の消化によって産生され得る。発酵後、細菌培養物は、高温、アルカリ条件下でアルカリプロテアーゼを使用して処理され得る。細菌は、室温または２５℃と３７℃との間の温度で最初に培養され得る。ガム産生のために、細菌培養物の温度を、約４５℃、約４７℃、約５０℃、約５２℃、約５５℃、約５７℃、約６０℃、約６５℃、または約７５℃に上昇させ得る。
また、細菌培養物は、高ｐＨにてアルカリプロテアーゼで処理され得る。細菌培養物は、約ｐＨ８、約ｐＨ８．５、約ｐＨ９、約ｐＨ９．５、約ｐＨ１０、約ｐＨ１０．５、または約ｐＨ１１にてアルカリプロテアーゼで処理され得る。細菌培養物は、アルカリプロテアーゼを使用してタンパク質分解した後に、ｇＦＰＥなどのＦＰＥで処理され得る。
培養物のｐＨは、ｇＦＰＥでの処理前に修正され得る。ｇＦＰＥ処理は、中性ｐＨで行われ得る。ｇＦＰＥ処理は、約ｐＨ５．５、約ｐＨ６、約ｐＨ６．５、約ｐＨ７、約ｐＨ７．５、または約ｐＨ８で行われ得る。
また、培養物の温度は、ｇＦＰＥでの処理前に修正され得る。ｇＦＰＥ処理は、約３０℃、約３２℃、約３５℃、約３７℃、または約４０℃の温度で行われ得る。
キサンタンガムなどのガムを産生するためのｇＦＰＥの培養物との反応は、アルコールを用いて停止され得る。イソプロパノールを使用して、細菌培養物とのｇＦＰＥの反応を停止させ得る。反応を停止させることができる他のアルコールまたは溶液も想定される。次いで、かかる反応から産生されたガムは、培養物から抽出（例えば、沈殿）され得る。
かかる反応から産生されたガムは、消費前にさらに処理され得る。例えば、ガムは、消費前に加熱処理または乾燥され得る。
包装
本明細書中に開示の消費可能な組成物の利益の１つは、前述の組成物をより簡素に包装できることである。一例として、消費可能な組成物は、組成物の濁度の欠如により消費者により魅力的な製品となるので、透明容器に包装され得る。
消費可能な組成物を、冷蔵するか、凍結するか、加温して保存するか、室温で保存するか、高温で保持することができる。
組換えＦＰＥ
ｒＦＰＥは、任意の種由来のアミノ酸配列を有することができる。例えば、ｒＦＰＥは、鳥類、魚類、両生類、または爬虫類由来のＦＰＥのアミノ酸配列を有することができる。鳥類由来のアミノ酸配列を有するｒＦＰＥを、家禽類（ｐｏｕｌｔｒｙ）、家禽（ｆｏｗｌ）、水鳥、狩猟鳥、ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、ダチョウ、ガチョウ、カモメ、ホロホロチョウ、キジ、エミュー、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択することができる。ｒＦＰＥは、単一の種（Ａｎｓｅｒ ａｎｓｅｒ ａｎｓｅｒまたはＧａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓなど）由来のアミノ酸配列を有することができる。あるいは、ｒＦＰＥは、２またはそれを超える種に由来するアミノ酸配列を有することができ、そのようなものとして、ハイブリッドであり得る。
ｒＦＰＥは、ＦＰＥの天然に存在しないバリアントであり得る。かかるバリアントは、未変性のＦＰＥ配列と比較して、１またはそれを超えるアミノ酸の挿入、欠失、または置換を含むことができる。
かかるバリアントは、配列番号１～４のうちのいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有することができる。好ましくは、バリアントは、配列番号１～４のうちのいずれか１つと少なくとも９０％またはそれを超える配列同一性を有することができる。一部の例では、好ましいバリアントは、配列番号１～４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し得る。一部の例では、好ましいバリアントは、配列番号１～４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し得る。アミノ酸配列の文脈において本明細書中で使用される用語「配列同一性」は、配列をアラインメントし、最大配列同一性％を達成するために必要に応じてギャップを導入した後に、選択された配列中のアミノ酸残基と同一の候補配列中のアミノ酸残基の百分率と定義され、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない。アミノ酸配列の同一性％を決定するためのアラインメントを、当該分野の技術の範囲内の種々の方法で（例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア（ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなど）を使用して）実施することができる。当業者は、アラインメントを測定するための好適なパラメーター（比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを実施するために必要な任意のアルゴリズムが挙げられる）を決定することができる。
いくつかの実施形態では、バリアントは、低減されたアレルゲン性などのさらなる特徴を付与するものである。
ｒＦＰＥを発現させるために使用される宿主生物に応じて、ｒＦＰＥは、野生型ＦＰＥと異なるグリコシル化、アセチル化、またはリン酸化のパターンを有することができる。例えば、ｒＦＰＥは、グリコシル化、アセチル化、またはリン酸化されていても、されていなくてもよい。ｒＦＰＥは、鳥類、非鳥類、微生物、非微生物、哺乳動物、または非哺乳動物のグリコシル化、アセチル化、またはリン酸化のパターンを有し得る。
一部の例では、ｒＦＰＥは、脱グリコシル化（例えば、化学的、酵素的、Ｅｎｄｏ－Ｈ、ＰＮＧａｓｅＦ、Ｏ－グリコシダーゼ、ノイラミニダーゼ、β１－４ガラクトシダーゼ、β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ）、脱アセチル化（例えば、プロテインデアセチラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ、サーチュイン）、または脱リン酸化（例えば、酸性ホスファターゼ、ラムダタンパク質ホスファターゼ、仔牛腸ホスファターゼ、アルカリホスファターゼ）であり得る。脱グリコシル化、脱アセチル化、または脱リン酸化は、より均一であるか、または変動の少ない組成物を産生することができるタンパク質を産生し得る。
ｒＦＰＥは、宿主細胞中で組換え発現される。本明細書中で使用される場合、「宿主」または「宿主細胞」は、本明細書では、所望の産物が産生されるように選択されたか遺伝的に改変された任意のタンパク質産生宿主を表す。例示的な宿主としては、真菌（糸状菌など）、ならびに細菌、酵母、植物、昆虫、および哺乳動物の細胞が挙げられる。宿主細胞は、Ａｒｘｕｌａ ｓｐｐ．、Ａｒｘｕｌａ ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐｈａｆｆｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐｐ．、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｓｐｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｓｐｐ．、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｐ．、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｄｅｓ、Ｅｎｄｏｔｈｉａ ｓｐｐ．、Ｅｎｄｏｔｈｉａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ、Ｍｕｃｏｒ ｓｐｐ．、Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ、Ｍｕｃｏｒ ｐｕｓｉｌｌｕｓ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｐ．、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｎｅｓｃｅｎｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）ｅｍｅｒｓｏｎｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｕｎｉｃｕｌｏ ｓｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｐｕｓｉｌｌｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐｐ．、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｌｔｒｏｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、またはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｕｓであり得る。宿主細胞は、米国食品医薬品局によって一般に安全と認められている承認された生物であり得る。
ｒＦＰＥタンパク質を、酵母、糸状菌、または細菌中で組換え発現することがきる。いくつかの実施形態では、ｒＦＰＥタンパク質は、Ｐｉｃｈｉａ種（Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐｈａｆｆｉｉおよびＫｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、またはＥ．ｃｏｌｉ種において組換え発現される。
宿主細胞（例えば、Ｐｉｃｈｉａ種、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種）においてｒＦＰＥを発現させると、転写後修飾または翻訳後修飾の一部としてＦＰＥ配列にペプチドが付加され得る。かかるペプチドは、未変性ＦＰＥ配列の一部でなくてよい。例えば、Ｐｉｃｈｉａ種（Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐｈａｆｆｉｉおよびＫｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐａｓｔｏｒｉｓなど）中でＦＰＥ配列を発現させると、Ｎ末端またはＣ末端にペプチドが付加され得る。一部の例では、宿主細胞中での発現の際に、ＦＰＥ配列のＮ末端にテトラペプチドＥＡＥＡが付加される。
宿主ゲノムに組み込まれる発現ベクター、プラスミド、核酸、または他の手段によってｒＦＰＥを発現させることができる。例えば、発現用ベクターは、以下を含むことができる：（ａ）プロモーターエレメント、（ｂ）シグナルペプチド、（ｃ）異種ＦＰＥ配列、および（ｄ）ターミネーターエレメント。
ＦＰＥの発現のために使用することができる発現ベクターとしては、エレメント（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）を有する発現カセットを含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチド（ｃ）は、ベクター中に含まれる必要はない。一般に、発現カセットは、同族宿主微生物のゲノムに組み込まれたときに導入遺伝子の転写を媒介するようにデザインされる。
宿主微生物への形質転換前のベクター増幅を補助するために、複製起点（ｅ）をベクター中に含めてもよい（ＰＵＣ＿ＯＲＩＣおよびＰＵＣ（ＤＮＡ２．０）など）。発現ベクターで安定に形質転換された微生物の選択を補助するために、また、ベクターは、ＵＲＡ３遺伝子およびゼオシン耐性遺伝子（ＺｅｏＲ）などの選択マーカー（ｆ）を含めてよい。また、発現ベクターは、宿主ゲノムへの発現ベクターの安定な組み込みを容易にするために、宿主微生物への形質転換前に発現ベクターを線状化することが可能な制限酵素部位（ｇ）を含んでよい。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、エレメント（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、および（ｇ）の任意のサブセット（エレメント（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、および（ｇ）の全ては含まない）を含み得る。当業者に公知の他の発現エレメントおよびベクターエレメントを、本明細書中に記載のエレメントと組み合わせて使用することができるか、前述のエレメントの代わりに使用することができる。
例示的なプロモーターエレメント（ａ）としては、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、およびハイブリッドプロモーターが挙げられ得るが、これらに限定されない。プロモーターとしては、ａｃｕ－５、ａｄｈ１＋、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２、ＡＤＨ４）、ＡＨＳＢ４ｍ、ＡＩＮＶ、ａｌｃＡ、α－アミラーゼ、代替オキシダーゼ（ＡＯＤ）、アルコールオキシダーゼＩ（ＡＯＸ１）、アルコールオキシダーゼ２（ＡＯＸ２）、ＡＸＤＨ、Ｂ２、ＣａＭＶ、セロビオヒドロラーゼＩ（ｃｂｈ１）、ｃｃｇ－１、ｃＤＮＡ１、細胞フィラメントポリペプチド（ｃｆｐ）、ｃｐｃ－２、ｃｔｒ４＋、ＣＵＰ１、ジヒドロキシアセトンシンターゼ（ＤＡＳ）、エノラーゼ（ＥＮＯ、ＥＮＯ１）、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＦＬＤ１）、ＦＭＤ、ギ酸デヒドロゲナーゼ（ＦＭＤＨ）、Ｇ１、Ｇ６、ＧＡＡ、ＧＡＬ１、ＧＡＬ２、ＧＡＬ３、ＧＡＬ４、ＧＡＬ５、ＧＡＬ６、ＧＡＬ７、ＧＡＬ８、ＧＡＬ９、ＧＡＬ１０、ＧＣＷ１４、ｇｄｈＡ、ｇｌａ－１、α－グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ（ｇｐｄＡ、ＧＡＰ、ＧＡＰＤＨ）、ホスホグリセリン酸ムターゼ（ＧＰＭ１）、グリセロールキナーゼ（ＧＵＴ１）、ＨＳＰ８２、ｉｎｖｌ＋、イソクエン酸リアーゼ（ＩＣＬ１）、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼ（ＩＬＶ５）、ＫＡＲ２、ＫＥＸ２、β－ガラクトシダーゼ（ｌａｃ４）、ＬＥＵ２、ｍｅｌＯ、ＭＥＴ３、メタノールオキシダーゼ（ＭＯＸ）、ｎｍｔ１、ＮＳＰ、ｐｃｂＣ、ＰＥＴ９、ペルオキシン８（ＰＥＸ８）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ、ＰＧＫ１）、ｐｈｏ１、ＰＨＯ５、ＰＨＯ８９、ホスファチジルイノシトールシンターゼ（ＰＩＳ１）、ＰＹＫ１、ピルビン酸キナーゼ（ｐｋｉ１）、ＲＰＳ７、ソルビトールデヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）、３－ホスホセリンアミノトランスフェラーゼ（ＳＥＲ１）、ＳＳＡ４、ＳＶ４０、ＴＥＦ、翻訳伸長因子１アルファ（ＴＥＦ１）、ＴＨＩ１１、ホモセリンキナーゼ（ＴＨＲ１）、ｔｐｉ、ＴＰＳ１、トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ１）、ＸＲＰ２、ＹＰＴ１、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
シグナル配列、ターゲティングシグナル、局在化シグナル、局在化配列、シグナルペプチド、輸送ペプチド、リーダー配列、またはリーダーペプチドとしても公知のシグナルペプチド（ｂ）は、タンパク質またはポリヌクレオチドの分泌を支持し得る。宿主細胞から組換え発現されたか異種発現されたタンパク質の細胞外分泌は、タンパク質精製を容易にし得る。シグナルペプチドは、タンパク質の前駆体（例えば、プレプロペプチド、プレタンパク質）に由来し得る。シグナルペプチドは、未変性ＦＰＥにおけるシグナルペプチド以外のタンパク質の前駆体に由来することができる。
ＦＰＥをコードする任意の核酸配列を、（ｃ）として使用することができる。好ましくは、かかる配列は、宿主細胞のためにコドン最適化される。
例示的な転写ターミネーターエレメントとしては、ａｃｕ－５、ａｄｈ１＋、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２、ＡＤＨ４）、ＡＨＳＢ４ｍ、ＡＩＮＶ、ａｌｃＡ、α－アミラーゼ、代替オキシダーゼ（ＡＯＤ）、アルコールオキシダーゼＩ（ＡＯＸ１）、アルコールオキシダーゼ２（ＡＯＸ２）、ＡＸＤＨ、Ｂ２、ＣａＭＶ、セロビオヒドロラーゼＩ（ｃｂｈ１）、ｃｃｇ－１、ｃＤＮＡ１、細胞フィラメントポリペプチド（ｃｆｐ）、ｃｐｃ－２、ｃｔｒ４＋、ＣＵＰ１、ジヒドロキシアセトンシンターゼ（ＤＡＳ）、エノラーゼ（ＥＮＯ、ＥＮＯ１）、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＦＬＤ１）、ＦＭＤ、ギ酸デヒドロゲナーゼ（ＦＭＤＨ）、Ｇ１、Ｇ６、ＧＡＡ、ＧＡＬ１、ＧＡＬ２、ＧＡＬ３、ＧＡＬ４、ＧＡＬ５、ＧＡＬ６、ＧＡＬ７、ＧＡＬ８、ＧＡＬ９、ＧＡＬ１０、ＧＣＷ１４、ｇｄｈＡ、ｇｌａ－１、α－グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ（ｇｐｄＡ、ＧＡＰ、ＧＡＰＤＨ）、ホスホグリセリン酸ムターゼ（ＧＰＭ１）、グリセロールキナーゼ（ＧＵＴ１）、ＨＳＰ８２、ｉｎｖｌ＋、イソクエン酸リアーゼ（ＩＣＬ１）、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼ（ＩＬＶ５）、ＫＡＲ２、ＫＥＸ２、β－ガラクトシダーゼ（ｌａｃ４）、ＬＥＵ２、ｍｅｌＯ、ＭＥＴ３、メタノールオキシダーゼ（ＭＯＸ）、ｎｍｔ１、ＮＳＰ、ｐｃｂＣ、ＰＥＴ９、ペルオキシン８（ＰＥＸ８）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ、ＰＧＫ１）、ｐｈｏ１、ＰＨＯ５、ＰＨＯ８９、ホスファチジルイノシトールシンターゼ（ＰＩＳ１）、ＰＹＫ１、ピルビン酸キナーゼ（ｐｋｉ１）、ＲＰＳ７、ソルビトールデヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）、３－ホスホセリンアミノトランスフェラーゼ（ＳＥＲ１）、ＳＳＡ４、ＳＶ４０、ＴＥＦ、翻訳伸長因子１アルファ（ＴＥＦ１）、ＴＨＩ１１、ホモセリンキナーゼ（ＴＨＲ１）、ｔｐｉ、ＴＰＳ１、トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ１）、ＸＲＰ２、ＹＰＴ１、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な選択マーカー（ｆ）としては、以下が挙げられ得るが、これらに限定されない：抗生物質耐性遺伝子（例えば、ゼオシン、アンピシリン、ブラストサイジン、カナマイシン、ノウルセオトライシン（ｎｕｒｓｅｏｔｈｒｉｃｉｎ）、クロラムフェニコール（ｃｈｌｏｒｏａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、テトラサイクリン、トリクロサン、ガンシクロビル、およびこれらの任意の組み合わせ）、栄養要求性マーカー（例えば、ａｄｅ１、ａｒｇ４、ｈｉｓ４、ｕｒａ３、ｍｅｔ２、およびこれらの任意の組み合わせ）。
一例を挙げれば、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．における発現用のベクターは、ＦＰＥをコードする核酸配列とインフレームで融合されるシグナルペプチド（アルファ接合因子）に作動可能に連結されたＡＯＸ１プロモーター、およびＦＰＥをコードする核酸配列のすぐ下流のターミネーターエレメント（ＡＯＸ１ターミネーター）を含むことができる。
別の例では、ＤＡＳ１プロモーターを含むベクターは、ＦＰＥをコードする核酸配列とインフレームで融合されるシグナルペプチド（アルファ接合因子）およびＦＰＥのすぐ下流のターミネーターエレメント（ＡＯＸ１ターミネーター）に作動可能に連結されている。
本明細書中に記載の組換えタンパク質は、１またはそれを超える宿主細胞から分泌され得る。いくつかの実施形態では、ｒＦＰＥは、宿主細胞から分泌される。分泌されたｒＦＰＥは、遠心分離、分画、濾過、親和性精製、ならびに細胞、液体、および固体の培地構成要素、および他の細胞生成物および副生成物からタンパク質を分離するための他の方法などの方法によって単離および精製され得る。いくつかの実施形態では、ｒＦＰＥは、Ｐｉｃｈｉａ Ｓｐ．で産生され、宿主細胞から培養培地に分泌される。次いで、分泌されたｒＦＰＥは、さらなる使用のために他の培地構成要素から分離される。
消費可能な製品およびｒＦＰＥは、実質的にいかなる微生物生育も存在しないことが可能である。例えば、ｒＦＰＥは、微生物生育を含む培養物から単離され得る。あるいは、ｒＦＰＥ組成物は、例えば、プロバイオティック配合物の場合に微生物生育を含み得る。一部の例では、プロバイオティック組成物は、ｒＦＰＥを含む。プロバイオティック組成物は、ｒＦＰＥを産生する微生物を含むことができる。
表１：配列
Figure 2023508948000002
実施例
実施例１：発現構築物、形質転換、タンパク質精製、およびプロセシング
６つの発現構築物を、配列番号１（ｒＦＰＥ１）を有するｇ型食料品保存酵素の成熟形態のＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓでの組換え発現のために作出した。構築物は、ＡＯＸ１、Ｐｅｘ１１、ＤＡＳ１、ＦＬＤ１、ＦＧＨ１、およびＦＤＨ１プロモーターを含んでいた。ｒＦＰＥ１コード配列（配列番号１をコードする）を、プロモーター配列下流のアルファ接合因子シグナル配列とインフレームで融合した。ＡＯＸ１遺伝子由来の転写ターミネーターを、ｒＦＰＥ１配列の下流に配置した。
Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ株を、細胞質キラープラスミド（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｋｉｌｌｅｒ ｐｌａｓｍｉｄ）を除去するように改変し、次いで、ＡＯＸ１遺伝子を欠失するようにさらに改変した。この欠失により、菌株のエネルギー源としてメタノールを消費する能力が低下したメタノール資化緩徐（ｍｕｔＳ）表現型が得られる。Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞を、６つの発現構築物のうちの１つでトランスフェクトした。
発酵：６つのｒＦＰＥ１発現構築物のうちの１つでトランスフェクトした細胞を、周囲条件で別個のバイオリアクター中で生育させた。発酵プロセスのためのシードトレインを、振盪フラスコへの液体成長ブロスの接種から開始させた。
培養物を、３０℃、設定したｐＨ、および溶存酸素（ＤＯ）で生育させた。培養物に、炭素源を供給した。
産生を拡大するために、低温保存していたｒＦＰＥ１のＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓシードトレインを取り出し、室温で解凍した。解凍されたシードバイアルの内容物を使用して、バッフル付きフラスコ中の液体シード培養培地に接種し、振盪インキュベーター中にて３０℃で生育させた。次いで、これらのシードフラスコを、基本塩培地、微量金属、およびグルコースを含む一連の次第に規模が大きくなるシード発酵槽（規模に応じて数量は変動する）に移し、生育させた。シードリアクター内の温度を、３０℃、ｐＨ５、およびＤＯ３０％に制御する。窒素源としても作用するアンモニア水を供給することによってｐＨを維持する。十分な細胞質量に到達した時点で、生育したｒＦＰＥ１ Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓを、基本塩培地、微量金属、およびグルコースを含む生産スケールのリアクターに接種する。シードタンクと同様に、また、培養物を、プロセスを通して、３０℃、ｐＨ５、および３０％ＤＯに制御する。ｐＨを、アンモニア水を供給することによって再度維持する。最初のバッチのグルコース期中に、培養物に全てのグルコースを消費させると、その後にエタノールが産生される。目標細胞密度が達成され、グルコースおよびエタノールの濃度がゼロと確認された時点で、グルコース流加生育期を開始させる。この期では、培養物が目標細胞密度に到達するまでグルコースを供給する。ゼロでない濃度のグルコースの存在下でエタノールが生成されるのを防止するために、グルコースを制限された速度で供給する。最後の誘導期では、培養物に、グルコースおよびメタノールを同時供給して、ｒＦＰＥ１を産生するように培養物を誘導する。発現が確実に一貫して誘導されるようにメタノール濃度が１％で維持されるようにメタノールを供給しながら、所望の生育速度が得られる量のグルコースを供給する。特異的なプロセスパラメーター（例えば、細胞密度、グルコース／メタノール濃度、生成物の力価、および品質）の分析のために発酵プロセスを通して定期的に試料を採取する。指定の発酵時間後、分泌されたｒＦＰＥ１を回収し、下流プロセシングに移行する。
ｒＦＰＥ１生成物を、液体生育ブロスから細胞を分離し、液体生育ブロスに複数の濾過工程を実施し、クロマトグラフィを実施し、そして／または最終タンパク質生成物を乾燥させることによって精製して、単離された組換えｒＦＰＥ１粉末を産生した。
実施例２：ｒＦＰＥ１対ニワトリムラミダーゼの比活性
最初の懸濁濃度の凍結乾燥Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ（Ｍ．ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ）（１０ｍｌリン酸カリウム緩衝液（ＫＰＩ ５０ｍＭ、ｐＨ６．２とｐＨ６．６との間）中０．０５％または５ｍｇ）を調製し、反転（３０秒間）により混合し懸濁させた。溶液をおよそ１５～２０分間静置して、細胞を適切に再湿潤化した。次いで、細胞懸濁物のＡ４５０吸光度は、０．６～０．７の間であると決定された。アッセイ実施前に、細胞懸濁物を、マイクロプレートに添加し、温度を２５℃に調整した。以下の表２に示すように、このアッセイにおいてｒＦＰＥ１調製物（実施例１由来）の比活性がニワトリムラミダーゼの比活性よりほぼ一桁高いことが認められた。
表２：比活性の結果
Figure 2023508948000003
Figure 2023508948000004
実施例３：キサンタンガム
Ｘａｎｔｈａｎｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓからのキサンタンガムの産生においてｒＦＰＥ１がニワトリムラミダーゼ（リソビン）の代用となり得るかどうかという問題に取り組むために機能アッセイを行った。細胞培養に由来する細菌ポリサッカリド（キサンタンガム、ジェランガム、およびジウタンガムが挙げられる）の産生のための工業的酵素プロセスがいくつか存在する。
細菌培養物を、アルカリ条件下（ｐＨ１０）にて５５℃で熱によって死滅させ、次いで、アルカリプロテアーゼ（サブチリシン関連セリンプロテアーゼ）を使用してタンパク質分解／可溶化を行った。タンパク質分解後、調製物を中性ｐＨ（例えば、ｐＨ６．５～７．５）に緩衝化し、濃度約３０ｐｐｍ（百万分率）のムラミダーゼを使用して２５℃で酵素処理した。キサンタンガムについて、１．６倍重量の９９％イソプロパノールを使用した固体ガムの抽出によって反応を停止させた。次いで、ガム残渣を乾燥させ、所望の最終％（ｗ／ｖ）まで水で再懸濁し、試料の光透過率（％Ｔ；または６００ｎｍでの清澄性）を測定することによってその品質を評価した。キサンタンガムを、種々の酵素濃度のｒＦＰＥ１（実施例１由来）またはニワトリムラミダーゼを使用して産生した。透過率の結果を、表３に示す。
表３：キサンタンガム調製物の透過率
Figure 2023508948000005
Figure 2023508948000006
実施例４：抗菌活性
卵白ムラミダーゼは、その細菌細胞壁分解活性により、「一般に安全と認められる」（ＧＲＡＳ）認証を取得しているので、食品および飲料製品に直接添加される一般的な保存剤／抗菌剤である。したがたって、ｒＦＰＥ１（実施例１由来）を、コロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイで試験して、Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ ｏｅｎｉ（ワイン、ビール、およびフルーツジュースの汚染物）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ（ビールおよびワインの腐敗）、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ（食物の腐敗）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ（ビール製造における有益な細菌）、およびＸａｎｔｈａｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ（キサンタンガム産生）の生きた培養物（約２×１０７細胞／ｍｌ）を死滅させることができるかどうかを決定した。これらの実験の結果を、図１Ａ～図１Ｅに示す。
この実験のために、細菌培養物を、それぞれの好ましい培地中で生育させ、次いで、水を用いて最終ＯＤ６００を１．０に調整した。次いで、細胞懸濁物を、５００ｐｐｍのｒＦＰＥ１（最終濃度）または水のみ（対照）と混合し、室温（２５℃）で１時間のインキュベーション後、細胞を希釈し、平板培養した（以下を参照のこと）。図１Ａ～図１Ｅに示すように、ｒＦＰＥ１は、Ｏ．ｏｅｎｉ、Ｐ．ｄａｍｎｏｓｕｓ、およびＭ．ｌｕｔｅｕｓの細胞に対して有意な殺菌活性を提供したが、しかしながら、ｒＦＰＥは、有益細菌Ｌ．ｂｒｅｖｉｓの生存能に目視可能な影響を及ぼさなかった。ｒＦＰＥ１はキサンタンガム産生時にＸａｎｔｈａｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓの生細胞を死滅させるために日常的に使用されていないが、５００ｐｐｍのｒＦＰＥ１は、処置後４８時間までこの細菌種の生育を統計的に調節することが実証された（図１Ｅを参照のこと）。したがって、これらの結果は、ｒＦＰＥ１の殺菌／静菌活性が、現在はニワトリ卵白ムラミダーゼが使用されている任意の食物または飲料への適用の代わりとなり得ることを実証している。
別の実験では、ｒＦＰＥ１およびニワトリムラミダーゼ酵素の最小阻止濃度を測定した。このアッセイの２回の異なる反復の結果を、以下の表４および５に示す。
表４：最初の実験における最小阻止濃度
Figure 2023508948000007
 表５：次の実験における最小阻止濃度
Figure 2023508948000008
Figure 2023508948000009
実施例５：ｒＦＰＥ１のゲル化
配列番号１を有するＦＰＥ１（ｒＦＰＥ１）を、実施例１に詳述するように組換え産生した。２０％のｒＦＰＥ１溶液を、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で作製した。２９ｍｇのｒＦＰＥ１粉末を、１４５μｌの１×ＰＢＳに再懸濁した。溶液を含むチューブを、１００℃の沸騰水浴に数秒間入れた。図２Ａは、煮沸前および煮沸後の溶液を示す。図２Ａに示すように、ｒＦＰＥ１は、ほぼ瞬時にゲルを形成した。
１００μｌの２０％ｒＦＰＥ１溶液を、チューブ内にて５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、または７５℃で１０分間加熱後、氷中に入れ、４℃で保存した。濃度２０％の組換えニワトリｃ型リゾチーム（ｃＯＶＬ）の比較溶液も、同一温度で加熱した。結果を図２Ｂに示す。図２Ｂに示すように、ｒＦＰＥ１は６０℃からゲル化したのに対して、ｃＯＶＬは７５℃でもゲル化しなかった。図２Ｃは、へこみおよび明らかな縁を有するゲル化ｒＦＰＥ１を示す。
また、７５℃で１５分間の処理後に氷上で保存した際の０．０６３％から１５％までの異なる濃度範囲でのｒＦＰＥ１溶液のゲル化を測定した。ｒＦＰＥ１は、０．０６３％もの低濃度でゲル化することができ、ゆるいゲル粒子を形成した。より高濃度では、ｒＦＰＥ１は、カード様構造を形成し、濃度１５％で構造化されたゲル粒子を形成した。
この実施例に記載の温度でのゲル化は、リゾチームタンパク質では比較的知られておらず、したがって予想外である。これらの結果は、ｒＦＰＥ１（その低温ゲル化プロフィール（ガラス転移温度）に起因して）がタンパク質ゲル化のための成核剤（ｎｕｃｌｅａｔｏｒ）および複雑なタンパク質－タンパク質またはタンパク質－炭水化物の食物組成物または食品における抗菌特性として使用され得ることを示す。
実施例６：ｒＦＰＥ１の免疫反応性
ｃＯＶＬまたはｒＦＰＥ１に指向する抗体の交差反応を、リソビン、市販のｃ型ＯＶＬ、およびｒＦＰＥ１に対して試験した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを、抗ｃＯＶＬ一次抗体または抗ＦＰＥ１一次抗体を使用して、ｒＦＰＥ１、リソビン、ｃＯＶＬ、および希釈ガチョウ卵白に対して行った。レーン１～８を１：３０００希釈の抗ｃＯＶＬ抗体を用いて処理したのに対して、レーン９～１６を１：１０，０００希釈の抗ｒＦＰＥ１抗体を用いて処理した。
表５：ＳＤＳ－Ｐａｇｅのレーン
Figure 2023508948000010
図３に示すように、左側のウェスタンブロットは、抗ｃＯＶＬ抗体がリソビン（ＭＷ約１３ｋＤ）に結合することを示す。右側のゲルでは、抗ｒ ｒＦＰＥ１抗体が精製ｒＦＰＥ１（ＭＷ約２０ｋＤ）に結合する。結果は、ニワトリ卵白リゾチームタンパク質（公知の食物アレルゲン）に対する市販の抗体が組換えガチョウ卵白リゾチームも未変性ガチョウ卵白リゾチームも認識しないことを示す。
本発明の好ましい実施形態を本明細書中に示し、説明しているが、かかる実施形態をほんの一例として提供していることが当業者に明らかであろう。本発明が明細書内に提供された具体例によって制限されることを企図しない。本発明は前述の明細書を参照して説明しているが、本明細書中の実施形態の説明および例示は、主旨が制限されると解釈されることを意図しない。当業者であるならば、本発明を逸脱することなく、多数の変形形態、変更形態、および置換形態を思いつくであろう。さらに、本発明の全ての態様が本明細書中に記載の特定の描写、構成、相対的な比率に制限されず、これらが種々の条件および変数に依存すると理解されるものとする。本発明の実施において、本明細書中に記載の発明の実施形態の種々の代替形態を使用することができると理解すべきである。したがって、本発明が任意のかかる代替形態、修正形態、変形形態、または均等物も対照にするものとすることを意図する。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義しており、これらの特許請求の範囲およびその均等物の範囲内の方法および構造物が特許請求の範囲の対象とされることが意図される。

Claims (66)

  1. 組換え食物保存酵素（ｒＦＰＥ）を含む消費可能な組成物であって、前記ＦＰＥがガチョウ型リゾチーム（ｇＦＰＥ）であり；前記組成物が半固体またはゲル状の組成物である、消費可能な組成物。
  2. 前記消費可能な組成物が細菌不純物を含まない、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  3. 前記ｇＦＰＥが、配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  4. 前記ｇＦＰＥが、配列番号１に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  5. 前記ｇＦＰＥが、配列番号２に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  6. 前記ｇＦＰＥが、配列番号２に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  7. 前記ｇＦＰＥが、配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  8. 前記ｇＦＰＥが、配列番号３に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  9. 前記ｇＦＰＥが、配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  10. 前記ｇＦＰＥが、配列番号４に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の消費可能な組成物。
  11. 前記消費可能な組成物が熱処理されている、先行する請求項のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  12. 前記消費可能な組成物が、前記ｇＦＰＥを含まないほぼ同一の消費可能な組成物より貯蔵寿命が長い、先行する請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  13. 前記消費可能な組成物が、前記ｇＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含むほぼ同一の消費可能な組成物の貯蔵寿命より貯蔵寿命が長い、先行する請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  14. 前記ｇＦＰＥがＰｉｃｈｉａ細胞中で産生される、先行する請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  15. 組換え食料品保存酵素（ｒＦＰＥ）を含む組成物であって、前記ｒＦＰＥが、約９０，０００シュガーＵ／ｍｇを超える活性を有する、組成物。
  16. 前記ｒＦＰＥが、約１５０，０００シュガーＵ／ｍｇを超える活性を有する、請求項１５に記載の組成物。
  17. 前記ｒＦＰＥが、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞中で産生され得る、請求項１５または請求項１６に記載の組成物。
  18. 前記組成物が食物組成物である、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の組成物。
  19. 前記食物組成物が、１またはそれを超える消費可能な成分を含む、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記食物組成物が、前記ｒＦＰＥを含まないほぼ同一の食物組成物より貯蔵寿命が長い、請求項１８または請求項１９に記載の組成物。
  21. 前記食物組成物が、前記ｒＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含むほぼ同一の製品の貯蔵寿命より長い貯蔵寿命を有する、請求項１８～２０のいずれか１項に記載の組成物。
  22. 前記組成物がｒＦＰＥを含む粉末組成物である、請求項１５～２１のいずれか１項に記載の組成物。
  23. 前記ｒＦＰＥが、配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  24. 前記ｒＦＰＥが、配列番号１に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  25. 前記ｒＦＰＥが、配列番号２に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  26. 前記ｒＦＰＥが、配列番号２に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  27. 前記ｒＦＰＥが、配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  28. 前記ｒＦＰＥが、配列番号３に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  29. 前記ｒＦＰＥが、配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  30. 前記ｒＦＰＥが、配列番号４に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  31. 前記組成物が、ニワトリ卵白ムラミダーゼを含むほぼ同一の組成物と比較して、低アレルゲン性である、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  32. 前記ｒＦＰＥが、非組換えＦＰＥおよび／またはニワトリムラミダーゼと比較して、より高い活性を有する、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  33. 前記ｒＦＰＥが、約２００，０００シュガーＵ／ｍｇを超える活性を有する、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  34. 前記ｒＦＰＥが、約３００，０００シュガーＵ／ｍｇを超える活性を有する、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  35. 前記ｒＦＰＥが、約４５０，０００シュガーＵ／ｍｇを超えるシュガー単位の活性を有する、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  36. １シュガー単位が、Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ細胞の懸濁物を消化し、それにより、３７℃、ｐＨ７．０にて０．００１／分の速度で溶液の吸光度を低下させる酵素の量である、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  37. 組換え食料品保存酵素（ｒＦＰＥ）を含む消費可能な組成物であって、前記ＦＰＥが、配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、消費可能な組成物。
  38. 前記消費可能な組成物が食物組成物である、請求項３７に記載の消費可能な組成物。
  39. 前記食物組成物が、ゲル様のテクスチャーまたは粘稠度を有する、請求項３７または請求項３８に記載の消費可能な組成物。
  40. 前記食物組成物が、焼成製品の形態である、請求項３７または請求項３８に記載の消費可能な組成物。
  41. 前記食物組成物が、卵白様製品の形態である、請求項３７～４０のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  42. 前記食物組成物が液体の形態である、請求項３７または請求項３８に記載の消費可能な組成物。
  43. 前記食物組成物が固体の形態である、請求項３７または請求項３８に記載の消費可能な組成物。
  44. 前記組成物が、前記ｒＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含むほぼ同一の組成物の貯蔵寿命より長いか同程度の貯蔵寿命を有する、請求項３７～４３のいずれか１項に記載の組成物。
  45. 前記食物組成物が、少なくとも０．０５重量％のｒＦＰＥを有する、請求項３７～４４のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  46. 前記食物組成物が、最大で１０重量％のｒＦＰＥを有する、請求項３７～４５のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  47. 前記消費可能な組成物が成分である、請求項３７～４６のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  48. 前記食物組成物が、微生物または細菌細胞デブリを実質的に含まない、請求項３７～４７のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  49. 前記食物組成物がプロバイオティック配合物である、請求項３７～４８のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  50. 前記ｒＦＰＥが少なくとも８０％純粋である、請求項３７～４９のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  51. 前記食物組成物が、前記ｒＦＰＥに加えて１つを超える組換えタンパク質を含む、請求項３７～５０のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  52. 前記ｒＦＰＥが、前記食品にゲル固体性または増大した粘度を提供する、請求項３７～５１のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  53. 前記食品が、前記ｒＦＰＥ以外のゲル化剤を含まない、請求項３７～５２のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  54. 前記ｒＦＰＥが、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞中で組換え産生される、請求項３７～５３のいずれか１項に記載の消費可能な組成物。
  55. 消費可能な組成物を調製する方法であって、
    ａ．組換え産生された単離食料品保存酵素（ＦＰＥ）を提供する工程であって、前記ＦＰＥがガチョウ型ＦＰＥ（ｇＦＰＥ）である、工程；
    ｂ．前記組換え産生されたＦＰＥを、１またはそれを超える消費可能な成分と組み合わせる工程を含む、方法。
  56. 前記組換え産生されたｇＦＰＥが、配列番号１～４のうちの１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記組換え産生されたｇＦＰＥが、酵母細胞中で組換え産生される、請求項５５または請求項５６に記載の方法。
  58. 前記酵母細胞がＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記組換え産生されたｇＦＰＥが、前記組換え産生されたｇＦＰＥを欠くか、前記ＦＰＥではなくニワトリ卵白ムラミダーゼを含むほぼ同一の消費可能な組成物と比較して前記消費可能な組成物の貯蔵寿命が増加する、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記組換え産生されたｇＦＰＥが、前記消費可能な組成物にゲル様のテクスチャーをもたらすか、または前記消費可能な組成物の粘度を増加させる、請求項５５～５９のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記消費可能な組成物が、ヒト／動物による消費のために準備ができた食品である、請求項５５～６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 単離したキサンタンガム製品を産生する方法であって、
    ａ．Ｘ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ細胞を発酵培地中に提供する工程；
    ｂ．前記細胞を、４５～６０℃の間の温度、ｐＨ８～１０の間のｐＨにてアルカリプロテアーゼで熱処理し、それにより、細胞デブリを含む溶液を産生する工程；
    ｃ．細胞デブリを含む溶液に、組換え産生された食料品保存酵素（ＦＰＥ）および／または配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換え産生されたＦＰＥを添加し、それによりキサンタンガム溶液を産生する工程；
    ｄ．アルコールを前記キサンタンガム溶液に添加し、それにより、キサンタンガムを沈殿させる工程；および
    ｅ．沈殿した前記キサンタンガムを単離および乾燥させ、それにより、単離したキサンタンガム製品を得る工程、
    を含む、方法。
  63. 添加される前記ＦＰＥの量が、他の点は同一の条件下で等量の前記キサンタンガム製品を産生するのに必要と考えられるニワトリ卵白ＦＰＥの量よりも少ない、請求項６２に記載の方法。
  64. 細胞デブリを含む溶液を産生した後に前記組成物のｐＨを調整する工程をさらに含む、請求項６２または請求項６３に記載の方法。
  65. 消費可能な組成物を調製する方法であって、請求項６２～６４のいずれか１項に記載の方法にしたがって産生されたキサンタンガム製品を、１またはそれを超えるさらなる成分と組み合わせて、前記消費可能な組成物を形成させる工程を含む、方法。
  66. 配列番号１に対して少なくとも９５％の同一性を有する組換え産生された食物保存酵素（ＦＰＥ）を含む食品保存剤。
JP2022538938A 2019-12-24 2020-12-22 酵素組成物およびその作製方法 Pending JP2023508948A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962953361P 2019-12-24 2019-12-24
US62/953,361 2019-12-24
PCT/US2020/066729 WO2021133852A1 (en) 2019-12-24 2020-12-22 Enzyme compositions and methods of making them

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023508948A true JP2023508948A (ja) 2023-03-06
JPWO2021133852A5 JPWO2021133852A5 (ja) 2024-01-04

Family

ID=76575664

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022538938A Pending JP2023508948A (ja) 2019-12-24 2020-12-22 酵素組成物およびその作製方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230024614A1 (ja)
EP (1) EP4081047A4 (ja)
JP (1) JP2023508948A (ja)
KR (1) KR20220119407A (ja)
CN (1) CN115135168A (ja)
AU (1) AU2020411469A1 (ja)
BR (1) BR112022012630A2 (ja)
CA (1) CA3162607A1 (ja)
IL (1) IL294195A (ja)
MX (1) MX2022007907A (ja)
WO (1) WO2021133852A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2020309602A1 (en) 2019-07-11 2022-02-24 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof
US12096784B2 (en) 2019-07-11 2024-09-24 Clara Foods Co. Protein compositions and consumable products thereof

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0549230B1 (en) * 1991-12-20 1997-08-27 Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. Process for preparation of purified xanthan gum
US6133010A (en) * 1999-07-08 2000-10-17 Biotec Asa Chlamysin B antibacterial protein, a protein gene for and an expression system for same
US6293980B2 (en) * 1999-12-20 2001-09-25 Norton Company Production of layered engineered abrasive surfaces
WO2006028497A2 (en) * 2004-02-20 2006-03-16 University Of Virginia Patent Foundation Active recombinant human lysozyme
US20070207209A1 (en) * 2004-08-27 2007-09-06 Murphy Christopher J Trophic factor combinations for nervous system treatment
CN101353630A (zh) * 2007-07-26 2009-01-28 复旦大学 一种获得高产量鹅型溶菌酶的方法
CN103160525A (zh) * 2011-12-15 2013-06-19 中国科学院烟台海岸带研究所 一种紫贻贝g型溶菌酶基因及其重组蛋白和应用
CN109722423A (zh) * 2017-10-27 2019-05-07 成都必高生物科技有限公司 具提升酶活性的溶菌酶

Also Published As

Publication number Publication date
BR112022012630A2 (pt) 2022-09-06
AU2020411469A1 (en) 2022-08-18
EP4081047A1 (en) 2022-11-02
WO2021133852A1 (en) 2021-07-01
MX2022007907A (es) 2022-07-21
KR20220119407A (ko) 2022-08-29
US20230024614A1 (en) 2023-01-26
CA3162607A1 (en) 2021-07-01
CN115135168A (zh) 2022-09-30
IL294195A (en) 2022-08-01
EP4081047A4 (en) 2024-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230024614A1 (en) Enzyme compositions and methods of making them
DK202300015Y3 (da) Ikke-animalsk baserede proteinkilder med funktionelle egenskaber
DK202300014Y3 (da) Proteinsammensætninger og konsumerbare produkter deraf
US11800887B2 (en) Protein compositions and consumable products thereof
AU2021224867A1 (en) Hypoallergenic recombinant milk proteins and compositions comprising the same
JP2024507872A (ja) 動物質を含まない卵様製品を調製するための組成物
CN116323660A (zh) 包含乳蛋白的融合蛋白及其组合物
US20230192811A1 (en) Non-animal based protein sources with functional properties
US20240206509A1 (en) Protein compositions and consumable products thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20231221

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20231221