JP2023024729A

JP2023024729A - ヤヌスキナーゼ阻害剤の結晶形

Info

Publication number: JP2023024729A
Application number: JP2022207814A
Authority: JP
Inventors: 幸宏神谷; Yukihiro Kamiya; 典昭下山; Noriaki Shimoyama; 隆平大倉; Ryuhei Okura; 悟野路; Satoru Nomichi
Original assignee: Japan Tobacco Inc
Current assignee: Japan Tobacco Inc
Priority date: 2016-12-21
Filing date: 2022-12-26
Publication date: 2023-02-16
Also published as: WO2018117153A1; IL267393A; KR20190092440A; BR112019012210A2; JP2020502224A; AU2017380213B2; CN110325536A; ES2926986T3; RU2019122566A; CA3044771A1; EP3559003A1; TWI822666B; MX2019007462A; RU2019122566A3; TW201829423A; US11339181B2; AU2017380213A1; IL267393B2; IL267393B1; EP3559003B1

Abstract

【課題】本発明は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の結晶形並びにその組成物、それらの調製方法、それらの使用方法及び定量方法に関する。【解決手段】本発明は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の結晶形並びにその組成物、それらの調製方法、それらの使用方法及び定量方法に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の結晶形並びにその組成物、それらの調製方法、それらの使用方法及び定量方法に関する。

ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤は、現在のところ、自己免疫疾患、炎症性疾患及び癌などの種々の疾患の治療において関心をもたれている。今日まで、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により２つのＪＡＫ阻害剤が承認されている。ルキソリチニブは原発性骨髄線維症及び真性赤血球増加症（ＰＶ）の治療について承認されており、トファシチニブは関節リウマチの治療について承認されている。他のＪＡＫ阻害剤は文献中にみられる。化合物３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）（構造は以下参照）は、米国特許公開公報第2011/0136778号及び国際出願第PCT/JP2016/070046号に報告されたスピロ環ＪＡＫ阻害剤の一例である。

例えば化合物Ａのような薬物化合物は、典型的に、他の製薬上許容可能な成分と組み合わせて、患者への投与に適した組成物に形成される。固形製剤は、薬物化合物が、熱及び湿気に対する安定性、取り扱いやすさ、及び固形剤形の調製を促進する他の特性などの、実効性のある固体特性を有することが要求されることが多い。そのため既存の薬物分子の固体形態について継続したニーズがある。本明細書に記載の化合物Ａの結晶形はこの目的に向けられている。

本発明は、とりわけ、３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の結晶形β及びγに向けられる。
本発明はさらに、β晶若しくはγ晶又はその両方とともにα晶を含む組成物に向けられる。
本発明はさらに、本発明の１種以上の結晶形又は組成物を含む医薬組成物に向けられる。
本発明はさらに、本発明の結晶形を調製する方法に向けられる。
本発明はさらに、本発明の結晶形を定量する方法に向けられる。
本発明はさらに、本発明の結晶形をヤヌスキナーゼと接触させることを含む、ヤヌスキナーゼの阻害方法に向けられる。
本発明はさらに、治療的有効量の本発明の結晶形又は組成物を患者に投与することを含む、患者における疾患を治療又は予防する方法に向けられる。
本発明はさらに、予防又は治療に用いるための本発明の結晶形又は組成物に向けられる。
本発明はさらに、予防又は治療に用いるための医薬の製造における本発明の結晶形又は組成物の使用に向けられる。

図１はα晶と一致するＸＲＰＤパターンを示す。図２はβ晶と一致するＸＲＰＤパターンを示す。図３はγ晶と一致するＸＲＰＤパターンを示す。図４はα晶と一致するＤＳＣサーモグラムを示す。図５はβ晶と一致するＤＳＣサーモグラムを示す。図６はγ晶と一致するＤＳＣサーモグラムを示す。図７はα晶と一致するＴＧ－ＤＴＡデータを示す。図８はβ晶と一致するＴＧ－ＤＴＡデータを示す。図９はγ晶と一致するＴＧ－ＤＴＡデータを示す。図１０はα晶と一致する固体^１３ＣＮＭＲデータを示す。図１１はβ晶と一致する固体^１３ＣＮＭＲデータを示す。図１２はγ晶と一致する固体^１３ＣＮＭＲデータを示す。図１３は０、２、５及び１０％のβ晶を含む化合物Ａの標準サンプルから得られたＸＲＰＤパターンを重ね合わせたものを示す（実施例４を参照）。図１４は０、１、２、５及び１０％のγ晶を含む化合物Ａの標準サンプルから得られたＸＲＰＤパターンを重ね合わせたものを示す（実施例４を参照）。図１５は下から、実施例６において、使用した化合物Ａのα晶、使用した化合物Ａのβ晶、化合物Ａのα晶とβ晶の撹拌前の重量比１：１の混合物、及び撹拌後に得られた当該結晶のＸＲＰＤパターンを示す。図１６は下から、実施例７において、使用した化合物Ａのα晶、使用した化合物Ａのγ晶、化合物Ａのα晶とγ晶の撹拌前の重量比１：１の混合物、及び撹拌後に得られた当該結晶のＸＲＰＤパターンを示す。図１７は下から、実施例８において、使用した化合物Ａのγ晶、使用した化合物Ａのβ晶、化合物Ａのβ晶とγ晶の撹拌前の重量比１：１の混合物、ホルムアミドから得られた結晶、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドから得られた結晶、及びジメチルスルホキシドから得られた結晶のＸＲＰＤパターンを示す。

本発明は、とりわけ、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の阻害剤であり、ヤヌスキナーゼ上方制御又は過剰発現と関連する種々の疾患の治療に有用である、３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの結晶形を提供する。いくつかの態様において、本発明の結晶形はＪＡＫ３を阻害する。いくつかの態様において、本発明の結晶形はＪＡＫ２を阻害する。

本発明は、ある側面において以下のとおりである。
［項１］ β晶である３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの結晶形。

［項２］２θ（°）において約１１．８に特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、項１に記載の結晶形。

［項３］２θ（°）において約１０．５、約１１．８、約１９．３及び約２２．０から選択される２つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、項１に記載の結晶形。

［項４］２θ（°）において約７．８、約１０．５、約１１．８、約１３．４、約１３．９、約１７．８、約１９．３、約２２．０、約２３．６及び約２８．０から選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、項１に記載の結晶形。

［項５］約１８６℃における吸熱ピークにより特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを有する、項１から４のいずれかに記載の結晶形。

［項６］約１６５．１ｐｐｍにおける少なくとも１つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを有する、項１から５のいずれかに記載の結晶形。

［項７］約１６．５、約２５．８、約２６．５、約３３．１、約３４．８、約３６．７、約３８．８、約４８．２、約５３．４、約７７．７、約７９．５、約１０１．２、約１０２．６、約１１７．５、約１２０．６、約１５１．１、約１５４．３及び約１６５．１ｐｐｍから選択される少なくとも５つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを有する、項１から５のいずれかに記載の結晶形。

［項８］単位格子パラメータ：

で示される空間群Ｐ１を有する、項１から７のいずれかに記載の結晶形。

［項９］少なくとも約５０％の純度を有する、項１から８のいずれかに記載の結晶形。

［項１０］少なくとも約７５％の純度を有する、項１から８のいずれかに記載の結晶形。

［項１１］少なくとも約８５％の純度を有する、項１から８のいずれかに記載の結晶形。

［項１２］少なくとも約９０％の純度を有する、項１から８のいずれかに記載の結晶形。

［項１３］少なくとも約９５％の純度を有する、項１から８のいずれかに記載の結晶形。

［項１４］ γ晶である３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの結晶形。

［項１５］２θ（°）において約１６．５に特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、項１４に記載の結晶形。

［項１６］２θ（°）において約１６．５、約１７．７、約２１．４、約２１．８及び約２３．１から選択される２つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、項１４に記載の結晶形。

［項１７］２θ（°）において約７．７、約１０．６、約１３．３、約１３．９、約１５．５、約１６．５、約１７．７、約１７．９、約１９．０、約２１．４、約２１．８、約２３．１、約２３．７及び約２８．１から選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、項１４に記載の結晶形。

［項１８］約１９６℃における吸熱ピークにより特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを有する、項１４から１７のいずれかに記載の結晶形。

［項１９］約１６２．９ｐｐｍにおける少なくとも１つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを有する、項１４から１８のいずれかに記載の結晶形。

［項２０］約１６．９、約２６．５、約３２．９、約３６．４、約４８．１、約５３．７、約７８．６、約１０２．６、約１１６．４、約１１７．９、約１２１．５、約１５１．８、約１５４．６及び約１６２．９ｐｐｍから選択される少なくとも５つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを有する、項１４から１９のいずれかに記載の結晶形。

［項２１］単位格子パラメータ：

で示される空間群Ｐ２_１を有する、項１４から２０のいずれかに記載の結晶形。

［項２２］少なくとも約５０％の純度を有する、項１４から２１のいずれかに記載の結晶形。

［項２３］少なくとも約７５％の純度を有する、項１４から２１のいずれかに記載の結晶形。

［項２４］少なくとも約８５％の純度を有する、項１４から２１のいずれかに記載の結晶形。

［項２５］少なくとも約９０％の純度を有する、項１４から２１のいずれかに記載の結晶形。

［項２６］少なくとも約９５％の純度を有する、項１４から２１のいずれかに記載の結晶形。

［項２７］３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルを溶媒から結晶化させることを含む、項１から１３のいずれかに記載の結晶形を調製する方法。

［項２８］溶媒が１－ブタノール及びアセトニトリルを含む、項２７に記載の方法。

［項２９］１－ブタノールとアセトニトリルの比が約１：３（ｖ／ｖ）である、項２８に記載の方法。

［項３０］項２７から２９のいずれかに記載の方法により調製される結晶形β。

［項３１］３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルのα晶をγ晶に変換することを含む、項１４から２６のいずれかに記載の結晶形を調製する方法。

［項３２］３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルのα晶をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で撹拌することを含む、項３１に記載の方法。

［項３３］３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルのα晶をホルムアミド中で撹拌することを含む、項３１に記載の方法。

［項３４］項３１から３３のいずれかに記載の方法により調製される結晶形γ。

［項３５］ α晶及びβ晶を含む、結晶性３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの組成物。

［項３６］本質的にα晶及びβ晶からなる、項３５に記載の組成物。

［項３７］ β晶がα晶に対して約１から約５０％ｗ／ｗの量で存在する、項３５又は３６に記載の組成物。

［項３８］ β晶がα晶に対して約１から約２０％ｗ／ｗの量で存在する、項３５又は３６に記載の組成物。

［項３９］ β晶がα晶に対して約１から約１０％ｗ／ｗの量で存在する、項３５又は３６に記載の組成物。

［項４０］ β晶がα晶に対して約１から約５％ｗ／ｗの量で存在する、項３５又は３６に記載の組成物。

［項４１］さらにγ晶を含む、項３５から４０のいずれかに記載の組成物。

［項４２］ β晶及びγ晶を含む、結晶性３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの組成物。

［項４３］本質的にβ晶及びγ晶からなる、項４２に記載の組成物。

［項４４］ γ晶がβ晶に対して約１から約５０％ｗ／ｗの量で存在する、項４２又は４３に記載の組成物。

［項４５］ γ晶がβ晶に対して約１から約２０％ｗ／ｗの量で存在する、項４２又は４３に記載の組成物。

［項４６］ γ晶がβ晶に対して約１から約１０％ｗ／ｗの量で存在する、項４２又は４３に記載の組成物。

［項４７］ γ晶がβ晶に対して約１から約５％ｗ／ｗの量で存在する、項４２又は４３に記載の組成物。

［項４８］さらにα晶を含む、項４２から４７のいずれかに記載の組成物。

［項４９］項１から４８のいずれかに記載の結晶形又は組成物及び製薬上許容される担体を含む医薬組成物。

［項５０］さらに第二治療剤を含む、項４９に記載の医薬組成物。

［項５１］経口、非経口、経肺、部分又は局所投与に適した、項４９又は５０に記載の医薬組成物。

［項５２］局所投与に適した、項４９又は５０に記載の医薬組成物。

［項５３］錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤又は軟膏の形態である、項４９又は５０に記載の医薬組成物。

［項５４］ＩＶ、ＩＭ又はＳＣ投与のための液剤への再構成に適した散剤の形態である、項４９又は５０に記載の医薬組成物。

［項５５］白色ワセリン、固形パラフィン、スクアレン又はその混合物を含む、項４９又は５０に記載の医薬組成物。

［項５６］ヤヌスキナーゼを項１から５５のいずれかに記載の結晶形又は組成物と接触させることを含む、ヤヌスキナーゼを阻害する方法。

［項５７］ヤヌスキナーゼがヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）である、項５６に記載の方法。

［項５８］ヤヌスキナーゼがヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）である、項５６に記載の方法。

［項５９］治療的有効量の、項１から５５のいずれかに記載の結晶形又は組成物を哺乳動物に投与することを含む、臓器移植時の拒絶、移植後の対宿主性移植片反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び慢性骨髄増殖性疾患から選択される疾患を治療又は予防する方法。

［項６０］治療的有効量の、項１から５５のいずれかに記載の結晶形又は組成物を哺乳動物に投与することを含む、関節リウマチ、乾癬、円形脱毛症、ドライアイ、アトピー性皮膚炎、湿疹又は手湿疹を治療又は予防する方法。

［項６１］医薬品有効成分として用いるための項１から５５のいずれかに記載の結晶形又は組成物。

［項６２］臓器移植時の拒絶、移植後の対宿主性移植片反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患又は慢性骨髄増殖性疾患の治療又は予防に用いるための項１から５５のいずれかに記載の結晶形又は組成物。

［項６３］関節リウマチ、乾癬、円形脱毛症、ドライアイ、アトピー性皮膚炎、湿疹又は手湿疹の治療又は予防に用いるための項１から５５のいずれかに記載の結晶形。

［項６４］β晶に特徴的なＸＲＰＤピークのピーク面積を測定し、該ピーク面積を標準と比較することを含む、３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルのα晶の調製物に存在するβ晶の量を測定する方法。

［項６５］ β晶に特徴的なピークが約１０．６°２θにみられる、項６４に記載の方法。

［項６６］ γ晶に特徴的なＸＲＰＤピークのピーク面積を測定し、該ピーク面積を標準と比較することを含む、３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルのα晶の調製物に存在するγ晶の量を測定する方法。

［項６７］ γ晶に特徴的なピークが約１６．６°２θにみられる、項６６に記載の方法。

本明細書において「結晶形」は、結晶性物質の特定の格子配置を意味する。同じ物質の異なる結晶形は典型的に、異なる結晶格子（例えば、単位格子）、及びその異なる結晶格子に起因する異なる物理的特性を有し、いくつかの場合には異なる含水量又は含溶媒量を有する。異なる結晶格子は粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）などの固体特性化法により特定することができる。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、動的水蒸気吸着測定（ＤＶＳ）、固体ＮＭＲなどの他の特性化法は、結晶形の特定並びに安定性及び含溶媒量／含水量の決定にさらに役立つ。

特定の物質の異なる結晶形は、その物質の無水物形態及び溶媒和物／水和物形態の両方を含むことができ、該無水物形態及び溶媒和物／水和物形態はそれぞれ、互いに、異なるＸＲＰＤパターンによって区別され、そのため異なる結晶格子を示す。いくつかの場合において、単一の結晶形（例えば、特有のＸＲＰＤパターンにより特定される）は様々な含水量又は含溶媒量を有することができるが、水及び／又は溶媒について組成が変動するにもかかわらず、その格子は実質的に変化しないままである（ＸＲＰＤパターンがそうであるように）。

反射（ピーク）のＸＲＰＤパターンは典型的に、特定の結晶形の指紋とみなされる。ＸＲＰＤピークの相対強度は、とりわけ、サンプル調製法、結晶サイズ分布、サンプルマウンティング手順及び用いる特定の装置により変化しうることはよく知られている。いくつかの場合において、機器又は設定の種類（例えば、Ｎｉフィルターを用いるか否か）に応じて、新たなピークが観測されてもよく、あるいは、既存のピークが消失してもよい。さらに、装置の変動及び他の要因が２θ値に影響しうる。したがって、本明細書に記載されているようなピークの同定は、±０．２°、±０．１°又は±０．０４°（２θ）変化し得、本明細書のＸＲＰＤの文脈で用いられる用語「実質的に」は上記変動を包含することを意味する。

同様に、ＤＳＣ、ＴＧＡ又は他の熱的実験に関する温度の読み取りは装置、特に設定、サンプル調製などに応じて約±３℃変動しうる。したがって、本明細書に記載されているような温度値は、±３℃変動し得、また、「実質的に」いずれかの図面にて示されるようなＤＳＣサーモグラム又は他のサーモグラムを有する本明細書に記載の結晶形は、そのような変動に対応すると理解される。

さらに、ケミカルシフトは^１３ＣＮＭＲスペクトルにおいて±０．２ｐｐｍ変動することができ、本明細書のＮＭＲデータの文脈で用いられる用語「実質的に」はこの変動を包含することを意味する。

β晶
本発明は、β晶である３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の結晶形を提供する。β晶に対応する結晶形は、例えばＤＳＣ及びＴＧ－ＤＴＡにより明らかにされているとおり無水であると考えられる（実施例２参照）。いくつかの態様において、β晶は２θ（°）において約１１．８に特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す。さらなる態様において、β晶は２θ（°）において約１０．５、約１１．８、約１９．３及び約２２．０から選択される２つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す。さらなる態様において、β晶は２θ（°）において約７．８、約１０．５、約１１．８、約１３．４、約１３．９、約１７．８、約１９．３、約２２．０、約２３．６及び約２８．０から選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す。さらなる態様において、β晶は２θ（°）において表２－１に記載のいずれかのピークから選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す（実施例２参照）。さらなる態様において、β晶は実質的に図２に示されるＸＲＰＤパターンを示す。

いくつかの態様において、β晶は約１８６℃における吸熱ピークにより特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを示す。いくつかの態様において、β晶は約１８５℃における補外開始温度により特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを示す。さらなる態様において、β晶は実質的に図５に示されるＤＳＣサーモグラムを示す。

いくつかの態様において、β晶は約１６５．１ｐｐｍにおける少なくとも１つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。さらなる態様において、β晶は約１６．５、約２５．８、約２６．５、約３３．１、約３４．８、約３６．７、約３８．８、約４８．２、約５３．４、約７７．７、約７９．５、約１０１．２、約１０２．６、約１１７．５、約１２０．６、約１５１．１、約１５４．３及び約１６５．１ｐｐｍから選択される少なくとも５つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。さらなる態様において、β晶は実質的に図１１に示される^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。

いくつかの態様において、β晶は単結晶Ｘ線回折により決定される単位格子パラメータ：

を有する空間群Ｐ１を有する（実施例５参照）。

β晶は少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％の純度を有しうる。いくつかの態様において、β晶は実質的に純粋である。

β晶は３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）を溶媒から結晶化させることにより調製しうる。例えば、化合物Ａ（例えばα晶として）を溶媒と混合して溶液又はスラリーを形成させ、これからβ晶の結晶を得ることができる。いくつかの態様において、該溶媒としては、アセトニトリルなどのニトリル又は１－ブタノール及びアセトニトリルの混合物が挙げられる。いくつかの態様において、該溶媒は１－ブタノール及びアセトニトリルをそれぞれ約１：３（ｖ／ｖ）含む。いくつかの態様において、化合物Ａは溶媒と混合して、約３０から約５０℃の温度に加熱することができる。いくつかの態様において、該混合物は約３５から約４５℃に、又は約４０℃に加熱することができる。加熱後、該混合物をおよそ室温（例えば約２３℃）に冷却し、β晶の結晶性生成物を得ることができる。

本発明はさらに、上記方法のいずれか１つにより調製されるβ晶を提供する。

γ晶
本発明はまた、γ晶である３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の結晶形も提供する。γ晶に対応する結晶形は、例えばＤＳＣ及びＴＧ－ＤＴＡにより明らかにされているとおり無水であると考えられる（実施例３参照）。いくつかの態様において、γ晶は２θ（°）において約１６．５に特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す。さらなる態様において、γ晶は２θ（°）において約１６．５、約１７．７、約２１．４、約２１．８及び約２３．１から選択される２つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す。さらなる態様において、γ晶は２θ（°）において約７．７、約１０．６、約１３．３、約１３．９、約１５．２、約１６．５、約１７．７、約１７．９、約１９．０、約２１．４、約２１．８、約２３．１、約２３．７及び約２８．１から選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す。さらなる態様において、γ晶は２θ（°）において表３－１に記載のいずれかのピークから選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを示す（実施例３参照）。さらなる態様において、γ晶は実質的に図３に示されるＸＲＰＤパターンを示す。

いくつかの態様において、γ晶は約１９６℃における吸熱ピークにより特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを示す。いくつかの態様において、γ晶は約１９６℃における補外開始温度により特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを示す。さらなる態様において、γ晶は実質的に図６に示されるＤＳＣサーモグラムを示す。

いくつかの態様において、γ晶は約１６２．９ｐｐｍにおける少なくとも１つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。さらなる態様において、γ晶は約１６．９、約２６．５、約３２．９、約３６．４、約４８．１、約５３．７、約７８．６、約１０２．６、約１１６．４、約１１７．９、約１２１．５、約１５１．８、約１５４．６及び約１６２．９ｐｐｍから選択される少なくとも５つのピークにより特徴づけられる固体^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。さらなる態様において、γ晶は実質的に図１１に示される^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す。

いくつかの態様において、γ晶は単結晶Ｘ線回折により決定される単位格子パラメータ：

を有する空間群Ｐ２_１を有する（実施例５参照）。

γ晶は少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％の純度を有しうる。いくつかの態様において、γ晶は実質的に純粋である。

γ晶は３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルのα晶をγ晶に変換することにより調製することができる。変換は、例えばα晶をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で撹拌することにより行うことができる。撹拌は、例えば室温にて行うことができる。あるいは、γ晶は化合物Ａをホルムアミドと混合し、γ晶の種晶を加えることにより調製することができる。調製は室温にて、適宜、窒素などの不活性雰囲気下にて行うことができる。

本発明はさらに、上記いずれかの方法により調製したγ晶を提供する。

組成物
β晶及びγ晶に加え、化合物Ａは無水α晶として調製し、得ることができ、実施例１に記載される。したがって、本発明は化合物Ａのα晶、β晶及びγ晶の２つ以上の混合物を提供する。

いくつかの態様において、本発明はα晶及びβ晶の両方を含む結晶性３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の組成物を提供する。いくつかの態様において、β晶はα晶に対し約１から約５０％ｗ／ｗの量で存在する。さらなる態様において、β晶はα晶に対し約１から約２０％ｗ／ｗの量で存在する。さらなる態様において、β晶はα晶に対し約１から約１０％ｗ／ｗの量で存在する。さらなる態様において、β晶はα晶に対し約１から約５％ｗ／ｗの量で存在する。いくつかの態様において、組成物はα晶及びβ晶を含み、実質的に化合物Ａの他の結晶形を含まない。さらなる態様において、α晶及びβ晶を含む組成物はさらにγ晶を含む。いくつかの態様において、組成物は本質的にα晶及びβ晶からなる。

さらに、本発明はβ晶及びγ晶の両方を含む結晶性３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の組成物を提供する。いくつかの態様において、γ晶はβ晶に対し約１から約５０％ｗ／ｗの量で存在する。さらなる態様において、γ晶はβ晶に対し約１から約２０％ｗ／ｗの量で存在する。さらなる態様において、γ晶はβ晶に対し約１から約１０％ｗ／ｗの量で存在する。さらなる態様において、γ晶はβ晶に対し約１から約５％ｗ／ｗの量で存在する。いくつかの態様において、組成物はβ晶及びγ晶を含み、実質的に化合物Ａの他の結晶形を含まない。さらなる態様において、β晶及びγ晶を含む組成物はさらにα晶を含む。いくつかの態様において、組成物は本質的にβ晶及びγ晶からなる。

本発明はさらに、β晶又はγ晶及び１つ以上の他の物質を含む組成物を提供する。いくつかの態様において、組成物は少なくとも約５０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、少なくとも約９８重量％又は少なくとも約９９重量％のβ晶又はγ晶を含む。

分析法
本発明は、β晶に特徴的なＸＲＰＤピークのピーク面積を測定し、該ピーク面積を標準と比較することを含む、α晶の調製物に存在するβ晶の量を測定する方法を提供する。いくつかの態様において、β晶に特徴的なピークは約１０．６°２θにみられる。標準はα晶中の既知の量のβ晶のピーク面積から算出される検量線でありうる。同様に、本発明は、γ晶に特徴的なＸＲＰＤピークのピーク面積を測定し、該ピーク面積を標準と比較することを含む、α晶の調製物に存在するγ晶の量を測定する方法を提供する。いくつかの態様において、γ晶に特徴的なピークは約１６．６°２θにみられる。標準はα晶中の既知の量のγ晶のピーク面積から算出される検量線でありうる。

医薬組成物及び用途
本発明の結晶形は、本発明の結晶形又は本発明の組成物を少なくとも１つの製薬上許容可能な担体（又は添加剤）とともに含む医薬組成物として調製しうる。ある態様において、医薬組成物は経口、非経口、経肺、部分又は局所投与に適している。いくつかの態様において、医薬組成物は錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などの経口製剤、又は外用剤、坐剤、注射剤、点滴剤、経鼻剤、経肺剤などの非経口製剤の形態である。いくつかの態様において、医薬組成物は軟膏などの局所適用に適している。

本発明の医薬組成物は、医薬製剤分野で既知の方法に従い、本発明の１種以上の結晶形又は本発明の組成物と少なくとも１つ以上の製薬上許容可能な担体を適量で混合することにより調製してもよい。医薬組成物中の化合物Ａの量は、その剤形、投与量などに応じて、例えば組成物の約０．１から１００重量％であることができる。本発明の医薬組成物は例えば錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤又は軟膏の形態であることができる。いくつかの態様において、本発明の医薬組成物は、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）又は皮下（ＳＣ）投与のための液剤への再構成に適した散剤の形態であることができる。さらに、本発明の医薬組成物はさらに第二治療剤を含んでもよい。

「製薬上許容可能な担体」としては、医薬材料のための種々の慣用の有機又は無機担体物質、例えば固形製剤について賦形剤、崩壊剤、結合剤、流動化剤及び滑沢剤、液体製剤について溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤、及び半固体製剤について基剤、乳化剤、保湿剤、安定剤、安定化剤、分散剤、可塑剤、ｐＨ調節剤、吸収促進剤、ゲル化剤、防腐剤、充填剤、溶解剤、溶解補助剤及び懸濁剤が挙げられる。さらに、保存剤、抗酸化剤、着色剤及び甘味剤などの添加剤を必要に応じて用いてもよい。

賦形剤の例としては、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、Ｄ－ソルビトール、トウモロコシデンプン、デキストリン、微結晶セルロース、結晶セルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム等が挙げられる。

崩壊剤の例としては、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、結晶セルロース等が挙げられる。

結合剤の例としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン、結晶セルロース、白糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、カルメロースナトリウム、アラビアゴム等が挙げられる。

流動化剤の例としては、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム等が挙げられる。

滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク等が挙げられる。

溶剤の例としては、精製水、エタノール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油等が挙げられる。

溶解補助剤の例としては、プロピレングリコール、Ｄ－マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。

懸濁化剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、カルメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、ポビドン、メチルセルロース、モノステアリン酸グリセリン等が挙げられる。

等張化剤の例としては、ブドウ糖、Ｄ－ソルビトール、塩化ナトリウム、Ｄ－マンニトール等が挙げられる。

緩衝剤の例としては、リン酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。

無痛化剤の例としては、ベンジルアルコール等が挙げられる。

保存剤の例としては、パラオキシ安息香酸エチル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、デヒドロ酢酸ナトリウム、ソルビン酸等が挙げられる。

抗酸化剤の例としては、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸等が挙げられる。

着色剤の例としては、食用色素（例えば、食用赤色２号又は３号、食用黄色４号又は５号等）、β－カロテン等が挙げられる。

甘味剤の例としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム等が挙げられる。

本発明の医薬組成物は、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、サル等）又はヒト等の患者に対し、疾患の治療又は予防のために治療的有効量にて経口的又は非経口的（例えば、部分、直腸、静脈内等）に投与してもよい。用語「哺乳動物」はヒト及び非ヒト哺乳動物対象の両方を含むことを意味する。医薬組成物の用量は対象、疾患、病態、剤形、投与経路に依存する。臓器移植時の拒絶、移植後の対宿主性移植片反応、自己免疫疾患又はアレルギー性疾患等に罹患している成人患者（体重：約６０ｋｇ）に経口投与するための用量は、例えば約１ｍｇから１ｇ／日の範囲であることができる。該用量は１回で又は数回に分けて投与してもよい。

局所医薬組成物について、担体（又は賦形剤）は白色ワセリン、固形パラフィン、スクアレン又はその組合せを含むことができる。白色ワセリン、固形パラフィン及びスクアレンは、それぞれ７０から９０重量％、５から１０重量％及び５から２０重量％の混合比にて混合してもよい。製剤の一例としては、化合物Ａ、白色ワセリン、５±２重量％の固形パラフィン及び１０±２重量％のスクアレンを含む。

局所薬剤は、例えば剤形等に応じて塗布、塗擦又はスプレーにより適用することができる。局所薬剤の患部への適用量は、有効成分の含量等に応じて選択することができ、局所薬剤は、例えば１日あたり１回又は数回に分けて適用することができる。いくつかの態様において、適用は１日１回又は１日２回である。

医薬組成物は、許容可能な製剤手順に従い製造することができ、例えばRemingtons Pharmaceutical Sciences, 17版. Alfonoso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985)に記載された手順であり、これはそのまま本明細書に参照により組み込まれる。

本発明の結晶形は、本発明の結晶形をヤヌスキナーゼ阻害剤と接触させることを含む、ＪＡＫ３、ＪＡＫ２又はその両者などのヤヌスキナーゼを阻害する方法に用いることができる。接触はインビトロ又はインビボで起こりうる。

本発明の結晶形又は組成物は、患者における以下の１つ以上の疾患の治療又は予防方法における有効成分として用いてもよい：
（ａ）臓器移植時の拒絶、又は移植後の対宿主性移植片反応；
（ｂ）関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、潰瘍性結腸炎、クローン病、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、キャッスルマン病、若年性特発性関節炎、ドライアイ等の自己免疫疾患；及び
（ｃ）喘息、アトピー性皮膚炎、鼻炎等のアレルギー性疾患。

いくつかの態様において、本発明の結晶形は、関節リウマチ、乾癬、円形脱毛症、ドライアイ、アトピー性皮膚炎、湿疹又は手湿疹の治療剤又は予防剤の有効成分として用いてもよい。

本発明の結晶形は、真性赤血球増加症、原発性骨髄線維症、本態性血小板血症等の慢性骨髄増殖性疾患の治療剤又は予防剤の有効成分として用いてもよい。

本明細書において化合物の「治療的有効量」は、所定の疾患及びその合併症の臨床症状を治癒し、緩和し、又は部分的に停止するのに十分な量を意味する。これを達成するのに適切な量は「治療的有効量」として定義される。各目的のための有効量は、疾患又は傷害の重篤度並びに対象の体重及び全身状態に応じる。

本明細書において用語「治療」は、症状の改善、悪化の予防、寛解の維持、増悪の予防及び再発の予防を含む。用語「治療」はまた、疾患、障害若しくは病態の進行の遅延、症状及び合併症の改善、緩和若しくは軽減、及び／又は疾患、障害若しくは病態の治癒若しくは除去も含んでもよい。

用語「治療」はまた、疾患、病態又は障害と闘う目的のための患者の管理及び世話を意味してもよい。

用語「予防」は、症状の発生を抑制することを意味する。

併用療法
本発明の結晶形は、治療的有効量の１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて患者に投与することができる。本発明の結晶形は、追加の治療剤と同時に（例えば、一緒に）投与することができる（例えば、単一の固定剤形又は別々の剤形にて）。同様に、本発明の結晶形及び追加の治療剤は、患者に連続して投与することができる。例えば、本発明の結晶形がその治療効果を発揮している間に追加の治療剤を投与する、あるいは、その逆も同様である。

本明細書に開示される発明をより効率的に理解するために、以下に実施例を挙げる。これらの実施例は例示のみを目的とするものであり、いかなる方法によっても本発明が限定して解釈されるものではないと理解されるべきである。

実施例１
３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリル（化合物Ａ）の調製及びα晶の特性化
化合物Ａの調製
化合物Ａを、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２０１６／０７００４６（実施例１から１５）に記載の以下の合成法により調製した。結晶化工程において、種晶を用いて結晶化を促進したが、種晶を用いずに、記載の方法に従い各化合物の結晶を調製することができる。

本明細書において略語は以下の意味を有する：
Ｓ－ＢＡＰＯ：（Ｓ）－２－（ベンジルアミノ）プロパン－１－オール
Ｓ－ＢＢＭＯ：（Ｓ）－Ｎ－ベンジル－Ｎ－（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）グリシン酸ｔｅｒｔ－ブチル
Ｒ－ＢＣＡＢ：（Ｒ）－Ｎ－ベンジル－Ｎ－（２－クロロプロピル）グリシン酸ｔｅｒｔ－ブチル
Ｓ－ＭＡＢＢ：（３Ｓ）－１－ベンジル－３－メチルアゼチジン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
Ｓ－ＭＡＢＢ－ＨＣ：（３Ｓ）－１－ベンジル－３－メチルアゼチジン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル塩酸塩
Ｓ－ＭＡＣＢ－ＨＣ：（３Ｓ）－３－メチルアゼチジン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル塩酸塩
Ｓ－ＺＭＡＢ：（３Ｓ）－３－メチルアゼチジン－１，２－ジカルボン酸１－ベンジル２－（ｔｅｒｔ－ブチル）
ＲＳ－ＺＭＢＢ：（２Ｒ，３Ｓ）－２－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－３－メチルアゼチジン－１，２－ジカルボン酸１－ベンジル２－（ｔｅｒｔ－ブチル）
ＲＳ－ＺＭＡＡ：（２Ｒ，３Ｓ）－１－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－２－（カルボキシメチル）－３－メチルアゼチジン－２－カルボン酸
ＲＳ－ＺＭＡＡ－ＤＮ・２Ｈ_２Ｏ：（２Ｒ，３Ｓ）－１－（（ベンジルオキシ）カルボニル）－２－（カルボキシメチル）－３－メチルアゼチジン－２－カルボン酸二ナトリウム塩二水和物
ＲＳ－ＺＭＯＯ：（２Ｒ，３Ｓ）－２－（２－ヒドロキシエチル）－２－（ヒドロキシメチル）－３－メチルアゼチジン－１－カルボン酸ベンジル
ＲＳ－ＺＭＳＳ：（２Ｒ，３Ｓ）－３－メチル－２－（２－（（メチルスルホニル）オキシ）エチル）－２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）アゼチジン－１－カルボン酸ベンジル
ＳＲ－ＺＭＤＢ：（３Ｓ，４Ｒ）－６－ベンジル－３－メチル－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－カルボン酸ベンジル
ＳＲ－ＭＤＯＺ：（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－カルボン酸ベンジル
ＳＲ－ＭＤＯＺ－ＯＸ：（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－カルボン酸ベンジルシュウ酸塩
ＳＲ－ＭＤＰＺ：（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－カルボン酸ベンジル
ＳＲ－ＭＤＯＰ：４－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－１，６－ジアザスピロ［３．４］－オクタン－６－イル］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン
化合物Ａ：３－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル］－３－オキソプロパンニトリル
ＣＰＰＹ：４－クロロ－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン
ＤＰＣＮ：１－シアノアセチル－３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール
ＴＢＢＡ：ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン

用いた測定装置及び測定条件は以下に示す。
^１Ｈ－ＮＭＲスペクトルはＣＤＣｌ_３又はＤＭＳＯ－ｄ_６中、テトラメチルシランを内部標準として測定し、全δ値をｐｐｍで示す。なお、特に記述のない限り、４００ＭＨｚのＮＭＲ装置を用いた。
実施例中の記号は次のような意味である。
ｓ：シングレット
ｄ：ダブレット
ｔ：トリプレット
ｑ：カルテット
ｄｄ：ダブルダブレット
ｄｄｄ：ダブルダブルダブレット
ｂｒｓ：ブロードシングレット
ｍ：マルチプレット
Ｊ：カップリング定数
試料中のイオン含量はその３回の測定値を平均化することにより測定した。
測定装置：イオンクロマトグラフLC-20システム（SHIMADZU）
測定条件：電気伝導度検出器SHIMADZU CDD-10A VP
アニオン分析用カラムSHIMADZU SHIM-PAC IC-A3
カチオン分析用カラムSHIMADZU SHIM-PAC IC-C1
試料中の含水量はカール・フィッシャー法により測定した。
測定装置：カール・フィッシャー水分計CA-06（MITSUBISHI CHEMICAL）
測定条件：
サンプル量：約２０ｍｇ
試薬：陽極液アクアミクロンAX（API Corporation）
陰極液アクアミクロンCXU（API Corporation）
元素分析により、サンプル中の炭素、水素及び窒素の各重量％を測定した。

工程Ａ．Ｓ－ＭＡＢＢ－ＨＣ（化合物［５］）の調製

工程１

窒素雰囲気下、水（１７５ｍＬ）にＳ－ＢＡＰＯ［１］（３５．０ｇ，２１２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。この懸濁液にトルエン（５３ｍＬ）および炭酸カリウム（３２．２ｇ，２３３ｍｍｏｌ）を室温にて添加した。この溶液にＴＢＢＡ（４３４．４ｇ，２２３ｍｍｏｌ）を室温にて滴下し、使用した滴下ロートをトルエン（１７ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を６５℃にて２１時間撹拌後、室温に冷却した。反応混合液にトルエン（１０５ｍＬ）を加え撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層を水（１７５ｍＬ）で洗浄後、水層を排出し、減圧下にて有機層の溶媒を留去した。この濃縮残渣にトルエン（１０５ｍＬ）を加えて濃縮した。この操作をあと２回繰り返した後、Ｓ－ＢＢＭＯ［２］のトルエン溶液（７４．０ｇ，２１２ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＳ－ＢＢＭＯのトルエン溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＳ－ＢＢＭＯ粗生成物を濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 7.36-7.13 (5H, m), 4.26 (1H, dd, J = 6.8, 3.9 Hz), 3.72 (2H, dd, J = 14.2, 6.8 Hz), 3.47-3.38 (1H, m), 3.30-3.08 (3H, m), 2.79 (1H, sext, J = 6.8 Hz), 1.35 (9H, s), 0.96 (3H, d, J = 6.8 Hz).
MS: m/z = 280 [M+H]⁺

工程２

窒素雰囲気下、Ｓ－ＢＢＭＯ［２］のトルエン溶液（７４．０ｇ，２１２ｍｍｏｌ）にトルエン（２００ｍＬ）、テトラヒドロフラン（３５ｍＬ）およびトリエチルアミン（２５．７ｇ，２５４ｍｍｏｌ）を室温にて順次添加した。この混合液にメタンスルホニルクロリド（２６．７ｇ，２３３ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下し、使用した滴下ロートをトルエン（１０ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を室温にて２時間撹拌し、更に６５℃にて２２時間撹拌した後に室温まで冷却した。反応混合液に重曹水（１０５ｍＬ）を加えて撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層を水（１０５ｍＬ）で洗浄後、水層を排出し、減圧下にて有機層の溶媒を留去した。この濃縮残渣にトルエン（１０５ｍＬ）を加え濃縮した。この操作をあと２回繰り返した後、Ｒ－ＢＣＡＢ［３］のトルエン溶液（７５．３ｇ，２１２ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＲ－ＢＣＡＢのトルエン溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＲ－ＢＣＡＢ粗生成物を濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 7.28-7.11 (5H, m), 4.24-4.11 (1H, m), 3.80 (2H, d, J = 3.6 Hz), 3.24 (2H, d, J = 3.6 Hz), 2.98-2.78 (2H, m), 1.46-1.37 (12H, m).
MS: m/z = 298 [M+H]⁺

工程３

窒素雰囲気下、Ｒ－ＢＣＡＢ［３］のトルエン溶液（７５．３ｇ，２１２ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（８８．０ｍＬ）および１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２（１Ｈ）－ピリミジノン（４２．０ｍＬ）を室温にて添加した。この溶液にリチウムビス（トリメチルシリル）アミド／テトラヒドロフラン溶液（１９５ｍＬ，２３３ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下し、使用した滴下ロートをテトラヒドロフラン（１７．０ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を０℃にて１時間撹拌した後、室温まで加温した。反応混合液に水（１７５ｍＬ）及びトルエン（１７５ｍＬ）を加えて撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層を塩化アンモニウム水溶液（１７５ｍＬ）および水（１７５ｍＬ）で順次洗浄後、減圧下にて有機層の溶媒を留去した。この濃縮残渣に酢酸エチル（１７５ｍＬ）を加えて濃縮した。この操作をあと２回繰り返し、Ｓ－ＭＡＢＢ［４］の酢酸エチル溶液（６６．５ｇ，２１２ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＳ－ＭＡＢＢの酢酸エチル溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＳ－ＭＡＢＢ粗生成物を濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 7.28-7.25 (10H, m), 3.75 (1H, d, J = 12.7 Hz), 3.68 (1H, d, J = 1.4 Hz), 3.66 (1H, d, J = 6.7 Hz), 3.46 (2H, d, J = 12.7 Hz), 3.30-3.17 (2H, m), 2.95 (1H, dd, J = 6.2, 1.2 Hz), 2.77 (1H, dd, J = 6.1, 2.2 Hz), 2.65-2.55 (1H, m), 2.48-2.40 (2H, m), 1.35 (9H, s), 1.35 (9H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.2 Hz), 1.09 (3H, d, J = 6.2 Hz).
MS: m/z = 262 [M+H]⁺

工程４

窒素雰囲気下、Ｓ－ＭＡＢＢ［４］の酢酸エチル溶液（６６．５ｇ，２１２ｍｍｏｌ相当）に酢酸エチル（１７５ｍＬ）及び活性炭（３．５ｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。活性炭を濾過にて除き、濾過残渣を酢酸エチル（１７５ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を濾液に添加した。この溶液に本法に従い調製したＳ－ＭＡＢＢ－ＨＣの結晶（１７．５ｍｇ）を０℃にて添加した後、０℃にて４Ｍ塩化水素／酢酸エチル溶液（５３．０ｍＬ，２１２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合液を０℃にて１７時間撹拌した後、析出した固体を濾取し、得られた固体を酢酸エチル（７０ｍＬ）で洗浄した。得られた湿固体を減圧下にて乾燥することでＳ－ＭＡＢＢ－ＨＣ［５］（４８．３ｇ，１６２ｍｍｏｌ）を収率７６．４％で得た。
同じ方法で合成したＳ－ＭＡＢＢ－ＨＣのＮＭＲ、ＭＳ及びＣｌ含量を測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 11.08 (1H, br s), 10.94 (1H, br s), 7.52-7.42 (10H, m), 5.34 (1H, t, J = 8.4 Hz), 4.90 (1H, br s), 4.45-4.10 (5H, m), 3.92-3.49 (3H, br m), 3.10-2.73 (2H, br m), 1.35 (9H, s), 1.29 (9H, s), 1.24 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.17 (3H, d, J = 7.4 Hz).
MS: m/z = 262 [M+H-HCl]⁺
Cl含量（イオンクロマトグラフィー）: 11.9%（理論値：11.9%）

工程Ｂ．Ｓ－ＭＡＣＢ－ＨＣ（化合物［６］）の調製

窒素雰囲気下、Ｓ－ＭＡＢＢ－ＨＣ［５］（５．０ｇ，１６．８ｍｍｏｌ）のメタノール（１５．０ｍＬ）溶液に５％パラジウム炭素（川研ファインケミカル社製ＰＨタイプ，５４．１％含水，１．０ｇ）を室温で添加した。反応容器を水素で置換し、水素ガス圧０．４ＭＰａで室温にて１２時間撹拌した後、反応容器を窒素で置換し、５％パラジウム炭素を濾過で除去した。反応容器と５％パラジウム炭素をメタノール（１０ｍＬ）で洗浄した。洗浄液を濾液に添加し、Ｓ－ＭＡＣＢ－ＨＣ［６］のメタノール溶液（２４．８ｇ，１６．８ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＳ－ＭＡＣＢ－ＨＣのメタノール溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＳ－ＭＡＣＢ－ＨＣ粗生成物を濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 9.60 (br s, 1H), 4.97 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 4.61 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 4.01 (dd, 1H, J = 10.0, 8.4 Hz), 3.78-3.74 (m, 1H), 3.54 (dd, 1H, J = 9.6, 8.4 Hz), 3.35 (dd, 1H, J = 10.0, 6.0 Hz), 3.15-3.03 (m, 1H), 3.00-2.88 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.47 (s, 9H), 1.22 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
MS: m/z = 172 [M+H]⁺ (フリー体)

工程Ｃ．Ｓ－ＺＭＡＢ（化合物［７］）の調製

窒素雰囲気下、Ｓ－ＭＡＣＢ－ＨＣ［６］のメタノール溶液（２４．８ｇ，１６．８ｍｍｏｌ相当）にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．８ｇ，３６．９ｍｍｏｌ）を室温にて滴下し、使用した滴下ロートをテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。この反応混合液にクロロギ酸ベンジルエステル（３．０ｇ，１７．６ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下し、使用した滴下ロートをテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を０℃にて１時間撹拌した後、減圧下にて溶媒を留去した。得られた濃縮残渣にトルエン（２５．０ｍＬ）及びクエン酸水（２５．０ｍＬ）を加えて撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層を重曹水（２５．０ｍＬ）及び水（２５．０ｍＬ）で順次洗浄し、減圧下にて有機層の溶媒を留去した。この濃縮残渣にトルエン（１５．０ｍＬ）を加えて濃縮した。この操作をあと１回繰り返した。濃縮終了後、Ｓ－ＺＭＡＢ［７］のトルエン溶液（６．９ｇ，１６．８ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＳ－ＺＭＡＢのトルエン溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＳ－ＺＭＡＢ粗生成物を濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (CDCl₃) δ: 7.38-7.28 (m, 10H), 5.16-5.04 (m, 4H), 4.60 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 4.18-4.12 (m, 2H), 4.04 (t, 1H, J = 8.6 Hz), 3.66 (dd, 1H, J = 7.6, 7.2 Hz), 3.50 (dd, 1H, J = 8.0, 5.2 Hz), 3.05-2.94 (m, 1H), 2.60-2.50 (m, 1H), 1.43 (br s, 18H), 1.33 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.15 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
MS: m/z = 328 [M+Na]⁺.

工程Ｄ．ＲＳ－ＺＭＢＢ（化合物［８］）の調製

窒素雰囲気下、Ｓ－ＺＭＡＢ［７］のトルエン溶液（６．９ｇ，１６．８ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（１５．０ｍＬ）を室温にて添加した。この溶液にリチウムビス（トリメチルシリル）アミド／テトラヒドロフラン溶液（１４．７ｍＬ，１７．６ｍｍｏｌ）を－７０℃にて滴下した。使用した滴下ロートをテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を－７０℃にて６時間撹拌した後、テトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）で希釈したＴＢＢＡ（３．４ｇ，１７．６ｍｍｏｌ）を－７０℃にて滴下した。使用した滴下ロートをテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を－７０℃にて１時間撹拌した後、室温に加温し、塩化アンモニウム水（２５ｍＬ）及びトルエン（２５ｍＬ）を添加して撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層をクエン酸水（２５ｍＬ）で２回、重曹水（２５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）で順次洗浄した後、減圧下にて有機層の溶媒を留去した。この濃縮残渣にアセトニトリル（１５ｍＬ）を加え、再度濃縮した。この操作をあと２回繰り返した。この濃縮残渣にアセトニトリル（１５ｍＬ）及び活性炭（０．２５ｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。活性炭を濾過にて除き、反応容器と濾過残渣をアセトニトリル（１０ｍＬ）で洗浄した。濾液と洗浄液を合わせて減圧下にて溶媒を留去し、ＲＳ－ＺＭＢＢ［８］のアセトニトリル溶液（１３．２ｇ，１６．８ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＲＳ－ＺＭＢＢのアセトニトリル溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＲＳ－ＺＭＢＢ粗生成物を濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 7.38-7.29 (m, 5H), 5.09-4.96 (m, 2H), 3.91 (t, 0.4H, J = 8.0 Hz), 3.79 (t, 0.6H, J = 8.0 Hz), 3.55 (t, 0.4H, J = 7.2 Hz), 3.46 (t, 0.6H, J = 7.5 Hz), 3.14-3.04 (m, 1H), 2.83-2.72 (m, 2H), 1.38 (br s, 9H), 1.37 (br s, 3.6H), 1.34 (br s, 5.4H), 1.12-1.09 (m, 3H).
MS: m/z = 420 [M+H]⁺.

工程Ｅ．ＲＳ－ＺＭＡＡ－ＤＮ・２Ｈ _２Ｏ（化合物［９］）の調製

窒素雰囲気下、ＲＳ－ＺＭＢＢ［８］のアセトニトリル溶液（１３．２ｇ，１６．８ｍｍｏｌ相当）にアセトニトリル（１５ｍＬ）を室温にて添加した。この溶液にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（６．４ｇ，３３．６ｍｍｏｌ）を室温にて添加した。反応混合液を５０℃にて１２時間撹拌した後、室温まで冷却し、水（７．５ｍＬ）を滴下した。この反応混合液を０℃まで冷却した後、４ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（１７．６ｍＬ，７０．５ｍｍｏｌ）を滴下した。室温にて１時間撹拌した後、アセトニトリル（７５ｍＬ）を室温にて滴下し、３時間撹拌した。析出した固体を濾取し、得られた固体をアセトニトリル：水＝４：１混合溶液（１０ｍＬ）及びアセトニトリル（１０ｍＬ）で順次洗浄した。得られた湿固体を減圧下にて乾燥することでＲＳ－ＺＭＡＡ－ＤＮ・２Ｈ２Ｏ［９］（５．２ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）を収率８５．４％で得た。
同じ方法で合成したＲＳ－ＺＭＡＡ－ＤＮ・２Ｈ_２ＯのＮＭＲ、ＭＳ、Ｎａ含量及び水分含量を測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 7.32-7.22 (m, 5H), 4.97 (d, 1H, J = 12.7 Hz), 4.84 (d, 1H, J = 12.7 Hz), 3.79 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 3.29 (d, 1H, J = 14.8 Hz), 3.16-3.12 (m, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H), 1.07 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
MS: m/z = 352 [M+H]⁺ (無水物)
Ｎａ含量（イオンクロマトグラフィー）：１３．３％（水分含量補正後）（理論値：１３．１％）
水分含量（カール・フィッシャー法）：９．８％（理論値：９．３％）

工程Ｆ．ＲＳ－ＺＭＡＡ（化合物［１０］）の調製

１ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１８０ｍＬ）にＲＳ－ＺＭＡＡ－ＤＮ・２Ｈ_２Ｏ［９］（３０ｇ，７７．５ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（６０ｍＬ）を加え、室温にて約１５分撹拌した。この反応混合液に酢酸エチル（２４０ｍＬ）を添加し更に撹拌した後、有機層を分取した。有機層を１０％食塩水（６０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層に硫酸マグネシウム（６ｇ）を添加し撹拌した後、硫酸マグネシウムを濾過し、濾過残渣を酢酸エチル（６０ｍＬ）で洗浄した。濾液及び洗浄液を合わせて、減圧下にて溶媒を留去した。この濃縮残渣にテトラヒドロフラン（２４０ｍＬ）を加え、減圧濃縮した。この操作をあと２回繰り返した。この濃縮残渣にテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）を加え、ＲＳ－ＺＭＡＡ［１０］のテトラヒドロフラン溶液を得た。得られたＲＳ－ＺＭＡＡのテトラヒドロフラン溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＲＳ－ＺＭＡＡのＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-D₆) δ: 7.35-7.28 (m, 5H), 5.06-4.94 (m, 2H), 3.86 (dt, 1H, J = 48.4, 7.9 Hz), 3.50 (dt, 1H, J = 37.9, 7.4 Hz), 3.16-3.02 (br m, 1H), 2.91-2.77 (br m, 2H), 1.08 (d, 3H, J = 6.9 Hz)
MS: m/z = 308 [M+H]⁺.

工程Ｇ．ＲＳ－ＺＭＯＯ（化合物［１１］）の調製

窒素雰囲気下、ＲＳ－ＺＭＡＡ［１０］のテトラヒドロフラン溶液（２５．８ｍｍｏｌ相当）にテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）を加え、０℃から５℃でボロントリフルオリドジエチルエーテル錯体（４．４０ｇ）を滴下した。テトラヒドロフラン（５ｍＬ）で滴下ロートを洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液に、０℃から５℃で１．２ｍｏｌ／Ｌボラン－テトラヒドロフラン錯体（４３．０ｍＬ）を滴下し、０℃から５℃で約３０分間撹拌した後、室温にて更に終夜撹拌した。反応混合液に１．２ｍｏｌ／Ｌボラン－テトラヒドロフラン錯体（２１．１ｍＬ）を０℃から５℃で滴下し、室温にて終夜撹拌した。撹拌後、反応混合液に０℃から１５℃で水（４０ｍＬ）を滴下した。反応混合液に０℃から１５℃にて重曹（５．４２ｇ）を添加し、容器に付着した重曹を水（１０ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を室温で２時間撹拌した後、トルエン（５０ｍＬ）を加えて更に撹拌した。有機層を分取した。得られた有機層を１０％食塩水２０ｍＬで１回、５％重曹水（２０ｍＬ）と１０％食塩水（２０ｍＬ）の混合溶液で３回、５％硫酸水素カリウム水溶液（１０ｍＬ）と１０％食塩水（１０ｍＬ）の混合溶液で１回、１０％食塩水（２０ｍＬ）で２回、順次洗浄した。有機層に硫酸マグネシウム（８．９ｇ）を添加し撹拌した後、硫酸マグネシウムを濾過し、濾過残渣をトルエン（２０ｍＬ）で洗浄した。この洗浄液を濾液に添加した後、減圧下にて濾液の溶媒を留去した。濃縮残渣にトルエン（８０ｍＬ）を加え、減圧濃縮し、トルエン（１５ｍＬ）を加え、ＲＳ－ＺＭＯＯ［１１］のトルエン溶液を得た。得られたＲＳ－ＺＭＯＯのトルエン溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＲＳ－ＺＭＯＯのＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (CDCl₃) δ: 7.39-7.30 (m, 5H), 5.10 (s, 2H), 4.15-4.01 (br m, 2H), 3.83-3.73 (br m, 3H), 3.48 (dd, 1H, J = 8.3, 6.4 Hz), 2.59-2.50 (br m, 1H), 2.46-2.40 (br m, 1H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz)
MS: m/z = 280 [M+H]⁺.

工程Ｈ．ＲＳ－ＺＭＳＳ（化合物［１２］）の調製

窒素雰囲気下、ＲＳ－ＺＭＯＯ［１１］のトルエン溶液（２３．７ｍｍｏｌ相当）にトルエン（５５ｍＬ）を加え、トリエチルアミン（５．２７ｇ）を－１０℃から１０℃で滴下し、滴下ロートをトルエン（１．８ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。この反応混合液に、メタンスルホニルクロリド（５．６９ｇ）を－１０℃から１０℃で滴下し、滴下ロートをトルエン（１．８ｍＬ）にて洗浄し、洗浄液を反応混合液に合わせた。反応混合液を０℃から１０℃で約２時間撹拌後、０℃から２０℃で水（２８ｍＬ）を滴下した。反応混合液を０℃から２０℃で約３０分間撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層を１０％食塩水（１８ｍＬ）で２回洗浄した。得られた有機層に硫酸マグネシウム（２．７５ｇ）を添加し撹拌した後、硫酸マグネシウムを濾過し、濾過残渣をトルエン（１８ｍＬ）で洗浄した。洗浄液を濾液に添加した後、減圧下にて濾液の溶媒を留去した。この濃縮残渣に、約１８ｍＬになるようにトルエンを添加し、ＲＳ－ＺＭＳＳ［１２］のトルエン溶液を得た。得られたＲＳ－ＺＭＳＳのトルエン溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＲＳ－ＺＭＳＳのＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-D₆) δ: 7.37-7.27 (br m, 5H), 5.10-4.98 (m, 2H), 4.58-4.22 (br m, 4H), 3.84 (dt, 1H, J = 45.6, 8.1 Hz), 3.48-3.33 (br m, 1H), 3.17-3.10 (m, 6H), 2.81-2.74 (br m, 1H), 2.22-2.12 (m, 2H)
MS: m/z = 436 [M+H]⁺.

工程Ｉ．ＳＲ－ＺＭＤＢ（化合物［１３］）の調製

窒素雰囲気下、ＲＳ－ＺＭＳＳ［１２］のトルエン溶液（２３．７ｍｍｏｌ相当）にトルエン（５５ｍＬ）を加え、室温でベンジルアミン（１７．８ｇ）を滴下し、滴下ロートをトルエン（９．２ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。この反応混合液を、室温で約１時間、５５℃から６５℃で約３時間、次いで７０℃から８０℃で約６時間撹拌した。反応混合液を室温まで冷却した後、１０％ＮａＣｌ（２８ｍＬ）を滴下し、室温で約３０分間撹拌した。反応混合液にトルエン（３７ｍＬ）を添加した後撹拌し、有機層を分取した。得られた有機層を１０％食塩水（１８ｍＬ）と酢酸（２．８４ｇ）の溶液で２回、１０％食塩水（１１ｍＬ）で１回、順次洗浄した。減圧下にて残渣が半量になるまで有機層の溶媒を留去した後、濃縮残渣に室温で無水酢酸（１．４５ｇ）を加えて約３時間撹拌した。反応混合液に硫酸水素カリウム（３．８７ｇ）と水（９２ｍＬ）の溶液を室温で滴下し、撹拌した後、水層を分取した。得られた水層をトルエン（１８ｍＬ）で洗浄した後、室温にてトルエン（７３ｍＬ）と重曹（６．５６ｇ）を順次添加し撹拌した。有機層を分取し、得られた有機層を１０％食塩水（１１ｍＬ）で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウム（２．７５ｇ）を添加して撹拌した後、硫酸マグネシウムを濾過した。濾過残渣をトルエン（１８ｍＬ）にて洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて減圧下にて溶媒を留去した。濃縮残渣にトルエン（４４ｍＬ）を加え、ＳＲ－ＺＭＤＢ［１３］のトルエン溶液を得た。ＳＲ－ＺＭＤＢのトルエン溶液を収率１００％として次工程へ用いた。
¹H-NMR (CDCl₃) δ: 7.35-7.20 (m, 10H), 5.08 (d, 2H, J = 23.6 Hz), 3.94 (q, 1H, J = 7.9 Hz), 3.73-3.42 (br m, 2H), 3.30-3.23 (m, 1H), 3.05 (dd, 1H, J = 19.7, 9.5 Hz), 2.79 (dt, 1H, J = 69.6, 6.1 Hz), 2.57-2.32 (br m, 4H), 1.96-1.89 (m, 1H), 1.09 (d, 3H, J = 6.9 Hz)
MS: m/z = 351 [M+H]⁺.

工程Ｊ．ＳＲ－ＭＤＯＺ（化合物［１４］）の調製

窒素雰囲気下、クロロギ酸１－クロロエチル（３．７２ｇ）とトルエン（２８ｍＬ）の溶液に０℃から１０℃でＳＲ－ＺＭＤＢ［１３］のトルエン溶液（２３．７ｍｍｏｌ相当）を滴下し、滴下ロートをトルエン（４．６ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液に、０℃から１０℃でトリエチルアミン（７１８ｍｇ）を添加し、１５℃から２５℃で約２時間撹拌した後、メチルアルコール（４６ｍＬ）を加え、５０℃から６０℃で更に約２時間撹拌した。減圧下にて、残渣が約３７ｍＬ以下になるまで、反応混合液の溶媒を留去した。濃縮残渣に１５℃から２０℃で２ｍｏｌ／Ｌ塩酸水（４６ｍＬ）を滴下し撹拌した後、水層を分取した。得られた水層をトルエン（２８ｍＬ）で２回洗浄した。水層に２０％食塩水（４６ｍＬ）とテトラヒドロフラン（９２ｍＬ）を添加した後、８ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（１８ｍＬ）を０℃から１０℃で滴下した。反応混合液から有機層を分取し、得られた有機層を２０％食塩水（１８ｍＬ）で２回洗浄した後、減圧下にて有機層の溶媒を留去した。濃縮残渣にテトラヒドロフラン（９２ｍＬ）を加えて減圧濃縮した。この操作をあと１回行った。濃縮残渣にテトラヒドロフラン（９２ｍＬ）を添加し溶解し、硫酸マグネシウム（２．７５ｇ）を添加し撹拌した後、硫酸マグネシウムを濾過した。濾過残渣をテトラヒドロフラン（２８ｍＬ）で洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて減圧下にて溶媒を留去した。この濃縮残渣はテトラヒドロフランで約２０ｍＬになるように容量を調整し、ＳＲ－ＭＤＯＺ［１４］のテトラヒドロフラン溶液（正味量４．０１ｇ，１５．４ｍｏｌ）を収率６５．０％で得た。
同じ方法で合成したＳＲ－ＭＤＯＺを濃縮乾固し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (CDCl₃) δ: 7.37-7.28 (m, 5H), 5.08 (dd, 2H, J = 16.8, 12.8 Hz), 4.00 (dd, 1H, J = 17.1, 8.3 Hz), 3.40-3.31 (m, 1H), 3.24 (d, 1H, J = 12.7 Hz), 3.00 (dd, 1H, J = 54.9, 12.4 Hz), 2.87-2.57 (m, 3H), 2.47-2.27 (m, 1H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz)
MS: m/z = 261 [M+H]⁺.

工程Ｋ．ＳＲ－ＭＤＯＺ－ＯＸ（化合物［１５］）の調製

窒素雰囲気下、シュウ酸（７６１ｍｇ）をテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）で溶解し、室温でＳＲ－ＭＤＯＺ［１４］のテトラヒドロフラン溶液（３．８４ｍｍｏｌ相当）を滴下した。この溶液に室温で本法に従い調製したＳＲ－ＭＤＯＺ－ＯＸの結晶（１ｍｇ）を添加し、室温で約３．５時間撹拌し、結晶を析出させた。このスラリー液にＳＲ－ＭＤＯＺのテトラヒドロフラン溶液（３．８４ｍｍｏｌ）を室温で滴下し、室温で約１時間撹拌した。このスラリー液を加熱し、５０℃から６０℃で約２時間撹拌後、室温で終夜撹拌した。このスラリー液を濾過し、湿結晶をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）にて洗浄し、減圧乾燥後、ＳＲ－ＭＤＯＺ－ＯＸ［１５］（２．３２ｇ，６．６２ｍｏｌ）を収率８６．２％で得た。
同じ方法で合成したＳＲ－ＭＤＯＺ－ＯＸのＮＭＲ、ＭＳ及び元素分析測定を行なった。
¹H-NMR (DMSO-D₆) δ: 7.37-7.30 (m, 5H), 5.15-5.01 (m, 2H), 3.92 (dt, 1H, J = 43.5, 8.4 Hz), 3.48-3.12 (br m, 5H), 2.67-2.56 (m, 1H), 2.46-2.35 (m, 1H), 2.12-2.05 (m, 1H), 1.13 (d, 3H, J = 6.9 Hz)
MS: m/z = 261 [M+H]⁺
元素分析: C 58.4wt% , H 6.4wt% , N 7.9wt%（理論値 C 58.3wt% , H 6.3wt% , N 8.0wt%）

工程Ｌ．ＳＲ－ＭＤＰＺ（化合物［１６］）の調製

窒素雰囲気下、ＳＲ－ＭＤＯＺ－ＯＸ［１５］（１２．０ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）にエタノール（３６ｍＬ）を添加し、次いで水（７２ｍＬ）、ＣＰＰＹ［２０］（５．３６ｇ，３４．９ｍｍｏｌ）及びＫ_３ＰＯ_４（２１．８ｇ，１０３ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合液を８０℃にて５時間撹拌した後、４０℃まで冷却し、４０℃にてトルエン（１２０ｍＬ）を添加し、有機層を分取した。得られた有機層を２０％炭酸カリウム水溶液（４８ｍＬ）で洗浄した後、さらに水（４８ｍＬ）で２回洗浄した。次いで減圧下にて有機層の溶媒を留去した。この濃縮残渣にｔｅｒｔ－ブタノール（６０ｍＬ）を加えて濃縮した。この操作をあと２回繰り返した。濃縮残渣にｔｅｒｔ－ブタノール（３６ｍＬ）を加え、ＳＲ－ＭＤＰＺ［１６］のｔｅｒｔ－ブタノール溶液（６１．１ｇ，３４．２ｍｍｏｌ相当）を得た。得られたＳＲ－ＭＤＰＺのｔｅｒｔ－ブタノール溶液を収率１００％として次工程に用いた。
同じ方法で合成したＳＲ－ＭＤＰＺを酢酸エチルとｎ－ヘプタン混合溶媒により固体として単離し、ＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 11.59 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.41-7.26 (br m, 3H), 7.22-7.08 (br m, 3H), 6.64-6.51 (br m, 1H), 5.07-4.91 (br m, 2H), 4.09-3.67 (br m, 5H), 3.47-3.32 (br m, 1H), 2.67-2.55 (br m, 2H), 2.21-2.15 (br m, 1H), 1.11 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
MS: m/z = 378 [M+H]⁺

工程Ｍ．ＳＲ－ＭＤＯＰ（化合物［１７］）の調製

窒素雰囲気下、ＳＲ－ＭＤＰＺ［１６］のｔｅｒｔ－ブタノール溶液（３４．２ｍｍｏｌ相当）にギ酸アンモニウム（１０．８ｇ，１７１ｍｍｏｌ）、水（６０ｍＬ）及び１０％パラジウム炭素（川研ファインケミカル社製Ｍタイプ，５２．６％含水，１．２０ｇ）を添加した。反応混合液を４０℃にて１３時間撹拌した後、室温まで冷却し、不溶物を濾過で除去した。反応容器と不溶物をｔｅｒｔ－ブタノール（２４ｍＬ）で洗浄し、洗浄液と濾液に８Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２５．７ｍＬ，２０５ｍｍｏｌ）と塩化ナトリウム（１３．２ｇ）を添加した。反応混合液を５０℃にて２時間撹拌した後、トルエン（８４ｍＬ）を室温にて加え、有機層を分取した。得られた有機層を２０％食塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムを添加し撹拌した後、硫酸ナトリウムを濾過した。濾過残渣をトルエン：ｔｅｒｔ－ブタノール＝１：１混合溶液（４８ｍＬ）で洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて減圧下にて溶媒を留去した。濃縮残渣にトルエン（６０ｍＬ）を添加し、５０℃にて２時間撹拌した後、減圧下にて溶媒を留去した。濃縮残渣に再度トルエン（６０ｍＬ）を加えて濃縮した。濃縮残渣にトルエン（４８ｍＬ）を加え、室温にて１時間、次いで氷冷下にて１時間撹拌した。析出した固体を濾取し、得られた固体をトルエン（２４ｍＬ）で洗浄した。得られた湿固体を減圧下にて乾燥することで、ＳＲ－ＭＤＯＰ［１７］（７．０７ｇ，２９．１ｍｍｏｌ）を収率８４．８％で得た。
同じ方法で合成したＳＲ－ＭＤＯＰのＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 11.57 (br s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.10 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 6.58 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 3.92-3.59 (br m, 4H), 3.49 (dd, 1H, J = 8.3, 7.2 Hz), 2.93 (dd, 1H, J = 7.2, 6.1 Hz), 2.61-2.53 (m, 2H), 2.12-2.01 (br m, 2H), 1.10 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
MS: m/z = 244 [M+H]⁺.

工程Ｎ．化合物Ａの１－エタノール和物（化合物［１８］）の調製

窒素雰囲気下、ＳＲ－ＭＤＯＰ［１７］（５．００ｇ，２０．５ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（６０ｍＬ）及びトリエチルアミン（４１６ｍｇ，４．１１ｍｍｏｌ）を添加した後、ＤＰＣＮ［２１］（３．６９ｇ，２２．６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３５ｍＬ）溶液を４５℃にて滴下し、使用した滴下ロートをアセトニトリル（５．０ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を反応混合液に添加した。反応混合液を４５℃にて３時間撹拌した後、室温まで冷却した。反応後混合液に５％重曹水（２５ｍＬ）、１０％食塩水（２５ｍＬ）及び酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えて撹拌した後、有機層を分取した。減圧下にて有機層の溶媒を留去した。濃縮残渣にテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）を加えて濃縮した。この操作をあと３回繰り返した。濃縮残渣にテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）を加え、溶液の水分含量が５．５％になるように水を添加し、析出した不溶物を濾過で除去した。反応容器と濾過残渣をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を濾液に添加した後、減圧下にて濾液の溶媒を留去した。濃縮残渣にエタノール（５０ｍＬ）及び下記実施例１５の方法で調製した化合物Ａの結晶（５．１ｍｇ）を添加し、室温にて１時間撹拌した後、減圧下にて溶媒を留去し、エタノール（５０ｍＬ）を加え再度濃縮した。濃縮残渣にエタノール（１５ｍＬ）を加え、室温にて１時間撹拌した。析出した固体を濾取し、得られた固体をエタノール（２０ｍＬ）で洗浄した。得られた湿固体を減圧下にて乾燥することで、化合物Ａの１－エタノール和物［１８］（６．２６ｇ，１７．６ｍｍｏｌ）を収率８５．５％で得た。
同じ方法で合成した化合物Ａの１－エタノール和物のＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 11.59 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.11 (dd, 1H, J = 3.5, 2.3 Hz), 6.58 (dd, 1H, J = 3.5, 1.8 Hz), 4.34 (t, 1H, J = 5.1 Hz), 4.16 (t, 1H, J = 8.3 Hz), 4.09-3.92 (m, 3H), 3.84-3.73 (m, 1H), 3.71 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.65 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.58 (dd, 1H, J = 8.2, 5.9 Hz), 3.44 (dq, 2H, J = 6.7, 5.1 Hz), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.23-2.13 (br m, 1H), 1.12 (d, 3H, J = 7.1 Hz), 1.06 (t, 3H, J = 6.7 Hz).
MS: m/z = 311 [M+H]⁺

工程Ｏ．化合物Ａ（化合物［１９］）の精製

窒素雰囲気下、化合物Ａの１－エタノール和物［１８］（４．００ｇ，１１．２ｍｍｏｌ）及びｎ－ブタノール（３２ｍＬ）を混合し、１１０℃にて溶解させた。８５℃に冷却後、本法に従い調製した化合物Ａの結晶（４．０ｍｇ）を添加し、８５℃にて２時間、７５℃にて１時間、室温にて１６時間撹拌した。析出した固体を濾取し、得られた固体をｎ－ブタノール（８．０ｍＬ）及び酢酸エチル（８．０ｍＬ）で順次洗浄した。得られた湿固体を減圧下にて乾燥することで、化合物Ａ［１９］（３．１８ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）を収率９１．３％で得た。
同じ方法で合成した化合物ＡのＮＭＲとＭＳを測定した。
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 11.59 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.11 (dd, 1H, J = 3.5, 2.5 Hz), 6.58 (dd, 1H, J = 3.5, 1.8 Hz), 4.16 (t, 1H, J = 8.3 Hz), 4.09-3.93 (m, 3H), 3.84-3.73 (m, 1H), 3.71 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.65 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.58 (dd, 1H, J = 8.2, 5.9 Hz), 2.69-2.59 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 1H), 1.12 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
MS: m/z = 311 [M+H]⁺

同じ方法で合成した化合物Ａについて、単結晶Ｘ線構造解析を行った。
（１）単結晶作製方法
ＬａＰｈａロボバイアル（登録商標）２．０ｍＬ広口バイアルに、１０ｍｇの化合物Ａを入れ、クロロホルム０．５ｍＬを加えて蓋をし、化合物Ａを完溶させた。溶媒をゆっくりと蒸発させるため、テルモ（登録商標）シリンジ針で、蓋に取り付けられたセプタムに穴を開け、バイアルを室温静置した。得られた単結晶を構造解析に使用した。
（２）測定装置
ビームライン：ＳＰｒｉｎｇ－８ＢＬ３２Ｂ２
検出器：ＲｉｇａｋｕＲ－ＡＸＩＳＶｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ
（３）測定方法
０．７１０６８Åの放射光を単結晶に当て、Ｘ線回折データを測定した。
（４）分析方法
得られた化合物Ａのクロロホルム和物が有する塩素原子のＸ線異常散乱効果を利用する方法により、化合物Ａの絶対立体配置を（３Ｓ，４Ｒ）と決定した。化合物Ａの絶対立体配置より化合物Ａの各製造中間体の立体構造を特定した。

α晶の特性化
粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）
α晶は、スペクトリス社のPANalytical装置型番：X’Pert Proを用いて以下のデータ収集パラメータにおけるＸＲＰＤにより特性化した。

α晶のＸＲＰＤパターンを図１に示し、対応データを以下の表１－８に示す。

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣデータは、以下のパラメータを有するTA Instruments型番Q2000装置で収集した：
サンプルサイズ：約3 mg
パン：アルミニウム密封パン
範囲：25～230℃
加熱速度：窒素気流下、2℃／分
α晶のＤＳＣサーモグラムは図４に示されており、185℃で開始し、188℃にピークを有する単一吸熱事象を示す。

熱重量示差熱分析（ＴＧ－ＤＴＡ）
ＴＧ－ＤＴＡデータは、以下のパラメータを有するMettler Toledo型番：TGA/SDTA851e/SF装置で収集した：
サンプル：約5 mg
範囲：25～250℃
加熱速度：窒素気流下、2℃／分
補外開始温度は186.29℃であり、重量減少は25～220℃の範囲では観測されなかった。α晶のＴＧ－ＤＴＡデータを図７に示す。

固体 ^１３ＣＮＭＲ
固体^１３ＣＮＭＲデータは、以下のパラメータを有するBruker BioSpin Corporation AVANCE III 400装置で収集した：
プローブ：4 mm CP/MASプローブ
測定温度：室温
標準物質：グリシン（外部標準：低磁場ピークを176.03 ppmに設定した）
測定核：^１３Ｃ（100.6228303 MHz）
回転速度：14.3 kHz
パルス繰り返し時間：5秒
積算回数：3072回
パルスモード：CP/MAS測定
α晶の固体^１３ＣＮＭＲデータは図１０に示されており、14.8、17.0、24.5、27.2、35.0、35.9、38.6、48.8、49.5、53.6、78.3、101.4、103.0、116.2、118.0、122.0、122.7、151.2、154.8、162.4及び163.3 ppmにピークを有する。

実施例２
化合物Ａ β晶の調製及び特性化
調製
500μmの篩を通した化合物Ａ（3992.3 g, α晶）を、以下の条件下、スパイラルジェットミル１００ＡＳ（ホソカワミクロン株式会社製）で砕いて、ノズルリング部に付着した化合物Ａ（361.0 g）とともに粉砕物（3473.6 g）を得た。

粉砕条件
使用気体：窒素
粉砕ノズル：直径1.5 mm x 4
エジェクターノズル：直径1.3 mm
粉砕気圧：0.50～0.60 MPa
エジェクターエア圧：0.50～0.60 MPa
化合物Ａの供給速度：8 g／分

ノズルリング部に付着した化合物Ａ（50.0 g, 161 mmol）を1-ブタノール／アセトニトリル（1:3 v/v）（250 mL）の混合溶液に添加し、混合物を40℃にて10日間撹拌した。得られた懸濁液を室温まで冷却し、室温にてさらに24時間撹拌した。析出した結晶性物質をろ取した。得られた結晶性生成物を酢酸エチル（50 mL）で２回洗浄し、40℃にて減圧乾燥し、化合物Ａのβ晶（35.5 g, 収率71%）を得た。

特性化
粉末Ｘ線回折
β晶のＸＲＰＤパターンを図２に示し、対応データを以下の表２－１に示す。装置及びデータ収集パラメータはα晶の特性化において上記実施例１で記載したとおりである。

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣデータは、以下のパラメータを有するTA Instruments型番Q2000装置で収集した：
サンプルサイズ：約3 mg
パン：アルミニウム密封パン
範囲：25～230℃
加熱速度：窒素気流下、2℃／分
β晶のＤＳＣサーモグラムは図５に示されており、185℃で開始し、187℃にピークを有する単一吸熱事象を示す。

熱重量示差熱分析（ＴＧ－ＤＴＡ）
ＴＧ－ＤＴＡデータは、β晶の測定範囲が25～230℃である点を除き、上記実施例１に記載したとおり収集した。吸熱ピークは188.59℃にて検出され、補外開始温度は186.68℃であり、重量減少は25～220℃の範囲では観測されなかった。β晶のデータを図８に示す。

固体 ^１３ＣＮＭＲ
固体^１３ＣＮＭＲデータは、上記実施例１で記載したとおりβ晶について収集した。^１３ＣＮＭＲスペクトルは図１１に示されており、16.5、25.8、26.5、33.1、34.8、36.7、38.8、48.2、53.4、77.7、79.5、101.2、102.6、117.5、120.6、151.1、154.3及び166.1 ppmにピークを有する。

実施例３
化合物Ａ γ晶の調製及び特性化
調製例１
500μmの篩を通した化合物Ａ（2491.5 g, α晶）を、以下の条件下、スパイラルジェットミル１００ＡＳ（ホソカワミクロン株式会社製）で砕いて、粉砕物（2106.5 g）及びノズルリング部に付着した化合物Ａ（247.9 g）を得た。

粉砕条件
使用気体：窒素
粉砕ノズル：直径1.5 mm x 4
エジェクターノズル：直径1.3 mm
粉砕気圧：0.50～0.60 MPa
エジェクターエア圧：0.50～0.60 MPa
化合物Ａの供給速度：4 g／分

ノズルリング部に付着した化合物Ａ（100 g, 322 mmol）を窒素下、ホルムアミド（330 mL）に添加し、種晶（化合物Ａのβ晶もいくらか含まれうるγ晶1.00 g）を混合物に添加した。混合物を室温にて30日間撹拌した。結晶性析出物をろ取し、酢酸エチル（150 mL）で２回洗浄した。得られた湿結晶を窒素下、酢酸エチル（300 mL）に添加し、混合物を室温にて30分間撹拌した。結晶性析出物をろ取し、酢酸エチル（150 mL）で２回洗浄し、40℃にて減圧乾燥して化合物Ａのγ晶（74.1 g, 収率74%）を得た。

調製例２
化合物Ａのα晶（少量だが未定量のβ晶を含む）（100 mg, 0.322 mmol）をN,N-ジメチルホルムアミド（0.2 mL）に添加し、混合物を室温にて6日間撹拌した。結晶性析出物をろ取した。得られた湿結晶性物質を室温にて18時間減圧乾燥し、化合物Ａのγ晶（13.7 mg, 収率13.7%）を得た。

特性化
粉末Ｘ線回折
γ晶のＸＲＰＤパターンを図３に示し、対応データを以下の表３－１に示す。装置及びデータ収集パラメータはα晶の特性化において上記実施例１で記載したとおりである。

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣデータは、以下のパラメータを有するTA Instruments型番Q2000装置で収集した：
サンプルサイズ：約3 mg
パン：アルミニウム密封パン
範囲：25～230℃
加熱速度：窒素気流下、2℃／分
γ晶のＤＳＣサーモグラムは図６に示されており、196℃で開始し、196℃にピークを有する単一吸熱事象を示す。

熱重量示差熱分析（ＴＧ－ＤＴＡ）
ＴＧ－ＤＴＡデータは、上記実施例１に記載したとおり収集した。吸熱ピークは198.68℃にて検出され、補外開始温度は197.38℃であり、重量減少は25～220℃の範囲では観測されなかった。γ晶のデータを図９に示す。

固体 ^１３ＣＮＭＲ
固体^１３ＣＮＭＲデータは、上記実施例１で記載したとおりγ晶について収集した。^１３ＣＮＭＲスペクトルは図１２に示されており、16.9、26.5、32.9、36.4、48.1、53.7、78.6、102.6、116.4、117.9、121.5、151.8、154.6及び162.9 ppmにピークを有する。

実施例４
α晶のサンプル中のβ晶及びγ晶の定量
化合物Ａのα晶の製造バッチ並びに化合物Ａのα晶を含む軟膏製剤についてβ晶及びγ晶の存在を分析した。ＸＲＰＤ法を用いると、β晶及びγ晶は１ｗ／ｗ％レベルまで検出される。
本分析に用いた化合物Ａ α晶のバッチを表４－１に示す。

本分析に用いた化合物Ａのα晶（３％）を含む軟膏のバッチを表４－２に示す。RHは相対湿度を示す。Mは月単位の期間を示す。

以下のパラメータで操作したPANalytical X’Pert PRO粉末Ｘ線回折装置を用いて、上記バッチ及び軟膏におけるβ晶及びγ晶を定量した：

β晶の分析
試験サンプル（化合物Ａのα晶、原薬）の調製
化合物Ａ試験サンプルの一部をメノウ乳鉢で微粉末に粉砕した。約10 mgをサンプルホルダーに載せた。

試験サンプル（軟膏）の調製
軟膏試験サンプル約1 gをn-ヘキサン80 mL中に懸濁させた。フラスコの栓をし、30秒間激しく振盪した。混合物を定量用ろ紙（5B）を用いて吸引濾過し、5 mLのn-ヘキサンで５回洗浄した。析出物約10 mgをサンプルホルダーに載せた。

標準サンプルの調製
化合物Ａ、ロットU（α晶）にロットP-3273-58（β晶）を添加して2、5及び10 w/w%の最終濃度を得、これを乳鉢を用いて混合した。約10 mgをサンプルホルダーに載せた。

手順
上記の装置設定及びデータ収集パラメータに従い、粉末Ｘ線回折測定を試験サンプル及び標準サンプルについて行った（第十七改正日本薬局方（2016年4月1日、英文版79～83頁、粉末Ｘ線回折測定法、一般試験法、方法及び装置）参照）。標準サンプル及び試験サンプルから得られた回折ピーク（10.6°）のピーク面積を自動積分又は手動積分により測定した。試験サンプルのβ晶の量（％）は、標準サンプルのピーク面積から作成される検量線を用いて算出した。
0%、2%、5%及び10% w/wのβ晶を含む標準サンプルから得られた粉末Ｘ線回折パターンを図１３に示す。

γ晶の分析
試験サンプル（化合物Ａのα晶、原薬）の調製
化合物Ａ試験サンプルの一部をメノウ乳鉢で微粉末に粉砕した。約10 mgをサンプルホルダーに載せた。

標準サンプルの調製
ロットU（α晶）に化合物ＡロットYKF56-28G（γ晶）を添加して1、2及び5 w/w%の最終濃度を得、これを乳鉢を用いて混合した。約10 mgをサンプルホルダーに載せた。

手順
上記の装置設定及びデータ収集パラメータに従い、粉末Ｘ線回折測定を試験サンプル及び標準サンプルについて行った（第十七改正日本薬局方（2016年4月1日、英文版79～83頁、粉末Ｘ線回折測定法、一般試験法、方法及び装置）参照）。標準サンプル及び試験サンプルから得られた回折ピーク（16.6°）のピーク面積を自動積分又は手動積分により測定した。試験サンプルのピーク面積が1%標準サンプルのもの以下であれば、「1%以下」と記録した。試験サンプルのピーク面積が1%標準サンプルのものよりも大きく、2%標準サンプルのもの以下であれば、「2%以下」と記録した。試験サンプルのピーク面積が2%標準サンプルのものよりも大きく、5%標準サンプルのもの以下であれば、「5%以下」と記録した。
0%、1%、2%及び5% w/wのγ晶を含む標準サンプルから得られた粉末Ｘ線回折パターンを図１４に示す。

結果
定量結果を表４－３に要約する。化合物Ａ原薬ロットP、及び原薬ロットPから製造したJTE-052軟膏ロット番号223-1A及びロット番号239-1Aはすべて、測定可能な量のβ晶を含んでいた。

実施例５
単結晶Ｘ線データ
単結晶Ｘ線構造を、以下のパラメータに従い、α晶、β晶及びγ晶について得た。結晶構造データを表５－１に示す。
α晶の単結晶データを、照射波長0.71068Åを用いたRayonix MX225HE検出器及びSPring-8 BL41XUビームラインで得た。
β晶及びγ晶の単結晶データを、照射波長0.71068Åを用いたDECTRIS PILATUS3 6M検出器及びSPring-8 BL41XUビームラインで得た。

実施例６
化合物Ａのα晶とβ晶の競争実験
化合物Ａのα晶とβ晶を重量比1:1で混合し、この混合物（80 mg）に1-ブタノール（800μL）を添加した。この懸濁液を室温にて12日間撹拌した。同温にて濾過後、室温にて19時間減圧乾燥した。使用した化合物Ａのα晶、使用した化合物Ａのβ晶、撹拌前の化合物Ａのα晶とβ晶の重量比1:1混合物、及び得られた結晶について、粉末Ｘ線回折法で回折角２θと回折強度を測定した。本法における装置及びデータ収集パラメータは上記実施例１におけるα晶の特性化で記載したものと同一である。得られたスペクトルを図１５に示す。図は、下から、使用した化合物Ａのα晶、使用した化合物Ａのβ晶、撹拌前の化合物Ａのα晶とβ晶の重量比1:1混合物、及び撹拌後に得られた結晶のスペクトルを示す。
α晶の回折角２θが10.2°のピークとβ晶の回折角２θが10.6°のピークの回折強度比を撹拌前と撹拌後で比較した。以下の表に示すように、撹拌前に比べて撹拌後ではα晶のピークに対するβ晶のピークの回折強度比が高くなった。

実施例７
化合物Ａのα晶とγ晶の競争実験
化合物Ａのα晶とγ晶を重量比1:1で混合し、この混合物（100 mg）に1-ブタノール（1 mL）を添加した。この懸濁液を室温にて11日間撹拌した。同温にて濾過した。使用した化合物Ａのα晶、使用した化合物Ａのγ晶、撹拌前の化合物Ａのα晶とγ晶の重量比1:1混合物、及び得られた結晶について、粉末Ｘ線回折法で回折角２θと回折強度を測定した。本法における装置及びデータ収集パラメータは上記実施例１におけるα晶の特性化で記載したものと同一である。得られたスペクトルを図１６に示す。図は、下から、使用した化合物Ａのα晶、使用した化合物Ａのγ晶、撹拌前の化合物Ａのα晶とγ晶の重量比1:1混合物、及び撹拌後に得られた結晶のスペクトルを示す。
α晶の回折角２θが10.2°のピークとγ晶の回折角２θが10.7°のピークの回折強度比を撹拌前と撹拌後で比較した。以下の表に示すように、撹拌前に比べて撹拌後ではα晶のピークに対するγ晶のピークの回折強度比が高くなった。

実施例８
化合物Ａのβ晶とγ晶の競争実験
（１）化合物Ａのβ晶とγ晶を重量比1:1で混合し、この混合物（150 mg）にホルムアミド（1 mL）を添加した。この懸濁液を室温にて1日間撹拌した。同温にて濾過した。
（２）化合物Ａのβ晶とγ晶を重量比1:1で混合し、この混合物（150 mg）にＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（1 mL）を添加した。この懸濁液を室温にて1日間撹拌した。同温にて濾過した。
（３）化合物Ａのβ晶とγ晶を重量比1:1で混合し、この混合物（800 mg）にジメチルスルホキシド（1 mL）を添加した。この懸濁液を室温にて1日間撹拌した。同温にて濾過した。
使用した化合物Ａのβ晶、使用した化合物Ａのγ晶、撹拌前の化合物Ａのβ晶とγ晶の重量比1:1混合物、並びに（１）、（２）及び（３）にて得られた結晶について、粉末Ｘ線回折法で回折角２θと回折強度を測定した。本法における装置及びデータ収集パラメータは上記実施例１におけるα晶の特性化で記載したものと同一である。得られたスペクトルを図１７に示す。図は、下から、使用した化合物Ａのγ晶、使用した化合物Ａのβ晶、撹拌前の化合物Ａのβ晶とγ晶の重量比1:1混合物、ホルムアミドから得られた結晶、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドからのもの、及びジメチルスルホキシドからのもののスペクトルを示す。
（１）、（２）及び（３）の結果によれば、混合晶はγ単一晶を形成した。

実施例９
溶解度試験
各試料（すなわち、化合物Ａのα晶、β晶及びγ晶）を4 mL容量のガラスバイアルに量りとった。試験液3 mLをバイアルに加えて懸濁させた。日本薬局方の溶解度試験第１液の試験液のために約150 mgの試料を量りとり、日本薬局方の溶解度試験第２液及び水の試験液のために約15 mgを量りとった。各混合物を20℃の恒温振とう槽（タイテック社製）で3時間振とうした。振とう後，上澄み液を0.2μm孔径－4 mm径ポリテトラフルオロエチレンディスクフィルター（Millex-LG；ミリポア社製）で濾過した。測定は高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で実施した。結果を下表に示す。

α晶は測定した各溶媒にて最も高い溶解度を示し、γ晶は測定した各溶媒にて最も低い溶解度を示した。

実施例１０
製剤例
化合物Ａ（例えば、α晶、β晶、γ晶又は上記いずれかの混合物）を含む製剤の例を以下に示すが、これらに限定されるものではない。

製剤例１（カプセルの製造）
１）化合物Ａ３０ｍｇ
２）微結晶セルロース１０ｍｇ
３）乳糖１９ｍｇ
４）ステアリン酸マグネシウム１ｍｇ
成分１）、２）、３）及び４）を混合して、ゼラチンカプセルに充填する。

製剤例２（錠剤の製造）
１）化合物Ａ１０ｇ
２）乳糖５０ｇ
３）トウモロコシデンプン１５ｇ
４）カルメロースカルシウム４４ｇ
５）ステアリン酸マグネシウム１ｇ
成分１）、２）、３）の全量及び３０ｇの成分４）を水で練合し、真空乾燥後、整粒を行う。この整粒末に１４ｇの成分４）及び１ｇの成分５）を混合し、打錠機により打錠する。このようにして、１錠あたり化合物Ａを１０ｍｇ含有する錠剤１０００錠を得る。

本明細書に記載のものに加え、本発明の種々の改変は、前述の記載から当業者に明らかであろう。そのような改変もまた、特許請求の範囲に含まれるものである。本願に引用されるすべての特許、特許出願及び雑誌文献などの各文献はそのまま本明細書に参照により組み込まれる。

Claims

２θ（°）において約１１．８に特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、β晶である３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの結晶形。
２θ（°）において約１０．５、約１１．８、約１９．３及び約２２．０から選択される２つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１に記載の結晶形。
２θ（°）において約７．８、約１０．５、約１１．８、約１３．４、約１３．９、約１７．８、約１９．３、約２２．０、約２３．６及び約２８．０から選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１に記載の結晶形。
約１８６℃における吸熱ピークにより特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１から３のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約５０％の純度を有する、請求項１から４のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約７５％の純度を有する、請求項１から４のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約８５％の純度を有する、請求項１から４のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約９０％の純度を有する、請求項１から４のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約９５％の純度を有する、請求項１から４のいずれかに記載の結晶形。
２θ（°）において約１６．５に特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、γ晶である３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの結晶形。
２θ（°）において約１６．５、約１７．７、約２１．４、約２１．８及び約２３．１から選択される２つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１０に記載の結晶形。
２θ（°）において約７．７、約１０．６、約１３．３、約１３．９、約１５．５、約１６．５、約１７．７、約１７．９、約１９．０、約２１．４、約２１．８、約２３．１、約２３．７及び約２８．１から選択される３つ以上の特徴的ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１０に記載の結晶形。
約１９６℃における吸熱ピークにより特徴づけられるＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１０から１２のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約５０％の純度を有する、請求項１０から１３のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約７５％の純度を有する、請求項１０から１３のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約８５％の純度を有する、請求項１０から１３のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約９０％の純度を有する、請求項１０から１３のいずれかに記載の結晶形。
少なくとも約９５％の純度を有する、請求項１０から１３のいずれかに記載の結晶形。
α晶及びβ晶を含む、結晶性３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの組成物。
本質的にα晶及びβ晶からなる、請求項１９に記載の組成物。
β晶がα晶に対して約１から約５０％ｗ／ｗの量で存在する、請求項１９又は２０に記載の組成物。
β晶がα晶に対して約１から約２０％ｗ／ｗの量で存在する、請求項１９又は２０に記載の組成物。
β晶がα晶に対して約１から約１０％ｗ／ｗの量で存在する、請求項１９又は２０に記載の組成物。
β晶がα晶に対して約１から約５％ｗ／ｗの量で存在する、請求項１９又は２０に記載の組成物。
さらにγ晶を含む、請求項１９から２４のいずれかに記載の組成物。
β晶及びγ晶を含む、結晶性３－（（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－６－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－１－イル）－３－オキソプロパンニトリルの組成物。
本質的にβ晶及びγ晶からなる、請求項２６に記載の組成物。
γ晶がβ晶に対して約１から約５０％ｗ／ｗの量で存在する、請求項２６又は２７に記載の組成物。
γ晶がβ晶に対して約１から約２０％ｗ／ｗの量で存在する、請求項２６又は２７に記載の組成物。
γ晶がβ晶に対して約１から約１０％ｗ／ｗの量で存在する、請求項２６又は２７に記載の組成物。
γ晶がβ晶に対して約１から約５％ｗ／ｗの量で存在する、請求項２６又は２７に記載の組成物。
さらにα晶を含む、請求項２６から３１のいずれかに記載の組成物。
請求項１から３２のいずれかに記載の結晶形又は組成物及び製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
さらに第二治療剤を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。