JP7412577B2 - 腫瘍の相乗的阻害におけるペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の応用 - Google Patents

腫瘍の相乗的阻害におけるペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の応用 Download PDF

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Description

本発明は、抗腫瘍薬の技術分野に関し、より具体的には、腫瘍の相乗的阻害におけるペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の応用ならびにその関連薬物に関する。
腫瘍は、多要素の参加、多段階の発達を伴う全身性および全身性疾患である。腫瘍は、高度な複雑さ、変動性および多様性という生物学的特徴を有する。癌関連遺伝子の異常は、腫瘍ゲノムの安定性の喪失を引き起こす可能性があり、アポトーシスの回避、無制限の複製の可能性、血管新生、浸潤、転移および免疫回避等の腫瘍細胞の異常な生物学的挙動につながる。
現在、外科手術、放射線療法、化学療法は、悪性腫瘍を治療する主な方法である。外科手術および放射治療は、局所治療法であるが、薬物治療は、全身効果法であり、拡大して転移する可能性のある悪性腫瘍の特徴を考慮に入れている。
外科手術、放射線療法、化学療法等の従来の腫瘍治療法は、優れた治療効果を示すが、すべて多くの欠点が存在する。近年出現した腫瘍免疫療法は、従来の腫瘍治療手段と比較して、患者の生活の質を大幅に改善する。
しかしながら、効果の良くない臨床治療および薬剤耐性の頻繁な出現により、より効果的な治療計画を開発する必要が乗じている。さらに、いくつかの抗腫瘍薬には、深刻な毒性と副作用があり、患者は、治療をあきらめればならない。
従って、当技術分野では、腫瘍を治療するための新しい効果的で低毒性と副作用の方法および薬物を開発することが緊急に必要とされる。
本発明の目的は、腫瘍を治療するための効果的で低毒性と副作用の治療方法および薬物を提供することであり、具体的には、本発明は、腫瘍の相乗的治療におけるペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤の用途を提供する。
本発明の第１の態様は、有効成分の組み合わせの用途を提供し、前記有効成分の組み合わせは、第１の有効成分ペグインターフェロンおよび第２の有効成分プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含み、また、前記組み合わせは、腫瘍を相乗的に治療するための医薬組成物またはキットの調製に使用される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、抗体である。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂである。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンは、１～１０万分子量のペグで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂ、好ましくは、１～５万分子量のペグで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂを含む。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との質量比は、１：１００～５００：１、好ましくは、１：２０～２００：１、より好ましくは、１：１０～１００：１または１：５～５０：１である。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇ、好ましくは、１００００ＩＵ／ｍｇ～１０００万ＩＵ／ｍｇ、より好ましくは、１０万ＩＵ／ｍｇ～５００万ＩＵ／ｍｇまたは２０万ＩＵ／ｍｇ～３００万ＩＵ／ｍｇである。
別の好ましい例において、前記医薬組成物またはキットは、哺乳動物の治療に使用されるか、または哺乳動物に投与され、より好ましくは、前記哺乳動物は齧歯類動物（例えば、マウス、ラット）またはヒトである。
別の好ましい例において、前記腫瘍は、肺がん、胃がん、乳がん、肝臓がん、腸がん、卵巣がん、子宮頸がん、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記腫瘍は、肺がん、胃がん、乳がん、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチン、ハーセプチン、ペルツズマブ、またはその組み合わせからなる群から選択される。
本発明の第２の態様は、医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、ペグインターフェロン、プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含む。
別の好ましい例において、前記医薬組成物は、追加の治療薬（例えば、抗腫瘍剤）をさらに含む。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチン、ハーセプチン、ペルツズマブ、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記医薬組成物は、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、ＣＡＲ－Ｔ細胞、またはその組み合わせをさらに含む。
別の好ましい例において、前記化学療法剤は、シスプラチン、パクリタキセルを含む。
本発明の第３の態様は、有効成分の組み合わせを含み、前記組み合わせは、ペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤で構成される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
本発明の第４の態様は、キットを提供し、前記キットは、
（ａ）ペグインターフェロンおよび薬学的に許容される担体を含む第１の製剤と、
（ｂ）プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含む第２の製剤と、および
（ｃ）ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤とを併用して腫瘍を治療する方法について説明する説明書とを含む。
別の好ましい例において、前記第１の製剤および第２の製剤は、それぞれ独立している。
別の好ましい例において、前記第１の製剤および第２の製剤は、凍結乾燥製剤または液体製剤である。
別の好ましい例において、前記第１の製剤および第２の製剤は、注射剤である。
別の好ましい例において、前記第１の製剤は、第２の製剤の投与前、投与中、または投与後に投与される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ２阻害剤、またはその組み合わせからなる群から選択される。
別の好ましい例において、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、アバスチン、ハーセプチン、ペルツズマブ、またはその組み合わせからなる群から選択される。
本発明の第５の態様は、腫瘍細胞培養系に本発明の第２の態様に記載の有効成分の組み合わせおよび／または第３の態様に記載の医薬組成物を加えることにより、腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害する段階を含む、腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害するためのインビトロの非治療的方法を提供する。
別の好ましい例において、前記方法は、腫瘍細胞をペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤とともに混合および培養する段階を含む。
別の好ましい例において、前記腫瘍細胞は、対数増殖期にある腫瘍細胞を含む。
別の好ましい例において、前記腫瘍細胞の数は、１０３～１０８細胞／ｍｌである。
別の好ましい例において、前記培養時間は、０．１～１２０時間、好ましくは、１～９６時間である。
別の好ましい例において、混合培養液におけるペグインターフェロンの最終濃度は、１００～１０００μｇ／ｍｌ、好ましくは、２００～５００μｇ／ｍｌ、より好ましくは、約３００μｇ／ｍｌである。
別の好ましい例において、混合培養液におけるプロトオンコジーン産物標的阻害剤の最終濃度は、０．５～５０μｇ／ｍｌ、好ましくは、１～２５μｇ／ｍｌ、より好ましくは、２～１５μｇ／ｍｌであり、例えば、約３μｇ／ｍｌである。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との質量比は、１：１００～５００：１、好ましくは、１：２０～２００：１、より好ましくは、１：１０～１００：１または１：５～５０：１である。
別の好ましい例において、前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇ、好ましくは、１００００ＩＵ／ｍｇ～１０００万ＩＵ／ｍｇ、より好ましくは、１０万ＩＵ／ｍｇ～５００万ＩＵ／ｍｇまたは２０万ＩＵ／ｍｇ～３００万ＩＵ／ｍｇである。
本発明の第６の態様は、必要とする対象（例えば、ヒト）に本発明の第２の態様に記載の有効成分の組み合わせおよび／または第３の態様に記載の医薬組成物を投与することにより、腫瘍細胞を治療する段階を含む、腫瘍を治療する方法を提供する。
本発明の第７の態様は、必要とする対象（例えば、ヒト）にペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを投与する段階を含む、プロトオンコジーン産物標的阻害剤の毒性を低減する方法を提供し、ここで、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの投与は、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤を前記対象に投与する前、投与中、および／または投与後に行われる。
別の好ましい例において、前記毒性と副作用は、体重減少、胃腸反応（例えば、吐き気、嘔吐、食欲不振）、倦怠感、発疹、紅斑からなる群から選択される。
本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説明される各技術的特徴との間を、互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることに理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。
ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。 ＮＣＩ－Ｎ８７担癌ヌードマウスの体重に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の影響を示す。 ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。 Ｈｕｈ－７担癌ヌードマウスの体重に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の影響を示す。 ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独または併用の治療効果を示す。
ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、ハーセプチンの単独または併用の治療効果を示す。 ＢＴ－４７４担癌ヌードマウスの体重に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、ハーセプチンの単独または併用の影響を示す。 ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、ハーセプチンの単独または併用の治療効果を示す。上の図：Ｄ２０、下の図：Ｄ６０。
ペグインターフェロンおよびハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）の併用が、インビトロで培養されたヒト乳がんＢＴ－４７４細胞の増殖に対して、相乗的な阻害活性を有することを示し、阻害効果が有意に改善され、併用指数（ＣＩ値）が０．３１であることにより、相乗的な相乗効果を有することを示す。
本発明者らは、広範囲にわたる詳細な研究の後、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤が腫瘍（特に、乳がん、胃がん）の治療において良好な相乗的効果を有することを予期せずに初めて発見した。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤とを併用すると、腫瘍の成長を効果的に阻害することができ、その効果は、両方の相加効果よりもはるかに優れており、また、インターフェロン使用の副作用（特に、高投与量でインターフェロン薬の長期使用によって引き起こされる副作用）を大幅に低減することができる。これに基づいて、本発明を完了した。
用語
本明細書で使用されるように、「第１の有効成分」という用語は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、またはペグインターフェロンを指す。当該用語は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンと同じ機能を有する誘導体を含むことを理解されたい。
本明細書で使用されるように、「第２の有効成分」という用語は、プロトオンコジーン産物標的阻害剤、特に、小分子標的阻害剤および抗体標的阻害剤を指す。好ましくは、前記プロトオンコジーン産物は、ＥＧＦＲタンパク質、Ｈｅｒ２タンパク質等のタンパク質である。
本明細書で使用されるように、「本発明の有効成分の組み合わせ」、「本発明の物質の組み合わせ」、「本発明の医薬成分の組み合わせ」という用語は、交換可能に使用され、上記第１の有効成分と第２の有効成分との組み合わせを指す。
本明細書で使用されるように、「本発明の医薬組成物」という用語は、第１の有効成分（または前記第１の有効成分を含む第１の製剤）および第２の有効成分（または前記第２の有効成分を含む第２の製剤）の組成物を含むか、または含有することを指し、ここで、前記第１の製剤および第２の製剤は、同じまたは異なる製剤であり得る。さらに、第１の製剤および第２の製剤は、同じ製剤であり得るか、またはそれぞれ独立した製剤であり得る。
一般的なインターフェロンおよびペグ（ＰＥＧ）インターフェロン
一般的なインターフェロン（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）療法は、腫瘍免疫療法の重要なメンバーとして、腫瘍治療において長年の臨床経験があり、大量の研究によると、一般的なインターフェロンは、様々な腫瘍の増殖に対して良好な阻害効果を有することを示す。
一般的なインターフェロンαは、１９８６年に悪性腫瘍の治療のための最初の生物学的製剤として承認され、現在、有毛細胞白血病、慢性白血病、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、膀胱がん、卵巣がん、進行性転移性腎がん、膵臓悪性内分泌腫瘍、黒色腫、喉頭乳頭腫、基底細胞がんおよびＫａｐｏｓｉ肉腫等を含む、幅広い適応症の範囲を有する。
一般的なインターフェロンα１ｂ（ｒｈＩＦＮα１ｂ）は、１９８０年代に中国の健康なヒト臍帯血の白血球から遺伝子にクローン化して、開発された中国の最初の遺伝子操作されたタンパク質の薬物である。
ｒｈＩＦＮα１ｂは、１６６個のアミノ酸で構成され、相対分子量は、１９．３８２ｋＤａであり、広範囲の抗ウイルス、抗腫瘍および免疫調節機能を有する。１９９０年代に実施された臨床研究の結果、過去数十年間の臨床研究および臨床的実際の使用効果は、それが特定の腫瘍に対して一定の治療効果を有することを証明した。しかしながら、インターフェロンの単独治療は、高投与量の使用が必要としかつ副作用が大きく、患者のコンプライアンスが低下する。
インターフェロンα種類のアミノ酸配列および相同性分析
ＨｕＩＦＮα－１ｂ（１６６ａａ） ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：ＡＡＬ３５２２３（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．：１）
１ ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤ ＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱ ＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬ ＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱ ＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫ
５１ ＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬ ＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴ ＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤ ＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹ ＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶ
１０１ ＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰ ＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶ ＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹ ＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡ ＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲ
１５１ ＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥ ＲＬＲＲＫＥ １６６
ＨｕＩＦＮα－２ａ（１６５ａａ） ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：１ＩＴＦ＿Ａ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．：２）
１ ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧ ＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱ ＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬ ＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱ ＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡ
５１ ＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩ ＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫ ＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬ ＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱ ＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩ
１０１ ＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬ ＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲ ＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬ ＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷ ＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳ
１５１ ＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳ ＬＲＳＫＥ １６５
ＨｕＩＦＮα－２ｂ（１６５ａａ） ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ：１ＲＨ２＿Ａ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．：３）
１ ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧ ＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱ ＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬ ＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱ ＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡ
５１ ＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩ ＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫ ＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬ ＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱ ＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩ
１０１ ＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬ ＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲ ＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬ ＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷ ＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳ
１５１ ＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳ ＬＲＳＫＥ １６５
相同性分析：ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ
ＨｕＩＦＮα－１ｂおよびＨｕＩＦＮα－２ａ：８１％
Ｑｕｅｒｙ １ ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬ ６０
ＣＤＬＰ＋ＴＨＳＬ ＋ＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭ ＋ＩＳ ＳＣＬ ＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦ ＧＮＱＦＱＫＡ Ｉ ＶＬＨＥ＋
Ｓｂｊｃｔ １ ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦ－ＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭ ５９
Ｑｕｅｒｙ ６１ ＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＰＮＤＬＥＡＣＶＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶ １２０
ＩＱＱＩＦＮＬＦ＋ＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥ ＬＬＤＫＦ ＴＥＬＹＱＱ ＮＤＬＥＡＣＶ＋Ｑ Ｖ ＥＴＰＬＭ ＤＳＩＬＡＶ
Ｓｂｊｃｔ ６０ ＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶ １１９
Ｑｕｅｒｙ １２１ ＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＶＲＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ １６６
＋ＫＹＦ＋ＲＩＴＬＹＬ ＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩ＋ＲＳ ＳＬＳＴＮＬＱＥ ＬＲ ＫＥ Ｓｂｊｃｔ １２０ ＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ １６５
ＨｕＩＦＮα－１ｂおよびＨｕＩＦＮα－２ｂ：８３％
Ｑｕｅｒｙ １ ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬ ６０
ＣＤＬＰ＋ＴＨＳＬ ＋ＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭ ＲＩＳ ＳＣＬ ＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦ ＧＮＱＦＱＫＡ Ｉ ＶＬＨＥ＋
Ｓｂｊｃｔ １ ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦ－ＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭ ５９
Ｑｕｅｒｙ ６１ ＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＰＮＤＬＥＡＣＶＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶ １２０
ＩＱＱＩＦＮＬＦ＋ＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥ ＬＬＤＫＦ ＴＥＬＹＱＱ ＮＤＬＥＡＣＶ＋Ｑ Ｖ ＥＴＰＬＭＮ ＤＳＩＬＡＶ
Ｓｂｊｃｔ ６０ ＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＮＥＤＳＩＬＡＶ １１９
Ｑｕｅｒｙ １２１ ＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＶＲＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ １６６
＋ＫＹＦ＋ＲＩＴＬＹＬ ＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩ＋ＲＳ ＳＬＳＴＮＬＱＥ ＬＲ ＫＥ
Ｓｂｊｃｔ １２０ ＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ １６５
ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ、PEG）は、線状または分岐構造を有し、平均分子量が２００Ｄａ以上であるエチレングリコールポリマーの総称であり、分子量が高く、安全で毒性がなく、両親媒性で、免疫不活性で、構造が安定する、等の特性を有する。ポリエチレングリコールによるタンパク質の化学修飾が、タンパク質のアミノ酸成分を変えることなく、その生インビボ半減期を延長し、安定性を向上させ、免疫原性および抗原性を低減させる等のことは、タンパク質の薬物の薬力学的特性を改善するための簡単で、効果的な手段である。
好ましいペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂは、約１～１０万ダルトン（例えば、約２万）のペグで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂである。特に好ましいのは、分子量が約２万ダルトンのペグで修飾された組換えヒトインターフェロンα１ｂであり、それは、新しい種類の長時間作用型インターフェロンα１ｂ薬物である（中国特許ＺＬ２００４１００６７６５２．３を参照する）。インビトロ実験では、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂが腫瘍細胞の増殖に対して阻害効果を生成できることが観察され、インビボ実験では、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがマウスの皮下移植腫瘍に対して明らかな治療効果を発揮できることを示す。
インビトロ実験の結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路を活性化することによって、腫瘍細胞の増殖を阻害して、その抗腫瘍効果を発揮できることを示す。腫瘍血管新生因子の発現を阻害することにより、血管内皮細胞の成長を阻害しかつそのアポトーシスを促進することができる。
好ましくは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとモノクローナル抗体薬物であるアバスチンとを併用する場合、ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７等の腫瘍細胞の腫瘍抑制率を有意に改善することができ、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがアバスチンのヌードマウスのヒト胃がん皮下移植腫瘍の治療に対して相乗的な相乗効果を有することを示す。
好ましくは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとモノクローナル抗体薬物であるハーセプチンとを併用する場合、ヒト乳がんＢＴ－４７４等の腫瘍細胞の腫瘍抑制率を有意に改善することができ、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂがハーセプチンのヌードマウスのヒト乳がん皮下移植腫瘍の治療に対して相乗的な相乗効果を有することを示す。
さらに、第１の有効成分ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンと第２の有効成分プロトオンコジーン産物標的阻害剤（例えば、アバスチンまたはハーセプチン等）とを併用する場合、腫瘍を効果的に阻害するだけでなく、毒性と副作用を大幅に低減させることができ、特に、インフルエンザ様症候群、胃腸反応（例えば、吐き気、嘔吐、食欲不振）、倦怠感、発疹（掻痒を伴う非特異的な発疹を含む）、紅斑、体重減少等からなる群から選択される一つまたは複数の副作用を低減させることができる。
本発明の研究によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂが腫瘍細胞に投与される場合、腫瘍細胞の増殖および／または遊走を阻害できることを示す。
プロトオンコジーン産物標的阻害剤
本明細書で使用されるように、「プロトオンコジーン産物標的阻害剤」、「プロトオンコタンパク質標的阻害剤」という用語は、交換可能に使用され、プロトオンコジーンのコードされた生成物（特に、タンパク質）を特異的に標的とする阻害剤を指す。本明細書で使用されるように、用語「プロトオンコタンパク質」という用語は、プロトオンコジーンによってコードされるタンパク質、特に膜タンパク質を指す。本発明のいくつかの実施形態において、プロトオンコタンパク質阻害剤は、プロトオンコタンパク質の量を減少させ、プロトオンコタンパク質の活性化を阻害または遮断するか、またはシグナル伝達経路における他の分子を阻害することによって作用することができる。
プロトオンコジーン産物標的阻害剤の非限定的な例としては、ＥＧＦＲを標的とする阻害剤、Ｈｅｒ２を標的とする阻害剤、またはその組み合わせを含む（これらに限定されない）。
本明細書で使用されるように、「プロトオンコタンパク質活性」という用語は、癌細胞の形成、成長、増殖、遊走および／または浸潤を促進するプロトオンコタンパク質の能力を指す。
本明細書で使用されるように、「プロトオンコタンパク質発現」という用語は、当技術分野で知られている任意の方法によって測定されるプロトオンコタンパク質遺伝子生成物の形成を指し、前記方法は、核酸ハイブリダイゼーション法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎブロッティング、インサイチュハイブリダイゼーション、ポリメラーゼ連鎖反応増幅、レポーター遺伝子発現等を含む（これらに限定されない）。プロトオンコタンパク質遺伝子生成物の形成は、免疫組織化学、免疫蛍光、ＷｅｓｔｅｒｎブロッティングおよびＥＬＩＳＡ法を含む、任意の抗体ベースの技術でも測定することができる。
本発明において、標的阻害剤は、抗体、小分子薬、核酸薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞等を含む（これらに限定されない）。
ＥＧＦＲおよびその阻害剤
上皮成長因子受容体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＥＧＦＲ）ＥＧＦＲは、ＥｒｂＢ受容体ファミリーメンバーに属する膜貫通タンパク質（ＮＭ＿２０１２８２）であり、そのリガンド（ＥＧＦ、ＴＧＦ－α等）は、ＥＧＦＲの細胞外セグメントに結合して二量体化することにより、細胞内セグメントのチロシンキナーゼの活性化および一連のシグナル伝達的カスケード反応をもたらし、細胞増殖、血管新生、転移を促進し、かつ細胞アポトーシスを阻害することにより、腫瘍の発生を引き起こす。大量の研究によると、ＥＧＦＲ遺伝子は、様々な腫瘍組織で過剰発現または異常に活性化されることにより、腫瘍細胞の増殖、浸潤および転移の能力が増強されることが分かる。ＥＧＦＲは、多くの種類の腫瘍に対して臨床的に検証された治療標的になっている。
癌標的治療の開発において、成功する策略は、モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｍＡｂ）を使用して腫瘍細胞の表面に抗原決定基を局在化することにより、癌細胞を標的にして殺すことである。従って、抗体または他の標的阻害剤を使用して、腫瘍細胞の表面のＥＧＦＲを標的化して、癌細胞を殺すか、または阻害することができる。
代表的なＥＧＦＲ阻害剤は、ベバシズマブ（アバスチンａｖａｓｔｉｎ）またはそのバイオシミラーまたはそのＡＤＣ等の抗ＥＧＦＲ抗体である。ベバシズマブは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体である。
Ｈｅｒ２およびその阻害剤
受容体チロシンキナーゼのＨＥＲファミリーは、細胞の増殖、分化および生存の重要なメディエーターである。当該受容体ファミリーは、ＨＥＲ１（ＥＧＦＲまたはＥｒｂＢ１）、Ｈｅｒ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）の四つの異なるメンバーを含む。
Ｈｅｒ２はＨＥＲ活性化リガンドと直接相互作用することはできないが、そのキナーゼがＨｅｒ２を含むヘテロ二量体にシグナルを伝達し、また、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ３に結合するリガンドの親和性を高めることができることは十分に確立される。Ｈｅｒ２二量体の形成は、細胞内で一連のプロセスを引き起こし、最終的には細胞の運動性、細胞の生存率と増殖、および抗アポトーシス活性の増加につながる。
同様に、抗体または他の標的阻害剤を使用して、腫瘍細胞の表面のＨｅｒ２抗原を標的とすることにより、癌細胞を殺すか、または阻害することができる。
代表的なＨｅｒ２阻害剤は、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）またはそのバイオシミラーまたはそのＡＤＣである。トラスツズマブは、Ｈｅｒ２細胞表面領域の領域IVに結合する、ヒト化抗Ｈｅｒ２モノクローナル抗体である。
トラスツズマブに加えて、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ、Ｐｅｒｊｅｔａ）は、ヒト化Ｈｅｒ２特異的モノクローナル抗体でもある。トラスツズマブとは異なり、ペルツズマブは、Ｈｅｒ２細胞表面領域の領域IIに結合するため、Ｈｅｒ２がＨＥＲファミリーの他のメンバーに結合するのを防ぐ。ペルツズマブは、卵巣がん、非小細胞肺がん、前立腺がん、乳がんおよび胃がんに対して臨床的効果を示す。
ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ
本発明において、プロトオンコジーンを標的とする核酸薬を使用して、前記プロトオンコジーン（例えば、ＥＧＦＲまたはＨｅｒ２）を標的にして阻害する。
代表的な核酸薬は、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびその前駆体、または発現ベクターを含む（これらに限定されない）。
本明細書で使用されるように、「ＲＮＡｉ」（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡ干渉）という用語は、進化の過程で高度に保存され、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって誘導され、相同なｍＲＮＡを高い効率および置く以西で分解する現象を指す。ＲＮＡｉ技術を使用すると、特定の遺伝子の発現を特異的にノックアウトまたはオフにすることができるため、当該技術は、遺伝子治療の分野で遺伝子機能および感染性疾患、悪性腫瘍の遺伝子治療に広く使用される。
本明細書で使用されるように、「ｓｉＲＮＡ」（Ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）という用語は、Ｄｉｃｅｒ（ＲＮＡ酵素IIIファミリーにおいて、二本鎖ＲＮＡに特異性を有する酵素）がその前駆体（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ等）から処理することができ、化学的方法によって合成するか、または他のタンパク質によって処理することができる、低分子ＲＮＡ分子（約２１～２５個のヌクレオチド）を指す。ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＩＳＣの主なメンバーであり、相補的な標的ｍＲＮＡを刺激して急速に切断および分解し、標的遺伝子をサイレンシングして、ＲＮＡｉの重要な機能分子になる。
本明細書で使用される「発現カセット」という用語は、本発明のＲＮＡｉ前駆体のコード配列と、前記コード配列に作動可能に結合されたプロモーターおよび終結シグナルとを含む発現カセットを指し、前記発現カセットは、転写後に本発明のＲＮＡｉ前駆体を生成する。本明細書で使用される「ＲＮＡｉ前駆体」という用語は、哺乳動物細胞でプロセシングされてｓｉＲＮＡを生成することができるＲＮＡ分子を指し、具体的には、Ｄｉｃｅｒ、Ａｇｏ２または他の類似なタンパク質で選択的にプロセシングされて成熟ｓｉＲＮＡを生成し、ＲＮＡｉを実施する。
本明細書で使用される「ｓｈＲＮＡ」という用語は、「ショートヘアピンＲＮＡ」、即ち、ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡの略語である。ｓｈＲＮＡは、二つの短い逆相補的配列で構成され、真ん中は、トップループ（ｌｏｏｐ）配列によって間隔されて、ヘアピン構造を形成し、細胞の内因性ＲＮＡポリメラーゼIII（ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ III）プロモーターによって転写を制御し、ｓｈＲＮＡ配列の末端は、ＲＮＡポリメラーゼIIIの転写ターミネーターとして５～６個のＴに結合される。生体で「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）を生成する一つの方法は、ｓｉＲＮＡ配列を「ショートヘアピン」の一部としてプラスミドベクターにクローン化することである。動物体内に送達する場合、当該ヘアピン配列が発現されて、トップループ構造を有する「二本鎖ＲＮＡ」（ｓｈＲＮＡ）を形成し、細胞内のＤｉｃｅｒおよびＡｇｏ２等のタンパク質によって識別および処理され、機能的なｓｉＲＮＡを生成する。
本明細書で使用される「ｍｉＲＮＡ」（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）という用語は、内因性遺伝子によってコードされた長さが約２０～２４個のヌクレオチドの非コード一本鎖ＲＮＡ分子のクラスであり、動植物における多数の遺伝子の発現の調節に関与する。これまでに、動植物およびウイルスで４０００を超えるｍｉＲＮＡ分子が発見された。ほとんどのｍｉＲＮＡ遺伝子は、単一コピー、複数コピーまたは遺伝子クラスター（ｃｌｕｓｔｅｒ）の形態でゲノムに存在する。各ｍｉＲＮＡは、複数の標的遺伝子を調節することができ、複数のｍｉＲＮＡも同じ遺伝子を一緒に調節することに関与して、複雑な調節ネットワークを形成することができる。ｍｉＲＮＡは、ヒト遺伝子の半分以上の発現を調節すると推測される。ｍｉＲＮＡには多くの形態が存在し、最も原始的なのは、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡであり、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡは、Ｄｒｏｓｈａによって処理された後、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ、即ち、約５０～９０個のヌクレオチドの長さのｍｉＲＮＡ前駆体になり、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ酵素に消化された後、約２０～２４個のヌクレオチドの長さの成熟ｍｉＲＮＡになる。ｍｉＲＮＡは、主に翻訳を阻害し、ｍＲＮＡの脱アデニル化を促進することにより、標的遺伝子の発現を阻害し、そのメカニズムは、ｓｉＲＮＡによって媒介されたｍＲＮＡ分解とは異なる。
発現ベクター
本明細書で使用されるように、「発現ベクター」という用語は、目的のポリヌクレオチド配列を標的細胞に転移することができるベクターを指す。このようなベクターは、自己複製するか、または宿主細胞染色体（宿主細胞には、例えば、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体、および植物個体等）に結合することができ、本発明のポリヌクレオチドの転写に適した部位にプロモーターを含み得る。発現ベクターは、構造遺伝子、およびその発現を調節するプロモーターを含み得、さらに、宿主細胞で機能する様々な調節要素をさらに含む。生物生体（例えば、動物）の発現ベクターの種類および使用される調節要素の種類は、使用される宿主細胞の種類に応じて変化し得ることが当技術分野でよく知られている。
本発明で使用できるウイルスベクター没は、特に限定さず、ウイルスの特性を使用してそのゲノムを伝達し、感染のために遺伝物質を他の細胞に持ち込むことができる任意のウイルスベクターであり得る。生体全体または細胞培養で発生することができる。レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポックスウイルスベクターを含む。本発明において、好ましい発現ベクターは、レンチウイルスベクターである。
医薬組成物および投与方式
本発明は、腫瘍成長および／または転移を阻害するために使用されることができる、腫瘍の相乗的治療に使用することができる組成物を提供する。
本発明の医薬組成物は、有効量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、有効量のプロトオンコジーン産物標的阻害剤、および薬学的に許容される担体を含む。
さらに、本発明の医薬組成物は、任意選択の固形腫瘍の化学療法剤をさらに含み得る。前記化学療法剤は、シスプラチン、パクリタキセル、アドリアマイシン等を含む（これらに限定されない）。
通常、本発明のペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、またはプロトオンコジーン産物標的阻害剤は、非毒性で、不活性で、薬学的に許容される担体媒体で調製されることができ、ここで、ｐＨは、通常約５～８であり、好ましくは、ｐＨは、約６～８である。
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される担体」は、様々な賦形剤および希釈剤を含む、治療剤の投与のための担体を指す。
用語は、それ自体が必須の有効成分ではなく、投与後に過度の毒性がない、いくつかの薬剤担体を指す。適切な担体は、当業者によく知られている。組成物中の薬学的に許容される担体は、水、生理食塩水、緩衝液等の液体を含み得る。さらに、これらの担体には、充填剤、潤滑剤、流動促進剤、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質等の補助性物質も存在し得る。前記担体には、細胞トランスフェクション試薬をさらに含み得る。
本明細書で使用されるように、「有効量」または「有効投与量」という用語は、ヒトおよび／または動物および／または細胞において機能的または活性であり、かつヒトおよび／または動物に許容される量を指す。
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される」成分は、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激およびアレルギー反応）なしにヒトおよび／または哺乳動物での使用に適した成分、即ち、合理的な利益／リスク比を有する物質である。「薬学的に許容される担体」という用語は、様々な賦形剤および希釈剤を含む、治療剤の投与のための担体を指す。このような担体は、生理食塩水、緩衝液、グルコース、水、グリセロール、ポリソルベート、エタノールおよびその組み合わせを含む（これらに限定されない）。通常、医薬製剤は、投与方式と一致する必要があり、本発明の医薬組成物は、注射剤の形態で、例えば、生理食塩水またはグルコースおよび他のアジュバントを含む水溶液を用いて、週ライノ方法によって調製されることができる。前記医薬組成物は、好ましくは、無菌条件下で調製される。有効成分の投与量は、治療有効量である。本発明の医薬製剤は、徐放性製剤にすることもできる。
さらに、本発明の有効成分の組み合わせは、他の治療剤（例えば、抗腫瘍剤または免疫調節剤）とともに使用することができる。
医薬組成物を使用する場合、安全かつ有効量の有効成分の組み合わせ（第１の有効成分（またはその製剤）および／または第２の有効成分（またはその製剤）を含む）を哺乳動物に投与する。
本発明の前記有効成分の組み合わせにおける第１の有効成分（またはその製剤）および／または第２の有効成分（またはその製剤）の有効量は、投与モードおよび腫瘍の重症度によって変化することができることを理解されたい。好ましい有効量の選択は、当業者が様々な要因（例えば、臨床試験を通じて）に基づいて決定することができる。前記要因には、例えば、バイオアベイラビリティ、代謝、半減期等の薬物動態パラメーター、腫瘍の重症度、患者の体重、患者の免疫状態、投与経路等を含むが、これらに限定されない。
典型的には、第１の有効成分については、その安全かつ有効量は、通常、少なくとも約１０ｎｇ／ｋｇ体重であり、ほとんどの場合、約５０ｍｇ／ｋｇ体重以下であり、好ましくは、当該投与量は、約５０ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状態等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。
第２の有効成分については、その安全かつ有効量は、通常、少なくとも約１０ｎｇ／ｋｇ体重、ほとんどの場合、約５０ｍｇ／ｋｇ体重以下であり、好ましくは、当該投与量は、約５０ｎｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状態等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。
本発明の前記医薬組成物の投与方式は、特に限定されず、代表的な例としては、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射等を含む（これらに限定されない）。
キット
本発明は、キットを提供し、前記キットは、次のようなコンポーネントを含む。
コンポーネント（１）：ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤、
コンポーネント（２）：プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤、
コンポーネント（３）：説明書。
前記ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤は、凍結乾燥剤、液体製剤または静脈内注射液を含む（これらに限定されない）。
前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤は、凍結乾燥剤、液体製剤、錠剤、カプセル、坐剤、または静脈内注射液を含む（これらに限定されない）。
本発明において、タンパク質製剤は、通常、凍結乾燥製剤または注射剤である。
典型的には、キットには、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む一つまたは複数（例えば、少なくとも二つ）のユニット剤形およびプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む一つまたは複数（例えば、少なくとも二つ）のユニット剤形が含まれ、好ましくは、それぞれ４～１０個である。
本明細書で使用されるように、「ユニット剤形」という用語は、様々な固体剤形（例えば、錠剤）、液体剤形、カプセル剤、徐放性剤形を含むが、これらに限定されない、投与の便宜のために段階投与に必要な剤形への組成物の調製を指す。
本発明によって提供される説明書には、次のように説明することができる。前記キットの使用方法は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含むユニット剤形とプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含むユニット剤形とを同時に使用することである。
本発明によって提供されるキットは、次のような段階によって調製される。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤とプロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤とを、説明書とともに一緒に配置して、キットを形成する。
前記ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む製剤は、好ましくは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンのユニット剤形を含み、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む製剤は、好ましくは、プロトオンコジーン産物標的阻害剤のユニット剤形を含む。
前記段階は、好ましくは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンを含む少なくとも一つのユニット剤形と、プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含む少なくとも一つのユニット剤形とを、説明書とともに一緒に配置して、キットを形成する。
本発明の有益な効果は、次のとおりである。
１．ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤（例えば、アバスチンまたはハーセプチン等）は、抗腫瘍治療に相乗的に作用することにより、腫瘍成長をより有意に阻害することができる。
２．ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤（例えば、アバスチンまたはハーセプチン等）との併用は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの投与量を大幅に低減することができ、より強力な抗腫瘍治療効果をより早く示すことができるため、長期および／または高投与量のインターフェロンによって引き起こされる副作用を大幅に低減することができる。
３．ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤（例えば、ハーセプチン）との併用は、乳がん等の特定の腫瘍で予想外に優れた効果を示し、高い比率で腫瘍組織が完全に消失する治療効果さえ現れたが、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの単独使用またはハーセプチンの単独使用の場合、同様の現象は観察されない。
以下、本発明は、具体的実施例と併せてされに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において、具体的条件を示さない実験方法は、通常、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、分子クローニング：実験マニュアル（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９）に記載される条件等の従来の条件、またはメーカーによって提案された条件に従う。特に明記されない限り、パーセンテージおよび部数は、重量パーセンテージおよび重量部数で計算される。
試薬
各実施例において、ペグインターフェロンとは、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（上海生物製品研究所株式会社）、白色凍結乾燥粉末注射剤、仕様１００μｇ／ボトル（０．５ｍｌ）、合計１０万ＩＵ（即ち、１０００ＩＵ／μｇ）を指す。
アバスチン（ベバシズマブ注射液）（ａｖａｓｔｉｎ）は、市販の製品である。
ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）は、市販の製品である。
一般的な方法
実験動物の使用および福祉は、「国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）」の規則に従って実行される。動物の健康状態および死亡状況を毎日モニターリングし、定期検査は、行動活動、体重変化、身体的兆候等の、動物の日常の行動に対する試験物質および薬物の影響を観察することを含む。
マウスにおける腫瘍抑制実験の指標は、腫瘍成長に対する薬物の効果を観察することであり、具体的な指標は、Ｔ／Ｃ％または腫瘍抑制率ＴＧＩ（％）である。
腫瘍の直径を週２回ノギスで測定し、腫瘍体積（Ｖ）の計算式は、Ｖ＝１／２×ａ×ｂ２であり、ここで、ａおよびｂは、それぞれ長さおよび幅を表す。
Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ－Ｔ０）／（Ｃ－Ｃ０）×１００、
ここで、ＴおよびＣは、実験終了時の腫瘍体積であり、Ｔ０およびＣ０は、実験開始時の腫瘍体積である。
腫瘍抑制率（ＴＧＩ）（％）＝１００－Ｔ／Ｃ（％）。
腫瘍が退縮する場合、腫瘍抑制率は、（ＴＧＩ）（％）＝１００－（Ｔ－Ｔ０）／Ｔ０×１００である。
腫瘍が開始体積から縮小する場合、即ち、Ｔ＜Ｔ０またはＣ＜Ｃ０の場合、部分腫瘍退縮（ＰＲ）と定義され、腫瘍が完全に消失する場合、完全な腫瘍退縮（ＣＲ）と定義される。
実験が終わり（例えば、Ｄ２１）、実験の終点に達するか、または腫瘍体積が１５００ｍｍ３に達する場合、動物をＣＯ２麻酔によって犠牲にし、その後に解剖して腫瘍を取り、写真を撮る。
実施例１
ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独使用またはアバスチンとの併用の治療効果
１．まとめ
ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）の単独使用またはアバスチンとの併用の治療効果を評価する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）、またはペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）との併用。
２．実験目的
ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの単独使用またはアバスチンとの併用の治療効果を評価する。
３．試験薬
３．１．薬物情報
注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）：白色凍結乾燥粉末注射剤、仕様１００μｇ／ボトル（０．５ｍｌ）、バッチ番号Ｓ２０１７０９０８、２～８℃下で暗所で密閉して保存する。上海生物製品研究所株式会社によって生産および提供される。
アバスチン（ベバシズマブ注射液）：無色透明の液体、１００ｍｇ（４ｍｌ）／ボトル、バッチ番号Ｈ０１８２Ｂ０３、２～８℃下で暗所で密閉して保存し、ロシュ(Roche)製薬会社から購入する。
３．２．薬物の調製
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの各ボトルに１２０μｌの注射用滅菌水を加え、濃度は１ｍｇ／ｍｌであり、使用前に調製し、生理食塩水で希釈し、アバスチンの濃度は２５ｍｇ／ｍｌであり、必要とする濃度に生理食塩水で直接希釈する。
４．細胞
ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入する。ＮＣＩ－Ｎ８７細胞を、１０ｃｍのペトリ皿で付着培養し、培養条件は、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ １６４０培地で、３７℃下で、５％ＣＯ２空気を含むインキュベーターで培養する。週に２～３回継代し、細胞が指数増殖期にある場合、トリプシン処理し、細胞を收集し、カウントし、接種するする。
５．実験動物
［Ｄ０００５２１］ＢＡＬＢ／ｃ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｇｐｔ、４～８週間、♀、江蘇集萃薬康生物科学技術株式会社から購入する。生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１８－０００８、動物合格証番号２０１９００９４９。飼育環境：ＳＰＦグレード。
６．実験段階
ヌードマウスに６×１０６のヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７細胞を皮下（ＳＣ）接種し、腫瘍が１００～１５０ｍｍ３に増殖した後、腫瘍体積に従って動物をグループ化する（Ｄ０）。マウスに週２回（ＢＩＷ）皮下注射（ＳＣ）するか、または静脈内注射（ＩＶ）して投与し、投与体積は、１０ｍＬ／ｋｇであり、溶媒群に同じ体積の「溶媒」（生理食塩水）を投与し、具体的な投与量および投与方案は、表１を参照する。腫瘍体積を週２回測定し、マウスの体重を測定し、データを記録する。
７．統計学的分析
両側Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ検定を使用して、二つのグループ間の腫瘍体積を比較し、Ｐ＜０．０５を統計的に有意な差として定義する。
８．結果
結果は、表１および図１、図２、図３に示されたとおりである。
表１．ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独使用または併用の治療効果
Ｄ０：最初の投与時間、アバスチンの最初の投与量を２倍にし、ＳＣ：皮下注射、ＩＶ：静脈内注射、Ｐ値は、溶媒との比較を指し、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン１ｍｇ／ｋｇ＋アバスチン１０ｍｇ／ｋｇ投与量群と比較する。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、投与量依存的にヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を阻害し、腫瘍抑制率は、それぞれ１９％、３２％および５５％であり、ＮＣＩ－Ｎ８７皮下移植腫瘍に対するアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）の腫瘍抑制率は、４９％である。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）とを併用する場合、ＮＣＩ－Ｎ８７に対する腫瘍抑制率を６７％（Ｐ＜０．０５、単剤と比較して）に有意に増加し、相乗的な阻害効果を示す。
さらに、併用する場合、担癌マウスは、薬物耐性が高く、体重減少等の症状は見られない。図２に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用群のマウス体重は、ペグインターフェロン群（１ｍｇ／ｋｇ）の単独使用およびアバスチン群（１０ｍｇ／ｋｇ）の単独使用のマウス体重と基本的に区別できない。
上記の実験結果によると、アバスチンと併用したペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂは、ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対して、有意な相乗的な阻害効果を示し、担癌マウス薬物耐性が良く、副作用が少なく、体重減少等の症状は発生しない。
９．結論
図１、２および３に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、投与量依存的にヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を阻害し、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）は、ＮＣＩ－Ｎ８７皮下移植腫瘍に対して同様の効果を有する。
併用する場合、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、ＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において、アバスチンに対して有意な相乗的な相乗効果を有する（Ｐ＜０．０５、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンまたはアバスチンの単剤との比較）。さらに、併用する場合、毒性は増加せず、担癌マウスは、薬物に対して良好な耐性を示す。
実施例２
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独使用またはアバスチンとの併用の治療効果
１．まとめ
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）の単独使用またはアバスチンとの併用の治療効果を評価する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）、またはペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）との併用。
２．実験目的
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの単独使用またはアバスチンとの併用の治療効果を評価する。
３．試験薬
３．１．薬物情報
注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）：実施例１と同じである。
アバスチン（ベバシズマブ注射液）：実施例１と同じである。
３．２．薬物の調製
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの各ボトルに１２０μｌの注射用滅菌水を加え、濃度は、１ｍｇ／ｍｌであり、使用前に調製し、生理食塩水で希釈し、アバスチンの濃度は２５ｍｇ／ｍｌであり、必要とする濃度に生理食塩水で直接希釈する。
４．細胞
ヒト肝臓がんＨｕｈ－７細胞は、中国科学院セルバンクから購入する。Ｈｕｈ－７細胞を１０ｃｍのペトリ皿で付着培養し、培養条件は、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ １６４０培地で、３７℃下で、５％ＣＯ２空気を含むインキュベーターで培養する。週に２～３回継代し、細胞が指数増殖期にある場合、トリプシン処理し、細胞を收集し、カウントし、接種する。
５．実験動物
［Ｄ０００５２１］ＢＡＬＢ／ｃ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｎｊｕ、６～７週間、♀、江蘇集萃薬康生物科学技術株式会社から購入する。生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１８－０００８、動物合格証番号２０１９００９４９。飼育環境：ＳＰＦグレード。
６．実験段階
ヌードマウスに６×１０６のヒト肝臓がんＨｕｈ－７細胞を皮下接種し、腫瘍が１００～１５０ｍｍ３に増殖した後、腫瘍体積に従って動物をグループ化する（Ｄ０）。マウスに週２回（ＢＩＷ）皮下注射（ＳＣ）するか、または静脈内注射（ＩＶ）して投与し、投与体積は、１０ｍＬ／ｋｇであり、溶媒群に同じ体積の「溶媒」（生理食塩水）を投与し、具体的な投与量および投与方案は、表２を参照する。腫瘍体積を週２回測定し、マウスの体重を測定し、データを記録する。
７．統計学的分析
両側Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ検定を使用して、二つのグループ間の腫瘍体積を比較し、Ｐ＜０．０５を統計的に有意な差として定義する。
８．結果
結果は、表２と図４、図５と図６に示されたとおりである。
表２．ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、アバスチンの単独使用または併用の治療効果
Ｄ０：最初の投与時間、アバスチンの最初の投与量を２倍にし、ＳＣ：皮下注射、ＩＶ：静脈内注射、Ｐ値は、溶媒との比較を指し、＊Ｐ＜０．０５、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン１ｍｇ／ｋｇ＋アバスチン１０ｍｇ／ｋｇ投与量群と比較する。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）は、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を有意に阻害せず、腫瘍抑制率は、それぞれ－１０％、－７％および９％であり、Ｈｕｈ－７皮下移植腫瘍に対するアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）の腫瘍抑制率は、４０％である。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）とアバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）とを併用する場合、Ｈｕｈ－７にt愛する腫瘍抑制率を４９％に増加する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において、アバスチンに対して、一定の相乗的な相乗効果を有する。
さらに、培養する場合、担癌マウスは、薬物耐性が高く、体重減少等の症状は見られない。図５に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とアバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用群のマウス体重は、ペグインターフェロン群（１ｍｇ／ｋｇ）の単独使用およびアバスチン群（１０ｍｇ／ｋｇ）の単独使用のマウス体重と明らかな区別はない。さらに、併用群の体重は、アバスチン（１０ｍｇ／ｋｇ）の単独使用の体重よりも高く、これは、併用する場合、アバスチン投与の副作用をさらに低減することができることを示唆する。
９．結論
図４、５および６に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計５回）は、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の増殖に対して、明らかな阻害効果を示さず、アバスチン（登録商標）（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計５回）は、Ｈｕｈ－７皮下移植腫瘍に対して効果的である。
併用する場合、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、ヒト肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において、アバスチンに対して相乗的な相乗効果を有する。さらに、併用する場合、毒性は増加せず、担癌マウスは、薬物に対して良好な耐性を示す。
実施例３
ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独使用またはハーセプチンとの併用の治療効果
１．まとめ
ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対する注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）の単独使用またはハーセプチンとの併用の治療効果を評価する。ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）、ハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）、またはペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用。
２．実験目的
ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの単独使用またはハーセプチンとの併用の治療効果を評価する。
３．試験薬
３．１．薬物情報
注射用ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（「ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン」と呼ばれる）：実施例１と同じである。
ハーセプチン（注射用トラスツズマブ）、白色から淡黄色の緩い塊状物、仕様４４０ｍｇ（２０ｍL）／ボトル、製品バッチ番号／希釈液バッチ番号Ｎ３８８６／Ｂ３０８３、製造日２０１７０２２０（製品）／２０１６１１１８（希釈液）、２０２００２１９まで有効である。２～８℃下で暗所で保存する。
３．２．プロバイダー
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンは、上海生物製品研究所株式会社から提供され、ハーセプチンは、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）製薬会社から購入する。
３．３．薬物の調製
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン：ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの各ボトルに１２０μｌの注射用滅菌水を加え、濃度は、１ｍｇ／ｍｌであり、使用前に調製し、生理食塩水で希釈し、
ハーセプチン：まず元の製造元から提供された溶媒で再構成し、溶解後に無色から淡黄色になり、わずかに乳白色の溶液になり、再構成後の濃度は、２１ｍｇ／ｍｌであり、すぐに分注して、－７０～－８０℃の条件下で凍結保存する。使用前に、必要とする濃度に生理食塩水で希釈する。
４．細胞
ヒト乳がんＢＴ－４７４細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入する。ＢＴ－４７４細胞を、１０ｃｍのペトリ皿で付着培養し、培養条件は、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）で、３７℃下で、５％ＣＯ２空気を含むインキュベーター（Ｔｈｅｒｍｏ）で培養する。週に２～３回継代し、細胞が指数増殖期にある場合、トリプシン処理し、細胞を收集し、カウントし、接種する。
５．実験動物
［Ｄ０００５２１］ＢＡＬＢ／ｃＪＧｐｔ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｇｐｔ、５週間、♀，江蘇集萃薬康生物科学技術株式会社から購入する。生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１８－０００８、動物合格証番号２０１９０１０６２。飼育環境：ＳＰＦグレード。
６．実験段階
ヌードマウスに１×１０７のヒト乳がんＢＴ－４７４細胞を皮下接種し、腫瘍が１００～１５０ｍｍ３に増殖した後、腫瘍体積に従って動物をグループ化する（Ｄ０）。マウスに週２回（ＢＩＷ）皮下注射（ＳＣ）するか、または静脈内注射（ＩＶ）して投与し、投与体積は、１０ｍＬ／ｋｇであり、溶媒群に同じ体積の「溶媒」（生理食塩水）を投与し、具体的な投与量および投与方案は、表３を参照する。腫瘍体積を週２回測定し、マウスの体重を測定し、データを記録する。
７．統計学的分析
両側Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ検定を使用して、二つのグループ間の腫瘍体積を比較し、Ｐ＜０．０５を統計的に有意な差として定義する。
８．結果
結果は、表３および図７、図８、図９に示されたとおりである。
表３．ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン、ハーセプチンの単独使用または併用の治療効果
Ｄ０：最初の投与時間、ハーセプチンの最初の投与量を２倍に資、ＳＣ：皮下注射、ＩＶ：静脈内注射、Ｐ値は、溶媒との比較を指し、＊＊Ｐ＜０．０１、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン１ｍｇ／ｋｇ＋ハーセプチン５ｍｇ／ｋｇ投与量群と比較する。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、投与量依存的にヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を阻害し、腫瘍抑制率は、それぞれ６６％、９８％および１５６％であり、１ｍｇ／ｋｇ群には、３／６部分腫瘍退縮を有し、１０ｍｇ／ｋｇ群には、４／６部分腫瘍退縮および２／６完全腫瘍退縮（Ｄ２０）を有し、実験が終わりまでに（Ｄ６０）、１０ｍｇ／ｋｇ群には、依然として４／６部分腫瘍退縮を有し、ＢＴ－４７４皮下移植腫瘍に対するハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）の腫瘍抑制率は、５７％（Ｄ２０）である。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）とを併用する場合、ＢＴ－４７４に対する腫瘍抑制率は、１７０％に有意に増加し（Ｐ＜０．０１、単剤と比較して）、３／６部分腫瘍退縮および３／６完全腫瘍退縮（Ｄ２０）があり、実験が終わりまでに（Ｄ６０）、依然として３／６部分腫瘍退縮および３／６完全腫瘍退縮を有し、これは、ハーセプチンと併用したペグ（ＰＥＧ）インターフェロンが、ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍の治療において、非常に有意な相乗的な相乗効果を有し、治療効果の部分退縮または完全退縮さえ達成したことを示す。
さらに、併用する場合、担癌マウスは、薬物耐性が高く、体重減少等の症状は見られない。特に、図８に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）との併用群のマウス体重は、ペグインターフェロン群の単独使用およびハーセプチン群の単独使用のマウス体重と差はない。
９．結論
図７、８および９に示されるように、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）は、ヒト乳がんＢＴ－４７４ヌードマウスの皮下移植腫瘍の成長を投与量依存的に阻害し、腫瘍の部分または完全退縮を引き起こし、ハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）は、ＢＴ－４７４皮下移植腫瘍に対して同様な効果を有する。
併用する場合、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロン（１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、週２回、合計６回）とハーセプチン（登録商標）（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、週２回、合計６回）とは、ＢＴ－４７４腫瘍の治療効果に対して、有意な相乗的な相乗効果を有する（Ｐ＜０．０５、単剤と比較して）。さらに、併用する場合、毒性は増加せず、担癌マウスは、薬物に対して良好な耐性を示す。
実施例４．インビトロでの腫瘍細胞株に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンの阻害効果
スルホニルローダミンＢタンパク質染色法（ＳＲＢ法）を使用して、インビトロでの腫瘍細胞の増殖に対するペグインターフェロンの単独使用または他の薬物との併用に及ぼす影響を評価する。
対数増殖期の一定の数の細胞を９６ウェル培養プレートに接種する。２４時間付着増殖した後、異なる濃度（最終濃度が１、３、１０、３０、１００、３００、１０００、３０００、１００００ｎＭである）の薬物を加える。薬物が１２０時間作用した後、トリクロロ酢酸で細胞を固定する。その後、ＳＲＢ溶液を染色し、最後に、Ｔｒｉｓ溶液を加えてＳＲＢを溶解し、マイクロプレートリーダーで５１０ｎｍの波長下でＯＤ値を測定し、以下の式で細胞の増殖阻害率を計算する。
阻害率＝（ＯＤ値の対照ウェル－ＯＤ値の投与ウェル）／ＯＤ値の対照ウェル×１００％
結果は、表４に示されたとおりである。
実施例５．腫瘍細胞株に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロンとハーセプチンとの相乗的な阻害効果
実施例４の方法を繰り返し、違いは、表５に示されるペグインターフェロン（単独使用群１）、ハーセプチン（単独使用群２）の異なる投与量、およびペグインターフェロン＋ハーセプチン（併用群）の異なる投与量を使用し、乳がん細胞ＢＴ４７４を使用して、対応する阻害率（％）を計算する。
注：ペグインターフェロンにおいて、ＩＦＮ－α１ｂとペグとの重量比は、約１：１であり、従って、６００μｇのペグインターフェロンにおけるＩＦＮ－α１ｂは、３００μｇ（約３０万ＩＵ）であり、このように類推する。
図１０に示されるように、結果によると、ペグインターフェロンとハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）との併用は、インビトロで培養されたヒト乳がんＢＴ－４７４細胞の増殖に対して、相乗的な阻害活性を示し、阻害効果が有意に向上され、併用指数（ＣＩ値）は、０．３１であり、相乗的な相乗効果を有することを表す。
具体的には、併用する場合、ペグインターフェロンの濃度が約９．３８～６００μｇ／ｍｌであり、かつハーセプチンの濃度が０．０５～３μｇ／ｍｌである場合、有意な相乗的な阻害効果が観察されることができる。例えば、１５０μｇ／ｍｌのペグインターフェロン＋０．７５μｇ／ｍｌのハーセプチンの併用時の阻害率は、３００μｇ／ｍｌのペグインターフェロンの単独使用または１．５μｇ／ｍｌのハーセプチンの単独使用時の阻害率よりも有意に高かった。
議論
インターフェロンは、広範囲の抗ウイルス増殖、抗腫瘍、免疫調節等の様々な活性を有する高活性タンパク質分子である。腫瘍治療の分野において、一般的なインターフェロンは、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病、腎臓がん、カポジ肉腫、黒色腫、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、子宮頚部上皮内腫瘍（Ｅｌｅｎａ Ｇａｒｃｉａ－Ｍａｒｔｉｎｅｚら、Ｔｒｉａｌ Ｗａｔｃｈ：Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ、ＯＮＣＯＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、２０１８、ＶＯＬ．７、ＮＯ．６：ｅ１４３３９８２、１６ｐａｇｅｓ、Ｘｉａｎｇ Ｃｈｅｎら、腎臓がんに対する免疫治療の臨床研究の進歩、中国泌尿外科ジャーナル、２０１７、Ｖｏｌ．３８、Ｎｏ．９：７１７－７２０）の治療のために、米国ＦＤＡおよび欧州ＥＭＡによって承認されている。さらに、肺がん、消化管がん、前立腺がん、頭頸部扁平上皮がん等の腫瘍の治療においても一定の治療効果を有する。
一般的なインターフェロンは、安全かつ効果的な製剤であるが、依然としていくつかの問題、特に、深刻な副作用が存在する。現在、臨床的に使用される一般的なインターフェロンは、分子量がより小さいため（２０ｋＤａ以下）、糸球体によるろ過が容易であり、ヒトインビボでの半減期は、わずかに１．５～２時間であり、理想的な治療効果を達成するために、一般的なインターフェロンの一般的な臨床治療は、大量の投与、複数回の注射を使用し、患者のコンプライアンスを低下させ、副作用を引き起こしやすくなる。
黒色腫を例にすると、まず、一般的なインターフェロン２０００万ＩＵ／ｍ２（約４００μｇ／人に等しい）を５天／周皮下注射し、１ケ月後に１０００万ＩＵ／ｍ２（約２００μｇ／人に等しい）を投与し、治療を週３回４８週間維持する必要があり、患者の生存期間を延長することができるが、高投与量の一般的なインターフェロンの副作用は、非常に明らかであり、患者の少なくとも５０％は、投与量を遅延するか、または減少する必要があるため、高リスクの患者にのみ使用することができる。
人体における一般的なインターフェロンαの副作用は、全身性であり（Ｘｕｅｌｉｎ Ｃａｏ、インターフェロン副作用のメカニズム、生物医学工学および臨床、２０１０、ＶＯＬ．１４、ＮＯ．４：３４０－３４２）、治療の初期段階において、ほとんどの患者は、インフルエンザ様症候群を発症し、臨床症状には、発熱、悪寒、頭痛、筋肉痛、胃腸痛等がある。吐き気、嘔吐、食欲不振は、一般的なインターフェロンα治療の初期段階における一般的な胃腸反応である。一般的なインターフェロンα治療を受ける７０％を超える患者に倦怠感が発生する。神経系および性神経の副作用は、主に精神障害、憂鬱症、トランス（ｔｒａｎｃｅ）、不安、過敏症等である。一般的なインターフェロンαの治療過程を受けている約２０％の患者は、総白血球、好中球および血小板のカウントの軽度から中程度の現象が現れる可能性がある。一般的なインターフェロンαによって引き起こされる皮膚および粘膜の病変は、最も一般的な発疹であり、掻痒を伴う非特異的な発疹として現れることがよくあり、他の症状には、注射部位の紅斑、皮膚潰瘍、口腔粘膜潰瘍、口唇炎等がある。一般的なインターフェロンα治療は、自己免疫および非自己免疫メカニズムを介して、甲状腺機能障害を引き起こす可能性があり、甲状腺機能障害では、甲状腺機能低下が最も一般的である。一般的なインターフェロンαは、膵島β細胞への自己免疫性損傷を誘発して、糖尿病を誘発する可能性がある。他のより珍しい副作用には、間質性肺炎、網膜病変、聴覚障害と耳鳴り、脱毛、下痢、体重減少がある。
腫瘍の治療における一般的なインターフェロンαの治療効果を改善し、副作用を低減するために、一般的なインターフェロンαと他の腫瘍薬物との併用法案については、有益な調査が行われた（Ｊｕｎ Ｇｕｏ、転移性腎臓がんの内科治療の進歩、第２回中国腫瘍内科会議、２００８：３３－３６）。ここで、進行性腎臓がんの治療において、一般的なインターフェロンαと併用したベバシズマブの治療方案が最も成功した法案であり、二つの独立した臨床試験により、ベバシズマブと一般的なインターフェロンαとを併用して腎臓がんを治療するのは、一般的なインターフェロンの単独使用の患者のＰＦＳを有意に延長することができることが確認された（１０．２ケ月ｖｓ５．４ケ月、８．５ケ月ｖｓ５．２ケ月）。以上の結果に基づいて、２００９年に米国ＦＤＡは、進行性腎臓がんの治療のために一般的なインターフェロンと併用したベバシズマブを承認した。しかし、グレード３以上の副作用の発生率は、８０％に達する可能性があるため（Ｂｒｉａｎ Ｉ． Ｒｉｎｉら、Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ Ｔｒｉａｌ ｏｆ Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ Ｐｌｕｓ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ Ｖｅｒｓｕｓ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｒｅｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｆｉｎａｌ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＣＡＬＧＢ ９０２０６、ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＯＮＣＯＬＯＧＹ、２０１０、ＶＯＬ２８、Ｎｏ．１３：２１３７－２１４３）、患者のコンプライアンスは高くなく、当該方案の応用を制限する。
ヒトインターフェロンα１ｂは、ヒト白血球によって生成される１６６個のアミノ酸からなるタンパク質であり、その相対分子量は、１９．３８２ｋＤａである。研究によると、ウイルスに攻撃された後、中国人の白血球によって生成される様々なインターフェロンにおいて、α１ｂ型インターフェロンが主な種類である。
１９８０年代初頭、中国医学院ウイルス学研究所の侯雲徳らが初めてα１ｂインターフェロン遺伝子のクローンを作成し、中国で最初の遺伝子操作されたタンパク質薬である組換えヒトインターフェロンα１ｂは、ウイルス学研究所および上海生物製品研究所で共同に開発したもので、中国で独立した知的財産権を有する数少ない新薬の一つである。
一般的なインターフェロンα２製品と比較して、一般的なインターフェロンα１は、インビトロで生物学的活性が比較的に低いが、インビボでの効果が強く、範囲が広く、副作用が小さい。例えば、インビトロでの一般的なインターフェロンα２ａおよび２ｂの比放射能は、両方とも１×１０８ＩＵ／ｍｇであるが、一般的なインターフェロンα１ｂの比放射能は、わずか１×１０７ＩＵ／ｍｇであり、前の二つの１０％である。臨床応用において、同じ重量の一般的なインターフェロンα１ｂは、一般的なインターフェロンα２ａ、２ｂとの治療効果と相当であり、副作用は後者の二つよりも有意に少ない（Ｋｕｉｔａｎｇ Ｔｏｎｇ、黒色腫のインターフェロンα治療、第１７回全国インターフェロンおよびサイトカイン学術会議、２０１１：２－６）。有毛細胞白血病の治療における一般的なインターフェロンα１ｂの臨床試験において、有効率は６３．６４％であり、緩和率は３６．３６％に達するが、副作用は、投薬なして治まった短期の微熱のみであり、他の副作用は明らかでなく、すべての患者に許容され、投薬を中止した患者は一人もない。
米国で行われた第Ｉ相、第II相臨床試験の結果によると、高投与量（５００μｇ／日）の一般的なインターフェロンα１ｂ注射を使用して転移性腎臓がんおよび多発性骨髄腫の患者を治療すると、一定の治療効果を有し、副作用は、他の一般的なインターフェロンの副作用よりももっと軽度である（Ｐ．Ｍａｓｃｉら、Ｇｅｎｅ Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ、ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α－１ｂ：Ａ Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α Ｆａｍｉｌｙ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２００７、Ｖｏｌ．８１、Ｎｏ．３：３５４－３６１）。
一般的なインターフェロンα１ｂは、他の一般的なインターフェロンと同様に、分子量が小さく、糸球体でろ過されやすく、人体での半減期が短いという欠点がある。半減期を延長しかつその治療効果を向上させるために、第２世代のポリエチレングリコール修飾剤を使用して一般的なインターフェロンα１ｂを修飾して、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂと名付けられる単一のペグ修飾インターフェロンα１ｂを得る。研究によると、その分子量が増加し、半減期が未修飾の一般的なインターフェロンよりも大幅に延長することを示す。ラットにおけるペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの半減期は、１３．９８時間であるが、一般的なインターフェロンα１ｂの半減期は、１．８４時間であり、蟹食猿におけるインビボペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの半減期は、２２．０３±３．３２時間であるが、一般的なインターフェロンα１ｂの半減期は、３．２７±１．４８時間であることを示す。市場に出回っているペグ修飾組換え治療性タンパク質薬に関連する研究報告によると、そのような薬物の分子量の増加は、その臨床応用の治療効果の改善と正の相関がある。
本発明において、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂを単独で、または他の薬物と併用して、前臨床のインビトロおよびインビボの薬力学的研究を行う。
研究結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとアバスチン、ハーセプチン等のいくつかの抗腫瘍薬との併用は、治療効果で相乗的効果を有するだけでなく、様々な副作用を相乗的に有意に低減することを示す。
本発明の根拠において、インビトロ腫瘍細胞モデルにおいて、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂが乳がん、肺がん、肝臓がんおよび胃がんの細胞に対して一定の阻害効果（１９．６％~５８．４％阻害率）を有することが観察される。
インビボでのヌードマウス乳がんＢＴ－４７４腫瘍モデルにおいて、中程度投与量ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂ（１ｍｇ／ｋｇ）とハーセプチンの併用群の治療効果の増強効果は明らかであり（併用群で１７０％の阻害率ｖｓ．中程度投与量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独使用群で９８％の阻害率ｖｓ．ハーセプチンの単独使用群で５７％の阻害率ｖｓ．高投与量のペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独使用群で１５６％の阻害率）、５０％のヌードマウス腫瘍の完全退縮さえ観察される。これらの結果は、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂが明らかな抗腫瘍効果を有することを確認しただけでなく、臨床腫瘍治療におけるその使用のための確固たる基礎を提供する。同時に、モノクローナル抗体と併用して生成される相乗的効果により、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの投与量を大幅に低減することができ（１０倍低減）、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとモノクローナル抗体等の抗腫瘍薬との併用のために、より幅広い投与量選択範囲を提供できることも示す。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとアバスチンとを併用する場合、ヒト胃がんＮＣＩ－Ｎ８７ヌードマウスの皮下移植腫瘍モデルで、治療効果が有意に増加されることが観察される。同時に、モノクローナル抗体と併用して生成される相乗的効果により、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの投与量を大幅に低減することができ（１０倍低減）、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとモノクローナル抗体等の抗腫瘍薬との併用のために、より幅広い投与量選択範囲を提供できることも示す。
肝臓がんＨｕｈ－７ヌードマウスモデルにおいて、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂの単独使用群は、明らかな腫瘍阻害効果を示されないことにより、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂに抗腫瘍活性を有するが、様々な腫瘍に対するその治療効果には、依然として一定または大きな違いがあることが分かる。しかしながら、ペグインターフェロンとアバスチンとを併用する場合、一定の相乗的な相乗効果を示す。
ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａおよびα２ｂは、慢性B型肝炎およびC型肝炎において一般的なインターフェロンの治療効果よりも明らかな利点があり、大きな成功を収めている。しかし、腫瘍治療の分野では全く異なり、第III相臨床研究において（Ｔ． Ｋ． Ｅｉｇｅｎｔｌｅｒら、Ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ pegｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α－２ａ ｖｅｒｓｕｓ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α－２ａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｍｅｌａｎｏｍａ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ＤｅＣＯＧ ｔｒｉａｌ、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２０１６、２７：１６２５-１６３２）、高リスク黒色腫患者におけるペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａと一般的なインターフェロンα２ａとの治療効果および安全性を比較し、結果によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａの治療効果は、一般的なインターフェロンα２ａの治療よりも優れず、副作用はより高かったことを示す。
別の第III相臨床研究において（ＴＨＯＭＡＳ Ｍ． Ｈら、Ｕ．Ｓ． Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ａｐｐｒｏｖａｌ：ペグｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ａｌｆａ－２ｂ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｌａｎｏｍａ、Ｔｈｅ ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、２０１２、１７：１３２３-１３２８）、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ｂで補助治療された黒色腫患者の平均無再発の生存期間は３４．８ケ月であり、２５．５ケ月の観察群よりも有意に延長したが、全生存期間には有意な改善はない。治療群における深刻な副作用の発生率は、観察群のほぼ２倍に達し（３３％ｖｓ１５％）、２０１１年、米国ＦＤＡは、局所リンパ節転移を伴う悪性黒色腫患者の補助治療としてペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ｂを承認し、毎週６μｇ／ｋｇ皮下投与し、連続の８回の注射後に毎週３μｇ／ｋｇの投与を維持する（ＮＣＣＮ腫瘍学臨床実践ガイドライン－悪性黒色腫、２０１８年第２版：ＭＳ－２０）。現在、腫瘍適応症に対するペグ（ＰＥＧ）インターフェロン薬の承認された方案は一つだけであり、腫瘍治療の分野で、治療効果に対する様々なペグ（ＰＥＧ）インターフェロン種類と様々な腫瘍種類の治療効果は、有意に異なり、単純に類推することはできないことを示した。
予期せぬことに、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα２ａとは異なり、本発明の研究によると、ペグ（ＰＥＧ）インターフェロンα１ｂとアバスチンまたはハーセプチンとの併用は、相乗的に腫瘍を阻害しながら、それぞれの対応する副作用（例えば、体重減少、発熱、胃腸の有害反応、発疹等）の発生率または程度を大幅に低減することができる。
本発明で言及されたすべての文書は、あたかも各文書が個別に参照として引用されたかのように、本出願における参照として引用される。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も、本出願の添付の請求範囲によって定義される範囲に含まれる。

Claims (10)

  1. 腫瘍を相乗的に治療するための医薬組成物またはキットの調製に用いられる有効成分の組み合わせの使用であって、
    前記有効成分の組み合わせは、第１の有効成分ペグインターフェロンおよび第２の有効成分プロトオンコジーン産物標的阻害剤を含み、
    前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂであり、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ベバシズマブ、トラスツズマブ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がベバシズマブである場合、前記腫瘍は肝臓がんであり、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がトラスツズマブである場合、前記腫瘍は乳がんであり、
    前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、前記使用。
  2. 前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との質量比は、１：１００～５００：１であることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
  3. 前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１００００ＩＵ／ｍｇ～１０００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
  4. 前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０万ＩＵ／ｍｇ～５００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
  5. 前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、２０万ＩＵ／ｍｇ～３００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
  6. 前記腫瘍は、肺がん、胃がん、乳がん、肝臓がん、腸がん、卵巣がん、子宮頸がん、またはその組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
  7. 腫瘍を相乗的に治療するための医薬組成物であって、
    前記医薬組成物は、ペグインターフェロン、プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含み、
    前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂであり、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ベバシズマブ、トラスツズマブ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がベバシズマブである場合、前記腫瘍は肝臓がんであり、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がトラスツズマブである場合、前記腫瘍は乳がんであり、
    前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、前記医薬組成物。
  8. 腫瘍を相乗的に治療するための有効成分の組み合わせであって、
    前記組み合わせは、ペグインターフェロンおよびプロトオンコジーン産物標的阻害剤で構成され、
    前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂであり、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ベバシズマブ、トラスツズマブ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がベバシズマブである場合、前記腫瘍は肝臓がんであり、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がトラスツズマブである場合、前記腫瘍は乳がんであり、
    前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、前記有効成分の組み合わせ。
  9. 腫瘍を相乗的に治療するためのキットであって、
    前記キットは、
    （ａ）ペグインターフェロンおよび薬学的に許容される担体を含む第１の製剤と、
    （ｂ）プロトオンコジーン産物標的阻害剤および薬学的に許容される担体を含む第２の製剤と、および
    （ｃ）ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤とを併用して腫瘍を治療する方法について説明する説明書とを含み、
    前記ペグインターフェロンは、ペグインターフェロンα１ｂであり、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤は、ベバシズマブ、トラスツズマブ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がベバシズマブである場合、前記腫瘍は肝臓がんであり、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がトラスツズマブである場合、前記腫瘍は乳がんであり、
    前記ペグインターフェロンとプロトオンコジーン産物標的阻害剤との比率（ＩＵ／ｍｇ）は、１０００ＩＵ／ｍｇ～１００００万ＩＵ／ｍｇであることを特徴とする、前記キット。
  10. 腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害するためのインビトロの非治療的方法であって、
    腫瘍細胞培養系に請求項８に記載の有効成分の組み合わせを加えることにより、腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害する段階を含み、
    前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がベバシズマブである場合、前記腫瘍細胞は肝臓がん細胞であり、前記プロトオンコジーン産物標的阻害剤がトラスツズマブである場合、前記腫瘍細胞は乳がん細胞であることを特徴とする、前記方法。
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