JP2022549741A

JP2022549741A - 腎がんの相乗的治療におけるペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の適用

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Publication number: JP2022549741A
Application number: JP2022544870A
Authority: JP
Inventors: ヤン，ユーフェン; ヘ，チェン; ロウ，ジュレン
Original assignee: SHANGHAI INSTITUTE OF BIOLOGICAL PRODUCTS Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI INSTITUTE OF BIOLOGICAL PRODUCTS Co Ltd
Priority date: 2019-09-30
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2022-11-28
Anticipated expiration: 2039-12-31
Also published as: EP4043027A1; JP7412576B2; WO2021062960A1; EP4043027A4; CN112569359A; US20220378879A1

Abstract

腎がんの相乗的治療におけるペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の適用。具体的には、有効成分の組み合わせの用途を提供し、前記有効成分の組み合わせは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含み、また前記組み合わせは、腎がんを相乗的に治療するための医薬組成物の調製に使用される。当該有効成分の組み合わせは、腎がんを効果的かつ相乗的に阻害し、また毒性と副作用を大幅に軽減できるため、腫瘍の標的治療に広く使用されることができる。

Description

本発明は、抗腫瘍薬の技術分野に関し、より具体的には、腎がんの相乗的治療におけるペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の適用ならびにその関連薬物に関する。

腫瘍は、多要素の参加、多段階の発達を伴う全身性および全身性疾患である。腫瘍は、高度な複雑さ、変動性および多様性という生物学的特徴を有する。癌関連遺伝子の異常は、腫瘍ゲノムの安定性の喪失を引き起こす可能性があり、アポトーシスの回避、無制限の複製の可能性、血管新生、浸潤、転移および免疫回避等の腫瘍細胞の異常な生物学的挙動につながる。

現在、外科手術、放射線療法、化学療法は、悪性腫瘍を治療する主な方法である。外科手術および放射治療は、局所治療法であるが、薬物治療は、全身効果法であり、拡大して転移する可能性のある悪性腫瘍の特徴を考慮に入れている。

外科手術、放射線療法、化学療法等の従来の腫瘍治療法は、優れた治療効果を示すが、すべて多くの欠点が存在する。近年出現した腫瘍免疫療法は、従来の腫瘍治療手段と比較して、患者の生活の質を大幅に改善する。

しかしながら、効果の良くない臨床治療および薬剤耐性の頻繁な出現により、より効果的な治療計画を開発する必要が乗じている。さらに、いくつかの抗腫瘍薬には、深刻な毒性と副作用があり、患者は、治療をあきらめればならない。

従って、当技術分野では、効果的で、毒性および副作用が低い腫瘍（腎がんを含む）を治療するための新しい治療方法および薬物を開発することが緊急に必要とされる。

本発明の目的は、効果的で、毒性および副作用が低い腎がんを治療するための治療方法および薬物を提供し、具体的には、本発明は、腎がんの相乗的治療におけるペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の用途を提供する。

本発明の第１の態様は、有効成分の組み合わせの用途を提供し、前記有効成分の組み合わせは、第１の有効成分ペグインターフェロンおよび第２の有効成分プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含み、また前記組み合わせは、腎がんを相乗的に治療するための医薬組成物またはキットの調製に使用される。

別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、抗体である。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂである。

別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンは、１～１０万分子量のＰＥＧで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂ、好ましくは、１～５万分子量のＰＥＧで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂを含む。

別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との質量比は、１：１００～５００：１、好ましくは、１：２０～２００：１、より好ましくは、１：１０～１００：１または１：５～５０：１である。

別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇ、好ましくは、１００００ＩＵ／ｍｇ～１０００万ＩＵ／ｍｇ、より好ましくは、１０万ＩＵ／ｍｇ～５００万ＩＵ／ｍｇまたは２０万ＩＵ／ｍｇ～３００万ＩＵ／ｍｇである。

別の好ましい例において、前記医薬組成物またはキットは、哺乳動物の治療に使用される、または哺乳動物に投与され、より好ましくは、前記哺乳動物は、齧歯類動物（例えば、マウス、ラット）またはヒトである。

別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチンを含む。

本発明の第２の態様は、医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、ペグインターフェロン、プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含む。
別の好ましい例において、前記医薬組成物は、追加の治療薬（例えば、抗腫瘍剤）をさらに含む。

別の好ましい例において、前記医薬組成物は、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、ＣＡＲ－Ｔ細胞、またはその組み合わせをさらに含む。
別の好ましい例において、前記化学療法剤は、シスプラチン、パクリタキセルを含む。

本発明の第３の態様は、有効成分の組み合わせを含み、前記組み合わせは、ペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤で構成される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤を含む。

本発明の第４の態様は、キットを提供し、前記キットは、
（ａ）ペグインターフェロンおよび薬学的に許容される担体を含む第１の製剤と、
（ｂ）プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含む第２の製剤と、および
（ｃ）ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤とを併用して、腫瘍を治療する方法について説明する説明書とを含む。

別の好ましい例において、前記第１の製剤および第２の製剤は、それぞれ独立している。
別の好ましい例において、前記第１の製剤および第２の製剤は、凍結乾燥製剤または液体製剤である。
別の好ましい例において、前記第１の製剤および第２の製剤は、注射剤である。

別の好ましい例において、前記第１の製剤は、第２の製剤の投与前、投与中または投与後に投与される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチンを含む。

本発明の第５の態様は、腫瘍細胞培養系に第３の態様に記載の有効成分の組み合わせおよび／または第２の態様に記載の医薬組成物を加えることにより、腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害する段階を含む、腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害するためのインビトロの非治療的方法を提供する。

別の好ましい例において、前記腫瘍細胞は、腎がん細胞および肝臓がん細胞を含む。
別の好ましい例において、前記方法は、腫瘍細胞およびペグインターフェロンならびにプロトオンコジーン産物標的阻害剤とともに混合および培養する段階を含む。

別の好ましい例において、前記腫瘍細胞は、対数増殖期にある腫瘍細胞を含む。
別の好ましい例において、前記腫瘍細胞の数は、１０^３～１０^８細胞／ｍｌである。

別の好ましい例において、前記培養時間は、０．１～１２０時間、好ましくは、１～９６時間である。
別の好ましい例において、混合培養液におけるペグインターフェロンの最終濃度は、１００～１０００μｇ／ｍｌ、好ましくは、２００～５００μｇ／ｍｌ、より好ましくは、約３００μｇ／ｍｌである。

別の好ましい例において、混合培養液におけるプロトオンコジーン産物標的阻害剤の最終濃度は、０．５～５０μｇ／ｍｌ、好ましくは、１～２５μｇ／ｍｌ、より好ましくは、２～１５μｇ／ｍｌであり、例えば、約３μｇ／ｍｌである。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチンを含む。

本発明の第６の態様は、必要とする対象（例えば、ヒト）に本発明の第２の態様に記載の有効成分の組み合わせおよび／または第３の態様に記載の医薬組成物を投与することにより、腫瘍細胞を治療する段階を含む、腎がんを治療する方法を提供する。

本発明の第７の態様は、必要とする対象（例えば、ヒト、特に腎がん患者）にペグインターフェロンを投与する段階を含む、プロトオンコジーン産物標的阻害剤の毒性を低減する方法を提供し、ここで、ペグインターフェロンの投与は、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤を前記対象に投与する前、投与中、および／または投与後に行われる。

別の好ましい例において、前記毒性と副作用は、体重減少、胃腸反応（例えば、吐き気、嘔吐、食欲不振）、倦怠感、発疹、紅斑からなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチンを含む。

本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説明される各技術的特徴との間を、互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることに理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。

ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用の治療効果を示すグラフである。ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウス体重に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用の影響を示す。ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用の治療効果を示す腫瘍写真グラフである。

ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。７８６－Ｏ担癌ヌードマウス体重に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の影響を示す。ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。上の図：Ｄ２１、下の図：Ｄ４２。

ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。Ｈｕｈ－７担癌ヌードマウス体重に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の影響を示す。ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。

本発明者らは、広範囲にわたる詳細な研究の後、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤が腫瘍（特に、腎がん）の治療において良好な相乗的効果を有することを予期せずに初めて発見した。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤とを併用すると、腫瘍の成長を効果的に阻害することができ、その効果は、両方の相加効果よりもはるかに優れており、また、インターフェロン使用の副作用（特に、高投与量でインターフェロン薬の長期使用によって引き起こされる副作用）を大幅に低減することができる。これに基づいて、本発明を完了した。

用語
本明細書で使用されるように、「第１の有効成分」という用語は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを指す。当該用語は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンと同じ機能を有する誘導体を含むことを理解されたい。
本明細書で使用されるように、「第２の有効成分」という用語は、プロトオンコジーン産物標的阻害剤、特に、小分子標的阻害剤および抗体標的阻害剤を指す。好ましくは、前記プロトオンコジーン産物は、ＥＧＦＲタンパク質等のタンパク質である。

本明細書で使用されるように、「本発明の有効成分の組み合わせ」、「本発明の物質の組み合わせ」、「本発明の医薬成分の組み合わせ」という用語は、交換可能に使用され、上記第１の有効成分と第２の有効成分との組み合わせを指す。

本明細書で使用されるように、「本発明の医薬組成物」という用語は、第１の有効成分（または前記第１の有効成分を含む第１の製剤）および第２の有効成分（または前記第２の有効成分を含む第２の製剤）の組成物を含むか、または含有することを指し、ここで、前記第１の製剤および第２の製剤は、同じまたは異なる製剤であり得る。さらに、第１の製剤および第２の製剤は、同じ製剤であり得るか、またはそれぞれ独立した製剤であり得る。

一般的なインターフェロンおよびペグ（ＰＥＧ）インターフェロン
一般的なインターフェロン（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）療法は、腫瘍免疫療法の重要なメンバーとして、腫瘍治療において長年の臨床経験があり、大量の研究によると、一般的なインターフェロンは、様々な腫瘍の増殖に対して良好な阻害効果を有することを示す。

一般的なインターフェロンαは、１９８６年に悪性腫瘍の治療のための最初の生物学的製剤として承認され、現在、有毛細胞白血病、慢性白血病、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、膀胱がん、卵巣がん、進行性転移性腎がん、膵臓悪性内分泌腫瘍、黒色腫、喉頭乳頭腫、基底細胞がんおよびＫａｐｏｓｉ肉腫等を含む、幅広い適応症の範囲を有する。

一般的なインターフェロンα１ｂ（ｒｈＩＦＮα１ｂ）は、１９８０年代に中国の健康なヒト臍帯血の白血球から遺伝子にクローン化して、開発された中国の最初の遺伝子操作されたタンパク質の薬物である。
ｒｈＩＦＮα１ｂは、１６６個のアミノ酸で構成され、相対分子量は、１９．３８２ｋＤａであり、広範囲の抗ウイルス、抗腫瘍および免疫調節機能を有する。１９９０年代に実施された臨床研究の結果、過去数十年間の臨床研究および臨床的実際の使用効果は、それが特定の腫瘍に対して一定の治療効果を有することを証明した。しかしながら、インターフェロンの単独治療は、高投与量の使用が必要としかつ副作用が大きく、患者のコンプライアンスが低下する。

インターフェロンα種類のアミノ酸配列および相同性分析
ＨｕＩＦＮα－１ｂ（１６６ａａ）ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＡＡＬ３５２２３（ＳＥＱＩＤＮｏ：１）
１ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫ
５１ＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶ
１０１ＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲ
１５１ＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ１６６

ＨｕＩＦＮα－２ａ（１６５ａａ）ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：１ＩＴＦ＿Ａ（ＳＥＱＩＤＮｏ：２）
１ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡ
５１ＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩ
１０１ＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳ
１５１ＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ１６５

ＨｕＩＦＮα－２ｂ（１６５ａａ）ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：１ＲＨ２＿Ａ（ＳＥＱＩＤＮｏ：３）
１ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡ
５１ＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩ
１０１ＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳ
１５１ＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ１６５

相同性分析：ＮＣＢＩＢＬＡＳＴ
ＨｕＩＦＮα－１ｂ与ＨｕＩＦＮα－２ａ：８１％
Ｑｕｅｒｙ１ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬ６０
ＣＤＬＰ＋ＴＨＳＬ＋ＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭ＋ＩＳＳＣＬＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＩＶＬＨＥ＋
Ｓｂｊｃｔ１ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦ－ＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭ５９

Ｑｕｅｒｙ６１ＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＰＮＤＬＥＡＣＶＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶ１２０
ＩＱＱＩＦＮＬＦ＋ＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＬＬＤＫＦＴＥＬＹＱＱＮＤＬＥＡＣＶ＋ＱＶＥＴＰＬＭＤＳＩＬＡＶ
Ｓｂｊｃｔ６０ＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶ１１９

Ｑｕｅｒｙ１２１ＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＶＲＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ１６６
＋ＫＹＦ＋ＲＩＴＬＹＬＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩ＋ＲＳＳＬＳＴＮＬＱＥＬＲＫＥ
Ｓｂｊｃｔ１２０ＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ１６５

ＨｕＩＦＮα－１ｂおよびＨｕＩＦＮα－２ｂ：８３％
Ｑｕｅｒｙ１ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬ６０
ＣＤＬＰ＋ＴＨＳＬ＋ＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＩＳＳＣＬＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＩＶＬＨＥ＋
Ｓｂｊｃｔ１ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦ－ＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭ５９

Ｑｕｅｒｙ６１ＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＰＮＤＬＥＡＣＶＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶ１２０
ＩＱＱＩＦＮＬＦ＋ＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＬＬＤＫＦＴＥＬＹＱＱＮＤＬＥＡＣＶ＋ＱＶＥＴＰＬＭＮＤＳＩＬＡＶ
Ｓｂｊｃｔ６０ＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＮＥＤＳＩＬＡＶ１１９

ポリエチレングリコール（ＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）は、線状または分岐構造を有し、平均分子量が２００Ｄａ以上であるエチレングリコールポリマーの総称であり、分子量が高く、安全で毒性がなく、両親媒性で、免疫不活性で、構造が安定する、等の特性を有する。ポリエチレングリコールによるタンパク質の化学修飾が、タンパク質のアミノ酸成分を変えることなく、その生インビボ半減期を延長し、安定性を向上させ、免疫原性および抗原性を低減させる等のことは、タンパク質の薬物の薬力学的特性を改善するための簡単で、効果的な手段である。

好ましいペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂは、約１～１０万ダルトン（例えば、約２万）のペグで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂである。特に好ましいのは、分子量が約２万ダルトンのペグで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂであり、それは、新しい種類の長時間作用型インターフェロンα１ｂ薬物である（中国特許ＺＬ２００４１００６７６５２．３を参照する）。インビトロ実験では、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂが腫瘍細胞の増殖に対して阻害効果を生成できることが観察され、インビボ実験では、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがマウスの皮下移植腫瘍に対して明らかな治療効果を発揮できることを示す。

インビトロ実験の結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路を活性化することによって、腫瘍細胞の増殖を阻害して、その抗腫瘍効果を発揮できることを示す。腫瘍血管新生因子の発現を阻害することにより、血管内皮細胞の成長を阻害しかつそのアポトーシスを促進することができる。
マウス担癌試験の結果は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの皮下注射が用量依存的にヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を阻害できることを示す。

さらに、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとモノクローナル抗体薬アバスチンとの併用がＣａｋｉ－１の腫瘍阻害率を大幅に改善できる場合、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療においてアバスチンに対して相乗的効果を有することを示す。さらに、第１の有効成分ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンと第２の有効成分プロトオンコジーン産物標的阻害剤（例えば、アバスチンまたはハーセプチン等）とを併用する場合、腫瘍を効果的に阻害するだけでなく、毒性と副作用を大幅に低減させることができ、特に、インフルエンザ様症候群、胃腸反応（例えば、吐き気、嘔吐、食欲不振）、倦怠感、発疹（掻痒を伴う非特異的な発疹を含む）、紅斑、体重減少等からなる群から選択される一つまたは複数の副作用を低減させることができる。

本発明の研究によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂが腫瘍細胞に投与される場合、腫瘍細胞の増殖および／または遊走を阻害できることを示す。

プロトオンコジーン産物標的阻害剤
本明細書で使用されるように、「プロトオンコジーン産物標的阻害剤」、「プロトオンコタンパク質標的阻害剤」という用語は、交換可能に使用され、プロトオンコジーンのコードされた生成物（特に、タンパク質）を特異的に標的とする阻害剤を指す。本明細書で使用されるように、用語「プロトオンコタンパク質」という用語は、プロトオンコジーンによってコードされるタンパク質、特に膜タンパク質を指す。本発明のいくつかの実施形態において、プロトオンコタンパク質阻害剤は、プロトオンコタンパク質の量を減少させ、プロトオンコタンパク質の活性化を阻害または遮断するか、またはシグナル伝達経路における他の分子を阻害することによって作用することができる。

プロトオンコジーン産物標的阻害剤の非限定的な例としては、ＥＧＦＲを標的とする阻害剤、Ｈｅｒ２を標的とする阻害剤、またはその組み合わせを含む（これらに限定されない）。
本明細書で使用されるように、「プロトオンコタンパク質活性」という用語は、癌細胞の形成、成長、増殖、遊走および／または浸潤を促進するプロトオンコタンパク質の能力を指す。

本明細書で使用されるように、「プロトオンコタンパク質発現」という用語は、当技術分野で知られている任意の方法によって測定されるプロトオンコタンパク質遺伝子生成物の形成を指し、前記方法は、核酸ハイブリダイゼーション法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎブロッティング、インサイチュハイブリダイゼーション、ポリメラーゼ連鎖反応増幅、レポーター遺伝子発現等を含む（これらに限定されない）。プロトオンコタンパク質遺伝子生成物の形成は、免疫組織化学、免疫蛍光、ＷｅｓｔｅｒｎブロッティングおよびＥＬＩＳＡ法を含む、任意の抗体ベースの技術でも測定することができる。
本発明において、標的阻害剤は、抗体、小分子薬、核酸薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞等を含む（これらに限定されない）。

ＥＧＦＲおよびその阻害剤
上皮成長因子受容体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＥＧＦＲ）ＥＧＦＲは、ＥｒｂＢ受容体ファミリーメンバーに属する膜貫通タンパク質（ＮＭ＿２０１２８２）であり、そのリガンド（ＥＧＦ、ＴＧＦ－α等）は、ＥＧＦＲの細胞外セグメントに結合して二量体化することにより、細胞内セグメントのチロシンキナーゼの活性化および一連のシグナル伝達的カスケード反応をもたらし、細胞増殖、血管新生、転移を促進し、かつ細胞アポトーシスを阻害することにより、腫瘍の発生を引き起こす。大量の研究によると、ＥＧＦＲ遺伝子は、様々な腫瘍組織で過剰発現または異常に活性化されることにより、腫瘍細胞の増殖、浸潤および転移の能力が増強されることが分かる。ＥＧＦＲは、多くの種類の腫瘍に対して臨床的に検証された治療標的になっている。

癌標的治療の開発において、成功する策略は、モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｍＡｂ）を使用して腫瘍細胞の表面に抗原決定基を局在化することにより、癌細胞を標的にして殺すことである。従って、抗体または他の標的阻害剤を使用して、腫瘍細胞の表面のＥＧＦＲを標的化して、癌細胞を殺すか、または阻害することができる。
代表的なＥＧＦＲ阻害剤は、ベバシズマブ（アバスチンａｖａｓｔｉｎ）またはそのバイオシミラーまたはそのＡＤＣ等の抗ＥＧＦＲ抗体である。ベバシズマブは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体である。

ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ
本発明において、プロトオンコジーンを標的とする核酸薬を使用して、前記プロトオンコジーン（例えば、ＥＧＦＲ）を標的にして阻害する。
代表的な核酸薬は、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびその前駆体、または発現ベクターを含む（これらに限定されない）。

本明細書で使用されるように、「ＲＮＡｉ」（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡ干渉）という用語は、進化の過程で高度に保存され、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって誘導され、相同なｍＲＮＡを高い効率および置く以西で分解する現象を指す。ＲＮＡｉ技術を使用すると、特定の遺伝子の発現を特異的にノックアウトまたはオフにすることができるため、当該技術は、遺伝子治療の分野で遺伝子機能および感染性疾患、悪性腫瘍の遺伝子治療に広く使用される。

本明細書で使用されるように、「ｓｉＲＮＡ」（ＳｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）という用語は、Ｄｉｃｅｒ（ＲＮＡ酵素IIIファミリーにおいて、二本鎖ＲＮＡに特異性を有する酵素）がその前駆体（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ等）から処理することができ、化学的方法によって合成するか、または他のタンパク質によって処理することができる、低分子ＲＮＡ分子（約２１～２５個のヌクレオチド）を指す。ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＩＳＣの主なメンバーであり、相補的な標的ｍＲＮＡを刺激して急速に切断および分解し、標的遺伝子をサイレンシングして、ＲＮＡｉの重要な機能分子になる。

本明細書で使用される「発現カセット」という用語は、本発明のＲＮＡｉ前駆体のコード配列と、前記コード配列に作動可能に結合されたプロモーターおよび終結シグナルとを含む発現カセットを指し、前記発現カセットは、転写後に本発明のＲＮＡｉ前駆体を生成する。本明細書で使用される「ＲＮＡｉ前駆体」という用語は、哺乳動物細胞でプロセシングされてｓｉＲＮＡを生成することができるＲＮＡ分子を指し、具体的には、Ｄｉｃｅｒ、Ａｇｏ２または他の類似なタンパク質で選択的にプロセシングされて成熟ｓｉＲＮＡを生成し、ＲＮＡｉを実施する。

本明細書で使用される「ｓｈＲＮＡ」という用語は、「ショートヘアピンＲＮＡ」、即ち、ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡの略語である。ｓｈＲＮＡは、二つの短い逆相補的配列で構成され、真ん中は、トップループ（ｌｏｏｐ）配列によって間隔されて、ヘアピン構造を形成し、細胞の内因性ＲＮＡポリメラーゼIII（ＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ III）プロモーターによって転写を制御し、ｓｈＲＮＡ配列の末端は、ＲＮＡポリメラーゼIIIの転写ターミネーターとして５～６個のＴに結合される。生体で「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）を生成する一つの方法は、ｓｉＲＮＡ配列を「ショートヘアピン」の一部としてプラスミドベクターにクローン化することである。動物体内に送達する場合、当該ヘアピン配列が発現されて、トップループ構造を有する「二本鎖ＲＮＡ」（ｓｈＲＮＡ）を形成し、細胞内のＤｉｃｅｒおよびＡｇｏ２等のタンパク質によって識別および処理され、機能的なｓｉＲＮＡを生成する。

本明細書で使用される「ｍｉＲＮＡ」（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）という用語は、内因性遺伝子によってコードされた長さが約２０～２４個のヌクレオチドの非コード一本鎖ＲＮＡ分子のクラスであり、動植物における多数の遺伝子の発現の調節に関与する。これまでに、動植物およびウイルスで４０００を超えるｍｉＲＮＡ分子が発見された。ほとんどのｍｉＲＮＡ遺伝子は、単一コピー、複数コピーまたは遺伝子クラスター（ｃｌｕｓｔｅｒ）の形態でゲノムに存在する。各ｍｉＲＮＡは、複数の標的遺伝子を調節することができ、複数のｍｉＲＮＡも同じ遺伝子を一緒に調節することに関与して、複雑な調節ネットワークを形成することができる。ｍｉＲＮＡは、ヒト遺伝子の半分以上の発現を調節すると推測される。ｍｉＲＮＡには多くの形態が存在し、最も原始的なのは、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡであり、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡは、Ｄｒｏｓｈａによって処理された後、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ、即ち、約５０～９０個のヌクレオチドの長さのｍｉＲＮＡ前駆体になり、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ酵素に消化された後、約２０～２４個のヌクレオチドの長さの成熟ｍｉＲＮＡになる。ｍｉＲＮＡは、主に翻訳を阻害し、ｍＲＮＡの脱アデニル化を促進することにより、標的遺伝子の発現を阻害し、そのメカニズムは、ｓｉＲＮＡによって媒介されたｍＲＮＡ分解とは異なる。

発現ベクター
本明細書で使用されるように、「発現ベクター」という用語は、目的のポリヌクレオチド配列を標的細胞に転移することができるベクターを指す。このようなベクターは、自己複製するか、または宿主細胞染色体（宿主細胞には、例えば、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体、および植物個体等）に結合することができ、本発明のポリヌクレオチドの転写に適した部位にプロモーターを含み得る。発現ベクターは、構造遺伝子、およびその発現を調節するプロモーターを含み得、さらに、宿主細胞で機能する様々な調節要素をさらに含む。生物生体（例えば、動物）の発現ベクターの種類および使用される調節要素の種類は、使用される宿主細胞の種類に応じて変化し得ることが当技術分野でよく知られている。

本発明で使用できるウイルスベクター没は、特に限定さず、ウイルスの特性を使用してそのゲノムを伝達し、感染のために遺伝物質を他の細胞に持ち込むことができる任意のウイルスベクターであり得る。生体全体または細胞培養で発生することができる。レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポックスウイルスベクターを含む。本発明において、好ましい発現ベクターは、レンチウイルスベクターである。

医薬組成物および投与方式
本発明は、腫瘍成長および／または転移を阻害するために使用されることができる、腫瘍の相乗的治療に使用することができる組成物を提供する。
本発明の医薬組成物は、有効量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、有効量のプロトオンコジーン産物標的阻害剤、および薬学的に許容される担体を含む。
さらに、本発明の医薬組成物は、任意選択の固形腫瘍の化学療法剤をさらに含み得る。前記化学療法剤は、シスプラチン、パクリタキセル、アドリアマイシン等を含む（これらに限定されない）。

通常、本発明のペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、またはプロトオンコジーン産物標的阻害剤は、非毒性で、不活性で、薬学的に許容される担体媒体で調製されることができ、ここで、ｐＨは、通常約５～８であり、好ましくは、ｐＨは、約６～８である。
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される担体」は、様々な賦形剤および希釈剤を含む、治療剤の投与のための担体を指す。

用語は、それ自体が必須の有効成分ではなく、投与後に過度の毒性がない、いくつかの薬剤担体を指す。適切な担体は、当業者によく知られている。組成物中の薬学的に許容される担体は、水、生理食塩水、緩衝液等の液体を含み得る。さらに、これらの担体には、充填剤、潤滑剤、流動促進剤、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質等の補助性物質も存在し得る。前記担体には、細胞トランスフェクション試薬をさらに含み得る。

本明細書で使用されるように、「有効量」または「有効投与量」という用語は、ヒトおよび／または動物および／または細胞において機能的または活性であり、かつヒトおよび／または動物に許容される量を指す。

本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される」成分は、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激およびアレルギー反応）なしにヒトおよび／または哺乳動物での使用に適した成分、即ち、合理的な利益／リスク比を有する物質である。「薬学的に許容される担体」という用語は、様々な賦形剤および希釈剤を含む、治療剤の投与のための担体を指す。このような担体は、生理食塩水、緩衝液、グルコース、水、グリセロール、ポリソルベート、エタノールおよびその組み合わせを含む（これらに限定されない）。通常、医薬製剤は、投与方式と一致する必要があり、本発明の医薬組成物は、注射剤の形態で、例えば、生理食塩水またはグルコースおよび他のアジュバントを含む水溶液を用いて、従来の方法によって調製されることができる。前記医薬組成物は、好ましくは、無菌条件下で調製される。有効成分の投与量は、治療有効量である。本発明の医薬製剤は、徐放性製剤にすることもできる。

さらに、本発明の有効成分の組み合わせは、他の治療剤（例えば、抗腫瘍剤または免疫調節剤）とともに使用することができる。
医薬組成物を使用する場合、安全かつ有効量の有効成分の組み合わせ（第１の有効成分（またはその製剤）および／または第２の有効成分（またはその製剤）を含む）を哺乳動物に投与する。

本発明の前記有効成分の組み合わせにおける第１の有効成分（またはその製剤）および／または第２の有効成分（またはその製剤）の有効量は、投与モードおよび腫瘍の重症度によって変化することができることを理解されたい。好ましい有効量の選択は、当業者が様々な要因（例えば、臨床試験を通じて）に基づいて決定することができる。前記要因には、例えば、バイオアベイラビリティ、代謝、半減期等の薬物動態パラメーター、腫瘍の重症度、患者の体重、患者の免疫状態、投与経路等を含むが、これらに限定されない。

典型的には、第１の有効成分については、その安全かつ有効量は、通常、少なくとも約１０ｎｇ／ｋｇ体重であり、ほとんどの場合、約５０ｍｇ／ｋｇ体重以下であり、好ましくは、当該投与量は、約５０ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状態等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。

第２の有効成分については、その安全かつ有効量は、通常、少なくとも約１０ｎｇ／ｋｇ体重、ほとんどの場合、約５０ｍｇ／ｋｇ体重以下であり、好ましくは、当該投与量は、約５０ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状態等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。
本発明の前記医薬組成物の投与方式は、特に限定されず、代表的な例としては、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射等を含む（これらに限定されない）。

キット
本発明は、キットを提供し、前記キットは、次のようなコンポーネントを含む。
コンポーネント（１）：ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤、
コンポーネント（２）：プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤、
コンポーネント（３）：説明書。

前記ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤は、凍結乾燥製剤、液体製剤または静脈内注射液を含む（これらに限定されない）。
前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤は、凍結乾燥製剤、液体製剤、錠剤、カプセル、坐剤、または静脈内注射液を含む（これらに限定されない）。
本発明において、タンパク質製剤は、通常、凍結乾燥製剤または注射剤である。

典型的には、キットには、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む一つまたは複数（例えば、少なくとも二つ）のユニット剤形およびプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む一つまたは複数（例えば、少なくとも二つ）のユニット剤形が含まれ、好ましくは、それぞれ４～１０個である。

本明細書で使用されるように、「ユニット剤形」という用語は、様々な固体剤形（例えば、錠剤）、液体剤形、カプセル剤、徐放性剤形を含むが、これらに限定されない、投与の便宜のために段階投与に必要な剤形への組成物の調製を指す。

本発明によって提供される説明書には、次のように説明することができる。前記キットの使用方法は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含むユニット剤形とプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含むユニット剤形とを同時に使用することである。

本発明によって提供されるキットは、次のような段階によって調製される。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤とプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤とを、説明書とともに一緒に配置して、キットを形成する。

前記ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤は、好ましくは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンのユニット剤形を含み、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤は、好ましくは、プロトオンコジーン産物標的阻害剤のユニット剤形を含む。

前記段階は、好ましくは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む少なくとも一つのユニット剤形と、プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む少なくとも一つのユニット剤形とを、説明書とともに一緒に配置して、キットを形成する。

本発明の有益な効果は、次のとおりである。
１．ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤は、抗腫瘍治療に相乗的に作用することにより、腫瘍成長をより有意に阻害することができる。
２．ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との併用は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの投与量を大幅に低減することができ、より強力な抗腫瘍治療効果をより早く示すことができるため、長期および／または高投与量のインターフェロンによって引き起こされる副作用を大幅に低減することができる。

以下、本発明は、具体的実施例と併せてされに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において、具体的条件を示さない実験方法は、通常、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、分子クローニング：実験マニュアル（ＮｅｗＹｏｒｋ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８９）に記載される条件等の従来の条件、またはメーカーによって提案された条件に従う。特に明記されない限り、パーセンテージおよび部数は、重量パーセンテージおよび重量部数で計算される。

試薬
各実施例において、ペグインターフェロンとは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（上海生物製品研究所株式会社）、白色凍結乾燥粉末注射剤、仕様１００μｇ／ボトル（０．５ｍｌ）、合計１０万ＩＵ（即ち、１０００ＩＵ／μｇ）を指す。
アバスチン（ベバシズマブ注射液）（ａｖａｓｔｉｎ）は、市販の製品である。

一般的な方法
実験動物の使用および福祉は、「国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）」の規則に従って実行される。動物の健康状態および死亡状況を毎日モニターリングし、定期検査は、行動活動、体重変化、身体的兆候等の、動物の日常の行動に対する試験物質および薬物の影響を観察することを含む。

マウスにおける腫瘍抑制実験の指標は、腫瘍成長に対する薬物の効果を観察することであり、具体的な指標は、Ｔ／Ｃ％または腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）である。
腫瘍の直径を週２回ノギスで測定し、腫瘍体積（Ｖ）の計算式は、Ｖ＝１／２×ａ×ｂ^２であり、ここで、ａおよびｂは、それぞれ長さおよび幅を表す。

Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ－Ｔ_０）／（Ｃ－Ｃ_０）×１００、
ここで、ＴおよびＣは、実験終了時の腫瘍体積であり、Ｔ_０およびＣ_０は、実験開始時の腫瘍体積である。
腫瘍抑制率（ＴＧＩ）（％）＝１００－Ｔ／Ｃ（％）。
腫瘍が退縮する場合、腫瘍抑制率は、（ＴＧＩ）（％）＝１００－（Ｔ－Ｔ_０）／Ｔ_０×１００である

腫瘍が開始体積から縮小する場合、即ち、Ｔ＜Ｔ_０またはＣ＜Ｃ_０の場合、部分腫瘍退縮（ＰＲ）と定義され、腫瘍が完全に消失する場合、完全な腫瘍退縮（ＣＲ）と定義される。
実験が終わり（例えば、Ｄ２１）、実験の終点に達するか、または腫瘍体積が１５００ｍｍ^３に達する場合、動物をＣＯ_２麻酔によって犠牲にし、その後に解剖して腫瘍を取り、写真を撮る。

実施例１
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用による抗腎がんＣａｋｉ－１腫瘍実験
１）実験動物およびその飼育
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、４～５週齢、雄、上海霊暢生物科学技術株式会社。実験中、マウスは、中国科学院の上海薬物研究所のＳＰＦ級動物室で飼育される。

２）細胞
ヒト腎がんＣａｋｉ－１細胞は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から購入される。細胞は、中国科学院の上海薬物研究所によって保存および使用される。

３）試験薬
注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンと呼ばれる」）：白色凍結乾燥粉末注射剤、仕様１００μｇ／ボトル（０．５ｍｌ）、バッチ番号Ｓ２０１７０９０８、２～８℃下で暗所で密閉されて保存される。上海生物製品研究所株式会社によって生産および提供される。

アバスチン（ベバシズマブ注射液）：無色透明の液体、１００ｍｇ（４ｍｌ）／ボトル、バッチ番号Ｈ０１８２Ｂ０３、２～８℃下で暗所で密閉されて保存され、ロシュ製薬会社から購入される。
注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの各ボトルに１２０μｌの生理食塩水を加え、濃度は、１ｍｇ／ｍｌであり、使用前に調製し、生理食塩水で希釈する。アバスチン濃度は、２５ｍｇ／ｍｌであり、必要とする濃度までに生理食塩水で直接希釈する。

４）ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスモデルの構築
ヌードマウスに８×１０^６個のヒト腎がんＣａｋｉ－１細胞を皮下接種し、腫瘍が１００～１５０ｍｍ^３に成長した後、腫瘍体積に応じて動物をグループ化する。

５）腫瘍阻害実験プロセス
マウスに皮下注射（ＳＣ）または静脈内注射（ＩＶ）で週２回（ＢＩＷ）投与し、投与体積は、１０ｍＬ／ｋｇであり、溶媒群に同量の「溶媒」（生理食塩水）を投与する。具体的な投与量および投与方案は、表１に示される。腫瘍体積を週２回測定し、マウスの体重を測定し、データを記録する。

６）実験結果
結果は、表１および図１～図３に示されたとおりである。

表１．ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用の治療効果

Ｄ０：最初の投与時間、Ｐ値とは、溶媒との比較を示し、＊Ｐ＜０．０５、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン１ｍｇ／ｋｇまたはアバスチン１０ｍｇ／ｋｇと比較。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、用量依存性地阻害ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を用量依存的に阻害し、腫瘍阻害率は、それぞれ３５％、４６％および７０％であり、Ｃａｋｉ－１皮下移植腫瘍に対するアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）の腫瘍阻害率は、４２％である。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）とを併用する場合、Ｃａｋｉ－１に対する腫瘍阻害率は、それぞれ４９％、６９％、７９％に増加し、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂは、ノードマウスのヒト腎がんＣａｋｉ－１皮下移植腫瘍の治療においてアバスチンに相乗的効果を有し、ここで、中用量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ１ｍｇ／ｋｇは、アバスチンに対して有意な相乗的効果（Ｐ＜０．０５、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂまたはアバスチンの単独と比較して）を有し、相乗的効果を示す。

さらに、併用する場合、担癌マウスは、薬物耐性が高く、体重減少等の症状はない。特に図２に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用群のマウス体重は、単独使用のアバスチン群のマウス体重よりも高く、これは、ペグインターフェロンとアバスチンとを併用する場合、治療効果が効果的に改善される同時に、対応する副作用も大幅に軽減される。

上記の実験結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂと併用したアバスチンは、ヒト腎がんＣａｋｉ－１ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対して、相乗的的阻害効果を示し、マウスは、耐性が良好で、副作用が減少し、体重が減少以内等の症状を有することを示す。

実施例２
ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用の治療効果

１．まとめ
ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）の単独またはバスチンとの併用の治療効果を評価する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）、またはペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）との併用。

２．実験目的
ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの単独またはバスチンとの併用の治療効果を評価する。

３．試験薬
３．１．薬物情報
注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）：実施例１と同じである。
アバスチン（ベバシズマブ注射液）：実施例１と同じである。

３．２．提供単位
実施例１と同じである。
３．３．薬物の調製
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの各ボトルに１２０μｌの注射用滅菌水を加え、濃度は、１ｍｇ／ｍｌであり、使用前に調製し、生理食塩水で希釈し、アバスチン濃度は、２５ｍｇ／ｍｌであり、必要とする濃度までに生理食塩水で直接希釈する。

４．細胞
ヒト腎がん７８６－Ｏ細胞は、中国科学院セルバンクから購入される。７８６－Ｏ細胞を１０ｃｍのペトリ皿で付着培養し、培養条件は、１０％ウシ胎児血清およびペニシリン、ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地でデ、３７℃下で、５％ＣＯ_２空気を含むインキュベーターで培養する。週に２～３回継代し、細胞が指数増殖期にある場合、トリプシン処理し、細胞を収集し、カウントし、接種する。。

５．実験動物
ＮＵ／ＮＵマウス、１８～２０ｇ、♂、北京維通利華実験動物技術株式会社上海子会社から購入される。生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（滬）２０１７－００１１、動物合格証番号２０１７００１１００２８１９。飼育環境：ＳＰＦ級。

６．実験段階
ヌードマウスに７×１０^６のヒト腎がん７８６－Ｏ細胞を皮下接種し、腫瘍が１００～１５０ｍｍ^３に成長した後、腫瘍体積に応じて動物をグループ化する（Ｄ０）。マウスに皮下注射（ＳＣ）または静脈内注射（ＩＶ）で週２回（ＢＩＷ）投与し、投与体積は、１０ｍＬ／ｋｇであり、溶媒群に同量の「溶媒」（生理食塩水）を投与し、具体的な投与量および投与方案は、表２に示される。腫瘍体積を週２回測定し、マウス体重を測定し、データを記録する。

７．統計学的分析
両側Ｓｔｕｄｅｎｔ'ｓｔ検定を使用して、二つのグループ間の腫瘍体積を比較し、Ｐ＜０．０５を統計的に有意な差として定義する。

８．結果
結果は、表２ならびに図４、図５および図６に示されたとおりである。
表２．ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果。

Ｄ０：最初の投与時間、アバスチンの最初の投与量を２倍にし、ＳＣ：皮下注射、ＩＶ：静脈内注射、Ｐ値とは、溶媒との比較を示し、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン１ｍｇ／ｋｇ＋アバスチン１０ｍｇ／ｋｇ投与量群と比較する。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、用量依存的にヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を阻害し、腫瘍阻害率は、それぞれ６１％、７５％および１６１％であり、１ｍｇ／ｋｇ群で１／６腫瘍が部分的に退縮し、１０ｍｇ／ｋｇ群で４／６腫瘍が部分的に退縮し、および２／６腫瘍が完全に退縮（Ｄ２１）し、実験の終わり（Ｄ４２）までに、１０ｍｇ／ｋｇ群で２／６腫瘍が依然として完全に退縮し、７８６－Ｏ皮下移植腫瘍に対するアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）の腫瘍阻害率は、６３％（Ｄ２１）である。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）とを併用する場合、７８６－Ｏに対する腫瘍阻害率は、１５７％に非常に有意に増加し（Ｐ＜０．０５、単剤と比較して）、５／６腫瘍が部分的に退縮し、１／６腫瘍が完全に退縮し（Ｄ２１）、実験の終わり（Ｄ４２）までに、１／６腫瘍が依然として部分的に退縮する。これは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、アバスチンと併用して、ヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において非常に有意な相乗的効果を示し、治療効果の部分的または完全な退縮さえ達成したことを示す。

さらに、併用する場合、担癌マウスは、薬物に対して良好な耐性を示し、体重減少等の症状は見られない。特に、図５に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用群のマウス体重は、ペグインターフェロンの単独群およびアバスチンの単独群のマウス体重よりも高く、これは、ペグインターフェロンとアバスチンとを併用する場合、治療効果を効果的に改善する同時に、対応する副作用も大幅に軽減されることを示唆する。

９．結論
図４、５および６に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、用量依存的にヒト腎がん７８６－Ｏのヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を阻害し、部分的または完全な腫瘍退縮を引き起こし、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）も、７８６－Ｏ皮下移植腫瘍に対して効果的である。
併用する場合、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、７８６－Ｏ腫瘍に対するアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）の治療効果を有意に増加する（Ｐ＜０．０５、単剤と比較して）。予期せぬことには、併用する場合、薬物の毒性は、大幅に増加しなかっただけでなく、大幅に減少する。

実施例３
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独またはバスチンとの併用の治療効果

１．まとめ
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）の単独またはバスチンとの併用の治療効果を評価する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）、またはペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）との併用。

２．実験目的
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの単独またはバスチンとの併用の治療効果を評価する。

４．細胞
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７細胞は、中国科学院セルバンクから購入される。Ｈｕｈ－７細胞を１０ｃｍのペトリ皿で付着培養し、培養条件は、１０％ウシ胎児血清およびペニシリン、ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地で、３７℃下で、５％ＣＯ_２空気を含むインキュベーターで培養する。週に２～３回継代し、細胞が指数増殖期にある場合、トリプシン処理し、細胞を収集し、カウントし、接種する。

５．実験動物
［Ｄ０００５２１］ＢＡＬＢ／ｃ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｎｊｕ、６～７週、♀、江蘇集萃薬康生物科学技術株式会社から購入する。生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１８－０００８、動物合格証番号２０１９００９４９。飼育環境：ＳＰＦ級。

６．実験段階
ヌードマウスに６×１０^６のヒト肝臓がんＨｕｈ－７細胞を皮下接種し、腫瘍が１００～１５０ｍｍ^３に成長した後、腫瘍体積に応じて動物をグループ化する（Ｄ０）。マウスに皮下注射（ＳＣ）または静脈内注射（ＩＶ）で週２回（ＢＩＷ）投与し、投与体積は、１０ｍＬ／ｋｇであり、溶媒群に同量の「溶媒」（生理食塩水）を投与し、具体的な投与量および投与方案は、表３に示される。腫瘍体積を週２回測定し、マウス体重を測定し、データを記録する。

８．結果
結果は、表３ならびに図７、図８および図９に示されたとおりである。
表３．ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果。

Ｄ０：最初の投与時間、アバスチンの最初の投与量を２倍にし、ＳＣ：皮下注射、ＩＶ：静脈内注射、Ｐ値とは、溶媒との比較を示し、＊Ｐ＜０．０５、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン１ｍｇ／ｋｇ＋アバスチン１０ｍｇ／ｋｇ投与量群と比較する。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）は、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を有意に阻害せず、腫瘍抑制率は、それぞれ－１０％、－７％および９％であり、Ｈｕｈ－７皮下移植腫瘍に対するアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）の腫瘍抑制率は、４０％である。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）とを併用する場合、Ｈｕｈ－７にｔ愛する腫瘍抑制率を４９％に増加する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において、アバスチンに対して、一定の相乗的な相乗効果を有する。

さらに、培養する場合、担癌マウスは、薬物耐性が高く、体重減少等の症状は見られない。図８に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用群のマウス体重は、ペグインターフェロン群（１ｍｇ／ｋｇ）の単独使用およびアバスチン群（１０ｍｇ／ｋｇ）の単独使用のマウス体重と明らかな区別はない。さらに、併用群の体重は、アバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ）の単独使用の体重よりも高く、これは、併用する場合、アバスチン投与の副作用をさらに低減することができることを示唆する。

９．結論
図７、８および９に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）は、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の増殖に対して、明らかな阻害効果を示さず、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）は、Ｈｕｈ－７皮下移植腫瘍に対して効果的である。

併用する場合、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において、アバスチンに対して相乗的な相乗効果を有する。さらに、併用する場合、毒性は増加せず、担癌マウスは、薬物に対して良好な耐性を示す。

議論
インターフェロンは、広範囲の抗ウイルス増殖、抗腫瘍、免疫調節等の様々な活性を有する高活性タンパク質分子である。腫瘍治療の分野において、一般的なインターフェロンは、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病、腎臓がん、カポジ肉腫、黒色腫、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、子宮頚部上皮内腫瘍（ＥｌｅｎａＧａｒｃｉａ－Ｍａｒｔｉｎｅｚら、ＴｒｉａｌＷａｔｃｈ：Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｃｙｔｏｋｉｎｅｓｆｏｒｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ、ＯＮＣＯＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、２０１８、ＶＯＬ．７、ＮＯ．６：ｅ１４３３９８２、１６ｐａｇｅｓ、ＸｉａｎｇＣｈｅｎら、腎臓がんに対する免疫治療の臨床研究の進歩、中国泌尿外科ジャーナル、２０１７、Ｖｏｌ．３８、Ｎｏ．９：７１７－７２０）の治療のために、米国ＦＤＡおよび欧州ＥＭＡによって承認されている。さらに、肺がん、消化管がん、前立腺がん、頭頸部扁平上皮がん等の腫瘍の治療においても一定の治療効果を有する。

一般的なインターフェロンは、安全かつ効果的な製剤であるが、依然としていくつかの問題、特に、深刻な副作用が存在する。現在、臨床的に使用される一般的なインターフェロンは、分子量がより小さいため（２０ｋＤａ以下）、糸球体によるろ過が容易であり、ヒトインビボでの半減期は、わずかに１．５～２時間であり、理想的な治療効果を達成するために、一般的なインターフェロンの一般的な臨床治療は、大量の投与、複数回の注射を使用し、患者のコンプライアンスを低下させ、副作用を引き起こしやすくなる。

黒色腫を例にすると、まず、一般的なインターフェロン２０００万ＩＵ／ｍ^２（約４００μｇ／人に等しい）を５天／周皮下注射し、１ケ月後に１０００万ＩＵ／ｍ^２（約２００μｇ／人に等しい）を投与し、治療を週３回４８週間維持する必要があり、患者の生存期間を延長することができるが、高投与量の一般的なインターフェロンの副作用は、非常に明らかであり、患者の少なくとも５０％は、投与量を遅延するか、または減少する必要があるため、高リスクの患者にのみ使用することができる。

人体における一般的なインターフェロンαの副作用は、全身性であり（ＸｕｅｌｉｎＣａｏ、インターフェロン副作用のメカニズム、生物医学工学および臨床、２０１０、ＶＯＬ．１４、ＮＯ．４：３４０－３４２）、治療の初期段階において、ほとんどの患者は、インフルエンザ様症候群を発症し、臨床症状には、発熱、悪寒、頭痛、筋肉痛、胃腸痛等がある。吐き気、嘔吐、食欲不振は、一般的なインターフェロンα治療の初期段階における一般的な胃腸反応である。一般的なインターフェロンα治療を受ける７０％を超える患者に倦怠感が発生する。神経系および性神経の副作用は、主に精神障害、憂鬱症、トランス（ｔｒａｎｃｅ）、不安、過敏症等である。一般的なインターフェロンαの治療過程を受けている約２０％の患者は、総白血球、好中球および血小板のカウントの軽度から中程度の現象が現れる可能性がある。一般的なインターフェロンαによって引き起こされる皮膚および粘膜の病変は、最も一般的な発疹であり、掻痒を伴う非特異的な発疹として現れることがよくあり、他の症状には、注射部位の紅斑、皮膚潰瘍、口腔粘膜潰瘍、口唇炎等がある。一般的なインターフェロンα治療は、自己免疫および非自己免疫メカニズムを介して、甲状腺機能障害を引き起こす可能性があり、甲状腺機能障害では、甲状腺機能低下が最も一般的である。一般的なインターフェロンαは、膵島β細胞への自己免疫性損傷を誘発して、糖尿病を誘発する可能性がある。他のより珍しい副作用には、間質性肺炎、網膜病変、聴覚障害と耳鳴り、脱毛、下痢、体重減少がある。

腫瘍の治療における一般的なインターフェロンαの治療効果を改善し、副作用を低減するために、一般的なインターフェロンαと他の腫瘍薬物との併用法案については、有益な調査が行われた（ＪｕｎＧｕｏ、転移性腎臓がんの内科治療の進歩、第２回中国腫瘍内科会議、２００８：３３－３６）。ここで、進行性腎臓がんの治療において、一般的なインターフェロンαと併用したベバシズマブの治療方案が最も成功した法案であり、二つの独立した臨床試験により、ベバシズマブと一般的なインターフェロンαとを併用して腎臓がんを治療するのは、一般的なインターフェロンの単独使用の患者のＰＦＳを有意に延長することができることが確認された（１０．２ケ月ｖｓ５．４ケ月、８．５ケ月ｖｓ５．２ケ月）。以上の結果に基づいて、２００９年に米国ＦＤＡは、進行性腎臓がんの治療のために一般的なインターフェロンと併用したベバシズマブを承認した。しかし、グレード３以上の副作用の発生率は、８０％に達する可能性があるため（ＢｒｉａｎＩ．Ｒｉｎｉら、ＰｈａｓｅＩＩＩＴｒｉａｌｏｆＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＰｌｕｓＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＡｌｆａＶｅｒｓｕｓＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＡｌｆａＭｏｎｏｔｈｅｒａｐｙｉｎＰａｔｉｅｎｔｓＷｉｔｈＭｅｔａｓｔａｔｉｃＲｅｎａｌＣｅｌｌＣａｒｃｉｎｏｍａ：ＦｉｎａｌＲｅｓｕｌｔｓｏｆＣＡＬＧＢ９０２０６、ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＬＩＮＩＣＡＬＯＮＣＯＬＯＧＹ、２０１０、ＶＯＬ２８、Ｎｏ．１３：２１３７－２１４３）、患者のコンプライアンスは高くなく、当該方案の応用を制限する。

ヒトインターフェロンα１ｂは、ヒト白血球によって生成される１６６個のアミノ酸からなるタンパク質であり、その相対分子量は、１９．３８２ｋＤａである。研究によると、ウイルスに攻撃された後、中国人の白血球によって生成される様々なインターフェロンにおいて、α１ｂ型インターフェロンが主な種類である。

１９８０年代初頭、中国医学院ウイルス学研究所の侯雲徳らが初めてα１ｂインターフェロン遺伝子のクローンを作成し、中国で最初の遺伝子操作されたタンパク質薬である組換えヒトインターフェロンα１ｂは、ウイルス学研究所および上海生物製品研究所で共同に開発したもので、中国で独立した知的財産権を有する数少ない新薬の一つである。

一般的なインターフェロンα２製品と比較して、一般的なインターフェロンα１は、インビトロで生物学的活性が比較的に低いが、インビボでの効果が強く、範囲が広く、副作用が小さい。例えば、インビトロでの一般的なインターフェロンα２ａおよび２ｂの比放射能は、両方とも１×１０^８ＩＵ／ｍｇであるが、一般的なインターフェロンα１ｂの比放射能は、わずか１×１０^７ＩＵ／ｍｇであり、前の二つの１０％である。臨床応用において、同じ重量の一般的なインターフェロンα１ｂは、一般的なインターフェロンα２ａ、２ｂとの治療効果と相当であり、副作用は後者の二つよりも有意に少ない（ＫｕｉｔａｎｇＴｏｎｇ、黒色腫のインターフェロンα治療、第１７回全国インターフェロンおよびサイトカイン学術会議、２０１１：２－６）。有毛細胞白血病の治療における一般的なインターフェロンα１ｂの臨床試験において、有効率は６３．６４％であり、緩和率は３６．３６％に達するが、副作用は、投薬なして治まった短期の微熱のみであり、他の副作用は明らかでなく、すべての患者に許容され、投薬を中止した患者は一人もない。

米国で行われた第I相、第II相臨床試験の結果によると、高投与量（５００μｇ／日）の一般的なインターフェロンα１ｂ注射を使用して転移性腎臓がんおよび多発性骨髄腫の患者を治療すると、一定の治療効果を有し、副作用は、他の一般的なインターフェロンの副作用よりももっと軽度である（Ｐ．Ｍａｓｃｉら、ＧｅｎｅＭｏｄｕｌａｔｏｒｙＥｆｆｅｃｔｓ、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ、ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＴｏｌｅｒａｎｃｅｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α－１ｂ：ＡＳｅｃｏｎｄＭｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α Ｆａｍｉｌｙ、ＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２００７、Ｖｏｌ．８１、Ｎｏ．３：３５４－３６１）。

一般的なインターフェロンα１ｂは、他の一般的なインターフェロンと同様に、分子量が小さく、糸球体でろ過されやすく、人体での半減期が短いという欠点がある。半減期を延長しかつその治療効果を向上させるために、第２世代のポリエチレングリコール修飾剤を使用して一般的なインターフェロンα１ｂを修飾して、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂと名付けられる単一のペグ修飾インターフェロンα１ｂを得る。研究によると、その分子量が増加し、半減期が未修飾の一般的なインターフェロンよりも大幅に延長することを示す。ラットにおけるペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの半減期は、１３．９８時間であるが、一般的なインターフェロンα１ｂの半減期は、１．８４時間であり、蟹食猿におけるインビボペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの半減期は、２２．０３±３．３２時間であるが、一般的なインターフェロンα１ｂの半減期は、３．２７±１．４８時間であることを示す。市場に出回っているペグ修飾組換え治療性タンパク質薬に関連する研究報告によると、そのような薬物の分子量の増加は、その臨床応用の治療効果の改善と正の相関がある。

本発明において、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂを単独で、または他の薬物と併用して、前臨床のインビトロおよびインビボの薬力学的研究を行う。

研究結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとアバスチン等の特定の抗腫瘍薬との併用は、治療効果で相乗的効果を有するだけでなく、様々な副作用を相乗的に有意に低減することを示す。
インビボでのヌードマウス腎がんｃａｋｉ－１腫瘍モデルにおいて、低用量、中用量および高用量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独群は、腎がんに対して治療効果を有し、治療効果は、明らかに用量依存的である。さらに、毒性と副作用の有意な減少が観察される。

モノクローナル抗体との併用方案において、低用量、中用量および高用量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとアバスチンとの併用により、腎がんＣａｋｉ－１に対して相乗的な阻害効果を有し、ここで、中用量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ）とアバスチンとの併用群は、有意な相乗的効果を示す（併用群で６９％の阻害率ｖｓペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独群で４６％阻害率ｖｓアバスチンの単独群で４２％の阻害率）。

しかしながら、肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスモデルにおいて、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独群は、明らかな腫瘍阻害効果を示さなかったため、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂは、抗腫瘍活性を有するが、様々な腫瘍のその治療効果には、依然として一定または大きな違いがあることが分かる。しかしながら、ペグインターフェロンとアバスチンとを併用する場合、一定の相乗的効果がみられる。

ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａおよびα２ｂは、慢性Ｂ型およびＣ型肝炎において一般的なインターフェロンよりも明らかな治療効果を有し、大きな成功を収めている。しかし、腫瘍治療の分野では、それは完全に異なり、第ＩＩＩ相臨床研究において（Ｔ．Ｋ．Ｅｉｇｅｎｔｌｅｒら、Ａｄｊｕｖａｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｐｅｇｙｌａｔｅｄｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α－２ａｖｅｒｓｕｓｌｏｗ－ｄｏｓｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α－２ａｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｉｇｈｒｉｓｋｍｅｌａｎｏｍａ：ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｐｈａｓｅＩＩＩＤｅＣＯＧｔｒｉａｌ、ＡｎｎａｌｓｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ、２０１６、２７：１６２５－１６３２）、高リスク黒色腫患者におけるペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａト一般的なインターフェロンα２ａの治療効果および安全性を比較し、結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａの治療効果は、一般的なインターフェロンα２ａよりも優れず、副作用は、より高かったことを示す。

別の第ＩＩＩ相臨床研究において（ＴＨＯＭＡＳＭ．Ｈら、Ｕ．Ｓ．ＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎＡｐｐｒｏｖａｌ：Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ａｌｆａ－２ｂｆｏｒｔｈｅＡｄｊｕｖａｎｔＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＭｅｌａｎｏｍａ、Ｔｈｅｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、２０１２、１７：１３２３－１３２８）、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ｂで補助治療された黒色腫患者の平均無再発の生存期間は３４．８ケ月であり、２５．５ケ月の観察群よりも有意に延長したが、全生存期間には有意な改善はない。治療群における深刻な副作用の発生率は、観察群のほぼ２倍に達し（３３％ｖｓ１５％）、２０１１年、米国ＦＤＡは、局所リンパ節転移を伴う悪性黒色腫患者の補助治療としてペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ｂを承認し、毎週６μｇ／ｋｇ皮下投与し、連続の８回の注射後に毎週３μｇ／ｋｇの投与を維持する（ＮＣＣＮ腫瘍学臨床実践ガイドライン－悪性黒色腫、２０１８年第２版：ＭＳ－２０）。現在、腫瘍適応症に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン薬の承認された方案は一つだけであり、腫瘍治療の分野で、治療効果に対する様々なペグ（ＰＥＧ）インターフェロン種類と様々な腫瘍種類の治療効果は、有意に異なり、単純に類推することはできないことを示した。

予期せぬことには、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａとは異なり、本発明の研究によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとアバスチンとの併用は、相乗的に腫瘍を阻害しながら、それぞれの対応する副作用（例えば、体重減少、発熱、胃腸の有害反応、発疹等）の発生率または程度を大幅に低減することができる。

本発明で言及されたすべての文書は、あたかも各文書が個別に参照として引用されたかのように、本出願における参照として引用される。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も、本出願の添付の請求範囲によって定義される範囲に含まれる。

Claims

有効成分の組み合わせの使用であって、
前記有効成分の組み合わせは、第１の有効成分ペグインターフェロンおよび第２の有効成分プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含み、また前記組み合わせは、腎がんを相乗的に治療するための医薬組成物またはキットの調製に使用されることを特徴とする、前記使用。
前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂであることを特徴とする
請求項１に記載の使用。
前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との質量比は、１：１００～５００：１、好ましくは、１：２０～２００：１、より好ましくは、１：１０～１００：１または１：５～５０：１であり、
または、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇ、好ましくは、１００００ＩＵ／ｍｇ～１０００万ＩＵ／ｍｇ、より好ましくは、１０万ＩＵ／ｍｇ～５００万ＩＵ／ｍｇまたは２０万ＩＵ／ｍｇ～３００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする
請求項１に記載の使用。
前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする
請求項１に記載の使用。
前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチンを含むことを特徴とする
請求項１に記載の使用。
医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、ペグインターフェロン、プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、前記医薬組成物。
前記医薬組成物は、追加の治療薬（例えば、抗腫瘍剤）をさらに含むことを特徴とする
請求項６に記載の医薬組成物。
有効成分の組み合わせであって、
前記組み合わせは、ペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤で構成されることを特徴とする、前記有効成分の組み合わせ。
キットであって、
前記キットは、
（ａ）ペグインターフェロンおよび薬学的に許容される担体を含む第１の製剤と、
（ｂ）プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含む第２の製剤と、および
（ｃ）ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤とを併用して、腫瘍を治療する方法について説明する説明書とを含むことを特徴とする、前記キット。
腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害するためのインビトロの非治療的方法であって、
腫瘍細胞培養系に請求項８に記載の有効成分の組み合わせを加えることにより、腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害する段階を含むことを特徴とする、前記腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害するためのインビトロの非治療的方法。