JP2022550121A - Lifに特異的な結合分子及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)配列番号1又は66からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR1;
(b)配列番号2又は67からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR2;
(c)配列番号3又は68からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR3;
(d)配列番号4又は69からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR1;
(e)配列番号5、45、又は70からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR2;及び
(f)配列番号6又は71からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR3
を含む単離抗体又はその抗原結合断片を提供する。
(a)配列番号1からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR1;
(b)配列番号2からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR2;
(c)配列番号3からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR3;
(d)配列番号4からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR1;
(e)配列番号5又は45からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR2;
(f)配列番号6からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR3
を含む。
1)(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号5を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3;
2)(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号45を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3;又は
3)(a)配列番号66を含むLCDR1、(b)配列番号67を含むLCDR2、(c)配列番号68を含むLCDR3、(d)配列番号69を含むHCDR1、(e)配列番号70を含むHCDR2、及び(f)配列番号71を含むHCDR3
を含む。
1)(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号5を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3;又は
2)(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号45を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3
を含む。
(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号5を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3
を含む。
(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号45を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3
を含む。
(a)配列番号66を含むLCDR1、(b)配列番号67を含むLCDR2、(c)配列番号68を含むLCDR3、(d)配列番号69を含むHCDR1、(e)配列番号70を含むHCDR2、及び(f)配列番号71を含むHCDR3
を含む。
(i)配列番号7、11、15、19、46、74又は82からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む軽鎖可変領域(VL);及び
(ii)配列番号23、27、31、48、75又は83からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
(i)配列番号7、11、15、19又は46からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む軽鎖可変領域(VL);及び
(ii)配列番号23、27、31又は48からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
(i)配列番号7、11、15又は19からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む軽鎖可変領域(VL);及び
(ii)配列番号23、27又は31からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
1)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
2)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
3)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
4)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
5)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
6)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
7)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
8)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
9)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
10)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
11)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
12)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
13)配列番号46のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号48のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
14)配列番号74のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号75のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);又は
15)配列番号82のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号83のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
1)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
2)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
3)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
4)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
5)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
6)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
7)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
8)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
9)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
10)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
11)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);又は
12)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号46のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号48のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号74のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号75のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
配列番号82のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号83のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む。
(i)配列番号7、11、15、19、46又は82のいずれか1つと同じ配列を有するLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む軽鎖可変領域(VL);及び
(ii)配列番号23、27、31、48又は83のいずれか1つと同じ配列を有するHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含む重鎖可変領域(VH)。
(I)軽鎖は、配列番号9、13、17、21、37、39、50又は54からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含み;及び
(II)重鎖は、配列番号25、29、33、35、52又は56からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む。
(I)軽鎖は、配列番号9、13、17、21、37、39又は50からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含み;及び
(II)重鎖は、配列番号25、29、33、35又は52からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む。
(I)軽鎖は、配列番号9、13、17又は21からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含み;及び
(II)重鎖は、配列番号25、29又は33からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む。
1)配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
2)配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
3)配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
4)配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
5)配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
6)配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
7)配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
8)配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
9)配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
10)配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
11)配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
12)配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
13)配列番号37のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
14)配列番号39のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、
15)配列番号50のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号52のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、又は
16)配列番号54のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号56のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号37のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号39のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号50のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号52のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
配列番号54のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号56のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む。
(i)配列番号7、11、15、19、46又は82のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(ii)配列番号23、27、31、48又は83のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
(i)配列番号7、11、15、19又は46のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(ii)配列番号23、27、31又は48のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
(i)配列番号7、11、15、又は19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(ii)配列番号23、27又は31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
1)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
2)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
3)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
4)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
5)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
6)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
7)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
8)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
9)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
10)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
11)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
12)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
13)配列番号46のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号48のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
14)配列番号74のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号75のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;又は
15)配列番号82のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号83のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
1)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
2)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
3)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
4)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
5)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
6)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
7)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
8)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
9)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
10)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
11)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;又は
12)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む;
配列番号46のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号48のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号74のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号75のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号82のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号83のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
(I)配列番号9、13、17、21、37、39、50又は54のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸配列;及び
(II)配列番号25、29、33、35、52又は56のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸配列
を含む。
(I)配列番号9、13、17、21、37、39又は50のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(II)配列番号25、29、33、35又は52のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
(I)配列番号9、13、17又は21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(II)配列番号25、29又は33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
1)配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
2)配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
3)配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
4)配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
5)配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
6)配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
7)配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
8)配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
9)配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
10)配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
11)配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
12)配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
13)配列番号37のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
14)配列番号39のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
15)配列番号50のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号52のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;又は
16)配列番号54のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号56のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号37のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号39のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号50のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号52のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
配列番号54のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号56のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む。
本説明をより容易に理解し得るように、初めに幾つかの用語を定義する。更なる定義は、詳細な説明全体を通じて示す。
1.1 ハイブリドーマ法による抗ヒトLIFモノクローナル抗体38E10E1C11の調製
モノクローナル抗体調製方法に従い(Kohler and Milstein(1975)Nature 256:495)、組換えヒトLIFタンパク質(Sino Biologicalから購入した)をBABL/cマウスの免疫化に使用した。25μg組換えヒトLIFタンパク質を等容積のフロイント完全アジュバントと共に使用して、背中への頻回皮下注射による初回免疫を行った。4週間後、フロイント不完全アジュバント+25μgの組換えヒトLIFタンパク質を使用して2回目の免疫化を行った。20日後、インダイレクトELISA法を用いて抗体力価を検出した。2~3週間の間隔を置いた後、50μgの組換えヒトLIFタンパク質を腹腔内注射して免疫を強化した。3日後、動物を犠牲死させて、融合用の脾臓細胞を取り出した。
組換えヒトLIFタンパク質をBABL/cマウスの免疫化に使用した。25μg組換えヒトLIFタンパク質を等容積のフロイント完全アジュバントと共に使用して、背中への頻回皮下注射による初回免疫を行った。4週間後、フロイント不完全アジュバント+25μgの組換えヒトLIFタンパク質を使用して2回目の免疫化を行う。20日後、インダイレクトELISA法を用いて抗体力価を検出した。2~3週間の間隔を置いた後、50μgの組換えヒトLIFタンパク質を腹腔内注射して免疫を強化した。3日後、動物を犠牲死させて、融合用の脾臓細胞を取り出した。Invitrogen社のTRIZOL試薬を用いて脾臓細胞から全RNAを抽出し、Invitrogen cDNA逆転写キットを用いてcDNAに逆転写した。マウス軽鎖及び重鎖可変領域の変性プライマーによって抗体遺伝子を増幅し、ファージディスプレイベクターとなるように構築して、ファージ抗体ライブラリを構築した。熱式自動磁気ビーズ選別システムを使用してファージ抗体ライブラリの取捨選択を行い、ファージELISAを用いて、組換えヒトLIFタンパク質への結合能を有する大腸菌(E.coli)クローンを選択し、抗体の配列を決定した。更に、ELISA及び細胞生存率の同定によってP36-033抗体を入手した。P36-033軽鎖及び重鎖の完全長遺伝子配列は、それぞれ配列番号55及び配列番号57に示され、P36-033抗体の軽鎖及び重鎖の対応する完全長アミノ酸配列は、それぞれ配列番号54及び配列番号56に示される;P36-033抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域をコードする遺伝子配列は、それぞれ配列番号72及び配列番号73に示され、P36-033抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域の対応するアミノ酸配列は、配列番号82及び配列番号83に示される。Kabat方式によれば、P36-033抗体のLCDR1のアミノ酸配列は配列番号66に示され、LCDR2のアミノ酸配列は配列番号67に示され、LCDR3のアミノ酸配列は配列番号68に示され、HCDR1のアミノ酸配列は配列番号69に示され、HCDR2のアミノ酸配列は配列番号70に示され、HCDR3のアミノ酸配列は配列番号71に示される。
特許文献の国際公開第2018/115960 A1号パンフレットの報告によれば、抗体5D8は、LIFタンパク質とGP130との結合を阻害する抗体である。この特許文献によれば、この発明の複数の遺伝子配列が合成されており、種々の軽鎖及び重鎖が種々の組み合わせで対を成してヒトIgG1形態の完全長抗体が構築され、それらのうちLIFタンパク質への結合が最良である1つが最終的に見出され、一方でそれは、細胞生存率の同定を通じて、ヒトGP130との組換えヒトLIFタンパク質の結合を遮断する能力及び組換えヒトLIFタンパク質によるHCT116細胞のSTAT3リン酸化を遮断する能力を有したため、従って、本発明はそれを、フォローアップ試験における陽性対照抗体として5D8と名付けた。5D8抗体の重鎖及び軽鎖をコードする完全長遺伝子配列は、それぞれ配列番号63及び配列番号65に示されるとおり決定され、5D8抗体の重鎖及び軽鎖の対応する完全長アミノ酸配列は、それぞれ配列番号62及び配列番号64に示された;5D8抗体の可変領域をコードする遺伝子配列は、それぞれ配列番号80及び配列番号81に示されるとおり決定され、5D8抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域の対応するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号78及び配列番号79に示される。
組換えヒトLIFタンパク質を1μg/mLに希釈し、酵素標識プレートにコートし、100μLのタンパク質を各ウェルに加え、4℃で一晩インキュベートした。翌日、酵素標識プレートを取り出し、液体を廃棄し、PBSTで3回洗浄し、PBS中2%BSAによって室温で1時間ブロックし、次にPBSTで3回洗浄し、抗ヒトLIF抗体38E10E1C11、5D8及びP36-033を種々の濃度で加え、室温で1時間インキュベートした。液体を廃棄し、プレートをPBSTで4回洗浄した。プレートにHRP標識ヤギ抗マウスFab抗体又はヤギ抗ヒトFC抗体を加え、室温で1時間インキュベートした。次に液体を廃棄し、プレートをPBSTで4回洗浄し、TMB発色溶液と共に室温で10分間インキュベートした。2mol/L H2SO4を加えることにより発色を停止させ、自動プレート光度計を用いて450nmの吸光値を定量化する。この結果は図1に示した。これらの結果は、ヒトLIFタンパク質に対する38E10E1C11抗体及びP36-033抗体の結合が、ヒトLIFタンパク質に対する5D8抗体の結合よりも強いことを示している。
組換えマウスLIFタンパク質(ACRO Biosystemsから購入した)を1μg/mLに希釈し、酵素標識プレートにコートし、100μLのタンパク質を各ウェルに加え、4℃で一晩インキュベートした。翌日、酵素標識プレートを取り出し、液体を廃棄し、PBSTで3回洗浄し、PBS中2%BSAによって室温で1時間ブロックし、次にPBSTで3回洗浄し、抗ヒトLIF抗体38E10E1C11、5D8及びP36-033を種々の濃度で加え、室温で1時間インキュベートした。液体を廃棄し、プレートをPBSTで4回洗浄した。プレートにHRP標識ヤギ抗マウスFab抗体又はヤギ抗ヒトFC抗体を加え、室温で1時間インキュベートした。次に液体を廃棄し、プレートをPBSTで4回洗浄し、TMB発色溶液と共に室温で10分間インキュベートした。2mol/L H2SO4を加えることにより発色を停止させ、自動プレート光度計を用いて450nmの吸光値を定量化する。この結果は図2に示した。これらの結果は、38E10E1C11抗体がマウスLIFタンパク質に対して結合活性を有さず、P36-033抗体がマウスLIFタンパク質に対して5D8抗体よりも低い結合活性を有することを示している。
組換えフィリピンカニクイザルLIFタンパク質(Sino Biologicalから購入した)を0.5μg/mLに希釈し、酵素標識プレートにコートし、100μLのタンパク質を各ウェルに加え、4℃で一晩インキュベートした。翌日、酵素標識プレートを取り出し、液体を廃棄し、PBSTで3回洗浄し、PBS中2%BSAによって室温で1時間ブロックし、次にPBSTで3回洗浄し、抗ヒトLIF抗体38E10E1C11、5D8及びP36-033を種々の濃度で加え、室温で1時間インキュベートした。液体を廃棄し、プレートをPBSTで4回洗浄した。プレートにHRP標識ヤギ抗マウスFab抗体又はヤギ抗ヒトFC抗体を加え、室温で1時間インキュベートした。次に液体を廃棄し、プレートをPBSTで4回洗浄し、TMB発色溶液と共に室温で10分間インキュベートした。2mol/L H2SO4を加えることにより発色を停止させ、自動プレート光度計を用いて450nmの吸光値を定量化する。この結果は図3に示した。これらの結果は、38E10E1C11及びP36-033の結合活性が5D8の結合活性よりも良好であることを示している。
組換えヒトLIFタンパク質に対する精製モノクローナル抗体の親和性をKinExA 4000によって決定した。200mg PMMA硬質ビーズを30μgの38E10E1C11抗体と共に加え、更にコーティング溶液を1mLになるまで加えた。緩衝液組成は、1×PBS、pH7.4、0.02%NaN3である。そしてビーズが溶液中に完全に懸濁されたことを確かめる。室温で2時間回転させた。ビーズを自然に沈降させるか、又は低速で素早く遠心した。上清を除去し、1%BSAを含有するPBSでビーズをブロックした。15mLの300pM抗原溶液及び15mLの240pM Ab2(38E10E1C11)溶液を調製した。0.6mLの300pM抗原及び0.6mLの240pM抗体Ab2(38E10E1C11)を異なる試料チューブに別々に入れた。これらの2本のチューブの試料を十分に混合して1本のチューブにまとめ、この時点で抗原の濃度は150pMであり、抗体Ab2(38E10E1C11)の濃度は120pMであり、溶液をチューブホルダーの対応する位置に置いた。16群を調製し、各群のインキュベーション時間は異なった。各群に1μg/Llストレプトアビジンタンパク質、DyLight 650溶液を加え、24時間インキュベートするように設定した機械上で検出した。KinExatm Proソフトウェアにおいて、n曲線解析についての平衡解離定数(Kd)を未知のリガンドモデルによって計算した。この結果は図4に示す。これらの結果は、ヒトLIFタンパク質に対する38E10E1C11 mAbの親和性が4.52×10-12Mであることを示している。
組換えヒトLIFタンパク質を酵素標識プレートに1μg/mLの濃度でコートし、0.6125μg/mLの濃度のLIFRタンパク質(ヒトFCと融合発現させた)を加え(50μL/ウェル)、同時に種々の濃度のCHO細胞によって組換え発現する抗ヒトLIF抗体38E10E1C11、P36-033及び38E10E1C11R(配列番号41及び43)を別々に加え(50μL/ウェル)、室温で2時間インキュベートした。PBSTで4回洗浄した後、HRP標識ヤギ抗マウスFC二次抗体と共に室温で1時間インキュベートした。次にプレートをPBSTで4回洗浄し、TMB発色溶液を10分間かけて加えた。酵素標識計測器を使用して450nmの吸光値を定量化する。及びOrigin pro 9ソフトウェアを用いてデータを分析し、プロットした。この結果は図5に示した。これらの結果は、38E10E1C11 mAb及び38E10E1C11がヒトLIFによるヒトLIFRへの結合を阻害することができ、一方、P36-033 mAbはヒトLIFによるヒトLIFRへの結合を阻害できないことを示している。
組換えヒトLIFタンパク質を酵素標識プレートに1μg/mLの濃度でコートし、20μg/mLの濃度のGP130タンパク質(ヒトFCと融合発現させた)を加え(50μL/ウェル)、同時に種々の濃度の抗ヒトLIF抗体P36-033及び38E10E1C11を別々に加え(50μL/ウェル)、室温で2時間インキュベートした。同時に、抗体を加えてGP130タンパク質を加えない対照ウェルをセットした。室温で2時間インキュベートした。PBSTで4回洗浄した後、HRP標識ヤギ抗マウスFC二次抗体と共に室温で1時間インキュベートした。次にプレートをPBSTで4回洗浄し、TMB発色溶液を10分間かけて加えた。酵素標識計測器を使用して450nmの吸光値を定量化する。及びOrigin pro 9ソフトウェアを用いてデータを分析し、プロットした。この結果は図6に示した。これらの結果は、P36-033及び38E10E1C11がヒトLIFによるヒトGP130タンパク質への結合を阻害できることを示している。
ヒトLIF、ヒトIL-6、ヒトOSM、ヒトCNTF(Sino Biologicalから購入した)を酵素標識プレートに1μg/mLの濃度で別々にコートし、種々の濃度の抗ヒトLIF抗体38E10E1C11、P36-033及び5D8を別々に加え、室温で1時間インキュベートした。次にプレートをPBSTで4回洗浄し、HRP標識ヤギ抗マウスFC二次抗体と共に室温で1時間インキュベートした。次にプレートをPBSTで4回洗浄し、TMB発色溶液を加えて室温で10分間発色させた。450nmの吸光値を酵素標識計測器によって定量化する。及びOrigin pro 9ソフトウェアを用いてデータを分析し、プロットした。この結果は図7に示した。これらの結果は、38E10E1C11 mAb及びP36-033 mAbがヒトLIFタンパク質にのみ結合し、ヒトIL-6、ヒトOSM及びヒトCNTFには結合しなかったが、5D8抗体はヒトOSM及びヒトCNTFタンパク質に結合したことを示している。
組換えヒトLIFタンパク質を図8に示す濃度に希釈した。5×SDS-PAGEローディング緩衝液と共に3日間培養したCT26及びC26-hLIF細胞の細胞上清を10分間煮沸した。10μL試料を取り出してSDS-PAGE電気泳動にかけ、次に電気泳動バンドをPVDF膜に転写してウエスタンブロット検出を行った。検出に使用した一次抗体は1μg/mLの濃度の38E10E1C11抗体であり、室温で2時間インキュベートし、TBST緩衝液によって3回洗浄する。次に1:3000希釈したHRP標識ヤギ抗マウス二次抗体を加え、室温で2時間インキュベートし、室温で2時間インキュベートし、TBST緩衝液によって3回洗浄した。次に高感度化学発光溶液(Perice)と共にインキュベートし、Amersham Imager 600超高感度多機能イメージング装置によって検出し、写真を撮った。この結果は図8に示した。これらの結果は、ヒトLIFタンパク質のウエスタンブロット検出に38E10E1C11 mAbを使用できることを示している。
10.1 HCT116細胞におけるSTAT3活性化の阻害の検出
HCT116細胞を消化及び遠心し、次に細胞を再懸濁し、12ウェルプレートに1mLの容積中5×105細胞/ウェルで播いた。次に細胞を37℃、5%CO2で一晩インキュベートした。翌日、元の培地を廃棄し、100ng/mLの組換えヒトLIFタンパク質及び種々の濃度の抗LIF抗体を含有する細胞培養培地を加えて37℃で30分間インキュベートし、同時に、組換えヒトLIFタンパク質を含有しない、及び組換えヒトLIFタンパク質のみを含有して抗体を含まない対照ウェルをセットした。次に培地を取り除き、12ウェルプレートの各ウェルに100μL 1×ライセートを加え、細胞を氷上で30分間溶解させた。ライセートを1.5mL遠心チューブに移し、ライセートが入ったチューブを13,000rpmで10分間遠心し、上清を回収した。上清を取り出してSTAT3のリン酸化のウエスタンブロット検出にかけた。結果は図9A及び図11に示した。これらの結果から、38E10E1C11抗体及びP36-033抗体が、ヒトLIFタンパク質によって誘導されたHCT116細胞のSTAT3リン酸化を阻害できることが明らかになった。
KP4細胞を消化及び遠心し、細胞を再懸濁し、12ウェルプレートに1mLの容積中5×105細胞/ウェルで播いた。次に細胞を37℃、5%CO2で一晩インキュベートした。翌日、元の培地を廃棄し、50ng/mLの組換えヒトLIFタンパク質及び種々の濃度の抗LIF抗体を含有する細胞培養培地を加えて37℃で30分間インキュベートし、同時に、組換えヒトLIFタンパク質を含有しない、及び組換えヒトLIFタンパク質のみを含有して抗体を含まない対照ウェルをセットした。次に培地を取り除き、12ウェルプレートの各ウェルに100μL 1×ライセートを加え、細胞を氷上で30分間溶解させた。ライセートを1.5mL遠心チューブに移し、ライセートが入ったチューブを13,000rpmで10分間遠心し、上清を回収した。上清を取り出してSTAT3のリン酸化のウエスタンブロット検出にかけた。結果は図9Bに示した。これは、38E10E1C11抗体が、ヒトLIFタンパク質によって誘導されたKP4細胞のSTAT3リン酸化を阻害できることを示している。
KP4細胞を消化及び遠心し、細胞を再懸濁し、12ウェルプレートに1mLの容積中5×105細胞/ウェルで播いた。次に細胞を37℃、5%CO2で一晩インキュベートした。翌日、元の培地を廃棄し、1:1の容積比の種々の濃度の抗LIF抗体及びCT26-hLIF細胞の細胞培養培地を加え、37℃で30分間インキュベートし、同時に、CT26の培養上清を含有する対照ウェルをセットした。次に培地を取り除き、細胞に100μL 1×ライセートを加え、細胞を氷上で30分間溶解させた。ライセートを1.5mL遠心チューブに移し、ライセートが入ったチューブを13,000rpmで10分間遠心し、上清を回収した。上清を取り出してSTAT3のリン酸化のウエスタンブロット検出にかけた。図10は、38E10E1C11抗体が、CT26-hLIF細胞によって分泌されるヒトLIFタンパク質によって誘導されたKP4細胞のSTAT3リン酸化を阻害できることを示している。
M1細胞を遠心し、RPMI1640培地によって2回洗浄し、M1細胞を96ウェルプレートに1ウェル当たり100μL細胞の容積中2×105細胞/mLの密度で播いた。10ng/mLの組換えヒトLIFタンパク質及び種々の濃度の抗LIF抗体を含有する細胞培養培地を、各ウェルの容積が最終的に200μLに達するまで加え、インキュベーターにおいて37℃で72時間インキュベートした。同時に、ヒトLIFタンパク質を含まない対照ウェルをセットした。CCK-8を加えて細胞増殖を測定した。この結果は図12に示した。及びこれらの結果は、mAb38E10E1C11 mAb及びP36-033 mAbが両方とも、ヒトLIFタンパク質によって誘導されるM1細胞増殖の阻害を逆転させることができることを示している。
ELISAアッセイによると、38E10E1C11抗体はマウスLIFタンパク質と交差反応しなかった。インビボでの活性判定を実施するためには、ヒトLIFタンパク質を過剰発現するCT26細胞株を構築する必要があった。文献によれば、ヒトLIFタンパク質は、マウス細胞の表面上のLIFR及びGP130に結合することができ、そのため下流シグナルを活性化させることができる。従って、ヒトLIFタンパク質を高度に発現するCT26細胞によって分泌されるヒトLIFタンパク質はマウスの免疫系を阻害することができ、抗LIFタンパク質が阻害効果を放ち、ひいては抗腫瘍効果を発揮することができると推測された。
ヒトLIF遺伝子を含有する構築したレンチウイルスにマウス結腸癌細胞株CT26を感染させた。48時間後、LIFタンパク質の発現を検出した。細胞株を限界希釈法によってクローニングし、1μg/mLの最終濃度のピューロマイシンを含む培地を加えて加圧スクリーニングにかけた。最終的に、ヒトLIFタンパク質を安定且つ高度に発現するCT26細胞株が入手された。
10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI-1640培地でCT26-hLIF細胞を培養し、対数増殖期の細胞を回収し、PBSに107細胞/mLとなるように再懸濁し、BABL/cマウスに皮下接種した。接種翌日、マウスを群分けし、それぞれ、媒体対照、抗ヒトLIF抗体を注射した。投与濃度は、15mg/kg体重、週2回、4週間連続であり、腫瘍容積を週2回測定し、腫瘍成長曲線を描き、及び腫瘍阻害率を計算する。この結果は図13に示した。これらの結果は、38E10E1C11 mAbがBABL/cマウスにおけるCT26-hLIF細胞の増殖を阻害できることを示している。
ヒト膵癌細胞株Panc02.03、KP4、MIA paca2を別々に6ウェルプレートに106細胞/ウェルの密度で接種した。一晩インキュベートした後に培地を新鮮培地に交換し、50ng/mL組換えヒトLIFタンパク質及び38E10E1C11抗体を加え、一方、LIFタンパク質を含まない対照ウェルをセットした。治療ウェル及び対照ウェルを37℃で30分間インキュベートした。次に培地を取り除き、各ウェルにつき200μLの細胞に200μL 1×ライセートを加え、細胞を氷上で30分間溶解させた。ライセートを1.5mL遠心チューブに移し、ライセートが入ったチューブを13,000rpmで10分間遠心し、上清を回収した。上清を取り出してSTAT3のリン酸化のウエスタンブロット検出にかけた。この結果は図14に示した。これらの結果は、KP4細胞株がヒトLIFタンパク質の刺激に対して最も高い感受性であったことを示している。
38E10E1C11 mAB及びP36-033 mAbの軽鎖遺伝子及び重鎖遺伝子を同一の組換え技法によって真核生物発現ベクターPCDNA3.1+に構築した。組換え抗体をThermoのExpiCHO発現システムによって発現させて、組換え抗体をプロテインGアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。精製抗体のエンドトキシン除去は、Smart-lifesciences社によって製造されるエンドトキシン除去ビーズを使用して行う。具体的な実験方法については、実施例10.2を参照した。図15は、CHO細胞によって組換え発現した38E10E1C11抗体(38E10E1C11Rと表示される)が、ヒトLIFタンパク質によって誘導されたKP4細胞のSTAT3リン酸化を阻害する能力を有することを示している。
予備実験により、38E10E1C11抗体(配列番号41及び43)がヒトLIFタンパク質(配列番号58)の表面上の線状エピトープを認識したことが確認された。この抗体はマウスLIFタンパク質を認識することはできず、ヒトLIFタンパク質及びヒトLIFRタンパク質の結合を遮断することができた。これらの3点によれば、種々のオンラインタンパク質線状エピトープ予測ソフトウェアの分析と合わせると、抗体の認識エピトープがLIFタンパク質の160~202アミノ酸配列に位置すると推測されたため、本発明では、以下のヘテロ接合LIFタンパク質を合成した。Mut3(配列番号59)は、ヒトLIFタンパク質の182~202アミノ酸配列をマウスLIFタンパク質のものに置き換えることであり、mut4(配列番号60)は、ヒトLIFタンパク質の166~202アミノ酸配列をマウスLIFタンパク質のものに置き換えることである。mut3、mut4及び完全長ヒトLIFタンパク質を含有するプラスミドを293T細胞にトランスフェクトした。3日間培養した後、293T細胞の培養上清を取り出してSDS-PAGE電気泳動及びウエスタンブロットにかけた。293T細胞の培養上清を陰性対照として使用し、38E10E1C11を一次抗体として使用し、及びHRP標識ヤギ抗マウスFabを二次抗体として使用した。同時に、M1細胞増殖実験を用いてハイブリッドタンパク質の活性を検出し、ハイブリッドタンパク質に対する38E10E1C11の中和活性を確かめた。同時に複数の対照ウェル群、ヒト組換えLIFタンパク質(rhLIF、Yiqiao Shenzhouから購入、製品番号は、14890-HNAHである)を加える対照ウェル、rhLIF及び38E10E1C11を加える対照ウェル、並びにrhLIF及びLIF抗体を加えない対照ウェルをセットアップした。これらの結果から、38E10E1C11抗体は変性した完全長LIFタンパク質及びmut3タンパク質を認識することができたが、mut4タンパク質は認識できなかったことが示された(図16A)。このM1細胞増殖実験は、38E10E1C11抗体が完全長LIFタンパク質及びMut3タンパク質によるM1細胞増殖の阻害を逆転させることができるが、Mut4タンパク質の阻害効果は逆転させることができないことを示している(図16B)。要約すれば、38E10E1C11抗体の認識エピトープは、ヒトLIFタンパク質の167~181アミノ酸配列に位置し、つまり、アミノ酸TYGPDTSGKDVFQKK(配列番号61)であった。
マウスを免疫して得られたモノクローナル抗体38E10E1C11をヒト化した。ヒト化は、標準的なCDRグラフト法によって実施した。38E10E1C11ハイブリドーマから標準的な分子クローニング技術によって重鎖及び軽鎖領域をクローニングし、サンガー法によってシーケンシングした。次にヒト重鎖及び軽鎖可変配列に関してBLAST検索を実施し、3つ又は4つの配列をヒト化用の受容フレームとして選択した。38E10E1C11の重鎖及び軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3を3つの異なる重鎖受容フレーム(H1~H3)及び4つの異なる軽鎖フレーム(L1~L4)にクローニングし、一方、38E10E1C11のHCDR2(突然変異前のアミノ酸配列は配列番号45に示されるとおり)を点突然変異させて(突然変異後のアミノ酸配列は配列番号5に示されるとおり)、重鎖定常領域にヒトIgG1アイソフォームを選択し、軽鎖定常領域にヒトκ鎖を選択した。ヒト化抗体重鎖及びヒト化抗体軽鎖の遺伝子を含有する発現ベクターを293S細胞にコトランスフェクトした。重鎖及び軽鎖可変領域の遺伝子配列、可変領域のアミノ酸配列、完全長遺伝子配列及び完全長アミノ酸配列を表1に示した。次に、293S細胞におけるこれらの12個の異なる抗体の組み合わせの発現レベル、抗原結合能力及び熱安定性を調べた。38E10E1C11キメラ抗体(キメラ)を陽性対照として使用し、続くアッセイでは、38E10E1C11キメラ抗体は全て、38Eキメラ抗体又は38Eキメラ(配列番号52及び配列番号50)と省略した。培地を回収し、そこでのIgGの発現レベルをGator(Octetと同様)で定量化し、ELISAによって補正した。種々の組み合わせの抗原結合能力をELISAによって比較した(表2、表3)。
各ウェルを100μLの0.5μg/ml抗原でコートし、4℃で一晩インキュベートし、プレートを300μLの洗浄緩衝液で3回洗浄した。プレートを200μLの封じ込め緩衝液(2%ウシ血清アルブミン)によって室温で60分間封じ込めた。プレートを300μLの洗浄緩衝液で3回洗浄した。各ウェルに種々の濃度の100μLの希釈抗LIF抗体を加え、室温で1時間インキュベートした。プレートを300μLの洗浄緩衝液で4回洗浄した。1:5000希釈の100μLのHRP標識ヤギ抗ヒトFc二次抗体を加え、室温で1時間インキュベートした。プレートを300μLの洗浄緩衝液で6回洗浄した。100μLのH2O2-Amplx発色溶液を加え、暗所条件下に室温で10分間発色させた。OD450値を酵素マーカーにより読み取った。熱処理:発現培地をPCR機において70℃で5分間加熱し、次に室温に急冷した。続くELISAアッセイを上記のとおり実施する。
結合親和性、ヒト化率、抗体発現レベル及び熱安定性データに基づき、次の特徴付けステップに以下の5つの候補抗体:H1L1、H1L4、H2L4、H3L2、H3L4を選択し、これらの5つの候補抗体の番号を、38E HuH1L1(配列番号25及び9)、38E HuH1L4(配列番号25及び21)、38E HuH2L4(配列番号29及び21)、38E HuH3L2(配列番号33及び13)、及び38E HuH3L4(配列番号33及び21)と付け直した。次に選択されたVH/VLプラスミドを293S細胞にコトランスフェクトし、細胞培養上清を回収し、抗体をプロテインAアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。精製した抗体を結合ELISA分析に使用して、ヒト化抗体の特異的結合能力を38Eキメラ抗体と比較した。本発明はまた、その熱安定性及び非特異的結合を比較する幾つかの予備的分析も行った。これらの結果から、精製されている候補抗体と38Eキメラ抗体とが極めて良く似た抗原結合特性を有したことが示された(図17A、図17C)。70℃で5分間処理した後、5つ全てのヒト化抗体が、キメラ抗体と同程度の結合能力を示した(図17B、図17D)。
LIF陰性HEK293細胞FACSを予備的アッセイに用いることにより、抗体の潜在的な非特異的結合リスクを評価した。
CE-SDS分析のワーキング濃度は1mg/mLとし、抗体試料をローディング緩衝液で指定される濃度に希釈した。
試料をUNcle Systems(Unchained Labs)にかけて分析した。DSF及びSLSに関して25℃~95℃の温度範囲を1℃/分でモニタした。UNcleは、266nm及び473nmでSLSを測定した。UNcle分析ソフトウェアを用いてTm及びTaggを計算し、分析した。
UNcleシステム(Unchained Labs)でDLSを実施した。DLSは25℃で測定した。データはUNcle分析ソフトウェアを用いて計算し、分析した。動的光散乱(DLS)は、抗体試料の凝集の検出に用いられる。「モード径」はタンパク質粒子の直径を指し、「質量百分率」は各粒径画分の割合を指す。「PDI」は多分散性指数を指し、この指数が高いほど、多分散性の高い試料となる。PDIが0.25以下の場合、その試料は単分散と見なすことができる。表7に示されるとおり、4つの抗体試料の全てが主「ピーク」(99%を超える質量分率)を有し、38E HuH3L4はキメラ抗体よりも良好なPDIを有し、38E HuH3L2はキメラ抗体と同程度であり、及び38E HuH1L1はキメラ抗体よりも悪いPDIを有した。
ヒトLIFタンパク質に対する抗LIF抗体の親和性をGatorを用いて決定した。初めに抗ヒトLIF抗体をPBSで5ug/mLに希釈し、次に96ウェルプレートの2列目のA~Fウェルに加えた(各ウェル200μL)。ヒトLIFタンパク質濃度をPBSでそれぞれ100、50、25、12.5及び6.25μg/mLに勾配希釈し、希釈したLIFタンパク質を96ウェルプレートの4列目のウェルA~Eウェルに加え(各ウェル100μL)、Fウェルにブランク対照としてPBSを加えた。1列目及び3列目のA~FウェルにPBSを加えた(各ウェル200μL)。96ウェルプレートを機器に入れ、抗ヒトFcバイオセンサーで検出した。結果は表8に示し、ここでは3つのヒト化抗体の親和性がキメラ抗体に近いことが示された。
ヒト化抗体38E HuH3L2及び38E HuH3L4の軽鎖及び重鎖の可変領域をマウス抗体の定常領域(重鎖の定常領域はマウスIgG1であり、軽鎖の定常領域はκ鎖であった)と連結し、それぞれPCDNA.3.4ベクターにクローニングし、38E HuH3L2-m(38E HuH3L2-m抗体の重鎖及び軽鎖をコードする完全長遺伝子配列は、それぞれ配列番号36及び配列番号38に示される;38E HuH3L2-m抗体の重鎖及び軽鎖の対応する完全長アミノ酸配列は、それぞれ配列番号35及び配列番号37に示される)及び38E HuH3L4-m(重鎖及び軽鎖の完全長遺伝子配列は、それぞれ配列番号36及び配列番号40に示され、38E HuH3L4-m抗体の重鎖及び軽鎖の対応する完全長アミノ酸配列は、それぞれ配列番号35及び配列番号39に示される)と命名した。遺伝子トランスフェクション及び抗体発現をthermo fisherのExpi CHO発現キットを使用して実施した。細胞培養上清を回収し、プロテインGアフィニティークロマトグラフィーカラムを使用して抗体を精製した。精製した抗体を濃縮し、Amicon(登録商標)Ultra限外ろ過チューブを使用した限外ろ過によって交換し、最後に抗体をpH7.4のPBSに溶解させた。38E10E1C11抗体もまた、同じように発現させて、精製した。
酵素標識プレートに組換えヒトLIFタンパク質を1μg/mLの濃度でコートし、0.6125μg/mLの濃度の50μL/ウェルの組換えヒトLIFRタンパク質(ヒトFcと融合発現したもの、ACROから購入、品目番号:LIR-H4252)を加え、一方で、種々の濃度の100μL/ウェルの種々のLIF抗体38E HuH3L2-m(配列番号35及び37)、38E HuH3L4-m(配列番号35及び39)、38E10E1C11(配列番号41及び43)、P36-033(配列番号54及び56)を加えた。抗CD3抗体を陰性対照として使用した(BioLegendから購入、番号317326)。プレートを室温で2時間インキュベートし、PBSTで4回洗浄し、HRP標識ヤギ抗ヒトFc抗体を加え、プレートを室温で1時間インキュベートし、PBSTで4回洗浄した。TMB発色溶液を加え、室温で10分間発色させた。450nmの吸光値を酵素マーカーにより読み取った。データは、Origin pro 9ソフトウェアを使用して分析し、プロットした。結果は図19に詳述した。これらの結果から、38E10E1C11、38E HuH3L2-m、38E HuH3L4-mが組換えヒトLIFによるヒトLIFRへの結合を、それぞれ、0.074μg/ml、0.145μg/ml及び0.103μg/mlのIC50で阻害可能であったことが示された。P36-033は阻害効果が弱く、陰性対照抗CD3抗体は、組換えヒトLIFによるヒトLIFRへの結合を阻害することができなかった。
酵素標識プレートに組換えヒトLIFタンパク質を1μg/mLの濃度でコートし、12μg/mLの濃度の50μL/ウェルの組換えヒトGP130タンパク質(ヒトFcと融合発現したもの、Yijiao Shenzhouから購入、品目番号:10974-H03H)を加え、一方で、種々の濃度の100μL/ウェルのLIF抗体38E HuH3L2-m((配列番号35及び37)、38E HuH3L4-m(配列番号35及び39)及びP36-033(配列番号56及び54)を加え、抗CD28抗体を陰性対照とした(BioLegendから購入、品目番号302914)。プレートを室温で2時間インキュベートし、PBSTで4回洗浄した。HRP標識ヤギ抗ヒトFc抗体を加え、室温で1時間インキュベートし、PBSTで4回洗浄した。TMB発色溶液を加え、室温で10分間発色させた。450nmの吸光値を酵素マーカーにより読み取った。データは、Origin pro 9ソフトウェアを使用して分析し、プロットした。結果は図20に詳述した。これらの結果から、ヒト化抗体38E HuH3L2-m、38E HuH3L4-m及び抗CD28抗体の陰性対照抗体が組換えヒトLIFによるヒトGP130タンパク質への結合を阻害しなかったこと、及びP36-033が組換えヒトLIFによるヒトGP130タンパク質への結合を阻害できたことが示された。
酵素標識プレートに、ヒトLIF、ヒトIL-6、ヒトOSM及びヒトCNTF(4つのタンパク質は、いずれもYijiao Shenzhouから購入した、それぞれ品目番号14890-HNAH;10395-HNAE;10452-HNAH;11841-H07E)を1μg/mLの濃度でコートし、種々の濃度のLIF抗体38E10E1C11、38E huH3L2-m、38E huH3L4-mを室温で1時間インキュベートした。PBSTで4回洗浄した後、HRP標識ヤギ抗マウスFab二次抗体を加え、室温で1時間インキュベートした。PBSTで4回洗浄した後、TMB発色溶液を加え、室温で10分間発色させた。450nmの吸光値を酵素マーカー(maker)により読み取った。データは、Origin pro 9ソフトウェアを使用して分析し、プロットした。この結果は図21に示した。この結果は、38E10E1C11、38E huH3L2-m及び38E huH3L4-m抗体がヒトLIFタンパク質にのみ結合し、しかしヒトIL-6、OSM及びCNTFには結合しないことを示している。
本発明では、前出の実験において、38E10E1C11抗体がLIFタンパク質の線状エピトープを認識することが見出されたため、従って38Eヒト化抗体がなおもLIFタンパク質の線状エピトープを認識するかどうかを初めに確かめる必要があった。ヒトLIF完全長遺伝子配列、Mut3及びMut4タンパク質配列をトランスフェクトした293T細胞の3日間培養した後の上清、及び293T細胞培養上清の陰性対照を取り、5×SDS-PAGEローディング緩衝液を加え、10分間煮沸した。次に10μLの試料を取ってSDS-PAGE電気泳動にかけ、次に電気泳動バンドをPVDF膜に転写してウエスタンブロット検出を行った。検出用の一次抗体は1μg/mLの濃度の38E huH3L2又は38E huH3L4抗体であり、室温で2時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回洗浄し、1:3000の希釈比で希釈したHRP標識ヒツジ抗ヒトFc二次抗体を加え、二次抗体と共に室温で2時間インキュベートし、PBST緩衝液で3回洗浄し、高感度化学発光溶液(Perice、品目番号34079)を加え、インキュベートした。Amersham Imager 600超高感度多機能イメージング装置を使用して検出し、写真を撮った。結果は図22Aに示した。この結果は、両方のヒト化抗体とも、変性ヒトLIFタンパク質及びMut3タンパク質を認識することができたが、Mut4タンパク質は認識しなかったことを示している。M1細胞増殖アッセイでも同じ結果が得られ、この結果は図22Bに詳述した。従って、38E huH3L2及び38E huH3L4抗体によって認識されるエピトープ配列は、TYGPDTSGKDVFQKK(配列番号61)であると決定された。
KP4細胞を消化及び遠心した後、細胞を再懸濁し、12ウェルプレートに1mL、5×105細胞/ウェルで播いた。プレートを37℃、5%CO2で一晩インキュベートした。翌日、元の培地を廃棄し、50ng/mL組換えヒトLIFタンパク質及び種々の濃度の抗LIFヒト化抗体を含有する細胞培地をそれぞれ加えた。組換えヒトLIFタンパク質を含まない、及び組換えヒトLIFタンパク質のみを含んで抗体を含まない対照ウェルをセットアップし、プレートを37℃のインキュベーターで30分間インキュベートした。次に培地を取り除き、各ウェルに100μLの1×細胞溶解溶液を加え、この混合物を氷上で30分間溶解させた。ライセートを1.5mL遠心チューブに移し、13,000rpmで10分間遠心し、上清を回収した。上清を取り出してウエスタンブロット検出にかけ、STAT3のリン酸化を検出した。これらの結果から、ヒト化抗体38E huH3L4及び38E huH3L2が、LIFタンパク質の誘導によるSTAT3のリン酸化を阻害可能であったことが示された(図23)。
M1の遠心後、RPMI1640培地で2回洗浄し、2.5×105細胞/mLの密度で96ウェルプレートを接種した。各ウェルに80μLの細胞を接種し、4ng/mLの組換えヒトLIFタンパク質及び種々の濃度の抗LIF抗体を含有する培地を加えることにより、各ウェルの最終容積を160μLにした。一方でLIFを含まない対照ウェルをセットアップし、37℃で72時間インキュベートし、CCK-8を加えることによって増殖を検出した。結果は図24に詳述した。この結果は、ヒト化抗体38E huH3L4-m及び38E huH3L2-mの両方とも、それぞれ6.52μg/mL及び8.93μg/mLのEC50でヒトLIFタンパク質によるM1細胞の増殖阻害を逆転させることが可能であったことを示している。
100,000個のKP4細胞を96ウェルプレートに接種した;勾配希釈したLIF抗体を20~100ng/mlのLIFタンパク質と共に室温で0.5~1時間インキュベートして、LIF-Ab混合物を形成した。細胞ウェルにLIF-Ab混合物を加え、37℃で5~30分間刺激した。P-STAT3(TYR705)KITS(Cisbio)及び全STAT3 KITS(Cisbio)の指示に従いP-STAT3及び全STAT3タンパク質発現レベルを検出すること。各ウェルについてドナー及びアクセプターの発光シグナル比を計算した:比=シグナル665nm/シグナル620nm×104。Prismソフトウェアを使用してデータグラフを作成し、LIF抗体の阻害率をカウントした。これらの結果から、LIF抗体38E HuH3L4が、図25に示されるとおり、LIFによって誘導されたSTAT3リン酸化のリン酸化の阻害効果を有し、IC50は3.415nMであったことが示された。
LIFはGP130及びLIFRに結合する一方、ヒト化LIF抗体はLIFによるLIFRへの結合を遮断するが、LIFによるGP130への結合は遮断しない。ヒト化LIF抗体がLIFによって媒介されて細胞表面に結合し、ひいてはADCCが働くかどうかを検出すること。抗体アービタックス(Epiduo(登録商標)、Merck Serono、陽性対照)及びヒトIgG2(カタログ番号HG2K、Sino、陰性対照)をADCC緩衝液(RPMI-1640+1%FBS)で順次希釈した;次にLIFタンパク質を含有するADCC緩衝液で38E huH3L4抗体をトリプリケート及び8点勾配で希釈し、取りのけておいた。DLD-1細胞をトリプシン(カタログ番号25200072、GIBCO)で消化し、反応の終了後、細胞をブローしてばらばらにし、遠心チューブに回収し、1500rpmで3分間遠心した。上清を廃棄し、細胞をADCC緩衝液で再懸濁してカウントした。細胞濃度を調整し、取りのけておいた。PBMC細胞(カタログ番号SLB-HP010B、Shanghai SAILYBIO Ltd.)を蘇生し、10mLのADCC緩衝液を加え、2000rpmで10分間遠心し、上清を廃棄した。PBMC細胞をADCC緩衝液に再懸濁してカウントした。細胞濃度を調整し、取りのけておいた;及び96ウェルU字底細胞培養プレートを取り出し、50μlの標的細胞DLD-1、50μlの抗体、及び50μlのPBMCエフェクター細胞を順番に加えた。PBMCエフェクター細胞と標的細胞の比は30:1であった。反応を5%CO2インキュベーターにおいて37℃で6時間行った。Cyto Tox96非放射性細胞傷害性アッセイキット(カタログ番号G1780、Promega)によってLDHを検出し、吸光度値を490nmで酵素マーカーを用いて測定した。
A:実験ウェルの補正後の平均吸光度値
B:補正後エフェクター細胞LDH自然発光ウェルの平均吸光度値
C:補正後標的細胞LDH自然発光ウェルの平均吸光度値
D:標的細胞の補正後LDH最大発光ポアの平均吸光度値
図26に示すとおり、38E huH3L4抗体はADCC活性を有しなかった。
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Claims (121)
- ヒトLIFタンパク質のアミノ酸配列TYGPDTSGKDVFQKK(配列番号61)によって表されるエピトープ又は別の哺乳類種の対応するアミノ酸配列のエピトープに結合する単離抗体又はその抗原結合断片。
- (a)配列番号1又は66からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR1;
(b)配列番号2又は67からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR2;
(c)配列番号3又は68からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR3;
(d)配列番号4又は69からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR1;
(e)配列番号5、45、又は70からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR2;及び
(f)配列番号6又は71からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR3
を含む、単離抗体又はその抗原結合断片。 - (a)配列番号1からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR1;
(b)配列番号2からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR2;
(c)配列番号3からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むLCDR3;
(d)配列番号4からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR1;
(e)配列番号5又は45からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR2;
(f)配列番号6からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含むHCDR3
を含む、請求項2に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 1)(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号5を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3;
2)(a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号45を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3;又は
3)(a)配列番号66を含むLCDR1、(b)配列番号67を含むLCDR2、(c)配列番号68を含むLCDR3、(d)配列番号69を含むHCDR1、(e)配列番号70を含むHCDR2、及び(f)配列番号71を含むHCDR3
を含む、請求項2又は3に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - (a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号5を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3
を含む、請求項4に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - (a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号45を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3
を含む、請求項4に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - (a)配列番号66を含むLCDR1、(b)配列番号67を含むLCDR2、(c)配列番号68を含むLCDR3、(d)配列番号69を含むHCDR1、(e)配列番号70を含むHCDR2、及び(f)配列番号71を含むHCDR3
を含む、請求項4に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - (i)配列番号7、11、15、19、46、74又は82からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む軽鎖可変領域(VL);及び
(ii)配列番号23、27、31、48、75又は83からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項2~7のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - (i)配列番号7、11、15、19又は46からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む軽鎖可変領域(VL);及び
(ii)配列番号23、27、31又は48からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項2~8のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 前記単離抗体が、請求項8又は9に記載の(i)から選択される軽鎖可変領域と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び請求項8又は9に記載の(ii)から選択される重鎖可変領域と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項2~9のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 1)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
2)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
3)配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
4)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
5)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
6)配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
7)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
8)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
9)配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
10)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
11)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
12)配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
13)配列番号46のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号48のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);
14)配列番号74のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号75のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH);又は
15)配列番号82のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号83のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項2~10のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - それぞれ請求項11に記載の1)~15)から選択される軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む、請求項2~11のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号46のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号48のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号74のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号75のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号82のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号83のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)
を含む、請求項11に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 軽鎖及び重鎖を含み、
(I)前記軽鎖が、配列番号9、13、17、21、37、39、50又は54からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含み;及び
(II)前記重鎖が、配列番号25、29、33、35、52又は56からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む、
請求項2~27のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 軽鎖及び重鎖を含み、
(I)前記軽鎖が、配列番号9、13、17、21、37、39又は50からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含み;及び
(II)前記重鎖が、配列番号25、29、33、35又は52からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列、及びその保存的修飾を含む、
請求項2~28のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 請求項28又は29に記載の(I)から選択される軽鎖と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び請求項28又は29に記載の(ii)から選択される重鎖と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項2~29のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 1)配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
2)配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
3)配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
4)配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
5)配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
6)配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
7)配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
8)配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
9)配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
10)配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
11)配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
12)配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
13)配列番号37のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
14)配列番号39のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;
15)配列番号50のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号52のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖;又は
16)配列番号54のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号56のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項2~30のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 軽鎖及び重鎖を含み、前記軽鎖及び重鎖が、それぞれ、請求項31に記載の1)~16)から選択される軽鎖及び重鎖可変領域と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項2~31のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号37のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号39のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号50のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号52のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号54のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号56のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項31に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。 - (a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号5を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3を含む、単離抗体又はその抗原結合断片。
- (a)配列番号1を含むLCDR1、(b)配列番号2を含むLCDR2、(c)配列番号3を含むLCDR3、(d)配列番号4を含むHCDR1、(e)配列番号45を含むHCDR2、及び(f)配列番号6を含むHCDR3を含む、単離抗体又はその抗原結合断片。
- 配列番号7によって表される軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号23によって表される重鎖可変領域(VH)を含む、単離抗体又はその抗原結合断片。
- 配列番号11によって表される軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31によって表される重鎖可変領域(VH)を含む、単離抗体又はその抗原結合断片。
- 配列番号19によって表される軽鎖可変領域(VL)、及び配列番号31によって表される重鎖可変領域(VH)を含む、単離抗体又はその抗原結合断片。
- 前記単離抗体が、IgGである、請求項1~53のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 前記単離抗体が、IgG1、IgG2又はIgG4である、請求項1~54のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 前記単離抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト改変抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、Fv、単鎖抗体(scFv)、Fab、Fab’、Fab’-SH又はF(ab’)2である、請求項1~55のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 白血病抑制因子(LIF)アンタゴニストである、請求項1~56のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- LIFの発現の阻害能及び/又はLIFの活性の遮断能を有する、請求項1~56のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- LIFへの結合に関する競合能又は交差競合能を有する、請求項1~56のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片をコードするヌクレオチド分子を含むヌクレオチド組成物。
- (i)配列番号7、11、15、19、46又は82のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(ii)配列番号23、27、31、48又は83のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60に記載のヌクレオチド組成物。 - (i)配列番号7、11、15、19又は46のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(ii)配列番号23、27、31又は48のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60又は61に記載のヌクレオチド組成物。 - (i)配列番号7、11、15、又は19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(ii)配列番号23、27又は31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60~62のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。 - 1)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
2)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
3)配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
4)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
5)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
6)配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
7)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
8)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
9)配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
10)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
11)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
12)配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
13)配列番号46のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号48のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
14)配列番号74のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号75のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAを含む第2の核酸分子;又は
15)配列番号82のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号83のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60~63のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。 - 配列番号7のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号8として示される、請求項60~64のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号11のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号12として示される、請求項60~65のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号15のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号16として示される、請求項60~66のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号19のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号20として示される、請求項60~67のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号46のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号47として示される、請求項60~68のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号74のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号76として示される、請求項60~69のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号82のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖可変領域(VL)をコードするDNAが、配列番号72として示される、請求項60~70のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号23のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAが、配列番号24として示される、請求項60~71のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号27のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAが、配列番号28として示される、請求項60~72のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号31のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAが、配列番号32として示される、請求項60~73のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号48のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAが、配列番号49として示される、請求項60~74のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号75のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAが、配列番号77として示される、請求項60~75のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号83のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖可変領域(VH)をコードするDNAが、配列番号73として示される、請求項60~76のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- (I)配列番号9、13、17、21、37、39、50又は54のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸配列;及び
(II)配列番号25、29、33、35、52又は56のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸配列
を含む、請求項60~77のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。 - (I)配列番号9、13、17、21、37、39又は50のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(II)配列番号25、29、33、35又は52のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60~78のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。 - (I)配列番号9、13、17又は21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子;及び
(II)配列番号25、29又は33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60~79のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。 - 1)配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
2)配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
3)配列番号9のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
4)配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
5)配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
6)配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
7)配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
8)配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
9)配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
10)配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
11)配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
12)配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
13)配列番号37のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
14)配列番号39のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;
15)配列番号50のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号52のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子;又は
16)配列番号54のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAを含む第1の核酸分子及び配列番号56のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAを含む第2の核酸分子
を含む、請求項60~80のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。 - 配列番号13のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号14として示される、請求項78~81のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号17のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号18として示される、請求項78~82のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号21のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号22として示される、請求項78~83のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号37のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号38として示される、請求項78~84のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号39のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号40として示される、請求項78~85のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号50のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号51として示される、請求項78~86のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号54のアミノ酸配列によって表されるとおりの軽鎖をコードするDNAが、配列番号55として示される、請求項78~87のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号25のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAが、配列番号26として示される、請求項78~88のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号29のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAが、配列番号30として示される、請求項78~89のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号33のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAが、配列番号34として示される、請求項78~90のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号35のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAが、配列番号36として示される、請求項78~91のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号52のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAが、配列番号53として示される、請求項78~92のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 配列番号56のアミノ酸配列によって表されるとおりの重鎖をコードするDNAが、配列番号57として示される、請求項78~93のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物。
- 請求項60~94のいずれか一項に記載のヌクレオチド組成物を含む、ベクター。
- 真核生物発現ベクター、原核生物発現ベクター又はウイルスベクターである、請求項95に記載のベクター。
- 請求項95又は96に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 前記ベクターを含む前記宿主細胞が、ベクター形質転換によって入手される、請求項97に記載の宿主細胞。
- 細菌、酵母又は哺乳類細胞である、請求項97又は98に記載の宿主細胞。
- 大腸菌、ピキア酵母、チャイニーズハムスター卵巣細胞又はヒト胎児腎臓293細胞である、請求項97~99のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片を調製する方法であって、請求項97~100のいずれか一項に記載の宿主細胞において前記抗体又はその抗原結合断片を発現させること、及び前記抗体又はその抗原結合断片を単離することを含む、方法。
- 治療有効量の請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
- 生体試料中のLIFを検出するための、請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片を含む試薬。
- 前記生体試料が、異常なLIFレベルを有する疑いがある血液、血清、尿、生検材料、腫瘍、又は任意の組織である、請求項103に記載の試薬。
- LIFの発現を阻害し及び/又はLIFの活性を遮断する方法であって、それを必要としている患者に、治療有効量の請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片、及び/又は請求項102に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
- LIFの発現を阻害し及び/又はLIFの活性を遮断するために使用される医薬品の製造における、請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片、及び/又は請求項102に記載の医薬組成物の使用。
- LIFの発現の阻害及び/又はLIFの活性の遮断における使用のための、請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片及び/又は請求項102に記載の医薬組成物。
- 生体試料中のLIFの検出方法であって、(i)対象の組織又は体液試料を入手すること、(ii)前記組織又は体液試料を請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片又は請求項103又は104に記載の試薬に曝露すること;及び(iii)(ii)の前記組織又は体液試料へのLIF結合を対照試料へのLIF結合と比較することであって、ここで前記対照試料と比較したLIF結合量の増加が、LIFの産生、発現又は活性化レベルの異常を示すことを含む、方法。
- 前記組織又は体液試料が、異常なLIFレベルを有する疑いがある血液、血清、尿、生検材料、腫瘍、又は任意の組織を含む、請求項108に記載の方法。
- LIFに関連する疾患又は病態を治療する方法であって、必要としている患者に、治療有効量の請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗原結合断片、及び/又は請求項102に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
- LIFに関連する前記疾患又は病態が、腫瘍である、請求項110に記載の方法。
- 前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項111に記載の方法。
- 前記固形腫瘍が、膠芽腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、膵癌又は前立腺癌を含む、請求項112に記載の方法。
- LIFに関連する疾患又は病態を治療するための医薬品の製造における、請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片、及び/又は請求項102に記載の医薬組成物の使用。
- LIFに関連する前記疾患又は病態が、腫瘍である、請求項114に記載の使用。
- 前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項115に記載の使用。
- 前記固形腫瘍が、膠芽腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、膵癌又は前立腺癌を含む、請求項116に記載の使用。
- LIFに関連する疾患又は病態の治療における使用のための、請求項1~59のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合断片、及び/又は請求項102に記載の医薬組成物。
- LIFに関連する前記疾患又は病態が、腫瘍である、請求項118に記載の単離抗体又はその抗原結合断片及び/又は医薬組成物。
- 前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項119に記載の単離抗体又はその抗原結合断片及び/又は医薬組成物。
- 前記固形腫瘍が、膠芽腫、肺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、膵癌又は前立腺癌を含む、請求項120に記載の単離抗体又はその抗原結合断片及び/又は医薬組成物。
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