JP2022546260A - 機能的性質を有する非動物系タンパク質源 - Google Patents
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Abstract
増強されたタンパク質含有量を有する組成物、機能性タンパク質を有する組成物、タンパク質の組合せ、およびそれらの調製のための方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、卵を含まない食品を製造するための原料が本明細書に提供される。卵を含まない食品を製造するための原料組成物は、組換えオボアルブミン(rOVA)を含み得、rOVAは、卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供し得る。
Description
関連出願への相互参照
本出願は、2019年8月19日に出願された米国仮特許第62/888,674号の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、2019年8月19日に出願された米国仮特許第62/888,674号の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、EFS-Webを介してASCIIフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。2020年8月18日に作成された前記ASCIIコピーは、49160-717.601_ST25.txtという名称であり、287,890バイトのサイズである。
本出願は、EFS-Webを介してASCIIフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。2020年8月18日に作成された前記ASCIIコピーは、49160-717.601_ST25.txtという名称であり、287,890バイトのサイズである。
発明の背景
タンパク質は、重要な食物栄養素および食品原料である。それらは、燃料源として、または身体によって合成することができない必須アミノ酸を含むアミノ酸源としての役割を果たし得る。健康な成人について一日の推奨されるタンパク質の摂取は、人の総カロリー所要の10%~35%であり、現在、ほとんどのヒトについてのタンパク質摂取の大部分は、動物系源由来である。加えて、タンパク質は、幅広い種類の食品および食品原料において使用される。多くの場合では、これらのタンパク質は、動物から供給される。世界の人口増加および全世界の食品需要の同時の増加により、毎日の食事、食品原料および食品製品について有用なタンパク質源として、代替の持続可能な非動物系タンパク質源を提供する必要性がある。
タンパク質は、重要な食物栄養素および食品原料である。それらは、燃料源として、または身体によって合成することができない必須アミノ酸を含むアミノ酸源としての役割を果たし得る。健康な成人について一日の推奨されるタンパク質の摂取は、人の総カロリー所要の10%~35%であり、現在、ほとんどのヒトについてのタンパク質摂取の大部分は、動物系源由来である。加えて、タンパク質は、幅広い種類の食品および食品原料において使用される。多くの場合では、これらのタンパク質は、動物から供給される。世界の人口増加および全世界の食品需要の同時の増加により、毎日の食事、食品原料および食品製品について有用なタンパク質源として、代替の持続可能な非動物系タンパク質源を提供する必要性がある。
発明の要旨
本開示の追加の態様および利点は、以下の詳細な説明から当業者に容易に明らかになり、本開示の実例となる実施形態のみを、示し、記載する。実現されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、本開示から逸脱することなくすべて、さまざまな自明な事項において改変が可能である。したがって、図面および説明は、本質的に実例として見なされるべきであり、限定的なものとして見なされるべきではない。
本開示の追加の態様および利点は、以下の詳細な説明から当業者に容易に明らかになり、本開示の実例となる実施形態のみを、示し、記載する。実現されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、本開示から逸脱することなくすべて、さまざまな自明な事項において改変が可能である。したがって、図面および説明は、本質的に実例として見なされるべきであり、限定的なものとして見なされるべきではない。
一部の実施形態では、卵を含まない食品を製造するための原料が本明細書に提供される。卵を含まない食品を製造するための原料組成物は、組換えオボアルブミン(rOVA)を含み得、rOVAのpHは、約3.5~約7.0であり得、卵を含まない食品中に存在する場合、rOVAは、約2%~約15%(w/w)の量であり、rOVAは、卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供する。
一部の場合では、組成物は、乾燥されていてもよく、または粉末であってもよい。一部の場合では、組成物は、少なくとも75%のrOVAを含んでいてもよい(総タンパク質のw/wまたは総組成物のw/w)。一部の場合では、粉末組成物は、濃縮物であってもよい。一部の場合では、粉末組成物は、単離物であってもよい。一部の場合では、粉末組成物は、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)であってもよい。一部の場合では、粉末組成物は、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)である。一部の場合では、粉末は、濃縮物である。一部の場合では、粉末組成物は、単離物である。
一部の場合では、組成物は、液体であってもよい。一部の場合では、液体組成物は、少なくとも50%のrOVAを含んでいてもよい(総タンパク質のw/wまたは組成物のw/w)。一部の場合では、液体組成物は、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)を含む。rOVA%の文脈における総タンパク質のw/wという用語は、rOVAが、組成物中の総タンパク質の定義されたパーセンテージを含むことを意味する。一例では、w/wで、総タンパク質の少なくとも50%のrOVAを含む組成物は、rOVAである、総タンパク質の少なくとも半分、および別のタンパク質である、その他の半分ほどを有するだろう。したがって、総組成物は、重量で少なくとも50%のrOVAである必要は必ずしもなく、組成物のタンパク質含有量のみが少なくとも50%のrOVAでなければならない。
一部の場合では、rOVAは、類似の食品中のネイティブ卵白と比較して、同等の特性または特性の改善を提供する。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を提供する。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速くあり得る起泡までの時間を提供する。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約3.5~約4.5である。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも高くあり得る硬さを卵を含まない食品組成物に提供する。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも高くあり得るかみ応えを卵を含まない食品組成物に提供する。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供する。
一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAのアミノ酸配列は、N末端メチオニンを欠く。一部の場合では、rOVAは、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む。
一部の場合では、rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。
一部の場合では、可溶化された場合、pHは、約6~約6.8であってもよい。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約6.1未満であってもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品中に約8%未満の量で存在していてもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品中に約7%または7%未満の量で存在していてもよい。
一部の実施形態では、焼き物が本明細書に提供される。焼き物食品製品は、(i)組換えオボアルブミン(rOVA)であって、可溶化された場合、rOVAのpHが、約3.5~約7.0であり得る、rOVA、(ii)少なくとも1種の脂肪または油、(iii)少なくとも1種の穀類デンプン、および(iv)少なくとも1種の甘味料を含み得、rOVAは、焼き物食品製品に、結合性、弾力性、空気混和性、褐色化、組織化、保水性および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供し、焼き物食品製品は、いかなる天然卵白タンパク質も天然卵白も含まない。
一部の場合では、rOVAは、約2%~15%で製品中に存在していてもよい(焼き前の総タンパク質のw/wまたは総食品製品のw/w)。一部の場合では、rOVAは、約2%~約5%で製品中に存在する(w/w)。一部の場合では、焼き物は、乳成分もしくは膨張剤、またはそれらの組合せを含んでいてもよい。一部の場合では、製品は、ケーキ、パン、ロール、ペストリー、クラッカー、マフィン、スコーン、ビスケットまたはクッキーであってもよい。一部の場合では、焼き物製品は、天然卵白または天然全卵を用いて作製された類似の焼き物製品と同等またはそれよりも良好なクラム構造を有していてもよい。一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、全卵を用いて作製された同等の焼き物製品と比較した場合、重量喪失のパーセンテージは、rOVAを用いて作製された焼き物製品においてより低い。
一部の実施形態では、乳状化製品が本明細書に提供される。乳状化製品は、(i)組換えオボアルブミン(rOVA)、(ii)少なくとも1種の脂肪または油、(iii)水を含み得、rOVAは、製品中に約2%~15%(w/w)で存在し得る。一部の場合では、乳状化製品は、酸性化剤を含んでいてもよい。一部の場合では、製品は、サラダドレッシング、ソース、マヨネーズ、サンドイッチスプレッドまたはグレービーであってもよい。
一部の実施形態では、食品製品であって、(i)組換えオボアルブミン(rOVA)であって、可溶化された場合、rOVAのpHが、約3.5~約7.0であり得る、rOVA、(ii)少なくとも1種の甘味料、および(iii)必要に応じて、摂取可能な液体を含み、rOVAが、食品製品中に約2%~約15%(w/w)で存在していてもよく、rOVAが、食品製品に、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を提供する、食品製品が本明細書に記載される。
一部の場合では、rOVAは、食品製品にゲル化をさらに提供してもよい。一部の場合では、rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、食品製品は、メレンゲ、ホイップデザート、ホイップトッピングまたはスフレであってもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を食品製品に提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速くあり得る起泡までの時間を食品製品に提供してもよい。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約3.5~約4.5である。
一部の場合では、rOVAは、食品製品中に約5%~約10%(w/w)で存在する。一部の場合では、rOVAは、食品製品中に約7%~約8%(w/w)で存在する。一部の場合では、rOVAは、食品製品中に約4%、約7%または約12%(w/w)で存在する。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約6である。一部の場合では、rOVAは、食品製品中に約9%~約10%(w/w)で存在する。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約7である。一部の場合では、製品は、飲料であってもよい。一部の場合では、飲料は、摂取可能なアルコールであってもよい。一部の場合では、rOVAは、摂取可能なアルコール飲料に、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を提供する。一部の場合では、飲料は、コーヒードリンクである。一部の場合では、rOVAは、コーヒードリンクに、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を提供する。一部の場合では、コーヒードリンクは、乳成分を欠く。
一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、Salmonellaで食品製品を汚染しない。一部の場合では、食品製品は、プロテインバー、エネルギーバー、栄養バーまたはグラノーラバーである。一部の場合では、食品製品は、約4%~約8%(w/w)のrOVAを含む。一部の場合では、バーは、焼かれているか、または焼かれていない。
一部の実施形態では、肉類似食品製品が本明細書に記載される。肉類似食品製品は、(i)組換えオボアルブミン(rOVA)、(ii)少なくとも1種の脂肪または油、および(iii)植物由来タンパク質を含み得、rOVAは、食品製品中に約2%~約15%(w/w)で存在し得、rOVAは、結合剤もしくはゲル化剤、またはそれらの組合せとして作用する。
一部の場合では、植物タンパク質は、押し出し植物タンパク質であってもよい。一部の場合では、植物タンパク質は、非押し出し植物タンパク質であってもよい。一部の場合では、肉類似食品製品は、ハンバーガー、パティ、ソーセージ、ホットドッグ、スライスされたデリミート、ジャーキー、ベーコン、ナゲット、挽肉様組成物および成形肉様組成物から選択されてもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも高くあり得る硬さを食品製品に提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも高くあり得るかみ応えを食品製品に提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供してもよい。
一部の場合では、rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAは、食品製品中に約4%、約5%または約6%(w/w)で存在する。一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。
一部の実施形態では、卵白代替物が本明細書に提供される。卵白代替物は、(i)組換えオボアルブミン(rOVA)、(ii)少なくとも1種の脂肪または油、および(iii)多糖類または多糖類含有原料を含み得、rOVAは、組成物中に約2%~15%(ww)で存在し得、組成物は、硬さ、接着性、破砕性、凝集性、粘着性およびかみ応えから選択される1つまたは複数の特性を有し得、卵白代替物が料理され得る場合、1つまたは複数の特性は、天然卵白と比較して、同等またはそれよりも改善されている。
一部の場合では、卵白代替物は、香味剤もしくは着色剤、またはそれらの組合せをさらに含んでいてもよい。一部の場合では、多糖類または多糖類含有原料は、デンプンであってもよい。一部の場合では、多糖類または多糖類含有原料は、ジェランガム、アルギン酸ナトリウムおよびサイリウム、またはそれらの任意の組合せから選択されていてもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも高くあり得る硬さを食品製品に提供してもよい。
一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白よりも高くあり得るかみ応えを食品製品に提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、ネイティブ卵白と同程度の粘着性および/または弾力性を提供してもよい。一部の場合では、rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAは、食品製品中に約10%~約12%(w/w)で存在する。
一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。
一部の実施形態では、粉末化原料組成物が本明細書に記載される。粉末化原料組成物は、組換えオボアルブミン(rOVA)を含み得、可溶化された場合、rOVAのpHは、約3.5~約7.0であり得、rOVAは、組成物の少なくとも75%w/wであり得、rOVAは、N-アセチルグルコサミンに連結されたマンノースを有する1つまたは複数のN連結グリコシル化部位を含み得、N連結グリコシル化部位は、ガラクトースを欠く。一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAのアミノ酸配列は、N末端メチオニンを欠く。一部の場合では、rOVAは、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む。一部の場合では、組成物は、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)を含む。
一部の実施形態では、液体組成物は、組換えオボアルブミン(rOVA)を含み得、組成物は、少なくとも50%のrOVAを含み得る(総タンパク質のw/wまたは総組成物のw/w)。一部の場合では、組成物は、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)を含んでいてもよい。
一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。
一部の場合では、rOVAのアミノ酸配列は、N末端メチオニンを欠く。一部の場合では、rOVAは、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む。一部の場合では、可溶化されたrOVAのpHは、約3.5~約7.0であってもよい。一部の場合では、可溶化されたrOVAのpHは、約6~約6.8であってもよい。一部の場合では、可溶化されたrOVAのpHは、約6.1未満であってもよい。
一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、類似の卵を含まない食品中のネイティブ卵白と比較して、同等の特性または特性の改善を提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を提供してもよい。
一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速くあり得る起泡までの時間を提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高くあり得る硬さを提供してもよい。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約3.5~約4.5である。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品中に約5%~約10%(w/w)で存在する。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品中に約7%~約8%(w/w)で存在する。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品中に約4%、約7%または約12%(w/w)で存在する。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約6である。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高くあり得るかみ応えを提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供してもよい。
一部の場合では、rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAは、Salmonellaで卵を含まない食品を汚染しない。
一部の実施形態では、組換えオボアルブミン(rOVA)を含む乾燥または粉末化組成物であって、組成物が、少なくとも50%のrOVAを含み得る(総タンパク質のw/wまたは総組成物のw/w)、乾燥または粉末化組成物が本明細書に記載される。一部の場合では、組成物は、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%または少なくとも約95%のrOVA(w/w)を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。
一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAのアミノ酸配列は、N末端メチオニンを欠く。一部の場合では、rOVAは、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、類似の卵を含まない食品中のネイティブ卵白と比較して、同等の特性または特性の改善を提供してもよい。
一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速くあり得る起泡までの時間を提供してもよい。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約3.5~約4.5である。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品中に約4%、約7%または約12%(w/w)で存在する。一部の場合では、可溶化された場合、rOVAのpHは、約6である。
一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高くあり得る硬さを提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高くあり得るかみ応えを提供してもよい。一部の場合では、rOVAは、卵を含まない食品に、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供してもよい。一部の場合では、rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。一部の場合では、rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、rOVAは、改善されたゲル化を提供する。
一部の実施形態では、食品製品を作製する方法が本明細書に提供される。食品製品を作製する方法は、(i)可溶化された場合、pHが約3.5~約7.0の組換えオボアルブミン(rOVA)を提供するステップ、(ii)2%~15%(w/w)の量のrOVAを1種または複数の摂取可能な原料と組み合わせて、食品製品を形成するステップを含み得、rOVAは、食品製品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供してもよい。
一部の実施形態では、原料を作製する方法が本明細書に提供される。原料組成物を製造する方法は、(i)組換えオボアルブミン(rOVA)を微生物細胞中で発現させるステップであって、rOVAが、微生物細胞によって液体培地に分泌され得る、ステップ、(ii)分泌されたrOVAを含有する液体培地を回収するステップ、(iii)約3.5のpHで分離ステップを行うステップ、(iv)rOVAを約12のpHで可溶化するステップ、(v)rOVAの最終pHを約3.5~約7.0に調整して、原料組成物を作成するステップを含み得る。
一部の場合では、分離ステップは、イオン交換クロマトグラフィーまたは硫酸アンモニウム沈殿を含んでいてもよい。一部の場合では、イオン交換クロマトグラフィーは、カチオン交換クロマトグラフィーもしくはアニオン交換クロマトグラフィー、またはそれらの組合せであってもよい。一部の場合では、方法は、可溶化ステップ後に、濾過ステップをさらに含んでいてもよい。一部の場合では、微生物細胞は、真菌細胞であってもよい。一部の場合では、真菌細胞は、Pichia sp.であってもよい。一部の場合では、微生物細胞は、組換えヘルパー因子を発現し、ヘルパー因子は、rOVAの発現または蓄積のレベルを増強する。
一部の場合では、rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、分泌されたrOVAのアミノ酸配列は、N末端メチオニンを欠く。一部の場合では、分泌されたrOVAは、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む。
一部の実施形態では、卵を含まない食品製品は、組換えオボアルブミン(rOVA)を約15%~約25%の量で含んでいてもよい(総タンパク質のw/wまたは食品製品のw/w)。一部の場合では、卵を含まない食品製品は、rOVAを最大で約23%(w/w)の量で含んでいてもよい。
一部の実施形態では、組換えオボアルブミン(rOVA)の使用が本明細書に提供される。組換えオボアルブミン(rOVA)は、焼き物の作製における原料として使用されてもよい。rOVAは、卵を含まない食品製品の作製における原料として使用されてもよい。rOVAは、肉類似食品製品の作製における原料として使用されてもよい。rOVAは、卵白代替物の作製における原料として使用されてもよい。rOVAは、焼き物製品のための代替卵液として使用されてもよく、代替卵液は、天然卵白もしくは天然全卵を含み得る卵液と同等またはそれよりも良好な膜形成を提供してもよい。
rOVAは、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。rOVAは、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の場合では、rOVAは、卵液中に8%~9%(w/w)の量で存在する。
一部の実施形態では、組換えオボアルブミン(rOVA)の大規模製造が本明細書に記載される。rOVAの大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも1リットルの液体培養を含んでいてもよい。一部の場合では、大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも10リットルの液体培養を含んでいてもよい。一部の場合では、大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも100リットルの液体培養を含んでいてもよい。一部の場合では、大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも1000リットルの液体培養を含んでいてもよい。一部の場合では、大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも10,000リットルの液体培養を含む。一部の場合では、大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも100,000リットルの液体培養を含む。一部の場合では、大規模製造は、rOVAを発現する微生物細胞の約200,000リットルの液体培養を含む。
一部の実施形態では、組換えオボアルブミンを含む卵を含まない食品を製造するための原料組成物が本明細書に提供され得る。組換えオボアルブミンは、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供してもよい。
組換えオボアルブミンによって提供される卵白の特性は、ネイティブ卵白によって提供される同じ特性と実質的に同じまたはそれよりも良好であってもよい。組成物は、任意のネイティブ卵白タンパク質を含有していなくてもよい。組成物は、任意の動物製品を含有していなくてもよい。
組成物は、卵から抽出された任意のタンパク質を含有していなくてもよい。組成物の色は、ネイティブ卵白と比較して、白さまたは無色が改善されていてもよい。組換えオボアルブミンは、ニワトリ、ガチョウ、ウズラ、ダチョウおよびアヒルからなる群に由来するポリペプチド配列を含んでいてもよい。
組換えオボアルブミンは、味、臭い、口当たり、またはそれらの任意の組合せに関して官能的に中立であってもよい。組換えオボアルブミンは、起泡性および凝固の特徴を組成物に提供してもよい。
一部の実施形態では、本明細書に提供される原料組成物を含む焼き物製品が本明細書に提供される。組換えオボアルブミンは、構造、食感、または構造および食感の両方を焼き物製品に提供してもよい。組換えオボアルブミンは、タンパク質強化を焼き物製品に提供してもよい。組換えオボアルブミンは、焼き物製品中で約1%~約20%(オボアルブミンの重量/製品の重量)の濃度であってもよい。組換えオボアルブミンは、焼き物製品中で約0.1%~約5%(オボアルブミンの重量/製品の重量)の濃度であってもよい。
組換えオボアルブミンは、グルテン形成に適合していてもよい。焼き物製品は、ケーキ、クッキー、ベーグル、ビスケット、パン、マフィン、カップケーキ、スコーン、パンケーキ、マカロン、メレンゲ、シュー皮およびスフレからなる群から選択されてもよい。そのような原料を使用して作製されるケーキは、パウンドケーキ、スポンジケーキ、イエローケーキまたはエンジェルフードケーキであってもよい。組成物は、甘味剤、ガム、親水コロイド、デンプン、繊維、植物タンパク質、藻類タンパク質、着色剤および香味抽出物からなる群から選択される1つまたは複数の成分をさらに含んでいてもよい。
組成物は、卵様料理に好適な1つまたは複数の特性を提供してもよく、特性は、起泡性、凝固、結合性、構造、食感、膜形成、栄養プロファイル、コレステロールなしおよびタンパク質強化からなる群から選択されてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載される原料組成物を含む卵様料理が本明細書に提供される。卵様料理は、スクランブル、オムレツ、パティ、スフレ、キッシュおよびフリッタータからなる群から選択されてもよい。卵様料理は、ビーガン、ベジタリアン、ハラールまたはコーシャーであってもよい。
組成物は、加工肉製品または肉様製品に好適な1つまたは複数の特性を提供してもよく、特性は、高タンパク質含有量、結合性および官能的中立性からなる群から選択されてもよい。一部の実施形態では、本明細書に提供される原料組成物を含む肉様製品が本明細書に提供される。
肉様製品は、ハンバーガー、パティ、ソーセージ、ホットドッグ、スライスされたデリミート、ジャーキー、ベーコン、ナゲットおよび挽肉様混合物または成形肉または肉様組成物からなる群から選択されてもよい。オボアルブミンは、肉様製品中に約0.1%~30%(オボアルブミンの重量/製品の重量)の量で存在していてもよい。
組換えオボアルブミンは、食品コーティングの接着に好適な結合性の特性を提供してもよい。食品コーティングは、本明細書に記載される原料を含んでいてもよい。食品コーティングは、バッターまたはブレッディングであってもよい。組換えオボアルブミンは、料理、焼かれるか、またはフライされた場合にサクサクした食感の特性を食品コーティングにさらに提供してもよい。
組換えオボアルブミンは、匂いの中立性、フレーバー、口当たり、食感、栄養価およびタンパク質強化からなる群から選択される菓子に好適な特性を提供してもよい。菓子製品は、本明細書に記載される原料組成物を含んでいてもよい。菓子は、卵または卵白を含有していなくてもよい。菓子は、卵または卵白から抽出された任意のタンパク質を含有していなくてもよい。組換えオボアルブミンは、堅いまたはモチモチした食感を菓子に提供してもよい。組換えオボアルブミンは、約0.1%~15%(オボアルブミンの重量/菓子の重量)の量で存在していてもよい。菓子は、グミ、タフィーまたはヌガーであってもよい。
組換えオボアルブミンは、匂いの中立性、フレーバー、口当たり、起泡性、発泡性、食感および栄養価からなる群から選択される乳製品様飲料に好適な特性を提供してもよい。乳製品様飲料は、本明細書に記載される原料組成物を含んでいてもよい。乳製品様飲料は、卵または卵白を含有していなくてもよい。飲料は、スムージー、ミルクセーキ、「エッグノッグ」およびコーヒー飲料からなる群から選択されてもよい。組換えオボアルブミンは、約0.1%~20%(オボアルブミンの重量/飲料の体積)の量で存在していてもよい。
組換えオボアルブミンは、クリーミーな食感、低脂肪含有量、匂いの中立性、フレーバー、口当たり、食感、結合性および栄養価からなる群から選択されるデザート製品に好適な特性を提供してもよい。デザート製品は、本明細書に記載される原料組成物を含んでいてもよい。デザート製品は、ムース、チーズケーキ、カスタード、プディング、棒付きアイスキャンデー、冷菓およびアイスクリームからなる群から選択されてもよい。デザート製品は、ビーガン、ベジタリアンまたは乳製品なしであってもよい。組換えオボアルブミンは、約0.1%~10%(オボアルブミンの重量/デザート製品の重量)の量で存在していてもよい。
組換えオボアルブミンは、結合性、乳状化能、匂いの中立性および口当たりからなる群から選択されるソースまたはドレッシングに好適な特性を提供してもよい。ソースまたはドレッシングは、本明細書に記載される原料組成物を含んでいてもよい。ソースまたはドレッシングは、サラダドレッシング、マヨネーズ、市販のマヨネーズ代替物、アルフレイドウソースおよびオランデーズソースからなる群から選択されてもよい。ソースまたはドレッシングは、卵、卵白、または卵から抽出された任意のタンパク質を含有していなくてもよい。
組換えオボアルブミンは、結合性、タンパク質添加、フレーバーの中立性、匂いの中立性および口当たりからなる群から選択されるスナック食品に好適な特性を提供してもよい。スナック食品は、本明細書に記載される原料組成物を含んでいてもよい。スナック食品は、プロテインバー、栄養バーまたはグラノーラバーであってもよい。原料組成物は、甘味料、ガム、植物タンパク質、藻類タンパク質、香味料、着色料、増粘料、酸味料および乳状化料からなる群から選択される1つまたは複数の追加成分をさらに含んでいてもよい。
一部の実施形態では、卵白代替品を製造する方法が本明細書に提供される。卵白代替品は、組換えオボアルブミンを提供するステップ、組換えオボアルブミンを少なくとも1種の追加成分と混合して、卵白代替品を形成するステップを含んでいてもよい。組換えオボアルブミンは、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、クリーム状および凝集性からなる群から選択される少なくとも1つの卵白の特性を卵白代替品に提供してもよい。卵白代替品は、任意の卵、卵白、卵から抽出または単離されたタンパク質を含有していなくてもよい。少なくとも1つの卵白の特性は、同じ量または濃度(重量/体積)で提供されるネイティブ卵と同じまたはそれよりも良好であってもよい。
方法は、異種宿主細胞中で組換えオボアルブミンを産生させるステップをさらに含んでいてもよく、宿主細胞は、E.coli、酵母、糸状菌またはTrichodermaであってもよい。酵母または糸状菌は、Saccharomyces種およびPichia種からなる群から選択されてもよい。組換えオボアルブミンは、宿主細胞から分泌されてもよい。組換えオボアルブミンは、宿主細胞によってグリコシル化されてもよく、オボアルブミンのグリコシル化は、鶏卵から単離されたオボアルブミンと同一でなくてもよい。
方法は、分泌されたオボアルブミンを脱グリコシル化酵素で処理するステップをさらに含んでいてもよい。脱グリコシル化酵素は、宿主細胞によって発現されてもよい。
宿主は、組換えオボアルブミンをコードする核酸配列を含んでいてもよく、組換えオボアルブミンは、鳥類種由来のオボアルブミンのアミノ酸配列を有する。宿主は、組換えオボアルブミンをコードする核酸配列を含んでいてもよく、組換えオボアルブミンは、鳥類種由来のオボアルブミンと少なくとも95%の配列同一性を有するオボアルブミンのアミノ酸配列を有する。鳥類種は、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、ダチョウまたはウズラであってもよい。
鳥類種由来のオボアルブミンは、配列番号1~74からなる群から選択されてもよい。
一部の実施形態では、卵白代替品としての使用のための組換えタンパク質組成物が本明細書に提供される。組成物は、組換えオボアルブミンおよび少なくとも1種の追加成分を含むことができる。組換えオボアルブミンは、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、クリーム状および凝集性からなる群から選択される少なくとも1つの卵白の特性を組成物に提供してもよい。組成物は、任意の卵、卵白、卵から抽出または単離されたタンパク質を含有していなくてもよい。少なくとも1つの卵白の特性は、同じ量または濃度(重量/体積)で比較して、ネイティブ卵と同じまたはそれよりも良好であってもよい。
組換えオボアルブミンは、鳥類種由来のオボアルブミンのアミノ酸配列を有していてもよい。組換えオボアルブミンは、鳥類種由来のオボアルブミンと少なくとも95%の配列同一性を有するオボアルブミンのアミノ酸配列を有していてもよい。
鳥類種は、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、ダチョウまたはウズラであってもよい。鳥類種由来のオボアルブミンは、配列番号1~74からなる群から選択されてもよい。
動物栄養組成物は、組換えオボアルブミン(rOVA)を含み得る。rOVAは、全細胞抽出物、分画された細胞抽出物および単離されたタンパク質から選択される形態であってもよい。組成物は、ペットフード、動物飼料、歯応えのあるおやつ、骨スープ、スムージー、または動物栄養のための他の液体および動物の食物摂取に好適な固体栄養サプリメント内に含まれていてもよい。
加えて、本明細書に開示される任意の組成物、食品製品、原料、使用または方法は、任意の本明細書に開示される組成物、食品製品、原料、使用または方法に適用可能である。言い換えれば、本明細書に記載される任意の態様または実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
本発明の新規の特徴を、添付の特許請求の範囲において特に記述する。本発明の特徴および利点のより良好な理解は、本発明の原理を利用する実例となる実施形態を記述する以下の詳細な説明を参照して得られ、添付の図面は以下である。
発明の詳細な説明
本発明のさまざまな実施形態を本明細書に示し、記載したが、当業者には、そのような実施形態が例としてのみ提供されていることは自明である。多数の変形、変化および置換は、本発明から逸脱することなく、当業者には思い当たり得る。本明細書に記載される本発明の実施形態に対するさまざまな代替を用いてもよいことが理解されるべきである。
本発明のさまざまな実施形態を本明細書に示し、記載したが、当業者には、そのような実施形態が例としてのみ提供されていることは自明である。多数の変形、変化および置換は、本発明から逸脱することなく、当業者には思い当たり得る。本明細書に記載される本発明の実施形態に対するさまざまな代替を用いてもよいことが理解されるべきである。
栄養および機能的性質を食品原料に提供するタンパク質の非動物系源のための組成物ならびにその組成物を作製する方法、ならびに例えば、毎日の食事のためのヒトを含む動物による経口摂取のための摂取可能な製品、ヒトの食品およびおやつのため、ならびにヒトおよび動物の栄養のための原料が本明細書に提供される。
本明細書に提供される組成物および方法は、組換え技術により産生された発酵に由来するオボアルブミン、すなわち、組換えオボアルブミン(rOVA)を含有する。rOVAを含む組成物およびrOVAを含む組成物を作製するための方法は、摂取可能な原料または食品原料のタンパク質含有量を増加させることができ、動物およびヒトの経口摂取のための食品原料および摂取可能な食品製品の調理における使用のための機能的特徴も提供する。
一部の実施形態では、rOVAは、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性などの1つまたは複数の機能的特性を提供する。そのような特徴を有するrOVAは、卵を含まないもしくは動物を含まない、食品原料または食品製品の製造のために提供される食品原料であり得る。
本明細書で使用される場合、ネイティブ卵白、ネイティブ卵タンパク質、ネイティブオボアルブミンおよびネイティブ卵の文脈における「ネイティブ」とは、動物によって生み出されるか、または動物、特に、鳥などの産卵動物から収集される、卵白、卵タンパク質、オボアルブミンまたは全卵をそれぞれ指す。rOVA、およびrOVAを含有する組成物は、食品原料および食品製品において使用することができ、その結果、原料または製品は、任意のネイティブ卵白、ネイティブ卵タンパク質、ネイティブオボアルブミンおよびネイティブ卵を含有しない。一部の場合では、rOVAを使用して作製される原料または食品製品は、rOVA以外の任意の卵白タンパク質を含まない。rOVA、およびrOVAを含有する組成物は、食品原料および食品製品において使用することができ、その結果、原料または製品は、任意の動物産物を含有しない。
一部の実施形態では、rOVAは、食品製品の製造における全卵または卵白の使用の代わりになり得る(単独または他の原料とともに)。一部の実施形態では、rOVAによって提供される特徴は、ネイティブ卵白またはネイティブ卵によって提供される同じ特性と実質的に同じ、またはそれよりも良好である。例えば、rOVA、およびrOVAを含有する組成物は、ネイティブ卵白またはネイティブ全卵およびネイティブ卵白を用いて作製された組成物と比較して、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、水分保存性(保水性)、清澄化および凝集性、改善された色、例えば、より白い色を有することができる。
rOVAを有する食品原料および食品製品
rOVAを有する食品原料および食品製品
本明細書に開示される食品原料および食品製品は、rOVAを含むか、rOVAから本質的になるか、またはrOVAからなる組成物を含み、rOVAは、少なくとも1つの機能的特徴を、組成物、食品原料または食品製品に提供する。一部の場合では、rOVAによって提供される少なくとも1つの機能的特徴は、ネイティブ卵もしくは卵白、またはネイティブOVA(nOVA)と同程度、または実質的に類似である。例えば、それは、全卵、卵白またはnOVA組成物と同程度の、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、水分保存性(保水性)、清澄化および凝集性のうちのいずれか1つを提供してもよい。一部の実施形態では、少なくとも1つの機能的特徴は、例えば、任意の他の全卵タンパク質または卵白タンパク質の非存在下、食品原料または食品製品へのrOVAの包含によって、提供されるか、または実質的に提供される。
そのような組成物は、重量/重量(w/w)または重量/体積(w/v)基準で、0.1%~25%の量のrOVAを含むことができる。rOVAは、重量/重量(w/w)または重量/体積(w/v)基準で、0.1%、0.2%、0.25%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%もしくは25%、または少なくとも0.1%、0.2%、0.25%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%もしくは25%で存在していてもよい。これらの濃度は、組成物の乾燥重量に基づき得る。加えて、または代替的に、そのような組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/v基準で、最大で30%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%または1%である。一部の実施形態では、食品原料または食品製品中のrOVAは、0.1%~20%、1%~20%、0.1%~10%、1%~10%、0.1%~5%、1%~5%、2~10%、4~8%、4~10%、4~12%、0.1%~2%、1%~2%または0.1~1%の濃度範囲であり得る。
rOVAが全卵または卵白の少なくとも1つの特徴を摂取可能な食品組成物に提供する、摂取可能な食品組成物およびそのような組成物を作製する方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、rOVAは、摂取可能な食品組成物に添加されて、例えば、添加された栄養について、タンパク質含有量を増加させる。一部の実施形態では、rOVAは、摂取可能な食品組成物中に、組成物の総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)基準で、約1%~約40%存在する。例えば、100mlの組成物中に、rOVAは30gで存在し、したがって、rOVAは30%の濃度(w/v)であり、または例えば、100gの組成物中に、rOVAは30gで存在し、したがってrOVAは30%の濃度(w/w)である。一部の実施形態では、rOVAの濃度は、組成物のw/wおよび/またはw/v基準で、0.5%、1%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%もしくは40%であるか、または約0.5%、1%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%もしくは40%である。一部の実施形態では、w/wおよび/またはw/vで、rOVAは、0.5~1%、1~5%、2~8%、4~8%、2~12%、4~12%、5~10%、10~15%、15~20%、20~25%、25~30%、もしくは約0.5~1%、1~5%、2~8%、4~8%、2~12%、4~12%、5~10%、10~15%、15~20%、20~25%、25~30%の濃度で存在し、またはrOVAは、1%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%もしくは40%より高い濃度で存在する。
摂取可能な製品は、1種または複数の他のタンパク質、例えば、非OVAタンパク質または非組換えタンパク質を含むことができる。rOVAは、摂取可能な製品中のタンパク質含有量の量を増加させることができ、および/または1つもしくは複数の卵白様特徴を提供することができる。例えば、摂取可能な組成物は、ホエイタンパク質、エンドウタンパク質、ダイズタンパク質、アーモンドタンパク質、カラスムギタンパク質、亜麻種子タンパク質、植物性タンパク質または卵白タンパク質を含むことができる。摂取可能なタンパク質は、押し出し植物タンパク質または非押し出し植物タンパク質を含んでいてもよい。一部の場合では、1種または複数の他のタンパク質は、鳥または爬虫類において天然で見出されるアミノ酸配列を有するOVAを含むことができる。
一部の実施形態では、組成物および組成物を作製するための方法は、卵白様性質を有し、組成物中のタンパク質含有量を増加させる。一部の実施形態では、卵白様性質を有する組成物および組成物を作製するための方法は、タンパク質含有量を増加させるが、安定性または組成物の1つもしくは複数の官能的品質に悪影響を及ぼさない。
一部の実施形態では、摂取可能な食品組成物および摂取可能な食品組成物を作製するための方法は、rOVAを含み、rOVAの添加は、卵白様組成物を生じる。摂取可能な食品組成物は、最終製品、または最終製品を作製するための原料、例えば、液体または粉末化rOVA組成物であってもよい。
rOVAタンパク質は、それ自体で、または他の成分と組み合わせて使用して、組成物を形成してもよい。一部の実施形態では、rOVAは、原料として使用されて、組成物を形成し、rOVA原料(または添加されるrOVA出発組成物)は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、約10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%、または少なくとも約10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%のrOVAを含有していてもよい。一部の場合では、本明細書に記載される組成物は、w/wまたはw/vで、最大で約10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%のrOVAを含有していてもよい。一部の実施形態では、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、組成物中の、約10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%、または少なくとも約10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%のタンパク質が、rOVAである。一部の場合では、w/wまたはw/vで、組成物中の、最大で10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%、または約10%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%もしくは99%のタンパク質が、rOVAである。
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、100mLの液体(例えば、水)あたり、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70もしくは75g、または少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70もしくは75gの総タンパク質の濃度で、総タンパク質を含有する。一部の場合では、本明細書に記載される組成物は、100gの組成物(例えば、粉末)あたり、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95もしくは100g、または少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95もしくは100gの総タンパク質の濃度で、総タンパク質を含有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、100mLの液体(例えば、水)あたり、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70もしくは75g、または少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70もしくは75gの濃度で、rOVAを含有する。一部の場合では、本明細書に記載される組成物は、100gの組成物(例えば、粉末)あたり、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95もしくは100g、または少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95もしくは100gの総タンパク質の濃度で、rOVAを含有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、100mLの液体(例えば、水)あたり、約0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5g、または少なくとも0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5gの総タンパク質の濃度で、総タンパク質を含有する。一部の場合では、本明細書に記載される組成物は、100gの組成物(例えば、粉末)あたり、約0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5g、または少なくとも0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5gの総タンパク質の濃度で、総タンパク質を含有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、100mLの液体(例えば、水)あたり、約0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5g、または少なくとも0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5gの濃度で、rOVAを含有する。一部の場合では、本明細書に記載される組成物は、100gの組成物(例えば、粉末)あたり、約0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5g、または少なくとも0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7もしくは5gの濃度で、rOVAを含有する。
一部の実施形態では、rOVAの摂取可能な組成物は、液体組成物である。そのような場合では、液体組成物中のrOVAの濃度は、0.1%~90%であってもよい。液体組成物中のrOVAの濃度は、少なくとも0.1%であってもよい。液体組成物中のrOVAの濃度は、最大で90%であってもよい。液体組成物中のrOVAの濃度は、総体積あたりの重量(w/v)で、0.1%~1%、0.1%~5%、0.1%~10%、0.1%~15%、0.1%~20%、0.1%~25%、0.1%~30%、0.1%~35%、0.1%~40%、1%~5%、1%~10%、1%~15%、1%~20%、1%~25%、1%~30%、1%~35%、1%~40%、5%~10%、5%~15%、5%~20%、5%~25%、5%~30%、5%~35%、5%~40%、10%~15%、10%~20%、10%~25%、10%~30%、10%~35%、10%~40%、15%~20%、15%~25%、15%~30%、15%~35%、15%~40%、20%~25%、20%~30%、20%~35%、20%~40%、25%~30%、25%~35%、25%~40%、30%~35%、30%~40%、35%~40%、40%~45%、45%~50%、50%~55%、55%~60%、60%~65%、65%~70%、70%~75%、75%~80%、80%~85%、85%~90%または90%~95%であってもよい。液体組成物中のrOVAの濃度は、w/vで、約0.1%、1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%または95%であってもよい。液体組成物中のrOVAの濃度は、w/vで、少なくとも0.1%、1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%または95%であってもよい。液体組成物中のrOVAの濃度は、w/vで、最大で1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%または95%であってもよい。一部の実施形態では、rOVAは、液体組成物中で唯一のタンパク質である。他の実施形態では、液体組成物は、rOVA以外のタンパク質を含む。
一部の実施形態では、rOVAの摂取可能な組成物は、固体組成物である。そのような場合では、固体組成物中のrOVAの濃度は、0.1%~70%であってもよい。固体組成物中のrOVAの濃度は、少なくとも0.1%であってもよい。固体組成物中のrOVAの濃度は、最大で70%であってもよい。固体組成物中のrOVAの濃度は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、0.1%~1%、0.1%~10%、0.1%~20%、0.1%~30%、0.1%~40%、0.1%~50%、0.1%~60%、0.1%~70%、1%~10%、1%~20%、1%~30%、1%~40%、1%~50%、1%~60%、1%~70%、10%~20%、10%~30%、10%~40%、10%~50%、10%~60%、10%~70%、20%~30%、20%~40%、20%~50%、20%~60%、20%~70%、30%~40%、30%~50%、30%~60%、30%~70%、40%~50%、40%~60%、40%~70%、50%~60%、50%~70%または60%~70%であってもよい。固体組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、0.1%、1%、10%、20%、30%、40%、50%、60%または70%であってもよい。固体組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、少なくとも0.1%、1%、10%、20%、30%、40%、50%または60%であってもよい。固体組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、最大で1%、10%、20%、30%、40%、50%、60%または70%であってもよい。
一部の実施形態では、rOVAの摂取可能な組成物は、粉末化組成物である。そのような場合では、粉末組成物中のrOVAの濃度は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、15%~99%であってもよい。粉末組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、少なくとも15%であってもよい。実施形態では、粉末組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、最大で99%であってもよい。粉末組成物中のrOVAの濃度は、w/wおよび/またはw/vで、15%~30%、15%~45%、15%~60%、15%~75%、15%~80%、15%~85%、15%~90%、15%~95%、15%~99%、30%~45%、30%~60%、30%~75%、30%~80%、30%~85%、30%~90%、30%~95%、30%~99%、45%~60%、45%~75%、45%~80%、45%~85%、45%~90%、45%~95%、45%~99%、60%~75%、60%~80%、60%~85%、60%~90%、60%~95%、60%~99%、75%~80%、75%~85%、75%~90%、75%~95%、75%~99%、80%~85%、80%~90%、80%~95%、80%~99%、85%~90%、85%~95%、85%~99%、90%~95%、90%~99%または95%~99%であってもよい。粉末組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、約15%、30%、45%、60%、75%、80%、85%、90%、95%または99%であってもよい。粉末組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、少なくとも15%、30%、45%、60%、75%、80%、85%、90%または95%であってもよい。粉末組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、最大で30%、45%、60%、75%、80%、85%、90%、95%または99%であってもよい。一部の実施形態では、rOVAは、粉末組成物中で唯一のタンパク質である。他の実施形態では、粉末組成物は、rOVA以外のタンパク質を含む。
一部の場合では、粉末組成物は、w/wで、少なくとも70%のrOVAを含む濃縮物であってもよい。一部の場合では、粉末組成物は、w/wで、少なくとも80%のrOVAを含む濃縮物であってもよい。一部の場合では、粉末組成物は、w/wで、少なくとも90%のrOVAを含む単離物であってもよい。一部の場合では、粉末組成物は、w/wで、少なくとも95%のrOVAを含む単離物であってもよい。
一部の実施形態では、rOVAの摂取可能な組成物は、濃縮化液体組成物である。そのような場合では、濃縮化液体組成物中のrOVAの濃度は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、10%~60%であってもよい。濃縮化液体中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、少なくとも10%であってもよい。濃縮化液体中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、最大で60%であってもよい。濃縮化液体中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、10%~20%、10%~30%、10%~40%、10%~50%、10%~60%、20%~30%、20%~40%、20%~50%、20%~60%、30%~40%、30%~50%、30%~60%、40%~50%、40%~60%または50%~60%であってもよい。濃縮化液体中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、約10%、20%、30%、40%、50%または60%であってもよい。濃縮化液体中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、少なくとも10%、20%、30%、40%または50%であってもよい。濃縮化液体中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/vで、最大で20%、30%、40%、50%または60%であってもよい。液体は、任意の摂取可能な溶媒、例えば、水、乳製品、油または他の料理ベースを含んでいてもよい。
一部の実施形態では、rOVAの摂取可能な組成物は、例えば、焼き物、サラダドレッシング、卵様料理(卵パティまたはスクランブルなど)、デザートもしくは乳製品様製品、または肉類似物(ビーガンの肉パティ、ソーセージまたはホットドッグなど)のような調理済み食品である。そのような組成物は、重量/重量(w/w)または重量/体積(w/v)基準で、0.1%~20%の量のrOVAを含むことができる。rOVAは、重量/重量(w/w)または重量/体積(w/v)基準で、0.1%、0.2%、0.25%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%もしくは20%、または少なくとも0.1%、0.2%、0.25%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%もしくは20%で存在していてもよい。加えて、または代替的に、そのような組成物中のrOVAの濃度は、w/wまたはw/v基準で、最大で30%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%または1%である。一部の実施形態では、食品原料または食品製品中のrOVAは、0.1%~20%、1%~20%、0.1%~10%、1%~10%、0.1%~5%、1%~5%、0.1%~2%、1%~2%または0.1~1%の濃度範囲であり得る。
rOVAを含有するrOVA組成物および食品原料および食品製品の特徴ならびに特性
rOVAを含有するrOVA組成物および食品原料および食品製品の特徴ならびに特性
本明細書のrOVA含有組成物は、1つまたは複数の機能的特徴を食品原料および食品製品に提供することができる。一部の実施形態では、rOVAは、タンパク質含有量、タンパク質強化およびアミノ酸含有量などの栄養的特徴を食品原料または食品製品に提供する。組成物中のrOVAによって提供される栄養的特徴は、卵、卵白またはネイティブOVA(nOVA)と同程度または実質的に類似であってもよい。組成物中のrOVAによって提供される栄養的特徴は、ネイティブ全卵またはネイティブ卵白によって提供されるものよりも良好であってもよい。一部の場合では、rOVAは、任意の他の卵白タンパク質の非存在下、卵白の1つまたは複数の機能的特徴を提供する。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、起泡性および泡の容量を組成物に提供することができる。例えば、rOVAは、泡を形成するために使用して、ケーキなどの焼き物製品、メレンゲ、およびrOVAが卵白の代わりに泡の容量を提供することができる他の食品において使用することができる。一部の場合では、rOVAは、任意の他の卵白タンパク質の非存在下、卵白の起泡性および泡の容量を提供する。
rOVAを含む組成物は、卵白またはnOVAを含む組成物の泡の高さよりも高い泡の高さを有していてもよい。一部の場合では、rOVAを含む組成物は、卵白、nOVA組成物または代替卵白と比べて、約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%もしくは500%、または少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%もしくは500%の泡の高さを有していてもよい。一部の場合では、rOVAを含む組成物は、卵白、nOVA組成物または代替卵白と比べて、最大で50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%または500%の泡の高さを有していてもよい。代替卵白は、卵白代替物として一般に使用されている、アクアファバ、チアシード、亜麻種子、でんぷん;アップルソース、バナナピューレ;コンデンスミルクなどのような製品を含んでいてもよい。
rOVAを含む組成物は、卵白、nOVA組成物または代替卵白の泡の安定性よりも高い泡の安定性を有していてもよい。一部の場合では、rOVAを含む組成物は、卵白または代替卵白と比べて、約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%もしくは500%、または少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%もしくは500%の泡の安定性を有していてもよい。一部の場合では、rOVAを含む組成物は、卵白と比べて、最大で50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%または500%の泡の安定性を有していてもよい。泡の安定性は、起泡した溶液の排液を測定することによって、算出されてもよい。排液は、泡の安定性についてのデータを蓄積するために、10分ごとに30分間測定されてもよい。30分後に排液された体積を、初期の液体の体積(5mL)と比較してもよく、例えば、泡の安定性(%):(初期体積-排液された体積)/初期体積×100であり得る。
rOVAを含む組成物は、卵白、nOVA組成物または代替卵白の泡の容量よりも高い泡の容量を有していてもよい。一部の場合では、rOVAを含む組成物は、卵白、nOVAまたは代替卵白と比べて、約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%もしくは500%、または少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%もしくは500%の泡の容量を有していてもよい。一部の場合では、rOVAを含む組成物は、卵白、nOVA組成物または代替卵白と比べて、最大で50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%、350%、400%、450%または500%の泡の容量を有していてもよい。泡の容量は、ホイップ後の泡の初期体積を測定し、初期体積の5mLに対して比較することによって決定されてもよい。泡の容量(%)=(泡の体積/初期体積)×100。
液体組成物は、卵白、nOVAまたは代替卵白を含む組成物よりも速く起泡してもよい。一部の場合では、rOVA組成物は、卵白、nOVAまたは代替卵白組成物よりも、少なくとも1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%速く起泡する。一部の場合では、rOVA組成物は、卵白、nOVAまたは代替卵白組成物よりも、最大で1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%速く起泡する。
rOVAを含む組成物は、卵白、nOVA組成物または卵白代替物のゲルの強度よりも高いゲルの強度を有していてもよい。一部の場合では、rOVA組成物は、100g~1500g、500g~1500gまたは700g~1500gの範囲内のゲルの強度を有していてもよい。一部の場合では、rOVA組成物は、約10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450もしくは1500g、または少なくとも10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450もしくは1500gのゲルの強度を有する。一部の場合では、rOVA組成物は、最大で10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450または1500gのゲルの強度を有する。一部の場合では、rOVA組成物は、卵白、nOVAまたは卵白代替物と比べて、約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、または少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%のゲルの強度を有する。一部の場合では、rOVA組成物は、卵白、nOVAまたは卵白代替物と比べて、最大で50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%のゲルの強度を有する。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、構造、食感、または構造および食感の組合せを提供することができる。一部の実施形態では、rOVAは、焼き物のための食品原料または食品製品に添加され、rOVAは、構造、食感、または構造および食感の組合せを焼き物製品に提供する。rOVAは、そのような焼き物製品において、ネイティブ卵白、ネイティブ卵またはネイティブ卵タンパク質の代わりに使用することができる。rOVAの焼き物製品への添加は、タンパク質強化を提供して、栄養含有量を改善することもできる。一部の実施形態では、rOVAは、焼き物製品において、重量/重量または重量/体積基準で、0.1%~25%の量で使用される。一部の実施形態では、rOVAは、焼き物製品において、0.1%~5%の量で使用される。一部の場合では、rOVAは、任意の他の卵白タンパク質の非存在下、卵白の構造および/食感を提供する。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、グルテン形成に適合し得、その結果、rOVAを、グルテン形成が、構造、食感および/または泡を食品原料または食品製品に提供する場合に、使用することができる。
rOVAを原料として使用することができる例示的な焼き物製品としては、限定されるものではないが、ケーキ、クッキー、パン、ベーグル、ビスケット、マフィン、カップケーキ、スコーン、パンケーキ、マカロン、シュー皮、メレンゲおよびスフレが挙げられる。例えば、rOVAを、原料として使用して、パウンドケーキ、スポンジケーキ、イエローケーキまたはエンジェルフードケーキなどのケーキを作製することができ、そのようなケーキは、任意のネイティブ卵白、ネイティブ全卵およびネイティブ卵タンパク質を含有しない。rOVAと一緒に、焼き物製品は、粉、甘味剤、ガム、親水コロイド、デンプン、繊維、香味料(香味抽出物など)および他のタンパク質源などの追加原料を含有していてもよい。一部の実施形態では、焼き物製品は、rOVA、ならびに少なくとも1種の脂肪または油、少なくとも1種の穀類デンプン、および必要に応じて少なくとも1種の甘味料を含んでいてもよい。そのような組成物における使用のための穀類デンプンとしては、小麦粉、米粉、トウモロコシ粉、雑穀粉、スペルト粉およびカラスムギ粉などの粉、およびトウモロコシ、ジャガイモ、ソルガムおよびクズウコン由来などのデンプンが挙げられる。そのような組成物における使用のための油および脂肪としては、オリーブ油、トウモロコシ油、アボカド油、ナッツ油(例えば、アーモンド、クルミおよびピーナッツ)およびベニバナ油などの植物由来の油および脂肪が挙げられる。rOVAは、焼き物製品の結合性、弾力性、空気混和性、褐色化、組織化、保水性および凝集性などの卵白の少なくとも1つの特性を有するそのような焼き物を提供してもよい。一部の場合では、焼き物製品は、任意の天然卵白および天然卵を含まず、および/またはrOVAを除いて、任意の他の卵白に由来するタンパク質を含まない。一部の場合では、rOVAは、焼き物組成物に、原料、例えば、rOVAの濃縮物、単離物または粉末形態で出発する原料として、提供される。一部の場合では、焼き物製品のための原料として提供されるrOVAは、約3.5~7.0のpH範囲である。一部の場合では、砂糖、シロップ、ハチミツまたは砂糖代替物などの甘味料が、焼き物製品に含まれる。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、ネイティブ全卵またはネイティブ卵白が、スクランブル、オムレツ、パティ、スフレ、キッシュおよびフリッタータなどの基本的または特徴的な原料である場合に、作製される食品製品などの卵を含まない食品製品を調理するために使用することもできる。一部の実施形態では、rOVAは、起泡性、凝固、結合性、構造、食感、膜形成、栄養プロファイル、コレステロールの非存在(すなわち、コレステロールなし)およびタンパク質強化を含む1つまたは複数の機能的特徴を、調理物に提供する。そのような卵を含まない調理物は、ビーガン、ベジタリアン、ハラールもしくはコーシャー、またはそれらの組合せであり得る。卵を含まない調理物(卵白代替物とも称する)は、rOVA、ならびに少なくとも1種の脂肪または油、多糖類または多糖類含有原料およびデンプンを含んでいてもよい。一部の場合では、卵を含まない調理物はまた、香味剤(塩辛さ、硫黄様またはうま味の風味を提供するためなど)および/または着色剤(例えば、黄色様またはオフホワイトの色を焼き物製品に提供するため)を含んでいてもよい。一部の場合では、卵を含まない調理物中の含有物またはrOVAは、組成物が加熱または料理される場合に、硬さ、接着性、破砕性、凝集性、粘着性およびかみ応えなどの天然(ネイティブ)卵白の特性を提供する。そのような組成物のための例示的な多糖類または多糖類含有原料としては、ジェランガム、アルギン酸ナトリウムおよびサイリウムが挙げられる。そのような組成物における使用のための油および脂肪としては、オリーブ油、トウモロコシ油、アボカド油、およびベニバナ油などの植物由来の油および脂肪が挙げられる。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、加工肉製品もしくは肉様製品のため、または魚様もしくは甲殻類様製品のために使用することができる。そのような製品では、rOVAは、タンパク質含有量およびタンパク質添加、ならびに結合性、組織化の性質などの1つまたは複数の機能的特性を提供することができる。例示的な肉および肉様製品としては、ハンバーガー、パティ、ソーセージ、ホットドッグ、スライスされたデリミート、ジャーキー、ベーコン、ナゲットおよび挽肉様混合物が挙げられる。肉様製品は、ウシ、ブタ、ニワトリ、ラムおよび他の可食物、ならびにヒトのためおよび他の動物のための摂取される肉のようであり得る。魚様および甲殻類様製品は、例えば、フィッシュケーキ、クラブケーキ、エビ、エビボール、フィッシュスティック、シーフードミート、カニ肉、魚の切り身およびアサリのむき身のようであり得る。一部の実施形態では、rOVAは、肉または肉様製品中に、w/wまたはw/vで、約0.1%~30%の量で存在する。一部の実施形態では、rOVAは、肉様製品(肉類似物とも称され、少なくとも1種の脂肪または油および植物由来タンパク質を含む)のために使用される。そのような組成物における使用のための油および脂肪としては、オリーブ油、トウモロコシ油、アボカド油およびベニバナ油などの植物由来の油および脂肪が挙げられる。肉類似物における使用のための植物由来タンパク質としては、ダイズタンパク質、ナッツタンパク質、エンドウタンパク質、レンズ豆および他の豆類タンパク質、ならびにホエイタンパク質が挙げられる。一部の場合では、そのような植物タンパク質は、押し出され、他の場合では、そのような植物タンパク質は非押し出しタンパク質である。一部の場合では、肉類似物は、約2%~15%(w/w)のrOVAを含む。肉類似組成物のための一部の場合では、rOVAは、そのような組成物のための、結合剤、ゲル化剤、または結合剤およびゲル化剤の組合せとして作用する。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、食品製品のためのコーティング中で用いることができる。例えば、rOVAは、結合または接着特性を提供して、別の食品原料にバッターまたはブレッディングを接着させることができる。rOVAは、「卵を含まない卵液」として使用することができ、rOVAタンパク質は、他の食品原料または食品製品、例えば、焼き物製品上にコーティングされた場合に、外観、色および食感を提供する。一例では、「卵を含まない卵液」を使用して、焼き物をコーティングしてもよく、その結果、焼き物は、コーティング(例えば、種子、塩、スパイスおよびハーブ)に接着する。コーティングとしてのrOVAの食品製品への添加は、サクサクした食感を提供することができ、または、例えば、製品が調理、焼かれるか、またはフライされた場合になどに食品製品の外側の硬さを増加させることができる。
本明細書に開示されるrOVA組成物は、卵を含まないマヨネーズ、市販のマヨネーズ代替物、グレービー、サンドイッチスプレッド、サラダドレッシングまたは食品ソースなどのソースおよびドレッシングを含む。rOVAのソースまたはドレッシングなどへの包含は、結合性、乳状化性、匂いの中立性および口当たりなどの1つまたは複数の特性を提供することができる。一部の実施形態では、rOVAは、そのようなソースおよびドレッシング中に、w/wまたはw/vで、0.1%~3%または約3%~約5%の量で存在する。一部の場合では、ソースまたはドレッシング中のrOVAの量は、市販または一般的に使用されるレシピにおいて使用される全卵、卵白またはnOVAの量と実質的に類似であってもよい。例示的なソースおよびドレッシングとしては、マヨネーズ、市販のマヨネーズ代替物、アルフレイドウソースおよびオランデーズソースが挙げられる。一部の実施形態では、rOVAを含有するソースまたはドレッシングは、全卵、卵白、または卵から抽出された任意の他のタンパク質を含有しない。一部の場合では、rOVAを用いて作製されたソース、ドレッシングまたは他の乳状化製品は、少なくとも1種の脂肪または油、および水を含む。そのような組成物のための例示的な脂肪および油としては、トウモロコシ油、ベニバナ油、ナッツ油およびアボカド油が挙げられる。
rOVA組成物を使用して、卵を含まない、動物なしの、ベジタリアンおよびビーガンの菓子などの菓子を調理することができる。rOVAは、匂いの中立性、フレーバー、口当たり、食感、ゲル化性、凝集性、起泡性、発泡性、栄養価およびタンパク質強化を含む1つまたは複数の機能的特徴を菓子に提供することができる。一部の実施形態では、rOVAを含有する調理された菓子は、任意のネイティブ卵タンパク質およびネイティブ卵白を含有しない。そのような菓子中のrOVAは、堅いまたはモチモチした食感を提供することができる。一部の実施形態では、rOVAは、約0.1%~15%で菓子中に存在する。例示的な菓子としては、グミ、タフィー、神のキャンディー、メレンゲ、マシュマロおよびヌガーが挙げられる。一部の実施形態では、菓子は、rOVA、少なくとも1種の甘味料、および必要に応じて摂取可能な液体を含む。例示的な甘味料としては、砂糖、ハチミツ、砂糖代替物および植物由来シロップが挙げられる。一部の場合では、rOVAは、菓子を作製するための原料として、約3.5~約7.0のpHで提供される。一部の場合では、rOVAは、菓子組成物中に約2%~約15%(w/v)で存在する。一部の実施形態では、菓子は、メレンゲ、ホイップデザートまたはホイップトッピングなどの食品製品である。一部の実施形態では、菓子中のrOVAは、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を食品製品に提供し、および/またはゲル化を提供する。一部の場合では、菓子は、発泡性ドリンクなどの液体である。一部の場合では、液体は、摂取可能なアルコール(甘いカクテルまたは夕食後のドリンクなど)を含んでいてもよい。
本明細書のrOVA組成物は、乳製品、乳製品様製品または乳製品含有製品において使用することができる。例えば、rOVAは、スムージー、ミルクセーキ、「エッグノッグ」およびコーヒー飲料などの飲料の調理において使用することができる。一部の実施形態では、rOVAは、追加原料に添加され、少なくとも1種の原料は、乳製品原料または乳製品由来原料(ミルク、クリーム、ホエイおよびバターなど)である。一部の実施形態では、rOVAは、追加原料に添加されて、任意のネイティブ卵タンパク質、ネイティブ卵白およびネイティブ卵を含有しない飲料を作り出す。一部の実施形態では、rOVAは、任意のネイティブ卵由来原料および任意の乳製品由来原料を含有しないものなどの動物由来原料を含有しない飲料における原料である。そのような非乳製品由来ドリンクの例としては、豆乳またはアーモンドミルクなどのナッツミルクが挙げられる。rOVAを使用して、タンパク質、フレーバー、食感および口当たりをコーヒー、紅茶、アルコール系飲料もしくはココアなどの飲料に提供するためのクリーマーまたは「ミルク」などの飲料添加物を作成することもできる。一部の実施形態では、rOVAは、飲料原料または飲料添加物中に、w/wまたはw/vで、約0.1%~20%の量で存在する。
本明細書の一部の実施形態では、rOVAを使用して、ヨーグルト、チーズまたはバターなどの乳製品様製品を調製することができる。rOVAを有する乳製品は、他の動物系乳成分またはタンパク質を含むことができる。一部の実施形態では、rOVAを用いて調製される乳製品は、任意の動物系原料を含まない。
デザート製品の調理物は、rOVAを使用して調理することができる。デザート製品では、rOVAは、クリーミーな食感、低脂肪含有量、匂いの中立性、フレーバー、口当たり、食感、結合性および栄養価などの1つまたは複数の特性を提供することができる。rOVAは、デザート製品を調理するために使用される原料または原料のセット中に存在していてもよい。rOVAを用いる調理に好適な例示的なデザート製品としては、ムース、チーズケーキ、カスタード、プディング、棒付きアイスキャンデーおよびアイスクリームが挙げられる。一部の実施形態では、rOVAを含むように調理されたデザート製品は、ビーガン、ベジタリアンまたは乳製品なしである。rOVAを含むデザート製品は、w/wまたはw/vで、約0.1%~約10%のrOVAであるrOVAの量を有することができる。
rOVAを使用して、プロテインバー、エネルギーバー、栄養バーまたはグラノーラバーなどのスナック食品を調理することができる。rOVAは、結合性、タンパク質添加、フレーバーの中立性、匂いの中立性、コーティングおよび口当たりのうちの1つまたは複数を含む特性をスナック食品に提供することができる。一部の実施形態では、rOVAは、スナック食品の調理物に、w/wまたはw/vで、約0.1%~30%の量で添加される。
rOVAを、rOVAが高タンパク質添加を提供する、非経口栄養、プロテインドリンクサプリメント、プロテインシェークなどの栄養サプリメントのために使用することができる。一部の実施形態では、rOVAは、そのような組成物に、w/wまたはw/vで、約10%~30%の量で添加することができる。
一部の実施形態では、rOVA組成物を、卵代替品および卵白代替品として使用することができる。rOVAは、少なくとも1種の追加成分と混合または組み合わせて、卵白代替品を形成することができる。rOVAは、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、クリーム状および凝集性などの1つまたは複数の特性を、卵代替品または卵白代替品に提供することができる。一部の実施形態では、特性は、同じ量または濃度(w/wまたはw/v)で提供されるネイティブ卵またはネイティブ卵白と同じまたはそれよりも良好である。一部の実施形態では、卵代替品または卵白代替品は、任意の卵、卵白、卵から抽出または単離されたタンパク質を含有しない。
rOVAを含有する食品原料および食品製品、例えば、本明細書に記載されるものは、追加原料または成分を含有することができる。例えば、rOVA組成物は、甘味料、ガム、香味料、増粘料、酸味料および乳状化料のうちの1種また複数などの追加成分を用いて調理することができる。粉、穀類、油および脂肪、繊維、果物ならびに野菜などの他の原料を、rOVAと組み合わせることができる。そのようなrOVA組成物は、ビーガン、ベジタリアン、ハラール、コーシャーおよび動物なし、またはそれらの組合せであり得る。一部の実施形態では、rOVAは、食品原料であり得るか、あるいは通常、動物系であるか、または肉、乳製品もしくは卵などの動物由来成分を通常含有する食品製品のために調理することができる。
食品原料および食品製品を含むrOVAを含む組成物は、加熱、焼き、グリル、ロースト、蒸し煮、電子レンジ、直火焼き、ゆでる、蒸す、押し出す、たっぷりの油で揚げる、もしくはパンフライなどの摂取可能な調理物の1つまたは複数のステップと適合性であり得るか、あるいは、オーム加熱、真空調理、冷凍する、冷やす、ブランチング、包装する、缶詰化する、漂白する、濃縮する、乾燥する、プレスする、粉砕する、混合する、パークッキング、料理する、生地を発酵させる、マリネする、切る、スライスする、さいの目切りする、破壊する、細かく刻む、みじん切りする、振とうする、芯を取り除く、らせん状にする、巻く、ジュースにする、裏ごしする、こす、こねる、泡立てる、撹拌する、ホイップする、すりつぶす、詰め物をする、皮をむく、燻す、硬化させる、塩漬け、保存する、ピクルス液に漬ける、発酵する、均質化する、低温殺菌する、滅菌する、照射する、コールドプラズマ処理する、高圧処理する、パルス電界処理する、マイクロ波支援熱滅菌、安定化する、ブレンドする、ピューレにする、栄養価を高める、精製する、水素化する、熟成する、有効期間を延長させる、または酵素を添加することを使用して処理され得る。
rOVAを用いて調理される食品原料および食品製品は、任意の微生物細胞または微生物細胞デブリを本質的に含まないことができる。例えば、rOVAは、微生物宿主細胞から分泌されてもよく、ならびに微生物細胞、培養培地および/または微生物細胞デブリから単離されてもよい。
一部の実施形態では、rOVAは、全細胞抽出物または分画された抽出物として調製されてもよく、その結果、rOVA組成物は、微生物細胞および/または微生物細胞成分を含有する。
一実施形態では、rOVA組成物は、動物の食物摂取のために調製され、rOVAは、全細胞抽出物または分画された抽出物中に存在し、その結果、rOVA組成物は、微生物細胞および/または微生物細胞成分を含有する。一部の実施形態では、rOVA組成物は、動物の食物摂取のために調製され、rOVAは、微生物細胞、培養培地および微生物細胞デブリから単離される。動物の食物摂取のための例示的な組成物としては、ペットフード、動物飼料、歯応えのあるおやつ、骨スープ、スムージー、または動物栄養のための他の液体および動物の食物摂取に好適な固体栄養サプリメントを挙げることができる。これらの場合では、微生物細胞抽出物または微生物細胞デブリは、追加の栄養価を提供してもよい。
rOVA組成物を摂取し得る動物は、コンパニオン動物(例えば、イヌ、ネコ、ウマ)、家畜、珍しい動物(ライオン、トラ、シマウマ)、および家畜類(ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど)を含むことができる。本明細書に記載されるrOVA組成物はまた、水産養殖(魚および甲殻類のためなど)および鳥類の栄養(ペットの鳥、動物園の鳥、野鳥、家禽、ならびにヒトおよび動物の食品のために育てられた鳥など)のために使用することもできる。
本明細書に記載される摂取可能な食品組成物の一部の実施形態では、組成物は、動物由来成分、ホエイタンパク質、カゼイン塩、脂肪、ラクトース、加水分解ラクトース、ダイズタンパク質、コラーゲン、加水分解コラーゲンもしくはゼラチン、またはそれらの任意の組合せを本質的に含まない。本明細書に記載される組成物は、コレステロール、グルコース、脂肪、飽和脂肪、トランス脂肪またはそれらの任意の組合せを本質的に含まなくてもよい。一部の場合では、本明細書に記載される組成物は、乾燥重量で、10%、5%、4%、3%、2%、1%または0.5%未満を含む。一部の実施形態では、組成物は、脂肪を含有していてもよく(例えば、マヨネーズおよび市販のマヨネーズ代替物など)、そのような組成物は、最大で約60%の脂肪または低脂肪組成物を含んでいてもよく(例えば、低脂肪のマヨネーズおよび市販のマヨネーズ代替物)、そのような組成物は、より低いパーセンテージの脂肪を含んでいてもよい。動物由来成分を含まない組成物は、ベジタリアンおよび/またはビーガンと考えることができる。
一部の実施形態では、rOVA粉末組成物は、5%未満の灰分を含む。「灰分」という用語は、当技術分野で公知の用語であり、1種もしくは複数の、イオン、元素、ミネラルおよび/または化合物などの無機物を表す。一部の場合では、rOVA粉末組成物は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、5%、4.5%、4%、3.5%、3%、2.5%、2%、1.5%、1%、0.75%、0.5%、0.25%または0.1%未満の灰分を含む。
一部の実施形態では、rOVA粉末組成物の水分含有量は、15%未満であってもよい。rOVA粉末組成物は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、15%、12%、10%、8%、6%、5%、3%、2%または1%未満の水分を有していてもよい。一部の実施形態では、rOVA粉末組成物の炭水化物含有量は、30%未満であってもよい。rOVA粉末組成物は、w/wまたはw/vで、30%、27%、25%、22%、20%、17%、15%、12%、10%、8%、5%、3%または1%未満の炭水化物を有していてもよい。
官能的中立性および改善された官能的アピール
官能的中立性および改善された官能的アピール
一部の実施形態では、卵白様性質に加えて、rOVAの摂取可能な食品組成物への添加は、そのような組成物中の他のタンパク質と比較して、増加したタンパク質栄養含有量、官能的中立性、または改善された官能的アピールを提供する。本明細書で使用される場合、「官能的中立性」とは、強いまたは独特の、味、匂い(臭い)または味および臭いの組合せだけでなく、食感、口当たり、後味および色の非存在を指す。Kemp et al. 2009に記載されているものなどの官能パネルを、訓練された官能分析者によって使用してもよい。官能的中立性は、rOVAを含有する摂取可能な食品組成物が、nOVA、ホエイタンパク質、エンドウタンパク質、ダイズタンパク質、全卵または卵白タンパク質などの異なるタンパク質を同じ濃度で有する組成物のような別の物と比較される場合に、改善された官能的アピールを、テスター、例えば、食品のテスターまたは消費者に提供してもよい。
一部の実施形態では、摂取可能な食品組成物に添加される場合のrOVAは、rOVAを含有する溶液/製品と等しい濃度で存在する異なるタンパク質成分を有する異なる溶液/製品との比較において、例えば、比較が、ホエイ、ダイズ、コラーゲン、エンドウ、卵白固体単離物および/またはnOVAである比較において、訓練された官能分析者によって測定されるように、実質的に無臭である。本明細書に記載されるrOVA組成物の一部の実施形態では、そのような組成物は、総重量あたりの重量(w/w)および/または総体積あたりの重量(w/v)で、約0.5~1%、1%~5%、5~10%、10~15%、15~20%、20~25%、25~30%のrOVAのタンパク質濃度、または100mLの溶液あたり(例えば、100mLの水あたり)、約0.1、1、5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29もしくは30gの総rOVAタンパク質のタンパク質濃度で、実質的に無臭である。
一部の実施形態では、rOVAの摂取可能な食品組成物への添加は、卵白様性質および増加したタンパク質栄養含有量などの特性に加えて、中立的な味も提供する。中立的な味は、rOVAと等しい濃度で存在する異なるタンパク質、例えば、ホエイ、ダイズ、コラーゲン、エンドウ、全卵および卵白固体単離物(ネイティブOVAを含む)を含む溶液との比較において、例えば、訓練された官能分析者によって測定することができる。
一部の実施形態では、rOVAの添加は、他のタンパク質または卵白に関連するある特定の匂いおよび/または味の低減を提供する。例えば、rOVAの添加は、全卵、分画された卵または卵白の摂取可能な食品組成物への添加と比較して、「卵様」の匂いまたは味が少ない。一部の実施形態では、rOVAの添加は、他のタンパク質源と比較して、金属の匂いまたは味が少ない。
一部の実施形態では、rOVAの添加は、卵白様性質を生じさせるために使用される他のタンパク質源の添加と比較して、改善された口当たりを有する。例えば、rOVAの添加は、他のタンパク質源と比較して、きめの粗さが少なく、または沈殿物もしくは固体が少ない。
一部の実施形態では、rOVAの添加は、例えば、他の利用可能な補助タンパク質源と比較して、改善された食感を有する。
rOVAを有する摂取可能な組成物はまた、rOVAなしの組成物、またはrOVAと等しい濃度で存在する異なるタンパク質を有する組成物と比較して、改善された官能的アピールを有していてもよい。そのような改善された官能的アピールは、味および/または臭いに関していてもよい。味および臭いは、例えば、訓練された官能分析者によって測定することができる。一部の例では、官能分析者は、rOVAを有する摂取可能な組成物を、rOVAなしのもの、または等量の異なるタンパク質もしくはタンパク質源を有するものと比較する。
本明細書に記載されるように、本明細書の摂取可能な組成物は、液体形態であり得る。液体形態は、可溶性rOVA溶液などの中間製品であり得る。一部の場合では、液体形態は、rOVAを含む飲料などの最終製品であり得る。本明細書で企図される飲料の異なる種類の例としては、ジュース、ソーダ、ソフトドリンク、フレーバーウォーター、プロテインウォーター、強化水、炭酸水、栄養ドリンク、エネルギードリンク、スポーツドリンク、リカバリードリンク、アルコール系ドリンク、温かいドリンク、コーヒー系ドリンク、紅茶系ドリンク、植物系ミルク、ナッツミルク、ミルク系ドリンク、非乳製品、植物系マイルドドリンク、幼児用フォーミュラドリンクおよび食事代替ドリンクが挙げられる。
組成物のpH
組成物のpH
rOVA組成物のpHは、3.5~8であってもよい。rOVA組成物のpHは、少なくとも3.5であってもよい。rOVA組成物のpHは、最大で8であってもよい。rOVA組成物のpHは、3.5~4、3.5~4.5、3.5~5、3.5~5.5、3.5~6、3.5~6.5、3.5~7、3.5~7.5、3.5~8、4~4.5、4~5、4~5.5、4~6、4~6.5、4~7、4~7.5、4~8、4.5~5、4.5~5.5、4.5~6、4.5~6.5、4.5~7、4.5~7.5、4.5~8、5~5.5、5~6、5~6.5、5~7、5~7.5、5~8、5.5~6、5.5~6.5、5.5~7、5.5~7.5、5.5~8、6~6.5、6~7、6~7.5、6~8、6.5~7、6.5~7.5、6.5~8、7~7.5、7~8または7.5~8であってもよい。rOVA組成物のpHは、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5または8であってもよい。3.5~7のpHを有するrOVA組成物は、nOVA、卵白、卵白代替組成物と比較して、1つまたは複数の改善された機能性を有していてもよい。
rOVA組成物のpHは、2~3.5であってもよい。rOVA組成物のpHは、少なくとも2であってもよい。rOVA組成物のpHは、最大で3.5であってもよい。rOVA組成物のpHは、2~2.5、2~3、2~3.5、2.5~3、2.5~3.5または3~3.5であってもよい。rOVA組成物のpHは、2、2.5、3または3.5であってもよい。
rOVA組成物のpHは、7~12であってもよい。rOVA組成物のpHは、少なくとも7であってもよい。rOVA組成物のpHは、最大で12であってもよい。rOVA組成物中のpHは、7~7.5、7~8、7~8.5、7~9、7~9.5、7~10、7~10.5、7~11、7~11.5、7~12、7.5~8、7.5~8.5、7.5~9、7.5~9.5、7.5~10、7.5~10.5、7.5~11、7.5~11.5、7.5~12、8~8.5、8~9、8~9.5、8~10、8~10.5、8~11、8~11.5、8~12、8.5~9、8.5~9.5、8.5~10、8.5~10.5、8.5~11、8.5~11.5、8.5~12、9~9.5、9~10、9~10.5、9~11、9~11.5、9~12、9.5~10、9.5~10.5、9.5~11、9.5~11.5、9.5~12、10~10.5、10~11、10~11.5、10~12、10.5~11、10.5~11.5、10.5~12、11~11.5、11~12または11.5~12であってもよい。rOVA組成物のpHは、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5または12であってもよい。
一部の実施形態では、rOVAのpHは、組成物におけるその包含の前または原料としてのその使用の前に調整されてもよい。一部の実施形態では、rOVAのpHは、精製および/または単離プロセス中に調整される。一部の実施形態では、原料におけるか、または食品製品組成物の製造における使用のためのrOVAのpHは、約3.5~約7.0に調整される。一部の場合では、rOVAのpHは、製造プロセス中に、1より高いpHに調整されてもよい。例えば、rOVAは、微生物細胞などの宿主細胞中で発現されてもよく、一部の場合では、rOVAは、宿主細胞によって、成長培地(例えば、液体培地)に分泌される。rOVAは、宿主細胞から分離され、そのような分離ステップは、選択されたpH、例えば、約3.5のpHで行われてもよい。一部の場合では、そのような分離pHでのrOVAは、可溶性でなくてもよく、または完全に可溶性でなくてもよく、pHは、より高いpH、例えば、約pH12に調整される。次いで、rOVAは、約3.5~約7.0の最終pHに調整されてもよい。宿主細胞の他の成分または液体培地の他の成分からのrOVAの分離は、カチオン交換クロマトグラフィーおよび/またはアニオン交換クロマトグラフィーなどのイオン交換クロマトグラフィー、濾過ならびに硫酸アンモニウム沈殿のうちの1つまたは複数を含むことができる。
組成物の追加成分
組成物の追加成分
本明細書に開示されるrOVAを含有する摂取可能な食品組成物およびそのような組成物を作製する方法は、rOVAを1種または複数の原料に添加するステップまたはrOVAを1種または複数の原料と混合するステップを含んでいてもよい。例えば、食品添加物を、組成物に添加してもよく、または組成物と混合してもよい。食品添加物は、組成物に、体積および/または質量を追加することができる。食品添加物は、機能的性能および/または物理的特性を改善してもよい。例えば、食品添加物は、凍結-解凍サイクルにおけるリポタンパク質の脂質部分に起因するゲル化または粘度の増加を防止してもよい。凝固防止剤を添加して、自由流動組成物を作製してもよい。炭水化物を添加して、熱のダメージ、例えば、乾燥中のタンパク質変性の低下に対する抵抗性を増加させることができ、ならびに乾燥組成物の安定性および流動性を改善することができる。食品添加物としては、限定されるものではないが、食品着色料、pH調整剤、天然香味料、人工香味料、フレーバー増強料、バッチマーカー、食用酸、フィラー、凝固防止剤(例えば、アルミン酸ケイ酸ナトリウム)、抗緑化剤(例えば、クエン酸)、食品安定化料、泡安定化料または結合剤、抗酸化剤、酸制御料、増量剤、着色保持剤、ホイップ剤(例えば、エステル型ホイップ剤、クエン酸トリエチル、ラウリル硫酸ナトリウム)、乳状化料(例えば、レシチン)、保水料、増粘料、賦形剤、固体希釈剤、塩、栄養素、甘味料、艶出し剤、保存料、ビタミン、食物元素、炭水化物、ポリオール、ガム、デンプン、粉、油またはブランが挙げられる。
食品着色料としては、限定されるものではないが、FD&C黄色#5、FD&C黄色#6、FD&C赤色#40、FD&C赤色#3、FD&C青色No.1、FD&C青色No.2、FD&C緑色No.3、カロテノイド(例えば、サフラン、β-カロテン)、アントシアニン、アナトー、ベタニン、チョウマメ、キャラメル着色料、クロロフィリン、エルダーベリージュース、リコピン、カーマイン、パンダン、パプリカ、ターメリック、クルクミノイド、キノリンイエロー、カルモイシン、Ponceau 4R、Patent Blue VおよびGreen Sが挙げられる。
pH調整のための原料としては、限定されるものではないが、トリス緩衝液、リン酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムおよび塩酸が挙げられる。
塩としては、限定されるものではないが、酸塩、アルカリ塩、有機塩、無機塩、リン酸塩、塩化物塩、ナトリウム塩、塩化ナトリウム、カリウム塩、塩化カリウム、マグネシウム塩、塩化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、カルシウム塩、塩化カルシウム、塩化アンモニウム、鉄塩、塩化鉄、亜鉛塩および塩化亜鉛が挙げられる。
栄養素としては、限定されるものではないが、主要栄養素、微量栄養素、必須栄養素、非必須栄養素、食物繊維、アミノ酸、必須脂肪酸、オメガ3脂肪酸および共役リノール酸が挙げられる。
甘味料としては、限定されるものではないが、砂糖代替物、人工甘味料、アセスルファムカリウム、アドバンテーム、アリターム、アスパルテーム、シクラミン酸ナトリウム、ズルチン、グリシン(glucin)、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、ネオテーム、P-4000、サッカリン、アスパルテーム-アセスルファム塩、スクラロース、ブラゼイン、クルクリン、グリチルリチン、グリセロール、イヌリン、モグロシド、マビンリン、マルトオリゴ糖、マンニトール、ミラクリン、モナチン、モネリン、オスラジン、ペンタジン、ステビア、トリロバチンおよびタウマチンが挙げられる。
炭水化物としては、限定されるものではないが、砂糖、スクロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、マルトース、マンノース、アルロース、タガトース、キシロース、アラビノース、高フルクトースコーンシロップ、高マルトースコーンシロップ、コーンシロップ(例えば、グルコース不含コーンシロップ)、シアル酸、単糖類、二糖類、多糖類(例えば、ポリデキストロース、マルトデキストリン)およびデンプンが挙げられる。
ポリオールとしては、限定されるものではないが、キシリトール、マルチトール、エリスリトール、ソルビトール、トレイトール、アラビトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マンニトールおよびガラクチトール(ズルシトール)が挙げられる。
ガムとしては、限定されるものではないが、アラビアガム、ジェランガム、グアーガム、ローカストビーンガム、アカシアガム、セルロースガムおよびキサンタンガムが挙げられる。
ビタミンとしては、限定されるものではないが、ナイアシン、リボフラビン、パントテン酸、チアミン、葉酸、ビタミンA、ビタミンB6、ビタミンB12、ビタミンD、ビタミンE、ルテイン、ゼアキサンチン、コリン、イノシトールおよびビオチンが挙げられる。
食物元素としては、限定されるものではないが、カルシウム、鉄、マグネシウム、リン、カリウム、ナトリウム、亜鉛、銅、マンガン、セレン、塩素、ヨウ素、硫黄、コバルト、モリブデン、ニッケルおよび臭素が挙げられる。
rOVAタンパク質およびrOVAタンパク質の製造
rOVAタンパク質およびrOVAタンパク質の製造
rOVAは、任意の種由来のアミノ酸配列を有することができる。例えば、rOVAは、鳥もしくは爬虫類、または他の産卵種由来のOVAのアミノ酸配列を有することができる。鳥類由来のアミノ酸配列を有するrOVAは、飼育鳥類、家禽、水鳥、狩猟鳥、ニワトリ、ウズラ、七面鳥、アヒル、ダチョウ、ガチョウ、カモメ、ホロホロチョウ、キジ、エミュー、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択することができる。rOVAは、単一種、例えば、Gallus gallus domesticusに由来するアミノ酸配列を有することができる。あるいは、rOVAは、2つまたはそれよりも多くの種に由来するアミノ酸配列を有することができ、例えば、ハイブリッドであり得る。
宿主細胞、例えば、Pichia種、Saccharomyces種、Trichoderma種、Pseudomonas種におけるrOVAの発現は、転写後または翻訳後の修飾の一部として、1つまたは複数のアミノ酸のOVA配列への付加をもたらしてもよい。そのようなアミノ酸は、ネイティブOVA配列の一部でなくてもよい。例えば、Pichia種、例えば、Komagataella phaffiiおよびKomagataella pastorisにおいてOVA配列を発現させることで、N末端またはC末端での1つまたは複数のアミノ酸の付加をもたらしてもよい。一部の場合では、4アミノ酸のEAEA(配列番号75)は、配列番号1に示されるように、宿主細胞中での発現の際に、OVA配列のN末端に付加される。例えば、配列番号1をコードするニワトリrOVAが、提供されてもよく、発現および分泌後、rOVAは、配列番号2のアミノ酸配列を有する。
rOVAは、OVAの天然に存在しないバリアントであり得る。そのようなバリアントは、ネイティブOVA配列と比べて、1つもしくは複数のアミノ酸の挿入、欠失または置換を含むことができる。
そのようなバリアントは、配列番号1~74と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有することができる。「配列同一性」という用語は、本明細書で使用される場合、アミノ酸配列の文脈では、配列を整列させ、必要によりギャップを導入して、最大パーセントの配列同一性を達成した後、選択された配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義され、任意の保存的置換は配列同一性の一部として考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のための整列は、当技術分野における技能内であるさまざまな方法で、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2またはMegalign(DNASTAR)ソフトウェアなどの公に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができ、BLASTは、好ましい整列アルゴリズムである。当業者は、比較される配列の全長にわたる最大整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、整列を測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
rOVAを発現させるために使用される宿主生物に応じて、rOVAは、野生型OVAとは異なるグリコシル化、アセチル化またはリン酸化のパターンを有することができる。例えば、本明細書のrOVAは、グリコシル化、アセチル化もしくはリン酸化されていてもよく、またはされていなくてもよい。rOVAは、鳥類、非鳥類、微生物、非微生物、哺乳動物または非哺乳動物のグリコシル化、アセチル化またはリン酸化のパターンを有していてもよい。
一部の場合では、rOVAは、脱グリコシル化(例えば、化学的、酵素的、Endo-H、PNGase F、O-グリコシダーゼ、ノイラミニダーゼ、β1-4ガラクトシダーゼ、β-N-アセチルグルコサミニダーゼ)、脱アセチル化(例えば、タンパク質デアセチラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ、サーチュイン)、または脱リン酸化(例えば、酸ホスファターゼ、ラムダプロテインホスファターゼ、仔ウシ腸ホスファターゼ、アルカリホスファターゼ)されていてもよい。脱グリコシル化、脱アセチル化または脱リン酸化は、より均一であるか、または変動が少ない組成物を製造することができるタンパク質を産生し得る。
rOVAは、宿主細胞において、組換えで発現される。本明細書で使用される場合、「宿主」または「宿主細胞」は、ここで、所望の産物を産生するように選択または遺伝子改変された、任意のタンパク質産生宿主を表す。例示的な宿主としては、糸状菌などの真菌、ならびに細菌、酵母、植物、昆虫および哺乳動物細胞が挙げられる。宿主細胞は、Arxula spp.、Arxula adeninivorans、Kluyveromyces spp.、Kluyveromyces lactis、Komagataella phaffii、Pichia spp.、Pichia angusta、Pichia pastoris、Saccharomyces spp.、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces spp.、Schizosaccharomyces pombe、Yarrowia spp.、Yarrowia lipolytica、Agaricus spp.、Agaricus bisporus、Aspergillus spp.、Aspergillus awamori、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、Aspergillus oryzae、Bacillus subtilis、Colletotrichum spp.、Colletotrichum gloeosporiodes、Endothia spp.、Endothia parasitica、Escherichia coli、Fusarium spp.、Fusarium graminearum、Fusarium solani、Mucor spp.、Mucor miehei、Mucor pusillus、Myceliophthora spp.、Myceliophthora thermophila、Neurospora spp.、Neurospora crassa、Penicillium spp.、Penicillium camemberti、Penicillium canescens、Penicillium chrysogenum、Penicillium(Talaromyces) emersonii、Penicillium funiculo sum、Penicillium purpurogenum、Penicillium roqueforti、Pleurotus spp.、Pleurotus ostreatus、Rhizomucor spp.、Rhizomucor miehei、Rhizomucor pusillus、Rhizopus spp.、Rhizopus arrhizus、Rhizopus oligosporus、Rhizopus oryzae、Trichoderma spp.、Trichoderma altroviride、Trichoderma reeseiまたはTrichoderma vireusであってもよい。宿主細胞は、米国食品医薬品局によって一般に安全と見なされているように承認された生物であり得る。
rOVAタンパク質は、酵母、糸状菌または細菌において、組換えで発現させることができる。一部の実施形態では、rOVAタンパク質は、Pichia種(Komagataella phaffiiおよびKomagataella pastoris)、Saccharomyces種、Trichoderma種、Pseudomonas種またはE.coli種において、組換えで発現される。
rOVAの発現は、発現ベクター、プラスミド、宿主のゲノムに組み込まれた核酸、または他の手段によって、提供することができる。例えば、発現のためのベクターは、(a)プロモーターエレメント、(b)シグナルペプチド、(c)宿主細胞と異種のOVA配列、および(d)ターミネーターエレメントを含むことができる。
OVAの発現のために使用することができる発現ベクターは、エレメント(a)、(b)、(c)および(d)を有する発現カセットを含有するものを含む。一部の実施形態では、シグナルペプチド(b)は、ベクターに含まれる必要はない。一般に、発現カセットは、同族の宿主微生物のゲノムに組み込まれた場合に、導入遺伝子の転写を媒介するように設計される。
宿主微生物への形質転換の前のベクターの増幅における補助のために、複製起点(e)が、ベクターに含有されていてもよい(PUC_ORICおよびPUC(DNA2.0)など)。発現ベクターで安定に形質転換された微生物の選択における補助のために、ベクターはまた、URA3遺伝子およびゼオシン耐性遺伝子(ZeoR)などの選択マーカー(f)を含んでいてもよい。発現ベクターはまた、発現ベクターの宿主ゲノムへの安定な組み込みを容易にするために、宿主微生物への形質転換前に発現ベクターの直線化を可能にする、制限酵素部位(g)を含有していてもよい。一部の実施形態では、発現ベクターは、エレメント(b)、(e)、(f)および(g)の任意のサブセットを含有していてもよく、エレメント(b)、(e)、(f)および(g)なしを含む。当業者に公知の他の発現エレメントおよびベクターエレメントは、本明細書に記載されるエレメントと組み合わせて、またはそれらと置き換えて使用することができる。
例示的なプロモーターエレメント(a)としては、限定されるものではないが、構成的プロモーター、誘導性プロモーターおよびハイブリッドプロモーターが挙げられ得る。プロモーターとしては、限定されるものではないが、acu-5、adh1+、アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH1、ADH2、ADH4)、AHSB4m、AINV、alcA、α-アミラーゼ、代替オキシダーゼ(AOD)、アルコールオキシダーゼI(AOX1)、アルコールオキシダーゼ2(AOX2)、AXDH、B2、CaMV、セロビオヒドロラーゼI(cbh1)、ccg-1、cDNA1、細胞フィラメントポリペプチド(cfp)、cpc-2、ctr4+、CUP1、ジヒドロキシアセトンシンターゼ(DAS)、エノラーゼ(ENO、ENO1)、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ(FLD1)、FMD、ギ酸デヒドロゲナーゼ(FMDH)、G1、G6、GAA、GAL1、GAL2、GAL3、GAL4、GAL5、GAL6、GAL7、GAL8、GAL9、GAL10、GCW14、gdhA、gla-1、α-グルコアミラーゼ(glaA)、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ(gpdA、GAP、GAPDH)、ホスホグリセリン酸ムターゼ(GPM1)、グリセロールキナーゼ(GUT1)、HSP82、invl+、イソクエン酸リアーゼ(ICL1)、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼ(ILV5)、KAR2、KEX2、β-ガラクトシダーゼ(lac4)、LEU2、melO、MET3、メタノールオキシダーゼ(MOX)、nmt1、NSP、pcbC、PET9、ペルオキシン8(PEX8)、ホスホグリセリン酸キナーゼ(PGK、PGK1)、pho1、PHO5、PHO89、ホスファチジルイノシトールシンターゼ(PIS1)、PYK1、ピルビン酸キナーゼ(pki1)、RPS7、ソルビトールデヒドロゲナーゼ(SDH)、3-ホスホセリンアミノトランスフェラーゼ(SER1)、SSA4、SV40、TEF、翻訳伸長因子1アルファ(TEF1)、THI11、ホモセリンキナーゼ(THR1)、tpi、TPS1、トリオースリン酸イソメラーゼ(TPI1)、XRP2、YPT1、およびそれらの任意の組合せが挙げられる。
シグナル配列、標的シグナル、局在化シグナル、局在化配列、シグナルペプチド、輸送ペプチド、リーダー配列またはリーダーペプチドとしても公知のシグナルペプチド(b)は、タンパク質またはポリヌクレオチドの分泌を支援し得る。宿主細胞由来の組換えまたは異種発現タンパク質の細胞外分泌は、タンパク質精製を容易にし得る。シグナルペプチドは、タンパク質の前駆体(例えば、プレプロペプチド、プレタンパク質)に由来していてもよい。シグナルペプチドは、ネイティブOVA中のシグナルペプチド以外のタンパク質の前駆体に由来することができる。分泌タンパク質の例は、配列番号1において太字および下線で示されたS.cerevisiaeアルファ因子プレプロ配列である。
OVAをコードする任意の核酸配列を(c)として使用することができる。好ましくは、そのような配列は、宿主細胞に対してコドン最適化される。
例示的な転写ターミネーターエレメントとしては、限定されるものではないが、acu-5、adh1+、アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH1、ADH2、ADH4)、AHSB4m、AINV、alcA、α-アミラーゼ、代替オキシダーゼ(AOD)、アルコールオキシダーゼI(AOX1)、アルコールオキシダーゼ2(AOX2)、AXDH、B2、CaMV、セロビオヒドロラーゼI(cbh1)、ccg-1、cDNA1、細胞フィラメントポリペプチド(cfp)、cpc-2、ctr4+、CUP1、ジヒドロキシアセトンシンターゼ(DAS)、エノラーゼ(ENO、ENO1)、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ(FLD1)、FMD、ギ酸デヒドロゲナーゼ(FMDH)、G1、G6、GAA、GAL1、GAL2、GAL3、GAL4、GAL5、GAL6、GAL7、GAL8、GAL9、GAL10、GCW14、gdhA、gla-1、α-グルコアミラーゼ(glaA)、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ(gpdA、GAP、GAPDH)、ホスホグリセリン酸ムターゼ(GPM1)、グリセロールキナーゼ(GUT1)、HSP82、invl+、イソクエン酸リアーゼ(ICL1)、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼ(ILV5)、KAR2、KEX2、β-ガラクトシダーゼ(lac4)、LEU2、melO、MET3、メタノールオキシダーゼ(MOX)、nmt1、NSP、pcbC、PET9、ペルオキシン8(PEX8)、ホスホグリセリン酸キナーゼ(PGK、PGK1)、pho1、PHO5、PHO89、ホスファチジルイノシトールシンターゼ(PIS1)、PYK1、ピルビン酸キナーゼ(pki1)、RPS7、ソルビトールデヒドロゲナーゼ(SDH)、3-ホスホセリンアミノトランスフェラーゼ(SER1)、SSA4、SV40、TEF、翻訳伸長因子1アルファ(TEF1)、THI11、ホモセリンキナーゼ(THR1)、tpi、TPS1、トリオースリン酸イソメラーゼ(TPI1)、XRP2、YPT1、およびそれらの任意の組合せが挙げられる。
例示的な選択マーカー(f)としては、限定されるものではないが、抗生物質耐性遺伝子(例えば、ゼオシン、アンピシリン、ブラストサイジン、カナマイシン、ヌルセオトリシン、クロラムフェニコール(chloroamphenicol)、テトラサイクリン、トリクロサン、ガンシクロビル、およびそれらの任意の組合せ)、栄養要求性マーカー(例えば、ade1、arg4、his4、ura3、met2、およびそれらの任意の組合せ)が挙げられ得る。
一例では、Pichia sp.における発現のためのベクターは、インフレームでOVAをコードする核酸配列と融合されたシグナルペプチド(アルファ接合因子)に作動可能に連結されたAOX1プロモーター、およびOVAをコードする核酸配列の直ぐ下流のターミネーターエレメント(AOX1ターミネーター)を含むことができる。
別の例では、DAS1プロモーターを含むベクターは、インフレームでOVAをコードする核酸配列と融合されたシグナルペプチド(アルファ接合因子)、およびOVAの直ぐ下流のターミネーターエレメント(AOX1ターミネーター)に作動可能に連結されている。
本明細書に記載される組換えタンパク質は、1種または複数の宿主細胞から分泌されてもよい。一部の実施形態では、rOVAタンパク質は、宿主細胞から分泌される。分泌されたrOVAは、遠心分離、分画、濾過、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー精製、ならびに細胞、液体および固体培地成分、ならびに他の細胞産物および副産物からタンパク質を分離するための他の方法などの方法によって、単離および精製されてもよい。一部の実施形態では、rOVAは、Pichia sp.において産生され、宿主細胞から培養培地に分泌される。次いで、分泌されたrOVAは、さらなる使用のために、他の培地成分から分離される。
本開示は、タンパク質の1つもしくは複数の機能的特性および/またはその産生を変化または増強するために、組換えOVAのグリコシル化を修飾することを企図する。一部の実施形態では、rOVAグリコシル化における変更は、rOVAをグリコシル化する宿主細胞に起因し得る。一部の実施形態では、rOVAは、ネイティブオボアルブミン(nOVA)、例えば、鶏卵由来のnOVAと同一ではないグリコシル化パターンを有する。一部の実施形態では、rOVAは、それがrOVA組成物における原料として使用される前、またはrOVAが組成物中に存在する時に、脱グリコシル化酵素で処理される。一部の実施形態では、rOVAのグリコシル化は、宿主細胞において1種または複数の酵素を発現させること、およびrOVAを1種または複数の酵素に曝露することによって、修飾または除去される。一部の実施形態では、rOVA、およびグリコシル化の修飾または除去のための1種もしくは複数の酵素は、同じ宿主細胞において共発現される。
例えば、ニワトリまたは別の鳥類の卵から単離されたネイティブオボアルブミン(nOVA)は、グリコシル化の非常に複雑な分岐形態を有する。グリコシル化パターンは、N連結グリカン構造、例えば、N-アセチルグルコサミン単位、ガラクトースおよびN-連結マンノース単位を含む。例えば、図1Aを参照されたい。一部の場合では、本明細書に開示される摂取可能な組成物における使用のための、本明細書に記載される方法を使用して産生されるrOVAは、nOVAのグリコシル化パターンとは異なるグリコシル化パターンを有する。例えば、rOVAがPichia sp.において産生される場合、タンパク質は、nOVAとは異なってグリコシル化されてもよく、N連結グリコシル化においてガラクトース単位を欠いていてもよい。図1Bは、複雑に分岐したグリコシル化パターンを示す、P.pastorisによって産生されたrOVAのグリコシル化パターンを図示する。本明細書に開示される組成物および方法の一部の実施形態では、rOVAは、処理されて、その結果、グリコシル化パターンは、nOVAのものから修飾され、また、そのような処理なしでPichia sp.によって産生されるrOVAと比較して、修飾されている。一部の場合では、rOVAは、グリコシル化を欠く。
rOVAの分子量は、nOVAと比較して、異なっていてもよい。タンパク質の分子量は、nOVAの分子量よりも少なくてもよく、またはrOVAのグリコシル化が修飾されていない宿主細胞によって産生されたrOVAよりも少なくてもよい。実施形態では、rOVAの分子量は、40kDa~55kDaであってもよい。一部の場合では、修飾されたグリコシル化を有するrOVAは、例えば、ネイティブOVA(鳥類の宿主種によって産生される)と比較して、またはrOVAをグリコシル化する宿主細胞、例えば、rOVAがN連結マンノシル化を含む場合と比較して、異なる分子量を有する。一部の場合では、rOVAの分子量は、翻訳後修飾が完全に回避されたrOVA、またはN連結グリコシル化のすべての形態を欠くrOVAの分子量よりも大きい。
定義
定義
本明細書で使用される専門用語は、特定の場合を記載する目的のためであって、限定することを意図するものではない。
本明細書で使用される場合、単数形の「a」、「an」および「the」は、文脈が明確に他を示していない限り、同様に、複数形を含むことが意図される。
「含む(including)」、「含む(includes)」、「有する(having)」、「有する(has)」、「有する(with)」という用語またはそれらの変形は、詳細な説明および/または特許請求の範囲のいずれかにおいて使用され、そのような用語は、「含む(comprising)」という用語と類似の方法で包含されることが意図される。
範囲は、本明細書において、「約」または「およそ」のある特定の値から、および/または「約」または「およそ」の別の特定の値までとして表すことができる。そのような範囲が表される場合、別の場合は、ある特定の値から、および/または他の特定の値までを含む。同様に、値が「約」または「およそ」の先行詞の使用によって近似値として表される場合、特定の値が別の場合を形成することが理解される。範囲のそれぞれの端点が、他の端点との関係で、および他の端点とは独立して、両方とも重要であることがさらに理解される。「約」または「およそ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の使用法の文脈内で、言及された数値から15%のプラスまたはマイナスである範囲を指す。例えば、約10は、8.5~11.5の範囲を含むだろう。「約」または「およそ」という用語はまた、値の測定における典型的な誤差または不正確さからなる。
本明細書に記載される任意の態様または実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
(実施例1)
組換えオボアルブミンの調製
Gallus gallus OVAコード配列を、インフレームで、プロモーター配列の下流のアルファ接合因子シグナル配列と融合した(配列番号1)。プロモーターを、シグナル配列OVAコード配列の上流に配置し、転写ターミネーターを、OVA配列の下流に配置した。発現構築物を、Kpas-URA 3ベクターに配置した。
組換えオボアルブミンの調製
Gallus gallus OVAコード配列を、インフレームで、プロモーター配列の下流のアルファ接合因子シグナル配列と融合した(配列番号1)。プロモーターを、シグナル配列OVAコード配列の上流に配置し、転写ターミネーターを、OVA配列の下流に配置した。発現構築物を、Kpas-URA 3ベクターに配置した。
発現構築物を、Pichia pastorisに形質転換した。成功した組み込みを、ゲノム配列決定によって確認した。
発酵:組換えOVAを、周囲条件で、バイオリアクターにおいて産生させた。発酵プロセスのためのシードトレインを、-80℃で保管され、接種前に室温で解凍された、2mlのPichia pastorisのクライオバイアルを使用して、液体成長ブロスを有する振とうフラスコの接種により開始した。
接種された振とうフラスコを、シェーカー中、30℃で24時間保ち、その後、成長したPichia pastorisを、製造規模のリアクターに移した。
培養物を、設定されたpHおよび溶存酸素(DO)で、30℃で成長させた。培養物に、炭素源を供給した。発酵の最後に、標的のOVAタンパク質を、上清から回収した。
細胞デブリを除去し、タンパク質を、精製し、乾燥粉末に凍結乾燥した。産生したOVAを、下記に記載される実施例において使用した。
(実施例2)
組換えオボアルブミンを使用する卵を含まないケーキの調理
(実施例2)
組換えオボアルブミンを使用する卵を含まないケーキの調理
卵を含まないパウンドケーキを、以下の原料を用いて調理することができる。第1の原料組成物を、2%~5%の組換えオボアルブミンおよび0.05%~0.5%のヒマワリレシチンを混合することによって作製した。パウンドケーキを調理するために、最大で4%の乾燥した第1の原料組成物を、22~26%の無塩バター、20~25%の中力粉、18~26%の水、20~25%の砂糖、4~6%のサワークリーム、1.2%のベーキングパウダー、0.4%のバニラフレーバー、0.05~1.5%のガムおよびデンプン、ならびに0.18%の塩に添加し、次いで、すべての原料を混合して、バッターを作った。このレシピのために、組換えオボアルブミンは2~5%で、ヒマワリレシチンは0.05~0.5%で使用され得る。
凝集性、復元力、硬さ、かみ応えおよび弾力性などの食感の品質を、Brookfield CT3 Textureアナライザー、1500gの負荷セルを使用して、測定した。有意差は、食感の性質およびケーキの高さに関して、対照卵ケーキおよびrOVAを用いて作製されたケーキの間で観察されなかった。官能的性質は、全卵を用いて作製された対照ケーキと同等であった
。
。
この実施例は、酒石英(cream of tartar)を使用しないレシピにおいて、rOVAを用いてメレンゲを作製する実現可能性を調べた。
材料:rOVA(pH:4.12のまま)、nOVA(pH:6.06のまま)、新鮮な卵白(pH:9のまま)、キサンタンガム、ラウリル硫酸ナトリウム(SLS)、酒石英、グラニュー糖、フレーバー。
機器:Kitchen Aid、Classic Plus、Breville BOV800XL Smart電気オーブン
方法:冷蔵温度で、注意深く卵黄から卵白を分離し、次いで、卵白を室温にした後、ホイップした。卵白を使用して、対照メレンゲ試料を作製した。nOVAまたはrOVAを使用して、試験試料を作製した。卵白、またはnOVAもしくはrOVA溶液(10%溶液)を、混合ボウルに移し、中速で30秒間ホイップし(均質な溶液を得るため)、次いで、酒石英を添加し(卵白のみについて)、高速で、柔らかい角が形成されるまで混合した。一定で撹拌しながら、砂糖を徐々に添加し、それぞれの添加後、砂糖が完全に溶解するまで、高速で撹拌した。光沢のある安定した角が形成されるまで混合を続け、最後に、フレーバーを添加した。柔らかいメレンゲミックスを、パンに移した。オーブンを250°Fに予熱し、メレンゲを50分間焼いた(または160°Fの内部温度まで)。冷却後、メレンゲを気密容器で保管した。
rOVAを使用する例示的なメレンゲのレシピは、5~10%のrOVA、約26~32%の砂糖、香味料(例えば、1~4%)、約59~64%の水、約0.01~0.5%のキサンタンガム、約0.01~0.1%のラウリル硫酸ナトリウムを含み得る(すべてw/w)。そのような例示的なレシピの1つ、および新鮮な卵白またはネイティブOVAまたはrOVAによる比較レシピを、下記に示す通り、構築した。
結論:最も低い重量喪失が、rOVAを用いるメレンゲにおいて観察された。さらにまた、rOVAメレンゲは、卵対照およびnOVAと比較して、最も高いフワフワ感を示した。結果を図3に表す。
この実施例は、rOVAの泡の容量/安定性および凝固の性質を評価し、それを、新鮮な全卵、卵白およびnOVAと比較した。
材料:市販の卵、nOVA(Bioceutica)、rOVA
方法:OVA(nOVAまたはrOVA)のストック溶液を、9.3gの蒸留水中で0.7gのOVAを混合することによって作製した(総体積10ml)。酒石英を使用して(下記の表10を参照されたい)、pHを調整した。泡を、スピード3でDremelを使用して作製した。泡立てる時間を記録した。ゲルを、ヒートブロックを使用して、1mlの試料を72℃で10分間加熱することによって、作製した。
泡の容量および安定性の結果を、下記の表11に示す。この設定では、pHは調整しなかった。
*泡の容量%=[初期液体体積(ml)/泡の体積(ml)]×100
結論:pH6のnOVAは、卵白と比較して、最も高い泡の容量を示したが、しかしながら、その泡の安定性は、卵白より低かった。結果を図4に表す。
結論:pHを低下させた後のnOVAの泡の容量は、依然として、卵白より高かった。rOVAの泡の容量は、新鮮な卵白のものと比較して、より高い値であった。rOVAについての泡立て時間は、新鮮な卵白について必要な時間の半分であった。結果を図5に示す。
(実施例5)
組換えニワトリオボアルブミン発現株の調製
(実施例5)
組換えニワトリオボアルブミン発現株の調製
最初の3つのカセットは、インフレームで、分泌シグナル配列をコードする核酸と融合されたニワトリOVA(配列番号2)のアミノ酸配列を含むニワトリOVAを発現するように作製し、発現した融合タンパク質は、(配列番号1)のアミノ酸配列を有する。3つのカセットのそれぞれにおいて、アルコールオキシダーゼ1(AOX1)プロモーターを、分泌シグナル配列の上流に配置し、K phaffii AOX1転写ターミネーターをOVAコード配列の下流に配置した。これらのカセットに、GgOVA-A1、GgOVA-A2およびGgOVA-A3とラベルを付け、第1のプラスミドに組み合わせた。
第4のカセットは、インフレームで、分泌シグナル配列をコードする核酸と融合されたニワトリOVAコード配列(配列番号2をコードする)を含んでいたが(それにより、配列番号1をコードする)、ジヒドロキシアセトンシンターゼ(DAS2)プロモーターを、分泌シグナル配列の上流に配置し、K phaffii AOX1転写ターミネーターを、OVAコード配列の下流に配置した。この構築物に、GgOVA-D1とラベルを付けた。
第5および第6のカセットは、インフレームで、分泌シグナル配列をコードする核酸と融合されたニワトリOVAコード配列(配列番号2をコードする)を含んでいたが(それにより、配列番号1をコードする)、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ(FLD)プロモーターを、分泌シグナル配列の上流に配置し、K phaffii AOX1転写ターミネーターを、OVAコード配列の下流に配置した。これらのカセットに、GgOVA-F1およびGgOVA-F2とラベルを付け、第2のプラスミドにおいて、GgOVA-D1と組み合わせた。
第7のカセットは、ヘルパー因子タンパク質HAC1コード配列の上流に配置されたペルオキシソームバイオジェネシス(PEX11)プロモーター、およびヘルパー因子配列の下流に配置されたK.phaffii AOX1転写ターミネーターを含んでいた。このカセットに、HF-1とラベルを付け、第3のプラスミドに形質転換した。
3つのプラスミドを、Pichia pastorisの背景の株に段階的に形質転換した。ゲノム配列決定は、発現構築物の組み込みを確認し、それぞれの構築物のコピー数を下記の表14に示す。
(実施例6)
アヒルおよびダチョウについての組換えオボアルブミン発現株の調製
アヒルおよびダチョウについての組換えオボアルブミン発現株の調製
発現構築物:Anas platyrhynchos(アヒル)OVAの発現のための1つのカセットおよびStruthio camelus(ダチョウ)OVAの発現のための1つのカセットを、Pichia pastorisにおける発現のために作出した。
1つの発現カセットを、ダチョウOVAの発現のために作出した。Struthio camelus OVA(配列番号71)をコードする核酸を、インフレームで、分泌シグナル配列をコードする核酸と融合した(それにより、配列番号72をコードする)。ダチョウ構築物は、分泌シグナル配列の上流に配置されたアルコールオキシダーゼ1(AOX1)プロモーターを含み、K phaffii AOX1転写ターミネーターをOVA配列の下流に配置した。ScOVAと呼ばれるこの発現カセットを、Pichia pastorisに形質転換した。ダチョウOVA構築物の4つのコピーの成功した組み込みを、ゲノム配列決定によって確認した。表15を参照されたい。
1つの発現カセットを、アヒルOVAの発現のために作出した。Anas platyrhynchos OVA(配列番号73)をコードする核酸を、インフレームで、分泌シグナル配列をコードする核酸と融合した(それにより、配列番号74をコードする)。アヒルカセットは、分泌シグナル配列の上流に配置されたアルコールオキシダーゼ1(AOX1)プロモーターを含み、K phaffii AOX1転写ターミネーターをOVA配列の下流に配置した。ApdOVAと呼ばれるこの発現カセットを、Pichia pastorisに形質転換した。アヒルOVA構築物の2つのコピーの成功した組み込みを、ゲノム配列決定によって確認した。表16を参照されたい。
(実施例7)
rOVAの発酵および産生
rOVAの発酵および産生
発酵:組換えOVA(rOVA)を発酵するための株を、周囲条件で、バイオリアクターにおいて、それぞれ培養した。発酵プロセスのためのシードトレインを、液体成長ブロスを有する振とうフラスコの接種により開始した。接種された振とうフラスコを、シェーカー中で保ち、その後、成長したP.pastorisを、製造規模のリアクターに移した。
製造を拡大するために、rOVA P.pastoris種菌株のシードバイアルを、冷凍保管から取り出し、室温まで解凍した。解凍されたシードバイアルの内容物を使用して、振とうインキュベーター中、30℃で成長させたバッフル付きフラスコ中の液体種培養培地に接種した。次いで、これらのシードフラスコを、基礎塩培地、微量の金属およびグルコースを含有する一連のさらにより大きなシード発酵槽(数は規模によって変わる)に移し、成長させた。シードリアクター中の温度を、30℃、pH5および溶存酸素(DO)30%で制御した。pHを、窒素源としても作用する水酸化アンモニウム(ammonia hydroxide)を供給することによって維持した。十分な細胞量に達したら、成長したrOVA P.pastorisを、基礎塩培地、微量の金属およびグルコースを含有する製造規模のリアクターに接種した。
シードタンク中のように、培養はまた、プロセス全体にわたって、30℃、pH5および30%のDOで制御した。pHを、再び、水酸化アンモニウムを供給することによって維持した。初期バッチグルコース段階の間、培養物は、すべてのグルコース、およびその後に産生するエタノールを消費するために残した。標的細胞密度が達成され、グルコースおよびエタノール濃度がゼロであると確認されたら、グルコースフェドバッチ成長段階を開始した。この段階では、グルコースを、培養が標的細胞密度に達するまで、供給した。グルコースを、制限された速度で供給して、エタノールを、ゼロでないグルコース濃度の存在下での構築から防止した。最終誘導段階では、培養物は、グルコースおよびメタノールを同時供給され、pAOXプロモーターを介してrOVAを生成するように誘導した。グルコースは、所望の成長速度を生じる量で供給され、一方メタノールは、発現が常に誘導されることを確実にするために、1%のメタノール濃度を維持するように供給された。定期的な試料を、特定のプロセスパラメータ(例えば、細胞密度、グルコース/メタノール濃度、産物力価および品質)の分析のために、発酵プロセス全体を通して、採取した。指定された量の発酵時間後、分泌されたrOVAを、収集し、下流の処理に移した。
分泌されたrOVAを含有する発酵ブロスを、12,000rpmでの遠心分離に付した。上清を、精密濾過を使用して、清澄化した。タンパク質を濃縮し、過剰の水を除去するために、室温での限外濾過を使用した。適切なサイズのフィルターを使用して、rOVAよりも小さい化合物、塩および水をフィルター通過させながら、標的rOVAを保持した。クロマトグラフィーのための調製物における最終塩含有量および伝導度を低下させるために、濃縮されたrOVA残余分を、1.7mS/cmの材料の最終伝導度まで、pH3.5で透析した。バルクの精製を、カチオン交換クロマトグラフィーを使用して、pH3.5で行った。高い塩濃度の塩化ナトリウムを含有するクエン酸緩衝液を使用して、樹脂から結合したrOVAを溶出させた。過剰の塩を除去するために、溶出液を、最終透析して、約5~10%のタンパク質および85~95%の水を含有する最終タンパク質溶液を作製した。最終溶液を、0.2umのバイオバーデンフィルターを通過させることによって、滅菌した。水を、適切な温度で、噴霧乾燥機/凍結乾燥機を使用して蒸発させて、約80%のタンパク質を含有する最終粉末を製造した。
(実施例8)
可溶化rOVAの調製
(実施例8)
可溶化rOVAの調製
この実施例では、疎水性組換えニワトリrOVAを、可溶化し、0.2μmフィルターを通過させた。
組換えrOVAを、pH3.5でのイオン交換クロマトグラフィーにより精製し、不溶性であることを見出した。水酸化ナトリウムを溶液に添加して、pHを12.5に変え、rOVAを可溶化した。pH12.5のrOVA溶液を、0.2μmフィルターを通過させた。濾過後、pHを、塩酸を使用して6.5に戻し、rOVAを噴霧乾燥または凍結乾燥した。次いで、この乾燥ニワトリrOVAを、下記の実施例において使用した。
(実施例9)
Gallus gallus rOVAのグリコシル化
(実施例9)
Gallus gallus rOVAのグリコシル化
この実施例では、Pichia分泌rOVAを、グリコシル化パターンについて分析した。
ネイティブオボアルブミン(nOVA)は、2つの可能性があるN連結グリコシル化部位を有する(図1A)。Asn-292のグリコシル化の単一部位は、卵白中で見出される。MALDI-TOF分析は、ネイティブOVAにおける典型的なグリカンが(Man)5(GlcNAc)5(Gal)1として整理されることを示した(図1A)(Harvey et al., 2000)。rOVAにおけるグリカンの分析は、示される典型的なグリコシル化パターンを示した(図1B)。
上記の実施例からのPichia分泌ニワトリrOVAを、ゲル電気泳動の移動によって分析し、3つの異なる形態(3つの白色の矢印は、「インプット」レーンの下のrOVA、a)グリコシル化なし、b)モノグリコシル化およびc)ジグリコシル化を指し示す)が観察された。モノおよびジグリコシル化されたグリコシル鎖は両方とも、エンドグリカナーゼのEndoHまたはPNGaseFのいずれかを使用して、成熟rOVAタンパク質から切断された。「変性」または「ネイティブ」の脱グリコシル化プロトコールの両方を使用した(NEBカタログに記載される通り)。緑色の矢印は、外因性EndoHを示し、紫色の矢印は、in vitro反応に追加された外因性PNGaseFを示す(図6A)。
Pichia分泌ニワトリOVAを、質量分析を使用する標準的な分析に付した。N連結グリカン(ManGlcNAc)の5つのバージョンを有することが見出された:高いマンノースグリカンのMan9(約40%)、Man10(約47%)またはMan11(約13%)型のNグリカン構造(図6B)。
(実施例10)
さまざまな種のrOVAの起泡の機能性の比較
(実施例10)
さまざまな種のrOVAの起泡の機能性の比較
この実施例では、ニワトリrOVA、アヒルrOVAおよびダチョウrOVAを、起泡能力および泡の保持の性質について評価した。
ダチョウおよびアヒル由来のrOVAを、実施例5~7に記述される方法と類似の方法を使用して、産生、精製および凍結乾燥した。ダチョウrOVAおよびアヒルrOVAは、精製のために使用された酸性のpHに近いままであった。ニワトリrOVAを、実施例5に記述される通り産生させ、pH12で可溶化した後、バイオバーデンを除去し、実施例7に記述される通り、pH6に戻した後、乾燥した。
凍結乾燥rOVA試料を、蒸留水にブレンドした。次いで、rOVA溶液の澄明性および溶解度を、視覚的に評価した。すべての試料を、ニワトリnOVAおよびニワトリrOVAと比較した。
11mLの溶液(7%w/vのタンパク質)を、それぞれのダチョウrOVA、ニワトリrOVAおよびニワトリnOVAについて作出した。6mLの溶液(7%w/vのタンパク質)を、試料の入手限界に起因して、アヒルrOVAについて作出した。粉末のタンパク質パーセントを、算出において使用して、7%の溶液に必要な量を決定した。1mLのそれぞれの溶液を、ゲル化を試験するための後の使用のために、マイクロチューブ中で検証する前に、取りおいた。試料を、5mLのアリコートに分割して、泡の容量および安定性について試験した。
それぞれの5mLのアリコートを、ビーカーにピペッティングし、スピード3でDremelを使用してホイップした。フワフワの泡が達成された後、起泡時間、および泡の初期体積を記録した。泡の容量を、ホイップ後の泡の初期体積を測定し、初期体積の5mLに対して比較することによって決定した。泡の容量(%)=(泡の体積/初期体積)×100。
排液は、泡の安定性についてのデータを蓄積するために、10分ごとに30分間測定した。30分後に排液された体積を、初期液体体積(5mL)と比較した。泡の安定性(%):(初期体積-排液された体積)/初期体積×100。
ニワトリrOVAおよびダチョウrOVAを、pH6に調整し、pHの効果を解明するために再び試験した。
表17は、pH5.87のニワトリnOVA、pH6.49およびpH6.08のニワトリrOVA、pH3.7およびpH5.73のダチョウrOVA、pH4.3のアヒルrOVA、ならびにpH9.0の卵白OVAに対する、起泡時間、泡の容量、泡の安定性についての結果を示す。ニワトリ、アヒルおよびダチョウ由来の組換えOVAは、卵白と比較して、一般に、類似または改善された泡の容量および泡の安定性を有しており、これらの組換えOVAタンパク質は、少なくともpH3.5~6.5で泡の容量および泡の安定性を提供した。rOVAの泡の容量および泡の安定性は、焼き物組成物などの組成物における有用性を提供する。
(実施例11)
さまざまなrOVA種のゲル化の比較
(実施例11)
さまざまなrOVA種のゲル化の比較
この実施例では、ニワトリ、アヒルおよびダチョウのrOVAタンパク質を、ゲル化の性質について評価した。ゲル化の性質は、料理された卵組成物などの適用において有用性を提供する。
1mLのそれぞれのOVA溶液を、ゲル化を試験する使用のために、取りおいた。実施例10におけるDremel手順および起泡性試験が終了した後、別の1mLの試料を、排液された液体(OVAを含有する)から抽出し、別のマイクロチューブにピペッティングした。起泡の前および後の収集された分画を両方とも、水浴に設置し、72℃に10分間加熱した。試料を、ゲル形成について観察した。
図7は、pH5.87のニワトリnOVA、pH6.49およびpH6.08のニワトリrOVA、pH3.7およびpH5.73のダチョウrOVA、pH4.3のアヒルrOVA、ならびにpH9.0の卵白OVAに対する、起泡の前および後のゲル化についての結果を示す。アヒルrOVAは、ニワトリrOVAと比較して、より良好なゲル化特性を示した。アヒルrOVAは、天然卵白のものと近いゲル化の機能性を有していた。
これらのデータは、組換えニワトリOVAについて上記に開示された好ましい性質(実施例10を参照されたい)が、他の種由来の組換えOVAによっても得られ得ることを示した。
(実施例12)
rOVA溶液の起泡の比較
(実施例12)
rOVA溶液の起泡の比較
この実施例では、rOVA(ニワトリ)溶液を、新鮮な卵白と比較し、起泡能力および泡の保持の性質について評価した。
凍結乾燥試料を、異なる濃度およびpHの水溶液(蒸留水)にブレンドした。次いで、溶液の澄明性および溶解度を、起泡能力および起泡の保持について、視覚的に評価した。
タンパク質溶液を、それぞれ、4%のrOVA、7%のrOVA、新鮮な卵白(12%のタンパク質)および12%のrOVAについて作出した。粉末のタンパク質パーセントを、算出において使用して、それぞれの溶液に必要な量を決定した。1mLのそれぞれの溶液を、ゲル化を試験するための後の使用のために、マイクロチューブ中で検証する前に、取りおいた。試料を、5mLのアリコートに分割して、泡の容量および安定性について試験した。
それぞれの5mLのアリコートを、ビーカーにピペッティングし、スピード3でDremelを使用してホイップした。フワフワの泡が達成された後、起泡時間、および泡の初期体積を記録した。泡の容量を、ホイップ後の泡の初期体積を測定することによって決定し、初期体積の5mLに対して比較した。泡の容量(%)=(泡の体積/初期体積)×100。
排液は、泡の安定性についてのデータを蓄積するために、10分ごとに30分間測定した。30分後に排液された体積を、初期液体体積(5mL)と比較した。泡の安定性(%):(初期体積-排液された体積)/初期体積×100。
4%、7%および12%のrOVAは、新鮮な卵白よりも、より高い泡の容量、より高い起泡の安定性を有し、より迅速に泡を形成する。
(実施例13)
rOVAの褐色化および艶の性質
(実施例13)
rOVAの褐色化および艶の性質
この実施例では、褐色化および艶の膜形成の性質を、パンの適用におけるrOVAの機能性について評価した。膜形成についてのrOVAの機能性を、パンの視覚的(官能的)特性に関して評価した。
パン焼きの説明:酵母、砂糖および温めた水を、小さなボウルで一緒に混合し、5分間放置した。小麦粉を、安定した生地が形成されるまで(スピード3で2分間混合した)、酵母溶液に混合した(30秒)。生地を、粉をまぶしたボード上でこね、油を塗ったボウルに入れ、80°Fで45分間、発酵させた。生地を、再びこね、25gのミニローフに成形し、油を塗ったパンに置いた。ミニローフを、覆い、室温で30分間、発酵させた。0.75gの体積の適切な液を、生地ボールの上部に塗った。ミニローフを、350°Fで8分間、またはきつね色まで、焼いた。パンのローフの場所は、すべての試料の均一な焼きを達成するために、4分、オーブン内で交代した。
比色分析アッセイ:個々の試料の写真を、Colorgrab application(Loomatix)を使用して、RGBスペクトルにおける色データについて分析した。試料の値を、パンの表面の中央から取得した2×2cmの断面を使用して、作成した。次いで、RGBデータを、オンラインソフトウェアwww.colormine.orgを使用して、CIELAB系に変換した。CIELABモデルは、色を3つの値で表す色空間系である:L*は黒色(0)から白色(100)まで、a*は緑(-)から赤(+)まで、b*は青(-)から黄色(+)までの明度。
rOVAおよび卵白タンパク質試料は、より高いL*値を有し、より高い光度または輝度を示唆した。対照(卵液なし)、市販の卵液代替物および卵白タンパク質試料は、低いa*値を有し、全卵およびrOVA試料と比較して、より低い赤さまたは茶色さを示唆した。8%の卵白タンパク質およびrOVA試料も類似のb*値を有し、他の試料と比較して、類似の黄色の色相を示唆した。
目視検査:対照試料は、淡くてしわが多く見え、艶がなかった。全卵を用いた試料は、良好な褐色化、高い艶および滑らかな表面を有していた。市販の卵液代替物使用は、滑らかな表面、わずかな注目すべき艶を有していたが、褐色化が欠けていた。nOVA試料は、良好な茶色、滑らかな肌を有していたが、輝き/艶が欠けていた。同様に、rOVA試料について、これは、良好な褐色化、滑らかな肌を有していたが、輝き/艶が欠けていた。試料の写真を図8に示す。結論として、rOVAは、市販の卵液代替物およびnOVAと同程度の膜を形成することが可能であった。
(実施例14)
rOVAの接着の性質
(実施例14)
rOVAの接着の性質
この実施例では、rOVAを、均一な膜を作り出して、トッピング(例えば、ゴマ種子)の追加を助ける、パンの適用における接着性の機能性の膜形成の性質について評価した。
ゴマ種子の保持:ケーキ、パン、ベーグルまたは他の焼き物上の任意のトッピングの保持は、卵液の意図される結果である。ゴマ種子を使用して、焼いた後のそれぞれの膜形成剤のトッピング保持機能を評価した。
生地ボールおよび目的のタンパク質を、実施例13の通り調理した。10個のゴマ種子を、液の適用の後、焼き物の前に、それぞれの生地ボールに適用した。これらのゴマ種子の保持を、焼いた後のパンにくっついた種子の量に基づいて、算出した。
以下の結果が得られた。卵液なしの対照試料は、ゴマ種子についての結合能力を有さず、ゼロ個のゴマ種子が、焼いた後の表面に保持された。すべての他の膜形成剤は、焼いた後に10個すべての種子を保持し、トッピングについての100%の保持率を示唆した。
(実施例15)
組み合わされたタンパク質rOVAエマルジョン
(実施例15)
組み合わされたタンパク質rOVAエマルジョン
この実施例では、個々のおよび組合せでの組換えタンパク質の乳状化作用の機能性を、サラダドレッシング適用において観察した。
水、酢および目的のタンパク質を、ミキサーで、30秒間、混ぜ合わせた。油を、30秒間、徐々に添加し、さらに2.5分間混合した。試料を、酢なしで調理して、中性pHでのタンパク質の乳状化能力を試験した。溶液のpHを、1Nの水酸化ナトリウムを使用して調整した。エマルジョンを、L5M-Aホモジナイザー(Silverson)Square Holeシェアヘッドミキサーを用いて、9分間、4000rpmで、周囲温度で均質化した。
すべてのエマルジョン試料を、ガラス管に移し、プラスチックキャップで封をし、4℃または周囲温度で3日間、保管した。試料の安定性を、保管時間とともに下相での目に見えるセラム分離の高さを視覚的に監視することによって、評価した。物理的安定性を、周囲条件および冷蔵条件の両方で、3日間、監視した。エマルジョンの安定性を、クリーミング指標(CI)=(Ht/H0)×100として表した。ここで、(H0)は、初期のエマルジョンの高さを表し、および視覚的なセラム分離層の高さを(Ht)で表す。
酸性pHの結果:0日目において、陰性対照を除くすべての試料は、良好な乳状化性を示した。その後、試料を周囲温度または冷蔵温度で保管して、安定性を監視した。卵白タンパク質(EWP)を有する試料は、わずかに黄色の外観を有し、両方の保管条件について、1日目に分離した。対照試料は、両方の保管条件について、1日目に直ぐに分離した。8パーセントのnOVAも、1日目にエマルジョンの破壊を示したが、しかしながら、組換えOVAは、最小限の注目すべき分離のみで良好なエマルジョンの性質を示した。エマルジョンは、任意のさらなる分離が観察されることなく、3日目まで等しく安定なままであった。全体として、8%のrOVAは、8%のnOVAよりも顕著に良好に働いた。rOVAはまた、EWPよりも良好なエマルジョンの安定性を示した。試料の写真を図9Aに示す。
中性pHの結果:rOVAのエマルジョンの安定性は、0日目および3日目において、卵白タンパク質と同程度であった。rOVAも、卵白タンパク質も、冷蔵形式または周囲温度で、3日にわたってエマルジョンの安定性を維持することはできなかった。試料の写真を図9Bに示す。
(実施例16)
起泡の機能性
(実施例16)
起泡の機能性
この実施例では、rOVAの起泡の機能性を、アルコール系ドリンク(例えば、起泡剤を含むウイスキーサワーなど)において観察した。
バーボンウイスキー、フレッシュレモンジュース、単シロップおよび目的のタンパク質を、カクテルシェーカー中で混ぜ合わせ、15秒間振とうした。氷をカクテルシェーカーに加え、混合物をさらに15秒間振とうした。振とうされた混合物を、グラスにあけ、観察した。
rOVA溶液のpHを、pH6に調整して(1MのNaOHによる)、最適な起泡性能を提供した。
0.5ozの卵白および同じ割合を使用する元のレシピを、組換えタンパク質の試験のために使用した。7%および12%のrOVAは、十分に起泡したが、有意差は、2つのレベルの間で観察されなかった。
試料を用いて調理されたクラフトカクテルの写真を図10に示す。
(実施例17)
ハンバーガーの結合性
(実施例17)
ハンバーガーの結合性
この実施例では、食感分析を使用して、rOVAおよび他の結合剤を用いて作製された、生および料理されたビーガンハンバーガーの両方の硬さの特質を、凝集性、弾力性およびかみ応えと一緒に観察した。
この実施例の目的は、rOVAの結合性の機能性を評価することであった。外観(どれだけ良好にハンバーガーがまとまっているか)、凝集性、弾力性、かみ応えおよび硬さなどの食感の態様などのパラメーターを、評価し、卵白、nOVAおよび市販の使用されている非タンパク質バインダーに対して比較した。
材料:乾燥系の原料:押し出しダイズタンパク質1(Arcon T U172(158172))、押し出しダイズタンパク質2(Arcon T Caramel Crumble 240(158225))、押し出しダイズタンパク質3(Arcon T U-118(158118))、結合剤/目的のタンパク質。ウェット原料:キャノーラ油、ココナツ油、水。試験される目的の結合剤:天然卵白タンパク質(“NEW”)、メチルセルロース(“MC”)、nOVA 90%タンパク質含有量、rOVA(ニワトリ) 92%タンパク質含有量。
混合:押し出しダイズタンパク質1を、1/3量の水と、2.5分間混合した。残りの押し出し試料および水を、以前の混合物とともに、さらに7.5分間、混ぜ合わせた。ブレンドを、フリーザーで10分間、冷やした。結合剤を添加し、30秒間混合した。キャノーラ油およびココナツ油のブレンドを添加し、30秒間混合した。混合物を、フリーザーで5分間、冷やし、次いで、5gのハンバーガー形状に成形し、冷凍した。
料理:冷凍されたハンバーガー試料を、冷蔵庫で、4℃の内部温度まで解凍した。試料を、350°Fに設定されたグリドルにおいて、5~6分間、165°Fの内部温度に達するまで、料理した。
食感分析:食感分析を行って、対照に対するビーガンハンバーガーの特質を分析した。食感分析を使用して、硬さの特質を、凝集性、弾力性およびかみ応えと一緒に定量化した。
冷凍された試料を、冷蔵庫で、4℃の内部温度まで解凍し、生の結合性について試験した。解凍された試料も、料理し、料理された結合性の値を測定するために使用した。
生の結合性についての知見:硬さに関して、rOVAは、メチルセルロースおよび天然卵白よりも有意に高く、差は、nOVAおよびrOVAの間で観察されなかった。すべての試料は、凝集性および弾力性に関して、類似していた。rOVAは、メチルセルロースおよび天然卵白よりも有意に良いかみ応えを示した。結果を表30に表す。
表30:硬さ、凝集性、弾力性およびかみ応えに関する生の結合性についての食感(TPA)の結果。特定の特質内で同じ文字を共有していないデータは、互いに有意差がある(p<0.05)。結果は、n=3にわたって平均された。
料理された結合性についての知見:rOVAは、メチルセルロースおよび天然卵白よりも有意に高い硬さの値を示した。すべての試料は、凝集性に関して、互いに類似していた。弾力性について、メチルセルロース試料は、天然卵白、nOVAおよびrOVAよりも有意に低い値を示した。nOVAおよびrOVA試料は両方とも、メチルセルロースよりも高い値のかみ応え値を示した。結果を表31に表す。
表31:硬さ、凝集性、弾力性およびかみ応えに関する料理された結合性についての食感(TPA)の結果。特定の特質内で同じ文字を共有していないデータは、互いに有意差がある(p<0.05)。結果は、n=3にわたって平均される。
(実施例18)
卵白パティ
卵白パティ
この実施例では、料理された卵系の例として卵白パティの適用におけるネイティブおよび組換えタンパク質OVAの包含の好適性を評価した。OVAによって置き換えられた場合の新鮮な卵白の栄養価などのパラメーター、および食感に対する効果(機能性の観点)、および外観を評価した。
混合:表32からの乾燥原料を、アルギン酸ナトリウムを除いて、一緒に混合した。タピオカシロップ、アルギン酸ナトリウムおよびレモンイエローカラーを、水中で、別々にブレンドした。すべての原料を、油とともに混合し、すべての原料が溶解するまで、ボルテックスした。混合物を、10分間放置することによって、平衡化させた。
料理:グリドルを使用して、試料を料理した。グリドルを250°Fに設定し、2分の1インチの直径のリング型を使用して、試料を料理した。型に油を吹き付け、混合物を、型に入れた。1/2の角氷を型に加えて、蒸気を発生させた。パティを料理し、別の角氷を加えた。パティを5分間料理し、蓋を開けた。リングは、料理された試料を給仕プレートにあわせて成形する。
卵白パティの食感の性質を、CT3 Brookfield Textureアナライザー(1500gの負荷セル)を使用して測定した。TPA圧縮試験を使用して圧縮し、卵白パティの硬さを測定した。それぞれのセットからの4つの試料を分析して、比較した。以下の試験パラメーターを使用した。
結果:
知見:天然卵白、nOVAおよびrOVAのすべての試料は、硬さ、接着性、破砕性、凝集性および粘着性に関して、統計的に類似していた。かみ応えについて、天然卵白パティは、nOVAおよびrOVAと個々に類似していたが、しかしながら、nOVAおよびrOVAは、互いに、統計的に異なっていた。nOVAは、他の試料と比較して、より高いかみ応え値を有していた。全体的に、OVAタンパク質は、ネイティブおよび組換え型の両方において、非動物パティ(料理された卵の適用)において、天然卵白に対する良好な代替を提供する。rOVA液体処方は、nOVA試料および卵白試料よりも粘度がより高かった。結果を図11に示す。
(実施例19)
メレンゲ
(実施例19)
メレンゲ
新鮮な卵白と比較したメレンゲ食品系におけるrOVAの機能性を、この実施例では、評価した。
材料:
- rOVA(Lyo 008;pH:6.7のまま)
- 新鮮な卵白(pH:9のまま)
- 砂糖(C&H Sugar、Pure Cane、顆粒状白色)
- キサンタン - 事前水和Ticaxan - Tic Gums
- TEC(クエン酸トリエチル)
- SLS(ラウリル硫酸ナトリウム)
- Kitchen Aid、Classic Plus
- Breville BOV800XL Smart電気オーブン
- rOVA(Lyo 008;pH:6.7のまま)
- 新鮮な卵白(pH:9のまま)
- 砂糖(C&H Sugar、Pure Cane、顆粒状白色)
- キサンタン - 事前水和Ticaxan - Tic Gums
- TEC(クエン酸トリエチル)
- SLS(ラウリル硫酸ナトリウム)
- Kitchen Aid、Classic Plus
- Breville BOV800XL Smart電気オーブン
方法:卵白を、冷蔵温度で、注意深く卵黄から分離し、卵白を室温にした後、ホイップした。rOVA粉末、SLS、キサンタンガムおよびTECを、室温で、DI水中で再構成した。混合物を、スピード5で30秒間ホイップし(均質な溶液を得るため)、次いで、スピード8で、柔らかい角が形成されるまで混合した。一定で撹拌しながら、砂糖を徐々に添加し、それぞれの添加後、次に添加する前に砂糖が溶解するまで、高速で撹拌した。混合を、光沢のある安定した角が形成されるまで続けた。オーブン(Breville BOV800XL Smart電気オーブン)を200°Fに加熱し、メレンゲを、70分間(または、軽くてサクサクするが茶色にはならないまで)、焼いた。冷却後、メレンゲを気密容器で保管した。それぞれのタンパク質溶液について安定した泡が生じるまでのホイップ時間を記録した。
知見:rOVAは、物理的パラメーターに関して、新鮮な卵白試料と同程度のメレンゲを生じた。rOVAメレンゲの外観は、新鮮な卵白対照よりも視覚的に良好であった。隆起は、rOVAメレンゲにおいてより輪郭が明らかで、試料は、新鮮な卵白対照と比較して白かった。結果を図12に示す。
(実施例20)
ゲル化特性に対するpHの効果
(実施例20)
ゲル化特性に対するpHの効果
方法:
1.7%のタンパク質溶液を、rOVAおよび卵白タンパク質の両方について調製した。
2.ネイティブpHに基づいて、溶液のpHを、1NのHClを用いて、pH3、4、5、6に調整した。
3.pHはまた、マイクロリットル量の1Nおよび3Nの水酸化ナトリウムを用いて、pH7、8、9、10、11および12のアルカリスペクトルに調整した。
4.すべての溶液を、85℃で5分間ゲル化させ、次いで、室温で冷却した。
5.すべてのゲル/溶液を採取し、ゲル特性について視覚的に評価した。
1.7%のタンパク質溶液を、rOVAおよび卵白タンパク質の両方について調製した。
2.ネイティブpHに基づいて、溶液のpHを、1NのHClを用いて、pH3、4、5、6に調整した。
3.pHはまた、マイクロリットル量の1Nおよび3Nの水酸化ナトリウムを用いて、pH7、8、9、10、11および12のアルカリスペクトルに調整した。
4.すべての溶液を、85℃で5分間ゲル化させ、次いで、室温で冷却した。
5.すべてのゲル/溶液を採取し、ゲル特性について視覚的に評価した。
知見:卵白タンパク質は、pH4~10で安定したゲルを形成しながら、すべてのpHでゲル化性を示した。pH11およびpH12のEWPおよびrOVAの両方についての溶液は、澄明な液体であったが、しかしながら、EWPのみ澄明なゲルにゲル化した一方、rOVAは、pH11および12で溶液のままであった。rOVA 7%溶液は、pH6、7、8および9でゲル化した。粘度の劇的な増加が、rOVA溶液について、pH5およびそれよりも下で観察された。EWPゲルはすべて、強い卵様の臭いを有していた一方、rOVAについては、pH9~12の溶液/ゲルのみが、卵様の臭いを有していた。rOVAについて、pH3.5~8は、任意の特徴的な臭いの性質は有していなかった。EWPおよびrOVAは両方とも、pH6~9でゲル化したが、しかしながら、EWPのゲルは、rOVAのゲルよりも強く、安定であった。全体的に、EWPは、より広いpHスペクトルにわたって、rOVAよりも良好なゲル化性を示し、それは、強い卵様の臭いの存在が伴った。rOVAは、pH6~8の範囲でゲル化性を提供し、官能的中立性を提供した(例えば、臭いなし)。pH8および9で、rOVAは、透明な視覚的外観を必要とする実施形態において固有の価値ある提案を有し得る澄明な安定なゲルを提供した。
(実施例21)
プロテインバー
(実施例21)
プロテインバー
rOVAを、プロテインバーの適用におけるタンパク質源として使用し、卵白タンパク質(effwhite proteins)およびnOVAと比較した。
調理の説明:
小さいミキサーにおいて、デーツ、ナッツを切り刻み/ブレンドした。デーツ、ナッツ、ココアおよび目的のタンパク質を、均質な混合物が形成されるまで、混合ボウルに加えた。混合物を、2つの等しい部分に分け、1つの部分を、焼いていないバージョンとして試験した。他の半分を、オーブン中、350°Fで10分間焼いた。
食感分析:プロテインバー(焼きおよび焼いていない)の食感の性質を、CT3 Brookfield Textureアナライザー(1500gの負荷セル)を使用して測定した。3点曲げ試験を使用して、折り、曲げ、およびプロテインバーの硬さを測定した。それぞれのタンパク質包含レベルについて1つの試料を分析した。以下の試験パラメーターを使用した。
焼いていない試料について、タンパク質なしの対照試料は、最も低い硬さの値を有していた。EWP、nOVAおよびrOVAの目的のタンパク質すべてについて、硬さの値は、タンパク質含有量の増加とともに増加した。卵白タンパク質試料は、8、12、16および23%で、nOVAおよびrOVA試料よりも高い硬さの値を有していた。nOVA試料は、12~23%のタンパク質包含から、最小限の硬さの増加を有していた。nOVAおよびrOVA試料の硬さは、4、8、12および16%で同程度であった。しかしながら、rOVAは、23%のタンパク質包含について、はるかに高い硬さの値を有していた。
全体的に、焼いた試料の硬さは、焼いていない試料よりもはるかに高かった。対照試料は、最も低い硬さを有していた。タンパク質包含を伴う試料はすべて、より低いタンパク質包含比率でさえ、はるかに硬かった。TA単位についての上限閾値(負荷セル)は1500gである。焼いたタンパク質試料はすべて、閾値に達し、それが、試料間の微妙な差を特定することを困難にした。nOVAおよびrOVA試料の硬さは、焼いていない、および焼いたプロテインバーの両方について、4、8、12および16%で同程度であった。写真を図13に示す。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し、記載したが、当業者には、そのような実施形態が例としてのみ提供されていることは自明である。ここに、多数の変形、変化および置換は、本発明から逸脱することなく、当業者には思い当たる。本明細書に記載される本発明の実施形態に対するさまざまな代替を、本発明の実行において用いてもよいことが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義すること、ならびにこれらの特許請求の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの均等物は、それらによって包含されることが意図される。
参照による組み込み
参照による組み込み
本明細書において言及されたすべての刊行物、特許および特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許または特許出願が、参照により組み込まれることが具体的かつ個々に示されているかのような同じ程度で、参照により本明細書に組み込まれる。
本開示の追加の態様および利点は、以下の詳細な説明から当業者に容易に明らかになり、本開示の実例となる実施形態のみを、示し、記載する。実現されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、本開示から逸脱することなくすべて、さまざまな自明な事項において改変が可能である。したがって、図面および説明は、本質的に実例として見なされるべきであり、限定的なものとして見なされるべきではない。
Claims (167)
- 卵を含まない食品を製造するための原料組成物であって、前記組成物が、組換えオボアルブミン(rOVA)を含み、
可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約7.0であり、
前記卵を含まない食品中に存在する場合、前記rOVAが、約2%~約15%(w/w)の量であり、
前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供する、
原料組成物。 - 前記組成物が、乾燥されているか、または粉末である、請求項1に記載の原料組成物。
- 前記組成物が、少なくとも75%のrOVAを含む(総タンパク質のw/wまたは総組成物のw/w)、請求項1または請求項2に記載の原料組成物。
- 前記粉末の組成物が、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)である、請求項3に記載の原料組成物。
- 前記粉末が、濃縮物である、請求項3または請求項4に記載の原料組成物。
- 前記粉末組成物が、単離物である、請求項2~5のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記組成物が、液体である、請求項1に記載の原料組成物。
- 前記液体組成物が、濃縮物である、請求項7に記載の原料組成物。
- 前記液体組成物が、少なくとも50%のrOVAを含む(総タンパク質のw/wまたは組成物のw/w)、請求項7または請求項8に記載の原料組成物。
- 前記液体組成物が、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)を含む、請求項7に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、類似の食品中のネイティブ卵白と比較して、同等の特性または特性の改善を提供する、請求項1~3のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を提供する、請求項1~11のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速い起泡までの時間を提供する、請求項1~12のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約4.5である、請求項12または請求項13に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、焼いた実施形態においてネイティブ卵白と同程度またはそれよりも高い硬さを前記卵を含まない食品組成物に提供する、請求項1~14のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも高いかみ応えを前記卵を含まない食品組成物に提供する、請求項1~15のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供する、請求項15または請求項16に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項1~17のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項1~18のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAのアミノ酸配列が、N末端メチオニンを欠く、請求項18または請求項19に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む、請求項20に記載の原料組成物。
- 前記rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項1~21のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項1~21のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 可溶化された場合、前記pHが、約6~約6.8である、請求項1~21のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約6.1未満である、請求項1~21のいずれか一項に記載の原料組成物。
- rOVAが、約8%未満の量で前記卵を含まない食品中に存在する、請求項1~25のいずれか一項に記載の原料組成物。
- rOVAが、約7%または7%未満の量で前記卵を含まない食品中に存在する、請求項1~25のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 前記rOVAが、Salmonellaで前記組成物を汚染しない、請求項1~27のいずれか一項に記載の原料組成物。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)であって、可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約7.0である、rOVA、
少なくとも1種の脂肪または油、
少なくとも1種の穀類デンプン、および
少なくとも1種の甘味料
を含む、焼き物食品製品であって、
前記rOVAが、前記焼き物食品製品に、結合性、弾力性、空気混和性、褐色化、組織化、保水性および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供し、
前記焼き物食品製品が、いかなる天然卵白タンパク質または天然卵白を含まない、
焼き物食品製品。 - 前記rOVAが、前記製品中に約2%~15%で存在する(焼き前の総タンパク質のw/wまたは総食品製品のw/w)、請求項29に記載の焼き物食品製品。
- 前記rOVAが、前記製品中に約2%~約5%(w/w)で存在する、請求項30に記載の焼き物食品製品。
- 乳成分もしくは膨張剤、またはそれらの組合せをさらに含む、請求項29または請求項30に記載の焼き物食品製品。
- 前記製品が、ケーキ、パン、ロール、ペストリー、クラッカー、マフィン、スコーン、ベーグル、ビスケットまたはクッキーである、請求項29~32のいずれか一項に記載の焼き物食品製品。
- 前記焼き物製品が、天然卵白または天然全卵を用いて作製された類似の焼き物製品と同等またはそれよりも良好なクラム構造を有する、請求項33に記載の焼き物製品。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項29~34の一項に記載の焼き物製品。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項29~35のいずれか一項に記載の焼き物製品。
- 全卵を用いて作製された同等の焼き物製品と比較した場合、重量喪失のパーセンテージが、rOVAを用いて作製された焼き物製品においてより低い、請求項29~36のいずれか一項に記載の焼き物製品。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)、
少なくとも1種の脂肪または油、
水
を含む、乳状化製品であって、
前記rOVAが、前記製品中に約2%~15%(w/w)で存在する、乳状化製品。 - 酸性化剤をさらに含む、請求項38に記載の乳状化製品。
- 前記製品が、サラダドレッシング、ソース、マヨネーズ、市販のマヨネーズ代替物、サンドイッチスプレッドまたはグレービーである、請求項38または請求項39に記載の乳状化製品。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)であって、可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約7.0である、rOVA、
少なくとも1種の甘味料、および
必要に応じて、摂取可能な液体
を含む、食品製品であって、
前記rOVAが、前記食品製品中に約2%~約15%(w/w)で存在し、前記rOVAが、前記食品製品に、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を提供する、
食品製品。 - rOVAが、前記食品製品にゲル化をさらに提供する、請求項41に記載の食品製品。
- 前記rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項42に記載の食品製品。
- 前記rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項42に記載の食品製品。
- 前記食品製品が、メレンゲ、ホイップデザート、ホイップトッピングまたはスフレである、請求項41~44に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を前記食品製品に提供する、請求項41~45のいずれか一項に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速い起泡までの時間を前記食品製品に提供する、請求項41~46のいずれか一項に記載の食品製品。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約4.5である、請求項46または請求項47に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記食品製品中に約5%~約10%(w/w)で存在する、請求項41~48のいずれか一項に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記食品製品中に約7%~約8%(w/w)で存在する、請求項49に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記食品製品中に約4%、約7%または約12%(w/w)で存在する、請求項46または請求項47に記載の食品製品。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約6である、請求項51に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記食品製品中に約9%~約10%(w/w)で存在する、請求項46または請求項47に記載の食品製品。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約7である、請求項53に記載の食品製品。
- 前記製品が、飲料である、請求項41に記載の食品製品。
- 前記飲料が、摂取可能なアルコールである、請求項55に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記摂取可能なアルコール飲料に、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を提供する、請求項56に記載の食品製品。
- 前記飲料が、コーヒードリンクである、請求項55に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記コーヒードリンクに、起泡性、ホイップ性、フワフワ性または空気混和性を提供する、請求項58に記載の食品製品。
- コーヒードリンクが、乳成分を欠くか、または乳成分を含む、請求項58または請求項59に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項41~60のいずれか一項に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項41~61のいずれか一項に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、Salmonellaで前記食品製品を汚染しない、請求項41~62のいずれか一項に記載の食品製品。
- 前記食品製品が、プロテインバー、エネルギーバー、栄養バーまたはグラノーラバーである、請求項41~63のいずれか一項に記載の食品製品。
- 前記食品製品が、約4%~約8%(w/w)のrOVAを含む、請求項64に記載の食品製品。
- 前記バーが、焼かれているか、または焼かれていない、請求項64または請求項65に記載の食品製品。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)、
少なくとも1種の脂肪または油、および
植物由来タンパク質
を含む、肉類似食品製品であって、
前記rOVAが、前記食品製品中に約2%~約15%(w/w)で存在し、
前記rOVAが、結合剤もしくはゲル化剤、またはそれらの組合せとして作用する、肉類似食品製品。 - 前記植物タンパク質が、押し出し植物タンパク質である、請求項67に記載の肉類似食品製品。
- 前記植物タンパク質が、非押し出し植物タンパク質である、請求項67に記載の肉類似食品製品。
- 前記肉類似食品製品が、ハンバーガー、パティ、ソーセージ、ホットドッグ、スライスされたデリミート、ジャーキー、ベーコン、ナゲット、挽肉様組成物および成形肉様組成物から選択される、請求項67~69のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも高い硬さを前記食品製品に提供する、請求項67~70のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも高いかみ応えを前記食品製品に提供する、請求項67~71のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供する、請求項71または請求項72に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項67~73のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項67~73のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAが、前記食品製品中に約4%、約5%または約6%(w/w)で存在する、請求項67~73のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項67~73のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項67~76のいずれか一項に記載の肉類似食品製品。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)、
少なくとも1種の脂肪または油、および
多糖類または多糖類含有原料
を含む、卵白代替物であって、
前記rOVAが、前記組成物中に約2%~15%(w/w)で存在し、
前記組成物が、硬さ、接着性、破砕性、凝集性、粘着性およびかみ応えから選択される1つまたは複数の特性を有し、前記卵白代替物が料理された場合、前記1つまたは複数の特性が、天然卵白と比較して、同等またはそれよりも改善されている、
卵白代替物。 - 香味剤もしくは着色剤、またはそれらの組合せをさらに含む、請求項79に記載の卵白代替物。
- 前記多糖類または多糖類含有原料が、デンプンである、請求項79または請求項80に記載の卵白代替物。
- 前記多糖類または多糖類含有原料が、ジェランガム、アルギン酸ナトリウムおよびサイリウム、またはそれらの任意の組合せから選択される、請求項79~81のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも高い硬さを食品製品に提供する、請求項79~82のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白よりも高いかみ応えを前記食品製品に提供する、請求項79~83のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAが、ネイティブ卵白と同程度の粘着性および/または弾力性を提供する、請求項83または請求項84に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項79~85のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項79~85のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAが、食品製品中に約10%~約12%(w/w)存在する、請求項79~85のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項79~88のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項79~88のいずれか一項に記載の卵白代替物。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)を含む粉末化原料組成物であって、
可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約7.0であり、
前記rOVAが、前記組成物の少なくとも75%w/wであり、
前記rOVAが、N-アセチルグルコサミンに連結されたマンノースを有する1つまたは複数のN連結グリコシル化部位を含み、前記N連結グリコシル化部位が、ガラクトースを欠く、
粉末化原料組成物。 - 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項91に記載の粉末化原料組成物。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項91または請求項92に記載の粉末化原料組成物。
- 前記rOVAのアミノ酸配列が、N末端メチオニンを欠く、請求項92または93に記載の粉末化原料組成物。
- 前記rOVAが、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む、請求項91~94のいずれか一項に記載の粉末化原料組成物。
- 前記組成物が、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)を含む、請求項91~95のいずれか一項に記載の粉末化組成物。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)を含む液体組成物であって、前記組成物が、少なくとも50%のrOVAを含む(総タンパク質のw/wまたは総組成物のw/w)、液体組成物。
- 前記組成物が、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%または少なくとも約90%のrOVA(w/w)を含む、請求項97に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項97または請求項98に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項97~99のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAのアミノ酸配列が、N末端メチオニンを欠く、請求項99または請求項100に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む、請求項101に記載の液体組成物。
- 前記可溶化されたrOVAのpHが、約3.5~約7.0である、請求項97~102のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記可溶化されたrOVAのpHが、約6~約6.8である、請求項97~103のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約6.1未満である、請求項97~104のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供する、請求項97~105のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、類似の卵を含まない食品中のネイティブ卵白と比較して、同等の特性または特性の改善を提供する、請求項106に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を提供する、請求項97~107のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速い起泡までの時間を提供する、請求項97~108のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約4.5である、請求項106~109のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品中に約5%~約10%(w/w)で存在する、請求項106~110のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品中に約7%~約8%(w/w)で存在する、請求項111に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品中に約4%、約7%または約12%(w/w)で存在する、請求項106~109のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約6である、請求項113に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高い硬さを提供する、請求項97~114のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高いかみ応えを提供する、請求項97~115のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供する、請求項115または請求項116に記載の液体組成物。
- 前記rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項97~117のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項97~117のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 前記rOVAが、Salmonellaで前記卵を含まない食品を汚染しない、請求項97~119のいずれか一項に記載の液体組成物。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)を含む乾燥または粉末化組成物であって、前記組成物が、少なくとも50%のrOVAを含む(総タンパク質のw/wまたは総組成物のw/w)、乾燥または粉末化組成物。
- 前記組成物が、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%または少なくとも95%のrOVA(w/w)を含む、請求項121に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項121または請求項122に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項121~123のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAのアミノ酸配列が、N末端メチオニンを欠く、請求項123または請求項124に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む、請求項125に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、卵を含まない食品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供する、請求項121~126のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、類似の卵を含まない食品中のネイティブ卵白と比較して、同等の特性または特性の改善を提供する、請求項127に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%高い泡の容量を提供する、請求項121~128のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも少なくとも20%、30%、40%または50%速い起泡までの時間を提供する、請求項121~129のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約3.5~約4.5である、請求項121~129のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品中に約4%、約7%または約12%(w/w)で存在する、請求項121~129のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 可溶化された場合、前記rOVAのpHが、約6である、請求項132に記載の食品製品。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高い硬さを提供する、請求項121~133のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白よりも高いかみ応えを提供する、請求項121~134のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAが、前記卵を含まない食品に、ネイティブ卵白と同程度の弾力性を提供する、請求項134または請求項135に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAがニワトリOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.5~7.0である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項121~136のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 前記rOVAがダチョウOVAのアミノ酸配列を含み、かつ可溶化された場合にpHが約6.0未満および約3.7超である場合、前記rOVAが、改善されたゲル化を提供する、請求項121~136のいずれか一項に記載の乾燥または粉末化組成物。
- 食品製品を作製する方法であって、
可溶化された場合、pHが約3.5~約7.0の組換えオボアルブミン(rOVA)を提供するステップ、
2%~15%(w/w)の量の前記rOVAを1種または複数の摂取可能な原料と組み合わせて、食品製品を形成するステップ
を含み、
前記rOVAが、前記食品製品に、ゲル化性、起泡性、ホイップ性、フワフワ性、結合性、弾力性、空気混和性、コーティング、膜形成性、乳状化作用、褐色化、増粘性、組織化、保水性、清澄化および凝集性から選択される少なくとも1つの卵白の特性を提供する、
方法。 - 原料組成物を製造する方法であって、前記方法が、
組換えオボアルブミン(rOVA)を微生物細胞中で発現させるステップであって、前記rOVAが、前記微生物細胞によって液体培地に分泌される、ステップ、
分泌されたrOVAを含有する前記液体培地を回収するステップ、
約3.5のpHで分離ステップを行うステップ、
前記rOVAを約12のpHで可溶化するステップ、
前記rOVAの最終pHを約3.5~約7.0に調整して、前記原料組成物を作成するステップ
を含む、方法。 - 前記分離ステップが、イオン交換クロマトグラフィーまたは硫酸アンモニウム沈殿を含む、請求項140に記載の方法。
- 前記イオン交換クロマトグラフィーが、カチオン交換クロマトグラフィーもしくはアニオン交換クロマトグラフィー、またはそれらの組合せである、請求項141に記載の方法。
- 前記方法が、前記可溶化ステップ後に、濾過ステップをさらに含む、請求項140~142のいずれか一項に記載の方法。
- 前記微生物細胞が、真菌細胞である、請求項140~143のいずれか一項に記載の方法。
- 前記真菌細胞が、Pichia sp.である、請求項144に記載の方法。
- 前記微生物細胞が、組換えヘルパー因子を発現し、前記ヘルパー因子が、rOVAの発現または蓄積のレベルを増強する、請求項144または請求項145に記載の方法。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項140~146のいずれか一項に記載の方法。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項140~147のいずれか一項に記載の方法。
- 前記分泌されたrOVAのアミノ酸配列が、N末端メチオニンを欠く、請求項147または請求項148に記載の方法。
- 前記分泌されたrOVAが、そのN末端にEAEAアミノ酸配列(配列番号75)をさらに含む、請求項140~149のいずれか一項に記載の方法。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)を約15%~約25%の量で含む(総タンパク質のw/wまたは食品製品のw/w)、卵を含まない食品製品。
- 前記rOVAを最大で約23%(w/w)の量で含む、請求項151に記載の卵を含まない食品製品。
- 焼き物製品の作製における原料としての組換えオボアルブミン(rOVA)の使用。
- 卵を含まない食品製品の作製における原料としての組換えオボアルブミン(rOVA)の使用。
- 肉類似食品製品の作製における原料としての組換えオボアルブミン(rOVA)の使用。
- 卵白代替物の作製における原料としての組換えオボアルブミン(rOVA)の使用。
- 焼き物製品のための代替卵液としての組換えオボアルブミン(rOVA)の使用であって、前記代替卵液が、天然卵白もしくは天然全卵を含む卵液と同等またはそれよりも良好な膜形成を提供する、使用。
- 前記rOVAが、配列番号2もしくは配列番号1のアミノ酸配列、または配列番号2もしくは配列番号1と少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項153~157のいずれか一項に記載の使用。
- 前記rOVAが、アヒルOVA、ダチョウOVAまたはニワトリOVAのアミノ酸配列を含む、請求項153~157のいずれか一項に記載の使用。
- 前記rOVAが、卵液中に8%~9%(w/w)の量で存在する、請求項153~158のいずれか一項に記載の使用。
- 組換えオボアルブミン(rOVA)の大規模製造であって、前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも1リットルの液体培養を含む、大規模製造。
- 前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも10リットルの液体培養を含む、請求項161に記載のrOVAの大規模製造。
- 前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも100リットルの液体培養を含む、請求項162に記載のrOVAの大規模製造。
- 前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも1,000リットルの液体培養を含む、請求項162に記載のrOVAの大規模製造。
- 前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも10,000リットルの液体培養を含む、請求項162に記載のrOVAの大規模製造。
- 前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の少なくとも100,000リットルの液体培養を含む、請求項162に記載のrOVAの大規模製造。
- 前記大規模製造が、前記rOVAを発現する微生物細胞の約200,000リットルの液体培養を含む、請求項162に記載のrOVAの大規模製造。
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