KR20220034206A - 결합제 및 이의 용도 - Google Patents

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모하메드 람칸피
필립 프란스 제이 반 호워메이린
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얀센 파마슈티카 엔.브이.
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Abstract

본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D-매개 세포사 및 염증을 억제하는 억제제에 관한 것이다. 상기 억제제는 단백질성일 수 있으며, 예를 들어 항원-결합 단백질일 수 있거나, 또는 비단백질성일 수 있으며, 예컨대 압타머일 수 있다. 서열 번호 9의 펩티드에 결합하는 항체가 개시된다: KREGSGRFSLPGATC. 일 실시 형태에서, 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시키고, 선택적으로 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.

Description

결합제 및 이의 용도
본 명세서에 제공된 개시내용은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D-매개 세포사 및 염증을 억제하는 억제제에 관한 것이다.
파이롭토시스(pyroptosis)는 사이토졸의 미생물 병원체- 또는 숙주-유래 섭동을 포함한 다수의 상이한 위협에 의해 촉발되는 고염증성 유형의 프로그래밍된 세포사이다. 파이롭토시스는 다른 형태의 세포사와 형태학적으로 그리고 기전적으로 구별되며, 세포막 내에 다량체성 기공을 형성하는 단백질 가스데르민 D의 활성화 및 동원에 의존한다. 이들 다량체성 기공의 형성은 세포의 막 전위를 파괴하여, 세포 이온 구배를 소실시키고, 삼투압의 순 증가(net increase), 물 유입, 세포 팽윤, 그리고 결국에는 삼투압 용해를 야기한다. 가스데르민 D 기공은 염증성 사이토카인, 예컨대 인터류킨(IL)-1α, IL-1β 및 IL-18을 방출할 수 있으며, 삼투압 용해에 의해 촉발되는 세포사는 염증성 사이토카인 및 알라르민, 예컨대 HMGB1 및 ATP의 추가 방출을 촉발한다. 따라서, 파이롭토시스의 특징은 신속한 형질막 파열 및 염증성 사이토카인의 방출을 포함하며, 이는 숙주에서 더 큰 염증 반응을 활성화하는 면역 이펙터 세포를 추가로 동원한다(문헌[Pandeya et al., (2019) Med. Chem. Commun. 10(5): 660-667]).
따라서, 파이롭토시스는, 감염에 대해 보호하고 병리학적 염증을 유도하는 1차 세포 반응이다. 그러나, 염증 반응의 조절이상은 급성 및 만성 염증, 예컨대 패혈증, 죽상경화증, 염증성 장 질병, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열 및 자가염증성 질병, 예컨대 크라이오피린-관련 주기성 증후군과 연관된 많은 쇠약성(debilitating) 질병에 있어서의 중요한 요인이다. 따라서, 파이롭토시스 세포사를 특이적으로 표적화하는 억제제는 임상에서 이들 질병의 치료에 치료적으로 유용할 수 있다.
NLRP3 인플라마좀(inflammasome) 및 카스파제 1은 파이롭토시스의 주요 염증 반응 개시자이다. AIM2, NLRC4 및 NLRP1과 같은 다른 인플라마좀이 또한 카스파제-1, 가스데르민 D 및 파이롭토시스의 활성화를 유도할 수 있다. 일단 인플라마좀 복합체에 의해 활성화되면, 카스파제 1은 사이토카인, 예컨대 IL-1β 및 IL-18의 절단 및 활성화뿐만 아니라, 단백질 가스데르민 D의 절단을 통해 전염증 반응을 개시한다. 가스데르민 D를 또한 절단할 수 있는 카스파제 4, 5 및 8을 통해 카스파제 1 비의존성 파이롭토시스가 또한 진행될 수 있다(문헌[Bergsbaken et al., (2009) Nat Rev Microbiol 7(2): 99-109]; 문헌[Frank and Vince (2019) Cell Death and Differentiation 26: 99-114]).
GSDMD, DF5L, DFNA5L, GSDMDC1 및 FKSG10으로도 알려진 가스데르민 D는 N-말단 도메인 및 C-말단 도메인으로 구성된 약 53 kDa 단백질이다. N-말단 도메인(GSDMDNterm)은 31 kDa이고, 링커에 의해 C-말단 도메인(GSDMDCterm)과 분리되며, C-말단 도메인은 22 kDa이다. 전장(full length) 단백질은 자가억제된(autoinhibited) 상태에 있는데, 즉, C-말단 도메인은 되접혀 있고(folding back) N-말단 도메인에 분자내 결합되어 있다. 전염증성 프로테아제에 의한 도메인간 링커의 영역에서의 전장 가스데르민 D의 절단은 가스데르민 D의 N-말단 도메인과 C-말단 도메인의 분리를 가져오는데, 이는 자가억제를 제거한다. GSDMDNterm는 그 자체로 파이롭토시스를 유도할 수 있다.
패혈증 또는 다른 염증성 질병의 치료를 위하여 가스데르민 D를 직접 표적화하는 시판 중인 치료제가 현재 없다. 가스데르민 D를 표적화하는 연구는 가스데르민 D의 위치 Cys191에 있는 유리 티올과 반응할 수 있는 소분자 억제제에만 초점이 맞추어져 왔다(문헌[Rathekey et al., (2018) Sci. Immunology. 3, eaat2738]). 따라서, 새로운 치료 방식에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시킨다.
본 발명은 또한 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 가스데르민 D 억제제를 제공한다.
본 발명은 또한 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 데 있어서의 본 발명의 가스데르민 D 억제제의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 가스데르민 D를 억제 및/또는 중화시키는 데, 예컨대 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 선택적으로 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같다:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한, 예를 들어 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야(Chikungunya) 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한, 가스데르민 D 억제제를 제공한다.
도 1의 A는 세포사 억제 검정에 대한 시간경과를 나타낸다. THP-1 세포를 소분자인 20 μM 다이설피람(Dis), 30 μM 네크로설폰아미드(NSA), 또는 2 μM MCC-950(MCC)과 병용하여 니제리신(Nig)으로 처리하거나, 소분자인 20 μM 다이설피람(Dis), 30 μM 네크로설폰아미드(NSA), 또는 2 μM MCC-950(MCC)만으로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 1의 B는 1시간째에서의 세포사 억제 검정을 나타낸다. THP-1 세포를 소분자인 20 μM 다이설피람(Dis), 30 μM 네크로설폰아미드(NSA), 또는 2 μM MCC-950(MCC)과 병용하여 니제리신(Nig)으로 처리하거나, 소분자인 20 μM 다이설피람(Dis), 30 μM 네크로설폰아미드(NSA), 또는 2 μM MCC-950(MCC)만으로 처리하였다. 세포사는 1시간 후에 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 2의 A 및 도 2의 B는 항체, Ab5의 존재 하에서의 세포사 억제 검정에 대한 시간경과를 나타낸다. THP-1 세포를 니제리신, MCC-950과 병용된 니제리신, 항체 Ab5, 또는 니제리신 및 상이한 농도의 Ab5(0.15 ㎍/ml 내지 20 ㎍/ml)의 병용물로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 3은 하기로 처리된 세포에서 1시간 후의 SYTOX™ 그린 흡수의 대표적인 이미지를 나타낸다: A. 모의, B. 니제리신, C. 니제리신과 Ab5, 및 D. 니제리신과 MCC-950. 살아있는 세포 형광 이미징을 가능하게 하는 IncuCyte Live Cell Analysis 시스템을 사용하여 이미지를 촬영하였다.
도 4는 항체, Ab3의 존재 하에서의 세포사 억제 검정에 대한 시간경과를 나타낸다. THP-1 세포를 니제리신, MCC-950과 병용된 니제리신, 항체 Ab3, 또는 니제리신 및 상이한 농도의 Ab3(0.15 ㎍/ml 내지 20 ㎍/ml)의 병용물로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 5는 하기로 처리된 세포에서 1시간 후의 SYTOX™ 그린 흡수의 대표적인 이미지를 나타낸다: A. 모의, B. 니제리신, C. 니제리신과, 다른 가스데르민 D 결합 항체, 예컨대 Ab3, 및 D. 니제리신과 MCC-950. 살아있는 세포 형광 이미징을 가능하게 하는 IncuCyte Live Cell Analysis 시스템을 사용하여 이미지를 촬영하였다.
도 6은 항체, Ab5의 존재 하에서의 세포사 억제 검정에 대한 시간경과를 나타내며, 여기서는 Ab5를 THP-1 세포에 투여하기 전에 비등시켰다. THP-1 세포를 니제리신, MCC-950과 병용된 니제리신, 및 비등된 Ab5와 병용된 니제리신으로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 7의 A는 카스파제-1에 의한 처리 전과 후의 재조합 GSDMD의 블롯(blot) 상의 단백질 염색을 나타낸다. 도 7의 B는 카스파제 1로 처리한 후의 가스데르민 D의 웨스턴 블롯을 나타낸다. Ab5가 프로브 항체로서 사용되었다.
도 8은 Ab5 및 차단 펩티드의 존재 하에서의 세포사 억제 검정에 대한 시간경과를 나타낸다. THP-1 세포를 니제리신, MCC-950과 병용된 니제리신, Ab5와 병용된 니제리신, 또는 Ab5 및 차단 펩티드와 병용된 니제리신으로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 9는 하기로 처리된 세포에서 2시간 후의 SYTOX™ 그린 흡수의 대표적인 이미지를 나타낸다: A. 모의, B. 니제리신, C. 니제리신과 Ab5, 및 D. 니제리신과 Ab5 및 차단 펩티드. 살아있는 세포 형광 이미징을 가능하게 하는 IncuCyte Live Cell Analysis 시스템을 사용하여 이미지를 촬영하였다.
도 10의 A는 Ab5 또는 차단 펩티드의 존재 하에서의 세포사 억제 검정에 대한 시간경과를 나타낸다. THP-1 세포를 니제리신, Ab5와 병용된 니제리신, 또는 차단 펩티드와 병용된 니제리신으로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다. 도 10의 B 및 도 10의 C는 니제리신에 의한 자극 후 80분째에 상층액 중에의 IL-1β 및 IL-18 방출의 정량화를 나타낸다.
도 11은 Ab5 또는 Ab5 및 차단 펩티드의 존재 하에서의 1차 인간 단핵구로부터의 IL-1β 방출의 정량화를 나타낸다. 1차 인간 단핵구를 지질다당류(LPS)로 3시간 동안 프라이밍하고, 이어서 추가로 니제리신으로 처리하거나(LN), 세포를 Ab5로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하거나(LN Ab 'x', 여기서 x는 ㎍/ml로의 항체의 농도), 또는 세포를 Ab5 및 40 ㎍/ml의 차단 펩티드로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하였다(LNAb 'x' + pep). 니제리신으로 자극 후 1시간째에 상층액 내로의 IL-1β 방출을 정량화하였다.
도 12는 뮤린 세포에서의 세포사 억제 검정의 시간경과를 나타낸다: 골수 유래 대식세포(BMDM). 뮤린 세포를 LPS로 프라이밍하고, 니제리신 또는 Ab5와 병용된 니제리신으로 처리하였다. 세포사는 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정되었다.
도 13은 Ab5 또는 Ab5 및 차단 펩티드의 존재 하에서의 니제리신 자극 후의 뮤린 골수 유래 대식세포(BMDM)로부터의 세포사 억제 검정 및 IL-1β 방출의 정량화의 시간경과를 나타낸다. BMDM을 지질다당류(LPS)로 3시간 동안 프라이밍하고, 이어서 추가로 세포를 인산염 완충 식염수로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하거나(LN), 또는 Ab5로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하거나(LN Ab 'x', 여기서 x는 ㎍/ml로의 항체의 농도), 또는 Ab5 및 40 ㎍/ml의 차단 펩티드로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하였다(LNAb 'x' + pep). 니제리신으로 자극 후 1.5시간째에 상층액 내로의 IL-1β 방출을 정량화하고(도 13의 A), 세포사의 속도론적 특성을 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정하였다(도 13의 B).
도 14는 Ab5 또는 Ab5 및 차단 펩티드의 존재 하에서의 탄저 독소(LeTx) 자극 후의 뮤린 골수 유래 대식세포(BMDM)로부터의 세포사 억제 검정 및 IL-1β 방출의 정량화의 시간경과를 나타낸다. BMDM을 지질다당류(LPS)로 3시간 동안 프라이밍하고, 이어서 추가로 세포를 인산염 완충 식염수로 전처리한 후에 LeTx로 처리하거나(LLeTx), 또는 Ab5로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하거나(LLeTx Ab 'x', 여기서 x는 ㎍/ml로의 항체의 농도), 또는 Ab5 및 40 ㎍/ml의 차단 펩티드로 전처리한 후에 니제리신으로 처리하였다(LLeTxAb 'x' + pep). 니제리신으로 자극 후 1.5시간째에 상층액 내로의 IL-1β 방출을 정량화하고(도 14의 A), 세포사의 속도론적 특성을 SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 측정하였다(도 14의 B).
도 15는 리포좀 누출 검정을 나타낸다. 재조합 가스데르민 D를 카스파제-1에 의해 절단하고, 칼세인 충전된 리포좀 내에 기공이 생성되게 하였다. 리포좀 밖으로의 칼세인 누출의 속도론적 특성을 기록하였다. 도 15는 재조합 가스데르민 D가 다양한 농도의 다이설피람(도 15의 A), 가스데르민 D 특이적 항체 Ab5(도 15의 B) 및 세포사 또는 IL-1β 방출을 억제하지 않는 다른 가스데르민 D 표적화된 항체(도 15의 C)로 전처리된 후의 칼세인 누출의 속도론적 특성을 나타낸다.
가스데르민 D 억제제
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D를 중화시킨다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 가스데르민 D 억제제를 제공한다.
따라서, 본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 활성의 억제이며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시키고/시키거나; 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 기능의 억제이며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킨다.
따라서, 본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 활성의 중화이고/이거나, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 기능의 중화이다.
따라서, 본 발명은 가스데르민 D에 결합하는 세포외 억제제를 제공한다. 따라서, 본 발명은 세포 표면 상의 가스데르민 D에 결합하는 억제제를 제공한다.
따라서, 본 발명은 또한, 가스데르민 D에 결합하고, 가스데르민 D에 결합되어 있지 않는 한 세포막을 가로지르지 않는 억제제를 제공한다.
따라서, 본 발명은 또한 대분자인 가스데르민 D 억제제를 제공한다.
따라서, 본 발명은 또한 가스데르민 D에 결합하는 억제제를 제공하며, 억제제는 > 2 kDa, > 3 kDa, > 4 kDa, >5 kDa, > 6 kDa, > 7 kDa, > 8 kDa, > 9 kDa 또는 > 10 kDa의 분자량을 갖는다.
가스데르민 D의 단백질 분해적 절단은 세포막 내로의 가스데르민 D의 N-말단 도메인의 삽입을 가져온다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 본 발명의 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 본 발명의 억제제는 서열 번호 9에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 본 발명의 억제제는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합한다.
원형질막 내로의 가스데르민 D의 삽입은 세포막의 지질과의 가스데르민 D의 N-말단 도메인의 회합을 필요로 한다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 억제하며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
세포막 내에의 가스데르민 D의 N-말단 도메인의 삽입은 가스데르민 D 하위단위들의 올리고머화를 초래하며, 여기서 이는 다량체성 기공 복합체로서 기능한다. 본 발명자들은 가스데르민 D의 기능이 기공 형성을 방지함으로써 파괴될 수 있는 것으로 판단하였다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 중화시킨다. 이로써 이 기전은 기공의 형성을 방지한다.
기공을 형성하기 위한 가스데르민 D 하위단위들의 올리고머화는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 상호작용을 필요로 한다. 따라서, 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용의 파괴는 기공 형성을 억제할 것이다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 중화시킨다. 이 기전은 올리고머화를 방지한다.
가스데르민 D 다량체성 기공 복합체의 형성은 사이토카인의 방출 및 세포 이온 구배의 파괴로 이어진다. 세포 표면 상에 이미 형성된 기공의 파괴 및 억제는 가스데르민 D 활성/활성들, 예컨대 파이롭토시스에 의한 세포사를 억제할 수 있다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제하며, 예컨대 억제제는 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 중화시킨다.
가스데르민 D의 활성 및/또는 기능의 억제는 파이롭토시스로 인한 세포사의 억제를 가져올 수 있다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 억제할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
가스데르민 D의 활성 및/또는 기능의 억제는 세포사, 예컨대 파이롭토시스로 인한 세포사의 지연을 가져올 수 있다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
요법에 사용하기 위한 억제제의 개발은 승인 전에 전임상 시험을 필요로 한다. 따라서, 구세계 원숭이 가스데르민 D 또는 신세계 원숭이 가스데르민 D와 교차반응하는 본 발명의 억제제는 비인간 영장류에서의 실험적 시험을 가능하게 하고, 본 발명의 억제제의 독성 프로파일, 안전성 프로파일 및 효능 프로파일을 시험하기 위한 비인간 모델을 제공한다. 따라서, 이는 개발 효율을 증가시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 구세계 원숭이 가스데르민 D 또는 신세계 원숭이 가스데르민 D와 교차반응한다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합한다.
항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 단백질성이며, 예를 들어 항원-결합 단백질이다. 항원-결합 단백질은 특정 항원에 대해 결합 친화성을 나타낼 수 있는 임의의 단백질성 구조(proteinaceous structure)이다. 본 명세서에서, 명시된 표적 항원은 가스데르민 D 단백질 또는 이의 단편이다. "항원-결합 단백질"은 항체 및 이의 결합 부분, 예컨대 면역학적 기능성 단편을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 펩티바디(Fc-융합체)는 항원-결합 단백질의 다른 예로서, 마찬가지로 중쇄 및 경쇄 유래 항체 단편이다. 그러한 단편은 에피토프에 결합하여 가스데르민 D를 억제할 수 있기 때문에 활성이다. 일 태양에서, 그러한 단편은 전장 경쇄 또는 중쇄에 존재하는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 보유할 것이며, 일부 실시 형태에서는 단일 중쇄 및/또는 경쇄 또는 이의 일부분을 포함할 것이다. 단편은 효소 또는 화학적 절단에 의해 용이하게 생성될 수 있다. 이들은 Fab, 다이아바디(diabody), Fab', F(ab')2, Fv, 도메인 항체 및 단일쇄 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 기재된 일부 항원-결합 단백질은 항체이거나 항체로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질의 폴리펩티드 구조는 단일클론 항체, 이중특이성 항체, 미니바디, 도메인 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체 융합체(때때로 "항체 접합체"로 지칭됨), 및 이들 각각의 단편을 포함하지만 이로 한정되지 않는 항체에 기초한다. 추가적으로, 항원-결합 단편은 주어진 관심 항원에 대해 친화성을 부여하는 배향으로 폴리펩티드 절편(segment)을 성공적으로 도입시킬 수 있는 비항체 단백질성 프레임워크, 예컨대 단백질 스캐폴드를 포함할 수 있다. 그러한 단백질 스캐폴드의 비제한적인 예에는 하기가 포함된다: 나노바디(VHH) 도메인, IgNAR 가변 도메인(vNAR), Fc 융합 단백질, 가변 림프구 수용체(VLR) 도메인, 피브로넥틴 III형 도메인, 센티린, 크링글(Kringle) 도메인 단백질, 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin), 시스틴-노트 미니단백질, Sso7d 단백질, 아피바디, 아피머, 안티칼린, 아필린, 아피틴, 또는 피노머(이들은 하기에서 더 상세히 논의됨).
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 항원-결합 단백질을 제공하며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D를 중화시킨다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 항원-결합 단백질을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 활성의 억제이며, 예컨대 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 활성을 중화시키고/시키거나; 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 기능의 억제이며, 예컨대 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 기능을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 활성의 중화이고/이거나, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 기능의 중화이다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하는 세포외 억제제이다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 세포 표면 상의 가스데르민 D에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하고, 가스데르민 D에 결합되어 있지 않는 한 세포막을 가로지르지 않는다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 대분자이다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 > 2 kDa, > 3 kDa, > 4 kDa, >5 kDa, > 6 kDa, > 7 kDa, > 8 kDa, > 9 kDa 또는 > 10 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 본 발명의 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 본 발명의 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 억제하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항원-결합 단백질은 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 억제할 수 있으며, 예컨대 항원-결합 단백질은 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항원-결합 단백질은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 구세계 원숭이 가스데르민 D 또는 신세계 원숭이 가스데르민 D와 교차반응한다. 그러한 교차반응성의 이점은 본 명세서에서 상기에 논의되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 나노바디(VHH) 도메인, IgNAR 가변 도메인(vNAR), Fc 융합 단백질, 가변 림프구 수용체(VLR) 도메인, 피브로넥틴 III형 도메인, 센티린, 크링글 도메인 단백질, 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin), 시스틴-노트 미니단백질, Sso7d 단백질, 아피바디, 아피머, 안티칼린, 아필린, 아피틴, 또는 피노머이다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하여 기공의 형성을 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 에피토프에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 서열에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항원-결합 단백질은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 단리된 펩티드에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항원-결합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항원-결합 단백질은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항원-결합 단백질은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항원-결합 단백질은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D 특이적 항체 또는 항원-결합 단편
가스데르민 D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 항체 분자의 일반적인 구조는 항원-결합 도메인 및 Fc 도메인을 포함한다. Fc는 이펙터 기능을 매개한다. 천연 발생 항체 구조 단위는 전형적으로 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄의 사량체를 포함한다. 항원-결합 도메인은 중쇄로부터의 가변 도메인 및 경쇄로부터의 가변 도메인으로 형성된다. 가변 영역은 전형적으로, 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 불리는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 비교적 보존된 프레임워크 영역(FR)들로 된 동일한 일반적인 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 사슬로부터의 CDR들은 전형적으로 프레임워크 영역들에 의해 정렬되며, 이는 특정 에피토프에 대한 결합을 가능하게 할 수 있다. N-말단에서 C-말단으로, 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역 둘 모두는 전형적으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 항체의 가변 영역은 전형적으로 이의 표적에 대한 특정 항체의 특이성을 결정한다. 인간 경쇄는 전형적으로 카파 경쇄 및 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 동종형(isotype)을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의한다. IgG는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하지만 이로 한정되지 않는 몇몇 하위부류를 갖는다. IgM도 역시 하위부류를 갖는다. 전장 경쇄는 가변 영역 도메인, VL, 및 불변 영역 도메인, CL을 포함한다. 경쇄의 가변 영역 도메인은 폴리펩티드의 아미노-말단에 존재한다. 경쇄는 카파 사슬 및 람다 사슬을 포함한다. 용어 "중쇄"는 결합 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 중쇄는 가변 영역 도메인, VH, 및 3개의 불변 영역 도메인, CH1, CH2, 및 CH3을 포함한다. VH 도메인은 폴리펩티드의 아미노-말단에 존재하고, CH 도메인은 카르복실-말단에 존재하며, 아울러 CH3은 폴리펩티드의 카르복시-말단에 가장 가까이 있다. "항체"는, 달리 명시되지 않는 한, 다양한 단량체 형태, 중합체 형태 및 키메라 형태를 포함한 면역글로불린의 모든 동종형(IgG, IgA, IgE, IgM, IgD, 및 IgY)을 지칭한다. 구체적으로, 용어 "항체"에는 다중클론 항체, 단일클론 항체(mAb), 및 항체-유사 폴리펩티드, 예컨대 키메라 항체 및 인간화 항체가 포함된다.
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D를 중화시킨다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 활성의 억제이며, 예컨대 항체 또는 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 활성을 중화시키고/시키거나; 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 기능의 억제이며, 예컨대 항체 또는 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 기능을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 활성의 중화이고/이거나, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 기능의 중화이다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하는 세포외 억제제이다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포 표면 상의 가스데르민 D에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하고, 가스데르민 D에 결합되어 있지 않는 한 세포막을 가로지르지 않는다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대분자이다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 > 2 kDa, > 3 kDa, > 4 kDa, >5 kDa, > 6 kDa, > 7 kDa, > 8 kDa, > 9 kDa 또는 > 10 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 억제하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 억제할 수 있으며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제하며, 예컨대 항체 또는 항원-결합 단편은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 구세계 원숭이 가스데르민 D 또는 신세계 원숭이 가스데르민 D와 교차반응한다. 그러한 교차반응성의 이점은 본 명세서에서 상기에 논의되어 있다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하여 기공의 형성을 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 에피토프에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 서열에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 및 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 단리된 펩티드에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 영역을 포함한다. "Fc" 영역은 항체의 CH1 및 CH2 도메인을 포함하는 2개의 중쇄 단편을 포함한다. 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 이황화물 결합에 의해 그리고 CH3 도메인들의 소수성 상호작용에 의해 함께 유지된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM 동종형을 포함한다. 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 모든 동종형, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 및 4-사슬 면역글로불린 구조의 합성 다량체를 포함한다. 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은 또한 암탉 또는 칠면조 혈청 및 암탉 또는 칠면조 난황에서 대체로 발견되는 IgY 동종형을 포함한다.
가스데르민 D-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 재조합 수단에 의해 유도될 수 있다. 인간에 대한 투여에 사용하기 위하여, 비인간 유래 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 환자에게 투여 시 더 적은 항원성을 나타내도록 유전자적으로 또는 구조적으로 변경될 수 있다.
IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포의 표면 상의 Fc 수용체(FcgR)에 결합하여, 표적화된 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적화된 세포를 사멸시킨다. 본 명세서에 기재된 항체는, 상이한 이펙터 기능들을 달성하도록 Fc 서열이 변형되어 있는 변형된 버전을 포함한, IgG 동종형들 중 임의의 것과 조합된 가변 도메인의 기재된 특징을 갖는 항체를 포함한다.
치료적 항체의 많은 응용에 있어서, Fc-매개 이펙터 기능은 작용 기전의 일부가 아니다. 이들 Fc-매개 이펙터 기능은 탈기전 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 조작하여 FcgR 또는 보체 인자에 대한 그의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcgR(FcgRI, FcgRIIa, FcgRIIIa 및 FcgRIIIb) 및 억제성 FcgR(FcgRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치된 잔기에 의존한다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성들 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) Fcg RI, Fcg RIIa, Fcg RIIb, Fcg RIIIb 및/또는 Fcg RIIIa에 대한 감소된 친화성; (c) FcgRI에 대한 감소된 친화성; (d) FcgRIIa에 대한 감소된 친화성; (e) FcgRIIb에 대한 감소된 친화성; (f) Fcg RIIIb에 대한 감소된 친화성; 또는 (g) FcgRIIIa에 대한 감소된 친화성.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 동종형이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다. 항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 이의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, 및/또는 K409R 치환(들)을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 이의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환을 함유한다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편 특이성은 CDR의 아미노산 서열, 및 배열에 의해 대체로 결정된다. 따라서, 하나의 동종형의 CDR은 항원 특이성을 변경시키지 않고서 다른 동종형으로 전달될 수 있다. 대안적으로, 하이브리도마가 항원 특이성을 변경시키지 않고서 하나의 항체 동종형을 생성하는 것으로부터 다른 항체 동종형으로 전환(동종형 전환)되게 하기 위한 기법이 확립되어 왔다. 따라서, 그러한 항체 동종형들은 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 범주 내에 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 키메라 항체 또는 항원-결합 단편이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "키메라"는 비인간 포유동물, 설치류, 또는 파충류의 항체 아미노산 서열로부터 유래되는 적어도 하나의 가변 도메인의 적어도 일부분을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하며, 한편 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 나머지 부분은 인간으로부터 유래된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 인간화 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래되는 최소한의 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)일 수 있다. 대부분, 인간화 항체는, 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 결합능(capacity)을 갖는 비인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 그리고 전형적으로는 2개의, 실질적으로 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. "인간화" 항체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 부가에 의해 비인간 종으로부터 유래되는 항체의 서열과 상이한 서열을 가지며, 이에 따라 인간화 항체는, 그것이 인간 대상체에게 투여될 때, 비인간 종 항체와 비교하여 면역 반응을 유도할 가능성이 더 적고/적거나, 덜 심각한 면역 반응을 유도한다. 일 실시 형태에서, 비인간 종 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 및 불변 도메인 내의 소정 아미노산을 돌연변이시켜 인간화 항체를 생성한다. 다른 실시 형태에서, 인간 항체로부터의 불변 도메인(들)이 비인간 종의 가변 도메인(들)에 융합된다. 다른 실시 형태에서, 비인간 항체의 하나 이상의 CDR 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 그것이 인간 대상체에게 투여될 때 비인간 항체의 가능성이 높은 면역원성을 감소시키도록 변경되며, 여기서 변경된 아미노산 잔기는 항체의 그의 항원에 대한 면역특이적 결합에 중요하지 않거나, 또는 만들어진 아미노산 서열에 대한 변화는 보존적 변화여서, 이에 따라 항원에 대한 인간화 항체의 결합이 항원에 대한 비인간 항체의 결합보다 유의하게 더 나빠지지 않게 된다.
소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 인간에서 실질적으로 비면역원성이다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 표적에 대해 인간화 항체의 유래가 되는 다른 종으로부터의 항체와 실질적으로 동일한 친화도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 당업계에 알려진 방법에 의한 항체의 변형은 전형적으로, 표적에 대한 증가된 결합 친화도를 달성하고/하거나 수용자에서의 항체의 면역원성을 감소시키도록 설계된다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 동종 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위하여 글리코실화 부위를 제거하도록 변형된다. 소정의 그러한 실시 형태에서, 그러한 기법은 전형적으로 외래 잔기의 수를 감소시킴으로써 항체 면역원성을 감소시키지만, 항체의 반복된 투여 후에 항-이디오타입(anti-idiotypic) 및 항-알로타입(anti-allotypic) 반응을 방지하지 못한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간을 포함할 수 있다. 인간 항체는, Ig 유전자가 결실되거나 불활성화되었고 인간 Ig 유전자로 대체된 설치류에서 제조될 수 있다. 큰 인간 Ig 단편은 큰 가변 유전자 다양성뿐만 아니라 항체 생성 및 발현의 적절한 조절을 보존할 수 있다. 항체 다양화 및 선택을 위하여 그리고 인간 단백질에 대한 면역학적 관용의 결여를 위하여 마우스 기전을 이용함으로써, 이들 마우스주(mouse strain)에서 재현된 인간 항체 레퍼토리는 인간 항원을 포함하여 임의의 관심 항원에 대해 고친화성 완전 인간 항체를 생성할 수 있다. 인간 항체는 뮤린 또는 래트 가변 및/또는 불변 영역을 갖는 항체와 관련된 문제들 중 일부를 피한다. 그러한 뮤린 또는 래트 유래 단백질의 존재는 항체의 급속한 제거를 초래할 수 있거나, 환자에 의한 항체에 대한 면역 반응의 생성을 초래할 수 있다. 뮤린 또는 래트 유래 항체의 이용을 피하기 위하여, 설치류, 다른 포유류 또는 동물이 완전 인간 항체를 생성하도록 설치류, 다른 포유류 또는 동물 내로의 기능성 인간 항체 유전자좌의 도입을 통해 완전 인간 항체가 생성될 수 있다. 인간화 항체는, 처음에는 인간이 아닌 항체 아미노산 서열을 함유하기 시작하지만 이들 비인간 항체 아미노산 서열들 중 적어도 일부가 인간 항체 서열로 대체된 항체이다. 이것은 인간 항체와 대조적인데, 여기서는 항체가 인간이 가진 유전자에 의해 인코딩된다(또는 인코딩될 수 있다).
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 항원-결합 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 Fab 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 또는 단일쇄 Fv(scFv) 분자를 포함한다. 어구 "항체 또는 이의 항원-결합 단편"은 주어진 항원-결합 단편이 이 어구에 언급된 항체의 하나 이상의 아미노산 절편을 포함함을 나타내기 위해 사용될 수 있다. 항원-결합 단편은 임의의 알려진 기법, 예컨대 효소적 절단, 펩티드 합성, 및 재조합 기법에 의해 제공된 것들을 포함한다. 일부 항원-결합 단편은 모 항체 분자의 항원-결합 특이성을 보유하는 온전한 항체의 일부분으로 구성된다. 예를 들어, 항원-결합 단편은 특정 항원과 결합하는 것으로 알려진 항체의 적어도 하나의 가변 영역(중쇄 또는 경쇄 가변 영역) 또는 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 적합한 항원-결합 단편의 예에는, 제한 없이, 다이아바디 및 단일쇄 분자뿐만 아니라, Fab, F(ab')2, Fc, Fabc, 및 Fv 분자, 단일쇄(Sc) 항체, 개별 항체 경쇄, 개별 항체 중쇄, 항체 사슬 또는 CDR과 다른 단백질 사이의 키메라 융합, 중쇄 단량체 또는 이량체, 경쇄 단량체 또는 이량체, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 이루어진 이량체, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편, 또는 국제 특허 출원 공개 WO2007059782호에 기재된 바와 같은 1가 항체, 힌지 영역에서 이황화물 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편, VH 및 CH1 도메인으로 본질적으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 본질적으로 이루어진 Fv 단편, dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 341, 544-546 (1989)]) - 이는 VH 도메인으로 본질적으로 이루어지고, 도메인 항체로도 불림(문헌[Holt et al; Trends Biotechnol. 2003 Nov.; 21(11):484-90]) -; 단리된 상보성 결정 영역(CDR) 등이 포함된다. 항원-결합 단편은 재조합적으로 생성되거나 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄, 및 하나의 중쇄의 CH1 및 가변 영역을 포함한다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 이황화물 결합을 형성할 수 없다.
"Fab' 단편"은 하나의 경쇄, 및 VH 도메인 및 CH1 도메인 및 또한 CH1 도메인과 CH2 도메인 사이의 영역을 함유하는 하나의 중쇄의 일부분을 포함하며, 이에 따라 2개의 Fab' 단편의 2개의 중쇄 사이에 사슬간 이황화물 결합이 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있다.
"F(ab')2 단편"은 2개의 경쇄, 및 CH1 도메인과 CH2 도메인 사이에 불변 영역의 일부분을 함유하는 2개의 중쇄를 함유하며, 이에 따라 2개의 중쇄 사이에 사슬간 이황화물 결합이 형성된다.
따라서, F(ab')2 단편은 2개의 중쇄 사이의 이황화물 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab'단편으로 구성된다.
"Fv 영역"은 중쇄 및 경쇄 둘 모두로부터의 가변 영역을 포함하지만 불변 영역이 결여되어 있다.
"단일쇄 항체"는 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역이 가요성 링커에 의해 연결되어 단일 폴리펩티드 사슬 - 이는 항원-결합 영역을 형성함 - 을 형성하고 있는 Fv 분자이다.
가스데르민 D에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 또한 개시된다. 본 명세서에 제공된 가변 도메인 절편을 인코딩할 수 있는 단리된 폴리뉴클레오티드는 동일한 또는 상이한 벡터 상에 포함되어 항체 또는 항원-결합 단편을 생성할 수 있다.
재조합 항원-결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 폴리뉴클레오티드(및 이것이 인코딩하는 펩티드)는 리더(leader) 서열을 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 리더 서열이 사용될 수 있다. 리더 서열은 제한 부위 또는 번역 개시 부위를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 생물학적 특성(예를 들어, 결합 친화성 또는 면역 이펙터 활성)을 보유하는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 포함한다. 본 발명과 관련하여, 달리 지시되지 않는 한, 돌연변이를 기재하기 위해 하기의 표기법이 사용된다: i) 주어진 위치에서의 아미노산의 치환은, 예를 들어 L234A로 표기되는데, 이는 위치 234에서의 류신의 알라닌으로의 치환을 의미하고; ii) 특정 변이체의 경우, 임의의 아미노산 잔기를 나타내기 위해 코드 Xaa 및 X를 포함한, 특정 3-문자 또는 1-문자 코드가 사용된다. 따라서, 위치 234에서의 알라닌 대신 류신의 치환은 L234A로 표기되거나, 또는 위치 234에서의 임의의 아미노산 잔기 대신 류신의 치환은 L234X로 표기된다. 위치 234에서 류신이 결실된 경우에, 그것은 L234*로 나타낸다. 당업자는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 생성할 수 있다.
이들 변이체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하나 이상의 아미노산 잔기가 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 치환된 변이체, (b) 하나 이상의 아미노산이 폴리펩티드에 부가되거나 그로부터 결실된 변이체, (c) 하나 이상의 아미노산이 치환기를 포함하는 변이체, 및 (d) 폴리펩티드가, 그 폴리펩티드에 유용한 특성을 부여할 수 있는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 융합 파트너, 단백질 태그 또는 다른 화학적 모이어티(moiety), 예컨대 항체에 대한 에피토프, 폴리히스티딘 서열, 비오틴 모이어티 등과 융합된 변이체. 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은, 하나의 종으로부터의 아미노산 잔기가, 보존 또는 비보존된 위치에서, 다른 종에서의 상응하는 잔기 대신 치환된 변이체를 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 비보존된 위치에서의 아미노산 잔기가 보존 또는 비보존된 잔기로 치환된다. 유전자적(결실, 돌연변이 등), 화학적, 및 효소적 기법을 포함한 이들 변이체를 얻기 위한 기법은 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 대한 결합 친화도가 약 5x10-7 M 미만, 바람직하게는 약 5x10-8 M 미만의 해리 상수(KD)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 가스데르민 D에 대한 결합 친화도가 약 5x10-7 M 미만, 바람직하게는 약 5x10-8 M 미만의 해리 상수(KD)를 포함한다. 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 친화도는 당업계에 알려진 다양한 방법, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 또는 ELISA-기반 방법에 의해 결정될 수 있다. SPR에 의해 친화도를 측정하기 위한 검정은 BIAcore 3000 기계를 사용하여 수행되는 검정을 포함하는데, 여기서 검정은 실온에서(예를 들어, 25℃ 또는 그 부근에서) 수행되며, 가스데르민 D에 결합할 수 있는 항체를 항-Fc 항체(예를 들어, 염소 항-인간 IgG Fc 특이적 항체, Jackson ImmunoResearch laboratories 제품 번호 109-005-098)에 의해 BIAcore 센서 칩 상에 약 75 RU의 수준까지 포획한 후, 40 μl/min의 유량으로 회합 및 해리 데이터의 수집을 행한다. 항체 또는 항체 단편과 관련하여 사용될 때, "특이적 결합" 또는 "면역특이적 결합" 또는 이들의 파생어는, 혼합된 분자 집단을 함유하는 샘플 중의 다른 분자에 우선적으로 결합하지 않고서, 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자의 단편에 의해 인코딩된 도메인을 통한 관심 단백질의 하나 이상의 에피토프에 대한 결합을 나타낸다. 전형적으로, 항체는 표면 플라즈몬 공명 검정 또는 세포 결합 검정에 의해 측정될 때 약 1x10-8 M 미만의 KD로 동종 항원에 결합한다. "[항원]-특이적" 항체(예를 들어, 가스데르민 D-특이적 항체)와 같은 어구는 언급된 항체가 언급된 항원에 특이적으로 결합함을 나타내고자 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "kd"(sec-1)는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. 상기 값은 koff 값으로 지칭되기도 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "ka"(M-1 sec-1)는 특정 항체-항원 상호작용의 회합 속도 상수를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "KD"(M)는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "KA"(M-1)는 특정 항체-항원 상호작용의 회합 평형 상수를 지칭하고, ka를 kd로 나눔으로써 얻어진다.
둘 이상의 항체 또는 항원-결합 단편과 관련하여 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "~와 경쟁한다" 또는 "~와 교차-경쟁한다"는 둘 이상의 항체 또는 항원-결합 단편이 가스데르민 D에 대한 결합을 위하여 경쟁함을 나타낸다. 문맥에 의해 달리 정의되거나 부인되지 않는 한, 본 명세서에서 사용될 때 용어 "~와 경쟁한다" 또는 "~와 교차-경쟁한다"는 또한 그러한 쌍의 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고자 한다.
본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 따라서, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 발현 벡터는 조절 서열(예를 들어, 프로모터, 인핸서), 선택 마커, 및 폴리아데닐화 신호와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 서열을 함유할 수 있다. 매우 다양한 숙주 세포를 형질전환시키기 위한 벡터는 잘 알려져 있으며, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 배큘로바이러스, 박미드(bacmid), 세균 인공 염색체(BAC), 효모 인공 염색체(YAC)뿐만 아니라, 다른 세균, 효모 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 범주 내의 재조합 발현 벡터는 적합한 조절 요소에 작동가능하게 연결될 수 있는 적어도 하나의 재조합 단백질을 인코딩하는 합성, 게놈, 또는 cDNA-유래 핵산 단편을 포함한다. 그러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 인코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터, 특히 포유류 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터가 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체- 또는 항원-결합 단편-코딩 서열은 강력한 구성적 프로모터, 예컨대 하기 유전자에 대한 프로모터의 제어 하에 놓여 있다: 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 및 기타. 게다가, 많은 바이러스성 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 실시 형태와 함께 사용하기에 적합하다. 그러한 바이러스성 프로모터는, 제한 없이, 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus, EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus, RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 일 실시 형태에서, 가스데르민 D-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 코딩 서열은 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터, 독시사이클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE)를 함유하는 프로모터, 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 신테타제, Mx 유전자, ADAR1 등의 제어 하에 놓여 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 하나 이상의 내부 리보솜 침입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 상류 또는 하류에 있을 수 있다. 벡터 성분들은 (즉, ORF들 사이에의 "스페이서" 뉴클레오티드의 도입에 의해) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
벡터는 선택 마커를 포함할 수 있으며, 선택 마커는 당업계에 잘 알려져 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커, 예를 들어 항생제 저항성 유전자(예를 들어, 네오마이신 저항성 유전자, 하이그로마이신 저항성 유전자, 카나마이신 저항성 유전자, 테트라사이클린 저항성 유전자, 페니실린 저항성 유전자), 글루타메이트 신타제 유전자, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK, HSV-TK 유도체, 또는 6-메틸푸린 선택을 위한 세균성 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열의 상류 또는 하류에 있을 수 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 다양한 세포를 기재된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 유전자로 형질전환시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터는 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편-생성 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 다른 태양은 가스데르민 D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재되고 예시된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다.
세포 내로의 외래 유전자의 도입을 위한 다수의 기법이 당업계에 알려져 있고, 본 명세서에 기재되고 예시된 다양한 실시 형태에 따라, 기재된 방법을 수행하려는 목적을 위하여 재조합 세포를 작제하는 데 사용될 수 있다. 사용되는 기법은 숙주 세포로의 이종 유전자 서열의 안정한 전달을 제공하여, 이종 유전자 서열이 세포의 자손에 의해 상속가능하고 발현가능하도록, 그리고 수령 세포의 필요한 발달 및 생리학적 기능이 파괴되지 않도록 해야 한다. 사용될 수 있는 기법은 염색체 전달(예를 들어, 세포 융합, 염색체 매개 유전자 전달, 마이크로 세포 매개 유전자 전달), 물리적 방법(예를 들어, 형질감염, 스페로플라스트 융합, 현미주사(microinjection), 전기천공, 리포좀 담체), 바이러스성 벡터 전달(예를 들어, 재조합 DNA 바이러스, 재조합 RNA 바이러스) 등(문헌[Cline, 29 Pharmac. Ther. 69-92 (1985)]에 기재됨)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 인산칼슘 침전 및 세균 프로토플라스트(bacterial protoplast)와 포유류 세포의 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-유도 융합이 또한 세포를 형질전환시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 본 명세서에 기재된 가스데르민 D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 발현에 사용하기에 적합한 세포는 바람직하게는 진핵 세포, 더 바람직하게는 식물, 설치류, 또는 인간 기원의 세포, 예를 들어, 그러나 제한 없이, 특히 NSO, CHO, CHOK1, perC.6, Tk-ts13, BHK, HEK293 세포, COS-7, T98G, CV-1/EBNA, L 세포, C127, 3T3, HeLa, NS1, Sp2/0 골수종 세포, 및 BHK 세포주이다. 게다가, 항체의 발현은 하이브리도마 세포를 사용하여 달성될 수 있다. 하이브리도마를 생성하기 위한 방법이 당업계에 잘 확립되어 있다.
본 명세서에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 재조합 발현을 위해 선택되거나 스크리닝될 수 있다. 재조합-양성 세포는 원하는 표현형, 예컨대 고수준 발현, 향상된 성장 특성, 또는, 예를 들어 단백질 변형 또는 변경된 번역 후 변형으로 인해 원하는 생화학적 특성을 갖는 단백질을 산출하는 능력을 나타내는 하위클론을 위해 증폭 및 스크리닝된다. 이들 표현형은 주어진 하위클론의 고유 특성에 기인하거나 돌연변이에 기인할 수 있다. 돌연변이는 화학물질, UV-파장 광, 방사선, 바이러스, 삽입 돌연변이원, DNA 불일치 수복의 억제, 또는 그러한 방법들의 조합의 사용을 통해 달성될 수 있다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 생성되도록 하는 조건 하에서 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
가스데르민 D 특이적 다중특이성 항체
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 다중특이성 항체이다. 본 명세서에 기재된 항-가스데르민 D 항체의 결합 도메인은 표면 상에 가스데르민 D를 발현하는 세포를 인식한다. 특정 하위세트의 세포들에 대한 더 특이적인 표적화가 가스데르민 D 및 다른 표적에 결합하는 이중특이성 분자, 예컨대 항체 또는 항체 단편을 제조함으로써 달성될 수 있다. 게다가, 가스데르민 D에 대한 더 특이적인 표적화는 다수의 에피토프를 인식하는 분자를 사용하여 가스데르민 D의 다수의 에피토프에 결합함으로써 달성될 수 있다. 이는 가스데르민 D에 결합하는 제1 영역 및 추가의 항원 또는 상이한 에피토프 영역에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 분자를 제조함으로써 달성된다. 항원-결합 영역은 표적의 특이적 인식을 가능하게 하는 임의의 형태를 취할 수 있으며, 예를 들어 결합 영역은 중쇄 가변 도메인, Fv(중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인의 조합), 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 항원-결합 단백질일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 따라서, 가스데르민 D 및 다른 항원에 각각 결합하는 2개의 상이한 항원-결합 영역을 포함하는 이중특이성 분자가 제공된다. 따라서, 가스데르민 D의 상이한 에피토프들에 결합하는 2개의 상이한 항원-결합 영역을 포함하는 이중특이성 분자가 제공된다.
이중특이성 또는 이중기능성 항체는 전형적으로 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이성 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편들의 연결을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Songsivilai et al., Clin. Exp. Immunol., 79: 315-321 (1990)]; 문헌[Kostelny et al., J. Immunol., 148:1547-1553 (1992)]을 참조한다.
상이한 포맷의 이중특이성 항체들이 기재되어 왔으며, 최근에는 문헌[Chames and Baty (2009) Curr Opin Drug Disc Dev 12: 276]에 의해 검토되어 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 다이아바디, 크로스-바디(cross-body), 또는 본 발명에 기재된 것들로서의 제어된 Fab 아암 교환을 통해 획득된 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 이종이량체화를 강제로 일으키는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자 - 여기서는, 분자의 2개의 측 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유함 -; IgG 융합 분자 - 여기서는, 전장 IgG 항체가 추가 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합됨 -; Fc 융합 분자 - 여기서는, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변-도메인, Fc-영역 또는 이들의 일부에 융합됨 -; Fab 융합 분자 - 여기서는, 상이한 Fab-단편들이 함께 융합됨 -; ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서는, 상이한 단일쇄 Fv 분자들 또는 상이한 다이아바디들 또는 상이한 중쇄 항체들(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)이 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합됨 - 를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG-유사 분자는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적으로 일치된 항체(electrostatically-matched) (Amgen), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus) 및 DuoBody (Genmab A/S)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) Mab (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), IgG-유사 이중특이체 (InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체 (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine--China)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중-작용체(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock, DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(BITE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 전장 이중특이성 항체는, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체들 사이에서의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있는데, 이는 공발현을 사용하거나 또는 무세포 환경에서의 시험관내(in vitro)에서, 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써 행해진다. Fab 아암 교환 반응은 이황화-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프, 즉 가스데르민 D 상의 에피토프 및 다른 표적 분자 상의 에피토프에 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2006/028936호 참조)이 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
전술된 방법에 더하여, 본 발명의 이중특이성 항체는, 2개의 단일특이성 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키고, 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이성 동종이량체성 항체로부터 이중특이성 이종이량체성 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있는데, 이는 국제 특허 출원 공개 W02011/131746호에 기재된 방법에 따른 것이다. 이들 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항-가스데르민 D 항체) 및 제2 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 상이한 항원을 표적화하는 항체)는 CH3 도메인에서 이종이량체 안정성을 촉진하는 소정의 치환을 갖도록 조작되며; 이들 항체는 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거칠 수 있게 하기에 충분한 환원성 조건 하에서 함께 인큐베이션되고; 그럼으로써 Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 비환원성 조건으로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 바람직하게는 환원제는 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
기재된 가스데르민 D 다중특이성 항체에 더하여, 기재된 가스데르민 D 다중특이성 항체를 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, 마찬가지로 가스데르민 D 다중특이성 항체를 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이들 세포는 포유류 세포(예컨대, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포, 또는 세균 세포(예컨대, E. 콜라이(E. coli))일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다.
가스데르민 D 특이적 나노바디(VHH) 도메인
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 VHH 도메인(나노바디)이다. 낙타류의 혈청에서 1993에 특유한 부류의 '중쇄 단독' 항체가 발견되었다. 본 명세서에서 '단일 도메인 항체' 또는 나노바디로도 기재된, 본 명세서에서 VHH 도메인으로 지칭되는, 이들 항체의 가변 도메인은 단일 단량체성 가변 항체 도메인으로 이루어진다. VHH는 전장 항체의 친화성 및 항원-결합 특이성을 유지할 수 있는 작은 천연 유래 항원-결합 기능성 단편(약 15 kDa)이다.
VHH 유전자는 클란(clan) III의 인간 VH3 패밀리와 고도로 상동성이다. 통상적인 인간 항체 VH와 비교하여, 몇몇 중요한 아미노산이 나노바디의 프레임워크 2 영역(FR2) 및 상보성 결정 영역(CDR)에서 치환된다. FR2 영역 내의 고도로 보존된 소수성 아미노산(Val47, Gly49, Leu50, Trp52)이 친수성 아미노산(Phe47, Glu49, Arg50, Gly52)에 의해 대체되어, 나노바디의 전체 구조가 더 친수성이 되게 하며, 이는 높은 안정성, 용해도 및 응집에 대한 저항성에 기여한다. VHH의 특유의 특징들 중 하나는 통상적인 단일클론 항체(mAb)와 같은 대분자에 의해 접근하기 어려운 위치에 있는 항원 에피토프를 표적화하는 이들의 능력이다. 게다가, VHH는 또한 이중특이성 및 다중특이성 항체의 생성에 매우 적합하다(문헌[Arbabi-Ghahroudi et al., (2017) Frontiers in Immunology Volume B: 1589]). 나노바디는 고온 및 극한의 pH에 대해 이례적인 저항성을 갖는다. 증가된 친수성 및 단일-폴리펩티드 성질로 인해, 나노바디는 세균, 효모, 포유류 세포 또는 식물 세포에서 비교적 효율적으로 생성되어, 합리적인 비용으로 대규모 생성을 가능하게 할 수 있다. VHH 도메인의 면역원성은 또한 인간화에 의해 최소화될 수 있다.
인간 혈청 알부민에 대한 직접 융합 및 페길화(PEGylation)가 또한 이들 분자의 혈청 반감기를 연장할 수 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 VHH 도메인은 이러한 도메인이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속(genus)에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 가스데르민 D 특이적 IgNAR 가변 도메인( vNAR )
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 IgNAR 가변 도메인(vNAR)이다.
연골 어류는 면역글로불린 신규 항원 수용체(면역글로불린 novel antigen receptor) 또는 IgNAR로 명명되는 특유한 부류의 중쇄 단독 항체를 갖는다. IgNAR은 이황화물 결합에 의해 연결된 2개의 중쇄의 동종이량체이고, 경쇄가 결여되어 있다. 각각의 중쇄는 5개의 불변 도메인 및 1개의 가변 도메인(vNAR)을 함유한다. 약 11 내지 15 kDa에서, 이들 단일 도메인 구조는 가장 작은 천연 발생 IgG-유사 단백질이고, 긴 연장된 CDR3을 갖는다. 이들 분자는 통상적인 항체 분자에 비해 이점을 갖는다: 이들은 더 높은 열안정성 및 화학적 안정성을 나타내고, 표적 분자에 결합하도록 그들의 CDR에서 조작될 수 있다(문헌[Cabanillas-Bernal et al., (2019) PLoS ONE 14(5): e0213394]). 재조합 항체의 신속한 생성을 가능하게 하는 vNAR의 합성 라이브러리가 구축되어 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 VNAR 도메인은 이러한 도메인이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 가변 림프구 수용체(VLR) 도메인
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 가변 림프구 수용체(VLR) 도메인이다. 무악 척추동물, 예컨대 칠성장어 및 먹장어에서의 적응 면역 시스템은 가변 림프구 수용체(VLR)에 기초하는 것으로 밝혀져 있다(문헌[Sang-Chul et al., PNAS (2012) 109 (9) 3299-3304]). VLR은 매우 다양한 류신-풍부 반복(LRR) 모듈로 이루어지며, 반복하는 20 내지 29개의 잔기 LRR 모듈들의 조립을 특징으로 한다. 각각의 LRR 모듈은 β 가닥-α-나선 구조로 이루어지며, 이 구조는 솔레노이드 접힘(solenoid fold)을 형성한다. 이 VLR 스캐폴드는 표적 분자에 결합하도록 돌연변이 유발될 수 있는 결합 스캐폴드로 발전되어 왔다. 가변 림프구 수용체(VLR)는 N-말단 캡(LRRNT), 제1 LRR(LRR1), 최대 9개의 24-잔기 가변 LRR(LRRV), 말단 LRRV(LRRVe), 연결 펩티드(CP), 및 C-말단 캡(LRRCT)으로 구성된다. LRRV 도메인의 서열은 상이한 표적 분자들에 대한 결합을 위하여 선택 잔기의 랜덤화 및 돌연변이생성을 가능하게 한다. VLR 도메인의 모듈 구조는 LRRV 도메인들의 상이한 조합을 가능하게 하며, 이는, 돌연변이생성에 더하여, 표적 분자에 대한 특이적 결합제의 선택을 위한 VLR 분자의 잠재적인 다양성을 추가로 증가시킨다. 리피바디(repebody)는 인터날린-B 캡 구조를 사용하여 LRR 주형 스캐폴드의 N-말단 도메인에서 재설계된 VLR의 변이체이다. 이러한 변형은 세균에서의 높은 가용성 발현을 가능하게 한다. 리피바디 스캐폴드는 LRRV 모듈의 수의 변동을 가능하게 하며, 이는 결국 표적 상호작용 표면의 크기의 변동을 가능하게 한다. LRRV 모듈은 리피바디 접힘의 전체 구조의 파괴 없이, 부가 또는 결실될 수 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 VLR 도메인은 이러한 도메인이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 피브로넥틴 III형 도메인
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 피브로넥틴 III형 도메인(FN3)이다. 용어 피브로넥틴 II형(FN3) 도메인은 피브로넥틴, 테나신, 세포내 세포골격 단백질, 사이토카인 수용체 및 원핵생물 효소를 포함하는 단백질에서 자주 나타나는 도메인을 지칭한다. 인간 피브로넥틴의 10번째 III형 도메인(10FN3)은 어떠한 이황화물 결합도 포함하지 않으며, 통상적인 VH 도메인과 유사한 7개의 β-가닥으로 구성된 단량체성 구조를 가지며, 6개의 표면 노출된 루프를 함유한다. FN3의 BC-, DE- 및 FG-루프는 항체 CDR과 구조적으로 유사하다. 이들 표면 노출된 루프, 또는 각각의 루프 내의 선택된 잔기들은, 가스데르민 D에 결합하는 신규한 분자들을 선택하는 데 사용될 수 있는 피브로넥틴 III형(FN3) 도메인의 라이브러리를 작제하기 위하여 무작위화될 수 있다.
일부 실시 형태에서, FN3 도메인 분자는 (미국 특허 제8,278,419호에 기재된 바와 같은 텐콘 FN3 도메인으로부터의, 미국 특허 제8,569,227호에 기재된 바와 같은 안정화된 텐콘 FN3 도메인으로부터의, 또는 미국 특허 제9,200,273호에 기재된 바와 같은 대체 결합 표면을 갖는 텐콘 분자로부터의) 인간 테나신 유래의 FN3 도메인, 또는 다른 피브로넥틴 도메인 유래의 FN3 도메인(미국 특허 제8,293,482호에 기재된 바와 같은 컨센서스 FN3 도메인)의 컨센서스 서열에 기반할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 예시적인 FN3 도메인은 인간 테나신 C에 존재하는 15개의 상이한 FN3 도메인, 인간 피브로넥틴(FN)에 존재하는 15개의 상이한 FN3 도메인, 및 예를 들어 미국 특허 출원 공개 제2010/0216708호에 기재된 바와 같은 비천연 합성 FN3 도메인이다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 피브로넥틴 III형 도메인은 이러한 도메인이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 센티린
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 센티린이다.
센티린은 컨센서스 테나신 FN3 프레임워크(텐콘)로부터 유래되는 FN3 도메인 유형 단백질로서, 이는 표적 분자에 대한 결합을 개선하기 위하여, FN3 도메인의 C-가닥, F-가닥, CD-루프 및 FG-루프의 특이적으로 랜덤화된 부분들을 갖는다. 센티린은 FN3 도메인의 다른 영역들이 단백질-단백질 상호작용에 관여한다는 확인을 통해 CDR-유사 루프를 넘어서 FN3 라이브러리 설계를 확장시킨다(문헌[Diem et al., (2014) Protein Engineering, Design and Selection 27(10): 419-429]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 센티린은 이러한 도메인이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 크링글 도메인
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 크링글 도메인-함유 단백질이다. 크링글 도메인은, 3개의 이황화물 결합 및 2개의 β-시트를 함유하는 강성 코어 구조를 가지며, 78 내지 82개의 아미노산으로 구성된다. 크링글 도메인 구조를 기반으로 하는 단백질 스캐폴드 라이브러리를 작제하는 것이 가능한데, 여기서는 루프 구조의 영역이 표적 분자에 특이적으로 결합하는 아미노산 서열들의 조합으로 돌연변이 유발되며, 이는 미국 특허 출원 공개 제20120021993호에 기재된 바와 같다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 크링글 도메인은 이러한 도메인이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin)
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin)이다. DARPin은 약 17 kDa의 분자량을 갖는 작은 펩티드이다. DARPin은 천연 안키린 반복 단백질로부터 유래된다(문헌[Stumpp et al. (2008) Drug Discov. Today 13 (15-16):695-701]). 33개의 아미노산 잔기의 안키린 반복 모듈은 β-턴(turn)을 포함하고, 이어서 2개의 역평행 α-나선이 뒤따르고, 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. DARPin은 다수의 랜덤화된 안키린 반복 모듈 단위를 포함하는 반복적 구조 모듈들의 앙상블(ensemble)이다. DARPin은 큰 잠재적인 표적 상호작용 표면을 갖는 안정한 단백질 프레임워크를 형성한다. DARPin 분자의 크기는 얼마나 많은 안키린 반복 모듈 단위가 단백질 내로 도입되는지에 따라 조정될 수 있다. DARPin은 세균에서 잘 발현되고, 이들의 안정성은 단백질 내로 도입된 안키린 반복 모듈의 수에 좌우된다. DARPin들의 모듈 조립으로 인해, 단일 DARPin 분자는 동일한 표적 분자 상의 상이한 에피토프들로, 또는 상이한 표적들로 유도될 수 있다. 단백질 스캐폴드로서, DARPin은, 분자의 구조를 불안정화시키지 않으면서, 측쇄 대체를 참아낼 수 있는 2차 구조 요소의 영역에서 돌연변이될 수 있다. 대안적으로, '루프' DARPin이 DARPin 코어 단위 상에 그래프팅될 수 있는 연속적인 연장된 루프를 도입시키는데, 이는 잠재적인 표적 분자의 범위를 확대시키고, 스캐폴드 코어의 안정성을 유지한다(문헌[Reverdatto et al., Curr Top Med Chem (2015) 15(2)]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 DARPin은 이러한 DARPin이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 시스틴-노트 미니단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 시스틴-노트 미니단백질이다.
노틴(knottin)으로도 알려진 시스틴-노트 미니단백질은 천연 발생 시스틴-풍부 펩티드의 부류이다. 노틴은 적어도 3개의 이황화물 결합에 의해 안정화된 역평행 β-가닥의 코어를 특징으로 하는 구조 패밀리(전형적으로 25 내지 50개의 아미노산 길이)이다. 특징적인 시스틴-노트 모티프에서, 제1 시스테인 잔기와 제4 시스테인 잔기 및 제2 시스테인 잔기와 제5 시스테인 잔기는 이황화물 결합을 형성한다. 제3 시스테인 잔기와 제6 시스테인 잔기 사이에 형성된 이황화물 결합은 이들 처음 2개의 이황화물을 통과하여, 매크로사이클릭 노트를 생성한다. 노틴은, 아미노산 돌연변이를 참아낼 수 있고 표적 분자에 결합하도록 조작될 수 있는 가변 길이의 루프 영역을 갖는다. 조작된 루프는 노틴 펩티드의 기존 루프 내에 아미노산 치환, 삽입, 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 노틴 펩티드 스캐폴드는 원하는 표적 분자 결합 특성을 갖는 조작된 루프로의 천연 루프의 대체를 참아낼 수 있다. 노틴 구조 스캐폴드는 탁월한 구조적 안정성 및 열안정성을 갖는다. 노틴 펩티드를 위한 스캐폴드는 온라인 KNOTTIN 데이터베이스에 기재된 펩티드일 수 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 시스테인-노트 미니단백질은 이러한 미니단백질이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 Sso7d 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 Sso7d 유래 단백질이다.
Sso7d는, 시스테인 잔기가 결여되어 있고 열적으로 안정한 초호열성(hyperthermophilic) 고세균 술폴로부스 솔파타리쿠스(Sulfolobus solfataricus)로부터 유래되는 단백질이다. 이것은 약 7 kDa의 소분자이다. Sso7d는 DNA 결합 단백질이다. 이의 DNA-결합 표면은 다른 표적 분자에 결합하도록 조작되기 위해 돌연변이 유발될 수 있다. Sso7d 스캐폴드는 높은 열안정성, 화학적 안정성 및 pH 안정성을 나타내고, 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있다(문헌[Gera et al., (2011) J Mol Biol 409(4): 601-616]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 Sso7d 단백질은 이러한 미니단백질이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 아피바디
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 아피바디이다.
아피바디 분자는 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococus aureus)로부터 유래되는 단백질 A의 면역글로불린 G 결합 도메인(Z 도메인)의 구조에 기반한 스캐폴드 단백질을 이용한다(문헌[Nygren (2008) FEBS J. 275 (11):2668-2676]). 따라서, 이들은 약 6 kDa 크기의 작은 3-나선 번들 도메인 프레임워크에 기반한다. 이 단백질 스캐폴드의 사용에 대한 많은 이점이 존재한다. 아피바디는 다양한 숙주 세포에서의 생성에 적합할 수 있거나, 또는 그들의 작은 크기로 인해, 화학적으로 합성될 수 있다. 이들은 신속하게 접히고, 단백질 분해에 대해 저항성이 있으며, 어떠한 시스테인 잔기도 함유하지 않는다. 3개의 나선 번들은 다수의 도메인과 함께 중합될 수 있으며, 이는 분자의 결합력(avidity)을 증가시킬 수 있거나, 하나의 단백질 내의 다수의 상이한 에피토프들 또는 표적 분자들에 대한 특이성을 가능하게 할 수 있다. 이 스캐폴드는 단백질의 2차 구조 요소 상에서의 돌연변이생성을 가능하게 하며; 3개의 나선 번들 중 나선 1 및 나선 2의 표면 상에 13개 초과의 용매 접근가능한 잔기가 존재하고, 돌연변이생성은 단백질을 불안정화시키지 않는다. 이는 표적 분자에 대한 선택성을 스크리닝하기 위해 아피바디의 신규한 조합 라이브러리의 생성을 가능하게 한다(문헌[Reverdatto et al., Curr Top Med Chem (2015) 15(2)]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 아피바디는 이러한 아피바디가 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 특이적 아피머
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 아피머이다. 아피머(Affimer)는 등록 상표이고, 아피머 기술의 스캐폴드/폴리펩티드는 시스타틴 패밀리를 기반으로 한다(문헌[Tiede et al., eLife (2017) 6 e24903]). 애드히론(Adhiron) 스캐폴드는 원래 시스타틴 패밀리의 컨센서스 서열을 기반으로 하는 합성 단백질이고, 인간 스테핀 A를 기반으로 하는 조작된 스캐폴드와 구조적으로 근연되어 있다. 이들 시스타틴은 역평행 β-시트의 상부에 놓인 알파-나선의 공통 3차 구조를 공유한다. 4개의 역평행 β-시트를 연결하는 2개의 루프는 N-말단 서열과 함께, 표적 분자에 결합하도록 돌연변이 유발될 수 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 아피머는 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 안티칼린
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 안티칼린이다.
안티칼린은 리포칼린 패밀리로부터 유래되는 단백질이다(문헌[Skerra (2008) FEBS J. 275 (11):2677-2683]). 리포칼린은 원핵생물 및 진핵생물에서 널리 발견되는 작은(약 20 kDa, 150 내지 160개의 잔기), 종종 단량체성인 세포외 단백질이다. 리포칼린의 접힘 구조에서의 중심 요소는 원통형 β-주름형 시트 구조, 이른바 β-배럴이며, 이는 8개의 거의 원형으로 배열된 역평행 β-가닥으로 구성된다. β-배럴은 조밀한 아미노산 패킹에 의해서뿐만 아니라 루프 절편에 의해 한쪽 단부에서 폐쇄되어, 4개의 구조적으로 가변적인 루프와 연결된 컵형(cup-shaped) β-배럴 코어를 형성한다. 리포칼린의 결합 포켓은 β-배럴 코어 내의 인접한 잔기들과 함께 4개의 루프 펩티드에서 발생된다. 리포칼린은 β-배럴에서 고도의 구조적 유사성을 가지며, 4-루프 영역에서 광범위한 구조적 다양성을 나타낸다. 이러한 4-루프 영역은 항체 항원-결합 부위의 조직화와 유사하지만, 항체 CDR의 대체로 편평한 계면과 달리, 리포칼린은 깊은 리간드 포켓을 갖는다. 이러한 4-루프 영역은 미국 특허 출원 공개 제20160280747호에 기재된 바와 같이, 특이적 표적 분자에 결합하도록 돌연변이 유발될 수 있다. 선택을 위한 안티칼린 조합 라이브러리를 설계하기 위하여 루프당 적어도 16 내지 24개의 랜덤화된 잔기를 생성하는 것이 가능하다. 안티칼린은 용융 온도가 70 oC를 초과하면서 구조적으로 매우 안정하며, 이들은 루프 영역에서의 치환에 의해 영향을 받지 않는다. 이들은 글리코실화되지 않는데, 이는 이들을 효모 또는 세균에서의 발현에 적합하게 한다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 안티칼린은 이러한 안티칼린이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 아필린
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 아필린이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 아필린(Affilin)®(이전에 Scil Proteins GmbH로 알려져 있던 Navigo Proteins GmbH의 등록 상표)은 유비퀴틴 또는 γ-B 크리스탈린 뮤테인의 돌연변이 유발된 버전을 기반으로 하는 비-면역글로불린 유래 결합 단백질을 지칭한다(문헌[Ebersbach et al. (2007) J. Mol. Biol. 372 (1): 172-185]). γ-B 크리스탈린은, 주로 β-시트 구조인 2개의 동일한 도메인을 갖는다. 이와 비교하여, 유비퀴틴은 3.5개의 α-턴, 및 5개의 가닥형 β-시트로 이루어진다. γ-B 크리스탈린에서, β-시트는 표적 분자에 대한 잠재적인 결합 표면을 제공하고, 8개의 표면 잔기는 돌연변이 유발될 수 있다. 유비퀴틴 스캐폴드는 표적 결합을 위하여 β-시트 영역 내의 6개의 잔기를 이용할 수 있으며, 더 광범위한 랜덤화가 또한 α-턴에서 채택될 수 있다. 게다가, 유비퀴틴 분자들은 또한 헤드-투-테일 배향으로 이량체화될 수 있다. 아피바디는 pH 변화, 열 변성 및 고농도의 변성제에 대한 그들의 안정성을 특징으로 한다(문헌[Reverdatto et al., Curr Top Med Chem (2015) 15(2)]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 아필린은 이러한 아필린이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 아피틴
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 아피틴이다.
아피틴은 술폴로부스 아시도칼다리우스(Sulfolobus acidocaldarius)에서 발견되는, DNA 결합 단백질 Sac7d로부터 구조적으로 유래되는 단백질이다(문헌[Krehenbrink et al. (2008) J. Mol. Biol. 383 (5): 1058-1068]). Sac7d의 결합 표면의 아미노산을 돌연변이 유발함으로써 아피틴이 표적 분자에 선택적으로 결합할 수 있게 한다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 아피틴은 이러한 아피틴이 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 피노머
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 피노머이다.
피노머는 Src 티로신 키나제 Fyn SH3 도메인으로부터 구조적으로 유래되는 단백질이다(문헌[Grabulovski et al. (2007) J. Biol. Chem. 282 (5):3196-3204]). FynSH3 도메인은 PXXP 결합 모티프를 함유하는 프롤린 풍부 펩티드에 결합하고, 이의 서열은 인간, 마우스, 래트 및 긴팔원숭이 사이에서 완전히 보존된다. Fyn SH3은 2개의 역평행 β-시트로 구성되고, 다른 단백질과 상호작용하도록 위치된 2개의 가요성 루프를 함유한다. 이들 루프는 표적 분자에 선택적으로 결합하도록 돌연변이 유발될 수 있다. 단백질의 용해도 및 접힘 특성을 유의하게 감소시키지 않으면서, 각각의 루프 내의 최대 6개의 잔기가 변동될 수 있다. 피노머는 항원-결합 단백질로서 매력적인 스캐폴드인데, 그 이유는, 이들은 높은 양으로 세균에서 가용적으로 발현될 수 있고, 단량체성이며 용액 상태로 저장될 때 응집되지 않고, 시스테인 잔기가 결여되어 있고, (용융 온도가 70℃를 초과하면서) 열적으로 안정하고, 인간 기원이며 이에 따라 비면역원성이다(문헌[Reverdatto et al., Curr Top Med Chem (2015) 15(2)]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 피노머는 이러한 피노머가 속한 본 명세서에서 논의된 항원-결합 단백질의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 Fc 융합 단백질
일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 Fc 융합 단백질이다. Fc-기반 융합 단백질은 다른 펩티드에 직접 연결된 면역글로불린 Fc 도메인으로 구성된다. 융합 파트너는 임의의 다른 관심 단백질 분자일 수 있다. Fc-도메인에 대한 융합 단백질의 부착은 다수의 추가적인 유익한 생물학적 및 약리학적 특성을 제공한다. Fc 도메인의 존재는 분자의 혈장 반감기를 증가시키며, 이는 분자의 치료적 활성을 연장시킬 수 있다. 게다가, Fc 도메인은 융합 파트너와 독립적으로 접히고, 파트너 분자의 용해도 및 안정성을 개선할 수 있다. Fc 융합체는 12개의 융합 파트너를 함유하는 명확한 착물로 중합되도록 변형되어, 분자의 결합력 및 효력을 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 Fc 융합 단백질이며, 여기서 융합 파트너는 가스데르민 D에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 Fc 융합 단백질이며, 여기서 융합 파트너는 가스데르민 D에 결합하고, 융합 단백질은 가스데르민 D의 N-말단 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 도메인은 Fc 융합 단백질이며, 여기서 융합 파트너는 가스데르민 D에 결합하고, Fc 영역은 다량체성 가스데르민 D 기공을 차단한다. 당업자는 Fc 융합 단백질이 제조될 수 있으며, 여기서 융합 파트너는 상기에 논의된 임의의 항원-결합 단백질임을 이해할 것이다.
가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 압타머이다. 압타머는 비단백질성이며, 예를 들어 핵산이거나; 또는, 단백질성이며, 예를 들어 표적 분자에 결합하는 펩티드이다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 압타머를 제공하며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D를 중화시킨다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 압타머를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 활성의 억제이며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D의 활성을 중화시키고/시키거나; 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 기능의 억제이며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D의 기능을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 활성의 중화이고/이거나, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 기능의 중화이다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하는 세포외 억제제이다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 세포 표면 상의 가스데르민 D에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하고, 가스데르민 D에 결합되어 있지 않는 한 세포막을 가로지르지 않는다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 대분자이다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 > 2 kDa, > 3 kDa, > 4 kDa, >5 kDa, > 6 kDa, > 7 kDa, > 8 kDa, > 9 kDa 또는 > 10 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 본 발명의 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 본 발명의 압타머는 서열 번호 9에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 억제하며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 예컨대 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다. 일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 억제할 수 있으며, 예컨대 압타머는 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제하며, 예컨대 압타머는 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 중화시킨다.
일부 실시 형태에서, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도(예를 들어, 100 μl 중 50,000개의 세포 또는 65,000개의 세포)로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 구세계 원숭이 가스데르민 D 또는 신세계 원숭이 가스데르민 D와 교차반응한다. 그러한 교차반응성의 이점은 본 명세서에서 상기에 논의되어 있다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 비단백질성이다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 올리고뉴클레오티드, 펩티드, 또는 SOMamer이다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 지질과의 회합을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하여 기공의 형성을 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 올리고머화를 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하며, 그럼으로써 다량체성 기공을 형성하는 올리고머화를 방지하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 에피토프에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 에피토프에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 서열에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 서열에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 압타머는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D의 단리된 펩티드에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위의 단리된 펩티드에 결합하여 가스데르민 D 다량체성 기공을 억제하는 가스데르민 D 특이적 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공을 차단하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
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일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제할 수 있으며, 선택적으로, 압타머는, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정된다.
일부 실시 형태에서, 압타머는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하며, 예컨대 압타머는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하고, 압타머는 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하여 기공의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하고, 압타머는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 THP-1 세포 검정에서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시킬 수 있으며, 선택적으로, 압타머는 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000 내지 65,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었다.
가스데르민 D 특이적 올리고뉴클레오티드 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 비단백질성이다. 일부 실시 형태에서, 압타머는 올리고뉴클레오티드 압타머이다. 올리고뉴클레오티드 압타머는 표적 분자에 결합하는, 특이적이고 복잡한 3차원 형상을 갖는, 단일 가닥 DNA(ssDNA) 또는 RNA 중 어느 하나인 짧은 단일 가닥 올리고뉴클레오티드이다. 압타머의 분자 인식은 표적 분자와 방향족 고리의 π-π 적층 상호작용, 수소 결합, 반데르발스 상호작용, 및 정전기력을 포함한 분자간 상호작용 및 구조 호환성에 기초한다. 올리고뉴클레오티드 기반 압타머는 이의 표적 리간드에 대해 높은 친화성 및 특이성을 갖는다. 올리고뉴클레오티드 압타머는 적응적 입체형태 변화를 통해 이들의 동종 표적과의 표면 접촉을 확대시켜, 특이적 결합 부위의 생성을 가져오기 때문에 정확하게 그리고 강하게 결합한다. 게다가, 핵산 압타머가 비독성이고 면역원성이 결여되어 있다.
압타머는 SELEX(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment, 지수적 풍부화에 의한 리간드의 체계적 진화)에 의해 랜덤 핵산의 대형 라이브러리로부터 시험관내에서 통상 설계된다. 올리고뉴클레오티드 압타머는 3D 구조로 접혀서 분자 표적에 선택적으로 결합할 수 있는 핵산(RNA, DNA 또는 XNA) 분자이다. SELEX(지수적 풍부화에 의한 리간드의 체계적 진화)는 분자 표적에 결합하기 위한 대형 합성 올리고뉴클레오티드 라이브러리의 신속한 질의를 가능하게 하는 기술이다(문헌[Dunn et al., (2017) Nature Reviews Chemistry 1:0076]). 당업자가 이해하는 바와 같이, 전형적인 SELEX 실험은 20 내지 100개의 염기쌍의 길이를 갖는 약 1014 내지 1016개의 랜덤한 서열을 선택하는 것을 수반하고, 1) 표적 분자와의 인큐베이션 조건을 스크리닝하는 단계; 2) 표적 분자에 결합하는 분자를 선택하는 단계; 3) 결합된 종을 용리하는 단계; 및 4) 핵산을 증폭시키는 단계를 포함한다. 이 프로세스는 표적 분자에 더 단단히 결합하는 서열을 선택하기 위해 반복적으로 반복된다. 표적 분자의 성질, 원래의 올리고뉴클레오티드 라이브러리의 랜덤화된 영역의 길이, 및 선택 엄격성(selection stringency)을 포함한 선택 실험의 다양한 파라미터를 조절함으로써, 광범위한 다기능성 압타머가 얻어질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 올리고뉴클레오티드 압타머의 선택 프로세스에서 사용되는 표적 분자는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9이며, 예컨대 표적 분자는 서열 번호 9이다.
DNA 또는 RNA 라이브러리를 사용하는 전통적인 압타머는 제한된 화학적 다양성을 가지며, 이들의 동종 표적과의 약한 소수성 상호작용이 결여되어 있거나 이를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 압타머는 뉴클레오티드의 당 단위, 핵염기, 또는 골격의 변형을 포함한다. 압타머는 하나 이상의 변형으로 부분적으로 또는 완전히 치환될 수 있고, 기능성 분자와 접합될 수 있다(문헌[Shuaijian et al., (2017) Int J Mol Sci. 18(8): 1683]).
당 변형의 비제한적인 예에는 (데옥시)-리보스 당 단위의 2' 위치에서의 변형, 예컨대 2′-아미노 피리미딘, 2′-플루오로 피리미딘, 2′-O-메틸 리보스 퓨린, 및 이러한 당 단위의 4' 산소 원자의 황으로의 대체가 포함된다.
일부 실시 형태에서, 올리고뉴클레오티드 압타머는 제노(Xeno) 핵산을 포함한다. X-압타머 및 제노 핵산(XNA)은 비천연 또는 합성 뉴클레오티드를 이용하여 화학적 다양성을 증가시키고 압타머의 결합 특성을 개선한다. 제노 핵산은 압타머의 당 골격 모이어티에서 구조적인 화학적 변화를 나타낸다. XNA의 비제한적인 예에는 1,5-안하이드로헥시톨 핵산(HNA), 사이클로헥센 핵산(CeNA), 트레오스 핵산(TNA), 글리콜 핵산(GNA), 고정된 핵산(LNA), 펩티드 핵산(PNA) 및 FANA(플루오로-아라비노 핵산)(문헌[Pinheiro and Holliger (2014) Trends in Biotechnology 32(6): 321-328])가 포함된다. 압타머 결합에 대해 증가된 화학적 다양성을 제공하는 상이한 화학적 특성을 제공하는 것에 더하여, XNA는 뉴클레아제 분해에 취약하지 않다.
일부 실시 형태에서, 올리고뉴클레오티드 압타머는 핵염기에 대한 변형을 포함한다. 핵염기 수준에서의 작용기의 도입은 올리고뉴클레오티드와 이의 표적 분자의 접촉 상호작용을 증가시키고, 야생형 핵산에 접근 불가능한 추가적인 2차 구조를 생성할 수 있다. 핵염기에 대한 변형의 비제한적인 예에는 피리미딘의 C5-위치, 및 7-데아자-퓨린의 N7 위치에서의 변형이 포함된다. SOMamer(slow off-rate modified aptamer, 느린 해리 속도의 변형된 압타머)는 데옥시우리딘의 5' 위치에서의 별개의 핵염기 변형을 이용하며, 하기에 논의되어 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 압타머는 올리고뉴클레오티드 압타머가 속한 본 명세서에서 논의된 압타머의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 SOMamer
일부 실시 형태에서, 압타머는 비단백질성이다. 일부 실시 형태에서, 압타머는 SOMamer이다. SOMamer 또는 (느린 해리 속도의 변형된 압타머)는 전통적인 올리고뉴클레오티드 압타머의 제한들 중 일부를 극복한 차세대 압타머 플랫폼이다(문헌[Rohloff et al., (2014) Molecular Therapy Nucleic Acids 3, e201]). 이들은, 분자 표적에 결합하기 위해 대형 랜덤화된 라이브러리로부터 시험관내에서 선택되는 짧은 단일 가닥 올리고뉴클레오티드이다. 상기에 논의된 바와 같이, 핵산 라이브러리의 화학적 다양성은 단백질 기반 라이브러리와 비교하여 더 낮고, 핵산 염기는 아미노산과 비교하여 더 작은 범위의 물리화학적 특성을 갖는다. 따라서, 핵산 염기 내로의 비천연 작용기의 도입은 핵산의 화학적 다양성을 증가시키는 방법을 제공하며, 이에 따라 다양한 분자 표적에 결합하도록 압타머의 해리 상수를 개선한다. SOMamer 시약은 압타머의 화학적 다양성을 증가시키도록 개발되었다. 단백질 결합을 위하여 핵산 압타머를 개선하는 작용기는 전형적으로 소수성 방향족 특성을 갖는다. SOMamer의 변형은, 5-위치에서 상이한 단백질 유사 모이어티로 작용화된 데옥시-우리딘 잔기로 조작된다. 단백질 유사 모이어티의 비제한적인 예에는 3-인돌릴-카르복스아미드; Bn, 벤질; Pe, 2-페닐에틸; Pp, 3-페닐프로필; Th, 2-티오페닐메틸; FBn, 4-플루오로벤질; Nap, 1-나프틸메틸; 2Nap, 2-나프틸메틸; Ne, 1-나프틸-2-에틸; 2Ne, 2-나프틸-2-에틸; Trp, 3-인돌-2-에틸; Bt, 3-벤조티오페닐-2-에틸; Bf, 3-벤조푸라닐-2-에틸; Bi, 1-벤즈이미다졸-2-에틸; Tyr, 4-하이드록시페닐-2-에틸; Pyr, 4-피리디닐메틸; MBn, 3,4-메틸렌다이옥시벤질; MPe, 3,4-메틸렌다이옥시페닐-2-에틸; 3MBn, 3-메톡시벤질; 4MBn, 4-메톡시벤질; 3,4MBn, 3,4-다이메톡시벤질; RTHF, R-테트라하이드로푸라닐메틸; STHF, S-테트라하이드로푸라닐메틸; Moe, 모르폴리노-2-에틸; Thr, R-2-하이드록시프로필; 및 iBu, 아이소-부틸 기(문헌[Rohloff et al., Molecular Therapy-Nucleic acids (2014) 3e201]). 게다가, 핵산의 작용화는 압타머의 뉴클레아제 저항성을 개선한다. 일부 실시 형태에서, SOMamer의 선택 프로세스에서 사용되는 표적 분자는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9이며, 예컨대 표적 분자는 서열 번호 9이다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 SOMamer는 SOMamer가 속한 본 명세서에서 논의된 압타머의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 특이적 펩티드 압타머
일부 실시 형태에서, 압타머는 펩티드 압타머이다. 펩티드 압타머는 특이적 표적 분자에 결합하도록 선택되는 작은 단백질이다. 펩티드 압타머는 높은 안정성, 높은 용해도, 및 빠른 접힘 속도론적 특성을 특징으로 한다(문헌[Reverdatto et al., Curr Top Med Chem (2015) 15(2) 1082-1101]). 이들은 표적 분자에 결합할 수 있는 짧은 아미노산 서열로서 정의된다. 펩티드 압타머는 본질적으로 '스캐폴드 상의 루프'이며, 여기서 루프는 표적 분자에 결합하는 펩티드 영역을 제공하고, 스캐폴드는 루프가 그래프팅된 단백질 골격이다. '스캐폴드' 상의 루프의 존재는 루프 영역에 대한 입체형태 구속을 유도하고, 삽입 루프를 안정화시키고, 접혀서 표적 분자를 인식하게 할 가능성을 더 높게 한다. 그러한 구속된 펩티드 압타머의 결합 친화도는 제한된 펩티드 루프의 더 낮은 입체형태 엔트로피로 인해 자유로운 펩티드 루프보다 종종 더 높다. 당업자는 펩티드 루프 압타머가 상기에 논의된 항원-결합 단백질의 스캐폴드 구조 상에 그래프팅될 수 있거나, 상기에 논의된 항원-결합 단백질의 기존의 2차 구조 요소 내도 도입될 수 있음을 이해할 것이다. 펩티드 압타머는 종종 핵산 압타머보다 더 작은 결합 풋프린트(binding footprint)를 나타낸다.
펩티드 압타머는 대형 조합 펩티드 라이브러리의 고처리량 스크리닝에 의해 선택될 수 있다. 조합 라이브러리를 스크리닝하는 것은, 예를 들어 당업계에서 일상적인 방법을 통해, 조합 라이브러리의 세포외 디스플레이 및 표적 분자에 대한 결합에 대한 스크리닝에 의해 달성될 수 있다. 펩티드 압타머의 선택을 위한 비제한적인 예에는 파지 디스플레이, 세균(예컨대, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 또는 스타필로콕쿠스)에서의 세포 표면 디스플레이, 효모에서의 세포 표면 디스플레이, 진핵 세포(예컨대, HEK293 세포)에서의 세포 표면 디스플레이, 리보솜 디스플레이, mRNA 디스플레이, DNA 디스플레이 및 시험관내 구획화가 포함된다. 대안적으로, 세포내 선택 방법은 효모 2-하이브리드 검정(yeast two hybrid assay, Y2H)과 같은 단백질 단편 상보성 검정을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 압타머의 선택에서 사용되는 표적 분자는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9이며, 예컨대 표적 분자는 서열 번호 9이다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명의 펩티드 압타머는 올리고뉴클레오티드 압타머가 속한 본 명세서에서 논의된 압타머의 속에 대해 정의된 기능적 특징을 포괄한다.
가스데르민 D 억제제의 사용 방법
본 발명은 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함한다.
본 발명은 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 중화시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제하는 데 있어서의 본 발명의 가스데르민 D 억제제의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 중화시키는 데 있어서의 본 발명의 가스데르민 D 억제제의 용도를 제공한다.
바람직한 실시 형태에서, 가스데르민 D 억제제는 항원-결합 단백질이다.
바람직한 실시 형태에서, 가스데르민 D 억제제는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
바람직한 실시 형태에서, 가스데르민 D 억제제는 압타머이다.
일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D의 임의의 생물학적 효과를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 다른 단백질과 상호작용하거나 그것에 결합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 가스데르민 D의 다른 분자와 상호작용하거나 그것에 결합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 지질과 회합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와 회합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 세포막 내로 삽입되는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 가스데르민 D의 다른 분자와 올리고머화하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 형성하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D가 다량체성 기공을 형성하는 능력을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 가스데르민 D 다량체성 기공의 형성으로부터 발생되는 임의의 활성을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 기공 형성으로 인한 세포 이온 구배의 소실을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 기공 형성으로 인한 염증성 사이토카인의 세포외 방출을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출이다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 기공 형성으로 인한 세포의 삼투압 용해를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 기공 형성으로 인한 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능은 전염증성 파이롭토시스 세포사를 초래하는 더 큰 염증성 반응을 포함한다.
본 발명은 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함하며; 상기 가스데르민 D 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합한다.
본 발명은 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 데 있어서의 가스데르민 D 억제제의 용도를 제공하며, 상기 가스데르민 D 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합한다.
때때로, 억제제는 단백질성이며, 예를 들어 항원-결합 단백질이고, 예컨대 항원-결합 단백질은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
가스데르민 D 억제제의 치료적 용도
가스데르민 D는 하기를 포함한 다수의 질병에 관여하고 있다: 패혈증(문헌[Kayagaki et al., Nature (2015) 526(7575): 666-671] 및 문헌[Wu et al., Immunity (2019) 50(6) 1401-1411]), 비알코올성 지방성 간염(문헌[Xu et al., Journal of Heaptology (2018) 68(4): 773-782]), 폐암(문헌[Gao et al., Oncology Reports 40(4): 1971-1984]), 가족성 지중해열(문헌[Kanneganti et al., Journal of Experimental Medicine (2018) 215(6): 1519-1529]), 자가염증성 질병, 예컨대 크라이오피린-관련 주기성 증후군(CAPS)(문헌[Xiao et al., PloS Biology (2018) 16(11)]), 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야(Chikungunya) 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상(문헌[Mangan et al., (2018) Nature Rev Drug Discov 17, 588-606]). 따라서, 가스데르민 D 활성 및/또는 기능의 억제는 치료적 용도를 갖는다.
따라서, 본 발명은 가스데르민 D를 억제하는 데, 예컨대 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한 억제제를 제공한다.
본 발명은 또한 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한 억제제를 제공한다.
본 발명은 또한 가스테르민 D를 억제하는 데 사용하기 위한 억제제를 제공하며, 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 활성의 억제이며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시키고/시키거나; 가스데르민 D의 억제는 가스데르민 D의 기능의 억제이며, 예컨대 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킨다.
본 발명은 또한 가스테르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한 억제제를 제공하며, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 활성의 중화이고/이거나, 가스데르민 D의 중화는 가스데르민 D의 기능의 중화이다.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 억제제를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D로 인해 야기되는 질병의 치료에 사용된다.
일부 실시 형태에서, 억제제는 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한 것이다.
바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D에 결합하는 항원-결합 단백질이다.
바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D에 결합하는 압타머이다.
용어 "치료하는" 또는 "치료"는 손상, 병리 또는 상태의 약화 또는 개선의 임의의 성공 또는 성공 징후를 지칭하는 것으로, 이에는 증상의 감퇴, 관해, 감소와 같은, 또는 상태를 환자가 더 참을 수 있게 하거나, 퇴화 또는 저하 속도를 늦추거나, 퇴화의 최종점을 덜 쇠약하게 하거나, 대상체의 신체적 또는 정신적 웰빙(well-being)을 개선하거나, 생존 기간을 연장시키는, 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터가 포함된다. 치료는 신체 검사, 신경학적 검사, 또는 정신 감정의 결과를 포함한 객관적 또는 주관적 파라미터에 의해 평가될 수 있다.
"유효량" 또는 "치료적 유효량"은 필요한 투여량에서 그리고 필요한 기간 동안 원하는 치료 결과를 달성하는 데 유효한 양을 지칭한다. 가스데르민 D 억제제의 치료적 유효량은 개체의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중, 그리고 항체가 개체에서 원하는 반응을 유도하는 능력과 같은 인자들에 따라 변동될 수 있다. 또한, 치료적 유효량은 항체 또는 항체 부분의 임의의 독성 효과 또는 유해 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 것이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 억제제는 또한 병용 요법으로 투여될 수 있는데, 즉 치료하고자 하는 질병 또는 질환에 대해 관련된 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 억제제는 하나 이상의 추가의 치료제와의 병용을 위한 것이다. 그러한 병용 투여는 동시적, 개별적 또는 순차적 - 임의의 순서임 - 일 수 있다. 동시적 투여의 경우, 작용제들은, 필요에 따라, 하나의 조성물로서 또는 개별 조성물들로서 투여될 수 있다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하고;
상기 억제제는 요법에 사용하기 위한 것이다.
본 발명은 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제를 제공하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하고;
상기 억제제는 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한 것이다.
때때로, 억제제는 단백질성이며, 예를 들어 항원-결합 단백질이고, 예컨대 항원-결합 단백질은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
조성물
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 a) 본 발명의 억제제, 예컨대 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체의 유효량, 및 b) 불활성이거나 생리학적으로 활성일 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항세균제 및 항진균제 등을 포함한다. 적합한 담체, 희석제 및/또는 부형제의 예에는 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등뿐만 아니라, 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우에, 조성물 중에 등장제, 예컨대 당류, 폴리알코올, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 특히, 적합한 담체의 관련 예에는 (1) 약 1 mg/mL 내지 25 mg/mL의 인간 혈청 알부민을 함유하거나 함유하지 않는 둘베코 인산염 완충 식염수(pH 약 7.4), (2) 0.9% 식염수(0.9% w/v 염화나트륨(NaCl)), 및 (3) 5% (w/v) 덱스트로스가 포함되고; 또한 산화방지제, 예컨대 트립타민 및 안정제, 예컨대 Tween 20®을 함유할 수 있다.
본 발명에서의 조성물은 또한, 특정 장애를 치료하는 데 필요하다면, 추가의 치료제를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 억제제와 보충적 활성 화합물은 서로에게 불리한 영향을 주지 않는 상보적 활성을 가질 것이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 화학요법제이다.
본 발명의 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어 액체, 반고체, 및 고체 투여형을 포함하지만, 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 응용에 좌우된다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사가능 또는 주입가능 용액의 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 근육내, 복막내, 피하) 투여이다. 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 일정 시간에 걸쳐 연속 주입에 의해 또는 볼루스(bolus)로서 정맥내 투여된다. 다른 바람직한 실시 형태에서, 이들은 국부뿐만 아니라 전신 치료적 효과를 발휘하도록 근육내, 피하, 관절내, 골액낭내, 종양내, 종양 주변, 병변내, 또는 병변 주변 경로에 의해 주사된다.
본 발명의 억제제, 예컨대 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체를 적절한 용매 중에 필요한 양으로 도입한 후, 미세여과에 의해 멸균함으로써 비경구 투여를 위한 멸균 조성물이 제조될 수 있다. 용매 또는 비히클로서, 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등뿐만 아니라 이들의 조합도 사용될 수 있다. 많은 경우에, 조성물 중에 등장제, 예컨대 당류, 폴리알코올, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 이들 조성물은 또한 애쥬번트(adjuvant), 특히 습윤제, 등장제, 유화제, 분산제 및 안정제를 함유할 수 있다. 비경구 투여를 위한 멸균 조성물은 또한 멸균 고체 조성물 형태로 제조될 수 있는데, 이것은 멸균수 또는 임의의 다른 주사가능 멸균 매질 중에서 사용 시에 용해될 수 있다.
본 발명의 억제제, 예컨대 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체는 또한 경구 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 정제, 환제, 분말(젤라틴 캡슐, 샤세(sachet)) 또는 과립이 사용될 수 있다. 이들 조성물에서, 본 발명에 따른 활성 성분은 아르곤 스트림 하에서 하나 이상의 불활성 희석제, 예컨대 전분, 셀룰로스, 수크로스, 락토스 또는 실리카와 혼합된다. 이들 조성물은 또한 희석제 이외의 물질, 예를 들어 하나 이상의 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트 또는 활석, 착색제, 코팅(당-코팅 정제) 또는 글레이즈를 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물로서, 불활성 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 글리세롤, 식물성 오일 또는 파라핀유를 함유하는 약제학적으로 허용되는 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 엘릭서(elixir)가 사용될 수 있다. 이들 조성물은 희석제 이외의 물질, 예를 들어 습윤, 감미, 증점, 향미 또는 안정화 제품을 포함할 수 있다.
키트
키트가 또한 본 명세서에 제공되며, 예를 들어 상기 키트는 기재된 억제제, 및 상기 억제제의 사용 설명서를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D의 억제제이다. 바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D에 결합하는 항원-결합 단백질이다. 바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 바람직한 실시 형태에서, 억제제는 가스데르민 D에 결합하는 압타머이다. 설명서는 시험관내, 생체내(in vivo) 또는 생체외(ex vivo)에서 억제제를 사용하는 것에 대한 안내를 포함할 수 있다.
전형적으로, 키트는 억제제를 함유하는 구획을 가질 것이다. 억제제는 동결건조된 형태, 액체 형태, 또는 키트 내에 포함되기에 적합한 다른 형태일 수 있다. 키트는 또한 키트 내의 설명서에 기재된 방법을 실시하는 데 필요한 추가 요소들, 예컨대 동결건조된 분말을 재구성하기 위한 멸균 용액, 환자에게 투여하기 전에 억제제와 병용하기 위한 추가 작용제, 및 억제제를 환자에게 투여하는 데 도움이 되는 도구를 수용할 수 있다.
가스데르민 D의 다른 관심 영역
돌연변이생성 및 상동성 모델링과 함께, 뮤린 가스데르민 단백질의 N-말단 도메인의 결정 구조는 지질 결합 및 올리고머화에 관여하는 단백질의 주요 잔기를 확인하는 데 도움이 되었다. 잔기 F49, W50, K51, R53, R137, K145, R151 및 R153과 함께, α1 나선 및 인접한 β1-β2 루프 내의 잔기가 지질 결합에 관여하고 있다(문헌[Liu et al., Immunity 13 May 2019]).
당업자는 또한 올리고머화가 가스데르민 D의 다수의 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 필요로 한다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 단백질-단백질 상호작용 계면에 결합할 수 있는 억제제는 가스데르민 D 올리고머화를 억제하는 능력을 가질 수 있다. 가스데르민 D 하위단위들 사이의 계면 상호작용에 관여하고 있는 주요 구조 영역은 α1' 나선, α2 나선, α3 나선, 및 β2 가닥, β3 가닥 및 β11 가닥을 포함한다.
게다가, 다수의 개별 잔기가 올리고머화의 중재에 관여하고 있으며, 특히 다음과 같은 것이 있다: L28, C38, L59, F80, I90, V94, C191, L192, V229, L230, L231, 및 F232.
따라서, 일부 실시 형태에서, 상기에 정의된 바와 같은 억제제는 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 또는 서열 번호 16 중 하나 이상, 예컨대 서열 번호 10, 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 또는 서열 번호 16 중 하나 이상을 포함하는 에피토프에 결합한다.
가스데르민 D 억제제를 평가하는 방법
본 명세서에 논의된 억제제의 활성은 시험관내 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
한 가지 그러한 방법은 인간 THP-1 세포의 용해의 억제제의 억제의 측정에 의존한다(다른 방법은 1차 인간 단핵구, 인간 대식세포 - 및 생체외에서 분화된 1차 혈액-유래 단핵구 및 대식세포를 포함함 - 의 용해의 억제제의 억제의 측정에 의존함). 인간 THP-1 세포는 급성 단핵구성 백혈병(M5 아형)의 말초 혈액으로부터 유래되는 불멸화 단핵구-유사 세포주이다. 이 검정에서는, THP-1 세포를 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지 중에서 배양한다. 유지/증폭 배양 조건 하에서, 이들 세포는 부유 상태로 성장하지만, 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트를 사용한 하룻밤 분화 후 이들 세포는 성숙되어 부착성이 되도록 될 수 있다. 이러한 분화 후, NLRP3 인플라마좀은 니제리신에 의한 자극에 의해 활성화될 수 있다. 확인되지 않았지만, 이는 빠른 세포사 유도(전형적으로 1 내지 2시간 이내에 관찰됨)로 이어질 것이다. 이러한 빠른 세포사 유도(파이롭토시스)는 GSDMD 기공 형성에 의해 구동된다. 파이롭토시스는 용해 형태의 세포사이며, 이에 따라 살아있는 세포의 온전한 세포막을 가로지를 수 없는 DNA 염료의 형광 신호의 증가를 측정함으로써 모니터링될 수 있다. 이들 예에서, SYTOX™ 그린이 검출에 사용되는 염료이지만, 작동 원리는 FACS에서 프로피듐 요오다이드와 같은 화합물의 사용과 동일하다.
따라서, 때때로 가스데르민 D의 억제는 하기에 의해 결정된다:
(i) THP-1 세포를 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지 중에서 배양하는 단계;
(ii) 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA)를 100 ng/ml의 농도로 첨가하고, 16시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iii) 배지를 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신, 및 형광 핵산 결합 염료(예를 들어, SYTOX™ 그린; 1 μM 최종 농도로)가 보충된 RPMI 배지로 대체하고, 2시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iv) 세포에 억제제를 첨가하고, 억제제와 함께 30분 동안 인큐베이션하는 단계;
(v) 20 μM의 농도로 니제리신을 세포에 첨가하는 단계; 및
(vi) 세포의 형광으로 표시된 바와 같은 세포사를 기록하는 단계.
IL-1β 및 IL-18 방출은 또한 이러한 검정의 변형된 형태를 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 니제리신 자극 후 규정된 시점에서, 예컨대 니제리신 자극 후 80분째에, 이 검정의 상층액을 수집하고, 상층액 내로 방출된 IL-1β 및 IL-18을 정량화한다. 정량화는 제조자의 설명서에 따라 Luminex 검정 시스템 또는 Meso Scale Discovery(MSD) 검정 시스템을 사용하여 달성될 수 있다.
때때로, THP-1 세포 검정이 상기에 언급된 경우에, 활성을 측정하기 위한 대안적인 방법을 사용하는 것이 가능하다.
한 가지 그러한 방법은 신선한 인간 혈액 PBMC로부터 단리된 1차 인간 단핵구로부터의 IL-1β의 방출의 억제제의 억제의 측정에 의존한다. 이 방법은 THP-1 검정과 개념적으로 유사하지만, 상이한 세포 유형을 사용한다. 이들 세포는 지질다당류(LPS)로 프라이밍된 신선한 인간 혈액 PBMC로부터 단리되고, NLRP3 인플라마좀은 니제리신에 의한 자극에 의해 활성화된다. 이는 GSDMD 기공의 형성 및 IL-1β의 방출로 이어진다. 니제리신 자극 후 규정된 시점에서, 예컨대 니제리신 자극 후 1시간째에, 이 검정의 상층액을 수집하고, 상층액 내로의 IL-1β 방출을 정량화할 수 있다. IL-1β 방출의 정량화는 제조자의 설명서에 따라 Luminex 검정 시스템 또는 Meso Scale Discovery(MSD) 검정 시스템을 사용하여 달성될 수 있다.
따라서, 때때로 가스데르민 D의 억제는 하기에 의해 결정된다:
(i) CD14 마이크로비드를 사용하여 신선한 인간 혈액 PBMC로부터 1차 인간 단핵구(CD14+)를 단리하는 단계;
(ii) 세포를 신선한 배지(10% FBS가 보충된 RPMI)로 2회 세척하는 단계;
(iii) 세포를 3시간 동안 100 ng/ml의 농도로 지질다당류(LPS)로 프라이밍하는 단계;
(iv) 세포에 억제제를 첨가하고, 억제제와 함께 15분 동안 인큐베이션하는 단계;
(v) 15 μM의 농도로 니제리신을 세포에 첨가하는 단계; 및
(vi) 상층액을 수집하고, IL-1β 방출을 측정하는 단계.
다른 그러한 방법은 뮤린 세포주에서 세포사 및 IL-1β 방출의 억제제의 억제의 측정에 의존한다. 이 방법은 THP-1 검정과 개념적으로 유사하고, 억제제가 뮤린 GSDMD를 억제할 때 사용될 수 있다. 가스데르민 D는 NLRP3 및 NLRP1B 인플라마좀 둘 모두에 의해 활성화된다. Balb/C 마우스는 탄저 치사 독소(LeTx) 감수성 NLRP1B 대립유전자를 발현한다. 따라서, LeTx와의 뮤린 세포주의 인큐베이션은 NLRP1B 인플라마좀의 특이적 활성화를 가능하게 한다. NLRP3 또는 NLRP1B 인플라마좀 중 어느 하나의 활성화는 가스데르민 D 기공 형성으로 인한 세포사의 유도 및 IL-1β의 방출로 이어진다. 따라서, 뮤린 세포의 파이롭토시스는 살아있는 세포의 온전한 세포막을 가로지를 수 없는 DNA 염료의 형광 신호의 증가를 측정함으로써 모니터링될 수 있다. 이들 예에서, SYTOX™ 그린이 검출에 사용되는 염료이지만, 작동 원리는 FACS에서 프로피듐 요오다이드와 같은 화합물의 사용과 동일하다. 게다가, IL-1β 방출의 정량화는 제조자의 설명서에 따라 Luminex 검정 시스템 또는 Meso Scale Discovery(MSD) 검정 시스템을 사용하여 달성될 수 있다.
따라서, 때때로 가스데르민 D의 억제는 하기에 의해 결정된다:
(i) Balb/C 마우스의 경골 및 대퇴골로부터 골수를 단리하는 단계;
(ii) 세포를 L929 배양 상층액과 혼합된, 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 IMDM 배지 중에서 6일 동안 배양함으로써 골수를 골수 유래 대식세포(BMDM)로 분화시키는 단계;
(iii) 세포를 세척하고, 수집하고, 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 신선한 IMDM 배지 중에서, 예를 들어 50,000개의 세포/웰의 밀도로 플레이팅하고, 세포를 하룻밤 부착되게 하는 단계;
(iv) 부착성 세포를 세척하고, 배지를 10% FBS, 페니실린/스트렙토마이신 및 형광 핵산 결합 염료(예를 들어, SYTOX™ 그린; 1 μM의 농도로)가 보충된 새로운 IMDM 배지로 대체하는 단계;
(v) 세포를 3시간 동안 100 ng/ml의 농도로 지질다당류(LPS)로 프라이밍하는 단계;
(vi) 세포에 억제제를 첨가하고, 억제제와 함께 15분 동안 인큐베이션하는 단계;
(vii) 추가 1.5시간 동안, 니제리신(15 μM)을 세포에 첨가하여 NLRP3 인플라마좀을 활성화시키거나, LeTX(1 ㎍/ml의 보호 항원(PA) + 0.5 ㎍/ml의 치사 인자(LF))를 첨가하여 NLRP1B 인플라마좀을 활성화시키는 단계; 및
(viii) 세포의 형광으로 표시된 바와 같은 세포사를 기록하고/하거나, 세포의 상층액을 수집하고 IL-1β 방출을 정량화하는 단계.
총론
상세한 설명의 태양과 관련된 다양한 용어가 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용된다. 이러한 용어는 달리 지시되지 않으면 본 기술 분야에서의 그의 통상적인 의미로 주어져야 한다. 다른 구체적으로 정의된 용어는 본 명세서에 제공된 정의와 일치하는 방식으로 해석된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 측정가능한 값, 예컨대 양, 시간적 지속기간 등을 지칭할 때 용어 "약"은 지정된 값으로부터 최대 ±5%의 변동을 포함함을 의미하는데, 이러한 변동은 개시된 방법을 수행하기에 적절하기 때문이다. 달리 지시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에 사용되는 성분의 양, 특성, 예컨대 분자량, 반응 조건 등을 표현하는 모든 수는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식된 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 나타내지 않는 한, 하기의 명세서 및 첨부된 청구범위에 기재된 수치 파라미터는 근사치로, 이는 본 발명에 의해 얻고자 하는 원하는 특성에 따라 변동될 수 있다. 최소한으로, 그리고 청구범위의 범주에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도로서가 아니라, 각각의 수치 파라미터는 적어도 보고된 유효숫자의 개수의 관점에서 그리고 보통의 반올림 기법을 적용함으로써 해석되어야 한다.
본 발명의 넓은 범주를 나타내는 수치 범위 및 파라미터가 근사치임에도 불구하고, 구체적인 실시예에 기재된 수치들은 가능한 한 정확하게 기록하였다. 그러나, 임의의 수치 값은 본질적으로 그의 각자의 시험 측정치에서 발견되는 표준 편차로부터 필연적으로 유래하는 소정의 오차를 포함한다.
"단리된"은 생물학적 성분(예컨대, 핵산, 펩티드 또는 단백질)이, 그러한 성분이 천연 발생하는 유기체의 다른 생물학적 성분들, 즉 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 및 단백질로부터 실질적으로 분리되거나, 따로 생성되거나, 또는 따로 정제되었음을 의미한다. 따라서, "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 조성물의 일부일 수 있고, 그러한 조성물이 핵산, 펩티드, 또는 단백질의 천연 환경의 일부가 아닌 경우 여전히 단리될 수 있다. 이 용어는 또한 숙주 세포에서의 재조합 발현에 의해 제조된 핵산, 펩티드 및 단백질뿐만 아니라 화학적으로 합성된 핵산도 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "단리된" 항체 또는 항원-결합 단편은 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체 또는 항원-결합 단편이 실질적으로 없는 항체 또는 항원-결합 단편을 지칭하고자 한다(예를 들어, 가스데르민 D에 특이적으로 결합되는 단리된 항체에는 가스데르민 D 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, 가스데르민 D의 에피토프, 아이소형 또는 변이체에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는, 예를 들어 다른 종(예컨대, 가스데르민 D 종 상동체) 유래의 다른 관련 항원에 대한 교차반응성을 가질 수 있다.
동의어로서 "핵산 분자", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"으로 지칭되는 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하거나 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물을 포함하는 하이브리드 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 실행될 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드의 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 사슬을 또한 포함한다.
용어 "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 천연 단백질의 아미노산 서열을 갖는 거대분자, 즉, 천연 발생 및 비재조합 세포에 의해 생성된 단백질을 의미하거나; 또는, 그것은 유전자-조작된 또는 재조합 세포에 의해 생성되고, 천연 단백질의 아미노산 서열을 갖는 분자, 또는 천연 서열의 하나 이상의 아미노산으로부터의 결실, 그에 대한 부가, 및/또는 그의 치환을 갖는 분자를 포함한다. 이 용어는 또한 하나 이상의 아미노산이 상응하는 천연 발생 아미노산 및 중합체의 화학적 유사체인 아미노산 중합체를 포함한다. 용어 "폴리펩티드 단편"은 전장 천연 단백질과 비교하여 아미노-말단 결실, 카르복실-말단 결실, 및/또는 내부 결실을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 그러한 단편은 또한 천연 단백질과 비교하여 변형된 아미노산을 함유할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단편은 약 5 내지 500개의 아미노산 길이이다. 예를 들어, 단편은 적어도 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 또는 450개의 아미노산 길이일 수 있다. 유용한 폴리펩티드 단편은 결합 도메인을 포함한, 항체의 면역학적으로 기능성인 단편을 포함한다.
용어 "에피토프"는 억제제에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정인자를 의미한다. 에피토프는 통상 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 표면 그룹화(grouping)로 이루어지며, 통상 특이적인 3차원 구조 특징뿐만 아니라 특이적인 전하 특징도 갖는다. 입체형태 및 비입체형태 에피토프는 전자에 대한 결합이 변성 용매의 존재 하에서 소실되나 후자는 그렇지 않다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접 관여하는 아미노산 잔기, 및 결합에 직접 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기, 예컨대 특이적 항원-결합 펩티드에 의해 효과적으로 차단되거나 덮이는 아미노산 잔기(다시 말하면, 이러한 아미노산 잔기는 특이적 항원-결합 펩티드의 풋프린트(footprint) 내에 있음)를 포함할 수 있다.
용어 "벡터"는 단백질 코딩 정보를 숙주 세포 내로 전달하는 데 사용되는 임의의 분자 또는 실체(예를 들어, 핵산, 플라스미드, 박테리오파지 또는 바이러스)를 의미한다.
용어 "발현 벡터" 또는 "발현 작제물"은, 숙주 세포의 형질전환에 적합하고, 작동가능하게 연결된 하나 이상의 이종성 코딩 영역의 발현을 (숙주 세포와 함께) 유도 및/또는 제어하는 핵산 서열을 함유하는 벡터를 지칭한다. 발현 작제물은 전사 및 번역에 영향을 주거나 이를 제어하고, 인트론이 존재하는 경우에는, 이것에 작동가능하게 연결된 코딩 영역의 RNA 스플라이싱에 영향을 주는 서열을 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "작동가능하게 연결된"은 이 용어가 적용되는 성분들이 적합한 조건 하에서 이들의 고유 기능을 수행할 수 있게 하는 관계에 있음을 의미한다. 예를 들어, 단백질 코딩 서열에 "작동가능하게 연결된" 벡터에서의 제어 서열이 그것에 라이게이션되어, 단백질 코딩 서열의 발현이 제어 서열의 전사 활성과 양립가능한 조건 하에서 달성되게 된다.
용어 "숙주 세포"는, 핵산 서열로 형질전환되었거나 형질전환될 수 있으며, 그럼으로써 관심 유전자를 발현하는 세포를 의미한다. 이 용어는 모 세포의 자손을 포함하는데, 이는, 관심 유전자가 존재하는 한, 자손이 원래의 모 세포와 형태에 있어서 또는 유전자적 구성에 있어서 동일한지의 여부에 관계없이 그러하다.
용어 "형질감염"은 세포에 의한 외래 또는 외인성 DNA의 흡수를 의미하고, 외인성 DNA가 세포막 내부에 도입되어 있을 때 세포가 "형질감염되어" 있다. 다수의 형질감염 기법이 당업계에 잘 알려져 있고, 본 명세서에 개시되어 있다. 예를 들어, 문헌[Graham et al., 1973, Virology 52:456]; 문헌[Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 상기 참조]; 문헌[Davis et al., 1986, Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier]; 문헌[Chu et al, 1981, Gene 13:197]을 참조한다. 그러한 기법은 하나 이상의 외인성 DNA 모이어티를 적합한 숙주 세포 내로 도입하는 데 사용될 수 있다.
재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 및 조직 배양 및 형질전환에 표준 기법(예를 들어, 전기천공, 리포펙션)이 사용될 수 있다. 효소 반응 및 정제 기법은 제조자의 사양에 따라 또는 당업계에서 통상적으로 달성되는 바와 같이 또는 본 명세서에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 일반적으로, 전술한 기법 및 절차는 당업계에 잘 알려진 통상적인 방법에 따라 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 전반적인 및 더 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1989]을 참조한다. 구체적인 정의가 제공되어 있지 않다면, 본 명세서에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 제약 화학의 실험실 절차 및 기법과 관련하여 이용되는 명명법은 당업계에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 화학적 분석, 약제학적 제조, 제형화, 및 전달, 및 환자의 치료에 표준 기법이 사용될 수 있다.
용어 "가스데르민 D" 또는 "GSDMD"는 서열 번호 1에 제시된 바와 같은 폴리펩티드 또는 이의 단편뿐만 아니라, 대립유전자 변이체, 스플라이스 변이체, 유도체 변이체, 치환 변이체, 결실 변이체, 및/또는 삽입 변이체(N-말단 메티오닌의 부가를 포함함), 융합 폴리펩티드, 및 종간 상동체를 포함하지만 이로 한정되지 않는 관련 폴리펩티드를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 가스데르민 D 폴리펩티드는 말단 잔기, 예컨대 비제한적으로, 리더 서열 잔기, 표적화 잔기, 아미노 말단 메티오닌 잔기, 라이신 잔기, 태그 잔기 및/또는 융합 단백질 잔기를 포함한다. 용어 "가스데르민 D"는 전장 가스데르민 D 및 프로테아제 절단 후에 생성된 산물 둘 모두를 나타낸다. "GSDMDNterm"은 가스데르민 D의 N-말단 도메인을 지칭하고, 서열 번호 2에 제시된 바와 같은 폴리펩티드를 포함하며, 예를 들어 N-말단 도메인은 서열 번호 2의 서열을 갖는다. "GSDMDCterm"은 가스데르민 D의 C-말단 도메인을 지칭하고, 서열 번호 3에 제시된 바와 같은 폴리펩티드를 포함하며, 예를 들어 C-말단 도메인은 서열 번호 3의 서열을 갖는다.
용어 "가스데르민 D 활성" 및/또는 "가스데르민 D 기능"은 가스데르민 D의 임의의 생물학적 효과를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 다른 단백질과 상호작용하거나 그것에 결합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 가스데르민 D의 다른 분자와 상호작용하거나 그것에 결합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 지질과 회합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와 회합하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 세포막 내로 삽입되는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 가스데르민 D의 다른 분자와 올리고머화하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 형성하는 능력을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D가 다량체성 기공을 형성하는 능력을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이 용어는 가스데르민 D 다량체성 기공의 형성으로부터 발생되는 임의의 활성을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 기공 형성으로 인한 세포 이온 구배의 소실을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 기공 형성으로 인한 염증성 사이토카인의 세포외 방출을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 기공 형성으로 인한 세포의 삼투압 용해를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 기공 형성으로 인한 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이 용어는 전염증성 파이롭토시스 세포사를 초래하는 더 큰 염증성 반응을 포함한다.
본 발명의 추가의 실시 형태가 하기에 열거된다:
1. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는, 가스데르민 D 억제제.
2. 실시 형태 1에 있어서, 가스데르민 D의 억제는 하기와 같은, 가스데르민 D 억제제:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴.
3. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 가스데르민 D 억제제.
4. 실시 형태 3에 있어서, 가스데르민 D의 중화는 하기와 같은, 가스데르민 D 억제제:
i) 가스데르민 D의 활성의 중화; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 중화.
5. 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서, 세포외 억제제인, 억제제.
6. 실시 형태 1 내지 실시 형태 5 중 어느 하나에 있어서, 세포 표면 상의 가스데르민 D에 결합하는, 억제제.
7. 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 하나에 있어서, 가스데르민 D에 결합하고, 가스데르민 D에 결합되어 있지 않는 한 세포막을 가로지르지 않는, 억제제.
8. 실시 형태 1 내지 실시 형태 7 중 어느 하나에 있어서, 대분자인, 억제제.
9. 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나에 있어서, > 2 kDa, > 3 kDa, > 4 kDa, >5 kDa, > 6 kDa, > 7 kDa, > 8 kDa, > 9 kDa 또는 > 10 kDa의 분자량을 갖는, 억제제.
10. 실시 형태 1 내지 실시 형태 9 중 어느 하나에 있어서, 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하는, 억제제.
11. 실시 형태 1 내지 실시 형태 10 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하는, 억제제.
12. 실시 형태 11에 있어서, 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하는, 억제제.
13. 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하는, 억제제.
14. 실시 형태 13에 있어서, 서열 번호 9에 결합하는, 억제제.
15. 실시 형태 1 내지 실시 형태 14 중 어느 하나에 있어서, 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9의 단리된 펩티드에 결합하는, 억제제.
16. 실시 형태 15에 있어서, 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고, 서열 번호 9의 단리된 펩디드에 결합하는, 억제제.
17. 실시 형태 1 내지 실시 형태 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시키는, 억제제.
18. 실시 형태 17에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시키는, 억제제.
19. 실시 형태 1 내지 실시 형태 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 올리고머화를 중화시키는, 억제제.
20. 실시 형태 19에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 중화시키는, 억제제.
21. 실시 형태 1 내지 실시 형태 18 중 어느 하나에 있어서, 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하는, 억제제.
22. 실시 형태 21에 있어서, 상기 기공을 차단하는, 억제제.
23. 실시 형태 21에 있어서, 상기 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하는, 억제제.
24. 실시 형태 21 내지 실시 형태 23 중 어느 하나에 있어서, 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하는, 억제제.
25. 실시 형태 24에 있어서, 상기 기공을 차단하는, 억제제.
26. 실시 형태 24에 있어서, 상기 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하는, 억제제.
27. 실시 형태 1 내지 실시 형태 26 중 어느 하나에 있어서, IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제하는, 억제제.
28. 실시 형태 1 내지 실시 형태 27 중 어느 하나에 있어서, 상기 억제제는 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 중화시키는, 억제제.
29. 실시 형태 28에 있어서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하는, 억제제.
30. 실시 형태 28 또는 실시 형태 29에 있어서, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 100%, 예컨대 100%만큼 억제하며, 여기서 상기 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, 상기 THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, 상기 THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도되었으며, 세포사는 1시간 후에 측정되는, 억제제.
31. 실시 형태 1 내지 실시 형태 30 중 어느 하나에 있어서, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키는, 억제제.
32. 실시 형태 31에 있어서, 인간 THP-1 세포에 투여될 때, 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 > 0.1시간, > 0.2시간, > 0.5시간, > 0.75시간, > 1시간, > 2시간, > 3시간, > 4시간, 또는 > 6시간만큼 지연시키며, 여기서 상기 THP-1 세포는 100 μl 중 50,000개의 세포의 세포 밀도로 존재하며, 상기 THP-1 세포는 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트로 16시간 동안 전처리되었으며, 상기 THP-1 세포는 20 μM 니제리신으로 유도된, 억제제.
33. 실시 형태 1 내지 실시 형태 32 중 어느 하나에 있어서, 구세계 원숭이 가스데르민 D 또는 신세계 원숭이 가스데르민 D와 교차반응하는, 억제제.
34. 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 하나에 있어서, 단백질성인, 예를 들어 항원-결합 단백질인, 억제제.
35. 실시 형태 34의 항원-결합 단백질로서,
항체 또는 이의 항원-결합 단편, 다중특이성 항체, VHH 도메인, VNAR, VLR 도메인, 피브로넥틴 III형 도메인, 센티린, 크링글 도메인, DARPin, 시스테인-노트 미니단백질, Sso7d 유래 단백질, 아피바디, 아피머, 안티칼린, 아필린, 아피틴, 피노머, 또는 Fc 융합 분자인, 항원-결합 단백질.
36. 실시 형태 35에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 항원-결합 단백질.
37. 실시 형태 36에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 영역을 포함하는, 항원-결합 단백질.
38. 실시 형태 36 또는 실시 형태 37에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM 동종형을 갖는, 항원-결합 단백질.
39. 실시 형태 36 내지 실시 형태 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형을 갖는, 항원-결합 단백질.
40. 실시 형태 36 내지 실시 형태 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 동종형을 갖는, 항원-결합 단백질.
41. 실시 형태 36 내지 실시 형태 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 동종형을 갖는, 항원-결합 단백질.
42. 실시 형태 36 내지 실시 형태 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 그의 Fc 영역 내에 L234A 치환, L235A 치환 및/또는 K409R 치환을 추가로 포함하는, 항원-결합 단백질.
43. 실시 형태 36에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 영역이 결여되어 있는, 항원-결합 단백질.
44. 실시 형태 36 내지 실시 형태 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 형태인, 항원-결합 단백질.
45. 실시 형태 36 내지 실시 형태 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화된, 항원-결합 단백질.
46. 실시 형태 34 내지 실시 형태 45 중 어느 하나의 항원-결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
47. 실시 형태 46의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
48. 실시 형태 47의 벡터를 포함하는 항원-결합 단백질을 생성하기 위한 숙주 세포.
49. 실시 형태 48에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
50. 실시 형태 48에 있어서, 상기 항원-결합 단백질은 재조합적으로 생성되는, 세포.
51. 항원-결합 단백질을 생성하는 방법으로서,
실시 형태 48 내지 실시 형태 50 중 어느 하나의 숙주 세포를 상기 항원-결합 단백질이 생성되도록 하는 조건 하에서 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
52. 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 하나에 있어서, 비단백질성인, 억제제.
53. 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 또는 실시 형태 52 중 어느 하나에 있어서, 압타머인, 억제제.
54. 실시 형태 52 또는 실시 형태 53에 있어서, 올리고뉴클레오티드 압타머인, 억제제.
55. 실시 형태 52 또는 실시 형태 53에 있어서, SOMamer인, 억제제.
56. 실시 형태 53에 있어서, 펩티드 압타머인, 억제제.
57. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제하는 방법으로서,
실시 형태 1, 실시 형태 2, 실시 형태 5 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나의 가스데르민 D 억제제 또는 항원-결합 단백질을 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
58. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 중화시키는 방법으로서,
실시 형태 3 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나의 가스데르민 D 억제제 또는 항원-결합 단백질을 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
59. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제하는 데 있어서의 실시 형태 1, 실시 형태 2, 실시 형태 5 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나의 가스데르민 D 억제제 또는 항원-결합 단백질의 용도.
60. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 중화시키는 데 있어서의 실시 형태 3 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나의 가스데르민 D 억제제 또는 항원-결합 단백질의 용도.
61. 실시 형태 1 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나에 있어서, 가스데르민 D를 억제하는 데, 예컨대 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한, 억제제 또는 항원-결합 단백질.
62. 실시 형태 1 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나에 있어서, 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한, 억제제 또는 항원-결합 단백질.
63. 실시 형태 61에 있어서, 가스데르민 D의 억제는 하기와 같은, 가스데르민 D를 억제하는 데 사용하기 위한, 억제제 또는 항원-결합 단백질:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴.
64. 실시 형태 62에 있어서, 가스데르민 D의 중화는 하기와 같은, 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한, 억제제 또는 항원-결합 단백질:
i) 가스데르민 D의 활성의 중화; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 중화.
65. 실시 형태 1 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나에 있어서, 요법에 사용하기 위한, 억제제 또는 항원-결합 단백질.
66. 실시 형태 1 내지 실시 형태 45 또는 실시 형태 52 내지 실시 형태 56 중 어느 하나에 있어서, 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한, 억제제 또는 항원-결합 단백질.
67. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 가스데르민 D 억제제.
68. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 방법으로서,
가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함하며; 상기 가스데르민 D 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 방법.
69. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 데 있어서의 가스데르민 D 억제제의 용도로서, 상기 가스데르민 D 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 용도.
70. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하고;
상기 억제제는 요법에 사용하기 위한, 가스데르민 D 억제제.
71. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
그리고,
a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하고;
상기 억제제는 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한, 가스데르민 D 억제제.
실시예
실시예 1: 세포사 유도의 항체 기반 억제
항-가스데르민 D 항체를 시험하여, 인간 단핵구 세포주에서 NLRP3 인플라마좀 자극 시에 세포사 유도를 억제하는 그들의 능력을 평가하였다.
인간 THP-1 세포는 급성 단핵구성 백혈병(M5 아형)의 말초 혈액으로부터 유래되는 불멸화 단핵구-유사 세포주이다. THP-1 세포를 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지 중에서 배양하였다. 유지/증폭 배양 조건 하에서, 이들 세포는 부유 상태로 성장하지만, 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트를 사용한 하룻밤 분화 후 이들 세포는 성숙하여 부착성이 되었다. 분화 과정 후, 니제리신에 의한 자극에 의해 NLRP3 인플라마좀을 활성화시키는 것이 가능하였다. 이는 빠른 세포사 유도(전형적으로 1 내지 2시간 이내에 관찰됨)로 이어졌다. 이러한 빠른 세포사 유도(파이롭토시스)는 GSDMD 기공 형성에 의해 구동된다. 파이롭토시스는 용해 형태의 세포사이며, 살아있는 세포의 온전한 세포막을 가로지를 수 없는 DNA 염료의 형광 신호의 증가를 측정함으로써 모니터링될 수 있다. 이들 예에서, SYTOX™ 그린이 검출에 사용되는 염료이지만, 작동 원리는 FACS에서 프로피듐 요오다이드와 같은 화합물의 사용과 동일하다.
인간 THP-1 세포를 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지 중에서 배양하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 재현탁시키고, 계수하고, 마지막으로 96웰 플레이트 내에서 웰당 50,000개의 세포의 세포 밀도로 100 μl의 총 부피로 플레이팅하였다. 세포를 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지 중에서 100 ng/ml의 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA)와 함께 하룻밤 16시간 동안 인큐베이션하였다.
하룻밤 분화 후에, 세포는 96웰 플레이트에 대해 부착성을 나타내었으며, 배지를, PMA를 함유하지 않고 형광 염료 SYTOX™ 그린(1 μM 최종 농도)을 포함하는, 10% FCS, 소듐 피루베이트, 및 항생제 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지로 대체하였다. 이 실험을 진행하기 전에 세포를 2시간 동안 인큐베이션하였다.
니제리신에 의한 NLRP3 인플라마좀의 자극 전에, 세포를 0.15 내지 20 ㎍/ml의 가스데르민 D 표적화된 항체 또는 20 μM의 소분자 다이설피람 또는 30 μM의 소분자 네크로설폰아미드로 30분 동안 전처리하였다. 30분 후에, NLRP3 인플라마좀의 활성화를 20 μM의 농도로 니제리신을 세포에 첨가함으로써 자극하였다.
모의 대조군은 니제리신으로 유도되지 않았다. 게다가, 2 μM MCC-950을 사용하는 제2 음성 대조군을 또한 사용하였다. MCC-950은 NLRP3 인플라마좀의 강력한 억제제이며, 이에 따라 니제리신에 의한 자극 전에 MCC-950으로 30분 동안 전처리된 인간 THP-1 세포주는 NLRP3 인플라마좀 유도 세포사를 거치지 않아야 한다. 이 대조군은 관찰된 세포사가 실제로 NLRP3 인플라마좀 및 GSDMD 기공 형성에 의해 유도되었음을 보장하였다. 소분자 억제제인 네크로설폰아미드 및 다이설피람은 알려진 GSDMD 기공 형성 억제제이며, 이 연구에서 양성 대조군으로서 사용되었다.
전술된 실험을 반복하였지만, 시험된 항체는 인간 THP-1 세포주에 투여하기 전에 비등함으로써 변성되었다. 항체의 비등은 변성 및 그의 표적에 대한 결합의 손실로 이어질 것이다.
살아있는 세포 형광 이미징을 가능하게 하는 IncuCyte Live Cell Analysis 시스템을 사용하여, SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 세포사의 유도를 모니터링하였다. 세포사 유도를 4시간 동안 매 10분마다 모니터링하고, 이미지화된 세포를 IncuCyte 소프트웨어를 사용하여 분석하여, SYTOX™ 그린을 흡수한, 그리고 이에 따라 세포사를 겪은 세포의 백분율을 평가하였다.
100% 세포사 형광 신호는 Triton X-100 처리된 웰로부터 획득된 최대 신호로서 측정되고, 0.1% 최종 농도의 Triton X-100은 모든 세포를 용해시킬 것이며 모든 세포의 염색을 유도한다. 모든 형광 측정치는 이 값에 대해 정규화하였다.
이 실험 프로토콜은 특정 시점 - 바람직한 시점은 1시간 후임 - 에서의 세포사의 단회 판독을 수행하는 데 사용될 수 있거나, 세포사의 속도론적 특성을 추적하는 데 사용될 수 있다. 모든 실험은 조건당 2회 반복/3회 반복 측정을 사용하였다.
결과:
20 μM 니제리신과 인간 THP-1의 인큐베이션은 NLRP3 인플라마좀의 활성화를 통한 세포사의 유도를 가져왔다(도 1의 A, 도 1의 B, 도 2의 A, 및 도 2의 B). 니제리신(모의)로 처리되지 않았거나 강력한 NLRP3 억제제(MCC-950)로 처리된 인간 THP-1 세포는 세포사를 겪지 않았다(도 1의 A, 도 1의 B, 도 2의 A, 및 도 2의 B).
소분자 억제제인 네크로설폰아미드(30 μM) 및 다이설피람(20 μM)의 투여는 세포사 유도의 억제 및 지연을 가져왔는데(도 1의 A 및 도 1의 B), 이는 이 실험 프로토콜이 가스데르민 D의 억제를 측정하는 데 사용될 수 있음을 나타낸다.
가스데르민 D를 특이적으로 표적화하는 Ab5의 투여는 세포사 유도의 억제 및 지연을 가져왔다(도 2의 A, 도 2의 B, 및 도 3의 A 내지 도 3의 D). 이러한 활성은 Ab5에 특이적이며, 니제리신 및 다른 GSDMD 항체, 예컨대 Ab3과 인간 THP-1 세포주의 인큐베이션은 세포사에서의 억제 또는 지연으로 이어지지 않는다(도 4, 및 도 5의 A 내지 도 5의 D).
도 6에 제시된 바와 같이, 항체의 비등은 세포사 유도의 억제를 방지하는데, 이는, Ab5가 세포사 유도를 억제하기 위해서는, 그의 표적에 결합할 수 있는 그의 천연 입체형태 상태에 있어야 한다는 것을 입증한다.
실시예 2: 항체 결합의 웨스턴 블롯 분석
재조합 His-SUMO 태깅된 가스데르민 D(rGSDMD)를 E. 콜라이에서 생성하였다. 이 물질을 Ni/NTA 친화성 정제에 의해 정제하였다. 이 물질을 Ulp-1로 절단하여 태그를 제거하고, 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 수행하여 순도를 개선하였다.
재조합 가스데르민 D를 37℃에서 1시간 동안 재조합 카스파제-1과 함께 인큐베이션하였다. 웨스턴 블롯 전에 반응 혼합물을 SDS-PAGE로 진행시켰다. 웨스턴 블롯을 Ab5와 함께 인큐베이션하고, 서양고추냉이 퍼옥시다제에 접합된 2차 항체를 검출에 사용하였다.
결과:
카스파제-1에 의한 가스데르민 D의 절단은 약 31 kDa N-말단 도메인 및 약 22 kDa C-말단 도메인의 형성을 가져왔다(도 7의 A). 프로브로서 Ab5를 사용한, 재조합 가스데르민 D의 절단 반응의 웨스턴 블롯 분석은 Ab5가 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합한다는 것을 나타내었다. 도 7의 B에 제시된 바와 같이, Ab5는 전장 가스데르민 D 및 가스데르민 D의 N-말단 도메인 중 어느 하나에 결합할 수 있지만, C-말단 도메인에는 결합할 수 없다.
실시예 3: 차단 펩티드는 항체 기능을 중화시킨다
실시예 1에 기재된 실험 프로토콜을 사용하여 Ab5의 결합 에피토프를 결정하였다. THP-1 세포에 항체를 투여하기 전에, 항체(20 ㎍/ml의 농도)를 15분 동안 차단 펩티드(40 ㎍/ml의 농도)와 함께 인큐베이션하였다. 음성 대조군으로서, THP-1 세포를 또한 항체의 부재 하에서 차단 펩티드(40 ㎍/ml의 농도)와 함께 인큐베이션하였다.
후속으로, 니제리신에 의한 NLRP3 인플라마좀의 자극 전에, THP-1 세포를 항체/펩티드 혼합물로 30분 동안 전처리하였다. 30분 후에, NLRP3 인플라마좀의 활성화를 20 μM의 농도로 니제리신을 세포에 첨가함으로써 자극하였다. 세포사의 정도를 실시예 1에 기재된 바와 같이 측정하였다. 제조자의 설명서에 따라 Luminex 검정 시스템을 사용하여 니제리신 자극 후 80분째에 THP-1 세포로부터의 IL-1β 및 IL-18의 상층액 내로의 방출을 정량화하였다.
결과:
Ab5와 서열 KREGSGRFSLPGATC(서열 번호 9)의 펩티드의 인큐베이션은 세포사의 항체 의존적 억제를 방지하였다(도 8 및 도 9의 A 내지 도 9의 D). 따라서, 이 차단 펩티드의 활성은 Ab5가 서열 KREGSGRFSLPGATC(서열 번호 9)에 특이적으로 결합하여 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제한다는 것을 나타낸다. 세포와 차단 펩티드 단독의 인큐베이션은 니제리신-유도 세포사를 방지하지 않는다(도 10의 A). 세포사 억제에 더하여, Ab5는 사이토카인(IL-1β 및 IL-18) 방출을 차단하는 반면, 차단 펩티드의 존재 하에서의 Ab5의 인큐베이션은 사이토카인 수준에 영향을 미치지 않는다(도 10의 B 및 도 10의 C).
실시예 4: 1차 인간 단핵구에서의 IL-1β 방출의 억제
항-가스데르민 D 항체를 시험하여, 1차 인간 단핵구 세포주에서 NLRP3 인플라마좀 자극 시에 IL-1β 방출을 억제하는 그들의 능력을 평가하였다.
제조자의 설명서에 따라 Myltenyi Biotech로부터의 CD14 마이크로비드를 사용하여 신선한 인간 혈액 PBMC로부터 1차 인간 단핵구(CD14+)를 단리하였다. 1차 인간 단핵구를 사용 시까지 냉동된 채로 유지하였다.
세포를 해동시키고, 신선한 배지(10% FBS가 보충된 RPMI)로 2회 세척하고, 3시간 동안 100 ng/ml의 LPS로 프라이밍하였다. NLRP3 인플라마좀 활성화를 유도하기 위해 추가 1시간 동안 니제리신(15 μM)으로 자극하기 전에, 세포를 0.03 내지 0.5 ㎍/ml 농도의 가스데르민 D 특이적 항체(Ab5)로 15분 동안 전처리하거나, 과량(40 ㎍/ml)의 펩티드 KREGSGRFSLPGATC와 함께 인큐베이션된 가스데르민 D 특이적 항체(Ab5)로 전처리하였다. 양성 대조군으로서는, 니제리신으로 자극하기 15분 전에, 세포를 100 ng/ml의 LPS와 함께 인큐베이션하고, 항체와 대조적인 것으로서 인산염 완충 식염수(PBS)로 전처리하였다. 음성 대조군으로서는, 세포를 LPS와 함께 인큐베이션하였지만, 니제리신과 함께 인큐베이션하지 않았다.
세포 상층액을 니제리신에 의한 처리 후 1시간째에 수집하고, 1차 인간 단핵구 세포로부터의 IL-1β의 상층액 내로의 방출을 제조자의 설명서에 따라 Meso Scale Discovery(MSD) 검정 시스템을 사용하여 정량화하였다.
결과:
LPS 및 니제리신(LN)으로 처리된 1차 인간 단핵구 세포는 IL-1β를 상층액 내로 방출하였는데(도 11), 이는, NLRP3 인플라마좀의 활성화 시에 가스데르민 D 기공이 형성됨을 시사한다. 세포가 LPS만으로 처리된 모의 대조군(LPS)은 IL-1β의 방출을 가져오지 않았다(도 11).
니제리신에 의한 자극 전에, 항체 Ab5(0.03 내지 0.5 ㎍/ml)에 의한 1차 인간 단핵구의 전처리는 용량 의존적 방식으로 이들 세포로부터의 IL-1β의 방출의 억제로 이어졌다(백색 막대). 이와 비교하여, 과량의 차단 펩티드(KREGSGRFSLPGATC)와 함께 인큐베이션된 항체 Ab5로 전처리된 세포는 IL-1β를 상층액 내로 방출하였다. 이 데이터는 THP-1 세포주로부터의 데이터와 일치하며, 가스데르민 D 특이적 항체가 1차 인간 단핵구로부터 IL-1β의 가스데르민 D 특이적 방출을 억제할 수 있음을 나타낸다.
실시예 5: 뮤린 세포에서 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사의 억제
뮤린 세포(Balb/C 마우스로부터의 1차 뮤린 골수 유래 대식세포(BMDM))를 사용하여 실시예 1의 실험 프로토콜을 반복하여 Ab5가 뮤린 세포에서 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사를 억제할 수 있는지의 여부를 평가하였다.
결과:
뮤린 세포에서 니제리신의 존재 하에서, 20 ㎍/ml 농도의 Ab5의 인큐베이션은 파이롭토시스에 의한 세포사를 억제할 수 없다(도 12). 고농도의 항체(20 ㎍/ml)는 1차 뮤린 BMDM에 대해 독성이다. 실시예 6에서 입증된 바와 같이, 더 낮은 농도의 항체(0.03 내지 0.5 ㎍/ml)는 뮤린 세포가 잘 참아낸다.
실시예 6: 뮤린 세포에서 파이롭토시스에 의해 유도되는 세포사 및 IL-1β 방출의 억제
항-가스데르민 D 항체를 시험하여, 뮤린 가스데르민 D와 교차반응하여 뮤린 세포에서 NLRP3 또는 NLRP1B 인플라마좀 자극 시에 세포사 및 IL-1β 방출을 억제하는 이들의 능력을 평가하였다.
Balb/C 마우스는 탄저 치사 독소(LeTx) 감수성 NLRP1B 대립유전자를 발현한다. 따라서, LeTx와의 BMDM 세포의 인큐베이션은 NLRP1B 인플라마좀의 특이적 활성화를 가능하게 한다. 이는 NLRP3의 니제리신 특이적 활성화와 유사하다.
Balb/C 마우스의 경골 및 대퇴골로부터 골수를 단리하였다. L929 배양 상층액과 혼합된, 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신 보충된 IMDM 배지 중에서 6일 동안 배양함으로써, 세포가 골수 유래 대식세포(BMDM)로 분화되었다. 분화 후에, 세포를 세척하고, 수집하고, 96웰 플레이트에서 웰당 50,000개의 세포의 밀도로 10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 신선한 IMDM 배지 중에 플레이팅하고, 하룻밤 부착되게 하였다.
세포를 세척하고, 배지를 교체하고, 1 μM SYTOX™ 그린(ThermoFisher)을 보충하였다. 이는 실시예 1에 기재된 바와 같이 Incucyte 장치(Essenbio)를 사용하여 세포사 유도의 속도론적 측정을 가능하게 한다. 세포를 3시간 동안 100 ng/ml의 LPS로 프라이밍하였다. NLRP3 또는 NLRP1B 인플라마좀의 자극 전에, 세포를 0.125 내지 0.5 ㎍/ml 농도의 가스데르민 D 특이적 항체(Ab5)로 15분 동안 전처리하거나, 과량(40 ㎍/ml)의 차단 펩티드 KREGSGRFSLPGATC와 함께 인큐베이션된 가스데르민 D 특이적 항체(Ab5)로 전처리하였다. 양성 대조군으로서는, 인플라마좀 자극 전에, 항체와 대조적인 것으로서 PBS로 15분 동안 세포를 전처리하였다.
이어서, 세포를 추가 1.5시간 동안 NLRP3 활성화제, 니베리신(15 μM) 또는 NLRP1B 활성화제, 탄저 치사 독소(LeTx)(1 ㎍/ml의 보호 항원(PA) + 0.5 ㎍/ml의 치사 인자(LF))로 자극하였다. 음성 대조군으로서는, 세포를 LPS와 함께 인큐베이션하였지만, 니제리신 또는 LeTx와 함께 인큐베이션하지 않았다.
실시예 1에 기재된 IncuCyte Live Cell Analysis 시스템을 사용하여, SYTOX™ 그린의 흡수에 의해 세포사의 유도를 모니터링하였다. 세포사 유도를 1.5시간 동안 매 10분마다 모니터링하고, 이미지화된 세포를 IncuCyte 소프트웨어를 사용하여 분석하여, SYTOX™ 그린을 흡수한, 그리고 이에 따라 세포사를 겪은 세포의 백분율을 평가하였다. 1.5시간 후에, 세포 상층액을 수집하고, 뮤린 세포로부터의 IL-1β의 상층액 내로의 방출을 제조자의 설명서에 따라 Luminex 검정 시스템을 사용하여 정량화하였다.
결과:
LPS와 니제리신(LN), 또는 LPS와 LeTx(LLeTx)로 처리된 뮤린 세포는 NLRP3 및 NLRP1B 인플라마좀의 활성화 시에 상층액 내로 IL-1β를 방출하고(도 13의 A 및 도 14의 A), 세포사를 겪었다(도 13의 B 및 도 14의 B). 세포가 LPS만으로 처리된 모의 대조군은 IL-1β의 방출 또는 세포사를 가져오지 않았다(도 13의 A, 도 13의 B, 도 14의 A, 도 14의 B).
니제리신 또는 LeTx에 의한 자극 전에, 항체 Ab5(0.125 내지 0.5 ㎍/ml)에 의한 뮤린 세포의 전처리는 용량 의존적 방식으로 이들 세포로부터의 IL-1β의 방출을 억제하고, 또한 세포사를 억제하였다(도 13의 A, 도 13의 B, 도 14의 A, 도 14의 B). 이는, 항-가스데르민 D 항체 Ab5가 뮤린 가스데르민 D와 교차반응하여 뮤린 세포에서 가스데르민 D 의존적 IL-1β 방출 및 세포사를 억제할 수 있음을 입증한다.
도 14의 A 및 도 14의 B에 나타낸 데이터는 또한, 뮤린 가스데르민 D가 NLRP1B 인플라마좀에 의해 활성화되고, NLRP1B 인플라마좀의 활성화 시에 유도되는 세포사 및 IL-1β 방출이 가스데르민 D를 표적화하는 항체에 의해 억제될 수 있음을 입증한다.
과량의 차단 펩티드(KREGSGRFSLPGATC)와 함께, 항체 Ab5와 인큐베이션된 뮤린 세포는 NLRP3 또는 NLRP1B 인플라마좀 활성화 시에 상층액 내로 IL-1β를 방출하고 세포사를 겪었다(도 13의 A, 도 13의 B, 도 14의 A, 및 도 14의 B).
실시예 7: 리포좀 누출 검정
재조합 가스데르민 D(50 ㎍/ml, 사내 제조)를 HEPES 완충액(20 mM HEPES, 150 mM NaCl) 중에서, 다이설피람(Sigma), 가스데르민 D 특이적 항체 Ab5, 또는 파이롭토시스를 억제하지 않는 가스데르민 D 항체 토끼 다중클론 제제로 15분 동안 전처리하였다. 혼합물을 HEPES 완충액 (20 mM HEPES, 150 mM NaCl) 중 칼세인 충전된 리포좀(POPE:POPS:POPC 지질 조성, 칼세인 캡슐화된 리포좀, Encapsula) 및 재조합 카스파제-1(10 ㎍/ml, Enzo Life Sciences)의 혼합물이 담긴 384웰 플레이트에 첨가하였다. 재조합 카스파제 1에 의한 재조합 가스데르민 D의 절단은 리포좀 내로의 가스데르민 D의 삽입 및 칼세인의 방출을 가져온다. 리포좀에서, 칼세인은 자가 실활(self quenching)로 이어지는 농도로 존재하며, 이에 따라 그것은 리포좀으로부터 방출 시에만 검출된다.
495 nm에서 설정된 여기 및 515 nm에서의 방출을 갖는 Spectramax(Molecular Devices)를 사용하여, 리포좀 밖으로의 칼세인의 누출을 42분 동안 매 3분마다 측정하였다.
결과:
알려진 가스데르민 D 기공 차단 소분자인 다이설피람에 의한 가스데르민 D의 전처리는 모든 시험된 농도에서 칼세인 누출을 강력하게 차단하였다(도 15의 A). 유사하게, 가스데르민 D 의존적 세포사 및 IL-1β 방출을 억제하는 것으로 알려진 Ab5에 의한 재조합 가스데르민 D의 전처리(실시예 1, 실시예 3, 실시예 4 및 실시예 6)는 또한 용량 의존적 방식으로 리포좀으로부터의 칼세인 누출을 억제하였다(도 15의 B). 이와 비교하여, 파이롭토시스를 억제할 수 없는 표적화된 항체에 의한 가스데르민 D의 전처리는 또한 리포좀으로부터 칼세인 방출을 차단할 수 없었다(도 15의 C). 이는, 이러한 비억제성 항체의 존재 하에서, 가스데르민 D가 카스파제-1에 의해 효율적으로 절단되고 리포좀 내로 삽입되어 기공을 형성할 수 있음을 시사한다.
서열
서열 번호 1
가스데르민 D 전장
MGSAFERVVRRVVQELDHGGEFIPVTSLQSSTGFQPYCLVVRKPSSSWFWKPRYKCVNLSIKDILEPDAAEPDVQRGRSFHFYDAMDGQIQGSVELAAPGQAKIAGGAAVSDSSSTSMNVYSLSVDPNTWQTLLHERHLRQPEHKVLQQLRSRGDNVYVVTEVLQTQKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLSQKKTVTIPSGSTLAFRVAQLVIDSDLDVLLFPDKKQRTFQPPATGHKRSTSEGAWPQLPSGLSMMRCLHNFLTDGVPAEGAFTEDFQGLRAEVETISKELELLDRELCQLLLEGLEGVLRDQLALRALEEALEQGQSLGPVEPLDGPAGAVLECLVLSSGMLVPELAIPVVYLLGALTMLSETQHKLLAEALESQTLLGPLELVGSLLEQSAPWQERSTMSLPPGLLGNSWGEGAPAWVLLDECGLELGEDTPHVCWEPQAQGRMCALYASLALLSGLSQEPH
서열 번호 2
가스데르민 D N-말단 도메인
MGSAFERVVRRVVQELDHGGEFIPVTSLQSSTGFQPYCLVVRKPSSSWFWKPRYKCVNLSIKDILEPDAAEPDVQRGRSFHFYDAMDGQIQGSVELAAPGQAKIAGGAAVSDSSSTSMNVYSLSVDPNTWQTLLHERHLRQPEHKVLQQLRSRGDNVYVVTEVLQTQKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLSQKKTVTIPSGSTLAFRVAQLVIDSDLDVLLFPDKKQRTFQPPATGHKRSTSEGAWPQLPSGLSMMRCLHNFLTD
서열 번호 3
가스데르민 D C-말단 도메인
GVPAEGAFTEDFQGLRAEVETISKELELLDRELCQLLLEGLEGVLRDQLALRALEEALEQGQSLGPVEPLDGPAGAVLECLVLSSGMLVPELAIPVVYLLGALTMLSETQHKLLAEALESQTLLGPLELVGSLLEQSAPWQERSTMSLPPGLLGNSWGEGAPAWVLLDECGLELGEDTPHVCWEPQAQGRMCALYASLALLSGLSQEPH
서열 번호 4
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
PNTWQTLLHERHLRQPEHKVLQQLRSRGDNVYVVTEVLQTQKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLSQKKTVTIPSGSTLAFRVAQLVIDSDLDVLLFPDKKQRTFQ
서열 번호 5
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
RHLRQPEHKVLQQLRSRGDNVYVVTEVLQTQKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLSQKKTVTIPSGSTLAFRVAQLVIDSDLDVLL
서열 번호 6
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
LQQLRSRGDNVYVVTEVLQTQKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLSQKKTVTIPSGSTLAFRVAQL
서열 번호 7
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
VYVVTEVLQTQKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLSQKKTVTIPSG
서열 번호 8
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
QKEVEVTRTHKREGSGRFSLPGATCLQGEGQGHLS
서열 번호 9
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
KREGSGRFSLPGATC
서열 번호 10
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
EHKVLQQLRSRGD
서열 번호 11
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
AFERVVRRVVQELD
서열 번호 12
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
YCLVVR
서열 번호 13
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
YKCVNLS
서열 번호 14
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
MDGQIQG
서열 번호 15
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
PNTWQTLLHE
서열 번호 16
가스데르민 D N-말단 도메인의 단편
DLDV
서열 번호 17
뮤린 가스데르민 D 단편
SQEGSGQFTLPGALC

Claims (26)

  1. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
    예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는, 가스데르민 D 억제제.
  2. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키는 가스데르민 D 억제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같은, 가스데르민 D 억제제:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    i) 세포외 억제제이고/이거나;
    ii) 세포 표면 상의 가스데르민 D에 결합하고/하거나;
    iii) 가스데르민 D에 결합하고, 가스데르민 D에 결합되어 있지 않는 한 세포막을 가로지르지 않는, 억제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 대분자인, 예컨대 상기 억제제는 > 2 kDa, > 3 kDa, > 4 kDa, > 5 kDa, > 6 kDa, > 7 kDa, > 8 kDa, > 9 kDa 또는 > 10 kDa의 분자량을 갖는, 억제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하는, 억제제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하는, 예컨대 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하는, 억제제.
  8. 제7항에 있어서, 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하는, 억제제.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 또는 서열 번호 9에 결합하는, 예컨대 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 억제제.
  10. 제9항에 있어서, 서열 번호 9에 결합하는, 억제제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 그의 회합을 억제하고, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 지질과의 가스데르민 D의 회합을 중화시키고, 선택적으로 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 그의 회합을 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 포스파티딜이노시톨 4-포스페이트 및/또는 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트와의 가스데르민 D의 회합을 중화시키는, 억제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D의 올리고머화를 억제하고, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 올리고머화를 중화시키고, 선택적으로 상기 억제제는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 억제하는, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 중화시키는, 억제제.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 가스데르민 D 다량체성 기공에 결합하는, 예컨대
    i) 상기 억제제는 상기 기공을 차단하거나; 또는
    ii) 상기 억제제는 상기 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하는, 억제제.
  14. 제13항에 있어서, 상기 다량체성 기공의 가스데르민 D 하위단위에 결합하는, 예컨대
    i) 상기 억제제는 상기 기공을 차단하거나; 또는
    ii) 상기 억제제는 상기 기공의 가스데르민 D 하위단위들 사이의 단백질-단백질 상호작용을 파괴하는, 억제제.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, IL-1β 및/또는 IL-18의 방출을 억제하는, 억제제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 억제제는 단백질성이며, 예를 들어 항원-결합 단백질이고, 예컨대 상기 항원-결합 단백질은 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 억제제.
  17. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 방법으로서,
    제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  18. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 데 있어서의 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 가스데르민 D 억제제의 용도.
  19. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 선택적으로 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같은, 가스데르민 D를 억제 및/또는 중화시키는 데, 예컨대 가스데르민 D를 중화시키는 데 사용하기 위한, 억제제:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴.
  20. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한, 억제제.
  21. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야(Chikungunya) 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한, 억제제.
  22. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
    예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
    그리고,
    a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
    b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
    c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
    d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 가스데르민 D 억제제.
  23. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 방법으로서,
    가스데르민 D 억제제를 가스데르민 D와 접촉시키는 단계를 포함하며; 상기 가스데르민 D 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
    그리고,
    a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
    b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
    c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
    d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 방법.
  24. 가스데르민 D의 활성 및/또는 기능을 억제 및/또는 중화시키는 데 있어서의 가스데르민 D 억제제의 용도로서,
    상기 가스데르민 D 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하며, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
    그리고,
    a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
    b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
    c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
    d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하는, 용도.
  25. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
    예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
    그리고,
    a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
    b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
    c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
    d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하고;
    상기 억제제는 요법에 사용하기 위한, 가스데르민 D 억제제.
  26. 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 억제하는 가스데르민 D 억제제로서,
    예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D에 결합하여 가스데르민 D를 중화시키며, 가스데르민 D의 억제 및/또는 중화는 하기와 같으며:
    i) 가스데르민 D의 활성의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 활성을 중화시킴; 및/또는
    ii) 가스데르민 D의 기능의 억제 및/또는 중화, 예컨대 상기 억제제는 가스데르민 D의 기능을 중화시킴;
    그리고,
    a) 상기 억제제는 세포외 억제제이고;
    b) 상기 억제제는 가스데르민 D의 N-말단 도메인에 결합하고;
    c) 상기 억제제는 서열 번호 9를 포함하는 에피토프에 결합하고;
    d) 상기 억제제는 서열 번호 9에 결합하고;
    상기 억제제는 패혈증, 패혈성 쇼크, 비알코올성 지방성 간염, 폐암, 가족성 지중해열, 자가염증성 질병, 크라이오피린-관련 주기성 증후군, 비알코올성 지방간 질병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 연령 관련 황반 변성, 죽상경화증, 천식 및 알레르기 기도 염증, 통풍, 크론병, 궤양성 결장염, 염증성 장 질병, 고혈압, 신장병증, 심근경색증, 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌염, 인플루엔자 감염 후 초염증, 이식편 대 숙주 질병, 뇌졸중, 규폐증, 석면증, 중피종, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 비만-유도 염증, 인슐린 저항성, 류마티스성 관절염, 골수이형성 증후군, 접촉 과민증, 치쿤구니야 바이러스에 의해 촉발된 관절 염증 및 외상성 뇌 손상으로부터 선택되는 적응증의 치료에 사용하기 위한, 가스데르민 D 억제제.
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