CN114599234A - 具有功能性能的非动物性蛋白质来源 - Google Patents

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CN114599234A CN202080073303.XA CN202080073303A CN114599234A CN 114599234 A CN114599234 A CN 114599234A CN 202080073303 A CN202080073303 A CN 202080073303A CN 114599234 A CN114599234 A CN 114599234A
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克里缇卡·马哈德万
法诺什·阿勇盖
伊沙·乔希
乔伊·安德鲁·克雷普斯
哈沙尔·卡什萨格
弗兰克·道格拉斯·艾维
钟微希
埃里克·林
亚历山大·查普奥克斯
斯里德哈兰·戈文德
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Abstract

本文提供了具有提高的蛋白质含量的组合物、含有功能性蛋白质的组合物、蛋白质组合及其制备方法。

Description

具有功能性能的非动物性蛋白质来源
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背景技术
蛋白质是重要的膳食营养物质和食品成分。它们可以作为能量来源或包括不能由身体合成的必需氨基酸的氨基酸的来源。健康成年人每日推荐的蛋白质摄入量是一个人总热量需求的10％至35％，并且目前大多数人的蛋白质摄入主要来自动物性来源。此外，蛋白质广泛用于各种食品和食品成分中。在许多情况下，这些蛋白质都来源于动物。随着世界人口的增长和全球食品需求的同步增长，有必要提供可持续的、非动物性的替代蛋白质来源，作为日常饮食、食品成分和食物产品的有用蛋白质来源。
发明内容
根据以下具体描述，本公开的另外的方面和优点对于本领域技术人员将容易地变得清楚，在以下具体描述中仅示出和描述了本公开的说明性实施方案。如将会理解的，本公开能够有其他的和不同的实施方案，并且其若干细节能够在各个明显的方面进行修改，所有这些都不背离本公开。相应地，附图和说明书应当被看作本质上是说明性的，而不是限制性的。
在一些实施方案中，本文提供了用于制作无蛋食品项目(food item)的成分。用于制作无蛋食品项目的成分组合物可以包含重组卵清蛋白(rOVA)，其中该rOVA的pH可以为约3.5至约7.0；其中当存在于无蛋食品项目中时，该rOVA的量为约2％至约15％(w/w)；并且其中该rOVA为无蛋食品项目提供至少一种蛋清特性，这些特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
在一些情况下，该组合物可以是干燥的，也可以是粉状物。在一些情况下，该组合物可包含至少75％(总蛋白质的w/w或总组合物的w/w)的rOVA。在一些情况下，该粉状组合物可以是浓缩物。在一些情况下，该粉状组合物可以是分离物。在一些情况下，该粉状组合物可以是至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。在一些情况下，该粉状组合物为至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。在一些情况下，该粉状物为浓缩物。
在一些情况下，该粉状组合物为分离物。
在一些情况下，该组合物可以是液体。在一些情况下，该液体组合物可包含至少50％(总蛋白质的w/w或组合物的w/w)的rOVA。在一些情况下，该液体组合物包含至少约60％、至少约65％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。在％rOVA的上下文中，术语“总蛋白质的w/w”意指rOVA包含该组合物中总蛋白质的限定百分比。在一个示例中，包含总蛋白质的至少50％的rOVA w/w的组合物将具有总蛋白质的至少一半的rOVA，而另一半左右是另一种蛋白质。因此，总组合物按重量计并不一定需要为至少50％的rOVA，只有组合物的蛋白质含量必须为至少50％的rOVA。
在一些情况下，与类似食品项目中的天然蛋清相比，rOVA提供了等同或改善的特性。在一些情况下，rOVA提供比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。在一些情况下，rOVA提供可能比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。在一些情况下，rOVA为无蛋食品组合物提供了比天然蛋清更大的硬度。在一些情况下，rOVA为无蛋食品组合物提供了可以比天然蛋清更大的咀嚼性。在一些情况下，rOVA提供了与天然蛋清相当的弹性。
在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。在一些情况下，rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
在一些情况下，当rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。在一些情况下，当rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
在一些情况下，溶解时的pH可为约6至约6.8。在一些情况下，rOVA溶解时的pH可以小于约6.1。在一些情况下，rOVA可以以小于约8％的量存在于无蛋食品项目中。在一些情况下，rOVA可以以约7％或小于7％的量存在于无蛋食品项目中。
在一些实施方案中，本文提供了烘焙物。一种烘焙食物产品，可以包括：(i)重组卵清蛋白(rOVA)，其中该rOVA溶解时的pH可以为约3.5至约7.0；(ii)至少一种脂肪或油；(iii)至少一种谷物淀粉；和(iv)至少一种甜味剂；其中rOVA为烘焙食物产品提供至少一种蛋清特性，这些特性选自于粘合性、弹性、通气性、褐变性、组织化、保湿性和粘结性，并且该烘焙食物产品不包含任何天然蛋清蛋白或天然蛋清。
在一些情况下，rOVA可以以约2％至15％(烘焙前总蛋白质的w/w或总食物产品的w/w)存在于产品中。在一些情况下，rOVA以约2％至约5％(w/w)存在于产品中。在一些情况下，烘焙物可以包含乳制品组分或发酵剂，或者其组合。在一些情况下，该产品可以是蛋糕、面包、面包卷、油酥点心、薄脆饼干、松饼、司康饼、饼干或曲奇饼。在一些情况下，该烘焙产品可以具有等同于或优于用天然蛋清或天然全蛋制成的类似烘焙产品的屑状结构。在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，与用全蛋制成的等同烘焙产品相比，用rOVA制成的烘焙产品的失重率更低。
在一些实施方案中，本文提供了乳化产品。乳化产品可以包括：(i)重组卵清蛋白(rOVA)；(ii)至少一种脂肪或油；(iii)水；其中rOVA可以以约2％至15％(w/w)存在于产品中。在一些情况下，该乳化产品可以包含酸化剂。在一些情况下，该产品可以是沙拉酱、调味汁、蛋黄酱、三明治酱或肉汁。
在一些实施方案中，本文描述的食物产品包括(i)重组卵清蛋白(rOVA)，其中该rOVA溶解时的pH可以为约3.5至约7.0；(ii)至少一种甜味剂；和(iii)任选地，可食用液体；其中rOVA可以以约2％至约15％(w/w)存在于食物产品中，并且其中rOVA为该食物产品提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性。
在一些情况下，rOVA可以进一步为食物产品提供凝胶化。在一些情况下，当rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。在一些情况下，当rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。在一些情况下，该食物产品可以是蛋白酥饼、奶油甜点(whippeddessert)、植脂奶油(whipped topping)或蛋奶酥。在一些情况下，rOVA可以为该食物产品提供比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。在一些情况下，rOVA可以为该食物产品提供可以比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。
在一些情况下，rOVA以约5％至约10％(w/w)存在于食物产品中。在一些情况下，rOVA以约7％至约8％(w/w)存在于食物产品中。在一些情况下，rOVA以约4％、约7％或约12％(w/w)存在于食物产品中。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约6。在一些情况下，rOVA以约9％至约10％(w/w)存在于食物产品中。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约7。在一些情况下，该产品可以是饮料。在一些情况下，该饮料可以是可食用酒精。在一些情况下，rOVA为可食用酒精饮料提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性。在一些情况下，该饮料是咖啡饮料。在一些情况下，rOVA为咖啡饮料提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性。在一些情况下，该咖啡饮料不含乳制品组分。
在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA不会使食物产品受到沙门氏菌的污染。在一些情况下，该食物产品是蛋白棒、能量棒、营养棒或燕麦棒(granolabar)。在一些情况下，该食物产品包含约4％至约8％(w/w)的rOVA。在一些情况下，该棒是烘焙的或未烘焙的。
在一些实施方案中，本文描述了一种仿造肉食物产品。一种仿造肉食物产品，可以包括：(i)重组卵清蛋白(rOVA)；(ii)至少一种脂肪或油；和(iii)植物源蛋白；其中该rOVA以约2％至约15％(w/w)存在于食物产品中；并且其中该rOVA用作粘合剂或胶凝剂或其组合。
在一些情况下，该植物蛋白可以是挤压植物蛋白。在一些情况下，该植物蛋白可以是非挤压植物蛋白。在一些情况下，仿造肉食物产品可选自于汉堡、馅饼、香肠、热狗、熟肉切片、肉干、培根、肉块、搅碎的肉状组合物和成型肉状组合物。在一些情况下，rOVA可以为食物产品提供可以比天然蛋清更大的硬度。在一些情况下，rOVA可以为食物产品提供可以比天然蛋清更大的咀嚼性。在一些情况下，rOVA可以提供与天然蛋清相当的弹性。
在一些情况下，当rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。在一些情况下，当rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。在一些情况下，rOVA以约4％、以约5％或以约6％(w/w)存在于食物产品中。在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供了蛋清代替物。一种蛋清代替物，可以包括：(i)重组卵清蛋白(rOVA)；(ii)至少一种脂肪或油；和(iii)多糖或含多糖成分；其中rOVA可以以约2％至15％(w/w)存在于组合物中；并且其中该组合物可以具有一种或多种特性，这些特性选自于硬度、粘附性、脆性、粘结性、胶粘性和咀嚼性，并且当可以烹饪蛋清代替物时，该一种或多种特性与天然蛋清等同或有改善。
在一些情况下，该蛋清代替物还可包含调味剂或着色剂或其组合。在一些情况下，该多糖或含多糖成分可以是淀粉。在一些情况下，该多糖或含多糖成分可以选自于吉兰糖胶、海藻酸钠和车前草或其任意组合。在一些情况下，rOVA可以为食物产品提供可以比天然蛋清更大的硬度。
在一些情况下，rOVA可以为食物产品提供可以比天然蛋清更大的咀嚼性。在一些情况下，rOVA可以提供与天然蛋清相当的胶粘性和/或弹性。在一些情况下，当rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。在一些情况下，当rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。在一些情况下，rOVA以约10％至约12％(w/w)存在于食物产品中。
在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文描述了粉状成分组合物。一种粉状成分组合物，可以包含重组卵清蛋白(rOVA)，其中该rOVA溶解时的pH可以为约3.5至约7.0，其中该rOVA可以是组合物的至少75％w/w，并且其中该rOVA可以包含一个或多个N-连接糖基化位点，该位点具有与N-乙酰氨基葡萄糖连接的甘露糖，并且其中该N-连接糖基化位点不含半乳糖。在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。在一些情况下，rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。在一些情况下，该组合物包含至少约80％、至少约85％或至少约90％(w/w)的rOVA。
在一些实施方案中，该液体组合物可以包含重组卵清蛋白(rOVA)，并且该组合物可以包含至少50％(总蛋白质的w/w或总组合物的w/w)的rOVA。在一些情况下，该组合物可以包含至少约60％、至少约65％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％(w/w)的rOVA。
在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
在一些情况下，rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。在一些情况下，rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。在一些情况下，溶解后rOVA的pH可以为约3.5至约7.0。在一些情况下，溶解后的rOVA的pH可以为约6至约6.8。在一些情况下，溶解后的rOVA的pH可以小于约6.1。
在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供至少一种蛋清特性，这些特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。在一些情况下，与类似无蛋食品项目中的天然蛋清相比，rOVA可以提供等同或改善的特性。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。
在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供可以比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供可以比天然蛋清更大的硬度。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。在一些情况下，rOVA以约5％至约10％(w/w)存在于无蛋食品项目中。在一些情况下，rOVA以约7％至约8％(w/w)存在于无蛋食品项目中。在一些情况下，rOVA以约4％、约7％或约12％(w/w)存在于无蛋食品项目中。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约6。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供可以比天然蛋清更大的咀嚼性。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供与天然蛋清相当的弹性。
在一些情况下，当rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。在一些情况下，当rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。在一些情况下，rOVA不会使无蛋食品项目受到沙门氏菌的污染。
在一些实施方案中，本文描述了包含重组卵清蛋白(rOVA)的干燥或粉状组合物，其中该组合物可包含至少50％(总蛋白质的w/w或总组合物的w/w)的rOVA。在一些情况下，该组合物可以包含至少约60％、至少约65％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％(w/w)的rOVA。在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。在一些情况下，rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供至少一种蛋清特性，这些特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。在一些情况下，与类似无蛋食品项目中的天然蛋清相比，rOVA可以提供等同或改善的特性。
在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供可以比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。在一些情况下，rOVA以约4％、约7％或约12％(w/w)存在于无蛋食品项目中。在一些情况下，rOVA溶解时的pH为约6。
在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供可以比天然蛋清更大的硬度。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供可以比天然蛋清更大的咀嚼性。在一些情况下，rOVA可以为无蛋食品项目提供与天然蛋清相当的弹性。在一些情况下，当rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。在一些情况下，当rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
在一些实施方案中，本文提供了制作食物产品的方法。一种制作食物产品的方法，可以包括：(i)提供重组卵清蛋白(rOVA)，其溶解时的pH为约3.5至约7.0；(ii)将2％至15％量(w/w)的rOVA与一种或多种可食用成分组合以形成食物产品，其中rOVA可为食物产品提供至少一种蛋清特性，这些特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
在一些实施方案中，本文提供了制作成分的方法。一种制作成分组合物的方法，可以包括：(i)在微生物细胞中表达重组卵清蛋白(rOVA)，其中rOVA可以由微生物细胞分泌到液体培养基中；(ii)收获含有分泌的rOVA的液体培养基；(iii)在约3.5的pH进行分离步骤；(iv)在约12的pH溶解rOVA；(v)将rOVA的最终pH调节到约3.5至约7.0，以生成成分组合物。
在一些情况下，分离步骤可以包括离子交换层析或硫酸铵沉淀。在一些情况下，离子交换层析可以是阳离子交换层析或阴离子交换层析或其组合。在一些情况下，该方法还可以包括在溶解步骤之后的过滤步骤。在一些情况下，该微生物细胞可以是真菌细胞。在一些情况下，该真菌细胞可以是毕赤酵母(Pichia sp.)。在一些情况下，该微生物细胞表达重组辅助因子；其中辅助因子增强rOVA的表达水平或积累水平。
在一些情况下，rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，分泌的rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。在一些情况下，分泌的rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
在一些实施方案中，无蛋食物产品可包含约15％至约25％(总蛋白质的w/w或食物产品的w/w)量的重组卵清蛋白(rOVA)。在一些情况下，无蛋食物产品可以包含高达约23％量(w/w)的rOVA。
在一些实施方案中，本文提供了重组卵清蛋白(rOVA)的用途。重组卵清蛋白(rOVA)可用作制作烘焙物的成分。rOVA可用作制作无蛋食物产品的成分。rOVA可用作制作仿造肉食物产品的成分。rOVA可用作制作蛋清代替物的成分。rOVA可用作烘焙产品的蛋液代替物；其中蛋液代替物可提供等同于或优于可以包含天然蛋清或天然全蛋的蛋液的成膜性。
rOVA可以包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。rOVA可以包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。在一些情况下，rOVA以8％至9％的量(w/w)存在于蛋液中。
在一些实施方案中，本文描述了重组卵清蛋白(rOVA)的大规模生产。rOVA的大规模生产，可以包括表达rOVA的微生物细胞的至少1升液体培养物。在一些情况下，该大规模生产可以包括表达rOVA的微生物细胞的至少10升液体培养物。在一些情况下，该大规模生产可以包括表达rOVA的微生物细胞的至少100升液体培养物。在一些情况下，该大规模生产可以包括表达rOVA的微生物细胞的至少1000升液体培养物。在一些情况下，该大规模生产包括表达rOVA的微生物细胞的至少10,000升液体培养物。在一些情况下，该大规模生产包括表达rOVA的微生物细胞的至少100,000升液体培养物。在一些情况下，该大规模生产包括表达rOVA的微生物细胞的约200,000升液体培养物。
在一些实施方案中，本文可以提供用于制作包含重组卵清蛋白的无蛋食品项目的一种成分组合物。重组卵清蛋白可以提供至少一种蛋清特性，这些特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
由重组卵清蛋白提供的蛋清特性可以基本上等同于或优于由天然蛋清提供的相同特性。该组合物可以不含任何天然蛋清蛋白。该组合物可以不含任何动物产品。
该组合物可以不含从蛋中提取的任何蛋白质。与天然蛋清相比，该组合物的色泽可在白度或无色度方面得到改善。重组卵清蛋白可以包含衍生自鸡、鹅、鹌鹑、鸵鸟和鸭的多肽序列。
重组卵清蛋白在味觉、嗅觉、口感或其任意组合方面可以是感官中性的。重组卵清蛋白可以为组合物提供起泡性和凝固性的特征。
在一些实施方案中，本文提供了包含本文提供的成分组合物的烘焙产品。重组卵清蛋白可以为烘焙产品提供结构、质地或同时提供结构和质地。重组卵清蛋白可以为烘焙产品提供蛋白强化。重组卵清蛋白在烘焙产品中的浓度可以为约1％至约20％(卵清蛋白重量/产品重量)。重组卵清蛋白在烘焙产品中的浓度可以为约0.1％至约5％(卵清蛋白重量/产品重量)。
重组卵清蛋白可以与面筋形成相容。烘焙产品可以选自于蛋糕、甜饼干、百吉饼、松饼、面包、松饼、纸杯蛋糕、司康饼、煎饼、蛋清杏仁饼干、蛋白酥饼、泡芙酥皮和蛋奶酥。使用这种成分制成的蛋糕可以是磅蛋糕、海绵蛋糕、鸡蛋糕或天使蛋糕。该组合物还可以包含这样一种或多种组分，这些组分选自于甜味剂、树胶、水解胶体、淀粉、纤维、植物蛋白、藻类蛋清、着色剂和调味精。
该组合物可以提供一种或多种适合于蛋状菜肴的特性，并且其中该特性可以选自于起泡性、凝固性、粘合性、结构、质地、成膜性、营养状况、不含胆固醇和蛋白强化。在一些实施方案中，本文提供了包含本文所述成分组合物的蛋状菜肴。该蛋状菜肴可以选自于炒蛋、煎蛋卷、馅饼、蛋奶酥、开口馅饼和菜肉馅煎蛋饼。该蛋状菜肴可以是纯素食、素食、清真食品和犹太洁食。
该组合物可以提供一种或多种适合于加工肉产品或肉状产品的特性，并且其中该特性可以选自于高蛋白质含量、粘合性和感官中性。在一些实施方案中，本文提供了肉状产品，其包含本文所述的成分组合物。
该肉状产品可以选自于汉堡、馅饼、香肠、热狗、熟肉切片、肉干、培根、肉块和搅碎的肉状混合物或成型肉或肉状组合物。卵清蛋白可以以约0.1％至30％(卵清蛋白重量/产品重量)的量存在于肉状产品中。
重组卵清蛋白可以提供适合于粘附食物涂层的粘合特性。食物涂层可以包含本文所述的成分。该食物涂层可以是面糊或面包屑。当烹饪、烘焙或油炸时，重组卵清蛋白还可以为食物涂层提供酥脆质地的特性。
重组卵清蛋白可以提供适合于糖果的特性，该特性选自于气味中性、风味、口感、质地、营养价值和蛋白强化。糖果产品可以包含本文描述的成分组合物。糖果可以不含蛋或蛋清。糖果可以不含从蛋或蛋清中提取的任何蛋白质。重组卵清蛋白可为糖果提供坚实或耐嚼质地。重组卵清蛋白可以以约0.1％至15％(卵清蛋白重量/糖果重量)的量存在。糖果可以是软糖、太妃糖或牛轧糖。
重组卵清蛋白可以提供适合于乳样饮料的特性，该特性选自于气味中性、风味、口感、起泡性、打发性、质地和营养价值。乳样饮料可以包含本文所述的成分组合物。乳样饮料可以不含蛋或蛋清。该饮料可以选自于加奶果汁(smoothie)、奶昔(milkshake)、“蛋奶酒(egg-nog)”和咖啡饮料。重组卵清蛋白可以以约0.1％至20％的量(卵清蛋白重量/饮料体积)存在。
重组卵清蛋白可提供适合于甜点产品的特性，这些特性选自于奶油质地、低脂肪含量、气味中性、风味、口感、质地、粘合性和营养价值。甜点产品可以包含本文所述的成分组合物。该甜点产品可以选自于慕斯、奶酪蛋糕、蛋奶沙司、布丁、雪糕、冷冻甜点和冰淇淋。甜点产品可以是纯素食、素食或无乳制品。重组卵清蛋白可以以约0.1％至10％(卵清蛋白重量/甜点产品重量)的量存在。
重组卵清蛋白可以提供适合于调味汁或调料的特性，该特性选自于粘合性、乳化性、气味中性和口感。调味汁或调料可以包含本文所述的成分组合物。调味汁或调料可以选自于沙拉酱、蛋黄酱、商业化蛋黄酱代替物、阿尔弗雷多酱(alfredo sauce)和荷兰辣酱油。调味汁或调料可以不含蛋、蛋清或从蛋中提取的任何蛋白质。
重组卵清蛋白可以提供适合于休闲食品的特性，该特性选自于粘合性、蛋清补充、风味中性、气味中性和口感。休闲食品可以包含本文所述的成分组合物。休闲食品可以是蛋白棒、营养棒或燕麦棒。成分组合物还可以包含一种或多种附加组分，这些附加组分选自于甜味剂、树胶、植物蛋白、藻类蛋白、调味剂、着色剂、增稠剂、酸化剂和乳化剂。
在一些实施方案中，本文提供了制作蛋清替代物的方法。该蛋清替代物可以包括提供重组卵清蛋白；将该重组卵清蛋白与至少一种附加组分混合，以形成蛋清替代物。该重组卵清蛋白可以为蛋清替代物提供至少一种蛋清特性，该特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、乳脂性和粘结性。蛋清替代物可以不含任何蛋、蛋清、从蛋中提取或分离的蛋白质。该至少一种蛋清特性可以等同于或优于以相同量或浓度(重量/体积)提供的天然蛋。
该方法还可包括在异源宿主细胞中产生重组卵清蛋白，其中该宿主细胞可以是大肠杆菌(E.coli)、酵母、丝状真菌或木霉菌(Trichoderma)。酵母或丝状真菌可以选自于酵母菌属物种和毕赤酵母属物种。重组卵清蛋白可以从宿主细胞分泌。重组卵清蛋白可以由宿主细胞进行糖基化，并且其中卵清蛋白的糖基化可以不同于从鸡蛋中分离的卵清蛋白。
该方法还可以包括用去糖基化酶处理分泌的卵清蛋白。去糖基化酶可以由宿主细胞来表达。
宿主可以包含编码重组卵清蛋白的核酸序列，并且重组卵清蛋白具有来自禽类物种的卵清蛋白的氨基酸序列。宿主可以包含编码重组卵清蛋白的核酸序列，并且重组卵清蛋白具有卵清蛋白的氨基酸序列，该序列与来自禽类物种的卵清蛋白具有至少95％的序列同一性。禽类物种可以是鸡、鸭、鹅、鸵鸟或鹌鹑。
来自禽类物种的卵清蛋白可以选自于SEQ ID NO.1-74。
在一些实施方案中，本文提供了用作蛋清替代物的重组蛋白组合物。该组合物可以包含重组卵清蛋白和至少一种附加组分。该重组卵清蛋白可以为组合物提供至少一种蛋清特性，该特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、乳脂性和粘结性。该组合物可以不含任何蛋、蛋清、从蛋中提取或分离的蛋白质。在相同的量或浓度(重量/体积)下比较时，该至少一种蛋清特性可以等同于或优于天然蛋。
重组卵清蛋白可以具有来自禽类物种的卵清蛋白的氨基酸序列。重组卵清蛋白可以具有卵清蛋白的氨基酸序列，该序列与来自禽类物种的卵清蛋白具有至少95％的序列同一性。
禽类物种可以是鸡、鸭、鹅、鸵鸟或鹌鹑。来自禽类物种的卵清蛋白可以选自于SEQID NO.1-74。
一种动物营养组合物，可以包含重组卵清蛋白(rOVA)。rOVA可以是选自于全细胞提取物、分级细胞提取物和分离的蛋白中的形式。该组合物可被包含在宠物食品、动物饲料、耐嚼零食、骨汤、加奶果汁或其他用于动物营养的液体以及适合于动物食用的固体营养补充剂中。
另外，本文公开的任何组合物、食物产品、成分、用途或方法适用于任何本文公开的组合物、食物产品、成分、用途或方法。换言之，本文描述的任何方面或实施方案可以与如本文公开的任何其他方面或实施方案组合。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考以下对利用了本发明的原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好理解，在附图中：
图1A-B分别示出了天然OVA和在巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)中产生的rOVA的糖基化模式。
图2示出了与用蛋制作的蛋糕相比，使用rOVA制作的磅蛋糕及其剖面。
图3示出了与用蛋制作的蛋白酥饼相比，使用rOVA制作的蛋白酥饼。
图4示出了全蛋、蛋清和天然OVA溶液的热凝固和起泡性能。
图5示出了与rOVA相比，蛋清和天然OVA的热凝固和起泡性能。
图6A示出了糖基化天然和重组OVA的凝胶电泳迁移。还示出了经EndoH和PNGaseF酶处理的去糖基化重组OVA。
图6B示出了描绘了在巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)中产生的rOVA的糖基化模式的色谱图。
图7示出了与蛋清相比，各种OVA样品起泡前后的凝胶化结果。
图8示出了使用nOVA、rOVA、全蛋液和商业化蛋清代替物的成膜情况。
图9A-B示出了nOVA、rOVA和蛋清蛋白在酸性和中性pH的乳化结果。
图10示出了rOVA和对照样品在含酒精性饮料中的起泡情况。
图11示出了使用nOVA、rOVA和蛋清蛋白制成的蛋馅饼。
图12示出了使用rOVA样品和蛋清蛋白制成的蛋白酥饼。
图13示出了由不同蛋白内含物水平的蛋清蛋白(EWP)、nOVA和rOVA制成的蛋白棒。
具体实施方式
虽然本文已经示出和描述了本发明的多种实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅是以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员可以想到许多变型、改变和替换。应该理解的是，可以采用本文描述的本发明实施方案的各种替代方案。
本文提供了用于非动物性蛋白质来源的组合物和制备组合物的方法，该非动物性蛋白质来源为由动物(包括人类)摄入的食品成分和可食用产品提供营养和功能性能，例如用于日常饮食、人类食物和零食的成分以及用于人类和动物营养。
本文提供的组合物和方法包含通过重组技术产生的发酵来源的卵清蛋白，即重组卵清蛋白(rOVA)。该组合物和用于制备包含rOVA的组合物的方法可提高可食用或食品成分的蛋白质含量，并且还提供用于制备供动物和人类摄入的食品成分和可食用食物产品的功能特征。
在一些实施方案中，rOVA提供一种或多种功能特性，例如胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。具有这种特征的rOVA可以是食品成分，其用于制作无蛋或不含动物成分的食品成分或食物产品。
在天然蛋清、天然卵蛋白、天然卵清蛋白和天然蛋的上下文中，如本文所用的“天然的”，分别指的是由动物(特别是产蛋动物如鸟类)产生或从其中收集的蛋清、卵蛋白、卵清蛋白或全蛋。该rOVA和含有rOVA的组合物可用于食品成分和食物产品中，使得成分或产品不含任何天然蛋清、天然卵蛋白、天然卵清蛋白或天然蛋。在一些情况下，使用rOVA制作的成分或食物产品不含除rOVA以外的任何蛋清蛋白。该rOVA和含有rOVA的组合物可用于食品成分和食物产品中，使得成分或产品不含任何动物产品。
在一些实施方案中，在食物产品制作中，rOVA可以(单独或与其他成分一起)代替全蛋或蛋清的使用。在一些实施方案中，由rOVA提供的特征基本上等同于或优于由天然蛋清或天然蛋提供的相同特性。例如，与天然蛋清或天然全蛋以及用天然蛋清制成的组合物相比，rOVA和含有rOVA的组合物可以具有胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保水性(保湿性)、澄清性和粘结性、改善的色泽，例如更白的色泽。
含rOVA的食品成分和食物产品
本文公开的食品成分和食物产品包括组合物，这些组合物包含rOVA，或者基本上由或由rOVA组成，其中rOVA为组合物、食品成分或食物产品提供至少一种功能特征。在一些情况下，由rOVA提供的至少一种功能特征与天然蛋或蛋清或天然OVA(nOVA)相当或基本相似。例如，它可以提供与全蛋、蛋清或nOVA组合物相当的胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保水性(保湿性)、澄清性和粘结性中的任何一种。在一些实施方案中，由食品成分或食物产品中包含rOVA提供或实质上提供该至少一种功能特征，例如，在不存在任何其他全蛋蛋白质或蛋清蛋白的情况下。
基于重量/重量(w/w)或重量/体积(w/v)，这些组合物可以包括0.1％至25％量的rOVA。基于重量/重量(w/w)或重量/体积(w/v)，rOVA可以以或至少以0.1％、0.2％、0.25％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％或25％存在。这些浓度可以基于组合物的干重。此外或者可选地，基于w/w或w/v，这种组合物中rOVA的浓度为至多30％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％或1％。在一些实施方案中，食品成分或食物产品中rOVA的浓度范围可以是0.1％-20％、1％-20％、0.1％-10％、1％-10％、0.1％-5％、1％-5％、2-10％、4-8％、4-10％、4-12％、0.1％-2％、1％-2％或0.1-1％。
本文提供了可食用食品组合物和制备这种组合物的方法，其中rOVA为可食用食品组合物提供全蛋或蛋清的至少一种特征。在一些实施方案中，将rOVA添加到可食用食品组合物中以增加蛋白含量，例如用于增加营养。在一些实施方案中，基于重量/组合物总重量(w/w)和/或重量/组合物总体积(w/v)，rOVA以约1％至约40％存在于可食用食品组合物中。例如，在100ml的组合物中，rOVA以30g存在，因此rOVA的浓度(w/v)为30％，或者例如，在100g的组合物中，rOVA以30g存在，因此rOVA的浓度(w/w)为30％。在一些实施方案中，基于组合物的w/w和/或w/v，rOVA的浓度为或约为0.5％、1％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。在一些实施方案中，按w/w和/或w/v计算，rOVA以下列浓度存在或约以下列浓度存在，即0.5-1％、1-5％、2-8％、4-8％、2-12％、4-12％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％，或者rOVA以大于下列浓度存在，即1％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。
可食用产品可包括一种或多种其他蛋白质，例如非OVA蛋白质或非重组蛋白质。rOVA可以提高可食用产品中的蛋白含量，和/或提供一种或多种蛋清样特征。例如，可食用组合物可以包括乳清蛋白、豌豆蛋白、大豆蛋白、杏仁蛋白、燕麦蛋白、亚麻籽蛋白、蔬菜蛋白或蛋清蛋白。可食用蛋白可以包括挤压植物蛋白或非挤压植物蛋白。在一些情况下，一种或多种其他蛋白质可以包含OVA，其具有在鸟类或爬行动物中天然存在的氨基酸序列。
在一些实施方案中，组合物和用于制备组合物的方法具有蛋清样特性，并提高组合物中的蛋白含量。在一些实施方案中，组合物和用于制备具有蛋清样特性的组合物的方法提高了蛋白含量，同时不会对该组合物的稳定性或一种或多种感官品质产生不利影响。
在一些实施方案中，可食用食品组合物和用于制备可食用食品组合物的方法包含rOVA，并且rOVA的添加产生了蛋清样组合物。可食用食品组合物可以是成品或用于制备成品例如液态或粉状rOVA组合物的成分。
rOVA蛋白可以单独使用，也可以与其他组分组合使用，以形成组合物。在一些实施方案中，rOVA用作形成组合物的成分，并且按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，rOVA成分(或待添加的rOVA起始组合物)可包含约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的rOVA。在一些情况下，按w/w或w/v计算，本文描述的组合物可含有高达约10％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的rOVA。在一些实施方案中，按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，组合物中约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的蛋白质为rOVA。在一些情况下，按w/w或w/v计算，组合物中高达或约10％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的蛋白质是rOVA。
在一些实施方案中，本文描述的组合物含有的总蛋白浓度为每100mL液体(如，水)约或为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或75g总蛋白。在一些情况下，本文描述的组合物含有的总蛋白浓度为每100g组合物(如，粉状物)约或为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100g总蛋白。
在一些实施方案中，本文描述的组合物含有的rOVA浓度为每100mL液体(如，水)约或为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或75g。在一些情况下，本文描述的组合物含有的rOVA的浓度为每100g组合物(如，粉状物)约或为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、13.2、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100g总蛋白。
在一些实施方案中，本文描述的组合物含有的总蛋白浓度为每100mL液体(如，水)约或为至少0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7或5g总蛋白。在一些情况下，本文描述的组合物含有的总蛋白浓度为每100g组合物(如，粉状物)约或为至少0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7或5g总蛋白。
在一些实施方案中，本文描述的组合物含有的rOVA浓度为每100mL液体(如，水)约或为至少0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7或5g。在一些情况下，本文描述的组合物含有的rOVA浓度为约或为每100g组合物(如，粉状物)中至少0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、1.7、2.0、2.2、2.5、2.7、3.0、3.2、3.5、3.7、4.0、4.2、4.5、4.7或5g。
在一些实施方案中，rOVA可食用组合物是液体组合物。在这种情况下，液体组合物中rOVA的浓度可以为0.1％至90％。液体组合物中rOVA的浓度可以为至少0.1％。液体组合物中rOVA的浓度可以为至多90％。按重量/总体积(w/v)计算，液体组合物中rOVA的浓度可以是0.1％至1％、0.1％至5％、0.1％至10％、0.1％至15％、0.1％至20％、0.1％至25％、0.1％至30％、0.1％至35％、0.1％至40％、1％至5％、1％至10％、1％至15％、1％至20％、1％至25％、1％至30％、1％至35％、1％至40％、5％至10％、5％至15％、5％至20％、5％至25％、5％至30％、5％至35％、5％至40％、10％至15％、10％至20％、10％至25％、10％至30％、10％至35％、10％至40％、15％至20％、15％至25％、15％至30％、15％至35％、15％至40％、20％至25％、20％至30％、20％至35％、20％至40％、25％至30％、25％至35％、25％至40％、30％至35％、30％至40％、35％至40％、40％至45％、45％至50％、50％至55％、55％至60％、60％至65％、65％至70％、70％至75％、75％至80％、80％至85％、85％至90％或90％至95％。液体组合物中rOVA的浓度可以是约0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％w/v。液体组合物中rOVA的浓度可以是至少0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％w/v。液体组合物中rOVA的浓度可以是至多1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％w/v。在一些实施方案中，rOVA是液体组合物中唯一的蛋白质。在其他实施方案中，液体组合物包含除rOVA以外的蛋白质。
在一些实施方案中，rOVA可食用组合物是固态组合物。在这种情况下，固态组合物中rOVA的浓度可以为0.1％至70％。固态组合物中rOVA的浓度可以为至少0.1％。固态组合物中rOVA的浓度可以为至多70％。按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，固态组合物中rOVA的浓度可以是0.1％至1％、0.1％至10％、0.1％至20％、0.1％至30％、0.1％至40％、0.1％至50％、0.1％至60％、0.1％至70％、1％至10％、1％至20％、1％至30％、1％至40％、1％至50％、1％至60％、1％至70％、10％至20％、10％至30％、10％至40％、10％至50％、10％至60％、10％至70％、20％至30％、20％至40％、20％至50％、20％至60％、20％至70％、30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、40％至50％、40％至60％、40％至70％、50％至60％、50％至70％或60％至70％。固态组合物中rOVA的浓度可以是0.1％、1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％w/w或w/v。固态组合物中rOVA的浓度可以是至少0.1％、1％、10％、20％、30％、40％、50％或60％w/w或w/v。固态组合物中rOVA的浓度可以是至多1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％w/w或w/v。
在一些实施方案中，rOVA可食用组合物是粉状组合物。在这种情况下，按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，粉状组合物中rOVA的浓度可以为15％至99％。粉状组合物中rOVA的浓度可以为至少15％w/w或w/v。在实施方案中，粉状组合物中rOVA的浓度可以为至多99％w/w或w/v。粉状组合物中rOVA的浓度可以是15％至30％、15％至45％、15％至60％、15％至75％、15％至80％、15％至85％、15％至90％、15％至95％、15％至99％、30％至45％、30％至60％、30％至75％、30％至80％、30％至85％、30％至90％、30％至95％、30％至99％、45％至60％、45％至75％、45％至80％、45％至85％、45％至90％、45％至95％、45％至99％、60％至75％、60％至80％、60％至85％、60％至90％、60％至95％、60％至99％、75％至80％、75％至85％、75％至90％、75％至95％、75％至99％、80％至85％、80％至90％、80％至95％、80％至99％、85％至90％、85％至95％、85％至99％、90％至95％、90％至99％或95％至99％w/w或w/v。粉状组合物中rOVA的浓度可以是约15％、30％、45％、60％、75％、80％、85％、90％、95％或99％w/w或w/v。粉状组合物中rOVA的浓度可以是至少15％、30％、45％、60％、75％、80％、85％、90％或95％w/w或w/v。粉状组合物中rOVA的浓度可以是至多30％、45％、60％、75％、80％、85％、90％、95％或99％w/w或w/v。在一些实施方案中，rOVA是粉状组合物中唯一的蛋白质。在其他实施方案中，粉状组合物包含除rOVA以外的蛋白质。
在一些情况下，粉状组合物可以是浓缩物，其包含至少70％的rOVA w/w。在一些情况下，粉状组合物可以是浓缩物，其包含至少80％的rOVA w/w。在一些情况下，粉状组合物可以是分离物，其包含至少90％的rOVA w/w。在一些情况下，粉状组合物可以是分离物，其包含至少95％的rOVA w/w。
在一些实施方案中，rOVA可食用组合物是浓缩的液体组合物。在这种情况下，按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，浓缩的液体组合物中rOVA的浓度可以为10％至60％。浓缩液体中rOVA的浓度可以为至少10％w/w或w/v。浓缩液体中rOVA的浓度可以为至多60％w/w或w/v。浓缩液体中rOVA的浓度可以为10％至20％、10％至30％、10％至40％、10％至50％、10％至60％、20％至30％、20％至40％、20％至50％、20％至60％、30％至40％、30％至50％、30％至60％、40％至50％、40％至60％或50％至60％w/w或w/v。浓缩液体中rOVA的浓度可以为约10％、20％、30％、40％、50％或60％w/w或w/v。浓缩液体中rOVA的浓度可以为至少10％、20％、30％、40％或50％w/w或w/v。浓缩液体中rOVA的浓度可以为至多20％、30％、40％、50％或60％w/w或w/v。该液体可以包括任何可食用溶剂，例如水、乳制品、油或其他烹饪基质。
在一些实施方案中，rOVA可食用组合物是预制食品，例如烘焙物、沙拉酱、蛋状菜肴(如，蛋馅饼或炒蛋)、甜点或乳制品样产品或仿造肉(如，纯素肉馅饼、香肠或热狗)。基于重量/重量(w/w)或重量/体积(w/v)，这些组合物可以包括0.1％至20％量的rOVA。基于重量/重量(w/w)或重量/体积(w/v)，rOVA可以以或至少以0.1％、0.2％、0.25％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％存在。此外或者可选地，基于w/w或w/v，这种组合物中rOVA的浓度为至多30％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％或1％。在一些实施方案中，食品成分或食物产品中rOVA的浓度范围可以是0.1％-20％、1％-20％、0.1％-10％、1％-10％、0.1％-5％、1％-5％、0.1％-2％、1％-2％或0.1-1％。
rOVA组合物以及含有rOVA的食品成分和食物产品的特征和特性
本文的含rOVA的组合物可以为食品成分和食物产品提供一种或多种功能特征。在一些实施方案中，rOVA为食品成分或食物产品提供营养特征，例如蛋白含量、蛋白强化和氨基酸含量。由组合物中的rOVA提供的营养特征可以与蛋、蛋清或天然OVA(nOVA)相当或基本相似。组合物中由rOVA提供的营养特征可以优于由天然全蛋或天然蛋清所提供的特征。在一些情况下，在不存在任何其他蛋清蛋白的情况下rOVA提供蛋清的一种或多种功能特征。
本文公开的rOVA组合物可以为组合物提供起泡性和起泡能力。例如，rOVA可用于形成泡沫以用于烘焙产品，如蛋糕、蛋白酥饼和其他食品中，其中rOVA可代替蛋清来提供起泡能力。在一些情况下，在不存在任何其他蛋清蛋白的情况下rOVA提供蛋清的起泡性和起泡能力。
包含rOVA的组合物具有可以大于蛋清或包含nOVA的组合物的起泡高度的起泡高度。在一些情况下，相对于蛋清、nOVA组合物或替代蛋清，包含rOVA的组合物可以具有约或至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的起泡高度。在一些情况下，相对于蛋清、nOVA组合物或替代蛋清，包含rOVA的组合物可以具有高达50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的起泡高度。替代蛋清可以包括诸如鹰嘴豆、奇亚籽、亚麻籽、淀粉；苹果酱、香蕉浆；炼乳等的产品，它们通常用作蛋清代替物。
包含rOVA的组合物具有可以大于蛋清、nOVA组合物或替代蛋清的起泡稳定性的起泡稳定性。在一些情况下，相对于蛋清或替代蛋清，包含rOVA的组合物可以具有约或至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的起泡稳定性。在一些情况下，相对于蛋清，包含rOVA的组合物可以具有高达50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的起泡稳定性。可以通过测量泡沫溶液的排液来计算起泡稳定性。可以10分钟增量测量排液30分钟，以收集起泡稳定性的数据。例如，可以将30分钟后的排出体积与初始液体体积(5mL)进行比较，起泡稳定性(％)：(初始体积-排出体积)/初始体积*100。
包含rOVA的组合物具有可以大于蛋清、nOVA组合物或替代蛋清的起泡能力的起泡能力。在一些情况下，相对于蛋清、nOVA或替代蛋清，包含rOVA的组合物可以具有约或至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的起泡能力。在一些情况下，相对于蛋清、nOVA组合物或替代蛋清，包含rOVA的组合物可以具有高达50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的起泡能力。可以通过测量搅打后泡沫的初始体积并与5mL的初始体积进行比较，来确定起泡能力。起泡能力(％)＝(泡沫体积/初始体积)*100。
液体组合物可以比包含蛋清、nOVA或替代蛋清的组合物起泡更快。在一些情况下，rOVA组合物比蛋清、nOVA或替代蛋清组合物的发泡快至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％。在一些情况下，rOVA组合物比蛋清、nOVA或替代蛋清组合物的发泡快高达1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％。
包含rOVA的组合物具有可以大于蛋清、nOVA组合物或蛋清代替物的胶凝强度的胶凝强度。在一些情况下，rOVA组合物具有可以在100g至1500g、500g至1500g或700g至1500g的范围内的胶凝强度。在一些情况下，rOVA组合物具有约或至少10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450或1500g的胶凝强度。在一些情况下，rOVA组合物具有高达10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450或1500g的胶凝强度。在一些情况下，相对于蛋清、nOVA或蛋清代替物，rOVA组合物具有约或至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％的胶凝强度。在一些情况下，相对于蛋清、nOVA或蛋清代替物，rOVA组合物具有高达50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％的胶凝强度。
本文公开的rOVA组合物可以提供结构、质地或结构和质地的组合。在一些实施方案中，将rOVA添加到食品成分或食物产品中用于烘焙，并且rOVA为烘焙产品提供结构、质地或结构和质地的组合。rOVA可用于此类烘焙产品中，以替代天然蛋清、天然蛋或天然卵蛋白。向烘焙产品中添加rOVA也可以提供蛋白强化，以提高营养含量。在一些实施方案中，基于重量/重量或重量/体积，rOVA在烘焙产品中的用量为0.1％至25％。在一些实施方案中，rOVA在烘焙产品中的用量为0.1％至5％。在一些情况下，在不存在任何其他蛋清蛋白的情况下rOVA提供蛋清的结构和/或质地。
本文公开的rOVA组合物可与面筋形成相容，使得rOVA可在面筋形成为食品成分或食物产品提供结构、质地和/或形状的情况下使用。
rOVA可作为成分在其中使用的示例性烘焙产品包括，但不限于蛋糕、甜饼干、面包、百吉饼、饼干、松饼、纸杯蛋糕、司康饼、煎饼、蛋清杏仁饼干、泡芙酥皮、蛋白酥饼和蛋奶酥。例如，rOVA可以作为的成分使用，其中这类蛋糕不含任何天然蛋清、天然全蛋或天然卵蛋白。除了rOVA之外，烘焙产品还可以含有其他成分，例如面粉、甜味剂、树胶、水解胶体、淀粉、纤维、调味剂(如调味提取物)和其他蛋白质来源。在一些实施方案中，烘焙产品可以包括rOVA和至少一种脂肪或油、至少一种谷物淀粉，以及任选的至少一种甜味剂。用于这种组合物的谷物淀粉包括面粉，例如小麦粉、米粉、玉米粉、小米粉、斯佩尔特小麦面粉(speltflour)和燕麦粉；以及淀粉，如来自玉米、马铃薯、高粱和竹芋的淀粉。用于这种组合物的油和脂肪包括植物源的油和脂肪，例如橄榄油、玉米油、鳄梨油、坚果油(如杏仁油、核桃油和花生油)和红花油。rOVA可以为这种烘焙物提供至少一种蛋清的特性，例如烘焙产品的粘合性、弹性、通气性、褐变性、组织化、保湿性和粘结性。在一些情况下，烘焙产品不包含任何天然蛋清或天然蛋，和/或不包括除rOVA以外的任何其他蛋清衍生的蛋白质。在一些情况下，rOVA作为成分被提供给烘焙组合物，例如从rOVA的浓缩物、分离物或粉状物形式开始。在一些情况下，作为烘焙产品成分提供的rOVA，其pH范围为约3.5至7.0。在一些情况下，烘焙产品中含有甜味剂，如糖、糖浆、蜂蜜或代糖。
本文公开的rOVA组合物还可用于制备无蛋食物产品，例如以天然全蛋或天然蛋清为其中主要或特色成分制成的食物产品，如炒蛋、煎蛋卷、馅饼、蛋奶酥、开口馅饼和菜肉馅煎蛋饼。在一些实施方案中，rOVA为制品提供了一种或多种功能特征，包括起泡性、凝固性、粘合性、结构、质地、成膜性、营养状况、不存在胆固醇(即，不含胆固醇)和蛋白强化。这种无蛋制品可以是纯素食、素食、清真食品或犹太洁食，或者其组合。无蛋制品(也称为蛋清代替物)可以包括rOVA和至少一种脂肪或油、多糖或含多糖成分以及淀粉。在一些情况下，无蛋制品还可以包括调味剂(例如提供咸味、硫磺味或鲜味)和/或着色剂(例如，为烘焙产品提供类黄色或灰白色)。在一些情况下，在无蛋制品中的rOVA内含物提供了自然(天然)蛋清的特性，例如加热或烹饪组合物时的硬度、粘附性、脆性、粘结性、胶粘性和咀嚼性。用于此类组合物的示例性多糖或含多糖成分包括吉兰糖胶、海藻酸钠和车前草。用于这种组合物的油和脂肪包括植物源的油和脂肪，例如橄榄油、玉米油、鳄梨油和红花油。
本文公开的rOVA组合物可用于加工肉产品或肉状产品，或者用于鱼类或贝类海鲜产品。在此类产品中，rOVA可以提供一种或多种功能特性，例如蛋白含量和蛋白补充以及粘合性、组织化性能。示例性的肉和肉状产品包括汉堡、馅饼、香肠、热狗、熟肉切片、肉干、培根、肉块和搅碎的肉状混合物。肉状产品可以类似于牛肉、猪肉、鸡肉、羊肉以及其他供人类和其他动物食用和消费的肉类。鱼类和贝类海鲜产品可以类似于例如鱼糕、蟹糕、虾、虾球、鱼条、海鲜肉、蟹肉、鱼排和蛤蜊条。在一些实施方案中，rOVA以约0.1％至30％w/w或w/v的量存在于肉类或肉状产品中。在一些实施方案中，rOVA用于肉状产品(也称为仿造肉，并且包括至少一种脂肪或油；和植物源蛋白)。用于这种组合物的油和脂肪包括植物源的油和脂肪，例如橄榄油、玉米油、鳄梨油和红花油。用于仿造肉的植物源蛋白包括大豆蛋清、坚果蛋白、豌豆蛋白、小扁豆蛋白以及其它豆蛋白和乳清蛋白。在一些情况下，这种植物蛋白是挤压蛋清，而在其他情况下，这种植物蛋白是非挤压蛋清。在一些情况下，仿造肉包括约2％至15％(w/w)的rOVA。在一些情况下，对于仿造肉组合物，rOVA可作为此类组合物的粘合剂、胶凝剂或粘合剂和胶凝剂的组合。
本文公开的rOVA组合物可应用于食物产品的涂层。例如，rOVA可以提供粘合或粘性功能，以将面糊或面包屑粘附到另一种食品成分上。rOVA可用作“无蛋蛋液”，其中rOVA蛋白当被涂布到其他食品成分或食物产品(如烘焙产品)上时提供外观、色泽和质地。在一个示例中，“无蛋蛋液”可用于涂布烘焙物，使得该烘焙物粘附到涂层(例如籽、盐、香料和香草)上。将rOVA作为涂层添加到食物产品中，例如当烹饪、烘焙或油炸食物产品时，可以提供食物产品外部的酥脆质地或提高食物产品外部的硬度。
本文公开的rOVA组合物包括调味汁和调料，例如无蛋蛋黄酱、商业化蛋黄酱代替物、肉汁、三明治酱、沙拉酱或食物调味汁。在调味汁或调料等中包含rOVA可以提供一种或多种特性，例如粘合性、乳化性、气味中性和口感。在一些实施方案中，按w/w或w/v计，rOVA以0.1％至3％的量或约3％至约5％的量存在于此类调味汁或调料中。在一些情况下，调味汁或调料中rOVA的量可以与市售或常用食谱中所用的全蛋、蛋清或nOVA的量基本相似。示例性调味汁或调料包括蛋黄酱、商业化蛋黄酱代替物、阿尔弗雷多酱和荷兰辣酱油。在一些实施方案中，含有rOVA的调味汁或调料不含全蛋、蛋清或从蛋中提取的任何其他蛋白质。在一些情况下，用rOVA制成的调味汁、调料或其他乳化产品包括至少一种脂肪或油和水。用于此类组合物的示例性脂肪和油包括玉米油、红花油、坚果油和鳄梨油。
rOVA组合物可用于制备糖果，如无蛋、不含动物成分的、素食和纯素食糖果。rOVA可以为糖果提供一种或多种功能特征，包括气味中性、风味、口感、质地、胶凝作用、粘结性、起泡性、打发性、营养价值和蛋白强化。在一些实施方案中，所制得的含有rOVA的糖果不含任何天然卵蛋白或天然蛋清。这种糖果中的rOVA可以提供坚硬或耐嚼质地。在一些实施方案中，rOVA以约0.1％至15％存在于糖果中。示例性糖果包括软糖、太妃糖、神糖(divinitycandy)、蛋白酥饼、棉花糖和牛轧糖。在一些实施方案中，糖果包括rOVA、至少一种甜味剂和任选的可食用液体。示例性甜味剂包括糖、蜂蜜、代糖和植物源糖浆。在一些情况下，rOVA作为用于制作pH为约3.5至约7的糖果的成分提供。在一些情况下，rOVA以约2％至约15％(w/v)存在于糖果组合物中。在一些实施方案中，糖果是食物产品，如蛋白酥饼、奶油甜点或植脂奶油。在一些实施方案中，糖果中的rOVA为食物产品提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性，和/或提供凝胶化。在一些情况下，糖果是液体，如发泡饮料。在一些情况下，该液体可以包括可食用酒精(例如在加糖鸡尾酒或餐后酒中)。
本文的rOVA组合物可用于乳制品、乳制品样产品或含乳制品产品。例如，rOVA可用于制备饮料，如加奶果汁、奶昔、“蛋奶酒”和咖啡饮料。在一些实施方案中，当至少一种成分是乳制品成分或乳制品衍生成分(如奶、奶油、乳清和黄油)时，则将rOVA添加到其他成分中。在一些实施方案中，将rOVA添加到其他成分中，以制作不含任何天然卵蛋白、天然蛋清或天然蛋的饮料。在一些实施方案中，rOVA是不含任何动物源成分的饮料中的成分，例如不含任何天然蛋源或任何乳制品衍生成分的饮料。这种非乳制品衍生饮料的示例包括坚果奶，如豆奶或杏仁奶。rOVA还可用于制作饮料添加剂，如奶精或“奶”，以为饮料(例如，咖啡、茶、含酒精饮料或热可可)提供蛋白质、风味、质地和口感。在一些实施方案中，rOVA以约0.1％至20％w/w或w/v的量存在于饮料成分或饮料添加剂中。
在本文的一些实施方案中，rOVA可用于制备乳制品样产品，如酸奶、奶酪或黄油。含有rOVA的乳制品可以包括其他动物源性乳制品组分或蛋白质。在一些实施方案中，用rOVA制备的乳制品不含任何动物源性成分。
甜点产品的制备可以使用rOVA来制备。在甜点产品中，rOVA可以提供一种或多种特性，例如奶油质地、低脂肪含量、气味中性、风味、口感、质地、粘合性和营养价值。rOVA可以存在于用于制备甜点产品的一种成分或一组成分中。适合用rOVA制备的示例性甜点产品包括慕斯、奶酪蛋糕、蛋奶沙司、布丁、雪糕和冰淇淋。在一些实施方案中，制得的含有rOVA的甜点产品是纯素食、素食或无乳制品。包含rOVA的甜点产品可以具有约0.1％至约10％w/w或w/v量的rOVA。
rOVA可用于制备休闲食品，如蛋白棒、能量棒、营养棒或燕麦棒。rOVA可以为休闲食品提供特性，包括粘合性、蛋白补充、风味中性、气味中性、涂层和口感中的一种或多种。在一些实施方案中，将rOVA以约0.1％至30％w/w或w/v的量添加到休闲食品的制品中。
rOVA可用于营养补充剂，如胃肠外营养、蛋白质饮料补充剂、蛋白质奶昔，其中rOVA提供高蛋清补充。在一些实施方案中，可以将rOVA以约10％至30％w/w或w/v的量添加到这些组合物中。
在一些实施方案中，rOVA组合物可用作蛋替代物和蛋清替代物。可以将rOVA与至少一种其他组分混合或组合，以形成蛋清替代物。rOVA可以为蛋替代物或蛋清替代物提供一种或多种特性，例如胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、乳脂性和粘结性。在一些实施方案中，特性等同于或优于以相同量或浓度(w/w或w/v)提供的天然蛋或天然蛋清。在一些实施方案中，蛋替代物或蛋清替代物不含任何蛋、蛋清、从蛋中提取或分离的蛋白质。
含rOVA的食品成分和食物产品(例如本文所述的那些)可以包含其他成分或组分。例如，rOVA组合物的制备还可以使用其他组分，例如甜味剂、树胶、调味剂、增稠剂、酸化剂和乳化剂中的一种或多种。其他成分，如面粉、谷物、油类和脂肪、纤维、水果和蔬菜都可以与rOVA组合。这种rOVA组合物可以是纯素食、素食、清真食品、犹太洁食和不含动物成分的食品，或者其组合。在一些实施方案中，rOVA可以是食品成分，也可以被制备用于通常动物源性的或通常含有动物源组分的食物产品，如肉类、乳制品或蛋类。
包含rOVA的组合物，包括食品成分和食物产品，可以与可食用制品的一个或多个步骤相容，该步骤例如加热、烘焙、炙烤、烘烤、炖煮、微波加热、焙烤、煮沸、蒸、挤压、油炸或油煎或使用欧姆加热加工、真空低温烹饪(Sue Vide)、冷冻、冷却、热烫、包装、罐装、漂白、浓缩、干燥、压制、研磨、混合、部分烹饪(par cooking)、烹饪、醒发、腌制、切割、切片、切块、压碎、切碎、剁碎、摇动、去核、螺旋切割、滚动、榨汁、拉紧、过滤、揉捏、搅拌、敲打、搅打、擦碎、填料、去皮、烟熏、腌制、盐渍、保鲜、酸渍、发酵、均质化、巴氏杀菌、灭菌、辐照、冷等离子体处理、高压处理、脉冲电场处理、微波辅助热杀菌、稳定、混合、煮成浓汤、强化、精炼、氢化、老化、延长保质期或添加酶类。
用rOVA制备的食品成分和食物产品可以基本上不含任何微生物细胞或微生物细胞碎片。例如，rOVA可以从微生物宿主细胞中分泌，并从微生物细胞、培养基和/或微生物细胞碎片中分离。
在一些实施方案中，rOVA可以制备成全细胞提取物或分级提取物，使得rOVA组合物包含微生物细胞和/或微生物细胞组分。
在一个实施方案中，制备rOVA组合物供动物食用，其中rOVA存在于全细胞提取物或分级提取物中，使得rOVA组合物含有微生物细胞和/或微生物细胞组分。在一些实施方案中，制备rOVA组合物供动物食用，其中从微生物细胞、培养基和微生物细胞碎片中分离rOVA。供动物食用的示例性组合物可包括宠物食品、动物饲料、耐嚼零食、骨汤、加奶果汁或其他用于动物营养的液体，以及适合于动物食用的固体营养补充剂。在这些情况下，微生物细胞提取物或微生物细胞碎片可以提供额外的营养价值。
可以食用rOVA组合物的动物可以包括伴侣动物(例如，狗、猫、马)、农场动物、野生动物(狮子、老虎、斑马)以及家畜(例如，牛、猪、绵羊、山羊)。本文所述的rOVA组合物也可用于水产养殖(如鱼类和贝类)和禽类营养(如鸟类宠物、动物园鸟类、野生鸟类、家禽和饲养用于人类和动物食品的鸟类)。
在本文所述的可食用食品组合物的一些实施方案中，该组合物基本上不含动物源组分、乳清蛋白、酪朊酸盐、脂肪、乳糖、水解乳糖、大豆蛋白、胶原蛋白、水解胶原蛋白或明胶或其任意组合。本文所述的组合物可以基本上不含胆固醇、葡萄糖、脂肪、饱和脂肪、反式脂肪或其任意组合。在一些情况下，按干重计，本文所述的组合物包含小于10％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的脂肪。在一些实施方案中，该组合物可以是包含脂肪的(例如，蛋黄酱和商业化蛋黄酱代替物)，并且这种组合物可以包括高达约60％的脂肪或低脂组合物(例如，低脂蛋黄酱和商业化蛋黄酱代替物)，并且这种组合物可以包括较少百分比的脂肪。不含动物源组分的组合物可被视为素食和/或纯素食。
在一些实施方案中，rOVA粉状组合物包含少于5％的灰分。术语“灰分”是一个本领域已知的术语，并代表无机物，例如一种或多种离子、元素、矿物质和/或化合物。在一些情况下，按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，rOVA粉状组合物包含小于5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％的灰分。
在一些实施方案中，rOVA粉状组合物的水分含量可以小于15％。按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，rOVA粉状组合物可以具有小于15％、12％、10％、8％、6％、5％、3％、2％或1％的水分。在一些实施方案中，rOVA粉状组合物的碳水化合物含量可以小于30％。按w/w或w/v计，rOVA粉状组合物可具有小于30％、27％、25％、22％、20％、17％、15％、12％、10％、8％、5％、3％或1％的碳水化合物含量。
感官中性和改善的感官吸引力
在一些实施方案中，除了蛋清样性能之外，与此类组合物中的其他蛋白质相比，将rOVA添加到可食用食品组合物中提供了提高的蛋白质营养含量、感官中性或改善的感官吸引力。如本文所用的，“感官中性”指的是不存在强烈或独特的味道、臭味(气味)或味道和气味的组合，以及质地、口感、后味和色泽。训练有素的感官分析师可以使用感官评价板，例如Kemp等人2009中描述的感官评价板。当将含有rOVA的可食用食品组合物与另一种具有相同浓度的不同蛋白质(例如，nOVA、乳清蛋白、豌豆蛋白、大豆蛋白、全蛋或蛋清蛋白)的类似组合物进行比较时，感官中性可以为试味员，例如食品测试员或消费者提供改善的感官吸引力。
在一些实施方案中，当rOVA被添加到可食用食品组合物中时，与含有不同蛋白组分(以与含有rOVA的溶液/产品相同的浓度存在)的不同溶液/产品进行比较，例如比较的是乳清、大豆、胶原蛋白、豌豆、蛋清固体分离物和/或nOVA，例如由训练有素的感官分析师进行测量的，rOVA基本上是无味的。在本文描述的rOVA组合物的一些实施方案中，按重量/总重量(w/w)和/或重量/总体积(w/v)计算，蛋白浓度为约0.5-1％、1％-5％、5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％的rOVA时，或者蛋白浓度为每100mL溶液(如，每100mL水)中约0.1、1、5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30g总rOVA蛋白时的这些组合物基本上是无味的。
在一些实施方案中，将rOVA添加到可食用食品组合物中，除了诸如蛋清样性能和提高的蛋白营养含量的特性之外，还提供了中性味道。例如可以由训练有素的感官分析师，与含有不同蛋白质例如，乳清、大豆、胶原蛋清、豌豆、全蛋和蛋清固体分离物(包括天然OVA)(以与所述rOVA相同的浓度存在)的溶液进行比较，测量中性味道。
在一些实施方案中，添加rOVA提供了与其他蛋白质或蛋清相关的某种气味和/或味道的降低。例如，与在可食用食品组合物中添加全蛋、分级蛋或蛋清相比，添加rOVA具有更少的“蛋样”气味或味道。在一些实施方案中，与其他蛋白质来源相比，添加rOVA具有更少的金属气味或味道。
在一些实施方案中，与添加其他蛋白质来源以产生蛋清样性能相比，添加rOVA改善了口感。例如，与其他蛋白质来源相比，添加rOVA颗粒更少，或具有更少的沉淀物或固形物。
在一些实施方案中，例如，与其他可用补充蛋白质来源相比，添加rOVA具有改善的质地。
与不含rOVA的组合物或含有不同蛋白质(以与rOVA相同的浓度存在)的组合物相比，含有rOVA的可食用组合物还可以具有改善的感官吸引力。这种改善的感官吸引力可能与味道和/或气味有关。例如，可以由训练有素的感官分析师来测量味道和气味。在一些情况下，感官分析师将含有rOVA的可食用组合物与不含rOVA的组合物或含有等量不同蛋白质或蛋白质来源的组合物进行比较。
如本文所述，本文的可食用组合物可以是液体形式。液体形式可以是中间产品，如可溶性rOVA溶液。在一些情况下，液体形式可以是最终产品，例如包含rOVA的饮料。本文预期的不同类型的饮料的示例包括：果汁、苏打汽水、软饮料、加味水、蛋白质水、强化水、碳酸水、营养饮料、能量饮料、运动饮料、康复饮料、含酒精性饮料、加热饮料、咖啡性饮料、茶类饮料、植物性奶、坚果奶、奶基饮料、非乳制品、植物基温和饮料、婴儿制剂饮料和代餐饮料。
组合物的pH
rOVA组合物的pH可以是3.5至8。rOVA组合物的pH可以是至少3.5。rOVA组合物的pH可以是至多8。rOVA组合物的pH可以是3.5至4、3.5至4.5、3.5至5、3.5至5.5、3.5至6、3.5至6.5、3.5至7、3.5至7.5、3.5至8、4至4.5、4至5、4至5.5、4至6、4至6.5、4至7、4至7.5、4至8、4.5至5、4.5至5.5、4.5至6、4.5至6.5、4.5至7、4.5至7.5、4.5至8、5至5.5、5至6、5至6.5、5至7、5至7.5、5至8、5.5至6、5.5至6.5、5.5至7、5.5至7.5、5.5至8、6至6.5、6至7、6至7.5、6至8、6.5至7、6.5至7.5、6.5至8、7至7.5、7至8或7.5至8。rOVA组合物的pH可以是3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或8。与nOVA、蛋清或蛋清代替物组合物相比，pH 3.5至7的rOVA组合物可以具有一种或多种改善的性能。
rOVA组合物的pH可以是2至3.5。rOVA组合物的pH可以是至少2。rOVA组合物的pH可以是至多3.5。rOVA组合物的pH可以是2至2.5、2至3、2至3.5、2.5至3、2.5至3.5或3至3.5。rOVA组合物的pH可以是2、2.5、3或3.5。
rOVA组合物的pH可以是7至12。rOVA组合物的pH可以是至少7。rOVA组合物的pH可以是至多12。rOVA组合物的pH可以是7至7.5、7至8、7至8.5、7至9、7至9.5、7至10、7至10.5、7至11、7至11.5、7至12、7.5至8、7.5至8.5、7.5至9、7.5至9.5、7.5至10、7.5至10.5、7.5至11、7.5至11.5、7.5至12、8至8.5、8至9、8至9.5、8至10、8至10.5、8至11、8至11.5、8至12、8.5至9、8.5至9.5、8.5至10、8.5至10.5、8.5至11、8.5至11.5、8.5至12、9至9.5、9至10、9至10.5、9至11、9至11.5、9至12、9.5至10、9.5至10.5、9.5至11、9.5至11.5、9.5至12、10至10.5、10至11、10至11.5、10至12、10.5至11、10.5至11.5、10.5至12、11至11.5、11至12或11.5至12。rOVA组合物的pH可以是7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5或12。
在一些实施方案中，可以在rOVA被包含在组合物中之前或用作成分之前调节rOVA的pH。在一些实施方案中，在纯化和/或分离过程中调节rOVA的pH。在一些实施方案中，将用于成分或食物产品组合物的生产中的rOVA的pH调节至约3.5至约7.0。在一些情况下，在产生过程中，可以将rOVA的pH调节至超过1个pH。例如，rOVA可以在宿主细胞如微生物细胞中表达，并且在一些情况下，rOVA由宿主细胞分泌到生长培养基(如液体培养基)中。从宿主细胞中分离rOVA，并且这种分离步骤可在选定的pH例如在约3.5的pH进行。在一些情况下，在这种分离pH，rOVA可能不可溶或不完全可溶，并且将pH调节到更高的pH，例如约pH 12。然后，可以将rOVA调节至约3.5至约7.0的最终pH。与宿主细胞的其他组分或液体培养基的其他组分的rOVA分离可以包括一种或多种离子交换层析，例如阳离子交换层析和/或阴离子交换层析、过滤和硫酸铵沉淀。
组合物的附加组分
本文公开的含有rOVA的可食用食品组合物以及制备这种组合物的方法可以包括添加rOVA或将rOVA与一种或多种成分一起混合。例如，可以将食品添加剂添加到组合物中或与组合物混合。食品添加剂可以增加组合物的体积和/或质量。食品添加剂可以改善功能性能和/或物理特性。例如，食品添加剂可以防止由于冻融循环中脂蛋白的脂质部分导致的凝胶化或粘性增加。可添加抗结块剂以制成自由流动的组合物。可以添加碳水化合物来增加对热损伤的抗性，例如，在干燥过程中减少蛋白质变性，并提高干燥组合物的稳定性和流动性。食品添加剂包括但不限于食物着色剂、pH调节剂、天然调味剂、人工调味剂、增味剂、批次标志物、食物酸、填充剂、抗结块剂(如，硅铝酸钠)、抗绿化剂(如，柠檬酸)、食物稳定剂、泡沫稳定剂或粘合剂、抗氧化剂、酸度调节剂、膨胀剂、保色剂、发泡剂(如，酯型发泡剂、柠檬酸三乙酯、十二烷基硫酸钠)、乳化剂(如，卵磷脂)、保湿剂、增稠剂、赋形剂、固体稀释剂、盐类、营养素、甜味剂、抛光剂、防腐剂、维生素、膳食元素、碳水化合物、多元醇、树胶、淀粉、面粉、油或麸皮。
食物着色剂包括但不限于FD&C黄色#5、FD&C黄色#6、FD&C红色#40、FD&C红色#3、FD&C蓝色1号、FD&C蓝色2号、FD&C绿色3号、类胡萝卜素(如，藏红花粉、β-胡萝卜素)、花青素、胭脂树红、甜菜苷、蝶豆花、焦糖着色剂、叶绿酸、接骨木汁、番茄红素、胭脂红、班兰(pandan)、辣椒粉、姜黄根粉、姜黄色素、喹啉黄、红色酸性染料、丽春红4R、专利蓝V和食用绿S。
用于pH调节的成分包括但不限于Tris缓冲液、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠和盐酸。
盐类包括但不限于酸盐、碱盐、有机盐、无机盐、磷酸盐、氯盐、钠盐、氯化钠、钾盐、氯化钾、镁盐、氯化镁、高氯酸镁、钙盐、氯化钙、氯化铵、铁盐、氯化铁、锌盐和氯化锌。
营养素包括但不限于大量营养素、微量营养素、必需营养素、非必需营养素、膳食纤维、氨基酸、必需脂肪酸、ω-3脂肪酸和共轭亚油酸。
甜味剂包括但不限于代糖、人工甜味剂、乙酰氨基磺酸钾、爱德万甜(advantame)、阿力甜(alitame)、阿斯巴甜、环己基氨基磺酸钠、甘素、甜素、新橙皮苷二氢查尔酮、纽甜、P-4000、邻磺酰苯甲酰亚胺、阿斯巴甜安赛蜜盐(aspartame-acesulfame salt)、三氯蔗糖、甜味蛋白、仙茅甜蛋白、甘草甜素、甘油、菊粉、罗汉果苷、马槟榔甜蛋白、麦芽低聚糖、甘露醇、神秘果蛋白、莫纳甜(monatin)、莫内林(monellin)、欧亚水龙骨甜素(osladin)、倍他丁(pentadin)、甜叶菊、三叶苷和奇异果甜蛋白。
碳水化合物包括但不限于糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、阿洛酮糖、塔格糖、木糖、阿拉伯糖、高果糖玉米糖浆、高麦芽糖玉米糖浆、玉米糖浆(如，无葡萄糖玉米糖浆)、唾液酸、单糖、二糖、多糖(如，聚葡萄糖、麦芽糊精)和淀粉。
多元醇包括但不限于木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、甘露醇和半乳糖醇(卫矛醇)。
树胶包括但不限于阿拉伯树胶、吉兰糖胶、瓜尔豆胶、剌槐豆胶、阿拉伯胶、纤维素胶和黄原胶。
维生素包括但不限于烟酸、核黄素、泛酸、硫胺素、叶酸、维生素A、维生素B6、维生素B12、维生素D、维生素E、叶黄素、玉米黄质、胆碱、肌醇和生物素。
膳食元素包括但不限于钙、铁、镁、磷、钾、钠、锌、铜、锰、硒、氯、碘、硫、钴、钼、镍和溴。
rOVA蛋白和rOVA蛋白的产生
rOVA可以具有来自任何物种的氨基酸序列。例如，rOVA可以具有来自鸟类、爬行动物或其他产蛋物种的OVA的氨基酸序列。具有来自禽类的氨基酸序列的rOVA可以选自于：家禽、飞禽、水禽、猎鸟、鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鸵鸟、鹅、海鸥、珍珠鸡、野鸡、鸸鹋及其任意组合。rOVA可以具有源自单一物种的氨基酸序列，例如家鸡(Gallus gallus domesticus)。可选地，rOVA可以具有源自两种或更多物种的氨基酸序列，因此可以是杂合的。
在下表1中提供了本文预期的示例性OVA氨基酸序列，SEQ ID NO:1-74。
表1.OVA序列
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rOVA在宿主细胞中例如毕赤酵母属物种、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌属物种的表达可以导致一个或多个氨基酸添加到OVA序列中，作为转录后或翻译后修饰的一部分。这些氨基酸可能不是天然OVA序列的一部分。例如，在毕赤酵母属物种例如法夫驹形氏酵母(Komagataella phaffii)和巴斯德驹形氏酵母(Komagataella pastoris)中表达OVA序列可以导致在N-末端或C-末端添加一个或多个氨基酸。在一些情况下，在宿主细胞中表达时，四个氨基酸EAEA(SEQ ID NO:75)被添加到OVA序列的N-末端，如SEQ ID NO:1所示。例如，可以提供编码SEQ ID NO:1的鸡rOVA，并且在表达和分泌后，rOVA具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
rOVA可以是非天然生成的OVA的变体。这种变体可以包含相对于天然OVA序列的一个或多个氨基酸插入、缺失或置换。
这样的变体可以与SEQ ID NOs:1-74具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。如本文所用，在氨基酸序列的上下文中，术语“序列同一性”被定义为在比对序列并且必要时引入缺口以实现最大序列同一性百分比，并且不考虑任何保守性置换作为序列同一性的一部分之后，候选序列中与所选序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了确定氨基酸序列同一性的百分比，可以通过在本领域技术范围内的多种方式实现比对，例如使用公开获取的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件，其中BLAST是首选的比对算法。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在正在比较的序列全长上实现最大比对所需的任何算法。
根据用于表达rOVA的宿主生物体，rOVA可以具有不同于野生型OVA的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。例如，本文的rOVA可以是也可以不是糖基化的、乙酰化的或磷酸化的。rOVA可以具有禽类、非禽类、微生物、非微生物、哺乳动物或非哺乳动物的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。
在一些情况下，rOVA可以去糖基化(例如，以化学方法、酶促地、Endo-H、PNGase F、O-糖苷酶、神经氨酸苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶)、去乙酰化(例如，蛋白质去乙酰化酶、组蛋白去乙酰化酶、sirtuin)或去磷酸化(例如，酸性磷酸酶、λ蛋白磷酸酶、牛小肠磷酸酶、碱性磷酸酶)。去糖基化、去乙酰化或去磷酸化可以产生更均一的蛋白质，或者能够产生具有较小变异的组合物。
rOVA在宿主细胞中重组表达。如本文所用，“宿主”或“宿主细胞”在此代表被选择来或进行基因修饰以产生期望产物的任何蛋白质产生宿主。示例性宿主包括真菌诸如丝状真菌以及细菌、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞。宿主细胞可以是阿氏酵母属种(Arxulaspp.)、解腺嘌呤阿氏酵母(Arxula adeninivorans)、克鲁维酵母属种(Kluyveromycesspp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、法夫驹形氏酵母(Komagataellaphaffii)、毕赤酵母属物种(Pichia spp.)、安格斯毕赤酵母(Pichia angusta)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、酵母属物种(Saccharomyces spp.)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、裂殖酵母属物种(Schizosaccharomyces spp.)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、耶氏酵母属物种(Yarrowia spp.)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、蘑菇属物种(Agaricus spp.)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、曲霉属物种(Aspergillus spp.)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、刺盘孢菌(Colletotrichumspp.)、炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporiodes)、内座壳菌(Endothia spp.)、寄生内座壳菌(Endothia parasitica)、大肠杆菌(Escherichia coli)、镰孢属物种(Fusariumspp.)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)、腐皮镰孢(Fusarium solani)、毛霉属物种(Mucor spp.)、米黑毛霉(Mucor miehei)、微小毛霉(Mucor pusillus)、毁丝霉属物种(Myceliophthora spp.)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)、脉孢菌属物种(Neurospora spp.)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、青霉属物种(Penicillium spp.)、沙门柏干酪青霉(Penicillium camemberti)、变灰青霉(Penicilliumcanescens)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、埃默森青霉(Penicillium(Talaromyces)emersonii)、绳状青霉(Penicillium funiculo sum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、娄地青霉(Penicillium roqueforti)、侧耳属物种(Pleurotus spp.)、糙皮侧耳(Pleurotusostreatus)、根毛霉属物种(Rhizomucor spp.)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)、根霉属物种(Rhizopus spp.)、少根根霉(Rhizopusarrhizus)、少孢根霉(Rhizopus oligosporus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、木霉属物种(Trichoderma spp.)、深绿木霉(Trichoderma altroviride)、里氏木霉(Trichodermareesei)、或绿木霉(Trichoderma vireus)。宿主细胞可以是被美国食品药品监督管理局批准为公认为安全的生物体。
rOVA蛋白可以在酵母、丝状真菌或细菌中重组表达。在一些实施方案中，rOVA蛋白在毕赤酵母属物种(法夫驹形氏酵母(Komagataella phaffii)和巴斯德驹形氏酵母(Komagataella pastoris))、酵母属物种、木霉属物种、假单胞菌属物种或大肠杆菌物种中重组表达。
可以通过表达载体、质粒、整合到宿主基因组中的核酸或其他方式来提供rOVA的表达。例如，用于表达的载体可以包括：(a)启动子元件、(b)信号肽、(c)与宿主细胞异源的OVA序列、和(d)终止子元件。
可用于OVA表达的表达载体包括含有具有元件(a)、(b)、(c)和(d)的表达盒的表达载体。在一些实施方案中，信号肽(b)不需要包含在载体中。通常，表达盒被设计成当整合到同源宿主微生物的基因组中时介导转基因的转录。
为了在转化入宿主微生物之前辅助载体的扩增，复制起点(e)可以被包含在载体中(例如，PUC_ORIC和PUC(DNA2.0))。为了辅助选择出用表达载体稳定转化的微生物，该载体还可以包括筛选标志物(f)，例如URA3基因和Zeocin抗性基因(ZeoR)。表达载体还可包含限制性酶切位点(g)，其允许在转化到宿主微生物中之前使表达载体线性化，以利于表达载体稳定整合到宿主基因组中。在一些实施方案中，表达载体可以包含元件(b)、(e)、(f)和(g)的任何子集，不包括元件(b)、(e)、(f)和(g)中的任何一项。本领域技术人员已知的其他表达元件和载体元件可以组合使用或者替代本文描述的元件。
示例性启动子元件(a)可以包括但不限于组成型启动子、诱导型启动子和杂合启动子。启动子包括但不限于acu-5、adh1+、醇脱氢酶(ADH1、ADH2、ADH4)、AHSB4m、AINV、alcA、α-淀粉酶、替代氧化酶(AOD)、醇氧化酶I(AOX1)、醇氧化酶2(AOX2)、AXDH、B2、CaMV、纤维二糖水解酶I(cbh1)、ccg-1、cDNA1、细胞丝多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、CUP1、二羟基丙酮合酶(DAS)、烯醇酶(ENO、ENO1)、甲醛脱氢酶(FLD1)、FMD、甲酸脱氢酶(FMDH)、G1、G6、GAA、GAL1、GAL2、GAL3、GAL4、GAL5、GAL6、GAL7、GAL8、GAL9、GAL10、GCW14、gdhA、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaA)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(gpdA、GAP、GAPDH)、磷酸甘油酸变位酶(GPM1)、甘油激酶(GUT1)、HSP82、invl+、异柠檬酸裂合酶(ICL1)、乙酰羟酸异构还原酶(ILV5)、KAR2、KEX2、β-半乳糖苷酶(lac4)、LEU2、melO、MET3、甲醇氧化酶(MOX)、nmt1、NSP、pcbC、PET9、过氧化物酶体蛋白质(peroxin)8(PEX8)、磷酸甘油酸酯激酶(PGK、PGK1)、pho1、PHO5、PHO89、磷脂酰肌醇合酶(PIS1)、PYK1、丙酮酸激酶(pki1)、RPS7、山梨醇脱氢酶(SDH)、3-磷酸丝氨酸氨基转移酶(SER1)、SSA4、SV40、TEF、翻译延伸因子1α-(TEF1)、THI11、同型丝氨酸激酶(THR1)、tpi、TPS1、磷酸丙糖异构酶(TPI1)、XRP2、YPT1，以及其任意组合。
信号肽(B)，也称为信号序列、靶向信号、定位信号、定位序列、信号肽、转运肽、前导序列或前导肽，可支持蛋白质或多核苷酸的分泌。重组蛋白质或异源表达的蛋白质从宿主细胞的细胞外分泌可有助于蛋白质纯化。信号肽可源自蛋白质的前体(例如前肽原、前蛋白)。信号肽可以来源于除天然OVA中的信号肽之外的蛋白质的前体。分泌蛋白的示例是在SEQ ID NO:1中用粗体和下划线标出的酿酒酵母α因子前原序列。
任何编码OVA的核酸序列都可以用作(c)。优选地，这种序列针对宿主细胞进行了密码子优化。
示例性的转录终止子元件包括，但不限于acu-5、adh1+、醇脱氢酶(ADH1、ADH2、ADH4)、AHSB4m、AINV、alcA、α-淀粉酶、替代氧化酶(AOD)、醇氧化酶I(AOX1)、醇氧化酶2(AOX2)、AXDH、B2、CaMV、纤维二糖水解酶I(cbh1)、ccg-1、cDNA1、细胞丝多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、CUP1、二羟基丙酮合酶(DAS)、烯醇酶(ENO、ENO1)、甲醛脱氢酶(FLD1)、FMD、甲酸脱氢酶(FMDH)、G1、G6、GAA、GAL1、GAL2、GAL3、GAL4、GAL5、GAL6、GAL7、GAL8、GAL9、GAL10、GCW14、gdhA、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaA)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(gpdA、GAP、GAPDH)、磷酸甘油酸变位酶(GPM1)、甘油激酶(GUT1)、HSP82、invl+、异柠檬酸裂合酶(ICL1)、乙酰羟酸异构还原酶(ILV5)、KAR2、KEX2、β-半乳糖苷酶(lac4)、LEU2、melO、MET3、甲醇氧化酶(MOX)、nmt1、NSP、pcbC、PET9、过氧化物酶体蛋白质(peroxin)8(PEX8)、磷酸甘油酸酯激酶(PGK、PGK1)、pho1、PHO5、PHO89、磷脂酰肌醇合酶(PIS1)、PYK1、丙酮酸激酶(pki1)、RPS7、山梨醇脱氢酶(SDH)、3-磷酸丝氨酸氨基转移酶(SER1)、SSA4、SV40、TEF、翻译延伸因子1α-(TEF1)、THI11、同型丝氨酸激酶(THR1)、tpi、TPS1、磷酸丙糖异构酶(TPI1)、XRP2、YPT1，及其任意组合。
示例性的选择性标记物(F)可包括但不限于：抗生素抗性基因(例如，博莱霉素(zeocin)、氨苄青霉素(ampicillin)、杀稻瘟素(blasticidin)、卡那霉素(kanamycin)、诺尔丝菌素(nourseothricin)、氯霉素(chloroamphenicol)、四环素(tetracycline)、三氯生(triclosan)、更昔洛韦(ganciclovir)及其任意组合)、营养缺陷型标记物(例如，ade1、arg4、his4、ura3、met2及其任意组合)。
在一个示例中，用于在毕赤酵母属物种中表达的载体可以包括可操作地连接到信号肽(α-交配因子)的AOX1启动子，该信号肽与编码OVA的核酸序列和紧邻编码OVA的核酸序列下游的终止子元件(AOX1终止子)在框内融合。
在另一示例中，包含DAS1启动子的载体可操作地连接到信号肽(α-交配因子)，该信号肽与编码OVA的核酸序列和紧邻OVA下游的终止子元件(AOX1终止子)在框内融合。
本文所述的重组蛋白可以从一种或多种宿主细胞中分泌。在一些实施方案中，rOVA蛋白由宿主细胞分泌。通过一些方法，例如离心、分级、过滤、离子交换层析、亲和纯化以及用于从细胞、液体和固体培养基组分和其他细胞产物和副产物中分离蛋白质的其他方法，来分离和纯化分泌的rOVA。在一些实施方案中，rOVA在毕赤酵母属物种中产生，并从宿主细胞分泌到培养基中。然后，将分泌的rOVA与其他培养基组分分离，以供进一步使用。
本公开涉及改善重组OVA的糖基化，以改变或增强该蛋白和/或其产生的一种或多种功能特性。在一些实施方案中，rOVA糖基化的变化可能是由于宿主细胞对rOVA进行糖基化。在一些实施方案中，rOVA具有与天然卵清蛋白(nOVA)不完全相同的糖基化模式，例如来自鸡蛋的nOVA。在一些实施方案中，rOVA在用作rOVA组合物中的成分之前，或当rOVA存在于组合物中时，用去糖基化酶处理rOVA。在一些实施方案中，通过在宿主细胞中表达一种或多种酶并将rOVA暴露于一种或多种酶来修饰或去除rOVA的糖基化。在一些实施方案中，rOVA和用于修饰或去除糖基化的一种或多种酶在同一宿主细胞中共表达。
天然卵清蛋白(nOVA)，例如从鸡或其他禽蛋中分离的，具有高度复杂的支化形式的糖基化。糖基化模式包括N-连接多糖结构，如N-乙酰氨基葡萄糖单元、半乳糖和N-连接甘露糖单元。例如，参见图1A。在一些情况下，用于本文公开的可食用组合物并使用本文描述的方法制成的rOVA具有不同于nOVA的糖基化模式的糖基化模式。例如，当在毕赤酵母属物种中产生rOVA时，该蛋白质可能以与nOVA不同的方式被糖基化，并且在N-连接糖基化中缺少半乳糖单元。图1B示出了由巴斯德毕赤酵母产生的rOVA的糖基化模式，显示了复杂的支化糖基化模式。在本文公开的组合物和方法的一些实施方案中，对rOVA进行处理，使得该糖基化模式与nOVA的糖基化模式相比有修饰，并且与未经这种处理的毕赤酵母属物种产生的rOVA相比也有修饰。在一些情况下，rOVA不含糖基化。
与nOVA相比，rOVA的分子量可不同。蛋白质的分子量可以小于nOVA的分子量或小于宿主细胞产生的rOVA，其中rOVA的糖基化未经修饰。在实施方案中，rOVA的分子量可以是40kDa至55kDa。在一些情况下，例如与天然OVA(由禽类宿主物种产生)相比，或者与糖基化rOVA(例如rOVA包括N-连接甘露糖基化的情况)的宿主细胞相比，具有修饰后糖基化的rOVA具有不同的分子量。在一些情况下，rOVA的分子量大于完全没有翻译后修饰的rOVA或缺乏N-连接糖基化的所有形式的rOVA的分子量。
定义
本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的，而不旨在是限制性的。
如本文所用，除非上下文另外明确说明，否则单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述(the)”旨在包括复数形式，。
在详细描述和/或权利要求书中使用了术语“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体，这些术语旨在以与术语“包含(comprising)”相似的方式是包含性的。
范围在本文中可以表示为从“约”或“近似”一个特定值，和/或到“约”或“近似”另一个特定值。当表示这种范围时，另一种情况包括从一个特定值和/或到另一个特定值。同样，当通过使用先行词“约”或“近似”将值表示为近似值时，可以理解为特定值形成了另一种情况。还应当理解，每个范围的端点都是有意义的，既与另一端点相关，又独立于另一端点。如本文所用的术语“约”或“近似”，指的是在特定用法的上下文中，从规定数值加或减15％的范围。例如，“约10”将包括从8.5到11.5的范围。术语“约”或“近似”还说明了测量值中的典型误差或不精确性。
本文描述的任何方面或实施方案可以与如本文公开的任何其他方面或实施方案组合。
实施例
实施例1：重组卵清蛋白的制备
原鸡(Gallus gallus)OVA编码序列与启动子序列下游的α-交配因子信号序列(SEQ ID NO:1)在框内融合。启动子位于信号序列OVA编码序列的上游，而转录终止子位于OVA序列的下游。将表达构建体置于Kpas-URA 3载体中。
将表达构建体转化到巴斯德毕赤酵母中。通过基因组测序证实了成功的整合。
发酵：在环境条件下，在生物反应器中产生重组OVA。用于发酵工艺的种子培养开始于使用2ml的巴斯德毕赤酵母冷冻管接种含有液态生长液的摇瓶，这些冷冻管储存在-80℃并于接种前在室温下解冻。
将接种后的摇瓶置于30℃摇床中保持24小时，之后将生长的巴斯德毕赤酵母转移到生产规模的反应器中。
培养物在30℃、设定的pH和溶解氧(DO)下生长。在培养物中添加碳源。发酵结束时，从上清液中收获目标OVA蛋白。
去除细胞碎片，蛋白质被纯化并冷冻干燥成干粉。所产生的OVA用于下文描述的实施例中。
实施例2：利用重组卵清蛋白制备无蛋蛋糕
可以用以下成分制备无蛋磅蛋糕。通过混合2％至5％的重组卵清蛋白和0.05％至0.5％的向日葵卵磷脂制成第一成分组合物。为了制备磅蛋糕，将高达4％的干燥的第一成分组合物添加到22-26％的无盐黄油、20-25％的中筋面粉、18-26％的水、20-25％的糖、4-6％的酸奶油、1.2％的发酵粉、0.4％的香草香精、0.05-1.5％的树胶和淀粉以及0.18％的盐中，然后混合所有成分以制成面糊。对于该食谱，可使用2-5％重组卵清蛋白以及0.05-0.5％向日葵卵磷脂。
在一个示例中，用rOVA和全蛋(作为比较)制作的磅蛋糕如下所示：
表2：含有rOVA+黄原胶的蛋糕
Figure BDA0003603620210000641
Figure BDA0003603620210000651
表3：含有全蛋的对照磅蛋糕
成分 ％w/w
面粉 23.34
糖 23.34
全蛋 23.34
无盐黄油 23.34
酸奶油 5.19
发酵粉 1.25
香草精 0.38
粗盐 0.21
合计 100.00
表4：含有rOVA+马铃薯淀粉+黄原胶的蛋糕
Figure BDA0003603620210000652
Figure BDA0003603620210000661
对于每种食谱，将面糊在325℉的温度下烘焙，直到烤至把牙签插入蛋糕中间，取出来时牙签是干净的。
表5：在磅蛋糕组合物中使用rOVA的结果
Figure BDA0003603620210000662
使用Brookfield CT3质地分析仪(1500g称重传感器)测量质地特征，如粘结性、回弹性、硬度、咀嚼性和弹性。在质地性能和蛋糕高度方面，对照含蛋蛋糕和用rOVA制作的蛋糕之间未观察到显著性差异。其感官性能与用全蛋制作的对照蛋糕相当。
磅蛋糕中的rOVA表现出在烘焙物以及其他食物产品和成分中多种实用的功能特征。结果如图2所示。
表6：由磅蛋糕中的rOVA提供的功能特征
功能 证据
起泡性 形成气室，在屑状结构中很明显(剖面照片)
搅打性 在混合面糊的过程中混入空气，这从屑状结构中的气室可以明显看出
胶凝作用 加热后蛋白质凝固。形成蛋糕的结构。
粘合性 与其他成分粘合，赋予蛋糕强度和结构，这从质地和感官测量明显看出。
弹性 质地测量
纹理化 烘焙时提供结构，由质地性能证明：咀嚼性、硬度、回弹性、粘结性。
实施例3：rOVA在蛋白酥饼中的应用
本实施例检验了在不使用塔塔粉的情况下，在食谱中使用rOVA制作蛋白酥饼的可行性。
材料：rOVA(不做任何处理，pH：4.12)、nOVA(不做任何处理，pH：6.06)、新鲜蛋清(不做任何处理，pH：9)、黄原胶、十二烷基硫酸钠(SLS)、塔塔粉、砂糖、香料。
仪器设备：厨宝(Kitchen Aid)、Classic Plus搅拌机、Breville BOV800XL智能电烤箱。
方法：在冷藏温度下小心地将蛋清与蛋黄分离，然后在搅打之前让蛋清达到室温。蛋清用于制作对照蛋白酥饼样品。nOVA或rOVA用于制作测试样品。将蛋清或nOVA或rOVA溶液(10％的溶液)转移到搅拌碗中，以中速搅打30秒(以获得均相溶液)，然后添加塔塔粉(仅适用于蛋清)，并以高速混合直至形成湿性发泡。在不断搅拌的同时，逐渐添加糖，并在每次添加后以高速搅拌，直到糖完全溶解。继续混合，直到形成有光泽的坚实的峰，最后添加香料。将松软的蛋白酥饼混合物倒入平底锅中。将烤箱预热到250°F，并将蛋白酥饼烘焙50分钟(或者直到内部温度达到160°F)。冷却后，将蛋白酥饼储存在密封容器中。
使用rOVA的示例性蛋白酥饼食谱可以包括5-10％的rOVA、约26-32％的糖、调味剂(例如1-4％)、约59-64％的水、约0.01-0.5％的黄原胶、约0.01-0.1％的十二烷基硫酸钠(均为w/w)。如下所示，构建了一个此类示例性食谱，以及含新鲜蛋清、或天然OVA或rOVA的对比食谱：
表7：食谱
Figure BDA0003603620210000681
表8：蛋白酥饼食谱的结果
蛋清蛋白酥皮 nOVA蛋白酥饼 rOVA蛋白酥饼
重量损耗％ *51±1b 60±14.6a 40±4.5c
体积(ml) 6.9±1.94a 7.82±1.5a 8.05±2.16a
密度(g/ml) 0.1±0.06a 0.07±0.01ab 0.06±0.01b
1/密度 9.14 13.78 16.65
膨松度 100 150.5 182.1
*同一行中带有不同字母的样品有显著性差异(p<0.05；平均值±标准差)。
结论：在含有rOVA的蛋白酥饼中观察到最低的重量损耗。此外，与蛋对照和nOVA相比，rOVA蛋白酥饼显示出最高的膨松度。结果如图3所示。
rOVA在蛋白酥饼中的使用显示了rOVA的多种功能特征。
表9：由蛋白酥饼中的rOVA提供的功能特征
功能 证据
起泡性 与蛋清相比，起泡能力提高
搅打性 易于搅打-与蛋清相比，搅打/搅拌时间缩短
通气性 保留气泡、湿性发泡
膨松性 提供更大的体积和膨松度
胶凝作用 加热后蛋白凝固，为蛋白酥饼样品提供结构
实施例4：起泡能力和起泡稳定性的比较
本实施例评估了rOVA的起泡能力/稳定性和凝固特性，并将其与新鲜全蛋、蛋清和nOVA进行了比较。
材料：现成的蛋、nOVA(Bioceutica)、rOVA
方法：通过将0.7g OVA混合在9.3g蒸馏水中(总体积为10ml)来制作OVA(nOVA或rOVA)的储备溶液。使用塔塔粉(见下表10)来调节pH。使用Dremel在速度3下制作泡沫。记录搅拌的时间。使用加热板在72℃下加热1ml样品10分钟制成凝胶。
表10：对rOVA、nOVA和蛋清组合物的pH调节
Figure BDA0003603620210000691
起泡能力和稳定性的结果如下表11所示。在这一组中，未调节pH。
*起泡能力％＝[初始液体体积(ml)/泡沫体积(ml)]*100
**起泡稳定性％＝[(初始液体体积(ml)-30分钟时的排液体积(ml))/初始液体体积(ml)]*100
表11：起泡能力和稳定性的结果
全蛋 蛋清 nOVA
*起泡能力％ 210±14.1a 300±0b 338.5±2.2c
**起泡稳定性％ 56±2.8b 71±1.4a 59.3±0.92b
搅拌的时间(秒) >120 80 19
pH不做任何处理 7.6 9.1 5.9
结论：在pH 6时，与蛋清相比，nOVA显示出最高的起泡能力；然而，其起泡稳定性低于蛋清。结果如图4所示。
使用塔塔粉调节pH，重复该实验。
表12：使用塔塔粉调节pH后起泡能力和稳定性的结果
Figure BDA0003603620210000701
结论：降低pH后，nOVA的起泡能力仍然高于蛋清。与新鲜蛋清的起泡能力值相比，rOVA的起泡能力值更高。rOVA的搅拌时间是新鲜蛋清所需时间的一半。结果如图5所示。
实施例5：重组鸡卵清蛋白表达菌株的制备
表达构建体：构建了七个表达盒，用于在巴斯德毕赤酵母中表达原鸡OVA(SEQ IDNO:2)。
表13：感兴趣的表达盒
Figure BDA0003603620210000711
构建前三个盒用于表达鸡OVA，其包含与编码分泌信号序列的核酸在框内融合的鸡OVA的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)；所表达的融合蛋白具有(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列。在三个盒的每一个中，将醇氧化酶1(AOX1)启动子置于分泌信号序列的上游，并将法夫驹形氏酵母AOX1转录终止子置于OVA编码序列的下游。这些盒被标记为GgOVA-A1、GgOVA-A2和GgOVA-A3，并组合成第一质粒。
第四个盒包括鸡OVA编码序列(其编码SEQ ID NO:2)，该序列与编码分泌信号序列的核酸在框内融合(从而编码SEQ ID NO:1)，且将二羟基丙酮合酶(DAS2)启动子置于分泌信号序列的上游，并将法夫驹形氏酵母AOX1转录终止子置于OVA编码序列的下游。该构建体被标记为GgOVA-D1。
第五和第六个盒包括该鸡OVA编码序列(其编码SEQ ID NO:2)，该序列与编码分泌信号序列的核酸在框内融合(从而编码SEQ ID NO:1)，且将甲醛脱氢酶(FLD)启动子置于分泌信号序列的上游，将法夫驹形氏酵母AOX1转录终止子置于OVA编码序列的下游。这些盒被标记为GgOVA-F1和GgOVA-F2，并在第二质粒中与GgOVA-D1组合。
第七个盒包括置于辅助因子蛋白HAC1编码序列上游的过氧化物酶体生物发生(PEX11)启动子和置于辅助因子序列下游的法夫驹形氏酵母AOX1转录终止子。该盒被标记为HF-1，并被转化入第三质粒中。
将这三个质粒逐步转化到巴斯德毕赤酵母的背景菌株中。基因组测序证实了表达构建体的整合，并且每个构建体的拷贝数如下表14所示。
表14：菌株基因组构成
Figure BDA0003603620210000721
实施例6：鸭和鸵鸟的重组卵清蛋白表达菌株的制备
表达构建体：创建了一个用于表达绿头鸭(鸭)OVA的盒和一个用于表达非洲鸵鸟(鸵鸟)OVA的盒，以用于在巴斯德毕赤酵母中表达。
表15：感兴趣的表达盒
Figure BDA0003603620210000731
创建了一个用于表达鸵鸟OVA的表达盒。编码非洲鸵鸟OVA(SEQ ID NO:71)的核酸与编码分泌信号序列的核酸在框内融合(从而编码SEQ ID NO:72)。鸵鸟构建体包括置于分泌信号序列上游的醇氧化酶1(AOX1)启动子和置于OVA序列下游的法夫驹形氏酵母AOX1转录终止子。这个被称为ScOVA的表达盒被转化到巴斯德毕赤酵母中。通过基因组测序证实了四个拷贝的鸵鸟OVA构建体的成功整合。参见表15。
创建了一个用于表达鸭OVA的表达盒。编码绿头鸭OVA(SEQ ID NO:73)的核酸与编码分泌信号序列的核酸在框内融合(从而编码SEQ ID NO:74)。鸭表达盒包括置于分泌信号序列上游的醇氧化酶1(AOX1)启动子和置于OVA序列下游的法夫驹形氏酵母AOX1转录终止子。这个被称为ApdOVA的表达盒被转化到巴斯德毕赤酵母中。通过基因组测序证实了两个拷贝的鸭OVA构建体的成功整合。参见表16。
表16：菌株基因组构成
菌株 盒 整合的拷贝
鸭OVA ApdOVA 2
鸵鸟OVA ScOVA 4
实施例7：rOVA的发酵和产生
发酵：用于发酵重组OVA(rOVA)的菌株均在环境条件下的生物反应器中培养。用于发酵工艺的种子培养开始于含有液态生长液的摇瓶的接种。将接种后的摇瓶置于摇床中，之后将生长的巴斯德毕赤酵母转移到生产规模的反应器中。
为了扩增产物，将rOVA巴斯德毕赤酵母种菌的种子管从冷冻库中取出，并在室温下解冻。解冻的种子管中的内容物用于接种振荡烧瓶中的液态种子培养基，将其在30℃置于振荡培养箱中生长。然后将这些种子培养瓶转移到一系列越来越大的种子发酵罐(数量因规模而异)并在其中生长，种子发酵罐中含有基础盐培养基、微量金属和葡萄糖。种子反应器中的温度控制在30℃，pH控制在5，并且溶解氧(DO)控制在30％。通过进料氢氧化氨来维持pH，氢氧化氨也作为氮源。一旦达到足够的细胞量，就将生长的rOVA巴斯德毕赤酵母接种到含有基础盐培养基、微量金属和葡萄糖的生产规模的反应器中。
与种子罐中一样，整个过程中培养物也控制在30℃、pH 5和30％的DO下。同样，通过进料氢氧化氨来维持pH。在最初的分批葡萄糖阶段，让培养物消耗所有的葡萄糖和随后产生的乙醇。一旦达到目标细胞密度，并且确认葡萄糖和乙醇浓度为零，就开始葡萄糖流加培养生长阶段。在此阶段，进料葡萄糖，直到培养物达到目标细胞密度。以限制性速率进料葡萄糖，以防止乙醇在非零葡萄糖浓度的情况下积聚。在最终的诱导阶段，向培养物中共进料葡萄糖和甲醇，诱导其经由pAOX启动子产生rOVA。以产生所需生长速度的量进料葡萄糖，进料甲醇以维持1％的甲醇浓度，以确保持续诱导表达。在整个发酵过程中定期取样以分析特定的工艺参数(例如，细胞密度、葡萄糖/甲醇浓度、产物滴度和质量)。经过指定量的发酵时间后，收集分泌的rOVA并转移用于下游加工。
将含有分泌的rOVA的发酵液在12,000rpm下进行离心。利用微孔过滤对上清液进行澄清。为了浓缩蛋白质并去除多余的水，在室温下使用超滤。使用适当尺寸的过滤器来保留目标rOVA，而小于rOVA的化合物、盐类和水则通过过滤器。为了降低层析制备过程中的最终盐含量和电导率，将浓缩的rOVA截留物在pH 3.5进行透析，直到材料的最终电导率为1.7mS/cm。大部分纯化是在pH 3.5使用阳离子交换层析完成的。使用含有高盐浓度氯化钠的柠檬酸盐缓冲液从树脂上洗脱结合的rOVA。为了去除过量的盐类，对洗脱液进行最后透析，以得到含有约5-10％蛋白质和85-95％水的最终蛋白质溶液。将最终溶液通过0.2um生物负荷过滤器进行灭菌。在适当的温度下，用喷雾干燥器/冻干机蒸发水分，以产生含有约80％蛋白质的最终粉状物。
实施例8：可溶性rOVA的制备
在本实施例中，疏水性重组鸡rOVA被溶解，并通过0.2μm过滤器。
重组rOVA在pH 3.5通过离子交换层析对被纯化，并且被发现是不溶性的。向溶液中添加氢氧化钠，以将pH改变为12.5，并溶解rOVA。将pH 12.5的rOVA溶液通过0.2μm过滤器。过滤后，使用盐酸将pH恢复至6.5，并对rOVA进行喷雾干燥或冻干。然后在下面的实施例中使用这种干燥的鸡rOVA。
实施例9：原鸡(Gallus gallus)rOVA的糖基化
在本实施例中，分析毕赤酵母分泌的rOVA的糖基化模式。
天然卵清蛋白(nOVA)有两个潜在的N-连接糖基化位点(图1A)。在蛋清中发现位于Asn-292的糖基化的单一位点。MALDI-TOF分析表明，天然OVA上的典型多糖被组织为(Man)5(GlcNAc)5(Gal)1(图1A)(Harvey等人,2000)。rOVA上的多糖分析示出了典型的糖基化模式，如图1B所示。
来自上述实施例的毕赤酵母分泌的鸡rOVA通过凝胶电泳迁移进行分析，并以三种不同的形式进行观察(三个白色箭头指向下面“阳性”泳道中的rOVA：a)无糖基化、b)单糖基化和c)二糖基化)。使用内糖苷酶(endoglycanase)EndoH或PNGaseF裂解来自成熟rOVA蛋清中的单糖基化和二糖基化的糖基链。使用了“变性”或“非变性”去糖基化方案(如NEB目录中所述)。绿色箭头表示外源性EndoH，而紫色箭头表示添加到体外反应的外源性PNGaseF(图6A)。
使用质谱法对毕赤酵母分泌的鸡rOVA进行标准分析。发现有五种形式的N-连接多糖(ManGlcNAc)：Man9(～40％)、Man10(～47％)或Man11(～13％)型N-多糖结构的高甘露糖型多糖(图6B)。
实施例10：不同物种rOVA起泡性能的比较
在本实施例中，对鸡rOVA、鸭rOVA和鸵鸟rOVA的起泡能力和泡持性性能进行了评估。
使用类似于实施例5至7中阐述的方法产生、纯化并冷冻干燥来自鸵鸟和鸭的rOVA。鸵鸟rOVA和鸭rOVA保持在接近用于纯化的酸性pH。鸡rOVA如实施例5中所述生产，并在去除生物负荷之前在pH 12被溶解，并在如实施例7中所述的干燥之前恢复至pH 6。
将冻干的rOVA样品混入蒸馏水中。然后目测评估rOVA溶液的澄清度和溶解度。将所有样品均与鸡nOVA和鸡rOVA进行比较。
为每种鸵鸟rOVA、鸡rOVA和鸡nOVA，配制了11mL溶液(7％w/v的蛋白质)。由于样品有限的可用性，配制了6mL鸭rOVA溶液(7％w/v的蛋白质)。计算中使用了粉状物的蛋白质百分比，以确定7％溶液所需的量。在验证之前，在微型管中保留每一种溶液1mL，以供以后测试凝胶化。将样品分成5mL试样，以测试起泡能力和稳定性。
将每个5mL的试样吸取入烧杯中，并使用Dremel以速度3进行搅打。在获得硬性发泡后，记录起泡时间以及泡沫的初始体积。通过测量搅打后泡沫的初始体积，并与5mL的初始体积进行比较，确定起泡能力。起泡能力(％)＝(泡沫体积/初始体积)*100。
以10分钟增量测量排液30分钟，以收集起泡稳定性的数据。将30分钟后的排出体积与初始液体体积(5mL)进行比较。起泡稳定性(％)：(初始体积-排出体积)/初始体积*100。
将鸡rOVA和鸵鸟rOVA调节至pH 6，并再次测试以确定pH的影响。
鸡nOVA迅速形成硬性白色泡沫。鸵鸟rOVA在15秒后起泡。鸭rOVA在20秒后起泡。
表17：不同物种中的rOVA的起泡参数
Figure BDA0003603620210000771
表17示出了pH 5.87的鸡nOVA、pH 6.49和pH 6.08的鸡rOVA、pH 3.7和pH 5.73的鸵鸟rOVA、pH 4.3的鸭rOVA和pH 9.0的蛋清OVA的起泡时间、起泡能力和起泡稳定性的结果。与蛋清相比，来自鸡、鸭和鸵鸟的重组OVA通常具有类似或改善的起泡能力和起泡稳定性，并且这些重组OVA蛋白提供至少pH 3.5至pH 6.5的起泡能力和起泡稳定性。rOVA的起泡能力和起泡稳定性提供了组合物如烘焙组合物中的效用。
实施例11：不同rOVA物种凝胶化的比较
在本实施例中，对鸡、鸭和鸵鸟rOVA蛋白的凝胶化性能进行了评估。凝胶化性能在诸如烹饪的蛋组合物的应用中提供了效用。
每一种OVA溶液都保留1mL，以供测试凝胶化。在实施例10中的Dremel程序和起泡测试完成后，从排出的液体(含有OVA)中吸取另外1mL样品，并移液到另一微型管中。在起泡之前和之后，将收集到的两个级分置于水浴中，并加热至72℃保持10分钟。观察样品的凝胶形成。
图7示出了pH 5.87的鸡nOVA、pH 6.49和pH 6.08的鸡rOVA、pH 3.7和pH 5.73的鸵鸟rOVA、pH 4.3的鸭rOVA和pH 9.0的蛋清OVA在起泡前后的凝胶化结果。与鸡rOVA相比，鸭rOVA显示出更好的凝胶化特性。鸭rOVA具有接近于天然蛋清的凝胶化功能。
这些数据表明，上文公开的重组OVA的有利性能(参见实施例10)也可以通过来自其他物种的重组OVA获得。
实施例12：rOVA溶液起泡性的比较
在本实施例中，将rOVA(鸡)溶液与新鲜蛋清进行比较，并评估起泡能力和泡持性性能。
将冻干的样品混入不同浓度和pH的水溶液(蒸馏水)中。然后目测评估溶液的澄清度和溶解度，以确定起泡能力和泡持性。
分别配制4％rOVA、7％rOVA、新鲜蛋清(12％蛋白质)和12％rOVA的蛋白溶液。计算中使用了粉状物的蛋白质百分比，以确定每种溶液所需的量。在验证之前，在微型管中保留每一种溶液1mL，以供以后测试凝胶化。将样品分成5mL试样，以测试起泡能力和稳定性。
将每个5mL的试样吸取入烧杯中，并使用Dremel以速度3进行搅打。在获得硬性发泡后，记录起泡时间以及泡沫的初始体积。通过测量搅打后泡沫的初始体积并与5mL的初始体积进行比较，来确定起泡能力。起泡能力(％)＝(泡沫体积/初始体积)*100。
在30分钟内以10分钟增量来测量排液，以收集起泡稳定性的数据。将30分钟后排出体积与初始液体体积(5mL)进行比较。起泡稳定性(％)：(初始体积-排出体积)/初始体积*100。
表18：鸡rOVA的起泡性功能
Figure BDA0003603620210000791
4％、7％和12％的rOVA具有更大的起泡能力、更高的起泡稳定性，并且比新鲜蛋清更快形成泡沫。
实施例13：rOVA的褐变和光泽性能
在本实施例中，为了确定rOVA在面包应用中的功能，评估了褐变和光泽的成膜性能。根据面包的视觉(感官)特性来评估rOVA的成膜功能。
烘焙说明：在一个小碗中将酵母、糖和温水混合，静置五分钟。将面粉混合到酵母溶液中(30秒)，直到形成紧实的面团(以速度3混合2分钟)。将面团放在撒有面粉的案板上揉捏，放入涂过油的碗中，并在80°F下发酵45分钟。再次揉捏面团，将其塑造成25g的迷你面包块，并放入抹了油的平底锅中。覆盖迷你面包块，并让其在室温下发酵30分钟。将量为0.75g的适当洗涤液涂在面团球的顶部。将迷你面包块在350°F下烘烤8分钟或直到变成淡棕色。在4分钟时，调换面包块在烤箱内的位置，以实现所有样品的均匀烘烤。
下表19列出了对照面包和其他样品中使用的成分及其比例的表。
表19：面包成分
成分 ％
DI水 41.77
砂糖 2.94
面包酵母 1
中筋面粉 53.62
盐 0.67
合计 100.00
用于感兴趣的蛋白质的制剂如表20所示。
表20：洗涤液制剂中使用的成分：
蛋清粉 rOVA
成分 ％ ％
DI水 90.67 91.30
成膜剂 9.33 8.7
色度测定：使用Colorgrab应用程序(Loomatix)分析各个样品图片的RGB光谱中的颜色数据。使用从面包表面中心截取的2×2cm的横截面来生成样品值。然后使用在线软件www.colormine.org将RGB数据转换成CIELAB系统。CIELAB模型是色彩空间系统，用3个值表示颜色：L*表示从黑色(0)至白色(100)的亮度，a*表示从绿色(-)至红色(+)，b*表示从蓝色(-)至黄色(+)。
表21：烘焙后的面包的CIELAB结果：
L* a* b*
阴性对照 63.669 1.10972 25.4527
全蛋 62.255 8.39894 45.57611
商业化蛋液代替物 68.349 0.04763 34.7033
8％蛋清蛋白 76.831 2.58977 31.1123
8％rOVA 80.135 3.24212 31.53948
rOVA和蛋清蛋白样品具有较高的L*值，表明更高的亮度或光亮度。对照(无蛋液)、商业化蛋液代替物和蛋清蛋白样品具有较低的a*值，表明与全蛋和rOVA样品相比具有更低的红色或褐色。8％蛋清蛋白和rOVA样品还具有类似的b*值，表明与其他样品相比具有类似的黄色色调。
目视检查：对照样品看起来暗淡、发皱，且没有光泽。含有全蛋的样品具有良好的褐变、很好的光泽和光滑的表面。商业化蛋液代替物样品具有光滑的表面、轻微的光泽，但没有褐变。nOVA样品具有良好的褐变、光滑的表皮，但缺乏光亮/光泽。同样，对于rOVA样品，它具有良好的褐变、光滑的表皮，但缺乏光亮/光泽。样品的照片如图8所示。总之，rOVA能够形成与商业化蛋液代替物和nOVA相当的膜。
实施例14：rOVA的粘性性能
在本实施例中，评价了rOVA在面包应用中的粘性功能的成膜性能，从而生成均一的膜以辅助添加浇头(例如，芝麻籽)。
芝麻籽的保留：在蛋糕、面包、百吉饼或其他烘焙物上保留任何浇头都是蛋液的预期结果。使用芝麻籽来评估烘焙后每种成膜剂的浇头保留功能。
按照实施例13来制备面团球和感兴趣的蛋白质。在应用洗涤液后且在烘焙前，在每个面团球上施用十粒芝麻籽。这些芝麻籽的保留是根据烘焙后粘在面包上的芝麻籽量来计算的。
获得了以下结果：不含蛋液的对照样品对芝麻籽没有粘合能力，并且烘焙后没有芝麻籽保留在表面上。所有其他成膜剂在烘焙后都保留了所有10粒芝麻籽，表明浇头的保留率为100％。
表22：芝麻籽的保留水平：
Figure BDA0003603620210000811
实施例15：组合的蛋白rOVA乳状液
在本实施例中，在沙拉酱应用中观察重组蛋白单独和组合使用的乳化功能。
下表23列出了对照调料和其他样品中使用的成分及其比例。
表23：成分列表
Figure BDA0003603620210000821
在混合器中混合水、醋和感兴趣的蛋白质30秒。在30秒内逐渐添加油，并混合另一2.5分钟。制备不含醋的样品，以测试蛋白质在中性pH的乳化能力。使用1N的氢氧化钠调节溶液的pH。在环境温度，使用L5M-A匀浆器(Silverson)方孔剪切头混合器，以4000rpm将乳状液均质化9分钟。
将所有乳状液样品转移到玻璃管中，用塑料盖密封，并在4℃或环境温度下储存3天。通过目视监测随储存时间变化的位于下相的可见乳清分离的高度来评价样品的稳定性。在环境和冷藏条件下，监测物理稳定性3天。乳状液的稳定性表示为：乳状液分层指数(CI)＝(Ht/H0)*100。其中(H0)代表初始乳状液高度，并且(Ht)代表可见乳清分离层的高度。
表25中列出了沙拉酱样品中使用的对照样品和其他含有感兴趣的特定蛋白质的成分及其比例。
表24：成分列表
Figure BDA0003603620210000831
表25：乳状液分层指数
Figure BDA0003603620210000832
酸性pH结果：第0天，除了阴性对照，所有样品都显示出良好的乳化性能。此后，将样品储存在环境温度或冷藏温度下，以监测稳定性。在两种储存条件下，含有蛋清蛋白(EWP)具有呈淡黄色的样品外观，并且第1天时出现分离。在两种储存条件下，对照样品在第1天时立即分离。8％的nOVA在第1天时也表现出乳状液破乳，然而，重组OVA表现出良好的乳状液性能，有仅最小的明显分离。该乳状液直到第3天都保持同等稳定，且未观察到任何进一步的分离。总体而言，8％rOVA的表现显著优于8％的nOVA。rOVA还表现出比EWP更好的乳状液稳定性。样品的照片如图9A所示。
中性pH结果：在第0天和第3天时，rOVA的乳状液稳定性与蛋清蛋白相当。无论是rOVA还是蛋清蛋白都不能在冷藏状态或环境温度下保持乳状液稳定性超过三天。样品的照片如图9B所示。
实施例16：起泡功能
在本实施例中，在含酒精的饮料(例如，包括起泡剂的威士忌酸酒)中观察了rOVA的起泡功能。
波旁威士忌、新鲜柠檬汁、单糖浆和感兴趣的蛋白质在鸡尾酒调酒器中被混合，并摇晃15秒。向鸡尾酒调酒器中添加冰块，并将混合物摇动另一15秒。摇匀的混合物被倒入玻璃杯中并被观察。
制剂：对照制剂包括天然蛋清。阴性制剂是在没有任何蛋清的情况下制备的。
表26：成分和制剂的列表
成分 盎司 mL
波旁威士忌 2 59
新鲜柠檬汁 0.75 22.125
单糖浆 0.5 14.75
蛋清 0.5 14.75
合计 3.75 110.625
使用感兴趣的蛋白质替代天然蛋清蛋白，并使用以下制剂：
表27：蛋清制剂
成分 7％rOVA 12％rOVA
rOVA 8.40 14.41
水 91.60 85.59
合计 100 100
将rOVA溶液的pH调节至pH 6(用1M NaOH)，以提供最佳的起泡表现。
原始配方中使用了0.5盎司蛋清，并且重组蛋白测试中也使用了相同比例。7％和12％的rOVA起泡良好，但在两个水平之间未观察到显著性差异。
用样品制备的手工鸡尾酒的照片如图10所示。
实施例17：汉堡粘合性
在本实施例中，使用质地分析来观察用rOVA和其他粘合剂制成的生的和熟的纯素汉堡的硬度属性以及粘结性、弹性和咀嚼性。
本实施例的目的是评估rOVA的粘合功能。对诸如外观(汉堡粘合在一起的程度)、质地方面(胡如粘结性、弹性、咀嚼性和硬度)的参数进行评估，并与蛋清、nOVA和商用非蛋白粘合剂进行比较，。
材料：干基成分：挤压大豆蛋白1(Arcon T U172(158172))、挤压大豆蛋白2(ArconT Caramel Crumble 240(158225))、挤压大豆蛋白3(Arcon T U-118(158118))、感兴趣的粘合剂/蛋白质。湿成分：芥花油、椰子油、水。待测试的感兴趣的粘合剂：天然蛋清蛋白(“NEW”)、甲基纤维素(“MC”)、nOVA 90％蛋白质含量、rOVA(鸡)92％蛋白含量。
混合：将挤压大豆蛋白1与1/3量的水混合2.5分钟。将剩余的挤压样品和水与之前的混合物混合另一7.5分钟。共混物在冰箱中冷却10分钟。添加并混合粘合剂30秒。添加芥花油和椰子油共混物，并混合30秒。混合物在冰箱中被冷却5分钟，然后被模制成5g的汉堡形状并被冷冻。
烹制：冷冻汉堡样品在冰箱中解冻至4℃的内部温度。将样品在设定为350°F的煎锅上烹制5-6分钟，直到内部温度达到165°F。
制剂：下表28中列出了对照样品和其他含有感兴趣的特定蛋白质的实验汉堡样品中使用的成分及其比例的表。
表28：成分列表
对照-甲基纤维素 天然蛋清 nOVA rOVA
成分 ％ ％ ％ ％
挤压大豆蛋白1 5 5 5 5
挤压大豆蛋白2 13 13 13 13
挤压大豆蛋白3 8 8 8 8
粘合剂 0.7 25 5 5
芥花油 12 12 12 12
椰子油 6.5 6.5 6.5 6.5
水 54.8 30.5 50.5 50.5
合计 100.00 100.00 100.00 100.00
质地分析：进行质地分析，以分析纯素汉堡相对于对照的属性。质地分析用于量化硬度属性以及粘结性、弹性和咀嚼性。
使用CT3 Brookfield质地分析仪(1500g称重传感器)测量纯素汉堡的质地性能。使用的测试参数列于表29。
表29：测试参数用于三点弯曲测试，以使用CT3 Brookfield质地分析仪测量纯素汉堡的硬度
Figure BDA0003603620210000861
冷冻样品在冰箱中解冻至4℃的内部温度，并测试生粘合性。还解冻的样品被烹制，并用于测量烹熟后的粘合值。
生粘合性结果：在硬度方面，rOVA显著高于甲基纤维素和天然蛋清，并且nOVA和rOVA之间未观察到差异。所有样品在粘结性和弹性方面都相似。与甲基纤维素和天然蛋清相比，rOVA表现出明显更大的咀嚼性。结果如表30所示。
表30：在硬度、粘结性、弹性和咀嚼性方面，生粘合性的质地(TPA)结果。在特定属性内不共享相同字母的数据彼此之间存在显著性差异(p<0.05)。结果是n＝3的情况下的平均值。
表30：纯素汉堡中生粘合性的质地(TPA)结果
Figure BDA0003603620210000871
烹熟后的粘合性的结果：与甲基纤维素和天然蛋清相比，rOVA表现出明显更高的硬度值。在粘结性方面，所有样品彼此都相似。对于弹性，甲基纤维素样品显示出显著低于天然蛋清、nOVA和rOVA的值。nOVA和rOVA样品都表现出比甲基纤维素更高的咀嚼性值。结果如表31所示。
表31：在硬度、粘结性、弹性和咀嚼性方面，烹熟后的粘合性的质地(TPA)结果。在特定属性内不共享相同字母的数据彼此之间存在显著性差异(p<0.05)。结果是在n＝3的情况下的平均值。
表31：纯素汉堡中烹熟后的粘合性的质地(TPA)结果
Figure BDA0003603620210000881
实施例18：蛋清馅饼
在本实施例中，评估了在蛋清馅饼应用中包含天然和重组蛋白OVA作为熟蛋系统示例的适用性。评估了诸如当用OVA替代新鲜蛋清时的营养价值以及对质地(就性能而言)和外观的影响的参数。
表32：用于制作蛋清馅饼的成分的列表
Figure BDA0003603620210000882
混合：将表32中除海藻酸钠之外的干成分混合在一起。在水中分别混合木薯糖浆、海藻酸钠和柠檬黄着色剂。将所有成分与油混合并进行旋涡混合直至所有成分被溶解。让混合物静置10分钟使其达到平衡。
烹制：使用煎锅来烹制样品。将煎锅设定在250°F，并使用直径为1/2英寸的环形模具来烹制样品。用油喷洒模具，然后将混合物倒入模具中。向模具中添加1/2的冰块以产生蒸汽。让馅饼进行烹制，并添加另外的冰块。将馅饼烹制5分钟，然后打开盖子。将带有烹熟样品的环形模具放入上菜盘中。
使用CT3 Brookfield质地分析仪(1500g称重传感器)测量蛋清馅饼的质地性能。采用TPA压缩测试对蛋清馅饼进行压缩并测量其硬度。分析每组中的四个样品，以进行比较。使用了以下测试参数：
表33：用于TPA测试以测量馅饼的质地性能的测试参数：
Figure BDA0003603620210000891
结果：
表34：质地分析仪结果
Figure BDA0003603620210000892
对于给定属性，不共享相同字母的数据彼此之间存在显著性差异(p<0.05)
结果：在硬度、粘附性、脆性、粘结性和胶粘性方面，在统计学上所有样品(天然蛋清、nOVA和rOVA)是相似的。对于咀嚼性，天然蛋清馅饼分别与nOVA和rOVA相似，然而在统计学上nOVA和rOVA互相之间存在差异。与其他样品相比，nOVA具有更高的咀嚼性值。总的来说，天然和重组形式的OVA蛋清均为非动物馅饼中的天然蛋清(熟蛋应用)提供了良好的代替物。rOVA液体制剂的粘性比nOVA样品和蛋清样品更稠。结果如图11所示。
实施例19：蛋白酥饼
在本实施例中，评价了与新鲜蛋清相比rOVA在蛋白酥饼食品系统中的功能。
材料：
-rOVA(Lyo 008；不做任何处理，pH：6.7)
-新鲜蛋清(不做任何处理，pH：9)
-糖(C&H糖、纯蔗糖、白砂糖)
-黄原胶-预水化Ticaxan-Tic Gums
-TEC(柠檬酸三乙酯)
-SLS(十二烷基硫酸钠)
-厨宝，Classic Plus搅拌机
-Breville BOV800XL智能电烤箱
方法：在冷藏温度下小心地将蛋清与蛋黄分离，并让蛋清在搅打前达到室温。在室温下，将rOVA粉状物、SLS、黄原胶和TEC在DI水中重构。将混合物以速度5搅打30秒(以获得均相溶液)，然后以速度8混合，直到形成湿性发泡。在不断搅拌的同时，逐渐添加糖，并在每次添加后以高速搅拌，直到糖溶解后再添加下一次。继续混合，直到形成有光泽紧实的峰。将烤箱(Breville BOV800XL智能电烤箱)加热至200°F；烘焙蛋白酥饼70分钟(或直到清淡松脆，但没有褐变)。冷却后，将蛋白酥饼储存在密封容器中。记录每种蛋白质溶液产生干性泡沫的搅打时间。
表35：制剂
Figure BDA0003603620210000911
表36：蛋白酥饼的物理参数
Figure BDA0003603620210000912
*平均值±标准差(n＝6)
结果：在物理参数方面，rOVA产生的蛋白酥饼与新鲜蛋清样品类似。rOVA蛋白酥饼的外观在视觉上优于新鲜蛋清对照组。与新鲜蛋清对照相比，在rOVA蛋白酥饼中脊线更清晰，并且样品更白。结果如图12所示。
实施例20：pH对凝胶化特性的影响
在本实施例中，与新鲜蛋清相比，评价了不同pH条件对rOVA组合物凝胶化特性的影响。
表37：材料：
Figure BDA0003603620210000921
方法：
1-为rOVA和蛋清蛋白分别配制7％蛋清溶液
2-在天然pH的基础上，用1N HCl将溶液的pH调节至pH 3、4、5、6
3-还用微升量的1N和3N氢氧化钠将pH调节至pH 7、8、9、10、11和12的碱性范围
4-所有溶液在85℃下凝胶化5分钟，然后在室温下冷却
5-取出所有凝胶/溶液，目测评估凝胶特性
表38：结果：在进行任何pH调节之前，pH记录如下：
样品 pH值
7％EWP 6.98
7％rOVA 6.82
结果：蛋清蛋白在所有pH值都表现出凝胶性能，而在pH 4-10时形成坚实凝胶。pH11和pH12的EWP和rOVA的溶液均为透明液体，然而，只有EWP胶凝成透明凝胶，而rOVA在pH11和pH 12时仍保持在溶液中。rOVA 7％溶液在pH 6、7、8和9时发生胶凝。在pH 5和更低时，观察到rOVA溶液的粘性显著增加。所有EWP凝胶都有强烈的蛋样气味，而对于rOVA，只有pH9-12的溶液/凝胶有蛋样气味。pH 3.5-8的rOVA没有任何特征性气味性能。EWP和rOVA均在pH 6-9时凝胶化；然而，EWP凝胶比rOVA凝胶更坚固、更结实。总体而言，尽管EWP在更宽的pH值范围内表现出比rOVA更好的凝胶性能，但它带有强烈的蛋样气味。rOVA在pH 6-8的范围内提供凝胶性能，并提供感官中性(例如，没有气味)。在pH 8和9时，rOVA提供了透明的坚实凝胶，这在需要透明视觉外观的实施方案中具有独特的价值定位。
实施例21：蛋白棒
将rOVA用作蛋白棒应用中的蛋白质来源，并与蛋清蛋白和nOVA进行比较。
制备说明：
在小型混合器中，将枣、坚果切碎/混合。将枣、坚果、可可粉和感兴趣的蛋白质添加到搅拌碗中，直到形成均匀的混合物。将混合物分成两等份，其中一份作为未烘焙形式进行测试。另一半在350°F的烤箱中烘烤10分钟。
表39：对照制剂中使用的成分及其比例的列表
成分 含量(％)
枣 78.53
坚果 17.47
可可粉 4
合计 100
对于含有蛋白粉的制剂，降低枣和坚果内含物，但保持枣与坚果的比例在4.5的水平不变。
表40：蛋清蛋白制剂中使用的成分及其比例的列表
Figure BDA0003603620210000941
表41：nOVA制剂中使用的成分及其比例的列表
Figure BDA0003603620210000942
表42：rOVA制剂中使用的成分及其比例的列表
Figure BDA0003603620210000943
质地分析：使用CT3 Brookfield质地分析仪(1500g称重传感器)测量蛋白棒(烘焙和未烘焙)的质地性能。使用三点弯曲测试，断裂、弯曲和测量蛋白棒的硬度。分析一个样品的每种蛋白质内含物水平。使用了以下测试参数：
表43：用于三点弯曲测试以使用CT3 Brookfield质地分析仪测量薄脆饼干的硬度的测试参数
测试类型 破裂测试
探头 TA7刀片
基座夹具 TA-TPB
触发负载 5g
修正负载 30g
测试速度 3mm/s
采样速度 30个点/秒
支撑臂之间的距离 2.5cm
质地性能 硬度(g)
表44：未焙烤的蛋白棒样品的质地分析测试结果：(n＝1)
Figure BDA0003603620210000951
表45：经烘焙的蛋白棒样品的质地分析测试结果：(n＝1)
Figure BDA0003603620210000952
Figure BDA0003603620210000961
对于未烘焙的样品，不含蛋白质的对照样品具有最低的硬度值。对于所有感兴趣的蛋白质(EWP、nOVA和rOVA)，硬度值随着蛋白含量的增加而增加。8％、12％、16％和23％的蛋清蛋白样品具有比nOVA和rOVA更高的硬度值。含有12-23％蛋白内容物的nOVA样品的硬度增加幅度最小。4％、8％、12％和16％的nOVA和rOVA样品硬度相当。然而，23％蛋白内容物的rOVA具有更高的硬度值。
总体而言，烘焙样品的硬度远高于未烘焙样品。对照样品具有最低的硬度。所有具有蛋白质内容物的样品，即使在较低的蛋白质包含率下，也硬得多。TA装置的阈值上限(称重传感器)为1500g。所有烘焙的蛋白质样品都达到了阈值，使得难以识别样品之间的细微差异。无论是未烘焙的还是烘焙的蛋白棒，4％、8％、12％和16％的nOVA和rOVA样品的硬度相当。照片如图13所示。
虽然本文已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员来说明显的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员将会想到许多变化、改变和替换。应当理解，可采用本文所述的本发明的实施方案的各种可替代方案来实践本发明。旨在由所附权利要求限定本发明的范围，并且由其涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同方案。
援引并入
本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。
根据以下具体描述，本公开的另外的方面和优点对于本领域技术人员来说将变得显而易见，在以下具体描述中仅示出和描述了本公开的说明性实施方案。如将会理解的，本公开能够有其他的和不同的实施方案，并且其若干细节能够在各个明显的方面进行修改，所有这些都不背离本公开。相应地，附图和说明书应当被看作本质上是说明性的，而不是限制性的。
序列表
<110> 克莱拉食品公司
<120> 具有功能性能的非动物性蛋白质来源
<130> 49160-717.601
<150> US 62/888,674
<151> 2019-08-19
<160> 75
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 1
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Asp Lys Arg Glu Ala Glu Ala Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser
85 90 95
Met Glu Phe Cys Phe Asp Val Phe Lys Glu Leu Lys Val His His Ala
100 105 110
Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Cys Pro Ile Ala Ile Met Ser Ala Leu Ala
115 120 125
Met Val Tyr Leu Gly Ala Lys Asp Ser Thr Arg Thr Gln Ile Asn Lys
130 135 140
Val Val Arg Phe Asp Lys Leu Pro Gly Phe Gly Asp Ser Ile Glu Ala
145 150 155 160
Gln Cys Gly Thr Ser Val Asn Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu
165 170 175
Asn Gln Ile Thr Lys Pro Asn Asp Val Tyr Ser Phe Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Arg Leu Tyr Ala Glu Glu Arg Tyr Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln
195 200 205
Cys Val Lys Glu Leu Tyr Arg Gly Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln
210 215 220
Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser
225 230 235 240
Gln Thr Asn Gly Ile Ile Arg Asn Val Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp
245 250 255
Ser Gln Thr Ala Met Val Leu Val Asn Ala Ile Val Phe Lys Gly Leu
260 265 270
Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg
275 280 285
Val Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Ile Gly
290 295 300
Leu Phe Arg Val Ala Ser Met Ala Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu
305 310 315 320
Leu Pro Phe Ala Ser Gly Thr Met Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp
325 330 335
Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys
340 345 350
Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys
355 360 365
Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser
370 375 380
Val Leu Met Ala Met Gly Ile Thr Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn
385 390 395 400
Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val
405 410 415
His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly
420 425 430
Ser Ala Glu Ala Gly Val Asp Ala Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg
435 440 445
Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Cys Ile Lys His Ile Ala Thr Asn Ala
450 455 460
Val Leu Phe Phe Gly Arg Cys Val Ser Pro
465 470
<210> 2
<211> 389
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 2
Glu Ala Glu Ala Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Met Glu Phe Cys Phe
1 5 10 15
Asp Val Phe Lys Glu Leu Lys Val His His Ala Asn Glu Asn Ile Phe
20 25 30
Tyr Cys Pro Ile Ala Ile Met Ser Ala Leu Ala Met Val Tyr Leu Gly
35 40 45
Ala Lys Asp Ser Thr Arg Thr Gln Ile Asn Lys Val Val Arg Phe Asp
50 55 60
Lys Leu Pro Gly Phe Gly Asp Ser Ile Glu Ala Gln Cys Gly Thr Ser
65 70 75 80
Val Asn Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu Asn Gln Ile Thr Lys
85 90 95
Pro Asn Asp Val Tyr Ser Phe Ser Leu Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu
100 105 110
Glu Arg Tyr Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Val Lys Glu Leu
115 120 125
Tyr Arg Gly Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln
130 135 140
Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile
145 150 155 160
Ile Arg Asn Val Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp Ser Gln Thr Ala Met
165 170 175
Val Leu Val Asn Ala Ile Val Phe Lys Gly Leu Trp Glu Lys Ala Phe
180 185 190
Lys Asp Glu Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg Val Thr Glu Gln Glu
195 200 205
Ser Lys Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Ile Gly Leu Phe Arg Val Ala
210 215 220
Ser Met Ala Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser
225 230 235 240
Gly Thr Met Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu
245 250 255
Glu Gln Leu Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
260 265 270
Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg
275 280 285
Met Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Met
290 295 300
Gly Ile Thr Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser
305 310 315 320
Ser Ala Glu Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala
325 330 335
Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Ala Glu Ala Gly
340 345 350
Val Asp Ala Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe
355 360 365
Leu Phe Cys Ile Lys His Ile Ala Thr Asn Ala Val Leu Phe Phe Gly
370 375 380
Arg Cys Val Ser Pro
385
<210> 3
<211> 419
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 3
Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Gly Ala Arg Cys Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Met Glu Phe Cys Phe
20 25 30
Asp Val Phe Lys Glu Leu Lys Val His His Ala Asn Glu Asn Ile Phe
35 40 45
Tyr Cys Pro Ile Ala Ile Met Ser Ala Leu Ala Met Val Tyr Leu Gly
50 55 60
Ala Lys Asp Ser Thr Arg Thr Gln Ile Asn Lys Val Val Arg Phe Asp
65 70 75 80
Lys Leu Pro Gly Phe Gly Asp Ser Ile Glu Ala Gln Cys Gly Thr Ser
85 90 95
Val Asn Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu Asn Gln Ile Thr Lys
100 105 110
Pro Asn Asp Val Tyr Ser Phe Ser Leu Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu
115 120 125
Glu Arg Tyr Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Val Lys Glu Leu
130 135 140
Tyr Arg Gly Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln
145 150 155 160
Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile
165 170 175
Ile Arg Asn Val Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp Ser Gln Thr Ala Met
180 185 190
Val Leu Val Asn Ala Ile Val Phe Lys Gly Leu Trp Glu Lys Ala Phe
195 200 205
Lys Asp Glu Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg Val Thr Glu Gln Glu
210 215 220
Ser Lys Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Ile Gly Leu Phe Arg Val Ala
225 230 235 240
Ser Met Ala Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser
245 250 255
Gly Thr Met Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu
260 265 270
Glu Gln Leu Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
275 280 285
Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg
290 295 300
Met Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Met
305 310 315 320
Gly Ile Thr Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser
325 330 335
Ser Ala Glu Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala
340 345 350
Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Ala Glu Ala Gly
355 360 365
Val Asp Ala Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe
370 375 380
Leu Phe Cys Ile Lys His Ile Ala Thr Asn Ala Val Leu Phe Phe Gly
385 390 395 400
Arg Cys Val Ser Pro Leu Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala His His His
405 410 415
His His His
<210> 4
<211> 406
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 4
Met Thr Ser Gly Phe Ala Asn Glu Leu Gly Pro Arg Leu Met Gly Lys
1 5 10 15
Leu Thr Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Met Glu Phe Cys Phe Asp
20 25 30
Val Phe Lys Glu Leu Lys Val His His Ala Asn Glu Asn Ile Phe Tyr
35 40 45
Cys Pro Ile Ala Ile Met Ser Ala Leu Ala Met Val Tyr Leu Gly Ala
50 55 60
Lys Asp Ser Thr Arg Thr Gln Ile Asn Lys Val Val Arg Phe Asp Lys
65 70 75 80
Leu Pro Gly Phe Gly Asp Ser Ile Glu Ala Gln Cys Gly Thr Ser Val
85 90 95
Asn Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu Asn Gln Ile Thr Lys Pro
100 105 110
Asn Asp Val Tyr Ser Phe Ser Leu Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu Glu
115 120 125
Arg Tyr Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Val Lys Glu Leu Tyr
130 135 140
Arg Gly Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala
145 150 155 160
Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile Ile
165 170 175
Arg Asn Val Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp Ser Gln Thr Ala Met Val
180 185 190
Leu Val Asn Ala Ile Val Phe Lys Gly Leu Trp Glu Lys Thr Phe Lys
195 200 205
Asp Glu Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg Val Thr Glu Gln Glu Ser
210 215 220
Lys Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Ile Gly Leu Phe Arg Val Ala Ser
225 230 235 240
Met Ala Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser Gly
245 250 255
Thr Met Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu
260 265 270
Gln Leu Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr Ser
275 280 285
Ser Asn Val Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met
290 295 300
Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Met Gly
305 310 315 320
Ile Thr Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser
325 330 335
Ala Glu Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu
340 345 350
Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Ala Glu Ala Gly Val
355 360 365
Asp Ala Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe Leu
370 375 380
Phe Cys Ile Lys His Ile Ala Thr Asn Ala Val Leu Phe Phe Gly Arg
385 390 395 400
Cys Val Ser Pro Ser Arg
405
<210> 5
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 5
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1 5 10 15
Tyr Val Asn Arg Gln Ile Ala Trp Arg Arg His His Arg Ser Leu Thr
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Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
35 40 45
Gly Ala Arg Cys Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Met Glu Phe Cys Phe
50 55 60
Asp Val Phe Lys Glu Leu Lys Val His His Ala Asn Glu Asn Ile Phe
65 70 75 80
Tyr Cys Pro Ile Ala Ile Met Ser Ala Leu Ala Met Val Tyr Leu Gly
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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165 170 175
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260 265 270
Ser Met Ala Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
Met Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Met
340 345 350
Gly Ile Thr Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser
355 360 365
Ser Ala Glu Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala
370 375 380
Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Ala Glu Ala Gly
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Val Asp Ala Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe
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His His His
450
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<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 6
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1 5 10 15
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35 40 45
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100 105 110
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115 120 125
Gly Leu Glu Ser Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Gly
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Ser Pro
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<211> 386
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
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Ser Pro
385
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 8
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<223> 合成的多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 10
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Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 11
Met Ala Leu Cys Lys Ala Phe His Pro Tyr Ile Phe Ile Val Leu Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
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Ile Glu Thr Asn Ala Ile Leu Leu Phe Gly Arg Cys Val Ser Pro
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<210> 13
<211> 408
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 13
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Gly Ser Ala Glu Ala Gly Val Asp Ala Thr Glu Glu Phe Arg Ala Asp
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His Pro Phe Leu Phe Cys Val Lys His Ile Glu Thr Asn Ala Ile Leu
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Leu Phe Gly Arg Cys Val Ser Pro
405
<210> 14
<211> 383
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 14
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<223> 合成的多肽
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Ser Met Leu Val Met Leu Pro Asp Asp Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu
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290 295 300
Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
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Ser Leu Lys Met Ser Glu Ala Val His Glu Ala Phe Val Glu Ile Tyr
325 330 335
Glu Ala Gly Ser Glu Ala Val Gly Ser Thr Gly Ala Gly Met Glu Val
340 345 350
Thr Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Leu
355 360 365
Ile Lys His Asn Pro Thr Asn Ser Ile Leu Phe Phe Gly Arg Cys Phe
370 375 380
Ser Pro
385
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<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 24
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Lys Glu Leu Lys Val Gln His Val Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<210> 32
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<213> 人工序列
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<223> 合成的多肽
<400> 32
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<210> 33
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<220>
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<400> 33
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Val Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Met Ile Lys Asn
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Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Met Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
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Val Gln Met Met Tyr Gln Ala Gly Ser Phe Lys Val Ala Val Met Ala
210 215 220
Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Glu Phe
225 230 235 240
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<220>
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<213> 人工序列
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
<400> 43
Met Gly Ser Ile Gly Pro Leu Ser Val Glu Phe Cys Cys Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Arg Ile Gln His Pro Arg Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
20 25 30
Val Thr Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Asp
35 40 45
Asn Thr Lys Ala Gln Ile Glu Lys Ala Val His Phe Asp Lys Ile Pro
50 55 60
Gly Phe Gly Glu Ser Ile Glu Ser Gln Cys Gly Thr Ser Leu Ser Ile
65 70 75 80
His Thr Ser Leu Lys Asp Ile Phe Thr Gln Ile Thr Lys Pro Ser Asp
85 90 95
Asn Tyr Thr Val Gly Ile Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu Glu Lys Tyr
100 105 110
Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Ile Lys Glu Leu Tyr Lys Gly
115 120 125
Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Glu Gln Ala Arg Glu
130 135 140
Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Met Ile Lys Asn
145 150 155 160
Ile Leu Gln Pro Ser Ser Val Asn Pro Glu Thr Asp Met Val Leu Val
165 170 175
Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Leu Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
Asp Ile Gln Thr Val Pro Phe Arg Ile Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro
195 200 205
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210 215 220
Ser Glu Lys Ile Arg Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Leu
225 230 235 240
Ser Leu Trp Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
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260 265 270
Lys Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Ile
275 280 285
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Thr Ser Leu Gly Ile Thr
290 295 300
Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
305 310 315 320
Ser Leu Lys Val Ser Ser Ala Phe His Glu Ala Ser Val Glu Ile Tyr
325 330 335
Glu Ala Gly Ser Lys Val Val Gly Ser Thr Gly Ala Glu Val Glu Asp
340 345 350
Thr Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Leu
355 360 365
Ile Lys His Asn Pro Ser Asn Ser Ile Phe Phe Phe Gly Arg Cys Phe
370 375 380
Ser Pro
385
<210> 44
<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 44
Met Gly Ser Ile Gly Thr Ala Ser Ala Glu Phe Cys Phe Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Val His His Val Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
20 25 30
Leu Ser Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Glu
35 40 45
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50 55 60
Gly Leu Gly Glu Ser Met Glu Ser Gln Cys Gly Thr Gly Val Ser Ile
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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Leu Ile Asn Ser Trp Ile Glu Ser Gln Thr Asn Gly Val Ile Lys Asn
145 150 155 160
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165 170 175
Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Met Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
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Asp Thr Gln Glu Val Pro Phe Arg Ile Thr Glu Gln Glu Ser Arg Pro
195 200 205
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Ala Glu Lys Ile Lys Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Glu Leu
225 230 235 240
Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Ser Pro
385
<210> 45
<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 45
Met Gly Ser Ile Gly Ala Val Ser Thr Glu Phe Ser Cys Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Arg Ile His His Val Gln Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
20 25 30
Val Thr Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Ile Tyr Leu Gly Ala Arg Asp
35 40 45
Ser Thr Lys Ala Gln Ile Glu Lys Ala Val His Phe Asp Lys Ile Pro
50 55 60
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65 70 75 80
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Ser Pro
385
<210> 46
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 46
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Thr Glu Phe Cys Phe Asp Val Phe
1 5 10 15
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Gly Leu Glu Ser Ile Ser Phe Gln Thr Ala Ala Tyr Gln Ala Arg Glu
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Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Ile Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
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Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
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355 360 365
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370 375 380
<210> 47
<211> 391
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 47
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Ser Glu Phe Cys Phe Asp Ile Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Val Gln His Val Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
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Leu Ser Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Glu
35 40 45
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65 70 75 80
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115 120 125
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130 135 140
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Gly Arg Ile Lys Asn Ile Leu Gln Pro Gly Ser Val Asp Pro Gln Thr
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260 265 270
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275 280 285
Pro Arg Met Lys Ile Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met
290 295 300
Ala Leu Gly Ile Thr Asp Leu Phe Ser Pro Leu Ala Asn Leu Ser Gly
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Ile Ser Ser Ala Glu Ser Leu Lys Met Ser Glu Ala Ile His Glu Ala
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<211> 383
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 48
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Lys Glu Leu Arg Ile Gln His Ala Arg Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
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Gly Phe Gly Glu Ser Ile Glu Ser Gln Cys Gly Thr Ser Leu Ser Ile
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Gly Leu Glu Pro Ile Ser Phe Gln Thr Ala Ala Glu Gln Ala Arg Glu
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Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile Ile Lys Asn
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Val Gln Met Met Phe Gln Ile Gly Ser Phe Arg Val Ala Glu Ile Ala
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Ser Glu Lys Ile Arg Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Leu
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Ser Leu Trp Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
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275 280 285
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Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
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Ser Glu Glu Phe Arg Val Asp Arg Pro Phe Leu Phe Leu Ile Lys His
355 360 365
Asn Pro Ser Asn Ser Ile Phe Phe Phe Gly Arg Cys Phe Ser Pro
370 375 380
<210> 49
<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 49
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Thr Glu Phe Cys Phe Asp Met Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Val His His Val Asn Glu Asn Ile Ile Tyr Ser Pro
20 25 30
Leu Ser Ile Ile Ser Ile Leu Ser Met Val Phe Leu Gly Ala Arg Glu
35 40 45
Asn Thr Lys Thr Gln Met Glu Lys Val Ile His Phe Asp Lys Ile Thr
50 55 60
Gly Phe Gly Glu Ser Leu Glu Ser Gln Cys Gly Thr Ser Val Ser Val
65 70 75 80
His Ala Ser Leu Lys Asp Ile Leu Ser Glu Ile Thr Lys Pro Ser Asp
85 90 95
Asn Tyr Ser Leu Ser Leu Ala Ser Lys Leu Tyr Ala Glu Glu Thr Tyr
100 105 110
Pro Val Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Ile Lys Glu Leu Tyr Lys Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Thr Val Ser Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu
130 135 140
Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Thr Gln Thr Asn Gly Val Ile Lys Asn
145 150 155 160
Phe Leu Gln Pro Gly Ser Val Asp Pro Gln Thr Glu Met Val Leu Val
165 170 175
Asp Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Thr Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
Asp Thr Gln Glu Val Pro Phe Arg Ile Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro
195 200 205
Val Gln Met Met Tyr Gln Ala Gly Ser Phe Lys Val Ala Thr Val Ala
210 215 220
Ala Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Glu Leu
225 230 235 240
Ser Met Phe Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
Glu Thr Thr Ile Ser Ile Glu Lys Leu Ser Glu Trp Thr Ser Ser Asn
260 265 270
Met Met Glu Asp Arg Lys Met Lys Val Tyr Leu Pro His Met Lys Ile
275 280 285
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Val Ala Leu Gly Met Thr
290 295 300
Asp Leu Phe Ser Pro Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Thr Ala Gln
305 310 315 320
Thr Leu Lys Met Ser Glu Ala Ile His Gly Ala Tyr Val Glu Ile Tyr
325 330 335
Glu Ala Gly Ser Glu Met Ala Thr Ser Thr Gly Val Leu Val Glu Ala
340 345 350
Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Val Asp His Pro Phe Leu Phe Leu
355 360 365
Ile Lys His Asn Pro Ser Asn Ser Ile Leu Phe Phe Gly Arg Cys Ile
370 375 380
Phe Pro
385
<210> 50
<211> 392
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 50
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Thr Glu Phe Cys Phe Asp Met Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Val His His Val Asn Glu Asn Ile Ile Tyr Ser Pro
20 25 30
Leu Ser Ile Ile Ser Ile Leu Ser Met Val Phe Leu Gly Ala Arg Glu
35 40 45
Asn Thr Lys Thr Gln Met Glu Lys Val Ile His Phe Asp Lys Ile Thr
50 55 60
Gly Phe Gly Glu Ser Leu Glu Ser Gln Cys Gly Thr Ser Val Ser Val
65 70 75 80
His Ala Ser Leu Lys Asp Ile Leu Ser Glu Ile Thr Lys Pro Ser Asp
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100 105 110
Pro Val Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Ile Lys Glu Leu Tyr Lys Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Thr Val Ser Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu
130 135 140
Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Thr Gln Thr Asn Gly Val Ile Lys Asn
145 150 155 160
Phe Leu Gln Pro Gly Ser Val Asp Pro Gln Thr Glu Met Val Leu Val
165 170 175
Asp Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Thr Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
Asp Thr Gln Glu Val Pro Phe Arg Ile Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro
195 200 205
Val Gln Met Met Tyr Gln Ala Gly Ser Phe Lys Val Ala Thr Val Ala
210 215 220
Ala Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Glu Leu
225 230 235 240
Ser Met Phe Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
Glu Thr Thr Ile Ser Ile Glu Lys Leu Ser Glu Trp Thr Ser Ser Asn
260 265 270
Met Met Glu Asp Arg Lys Met Lys Val Tyr Leu Pro His Met Lys Ile
275 280 285
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Asp Leu Phe Ser Pro Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Thr Ala Gln
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325 330 335
Glu Ala Gly Ser Glu Met Ala Thr Ser Thr Gly Val Leu Val Glu Ala
340 345 350
Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Val Asp His Pro Phe Leu Phe Leu
355 360 365
Ile Lys His Asn Pro Ser Asn Ser Ile Leu Phe Phe Gly Arg Cys Ile
370 375 380
Phe Pro His His His His His His
385 390
<210> 51
<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 51
Met Gly Ser Ile Gly Pro Leu Ser Val Glu Phe Cys Cys Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Arg Ile Gln His Ala Arg Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
20 25 30
Val Thr Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Asp
35 40 45
Asn Thr Lys Ala Gln Ile Glu Lys Ala Val His Phe Asp Lys Ile Pro
50 55 60
Gly Phe Gly Glu Ser Ile Glu Ser Gln Cys Gly Thr Ser Leu Ser Ile
65 70 75 80
His Thr Ser Leu Lys Asp Ile Phe Thr Gln Ile Thr Lys Pro Ser Asp
85 90 95
Asn Tyr Thr Val Gly Ile Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu Glu Lys Tyr
100 105 110
Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Ile Lys Glu Leu Tyr Lys Gly
115 120 125
Gly Leu Glu Pro Ile Ser Phe Gln Thr Ala Ala Glu Gln Ala Arg Glu
130 135 140
Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Met Ile Lys Asn
145 150 155 160
Ile Leu Gln Pro Ser Ala Val Asn Pro Glu Thr Asp Met Val Leu Val
165 170 175
Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Leu Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Val Pro Phe Arg Ile Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro
195 200 205
Val Gln Met Met Phe Gln Ile Gly Ser Phe Arg Val Ala Glu Ile Thr
210 215 220
Ser Glu Lys Ile Arg Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Leu
225 230 235 240
Ser Leu Trp Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
Glu Thr Ala Ile Thr Phe Glu Asn Leu Lys Glu Trp Thr Ser Ser Thr
260 265 270
Lys Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Ile
275 280 285
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Thr Ser Leu Gly Ile Thr
290 295 300
Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
305 310 315 320
Arg Leu Lys Val Ser Ser Ala Phe His Glu Ala Ser Met Glu Ile Tyr
325 330 335
Glu Ala Gly Ser Lys Val Val Gly Ser Thr Gly Ala Gly Val Asp Asp
340 345 350
Thr Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Val Asp Arg Pro Phe Leu Phe Leu
355 360 365
Ile Lys His Asn Pro Ser Asn Ser Ile Phe Phe Phe Gly Arg Cys Phe
370 375 380
Ser Pro
385
<210> 52
<211> 395
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<220>
<221> misc_特征
<222> (99)..(99)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_特征
<222> (233)..(233)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_特征
<222> (341)..(341)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_特征
<222> (379)..(379)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 52
Met Glu Asp Gln Arg Gly Asn Thr Gly Phe Thr Met Gly Ser Ile Gly
1 5 10 15
Ala Ala Ser Thr Glu Phe Cys Ile Asp Val Phe Arg Glu Leu Arg Val
20 25 30
Gln His Val Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro Leu Thr Ile Ile Ser
35 40 45
Ala Leu Ser Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Glu Asn Thr Arg Ala Gln
50 55 60
Ile Asp Gln Val Val His Phe Asp Lys Ile Ala Gly Phe Gly Asp Thr
65 70 75 80
Val Glu Ser Gln Cys Gly Ser Ser Pro Ser Val His Asn Ser Leu Lys
85 90 95
Thr Val Xaa Ala Gln Ile Thr Gln Pro Arg Asp Asn Tyr Ser Leu Asn
100 105 110
Leu Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu Glu Ser Tyr Pro Ile Leu Pro Glu
115 120 125
Tyr Leu Gln Cys Val Lys Glu Leu Tyr Asn Gly Gly Leu Glu Thr Val
130 135 140
Ser Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp
145 150 155 160
Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile Ile Lys Asn Ile Leu Gln Pro Ser
165 170 175
Ser Val Asp Pro Gln Thr Glu Met Val Leu Val Asn Ala Ile Tyr Phe
180 185 190
Lys Gly Leu Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu Glu Thr Gln Ala Val
195 200 205
Pro Phe Arg Ile Thr Glu Gln Glu Asn Arg Pro Val Gln Met Met Tyr
210 215 220
Gln Phe Gly Ser Phe Lys Val Ala Xaa Val Ala Ser Glu Lys Ile Lys
225 230 235 240
Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Leu Ser Met Leu Val Leu
245 250 255
Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Asn Ala Ile Thr Phe Glu
260 265 270
Lys Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asp Leu Met Glu Glu Arg Lys Ile
275 280 285
Lys Val Phe Phe Pro Arg Val Lys Ile Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr
290 295 300
Ala Val Leu Val Ser Leu Gly Ile Thr Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala
305 310 315 320
Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu Asn Leu Lys Met Ser Glu Ala
325 330 335
Val His Glu Ala Xaa Val Glu Ile Tyr Glu Ala Gly Ser Glu Val Ala
340 345 350
Gly Ser Ser Gly Ala Gly Ile Glu Val Ala Ser Asp Ser Glu Glu Phe
355 360 365
Arg Val Asp His Pro Phe Leu Phe Leu Ile Xaa His Asn Pro Thr Asn
370 375 380
Ser Ile Leu Phe Phe Gly Arg Cys Phe Ser Pro
385 390 395
<210> 53
<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 53
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Thr Glu Phe Cys Ile Asp Val Phe
1 5 10 15
Arg Glu Leu Arg Val Gln His Val Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
20 25 30
Leu Ser Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Glu
35 40 45
Asn Thr Arg Ala Gln Ile Asp Glu Val Phe His Phe Asp Lys Ile Ala
50 55 60
Gly Phe Gly Asp Thr Val Asp Pro Gln Cys Gly Ala Ser Leu Ser Val
65 70 75 80
His Lys Ser Leu Gln Asn Val Phe Ala Gln Ile Thr Gln Pro Lys Asp
85 90 95
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145 150 155 160
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165 170 175
Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Leu Trp Gln Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Ser Glu Lys Val Lys Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Leu
225 230 235 240
Ser Met Trp Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
Glu Asn Ala Ile Thr Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asp
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Asn Leu Lys Met Ser Glu Ala Val His Glu Ala Phe Val Glu Ile Tyr
325 330 335
Glu Ala Gly Ser Glu Val Val Gly Ser Ser Gly Ala Gly Ile Glu Ala
340 345 350
Pro Ser Asp Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Leu
355 360 365
Ile Lys His Asn Pro Thr Asn Ser Ile Leu Phe Phe Gly Arg Cys Phe
370 375 380
Ser Pro
385
<210> 54
<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 54
Met Gly Ser Ile Gly Pro Leu Ser Val Glu Phe Cys Cys Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Arg Ile Gln His Ala Arg Asp Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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165 170 175
Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Leu Trp Lys Lys Ala Phe Lys Asp Glu
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195 200 205
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210 215 220
Ser Glu Lys Ile Arg Ile Leu Glu Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Leu
225 230 235 240
Ser Leu Trp Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
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260 265 270
Lys Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Ile
275 280 285
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Thr Ser Leu Gly Ile Thr
290 295 300
Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
305 310 315 320
Lys Leu Lys Val Ser Ser Ala Phe His Glu Ala Ser Met Glu Ile Tyr
325 330 335
Glu Ala Gly Asn Lys Val Val Gly Ser Thr Gly Ala Gly Val Asp Asp
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370 375 380
Ser Pro
385
<210> 55
<211> 385
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 55
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Ala Glu Phe Cys Val Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Asp Gln His Val Asn Asn Ile Val Phe Ser Pro Leu
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Met Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Asn Ile Gly Ala Arg Glu Asp
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Leu Lys Leu Ser Asp Ala Val His Glu Ala Phe Val Glu Ile Tyr Glu
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370 375 380
Pro
385
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<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 56
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Asn Thr Asp Phe Cys Phe Asp Val Phe
1 5 10 15
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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Ile Lys His Asn Pro Thr Asp Ser Ile Val Phe Phe Gly Arg Cys Met
370 375 380
Ser Pro
385
<210> 57
<211> 383
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 57
Met Gly Ser Ile Gly Pro Leu Ser Val Glu Phe Cys Cys Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Arg Ile Gln His Ala Arg Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
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Gly Phe Gly Glu Ser Ile Glu Ser Gln Cys Gly Thr Ser Leu Ser Ile
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Gly Leu Glu Pro Ile Ser Phe Gln Thr Ala Ala Glu Gln Ala Arg Glu
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<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 58
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Leu Pro
385
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<211> 386
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 59
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Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Met Ile Lys Asp
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Ser Met Leu Val Ile Leu Pro Asp Asp Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Leu Gly Ile Thr
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355 360 365
Ile Lys His Lys Pro Thr Asn Ser Ile Leu Phe Phe Gly Arg Cys Phe
370 375 380
Ser Pro
385
<210> 60
<211> 2174
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 60
Met Glu His Ala Gln Leu Thr Gln Leu Val Asn Ser Asn Met Thr Ser
1 5 10 15
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Glu Met Lys Val His His Val Asn Glu Asn Ile Leu Tyr Ser Pro Leu
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65 70 75 80
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85 90 95
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Ile Glu
275 280 285
Lys Ala Ile Asn Phe Glu Lys Leu Arg Glu Trp Thr Ser Thr Asn Ala
290 295 300
Met Glu Lys Lys Ser Met Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Ile Glu
305 310 315 320
Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Thr Leu Met Ala Leu Gly Met Thr Asp
325 330 335
Leu Phe Ser Arg Ser Ala Asn Leu Thr Gly Ile Ser Ser Val Glu Asn
340 345 350
Leu Met Ile Ser Asp Ala Val His Gly Ala Phe Met Glu Val Asn Glu
355 360 365
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370 375 380
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450 455 460
Ala Lys Asp Ser Thr Arg Thr Gln Ile Asn Lys Val Val Arg Phe Asp
465 470 475 480
Lys Leu Pro Gly Phe Gly Asp Ser Ile Glu Ala Gln Cys Gly Thr Ser
485 490 495
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500 505 510
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850 855 860
Thr Ala Asp Gln Met Ala Lys Thr Glu Ile Gly Lys Ser Gly Asn Ile
865 870 875 880
His Ala Gly Phe Lys Ala Leu Asp Leu Glu Ile Asn Gln Pro Thr Lys
885 890 895
Asn Tyr Leu Leu Asn Ser Val Asn Gln Leu Tyr Gly Glu Lys Ser Leu
900 905 910
Pro Phe Ser Lys Glu Tyr Leu Gln Leu Ala Lys Lys Tyr Tyr Ser Ala
915 920 925
Glu Pro Gln Ser Val Asp Phe Leu Gly Lys Ala Asn Glu Ile Arg Arg
930 935 940
Glu Ile Asn Ser Arg Val Glu His Gln Thr Glu Gly Lys Ile Lys Asn
945 950 955 960
Leu Leu Pro Pro Gly Ser Ile Asp Ser Leu Thr Arg Leu Val Leu Val
965 970 975
Asn Ala Leu Tyr Phe Lys Gly Asn Trp Ala Thr Lys Phe Glu Ala Glu
980 985 990
Asp Thr Arg His Arg Pro Phe Arg Ile Asn Met His Thr Thr Lys Gln
995 1000 1005
Val Pro Met Met Tyr Leu Arg Asp Lys Phe Asn Trp Thr Tyr Val
1010 1015 1020
Glu Ser Val Gln Thr Asp Val Leu Glu Leu Pro Tyr Val Asn Asn
1025 1030 1035
Asp Leu Ser Met Phe Ile Leu Leu Pro Arg Asp Ile Thr Gly Leu
1040 1045 1050
Gln Lys Leu Ile Asn Glu Leu Thr Phe Glu Lys Leu Ser Ala Trp
1055 1060 1065
Thr Ser Pro Glu Leu Met Glu Lys Met Lys Met Glu Val Tyr Leu
1070 1075 1080
Pro Arg Phe Thr Val Glu Lys Lys Tyr Asp Met Lys Ser Thr Leu
1085 1090 1095
Ser Lys Met Gly Ile Glu Asp Ala Phe Thr Lys Val Asp Ser Cys
1100 1105 1110
Gly Val Thr Asn Val Asp Glu Ile Thr Thr His Ile Val Ser Ser
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1130 1135 1140
Cys Asn Lys Ala Val Ala Met Glu Gln Val Ser Ala Ser Ile Gly
1145 1150 1155
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1160 1165 1170
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1220 1225 1230
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Leu Leu Pro Thr Tyr Ile Gln Leu Ser Lys Lys Tyr Tyr Lys Ala
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Glu Pro Tyr Lys Val Asn Phe Lys Thr Ala Pro Glu Gln Ser Arg
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1280 1285 1290
Lys Asn Phe Leu Ser Ser Asp Asp Val Lys Asn Ser Thr Lys Ser
1295 1300 1305
Ile Leu Val Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Ala Glu Trp Glu Glu Lys
1310 1315 1320
Phe Gln Ala Gly Asn Thr Asp Met Gln Pro Phe Arg Met Ser Lys
1325 1330 1335
Asn Lys Ser Lys Leu Val Lys Met Met Tyr Met Arg His Thr Phe
1340 1345 1350
Pro Val Leu Ile Met Glu Lys Leu Asn Phe Lys Met Ile Glu Leu
1355 1360 1365
Pro Tyr Val Lys Arg Glu Leu Ser Met Phe Ile Leu Leu Pro Asp
1370 1375 1380
Asp Ile Lys Asp Ser Thr Thr Gly Leu Glu Gln Leu Glu Arg Glu
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1400 1405 1410
Ser Val Thr Leu Val Asp Leu His Leu Pro Lys Phe Ser Met Glu
1415 1420 1425
Asp Arg Tyr Asp Leu Lys Asp Ala Leu Lys Ser Met Gly Met Ala
1430 1435 1440
Ser Ala Phe Asn Ser Asn Ala Asp Phe Ser Gly Met Thr Gly Phe
1445 1450 1455
Gln Ala Val Pro Met Glu Ser Leu Ser Ala Ser Thr Asn Ser Phe
1460 1465 1470
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1475 1480 1485
Asn Ile Phe Phe Ala Ser Trp Ser Ile Ala Thr Ala Leu Ala Met
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Val His Leu Gly Ala Lys Gly Asp Thr Ala Thr Gln Val Ala Lys
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1520 1525 1530
Glu Leu Leu Ser Ala Ile Asn Lys Pro Arg Asn Thr Tyr Leu Met
1535 1540 1545
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1550 1555 1560
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1640 1645 1650
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1655 1660 1665
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1670 1675 1680
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1730 1735 1740
Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Ser Asp Met Gly Ile Arg Ser Ala
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1760 1765 1770
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1775 1780 1785
Asn Glu Glu Asp Arg Ile Val Gln Leu Ala Ser Gly Arg Leu Thr
1790 1795 1800
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1820 1825 1830
Leu Ser Met Ile Leu Leu Gly Ser Lys Gly Asn Thr Glu Ala Gln
1835 1840 1845
Ile Ala Lys Val Leu Ser Leu Ser Lys Ala Glu Asp Ala His Asn
1850 1855 1860
Gly Tyr Gln Ser Leu Leu Ser Glu Ile Asn Asn Pro Asp Thr Lys
1865 1870 1875
Tyr Ile Leu Arg Thr Ala Asn Arg Leu Tyr Gly Glu Lys Thr Phe
1880 1885 1890
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1895 1900 1905
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1910 1915 1920
Arg Lys Gln Ile Asn Gly Trp Val Glu Glu Lys Thr Glu Gly Lys
1925 1930 1935
Ile Gln Lys Leu Leu Ser Glu Gly Ile Ile Asn Ser Met Thr Lys
1940 1945 1950
Leu Val Leu Val Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Asn Trp Gln Glu
1955 1960 1965
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1970 1975 1980
Lys Asn Glu Thr Lys Pro Val Gln Met Met Phe Arg Lys Gly Lys
1985 1990 1995
Tyr Asn Met Thr Tyr Ile Gly Asp Leu Glu Thr Thr Val Leu Glu
2000 2005 2010
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2015 2020 2025
Asp Ser Ile Gln Asp Glu Ser Thr Gly Leu Glu Lys Leu Glu Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 61
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Lys Glu Met Lys Val Gln His Ala Asn Gln Asn Ile Ile Phe Ser Pro
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Thr Ser Val Leu Glu Glu Val Arg Ala Asp Lys Pro Phe Leu Phe Phe
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370 375 380
Ser Pro
385
<210> 62
<211> 2104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 62
Met Thr Ser Asn Thr Cys His Glu Ala Asp Glu Phe Glu Asn Ile Asp
1 5 10 15
Phe Arg Met Asp Ser Ile Ser Val Thr Asn Thr Lys Phe Cys Phe Asp
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245 250 255
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260 265 270
Arg Ile Glu Lys Ala Ile Asn Phe Glu Lys Leu Arg Glu Trp Thr Ser
275 280 285
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290 295 300
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Met Thr Asp Leu Phe Ser Arg Ser Ala Asn Leu Thr Gly Ile Ser Ser
325 330 335
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Gly Thr Ser Ala Asn Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu Asn Gln
485 490 495
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500 505 510
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530 535 540
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Phe Ala Ser Gly Thr Met Ser Met Trp Val Leu Leu Pro Asp Glu Val
645 650 655
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865 870 875 880
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885 890 895
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900 905 910
Asn Leu Glu Ile Asn Gln Pro Thr Lys Asn Tyr Leu Leu Asn Ser Val
915 920 925
Asn Gln Leu Tyr Gly Glu Lys Ser Leu Pro Phe Ser Lys Glu Tyr Leu
930 935 940
Gln Leu Ala Lys Lys Tyr Tyr Ser Ala Glu Pro Gln Ser Val Asp Phe
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965 970 975
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980 985 990
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1550 1555 1560
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1655 1660 1665
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2000 2005 2010
Ser Thr Met Gly Met Pro Asp Ala Phe Asp Leu Arg Thr Ala Asp
2015 2020 2025
Phe Ser Gly Ile Ser Ser Gly Asn Glu Leu Val Leu Ser Glu Val
2030 2035 2040
Val His Lys Ser Phe Val Glu Val Asn Glu Glu Gly Thr Glu Ala
2045 2050 2055
Ala Ala Ala Thr Ala Gly Ile Met Leu Leu Arg Cys Ala Met Ile
2060 2065 2070
Val Ala Asn Phe Thr Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Phe Ile Arg
2075 2080 2085
His Asn Lys Thr Asn Ser Ile Leu Phe Cys Gly Arg Phe Cys Ser
2090 2095 2100
Pro
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<211> 386
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 63
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1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Thr Gln His Val Lys Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro
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Met Ala Ile Ile Ser Ala Leu Ser Met Val Tyr Ile Gly Ala Arg Glu
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385
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 64
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<220>
<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<223> 合成的多肽
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<220>
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Gly Glu Leu Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Asp Ile Ser Gly Leu
245 250 255
Glu Gln Leu Glu Thr Thr Ile Ser Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
260 265 270
Ser Ser Asn Met Met Glu Asp Arg Asn Met Lys Val Tyr Leu Pro Arg
275 280 285
Met Lys Ile Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Ile Ala Leu
290 295 300
Gly Met Thr Asp Leu Phe Ser Pro Ala Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser
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Ala Ala Glu Ser Leu Lys Met Ser Glu Ala Ile His Ala Ala Tyr Val
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385
<210> 72
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 72
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
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Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Gly Ser Ile Gly Thr Ala Ser
85 90 95
Ala Glu Phe Cys Phe Asp Val Phe Lys Glu Leu Lys Val His His Val
100 105 110
Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro Leu Ser Ile Ile Ser Ala Leu Ser
115 120 125
Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Glu Asn Thr Lys Thr Gln Met Glu Lys
130 135 140
Val Ile His Phe Asp Lys Ile Thr Gly Leu Gly Glu Ser Met Glu Ser
145 150 155 160
Gln Cys Gly Thr Gly Val Ser Ile His Thr Ala Leu Lys Asp Met Leu
165 170 175
Ser Glu Ile Thr Lys Pro Ser Asp Asn Tyr Ser Leu Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Arg Leu Tyr Ala Glu Gln Thr Tyr Ala Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln
195 200 205
Cys Ile Lys Glu Leu Tyr Lys Glu Ser Leu Glu Thr Val Ser Phe Gln
210 215 220
Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Ile Glu Ser
225 230 235 240
Gln Thr Asn Gly Val Ile Lys Asn Phe Leu Gln Pro Gly Ser Val Asp
245 250 255
Ser Gln Thr Glu Leu Val Leu Val Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Met
260 265 270
Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu Asp Thr Gln Glu Val Pro Phe Arg
275 280 285
Ile Thr Glu Gln Glu Ser Arg Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Ala Gly
290 295 300
Ser Phe Lys Val Ala Thr Val Ala Ala Glu Lys Ile Lys Ile Leu Glu
305 310 315 320
Leu Pro Tyr Ala Ser Gly Glu Leu Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp
325 330 335
Asp Ile Ser Gly Leu Glu Gln Leu Glu Thr Thr Ile Ser Phe Glu Lys
340 345 350
Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asn Met Met Glu Asp Arg Asn Met Lys
355 360 365
Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Ile Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser
370 375 380
Val Leu Ile Ala Leu Gly Met Thr Asp Leu Phe Ser Pro Ala Ala Asn
385 390 395 400
Leu Ser Gly Ile Ser Ala Ala Glu Ser Leu Lys Met Ser Glu Ala Ile
405 410 415
His Ala Ala Tyr Val Glu Ile Tyr Glu Ala Asp Ser Glu Ile Val Ser
420 425 430
Ser Ala Gly Val Gln Val Glu Val Thr Ser Asp Ser Glu Glu Phe Arg
435 440 445
Val Asp His Pro Phe Leu Phe Leu Ile Lys His Asn Pro Thr Asn Ser
450 455 460
Val Leu Phe Phe Gly Arg Cys Ile Ser Pro
465 470
<210> 73
<211> 389
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 73
Glu Ala Glu Ala Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Thr Glu Phe Cys Phe
1 5 10 15
Asp Val Phe Arg Glu Leu Arg Val Gln His Val Asn Glu Asn Ile Phe
20 25 30
Tyr Ser Pro Phe Ser Ile Ile Ser Ala Leu Ala Met Val Tyr Leu Gly
35 40 45
Ala Arg Asp Asn Thr Arg Thr Gln Ile Asp Lys Val Val His Phe Asp
50 55 60
Lys Leu Pro Gly Phe Gly Glu Ser Met Glu Ala Gln Cys Gly Thr Ser
65 70 75 80
Val Ser Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu Thr Gln Ile Thr Lys
85 90 95
Pro Ser Asp Asn Phe Ser Leu Ser Phe Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu
100 105 110
Glu Thr Tyr Ala Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Val Lys Glu Leu
115 120 125
Tyr Lys Gly Gly Leu Glu Ser Ile Ser Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln
130 135 140
Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile
145 150 155 160
Ile Lys Asn Ile Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp Ser Gln Thr Thr Met
165 170 175
Val Leu Val Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Met Trp Glu Lys Ala Phe
180 185 190
Lys Asp Glu Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg Met Thr Glu Gln Glu
195 200 205
Ser Lys Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Val Gly Ser Phe Lys Val Ala
210 215 220
Met Val Thr Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser
225 230 235 240
Gly Met Met Ser Met Phe Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu
245 250 255
Glu Gln Leu Glu Ser Thr Ile Ser Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
260 265 270
Ser Ser Thr Met Met Glu Glu Arg Arg Met Lys Val Tyr Leu Pro Arg
275 280 285
Met Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Phe Met Ala Leu
290 295 300
Gly Met Thr Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn Met Ser Gly Ile Ser
305 310 315 320
Ser Thr Val Ser Leu Lys Met Ser Glu Ala Val His Ala Ala Cys Val
325 330 335
Glu Ile Phe Glu Ala Gly Arg Asp Val Val Gly Ser Ala Glu Ala Gly
340 345 350
Met Asp Val Thr Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe
355 360 365
Leu Phe Phe Ile Lys His Asn Pro Thr Asn Ser Ile Leu Phe Phe Gly
370 375 380
Arg Trp Met Ser Pro
385
<210> 74
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 74
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser
85 90 95
Thr Glu Phe Cys Phe Asp Val Phe Arg Glu Leu Arg Val Gln His Val
100 105 110
Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Ser Pro Phe Ser Ile Ile Ser Ala Leu Ala
115 120 125
Met Val Tyr Leu Gly Ala Arg Asp Asn Thr Arg Thr Gln Ile Asp Lys
130 135 140
Val Val His Phe Asp Lys Leu Pro Gly Phe Gly Glu Ser Met Glu Ala
145 150 155 160
Gln Cys Gly Thr Ser Val Ser Val His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu
165 170 175
Thr Gln Ile Thr Lys Pro Ser Asp Asn Phe Ser Leu Ser Phe Ala Ser
180 185 190
Arg Leu Tyr Ala Glu Glu Thr Tyr Ala Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln
195 200 205
Cys Val Lys Glu Leu Tyr Lys Gly Gly Leu Glu Ser Ile Ser Phe Gln
210 215 220
Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser
225 230 235 240
Gln Thr Asn Gly Ile Ile Lys Asn Ile Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp
245 250 255
Ser Gln Thr Thr Met Val Leu Val Asn Ala Ile Tyr Phe Lys Gly Met
260 265 270
Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg
275 280 285
Met Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro Val Gln Met Met Tyr Gln Val Gly
290 295 300
Ser Phe Lys Val Ala Met Val Thr Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu
305 310 315 320
Leu Pro Phe Ala Ser Gly Met Met Ser Met Phe Val Leu Leu Pro Asp
325 330 335
Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu Glu Ser Thr Ile Ser Phe Glu Lys
340 345 350
Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Thr Met Met Glu Glu Arg Arg Met Lys
355 360 365
Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Met Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser
370 375 380
Val Phe Met Ala Leu Gly Met Thr Asp Leu Phe Ser Ser Ser Ala Asn
385 390 395 400
Met Ser Gly Ile Ser Ser Thr Val Ser Leu Lys Met Ser Glu Ala Val
405 410 415
His Ala Ala Cys Val Glu Ile Phe Glu Ala Gly Arg Asp Val Val Gly
420 425 430
Ser Ala Glu Ala Gly Met Asp Val Thr Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg
435 440 445
Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Phe Ile Lys His Asn Pro Thr Asn Ser
450 455 460
Ile Leu Phe Phe Gly Arg Trp Met Ser Pro
465 470
<210> 75
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 75
Glu Ala Glu Ala
1

Claims (167)

1.一种用于制作无蛋食品项目的成分组合物，所述组合物包括重组卵清蛋白(rOVA)，
其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约7.0；
其中所述rOVA存在于所述无蛋食品项目中时的量为约2％至约15％(w/w)；并且
其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供至少一种蛋清特性，所述特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
2.如权利要求1所述的成分组合物，其中所述组合物是干燥的或者是粉状物。
3.如权利要求1或权利要求2所述的成分组合物，其中所述组合物包含至少75％(总蛋白质的w/w或总组合物的w/w)的rOVA。
4.如权利要求3所述的成分组合物，其中所述粉状组合物为至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。
5.如权利要求3或权利要求4所述的成分组合物，其中所述粉状物为浓缩物。
6.如权利要求2至5中任一项所述的成分组合物，其中所述粉状组合物为分离物。
7.如权利要求1所述的成分组合物，其中所述组合物是液体。
8.如权利要求7所述的成分组合物，其中所述液体组合物为浓缩物。
9.如权利要求7或权利要求8所述的成分组合物，其中所述液体组合物包含至少50％(总蛋白质的w/w或组合物的w/w)的rOVA。
10.如权利要求7所述的成分组合物，其中所述液体组合物包含至少约60％、至少约65％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。
11.如权利要求1至3中任一项所述的成分组合物，其中与类似食品项目中的天然蛋清相比，所述rOVA提供了等同或改善的所述特性。
12.如权利要求1至11中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA提供比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。
13.如权利要求1至12中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA提供比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。
14.如权利要求12或权利要求13所述的成分组合物，其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。
15.如权利要求1至14中任一项所述的成分组合物，其中在烘焙实施方案中，所述rOVA为无蛋食品组合物提供了相当于或大于天然蛋清的硬度。
16.如权利要求1至15中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA为无蛋食品组合物提供了比天然蛋清更大的咀嚼性。
17.如权利要求15或权利要求16所述的成分组合物，其中所述rOVA提供了与天然蛋清相当的弹性。
18.如权利要求1至17中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
19.如权利要求1至18中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
20.如权利要求18或权利要求19所述的成分组合物，其中所述rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。
21.如权利要求20所述的成分组合物，其中所述rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
22.如权利要求1至21中任一项所述的成分组合物，其中当所述rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。
23.如权利要求1至21中任一项所述的成分组合物，其中当所述rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
24.如权利要求1至21中任一项所述的成分组合物，其中溶解时的pH为约6至约6.8。
25.如权利要求1至21中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA溶解时的pH小于约6.1。
26.如权利要求1至25中任一项所述的成分组合物，其中rOVA以小于约8％的量存在于所述无蛋食品项目中。
27.如权利要求1至25中任一项所述的成分组合物，其中rOVA以约7％或小于7％的量存在于所述无蛋食品项目中。
28.如权利要求1至27中任一项所述的成分组合物，其中所述rOVA不会使所述组合物受到沙门氏菌的污染。
29.一种烘焙食物产品，包括：
重组卵清蛋白(rOVA)，其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约7.0；
至少一种脂肪或油；
至少一种谷物淀粉；以及
至少一种甜味剂；
其中所述rOVA为所述烘焙食物产品提供至少一种蛋清特性，所述特性选自于粘合性、弹性、通气性、褐变性、组织化、保湿性和粘结性，
并且所述烘焙食物产品不包含任何天然蛋清蛋白或天然蛋清。
30.如权利要求29所述的烘焙食物产品，其中所述rOVA以约2％至15％存在于所述产品(烘焙前总蛋白质的w/w或总食物产品的w/w)中。
31.如权利要求30所述的烘焙食物产品，其中所述rOVA以约2％至约5％存在于所述产品(w/w)中。
32.如权利要求29或权利要求30所述的烘焙食物产品，其还包含乳制品组分或发酵剂或者其组合。
33.如权利要求29至32中任一项所述的烘焙食物产品，其中所述产品是蛋糕、面包、面包卷、油酥点心、薄脆饼干、松饼、司康饼、百吉饼、饼干或曲奇饼。
34.如权利要求33所述的烘焙产品，其中所述烘焙产品具有等同于或优于用天然蛋清或天然全蛋制成的类似烘焙产品的屑状结构。
35.如权利要求29至34中任一项所述的烘焙产品，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
36.如权利要求29至35中任一项所述的烘焙产品，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
37.如权利要求29至36中任一项所述的烘焙产品，其中与用全蛋制成的等同烘焙产品相比，用rOVA制成的烘焙产品的失重率更低。
38.一种乳化产品，包括：
重组卵清蛋白(rOVA)；
至少一种脂肪或油；
水；
其中所述rOVA以约2％至15％(w/w)存在于所述产品中。
39.如权利要求38所述的乳化产品，其还包含酸化剂。
40.如权利要求38或权利要求39所述的乳化产品，其中所述产品为沙拉酱、调味汁、蛋黄酱、商业化蛋黄酱代替物、三明治酱或肉汁。
41.一种食物产品，包括：
重组卵清蛋白(rOVA)，其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约7.0；
至少一种甜味剂；以及
任选地，可食用液体；
其中所述rOVA以约2％至约15％(w/w)存在于所述食物产品中，并且其中所述rOVA为所述食物产品提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性。
42.如权利要求41所述的食物产品，其中rOVA还为所述食物产品提供凝胶化。
43.如权利要求42所述的食物产品，其中当所述rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。
44.如权利要求42所述的食物产品，其中当所述rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
45.如权利要求41-44所述的食物产品，其中所述食物产品是蛋白酥饼、奶油甜点、植脂奶油或蛋奶酥。
46.如权利要求41至45中任一项所述的食物产品，其中所述rOVA为所述食物产品提供比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。
47.如权利要求41至46中任一项所述的食物产品，其中所述rOVA为所述食物产品提供比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。
48.如权利要求46或权利要求47所述的食物产品，其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。
49.如权利要求41至48中任一项所述的食物产品，其中所述rOVA以约5％至约10％(w/w)存在于所述食物产品中。
50.如权利要求49所述的食物产品，其中所述rOVA以约7％至约8％(w/w)存在于所述食物产品中。
51.如权利要求46或权利要求47所述的食物产品，其中所述rOVA以约4％、约7％或约12％(w/w)存在于所述食物产品中。
52.如权利要求51所述的食物产品，其中所述rOVA溶解时的pH为约6。
53.如权利要求46或权利要求47所述的食物产品，其中所述rOVA以约9％至约10％(w/w)存在于所述食物产品中。
54.如权利要求53所述的食物产品，其中所述rOVA溶解时的pH为约7。
55.如权利要求41所述的食物产品，其中所述产品是饮料。
56.如权利要求55所述的食物产品，其中所述饮料是可食用酒精。
57.如权利要求56所述的食物产品，其中所述rOVA为所述可食用酒精饮料提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性。
58.如权利要求55所述的食物产品，其中所述饮料是咖啡饮料。
59.如权利要求58所述的食物产品，其中所述rOVA为所述咖啡饮料提供起泡性、搅打性、膨松性或通气性。
60.如权利要求58或权利要求59所述的食物产品，其中咖啡饮料不含乳制品组分或包含乳制品组分。
61.如权利要求41至60中任一项所述的食物产品，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
62.如权利要求41至61中任一项所述的食物产品，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
63.如权利要求41至62中任一项所述的食物产品，其中所述rOVA不会使所述食物产品受到沙门氏菌的污染。
64.如权利要求41至63中任一项所述的食物产品，其中所述食物产品是蛋白棒、能量棒、营养棒或燕麦棒。
65.如权利要求64所述的食物产品，其中所述食物产品包含约4％至约8％(w/w)的rOVA。
66.如权利要求64或权利要求65所述的食物产品，其中所述棒是烘焙的或未烘焙的。
67.一种仿造肉食物产品，包括：
重组卵清蛋白(rOVA)；
至少一种脂肪或油；以及
植物源蛋白；
其中所述rOVA以约2％至约15％(w/w)存在于所述食物产品中；并且
其中所述rOVA用作粘合剂或胶凝剂或其组合。
68.如权利要求67所述的仿造肉食物产品，其中所述植物蛋白是挤压植物蛋白。
69.如权利要求67所述的仿造肉食物产品，其中所述植物蛋白是非挤压植物蛋白。
70.如权利要求67至69中任一项所述的仿造肉食物产品，其中所述仿造肉食物产品选自于汉堡、馅饼、香肠、热狗、熟肉切片、肉干、培根、肉块、搅碎的肉状组合物和成型肉状组合物。
71.如权利要求67至70中任一项所述的仿造肉食物产品，其中所述rOVA为所述食物产品提供了比天然蛋清更大的硬度。
72.如权利要求67至71中任一项所述的仿造肉食物产品，其中所述rOVA为所述食物产品提供了比天然蛋清更大的咀嚼性。
73.如权利要求71或权利要求72所述的仿造肉食物产品，其中所述rOVA提供了与天然蛋清相当的弹性。
74.如权利要求67至73中任一项所述的仿造肉食物产品，其中当所述rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供了改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。
75.如权利要求67至73中任一项所述的仿造肉食物产品，其中当所述rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
76.如权利要求67至73中任一项所述的仿造肉食物产品，其中所述rOVA以约4％、以约5％或以约6％(w/w)存在于所述食物产品中。
77.如权利要求67至73中任一项所述的仿造肉食物产品，其中所述rOVA包含SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
78.如权利要求67至76中任一项所述的仿造肉食物产品，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
79.一种蛋清代替物，包括：
重组卵清蛋白(rOVA)；
至少一种脂肪或油；以及
多糖或含多糖成分；
其中所述rOVA以约2％至15％(w/w)存在于所述组合物中；并且
其中所述组合物具有选自于硬度、粘附性、脆性、粘结性、胶粘性和咀嚼性的一种或多种特性，并且当烹饪所述蛋清代替物时，所述一种或多种特性与天然蛋清等同或与天然蛋清相比有改善。
80.如权利要求79所述的蛋清代替物，其还包含调味剂或着色剂或其组合。
81.如权利要求79或权利要求80所述的蛋清代替物，其中所述多糖或含多糖成分是淀粉。
82.如权利要求79至81中任一项所述的蛋清代替物，其中所述多糖或含多糖成分选自于吉兰糖胶、海藻酸钠和车前草或其任意组合。
83.如权利要求79至82中任一项所述的蛋清代替物，其中所述rOVA为所述食物产品提供了比天然蛋清更大的硬度。
84.如权利要求79至83中任一项所述的蛋清代替物，其中所述rOVA为所述食物产品提供了比天然蛋清更大的咀嚼性。
85.如权利要求83或权利要求84所述的蛋清代替物，其中所述rOVA提供了与天然蛋清相当的胶粘性和/或弹性。
86.如权利要求79至85中任一项所述的蛋清代替物，其中当所述rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。
87.如权利要求79至85中任一项所述的蛋清代替物，其中当所述rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
88.如权利要求79至85中任一项所述的蛋清代替物，其中所述rOVA以约10％至约12％(w/w)存在于所述食物产品中。
89.如权利要求79至88中任一项所述的蛋清代替物，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
90.如权利要求79至88中任一项所述的蛋清代替物，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
91.一种粉状成分组合物，其包含重组卵清蛋白(rOVA)，
其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约7.0，
其中所述rOVA是所述组合物的至少75％w/w，并且
其中所述rOVA包含一个或多个N-连接糖基化位点，所述位点具有与N-乙酰氨基葡萄糖连接的甘露糖，并且其中所述N-连接糖基化位点不含半乳糖。
92.如权利要求91所述的粉状成分组合物，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
93.如权利要求91或权利要求92所述的粉状成分组合物，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
94.如权利要求92或93所述的粉状成分组合物，其中所述rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。
95.如权利要求91至94中任一项所述的粉状成分组合物，其中所述rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
96.如权利要求91至95中任一项所述的粉状组合物，其中所述组合物包含至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。
97.一种液体组合物，其包含重组卵清蛋白(rOVA)，所述组合物包含至少50％(总蛋白质的w/w或总组合物的w/w)的rOVA。
98.如权利要求97所述的液体组合物，其中所述组合物包含至少约60％、至少约65％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的rOVA(w/w)。
99.如权利要求97或权利要求98所述的液体组合物，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
100.如权利要求97至99中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
101.如权利要求99或权利要求100所述的液体组合物，其中所述rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。
102.如权利要求101所述的液体组合物，其中所述rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
103.如权利要求97至102中任一项所述的液体组合物，其中溶解的rOVA的pH为约3.5至约7.0。
104.如权利要求97至103中任一项所述的液体组合物，其中所述溶解的rOVA的pH为约6至约6.8。
105.如权利要求97至104中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA溶解时的pH小于约6.1。
106.如权利要求97至105中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA为无蛋食品项目提供至少一种蛋清特性，所述特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
107.如权利要求106所述的液体组合物，其中与类似无蛋食品项目中的天然蛋清相比，所述rOVA提供了等同或改善的特性。
108.如权利要求97至107中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。
109.如权利要求97至108中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。
110.如权利要求106至109中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。
111.如权利要求106至110中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA以约5％至约10％(w/w)存在于所述无蛋食品项目中。
112.如权利要求111所述的液体组合物，其中所述rOVA以约7％至约8％(w/w)存在于所述无蛋食品项目中。
113.如权利要求106至109中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA以约4％、约7％或约12％(w/w)存在于所述无蛋食品项目中。
114.如权利要求113所述的液体组合物，其中所述rOVA溶解时的pH为约6。
115.如权利要求97至114中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清更大的硬度。
116.如权利要求97至115中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清更大的咀嚼性。
117.如权利要求115或权利要求116所述的液体组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了与天然蛋清相当的弹性。
118.如权利要求97至117中任一项所述的液体组合物，其中当所述rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供了改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。
119.如权利要求97至117中任一项所述的液体组合物，其中当所述rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供了改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
120.如权利要求97至119中任一项所述的液体组合物，其中所述rOVA不会使所述无蛋食品项目受到沙门氏菌的污染。
121.一种干燥或粉状组合物，其包含重组卵清蛋白(rOVA)，所述组合物包含至少50％(总蛋白质的w/w或总组合物的w/w)的rOVA。
122.如权利要求121所述的干燥或粉状组合物，所述组合物包含至少约60％、至少约65％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％的rOVA(w/w)。
123.如权利要求121或权利要求122所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA包含SEQID NO:2或SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
124.如权利要求121至123中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
125.如权利要求123或权利要求124所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。
126.如权利要求125所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
127.如权利要求121至126中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA为无蛋食品项目提供至少一种蛋清特性，所述特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
128.如权利要求127所述的干燥或粉状组合物，其中与类似无蛋食品项目中的天然蛋清相比，所述rOVA提供等同或改善的特性。
129.如权利要求121至128中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清大至少20％、30％、40％或50％的起泡能力。
130.如权利要求121至129中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清快至少20％、30％、40％或50％的起泡时间。
131.如权利要求121至129中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA溶解时的pH为约3.5至约4.5。
132.如权利要求121至129中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA以约4％、约7％或约12％(w/w)存在于无蛋食品中。
133.如权利要求132所述的食物产品，其中所述rOVA溶解时的pH为约6。
134.如权利要求121至133中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清更大的硬度。
135.如权利要求121至134中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了比天然蛋清更大的咀嚼性。
136.如权利要求134或权利要求135所述的干燥或粉状组合物，其中所述rOVA为所述无蛋食品项目提供了与天然蛋清相当的弹性。
137.如权利要求121至136中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中当所述rOVA包含鸡OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供了改善的凝胶化，并且溶解时的pH为约6.5至7.0。
138.如权利要求121至136中任一项所述的干燥或粉状组合物，其中当所述rOVA包含鸵鸟OVA的氨基酸序列时，所述rOVA提供了改善的凝胶化，并且溶解时的pH小于约6.0且高于约3.7。
139.一种制作食物产品的方法，包括：
提供溶解时的pH为约3.5至约7.0的重组卵清蛋白(rOVA)；
将2％至15％量(w/w)的所述rOVA与一种或多种可食用成分组合以形成食物产品，
其中所述rOVA为所述食物产品提供至少一种蛋清特性，所述特性选自于胶凝作用、起泡性、搅打性、膨松性、粘合性、弹性、通气性、涂布性、成膜性、乳化性、褐变性、增稠性、组织化、保湿性、澄清性和粘结性。
140.一种制作成分组合物的方法，所述方法包括：
在微生物细胞中表达重组卵清蛋白(rOVA)，其中所述rOVA由所述微生物细胞分泌到液体培养基中；
收获含有分泌的rOVA的所述液体培养基；
在约3.5的pH进行分离步骤；
在约12的pH溶解所述rOVA；
将所述rOVA的最终pH调节到约3.5至约7.0，以生成所述成分组合物。
141.如权利要求140所述的方法，其中所述分离步骤包括离子交换层析或硫酸铵沉淀。
142.如权利要求141所述的方法，其中所述离子交换层析是阳离子交换层析或阴离子交换层析或其组合。
143.如权利要求140至142中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在溶解步骤之后的过滤步骤。
144.如权利要求140至143中任一项所述的方法，其中所述微生物细胞是真菌细胞。
145.如权利要求144所述的方法，其中所述真菌细胞是毕赤酵母。
146.如权利要求144或权利要求145所述的方法，其中所述微生物细胞表达重组辅助因子；其中所述辅助因子增强rOVA的表达水平或积累水平。
147.如权利要求140至146中任一项所述的方法，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
148.如权利要求140至147中任一项所述的方法，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
149.如权利要求147或权利要求148所述的方法，其中所述分泌的rOVA的氨基酸序列缺少N-末端蛋氨酸。
150.如权利要求140至149中任一项所述的方法，其中所述分泌的rOVA在其N-末端还包含EAEA氨基酸序列(SEQ ID NO:75)。
151.一种无蛋食物产品，包含约15％至约25％量(总蛋白质的w/w或食物产品的w/w)的重组卵清蛋白(rOVA)。
152.如权利要求151所述的无蛋食物产品，其包含高达约23％量(w/w)的所述rOVA。
153.重组卵清蛋白(rOVA)作为制作烘焙产品的成分的用途。
154.重组卵清蛋白(rOVA)作为制作无蛋食物产品的成分的用途。
155.重组卵清蛋白(rOVA)作为制作仿造肉食物产品的成分的用途。
156.重组卵清蛋白(rOVA)作为制作蛋清代替物的成分的用途。
157.重组卵清蛋白(rOVA)作为烘焙产品的蛋液代替物的用途；其中所述蛋液代替物提供了等同或优于包含天然蛋清或天然全蛋的蛋液的成膜性。
158.如权利要求153至157中任一项所述的用途，其中所述rOVA包含SEQ ID NO:2或SEQID NO:1的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
159.如权利要求153至157中任一项所述的用途，其中所述rOVA包含鸭OVA、鸵鸟OVA或鸡OVA的氨基酸序列。
160.如权利要求153至158中任一项所述的用途，其中所述rOVA以8％至9％的量(w/w)存在于所述蛋液中。
161.重组卵清蛋白(rOVA)的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的至少1升液体培养物。
162.如权利要求161所述的rOVA的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的至少10升液体培养物。
163.如权利要求162所述的rOVA的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的至少100升液体培养物。
164.如权利要求162所述的rOVA的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的至少1,000升液体培养物。
165.如权利要求162所述的rOVA的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的至少10,000升液体培养物。
166.如权利要求162所述的rOVA的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的至少100,000升液体培养物。
167.如权利要求162所述的rOVA的大规模生产，其中所述大规模生产包括表达所述rOVA的微生物细胞的约200,000升液体培养物。
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