JP2022540843A - 結合剤及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤに媒介される細胞死及び炎症を阻害する、阻害剤に関する。阻害剤は、タンパク質性、例えば、抗原結合タンパク質であり得るか、又は非タンパク質性、例えば、アプタマーであり得る。配列番号９：ＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣのペプチドに結合する抗体が、開示される。一実施形態において、阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を中和するなど、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、任意選択で、阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスホスフェートとの会合を中和するなど、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスホスフェートとの会合を阻害する。

Description

本明細書に提供される開示は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤ媒介性の細胞死及び炎症を阻害する、阻害剤に関する。
ピロトーシスは、微生物病原体又は宿主由来のサイトゾル摂動を含む、多数の異なる脅威によってトリガーされる、高炎症性型のプログラム細胞死である。ピロトーシスは、他の形態の細胞死とは形態学的及び機構的に異なり、細胞膜に多量体細孔を形成するタンパク質ガスダーミンＤの活性化及び動員に依存している。これらの多量体細孔の形成により、細胞の膜電位が破壊され、細胞イオン勾配を消散させ、浸透圧の正味の増加、水流入、細胞膨潤、及び最終的には浸透圧溶解をもたらす。ガスダーミンＤ細孔は、炎症性サイトカイン、例えば、インターロイキン（interleukin、ＩＬ）－１α、ＩＬ－１β、及びＩＬ－１８を放出することができ、浸透圧溶解によってトリガーされる細胞死は、炎症性サイトカイン並びにＨＭＧＢ１及びＡＴＰなどのアラーミンの更なる放出をトリガーする。したがって、ピロトーシスの特徴には、急速な原形質膜の破裂及び炎症性サイトカインの放出が含まれ、これによって、宿主においてより大きな炎症応答を活性化する免疫エフェクター細胞が更に動員される（Ｐａｎｄｅｙａ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１０（５）：６６０－６６７）。
したがって、ピロトーシスは、感染から保護し、病理学的炎症を誘導する、一次細胞応答である。しかしながら、炎症応答の調節不全は、敗血症、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、及び自己炎症性疾患、例えば、クリオピリン関連周期性症候群などの急性及び慢性炎症に関連する多くの衰弱性疾患における主要な駆動因子である。したがって、ピロトーシス細胞死を特異的に標的とする阻害剤は、これらの疾患の治療に関して、臨床において治療的に有用であり得る。
ＮＬＲＰ３インフラマソーム及びカスパーゼ１は、ピロトーシスの重要な炎症応答開始因子である。他のインフラマソーム、例えば、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、及びＮＬＲＰ１もまた、カスパーゼ－１、ガスダーミンＤ、及びピロトーシスの活性化を誘導し得る。インフラマソーム複合体によって活性化されると、カスパーゼ１は、サイトカイン、例えば、ＩＬ－１β及びＩＬ－１８の切断及び活性化、並びにタンパク質ガスダーミンＤの切断によって炎症促進応答を開始する。カスパーゼ１に非依存性のピロトーシスもまた、カスパーゼ４、５、及び８を介して進行し得、これによっても、ガスダーミンＤが切断され得る（Ｂｅｒｇｓｂａｋｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ７（２）：９９－１０９；Ｆｒａｎｋ ａｎｄ Ｖｉｎｃｅ（２０１９）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ２６：９９－１１４）。
ＧＳＤＭＤ、ＤＦ５Ｌ、ＤＦＮＡ５Ｌ、ＧＳＤＭＤＣ１、及びＦＫＳＧ１０としても知られるガスダーミンＤは、Ｎ末端ドメイン及びＣ末端ドメインから構成される約５３ｋＤａのタンパク質である。Ｎ末端ドメイン（ＧＳＤＭＤＮｔｅｒｍ）は、３１ｋＤａであり、リンカーによって、２２ｋＤａのＣ末端ドメイン（ＧＳＤＭＤＣｔｅｒｍ）と分離されている。全長タンパク質は、Ｃ末端ドメインが折り返されてＮ末端ドメインに分子内結合した自己阻害状態にある。炎症促進性プロテアーゼによるドメイン間リンカーの領域における全長ガスダーミンＤの切断は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメイン及びＣ末端ドメインの分離をもたらし、これにより自己阻害が解除される。ＧＳＤＭＤＮｔｅｒｍは、それ自体が、ピロトーシスを誘導することができる。
敗血症又は他の炎症性疾患の治療のための、ガスダーミンＤを直接的に標的とする治療薬は、現在、市場には存在しない。ガスダーミンＤを標的とした研究は、ガスダーミンＤのＣｙｓ１９１位において遊離チオールと反応することができる小分子阻害剤にのみ焦点を当てている（Ｒａｔｈｅｋｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｓｃｉ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３，ｅａａｔ２７３８）。したがって、新しい治療モダリティが必要とされている。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和するための方法であって、本発明のガスダーミンＤ阻害剤をガスダーミンＤと接触させることを含む、方法を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和することにおける本発明のガスダーミンＤ阻害剤の使用を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤを中和することなどの、ガスダーミンＤを阻害及び／又は中和することにおける使用のための、ガスダーミンＤの阻害剤であって、任意選択で、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和である、ガスダーミンＤの阻害剤を提供する。
本発明はまた、治療における使用のための、例えば、敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン（cryoprin）関連周期性症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のための、ガスダーミンＤの阻害剤を提供する。
細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、２０μＭのジスルフィラム（disulfiram、Ｄｉｓ）、３０μＭのネクロスルホンアミド（necrosulfonamide、ＮＳＡ）、若しくは２μＭのＭＣＣ－９５０（ＭＣＣ）の小分子と組み合わせてニゲリシン（Ｎｉｇ）で処理したか、又は２０μＭのジスルフィラム（Ｄｉｓ）、３０μＭのネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）、若しくは２μＭのＭＣＣ－９５０（ＭＣＣ）の小分子のみで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 １時間時点の細胞死阻害アッセイを示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、２０μＭのジスルフィラム（Ｄｉｓ）、３０μＭのネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）、若しくは２μＭのＭＣＣ－９５０（ＭＣＣ）の小分子と組み合わせてニゲリシン（Ｎｉｇ）で処理したか、又は２０μＭのジスルフィラム（Ｄｉｓ）、３０μＭのネクロスルホンアミド（ＮＳＡ）、若しくは２μＭのＭＣＣ－９５０（ＭＣＣ）の小分子のみで処理した。細胞死を、１時間後に、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 抗体Ａｂ５の存在下における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシン、ＭＣＣ－９５０と組み合わせたニゲリシン、抗体Ａｂ５、又はニゲリシンと、異なる濃度のＡｂ５（０．１５μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬ）との組合せで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 抗体Ａｂ５の存在下における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシン、ＭＣＣ－９５０と組み合わせたニゲリシン、抗体Ａｂ５、又はニゲリシンと、異なる濃度のＡｂ５（０．１５μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬ）との組合せで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 Ａ．模擬、Ｂ．ニゲリシン、Ｃ．ニゲリシン及びＡｂ５、並びにＤ．ニゲリシン及びＭＣＣ－９５０で処理した細胞における１時間後のＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みの代表的な画像を示す図である。画像は、生細胞蛍光イメージングを可能にするＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓシステムを使用して取得された。 抗体Ａｂ３の存在下における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシン、ＭＣＣ－９５０と組み合わせたニゲリシン、抗体Ａｂ３、又はニゲリシンと、異なる濃度のＡｂ３（０．１５μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬ）との組合せで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 Ａ．模擬、Ｂ．ニゲリシン、Ｃ．ニゲリシン及び他のガスダーミンＤ結合抗体、例えば、Ａｂ３、並びにＤ．ニゲリシン及びＭＣＣ－９５０で処理した細胞における１時間後のＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みの代表的な画像を示す図である。画像は、生細胞蛍光イメージングを可能にするＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓシステムを使用して取得された。 抗体Ａｂ５をＴＨＰ－１細胞への投与前に煮沸した、抗体であるＡｂ５の存在下における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシン、ＭＣＣ－９５０と組み合わせたニゲリシン、及び煮沸したＡｂ５と組み合わせたニゲリシンで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 カスパーゼ－１による処理の前及び後の組換えＧＳＤＭＤのブロットにおけるタンパク質染色を示す図である。 カスパーゼ１による処理の後のガスダーミンＤのウエスタンブロットを示す図である。Ａｂ５を、プローブ抗体として使用した。 Ａｂ５及び遮断ペプチドの存在下における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシン、ＭＣＣ－９５０と組み合わせたニゲリシン、Ａｂ５と組み合わせたニゲリシン、又はＡｂ５及び遮断ペプチドと組み合わせたニゲリシンで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 Ａ．模擬、Ｂ．ニゲリシン、Ｃ．ニゲリシン及びＡｂ５、並びにＤ．ニゲリシン及びＡｂ５及び遮断ペプチドで処理した細胞における２時間後のＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みの代表的な画像を示す図である。画像は、生細胞蛍光イメージングを可能にするＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓシステムを使用して取得された。 Ａｂ５又は遮断ペプチドの存在下における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシン、Ａｂ５と組み合わせたニゲリシン、又は遮断ペプチドと組み合わせたニゲリシンで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 ニゲリシンでの刺激の８０分後における上清中へのＩＬ－１β及びＩＬ－１８放出の定量化を示すグラフである。 ニゲリシンでの刺激の８０分後における上清中へのＩＬ－１β及びＩＬ－１８放出の定量化を示すグラフである。 Ａｂ５又はＡｂ５及び遮断ペプチドの存在下における初代ヒト単球からのＩＬ－１β放出の定量化を示すグラフである。初代ヒト単球を、リポ多糖（ＬＰＳ）で３時間プライミングし、次いで、ニゲリシンで（ＬＮ）、細胞をＡｂ５で前処理した後にニゲリシンで（ＬＮ Ａｂ「ｘ」、ｘは、μｇ／ｍＬ単位の抗体の濃度である）、又は細胞をＡｂ５及び４０μｇ／ｍＬの遮断ペプチドで前処理した後にニゲリシンで（ＬＮＡｂ「ｘ」＋ｐｅｐ）、更に処理した。上清中へのＩＬ－１βの放出を、ニゲリシンでの刺激の１時間後に定量化した。 マウス細胞：骨髄由来マクロファージ（Bone Marrow Derived Macrophage、ＢＭＤＭ）における細胞死阻害アッセイの時間経過を示すグラフである。マウス細胞を、ＬＰＳでプライミングし、ニゲリシン又はＡｂ５と組み合わせたニゲリシンで処理した。細胞死を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した。 Ａｂ５又はＡｂ５及び遮断ペプチドの存在下における、細胞死阻害アッセイの時間経過、並びにニゲリシン刺激後のマウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）からのＩＬ－１β放出の定量化を示すグラフである。ＢＭＤＭを、リポ多糖（ＬＰＳ）で３時間プライミングし、次いで、細胞を、リン酸緩衝生理食塩水（ＬＮ）、又はＡｂ５（ＬＮ Ａｂ「ｘ」、ｘは、μｇ／ｍＬ単位の抗体の濃度である）、又はＡｂ５及び４０μｇ／ｍＬの遮断ペプチド（ＬＮＡｂ「ｘ」＋ｐｅｐ）で前処理した後のニゲリシンで、更に処理した。上清中へのＩＬ－１β放出を、ニゲリシンでの刺激の１．５時間後に定量化し（図１３Ａ）、細胞死の動態を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した（図１３Ｂ）。 Ａｂ５又はＡｂ５及び遮断ペプチドの存在下における、細胞死阻害アッセイの時間経過、並びに炭疽菌毒素（ＬｅＴｘ）刺激後のマウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）からのＩＬ－１β放出の定量化を示すグラフである。ＢＭＤＭを、リポ多糖（ＬＰＳ）で３時間プライミングし、次いで、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＬＬｅＴｘ）、又はＡｂ５（ＬＬｅＴｘ Ａｂ「ｘ」、ｘは、μｇ／ｍＬ単位の抗体の濃度である）、又はＡｂ５及び４０μｇ／ｍＬの遮断ペプチド（ＬＬｅＴｘＡｂ「ｘ」＋ｐｅｐ）で前処理した後のＬｅＴｘで、更に処理した。上清中へのＩＬ－１β放出を、ニゲリシンでの刺激の１．５時間後に定量化し（図１４Ａ）、細胞死の動態を、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって測定した（図１４Ｂ）。 リポソーム漏出アッセイを示すグラフである。組換えガスダーミンＤを、カスパーゼ－１によって切断し、カルセイン充填リポソームに細孔を生成させた。リポソームからのカルセイン漏出の動態を記録した。図１５は、組換えガスダーミンＤを様々な濃度のジスルフィラム（図１５Ａ）、ガスダーミンＤ特異的抗体Ａｂ５（図１５Ｂ）、及び細胞死もＩＬ－１β放出も阻害しない他のガスダーミンＤ標的化抗体（図１５Ｃ）で前処理した後のカルセイン漏出の動態を示す。
ガスダーミンＤの阻害剤
本発明は、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
したがって、本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害が、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又は阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害が、ガスダーミンＤの機能の阻害である、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
したがって、本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの中和が、ガスダーミンＤの活性の中和であり、かつ／又はガスダーミンＤの中和が、ガスダーミンＤの機能の中和である、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
したがって、本発明は、ガスダーミンＤに結合する細胞外阻害剤を提供する。したがって、本発明は、細胞表面上のガスダーミンＤに結合する阻害剤を提供する。
したがって、本発明はまた、ガスダーミンＤに結合し、阻害剤がガスダーミンＤに結合しない限り細胞膜を通過しない、阻害剤を提供する。
したがって、本発明はまた、大型分子であるガスダーミンＤの阻害剤を提供する。
したがって、本発明はまた、ガスダーミンＤに結合する阻害剤であって、＞２ｋＤａ、＞３ｋＤａ、＞４ｋＤａ、＞５ｋＤａ、＞６ｋＤａ、＞７ｋＤａ、＞８ｋＤａ、＞９ｋＤａ、又は＞１０ｋＤａの分子量を有する、阻害剤を提供する。
ガスダーミンＤのタンパク質分解切断は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインの細胞膜への挿入をもたらす。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合する。
いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合する。
原形質膜へのガスダーミンＤの挿入には、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインと細胞膜の脂質との会合が必要である。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合（association）を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤとホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
細胞膜におけるガスダーミンＤのＮ末端ドメインの挿入は、ガスダーミンＤサブユニットのオリゴマー化をもたらし、それが多量体細孔複合体として機能する。本発明者らは、ガスダーミンＤの機能が、細孔形成を防止することによって破壊され得ると判断した。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤのオリゴマー化を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。この機序は、それよって細孔の形成を防止する。
細孔を形成するガスダーミンＤサブユニットのオリゴマー化には、ガスダーミンＤサブユニット間の相互作用が必要である。したがって、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用の破壊は、細孔形成を阻害することとなる。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を中和するなど、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する。この機序は、それによってオリゴマー化を防止する。
ガスダーミンＤ多量体細孔複合体の形成は、サイトカインの放出及び細胞イオン勾配の破壊をもたらす。細胞表面上に既に形成されている細孔の破壊及び阻害は、ピロトーシスによる細胞死など、ガスダーミンＤの１つ又は複数の活性を阻害し得る。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を中和するなど、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を阻害する。
ガスダーミンＤの活性及び／又は機能の阻害は、ピロトーシスに起因する細胞死の阻害をもたらし得る。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を阻害することができる。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害する。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害する。ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
ガスダーミンＤの活性及び／又は機能の阻害は、ピロトーシスに起因するものなどの細胞死の遅延をもたらし得る。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得る。いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させる。ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
治療における使用のための阻害剤の開発には、承認の前に事前臨床試験が必要である。それ故に、旧世界ザルのガスダーミンＤ又は新世界ザルのガスダーミンＤと交差反応する本発明の阻害剤は、非ヒト霊長類における実験的試験を可能にし、本発明の阻害剤の毒物学的プロファイル、安全性プロファイル、及び有効性プロファイルを試験するための非ヒトモデルを提供する。したがって、これは、開発効率を高めることができる。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、旧世界ザルのガスダーミンＤ又は新世界ザルのガスダーミンＤと交差反応する。
本発明は、ガスダーミンＤ阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、タンパク質性、例えば、抗原結合タンパク質である。抗原結合タンパク質は、特定の抗原に対して結合親和性を示し得る、任意のタンパク質性構造体である。本明細書では、指定される標的抗原は、ガスダーミンＤタンパク質又はそのフラグメントである。「抗原結合タンパク質」には、抗体及びその結合部分、例えば、免疫学的に機能性のフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。ペプチボディ（Ｆｃ融合体）は、抗原結合タンパク質の別の例であり、重鎖及び軽鎖由来の抗体フラグメントも同様である。そのようなフラグメントは、エピトープに結合し、ガスダーミンＤを阻害することができるため、活性である。一態様では、そのようなフラグメントは、全長軽鎖又は重鎖に存在する少なくとも１つの相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）を保持することとなり、いくつかの実施形態において、単一の重鎖及び／若しくは軽鎖又はその一部分を含むこととなる。フラグメントは、酵素又は化学的切断によって容易に生成することができる。フラグメントは、Ｆａｂ、ダイアボディ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体、及び一本鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載されるいくつかの抗原結合タンパク質は、抗体であるか、又は抗体に由来する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質のポリペプチド構造は、抗体に基づき、これには、それぞれ、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合体（「抗体コンジュゲート」と呼ばれることもある）、及びこれらのフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。加えて、抗原結合フラグメントは、対象となる所与の抗原に対する親和性を付与する方向にポリペプチドセグメントをうまく組み込み得る、抗体以外のタンパク質性フレームワーク、例えば、タンパク質スキャフォールドを含んでもよい。そのようなタンパク質スキャフォールドの非限定的な例としては、以下により詳細に考察されるように、ナノボディ（ＶＨＨ）ドメイン、ＩｇＮＡＲ可変ドメイン（ｖＮＡＲ）、Ｆｃ融合タンパク質、可変リンパ球受容体（variable lymphocyte receptor、ＶＬＲ）ドメイン、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、センチリン、クリングルドメインタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（designed ankyrin repeat protein、ＤＡＲＰｉｎ）、シスチンノットミニタンパク質、Ｓｓｏ７ｄタンパク質、アフィボディ、アフィマー、アンチカリン、アフィリン、アフィチン、又はフィノマーが挙げられる。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、抗原結合タンパク質であって、例えば、阻害剤が、ガスダーミンＤを中和する、抗原結合タンパク質を提供する。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、抗原結合タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、抗原結合タンパク質が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害は、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又は抗原結合タンパク質が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害は、ガスダーミンＤの機能の阻害である。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和し、ガスダーミンＤの中和は、ガスダーミンＤの活性の中和であり、かつ／又はガスダーミンＤの中和は、ガスダーミンＤの機能の中和である。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合する細胞外阻害剤である。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、細胞表面上のガスダーミンＤに結合する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、抗原結合タンパク質がガスダーミンＤに結合しない限り細胞膜を通過しない。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、大型分子である。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、＞２ｋＤａ、＞３ｋＤａ、＞４ｋＤａ、＞５ｋＤａ、＞６ｋＤａ、＞７ｋＤａ、＞８ｋＤａ、＞９ｋＤａ、又は＞１０ｋＤａの分子量を有する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する。
いくつかの実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を中和するなど、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を中和するなど、ピロトーシスによって誘導される細胞死を阻害し得る。
いくつかの実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を中和するなど、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害することができる。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害する。ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得る。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させる。ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、旧世界ザルのガスダーミンＤ又は新世界ザルのガスダーミンＤと交差反応する。そのような交差反応性の利点は、本明細書で上述されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合フラグメント、ナノボディ（ＶＨＨ）ドメイン、ＩｇＮＡＲ可変ドメイン（ｖＮＡＲ）、Ｆｃ融合タンパク質、可変リンパ球受容体（ＶＬＲ）ドメイン、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、センチリン、クリングルドメインタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、シスチンノットミニタンパク質、Ｓｓｏ７ｄタンパク質、アフィボディ、アフィマー、アンチカリン、アフィリン、アフィチン、又はフィノマーである。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害する。ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、細孔の形成を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、抗原結合タンパク質は、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットのエピトープに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットの配列に結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットの単離されたペプチドに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗原結合タンパク質は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗原結合タンパク質は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗原結合タンパク質は、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗原結合タンパク質は、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメント
ガスダーミンＤに特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントが、本明細書に記載される。抗体分子の一般的な構造は、抗原結合ドメイン及びＦｃドメインを含む。Ｆｃは、エフェクター機能を媒介する。天然に存在する抗体構造単位は、典型的には、２つの軽鎖及び２つの重鎖の四量体を含む。抗原結合ドメインは、重鎖に由来する可変ドメイン及び軽鎖に由来する可変ドメインから形成される。可変領域は、典型的には、比較的保存されたフレームワーク領域（framework region、ＦＲ）が相補性決定領域又はＣＤＲとも呼ばれる、３つの超可変領域によって結合された、同じ一般構造を示す。それぞれの対の２つの鎖に由来するＣＤＲは、典型的には、フレームワーク領域によって整列されており、これが、特異的エピトープへの結合を可能にし得る。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、典型的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。抗体の可変領域は、典型的には、その標的に対する特定の抗体の特異性を決定する。ヒト軽鎖は、典型的には、カッパ軽鎖及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、典型的には、μ、δ、γ、α、又はεとして分類され、それぞれ、抗体のアイソタイプをＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして定義する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭもまた、サブクラスを有する。全長軽鎖は、可変領域ドメインＶＬ、及び定常領域ドメインＣＬを含み、軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖には、カッパ鎖及びラムダ鎖が含まれる。「重鎖」という用語は、全長重鎖、及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントを含む。全長重鎖は、可変領域ドメインＶＨ、並びに３つの定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨドメインは、カルボキシル末端にあり、ＣＨ３が、ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。「抗体」は、特に断らない限り、免疫グロブリンの全てのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＹ）を指し、様々な単量体形態、ポリマー形態、及びキメラ形態を含む。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（monoclonal antibody，ｍＡｂ）、及び抗体様ポリペプチド、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体が、「抗体」という用語に具体的に包含される。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、抗体若しくは抗原結合フラグメントが、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害は、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又は抗体若しくは抗原結合フラグメントが、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害は、ガスダーミンＤの機能の阻害である。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和し、ガスダーミンＤの中和は、ガスダーミンＤの活性の中和であり、かつ／又はガスダーミンＤの中和は、ガスダーミンＤの機能の中和である。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合する細胞外阻害剤である。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、細胞表面上のガスダーミンＤに結合する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントがガスダーミンＤに結合しない限り細胞膜を通過しない。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、大型分子である。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、＞２ｋＤａ、＞３ｋＤａ、＞４ｋＤａ、＞５ｋＤａ、＞６ｋＤａ、＞７ｋＤａ、＞８ｋＤａ、＞９ｋＤａ、又は＞１０ｋＤａの分子量を有する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合する。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９の単離されたペプチドに結合する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントはガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤのオリゴマー化を中和するなど、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を中和するなど、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合する。いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を中和するなど、ピロトーシスによって誘導される細胞死を阻害し得る。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を中和するなど、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害することができる。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得る。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、旧世界ザルのガスダーミンＤ又は新世界ザルのガスダーミンＤと交差反応する。そのような交差反応性の利点は、本明細書で上述されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、細孔の形成を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットのエピトープに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットの配列に結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体及びその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットの単離されたペプチドに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｃ領域を含む。「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖フラグメントを含む。２つの重鎖フラグメントは、２つ以上のジスルフィド結合によって、かつＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって、一緒に保持される。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭアイソタイプを含む。記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、全てのアイソタイプである、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、並びに４本鎖免疫グロブリン構造の合成多量体を含む。記載される抗体又は抗原結合フラグメントはまた、雌鳥又はシチメンチョウの血清及び雌鳥又はシチメンチョウの卵黄中に一般的に見出されるＩｇＹアイソタイプも含む。
ガスダーミンＤ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、組換え手法によって得ることができる。ヒトへの投与に使用するために、非ヒト由来の抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト患者に投与したときの抗原性がより低くなるよう遺伝的に又は構造的に改変されてもよい。
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において９５％を上回る相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（antibody-dependent cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement-dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣでは、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃｇＲ）に結合し、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣでは、抗体は、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることによって、標的細胞を殺滅させる。本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧアイソタイプのいずれかとの組合せで、可変ドメインの記載された特徴を有する抗体を含み、これには、異なるエフェクター機能をもたらすようにＦｃ配列が改変されている改変版が含まれる。
多くの治療用抗体の適用に関し、Ｆｃに媒介されるエフェクター機能は、作用機序を担わない。これらのＦｃに媒介されるエフェクター機能は、機序外の毒性を引き起こすことにより有害となるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能の改変は、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩａ、及びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１成分（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されると、Ｆｃ機能が低下又はサイレンシングする。本明細書に記載される抗体は、これらの改変を含んでもよい。
一実施形態において、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩｂ、ＦｃｇＲＩＩＩｂ、及び／又はＦｃｇＲＩＩＩａに対する低減された親和性、（ｃ）ＦｃｇＲＩに対する低減された親和性、（ｄ）ＦｃｇＲＩＩａに対する低減された親和性、（ｅ）ＦｃｇＲＩＩｂに対する低減された親和性、（ｆ）ＦｃｇＲＩＩＩｂに対する低減された親和性、又は（ｇ）ＦｃｇＲＩＩＩａに対する低減された親和性のうちの１つ以上を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有するいくつかの実施形態において、抗体は、そのＦｃ領域に、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＫ４０９Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプである。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有するいくつかの実施形態において、抗体は、そのＦｃ領域に、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を含む。本明細書に記載される抗体は、これらの改変を含んでもよい。
抗体又はその抗原結合フラグメントの特異性は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び配置により主に決定される。したがって、あるアイソタイプのＣＤＲは、抗原特異性を変化させることなく、別のアイソタイプに変更することができる。あるいは、抗原特異性を変化させることなく、ハイブリドーマに、ある抗体アイソタイプを別のものにスイッチさせる技術（アイソタイプスイッチング）が確立されてきた。したがって、このような抗体アイソタイプは、記載される抗体又は抗原結合フラグメントの範囲内にある。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントは、キメラである。本明細書で使用されるとき、「キメラ」という用語は、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、非ヒト哺乳動物、げっ歯動物、又は爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変ドメインの少なくともいくらかの部分を有するものの、それらの残りの部分はヒトに由来するものである、抗体又はその抗原結合フラグメントを指す。
いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最少配列を含む、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又はフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、若しくは抗体の他の抗原結合部分配列）であってもよい。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、又はウサギのＣＤＲからの残基（ドナー抗体）により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含み得る。「ヒト化」抗体は、ヒト化抗体がヒト対象に投与された場合に、非ヒト種抗体と比較して、免疫応答を誘導する可能性が低く、かつ／又は誘導する免疫応答があまり重度ではなくなるように、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、及び／又は付加によって非ヒト種に由来する抗体の配列とは異なっている配列を有する。一実施形態において、非ヒト種抗体の重鎖及び／又は軽鎖のフレームワーク及び定常ドメインのある特定のアミノ酸は、ヒト化抗体を産生するように変異されている。別の実施形態において、ヒト抗体に由来する（複数の）定常ドメインは、非ヒト種の（複数の）可変ドメインに融合されている。別の実施形態において、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列中の１つ以上のアミノ酸残基は、ヒト対象に投与した場合の非ヒト抗体の潜在的な免疫原性を低減するように変更され、変更されるアミノ酸残基は、抗原へのヒト化抗体の結合が、抗原への非ヒト抗体の結合よりも有意に悪化しないように、抗体のその抗原への免疫特異的結合にとって重要ではないか、又は行われるアミノ酸配列に対する変更が保存的変更であるかのいずれかである。
ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化抗体が由来する別の種に由来する抗体と、標的に対する実質的に同じ親和性を有する。ある特定の実施形態において、当該技術分野で既知の方法による抗体の改変は、典型的には、標的に対する結合親和性の増加を達成するように、かつ／又はレシピエントにおける抗体の免疫原性を低減するように設計される。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、その同種抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、グリコシル化部位を排除するように改変されている。ある特定のそのような実施形態において、そのような技術は、典型的には、外来残基の数を低減することによって抗体免疫原性を低減させるが、抗体の反復投与後の抗イディオタイプ応答及び抗アロタイプ応答を防止しない。
いくつかの実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトを含み得る。ヒト抗体は、Ｉｇ遺伝子を欠失させたか又は不活性化させ、ヒトＩｇ遺伝子と置き換えた、げっ歯類において、作製することができる。大きなヒトＩｇフラグメントは、大きな可変遺伝子多様性、並びに抗体産生及び発現の適切な調節を保持することができる。抗体の多様化及び選択のためのマウス機構及びヒトタンパク質に対する免疫学的寛容性の欠如を利用することにより、これらのマウス株における複製ヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む任意の目的の抗原に対する高親和性の完全ヒト抗体をもたらすことができる。ヒト抗体は、マウス若しくはラット可変領域及び／又は定常領域を有する抗体に関連する問題のいくつかを回避する。そのようなマウス又はラット由来のタンパク質の存在は、抗体の急速なクリアランスをもたらし得るか、あるいは患者による抗体に対する免疫応答の生成をもたらし得る。マウス又はラット由来の抗体の利用を回避するために、げっ歯動物、他の哺乳動物、又は動物が完全ヒト抗体を産生するように、げっ歯動物、他の哺乳動物、又は動物へ機能的ヒト抗体遺伝子座を導入することによって、完全ヒト抗体を生成することができる。ヒト化抗体は、最初はヒトではない抗体アミノ酸配列を含めることから開始するが、これらの非ヒト抗体アミノ酸配列の少なくとも一部がヒト抗体配列と置き換えられている、抗体である。これは、抗体がヒトが有する遺伝子によってコードされる（又はコードされ得る）ヒト抗体とは対照的である。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、又は一本鎖Ｆｖ（single-chain Fv、ｓｃＦｖ）分子を含む。「抗体又はその抗原結合フラグメント」という語句は、所与の抗原結合フラグメントが、この語句内で参照されている抗体の１つ以上のアミノ酸セグメントを組み込んでいることを示すために使用され得る。抗原結合フラグメントは、任意の既知の手法、例えば、酵素切断、ペプチド合成、及び組換え手法によって得られるものを含む。一部の抗原結合フラグメントは、親抗体分子の抗原結合特異性を保持しているインタクトな抗体の部分から構成される。例えば、抗原結合フラグメントは、特定の抗原に結合することが既知である抗体の、少なくとも１つの可変領域（重鎖若しくは軽鎖の可変領域のいずれか一方）、又は１つ若しくは複数のＣＤＲを含んでもよい。好適な抗原結合フラグメントの例には、ダイアボディ及び一本鎖分子、並びにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｂｃ、及びＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖若しくはＣＤＲと他のタンパク質との間のキメラ融合体、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、１本の重鎖と１本の軽鎖とからなる二量体、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、又は国際公開第２００７０５９７８２号に記載される一価抗体、ヒンジ領域においてジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、ＶＨ及びＣＨ１ドメインから本質的になるＦｄフラグメント、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから本質的になるＦｖフラグメント、ＶＨドメインから本質的になり、ドメイン抗体とも呼ばれる（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ．；２１（１１）：４８４－９０）ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４－５４６（１９８９））、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）などが挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合フラグメントは、組換えにより生成されてもよく、又はインタクトな抗体の酵素分解若しくは化学分解により生成されてもよい。
「Ｆａｂフラグメント」は、１つの軽鎖と、１つの重鎖のＣＨ１及び可変領域とを含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
「Ｆａｂ’」フラグメントは、１つの軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む１つの重鎖の一部とを含み、更に、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域も含み、その結果、２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子が形成され得る。
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つの軽鎖と、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部分を含む２つの重鎖とを含み、その結果、２つの重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。
したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、２つの重鎖の間のジスルフィド結合によって一緒に保持される２つのＦａｂ’フラグメントから構成される。
「Ｆｖ領域」は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域が欠如している。
「一本鎖抗体」は、重鎖及び軽鎖可変領域が可動性リンカーによって接続されて、抗原結合領域を形成する単一のポリペプチド鎖を形成している、Ｆｖ分子である。
ガスダーミンＤに免疫特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドもまた、開示される。本明細書に提供される可変ドメインセグメントをコードすることができる単離されたポリヌクレオチドは、抗体又は抗原結合フラグメントを生成するために、同じか又は異なるベクターに含まれ得る。
組換え抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示の範囲内である。いくつかの実施形態において、記載されるポリヌクレオチド（及びそれらがコードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当該技術分野において既知の任意のリーダー配列を利用することができる。リーダー配列は、制限部位又は翻訳開始部位を含み得るがこれらに限定されない。
本明細書に記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生物学的特性（例えば、結合親和性又は免疫エフェクター活性）を保持する１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有するバリアントを含む。本発明の文脈において、別途記載のない限り、下記注釈が、変異を説明するために使用される。ｉ）所与の位置におけるアミノ酸の置換は、例えば、Ｌ２３４Ａと記載され、これは、２３４位におけるロイシンのアラニンとの置換を意味し、ｉｉ）特定のバリアントについて、特定の三文字又は一文字コードが、コードＸａａ及びＸを含め、アミノ酸残基を示すために使用される。このため、２３４位におけるロイシンのアラニンと置換は、Ｌ２３４Ａと表記され、又は２３４位におけるロイシンの任意のアミノ酸残基との置換は、Ｌ２３４Ｘと表記される。２３４位におけるロイシンの欠失の場合には、この欠失は、Ｌ２３４＊により示される。当業者であれば、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有するバリアントを生成することができる。
これらのバリアントとしては、（ａ）１つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸により置換されているバリアント、（ｂ）１つ以上のアミノ酸がポリペプチドに付加されているか又はそれから欠失しているバリアント、（ｃ）１つ以上のアミノ酸が置換基を含むバリアント、及び（ｄ）ポリペプチドが、ポリペプチドに有用な特性、例えば、抗体に対するエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分などを付与し得る別のペプチド又はポリペプチド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ、又は他の化学部分と融合したバリアントを挙げることができる。本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントは、保存的又は非保存的位置のいずれかにおいて、ある種に由来するアミノ酸残基が別の種における対応する残基に置換されているバリアントを含んでもよい。他の実施形態において、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基により置換される。これらのバリアントを得るための手法は、遺伝的（欠失、変異など）、化学的、及び酵素的手法を含め、当業者に既知である。
本明細書に記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、約５×１０－７Ｍ未満、好ましくは、約５×１０－８Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を含む、ガスダーミンＤに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、約５×１０－７Ｍ未満、好ましくは、約５×１０－８Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を含む、ガスダーミンＤに対する結合親和性を有する。記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの親和性は、当該技術分野において既知の様々な方法、例えば、表面プラズモン共鳴又はＥＬＩＳＡに基づく方法によって決定することができる。ＳＰＲにより親和性を測定するためのアッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器を使用して行われるアッセイを含み、その場合、このアッセイは、室温（例えば、２５℃又は２５℃付近）で行われ、ガスダーミンＤに結合することができる抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅセンサチップ上に、抗Ｆｃ抗体（例えば、ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製品番号１０９－００５－０９８）によって、７５ＲＵ付近のレベルで捕捉され、続けて、４０μＬ／分の流量において、会合及び解離のデータが収集される。抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「特異的結合」若しくは「免疫特異的結合」、又はそれらの派生語は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされるドメインを介して、分子の混合集団を含有するサンプル中の他の分子に優先的に結合することなく、目的のタンパク質の１つ以上のエピトープに結合することを表す。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイによって測定される場合、約１×１０－８Ｍ未満のＫＤで、同種抗原に結合する。「［抗原］特異的」抗体（例えば、ガスダーミンＤ特異的抗体）などの語句は、列挙された抗体が列挙された抗原に特異的に結合することを伝えることを意味する。
本明細書で使用されるとき、「ｋｄ」（秒－１）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数を意味する。当該値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
本明細書で使用されるとき、「ｋａ」（Ｍ－１秒－１）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度定数を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ＫＡ」（Ｍ－１）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合平衡定数を意味し、ｋａをｋｄで割ることにより得られる。
２つ以上の抗体又は抗原結合フラグメントの文脈において本明細書で使用されるとき、「と競合する」又は「と交差競合する」という用語は、２つ以上の抗体又は抗原結合フラグメントが、ガスダーミンＤへの結合について競合することを示す。別途定義されるか又は文脈によって否定されない限り、「と競合する」又は「と交差競合する」という用語は、本明細書で使用されるとき、そのような抗体又は抗原結合フラグメントの対を包含することも意図される。
本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。ベクターは、発現ベクターであり得る。したがって、目的のポリペプチドをコードする配列を含む組換え発現ベクターは、本開示の範囲内であることが企図される。発現ベクターは、制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルなどであるがこれらに限定されない、１つ以上の追加配列を含んでもよい。広範な宿主細胞を形質転換するためのベクターは周知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（bacterial artificial chromosome、ＢＡＣ）、酵母人工染色体（yeast artificial chromosome、ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本説明の範囲内にある組換え発現ベクターは、好適な調節エレメントに作動可能に連結することができる少なくとも１つの組換えタンパク質をコードする、合成、ゲノム、又はｃＤＮＡ由来の核酸フラグメントを含む。そのような調節エレメントとしては、転写プロモーター、好適なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクター、特に、哺乳動物の発現ベクターはまた、１つ以上の非転写エレメント、例えば、複製の起点、発現させようとする遺伝子に連結されている好適なプロモーター及びエンハンサー、他の５’若しくは３’フランキング非転写配列、５’若しくは３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終了配列を含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製の起点もまた、組み込まれ得る。
脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳制御配列は、ウイルス資源により提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）に記載されるように構築されてもよい。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントのコーディング配列は、強力な構成的プロモーター、例えば、以下の遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチンなどのためのプロモーターの制御下に置かれる。加えて、多くのウイルスプロモーターが、真核細胞中で構成的に機能し、記載される実施形態での使用に好適である。そのようなウイルスプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（Cytomegalovirus、ＣＭＶ）最初期プロモーター、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（Mouse Mammary Tumor Virus、ＭＭＴＶ）プロモーター、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency Virus、ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（Epstein Barr Virus、ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（Rous Sarcoma Virus、ＲＳＶ）、及び他のレトロウイルスの長端末反復配列（long terminal repeat、ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ガスダーミンＤ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントのコーディング配列は、誘導性プロモーター、例えば、メタロチオネインプロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、ドキシサイクリン誘導性プロモーター、１つ又複数のインターフェロン刺激応答エレメント（interferon-stimulated response element、ＩＳＲＥ）、例えば、プロテインキナーゼＲ２’，５’－オリゴアデニレート合成酵素、Ｍｘ遺伝子、ＡＤＡＲ１などを含むプロモーターの制御下に置かれる。
本明細書に記載されるベクターは、１つ以上の内部リボソーム進入部位（Internal Ribosome Entry Site、ＩＲＥＳ）を含み得る。ＩＲＥＳ配列を融合ベクターに含めることは、一部のタンパク質の発現を増強させるのに有益であり得る。いくつかの実施形態において、ベクター系は、１つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含むこととなり、これは、前述の核酸配列のうちいずれかの上流又は下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接して連結されてもよく、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよく、又は別の方法で位置付けられてもよい。調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフはまた、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
ベクターは、当該技術分野において既知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーとしては、陽性及び陰性選択マーカー、例えば、抗生物質抵抗性遺伝子（例えば、ネオマイシン抵抗性遺伝子、ヒグロマイシン抵抗性遺伝子、カナマイシン抵抗性遺伝子、テトラサイクリン抵抗性遺伝子、ペニシリン抵抗性遺伝子）、グルタミン酸合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、目的のポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流又は下流にあってもよい。
本明細書に記載されるベクターを使用して、様々な細胞に、記載される抗体又は抗原結合フラグメントをコードする遺伝子を形質転換することができる。例えば、ベクターを使用して、ガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生成細胞を生成することができる。このため、別の態様は、ガスダーミンＤに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載され例示される抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターが形質転換された宿主細胞を特徴とする。
外来遺伝子を細胞内に導入するための数多くの手法が、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載され例示される様々な実施形態に従って、記載される方法を行う目的で組換え細胞を作成するのに使用することができる。使用される手法は、異種遺伝子配列が細胞の子孫により遺伝及び発現可能であり、かつレシピエント細胞に必須の成育及び生理学的機能を損なうことのないよう、異種遺伝子配列を宿主細胞に安定して導入するものでなければならない。使用することができる手法としては、染色体導入法（例えば、細胞融合、染色体媒介性遺伝子導入、マイクロ細胞媒介性遺伝子導入）、物理的方法（例えば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソーム担体）、ウイルスベクター導入（例えば、組換えＤＮＡウイルス、組換えＲＮＡウイルス）などが挙げられる（Ｃｌｉｎｅ，２９ Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６９－９２（１９８５））が、これらに限定されない。哺乳類細胞による細菌プロトプラストのリン酸カルシウム沈殿及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導融合を使用しても、細胞を形質転換することができる。
また、本明細書に記載されるベクターを含む、宿主細胞が提供される。本明細書に記載されるガスダーミンＤ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの発現に使用するのに好適な細胞は、好ましくは、真核細胞、より好ましくは、植物、げっ歯動物、又はヒト起源の細胞であり、例えば、とりわけ、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ｐｅｒＣ．６、Ｔｋ－ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ－１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞、及びＢＨＫ細胞株であるが、これらに限定されない。加えて、抗体の発現は、ハイブリドーマ細胞を使用して達成されてもよい。ハイブリドーマを生成するための方法は、当該技術分野において十分確立されている。
本明細書に記載される発現ベクターが形質転換された細胞は、本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントの組換え発現について選択され、又はスクリーニングされてもよい。組換え陽性細胞は、例えば、タンパク質改変又は変化させた翻訳後改変により、所望の表現型、例えば、高レベルの発現、増強された増殖特性、又は所望の生化学的特性を有するタンパク質を生成する能力を示すサブクローンについて、増殖され、スクリーニングされる。これらの表現型は、所与のサブクローンの本来の特性又は変異によるものであり得る。変異は、化学薬品、ＵＶ波長光、照射、ウイルス、挿入変異源、ＤＮＡミスマッチ修復の阻害、又はこのような方法の組合せにより生じ得る。
抗体又はその抗原結合フラグメントが生成されるような条件下で宿主細胞を培養することを含む、抗体又はその抗原結合フラグメントを生成するための方法もまた、提供される。
ガスダーミンＤ特異的多重特異性抗体
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、多重特異性抗体である。本明細書に記載される抗ガスダーミンＤ抗体の結合ドメインは、表面上にガスダーミンＤを発現している細胞を認識する。特定の細胞部分集合に対するより特異的な標的化は、二重特異性分子、例えば、ガスダーミンＤ及び別の標的に結合する抗体又は抗体フラグメントを作製することにより達成することができる。更に、ガスダーミンＤへの更なる特異的標的化は、複数のエピトープを認識する分子を使用して、ガスダーミンＤの複数のエピトープに結合することによって達成することができる。これは、ガスダーミンＤに結合する第１の領域及び更なる抗原又は異なるエピトープ領域に結合する第２の結合領域を含む分子を作製することにより達成される。これらの抗原結合領域は、標的の特異的な認識を可能にする任意の形態をとることができ、例えば、結合領域は、重鎖可変ドメイン、Ｆｖ（重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの組合せ）、又は本明細書に記載される任意の抗原結合タンパク質であってもよく、又はこれらを含んでもよい。したがって、ガスダーミンＤ及び別の抗原それぞれに結合する２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性分子が提供される。したがって、ガスダーミンＤの異なるエピトープに結合する２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性分子が提供される。
二重特異性抗体又は二官能性抗体は、典型的には、２つの異なる重鎖対／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’フラグメントの連結を含むがこれらに限定されない、様々な方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５－３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい。
これまでに様々なフォーマットの二重特異性抗体が記載されており、近年ではＣｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｂａｔｙ（２００９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ Ｄｅｖ １２：２７６によりレビューされている。
いくつかの実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、本発明において記載されるものなどの制御されたＦａｂアーム交換により得られるダイアボディ、クロスボディ、又は二重特異性抗体である。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体には、ヘテロ二量体化を強制する相補的ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面はそれぞれ、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部を含む）、ＩｇＧ融合分子（全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部に融合されている）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂフラグメントが一緒に融合されている）、ＳｃＦｖ及びダイアボディベース及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに融合されているか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子としては、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、組換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ融合分子としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ融合分子としては、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）．ｓｕｂ．２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、Ｆａｂ融合二重特異性抗体としては、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ－、ダイアボディベース及びドメイン抗体としては、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢＩＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、Ｔａｎｄｅｍ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ－ｌｉｋｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ＳｃＦｖ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的化ナノボディ（dual targeting nanobody）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的化重鎖単一ドメイン抗体（dual targeting heavy chain only domain antibody）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の全長二重特異性抗体は、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用い、インビトロにおいて、無細胞環境下又は共発現使用下のいずれかで、別個の特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体形成に有利になるようにそれぞれの半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよい。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異性親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は、低減される。単一特異性親抗体のうち１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異性親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりもヘテロ二量体形成に有利となるように操作されてもよい。得られる生成物は、それぞれが異なるエピトープ、すなわち、ガスダーミンＤ上のエピトープ及び別の標的分子上のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。
本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
全長二重特異性抗体を生成するのに「ノブ－イン－ホール」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照されたい）を使用してもよい。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
他の戦略、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進されてもよい。
上述の方法に加えて、本発明の二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、無細胞環境においてインビトロで、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において、２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することにより生成されてもよい。この方法では、第１の単一特異性二価抗体（例えば、抗ガスダーミンＤ抗体）及び第２の単一特異性二価抗体（例えば、異なる抗原を標的とする抗体）は、ＣＨ３ドメインにヘテロ二量体の安定性を促進するある特定の置換を有するように遺伝子操作され、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下において共にインキュベーションされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用されてもよい例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びベータ－メルカプトエタノール、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベートが使用されてもよい。
記載されるガスダーミンＤ多重特異性抗体に加えて、記載されるガスダーミンＤ多重特異性抗体をコードすることができるポリヌクレオチド配列もまた、提供される。記載されるポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供され、同様に、本明細書において提供されるガスダーミンＤ多重特異性抗体を発現する細胞も提供される。また、開示されるベクターを発現することができる細胞もまた、記載される。これらの細胞は、哺乳動物細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、大腸菌）であってもよい。記載される抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。
ガスダーミンＤ特異的ナノボディ（ＶＨＨ）ドメイン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＶＨＨドメイン（ナノボディ）である。固有の部類の「重鎖単一」抗体は、１９９３年にラクダ科動物の血清において発見された。本明細書においてＶＨＨドメインと称されるこれらの抗体の可変ドメインは、本明細書において「単一ドメイン抗体」又はナノボディとしても記載されており、単一の単量体可変抗体ドメインからなる。ＶＨＨは、全長抗体の親和性及び抗原結合特異性を維持することができる小さな天然由来の抗原結合機能性フラグメント（約１５ｋＤａ）である。
ＶＨＨ遺伝子は、ＩＩＩ族のヒトＶＨ３ファミリーと高度に相同性である。従来のヒト抗体ＶＨと比較して、いくつかの重要なアミノ酸が、ナノボディのフレームワーク２領域（framework 2 region、ＦＲ２）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）において置換されている。ＦＲ２領域における高度に保存された疎水性アミノ酸（Ｖａｌ４７、Ｇｌｙ４９、Ｌｅｕ５０、Ｔｒｐ５２）は、親水性アミノ酸（Ｐｈｅ４７、Ｇｌｕ４９、Ａｒｇ５０、Ｇｌｙ５２）によって置き換えられ、ナノボディの全体的な構造をより親水性にし、それによって、高い安定性、可溶性、及び凝集に対する抵抗性に寄与する。ＶＨＨの固有の特徴のうちの１つは、従来のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの大型分子によってアクセスすることが困難である場所における抗原性エピトープを標的とする能力である。更に、ＶＨＨは、二重及び多重特異性抗体の生成にも十分に適している（Ａｒｂａｂｉ－Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ Ｂ：１５８９）。ナノボディは、高温及び極端なｐＨに対する優れた抵抗性を有する。これらの増加した親水性及び単一ポリペプチドの性質により、ナノボディは、細菌、酵母、哺乳動物細胞、又は植物細胞において比較的効率的に生成することができ、合理的なコストでの大量生成が可能である。ＶＨＨドメインの免疫原性はまた、ヒト化によって最小化することができる。
ヒト血清アルブミンへの直接融合及びＰＥＧ化はまた、これらの分子の血清半減期を延長することができる。当業者には理解されるように、本発明のＶＨＨドメインは、ドメインが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的、ガスダーミンＤ特異的ＩｇＮＡＲ可変ドメイン（ｖＮＡＲ）
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＩｇＮＡＲ可変ドメイン（ｖＮＡＲ）である。
軟骨魚類は、免疫グロブリン新規抗原受容体又はＩｇＮＡＲ（immunoglobulin novel antigen receptor）と呼ばれる固有の部類の重鎖単一抗体を有する。ＩｇＮＡＲは、ジスルフィド結合によって結合された２つの重鎖のホモ二量体であり、軽鎖が欠如している。それぞれの重鎖は、５つの定常ドメイン及び１つの可変ドメイン（ｖＮＡＲ）を含む。約１１～１５ｋＤａで、これらの単一ドメイン構造は、最も小さな自然発生ＩｇＧ様タンパク質であり、長い伸長されたＣＤＲ３を有する。これらの分子は、従来の抗体分子よりも優れた利点を有する。すなわち、これらは、より高い熱安定性及び化学的安定性を示し、標的分子に結合するようにこれらのＣＤＲにおいて操作することができる（Ｃａｂａｎｉｌｌａｓ－Ｂｅｒｎａｌ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）ＰＬｏＳ ＯＮＥ １４（５）：ｅ０２１３３９４）。組換え抗体の迅速な生成を可能にする、ｖＮＡＲの合成ライブラリーが構築されている。当業者には理解されるように、本発明のＶＮＡＲドメインは、ドメインが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的可変リンパ球受容体（variable lymphocyte receptor、ＶＬＲ）ドメイン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、可変リンパ球受容体（ＶＬＲ）ドメインである。ヤツメウナギ及びメクラウナギなどの無顎脊椎動物の適応免疫系は、可変リンパ球受容体（ＶＬＲ）に基づいていることが示されている（Ｓａｎｇ－Ｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（２０１２）１０９（９）３２９９－３３０４）。ＶＬＲは、高度に多様なロイシンリッチ反復（leucine-rich repeat、ＬＲＲ）モジュールからなり、反復する２０～２９残基のＬＲＲモジュールのアセンブリによって特徴付けられる。それぞれのＬＲＲモジュールは、β鎖－α－ヘリックス構造からなり、これが、ソレノイドフォールディングを形成する。このＶＬＲスキャフォールドは、標的分子に結合するように変異誘発することができる結合スキャフォールドに発展している。可変リンパ球受容体（ＶＬＲ）は、Ｎ末端キャップ（ＬＲＲＮＴ）、第１のＬＲＲ（ＬＲＲ１）、最大９個の２４残基の可変ＬＲＲ（ＬＲＲＶ）、末端ＬＲＲＶ（ＬＲＲＶｅ）、接続ペプチド（connecting peptide、ＣＰ）、及びＣ末端キャップ（ＬＲＲＣＴ）から構成される。ＬＲＲＶドメインの配列は、異なる標的分子に結合するための選択残基のランダム化及び変異誘発を可能にする。ＶＬＲドメインのモジュラアーキテクチャは、変異誘発に加えて、標的分子に特異的な結合剤の選択のために、ＶＬＲ分子の潜在的な多様性を更に増加させるＬＲＲＶドメインの異なる組合せを可能にする。リピボディ（repebody）は、インターナリン－Ｂキャップ構造を使用して、ＬＲＲ鋳型スキャフォールドのＮ末端ドメインにおいて再設計されたＶＬＲのバリアントである。この改変は、細菌における高可溶性発現を可能にする。リピボディスキャフォールドは、ＬＲＲＶモジュールの数の変動を可能にし、それによって、標的相互作用表面のサイズの変動が可能となる。ＬＲＲＶモジュールは、リピボディフォールドの全体的な構造を破壊することなく、付加又は欠失させることができる。当業者には理解されるように、本発明のＶＬＲドメインは、ドメインが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（fibronectin type III、ＦＮ３）である。「フィブロネクチンＩＩ型（ＦＮ３）ドメイン」という用語は、フィブロネクチン、テネイシン、細胞内細胞骨格タンパク質、サイトカイン受容体、及び原核細胞酵素を含むタンパク質においてしばしば存在するドメインを意味する。ヒトフィブロネクチンドメインの１０個目のＩＩＩ型ドメイン（１０ＦＮ３）は、ジスルフィド結合を含まず、従来のＶＨドメインに似ている７つのβ鎖から構成される単量体構造を有し、６つの表面露出ループを含む。ＦＮ３のＢＣループ、ＤＥループ、及びＦＧループは、抗体ＣＤＲに構造的に類似している。これらの表面露出ループ又はそれぞれのループ内の選択された残基を、フィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮ３）ドメインのライブラリーを構築するためにラムダム化することができ、それを用いてガスダーミンＤに結合する新規分子を選択することができる。
いくつかの実施形態において、ＦＮ３ドメイン分子は、ヒトテネイシンに由来する（米国特許第８，２７８，４１９号に記載されるｔｅｎｃｏｎ Ｆｎ３ドメイン由来、米国特許第８，５６９，２２７号に記載される安定化ｔｅｎｃｏｎ Ｆｎ３ドメイン由来、若しくは米国特許第９，２００，２７３号に記載される代替的な結合表面を有するｔｅｎｃｏｎ分子由来）、又は他のフィブロネクチンドメインに由来する（米国特許第８，２９３，４８２号に記載されるコンセンサスＦＮ３ドメイン）ＦＮ３ドメインのコンセンサス配列に基づき得る。
いくつかの実施形態において、例示的なＦＮ３ドメインは、ヒトテネイシンＣに存在する１５個の異なるＦＮ３ドメイン、ヒトフィブロネクチン（ＦＮ）に存在する１５個の異なるＦＮ３ドメイン、及び例えば米国特許出願公開第２０１０／０２１６７０８号に記載される非天然の合成ＦＮ３ドメインである。当業者には理解されるように、本発明のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインは、ドメインが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的センチリン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、センチリンである。センチリンは、標的分子への結合を改善するために、ＦＮ３ドメインのＣ鎖、Ｆ鎖、ＣＤループ、及びＦＧループの特別にランダム化された部分を有するコンセンサステネイシンＦＮ３フレームワーク（Ｔｅｎｃｏｎ）に由来するＦＮ３ドメイン型タンパク質である。センチリンは、ＦＮ３ドメインの他の領域がタンパク質タンパク質相互作用に関与することを特定することにより、ＦＮ３ライブラリー設計をＣＤＲ様ループを越えて拡張する（Ｄｉｅｍ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２７（１０）：４１９－４２９）。当業者には理解されるように、本発明のセンチリンは、ドメインが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的クリングルドメイン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、クリングルドメイン含有タンパク質である。クリングルドメインは、３つのジスルフィド結合及び２つのβシートを含む剛性コア構造を有し、７８～８２個のアミノ酸から構成される。クリングルドメイン構造に基づいてタンパク質スキャフォールドライブラリーを構築することが可能であり、ループ構造の領域は、米国特許出願公開第２０１２００２１９９３号に記載されるように、標的分子に特異的に結合するアミノ酸配列の組合せに対して変異誘発されている。当業者には理解されるように、本発明のクリングルドメインは、ドメインが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、設計アンキリンリピートタンパク質である。ＤＡＲＰｉｎは、約１７ｋＤａの分子量を有する小さなペプチドである。ＤＡＲＰｉｎは、天然アンキリンリピートタンパク質に由来する（Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １３（１５－１６）：６９５－７０１）。３３個のアミノ酸残基のアンキリンリピートモジュールは、２つの逆平行α－ヘリックスが続くβターンを含み、システイン残基を含まない。ＤＡＲＰｉｎは、複数のランダム化されたアンキリンリピートモジュール単位を含む反復的な構造モジュールのアンサンブルである。ＤＡＲＰｉｎは、大きな潜在的な標的相互作用表面を有する安定したタンパク質フレームワークを形成する。ＤＡＲＰｉｎ分子のサイズは、いくつのアンキリンリピートモジュール単位がタンパク質に組み込まれるかに応じて調整することができる。ＤＡＲＰｉｎは、細菌において良好に発現し、これらの安定性は、タンパク質に組み込まれたアンキリンリピートモジュールの数に依存する。ＤＡＲＰｉｎのモジュラーアセンブリに起因して、単一のＤＡＲＰｉｎ分子は、同じ標的分子上の異なるエピトープ、又は異なる標的に指向され得る。タンパク質スキャフォールドとして、ＤＡＲＰｉｎは、分子の構造を不安定化することなく、側鎖置換に耐えることができる二次構造エレメントの領域で変異させることができる。あるいは、「ループ」ＤＡＲＰｉｎは、ＤＡＲＰｉｎコアユニット上にグラフトされ得る、連続した長いループを組み込み、これによって、潜在的な標的分子の範囲が拡大され、スキャフォールドコアの安定性が保持される（Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ（２０１５）１５（２））。当業者には理解されるように、本発明のＤＡＲＰｉｎは、ＤＡＲＰｉｎが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的シスチンノットミニタンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、シスチンノットミニタンパク質である。
ノッチンとしても知られるシスチンノットミニタンパク質は、天然に存在するシスチンリッチペプチドのクラスである。ノッチンは、少なくとも３つのジスルフィド結合によって安定化された逆平行β鎖のコアを特徴とする構造ファミリー（典型的には２５～５０個のアミノ酸の長さ）である。特徴的なシスチンノットモチーフでは、第１及び第４のシステイン残基並びに第２及び第５のシステイン残基が、ジスルフィド結合を形成する。第３及び第６のシステイン残基の間に形成されたジスルフィド結合は、これらの第１の２つのジスルフィドを通過し、マクロ環式ノットを生成する。ノッチンは、アミノ酸変異に耐えることができる可変長のループ領域を有し、標的分子に結合するように操作することができる。操作されたループは、ノッチンペプチドの既存のループにおけるアミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失を含み得る。ノッチンペプチドスキャフォールドは、天然ループと、所望される標的分子結合特性を有する操作されたループとの置き換えに耐えることができる。ノッチン構造スキャフォールドは、優れた構造的安定性及び熱的安定性を有する。ノッチンペプチドのスキャフォールドは、オンラインＫＮＯＴＴＩＮデータベースに記載されているペプチドであり得る。当業者には理解されるように、本発明のシステインノットミニタンパク質は、ミニタンパク質が属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的Ｓｓｏ７ｄタンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｓｓｏ７ｄ由来のタンパク質である。
Ｓｓｏ７ｄは、システイン残基が欠如しており、熱的に安定である、超好熱性古細菌Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ｓｏｌｆａｔａｒｉｃｕｓに由来するタンパク質である。Ｓｓｏ７ｄは、約７ｋＤａの小分子である。Ｓｓｏ７ｄは、ＤＮＡ結合タンパク質である。そのＤＮＡ結合表面は、他の標的分子に結合するように操作されるために、変異誘発され得る。Ｓｓｏ７ｄスキャフォールドは、高い、熱的安定性、化学的安定性、及びｐＨ安定性を示し、組換え発現によって容易に生成することができる（Ｇｅｒａ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４０９（４）：６０１－６１６）。当業者には理解されるように、本発明のＳｓｏ７ｄタンパク質は、ミニタンパク質が属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的アフィボディ
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、アフィボディである。
アフィボディ分子は、黄色ブドウ球菌（Staphylococus aureus）に由来するプロテインＡの免疫グロブリンＧ結合ドメイン（Ｚドメイン）の構造に基づいて、スキャフォールドタンパク質を利用する（Ｎｙｇｒｅｎ（２００８）ＦＥＢＳ Ｊ．２７５（１１）：２６６８－２６７６）。したがって、これらは、サイズが約６ｋＤａである小さな３つのヘリックスの束のドメインフレームワークに基づく。このタンパク質スキャフォールドの使用には多くの利点がある。アフィボディは、様々な宿主細胞における生成に適しているか、又はそれらの小さいサイズに起因して、化学的に合成することができる。アフィボディは、急速にフォールディングし、タンパク質分解に抵抗性であり、いずれのシステイン残基も含まない。３つのヘリックス束を重合させることができ、複数のドメインを有することで、分子の結合力を増加させることができるか、又は１つのタンパク質において複数の異なるエピトープ若しくは標的分子に対する特異性が可能となり得る。スキャフォールドは、タンパク質の二次構造エレメントに対する変異誘発を可能にし、３つのヘリックス束のヘリックス１及び２の表面上に１３個を上回る溶媒アクセス可能残基が存在し、変異誘発がタンパク質を不安定化させることはない。これにより、標的分子に対する選択性についてスクリーニングするために、アフィボディの新規なコンビナトリアルライブラリーを生成することが可能になる（Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ（２０１５）１５（２））。当業者には理解されるように、本発明のアフィボディは、アフィボディが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミン特異的アフィマー
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、アフィマーである。アフィマーは、登録商標であり、アフィマー技術のスキャフォールド／ポリペプチドは、シスタチンファミリーに基づく（Ｔｉｅｄｅ ｅｔ ａｌ．，ｅＬｉｆｅ（２０１７）６ ｅ２４９０３）。アドヒロン（Adhiron）スキャフォールドは、もともとはシスタチンファミリーのコンセンサス配列に基づいた合成タンパク質であり、ヒトステフィンＡに基づいて操作されたスキャフォールドと構造的に緊密に関連している。シスタチンは、逆平行βシートの上に横たわるα－ヘリックスの共通の三次構造を共有する。４つの逆平行βシートを接続する２つのループは、Ｎ末端配列と一緒に、標的分子に結合するように変異誘発され得る。当業者には理解されるように、本発明のアフィマーは、本明細書で考察される抗原結合タンパク質の機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的アンチカリン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、アンチカリンである。
アンチカリンは、リポカリンファミリーに由来するタンパク質である（Ｓｋｅｒｒａ（２００８）ＦＥＢＳ Ｊ．２７５（１１）：２６７７－２６８３）。リポカリンは、原核生物及び真核生物に広く見られる、小さな（約２０ｋＤａ、１５０～１６０個の残基）、多くの場合には単量体の細胞外タンパク質のファミリーである。リポカリンのフォールディングアーキテクチャにおける中心的な要素は、いわゆるβバレルである円筒形βプリーツシート構造であり、これは、ほぼ円形に配置された８つの逆平行β鎖で構成されている。βバレルは、一方の末端において、密に充填されたアミノ酸、並びにループセグメントによって閉鎖されており、４つの構造的に可変のループで接続されたカップ形状のβバレルコアを形成している。リポカリンの結合ポケットは、βバレルコアにおける隣接する残基と共に、４つのループペプチドにおいて生じる。リポカリンは、βバレルにおいて高度の構造的類似性を有し、４つのループの領域において広範な構造的多様性を示す。この４つのループの領域は、抗体抗原結合部位の組織に類似しているが、抗体ＣＤＲの通常は平坦な界面とは異なり、リポカリンは、深いリガンドポケットを有する。この４つのループの領域は、米国特許出願公開第２０１６０２８０７４７号に記載されるように、特定の標的分子に結合するように変異誘発することができる。選択のためのアンチカリンコンビナトリアルライブラリーを設計するために、ループ１つ当たり少なくとも１６～２４個のランダム化残基を生成することが可能である。アンチカリンは、構造的に非常に安定であり、融解温度は７０℃を超え、ループ領域における並び替えによって影響を受けない。アンチカリンは、グリコシル化されておらず、それによって、酵母又は細菌における発現に好適となっている。当業者には理解されるように、本発明のアンチカリンは、アンチカリンが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的アフィリン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、アフィリンである。
本明細書で使用される場合、アフィリン（登録商標）（以前はＳｃｉｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＧｍｂＨとして知られていたＮａｖｉｇｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＧｍｂＨの登録商標）という用語は、ユビキチンの変異誘発されたバージョン又はγ－Ｂ結晶の変異タンパク質に基づく非免疫グロブリン由来の結合タンパク質を指す（Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２（１）：１７２－１８５）。γ－Ｂ結晶は、構造が主としてβシートである２つの同一なドメインを有する。比較のために、ユビキチンは、３つ及び半分のα－ターン、及び５つの鎖β－シートからなる。γ－Ｂ結晶において、β－シートは、標的分子の潜在的な結合表面を提供し、８つの表面残基が、変異誘発され得る。ユビキチンスキャフォールドは、標的結合のためにβシート領域内の６つの残基を利用し得、更により広範なランダム化も、α－ターンにおいて用いられ得る。更に、ユビキチン分子はまた、頭部から尾部への配向で二量体化され得る。アフィボディは、ｐＨ、熱変性、及び高濃度の変性剤の変化に対する安定性を特徴とする（Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ（２０１５）１５（２））。当業者には理解されるように、本発明のアフィリンは、アフィリンが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的アフィチン
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、アフィチンである。
アフィチンは、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓにおいて見出される、ＤＮＡ結合タンパク質Ｓａｃ７ｄに構造的に由来するタンパク質である（Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８３（５）：１０５８－１０６８）。Ｓａｃ７ｄの結合表面のアミノ酸を変異誘発させることにより、アフィチンが標的分子に選択的に結合することが可能となる。当業者には理解されるように、本発明のアフィチンは、アフィチンが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的フィノマー
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、フィノマーである。フィノマーは、ＳｒｃチロシンキナーゼＦｙｎ ＳＨ３ドメインに構造的に由来するタンパク質である（Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２（５）：３１９６－３２０４）。ＦｙｎＳＨ３ドメインは、ＰＸＸＰ結合モチーフを含むプロリンリッチペプチドに結合し、その配列は、ヒト、マウス、ラット、及びテナガザル間で完全に保存される。Ｆｙｎ ＳＨ３は、２つの逆平行βシートから構成され、他のタンパク質と相互作用するように位置付けられた２つの可動性ループを含む。これらのループは、標的分子に選択的に結合するように変異誘発され得る。それぞれのループにおいて最大６つの残基は、タンパク質の可溶性及びフォールディング特性を有意に低減させることなく変化させることができる。フィノマーは、細菌において多量で可溶性発現させることができ、単量体であり、溶液中に貯蔵された場合に凝集せず、システイン残基が欠如しており、熱安定性であり（融解温度が７０℃を上回る）、ヒト起源のものであり、そのため非免疫原性であるため、抗原結合タンパク質として魅力的なスキャフォールドである（Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ（２０１５）１５（２））。当業者には理解されるように、本発明のフィノマーは、フィノマーが属する本明細書で考察される抗原結合タンパク質の属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的Ｆｃ融合タンパク質
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｆｃ融合タンパク質である。Ｆｃに基づく融合タンパク質は、別のペプチドに直接連結された免疫グロブリンＦｃドメインから構成される。融合パートナーは、目的とされる任意の他のタンパク質分子であり得る。融合タンパク質のＦｃドメインへの結合は、多くの追加の有益な生物学的特性及び薬理学的特性を提供する。Ｆｃドメインの存在は、分子の血漿半減期を増加させ、これによって、分子の治療活性を延長することができる。更に、Ｆｃドメインは、融合パートナーとは独立してフォールディングされ、パートナー分子の可溶性及び安定性を改善することができる。Ｆｃ融合体は、重合して１２個の融合パートナーを含む十分に定義された複合体となるように改変することができ、したがって、分子の結合力、及び効力を増加させる。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｆｃ融合タンパク質であり、融合パートナーは、ガスダーミンＤに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｆｃ融合タンパク質であり、融合パートナーは、ガスダーミンＤに結合し、融合タンパク質は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、Ｆｃ融合タンパク質であり、融合パートナーは、ガスダーミンＤに結合し、Ｆｃ領域は、多量体ガスダーミンＤ細孔を遮断する。当業者であれば、融合パートナーが上記で考察された任意の抗原結合タンパク質であるＦｃ融合タンパク質を作成することができることを理解するであろう。
ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、アプタマーである。アプタマーは、非タンパク質性、例えば、核酸であるか、又はタンパク質性、例えば、標的分子に結合するペプチドであるかのいずれかである。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤを阻害する、アプタマーを提供する。
本発明は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、アプタマーを提供する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、アプタマーが、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害は、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又はアプタマーが、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの阻害は、ガスダーミンＤの機能の阻害である。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和し、ガスダーミンＤの中和は、ガスダーミンＤの活性の中和であり、かつ／又はガスダーミンＤの中和は、ガスダーミンＤの機能の中和である。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合する細胞外阻害剤である。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、細胞表面上のガスダーミンＤに結合する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、アプタマーがガスダーミンＤに結合しない限り細胞膜を通過しない。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、大型分子である。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、＞２ｋＤａ、＞３ｋＤａ、＞４ｋＤａ、＞５ｋＤａ、＞６ｋＤａ、＞７ｋＤａ、＞８ｋＤａ、＞９ｋＤａ、又は＞１０ｋＤａの分子量を有する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する。
いくつかの実施形態において、本発明のアプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本発明のアプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤのオリゴマー化を中和するなど、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を中和するなど、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合する。いくつかの実施形態において、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を中和するなど、ピロトーシスによって誘導される細胞死を阻害し得る。
いくつかの実施形態において、アプタマーが、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を中和するなど、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害することができる。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるようなＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得る。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞（例えば、１００μＬ中５０，０００個の細胞又は６５，０００個の細胞）の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、旧世界ザルのガスダーミンＤ又は新世界ザルのガスダーミンＤと交差反応する。そのような交差反応性の利点は、本明細書で上述されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、非タンパク質性である。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、オリゴヌクレオチド、ペプチド、又はＳＯＭａｍｅｒである。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、抗原結合タンパク質は、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、脂質との会合を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、細孔の形成を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、オリゴマー化を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害し、それによって、多量体細孔を形成するオリゴマー化を防止し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤのエピトープに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットのエピトープに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの配列に結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットの配列に結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、アプタマーは、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤの単離されたペプチドに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットの単離されたペプチドに結合し、ガスダーミンＤ多量体細孔を阻害する、ガスダーミンＤ特異的アプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔を遮断し、アプタマーは、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、アプタマーは、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される。
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合し、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合し、細孔のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊し、アプタマーは、例えば、本明細書に記載されるＴＨＰ－１細胞アッセイにおいて、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ得、任意選択で、アプタマーは、ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００～６５，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている。
ガスダーミンＤ特異的オリゴヌクレオチドアプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、非タンパク質性である。いくつかの実施形態において、アプタマーは、オリゴヌクレオチドアプタマーである。オリゴヌクレオチドアプタマーは、特定の複雑な三次元形状を有し、標的分子に結合する、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）又はＲＮＡのいずれかの短い一本鎖オリゴヌクレオチドである。アプタマーの分子認識は、構造適合性、並びに標的分子との静電力、ファンデルワールス相互作用、水素結合、及び芳香族環のπ－πスタッキング相互作用を含む分子間相互作用に基づく。オリゴヌクレオチド系アプタマーは、オリゴヌクレオチド系アプタマーの標的リガンドに対して高い親和性及び特異性を有する。オリゴヌクレオチドアプタマーは、適応的立体構造変化によってオリゴヌクレオチドアプタマーの同種標的と表面接触を拡張するため、正確かつ強く結合し、結果として、特異的結合部位の作製がもたらされる。核酸アプタマーは、更に、非毒性であり、免疫原性が欠如している。
アプタマーは、通常、指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment、ＳＥＬＥＸ）によって、ランダム核酸の大きなライブラリーからインビトロで設計される。オリゴヌクレオチドアプタマーは、分子標的に選択的に結合するために３次元構造にフォールディングすることができる核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はＸＮＡ）分子である。ＳＥＬＥＸ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化）は、それらの分子標的に結合する大きな合成オリゴヌクレオチドライブラリーの急速な問合せを可能にする技術である（Ｄｕｎｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １：００７６）。当業者には理解されるように、典型的なＳＥＬＥＸ実験は、２０～１００塩基対の長さを有する約１０１４～１０１６のランダムな配列を選択することを伴い、１）標的分子とのインキュベーションの状態をスクリーニングすること、２）標的分子に結合する分子を選択すること、３）結合した種を溶出すること、及び４）核酸の増幅を含む。このプロセスを、繰り返し反復して、標的分子によりしっかりと結合する配列を選択する。標的分子の特質、もともとのオリゴヌクレオチドライブラリーのランダム化された領域の長さ、及び選択のストリンジェンシーを含む、選択実験の様々なパラメータを調節することによって、広い多官能性アプタマーのアレイを得ることができる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドアプタマーの選択プロセスにおいて使用される標的分子は、配列番号９であるなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９である。
ＤＮＡ又はＲＮＡライブラリーを使用する従来のアプタマーは、化学的多様性が限定されており、それらの同種標的との疎水性相互作用が欠如しているか、又は弱い疎水性相互作用を有する。いくつかの実施形態において、アプタマーは、ヌクレオチドの糖単位、核酸塩基、又は骨格の改変を含む。アプタマーは、１つ以上の改変により部分的又は完全に置換されていてもよく、機能性分子とコンジュゲートしていてもよい（Ｓｈｕａｉｊｉａｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．１８（８）：１６８３）。
糖改変の非限定的な例としては、（デオキシ）－リボース糖単位の２’位、例えば、２’－アミノピリミジン、２’－フルオロピリミジン、２’－Ｏ－メチルボリースプリンの改変、及び糖単位の４’酸素原子を硫黄で置き換えることが挙げられる。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドアプタマーは、ゼノ核酸を含む。Ｘ－アプタマー及びゼノ核酸（Xeno nucleic acid、ＸＮＡ）は、非天然又は合成ヌクレオチドを利用して、化学的多様性を増加させ、アプタマーの結合特性を改善する。ゼノ核酸は、アプタマーの糖骨格部分において構造上の化学的変化を示す。ＸＮＡの非限定的な例としては、１，５－アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、及びＦＡＮＡ（フルオロ－アラビノ核酸）が挙げられる（Ｐｉｎｈｅｉｒｏ ａｎｄ Ｈｏｌｌｉｇｅｒ（２０１４）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３２（６）：３２１－３２８）。アプタマー結合のための化学的多様性の増加を提供するために異なる化学的特性を提供することに加えて、ＸＮＡはヌクレアーゼ分解の影響を受けにくい。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドアプタマーは、核酸塩基上の改変を含む。核酸塩基のレベルでの官能性の導入により、オリゴヌクレオチドとそれらの標的分子との接触相互作用を増加させ、野生型核酸にはアクセスできない追加の二次構造を生成することができる。核酸塩基に対する改変の非限定的な例としては、ピリミジンのＣ５位、及び７－デアザ－プリンのＮ７位における改変が挙げられる。ＳＯＭａｍｅｒ（低速オフレート改変アプタマー（Slow off-rate modified aptamer））は、デオキシウリジンの５’位における別個の核酸塩基改変を利用し、以下において考察する。当業者には理解されるように、本発明のオリゴヌクレオチドアプタマーは、オリゴヌクレオチドアプタマーが属する本明細書で考察されるアプタマーの属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的ＳＯＭａｍｅｒ
いくつかの実施形態において、アプタマーは、非タンパク質性である。いくつかの実施形態において、アプタマーは、ＳＯＭａｍｅｒである。ＳＯＭａｍｅｒ又は（低速オフレート改変アプタマー）は、従来のオリゴヌクレオチドアプタマーのうちの制限のいくつかを克服する次世代アプタマープラットフォームである（Ｒｏｈｌｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ３，ｅ２０１）。それらは、分子標的に結合する大きなランダム化ライブラリーからインビトロで選択される短い一本鎖オリゴヌクレオチドである。上述のように、核酸ライブラリーの化学的多様性は、タンパク質に基づくライブラリーと比較して低く、核酸塩基は、アミノ酸と比較してより小さい範囲の物理化学的特性を有する。したがって、非天然の官能基を核酸塩基に導入することは、核酸の化学的多様性を増加させる方法を提供し、したがって、ある範囲の分子標的に結合するようにアプタマーの解離定数を改善する。アプタマーの化学的多様性を高めるような、ＳＯＭａｍｅｒ試薬が開発されている。タンパク質結合のために核酸アプタマーを改善する官能基は、典型的には、疎水性芳香族特性を有する。ＳＯＭａｍｅｒの改変は、異なるタンパク質様部分を有する５位において官能化されているデオキシ－ウリジン残基により操作される。タンパク質様部分の非限定的な例としては、３－インドリル－カルボキサミド；Ｂｎ、ベンジル；Ｐｅ、２－フェニルエチル；Ｐｐ、３－フェニルプロピル；Ｔｈ、２－チオフェニルメチル；ＦＢｎ、４－フルオロベンジル；Ｎａｐ、１－ナフチルメチル；２Ｎａｐ、２－ナフチルメチル；Ｎｅ、１－ナフチル－２－エチル；２Ｎｅ、２－ナフチル－２－エチル；Ｔｒｐ、３－インドール－２－エチル；Ｂｔ、３－ベンゾチオフェニル－２－エチル；Ｂｆ、３－ベンゾフラニル－２－エチル；Ｂｉ、１－ベンズイミダゾール－２－エチル；Ｔｙｒ、４－ヒドロキシフェニル－２－エチル；Ｐｙｒ、４－ピリジニルメチル；ＭＢｎ、３，４－メチレンジオキシベンジル；ＭＰｅ、３，４－メチレンジオキシフェニル－２－エチル；３ＭＢｎ、３－メトキシベンジル；４ＭＢｎ、４－メトキシベンジル；３，４ＭＢｎ、３，４－ジメトキシベンジル；ＲＴＨＦ、Ｒ－テトラヒドロフラニルメチル；ＳＴＨＦ、Ｓ－テトラヒドロフラニルメチル；Ｍｏｅ、モルホリノ－２－エチル；Ｔｈｒ、Ｒ－２－ヒドロキシプロピル；及びｉＢｕ、イソ－ブチル基が挙げられる（Ｒｏｈｌｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ（２０１４）３ｅ２０１）。更に、核酸の官能化は、アプタマーのヌクレアーゼ抵抗性を改善する。いくつかの実施形態において、ＳＯＭａｍｅｒの選択プロセスにおいて使用される標的分子は、配列番号９であるなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９である。当業者には理解されるように、本発明のＳＯＭａｍｅｒは、ＳＯＭａｍｅｒが属する本明細書で考察されるアプタマーの属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤ特異的ペプチドアプタマー
いくつかの実施形態において、アプタマーは、ペプチドアプタマーである。ペプチドアプタマーは、特定の標的分子に結合するように選択される小さなタンパク質である。ペプチドアプタマーは、高い安定性、高い可溶性、及び高速フォールディング動態を特徴とする（Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ（２０１５）１５（２）１０８２－１１０１）。それらは、標的分子に結合することができる短いアミノ酸配列として定義される。ペプチドアプタマーは、本質的に、「スキャフォールド上のループ」であり、ループは、標的分子に結合するペプチド領域を提供し、スキャフォールドは、ループがグラフトされるタンパク質骨格である。「スキャフォールド」上のループの存在は、ループ領域上の立体構造拘束を誘導し、インサートループを安定化させ、それがフォールディングして標的分子を認識する可能性が高くなるようにする。このような拘束ペプチドアプタマーの結合親和性は、制限ペプチドループの立体構造エントロピーが低いことに起因して、多くの場合、遊離ペプチドループよりも高い。当業者であれば、ペプチドループアプタマーが上述の抗原結合タンパク質のスキャフォールド構造上にグラフトされ得るか、又は上述の抗原結合タンパク質の既存の二次構造エレメントに組み込まれ得ることを理解するであろう。ペプチドアプタマーは、多くの場合、核酸アプタマーよりも小さい結合フットプリントを示す。
ペプチドアプタマーは、大きなコンビナトリアルペプチドライブラリーのハイスループットスクリーニングによって選択することができる。コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングは、例えば、当該技術分野において慣例的な方法によって、コンビナトリアルライブラリーの細胞外提示及び標的分子への結合についてのスクリーニングによって達成することができる。ペプチドアプタマーの選択の非限定的な例としては、ファージディスプレイ、細菌（例えば、大腸菌又はブドウ球菌）における細胞表面ディスプレイ、酵母における細胞表面ディスプレイ、真核生物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）における細胞表面ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、ＤＮＡディスプレイ、及びインビトロ区画化が挙げられる。あるいは、細胞内選択方法としては、酵母ツーハイブリッドアッセイ（yeast two hybrid assay、Ｙ２Ｈ）などのタンパク質フラグメント相補性アッセイが挙げられる。いくつかの実施形態において、ペプチドアプタマーの選択において使用される標的分子は、配列番号９であるなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９である。当業者には理解されるように、本発明のペプチドアプタマーは、オリゴヌクレオチドアプタマーが属する本明細書で考察されるアプタマーの属について定義される機能的特徴を包含する。
ガスダーミンＤの阻害剤を使用する方法
本発明は、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害するための方法であって、本発明のガスダーミンＤ阻害剤をガスダーミンＤと接触させることを含む、方法を提供する。
本発明は、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を中和するための方法であって、本発明のガスダーミンＤ阻害剤をガスダーミンＤと接触させることを含む、方法を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害することにおける本発明のガスダーミンＤ阻害剤の使用を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を中和することにおける本発明のガスダーミンＤ阻害剤の使用を提供する。
好ましい実施形態において、ガスダーミンＤ阻害剤は、抗原結合タンパク質である。
好ましい実施形態において、ガスダーミンＤ阻害剤は、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
好ましい実施形態において、ガスダーミンＤ阻害剤は、アプタマーである。
いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ガスダーミンＤの任意の生物学的作用を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、別のタンパク質と相互作用するか又は別のタンパク質に結合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ガスダーミンＤの別の分子と相互作用するか又はそれに結合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、脂質と会合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸と会合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、細胞膜に挿入されるガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ガスダーミンＤの他の分子とオリゴマー化するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を形成するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、多量体細孔を形成するガスダーミンＤの能力を含む。
いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ガスダーミンＤ多量体細孔の形成により生じる任意の活性を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、細孔形成に起因する細胞イオン勾配の消散を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、細孔形成に起因する炎症性サイトカインの細胞外放出を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出である。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、細孔形成に起因する細胞の浸透圧溶解を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、細孔形成に起因するピロトーシスによって誘導される細胞死を含む。いくつかの実施形態において、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能は、炎症促進性ピロトーシス細胞死により生じる、より大きな炎症反応を含む。
本発明は、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和するための方法であって、ガスダーミンＤ阻害剤を、ガスダーミンＤと接触させることを含み、ガスダーミンＤ阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、方法を提供する。
本発明は、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和することにおけるガスダーミンＤ阻害剤の使用であって、ガスダーミンＤ阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、ガスダーミンＤ阻害剤の使用を提供する。
ときには、阻害剤は、タンパク質性、例えば、抗原結合タンパク質であり、例えば、抗原結合タンパク質が、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
ガスダーミンＤの阻害剤の治療的使用
ガスダーミンＤは、敗血症（Ｋａｙａｇａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（２０１５）５２６（７５７５）：６６６－６７１ ａｎｄ Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１９）５０（６）１４０１－１４１１）、非アルコール性脂肪性肝炎（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅａｐｔｏｌｏｇｙ（２０１８）６８（４）：７７３－７８２）、肺がん（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ ４０（４）：１９７１－１９８４）、家族性地中海熱（Ｋａｎｎｅｇａｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１８）２１５（６）：１５１９－１５２９）、自己炎症性疾患、例えば、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）（Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．，ＰｌｏＳ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１８）１６（１１））、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷（Ｍａｎｇａｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ １７，５８８－６０６）を含む、多数の疾患に関係している。したがって、ガスダーミンＤ活性及び／又は機能の阻害は、治療的有用性がある。
したがって、本発明は、ガスダーミンＤを中和することなど、ガスダーミンＤを阻害することにおける使用のための阻害剤を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤを中和することにおける使用のための阻害剤を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤを阻害することにおける使用のための阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害が、阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又はガスダーミンＤの阻害が、阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害である、阻害剤を提供する。
本発明はまた、ガスダーミンＤを中和することにおける使用のための阻害剤であって、ガスダーミンＤの中和が、ガスダーミンＤの活性の中和であり、かつ／又はガスダーミンＤの中和が、ガスダーミンＤの機能の中和である、阻害剤を提供する。
本発明はまた、治療における使用のための阻害剤を提供する。
いくつかの実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤによって引き起こされる疾患の治療において使用される。
いくつかの実施形態において、阻害剤は、敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン関連周期性的症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のためのものである。
好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合する抗原結合タンパク質である。
好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントである。
好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合するアプタマーである。
「治療すること」又は「治療」という用語は、損傷、病理、又は病状の減弱又は改善における、何らかの成功又は成功の兆候を指し、これには、寛解、緩解、症状の低減若しくは病状を患者にとってより許容できるものにすること、変性又は低下速度を遅くすること、変性による最終的な衰弱を和らげること、患者の肉体的又は精神的健康を改善すること、あるいは生存期間を延長することなどの、何らかの客観的又は主観的パラメータが含まれる。治療は、客観的又は主観的なパラメータにより評価されてもよい。同パラメータには、身体検査、神経学的検査、又は精神医学評価の結果が挙げられる。
「有効量」又は「治療的に有効な量」は、必要とされる用量及び期間において、所望の治療結果を達成するのに有効な量を意味する。ガスダーミンＤ阻害剤の治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を引き出す抗体の能力などの要因に従って変動し得る。治療的に有効な量はまた、抗体又は抗体部分の任意の毒性又は有害作用より、治療的に有益な作用が上回る量でもある。
本明細書に記載される本発明の阻害剤はまた、組合せ治療において投与されてもよく、すなわち、治療しようとする疾患又は状態に関連する他の治療剤と組み合わせてもよい。したがって、一実施形態において、本発明の阻害剤は、１つ以上の更なる治療剤と組み合わせるためのものである。このような組合せ投与は、同時、任意の順序において、別々又は連続的でもよい。同時投与では、薬剤は、必要に応じて、１つの組成物又は別々の組成物として投与されてもよい。
本発明は、ガスダーミンＤ阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、
治療における使用のためのガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
本発明は、ガスダーミンＤ阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合し、
敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン関連周期性症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のための、ガスダーミンＤ阻害剤を提供する。
ときには、阻害剤は、タンパク質性、例えば、抗原結合タンパク質であり、例えば、抗原結合タンパク質が、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
組成物
本明細書に提供される医薬組成物は、ａ）有効量の本発明の阻害剤、例えば、本発明の抗体、抗体フラグメント、又は抗体コンジュゲートと、ｂ）不活性であっても生理学的に活性であってもよい医薬的に許容され得る担体と、を含む。本明細書で使用されるとき、「医薬的に許容され得る担体」という用語は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、及び抗真菌剤などを含む。好適な担体、希釈剤、及び／又は賦形剤の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つ以上、並びにそれらの任意の組合せが挙げられる。多くの場合、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含めるのが好ましい。特に、好適な担体の関連する例としては、（１）ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬのヒト血清アルブミンを含有又は非含有、（２）０．９％の生理食塩水（０．９％重量／体積の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ））、及び（３）５％（重量／体積）のデキストロースが挙げられ、抗酸化剤、例えば、トリプタミン、及び安定化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）も含有してもよい。
本明細書における組成物はまた、治療される特定の疾患にとって必要な場合には、更なる治療剤を含有してもよい。好ましくは、本発明の阻害剤と補助的な活性化合物とは、互いに有害に影響を及ぼさない補完的な活性を有することとなる。好ましい実施形態において、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。好ましい実施形態において、更なる治療剤は、化学療法剤である。
本発明の組成物は、様々な形態であってよい。このような形態としては、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形が挙げられるが、好ましい形態は、意図された投与方式及び治療用途により決まる。典型的に好ましい組成物は、注射可能な溶液又は注入可能な溶液の形態である。好ましい投与方式は、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下）である。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ボーラス又は一定期間にわたる連続的な注入により静脈投与される。別の好ましい実施形態において、本組成物は、局所並びに全身的な治療効果を発揮するために、筋肉内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、腫瘍内、腫瘍周囲、病巣内、又は病巣周囲の経路により注射される。
非経口投与用の無菌組成物は、本発明の阻害剤、例えば、本発明の抗体、抗体フラグメント、又は抗体コンジュゲートを、必要とされる量で適切な溶媒中に組み込み、続けて、マイクロフィルター法により滅菌することによって調製することができる。溶媒又は賦形剤として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、並びにこれらの組合せを使用することができる。多くの場合、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含めるのが好ましい。これらの組成物はまた、補助剤、特に、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤、及び安定化剤を含有してもよい。非経口投与用の無菌組成物はまた、使用時に滅菌水又は任意の他の注射可能な無菌媒体中に溶解することができる、無菌の固体組成物の形態で調製されてもよい。
本発明の阻害剤、例えば、本発明の抗体、抗体フラグメント、又は抗体コンジュゲートはまた、経口投与されてもよい。経口投与用の固体組成物として、錠剤、丸剤、粉末剤（ゼラチンカプセル剤、サッシェ剤）、又は顆粒剤が使用されてもよい。これらの組成物において、本発明による活性成分は、１つ以上の不活性希釈剤、例えば、デンプン、セルロース、スクロース、ラクトース、又はシリカと、アルゴン流下において混合される。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えば、１つ若しくは複数の滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム若しくはタルク、着色剤、コーティング（糖衣錠）、又はグレーズを含んでもよい。
経口投与用の液体組成物として、不活性希釈剤、例えば、水、エタノール、グリセロール、植物油、又はパラフィンオイルを含有する、医薬的に許容され得る液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が使用されてもよい。これらの組成物は、希釈剤以外の物質、例えば、湿潤剤、甘味料、増粘剤、着香剤、又は安定化製品を含んでもよい。
キット
例えば、記載される阻害剤と、阻害剤を使用するための説明書と、を含む、キットもまた、本明細書に提供され、含まれる。好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤの阻害剤である。好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合する抗原結合タンパク質である。好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合する抗体又は抗体結合フラグメントである。好ましい実施形態において、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合するアプタマーである。説明書には、阻害剤をインビトロ、インビボ、又はエキソビボで使用するための指示書が含まれ得る。
典型的には、キットは、阻害剤を含有するコンパートメントを有する。阻害剤は、凍結乾燥形態、液体形態、又はキットに含ませるのに適した他の形態であり得る。キットはまた、キットの使用説明書に記載される方法を実施するのに必要とされる更なる要素、例えば、凍結乾燥粉末を再構成するための無菌溶液、患者への投与の前に阻害剤と組み合わせるための更なる薬剤、及び阻害剤を患者に投与するのを支援するツールを含んでもよい。
ガスダーミンＤの他の目的の領域
マウスガスダーミンタンパク質のＮ末端ドメインの結晶構造は、変異誘発及び相同性モデリングとともに、脂質結合及びオリゴマー化に関与するタンパク質の重要な残基の特定に役立っている。α１ヘリックス及び隣接するβ１－β２ループの残基は、残基Ｆ４９、Ｗ５０、Ｋ５１、Ｒ５３、Ｒ１３７、Ｋ１４５、Ｒ１５１、及びＲ１５３とともに、脂質結合に関係している（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３ Ｍａｙ ２０１９）。
当業者であれば、オリゴマー化がガスダーミンＤの複数のサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を必要とすることを理解するであろう。したがって、タンパク質－タンパク質相互作用界面に結合することができる阻害剤は、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する能力を有し得る。ガスダーミンＤサブユニット間の界面相互作用に関係している主要な構造領域としては、α１’ヘリックス、α２ヘリックス、α３ヘリックス、並びにβ２鎖、β３鎖、及びβ１１鎖が挙げられる。
更に、いくつかの個々の残基、特に、Ｌ２８、Ｃ３８、Ｌ５９、Ｆ８０、Ｉ９０、Ｖ９４、Ｃ１９１、Ｌ１９２、Ｖ２２９、Ｌ２３０、Ｌ２３１、及びＦ２３２が、オリゴマー化の媒介に関係している。
したがって、いくつかの実施形態において、上記で定義された阻害剤は、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、又は配列番号１６のうちの１つ以上など、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、又は配列番号１６のうちの１つ以上を含むエピトープに結合する。
ガスダーミンＤ阻害剤を評価するための方法
本明細書で考察される阻害剤の活性は、インビトロ方法を使用して評価することができる。
１つのそのような方法は、阻害剤によるヒトＴＨＰ－１細胞の溶解の阻害の測定に依存する（他の方法は、阻害剤による初代ヒト単球、ヒトマクロファージの溶解の阻害の測定に依存し、エキソビボで分化した初代血液由来単球及びマクロファージを含む）。ヒトＴＨＰ－１細胞は、急性単球性白血病（Ｍ５サブタイプ）の末梢血に由来する不死化単球様細胞株である。このアッセイでは、ＴＨＰ－１細胞を、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地で培養する。維持／増殖培養条件下において、これらの細胞は、懸濁液中で成長するが、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートを使用した終夜分化の後、これらの細胞は、それらが接着性になるように成熟させることができる。この分化の後、ＮＬＲＰ３インフラマソームを、ニゲリシンでの刺激によって活性化することができる。調べられていないが、これは、急速な細胞死誘導（典型的には１～２時間以内に観察される）をもたらす。この急速な細胞死誘導（ピロトーシス）は、ＧＳＤＭＤ細孔形成によって駆動される。ピロトーシスは、細胞死の溶解形態であり、したがって、生細胞のインタクトな細胞膜を通過することができないＤＮＡ色素の蛍光シグナルの増加を測定することによって監視することができる。これらの例では、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色が検出に使用される色素であるが、作業原理は、ＦＡＣＳにおけるヨウ化プロピジウムなどの化合物の使用と同一である。
したがって、ときには、ガスダーミンＤの阻害は、
（ｉ）ＴＨＰ－１細胞を、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地で培養し、
（ｉｉ）ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテート（phorbol 12-myristate 13-acetate、ＰＭＡ）を１００ｎｇ／ｍＬの濃度まで添加し、１６時間インキュベートし、
（ｉｉｉ）培地を、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシン、並びに蛍光核酸結合色素（例えば、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色、１μＭの最終濃度）を補充したＲＰＭＩ培地と置き換え、２時間インキュベートし、
（ｉｖ）阻害剤を細胞に添加し、阻害剤とともに３０分間インキュベートし、
（ｖ）２０μＭの濃度で、ニゲリシンを細胞に添加し、
（ｖｉ）細胞の蛍光によって示される細胞死を記録することによって、判定される。
ＩＬ－１β及びＩＬ－１８放出もまた、このアッセイの改変形態を使用して測定することができる。例えば、ニゲリシン刺激後の所定の時点、例えば、ニゲリシン刺激の８０分後に、アッセイの上清を採取し、上清中に放出されたＩＬ－１β及びＩＬ－１８を定量化する。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイシステム又はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイシステムを、製造業者の説明書に従って使用して、定量化を行うことができる。
ＴＨＰ－１細胞アッセイが上記である場合には、活性を測定するために、代替的な方法を使用することが可能である。
１つのそのような方法は、阻害剤による、新鮮なヒト血液ＰＢＭＣから単離された初代ヒト単球からのＩＬ－１βの放出の阻害の測定に依存する。この方法は、ＴＨＰ－１アッセイと概念的に類似であるが、異なる細胞型を使用する。細胞を新鮮なヒト血液ＰＢＭＣから単離し、リポ多糖（lipopolysaccharide、ＬＰＳ）でプライミングし、ＮＬＲＰ３インフラマソームを、ニゲリシンでの刺激によって活性化する。これは、ＧＳＤＭＤ細孔の形成及びＩＬ－１βの放出をもたらす。ニゲリシン刺激後の所定の時点、例えば、ニゲリシン刺激の１時間後に、アッセイの上清を採取し、上清中のＩＬ－１β放出を定量化することができる。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイシステム又はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイシステムを、製造業者の説明書に従って使用して、ＩＬ－１β放出の定量を行うことができる。
したがって、ときには、ガスダーミンＤの阻害は、
（ｉ）ＣＤ１４マイクロビーズを使用して、新鮮なヒト血液ＰＢＭＣから初代ヒト単球（ＣＤ１４＋）を単離し、
（ｉｉ）細胞を、新鮮な培地（１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ）で２回洗浄し、
（ｉｉｉ）細胞を、１００ｎｇ／ｍＬの濃度で３時間、リポ多糖（ＬＰＳ）でプライミングし、
（ｉｖ）阻害剤を細胞に添加し、阻害剤とともに１５分間インキュベートし、
（ｖ）１５μＭの濃度で、ニゲリシンを細胞に添加し、
（ｖｉ）上清を採取し、ＩＬ－１β放出を測定することによって、判定される。
別のそのような方法は、阻害剤による、マウス細胞株における細胞死及びＩＬ－１β放出の阻害の測定に依存する。この方法は、ＴＨＰ－１アッセイと概念的に類似であり、阻害剤がマウスＧＳＤＭＤを阻害する場合に使用することができる。ガスダーミンＤは、ＮＬＲＰ３及びＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームの両方によって活性化される。Ｂａｌｂ／Ｃマウスは、炭疽菌致死毒素（ＬｅＴｘ）感受性ＮＬＲＰ１Ｂ対立遺伝子を発現する。したがって、マウス細胞株とＬｅＴｘとのインキュベーションは、ＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームの特異的活性化を可能にする。ＮＬＲＰ３又はＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームのいずれの活性化も、ガスダーミンＤ細孔形成に起因する細胞死の誘導及びＩＬ－１βの放出をもたらす。したがって、マウス細胞のピロトーシスは、生細胞のインタクトな細胞膜を通過することができないＤＮＡ色素の蛍光シグナルの増加を測定することによって監視することができる。これらの例では、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色が検出に使用される色素であるが、作業原理は、ＦＡＣＳにおけるヨウ化プロピジウムなどの化合物の使用と同一である。更に、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイシステム又はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイシステムを、製造業者の説明書に従って使用して、ＩＬ－１β放出の定量化を行うことができる。
したがって、ときには、ガスダーミンＤの阻害は、
（ｉ）Ｂａｌｂ／Ｃマウスの頚骨及び大腿骨から骨髄を単離し、
（ｉｉ）細胞を、Ｌ９２９培養上清と混合した、１０％ＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＩＭＤＭ培地において、６日間培養することによって、骨髄を、骨髄由来マクロファージ（bone marrow derived macrophage、ＢＭＤＭ）に分化させ、
（ｉｉｉ）細胞を、洗浄し、収集し、１０％ＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充した新鮮なＩＭＤＭ培地に、例えば、１ウェル当たり５０，０００個の細胞の密度で播種し、細胞を一晩接着させ、
（ｉｖ）接着細胞を洗浄し、培地を、１０％ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、及び蛍光核酸結合色素（例えば、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色、１μＭの濃度）を補充した新鮮なＩＭＤＭ培地と置き換え、
（ｖ）細胞を、１００ｎｇ／ｍＬの濃度で３時間、リポ多糖（ＬＰＳ）でプライミングし、
（ｖｉ）阻害剤を細胞に添加し、阻害剤とともに１５分間インキュベートし、
（ｖｉｉ）ニゲリシン（１５μＭ）を細胞に添加して、ＮＬＲＰ３インフラマソームを活性化するか、又はＬｅＴＸ（１μｇ／ｍＬの保護抗原（ＰＡ）＋０．５μｇ／ｍＬの致死因子（lethal factor、ＬＦ））を添加して、ＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームを更に１．５時間活性化し、
（ｖｉｉｉ）細胞の蛍光によって示される細胞死を記録し、かつ／又は細胞の上清を採取し、ＩＬ－１β放出を定量化することによって、判定される。
一般的事項
本明細書及び特許請求の範囲を通して本明細書の諸態様に関する種々の用語が使用される。特に指示がない限り、このような用語には、当該技術分野におけるそれらの通常の意味が与えられるものとする。その他の具体的に定義される用語は、本明細書に提供される定義と一致する様式で解釈されるものとする。
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組合せ、及びこれに類するものなどが含まれる。
本明細書で使用されるとき、測定値、例えば、量、持続時間等に言及する場合の「約」という用語は、指定された値から最大±５％の偏差を包含することを意味する。同様に、このような偏差は、開示された方法を行うのに適している。別途記載のない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される、成分の量、並びに分子量及び反応条件などの特性を表わす全ての数字は、全ての事例において「約」という用語により修飾されていると理解されたい。したがって、そうではないと示されない限り、下記明細書及び添付の特許請求の範囲で説明される数値パラメータは、本発明により得ようとする所望の特性に応じて変動する場合がある近似値である。最低でも、特許請求の範囲の範囲に対して均等論の適用を制限することを試みてはならず、各数値パラメータは、報告された有効桁の数字を考慮し、通常の四捨五入の手法を適用することにより、少なくとも解釈されるべきである。
本発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは近似値であるが、特定の実施例に記載された数値は、可能な限り正確に報告される。但し、任意の数値は、各試験測定において見出される標準偏差から必然的に生じる一定の誤差を本質的に含有する。
「単離された」とは、生物学的成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの成分が本来存在する生物の他の生物学的成分、すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質から、実質的に分離され、同他の成分とは別に生成され、又は同他の成分から離して精製されていることを意味する。このため、「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、このような組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であっても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組換え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。本明細書で使用されるとき、「単離された」抗体又は抗原結合フラグメントは、様々な抗原特異性を有する他の抗体又は抗原結合フラグメントを実質的に含まない抗体又は抗原結合フラグメントを意味することを意図している（例えば、ガスダーミンＤに特異的に結合する単離された抗体は、ガスダーミンＤ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。ただし、ガスダーミンＤのエピトープ、アイソフォーム、又はバリアントに特異的に結合する単離された抗体は、例えば、他の種に由来する他の関連する抗原（例えば、ガスダーミンＤ種間ホモログ）に対する交差反応性を有してもよい。
同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」と呼ばれる「ポリヌクレオチド」は、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指し、これは、改変されていないＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は改変されたＲＮＡ若しくはＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」には、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、ＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖、又はより典型的には、二本鎖、又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物でもよい）が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ以上の改変された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により改変された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「改変された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な改変が、ＤＮＡ及びＲＮＡになされてもよい。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的に天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に改変された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと呼ばれる）も包含する。
「ポリペプチド」又は「タンパク質」という用語は、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する巨大分子、すなわち天然に存在する非組換え細胞によって生成されたタンパク質を意味するか、又は遺伝子操作された細胞若しくは組換え細胞によって生成され、天然のタンパク質のアミノ酸配列を有する分子、又は天然の配列の１つ以上のアミノ酸の欠失、付加、及び／若しくは置換を有する分子を含む。この用語はまた、１つ以上のアミノ酸が、対応する天然に存在するアミノ酸の化学類似体及びポリマーである、アミノ酸ポリマーを含む。「ポリペプチドフラグメント」という用語は、全長天然タンパク質と比較して、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、及び／又は内部欠失を有するポリペプチドを指す。そのようなフラグメントはまた、天然のタンパク質と比較して、改変されたアミノ酸を含み得る。ある特定の実施形態において、フラグメントは、約５～５００個のアミノ酸の長さである。例えば、フラグメントは、少なくとも５個、６個、８個、１０個、１４個、２０個、５０個、７０個、１００個、１１０個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、又は４５０個のアミノ酸の長さであり得る。有用なポリペプチドフラグメントは、結合ドメインを含む抗体の免疫学的に機能的なフラグメントを含む。
「エピトープ」という用語は、阻害剤に特異的に結合することができるタンパク質決定因子を意味する。エピトープは、通常、分子の表面グルーピング、例えば、アミノ酸又は糖側鎖からなり、通常、特定の三次元構造特性並びに特定の荷電特性を有する。構造的及び非構造的エピトープは、後者ではなく前者に対する結合が、変性溶媒の存在下で損失するという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的に抗原に結合するペプチドによって効果的に遮断されるか又は覆われるアミノ酸残基（すなわち、アミノ酸残基が、特異的に抗原に結合するペプチドのフットプリント内にある）とを含んでもよい。
「ベクター」という用語は、タンパク質コーディング情報を宿主細胞に移すために使用される任意の分子又は実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ、又はウイルス）を意味する。
「発現ベクター」又は「発現構築物」という用語は、宿主細胞の形質転換に好適であり、それに作動可能に連結された１つ以上の異種コーディング領域の発現を（宿主細胞とともに）指向及び／又は制御する核酸配列を含有する、ベクターを指す。発現構築物には、転写、翻訳に影響を及ぼすか又はそれを制御し、かつイントロンが存在する場合には、それに作動可能に連結されたコーディング領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす、配列が含まれ得るが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「作動可能に連結された」とは、この用語が適用される成分が、好適な条件下においてそれらの固有の機能を実行することを可能にする関係にあることを意味する。例えば、タンパク質コーディング配列に「作動可能に連結された」ベクターにおける制御配列は、タンパク質コーディング配列の発現が、制御配列の転写活性と適合性のある条件下において達成されるように、タンパク質コーディング配列にライゲーションされている。
「宿主細胞」という用語は、核酸配列が形質転換されているか、又は形質転換することができ、それによって目的の遺伝子を発現する、細胞を意味する。この用語は、親細胞の子孫を含み、目的の遺伝子が存在する限り、子孫がもともとの親細胞と形態又は遺伝子構成が同一であるかどうかは問わない。
「トランスフェクション」という用語は、細胞による外来又は外因性ＤＮＡの取り込みを意味し、細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜の内部に導入されている場合、「トランスフェクト」されている。いくつかのトランスフェクション技術は、当該技術分野で周知であり、本明細書に開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（上記）；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ，１９８１，Ｇｅｎｅ １３：１９７を参照されたい。そのような技術を使用して、１つ以上の外因性ＤＮＡ部分を好適な宿主細胞に導入することができる。
標準的な手法を、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に使用することができる。酵素反応及び精製手法は、製造業者の仕様書に従って、又は当該技術分野で一般的に達成されているように、又は本明細書に記載されるように、実行することができる。前述の手法及び手順は、一般に、当該技術分野で周知の従来の方法に従って、かつ本明細書全体を通して引用及び考察される様々な一般的かつより具体的な参考文献に記載されるように、実行することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９．を参照されたい。具体的な定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、並びに医学及び医薬化学に関連して利用される命名法、並びにこれらの実験手順及び手法は、当該技術分野で周知であり一般的に使用されているものである。標準的な手法を、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化、及び送達、並びに患者の治療に使用することができる。
「ガスダーミンＤ」又は「ＧＳＤＭＤ」という用語は、配列番号１に記載のポリペプチド又はそのフラグメント、並びに関連するポリペプチドを含み、これには、対立遺伝子バリアント、スプライスバリアント、誘導体バリアント、置換バリアント、欠失バリアント、及び／又はＮ末端メチオニンの付加を含む挿入バリアント、融合ポリペプチド、並びに種間相同体が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、ガスダーミンＤポリペプチドは、リーダー配列残基、標的化残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基、及び／又は融合タンパク質残基などであるがこれらに限定されない、末端残基を含む。「ガスダーミンＤ」という用語は、全長ガスダーミンＤ、及びプロテアーゼ切断後に生成される生成物の両方を示す。「ＧＳＤＭＤＮｔｅｒｍ」は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインを指し、配列番号２に記載のポリペプチドを含み、例えば、Ｎ末端ドメインは、配列番号２の配列を有する。「ＧＳＤＭＤＣｔｅｒｍ」は、ガスダーミンＤのＣ末端ドメインを指し、配列番号３に記載のポリペプチドを含み、例えば、Ｃ末端ドメインは、配列番号３の配列を有する。
「ガスダーミンＤの活性」及び／又は「ガスダーミンＤの機能」という用語は、ガスダーミンＤの任意の生物学的作用を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、別のタンパク質と相互作用するか又は別のタンパク質に結合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、ガスダーミンＤの別の分子と相互作用するか又はガスダーミンＤの別の分子と結合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、脂質と会合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸と会合するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、細胞膜に挿入されるガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、ガスダーミンＤの他の分子とオリゴマー化するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を形成するガスダーミンＤの能力を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、多量体細孔を形成するガスダーミンＤの能力を含む。
いくつかの実施形態において、この用語は、ガスダーミンＤ多量体細孔の形成により生じる任意の活性を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、細孔形成に起因する細胞イオン勾配の消散を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、細孔形成に起因する炎症性サイトカインの細胞外放出を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、細孔形成に起因する細胞の浸透圧溶解を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、細孔形成に起因するピロトーシスによって誘導される細胞死を含む。いくつかの実施形態において、この用語は、炎症促進性ピロトーシス細胞死により生じる、より大きな炎症反応を含む。
本発明の更なる実施形態を、以下に列挙する。
１．ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤。
２．ガスダーミンＤの阻害は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害である、実施形態１に記載のガスダーミンＤ阻害剤。
３．ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、ガスダーミンＤ阻害剤。
４．ガスダーミンＤの中和は、
ｉ）ガスダーミンＤの活性、及び／又は
ｉｉ）ガスダーミンＤの機能の中和である、実施形態３に記載のガスダーミンＤ阻害剤。
５．阻害剤は、細胞外阻害剤である、実施形態１～４のいずれか１つに記載の阻害剤。
６．阻害剤は、細胞表面上のガスダーミンＤに結合する、実施形態１～５のいずれか１つに記載の阻害剤。
７．阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、阻害剤がガスダーミンＤに結合しない限り細胞膜を通過しない、実施形態１～６のいずれか１つに記載の阻害剤。
８．阻害剤は、大型分子である、実施形態１～７のいずれか１つに記載の阻害剤。
９．阻害剤は、＞２ｋＤａ、＞３ｋＤａ、＞４ｋＤａ、＞５ｋＤａ、＞６ｋＤａ、＞７ｋＤａ、＞８ｋＤａ、＞９ｋＤａ、又は＞１０ｋＤａの分子量を有する、実施形態１～８のいずれか１つに記載の阻害剤。
１０．阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する、実施形態１～９のいずれか１つに記載の阻害剤。
１１．阻害剤は、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合する、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の阻害剤。
１２．阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合する、実施形態１１に記載の阻害剤。
１３．阻害剤は、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合する、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の阻害剤。
１４．阻害剤は、配列番号９に結合する、実施形態１３に記載の阻害剤。
１５．阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９の単離されたペプチドに結合する、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の阻害剤。
１６．阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、配列番号９の単離されたペプチドに結合する、実施形態１５に記載の阻害剤。
１７．阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を中和するなど、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害する、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の阻害剤。
１８．阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を中和するなど、阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する、実施形態１７に記載の阻害剤。
１９．阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、阻害剤が、ガスダーミンＤのオリゴマー化を中和するなど、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害する、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の阻害剤。
２０．阻害剤が、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を中和するなど、阻害剤は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する、実施形態１９に記載の阻害剤。
２１．阻害剤は、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合する、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の阻害剤。
２２．阻害剤は、細孔を遮断する、実施形態２１に記載の阻害剤。
２３．阻害剤は、細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する、実施形態２１に記載の阻害剤。
２４．阻害剤は、多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合する、実施形態２１～２３のいずれか１つに記載の阻害剤。
２５．阻害剤は、細孔を遮断する、実施形態２４に記載の阻害剤。
２６．阻害剤は、細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊する、実施形態２４に記載の阻害剤。
２７．阻害剤は、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を阻害する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の阻害剤。
２８．阻害剤が、ピロトーシスによって誘導される細胞死を中和するなど、阻害剤は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を阻害する、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の阻害剤。
２９．阻害剤が、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害する、実施形態２８に記載の阻害剤。
３０．ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、阻害剤は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は約１００％、例えば、１００％阻害し、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されており、細胞死は、１時間後に測定される、実施形態２８又は実施形態２９に記載の阻害剤。
３１．阻害剤は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させる、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の阻害剤。
３２．ヒトＴＨＰ－１細胞に投与されると、阻害剤は、ピロトーシスによって誘導される細胞死を、＞０．１時間、＞０．２時間、＞０．５時間、＞０．７５時間、＞１時間、＞２時間、＞３時間、＞４時間、又は＞６時間遅延させ、ＴＨＰ－１細胞は、１００μＬ中５０，０００個の細胞の細胞密度であり、ＴＨＰ－１細胞は、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートで１６時間前処理されており、ＴＨＰ－１細胞は、２０μＭのニゲリシンで誘導されている、実施形態３１に記載の阻害剤。
３３．阻害剤は、旧世界ザルのガスダーミンＤ又は新世界ザルのガスダーミンＤと交差反応する、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の阻害剤。
３４．阻害剤は、タンパク質性であり、例えば、抗原結合タンパク質である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の阻害剤。
３５．抗原結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合フラグメント、多重特異性抗体、ＶＨＨドメイン、ＶＮＡＲドメイン、ＶＬＲドメイン、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、センチリン、クリングルドメイン、ＤＡＲＰｉｎ、システインノットミニタンパク質、Ｓｓｏ７ｄ由来タンパク質、アフィボディ、アフィマー、アンチカリン、アフィリン、アフィチン、フィノマー、又はＦｃ融合分子である、実施形態３４に記載の抗原結合タンパク質。
３６．抗原結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合フラグメントである、実施形態３５に記載の抗原結合タンパク質。
３７．抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｃ領域を含む、実施形態３６に記載の抗原結合タンパク質。
３８．抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はＩｇＭアイソタイプのものである、実施形態３６又は実施形態３７に記載の抗原結合タンパク質。
３９．抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
４０．抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、実施形態３６～３９のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
４１．抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、実施形態３６～４０のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
４２．抗体又はその抗原結合フラグメントは、そのＦｃ領域にＬ２３４Ａ置換、Ｌ２３５Ａ置換、及び／又はＫ４０９Ｒ置換を更に含む、実施形態３６～４１のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
４３．抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｃ領域が欠如している、実施形態３６に記載の抗原結合タンパク質。
４４．抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトである、実施形態３６～４３のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
４５．抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト化である、実施形態３６～４３のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質。
４６．実施形態３４～４５のいずれか１つに記載の抗原結合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
４７．実施形態４６に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
４８．実施形態４７に記載のベクターを含む、抗原結合タンパク質を生成するための宿主細胞。
４９．細胞は、ハイブリドーマである、実施形態４８に記載の細胞。
５０．抗原結合タンパク質は、組換えにより生成される、実施形態４８に記載の細胞。
５１．抗原結合タンパク質を生成する方法であって、実施形態４８～５０のいずれか１つに記載の宿主細胞を、抗原結合タンパク質が生成されるような条件下で培養することを含む、方法。
５２．阻害剤は、非タンパク質性である、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の阻害剤。
５３．阻害剤は、アプタマーである、実施形態１～３３又は５２のいずれか１つに記載の阻害剤。
５４．阻害剤は、オリゴヌクレオチドアプタマーである、実施形態５２又は実施形態５３に記載の阻害剤。
５５．阻害剤は、ＳＯＭａｍｅｒである、実施形態５２又は実施形態５３に記載の阻害剤。
５６．阻害剤は、ペプチドアプタマーである、実施形態５３に記載の阻害剤。
５７．ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害するための方法であって、実施形態１、２、５～４５、又は５２～５６のいずれか１つに記載のガスダーミンＤ阻害剤又は抗原結合タンパク質を、ガスダーミンＤと接触させることを含む、方法。
５８．ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を中和するための方法であって、実施形態３～４５又は５２～５６のいずれか１つに記載のガスダーミンＤ阻害剤又は抗原結合タンパク質を、ガスダーミンＤと接触させることを含む、方法。
５９．ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害することにおける、実施形態１、２、５～４５、又は５２～５６のいずれか１つに記載のガスダーミンＤ阻害剤又は抗原結合タンパク質の使用。
６０．ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を中和することにおける、実施形態３～４５又は５２～５６のいずれか１つに記載のガスダーミンＤ阻害剤又は抗原結合タンパク質の使用。
６１．ガスダーミンＤを中和することなど、ガスダーミンＤを阻害することにおける使用のための、実施形態１～４５又は５２～５６のいずれか１つに記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質。
６２．ガスダーミンＤを中和することにおける使用のための、実施形態１～４５又は５２～５６のいずれか１つに記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質。
６３．ガスダーミンＤを阻害することにおける使用のための、実施形態６１に記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質であって、ガスダーミンＤの阻害は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害である、実施形態６１に記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質。
６４．ガスダーミンＤを中和することにおける使用のための、実施形態６２に記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質であって、ガスダーミンＤの中和は、
ｉ）ガスダーミンＤの活性、及び／又は
ｉｉ）ガスダーミンＤの機能の中和である、実施形態６２に記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質。
６５．治療における使用のための、実施形態１～４５又は５２～５６のいずれか１つに記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質。
６６．敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン関連周期性症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のための、実施形態１～４５又は５２～５６のいずれか１つに記載の阻害剤又は抗原結合タンパク質。
６７．ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、ガスダーミンＤ阻害剤。
６８．ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和するための方法であって、ガスダーミンＤ阻害剤を、ガスダーミンＤと接触させることを含み、ガスダーミンＤ阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤が、配列番号９に結合する、方法。
６９．ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和することにおけるガスダーミンＤ阻害剤の使用であって、ガスダーミンＤ阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、ガスダーミンＤ阻害剤の使用。
７０．ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合する、
治療における使用のためのガスダーミンＤ阻害剤。
７１．ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの阻害及び／又は中和は、
ｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の阻害及び／若しくは中和であり、かつ／又は
ｉｉ）阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の阻害及び／若しくは中和であり、
ａ）阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
ｂ）阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
ｃ）阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
ｄ）阻害剤は、配列番号９に結合し、
敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン関連周期性症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のための、ガスダーミンＤ阻害剤。
実施例１：抗体に基づく細胞死誘導の阻害
ヒト単球細胞株におけるＮＬＲＰ３インフラマソーム刺激時の細胞死誘導を阻害する抗ガスダーミンＤ抗体の能力を評価するために、抗ガスダーミンＤ抗体を試験した。
ヒトＴＨＰ－１細胞は、急性単球性白血病（Ｍ５サブタイプ）の末梢血に由来する不死化単球様細胞株である。ＴＨＰ－１細胞を、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地で培養した。維持／増殖培養条件下において、これらの細胞は、懸濁液中で成長するが、ホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテートを使用した終夜分化の後、これらの細胞は、成熟し、接着性となった。分化プロセス後、ニゲリシンでの刺激によってＮＬＲＰ３インフラマソームを活性化することが可能であった。これにより、急速な細胞死誘導（典型的には１～２時間以内に観察される）がもたらされた。この急速な細胞死誘導（ピロトーシス）は、ＧＳＤＭＤ細孔形成によって駆動される。ピロトーシスは、細胞死の溶解形態であり、生細胞のインタクトな細胞膜を通過することができないＤＮＡ色素の蛍光シグナルの増加を測定することによって監視することができる。これらの例では、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色が検出に使用される色素であるが、作業原理は、ＦＡＣＳにおけるヨウ化プロピジウムなどの化合物の使用と同一である。
ヒトＴＨＰ－１細胞を、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地で培養した。細胞を、遠心分離によって収集し、再懸濁させ、計数し、最終的に、１００μＬの総体積で１ウェル当たり５０，０００個の細胞の細胞密度で、９６ウェルプレートに播種した。細胞を、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地で、１００ｎｇ／ｍＬのホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテート（ＰＭＡ）とともに１６時間終夜インキュベートした。
終夜分化の後、細胞を、９６ウェルプレートに接着させ、培地を、ＰＭＡなしであるが蛍光色素ＳＹＴＯＸ（商標）緑色（最終濃度１μＭ）を含む、１０％ＦＣＳ、ピルビン酸ナトリウム、並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地と置き換えた。細胞を、実験へと進める前に２時間インキュベートした。
ニゲリシンによるＮＬＲＰ３インフラマソームの刺激の前に、細胞を、０．１５～２０μｇ／ｍＬのガスダーミンＤ標的化抗体又は２０μＭの小分子ジスルフィラム若しくは３０μＭの小分子ネクロスルホンアミドで、３０分間前処理した。３０分後に、ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化を、２０μＭの濃度でニゲリシンを細胞に添加することによって刺激した。
模擬対照は、ニゲリシンで誘導しなかった。更に、２μＭのＭＣＣ－９５０を使用した第２の陰性対照も使用した。ＭＣＣ－９５０は、ＮＬＲＰ３インフラマソームの強力な阻害剤であり、したがって、ニゲリシンでの刺激の前に、ＭＣＣ－９５０で３０分間前処理したヒトＴＨＰ－１細胞株は、ＮＬＲＰ３インフラマソームに誘導される細胞死を受けない。この対照により、観察された細胞死が、実際に、ＮＬＲＰ３インフラマソーム及びＧＳＤＭＤ細孔形成によって誘導されたことを確認した。小分子阻害剤であるネクロスルホンアミド及びジスルフィラムは、ＧＳＤＭＤ細孔形成の既知の阻害剤であり、この研究において陽性対照として使用した。
上記の実験を繰り返したが、試験した抗体を、ヒトＴＨＰ－１細胞株への投与前に煮沸によって変性させた。抗体の煮沸は、変性及びその標的への結合の消失をもたらすであろう。
細胞死の誘導を、生細胞蛍光イメージングを可能にするＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓシステムを使用して、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって監視した。細胞死誘導を、１０分毎に４時間監視し、イメージングした細胞を、ＩｎｃｕＣｙｔｅソフトウェアを使用して分析して、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色を取り込んでおり、それ故に、細胞死を受けている、細胞のパーセンテージを評価した。
１００％の細胞死蛍光シグナルは、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００処理ウェルから得られる最大シグナルとして測定され、０．１％の最終濃度のＴｒｉｔｏｎＸ－１００が、全ての細胞を溶解することとなり、全ての細胞の染色を誘導する。全ての蛍光測定値をこの値に対して正規化した。
この実験プロトコールは、１時間後が好ましい時点であるが、特定の時点における細胞死の単一の読み出しを実行するために使用することができ、又は細胞死の動態を追跡するために使用することができる。全ての実験は、条件ごとに二重／三重測定値を使用した。
結果：
２０μＭのニゲリシンとヒトＴＨＰ－１とのインキュベーションは、ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化による細胞死の誘導をもたらした（図１Ａ、図１Ｂ、図２Ａ、及び図２Ｂ）。ニゲリシンで処理していない（模擬）か、又は強力なＮＬＲＰ３阻害剤（ＭＣＣ－９５０）で処理した、ヒトＴＨＰ－１細胞は、細胞死を受けなかった（図１Ａ、図１Ｂ、図２Ａ、及び図２Ｂ）。
小分子阻害剤ネクロスルホンアミド（３０μＭ）及びジスルフィラム（２０μＭ）の投与により、細胞死誘導の阻害及び遅延がもたらされ（図１Ａ及び図１Ｂ）、この実験プロトコールを、ガスダーミンＤの阻害を測定するために使用することができることが示された。
ガスダーミンＤを特異的に標的とするＡｂ５の投与は、細胞死誘導の阻害及び遅延をもたらした（図２Ａ、図２Ｂ、及び図３Ａ～図３Ｄ）。この活性は、Ａｂ５に特異的であり、ニゲリシン及び他のＧＳＤＭＤ抗体、例えば、Ａｂ３とヒトＴＨＰ－１細胞株とのインキュベーションは、細胞死の阻害も遅延ももたらさなかった（図４及び図５Ａ～図５Ｄ）。
図６に示されるように、抗体の煮沸は、細胞死誘導の阻害を防止し、Ａｂ５は、細胞死誘導を阻害するためには、その標的に結合することができるその天然の立体構造状態になければならないことが示された。
実施例２：抗体結合のウエスタンブロット分析
組換えＨｉｓ－ＳＵＭＯのタグ付けガスダーミンＤ（ｒＧＳＤＭＤ）を、大腸菌において生成した。材料を、Ｎｉ／ＮＴＡ親和性精製によって精製した。この材料を、Ｕｌｐ－１で切断して、タグを除去し、サイズ排除クロマトグラフィー（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）を実行して、純度を改善した。
組換えガスダーミンＤを、組換えカスパーゼ－１とともに、３７℃で１時間インキュベートした。ウエスタンブロットの前にＳＤＳ－ＰＡＧＥによって反応混合物を処理した。ウエスタンブロットを、Ａｂ５とともにインキュベートし、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした二次抗体を、検出に使用した。
結果：
ガスダーミンＤをカスパーゼ－１で切断することにより、約３１ｋＤａのＮ末端ドメイン及び約２２ｋＤａのＣ末端ドメインが形成された（図７Ａ）。Ａｂ５をプローブとして使用した、組換えガスダーミンＤの切断反応のウエスタンブロット分析は、Ａｂ５が、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合することを示した。図７Ｂに示されるように、Ａｂ５は、全長ガスダーミンＤ及びガスダーミンＤのＮ末端ドメインのいずれかに結合することができるが、Ｃ末端ドメインには結合することができない。
実施例３：遮断ペプチドは抗体機能を中和する
実施例１に記載の実験プロトコールを使用して、Ａｂ５の結合エピトープを決定した。抗体をＴＨＰ－１細胞に投与する前に、抗体（２０μｇ／ｍＬの濃度）を、遮断ペプチド（４０μｇ／ｍＬの濃度）とともに１５分間インキュベートした。また、陰性対照として、ＴＨＰ－１細胞を、抗体の不在下において、遮断ペプチド（４０μｇ／ｍＬの濃度）とともにインキュベートした。
続いて、ＴＨＰ－１細胞を、ニゲリシンによるＮＬＲＰ３インフラマソームの刺激の前に、抗体／ペプチド混合物で３０分間、前処理した。３０分後に、ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化を、２０μＭの濃度でニゲリシンを細胞に添加することによって刺激した。細胞死の程度を、実施例１に記載されるように測定した。ＴＨＰ－１細胞から上清中へのＩＬ－１β及びＩＬ－１８の放出を、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイシステムを製造業者の説明書に従って使用して、ニゲリシン刺激の８０分後に定量化した。
結果：
Ａｂ５と配列：ＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣ（配列番号９）のペプチドとのインキュベーションにより、細胞死の抗体依存性阻害が防止された（図８及び図９Ａ～図９Ｄ）。したがって、この遮断ペプチドの活性は、Ａｂ５が、配列ＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣ（配列番号：９）に特異的に結合して、ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害することを示す。細胞と遮断ペプチド単独とのインキュベーションでは、ニゲリシンに誘導される細胞死は防止されない（図１０Ａ）。細胞死阻害に加えて、Ａｂ５は、サイトカイン（ＩＬ－１β及びＩＬ－１８）の放出を遮断するが、遮断ペプチドの存在下におけるＡｂ５のインキュベーションは、サイトカインレベルに対して何の影響も及ぼさない（図１０Ｂ及び図１０Ｃ）。
実施例４：初代ヒト単球におけるＩＬ－１β放出の阻害
初代ヒト単球細胞株におけるＮＬＲＰ３インフラマソーム刺激時のＩＬ－１β放出を阻害する抗ガスダーミンＤ抗体の能力を評価するために、抗ガスダーミンＤ抗体を試験した。
初代ヒト単球（ＣＤ１４＋）を、Ｍｙｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ製のＣＤ１４マイクロビーズを製造業者の説明書に従って使用して、新鮮なヒト血液ＰＢＭＣから単離した。初代ヒト単球は、使用するまで凍結保存した。
細胞を解凍し、新鮮な培地（１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ）で２回洗浄し、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで３時間プライミングした。ＮＬＲＰ３インフラマソーム活性化を誘導するために更に１時間ニゲリシン（１５μＭ）で刺激する前に、細胞を、０．０３～０．５μｇ／ｍＬの濃度でガスダーミンＤ特異的抗体（Ａｂ５）で１５分間前処理したか、又は過剰量（４０μｇ／ｍＬ）のペプチドＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣとともにインキュベートしたガスダーミンＤ特異的抗体（Ａｂ５）で前処理した。陽性対照として、細胞を、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳとともにインキュベートし、抗体とは対照的に、ニゲリシンで刺激する１５分前に、リン酸緩衝生理食塩水（phosphate buffered saline、ＰＢＳ）で前処理した。陰性対照として、細胞を、ＬＰＳとともにインキュベートしたが、ニゲリシンとはインキュベートしなかった。
ニゲリシンでの処理の１時間後に、細胞上清を収集し、初代ヒト単球細胞から上清中へのＩＬ－１βの放出を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイシステムを製造業者の説明書に従って使用して、定量化した。
結果：
ＬＰＳ及びニゲリシン（ＬＮ）で処理した初代ヒト単球細胞は、ＩＬ－１βを上清中に放出し（図１１）、ガスダーミンＤ細孔が、ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化時に形成されることが示唆された。細胞をＬＰＳのみで処理した模擬対照（ＬＰＳ）は、ＩＬ－１βの放出をもたらさなかった（図１１）。
ニゲリシンでの刺激の前の、抗体Ａｂ５（０．０３～０．５μｇ／ｍＬ）での初代ヒト単球の前処理は、これらの細胞からのＩＬ－１βの放出の阻害を、用量依存的にもたらす（白色のバー）。比較として、過剰量の遮断ペプチド（ＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣ）とともにインキュベートした抗体Ａｂ５で前処理した細胞は、ＩＬ－１βを上清中に放出した。このデータは、ＴＨＰ－１細胞株から得られたデータと一致しており、ガスダーミンＤ特異的抗体が、初代ヒト単球からのＩＬ－１βのガスダーミンＤ特異的放出を阻害することができることを示す。
実施例５：マウス細胞におけるピロトーシスによって誘導される細胞死の阻害
実施例１の実験プロトコールを、マウス細胞（Ｂａｌｂ／Ｃマウスに由来する初代マウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ））を使用して繰り返して、Ａｂ５がマウス細胞においてピロトーシスによって誘導される細胞死を阻害することができるかどうかを評価した。
結果：
マウス細胞においてニゲリシンの存在下で、２０μｇ／ｍＬの濃度でのＡｂ５のインキュベーションは、ピロトーシスによる細胞死を阻害することができない（図１２）。高濃度の抗体（２０μｇ／ｍＬ）は、初代マウスＢＭＤＭには毒性である。実施例６に示されるように、より低い濃度（０．０３～０．５μｇ／ｍＬ）の抗体は、マウス細胞によって良好に寛容される。
実施例６：マウス細胞におけるピロトーシスによって誘導される細胞死及びＩＬ－１β放出の阻害
マウスガスダーミンＤと交差反応し、マウス細胞においてＮＬＲＰ３又はＮＬＲＰ１Ｂインフラマソーム刺激時に細胞死及びＩＬ－１β放出を阻害する抗ガスダーミンＤ抗体の能力を評価するために、抗ガスダーミンＤ抗体を試験した。
Ｂａｌｂ／Ｃマウスは、炭疽菌致死毒素（ＬｅＴｘ）感受性ＮＬＲＰ１Ｂ対立遺伝子を発現する。したがって、ＢＭＤＭ細胞とＬｅＴｘとのインキュベーションは、ＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームの特異的活性化を可能にする。これは、ＮＬＲＰ３のニゲリシン特異的活性化に類似している。
骨髄を、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの頚骨及び大腿骨から単離した。細胞を、Ｌ９２９培養上清と混合した、１０％ＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＩＭＤＭ培地において、６日間培養することによって、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）に分化させた。分化後、細胞を洗浄し、収集し、９６ウェルプレートにおいて、１０％ＦＢＳ及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充した新鮮なＩＭＤＭ培地に、１ウェル当たり５０，０００個の細胞の密度で播種し、一晩接着させた。
細胞を洗浄し、培地を置き換え、１μＭのＳＹＴＯＸ（商標）緑色（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を補充した。これにより、実施例１に記載されるように、Ｉｎｃｕｃｙｔｅデバイス（Ｅｓｓｅｎｂｉｏ）を使用した細胞死誘導の動態測定が可能となる。細胞を、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで３時間プライミングした。ＮＬＲＰ３又はＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームの刺激の前に、細胞を、０．１２５～０．５μｇ／ｍＬの濃度のガスダーミンＤ特異的抗体（Ａｂ５）で１５分間前処理したか、又は過剰量（４０μｇ／ｍＬ）の遮断ペプチドＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣとともにインキュベートしたガスダーミンＤ特異的抗体（Ａｂ５）で前処理した。陽性対照として、インフラマソーム刺激の前に、細胞を、抗体とは対照的にＰＢＳで１５分間前処理した。
次いで、細胞を、ＮＬＲＰ３活性化剤であるニゲリシン（１５μＭ）又はＮＬＲＰ１Ｂ活性化剤である炭疽菌致死毒素（ＬｅＴｘ）（１μｇ／ｍＬの保護抗原（ＰＡ）＋０．５μｇ／ｍＬの致死因子（ＬＦ））のいずれかで、更に１．５時間刺激した。陰性対照として、細胞を、ＬＰＳとともにインキュベートしたが、ニゲリシンともＬｅＴｘともインキュベートしなかった。
細胞死の誘導を、実施例１に記載のＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓシステムを使用して、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色の取り込みによって監視した。細胞死誘導を、１０分毎に１．５時間監視し、イメージングした細胞を、ＩｎｃｕＣｙｔｅソフトウェアを使用して分析して、ＳＹＴＯＸ（商標）緑色を取り込んでおり、それ故に、細胞死を受けている、細胞のパーセンテージを評価した。１．５時間後に、細胞上清を収集し、マウス細胞から上清中へのＩＬ－１βの放出を、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイシステムを製造業者の説明書に従って使用して定量化した。
結果：
ＬＰＳ及びニゲリシン（ＬＮ）、又はＬＰＳ及びＬｅＴｘ（ＬＬｅＴｘ）で処理したマウス細胞は、ＩＬ－１βを上清中に放出し（図１３Ａ及び図１４Ａ）、ＮＬＲＰ３及びＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームの活性化時に細胞死を受けた（図１３Ｂ及び図１４Ｂ）。細胞をＬＰＳのみで処理した模擬対照は、ＩＬ－１βの放出も細胞死ももたらさなかった（図１３Ａ、図１３Ｂ、図１４Ａ、図１４Ｂ）。
ニゲリシン又はＬｅＴｘでの刺激の前に、マウス細胞を抗体Ａｂ５（０．１２５～０．５μｇ／ｍＬ）で前処理することにより、これらの細胞からのＩＬ－１βの放出が用量依存的に阻害され、細胞死も阻害された（図１３Ａ、図１３Ｂ、図１４Ａ、図１４Ｂ）。これは、抗ガスダーミンＤ抗体Ａｂ５が、マウスガスダーミンＤと交差反応し、マウス細胞においてガスダーミンＤ依存性ＩＬ－１β放出及び細胞死を阻害することができることを実証する。
図１４Ａ及び図１４Ｂに提示されるデータはまた、マウスガスダーミンＤがＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームによって活性化されること、並びにＮＬＲＰ１Ｂインフラマソームの活性化時に誘導される細胞死及びＩＬ－１β放出が、ガスダーミンＤを標的とする抗体によって阻害され得ることも示す。
過剰量の遮断ペプチド（ＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣ）と一緒に、抗体Ａｂ５とともにインキュベートしたマウス細胞は、ＩＬ－１βを上清中に放出し、ＮＬＲＰ３又はＮＬＲＰ１Ｂインフラマソーム活性化時に細胞死を受けた（図１３Ａ、図１３Ｂ、図１４Ａ、及び図１４Ｂ）。
実施例７：リポソーム漏出アッセイ
組換えガスダーミンＤ（５０μｇ／ｍＬ、社内で生成）を、ＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ）において、ジスルフィラム（Ｓｉｇｍａ）、ガスダーミンＤ特異的抗体Ａｂ５、又はピロトーシスを阻害しないガスダーミンＤ抗体ウサギポリクローナル調製物で１５分間前処理した。混合物を、ＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ）中のカルセイン充填リポソーム（ＰＯＰＥ：ＰＯＰＳ：ＰＯＰＣ脂質組成物、カルセイン封入リポソーム、Ｅｎｃａｐｓｕｌａ）及び組換えカスパーゼ－１（１０μｇ／ｍＬ、ＥｎｚｏＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）の混合物を含有する３８４ウェルプレートに添加した。組換えカスパーゼ１による組換えガスダーミンＤの切断により、ガスダーミンＤのリポソームへの挿入、及びカルセインの放出がもたらされる。リポソーム中、カルセインは、自己反応停止をもたらす濃度であり、したがって、リポソームからの放出時にのみ検出される。
リポソームからのカルセインの漏出を、４９５ｎｍに設定された励起及び５１５ｎｍでの放出で、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、３分毎に４２分間測定した。
結果：
ガスダーミンＤを、既知のガスダーミンＤ細孔遮断小分子であるジスルフィラムで前処理することにより、試験した全ての濃度において、カルセイン漏出が強力に遮断された（図１５Ａ）。同様に、組換えガスダーミンＤを、ガスダーミン依存性細胞死及びＩＬ－１β放出を阻害することが知られている（実施例１、３、４、及び６を参照されたい）Ａｂ５で前処理することによっても、リポソームからのカルセイン漏出が用量依存的に阻害された（図１５Ｂ）。比較として、ピロトーシスを阻害することができない標的化抗体でのガスダーミンＤの前処理はまた、リポソームからのカルセイン放出を遮断することができなかった（図１５Ｃ）。これは、この非阻害性抗体の存在下において、ガスダーミンＤが、カスパーゼ－１によって効率的に切断され、リポソームに挿入され、細孔を形成することができることを示唆している。
（配列）
配列番号１
ガスダーミンＤ全長
ＭＧＳＡＦＥＲＶＶＲＲＶＶＱＥＬＤＨＧＧＥＦＩＰＶＴＳＬＱＳＳＴＧＦＱＰＹＣＬＶＶＲＫＰＳＳＳＷＦＷＫＰＲＹＫＣＶＮＬＳＩＫＤＩＬＥＰＤＡＡＥＰＤＶＱＲＧＲＳＦＨＦＹＤＡＭＤＧＱＩＱＧＳＶＥＬＡＡＰＧＱＡＫＩＡＧＧＡＡＶＳＤＳＳＳＴＳＭＮＶＹＳＬＳＶＤＰＮＴＷＱＴＬＬＨＥＲＨＬＲＱＰＥＨＫＶＬＱＱＬＲＳＲＧＤＮＶＹＶＶＴＥＶＬＱＴＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫＫＴＶＴＩＰＳＧＳＴＬＡＦＲＶＡＱＬＶＩＤＳＤＬＤＶＬＬＦＰＤＫＫＱＲＴＦＱＰＰＡＴＧＨＫＲＳＴＳＥＧＡＷＰＱＬＰＳＧＬＳＭＭＲＣＬＨＮＦＬＴＤＧＶＰＡＥＧＡＦＴＥＤＦＱＧＬＲＡＥＶＥＴＩＳＫＥＬＥＬＬＤＲＥＬＣＱＬＬＬＥＧＬＥＧＶＬＲＤＱＬＡＬＲＡＬＥＥＡＬＥＱＧＱＳＬＧＰＶＥＰＬＤＧＰＡＧＡＶＬＥＣＬＶＬＳＳＧＭＬＶＰＥＬＡＩＰＶＶＹＬＬＧＡＬＴＭＬＳＥＴＱＨＫＬＬＡＥＡＬＥＳＱＴＬＬＧＰＬＥＬＶＧＳＬＬＥＱＳＡＰＷＱＥＲＳＴＭＳＬＰＰＧＬＬＧＮＳＷＧＥＧＡＰＡＷＶＬＬＤＥＣＧＬＥＬＧＥＤＴＰＨＶＣＷＥＰＱＡＱＧＲＭＣＡＬＹＡＳＬＡＬＬＳＧＬＳＱＥＰＨ
配列番号２
ガスダーミンＤのＮ末端ドメイン
ＭＧＳＡＦＥＲＶＶＲＲＶＶＱＥＬＤＨＧＧＥＦＩＰＶＴＳＬＱＳＳＴＧＦＱＰＹＣＬＶＶＲＫＰＳＳＳＷＦＷＫＰＲＹＫＣＶＮＬＳＩＫＤＩＬＥＰＤＡＡＥＰＤＶＱＲＧＲＳＦＨＦＹＤＡＭＤＧＱＩＱＧＳＶＥＬＡＡＰＧＱＡＫＩＡＧＧＡＡＶＳＤＳＳＳＴＳＭＮＶＹＳＬＳＶＤＰＮＴＷＱＴＬＬＨＥＲＨＬＲＱＰＥＨＫＶＬＱＱＬＲＳＲＧＤＮＶＹＶＶＴＥＶＬＱＴＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫＫＴＶＴＩＰＳＧＳＴＬＡＦＲＶＡＱＬＶＩＤＳＤＬＤＶＬＬＦＰＤＫＫＱＲＴＦＱＰＰＡＴＧＨＫＲＳＴＳＥＧＡＷＰＱＬＰＳＧＬＳＭＭＲＣＬＨＮＦＬＴＤ
配列番号３
ガスダーミンＤのＣ末端ドメイン
ＧＶＰＡＥＧＡＦＴＥＤＦＱＧＬＲＡＥＶＥＴＩＳＫＥＬＥＬＬＤＲＥＬＣＱＬＬＬＥＧＬＥＧＶＬＲＤＱＬＡＬＲＡＬＥＥＡＬＥＱＧＱＳＬＧＰＶＥＰＬＤＧＰＡＧＡＶＬＥＣＬＶＬＳＳＧＭＬＶＰＥＬＡＩＰＶＶＹＬＬＧＡＬＴＭＬＳＥＴＱＨＫＬＬＡＥＡＬＥＳＱＴＬＬＧＰＬＥＬＶＧＳＬＬＥＱＳＡＰＷＱＥＲＳＴＭＳＬＰＰＧＬＬＧＮＳＷＧＥＧＡＰＡＷＶＬＬＤＥＣＧＬＥＬＧＥＤＴＰＨＶＣＷＥＰＱＡＱＧＲＭＣＡＬＹＡＳＬＡＬＬＳＧＬＳＱＥＰＨ
配列番号４
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＰＮＴＷＱＴＬＬＨＥＲＨＬＲＱＰＥＨＫＶＬＱＱＬＲＳＲＧＤＮＶＹＶＶＴＥＶＬＱＴＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫＫＴＶＴＩＰＳＧＳＴＬＡＦＲＶＡＱＬＶＩＤＳＤＬＤＶＬＬＦＰＤＫＫＱＲＴＦＱ
配列番号５
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＲＨＬＲＱＰＥＨＫＶＬＱＱＬＲＳＲＧＤＮＶＹＶＶＴＥＶＬＱＴＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫＫＴＶＴＩＰＳＧＳＴＬＡＦＲＶＡＱＬＶＩＤＳＤＬＤＶＬＬ
配列番号６
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＬＱＱＬＲＳＲＧＤＮＶＹＶＶＴＥＶＬＱＴＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫＫＴＶＴＩＰＳＧＳＴＬＡＦＲＶＡＱＬ
配列番号７
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＶＹＶＶＴＥＶＬＱＴＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳＱＫＫＴＶＴＩＰＳＧ
配列番号８
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＱＫＥＶＥＶＴＲＴＨＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣＬＱＧＥＧＱＧＨＬＳ
配列番号９
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＫＲＥＧＳＧＲＦＳＬＰＧＡＴＣ
配列番号１０
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＥＨＫＶＬＱＱＬＲＳＲＧＤ
配列番号１１
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＡＦＥＲＶＶＲＲＶＶＱＥＬＤ
配列番号１２
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＹＣＬＶＶＲ
配列番号１３
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＹＫＣＶＮＬＳ
配列番号１４
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＭＤＧＱＩＱＧ
配列番号１５
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＰＮＴＷＱＴＬＬＨＥ
配列番号１６
ガスダーミンＤのＮ末端ドメインのフラグメント
ＤＬＤＶ
配列番号１７
マウスガスダーミンＤフラグメント
ＳＱＥＧＳＧＱＦＴＬＰＧＡＬＣ

Claims (26)

  1. ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤。
  2. ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和する、ガスダーミンＤ阻害剤。
  3. ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和である、請求項１又は２に記載のガスダーミンＤ阻害剤。
  4. 前記阻害剤は、
    ｉ）細胞外阻害剤であり、
    ｉｉ）細胞表面上のガスダーミンＤに結合し、かつ／又は
    ｉｉｉ）ガスダーミンＤに結合し、前記阻害剤がガスダーミンＤに結合しない限り細胞膜を通過しない、請求項１～３のいずれか一項に記載の阻害剤。
  5. 前記阻害剤は、前記阻害剤が、＞２ｋＤａ、＞３ｋＤａ、＞４ｋＤａ、＞５ｋＤａ、＞６ｋＤａ、＞７ｋＤａ、＞８ｋＤａ、＞９ｋＤａ、又は＞１０ｋＤａの分子量を有するなど、大型分子である、請求項１～４のいずれか一項に記載の阻害剤。
  6. 前記阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載の阻害剤。
  7. 前記阻害剤は、前記阻害剤が、配列番号９を含むエピトープに結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９を含むエピトープに結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載の阻害剤。
  8. 前記阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合する、請求項７に記載の阻害剤。
  9. 前記阻害剤は、前記阻害剤が、配列番号９に結合するなど、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、又は配列番号９に結合する、請求項１～８のいずれか一項に記載の阻害剤。
  10. 前記阻害剤は、配列番号９に結合する、請求項９に記載の阻害剤。
  11. 前記阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、脂質との会合（association）を中和するなど、前記阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、前記ガスダーミンＤの、脂質との会合を阻害し、任意選択で、前記阻害剤が、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を中和するなど、前記阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、前記ガスダーミンＤの、ホスファチジルイノシトール４－リン酸及び／又はホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸との会合を阻害する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の阻害剤。
  12. 前記阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、前記阻害剤が、ガスダーミンＤのオリゴマー化を中和するなど、ガスダーミンＤのオリゴマー化を阻害し、任意選択で、前記阻害剤が、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を中和するなど、前記阻害剤は、ガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を阻害する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の阻害剤。
  13. 前記阻害剤は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤ多量体細孔を遮断するか、又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、前記細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊するなど、ガスダーミンＤ多量体細孔に結合する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の阻害剤。
  14. 前記は、
    ｉ）前記阻害剤が、前記多量体細孔を遮断するか、又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、前記細孔のガスダーミンＤサブユニット間のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊するなど、前記多量体細孔のガスダーミンＤサブユニットに結合する、請求項１３に記載の阻害剤。
  15. 前記阻害剤は、ＩＬ－１β及び／又はＩＬ－１８の放出を阻害する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の阻害剤。
  16. 前記阻害剤は、タンパク質性、例えば、抗原結合タンパク質であり、例えば、前記抗原結合タンパク質が、抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の阻害剤。
  17. ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和するための方法であって、請求項１～１６のいずれか一項に記載のガスダーミンＤ阻害剤を、ガスダーミンＤと接触させることを含む、方法。
  18. ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和することにおける、請求項１～１６のいずれか一項に記載のガスダーミンＤ阻害剤の使用。
  19. ガスダーミンＤを中和することなどの、ガスダーミンＤを阻害及び／又は中和することにおける使用のための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の阻害剤であって、任意選択で、ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の阻害剤。
  20. 治療における使用のための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の阻害剤。
  21. 敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン関連周期性症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の阻害剤。
  22. ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害するガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、
    ａ）前記阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
    ｂ）前記阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
    ｃ）前記阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
    ｄ）前記阻害剤は、配列番号９に結合する、ガスダーミンＤ阻害剤。
  23. ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和するための方法であって、ガスダーミンＤ阻害剤を、ガスダーミンＤと接触させることを含み、前記ガスダーミンＤ阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、
    ａ）前記阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
    ｂ）前記阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
    ｃ）前記阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
    ｄ）前記阻害剤は、配列番号９に結合する、方法。
  24. ガスダーミンＤの活性及び／又は機能を阻害及び／又は中和することにおけるガスダーミンＤ阻害剤の使用であって、前記ガスダーミンＤ阻害剤は、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害し、ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、
    ａ）前記阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
    ｂ）前記阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
    ｃ）前記阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
    ｄ）前記阻害剤は、配列番号９に結合する、使用。
  25. ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、
    ａ）前記阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
    ｂ）前記阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
    ｃ）前記阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
    ｄ）前記阻害剤は、配列番号９に結合する、治療における使用のための、ガスダーミンＤ阻害剤。
  26. ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを中和するなど、ガスダーミンＤに結合し、ガスダーミンＤを阻害する、ガスダーミンＤ阻害剤であって、ガスダーミンＤの前記阻害及び／又は前記中和は、
    ｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの活性を中和するなど、ガスダーミンＤの活性の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、かつ／又は
    ｉｉ）前記阻害剤が、ガスダーミンＤの機能を中和するなど、ガスダーミンＤの機能の前記阻害及び／若しくは前記中和であり、
    ａ）前記阻害剤は、細胞外阻害剤であり、
    ｂ）前記阻害剤は、ガスダーミンＤのＮ末端ドメインに結合し、
    ｃ）前記阻害剤は、配列番号９を含むエピトープに結合し、
    ｄ）前記阻害剤は、配列番号９に結合し、
    敗血症、敗血症性ショック、非アルコール性脂肪性肝炎、肺がん、家族性地中海熱、自己炎症性疾患、クリオピリン関連周期性症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、加齢性黄斑変性、アテローム性動脈硬化症、喘息及びアレルギー性気道炎症、痛風、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、高血圧症、腎症、心筋梗塞、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳炎、インフルエンザ感染後の過剰炎症、移植片対宿主病、卒中、珪肺症、石綿症、中皮腫、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満誘導性炎症、インスリン抵抗性、リウマチ性関節炎、骨髄異形成症候群、接触過敏症、チクングニアウイルスによってトリガーされる関節炎症、並びに外傷性脳損傷から選択される適応症の治療における使用のための、ガスダーミンＤ阻害剤。
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