JP2022547541A - アフリベルセプトをコードするａａｖ２バリアントを使用して眼内血管新生疾患を処置する方法 - Google Patents

アフリベルセプトをコードするａａｖ２バリアントを使用して眼内血管新生疾患を処置する方法 Download PDF

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Abstract

個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の単位用量を個体の眼に投与するステップを含み、ｒＡＡＶ粒子が、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、およびｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法を提供する。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、それぞれの開示全体がこれによって参照により組み込まれる、２０１９年９月１１日出願の米国仮特許出願第６２／８９９，０７０号、２０１９年１０月１０日出願の米国仮特許出願第６２／９１３，６４８号、２０１９年１１月１８日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０６２０６６号、２０２０年１月１０日出願の米国仮特許出願第６２／９５９，７８４号、２０２０年２月７日出願の米国仮特許出願第６２／９７１，８３５号、２０２０年５月１日出願の米国仮特許出願第６３／０１９，１９０号、２０２０年５月２７日出願の米国仮特許出願第６３／０３０，８１９号および２０２０年８月７日出願の米国仮特許出願第６３／０６３，２０３号に基づく利益を主張するものである。
分野
本開示は、個体における眼内血管新生疾患および障害を処置する方法であって、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の１回単位用量を個体の眼に投与するステップを含む方法に関する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出物の内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：６２７００２００１２４１ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年９月９日、サイズ：４１ＫＢ）。
背景
加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）は、字を読む、および細かいものを見る視力を担う網膜の中心にある光感受性の小さい領域である黄斑に影響を及ぼす眼の変性疾患である。黄斑に影響を及ぼす状態は、中心視野を低減させるが、周辺視野は影響を受けないままである。重度の例では、疾患は、中枢盲をもたらし得る。ＡＭＤは、米国集団の６５歳およびそれより上の人における視覚喪失の顕著な原因であり、年齢４０歳を超える人における任意のＡＭＤの推定有病率は、およそ６．５％である（Klein et al., (2011) Arch Ophthalmol, 129(1):75-80）。血管新生型または滲出型または滲出性ＡＭＤ（ｎＡＭＤ、ｗＡＭＤ、またはｎｗＡＭＤ）は、ＡＭＤの進行型である。ｗＡＭＤの典型的特徴は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）であり、これはその下にある脈絡膜層から網膜への異常な血管の浸潤であり、網膜細胞の損傷および中枢盲をもたらす。この異常な血管形成プロセスは、増殖因子、特に血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）によってモジュレートされる。ｗＡＭＤの標準治療は、ＶＥＧＦに結合してこれを隔離する分子のクラス、例えばラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ）である。
糖尿病網膜症（ＤＲ）は糖尿病の主要な合併症であり、労働年齢集団における失明の主な原因である。ＤＲは、新しい血管成長を伴わない非増殖性（ＮＰＤＲ）であるか、または網膜もしくは脈絡膜内の新しい異常な血管成長を伴う増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）であり得る。糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）はＤＲの合併症であり、黄斑に影響を及ぼす眼の疾患の別の例である。ＤＭＥは糖尿病の人の１０％に至るまでに影響を及ぼし、黄斑内への液の蓄積によって引き起こされる。ＤＭＥはＤＲを有する人における視覚喪失の最も頻度の高い原因である。ＤＭＥを処置するために利用可能な治療としては、レーザーおよびアフリベルセプトなどの抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）薬が挙げられる。
アフリベルセプトは、血管内皮増殖因子サブタイプＡおよびＢ（ＶＥＧＦ－ＡおよびＶＥＧＦ－Ｂ）ならびに胎盤増殖因子（ＰＧＦ）のデコイ受容体として作用する組換え融合タンパク質である。これらのリガンドに結合することによって、アフリベルセプトは、それらのリガンドが血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、ＶＥＧＦＲ－１およびＶＥＧＦＲ－２に結合するのを防止し、血管新生を抑制し、血管透過性を減少させることができる。アフリベルセプトは、ＩｇＧ１のＦｃ断片に融合したＶＥＧＦＲ－１のドメイン２およびＶＥＧＦＲ－２のドメイン３からなる。
現在の標準治療のアフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤は、最適な治療転帰を達成するためおよび視力を維持するためには、硝子体内（ＩＶＴ）注射を介して４～８週間毎に再投与する必要がある。そのようなレジメンのコンプライアンスは患者、その介護者および保健システムにとって煩わしく、ほとんどの患者が、時間が経つにつれて最適なレジメンのコンプライアンスから外れ、これは視覚喪失と相関する（Khanani AM, et al.）。加えて、眼内炎、網膜剥離、外傷性白内障、および眼圧（ＩＯＰ）上昇を含む合併症が存在し、これらの合併症のリスクは、繰り返しＩＶＴ注射によって増加する可能性がある（Falavarjani et al., (2013) Eye (Lond), 27(7):787-794）。
Klein et al., (2011) Arch Ophthalmol, 129(1):75-80 Falavarjani et al., (2013) Eye (Lond), 27(7):787-794
したがって、有効で、有害効果のリスクを低減し、患者が長期間の高いコンプライアンスを受け入れやすい、ｗＡＭＤ、ＤＲ、またはＤＭＥなどの眼内血管新生疾患の治療が当技術分野で必要である。
本開示の要旨
一態様では、本明細書において、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量を個体の１つの眼に投与するステップを含み、個体がヒトであり、ｒＡＡＶ粒子が、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および（ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含む、またはからなるＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、個体の眼の網膜液を低減させるステップを含む。
別の態様では、本明細書において、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法であって、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与するステップを含み、個体がヒトであり、ｒＡＡＶ粒子が、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および（ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含む、からなるＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のおよそ最後の１２週間に抗ＶＥＧＦ剤の少なくとも１回の処置を受けている。一部の実施形態では、個体の１つの眼の網膜液の量または存在は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して不応性である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つの眼の網膜液は、少なくとも約６０％低減される。一部の実施形態では、１つの眼の網膜液は、ｒＡＡＶを個体に投与する前の個体の１つの眼の網膜液のレベルと比較して約８０％低減される。一部の実施形態では、網膜液は、網膜下液（ＳＲＦ）または網膜内液（ＩＲＦ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）またはそれ未満である。
別の態様では、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、（ａ）抗ＶＥＧＦ剤を個体の１つの眼に投与するステップと、（ｂ）抗ＶＥＧＦ剤の投与後に、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量を個体の１つの眼に投与するステップとを含み、個体がヒトであり、ｒＡＡＶ粒子が、（ｉ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および（ｉｉ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む、方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、方法は、抗ＶＥＧＦ剤の投与の約１週間後または約７日後にｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、抗ＶＥＧＦ剤の投与の約１週間～約２週間後にｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、抗ＶＥＧＦ剤の投与の約１日後、約２日後、約３日後、約４日後、約５日後、約６日後、約７日後、約８日後、約９日後、約１０日後、約１１日後、約１２日後、約１３日後、約１４日後、または約１５日後にｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、１日目に抗ＶＥＧＦ剤を個体の１つの眼に投与し、８日目にｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトを含む。一部の実施形態では、アフリベルセプトを約２ｍｇの用量で硝子体内注射によって投与する。一部の実施形態では、方法は、局所ステロイド処置を施行するステップをさらに含む。一部の実施形態では、局所ステロイド処置はジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約４週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングは抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングは抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０１０～約２×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０１１または約６×１０１０ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０１０～約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０１０～約２×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０１１～約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０１１または約６×１０１０ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０１１ｖｇ／眼である。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、個体は、反対側の眼に眼内血管新生疾患の１つまたは複数の症状を有する。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップと同じ日であるか、または、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの約１日後から約１４日後の間である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と同じであるか、またはより少ないベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より多くのベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、核酸は、配列番号４０の核酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ポリペプチドは配列番号３５のアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、核酸は、第１のエンハンサー領域、プロモーター領域、５’ＵＴＲ領域、第２のエンハンサー領域、およびポリアデニル化部位をさらに含む。一部の実施形態では、核酸は、５’から３’の順に：（ａ）第１のエンハンサー領域；（ｂ）プロモーター領域；（ｃ）５’ＵＴＲ領域；（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸；（ｅ）第２のエンハンサー領域；および（ｆ）ポリアデニル化部位を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。一部の実施形態では、第１のエンハンサー領域は、配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む。一部の実施形態では、プロモーター領域は、配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードする核酸は、配列番号４０の核酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４１のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ領域は、５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む。一部の実施形態では、第２のエンハンサー領域は、配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む。一部の実施形態では、ポリアデニル化部位は、配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位を含む。一部の実施形態では、核酸は、（ａ）配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域；（ｂ）配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含むプロモーター領域；（ｃ）５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｅ）配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位をさらに含む。一部の実施形態では、核酸は、エレメントの両端にＡＡＶ ＩＴＲを含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、核酸は、配列番号３９の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３８のアミノ酸配列または配列番号３８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＨループを含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３８と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のいずれかの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＨループを含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３７のアミノ酸配列または配列番号３７と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３７と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のいずれかの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むか、またはそれからなる。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、アミノ酸残基ナンバリングはＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、アミノ酸残基ナンバリングはＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与は硝子体内投与による。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は医薬製剤中にある。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムおよび界面活性剤を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１５０～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８、および約６×１０１３～約６×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬ（ｖｇ／ｍＬ）のｒＡＡＶ粒子を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約２×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２５μＬ～約２５０μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約３０μＬの体積を含む。前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されるｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２５μＬ～約２５０μＬの体積を含む。一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されるｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されるｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約３０μＬの体積を含む。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による眼内血管新生疾患の以前の処置を受けている。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に１つの眼および／または反対側の眼への抗ＶＥＧＦ剤の注射を１回または２回受けている。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による眼内血管新生疾患の以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトである。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、滲出性加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそれらのいずれかの組合せである。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量はステロイド処置と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置はコルチコステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置はプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、経口プレドニゾン処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与の３日前に開始して、プレドニゾンを１日当たり約６０ｍｇの用量で合計６日間にわたって投与し、その後、プレドニゾンを１日当たり約４０ｍｇの用量で合計３日間にわたって投与し、その後、プレドニゾンを１日当たり約２０ｍｇの用量で合計２日間にわたって投与し、その後、プレドニゾンを１日当たり約１０ｍｇの用量で合計２日間にわたって投与することを含む。一部の実施形態では、ステロイド処置は局所ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置はジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイドをｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与する。一部の実施形態では、ステロイドをｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前、投与の間、および／または投与後に投与する。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ステロイド処置は局所ステロイド処置であり、局所ステロイド処置はｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から最大約４週間、最大約６週間、または最大約８週間の毎日ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後約３週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含む。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約４週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約１週間前から開始する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングはおよそｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与時から開始する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約１週間前から開始する。一部の実施形態では、局所ステロイドは０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は滲出性加齢黄斑変性（ｗＡＭＤ）である。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較した網膜厚の維持または減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約３０週間、約３４週間、約４４週間、約６カ月、約１年、約１．５年、約２年、約３年、約５年、約１０年、またはそれよりも長く存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少をもたらす。一部の実施形態では、網膜厚の減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して少なくとも約１０％である。一部の実施形態では、網膜厚は中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較した黄斑体積の維持または減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約３０週間、約３４週間、約４４週間、約６カ月、約１年、約１．５年、約２年、約３年、約５年、約１０年、またはそれよりも長く存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、黄斑体積の減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％である。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較した視力の維持または改善は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約３０週間、約３４週間、約４４週間、約６カ月、約１年、約１．５年、約２年、約３年、約５年、約１０年、またはそれよりも長く存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、視力は最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、治療的利益（例えば、眼内血管新生疾患の処置、網膜液の減少、網膜厚の維持もしくは減少、黄斑体積の維持もしくは減少、および／または視力の維持もしくは改善）をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約３０週間またはそれよりも長く、約３４週間またはそれよりも長く、約４４週間またはそれよりも長く、約６カ月またはそれよりも長く、約１年またはそれよりも長く、約１．５年またはそれよりも長く、または約２年、約３年、約５年、約１０年、またはそれよりも長く存在する治療的利益をもたらす。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の結果、複数内の個体の少なくとも約５０％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。一部の実施形態では、複数内の個体の少なくとも約５０％が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後、少なくとも約２０週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、またはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約６７％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。一部の実施形態では、複数内の個体の少なくとも約６７％が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後、少なくとも約２０週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、または少なくとも約６６週間にわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の結果、複数内の個体の少なくとも約７８％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。一部の実施形態では、複数内の個体の少なくとも約７８％が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後、少なくとも約２０週間、少なくとも約３６週間、またはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の結果、複数内の個体の１００％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。一部の実施形態では、複数内の個体の１００％が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、またはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない。
前述の実施形態のいずれかとの組合せであり得る一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の年間の抗ＶＥＧＦ注射率と比較して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％の年間の抗ＶＥＧＦ注射率の低下をもたらす。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の２段階または３段階の改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の２段階の改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の３段階の改善をもたらす。
参照による組み込み
本明細書で引用した特許出願および刊行物を含む参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に記載されている。本発明の原理が利用されている例示的な実施形態が記載されている以下の詳細な説明および付属図を参照することにより、本発明の特徴および利点のよりよい理解が得られよう。
図１Ａ～１Ｂは、調査医薬品ならびに実施例１および２に記載されている第Ｉ相試験の概略図を提示する。図１Ａは、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの概略図である。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは、ＡＡＶ２．７ｍ８タンパク質カプシドと、遍在するキメラプロモーターの制御下にあるアフリベルセプトｃＤＮＡのコドン最適化バージョンの発現カセット（Ｃ１１）を含有するベクターゲノムとを含有する組換え複製欠損アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトベクターゲノムは、アフリベルセプトｃＤＮＡ発現カセットの両端にある２つのＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）も含有する。図１Ｂは、実施例１および２に記載されている第Ｉ相試験の試験設計を要約する図である。 同上。
図１Ｃは、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトベクターゲノム（配列番号３９）の図を提示する。ベクターゲノムは、ＡＡＶ血清型２の末端逆位配列（ＩＴＲ）を２つ（配列番号３９の１～１４５位および３７７２～３９１６位）と、ＣＭＶプロモーター（配列番号３９の１８０～６９３位）、アデノウイルスの三部分からなるリーダー配列および合成イントロンで構成される５’非翻訳領域（ＵＴＲ）（配列番号３９の６９４～１３１４位）、コザック配列（配列番号３９の１３２９～１３４０位）、コドン最適化されたアフリベルセプトｃＤＮＡ（配列番号３９の１３３８～２７１４位）、ヒト足場付着領域で構成される３’ＵＴＲ（配列番号３９の２７１７～３５２７位）、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化／転写終結シグナル（配列番号３９の３５４６～３７４８位）で構成される発現カセットを含む。ＡＡＶ＝アデノ随伴ウイルス；ＣＭＶ＝サイトメガロウイルス；ＧＨ＝成長ホルモン；ＩＴＲ＝末端逆位配列；ポリＡ＝ポリアデニル化；ＳＡＲ＝足場付着領域；ＴＰＬ＝三部分からなるリーダー配列。
図２Ａ～２Ｌは、実施例１に記載の試験のコホート１の対象から取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。ＯＣＴ画像をＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与（１日目）の前後の示されている時点で取得した。抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ処置間隔が対象全員について示されている。図２Ａは、対象１から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。対象１は５～７週間ごとのアフリベルセプトＩＶＴを必要としており、アフリベルセプト標準治療による処置にもかかわらず不応性網膜下液および色素上皮剥離（ＰＥＤ）を示した。図２Ｂは、対象１からスクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－７日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象１は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象１は第４週に始まる網膜下液の消散を示し、網膜下および網膜内液が存在しないまま（乾燥したまま）であった。図２Ｃは、対象２から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。対象２は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前の８カ月の間に、網膜の解剖学的構造を維持するために６回のアフリベルセプトＩＶＴ処置を必要とした。図２Ｄは、対象２からスクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－７日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象２は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象２は第２４週まで安定な網膜の解剖学的構造を示し、網膜下液も網膜内液も存在しなかった。図２Ｅは、対象３から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での４回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。－２７週に取得したＯＣＴ画像は示されていない。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。対象３は網膜下液を示し、アフリベルセプトＩＶＴ間の間隔が５週間から７週間に増すと網膜下液が増加した。図２Ｆは、対象３から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－７日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象３は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象３は、第８週までに不応性網膜下液の消散を示し、また、第２４週まで安定な網膜の解剖学的構造を示した。図２Ｇは、対象４から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をラニビズマブ０．５ｍｇ ＩＶＴ標準治療による処置の直前に取得した。対象４はラニビズマブＩＶＴ注射に対して不応性の網膜下液を示した。図２Ｈは、対象４から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－１４日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象４は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象４は、第８週までに不応性網膜下液の消散を示し、また、第２４週まで安定な網膜の解剖学的構造を示した。図２Ｉは、対象５から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像をアフリベルセプト標準治療による処置の直前に取得した。図２Ｊは、対象５から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－１４日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象５は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置時に網膜下液およびＰＥＤが存在し、経時的に消散し、また、第２４週まで網膜の解剖学的構造は安定なままであり、網膜下液も網膜内液も存在しなかった。図２Ｋは、対象６から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射前の示されている時点での５回の来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。ＯＣＴ画像を示されている通りベバシズマブ１．５ｍｇ ＩＶＴ標準治療またはラニビズマブ０．５ｍｇ ＩＶＴ標準治療のいずれかによる処置の直前に取得した。対象６の網膜の外観はポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）と一致した。図２Ｌは、対象６から、スクリーニングでのアフリベルセプト注射時（－１０日目）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時（１日目）、および示されている時点でのフォローアップ来訪時に取得したＯＣＴ画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを提示する。対象６は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射後にいかなるレスキュー注射も必要としなかった。対象６は第２４週までいかなる網膜下液の増加も示さず、いくらかの解剖学的改善が実現された。対象６の反対側の眼は標準治療であるアフリベルセプト注射を試験の経過にわたって４週間ごとに受け、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトで処置された眼と同様の網膜形態を示した。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。
図３は、実施例１に記載の試験のコホート１の対象についての示されている時点での平均中心窩網膜厚（ＣＳＴ）の変化を示す。エラーバーは、Ｔ分布を使用して算出された９０％信頼区間を示す。ベースライン（ＢＬ）は、１日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の７～１５日前（例えば、７～１４日前）のスクリーニングでのアフリベルセプト注射前に取得された測定値を示す。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後２４週間の時点で、対象が示したＣＲＴの変化は平均で－５２．７μｍ（９０％ＣＩ－８６．５、－１８．８）であった。ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。１日目の来訪はベースライン来訪の７～１４日後に行われた。
図４は、実施例１に記載の試験のコホート１の対象についての示されている時点でのＥａｒｌｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ（ＥＴＤＲＳ）文字評価に基づく平均最高矯正視力（ＢＣＶＡ）測定値を示す。エラーバーは、Ｔ分布を使用して算出された９０％信頼区間を示す。ベースライン（ＢＬ）は、１日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の７～１５日前（例えば、７～１４日前）のスクリーニングでのアフリベルセプト注射前に取得された測定値を示す。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後２４週間の時点で、対象が示したＢＣＶＡの変化は平均で－２文字（９０％ＣＩ－９．１、５．１）であった。ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。１日目の来訪はベースライン来訪の７～１４日後に行われた。
図５は、アフリベルセプトの核酸配列（配列番号３６）を提示する。
図６は、実施例１に記載の試験の対象１～６についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の前房内細胞および硝子体細胞計数のプロットを示す。各患者に投与されたステロイド処置が各プロットの下に示されている。房水細胞計数カテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準（Jabs, DA et al., J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516）に基づくものであった。硝子体細胞計数カテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。房水細胞に関しては、細胞計数値０．５＋は１～５個の細胞を示し、細胞計数値１＋は６～１５個の細胞を示し、細胞計数値２＋は１６～２５個の細胞を示し、細胞計数値３＋は２６～５０個の細胞を示し、細胞計数値４＋は＞５０個の細胞を示す。硝子体細胞に関しては、細胞計数値０．５＋は１～１０個の細胞を示し、細胞計数値１＋は１１～２０個の細胞を示し、細胞計数値２＋は２１～３０個の細胞を示し、細胞計数値３＋は３１～１００個の細胞を示し、細胞計数値４＋は＞１００個の細胞を示す。この図に示されている分析に関しては希少な細胞は０．５＋として捕捉した。
図７Ａ～７Ｂは、実施例１に記載の試験のコホート１の対象１～６からフォローアップ時間中央値である第３４週に取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。さらに、ＢＣＶＡのベースラインからの変化、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前８カ月の間の抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射の回数、および試験中に投与されたレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射の回数も対象１～６のそれぞれについて提示する。各対象についてＯＣＴ画像および網膜厚マップを得た実際の週が示されている（対象１＝第４４週；対象２＝第４０週；対象３＝第３６週；対象４＝第３２週；対象５＝第２８週；および対象６＝第２８週）。試験中にレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を必要とした対象はおらず、また、最大４４週間のフォローアップ期間中のいかなる時点においても満たされた再処置基準はなかった。ＯＣＴイメージングで疾患再活動化の徴候を示した対象はいなかった。 同上。
図８は、実施例１に記載の試験のコホート１の対象１～６についての、最大でフォローアップ時間中央値である４４週間（４０～５２週間）までのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。各対象に施行されたステロイド処置が各プロットの下に示されている。房水細胞グレードカテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準に基づくものであった（Jabs, DA et al. J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516）。硝子体細胞グレードカテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。房水細胞に関しては、細胞グレード０．５＋は細胞１～５個を示し、細胞グレード１＋は６～１５個の細胞を示し、細胞グレード２＋は１６～２５個の細胞を示し、細胞グレード３＋は２６～５０個の細胞を示し、細胞グレード４＋は細胞＞５０個を示す。硝子体細胞に関しては、細胞グレード０．５＋は細胞１～１０個を示し、細胞グレード１＋は１１～２０個の細胞を示し、細胞グレード２＋は２１～３０個の細胞を示し、細胞グレード３＋は３１～１００個の細胞を示し、細胞グレード４＋は細胞＞１００個を示す。希少な細胞は細胞グレード０．５＋として捕捉した。
図９Ａ～９Ｂは、実施例１に記載の試験のコホート１の対象１～６からフォローアップ時間中央値である４４週間の時点で取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。ＢＣＶＡ ＥＴＤＲＳ文字およびＣＳＴのベースラインからの変化も提示する。各対象についてＯＣＴ画像および網膜厚マップを得た実際の週が示されている。アスタリスクは、対象４が自発性偽水晶体下黄斑剥離裂孔原性網膜剥離（ＲＲＤ）を修復するために気泡注射を用いた網膜剥離の修復を受けたことを示す（図９Ｂ）。対象４は依然としてフォローアップ下にある；対象４についてのＯＣＴ画像およびＢＣＶＡ値は網膜剥離前の最後の観察に対応する。 同上。
図１０は、実施例２および３に記載の試験のコホート２の対象についての示されている時点でのＥａｒｌｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ（ＥＴＤＲＳ）文字評価に基づく平均最高矯正視力（ＢＣＶＡ）測定値を示す。エラーバーは、Ｔ分布を使用して算出された平均絶対ＢＣＶＡの９０％信頼区間を示す。ベースライン（ＢＬ）は、１日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の７～１５日前（例えば、７～１４日前）のスクリーニングでのアフリベルセプト注射前に取得された測定値を示す。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後２４週間の時点で、対象は、ＢＣＶＡの平均変化－４．８文字を示した。ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。１日目の来訪はベースライン来訪の７～１５日後に行われた。
図１１は、実施例２および３に記載の試験のコホート２の対象についての示されている時点での平均中心窩網膜厚（ＣＳＴ）を示す。エラーバーは、Ｔ分布を使用して算出された平均絶対ＣＳＴの９０％信頼区間を示す。ベースライン（ＢＬ）は、１日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の７～１５日前（例えば、７～１４日前）のスクリーニングでのアフリベルセプト注射前に取得された測定値を示す。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後２４週間の時点で、対象は、ＣＳＴの平均変化－２７．８μｍを示した。ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。１日目の来訪はベースライン来訪の７～１５日後に行われた。
図１２は、実施例２および３に記載の試験のコホート２の対象についての最大で２４週間のフォローアップ時間までの、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。各対象に施行されたステロイド処置が各プロットの下に示されている；局所ステロイド（ジフルプレドネート）点眼剤投与の頻度が示されている（例えば、１×＝１日当たり１回；２×＝１日当たり２回；３×＝１日当たり３回；４×＝１日当たり４回）。房水細胞グレードカテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準に基づくものであった（Jabs, DA et al. J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516）。硝子体細胞グレードカテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。房水細胞に関しては、細胞グレード０．５＋は細胞１～５個を示し、細胞グレード１＋は６～１５個の細胞を示し、細胞グレード２＋は１６～２５個の細胞を示し、細胞グレード３＋は２６～５０個の細胞を示し、細胞グレード４＋は細胞＞５０個を示す。硝子体細胞に関しては、細胞グレード０．５＋は細胞１～１０個を示し、細胞グレード１＋は１１～２０個の細胞を示し、細胞グレード２＋は２１～３０個の細胞を示し、細胞グレード３＋は３１～１００個の細胞を示し、細胞グレード４＋は細胞＞１００個を示す。この分析に関して、希少な細胞は細胞グレード０．５＋として捕捉した。
図１３Ａ～１３Ｂは、最大で２４週間のフォローアップ時間までの、実施例２および３に記載の試験のコホート２の対象１～６から取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。ＢＣＶＡのベースラインからの変化、ＣＳＴのベースラインからの変化、および２４週間のフォローアップ期間中の投与されたレスキュー抗ＶＥＧＦ注射の回数も提示する。図１３Ａにおいて、アスタリスクは、対象３が、全てＢＣＶＡのベースラインから≧１０文字の減少に起因して、第２４週を含めてレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を３回受けたことを示す。これは網膜内または網膜下液に帰するものであった。図１３Ｂにおいて、アスタリスクは、対象５が、ベースラインから中心領域網膜厚の＞７５μｍの増加に起因してレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を３回受け、最後の注射が第２０週に行われたことを示す。 同上。
図１４は、実施例１～３に記載の試験のコホート１および２の対象についての抗ＶＥＧＦ注射の回数を示すＳｗｉｍｍｅｒ’ｓ Ｌａｎｅ Ｐｌｏｔである。ｘ軸はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した時点に対する週単位での時点を表す。ｙ軸はコホート１および２の個々の対象を示す。円形は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の前後に投与された抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を表す。アスタリスクは、コホート２の対象６がｎＡＭＤの診断をＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の６．４カ月前に受けていたことを示す。プロットを二分する縦線は１日目、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した時を示す。二分する縦線の右側は、その後の６１試験来訪のそれぞれである。
図１５Ａ～１５Ｃは、実施例１～５に記載の試験のコホート１、２および３の対象についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の細隙灯検査によって測定された房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図１５Ａは、コホート１の対象についての、最大で６４週間のフォローアップ時間までの（中央値＝６０週間；範囲＝５２～６４週間）の房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図１５Ｂは、コホート２の対象についての、最大で４０週間のフォローアップ時間までの（中央値＝３６週間；範囲＝３２～４０週間）の房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図１５Ｃは、コホート３の対象についての最大で２０週間のフォローアップ時間までの房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図１５Ａ～１５Ｃには、各対象に施行されたステロイド処置が各プロットの下に示されている；房水細胞グレードカテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準に基づくものであった：Jabs DA, et al. J Ophthalmol 2005; 140: 509-516；硝子体細胞グレードカテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった；房水細胞：０．５＋＝１～５個の細胞；１＋＝６～１５個の細胞；２＋＝１６～２５個の細胞；３＋＝２６～５０個の細胞；４＋＝＞５０個の細胞；硝子体細胞：０．５＋＝１～１０個の細胞；１＋＝１１～２０個の細胞；２＋＝２１～３０個の細胞；３＋＝３１～１００個の細胞；４＋＝＞１００個の細胞；この分析に関して、希少な細胞は０．５＋として捕捉した。ＱＩＤ＝１日当たり４回；ＴＩＤ＝１日当たり３回；ＢＩＤ＝１日当たり２回；ＱＤ＝１日当たり１回；ＱＯＤ＝２日に１回；「ＱＤ＞＞」は、対象が１日当たり１回の局所ステロイドを受け続けていることを示し、「ＢＩＤ＞＞」は、対象が１日当たり２回の局所ステロイドを受け続けていることを示し、「ＱＩＤ＞＞」は、対象が１日当たり４回の局所ステロイドを受け続けていることを示す。 同上。 同上。
図１６Ａ～１６Ｂは、実施例１～５に記載の試験のコホート１の対象（ｎ＝６）についてのベースラインから最大で第５２週までの平均ＢＣＶＡおよび平均ＣＳＴを提示する。図１６Ａは、ベースラインから最大で第５２週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。アスタリスクは、１名の対象が第４４週および第４８週に網膜剥離に起因して低ＢＣＶＡスコアを有したことを示す。図１６Ｂは、ベースラインから最大で第５２週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。アスタリスクは、１名の対象が第４４週および第４８週に網膜剥離に起因してＣＳＴデータを有さなかったことを示す。図１６Ａ～１６Ｂにおいて、エラーバーは、Ｔ分布を使用した平均絶対ＢＣＶＡおよびＣＳＴ値の９０％信頼区間を示す；ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。 同上。
図１７Ａ～１７Ｂは、実施例１～５に記載の試験のコホート２の対象（ｎ＝６）についてのベースラインから最大で第３６週までの平均ＢＣＶＡおよび平均ＣＳＴを提示する。図１７Ａは、ベースラインから最大で第３６週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。図１７Ｂは、ベースラインから最大で第３６週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。図１７Ａ～１７Ｂにおいて、エラーバーは、Ｔ分布を使用した平均絶対ＢＣＶＡおよびＣＳＴ値の９０％信頼区間を示す；ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週；１名の対象が第３６週の来訪を欠席した。 同上。
図１８Ａ～１８Ｂは、実施例１～５に記載の試験のコホート３の対象５名についてのベースラインから最大で第２０週までの平均ＢＣＶＡおよび平均ＣＳＴを提示する。図１８Ａは、ベースラインから最大で第２０週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。図１８Ｂは、ベースラインから最大で第２０週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。図１８Ａ～１８Ｂにおいて、エラーバーは、Ｔ分布を使用した平均絶対ＢＣＶＡおよびＣＳＴ値の９０％信頼区間を示す；ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週；１名の対象が第３６週の来訪を欠席した。 同上。
図１９は、実施例１～５に記載の試験のコホート１、２および３の対象に投与された抗ＶＥＧＦ注射の回数を示すＳｗｉｍｍｅｒ’ｓ Ｌａｎｅ Ｐｌｏｔである。ｘ軸はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した時点に対する週単位での時点を表す。ｙ軸はコホート１～３の個々の対象を示す。円形は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の前後に投与された抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を表す。プロットを二分する縦線は１日目、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した時を示す。二分する縦線の右側はその後の試験来訪のそれぞれである。
図２０Ａ～２０Ｂは、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている時点で実施例１～５に記載の試験のコホート１の対象４から取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。図２０Ａは、コホート１の対象４についての、対象が抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射（ラニビズマブ）の投与を受けている間のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前の示されている時点（週数）でのＯＣＴ画像および網膜厚マップを示す。図２０Ｂは、コホート１の対象４についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている時点（週数）でのＯＣＴ画像および網膜厚マップを示す。スクリーニングでの抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射（「スクリーニングでの抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ」）の投与およびＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト（「ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト」）の投与の時間が示されている。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている各時間におけるＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）およびＣＳＴ（μｍ）が提示されている。アスタリスクは、対象がＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトとは関連しない網膜剥離事象を有したことを示す。 同上。
図２１Ａ～２１Ｂは、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている時点で実施例１～５に記載の試験のコホート３の対象５から取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。図２１Ａは、コホート３の対象５についての、対象が抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射（アフリベルセプト）の投与を受けている間のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前の示されている時点（週数）でのＯＣＴ画像および網膜厚マップを示す。図２１Ｂは、コホート３の対象５についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている時点（週数）でのＯＣＴ画像および網膜厚マップを示す。スクリーニングでの抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射（「スクリーニングでの抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ」）の投与およびＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト（「ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト」）の投与の時間が示されている。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている各時間におけるＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）およびＣＳＴ（μｍ）が提示されている。 同上。
図２２Ａ～２２Ｄは、実施例１～５および７に記載の試験のコホート１、２、３、および４の対象についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の細隙灯検査によって測定された房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図２２Ａは、コホート１の対象についての最大で８０週間のフォローアップ時間までの房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図２２Ｂは、コホート２の対象についての最大で５６週間のフォローアップ時間までの房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図２２Ｃは、コホート３の対象についての最大で３６週間のフォローアップ時間までの房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図２２Ｄは、コホート４の対象についての最大で８週間のフォローアップ時間までの房水細胞計数および硝子体細胞計数のプロットを示す。図２２Ａ～２２Ｄにおいて、各対象に施行されたステロイド処置が各プロットの下に示されている；房水細胞グレードカテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準に基づくものであった：Jabs DA, et al. J Ophthalmol 2005; 140: 509-516；硝子体細胞グレードカテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった；房水細胞：０．５＋＝１～５個の細胞；１＋＝６～１５個の細胞；２＋＝１６～２５個の細胞；３＋＝２６～５０個の細胞；４＋＝＞５０個の細胞；硝子体細胞：０．５＋＝１～１０個の細胞；１＋＝１１～２０個の細胞；２＋＝２１～３０個の細胞；３＋＝３１～１００個の細胞；４＋＝＞１００個の細胞；この分析に関して、希少な細胞は０．５＋として捕捉した。ＱＩＤ＝１日当たり４回；ＴＩＤ＝１日当たり３回；ＢＩＤ＝１日当たり２回；ＱＤ＝１日当たり１回；ＱＯＤ＝２日に１回；「ＱＤ＞＞」は、対象が１日当たり１回の局所ステロイドを受け続けていることを示し、「ＢＩＤ＞＞」は、対象が１日当たり２回の局所ステロイドを受け続けていることを示し、「ＴＩＤ＞＞」は、対象が１日当たり３回の局所ステロイドを受け続けていることを示し、「ＱＩＤ＞＞」は、対象が１日当たり４回の局所ステロイドを受け続けていることを示す。 同上。 同上。 同上。
図２３Ａ～２３Ｂは、実施例１～５および７に記載の試験のコホート１の対象（ｎ＝６）についてのベースラインから最大で第７２週までの平均ＢＣＶＡおよび平均ＣＳＴを提示する。図２３Ａは、ベースラインから最大で第７２週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。１名の対象が第４４週および第４８週に網膜剥離に起因して低ＢＣＶＡスコアを有した。＊第５６週から第７２週まではｎ＝５。図２３Ｂは、ベースラインから最大で第７２週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。１名の対象が第４４週および第４８週に網膜剥離に起因してＣＳＴデータを有さなかった。＊第５６週から第７２週まではｎ＝５。図２３Ａ～２３Ｂにおいて、エラーバーは、Ｔ分布を使用した平均絶対ＢＣＶＡおよびＣＳＴ値の９０％信頼区間を示す；ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。 同上。
図２４Ａ～２４Ｂは、実施例１～５および７に記載の試験のコホート２の対象（ｎ＝６）についてのベースラインから最大で第５２週までの平均ＢＣＶＡおよび平均ＣＳＴを提示する。図２４Ａは、ベースラインから最大で第５２週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。＊第３６週および第４０週についてはｎ＝５。図２４Ｂは、ベースラインから最大で第５２週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。＊第３６週および第４０週についてはｎ＝５。図２４Ａ～２４Ｂにおいて、エラーバーは、Ｔ分布を使用した平均絶対ＢＣＶＡおよびＣＳＴ値の９０％信頼区間を示す；ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。 同上。
図２５Ａ～２５Ｂは、実施例１～５および７に記載の試験のコホート３の対象（ｎ＝９）についてのベースラインから最大で第２０週までの平均ＢＣＶＡおよび平均ＣＳＴを提示する。図２５Ａは、ベースラインから最大で第２０週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。＊第４週、第１６週、および第２０週についてはｎ＝８。図２５Ｂは、ベースラインから最大で第２０週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。＊第４週、第１６週、および第２０週についてはｎ＝８。図２５Ａ～２５Ｂにおいて、エラーバーは、Ｔ分布を使用した平均絶対ＢＣＶＡおよびＣＳＴ値の９０％信頼区間を示す；ＢＬ＝ベースライン；Ｄ＝日；Ｗ＝週。 同上。
図２６は、実施例１～５および７に記載の試験のコホート１、２、３、および４の対象に投与された抗ＶＥＧＦ注射の回数を示すＳｗｉｍｍｅｒ’ｓ Ｌａｎｅ Ｐｌｏｔである。ｘ軸はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した時点に対する週単位での時点を表す。ｙ軸はコホート１～４の個々の対象を示す。円形は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の前後に投与された抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を表す。プロットを二分する縦線は１日目、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した時を示す。二分する縦線の右側はその後の試験来訪のそれぞれである。５名の対象がＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の＜１年前に診断を受けていた（コホート２および３の対象それぞれ１名、およびコホート４の対象３名）。コホート４では、対象２については移住のために、および対象５は診断後に不明の薬を用いた臨床試験に参加したことが原因で、１日目よりも前のデータが不完全である。
図２７Ａ～２７Ｂは、実施例１～５および７に記載の試験のコホート１～３の対象についての年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率を示す。図２７Ａは、コホート１の対象（「高用量」の６×１０１１ｖｇ／眼の投与を受けた；ｎ＝６）について、ならびにコホート２および３の対象（「低用量」の２×１０１１ｖｇ／眼の投与を受けた；ｎ＝１５）についての年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率の比較を提示する。図２７Ｂは、コホート１（ｎ＝６）、２（ｎ＝６）、および３（ｎ＝９）のそれぞれの対象についての年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率の比較を提示する。図２７Ａ～２７Ｂにおいて、年間の率（前）＝（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト前１２カ月の間の抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射の回数）／（過去１２カ月の間の第１の抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射からＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射時までの日数／３６５．２５）；および年間の率（後）＝（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトからの抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射の回数）／（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトから最後の試験フォローアップまでの日数／３６５．２５）。 同上。
図２８Ａ～２８Ｂは、実施例１～５および７に記載の試験のコホート３の対象５からＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている時点で取得した光干渉断層法（ＯＣＴ）画像およびＯＣＴ画像から引き出された網膜厚マップを示す。図２８Ａは、コホート３の対象５についての、対象が抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射（アフリベルセプト）の投与を受けている間のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前の示されている時点（週数）でのＯＣＴ画像および網膜厚マップを示す。図２８Ｂは、コホート３の対象５についてのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている時点（週数）でのＯＣＴ画像および網膜厚マップを示す。スクリーニングでの抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射（「アフリベルセプトＩＶＴ」）およびＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与回数が示されている。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の前後の示されている各時間におけるＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）およびＣＳＴ（μｍ）が提示されている。 同上。
図２９は、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）を有する対象におけるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回硝子体内（ＩＶＴ）注射の持続性を評価した実施例６に記載の試験設計の図を示す。ＤＲＳＳ＝糖尿病網膜症の重症度スコア；ＯＣＴ＝光干渉断層法；ＣＳＴ＝中心領域網膜厚。＊対象全員が７週間のジフルプレドネート点眼剤のコースを受け、ＱＩＤで開始してＱＤまで漸減させた。＊＊ＰＥ＝主要エンドポイント評価。＊＊＊ＥＯＳ＝試験評価の終わり。
詳細な説明
いくつかの態様を、例証のための例としての応用を参照して以下に記載する。多数の具体的詳細、関係、および方法は、本明細書に記載される特色の十分な理解を提供するために記載されることを理解すべきである。しかし、関連技術分野の当業者は、本明細書に記載される特色が具体的詳細の１つもしくは複数がなくとも、または他の方法によって実践することができることを容易に認識する。本明細書に記載される特色は、一部の行為が他の行為もしくは事象と異なる順序および／または同時に起こり得ることから、行為または事象の例証される順序に限定されない。さらに、本明細書に記載される特色に従って方法論を実施するために、必ずしも全ての例証される行為または事象は必要ではない。
定義
特に定義していない限り、本明細書で使用される全ての技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。
本明細書で使用される用語は、単に特定の例を説明する目的のためであり、限定することを意図していない。本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、本文が明らかにそれ以外であることを示していない限り、複数形も同様に含むと意図される。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「と共に（ｗｉｔｈ）」という用語またはその変化形を、詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかで使用する場合、そのような用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と類似の方法で包括的であると意図される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」と同義であり、包括的であるか、または非限定的である。
本明細書において「または」という言及は、それ以外であることを示していない限り「および／または」を包含すると意図される。本明細書で使用される場合、用語「約」の数は、その数のプラスまたはマイナス１０％の数を指す。「約」値またはパラメータへの言及は、本明細書では、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（および説明する）。
「対象」、「患者」、または「個体」という用語は、霊長類、例えばヒトおよび非ヒト霊長類、例えばアフリカミドリザルおよびアカゲザルを指す。一部の実施形態では、対象はヒトである。
「処置する」、「処置している」、「処置」、「改善する」または「改善している」という用語および他の文法的等価物は、本明細書で使用される場合、眼内血管新生疾患もしくは障害、または眼内血管新生疾患もしくは障害の症状を軽減する、弱める、または改善すること、眼内血管新生疾患または障害の追加の症状を防止すること、症状の基礎となる代謝的原因を改善または防止すること、眼内血管新生疾患または障害を阻害すること、例えば眼内血管新生疾患または障害の発生を停止させること、眼内血管新生疾患または障害を緩和すること、眼内血管新生疾患または障害の退縮を引き起こすこと、あるいは眼内血管新生疾患または障害の症状を停止させることを指し、予防を含むと意図される。用語は、治療利益および／または予防利益を達成することをさらに含む。「治療利益」という用語は、処置される眼内血管新生疾患または障害の根絶または改善を指す。「治療利益」という用語は、処置される眼内血管新生疾患または障害の根絶または改善を指す。同様に、治療利益は、それによって一部の実施形態では、対象が眼内血管新生疾患または障害になおも罹患しているにもかかわらず、対象において改善が観察されるように、眼内血管新生疾患または障害に関連する１つまたは複数の生理的症状の根絶または改善によっても達成される。予防利益の場合、医薬組成物は、眼内血管新生疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象、またはたとえ疾患もしくは障害の診断が行われていない場合であっても眼内血管新生疾患もしくは障害の１つまたは複数の生理的症状を報告する対象に投与される。
「投与する」、「投与している」、「投与」等という用語は、本明細書で使用される場合、生物学的作用の所望の部位への治療薬または医薬組成物の送達を可能にするために使用される方法を指し得る。これらの方法は、眼への硝子体内または網膜下注射を含む。
「有効量」、「治療有効量」、または「薬学的有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、処置される眼の疾患または障害の１つまたは複数の症状をある程度軽減する、投与される少なくとも１つの医薬組成物または化合物の十分量を指し得る。医薬組成物の「有効量」、「治療有効量」、または「薬学的有効量」は、それを必要とする対象に単位用量として投与され得る（本明細書において他所でさらに詳しく記載される）。
「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に開示される化合物の生物活性または特性を排除せず、比較的非毒性である（すなわち、材料を個体に投与した場合に、望ましくない生物作用を引き起こさず、それが含有される組成物の構成成分のいずれとも有害に相互作用しない）担体または希釈剤などの材料を指し得る。
「医薬組成物」または単に「組成物」という用語は、本明細書で使用される場合、担体、安定化剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、濃化剤、賦形剤等などの、しかしこれらに限定されない少なくとも１つの薬学的に許容される化学構成成分と必要に応じて混合された生物活性化合物を指し得る。
「ＡＡＶベクター」または「ｒＡＡＶベクター」は、本明細書で使用される場合、標的細胞中へのまたは標的組織への形質導入のための、ＡＡＶ起源ではないポリヌクレオチド配列（例えば、治療用トランスジーン、例えばアフリベルセプトをコードする核酸配列などの、ＡＡＶに対して異種のポリヌクレオチド）を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターまたは組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターを指す。一般的に、異種ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）が隣接し、一般的に２つのＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。ｒＡＡＶベクターという用語は、ｒＡＡＶベクター粒子およびｒＡＡＶベクタープラスミドの両方を包含する。ｒＡＡＶベクターは、一本鎖（ｓｓＡＡＶ）または自己相補的（ｓｃＡＡＶ）のいずれかであり得る。
「ＡＡＶウイルス」または「ＡＡＶウイルス粒子」または「ｒＡＡＶベクター粒子」または「ｒＡＡＶ粒子」は、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質およびポリヌクレオチドｒＡＡＶベクターを含むウイルス粒子を指す。一部の例では、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質は、野生型ＡＡＶに由来するか、またはバリアントＡＡＶカプシドタンパク質（例えば、挿入、例えば以下に記載される７ｍ８アミノ配列の挿入を有するＡＡＶカプシドタンパク質）である。粒子が異種ポリヌクレオチド（例えば、標的細胞または標的組織に送達されるトランスジーンなどの野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド）を含む場合、「ｒＡＡＶ粒子」、「ｒＡＡＶベクター粒子」、または「ｒＡＡＶベクター」と呼ばれる。このように、ｒＡＡＶ粒子の産生は、そのようなベクターがｒＡＡＶ粒子内に含有されることから、ｒＡＡＶベクターの産生を必然的に含む。
「パッケージング」という用語は、本明細書で使用される場合、ｒＡＡＶ粒子のアセンブリおよびカプシド形成をもたらし得る一連の細胞内事象を指し得る。
ＡＡＶ「ｒｅｐ」および「ｃａｐ」遺伝子は、アデノ随伴ウイルスの複製およびカプシド形成タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を指す。ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐは、本明細書においてＡＡＶ「パッケージング遺伝子」と呼ばれる。
「ポリペプチド」という用語は、天然に存在するおよび天然に存在しない、両方のタンパク質（例えば、融合タンパク質）、ペプチド、断片、突然変異体、その誘導体およびアナログを包含し得る。ポリペプチドは、単量体、二量体、三量体、またはポリマーであり得る。さらに、ポリペプチドは、その各々が１つまたは複数の明確な活性を有するいくつかの異なるドメインを含み得る。誤解を避けるために、「ポリペプチド」は、２アミノ酸より長い任意の長さであり得る。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチドバリアント」または単純に「バリアント」は、その配列がアミノ酸改変を含有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、改変は、参照のタンパク質またはポリペプチド、例えばネイティブまたは野生型タンパク質のアミノ酸配列と比較した、１つまたは複数のアミノ酸の挿入、重複、欠失、再配列、または置換である。バリアントは、ある位置での単一のアミノ酸が別のアミノ酸に変化している１つもしくは複数のアミノ酸の点置換、１つもしくは複数のアミノ酸が参照タンパク質の配列においてそれぞれ、挿入されるかもしくは欠失している１つもしくは複数の挿入および／もしくは欠失、ならびに／またはアミノ末端もしくはカルボキシ末端のいずれかもしくは両方でのアミノ酸配列の切断を有し得る。バリアントは、参照タンパク質または非改変タンパク質と比較して同じまたは異なる生物活性を有し得る。
一部の実施形態では、バリアントは、その相対物の参照タンパク質と例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な配列相同性を有し得る。一部の実施形態では、バリアントは、野生型タンパク質と少なくとも約９０％の全体的な配列相同性を有し得る。一部の実施形態では、バリアントは、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または少なくとも約９９．９％の全体的な配列同一性を示す。
本明細書で使用される場合、「組換え」は、（１）その天然に存在する環境から除去されている、（２）遺伝子が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部に会合していない、（３）天然において連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結している、または（４）天然に存在しない、生物分子、例えば遺伝子またはタンパク質を指し得る。「組換え」という用語は、クローニングされたＤＮＡ単離体、化学合成されたポリヌクレオチドアナログ、または異種系によって生物学的に合成されたポリヌクレオチドアナログ、ならびにそのような核酸によってコードされるタンパク質および／またはｍＲＮＡに関連して使用することができる。このように、例えば、微生物によって合成されたタンパク質は、例えばそれが細胞に存在する組換え遺伝子から合成されたｍＲＮＡから合成される場合、組換えである。
「抗ＶＥＧＦ剤」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏで内因性のＶＥＧＦおよび／もしくは内因性のＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）の活性もしくは機能、またはＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ相互作用もしくは経路を低減する、妨害する、破壊する、遮断する、および／または阻害することができるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、多量体タンパク質、遺伝子産物、抗体、ヒトモノクローナル抗体、抗体断片、アプタマー、低分子、キナーゼ阻害剤、受容体もしくは受容体断片、または核酸分子を含む任意の治療剤を含む。抗ＶＥＧＦ剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞、組織、または対象に送達した場合に、新規血管の成長もしくは形成および／または浮腫もしくは腫脹を低減させることができる公知の治療剤の任意の１つ、例えばラニビズマブ、ブロルシズマブ、またはベバシズマブであり得る。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、天然に存在する、天然に存在しない、または合成であり得る。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、天然に存在する分子に由来し得て、その後抗ＶＥＧＦ活性を付与するように改変または突然変異させた。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、融合タンパク質またはキメラタンパク質である。そのようなタンパク質では、機能的ドメインまたはポリペプチドを部分またはポリペプチドに人為的に融合して、ｉｎ ｖｉｖｏでＶＥＧＦを隔離するか、またはＶＥＧＦＲデコイとして機能することができる融合タンパク質またはキメラタンパク質を作製する。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、内因性のＶＥＧＦＲをそのリガンドと相互作用しないように遮断する融合タンパク質またはキメラタンパク質である。
本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦ」は、それ以外を必要としている場合を除き、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＶＥＧＦ－Ｅ、ＶＥＧＦ－Ｆ、またはその任意の組合せ、またはその任意の機能的断片もしくはバリアントを含むがこれらに限定されない、ＶＥＧＦの任意のアイソフォームを指し得る。それ以外を必要とする場合を除き、「ＶＥＧＦ」は、メンバー：ＶＥＧＦ－Ａ、胎盤増殖因子（ＰＧＦ）、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、およびＶＥＧＦ－Ｄ、またはその任意の組合せ、機能的断片、もしくはバリアントを含むＶＥＧＦファミリーの任意のメンバーを指し得る。本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦ受容体」または「ＶＥＧＦＲ」または「ＶＥＧＦ－Ｒ」は、ＶＥＧＦＲ－１（またはＦｌｔ－１）、ＶＥＧＦＲ－２（またはＦｌｋ－１／ＫＤＲ）、およびＶＥＧＦＲ－３（またはＦｌｔ－４）を含むがこれらに限定されないＶＥＧＦの受容体のいずれか１つを指すために使用され得る。ＶＥＧＦＲは、膜結合型もしくは可溶性型、または受容体の機能的断片もしくは切断型であり得る。抗ＶＥＧＦ剤の例としては、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、またはその任意の組合せ、バリアント、もしくは機能的断片を含むがこれらに限定されない。
「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」または「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｂｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」または「カップリングされた」は、エレメントが、それらを予想される様式で作動させることができる関係にある、遺伝子エレメントの並置を指し得る。例えば、プロモーターは、プロモーターがコード配列の転写の開始を助ける場合、コード領域に作動可能に連結され得る。この機能的関係が維持される限り、プロモーターとコード領域の間に介在残基が存在してもよい。
「発現ベクター」または「発現構築物」または「カセット」または「プラスミド」または単に「ベクター」という用語は、配列をコードする核酸の一部または全てが転写可能であり、遺伝子治療に適合する遺伝子産物をコードする核酸またはポリヌクレオチドを含有するＡＡＶまたはｒＡＡＶベクターを含む任意のタイプの遺伝子産物を含み得る。転写物はタンパク質に翻訳され得る。一部の実施形態では、転写物は、部分的に翻訳されるか、または翻訳されない。ある特定の態様では、発現は、遺伝子の転写およびｍＲＮＡの遺伝子産物への翻訳の両方を含む。他の態様では、発現のみは、目的の遺伝子をコードする核酸の転写を含む。発現ベクターはまた、標的細胞におけるタンパク質の発現を容易にするために、コード領域に作動可能に連結された制御エレメントも含み得る。制御エレメントと、それらが発現のために作動可能に連結される遺伝子または複数の遺伝子の組合せは、時に「発現カセット」と呼ぶことができ、その多くは当技術分野で公知であり、利用可能であるか、または当技術分野で利用可能な構成成分から容易に構築することができる。
「異種」という用語は、それが比較される実体の残りの部分とは遺伝子型が異なる実体を指し得る。例えば、遺伝子操作技法によって異なる種に由来するプラスミドまたはベクターに導入されたポリヌクレオチドは、異種ポリヌクレオチドであり得る。そのネイティブのコード配列から除去され、それとの連結が天然に見出されないコード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、異種プロモーターであり得る。
本明細書で使用される場合、「７ｍ８」は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を指す。
「７ｍ８バリアント」は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）が、カプシドタンパク質の溶媒に露出したＧＨループに挿入されている任意の血清型であり得るｒＡＡＶを指す。
７ｍ８がｒＡＡＶ２に挿入される場合（ＡＡＶ２．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸５７０～６１１内のＧＨループに、例えばＡＡＶ２カプシドタンパク質ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入される。一部の例では、７ｍ８がｒＡＡＶ２に挿入される場合（ＡＡＶ２．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のＧＨループに、例えば配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ１に挿入される場合（ＡＡＶ１．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ１カプシドタンパク質のアミノ酸５７１～６１２内のＧＨループに、例えばＡＡＶ１カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ５に挿入される場合（ＡＡＶ５．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ５カプシドタンパク質のアミノ酸５６０～６０１内のＧＨループに、例えばＡＡＶ５カプシドタンパク質のアミノ酸５７５と５７６の間に挿入される。７ｍ８が、ｒＡＡＶ６に挿入される場合（ＡＡＶ６．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ６カプシドタンパク質のアミノ酸５７１～６１２内のＧＨループに、例えばＡＡＶ６カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ７に挿入される場合（ＡＡＶ７．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ７カプシドタンパク質のアミノ酸５７２～６１３内のＧＨループに、例えばＡＡＶ７カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ８に挿入される場合（ＡＡＶ８．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸５７３～６１４内のＧＨループに、例えばＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ９に挿入される場合（ＡＡＶ９．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質のＧＨループに、例えばＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸５８８と５８９の間に挿入される。７ｍ８がｒＡＡＶ１０に挿入される場合（ＡＡＶ１０．７ｍ８とも呼ばれる）、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）は、ＡＡＶ１０カプシドタンパク質のアミノ酸５７３～６１４内のＧＨループに、例えばＡＡＶ１０カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間に挿入される。
概要
眼内血管新生疾患、例えばｗＡＭＤに関する現在の治療（例えば、アフリベルセプト組換えタンパク質、ラニビズマブ組換えタンパク質）は、およそ４～８週間毎の一生涯続くＩＶＴ投与を必要とする。これは、一部の患者では炎症、感染症、および他の有害効果のリスクを増加させ得る。さらに、現在の治療は、特にｗＡＭＤに最も多く罹患している高齢患者に治療を投与するための診療所への繰り返しおよび／または頻繁な移動により、コンプライアンスの問題を有する。投与回数の低減は、視覚喪失および眼の疾患または状態の悪化に関連する。ＡＡＶベクターが、ＩＶＴ注射後に標的網膜細胞に効率よく形質導入できることは、治療遺伝子を光受容器、網膜色素上皮、および内部網膜へとうまく移入して多様な網膜疾患を処置するために利用されている。このように、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするｒＡＡＶ粒子の投与は、抗ＶＥＧＦ剤のｉｎ ｖｉｖｏでの長期間のおよび／または持続的な放出を提供することができる。
意外にも、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ粒子の６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）／眼の１回単位低用量を、眼内血管新生疾患を有する個体の眼に投与することは、処置した全ての個体において疾患の安定化およびロバストな解剖学的応答をもたらした（実施例１を参照されたい）。加えて、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ粒子の６×１０１１ｖｇ／眼の１回単位低用量の投与後、全ての処置した個体において視力が安定化され、いずれの個体もレスキュー抗ＶＥＧＦ処置（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を必要としなかった。その上、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ粒子の１回単位用量を、眼内血管新生疾患を有する個体の眼に投与することは、以前の抗ＶＥＧＦ処置（例えば、アフリベルセプト、ラニビズマブ、またはベバシズマブの長期的なＩＶＴ注射）に対して不応性であった網膜内液および網膜下液を含む症状の低減（例えば、消散）を意外にも引き起こした。
したがって、本開示は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするｒＡＡＶ粒子の６×１０１１ｖｇ／眼またはそれ未満の１回単位用量を投与することによって、個体における眼内血管新生疾患を処置する方法を提供する。加えて、本開示は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするｒＡＡＶ粒子の１回単位用量を投与することによって、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減するための方法を提供する。本明細書に開示される方法は、繰り返しＩＶＴ注射の必要性を低減させるかまたはなくし、長期的な有効性を提供しながら、ノンコンプライアンスおよびノンアドヒアランスの問題に対処する。加えて、本明細書に提供される方法は、複数のＩＶＴ注射に関連する有害効果を低減する。
処置の方法
本明細書において、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の単位用量を個体の眼に投与するステップを含む方法が提供される。
同様に、本明細書において、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法であって、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の眼に投与するステップを含む方法が提供される。
個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）を個体の眼に投与するステップと、抗ＶＥＧＦ剤の投与後に単位用量の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を個体の眼に投与するステップとを含む方法も本明細書で提供される。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、滲出性加齢黄斑変性（ｗＡＭＤ）、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそのいずれかの組合せである。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患という用語は、治療せずに放置すると新生血管形態に進行するＶＥＧＦ駆動型前血管新生疾患も包含する。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、前血管新生疾患、非増殖性糖尿病網膜症である。
一部の実施形態では、個体はヒトである。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）および／またはアフリベルセプト）による眼内血管新生疾患の少なくとも１回の以前の処置（例えば、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、またはそれより多くの処置）を、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のおよそ最後の８週間、およそ最後の９週間、およそ最後の１０週間、およそ最後の１１週間、およそ最後の１２週間、およそ最後の１３週間、およそ最後の１４週間、およそ最後の１５週間、またはおよそ最後の１６週間の間に受けた。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）および／またはアフリベルセプト）による以前の処置に対して意味のある応答を示した。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液は、網膜内液（ＩＲＦ）および／または網膜下液（ＳＲＦ）である。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液の量または存在は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）および／またはアフリベルセプト）による以前の処置に対して不応性である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）である。一部の実施形態では、個体はヒトである。一部の実施形態では、個体は１型または２型糖尿病を有する。一部の実施形態では、個体は、中心窩を含む糖尿病黄斑浮腫に起因する視覚機能障害を有する。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、約７８～５０文字のＥＴＤＲＳ文字（例えば、５０文字、５１文字、５２文字、５３文字、５４文字、５５文字、５６文字、５７文字、５８文字、５９文字、６０文字、６１文字、６２文字、６３文字、６４文字、６５文字、６６文字、６７文字、６８文字、６９文字、７０文字、７１文字、７２文字、７３文字、７４文字、７５文字、７６文字、７７文字、または７８文字のいずれかのＥＴＤＲＳ文字）の視力（ＢＣＶＡ）を有する。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、約２０／３２～約２０／１００の視力（スネレン等価視力）を有する。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ（登録商標）を使用して≧３２５μｍの中心領域網膜厚（ＣＳＴ）を有し、中心窩に及ぶＩＲＦ（中心窩１ｍｍ）を伴う。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、主に糖尿病黄斑浮腫に起因する視覚の減少を有する。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の約６カ月またはそれ未満の間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の約６カ月、約５カ月、約４カ月、約３カ月、約２カ月、約１カ月、またはそれ未満のいずれかの間に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、糖尿病黄斑浮腫の診断を受けている。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、ＤＭＥに対する以前の処置を０回、１回、または２回、例えば、抗ＶＥＧＦ剤、例えばアフリベルセプトの硝子体内注射を０回、１回、または２回受けていた。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置を少なくとも約６０日間（すなわち、約２カ月）受けていた。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して、中心領域網膜厚に関して意味のある応答、例えば、中心領域網膜厚の少なくとも１０％の減少を示していた。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対する有害反応が生じていなかった。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ＡＡＶ２．７ｍ８に対する中和抗体を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、例えば、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前約６カ月以内に、１：１２５を超える抗ＡＡＶ２．７ｍ８中和抗体力価を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、アフリベルセプト、コルチコステロイド、またはフルオレセイン色素もしくはナトリウムフルオレセイン（例えば、血管造影に使用される）に対するアレルギーの履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、アフリベルセプト、コルチコステロイド、またはフルオレセイン色素もしくはナトリウムフルオレセイン（例えば、血管造影に使用される）に対する軽症のアレルギーの履歴を有し、ここで、アレルギーは処置に適したものである。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、制御されていない糖尿病、例えば１０％を超えるＨｂＡ１ｃを有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前約３カ月以内に糖尿病性ケトアシドーシスの履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、例えばインスリンポンプまたは多数回の毎日のインスリン注射を用いた集中的なインスリンによる処置を開始していなかった。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後約３カ月以内に、例えばインスリンポンプまたは多数回の毎日のインスリン注射を用いた集中的なインスリンによる処置を開始する予定がない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、全身性ステロイド薬または免疫抑制処置、例えば、メトトレキサートまたはアダリムマブによる処置を必要とする全身性自己免疫疾患の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、黄斑浮腫を引き起こすことが分かっている全身性薬物、例えば、フィンゴリモド、タモキシフェン、クロロキン、またはヒドロキシクロロキンなどの投与を受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、全身性の抗ＶＥＧＦによる処置の投与を受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）の高リスクを有していない。一部の実施形態では、ＰＤＲは、あらゆる硝子体または網膜前出血、臨床検査で標準のＥＴＤＲＳ ７視野と等価の面積内で＞１／２乳頭面積の他の箇所の血管新生、または臨床検査で＞１／３乳頭面積の乳頭の血管新生と定義される。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、焦点または格子状レーザー光凝固術を受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、いかなる以前の汎網膜光凝固術（ＰＲＰ）も受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、抗ＶＥＧＦ治療（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前少なくとも６０日間、抗ＶＥＧＦ治療（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を２回よりも多く受けていない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、前眼部血管新生（例えば、虹彩の血管新生［ＮＶＩ］または血管新生緑内障［ＮＶＧ］）、著しい硝子体出血、血管結合組織増殖、または牽引性網膜剥離のうちのいずれの履歴も有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、黄斑浮腫または視力障害に寄与する中心窩の構造的異常（例えば、濃くて硬い滲出液、色素異常、中心窩萎縮、硝子体黄斑牽引または網膜上膜のいずれも）有していない。一部の実施形態では、中心窩の構造的異常は臨床検査またはＯＣＴで評価される。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、糖尿病網膜症（例えば、加齢黄斑変性症（いずれかの眼におけるもの）、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞、または病理的近視）以外の網膜疾患の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、糖尿病黄斑浮腫以外の眼の疾患、例えば、著しい白内障もしくは黄斑牽引の履歴、または後嚢下白内障のエビデンスを有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前少なくとも約３カ月以内に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、白内障摘出術またはイットリウム・アルミニウム・ガーネット（ＹＡＧ）嚢切開術の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、網膜剥離（修復を伴うまたは伴わない）の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、線維柱帯切除術、緑内障シャント術、または低侵襲性緑内障手術（ＭＩＧＳ）のうちのいずれの履歴も有していない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、個体は、硝子体切除術または他の濾過手術の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、無水晶体または前房眼内レンズの存在を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、制御されていない高眼圧症または緑内障、例えば、抗緑内障薬による処置にもかかわらずＩＯＰ＞２２ｍｍＨｇまたは現時点で＞２のＩＯＰ降下薬の使用を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、任意の眼の状態に対する眼内または眼周囲のステロイド処置（例えば、ＩＶＴ Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ、ＩｌｕｖｉｅｎまたはＯｚｕｒｄｅｘ）の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前少なくとも約９０日以内に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、屈折矯正手術を受けていなかった。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、以前の全層角膜移植術、内皮角膜移植術、または眼への放射線照射を有していなかい。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける眼に関して、いかなる以前の硝子体網膜外科手術も受けていなかった。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ぶどう膜炎または眼内炎症、例えば、消散した軽症の予測された手術後の炎症以外の痕跡またはそれを超えるグレードの履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、局所ステロイド投与に関連するＩＯＰ上昇の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、ウイルス性ぶどう膜炎、網膜炎または角膜炎を含めた眼の単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の履歴を有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、結膜炎、霰粒腫、または著しい眼瞼炎を含めた外眼部感染症のいずれのエビデンスも有していない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に、眼トキソプラズマ症の履歴を有していない。
一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０１０～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２×１０１１または約６×１０１０ｖｇ／眼である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与される。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼または左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼である。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼であり、反対側の眼は左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼であり、反対側の眼は右眼である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間（例えば、約０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日）後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とほぼ同じである（例えば、１％未満高いもしくは低い、５％未満高いもしくは低い、１０％未満高いもしくは低い、または２０％未満高いもしくは低い）か、またはそれより低い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低い）。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間（例えば、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、またはそれより長い期間）後である。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％のいずれか、またはそれより大きい、高い）。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、およびｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。配列番号３５の配列を以下に提供する：
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号３５）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、およびｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、アフリベルセプトまたはその機能的バリアントまたはその機能的断片である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするコドン最適化された配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするコドン最適化された配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードするコドン最適化された配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトまたはその機能的バリアントまたはその機能的断片のｃＤＮＡ配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトまたはその機能的バリアントまたはその機能的断片のコドン最適化ｃＤＮＡ配列を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３６の核酸配列を含む核酸を含む。
一部の実施形態では、核酸は、（ａ）ＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域；（ｂ）ＣＭＶ配列を含むプロモーター領域；（ｃ）５’から３’の順に、ＴＰＬ配列およびｅＭＬＰ配列を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｅ）ＨＧＨポリアデニル化部位をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＭＶ配列を含むエンハンサー領域は、配列番号２２の配列を含む。一部の実施形態では、ＣＭＶ配列を含むプロモーター領域は、配列番号２３の配列を含む。一部の実施形態では、ＴＰＬ配列は、配列番号２４の配列を含む。一部の実施形態では、ｅＭＬＰ配列は、配列番号２５の配列を含む。一部の実施形態では、全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域は、配列番号２６の配列を含む。一部の実施形態では、ＨＧＨポリアデニル化部位は、配列番号２７の配列を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。配列番号１３の配列を以下に提供する：
MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLD
KGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQ
AKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDAD
SVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVI
TTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLI
NNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQG
CLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPF
HSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPG
PCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVL
IFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGV
LPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTT
FSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVY
SEPRPIGTRYLTRNL（配列番号１３）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入された以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、ＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のいずれかを含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入された以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、ＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のいずれかを含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内（ＩＶＴ）注射、眼内投与、または網膜内注射による。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内（ＩＶＴ）注射による。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は医薬製剤中にある。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、１つまたは複数の浸透圧またはイオン強度調整剤、１つまたは複数の緩衝剤、１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の溶媒を含む。一部の実施形態では、浸透圧またはイオン強度調整剤は、塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、１つまたは複数の緩衝剤は、リン酸二水素ナトリウムおよび／またはリン酸水素ナトリウムである。一部の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。一部の実施形態では、溶媒は水である。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、および界面活性剤を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１×１０１０ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム（例えば、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、または約２００ｍＭのいずれか）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム（例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭ）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム（例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭ）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８（例えば、約０．０００５％（重量／体積）、０．０００６％（重量／体積）、０．０００７％（重量／体積）、０．０００８％（重量／体積）、０．０００９％（重量／体積）、０．００１％（重量／体積）、０．００２％（重量／体積）、０．００３％（重量／体積）、０．００４％（重量／体積）、または約０．００５％（重量／体積）のいずれか）を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約７．０～約７．５（例えば、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５のいずれか）のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約２５μＬ～約２５０μＬの間（例えば、約２５μＬ、約３０μＬ、約４０μＬ、約５０μＬ、約６０μＬ、約７０μＬ、約８０μＬ、約９０μＬ、約１００μＬ、約１１０μＬ、約１２０μＬ、約１３０μＬ、約１４０μＬ、約１５０μＬ、約１６０μＬ、約１７０μＬ、約１８０μＬ、約１９０μＬ、約２００μＬ、約２１０μＬ、約２２０μＬ、約２３０μＬ、約２４０μＬ、または約２５０μＬのいずれか）の体積を含む。一部の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子の濃度は、個体の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量の体積が約２５μＬ～約２５０μＬの間となるように調整される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約３０μＬの体積を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ステロイド処置と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置はコルチコステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置はプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、局所ステロイド処置（例えば、点眼液）、眼周囲のステロイド処置（例えば、テノン嚢下、結膜下）、硝子体内ステロイド処置、または脈絡膜上ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置、メドリゾン処置、ロテプレドノール処置、プレドニゾロン処置、フルオシノロン処置、トリアムシノロン処置、リメキソロン処置、デキサメタゾン処置、フルオロメトロン処置、フルオシノロン処置、リメキソロン処置、またはプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置はジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および投与後に投与される。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から最大約４週間、約６週間、または約８週間の毎日ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、約１週目に眼科用ステロイドの約４回の投与、約２週目に眼科用ステロイドの約３回の投与、約３週目に眼科用ステロイドの約２回の投与、および約４週目に眼科用ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％～約０．５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％ジフルプレドネートのいずれかである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、０．０５％ジフルプレドネートの用量は、眼科用溶液１滴である。一部の実施形態では、１滴は約５０μｌ（例えば、約２５μｌ～約５０μｌ、約５０μｌ～約１００μｌ）である。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約１μｇ～約５μｇ、または約２μｇ～約３μｇ、または約２．５μｇジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約２．５μｇジフルプレドネートを含む。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置（例えば、ジフルプレドネート）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から最大約４週間、約６週間、または約８週間の毎日の局所ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後、約３週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の局所ステロイドの約１週間にわたる１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、約０．００５％～約０．５％ジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、局所ステロイドは、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％ジフルプレドネートのいずれかである。一部の実施形態では、局所ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、０．０５％ジフルプレドネートの用量は、眼科用溶液１滴である。一部の実施形態では、１滴は約５０μｌ（例えば、約２５μｌ～約５０μｌ、約５０μｌ～約１００μｌ）である。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約１μｇ～約５μｇ、または約２μｇ～約３μｇ、または約２．５μｇジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は約２．５μｇジフルプレドネートを含む。
一部の実施形態では、個体の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％のいずれかより大きく低減される。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の個体の眼の網膜液のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％のいずれかより大きく低減される。一部の実施形態では、個体の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の個体の眼の網膜液のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、約１００％低減される。
一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後の個体の１つの眼および／または反対側の眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）のレベルをモニターするステップをさらに含む。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の、約１日、約３日、約８日、約２週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間、約２８週間、約３２週間、約３６週間、約４０週間、約４４週間、約４８週間、約５２週間、約５６週間、約６０週間、約６４週間、約６８週間、約７２週間、約７６週間、約８０週間、約８４週間、約８８週間、約９２週間、約９６週間、約１００週間、約１０４週間、またはそれより長い期間のいずれかの後に初めて観察される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を投与後、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、少なくとも２０週間、少なくとも２４週間、少なくとも２８週間、少なくとも３２週間、少なくとも３６週間、少なくとも４０週間、少なくとも４４週間、少なくとも４８週間、少なくとも５２週間、少なくとも５６週間、少なくとも６０週間、少なくとも６４週間、少なくとも６８週間、少なくとも７２週間、少なくとも７６週間、少なくとも８０週間、少なくとも８４週間、少なくとも８８週間、少なくとも９２週間、少なくとも９６週間、少なくとも１００週間、少なくとも１０４週間、またはそれより長い期間持続するか、または維持される。
一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、光干渉断層法（ＯＣＴ）、スペクトラルドメインＯＣＴ（ＳＤ－ＯＣＴ）、ＯＣＴ血管造影、フルオレセイン血管造影、または直接網膜観察によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、光干渉断層法（ＯＣＴ）によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、スペクトラルドメインＯＣＴ（ＳＤ－ＯＣＴ）によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、ＯＣＴ血管造影によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、フルオレセイン血管造影によって決定される。一部の実施形態では、眼の網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）の低減は、直接網膜観察によって決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液（例えば、網膜内液（ＩＲＦ）および／または網膜下液（ＳＲＦ））のレベルと比較した網膜液（例えば、ＳＲＦおよび／またはＩＲＦ）のレベルに基づいて評価される（例えば、上記のように）。一部の実施形態では、網膜液は、網膜下液（ＳＲＦ）または網膜内液（ＩＲＦ）である。一部の実施形態では、網膜液は網膜下液（ＳＲＦ）である。一部の実施形態では、網膜液は網膜内液（ＩＲＦ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液（例えば、ＩＲＦおよび／またはＳＲＦ）のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に網膜液（例えば、ＩＲＦおよび／またはＳＲＦ）の低減が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される（例えば、上記のように）。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少をもたらす。一部の実施形態では、網膜厚は、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれかより大きい網膜厚の減少をもたらす。一部の実施形態では、網膜厚（例えば、ＣＳＴまたはＣＲＴ）は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１０μｍ～約１００μｍ（例えば、約１０μｍ、約１５μｍ、約２０μｍ、約２５μｍ、約３０μｍ、約３５μｍ、約４０μｍ、約４５μｍ、約５０μｍ、約５５μｍ、約６０μｍ、約６５μｍ、約７０μｍ、約７５μｍ、約８０μｍ、約８５μｍ、約９０μｍ、約９５μｍ、約１００μｍのいずれかよりも大きく、またはそれよりも大きく）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約５μｍ～約５０μｍ（例えば、約５μｍ、約１０μｍ、約１５μｍ、約２０μｍ、約２５μｍ、約３０μｍ、約３５μｍ、約４０μｍ、約４５μｍ、または約５０μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約５μｍ～約４０μｍ（例えば、約５μｍ、約１０μｍ、約１５μｍ、約２０μｍ、約２５μｍ、約３０μｍ、約３５μｍ、または約４０μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約５μｍ～約３０μｍ（例えば、約５μｍ、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、約９μｍ、約１０μｍ、約１１μｍ、約１２μｍ、約１３μｍ、約１４μｍ、約１５μｍ、約１６μｍ、約１７μｍ、約１８μｍ、約１９μｍ、約２０μｍ、約２１μｍ、約２２μｍ、約２３μｍ、約２４μｍ、約２５μｍ、約２６μｍ、約２７μｍ、約２８μｍ、約２９μｍ、または約３０μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約５μｍ～約２５μｍ（例えば、約５μｍ、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、約９μｍ、約１０μｍ、約１１μｍ、約１２μｍ、約１３μｍ、約１４μｍ、約１５μｍ、約１６μｍ、約１７μｍ、約１８μｍ、約１９μｍ、約２０μｍ、約２１μｍ、約２２μｍ、約２３μｍ、約２４μｍ、または約２５μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約５μｍ～約２０μｍ（例えば、約５μｍ、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、約９μｍ、約１０μｍ、約１１μｍ、約１２μｍ、約１３μｍ、約１４μｍ、約１５μｍ、約１６μｍ、約１７μｍ、約１８μｍ、約１９μｍ、または約２０μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１８μｍ～約７５μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１８．５μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約２１．０μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約８．３μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約２５．５μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約２４．８μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約７５μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１００μｍまたはそれよりも大きく（例えば、約１００μｍまたはそれよりも大きく、約１１０μｍまたはそれよりも大きく、約１２０μｍまたはそれよりも大きく、約１３０μｍまたはそれよりも大きく、約１４０μｍまたはそれよりも大きく、約１５０μｍまたはそれよりも大きく、約１６０μｍまたはそれよりも大きく、約１７０μｍまたはそれよりも大きく、約１８０μｍまたはそれよりも大きく、約１９０μｍまたはそれよりも大きく、または約２００μｍまたはそれよりも大きくのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１０μｍ、約２０μｍ、約３０μｍ、約４０μｍ、約５０μｍ、約６０μｍ、約７０μｍ、約８０μｍ、約９０μｍ、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約５０μｍ～約２００μｍ（例えば、約５０μｍ、約６０μｍ、約７０μｍ、約８０μｍ、約９０μｍ、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約６０μｍ～約２００μｍ（例えば、約６０μｍ、約７０μｍ、約８０μｍ、約９０μｍ、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約７０μｍ～約２００μｍ（例えば、約７０μｍ、約８０μｍ、約９０μｍ、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約８０μｍ～約２００μｍ（例えば、約８０μｍ、約９０μｍ、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約９０μｍ～約２００μｍ（例えば、約９０μｍ、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１００μｍ～約２００μｍ（例えば、約１００μｍ、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１１０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１１０μｍ、約１２０μｍ、約１３０μｍ、約１４０μｍ、約１５０μｍ、約１６０μｍ、約１７０μｍ、約１８０μｍ、約１９０μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１１５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１１５μｍ、約１２０μｍ、約１２５μｍ、約１３０μｍ、約１３５μｍ、約１４０μｍ、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１２０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１２０μｍ、約１２５μｍ、約１３０μｍ、約１３５μｍ、約１４０μｍ、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１２５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１２５μｍ、約１３０μｍ、約１３５μｍ、約１４０μｍ、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１３０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１３０μｍ、約１３５μｍ、約１４０μｍ、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１３５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１３５μｍ、約１４０μｍ、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１４０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１４０μｍ、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１


６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１４５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１４５μｍ、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１５０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１５０μｍ、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１５５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１５５μｍ、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１６０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１６０μｍ、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１６５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１６５μｍ、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１７０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１７０μｍ、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１７５μｍ～約２００μｍ（例えば、約１７５μｍ、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約１８０μｍ～約２００μｍ（例えば、約１８０μｍ、約１８５μｍ、約１９０μｍ、約１９５μｍ、または約２００μｍのいずれか）減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約２１．０μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約８．３μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約２６．２μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約２４．８μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約４０．８μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約３０．０μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約１１８．６μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約１１９．０μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約１３７．８μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約１５２．７μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約１５３．３μｍ減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約１４９．８μｍ減少する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約－２００μｍ～約＋４０μｍ（例えば、約－２００μｍ、約－１８０μｍ、約－１６０μｍ、約－１４０μｍ、約－１２０μｍ、約－１００μｍ、約－８０μｍ、約－６０μｍ、約－４０μｍ、約－２０μｍ、約０μｍ、約＋５μｍ、約＋１０μｍ、約＋１５μｍ、約＋２０μｍ、約＋２５μｍ、約＋３０μｍ、約＋３５μｍ、または約＋４０μｍのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約８μｍ、約１１μｍ、約１６μｍ、約２９μｍ、約３３μｍ、約３８μｍ、約５５μｍ、約６１μｍ、または約１１７μｍのいずれか減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約２７．８μｍまたは約３０．８μｍのいずれか減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）が約４μｍ、約１２μｍ、または約３２μｍのいずれか増加する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－２１．０μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－８．３μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－２６．２μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－２４．８μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－４０．８μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－３０．０μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－１１８．６μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－１１９．０μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－１３７．８μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－１５２．７μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－１５３．３μｍ変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して約－１４９．８μｍ変化する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較した中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の変化（例えば、減少）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約１日後、約１週間後、約２週間後、約４週間後、約８週間後、約１６週間後、約２４週間後、約３０週間後、約３２週間後、約３４週間後、約４０週間後、約４４週間後、約４８週間後、約５２週間後、またはそれよりも後のいずれかの時点で存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較した中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の変化（例えば、減少）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約１日後、約１週間後、約２週間後、約４週間後、約８週間後、約１２週間後、約１６週間後、約２０週間後、約２４週間後、約２８週間後、約３２週間後、約３６週間後、約４０週間後、約４４週間後、約４８週間後、約５２週間後、約５６週間後、約６０週間後、約６４週間後、約６８週間後、約７２週間後、約７６週間後、約８０週間後、約８４週間後、約８８週間後、約９２週間後、約９６週間後、約１００週間後、約１０４週間後、約１０８週間後、またはそれよりも後のいずれかの時点で存在する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれかよりも大きく減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して少なくとも約１０％減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約１５％またはそれよりも大きく減少する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約４０μｍ未満（例えば、約４０μｍ未満、約３５μｍ未満、約３０μｍ未満、約２５μｍ未満、約２０μｍ未満、約１５μｍ未満、約１０μｍ未満、約５μｍ未満、約１μｍ未満のいずれか、またはそれ未満）増加する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約３２μｍまたはそれ未満増加する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較した網膜厚の維持、減少、または増加は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約３０週間後またはそれよりも後の時点で存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較した網膜厚の維持、減少、または増加は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約３０週間後、約３４週間後、約４４週間後、約６カ月後、約１年後、約１．５年後、約２年後、約３年後、約５年後、約１０年後、またはそれよりも後のいずれかの時点で存在する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％のいずれかより大きい黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％の黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、黄斑体積は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％の黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して約１５％またはそれより大きい黄斑体積の減少をもたらす。一部の実施形態では、黄斑体積はＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較した黄斑体積の維持または減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約３０週間後またはそれよりも後の時点で存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較した黄斑体積の維持または減少は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約３０週間後、約３４週間後、約４４週間後、約６カ月後、約１年後、約１．５年後、約２年後、約３年後、約５年後、約１０年後、またはそれよりも後のいずれかの時点で存在する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、またはそれより大きい％のいずれかより大きい視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、視力は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡの改善をもたらす。一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＥＴＤＲＳスコアとして表記され、これは正確に読んだ文字数に対応する（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで少なくとも１５文字（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134 (9): 1041: 1047）（例えば、少なくとも約１５文字、少なくとも約２０文字、少なくとも約３０文字、少なくとも約４０文字、少なくとも約５０文字、少なくとも約６０文字、または約７０文字）改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約１～約１５文字（例えば、約１文字、約２文字、約３文字、約４文字、約５文字、約６文字、約７文字、約８文字、約９文字、約１０文字、約１１文字、約１２文字、約１３文字、約１４文字、または約１５文字のいずれか）改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約５文字改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約１文字、約２文字、約３文字、約４文字、約５文字、約６文字、または約７文字のいずれか改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約３文字またはそれよりも大きく改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約４文字またはそれよりも大きく改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約５．１文字またはそれよりも大きく改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約６．４文字またはそれよりも大きく改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約６．８文字改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約８．８文字改善する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約２．３文字改善する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体のＥＴＤＲＳ文字の減少は１５文字未満（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134 (9): 1041: 1047）（例えば、１５文字またはそれ未満、１４文字またはそれ未満、１３文字またはそれ未満、１２文字またはそれ未満、１１文字またはそれ未満、１０文字またはそれ未満、９文字またはそれ未満、８文字またはそれ未満、７文字またはそれ未満、６文字またはそれ未満、５文字またはそれ未満、４文字またはそれ未満、３文字またはそれ未満、２文字またはそれ未満、１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約２文字である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体のＥＴＤＲＳ文字の減少は約１文字、約２文字、約３文字、約４文字、約５文字、約６文字、約７文字、約８文字、または約９文字のいずれかである。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は０文字である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約１文字である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約２．７文字である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約２．８文字である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約２文字またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約３．２文字またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約１５～約０文字（例えば、約１５文字、約１４文字、約１３文字、約１２文字、約１１文字、約１０文字、約９文字、約８文字、約７文字、約６文字、約５文字、約４文字、約３文字、約２文字、約１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約１０～約０文字（例えば、約１０文字、約９文字、約８文字、約７文字、約６文字、約５文字、約４文字、約３文字、約２文字、約１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約５～約０文字（例えば、約５文字、約４文字、約３文字、約２文字、約１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約４～約０文字（例えば、約４文字、約３文字、約２文字、約１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約３～約０文字（例えば、約３文字、約２文字、約１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約２～約０文字（例えば、約２文字、約１文字、または０文字のいずれか）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡが維持され、ここで、個体の文字の減少は約１～約０文字である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡがＥＴＤＲＳで約－２０～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－２０、－１９、－１８、－１７、－１６、－１５、－１４、－１３、－１２、－１１、－１０、－９、－８、－７、－６、－５、－４、－３、－２、－１、０、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、＋６、＋７、＋８、＋９、＋１０、＋１１、＋１２、＋１３、＋１４、＋１５、＋１６、＋１７、＋１８、＋１９、＋２０のいずれか、またはそれよりも大きく）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約１６文字、７文字または５文字のいずれか増加する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約１９文字、１４文字、７文字、６文字、５文字、４文字、３文字、２文字、または１文字のいずれか減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約４．８文字または約０．８文字減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約２文字またはそれ未満減少する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約３．２文字またはそれ未満減少する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－１５～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－１５文字、－１４文字、－１３文字、－１２文字、－１１文字、－１０文字、－９文字、－８文字、－７文字、－６文字、－５文字、－４文字、－３文字、－２文字、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－１０～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－１０文字、－９文字、－８文字、－７文字、－６文字、－５文字、－４文字、－３文字、－２文字、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－５～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－５文字、－４文字、－３文字、－２文字、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－４～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－４文字、－３文字、－２文字、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－３～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－３文字、－２文字、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－２～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－２文字、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約－１～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、－１文字、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約０～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、０文字、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約＋１～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、＋１文字、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約＋２～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、＋２文字、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約＋３～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、＋３文字、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約＋４～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、＋４文字、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約＋５～＋７文字またはそれよりも大きく（例えば、＋５文字、＋６文字、＋７文字、＋８文字、＋９文字、＋１０文字、＋１１文字、＋１２文字、＋１３文字、＋１４文字、＋１５文字、＋１６文字、＋１７文字、＋１８文字、＋１９文字、＋２０文字、またはそれよりも大きくのいずれか）変化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップの結果、ＢＣＶＡがｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＥＴＤＲＳで約＋６文字または約＋７文字変化する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、一過性の炎症（例えば、房水細胞および／または硝子体細胞によって駆動される炎症、房水フレア、虹彩後癒着、低瞳孔散大）が生じる。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、炎症（例えば、房水細胞および／または硝子体細胞によって駆動される炎症、房水フレア、虹彩後癒着、低瞳孔散大）が生じ、それは経口および／もしくは局所ステロイドによる処置ならびに／または散瞳薬の投与後に改善される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、炎症（例えば、房水細胞および／または硝子体細胞によって駆動される炎症）が生じ、それは、経口および／または局所ステロイドによる処置の投与後に消散する。炎症（例えば、房水細胞および／または硝子体細胞によって駆動される炎症、房水フレア、虹彩後癒着、低瞳孔散大）は、細隙灯検査などの当技術分野で公知の任意の方法を使用して測定することができる。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較した視力の維持または改善（例えば、ＢＣＶＡ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約１日後、約１週間後、約２週間後、約４週間後、約８週間後、約１２週間後、約１６週間後、約２０週間後、約２４週間後、約２８週間後、約３２週間後、約３６週間後、約４０週間後、約４４週間後、約４８週間後、約５２週間後、約５６週間後、約６０週間後、約６４週間後、約６８週間後、約７２週間後、約７６週間後、約８０週間後、約８４週間後、約８８週間後、約９２週間後、約９６週間後、約１００週間後、約１０４週間後、約１０８週間後、またはそれよりも後のいずれかの時点で存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較した視力の維持または改善（例えば、ＢＣＶＡ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約３０週間後またはそれよりも後の時点で存在する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較した視力の維持または改善（例えば、ＢＣＶＡ）は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の約３０週間後、約３４週間後、約４４週間後、約６カ月後、約１年後、約１．５年後、約２年後、約３年後、約５年後、約１０年後、またはそれよりも後のいずれかの時点で存在する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における最高矯正視力（ＢＣＶＡ）に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＥＴＤＲＳスコアとして表記され、これは正確に読んだ文字数に対応する（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）。一部の実施形態では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、ＥＴＤＲＳスコアの１５文字未満（例えば、１５文字もしくはそれ未満、１４文字もしくはそれ未満、１３文字もしくはそれ未満、１２文字もしくはそれ未満、１１文字もしくはそれ未満、１０文字もしくはそれ未満、９文字もしくはそれ未満、８文字もしくはそれ未満、７文字もしくはそれ未満、６文字もしくはそれ未満、５文字もしくはそれ未満、４文字もしくはそれ未満、３文字もしくはそれ未満、２文字もしくはそれ未満、１文字、または０文字のいずれか）の減少を有する場合、個体は視覚および／または視力の維持を有すると決定される。一部の実施形態では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、少なくとも１５文字（例えば、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、または約７０文字のいずれか）の増加を有する場合、個体は、視覚および／または視力の改善を有すると決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＣＳＴまたはＣＲＴは、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが減少する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが維持される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における黄斑体積に基づいて評価される。一部の実施形態では、黄斑体積は、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価した黄斑体積が減少する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価した黄斑体積が維持される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、１つの眼および／または反対側の眼における網膜厚（例えば、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ））、および黄斑体積に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＣＳＴおよび黄斑体積は、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴおよび黄斑体積が減少する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴおよび黄斑体積が維持される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に個体が必要とするレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）の数に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後、個体が４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎またはそれより多くのいずれかの、１回未満のレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。
一部の実施形態では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、少なくとも２０週間、少なくとも３０週間、少なくとも４０週間、少なくとも５０週間、少なくとも６０週間、少なくとも７０週間、少なくとも８０週間、少なくとも９０週間、少なくとも１００週間、少なくとも１１０週間、またはそれより長い期間のいずれかの間、いかなるレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。
一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約２４カ月、少なくとも約２３カ月、少なくとも約２２カ月、少なくとも約２１カ月、少なくとも約２０カ月、少なくとも約１９カ月、少なくとも約１８カ月、少なくとも約１７カ月、少なくとも約１６カ月、少なくとも約１５カ月、少なくとも約１４カ月、少なくとも約１３カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１１カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約１カ月、少なくとも約３週間、少なくとも約２週間、または少なくとも約１週間のいずれかにわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約１２カ月にわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約１０カ月にわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約７カ月にわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約６カ月にわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約２カ月にわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後少なくとも約１カ月にわたって、いかなるレスキュー治療による処置（例えば、アフリベルセプト注射）も必要としない。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％のいずれか）が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約６７％（例えば、少なくとも約６７％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％のいずれか）が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約５０％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約７８％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約８０％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約８２％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の１００％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％のいずれか）が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９２週間、少なくとも約９６週間、少なくとも約１００週間、少なくとも約１０４週間、少なくとも約１０８週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約５０％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後約５２週間もしくはそれよりも長く、または約５６週間もしくはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約６７％（例えば、少なくとも約６７％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％のいずれか）が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約７８％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９２週間、少なくとも約９６週間、少なくとも約１００週間、少なくとも約１０４週間、少なくとも約１０８週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約７８％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後約２０週間もしくはそれよりも長く、または約３６週間もしくはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約８０％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の少なくとも約８２％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の１００％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の１００％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９２週間、少なくとも約９６週間、少なくとも約１００週間、少なくとも約１０４週間、少なくとも約１０８週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単回単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の１００％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後約６４週間もしくはそれよりも長く、７２週間もしくはそれよりも長く、または８４週間もしくはそれよりも長くのいずれかにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要としない。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約７８％またはそれ未満（例えば、約７８％もしくはそれ未満、約７５％もしくはそれ未満、約７０％もしくはそれ未満、約６５％もしくはそれ未満、約６０％もしくはそれ未満、約５５％もしくはそれ未満、約５０％もしくはそれ未満、約４５％もしくはそれ未満、約４０％もしくはそれ未満、約３５％もしくはそれ未満、約３０％もしくはそれ未満、約２５％もしくはそれ未満、約２０％もしくはそれ未満、約１５％もしくはそれ未満、約１０％もしくはそれ未満、約５％もしくはそれ未満、約２．５％もしくはそれ未満、約１％もしくはそれ未満、または約０．５％もしくはそれ未満のいずれか）が１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約５０％またはそれ未満（例えば、約５０％もしくはそれ未満、約４５％もしくはそれ未満、約４０％もしくはそれ未満、約３５％もしくはそれ未満、約３０％もしくはそれ未満、約２５％もしくはそれ未満、約２０％もしくはそれ未満、約１５％もしくはそれ未満、約１０％もしくはそれ未満、約５％もしくはそれ未満、約２．５％もしくはそれ未満、約１％もしくはそれ未満、または約０．５％もしくはそれ未満のいずれか）が１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約３０％未満（例えば、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約２．５％、約１％、または約０．５％のいずれか未満）が１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約３０％未満が１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約２０％未満が１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の０％が１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約７８％またはそれ未満（例えば、約７８％もしくはそれ未満、約７５％もしくはそれ未満、約７０％もしくはそれ未満、約６５％もしくはそれ未満、約６０％もしくはそれ未満、約５５％もしくはそれ未満、約５０％もしくはそれ未満、約４５％もしくはそれ未満、約４０％もしくはそれ未満、約３５％もしくはそれ未満、約３０％もしくはそれ未満、約２５％もしくはそれ未満、約２０％もしくはそれ未満、約１５％もしくはそれ未満、約１０％もしくはそれ未満、約５％もしくはそれ未満、約２．５％もしくはそれ未満、約１％もしくはそれ未満、または約０．５％もしくはそれ未満のいずれか）がｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９２週間、少なくとも約９６週間、少なくとも約１００週間、少なくとも約１０４週間、少なくとも約１０８週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約３０％未満（例えば、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約２．５％、約１％、または約０．５％のいずれか未満）がｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約３０％未満が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の約２０％未満が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の０％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６６週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与の結果、複数内の個体の０％が、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、例えば、ｒＡＡＶ粒子の投与後少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１２週間、少なくとも約１６週間、少なくとも約２０週間、少なくとも約２４週間、少なくとも約２８週間、少なくとも約３２週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約４０週間、少なくとも約４４週間、少なくとも約４８週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、少なくとも約８８週間、少なくとも約９２週間、少なくとも約９６週間、少なくとも約１００週間、少なくとも約１０４週間、少なくとも約１０８週間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって１つの眼および／または反対側の眼に対する何らかのレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする。
一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の結果、年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率と比較して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％のいずれか低下する。一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の結果、年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率と比較して約８７％またはそれよりも大きく低下する。一部の実施形態では、複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の結果、年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率がｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率と比較して１００％低下する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の平均年間抗ＶＥＧＦ注射率を以下の式に従って算出する：
ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の年間の率＝（ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前１２カ月の間の抗ＶＥＧＦ注射の回数）／（ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前１２カ月の間の最初の抗ＶＥＧＦ注射からｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与までの日数／３６５．２５）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後の平均年間抗ＶＥＧＦ注射率を以下の式に従って算出する：
ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後の年間の率＝（ｒＡＡＶ粒子の単位用量を投与してからの抗ＶＥＧＦ注射の回数）／（ｒＡＡＶ粒子の単位用量を投与してからの日数／３６５．２５）。
一部の実施形態では、個体が、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける１つの眼および／または反対側の眼に関して、ｒＡＡＶ粒子の投与前のｒＡＡＶ粒子の投与を受ける１つの眼および／または反対側の眼に関するＢＣＶＡと比較して、網膜内または網膜下液（例えば、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される）に起因してＢＣＶＡの１０文字またはそれよりも多くの減少（例えば、ＥＴＤＲＳプロトコールを使用）を示す場合、その個体にｒＡＡＶ粒子の投与後のレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射などの抗ＶＥＧＦ硝子体内注射）が必要であると判定する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の投与を受ける１つの眼および／または反対側の眼に関して、ｒＡＡＶ粒子の投与前のｒＡＡＶ粒子の投与を受ける１つの眼および／または反対側の眼の中心領域網膜厚と比較して、例えば、ＳＤ－ＯＣＴによって決定して中心領域網膜厚（例えば、ＣＳＴまたはＣＲＴ）の７５μｍよりも大きな増加を示す場合、その個体にｒＡＡＶ粒子の投与後のレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射などの抗ＶＥＧＦ硝子体内注射）が必要であると判定する。一部の実施形態では、個体がｒＡＡＶ粒子の投与を受ける１つの眼および／または反対側の眼に関してＡＭＤに起因する視覚を脅かす出血を示す場合、その個体にｒＡＡＶ粒子の投与後のレスキュー処置（例えば、アフリベルセプト注射などの抗ＶＥＧＦ硝子体内注射）が必要であると判定する。
一部の実施形態では、レスキュー処置は、標準治療である抗ＶＥＧＦ治療の施行を含む。そのような標準治療である抗ＶＥＧＦ治療は、１回または複数回の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、抗ＶＥＧＦ硝子体内注射）を含む。一部の実施形態では、レスキュー処置は、１回または複数回のアフリベルセプトのＩＶＴ注射を含む。一部の実施形態では、レスキュー処置は、１回または複数回の、アフリベルセプト約２ｍｇを含むアフリベルセプトのＩＶＴ注射を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較した網膜液のレベルに基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、網膜液の低減が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の色素上皮剥離（ＰＥＤ）と比較したＰＥＤの消散に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前のＰＥＤと比較して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後にＰＥＤの消散が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、フルオレセイン血管造影によって決定される脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）病変の成長に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、ＣＮＶ病変が収縮（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または１００％のいずれかより大きく）する場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後にＣＮＶ病変が成長しない（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１５％、または約２０％のいずれかより小さい成長）場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、当技術分野で公知のいずれかの方法（例えば、ＳＤ－ＯＣＴ、ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影等）に基づく１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色に基づいて評価される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色に改善が観察される場合、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたことが決定される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後の個体において眼内血管新生疾患が処置されたかは、眼科検査、眼内圧（例えば、ゴールドマン圧平眼圧計、またはＴｏｎｏ－ｐｅｎを使用する）、倒像眼底検査、１つの眼および／または反対側の眼ならびに眼付属器の検査、眼瞼および／または瞳孔の応答性、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、求心性瞳孔障害、細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、光彩、および前房の検査を含む）、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後側セグメントの異常、ＳＤ－ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影（網膜、視神経乳頭、および／または黄斑の画像を含む）、房水採取、硝子体液採取、ＯＣＴ－血管造影（ＯＣＴ－Ａ）、屈折および／または視力（ＢＣＶＡ）に基づいて評価される。一部の実施形態では、ＳＤ－ＯＣＴは、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚または中心領域網膜厚）、黄斑体積、および／または液体（例えば、網膜下液または網膜内液）の存在を評価するために実施される。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患はｗＡＭＤである。
ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、当技術分野で公知の任意の方法によって個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与され得る。例えばｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼の眼内にまたは硝子体内注射によって投与され得る。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、眼内である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内注射（ＩＶＴ）または網膜下注射による。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、ＩＶＴ注射による。一部の実施形態では、無菌的技法を使用して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を硝子体内注射によって投与する。一部の実施形態では、ポビドン（providone）ヨードを伴う無菌的技法を使用して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を硝子体内注射によって投与する。
一部の実施形態では、個体は、眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への、眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、以前のアフリベルセプト処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への以前のアフリベルセプト処置を受けていない。
ステロイド処置
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ステロイド処置と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、コルチコステロイド処置である。例示的なコルチコステロイドとしては、アクロメタゾン、アムシノミド（amcinomide）、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチバゾール、デフラザコルト、デオキシコルチコステロン、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドネート、フルクロロロン、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルチカゾン、フプレドニデン（fuprednidene）、フォルモコルタル（formocortal）、ハルシノニド、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾンアセポン酸エステル、ヒドロコルチゾンブテプレート、ヒドロコルチゾン酪酸エステル、ロテプレドノール、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセポン酸エステル、モメタゾンフランカルボン酸エステル、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾン、プレドニゾロン、プレドニリデン、レメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、およびウロベタゾールを含むが限定されない。一部の実施形態では、ステロイド処置は、全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、局所ステロイド処置（例えば、点眼液）、眼周囲のステロイド処置（例えば、テノン嚢下、結膜下）、硝子体内ステロイド処置、または脈絡膜上ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置、メドリゾン処置、ロテプレドノール処置、プレドニゾロン処置、フルオシノロン処置、トリアムシノロン処置、リメキソロン処置、デキサメタゾン処置、フルオロメトロン処置、フルオシノロン処置、リメキソロン処置、またはプレドニゾン処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、プレドニゾン処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、全身性のステロイド処置および局所ステロイド処置を含む。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置は、経口ステロイド処置である。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置は、プレドニゾン処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置および局所ステロイド処置は、同時に（例えば、同じ日に）投与される。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置および局所ステロイド処置は、個別に（例えば、異なる日に）投与される。
一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間、および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与後に投与される。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、全身性のステロイド処置である。一部の実施形態では、全身性のステロイド処置は、経口ステロイド処置である。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、経口プレドニゾン処置である。一部の実施形態では、経口プレドニゾン処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に開始される。一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置は、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、または約７０ｍｇ／日のプレドニゾンのいずれかの用量で、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約７日、約６日、約５日、約４日、約３日、約２日、約１日、または０日前のいずれかに投与され、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、または約１０日間、またはそれより長い期間のいずれか持続する。一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置は、約６０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、ｒＡＡＶの単位用量の投与の約３日前に投与され、約３日間持続する。
一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置の後、経口プレドニゾン処置の用量を漸減させる。一部の実施形態では、経口プレドニゾン処置の用量の漸減は、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、または約５０ｍｇ／日のプレドニゾンのいずれかの用量で、全体で約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間のいずれか、その後約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、または約２５ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、約１日間、約２日間、約３日間、または約４日間のいずれか、その後約５ｍｇ、約１０ｍｇ、または約１５ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、約１日間、約２日間、約３日間、または約４日間投与する。一部の実施形態では、プレドニゾンの用量の漸減は、約４０ｍｇ／日のプレドニゾンのいずれかの用量で、３日間、その後約２０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間、その後約１０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間投与される。
一部の実施形態では、初回の経口プレドニゾン処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の３日前に、６０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、全体で６日間から開始され、その後４０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、全体で３日間、その後２０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間、その後１０ｍｇ／日のプレドニゾンの用量で、２日間投与される。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、眼科用ステロイド処置である。一部の実施形態では、眼科用ステロイド処置は、ジフルプレドネート処置である。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および／または投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与の間に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の間および投与後に投与される。一部の実施形態では、ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前、投与の間、および投与後に投与される。
一部の実施形態では、ステロイド処置は、点眼用ステロイド処置、例えば局所ステロイド処置である。一部の実施形態では、点眼用ステロイド処置、例えば局所ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後最大４週間、最大６週間、最大８週間、最大３カ月間、最大４カ月間、最大５カ月間、または最大６カ月間にわたる毎日ステロイド処置である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１週目に局所ステロイドの約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与から開始し投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後約３週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の局所ステロイドの約１週間にわたる１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含む。一部の実施形態では、点眼用ステロイド処置は処置にあたる医師の自由裁量で延長される。
一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％～約０．５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％ジフルプレドネートのいずれかである。一部の実施形態では、眼科用ステロイドは、０．０５％ジフルプレドネートである。一部の実施形態では、０．０５％ジフルプレドネートの用量は、眼科用溶液１滴である。一部の実施形態では、１滴は約５０μｌ（例えば、約２５μｌ～約５０μｌ、または約５０μｌ～約１００μｌ）である。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約１μｇ～約５μｇ、または約２μｇ～約３μｇ、または約２．５μｇジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、ジフルプレドネートの用量は、約２．５μｇジフルプレドネートを含む。
一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、７週間の局所ステロイド処置、例えば、０．０５％ジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約４週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の局所ステロイドの約１週間にわたる１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約１週間前から開始する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約２８日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約７日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約７日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約７日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約７日前に開始する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、１日目～約２８日目に局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約２９日目～約３５日目に局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約３６日目～約４２日目の局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約４３日目～約４９日目の局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは１日目に開始する。一部の実施形態では、炎症が存在している場合、局所ステロイド処置を継続する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される処置方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与する前に、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を個体の１つの眼に投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤をｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約７日または約１週間前に投与する。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤を約１日目に投与し、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を約８日目に投与する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、７週間の局所ステロイド処置、例えば、０．０５％ジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約４週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約２８日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約７日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約７日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約７日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、１日目～約２８日目に局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約２９日目～約３５日目に局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約３６日目～約４２日目の局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約４３日目～約４９日目の局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは１日目に開始する。一部の実施形態では、炎症が存在している場合、局所ステロイド処置を継続する。
一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、４カ月間の局所ステロイド処置、例えば、０．０５％ジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約１週間前から開始する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約７日前に開始する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、１日目～約３０日目に局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約３１日目～約６０日目に局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約６１日目～約９０日目の局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約９１日目～約１２０日目の局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは１日目に開始する。一部の実施形態では、炎症が存在している場合、局所ステロイド処置を継続する。
一部の実施形態では、本明細書で提供される処置方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼に投与する前に、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプトのＩＶＴ注射）を個体の１つの眼に投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤をｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約７日または約１週間前に投与する。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤を約１日目に投与し、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を約８日目に投与する。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、４カ月間の局所ステロイド処置、例えば、０．０５％ジフルプレドネートを含む。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約１カ月間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約３０日間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である。一部の実施形態では、局所ステロイド処置は、１日目～約３０日目に局所ステロイドの１日当たり約４回の投与（すなわち、ＱＩＤ）、その後の約３１日目～約６０日目に局所ステロイドの１日当たり約３回の投与（すなわち、ＴＩＤ）、その後の約６１日目～約９０日目の局所ステロイドの１日当たり約２回の投与（すなわち、ＢＩＤ）、およびその後の約９１日目～約１２０日目の局所ステロイドの１日当たり約１回の投与（すなわち、ＱＤ）を含み、タイミングは１日目に開始する。一部の実施形態では、炎症が存在している場合、局所ステロイド処置を継続する。
標的細胞にトランスジーンを送達するためのベクター
一部の実施形態では、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子は、対象（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）において複製欠損であるように変更されているアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する組換えウイルスベクターを含む。一部の実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である。
ＡＡＶまたはｒＡＡＶは、小さいノンエンベロープの一本鎖ＤＮＡウイルスである。ｒＡＡＶは、非病原性ヒトパルボウイルスであり、複製がアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、およびＣＭＶを含むヘルパーウイルスに依存するように作製することができる。
野生型（ｗｔ）ＡＡＶに対する曝露は、いかなるヒト病態にも関連せず、または引き起こさないことが公知であり、一般集団において一般的であることから、ＡＡＶまたはｒＡＡＶは、遺伝子治療のための適した送達系となる。抗ＶＥＧＦ剤、例えばアフリベルセプトを送達するための遺伝子治療のために使用されるＡＡＶおよびｒＡＡＶは、任意の血清型であり得る。一部の実施形態では、本開示の方法は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ｒｈ１０、ＡＡＶ－ＤＪ、およびその任意のハイブリッドまたはキメラＡＡＶを含む、任意の適したＡＡＶ血清型の使用を提供する。一部の実施形態では、使用される血清型は、ウイルスの指向性または目的の標的細胞の感染力に基づく。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤トランスジーン（例えば、アフリベルセプトトランスジーン）と共に使用するために最も最適な血清型の選択を可能にするために、いくつかのＡＡＶベクターが生成され得る。
一部の実施形態では、本開示の方法は、シュードタイプＡＡＶの使用を提供する。シュードタイプＡＡＶ粒子は、別のＡＡＶ血清型のＡＡＶカプシドによってカプシド化された１つのＡＡＶ血清型のＡＡＶゲノム末端逆位配列（ＩＴＲ）を含む。典型的には、シュードタイプＡＡＶは、「ＡＡＶ＃／＃」として指定され、第１の「＃」は、ＡＡＶ ＩＴＲ血清型を示し、第２の「＃」は、カプシドの血清型を示す。例えば、ＡＡＶ２ ＩＴＲおよびＡＡＶ１カプシドを含むＡＡＶ粒子は、「ＡＡＶ２／１」と指定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、核酸、例えば異種核酸を含む。一部の実施形態では、核酸は、トランスジーン、例えば抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする。一部の実施形態では、コードされるトランスジーン、例えば抗ＶＥＧＦ剤は、核酸の転写を開始するプロモーターの転写制御下にある。一部の実施形態では、プロモーターは、「遍在する」プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、「強力な」または構成的に活性なプロモーター、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、伸長因子１アルファ（ＥＦｌａ）プロモーター、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、またはコネキシン３６（または「Ｃｘ３６」）プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、非標的化細胞への潜在的毒性または望ましくない効果を低減するために、特定の組織または細胞、例えば網膜細胞において活性化される組織特異的プロモーターである。一部の態様では、抗ＶＥＧＦ剤トランスジーン（例えば、アフリベルセプトトランスジーン）と共に使用するために最も最適な血清型およびプロモーターの選択を可能にするために、いくつかのＡＡＶベクターが生成され得る。一部の実施形態では、核酸は、ＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。一部の実施形態では、核酸はＡＡＶ２ ＩＴＲを両端に有する。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、標的細胞（例えば、網膜細胞）におけるトランスジーン（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を増強するためにポリヌクレオチドカセットを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドカセットは、５’から３’の順に：（ａ）ＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域（配列番号２２）；（ｂ）ＣＭＶ配列を含むプロモーター領域（配列番号２３）；（ｃ）５’から３’の順にＴＰＬおよびｅＭＬＰ配列（それぞれ、配列番号２４および配列番号２５）を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）ペプチドまたはポリペプチド（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）をコードするコード配列；（ｅ）全長のＥＥＳ配列（配列番号２６）を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｆ）ＨＧＨポリアデニル化部位（配列番号２７）を含む。ある特定のこれらの実施形態では、ポリヌクレオチドカセットは、配列番号２８～３２から選択される１つもしくは複数の配列、またはそれらと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。ある特定のこれらの実施形態では、ポリヌクレオチドカセットの５’アームは、配列番号３３またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。ある特定のこれらの実施形態では、ポリヌクレオチドカセットの３’アームは、配列番号３４またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。配列番号２２～３４の核酸配列を以下に提供する：
ACTTACGGTA AATGGCCCGC CTGGCTGACC GCCCAACGAC CCCCGCCCAT TGACGTCAAT
AATGACGTAT GTTCCCATAG TAACGCCAAT AGGGACTTTC CATTGACGTC AATGGGTGGA
GTATTTACGG TAAACTGCCC ACTTGGCAGT ACATCAAGTG TATCATATGC CAAGTCCGCC
CCCTATTGAC GTCAATGACG GTAAATGGCC CGCCTGGCAT TATGCCCAGT ACATGACCTT
ACGGGACTTT CCTACTTGGC AGTACATCTA CGTATTAGTC ATCGCTATTA CCA（配列番号２２）
TGCTGATGCG GTTTTGGCAG TACACCAATG GGCGTGGATA GCGGTTTGAC TCACGGGGAT
TTCCAAGTCT CCACCCCATT GACGTCAATG GGAGTTTGTT TTGGCACCAA AATCAACGGG
ACTTTCCAAA ATGTCGTAAT AACCCCGCCC CGTTGACGCA AATGGGCGGT AGGCGTGTAC
GGTGGGAGGT CTATATAAGC AGAGCTCGTT TAGTGAACCG（配列番号２３）
CTCACTCTCT TCCGCATCGC TGTCTGCGAG GGCCAGCTGT TGGGCTCGCG GTTGAGGACA
AACTCTTCGC GGTCTTTCCA GTACTCTTGG ATCGGAAACC CGTCGGCCTC CGAACGGTAC
TCCGCCACCG AGGGACCTGA GCGAGTCCGC ATCGACCGGA TCGGAAAACC TCTCGAGAAA
GGCGTCTAAC CAGTCACAGT CGCAAGGTAG GCTGAGCACC GTGGCGGGCG GCAGCGGGTG
GCGGTCGGGG TTGTTTCTGG CGGAGGTGCT GCTGATGATG TAATTAAAGT AGGCGGTCTT
GAGACGGCGG ATGGTCGA（配列番号２４）
CCAGCTGTTG GGGTGAGTAC TCCCTCTCAA AAGCGGGCAT TACTTCTGCG CTAAGATTGT
CAGTTTCCAA AAACGAGGAG GATTTGATAT TCACCTGGCC CG（配列番号２５）
CTGTTCTCAT CACATCATAT CAAGGTTATA TACCATCAAT ATTGCCACAG ATGTTACTTA
GCCTTTTAAT ATTTCTCTAA TTTAGTGTAT ATGCAATGAT AGTTCTCTGA TTTCTGAGAT
TGAGTTTCTC ATGTGTAATG ATTATTTAGA GTTTCTCTTT CATCTGTTCA AATTTTTGTC
TAGTTTTATT TTTTACTGAT TTGTAAGACT TCTTTTTATA ATCTGCATAT TACAATTCTC
TTTACTGGGG TGTTGCAAAT ATTTTCTGTC ATTCTATGGC CTGACTTTTC TTAATGGTTT
TTTAATTTTA AAAATAAGTC TTAATATTCA TGCAATCTAA TTAACAATCT TTTCTTTGTG
GTTAGGACTT TGAGTCATAA GAAATTTTTC TCTACACTGA AGTCATGATG GCATGCTTCT
ATATTATTTT CTAAAAGATT TAAAGTTTTG CCTTCTCCAT TTAGACTTAT AATTCACTGG
AATTTTTTTG TGTGTATGGT ATGACATATG GGTTCCCTTT TATTTTTTAC ATATAAATAT
ATTTCCCTGT TTTTCTAAAA AAGAAAAAGA TCATCATTTT CCCATTGTAA AATGCCATAT
TTTTTTCATA GGTCACTTAC ATATATCAAT GGGTCTGTTT CTGAGCTCTA CTCTATTTTA
TCAGCCTCAC TGTCTATCCC CACACATCTC ATGCTTTGCT CTAAATCTTG ATATTTAGTG
GAACATTCTT TCCCATTTTG TTCTACAAGA ATATTTTTGT TATTGTCTTT GGGCTTTCTA
TATACATTTT GAAATGAGGT TGACAAGTTA（配列番号２６）
CTGCCCGGGT GGCATCCCTG TGACCCCTCC CCAGTGCCTC TCCTGGCCCT GGAAGTTGCC
ACTCCAGTGC CCACCAGCCT TGTCCTAATA AAATTAAGTT GCATCATTTT GTCTGACTAG
GTGTCCTTCT ATAATATTAT GGGGTGGAGG GGGGTGGTAT GGAGCAAGGG GCCCAAGTTG
GGAAGAAACC TGTAGGGCCT GC（配列番号２７）
AGGCGGTCTT GAGACGGCGG ATGGTCGAGG TGAGGTGTGG CAGGCTTGAG ATCCAGCTGT
TGGGGTGA（配列番号２８）
CGCTGTTTTG ACCTCCATAG TGGACACCGG GACCGATCCA GCCTCCGCGT CTCAGGGGAG
ATCTCGTTTA GTGAACCGTC AGATCCTCAC TCTCTTCCGC ATCGCTGTCT GCGAGGGCCA
GCTGTTGGG（配列番号２９）
TTGATATTCA CCTGGCCCGA TCTGGCCATA CACTTG（配列番号３０）
CCCAGGTCCA AGTTTAAACG CC（配列番号３１）
TCTTTGGGCT TTCTATATAC ATTTTGAAAT GAGGTTGACA AGTTACCTAG GAAAACTGTC
TTCCTGCCCG GGTGGCA（配列番号３２）
CTCTGGAGAC GACTTACGGT AAATGGCCCG CCTGGCTGAC CGCCCAACGA CCCCCGCCCA
TTGACGTCAA TAATGACGTA TGTTCCCATA GTAACGCCAA TAGGGACTTT CCATTGACGT
CAATGGGTGG AGTATTTACG GTAAACTGCC CACTTGGCAG TACATCAAGT GTATCATATG
CCAAGTCCGC CCCCTATTGA CGTCAATGAC GGTAAATGGC CCGCCTGGCA TTATGCCCAG
TACATGACCT TACGGGACTT TCCTACTTGG CAGTACATCT ACGTATTAGT CATCGCTATT
ACCATGCTGA TGCGGTTTTG GCAGTACACC AATGGGCGTG GATAGCGGTT TGACTCACGG
GGATTTCCAA GTCTCCACCC CATTGACGTC AATGGGAGTT TGTTTTGGCA CCAAAATCAA
CGGGACTTTC CAAAATGTCG TAATAACCCC GCCCCGTTGA CGCAAATGGG CGGTAGGCGT
GTACGGTGGG AGGTCTATAT AAGCAGAGCT CGTTTAGTGA ACCGTCAGAT CGCCTGGAGA
GGCCATCCAC GCTGTTTTGA CCTCCATAGT GGACACCGGG ACCGATCCAG CCTCCGCGTC
TCAGGGGAGA TCTCGTTTAG TGAACCGTCA GATCCTCACT CTCTTCCGCA TCGCTGTCTG
CGAGGGCCAG CTGTTGGGCT CGCGGTTGAG GACAAACTCT TCGCGGTCTT TCCAGTACTC
TTGGATCGGA AACCCGTCGG CCTCCGAACG GTACTCCGCC ACCGAGGGAC CTGAGCGAGT
CCGCATCGAC CGGATCGGAA AACCTCTCGA GAAAGGCGTC TAACCAGTCA CAGTCGCAAG
GTAGGCTGAG CACCGTGGCG GGCGGCAGCG GGTGGCGGTC GGGGTTGTTT CTGGCGGAGG
TGCTGCTGAT GATGTAATTA AAGTAGGCGG TCTTGAGACG GCGGATGGTC GAGGTGAGGT
GTGGCAGGCT TGAGATCCAG CTGTTGGGGT GAGTACTCCC TCTCAAAAGC GGGCATTACT
TCTGCGCTAA GATTGTCAGT TTCCAAAAAC GAGGAGGATT TGATATTCAC CTGGCCCGAT
CTGGCCATAC ACTTGAGTGA CAATGACATC CACTTTGCCT TTCTCTCCAC AGGTGTCCAC
TCCCAGGTCC AAGTTTAAAC GCCGCCACCA TG（配列番号３３）
ACTGTTCTCA TCACATCATA TCAAGGTTAT ATACCATCAA TATTGCCACA GATGTTACTT
AGCCTTTTAA TATTTCTCTA ATTTAGTGTA TATGCAATGA TAGTTCTCTG ATTTCTGAGA
TTGAGTTTCT CATGTGTAAT GATTATTTAG AGTTTCTCTT TCATCTGTTC AAATTTTTGT
CTAGTTTTAT TTTTTACTGA TTTGTAAGAC TTCTTTTTAT AATCTGCATA TTACAATTCT
CTTTACTGGG GTGTTGCAAA TATTTTCTGT CATTCTATGG CCTGACTTTT CTTAATGGTT
TTTTAATTTT AAAAATAAGT CTTAATATTC ATGCAATCTA ATTAACAATC TTTTCTTTGT
GGTTAGGACT TTGAGTCATA AGAAATTTTT CTCTACACTG AAGTCATGAT GGCATGCTTC
TATATTATTT TCTAAAAGAT TTAAAGTTTT GCCTTCTCCA TTTAGACTTA TAATTCACTG
GAATTTTTTT GTGTGTATGG TATGACATAT GGGTTCCCTT TTATTTTTTA CATATAAATA
TATTTCCCTG TTTTTCTAAA AAAGAAAAAG ATCATCATTT TCCCATTGTA AAATGCCATA
TTTTTTTCAT AGGTCACTTA CATATATCAA TGGGTCTGTT TCTGAGCTCT ACTCTATTTT
ATCAGCCTCA CTGTCTATCC CCACACATCT CATGCTTTGC TCTAAATCTT GATATTTAGT
GGAACATTCT TTCCCATTTT GTTCTACAAG AATATTTTTG TTATTGTCTT TGGGCTTTCT
ATATACATTT TGAAATGAGG TTGACAAGTT ACCTAGGAAA ACTGTCTTCC TGCCCGGGTG
GCATCCCTGT GACCCCTCCC CAGTGCCTCT CCTGGCCCTG GAAGTTGCCA CTCCAGTGCC
CACCAGCCTT GTCCTAATAA AATTAAGTTG CATCATTTTG TCTGACTAGG TGTCCTTCTA
TAATATTATG GGGTGGAGGG GGGTGGTATG GAGCAAGGGG CCCAAGTTGG GAAGAAACCT
GTAGGGCCTG CGAAGACAGT CAG（配列番号３４）
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドカセットは、配列番号３９またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むか、またはそれからなる。
gcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttccttgtagttaatgattaacccgccatgctacttatctacgtactctggagacgacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtccgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttacgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatgctgatgcggttttggcagtacaccaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaataaccccgccccgttgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagaggccatccacgctgttttgacctccatagtggacaccgggaccgatccagcctccgcgtctcaggggagatctcgtttagtgaaccgtcagatcctcactctcttccgcatcgctgtctgcgagggccagctgttgggctcgcggttgaggacaaactcttcgcggtctttccagtactcttggatcggaaacccgtcggcctccgaacggtactccgccaccgagggacctgagcgagtccgcatcgaccggatcggaaaacctctcgagaaaggcgtctaaccagtcacagtcgcaaggtaggctgagcaccgtggcgggcggcagcgggtggcggtcggggttgtttctggcggaggtgctgctgatgatgtaattaaagtaggcggtcttgagacggcggatggtcgaggtgaggtgtggcaggcttgagatccagctgttggggtgagtactccctctcaaaagcgggcattacttctgcgctaagattgtcagtttccaaaaacgaggaggatttgatattcacctggcccgatctggccatacacttgagtgacaatgacatccactttgcctttctctccacaggtgtccactcccaggtccaagtttaaacgccgccaccatggtgtcatactgggatactggagtcttgctttgtgccctgctgtcctgcctcctcctgactggctccagctcgggctcagataccggtcgccccttcgtggagatgtactccgagatcccggaaattatccacatgactgaggggcgcgaacttgtgatcccctgccgggtcaccagcccgaacattactgtgactttgaagaagttccccctggacaccctgattccggatgggaagagaattatctgggattcacggaagggattcatcatcagcaacgcgacctacaaggaaattggcctcctcacttgcgaagccactgtgaacggacacttgtacaagaccaactacctgacccaccgccagaccaacaccatcatcgacgtcgtcctgtccccttcgcacgggatcgagctctcggtgggagagaagttggtgcttaactgcaccgcccggacggaactgaatgtgggaatcgacttcaactgggaatacccgtccagcaagcatcagcataagaagctggtgaaccgggacctcaagactcagtccggcagcgaaatgaagaagttcctgtcgaccctcactattgacggagtgaccagatccgaccagggcctctacacttgcgccgcttccagcggactcatgaccaagaagaacagcactttcgtgagggtgcatgagaaggacaagacccacacgtgtccgccgtgcccagccccagagctgctgggaggcccttccgtgttcctgtttccgcccaagccaaaggataccctgatgatctcaaggacccctgaggtcacatgcgtcgtggtggatgtgtcgcacgaggaccctgaagtcaaattcaattggtatgtggacggagtggaagtccacaacgcgaaaaccaagccgagagaagaacagtacaattccacctaccgggtggtgtcggtgctgactgtgctgcaccaggactggctcaacggaaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggctctgcccgcacctattgaaaagaccatctccaaggccaagggtcaacctcgcgagcctcaggtgtacactctgcctccaagccgggacgaactgactaagaaccaagtctctctgacctgtttggtgaagggcttctacccgtcagacatcgcagtggagtgggagtcaaacggtcagccggagaacaactacaaaacaaccccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctgtactccaagcttaccgtggataagagccgctggcaacagggcaacgtgttttcctgctccgtcatgcacgaagccctgcacaaccattatacccagaagtccctgtcgctgtcccccgggaaatagtgactgttctcatcacatcatatcaaggttatataccatcaatattgccacagatgttacttagccttttaatatttctctaatttagtgtatatgcaatgatagttctctgatttctgagattgagtttctcatgtgtaatgattatttagagtttctctttcatctgttcaaatttttgtctagttttattttttactgatttgtaagacttctttttataatctgcatattacaattctctttactggggtgttgcaaatattttctgtcattctatggcctgacttttcttaatggttttttaattttaaaaataagtcttaatattcatgcaatctaattaacaatcttttctttgtggttaggactttgagtcataagaaatttttctctacactgaagtcatgatggcatgcttctatattattttctaaaagatttaaagttttgccttctccatttagacttataattcactggaatttttttgtgtgtatggtatgacatatgggttcccttttattttttacatataaatatatttccctgtttttctaaaaaagaaaaagatcatcattttcccattgtaaaatgccatatttttttcataggtcacttacatatatcaatgggtctgtttctgagctctactctattttatcagcctcactgtctatccccacacatctcatgctttgctctaaatcttgatatttagtggaacattctttcccattttgttctacaagaatatttttgttattgtctttgggctttctatatacattttgaaatgaggttgacaagttacctaggaaaactgtcttcctgcccgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcccaagttgggaagaaacctgtagggcctgcgtacgtagataagtagcatggcgggttaatcattaactacaaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgc（配列番号３９）
上記の配列番号３９は、５’から３’の方向に、配列番号３９のヌクレオチド１～１４５を含むＡＡＶ血清型２の末端逆位配列（ＩＴＲ）；配列番号３９のヌクレオチド１８０～６９３を含むＣＭＶプロモーター；アデノウイルスの三部分からなるリーダー配列および合成イントロンを含み、配列番号３９のヌクレオチド６９４～１３１４を含む５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；配列番号３９のヌクレオチド１３２９～１３４０を含むコザック配列；配列番号３９のヌクレオチド１３３８～２７１４を含むコドン最適化されたアフリベルセプトｃＤＮＡ配列；ヒト足場付着領域を含み、配列番号３９のヌクレオチド２７１７～３５２７を含む３’ＵＴＲ；配列番号３９のヌクレオチド３５４６～３７４８を含むヒト成長ホルモンポリアデニル化／転写終結シグナル；ならびに配列番号３９のヌクレオチド３７７２～３９１６を含むＡＡＶ血清型２の末端逆位配列（ＩＴＲ）を含む。例えば、図１Ｃを参照されたい。
標的細胞（例えば、網膜細胞）におけるトランスジーン（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤をコードするトランスジーン）の発現を増強するための追加のポリヌクレオチドカセットは、ＷＯ２０１８／１７０４７３に開示されており、標的細胞におけるトランスジーンの発現を増強させるためのポリヌクレオチドカセットに関連するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、標的細胞、例えば網膜細胞の感染力の増加を有するバリアントカプシドタンパク質を含み、網膜細胞への形質導入を増加させるために、または個体における網膜細胞への遺伝子送達の標的化を増加させるために使用される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶカプシドタンパク質のカプシドタンパク質ＧＨループ／ループＩＶにアミノ酸改変を含む。一部の実施形態では、改変部位は、ＡＡＶカプシドタンパク質のＧＨループ／ループＩＶの溶媒アクセス可能部分である。ＡＡＶカプシドのＧＨループ／ループＩＶの説明に関しては、例えばvan Vliet et al. (2006) Mol. Ther. 14:809；Padron et al. (2005) J. Virol. 79:5047；およびShen et al. (2007) Mol. Ther. 15:1955を参照されたい。７ｍ８バリアントを含むいくつかのＡＡＶカプシドバリアントが公知である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、対応する親のＡＡＶカプシドタンパク質と比較してカプシドタンパク質のＧＨループに５アミノ酸～１１アミノ酸、例えば７アミノ酸配列の挿入を含むバリアントＡＡＶカプシドタンパク質を含み、バリアントカプシドタンパク質は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子による網膜細胞の感染力と比較すると、網膜細胞の感染力の増加を付与する。一部の実施形態では、以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、およびＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のうちのいずれか１つがカプシドタンパク質のＧＨループに挿入され得る。一部の実施形態では、配列番号１～１２および１４～２１に記載のアミノ酸配列のいずれか１つが、ｒＡＡＶにおけるＶＰ１カプシドタンパク質の溶媒に露出したＧＨループに挿入される。例えばＩＶＴ注射後の網膜細胞への目的の核酸の形質導入を容易にするために、カプシドタンパク質のＧＨループに挿入することができるアミノ酸配列に関する追加の詳細は、ＷＯ２０１２１４５６０１、ＵＳ９５８７２８２、ＵＳ１０２０２６５７、およびＵＳ１０２１４７８５に提供され、カプシドタンパク質のＧＨループに挿入することができるアミノ酸配列に関連するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、以下の位置：ＡＡＶ２カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間；ＡＡＶ１カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間；ＡＡＶ５カプシドタンパク質のアミノ酸５７５と５７６の間；ＡＡＶ６カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間；ＡＡＶ７カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間；ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸５９０と５９１の間；ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸５８８と５８９の間；またはＡＡＶ１０カプシドタンパク質のアミノ酸５８９と５９０の間に挿入された以下のアミノ酸配列：ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）；ＬＡＮＥＴＩＴＲＰＡ（配列番号２）、ＬＡＫＡＧＱＡＮＮＡ（配列番号３）、ＬＡＫＤＰＫＴＴＮＡ（配列番号４）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号５）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号６）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号７）、ＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号８）、ＬＡＫＤＴＤＴＴＲＡ（配列番号９）、ＬＡＲＡＧＧＳＶＧＡ（配列番号１０）、ＬＡＡＶＤＴＴＫＦＡ（配列番号１１）、およびＬＡＳＴＧＫＶＰＮＡ（配列番号１２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）、ＮＥＴＩＴＲＰ（配列番号１５）、ＫＡＧＱＡＮＮ（配列番号１６）、ＫＤＰＫＴＴＮ（配列番号１７）、ＫＤＴＤＴＴＲ（配列番号１８）、ＲＡＧＧＳＶＧ（配列番号１９）、ＡＶＤＴＴＫＦ（配列番号２０）、およびＳＴＧＫＶＰＮ（配列番号２１）のうちのいずれか１つを含むＡＡＶカプシドタンパク質、例えばＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２ ＶＰ１タンパク質のＧＨループ内、ＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２由来の７ｍ８バリアントカプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３８のアミノ酸配列または配列番号３８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＨループを含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３８と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のいずれかの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＨループを含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む。
FSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDI
RDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDE
EKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNLAL
GETTRPARQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLK
HPPPQILIKN（配列番号３８）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２由来の７ｍ８バリアントカプシドタンパク質を含む。ＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むＡＡＶ２由来の７ｍ８バリアントカプシドタンパク質の配列を以下に提示する：
MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNLALGETTRPARQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL（配列番号３７）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むカプシドタンパク質ＶＰ１であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むカプシドタンパク質ＶＰ２であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ２を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むカプシドタンパク質ＶＰ３であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ３を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３であって、その各々がカプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含み、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むカプシドタンパク質ＶＰ１であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むカプシドタンパク質ＶＰ２であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ２を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含むカプシドタンパク質ＶＰ３であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ３を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３であって、その各々がカプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶウイルスを生成するために使用される組換えウイルスおよび／またはプラスミドは、他の転写または調節エレメント、例えばポリＡ（ポリアデニル化）配列、非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、または終止配列を含む。一部の実施形態では、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、あるいは２つもしくはそれより多くのタンパク質の同時発現を可能にするか、または多重遺伝子もしくは多シストロン性ｍＲＮＡを作製する類似のエレメントを使用して、１つより多くの遺伝子が、ベクターまたはプラスミドから発現される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶおよび／またはｒＡＡＶを生成するために使用されるプラスミドは、以下の核酸エレメント：第１のＩＴＲ配列；プロモーター配列；イントロン配列；第１のＵＴＲ配列；抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする異種核酸；第２のＵＴＲ配列；ポリＡ配列；および第２のＩＴＲ配列のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、リンカー配列（複数可）が核酸エレメントの２つまたはそれより多くの間に挿入される。一部の実施形態では、治療ポリペプチドをコードする異種核酸は、例えば、アフリベルセプト（またはその機能的断片もしくは機能的バリアント）をコードする。
一部の実施形態では、ベクターは、標的化ベクター、特に特定の細胞、例えば網膜細胞（例えば、光受容器、網膜神経節細胞、ミュラー細胞、双極細胞、アマクリン細胞、水平細胞、または網膜色素上皮細胞）の高い感染力を示す標的化ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）である。本開示において使用するためのウイルスベクターは、個体において低い毒性および／または低い免疫原性を示し、個体、例えばヒトにおいて抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）の治療有効量を発現するベクターを含み得る。当技術分野で公知の任意の適した方法を、例えば本明細書の他所で記載される医薬組成物を調製するための組換えウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）の生化学的精製に使用することができる。組換えＡＡＶウイルスは、細胞から直接または細胞を含む培養培地から採取することができる。ウイルスは、様々な生化学的手段、例えばゲル濾過、濾過、クロマトグラフィー、アフィニティ精製、密度勾配超遠心、またはサイズ排除法を使用して精製することができる。一部の実施形態では、ウイルスは凍結乾燥される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、７ｍ８バリアントカプシドタンパク質、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８、および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト、またはその機能的断片もしく機能的バリアント）をコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子（例えば、７ｍ８バリアント）は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％のいずれかの網膜細胞感染力の増加を有する。一部の実施形態では、網膜細胞の感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、５％～１００％の間、５％～９５％の間、５％～９０％の間、５％～８５％の間、５％～８０％の間、５％～７５％の間、５％～７０％の間、５％～６５％の間、５％～６０％の間、５％～５５％の間、５％～５０％の間、５％～４５％の間、５％～４０％の間、５％～３５％の間、５％～３０％の間、５％～２５％の間、５％～２０％の間、５％～１５％の間、または５％～１０％の間のいずれかの増加である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８の網膜細胞感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１倍、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、または少なくとも２倍のいずれかである。一部の実施形態では、感染力の増加は、対応する親ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍のいずれかである。一部の実施形態では、感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも３０倍、少なくとも３５倍、少なくとも４０倍、少なくとも４５倍、少なくとも５０倍、少なくとも５５倍、少なくとも６０倍、少なくとも６５倍、少なくとも７０倍、少なくとも７５倍、少なくとも８０倍、少なくとも８５倍、少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍のいずれかである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８の網膜細胞感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、１０倍～１００倍の間、１０倍～９５倍の間、１０倍～９０倍の間、１０倍～８５倍の間、１０倍～８０倍の間、１０倍～７５倍の間、１０倍～７０倍の間、１０倍～６５倍の間、１０倍～６０倍の間、１０倍～５５倍の間、１０倍～５０倍の間、１０倍～４５倍の間、１０倍～４０倍の間、１０倍～３５倍の間、１０倍～３０倍の間、１０倍～２５倍の間、１０倍～２０倍の間、または１０倍～１５倍の間である。
一部の実施形態では、網膜細胞感染力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、２倍～２０倍の間、２倍～１９倍の間、２倍～１８倍の間、２倍～１７倍の間、２倍～１６倍の間、２倍～１５倍の間、２倍～１４倍の間、２倍～１３倍の間、２倍～１２倍の間、２倍～１１倍の間、２倍～１０倍の間、２倍～９倍の間、２倍～８倍の間、２倍～７倍の間、２倍～６倍の間、２倍～５倍の間、２倍～４倍の間、または２倍～３倍の間である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるカプシドタンパク質のアミノ酸改変は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子が対象の眼の内境界膜（ＩＬＭ）を通過する能力と比較して、個体、例えばヒトの眼のＩＬＭを通過する能力の増加を付与し得る。一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％のいずれかの増加である。一部の実施形態では、ＩＬＭを通過する能力の増加は、親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質と比較して、５％～１００％の間、５％～９５％の間、５％～９０％の間、５％～８５％の間、５％～８０％の間、５％～７５％の間、５％～７０％の間、５％～６５％の間、５％～６０％の間、５％～５５％の間、５％～５０％の間、５％～４５％の間、５％～４０％の間、５％～３５％の間、５％～３０％の間、５％～２５％の間、５％～２０％の間、５％～１５％の間、または５％～１０％の間の増加である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親のＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１倍、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、または少なくとも２倍のいずれかである。一部の実施形態では、ＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親のＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍のいずれかである。一部の実施形態では、ＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも３０倍、少なくとも３５倍、少なくとも４０倍、少なくとも４５倍、少なくとも５０倍、少なくとも５５倍、少なくとも６０倍、少なくとも６５倍、少なくとも７０倍、少なくとも７５倍、少なくとも８０倍、少なくとも８５倍、少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍のいずれかである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、１０倍～１００倍の間、１０倍～９５倍の間、１０倍～９０倍の間、１０倍～８５倍の間、１０倍～８０倍の間、１０倍～７５倍の間、１０倍～７０倍の間、１０倍～６５倍の間、１０倍～６０倍の間、１０倍～５５倍の間、１０倍～５０倍の間、１０倍～４５倍の間、１０倍～４０倍の間、１０倍～３５倍の間、１０倍～３０倍の間、１０倍～２５倍の間、１０倍～２０倍の間、または１０倍～１５倍の間である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶバリアント、例えばｒＡＡＶ２．７ｍ８がＩＬＭを通過する能力の増加は、対応する親または非改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶ粒子と比較して、２倍～２０倍の間、２倍～１９倍の間、２倍～１８倍の間、２倍～１７倍の間、２倍～１６倍の間、２倍～１５倍の間、２倍～１４倍の間、２倍～１３倍の間、２倍～１２倍の間、２倍～１１倍の間、２倍～１０倍の間、２倍～９倍の間、２倍～８倍の間、２倍～７倍の間、２倍～６倍の間、２倍～５倍の間、２倍～４倍の間、または２倍～３倍の間である。
一部の実施形態では、アフリベルセプトをコードする核酸を含むｒＡＡＶ．７ｍ８を、遺伝子治療のために使用する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２またはｒＡＡＶ２を使用して、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を、対象の眼または網膜細胞に硝子体内または網膜下注射を介して送達する。一部の実施形態では、ＡＡＶ２またはｒＡＡＶ２を使用して、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を対象の眼または網膜細胞に硝子体内注射を介して送達する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ２．７ｍ８を使用して、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）の核酸配列を、対象の網膜細胞に送達する。一部の実施形態では、異種核酸（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤をコードする核酸）は、標的細胞ゲノム（例えば、網膜細胞ゲノム）に組み込まれ、標的細胞において例えば、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）の長期間の発現をもたらす。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、異種核酸（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤をコードする核酸）を含むプラスミドまたは他の染色体外遺伝子エレメントを、標的細胞（例えば、網膜細胞）に送達する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。配列番号３５の配列を以下に提供する：
SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号３５）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号３６の核酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、または少なくとも約１００％のいずれかの配列相同性を有する核酸であって、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。配列番号３６の配列を図５に提供する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトの核酸配列（例えば、配列番号３６）と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、または少なくとも約１００％のいずれかの配列相同性を有する核酸であって、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、そのアミノ酸配列に由来する。一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、対象におけるその発現を改善するためにコドン最適化されている。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４０の核酸配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、または１００％の配列相同性のいずれかを有する核酸を含み、核酸は、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４０の核酸配列を含む核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４０の核酸配列を含む核酸を含み、核酸は、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する。
atggtgtcatactgggatactggagtcttgctttgtgccctgctgtcctgcctcctcctgactggctccagctcgggctcagataccggtcgccccttcgtggagatgtactccgagatcccggaaattatccacatgactgaggggcgcgaacttgtgatcccctgccgggtcaccagcccgaacattactgtgactttgaagaagttccccctggacaccctgattccggatgggaagagaattatctgggattcacggaagggattcatcatcagcaacgcgacctacaaggaaattggcctcctcacttgcgaagccactgtgaacggacacttgtacaagaccaactacctgacccaccgccagaccaacaccatcatcgacgtcgtcctgtccccttcgcacgggatcgagctctcggtgggagagaagttggtgcttaactgcaccgcccggacggaactgaatgtgggaatcgacttcaactgggaatacccgtccagcaagcatcagcataagaagctggtgaaccgggacctcaagactcagtccggcagcgaaatgaagaagttcctgtcgaccctcactattgacggagtgaccagatccgaccagggcctctacacttgcgccgcttccagcggactcatgaccaagaagaacagcactttcgtgagggtgcatgagaaggacaagacccacacgtgtccgccgtgcccagccccagagctgctgggaggcccttccgtgttcctgtttccgcccaagccaaaggat
accctgatgatctcaaggacccctgaggtcacatgcgtcgtggtggatgtgtcgcacgaggaccctgaagtcaaattcaattggtatgtggacggagtggaagtccacaacgcgaaaaccaagccgagagaagaacagtacaattccacctaccgggtggtgtcggtgctgactgtgctgcaccaggactggctcaacggaaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggctctgcccgcacctattgaaaagaccatctccaaggccaagggtcaacctcgcgagcctcaggtgtacactctgcctccaagccgggacgaactgactaagaaccaagtctctctgacctgtttggtgaagggcttctacccgtcagacatcgcagtggagtgggagtcaaacggtcagccggagaacaactacaaaacaaccccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctgtactccaagcttaccgtggataagagccgctggcaacagggcaacgtgttttcctgctccgtcatgcacgaagccctgcacaaccattatacccagaagtccctgtcgctgtcccccgggaaatag（配列番号４０）
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を含む。
MVSYWDTGVLLCALLSCLLLTGSSSGSDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（配列番号４１）
一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、霊長類またはヒト対象における発現のためにコドン最適化されている。アフリベルセプトアミノ酸配列に対応する合成遺伝子の構築は、文献、例えばKanda A, Noda K, Saito W, Ishida S. Aflibercept Traps Galectin-1, an Angiogenic Factor Associated with Diabetic Retinopathy. Scientific Reports 5:17946 (2015)（「ＶＥＧＦ－ＴｒａｐＲ１Ｒ２（アフリベルセプトに対応する）ｃＤＮＡが、ＩＤＴ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ、ＩＡ）によって合成遺伝子として生成された」ことを記載する）に記載されている。アフリベルセプトの利用可能なアミノ酸配列を考慮すると、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、本明細書に記載される遺伝子治療またはｒＡＡＶにおいて使用するためのアフリベルセプトのｃＤＮＡを生成することができる。
コドン最適化は、当技術分野で公知の任意の方法によって達成することができる。コドン最適化は、目的の標的または宿主細胞、例えばヒト網膜細胞における遺伝子の発現を増強するために、ネイティブアミノ酸配列を維持しながら、ネイティブ配列の少なくとも１つのコドン（例えば、約１個もしくはそれより多く、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、１００個、またはそれより多くのコドン）を宿主細胞においてより頻繁に使用されるまたは最も頻繁に使用されるコドンと交換することによって、核酸配列を改変するプロセスを指す。例えば、GenScript Codon Usage Frequency Table Tool at www(dot)genscript(dot)com/tools/codon-frequency-table；Codon Usage Database at www(dot)kazusa(dot)or(dot)jp/codon/；およびNakamura, Y., et al. "Codon usage tabulated from the international DNA sequence databases: status for the year 2000" Nucl. Acids Res. 28:292 (2000)を含むコドン使用表が容易に入手可能である。
相同性は、機能的断片、挿入、欠失、置換を含む配列、偽断片、偽遺伝子、スプライスバリアント、または人為的に最適化した配列を含むがこれらに限定されない２つの配列間のアライメントの残基のパーセント保存を指す。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、アフリベルセプトをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。
本明細書で使用される場合、「アフリベルセプト」は、上記で同定されるアフリベルセプトアミノ酸配列（配列番号３５）と少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高く、または１００％のいずれかの相同性を有するポリペプチドまたはタンパク質配列またはその機能的断片もしくはバリアントもしくは突然変異体を指す。相同性は、機能的断片、挿入、欠失、置換を含む配列、偽断片、偽遺伝子、スプライスバリアント、または人為的に最適化した配列を含むがこれらに限定されない２つの配列間のアライメントの残基のパーセント保存を指す。
一部の実施形態では、アフリベルセプトのアミノ酸配列は、配列番号３５のアフリベルセプトアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれか、相同である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるアフリベルセプトをコードする核酸配列は、上記で同定されたアフリベルセプトアミノ酸配列の対応するｃＤＮＡ配列と比較した場合、アフリベルセプトの核酸配列（例えば、配列番号３６）との間で少なくとも７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれかの配列相同性を示す。一部の実施形態では、アフリベルセプトは、アフリベルセプトと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれか、空間的に（例えば、その二次構造、三次構造、および四次構造または立体配座に関して）相同である。一部の実施形態では、アフリベルセプトは、標準治療で使用されるアフリベルセプトと多くて８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のいずれか、空間的に（例えば、二次構造、三次構造、および四次構造または立体配座）相同である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶに基づく遺伝子治療に含まれるアフリベルセプト遺伝子産物、またはアフリベルセプトトランスジーンは、本明細書に開示されるカプシドバリアント（例えば、７ｍ８バリアント）を含み、配列番号３５の上記のアミノ酸配列と、またはアフリベルセプトの対応するｃＤＮＡ配列（例えば、配列番号３６と比較して遺伝子治療に使用されるアフリベルセプト配列のｃＤＮＡ）との間で、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％のいずれかの相同性を有するタンパク質、融合タンパク質、またはポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法、組成物は、アフリベルセプトの機能的断片、またはそのバリアントもしくは突然変異体を含む。一部の実施形態では、アフリベルセプトの核酸配列は、ｉｎ ｖｉｖｏでのその活性、発現、安定性、および／または溶解度を増強するように改変されるかまたはコドン最適化される。
アフリベルセプトは、グリコシル化され得る１１５ｋＤａの融合タンパク質である。アフリベルセプトは、ヒトＶＥＧＦＲ－１およびＶＥＧＦＲ－２の細胞外ＶＥＧＦ受容体配列に融合されたＩｇＧ骨格を含み、その天然のまたは内因性の受容体より高い親和性でＶＥＧＦ－Ａに結合することによって可溶性のデコイ受容体として機能する。例えば、Stewart MW. Aflibercept (VEGF Trap-eye): the newest anti-VEGF drug. Br. J. Ophthalmol. 2012 Sep;96(9):1157-8を参照されたい。アフリベルセプトのＶＥＧＦに対する高い親和性は、ネイティブまたは内因性のＶＥＧＦ受容体のその後の結合および活性化を妨害または破壊する。ＶＥＧＦ活性の低減は、血管形成および血管透過性の減少をもたらし得る。アフリベルセプトによる胎盤増殖因子ＰＩＧＦおよびＶＥＧＦ－Ｂの阻害はまた、異常な（例えば、過剰な）血管形成および／または血管新生によって特徴付けられる眼の疾患または障害の処置にも寄与し得る。ＰＩＧＦは、ＰＩＧＦの上昇レベルに関連し得る、血管形成および滲出性ＡＭＤなどのある特定の眼の疾患または障害に関連している。ＶＥＧＦ－Ｂの過剰発現は、血液－網膜関門の破壊および網膜血管形成に関連し得る。このように、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、およびＰＩＧＦの阻害は全て、アフリベルセプトの有効性に寄与し得る。
標的細胞にトランスジーンを送達するためのベクターの調製方法
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して製造される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞におけるバキュロウイルス発現ベクター系を使用して製造される。Ｓｆ９細胞は、バキュロウイルスを使用する組換えタンパク質産生のために一般的に使用される昆虫細胞培養細胞系である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造され、第１のバキュロウイルスは、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、第２のバキュロウイルスは抗ＶＥＧＦ剤をコードする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造され、第１のバキュロウイルスは、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、第２のバキュロウイルスはアフリベルセプト（例えば、ヒトアフリベルセプト）ｃＤＮＡ発現カセットをコードする。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｓｆ９細胞において２つのバキュロウイルスを使用して製造され、第１のバキュロウイルスは、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、第２のバキュロウイルスは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはアフリベルセプトである。
用量
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与される。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼または左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼である。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、個体の１つの眼は右眼であり、反対側の眼は左眼である。一部の実施形態では、個体の１つの眼は左眼であり、反対側の眼は右眼である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間（例えば、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、またはそれより長い期間）後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％のいずれか、またはそれより大きい、それより高い）。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約１週間、最大約２週間、最大約３週間、または最大約４週間後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間（例えば、約０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日）後である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間（例えば、約０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日）後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とほぼ同じであるか（例えば、１％未満高いもしくは低い、５％未満高いもしくは低い、１０％未満高いもしくは低い、または２０％未満高いもしくは低い）、または低い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低い）。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とほぼ同じである（例えば、１％未満高いもしくは低い、５％未満高いもしくは低い、１０％未満高いもしくは低い、または２０％未満高いもしくは低い）。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の反対側の眼に投与するステップは、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を１つの眼に投与するステップの最大約２週間後であり、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より低い（例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低い）。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１×１０１０～約２×１０１０ｖｇ、約２×１０１０～約３×１０１０ｖｇの間、約３×１０１０～約４×１０１０ｖｇの間、約４×１０１０～約５×１０１０ｖｇの間、約５×１０１０～約６×１０１０ｖｇの間、約６×１０１０～約７×１０１０ｖｇの間、約７×１０１０～約８×１０１０ｖｇの間、約８×１０１０～約９×１０１０ｖｇの間、約９×１０１０～約１０×１０１０ｖｇの間、約１×１０１１～約２×１０１１ｖｇの間、約２×１０１１～約３×１０１１ｖｇの間、約３×１０１１～約４×１０１１ｖｇの間、約４×１０１１～約５×１０１１ｖｇの間、または約５×１０１１～約６×１０１１ｖｇの間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）～約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ～約２×１０１１ｖｇ、約７×１０１０ｖｇ～約２×１０１１ｖｇ、約８×１０１０ｖｇ～約２×１０１１ｖｇ、約９×１０１０ｖｇ～約２×１０１１ｖｇ、約１０×１０１０ｖｇ～約２×１０１１ｖｇ、または約１×１０１１ｖｇ～約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ～約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ～約７×１０１０ｖｇ、約７×１０１０ｖｇ～約８×１０１０ｖｇ、約８×１０１０ｖｇ～約９×１０１０ｖｇ、約９×１０１０ｖｇ～約１０×１０１０ｖｇ、約１０×１０１０ｖｇ～約１×１０１１ｖｇ、または約１×１０１１ｖｇ～約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ、約７×１０１０ｖｇ、約８×１０１０ｖｇ、約９×１０１０ｖｇ、約１０×１０１０ｖｇ、約１×１０１１ｖｇ、または約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇまたは約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、約６×１０１０ｖｇ、約２×１０１１ｖｇ、または約６×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約２×１０１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０１１ｖｇである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１×１０１０～約２×１０１０ｖｇ／眼、約２×１０１０～約３×１０１０ｖｇ／眼の間、約３×１０１０～約４×１０１０ｖｇ／眼の間、約４×１０１０～約５×１０１０ｖｇ／眼の間、約５×１０１０～約６×１０１０ｖｇ／眼の間、約６×１０１０～約７×１０１０ｖｇ／眼の間、約７×１０１０～約８×１０１０ｖｇ／眼の間、約８×１０１０～約９×１０１０ｖｇ／眼の間、約９×１０１０～約１０×１０１０ｖｇ／眼の間、約１×１０１１～約２×１０１１ｖｇ／眼の間、約２×１０１１～約３×１０１１ｖｇ／眼の間、約３×１０１１～約４×１０１１ｖｇ／眼の間、約４×１０１１～約５×１０１１ｖｇ／眼の間、または約５×１０１１～約６×１０１１ｖｇ／眼の間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約７×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約８×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約９×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約１０×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、または約１×１０１１ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約７×１０１０ｖｇ／眼、約７×１０１０ｖｇ／眼～約８×１０１０ｖｇ／眼、約８×１０１０ｖｇ／眼～約９×１０１０ｖｇ／眼、約９×１０１０ｖｇ／眼～約１０×１０１０ｖｇ／眼、約１０×１０１０ｖｇ／眼～約１×１０１１ｖｇ／眼、または約１×１０１１ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼、約７×１０１０ｖｇ／眼、約８×１０１０ｖｇ／眼、約９×１０１０ｖｇ／眼、約１０×１０１０ｖｇ／眼、約１×１０１１ｖｇ／眼、または約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼または約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、約６×１０１０ｖｇ／眼、約２×１０１１ｖｇ／眼、または約６×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６×１０１１ｖｇ／眼である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、Ｅは、底１０の指数の略記であり、ｘＥｙは、ｘに、底１０の累乗／羃指数ｙ乗を掛けたものを指す。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１Ｅ１０～約２Ｅ１０ｖｇ、約２Ｅ１０～約３Ｅ１０ｖｇの間、約３Ｅ１０～約４Ｅ１０ｖｇの間、約４Ｅ１０～約５Ｅ１０ｖｇの間、約５Ｅ１０～約６Ｅ１０ｖｇの間、約６Ｅ１０～約７Ｅ１０ｖｇの間、約７Ｅ１０～約８Ｅ１０ｖｇの間、約８Ｅ１０～約９Ｅ１０ｖｇの間、約９Ｅ１０～約１０Ｅ１０ｖｇの間、約１Ｅ１１～約２Ｅ１１ｖｇの間、約２Ｅ１１～約３Ｅ１１ｖｇの間、約３Ｅ１１～約４Ｅ１１ｖｇの間、約４Ｅ１１～約５Ｅ１１ｖｇの間、または約５Ｅ１１～約６Ｅ１１ｖｇの間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ベクターゲノム（ｖｇ）～約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇ、約７Ｅ１０ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇ、約８Ｅ１０ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇ、約９Ｅ１０ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇ、約１０Ｅ１０ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇ、または約１Ｅ１１ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ～約７Ｅ１０ｖｇ、約７Ｅ１０ｖｇ～約８Ｅ１０ｖｇ、約８Ｅ１０ｖｇ～約９Ｅ１０ｖｇ、約９Ｅ１０ｖｇ～約１０Ｅ１０ｖｇ、約１０Ｅ１０ｖｇ～約１Ｅ１１ｖｇ、または約１Ｅ１１ｖｇ～約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ、約７Ｅ１０ｖｇ、約８Ｅ１０ｖｇ、約９Ｅ１０ｖｇ、約１０Ｅ１０ｖｇ、約１Ｅ１１ｖｇ、または約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇまたは約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は、約６Ｅ１０ｖｇ、約２Ｅ１１ｖｇ、または約６Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６Ｅ１０ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約２Ｅ１１ｖｇである。一部の実施形態では、単位用量は約６Ｅ１１ｖｇである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１Ｅ１０～約２Ｅ１０ｖｇ／眼、約２Ｅ１０～約３Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約３Ｅ１０～約４Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約４Ｅ１０～約５Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約５Ｅ１０～約６Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約６Ｅ１０～約７Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約７Ｅ１０～約８Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約８Ｅ１０～約９Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約９Ｅ１０～約１０Ｅ１０ｖｇ／眼の間、約１Ｅ１１～約２Ｅ１１ｖｇ／眼の間、約２Ｅ１１～約３Ｅ１１ｖｇ／眼の間、約３Ｅ１１～約４Ｅ１１ｖｇ／眼の間、約４Ｅ１１～約５Ｅ１１ｖｇ／眼の間、または約５Ｅ１１～約６Ｅ１１ｖｇ／眼の間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼、約７Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼、約８Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼、約９Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼、約１０Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼、または約１Ｅ１１ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼～約７Ｅ１０ｖｇ／眼、約７Ｅ１０ｖｇ／眼～約８Ｅ１０ｖｇ／眼、約８Ｅ１０ｖｇ／眼～約９Ｅ１０ｖｇ／眼、約９Ｅ１０ｖｇ／眼～約１０Ｅ１０ｖｇ／眼、約１０Ｅ１０ｖｇ／眼～約１Ｅ１１ｖｇ／眼、または約１Ｅ１１ｖｇ／眼～約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼、約７Ｅ１０ｖｇ／眼、約８Ｅ１０ｖｇ／眼、約９Ｅ１０ｖｇ／眼、約１０Ｅ１０ｖｇ／眼、約１Ｅ１１ｖｇ／眼、または約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼または約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６Ｅ１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は、約６Ｅ１０ｖｇ／眼、約２Ｅ１１ｖｇ／眼、または約６Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６Ｅ１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約２Ｅ１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、単位用量は約６Ｅ１１ｖｇ／眼である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｍｌまたはそれより高いμｇ／ｍｌのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、硝子体液中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｍｌまたはそれより高いμｇ／ｍｌのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。
一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中で、少なくとも約０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０μｇ／ｍｌまたはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、房水中で少なくとも約０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０μｇ／ｍｌまたはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中で少なくとも約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇ、またはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、網膜中で少なくとも約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇ、またはそれより高い、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中で治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇまたはそれより高いμｇ／ｇのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含む治療タンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤）の濃度を達成するために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中でアフリベルセプトの発現を引き起こすために十分な単位用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、脈絡膜中で約３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０μｇ／ｇ、またはそれより高いμｇ／ｇのいずれか１つの、これらの値の間の任意の範囲を含むアフリベルセプトの濃度を達成するために十分な単位用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、網膜厚は、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の網膜厚と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれかより大きい網膜厚の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、網膜厚（例えば、ＣＳＴまたはＣＲＴ）は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の黄斑体積と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、または約６５％のいずれかより大きい黄斑体積の減少を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、黄斑体積は、ＯＣＴまたはＳＤ－ＯＣＴによって決定される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の視力と比較して約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより大きい％のいずれかより大きい視力の改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、視力は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較してＢＣＶＡの改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＥＴＤＲＳスコアとして表記され、これは正確に読んだ文字数に対応する（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して、少なくとも１５ＥＴＤＲＳ文字（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）（例えば、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、または約７０文字）のＢＣＶＡの改善を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量が、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＢＣＶＡと比較して個体が１５ＥＴＤＲＳ文字未満（Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）（例えば、１５文字もしくはそれ未満、１４文字もしくはそれ未満、１３文字もしくはそれ未満、１２文字もしくはそれ未満、１１文字もしくはそれ未満、１０文字もしくはそれ未満、９文字もしくはそれ未満、８文字もしくはそれ未満、７文字もしくはそれ未満、６文字もしくはそれ未満、５文字もしくはそれ未満、４文字もしくはそれ未満、３文字もしくはそれ未満、２文字もしくはそれ未満、１文字、または０文字）の減少を有する、ＢＣＶＡの維持を引き起こすために十分である場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が視覚の維持を有すると決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が視覚の改善を有すると決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが減少する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価したＣＳＴまたはＣＲＴが維持される場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に黄斑体積が減少する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に黄斑体積が維持される場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ））および黄斑体積が減少する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ））および黄斑体積が維持される場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体がｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与後に、約４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、またはそれより長い期間毎のいずれかに１回未満のレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）を必要とする場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に個体が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、少なくとも２０週間、少なくとも３０週間、少なくとも４０週間、少なくとも５０週間、少なくとも６０週間、少なくとも７０週間、少なくとも８０週間、少なくとも９０週間、少なくとも１００週間、少なくとも１１０週間、またはそれより長い期間のうちの、少なくともおよそいずれかの期間、いかなるレスキュー治療処置も（例えば、アフリベルセプト注射）必要としない場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が網膜液の低減を有することが決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の網膜液のレベルと比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が網膜液の維持を有することが決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前のＩＲＦおよび／またはＳＲＦのレベルと比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が１つの眼および／または反対側の眼においてＩＲＦおよび／またはＳＲＦの低減を有することが決定される場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前の色素上皮剥離（ＰＥＤ）と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体がＰＥＤの消散を有することが決定される場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が収縮する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれかより大きく収縮する場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が成長しない場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に存在するＣＮＶ病変と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＣＮＶ病変が、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、または２０％のいずれかより大きく成長しない場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の解剖学的特色と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が、１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色の改善を有することが決定される場合、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の解剖学的特色と比較してｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、個体が、１つの眼および／または反対側の眼の解剖学的特色の安定化および／または維持を有することが決定される場合、治療有効用量である。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与が、眼内血管新生疾患または障害の少なくとも１つの症状を低減する、停止する、または防止する場合、治療的に有効である。異常な（例えば、過剰な）血管形成によって特徴付けられる眼内血管新生疾患または障害の場合、そのような症状としては、例えば視覚障害（例えば、色覚障害、かすみ目、中心視力の悪化）および視覚喪失を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与が、眼内血管新生疾患の１つまたは複数の臨床特色の維持、部分消散、または完全消散をもたらす場合、治療有効用量である。例えば、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定した場合に、個体の１つの眼および／または反対側の眼への用量の投与が、眼内血管新生疾患の完全消散、部分消散、または維持をもたらす場合、治療的に有効である。一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への用量の投与が、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）（例えば、ＥＴＤＲＳスコアに基づく；Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047）、ＳＤ－ＯＣＴによって決定される中心網膜厚、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の１つの眼および／または反対側の眼への投与への投与後に個体が必要としたレスキュー治療処置（例えば、アフリベルセプト注射）の回数、網膜内液（ＩＲＦ）および／または網膜下液（ＳＲＦ）の存在、色素上皮剥離（ＰＥＤ）の消散、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）病変の成長、当技術分野で公知の任意の方法（例えば、ＳＤ－ＯＣＴ、ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影等）に基づく解剖学的特色によって評価した場合に、眼内血管新生疾患の完全消散、部分消散、または維持をもたらす場合、治療的に有効である。一部の実施形態では、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への用量の投与が、眼科検査、眼内圧（例えば、ゴールドマン圧平眼圧計、またはＴｏｎｏ－ｐｅｎを使用する）、倒像眼底検査、１つの眼および／または反対側の眼ならびに眼付属器の検査、眼瞼および／または瞳孔の応答性、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、求心性瞳孔障害、細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、光彩、および前房の検査を含む）、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後側セグメントの異常、ＳＤ－ＯＣＴ、フルオレセイン血管造影、デジタルカラー眼底撮影（網膜、視神経乳頭、および／または黄斑の画像を含む）、房水採取、硝子体液採取、ＯＣＴ－血管造影（ＯＣＴ－Ａ）、屈折および視力（ＢＣＶＡ）によって評価した場合に、眼内血管新生疾患の完全消散、部分消散、または維持をもたらす場合、治療的に有効である。
一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と同じである。一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量とは異なる。一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高く、例えば約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより高い％のいずれかより高い。一部の実施形態では、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量より高く、例えば約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％またはそれより高い％のいずれかより高い。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ベクターゲノム数（ｖｇ）／眼（ｖｇ／眼）として表記される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１１ｖｇ／眼またはそれ未満である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約１×１０１０～約２×１０１０ｖｇ／眼、約２×１０１０～約３×１０１０ｖｇ／眼の間、約３×１０１０～約４×１０１０ｖｇ／眼の間、約４×１０１０～約５×１０１０ｖｇ／眼の間、約５×１０１０～約６×１０１０ｖｇ／眼の間、約６×１０１０～約７×１０１０ｖｇ／眼の間、約７×１０１０～約８×１０１０ｖｇ／眼の間、約８×１０１０～約９×１０１０ｖｇ／眼の間、約９×１０１０～約１０×１０１０ｖｇ／眼の間、約１×１０１１～約２×１０１１ｖｇ／眼の間、約２×１０１１～約３×１０１１ｖｇ／眼の間、約３×１０１１～約４×１０１１ｖｇ／眼の間、約４×１０１１～約５×１０１１ｖｇ／眼の間、または約５×１０１１～約６×１０１１ｖｇ／眼の間であり、ｒＡＡＶ粒子のこれらの範囲内の任意の値を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約７×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約８×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約９×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、約１０×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼、または約１×１０１１ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼～約７×１０１０ｖｇ／眼、約７×１０１０ｖｇ／眼～約８×１０１０ｖｇ／眼、約８×１０１０ｖｇ／眼～約９×１０１０ｖｇ／眼、約９×１０１０ｖｇ／眼～約１０×１０１０ｖｇ／眼、約１０×１０１０ｖｇ／眼～約１×１０１１ｖｇ／眼、または約１×１０１１ｖｇ／眼～約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼、約７×１０１０ｖｇ／眼、約８×１０１０ｖｇ／眼、約９×１０１０ｖｇ／眼、約１０×１０１０ｖｇ／眼、約１×１０１１ｖｇ／眼、または約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼または約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、ｒＡＡＶ粒子の約６×１０１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約６×１０１０ｖｇ／眼、約２×１０１１ｖｇ／眼、または約６×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０１０ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０１１ｖｇ／眼である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約６×１０１１ｖｇ／眼である。
一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、同じ時間に投与される。一部の実施形態では、個体の１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量と、個体の反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の単位用量は、異なる時間に投与される。一部の実施形態では、反対側の眼に投与された単位用量は、単位用量を１つの眼に投与した少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、またはそれより長い期間のいずれかの後に投与される。一部の実施形態では、反対側の眼に投与された単位用量は、単位用量を１つの眼に投与した少なくとも約２週間後に投与される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の１回単位用量は、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の１回単位用量は、治療有効用量である。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の１つより多くの用量（例えば、約２、３、４、５、またはそれより多くの単位用量のいずれかより多く）が、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与される。一部の実施形態では、１つの眼および／または反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の１つより多くの用量は、治療有効用量である。
一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦによる処置、例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤によるＩＶＴ注射をｒＡＡＶ粒子の投与を受ける１つの眼および／または反対側の眼に、ｒＡＡＶ粒子の単位用量（例えば、約２×１０１１ｖｇ／眼～約６×１０１１ｖｇ／眼のｒＡＡＶ粒子の単位用量）を投与する少なくとも約１週間前、例えば少なくとも約７日前に施行する。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦによる処置、例えば、アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ剤によるＩＶＴ注射を眼に約１日目に施行し、ｒＡＡＶ粒子の単位用量、例えば約２×１０１１ｖｇ／眼～約６×１０１１ｖｇ／眼のｒＡＡＶ粒子の単位用量を眼に約８日目に投与する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は約２×１０１１ｖｇ／眼または約６×１０１１ｖｇ／眼のｒＡＡＶ粒子である。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は糖尿病黄斑浮腫である。
医薬製剤
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は医薬製剤中にある。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、１つまたは複数の浸透圧またはイオン強度調整剤、１つまたは複数の緩衝剤、１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の溶媒を含む。一部の実施形態では、浸透圧またはイオン強度調整剤は塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、１つまたは複数の緩衝剤はリン酸二水素ナトリウムおよび／またはリン酸水素ナトリウムである。一部の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。一部の実施形態では、溶媒は水である。一部の実施形態では、医薬製剤は、ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、および界面活性剤を含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、約１×１０１０ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１ｍＭ～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。
一部の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子は、約１×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約１×１０１３ｖｇ／ｍｌの濃度で存在する。一部の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子は、約１×１００９ｖｇ／ｍｌ～約６×１０１４ｖｇ／ｍｌの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、医薬製剤中のｒＡＡＶ粒子は、約１×１００９ｖｇ／ｍｌ～約２×１００９ｖｇ／ｍｌ、約２×１００９ｖｇ／ｍｌ～約３×１００９、約３×１００９ｖｇ／ｍｌ～約４×１００９、約４×１００９ｖｇ／ｍｌ～約５×１００９、約５×１００９ｖｇ／ｍｌ～約６×１００９、約６×１００９ｖｇ／ｍｌ～約７×１００９、約７×１００９ｖｇ／ｍｌ～約８×１００９、約８×１００９ｖｇ／ｍｌ～約９×１００９、約９×１００９ｖｇ／ｍｌ～約１０×１００９、約１０×１００９ｖｇ／ｍｌ～約１×１０１０、約１×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約２×１０１０、約２×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約３×１０１０、約３×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約４×１０１０、約４×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約５×１０１０、約５×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約６×１０１０、約６×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約７×１０１０、約７×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約８×１０１０、約８×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約９×１０１０、約９×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０１０、約１０×１０１０ｖｇ／ｍｌ～約１×１０１１、約１×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約２×１０１１、約２×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約３×１０１１、約３×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約４×１０１１、約４×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約５×１０１１、約５×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約６×１０１１、約６×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約７×１０１１、約７×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約８×１０１１、約８×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約９×１０１１、約９×１０１１ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０１１、約１×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約２×１０１２、約２×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約３×１０１２、約３×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約４×１０１２、約４×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約５×１０１２、約５×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約６×１０１２、約６×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約７×１０１２、約７×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約８×１０１２、約８×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約９×１０１２、約９×１０１２ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０１２、約１×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約２×１０１３、約２×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約３×１０１３、約３×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約４×１０１３、約４×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約５×１０１３、約５×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約６×１０１３、約６×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約７×１０１３、約７×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約８×１０１３、約８×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約９×１０１３、約９×１０１３ｖｇ／ｍｌ～約１０×１０１３、約１×１０１４ｖｇ／ｍｌ～約２×１０１４、約２×１０１４ｖｇ／ｍｌ～約３×１０１４、約３×１０１４ｖｇ／ｍｌ～約４×１０１４、約４×１０１４ｖｇ／ｍｌ～約５×１０１４、または約５×１０１４ｖｇ／ｍｌ～約６×１０１４ｖｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。
一部の実施形態では、医薬製剤中の塩化ナトリウムは、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、医薬製剤中の塩化ナトリウムは、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、または約２００ｍＭの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、医薬製剤中の塩化ナトリウムは、約１８０ｍＭの濃度で存在する。
一部の実施形態では、リン酸二水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、リン酸二水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭのいずれかの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、リン酸二水素ナトリウムは医薬製剤中に約５ｍＭの濃度で存在する。
一部の実施形態では、リン酸水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、リン酸水素ナトリウムは医薬製剤中に約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭのいずれかの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、リン酸水素ナトリウムは医薬製剤中に約５ｍＭの濃度で存在する。
一部の実施形態では、ポロキサマー１８８は医薬製剤中に約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポロキサマー１８８は医薬製剤中に約０．０００５％（重量／体積）、約０．０００６％（重量／体積）、約０．０００７％（重量／体積）、約０．０００８％（重量／体積）、約０．０００９％（重量／体積）、約０．００１％（重量／体積）、約０．００２％（重量／体積）、約０．００３％（重量／体積）、約０．００４％（重量／体積）、または約０．００５％（重量／体積）のいずれかの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、ポロキサマー１８８は医薬製剤中に約０．００１％（重量／体積）の濃度で存在する。
一部の実施形態では、医薬製剤は約７．０～約７．５のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、塩酸および水酸化ナトリウムを使用して医薬製剤のｐＨを調整する。
一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。一部の実施形態では、医薬製剤は、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、医薬製剤は約７．３のｐＨを有する。
一部の実施形態では、医薬製剤は、個体、例えばヒト患者の１つの眼および／または反対側の眼に硝子体内（ＩＶＴ）注射によって投与して所望の治療効果または予防効果を実現するために適したものである。一部の実施形態では、医薬製剤を復元された均一な溶液として供給する。一部の実施形態では、溶液は懸濁液である。一部の実施形態では、医薬製剤を凍結懸濁液として供給し、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与する前に解凍する。一部の実施形態では、溶液は等張性である。
他の実施形態では、例えば抗ＶＥＧＦ剤（例えば、その機能的断片またはバリアント）をコードする核酸配列を含むＡＡＶ２．７ｍ８ベクターを含む医薬組成物を凍結乾燥形態で供給し、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与する前に復元する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）を含み、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプトまたはその機能的断片もしくはバリアント）をコードする凍結乾燥させた医薬組成物を、対象への投与前に緩衝剤中に復元する、溶解させる、または可溶化させるステップをさらに含む。一部の実施形態では、そのような凍結乾燥させた医薬組成物は、以下の１つまたは複数を含む：凍結保護物質、界面活性剤、塩、安定剤、またはそのいずれかの組合せ。
一部の実施形態では、医薬製剤は均一な溶液である。一部の実施形態では、均一な溶液を充填済みシリンジ中に入れて供給する。一部の実施形態では、医薬製剤を懸濁液として供給する。一部の実施形態では、懸濁液は溶液である。一部の実施形態では、懸濁液は冷蔵されている。一部の実施形態では、懸濁液は凍結している。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に（例えば、ＩＶＴ注射による）、冷蔵されている懸濁液を室温まで温め、かつ／または懸濁液を撹拌して、活性成分（複数可）が溶液中に溶解し、かつ／または一様に分布することを確実にするステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与前に（例えば、ＩＶＴ注射による）、凍結懸濁液を解凍し、室温まで温め、かつ／または懸濁液を撹拌して、活性成分（複数可）が溶液中に溶解し、かつ／または一様に分布することを確実にするステップをさらに含む。一部の実施形態では、懸濁液を対象（例えば、ＩＶＴ注射によって）への投与前に希釈する。一部の実施形態では、懸濁液を充填済みシリンジとして供給する。
一部の実施形態では、医薬製剤を凍結懸濁液として提供する。一部の実施形態では、懸濁液は、薬学的に許容される賦形剤、例えば、界面活性剤、グリセロール、非イオン界面活性剤、緩衝剤、グリコール、塩、およびそのいずれかの組合せを含む。
一部の実施形態では、懸濁液は溶液である。一部の実施形態では、懸濁液はミセルを含む。
一部の実施形態では、貯蔵安定性および取扱いの利便性のために、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプトまたはその機能的断片もしくはバリアント）をコードする核酸配列を含む医薬製剤を、凍結乾燥粉末、フリーズドライ粉末、または真空乾燥粉末として製剤化し、それを、個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与する前に生理食塩水、緩衝剤、または水を用いて復元する。かわるがわる、医薬製剤を懸濁液または均一な溶液などの水溶液として製剤化する。医薬製剤は、アフリベルセプトをコードする核酸配列を含むｒＡＡＶ粒子を含有し得る。リン酸、ＰＢＳ、もしくはトリス緩衝剤、グリコール、グリセロール、生理食塩水、界面活性剤（例えば、プルロニック（登録商標）もしくはポリソルベート）、またはそのいずれかの組合せなどの種々の賦形剤を使用して医薬製剤を安定化することができる。さらに、アルコールなどの凍結保護物質を凍結または乾燥条件下での安定剤として使用することができる。一部の実施形態では、遺伝子治療薬を懸濁液、冷蔵懸濁液、または凍結懸濁液として提供する。
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は、約２０μＬ、３０μＬ、４０μＬ、５０μＬ、６０μＬ、７０μＬ、８０μＬ、９０μＬ、１００μＬ、２００μＬ、３００μＬ、４００μＬ、５００μＬ、６００μＬ、７００μＬ、８００μＬ、９００μＬ、または１０００μＬのいずれかの体積を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は約２５０μＬの体積を有する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は、０．１～０．５ｍＬ、０．１～０．２ｍＬ、０．３～０．５ｍＬ、０．５～１．０ｍＬ、０．５～０．７ｍＬ、０．６～０．８ｍＬ、０．８～１ｍＬ、０．９～１．１ｍＬ、１．０～１．２ｍＬ、または１．０～１．５ｍＬの体積を有する。他の実施形態では、体積は、０．１ｍＬ以下、０．２ｍＬ以下、０．３ｍＬ以下、０．４ｍＬ以下、０．５ｍＬ以下、０．６ｍＬ以下、０．７ｍＬ以下、０．８ｍＬ以下、０．９ｍＬ以下、１．０ｍＬ以下、１．１ｍＬ以下、１．２ｍＬ以下、１．３ｍＬ以下、１．４ｍＬ以下、または１．５ｍＬ以下である。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液は約０．２５ｍＬの体積を有する。
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液を、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液を、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供し、ここで、バイアルは、０．１～０．５ｍＬ、０．１～０．２ｍＬ、０．２～０．３ｍＬ、０．３～０．４ｍＬ、または０．４ｍＬ～０．５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤の懸濁液を、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供し、ここで、バイアルは、約０．２５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤を、霊長類（例えば、非ヒト霊長類およびヒト対象）に硝子体内注射または網膜下注射によって投与するために設計する、工学的に操作する、または適合させる。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含むｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤を、個体の眼に硝子体内注射するために製剤化する。一部の実施形態では、医薬組成物を、約２５μＬ以下、約３０μＬ以下、約３５μＬ以下、約４０μＬ以下、約４５μＬ以下、約５０μＬ以下、約５５μＬ以下、約６０μＬ以下、約６５μＬ以下、約７０μＬ以下、約７５μＬ以下、約８０μＬ以下、約８５μＬ以下、約９０μＬ以下、約９５μＬ以下、約１００μＬ以下、約１１０μＬ以下、約１２０μＬ以下、約１３０μＬ以下、約１４０μＬ以下、約１５０μＬ以下、約１６０μＬ以下、約１７０μＬ以下、約１８０μＬ以下、約１９０μＬ以下、約２００μＬ以下、約２１０μＬ以下、約２２０μＬ以下、約２３０μＬ以下、約２４０μＬ以下、もしくは約２５０μＬ以下、または２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、もしくは２５０μＬのいずれか以下の体積の硝子体内注射を可能にする濃度に製剤化する、または復元する。一部の実施形態では、医薬製剤の単位用量は、約２５μＬ以下、約３０μＬ以下、約３５μＬ以下、約４０μＬ以下、約４５μＬ以下、約５０μＬ以下、約５５μＬ以下、約６０μＬ以下、約６５μＬ以下、約７０μＬ以下、約７５μＬ以下、約８０μＬ以下、約８５μＬ以下、約９０μＬ以下、約９５μＬ以下、約１００μＬ以下、約１１０μＬ以下、約１２０μＬ以下、約１３０μＬ以下、約１４０μＬ以下、約１５０μＬ以下、約１６０μＬ以下、約１７０μＬ以下、約１８０μＬ以下、約１９０μＬ以下、約２００μＬ以下、約２１０μＬ以下、約２２０μＬ以下、約２３０μＬ以下、約２４０μＬ以下、もしくは約２５０μＬ以下、または２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、もしくは２５０μＬのいずれか以下の体積を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、または２５０μＬのいずれかの体積で硝子体内注射することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約３０μＬまたは約１００μＬの体積で硝子体内注射することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約３０μＬの体積で硝子体内注射することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードする核酸配列を含む医薬製剤の溶液または懸濁液を約１００μＬの体積で硝子体内注射することを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）導入遺伝子の核酸配列を含むＡＡＶ２．７ｍ８粒子は、遺伝子治療薬用医薬製剤の構成成分である。一部の実施形態では、本明細書に記載の７ｍ８バリアントカプシドタンパク質を含む任意の血清型のｒＡＡＶ粒子を使用して、凍結懸濁液またはフリーズドライもしくは凍結乾燥させた製剤組成物を作出する。一部の実施形態では、遺伝子治療薬を冷蔵または凍結懸濁液として製剤化する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子はｒＡＡＶ２である。一部の実施形態では、医薬製剤の凍結乾燥または懸濁液は、７ｍ８バリアントカプシドタンパク質、および抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）をコードするＤＮＡ配列を含むｒＡＡＶ２を含む。一部の実施形態では、懸濁液は冷蔵または凍結されたものである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の個体の１つの眼および／または反対側の眼への投与は、硝子体内（ＩＶＴ）注射による。ＩＶＴ注射に関しては、ｒＡＡＶ粒子を医薬製剤の懸濁液の形で送達することができる（例えば、本明細書に記載の通り）。最初に、局所麻酔薬を眼の表面に適用し、その後、点眼用消毒溶液を適用する。器具使用を伴ってまたは伴わずに眼を開いたままに保ち、直接観察下で、ｒＡＡＶ粒子を、個体の１つの眼および／または反対側の眼の硝子体腔に、短く細い針、例えば３０ゲージの針を用いて強膜を通じて注射する。一般には、約２５μＬ～約２５０μＬ（例えば、約２５μＬ、約３０μＬ、約４０μＬ 約５０μＬ、約６０μＬ、約７０μＬ、約８０μＬ、約９０μＬ、約１００μＬ、約１１０μＬ、約１２０μＬ、約１３０μＬ、約１４０μＬ、約１５０μＬ、約１６０μＬ、約１７０μＬ、約１８０μＬ、約１９０μＬ、約２００μＬ、約２１０μＬ、約２２０μＬ、約２３０μＬ、約２４０μＬ、または約２５０μＬのいずれか）の体積のｒＡＡＶ粒子懸濁液をＩＶＴ注射によって眼に送達することができる。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約１００μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量は、約３０μＬの体積を含む。一部の実施形態では、ＩＶＴ注射を硝子体液の除去と組み合わせて実施する。一部の実施形態では、硝子体切除術を実施することができ、ｒＡＡＶ粒子懸濁液（例えば、約４ｍＬのｒＡＡＶ粒子懸濁液）を注入することによって硝子体ゲルの全体積を置き換える。硝子体切除術は適当な口径サイズ（例えば、２０ゲージ～２７ゲージ）のカニューレを使用して実施し、除去された硝子体ゲルの体積を注入用カニューレからの液、例えば、生理食塩水、等張溶液、ｒＡＡＶ粒子懸濁液の注入によって置き換える。ＩＶＴ投与は一般に忍容性が良好である。時には手順の終わりに注射部位が軽く赤くなる。圧痛が時々生じるが、大多数の患者からはいかなる痛みも報告されない。この手順後、眼帯も眼球保護帯も必要なく、活動も制限されない。時には感染防止を補助するために数日間の抗生物質点眼剤が処方される。
一部の実施形態では、医薬製剤は、異常な（例えば、過剰な）血管形成または血管新生を特徴とする眼の疾患または障害を処置するために個体（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）の１つの眼および／または反対側の眼にＩＶＴ注射によって投与される単位用量（例えば、治療有効用量）である。一部の実施形態では、医薬製剤は、本明細書の他の箇所でさらに詳細に記載されている単位用量（例えば、治療有効用量）を含む。一部の実施形態では、対象に投与されるウイルスベクター（例えば、本明細書に開示されるｒＡＡＶベクター）の単位用量（例えば、治療有効用量）の体積は、これらの値の間の任意の範囲を含め、約２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、２００μＬ、２１０μＬ、２２０μＬ、２３０μＬ、２４０μＬ、または２５０μＬのいずれか１つ以下である。対象に投与される単位用量の体積を最小化することにより、ＩＶＴ注射に付随する眼圧の変化および他の有害作用（例えば、眼圧、炎症、刺激、または疼痛の増大）が回避または軽減され得る。
眼への使用に適した医薬製剤は、滅菌水溶液または分散および滅菌注射用溶液、懸濁液、または分散を即時調製するための滅菌粉末を含む。硝子体内投与に関しては、適切な担体として、生理的食塩水、静菌水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、および／または等張化剤、例えばグリセロールが挙げられる。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、容易な注射可能性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ ｏｒ ｉｎｊｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に滅菌された流体である。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、製造および貯蔵の条件下で安定であり、細菌および真菌などの微生物の夾雑作用から保護される。一部の実施形態では、医薬組成物は、塩またはグリセロールなどの等張化剤を含み得る。一部の実施形態では、凝集を防止するために界面活性剤または安定剤を医薬組成物に添加する。
一部の実施形態では、医薬製剤は賦形剤または担体を含有する。担体は、例えば、水、生理食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそのいずれかの組合せを含有する溶媒または分散媒である。適当な流動性を、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散の場合では必要な粒子サイズを維持することによって、ならびにポリソルベート（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）、ドデシル硫酸ナトリウム（ラウリル硫酸ナトリウム）、ラウリルジメチルアミン酸化物、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、ポリエトキシル化アルコール、ポリオキシエチレンソルビタン、オクトキシノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（商標））、Ｎ，Ｎ－ジメチルドデシルアミン－Ｎ－オキシド、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ＨＴＡＢ）、ポリオキシル１０ラウリルエーテル、Ｂｒｉｊ ７２１（商標）、胆汁酸塩（デオキシコール酸ナトリウム、コール酸ナトリウム）、プルロニック（登録商標）酸（Ｆ－６８、Ｆ－１２７）、ポリオキシルヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（商標））ノニルフェノールエトキシレート（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標））、シクロデキストリン、および、塩化エチルベンゼトニウム（Ｈｙａｍｉｎｅ（商標））などの界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用の防止を種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、クレゾール、チメロサールなどによって実現することができる。多くの実施形態では、等張化剤は、医薬製剤中に、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、および／または塩化ナトリウムを含める。内部組成物の持続的な吸収を、吸収を遅延させる作用剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。一部の実施形態では、医薬担体は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート、およびスクロースを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート、ポロキサマー、またはプルロニック（登録商標）などの非イオン界面活性剤を含む。一部の実施形態では、非イオン界面活性剤の添加により、医薬組成物中の凝集が低減する。
本明細書に記載の少なくとも１つの医薬製剤を含むキットも本明細書で提供される。一部の実施形態では、キットは、医薬製剤の凍結懸濁液（例えば、バイアル中に１つの単位用量）を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に開示される凍結乾燥またはフリーズドライさせた医薬製剤（例えば、バイアル中に１つの単位用量）ならびに凍結乾燥させた医薬組成物を溶解させる、希釈する、および／または復元するための溶液を含む。一部の実施形態では、復元または希釈のための溶液を充填済みシリンジとして供給する。一部の実施形態では、キットは、ｒＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８）を含むフリーズドライまたは凍結乾燥させた医薬組成物、および医薬組成物を所望の濃度または体積に復元するための溶液を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に開示される医薬組成物を復元する際の凝集を防止するのに役立つ緩衝剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物を充填済みシリンジ中にいれて提供する。一部の実施形態では、キットは、二重チャンバーシリンジまたは容器を含み、その場合、チャンバーの一方は医薬組成物を溶解させるまたは希釈するための緩衝剤を含有する。一部の実施形態では、キットは、注射用のシリンジを含む。一部の実施形態では、復元された溶液を投与前に濾過する。一部の実施形態では、キットは、復元された医薬組成物を患者への投与前にろ過するためのフィルターまたはフィルターシリンジを含む。一部の実施形態では、キットは、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供される、本明細書に開示されるｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤の懸濁液を含む。一部の実施形態では、キットは、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供される、本明細書に開示されるｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤の懸濁液を含み、ここで、バイアルは、０．１～０．５ｍＬ、０．１～０．２ｍＬ、０．２～０．３ｍＬ、０．３～０．４ｍＬ、または０．４ｍＬ～０．５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。一部の実施形態では、キットは、すぐ使用できる止め栓（例えば、クロロブチル製の止め栓）を伴う滅菌されたすぐ使用できるバイアル（例えば、０．５ｍＬバイアル；例えばＣｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）バイアル）中に入った、密閉された（例えば、滅菌アルミニウム剥ぎ取り式シールを用いて）滅菌濾過された凍結懸濁液として提供される、開示されるｒＡＡＶ粒子を含む医薬製剤の懸濁液を含み、ここで、バイアルは、約０．２５ｍＬの体積の医薬製剤の懸濁液を含有する。一部の実施形態では、キットは、使用説明書；例えば、本明細書に開示されるｒＡＡＶ粒子を用いて眼内血管新生疾患を処置するための説明書をさらに含む。
眼内血管新生疾患
一態様では、本開示は、個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法を提供する。別の態様では、本開示は、眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減するための方法を提供する。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、滲出性ＡＭＤ、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそのいずれかの組合せである。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に続発する活動性脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）である。
一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、再発性および／または持続性ｗＡＭＤである。一部の実施形態では、眼内血管新生疾患は、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶである。一部の実施形態では、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶは総病変サイズの≧５０％を占める。一部の実施形態では、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶは総病変サイズの≧５０％を占め、フルオレセイン血管造影図（ＦＡ）での漏出、スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）での滲出液、および／またはカラー眼底撮影での網膜下出血のエビデンスが伴う。一部の実施形態では、ＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶは総病変サイズの≧５０％を占め、フルオレセイン血管造影図（ＦＡ）での漏出、スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）での滲出液、および／またはカラー眼底撮影での網膜下出血のエビデンスが伴い、かつ、病変の総寸法が１２黄斑光凝固試験ディスク面積を超えない。一部の実施形態では、本開示のｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に個体の１つの眼および／または反対側の眼により示されたＥＴＤＲＳ文字評価に基づく最高矯正視力（ＢＣＶＡ）は、７８～２５（例えば、約７８、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、または約２５のいずれか未満）であった。一部の実施形態では、本開示のｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に個体の１つの眼および／または反対側の眼により示されたＥＴＤＲＳ文字評価に基づく最高矯正視力（ＢＣＶＡ）は約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、または約１００のいずれかよりも大きいものであった。
一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に１つの眼および／または反対側の眼にポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）を有していた。
一部の実施形態では、ＥＴＤＲＳ文字評価を約０．５メートル、約１メートル、約２メートル、約３メートル、または約４メートルで行う。一部の実施形態では、ＥＴＤＲＳ文字評価を約４メートルで行う。
一部の実施形態では、個体は、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の直前約１２週間（例えば、約３カ月または約４カ月）の間に、抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による少なくとも１回の以前の処置（例えば、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回またはそれよりも多くの処置）を受けている。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の直前約１２週間（例えば、約３カ月または約４カ月）の間に、１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による２回または３回の以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による少なくとも約１回、少なくとも約５回、少なくとも約１０回、少なくとも約２０回、少なくとも約３０回、少なくとも約４０回、少なくとも約５０回、少なくとも約６０回、少なくとも約７０回、少なくとも約８０回、少なくとも約９０回、少なくとも約１００回、少なくとも約１１０回、少なくとも約１２０回、またはそれよりも多くの以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、個体は、約２週間、約３週間、４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、またはそれよりも長い、１つの眼および／または反対側の眼に対する計算された抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、および／またはアフリベルセプト）注射間隔を有していた。一部の実施形態では、個体は、約５～７週間、約４～１０週間、約４～７週間、または約４～６週間の、１つの眼および／または反対側の眼に対する算出された抗ＶＥＧＦ（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、および／またはアフリベルセプト）注射間隔を有していた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間のいずれかにわたって１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前の約７日間、約１０日間、または約１４日間にわたって１つの眼および／または反対側の眼に抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を受けていた。一部の実施形態では、以前の処置は、抗ＶＥＧＦ剤の眼内注射、網膜下注射または硝子体内注射を含む。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプトである。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤はアフリベルセプトである。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前約１２カ月の間に、１つの眼および／または反対側の眼に対して抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を１回から２０回の間（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、または２０回のいずれか）受けていた。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前約１２カ月の間に、１つの眼および／または反対側の眼に対して抗ＶＥＧＦ剤（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプト）による以前の処置を約９回または約１０回受けていた。
一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して意味のある応答を示した。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片である。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前に１つの眼および／または反対側の眼への眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を示した。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦによる処置後少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって、１つの眼および／または反対側の眼に対する最初の診断時の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧３０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦによる処置後の約７日間、約１０日間、または約１４日間のいずれかよりも長くにわたって、１つの眼および／または反対側の眼への以前の抗ＶＥＧＦによる処置の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧３０％（例えば、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。
一部の実施形態では、中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚は１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定される。中心領域網膜厚は、中心窩を中心とした直径１ｍｍの円であるＥＴＤＲＳグリッドの中心領域にわたる網膜の平均厚である。
一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与前の中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚と比較して、中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与後少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与前の中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚と比較して中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与後約７日間、約１０日間、または約１４日間にわたって、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置の投与前の中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚と比較して中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、中心領域網膜厚および／または中心窩網膜厚は１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定される。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への抗ＶＥＧＦによる処置後にＣＳＴの正常化が観察され、観察可能な血管滲出が伴わない場合、眼内血管新生疾患に対する抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。正規化とは、ＣＳＴ値がその患者のクラス（例えば、年齢、性別などに基づく）に関して正常であることを指す。
一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定して、抗ＶＥＧＦによる処置後少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、またはそれよりも長くのいずれかにわたって、抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト）の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して、中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼のＳＤ－ＯＣＴによって決定して、抗ＶＥＧＦによる処置後約７日間、約１０日間、または約１４日間にわたって、抗ＶＥＧＦによる処置の投与前の中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）と比較して中心窩網膜厚（ＣＲＴ）または中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の≧２０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％のいずれか）の減少が観察された場合、眼内血管新生疾患に対する以前の抗ＶＥＧＦによる処置（例えば、アフリベルセプト、その機能的バリアント、またはその機能的断片）に対して意味のある応答を有すると判定される。
一部の実施形態では、個体は、眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への眼内血管新生疾患に対する以前の処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、以前の抗ＶＥＧＦによる処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への以前の抗ＶＥＧＦによる処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、以前のアフリベルセプトによる処置を受けていない。一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼への以前のアフリベルセプトによる処置を受けていない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される眼の疾患または障害は、糖尿病黄斑浮腫である。糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、糖尿病における黄斑内の血管からの液の漏出に起因する網膜の腫れである。黄斑は網膜の中心部分であり、色を検出し、昼間視覚が依存する特殊化された神経終末である錐体に富む狭い領域である。黄斑浮腫が発生するにつれ、中心視野の中央またはちょうど側面にぼやけが生じる。糖尿病黄斑浮腫からの失明が数カ月の期間にわたって進行する可能性があり、はっきりと焦点を合わせることが不可能になる。ＤＭＥの一般的な症状は、霧視、飛蚊症、複視、および無処置のままでいると最終的に視覚消失である。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物を使用してＤＭＥを処置する。一部の実施形態では、ＤＭＥの処置を、屈折または視力（例えば、ＥＴＤＲＳ文字を使用したＢＣＶＡ）を測定することによって評価する。一部の実施形態では、視力を、１つの眼および／または反対側の眼を散大させる前に、約４メートルの距離から出発して測定する。一部の実施形態では、個体のｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後のＥＴＤＲＳスコアのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前と比較した減少が１５文字未満であれば視力が維持されているとみなす。一部の実施形態では、ＤＭＥの処置をＳＤ－ＯＣＴおよび／またはＯＣＴ－Ａによって評価する。一部の実施形態では、ＤＭＥの処置を、ＳＤ－ＯＣＴを使用して中心領域網膜厚および／または黄斑体積を測定することによって評価する。一部の実施形態では、ＤＭＥの処置を、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に施行された抗ＶＥＧＦ剤（例えば、アフリベルセプト）による処置（例えば、アフリベルセプトによるレスキュー処置）の回数によって評価する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後に、ＳＤ－ＯＣＴによって評価して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前（例えば１日目）およびｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約３週間後（例えば、第４週）に記録された２つのＣＳＴ測定値の小さい方と比較して中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の＞５０μｍの増加が生じた場合、１つまたは複数のアフリベルセプトによるレスキュー処置を施行する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与後、ＤＭＥ疾患活動性の悪化に起因して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前（例えば、１日目）およびｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の約３週間後（例えば、第４週）に記録された２つのＢＣＶＡ測定値の大きい方と比較してＢＣＶＡの＞５文字の減少が生じた場合、１つまたは複数のアフリベルセプトによるレスキュー処置を施行する。一部の実施形態では、ＤＭＥの処置を、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）を使用して、例えば、超広視野カラー眼底撮影を使用して、ｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与前のＤＲＳＳと比較して評価する。一部の実施形態では、ＤＭＥの処置を、視覚を脅かす合併症（例えば、前眼部血管新生、糖尿病黄斑浮腫、高リスクＰＤＲ発生、硝子体出血、または牽引性網膜剥離）の出現率によって評価する。一部の実施形態では、視覚を脅かす合併症を超広視野イメージングおよび臨床検査によって評価する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の２段階または３段階の改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の２段階の改善をもたらす。一部の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を個体の１つの眼および／または反対側の眼に投与するステップは、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の３段階の改善をもたらす。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される眼の疾患または障害は、網膜静脈閉塞症である。網膜静脈閉塞症は、網膜から血液を運び出す小静脈の遮断である。網膜は、眼の内部の後方にある組織の層であり、光の像を神経シグナルに変換し、それらを脳に送る。網膜静脈閉塞症は、動脈硬化（アテローム性動脈硬化症）および血餅の形成によって引き起こされることが最も多い。網膜におけるより小さな静脈（分枝静脈またはＢＲＶＯ）の遮断は、多くの場合、アテローム性動脈硬化症によって肥厚または硬化した網膜動脈が交差し、網膜静脈に圧力がかかる場所で生じる。網膜静脈閉塞症の症状は、突発性のぼやけまたは１つの眼の全部もしくは一部の視力喪失を含み得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される眼の疾患または障害は、滲出性加齢黄斑変性（ｗＡＭＤ）としても公知の脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）である。脈絡膜血管新生は、脈絡膜を起源とし、ブルッフ膜の割れ目から網膜下色素上皮（ＲＰＥ下）または網膜下腔への新しい血管の成長を伴い得、これは失明の主要な原因になり得る。ＣＮＶにより、数週間以内に注目すべき中心視覚の突発性の悪化が生じ得る。他の症状は、色覚障害、および変形視症（直線が波状に見える歪み）を含み得る。新しい血管からの出血により、ＣＮＶの症状の発症が加速し得る。ＣＮＶは眼の奥の圧迫感も含み得る。
進行した「滲出」形態（新生血管または滲出型）のＡＭＤは、患者における急速かつ多くの場合に実質的である中心視覚の喪失を頻繁に引き起こし得る。滲出形態のＡＭＤでは、脈絡膜血管新生が形成され、網膜色素上皮の下におよびそれを通って成長し得る血管のネットワークに発達する。これには網膜下腔内への血漿の漏出および／または出血が伴うので、これが黄斑において生じた場合には中心視覚の重症の突発性喪失が生じ得る。本開示は、ＡＭＤ、滲出性ＡＭＤの処置または防止を意図している。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物を使用してＡＭＤを処置する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、ファリシマブ、アビシパルペゴル、コンベルセプト、ＯＰＴ－３０２、ＫＳＩ－３０１、注射用スニチニブマレイン酸塩（ＧＢ－１０２）、ＰＡＮ－９０８０６（ＰａｎＯｐｔｉｃａ）、および／またはアフリベルセプトによる以前の処置を受けた対象における眼の疾患または障害を防止または処置する。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して、ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、および／またはアフリベルセプトによる処置に対して応答性の眼の疾患または障害を防止または処置する。
一部の実施形態では、個体は、１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の単位用量の投与の少なくとも１日前、少なくとも１週間前、少なくとも１カ月前、少なくとも２カ月前、少なくとも４カ月前、少なくとも６カ月前、少なくとも１２カ月前、少なくとも１８カ月前、少なくとも２４カ月前、少なくとも３０カ月前、少なくとも３６カ月前、少なくとも４２カ月前、少なくとも４８カ月前、少なくとも５４カ月前、少なくとも６０カ月前、少なくとも６６カ月前、少なくとも７２カ月前、少なくとも７８カ月前、少なくとも８４カ月前、少なくとも９０カ月前、９６カ月前、少なくとも１０２カ月前、少なくとも１０８カ月前、少なくとも１１４カ月前、少なくとも１２０カ月前、少なくとも１２６カ月前、少なくとも１３２カ月前、またはそれよりも前に眼内血管新生疾患の診断を受けている。
以下の説明は、当業者が種々の実施形態を作出し、使用することを可能にするために提示するものである。特定のデバイス、技法、および適用の説明は単に例として提示される。本明細書に記載の実施例に対する種々の改変が当業者には容易に明らかになり、また、本明細書において定義されている一般原則を、種々の実施形態の主旨および範囲から逸脱することなく、他の実施例および適用に適用することができる。したがって、種々の実施形態は、本明細書に記載され示されている実施例に限定されるものではなく、請求項に矛盾しない範囲と一致するものである。
（実施例１）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対する６×１０１１ｖｇ／眼の用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験。
本実施例では、脈絡膜血管新生を伴う加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を処置するための、ＶＥＧＦ阻害剤であるアフリベルセプトおよびＡＡＶ２．７ｍ８タンパク質カプシドを含有するｒＡＡＶベクターであるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験について記載する。
Ｉ．試験の目的
Ａ．主要目的
本試験の主要目的は、ｗＡＭＤを有する対象に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回硝子体内（ＩＶＴ）注射の安全性および忍容性を評価することであった。
主要エンドポイント
本試験の主要エンドポイントは、眼および全身性の有害事象（ＡＥ）の型、重症度、および発生率であった。
Ｂ．副次目的
本試験の副次目的は以下の通りであった：
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）に対する効果を評価すること。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの中心窩網膜厚（ＣＲＴ）としても公知の中心領域網膜厚（ＣＳＴ）に対する効果を評価すること。
・第４週から第１０４週までのレスキュー治療の必要性を評価すること。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの網膜内液（ＩＲＦ）および網膜下液（ＳＲＦ）の存在に対する効果を評価すること。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの、ベースラインにおいてＰＥＤを有する患者の間での色素上皮剥離（ＰＥＤ）消散に対する効果を評価すること。
副次的エンドポイント
本試験の副次的エンドポイントは以下の通りであった：
・８日目から第１０４週まで経時的にＥＴＤＲＳ文字によって評価される、ベースラインと比較したベースラインからの経時的なＢＣＶＡの平均変化。
・８日目から第１０４週まで評価して、ベースラインと比較して、ベースラインから経時的に≧１５ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ増加を有した対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、ベースラインと比較して、ベースラインから経時的に≦１５ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ減少を有した対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、ベースラインと比較した、ベースラインからの経時的なＣＳＴおよび黄斑体積の平均変化。
・第４週から第１０４週まで評価して、経時的な、アフリベルセプト注射の平均回数。
・第４週から第１０４週まで評価して、経時的な、アフリベルセプト注射を必要とする対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、経時的な、ＩＲＦを有さない対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、経時的な、ＳＲＦを有さない対象のパーセンテージ。
・８日目から第１０４週まで評価して、経時的な、ベースラインにおいてＰＥＤを有した対象の中でＰＥＤを有さない対象のパーセンテージ。
ＩＩ．試験の対象
本試験の対象は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に続発する活動性脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の診断を受けており、最近の抗ＶＥＧＦによる処置に応答した履歴があり、かつ頻繁な抗ＶＥＧＦ治療薬の注射を必要とする対象であった。
試験の持続時間にわたって、試験を行う眼として１つの眼のみを選択した。両方の眼が組み入れ基準および除外基準の全てを満たす場合には、スクリーニング時に評価されたＢＣＶＡが最悪であった眼を試験を行う眼として選択した。両方の眼が組み入れ基準および除外基準の全てを満たし、かつ両方の眼のＢＣＶＡ値が同一である場合には、利き目でない方の眼を処置に選択するか、またはデフォルトで右眼を試験を行う眼として選択するかを対象が選択した。
Ａ．組み入れ基準
以下の組み入れ基準を満たす対象を本試験に登録した：
・男性または女性の対象、年齢≧５０歳であること。
・試験を行う眼に総病変サイズの≧５０％を占有するＡＭＤに続発する活動性中心窩下ＣＮＶの以前のまたは現在のエビデンスがあり、以下を伴うこと：
○フルオレセイン血管造影図（ＦＡ）での漏出、スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）での液、またはカラー眼底写真での網膜下出血；および
○病変の寸法全体が１２黄斑光凝固試験ディスク面積を超えていないこと。
・対象がスクリーニング前４カ月の間に最低２回の注射によるｗＡＭＤに対する積極的な抗ＶＥＧＦによる処置を受けていること。
・スクリーニング来訪時（アフリベルセプト注射の前）の試験を行う眼の視覚に関して：
○ＢＣＶＡ ＥＴＤＲＳが７８～２５であること。
・試験を行わない眼の視覚に関して：
○ＢＣＶＡ ＥＴＤＲＳが≧３５であること。
・試験責任医師によって確認され、以下の通り定義される意味のある抗ＶＥＧＦ応答が実証されていること：
○ＳＤ－ＯＣＴを使用して評価して、中心領域網膜厚が最初の診断から≧３０％減少していること；または
○ＳＤ－ＯＣＴを使用して評価して、中心領域網膜厚がスクリーニング時から≧２０％減少していること；または
○ＣＳＴが正常化しており、観察可能な血管滲出が伴わないこと。
ＶＥＧＦ応答性は、１日目の来訪時、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前に抗ＶＥＧＦ応答を確認する目的で試験責任医師によって確認された。意味のある抗ＶＥＧＦ応答を有さないと判定された対象はスクリーニング不合格となり、本試験に登録されなかった。
Ｂ．除外基準
以下の除外基準を満たす対象は本試験に登録しなかった：
中和抗体
・血清および硝子体液中の中和抗体（ＮＡｂ）のレベルとＡＡＶの間の相関は確立されていないが（Lukason et al., (2011) Mol Ther 19 (2): 260-265）、用心のために対象をＡＡＶ２．７ｍ８ベクターに対するＮＡｂについてスクリーニングした。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前６カ月の間に＞１：１２５の抗ＡＡＶ２．７ｍ８中和抗体力価レベルが実証された対象を本試験から除外した。
ＣＮＶ病変
・以下のＣＮＶ病変の特徴の、分かっている履歴またはエビデンス：
○線維症もしくは萎縮、試験を行う眼の中心窩の中央の網膜上皮断裂、または視力改善を妨げるあらゆる状態。
○総病変面積の＞５０％を構成する瘢痕化または線維症。
○蛍光眼底造影（ＦＡ）によって評価される、血液、瘢痕、および血管新生を含めた＞１２黄斑光凝固試験ディスク面積（３０．５ｍｍ２）の病変サイズ。
○試験を行う眼における総病変面積の≧５０％である網膜下出血、または≧１ディスク面積のサイズの中心窩の下の血液の存在（血液が中心窩の下にある場合、中心窩は可視ＣＮＶによって２７０度囲まれていた）。
眼の状態（網膜／後眼）
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬時点での試験を行う眼における著しい網膜上膜または硝子体黄斑牽引（ＶＭＴ）症候群または試験を行う眼における全層の黄斑円孔（Ｇａｓｓ Ｓｔａｇｅ ２およびそれよりも高い）の履歴。
・試験を行う眼における、糖尿病網膜症（いずれかの眼におけるもの）、網膜静脈閉塞症、ぶどう膜炎、疑わしい網膜血管腫状増殖、ポリープ状脈絡膜症、または他の原因によるＣＮＶ（例えば、眼ヒストプラスマ症、外傷、もしくは病理的近視）、または眼における任意の他の血管疾患（硝子体もしくは周辺網膜の良性の状態は除外対象としなかった）を含めたｗＡＭＤ以外の網膜疾患の履歴。
・試験を行う眼における網膜剥離（修復を伴うまたは伴わない）の履歴。
他の状態（非網膜）
・試験の過程中に視覚を損なう恐れがあり、外科手術が必要になる恐れがあり、かつ／または網膜の適当な可視化またはイメージングを妨げる恐れがある、試験を行う眼における有意な非網膜疾患または中間透光体混濁の、分かっている履歴またはエビデンス（例えば、中心角膜瘢痕化、著しい白内障、角膜ジストロフィー、強膜軟化症）。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬時点での試験を行う眼における制御されていない高眼圧症または緑内障（抗緑内障薬による処置にもかかわらず眼圧［ＩＯＰ］が＞２２ｍｍＨｇであると定義される）またはスクリーニング時に＞２のＩＯＰ降下薬の使用。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前４週間以内にいずれかの眼における眼または眼周囲の活動性の感染またはその履歴。
眼の外科手術／手順
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬の６カ月以内の試験を行う眼に対するあらゆる以前の眼内もしくは眼周囲の外科手術、または、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬の６カ月以内のあらゆる計画されている大きな外科手技。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬の＞１カ月の瞼の外科手術は除外基準としなかった。
・試験を行う眼に対する硝子体切除術、線維柱帯切除術、または他の濾過手術の履歴。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前３カ月以内のイットリウム・アルミニウム・ガーネット（ＹＡＧ）後嚢切開術。
・ｗＡＭＤを処置するための光線力学的療法または網膜レーザーによるあらゆる以前の処置および試験を行う眼の領域内のあらゆる以前の治療的放射線照射。
全般／全身の状態
・指定がなければ投薬の６カ月以内の以下の心血管疾患のいずれかの履歴またはエビデンス：
○重症心疾患（例えば、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［ＮＹＨＡ］Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓ ＩＩＩまたはＩＶ）の履歴または不安定狭心症の臨床的なエビデンス。
○急性冠状動脈症候群、心筋梗塞または冠状動脈血管再生。
○継続処置が必要な心室頻脈性不整脈、または制御されていない不整脈。
○投薬前のスクリーニング期間内のＢＰ降下薬の使用にもかかわらず、平均収縮期血圧（ＳＢＰ）≧１６０ｍｍＨｇまたは平均拡張期血圧（ＤＢＰ）≧１００ｍｍＨｇと定義される制御されていない高血圧。
○脳血管発作または一過性脳虚血発作の履歴。
・進行中の出血障害のあらゆる履歴または国際標準化比（ＩＮＲ）＞３．０。アスピリンまたは他の抗凝固薬（例えば、第Ｘａ因子阻害剤）の使用は除外基準としなかった。適格基準が満たされていることを確認するためにＩＮＲをスクリーニング期間中に報告した。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前のスクリーニング期間内にＨｂＡ１ｃ＞７．０％を伴う制御されていない糖尿病のエビデンス。
・十分に処置されている場合には以下を除き、過去５年以内の悪性腫瘍の履歴：
○皮膚の局部的な基底細胞癌または扁平上皮癌。
○子宮頸部または乳房の上皮内癌。
○乳頭状非侵襲膀胱がん。
○観察により６カ月にわたって安定な前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が臨床的に示される前立腺がんステージ１および２。
○少なくとも２年にわたって完全寛解の状態にあるかまたは外科的に治癒したとみなされる任意の他のがん。
・ＨＩＶ、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎陽性（処置され治癒が実証された場合を除く）。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前３６時間以内に、臨床検査および／または体温＞３８．５℃に基づいて試験責任医師によって臨床的に意味があるとみなされる任意の型の全身性の活動性感染エビデンスまたは疑い。
・以下に対する分かっている重篤なアレルギー：
○血管造影に使用されるフルオレセイン色素またはナトリウムフルオレセイン（処置を適用できる軽症のアレルギーは許容された）；または
○アフリベルセプト。
・妊娠中、授乳中、または試験中に妊娠する予定の女性。
・試験責任医師の見解で対象の安全性を損なう他の著しい検査値異常または医学的状態。
薬物適用
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前、全身性の抗炎症性ステロイドまたは免疫抑制薬の５半減期以内の使用（プロトコール指定のプレドニゾン以外）。吸入または局所ステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は許容された。
・以下のいずれかを受けたこと：
○調査医薬品、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前３０日か５半減期のいずれか長い方の期間内。
○以前の遺伝子治療薬。
ＩＩＩ．調査医薬品
調査医薬品（ＩＭＰ）であるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは、ＡＡＶ２カプシドに対するｉｎ ｖｉｖｏ定向進化によって引き出されたＡＡＶ２．７ｍ８タンパク質カプシドを含有する組換え複製欠損アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターであった（Dalkara et al., (2013) Sci Transl Med 5 (189): 189ra76; US2014/0364338）。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは、遍在するキメラプロモーターの制御下にあるアフリベルセプトｃＤＮＡのコドン最適化バージョンの発現カセットを保有するものであった（図１Ａ）（ＷＯ２０１８１７０４７３Ａ１参照）。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを、Ｓｆ９細胞において一方がＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ２．７ｍ８ Ｃａｐタンパク質の遺伝子をコードし、他方がヒトアフリベルセプトｃＤＮＡ発現カセットをコードする２つの異なるバキュロウイルスを使用するバキュロウイルス発現ベクター系を使用して製造した。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを、表１に示されている通り製剤化した、ＩＭＰ、０．２５ｍＬを含有する滅菌されたすぐ使用できる０．５ｍＬ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈバイアル中の滅菌濾過された凍結懸濁液として供給した。
Figure 2022547541000001
 ＩＶ．試験設計
Ａ．用量および投与方法
コホート１
コホート１の対象に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを用量１の６×１０１１ｖｇ／眼で注射量を１００μＬとして単回ＩＶＴ注射によって投与した。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのバイアルを≦－６０℃での凍結保存から取り出し、室温で解凍した。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトをＩＶＴ注射によって投与した。ポビドンヨードを用いた無菌技法を局所または結膜下麻酔と一緒に使用した。注射後のケアおよび薬物適用レジメンを施設の標準治療に基づいて行った。
Ｂ．試験来訪
スクリーニング（－１５日目～－７日目）
図１Ｂに示されている通り、対象は、－１５日目～－７日目（例えば、－１４日目～－７日目）のスクリーニング中に標準治療と両立してアフリベルセプト２ｍｇの単回ＩＶＴ注射を受けた。対象は常套的な施設の標準の注射後のケアを受けた。
試験１日目
試験１日目に（アフリベルセプトのＩＶＴ注射の７日後から１５日後の間、例えば、７日後から１４日後の間）、試験対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投薬前に、抗ＶＥＧＦ治療薬に対して応答性であることを確認するためにＳＤ－ＯＣＴ試験を受けた。抗ＶＥＧＦ応答性は試験責任医師によって確認された。上記の通り意味のある抗ＶＥＧＦ応答を有することが確認された対象のみ（組み入れ基準を参照されたい）を本試験への登録に適格であるとした。
抗ＶＥＧＦ治療薬に対して応答性の対象は試験コホートに逐次的に登録され、試験を行う眼への単回のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトＩＶＴ注射を受けた。上記の通り、試験の持続時間にわたって１つの眼のみを試験を行う眼として選択した。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与後
対象は、３日目および８日目、第２週、第４週、第６週、および第８週の間、ならびにその後４週間ごと（すなわち、第１２週、第１６週、第２０週、および第２４週）に臨床評価および処置（必要であれば）のために戻った。コホート１に関する安全性および有効性解析を第２４週に実施した。
第４週に開始して、再処置基準（以下を参照されたい）に従って疾患活動性の増大のエビデンスが存在する場合には、対象を、アフリベルセプト２ｍｇ ＩＶＴのレスキュー注射を受けることに適格であるとした。以下のいずれか１つが存在することにより、２ｍｇ ＩＶＴアフリベルセプトを用いた標準の抗ＶＥＧＦによる処置の再開が正当化された：
・ＢＣＶＡのベースラインから≧１０文字の減少（ＥＴＤＲＳプロトコールを使用）およびＳＤ－ＯＣＴによって観察され、試験責任医師によってＢＣＶＡ低下の原因であると判断される網膜内または網膜下液。
・ＳＤ－ＯＣＴによって評価して、中心領域網膜厚のベースラインから＞７５μｍの増加。
・黄斑変性症に起因する視覚を脅かす出血の存在。
対象を、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後第５２週に安全性および有効性について再度評価する。フォローアップ期間はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後第１０４週まで続く。
Ｃ．コルチコステロイドレジメン
可能性のある注射後の眼の炎症のリスクを低減するために、対象に予防的コルチコステロイドレジメン（例えば、プレドニゾン）を投与し、ベクターの眼および全身性の忍容性について厳密にモニタリングした。
コホート１の対象に、予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを投与した。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置の３日前（－３日目）から３日後まで、合計６日間にわたる６０ｍｇ／日のプレドニゾンから開始した。これに続いて、７日間のプレドニゾン漸減を行った。経口プレドニゾンレジメンの要約を表２に提示する。
Figure 2022547541000002
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ注射前の免疫抑制（すなわち、プレドニゾン）の開始を、カプシド抗原に曝露した際の免疫応答が限定されるように設計した。対象はプレドニゾンを１３日間のレジメンにわたって自己投与した。
対象は、必要に応じて試験の第２週～第２４週に局所または経口コルチコステロイド（プレドニゾン）を受けた。
Ｄ．禁止薬物および処置
試験の間、以下の薬物を禁止した：
・ベバシズマブを含めたあらゆる全身性の抗ＶＥＧＦ剤。
・試験薬または本試験のレスキュー抗ＶＥＧＦ注射基準に従ったアフリベルセプト注射２ｍｇ以外の、試験を行う眼へのあらゆる抗ＶＥＧＦ剤。
・試験を行う眼へのＩＶＴステロイド。
・免疫抑制薬。全身性、吸入または局所ステロイドおよびＮＳＡＩＤは許容された。
・あらゆる他の調査試験薬の使用および試験への参加。
・試験を行う眼の白内障外科手術は、臨床的に必要が示され、ＩＶＴ投与後９０日よりも後かつ／またはアフリベルセプトの最後の注射後７日よりも後に予定されている場合には実施することができる。
・試験を行わない眼にＡＭＤが発生している対象は試験を行わない眼への標準治療を受けることができる。
Ｅ．コホート１に対する試験設計の要約
６名の対象をコホート１に登録した。
コホート１の対象に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを６×１０１１ｖｇ／眼の用量１で単回ＩＶＴ注射によって投与した。コホート１に登録された第１の（センチネル）対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトをＩＶＴ注射し、２９日間評価を行った後、コホート内の後の５名の対象（対象２～６）への投薬を行った。
コホート１に対する試験設計の要約を表３に提示する。
Figure 2022547541000003
 Ｆ．試験持続時間
対象が試験に参加する持続時間は、各対象についておよそ１０８週間である。これには４週間のスクリーニング期間および追加的な１０４週間の試験期間が含まれる。
試験が完了するかまたは中止されると、必要に応じて、この遺伝子治療薬の安全性をさらに評価するために長期間のフォローアップ試験に登録する機会が対象に提供される。
Ｖ．試験評価
Ａ．全般的な身体検査およびバイタルサイン
各対象の関連性のある医学的および眼に関する履歴を収集し、記録した。全般的な身体検査は身長（スクリーニング時のみ）、体重、およびバイタルサインからなった。
バイタルサインは血圧、脈拍数測定、体温、および呼吸数からなった。１２誘導心電図（ＥＣＧ）を各対象について取得した。以下の臨床検査および抗体検査を実施した：化学的検査、全血球計算（ＣＢＣ）、凝固試験、尿検査、ＨＩＶまたは肝炎の血清学的エビデンス、ならびに妊娠検査。
第１０４週、試験終了時（ＥＯＳ）、および／または早期中止来訪時に、身体検査により、スクリーニング検査時から対象の健康状態に何らかの変化が生じているかどうかを評価する。
Ｂ．免疫応答およびアフリベルセプト発現
総抗ＡＡＶ２．７ｍ８抗体を測定した。対象の血清中の中和性抗ＡＡＶ２．７ｍ８抗体を、カットポイントによって評価されるレポーター遺伝子に基づく形質導入干渉アッセイを使用して決定した。
抗アフリベルセプト抗体に対する液性免疫応答を血清においてＥＬＩＳＡに基づくカットポイント抗体アッセイを使用して測定した。
血清を収集して、アフリベルセプトタンパク質の存在を決定した。
ＡＡＶ２．７ｍ８カプシドタンパク質およびアフリベルセプトタンパク質に対する細胞性免疫をＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して測定した。
Ｃ．全眼科検査および他の評価方法
試験評価には眼科学的検査、眼圧（ＩＯＰ）、および間接検眼が含まれた。
眼科検査は、眼および付属器の外診、眼瞼／瞳孔応答性に関する常套的なスクリーニング（これだけに限定されないが、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、および求心性瞳孔障害を含む）、ならびに細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、虹彩、前房）からなった。細隙灯検査により眼の前側の構造を検査し、あらゆる所見のグレード分類のために使用した。いずれかの来訪時の細隙灯検査の間に何らかの所見が認められた場合、重症度が試験責任医師によってグレード分類され、その所見が臨床的に意味があるものまたは臨床的に意味がないものとして記載された。
ＩＯＰ測定をＧｏｌｄｍａｎｎ圧平眼圧計またはＴｏｎｏ－ｐｅｎ（商標）を使用して実施した。あらゆるＩＶＴ注射の前および眼を散大させる前にＩＯＰ測定を実施した。１日目の来訪では注射前および注射後（注射の３０分後）のＩＯＰ測定が必要であった。
散大間接検眼試験には、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後側セグメントの異常の評価が含まれた。いずれかの来訪時の検眼鏡検査の間に何らかの所見が認められた場合、重症度が試験責任医師によってグレード分類され、その所見が臨床的に意味があるものまたは臨床的に意味がないものとして記載された。１日目の来訪では注射前および注射後の間接検眼評価が必要であった。
スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）
ＳＤ－ＯＣＴを使用して、干渉縞パターンのスペクトル分析によって後方散乱光の大きさおよび遅延にコード化された深さ分解された組織構造情報を得た。
蛍光眼底造影
ＣＮＶ病変成長の有効性を評価するため、およびベースラインと比較した漏出を評価するため、蛍光眼底造影画像を使用して試験登録に対する患者の適格性を確認した。
デジタルカラー眼底撮影
網膜、視神経乳頭、および黄斑のカラー眼底画像を取得した。
光干渉断層血管造影（ＯＣＴ－Ａ）
ＯＣＴ－Ａイメージング（波長掃引またはスペクトラルドメイン）を使用して、網膜および脈絡膜の容積３次元マップならびに血流に関する情報を得た。
屈折および視力
屈折およびＢＣＶＡを試験場所において訓練を受け認証された視力試験者が測定した。視力を、眼を散大させる前に、出発距離４メートルで測定した。
Ｄ．安全性評価
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ投与に伴うリスクを軽減するために、ＩＶＴ ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与日および処置後に対象を厳密にモニタリングした。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性を、ＡＥ、バイタルサイン、身体検査および眼検査、ＥＣＧ、妊娠検査、ならびに実験室評価を収集することによって評価した。
試験の最初の８週間に対象のモニタリングを集中して行い、その後、安全性および有効性に関する通常の安全性評価を行った。全ての対象に対して各試験来訪時にＥａｒｌｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ（ＥＴＤＲＳ）文字評価による視力検査を行い、標準治療であるアフリベルセプトのＩＶＴ注射をレスキュー処置として使用した。
ＡＥの重症度、または強度を以下の尺度で評価した：
・軽症：ＡＥは注目すべきものではあるが、対象の日常活動を有意に損なうものではなかった。
・中等症：ＡＥにより通常の日常活動が低減するかまたは損なわれるが、無能力になるものではなかった。
・重症：ＡＥにより無能力になり、通常の日常活動を行うことが不可能になった。
安全性を試験処置の投与後１０４週間にわたって評価する。試験終了（ＥＯＳ）来訪が完了したら、対象に導入遺伝子発現の安全性および耐久性をさらに評価するために長期間の延長試験への登録を提案する。
Ｅ．有効性評価
ｗＡＭＤの処置に関するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの有効性を以下の評価基準によって評価した。重要な評価時点は２４週間であった。ＢＣＶＡおよびＳＤ－ＯＣＴのベースライン値は、－１５日目～－７日目（例えば、－１４日目～－７日目）のスクリーニング来訪中、アフリベルセプト注射の前に取得された値を指す。ベースライン値を分析に関する比較のために使用した。
視覚は主にＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）（Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134 (9): 1041-1047）として表されるＢＣＶＡによって評価した。対象が、ベースラインと比較して、ＥＴＤＲＳスコアの１５文字未満の減少を有する場合、視覚の維持に分類した。算出されたエンドポイントには、ベースラインからの平均変化、ベースラインと比較して、少なくとも１５文字の増加を有したパーセント、およびベースラインと比較して１５文字またはそれよりも多くの減少を有したパーセントが含まれた。
ＦＡを実施して、ベースラインと比較した漏出を評価するための標準の技法を使用してＣＮＶ病変を評価した。
認可された設備および標準の技法を使用してＳＤ－ＯＣＴを実施して、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚または中心領域網膜厚）、黄斑体積、および液（例えば、網膜下液および網膜内液）の存在をベースライン値と比較して評価した。
第４週から第１０４週までの経時的な対象当たりのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に行われたアフリベルセプト注射の回数を決定した。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の最初のアフリベルセプト注射までの時間およびアフリベルセプトによるレスキュー処置を必要としなかった対象の割合を決定した。
第４週から第１０４週までの経時的なＩＲＦを有さない対象の割合を決定した。
第４週から第１０４週までの経時的なＳＲＦを有さない対象の割合を決定した。
ベースラインにおいてＰＥＤを有した対象の中で第４週から第１０４週までの経時的なＰＥＤを有さない対象の割合を決定した。
Ｆ．統計値
安全性解析対象集団に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを受け、受けた用量に従って解析された対象全員を含めた。
全ての他の安全性パラメータをコホートごとに要約した。ＡＥを医薬品規制用語集（ＭｅｄＤＲＡ、バージョン２１）分類を使用してコード化して、各事象に基本語（ＰＴ）および器官別大分類（ＳＯＣ）を付与した。試験離脱に至ったＳＡＥおよびＡＥを別々に列挙した。
有効性解析には対象全員を含めた。有効性解析エンドポイントを評価し、記述統計をコホートごとに算出する。重要な評価時点は２４週間であった。有効性を、受けた用量に応じて、および全体として評価した。
ＶＩ．結果
Ａ．対象の特徴
コホート１に登録された対象６名全員がｗＡＭＤと診断された。登録時に、対象は抗ＶＥＧＦによる処置の大きな必要性（例えば、頻繁な抗ＶＥＧＦによる処置を必要としていた）、約２０／５０の機能的視覚、ＯＣＴでのいくつかの過剰な中心領域網膜厚を有しており、抗ＶＥＧＦによる処置の定期的なＩＶＴ注射を受けており、治療に応答していた。対象全員の疾患特徴および処置歴を表４～５に提示する。
表４に示されている通り、コホート１の対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与されるおよそ１年前（対象５）からおよそ１０年またはそれよりも前（対象４）の間にｗＡＭＤと診断されていた。対象は、注射前７（対象５）から１０９（対象４）まで、試験を行う眼に広範囲の以前の抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を受けていた。算出された本試験前の平均抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射間隔は４週間ごとから１０週間ごとにわたった。対象全員が本試験への登録のためのスクリーニング前４カ月の間に抗ＶＥＧＦ注射を２回または３回受けていた。試験開始前のスクリーニング抗ＶＥＧＦ注射の７日後（対象１～３）または１４日後（対象４～６）に対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与した。
Figure 2022547541000004
Figure 2022547541000005
 Ｂ．安全性
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後２４週間の間、ＳＡＥも生じず、用量制限毒性（ＤＬＴ）の基準を満たすいかなるＡＥも生じなかった。薬物に関連する眼以外のＡＥは観察されなかった。眼の炎症が対象全員に関して観察され、局所ステロイドで管理可能であった。さらに、血管炎、網膜炎、または脈絡膜炎のいずれも観察されなかった。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに潜在的に関連すると思われる眼のＡＥが１９件観察され、１４件が軽症であり、５件が中等症であった（２件のＡＥは中間部ぶどう膜炎であり、１件のＡＥは硝子体細胞であり、２件のＡＥは前房内細胞であった）。１名の患者が２件の前房内細胞事象を有した（１件は軽症の事象であり、１件は中等症の事象であった）。初期フォローアップ中に局所または経口コルチコステロイドに応答性の軽症から中等症の眼内炎症が頻繁に観察された。ＯＣＴ画像から、大多数の対象における残留液の消散が示され、悪化の徴候は見られなかった。視力は一般に安定していた。２４週間を通じたＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連した全ての安全性事象の要約を表６に提示する。
Figure 2022547541000006
対象全員が経口プレドニゾン６０ｍｇを－３日目から開始して６日間受け、その後、７日間のプレドニゾンの漸減過程を受けた。眼の細胞の炎症の臨床評価から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト後初期に臨床的に意味がある炎症は生じなかったことが明らかになった。さらに、図６に示されている通り、対象がステロイド点眼剤を受けた場合、悪化も新しい炎症も観察されなかった。第２４週までに前房内細胞の炎症が消散または改善した。観察された細胞の炎症は概して軽症であった。図６に示されている房水細胞計数カテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準（Jabs, DA et al., J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516）に基づくものであり、一方、硝子体細胞計数カテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。
全体的に、安全性評価により、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは忍容性が良好であり、ＤＬＴもＳＡＥも報告されなかったことが示された。全ての安全性事象が軽症～中等症であり、大多数が炎症に関連するものであった。ＡＥの継続的なフォローアップにより、平均視力が安定なままであり、抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射は必要なかったことが示された。したがって、結果から、以前から頻繁な抗ＶＥＧＦ注射を必要としているｗＡＭＤ患者に対して６×１０１１ｖｇ／眼の用量で単回ＩＶＴ注射として投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性プロファイルが許容されるものであることが示される。
Ｃ．有効性
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後、ＯＣＴ評価に基づいて６名の対象全員で疾患活動性の安定化が示された。図２Ａ～２Ｌに示されている通り、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前および処置後に取得したＯＣＴ画像から、コホート１の対象６名全員においてロバストな解剖学的応答が明らかになったことが示された。例えば、対象１（例えば、図２Ａと２Ｂを比較されたい）、対象２（例えば、図２Ｃと２Ｄを比較されたい）、対象３（例えば、図２Ｅと２Ｆを比較されたい）、対象４（例えば、図２Ｇと２Ｈを比較されたい）、および対象５（例えば、図２Ｉと２Ｊを比較されたい）において、網膜下液が標準治療の抗ＶＥＧＦによる処置では残留したが、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後には消散し、消散したままであった。対象６はポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）と一致する網膜形態を示し（図２Ｋ）、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後にいくらかの液が残留したが、疾患進行のエビデンスは認められなかった（図２Ｌ）。さらに、図３に示されている通り、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の増加を示した対象はおらず、－５２．７μｍの平均減少が観察された（９０％ＣＩ－８６．５、－１８．８）。ＣＳＴの増加はｗＡＭＤの疾患進行を示す。重要なことに、いずれの対象も、標準治療であるアフリベルセプトによるレスキュー注射（「レスキュー注射」）の投与を一切受けず、必要ともしなかった。
対象全員に対して試験全体を通して最高矯正視力（ＢＣＶＡ）をＥＴＤＲＳ文字評価に基づいて測定した。図４に示されている通り、ＢＣＶＡはコホート１の対象にわたって安定であり、平均減少は－２文字（９０％ＣＩ－９．１、５．１）であった。
フォローアップ時間中央値であるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の３４週間後に、ＯＣＴイメージングで疾患再活性化の徴候を示した対象はいなかった（図７Ａ～７Ｂ）。さらに、いずれの対象もいかなるレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射も必要とせず、また、最大４４週間のフォローアップ期間中のいかなる時点においても再処置基準を満たす対象はいなかった。最後に、２４週間を超える追加的なフォローアップ期間中、ＢＣＶＡは維持され（すなわち、１０ＥＴＤＲＳ文字よりも多くの減少または増加を有した患者はいなかった）、第２４週に観察された解剖学的改善（すなわち、網膜下および網膜内液の消散、ならびにＣＳＴの減少）が維持され、安全性の懸念は生じなかった。
フォローアップ時間中央値である第３４週に評価された安全性および有効性に関する結果の要約を表７に提示する。フォローアップ時間中央値である４４週間に評価された有効性に関する結果の要約を表８に提示する。１名の患者に試験処置に関連しない黄斑剥離網膜剥離が生じた。その患者に関しては、脱離前の最後の観察を使用してＣＳＴおよびＢＣＶＡ平均値を算出し、範囲を表８に示す。
Figure 2022547541000007
Figure 2022547541000008
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後のフォローアップ時間中央値である４４週間（４０～５２週の範囲）における有効性に関する結果の追加的な分析の要約を表９に提示する。
Figure 2022547541000009
各対象についての細胞の炎症性事象および行われたステロイド処置を最大で５２週間のフォローアップ時間まで分析した。図８に示されている通り、対象１および５は３日目を過ぎると細胞反応を有さなかった。どちらの対象も試験の２番目の６カ月のうちに房水細胞（ＡＣ）フレアおよび虹彩後癒着に対する局所ステロイドを開始していた。どちらの対象も局所ステロイドおよび散瞳性点眼剤を受けており、対象１は局所ステロイド点眼剤を受けるのを停止した。対象２および６はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後最初の１カ月までに早発性炎症を示し、ＡＣ応答および硝子体細胞へのいくらかの溢出を伴った。どちらの対象の炎症も局所ステロイドによる処置後に消散した。どちらの対象も１日２回の点眼剤（ＢＩＤ）を継続した。対象３および４では細胞の炎症の発症がより遅く、局所ステロイドを中止した後であった（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の２～３カ月後）。これらの対象における炎症は局所ステロイドに対して応答性であった。対象３は局所ステロイド点眼剤を受けるのを停止した。対象４では無関連の網膜剥離が生じ、ＢＩＤ点眼剤を受けている。
全体的に、炎症は低グレードのものであり、早期の臨床的に意味がある炎症は報告されなかった。炎症は全て局所ステロイドに対して応答性であり、経時的に消散する傾向があった。炎症は主に房水細胞プロセス駆動型であった。
図９Ａ～９Ｂは、対象１～６についてのフォローアップの第４０週から第５２週までのＯＣＴイメージングを示す。ＯＣＴイメージングで疾患再活性化の徴候を示した対象はおらず、また、ＢＣＶＡおよび解剖学的改善が維持された。さらに、いずれの対象もいかなるレスキュー抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射も必要とせず、再処置基準を満たす対象もいなかった。
Ｄ．結論
ｗＡＭＤに対する現行の標準治療は、一般には長期にわたって約４～８週間ごとに必要な抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射である。このレジメンでのコンプライアンスは患者、介護者、および健康管理システムにとって困難であり得、それにより、最適以下の投薬および処置不十分に起因した視力の喪失が導かれる。
この実施例で示された結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが、網膜の解剖学的構造の改善および視覚の安定化に関して明らかな利益をもたらす一方で、許容される安全性プロファイルを示すことが示される。特に、試験の間、患者の視覚が維持され、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが安全であり、忍容性が良好であることが示され、観察された炎症は一般に軽症であり、ステロイド点眼剤に応答性のものであった。
本試験のコホート１の対象は、疾患の進行を緩徐化するまたは防止するために以前から頻繁な抗ＶＥＧＦ注射を必要としていたが（表４）、本試験の間、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後は抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射を必要としなかったことが認められた。
標準治療である抗ＶＥＧＦによる処置を２０週間よりも長く受けている対象のＯＣＴスキャンで網膜下液が存在し、スクリーニングでのアフリベルセプトのＩＶＴ注射の１～２週間後に継続していることが認められた。この液は、対象が処置を繰り返し受けていたにもかかわらず存在し、したがって、標準治療である抗ＶＥＧＦタンパク質のＩＶＴボーラスに対して不応性であった。予想外に、この不応性ＳＲＦはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に消散し、この結果は、前臨床試験からは予測されていなかった。
６×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与されたＡＡＶ２．７Ｍ８－アフリベルセプトの観察された安全性および有効性により、実施例２に記載の通り、低用量で局所コルチコステロイドと共に投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性および有効性を評価するためにこの第１相試験の継続が導かれた。
（実施例２）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対する、６×１０１１ｖｇ／眼よりも低用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトと局所コルチコステロイドのオープンラベル第１相試験。
以下の実施例では、ｗＡＭＤを有する対象に対する、局所コルチコステロイドを伴い、６×１０１１ｖｇ／眼よりも低用量で投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性および有効性を評価するための、実施例１に記載の第１相試験の継続について記載する。
Ｉ．試験の目的およびエンドポイント
主要目的、副次目的、および主要エンドポイントおよび副次的エンドポイントは実施例１の節Ｉに記載されている通りである。
ＩＩ．試験の対象
本試験の試験対象は実施例１の節ＩＩに記載されている通りである。
ＩＩＩ．調査医薬品
調査医薬品はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトであり、以下の表８に記載されている通り適切な注射量を維持するためにＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの濃度を変動させたことを例外として、実施例１の節ＩＩＩにおいて詳細に記載されており、図１Ａに示されている通りである。
Figure 2022547541000010
 ＩＶ．試験設計
Ａ．用量および投与方法
下記の用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを実施例１の節ＩＶに記載されている通り投与した。
試験コホート２～４
コホート２：ｗＡＭＤの診断を受けている６名の対象をコホート２に登録する。コホート２の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な経口プレドニゾンレジメンを伴う。
コホート３：ｗＡＭＤの診断を受けている９名の対象をコホート３に登録する。コホート３の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な局所コルチコステロイドレジメンを伴う。
コホート４：ｗＡＭＤの診断を受けている９名の対象をコホート４に登録する。レスキュー治療を必要とする脈絡膜血管新生滲出の徴候がコホート２および３の対象の大多数で観察された場合には、コホート４の対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量３の６×１０１０ｖｇ／眼で投与し、局所コルチコステロイドレジメンを伴う（コホート４ｂ）。レスキュー治療を必要とする脈絡膜血管新生滲出の徴候がコホート２および３の対象の大多数で観察されない場合には、コホート４の対象にＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量１の６×１０１１ｖｇ／眼で投与し、局所コルチコステロイドレジメンを伴う（コホート４ａ）。
Ｂ．試験来訪
試験来訪は実施例１の節ＩＶおよび図１Ｂに記載されている通りである。
Ｃ．コルチコステロイドレジメン
実施例１のコホートについて詳細に記載されている通り、コホート２の対象に予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを投与する：
コホート２：コホート２の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを、プレドニゾン６０ｍｇから開始してＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前３日間および処置後３日間、合計６日間にわたって投与する。この後に７日間のプレドニゾン漸減を続ける。コホート２に対する経口プレドニゾンレジメンの要約は実施例１の表２に提示されている。
コホート３および４の対象には下記の通り予防的な漸減レジメンの局所コルチコステロイド（０．０５％ジフルプレドネート点眼薬）を投与する：
コホート３：コホート３の対象には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量２の２×１０１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な４週間の漸減局所コルチコステロイドレジメンを伴う。
コホート４：コホート４ｂの対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量３の６×１０１０ｖｇ／眼で投与し、予防的な４週間の漸減局所コルチコステロイドレジメンを伴い、これは、処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。コホート４ａの対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を用量３の６×１０１１ｖｇ／眼で投与し、予防的な４週間の漸減局所ジフルプレドネートレジメンを伴い、これは処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。
局所ジフルプレドネートレジメンの要約を以下の表１１Ａに提示する。
Figure 2022547541000011
コホート３および４の対象は６週間の予防的コルチコステロイドレジメンの投与を受けることもでき、これは処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。６週間の予防的コルチコステロイドレジメンの要約を表１１Ｂに提示する。
Figure 2022547541000012
カプシド抗原に曝露した際の免疫応答を限定するために、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ注射への曝露の直後の免疫抑制の開始を設計する。対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの注射日（１日目、注射後）から開始して第１の週にわたって０．０５％ジフルプレドネート溶液（ジフルプレドネート２．５μｇ）を１滴、処置を受ける眼の結膜嚢に１日当たり４回自己投与する。この後、第２の週にわたって１日当たり３回、第３の週にわたって１日当たり２回、および第４の週にわたって１日当たり１回投与する。漸減コルチコステロイドレジメンは処置にあたる医師の自由裁量で延長することができる。
Ｄ．禁止薬物および処置
本試験の禁止薬物および処置は実施例１の節ＩＶに記載されている通りである。
Ｅ．コホート２～４に対する試験設計の要約
コホート２～４に対する試験設計の要約を表１２に提示する。
Figure 2022547541000013
 Ｆ．試験持続時間
対象の本試験への参加の持続時間は実施例１の節ＩＶに記載されている通りである。
Ｖ．試験評価
本試験において実施する評価は実施例１の節Ｖに記載されている通りである。さらに、房水および硝子体液の試料を取得する。
房水試料採取
房水試料を、スクリーニング時（アフリベルセプト注射の前）および１日目（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の前）、第１２週、第２４週、第３６週、第５２週、第７６週、第８８週、第１０４週、および第１のアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ）レスキュー処置が必要な任意の来訪時、または早期中止時に得る。房水試料をアフリベルセプト、ＶＥＧＦ－Ａ、およびＮＡｂ濃度について分析する。
硝子体液試料採取
硝子体液試料を、試験中のいかなる時点でも硝子体切除術が実施される際に得る。硝子体液試料を主にアフリベルセプト濃度について分析する。残りの試料をＶＥＧＦ－Ａ濃度について分析する。
ＶＩ．結果
Ａ．対象の特徴
対象全員の疾患特徴および処置歴を記録する。特に、血管新生ＡＭＤ診断の日付または年、試験を行う眼への以前の抗ＶＥＧＦ注射の回数、算出された試験前の抗ＶＥＧＦ注射間隔の平均、スクリーニング前４カ月の間に受けた抗ＶＥＧＦ注射の回数、スクリーニングでのアフリベルセプトＩＶＴ投薬の日付、およびＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の日付を記録する。
Ｂ．安全性
対象をＩＶＴ ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与日および処置後、厳密にモニタリングする。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性を、バイタルサイン、身体検査および眼検査、ＥＣＧ、妊娠検査、および実験室評価を収集することによって評価する。
ＡＥ、ＳＡＥ、およびＤＬＴの発生率、重症度、および処置との関連性を対象全員に関して評価する。
眼内炎症の出現率、重症度、および処置との関連性を対象全員に関して評価する。
視力を対象全員に関して、ＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）（Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134 (9): 1041-1047）として表されるＢＣＶＡによって評価する。
抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射の必要性を対象全員に関してモニタリングする。
対象の血清中の既存の抗ＡＡＶ ＮＡｂレベルとＡＥ、ＳＡＥ、およびＤＬＴの間の相関の存在を決定する。
ステロイド予防法（局所または経口）のＡＥ、ＳＡＥ、ＤＬＴ、および眼内炎症出現率および消散に対する効果を評価する。
標準治療であるアフリベルセプトのＩＶＴ注射をレスキュー処置として使用する。
Ｃ．有効性評価
疾患安定化を対象全員に関して評価する。網膜厚、中心領域網膜厚、液および他の解剖学的特色を試験処置の投与前および投与後に測定する（例えば、ＯＣＴイメージングによって）。
ｗＡＭＤの処置に関するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの有効性を以下の評価基準によって評価する。重要な評価時点は第２４週である。ＢＣＶＡおよびＳＤ－ＯＣＴのベースライン値は、－１５日目～－７日目（例えば、－１４日目～－７日目）のスクリーニング来訪中、アフリベルセプト注射の前に取得された値を指す。ベースライン値を分析のための比較に使用する。
視覚を、ＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）（Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134 (9): 1041-1047）として表されるＢＣＶＡによって主に評価する。対象が、ベースラインと比較して、ＥＴＤＲＳスコアの１５文字未満の減少を有する場合には視覚の維持に分類する。算出されたエンドポイントには、ベースラインからの平均変化、ベースラインと比較して少なくとも１５文字の増加を有したパーセント、およびベースラインと比較して１５文字またはそれよりも多くの減少を有したパーセントが含まれる。
ＦＡを実施して、ベースラインと比較した漏出を評価するための標準の技法を使用してＣＮＶ病変を評価する。
ＳＤ－ＯＣＴを認可された設備および標準の技法を使用して実施して、網膜厚（例えば、中心窩網膜厚または中心領域網膜厚）、黄斑体積、および液（例えば、網膜下液および網膜内液）の存在を評価し、液をベースライン値と比較する。
第４週から第１０４週までの経時的な対象当たりのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に行われたアフリベルセプト注射の回数を決定する。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後の最初のアフリベルセプト注射までの時間およびアフリベルセプトによる再処置を必要としなかった対象の割合を決定する。
第４週から第１０４週までの経時的なＩＲＦを有さない対象の割合を決定する。
第４週から第１０４週までの経時的なＳＲＦを有さない対象の割合を決定する。
ベースラインにおいてＰＥＤを有した対象の中で第４週から第１０４週までの経時的なＰＥＤを有さない対象の割合を決定する。
（実施例３）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対する、６×１０１１ｖｇ／眼よりも低用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトと局所コルチコステロイドのオープンラベル第１相試験の結果。
本実施例では、ｗＡＭＤを有する対象に対する、６×１０１１ｖｇ／眼よりも低用量で局所コルチコステロイドと共に投与されるＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性および有効性を評価した実施例２に記載の第１相試験の結果について記載する。
結果
コホート２
コホート２の対象のベースライン特徴を表１３に提示する。
Figure 2022547541000014
実施例２に記載の通り、コホート２の対象に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを２×１０１１ｖｇ／眼の用量２で単回ＩＶＴ注射によって投与し、これと共に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置前３日間および処置後３日間、合計６日間にわたるプレドニゾン６０ｍｇから開始する予防的な１３日間の経口コルチコステロイドレジメンを行った。これに続いて、７日間のプレドニゾン漸減を行った。コホート２に対する経口プレドニゾンレジメンの要約は実施例１の表２に提示されている。
図１０に示されている通り、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の２４週間後、ＢＣＶＡはコホート２の対象にわたって安定であり、平均減少はＥＴＤＲＳで－４．８文字であった。さらに、図１１に示されている通り、対象はＯＣＴで中心窩網膜厚の改善を示し、ＣＳＴの平均減少は２７．８μｍであった。６名の対象のうち４名（６６％）が２４週間のフォローアップ時間にレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。
各対象についての細胞の炎症性事象および行われたステロイド処置を最大で２４週間のフォローアップ時間まで分析した。図１２に示されている通り、炎症は局所ステロイドに対して応答性のものであった。対象４および５は臨床的に意義のある細胞の炎症を有さず（対象５は第２０週に＜５のＡＣ細胞を有した）、ステロイド処置を必要としなかった。対象２および３は１／２＋の房水細胞および硝子体細胞グレードを示したか、または１～５個の房水細胞が観察され、１～１０個の硝子体細胞が観察され、これは局所ステロイドの短期コース後に消散した。対象１は経口ステロイド休止後に早期炎症反応を有し、これはステロイド点眼剤に迅速に応答した；対象は１日当たり４回（ＱＩＤ）のステロイド点眼剤を続けた。対象６はＡＣ細胞応答を有し、これはＢＩＤ点眼薬では悪化し、ＱＩＤ点眼薬で消散した。房水細胞グレードカテゴリーはＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｖｅｉｔｉｓ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＳＵＮ）基準に基づくものであった（Jabs, DA et al. J Ophthalmol. 2005; 140: 509-516）。硝子体細胞グレードカテゴリーはＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）ガイドラインに基づくものであった。
全体的に、炎症は概して軽症であった。ある特定の対象に関しては経口ステロイドでは長期の十分なカバレッジはもたらされなかった。しかし、炎症事象は全て局所ステロイドに対して応答性のものであった。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の２４週間後のＯＣＴイメージングにより、解剖学的改善および視力（ＢＣＶＡ）の維持が示された。図１３Ａ～１３Ｂに示されている通り、対象１、２、４、および６は液の消散を示した。対象３はレスキューアフリベルセプト注射を３回受け、全て網膜液に起因するＢＣＶＡの１０文字の減少に対するものであった。対象５はレスキューアフリベルセプト注射を３回受け、全てＣＳＴが７５μｍ増加したことに対するものであった。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後第２４週まで、６名の対象のうち４名はいかなる抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射も受けなかった。図１４のＳｗｉｍｍｅｒ’ｓ Ｌａｎｅ Ｐｌｏｔに示されている通り、対象３および５は抗ＶＥＧＦ ＩＶＴ注射を３回受け、それぞれ２４週間のフォローアップ期間中であった。
全体的に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の２４週間後のコホート２に関する結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが頑強な有効性を有することが示される。特に、レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を必要としなかった対象では平均ＢＣＶＡが維持され、網膜の解剖学的構造およびＣＳＴが改善された。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは安全かつ忍容性が良好であり、付随した炎症は低グレードであり、ステロイド点眼剤に対して応答性のものであった。
（実施例４）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験の結果の概要。
本実施例では、実施例１～３に記載の脈絡膜血管新生を伴う加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を処置するためのＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験の結果の概要を提示する。
安全性
コホート１について最大でフォローアップ時間中央値である４４週間まで、およびコホート２について最大で２４週間のフォローアップ時間までの入手可能な結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの忍容性が良好であることが示される。具体的には、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトまたは手順に関連する重篤な有害事象は報告されていない。さらに、用量制限毒性の基準を満たすＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する全身性の有害事象または有害事象は報告されていない。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する有害事象は軽症（７１％）または中等症（２９％）であった。低グレードの炎症が一般に報告され、ステロイド点眼剤に対して応答性のものであった。血管炎、網膜炎、または脈絡膜炎は報告されなかった。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトには関連しない自発性の偽水晶体網膜剥離という重篤な有害事象が１件報告された。網膜剥離は外科的に修復され、対象は依然としてフォローアップ下にある。
有効性
コホート１について最大でフォローアップ時間中央値である４４週間まで、およびコホート２について最大で２４週間のフォローアップ時間までの入手可能な結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが頑強な有効性を有することが示される。コホート１に関しては、抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射の投与を受けた対象はいなかった。コホート２に関しては、６名の対象のうち４名が抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射の投与を受けなかった。全体的に、抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射の投与を受けなかったコホート１および２の１２名の対象のうち１０名（８３％）では、平均ＢＣＶＡが維持され、平均ＣＳＴが改善された。
コホート１および２についての入手可能な安全性および有効性に関する結果の要約を表１４に提示する。
Figure 2022547541000015
（実施例５）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験の追加の結果。
本実施例では、ｗＡＭＤを有する対象に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回硝子体内注射の安全性および有効性の評価を行った実施例１～４に記載の第１相試験のコホート１、２、および３についての結果について記載する。コホート１についてはフォローアップ時間中央値である６０週間（５２～６４週間の範囲）、コホート２についてはフォローアップ時間中央値である３６週間（３２～４０週間の範囲）、およびコホート３については最大２０週間のフォローアップ時間における安全性および有効性に関する結果を提示する。
結果
コホート１の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を６×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与した。コホート２の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を２×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与した。コホート１および２の対象に予防的な経口プレドニゾンレジメンも投与した（表２参照）。
コホート３の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を２×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与し、６週間の予防的な局所コルチコステロイドレジメンを伴った（表１１Ｂ参照）。局所コルチコステロイドレジメンは、３週間にわたるコルチコステロイド点眼剤（０．０５％ジフルプレドネート［２．５μｇ］）の１日当たり４回の投与（ＱＩＤ、３週間）からなり、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与と同じ日に開始し（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのＩＶＴ注射後に投与）、その後、３週間の漸減を行い、これは、１週間にわたる１日当たり３回のコルチコステロイド点眼剤投与（ＴＩＤ、１週間）、その後、１週間にわたるコルチコステロイド点眼剤の１日当たり２回の投与（ＢＩＤ、１週間）、その後、１週間にわたるコルチコステロイド点眼剤の１日当たり１回の投与（ＱＤ、１週間）からなった。
対象の特徴
コホート１、２、および３の対象についてのベースラインの対象の特徴を表１５に提示する。
Figure 2022547541000016
表１５に示されている通り、コホート１～３の対象は、視覚を維持するために以前から頻繁な抗ＶＥＧＦ注射を必要としていた。コホートにわたってＥＴＤＲＳで約６５文字の比較的高いベースライン視覚が維持されるように、コホート１～３の対象についてのベースライン特徴について十分にバランスを取り、同様の年齢、同様の以前の抗ＶＥＧＦ注射の平均、および同様の頻繁な注射の必要性（例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前の１年間に９回を超える注射）にした。コホート３の対象は、平均して、より若年であり、最初の診断からの以前の抗ＶＥＧＦ注射が少なく、また、平均ベースラインＣＳＴがより厚かった。
安全性に関する結果
表１６に示されている通り、コホート１～３にわたって、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する重篤な有害事象（ＳＡＥ）も手順に関連する重篤な有害事象（ＳＡＥ）も生じなかった。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する全身性の有害事象（ＡＥ）は観察されなかった。試験処置に関連しない網膜剥離のＳＡＥが生じ、それは外科的に修復され、消散した（以前の白内障摘出術および人工水晶体埋込みが重要な危険因子であった）。２名の対象が眼圧（ＩＯＰ）上昇の有害事象を有し、それは消散した。１名の対象が２件の軽症ＩＯＰ上昇事象（最高ＩＯＰは２４ｍｍＨｇであった）を有し、どちらもＣｏｍｂｉｇａｎ（登録商標）点眼剤で処置された。第２の対象が高眼圧症に対してＣｏｍｂｉｇａｎ（登録商標）を受け、ＩＯＰ ＡＥは処置に変化を加えることなく１カ月のうちに自然に消散した。
コホート３の対象（ステロイド点眼剤予防の投与を受けた）では眼の有害事象の数が少なかった。
Figure 2022547541000017
図１５Ａ～１５Ｃに示されている通り、主に前眼部に影響を及ぼす軽症および低グレードの炎症がコホート１～３にわたって共通し、局所ステロイドに対して応答性のものであった。臨床的またはフルオレセイン（後極の蛍光眼底造影）による血管炎、網膜炎、または脈絡膜炎のエビデンスは観察されなかった。
コホート１の対象３名は局所ステロイドによる管理を継続しているが、１名の対象のみが炎症細胞の何らかのエビデンスを有する。対象２は１日当たり１回の局所ステロイドを受けており、対象４は１日当たり２回の局所ステロイドを受けており、対象６は１日当たり１回の局所ステロイドを受けている。全体的に、コホート１の対象のいずれも２＋を超える炎症細胞計数を有することはなかった。さらに、コホート１の対象は１つの時点で２＋の炎症細胞計数を有しただけであった。
コホート２の対象２名が局所ステロイドによる管理を続け、軽症炎症細胞のエビデンスを有する。対象１は１日当たり１回の局所ステロイドを受けており、対象６は１日当たり１回の局所ステロイドを受けている。対象１および６は最大３＋炎症細胞計数のいくらかのブレイクスルー炎症を有するが、どちらの対象でも局所ステロイド処置で急速に消散した。
コホート３の対象に６週間の予防的なステロイド点眼剤レジメンを投与した。このレジメンにより早期の眼の炎症が最小化された（図１５Ｃ）。コホート３のある特定の対象には局所ステロイドによる管理の継続も行う。コホート３の対象３は１日当たり４回の局所ステロイドを受けている。対象５はもう局所ステロイドを受けていないが、局所ステロイドの投与を以下の通り受けていた：ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後３週間にわたって１日当たり４回、次いで１週間にわたって１日当たり２回、次いで第５週に開始して１週間にわたって１日当たり４回、次いで１週間にわたって１日当たり３回から１週間にわたって１日当たり２回に減少させ、１週間にわたって１日当たり１回に減少させた。コホート３の対象７～９は６週間の予防的なステロイド点眼剤レジメンを継続する。記載されている予防的なステロイドレジメンに加えて、対象６はＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）で入院し、経口ステロイドの処方を受けた。ＣＯＰＤはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連しないものと見いだされた。
有効性
図１６Ａは、コホート１の対象についてのベースラインから最大で第５２週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。フォローアップ時間中央値である６０週間（５２～６４週間の範囲）において、コホート１の対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は－２．７文字であり、対象の１００％（６／６）がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。第４４週および第４８週における平均ＢＣＶＡの明白な減少は網膜剥離のＳＡＥが生じた対象１名に起因するものであった。図１６Ｂは、コホート１の対象についてのベースラインから最大で第５２週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。フォローアップ時間中央値である６０週間（５２～６４週間の範囲）において、コホート１の対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－２６．２μｍであった。
図１７Ａは、コホート２の対象についてのベースラインから最大で第３６週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。フォローアップ時間中央値である３６週間（３２～４０週間の範囲）において、コホート２の対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は－２．８文字であり、対象の６７％（４／６）がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は＋２．３文字であった。図１７Ｂは、コホート２の対象についてのベースラインから最大で第３６週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。フォローアップ時間中央値である３６週間（３２～４０週間の範囲）において、コホート２の対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－４０．８μｍであった。さらに、レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－３０．０μｍであった。全体的に、コホート２に関しては、ＣＳＴの改善が第３６週まで維持された。
図１８Ａは、コホート３の対象５名についてのベースラインから最大で第２０週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。２０週間のフォローアップ時間において、コホート３の５名の対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は＋６．８文字であり、コホート３の５名の対象の８０％（４／５）がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は＋８．８文字であった。全体的に、コホート３の対象５名に関しては、ＢＣＶＡが第２０週を通して改善された（すなわち、コホート３の対象５名について６．８文字の平均改善）。図１８Ｂは、コホート３の対象５名についてのベースラインから最大で第２０週までの平均ＣＳＴを示す。２０週間のフォローアップ時間において、コホート３の５名の対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－１３７．８μｍであった。さらに、レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－１４９．８μｍであった。全体的に、コホート３の対象５名に関しては、平均ＣＳＴが第２０週を通して改善され、ＣＳＴが実質的に減少した（すなわち、コホート３の対象５名について１３７．８μｍの平均減少）。
図１９のＳｗｉｍｍｅｒ’ｓ Ｌａｎｅ Ｐｌｏｔに示されている通り、コホート１の対象のいずれも、フォローアップ時間中央値である６０週間（５２～６４週間の範囲）にレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。コホート２の対象３および５はそれぞれ抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射（アフリベルセプト）を４回受けた。コホート３の対象３は抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射（アフリベルセプト）を２回受けた。
対象の症例研究
ベースラインにおいて、コホート１の対象４（６２歳の男性）は以前の抗ＶＥＧＦ注射を１０９回（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与前の１２カ月の間に９回）受けており、抗ＶＥＧＦ注射を頻繁に受けていても持続的な網膜下液を有していた（図２０Ａ）。図２０Ｂに示されている通り、対象４においてスクリーニングでのＩＶＴアフリベルセプト注射後に網膜下液のいくらかの減少が観察された。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後、網膜下液は消散し続け、第１２週までに網膜が乾燥した。この効果は、第４４週に診断された無関連の黄斑を含む網膜剥離が対象に生じるまで、液の再発の徴候を伴わずに継続した。黄斑が含まれることに起因して、視覚が低下し、対象は硝子体切除術および気泡を用いた上首尾の網膜剥離の修復手術を受けた。しかし、気泡が原因で、第４８週においてＯＣＴイメージングが不可能であり、また、対象は視力チャートのいかなる文字も読み取ることができなかった。気泡が溶解するにつれて視覚が改善され、滲出性ＡＭＤ疾患活動性または液の再発の徴候はなくなった。第４４週、第５２週、および第６０週において、図２０Ｂに示されている網膜厚マップにおける手術前の参照スキャンと対応させるために網膜剥離および中心窩を手動で位置付けたので、眼底トポグラフィーがいくらか変化した。第６０週において、網膜は乾燥したままであり、視覚はベースラインから１０文字以内であり（ＢＣＶＡ）、対象はレスキュー注射なしのままであった。
ベースラインにおいて、コホート３の対象５（８２歳の男性）は以前の抗ＶＥＧＦ注射を１９回（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与前の１２カ月の間に９回）受けており、抗ＶＥＧＦ注射を頻繁に受けていても持続的な網膜下液を有していた（図２１Ａ）。図２１Ｂに示されている通り、対象５は、スクリーニングでの抗ＶＥＧＦ注射に対して応答性を示したが、２週間以内に網膜下液が戻った。したがって、対象５は、抗ＶＥＧＦによる処置に対して応答性であるが、液を避けるために頻繁な注射を必要とする対象の例である。対象５の履歴に基づくと、対象は毎月ベース（例えば、約４週間に１回）のボーラス抗ＶＥＧＦ注射を必要とすることになる。しかし、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与の１週間後、網膜下液は増加せず、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与後第１２週、第１６週、および第２０週において液は観察されなかった。これらの結果から、対象５における疾患の過程が単回ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与によって変更されたことが実証される。
考察
本実施例に記載されている結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの忍容性が良好であり、また、コホート１、２、および３にわたって頑強な有効性が示されたことが示された。特に、これらの結果から、コホート１、２、および３の対象に関してＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回投薬により抗ＶＥＧＦ注射負荷量が低減することが示された。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを６×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与されたコホート１の対象についての結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後１年およびそれを超えて抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射を必要とした対象がゼロであることが示され、したがって、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの有効性の長期間にわたる持続性が実証される。さらに、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを２×１０１１ｖｇ／眼の用量（コホート１の３分の１の用量）で投与されたコホート２および３の対象の大多数も抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射なしのままであった。
全体的に、コホート１～３のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを投与された１７名の対象のうち（２０週間フォローしたコホート３の５名の対象を含む）、１４名（８２％）について抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射なしのままであり、平均ＢＣＶＡが維持され、平均ＣＳＴが改善された。
コホート１～３の結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する有害事象の全てが軽症～中等症であること、およびＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与後に観察された眼の炎症が低グレードであり、かつステロイド点眼剤に対して応答性であることも示された。さらに、６週間の予防的なステロイド点眼剤レジメンを施行したコホート３の対象は最小の炎症を示し、したがって、６週間の予防的なステロイド点眼剤レジメンが早期の眼の炎症を最小化することに関して効果的であることが実証された。血管炎、網膜炎、または脈絡膜炎の事象は観察されなかった。
（実施例６）
糖尿病黄斑浮腫を有する対象に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの第２相、多施設、ランダム化、二重盲検、実対照薬試験。
本実施例では、糖尿病黄斑浮腫を有する対象に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回硝子体内（ＩＶＴ）注射の持続性を評価する第２相、多施設、ランダム化、二重盲検、実対照薬試験について記載する。
Ｉ．試験の目的およびエンドポイント
Ａ．主要目的
本試験の主要目的は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射の持続性を評価することである。
Ｂ．副次目的
本試験の副次目的は以下を含む：
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの安全性および忍容性の評価。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの黄斑浮腫に対する効果の評価。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）に対する効果の評価。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）スコアに対する効果の評価。
・レスキューアフリベルセプト（２ｍｇ ＩＶＴ）の必要性の評価。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与前の先行するアフリベルセプトの用量（２ｍｇ ＩＶＴ）の評価。
・ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの視覚を脅かす合併症（前眼部血管新生、硝子体出血、または牽引性網膜剥離）の発生に対する効果の評価。
Ｃ．主要エンドポイント
本試験の主要エンドポイントは、試験を行う眼に関する、以下のいずれかの出現率によって定義される糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）疾患活動性の悪化までの時間である：
・ＳＤ－ＯＣＴによって評価して、１日目または第４週に記録された２つのＣＳＴ測定値のうちの小さい方と比較して中心領域網膜厚（ＣＳＴ）の＞５０μｍの増加。
・ＤＭＥ疾患活動性の悪化に起因する、１日目または第４週に記録された２つのＢＣＶＡ測定値のうちの大きい方と比較してＢＣＶＡの＞５文字の減少。
Ｄ．副次的エンドポイント
本試験の副次的エンドポイントは試験を行う眼（別段の指定がない限り）についての転帰の評価基準に基づき、以下を含む：
・眼のおよび眼以外の有害事象（ＡＥ）の発生率および重症度。
・第４８週を通した経時的な、ＣＳＴおよび黄斑体積のベースラインからの変化。
・第４８週を通した経時的な、ＢＣＶＡのベースラインからの変化。
・試験中の経時的な試験を行う眼へのレスキューアフリベルセプト（２ｍｇ ＩＶＴ）の頻度。
・第４８週を通した経時的な、ＤＲＳＳスコアの２段階の改善および３段階の改善の発生率。
・第４８週を通した経時的な、ＤＲＳＳスコアの２段階の悪化および３段階の悪化の発生率。
・第４８週を通した経時的な、視覚を脅かす合併症（前眼部血管新生、硝子体出血、または任意の他の高リスク増殖性糖尿病網膜症（ＤＲ）、または牽引性網膜剥離）の発生。
・第４８週を通した経時的な、ＣＳＴ＜３００μｍの発生率。
・第４８週を通した経時的な、身体検査、眼の検査、イメージング、および臨床評価による臨床的に意味がある所見の発生率。
ＩＩ．試験集団
Ａ．組み入れ基準
試験を行う眼への以前の抗ＶＥＧＦ治療の注射を最大２回受けている、新たに診断されたＤＭＥ（すなわち、スクリーニングの６カ月以内のＤＭＥ診断）を有する対象が以下の組み入れ基準を満たす場合、その対象を本試験に含める：
・年齢≧１８歳。
・１型または２型糖尿病。
・中心窩を含む糖尿病黄斑浮腫に起因する視覚機能障害。
・スクリーニング時の視覚：
ｏ試験を行う眼：ＢＣＶＡがＥＴＤＲＳで７８～５０文字、包括的（概算のスネレン等価視力２０／３２～２０／１００）。
ｏ試験を行わない眼：ＢＣＶＡがＥＴＤＲＳで３５文字またはそれよりも多く（概算のスネレン等価視力２０／２００またはそれよりも良好）。
・Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ（登録商標）を使用してスクリーニング来訪時の試験を行う眼のＣＳＴ≧３２５μｍ、中心窩に及ぶＩＲＦ（中心窩１ｍｍ）。
・主にＤＭＥに起因するものと判定された、試験を行う眼の視覚の減少。
・スクリーニングから６カ月以内の最初のＤＭＥ診断。
・試験を行う眼への抗ＶＥＧＦの最大２回の以前の注射（０回、１回、または２回）。
ｏ以前の抗ＶＥＧＦが試験を行う眼に投与されている場合、意味のあるＣＳＴ応答（例えば、≧１０％の減少）がなければならず、抗ＶＥＧＦに対する有害反応（例えば、炎症）があってはならない。
・試験を行う眼への最後の抗ＶＥＧＦ注射と１日目のランダム化の間に最低６０日の間隔。
Ｂ．除外基準
以下の基準のいずれかを満たす対象は本試験から除外される：
・ランダム化６カ月以内に実証された抗ＡＡＶ２．７ｍ８中和抗体力価＞１：１２５。
・以前の眼の遺伝子治療。
・アフリベルセプト、コルチコステロイド、または血管造影に使用されるフルオレセイン色素もしくはナトリウムフルオレセインに対するアレルギーの履歴（処置を適用できる軽症アレルギーは許容される）。
・投薬の６カ月以内の以下の心血管疾患のいずれかの履歴またはエビデンス：
ｏ重症心疾患（例えば、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［ＮＹＨＡ］Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓ ＩＩＩまたはＩＶ）または不安定狭心症の臨床的なエビデンス。
ｏ急性冠状動脈症候群、心筋梗塞または冠状動脈血管再生、脳血管発作（ＣＶＡ）、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）。
ｏ継続処置が必要な心室頻脈性不整脈、または制御されていない不整脈。
ｏスクリーニング期間内のＢＰ降下薬の使用にもかかわらず、収縮期血圧（ＳＢＰ）＞１６０ｍｍＨｇまたは拡張期血圧（ＤＢＰ）＞１００ｍｍＨｇと定義される制御されていない高血圧。ＢＰ降下薬が必要な場合、対象は、ランダム化前の連続した３０日間、同じ薬の安定な用量を受けているべきである。
・進行中の出血障害のあらゆる履歴。アスピリンまたは他の抗凝固薬（例えば、第Ｘａ因子阻害剤）の使用は除外基準としない。
・ＨｂＡ１ｃ＞１０％と定義される制御されていない糖尿病；またはランダム化前３カ月以内の糖尿病性ケトアシドーシスの履歴；または、直近３カ月以内に、集中的なインスリンによる処置（ポンプまたは多数回の毎日の注射）が開始されたかもしくは今後３カ月以内にその予定がある対象。
・全身性ステロイド薬または免疫抑制処置（例えば、メトトレキサート、アダリムマブ）による処置を必要とする全身性自己免疫疾患の履歴。
・黄斑浮腫を引き起こすことが分かっている全身性薬物（例えば、フィンゴリモド（fingolomod）、タモキシフェン、クロロキン／ヒドロキシクロロキン）またはあらゆる以前の全身性の抗ＶＥＧＦ治療。
・ＨＩＶ陽性が分かっていることまたは活動性ウイルス性肝炎（Ｃ型肝炎に対する処置後に治癒が実証されている場合を除く）；梅毒の分かっている履歴
・推定ＣｒＣｌ＜３０ｍＬ／分（コッククロフト・ゴールト算出による）によって示される重症腎機能障害が分かっていること；試験期間中に血液透析の必要性または必要性が予測されること。
・ランダム化前１週間以内のあらゆる熱性の疾病。
さらに、試験を行う眼に関して以下の眼に関する除外基準のいずれかを満たす対象は本試験から除外される：
・スクリーニング時に、以下と定義される高リスク増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）：あらゆる硝子体または網膜前出血、臨床検査で標準のＥＴＤＲＳ ７－視野と等価の面積内で＞１／２乳頭面積の他の箇所の血管新生、または臨床検査で＞１／３乳頭面積の乳頭の血管新生。
・試験を行う眼に対するあらゆる以前の焦点もしくは格子状レーザー光凝固術またはあらゆる以前の汎網膜光凝固術（ＰＲＰ）。
・ランダム化前の６０日間のあらゆる抗ＶＥＧＦ治療（最大２回の以前の抗ＶＥＧＦ注射は許容されるが、前の６０日間に行われたものであってはならない）。
・前眼部血管新生（例えば、虹彩の血管新生［ＮＶＩ］もしくは血管新生緑内障［ＮＶＧ］）、著しい硝子体出血、血管結合組織増殖または牽引性網膜剥離の履歴。
・黄斑浮腫または視力障害に寄与すると考えられる中心窩の構造的異常（例えば、濃くて硬い滲出液、色素異常、中心窩萎縮、硝子体黄斑牽引または網膜上膜）の臨床検査またはＯＣＴでの検査によるエビデンス。
・試験を行う眼に関して、加齢黄斑変性症（いずれかの眼におけるもの）、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、病理的近視などを含めた糖尿病網膜症以外の網膜疾患の履歴。
・視覚の改善の潜在性を低下させる可能性があるあらゆる現在のＤＭＥ以外の眼の疾患もしくはその履歴、交絡を生じさせる黄斑の評価または試験中の医学的もしくは外科的介入の必要（例えば、著しい白内障、黄斑牽引）またはあらゆる後嚢下白内障のエビデンス。
・１日目の前３カ月以内の白内障摘出術またはイットリウム・アルミニウム・ガーネット（ＹＡＧ）嚢切開術の履歴。
・試験を行う眼における網膜剥離（修復を伴うまたは伴わない）の履歴。
・線維柱帯切除術または緑内障シャント術または低侵襲性緑内障手術（ＭＩＧＳ）の履歴。
・硝子体切除術または他の濾過手術の履歴。
・無水晶体または前房眼内レンズの存在。
・ランダム化の時点での試験を行う眼における制御されていない高眼圧症または緑内障（抗緑内障薬による処置にもかかわらずＩＯＰ＞２２ｍｍＨｇと定義される）または現時点で＞２のＩＯＰ降下薬の使用。
・あらゆる任意の眼の状態に対する眼内または眼周囲のステロイド処置（例えば、ＩＶＴ Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ、ＩｌｕｖｉｅｎまたはＯｚｕｒｄｅｘ）の履歴。
・スクリーニングの前９０日の期間内の屈折矯正手術。
・以前の全層角膜移植術、内皮角膜移植術、または眼への放射線照射。
・あらゆる以前の硝子体網膜外科手術。
さらに、試験を行う眼または試験を行わない眼（すなわち「もう片方の眼」）に関して以下の眼に関する除外基準のいずれかを満たす対象は本試験から除外される：
・消散した軽症の予測された手術後の炎症以外のぶどう膜炎または眼内炎症（ごくわずかなまたはそれを超えるグレード）のあらゆる履歴。
・局所ステロイド投与に関連するＩＯＰ上昇の履歴。
・ウイルス性ぶどう膜炎、網膜炎または角膜炎を含めた眼の単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の分かっている履歴。
・結膜炎、霰粒腫または著しい眼瞼炎を含めた外眼部感染症のエビデンス。
・眼トキソプラズマ症の履歴。
ＩＩＩ．試験設計
Ａ．試験処置
本試験は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの０．１０ｍＬでの単回ＩＶＴ注射の有効性、安全性および忍容性を評価するための、多施設、ランダム化、二重盲検、対照、並行群間試験である。２用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを調査する。
スクリーニングの６カ月以内にＤＭＥの最初の診断を受けており、以前の抗ＶＥＧＦ治療の注射を最大２回受けている対象が登録に適格である。
適格の対象およそ３３名を、２用量のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト（６×１０１１ｖｇ／眼もしくは２×１０１１ｖｇ／眼）のうちの１つを受けるように、または、先行するアフリベルセプト注射を伴って眼へのニセ（ｓｈａｍ）注射を受ける対照アームにランダム化する。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを受けるように割り当てられた対象を、先行するアフリベルセプトまたは眼へのニセ注射を受けるようにさらにランダム化する。試験アームを以下に要約する：
・アーム１（ｎ＝６）：対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを６×１０１１ｖｇ／眼の用量で受け、先行するアフリベルセプト投薬を伴う。
・アーム２（ｎ＝６）：対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを６×１０１１ｖｇ／眼の用量で受け、先行するアフリベルセプト投薬を伴わない。
・アーム３（ｎ＝６）：対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを２×１０１１ｖｇ／眼の用量で受け、先行するアフリベルセプト投薬を伴う。
・アーム４（ｎ＝６）：対象は、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを２×１０１１ｖｇ／眼の用量で受け、先行するアフリベルセプト投薬を伴わない。
・アーム５（ｎ＝９）：対象は、アフリベルセプトのみを受ける（実対照）。
処置の割り当ての遮蔽を維持するために、１日目の先行するアフリベルセプトなしのアームまたは８日目のＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトなしのアームに割り当てられた対象は、対応する来訪時に眼へのニセ注射を受ける。対象当たり１つの眼のみを、試験を行う眼として選択する。両方の眼が適格である場合、ＢＣＶＡが悪い方の眼を、試験を行う眼として選択する。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトおよびアフリベルセプトのどちらもＩＶＴ注射によって投与する。活動性炎症が存在する場合にはＩＶＴ注射を実施しない。ポビドンヨードを用いた無菌技法を局所または結膜下麻酔と共に使用する。眼へのニセ注射手順は同じ条件下で行うが、針を伴わない空のシリンジ（鈍端を使用する）を眼に押し付けて注射を模倣する。
本試験におけるアームの要約を表１７に提示する。
Figure 2022547541000018
１日目および８日目の割り当てられたＩＶＴ注射の後、対象全員を第２週、第４週、および、その後、４週間ごとに、１日目の後最大で第４８週まで（例えば、第８週、第１２週、第１６週など）フォローアップする。遮蔽を維持するために、対象と評価を行う人員のどちらに対しても試験全体を通して処置の割り当てを遮蔽する。
対象全員をランダム化後４８週間にわたってフォローする。
試験設計の概要を図２９に提示する。
Ｂ．予防的な局所ステロイドレジメン
対象全員に予防的な７週間のジフルプレドネート（０．０５％；例えば、Ｄｕｒｅｚｏｌ）の局所コルチコステロイドレジメンを、１日目に開始して施行する。対象に、ジフルプレドネートを４週間にわたって（すなわち、１日目から２８日目まで）１日当たり４回（ＱＩＤ）自己投与し、その後、１週間（すなわち、７日間）にわたって１日当たり３回（ＴＩＤ）自己投与し、その後、１週間（すなわち、７日間）にわたって１日当たり２回（ＢＩＤ）自己投与し、最終的に、１週間（すなわち、７日間）にわたって１日当たり１回（ＱＤ）自己投与するよう指示する。活動性炎症の存在下では漸減を開始しない。炎症の徴候が生じたらこのレジメンを持続する。ジフルプレドネートレジメンの要約を表１８に提示する。
Figure 2022547541000019
 Ｃ．レスキュー処置
第８週に開始して、対象は、以下のいずれかを満たす場合、レスキューアフリベルセプト（２ｍｇ ＩＶＴ）を受ける：
・ＣＳＴの、ＳＤ－ＯＣＴによって評価して、１日目または第４週に記録された２つのＣＳＴ測定値のうちの小さい方と比較して＞５０μｍの増加。
・ＢＣＶＡの、ＤＭＥ疾患活動性の悪化に起因する、１日目または第４週に記録された２つのＢＣＶＡ測定値のうちの大きい方と比較して＞５文字の減少。
活動性炎症を有する眼にはアフリベルセプトを注射しない。レスキューアフリベルセプト注射間には最低２１日間が必要である。
Ｄ．薬物および処置
試験の間、以下の薬物を禁止する：
・ベバシズマブを含めたあらゆる全身性の抗ＶＥＧＦ剤。
・黄斑浮腫を引き起こすことが分かっている全身性薬物（例えば、フィンゴリモド、タモキシフェン、クロロキン／ヒドロキシクロロキン）。
・試験薬またはアフリベルセプトＩＶＴ ２ｍｇ以外の、試験を行う眼へのあらゆる抗ＶＥＧＦ剤。
・試験を行う眼へのＩＶＴステロイド（例えば、ＯｚｕｒｄｅｘまたはＩｌｌｕｖｉｅｎ、Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ）。
・全身性の免疫抑制薬（例えば、静脈内ステロイド、メトトレキサート、アザチオプリン、シクロスポリン、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト）。吸入または局所ステロイドおよびＮＳＡＩＤは許容される。
試験を行う眼に高リスクＰＤＲが発生している対象は、レスキューアフリベルセプトを受けた後に汎網膜光凝固（ＰＲＰ）を受ける。
視覚的に著しい白内障を有する対象は本試験に登録されないが、白内障が試験中に発生した場合、試験を行う眼の白内障外科手術を、臨床的に必要が示され、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与の＞９０日後および／またはアフリベルセプトの最後の注射＞７日後に予定される場合には実施することができる。
もう片方の（試験を行わない）眼にＤＭＥが発生している対象は標準治療を受けることができる。
ＩＶ．試験評価
Ａ．全般的な身体検査およびバイタルサイン
全般的な身体検査（ＰＥ）をスクリーニング時および試験終了（ＥＯＳ）または早期中止来訪時に行う。ＰＥは、全身外観、神経、ＨＥＥＮＴ（頭部、眼、耳、鼻、およびのど）、頸部、心血管、呼吸器、腹部、四肢、皮膚、体重、および身長についての身体系検査からなった。ＥＯＳまたは早期中止来訪時に、身体検査により、スクリーニング検査時から対象の健康状態に何らかの変化が生じているかどうかを評価する。ＡＥの評価のために必要に応じて標的化身体検査を行う。
バイタルサインは、血圧、脈拍数、体温、および呼吸数からなる。１２誘導心電図（ＥＣＧ）を各対象についてスクリーニング時およびＥＯＳまたは早期中止来訪時に取得する。
Ｂ．臨床検査、ベクター発現および免疫応答
試験のために以下の臨床検査を行う：化学的検査、全血球計算、ＨｂＡ１ｃ、尿検査、およびＨＬＡ－Ｂ２７遺伝子型決定。
対象の試料（血液および／または房水の両方）を収集して以下を測定する：
・ＡＡＶ２．７ｍ８に対する総抗体：総抗ＡＡＶ２．７ｍ８抗体用の血清をＥＬＩＳＡアッセイで測定する。
・ＡＡＶ２．７ｍ８に対する中和抗体：中和性抗ＡＡＶ２．７ｍ８抗体用の血清を細胞に基づくアッセイで測定する。
・抗アフリベルセプト抗体：アフリベルセプトに対する液性免疫応答用の血清をＥＬＩＳＡアッセイで測定する。
・アフリベルセプトタンパク質発現：アフリベルセプトタンパク質の存在をＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙアッセイで測定するために、血清および房水試料を収集する。
・細胞媒介性免疫応答：ＡＡＶ２．７ｍ８カプシドおよびアフリベルセプトタンパク質に対する細胞性免疫をＥＬＩＳＰＯＴアッセイで測定する。
Ｃ．全眼科検査
試験評価には眼科学的検査、眼圧（ＩＯＰ）、および間接検眼が含まれる。
眼科検査は、眼および付属器の外診、眼瞼／瞳孔応答性に関する常套的なスクリーニング（これだけに限定されないが、眼瞼下垂、異常な瞳孔形状、瞳孔不同、光に対する反応の異常、および求心性瞳孔障害を含む）、ならびに細隙灯検査（眼瞼、結膜、角膜、水晶体、虹彩、前房）からなる。細隙灯検査により眼の前側の構造を検査し、あらゆる所見のグレード分類のために使用する。いずれかの来訪時の細隙灯検査の間に何らかの所見が認められた場合、重症度をグレード分類し、所見を臨床的に意味があるものまたは臨床的に意味がないものとして記載する。
ＩＯＰ測定をＧｏｌｄｍａｎｎ圧平眼圧計またはＴｏｎｏ－ｐｅｎ（商標）を使用して実施する。同じＩＯＰ測定の方法を個々の対象それぞれに対して試験全体を通して使用する。あらゆるＩＶＴ注射の前および眼を散大させる前にＩＯＰ測定を実施し、試験全体を通して同じ方法を使用する。１日目および８日目の来訪では注射前および注射後（注射の３０分後）のＩＯＰ測定が必要である。
散大間接検眼試験には、硝子体、視神経、周辺網膜、および網膜の脈管構造の後眼部の異常の評価が含まれる。いずれかの来訪時の検眼鏡検査の間に何らかの所見が認められた場合、重症度をグレード分類し、所見を臨床的に意味があるものまたは臨床的に意味がないものとして記載する。１日目および８日目の来訪では注射前および注射後の間接検眼評価が必要である。
Ｄ．屈折および視力
屈折およびＢＣＶＡを測定する。視力測定値は、眼を散大させる前に、出発距離４メートルで測定する。
Ｅ．イメージング
スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）は、干渉縞パターンのスペクトル分析によって後方散乱光の大きさおよび遅延にコード化された深さ分解された組織構造情報をもたらす、干渉による技法である。対象が試験ランダム化前の来訪時に抗ＶＥＧＦ注射を受ける場合、これらの来訪でのＯＣＴを収集し、中央読み取り施設に送付する。
光干渉断層血管造影（ＯＣＴ－Ａ）は、網膜および脈絡膜の容積３次元マップならびに血流に関する情報をもたらすイメージング技術である。ＯＣＴ－Ａには掃引供給源とスペクトラルドメインの２つの型が存在する。利用可能な場合には掃引供給源イメージングを使用する。掃引供給源機器が利用不可能であり、スペクトラルドメイン機器が利用可能である場合には、スペクトラルドメイン機器を使用する。
網膜、視神経乳頭、および黄斑の超広視野眼底デジタル写真画像を収集するための標準化された手順に従う。さらに、虹彩の写真を散大前に取得する。
色素追跡法を使用して網膜循環および血管透過性を検査するための標準化された手順に従う。これには、ナトリウムフルオレセインを体循環中に注射し、その後、網膜に波長４９０ｎｍの青色光を照射した後に放出された蛍光をデジタル撮影することによって血管造影図を得ることを伴う。
Ｆ．臨床検査用、バイオマーカーおよび他の生物検体
房水試料を収集し、アフリベルセプト、ＶＥＧＦ－Ａ、中和抗体（ＮＡｂ）、および追加的なバイオマーカーのレベルについて分析する。硝子体液試料を得、アフリベルセプト濃度および他のバイオマーカーについて分析する。
Ｇ．安全性
試験処置の施行後、臨床的に意味がある有害事象（ＡＥ）を全て報告する。各対象を、ａ）最後の試験来訪の３０日後のＡＥ報告期間終了まで、またはｂ）あらゆる継続している試験処置に関連するＡＥおよび／または重篤なＡＥ（ＳＡＥ）が消散するかまたは安定するまで、フォローする。ＤＭＥに関連するあらゆる臨床的に意味がある安全性評価は、対象の状態に関して予測されたものよりも重症であると判断されなければＡＥまたはＳＡＥとして報告しない。試験下での疾患の進行は有効性に関する転帰として捕捉する。
本試験に関して特に重要性の高い有害事象として以下が挙げられる：
・視界を脅かす有害事象：有害事象は、以下の基準の１つまたは複数が満たされる場合、視界を脅かすものとみなされる：
ｏ以前の来訪と比較してＢＣＶＡの≧３０文字の減少が引き起こされる。
ｏ恒久的な視界喪失を防止するために外科的または医学的介入（すなわち、従来の外科手術、硝子体切除術）が必要である。
ｏ重症眼内炎症（すなわち、眼内炎、４＋前房内細胞／フレア、または４＋硝子体細胞）が引き起こされる。
上記の視界を脅かす有害事象の全てを重篤な有害事象として報告し、事象の根本原因（分かっている場合）を主要な事象用語として列挙する。
Ｈ．有効性
ＤＭＥの処置に関するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの有効性を以下の評価基準によって評価する。ＢＣＶＡおよびＳＤ－ＯＣＴエンドポイントのベースライン値は、アフリベルセプトＩＶＴまたは眼へのニセ注射が投与される１日目の来訪時に取得される処置前の測定値を指す。
・ＢＣＶＡ：視覚を、ＥＴＤＲＳスコア（正確に読み取られる文字の数）として表されるＢＣＶＡによって主に評価する。対象のＥＴＤＲＳスコアのベースラインと比較した減少が１５文字未満の場合には視覚の維持に分類する。算出されたエンドポイントには、ベースラインからの平均変化、ベースラインと比較して少なくとも１５文字増加したパーセント、およびベースラインと比較して１５文字またはそれよりも多く減少したパーセントが含まれる。
・中心領域網膜厚：認可された設備および標準の技法を使用してＳＤ－ＯＣＴを実施して、厚さおよび液をベースライン値と比較して評価する。エンドポイントにはＣＳＴおよび黄斑体積が含まれる。
・アフリベルセプトによる再処置：ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトによる処置後に行われたアフリベルセプト注射の経時的な発生率およびタイミング。
・各時点について、超広視野カラー眼底撮影を使用して糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）を決定し、１日目と比較する。
・超広視野イメージングおよび臨床検査によって決定される視覚を脅かす合併症（前眼部血管新生、糖尿病黄斑浮腫、高リスクＰＤＲ発生、硝子体出血、または牽引性網膜剥離）。
Ｉ．統計解析
主要解析集団には、８日目に試験処置（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトＩＶＴまたは眼へのニセ注射）を受けるランダム化された対象全員が含まれる。全ての安全性および有効性に関する変数を処置アームごとに説明的に要約する。平均値、標準偏差（ＳＤ）、中央値および範囲を連続変数として提示し、頻度計数およびパーセンテージをカテゴリカル変数として提示する。平均値およびパーセンテージの信頼区間を９０％レベルと９５％レベルの両方で提示する。カプラン・マイヤー生存解析を利用して、ＤＭＥ疾患悪化の最初の出現までの時間中央値を引き出す。試験中に各対象が受けた全てのレスキューアフリベルセプト（２ｍｇ ＩＶＴ）を再発性事象についての統計学的モデルを使用して要約する。注射の平均累積数について平均累積関数（ＭＣＦ）曲線を経時的にプロットする。反復測定のための混合効果モデル（ＭＭＲＭ）を使用して、経時的なＢＣＶＡおよびＣＳＴの変化に対する処置の効果を探究する。経時的なＤＲＳＳの変化に対する処置の効果を、カテゴリカル転帰に関する全般混合モデルを使用して探究する。対象全員を２４週間フォローした後に暫定解析（ＩＡ）を行う。
（実施例７）
血管新生（滲出性）加齢黄斑変性症に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトのオープンラベル第１相試験の追加的な結果。
本実施例では、ｗＡＭＤを有する対象に対するＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回硝子体内注射の安全性および有効性の評価を行った実施例１～５に記載の第１相試験のコホート１、２、３、および４に関する結果について記載する。安全性および有効性に関する結果を、コホート１についてはフォローアップ時間中央値である７２週間（６４～８４週間の範囲）の時点、コホート２についてはフォローアップ時間中央値である５２週間（５２～５６週間の範囲）の時点、コホート３についてはフォローアップ時間中央値である３６週間（２０～４０週間の範囲）の時点、およびコホート４についてはフォローアップ時間中央値である４週間（２～８週間の範囲）の時点について提示する。
結果
コホート１の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を６×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与した。コホート２の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を２×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与した。コホート１および２の対象には予防的な経口プレドニゾンレジメンも投与した（表２参照）。
コホート３の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を２×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与した。コホート４の対象にはＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射を６×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与した。コホート３および４の対象には６週間の予防的な局所コルチコステロイドレジメンを投与した（実施例５および表１１Ｂを参照されたい）。
対象の特徴
コホートにわたってＥＴＤＲＳで約６５文字のベースライン視覚が維持されるように、コホート１～４の対象についてのベースライン特徴について十分にバランスを取り、同様の年齢、同様の以前の抗ＶＥＧＦ注射の平均、および同様の頻繁な注射の必要性にした。コホート４の一部の対象は他のコホートの対象よりも最近、例えば、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与前１２カ月未満に診断されており、したがって、以前の抗ＶＥＧＦ注射の平均回数が少ない。全体的に、コホート１～４の対象は良好な視覚を有し、処置するのが難しく、抗ＶＥＧＦ注射による頻繁な処置でもいくらかの液が伴った。コホート１～４の対象についてのベースライン対象特徴を表１９に提示する。
Figure 2022547541000020
 安全性
死亡も、処置中止も、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する眼以外の有害事象も生じなかった。
観察された場合、炎症は局所ステロイドに対して応答性であり、それにより管理された。後部の炎症の臨床的またはフルオレセイン（後極の蛍光眼底造影）エビデンスは観察されなかった。さらに、血管炎、網膜炎、脈絡膜炎、血管閉塞、眼内炎も生じなかった。
ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する眼の有害事象は全て軽症（７８％）または中等症（２２％）であった。
特に重要性の高い有害事象（ＡＥＳＩ）の再発性中等症ぶどう膜炎が１件生じ、これは、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連するものと思われた（コホート１）。再発性中等症ぶどう膜炎ＡＥＳＩはステロイド点眼剤に対して応答性であった。さらに、処置に関連しない眼の重篤な有害事象（ＳＡＥ）の網膜剥離が生じ、外科的に修復され、消散した（コホート１）。
２名の対象が軽症有害事象の軽症眼圧（ＩＯＰ）上昇を有し、これは消散した。コホート１の対象１名が２件の軽症ＩＯＰ上昇（最高２４ｍｍＨｇ）を有し、これらはどちらもＣｏｍｂｉｇａｎ（登録商標）点眼剤により処置された。第２の対象が高眼圧症に対してＣｏｍｂｉｇａｎ（登録商標）を受け、ＩＯＰ有害事象は処置に変化を加えることなく１カ月以内に自然に消散した。
全体的に、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトは忍容性が良好であり、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに起因する全身性の有害事象は認められなかった。
本試験のコホート１～４における安全性に関する結果の要約を表２０に提示する。
Figure 2022547541000021
ＭｅｄＤＲＡ優先語によって報告された、コホート１～４において生じたＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する有害事象を表２１に提示する。
Figure 2022547541000022
ＭｅｄＤＲＡ優先語によって報告された、≧２件の事象の頻度で生じた眼の有害事象を表２２に提示する。
Figure 2022547541000023
ＭｅｄＤＲＡ優先語によって報告された、≧２件の事象の頻度で生じた眼以外の有害事象を表２３に提示する。
Figure 2022547541000024
本試験のコホート１～４において観察された眼のおよび眼以外の重篤な有害事象、軽症の有害事象、および中等症の有害事象の要約を表２４に提示する。
Figure 2022547541000025
図２２Ａ～２２Ｄに示されている通り、炎症は、観察された場合、主に前眼部におけるものであり、局所ステロイドに対して応答性であり、それにより管理された。後部の炎症のエビデンスは観察されず、血管炎の症例もなかった。
図２２Ａに示されている通り、以前にＱＤステロイド点眼剤を受けていたコホート１の２名の対象（対象２および６）は活動性炎症を有さず、その後点眼薬を中止した。対象２は中止後に再発性中等症ぶどう膜炎を有し、ステロイド点眼剤を再開した。炎症が改善され、対象はステロイド点眼剤の漸減を再開した。データカット時点で、対象４はステロイド点眼剤ＢＩＤを受けており、網膜剥離手術後にごくわずかな炎症を有した。対象６はいかなるステロイド点眼剤も受けておらず、炎症を有さなかった。全体的に、データカット時点で、コホート１の対象における炎症は消散しており、６名の対象のうち２名のみがステロイド点眼剤による処置を継続していた。コホート１の結果から、データカット時点で対象全員が局所ステロイドに対して応答性であり、ステロイドを漸減する傾向にあったことが示される。
コホート２では、データカット時点で６名の対象のうち４名が炎症を有しておらず、６名の対象のうち２名がステロイド点眼剤を受け続けていた（図２２Ｂ）。対象３は局所ステロイドを白内障外科手術後およそ第４６週に受けた。データカット時点で対象１がステロイド点眼剤ＱＤを受けており、対象６が低グレード炎症を有し、ステロイド点眼剤を継続していた。全体的に、データカット時点でコホート２の対象における炎症は消散しており、対象全員が５２週間（１年）のマイルストーンを通り越した。
コホート３では、データカット時点で９名の対象のうち６名が炎症を有しておらず（図２２Ｃ）、全員が２０週間のマイルストーンを通り越した。データカット時点で対象２、３および４がステロイド点眼剤を受けていた。対象４は第２４週に無症状の炎症に関連する可能性が高い低瞳孔散大および虹彩後癒着に起因してｄｕｒｅｚｏｌ処置、ＢＩＤを開始した。データカット時点で９名の対象のうち３名がステロイド点眼剤を受け続けていた。
図２２Ｄに示されている通り、コホート４の対象はステロイド点眼剤で最小～ゼロの早期の炎症を示し、これはコホート３に関して観察された結果と一致する。データカット時点で対象１、２および３が前部の炎症を有し、ステロイド点眼剤を受け続けていた。
コホート３および４に投与した６週間の予防的な局所ステロイドレジメンでは、コホート１および２に投与した経口ステロイドレジメン（図２２Ａ～２２Ｂ）と比較して活動性が低い炎症のエビデンスが示された（図２２Ｃ～２２Ｄ）。
有効性
図２３Ａは、コホート１の対象についてのベースラインから最大で第７２週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。フォローアップ時間中央値である７２週間（６４～８４週間の範囲）において、コホート１の対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は－３．２文字であり、対象の１００％（６／６）がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。第４４週および第４８週における平均ＢＣＶＡの明白な減少は網膜剥離のＳＡＥが生じた対象１名に起因するものであった。全体的に、コホート１の対象のＢＣＶＡスコアは第７２週まで安定なままであった。図２３Ｂは、コホート１の対象についてのベースラインから最大で第７２週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。フォローアップ時間中央値である７２週間（６４～８４週間の範囲）において、コホート１の対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－２１．０μｍであった。全体的に、コホート１に関するＣＳＴ測定値から、対象全員について第７２週まで解剖学的構造が維持されたことが示された。図２３Ｂにおいて第６８週および第７２週に観察されたエラーバーの降下および変化は、常に非常に厚い網膜を有していた１名の対象が除外されたことに起因した。
図２４Ａは、コホート２の対象についてのベースラインから最大で第５２週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。フォローアップ時間中央値である５２週間（５２～５６週間の範囲）において、コホート２の対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は－２．０文字であり、対象の５０％（３／６）がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は＋０文字であった。全体的に、コホート２の対象のＢＣＶＡスコアは５２週間を超えて安定なままであった。図２４Ｂは、コホート２の対象についてのベースラインから最大で第５２週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。フォローアップ時間中央値である５２週間（５２～５６週間の範囲）において、コホート２の対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－２４．８μｍであった。さらに、レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－８．３μｍであった。全体的に、コホート２に関するＣＳＴ測定値から、解剖学的構造が第５２週を超えて維持されたことが示された。
図２５Ａは、コホート３の対象についてのベースラインから最大で第２０週までの平均ＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳ文字）を示す。フォローアップ時間中央値である３６週間（２０～４０週間の範囲）の時点で、コホート３の対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は＋４．０文字であり、コホート３の対象の７８％（７／９）がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＢＣＶＡのベースラインからの変化は＋６．４文字であった。全体的に、コホート３の対象のＢＣＶＡスコアが改善された。図２５Ｂは、コホート３の対象についてのベースラインから最大で第２０週までの平均ＣＳＴ（μｍ）を示す。フォローアップ時間中央値である３６週間（２０～４０週間の範囲）の時点で、コホート３の対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－１１８．６μｍであった。さらに、レスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった対象の平均ＣＳＴのベースラインからの変化は－１５２．７μｍであった。全体的に、コホート３の対象９名全員に関して平均ＣＳＴの改善が継続した。
図２６のＳｗｉｍｍｅｒ’ｓ Ｌａｎｅ Ｐｌｏｔに示されている通り、コホート１の対象のいずれも、フォローアップ時間中央値である７２週間（６４～８４週間の範囲）にレスキュー抗ＶＥＧＦ注射を受けなかった。コホート２（フォローアップ時間中央値である５２週間；５２～５６週間の範囲）では、対象２が抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射（アフリベルセプト）を１回受け、対象３および５がそれぞれ抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射（アフリベルセプト）を６回受けた。コホート３（フォローアップ時間中央値である３６週間； ２０～４０週間の範囲）では、対象２が抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射（アフリベルセプト）を１回受け、対象３が抗ＶＥＧＦによるレスキュー注射（アフリベルセプト）を４回受けた。全体的に、コホート２～３の対象１５名のうち１０名がレスキュー注射なしのままであった。全体的に、ある特定のコホートではレスキュー注射を用いたとしても、抗ＶＥＧＦ注射負荷量が劇的に低減した。
年間の抗ＶＥＧＦ注射率の実質的な低下がコホート１～３の対象において観察された（図２７Ａ～２７Ｂ）。具体的には、コホート１の対象はいずれも、いかなるレスキュー抗ＶＥＧＦ注射も受けず（１００％低下）、コホート２および３の対象は合わせて年間の平均抗ＶＥＧＦ注射率が８７％低下した（図２７Ａ）。
症例研究
ベースラインにおいて、コホート３の対象５（右眼にｗＡＭＤを有する８２歳の男性）は以前の抗ＶＥＧＦ注射を１９回（ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与前の１２カ月の間に９回）受けていた。対象５は抗ＶＥＧＦ注射を頻繁に５週間毎に受けていても持続的な網膜下液を有していた（図２８Ａ）。図２８Ａの厚さマップの中央の白色の領域は非常に厚い黄斑を反映する。
図２８Ｂに示されている通り、対象５は、予定されているＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の２週間前にスクリーニングでのアフリベルセプト注射を受けた。対象５はスクリーニングでのアフリベルセプト注射に対して良好な応答を示し、ＩＲＦが消散し、ＳＲＦが改善された。したがって、対象５は抗ＶＥＧＦによる処置に対して応答性であったが、液を避けるために非常に頻繁な注射を必要とした。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の１週間後に、液が改善された。この対象がボーラスアフリベルセプト注射のみを受けた場合、４～５週間以内に液が戻り始め、ＯＣＴ画像が、著しい液を伴ってベースラインＯＣＴ画像のように見えることになる。しかし、図２８Ｂに示されている通り、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射の１２週間後、１６週間後、２０週間後、２８週間後、および３６週間後に、液は存在せず、視覚が改善された。したがって、対象５に関して、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト注射により、注射の必要が排除され、視覚が改善し、疾患活動性が制御されることによって処置負荷量への対処がなされた。これらの結果から、対象５における疾患の過程が単回ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプト投与によって変更されたことが実証される。
考察
本実施例に記載されている結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが、全てのコホート（ｎ＝３０）において忍容性が良好であり続け、好都合な安全性プロファイルを有することが示された。ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトに関連する眼の有害事象は全て軽症（７８％）または中等症（２２％）であり、眼の炎症が観察された場合、それはステロイド点眼剤に対して応答性であった。
さらに、本実施例に記載の結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトが頑強かつ持続的な有効性を有することが示された。
明らかな用量反応が観察され、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを６×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与された対象全員がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射なしのままであり、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトを２×１０１１ｖｇ／眼の用量で投与された１５名の対象のうち１０名がレスキュー抗ＶＥＧＦ注射なしのままであった。コホート１の対象（６×１０１１ｖｇ／眼の用量）は全員がＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの投与の１５カ月後を超えてレスキュー注射なしのままであった。
本実施例に記載されている結果から、ＡＡＶ２．７ｍ８－アフリベルセプトの単回ＩＶＴ注射により年間の抗ＶＥＧＦ注射率の実質的な低下がもたらされることも示された。平均ＢＣＶＡは概して維持～改善され、平均ＣＳＴは概して改善された。
コホート４の結果から、６週間の予防的なステロイド点眼剤のレジメンが早期の眼の炎症を最小化することに関して効果的であることが示され、これはコホート３において観察された結果と一致する。
本開示を明確な理解のために実例および実施例として一部の詳細に関して記載しているが、説明および実施例は本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書において引用されている全ての特許および科学文献の開示は明白にその全体が参照により組み入れられる。

Claims (106)

  1. 個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量を前記個体の１つの眼に投与するステップを含み、前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
    ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
    ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質
    を含む、方法。
  2. 眼内血管新生疾患を有する前記個体の前記眼の網膜液が低減される、請求項１に記載の方法。
  3. 眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法であって、ｒＡＡＶ粒子の単位用量を前記個体の１つの眼に投与するステップを含み、前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
    ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
    ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質
    を含む、方法。
  4. 前記個体が、抗ＶＥＧＦ剤の少なくとも１つの処置をｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を投与する約１２週間前に受けた、請求項３に記載の方法。
  5. 前記個体の前記１つの眼の網膜液の量または存在が、抗ＶＥＧＦ剤による以前の処置に対して不応性である、請求項３または請求項４に記載の方法。
  6. 前記抗ＶＥＧＦ剤がアフリベルセプトである、請求項４または請求項５に記載の方法。
  7. 前記１つの眼の前記網膜液が少なくとも約６０％低減される、請求項２～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記１つの眼の前記網膜液が、前記ｒＡＡＶの前記個体への投与前の前記個体の前記１つの眼の網膜液のレベルと比較して約８０％低減される、請求項２～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記網膜液が、網膜下液（ＳＲＦ）または網膜内液（ＩＲＦ）である、請求項２～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）またはそれ未満である、請求項３～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法であって、
    （ａ）抗ＶＥＧＦ剤を前記個体の１つの眼に投与するステップと、
    （ｂ）前記抗ＶＥＧＦ剤の投与後に、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量を前記個体の前記１つの眼に投与するステップとを含み、
    前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
    （ｉ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
    （ｉｉ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質
    を含む、方法。
  12. 前記抗ＶＥＧＦ剤の投与の約１週間後または約７日後にｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼に投与することを含む、請求項１１に記載の方法。
  13. １日目に前記抗ＶＥＧＦ剤を前記個体の前記１つの眼に投与し、８日目にｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼に投与することを含む、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
  14. 前記抗ＶＥＧＦ剤がアフリベルセプトを含む、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記アフリベルセプトを約２ｍｇの用量で硝子体内注射によって投与する、請求項１４に記載の方法。
  16. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約６×１０１０～約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約６×１０１０～約２×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約２×１０１１～約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
  19. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約２×１０１１または約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、請求項１８に記載の方法。
  20. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約２×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、請求項１９に記載の方法。
  21. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、約６×１０１１ベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）である、請求項１９に記載の方法。
  22. 前記個体が、反対側の眼に眼内血管新生疾患の１つまたは複数の症状を有する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. ｒＡＡＶ粒子の単位用量を前記個体の前記反対側の眼に投与するステップをさらに含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記１つの眼に投与するステップの最大約２週間後である、請求項２３に記載の方法。
  25. （ａ）ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記１つの眼に投与する前記ステップと同じ日である；または
    （ｂ）ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記１つの眼に投与するステップの約１日後から約１４日後の間である、
    請求項２４に記載の方法。
  26. 前記個体の前記反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、前記個体の前記１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量と同じであるか、またはより少ないベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む、請求項２４または請求項２５に記載の方法。
  27. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記１つの眼に投与するステップの少なくとも約２週間後である、請求項２３に記載の方法。
  28. 前記個体の前記反対側の眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、前記個体の前記１つの眼に投与されたｒＡＡＶ粒子の前記単位用量より多くのベクターゲノム／眼（ｖｇ／眼）を含む、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記核酸が、配列番号４０の核酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記ポリペプチドが、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記ポリペプチドが、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記ポリペプチドがアフリベルセプトである、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記核酸が、第１のエンハンサー領域、プロモーター領域、５’ＵＴＲ領域、第２のエンハンサー領域、およびポリアデニル化部位をさらに含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記核酸が５’から３’の順に：
    （ａ）第１のエンハンサー領域；
    （ｂ）プロモーター領域；
    （ｃ）５’ＵＴＲ領域；
    （ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸；
    （ｅ）第２のエンハンサー領域；および
    （ｆ）ポリアデニル化部位；
    を含み、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記第１のエンハンサー領域が、配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
  36. 前記プロモーター領域が、配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. ポリペプチドをコードする前記核酸が、配列番号４０の核酸配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記ポリペプチドが、配列番号３５のアミノ酸配列またはそれと少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、請求項３４～３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. 前記ポリペプチドが、配列番号４１のアミノ酸配列またはそれと少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、請求項３４～３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記ポリペプチドがアフリベルセプトである、請求項３４～３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記５’ＵＴＲ領域が、５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む、請求項３３～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記第２のエンハンサー領域が、配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む、請求項３３～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記ポリアデニル化部位が、配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位を含む、請求項３３～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記核酸が、（ａ）配列番号２２の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含む第１のエンハンサー領域；（ｂ）配列番号２３の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＣＭＶ配列を含むプロモーター領域；（ｃ）５’から３’の順に、配列番号２４の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＴＰＬ配列、および配列番号２５の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むｅＭＬＰ配列を含む５’ＵＴＲ領域；（ｄ）配列番号２６の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む全長のＥＥＳ配列を含む第２のエンハンサー領域；ならびに（ｅ）配列番号２７の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むＨＧＨポリアデニル化部位をさらに含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記核酸が、配列番号３９の配列またはそれと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質が、前記カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含み、前記アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質が、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質が、配列番号１３の配列を含むＡＡＶ２ ＶＰ１の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１）を含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記ｒＡＡＶ粒子が、配列番号３８のアミノ酸配列または配列番号３８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＧＨループを含むＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  50. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の前記１つの眼および／または前記反対側の眼への投与が硝子体内投与による、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が医薬製剤中にある、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記医薬製剤が、前記ｒＡＡＶ粒子、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムおよび界面活性剤を含む、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記医薬製剤が、約１５０～約２００ｍＭ塩化ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約１～約１０ｍＭリン酸水素ナトリウム、約０．０００５％（重量／体積）～約０．００５％（重量／体積）ポロキサマー１８８、および約６×１０１３～約６×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬ（ｖｇ／ｍＬ）の前記ｒＡＡＶ粒子を含み、前記医薬製剤が約７．０～約７．５のｐＨを有する、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記医薬製剤が、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬの前記ｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、前記医薬製剤が約７．３のｐＨを有する、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記医薬製剤が、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約２×１０１２ｖｇ／ｍＬの前記ｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、前記医薬製剤が約７．３のｐＨを有する、請求項５３に記載の方法。
  56. 前記医薬製剤が、約１８０ｍＭ塩化ナトリウム、約５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、約５ｍＭリン酸水素ナトリウム、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬの前記ｒＡＡＶ粒子、および約０．００１％（重量／体積）ポロキサマー１８８を含み、前記医薬製剤が約７．３のｐＨを有する、請求項５３に記載の方法。
  57. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が、前記１つの眼および／または前記反対側の眼に約２５μＬ～約２５０μＬの体積で投与される、請求項１～５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与されるｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が約１００μＬの体積を含む、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与されるｒＡＡＶ粒子の前記単位用量が約３０μＬの体積を含む、請求項５７に記載の方法。
  60. 前記個体が、抗ＶＥＧＦ剤による前記眼内血管新生疾患の以前の処置を受けた、請求項１～５９のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記個体が、前記ｒＡＡＶ粒子の前記１つの眼および／または前記反対側の眼への投与前に前記１つの眼および／または前記反対側の眼への抗ＶＥＧＦ剤の注射を１回または２回受けた、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記個体が、抗ＶＥＧＦ剤による前記眼内血管新生疾患の以前の処置を受けていない、請求項１～３または７～５９のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記抗ＶＥＧＦ剤がアフリベルセプトである、請求項６０～６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記眼内血管新生疾患が、滲出性加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜虚血、虚血性網膜症、糖尿病網膜浮腫、またはそれらのいずれかの組合せである、請求項１～６３のいずれか一項に記載の方法。
  65. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量がステロイド処置と組み合わせて投与される、請求項１～１０または１６～６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記ステロイド処置がコルチコステロイド処置である、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記ステロイド処置が全身性のステロイド処置である、請求項６５または請求項６６に記載の方法。
  68. 前記ステロイド処置が経口ステロイド処置である、請求項６５～６７のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記ステロイド処置がプレドニゾン処置である、請求項６５～６８のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記ステロイド処置が局所ステロイド処置である、請求項６５または請求項６６に記載の方法。
  71. 前記ステロイド処置がジフルプレドネート処置である、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記ステロイドが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の前記１つの眼および／または前記反対側の眼への投与前、投与の間、および／または投与後に投与される、請求項６５～７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記ステロイド処置が局所ステロイド処置であり、前記局所ステロイド処置が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与から最大約４週間、最大約６週間、または最大約８週間の毎日ステロイド処置である、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の方法。
  74. 前記局所ステロイド処置が、約１週目に局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、約２週目に局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、約３週目に局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、および約４週目に局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与から開始し投与後である、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記局所ステロイド処置が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与後約３週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含む、請求項７３に記載の方法。
  76. 前記局所ステロイド処置が、約４週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングはｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与の約１週間前に開始する、請求項７３に記載の方法。
  77. 局所ステロイド処置を施行するステップをさらに含む、請求項１１～６４のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記局所ステロイド処置がジフルプレドネート処置である、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記局所ステロイド処置が、約４週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約４回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約３回の投与、その後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約２回の投与、およびその後の約１週間にわたる局所ステロイドの１日当たり約１回の投与を含み、タイミングは前記抗ＶＥＧＦ剤の投与から開始して投与後である、請求項７７または請求項７８に記載の方法。
  80. 前記局所ステロイドが、０．０５％ジフルプレドネートの約１μｇ～約３μｇ用量を含む、請求項７１～７９のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記局所ステロイドが、０．０５％ジフルプレドネートの約２．５μｇ用量を含む、請求項７１～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の維持または減少をもたらす、請求項１～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の網膜厚と比較して網膜厚の減少をもたらす、請求項８２に記載の方法。
  84. 網膜厚の前記減少が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の網膜厚と比較して少なくとも約１０％である、請求項８３に記載の方法。
  85. 網膜厚が、中心領域網膜厚（ＣＳＴ）または中心窩網膜厚（ＣＲＴ）である、請求項８２～８４のいずれか一項に記載の方法。
  86. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の維持または減少をもたらす、請求項１～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の黄斑体積と比較して黄斑体積の減少をもたらす、請求項８６に記載の方法。
  88. 黄斑体積の前記減少が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の黄斑体積と比較して少なくとも約１０％である、請求項８７に記載の方法。
  89. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の視力と比較して視力の維持または改善をもたらす、請求項１～８８のいずれか一項に記載の方法。
  90. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の視力と比較して視力の改善をもたらす、請求項８９に記載の方法。
  91. 視力が、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）である、請求項８９または請求項９０に記載の方法。
  92. 複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与の結果、前記複数内の個体の少なくとも約５０％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項１～９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記複数内の個体の少なくとも約５０％が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与後、少なくとも約２０週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約５６週間、またはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項９２に記載の方法。
  94. 複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与の結果、前記複数内の個体の少なくとも約６７％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項１～９１のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記複数内の個体の少なくとも約６７％が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与後、少なくとも約２０週間、少なくとも約３６週間、少なくとも約５２週間、少なくとも約６０週間、少なくとも約６４週間、または少なくとも約６６週間にわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項９４に記載の方法。
  96. 複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与の結果、前記複数内の個体の少なくとも約７８％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項１～９１のいずれか一項に記載の方法。
  97. 前記複数内の個体の少なくとも約７８％が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与後、少なくとも約２０週間、少なくとも約３６週間、またはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項９６に記載の方法。
  98. 複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与の結果、前記複数内の個体の１００％が抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項１～９１のいずれか一項に記載の方法。
  99. 前記複数内の個体の１００％が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与後、少なくとも約６４週間、少なくとも約６８週間、少なくとも約７２週間、少なくとも約７６週間、少なくとも約８０週間、少なくとも約８４週間、またはそれよりも長くにわたって抗ＶＥＧＦレスキュー処置を必要としない、請求項９８に記載の方法。
  100. 複数の個体の１つの眼および／または反対側の眼へのｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与が、ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量の投与前の年間の抗ＶＥＧＦ注射率と比較して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％の年間の抗ＶＥＧＦ注射率の低下をもたらす、請求項１～９９のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記眼内血管新生疾患が滲出性加齢黄斑変性（ＡＭＤ）である、請求項１～１０、１６～７６、または８０～１００のいずれか一項に記載の方法。
  102. 前記眼内血管新生疾患が糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）である、請求項１～３、１１～６４、７７～８３、８５～８７、または８９～９１のいずれか一項に記載の方法。
  103. ｒＡＡＶ粒子の前記単位用量を前記個体の前記１つの眼および／または前記反対側の眼に投与する前記ステップが、糖尿病網膜症重症度尺度（ＤＲＳＳ）の２段階または３段階の改善をもたらす、請求項１０２に記載の方法。
  104. 個体における眼内血管新生疾患を処置するための方法における使用のための、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量であって、前記方法が、前記単位用量を前記個体の１つの眼に投与するステップを含み、前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
    ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
    ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質
    を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子の約６×１０１１ベクターゲノム（ｖｇ）またはそれ未満の単位用量。
  105. 眼内血管新生疾患を有する個体の眼の網膜液を低減させるための方法における使用のための、ｒＡＡＶ粒子の単位用量であって、前記方法が、前記単位用量を前記個体の１つの眼に投与するステップを含み、前記個体がヒトであり、前記ｒＡＡＶ粒子が、
    ａ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ＡＡＶ２末端逆位配列（ＩＴＲ）を両端に有する核酸、および
    ｂ）カプシドタンパク質の５８７位と５８８位の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１４）を含むＡＡＶ２カプシドタンパク質であって、アミノ酸残基ナンバリングがＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質に対応する、ＡＡＶ２カプシドタンパク質
    を含む、ｒＡＡＶ粒子の単位用量。
  106. 前記方法が、前記単位用量の投与前に抗ＶＥＧＦ剤を前記個体の前記１つの眼に投与するステップをさらに含む、請求項１０４または請求項１０５に記載の使用のための単位用量。
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