JP2023175708A

JP2023175708A - ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種法

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Publication number: JP2023175708A
Application number: JP2023136194A
Authority: JP
Inventors: ゲルガナ・ガラボワ; Galabova Gergana; ザビーネ・シュミットフーバー; Schmidhuber Sabine; アヒム・シュネーベルガー; Schneeberger Achim; アルネ・フォン・ボニン; Von Bonin Arne; ドリアン・ヴィンター; Winter Dorian; ヤーナ・ツィマーマン; Zimmermann Jana
Original assignee: AC Immune SA
Current assignee: AC Immune SA
Priority date: 2015-11-03
Filing date: 2023-08-24
Publication date: 2023-12-12
Also published as: BR112018008697A2; AU2016348610A1; RU2018120009A; JP2018532782A; WO2017076873A1; RU2734924C2; CA3003943A1; RU2018120009A3; EP3370761A1; KR20180079406A; CN108472344A; US20190091306A1; AU2016348610B2; JP7378931B2

Abstract

【課題】ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種方法を提供する。【解決手段】有効量の自己抗原を含む投与量を患者に投与して一次免疫応答を誘導し、該患者が前述の自己抗原のブースト投与を受けることを特徴とし、ここで、該ブースト投与のための投与量中の該自己抗原の量は、一次免疫応答のための投与において使用される投与量中の自己抗原の量よりも高い方法とする。【選択図】なし

Description

本発明は、ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種法およびかかるワクチン接種に適したワクチン処方のセットに関する。

自己タンパク質抗原を用いた能動免疫化は、Ｔ細胞およびＢ細胞の両方が関与する免疫応答を生み出すことからなり、これは、抗原特異的Ｂ細胞が増殖し、抗体分泌性プラズマ細胞および記憶Ｂ細胞へと分化する、特異的構造（胚中心、ＧＣ）による非常に効率的なＢ細胞分化経路の誘導をもたらす。自己免疫は、自己タンパク質に対するワクチンの主要な副作用である（例えば、非特許文献１）という事実から考えると、成功の可能性を秘めたワクチンは、一連の基準を満たさなければならない。

第一に、その抗原性の構成要素は、Ｔ細胞を活性化してはならないが、Ｂ細胞抗原として働かなければならない。故に、Ａｇは、抗原提示細胞によってそのＭＨＣ分子上で提示されなければならない。それらに結合することは、該ペプチドＡｇが、（ｉ）ある特定の長さ（ＭＨＣクラスＩの場合、８－９ａａ（アミノ酸残基））を有すること、および（ｉｉ）いわゆるアンカーポジションの所定のアミノ酸残基を提示することを必要とする（非特許文献２）。一般的に、抗原エピトープは、Ｔ細胞の活性化を防ぐ程度に短い必要があるが、抗体エピトープとして働く程度に長い必要がある。しかし、ＩｇＧ型のＡｂ応答の発生は、ヘルパーＴ（ＴＨ）細胞にも依存する。故に、該ワクチンは、ヘルパーＴ（ＴＨ）細胞を活性化することができるエピトープを含有する必要がある。細胞性自己免疫をもたらす可能性があるので、これらは、目的のＡｇに関連してはならない。理想的には、それらは、強力なＴＨエピトープでなければならず、ヒトにおいて見られる分子／構造と交差応答するＡｂを活性化できないことが知られている必要がある。この点において、種々のタンパク質担体が、臨床的にだけでなく臨床前にもＴ細胞ヘルプの強力なアクチベーターであるということが示されてきた。キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）は、よく記載される「ヒトの免疫系に無関係である」タンパク質であり、特異的抗原性エピトープ、例えば抗原ペプチド配列と物理的に結合すると強力なＡｂ応答を生み出す。

自己タンパク質を標的としているワクチンのＡｂ応答を調整することは、真の課題である。関連する構造を攻撃することなく所望の構造を捕捉する必要がある。これは、同時に２つの基準を満たす必要がある。１つ目は、上昇したＡｂが所定の標的に結合する必要があり、これはワクチンの意図された活性に不可欠である。しかしながら、２つ目は、それらが、関連または相同の構造に結合してはならず、これは不可欠な安全機能である。

パーキンソン病（ＰＤ）は、２番目に多い神経変性疾患である。それは、複雑な全身性の疾患であり、広範囲の消耗性の運動性および非運動性症状を引き起こす。典型的に、ＰＤの主兆候は確定しておらず、非運動性症状は、神経精神病学的疾患（鬱病、レム睡眠障害など）、胃腸障害（便秘など）、および自立神経障害を包含している。ＰＤの基本的な運動性症状は、休止時振戦、動作緩慢、固縮、および姿勢不安定を包含し、その非運動性症状の発症の１０年後までに発症し得る。ＰＤは、目下、世界中で約５００万人の人々に影響を与え、その罹患率は世界的な人口の高齢化に伴い増加している。

かなりの出資にも関わらず、目下、疾患修飾特性を有する入手可能な薬剤は無い。ＰＤの処置は、主にドーパミン作動性の戦略（レボドパまたはドーパミンアゴニスト、ＣＯＭＴ阻害剤およびＭＡＯ－Ｂ阻害剤）、抗コリン薬、または脳深部刺激療法の使用によって運動性症状に対処するが、それらは対症的な効果があるのみで、かつ、副作用が多い。可能性のある疾患修飾剤を用いた２０を超える臨床試験が実施された、または目下進行中である。しかし、臨床的エンドポイントに到達したものはない（非特許文献３）。結果として、新規な疾患改変処置法の開発に対する緊急の要望がある。

ＰＤにおいて神経変性を引き起こす過程において、アルファ－シヌクレイン（ａＳｙｎ）オリゴマーの因果的役割を示す証拠が増加している。レビー小体またはレビー神経突起は、ＰＤの病理組織学的な特徴的なマーカーである。それらは、主にニューロンで見られ、主にミスフォールドした繊維状のａＳｙｎで構成される。生理的条件下で、ａＳｙｎは、核およびシナプス前終末において豊富な、細胞質性の細胞内のフォールディングしていないタンパク質として存在し、ａＳｙｎは、生理学的にシナプス可塑性と関連するかもしれないことが示唆されてきた。ＰＤにおいて、おそらくａＳｙｎのオリゴマーを含んでいるであろう病理学的凝集型のａＳｙｎは、細胞から細胞へプリオン様に伝播することによって、該疾患だけでなく、レビー小体病変をも増殖させるようである。さらに、動物モデルにおけるいくつかの一連の証拠は、オリゴマーａＳｙｎの蓄積量を減らすことが疾患修飾性効果をもたらし得るという理論を支持する（非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、および非特許文献７）。故に、ａＳｙｎ凝集体を減らす処置は、疾患の進行を妨げる可能性を有すると認識されている（非特許文献８、非特許文献９）。この１０年間において、ａＳｙｎ凝集体を除去するための免疫療法的アプローチの開発に向けて、著しく前進した。ａＳｙｎに対する免疫付与戦略は、動物モデルにおいて、ａＳｙｎ凝集体の分解を促進すること（非特許文献１０）、細胞間伝播を防ぐこと（非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）、および運動障害を減らすこと（非特許文献１４）がすでに示されてきた。まとめると、これらの研究は、ａＳｙｎに対する免疫付与がヒトにおいて疾患改変特性を有する可能性があるという証拠を提供する。

ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａは、ＰＤのようなシヌクレイノパチーの処置のために開発された（参照：非特許文献１５）。ＰＤ０１Ａは、ペプチド－ＫＬＨ複合体であり、該ペプチド部分がヒトａＳｙｎのカルボキシル末端領域を模倣する（特許文献１）。それは、β－シヌクレイン（ｂＳｙｎ）を包含する密接に関連したタンパク質ファミリーメンバーを回避しながら、ａＳｙｎを標的とし、神経防護特性を有し得る（非特許文献１６）。ＰＤにおいて神経変性を引き起こす過程において、アルファ－シヌクレイン（ａＳｙｎ）オリゴマーの因果的役割を示す証拠が増加している。レビー小体またはレビー神経突起は、ＰＤの病理組織学的な特徴的なマーカーである。それらは、主にニューロンで見られ、主にミスフォールドした繊維状のａＳｙｎで構成される。さらに、動物モデルにおけるいくつかの一連の証拠は、オリゴマーａＳｙｎの蓄積量を減らすことが疾患修飾性効果を有し得るという理論を支持する。故に、ａＳｙｎ凝集体を減らす処置は、疾患の進行を妨げる可能性を有し得る。

近年、ＰＤ０１Ａを用いたワクチン接種が、ＰＤおよびＭＳＡ（多系統萎縮症）をカバーしているシヌクレイノパチーの２匹のモデルマウスにおいて、ａＳｙｎのオリゴマーの減少した蓄積をもたらし、記憶および運動障害を改善したことが示された（非特許文献１７）。かなりの臨床投資にも関わらず、目下、ヒトにおいて、疾患修飾特性を有する治療効果のある入手可能な薬剤は無い。ＰＤの処置は、主にドーパミン作動性の戦略、抗コリン薬、または脳深部刺激療法の使用によって運動性症状に対処するが、それらは対症的な効果があるのみで、かつ、副作用が多い。可能性のある疾患修飾剤を用いた２０を超える臨床試験が実施された、または目下進行中である。しかし、臨床的エンドポイントに到達したものはない。結果として、新規な疾患改変処置法の開発に対する緊急の要望がある。

ＷＯ２００９／１０３１０５Ａ２

Ｇｉｌｍａｎら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ６４（２００５），１５５３－１５６２Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（２００６），４１９－４６６ＡＬＤａｋｈｅｅｌら，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ１１，（２０１４）６－２３Ｇａｍｅｓら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８２（２０１３），９４０Ｋｉｍら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１０７（２００８），３０３Ｒｅｃａｓｅｎｓら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．７５（２０１４），３５１Ｗｉｎｎｅｒら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３２（２０１２），１６９０６Ｌｅｅら，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．７０（２０１１），３３９Ｖａｌｅｒａら，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１３８（２０１３），３１１Ｍａｓｌｉａｈら，Ｎｅｕｒｏｎ．４６（２００５），８５７Ｂａｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３２（２０１２），１３４５４Ｂａｎｎｅｒら，ＰＮＡＳ１０１（２００４），９４３５Ｇａｍｅｓら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３４（２０１４），９４４１Ｍａｓｌｉａｈら，ＰＬｏＳＯｎｅ．６（２０１１），ｅ１９３３８ＰＤ０１Ａに関する初の臨床データを報告しているＡＦＦｉＲｉＳのプレス・リリース；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｆｆｉｒｉｓ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｆｉｒｓｔ－ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｄａｔａ－ｏｆ－ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ－ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓ－ｄｉｓｅａｓｅ－ｖａｃｃｉｎｅ－ｅｎｃｏｕｒａｇｅ－ｓ－ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ－ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／Ｖｉｇｎｅｓｗａｒａら，ＰＬｏｓＯｎｅ８（２０１３），ｅ６１４４２Ｍａｎｄｌｅｒら，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ１０（２０１５），１０

本発明の目的は、自己抗原を用いた免疫付与に基づいた、より効率的な疾患改変処置法を提供することにある。

故に、本発明は、有効量の自己抗原の投与量を患者に投与して一次免疫応答を誘導する、ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種方法であって、該患者が該自己抗原のブースト投与を受けることを特徴とし、ここで、該ブースト投与のための投与量中の自己抗原の量が、一次免疫応答のための投与において用いられる投与量中の自己抗原の量よりも高い（すなわち、免疫応答のプライミング（ｐｒｉｍｉｎｇ）のために用いられる投与量における自己抗原の量よりも高い）方法を提供する。

本発明のクール内で、自己抗原に対する患者のワクチン接種の過程において、ブースト投与が、効果的な免疫学的および治療的な効果を得るのに中心的な役割を果たすことを示す臨床データが、出願人によって得られた。通常のもの（非自己抗原、例えば病原体抗原）を用いて得られたデータは、自己抗原に対するワクチン接種戦略と比較できるものでも、合致するものでもないことも明らかになった。本出願により得られた結果は、一次免疫付与（すなわち、一次免疫応答を得ること）が比較的少量の抗原により誘導され、追加免疫付与（ｂｏｏｓｔｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）が一次免疫応答のための投与におけるよりも多量の自己抗原により誘導される場合、有利であるということを示す。

ＡＦＦ００８試験クールにおける有望な初めの結果（上記の非特許文献１５を参照）にも関わらず、本発明によるブースターワクチン接種スキームの特定の選択が、適用された種々の量の投薬計画の総合的なパフォーマンスの臨床転帰を有意に誘発していることは驚くべきことであった。とりわけ長期間に渡って、ブースト段階での該ワクチンの投与量は（プライミング段階と比較して）、特異的な抗体応答および該ワクチンの特異的応答性にとって最重要であった。これはとりわけ驚くべきことであった。なぜなら、有利な結果は、ブースト投与のための投与量における自己抗原の量が一次免疫応答のための投与において使用される投与量における自己抗原の量よりも高い場合に得られるからである。これは、かかる抗原に対するワクチン接種を提案している先行技術（例えば、ＷＯ２００９／１０３１０５Ａ２、ＷＯ２０１１／００９１５２Ａ１、ＷＯ２０１４／０３３１５８Ａ２など）からも、またはかかるワクチンを適用しているモデルマウスに関する科学報告書（Ｍａｎｄｌｅｒら，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｄｅｇ．１０（２０１５）：１０、Ｍａｎｄｌｅｒら，ＡｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１２７（２０１４）：８６１－８７９）からも導き出すことはできなかった。これは、先行技術からはさらにいっそう予測不可能であった。なぜなら、以前報告されたようなプライミングおよびブースター投与の効果は、特定のワクチンおよび特定の投与量、または特定の個体に対してさえも特異的である（例えば、Ｓｈｅｔｅら，Ｊ．Ａｉｄｓ＆Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．５（２０１４），ＤＯＩ：１０．４１７２／２１５５－６１１３．１０００２９３；Ｍｏｒｅｒａら，Ｖａｃｃｉｎｅ３０（２０１２）：３６８－３７７；Ｇｏｎｚａｌｅｓら，Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ３（２００７）：８－１３）が、本発明に従う自己抗原ワクチンのクラス、とりわけ本明細書において開示され、本発明の実施例の節にて示されるような自己抗原、いわゆるアミロイドβ、前駆蛋白質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＳＣＫ９）、ＩｇＥ型の膜結合型免疫グロブリン、ハンチンチンタンパク質、ＣＤ２６またはアルファ－シヌクレイン（下記参照）に対して特異的ではないと見なされていたからである。このワクチン接種の一次段階で最も特異的なＢ細胞が選択できるように、一次免疫応答のための投与１回あたりの投与量が低い、すなわちブースト投与におけるよりも低いことは本発明にとって不可欠である。この戦略は、より特異的でないＢ細胞および抗原レセプターの誘導を妨げる。その一方で、該ブースト投与は、Ｂ細胞の現在の位置がどこであるかに関わらず（骨髄、リンパ節、脾臓など）、可能な限り多くのＢ細胞（一次免疫応答で産生される）を扱うために抗原の量に関して高投与量（すなわち、一次免疫応答におけるより高い）を用いて行うべきである。本発明に従って使用されるより高い量は、従って、自己抗原に対する効率的な免疫付与、および最終的に本発明のワクチン接種方法による該自己抗原の効率的な制御を（一次免疫応答と共にプライムされた最も特異的なＢ細胞に基づいて）確立することができるブーストを可能にする。これに関して、一次免疫応答の誘導は、ワクチン接種を受けるべき個体に対する１回以上の自己抗原の初期投与量の投与により達成され得ることに留意することも重要である。好ましくは、一次免疫応答は、２回、より好ましくは３回、とりわけ好ましくは４回の自己抗原の投与により誘導される。一次免疫応答のためのこれらの投与は、好ましくは少なくとも２週間、より好ましくは少なくとも３週間、とりわけ好ましくは少なくとも４週間の間隔を空けて行われる。多くのワクチン接種スキームは、２週間に１度または１ヶ月に１度のワクチン接種間隔を適用し、故にそれらがとりわけ好ましい。ブースト投与に対しても同じことが言える。すでに述べられたように、本発明の目的を達成するため、すなわち自己抗原に関して全体的な効率的な免疫応答を引き起こすために不可欠な要素は、投与１回あたりの投与量であり、投与される全ての投与量の（合計の）量ではない。

これは、ＰＤの場合、病理学的なタンパク質凝集体である、ａＳｙｎ凝集体の脳内レベルを調節するためにａＳｙｎミモトープを利用し、自己抗原としてのアルファ－シヌクレイン（「ａＳｙｎ」）を標的としているＰＤに対するワクチン接種戦略に関する臨床試験において、本発明に対してとりわけ示されてきた。

本発明の出願者は、最近、初期のＰＤ患者に投与された治療ワクチンＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａの２種類の投与量（１５μｇおよび７５μｇ）の安全性および認容性（ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ）を評価する第Ｉ相ファーストインヒューマン臨床試験を完了した。全ての有害事象は重篤度において軽度または中度であり、処置は認容性良好であると見なされた。抗原（ＰＤ０１Ａ）投与（１ヶ月に１度を４回適用された）が、（ｉ）該ワクチンのペプチド構成要素であるＰＤ０１Ａとも、（ｉｉ）標的であるａＳｙｎペプチド配列とも反応する（低い）ＩｇＧＡｂの出現をもたらす濾胞外応答（ｅｘｔｒａｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｒｅｓｐｏｎｓｅ）を誘導することが実証された（図１）。Ｂ細胞が胚中心で増殖し、プラズマ細胞へ分化するにつれ、ＩｇＧＡｂ力価はピーク値まで上昇し、３度目の免疫付与の４週間後にピーク値に達した（Ｖ８）。

免疫付与による機能性Ａｂ、例えばａＳｙｎ特異的Ａｂの誘導、免疫付与のプライミング時点での投与量と、その結果生じるＡｂ応答との間の関係、並びに自己抗原（例えば、ａＳｙｎ）に対するプライミング免疫応答（ＰＤ０１Ａ誘導応答）がヒトにおいてどれほど「再活性化」され得るのかをより理解するために、該ＡＦＦ０８Ａ研究のＰＤ０１Ａ処置を受けた患者を第２の臨床実験において分析した。この目的で、ＰＤ０１Ａ免疫付与ＰＤ患者は、（平均で）１１５週後に１回の投与量１５μｇまたは７５μｇいずれかのＰＤ０１Ａによりブーストされた。ＡＦＦ０８Ａ試験において、抗原ＰＤ０１Ａへの「ブースター」暴露は、免疫記憶を再活性化し、ＰＤ０１Ａおよび標的であるａＳｙｎペプチド配列に対するＡｂ力価の急速な上昇をもたらし（図１を参照）、これは真の二次免疫応答を実証している。一般に、短寿命のプラズマ細胞は、ピークのＡｂレベルを２、３週間維持する。その後、血清中のＡｂ力価は、初めに、後に続く一次免疫と同様に急速な速度で減少する。骨髄で生存ニッチに到達した長寿命のプラズマ細胞は、抗原に特異的なＡｂを産生し続け、その後、より低い速度で減少する。

多くの決定因子が、ワクチン誘導ＧＣの、従って、ピークのＡｂ応答の強度を調節する。主要な決定因子は、ワクチン抗原の性質およびその固有の免疫原性である。

一次ワクチンＡｂ応答のまた別の重要な因子は、ワクチン抗原の最適な投与量の使用であり、それは実験的に決定され得る。概して、一定の閾値までの、抗原のより高い投与量は、より高い一次Ａｂ応答を誘導する。閾値を超える投与量では、釣り鐘型またはプラトー型の応答が見られ得る。これは、免疫能力が制限される時にとりわけ有用であり得る。

制限された投与量のワクチンは、一次免疫応答を制限し得るが、Ｂ細胞の濾胞樹状細胞関連抗原をめぐる競争を増加させ、それ故、より高い親和性のＧＣ－Ｂ細胞のよりストリンジェントな選択、およびより強力な二次「ブースト」応答を引き起こし得る。従って、ヒトにおいて、「プライミング」段階で、および「ブースティング（ｂｏｏｓｔｉｎｇ）」段階で再び、抗原投与量の特定の組み合わせ、例えば至適抗原投与域（ｏｐｔｉｍａｌａｎｔｉｇｅｎｉｃｄｏｓｉｎｇ－ｗｉｎｄｏｗ）だけが、病理学的なタンパク質凝集体、例えばＰＤの場合、ａＳｙｎ凝集体、の発現を調節することができる十分なＡｂ応答を提供するだろう。

上記ですでに述べられたように、本発明に従うワクチンは、ワクチン接種される個体に対して「自己」であるが、投与された場合に副作用として自己免疫を引き起こしてはならない抗原に向けられた、自己抗原（「自己タンパク質」）を扱う適切なワクチンとしての関連する基準を満たす。従って、該自己抗原の抗原性構成要素は、Ｔ細胞を活性化してはならないが、Ｂ細胞抗原として働く。故に、該抗原は、抗原提示細胞によってそれらのＭＨＣ分子上で提示される必要がある。また、Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（２００６），４１９－４６６によって報告された必要性が適用される。一般に、抗原性エピトープは、Ｔ細胞の活性化を防ぐ程度に短く、かつ、抗体エピトープとして働く程度に長い必要がある。さらに、ＩｇＧ型抗体応答の発生は、ヘルパーＴ（ＴＨ）細胞にも依存的であり、故に、該ワクチンはヘルパーＴ（ＴＨ）細胞（（細胞性自己免疫を防ぐために）目的の抗原に関連していない）を活性化できるエピトープを含有する必要がある。理想的には、本発明に従うワクチンは、強力なＴｈエピトープであり、ヒトにおいて見られる他の分子／構造と交差作用する抗体を活性化することができないことが知られている。従って、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）のような（タンパク質）担体は、臨床的にだけでなく臨床前にもＴ細胞ヘルプの強力なアクチベーターであることが示されてきた。例えば、ＫＬＨは、よく記載される「ヒトの免疫系に無関係である」タンパク質であり、特異的抗原性エピトープ、例えば抗原ペプチド配列と物理的に結合すると強力なＡｂ応答を生み出す。本発明のワクチンの免疫応答は、関係する構造を攻撃することなく、所望の構造に向けられる必要がある。従って、ワクチン接種された個体において上昇した抗体は、所定の標的（自己抗原）に結合する必要があり、これは該ワクチンの意図された活性に不可欠である。さらに、これらのワクチン誘導抗体は、（不可欠な安全機能として、）関連または相同の構造に結合してはならない。

好ましくは、本発明に従う自己抗原は、本分野において科学的に妥当なワクチン候補またはワクチン接種標的として報告または示唆されてきた抗原である。

本発明に従う方法は、故に、原則として、あらゆる種類の自己抗原ワクチン接種戦略に対して適用できる。しかし、効率的な免疫応答を得るには問題があることが知られている自己抗原に対して本発明の方法を利用することは好ましい。従って、本発明に従う好ましい自己抗原は、アミロイドβ、前駆蛋白質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＳＣＫ９）、ＩｇＥ型の膜結合型免疫グロブリン、ハンチンチンタンパク質、ＣＤ２６およびアルファ－シヌクレイン抗原、好ましくはアルファ－シヌクレイン抗原、とりわけＤＭＰＶＤＰＤＮエピトープおよび／またはＫＮＥＥＧＡＰエピトープを含有しているアルファ－シヌクレイン抗原から構成されているグループから選択される。

天然配列と比べて、少なくとも同じ（好ましくは改良された）免疫付与特性を有する、該自己抗原の天然配列のバリエーションが適用される場合、ワクチン接種による免疫付与はさらに改良され得ることが示されてきた。従って、本発明に関して、該天然自己抗原アミノ酸配列のかかるバリエーションは、ワクチン接種された個体において特異的な（天然の）自己抗原結合抗体を誘導することに関して、該免疫付与特性が（少なくとも）保存される（または、好ましくは改良される）限り、本発明に従う用語「自己抗原」の範囲内に包含されるべきであることは明らかである。かかるバリエーションは、ＡＥＥＩＴＯＭＥ（登録商標）技術によって提供され得る（例えば、Ｓｃｈｎｅｅｂｅｒｇｅｒら，ＨｕｍａｎＶａｃｃ．６（２０１０），１－５において開示された）。該ＡＥＥＩＴＯＭＥ（登録商標）技術によって提供されるこれらのバリエーションは、ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）と呼ばれ、とりわけ、アミロイドβに関してはＷＯ２００４／０６２５５６ＡおよびＷＯ２００６／００５７０７Ａに、ａＳｙｎに関してはＷＯ２００９／１０３１０５ＡおよびＷＯ２０１１／０２０１３３Ａに、ＡｎｇＩＩに関してはＷＯ２０１１／００９１５２Ａに、Ｃ５ａに関してはＷＯ２０１３／１７４９２０Ａに、ＰＣＳＫ９に関してはＷＯ２０１４／０３３１５８ＡおよびＷＯ２０１５／１２８２８７Ａにおいて開示される。これらの文書において開示される該ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）は、本発明に従う好ましい自己抗原でもある。

従って、本発明において、自己抗原として、自己抗原の天然配列のバリエーション、すなわちＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）（自己抗原の元の天然配列と比較して配列バリエーションを含有するペプチドである「ミモトープ」とも呼ばれ得るが、該ミモトープは、類似の（同じまたは改良された）免疫付与特性を示す、すなわち、天然配列を用いて得られる免疫応答と類似またはより高い免疫応答を誘導することができる；ミモトープは、故に、天然自己抗原と同じｍＡｂｓまたはｐＡｂｓによって認識されるが、より強力な免疫応答または神経炎症のような重篤な副作用とは関連の無い免疫応答を誘導する）を使用することが好ましい。故に、本発明に従うワクチン接種において、自己抗原として、ａＳｙｎミモトープ、アンジオテンシンＩＩミモトープまたはＰＣＳＫ９ミモトープ、より好ましくは、ＤＱＰＶＬＰＤ、ＤＭＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＷＡＥ、ＤＴＰＶＬＡＥ、ＤＱＰＶＬＰＤＮ、ＤＭＰＶＬＰＤＮ、ＤＳＰＶＬＰＤＮ、ＤＱＰＶＴＡＥＮ、ＤＳＰＶＷＡＥＮ、ＤＴＰＶＬＡＥＮ、ＨＤＲＰＶＴＰＤ、ＤＲＰＶＴＰＤ、ＤＶＰＶＬＰＤ、ＤＴＰＶＹＰＤ、ＤＴＰＶＩＰＤ、ＨＤＲＰＶＴＰＤＮ、ＤＲＰＶＴＰＤＮ、ＤＮＰＶＨＰＥＮ、ＤＶＰＶＬＰＤＮ、ＤＴＰＶＹＰＤＮ、ＤＴＰＶＩＰＤＮ、ＤＱＰＶＬＰＤＧ、ＤＭＰＶＬＰＤＧ、ＤＳＰＶＬＰＤＧ、ＤＳＰＶＷＡＥＧ、ＤＲＰＶＡＰＥＧ、ＤＨＰＶＨＰＤＳ、ＤＭＰＶＳＰＤＲ、ＤＳＰＶＰＰＤＤ、ＤＱＰＶＹＰＤＩ、ＤＲＰＶＹＰＤＩ、ＤＨＰＶＴＰＤＲ、ＥＹＰＶＹＰＥＳ、ＤＴＰＶＬＰＤＳ、ＤＭＰＶＴＰＤＴ、ＤＡＰＶＴＰＤＴ、ＤＳＰＶＶＰＤＮ、ＤＬＰＶＴＰＤＲ、ＤＳＰＶＨＰＤＴ、ＤＡＰＶＲＰＤＳ、ＤＭＰＶＷＰＤＧ、ＤＡＰＶＹＰＤＧ、ＤＲＰＶＱＰＤＲ、ＹＤＲＰＶＱＰＤＲ、ＤＭＰＶＤＰＥＮ、ＤＭＰＶＤＡＤＮ、ＥＭＰＶＤＰＤＮ、ＤＮＰＶＨＰＥ、ＫＮＤＥＧＡＰ、ＡＮＥＥＧＡＰ、ＫＡＥＥＧＡＰ、ＫＮＡＥＧＡＰ、ＲＮＥＥＧＡＰ、ＨＮＥＥＧＡＰ、ＫＮＥＤＧＡＰ、ＫＱＥＥＧＡＰ、ＫＳＥＥＧＡＰ、ＫＮＤＤＧＡＰ、ＲＮＤＥＧＡＰ、ＲＮＥＤＧＡＰ、ＲＱＥＥＧＡＰ、ＲＳＥＥＧＡＰ、ＡＮＤＥＧＡＰ、ＡＮＥＤＧＡＰ、ＨＳＥＥＧＡＰ、ＡＳＥＥＧＡＰ、ＨＮＥＤＧＡＰ、ＨＮＤＥＧＡＰ、ＲＮＡＥＧＡＰ、ＨＮＡＥＧＡＰ、ＫＳＡＥＧＡＰ、ＫＳＤＥＧＡＰ、ＫＳＥＤＧＡＰ、ＲＱＤＥＧＡＰ、ＲＱＥＤＧＡＰ、ＨＳＡＥＧＡＰ、ＲＳＡＥＧＡＰ、ＲＳＤＥＧＡＰ、ＲＳＥＤＧＡＰ、ＨＳＤＥＧＡＰ、ＨＳＥＤＧＡＰ、およびＲＱＤＤＧＡＰからなるグループから選択されるａＳｙｎミモトープ、とりわけ、ＤＱＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＬＰＤ、ＤＶＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＬＰＤＧ、ＹＤＲＰＶＱＰＤＲ、ＤＨＰＶＨＰＤＳ、ＤＡＰＶＲＰＤＳ、ＫＮＤＥＧＡＰ、ＫＱＥＥＧＡＰまたはＫＳＥＥＧＡＰ、ＤＰＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＶＹＩＨＰＦ、ＤＲＨＹＩＨＰＦ、ＤＡＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＤＨＰＦ、ＡＡＹＩＨＰＦ、ＲＡＹＡＨＰＦ、およびＰＧＹＩＨＰＦからなるグループから選択されるアンジオテンシンＩＩミモトープ、とりわけ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦまたはＰＧＹＩＨＰＦ、または、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴＰＰＲ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＴＴＰＰＲ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬＰＰＲ、ＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱＰＰＲ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＴＴ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＬＴ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＬＴＰＰＲ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＱ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＱＰＰＲ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬおよびＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱからなるグループから選択されるＰＣＳＫ９ミモトープ、とりわけ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬまたはＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱ、を用いることが好ましい。

一次免疫誘導のための投与量におけるよりも、ブースト投与のための投与量において有意に高い量の自己抗原を使用することが好ましい。従って、ブースト投与のための投与量における自己抗原の量は、一次免疫応答のための投与において使用される量よりも少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも１００％、とりわけ好ましくは少なくとも２００％高い。

絶対量において、ブースト投与のための投与量において、自己抗原の量を少なくとも２０μｇ、より好ましくは５０μｇとすることが好ましい。これに関連して、本発明において言及される「μｇ自己抗原」とは、投与量中の抗原ペプチドの量を意味すること、および該ワクチン複合体の担体またはリンカー部分（存在する場合）は包含しないことに留意することが重要である。

本発明に関して、一次免疫応答がすでに終わった時点、すなわち、この一次ワクチン接種で誘導された抗体力価（一次免疫応答誘導コースにおいて、１回、２回、３回、４回、またはそれ以上のワクチン投与によって誘導された）が有意水準を超えて（例えば、所与の閾値レベルを超えて、または多数のサンプルをテストするのに適した（好ましくはかなり感度の低い）アッセイの検出限界を超えてさえ）低下した時点、または該一次ワクチン接種のコースにおいて存在している最大抗体レベルの少なくとも３０％、好ましくは２０％、とりわけ１０％以下に低下した時点でブーストワクチン接種を行うことが重要である。かかるレベルは、種々の自己抗原ワクチン間で異なり得るが、通常は、一次ワクチン接種の少なくとも６ヶ月後には存在する。従って、該ブースト投与は、好ましい一実施形態において、一次免疫応答を引き起こすための自己抗原の１回目の投与の、少なくとも６ヶ月、好ましくは少なくとも１２ヶ月後に投与され得る。ブースト投与が、好ましくはより遅い時点で、例えば、一次免疫応答ワクチン接種後の１８ヶ月、２年、３年または５年後に行われる戦略もある。

本発明に従う投与経路は、通常、現行のワクチン接種経路と同じ経路である。故に、自己抗原の好ましい投与は、皮下、皮内、または筋内投与である。

本発明の好ましい一実施形態によると、自己抗原は、アジュバント、好ましくは水酸化アルミニウムと一緒に投与される。この最も好ましい実施形態によると、本発明は、欧州薬局方グレード（Ａｌｕｍｉｎｉｕｍ－ｏｘｙｈｙｄｒｏｘｉｄｅ，ｍｏｎｏｇｒａｐｈ１６６４）の使用、とりわけ欧州薬局方遵守を目的としてテストされたＢｔｅｎｎｔａｇＢｉｏｓｅｃｔｏｒにより製造された製品（２％アルヒドロゲル（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ））の使用に関連する。アルヒドロゲルは、アルヒドロゲル１．３％、アルヒドロゲル２％、およびアルヒドロゲル「８５」の３種類が入手可能である。アルヒドロゲル２％は、水酸化アルミニウムゲルの国際標準品として選択された。本発明に従う医薬調製物は、適切なバッファー、好ましくは等張リン酸バッファー（１ｍＭ～１００ｍＭ）中に、好ましくは１．０ｍｇ／ｍＬ以上のアルヒドロゲル濃度で（Ａｌ_２Ｏ_３の換算値として与えられる。この測定基準（「Ａｌ_２Ｏ_３の換算値」としてのＡｌ）は、本発明に対して一般的に使用される。従って、本出願において言及される全ての投与量および量は、水酸化アルミニウムに関連している限り、Ａｌ_２Ｏ_３の換算値（水酸化アルミニウム（アルヒドロゲル）の）を示す。）、さらにより好ましくは１．５ｍｇ／ｍＬ以上のアルヒドロゲル濃度で、最も好ましくは２．０ｍｇ／ｍＬ以上のアルヒドロゲル濃度（Ａｌ_２Ｏ_３の換算値として与えられる）で、無菌で処方される。アルヒドロゲルのためのアルミニウム塩の量は、製造者により述べられるように、強度に合わせてＡｌ_２Ｏ_３の換算値として与えられる（すなわち、２％アルヒドロゲルは、２％Ａｌ_２Ｏ_３、すなわち２０ｍｇ／ｍＬのＡｌ_２Ｏ_３と同等である）。該濃度は、それぞれの分子質量（２０ｍｇ／ｍＬＡｌ_２Ｏ_３（分子量１０１，９６）は、１０．６ｍｇ／ｍＬアルミニウム（分子質量２６，９８）に相当）を用いることにより、アルミニウムの各濃度へ直接換算可能である。

本発明に従う好ましい自己抗原は、７～３０、好ましくは７～２０、より好ましくは７～１６、最も好ましくは８個の、アミノ酸残基を含むポリペプチドである。これらのペプチド抗原を医薬上許容される担体、好ましくはタンパク質担体、とりわけキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、Ｃｒｍ－１９７、破傷風トキソイド（ＴＴ）またはジフテリア毒素（ＤＴ）に結合させることも好ましい（および、これは、免疫応答を得るためにしばしば不可欠である）。

さらに好ましい一実施形態によると、該ブースト投与はいくらかの時間後、例えば、１年、２年、３年、５年または１０年後に繰り返される。好ましくは、２回目の、またはそれ以降のブーストは、１回目のブースト投与と同じ、または類似の方法で、すなわち、一次ワクチン接種の投与量と比べ増加した量の自己抗原を用いて行われる。

さらなる一態様によると、本発明は、ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種における使用のためのキットであって、
該自己抗原に対する一次免疫応答を誘導するための、有効量の自己抗原を含有している第１のワクチン処方、および
該自己抗原に対するブースト免疫応答を誘導するための、有効量の該自己抗原を含有している第２のワクチン処方
を含み、ここで、第２のワクチン処方における自己抗原の量が、第１のワクチン処方におけるよりも高い、キットにも関連する。

該キットにおいて、本発明に従う（すなわち、本明細書で開示されるような）ワクチン処方が提供される。

本発明は、ヒト患者における自己抗原に対する免疫応答を誘導するためのワクチンの製造のための、本発明に従うキットの使用にも関連する。

本発明は、有効量の自己抗原、とりわけ自己抗原のミモトープを含む投与量を患者に投与して一次免疫応答を誘導する、自己抗原に対するヒト患者のワクチン接種における使用のためのワクチンであって、ここで、該患者は、該自己抗原のブースト投与を受け、該ブースト投与のための投与量における該自己抗原の量は、該一次免疫応答のための投与において使用される投与量中の自己抗原の量よりも高い、ワクチンも提供する。

本発明は、これを制限するものではないが、以下の実施例および図においてさらに開示される。

図１Ａ－Ｄは、プライミングの２０ヶ月後のａＳｙｎミモトープＰＤ０１Ａの注射が、免疫学的ブースト効果を引き起こすことを示す図である。（Ｃ）最も顕著な免疫学的効果は、月に１度の１５μｇのＰＤ０１Ａの注射を４回してプライミングを行い、７５μｇのＰＤ０１Ａでブーストを行った時に見られる。（Ｄ）７５μｇを用いたブーストは、プライミングの間に到達されたレベル以上に、抗体応答をなお強めていた。図１Ｅ－Ｈは、ヒト血清中のａＳｙｎ特異的抗体を示す。図１Ｉ－Ｌは、ヒト血清中のＫＬＨ特異的抗体を示す。図２Ａ－Ｄは、ＡｎｇＩＩに対する力価を示す図である（３×２週間に１度の５μｇのワクチン接種、および２２週目に５μｇおよび３３週目に５０μｇのブースト）。ｈｕＰＣＳＫ９に対する力価を示す図である（長期（３×２週間に１度のワクチン接種（２種類の投与量）、および５２週間追跡）。５２週目における３０μｇを用いた再ワクチン接種）。ＡＦＦ００８Ａ臨床試験のワクチン処方を示す図である。ＡＦＦ００８Ａ臨床試験における患者の基本特性を示す図である。ＡＦＦ００８Ａ臨床試験の免疫化スケジュールと経過観察を示す図である。ＡＦＦ００８Ａ臨床試験の試験グループによる有害事象を示す図である。ＡＦＦ００８Ａ臨床試験の試験グループによるＳＯＣ用語と有害事象を示す図である。ＡＦＦ００８Ａ臨床試験におけるＰＤ０１特異的抗体力価を示す図である。

ＰＤワクチン接種ブースト
ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａは、ＰＤのようなシヌクレイノパチーの処置のために開発された（ＷＯ２００９／１０３１０５Ａ２）。ＰＤ０１Ａは、ペプチド－ＫＬＨ複合体であり、該ペプチド部分は、ヒトａＳｙｎ（天然エピトープＤＭＰＶＤＰＤＮを有する）のカルボキシル末端領域を模倣する。それは、β－シヌクレイン（ｂＳｙｎ）を包含する密接に関連したタンパク質ファミリーメンバーを回避しながら、ａＳｙｎを標的とし、神経保護特性を有し得る（Ｖｉｇｎｅｓｗａｒａら，ＰＬｏＳＯｎｅ８（２０１３），ｅ６１４４２）。ＰＤ０１Ａを用いたワクチン接種が、ＰＤの二匹のモデルマウスにおいて、ａＳｙｎのオリゴマーの減少した蓄積をもたらし、記憶および運動障害を改善したことが最近示された（Ｍａｎｄｌｅｒら，ＡｃｔａＮｅｕｒｉｐａｔｈｏｌ．１２７（２０１４），８６１；Ｍａｎｄｌｅｒら，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ１０：１０（２０１５））。

参加者：
試験参加者は、オーストリアのウィーンおよび周辺地域から採用された。該臨床試験への参入のために、患者は、ＰＤの確認された診断を有する必要があった。突発性パーキンソン病を有する個人は、その疾患が４年未満であることが知られており、ホーン・ヤールの重篤度分類ステージＩ／ＩＩを示しており、ＵＫＰａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓＤｉｓｅａｓｅＳｏｃｉｅｔｙＢｒａｉｎＢａｎｋＣｒｉｔｅｒｉａ（Ｈｕｇｈｅｓら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ５５（１９９２），１８１）を満たしていた。

患者の脳のドーパミントランスポーター－単光子放出コンピューター断層撮影（ＤＡＴ－ＳＰＥＣＴ）検査の結果および磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）画像は、ＰＤの診断と合致している必要があった。従来型のＰＤの治療を受けた全ての参加者になる可能性のある人々は、該研究期間の前に、少なくとも３ヶ月の安定した投与を受け、全試験期間の間、継続する意思を有していなければならなかった。

全ての研究対象は、自由意思によるインフォームド・コンセントを提供した。試験手順書、患者情報、インフォームド・コンセントおよび他の全ての必要とされる試験文書は、独立した倫理委員会に提出された。

材料および方法：
ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａは、主として、該ワクチンの安全性および認容性を評価し、次いで、その免疫学的および臨床学的活性を評価（予備分析）するように設計された第Ｉ相臨床試験であるＡＦＦ００８において、初期のＰＤに罹患している２４名の個人に初めに適用された。この目的に向けて、１ｍｇのアルヒドロゲル（Ａｌ_２Ｏ_３の換算値として）に吸着させた２種類の投与量（１５μｇまたは７５μｇのＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａ（すなわち、ＫＬＨの対応する量に結合した、１５μｇまたは７５μｇのペプチドＣＤＭＰＶＤＰＤＮ）が、４週間の間隔を空けて４度適用された。各投与は、１２名の患者に適用された。加えて、８名までの患者が、未処理対照グループへの参加を依頼された。得られた結果は、（ｉ）該ワクチンの安全性および認容性を確認し、（ｉｉ）ワクチン特異的ＩｇＧ応答の誘導を立証し、（ｉｉｉ）意図された臨床活性を支持する証拠を提供した。全３２名の患者は、経過観察研究（ＡＦＦ００８Ｅ）を依頼され、３１名（ワクチン患者２４名およびコントロール７名）が承諾し、３０名が該研究を終えた。低投与量グループの１名の患者は、経過観察から離脱した。ＡＦＦ００８Ｅ参加者は、低投与量（１５μｇ；臨床での混合により高投与量から得られる）、または高投与量（７５μｇ）処方の１回の「ブースト注射」を依頼され、４つの異なる処理グループに分かれた。すなわち、低投与量（ＡＦＦ００８）－抵投与量（ＡＦＦ００８）、低投与量－高投与量、高投与量－低投与量、および高投与量－高投与量である。対照グループの患者は、処理を行わないままにした。全部で２８名（２２／６）が承諾し、全２８名が該ＡＦＦ００８Ｅ研究を終えた。

注射は、治験責任者によって皮下組織へと適用された。全ての投与は、治験実施施設で行われた。処理グループの患者は、無作為に１５μｇまたは７５μｇのＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａの投与を受けた。両方の処方は、０．５ｍｇ当量のアルミニウムを含有する。

該試験は、ＧｏｏｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｒａｃｔｉｃｅ（医薬品の臨床試験の実施基準）（ＧＣＰ）、改正ヘルシンキ宣言（２０１３）および、現地の法令上および規制上の要件（オーストリア薬事法）および適用可能な国際規制を遵守して実施された。該試験は、認可された臨床試験リポジトリ（ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ：ＮＣＴ０１５６８０９９，ＮＣＴ０２２１６１８８）に登録されている。

結果を図１Ａ－Ｌに示す。１Ａ－Ｄは、プライミングの２０ヶ月後のａＳｙｎミモトープＰＤ０１Ａの注射が、免疫学的ブースト効果を誘導することを示す。（Ｃ）最も顕著な免疫学的効果は、月に１度の１５μｇのＰＤ０１Ａの注射を４回してプライミングを行い、７５μｇのＰＤ０１Ａでブーストを行った時に見られる。（Ｄ）７５μｇを用いたブーストは、プライミングの間に到達されたレベル以上に、抗体応答をなお強めていた。

図１Ｅ－Ｈは、ａＳｙｎエピトープ応答を示す。図Ｉ－Ｌは、ＫＬＨ応答を示す。全ての図１Ａ－Ｌは、ヒト血清由来の抗体力価を示す。

図１Ｅ－Ｈおよび図１Ｉ－Ｌは、図１Ａ－Ｄと似たように体系化されている。赤い点線は、グループ平均値を表す。該図の見出しは、ワクチンの投与量を表す。プライミング投与量（ＡＦＦ００８）／ブースト投与量（ＡＦＦ００８Ａ）である。グループの大きさ：ｎ＝４（１５μｇ／１５μｇ）、その他の全てのグループはｎ＝６。該図全ての時間周期：３．５年。初期のＰＤ患者（ホーン・ヤールの重篤度分類ステージＩ／ＩＩにより定義される）は、２８日の間隔を空けて、１５または７５μｇの投与量で４回のプライミング免疫付与を受けた。該免疫化ペプチド（ＰＤ０１）に対する、標的であるａＳｙｎエピトープ（ａａ１１０－１３０；ＢＳＡ複合体として処方される）に対する、およびＫＬＨに対する抗体が、ＥＬＩＳＡ法によって定量された。プライミング投与量は、主に抗体応答の持続時間に関して有益であった。該低投与量は、該高投与量よりも長く続く抗体応答を引き起こし、両方の応答の強度は同等であった。同様に、該ブーストの結果は、該投与量によって決定された。該低投与量は、プライミング応答のレベルまで、該抗体応答の再活性化を達成した。対照的に、該高投与量は、プライミング段階の間に得られた応答と比較して１０倍まで該抗体応答を強めた。本発明の基礎を形成する最も良い応答は、プライミングおよびブーストのための低および高投与量の組み合わせで見られた。

ＡｎｇＩＩワクチン接種ブースト
ワクチン
ペプチドＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦおよびＰＧＹＩＨＰＦは、ヘテロ二機能性リンカーＧＭＢＳ（４－マレイミド酪酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）を介して、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）またはＣＲＭ１９７（ＣｒｏｓｓＲｅａｃｔｉｖｅＭａｔｅｒｉａｌ１９７）に結合された。該結合ペプチドの示される量（１，５，３０，１５０μｇ）は、水酸化アルミニウム（水酸化アルミニウムの終濃度は０．２％であった）を用いて懸濁された。バッファーとしては、ＰＢＳまたはマンニトール／リン酸塩のいずれかが使用された。

動物実験
雌ＢＡＬＢ／ｃマウスが、１２時間明／暗サイクルの下に置かれ、食料と水を自由に摂取させた。実験開始時のマウスの週齢は、およそ８～１０週齢であった。

グループごとに、１０匹のＢａｌｂ／ｃマウスが皮下に免疫化された。マウスは、初めに２週間の間隔を空けて３度、合わせて１ｍＬ量注射された（左右の肩領域へ２×５００μＬ）。血液は、３回目の注射の後、一定の間隔を空けて数回採取した。ここに示されるデータは、３回目の注射のおよそ８ヶ月後に採取された血漿由来である（Ｐ３ｉとして表記）。３回目の注射のおよそ８．５ヶ月後に、各グループにおいて残っているマウスの半分は、初めの３回の免疫付与におけるのと同じ量の抗原を用いてブーストされた、または、より高い／より低い量を用いて免疫付与された（下記スキーム参照）。最後の血漿（Ｐ４ｂとして表記）は、４回目のワクチン接種の６週間後に採取された。

ペプチドＥＬＩＳＡ法
該ワクチンの免疫原性を決定するために、９６ウェルＮｕｎｃ－Ｍａｘｉｓｏｒｂプレートは、ｐＨ９．２－９．４の０．１ＭＮＡＨＣＯ_３中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）に結合した、１μＭの、それぞれ注射されたペプチドを用いてコーティングされた。非特異的な結合は、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中５％ＢＳＡ）でのインキュベーションでブロックした。適当な血清希釈液が、該ウェルに加えられ、段階的に１：２倍に希釈され、およそ１時間３７℃でインキュベートされた。結合した抗体は、ビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＧを用いて、続いてストレプトアビジン（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）に結合した西洋ワサビペルオキシダーゼを用いてインキュベートすることで検出された。基質ＡＢＴＳが加えられ、４０５ｎｍにおける光学的濃度（ＯＤ）がマイクロウェルプレートリーダーで測定された。力価は、該アッセイにおいてＯＤ_ｍａｘの５０％に到達するときの該血清の希釈倍数として定義された。

再ブースト後の抗体の誘導倍数（ｆｏｌｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）を算出するために、４回目の免疫付与後に決定された個々のマウスの抗注射ペプチド力価を、３回目の免疫付与後、８ヶ月までの間に決定された力価で割った。各グループに対して得られた平均因子をグラフに示す。

結果を図２Ａ－Ｄに示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスのグループ（ｎ＝１０）は、ＫＬＨに結合したアンジオテンシンＩＩ疑似ペプチド５μｇ（ＡおよびＢ）、ＣＲＭに結合したアンジオテンシンＩＩ疑似ペプチド５μｇ（ＣおよびＤ）を注射することによって、０、２および４週にプライミング免疫付与を受けた。いずれかのワクチンを用いた免疫付与も、ＡｎｇＩＩ特異的ＩｇＧＡｂ応答の誘導をもたらした。全てのワクチンは、応答速度の点で類似の応答を示したが、強度に関してある程度異なっていた。２２週目に適用された、低投与量、すなわち５μｇの各ワクチンを用いたブーストは、ワクチンのタイプ／処方に関わらず、ＡｎｇＩＩ特異的Ａｂ応答を有意に増強しなかった。対照的に、３３週目における、高い処方量、すなわち５０μｇでの各ワクチンの適用は、プライミング段階の間到達されたレベルを明らかに超えて、ＡｎｇＩＩ特異的Ａｂ応答をブーストした。

ＰＣＳＫ９免疫付与ブースト
材料および方法
ワクチン：
ペプチドＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬおよびＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱは、ヘテロ二機能性リンカーＧＭＢＳ（４－マレイミド酪酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）を介して、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合された。

動物実験：
５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスが、皮下に免疫化された。マウスには、食料および水を自由に摂取させ、１２時間明／暗サイクルの下に置かれた。２１個の実験開始時のマウスの週齢は、８～１０週齢であった。マウスは、ＫＬＨに結合させ、かつ、アジュバントとしてアルヒドロゲルに吸着させたペプチドを正味で５μｇまたは２５μｇのいずれか、全体で１ｍＬ容量で用いて、２週間の間隔を空けて３度、注射された。血液は、各注射のおよそ２週間後に、および最後の３度目の免疫付与後１ヶ月の間隔を空けて（最大１年間）、採取された。プライム免疫付与の５２週間後に、マウスは、ＫＬＨに結合させ、アジュバントとしてアルヒドロゲルに吸着させた正味２５μｇのペプチドを全体で１ｍＬ容量で用いて再ワクチン接種（４度目の免疫付与）を受けた。血液は、４度目の免疫付与の２および４週間後に採取された（それぞれ、血漿４ａおよび４ｂ）。

タンパク質ＥＬＩＳＡ法：
該ワクチンの免疫原性を決定するために、故に、該免疫化された動物における血漿中のＰＣＳＫ９特異的抗体の量を同定するために、ＥＬＩＳＡイムノアッセイが行われた。ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、容易に定量することができるシグナルを生み出し、ワクチン誘導ＰＣＳＫ９特異的抗体の量の定量的尺度を表す。従って、ＥＬＩＳＡ法によって測定されるような力価は、処置された動物の血漿試料中の標的特異的抗体の量（μｇ／ｍＬ）と直接相関する。全ての血漿試料は、最後の免疫付与の２週間後に採取され、等しく処理された。直接的な比較を行うために、該ワクチン誘導ＰＣＳＫ９特異的抗体のＰＣＳＫ９タンパク質ＥＬＩＳＡイムノアッセイによる定量的な評価、およびそれらに関連するコントロール（元の配列およびネガティブコントロール）との比較が、全ての試料に対して同時に行われた。この目的のために、ＥＬＩＳＡプレートは、組換え型発現ヒトＰＣＳＫ９タンパク質でコーティングされた。非特異的な結合は、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中に１％ＢＳＡ）でのインキュベーションによりブロックした。適切な血清希釈液（１：１００の開始希釈でのプール）がウェルに加えられ、段階的に１：２倍に希釈され（１２回の希釈段階）、およそ１時間インキュベートされた。結合した抗体は、抗マウスＩｇＧ抗体とのインキュベーションによって検出され、ＡＢＴＳが基質として加えられ、４０５ｎｍのＯＤが測定された。ネガティブコントロールとして、関連のないペプチドが注射された対照グループからの血清が分析された。該力価は、該アッセイにおいてＯＤ_ｍａｘの５０％に到達する時の血清の希釈倍数として定義された。

結果を図３に示す。マウスのグループは、０、２または４週目に、ＰＣＳＫ９を標的としているＡＦＦＩＴＯＰＥワクチン５μｇまたは２５μｇのいずれかを注射することによって、プライミング免疫付与を受けた。ネガティブコントロールマウスは、ＫＬＨに結合し、Ａｌｕｍ（水酸化アルミニウム）でアジュバント化された関連のないペプチドを投与された。ヒトＰＣＳＫ９に対するＡｂは、両方の処置グループについて、プライミングの４８および５２週後になお検出可能であった。しかし、応答は、低投与量の投与を受けた動物のグループにおいてより顕著であった。一方で、ネガティブコントロール動物は、ヒトＰＣＳＫ９に対するＡｂ応答を示さなかった。５２週目における２５μｇのＡＦＦＩＴＯＰＥワクチンを用いた１度のブーストの適用は、より顕著なｈｕＰＣＳＫ９Ａｂの増加をもたらし、該低投与量（５μｇ）／高投与量（２５μｇ）グループにおいて到達されたレベルは、該高投与量（２５）／高投与量（２５）グループにおいて到達されたレベルのおよそ２倍の高さであった。２５μｇのＡＦＦＩＴＯＰＥワクチンの１回の注射は、コントロールマウス（それ以前にＡＦＦＩＴＯＰＥワクチンに暴露されたことがない）においてＡｂ応答を引き起こさなかった。

ＡＦＦ００８Ａ：アルファ－シヌクレイン（「ａＳｙｎ」）に対する既存免疫応答の成功したブースティング
臨床試験（「ＡＦＦ００８Ａ」）のクールにおいて、ａＳｙｎ標的配列（ペプチドＤＱＰＶＬＰＤ；「ＰＤ０１Ａ」）を用いたＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）に基づいたワクチンアプローチの安全性および免疫学的分析は、初期段階のパーキンソン病（ＰＤ）患者において分析された。

ＰＤは、多い進行性の神経変性疾患であり、その罹患率は、年齢と相関関係があり、８５歳を超える人々の４％にまでも及ぶ。該疾患の初めの臨床兆候は、運動障害である。しかし、嗅覚欠損、便秘、鬱および起立性低血圧症のような非運動性症状もまた、疾患発症の特徴であり、疾患進行の間に認識機能障害ないし認知症が起こる場合もある。該疾患の発病機序の理解における集中的な科学的取り組みにも関わらず、目下利用可能な処置は、対症的なものに限られるが、疾患改変特性に乏しい。アルファ－シヌクレイン（ａＳｙｎ）、とりわけそのオリゴマー構造は、疾患発病機序の主要な病理学的特徴であると考えられており、従って、ＰＤに対する治療法の開発における魅力的な標的である。

本研究の目的は、ＰＤの長期的な処置または予防のためにａＳｙｎを標的としているＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）に基づいたワクチン（ＰＤ０１Ａと呼ばれる；図４）を開発することにあった。

研究計画および方法
ペプチドに基づいたＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａを用いた免疫付与の評価を行うための第Ｉ相試験ＡＦＦ００８Ａ（ＮＣＴ０２２１６１８８－追加して行うブースト）は、患者は盲検化され、単一施設で実施され、無作為であり、制御された、同時並行して２つの「ブースト」投与量（１５μｇおよび７５μｇ）を評価するグループであった。該研究は、初期段階のＰＤ患者において行われた（図５）。一次エンドポイントは、１度の皮下ブースト注射の認容性および安全性であった（図６）。各投与量は、１５μｇまたは７５μｇのいずれかのＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａを用いた４度のプライミング免疫付与を以前に受けた患者において試験された（ＮＣＴ０１５６８０９９，「ＡＦＦ００８」；実施例１を参照）。二次エンドポイントは、該２つのＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａ投与計画によって誘導されたブースティング後の免疫応答であった。さらに、該免疫付与ペプチド、ＫＬＨ（担体タンパク質）およびａＳｙｎ標的配列に特異的なＩｇＧＡｂの抗体力価が、ＥＬＩＳＡ法によってモニターされた。加えて、ａＳｙｎリコンビナントタンパク質に対する応答性もまたＥＬＩＳＡ法によってモニターされた。

結果
２つの異なる投与量のＰＤ０１ＡＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）に基づくワクチンを使用している該ブーストは、よく認容された（図７、８）。調査有効性変数は、本研究の未処理対照グループ（ｕｎｔｒｅａｔｅｄｃｏｎｔｒｏｌ－ａｒｍ）に比べて、処理グループにおいて臨床症状の悪化を示さなかった。ＰＤ０１Ａを用いた該ブーストワクチン接種は、プライミング免疫付与の約２年後に、投与量依存的に特異的な免疫応答の再活性化をもたらす。すなわち、低投与量（ＡＦＦ００８）で４度免疫化され、高投与量（ＡＦＦ００８Ａ）でブーストされたＰＤ患者は、明確な免疫学的ブーストを示した。該免疫応答は、２４週間の観察期間全体を通して維持された（図９）。

ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａに対する免疫応答は、ワクチン接種されたＰＤ患者２２名中１９名（８６％）において見られた。これらの１９名のＰＤ患者のうち１４名（７３％）は、ａＳｙｎの元のエピトープに対して特異的な抗体を産生した。

結論
初期ＰＤ患者における該ＡＦＦＩＴＯＰＥ（登録商標）ＰＤ０１Ａワクチンアプローチはよく認容され、長期の免疫応答を引き起こし、ブースト可能である。

Claims

有効量の自己抗原を含む投与量を患者に投与して一次免疫応答を誘導する、ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種方法であって、該患者が該自己抗原のブースト投与を受けることを特徴とし、ここで、該ブースト投与における投与量中の該自己抗原の量は、一次免疫応答のための投与において使用される投与量中の該自己抗原の量よりも高い、方法。
該自己抗原が、アミロイドβ、前駆蛋白質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＳＣＫ９）、ＩｇＥ型の膜結合型免疫グロブリン、ハンチンチンタンパク質、ＣＤ２６およびアルファ－シヌクレイン抗原、好ましくはアルファ－シヌクレイン抗原、とりわけＤＭＰＶＤＰＤＮエピトープおよび／またはＫＮＥＥＧＡＰエピトープを含有しているアルファ－シヌクレイン抗原からなるグループから選択される、請求項１に記載の方法。
該自己抗原が、ミモトープ、好ましくはアルファ－シヌクレインミモトープ、アンジオテンシンＩＩミモトープまたはＰＣＳＫ９ミモトープ、より好ましくは、ＤＱＰＶＬＰＤ、ＤＭＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＷＡＥ、ＤＴＰＶＬＡＥ、ＤＱＰＶＬＰＤＮ、ＤＭＰＶＬＰＤＮ、ＤＳＰＶＬＰＤＮ、ＤＱＰＶＴＡＥＮ、ＤＳＰＶＷＡＥＮ、ＤＴＰＶＬＡＥＮ、ＨＤＲＰＶＴＰＤ、ＤＲＰＶＴＰＤ、ＤＶＰＶＬＰＤ、ＤＴＰＶＹＰＤ、ＤＴＰＶＩＰＤ、ＨＤＲＰＶＴＰＤＮ、ＤＲＰＶＴＰＤＮ、ＤＮＰＶＨＰＥＮ、ＤＶＰＶＬＰＤＮ、ＤＴＰＶＹＰＤＮ、ＤＴＰＶＩＰＤＮ、ＤＱＰＶＬＰＤＧ、ＤＭＰＶＬＰＤＧ、ＤＳＰＶＬＰＤＧ、ＤＳＰＶＷＡＥＧ、ＤＲＰＶＡＰＥＧ、ＤＨＰＶＨＰＤＳ、ＤＭＰＶＳＰＤＲ、ＤＳＰＶＰＰＤＤ、ＤＱＰＶＹＰＤＩ、ＤＲＰＶＹＰＤＩ、ＤＨＰＶＴＰＤＲ、ＥＹＰＶＹＰＥＳ、ＤＴＰＶＬＰＤＳ、ＤＭＰＶＴＰＤＴ、ＤＡＰＶＴＰＤＴ、ＤＳＰＶＶＰＤＮ、ＤＬＰＶＴＰＤＲ、ＤＳＰＶＨＰＤＴ、ＤＡＰＶＲＰＤＳ、ＤＭＰＶＷＰＤＧ、ＤＡＰＶＹＰＤＧ、ＤＲＰＶＱＰＤＲ、ＹＤＲＰＶＱＰＤＲ、ＤＭＰＶＤＰＥＮ、ＤＭＰＶＤＡＤＮ、ＥＭＰＶＤＰＤＮ、ＤＮＰＶＨＰＥ、ＫＮＤＥＧＡＰ、ＡＮＥＥＧＡＰ、ＫＡＥＥＧＡＰ、ＫＮＡＥＧＡＰ、ＲＮＥＥＧＡＰ、ＨＮＥＥＧＡＰ、ＫＮＥＤＧＡＰ、ＫＱＥＥＧＡＰ、ＫＳＥＥＧＡＰ、ＫＮＤＤＧＡＰ、ＲＮＤＥＧＡＰ、ＲＮＥＤＧＡＰ、ＲＱＥＥＧＡＰ、ＲＳＥＥＧＡＰ、ＡＮＤＥＧＡＰ、ＡＮＥＤＧＡＰ、ＨＳＥＥＧＡＰ、ＡＳＥＥＧＡＰ、ＨＮＥＤＧＡＰ、ＨＮＤＥＧＡＰ、ＲＮＡＥＧＡＰ、ＨＮＡＥＧＡＰ、ＫＳＡＥＧＡＰ、ＫＳＤＥＧＡＰ、ＫＳＥＤＧＡＰ、ＲＱＤＥＧＡＰ、ＲＱＥＤＧＡＰ、ＨＳＡＥＧＡＰ、ＲＳＡＥＧＡＰ、ＲＳＤＥＧＡＰ、ＲＳＥＤＧＡＰ、ＨＳＤＥＧＡＰ、ＨＳＥＤＧＡＰ、およびＲＱＤＤＧＡＰからなるグループから選択されるアルファ－シヌクレインミモトープ、とりわけ、ＤＱＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＬＰＤ、ＤＶＰＶＬＰＤ、ＤＳＰＶＬＰＤＧ、ＹＤＲＰＶＱＰＤＲ、ＤＨＰＶＨＰＤＳ、ＤＡＰＶＲＰＤＳ、ＫＮＤＥＧＡＰ、ＫＱＥＥＧＡＰまたはＫＳＥＥＧＡＰ、ＤＰＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＶＹＩＨＰＦ、ＤＲＨＹＩＨＰＦ、ＤＡＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＤＨＰＦ、ＡＡＹＩＨＰＦ、ＲＡＹＡＨＰＦおよびＰＧＹＩＨＰＦからなるグループから選択されるアンジオテンシンＩＩミモトープ、とりわけ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦまたはＰＧＹＩＨＰＦ、または、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴＰＰＲ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＴＴＰＰＲ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬＰＰＲ、ＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱＰＰＲ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＴＴ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＬＴ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＬＴＰＰＲ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＱ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＱＰＰＲ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬおよびＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱからなるグループから選択されるＰＣＳＫ９ミモトープ、とりわけ、ＳＩＰＷＳＬＥＲＩＴ、ＶＩＰＷＮＬＥＲＩＬまたはＳＶＰＷＮＬＥＲＩＱである、請求項１または２に記載の方法。
該ブースト投与のための投与量中の自己抗原の量が、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも１００％、とりわけ少なくとも２００％、一次免疫応答のための投与のための投与量において使用される量よりも高い、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
該ブースト投与のための投与量中の自己抗原の量が、少なくとも２０μｇ、好ましくは少なくとも５０μｇである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
該ブースト投与が、一次免疫応答を誘導するための自己抗原の１回目の投与の少なくとも６ヶ月、好ましくは少なくとも１２ヶ月後に投与される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
該自己抗原の投与が、皮下、皮内または筋内投与である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
該自己抗原が、アジュバント、好ましくは水酸化アルミニウムと一緒に投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
該自己抗原、とりわけ該自己抗原のミモトープが、７～３０、好ましくは７～２０、より好ましくは７～１６、最も好ましくは８個のアミノ酸残基を含むポリペプチドであって、医薬上許容される担体、好ましくはタンパク質担体、とりわけＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、Ｃｒｍ－１９７、破傷風トキソイド（ＴＴ）またはジフテリア毒素（ＤＴ）に結合されている、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
該ブースト投与が繰り返される、好ましくは１回目のブースト投与から少なくとも３年後に、該１回目のブースト投与におけるのと同じ量を用いて繰り返される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
ヒト患者における自己抗原に対するワクチン接種における使用のためのキットであって、
自己抗原に対する一次免疫応答を誘導するための、有効量の自己抗原を含有している第１のワクチン処方、および
自己抗原に対するブースト免疫応答を誘導するための、有効量の自己抗原を含有している第２のワクチン処方
を含み、ここで、第２のワクチン処方における自己抗原の量は、第１のワクチン処方におけるよりも高い、キット。
該ワクチン処方が、請求項１から１０のいずれか一項に従って定義される、請求項１１に記載のキット。
ヒト患者における自己抗原に対する免疫応答を誘導するためのワクチンの製造のための、請求項１１または１２に記載のキットの使用。
自己抗原に対するヒト患者のワクチン接種における使用のためのワクチンであって、有効量の自己抗原の投与量を該患者に投与して一次免疫応答を誘導し、ここで、該患者は、該自己抗原のブースト投与を受け、該ブースト投与のための投与量中の該自己抗原の量は、一次免疫応答のための投与のために使用される投与量中の自己抗原の量よりも高い、ワクチン。