JP2023505289A

JP2023505289A - Ｅｒｋ阻害剤としてのスピロ系化合物およびその使用

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Publication number: JP2023505289A
Application number: JP2022534191A
Authority: JP
Inventors: 翼李; 寧劉; 涛于; 成徳呉; 健黎; 曙輝陳
Original assignee: メッドシャインディスカバリーインコーポレイテッド
Priority date: 2019-12-06
Filing date: 2020-12-07
Publication date: 2023-02-08
Anticipated expiration: 2040-12-07
Also published as: KR20220107020A; CA3160899C; AU2020394767B2; TWI765451B; US20230044606A1; CA3160899A1; CN114761411B; AU2020394767A1; WO2021110168A1; EP4071152A1; JP7326622B2; EP4071152A4; TW202128715A; CN114761411A

Abstract

本発明は、ＥＲＫ阻害剤としてのスピロ系化合物、およびＥＲＫに関連する疾患のための医薬品の調製におけるその使用を開示する。具体的に、式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を開示する。TIFF2023505289000069.tif3172

Description

（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１９年１２月０６日に出願されたＣＮ２０１９１１２４４７８８．Ｘ、２０１９年１２月１０日に出願されたＣＮ２０１９１１２５７９９８．２、２０２０年０２月２０日に出願されたＣＮ２０２０１０１０６８９７．１、２０２０年０９月３０日に出願されたＣＮ２０２０１１０６８９３７．４および２０２０年１２月０３日に出願されたＣＮ２０２０１１４１０４８８．７に基づく優先権を主張する。

（技術分野）
本発明は、ＥＲＫ阻害剤としてのスピロ系化合物、およびＥＲＫに関連する疾患のための医薬品の調製におけるその使用に関する。具体的に、式（ＩＩＩ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫＫ経路は、典型的なマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）シグナル伝達カスケード経路であり、活性化後の各種の成長因子、サイトカイン、マイトジェン及びホルモン受容体のシグナル伝達に関与し、細胞の成長、分化および生存を制御するための最も重要なシグナル伝達経路の１つである。

研究によると、突然変異または増幅によるＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の異常な活性化は、さまざまな癌の発生の決定要因であることが示された。ヒト腫瘍では、ＲＡＳ変異の発生率は約２２％、ＢＲＡＦ変異の発生率は約７％、ＭＥＫ変異の発生率は約１％である。したがって、この経路の主要なノードのタンパク質は、癌の治療の重要な標的になっている（ＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖ．２０１９，９，３２９－３４１）。現在、多くのＢＲＡＦ阻害剤とＭＥＫ１／２阻害剤、およびそれらの併用療法は、米国ＦＤＡによって黒色腫やＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異型非小細胞肺癌などの癌の治療に使用することが承認されている。しかしながら、これらの上流ノードにＢＲＡＦおよびＭＥＫ阻害剤を使用すると、変異または経路の再活性化による薬剤耐性の問題が急速に発生し、臨床応用が大幅に制限される可能性がある。

細胞外調節プロテインキナーゼ（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ，ＥＲＫ）、特にＥＲＫ１およびＥＲＫ２キナーゼは、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路に関与する主なものおよび下流の重要なノードであり、多くのヒトの癌でそれらの過剰活性化が見られる。この経路の末端シグナル伝達キナーゼとしてのＥＲＫは、薬剤耐性につながる変異を持つことがまだ発見されていないため、ＥＲＫキナーゼを標的とする医薬品は、上流標的阻害剤を利用した治療による薬剤耐性の問題を克服し、より潜在的な治療戦略になることが期待される。しかし、これまでＥＲＫ阻害剤の研究はまだ臨床段階にあり、ＥＲＫ阻害剤は医薬品としての販売が承認されていない。

以上より、腫瘍治療のニーズを満たすために、安全で効果的なＥＲＫ阻害剤の開発は強く求められている。

本発明は、式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
ｎは０または１であり；
ｍは１または２であり；
環Ａは、

であり；
Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３は、それぞれ独立してＮおよびＣＨから選択され；
Ｅ_１は、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｒ_１は、ＨおよびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく；
Ｒ_２とＲ_３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ｂで置換されていてもよく；
Ｒ_４は、Ｈから選択され；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ｃで置換されていてもよく；
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮおよびＮＨ_２から選択される。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_１は、ＨおよびＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３は、１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_１はＣＨ_３であり、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_２とＲ_３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３は、１個、２個または３個のＲ_ｂで置換されていてもよく、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_２とＲ_３は、それぞれ独立してＨおよびＣＨ_３から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_２とＲ_３は、それぞれ独立してＨから選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２、ＣＨ_３および－ＣＨ_２－ＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３および－ＣＨ_２－ＣＨ_３は、１個、２個または３個のＲ_ｃで置換されていてもよく、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮおよびＮＨ_２から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記の構造単位

は、

であり、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記の構造単位

は、

であり、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一実施形態において、上記の環Ａは、

であり、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明は、式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
ｎは０または１であり；
Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３は、それぞれ独立してＮおよびＣＨから選択され；
Ｒ_１は、ＨおよびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく；
Ｒ_２とＲ_３は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ｂで置換されていてもよく；
Ｒ_４は、Ｈから選択され；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ｃで置換されていてもよく；
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮおよびＮＨ_２から選択される。

本発明の一実施形態において、上記のＲ_２とＲ_３は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３は、１個、２個または３個のＲ_ｂで置換されていてもよく、他の変数は本発明で定義した通りである。

また、本発明の一部の実施形態は、上記のそれぞれの変数を任意に組み合わせたものである。

本発明の一実施形態において、上記の化合物およびその薬学的に許容される塩は、

から選択され、
ここで、
ｍ、ｎ、Ｅ_１、Ｔ_１、Ｔ_２、Ｔ_３、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、本発明で定義した通りである。

から選択され、
ここで、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｅ_１、Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３は、本発明で定義した通りである。

から選択され、
ここで、
Ｔ_１、Ｔ_２、Ｔ_３、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、本発明で定義した通りである。

から選択され、
ここで、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、本発明で定義した通りである。

さらに、本発明は、以下の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩を提供する。

から選択される。

さらに、本発明は、ＥＲＫに関する疾患を治療する医薬品の調製における、上記の化合物、その異性体およびそれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。

本発明の化合物は、ＥＲＫ２キナーゼおよびＨＴ２９細胞の増殖に対して優れた阻害活性を示す。また、本発明の化合物は、優れた経口曝露量およびバイオアベイラビリティを示す。さらに、本発明の化合物は、腫瘍の成長を明らかに阻害することができる。投与中、動物の体重の大幅な減少は見られず、忍容性は良好である。

定義と用語
特に明記しない限り、本明細書で使用される以下の用語は、以下の意味を有することを意図している。特定の用語は、特定の定義がない場合に、不定または不明瞭と見なされるべきではないが、通常の意味で理解されるべきである。本明細書に商品名が記載される場合、その対応する商品またはその活性成分を指す。

ここで、用語「薬学的に許容される」とは、これらの化合物、材料、組成物、および／または剤形について、信頼性のある医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触して使用することに適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題または合併症を伴うことなく、合理的な利益／リスク比に見合うことをいう。

用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明で発見された特定の置換基を有する化合物を比較的毒性のない酸または塩基と反応させることで調製される本発明の化合物の塩を指す。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、純粋な溶液または適切な不活性溶媒中で、このような化合物が十分な量の塩基と接触させることで、塩基付加塩が得られる。薬学的に許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミンもしくはマグネシウムの塩、または類似の塩を含む。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、純粋な溶液または適切な不活性溶媒中で、このような化合物が十分な量の酸と接触させることで、酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸塩と有機酸塩を含む。上記の無機酸塩として、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、重炭酸塩、リン酸、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、硫酸、硫酸水素塩、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの無機酸塩が挙げられる。上記の有機酸塩として、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの類似の酸の塩や、アミノ酸（例えばアルギニンなど）の塩、およびグルクロン酸などの有機酸の塩が挙げられる。本発明の一部の特定の化合物は、塩基性官能基と酸性官能基の両方を含むため、塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換することができる。

本発明の薬学的に許容される塩は、通常の化学的方法によって酸性または塩基性部分を含む親化合物から調製することができる。一般的に、このような塩は、水または有機溶媒或いは両者の混合物中で、これらの化合物を遊離酸または塩基として化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることで調製される。

本発明の化合物は、特定の幾何異性体または立体異性体として存在してもよい。本発明では、シスとトランス異性体、（－）と（＋）エナンチオマー、（Ｒ）と（Ｓ）エナンチオマー、ジアステレオ異性体、（Ｄ）異性体、（Ｌ）異性体、およびそのラセミ混合物、他の混合物、例えばエナンチオマーまたはジアステレオ異性体が豊富な混合物を含むすべてのこのような化合物が想定される。これらはすべて本発明の範囲内に含まれる。アルキル基などの置換基は、さらなる不斉炭素原子を有していてもよい。これらの異性体およびそれらの混合物はすべて、本発明の範囲内に含まれる。

特に明記しない限り、「エナンチオマー」または「光学異性体」という用語は、互いに鏡像関係にある立体異性体を指す。

特に明記しない限り、「シス－トランス異性体」または「幾何異性体」という用語は、二重結合や環形成炭素原子間の単結合が自由に回転できないことにより生成される。

特に明記しない限り、「ジアステレオマー」という用語は、分子に２つ以上のキラル中心を含み、且つ分子間で非鏡像関係にある立体異性体を指す。

特に明記しない限り、「（＋）」とは右旋性異性体を意味し、「（－）」とは左旋性異性体を意味し、「（±）」とはラセミ体を意味する。

特に明記しない限り、くさび形の実線結合（

）およびくさび形の破線結合（

）で立体中心の絶対配置を表し、直線形の実線結合（

）と直線形の破線結合（

）で立体中心の相対配置を表し、波線（

）でくさび形の実線結合（

）またはくさび形の破線結合（

）を表し、或いは波線（

）で直線形の実線結合（

）または直線形の破線結合（

）を表す。

特に明記しない限り、化合物に、例えば炭素－炭素二重結合、炭素－窒素二重結合および窒素－窒素二重結合などの二重結合構造が存在し、且つ二重結合の各原子がいずれも２つの異なる置換基に結合している場合（窒素原子を含む二重結合では、窒素原子上の孤立電子対のペアを、それに結合している置換基の１つとする）、この化合物の二重結合の原子がその置換基と波線（

）で連結していると、該化合物は、（Ｚ）型異性体、（Ｅ）型異性体、または２つの異性体の混合物を表す。例えば、以下の式（Ａ）は、その化合物が式（Ａ－１）または式（Ａ－２）の単一の異性体として存在し、或いは式（Ａ－１）および式（Ａ－１）の２つの異性体の混合物として存在することを表す。以下の式（Ｂ）は、その化合物が式（Ｂ－１）または式（Ｂ－２）の単一の異性体として存在し、或いは式（Ｂ－１）および式（Ｂ－２）の２つの異性体の混合物として存在することを表す。以下の式（Ｃ）は、その化合物が式（Ｃ－１）または式（Ｃ－２）の単一の異性体として存在し、或いは式（Ｃ－１）および式（Ｃ－２）の２つの異性体の混合物として存在することを表す。

特に明記しない限り、「互変異性体」または「互変異性体形態」という用語は、異なる官能基の異性体が室温で動的平衡状態にあり、互いに迅速に変換できることを意味する。互変異性体が可能な場合（例えば、溶液の中に）に、互変異性体の化学平衡を達成できる。例えば、プロトン互変異性体（ｐｒｏｔｏｎｔａｕｔｏｍｅｒ）（プロトトロピック互変異性体（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｃｔａｕｔｏｍｅｒ）としても知られる）には、ケト－エノール異性化やイミン－エナミン異性化などのプロトン移動による相互変換が含まれる。原子価互変異性体（ｖａｌｅｎｃｅｔａｕｔｏｍｅｒ）には、一部の結合電子の再結合による相互変換が含まれる。ケト－エノール互変異性化の例としては、ペンタン－２，４－ジオンと４－ヒドロキシペント－３－エン－２－オンとの２つの互変異性体間の相互変換がある。

特に明記しない限り、「１つの異性体に富む」、「異性体に富む」、「１つの鏡像異性体に富む」または「鏡像異性体に富む」という用語は、１つの異性体または鏡像異性体の含有量が１００％未満であり、且つその異性体または鏡像異性体の含有量は６０％以上、または７０％以上、または８０％以上、または９０％以上、または９５％以上、または９６％以上、または９７％以上、または９８％以上、または９９％以上、または９９．５％以上、または９９．６％以上、または９９．７％以上、または９９．８％以上、または９９．９％以上であることを意味する。

特に明記しない限り、「異性体過剰率」または「鏡像異性体過剰率」という用語は、２つの異性体または２つの鏡像異性体の相対パーセンテージ間の差を指す。例えば、一方の異性体または鏡像異性体が９０％の量で存在し、他方の異性体または鏡像異性体が１０％の量で存在する場合、異性体または鏡像異性体過剰率（ｅｅ値）は８０％である。

光学活性を有する（Ｒ）と（Ｓ）異性体、およびＤとＬ異性体は、キラル合成、キラル試薬または他の従来技術を用いて調製される。本発明のある化合物の１種類のエナンチオマーを得たい場合、純粋な所望のエナンチオマーは、不斉合成、または得られたジアステレオマー混合物の分離および補助基の開裂を含む、キラル補助剤による誘導作用によって得ることができる。或いは、分子が塩基性官能基（アミノ基など）または酸性官能基（カルボキシル基など）を含む場合、化合物は適切な光学活性を有する酸または塩基と反応して、ジアステレオマー異性体の塩を形成し、その後、当技術分野における一般的な方法でジアステレオマーの分離を行い、純粋なエナンチオマーを回収する。さらに、エナンチオマーおよびジアステレオ異性体は、一般的に、キラル固定相を使用した、任意に化学誘導法（例えば、アミンからカルバメートを生成する）と組み合わせたクロマトグラフィーによって単離される。

本発明の化合物は、該化合物を構成する１つ以上の原子で非自然な割合の原子同位体を含んでもよい。本発明の化合物は、この化合物を構成する１つ以上の原子に非天然な割合で同位体原子を含有していてもよい。例えば、トリチウム（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５（^１２５Ｉ）またはＣ－１４（^１４Ｃ）のような放射性同位体で標識された化合物が用いられる。別の例として、水素を重水素に置き換えて重水素化薬物を形成することができる。重水素と炭素との結合は、通常の水素と炭素との結合よりも強い。重水素化されていない薬物と比較して、重水素化された薬物は、毒性副作用の低減、薬物の安定性の向上、有効性の向上、および薬物の生物学的半減期の延長などの利点を有する。本発明の化合物のすべての同位体組成の変化は、放射能を有するかどうかにかかわらず、本発明の範囲内に含まれる。

「任意の」または「任意に」という用語は、後続の事項または条件が発生する可能性があるが必ず発生ではないことを意味し、この用語は、上記の事項または条件が発生する場合および上記の事項または条件が発生しない場合を含む。

「置換された」という用語は、特定の原子上の１個以上の水素原子が置換基によって置換されることを指し、また、特定の原子の原子価が正常であり、且つ置換された化合物は安定している限り、重水素および水素の変種を含んでも良い。置換基がオキソ基（即ち、＝Ｏ）である場合、２個の水素原子が置換されていることを意味する。なお、芳香環基では、オキソ基の置換は起こらない。

「置換されていてもよい」という用語は、原子が置換基で置換されても置換されていなくてもよいことを意味し、特に断りのない限り、置換基の種類および数は、化学的に実現可能である限り任意でもよい。

いずれの変数（例えば、Ｒ）でも化合物の組成や構造中に一回以上現れる場合、それぞれの場合での定義は独立している。したがって、例えば、ある基が０～２個のＲで置換されている場合、上記の基は多くても２個のＲで置換されていてもよく、且つそれぞれの場合におけるＲは独立した選択肢を有する。さらに、置換基および／またはその変種の組み合わせは、安定な化合物を生じる場合に限り許容される。

例えば－（ＣＲＲ）_０－のような、連結基の数が０である場合、その連結基は単結合であることを意味する。

１個の変数が単結合である場合、該単結合によって結合された２つの基が直接結合していることを意味する。例えば、Ａ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、該構造は実質にＡ－Ｚである。

置換基が空いている場合は、該置換基が存在しないことを意味し、例えば、Ａ－ＸにおけるＸが空いている場合、該構造は実質にＡである。挙げられた置換基においてどの原子を介して置換される基に結合することを明記していない場合、このような置換基は、いずれの原子によって結合しても良く、例えば、置換基としてのピリジル基は、ピリジン環のいずれかの炭素原子を介して、置換される基に結合してもよい。

挙げられた連結基の連結方向を明記しない場合、その連結方向は任意である。例えば、

における連結基Ｌが－Ｍ－Ｗ－である場合、－Ｍ－Ｗ－は、左から右への読み取り順序と同じ方向で環Ａと環Ｂを連結して

となってもよく、左から右への読み取り順序と逆方向で環Ａと環Ｂを連結して

となってもよい。前記した連結基、置換基および／またはその変種の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物を生じる場合に限り許容される。

特に明記しない限り、ある基に１つ以上の接続可能な部位がある場合、この基の任意の１つ以上の部位を化学結合を介して他の基に接続することができる。前記の部位と他の基との間の化学結合は、直線形の実線結合（

）、直線形の破線結合（

）、または波線（

）で表すことができる。例えば、－ＯＣＨ_３における直線形の実線結合は、この基における酸素原子を介して他の基に接続することを示し；

における直線形の破線結合は、この基における窒素原子の両端を介して他の基に接続することを示し；

における波線は、このフェニル基における１位と２位の炭素原子を介して他の基に接続することを示す。

特に明記しない限り、用語「Ｃ_１－３アルキル」は、１～３個の炭素原子からなる直鎖または分岐の飽和炭化水素基を示す。前記のＣ_１－３アルキルは、Ｃ_１－２およびＣ_２－３のアルキルなどを含み；それは、一価の基（例えばメチル基）、二価の基（例えばメチレン基）または多価の基（例えばメチン基）であってもよい。Ｃ_１－３アルキルの例として、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピルおよびイソプロピルを含む）などが挙げられるが、これらに限定されない。

特に明記しない限り、用語「Ｃ_１－３アルコキシ」は、１～３個の炭素原子を含む、酸素原子を介して分子の残りの部分に結合しているアルキルを指す。前記のＣ_１－３アルコキシは、Ｃ_１－２、Ｃ_２－３、Ｃ_３およびＣ_２アルコキシなどを含む。Ｃ_１－３アルコキシの例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ－プロポキシおよびイソプロポキシを含む）などが挙げられるが、これらに限定されない。

特に明記しない限り、用語「ハロ」または「ハロゲン」は、それ自体、または別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を表す。

特に明記しない限り、Ｃ_{ｎ－ｎ＋ｍ}またはＣ_ｎ－Ｃ_ｎ＋ｍは、ｎからｎ＋ｍ個の炭素のいずれかを含む。例えば、Ｃ_１－１２は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、およびＣ_１２を含み、また、ｎからｎ＋ｍのうちの任意の範囲を含み、例えば、Ｃ_１－１２は、Ｃ_１－３、Ｃ_１－６、Ｃ_１－９、Ｃ_３－６、Ｃ_３－９、Ｃ_３－１２、Ｃ_６－９、Ｃ_６－１２、およびＣ_９－１２などを含む。同様に、ｎ員からｎ＋ｍ員は、環上の原子の数がｎからｎ＋ｍ個であることを意味する。例えば、３～１２員環は、３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、および１２員環を含み、また、ｎからｎ＋ｍのうちの任意の範囲を含み、例えば、３～１２員環は、３～６員環、３～９員環、５～６員環、５～７員環、６～７員環、６～８員環、および６～１０員環などを含む。

用語「脱離基」とは、置換反応（例えば、求核置換反応）によって別の官能基または原子で置換される官能基または原子を指す。代表的な脱離基として、例えば、トリフレート；塩素、臭素およびヨウ素；メシレート、トシレート、ｐ－ブロモベンゼンスルホネート、ｐ－トルエンスルホネート等のスルホネート基；アセトキシ、トリフルオロアセトキシ等のアシルオキシ基などが挙げられる。

用語「保護基」は、「アミノ保護基」、「ヒドロキシ保護基」または「チオ保護基」を含むが、これらに限定されない。用語「アミノ保護基」とは、アミノ基の窒素位置における副反応を阻止することに適した保護基を指す。代表的なアミノ保護基として、ホルミル；アルカノイル（例えばアセチル、トリクロロアセチルまたはトリフルオロアセチル）等のアシル；ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）等のアルコキシカルボニル；ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等のアリールメトキシカルボニル；ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）、１，１－ビス（４’－メトキシフェニル）メチル等のアリールメチル；トリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等のシリルなど挙げられるが、これらに限定されない。用語「ヒドロキシ保護基」とは、ヒドロキシ基の副反応を阻止することに適した保護基を指す。代表的なヒドロキシ保護基として、メチル、エチルおよびｔｅｒｔ－ブチル等のアルキル；アルカノイル（例えば、アセチル）等のアシル；ベンジル（Ｂｎ）、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）、９－フルオレニルメチル（Ｆｍ）、ジフェニルメチル（ベンズヒドリル、ＤＰＭ）等のアリールメチル；トリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等のシリルなど挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の化合物は、以下の実施形態、それらを他の化学合成方法と組み合わせた実施形態、および当業者に周知の同等置換を含む、当業者に周知の様々な合成方法によって調製される。好ましい実施形態は、本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。

本発明の化合物の構造は、当業者に周知の従来の方法によって確認することができる。本発明が化合物の絶対配置に関する場合、その絶対配置は、当技術分野の従来の技術によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折法（ＳＸＲＤ）では、得られた単結晶について、ＢｒｕｋｅｒＤ８ｖｅｎｔｕｒｅ回折計（スキャンモード：φ／ωスキャン、光源：ＣｕＫα線）を使用して回折強度データを収集した後、さらに、直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）で結晶構造を分析し、絶対配置を確認する。

本発明で使用される全ての溶媒は市販されている。本発明は以下の略語を使用する。ａｑは、水を表す。

図１は、溶媒およびＷＸ００７をそれぞれ投与したモデル動物におけるヒト結腸直腸癌ＨＣＴ１１６の腫瘍増殖曲線を示す。図２は、ヒト結腸直腸癌ＨＣＴ１１６のモデル動物の投与中の体重変化率（％）を示す。

本発明は、実施例により以下に詳細に記載される。しかしながら、これらの例が本発明に対して不利な制限を有することは意図されていない。本発明は本明細書で詳細に説明されており、実施形態も開示されている。本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される実施形態に様々な変更および修正を加えることができることは当業者には明らかであろう。

参考例１：フラグメントＡ－１

工程１：化合物Ａ－１－２の合成
予備乾燥した一口フラスコに、酢酸ナトリウム（４．６４ｇ，５６．６０ｍｍｏｌ，５ｅｑ）、一過硫酸カリウム（１３．９２ｇ，２２．６４ｍｍｏｌ，２ｅｑ）および水（４７ｍＬ）の溶液を加え、℃に冷却し、Ａ－１－１（４．７ｇ，１１．３２ｍｍｏｌ，１ｅｑ）、溶媒テトラヒドロフラン（４７ｍＬ）とメタノール（４７ｍＬ）の溶液を滴下し、０℃で１時間撹拌した。２９℃の油浴で１５時間撹拌した。反応終了後、この反応液を水（２００ｍＬ）に注ぎ、水相を酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、有機相を飽和食塩水（２００ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を収集し、減圧下で濃縮して残留物を得た。残余物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ａ－１－２を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ８．６７（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），１．６３－１．５３（ｍ，６Ｈ），１．３９－１．３０（ｍ，６Ｈ），１．２６－１．１２（ｍ，６Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，９Ｈ）。

工程２：化合物Ａ－１の合成
フラスコに、Ａ－１－２（３．９ｇ，８．７２ｍｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１－３（１．０２ｇ，１０．４６ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）およびテトラヒドロフラン（１１７ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、－３５℃でリチウムヘキサメチルジシラジド（１Ｍ，１８．３１ｍＬ，２．１ｅｑ）を滴下し、－３５℃で混合液を１０分間反応させ、反応終了後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）およびジクロロメタン（１００ｍＬ）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、回転蒸発乾固させて、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ａ－１を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ８．１７（ｄ，Ｊ＝４．８５Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝４．６３Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝１．９８Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），１．５２－１．６１（ｍ，６Ｈ），１．２８－１．４０（ｍ，６Ｈ），１．０３－１．２０（ｍ，６Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，９Ｈ）。

実施例１

合成経路

工程１：ＷＸ００１－３の合成
フラスコに、ＷＸ００１－１（５ｇ，２４．０３ｍｍｏｌ，１ｅｑ）およびテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、－７８℃に冷却し、リチウムジイソプロピルアミド（２ｍｏｌ／Ｌ，２８．８４ｍＬ，２．４ｅｑ）およびテトラメチルエチレンジアミン（４．１９ｇ，３６．０５ｍｍｏｌ，５．４４ｍＬ，１．５ｅｑ）をゆっくりと滴下し、－７８℃で０．５時間撹拌した後、ＷＸ００１－２（３．１０ｇ，３６．０５ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）を加え、－７８℃で混合液を２時間反応させた。反応終了後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液（２５０ｍＬ）でクエンチし、２ｍｏｌ／Ｌの塩酸でｐＨを２～３に調整し、酢酸エチル（１００ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮し、ＷＸ００１－３を得た。

工程２：ＷＸ００１－４の合成
フラスコに、ＷＸ００１－３（１ｇ，３．４０ｍｍｏｌ，１ｅｑ）およびアセトニトリル（１０ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、０℃に冷却し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル（５７９．０６ｍｇ，４．０８ｍｍｏｌ，５０３．５３μＬ，１．２ｅｑ）をゆっくりと滴下し、２０℃で混合液を２時間反応させ、５０℃に昇温し、さらに１６時間反応させた。６０℃に昇温し、さらに８時間反応させた。反応終了後、反応液を水（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮して乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００１－４を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）： δ（ｐｐｍ）４．１８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０６－４．１３（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７６－２．８７（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｄｔ，Ｊ＝１２．９，７．５Ｈｚ，１Ｈ）．

工程３：ＷＸ００１－５の合成
フラスコに、ＷＸ００１－４（２５０ｍｇ，７８８．２５μｍｏｌ，１ｅｑ）、塩酸（２ｍｏｌ／Ｌ，１．９７ｍＬ，５ｅｑ）およびエタノール（２ｍＬ）を加え、７０℃で混合液を１６時間反応させた。反応終了後、反応液を水（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（２ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮して乾固させた。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００１－５を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）： δ（ｐｐｍ）９．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），３．９７－４．１４（ｍ，２Ｈ），３．８４－３．９５（ｍ，１Ｈ），３．７６（ｂｒｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１７－２．３３（ｍ，１Ｈ）．

工程４：ＷＸ００１－７の合成
フラスコに、ＷＸ００１－５（１５０ｍｇ，５４５．２１μｍｏｌ，１ｅｑ）およびＮ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、０℃に冷却し、水素化ナトリウム（２６．１７ｍｇ，６５４．２５μｍｏｌ，純度６０％，１．２ｅｑ）を加え、０．５時間撹拌した後、ＷＸ００１－６（１３４．４４ｍｇ，６５４．２５μｍｏｌ，８５．６３μＬ，１．２ｅｑ）を加え、２０℃にゆっくりと昇温させ、０．５時間反応させた。反応終了後、反応液を水（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮して乾固させた。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００１－７を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）： δ（ｐｐｍ）７．３０－７．３９（ｍ，３Ｈ），７．２３－７．２９（ｍ，１Ｈ），４．６２－４．７９（ｍ，２Ｈ），４．０２－４．１１（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７２－３．８２（ｍ，２Ｈ），２．３０－２．３８（ｍ，２Ｈ）．

工程５：ＷＸ００１－８の合成
フラスコに、ＷＸ００１－７（１００ｍｇ，２５０．１９μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１（１２７．７６ｍｇ，２７５．２１μｍｏｌ，１．１ｅｑ）およびトルエン（２ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５７．８２ｍｇ，５０．０４μｍｏｌ，０．２ｅｑ）を加え、１２５℃で混合液を１４時間反応させた。反応終了後、反応液そのまま回転蒸発乾固させた。粗生成物を薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００１－８を得た。

工程６：ＷＸ００１ＡまたはＷＸ００１Ｂ
ＷＸ００１－８を、超臨界流体クロマトグラフィー（分離条件：クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＪ（２５０＊３０ｍｍｉ．ｄ．１０μｍ）；移動相：ＡはＣＯ_２、Ｂはエタノール（０．１％ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ）、Ｂ％＝５０％；流速：７０ｍＬ／ｍｉｎ）によってキラル分離して、ＷＸ００１ＡまたはＷＸ００１Ｂを得た。ＷＸ００１Ａの保持時間は１．７８２分であり、ＷＸ００１Ｂの保持時間は１．９６９分である。

実施例２

合成経路

工程１：ＷＸ００２－２の合成
窒素ガス保護下、フラスコにＷＸ００１－１（５ｇ，２４．０３ｍｍｏｌ，１ｅｑ）のテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）を加え、－７８℃でリチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ，２８．８４ｍＬ，２．４ｅｑ）、テトラメチルエチレンジアミン（４．１９ｇ，３６．０５ｍｍｏｌ，５．４４ｍＬ，１．５ｅｑ）をゆっくりと加え、－７８℃で０．５時間反応させた後、ＷＸ００２－１（４．８１ｇ，４８．０７ｍｍｏｌ，４．４２ｍＬ，２ｅｑ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液をさらに加え、－７８℃で２時間反応させた。反応終了後、０℃で反応液を１００ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液にゆっくりと注ぎ、塩酸（２Ｍ）でｐＨを３－４程度に調整し、酢酸エチル（２００ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２００ｍＬ＊３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮し、ＷＸ００２－２を得た。

工程２：ＷＸ００２－３の合成
フラスコに、ＷＸ００２－２（１ｇ，３．２５ｍｍｏｌ，１ｅｑ）およびアセトニトリル（２０ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル（５５２．７０ｍｇ，３．８９ｍｍｏｌ，４８０．６１μＬ，１．２ｅｑ）を加え、６０℃で混合液を１６時間反応させた。反応終了後、反応液に、飽和炭酸水素ナトリウム（２０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（３０ｍＬ＊３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物を酢酸エチル（１０ｍＬ）でスラリー化させ、ＷＸ００２－３を得た。

工程３：ＷＸ００２－４の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００２－３（２６０ｍｇ，７８５．０６μｍｏｌ，１ｅｑ）、塩酸（２Ｍ，４ｍＬ，１０．１９ｅｑ）およびエタノール（６ｍＬ）を加え、５０℃で１６時間反応させた。７０℃に昇温し、４時間反応させた。反応終了後、反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（５０ｍＬ＊３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物を酢酸エチル（１０ｍＬ）でスラリー化させ、ＷＸ００２－４を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）９．３２（ｓ，１Ｈ），３．７３－３．７９（ｍ，２Ｈ），３．５６－３．６３（ｍ，２Ｈ），２．２７－２．３４（ｍ，１Ｈ），１．８６－１．９１（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．８２（ｍ，１Ｈ）

工程４：ＷＸ００２－５の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００２－４（５０ｍｇ，１７２．９２μｍｏｌ，１ｅｑ）およびＮ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、０℃で水素化ナトリウム（１０．３７ｍｇ，２５９．３８μｍｏｌ，純度６０％，１．５ｅｑ）を加え、０℃で０．５時間反応させた後、ＷＸ００１－６（３５．５３ｍｇ，１７２．９２μｍｏｌ，２２．６３μＬ，１ｅｑ）をさらに加え、反応液を２５℃にゆっくりと昇温させ、さらに１．５時間反応させた。反応終了後、反応液を３０ｍＬの水に注ぎ、酢酸エチル（５０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（５０ｍＬ＊３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００２－５を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）７．４２（ｓ，１Ｈ），７．２９－７．３８（ｍ，３Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），４．０３（ｂｒｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．１Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｂｒｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１７－２．２５（ｍ，４．８Ｈｚ，２Ｈ），１．３８（ｂｒｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２Ｈ）。

工程５：ＷＸ００２の合成
フラスコに、ＷＸ００２－５（５０ｍｇ，１２０．８６μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１（６５．６６ｍｇ，１２０．８６μｍｏｌ，１ｅｑ）、トルエン（１ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、１２５℃に加熱した後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２７．９３ｍｇ，２４．１７μｍｏｌ，０．２ｅｑ）をゆっくりと加えた。１２５℃で４８時間反応させた。反応終了後、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で反応液を濃縮した。粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅＢＥＨＣ１８１００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム）－アセトニトリル］；アセトニトリル：２８％－５８％，８ｍｉｎ）により精製して、ＷＸ００２を得た。

実施例３

合成経路

工程１：ＷＸ００３－１の合成
予備乾燥したフラスコに、ＷＸ００２－５（１００ｍｇ，２４１．７１μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１－２（１０８．１０ｍｇ，２４１．７１μｍｏｌ，１ｅｑ）およびトルエン（２ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換え、１２５℃でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５５．８６ｍｇ，４８．３４μｍｏｌ，０．２ｅｑ）を加え、撹拌しながら４８時間反応させた。反応終了後、水ポンプを利用して、４５℃、減圧下で反応液を濃縮した。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００３－１を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）９．２９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３１－７．３９（ｍ，３Ｈ），４．８３（ｓ，２Ｈ），４．０７（ｍ，Ｊ＝１２．３，４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｍ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），２．２４－２．３１（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｍ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，２Ｈ）

工程２：ＷＸ００３の合成
予備乾燥したフラスコに、ＷＸ００３－１（５０ｍｇ，１０１．８４μｍｏｌ，１ｅｑ）、テトラヒドロピラン－４－アミン（１０．３０ｍｇ，１０１．８４μｍｏｌ，１ｅｑ）およびジメチルスルホキシド（１ｍＬ）を加え、１００℃で撹拌し１６時間反応させた。反応終了後、反応液を高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅＢＥＨＣ１８１００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム）－アセトニトリル］；アセトニトリル：３２％－６２％，８ｍｉｎ）により精製して、ＷＸ００３を得た。

実施例４

合成経路

工程１：ＷＸ００４－１の合成
フラスコに、ＷＸ００１－１（１０ｇ，４８．０７ｍｍｏｌ，１ｅｑ）およびテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、窒素ガス保護下、ボラン－テトラヒドロフラン錯体の溶液（１Ｍ，１４４．２１ｍＬ，３ｅｑ）をゆっくりと滴下し、２５℃で５時間反応させた。反応終了後、窒素ガス下で反応液にメタノール（１００ｍＬ）をゆっくりと滴下し、２５℃で１６時間撹拌した後、４０℃で回転蒸発乾固させて、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００４－１を得た。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）７．４７（ｓ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，２Ｈ）．

工程２：ＷＸ００４－３の合成
フラスコに、ＷＸ００４－１（７．８６ｇ，４０．５１ｍｍｏｌ，１ｅｑ）およびテトラヒドロフラン（７８．６ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換え、－７８℃に冷却し、リチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ，４８．６１ｍＬ，２．４ｅｑ）をゆっくりと加え、次に、テトラメチルエチレンジアミン（７．０６ｇ，６０．７６ｍｍｏｌ，９．１７ｍＬ，１．５ｅｑ）を加え、－７８℃で０．５時間反応させた。ＷＸ００４－２（１０．６５ｇ，６０．７６ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）の混合溶液を添加し、－７８℃で１時間反応させた。反応終了後、反応液を飽和塩化アンモニウム（１００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（５０ｍＬ＊３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を４５℃で回転蒸発乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００４－３を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）６．３９（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８４－５．０３（ｍ，４Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．１２（ｓ，９Ｈ）．

工程３：ＷＸ００４－４の合成
フラスコに、テトラヒドロフラン（５６ｍＬ）、ＷＸ００４－３（５．６ｇ，１１．０７ｍｍｏｌ，純度７３％，１ｅｑ）およびトリブチルホスフィン（４．４８ｇ，２２．１４ｍｍｏｌ，５．４６ｍＬ，２ｅｑ）を加え、完全に溶解させた後、雰囲気を窒素ガスに置き換え、０℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（４．４８ｇ，２２．１４ｍｍｏｌ，４．３０ｍＬ，２ｅｑ）をゆっくりと加え、徐々に２０℃に昇温し、２時間反応させた。反応終了後、反応液に水（６０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を４５℃で回転蒸発乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００４－４を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）５．３０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７５－４．８７（ｍ，３Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），１．２７（ｓ，９Ｈ）．

工程４：ＷＸ００４－５の合成
フラスコに、ＷＸ００４－４（５００ｍｇ，１．４２ｍｍｏｌ，１ｅｑ）、テトラヒドロフラン（８．３ｍＬ）、水（１．６ｍＬ）およびヨウ素（７２．２５ｍｇ，２８４．６７ｕｍｏｌ，５７．３４ｕＬ，０．２ｅｑ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換え、３０℃で１６時間反応させた。反応終了後、ＷＸ００４－５を得た。反応液をそのまま次の工程に使用した。

工程５：ＷＸ００４－６の合成
工程４で得られたＷＸ００４－５の反応液に、テトラヒドロフラン（８．３ｍＬ）、水（１．６ｍＬ）、炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４６５．００ｍｇ，２．１３ｍｍｏｌ，４８９．４７μＬ，１．５ｅｑ）および炭酸ナトリウム（３０１．１０ｍｇ，２．８４ｍｍｏｌ，２ｅｑ）を順次加え、２５℃で４時間反応させた。反応終了後、反応液を水（１０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を４５℃で回転蒸発乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００４－６を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）５．４６（ｂｒｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｂｒｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｂｒｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｂｒｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｂｒｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４７－１．５７（ｍ，９Ｈ）．

工程６：ＷＸ００４－７の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００４－６（１５０ｍｇ，４３１．９９μｍｏｌ，１ｅｑ）、三酸化クロム（８６．３９ｍｇ，８６３．９９μｍｏｌ，３２．００μＬ，２ｅｑ）、酢酸（３ｍＬ）を加え、２５℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液を水（３ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（５ｍＬ）で３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（５ｍＬ）で有機相を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００４－７を得た。

工程７：ＷＸ００４－８の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００４－７（７０ｍｇ，１９３．７９μｍｏｌ，１ｅｑ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）、トリフルオロ酢酸（２８７．４７ｍｇ，２．５２ｍｍｏｌ，１８６．６７μＬ，１３．０１ｅｑ）を加え、２５℃で１時間反応させた。反応終了後、反応液をそのまま濃縮し、粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００４－８を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）９．５９（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．８９（ｓ，４Ｈ）．

工程８：ＷＸ００４－１０の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００４－８（４５ｍｇ，１７２．３５μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ｎ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）、炭酸セシウム（８４．２３ｍｇ，２５８．５３μｍｏｌ，１．５ｅｑ）、ＷＸ００４－９（３９．０９ｍｇ，２０６．８２μｍｏｌ，２５．３９μＬ，１．２ｅｑ）を加えた。雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、２５℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液を水（２ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（２ｍＬ）で３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で有機相を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して減圧下で濾液を濃縮し、粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００４－１０を得た。

工程９：ＷＸ００４－１０の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００４－１０（４５ｍｇ，１２１．８８μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１（６２．２４ｍｇ，１３４．０７μｍｏｌ，１．１ｅｑ）、トルエン（１ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２８．１７ｍｇ，２４．３８μｍｏｌ，０．２ｅｑ）を加え、１２５℃に加熱し、１６時間反応させた。反応終了後、反応液をそのまま濃縮し、粗生成物を薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートにより精製し、さらに、高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅＢＥＨＣ１８１００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動相：［Ｈ_２Ｏ（１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％－４５％，８ｍｉｎ）により精製して、ＷＸ００４を得た。

実施例５

合成経路

工程１：ＷＸ００５－１の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００４－８（３００ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ，１ｅｑ）、Ｎ’Ｎ－ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）、炭酸セシウム（５６１．５５ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）、ＷＸ００１－６（２８３．３２ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ，１８０．４６μＬ，１．２ｅｑ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、２５℃で１６時間反応させた。反応終了後、反応液を水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ＊５）で有機相を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００５－１を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）７．４２（ｓ，１Ｈ），７．３２－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．２６－７．３２（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），４．７９－４．８９（ｍ，４Ｈ）

工程２：ＷＸ００５の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００５－１（３０ｍｇ，７７．７９μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１（３９．７２ｍｇ，８５．５７μｍｏｌ，１．１ｅｑ）、トルエン（１ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１７．９８ｍｇ，１５．５６μｍｏｌ，０．２ｅｑ）を加え、１２５℃に加熱し、１６時間反応させた。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（８．９９ｍｇ，７．７８μｍｏｌ，０．１ｅｑ）を追加し、１２５℃で３時間反応させた。反応終了後、反応液をそのまま濃縮した。粗生成物を薄層クロマトグラフィー用シリカゲルプレートにより精製し、さらに、高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅＢＥＨＣ１８１００＊３０ｍｍ＊１０ｕｍ；移動相：［水（１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％－５５％，８ｍｉｎ）により精製し、ＷＸ００５を得た。

実施例６

合成経路

工程１：ＷＸ００６－２の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００４－１０（１０５ｍｇ，２８４．３９μｍｏｌ，１ｅｑ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、塩化亜鉛（０．７Ｍ，４０６．２７μＬ，１ｅｑ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、－３０℃でｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ，１７０．６４μＬ，１．５ｅｑ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。次に、反応温度を－３０℃に冷却し、Ｂ－１（７５．６８ｍｇ，２８４．３９μｍｏｌ，１ｅｑ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１６．４３ｍｇ，１４．２２μｍｏｌ，０．０５ｅｑ）のテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）溶液を加え、温度を６０℃に昇温し、さらに１６時間反応させた。反応終了後、反応液に、２ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液を添加し、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で有機相を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物を、２ｍＬのｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルでスラリー化し、純化してＷＸ００６－２を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）８．７７（ｓ，１Ｈ），７．３７－７．４２（ｍ，１Ｈ），７．２０（ｂｒｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，３Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ）。

工程２：ＷＸ００６－３の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００６－２（２０ｍｇ，４６．６７μｍｏｌ，１ｅｑ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、０℃でｍ－クロロ過安息香酸（３０．２０ｍｇ，１４０．０２μｍｏｌ，８０％純度、３ｅｑ）を加え、、温度を２５℃にゆっくりと昇温し、３時間反応させた。反応終了後、反応液に、デンプンヨウ化カリウム試験紙が青色を示さなくなるように、飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を添加し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、有機相を分液し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム１０ｍＬ、飽和食塩水１０ｍＬでそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を回転蒸発乾固させた。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００６－３を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）９．２０（ｓ，１Ｈ），７．３７－７．４５（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０９－７．１５（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｓ，２Ｈ），４．９３－４．９６（ｍ，２Ｈ），４．８９－４．９１（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｓ，３Ｈ）．

工程３：ＷＸ００６の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００６－３（２８ｍｇ，６０．８０μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１－３（１１．８１ｍｇ，１２１．６１μｍｏｌ，２ｅｑ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、－３０℃でリチウムヘキサメチルジシラジド（１Ｍ，１２７．６９μＬ，２．１ｅｑ）を加え、２５℃で１時間反応させた。反応終了後、反応液に、１ｍＬの水を添加し、系内の有機溶媒を回転蒸発させ、固体を沈殿させ、濾過し、固体をを収集して粗生成物を得た。粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅＢＥＨＣ１８１００＊２５ｍｍ＊５μｍ；移動相：［Ｈ_２Ｏ（１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：２５％－６０％，１０ｍｉｎ）により精製して、ＷＸ００６を得た。

実施例７

合成経路

工程１：ＷＸ００７－１の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００５－１（１００ｍｇ，２５９．２９μｍｏｌ，１ｅｑ）、塩化亜鉛（０．７Ｍ，３７０．４２μＬ，１ｅｑ）、テトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、－３０℃に冷却し、ｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ，１５５．５８μＬ，１．５ｅｑ）を加え、２０℃で１時間反応させた。次に、－３０℃に冷却し、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１４．９８ｍｇ，１２．９６μｍｏｌ，０．０５ｅｑ）、Ｂ－１（６９．００ｍｇ，２５９．２９μｍｏｌ，１ｅｑ）のテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、６０℃で１５時間反応させた。反応終了後、反応液を５ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（１０ｍＬ）で有機相を洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、水ポンプを利用して減圧下で濾液を濃縮した。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００７－１を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）８．７８（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３０－７．４２（ｍ，３Ｈ），５．０３（ｓ，２Ｈ），４．９１－４．９６（ｍ，２Ｈ），４．８３－４．８９（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．７１（ｍ，６Ｈ）。

工程２：ＷＸ００７－２の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００７－１（４０ｍｇ，８９．９０μｍｏｌ，１ｅｑ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、０℃でｍ－クロロ過安息香酸（５８．１８ｍｇ，２６９．６９μｍｏｌ，純度８０％，３ｅｑ）を加え、２５℃にゆっくりと昇温し、３時間反応させた。反応終了後、反応液に、デンプンＫＩ試験紙が青色を示さなくなるまで飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を添加し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、有機相を分液し、有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム１０ｍＬ、飽和食塩水１０ｍＬでそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を回転蒸発乾固させた。粗生成物を薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートにより精製して、ＷＸ００７－２を得た。

工程３：ＷＸ００７の合成
乾燥したフラスコに、ＷＸ００７－２（３５ｍｇ，７３．３８μｍｏｌ，１ｅｑ）、Ａ－１－３（１４．９７ｍｇ，１５４．１０μｍｏｌ，２．１ｅｑ）、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）を加え、雰囲気を窒素ガスに置き換えた後、反応を０℃に冷却し、リチウムヘキサメチルジシラジド（１Ｍ，１４６．７６μＬ，２ｅｑ）を滴下し、０℃で０．５時間反応させ、２５℃で１時間反応させた。反応終了後、１０ｍＬの水でクエンチし、２０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、分液し、有機相を収集し、水相をジクロロメタン（３＊２０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、順次、飽和食塩水（３＊２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、残留物を得た。粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーカラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉ－ＮＸＣ１８７５＊３０ｍｍ＊３μｍ；移動相：［Ｈ_２Ｏ（１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：３５％－５５％，８ｍｉｎ）により精製して、ＷＸ００７を得た。

各実施例の１ＨＮＭＲスペクトルおよび質量スペクトルのデータを表１に示す。

実験例１．インビトロキナーゼ活性アッセイ：
１．実験目的：
化合物のＥＲＫ２キナーゼ活性に対する阻害能力を測定した。

２．実験緩衝液：
２０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのエチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸（ＥＧＴＡ）、０．０２％のＢｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．１ｍＭのＮａ_３ＶＯ_４、２ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）、１％のＤＭＳＯ。

３．化合物処理：
試験化合物を１００％のＤＭＳＯに溶解して、特定の濃度のストック溶液を調製した。ＩｎｔｅｇｒａＶｉａｆｌｏＡｓｓｉｓｔスマートピペットを使用して、化合物をＤＭＳＯ溶液で段階希釈した。

３．実験方法
１）新たに調製された反応緩衝液で基質ＭＢＰを調製した。
２）ＥＲＫ２キナーゼを上記のＭＢＰ溶液に加え、穏やかに混合した。
３）超音波技術（Ｅｃｈｏ５５０；ナノリットル範囲）を利用して、１００％のＤＭＳＯに溶解した化合物をキナーゼ反応系に加え、室温で２０分間インキュベートした。
４） ^３３Ｐ－ＡＴＰ（特定の濃度１０μＣｉ／μＬ）を反応系に加え、この時点で反応を開始させた。
５）室温で２時間インキュベートした。
６）フィルター結合法により、放射線量を測定した。
７）対照群（ジメチルスルホキシド処理）のキナーゼ活性に対する試験サンプル中の残りのキナーゼ活性の比として、ＥＲＫ２キナーゼ活性を算出した。Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を使用して曲線をフィッティングし、ＩＣ_５０値を算出した。

５．実験の結果を表２に示す。

結論：本発明の化合物は、より優れたＥＲＫ２キナーゼに対する阻害活性を示す。

実験例２．インビトロ細胞増殖阻害アッセイ：
１．実験目的：
化合物のＨＴ２９腫瘍細胞の増殖に対する阻害能力を測定した。

２．化合物処理：
試験化合物を１００％のＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭのストック溶液を調製した。

３．実験の手順および方法：
１）生物学的安全キャビンのＵＶ光がオンにして、３０分間カウントダウンした。
２）３７℃の水浴でＲＰＭＩ１６４０培地およびトリプシンを予熱した。
３）ＵＶ照射終了後、生物学的安全キャビンを開け、予熱した培地、トリプシン、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）などをアルコールで拭き取り、生物学的安全キャビンに入れた。
４）ＨＴ２９細胞をインキュベーターから取り出し、生物学的安全キャビンで古い培地を除去し、１０ｍｌのＰＢＳを加え、穏やかに振とうし、ＰＢＳを除去した。
５）予熱した０．２５％トリプシン１．５ｍｌを加え、トリプシンが底部の細胞を均一に覆ったように培養フラスコを水平に振とうし、インキュベーターに２分間放置した。
６）完全培地で細胞の消化を停止し、細胞懸濁液をピペットで均一にし、カウントした。
７）細胞計数の結果に従って、細胞懸濁液の密度をウェルあたり１５００細胞に調整し、細胞懸濁液をウェルあたり５０μｌで播種した。
８）化合物のストック溶液をＤＭＳＯ溶液で段階希釈し、Ｔｅｃａｎを使用して化合物を細胞プレートに加えた。
９）化合物を添加した細胞プレートおよびＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを室温で平衡化した後、２５マイクロリットルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを各ウェルに添加し、１～２分間振とうし、１０分間静置した。次に、信号値を検出し、ＸＬ－Ｆｉｔを使用してデータを分析し、各化合物のＩＣ_５０を算出した。

４．実験の結果を表３に示す。

結論：本発明の化合物は、より優れたＨＴ２９細胞の増殖に対する阻害活性を示す。

実験例３．インビボＤＭＰＫ研究：
マウスにおけるインビボＤＭＰＫ研究
１．実験目的：
雄のＢＡＬＢ／ｃマウスを試験動物として使用して、単回投与後、化合物の血中濃度を測定して、薬物動態学的挙動を評価した。

２．実験手順：
健康な成体雄ＢＡＬＢ／ｃマウスを８匹選択し、静脈内投与群に４匹、経口投与群に４匹をそれぞれ割り付けした。試験化合物を、適切な量の静脈内投与群用溶媒（５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ））と混合し、ボルテックスし、超音波処理して、０．５ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。この透明な溶液をミクロポーラス膜で濾過した。試験化合物を、経口投与群用溶媒（５％ＤＭＳＯ＋９５％（２０％ＨＰ－β－ＣＤ））と混合し、ボルテックスし、超音波処理して、０．３ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。マウスに、１ｍｇ／ｋｇで静脈内投与または３ｍｇ／ｋｇで経口投与した後、一定期間の全血を採取し、血漿を準備した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法で薬物濃度を分析し、ＰｈｏｅｎｉｘＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、ＵＳＡ）で薬物動態パラメーターを算出した。
注ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＨＰ－β－ＣＤ：ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン。

３．実験の結果を表４に示す。

注：Ｃ_ｍａｘは最大濃度であり；Ｆ％は経口バイオアベイラビリティであり；ＤＮＡＵＣ＝ＡＵＣ_ＰＯ／Ｄｏｓｅ、ＡＵＣ_ＰＯは経口曝露量であり、Ｄｏｓｅは薬物用量であり；Ｖｄ_ｓｓは分布容積であり；Ｃｌはクリアランスであり；Ｔ_１／２は半減期であることを意味する。

結論：本発明の化合物は、優れた経口曝露量およびバイオアベイラビリティを示す。

実験例４．ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒト結腸癌ＨＣＴ１１６細胞の皮下異種移植腫瘍モデルにおけるインビボ有効性研究：
１．実験目的：
ヌードマウスにおけるヒト結腸癌ＨＣＴ－１１６細胞の皮下異種移植腫瘍モデルを使用して、ＷＸ００７の抗腫瘍効果を評価した。

２．実験動物：
種：マウス
系統：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス
週齢：６～８週齢
性別：雌
体重：１７～２３グラム
供給者：ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＭａｎａｇｅｍｅｎｔＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＢｉｏｍｅｄｉｃａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社
動物証明書番号：２０１８０００６０２０２１４

３．実験手順：
１）実験細胞および培養：ヒト結腸癌ＨＣＴ－１１６細胞を、インビトロ、単層で培養した。培養の条件は、１０％ウシ胎児血清を加えたＭｃＣｏｙ’ｓ５ａ培地、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターであった。トリプシン－エチレンジアミン四酢酸による通常の消化処理を週に３回実施し、継代を行った。細胞の飽和度が８０％～９０％になり、数が要求に満たした際に、細胞を収集し、カウントし、播種した。

２）腫瘍組織の接種および群分け：０．２ｍＬ（５×１０^６個）のＨＣＴ－１１６細胞を、各マウスの右脇の下に皮下接種した。腫瘍の平均体積が１４９ｍｍ^３に達した際に、動物をランダムで２群に分け、投与を開始した。実験の群分けおよび投与レジメンを表５に示す。

３）実験動物の毎日の観察：本実験のプロトコル方案の設計および変更は、実験動物管理と使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験動物の使用と福祉は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規則に従って実施された。動物の健康状態および死亡を毎日モニターした。定期検査には、例えば、腫瘍の成長の観察、および行動活動、餌と水の摂取量（目視検査のみ）、体重の変化（週に２回の体重測定）、外観の兆候またはその他の異常状況などの動物の日常の行動に対する薬物治療の影響が含まれた。各群の動物数に基づいて各群における動物の死亡数と副作用を記録した。

４）試験化合物の調製
ａ）溶媒群：コーン油。
ｂ）試験化合物群：定量の試験化合物を瓶に秤量し、対応する体積のコーン油を添加した後、ボルテックスして透明な溶液を得た。化合物は週に一回調製された。

５）腫瘍の測定および実験の指標：
ａ）ノギスを用いて腫瘍直径を週に２回測定した。腫瘍体積の計算式は、ＴＶ＝１／２×ａ×ｂ^２であり、ここで、ａおよびｂは、それぞれ腫瘍の腫瘍の長径および短径を表す。
ｂ）化合物の腫瘍阻害効果は、ＴＧＩ（％）によって評価された。ＴＧＩ（％）は、腫瘍増殖の阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）は次のように計算された。ＴＧＩ（％）＝｛［１－（ある処理群における投与終了時の平均腫瘍体積－この処理群における投与開始時の平均腫瘍体積）］／（溶媒対照群における治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群における治療開始時の平均腫瘍体積）｝×１００％。

４．実験結果：
１）表６および図１に示されるように、ヌードマウスにおけるヒト結腸癌ＨＣＴ－１１６細胞の皮下異種移植腫瘍モデルにおいて、１８日目まで経口投与された場合、１５ｍｇ／ｋｇのＷＸ００７の投与群は、腫瘍増殖に対する明らかな抑制効果を示し、ＴＧＩが６２％である。
２）実験動物の体重を、薬物の毒性を間接的に測定する参照指標として使用した。図２に示されるように、１８日目まで投与された場合、溶媒対照群および１５ｍｇ／ｋｇのＷＸ００７の投与群のすべての動物は、体重が有意に減少せず、発症や死亡が認められなかった。

結論：本発明の化合物は、腫瘍の成長を明らかに阻害することができる。また、投与中、動物の体重の大幅な減少は見られず、忍容性は良好である。

工程３：ＷＸ００９－５の合成
工程５：ＷＸ００４－６の合成
工程４で得られたＷＸ００４－５の反応液に、テトラヒドロフラン（８．３ｍＬ）、水（１．６ｍＬ）、ジ炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４６５．００ｍｇ，２．１３ｍｍｏｌ，４８９．４７μＬ，１．５ｅｑ）および炭酸ナトリウム（３０１．１０ｍｇ，２．８４ｍｍｏｌ，２ｅｑ）を順次に加え、２５℃で４時間反応させた。反応終了後、反応液を水（１０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を４５℃で回転蒸発乾固させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＷＸ００４－６を得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）： δ（ｐｐｍ）５．４６（ｂｒｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｂｒｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｂｒｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｂｒｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｂｒｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４７－１．５７（ｍ，９Ｈ）．

Claims

式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、

ただし、
ｎは０または１であり；
ｍは１または２であり；
環Ａは、

であり；
Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３は、それぞれ独立してＮおよびＣＨから選択され；
Ｅ_１は、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｒ_１は、ＨおよびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく；
Ｒ_２とＲ_３は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ｂで置換されていてもよく；
Ｒ_４は、Ｈから選択され；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣ_１－３アルキルから選択され、ここで、前記のＣ_１－３アルキルは、１個、２個または３個のＲ_ｃで置換されていてもよく；
Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮおよびＮＨ_２から選択される、
式（ＩＩＩ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ_１が、ＨおよびＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３は、１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ_１がＣＨ_３である、
請求項２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ_２とＲ_３が、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２およびＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３が、１個、２個または３個のＲ_ｂで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ_２とＲ_３が、それぞれ独立してＨおよびＣＨ_３から選択される、
請求項４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９が、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ_２、ＣＨ_３および－ＣＨ_２－ＣＨ_３から選択され、ここで、前記のＣＨ_３および－ＣＨ_２－ＣＨ_３が、１個、２個または３個のＲ_ｃで置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９が、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮおよびＮＨ_２から選択される、
請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
構造単位

が、

である、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
環Ａが、

である、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記の化合物が、

から選択され、
ここで、
ｍ、ｎ、Ｅ_１、Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３が、請求項１に定義した通りであり；
Ｒ_１が、請求項１～３のいずれか１項に定義した通りであり；
Ｒ_２とＲ_３が、請求項１、４または５のいずれか１項に定義した通りであり；
Ｒ_４が、請求項１に定義した通りであり；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９が、請求項１、６または７のいずれか１項に定義した通りである、
請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記の化合物が、

から選択され、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｅ_１、Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３が、請求項１０に定義した通りである、
請求項１０に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記の化合物が、

から選択され、
ここで、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｔ_１、Ｔ_２およびＴ_３が、請求項１０に定義した通りである、
請求項１０に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記の化合物が、

から選択され、
ここで、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９が、請求項１０に定義した通りである、
請求項１２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
からなる群から選択される、
化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記の化合物が、

から選択される、
請求項１４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
ＥＲＫに関する疾患の治療のための医薬品の調製における、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。