JP2023139160A - ミスフォールドされたtdp-43結合分子 - Google Patents
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Abstract
【課題】43kDaの分子量を有するトランス活性化応答DNA結合タンパク質(TDP-43)の抗体を提供する。【解決手段】前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、および/またはパーキンソン病(PD)を含むミスフォールドされたTDP-43に関する疾患および/または異常を診断し、予防し、緩和し、および/または治療するための手法および方法を提供する。本発明は、TDP-43関連疾患および/または異常の診断、予防、緩和、および/または治療における使用のための、TDP-43タンパク質に由来する改変された立体構造特異的な抗原ペプチドおよびペプチド断片、ならびに前記ペプチドまたは断片によって得られる抗体を提供する。【選択図】なし
Description
発明の分野
本発明は、43kDaの分子量を有するトランス活性化応答DNA結合タンパク質(TARDBまたはTDP-43)の分野に関するものである。本発明は、TDP-43特異的結合分子、特に、抗TDP-43抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体およびその使用に関する。本発明は、以下に限定されないが、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、および/またはパーキンソン病(PD)を含むミスフォールドされたTDP-43に関連する疾患および/または異常を診断し、予防し、緩和し、および/または治療するための手法および方法を提供する。本発明は、TDP-43関連疾患および/または異常の診断、予防、緩和、および/または治療における使用のための、TDP-43タンパク質に由来する改変された立体構造特異的な抗原ペプチドおよびペプチド断片、ならびに前記ペプチドまたは断片によって得られる抗体を提供する。
本発明は、43kDaの分子量を有するトランス活性化応答DNA結合タンパク質(TARDBまたはTDP-43)の分野に関するものである。本発明は、TDP-43特異的結合分子、特に、抗TDP-43抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体およびその使用に関する。本発明は、以下に限定されないが、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、および/またはパーキンソン病(PD)を含むミスフォールドされたTDP-43に関連する疾患および/または異常を診断し、予防し、緩和し、および/または治療するための手法および方法を提供する。本発明は、TDP-43関連疾患および/または異常の診断、予防、緩和、および/または治療における使用のための、TDP-43タンパク質に由来する改変された立体構造特異的な抗原ペプチドおよびペプチド断片、ならびに前記ペプチドまたは断片によって得られる抗体を提供する。
背景
中枢神経系(CNS)および末梢器官におけるタンパク質の病理学的凝集(タンパク質症)によって特徴付けられる年齢に伴う脳疾患は、世界における障害及び死亡率の主因の1つである。細胞外凝集物を形成する最も特徴付けられているタンパク質は、アルツハイマー病およびその関連疾患におけるアミロイドベータである。神経変性を引き起こす他の疾患に関連する凝集しやすいタンパク質としては、以下に限定されないが、タウ、アルファシヌクレイン(aSyn)、ハンチンチン、fused in sarcoma(FUS)、ジペプチドリピートタンパク質(DPR)(C9orf72リピート伸長の特殊な翻訳によって生成)、スーパーオキシドジスムターゼ1(SOD1)、およびTDP-43が挙げられる。TDP-43凝集に関する疾患は、一般に、ALSおよびFTDを含むが、これらに限定されないTDP-43タンパク質症として記載される。
中枢神経系(CNS)および末梢器官におけるタンパク質の病理学的凝集(タンパク質症)によって特徴付けられる年齢に伴う脳疾患は、世界における障害及び死亡率の主因の1つである。細胞外凝集物を形成する最も特徴付けられているタンパク質は、アルツハイマー病およびその関連疾患におけるアミロイドベータである。神経変性を引き起こす他の疾患に関連する凝集しやすいタンパク質としては、以下に限定されないが、タウ、アルファシヌクレイン(aSyn)、ハンチンチン、fused in sarcoma(FUS)、ジペプチドリピートタンパク質(DPR)(C9orf72リピート伸長の特殊な翻訳によって生成)、スーパーオキシドジスムターゼ1(SOD1)、およびTDP-43が挙げられる。TDP-43凝集に関する疾患は、一般に、ALSおよびFTDを含むが、これらに限定されないTDP-43タンパク質症として記載される。
I.TDP-43序論
トランス活性化応答(TAR)DNA結合タンパク質43kDa(TDP-43)は、染色体1p36.2(ALS10)上のTARDBP遺伝子によってコードされる414アミノ酸タンパク質である。TARDBPは、6つのエクソン(エクソン1は非コーディングであり;エクソン2~6はタンパク質コーディングである)から構成される。TDP-43は、異種性リボ核タンパク質(hnRNP)RNA結合タンパク質ファミリーに属する(Wang et al., Trends in Molecular Medicine Vol.14 No.11, 2008, 479-485; Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64)。TDP-43は、5個の機能ドメイン(Warraich et al., The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 42 (2010) 1606-1609における図1):2個のRNA認識モチーフ(RRM1およびRRM2)(2個の高度に保存された六量体リボ核タンパク質2(RNP2)および八量体リボ核タンパク質1(RNP1)領域を有する)、核外移行シグナル(NES)および核移行シグナル(NLS)(核と細胞質間を往復して結合したmRNAを輸送することを可能にする)、ならびにC末端にグリシン富化ドメイン(タンパク質-タンパク質間の相互作用を介在する)を含有する。TDP-43は、転写、スプライシング、輸送、および安定化を含む、RNAプロセッシングの複数の局面に関連する(Buratti and Baralle, FEBS Journal 277 (2010) 2268-2281)。これは、核と細胞質との間を断続的に往復するが、核に局在することが多く、厳密に自己調節された発現レベルをもって、高度に保存された遍在的に発現されるタンパク質である。2006年に、TDP-43は、タウ陰性のユビキチン陽性封入体(FTLD-TDPと称される)を伴う前頭側頭葉変性症(FTLD)の大部分の場合および筋萎縮性側索硬化症(ALS)の大半の場合に蓄積するタンパク質として同定された(Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133)。
トランス活性化応答(TAR)DNA結合タンパク質43kDa(TDP-43)は、染色体1p36.2(ALS10)上のTARDBP遺伝子によってコードされる414アミノ酸タンパク質である。TARDBPは、6つのエクソン(エクソン1は非コーディングであり;エクソン2~6はタンパク質コーディングである)から構成される。TDP-43は、異種性リボ核タンパク質(hnRNP)RNA結合タンパク質ファミリーに属する(Wang et al., Trends in Molecular Medicine Vol.14 No.11, 2008, 479-485; Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64)。TDP-43は、5個の機能ドメイン(Warraich et al., The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 42 (2010) 1606-1609における図1):2個のRNA認識モチーフ(RRM1およびRRM2)(2個の高度に保存された六量体リボ核タンパク質2(RNP2)および八量体リボ核タンパク質1(RNP1)領域を有する)、核外移行シグナル(NES)および核移行シグナル(NLS)(核と細胞質間を往復して結合したmRNAを輸送することを可能にする)、ならびにC末端にグリシン富化ドメイン(タンパク質-タンパク質間の相互作用を介在する)を含有する。TDP-43は、転写、スプライシング、輸送、および安定化を含む、RNAプロセッシングの複数の局面に関連する(Buratti and Baralle, FEBS Journal 277 (2010) 2268-2281)。これは、核と細胞質との間を断続的に往復するが、核に局在することが多く、厳密に自己調節された発現レベルをもって、高度に保存された遍在的に発現されるタンパク質である。2006年に、TDP-43は、タウ陰性のユビキチン陽性封入体(FTLD-TDPと称される)を伴う前頭側頭葉変性症(FTLD)の大部分の場合および筋萎縮性側索硬化症(ALS)の大半の場合に蓄積するタンパク質として同定された(Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133)。
TDP-43における38個の陰性ドミナント変異は、孤発性および家族性ALS患者、ならびにグリシン富化ドメインに大半が局在する遺伝性FTD患者で同定されている(図1;Lagier-Tourenne and Cleveland, Cell 136, 2009, 1001-1004)。TDP-43は、沈降アッセイによって示されるように、本質的に凝集する傾向にあり、この傾向は、TDP-43凝集と臨床的な疾患の症状とを結び付けるALS関連TARDBP変異のいくつかによってさらに増加される(Ticozzi et al., CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 2010, 9(3), 285-296.)。
II.神経変性におけるTDP-43
TDP-43凝集は、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALS、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する封入体ミオパチー(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー)を含むが、これらに限定されない神経変性状態の増加するリスト(Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64)において同定されている。
TDP-43凝集は、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALS、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する封入体ミオパチー(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症も伴う)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する筋原線維ミオパチー)を含むが、これらに限定されない神経変性状態の増加するリスト(Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64)において同定されている。
患者の脳に由来する凝集されたTDP-43は、過剰リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、およびタンパク質切断によるC末端断片を含む多くの異常な修飾を示す(Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133; Neumann et al., Acta Neuropathol. (2009) 117: 137-149; Hasegawa et al., (2008) Annals of Neurology Vol 64 No 1, 60-70; Cohen et al., Nat Commun. 6: 5845, 2015)。TDP-43病変の別の性質は、TDP-43の核から細胞質への再分布と蓄積である。FTLD-TDPの特徴的な病変は、神経とグリアの細胞質内封入体(NCIおよびGCI各々)および変性神経突起(DN)であり、TDP-43、ならびにユビキチンおよびp62に免疫応答性であるが、他の神経変性症関連タンパク質に陰性である。封入形態とその組織分布における差異は、特異的な変異および/または臨床的な症状に関連している。TDP-43病変の4つのタイプがこれまでに組織学的な分類によって報告されている(Mackenzie and Neumann, J. Neurochem. (2016) 138 (Suppl. 1), 54-70)。FTLD-TDPタイプAの場合は、主に新皮質の層IIにおける大量の短いDN(神経変性突起)および小さい卵型または半月状のNCI(神経細胞質封入体)によって特徴付けられる(Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図2f)。この病変の場合は、通常、行動障害型前頭側頭型認知症(bvFTD)または原発性進行性失語症(nfvPPA)のいずれかを臨床的に示し、プログラニュリン(GRN)変異に関連する。タイプBの場合は、皮質表面層および深層の両方における中程度の数の小さいか、または粒状のNCIを比較的少ないDNおよびNIIとともに示す(神経核内封入体;Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図2g)。FTDおよびALS症状を同時に発現する多くの場合は、FTLD-TDPタイプB病変を示すことが見出されている。タイプCの場合は、特に皮質表面層で豊富な長い蛇行状の神経突起を有し、NCIはほとんどまたは全く存在しない(Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図2j)。この病変は、特に、原発性進行性失語(svPPA)を伴って示す場合に見られる。FTLD-TDPタイプDは、新皮質における豊富な神経核内封入体(NII)および短いDNを極めてまれなNCIとともに示す(Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70における図2k)。この病変パターンは、封入体筋炎に関連するVCPの場合にのみ見られる。
III.FTDにおけるTDP-43
前頭側頭葉型認知症(FTD)は、前頭葉と側頭葉の変性(前頭側頭葉変性症(FTLD)と呼ばれる病理学的特徴)に基づく広範囲の疾患を含む臨床学的用語である。FTDは、65歳より以下の年代における初期の変性認知症のうち2番目に多い症例である(Le Ber, Revue Neurologique 169 (2013) 811-819)。FTDは、性格と行動の変化によって特徴付けられるbvFTD;言語機能の変化によって特徴付けられる意味性認知症(SD)および進行性非流暢性失語(PNFA);運動機能障害によって特徴付けられる大脳皮質基底核症候群(CBS)、進行性核上性麻痺症候群および運動ニューロン疾患(FTD-MND)を含むいくつかの症状によって示される。これらの症状の診断は複雑であり、最終的な結論は、罹患した脳領域の凝集されたタンパク質および疾患を検出する免疫組織化学に基づく死後組織解析によってのみ行うことができる。病理学的観点から、タンパク質封入のうち、約45%の場合がミスフォールドされたタウの病理学的蓄積を示し、45%の症例が病理学的TDP-43を示し、少ない集団がFUSおよび他のタンパク質の凝集を示す。
前頭側頭葉型認知症(FTD)は、前頭葉と側頭葉の変性(前頭側頭葉変性症(FTLD)と呼ばれる病理学的特徴)に基づく広範囲の疾患を含む臨床学的用語である。FTDは、65歳より以下の年代における初期の変性認知症のうち2番目に多い症例である(Le Ber, Revue Neurologique 169 (2013) 811-819)。FTDは、性格と行動の変化によって特徴付けられるbvFTD;言語機能の変化によって特徴付けられる意味性認知症(SD)および進行性非流暢性失語(PNFA);運動機能障害によって特徴付けられる大脳皮質基底核症候群(CBS)、進行性核上性麻痺症候群および運動ニューロン疾患(FTD-MND)を含むいくつかの症状によって示される。これらの症状の診断は複雑であり、最終的な結論は、罹患した脳領域の凝集されたタンパク質および疾患を検出する免疫組織化学に基づく死後組織解析によってのみ行うことができる。病理学的観点から、タンパク質封入のうち、約45%の場合がミスフォールドされたタウの病理学的蓄積を示し、45%の症例が病理学的TDP-43を示し、少ない集団がFUSおよび他のタンパク質の凝集を示す。
IV.ALSにおけるTDP-43
筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、上下運動神経の早期喪失によって特徴付けられる神経変性疾患である。ALSの進行は、1~5年の診断から死亡までの病気進行に伴い、致命的な運動麻痺と呼吸不全が顕著である。孤発性ALSのほとんどの症例において、その神経病変は、一次運動皮質、脳幹運動核、脊髄、および関連する白質路の神経およびグリアにおけるTDP-43の異常な細胞質蓄積によって特徴付けられる。認知症を伴うALSは、運動外新皮質(extramotor neocortex)および海馬におけるTDP-43の蓄積に関する。ALS患者におけるTDP-43のリン酸化の役割は、TDP-43のリン酸化の主な部位としてのアミノ酸S379、S403、S404、S409、S410による核および細胞質の封入体におけるリン酸化TDP-43に特異的に結合する抗体の助けを借りて研究されている(Hasegawa et al., Ann Neurol 2008; 64: 60-70; Neumann et al., Acta Neuropathol (2009) 117: 137-149)。
筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、上下運動神経の早期喪失によって特徴付けられる神経変性疾患である。ALSの進行は、1~5年の診断から死亡までの病気進行に伴い、致命的な運動麻痺と呼吸不全が顕著である。孤発性ALSのほとんどの症例において、その神経病変は、一次運動皮質、脳幹運動核、脊髄、および関連する白質路の神経およびグリアにおけるTDP-43の異常な細胞質蓄積によって特徴付けられる。認知症を伴うALSは、運動外新皮質(extramotor neocortex)および海馬におけるTDP-43の蓄積に関する。ALS患者におけるTDP-43のリン酸化の役割は、TDP-43のリン酸化の主な部位としてのアミノ酸S379、S403、S404、S409、S410による核および細胞質の封入体におけるリン酸化TDP-43に特異的に結合する抗体の助けを借りて研究されている(Hasegawa et al., Ann Neurol 2008; 64: 60-70; Neumann et al., Acta Neuropathol (2009) 117: 137-149)。
V.ADおよび他の疾患におけるTDP-43
TDP-43病変は、アルツハイマー病患者の脳の57%近くまでで生じる(Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450; McAleese et al., Brain Pathol. 2017 Jul; 27(4): 472-479)。TDP-43凝集は、患者の年齢に関連し、ADにおける認知機能の衰退、記憶喪失、および側頭葉内側萎縮と相関する。TDP-43陽性患者は、TDP-43陰性対象と比較して死亡時に認知機能が損なわれる可能性が10倍以上である。ADにおけるTDP-43は、内側側頭葉におけるアミロイドベータおよびタウ病変と重複する脳分布を共有する二次的または独立的な病変を示すようである。病変TDP-43は、いわゆる、ADのTDP-43(TAD)段階化スキーム:最初に、扁桃体(ステージI)、続いて海馬、辺縁系、側頭、最終的に、線条体前部(ステージV)におけるTDP-43の沈着によって報告されている進行性沈着の画一的パターンに従う(Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450)。
TDP-43病変は、アルツハイマー病患者の脳の57%近くまでで生じる(Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450; McAleese et al., Brain Pathol. 2017 Jul; 27(4): 472-479)。TDP-43凝集は、患者の年齢に関連し、ADにおける認知機能の衰退、記憶喪失、および側頭葉内側萎縮と相関する。TDP-43陽性患者は、TDP-43陰性対象と比較して死亡時に認知機能が損なわれる可能性が10倍以上である。ADにおけるTDP-43は、内側側頭葉におけるアミロイドベータおよびタウ病変と重複する脳分布を共有する二次的または独立的な病変を示すようである。病変TDP-43は、いわゆる、ADのTDP-43(TAD)段階化スキーム:最初に、扁桃体(ステージI)、続いて海馬、辺縁系、側頭、最終的に、線条体前部(ステージV)におけるTDP-43の沈着によって報告されている進行性沈着の画一的パターンに従う(Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450)。
VI.TDP-43伝播
最近の証拠により、プリオン様メカニズムによるアミロイドベータ、タウ、アルファシヌクレイン、およびTDP-43の神経組織におけるタンパク質伝播の考えが支持されているが(Hasegawa et al., 2017)、開始点および組織分布伝播パターンは、前記4個のタンパク質とは基本的に異なる(Brettschneider J et al., Nature Rev. Neuroscience, 2015, 109)。ALSの開始と最初の症状は患者間で著しく異なるが、病気進行の共通する特徴は、最初の限局的な領域から多くの神経への病変の広がりである。症状の断続的な悪化は、TDP-43病変の進行的な広がりによって説明しうるかもしれない。ALS患者の脳におけるTDP-43病変は、四段階プロセスでの伝播であり得、順行性軸索移行を用いて皮質下行性軸索投射により経シナプス的に伝播が生じていると考えられる(Brettschneider et al., Ann Neurol. 2013 July; 74(1): 20-38.)。
最近の証拠により、プリオン様メカニズムによるアミロイドベータ、タウ、アルファシヌクレイン、およびTDP-43の神経組織におけるタンパク質伝播の考えが支持されているが(Hasegawa et al., 2017)、開始点および組織分布伝播パターンは、前記4個のタンパク質とは基本的に異なる(Brettschneider J et al., Nature Rev. Neuroscience, 2015, 109)。ALSの開始と最初の症状は患者間で著しく異なるが、病気進行の共通する特徴は、最初の限局的な領域から多くの神経への病変の広がりである。症状の断続的な悪化は、TDP-43病変の進行的な広がりによって説明しうるかもしれない。ALS患者の脳におけるTDP-43病変は、四段階プロセスでの伝播であり得、順行性軸索移行を用いて皮質下行性軸索投射により経シナプス的に伝播が生じていると考えられる(Brettschneider et al., Ann Neurol. 2013 July; 74(1): 20-38.)。
いくつかのある報告では、様々なインビトロモデルにおいて分子レベルでのTDP-43伝播に取り組んでいる。患者の脳由来の不溶性TDP-43調製物は、インビトロで細胞内凝集体形成を誘導することができる(Nonaka et al., Cell Reports 4 (2013), 124-134; Feiler et al., 2015; Porta et al., Nat. Comm., 2018)。また、最近、患者由来の病変TDP-43は、トランスジェニックおよび野生型マウスへの接種後の内在性TDP-43の広範囲に広がった沈着が生じうることが示された(Porta et al., Nat. Comm., 2018)。さらに、細胞内TDP-43凝集体は、その隣接細胞へ伝播する前にエクソソームとともに遊離されることが示された(Nonaka et al., Cell Reports 4 (2013, 124-134))。同様に、アデノウイルスで導入したTDP-43発現は、リン酸化され、遍在化され、最も重要なこととして細胞間の伝播を開始する種として作用した細胞質凝集を引き起こす(Ishii et al., PLoS ONE 12(6): e0179375, 2017)。
VII.TDP-43タンパク質症の予防および治療
病変TDP-43の凝集および伝播は、ALSおよびFTD(現在利用できる治療法が存在しない致命的な疾患)の主な特徴である。TDP-43における変異は、TDP-43ミスフォールディングと病気の進行との因果関係を供するALSおよびFTDの家族性症例に関連している。それゆえ、TDP-43タンパク質症に関連する臨床的症状を示す疾患において、TDP-43凝集体の進行と伝播を阻害し、および/または遅延させることを目的とする予防法および治療法が必要とされている。
病変TDP-43の凝集および伝播は、ALSおよびFTD(現在利用できる治療法が存在しない致命的な疾患)の主な特徴である。TDP-43における変異は、TDP-43ミスフォールディングと病気の進行との因果関係を供するALSおよびFTDの家族性症例に関連している。それゆえ、TDP-43タンパク質症に関連する臨床的症状を示す疾患において、TDP-43凝集体の進行と伝播を阻害し、および/または遅延させることを目的とする予防法および治療法が必要とされている。
いずれの理論によって拘束されることなく、本発明は、TDP-43タンパク質または全TDP-43タンパク質に由来する改変された立体構造特異的抗原ペプチドおよびペプチド断片、ならびに前記ペプチドもしくは断片または全TDP-43タンパク質によって得ることができるか、得られる抗体が、TDP-43の細胞間伝播を遮断し、および/またはTDP-43凝集体を脱凝集させ、および/またはTDP-43タンパク質またはその断片の凝集を阻害するとの前提に基づいて開発された。本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたTDP-43、特に、細胞質および細胞外のミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する。1の実施態様において、本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、細胞質のミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する。1の実施態様において、本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、細胞外のミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する。
VIII.TDP-43タンパク質症の診断
臨床的症状に基づくFTDの診断は、特に、初期の段階において、その臨床的症状が他の疾患と重複しうるために不十分である。それゆえ、FTD範囲内の病変タイプを分類することができる感度が高く特異的なバイオマーカーの開発が緊急の課題である。このようなツールは、神経変性を引き起こす病変の特定のタイプの優れた検出と理解を可能にする。最終的に、このことは、より効率的で正確に臨床試験において長期的にモニターするための患者の選択を可能にする診断バイオマーカーの開発につながり、そしてTDP-43タンパク質症の新規な治療薬の開発をサポートする。
臨床的症状に基づくFTDの診断は、特に、初期の段階において、その臨床的症状が他の疾患と重複しうるために不十分である。それゆえ、FTD範囲内の病変タイプを分類することができる感度が高く特異的なバイオマーカーの開発が緊急の課題である。このようなツールは、神経変性を引き起こす病変の特定のタイプの優れた検出と理解を可能にする。最終的に、このことは、より効率的で正確に臨床試験において長期的にモニターするための患者の選択を可能にする診断バイオマーカーの開発につながり、そしてTDP-43タンパク質症の新規な治療薬の開発をサポートする。
多くのアプローチは、異なるタイプのFTD病変を区別するための生化学的バイオマーカーの開発を目的としている。TDP-43の異なる立体構造に対する抗体の開発は、より感度の高い特異的な診断ツールの作成を可能にしうる。生化学的バイオマーカーと並行して、イメージング用バイオマーカーの開発は、TDP-43タンパク質症における病変の早期の特異的な検出を可能にしうる。脳のTDP-43沈着をイメージングする能力は、TDP-43タンパク質症の診断および薬物開発のための大きな成果となりうる。細胞透過性の抗体断片の使用はこのような検出を可能にする。
異なるタンパク質のミスフォールディングに基づく神経変性疾患の最も初期の事象は、タンパク質を毒性とする別の立体構造の出現である。さらに、このミスフォールドされた立体構造は、罹患した組織を通して観察された伝播の基本メカニズムとして、内在性の正常なタンパク質をミスフォールドされた立体構造として補充することにより自己増殖することができる。それゆえ、タンパク質標的の正常な立体構造に対するミスフォールドを標的とすることは、極めて正確な治療と診断方法を提供する。
一定のタンパク質の異なる立体構造状態に対する抗体を開発するために、提示された抗原の立体構造が特定の立体構造状態における所定の標的に対する立体構造特異的な抗体を生じるように調節された超分子抗原構築物が設計された(WO2012/055933およびWO2012/020124)。立体構造特異的な抗体は、それらが、これらのタンパク質の疾患に関連する立体構造と良性の内在的な立体構造とを区別することができるため、多くの有利な点を供する。このアプローチは、このような抗体が、タンパク質の正常な立体構造に吸着される可能性が低い一方、ミスフォールドされた疾患に関連するそのアイソフォームを標的とするため、治療への応用において多くの利点を提供する。診断への応用においても同様に、このような抗体は、タンパク質の立体構造状態を認識するのみであり、それゆえ最も感度の高い特異的な診断の開発に最重要である疾患に関係する可能性が高い物質を検出する。
IX.先行技術
特許出願WO2008/151055は、生物学的液体中のTDP-43ポリペプチドおよび/またはTDP-43ポリペプチド切断産物(例えば、25kDおよび35kDのTDP-43ポリペプチド切断産物)のレベルを用いて、哺乳類が神経変性疾患にかかっているか否かを調べるための方法および物質を開示する。特許出願WO2013/061163は、ポリペプチド、例えば、ヒト、抗体、ならびにその断片、誘導体および変異体を含むTDP-43特異的結合分子を開示する。
特許出願WO2008/151055は、生物学的液体中のTDP-43ポリペプチドおよび/またはTDP-43ポリペプチド切断産物(例えば、25kDおよび35kDのTDP-43ポリペプチド切断産物)のレベルを用いて、哺乳類が神経変性疾患にかかっているか否かを調べるための方法および物質を開示する。特許出願WO2013/061163は、ポリペプチド、例えば、ヒト、抗体、ならびにその断片、誘導体および変異体を含むTDP-43特異的結合分子を開示する。
発明の概要
本発明は、ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片に関する。本発明の好ましい実施態様において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、生理学的に機能的なTDP-43に結合しない。本発明において、ミスフォールドされたTDP-43には、ミスフォールドされたモノマーの、および/またはミスフォールドされたオリゴマーの、および/またはミスフォールドされ凝集され、および/または翻訳後修飾され、および/または、ミスフォールドされ短縮されたTDP-43が含まれる。よって、本発明は、ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片であって、前記ミスフォールドされたTDP-43が、オリゴマーの、および/または凝集され、および/または翻訳後修飾されたTDP-43であり、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片が、生理学的に機能的なTDP-43に結合しないものを提供する。
本発明は、ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片に関する。本発明の好ましい実施態様において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、生理学的に機能的なTDP-43に結合しない。本発明において、ミスフォールドされたTDP-43には、ミスフォールドされたモノマーの、および/またはミスフォールドされたオリゴマーの、および/またはミスフォールドされ凝集され、および/または翻訳後修飾され、および/または、ミスフォールドされ短縮されたTDP-43が含まれる。よって、本発明は、ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片であって、前記ミスフォールドされたTDP-43が、オリゴマーの、および/または凝集され、および/または翻訳後修飾されたTDP-43であり、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片が、生理学的に機能的なTDP-43に結合しないものを提供する。
本発明のミスフォールドされたTDP-43特異的結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、TDP-43の細胞間伝播を遮断し、および/またはTDP-43凝集体を脱凝集させ、および/またはTDP-43タンパク質またはその断片の凝集を阻害する。
特に、本発明のミスフォールドされたTDP-43特異的結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、TDP-43の細胞間の伝播を遮断する。1の実施態様において、本発明のミスフォールドされたTDP-43特異的結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、TDP-43凝集体を脱凝集させる。
1の実施態様において、本発明のミスフォールドされたTDP-43特異的結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、TDP-43タンパク質またはその断片の凝集を阻害する。
本発明において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する。本発明の結合分子は、TDP-43タンパク質に対して/のために特異的なポリペプチドおよび/または抗体、および/またはその抗原結合断片を含む。「ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する」は、本発明の結合分子が、ミスフォールドされたTDP-43、特に、TDP-43内のエピトープ、特に、TDP-43タンパク質の1つまたはそれ以上の病理学的な立体構造中の露出された/利用可能なエピトープに対して、他のエピトープ、特に、生理学的に機能的なTDP-43中で見出されるエピトープより高い親和性をもって、特異的に、一般的に、および合わせて結合することを意味する。ミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたモノマーの、および/またはミスフォールドされたオリゴマーの、および/またはミスフォールドされ凝集され、および/またはミスフォールドされ翻訳後修飾されたTDP-43に特異的に結合する。本発明の結合分子、特に、ポリペプチド、より具体的には、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたTDP-43、特に、細胞質のミスフォールドされたTDP-43、特に、細胞外のミスフォールドされたTDP-43、特に、細胞質および細胞外のミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する。本発明の1の実施態様によれば、結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたモノマーの、オリゴマーの、凝集され、翻訳後修飾されたTDP-43(これらの全ては、全長および/または短縮TDP-43を含みうる)を含む、ミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する。1の実施態様において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたモノマーのTDP-43に特異的に結合する。1の実施態様において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされたオリゴマーのTDP-43に特異的に結合する。1の実施態様において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされ凝集されたTDP-43に特異的に結合する。1の実施態様において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされ翻訳後修飾されたTDP-43に特異的に結合する。好ましい実施態様において、全長ヒトTDP-43は、配列番号1の配列を含み、好ましくは、有する。本発明の別の好ましい実施態様において、結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、全長および/または短縮TDP-43内のエピトープに特異的に結合し、前記エピトープは、配列番号1の配列を有する全長ヒトTDP-43の残基215-222(配列番号5)からなる。よって、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは、配列番号1の配列を有する全長ヒトTDP-43の残基215-222(配列番号5)を含み、好ましくは、からなるペプチドに特異的に結合する。
本発明において、前記結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片は、ミスフォールドされた細胞外TDP-43に特異的に結合する。ある実施態様において、本発明の結合分子、特に、抗体またはその抗原結合断片はまた、ミスフォールドされた細胞質TDP-43に特異的に結合する。
本発明のある実施態様において、前記抗体は、モノクローナル抗体である。ある実施態様において、前記抗体は、マウス、マウス化、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。
本発明のある実施態様において、本明細書に記載の抗体の免疫学的結合特性を有する抗体またはその抗原結合断片もしくは誘導体は、配列番号10および配列番号20、配列番号30および配列番号40、配列番号50および配列番号60、配列番号70および配列番号80、配列番号90および配列番号100、配列番号110および配列番号120、配列番号130および配列番号140、配列番号150および配列番号160、配列番号170および配列番号180、配列番号190および配列番号200、配列番号210および配列番号220、配列番号230および配列番号232、配列番号234および配列番号236、配列番号238および配列番号240、配列番号242および配列番号244、配列番号246および配列番号248、配列番号250および配列番号252、配列番号254および配列番号256、または配列番号258および配列番号260でそれぞれ示されるアミノ酸配列の可変領域VLおよび/またはVHを有する抗体である。上記配列において、配列番号10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、および160は、VH/VL配列の一部として末尾配列を含む。末尾配列に相当するこれらの配列の一部は、配列表で提供されるものであり、特に、配列番号10に含まれる末尾配列は、配列番号18で提供され、配列番号20に含まれる末尾配列は、配列番号28で提供されるものなどである。当業者には、VH/VL配列におけるFR4の末端配列のC末端は、VHまたはVL配列の一部として考慮されることがあるが、その一部として考慮されないこともあることが知られている。本発明において、いくつかの抗体については両方の場合が提供され、末端を有しないVH/VL配列が好ましい。下記の表1は、本発明の抗体の供されるVHおよびVL配列の概要を提供する:
表1
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
d)配列番号70の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号70のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
e)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
f)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
g)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
h)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
i)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
j)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
k)配列番号210の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号210のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
l)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
m)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
n)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
o)配列番号242の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号242のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
p)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
q)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
r)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);あるいは
s)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)
を含む。
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
d)配列番号70の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号70のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
e)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
f)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
g)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
h)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
i)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
j)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
k)配列番号210の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号210のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
l)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
m)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
n)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
o)配列番号242の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号242のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
p)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
q)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
r)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);あるいは
s)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号80の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号80のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号220の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号220のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号244の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号244のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
p)配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
q)配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
r)配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
s)配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
a)配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号80の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号80のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号220の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号220のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号244の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号244のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
p)配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
q)配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
r)配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
s)配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号70の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号70のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号80の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号80のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号210の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号210のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号220の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号220のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号242の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号242のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号244の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号244のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
p)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
q)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
r)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
s)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号70の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号70のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号80の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号80のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号210の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号210のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号220の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号220のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号242の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号242のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号244の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号244のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
p)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
q)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
r)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
s)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
d)配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号72に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号76に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
e)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
f)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
g)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
h)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
i)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
j)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
k)配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号212に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号216に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3
を含む。
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
d)配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号72に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号76に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
e)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
f)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
g)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
h)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
i)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
j)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
k)配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、あるいは配列番号212に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号216に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号82に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
j)配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
k)配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号222に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
a)配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号82に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
j)配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
k)配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、あるいは配列番号222に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
j)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
k)配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
j)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
k)配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
ある実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号72に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号76に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号82に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
j)配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
k)配列番号212に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号216に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号222に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
a)配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号72に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号76に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号82に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
j)配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
k)配列番号212に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号216に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号222に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
d)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
e)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
f)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
g)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
h)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
i)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
j)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
k)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
l)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
m)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
n)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
o)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);あるいは
p)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)
を含む。
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
d)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
e)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
f)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
g)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
h)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
i)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
j)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
k)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
l)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
m)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
n)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);
o)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL);あるいは
p)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
p)配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
a)配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
p)配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
p)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
a)配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b)配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c)配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d)配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e)配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f)配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g)配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h)配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i)配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j)配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号232のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k)配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l)配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m)配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n)配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o)配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
p)配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)および配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
d)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
e)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
f)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
g)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
h)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
i)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3
を含む。
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
d)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
e)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
f)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
g)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
h)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;あるいは
i)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3あるいは配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
a)配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3あるいは配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
d)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
e)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
f)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
g)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
h)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
i)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
d)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
e)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
f)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
g)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
h)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;または
i)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
ある特定の実施態様において、前記抗体は:
a)配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
a)配列番号12に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
b)配列番号32に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
c)配列番号52に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
d)配列番号92に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
e)配列番号112に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
f)配列番号132に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
g)配列番号152に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
h)配列番号172に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3;あるいは
i)配列番号192に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206に対して少なくとも80%、90%、または95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むVH-CDR3
を含む。
ある実施態様において、本明細書で供される結合分子または抗体は、特に、ミスフォールドされたTDP-43、特に、ミスフォールドされたモノマーTDP-43、ミスフォールドされ凝集されたTDP-43、および/またはミスフォールドされたオリゴマーTDP-43への結合に関して、≦1μM、≦100nM、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、または≦0.001nM(例えば、10-8Mまたはそれ以下、例えば、10-8M~10-13M、例えば、10-9M~10-13M)の解離定数(Kd)を有する。
1の実施態様において、Kdは、25℃において-10共鳴単位(RU)で固定した抗原CM5チップとともにBIACORE(登録商標)-2000またはBIACORE(登録商標)-3000(BIACORE,Inc.,ニュージャージー州のピスカタウェイ)を用いて表面プラズモン共鳴法で測定される。簡潔に説明すると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ(CM5,BIACORE,Inc)を、供給元の説明書に従ってN-エチル-N’-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC)およびN-ヒドロキシコハク酸イミド(NHS)で活性化させる。抗原を10mM 酢酸ナトリウムをpH4.8で5μg/ml(0.2μM)まで希釈し、5μl/分の流速で注入し、結合タンパク質の約10反応単位(RU)とする。抗原の注入後、1M エタノールアミンを注入して未反応の基をブロッキングする。反応速度測定のために、抗体の2倍連続希釈(0.58nM~200nM)を、25℃で約25μl/分の流速にて0.05% ポリソルベート20(TWEEN-20(登録商標))界面活性剤(PEST)を含有するPBS中に注入する。結合速度(kon)および解離速度(koff)は、結合と解離センサーグラムを同時に適合することにより単純な一対一ラングミュア結合モデル(BIACORE(登録商標)T100評価ソフトフェア)を用いて算出する。平衡解離定数(Kd)は、koff/kon比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。オンレート(on-rate)が上記表面プラズモン共鳴法により106M-1s-1を超える場合、前記オンレートは、分光計、例えば、ストップフロー搭載分光光度計(Aviv Instrument)または8000シリーズSLM-AMINCO(登録商標)分光光度計(ThermoSpectronic)(攪拌用キュベットを備える)で測定されるように、高濃度の抗原の存在下でPBS中の20nM 抗抗原抗体(pH7.2)の25℃において蛍光発光強度(励起=295nm;発光=340nM、16nmの帯域通過)の増加または減少を測定する蛍光消光法を用いて決定することができる。
ある実施態様において、ヒトTDP-43に結合する本明細書に記載される本発明の抗体、特に、単離された抗体が提供され、前記抗体は、ミスフォールドされたモノマーのTDP-43、ミスフォールドされ凝集されたTDP-43、およびミスフォールドされたオリゴマーのTDP-43の各々に、100nM以下、10nM以下、1nM以下、200pM以下、100pM以下、または10pM以下のKDで結合する。好ましくは、本発明の抗体は、ミスフォールドされたモノマーのTDP-43、ミスフォールドされ凝集されたTDP-43、ミスフォールドされたオリゴマーのTDP-43の各々に、100nM以下、10nM以下、1nM以下、200pM以下、100pM以下、または10pM以下のKDで結合するものであって、前記TDP-43は、翻訳後修飾され、例えば、リン酸化されたTDP-43である。
本発明はまた、本明細書に記載される本発明の結合分子、特に、抗体(TDP-43に結合する抗体断片および誘導体を含む)またはTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物に関し、ならびにTDP-43タンパク質症の予防、診断、または治療においてこのような組成物を用いる免疫治療および免疫診断方法であって、前記組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与する方法に関する。
ある実施態様において、本発明は、TDP-43に特異的に結合する本明細書に記載される本発明の分子、特に、抗体、ならびに前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)、およびパーキンソン病(PD)を含むが、これらに限定されないTDP-43凝集に関連する疾患または異常を診断し、予防し、緩和し、または治療するためのこれらの分子の使用を包含する。本明細書に記載の方法および組成物は、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)を含むが、これらに限定されないTDP-43凝集に関連する疾患または異常の診断、予防、緩和、または治療への適用を示す。
別の実施態様において、TDP-43に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に、抗体は、試料に接触させることにより、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALSであって、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する封入体ミオパチー(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))から選択されるTDP-43凝集に関連する疾患または異常を検出し、診断し、またはモニターするものである。
1の実施態様において、本発明は、TDP-43に特異的に結合する本明細書に記載される本発明の分子、特に、抗体、ならびに試料中のTDP-43の存在を検出するためのこれらの分子、特に、これらの抗体の使用を包含する。よって、本発明のTDP-43結合分子、例えば、本明細書に記載されるTDP-43抗体は、例えば、ELISAに基づくアッセイまたは表面適合(surface adapted)アッセイを用いることによって、試料中のTDP-43の存在についてヒト、血液、CSF、および尿をスクリーニングするために用いることができる。本発明の方法および組成物はまた、前駆症状の疾患の診断、および疾患進行および治療効果のモニターに適用するものであり、ある実施態様によれば、TDP-43特異的な抗体(例えば、全長抗体または抗体のTDP-43結合断片または誘導体)は、試料(例えば、血液、脳脊髄液、または脳組織)に接触させることにより、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALSであって、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病として公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、封入体ミオパチー(バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する)(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症ともいう)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))を検出し、診断し、またはモニターするものである。
さらなる実施態様において、本発明は、TDP-43凝集に関連する疾患または異常の予防方法、緩和方法、または治療方法を提供する。1の実施態様によれば、本発明の方法は、本明細書に記載されるTDP-43に特異的な本発明の結合分子、特に、抗体(例えば、全長抗体または抗体のTDP-43結合断片もしくは誘導体)の有効濃度を対象に投与することを特徴とする。さらなる実施態様において、本発明は、TDP-43タンパク質症を予防し、緩和し、または治療するための方法を提供する。ある実施態様によれば、TDP-43に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に、抗体は、前頭側頭葉変性症(FTD)または筋萎縮性側索硬化症(ALS)を治療し、緩和し、または予防するために投与される。別の実施態様において、TDP-43に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に、抗体は、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、およびパーキンソン病(PD)から選択される神経変性疾患を予防し、緩和し、または治療するために投与される。
別の実施態様において、TDP-43に特異的な本明細書に記載される本発明の結合分子、特に、抗体は、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALSであって、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する封入体ミオパチー(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症))、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))から選択される疾患を予防し、緩和し、または治療するために投与される。
本発明の実施態様の詳細な説明
X.定義
本明細書で用いられる「抗原結合分子」は、抗原に特異的または選択的に結合することができる分子である。結合分子は、抗体またはその断片を含むか、または抗体またはその断片であってもよい。抗ミスフォールドTDP-43結合分子は、エピトープ特異的認識部位でミスフォールドされたTDP-43タンパク質に結合する分子、例えば、抗TDP-43抗体またはその断片である。すなわち、本発明の抗原結合分子は、配列番号1のアミノ酸配列内、好ましくは、そのアミノ酸215-222内でエピトープに結合する。他の抗ミスフォールドTDP-43結合分子はまた、多価分子、多特異的分子(例えば、二特異性抗体)、融合分子、アプタマー、アビマー(Avimer)、または他の天然に存在するか、もしくは組み換えて作り出された分子を含みうる。本発明に有用な例示的な抗原結合分子には、抗体様分子(antibody-like molecule)が含まれる。前記抗体様分子は、標的分子に結合することによって機能を示すことができる分子であり(例えば、Current Opinion in Biotechnology 2006, 17:653-658; Current Opinion in Biotechnology 2007, 18:1-10; Current Opinion in Structural Biology 1997, 7:463-469; Protein Science 2006, 15:14-27を参照)、例えば、DARPin(WO2002/020565)、アフィボディ(WO1995/001937)、アビマー(Avimer)(WO2004/044011;WO2005/040229)、アドネクチン(Adnectin)(WO2002/032925)、およびフィノマー(fynomer)(WO2013/135588)が挙げられる。
X.定義
本明細書で用いられる「抗原結合分子」は、抗原に特異的または選択的に結合することができる分子である。結合分子は、抗体またはその断片を含むか、または抗体またはその断片であってもよい。抗ミスフォールドTDP-43結合分子は、エピトープ特異的認識部位でミスフォールドされたTDP-43タンパク質に結合する分子、例えば、抗TDP-43抗体またはその断片である。すなわち、本発明の抗原結合分子は、配列番号1のアミノ酸配列内、好ましくは、そのアミノ酸215-222内でエピトープに結合する。他の抗ミスフォールドTDP-43結合分子はまた、多価分子、多特異的分子(例えば、二特異性抗体)、融合分子、アプタマー、アビマー(Avimer)、または他の天然に存在するか、もしくは組み換えて作り出された分子を含みうる。本発明に有用な例示的な抗原結合分子には、抗体様分子(antibody-like molecule)が含まれる。前記抗体様分子は、標的分子に結合することによって機能を示すことができる分子であり(例えば、Current Opinion in Biotechnology 2006, 17:653-658; Current Opinion in Biotechnology 2007, 18:1-10; Current Opinion in Structural Biology 1997, 7:463-469; Protein Science 2006, 15:14-27を参照)、例えば、DARPin(WO2002/020565)、アフィボディ(WO1995/001937)、アビマー(Avimer)(WO2004/044011;WO2005/040229)、アドネクチン(Adnectin)(WO2002/032925)、およびフィノマー(fynomer)(WO2013/135588)が挙げられる。
本明細書で用いられる用語「抗ミスフォールドTDP-43抗体」および「ミスフォールドされたTDP-43に結合する抗体」または単に「抗体」は、ミスフォールドされたTDP-43に、抗体がTDP-43を標的する診断薬および/または治療剤として有用であるために十分な親和性で結合することができる抗体を意味する。1の実施態様において、本発明の抗TDP-43抗体の無関係の非TDP-43タンパク質または生理学的に機能的なTDP-43への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ(RIA)によって測定されると、抗体のミスフォールドされたTDP-43への結合の約10%以下である。ある実施態様において、抗ミスフォールドTDP-43抗体は、生理学的に機能的なTDP-43では利用できないTDP-43のエピトープに結合する。すなわち、ミスフォールディングにより、前記エピトープは利用可能となり、本発明の結合分子、特に、抗体によって結合される。このようなエピトープは、ヒトTDP-43のアミノ酸215-222(配列番号5)内でありうる。これに関して、用語「生理学的に機能的な」は、インビボ細胞環境においてその所望される機能を示すことができる状態であるTDP-43タンパク質に関する。対照的に、ミスフォールディングにより、前記TDP-43タンパク質は、少なくとも元の生理学的に関連する機能の50%以上によって定義される程度まで同一機能を示すその活性を喪失する。一般に、用語「抗体」は、本明細書において、最も広範囲の意味で用いられ、以下に限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体(例えば、二特異性抗体)、全ヒト抗体、および抗体断片(それらは所望される抗原結合活性を示すものに限定される)を含む様々な抗体構造を包含する。本発明内の抗体はまた、キメラ抗体、組み換え抗体、組み換え抗体の抗原結合断片、ヒト化抗体、あるいはファージの表面により提示されるか、またはキメラ抗原受容体(CAR)T細胞の表面により提示される抗体でありうる。
抗体の「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体以外の分子を意味する。抗体断片の例には、以下に限定されないが、抗体断片から形成されるFv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2;二特異性抗体;線状抗体;単鎖抗体分子(例えば、scFv);および多特異性抗体が含まれる。
タンパク質の規定された領域内の「エピトープに結合する抗体」は、前記タンパク質に結合するための領域内のアミノ酸の1つまたはそれ以上の存在を必要とする抗体である。
ある実施態様において、タンパク質の規定された領域内の「エピトープに結合する抗体」は、前記タンパク質のアミノ酸に変異を入れ、前記抗体の生じた変化したタンパク質(例えば、変化したタンパク質(前記エピトープを含む))への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも20%であるまで決定される変異分析によって同定される。ある実施態様において、タンパク質の規定された領域内の「エピトープに結合する抗体」は、前記タンパク質のアミノ酸に変異を入れ、前記抗体の生じた変化したタンパク質(例えば、変化したタンパク質(前記エピトープを含む))への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、または少なくとも90%であるまで決定される変異分析によって同定される。ある実施態様において、前記抗体の結合は、FACS、WBによって、または適する結合アッセイ(例えば、ELISA)によって決定される。ある実施態様において、本発明の抗体は、生理学的に機能的なTDP-43に利用することができず、TDP-43がミスフォールド、すなわち、前記タンパク質がその生理学的機能を示すことができない異なる三次構造である場合に利用可能となり、好ましくは、前記エピトープは、配列番号1のアミノ酸215-222(配列番号5)内に存在する。
本発明の中で用いられる用語「に結合する」は、相互に少なくとも2つの「抗原相互作用部位」の結合(相互作用)を定義する。用語「抗原相互作用部位」は、本発明によれば、ポリペプチドのモチーフ、すなわち、TDP-43の抗原の特異的な抗原または特異的なグループと特異的に相互作用する能力を示す本発明の抗体または抗原結合断片の一部を定義する。前記結合/相互作用はまた、「特異的な認識」を定義するために理解される。用語「特異的に認識する」は、本発明によれば、前記抗体が、本明細書で定義されるTDP-43の少なくとも2個のアミノ酸に特異的に相互作用し、および/または結合することができ、特に、配列番号1の残基215-222(配列番号5)内の少なくとも2個のアミノ酸に相互作用し/結合することができることを意味する。
本発明により用いられる用語「特異的な相互作用」は、本発明の抗体またはその抗原結合断片が、類似する構造の(ポリ)ペプチドと交差反応しないか、または実質的にしないことを意味する。よって、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号1のアミノ酸215-222(配列番号5)内の特定のアミノ酸配列によって形成されるTDP-43の構造に特異的に結合し/相互作用する。
抗原結合分子、特に、研究中の抗体またはその抗原結合断片の一団の交差反応性は、一般的な条件下での抗体またはその抗原結合断片の前記一団の結合(例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1988)、およびUsing Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1999)を参照のこと)の目的の(ポリ)ペプチドならびに多くの程度の差があるが(構造的におよび/または機能的に)密接に関連する(ポリ)ペプチドへの結合を評価することによって試験されうる。本明細書で定義されるTDP-43の特定の構造、例えば、本明細書に記載されるTDP-43の特異的なエピトープまたは(ポリ)ペプチド/タンパク質に結合するが、同一のTDP-43の他のエピトープまたは(ポリ)ペプチドのいずれにも結合しないか、または実質的に結合しないこれらの構築物(すなわち、抗体、これらの抗原結合断片など)のみが、目的のエピトープまたは(ポリ)ペプチド/タンパク質に特異的であると考慮され、本明細書で供される方法によるさらなる実験のために選択される。これらの方法には、とりわけ、構造的におよび/または機能的に密接に関連する分子との結合実験、遮断および競合実験が含まれうる。これらの結合実験にはまた、FACS分析、表面プラズモン共鳴法(SPR、例えば、BIACORE(登録商標))、分析用超遠心、等温滴定カロリメトリー、蛍光異方性、蛍光分光法、または放射性標識リガンド結合アッセイが含まれる。
よって、特異性は、当該技術分野で公知の方法および本明細書に記載される方法によって実験的に調べることができる。このような方法には、以下に限定されないが、ウェスタンブロット、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA試験、およびペプチドスキャンが含まれる。
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を意味し、すなわち、前記集団を含む各抗体は、少量で存在しうる可能性のある天然に生じる変異の除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一抗原部位に対して高度に特異的である。モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンが実質的に混在しないハイブリドーマ培養によって合成されうる点で有利である。前記調製された「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団としての抗体の特徴を示し、いずれか特定の方法による抗体の生成が必要であるものと解釈されるべきではない。上記に記載されるように、本発明により用いられるモノクローナル抗体は、Kohler, Nature 256 (1975), 495に記載されるハイブリドーマ方法によって作成されてもよい。
本明細書で用いられる用語「ポリクローナル抗体」は、1つまたはそれ以上の他の非同一の抗体間または存在下で生成された抗体を意味する。一般に、ポリクローナル抗体は、非同一の抗体を生成した数種類の他のBリンパ球の存在下でBリンパ球から生成される。通常、ポリクローナル抗体は、免疫化された動物から直接得られる。
本明細書で用いられる用語「全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞由来のハイブリドーマで生成される場合、マウス糖鎖を含有しうる。同様に、「マウス(mouse)抗体」または「マウス(murine)抗体」は、マウス(mouse)/マウス(murine)免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。あるいは、「全ヒト抗体」は、ラット、ラット細胞、ラット細胞由来のハイブリドーマで生成される場合、ラット糖鎖を含有しうる。同様に、用語「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。全ヒト抗体はまた、例えば、全ヒト抗体の生成とスクリーニングを可能にする広く用いられているスクリーニング技術であるファージディスプレイによって生成されうる。ファージ抗体もまた、本発明で用いることができる。ファージディスプレイ法は、例えば、US5,403,484、US5,969,108、およびUS5,885,793に記載されている。全ヒト抗体の開発を可能にする別の技術は、マウスハイブリドーマ技術の改変法に関するものである。マウスは、それら自身のマウス遺伝子の代わりにヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むように導入される(例えば、US5,877,397を参照のこと)。
用語「キメラ抗体」は、別のヒトまたは非ヒト種(例えば、マウス、ウマ、ラビット、イヌ、ウシ、ニワトリ)に由来する抗体領域(例えば、定常領域)に融合されるか、またはキメラ化された、本発明の可変領域を含む抗体を意味する。
用語「抗体」はまた、組み換えヒト抗体、異種抗体、およびヘテロハイブリッド抗体に関する。用語「組み換え(ヒト)抗体」には、組み換え法によって調製され、発現され、作成され、または単離される全てのヒト配列抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物(例えば、マウス)から単離される抗体;宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを用いて発現される抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、あるいはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のDNA配列へのスプライシングに関する他のいずれかの手法によって調製され、発現され、作成され、または単離される抗体が含まれる。このような組み換えヒト抗体は、(存在すれば)ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、このような抗体は、インビトロ変異誘発(またはヒトIg配列の動物トランスジェニックを用いる場合、インビボ体細胞変異誘発)にかけることができ、それにより、前記組み換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列VHおよびVL配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内において天然に存在しえない配列である。
「異種抗体」は、このような抗体を生成するトランスジェニック非ヒト生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物ではない生物、一般に、トランスジェニック非ヒト動物の種以外の種に由来する生物で見出されるアミノ酸配列またはこれに対応する核酸配列を有する抗体を意味する。
用語「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物由来の軽鎖および重鎖を有する抗体を意味する。例えば、マウス軽鎖に結合したヒト重鎖を有する抗体は、ヘテロハイブリッド抗体である。ヘテロハイブリッド抗体の例には、キメラおよびヒト化抗体が挙げられる。
用語「抗体」はまた、ヒト化抗体に関する。非ヒト(例えば、マウスまたはウサギ)抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはこれらの断片(例えば、Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、または抗体の他の抗原結合部分配列)である。多くの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域(CDR)に由来する残基が、所望される特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種のCDR(ドナー抗体)に由来する残基によって置換されているヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。ある例において、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも導入されたCDRまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含みうる。これらの改変は、抗体の機能をさらに改善し、最適化するためになされる。一般に、前記ヒト化抗体は、少なくとも1つ、典型的には、2つの可変領域の実質的に全てを含むものであって、CDR領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、FR領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである。前記ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含んでいてもよい。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321 (1986), 522-525; Reichmann Nature 332 (1998), 323-327 and Presta Curr Op Struct Biol 2 (1992), 593-596を参照のこと。
抗体のヒト化のための一般的な方法は、非ヒトドナーの抗体由来の機能的な抗原結合部位がヒトアクセプター抗体に移植されるCDR移植に関するものである。CDR移植法は、当該技術分野で公知であり、例えば、US5,225,539、US5,693,761、およびUS6,407,213に記載されている。別の関連する方法は、遺伝子再構成と遺伝子変換を起こすことができる1つまたはそれ以上のヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むように遺伝学的に操作されているトランスジェニック動物由来のヒト化抗体の生成である(例えば、US7,129,084を参照のこと)。
よって、本発明において、用語「抗体」は、全免疫グロブリン分子ならびにこのような免疫グロブリン分子の一部(すなわち、「その抗原結合断片」)に関する。さらに、前記用語は、上記に記載されるように、改変され、および/または変換された抗体分子に関する。前記用語はまた、組み換えまたは合成して作成され/合成された抗体に関する。前記用語はまた、インタクトな抗体、ならびにその抗体断片(例えば、分離させた軽鎖および重鎖、Fab、Fv、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2に関する。用語抗体はまた、以下に限定されないが、全ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、CDR移植抗体、および抗体構築物、例えば、単鎖Fvs(scFv)もしくは抗体融合タンパク質を含む
「単鎖Fv」または「scFv」抗体断片は、本発明の文脈において、抗体のVHおよびVL領域を有するものであって、これらの領域は、単一ポリペプチド鎖で存在する。一般に、前記scFv ポリペプチドには、scFvが抗原結合のための所望される構造を形成することを可能にするVHおよびVL領域の間のポリペプチドリンカーがさらに含まれる。単鎖抗体の作成について記載される技術は、例えば、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, N.Y. (1994), 269-315に開示されている。
本明細書で用いられる「Fab断片」は、1つの軽鎖およびCH1、ならびに1つの重鎖の可変領域から構成される。Fab分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
「Fc」領域は、抗体のCH2およびCH3領域を含む2つの重鎖断片を含有する。前記2つの重鎖断片は、2つまたはそれ以上のジスルフィド結合およびCH3領域の疎水性相互作用によって結合されている。
「Fab’断片」は、1つの軽鎖ならびにVH領域およびCH1領域を含有する1つの重鎖の一部を含み、さらに2つのFab’断片の2つの重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてF(ab’)2分子を形成できるようなCH1およびCH2領域の間の領域を含む。
「F(ab’)2 断片」は、2つの軽鎖、ならびにCH1およびCH2領域の間の定常領域の一部を含む2つの重鎖を含有するものであって、前記2つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。よって、F(ab’)2 断片は、前記2つの重鎖間のジスルフィド結合によって結合されている2つのFab’断片から構成される。
前記「Fv領域」は、重鎖および軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠如している。
本発明により用いられる抗体、抗体構築物、抗体断片、抗体誘導体(全てIgに由来する)、またはそれらの対応する免疫グロブリン鎖は、当該技術分野で公知の従来技術を用いて、例えば、アミノ酸の欠失、挿入、置換、付加、および/または組換、ならびに/あるいは当該技術分野で公知のいずれか他の改変を単独で、または組み合わせて用いることによってさらに改変することができる。免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列に内在するDNA配列におけるこのような改変を導入するための方法は、当業者に周知であり;例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989) and 3rd edition (2001)を参照のこと。用語「Igに由来する領域」は、特に、少なくとも1つのCDRを含む(ポリ)ペプチド構築物に関する。記載されるIgに由来する領域の断片または誘導体は、上記抗体分子の一部であり、ならびに/あるいは化学/生化学的方法または分子生物学的方法によって改変されている(ポリ)ペプチドを定義する。対応する方法は、当該技術分野で公知であり、とりわけ、研究室用マニュアルに記載されている(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989) and 3rd edition (2001); Gerhardt et al., Methods for General and Molecular Bacteriology ASM Press (1994); Lefkovits, Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques; Academic Press (1997); Golemis, Protein-Protein Interactions: A Molecular Cloning Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press (2002)を参照のこと)。
本明細書で用いられる用語「CDR」は、当該技術分野で周知である「相補性決定領域」に関する。CDRは、前記分子の特異性を決定する免疫グロブリンの一部であり、特定のリガンドと接触する。CDRは、分子のうちの最も変化しやすい部分であり、これらの分子の多様性に寄与している。各V領域において3つのCDR領域(CDR1、CDR2、およびCDR3)が存在する。CDR-Hは、可変重鎖のCDR領域を表し、CDR-Lは、可変軽鎖のCDR領域に関する。VHは、可変重鎖を意味し、VLは、可変軽鎖を意味する。Igに由来する領域のCDR領域は、Kabat "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th edit. NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services (1991); Chothia J., Mol. Biol. 196 (1987), 901-917 or Chothia, Nature 342 (1989), 877-883に記載されるように決定されうる。
よって、本発明において、上記の本明細書に記載の抗体分子は、全長抗体(免疫グロブリン、例えば、IgG1、IgG2、IgG2A、IgG2b、IgA1、IgGA2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD、またはIgE)、F(ab)-、Fab’-SH-、Fv-、Fab’-、F(ab’)2断片、キメラ抗体、CDR移植抗体、全ヒト抗体、二価抗体構築物、抗体融合タンパク質、合成抗体、二価単鎖抗体、三価単鎖抗体、および多価単鎖抗体からなる群から選択される。
「ヒト化方法」は、当該技術分野で周知であり、特に、抗体分子、例えば、Ig由来分子について記載されている。用語「ヒト化」は、非ヒト抗体に由来する配列のある一部を含有する非ヒト(例えば、マウス)抗体またはその断片(例えば、Fv、Fab、Fab’、F(ab’)、scFvs、または他の抗体の抗原結合部分配列)のヒト化型を意味する。ヒト化抗体には、ヒト免疫グロブリンの相補性決定領域(CDR)に由来する残基が、所望される結合特異性、親和性および能力を有する非ヒト種(例えば、マウス、ラット、またはウサギ)のCDRに由来する残基によって置換されているヒト免疫グロブリンが含まれる。一般に、前記ヒト化抗体は、少なくとも1つ、一般的に、2つの可変領域を実質的に全て含むものであって、前記CDR領域の全てまたは実質的な全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、前記FR領域の全てまたは実質的な全てが、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである。ヒト化抗体は、適宜、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含んでいてもよい;とりわけ、Jones et al., Nature 321 (1986),522-525, Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2 (1992),593-596を参照のこと。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトがその抗体の元々の結合活性をまだ維持する供給源からそこに導入された1つまたはそれ以上のアミノ酸を有する。抗体/抗体分子のヒト化のための方法は、Jones et al., Nature 321 (1986),522-525; Reichmann et al., Nature 332 (1988),323-327;およびVerhoeyen et al., Science 239 (1988),1534-1536にさらに詳細に記載されている。ヒト化抗体、例えば、EpCAMに対する抗体の特定の例が、当該技術分野で公知である(例えば、LoBuglio, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 1562 and Khor, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 847を参照のこと)。
よって、本発明において、ヒト化であり、医薬組成物でさらに用いることができる抗体分子またはその抗原結合断片が提供される。
本発明の抗体または抗原結合断片の特異性は、上記で定義される抗体または抗原結合断片のアミノ酸配列の形によって発現されるだけではなく、その抗体が結合することができるエピトープによっても発現されうる。よって、本発明は、1の実施態様において、本発明の抗体と同一のエピトープを認識する抗ミスフォールドTDP-43抗体またはその抗原結合断片に関する。
当業者によれば、前記エピトープは、TDP-43タンパク質中に含まれうるが、分解産物中に含まれてもよく、または化学的に合成されたペプチドであってもよいことが理解されうる。アミノ酸位置は、TDP-43タンパク質の配列において対応するアミノ酸配列の位置を示すために示されるのみである。本発明には、前記エピトープを含む全てのペプチドが包含される。前記ペプチドは、100以上のアミノ酸長のポリペプチドの一部であってもよく、あるいは100以下のペプチド、好ましくは、50以下、より好ましくは、25以下のアミノ酸、さらにより好ましくは、16以下のアミノ酸の小さいペプチドであってもよい。このようなペプチドのアミノ酸は、天然のアミノ酸または非天然のアミノ酸(例えば、ベータアミノ酸、ガンマアミノ酸、D-アミノ酸)あるいはこれらの組み合わせであってもよい。さらに、本発明は、エピトープの各レトロインベルソ(retro-inverso)ペプチドを包含しうる。前記ペプチドは結合しなくてもよく、または結合してもよい。それは、例えば、低分子(例えば、薬物またはフルオロフォア)、高分子量ポリマー(例えば、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリエチレンイミン(PEI)、メタクリル酸ヒドロキシプロピル(HPMA)など)、あるいはタンパク質、脂肪酸、糖部分に結合していてもよく、あるいは膜内に挿入されていてもよい。
問題の抗体および本発明の抗体が同一のエピトープを認識するかどうかを試験するために、下記の競合実験が行われうる:3MOI(感染の多重度)で感染させたベロ細胞を、20時間後に、問題の抗体の各種濃度を競合因子として1時間インキュベートする。2回目のインキュベーション工程において、本発明の抗体を100nMの規定濃度で適用し、その結合は、本発明の抗体の定常領域に対する蛍光標識抗体を用いてフローサイトメトリーで検出する。問題とする抗体の濃度に対して反比例して生じる結合は、両方の抗体が同一のエピトープを認識している指標である。しかしながら、用いられうる多くの他のアッセイが当該技術分野で公知である。
本発明はまた、TDP-43の内在性ポリペプチドおよび組み換えポリペプチドに対する特異的な抗体の生成に関する(これらのポリペプチドがTDP-43のミスフォールドされた状態を示す限り)。この生成は、例えば、動物(例えば、マウス)の免疫化に基づくものである。しかしながら、抗体/抗血清の生成のための他の動物もまた、本発明内に含まれる。例えば、モノクローナルおよびポリクローナル抗体は、ウサギ、マウス、ヤギ、ロバなどによって生成させることができる。TDP-43に対応して選択したポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、適当なベクターにサブクローン化することができ、前記組み換えポリペプチドは、発現させることができる生物、例えば、細菌で発現される。よって、発現される組み換えタンパク質は、マウスに腹腔内で注入することができ、生じる特異的な抗体は、例えば、心臓内血液穿刺によって供されるマウス血清から取得することができる。本発明はまた、記載の例で例示されるようにDNAワクチン法を用いることによる内在性ポリペプチドおよび組み換えポリペプチドに対する特異的な抗体の生成が想定される。DNAワクチン法は、当該技術分野で周知であり、遺伝子銃またはジェット注射および筋肉内または皮下注射によるリポソーム介在送達を包含する。よって、TDP-43のポリペプチドもしくはタンパク質またはエピトープ、特に、本明細書で供される抗体のエピトープは、TDP-43の所望されるポリペプチドもしくはタンパク質またはエピトープ、特に、配列番号1のアミノ酸残基215-222内に存在する本発明の抗体のエピトープを発現するベクターを筋肉内に直接注射することにより動物を直接免疫化することによって得ることができる。得られた特異的な抗体の量は、下記の本明細書にも記載されるELISAを用いて定量化することができる。抗体の生成のためのさらなる方法は当該技術分野で周知であり、例えば、Harlow and Lane, "Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988を参照のこと。
よって、特定のアッセイ条件下において、TDP-43の特定の抗体および対応するエピトープは、相互に結合し、試料中に存在するかなりの量の他の構成成分に結合しない。このような条件下での標的分析物への特異的な結合は、特定の標的分析物に対してその特性について選択される結合部分が必要とされうる。様々な免疫アッセイ方法が特定の抗原に特異的に反応する抗体を選択するために用いられてもよい。例えば、固相ELISAイムノアッセイは、分析物と特異的な免疫反応性を有するモノクローナル抗体を選択するために日常的に用いられる。特異的な免疫反応性を調べるために用いることができる免疫アッセイ方法および条件の説明については、Shepherd and Dean (2000), Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Pressおよび/またはHoward and Bethell, (2000) Basic Methods in Antibody Production and Characterization, Crc. Pr. Inc.を参照のこと。典型的には、特異的または選択的な反応は、ノイズによるバックグラウンドシグナルの少なくとも2倍、より典型的には、バックグラウンドより10~100倍以上高いものである。当業者は、新規のポリペプチドに対して特異的な結合分子を提供し、作成する位置にいる。特定の結合アッセイについては、望ましくない交差反応を回避するために容易に用いることができ、例えば、ポリクローナル抗体は、公知の方法によって容易に精製し、選択することができる(Shepherd and Dean, loc. citを参照のこと)。
抗体の「クラス」は、定常領域のタイプまたはその重鎖が有する定常領域を意味する。5つの主な抗体クラスが存在し(IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgM)、これらのうちのいくつかは、サブクラス(アイソタイプ)、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2にさらに分けられうる。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
ある実施態様において、本明細書で供される抗体のアミノ酸配列変異型が含まれる。例えば、それは、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を向上させることが望まれうる。抗体のアミノ酸配列変異型は、適切な改変を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することによって、またはペプチド合成によって調製されうる。このような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および/または当該残基への挿入、および/または当該残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換のいずれも組み合わせも、最終的な構築物が所望される特徴、例えば、抗原結合を有する限り最終的な構築物に作成することができる。
ある実施態様において、1つまたはそれ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異型が提供される。置換変異誘導のための目的の部位には、CDRおよびFRが含まれる。保存的置換は、「好ましい置換」の項目で表2に示されている。より多くの変化が「典型的な置換」の項目で表2において供され、アミノ酸側鎖クラスに関して下記でさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体に導入され、その生成物を所望の活性、例えば、抗原結合の維持/改善、免疫原性の減少、またはADCCまたはCDCの向上についてスクリーニングされうる。
表2
表2
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化されうる:
(1)疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
(3)酸性:Asp、Glu;
(4)塩基性:His、Lys、Arg;
(5)鎖配向性に影響する残基:Gly、Pro;
(6)芳香族性:Trp、Tyr、Phe。
非保存的置換は、これらのクラスの1つのメンバーを別のクラスに変化させることを伴う。
(1)疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
(3)酸性:Asp、Glu;
(4)塩基性:His、Lys、Arg;
(5)鎖配向性に影響する残基:Gly、Pro;
(6)芳香族性:Trp、Tyr、Phe。
非保存的置換は、これらのクラスの1つのメンバーを別のクラスに変化させることを伴う。
置換変異型の1つのタイプは、親抗体の1つまたはそれ以上の超可変領域残基を置換することに関する(例えば、ヒト化またはヒト抗体)。一般に、さらなる研究のために選択される生じた変異型は、親抗体と比較して一定の生物学的特性(例えば、高い親和性、低い免疫原性)における改変(例えば、改良)を有するか、および/または親抗体の実質的に維持された一定の生物学的特性を有する。典型的な置換変異型は、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術(例えば、本明細書に記載される技術)を用いて、利便的に作成されうる親和性成熟抗体である。簡単に説明すると、1つまたはそれ以上のCDR残基に変異を入れ、その変異型抗体をファージ上に提示し、特定の生物学的活性(例えば、結合親和性)についてスクリーニングする。
変換(例えば、置換)は、例えば、抗体の親和性を向上させるために、CDRにおいてなされてもよい。このような変換は、CDR「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程の間に高頻度で変異が入るコドンによってコードされる残基(例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照)、および/またはSDR(a-CDR)においてなされ、同時に、生じた変異型VHまたはVLを結合親和性について試験されてもよい。二次ライブラリーから構築し、再選択することによる親和性成熟は、例えば、Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001).)に記載されている。親和性成熟のある実施態様において、多様性は、様々な方法のいずれか(例えば、エラープローンPCR、鎖シャッフリング法(chain shuffling)、またはオリゴヌクレオチド指定変異誘発)によって成熟について選択される可変遺伝子に導入される。そして、二次ライブラリーが作成される。続いて、前記ライブラリーをスクリーニングして、所望される親和性を有する抗体変異型のいずれかを同定する。多様性を導入するための別の方法は、数個のCDR残基(例えば、1回に4~6残基)がランダム化されるCDR指定方法に関する。抗原結合に関するCDR残基は、例えば、アラニンスキャンニング変異誘発またはモデリングを用いて具体的に同定されうる。CDR-H3およびCDR-L3は、特に標的とされることが多い。
ある実施態様において、置換、挿入、または欠失は、このような変換が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り1つまたはそれのCDR内で生じうる。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変換(例えば、本明細書で供される保存的置換)は、CDRでなされてもよい。このような変換は、CDR「ホットスポット」またはSDRの外側であってもよい。上記で供される変異型VHおよびVL配列のある実施態様において、各CDRは、変換されないか、または1つ、2つ、または3つ以下のアミノ酸置換を含みうる。
変異誘発について標的とされうる抗体の残基または領域の同定に有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science , 244: 1081-1085に記載されるように「アラニンスキャンニング変異誘発」と呼ばれる。この方法において、残基または標的残基の群(例えば、荷電した残基、例えば、Arg、Asp、His、Lys、およびGlu)は、抗体の抗原との相互作用が影響されるかどうかを決定するために、同定され、中性または負に荷電したアミノ酸(例えば、アラニンまたはポリアラニン)により置換される。さらなる置換が最初の置換に対して機能的な感受性を示すアミノ酸位置に導入されうる。代替的に、または加えて、抗原抗体複合体の結晶構造が抗体と抗原との間の接触点を同定するために用いられる。このような接触している残基と隣接する残基は、置換のための候補として標的とされるか、排除されうる。変異型は、所望される特性を有するかどうかを調べるためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列の挿入には、1残基から100またはそれ以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および/またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、N末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異型には、抗体のNまたはC末端への、抗体の血清半減期を増加させる酵素(例えば、ADEPT)またはポリペプチドの融合が含まれる。
ある実施態様において、本明細書で供される抗体は、抗体が糖化される程度を増加するか、または減少するように変換される。抗体への糖化部位の付加または欠失は、アミノ酸配列を1つまたはそれ以上の糖化部位を作り出すか、または取り除くように変換することによって利便的に行われうる。
抗体がFc領域を含む場合、そこに結合している糖鎖が変換されてもよい。哺乳類細胞によって生成される内在性抗体は、典型的に、Fc領域のCH2領域のAsn297へのN末端結合によって結合されている二分岐のオリゴ糖を含む。例えば、Wright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照のこと。前記オリゴ糖には、様々な糖鎖、例えば、マンノール、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐のオリゴ糖構造の「幹」においてGlcNAcに結合するフコースが含まれうる。ある実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は、一定の向上した特性を有する抗体変異型を作り出すためになされうる。
1の実施態様において、Fc領域に(直接または間接的に)結合するフコースを欠如する糖鎖構造を有する抗体変異型が提供される。例えば、このような抗体におけるフコースの量は、1%~80%、1%~65%、5%~65%、または20%~40%でありうる。フコースの量は、例えば、WO2008/077546に記載されるように、Asn297に結合している全ての糖構造(例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造)の合計に対するAsn297における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Asn297は、Fc領域における約297位(Fc領域残基のEUナンバリング)に位置するアスパラギン残基を意味するが、Asn297はまた、抗体における小さな配列変化により297位の約±3アミノ酸上流または下流、すなわち、294位および300位の間に位置しうる。このようなフコシル化変異型は、向上したADCC機能を有しうる。例えば、US特許公開番号US2003/0157108(Presta,L.);US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠失」抗体変異型に関する文献の例としては、US2003/0157108;WO2000/61739;WO2001/29246;US2003/0115614;US2002/0164328;US2004/0093621;US2004/0132140;US2004/0110704;US2004/0110282;US2004/0109865;WO2003/085119;WO2003/084570;WO2005/035586;WO2005/035778;W02005/053742;W02002/031140;Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004);Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。脱フコシル化抗体を生成することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠失するLec 13CHO細胞(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986);US特許出願番号US2003/0157108Al(Presta,L);およびWO2004/056312Al(Adamsら)、特に実施例11)、およびノックアウト細胞株、例えば、アルファ-1,6-フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、FUT8、ノックアウトCHO細胞(例えば、Yamane-Ohnuki et al. Bioteeh. Bioeng. 87: 614 (2004);Kanda, Y. et al., Bioteehnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006);およびW02003/085l07を参照のこと)が挙げられる。例えば、抗体のFc領域に結合する二分岐のオリゴ糖がGlcNAcによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体変異型がさらに提供される。このような抗体変異型は、フコシル化の減少および/またはADCC機能の向上を示しうる。このような抗体変異型の例は、例えば、WO2003/011878(Jean-Mairetら);米国特許第6,602,684号(Umanaら);およびUS2005/0123546(Umanaら)に記載されている。Fc領域に結合するオリゴ糖において少なくとも1つのガラクトース残基を有する抗体変異型もまた提供される。このような抗体変異型は、CDC機能の向上を示しうる。このような抗体変異型は、例えば、WO1997/30087(Patelら);WO1998/58964(Raju,S.);およびWO1999/22764(Raju,S.)に記載されている。
ある実施態様において、1つまたはそれ以上のアミノ酸の改変は、本明細書で供される抗体のFc領域に導入され、それによりFc領域の変異型が作成されていてもよい。前記Fc領域の変異型は、1つまたはそれ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸の改変(例えば、置換)を含むヒトFc領域配列(例えば、ヒト、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4 Fc領域)を含みうる。
ある実施態様において、本発明は、ある程度ではあるが全てではないエフェクター機能を有する抗体変異型を意図しており、このことは、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、一定のエフェクター機能(例えば、補体活性化およびADCC)は不要であるか、または有害である適用のための望ましい候補とする。インビトロおよび/またはインビボ細胞傷害性アッセイは、CDCおよび/またはADCC活性の減少/喪失を確認するために行うことができる。例えば、Fc受容体(FcR)結合アッセイは、抗体がFcγR結合(これによりADCC活性を欠失しうること)を欠失するが、FcRn結合能を保持することを確認するために行うことができる。ADCCを介在するための初代細胞であるNK細胞は、FcγRIIIのみを発現する一方、単球およびミクログリアは、FcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIを発現する。造血細胞におけるFcR発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の464頁の表3にまとめられている。目的分子のADCC活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例が米国特許第5,500,362号に記載されている(例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499- 1502 (1985); 5,821,337(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照のこと)を参照のこと)。
あるいは、非放射性アッセイ法が用いられてもよい(例えば、フローサイトメトリー用ACTI(登録商標)非放射性細胞毒性アッセイ(Cell Technology,Inc.,カリフォルニア州のマウンテンビュー);およびCytoTox 96(登録商標)非放射性細胞毒性アッセイ(Promega,ウィスコンシン州のマディソン)。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球(PBMC)、およびナチュラルキラー(NK)細胞が含まれる。
代替的に、または加えて、目的分子のADCC活性は、例えば、モデル動物、例えば、Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるものにおいて、インビボで評価されうる。
C1q結合アッセイはまた、抗体がClqに結合できず、それゆえ、CDC活性を欠如することを確認するために行われてもよい。例えば、WO2006/029879およびWO2005/100402におけるClqおよびC3c結合ELISAを参照のこと。補体活性化を評価するために、CDCアッセイが行われてもよい(例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003);およびCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照のこと)。FcRn結合およびインビボクリアランス/半減期の測定もまた、当該技術分野で公知の方法を用いて行うことができる(例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照のこと)。
減少したエフェクター機能を有する抗体には、Fc領域の残基238、265、269、270、297、327および329のうちの1つまたはそれ以上の置換を有する抗体が含まれる(米国特許第6,737,056号)。このようなFc変異には、アミノ酸位置265、269、270、297、および327のうちの2つまたはそれ以上における置換を有するFc変異(いわゆる「DANA」Fc変異(残基265および297のアラニンへの置換を有する)を含む)が含まれる(米国特許第7,332,581号)。あるいは、減少したエフェクター機能を有する抗体には、Fc領域の残基234、235、および329のうちの1つまたはそれ以上の置換を有する抗体(いわゆる「PG-LALA」Fc変異(残基234および235のアラニンへおよび329のグリシンへの置換を有する))が含まれる(Lo, M. et al., Journal of Biochemistry, 292, 3900-3908)。
FcRへの向上し、または低下した結合を有する一定の抗体変異型が記載されている(例えば、米国特許第6,737,056号;WO2004/056312、およびShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照のこと)。
ある実施態様において、抗体変異型は、ADCCを向上する1つまたはそれ以上のアミノ酸置換、例えば、Fc領域の298、333、および/または334位における置換(残基のEUナンバリング)を有するFc領域を含む。
ある実施態様において、変換は、例えば、米国特許第6,194,551号、WO99/51642、およびIdusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載されるように、変化した(すなわち、向上し、または低下した)C1q結合および/または補体依存性細胞傷害(CDC)を生じるFc領域でなされる。
増加した半減期および向上した新生児型Fc受容体(FcRn)(母性IgGから胎児への移行に関連する)への結合を有する抗体(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kirn et al., J. Immunol. 24:249 (1994))は、US2005/0014934Al(Hintonら)に記載されている。これらの抗体は、Fc領域のFcRnへの結合を向上させる1つまたはそれ以上の置換を有するFc領域を含む。このようなFc変異型には、hFc領域の残基:238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、または434のうちの1つまたはそれ以上の置換、例えば、Fc領域の残基434の置換を有するものが含まれる(米国特許第7,371,826号)。
Fc領域の変異型の他の例については、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988);米国特許第5,648,260号;米国特許第5,624,821号;およびWO94/29351も参照のこと。
ある実施態様において、システインで改変された抗体、例えば、抗体の1つまたはそれ以上の残基がシステイン残基で置換されている「チオMAb」を作成することが所望されうる。特定の実施態様において、残基の置換は、抗体の受容可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、本明細書にさらに記載されるように、反応性チオール基を抗体の受容可能な部位に配置し、抗体を他の部分(例えば、薬物部分またはリンカー薬物部分)に抱合させて免疫コンジュゲートを作成させるために用いられてもよい。ある実施態様において、以下の残基のいずれか1つまたはそれ以上がシステインで置換されてもよい:軽鎖のV205(カバットナンバリング);重鎖のA118(EUナンバリング);および重鎖Fc領域のS400(EUナンバリング)。システインで改変された抗体は、例えば、米国特許第7,521,541号に記載されるように作成されてもよい。
ある実施態様において、本明細書で供される抗体は、当該技術分野で公知であり、容易に利用可能であるさらなる非タンパク質部分を含むようにさらに改変されてもよい。抗体の誘導体化に適する部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール(PEG)、エチレングリコール/プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ1、3-ジオキソラン、ポリ1,3,6-トリオキサン、エチレン/マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸(ホモポリマーまたはランダムコポリマー)、およびデキストランまたはポリ(n-ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド/エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール(例えば、グリセロール)、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物質が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性により製造時に有効でありうる。前記ポリマーは、いずれの分子量のものであってもよく、分岐していてもよく、分岐していなくてもよい。抗体に結合されるポリマー数は、変動しうるものであり、1つ以上のポリマーが結合する場合、それらは同一のまたは異なる分子でありうる。一般に、誘導体化に用いられるポリマーの数および/またはタイプは、以下に限定されないが、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が特定条件下で治療に用いられるかどうかなどを含む検討事項に基づいて決定することができる。
別の実施態様において、放射線への曝露により選択的に加熱されうる抗体および非タンパク質部分の抱合体が提供される。1の実施態様において、前記非タンパク質部分は、カーボンナノチューブである(Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005))。前記放射線は、いずれの波長のものであってもよく、以下に限定されないが、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質部分を抗体-非タンパク質部分の近位にある細胞が死滅される温度まで加熱する波長が含まれる。
抗体は、例えば、米国特許第4,816,567号に記載されるような、組み換え方法および組成物を用いて生成されうる。1の実施態様において、本明細書に記載の抗ミスフォールドTDP-43抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のVLを含むアミノ酸配列および/またはVHを含むアミノ酸配列(例えば、抗体の軽鎖および/または重鎖)をコードしうる。さらなる実施態様において、このような核酸を含む1つまたはそれ以上のベクター(例えば、発現ベクター)が提供される。さらなる実施態様において、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。1のこのような実施態様において、宿主細胞は、(1)抗体のVLを含むアミノ酸配列およびVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または(2)抗体のVLを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第1のベクターおよび抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第2のベクターを含む(例えば、形質転換される)。1の実施態様において、前記宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞またはリンパ球系細胞(例えば、YO、NSO、Sp20)である。1の実施態様において、抗ミスフォールドTDP-43抗体を生成するための方法であって、上記で供されるような、前記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、前記抗体の発現に適する条件下で培養し、必要に応じて、前記抗体を前記宿主細胞(または宿主細胞培養培地)から回収することを含む方法が提供される。
抗ミスフォールドTDP-43抗体の組み換え生成のために、例えば、上記に記載されるような抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞におけるさらなるクローン化および/または発現のための1つまたはそれ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の方法を用いて(例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることより)、配列決定されうる。
抗体をコードするベクターのクローン化または発現のために適する宿主細胞には、本明細書に記載の原核生物または真核生物の細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に、糖化化およびFcエフェクター機能が必要とされていない場合、細菌中で生成されてもよい。細菌中の抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第5,648,237、5,789,199、および5,840,523号を参照。(E.coliにおける抗体断片の発現を開示するCharlton, Methods in Molecular Biology, Val. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照のこと)。発現後、前記抗体は、可溶性フラクション中の細菌細胞ペーストから単離され、さらに精製されうる。
原核生物に加え、真核生物の微生物、例えば、糸状菌または酵母は、真菌および酵母株(これらの糖化経路は、部分的または全部のヒト糖化パターンを有する抗体の生成を生じる「ヒト化」される)を含む、抗体をコードするベクターのために適するクローン化または発現宿主である。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), and Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照のこと。
糖化化された抗体の発現に適切な宿主細胞はまた、多細胞生物(無脊椎動物および脊椎動物)に由来する。無脊椎物の細胞の例には、植物および昆虫細胞が含まれる。特に、スポドプテラ・フルギペルダ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて用いられうる多くのバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞の培養物は、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978、および6,417,429号(トランスジェニック植物において抗体を生成するためのPL抗体(登録商標)技術を記載する)を参照のこと。
脊椎動物の細胞もまた、宿主として用いられてもよい。例えば、浮遊で増殖させるために用いられる哺乳類動物の細胞株が有用でありうる。有用な哺乳類の宿主細胞株の他の例として、SV40(COS-7)によって形質転換されたマカク腎臓CVl株;ヒト胚性腎臓株(Graham et al., J. Gen Viral. 36:59 (1977)に記載される293または293細胞);ベビーハムスター腎臓細胞(BHK);マウスセルトリ細胞(例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるTM4細胞);マカク腎臓細胞(CVl);アフリカグリーンモンキー腎臓細胞(VER0-76);ヒト子宮頚癌細胞(HeLa);イヌ腎臓細胞(MDCK;バッファローラット肝細胞(BRL3A);ヒト肺細胞(Wl38);ヒト肝臓細胞(HepG2);マウス乳房腫瘍(MMT060562);例えば、Mather et al., Annals N. Y Aead. Sei. 383:44-68 (1982)に記載されるTRI細胞;MRC5細胞;およびFS4細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞細部には、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞(DHFR CHO細胞を含む)(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. cii. USA 77:4216 (1980));ならびにミエローマ細胞株、例えば、YO、NSO、およびSp2/0が含まれる。抗体生成に適する一定の哺乳類宿主細胞株の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Val. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。
本明細書で供される抗ミスフォールドTDP-43抗体は、当該技術分野公知の様々なアッセイによって、それらの物理学/化学的特性および/または生物学的活性について同定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
1の態様において、本発明の抗体は、例えば、ELISA、BIACORE(登録商標)、FACS、免疫蛍光法、または免疫組織化学などの公知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。
別の態様において、競合アッセイは、ミスフォールドされたTDP-43への結合について本明細書に記載の抗体のいずれかと競合する抗体を同定するために用いられうる。ある実施態様において、このような競合する抗体は、本明細書に記載の抗体によって結合されるエピトープと同一のエピトープ(例えば、線状または立体構造エピトープ)に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法は、Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)で供される。
典型的な競合アッセイにおいて、固定化されたミスフォールドされたTDP-43は、ミスフォールドされたTDP-43(例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか)に結合する第1の標識された抗体および第2の標識されていない抗体を含む溶液中でインキュベートされ、ミスフォールドされたTDP-43への結合について前記第1の抗体と競合するその能力を試験される。コントロールとして、固定化されたミスフォールドされたTDP-43は、前記第1の標識された抗体を含むが、前記第2の標識されていない抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。前記第1の抗体のミスフォールドされたTDP-43への結合を可能にする条件下でのインキュベート後、過剰の結合していない抗体を除去し、固定化されたミスフォールドされたTDP-43に結合した標識の量を測定する。固定化されたミスフォールドされたTDP-43に結合した標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料において実質的に減少している場合、前記第2の抗体が、ミスフォールドされたTDP-43への結合について前記第1の抗体と競合することを示す。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照のこと。
本発明はまた、1つまたはそれ以上の治療剤、例えば、化学療法剤または薬物、成長阻害剤、毒素(例えば、タンパク毒素、酵素学的に活性な毒素(細菌、真菌、植物、もしくは動物由来)、またはこれらの断片)、放射性同位体(すなわち、放射性コンジュゲート)、血液脳関門通過部分、または検出可能な標識に抱合された、本明細書で供される抗ミスフォールドTDP-43抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
本発明の別の態様において、上記に記載の疾患の治療、予防、および/または診断に有用な材料を含む製品が提供される。前記製品は、容器および前記容器上もしくは添付のラベルまたは添付文書を含む。適する容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射(IV)用溶液バッグなどが挙げられる。前記容器は、様々な原料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成されていてもよい。前記容器は、それ自体の組成物、または疾患を治療し、予防し、および/または診断するために有効な別の組成物と合わせた組成物を含有し、滅菌した開閉口を備えていてもよい(例えば、前記容器は、皮下注射ニードルによって突き刺し可能なストッパーを備える静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい)。前記組成物中の少なくとも1つの活性薬剤は、本発明の抗体である。前記ラベルまたは添付文書は、その組成物が適切な疾患を治療するために使用されることを表示する。さらに、前記製品は、(a)そこでに含まれる組成物を有する第1の容器(前記組成物は本発明の抗体を含む);ならびに(b)そこでに含まれる組成物を有する第2の容器(前記組成物はさらなる治療剤を含む)第2の容器を含みうる。本発明のこの実施態様における製品は、前記組成物が特定の疾患を治療するために使用できることを示す添付文書をさらに含んでいてもよい。代替的に、または加えて、前記製品は、医薬的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、およびデキストロース溶液を含む第2(または第3)の容器をさらに含んでいてもよい。他の緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、およびシリンジを含む商業的におよび使用者の立場から望まれる他の材料がさらに含まれてもよい。
上記製品のいずれもが、抗TDP-43抗体の代わりに、または加えて本発明の免疫コンジュゲートを含んでいてもよいことが理解される。
I.典型的なTDP-43特異的結合分子または抗体
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号70の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号80の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号210の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号220の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号232の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号242の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号244の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、前記抗体は、配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)および配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む。
ある実施態様において、配列番号4に含まれるエピトープ内のヒトTDP-43に結合する抗体が提供される。ある特定の実施態様において、ヒトTDP-43に結合する単離された抗体が提供され、前記抗体は、ヒトTDP-43のアミノ酸215-222(配列番号5)内のエピトープに結合する。ある実施態様において、ミスフォールドされたTDP-43に結合する単離された抗体が提供される。ある実施態様において、ヒトTDP-43に結合する単離された抗体が提供され、前記抗体は、細胞外または細胞質TDP-43に結合する。ある実施態様において、モノマーの、オリゴマーの、または凝集されたTDP-43に結合する単離された抗体が提供される。本発明のある実施態様において、前記モノマーの、オリゴマーの、または凝集されたTDP-43は、翻訳後修飾され、例えば、リン酸化されている。
ある実施態様において、本発明は、ACI-7062-401A2-Ab2、ACI-7062-404D6-Ab2、ACI-7062-406E3-Ab1、ACI-7062-406E3-Ab2、ACI-7062-410H3-Ab1、ACI-7062-412A7-Ab1、ACI-7062-412E12-Ab1、ACI-7062-414A5-Ab1、ACI-7062-415C4-Ab1、ACI-7062-415H10-Ab2、およびACI-7062-416A11-Ab1から選択される抗体に関する。好ましい実施態様において、本発明は、ACI-7062-401A2-Ab2、ACI-7062-406E3-Ab1、ACI-7062-406E3-Ab2、ACI-7062-410H3-Ab1、ACI-7062-412A7-Ab1、ACI-7062-412E12-Ab1、ACI-7062-414A5-Ab1、ACI-7062-415C4-Ab1、およびACI-7062-416A11-Ab1から選択される抗体に関する。
ある実施態様において、ペプチド配列によって作成された抗体は、ACI-7062-401A2-Ab2、ACI-7062-404D6-Ab2、ACI-7062-406E3-Ab1、ACI-7062-406E3-Ab2、ACI-7062-410H3-Ab1、ACI-7062-412A7-Ab1、ACI-7062-412E12-Ab1、ACI-7062-414A5-Ab1、ACI-7062-415C4-Ab1、ACI-7062-415H10-Ab2、およびACI-7062-416A11-Ab1、好ましくは、ACI-7062-401A2-Ab2、ACI-7062-406E3-Ab1、ACI-7062-406E3-Ab2、ACI-7062-410H3-Ab1、ACI-7062-412A7-Ab1、ACI-7062-412E12-Ab1、ACI-7062-414A5-Ab1、ACI-7062-415C4-Ab1、およびACI-7062-416A11-Ab1から選択される抗体と同一のエピトープに結合する。本明細書で供される抗体のいずれかと同一のエピトープに結合する抗体もまた本発明の一部である。
ある実施態様において、単離された抗体が提供され、前記単離された抗体は、配列番号2を含むペプチドで作成され、配列番号4を含む同一のエピトープに結合する。
ある実施態様において、単離された抗体が提供され、前記単離された抗体は、配列番号2を含むペプチドで作成され、配列番号5を含む同一のエピトープに結合する。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、本明細書に記載の抗体をコードする。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号19を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号29を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号39を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号49を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号59を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号69を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号79を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号89を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号99を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号109を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号119を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号129を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号139を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号149を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号159を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号169を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号179を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号189を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号199を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号209を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号219を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は抗TPD43抗体をコードする配列番号229を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号231を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号233を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号235を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号237を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号239を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号241を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号243を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号245を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号247を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号249を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号251を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号253を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号255を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号257を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号259を含む。
ある実施態様において、単離された核酸が提供され、前記単離された核酸は、抗TPD43抗体をコードする配列番号261を含む。
ある実施態様において、宿主細胞が提供され、前記宿主細胞は、本明細書に記載の抗体をコードする単離された核酸を含む。ある実施態様において、抗体を生成する方法であって、宿主細胞を、前記抗体を生成するために適する条件下で培養することを含む方法が提供される。
ある実施態様において、ミスフォールドされたTDP-43特異的な抗体は、本明細書で供される抗体のいずれかと70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、または99%の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、配列番号10;配列番号30;配列番号50;配列番号70;配列番号90;配列番号110;配列番号130;配列番号150;配列番号170;配列番号190;配列番号210;配列番号230;配列番号234;配列番号238;配列番号242; 配列番号246;配列番号250;配列番号254;および配列番号258の群から選択される配列を含む軽鎖可変領域配列(VL)と比較して、86%またはそれ以上の配列相同性を有する。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、配列番号20;配列番号40;配列番号60;配列番号80;配列番号100;配列番号120;配列番号140;配列番号160;配列番号180;配列番号200;配列番号220;配列番号232;配列番号236;配列番号240;配列番号244;配列番号248;配列番号252;配列番号256;および配列番号260の群から選択される配列を含む重鎖可変領域配列(VH)と比較して、86%またはそれ以上の配列相同性を有する。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、≦1μM、≦100nM、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、または≦0.001nM(例えば、10-8Mまたはそれ以下、例えば、10-8M~10-13M、例えば、10-9M~10-13M)の解離定数(Kd)を有する。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子または抗TDP-43抗体は、モノマーのTDP-43、リン酸化されたTDP-43、リン酸化されていないTDP-43、凝集されたTDP-43、およびオリゴマーのTDP-43の各々に、100nM以下、10nM以下、1nM以下、200pM以下、100pM以下、または10pM以下のKDで結合する。
II.組成物および方法
ある実施態様において、免疫コンジュゲートが提供され、前記免疫コンジュゲートは、本明細書に記載の単離された抗体および治療剤を含む。ある実施態様において、本明細書に記載の抗体および検出可能な標識を含む標識された抗体が提供される。
ある実施態様において、免疫コンジュゲートが提供され、前記免疫コンジュゲートは、本明細書に記載の単離された抗体および治療剤を含む。ある実施態様において、本明細書に記載の抗体および検出可能な標識を含む標識された抗体が提供される。
ある実施態様において、本明細書に記載の単離された抗体および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
ある実施態様において、本発明のTDP-43特異的結合分子は、検出可能な標識に結合されている。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している免疫コンジュゲートの一部である。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子またはこれを含む免疫コンジュゲートは、TDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子、またはこれらのアンタゴニストを含む組成物として存在する。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している)を含む医薬組成物、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを、医薬的に許容される担体と組み合わせて含む組成物の一部である。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している)を含む診断キット、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子、またはこれらのアンタゴニストを含む組成物の一部である。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、TDP-43タンパク質症の予防、診断または治療における使用のための免疫診断方法で用いられる。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、TDP-43タンパク質症の予防または治療のための免疫療法であって、前記TDP-43特異的結合分子、または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している)、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物の有効量がそれを必要とする患者に投与される免疫療法の一部である。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が、別の適当な治療剤に共有結合している)、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)、およびパーキンソン病(PD)を含むが、これらに限定されないTDP-43凝集に関連する疾患または異常を診断し、予防し、緩和し、または治療するためにそれを必要とする患者に投与される。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が、別の適当な治療剤に共有結合している)、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALS、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、封入体ミオパチー(バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する)(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症ともいう)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))から選択されるTDP-43凝集に関連する疾患または異常を診断し、またはモニターするための方法に使用するためにそれを必要とする患者に投与される。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、前駆症状の疾患を診断し、または疾患進行および治療効果をモニターし、応答性を予測し、またはTDP-43特異的結合分子による治療に応答する可能性が高い患者を選択するための方法で用いられる。前記方法は、好ましくは、ヒト、血液、または尿の試料を用いて行われる。最も好ましくは、前記方法は、ELISAに基づくアッセイまたは表面適合(surface adapted)アッセイに関する。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、本発明のTDP-43特異的結合分子を試料(例えば、血液、脳脊髄液、または脳組織)と接触させることにより、前頭側頭葉変性症(FTD)または筋萎縮性側索硬化症(ALS)アルツハイマー病(AD)およびパーキンソン病(PD)を検出し、診断し、モニターする方法で用いられる。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子は、本発明のTDP-43特異的結合分子を試料(例えば、血液、脳脊髄液、または脳組織)と接触させることにより、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALS、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、封入体ミオパチー(バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する)(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症ともいう)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))から選択される疾患を検出し、診断する方法で用いられる。ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している)、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、TDP-43凝集に関連する疾患もしくは異常またはTDP-43タンパク質症または前頭側頭葉変性症(FTD)または筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、およびパーキンソン病(PD)を予防し、緩和し、または治療するためにそれを必要とする患者に投与される。
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している)、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、前頭側頭葉型認知症(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(孤発性ALS、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、封入体ミオパチー(バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症ともいう))、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))から選択される疾患を治療するためにそれを必要とする患者に投与される。好ましくは、前記疾患の治療は、精神的な認知の維持もしくは増加および/または reduces 脳における凝集体のレベルの低下に有用である
ある実施態様において、前記TDP-43特異的結合分子または免疫コンジュゲート(前記TDP-43特異的結合分子が別の適当な治療剤に共有結合している)、あるいはTDP-43特異的結合分子およびTDP-43アゴニストおよび同種分子またはこれらのアンタゴニストを含む組成物は、それを必要とする患者に投与される、TDP-43凝集に関連する疾患または異常またはTDP-43タンパク質症または前頭側頭葉変性症(FTD)または筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、およびパーキンソン病(PD)の治療剤の製造に用いられる
本明細書に記載される抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートの医薬製剤は、このような抗体または免疫コンジュゲート(望ましい程度の純度を有する)を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態において、1つまたはそれ以上の任意の医薬的に許容される担体(Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))と混合することによって調製される。医薬的に許容される担体は、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して一般的に非毒性であり、以下に限定されないが、緩衝液(例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸);抗酸化剤(アスコルビン酸およびメチオニンを含む);保存剤(例えば、オクタデシルジメチルベンジル(octadecyldimethylbenzyl)塩化アンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール;アルキルパラベン(例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン);カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾール);低分子量(約10残基以下)ポリペプチド;タンパク質(例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン);親水性ポリマー(例えば、ポリビニルピロリドン);アミノ酸(例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン);単糖類、二糖類、および他の糖類(グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む);キレート剤(例えば、EDTA);糖類(例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール);塩形成対イオン(例えば、ナトリウム);金属錯体(例えば、Znタンパク質錯体);および/または非イオン性界面活性剤(例えば、ポリエチレングリコール(PEG))が挙げられる。本明細書に記載の典型的な医薬的に許容される担体には、介在性(interstitial)薬物分散剤、例えば、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質(sHASEGP)、例えば、ヒト可溶性PH-20ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、rHuPH20(HYLENEX(登録商標),Baxter International,Inc)がさらに含まれる。一定の典型的なHASEGおよび使用方法(rHuPH20を含む)は、US特許公開第2005/0260186および2006/0104968号に記載されている。1の態様において、sHASEGPは、1つまたはそれ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ(glycosaminoglycanase)(例えば、コンドロイチナーゼ)と組み合わされる。
典型的な凍結乾燥された抗体または免疫コンジュゲート製剤が米国特許第6,267,958号に開示されている。水性抗体または免疫コンジュゲート製剤には、米国特許第6,171,586号およびW02006/044908に記載されるものが含まれ、後者の製剤には、ヒスチジン酢酸緩衝液が含まれる。
本明細書に記載の製剤はまた、治療される特定の効能のために必要に応じて1つ以上の活性成分、好ましくは、相互に有害な効果を生じない相補的な活性を有するものが含まれてもよい。
活性成分は、コロイド薬物送達システム(例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル)またはマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メタクリル酸メチル)マイクロカプセル中にそれぞれ封入されていてもよい。このような技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の適する例には、前記抗体または免疫コンジュゲートを含む固形疎水性ポリマーの半浸透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形された製品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に用いられる製剤は、一般に、無菌である。無菌は、例えば、滅菌ろ過膜による濾過により容易に行われうる。
本明細書で供される抗原結合分子、抗ミスフォールドTDP-43抗体、または免疫コンジュゲートのいずれもが方法、例えば、治療方法で用いられてもよい。
別の態様において、医薬として使用するための抗ミスフォールドされたTDP-43抗体または免疫コンジュゲートが提供される。さらなる態様において、治療方法における使用のための抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートが提供される。ある実施態様において、TDP-43タンパク質症の予防、診断、および/または治療における使用のための抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートが提供される。本発明の好ましい実施態様において、抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートは、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)、および/またはパーキンソン病(PD)を含むが、これらに限定されないTDP-43凝集に関連する疾患または異常の予防、診断、および/または治療における使用のために提供される。
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造または調製における抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートの使用を提供する。1のこのような実施態様において、前記方法は、少なくとも1つのさらなる治療剤(例えば、下記に記載のもの)の有効量を前記個体に投与することをさらに含む。
上記実施態様のいずれかによる「対象」または「個体」または「患者」は、動物、哺乳類、好ましくは、ヒトでありうる。
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記治療方法のいずれかで使用するための、本明細書で供される抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートのいずれかを含む医薬製剤を提供する。1の実施態様において、医薬製剤は、本明細書で供される抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートのいずれかおよび医薬的に許容される担体を含む。別の実施態様において、医薬製剤は、本明細書で供される抗ミスフォールドTDP-43抗体または免疫コンジュゲートのいずれかおよび少なくとも1つのさらなる治療剤(例えば、下記に記載のもの)を含む。
本発明の抗体または免疫コンジュゲートは、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて用いることができる。例えば、本発明の抗体または免疫コンジュゲートは、少なくとも1つのさらなる治療剤と共投与されてもよい。
上記に記載されるこのような併用療法には、合わせた投与(2つまたはそれ以上の治療剤が同一または別の製剤に含まれる)および別々の投与が含まれ、別々の投与の場合、本発明の抗体または免疫コンジュゲートの投与は、さらなる治療剤および/またはアジュバントの投与前、投与と同時、および/または投与後に行うことができる。本発明の抗体または免疫コンジュゲートはまた、放射線治療と組み合わせて用いることもできる。
本発明の抗体または免疫コンジュゲート(およびさらなる治療剤)は、非経口、肺内、および鼻腔内、必要に応じて、局所療法、病巣内投与、子宮内、または膀胱内投与を含むいずれかの適する方法によって投与することができる。非経口吸入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、、いずれかの適する経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によって、投薬が短期または慢性であるどうかに一部応じて行われうる。様々な投薬スケジュール(様々な時点における単回もしくは複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない)が本明細書で意図される。
本発明の抗体または免疫コンジュゲートは、適切な医療行為に相当する形で製剤化され、投薬され、投与されうる。本発明で考慮する因子としては、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳類動物、各患者の臨床的状態、疾患の病因、薬剤の送達部位、投与方法、投薬スケジュール、および医療従事者に公知の他の因子が挙げられる。前記抗体または免疫コンジュゲートは、問題となる疾患を予防し、または治療するために現在用いられている1つまたはそれ以上の薬剤を必要としないが、適宜製剤化されてもよい。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫コンジュゲートの量、疾患または治療のタイプ、および上記に記載の他の因子に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるものと同一用量と投与経路、あるいは本明細書に記載される用量の約1~99%、あるいは適切であると経験的/臨床的に決定されるいずれかの用量といずれかの経路で用いられる。
疾患の予防または治療において、(単独で、または1つもしくはそれ以上の他のさらなる治療剤と組み合わせて用いられる場合の)本発明の抗体または免疫コンジュゲートの適当な用量は、治療されるべき疾患のタイプ、抗体または免疫コンジュゲートのタイプ、疾患の重症度と経過、抗体または免疫コンジュゲートが予防もしくは治療目的で投与されるかどうか、過去の治療歴、患者の病歴と抗体または免疫コンジュゲートに対する応答性、ならびに治療者の判断に依存する。抗体または免疫コンジュゲートは、一度に、または一連の治療期間をかけて患者に適切に投与される。疾患のタイプおよび重症度に応じて、抗体または免疫コンジュゲートの約1μg/kg~15mg/kg(例えば、0.1mg/kg~10mg/kg)は、1回またはそれ以上の別々の投与または持続注入による患者への投与のための最初の候補用量でありうる。1の典型的な1日用量は、上記に記載の因子に応じて、約1μg/kg~100mg/kgまたはそれ以上の範囲でありうる。数日間またはそれ以上にわたる繰り返し投与については、その状態に応じて、治療は、一般に、疾患の所望される抑制が生じるまで持続される。抗体または免疫コンジュゲートの1の典型的な用量はx、約0.05mg/kg~約10mg/kgの範囲である。よって、約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、または10mg/kg(またはこれらのいずれかの組み合わせ)の1回またはそれ以上の用量が患者に投与されてもよい。このような用量は、例えば、(例えば、患者が抗体の約2回~約20回分または例えば、約3回分の用量を受容するように)毎週または3週間に1回、断続的に投与されてもよい。最初の高い投与用量、続いて1回またはそれ以上の低用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬計画も有用でありうる。この治療の過程は、従来技術およびアッセイによって容易にモニターされる。
上記製剤または治療方法のいずれもが本発明の免疫コンジュゲートおよび抗ミスフォールドTDP-43抗体の両方を用いて行われてもよいことが理解される。
本発明の別の態様において、上記に記載の疾患の治療、予防、および/または診断に有用な材料を含む製品が提供される。前記製品は、容器および前記容器上もしくは添付のラベルまたは添付文書を含む。適する容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射(IV)用溶液バッグなどが挙げられる。前記容器は、様々な原料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成されていてもよい。前記容器は、それ自体の組成物、または疾患を治療し、予防し、および/または診断するために有効な別の組成物と合わせた組成物を含有し、滅菌した開閉口を備えていてもよい(例えば、前記容器は、皮下注射ニードルによって突き刺し可能なストッパーを備える静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい)。前記組成物中の少なくとも1つの活性薬剤は、本発明の抗体である。前記ラベルまたは添付文書は、その組成物が適切な疾患を治療するために使用されることを表示する。
さらに、前記製品は、(a)そこでに含まれる組成物を有する第1の容器(前記組成物は本発明の抗体を含む);ならびに(b)そこでに含まれる組成物を有する第2の容器(前記組成物はさらなる治療剤を含む)第2の容器を含みうる。本発明のこの実施態様における製品は、前記組成物が特定の疾患を治療するために使用できることを示すをさらに含んでいてもよい。代替的に、または加えて、前記製品は、医薬的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、およびデキストロース溶液を含む第2(または第3)の容器をさらに含んでいてもよい。他の緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、およびシリンジを含む商業的におよび使用者の立場から望まれる他の材料がさらに含まれてもよい。
さらなる実施態様において、本発明は、対象において、認知記憶能力、運動、および言語機能を維持し、または増加させ、あるいは認知記憶能力、運動、および言語機能の減退を予防し、および/または遅延させる方法であって、本発明の結合分子、本発明の免疫コンジュゲート、本発明の組成物、または本発明の医薬組成物を投与することを特徴とする方法に関する。
さらなる実施態様において、本発明は、ミスフォールドされたTDP-43のレベルを減少させる方法であって、本発明の結合分子、本発明の免疫コンジュゲート、本発明の組成物、または本発明の医薬組成物を投与することを含む方法に関する。
本発明の方法は、少なくとも1つのさらなる治療を投与すること含んでいてもよく、前記さらなる治療は、以下に限定されないが、神経薬、抗Aベータ抗体、抗タウ抗体、タウ凝集阻害因子、ベータアミロイド凝集阻害因子、抗BACE1抗体、およびBACE1阻害因子から選択される。
本発明は、さらに、ミスフォールドされたTDP-43を検出する方法であって、試料を本発明の結合分子と接触させることを含み、好ましくは、前記試料は、脳試料、脳脊髄液試料、尿試料、または血液試料である方法に関する。
実施例
I.実施例1:TDP-43ワクチン組成物の調製
リポソームに基づく抗原構築物は、WO2012/055933で公開されているプロトコールに従って調製した。TDP-1ペプチドを抗原とするリポソームワクチンを抗体作成のために使用した。簡単に説明すると、DMPC、DMPG脂質(両方ともLipoid AG(スイス)による)、コレステロールおよびモノホスホリルヘキサアシルリピドA3脱アシル化合成(3D-(6-アシル)PHAD(登録商標))(Avanti Polar Lipids,米国のアラバマ州)を、各々、モル比9:1:7:0.05でEtOH中に60℃で30分間溶解させた。同一のバッチをさらに製造したが、ワクチン化の強めるアジュバントを含ませなかった。多重膜リポソーム(EmulsiFlex-C5,Avestin,ドイツ)をポリカーボネートWhatmanフィルター(0.08μMの細孔径を有する)により押し出した。抗原として使用するTDP-1ペプチドをシステイン-マレイミド結合を用いてリポソームに抱合させた。該TDP-1ペプチドを、TCEP(Sigma-Aldrich,スイス)を用いて100:1のTCEP/ペプチドモル比で室温にて30分間還元させた。前記TDP-1を、DSPEPEG(2000)マレイミド脂質(Avanti Polar Lipids)に、30:1の脂質/タンパク質モル比で周囲温度にて4時間さらに結合させた。結合した生成物を、予め生成させたリポソームと37℃で15時間インキュベートした。リポソームをPBS(pH7.4)中で限外ろ過および透析ろ過にさらにかけ、0.2μM ポリエーテルスルホン(PES)膜シリンジフィルターに通して滅菌ろ過し、投与まで5℃で保存した。
表3:TDP-43タンパク質およびペプチド抗原の記載
I.実施例1:TDP-43ワクチン組成物の調製
リポソームに基づく抗原構築物は、WO2012/055933で公開されているプロトコールに従って調製した。TDP-1ペプチドを抗原とするリポソームワクチンを抗体作成のために使用した。簡単に説明すると、DMPC、DMPG脂質(両方ともLipoid AG(スイス)による)、コレステロールおよびモノホスホリルヘキサアシルリピドA3脱アシル化合成(3D-(6-アシル)PHAD(登録商標))(Avanti Polar Lipids,米国のアラバマ州)を、各々、モル比9:1:7:0.05でEtOH中に60℃で30分間溶解させた。同一のバッチをさらに製造したが、ワクチン化の強めるアジュバントを含ませなかった。多重膜リポソーム(EmulsiFlex-C5,Avestin,ドイツ)をポリカーボネートWhatmanフィルター(0.08μMの細孔径を有する)により押し出した。抗原として使用するTDP-1ペプチドをシステイン-マレイミド結合を用いてリポソームに抱合させた。該TDP-1ペプチドを、TCEP(Sigma-Aldrich,スイス)を用いて100:1のTCEP/ペプチドモル比で室温にて30分間還元させた。前記TDP-1を、DSPEPEG(2000)マレイミド脂質(Avanti Polar Lipids)に、30:1の脂質/タンパク質モル比で周囲温度にて4時間さらに結合させた。結合した生成物を、予め生成させたリポソームと37℃で15時間インキュベートした。リポソームをPBS(pH7.4)中で限外ろ過および透析ろ過にさらにかけ、0.2μM ポリエーテルスルホン(PES)膜シリンジフィルターに通して滅菌ろ過し、投与まで5℃で保存した。
表3:TDP-43タンパク質およびペプチド抗原の記載
II.実施例2:抗TDP-43抗体の作成
A.マウス免疫
雌C57BL/6JOlaHsd(C57BL/6)およびBALB/c OlaHsd(BALB/c)野生型マウス(Harlan,米国)を9週齢で受け取った。ワクチン化を10週目で開始した。マウスを、アジュバントとしてMPLA(97μg/ml)の存在中のリポソーム表面上で提示されるTDP-1ペプチド(198μg/ml)でワクチン化した。マウスを、皮下注射(s.c)により0、4、8、22、36、および62日目にワクチン化した。マウスは、免疫化7日前(前免疫血漿)および最初の免疫化15、29、43、および81日後に血を抜き、ヘパリン化血漿を調製した。ミエローマ融合に使用するマウスは、アジュバントなしで腹腔内注射によるTDP-1の3回の毎日の追加免疫注射でさらにワクチン化した。
表4:マウスおよびワクチン化プロトコール
A.マウス免疫
雌C57BL/6JOlaHsd(C57BL/6)およびBALB/c OlaHsd(BALB/c)野生型マウス(Harlan,米国)を9週齢で受け取った。ワクチン化を10週目で開始した。マウスを、アジュバントとしてMPLA(97μg/ml)の存在中のリポソーム表面上で提示されるTDP-1ペプチド(198μg/ml)でワクチン化した。マウスを、皮下注射(s.c)により0、4、8、22、36、および62日目にワクチン化した。マウスは、免疫化7日前(前免疫血漿)および最初の免疫化15、29、43、および81日後に血を抜き、ヘパリン化血漿を調製した。ミエローマ融合に使用するマウスは、アジュバントなしで腹腔内注射によるTDP-1の3回の毎日の追加免疫注射でさらにワクチン化した。
表4:マウスおよびワクチン化プロトコール
B.免疫化後の抗原特異的な抗体の定量
抗原特異的IgG応答は、ELISAにより調べた。簡単に説明すると、プレートを炭酸緩衝液中の1μg/mLの組み換えヒト全長TDP-43(recFL TDP-43)で4℃にて終夜コーティングした。PBS-0.05% Tween 20で洗浄し、1% BSAでブロッキングし、血漿の連続希釈液をプレートに加え、37℃で2時間インキュベートした。陽性コントロールとして、市販のマウスモノクローナル抗体2E2-D3(Abcam)を用いた。洗浄後、プレートをアルカリホスファターゼ(AP)抱合抗マウスIgG抗体(Jackson Immunoresearch、ロット123565、1/1000希釈)と37℃で1時間インキュベートした。最終洗浄後、プレートをAP基質(p-ニトロフェニルリン酸二ナトリウム六水和物;pNPP)と30分間、1時間、または2時間インキュベートし、ELISAプレートリーダーを用いて405nmで読み取った。。結果(図1)を吸光度(O.D)として表す。
抗原特異的IgG応答は、ELISAにより調べた。簡単に説明すると、プレートを炭酸緩衝液中の1μg/mLの組み換えヒト全長TDP-43(recFL TDP-43)で4℃にて終夜コーティングした。PBS-0.05% Tween 20で洗浄し、1% BSAでブロッキングし、血漿の連続希釈液をプレートに加え、37℃で2時間インキュベートした。陽性コントロールとして、市販のマウスモノクローナル抗体2E2-D3(Abcam)を用いた。洗浄後、プレートをアルカリホスファターゼ(AP)抱合抗マウスIgG抗体(Jackson Immunoresearch、ロット123565、1/1000希釈)と37℃で1時間インキュベートした。最終洗浄後、プレートをAP基質(p-ニトロフェニルリン酸二ナトリウム六水和物;pNPP)と30分間、1時間、または2時間インキュベートし、ELISAプレートリーダーを用いて405nmで読み取った。。結果(図1)を吸光度(O.D)として表す。
C.ハイブリドーマの作成およびサブクローニングの選択
マウスを安楽死させ、ミエローマ細胞との融合を2匹の各マウスに由来する脾臓細胞を用いて行った。融合産物のスクリーニングのために、1:32の上澄み希釈物を、ルミネックスビーズに基づくマルチプレックスアッセイ(ルミネックス,オランダ)を用いて分析した。ルミネックスビーズをFL TDP-43、TDP-1ペプチド、またはTDP-3ペプチド(無関係の標的)に抱合し、IgGをIgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、およびIgG3サブクラスに特異的な抗マウスIgG-Fc抗体(Jackson Immunoresearch,米国)で捕捉した。FL TDP-43およびTDP-1ペプチドに抱合させたビーズへの結合により、グループDに由来するマウス(BALB/C)から生じる153個のヒットが同定された(図2)。生存可能なハイブリドーマを、血清含有の選択培地を用いて増殖させ、次いで両方の標的に結合する最良のハイブリドーマをサブクローン化するために選択した。限界希釈後、該クローンハイブリドーマを低い免疫グロブリン含有培地で増殖し、安定なコロニーを抗体スクリーニングおよび選択のために選択した。表4に示す抗体をこのスクリーニングから同定した。
マウスを安楽死させ、ミエローマ細胞との融合を2匹の各マウスに由来する脾臓細胞を用いて行った。融合産物のスクリーニングのために、1:32の上澄み希釈物を、ルミネックスビーズに基づくマルチプレックスアッセイ(ルミネックス,オランダ)を用いて分析した。ルミネックスビーズをFL TDP-43、TDP-1ペプチド、またはTDP-3ペプチド(無関係の標的)に抱合し、IgGをIgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、およびIgG3サブクラスに特異的な抗マウスIgG-Fc抗体(Jackson Immunoresearch,米国)で捕捉した。FL TDP-43およびTDP-1ペプチドに抱合させたビーズへの結合により、グループDに由来するマウス(BALB/C)から生じる153個のヒットが同定された(図2)。生存可能なハイブリドーマを、血清含有の選択培地を用いて増殖させ、次いで両方の標的に結合する最良のハイブリドーマをサブクローン化するために選択した。限界希釈後、該クローンハイブリドーマを低い免疫グロブリン含有培地で増殖し、安定なコロニーを抗体スクリーニングおよび選択のために選択した。表4に示す抗体をこのスクリーニングから同定した。
III.実施例3:結合親和性(EC50)の測定
抗体の連続希釈を用いたルミネックスアッセイを、抗体のFL TDP-43、TDP-1ペプチド、またはTDP-3ペプチド(無関係の標的)への結合の半数最大効果濃度(EC50)を調べるために、前記に記載されるように行った。抗体サブセットの結果を図3に示す。EC50値を表5に示す。全ての試験した抗体は、全長TDP-43およびTDP-1ペプチドに高い親和性で結合する(無関係のTDP-3ペプチドに対する結合は見られなかった)。
表5:ルミネックスアッセイによるEC50値
抗体の連続希釈を用いたルミネックスアッセイを、抗体のFL TDP-43、TDP-1ペプチド、またはTDP-3ペプチド(無関係の標的)への結合の半数最大効果濃度(EC50)を調べるために、前記に記載されるように行った。抗体サブセットの結果を図3に示す。EC50値を表5に示す。全ての試験した抗体は、全長TDP-43およびTDP-1ペプチドに高い親和性で結合する(無関係のTDP-3ペプチドに対する結合は見られなかった)。
表5:ルミネックスアッセイによるEC50値
IV.実施例4:ヒトFL TDP-43に結合する抗体
ヒトFL TDP-43に結合する抗体を、間接ELISAを用いて調べた。炭酸緩衝液中で4℃にて終夜コーティングを行った。プレートを0.05% Tween-20/PBSで十分に洗浄し、続いて0.05% Tween-20/PBS中の1% ウシ血清アルブミン(BSA)で37℃にて1時間ブロッキングした。次いで、ハイブリドーマ上澄み液中の抗体を1μg/mlで加え、37℃で2時間インキュベートし、その後、該プレートを前記で記載されるように洗浄した。AP抱合抗マウスIgG二次抗体(Jackson Immunoresearch Laboratories,英国)を0.05% Tween-20/PBS中で1/1000希釈で37℃にて1時間加えた。最終洗浄後、プレートをpNPP(Sigma-Aldrich,スイス)リン酸基質溶液でインキュベートし、ELISAプレートリーダー(Tecan,スイス;図4)を用いて405nmで読み取った。全ての試験したクローンは、全長TDP-43に異なる親和性で結合する。
ヒトFL TDP-43に結合する抗体を、間接ELISAを用いて調べた。炭酸緩衝液中で4℃にて終夜コーティングを行った。プレートを0.05% Tween-20/PBSで十分に洗浄し、続いて0.05% Tween-20/PBS中の1% ウシ血清アルブミン(BSA)で37℃にて1時間ブロッキングした。次いで、ハイブリドーマ上澄み液中の抗体を1μg/mlで加え、37℃で2時間インキュベートし、その後、該プレートを前記で記載されるように洗浄した。AP抱合抗マウスIgG二次抗体(Jackson Immunoresearch Laboratories,英国)を0.05% Tween-20/PBS中で1/1000希釈で37℃にて1時間加えた。最終洗浄後、プレートをpNPP(Sigma-Aldrich,スイス)リン酸基質溶液でインキュベートし、ELISAプレートリーダー(Tecan,スイス;図4)を用いて405nmで読み取った。全ての試験したクローンは、全長TDP-43に異なる親和性で結合する。
V.実施例5:エピトープマッピング
血清を含まない上澄み物は、安定なハイブリドーマから採取した。次いで、目的の抗体を含む上澄み物を、エピトープを決定するために間接ELISAアッセイによりスクリーニングした。エピトープを、TDP-43の15merペプチドのライブラリーを用いてマッピングした。簡単に説明すると、96ウェルのストレプトアビジンでコーティングした96ウェル ELISAプレートを、ヒトTDP-43のアミノ酸(aa)199-285(9aaのオフセットと6aaの重複を有する)に及ぶビオチン化15merペプチドを5μg/mLでインキュベートした。ペプチド配列を表5に供する。プレートを0.05% Tween-20/PBSで完全に洗浄し、次いで0.05% Tween-20/PBS中の1% ウシ血清アルブミン(BSA)で37℃にて1時間洗浄した。続いて、ハイブリドーマ上澄み物中に含まれる抗体を、示される希釈で加え、37℃で2時間インキュベートし、該プレートを前記に記載されるように洗浄した。AP抱合抗マウスIgG二次抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories,米国)を、0.05% Tween-20/PBS中で1/1000希釈で37℃にて1時間加えた。最終洗浄後、プレートをpNPP(Sigma-Aldrich、スイス)およびAP基質溶液でインキュベートし、ELISAプレートリーダー(Tecan)を用いて405nmで読み取った。結果を図5Aに示し、TP-24およびTP-25ペプチドへの結合についてのOD値を表7に供する。全19個の抗体は、配列番号4:REFFSQYGDVMDVFIPKPFRAFAFの配列(表6で供されるTP-24およびTP-25ペプチド)内に結合する。
表6:エピトープマッピングのための15merペプチドの配列
表7:TP-24およびTP-25ペプチドへの結合についてのOD値(表6に記載)
血清を含まない上澄み物は、安定なハイブリドーマから採取した。次いで、目的の抗体を含む上澄み物を、エピトープを決定するために間接ELISAアッセイによりスクリーニングした。エピトープを、TDP-43の15merペプチドのライブラリーを用いてマッピングした。簡単に説明すると、96ウェルのストレプトアビジンでコーティングした96ウェル ELISAプレートを、ヒトTDP-43のアミノ酸(aa)199-285(9aaのオフセットと6aaの重複を有する)に及ぶビオチン化15merペプチドを5μg/mLでインキュベートした。ペプチド配列を表5に供する。プレートを0.05% Tween-20/PBSで完全に洗浄し、次いで0.05% Tween-20/PBS中の1% ウシ血清アルブミン(BSA)で37℃にて1時間洗浄した。続いて、ハイブリドーマ上澄み物中に含まれる抗体を、示される希釈で加え、37℃で2時間インキュベートし、該プレートを前記に記載されるように洗浄した。AP抱合抗マウスIgG二次抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories,米国)を、0.05% Tween-20/PBS中で1/1000希釈で37℃にて1時間加えた。最終洗浄後、プレートをpNPP(Sigma-Aldrich、スイス)およびAP基質溶液でインキュベートし、ELISAプレートリーダー(Tecan)を用いて405nmで読み取った。結果を図5Aに示し、TP-24およびTP-25ペプチドへの結合についてのOD値を表7に供する。全19個の抗体は、配列番号4:REFFSQYGDVMDVFIPKPFRAFAFの配列(表6で供されるTP-24およびTP-25ペプチド)内に結合する。
表6:エピトープマッピングのための15merペプチドの配列
さらに、抗体は、ヒトTDP-43のaa210~aa231の配列を網羅する8merのペプチド(7aaの重複を有する)のペプチドライブラリーについて間接ELISAを、本項目の前記に記載される方法と同一のELISA法を用いて試験した。ペプチド配列を表8に示し、ELISAの結果を図5Bに示す。205-222のレポーターの付いたエピトープを有する抗体2E2-D3(Abcam)は、コントロールとして用い、TDP-43の残基215-222に結合しなかった(Zhang et al. (2008) Neuroscience Letters 434, Issue 2, pp. 170-4)。試験した全ての抗体は、ペプチドGDVMDVFI(配列番号5、TDP-43の残基215-222)の配列内に結合する。これらの結果により、コントロール抗体が、本明細書で示される抗体とは異なるエピトープを有することを示すペプチドのいずれにも結合しないことも示される。
表8:エピトープマッピングのための8merのペプチドの配列
表8:エピトープマッピングのための8merのペプチドの配列
VI.実施例6:FTD/ALS患者由来の脳組織におけるTDP-43の検出
目的とする結合は、FTD患者の脳に由来する組織における免疫組織化学実験で評価した。前記脳試料のヒトFTD組織は、オランダブレインバンク(The Netherlands Brain Bank)(Netherlands Institute for Neuroscience,アムステルダム)(オープンアクセス:www.brainbank.nl)から入手した(前頭皮質)。全ての材料は、研究目的のための脳の検視解剖および材料と臨床的情報の使用についてのインフォームドコンセントの署名がNBBによって得られたドナーから収集した。、また、ヒトFTD組織は、チュービンゲン大学病院の神経病理科から入手した(前頭皮質および海馬)。免疫組織化学を、蛍光二次抗体検出を用いて10μMの薄い凍結切片について、またはDAB検出を用いて6μMの薄いパラフィン包埋切片において行った。下記の抗体をコントロールとして使用した:ウサギポリクローナルパンTDP-43抗体(Proteintech,10782-2-AP)(病変封入体および生体核TDP-43を検出するため);ウサギモノクローナルリン酸TDP-43p409/410抗体(Cosmobio、TIP-TD-P02)およびラットモノクローナルリン酸TDP-43 p409/410抗体(Millipore、MAB N14)(病変の凝集されリン酸化されたTDP-43を検出するため)。本発明の抗体は、タイプA/C病変(図6)およびタイプB病変(図7)において細胞質中のミスフォールドされ凝集されたTDP-43に特異的に結合し、患者およびコントロールの脳のいずれにおいても病変の核TDP-43に結合しない。結合とバックグラウンド比に対するシグナルの評価を表9にまとめる。
表9:FTD/ALS患者由来の脳組織におけるTDP-43の検出
目的とする結合は、FTD患者の脳に由来する組織における免疫組織化学実験で評価した。前記脳試料のヒトFTD組織は、オランダブレインバンク(The Netherlands Brain Bank)(Netherlands Institute for Neuroscience,アムステルダム)(オープンアクセス:www.brainbank.nl)から入手した(前頭皮質)。全ての材料は、研究目的のための脳の検視解剖および材料と臨床的情報の使用についてのインフォームドコンセントの署名がNBBによって得られたドナーから収集した。、また、ヒトFTD組織は、チュービンゲン大学病院の神経病理科から入手した(前頭皮質および海馬)。免疫組織化学を、蛍光二次抗体検出を用いて10μMの薄い凍結切片について、またはDAB検出を用いて6μMの薄いパラフィン包埋切片において行った。下記の抗体をコントロールとして使用した:ウサギポリクローナルパンTDP-43抗体(Proteintech,10782-2-AP)(病変封入体および生体核TDP-43を検出するため);ウサギモノクローナルリン酸TDP-43p409/410抗体(Cosmobio、TIP-TD-P02)およびラットモノクローナルリン酸TDP-43 p409/410抗体(Millipore、MAB N14)(病変の凝集されリン酸化されたTDP-43を検出するため)。本発明の抗体は、タイプA/C病変(図6)およびタイプB病変(図7)において細胞質中のミスフォールドされ凝集されたTDP-43に特異的に結合し、患者およびコントロールの脳のいずれにおいても病変の核TDP-43に結合しない。結合とバックグラウンド比に対するシグナルの評価を表9にまとめる。
表9:FTD/ALS患者由来の脳組織におけるTDP-43の検出
VII.実施例7:SPRを用いる親和性/結合活性の測定
FL TDP-43への結合親和性は、表面プラズモン共鳴(SPR;BIACORE 8K,GE Healthcare Life Sciences)を用いて解離定数(Kd)を決定することによって評価した。抗マウスIgGは、アミンカップリングによりCM5シリーズSセンサーチップ(GE Healthcare Life Sciences)上に固定化した。抗IgGの固定化を、10μl/分の流速において10mM 酢酸ナトリウム(pH5.5)中で30μg/mlの濃度で500秒間行った。試験する精製した抗体およびコントロール抗体(2E2-D3)を、10μl/分の流速において10mM 酢酸Na(pH5.5)中で1μg/mlの濃度で500秒間注入した。KDを評価するために、組み換えヒトFL TDP-43モノマー分析物を、シングルサイクルカイネティクスを用いて、400nMから開始し、1.6nMまで希釈する2倍希釈で注入した。該タンパク質分析物を、20μl/分の流速で600秒間の接触時間と1200秒の解離領域において、中間の再生ステップなしで注入した。カイネティックから得られた結果は、1:1結合モデル解析を用いて分析した。16個の抗体についての親和性を表10に示す。
FL TDP-43への結合親和性は、表面プラズモン共鳴(SPR;BIACORE 8K,GE Healthcare Life Sciences)を用いて解離定数(Kd)を決定することによって評価した。抗マウスIgGは、アミンカップリングによりCM5シリーズSセンサーチップ(GE Healthcare Life Sciences)上に固定化した。抗IgGの固定化を、10μl/分の流速において10mM 酢酸ナトリウム(pH5.5)中で30μg/mlの濃度で500秒間行った。試験する精製した抗体およびコントロール抗体(2E2-D3)を、10μl/分の流速において10mM 酢酸Na(pH5.5)中で1μg/mlの濃度で500秒間注入した。KDを評価するために、組み換えヒトFL TDP-43モノマー分析物を、シングルサイクルカイネティクスを用いて、400nMから開始し、1.6nMまで希釈する2倍希釈で注入した。該タンパク質分析物を、20μl/分の流速で600秒間の接触時間と1200秒の解離領域において、中間の再生ステップなしで注入した。カイネティックから得られた結果は、1:1結合モデル解析を用いて分析した。16個の抗体についての親和性を表10に示す。
結合活性の測定は、CM5シリーズSセンサーチップを用いてSPR装置(BIACORE T200,GE Healthcare Life Sciences)で行った。組み換えヒトFL TDP-43モノマーまたは凝集された組み換えヒトFL TDP-43を、5μl/分の流速で420秒間注入しながらアミンカップリングを用いてCM5チップ上で固定化した。200RU以下のタンパク質が固定化されるように条件を最適化した。前記抗体およびコントロール抗体(2E2-D3)の結合は、10mM グリシン-HCl(pH1.7)によるリガンド表面の3回の再生サイクルとともに、50μl/分の流速にて90秒間の接触時間と600秒の解離領域において(1xPBS P+中の)1.37、4.11、12.33、37、111、および333nMで注入することによって得た。カイネティクスは、1:1適合モデルを用いて分析した(図8を参照)。
表10:親和性および結合活性データ
表10:親和性および結合活性データ
VIII.実施例8:抗体配列決定
クローンハイブリドーマ細胞溶解物を可変領域遺伝子配列決定に用いた。マウスハイブリドーマを採取し、RNアーゼを不活性化するグアニジン塩を含む溶解緩衝液を用いて溶解した。次いで、ゲノムDNAを、RNアーゼを含まないDNアーゼにより取り除き、RNAを、複数回の洗浄とともにシリカアフィニティーカラムで精製し、RNアーゼを含まない水を用いて該カラムから溶出した。RNAを抽出したら、その純度と濃度を分光光度法で測定した。RNAの状態を変性アガロースゲルで評価し、RNAを逆転写酵素(RT)でcDNAに逆転写させた。反応混合物を加える前に、前記RNAは、RNA二次構造を壊すために、70℃に10分間加熱した。該RT産物は、PCR増幅のためにそのまま使用した。cDNAの高い忠実度のPCR増幅のために、抗体をコードする異なる遺伝子ファミリーに対応する可変領域プライマーの各々を、VHおよびVL各々についての定常プライマーと、50μlの合計反応体積で混合した。当初の目的において、縮重プライマープールを用い(VHについて12個およびVLについて12個)、その結果により、2番目のプールを用いてPCR産物を得た。PCR反応後、該産物を、臭化エチジウムで染色した2% アガロースゲル上のゲル電気泳動で分析した。VLおよびVHについてのPCR産物を各々、トリス酢酸EDTA(TAE)を用いてアガロースゲル上で精製した。次いで、該ゲルから切り出した精製した断片を、ダイターミネーター配列決定法を用いて配列決定した。PCRで用いたプライマーと同一のプライマーをシークエンス反応に用いた。配列決定は、両末端での重複を供するために両方向において行った。該配列を、マルチプル配列アラインメント(Clustal tool)を用いて解析した。配列を、Pommie C et al., Journal of Molecular Recognition, 17, 17-32 (2004)に記載されるIMGT Colliers de Perlesのアルゴリズムに従ってアノテートした。選択された重鎖(VH)および軽鎖(VL)可変領域、ならびにそれらの相補性決定領域(CDR)のタンパク質配列を表11に示す。
表11:抗体可変領域配列
クローンハイブリドーマ細胞溶解物を可変領域遺伝子配列決定に用いた。マウスハイブリドーマを採取し、RNアーゼを不活性化するグアニジン塩を含む溶解緩衝液を用いて溶解した。次いで、ゲノムDNAを、RNアーゼを含まないDNアーゼにより取り除き、RNAを、複数回の洗浄とともにシリカアフィニティーカラムで精製し、RNアーゼを含まない水を用いて該カラムから溶出した。RNAを抽出したら、その純度と濃度を分光光度法で測定した。RNAの状態を変性アガロースゲルで評価し、RNAを逆転写酵素(RT)でcDNAに逆転写させた。反応混合物を加える前に、前記RNAは、RNA二次構造を壊すために、70℃に10分間加熱した。該RT産物は、PCR増幅のためにそのまま使用した。cDNAの高い忠実度のPCR増幅のために、抗体をコードする異なる遺伝子ファミリーに対応する可変領域プライマーの各々を、VHおよびVL各々についての定常プライマーと、50μlの合計反応体積で混合した。当初の目的において、縮重プライマープールを用い(VHについて12個およびVLについて12個)、その結果により、2番目のプールを用いてPCR産物を得た。PCR反応後、該産物を、臭化エチジウムで染色した2% アガロースゲル上のゲル電気泳動で分析した。VLおよびVHについてのPCR産物を各々、トリス酢酸EDTA(TAE)を用いてアガロースゲル上で精製した。次いで、該ゲルから切り出した精製した断片を、ダイターミネーター配列決定法を用いて配列決定した。PCRで用いたプライマーと同一のプライマーをシークエンス反応に用いた。配列決定は、両末端での重複を供するために両方向において行った。該配列を、マルチプル配列アラインメント(Clustal tool)を用いて解析した。配列を、Pommie C et al., Journal of Molecular Recognition, 17, 17-32 (2004)に記載されるIMGT Colliers de Perlesのアルゴリズムに従ってアノテートした。選択された重鎖(VH)および軽鎖(VL)可変領域、ならびにそれらの相補性決定領域(CDR)のタンパク質配列を表11に示す。
表11:抗体可変領域配列
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Claims (53)
- 成熟ヒトTDP-43のアミノ酸215-222内のエピトープに特異的に結合する、ミスフォールドされたTDP-43を特異的に認識する結合分子。
- 細胞質のミスフォールドされたTDP‐43、および/または細胞外のミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する、請求項1に記載の結合分子。
- 前記ミスフォールドされたTDP-43が、モノマーの、および/またはオリゴマーの、および/または凝集され、および/または翻訳後修飾されたTDP-43である、請求項1または2に記載の結合分子。
- 前記結合分子が、生理学的に機能的なTDP-43に結合していない、請求項1~3のいずれか1項に記載の結合分子。
- TDP-43細胞間の伝播を遮断し、および/またはTDP-43凝集体を脱凝集させ、および/またはTDP-43タンパク質またはその断片の凝集を阻害する、請求項1~4のいずれか1項に記載の結合分子。
- 抗体またはその抗原結合断片である、請求項1~5のいずれか1項に記載の結合分子。
- ミスフォールドされたモノマーTDP-43、ミスフォールドされた凝集されたTDP-43、および/またはミスフォールドされたオリゴマーTDP-43に結合する、請求項1~6のいずれか1項に記載の結合分子。
- TDP-43が、翻訳後修飾されたTDP-43、好ましくは、リン酸化されたTDP-43である、請求項7に記載の結合分子。
- TDP-43が、リン酸化されていないTDP-43である、請求項7に記載の結合分子。
- 成熟ヒトTDP-43が、配列番号1によって示される、請求項1~9のいずれか1項に記載の結合分子。
- 細胞質の凝集されたTDP-43、および/または細胞外の凝集されたTDP-43に特異的に結合する、請求項1~10のいずれか1項に記載の結合分子。
- 細胞質の凝集されたTDP-43に特異的に結合する、請求項1~11のいずれか1項に記載の結合分子。
- 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項6に記載の結合分子。
- 前記抗体が、マウス、マウス化、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項6に記載の結合分子。
- 前記抗体が、配列番号2を含むペプチドを用いて作成され、前記抗体が、配列番号5の配列を含むエピトープに特異的に結合する、請求項6、13、または14に記載の結合分子。
- (a)配列番号10および配列番号20;配列番号30および配列番号40;配列番号50および配列番号60;配列番号70および配列番号80;配列番号90および配列番号100;配列番号110および配列番号120;配列番号130および配列番号140;または配列番号150および配列番号160;配列番号170および配列番号180;配列番号190および配列番号200;配列番号210および配列番号220;配列番号230および配列番号232;配列番号234および配列番号236;配列番号238および配列番号240;配列番号242および配列番号244;配列番号246および配列番号248;配列番号250および配列番号252;配列番号254および配列番号256、または配列番号258および配列番号260でそれぞれ示されるアミノ酸配列の可変領域VLおよび/またはVH;あるいは
(b)配列番号10および配列番号20;配列番号30および配列番号40;配列番号50および配列番号60;配列番号70および配列番号80;配列番号90および配列番号100;配列番号110および配列番号120;配列番号130および配列番号140;または配列番号150および配列番号160;配列番号170および配列番号180;配列番号190および配列番号200;配列番号210および配列番号220;配列番号230および配列番号232;配列番号234および配列番号236;配列番号238および配列番号240;配列番号242および配列番号244;配列番号246および配列番号248;配列番号250および配列番号252;配列番号254および配列番号256、または配列番号258および配列番号260でそれぞれ示されるアミノ酸配列に対して少なくとも70%、80%、90%、または95%の配列相同性を有する可変領域VLおよび/またはVHのアミノ酸配列を含む、請求項1~15のいずれか1項に記載の結合分子。 - 配列番号10;配列番号30;配列番号50;配列番号70;配列番号90;配列番号110;配列番号130;配列番号150;配列番号170;配列番号190;配列番号210;配列番号230;配列番号234;配列番号238;配列番号242;配列番号246;配列番号250;配列番号254;および配列番号258の群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)を有する、請求項1~15のいずれか1項に記載の結合分子。
- 配列番号20;配列番号40;配列番号60;配列番号80;配列番号100;配列番号120;配列番号140;配列番号160;配列番号180;配列番号200;配列番号220;配列番号232;配列番号236;配列番号240;配列番号244;配列番号248;配列番号252;配列番号256;および配列番号260の群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)を有する、請求項1~15のいずれか1項に記載の結合分子。
- 前記抗体が、
a.配列番号10の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号10のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号20の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号20のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
b.配列番号30の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号30のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号40の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号40のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
c.配列番号50の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号50のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号60の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号60のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
d.配列番号70の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号70のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号80の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号80のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
e.配列番号90の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号90のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号100の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号100のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
f.配列番号110の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号110のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号120の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号120のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
g.配列番号130の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号130のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号140の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号140のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
h.配列番号150の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号150のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号160の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号160のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
i.配列番号170の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号170のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号180の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号180のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
j.配列番号190の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号190のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号200の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号200のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
k.配列番号210の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号210のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号220の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号220のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
l.配列番号230の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号230の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号230のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
m.配列番号234の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号234のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号236の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号236のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
n.配列番号238の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号238のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号240の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号240のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
o.配列番号242の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号242のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号244の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号244のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
p.配列番号246の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号246のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号248の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号248のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
q.配列番号250の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号250のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号252の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号252のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);
r.配列番号254の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号254のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号256の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号256のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);あるいは
s.配列番号258の配列を含む軽鎖可変領域(VL)、あるいは配列番号258のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、ならびに配列番号260の配列を含む重鎖可変領域(VH)、あるいは配列番号260のアミノ酸配列に対して少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項1~15のいずれか1項に記載の結合分子。 - a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
d)配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
e)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
f)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
g)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
h)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
i)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;
j)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;ならびに
k)配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;および配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3
の群から選択されるCDR配列を含む、請求項1~19のいずれか1項に記載の結合分子。 - a)配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
b)配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
c)配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
d)配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
e)配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
f)配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
g)配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
h)配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
i)配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
j)配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;ならびに
k)配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3
の群から選択されるCDR配列を含む、請求項1~19のいずれか1項に記載の結合分子。 - a)配列番号12のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号14のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号16のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号22のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号26のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
b)配列番号32のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号34のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号36のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号46のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
c)配列番号52のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号54のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号56のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号62のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
d)配列番号72のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号82のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号84のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号86のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
e)配列番号92のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号94のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号96のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号102のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号104のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号106のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
f)配列番号112のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号114のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号116のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号122のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号124のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号126のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
g)配列番号132のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号134のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号136のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号142のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号144のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号146のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
h)配列番号152のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号154のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号156のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号162のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号164のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号166のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
i)配列番号172のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号174のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号176のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号182のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号184のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号186のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;
j)配列番号192のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号194のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号196のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号202のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号204のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号206のアミノ酸配列を含むVH-CDR3;ならびに
k)配列番号212のアミノ酸配列を含むVL-CDR1;配列番号214のアミノ酸配列を含むVL-CDR2;配列番号216のアミノ酸配列を含むVL-CDR3;配列番号222のアミノ酸配列を含むVH-CDR1;配列番号224のアミノ酸配列を含むVH-CDR2;および配列番号226のアミノ酸配列を含むVH-CDR3
の群から選択されるCDR配列を含む、請求項1~19のいずれか1項に記載の結合分子。 - 前記結合分子が、≦1μM、≦100nM、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、または≦0.001nMの解離定数(Kd)を有する、請求項1~22のいずれか1項に記載の結合分子。
- 前記結合分子が、100nM以下、10nM以下、1nM以下、200pM以下、100pM以下、または10pM以下のKDを有するミスフォールドされたモノマーのTDP-43、ミスフォールドされ、凝集されたTDP-43、および/またはミスフォールドされたオリゴマーのTDP-43の各々に特異的に結合し、好ましくは、前記TDP-43が、翻訳後修飾されたTDP-43であり、好ましくは、リン酸化されたTDP-43である、請求項1~23のいずれか1項に記載の結合分子。
- 前記結合分子が、検出可能な標識に結合されている、請求項1~24のいずれか1項に記載の結合分子。
- 前記結合分子が、治療剤に共有結合されている、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子を含む、免疫コンジュゲート。
- 請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子および/または請求項26に記載の免疫コンジュゲート、ならびにTDP-43アゴニストを含む、組成物。
- 請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、および/または請求項26に記載の免疫コンジュゲート、および/または請求項27に記載の組成物、ならびに医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
- 請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、および/または請求項26に記載の免疫コンジュゲート、および/または請求項27に記載の組成物を含む、診断キット。
- 対象におけるTDP-43タンパク質症を診断するための、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、および/または請求項26に記載の免疫コンジュゲート、および/または請求項27に記載の組成物の使用を含む、免疫診断方法。
- 前記TDP-43タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症(FTD)(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異を有し、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)(孤発性ALSであって、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、封入体ミオパチー(バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する)(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症ともいう)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する)、あるいはパーキンソン病(PD)から選択される、請求項30に記載の方法。
- 前記TDP-43タンパク質症が、以下に限定されないが、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)、およびパーキンソン病(PD)を含むTDP-43凝集に関連する疾患または異常である、請求項30に記載の方法。
- 前記対象から得られた試料の使用を含むものであって、前記試料が、血液試料、CSF試料、脳組織試料、または尿試料である、請求項30~32のいずれか1項に記載の方法。
- ELISAに基づくアッセイまたは表面適合(surface adapted)アッセイの使用を含む、請求項30~33のいずれか1項に記載の方法。
- TDP-43タンパク質症の予防方法および/または治療方法であって、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、および/または請求項26に記載の免疫コンジュゲート、および/または請求項27に記載の組成物の使用を含み、前記結合分子、免疫コンジュゲート、および/または組成物の有効量が、それを必要とする対象に投与される、方法。
- TDP-43タンパク質症の予防および/または治療における使用のための、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、請求項26に記載の免疫コンジュゲート、または請求項27に記載の組成物。
- 脳におけるTDP-43凝集のレベルを減少させる、請求項35に記載の方法、あるいは請求項36に記載の使用のための結合分子、免疫コンジュゲート、または組成物。
- 前記TDP-43タンパク質症が、前頭側頭葉型認知症(FTD)(孤発性または家族性であって、運動ニューロン疾患(MND)を伴うか、または伴わず、プログラニュリン(GRN)変異を有し、TARDBP変異を有し、バロシン含有タンパク質(VCP)変異、染色体9pに関連し、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症、嗜銀顆粒病、ピック病など)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)(孤発性ALSであって、TARDBP変異を有し、アンジオゲニン(ANG)変異を有する)、アルツハイマー病(AD、孤発性および家族性)、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病(ハンチントン病および脊髄小脳失調症3型(SCA3;マシャド・ジョセフ病としても公知))、海馬硬化症認知症およびミオパチー(孤発性封入体筋炎、封入体ミオパチー(バロシン含有タンパク質(VCP)の変異を有する)(骨パジェット病および前頭側頭葉型認知症という)、眼咽頭筋型筋ジストロフィー(縁取り空胞を伴う)、筋原線維ミオパチー(ミオチリン(MYOT)遺伝子の変異またはデスミン(DES)をコードする遺伝子の変異を有する))、またはパーキンソン病(PD)から選択される、請求項35または37に記載の方法、あるいは請求項36または37に記載の使用のための結合分子、免疫コンジュゲート、または組成物。
- 前記TDP-43タンパク質症が、以下に限定されないが、前頭側頭葉型認知症(FTD)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)、およびパーキンソン病(PD)を含むTDP-43凝集に関連する疾患または異常である、請求項35または37に記載の方法、あるいは請求項36または37に記載の使用のための結合分子、免疫コンジュゲート、または組成物。
- 請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子をコードする核酸。
- (a)配列番号19;配列番号29;配列番号39;配列番号49;配列番号59;配列番号69;配列番号79;配列番号89;配列番号99;配列番号109;配列番号119;配列番号129;配列番号139;配列番号149;配列番号159;配列番号169;配列番号179;配列番号189;配列番号199;配列番号209;配列番号219;配列番号229;配列番号231;配列番号233;配列番号235;配列番号237;配列番号239;配列番号241;配列番号243;配列番号245;配列番号247;配列番号249;配列番号251;配列番号253;配列番号255;配列番号257;配列番号259;および配列番号261;
(b)配列番号19;配列番号29;配列番号39;配列番号49;配列番号59;配列番号69;配列番号79;配列番号89;配列番号99;配列番号109;配列番号119;配列番号129;配列番号139;配列番号149;配列番号159;or配列番号169;配列番号179;配列番号189;配列番号199;配列番号209;配列番号219;配列番号229;配列番号231;配列番号233;配列番号235;配列番号237;配列番号239;配列番号241;配列番号243;配列番号245;配列番号247;配列番号249;配列番号251;配列番号253;配列番号255;配列番号257;配列番号259;および配列番号261のうちのいずれか1つに対して少なくとも60%、70%、80%、90%、または95%の配列相同性を有する核酸配列;
(c)配列番号29;配列番号39;配列番号49;配列番号59;配列番号69;配列番号79;配列番号89;配列番号99;配列番号109;配列番号119;配列番号129;配列番号139;配列番号149;配列番号159;配列番号169配列番号179;配列番号189;配列番号199;配列番号209;配列番号219;配列番号229;配列番号231;配列番号233;配列番号235;配列番号237;配列番号239;配列番号241;配列番号243;配列番号245;配列番号247;配列番号249;配列番号251;配列番号253;配列番号255;配列番号257;配列番号259;または配列番号261のうちのいずれか1つに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸配列
の群から選択される配列を含む、請求項40に記載の核酸。 - 請求項40または41に記載の核酸を含む、宿主細胞。
- ミスフォールドされたTDP-43に特異的に結合する結合分子の生成方法であって、請求項42に記載の宿主細胞を、TDP-43結合分子を生成するために適する条件下で培養することを含む、方法。
- 対象において、認知記憶能力、運動および言語機能を維持し、または増加させ、あるいは認知記憶能力、運動および言語機能の減退を予防し、および/または遅延させる方法であって、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、請求項26に記載の免疫コンジュゲート、請求項27に記載の組成物、または請求項28に記載の医薬組成物を投与することを特徴とする方法。
- ミスフォールドされたTDP-43のレベルを減少させる方法であって、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、請求項26に記載の免疫コンジュゲート、請求項27に記載の組成物、または請求項28に記載の医薬組成物を投与することを特徴とする方法。
- 少なくとも1つのさらなる治療を投与することを含む、請求項44または45に記載の方法。
- 前記さらなる治療が、以下に限定されないが、神経薬、抗Aベータ抗体、抗タウ抗体、タウ凝集阻害因子、ベータアミロイド凝集阻害因子、抗BACE1抗体、およびBACE1阻害因子から選択される、請求項46に記載の方法。
- 医薬として使用するための、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子。
- 対象におけるTDP-43タンパク質症の治療剤の製造のための、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子の使用。
- 対象におけるミスフォールドされたTDP-43のレベルを減少させるために使用するための、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、請求項26に記載の免疫コンジュゲート、請求項27に記載の組成物、または請求項28に記載の医薬組成物。
- 対象において、認知記憶能力、運動および言語機能を維持し、または増加させ、あるいは認知記憶能力、運動および言語機能の減退を予防し、および/または遅延させるための使用のための、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子、請求項26に記載の免疫コンジュゲート、請求項27に記載の組成物、または請求項28に記載の医薬組成物。
- ミスフォールドされたTDP-43を検出する方法であって、試料を、請求項1~25のいずれか1項に記載の結合分子と接触させることを含む、方法。
- 前記試料が、脳試料、脳脊髄液試料、尿試料、または血液試料である、請求項52に記載の方法。
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