JP2022542431A - 二重特異性抗ｌｒｒｃ１５及びｃｄ３イプシロン抗体 - Google Patents

Abstract

ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３に結合する多重特異性結合化合物が、そのような結合化合物を作製する方法、そのような結合化合物を含む、医薬組成物を含む組成物、及びＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害を治療するためのそれらの使用とともに開示されている。【選択図】図３

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年７月３０日出願の米国仮特許出願第６２／８８０，３４７号の出願日の優先権を主張し、この出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３に結合する多重特異性結合化合物に関する。本発明はさらに、そのような結合化合物を作製する方法、そのような結合化合物を含む、医薬組成物を含む組成物、及びＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害を治療するためのそれらの使用に関する。

ＬＲＲＣ１５
ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）は、ホルモン－受容体相互作用、酵素阻害、細胞接着、及び細胞輸送などの多様な機能を有するいくつかのタンパク質に存在する２０～２９残基配列モチーフである。これらのモチーフの主な機能は、タンパク質間相互作用の形成のための汎用的な構造フレームワークを提供することであると思われる。ＬＲＲ配列モチーフを含有する１つのタンパク質は、５８１個のアミノ酸のロイシンリッチ膜貫通タンパク質である、ＬＲＲＣ１５である。

ＬＲＲＣ１５（１５を含有するロイシンリッチ反復、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ８ＴＦ６６）、別名ＨＬｉｂ及びＬＩＢは、複数の固形腫瘍適応で高度に発現し、正常組織での発現が制限されていることが特定されている。（Ｐｕｒｃｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；７８（１４）；４０５９－７２）。ＬＲＲＣ１５は、明らかな細胞内シグナル伝達ドメインを有しない１型膜タンパク質である。（同上）。このタンパク質は、多くの固形腫瘍で間質線維芽細胞の細胞表面上で高度に発現されることが見出されている。（同上）。正常組織中での発現が限られているため、ＬＲＲＣ１５は、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする悪性腫瘍の治療のための魅力的な標的である。ＬＲＲＣ１５に特異的なモノクローナル抗体は、文献、例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１７／０１５１３４３号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＲＮＡ発現解析は、ＬＲＲＣ１５が、浸潤性乳癌、結腸腺癌、リンパ腫びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵臓腺癌、及び直腸腺癌のサブセットにおいて高度に発現することを実証する。（ｈｔｔｐ：／／ｇｅｐｉａ．ｃａｎｃｅｒ－ｐｋｕ．ｃｎ／ｄｅｔａｉｌ．ｐｈｐ？ｇｅｎｅ＝ＬＲＲＣ１５）。ＬＲＲＣ１５発現は、膀胱尿路上皮細胞癌、子宮頸部扁平上皮細胞癌及び子宮頸部腺癌、胆管癌、多形性膠芽腫、肉腫、皮膚皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣生殖細胞腫瘍、ならびに子宮癌のより小さなサブセットにおいて増加する。（同上）。

ＬＲＲＣ１５は、副腎皮質癌、腎臓色素沈着物、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳低悪性度神経膠腫、肝臓肝細胞癌、フェオクロモサイトーマ及び傍神経節腫、前立腺腺癌、甲状腺癌、胸腺腫、または子宮体内膜癌において過剰発現されない。（同上）。

Ｐｕｒｃｅｌｌらは、ＬＲＲＣ１５発現の組織学的分析を報告した。特に、骨肉腫、未分化肉腫、神経膠芽腫、及び黒色腫由来の腫瘍は、ＬＲＲＣ１５を直接発現するとともに、腫瘍を囲う間質上で発現した。興味深いことに、他の腫瘍は、腫瘍関連間質上で発現を示したが、腫瘍細胞自体、例えば、膵臓、乳、扁平上皮肺、卵巣、睾丸、胃、頭頸部、及び結腸直腸癌上では発現を示さなかった。Ｕ８７ＭＧ及びＵ－１１８ＭＧ（膠芽腫）、ＲＰＭＩ－７９５１及びＳＫＭＥＬ２（黒色腫）、ならびにＳＡＯＳ－２（肉腫）を含むいくつかの細胞株で、ＬＲＲＣ１５の発現が記載された。

上記に鑑み、多重特異性結合化合物（例えば、二重特異性抗体）の治療開発は、腫瘍細胞及び間質の両方がＬＲＲＣ１５を発現する間質に囲まれたがん、及び潜在的には腫瘍を囲む間質のみにＬＲＲＣ１５を発現するがんにおいて、ＬＲＲＣ１５を発現する様々ながんを有する患者を治療するのに有効であり得る。

本発明の態様は、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する第１の結合単位、及びＣＤ３εに対する結合親和性を有する第２の結合単位を含む、多重特異性結合化合物を含み、第１の結合単位は、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態では、第１の結合単位は、配列番号２４～２６からなる群から選択される重鎖可変領域配列、及び／または配列番号２７の軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合単位は、配列番号２５の重鎖可変領域配列、及び配列番号２７の軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合単位は、配列番号２８～８０の配列番号のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号８１～１３２の配列番号のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合単位は、配列番号２８～８０からなる群から選択される重鎖可変領域配列、及び／または配列番号８１～１３２の軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合単位は、（ａ）配列番号５５の重鎖可変領域配列、及び配列番号１０７の軽鎖可変領域配列、または（ｂ）配列番号２８の重鎖可変領域配列、及び配列番号８１の軽鎖可変領域配列、または（ｃ）配列番号２９の重鎖可変領域配列、及び配列番号８２の軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合単位は、第１の可変領域配列、第２の可変領域配列、及び第１の可変領域配列を第２の可変領域配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、配列番号２２９の配列を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、可変領域配列（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含み、Ｈ１は、可変領域配列（Ｈ１Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ２）、及びＣ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ３）を含み、Ｈ２は、第１の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ）、及びＨ２ｓｃＦｖ_Ｈ配列をＨ２ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ２ｓｃＦｖ）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ２）、ならびにＣ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ３）を含み、Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ配列は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、Ｈ２ｓｃＦｖは、ＣＤ３εに対する結合親和性を有し、Ｌ１Ｃ_Ｌ及びＨ１Ｃ_Ｈ１配列は、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖は、任意選択で、Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって接続されるヒンジ領域を含み、Ｈ１Ｃ_Ｈ３及びＨ２Ｃ_Ｈ３配列は、Ｈ１ポリペプチド鎖とＨ２ポリペプチド鎖との間の適切な対形成を促進する非対称界面を含む。

いくつかの実施形態では、Ｌ１Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１Ｖ_Ｈは、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４～２６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｈ２ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、可変領域配列（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含み、Ｈ１は、可変領域配列（Ｈ１Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ２）、Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ３）、ならびに第１の可変領域配列（Ｈ１ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ１ｓｃＦｖ_Ｌ）、及びＨ１ｓｃＦｖ_Ｈ配列をＨ１ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ１ｓｃＦｖ）を含み、Ｈ２は、可変領域配列（Ｈ２Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ２）、Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ３）、ならびに第１の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ）、及びＨ２ｓｃＦｖ_Ｈ配列をＨ２ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ２ｓｃＦｖ）を含み、Ｌ２は、可変領域配列（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含み、Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ配列は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ配列は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、Ｈ１ｓｃＦｖ及びＨ２ｓｃＦｖは、ＣＤ３εに対する結合親和性を有し、Ｌ１Ｃ_Ｌ及びＨ１Ｃ_Ｈ１配列は、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、Ｌ２Ｃ_Ｌ及びＨ２Ｃ_Ｈ１配列は、任意選択で、ジスルフィド結合によって接続され、Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖は、任意選択で、Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって接続されるヒンジ領域を含む。

いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１及びＨ２は、同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、異なる配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１及びＨ２は、異なる配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１Ｖ_Ｈは、配列番号２４～２６の配列のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４～２６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｈ１ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５の配列のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２Ｖ_Ｈは、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４～２６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｈ２ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｈ１Ｃ_Ｈ１、Ｈ１Ｃ_Ｈ２、Ｈ１Ｃ_Ｈ３、Ｈ１ｓｃＦｖのとおり進行する配列順序を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３、Ｈ２ｓｃＦｖのとおり進行する配列順序を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｈ１Ｃ_Ｈ１、Ｈ１ｓｃＦｖ、Ｈ１Ｃ_Ｈ２、Ｈ１Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２ｓｃＦｖ、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３、のとおり進行する配列順序を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、可変領域配列（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含み、Ｈ１は、可変領域配列（Ｈ１Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ２）、及びＣ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ３）を含み、Ｈ２は、可変領域配列（Ｈ２Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ２）、Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ３）、ならびに第１の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ）、及びＨ２ｓｃＦｖ_Ｈ配列をＨ２ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ２ｓｃＦｖ）を含み、Ｌ２は、可変領域配列（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含み、Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ配列は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ配列は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、Ｈ２ｓｃＦｖは、ＣＤ３εへの結合親和性を有し、Ｌ１Ｃ_Ｌ及びＨ１Ｃ_Ｈ１配列は、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、Ｌ２Ｃ_Ｌ及びＨ２Ｃ_Ｈ１配列は、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖は、任意選択で、Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって接続されるヒンジ領域を含み、Ｈ１Ｃ_Ｈ３及びＨ２Ｃ_Ｈ３配列は、Ｈ１ポリペプチド鎖とＨ２ポリペプチド鎖との間の適切な対形成を促進する非対称界面を含む。

いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、異なる配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１Ｖ_Ｈは、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ１Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４～２６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｈ２ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２ｓｃＦｖは、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７の配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２Ｖ_Ｈは、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４～２６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｈ１は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｈ１Ｃ_Ｈ１、Ｈ１Ｃ_Ｈ２、Ｈ１Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３、Ｈ２ｓｃＦｖのとおり進行する配列順序を含む。いくつかの実施形態では、Ｈ２は、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２ｓｃＦｖ、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、Ｈ１は、配列番号２０１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、Ｈ２は、配列番号２２４～２２８、または２３２の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４の配列を含み、Ｈ１は、配列番号２０１の配列を含み、Ｈ２は、配列番号２２４～２２８、または２３２からなる群から選択される配列を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２２５を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、Ｈ１は、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４の配列を含み、Ｈ１は、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４の配列を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号１９５及び１９８からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９５及び１９８からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号１９６及び１９９からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９６及び１９９からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号１９７及び２００からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９７及び２００からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２３３及び２３４からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２３３及び２３４からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０２、２０６、２０９、及び２１２からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０３、２０７、２１０、及び２１３からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０４、２０８、２１１、及び２１４からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０５を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２３１を含み、Ｈ２は、配列番号２３５、２３６、及び２３７からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１５、２１９、２２１、及び２３９からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２１５、２１９、２２１、及び２３９からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１６、２２０、２２２、及び２４０からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２１６、２２０、２２２、及び２４０からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１７及び２２３からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２１７及び２２３からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１８を含み、Ｈ２は、配列番号２１８を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

本発明の態様は、本明細書に記載される多重特異性結合化合物を含む医薬組成物を含む。本発明の態様は、有効量の本明細書に記載の多重特異性結合化合物または医薬組成物を必要とする個体に投与することを含む治療の方法を含む。本発明の態様は、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害の治療のための方法を含み、この方法は、該障害を有する対象に、本明細書に記載される多重特異性結合化合物または医薬組成物を投与することを含む。

本発明の態様は、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害の治療のための医薬の調製における、本明細書に記載されるような多重特異性結合化合物の使用を含む。本発明の態様は、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害の治療に使用するための、本明細書に記載されるような多重特異性結合化合物を含む。

いくつかの実施形態では、障害は、肉腫、乳癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、及び大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される。

本発明の態様は、本明細書に記載されるような多重特異性結合化合物をコードするポリヌクレオチド、本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドを含むベクター、及び本明細書に記載されるようなベクターを含む細胞を含む。

本発明の態様は、本明細書に記載されるような多重特異性結合化合物を産生する方法を含み、この方法は、多重特異性結合化合物の発現を許容する条件下で、本明細書に記載されるような細胞を成長させることと、多重特異性結合化合物を単離することとを含む。

これら及びさらなる態様は、実施例を含め、本開示の残りの部分でさらに説明される。

本発明の実施形態による多重特異性結合化合物の凝集の割合、単量体の割合、及び融点を示す表である。 本発明の実施形態による多重特異性結合化合物の結合動態を示す表である。 パネルＡは、本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物の概略図である。 パネルＢは、本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物の概略図である。 パネルＣは、本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物の概略図である。 パネルＤは、本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物の概略図である。 パネルＥは、本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物の概略図である。 パネルＦは、本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物の概略図である。 本発明の実施形態による様々な多重特異性結合化合物で実施されたタンパク質熱シフトアッセイの結果を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、ヒトＪｕｒｋａｔ細胞（パネルＡ）及びカニクイザルＨ－ＳＣＦ細胞（パネルＢ）に結合する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ－Ｆｃクローンの濃度の関数としての結合を示すグラフである。 パネルＡは、様々な二重特異性結合化合物形式のＣＤ３＋細胞への結合を示すグラフである。パネルＡは、ｓｃＦｖ－Ｆｃ化合物のＣＤ３＋細胞への結合を示す。 パネルＢは、様々な二重特異性結合化合物形式のＣＤ３＋細胞への結合を示すグラフである。パネルＢは、１型化合物のＣＤ３＋細胞への結合を示す。 パネルＣは、様々な二重特異性結合化合物形式のＣＤ３＋細胞への結合を示すグラフである。パネルＣは、２型化合物のＣＤ３＋細胞への結合を示す。 パネルＤは、様々な二重特異性結合化合物形式のＣＤ３＋細胞への結合を示すグラフである。パネルＤは、４型化合物、５型化合物、及びｓｃＦｖ－Ｆｃ化合物の、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞へ、及びＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞への結合を比較する。 パネルＥは、様々な二重特異性結合化合物形式のＣＤ３＋細胞への結合を示すグラフである。パネルＥは、４型化合物、５型化合物、及びｓｃＦｖ－Ｆｃ化合物の、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞へ、及びＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞への結合を比較する。 パネルＦは、様々な二重特異性結合化合物形式のＣＤ３＋細胞への結合を示すグラフである。パネルＦは、４型化合物、５型化合物、及びｓｃＦｖ－Ｆｃ化合物の、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞へ、及びＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞への結合を比較する。 パネルＡ及びＢは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての、それぞれＬＲＲＣ１５＋Ｕ１１８ＭＧ及びＵ８７ＭＧ細胞への結合を示すグラフである。 パネルＡは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞活性化を示すグラフである。 パネルＢは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞活性化を示すグラフである。 パネルＣは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞活性化を示すグラフである。 パネルＤは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞活性化を示すグラフである。 パネルＥは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞活性化を示すグラフである。 パネルＡ、は、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞の増殖を示すグラフである。 パネルＢ、は、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞の増殖を示すグラフである。 パネルＣ、は、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞の増殖を示すグラフである。 パネルＤ、は、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞の増殖を示すグラフである。 パネルＥ、は、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのＴ細胞の増殖を示すグラフである。 パネルＡは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのサイトカイン放出を示すグラフである。 パネルＢは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのサイトカイン放出を示すグラフである。 パネルＣは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としてのサイトカイン放出を示すグラフである。 パネルＡは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 パネルＢは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 パネルＣは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 パネルＤは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 パネルＥは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 パネルＦは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 パネルＧは、様々な結合化合物形式の濃度の関数としての細胞傷害性の割合を示すグラフである。 様々な結合化合物形式または対照を投与した動物に関する時間の関数としての腫瘍体積を示すグラフである。

本発明の実践には、別段の指示がない限り、当該技術分野の技能内である分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法が用いられる。そのような技法は、文献、例えば、”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）、“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｕｐｄａｔｅｓ）、“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，１９９４）、“Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”（Ｐｅｒｂａｌ Ｂｅｒｎａｒｄ Ｖ．，１９８８）、“Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”（Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）、Ｈａｒｌｏｗ，Ｌａｎｅ ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：Ｐｏｒｔａｂｌｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｎｏ．Ｉ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９９８）、及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；（１９８８）で十分に説明される。

値の範囲が提供される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、また、表示範囲内の任意の具体的な除外限度に従って、本明細書にも包含される。表示範囲がそれらの上限値及び下限値のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される上限値及び下限値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に包含される。

別段の指示がない限り、本明細書における抗体残基は、Ｋａｂａｔナンバリング方式に従って付番される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。

以下の説明では、本発明のより完全な理解を提供するために、多くの具体的な詳細が述べられている。しかしながら、本発明がこれらの具体的な詳細の１つ以上を伴わずに実施され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、本発明を曖昧にすることを回避するために、周知の特徴及び当業者に周知の手順は記載されていない。

特許出願及び公報を含む、本開示を通じて引用されるすべての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。

Ｉ．定義
「含む」とは、列挙される要素が組成物／方法／キットに必要であることを意味するが、特許請求の範囲内で他の要素が組成物／方法／キットなどを形成するために含まれ得る。

「～から本質的になる」とは、記載する組成物または方法の範囲を、本発明の基本的及び新規の特性（複数可）に実質的に影響を及ぼさない特定の物質またはステップに限定することを意味する。

「～からなる」とは、特許請求の範囲で指定されていない任意の要素、ステップ、または成分が、組成物、方法、またはキットから除外されることを意味する。

本明細書の抗体残基は、Ｋａｂａｔナンバリング方式及びＥＵナンバリング方式に従って番号付けされている。Ｋａｂａｔナンバリング方式は、一般的に、可変ドメイン内の残基（およそ、重鎖の残基１～１１３）に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。「ＥＵナンバリング方式」または「ＥＵインデックス」は、一般的に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）で報告されているＥＵインデックス）。「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。本明細書中で特に明記しない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔナンバリング方式による残基ナンバリングを意味する。本明細書に別段の定めがない限り、抗体の定常ドメインにおける残基番号への言及は、ＥＵナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する。

免疫グロブリンとも称される抗体は、従来、少なくとも１つの重鎖及び１つの軽鎖を含み、重鎖及び軽鎖のアミノ末端ドメインは配列上可変であるため、一般に可変領域ドメイン、または可変重鎖（ＶＨ）もしくは可変軽鎖（ＶＨ）ドメインと称される。２つのドメインは、従来、特異的結合領域を形成するように会合するが、本明細書で論じられるように、特異的結合は、重鎖のみの可変配列でも得ることができ、抗体の様々な非天然構造が知られており、当技術分野で使用されている。

「機能的」または「生物学的に活性な」抗体または結合化合物は、構造的、調節的、生化学的、または生物物理学的事象において１つ以上の活性を発揮することができるものである。例えば、機能的抗体または他の結合分子は、抗原に特異的に結合する能力を有し得、その結合は、次に、シグナル伝達または酵素活性などの細胞事象または分子事象を誘発または変化させ得る。機能的抗体または他の結合分子はまた、受容体のリガンド活性化を遮断するか、またはアゴニストもしくはアンタゴニストとして作用し得る。抗体または他の結合分子が１つ以上の活性を発揮する能力は、ポリペプチド鎖の適切な折り畳み及び集合を含むいくつかの要因に依存する。

本明細書における用語「抗体」は、最も広義に使用され、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単量体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、三本鎖抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ナノボディなどを網羅し、また、所望の生体活性を呈する限り、抗体断片も含む（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４－４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラ、または他の種に由来するものであってもよい。

抗体という用語は、全長重鎖、全長軽鎖、無傷の免疫グロブリン分子、またはこれらのポリペプチドのいずれかの免疫学的に活性な部分、すなわち、目的とする標的またはその一部の抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含むポリペプチドを指してもよく、そのような標的には、がん細胞、または自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、または減弱または増強したエフェクター細胞活性を提供する改変Ｆｃ部分により操作されたサブクラスを含むサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来してもよい。

本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位を指向し、高度に特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。本発明によるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、例えば、組換えタンパク質産生法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）を介して作製することもできる。

抗体に関連して使用する用語「可変」とは、抗体可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で大きく異なっており、その配列が各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に使用されているという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等には分布していない。これは、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインのいずれにおいても超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのＦＲを含み、これらは主にβシート構成を採用し、３つの超可変領域により接続され、これら超可変領域は、βシート構造に接続するループを形成し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、近接して保持されており、他方の鎖からの超可変領域により、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。

本明細書に使用されるとき、用語「超可変領域」は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、重鎖可変ドメインにおける残基３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））及び／または重鎖可変ドメインにおける「超可変ループ」残基２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）からの残基；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

例示的なＣＤＲの呼称を本明細書に示すが、当業者であれば、配列の変動性に基づき、最も一般的に使用されているＫａｂａｔ定義（“Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ａ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０；４７：６９４－７００を参照されたい）を含む、ＣＤＲのいくつかの定義が一般的に使用されていることを理解するであろう。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づいている（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｎａｔｕｒｅ．１９８９；３４２：８７７－８８３）。目的の代替のＣＤＲ定義には、限定されないが、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，“Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏｏｌ．”Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００１；３０９：６５７－６７０、Ｏｆｒａｎ ｅｔ ａｌ．“Ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ（ＣＤＲｓ）ｒｅｖｅａｌｓ ｐｅｃｕｌｉａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＣＤＲｓ ａｎｄ Ｂ ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ．”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；１８１：６２３０－６２３５、Ａｌｍａｇｒｏ“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｉｚｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ．”Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００４；１７：１３２－１４３、及びＰａｄｌａｎｅｔ ａｌ．“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”Ｆａｓｅｂ Ｊ．１９９５；９：１３３－１３９．によって開示された定義が含まれ、これらの各々は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。

本明細書で使用される場合、用語「多重特異性結合化合物」は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合化合物を意味する。本発明の実施形態による多重特異性結合化合物は、２つ、３つ、または４つのポリペプチドサブユニットを含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる抗体様分子であってよく、これらのうちのいずれかは、標的抗原（例えば、ＬＲＲＣ１５）に対する結合親和性を有する１つ以上の可変領域ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、ともに、結合単位を形成する一対の可変領域ドメイン（例えば、重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）形式の一対の可変領域ドメインを含み、第１の可変領域ドメイン及び第２の可変領域ドメインは、リンカーによって接続され、ともに、結合単位を形成する。主題の多重特異性結合化合物は、本明細書に記載される特定の構成を含むが、これらに限定されない、結合単位の任意の好適な組み合わせまたは構成を有することができる。

本明細書に記載されるような多重特異性結合化合物は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥサブクラスを含む任意の免疫グロブリンスクラスに属し得る。特定の実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、特にＩｇＧ１サブタイプのものである。エフェクター機能を改変させるＣＨドメインの修飾は、本明細書にさらに記載される。

本明細書中で使用する「インタクトな抗体鎖」とは、全長の可変領域及び全長の定常領域（Ｆｃ）を含む抗体鎖である。インタクトな「従来の」抗体は、インタクトな軽鎖及びインタクトな重鎖、ならびに分泌型ＩｇＧ用の軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。ＩｇＭまたはＩｇＡなどの他のアイソタイプは、異なるＣＨドメインを有している場合がある。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。インタクトな抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有し得、これは、抗体のＦｃ定常領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントのＦｃ領域）に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例として、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、及び細胞表面受容体の下方調節が挙げられる。定常領域バリアントには、エフェクター特性、Ｆｃ受容体への結合などを変化させるバリアントが含まれる。

重鎖のＦｃ（定常ドメイン）のアミノ酸配列に応じて、抗体及び様々な抗原結合タンパク質は、異なるクラスとして提供され得る。重鎖Ｆｃ領域には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。異なるクラスの抗体に対応するＦｃ定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれ得る。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成は、周知である。Ｉｇ型としては、ヒンジ修飾またはヒンジのない型が挙げられる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３－４０９０、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６－７２５６、ＵＳ２００５／００４８５７２、ＵＳ２００４／０２２９３１０）。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ及びλと呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。

「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。エフェクター機能の非限定的な例としては、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が、受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＦｃγＲＩＩＢ２、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ受容体、及び低親和性ＦｃＲｎ受容体と相互作用することを必要とし、当該技術分野で既知の様々なアッセイを使用して評価することができる。「死んだ」または「サイレンシングされた」Ｆｃは、例えば、血清半減期の延長に関して活性を保持するように変異しているが、高親和性Ｆｃ受容体を活性化しないか、またはＦｃ受容体に対する親和性が低下しているものである。

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、例えば、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然のバリアントが含まれる。

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１～約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、親ポリペプチドの天然配列Ｆｃ領域及び／またはＦｃ領域との少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは、それらとの少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらとの少なくとも約９５％の相同性を保有する。

ヒトＩｇＧ１アミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｎｏ．Ｐ０１８５７によって提供され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒトＩｇＧ２アミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｎｏ．Ｐ０１８５９によって提供され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒトＩｇＧ３アミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｎｏ．Ｐ０１８６０によって提供され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒトＩｇＧ４アミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｎｏ．Ｐ０１８６１によって提供され、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

バリアントＦｃ配列は、ＥＵインデックス位置２３４、２３５、及び２３７におけるＦｃγＲＩ結合を低減させるためにＣＨ２領域内に３つのアミノ酸置換を含み得る（Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：５６３、Ｈｅｚａｒｅｈ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５：１２１６１、米国特許第５，６２４，８２１号を参照されたく、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ配列は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含むことができる。これらの３つのアミノ酸置換が、ＩｇＧ１ Ｆｃ配列中に存在する場合、それらは、Ｇ１ＡＡＡまたはＬＡＬＡＧＡと称され得る。

ＥＵインデックス位置３３０及び３３１の補体Ｃ１ｑ結合部位における２つのアミノ酸置換は、補体結合を低下させる（Ｔａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６１（１９９３）、及びＣａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３（１９９１）を参照されたい）。位置２３３～２３６でのヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２残基ならびに位置３２７、３３０、及び３３１でのＩｇＧ４残基への置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に低下させる（例えば、Ａｒｍｏｕｒ ＫＬ．ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４、及びＳｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，２００１．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４を参照されたい）。

他のＦｃバリアントも可能であるが、これには、ジスルフィド結合を形成することができる領域が欠失しているか、または天然ＦｃのＮ末端で、ある特定のアミノ酸残基が排除されているか、もしくはメチオニン残基がそれに付加されているものが含まれるが、これらに限定されない。したがって、いくつかの実施形態では、結合化合物の１つ以上のＦｃ部分が、ヒンジ領域に１つ以上の変異を含んでジスルフィド結合を排除してもよい。さらに別の実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域は、完全に除去され得る。さらに別の実施形態では、結合化合物は、Ｆｃバリアントを含んでもよい。

さらに、Ｆｃバリアントは、補体結合またはＦｃ受容体結合をもたらすためにアミノ酸残基を置換（変異）、欠失、または付加することによって、エフェクター機能を除去または実質的に低減するように構築することができる。例えば、限定されないが、欠失を、Ｃ１ｑ結合部位などの補体結合部位で行ってもよい。免疫グロブリンＦｃ断片のそのような配列誘導体を調製するための技法は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号及びＷＯ９６／３２４７８号に開示されている。加えて、Ｆｃドメインは、リン酸化、硫酸化、アシル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などによって修飾され得る。

用語「Ｆｃ領域を含む抗体」とは、Ｆｃ領域を含む抗体を指す。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリング方式による残基４４７）を、例えば、抗体の精製中に、または抗体をコードする核酸の組換え操作により除去してもよい。したがって、本発明のＦｃ領域を有する抗体は、Ｋ４４７を有するか、または有しない抗体を含むことができる。

本発明の態様は、限定されないが、二重特異性、三重特異性などを含む多重特異性構成を有する結合化合物を含む。二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）、三重特異性抗体などにおいて、多種多様な方法及びタンパク質構成が知られており、使用されている。

２つ以上の抗体の可変ドメインを組換え融合することによって、多価人工抗体の産生のための様々な方法が開発されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチド上の第１及び第２の抗原結合ドメインは、ポリペプチドリンカーによって接続される。そのようなポリペプチドリンカーの１つの非限定的な例は、４つのグリシン残基、続いて１つのセリン残基のアミノ酸配列を有するＧＳリンカーであり、この配列はｎ回繰り返され、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、または９などの１～約１０の範囲の整数である。そのようなリンカーの非限定的な例としては、ＧＧＧＧＳ（配列番号１９２）（ｎ＝１）及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１９３）（ｎ＝２）が挙げられる。他の好適なリンカーも使用することができ、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３ Ｏｃｔｏｂｅｒ １５；６５（１０）：１３５７－６９に記載され、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書に記載されるような抗体及び多重特異性結合化合物は、２つの重鎖がジスルフィド結合しているか、またはそうでなければ共有結合もしくは非共有結合で互いに付着している二量体の形態であり得、任意選択で、ポリペプチド鎖間の適切な対形成を促進するために、ＣＨドメインのうちの２つ以上の間の非対称界面を含むことができる。重鎖ヘテロ二量体化のためのＫｎｏｂｓ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅｓ抗体エンジニアリング技法は、例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ Ｊｕｌ；９（７）：１７－２１、及び米国特許第８，２１６，８０５号に論じられており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。非対称界面を含むＦｃ領域は、本明細書において「ＫｉＨ」の略称を用いて言及することができ、これは、ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓを意味する。例えば、本発明の態様は、非対称界面を含有する、Ｇ１ＡＡＡ配列などのバリアントＦｃ領域配列を含み、これは、本明細書において「Ｇ１ＡＡＡ ＫｉＨ」と称される。

用語「ＬＲＲＣ１５」及び「１５を含有するロイシンリッチ反復」は、任意のヒト及び非ヒト動物種のＬＲＲＣ１５タンパク質を指し、具体的には、ヒトＬＲＲＣ１５ならびに非ヒト哺乳動物のＬＲＲＣ１５を含む。

本明細書で使用される場合、用語「ヒトＬＲＲＣ１５」は、その供給源または調製に様式にかかわらず、ヒトＬＲＲＣ１５（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ８ＴＦ６６）の任意のバリアント、アイソフォーム、及び種相同体を含む。したがって、「ヒトＬＲＲＣ１５」は、細胞によって自然に発現したＬＲＲＣ１５、及びヒトＬＲＲＣ１５遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現したＬＲＲＣ１５を含む。

本明細書で使用される場合、用語「抗ＬＲＲＣ１５抗体」、「ＬＲＲＣ１５抗体」、「抗ＬＲＲＣ１５結合化合物」、及び「ＬＲＲＣ１５結合化合物」は、本明細書に定義される、ヒトＬＲＲＣ１５を含む、ＬＲＲＣ１５に免疫特異的に結合する、本明細書に定義される抗体または結合化合物を指すために互換的に使用される。

参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性割合（％）」は、配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パーセントを達成した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性の割合を決定することを目的としたアラインメントは、当技術分野における技術の範囲内である様々な方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較している配列の全長にわたる最大のアラインメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用してアミノ酸配列同一性の値％が生成される。

「単離された」抗体または結合化合物とは、その自然環境の成分から特定及び分離され、及び／または回収されたものである。その自然環境の混入成分は、抗体の診断上または治療上の使用を妨げる材料であり、これには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。好ましい実施形態では、抗体を、（１）ローリー法により判定した場合に抗体の９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップシーケネータ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用して少なくとも１５残基のＮ末端配列もしくは内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を用いて還元条件もしくは非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、均質になるまで精製する。単離された抗体には、抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内でのｉｎ ｓｉｔｕ抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製されるであろう。

本発明の結合化合物は、多重特異性結合化合物を含む。多重特異性抗体は、１つ以上の結合特異性を有する。用語「多重特異性」には、具体的には、「二重特異性」及び「三重特異性」、ならびに高次のポリエピトープ特異性などの高次の独立した特異的結合親和性、ならびに四価抗体及び抗体断片が含まれる。用語「多重特異性抗体」及び「多重特異性結合化合物」は、最も広い意味で本明細書で使用され、２つ以上の結合特異性を有するすべての抗体及び抗体様分子を網羅する。本発明の多重特異性抗ＬＲＲＣ５結合化合物は、具体的には、ヒトＬＲＲＣ１５などのＬＲＲＣ１５タンパク質上のエピトープ、及び、例えば、ＣＤ３タンパク質などの異なるタンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する結合化合物を含む。

「エピトープ」とは、単一の抗体分子が結合する抗原分子の表面上の部位である。一般的に、抗原はいくつかまたは多くの異なるエピトープを有し、多くの異なる抗体と反応する。この用語は、具体的には、線状エピトープ及び立体配座エピトープを含む。

抗体エピトープは、直線状エピトープまたは立体配座エピトープであり得る。直鎖状エピトープは、タンパク質中のアミノ酸の連続配列によって形成される。立体配座エピトープは、タンパク質配列において不連続であるが、タンパク質のその三次元構造への折り畳みの際に結合するアミノ酸から形成される。

本明細書で使用される場合、用語「価」とは、抗体分子または結合化合物内の特定の数の結合部位を指す。

「一価」結合化合物は、１つの結合部位を有する。したがって、一価結合化合物は、単一特異的でもある。

「多価」抗体は、２つ以上の結合部位を有する。したがって、用語「二価」、「三価」、及び「四価」とは、それぞれ、２つの結合部位、３つの結合部位、及び４つの結合部位が存在することを指す。したがって、本発明による二重特異性結合化合物は、少なくとも二価であり、三価、四価、またはそうでなければ多価であり得る。本発明の実施形態による二価結合化合物は、同じエピトープ（すなわち、二価、モノパラトピック）、または２つの異なるエピトープ（すなわち、二価、バイパラトピック）に対する２つの結合部位を有し得る。

二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）及び結合化合物、三重特異性抗体及び結合化合物などを調製するための多種多様な方法及びタンパク質構成が知られており、使用されている。

用語「ヒト抗体」は、本明細書中では、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むように使用される。本明細書のヒト抗体には、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基、例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的な変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異が含まれ得る。用語「ヒト抗体」は、具体的には、ヒト重鎖可変領域配列を有する抗体及び結合化合物を含む。

本明細書で使用される場合、用語「キメラ」抗体は、ラットまたはマウス抗体などの非ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列、及び典型的にはヒト免疫グロブリンテンプレートから選択されるヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９（４７１９）：１２０２－７、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４－２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２、米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、及び同第４，８１６，３９７号を参照されたく、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。用語「キメラ抗体」は、具体的には、非ヒト免疫グロブリンに由来する可変領域配列、及びヒト免疫グロブリン定常領域配列を有する抗体及び結合化合物を含む。

本明細書で使用される場合、用語「ヒト化抗体」は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する抗体または結合化合物を指す。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の少なくとも一部分を含むことができる。抗体ヒト化の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－７、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、及び米国特許第６，１８０，３７０号、ＥＰ２３９４００、ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、ＥＰ５９２１０６、ＥＰ５１９５９６、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８：４８９－４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．７：８０５－８１４、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９－９７３、ならびに米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたく、これらのすべては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書中で使用する場合、用語「エフェクター細胞」とは、免疫応答の認知及び活性化段階とは対照的に、免疫応答のエフェクター段階に関与する免疫細胞を指す。いくつかのエフェクター細胞は、特定のＦｃ受容体を発現し、特定の免疫機能を果たす。いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。例えば、ＦｃＲを発現する単球とマクロファージは、標的細胞の特異的な死滅と免疫系の他の成分への抗原の提示、または抗原を提示する細胞への結合に関与する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、標的抗原または標的細胞を貪食し得る。

「ヒトエフェクター細胞」は、Ｔ細胞受容体またはＦｃＲなどの受容体を発現し、エフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、及び好中球が挙げられ、ＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、本明細書に記載されるように、その天然源から、例えば、血液またはＰＢＭＣから単離され得る。

「免疫細胞」という用語は、本明細書では最も広義で使用され、骨髄またはリンパ系由来の細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好酸球、多形核細胞、例えば、好中球、顆粒球、肥満細胞、及び好塩基球を含むが、これらに限定されない。

抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御などが含まれる。

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」及び「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）の４６４ページの表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的とする分子のＡＤＣＣ活性を、動物モデル、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているモデルにおいてインビボで評価してもよい。

「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的を溶解させる分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が、同種抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されているようなＣＤＣアッセイを行ってもよい。

本明細書において互換的に使用される「指向性Ｔ細胞媒介性細胞傷害性」及び「再指向性Ｔ細胞媒介性細胞傷害性」は、架橋分子（例えば、二重特異性抗体）がＴ細胞（例えば、ＣＤ３）上の表面抗原及び標的細胞（例えば、がん細胞上の表面抗原）上の抗原を架橋する、細胞媒介性反応を指す。Ｔ細胞と標的細胞との架橋は、Ｔ細胞の細胞傷害性活性を介してＴ細胞による標的細胞の死滅を促進する。再指向性Ｔ細胞媒介細胞傷害性は、例えば、Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１８：１３１３０－３８に記載されている。

「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、一方で、高親和性抗体は、一般に、抗原により早く結合し、結合したままである傾向がある。

本明細書で使用される場合、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」とは、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６機器（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）を動力学モードで使用して、バイオレイヤー干渉法によって決定される解離定数を指す。例えば、抗マウスＦｃセンサーにマウス－Ｆｃ融合抗原を装填し、次いで抗体含有ウェルに浸して、濃度依存性会合速度（ｋｏｎ）を測定する。抗体解離速度（ｋｏｆｆ）は、センサーが緩衝液のみを含有するウェルに浸される最終ステップで測定される。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率である。（詳細については、Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎ，Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ，１２（８），７９１－８００，２００９を参照されたい）。

用語「治療」、「治療する」などは、一般的に、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味するものとして本明細書中で使用される。その効果は、その疾患または症状を完全にまたは部分的に予防するという観点において予防的であり得、及び／または疾患及び／またはその疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒という観点において治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物における疾患の任意の治療を網羅し、これには、（ａ）疾患にかかりやすい可能性があるが、まだそれを有すると診断されていない対象における疾患の発症を予防するか、（ｂ）疾患を阻害する、すなわち、その進行を阻止するか、または（ｃ）疾患を軽減する、すなわち、疾患の退行を引き起こすことを含む。治療薬は、疾患または傷害の発症前、発症中、または発症後に投与してもよい。進行中の疾患の治療で、その治療が患者の望ましくない臨床症状を安定化するか、または軽減するものは、特に興味深い。そのような治療は、影響を受けた組織の機能が完全に失われる前に実施することが望ましい。対象の治療薬は、疾患の症候期の間、及びいくつかの場合では疾患の症候期の後に投与してもよい。

「治療有効量」は、対象に治療効果を与えるために必要な活性薬剤の量を意図している。例えば、「治療有効量」とは、疾患に関連する病理学的症状、疾患の進行または生理学的状態の改善を誘発、寛解、または引き起こすか、または障害に対する耐性を改善する量である。

用語「がん」及び「がん性」は、調節されていない細胞成長を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。「腫瘍」は、１つ以上のがん性細胞を含む。がんの例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病、またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮系扁平上皮細胞癌）、皮膚癌、黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜のがん、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌（例えば、膵管腺癌）、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌（例えば、高悪性度漿液性卵巣癌）、肝臓癌（例えば、肝細胞（ＨＣＣ））、膀胱癌（例えば、尿路上皮膀胱癌）、精巣（胚細胞腫瘍）癌、肝臓癌、乳癌、脳腫瘍（例えば、星状細胞腫）、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、腎細胞癌、腎芽細胞腫、またはウィルムス腫瘍）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌が挙げられる。がんのさらなる例としては、網膜芽腫、卵胞膜細胞腫、男化腫瘍、肝臓癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫、及び急性血液悪性腫瘍を含む血液悪性腫瘍、子宮内膜または子宮癌、子宮内膜症、線維肉腫、絨毛癌、唾液腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、食道癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、鼻咽頭癌、喉頭癌、カポジ肉腫、黒色腫、皮膚癌、シュワン腫、乏突起膠腫、神経芽腫、横紋筋肉腫、骨形成肉腫、平滑筋肉腫、及び尿路癌腫が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「転移性癌」は、原発組織のがん細胞が、血管またはリンパ腺によって、元の部位から体内の１つ以上の他の部位に伝播して、原発組織以外の１つ以上の臓器内で１つ以上の二次腫瘍を形成する、がんの状態を意味する。顕著な例は、転移性乳癌である。

用語「ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする」は、任意の疾患または障害を広義に指し、そこで、ＬＲＲＣ１５の発現が、その疾患または障害の特徴である１つ以上の病理学的プロセスに関連するか、またはそれに関与する。具体的には、限定されないが、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする疾患または障害としては、例えば、腫瘍細胞がＬＲＲＣ１５を発現するがん、及び／または腫瘍関連間質がＬＲＲＣ１５の発現を呈するがんが挙げられる。そのような障害には、侵襲性乳癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、卵巣漿液嚢胞腺癌、膵臓腺癌、直腸腺癌、膀胱尿路上皮癌、子宮頸部扁平上皮癌及び子宮頸部内腺癌、胆管癌、多形性膠芽腫、肉腫（例えば、未分化肉腫）、皮膚黒色腫、腸腺癌、精巣胚細胞腫瘍、子宮癌肉腫、骨肉腫、膠芽細胞腫、黒色腫、卵巣癌、胃癌、ならびに結腸直腸癌が含まれるが、これらに限定されない。

用語「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。

「腫瘍」は、本明細書に使用されるとき、悪性または良性に関わらず、あらゆる腫瘍性の細胞成長及び増殖、ならびにあらゆる前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。

本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療」、または「治療すること」は、治療学的な治療及び予防的措置の両方を指し、目的は、標的化された病理学的状態または障害を予防するか、または遅延（軽減）させることである。治療を必要としている対象には、すでに特定の状態または障害を有する対象、ならびに障害を有する傾向がある対象、または障害が防止されるべき対象が含まれる。

用語「対象」、「個体」、及び「患者」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、治療について評価されている、及び／または治療されている哺乳類を指す。一実施形態では、哺乳類は、ヒトである。用語「対象」、「個体」、及び「患者」は、限定されないが、がんを有する個体、自己免疫疾患を有する個体、病原体感染症を有する個体などを包含する。対象はヒトであり得るが、他の哺乳類、特にヒトの疾患の実験室モデルとして有用な哺乳類、例えば、マウス、ラットなども含まれる。

用語「医薬製剤」とは、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、及び製剤を投与する対象にとって許容できない程度に毒性である追加の成分を含有しない製剤を指す。そのような製剤は、無菌である。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）とは、対象哺乳類に適度に投与して、用いる有効用量の活性成分を提供することができる賦形剤である。

「無菌」製剤は、無菌であるか、またはすべての生存微生物及びそれらの胞子を含まないか、もしくはそれらを本質的に含まない。「凍結」製剤は、温度が０℃未満の製剤である。

「安定」製剤とは、内部のタンパク質が保管時にその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を本質的に保持する製剤である。好ましくは、製剤は、保管時に、その物理的及び化学的安定性、ならびにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般的に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１．Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ．Ａ． Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０）（１９９３）に説明されている。安定性は、選択された温度で、選択された期間測定することができる。安定性は、様々な異なる方法で、質的及び／または量的に評価され得、これには、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、及び／または目視検査によって）、カチオン交換クロマトグラフィー、イメージキャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用して電荷不均一性を評定することによって、アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析、質量分光分析、還元されたインタクトな抗体を比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析、ペプチドマッピング（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ－Ｃ）分析、抗体の生物学的活性または抗原結合機能の評価などが含まれる。不安定性には、凝集、脱アミド化（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミド形成、対形成していないシステイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化の差異などのうちのいずれか１つ以上が含まれ得る。

ＩＩ．詳細な説明
抗ＬＲＲＣ１５結合化合物
本発明の態様は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有する多重特異性結合化合物を含む。多重特異性結合化合物は、様々な構成を含むことができ、各結合単位は、一組のＣＤＲ配列を含むことができる。ＣＤＲ配列を表１及び２に提供する。抗ＬＲＲＣ１５重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１、３、及び１３を含み、抗ＬＲＲＣ１５軽鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１５、１９、及び２２を含む。抗ＣＤ３ε重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号２、４～１２、及び１４を含み、抗ＣＤ３ε軽鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１６～１８、２０～２１、及び２３を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、任意の１つの配列番号１～２３における２つ以下のアミノ酸置換を有するＣＤＲ配列を含む。

本発明の実施形態による多重特異性結合化合物は、表３、４、５、及び６に列挙されるような重鎖及び軽鎖可変領域配列の任意の好適な組み合わせを含むことができる。抗ＬＲＲＣ１５重鎖可変領域配列は、配列番号２４～２６を含む。抗ＬＲＲＣ１５軽鎖可変領域配列は、配列番号２７を含む。抗ＣＤ３ε重鎖可変領域配列は、配列番号２８～８０を含む。抗ＣＤ３ε軽鎖可変領域配列は、配列番号８１～１３２を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、配列番号２４～１３２のいずれか１つの可変領域配列に対する、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約９９．９％の同一性など、少なくとも約８０％の同一性を有する可変領域配列を含む。

本発明の実施形態による多重特異性結合化合物は、表７に列挙されるような１つ以上の抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖ配列を含むことができる。抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖ配列は、配列番号１３３～１８５を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、配列番号１３３～１８５のいずれか１つのｓｃＦｖ配列に対する、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約９９．９％の同一性など、少なくとも約８０％の同一性を有するｓｃＦｖ配列を含む。

本明細書に記載される多重特異性結合化合物は、臨床的治療薬（複数可）としての有用性に寄与するいくつかの利点を提供する。多重特異性結合化合物は、様々な結合単位構成を有するメンバーを含み、治療上の利点を示す特定の分子の選択を可能にする。

好適な結合化合物は、開発、及び治療または他の使用のために本明細書に提供されるものから選択され得、これには、例えば、図３のパネルＡ～Ｆに示されるような二重特異性結合化合物としての使用を含むが、これに限定されない。図３は、本発明の実施形態による多重特異性結合化合物の非限定的な例の概略図を提供する。いくつかの実施形態では、２つの重鎖を、例えば、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ技法を使用して対にする。

図３に示される結合化合物を参照すると、パネルＡは、２つの重鎖を含むｓｃＦｖ－Ｆｃ形式の分子を示し、各重鎖は、ＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖ、ヒンジ領域、及びＦｃ領域を含む。

図３のパネルＢは、第１の軽鎖、第１の重鎖、及び第２の重鎖を含む非対称の二重特異性結合化合物を示す。第１の軽鎖は、可変領域（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含む。第１の重鎖は、可変領域Ｈ１Ｖ_Ｈ、ならびにヒンジ領域及びＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３ドメインを含む定常領域を含む。Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。第２の重鎖は、ＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖ、ヒンジ領域、ならびにＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインを含む。Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、Ｆｃ領域を構成する。いくつかの実施形態では、結合化合物は、第１及び第２の重鎖のＣ_Ｈ２ドメイン及び／またはＣ_Ｈ３ドメイン間の非対称界面を含み、これは、第１の重鎖と第２の重鎖との間の適切な対形成を確実にする。図３のパネルＢに示される結合化合物は、本明細書において１型結合化合物と称される。

図３のパネルＣは、第１の軽鎖、第１の重鎖、第２の重鎖、及び第２の軽鎖を含む対称的な二重特異性結合化合物を示す。第１の軽鎖は、可変領域（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含む。第１の重鎖は、可変領域Ｈ１Ｖ_Ｈ、ヒンジ領域及びＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３ドメインを含む定常領域、ならびにＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖを含む。Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。第２の重鎖は、可変領域Ｈ２Ｖ_Ｈ、ヒンジ領域及びＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３ドメインを含む定常領域、ならびにＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖを含む。Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、Ｆｃ領域を構成する。第２の軽鎖は、可変領域（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含む。Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ領域は、合わせて、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。図３のパネルＣに示される結合化合物は、本明細書において２型結合化合物と称される。

図３のパネルＤは、第１の軽鎖、第１の重鎖、第２の重鎖、及び第２の軽鎖を含む非対称の二重特異性結合化合物を示す。第１の軽鎖は、可変領域（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含む。第１の重鎖は、可変領域Ｈ１Ｖ_Ｈ、ならびにヒンジ領域及びＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３ドメインを含む定常領域を含む。Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。第２の重鎖は、可変領域Ｈ２Ｖ_Ｈ、ヒンジ領域、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３、ならびにＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖを含む。Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、Ｆｃ領域を構成する。いくつかの実施形態では、結合化合物は、第１及び第２の重鎖のＣ_Ｈ２ドメイン及び／またはＣ_Ｈ３ドメイン間の非対称界面を含み、これは、第１の重鎖と第２の重鎖との間の適切な対形成を確実にする。第２の軽鎖は、可変領域（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含む。Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。図３のパネルＤに示される結合化合物は、本明細書において３型結合化合物と称される。

図３のパネルＥは、第１の軽鎖、第１の重鎖、第２の重鎖、及び第２の軽鎖を含む非対称の二重特異性結合化合物を示す。第１の軽鎖は、可変領域（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含む。第１の重鎖は、可変領域Ｈ１Ｖ_Ｈ、ならびにヒンジ領域及びＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３ドメインを含む定常領域を含む。Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。第２の重鎖は、可変領域Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｈ１ドメイン、第１のヒンジ領域、及び／または第１のリンカー領域、ＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖ、第２のヒンジ領域、ならびにＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインを含む。Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、Ｆｃ領域を構成する。いくつかの実施形態では、結合化合物は、第１及び第２の重鎖のＣ_Ｈ２ドメイン及び／またはＣ_Ｈ３ドメイン間の非対称界面を含み、これは、第１の重鎖と第２の重鎖との間の適切な対形成を確実にする。第２の軽鎖は、可変領域（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含む。Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。図３のパネルＥに示される結合化合物は、本明細書において４型結合化合物と称される。

図３のパネルＦは、第１の軽鎖、第１の重鎖、第２の重鎖、及び第２の軽鎖を含む対称的な二重特異性結合化合物を示す。第１の軽鎖は、可変領域（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含む。第１の重鎖は、可変領域Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｈ１ドメイン、第１のヒンジ領域、及び／または第１のリンカー領域、ＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖ、第２のヒンジ領域、ならびにＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインを含む。Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。第２の重鎖は、可変領域Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｈ１ドメイン、第１のヒンジ領域、及び／または第１のリンカー領域、ＣＤ３εに対する結合親和性を有するｓｃＦｖ、第２のヒンジ領域、ならびにＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ ドメインを含む。Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、Ｆｃ領域を構成する。第２の軽鎖は、可変領域（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含む。Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ領域は、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成する。図３のパネルＦに示される結合化合物は、本明細書において５型結合化合物と称される。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、配列番号１９４の配列を含む第１の軽鎖ポリペプチド、配列番号２０１の配列を含む第１の重鎖ポリペプチド、及び配列番号２２４の配列を含む第２の重鎖ポリペプチドを含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、配列番号１９４の配列を含む第１の軽鎖ポリペプチド、配列番号２０１の配列を含む第１の重鎖ポリペプチド、及び配列番号２２５の配列を含む第２の重鎖ポリペプチドを含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、配列番号１９４の配列を含む第１の軽鎖ポリペプチド、配列番号２０１の配列を含む第１の重鎖ポリペプチド、及び配列番号２２６の配列を含む第２の重鎖ポリペプチドを含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、配列番号１９４の配列を含む第１の軽鎖ポリペプチド、配列番号２０１の配列を含む第１の重鎖ポリペプチド、及び配列番号２２７の配列を含む第２の重鎖ポリペプチドを含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、配列番号１９４の配列を含む第１の軽鎖ポリペプチド、配列番号２０１の配列を含む第１の重鎖ポリペプチド、及び配列番号２２８の配列を含む第２の重鎖ポリペプチドを含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、配列番号１９４の配列を含む第１の軽鎖ポリペプチド、配列番号２０１の配列を含む第１の重鎖ポリペプチド、及び配列番号２３２の配列を含む第２の重鎖ポリペプチドを含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号１９５及び１９８からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９５及び１９８からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号１９６及び１９９からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９６及び１９９からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号１９７及び２００からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号１９７及び２００からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２３３及び２３４からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２３３及び２３４からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０２、２０６、２０９、及び２１２からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０３、２０７、２１０、及び２１３からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０４、２０８、２１１、及び２１４からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２０１を含み、Ｈ２は、配列番号２０５を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態において、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２３１を含み、Ｈ２は、配列番号２３５、２３６、及び２３７からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１５、２１９、２２１、及び２３９からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２１５、２１９、２２２１、及び２３９からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１６、２２０、２２２、及び２４０からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２１６、２２０、２２２、及び２４０からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１７及び２２３からなる群から選択される配列を含み、Ｈ２は、配列番号２１７及び２２３からなる群から選択される配列を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２１８を含み、Ｈ２は、配列番号２１８を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

１つの好ましい実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有し、第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含み、Ｌ１は、配列番号１９４を含み、Ｈ１は、配列番号２３８を含み、Ｈ２は、配列番号２３８を含み、Ｌ２は、配列番号１９４を含む。

候補タンパク質に対する親和性の決定は、Ｂｉａｃｏｒｅ測定などの当技術分野において既知の方法を使用して実施することができる。本明細書に記載される多重特異性結合化合物は、限定されないが、約１０^－６～約１０^－１０、約１０^－６～約１０^－９、約１０^－６～約１０^－８、約１０^－８～約１０^－１１、約１０^－８～約１０^－１０、約１０^－８～約１０^－９、約１０^－９～約１０^－１１、約１０^－９～約１０^－１０、またはこれらの範囲内の任意の値を含む、約１０^－６～約１０^－１１のＫｄを有するＬＲＲＣ１５またはＣＤ３εに対する親和性を有し得る。親和性の選択は、インビトロアッセイ、前臨床モデル、及び臨床試験を含む、ＬＲＲＣ１５またはＣＤ３ε生物学的活性を調節するための生物学的評価、ならびに潜在的な毒性の評価により確認することができる。

本明細書に記載されるように、２つの鎖ポリペプチド、３つの鎖ポリペプチド、及び４つの鎖ポリペプチドを含むが、これらに限定されない、多重特異性結合化合物の様々な形式は、本発明の範囲内にある。本明細書における多重特異性結合化合物は、具体的には、ＬＲＲＣ１５及びＣＤ３εに対する結合親和性を有する二重特異性結合化合物（例えば、抗ＬＲＲＣ１５×抗ＣＤ３ε結合化合物）を含む。このような二重特異性結合化合物は、ＬＲＲＣ１５を発現する細胞及び／またはＬＲＲＣ１５を発現する腫瘍細胞会合間質の強力なＴ細胞媒介性死滅を誘導する。配列情報を表１～１４に提供する。

結合化合物の調製
本発明の多重特異性結合化合物は、当該技術分野で既知の方法によって調製することができる。例えば、結合化合物及びその抗原結合断片はまた、組換えＤＮＡ技法によって、例えば、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）、Ｅ．ｃｏｌｉ、または酵母を含む好適な真核生物または原核生物宿主におけるコード核酸の発現によって産生することができる。

医薬組成物、使用、及び治療の方法
本発明の別の態様は、適切な薬学的に許容される担体と混合した本発明の１つ以上の多重特異性結合化合物を含む医薬組成物を提供することである。本明細書で使用される薬学的に許容される担体は、例示されたアジュバント、固体担体、水、緩衝液、または治療成分を保持するために当技術分野で使用される他の担体、またはそれらの組み合わせであるが、これらに限定されない。

一実施形態では、医薬組成物は、ＬＲＲＣ１５に結合する多重特異性結合化合物を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、ＬＲＲＣ１５タンパク質上の２つ以上の非重複エピトープに対する結合特異性を有する多重特異性結合化合物を含む。好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＬＲＲＣ１５に対する結合特異性を有し、かつエフェクター細胞上の結合標的（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質などのＴ細胞上の結合標的）に対する結合特異性を有する多重特異性結合化合物を含む。

本発明に従って使用される結合化合物の医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態など、所望の純度を有するタンパク質を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって保管用に調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）を参照されたい）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用する用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、これには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールなど）、低分子量（約１０個の残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、ショ糖、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。

経口投与用の医薬組成物は、好ましくは無菌であり、実質的に等張であり、優良医薬品製造基準（ＧＭＰ）条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与の用量）で提供することができる。製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書における結合化合物は、静脈内への注射もしくは注入によって投与するか、または皮下投与することができる。注射による投与の場合、本明細書における結合化合物を、水溶液中に、好ましくは生理学的に適合性のある緩衝液中に製剤化して、注射部位の不快感を軽減することができる。溶液は、上記のような担体、賦形剤、または安定剤を含有し得る。あるいは、結合化合物を、使用前に、適切なビヒクル、例えば、無菌のパイロジェンフリー水を用いて構成するために、凍結乾燥形態とすることができる。

抗体製剤は、例えば、米国特許第９，０３４，３２４号に開示されている。同様の製剤は、本発明の結合化合物に使用することができる。皮下抗体製剤は、例えば、ＵＳ２０１６０３５５５９１及びＵＳ２０１６０１６６６８９に記載されている。

使用方法
本明細書に記載される多重特異性結合化合物及び医薬組成物は、限定されないが、本明細書に記載される状態及び疾患を含む、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする疾患及び状態の治療のために使用することができる。

ＬＲＲＣ１５は、いくつかの腫瘍関連間質を含む複数の固形腫瘍適応で高発現であり、正常組織での発現が制限されていることが特定されている。（Ｐｕｒｃｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；７８（１４）；４０５９－７２）。正常組織中での発現が限られているため、ＬＲＲＣ１５は、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする悪性腫瘍の治療のための魅力的な標的である。

一態様では、本明細書における多重特異性結合化合物及び医薬組成物を使用して、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とするがんを治療することができる。本明細書で使用される場合、「ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする」がんとしては、１つ以上の腫瘍細胞がＬＲＲＣ１５を発現し、及び／または腫瘍関連間質がＬＲＲＣ１５の発現を呈するがんが挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんには、限定されないが、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする血液悪性腫瘍が含まれ、これらには、限定されないが、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。別の態様では、本明細書における多重特異性結合化合物及び医薬組成物を使用して、乳癌、肺癌、膵臓癌、及び卵巣癌を含むがこれらに限定されない、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする固形腫瘍を治療することができる。さらに別の態様では、本明細書における多重特異性結合化合物及び医薬組成物を使用して、ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする肉腫を治療することができる。

疾患の治療のための本発明の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び治療が予防的なものであるか治療的なものであるかを含む多くの異なる要因によって変化する。通常、患者は、ヒトであるが、非ヒト哺乳類、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどの伴侶動物や、例えば、ウサギ、マウス、ラットなどの実験用哺乳類などもまた、処置され得る。処置用量を漸増させて、安全性及び有効性を最適化することができる。

用量レベルは、当業者によって容易に決定され得るが、必要に応じて、例えば、治療への対象の応答を変化させる必要に応じて、変化させることができる。単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、治療する宿主及び特定の投与様式に応じて異なる。一般的に、単位剤形は、約１ｍｇ～約５００ｍｇの活性成分を含む。

いくつかの実施形態では、薬剤の治療用量は、宿主の体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には、０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。例えば、投与量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療計画は、２週間に１回または１ヶ月に１回または３～６ヶ月に１回の投与を伴う。本発明の治療物質は、通常、複数回投与される。単回投与の間隔は、毎週、毎月または毎年とすることができる。間隔はまた、患者における治療物質の血中レベルを測定することによって指定されるように、不定期とすることもできる。あるいは、本発明の治療物質を徐放性製剤として投与することができ、その場合、あまり頻繁な投与を必要としない。用量及び頻度は、患者におけるポリペプチドの半減期に依存して様々に異なる。

一般的に、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製され、注射前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁するのに適した固体形態もまた、調製することができる。本明細書の医薬組成物は、直接の、または固体（例えば、凍結乾燥）組成物の再構成後の静脈内または皮下投与に適している。製剤はまた、上記のように、アジュバント効果を増強するために、リポソーム、またはポリラクチド、ポリグリコリド、もしくはコポリマーなどの微粒子に乳化またはカプセル化することができる。Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７，１９９０及びＨａｎｅｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２８：９７－１１９，１９９７。本発明の薬剤は、活性成分の徐放またはパルス放出を可能にするような方法で製剤化することが可能な、デポー注射またはインプラント製剤の形態で投与することができる。医薬組成物は、一般に、無菌で、実質的に等張であり、米国食品医薬品局のすべての優良医薬品製造基準（ＧＭＰ）の規制に完全に準拠して製剤化される。

本明細書に記載の抗体及び抗体構造の毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対する致死用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に対する致死用量）を測定することによって決定することができる。毒性と治療効果との間の用量比が、治療指数である。これらの細胞培養アッセイ及び動物実験から得られるデータは、ヒトでの使用に毒性のない用量範囲を策定する際に用いることができる。本明細書に記載の抗体の用量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、用いる剤形及び利用する投与経路に応じて、この範囲内で様々に異なり得る。正確な処方、投与経路、及び投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。

投与用組成物は、一般に、薬学的に許容される担体、好ましくは水性担体に溶解した抗体または他の薬剤（例えば、別の削摩剤）を含むであろう。様々な水性担体、例えば、緩衝食塩水などを使用することができる。これらの溶液は無菌であり、一般的に望ましくない物質を含まない。これらの組成物を、従来の周知の滅菌技法によって無菌化してもよい。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされるような薬学的に許容される補助物質（ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど）を含有し得る。これらの製剤中の活性薬剤の濃度は大きく変動し得、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に液量、粘度、体重などに基づいて選択される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ ｅｄ．，１９８０）及びＧｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９６））。

本発明の活性剤及びその製剤、ならびに使用説明書を含むキットも本発明の範囲内である。キットはさらに、少なくとも１つの追加の試薬、例えば、化学療法薬などを含み得る。キットは、典型的には、キットの内容物の使用目的を示すラベルを含む。本明細書中で使用する用語「ラベル」には、キット上にもしくはキットとともに供給されるか、または他の方法でキットに付随する、あらゆる書面または記録物が含まれる。

ここで十分に説明されている本発明は、本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正を行い得ることが当業者に明らかとなるであろう。

実施例１：ライブラリ構築及びファージディスプレイ
ヒト化／最適化ライブラリを以下の原理に基づいて構築した。マウスＣＤＲは、ヒト及びカニクイザルＣＤ３εへの結合を維持するために変化させないであろう。ヒトフレームワークを、マウスフレームワークに対する相同性について分析した。フレームワークの差異の多様性は、マウス及びヒトのフレームワークアミノ酸に基づいた。加えて、８９０個のフレームワーク－ファミリー抗体を分析して、フレームワークの進化を通じて維持されたアミノ酸が安定性の向上につながり得るという仮説で、共変アミノ酸多様性を保存した。ＶＨの組み合わせ多様性は、１．２６Ｅ７であり、ＶＬ多様性は、２．５６Ｅ２であった。

この多様性は、各位置に設計されたアミノ酸を含むウルトラマー（ＩＤＴ）にコードされた。Ｖ領域の構築は、スプライシングＰＣＲ反応における重複保存領域によって促進された。完全長ＶＬ及びＶＨセグメントを、高忠実度ＰＣＲを使用してエンドプライマーによって救出した。ＳｃＦｖライブラリ挿入プールは、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－６ｈｉｓタグ－ｍｙｃタグ－ａｍｂｅｒ ｓｔｏｐ＿ｇ３ｐの形式で、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号２２９）を用いて、ＶＨ及びＶＬプールのＰＣＲによって完成させた。
完全なライブラリ断片プールをＳｆｉＩ制限酵素で消化し、エレクトロリガーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、ＢｇＬ１で消化したベクターｐＡＤＬ２３ｃ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ）にクローニングした。最後に、ＮＥＢ５ Ｆ’Ｉｑ電気能細胞を、クローニングしたファージミドで形質転換し、培養物を対数期まで成長させた。ＳｃＦｖクローンを発現するファージを、ヘルパーＭ１３Ｋ０７とともにパッケージ化し、一晩培養した。精製したファージライブラリを１０分間６５℃まで加熱して、ライブラリ内の折り畳みが悪いクローンを減少させた。完成したｓｃＦｖクローンを発現するファージを、ビオチン化ヤギ抗Ｍｙｃ抗体でコーティングした実験規模のナノリンクストレプトアビジン磁気ビーズによって捕捉し、ＮＥＢ Ｆ’Ｉｑファージ培養物中で繁殖させた。

得られたライブラリを保存し、カニクイザルＣＤ３ε １－２７ａａ－Ｆｃのプレートベースのファージディスプレイ及びビーズベースのファージディスプレイに使用した。加えて、カニクイザルＣＤ３ε １－２７ａａ－Ｆｃに対するパンニング、続いてヒトＣＤ３ε １－２７ａａ－Ｆｃへの後続の結合ラウンドを行って、交差反応性クローンを維持した。いくつかのパンニング実験では、室温で結合した後、６５℃でインキュベートし、厳密な洗浄を行って、安定したクローンを濃縮した。標的結合ファージを、酸性グリシン緩衝液によって溶出させ、定量化及び配列決定のためにプレーティングコロニーの前に中和した。ＨＢ２１５１Ｅ．ｃｏｌｉを標的濃縮溶出ファージに感染させて、可溶性ｓｃＦｖタンパク質を発現させ、これを酵素結合免疫吸着アッセイＥＬＩＳＡスクリーニングで評価した。

実施例２：ベクター構築
ベクターｐｃＤＮＡ３．４ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、ＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩ、及びＮｏｔＩを含有する短いポリリンカーにライゲーションした。得られたプラスミドをＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩ制限酵素で消化し、ゲル電気泳動によって精製した。重鎖クローニングのために、Ｇｉｂｓｏｎ法を使用して、調製されたベクターを、ＶＨ領域をコードする適切なＤＮＡ断片及びヒトＩｇＧ１ＡＡＡ断片（ＣＨ１～ＣＨ３ドメイン）で組み立てた。定常カッパ（Ｃｋ）をコードするｇｂｌｏｃｋ断片でＶｋａｐｐａ領域を組み立てるためのｇｂｌｏｃｋｓを使用して、可変光領域を同様の方法で構築した。プラスミドを発現するｓｃＦｖ－Ｆｃは、ｓｃＦｖをコードするためにｇｂｌｏｃｋ断片（ＩＤＴ）を使用し、抗体ヒンジをＩｇＧ１のＣＨ３ドメインにコードするためにＰＣＲ断片を使用した。対称形式であるｓｃＦｖ－Ｆｃ、２型、及び５型（図３、パネルＡ、Ｃ、及びＦ）は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７ＡのＦｃｇ受容体相互作用及び相補結合を破壊するための３つの変異を有するＩＧＨＧ１ Ｆｃ配列を含有し、これらは、（ヒンジ領域からの）配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡ（配列番号２３０）をもたらす。好ましい実施形態では、Ｃ２２０Ｓ変異は、ｓｃＦｖがヒンジＦｃに結合する（配列番号２４１及び２４２）形式で上部ヒンジ領域に含まれた（例えば、ＵＳ２０１０／０２３３１７３Ａ１、ＷＯ２０１８／０７１９１９Ａ１、ＵＳ２０１６／０００９８２４Ａ１、ＷＯ２０１４／１４４３５７、及びＥＰ３５１３４２Ａ１を参照されたく、これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。１型及び４型（図３、パネルＢ及びＥ）などの非対称形式は、「ノブ」または「ホール」の突然変異を加えて同じＦｃ配列を共有した（例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ Ｊｕｌ；９（７）：１７－２１、米国特許第８，２１６，８０５語を参照されたい）。好ましい実施形態では、変異Ｓ３５４Ｃ（ノブＦｃ）、Ｙ３４９Ｃ（ホールＦｃ）（Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９８ Ｊｕｌ；１６：６７７－６８１）は、二重特異性抗体の産生を助けるために、ＣＨ３ドメイン間のジスルフィド結合を作成した。さらなる好ましい実施形態では、プロテインＡの非結合変異Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆ（Ｊｅｎｄｅｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １９９７；２０１：２５－３４）のノブＦｃへの追加により、非対称形式の精製が促進された。ＦｃドメインのＣ末端で抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖを提示した２型形式は、末端リジンをＦｃから除去し、ｓｃＦｖ、ならびにＧ及びＳアミノ酸残基を含むリンカーをクローニングすることによって構築した（表９は、評価された様々なリンカーを示す）。４型及び５型の伸長重鎖断片を、［抗ＬＲＲＣ１５ ＶＨ］－［ＣＨ１］－［リンカー１］－［抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ］－［ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３］の構造でクローニングし、リンカー１は、配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号１８９）またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号２４１）、ＥＰＫＳＣＤＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１９０）、またはＥＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１９１）を含んだ。すべての組み立てをＧｉｂｓｏｎ法（ＮＥＢ）で行った。

実施例３：タンパク質発現
プラスミドを調製し、一過性発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してＥｘｐｉ２９３またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。簡潔に述べると、プラスミドを、１ｕｇのプラスミドＤＮＡ合計／ｍＬ培養で３ｅ６細胞／ｍＬ細胞にトランスフェクトした。重鎖及び軽鎖プラスミドを１：１の比率で混合した。二重特異性結合化合物トランスフェクションは、２つの別個の重鎖プラスミドと比較して増加した軽鎖プラスミドを使用した。培養物を振盪しながら３７℃でインキュベートした。１６時間後、培養物にトランスフェクションエンハンサー１及び２を添加し、インキュベーションを６日間継続した。上清を濾過し、タンパク質力価を、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６（Ｐａｌｌ）を使用したＩｇＧ定量プロトコルによって決定した。ＩｇＧをＡＣＴＡ ＰＵＲＥシステム上でＭａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ａカラム精製によって精製し、ＰＢＳ中で一晩透析した。非対称二重特異性抗体（１型及び４型、図３、パネルＢ及びＥ）は、通常、追加の精製を必要とし、これは、典型的には、調製サイズ排除クロマトグラフィー（ｐＳＥＣ）を伴う。

実施例４：ヒト化抗ＬＲＲＣ１５ｘＣＤ３二重特異性結合化合物のタンパク質熱シフト
１０ｕｇ／ｍＬの抗ＬＲＲＣ１５×ＣＤ３二重特異性結合化合物を、２ｕｌの５０×タンパク質熱シフト染料、及びＰＢＳと混合して、最終体積を１００ｕｌにした。試料を４回でＰＣＲ９６チューブプレートに分取した（２５ｕｌ／ウェル）。Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＳｔｅｐＯｎｅ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ機器上で、２２～９５℃で１分５秒ごとに１℃の連続的な温度変化勾配を使用して、タンパク質熱シフト反応を測定した。Ｔｍを、誘導体法を用いて解析した。結果は、３つのクローン、１６０Ｃ９、４Ｇ２、及び１Ｂ４が異なるリンカーを用いて異なる形式で提示される場合、ｓｃＦｖのＴｍが６０～６６℃の範囲であることを示す（図４）。抗ＣＤ３クローン１６０Ｃ９ ｓｃＦｖ－ＦｃのＴｍは、約６４℃であり（図１及び４を参照）、ｓｃＦｖがＴ２ａ形式（ＧＳリンカーを用いた２型形式）でＣ末端に提示されると、約６２℃に低下する。Ｔｍの低下は、同じく２つの追加のクローンにおいて観察された（図４を参照）。概して、４型及び５型形式は、図３のパネルＡに示されるｓｃＦｖ－Ｆｃ形式と比較して、同様またはわずかに改善されたＴｍを示した。

実施例５：Ｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＨ－ＳＣＦ細胞に対する抗ＣＤ３ε抗体のフローサイトメトリー結合分析
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、Ｊｕｒｋａｔ、またはＨ－ＳＣＦ（カニクイザルＴ細胞）細胞を標準方法によって調製し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２００，０００細胞／ウェルで９６ウェルｖ底ポリプロピレンプレートに分布した。ＳｃＦｖ－Ｆｃタンパク質または陽性対照抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５５６６１０）を４０ｕｇ／ｍＬから逐次希釈し、細胞を氷上で２０分間染色するために使用した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、氷上で１：５００の二次抗体ヤギ抗ｈｕ ＩｇＧ Ｆｃ－ＡＦ６４７（対照についてはヤギ抗ｍｓ－ＩｇＧ Ｆｃ－ＡＦ６４７）で２５分間染色し、再び洗浄し、７－ＡＡＤを含有する緩衝液中に再懸濁した後、フローサイトメトリーによって分析した。二重特異性抗体に加えて、ＰＢＭＣをＣＤ３－ＦＩＴＣ、ＣＤ４－ＡＰＣ－Ｈ７、ＣＤ８－ＰＥ発現について染色し、これらは、上記のようにヤギ抗ｈｕ ＩｇＧ Ｆｃ－ＡＦ６４７によって検出された。この結果は、いくつかのｓｃＦｖ－Ｆｃクローンが、ヒトＪｕｋａｔ細胞（図５Ａ）、カニクイザルＴ細胞株Ｈ－ＳＣＦ（図５Ｂ）、及び調製したヒトＰＢＭＣ中のＣＤ３＋細胞（図６Ａ）に強固に結合することを実証する。ＣＤ３＋ＰＢＭＣへの結合は、１型（図６Ｂ）及び２型（図６Ｃ）において減少する。同様に、ｓｃＦｖ－Ｆｃと比較して、５型の二重特異性のＣＤ４＋Ｔ細胞への抗ＣＤ３結合が低減され、４型の結合がさらに低減される（図６Ｄ）。図６Ｅ及び図６Ｆは、それぞれ、ＣＤ８＋及び汎Ｔ細胞への結合の同様のパターンを実証し、結合シグナルは、５型で低減され、４型形式でさらに低減される。

実施例６：Ｕ１１８ＭＧ細胞のフローサイトメトリー結合分析
Ｕ１１８ＭＧまたはＵ８７ＭＧ細胞をトリプシンによって採取し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、５Ｅ６細胞／ｍＬで再懸濁し、１Ｅ５細胞／ウェルで９６ウェルプレート中に分取した。細胞を、抗ＬＲＲＣ１５結合化合物、二重特異性結合化合物、陽性対照抗体「Ｃ１－ＩｇＧ１」、またはアイソタイプＩｇＧ１（開始濃度５０ｎＭ）の連続希釈液で、４５分間氷上で染色した後、洗浄し、１：５００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＡＦ６４７で二次染色した。細胞を、最終洗浄及び７－ＡＡＤの添加後に、フローサイトメトリーによって分析した。結果を図７に示し、ＬＲＲＣ１５陽性Ｕ１１８ＭＧ（図７Ａ）及びＵ８７ＭＧ（図７Ｂ）細胞への強固な結合を実証する。

実施例７：腫瘍依存性Ｔ細胞活性化アッセイ
ＲＰＭＩ７９５１、Ｕ１１８ＭＧ、Ｕ８７ＭＧ、またはＡ４３１（ＬＲＲＣ１５陰性）腫瘍細胞を、ＲＰＭＩ１０％ヒト血清を含有する培地中で２Ｅ５細胞／ｍＬで調製し、１Ｅ４細胞／ウェルで平底９６ウェルプレートに分配し、一晩インキュベートした。翌日、新鮮なＰＢＭＣを、ＲＰＭＩ＋１０％ヒト血清中において４Ｅ６細胞／ｍＬで標準的な技法によって調製した。次いで、これらの細胞及び希釈した二重特異性結合化合物、または対照結合化合物を、１０：１のエフェクター：標的細胞比で腫瘍細胞を含有するウェルに添加し、プレートを４８時間インキュベートした後、細胞のフローサイトメトリー分析を行った。対照ウェルは、抗ＣＤ３含有二重特異性結合化合物によるＴ細胞の直接活性化について試験するための腫瘍細胞を欠いた。サイトカイン検出のために上清を凍結した。細胞を、以下の一次試薬抗体を用いてフローサイトメトリーによって分析した。ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈したＣＤ３－ＦＩＴＣ、ＣＤ４－ＡＰＣ－Ｈ７、ＣＤ８－ＰＥ、ＣＤ２５－ＢＶ４２１、ＣＤ６９－ＡＰＣ、７－ＡＡＤ、アイソタイプ－ＡＰＣ、アイソタイプ－ＢＶ４２１、アイソタイプ－ＡＰＣ。試料採取後、データを、単一細胞に対する（Ｐ１）ＦＳＣ／ＳＳＣ、（Ｐ２）ＦＳＣ－ＡｘＦＳＣ－Ｈ、続いて（Ｐ３）ＣＤ３ｘ７ＡＡＤ生／死細胞ゲーティング、次いでＣＤ４（Ｐ４）ｘＣＤ８（Ｐ５）上のゲーティングによってＦｌｏｗＪｏを使用して解析した。ＣＤ３＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ３＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ２５及びＣＤ６９マーカーによって活性化を評価した。結果は、ＬＲＲＣ１５ｘＣＤ３の１型クローンが、Ｕ１１８ＭＧ腫瘍細胞の存在下でＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化するが、腫瘍細胞の不在下では活性化しないことを実証する（図８Ａ）。同様に、ＬＲＲＣ１５ｘＣＤ３の２型クローン（図８Ｂ）、４型及び５型クローン（図８Ｃ及び図８Ｅ）は、Ｕ１１８ＭＧ腫瘍細胞依存的様式でＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化する。

実施例８：Ｔ細胞増殖アッセイ
ＲＰＭＩ７９５１，Ｕ１１８ＭＧ，Ｕ８７ＭＧ、またはＡ４３１（ＬＲＲＣ１５陰性）腫瘍細胞を、ＲＰＭＩ１０％ヒト血清を含有する培地中で２Ｅ５細胞／ｍＬで調製し、１Ｅ４細胞／ウェルで平底９６ウェルプレートに分配し、一晩インキュベートした。翌日、新鮮なＰＢＭＣからＴ細胞を調製し、ＰＢＳ中の５ｕＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔで暗所において１５分間標識した。培地中で３回洗浄した後、５Ｅ４標識Ｔ細胞をウェルに添加した（５：１のエフェクター：標的細胞比）。次いで、希釈した二重特異性結合化合物、または対照化合物を、腫瘍細胞を含有するウェルに添加し、プレートを５日間インキュベートした後、細胞のフローサイトメトリー分析を行った。細胞を、以下の一次試薬抗体を用いてフローサイトメトリーによって分析した。ＣＤ３－ＦＩＴＣ、ＣＤ８－ＰＥ、７ＡＡＤ－ＰｅｒＣＰ、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ－ＰＢ、ＣＤ５６－ＡＰＣ、ＣＤ４－ＡＰＣ－Ｈ７、及び適切なアイソタイプ対照試薬。結果は、ＬＲＲＣ１５ｘＣＤ３二重特異性抗体が、ＬＲＲＣ１５陽性ＲＰＭＩ７９５１細胞の存在下でＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を強化するが、ＬＲＲＣ１５を発現しないＡ４３１腫瘍細胞の存在下では増殖を強化しないことを示す（図９Ａ及び９Ｂ）。クローン１６０Ｃ９＿Ｔ４ｈは、１６０Ｃ９＿Ｔ１に対して向上した効力を示す（図９）。同様の結果は、増殖アッセイがＵ１１８ＭＧ腫瘍細胞で調製されたときに得られる。図９Ｃ、図９Ｄ、及び図９Ｅを参照されたい。

実施例９：サイトカインアッセイ
プレートを、前述の活性化または増殖アッセイにおいて２～５日間インキュベートした。上清を、製造業者のプロトコル（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従って、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮγ及びＩＬ－２放出について解析した。結果を図１０Ａ～１０Ｃに示し、腫瘍細胞の存在下でのＩＦＮγ及びＩＬ－２の用量依存的産生を実証する。最高濃度の化合物でインキュベートしたＰＢＭＣは、ＩＦＮγ及びＩＬ－２分泌を示さなかった。

実施例１０：細胞傷害性アッセイ
ＲＰＭＩ７９５１、Ｕ１１８ＭＧ、Ｕ８７ＭＧ、またはＡ４３１（ＬＲＲＣ１５陰性）腫瘍細胞を、ＲＰＭＩ１０％ヒト血清を含有する培地中で２Ｅ５細胞／ｍＬで調製し、１Ｅ４細胞／ウェルで平底９６ウェル白色プレートに分配し、一晩インキュベートした。翌日、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣＤ８単離キットを使用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞をＰＢＭＣから精製した。次いで、二重特異性結合化合物及び対照結合化合物、ならびに５Ｅ４の新たに調製したＴ細胞の１ｎＭ（最終）から始まる連続希釈物をウェルに添加した。細胞濃度は、１：５の標的細胞：エフェクター細胞比を表した。プレートを、ＲＰＭＩ７９５１細胞について２日間、及びＵ１１８ＭＧ及びＡ４３１細胞について３日間インキュベートした。プレートを、製造業者の指示に従ってＣｙｔｏＴｏｘ－Ｇｌｏキットで処理し、発光を分析した。結果は、ＬＲＲＣ１５ｘＣＤ３二重特異性抗体がＬＲＲＣ１５陽性腫瘍細胞のＴ細胞死滅を増強することを示す（図１１）。図１１Ａ～Ｃは、１型、２型、４型、及び５型化合物によるＲＰＭＩ７９５１細胞のＴ細胞指向性細胞傷害性の例を示す。同様に、図１１Ｄ～Ｆは、２型、４型、及び５型化合物によるＵ１１８ＭＧ細胞のＴ細胞指向性細胞傷害性の例を示す。最後に、図１１Ｇは、Ｕ８７ＭＧ細胞のＴ細胞指向性細胞傷害の例を示す。

実施例１１：インビボ有効性研究
各免疫不全ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＃００５５５７の６～９週齢雌）に、１Ｅ６のＵ１１８ＭＧ腫瘍細胞をＳＣにて移植し、腫瘍が約６０ｍｍ３に成長したときに無作為化した。単一ドナー由来の新鮮なＰＢＭＣをマウス１匹当たり１Ｅ７の細胞でＩＰにて移植した。動物（１群当たり８匹のマウス）に、ＰＢＭＣ移植の３日後に開始して、１ｍｇ／ｋｇの二重特異性結合化合物またはＯＫＴ３抗体またはＰＢＳの４回の用量を隔週で投与した。腫瘍を隔週で測定した。結果を図１２に示し、４つの化合物対ＰＢＳ対照の腫瘍体積を比較する。すべてのＬＲＲＣ１５ｘＣＤ３二重特異性抗体の投薬は、腫瘍サイズを制御及び／または低減するように見える。

本発明の好ましい実施形態が、本明細書に示され、説明されたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは、当業者にとって明らかであろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく、数多くの変形、変更、及び置換を見出すであろう。本明細書に記載する本発明の実施形態に対する様々な代替手段が、本発明の実施において採用され得ることを理解すべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲に含まれる方法及び構造、ならびにそれらの均等物が、それにより包含されることが意図される。

Claims (81)

1. ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する第１の結合単位、及びＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）に対する結合親和性を有する第２の結合単位を含む多重特異性結合化合物であって、前記第１の結合単位が、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、前記多重特異性結合化合物。
2. 前記第１の結合単位が、配列番号２４～２６からなる群から選択される重鎖可変領域配列、及び／または配列番号２７の軽鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の多重特異性結合化合物。
3. 前記第１の結合単位が、
   配列番号２５の重鎖可変領域、及び配列番号２７の軽鎖可変領域を含む、請求項２に記載の多重特異性結合化合物。
4. 前記第２の結合単位が、配列番号２８～８０の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号８１～１３２の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
5. 前記第２の結合単位が、配列番号２８～８０からなる群から選択される重鎖可変領域配列、及び／または配列番号８１～１３２からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、請求項４に記載の多重特異性結合化合物。
6. 前記第２の結合単位が、
   （ａ）配列番号５５の重鎖可変領域配列、及び配列番号１０７の軽鎖可変領域配列、または
   （ｂ）配列番号２８の重鎖可変領域配列、及び配列番号８１の軽鎖可変領域配列を含む、請求項５に記載の多重特異性結合化合物。
7. 前記第２の結合単位が、第１の可変領域配列、第２の可変領域配列、及び前記第１の可変領域配列を前記第２の可変領域配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
8. 前記リンカー配列が、配列番号２２９の配列を含む、請求項７に記載の多重特異性結合化合物。
9. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
   Ｌ１が、可変領域配列（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含み、
   Ｈ１が、可変領域配列（Ｈ１Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ２）、及びＣ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ３）を含み、
   Ｈ２が、
   第１の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ）、及び前記Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ配列を前記Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ２ｓｃＦｖ）、
   Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ２）、ならびに
   Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ３）を含み、
   前記Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ配列が、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、
   前記Ｈ２ｓｃＦｖが、ＣＤ３εに対する結合親和性を有し、
   前記Ｌ１Ｃ_Ｌ及びＨ１Ｃ_Ｈ１配列が、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、
   前記Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が、任意選択でヒンジ領域を含み、そこで、前記Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が、任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって接続され、
   前記Ｈ１Ｃ_Ｈ３及びＨ２Ｃ_Ｈ３配列が、前記Ｈ１ポリペプチド鎖と前記Ｈ２ポリペプチド鎖との間の適切な対形成を促進する非対称界面を含む、前記多重特異性結合化合物。
10. 前記Ｌ１Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９に記載の多重特異性結合化合物。
11. 前記Ｌ１Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列を含む、請求項１０に記載の多重特異性結合化合物。
12. 前記Ｈ１Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９に記載の多重特異性結合化合物。
13. 前記Ｈ１Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６からなる群から選択される、請求項１２に記載の多重特異性結合化合物。
14. 前記Ｈ２ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９に記載の多重特異性結合化合物。
15. 前記Ｈ２ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む、請求項１４に記載の多重特異性結合化合物。
16. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、可変領域配列（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含み、
    Ｈ１が、可変領域配列（Ｈ１Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ２）、Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ３）、ならびに第１の可変領域配列（Ｈ１ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ１ｓｃＦｖ_Ｌ）、及び前記Ｈ１ｓｃＦｖ_Ｈ配列を前記Ｈ１ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ１ｓｃＦｖ）を含み、
    Ｈ２が、可変領域配列（Ｈ２Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ２）、Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ３）、ならびに第１の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ）、及び前記Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ配列を前記Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ２ｓｃＦｖ）を含み、
    Ｌ２が、可変領域配列（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含み、
    前記Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ配列が、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、
    前記Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ配列が、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、
    前記Ｈ１ｓｃＦｖ及び前記Ｈ２ｓｃＦｖが、ＣＤ３εに対する結合親和性を有し、
    前記Ｌ１Ｃ_Ｌ及びＨ１Ｃ_Ｈ１配列が、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、
    前記Ｌ２Ｃ_Ｌ及びＨ２Ｃ_Ｈ１配列が、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、
    前記Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が、任意選択でヒンジ領域を含み、そこで、前記Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が、任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって接続される、前記多重特異性結合化合物。
17. Ｌ１及びＬ２が、同一の配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
18. Ｈ１及びＨ２が、同一の配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
19. Ｌ１及びＬ２が、異なる配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
20. Ｈ１及びＨ２が、異なる配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
21. 前記Ｌ１Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
22. 前記Ｌ１Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列を含む、請求項２１に記載の多重特異性結合化合物。
23. 前記Ｈ１Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
24. 前記Ｈ１Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６からなる群から選択される、請求項２３に記載の多重特異性結合化合物。
25. 前記Ｈ１ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
26. 前記Ｈ１ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む、請求項２５に記載の多重特異性結合化合物。
27. 前記Ｌ２Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
28. 前記Ｌ２Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列を含む、請求項２７に記載の多重特異性結合化合物。
29. 前記Ｈ２Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
30. 前記Ｈ２Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６からなる群から選択される、請求項２９に記載の多重特異性結合化合物。
31. 前記Ｈ２ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
32. 前記Ｈ２ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む、請求項３１に記載の多重特異性結合化合物。
33. Ｈ１が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｈ１Ｃ_Ｈ１、Ｈ１Ｃ_Ｈ２、Ｈ１Ｃ_Ｈ３、Ｈ１ｓｃＦｖのとおり進行する配列順序を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
34. Ｈ２が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３、Ｈ２ｓｃＦｖのとおり進行する配列順序を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
35. Ｈ１が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｈ１Ｃ_Ｈ１、Ｈ１ｓｃＦｖ、Ｈ１Ｃ_Ｈ２、Ｈ１Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
36. Ｈ２が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２ｓｃＦｖ、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む、請求項１６に記載の多重特異性結合化合物。
37. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、可変領域配列（Ｌ１Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ１Ｃ_Ｌ）を含み、
    Ｈ１が、可変領域配列（Ｈ１Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ２）、及びＣ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ１Ｃ_Ｈ３）を含み、
    Ｈ２が、可変領域配列（Ｈ２Ｖ_Ｈ）、Ｃ_Ｈ１定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ１）、Ｃ_Ｈ２定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ２）、Ｃ_Ｈ３定常領域配列（Ｈ２Ｃ_Ｈ３）、ならびに第１の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ）、第２の可変領域配列（Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ）、及び前記Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｈ配列を前記Ｈ２ｓｃＦｖ_Ｌ配列に連結するリンカー配列を含む、単鎖Ｆｖ（Ｈ２ｓｃＦｖ）を含み、
    Ｌ２が、可変領域配列（Ｌ２Ｖ_Ｌ）及び定常領域配列（Ｌ２Ｃ_Ｌ）を含み、
    前記Ｌ１Ｖ_Ｌ及びＨ１Ｖ_Ｈ配列が、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、
    前記Ｌ２Ｖ_Ｌ及びＨ２Ｖ_Ｈ配列が、ともに、ＬＲＲＣ１５に対する結合親和性を有する結合単位を形成し、
    前記Ｈ２ｓｃＦｖが、ＣＤ３εに対する結合親和性を有し、
    前記Ｌ１Ｃ_Ｌ及びＨ１Ｃ_Ｈ１配列が、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、
    前記Ｌ２Ｃ_Ｌ及びＨ２Ｃ_Ｈ１配列が、任意選択でジスルフィド結合によって接続され、
    前記Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が、任意選択でヒンジ領域を含み、そこで、前記Ｈ１及びＨ２ポリペプチド鎖が、任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって接続され、
    前記Ｈ１Ｃ_Ｈ３及びＨ２Ｃ_Ｈ３配列が、前記Ｈ１ポリペプチド鎖と前記Ｈ２ポリペプチド鎖との間の適切な対形成を促進する非対称界面を含む、前記多重特異性結合化合物。
38. Ｌ１及びＬ２が、同一の配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
39. Ｌ１及びＬ２が、異なる配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
40. 前記Ｌ１Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
41. 前記Ｌ１Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列を含む、請求項４０に記載の多重特異性結合化合物。
42. 前記Ｈ１Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
43. 前記Ｈ１Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６からなる群から選択される、請求項４２に記載の多重特異性結合化合物。
44. 前記Ｈ２ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
45. 前記Ｈ２ｓｃＦｖが、配列番号１３３～１８５からなる群から選択される配列を含む、請求項４４に記載の多重特異性結合化合物。
46. 前記Ｌ２Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
47. 前記Ｌ２Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７の配列を含む、請求項４６に記載の多重特異性結合化合物。
48. 前記Ｈ２Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
49. 前記Ｈ２Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４～２６からなる群から選択される、請求項４８に記載の多重特異性結合化合物。
50. Ｈ１が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ１Ｖ_Ｈ、Ｈ１Ｃ_Ｈ１、Ｈ１Ｃ_Ｈ２、Ｈ１Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
51. Ｈ２が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３、Ｈ２ｓｃＦｖのとおり進行する配列順序を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
52. Ｈ２が、Ｎ末端からＣ末端へ、Ｈ２Ｖ_Ｈ、Ｈ２Ｃ_Ｈ１、Ｈ２ｓｃＦｖ、Ｈ２Ｃ_Ｈ２、Ｈ２Ｃ_Ｈ３のとおり進行する配列順序を含む、請求項３７に記載の多重特異性結合化合物。
53. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号２２４～２２８、または２３２の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、前記多重特異性結合化合物。
54. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４の配列を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１の配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号２２４～２２８、または２３２からなる群から選択される配列を含む、前記多重特異性結合化合物。
55. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、及び第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１を含み、
    Ｈ２が、配列番号２２５を含む、前記多重特異性結合化合物。
56. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、
    Ｈ１が、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０の配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、前記多重特異性結合化合物。
57. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４の配列を含み、
    Ｈ１が、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号１９５～２２３、２３１、２３３～２４０からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４の配列を含む、前記多重特異性結合化合物。
58. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号１９５及び１９８からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号１９５及び１９８からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
59. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号１９６及び１９９からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号１９６及び１９９からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
60. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号１９７及び２００からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号１９７及び２００からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
61. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２３３及び２３４からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号２３３及び２３４からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
62. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１を含み、
    Ｈ２が、配列番号２０２、２０６、２０９、及び２１２からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
63. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１を含み、
    Ｈ２が、配列番号２０３、２０７、２１０、及び２１３からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
64. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１を含み、
    Ｈ２が、配列番号２０４、２０８、２１１、及び２１４からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
65. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２０１を含み、
    Ｈ２が、配列番号２０５を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
66. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２３１を含み、
    Ｈ２が、配列番号２３５、２３６、及び２３７からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
67. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２１５、２１９、２２１、及び２３９からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号２１５、２１９、２２１、及び２３９からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
68. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２１６、２２０、２２２、及び２４０からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号２１６、２２０、２２２、及び２４０からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
69. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２１７及び２２３からなる群から選択される配列を含み、
    Ｈ２が、配列番号２１７及び２２３からなる群から選択される配列を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
70. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２１８を含み、
    Ｈ２が、配列番号２１８を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
71. 第１の軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）、第１の重鎖ポリペプチド（Ｈ１）、第２の重鎖ポリペプチド（Ｈ２）、及び第２の軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含む、多重特異性結合化合物であって、
    Ｌ１が、配列番号１９４を含み、
    Ｈ１が、配列番号２３８を含み、
    Ｈ２が、配列番号２３８を含み、
    Ｌ２が、配列番号１９４を含む、前記多重特異性結合化合物。
72. 請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物を含む、医薬組成物。
73. 治療の方法であって、有効用量の請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物、または請求項６９に記載の医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、前記方法。
74. ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害の治療のための方法であって、前記障害を有する対象に、請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物、または請求項６９に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
75. ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害の治療のための医薬の調製における、請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物の使用。
76. ＬＲＲＣ１５の発現を特徴とする障害の治療に使用するための、請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
77. 前記障害が、肉腫、乳癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、及び大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項７１～７３のいずれか１項に記載の方法、使用、または多重特異性結合化合物。
78. 請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物をコードする、ポリヌクレオチド。
79. 請求項７５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
80. 請求項７６に記載のベクターを含む、細胞。
81. 請求項１～６８のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物を産生する方法であって、前記多重特異性結合化合物の発現を許容する条件下で、請求項７７に記載の細胞を成長させることと、前記多重特異性結合化合物を単離することと、を含む、前記方法。

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