TWI770619B - 對lif具有專一性的結合分子及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供對LIF具有專一性的結合分子及其用途，具體而言，本發明提供結合LIF且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分。本發明亦提供本發明分離的抗體或其抗原結合部分在治療疾病中的用途。

Description

對LIF具有專一性的結合分子及其用途
本發明關於與LIF專一性結合的分離的抗體或其抗原結合部分，以及本發明的分離的抗體或其抗原結合部分的用途，以及使用本發明的分離的抗體或其抗原結合部分的治療方法。
白血病抑制因子(LIF, Leukemia Inhibitory Factor)是IL-6類細胞因子的一員，它具有多種生物活性包括刺激或抑制細胞的增殖、分化和存活[1]。人LIF蛋白含有202個胺基酸，它在細胞膜表面的受體有兩個，GP130和LIFR，LIF蛋白通過與這兩個受體結合，導致這兩個受體形成異二聚體，從而活化下游訊息傳導路徑，例如MAPK訊息傳導路徑和JAK/STAT訊息傳導路徑[2]。大量表現和高血清濃度的LIF蛋白已顯示與多種腫瘤的不良預後相關[3, 4]。LIF是腫瘤幹細胞的重要調節因子，在幹細胞維持、自我更新和多能性等方面發揮重要作用，並與化療耐藥有關[5, 6]。此外，LIF還能促進腫瘤的生長和轉移[7]。最近的證據表明在腫瘤中LIF通過自分泌和旁分泌的方式上調JAK-STAT3訊息傳導路徑，從而發揮促進腫瘤生長和抑制免疫反應的作用[8, 9, 10]。因此，LIF是極具潛力的治療標靶，但是目前針對LIF標靶所開發的治療方法並不樂觀。例如已有多篇文獻報導，利用RNA干擾降低LIF蛋白的表現，能夠抑制腫瘤生長[11, 12]，但是RNA干擾技術具有靶向性差，半衰期短，穿膜性差等弱點成藥困難；EC359為針對LIFR的小分子抑制劑，不僅能夠抑制LIFR與LIF的結合還能同時抑制OSM，CTF1，CNTF與LIFR的結合[13]，這些額外的抑制會不會導致額外的毒性還是未知，而專一性針對LIF蛋白的小分子抑制劑還未見報導；目前只有一款針對LIF蛋白的抗體處於臨床開發階段，相關的安全性和有效性數據還未公開。
因此，仍然需要更多研究來開發針對LIF標靶的藥物及組合治療方法。
本發明提供專一性結合LIF的分離的抗體或抗原結合部分及其在治療疾病中的用途。
在一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述分離的抗體或其抗原結合部分結合在人LIF蛋白的胺基酸序列TYGPDTSGKDVFQKK (SEQ ID NO: 61)所示的抗原決定位或在不同哺乳動物物種的相應胺基酸序列的抗原決定位。
在再一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (a) LCDR1，該LCDR1包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 66及其保留修飾形式的胺基酸序列； (b) LCDR2，該LCDR2包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 67及其保留修飾形式的胺基酸序列； (c) LCDR3，該LCDR3包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 68及其保留修飾形式的胺基酸序列； (d) HCDR1，該HCDR1包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 69及其保留修飾形式的胺基酸序列； (e) HCDR2，該HCDR2包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 45或SEQ ID NO: 70及其保留修飾形式的胺基酸序列；及 (f) HCDR3，該HCDR3包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 71及其保留修飾形式的胺基酸序列。
任選地，所述LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2或HCDR3具有17個或更少的胺基酸的添加、取代、刪除和/或插入。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (a) LCDR1，該LCDR1包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 1及其保留修飾形式的胺基酸序列； (b) LCDR2，該LCDR2包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 2及其保留修飾形式的胺基酸序列； (c) LCDR3，該LCDR3包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 3及其保留修飾形式的胺基酸序列； (d) HCDR1，該HCDR1包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 4及其保留修飾形式的胺基酸序列； (e) HCDR2，該HCDR2包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 45及其保留修飾形式的胺基酸序列；及 (f) HCDR3，該HCDR3包含選自以下所組成的組：SEQ ID NO: 6及其保留修飾形式的胺基酸序列。
任選地，所述LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2或HCDR3具有17個或更少的胺基酸的添加、取代、刪除和/或插入。
在某些實施方案中，任選地，所述LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2或HCDR3具有9個或更少的胺基酸的添加、取代、刪除、和/或插入。
在某些實施方案中，任選地，所述所述LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2或HCDR3具有5個或更少的胺基酸的添加、取代、刪除、和/或插入。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 1) (a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 5的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3； 2) (a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 45的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3；或者 3) (a)包含SEQ ID NO: 66的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 67的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 68的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 69的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 70的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 71的HCDR3。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 1) (a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 5的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3；或者 2) (a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 45的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 5的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 45的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (a)包含SEQ ID NO: 66的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 67的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 68的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 69的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 70的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 71的HCDR3。
在某些實施方案中，所述分離的抗體或其抗原結合片段是鼠源抗體或其抗原結合片段、嵌合抗體或其抗原結合片段、全人抗體或其抗原結合片段，或人源化抗體或其抗原結合片段。
在某些實施方案中，所述分離的抗體為人源化抗體，所述人源化抗體包含源自人抗體的框架區或其框架區變異體。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (i)輕鏈變異區(VL )，該輕鏈變異區包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 7、11、15、19、46、74或82及其保留修飾形式的胺基酸序列；以及 (ii)重鏈變異區(VH )，該重鏈變異區包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 23、27、31、48、75或83及其保留修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (i)輕鏈變異區(VL )，該輕鏈變異區包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 7、11、15、19或46及其保留修飾形式的胺基酸序列；以及 (ii)重鏈變異區(VH )，該重鏈變異區包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 23、27、31或48及其保留修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： (i)輕鏈變異區(VL )，該輕鏈變異區包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 7、11、15或19及其保留修飾形式的胺基酸序列；以及 (ii)重鏈變異區(VH )，該重鏈變異區包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 23、27或31及其保留修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的輕鏈變異區包含與選自(i)中的輕鏈變異區至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的胺基酸序列；所述重鏈變異區包含與選自(ii)中的重鏈變異區至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 1)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 2)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 3)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 4)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 5)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 6)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 7)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 8)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 9)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 10)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 11)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 12)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 13)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 46的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 48的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 14)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 74的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 75的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；或者 15)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 82的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 83的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 1)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 2)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 3)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 4)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 5)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 6)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 7)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 8)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 9)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 10)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 11)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；或者 12)輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 7的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 11的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 23的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 19的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 31的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 46的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 48的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 74的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 75的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈變異區(VL )，其包含與SEQ ID NO: 82的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈變異區(VH )，其包含與SEQ ID NO: 83的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述輕鏈變異區及重鏈變異區分別包含與選自1)-15)中輕鏈變異區及重鏈變異區至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈變異區和輕鏈變異區，其中： (i)輕鏈變異區(VL )，該輕鏈變異區包含與SEQ ID NOs: 7、11、15、19、46或82任一序列中具有相同序列的LCDR1、LCDR2以及LCDR3；以及 (ii)重鏈變異區(VH )，該重鏈變異區包含與SEQ ID NOs: 23、27、31、48或83任一序列中具有相同HCDR1、HCDR2以及HCDR3。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含輕鏈和重鏈，其中： (I)所述輕鏈包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 9、13、17、21、37、39、50或者54及其保留修飾形式的胺基酸序列；以及 (II)所述重鏈包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 25、29、33、35、52或者56及其保留修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含輕鏈和重鏈，其中： (I)所述輕鏈包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 9、13、17、21、37、39或者50及其保留修飾形式的胺基酸序列；以及 (II)所述重鏈包含選自以下所組成的組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 25、29、33、35或者52及其保留修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含輕鏈和重鏈，其中： (I)所述輕鏈包含選自以下所組成的下組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 9、13、17或21及其保留修飾形式的胺基酸序列；以及 (II)所述重鏈包含選自以下所組成的下組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 25、29或33及其保留修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的輕鏈包含與選自(I)中的輕鏈至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的胺基酸序列；所述的重鏈包含與選自(II)的重鏈至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 1)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 9的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 2)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 9的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 3)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 9的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 4)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 5)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 6)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 7)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 17的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 8)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 17的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 9)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 17的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 10)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 21的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 11)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 21的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 12)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 21的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 13)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 37的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 35的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 14)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 39的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 35的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列； 15)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 50的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 52的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；或者 16)輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 54的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 56的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述輕鏈及重鏈分別包含與選自1)-16)中輕鏈及重鏈至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 9的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 9的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 9的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 17的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 17的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 17的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 21的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 21的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 29的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 21的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 33的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 37的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 35的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 39的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 35的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 50的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 52的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 54的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列；以及重鏈，其包含與SEQ ID NO: 56的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列。
在另一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 5的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3。
在又一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO: 1的LCDR1，(b)包含SEQ ID NO: 2的LCDR2，(c)包含SEQ ID NO: 3的LCDR3，(d)包含SEQ ID NO: 4的HCDR1，(e)包含SEQ ID NO: 45的HCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO: 6的HCDR3。
在又一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，含有SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )，以及含有SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )。
在再一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，含有SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )，以及含有SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )。
在另一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，含有SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )，以及含有SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )。
在某些實施方案中，所述分離的抗體是單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人改造抗體、人抗體、雙專一性抗體、Fv、單鏈抗體(scFv)、Fab、Fab’、Fab’-SH或者F(ab’)2 。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體是IgG。
在某些實施方案中，所述分離的抗體是IgG1、IgG2或IgG4。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分為LIF (leukemia inhibitory factor)拮抗劑。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分能夠抑制LIF表現和/或阻斷LIF活性。
在某些實施方案中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分能夠競爭或交叉競爭用於結合LIF。
在再一方面，本發明提供一種核苷酸組合物，其包含編碼本發明所述的分離的抗體或其抗原結合部分的核苷酸分子。在一些實施方式中，所述的核苷酸分子為DNA或RNA。在一些實施方式中，所述的核苷酸分子為DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： (i)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 7、11、15、19、46或82所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及 (ii)第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 23、27、31、48或83所述的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： (i)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 7、11、15、19或46所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及 (ii)第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 23、27、31或48所述的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： (i)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 7、11、15或19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及 (ii)第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 23、27或31所述的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，第一核酸分子包含與選自(i)中第一核酸分子至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的DNA；第二核酸分子包含與選自(ii)中的第二核酸分子至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 1)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 2)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 3)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 4)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23的重鏈變異區(VH )的DNA； 5)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 6)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 7)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 8)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 9)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 10)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 11)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 12)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 13)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 46所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 48所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 14)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 74所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 75所示的重鏈變異區(VH )的DNA；或者 15)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 82所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 83所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 1)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 2)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 3)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 4)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23的重鏈變異區(VH )的DNA； 5)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 6)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 7)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 8)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 9)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 10)第一核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA； 11)第一核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA；或者 12)第一核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 46所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 48所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 74所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 75所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 82所示的輕鏈變異區(VL )的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 83所示的重鏈變異區(VH )的DNA。
在某些實施方案中，第一核酸序列分別包含與選自1)-15)中第一核酸序列或第二核酸序列至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的DNA序列。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 7所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 8所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 11所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 12所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 15所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 16所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 19所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 20所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 46所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 47所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 74所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 76所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 82所示的輕鏈變異區(VL )的DNA如SEQ ID NO: 72所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 23所示的重鏈變異區(VH )的DNA如SEQ ID NO: 24所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 27所示的重鏈變異區(VH )的DNA如SEQ ID NO: 28所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 31所示的重鏈變異區(VH )的DNA如SEQ ID NO: 32所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 48所示的重鏈變異區(VH )的DNA如SEQ ID NO: 49所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 75所示的重鏈變異區(VH )的DNA如SEQ ID NO: 77所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 83所示的重鏈變異區(VH )的DNA如SEQ ID NO: 73所示。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包括： (I)第一核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 9、13、17、21、37、39、50或54所示的輕鏈的DNA；以及 (II)第二核酸序列，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 25、29、33、35、52或56所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包括： (I)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 9、13、17、21、37、39或50所示的輕鏈的DNA；以及 (II)第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 25、29、33、35或52所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包括： (I)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 9、13、17或21所示的輕鏈的DNA；以及 (II)第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NOs: 25、29或33所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，第一核酸分子包含與選自(I)中的第一核酸分子至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的DNA；第二核酸分子包含與選自(II)中的第二核酸分子至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 1)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA； 2)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA； 3)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA； 4)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA； 5)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA； 6)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA； 7)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA； 8)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA； 9)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA； 10)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA； 11)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29的重鏈的DNA； 12)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA； 13)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 37所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 35所示的重鏈的DNA； 14)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 39所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 35所示的重鏈的DNA； 15)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 50所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 52所示的重鏈的DNA；或者 16)第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 54所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 56所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述第一核酸分子以及第二核酸分子包含與選自1)-16)中第一核酸分子或第二核酸分子至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或者100%同源性的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 37所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 35所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 39所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 35所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 50所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 52所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，所述的核苷酸組合物包含： 第一核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 54所示的輕鏈的DNA；以及第二核酸分子，其含有編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 56所示的重鏈的DNA。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 9所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 10所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 13所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 14所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 17所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 18所示。
在某些實施方案中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 21所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 22所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 37所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 38所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 39所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 40所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 50所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 51所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 54所示的輕鏈的DNA如SEQ ID NO: 55所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 25所示的重鏈的DNA如SEQ ID NO: 26所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 29所示的重鏈的DNA如SEQ ID NO: 30所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 33所示的重鏈的DNA如SEQ ID NO: 34所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 35所示的重鏈的DNA如SEQ ID NO: 36所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 52所示的重鏈的DNA如SEQ ID NO: 53所示。
在某些實施方式中，編碼胺基酸序列如SEQ ID NO: 56所示的重鏈的DNA如SEQ ID NO: 57所示。
再一方面，本發明提供一種載體，其含有如本發明所述的核苷酸組合物。
在某些實施方式中，所述的載體為真核表現載體、原核表現載體或病毒載體。
再一方面，本發明提供一種宿主細胞，其含有本發明所述的載體。
在一些實施方式中，含所述載體的宿主細胞是經載體轉殖獲得的。
在一些實施方式中，所述宿主細胞為細菌、酵母或者哺乳動物細胞。
在一些實施方式中，所述宿主細胞為大腸桿菌、畢赤酵母菌、中國倉鼠卵巢細胞或人胎腎293細胞。
再一方面，本發明提供一種用於製備本發明所述的分離的抗體或其抗原結合部分的方法，所述方法包括在本發明所述的宿主細胞中表現所述抗體或其抗原結合片段，並分離所述抗體或其抗原結合片段。
在又一方面，本發明提供一種藥物組合物，其包括治療有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分，以及藥學上可接受的賦形劑。
在再一方面，本發明提供一種用於測量生物樣品中LIF的試劑，其包含上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在某些實施方案中，生物樣本為血液、血清、尿、生檢材料、腫瘤或懷疑含有異常LIF水平的任意組織。
在另一方面，本發明提供一種抑制LIF表現和/或阻斷LIF活性的方法，包括向有需要的病人給予治療有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分，和/或上述的藥物組合物。
在又一方面，本發明提供上述分離的抗體或其抗原結合部分，和/或上述的藥物組合物在治療藥物中的用途，所述藥物用於抑制LIF表現和/或阻斷LIF活性。
在再一方面，本發明提供用於抑制LIF表現和/或阻斷LIF活性的上述的分離的抗體或其抗原結合部分，和/或上述的藥物組合物。
在另一方面，本發明提供一種治療與LIF相關的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的病人給予治療有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分，和/或上述的藥物組合物。在某些實施方式中，與LIF相關的疾病為腫瘤。在一些實施方式中，所述腫瘤為實性瘤。在一些實施方式，所述的實性瘤包括神經膠母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、結直腸癌、胰腺癌或前列腺癌。
在又一方面，本發明提供上述分離的抗體或其抗原結合部分，和/或上述的藥物組合物在治療與LIF相關的疾病或病症的藥物中的用途。在某些實施方式中，與LIF相關的疾病或病症為腫瘤。在一些實施方式中，所述腫瘤為實性瘤。在一些實施方式，所述的實性瘤包括神經膠母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、結直腸癌、胰腺癌或前列腺癌。
在再一方面，本發明提供用於治療與LIF相關的疾病或病症的上述的分離的抗體或其抗原結合部分，和/或上述的藥物組合物。在某些實施方式中，與LIF相關的疾病為腫瘤。在一些實施方式中，所述腫瘤是實性瘤。在一些實施方式中，所述實性瘤包括神經膠母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、結直腸癌、胰腺癌或前列腺癌。
與LIF相關的疾病或病症是指阻斷LIF與LIRR和/或GP130能夠治療、減輕、緩解和/或穩定該疾病或病症。
在另一方面，本發明提供一種檢測生物樣品中LIF的方法，包括：(i)獲得受試者的組織或液體樣品，(ii)暴露所述組織或液體樣品到上述的分離的抗體或其抗原結合部分或上述的試劑；以及(iii)檢測從(ii)中獲得的所述組織或液體樣品結合的LIF與對照樣品結合的LIF進行對比，其中與對照進行對比的LIF結合量的增加顯示LIF的生成、表現或活化的異常水平。
在某些實施方案中，其中所述組織或液體樣品包括血液、血清、尿、生檢材料、腫瘤或懷疑含有異常LIF水平的任意組織。
表I 本發明抗體序列說明表
序列編號 序列
SEQ ID NO: 1 (38E10E1C11、人源化抗LIF抗體或38E Chimeric的LCDR1，aa) RASENIYSYLA
SEQ ID NO: 2 (38E10E1C11、人源化抗LIF抗體或38E Chimeric的LCDR2，aa) NAKTLAE
SEQ ID NO: 3 (38E10E1C11、人源化抗LIF抗體或38E Chimeric的LCDR3，aa) QHHYVTPLT
SEQ ID NO: 4 (38E10E1C11、人源化抗LIF抗體或38E Chimeric的HCDR1，aa) SYAMS
SEQ ID NO: 5 (人源化抗LIF抗體的HCDR2，aa) TISSGGSNTYSPDTVKG
SEQ ID NO: 6 (38E10E1C11、人源化抗LIF抗體或38E Chimeric的HCDR3，aa) YYGYYFDF
SEQ ID NO: 7 (VL 1, aa) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKR
SEQ ID NO: 8 (VL 1, nt) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCAAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGG
SEQ ID NO: 9 (full light chain 1, aa) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 10 (full light chain 1, nt) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCAAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 11 (VL 2, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKR
SEQ ID NO: 12 (VL 2, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCAAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGG
SEQ ID NO: 13 (full light chain 2, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 14 (full light chain 2, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCAAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 15 (VL 3, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKR
SEQ ID NO: 16 (VL 3, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCCAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGG
SEQ ID NO: 17 (full light chain 3, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 18 (full light chain 3, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCCAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 19 (VL 4, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLKINSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKR
SEQ ID NO: 20 (VL 4, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCAGGGCAAGAGCCCCCAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGTTCACCCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGG
SEQ ID NO: 21 (full light chain 4, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLKINSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 22 (full light chain 4, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCAGGGCAAGAGCCCCCAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGTTCACCCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 23 (VH 1, aa) EVMLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPGTGLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSS
SEQ ID NO: 24 (VH 1, nt) GAGGTGATGCTGCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCACCGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 25 (full heavy chain 1, aa) EVMLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPGTGLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 26 (full heavy chain 1, nt) GAGGTGATGCTGCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCACCGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 27 (VH 2, aa) EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPGTGLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSS
SEQ ID NO: 28 (VH 2, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCACCGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 29 (full heavy chain 2, aa) EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPGTGLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 30 (full heavy chain 2, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCACCGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 31 (VH 3, aa) EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPETRLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSS
SEQ ID NO: 32 (VH 3, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGAGACCAGGCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 33 (full heavy chain 3, aa) EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPETRLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 34 (full heavy chain 3, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGAGACCAGGCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 35 (38E HuH3L2-m或38E HuH3L4-m full heavy chain, aa) EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSYAMSWVRQAPETRLEWVATISSGGSNTYSPDTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTLLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
SEQ ID NO: 36 (38E HuH3L2-m或38E HuH3L4-m full heavy chain, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGAGACCAGGCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGCTGACCGTGAGCAGCGCCAAGACCACCCCCCCCAGCGTGTACCCCCTGGCCCCCGGCAGCGCCGCCCAGACCAACAGCATGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGGCTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGACCTGGAACAGCGGCAGCCTGAGCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCGACCTGTACACCCTGAGCAGCAGCGTGACCGTGCCCAGCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTGACCTGCAACGTGGCCCACCCCGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAGATCGTGCCCAGGGACTGCGGCTGCAAGCCCTGCATCTGCACCGTGCCCGAGGTGAGCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACGTGCTGACCATCACCCTGACCCCCAAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACATCAGCAAGGACGACCCCGAGGTGCAGTTCAGCTGGTTCGTGGACGACGTGGAGGTGCACACCGCCCAGACCCAGCCCAGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACCTTCAGGAGCGTGAGCGAGCTGCCCATCATGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTTCAAGTGCAGGGTGAACAGCGCCGCCTTCCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCAGGCCCAAGGCCCCCCAGGTGTACACCATCCCCCCCCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGACAAGGTGAGCCTGACCTGCATGATCACCGACTTCTTCCCCGAGGACATCACCGTGGAGTGGCAGTGGAACGGCCAGCCCGCCGAGAACTACAAGAACACCCAGCCCATCATGGACACCGACGGCAGCTACTTCGTGTACAGCAAGCTGAACGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCCGGCAACACCTTCACCTGCAGCGTGCTGCACGAGGGCCTGCACAACCACCACACCGAGAAGAGCCTGAGCCACAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 37 (38E HuH3L2-m full light chain, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO: 38 (38E HuH3L2-m full light chain, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGAGCCCCAAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGGCCGACGCCGCCCCCACCGTGAGCATCTTCCCCCCCAGCAGCGAGCAGCTGACCAGCGGCGGCGCCAGCGTGGTGTGCTTCCTGAACAACTTCTACCCCAAGGACATCAACGTGAAGTGGAAGATCGACGGCAGCGAGAGGCAGAACGGCGTGCTGAACAGCTGGACCGACCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTGACCCTGACCAAGGACGAGTACGAGAGGCACAACAGCTACACCTGCGAGGCCACCCACAAGACCAGCACCAGCCCCATCGTGAAGAGCTTCAACAGGAACGAGTGC
SEQ ID NO: 39 (38E HuH3L4-m full light chain, aa) DIHMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLKINSLQPEDFATYYCQHHYVTPLTFGQGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO: 40 (38E HuH3L4-m full light chain, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCAGGGCAAGAGCCCCCAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGTTCACCCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 41 (38E10E1C11 full light chain, aa) DIHMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYVTPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO: 42 (38E10E1C11 full light chain, nt) GACATCCACATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGTTACTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
SEQ ID NO: 43 (38E10E1C11 full heavy chain, aa) EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFIFSSYAMSWVRQSPETRLEWVATISSGGSNTYSPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
SEQ ID NO: 44 (38E10E1C11 full heavy chain, nt) GAAGTGATGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCATTTTCAGTAGTTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGAGTCCGGAGACGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTAACACCTACTCTCCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGATATTATGGTTACTACTTTGACTTCTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA
SEQ ID NO: 45 (38E10E1C11或38E Chimeric HCDR2, aa) TISSGGSNTYSPDSVKG
SEQ ID NO: 46 (38E Chimeric VL , aa) DIHMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYVTPLTFGAGTKLELKR
SEQ ID NO: 47 (38E Chimeric VL , nt) GACATCCACATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACATTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGTTACTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGC
SEQ ID NO: 48 (38E Chimeric VH , aa) EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFIFSSYAMSWVRQSPETRLEWVATISSGGSNTYSPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 49 (38E Chimeric VH , nt) GAAGTGATGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCATTTTCAGTAGTTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGAGTCCGGAGACGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTAACACCTACTCTCCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGATATTATGGTTACTACTTTGACTTCTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 50 (38E Chimeric full light chain, aa) DIHMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYVTPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 51 (38E Chimeric full light chain, nt) GACATCCACATGACCCAGAGCCCCGCCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGAGACCGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCAGGGCAAGAGCCCCCAGCTGCTGGTGTACAACGCCAAGACCCTGGCCGAGGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGTTCAGCCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGGCAGCTACTACTGCCAGCACCACTACGTGACCCCCCTGACCTTCGGCGCCGGCACCAAGCTGGAGCTGAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 52 (38E Chimeric full heavy chain, aa) EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFIFSSYAMSWVRQSPETRLEWVATISSGGSNTYSPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 53 (38E Chimeric full heavy chain, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGAAGCCCGGCGGCAGCCTGAAGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCATCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGAGCCCCGAGACCAGGCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCAGCGGCGGCAGCAACACCTACAGCCCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGGTACTACGGCTACTACTTCGACTTCTGGGGCCAGGGCACCACCCTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 54 (P36-033 full light chain, aa) DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSNAVAWYQQKPGQSPRLLIYWASFRHTGVPDRFTGSGSGTEYTLTISRVQAEDLALYYCQQHYNTPYTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
SEQ ID NO: 55 (P36-033 full light chain, nt) GACATCGTGATGACCCAGTCCCACAAGTTCATGAGCACCAGCGTGGGCGATCGGGTGTCCATCACCTGTAAGGCCTCCCAGGACGTGAGCAACGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCCAGTCCCCTCGGCTGCTGATCTATTGGGCTTCCTTCAGGCACACCGGCGTGCCCGATCGGTTCACCGGCTCCGGATCCGGCACCGAGTATACCCTGACCATCTCCCGGGTGCAGGCCGAGGATCTGGCTCTGTATTATTGTCAGCAGCACTACAATACCCCCTACACCTTCGGCGGCGGCACCAGGCTGGAGATCAAGAGAGCTGATGCTGCCCCCACCGTGAGCATCTTCCCTCCCTCCAGCGAGCAGCTGACCTCCGGCGGAGCCTCCGTGGTGTGCTTCCTGAACAACTTCTACCCCAAGGATATCAACGTGAAGTGGAAGATCGACGGCAGCGAGCGGCAGAATGGCGTGCTGAACTCCTGGACCGACCAGGACAGCAAGGACTCCACCTATTCCATGTCCTCCACCCTGACCCTGACCAAGGATGAGTACGAGCGGCACAACAGCTATACCTGTGAGGCCACCCACAAGACCTCCACCTCCCCCATCGTGAAGTCCTTCAATAGGAATGAGTGC
SEQ ID NO: 56 (P36-033 full heavy chain, aa) EVMLVESGGGLVQPGGSRRLSCAASGFTFSSYPMFWVRQTPEKRMEWVAYISNGGDSTYYPDTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMSSLKSVDTAIYYCVRPSARYDEWFAYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
SEQ ID NO: 57 (P36-033 full heavy chain, nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCAGGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACCCCATGTTCTGGGTGAGGCAGACCCCCGAGAAGAGGATGGAGTGGGTGGCCTACATCAGCAACGGCGGCGACAGCACCTACTACCCCGACACCGTGAAGGGCAGGTTCACCGTGAGCAGGGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCCTGAAGAGCGTGGACACCGCCATCTACTACTGCGTGAGGCCCAGCGCCAGGTACGACGAGTGGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCCAAGACCACCCCCCCCAGCGTGTACCCCCTGGCCCCCGGCAGCGCCGCCCAGACCAACAGCATGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGGCTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGACCTGGAACAGCGGCAGCCTGAGCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCGACCTGTACACCCTGAGCAGCAGCGTGACCGTGCCCAGCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTGACCTGCAACGTGGCCCACCCCGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAGATCGTGCCCAGGGACTGCGGCTGCAAGCCCTGCATCTGCACCGTGCCCGAGGTGAGCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACGTGCTGACCATCACCCTGACCCCCAAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACATCAGCAAGGACGACCCCGAGGTGCAGTTCAGCTGGTTCGTGGACGACGTGGAGGTGCACACCGCCCAGACCCAGCCCAGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACCTTCAGGAGCGTGAGCGAGCTGCCCATCATGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTTCAAGTGCAGGGTGAACAGCGCCGCCTTCCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCAGGCCCAAGGCCCCCCAGGTGTACACCATCCCCCCCCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGACAAGGTGAGCCTGACCTGCATGATCACCGACTTCTTCCCCGAGGACATCACCGTGGAGTGGCAGTGGAACGGCCAGCCCGCCGAGAACTACAAGAACACCCAGCCCATCATGGACACCGACGGCAGCTACTTCGTGTACAGCAAGCTGAACGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCCGGCAACACCTTCACCTGCAGCGTGCTGCACGAGGGCCTGCACAACCACCACACCGAGAAGAGCCTGAGCCACAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 58 (Human LIF, aa) MKVLAAGVVPLLLVLHWKHGAGSPLPITPVNATCAIRHPCHNNLMNQIRSQLAQLNGSANALFILYYTAQGEPFPNNLDKLCGPNVTDFPPFHANGTEKAKLVELYRIVVYLGTSLGNITRDQKILNPSALSLHSKLNATADILRGLLSNVLCRLCSKYHVGHVDVTYGPDTSGKDVFQKKKLGCQLLGKYKQIIAVLAQAF
SEQ ID NO: 59 (Mut3, aa) MKVLAAGVVPLLLVLHWKHGAGSPLPITPVNATCAIRHPCHNNLMNQIRSQLAQLNGSANALFILYYTAQGEPFPNNLDKLCGPNVTDFPPFHANGTEKAKLVELYRIVVYLGTSLGNITRDQKILNPSALSLHSKLNATADILRGLLSNVLCRLCSKYHVGHVDVTYGPDTSGKDVFQKKKLGCQLLGTYKQVISVVVQAF
SEQ ID NO: 60 (Mut4, aa) MKVLAAGVVPLLLVLHWKHGAGSPLPITPVNATCAIRHPCHNNLMNQIRSQLAQLNGSANALFILYYTAQGEPFPNNLDKLCGPNVTDFPPFHANGTEKAKLVELYRIVVYLGTSLGNITRDQKILNPSALSLHSKLNATADILRGLLSNVLCRLCSKYHVGHVDVPPVPDHSDKEAFQRKKLGCQLLGTYKQVISVVVQAF
SEQ ID NO: 61 TYGPDTSGKDVFQKK
SEQ ID NO: 62 (5D8 full heavy chain, aa) QVQLQESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSHAWMHWVRQAPGKGLEWVGQIKAKSDDYATYYAESVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTCWEWDLDFWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 63 (5D8 full heavy chain, nt) CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGAAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCCACGCCTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCAGATCAAGGCCAAGAGCGACGACTACGCCACCTACTACGCCGAGAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAAGACCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCTGCTGGGAGTGGGACCTGGACTTCTGGGGCCAGGGCACCATGGTGACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG
SEQ ID NO: 64 (5D8 full light chain, aa) DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLLDSDGHTYLNWLQQRPGQPPRLLIYSVSNLESGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATHAPPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 65 (5D8 full light chain, nt) GACATCGTGATGACCCAGACCCCCCTGAGCAGCCCCGTGACCCTGGGCCAGCCCGCCAGCATCAGCTGCAGGAGCAGCCAGAGCCTGCTGGACAGCGACGGCCACACCTACCTGAACTGGCTGCAGCAGAGGCCCGGCCAGCCCCCCAGGCTGCTGATCTACAGCGTGAGCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGCGGCGCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAGGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCCACCCACGCCCCCCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO: 66 (P36-033 LCDR1, aa) KASQDVSNAVA
SEQ ID NO: 67 (P36-033 LCDR2, aa) WASFRHT
SEQ ID NO: 68 (P36-033 LCDR3, aa) QQHYNTPYT
SEQ ID NO: 69 (P36-033 HCDR1, aa) SYPMF
SEQ ID NO: 70 (P36-033 HCDR2, aa) YISNGGDSTYYPDTVKG
SEQ ID NO: 71 (P36-033 HCDR3, aa) PSARYDEWFAY
SEQ ID NO: 72 (P36-033 VL , nt) GACATCGTGATGACCCAGTCCCACAAGTTCATGAGCACCAGCGTGGGCGATCGGGTGTCCATCACCTGTAAGGCCTCCCAGGACGTGAGCAACGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCCAGTCCCCTCGGCTGCTGATCTATTGGGCTTCCTTCAGGCACACCGGCGTGCCCGATCGGTTCACCGGCTCCGGATCCGGCACCGAGTATACCCTGACCATCTCCCGGGTGCAGGCCGAGGATCTGGCTCTGTATTATTGTCAGCAGCACTACAATACCCCCTACACCTTCGGCGGCGGCACCAGGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 73 (P36-033 VH , nt) GAGGTGATGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCTCGGAGGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCTCCTCCTATCCCATGTTCTGGGTGAGGCAGACCCCCGAGAAGCGGATGGAGTGGGTGGCCTATATCTCCAATGGCGGCGATTCCACCTATTATCCTGACACCGTGAAGGGCCGGTTCACCGTGAGCCGGGATAACGCCAAGAATACCCTGTACCTGCAGATGAGCAGCCTGAAGTCCGTGGACACCGCTATCTACTATTGCGTGAGGCCCTCCGCTCGGTACGACGAGTGGTTCGCCTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCGCT
SEQ ID NO: 74 (38E10E1C11 VL , aa) DIHMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYVTPLTFGAGTKLELKRA
SEQ ID NO: 75 (38E10E1C11 VH , aa) EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFIFSSYAMSWVRQSPETRLEWVATISSGGSNTYSPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARYYGYYFDFWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 76 (38E10E1C11 VL , nt) GACATCCACATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGTTACTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCT
SEQ ID NO: 77 (38E10E1C11 VH , nt) GAAGTGATGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCATTTTCAGTAGTTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGAGTCCGGAGACGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTAACACCTACTCTCCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTGCAAGATATTATGGTTACTACTTTGACTTCTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 78 (5D8 VH , aa) QVQLQESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSHAWMHWVRQAPGKGLEWVGQIKAKSDDYATYYAESVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTCWEWDLDFWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 79 (5D8 VL , aa) DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLLDSDGHTYLNWLQQRPGQPPRLLIYSVSNLESGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATHAPPYTFGQGTKLEIKRTV
SEQ ID NO: 80 (5D8 VH , nt) CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGAAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCCACGCCTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCCAGATCAAGGCCAAGAGCGACGACTACGCCACCTACTACGCCGAGAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACGACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAAGACCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCTGCTGGGAGTGGGACCTGGACTTCTGGGGCCAGGGCACCATGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 81 (5D8 VL , nt) GACATCGTGATGACCCAGACCCCCCTGAGCAGCCCCGTGACCCTGGGCCAGCCCGCCAGCATCAGCTGCAGGAGCAGCCAGAGCCTGCTGGACAGCGACGGCCACACCTACCTGAACTGGCTGCAGCAGAGGCCCGGCCAGCCCCCCAGGCTGCTGATCTACAGCGTGAGCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGCGGCGCCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAGGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCATGCAGGCCACCCACGCCCCCCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACCGTG
SEQ ID NO: 82 (P36-033 VL , aa) DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSNAVAWYQQKPGQSPRLLIYWASFRHTGVPDRFTGSGSGTEYTLTISRVQAEDLALYYCQQHYNTPYTFGGGTRLEIK
SEQ ID NO: 83 (P36-033 VH , aa) EVMLVESGGGLVQPGGSRRLSCAASGFTFSSYPMFWVRQTPEKRMEWVAYISNGGDSTYYPDTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMSSLKSVDTAIYYCVRPSARYDEWFAYWGQGTLVTVSA
說明：CDR和框架區所有胺基酸編號均根據Kabat系統的EU索引(Kabat, E.A.等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S. Department of Health and Human Services，NIH公佈第91-3242號)註釋。所有序列均不包含訊息肽。aa：amino acid，nt：nucleotide。
[定義] 為更容易地理解本說明書，首先定義某些術語。其他定義陳述於說明書通篇中。
本文所用的術語「LIF (Leukemia Inhibitory Factor)」指白血病抑制因子。LIF的胺基酸序列為公開可用的(Ref Seq NM_001257135)。在一些實施方案中，LIF可以是人、小鼠(Ref Seq NM_001039537.2)或食蟹猴LIF (XM_015457518.1)。如本文別處所描述，LIF可以是重組的和/或醣基化或非醣基化的。
如本文所使用的術語「抗體」可包括完整抗體及其任何抗原結合片段(即「抗原結合部分」)或單鏈。在一個實施方案中，「抗體」指包含藉由雙硫鍵互連的至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈的醣蛋白或其抗原結合部分。每一重鏈包含重鏈變異區(在本文中縮寫為VH )及重鏈恆定區。在某些天然存在的IgG、IgD及IgA抗體中，重鏈恆定區包含三個結構域，CH 1、CH 2及CH 3。在某些天然存在的抗體中，每一輕鏈包含輕鏈變異區(在本文中縮寫為VL )及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個結構域CL 。可將VH 及VL 區進一步細分成高度變異區(稱為互補決定區(CDR))及更保留的區域(稱為框架區(FR))，二者間雜排列。在本文中，VH 區的CDR縮寫為HCDR，即VH 區的三個CDR可以縮寫為HCDR1、HCDR2、HCDR3；VL 區的CDR縮寫為LCDR，即VL 區的三個CDR可以縮寫為LCDR1、LCDR2、LCDR3。每一VH 及VL 由三個CDR及四個FR構成，其自胺基末端至羧基末端按下列順序佈置：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈的變異區含有與抗原相互作用的結合結構域。
抗體的重鏈可或可不含有末端離胺酸(K)或末端甘胺酸及離胺酸(GK)。因此，本文所提供的任何重鏈序列及重鏈恆定區序列可以以GK或G結尾，或缺少K或GK，無論該序列的最後一個胺基酸為何。這是因為末端的離胺酸，有時是甘胺酸與離胺酸，在抗體表現期間會被切去。
抗體通常以高親和力專一性結合至其同源抗原，高親和力由10-7 M至10-11 M或更小的解離常數(KD )所反映。通常認為大於約10-6 M的任何KD 指示非專一性結合。如本文所使用的，「專一性結合」至抗原的抗體指以高親和力結合至抗原且實質上相同的抗原、但不以高親和力結合至不相關抗原的抗體，高親和力意指具有10-7 M或更小、較佳為10-8 M或更小、甚至更佳為5×10-9 M或更小、且最佳為介於10-8 M與10-10 M之間或更小的KD 。若抗原展現與給定抗原的高度序列同一性，例如若其展現與給定抗原的序列至少80%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%或更大的序列同一性，則該抗原與給定抗原「實質上相同」。
免疫球蛋白可來自普遍已知同型中的任一者，包括(但不限於)IgA、分泌性IgA、IgG及IgM。IgG同型在某些物種中分成多個子類：在人中分成IgG1、IgG2、IgG3及IgG4，在小鼠中分成IgG1、IgG2a、IgG2b及IgG3。在某些實施方案中，本文所述抗LIF抗體具有人IgG1或小鼠IgG1子型。免疫球蛋白(例如人IgG1)以若干異型存在，其彼此相差至多幾個胺基酸。舉例而言，「抗體」可包括天然存在的及非天然存在的抗體；單株及多株抗體；嵌合及人源化抗體；人及非人抗體；全合成抗體；及單鏈抗體。
如本文所使用，術語抗體的「抗原結合部分」指抗體的保留專一性結合至抗原的能力的一個或多個片段。已顯示，抗體的抗原結合功能可由全長抗體的片段來實施。抗體(例如本文所述的抗LIF抗體)的「抗原結合部分」這一術語所涵蓋的結合片段的實例包括(i) Fab片段，其是由VL 、VH 、CL 及CH 1結構域所組成的單價片段；(ii) F(ab')2 片段，其是包含藉由雙硫鍵在鉸鏈區處連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii) Fd片段，其由VH 及CH 1結構域組成；(iv) Fv片段，其由抗體的一條單臂的VL 及VH 結構域組成，(v) dAb片段(Ward等人(1989) Nature 341: 544-546)，其由VH 結構域組成；及(vi)分離的互補決定區(CDR)，或(vii)兩個或更多個分離的CDR的組合，這些CDR可視情況藉由合成接頭連結。另外，儘管Fv片段的兩個結構域VL 及VH 由不同的基因編碼，但其可利用重組方法藉由合成接頭來連結這些結構域，使它們能夠被製備成為單一蛋白鏈，其中VL 及VH 區配對形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv))；參見例如Bird等人(1988) Science 242: 423-426；及Huston等人(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85: 5879-5883)。這些單鏈抗體亦欲涵蓋於術語抗體的「抗原結合部分」內。這些及其他潛在建構體闡述於Chan及Carter (2010) Nat. Rev. Immunol. 10: 301。這些抗體片段是使用本領域技術人員已知的習用技術來獲得，並且從這些片段中篩選可以按照與完整抗體相同的方式使用者。抗原結合部分可通過重組DNA技術或通過酶或化學溶解完整免疫球蛋白來產生。
術語「保留修飾形式的胺基酸序列」指這樣的胺基酸修飾，它不顯著影響或改變包含該胺基酸序列的抗體的結合特性，該修飾包括胺基酸置換、增加和缺失。修飾可通過例如定點誘變和PCR介導的誘變等標準技術引入本發明的抗體中。保留胺基酸置換是其中的胺基酸殘基被具有相似側鏈的胺基酸殘基替換的置換。在本領域中已經確定具有相似側鏈的胺基酸殘基家族。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈的胺基酸(如天冬胺酸、麩胺酸)、具有不帶電的極性側鏈的胺基酸(如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、具有非極性側鏈的胺基酸(如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、具有β-分枝側鏈的胺基酸(如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)、和具有芳香側鏈的胺基酸(如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，本發明的抗體的CDR區中的一個或多個胺基酸殘基可以被來自相同側鏈家族的其他胺基酸殘基替代，並且使可用此處說明的功能測定方法對經改變的抗體的保留功能進行測試。較佳的是，保留修飾在數目上不超過1個或2個。
修飾本文所描述的胺基酸序列是本發明希望的，特別是那些人重鏈恆定區以改編序列到所希望的異型，如在亞洲人群中發現的異型。
例如，抗體的一個或多個CDR或CDR組可以被嫁接到框架內(如人框架)以提供抗體分子。框架可以是人生殖系的基因序列，或非生殖系的。這樣框架可以是生殖的，其中框架內的一個或多個殘基可以被交換以匹配最相似人生殖系框架內的相當位置的殘基。這樣，本發明的結合成員可以是分離的具有在人生殖系框架內包含HCDR組的VH 結構域，例如，人生殖系IgG VH 框架。結合成員還可以帶有包含LCDR組的VL 結構域，如在人生殖系IgG VL 框架內。
VH 和/或VL 支架殘基可以如所討論的被修飾，本文舉例，如使用定點誘變。本發明的VH 或VL 結構域，或結合成員包括這樣的VL 結構域。
可以在一個或多個框架區和/或一個或多個CDR內進行變化，所述變化通常不導致功能的喪失，所以包含這種變化胺基酸序列的結合成員應保持結合和/或中和LIF的能力。它可以保持與沒有進行變化的結合成員具有相同數量結合和/或中和能力，如按本文所述的分析法進行測量。包含這樣變化的胺基酸序列的結合成員可以具有改善的結合和/或中和LIF的能力。
變化可以包括有非天然存在的或非標準胺基酸替換一個或多個胺基酸殘基，將一個或多個胺基酸殘基修飾到非天然存在的或非標準的形式內，或將一個或多個非天然存在的或非標準的胺基酸插入該序列。本發明序列中變化的位置和數量的例子在本文別處進行描述。天然存在的胺基酸包括通過其標準單字母代碼被確定為G、A、V、L、I、M、P、F、W、S、T、N、Q、Y、C、K、R、H、D、E的20「標準」L-胺基酸。非標準胺基酸包括可以被合併入多肽骨架或來自現有胺基酸殘基修飾而成的任意的其他殘基。非標準胺基酸可以是天然存在或非天然存在。幾個天然存在非標準胺基酸已為本領域所知，4-羥基脯胺酸、5-羥基離胺酸、3-甲基組胺酸、N-乙基絲胺酸等(Voet & Voet, 1995, Biochemistry, 2nd Edition, (Wiley))。在其N-α位進行衍生的那些胺基酸殘基將僅被定位在胺基酸序列的N-末端。通常本發明中的胺基酸為L-胺基酸，但可以是D-胺基酸。因此變化可以包括用L-胺基酸進行修飾或D-胺基酸替換L-胺基酸。胺基酸的甲醯化、乙醯化和/或磷酸化形式是已知的，本發明胺基酸可以進行這樣的修飾。
本發明結合成員和抗體結構域中的胺基酸序列可以包含以上所描述的非天然或非標準的胺基酸。非標準胺基酸(如D-胺基酸)可以在合成過程中被併入胺基酸序列，或通過在胺基酸合成之後進行「原始」標準胺基酸的修飾或替換。
使用非標準和/或非天然存在的胺基酸提高結構和功能的多樣性，並能提高潛能以實現本發明結合成員中所希望的LIF結合和中和性能。另外，與標準L-胺基酸相比，D-胺基酸及類似物已顯示具有更好的藥物動力學特性，原因是在向動物如人施用之後，具有L-胺基酸的多肽的體內降解。
本發明帶有CDR-衍生序列的新的VH 或VL 區域的生成可以採用一種或多種選自VH 和/或VL 基因的隨機誘變以生成全部變異區內的突變體。這樣的技術描述在Gram等人(Gram等人，1992，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.，89: 3576-3580)，其使用了易出錯PCR。在一些實施方案中，一種或多種胺基酸替代在全部變異區或CDR組內進行。
可以使用的另一種方法為VH 或VL 基因的CDR區的導向誘變。這樣的方法公佈在Barbas等人(Barbas等人，1994，Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A.，91: 3809-3813)和Schier等人(Schier等人，1996，J. Mol. Biol.，263: 551-567)。
以上所述描述的所有方法為本領域已知，本領域技術人員將能夠使用這樣的方法並採用本領域的常規方法以提供本發明的結合成員。
根據本發明可以使用本文所公開的特定序列的任意VH 和VL 結構域的變異結構域胺基酸序列變異體，如所討論的。特定的變異體可以包括一種或多種胺基酸序列的變化(胺基酸殘基的增加、刪除、取代和/或插入)。在某些實施方式中，變異體具有少於約17、少於9或少於5的這樣的變化。
如以上所示，實質上如本文所述的CDR胺基酸序列可以被攜帶作為人抗體變異結構區或其大部分中的CDR。實質上如本文所述的HCDR3序列代表本發明的實施方式，這些中的每一個可以被攜帶作為人抗體變異區或其大部分中的CDR，任選地聯合本發明的HCDR1、HCDR2、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
如本文所使用，術語「單株抗體」指展示針對特定抗原決定位的單一結合專一性及親和力的某一抗體，或者是抗體組合物，其中抗體組合物中的所有的抗體皆展示針對特定抗原決定位的單一結合專一性及親和力。通常，這些單株抗體將源自單一抗體編碼細胞或核酸，且將在不有意引入任何序列變化的條件下增殖。因此，術語「人單株抗體」指具有源自人生殖系免疫球蛋白序列的變異區、及任選的恆定區的單株抗體。在一個實施方案中，人單株抗體是通過例如通過融合來自轉基因或轉染色體非人動物(例如具有包含人重鏈轉基因及輕鏈轉基因的基因組的轉基因小鼠)獲得的B細胞與永生細胞獲得的融合瘤產生的。術語「mAb」指單株抗體。
如本文所使用的，術語「重組人抗體」包括通過重組方式製備、表現、產生或分離的所有人抗體，例如(a)自對人免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體的動物(例如小鼠)或自其製備的融合瘤分離的抗體，(b)自經轉殖以表現該抗體的宿主細胞，例如自轉染瘤分離的抗體，(c)自重組、組合人抗體庫分離的抗體，及(d)通過關於將人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他方式製備、表現、產生或分離的抗體。這些重組人抗體包含利用具體人生殖系免疫球蛋白序列且由生殖系基因編碼、但包括在例如抗體成熟期間發生的後續重排及突變的變異區及恆定區。如本領域已知(例如，參見Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117-1125)，變異區含有由重排以形成專一性針對外源抗原的抗體的不同基因編碼的抗原結合結構域。除重排之外，變異區可進一步經多個單一胺基酸變化(稱為體細胞突變或超突變)修飾以增加抗體對外源抗原的親和力。恆定區將進一步因應抗原而改變(即同型切換)。因此，因應抗原的編碼輕鏈及重鏈免疫球蛋白多肽的經重排及體細胞突變的核酸序列可與原始生殖系序列不相同，但將實質上相同或相似(即具有至少80%同一性)。
「人」抗體(HuMAb)指具有這樣的變異區的抗體：變異區中的框架區及CDR區皆源自人生殖系免疫球蛋白序列。另外，若抗體含有恆定區，則恆定區亦源自人生殖系免疫球蛋白序列。本文所述抗體可包括不由人生殖系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(例如，通過體外隨機誘變或定點誘變或通過體內體細胞突變引入的突變)。然而，如本文所使用的，術語「人抗體」並不欲包括源自另一哺乳動物物種(例如小鼠)生殖系的CDR序列已移植至人框架序列上的抗體。「人」抗體與「全人」抗體兩個術語以同義使用。
「人源化」抗體指這樣的抗體，其中，非人抗體的CDR結構域以外的一些、大部分或所有胺基酸被源自人免疫球蛋白的相應胺基酸替代。在抗體的人源化形式的一個實施方案中，CDR結構域以外的一些、大部分或所有胺基酸已被來自人免疫球蛋白的胺基酸替代，而一個或多個CDR區內的一些、大部分或所有胺基酸未發生變化。可容許存在胺基酸的小添加、缺失、插入、取代或修飾，只要其不消除抗體結合具體抗原的能力即可。「人源化」抗體保留類似於原始抗體的抗原專一性。
「嵌合抗體」指變異區源自一個物種且恆定區源自另一物種的抗體，例如變異區源自小鼠抗體且恆定區源自人抗體的抗體。
本發明功能性抗體片段包括通過諸如通過PEG化，或併入到脂質體中的化學修飾提高半衰期的任意的功能性片段。
本發明抗體包括雙專一性抗體。雙專一性或雙功能性抗體形成第二代單株抗體，其中兩個不同變異區被結合到相同的分子中(Holliger and Bohlen, 1999, Cancer and metastasis rev., 18: 411-419)。從它們的招募新效應物功能或靶向一些分子到腫瘤細胞表面上的能力它們在診斷領域和治療領域的應用已經被闡述。其中使用雙專一性抗體時，這些可以是常規的雙專一性抗體，其可以是以各種方式進行製造(Holliger P. & Winter G., Current Opinion Biotechnol. 4, 446-449: 1993)，如化學製備、或來自雜交的融合瘤，或可以是以上所提到的任意的雙專一性抗體片段。這些抗體的獲得可以通過化學方法或體細胞的方法，但同樣地並較佳為基因工程方法，所述方法允許實施異源二聚化，這樣有利於所得抗體的純化程序。雙專一性抗體的例子包括那些BiTETM方法，該方法中帶有不同的專一性兩個抗體的結合結構域可以被使用並直接地通過短的柔性肽連接。這在短的單個多肽鏈上結合兩個抗體。雙鏈抗體和scFc在沒有Fc區域下被建構，僅使用變異區，潛在地降低了抗獨特型反應的效果。
雙專一性抗體可以被建構為全IgG，雙專一性F(ab’)2 、F(ab’)PEG、雙鏈抗體或其他的雙專一性scFv。進一步可以使用本領域已知常規方法兩個雙專一性抗體進行連接以形成四價抗體。
相對於雙專一性全抗體，雙專一性雙鏈抗體也是特別有用的，因為它們能夠輕易地在大腸桿菌中被建構和表現。使用噬菌體展示庫(WO1994/13804)，適當結合專一性的雙鏈抗體(和許多其他的多肽，如抗體片段)能夠輕易地被選擇。如果雙鏈抗體的一個臂被保持恆定，然後製備庫，其中其他的臂被變異，選擇適當專一性的抗體。雙專一性全抗體可以通過不同的工程方法進行製備，所述方法描述在Ridgeway等人(Ridgeway, J.B.B.等人，Protein Eng. 9，616-621，1996）或WO1996/27011，WO1998/50431和WO2006/028936。
「經修飾的重鏈恆定區」指包含恆定結構域CH 1、鉸鏈、CH 2及CH 3的重鏈恆定區，其中一個或多個恆定結構域來自不同同型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。在某些實施方案中，經修飾的恆定區包括人IgG2 CH 1結構域及融合至人IgG1 CH 2結構域的人IgG2鉸鏈及人IgG1 CH 3結構域。在某些實施方案中，這些經修飾恆定區亦包括相對於野生型胺基酸序列，一個或多個結構域內的胺基酸修飾。
如本文所使用的，「同型」指由重鏈恆定區基因編碼的抗體類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD及IgE抗體)。
「異型」指特定同型群內的天然存在的變異體，這些變異體相差幾個胺基酸(例如，參見Jefferis等人(2009) mAbs 1: 1)。本文所述抗體可具有任何異型。
除非本文在別處另有說明，否則所有胺基酸編號均根據Kabat系統的EU索引(Kabat, E.A.等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S. Department of Health and Human Services，NIH公佈第91-3242號)。
「識別抗原的抗體」及「專一性針對抗原的抗體」在本文中可與術語「專一性結合至抗原的抗體」互換使用。
如本文所使用的，術語「分離的抗體」欲指這樣的抗體，其實質游離於其他具有不同抗原專一性的抗體(例如，專一性結合至LIF的分離的抗體實質游離於專一性結合除LIF外的抗原的抗體)。然而，專一性結合至LIF的抗原決定位的分離的抗體可具有針對不同物種的其他LIF蛋白的交叉反應性。
「效應物功能」指抗體Fc區與Fc受體或配體的相互作用，或源自其的生物化學事件。例示性「效應物功能」包括C1q結合、補體依賴性細胞毒殺(CDC)、Fc受體結合、FcγR介導的效應物功能(例如ADCC及抗體依賴性細胞介導的吞噬作用(ADCP))及調降細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)。這些效應物功能通常需要組合Fc區與結合結構域(例如抗體可變結構域)。
「Fc受體」或「FcR」是結合至免疫球蛋白的Fc區的受體。結合至IgG抗體的FcR包括FcγR家族的受體，包括這些受體的等位基因變異體及選擇性剪接形式。FcγR家族由三種活化性受體(在小鼠中為FcγRⅠ、FcγRⅢ及FcγRⅣ；在人類中為FcγRⅠA、FcγRⅡA及FcγRⅢA)及一種抑制性受體(FcγRⅡB)組成。人FcγR的多種特性概述於表A中。大部分固有效應細胞類型共表現一種或多種活化FcγR及抑制性FcγRⅡB，而自然殺手(NK)細胞選擇性表現一種活化Fc受體(小鼠中的FcγRⅢ及人中的FcγRⅢA)，但不表現小鼠及人中的抑制性FcγRⅡB。人IgG1結合至大部分人Fc受體且認為其所結合的活化Fc受體類型等效於鼠類IgG2a。
表A.人FcγR的特性
Fcγ 等位基因變異體 對人IgG的親和力 同型偏好性 細胞分佈
FcγRⅠ 未闡述 高(KD 約10 nM) IgG1=3＞4＞＞2 單核細胞、巨噬細胞、活化嗜中性球、樹突細胞
FcγRⅡA H131 低至中等 IgG1＞3＞2＞4 嗜中性球、單核細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、樹突細胞、血小板
R131 低 IgG1＞3＞4＞2
FcγRⅢA V158 中等 IgG1=3＞＞4＞2 NK細胞、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞、嗜酸性球、樹突細胞
F158 低 IgG1=3＞＞4＞2
FcγRⅡB I232 低 IgG1=3=4＞2 B細胞、單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞、肥大細胞
「鉸鏈」、「鉸鏈結構域」或「鉸鏈區」或「抗體鉸鏈區」指重鏈恆定區的連結CH 1結構域與CH 2結構域且包括鉸鏈之上部分、中間部分及下部分的結構域(Roux等人，J. Immunol. 1998 161: 4083)。鉸鏈提供抗體的結合區域與效應物區域之間的不同柔性且亦提供兩個重鏈恆定區之間的分子間雙硫鍵連接的位點。
術語「鉸鏈」包括野生型鉸鏈以及其變異體(例如非天然存在的鉸鏈或經修飾鉸鏈)。例如，術語「IgG2鉸鏈」包括野生型IgG2鉸鏈及具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1個突變(例如取代、缺失或添加)的變異體。
術語「CH 1結構域」指將可變結構域與重鏈恆定結構域中的鉸鏈連接的重鏈恆定區。術語「CH 1結構域」包括野生型CH 1結構域以及其變異體(例如非天然存在的CH 1結構域或經修飾的CH 1結構域)。例如，術語「CH 1結構域」包括野生型CH 1結構域及其具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1突變(例如取代、缺失或添加)的變異體。例示性CH 1結構域包括具有改變抗體的生物活性(例如ADCC、CDC或半衰期)的突變的CH 1結構域。
術語「CH 2結構域」指連接重鏈恆定結構域中的鉸鏈與CH 3結構域的重鏈恆定區。術語「CH 2結構域」包括野生型CH 2結構域以及其變異體(例如非天然存在的CH 2結構域或經修飾的CH 2結構域)。例如，術語「CH 2結構域」包括野生型CH 2結構域及其具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1個突變(例如取代、缺失或添加)的變異體。例示性CH 2結構域包括具有改變抗體的生物活性(例如ADCC、CDC或半衰期)的突變的CH 2結構域。
術語「CH 3結構域」指在重鏈恆定結構域中為CH 2結構域的C末端的重鏈恆定區。術語「CH 3結構域」包括野生型CH 3結構域以及其變異體(例如非天然存在的CH 3結構域或經修飾的CH 3結構域)。例如，術語「CH 3結構域」包括野生型CH 3結構域及其具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1個突變(例如取代、缺失或添加)的變異體。例示性CH 3結構域包括具有改變抗體的生物活性(例如ADCC、CDC或半衰期)的突變的CH 3結構域。
「CL 結構域」指輕鏈的恆定結構域。術語「CL 結構域」包括野生型CL 結構域及其變異體。
「天然序列Fc區」或「天然序列Fc」包含與自然界中發現的Fc區的胺基酸序列相同的胺基酸序列。天然序列人Fc區包括天然序列人IgG1 Fc區、天然序列人IgG2 Fc區、天然序列人IgG3 Fc區、及天然序列人IgG4 Fc區以及其天然變異體。天然序列Fc包括Fc的多個異型(例如，參見Jefferis等人(2009) mAbs 1: 1)。
術語「抗原決定位」或「抗原決定簇」指抗原(例如LIF)上免疫球蛋白或抗體專一性結合的位點。蛋白質抗原內的抗原決定位可自連續胺基酸(通常為線性抗原決定位)或通過蛋白質的三級折疊並置的非連續胺基酸二者形成(通常為構象抗原決定位)。在暴露於變性溶劑時，通常但不始終保留自連續胺基酸形成的抗原決定位，而在用變性溶劑處理時通常丟失由三級折疊形成的抗原決定位。在獨特空間構象中，抗原決定位通常包括至少3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或15個胺基酸。確定由給定抗體結合抗原決定位的方法(即抗原決定位定位)為本領域所熟知，且包括例如免疫點墨及免疫沉澱分析，其中測試重疊或連續肽(例如來自LIF)與給定抗體(例如抗LIF抗體)的反應性。確定抗原決定位的空間構象的方法包括本領域中的技術及那些本文所述者，例如x射線結晶學、二維核磁共振及HDX-MS(例如，參見Epitope Mapping Protocolsin Methods in Molecular Biology，第66卷，G.E. Morris編輯(1996))。
「與另一抗體競爭與靶結合」的抗體指抑制(部分抑制或完全抑制)另一抗體與靶的結合的抗體。可使用已知競爭實驗(例如實施例中所述的那些)來確定兩種抗體是否彼此競爭結合至靶，即一種抗體是否抑制另一抗體與靶的結合以及抑制程度。在某些實施方案中，抗體與另一抗體競爭與靶的結合，且抑制至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的該結合。抑制或競爭的程度可依賴於哪種抗體為「阻斷抗體」(即先與靶一起溫育的冷性抗體)而不同。競爭測定可如例如以下文獻中所述來實施：E.d. Harlow及David Lane，Cold Spring Harb. Protoc.，2006，doi: 10.1101/pdb.prot4277或「UsingAntibodies」，E.d. Harlow及David Lane，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，U.S.A. 1999的第11章。競爭性抗體結合至相同抗原決定位、重疊抗原決定位或毗鄰抗原決定位(例如，由位阻作用所證實的)。
其他競爭性結合測定包括：固相直接或間接放射性免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心競爭測定(參見Stahli等人，Methods in Enzymology 9: 242 (1983))、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(參見Kirkland等人，J. Immunol. 137: 3614 (1986))、固相直接標記測定、固相直接標記夾心分析(參見Harlow及Lane，Antibodies: ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Press (1988))、使用I-125標記的固相直接標記RIA(參見Morel等人，Mol. Immunol. 25(1): 7(1988))、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，Virology 176: 546(1990))、及直接標記RIA。(Moldenhauer等人，Scand. J. Immunol. 32: 77(1990))。
如本文所使用的，術語「Kassoc」或「Ka」欲指具體抗體-抗原相互作用的結合速率常數(association rate constant)，而如本文所使用，術語「Kdis」或「Kd」欲指具體抗體-抗原相互作用的解離速率常數(dissociation rate constant)。如本文所使用，術語「KD 」欲指平衡解離常數，其是自Kd對Ka的比率(即Kd/Ka)獲得且以莫耳濃度(M)表示。可使用本領域充分確立的方法測定抗體的KD 值。測定抗體的KD 的較佳方法是通過使用表面電漿子共振，較佳為使用生物感測器系統，例如Biacore®表面電漿子共振系統或流式細胞術或Scatchard分析。
術語「EC50 」在使用抗體或其抗原結合片段的體外或體內分析背景下指誘導50%最大反應，即介於最大反應與基線之間之中途的反應的抗體或其抗原結合部分的濃度。
術語「IC50 」，在功能性分析中，IC50 為能將生物反應降低到其最大值50%的結合成員的濃度，以nM為單位。在配體-結合研究中，IC50 為降低受體結合到最大專一性結合水平的50%的濃度。IC50 可以通過繪製最大生物活性反應的百分數作為結合成員濃度的log的函數，並使用軟體程式如Origin(OriginLab軟體公司，Northampton，Massachusetts，USA)，以將S函數擬合數據以生成IC50 值。使用一種或多種本領域技術人員已知的和/或本文所描述或參考的分析法進行測定或測量效價。結合成員的中和效價可用表述為幾何平均數(Geomean)。
如本文所使用的術語「天然存在」在應用於目標時指可在自然界中發現目標的事實。例如，存在於可自自然界來源分離且尚未在實驗室中經人有意修飾的生物體(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
「多肽」指包含至少兩個連續連接的胺基酸殘基的鏈，且鏈的長度無上限。蛋白質中之一或多個胺基酸殘基可含有修飾，例如(但不限於)醣基化、磷酸化或雙硫鍵。「蛋白質」可包含一個或多個多肽。
如本文所使用，術語「核酸分子」意欲包括DNA分子及RNA分子。核酸分子可為單鏈或雙鏈，且可為cDNA。亦提供本文所述SEQ ID NOs中所述序列的「保留序列修飾」，即不消除由核苷酸序列編碼或含有胺基酸序列的抗體與抗原的結合的核苷酸及胺基酸序列修飾。這些保留序列修飾包括保留核苷酸及胺基酸取代以及核苷酸及胺基酸添加及缺失。例如，可通過本領域已知的標準技術(例如定點誘變及PCR介導的誘變)將修飾引入本文所述的SEQ ID NOs中。保留序列修飾包括保留胺基酸取代，其中胺基酸殘基被替換為具有類似側鏈的胺基酸殘基。具有類似側鏈的胺基酸殘基的家族是本領域中已有定義的。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈的胺基酸(例如天冬胺酸、麩胺酸)、具有不帶電極性側鏈的胺基酸(例如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、具有非極性側鏈的胺基酸(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、具有β-分枝側鏈的胺基酸(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及具有芳香族側鏈的胺基酸(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。
對於核酸而言，術語「實質同源性」表示，兩個核酸或其指定序列在最佳比對及比較(其中適當插入或缺失核苷酸)時有至少約80%的核苷酸、通常至少約90%至95%、且更佳至少約98%至99.5%的核苷酸相同。作為另一選擇，當區段在選擇性雜交條件下與鏈的互補物雜交，則存在實質同源性。
對於多肽而言，術語「實質同源性」表示，兩個多肽或其指定序列在最佳比對及比較(其中適當插入或缺失核苷酸)時有至少約80%的胺基酸、通常至少約90%至95%、且更佳至少約98%至99.5%的胺基酸相同。
兩條序列之間的同一性%在最佳比對序列時隨這些序列所共享的相同位置數而變化(即同源性%=相同位置數/總位置數×100)，其中最佳比對是考慮到為達成兩條序列的最佳比對而需要引入的空位數及每一空位的長度來確定。兩條序列之間的序列比較及同一性百分數測定可使用數學演算法來完成，如下文非限制性實施例中所述。
兩條核苷酸序列之間的同一性百分數可使用GCG套裝軟體(可在http://www.gcg.com上獲得)中的GAP程式、使用NWSgapdna.CMP矩陣及空位權重40、50、60、70或80以及長度權重1、2、3、4、5或6來測定。兩條核苷酸或胺基酸序列之間之同一性百分數亦可使用已納入比對程式(ALIGN program，2.0版)中的E. Meyers及W. Miller (CABIOS, 4: 11-17 (1989))演算法、使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4來測定。另外，兩條胺基酸序列之間的同一性百分數可使用已納入GCG套裝軟體(可在http://www.gcg.com上獲得)中的空位程式中的Needleman及Wunsch (J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970))演算法、使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣及空位權重16、14、12、10、8、6或4以及長度權重1、2、3、4、5或6來測定。
本文所述的核酸及蛋白質序列可進一步用作「查詢序列」來實施針對公共數據庫的檢索，以例如鑑定相關序列。這些檢索可使用Altschul等人(1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10的NBLAST及XBLAST程式(2.0版)來實施。BLAST核苷酸檢索可使用NBLAST程式、評分=100、字長=12來實施，以獲得與本文所述核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質檢索可使用XBLAST程式、評分=50、字長=3來實施，以獲得與本文所述蛋白質分子同源的胺基酸序列。為獲得用於比較目的的空位比對，可如Altschul等人(1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402中所述使用空位BLAST。在使用BLAST及空位BLAST程式時，可使用各程式(例如XBLAST及NBLAST)的預設參數。參見www.ncbi.nlm.nih.gov。
這些核酸可存在於完整細胞中，存在於細胞溶解產物中，或以部分純化或實質上純淨的形式存在。當通過標準技術實施純化以清除其他細胞組分或其他污染物例如其他細胞核酸(例如染色體的其他部分)或蛋白質時，核酸是「分離的」或「實質上純淨」的，這些標準技術包括鹼/SDS處理、CsCl顯帶、管柱層析、瓊脂糖凝膠電泳及本領域熟知的其他方法。參見F.Ausubel等人編輯Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishingand Wiley Interscience，New York (1987)。
核酸(例如cDNA)可根據標準技術進行突變以提供基因序列。對於編碼序列，這些突變可視需要影響胺基酸序列。具體而言，涵蓋與天然V序列、D序列、J序列、恆定序列、切換序列及本文所述的其他這些序列實質上同源或源自其的DNA序列。
如本文所使用，術語「載體」欲指能夠運輸與其連接的另一核酸的核酸分子。一類載體為「質體」，其指其他DNA區段可連接至其中的環形雙鏈DNA環。另一類載體為病毒載體，其中其他DNA區段可連接至病毒基因組中。某些載體能夠在已引入其的宿主細胞中進行自主複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中時整合至該宿主細胞的基因組中，並藉此隨宿主基因組一同複製。另外，某些載體能夠引導與其可操作連接的基因的表現。這些載體在本文中稱為「重組表現載體」(或簡稱為「表現載體」)。一般而言，用於重組DNA技術中的表現載體通常呈質體形式。在本說明書中，「質體」與「載體」可互換使用，這是因為質體是載體的最常用形式。然而，本發明亦包括提供等效功能的其他形式的表現載體，例如病毒載體(例如複製缺陷型反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
如本文所使用，術語「重組宿主細胞」(或簡稱為「宿主細胞」)欲指包含並非天然存在於細胞中的核酸的細胞，且可為已引入重組表現載體中的細胞。應理解，這些術語不僅欲指具體個體細胞，亦欲指此細胞的子代。由於突變或環境影響可使後續各代發生某些改變，故該子代實際上可能與親代細胞不同，但仍包括於如本文所使用的術語「宿主細胞」的範疇內。
如本文所使用的，術語「抗原」指任何天然或合成免疫原性物質，例如蛋白質、肽或半抗原。抗原可為LIF或其片段。
如本文所使用，術語「抑制」或「阻斷」(例如，提及LIF結合或活性的抑制/阻斷)可互換使用，且涵蓋部分及完全抑制/阻斷二者。
如本文所使用，「癌症」指以身體中的不受控異常細胞生長為特徵的一大類疾病。由於失調的細胞分裂可形成惡性的腫瘤或細胞，它們侵襲鄰近組織且可經由淋巴系統或血流轉移至身體遠端。
如本文所使用，術語「治療」或「處理」指對受試者實施任何類型的干預或過程，或向受試者施用活性劑，以逆轉、緩和、改善、抑制或減緩或預防與疾病相關的症狀、併發症、病況或生物化學標記的進展、發展、嚴重程度或復發。預防指對未患疾病的受試者施用來預防疾病發生，或者若疾病發生，最小化其影響。
術語「有效劑量(effective dose或effective dosage)」定義為足以達成或至少部分達成期望效應的量。藥物或治療劑的「治療有效量」或「治療有效劑量」是該藥物在單獨使用或與另一治療劑組合使用時可促進疾病消退的任何量，該疾病消退由疾病症狀的嚴重程度的減輕、無疾病症狀期的頻率及持續時間的增加、或因患病所致的損害或失能的防止所證實。藥物的「預防有效量」或「預防有效劑量」是該藥物在單獨施用或與另一治療劑組合施用於具有罹患疾病或遭受疾病復發的風險的受試者時，抑制該疾病的發展或復發的量。治療劑或預防劑促進疾病消退或抑制疾病的發展或復發的能力可使用本領域技術人員已知的多種方法來評估，例如在臨床試驗期間在人受試者中評估，在可預測在人中的功效的動物模型系統中評估，或通過在體外測定中測定藥劑的活性來評估。
術語「患者」及「受試者」指接受預防或治療性治療的任何人或非人動物。例如，可使用本文所述的方法及組合物來治療患有癌症的受試者。術語「非人動物」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，例如非人靈長類動物、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。
[實施例1 抗人LIF單株抗體的篩選與鑑定] 1.1 融合瘤法製備抗人LIF單株抗體38E10E1C11 按單株抗體製備方法(Kohler和Milstein (1975) Nature 256: 495)，用重組人LIF蛋白(購自於Sino Biological)免疫BABL/c小鼠，初次免疫使用25 μg重組人LIF蛋白與等體積的弗氏完全佐劑，背部皮下多點注射，四週後第二次免疫，使用弗氏不完全佐劑加25 μg重組人LIF蛋白，20天後通過間接ELISA方法檢測小鼠血清抗體效價。間隔2-3週後，經腹腔注射50 μg重組人LIF蛋白加強免疫，3天後處死動物取脾細胞進行融合。
取對數生長期的小鼠骨髓瘤細胞SP2/0計數，同時製備免疫鼠的脾細胞懸液，按常規方法用50% PEG使脾細胞與SP2/0細胞進行融合。融合後的細胞加入滋養層細胞(六週齡BABL/c鼠腹腔巨噬細胞)的96孔盤內，已含1% HAT、20%胎牛血清的DMEM篩選培養。當克隆長至1/3板底時，收集培養上清液。以重組人LIF蛋白包被ELISA板，間接ELISA法檢測培養上清液中抗LIF抗體，篩選分泌抗人LIF抗體的克隆，進一步利用極限稀釋法進行單株化獲得一株可穩定分泌高親和力的抗人LIF單株抗體的細胞株，將其分泌的抗體標記為38E10E1C11，經測定，編碼38E10E1C11抗體輕鏈及重鏈的全長基因序列分別為SEQ ID NO: 42和SEQ ID NO: 44所示，對應的38E10E1C11抗體的輕鏈及重鏈的全長胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 41和SEQ ID NO: 43所示；編碼38E10E1C11抗體輕鏈及重鏈的變異區基因序列分別如SEQ ID NO: 76和SEQ ID NO: 77所示，對應的38E10E1C11抗體的輕鏈及重鏈的變異區的胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 74和SEQ ID NO: 75所示；按Kabat編碼規則獲知38E10E1C11抗體的LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO: 3所示，HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO: 4所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO: 45所示，HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO: 6所示，對該抗體進行免疫球蛋白類型及亞型鑑定(結果為IgG1亞類，κ型輕鏈)。
在獲得能夠穩定分泌抗體的融合瘤細胞株之後，使用thermo fisher的CD hybridoma無血清培養基馴化細胞，讓其適應無血清懸浮震盪培養，之後利用無血清培養基表現純化抗體。
1.2 噬菌體展示技術製備抗人LIF單株抗體P36-033 用重組人LIF蛋白免疫BABL/c小鼠，初次免疫使用25 μg純重組人LIF蛋白與等體積的弗氏完全佐劑，背部皮下多點注射，四週後第二次免疫，使用弗氏不完全佐劑加25 μg重組人LIF蛋白，20天後通過間接ELISA方法檢測小鼠血清抗體效價。間隔2-3週後，經腹腔注射50 μg重組人LIF蛋白加強免疫，3天後處死動物取脾細胞。採用invitrogen公司的TRIZOL Reagent提取脾細胞總RNA，invitrogen cDNA反轉錄試劑盒進行反轉錄，合成cDNA，利用小鼠輕重鏈變異區簡併引子擴增抗體基因，建構到噬菌體展示載體中，建構噬菌體抗體庫，利用thermo的全自動磁珠分選系統進行噬菌體抗體庫淘篩，利用噬菌體ELISA挑選能夠結合重組人LIF蛋白的大腸桿菌克隆，測定抗體基因序列。進一步通過ELISA和細胞活性鑑定獲得了一株抗體標記為P36-033，P36-033輕鏈及重鏈的全長基因序列分別如SEQ ID NO: 55和SEQ ID NO: 57所示，對應的P36-033抗體的輕鏈及重鏈的全長胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO: 56所示；編碼P36-033抗體輕鏈及重鏈的變異區基因序列分別如SEQ ID NO: 72和SEQ ID NO: 73所示，對應的P36-033抗體的輕鏈及重鏈的變異區的胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 82和SEQ ID NO: 83所示；按Kabat編碼規則獲知P36-033抗體的LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO: 66所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO: 67所示，LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO: 68所示，HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO: 69所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO: 70所示，HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO: 71所示。
1.3 陽性對照抗體5D8的表現純化 根據專利文獻WO 2018/115960 A1的報導，5D8抗體為一株阻斷LIF蛋白與其受體GP130結合的抗體，參考專利文獻中的序列本發明合成了多條基因序列，進行不同的輕重鏈組合配對，建構為人IgG1形式的全長抗體，最終發現其中一組配對具有最好的LIF蛋白結合活性，同時能夠阻斷重組人LIF蛋白與人GP130蛋白的結合，經過細胞活性驗證能夠阻斷重組人LIF蛋白對HCT116細胞的STAT3的磷酸化，因此本發明將其命名為5D8，用於後續實驗中作為陽性對照抗體，經測定，編碼5D8抗體重鏈及輕鏈的全長基因序列分別如SEQ ID NO: 63和SEQ ID NO: 65所示，對應的5D8抗體的重鏈及輕鏈的全長胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 62和SEQ ID NO: 64所示；編碼5D8抗體重鏈及輕鏈的變異區基因序列分別如SEQ ID NO: 80和SEQ ID NO: 81所示，對應的5D8抗體的重鏈及輕鏈的變異區的胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 78和SEQ ID NO: 79所示。
[實施例2 抗人LIF抗體與人LIF蛋白的結合試驗] 將重組人LIF蛋白稀釋為1 μg/ml，包被微量多孔盤，每孔加入100 μL蛋白，4℃冰箱孵育過夜，第二天取出微量多孔盤，棄去液體，PBST洗滌三次，加入含2% BSA的PBS室溫封閉一個小時，PBST洗滌三次，加入不同濃度的抗人LIF抗體38E10E1C11、5D8、P36-033，室溫孵育一個小時，棄去液體，PBST洗滌四次，加入HRP標記的山羊抗小鼠Fab抗體或山羊抗人FC 抗體，室溫孵育1個小時，棄去液體，PBST洗滌四次，加入TMB顯色液，室溫孵育10分鐘，加入2 mol/L濃硫酸終止顯色，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，結果詳見圖1。結果顯示38E10E1C11和P36-033對人LIF蛋白的結合活性要強於5D8。
[實施例3 抗人LIF抗體與鼠LIF蛋白的結合試驗] 將重組小鼠LIF(購自於ACRO Biosystems)蛋白稀釋為1 μg/mL，包被微量多孔盤，每孔加入100 μL蛋白，4℃冰箱孵育過夜，第二天取出微量多孔盤，棄去液體，PBST洗滌三次，加入含2% BSA的PBS室溫封閉一個小時，PBST洗滌三次，加入不同濃度的抗人LIF抗體38E10E1C11、5D8、P36-033，室溫孵育1個小時，棄去液體，PBST洗滌四次，加入HRP標記的山羊抗小鼠Fab抗體或山羊抗人FC 抗體，室溫孵育1個小時，棄去液體，PBST洗滌四次，加入TMB顯色液，室溫孵育10分鐘，加入2 mol/L濃硫酸終止顯色，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，結果詳見圖2。結果顯示38E10E1C11抗體對小鼠LIF蛋白沒有結合活性。P36-033對小鼠LIF蛋白有結合活性，但結合活性要弱於5D8抗體。
[實施例4 抗人LIF抗體與食蟹猴LIF蛋白的結合試驗] 將重組猴LIF蛋白(購自於Sino Biological)稀釋為0.5 μg/mL，包被微量多孔盤，每孔加入100 μL蛋白，4℃冰箱孵育過夜，第二天取出微量多孔盤，棄去液體，PBST洗滌三次，加入含2% BSA的PBS室溫封閉一個小時，PBST洗滌三次，加入不同濃度的抗人LIF抗體38E10E1C11、5D8、P36-033，室溫孵育1個小時，棄去液體，PBST洗滌四次，加入HRP標記的山羊抗小鼠Fab抗體或山羊抗人Fc抗體，室溫孵育1個小時，棄去液體，PBST洗滌四次，加入TMB顯色液，室溫孵育10分鐘，加入2 mol/L濃硫酸終止顯色，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，結果詳見圖3。結果顯示38E10E1C11和P36-033的結合活性好於5D8。
[實施例5 抗人LIF抗體親和力測定] 用KinExA 4000測定純化單株抗體與重組人LIF蛋白親和力，向200 mg PMMA hard beads中加入30 μg 38E10E1C11抗體，補加包被溶液至1.0 mL。緩衝液組成為1×PBS，pH7.4，0.02% NaN3 。確保珠子完全懸浮在溶液中。室溫旋轉珠子2小時。珠子自然沉降或低速短暫離心，去上清液，用含1% BSA的PBS封閉1小時。準備15 mL 300 pM抗原溶液和15 mL 240 pM Ab2 (38E10E1C11)溶液。取0.6 mL 300 pM抗原和0.6 mL 240 pM抗體Ab2 (38E10E1C11)各自放入不同的樣品管中。將兩個管中的樣品充分混勻，合到一管，此時抗原的濃度為150 pM，抗體Ab2 (38E10E1C11)的濃度為120 pM，放在管架中相應的位置。準備16組，每組的樣品孵育時間不同。加入1 μg/ml Streptavidin Protein，DyLight 650溶液，上機檢測，設置孵育時間為24小時。在KinExatm Pro軟體中，用未知配體模型計算平衡離解常數(KD )進行n-曲線分析，結果詳見圖4。結果顯示38E10E1C11單抗與人LIF蛋白結合的親和力為4.52×10-12 M。
[實施例6 P36-033、38E10E1C11 mAb與LIFR競爭結合人LIF蛋白] 將重組人LIF蛋白按照1 μg/mL的濃度包被微量多孔盤，加入0.6125 μg/mL的LIFR(與人FC 融合表現)蛋白50 μL/孔，同時加入不同濃度的LIF抗體38E10E1C11、P36-033和經過CHO細胞重組表現的38E10E1C11R(SEQ ID NOs: 41和43)，50 μL/孔，室溫孵育2小時，PBST洗滌四次後，加入HRP標記的羊抗人FC 二抗，室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入TMB顯色液室溫顯色10分鐘，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，數據採用Origin pro 9軟體進行分析和作圖。結果詳見圖5，結果顯示38E10E1C11 mAb和38E10E1C11R能夠抑制人LIF與人LIFR的結合，而P36-033不能抑制人LIF與人LIFR的結合。
[實施例7 P36-033、38E10E1C11 mAb與GP130競爭結合人LIF蛋白] 將重組人LIF蛋白按照1 μg/mL的濃度包被微量多孔盤，加入20 μg/mL的GP130(與人Fc融合表現)蛋白50 μL/孔，同時加入不同濃度的P36-033抗體或不同濃度的38E10E1C11抗體，50 μL/孔，同時設置只加抗體不加GP130的對照孔，室溫孵育2小時，PBST洗滌四次後，加入HRP標記的羊抗人Fc二抗，室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入TMB顯色液室溫顯色10分鐘，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，數據採用Origin pro 9軟體進行分析和作圖。結果詳見圖6，結果顯示P36-033和38E10E1C11能夠抑制人LIF與人GP130的結合。
[實施例8 38E10E1C11 mAb專一性檢測] 將人LIF、人IL-6、人OSM、人CNTF (均購自於Sino Biological)按照1 μg/mL濃度包被微量多孔盤，加入不同濃度的LIF抗體38E10E1C11、P36-033、5D8室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入HRP標記的羊抗鼠Fab二抗，室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入TMB顯色液室溫顯色10分鐘，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，數據採用Origin pro 9軟體進行分析和作圖。結果詳見圖7，結果顯示38E10E1C11單抗、P36-033單抗僅與人LIF蛋白結合而與人IL-6、OSM、CNTF沒有結合，5D8抗體除結合人LIF蛋白外還與人OSM及人CNTF蛋白結合。
[實施例9 38E10E1C11 mAb能夠用於人LIF蛋白的western blot檢測] 將重組人LIF蛋白稀釋為圖8中所示濃度，或將培養三天的CT26和CT26-hLIF細胞上清液，加入5X SDS-PAGE上樣緩衝液，煮沸10分鐘，然後取10 μL樣品進行SDS-PAGE電泳，然後將電泳條帶轉移到PVDF膜上進行western blot檢測，檢測用的一抗為38E10E1C11抗體，抗體濃度為1 μg/mL，室溫孵育2小時，TBST緩衝液洗滌三次後加入1：3000稀釋的HRP標記的羊抗小鼠二抗，室溫孵育2小時，室溫孵育1小時，TBST緩衝液洗滌三次後，加入增強型化學發光液(Perice)孵育，利用Amersham Imager 600超靈敏多功能成像儀進行檢測和拍照。結果詳見圖8，結果顯示38E10E1C11 mAb能夠用於人LIF蛋白的western blot檢測。
[實施例10 抗人LIF抗體細胞活性檢測] 10.1 HCT116細胞STAT3活化抑制試驗檢測 HCT116細胞消化並離心後，重懸細胞，以1 mL，5×105 個細胞/孔，鋪12孔盤。37℃，5% CO2 過夜培養。第二天棄去原培養基，加入含有100 ng/mL重組人LIF蛋白和不同濃度抗LIF抗體的細胞培養基，設置不加重組人LIF蛋白和只加重組人LIF蛋白不加抗體的對照孔，37℃培養箱孵育30 min。然後將培養基取出，向12孔盤中每孔加100 μL 1x溶解液，冰上溶解30 min。將溶解液轉移到1.5 mL離心管中，13,000 rpm，10 min離心，收集上清液。取上清液進行western blot檢測STAT3的磷酸化情況。結果詳見圖9中的子圖A和圖11，由結果可知38E10E1C11抗體和P36-033抗體能夠抑制人LIF蛋白誘導的HCT116細胞中STAT3的磷酸化。
10.2 KP4細胞STAT3活化抑制試驗檢測LIF抗體活性 KP4細胞消化並離心後，重懸細胞，以1 mL，5×105 個細胞/孔，鋪12孔盤。37℃，5% CO2 過夜培養。第二天棄去原培養基，加入含有50 ng/mL重組人LIF蛋白和不同濃度抗LIF抗體的細胞培養基，設置不加重組人LIF蛋白和只加重組人LIF蛋白不加抗體的對照孔，37℃培養箱孵育30 min。然後將培養基取出，向細胞中加入1x細胞溶解液，每孔100 μL，冰上溶解30 min。將溶解液轉移到1.5 mL離心管中，13,000 rpm，10 min離心，收集上清液。取上清液進行western blot檢測STAT3的磷酸化情況。圖9中的子圖B結果顯示38E10E1C11抗體能夠抑制人LIF蛋白誘導的KP4細胞中STAT3的磷酸化。
10.3 KP4細胞STAT3活化抑制試驗檢測LIF抗體活性 KP4細胞消化並離心後，重懸細胞，以1 mL，5×105 個細胞/孔，鋪12孔盤。37℃，5% CO2 過夜培養。第二天棄去原培養基，將不同濃度抗LIF抗體和CT26-hLIF細胞培養基按體積比1：1配置後加入細胞中，設置CT26培養上清液的對照孔，37℃培養箱孵育30 min。然後將培養基取出，向細胞中加入1x細胞溶解液，每孔100 μL，冰上溶解30 min。將溶解液轉移到1.5 mL離心管中，13,000 rpm，10 min離心，收集上清液液。取上清液液進行western blot檢測STAT3的磷酸化情況。圖10顯示本發明38E10E1C11抗體阻斷CT26-hLIF細胞分泌的人LIF對於胰腺癌細胞KP4的STAT3的活化。
10.4 M1細胞增殖實驗檢測LIF抗體活性 M1離心後，RPMI1640培養基洗滌兩次，按照2×105 /mL的密度接種96孔盤，每孔接種100 μl細胞，加入含有10 ng/mL重組人LIF蛋白和不同濃度抗LIF抗體的培養基，使每孔的最終體積為200 μL，同時設置不加LIF的對照孔，37℃培養箱培養72小時，加入CCK-8檢測細胞增殖情況。結果詳見圖12，結果顯示單抗38E10E1C11和單抗P36-033都能夠逆轉人LIF蛋白對M1細胞的增殖抑制。
[實施例11 抗人LIF抗體體內抗腫瘤活性檢測] 經過ELISA檢測38E10E1C11抗體與小鼠LIF蛋白沒有交叉反應，為進行體內活性評價，需建構大量表現人LIF蛋白的CT26細胞株，根據文獻報導人LIF蛋白能夠結合小鼠細胞表面的LIFR和GP130從而活化下游訊息，因此推測大量表現人LIF的CT26分泌的人LIF蛋白能夠抑制小鼠的免疫系統，加入抗LIF蛋白的抗體能夠解除這種抑制效果，從而發揮抗腫瘤作用。
11.1 大量表現人LIF基因的CT26細胞株的建立 將建構好的含有人LIF基因的慢病毒感染小鼠結腸癌細胞株CT26，感染48小時後檢測LIF蛋白表現情況，極限稀釋法對細胞株進行單株化，加入終濃度為1 μg/mL puromycin的培養基進行加壓篩選，最終得到大量表現人LIF蛋白的CT26穩定細胞株CT26-hLIF。
11.2 CT26-hLIF BABL/C皮下植入模型檢測抗人LIF抗體的抗腫瘤活性 CT26-hLIF細胞培養在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液中，收集對數生長期的細胞，PBS重懸至107 個細胞/mL後接種BABL/c小鼠皮下。接種一天後對小鼠進行分組，分別注射溶媒對照、抗人LIF抗體，給藥濃度為15 mg/kg體重，每週給藥兩次，連續給藥4週，每週測量腫瘤體積兩次，繪製腫瘤生長曲線，計算腫瘤抑制率。結果詳見圖13，結果顯示單抗38E10E1C11能夠抑制CT26-hLIF細胞在BABL/c小鼠體內增殖。
11.3 測試不同胰腺癌細胞株對於LIF蛋白刺激的敏感性 將人胰腺癌細胞株Panc02.03、KP4、MIA paca2接種6孔盤，每孔接種106 個細胞，過夜培養後更換新鮮培養基，加入50 ng/mL重組人LIF蛋白和抗人LIF抗體38E10E1C11，同時設置不加LIF的對照孔，37℃培養箱孵育30 min，然後移除培養基，向細胞中加入1x細胞溶解液，每孔200 μL，冰上溶解30 min。將溶解液轉移到1.5 mL離心管中，13,000 rpm，10 min離心，收集上清液。取上清液進行western blot檢測STAT3的磷酸化情況。結果詳見圖14，由結果可知，KP4細胞株對於人LIF蛋白刺激最為敏感。
[實施例12 38E10E1C11單株抗體和P36-033單株抗體的重組表現及驗證] 將38E10E1C11和P36-033單株抗體的輕重鏈抗體基因利用同源重組技術建構到真核表現載體PCDNA3.1(+)中，利用thermo的ExpiCHO表現系統表現重組抗體，利用Protein G親和層析純化抗體，利用常州天地人和公司的Endotoxin Removal Beads對純化的抗體進行內毒素去除。具體實驗方法參照實施例10.2，圖15顯示經CHO細胞重組表現的38E10E1C11抗體(標註為38E10E1C11R)能夠抑制人LIF蛋白誘導的KP4細胞中STAT3的磷酸化。
[實施例13 38E10E1C11抗體識別抗原決定位的鑑定] 前期實驗證實38E10E1C11(SEQ ID NOs: 41和43)抗體識別的是人LIF蛋白(SEQ ID NO: 58)表面的線性抗原決定位、此抗體不能識別小鼠LIF蛋白、能夠阻斷人LIF蛋白與人LIFR蛋白的結合，根據此三點提示，同時結合多種線上蛋白線性抗原決定位預測軟體分析，推測此抗體的識別抗原決定位位於人LIF蛋白160-202這段胺基酸序列中，於是合成了如下的雜合LIF蛋白，Mut3 (SEQ ID NO: 59)為將人LIF蛋白的182-202位點的胺基酸序列替換為小鼠LIF蛋白胺基酸序列，Mut4 (SEQ ID NO: 60)為將人LIF蛋白的166-202位點的胺基酸序列替換為小鼠LIF蛋白胺基酸序列，將含有Mut3，Mut4雜合蛋白以及全長人LIF蛋白的質體轉染293T細胞，培養三天後取細胞上清液進行SDS-PAGE電泳和轉膜，以293T細胞培養上清液作為陰性對照，使用38E10E1C11作為一抗，HRP標記的羊抗小鼠Fab作為二抗進行檢測，同時利用M1細胞增殖實驗檢測雜合蛋白的活性和驗證38E10E1C11對雜合蛋白的中和活性。同時設置多組對照孔，加入人重組LIF蛋白(rhLIF，購自於義翹神州，貨號分別為：14890-HNAH)的對照孔、加入rhLIF和38E10E1C11的對照孔、不加rhLIF和不加LIF抗體的對照孔。結果顯示38E10E1C11抗體能夠識別變性全長LIF蛋白，Mut3蛋白，但不能識別Mut4蛋白(圖16中的子圖A)，M1細胞增殖實驗顯示38E10E1C11抗體能夠逆轉全長LIF蛋白和Mut3蛋白對M1細胞增殖的抑制而不能逆轉Mut4蛋白的抑制作用(圖16中的子圖B)，綜上所述38E10E1C11抗體的識別抗原決定位位於LIF蛋白的的167-181位胺基酸之中，即TYGPDTSGKDVFQKK這段胺基酸之中(SEQ ID NO: 61)。
[實施例14 人源化抗LIF抗體設計及表現純化] 將從小鼠免疫得到的單株抗體38E10E1C11進行人源化。採用標準CDR嫁接方法進行人源化。用標準分子克隆技術從38E10E1C11融合瘤中克隆重鏈區和輕鏈區，並用Sanger法進行測序。然後對人類重鏈和輕鏈可變序列進行BLAST搜索，並從每個序列中選擇3或4個序列作為人源化的受體框架。將38E10E1C11的重鏈和輕鏈CDR1、CDR2和CDR3克隆到3個不同的重鏈受體框架(H1-H3)和4個不同的輕鏈框架(L1-L4)中，同時對38E10E1C11的HCDR2(突變前的胺基酸序列如SEQ ID NO: 45所示)進行點突變(突變後的胺基酸序列如SEQ ID NO: 5所示)，重鏈恆定區選擇人IgG1亞型，輕鏈恆定區選擇人Kappa鏈，將含有人源化抗體重鏈和人源化抗體輕鏈基因的表現載體共轉染293S細胞，上述所獲得的人源化抗LIF抗體的重輕鏈變異區基因序列、變異區胺基酸序列、全長基因序列以及全長胺基酸序列詳見表1，然後檢測12種不同的抗體組合在293S細胞中的表現水平、抗原結合能力和熱穩定性。以38E10E1C11嵌合抗體(Chimeric)作為陽性對照，後續試驗中38E10E1C11嵌合抗體均簡稱為38E嵌合抗體或38E Chimeric(SEQ ID NO: 52和SEQ ID NO: 50)。收集培養基，在Gator(類似於Octet)上定量其中IgG的表現水平，並用ELISA進行修正。用ELISA的方法比較不同組合的抗原結合能力(表2、表3)。
酵素結合免疫吸附試驗(ELISA)： 在每個孔包被100 μL 0.5 μg/ml抗原，4℃孵育過夜，用300 μL洗滌緩衝液洗滌盤三次。用200 μL封閉緩衝液(2%牛血清白蛋白)在室溫下封閉60分鐘。用300 μL洗滌緩衝液洗滌盤三次。加入100 μL不同濃度的稀釋抗LIF抗體每孔100 μL，室溫孵育1小時。用300 μL洗滌緩衝液洗滌盤4次。加入100 μL 1：5000稀釋的HRP標記的羊抗人Fc二抗，室溫孵育1小時。用300 μL清洗緩衝液清洗盤6次。在黑暗條件下，在室溫下加入100 μL H2 O2 -Amplx顯色液顯色10分鐘。微量盤分光光譜儀讀取OD450 值。熱處理：表現培養基在70℃下在PCR機上加熱5分鐘，然後快速冷卻到室溫。進行後續ELISA檢測，方法同上述。
表1. 不同人源化輕重鏈組合在293S細胞中表現水平
編號 人源化抗體變異區基因序列 人源化抗體變異區胺基酸序列 人源化抗體全長基因序列 人源化抗體全長胺基酸序列 培養上清液抗體濃度(μg/ml)
H1L1 重鏈 SEQ ID NO: 24 (VH 1, nt) SEQ ID NO: 23 (VH 1, aa) SEQ ID NO: 26 (full heavy chain 1, nt) SEQ ID NO: 25 (full heavy chain 1, aa) 95.5
輕鏈 SEQ ID NO: 8 (VL 1, nt) SEQ ID NO: 7 (VL 1, aa) SEQ ID NO: 10 (full light chain 1, nt) SEQ ID NO: 9 (full light chain 1, aa)
H2L1 重鏈 SEQ ID NO: 28 (VH 2, nt) SEQ ID NO: 27 (VH 2, aa) SEE ID NO: 30 (full heavy chain 2, nt) SEQ ID NO: 29 (full heavy chain 2, aa) 120
輕鏈 SEQ ID NO: 8 (VL 1, nt) SEQ ID NO: 7 (VL 1, aa) SEQ ID NO: 10 (full light chain 1, nt) SEQ ID NO: 9 (full light chain 1, aa)
H3L1 重鏈 SEQ ID NO: 32 (VH 3, nt) SEQ ID NO: 31 (VH 3, aa) SEQ ID NO: 34 (full heavy chain 3, nt) SEQ ID NO: 33 (full heavy chain 3, aa) 108
輕鏈 SEQ ID NO: 8 (VL 1, nt) SEQ ID NO: 7 (VL 1, aa) SEQ ID NO: 10 (full light chain 1, nt) SEQ ID NO: 9 (full light chain 1, aa)
H1L2 重鏈 SEQ ID NO: 24 (VH 1, nt) SEQ ID NO: 23 (VH 1, aa) SEQ ID NO: 26 (full heavy chain 1, nt) SEQ ID NO: 25 (full heavy chain 1, aa) 110
輕鏈 SEQ ID NO: 12 (VL 2, nt) SEQ ID NO: 11 (VL 2, aa) SEQ ID NO: 14 (full light chain 2, nt) SEQ ID NO: 13 (full light chain 2, aa)
H2L2 重鏈 SEQ ID NO: 28 (VH 2, nt) SEQ ID NO: 27 (VH 2, aa) SEQ ID NO: 30 (full heavy chain 2, nt) SEQ ID NO: 29 (full heavy chain 2, aa) 89.4
輕鏈 SEQ ID NO: 12 (VL 2, nt) SEQ ID NO: 11 (VL 2, aa) SEQ ID NO: 14 (full light chain 2, nt) SEQ ID NO: 13 (full light chain 2, aa)
H3L2 重鏈 SEQ ID NO: 32 (VH 3, nt) SEQ ID NO: 31 (VH 3, aa) SEQ ID NO: 34 (full heavy chain 3, nt) SEQIDNO: 33 (full heavy chain 3, aa) 95.3
輕鏈 SEQ ID NO: 12 (VL 2, nt) SEQ ID NO: 11 (VL 2, aa) SEQ ID NO: 14 (full light chain 2, nt) SEQ ID NO: 13 (full light chain 2, aa)
H1L3 重鏈 SEQ ID NO: 24 (VH 1, nt) SEQ ID NO: 23 (VH 1, aa) SEQ ID NO: 26 (full heavy chain 1, nt) SEQ ID NO: 25 (full heavy chain 1, aa) 115
輕鏈 SEQ ID NO: 16 (VL 3, nt) SEQ ID NO: 15 (VL 3, aa) SEQ ID NO: 18 (full light chain 3, nt) SEQ ID NO: 17 (full light chain 3, aa)
H2L3 重鏈 SEQ ID NO: 28 (VH 2, nt) SEQ ID NO: 27 (VH 2, aa) SEQ ID NO: 30 (full heavy chain 2, nt) SEQ ID NO: 29 (full heavy chain 2, aa) 123
輕鏈 SEQ ID NO: 16 (VL 3, nt) SEQ ID NO: 15 (VL 3, aa) SEQ ID NO: 18 (full light chain 3, nt) SEQ ID NO: 17 (full light chain 3, aa)
H3L3 重鏈 SEQ ID NO: 32 (VH 3, nt) SEQ ID NO: 31 (VH 3, aa) SEQ ID NO: 34 (full heavy chain 3, nt) SEQ ID NO: 33 (full heavy chain 3, aa) 97.6
輕鏈 SEQ ID NO: 16 (VL 3, nt) SEQ ID NO: 15 (VL 3, aa) SEQ ID NO: 18 (full light chain 3, nt) SEQ ID NO: 17 (full light chain 3, aa)
H1L4 重鏈 SEQ ID NO: 24 (VH 1, nt) SEQ ID NO: 23 (VH 1, aa) SEQ ID NO: 26 (full heavy chain 1, nt) SEQ ID NO: 25 (full heavy chain 1, aa) 183
輕鏈 SEQ ID NO: 20 (VL 4, nt) SEQ ID NO: 19 (VL 4, aa) SEQ ID NO: 22 (full light chain 4, nt) SEQ ID NO: 21 (full light chain 4, aa)
H2L4 重鏈 SEQ ID NO: 28 (VH 2, nt) SEQ ID NO: 27 (VH 2, aa) SEQ ID NO: 30 (full heavy chain 2, nt) SEQ ID NO: 29 (full heavy chain 2, aa) `155
輕鏈 SEQ ID NO: 20 (VL 4, nt) SEQ ID NO: 19 (VL 4, aa) SEQ ID NO: 22 (full light chain 4, nt) SEQ ID NO: 21 (full light chain 4, aa)
H3L4 重鏈 SEQ ID NO: 32 (VH 3, nt) SEQ ID NO: 31 (VH 3, aa) SEQ ID NO: 34 (full heavy chain 3, nt) SEQ ID NO: 33 (full heavy chain 3, aa) 172
輕鏈 SEQ ID NO: 20 (VL 4, nt) SEQ ID NO: 19 (VL 4, aa) SEQ ID NO: 22 (full light chain 4, nt) SEQ ID NO: 21 (full light chain 4, aa)
38E Chimeric 重鏈 SEQ ID NO: 49 (38E Chimeric VH , nt) SEQ ID NO: 48 (38E Chimeric VH , aa) SEQ ID NO: 53 (38E Chimericfull heavy chain, nt) SEQ ID NO: 52 (38E Chimeric full heavy chain, aa) 97.4
輕鏈 SEQ ID NO: 47 (38E Chimeric VL , nt) SEQ ID NO: 46 (38E Chimeric VL , aa) SEQ ID NO: 51 (38E Chimeric full light chain, nt) SEQ ID NO: 50 (38E Chimeric full light chain, aa)
表2. 不同人源化輕重鏈組合經293S細胞表現上清液的ELISA結果(非加熱)
抗體濃度(μg/mL)     克隆編號/非加熱 1 0.2 0.04 0
H1L1 11840 10574 6849 2134
H2L1 11953 10737 6369  
H3L1 11367 10041 6222  
H1L2 12118 11246 6682  
H2L2 11699 10321 6517  
H3L2 11266 10575 6599  
H1L3 11846 10790 6435  
H2L3 11967 11286 6266  
H3L3 11280 10978 6755  
H1L4 11929 10931 7321  
H2L4 11821 10859 6877  
H3L4 11918 11226 7055  
38E Chimeric 11353 10414 6783  
表3. 不同人源化輕重鏈組合經293S細胞表現上清液的ELISA結果(加熱)
抗體濃度(μg/mL)     克隆編號/加熱 1 0.2 0.04 0
H1L1 9796 9007 5970 27.7
H2L1 9647 8560 5442  
H3L1 9131 7903 5192  
H1L2 9833 8925 5493  
H2L2 9779 8716 5259  
H3L2 9448 8775 5065  
H1L3 9627 8748 4978  
H2L3 9731 9153 4866  
H3L3 9543 8898 5393  
H1L4 10526 9705 5670  
H2L4 10572 9234 5702  
H3L4 9948 9061 5299  
38E Chimeric 10567 8845 4727  
[實施例15 用純化的IgG樣品表徵所選的人源化候選抗體] 基於結合親和力、人源化百分比、抗體表現水平和熱穩定性數據，本發明選擇了以下5個候選抗體進行下一步表徵：H1L1、H1L4、H2L4、H3L2、H3L4，並將這5個候選抗體重新編號為38E HuH1L1 (SEQ ID NOs: 25和9)、38E HuH1L4 (SEQ ID NOs: 25和21)、38E HuH2L4 (SEQ ID NOs: 29和21)、38E HuH3L2 (SEQ ID NOs: 33和13)、38E HuH3L4 (SEQ ID NOs: 33和21)，然後將所選的VH /VL 質體共轉染293S細胞，收獲細胞培養上清液，protein A親和層析純化抗體。用純化的抗體進行結合ELISA分析，比較人源化抗體與38E嵌合抗體的特異結合能力。本發明還進行了一些初步分析，以比較它們的熱穩定性和非專一性結合。結果表明，用純化的候選抗體與38E嵌合抗體具有非常相似的抗原結合特性(圖17A、17C)。在70℃處理5分鐘後，5個人源化抗體均表現出與嵌合抗體相似的結合能力(圖17B、17D)。
[實施例16 評價人源化候選抗體的非專一性結合] 採用LIF陰性的HEK293細胞FACS作為初步檢測，以評估抗體潛在的非專一性結合風險。
將HEK293細胞用胰酶消化後，用含1% FBS的PBS洗滌兩次，重懸細胞，調整細胞密度為1.5-2×106 個/mL，將細胞加入到96孔U形盤中。將待檢測的抗體濃度調整為20 μg/mL，然後進行3倍倍比稀釋，共稀釋8個濃度，設置空白對照和陰性對照(Rituxan)。將稀釋好的抗體和空白對照加入到96孔盤中的細胞中，每孔加入100 μL抗體。4℃孵育1小時，1000 rpm離心5分鐘，小心棄去上清液，用含1% FBS的PBS洗滌兩次，最終用200 μL含1% FBS的PBS重懸細胞，進行流式細胞分析。在HEK293細胞非專一性結合FACS檢測中，38E HuH1L1、38E HuH3L2、38E HuH3L4、38E HuH1L4、38E嵌合抗體和陰性對照(Rituxan)對HEK293細胞具有相似的非專一性結合親和力，而38E HuH2L4對HEK293細胞具有更高的非專一性結合(圖18中的子圖A和圖18中的子圖B)。
[實施例17 CE-SDS分析抗體純度] CE-SDS分析的工作濃度為1 mg/mL，將抗體樣品用上樣緩衝液稀釋到指定濃度。
非還原CE-SDS電泳樣品的製備：取稀釋好的樣品溶液95 μL，加入0.8 M碘乙酸銨水溶液5 μL，5 μL內部參考，渦旋混勻。取空白對照95 μL，加入0.8 M碘乙酸銨水溶液5 μL，5 μL內部參考，渦旋混勻，為非還原空白對照。70℃，金屬浴加熱5分鐘，冷卻至室溫，6000 rpm離心1分鐘。
還原樣品溶液製備：取稀釋好的樣品溶液95 μL，加入2-巰基乙醇溶液5 μL，內部參考5 μL，渦旋混勻。取空白對照95 μL，加入2-巰基乙醇溶液5 μL，內部參考5 μL，渦旋混勻，為還原空白對照。70℃，金屬浴加熱15分鐘，冷卻至室溫，6000 rpm離心1分鐘。
樣品分析：取75 μL樣品加入到測試管中，將測試管放入測試杯中，測試杯小心插入進樣盤中，運行測試程式，還原樣品進樣時長為30秒，非還原樣品進樣時長為40秒，毛細管溫度為20℃，樣品溫度為20℃，聚焦電壓為15 KV，聚焦時間為40分鐘，用PDA檢測器214 nm波長採集數據。CE結果表明見表4、表5。
表4. 還原CE-SDS結果
  Peak # Size (KDa) Peak Area (%) Peak ID
38E chimeric 1 27.77 35.5 LC
2 62.43 64.5 HC
38E HuH1L1 1 25.6 0.57 LMC
2 27.85 32.02 LC
3 36.03 1.41 LMC
4 61.41 66 HC
38E HuH3L2 1 27.41 31.7 LC
2 33.84 0.35 LMC
3 62.49 67.95 HC
38E HuH3L4 1 27 34.93 LC
2 62.06 65.07 HC
表5. 非還原CE-SDS結果
  Size (KDa) Peak Area (%) Peak ID
38E chimeric 166.39 ＞99 intact AB
38E HuH1L1 165.93 92.46 intact AB
38E HuH3L2 167.63 93.01 intact AB
38E HuH3L4 166.37 98.82 intact AB
[實施例18 用示差掃描螢光法(DSF)/靜態光散射技術(SLS)分析熱穩定性] 樣品被提交給UNcle系統(Unchained Labs)進行分析。在25℃至95℃的溫度範圍內，對DSF和SLS進行1℃/min的升溫監測。UNcle在266 nm和473 nm處測量SLS。利用UNcle分析軟體對Tm和Tagg進行了計算和分析。
IgG是具有多個結構域，每個結構域都有自己的熔化溫度(Tm)。CH 2結構域在PBS中通常有約70℃的Tm，CH 3更穩定，其Tm約為80℃。Fabs由於其序列變化較大，Tm的範圍較大，約為50-85℃。因此，通過各種分析技術測量的Tm值通常是「表觀」轉變溫度，而不是每個結構域的真實Tm值。很明顯，即使這種DSF分析也能產生一個以上的Tm值，只有Tm1才用於評價治療用抗體的熱穩定性。Tagg是SLS開始檢測聚集的溫度。Tagg 266在266 nm處測量SLS，它更敏感，更適合於檢測較小的聚集粒子。Tagg 473在473 nm處測量SLS，更適合於檢測較大的粒子。
如表6所示，三種人源化候選抗體均比38E嵌合抗體具有更高的熔化溫度(Tm1)和更小的聚集風險。
表6. 示差掃描螢光法(DSF)/靜態光散射技術(SLS)分析結果
  DSF(℃) SLS(℃)
Sample Tm1 Tm2 Tm3 Tagg 266 Tagg 473
38E chimeric 69.3     68.5 69.8
38E HuH1L1 72.7 82.8   72.5 73.6
38E HuH3L2 72 82.4   73.3 73.7
38E HuH3L4 71.5 82.1   69.8 70.9
[實施例19 用動態光散射技術(DLS)分析抗體的聚集傾向：] DLS是在UNcle系統(Unchained Labs)上執行的。在25℃下測量DLS。使用UNcle分析軟體計算和分析數據。動態光散射(DLS)用於檢測抗體樣品中的聚集。「模式直徑」是指蛋白質顆粒直徑，「質量百分比」是指每種粒徑分數的百分比。「PDI」是多分散指數，該指數越高，樣品的多分散性越強。如果PDI不大於0.25，則樣品可視為單分散。如表7所示，所有4個抗體樣本都有一個主「峰」(質量分數超過99%)，38E HuH3L4的PDI優於嵌合抗體，38E HuH3L2與嵌合抗體相似，38E HuH1L1的PDI比嵌合抗體差。
表7. 動態光散射技術(DLS)分析結果
  Peak1     Peak2  
Sample 模式直徑(nm) 質量百分比(%) PDI 模式直徑(nm) 質量百分比(%)
38E chimeric 10.41 99.90 0.229    
38E HuH1L1 9.68 99.15 0.383 101.16 0.96
38E HuH3L2 10.41 99.62 0.28 99.18 0.38
38E HuH3L4 10.41 100.00 0.043    
[實施例20 抗體親和力測定] 利用Gator測定抗LIF抗體與人LIF蛋白的親和力。首先將抗人LIF抗體用PBS稀釋至5 μg/mL，然後分別加入96孔盤的第二列A-F孔(每孔200 μL);以PBS梯度稀釋人LIF蛋白濃度分別為100、50、25、12.5、6.25 μg/mL，分別加入到96孔盤第四列的A-E孔(每孔100 μL)，F孔加PBS作為空白對照；第一列與第三列的A-F孔均加入PBS(每孔200 μL)。將96孔盤放入到儀器中，用抗人Fc生物感測器進行檢測。實驗結果如表8所示，結果顯示3株人源化抗體與嵌合抗體親和力接近。
表8. 人源化抗LIF抗體親和力測定
Sample Koff (1/s) Kon (1/Ms) KD (M)
38E HuH1L1 4.65E-05 5.69E+05 8.17E-11
38E HuH3L2 3.39E-05 6.31E+05 5.38E-11
38E HuH3L4 4.44E-05 5.79E+05 7.66E-11
38E chimeric 1.57E-05 6.77E+05 2.33E-11
[實施例21 人源化抗體和38E10E1C11抗體的表現純化] 將人源化抗體38E HuH3L2和38E HuH3L4的輕重鏈的變異區與小鼠抗體恆定區(重鏈恆定區為小鼠IgG1，輕鏈恆定區為kappa鏈)連接分別克隆到PCDNA.3.4載體中，分別命名為38E HuH3L2-m(編碼38E HuH3L2-m抗體重鏈及輕鏈的全長基因序列分別如SEQ ID NO: 36和SEQ ID NO: 38所示，對應的38E HuH3L2-m抗體的重鏈及輕鏈的全長胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 37所示)和38E HuH3L4-m(編碼38E HuH3L4-m抗體重鏈及輕鏈的全長基因序列分別如SEQ ID NO: 36和SEQ ID NO: 40所示，對應的38E HuH3L4-m抗體的重鏈及輕鏈的全長胺基酸序列分別如SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 39所示)利用thermo fisher公司的Expi CHO表現試劑盒進行基因的轉染和抗體表現，收集細胞培養上清液，利用protein G親和層析管柱對抗體進行純化，純化後的抗體利用Amicon® Ultra超濾管進行超濾濃縮和換液，最終將抗體溶解在pH7.4的PBS中。38E10E1C11抗體也利用相同的方式表現純化。
[實施例22 人源化抗LIF抗體與LIFR競爭結合人LIF蛋白] 將重組人LIF蛋白按照1 μg/mL的濃度包被微量多孔盤，加入0.6125 μg/mL的重組人LIFR(與人Fc融合表現，購自於ACRO，貨號：LIR-H4252)蛋白50 μL/孔，同時加入不同濃度的LIF抗體38E HuH3L2-m (SEQ ID NOs: 35和37)、38E HuH3L4-m (SEQ ID NOs: 35和39)、38E10E1C11 (SEQ ID NOs: 41和43)、P36-033 (SEQ ID NOs: 54和56)100 μL/孔，以anti-CD3抗體作為陰性對照(購自於BioLegend，貨號：317326)室溫孵育2小時，PBST洗滌四次後，加入HRP標記的羊抗人Fc抗體，室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入TMB顯色液室溫顯色10分鐘，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，數據採用Origin pro 9軟體進行分析和作圖。結果詳見圖19，結果顯示38E10E1C11、38E HuH3L2-m、38E HuH3L4-m能夠抑制重組人LIF與人LIFR的結合，IC50 分別為0.074 μg/ml、 0.145 μg/ml、0.103 μg/ml。P36-033具有微弱的抑制作用，陰性對照anti-CD3抗體不能抑制重組人LIF與人LIFR的結合。
[實施例23 人源化抗LIF抗體不與GP130競爭結合人LIF蛋白] 將重組人LIF蛋白按照1 μg/mL的濃度包被微量多孔盤，加入12 μg/mL的重組人GP130 (與人Fc融合表現，購自於義翹神州，貨號：10974-H03H)蛋白50 μL/孔，同時加入不同濃度的LIF抗體38E HuH3L2-m (SEQ ID NOs: 35和37)、38E HuH3L4-m (SEQ ID NOs: 35和39)、P36-033 (SEQ ID NOs: 56和54) 100 μL/孔，以anti-CD28抗體作為陰性對照(購自於BioLegend，貨號：302914)，室溫孵育2小時，PBST洗滌四次後，加入HRP標記的羊抗人Fc抗體，室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入TMB顯色液室溫顯色10分鐘，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，數據採用Origin pro 9軟體進行分析和作圖。結果詳見圖20，結果顯示人源化抗體38E HuH3L2-m、38E HuH3L4-m和陰性對照抗體anti-CD28抗體不能抑制重組人LIF與人GP130蛋白的結合，P36-033能夠抑制重組人LIF與人GP130蛋白的結合。
[實施例24 人源化抗LIF抗體抗原識別專一性檢測] 將人LIF、人IL-6、人OSM、人CNTF (四種蛋白均購自於義翹神州，貨號分別為：14890-HNAH、10395-HNAE、10452-HNAH、11841-H07E)按照1 μg/mL濃度包被微量多孔盤，加入不同濃度的LIF抗體38E10E1C11、38E huH3L2-m、38E huH3L4-m室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入HRP標記的羊抗小鼠Fab二抗，室溫孵育1小時，PBST洗滌四次後，加入TMB顯色液室溫顯色10分鐘，微量盤分光光譜儀讀取450 nm吸光值，數據採用Origin pro 9軟體進行分析和作圖。結果詳見圖21，結果顯示38E10E1C11、38E huH3L2-m、38E huH3L4-m抗體僅與人LIF蛋白結合而與人IL-6、OSM、CNTF沒有結合。
[實施例25 人源化抗LIF抗體識別抗原決定位的鑑定] 在前期實驗中本發明發現38E10E1C11抗體識別的是LIF蛋白的線性抗原決定位，因此本發明首先驗證38E人源化抗體是否識別的仍然是LIF蛋白的線性抗原決定位。取轉染人LIF全長基因序列，Mut3和Mut4蛋白序列的293T細胞培養3天後的上清液，陰性對照為293T細胞培養上清液，加入5x SDS-PAGE上樣緩衝液，煮沸10分鐘，然後取10 μL樣品進行SDS-PAGE電泳，然後將電泳條帶轉移到PVDF膜上進行western blot檢測，檢測用的一抗為38E huH3L2或38E huH3L4抗體，抗體濃度為1 μg/mL，室溫孵育2小時，PBST緩衝液洗滌三次後加入1：3000稀釋的HRP標記的羊抗人Fc二抗，室溫孵育2小時，PBST緩衝液洗滌三次後，加入增強型化學發光液(Perice，貨號為：34079)孵育，利用Amersham Imager 600超靈敏多功能成像儀進行檢測和拍照。結果見圖22中的子圖A，結果顯示兩株人源化抗體均能識別變性的人LIF蛋白和Mut3蛋白而不能識別Mut4蛋白。M1細胞增殖實驗也得到相同的結果，結果詳見圖22中的子圖B。因此確定38E huH3L2和38E huH3L4抗體識別的抗原決定位序列為TYGPDTSGKDVFQKK (SEQ ID NO: 61)。
[實施例26 KP4細胞STAT3活化抑制試驗檢測人源化抗LIF抗體活性] KP4細胞消化並離心後，重懸細胞，以1 mL，5×105 個細胞/孔，鋪12孔盤。37℃，5% CO2 過夜培養。第二天棄去原培養基，加入含有50 ng/mL重組人LIF蛋白和不同濃度抗LIF人源化抗體的細胞培養基，設置不加重組人LIF蛋白和只加重組人LIF蛋白不加抗體的對照孔，37℃培養箱孵育30 min。然後將培養基取出，向細胞中加入1x細胞溶解液，每孔100 μL，冰上溶解30 min。將溶解液轉移到1.5 mL離心管中，13,000 rpm，10 min離心，收集上清液。取上清液液進行western blot檢測STAT3的磷酸化情況。結果顯示人源化抗體38E huH3L4和38E huH3L2能夠抑制LIF蛋白誘導的STAT3的磷酸化(圖23)。
[實施例27 M1細胞增殖實驗檢測人源化抗LIF抗體的活性] M1離心後，RPMI1640培養基洗滌兩次，按照2.5×105 個/mL的密度接種96孔盤，每孔接種80 μL細胞，加入含有4 ng/mL重組人LIF蛋白和不同濃度抗LIF抗體的培養基，使每孔的最終體積為160 μL，同時設置不加LIF的對照孔，37℃培養箱培養72小時，加入CCK-8檢測細胞增殖情況。結果詳見圖24，結果顯示人源化抗體38E huH3L4-m和38E huH3L2-m都能夠逆轉人LIF蛋白對M1細胞的增殖抑制，EC50 分別為6.52 μg/mL和8.93 μg/mL。
[實施例28：LIF抗體對LIF誘導的STAT3磷酸化的抑制作用] 接種100,000個KP4細胞於96孔盤中；倍比稀釋的LIF抗體與20-100 ng/ml LIF蛋白室溫孵育0.5-1 h，形成LIF-Ab混合溶液；加入LIF-Ab混合溶液於細胞孔中，37℃刺激5-30 min；按P-STAT3 (TYR705) KITS (Cisbio)和Total-STAT3 KITS (Cisbio)說明書檢測P-STAT3和Total-STAT3蛋白表現水平，並計算每個孔的供體和受體的發射訊號比：Ratio=Signal 665 nm/Signal 620 nm*104 。用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計LIF抗體的抑制率。結果顯示LIF抗體38E HuH3L4對LIF誘導STAT3磷酸化有抑制作用，如圖25所示，IC50 為3.415 nM。
[實施例29：檢測LIF抗體的ADCC活性] LIF與GP130和LIFR結合，人源化LIF抗體阻斷LIF與LIFR結合，但不能阻斷LIF與GP130結合。檢測人源化LIF抗體是否通過LIF介導，結合至細胞表面，從而發生ADCC作用。用ADCC緩衝液(RPMI-1640+1% FBS)依次稀釋抗體Erbitux (愛必妥®，Merck Serono，陽性對照)和Human IgG2 (Cat#HG2K，Sino，陰性對照)；再用含LIF蛋白的ADCC緩衝液稀釋38E huH3L4抗體，三倍稀釋，八個梯度，備用；用胰酶(Cat#25200072，GIBCO)消化DLD-1細胞，終止反應後吹散細胞收集到離心管中，1500 rpm離心3 min，棄上清液，用ADCC緩衝液重懸細胞並計數，調整細胞濃度，備用；復甦PBMC細胞(Cat#SLB-HP010B，上海賽笠生物科技有限公司)，加入10 mL ADCC緩衝液，2000 rpm離心10 min，棄上清液，重懸至ADCC緩衝液中計數，調整細胞濃度，備用；取出96孔U底細胞培養盤，依次加入50 μl靶細胞DLD-1、50 μl抗體、50 μl效應細胞PBMC，效靶比=30：1，混勻置於37℃ 5% CO2 培育箱反應6 h，用Cyto Tox96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay試劑盒(Cat#G1780，Promega)檢測LDH，用微量盤分光光譜儀在490 nm測量吸光值。
計算各平行孔吸光值均值，使所有實驗孔、靶細胞LDH自發釋放孔(TCR)、效應細胞LDH自發釋放孔(ECR)的吸光值均值減去空白培養基(CMB)的吸光值均值。靶細胞LDH最大釋放孔(TCM)的吸光值均值減去體積校正對照孔(VCC)的吸光值均值。用上述校正後的值按照以下公式，計算各濃度抗體產生的Cytotoxicity (%)： Cytotoxicity (%)=(A-B-C)/(D-C)×100% A：實驗孔校正後的平均吸光值 B：效應細胞LDH自發釋放孔校正後的平均吸光值 C：靶細胞LDH自發釋放孔校正後的平均吸光值 D：靶細胞LDH最大釋放孔校正後的平均吸光值 如圖26所示，38E huH3L4抗體無ADCC活性。
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無
圖1顯示本發明LIF抗體與人LIF蛋白結合能力； 圖2顯示本發明LIF抗體與小鼠LIF蛋白結合能力； 圖3顯示本發明LIF抗體與食蟹猴LIF蛋白結合能力； 圖4顯示本發明38E10E1C11抗體與抗原結合的親和力； 圖5顯示本發明38E10E1C11抗體與LIFR競爭結合人LIF蛋白的能力； 圖6顯示本發明P36-033抗體與受體GP130競爭結合人LIF蛋白的能力； 圖7顯示本發明38E10E1C11抗體和P36-033抗體與IL-6家族蛋白的交叉反應； 圖8顯示本發明38E10E1C11R抗體識別變性的人LIF蛋白； 圖9中的子圖A顯示本發明38E10E1C11抗體抑制人LIF蛋白誘導的結腸癌細胞(HCT116)STAT3的磷酸化；圖9中的子圖B顯示本發明38E10E1C11抗體抑制人LIF蛋白誘導的胰腺癌細胞(KP4)STAT3的磷酸化； 圖10顯示本發明38E10E1C11抗體阻斷CT26-hLIF細胞分泌的人LIF對於胰腺癌細胞KP4的STAT3的活化； 圖11顯示本發明P36-033抗體抑制人LIF蛋白誘導的結腸癌細胞(HCT116)STAT3的磷酸化； 圖12顯示本發明38E1E1C11和P36-033抗體逆轉LIF對於M1細胞的增殖抑制； 圖13顯示本發明38E10E1C11抗體抑制CT26-hLIF細胞在BABL/c小鼠體內的生長； 圖14顯示三種人胰腺癌細胞系對人LIF蛋白刺激的敏感性； 圖15顯示本發明38E10E1C11R抗體抑制LIF蛋白刺激導致的KP4細胞STAT3的磷酸化； 圖16中的子圖A顯示本發明38E10E1C11抗體識別全長人LIF蛋白以及雜合LIF蛋白的實驗結果，圖16中的子圖B顯示本發明38E10E1C11抗體能夠逆轉全長人LIF蛋白以及雜合LIF蛋白對M1細胞增殖抑制的實驗結果； 圖17A-圖17D顯示本發明人源化抗LIF抗體與抗原結合特性的實驗結果； 圖18顯示本發明人源化抗LIF抗體的非專一性結合親和力的實驗結果； 圖19顯示本發明人源化抗LIF抗體與LIFR競爭結合人LIF蛋白的實驗結果； 圖20顯示本發明人源化抗LIF抗體與GP130競爭結合人LIF蛋白的實驗結果； 圖21顯示本發明人源化抗LIF抗體識別抗原專一性的實驗結果； 圖22中的子圖A顯示本發明人源化抗LIF抗體識別全長人LIF蛋白以及雜合LIF蛋白的實驗結果，圖22中的子圖B顯示本發明人源化抗LIF抗體阻斷全長LIF蛋白和雜合蛋白對M1細胞增殖抑制的實驗結果； 圖23顯示本發明人源化抗LIF抗體抑制LIF蛋白誘導的STAT3的磷酸化的實驗結果； 圖24顯示本發明人源化抗LIF抗體能夠逆轉人LIF蛋白對M1細胞增殖抑制的實驗結果； 圖25顯示HTFR方法檢測的人源化抗LIF抗體抑制LIF蛋白誘導的STAT3的磷酸化水平和總STAT3水平； 圖26顯示人源化抗LIF抗體的ADCC作用。
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Claims (30)

  1. 一種與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)LCDR1，該LCDR1包含如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列；(b)LCDR2，該LCDR2包含如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；(c)LCDR3，該LCDR3包含如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；(d)HCDR1，該HCDR1包含如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；(e)HCDR2，該HCDR2包含如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；及(f)HCDR3，該HCDR3包含如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
  2. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(i)輕鏈變異區(VL)，該輕鏈變異區包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：如SEQ ID NOs：7、11、15或19所示的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及(ii)重鏈變異區(VH)，該重鏈變異區包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：如SEQ ID NOs：23、27或31所示的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3。
  3. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；2)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；3)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3； 以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；4)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；5)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；6)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序 列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；7)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；8)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3； 9)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；10)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；11)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序 列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；12)輕鏈變異區(VL)，所述輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈變異區(VH)，所述重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3。
  4. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；2)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；3)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列； 4)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；5)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；6)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列；7)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列；8)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；9)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列；10)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列； 11)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列；12)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列；以及重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。
  5. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含輕鏈和重鏈，其中：(I)所述輕鏈包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：如SEQ ID NOs：9、13、17或21所示的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及(II)所述重鏈包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：如SEQ ID NOs：25、29或33所示的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3。
  6. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含： 1)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；2)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；3)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基 酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；4)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；5)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；6)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述 重鏈包含與如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；7)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；8)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；9)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；10)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3；11)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3； 12)輕鏈，所述輕鏈包含與如SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的LCDR1，包含如SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的LCDR2，以及包含如SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的LCDR3；以及重鏈，所述重鏈包含與如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含如SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的HCDR1，包含如SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的HCDR2，以及包含如SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的HCDR3。
  7. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列；2)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；3)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列；4)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列；5)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；6)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列； 7)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列；8)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；9)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列；10)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列；11)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列；12)輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列；以及重鏈，所述重鏈包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。
  8. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體是IgG。
  9. 根據請求項8所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述分離的抗體是IgG1、IgG2或IgG4。
  10. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述分離的抗體是單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人改造抗體、人抗體、雙專一性抗體、Fv、單鏈抗體(scFv)、Fab、Fab’、Fab’-SH或者F(ab’)2。
  11. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中所述分離的抗體或其抗原結合部分為白血病抑制因子(LIF)拮抗劑。
  12. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中所述分離的抗體或其抗原結合部分能夠抑制LIF表達和/或阻斷LIF活性。
  13. 根據請求項1所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中所述分離的抗體或其抗原結合部分能夠與LIFR和/或GP130競爭與LIF的結合。
  14. 一種核苷酸組合物，其包含編碼請求項1-13中任一項所述的分離的抗體或其抗原結合部分的核苷酸分子。
  15. 一種載體，其含有請求項14所述的核苷酸組合物。
  16. 根據請求項15所述的載體，其中，所述的載體為真核表現載體、原核表現載體或病毒載體。
  17. 一種宿主細胞，其含有請求項15或16中所述的載體。
  18. 根據請求項17所述的宿主細胞，其中，所述宿主細胞為細菌、酵母或者哺乳動物細胞。
  19. 根據請求項18所述的宿主細胞，其中，所述宿主細胞為大腸桿菌、畢赤酵母菌、中國倉鼠卵巢細胞或人胎腎293細胞。
  20. 一種用於製備請求項1-13中任一項所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分的方法，所述方法包括在請求項17-19中任一 項所述與LIF結合且抑制LIF活性的的宿主細胞中表現所述抗體或其抗原結合片段，並分離所述與LIF結合且抑制LIF活性的抗體或其抗原結合片段。
  21. 一種藥物組合物，包括治療有效劑量的請求項1-13中任一項所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，以及藥學上可接受的賦形劑。
  22. 一種用於測量生物樣品中LIF的試劑，其包含請求項1-13中任一項所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分。
  23. 根據請求項22所述的試劑，其中，所述的生物樣本為血液、血清、尿、生檢材料、腫瘤或懷疑含有異常LIF水平的任意組織。
  24. 一種請求項1-13中任一項所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分，和/或請求項21所述的藥物組合物在製備用於抑制LIF表達和/或阻斷LIF活性的藥物中的用途。
  25. 一種檢測生物樣品中LIF的方法，包括：(i)獲得受試者的組織或液體樣品，(ii)暴露所述組織或液體樣品到請求項1-13任一項所述的與LIF結合且抑制LIF活性的分離的抗體或其抗原結合部分或請求項22或23所述的試劑；以及(iii)檢測從(ii)中獲得的所述組織或液體樣品結合的LIF與對照樣品結合的LIF進行對比，其中與對照進行對比的LIF結合量的增加顯示LIF的生成、表現或活化的異常水平。
  26. 根據請求項25所述的方法，其中所述組織或液體樣品包括血液、血清、尿、生檢材料、腫瘤或懷疑含有異常LIF水平的任意組織。
  27. 一種請求項1-13中任一項所述的分離的抗體或其抗原結合部分，和/或請求項21所述的藥物組合物在製備用於治療與LIF相關的疾病或病症的藥物中的用途。
  28. 根據請求項27所述的用途，其中，與LIF相關的疾病或病症為腫瘤。
  29. 根據請求項28所述的用途，其中，所述腫瘤為實性瘤。
  30. 根據請求項29所述的用途，其中，所述的實性瘤包括神經膠母細胞瘤、肺癌、卵巢癌、結直腸癌、胰腺癌或前列腺癌。
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