JP2022540064A - ヘリコバクターピロリに対する徐放性胃内滞留製剤 - Google Patents

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Abstract

本書には、カルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒドの共役体を含む徐放性胃内滞留剤形であって、前記共役体が、前記シンナムアルデヒドのアルデヒド基と前記カルボキシル化多糖のヒドロキシル基との間で形成されるアセタール、ヘミアセタール又は環状ヘミアセタールを介して形成される、徐放性胃内滞留剤形が記載されている。また、本書には、約７．５乃至７．９のｐＨ値を有し、かつ乳化剤で安定化されたアルテスネート又はその薬学的に許容される塩及びその立体異性体を含むアルテスネートエマルジョンを含む、徐放性胃内滞留剤形が記載されている。また、本書では、ヘリコバクター・ピロリ感染の治療のための剤形の使用も記載されている。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／８６７，９５１号の優先権を主張するものであり、その明細書は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
背景
（ａ）分野
開示される主題は、一般に、徐放性胃内滞留剤形に関する。より具体的には、開示される主題は、ヘリコバクターピロリ及び／又は癌の治療のためのシンナムアルデヒド及び／又はアルテスネートを含む徐放性胃内滞留剤形に関する。
（ｂ）関連する先行技術
広範囲の薬用植物及び芳香植物がその精油のために探索されてきた。これらのオイルは、さまざまな細菌、真菌、ウイルスの病原体を効果的に破壊するため、生物医学の分野で大きな可能性を秘めている。精油は、アロマセラピーや、心血管疾患、糖尿病、アルツハイマー病、癌などのいくつかの疾患の治療にも使用されている。様々な種類のアルデヒド類、フェノール類、テルペン類、及び他の抗菌化合物を含むことは、精油が多様な範囲の病原体に対して有効であることを意味する。
精油（ＥＯ）は、フェノール性化合物を主成分とする疎水性の植物抽出物で、細菌の膜を破壊することで作用する。多くの研究により、オレガノ油、シナモン油、タイム油などのＥＯが、大腸菌、リステリア・モノサイトゲネス、ネズミチフス菌、黄色ブドウ球菌、ウェルシュ菌及びボツリヌス菌に対して重要な抗菌活性を有することが実証された。また、これらのＥＯがカンピロバクター・ジェジュニ、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、リステリア・モノサイトゲネス、及びサルモネラ菌に対して強力な殺菌活性をもっていることを実証した。
近年、抗菌薬耐性菌の蔓延により、研究者は、様々なヒト病原体を治療するための新規な抗菌リード分子を発見するようになった。現在利用可能な合成薬物の中には、多くの病原体を抑制することができないものがある。加えて、病原性微生物の制御のための合成化学物質の使用は、それらの発癌効果、急性毒性、及び潜在的な環境危険性のために制限される。この点に関して、病原性微生物の流行性多剤耐性を制御するための精油の利用は、種々の感染性疾患と闘うために有用であり得る。
ＥＯは、広範囲の異なる化学的分類から派生される疎水性かつ高揮発性の成分であり、ＥＯは、いくつかのパラメータ、特に温度、光、及び酸素などによる変換及び分解反応を受けやすいことが知られており、ＥＯの完全性に重大な影響を及ぼすことが認識されている。自動酸化や重合の過程で、品質や薬理学的特性が損なわれる可能性がある。さらに、油性の液体の形態であるため、薬学的な応用が制限される。このような理由から、ＥＯを保護し、特に保存中の安定性を保つための解決策が求められている。
本発明は、精油化合物、特にシンナムアルデヒドの保存と安定化のために、マイクロカプセル化システムによる解決策を提示することを提案する。本発明は、他のマイクロカプ
セル化システムの欠点を緩和することを期待している。
本発明は、シンナムアルデヒドを安定化させるために、カルボキシル化多糖との共役を提案し、したがって、化学的特性を維持し、蒸発や劣化を防止又は低減させるものである。
概要
一実施形態によれば、カルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒドの共役体を含む徐放性胃内滞留剤形であって、前記共役体が、前記シンナムアルデヒドのアルデヒド基と前記カルボキシル化多糖のヒドロキシル基との間で形成されるアセタール、ヘミアセタール又は環状ヘミアセタールを介して形成される、徐放性胃内滞留剤形が提供される。
前記カルボキシル化多糖が、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、カルボキシメチル高アミロースデンプン、カルボキシエチルデンプン、カルボキシエチル高アミロースデンプン、スクシニルデンプン、スクシニル高アミロースデンプン、カルボキシメチルグアーガム、カルボキシメチルヒドロキシプロピルグアーガム、ジェランガム、キサンタンガム、アルギン酸塩、ペクチン酸塩、ヒアルロン酸塩、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記カルボキシル化多糖は、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記カルボキシル化多糖が下記一般式（Ｉ）、又はその薬学的に許容される塩、及びその立体異性体であってもよい。
Figure 2022540064000002
 （式（Ｉ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
Figure 2022540064000003
 を表し；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；
ｍは０乃至４を表し；
ｐは０乃至８を表し；そして
Figure 2022540064000004
 は、前記Ｒ１’に結合する共有結合を示し、
Figure 2022540064000005
 は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
前記一般式（Ｉ）の前記カルボキシル化多糖が下記一般式（Ｉａ）であってもよい。
Figure 2022540064000006
 （式（Ｉａ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
Figure 2022540064000007
 を表し；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ４、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
ｍは０乃至４を表し；
ｐは０乃至８を表し；
Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；そして
Figure 2022540064000008
 は、前記Ｒ１’に結合する共有結合を示し、
Figure 2022540064000009
 は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
Ｒ２がＯ－ＣＨ２ＣＯＯ－であってもよい。
前記カルボキシル化多糖が、約０．０１乃至約１．０のカルボキシル含有基の置換度を有してもよい。
前記置換度が約０．２乃至約０．４であってもよい。
前記置換度が０．４であってもよい。
前記シンナムアルデヒドが、前記カルボキシル化ポリマー上に約０．０１乃至約０．２０の置換度を有してもよい。
別の実施形態によれば約７．５乃至７．９のｐＨ値を有し、かつ乳化剤で安定化されたアルテスネート又はその薬学的に許容される塩及びその立体異性体を含むアルテスネートエマルジョンを含む、徐放性胃内滞留剤形が提供される。
前記アルテスネートエマルジョンにおける前記アルテスネートの薬学的に許容される塩と前記乳化剤との重量比が、約９：１乃至約１：１であってもよい。
前記重量比が３：２であってもよい。
前記乳化剤が界面活性剤であってもよい。
前記界面活性剤が、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性の界面活性剤、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ソルビタン、ソルビタンエステル、ラウレス硫酸ナトリウム、サルコシル、コカミドプロピルベタイン（ＣＡＰＢ）、ラウリルエーテルスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ノニルフェノールエトキシレート、ヘキサデシルベタイン、ラウリルベタイン、エーテルエトキシレート、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレ
ート、及び３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）からなる群より選択されてもよい。前記界面活性剤は、好ましくはラウリル硫酸ナトリウムであってもよい。
前記乳化剤がコール酸塩であってもよい。前記コール酸塩が、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸及びリトコール酸からなる群から選択されてもよい。
前記ｐＨ値が弱塩基で得られてもよい。前記弱塩基が炭酸塩であってもよい。前記炭酸塩が、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、及び炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）からなる群から選択されてもよい。
前記徐放性胃内滞留剤形はプロトンポンプ阻害薬をさらに含んでもよい。前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記徐放性胃内滞留剤形は抗生物質をさらに含んでもよい。前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせであってもよい。
本発明の徐放性胃内滞留剤形は、カルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒドの共役体を含んでもよく、本発明によるアルテスネートエマルジョンを含む徐放性胃内滞留剤形をさらに含んでもよい。
前記徐放性胃内滞留剤形は、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療に使用するためのものであってもよい。
使用のための前記徐放性胃内滞留剤形は、プロトンポンプ阻害薬の使用をさらに含んでもよい。前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせであってもよい。
使用のための前記徐放性胃内滞留剤形は、抗生物質をさらに含んでもよい。前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせであってもよい。
本発明の徐放性胃内滞留剤形において、前記塩はその薬学的に許容される塩であってもよい。
別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法であって、それを必要とする対象に、本発明の徐放性胃内滞留剤形の治療有効量を投与することを含む方法が提供される。
別の実施形態によれば、治療有効量の本発明の徐放性胃内滞留剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法が提供される。
別の実施形態によれば、治療有効量の本発明の徐放性胃内滞留剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法が提供される。
前記方法は、治療有効量のプロトンポンプ阻害薬を、それを必要とする対象に投与することをさらに含んでもよい。前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記方法は、治療有効量の抗生物質を、それを必要とする前記対象に投与することをさらに含んでもよい。前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に、又は同時に投与されてもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に投与されてもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約１０分前から約６０分前に投与されてもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約２０分前から約３０分前に投与されてもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約３０分前に投与されてもよい。
前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形の前、後、又は同時に投与されてもよい。
前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形と同時に投与されてもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が前記徐放性胃内滞留剤形の前に投与されてもよく、前記抗生物質が前記徐放性胃内滞留剤形と同時又は後に投与されてもよい。
別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための、それを必要とする対象における本発明の徐放性胃内滞留剤形の使用が提供される。
別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための、それを必要とする対象における本発明の徐放性胃内滞留剤形の使用が提供される。
別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わ
せの予防又は治療のための医薬品の調製のための、それを必要とする対象における本発明の徐放性胃内滞留剤形の使用が提供される。
別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための医薬品の調製のための、それを必要とする対象における本発明の徐放性胃内滞留剤形の使用が提供される。
前記使用は、プロトンポンプ阻害薬の使用をさらに含んでもよい。前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に、又は同時に使用するためのものであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に使用するためのものであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約１０分前から約６０分前に使用するためのものであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約２０分前から約３０分前に使用するためのものであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約３０分前に使用するためのものであってもよい。
前記使用は、抗生物質をさらに含んでもよい。
前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせであってもよい。
前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形の前、後、又は同時に使用するためのものであってもよい。
前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形と同時に使用するためのものであってもよい。
前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に使用するためのものであってもよく、前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形と同時又は後に投与されてもよい。
別の実施形態によれば、アルテスネートエマルジョンを含む徐放性胃内滞留製剤の調製方法であって、
ａ）乳化剤を含む緩衝液に、アルテスネート、又はその薬学的に許容される塩、又はその立体異性体を導入して、乳化アルテスネート溶液を得る工程、
ｂ）前記乳化アルテスネート溶液のｐＨ値を約７．５乃至約７．９に調整し、調整された乳化アルテスネート溶液を得る工程；並びに
ｃ）前記調整された乳化アルテスネート溶液を乾燥させて、約７．５乃至約７．９のｐＨ値を有する乳化アルテスネートの乾燥粉末を得る工程
を含む、調製方法が提供される。
前記乳化アルテスネートの乾燥粉末のｐＨ値が約７．７５であってもよい。
前記アルテスネートの薬学的に許容される塩と前記乳化剤との重量比が約９：１乃至約１：１であってもよい。
前記重量比が３：２であってもよい。
前記乳化剤が界面活性剤であってもよい。
前記界面活性剤が、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性の界面活性剤、又はそれらの組み合わせであってもよい。
前記界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ソルビタン、ソルビタンエステル、ラウレス硫酸ナトリウム、サルコシル、コカミドプロピルベタイン（ＣＡＰＢ）、ラウリルエーテルスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ノニルフェノールエトキシレート、ヘキサデシルベタイン、ラウリルベタイン、エーテルエトキシレート、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレート、及び３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）からなる群より選択されてもよい。前記界面活性剤は、好ましくはラウリル硫酸ナトリウムであってもよい。
前記乳化剤がコール酸塩であってもよい。前記コール酸塩が、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸及びリトコール酸からなる群から選択されてもよい。
前記ｐＨ値が弱塩基で得られるものであってもよい。前記弱塩基が炭酸塩であってもよい。前記炭酸塩が、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、及び炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）からなる群から選択されてもよく、それらの組み合わせであってもよい。
前記乾燥が噴霧乾燥であってもよい。
以下の用語を以下に定義する。
特に指定のない限り、以下の定義が適用される。
単数形“ａ”、“ａｎ”及び“ｔｈｅ”は、文脈上他に明確に指示されない限り、対応する複数形の参照を含む。
本明細書中で使用される場合、“含む”という用語は、単語“含む”に続く要素のリストが必要又は必須であるが、他の要素は任意であり、存在してもしなくてもよいことを意味するよう意図されている。
本明細書中で使用される場合、“からなる”という用語は、語句“からなる”の後に続
くものを含み、かつそれに限定することを意味することを意図する。したがって、“からなる”という語句は、列挙された要素が必要又は必須であり、他の要素が存在しない可能性があることを示す。
本明細書において、“好ましくは”、“一般的に”、“典型的には”という用語は、請求項に係る発明の範囲を限定するために、また、請求項に係る発明の構造又は機能にとって特定の特徴が決定的、必須、あるいは重要であることを示唆するために利用するものでもないことに留意されたい。むしろ、これらの用語は、単に、本発明の特定の実施形態において利用することができる、又は利用することができない代替的又は追加的な特徴を強調することを意図しているにすぎない。
本発明を説明及び定義する目的で、“実質的に”という用語は、本明細書では、任意の定量的比較、値、測定、又は他の表現に起因し得る固有の不確実性の程度を表すために使用されることに留意されたい。また、本明細書では、“実質的に”という用語は、問題となっている主題の基本的な機能に変化をもたらすことなく、定量的表現が記載された基準から変化し得る程度を表すために使用される。
本明細書中で使用される場合、“対象”という用語は、ヒト及び霊長類、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ、ラット、マウスなどの非ヒト哺乳動物を意味することが意図される。
本明細書中で使用される場合、“化合物”又は“本発明の化合物”という用語は、本明細書中に記載される共役複合体及び／又は複合体を意味することが意図される。
本明細書中で使用される場合、“薬学的に受容可能な担体、希釈剤又は賦形剤”という用語は、限定されるものではないが、任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、保存料、色素／着色剤、香味増強剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、乳化剤、又はカプセル化剤、例えば、リポソーム、シクロデキストリン、カプセル化ポリマー送達系又はポリエチレングリコールマトリックスを意味することが意図され、これらは、対象、好ましくはヒトにおける使用に許容されるものである。
本明細書中で使用される場合、“薬学的に許容される塩”という用語は、酸及び塩基付加塩の両方を意味することが意図される。
本明細書中で使用される場合、“薬学的に許容される酸付加塩”という用語は、遊離塩基の生物学的効果及び特性を保持し、生物学的又はその他の点で望ましくないものではなく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等などの無機酸、及び酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸を用いて形成される塩を意味することが意図される。
本明細書中で使用される場合、“薬学的に許容される塩基付加塩”という用語は、遊離酸の生物学的効果及び特性を保持する塩を意味することが意図され、これらは生物学的又は他の点で望ましくないものではない。これらの塩は、遊離酸への無機塩基又は有機塩基の添加から調製される。無機塩基から誘導される塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、アルミニウム塩などが挙げられるがこれらに限定されない。有機塩基から誘導される塩としては、第一級、第二級及び第三級アミンの塩、天然に存在する置換アミン
を含む置換アミンの塩、環状アミンの塩及び塩基性イオン交換樹脂の塩、例えば、イソプロピルアミン塩、トリメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、トリプロピルアミン塩、エタノールアミン塩、２－ジメチルアミノエタノール塩、２－ジエチルアミノエタノール塩、ジシクロヘキシルアミン塩、リジン塩、アルギニン塩、ヒスチジン塩、カフェイン塩、プロカイン塩、ヒドラバミン塩、コリン塩、ベタイン塩、エチレンジアミン塩、グルコサミン塩、メチルグルカミン塩、テオブロミン塩、プリン塩、ピペラジン塩、ピペリジン塩、Ｎ－エチルピペリジン塩、ポリアミン樹脂の塩などが挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書中で使用される場合、“治療有効量”という用語は、対象に投与された場合に、不十分なアポトーシスに関連する疾患状態の治療を達成するのに十分である式Ｉの化合物の量を意味することが意図される。式Ｉの化合物の量は、化合物、症状及びその重症度、並びに治療される対象の年齢に依存して変化するが、当業者自身の知識及び本開示を考慮して、当業者によって慣用的に決定され得る。
本明細書中で使用される場合、“治療すること”又は“治療”という用語は、本明細書中で開示されるように、対象において不十分なアポトーシスに関連する疾患状態の治療を意味することを意図し、以下を含む：（ｉ）対象において不十分なアポトーシスに関連する疾患又は症状が発生するのを防止すること、特に、かかる哺乳動物が疾患又は症状の素因を有するが、まだそれを有すると診断されていない場合に防止すること；（ｉｉ）不十分なアポトーシスに関連する疾患又は症状を抑制すること、すなわち、その発生を停止すること；又は（iii）不十分なアポトーシスに関連する疾患又は症状を緩和すること、すなわち、症状の退行を引き起こすこと。
本明細書中で使用される場合、“癌を治療すること”という用語は、癌に罹患している対象、好ましくはヒトに本発明の医薬組成物を投与して、癌細胞の殺傷、増殖の抑制、又は転移の阻害によって癌の緩和を引き起こすことを意味することが意図される。
本明細書中で使用される場合、“疾患を予防する”という用語は、癌の場合、癌に罹患した対象、好ましくはヒトに本発明の医薬組成物を外科手術後、化学療法後又は放射線療法後に投与し、残存する癌細胞を殺傷、その増殖を抑制し又はその転移を阻害することで癌の再発を予防することを意図するものである。また、この定義には、喘息、ＭＳなどのような疾患につながる生存促進性状態の予防も含まれる。
本明細書中で使用される場合、“相乗効果”という用語は、本発明の化合物と本発明の化学療法剤又はデスレセプターアゴニストとの組み合わせで得られる効果が、化合物、薬剤又はアゴニストのうちの１つのみを用いて得られる効果よりも大きいこと、又は有利には上記の化合物、薬剤又はアゴニストを組み合わせて得られる効果が、別々に使用したそれぞれの化合物、薬剤又はアゴニストの効果を加算したものより大きいことを意図するものである。このような相乗効果により、より少ない投与量で投与することが可能となる。
本明細書中で使用される場合、“ＩＣ５０”という用語は、最大応答を測定するアッセイにおける最大蛍光プローブ結合の転移などの最大応答の５０％阻害を達成する本発明の特定の化合物の量、濃度又は投与量を意味することが意図される。
本明細書中で使用される場合、“ＥＣ５０”という用語は、細胞生存の５０％阻害を達成する本発明の特定の化合物の量、濃度又は投与量を意味することを意図している。
“置換度”又は“配位度”という用語は、本発明で用いる多糖類のモノマー単位である糖単位（ＳＵ）あたりの平均置換基数を意味することを意図している。各ＳＵは３つのヒ
ドロキシル基を含むので、ＤＳは０乃至３の間で変動し得る。
本明細書中で使用される場合、“カルボキシル化多糖”という用語は、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン（デンプングリコレート）、カルボキシメチル高アミロースデンプン、カルボキシエチルデンプン、カルボキシエチル高アミロースデンプン、スクシニルデンプン、スクシニル高アミロースデンプンカルボキシメチルグアーガム、カルボキシメチルヒドロキシプロピルグアーガム、ジェランガム、キサンタンガム、アルギン酸塩、ペクチン酸塩、ヒアルロン酸塩、又はそれらの組合せを意味することが意図される。好ましくは、本発明において使用され得るカルボキシル化多糖は、カルボキシメチルセルロース及び／又はカルボキシメチルデンプンである。最も好ましくは、カルボキシル化多糖はカルボキシメチルデンプンである。また、適切なカルボキシル化修飾を含む、任意の適切な組み合わせのヘキソース単糖（アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、及びタロース）の組み合わせも包含される。
本発明の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩は、１つ以上の不斉中心、キラル軸及びキラル平面を含み得、したがって、エナンチオマー、ジアステレオマー及び他の立体異性体形態を生じ得、そして絶対立体化学の観点から、（Ｒ）－又は（Ｓ）－又は、アミノ酸の（Ｄ）－又は（Ｌ）－のように定義されてもよい。本発明は、このような全ての可能な異性体、並びにそれらのラセミ形態及び光学的に純粋な形態を含むことが意図される。光学的に活性な（＋）及び（－）、（Ｒ）－及び（Ｓ）－、又は（Ｄ）－及び（Ｌ）－異性体は、キラルシントン又はキラル試薬を使用して調製され得るか、又は逆相ＨＰＬＣのような従来の技術を使用して分割され得る。ラセミ混合物を調製し、その後個々の光学異性体に分離してもよく、又はこれらの光学異性体をキラル合成によって調製してもよい。エナンチオマーは、当業者に公知の方法、例えば、結晶化、気液又は液体クロマトグラフィー、一方のエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応によって分離され得るジアステレオ異性体塩の形成によって分割され得る。所望のエナンチオマーが分離技術によって別の化学物質に変換される場合、所望のエナンチオマー形態を形成するためにさらなる工程が必要とされることもまた、当業者によって理解される。あるいは、特定のエナンチオマーは、光学活性な試薬、基質、触媒、若しくは溶媒を使用する不斉合成によって、又は不斉変換によって１つのエナンチオマーを別のエナンチオマーに変換することによって合成され得る。
本発明の特定の化合物は双性イオン形態で存在してもよく、本発明はこれらの化合物の双性イオン形態及びそれらの混合物を含む。
本発明の化合物（共役複合体又は複合体の形態）、又はそれらの塩、薬学的に許容される塩若しくはそのプロドラッグは、純粋な形態で、又は適切な医薬組成物で投与することができ、ガレヌス医薬の実施に適したいずれかの認められた様式を介して実施することが可能である。
本発明の医薬組成物は、本発明の化合物を適切な薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合することによって調製でき、そして錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、座薬、注射剤、ゲル、マイクロスフェアなどの固体、半固体、液体の形態で製剤化され得る。本発明のそのような医薬組成物の代表的な投与経路としては、経口投与が挙げられる。本発明の医薬組成物は、その中に含まれる活性成分が、対象への組成物の投与の際に生物学的に利用可能にするように製剤化される。対象又は患者に投与される組成物は、１つ以上の投薬単位の形態をとり、ここで、例えば、錠剤は、単一の投薬単位であり得、そしてエアロゾル形態の本発明の化合物の容器は、複数の投薬単位を保持し得る。このような剤形を調製する実際の方法は、当業者に知られているか、又は明らかであろう；例えば、Ｒ
ｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８ｔｈ
Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １９９０）を参照のこと。投与される組成物は、いずれにしても、上記のような疾患状態の治療のために、治療有効量の本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む。
本発明の医薬組成物は、固体又は液体の形態であってもよい。一態様では、担体（複数可）は微粒子であるので、組成物は、例えば、錠剤又は粉末の形態である。担体(複数可)は液体であってもよく、組成物は、例えば、経口シロップ、注射用液体、又は吸入可能な霧化若しくは噴霧化である。
経口投与の場合、医薬組成物は、固体又は液体のいずれかの形態であることが好ましく、ここで、半固体、半液体、懸濁液及びゲルの形態は、本明細書中で固体又は液体のいずれかとして見なされる形態に含まれる。
経口投与用の固体組成物として、医薬組成物は、粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸薬、カプセル等の形態に製剤化することができる。このような固体組成物は、通常、１つ以上の不活性な希釈剤又は食用担体を含むことになる。さらに、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンなどの結合剤；デンプン、ラクトース又はデキストリンなどの賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモジェル、コーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステロテックスなどの滑沢剤;コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤;スクロース又はサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料などの香味剤；及び着色剤の１つ又は複数が存在してもよい。
医薬組成物がカプセル、例えばゼラチンカプセルの形態である場合、上記タイプの材料に加えて、ポリエチレングリコールなどの液体担体又は大豆油若しくは植物油などの油を含有してもよい。
医薬組成物は、液体の形態、例えば、エリキシル剤、シロップ、溶液、乳剤又は懸濁液の形態であってもよい。液体は、２つの例として、経口投与用又は注射による送達用であってもよい。経口投与を意図する場合、好ましい組成物は、本発明の化合物に加えて、甘味剤、保存料、色素／着色剤及び香味増強剤のうちの１つ以上を含有する。注射による投与を目的とする組成物においては、界面活性剤、保存料、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定剤、等張化剤の１種以上が含まれ得る。
本発明の液体医薬組成物は、それらが溶液、懸濁液又は他の同様の形態であるかどうかにかかわらず、以下のアジュバントの１種以上を含むことができる：無菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、溶媒又は懸濁媒体としてなり得る合成モノ又はジグリセリドなどの不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩及び張度調整剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース。非経口製剤は、ガラス製又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は多回投与バイアルに封入することができる。注射用医薬組成物は、好ましくは無菌である。
非経口投与又は経口投与のいずれかのために使用される本発明の液体医薬組成物は、適切な投与量が得られるような量の本発明の化合物を含むべきである。典型的には、この量は、組成物中の本発明の化合物の少なくとも０．０１％である。経口投与が意図される場
合、この量は、組成物の重量の０．１乃至約７０％の間で変動し得る。非経口的な使用のために、本発明による組成物及び調製物は、非経口投与単位が０．０１乃至１重量％の本発明の化合物を含有するように調製される。
本発明の医薬組成物は、油性液体の物理的形態を固体粉末形態に変換する様々な材料を含むことができる。例えば、組成物は、有効成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料を含んでもよい。コーティングシェルを形成する材料は、典型的には不活性であり、例えば、砂糖、シェラック、及び他の腸溶性コーティング剤から選択され得る。あるいは、有効成分は、ゼラチンカプセルに封入されてもよい。
固体又は液体の形態の本発明の医薬組成物は、本発明の化合物に結合し、それによって化合物の送達を補助する薬剤を含んでもよい。この能力で作用し得る適切な薬剤としては、モノクローナル抗体若しくはポリクローナル抗体、タンパク質又はリポソームが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の医薬組成物は、医薬の技術分野で周知の方法論によって調製され得る。例えば、注射によって投与されることを意図した医薬組成物は、本発明の化合物を滅菌蒸留水と混合して溶液を形成することによって調製することができる。均質な溶液又は懸濁液の形成を促進するために、界面活性剤を添加してもよい。界面活性剤は、水性送達システム中の化合物の溶解又は均質な懸濁を促進するように、本発明の化合物と非共有結合的に相互作用する化合物である。
本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩は、治療上有効な量で投与されるが、この量は、採用する特定の化合物の活性；化合物の代謝安定性及び作用時間；患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別及び食事；投与の方法及び時間；排泄率；薬物の組み合わせ；特定の障害又は状態の重症度；及び治療を受ける対象を含む種々の要因によって変化するであろう。一般に、治療上有効な１日の投与量は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を１日当たり約０．１ｍｇ乃至約４０ｍｇ／体重ｋｇ又は１日２回とすることができる。
本明細書の主題の特徴及び利点は、添付の図面に示されるように、選択された実施形態の以下の詳細な説明に照らしてより明らかになるであろう。実現されるように、開示され請求された主題は、様々な点で修正が可能であり、全ては請求項の範囲から逸脱することはない。したがって、図面及び説明は、本質的に例示的なものとみなされ、制限的なものとみなされるべきではなく、主題の全範囲は、特許請求の範囲に記載される。
本開示のさらなる特徴及び利点は、添付の図面と組み合わせた以下の詳細な説明から明らかになる。
図１は、胃内滞留錠剤からヘリコバクター・ピロリ感染部位へのシンナムアルデヒドの徐放を説明する模式図を示す。 図２は、シンナムアルデヒドとデンプングリコレートの共役により、環状ヘミアセタールが形成される様子を示している。この図は、デンプングリコレートを用いたいくつかの可能な共役シナリオのうちの１つを示したに過ぎず、非限定的なものである。 図３は、本発明の実施形態による、デンプングリコレートと共役したシンナムアルデヒドのＦＴＩＲ分析を示している。 図４は、デンプングリコレートと共役したシンナムアルデヒドの倍率１５０倍及び５００倍の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）像を示している。 図５は、デンプングリコレート、未処理アルテスネート、アルテスネート／デンプングリコレート複合体のＦＴＩＲスペクトルを示している。 図６は、デンプングリコレート及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体の顆粒におけるＳＥＭ像を示している。 図７は、胃内通過中のアルテスネートの酸触媒による加水分解を示したものである。 図８は、３６．５℃で２時間及び１２時間培養した後の模擬胃液（ＳＧＦ）における、異なる処理を施したアルテスネート（５％）を示したものである。 図９は、未処理アルテスネート、アルテスネート／デンプングリコレート複合体及び水溶性アルテスネートについてのＦＴＩＲスペクトルを示す。 図１０は、デンプングリコレート、アルテスネート／デンプングリコレート複合体及び水溶性アルテスネートの顆粒におけるＳＥＭ像を示している。 図１１は、ヘリコバクター・ピロリの異なる株に対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート（ＣＡＣＩＮＮ）共役体及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体についての寒天ディスク拡散試験を示す。示されている株は、ヘリコバクター・ピロリ Ｃｃｕｇ１７８７４である。 図１２は、ヘリコバクター・ピロリの異なる株に対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート共役体及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体についての寒天ディスク拡散試験を示す。示されている株は、ヘリコバクター・ピロリ４０３８である。 図１３は、ヘリコバクター・ピロリの異なる株に対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート共役体及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体についての寒天ディスク拡散試験を示す。示されている株は、ヘリコバクター・ピロリ３９９２である。 図１４は、カンピロバクター・ジェジュニＣｉＰ７０２株に対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート共役体及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体についての寒天ディスク拡散試験を示す。 図１５は、カンピロバクター・コリ株に対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート共役体及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体についての寒天ディスク拡散試験を示す。 図１６は、ヘリコバクター・ピロリに対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート複合体の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）決定を示す図である。 図１７は、ヘリコバクター・ピロリに対するアルテスネート（上）及びアルテスネート／デンプングリコレート共役複合体（下）の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）決定を示す図である。 図１８は、異なる処理を行ったアルテスネートの抗菌活性を示している。 図１９Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に血液中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図１９Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に血液中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２０Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に血液中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２０Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に血液中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２１Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に脳中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２１Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に脳中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２２Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に脳中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２２Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に脳中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２３Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に肝臓中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２３Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に肝臓中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２４Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に肝臓中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２４Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に肝臓中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２５Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に前立腺中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２５Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに３．５ｍｇ／ｋｇ静脈内投与した後に前立腺中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２６Ａは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に前立腺中で検出されたジヒドロアルテミシニンを示す。図２６Ｂは、未処理アルテスネート及びデンプングリコレートと複合したアルテスネートをマウスに２００ｍｇ／ｋｇ経口投与した後に前立腺中で検出されたジヒドロアルテミシニン－グルクロニドを示す。 図２７は、水溶性アルテスネートの薬物動態プロファイルを市販のアルテスネートと比較したものである。 図２８Ａは、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の非存在下で異なる成分からの定量培養によりマウスで検出された抗菌活性を示す。図２８Ｂは、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の非存在下で異なる成分からの定量ＰＣＲによりマウスで検出された抗菌活性を示す。 図２９Ａは、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の存在下で異なる成分からの定量培養によりマウスで検出された抗菌活性を示す。図２９Ｂは、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の存在下で異なる成分からの定量ＰＣＲによりマウスで検出された抗菌活性を示す。 図３０Ａは、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の存在下で異なる成分からの定量培養によりマウスで検出された抗菌活性を示す。図３０Ｂは、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の存在下で異なる成分からの定量ＰＣＲによりマウスで検出された抗菌活性を示す。 図３１は、プロトンポンプ阻害薬（パントプラゾール、１５０ｍｇ／ｋｇ）の存在下、マウスで検出された水溶性アルテスネートの抗菌活性を示す。 図３２は、１１種の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株（Ｎ＝３）の増殖速度に対する、アルテスネート及び本発明によるデンプングリコレートとアルテスネート複合体の効果を示す；データを、各細胞株について３日目のコントロールに対して正規化した。 図３３は、１１種の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株（Ｎ＝３）の生存率に対する、アルテスネート及び本発明によるデンプングリコレートとアルテスネート複合体の効果を示す；データを、各細胞株について０日目のコントロールに対して正規化した。 図３４は、アルテスネート／ＳＧ複合体の安定性試験を示す。ＡＲＴＥ／ＳＧの新鮮な溶液（０日目に調製）を、実験の１１、１５又は１８日前に調製した３つの古い溶液と共に試験した。アルテスネート（ＡＲＴＥ）をポジティブコントロールとして使用した。統計解析は、細胞複製間で行った。 図３５は、選択した細胞株のメタノール毒性を示す。 図３６は、４種の白血病細胞株に対するアルテスネート／デンプングリコレート複合体（ＡＲＴＥ．ＳＧ）及びアルテスネート（ＡＲＴＥ）のＩＣ５０を示す図である。 図３７は、ＡＭＬ細胞の増殖に対するシンナムアルデヒド／デンプングリコレート（ＣＡＣＩＮＮ）共役複合体の効果を示す。データは、３日目のコントロールに対して正規化した生存率のパーセンテージとして報告する。パラメトリック一元配置分散分析を多重比較に使用し、その後、各細胞株についてＮＡＣＩＮＮ共役複合体－処理条件をコントールと比較するＢＨ調整t－検定を行った。 図３８は、溶解装置ディステックを用いた、３７℃、１００ｒｐｍでの１Ｌの模擬胃液（ｐＨ１．５）中の水溶性アルテスネートのイン・ビトロ溶解プロファイルを示す。 図３９は、溶解装置ディステックを用いた、３７℃、１００ｒｐｍでの１Ｌの模擬胃液（ｐＨ１．５）中のシンナムアルデヒドのイン・ビトロ溶解プロファイルを示す。
添付の図面全体を通して、同様の特徴は同様の参照番号によって識別されることに留意されたい。
実施形態では、カルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒド共役体を含む徐放性胃内滞留剤形が開示され、前記共役体は、シンナムアルデヒドのアルデヒド基とカルボキシル化多糖のヒドロキシル基との間に形成されるアセタール、ヘミアセタール、又は環状ヘミアセタールを介して形成される。
別の実施形態では、カルボキシル化多糖及びアルテスネート複合体を含む徐放性胃内滞留剤形が開示され、前記複合体は、アルテスネートのカルボキシル基とカルボキシル化多糖のカルボキシレート基との間の二価金属カチオンの配位を介して形成される。
エマルジョンによる共役及び／又は安定化は、水性媒体、特に胃液中でのシンナムアルデヒド／アルテスネートの溶解性を高めることである。また、特に揮発性の高い精油抽出物の場合、シンナムアルデヒド／アルテスネートの安定性を改善する。また、エマルジョンによる共役及び／又は安定化は、油性液体を、様々な剤形（すなわち、錠剤;カプセル;坐剤など）で製剤化しやすい固体粉末形態に変換し、最終的に、胃内滞留製剤を製剤化するための利点である粘膜付着性を提供する。摂取後、胃に到達すると、錠剤は胃酸媒体で水和され、複合体のプロトン化によりシンナムアルデヒド／アルテスネートが放出される。
シンナムアルデヒド共役体
シンナムアルデヒドは、式Ｃ６Ｈ５ＣＨ＝ＣＨＣＨＯの下記の構造をもつ有機化合物である。
Figure 2022540064000010
天然には主にトランス（Ｅ）異性体として存在し、シナモンの風味と臭いの元となっている。それは、シキミ酸経路によって天然に合成されるフェニルプロパノイドである。この淡黄色の粘性液体は、シナモンの木及びニッケイ属の他の種の樹皮に発生する。シナモン樹皮の精油は約５５乃至７６％がシンナムアルデヒドである。
本発明の共役体は、シンナムアルデヒドをカルボキシル化多糖と反応させて、アセタール、ヘミアセタール又は環状ヘミアセタールを形成することによって調製される。この反応は、図２及び以下に示すように、シンナムアルデヒドのアルデヒド基とカルボキシル化多糖のヒドロキシル基との間で行われる。
実施形態において、本発明において使用され得るカルボキシル化多糖は、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン（デンプングリコレート）、カルボキシメチル高アミロースデンプン、カルボキシエチルデンプン、カルボキシエチル高アミロースデンプン、スクシニルデンプン、スクシニル高アミロースデンプン、デンプンオクテニルコハク酸ナトリウム、高アミロースデンプンオクテニルコハク酸ナトリウム、カルボキシメチルグアーガム、カルボキシメチルヒドロキシプロピルグアーガム、ジェランガム、キサンタンガム、アルギン酸塩、ペクチン酸塩、ヒアルロン酸塩、又はそれらの組み合わせを含む。好ましくは、本発明において使用され得るカルボキシル化多糖は、カルボキシメチルセルロース及び／又はカルボキシメチルデンプンである。最も好ましくは、カルボキシル化多糖はカルボキシメチルデンプンである。
一実施形態によれば、カルボキシル化多糖のカルボキシル含有基の置換度は、約０．４乃至約１．０、又は約０．５乃至約１．０、又は約０．６乃至約１．０、又は約０．７乃至約１．０、又は約０．８乃至約１．０、又は約０．９乃至約１．０であってもよく、好ましくは０．４乃至０．７であってもよく、最も好ましくは０．６乃至０．８であってもよい。
一実施形態によれば、カルボキシル化多糖上のシンナムアルデヒド基の置換度は、約０．０１乃至約０．２０、又は約０．０２乃至約０．２０、又は約０．０３乃至約０．２０、又は約０．０４乃至約０．２０、又は約０．０５乃至約０．２０、又は約０．０６乃至約０．２０、又は約０．０７乃至約０．２０、又は約０．０８乃至約０．２０、又は約０．０９乃至約０．２０、又は約０．１０乃至約０．２０、又は約０．１１乃至約０．２０、又は約０．１２乃至約０．２０、又は約０．１３乃至約０．２０、又は約０．１４乃至約０．２０、又は約０．１５乃至約０．２０、又は約０．１６乃至約０．２０、又は約０．１７乃至約０．２０、又は約０．１８乃至約０．２０、又は約０．１９乃至約０．２０であってもよく、好ましくは０．０１乃至０．１であってもよい。これは、糖１００に対して１乃至５分子のシンナムアルデヒドに相当する。
以下、式（Ｉ）又は（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で示される化合物の実施形態、基及び置換基を詳細に説明する。
ｎ：
式（Ｉ）の化合物の１つのサブセットにおいて、ｎは１である。
ｍ：
式（Ｉ）の化合物の１つのサブセットにおいて、ｍは１である。
本明細書に示されるｎの任意の及びそれぞれの個々の定義は、本明細書に示されるＲ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の任意の及びそれぞれの個々の定義と組み合わされ得る。
本発明の実施形態において、カルボキシル化多糖は、下記一般式（Ｉ）、又はその薬学的に許容される塩、及びその立体異性体である。
Figure 2022540064000011
 （式（Ｉ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
Figure 2022540064000012
 を表し；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；
ｍは０乃至４を表し；
ｐは０乃至８を表し；そして
Figure 2022540064000013
 は、前記Ｒ１’に結合する共有結合を示し、
Figure 2022540064000014
 は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
別の実施形態によれば、一般式（Ｉ）のカルボキシル化多糖は、一般式（Ｉａ）である。
Figure 2022540064000015
 （式（Ｉａ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
Figure 2022540064000016
 を表し；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ４、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
ｍは０乃至４を表し；
ｐは０乃至８を表し；
Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；そして
Figure 2022540064000017
 は、前記Ｒ１’に結合する共有結合を示し、
Figure 2022540064000018
 は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
別の実施形態によれば、一般式（Ｉ）のカルボキシル化多糖は、一般式（Ｉｂ）である。
Figure 2022540064000019
 （式（Ｉｂ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
Figure 2022540064000020
 を表し；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ４、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ-ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
ｍは０乃至４を表し；
ｐは０乃至８を表し；
Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；そして
前記Ｒ１’に結合する結合を示し、
Figure 2022540064000021
 は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
実施形態では、Ｒ２は、Ｏ－ＣＨ２ＣＯＯ－を表す。
実施形態において、上記の繰り返し単位“ｎ”の数は、最小約５０個の個々の糖単位から最大約５００，０００個の糖単位を有するカルボキシル化多糖について示される。これは、約１０４ｇ／ｍｏｌの最小鎖長から約１０８ｇ／ｍｏｌの最大鎖長にほぼ相当する。
実施形態において、カルボキシル化多糖は、非分枝状多糖と同様に分枝状カルボキシル化多糖であってよい。例えば、カルボキシル化多糖類は、アミロース、アミロペクチンを含むカルボキシル化デンプン、並びに非分岐セルロース、及びヘミセルロース（分岐）を含むカルボキシル化セルロースであってもよい。
アルテスネート水溶性複合体
Figure 2022540064000022
 アルテスネートは、アルテミシニンのヘミスクシナート誘導体である。アルテスネートは、水性、酸性及び塩基性条件下で不安定であり、光に敏感である。また、アルテスネートの塩形態（アルテスネートナトリウムなど）は、粘着性があり、流動性が低く、取り扱いが困難である。
市販のアルテスネートは、水性媒体に難溶性であるアルテスン酸の乾燥粉末形態で入手可能である。ドラッグバンクによれば、アルテスン酸の水溶解度は約０．６７８ｍｇ／ｍＬ（又は０．６８％、ｗ／ｗ）である。この溶解度の低さから、市販のアルテスネート注射液（６０ｍｇ）は、使用直前に１ｍＬの炭酸水素ナトリウム（５％ ｗ／ｗ）溶液と５ｍＬの生理食塩液（０．９％ ＮａＣｌ ｗ／ｗ）で希釈する必要がある。この投与方法は不便であり、ミスを犯しやすいので、改善の余地がある。非経口投与後、速やかに加水分解され、活性代謝物であるジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ）に変化する。
経口投与場合、一般にアルテスネートは胃酸に不溶のままであり、胃内で速やかに加水分解され、ＤＨＡへの変換速度はｐＨ依存性である。さらに、アルテスネートのＤＨＡへの加水分解は、全身循環に入る前の胃の通過中に実施される。臨床的には、アルテスネートは本質的にＤＨＡのプロドラッグとして働く。現在臨床的に使用されているアルテミシニン誘導体のうち、ＤＨＡは、細胞アッセイ及び動物アッセイにおいて最も高い神経毒性を誘発する。さらに、アルテスネートとＤＨＡのそれぞれは、水性酸性条件下で容易に分解し、不活性な最終生成物である２－デオキシアルテミシニンを提供する。重要なのは、保存されたエンドペルオキシド架橋をもつ分子だけが抗マラリア活性をもつということである。２－デオキシアルテミシニンを含む他の非過酸化物含有分解生成物は抗マラリア活性をもたない。図７は、胃の通過中、酸触媒によりアルテスネートがＤＨＡに、さらに２－デオキシアルテミシニンに加水分解される様子を示したものである。
これに関連して、当技術分野で公知の塩形態下のアルテスネート及び当技術分野で公知のデンプングリコレート中に捕捉されたアルテスネート（例えば、それぞれＷＯ２００６／０４９３９１及びＷＯ２０１５／１２７５３７）と比較した水溶性アルテスネートの調製物が提供される。この水溶性アルテスネート（ＷＳＡ）粉末は、塩形態下で予想外に安定であり、水性媒体中だけでなく、様々な温度で胃酸又は腸液中でもより可溶性である。意外にも、市販のアルテスネートと比較して、溶液中で２４時間経過しても沈殿物が観察されない。この胃酸環境下での溶解性は、浮遊又は膨潤による徐放性錠剤の製剤化に適した重要な特徴である。
別の実施形態によれば、約７．５乃至７．９のｐＨ値を有し、かつ乳化剤で安定化されたアルテスネート又はその薬学的に許容される塩及びその立体異性体を含むアルテスネー
トエマルジョンを含む、徐放性胃内滞留剤形が提供される。
実施形態において、前記アルテスネートエマルジョンにおける前記アルテスネートの薬学的に許容される塩と前記乳化剤との重量比が、約９：１から約１：１、又は約８：１から約１：１、又は約７：１から約１：１、又は約６：１から約１：１、又は約５：１から約１：１、又は約４：１から約１：１、又は約３：１から約１：１、又は約２：１から約１：１、又は約９：２から約１：１、又は約７：２から約１：１、又は約５：２から約１：１、又は約３：２から約１：１、又は約１：２から約１：１、又は約９：３から約１：１、又は約８：３から約１：１、又は約７：３から約１：１、又は約５：３から約１：１、又は約４：３から約１：１、又は約２：３から約１：１、又は約１：３から約１：１、又は約９：４から約１：１、又は約７：４から約１：１、又は約５：４から約１：１、又は約３：４から約１：１、又は約１：４から約１：１、又は約９：５から約１：１、又は約８：５から約１：１、又は約７：５から約１：１、又は約６：５から約１：１、又は約４：５から約１：１、又は約３：５から約１：１、又は約２：５から約１：１、又は約１：５から約１：１、又は約７：６から約１：１、又は約５：６から約１：１、又は約１：６から約１：１、又は約９：７から約１：１、又は約８：７から約１：１、又は約６：７から約１：１、又は約５：７から約１：１、又は約４：７から約１：１、又は約３：７から約１：１、又は約２：７から約１：１、又は約１：７から約１：１、又は約９：８から約１：１、又は約７：８から約１：１、又は約５：８から約１：１、又は約３：８から約１：１、又は約１：８から約１：１、又は約８：９から約１：１、又は約７：９から約１：１、又は約５：９から約１：１、又は約４：９から約１：１、又は約２：９から約１：１、又は約１：９から約１：１、又は約９：１から約１：２、又は約８：１から約１：２、又は約７：１から約１：２、又は約６：１から約１：２、又は約５：１から約１：２、又は約４：１から約１：２、又は約３：１から約１：２、又は約２：１から約１：２、又は約９：２から約１：２、又は約７：２から約１：２、又は約５：２から約１：２、又は約３：２から約１：２、又は約１：２から約１：２、又は約９：３から約１：２、又は約８：３から約１：２、又は約７：３から約１：２、又は約５：３から約１：２、又は約４：３から約１：２、又は約２：３から約１：２、又は約１：３から約１：２、又は約９：４から約１：２、又は約７：４から約１：２、又は約５：４から約１：２、又は約３：４から約１：２、又は約１：４から約１：２、又は約９：５から約１：２、又は約８：５から約１：２、又は約７：５から約１：２、又は約６：５から約１：２、又は約４：５から約１：２、又は約３：５から約１：２、又は約２：５から約１：２、又は約１：５から約１：２、又は約７：６から約１：２、又は約５：６から約１：２、又は約１：６から約１：２、又は約９：７から約１：２、又は約８：７から約１：２、又は約６：７から約１：２、又は約５：７から約１：２、又は約４：７から約１：２、又は約３：７から約１：２、又は約２：７から約１：２、又は約１：７から約１：２、又は約９：８から約１：２、又は約７：８から約１：２、又は約５：８から約１：２、又は約３：８から約１：２、又は約１：８から約１：２、又は約８：９から約１：２、又は約７：９から約１：２、又は約５：９から約１：２、又は約４：９から約１：２、又は約２：９から約１：２、又は約１：９から約１：２、又は約９：１から約１：３、又は約８：１から約１：３、又は約７：１から約１：３、又は約６：１から約１：３、又は約５：１から約１：３、又は約４：１から約１：３、又は約３：１から約１：３、又は約２：１から約１：３、又は約９：２から約１：３、又は約７：２から約１：３、又は約５：２から約１：３、又は約３：２から約１：３、又は約１：３から約１：３、又は約９：３から約１：３、又は約８：３から約１：３、又は約７：３から約１：３、又は約５：３から約１：３、又は約４：３から約１：３、又は約２：３から約１：３、又は約９：４から約１：３、又は約７：４から約１：３、又は約５：４から約１：３、又は約３：４から約１：３、又は約１：４から約１：３、又は約９：５から約１：３、又は約８：５から約１：３、又は約７：５から約１：３、又は約６：５から約１：３、又は約４：５から約１：３、又は約３：５から約１：３、又は約２：５から約１：３、又は約１：５から約１：３、又は約７：６から約１：３、又
は約５：６から約１：３、又は約１：６から約１：３、又は約９：７から約１：３、又は約８：７から約１：３、又は約６：７から約１：３、又は約５：７から約１：３、又は約４：７から約１：３、又は約３：７から約１：３、又は約２：７から約１：３、又は約１：７から約１：３、又は約９：８から約１：３、又は約７：８から約１：３、又は約５：８から約１：３、又は約３：８から約１：３、又は約１：８から約１：３、又は約８：９から約１：３、又は約７：９から約１：３、又は約５：９から約１：３、又は約４：９から約１：３、又は約２：９から約１：３、又は約１：９から約１：３、又は約９：１から約１：４、又は約８：１から約１：４、又は約７：１から約１：４、又は約６：１から約１：４、又は約５：１から約１：４、又は約４：１から約１：４、又は約３：１から約１：４、又は約２：１から約１：４、又は約９：２から約１：４、又は約７：２から約１：４、又は約５：２から約１：４、又は約３：２から約１：４、又は約１：２から約１：４、又は約９：３から約１：４、又は約８：３から約１：４、又は約７：３から約１：４、又は約５：３から約１：４、又は約４：３から約１：４、又は約２：３から約１：４、又は約１：３から約１：４、又は約９：４から約１：４、又は約７：４から約１：４、又は約５：４から約１：４、又は約３：４から約１：４、又は約１：４から約１：４、又は約９：５から約１：４、又は約８：５から約１：４、又は約７：５から約１：４、又は約６：５から約１：４、又は約４：５から約１：４、又は約３：５から約１：４、又は約２：５から約１：４、又は約１：５から約１：４、又は約７：６から約１：４、又は約５：６から約１：４、又は約１：６から約１：４、又は約９：７から約１：４、又は約８：７から約１：４、又は約６：７から約１：４、又は約５：７から約１：４、又は約４：７から約１：４、又は約３：７から約１：４、又は約２：７から約１：４、又は約１：７から約１：４、又は約９：８から約１：４、又は約７：８から約１：４、又は約５：８から約１：４、又は約３：８から約１：４、又は約１：８から約１：４、又は約８：９から約１：４、又は約７：９から約１：４、又は約５：９から約１：４、又は約４：９から約１：４、又は約２：９から約１：４、又は約１：９から約１：４、又は約９：１から約１：５、又は約８：１から約１：５、又は約７：１から約１：５、又は約６：１から約１：５、又は約５：１から約１：５、又は約４：１から約１：５、又は約３：１から約１：５、又は約２：１から約１：５、又は約１：５から約１：５、又は約９：２から約１：５、又は約７：２から約１：５、又は約５：２から約１：５、又は約３：２から約１：５、又は約１：２から約１：５、又は約９：３から約１：５、又は約８：３から約１：５、又は約７：３から約１：５、又は約５：３から約１：５、又は約４：３から約１：５、又は約２：３から約１：５、又は約１：３から約１：５、又は約９：４から約１：５、又は約７：４から約１：５、又は約５：４から約１：５、又は約３：４から約１：５、又は約１：４から約１：５、又は約９：５から約１：５、又は約８：５から約１：５、又は約７：５から約１：５、又は約６：５から約１：５、又は約４：５から約１：５、又は約３：５から約１：５、又は約２：５から約１：５、又は約７：６から約１：５、又は約５：６から約１：５、又は約１：６から約１：５、又は約９：７から約１：５、又は約８：７から約１：５、又は約６：７から約１：５、又は約５：７から約１：５、又は約４：７から約１：５、又は約３：７から約１：５、又は約２：７から約１：５、又は約１：７から約１：５、又は約９：８から約１：５、又は約７：８から約１：５、又は約５：８から約１：５、又は約３：８から約１：５、又は約１：８から約１：５、又は約８：９から約１：５、又は約７：９から約１：５、又は約５：９から約１：５、又は約４：９から約１：５、又は約２：９から約１：５、又は約１：９から約１：５、又は約９：１から約２：１、又は約８：１から約２：１、又は約７：１から約２：１、又は約６：１から約２：１、又は約５：１から約２：１、又は約４：１から約２：１、又は約３：１から約２：１、又は約２：１から約２：１、又は約９：２から約２：１、又は約７：２から約２：１、又は約５：２から約２：１、又は約３：２から約２：１、又は約１：２から約２：１、又は約９：３から約２：１、又は約８：３から約２：１、又は約７：３から約２：１、又は約５：３から約２：１、又は約４：３から約２：１、又は約２：３から約２：１、又は約１：３から約２：１、又は約９：４から約２：１、又は約７：４から約２：１、又は約５：４から約２：１
、又は約３：４から約２：１、又は約１：４から約２：１、又は約９：５から約２：１、又は約８：５から約２：１、又は約７：５から約２：１、又は約６：５から約２：１、又は約４：５から約２：１、又は約３：５から約２：１、又は約２：５から約２：１、又は約１：５から約２：１、又は約７：６から約２：１、又は約５：６から約２：１、又は約１：６から約２：１、又は約９：７から約２：１、又は約８：７から約２：１、又は約６：７から約２：１、又は約５：７から約２：１、又は約４：７から約２：１、又は約３：７から約２：１、又は約２：７から約２：１、又は約１：７から約２：１、又は約９：８から約２：１、又は約７：８から約２：１、又は約５：８から約２：１、又は約３：８から約２：１、又は約１：８から約２：１、又は約８：９から約２：１、又は約７：９から約２：１、又は約５：９から約２：１、又は約４：９から約２：１、又は約２：９から約２：１、又は約１：９から約２：１、又は約９：１から約２：３、又は約８：１から約２：３、又は約７：１から約２：３、又は約６：１から約２：３、又は約５：１から約２：３、又は約４：１から約２：３、又は約２：３から約２：３、又は約２：１から約２：３、又は約９：２から約２：３、又は約７：２から約２：３、又は約５：２から約２：３、又は約３：２から約２：３、又は約２：３から約２：３、又は約９：３から約２：３、又は約８：３から約２：３、又は約７：３から約２：３、又は約５：３から約２：３、又は約４：３から約２：３、又は約２：３から約２：３、又は約１：３から約２：３、又は約９：４から約２：３、又は約７：４から約２：３、又は約５：４から約２：３、又は約３：４から約２：３、又は約１：４から約２：３、又は約９：５から約２：３、又は約８：５から約２：３、又は約７：５から約２：３、又は約６：５から約２：３、又は約４：５から約２：３、又は約３：５から約２：３、又は約２：５から約２：３、又は約１：５から約２：３、又は約７：６から約２：３、又は約５：６から約２：３、又は約１：６から約２：３、又は約９：７から約２：３、又は約８：７から約２：３、又は約６：７から約２：３、又は約５：７から約２：３、又は約４：７から約２：３、又は約３：７から約２：３、又は約２：７から約２：３、又は約１：７から約２：３、又は約９：８から約２：３、又は約７：８から約２：３、又は約５：８から約２：３、又は約３：８から約２：３、又は約１：８から約２：３、又は約８：９から約２：３、又は約７：９から約２：３、又は約５：９から約２：３、又は約４：９から約２：３、又は約２：９から約２：３、又は約１：９から約２：３、又は約９：１から約２：５、又は約８：１から約２：５、又は約７：１から約２：５、又は約６：１から約２：５、又は約５：１から約２：５、又は約４：１から約２：５、又は約３：１から約２：５、又は約２：１から約２：５、又は約９：２から約２：５、又は約７：２から約２：５、又は約５：２から約２：５、又は約３：２から約２：５、又は約２：５から約２：５、又は約９：３から約２：５、又は約８：３から約２：５、又は約７：３から約２：５、又は約５：３から約２：５、又は約４：３から約２：５、又は約２：３から約２：５、又は約９：４から約２：５、又は約７：４から約２：５、又は約５：４から約２：５、又は約３：４から約２：５、又は約１：４から約２：５、又は約９：５から約２：５、又は約８：５から約２：５、又は約７：５から約２：５、又は約６：５から約２：５、又は約４：５から約２：５、又は約３：５から約２：５、又は約２：５から約２：５、又は約１：５から約２：５、又は約７：６から約２：５、又は約５：６から約２：５、又は約１：６から約２：５、又は約９：７から約２：５、又は約８：７から約２：５、又は約６：７から約２：５、又は約５：７から約２：５、又は約４：７から約２：５、又は約３：７から約２：５、又は約２：７から約２：５、又は約１：７から約２：５、又は約９：８から約２：５、又は約７：８から約２：５、又は約５：８から約２：５、又は約３：８から約２：５、又は約１：８から約２：５、又は約８：９から約２：５、又は約７：９から約２：５、又は約５：９から約２：５、又は約４：９から約２：５、又は約２：９から約２：５、又は約１：９から約２：５、又は約９：１から約３：１、又は約８：１から約３：１、又は約７：１から約３：１、又は約６：１から約３：１、又は約５：１から約３：１、又は約４：１から約３：１、又は約３：１から約３：１、又は約２：１から約３：１、又は約９：２から約３：１、又は約７：２から約３：１、又は約５：２から約３：１、又は約３：２から約３：１、又は約１：２から約３
：１、又は約９：３から約３：１、又は約８：３から約３：１、又は約７：３から約３：１、又は約５：３から約３：１、又は約４：３から約３：１、又は約２：３から約３：１、又は約１：３から約３：１、又は約９：４から約３：１、又は約７：４から約３：１、又は約５：４から約３：１、又は約３：４から約３：１、又は約１：４から約３：１、又は約９：５から約３：１、又は約８：５から約３：１、又は約７：５から約３：１、又は約６：５から約３：１、又は約４：５から約３：１、又は約３：５から約３：１、又は約２：５から約３：１、又は約１：５から約３：１、又は約７：６から約３：１、又は約５：６から約３：１、又は約１：６から約３：１、又は約９：７から約３：１、又は約８：７から約３：１、又は約６：７から約３：１、又は約５：７から約３：１、又は約４：７から約３：１、又は約３：７から約３：１、又は約２：７から約３：１、又は約１：７から約３：１、又は約９：８から約３：１、又は約７：８から約３：１、又は約５：８から約３：１、又は約３：８から約３：１、又は約１：８から約３：１、又は約８：９から約３：１、又は約７：９から約３：１、又は約５：９から約３：１、又は約４：９から約３：１、又は約２：９から約３：１、又は約１：９から約３：１、又は約９：１から約３：２、又は約８：１から約３：２、又は約７：１から約３：２、又は約６：１から約３：２、又は約５：１から約３：２、又は約４：１から約３：２、又は約３：１から約３：２、又は約２：１から約３：２、又は約９：２から約３：２、又は約７：２から約３：２、又は約５：２から約３：２、又は約３：２から約３：２、又は約３：２から約３：２、又は約９：３から約３：２、又は約８：３から約３：２、又は約７：３から約３：２、又は約５：３から約３：２、又は約４：３から約３：２、又は約２：３から約３：２、又は約１：３から約３：２、又は約９：４から約３：２、又は約７：４から約３：２、又は約５：４から約３：２、又は約３：４から約３：２、又は約１：４から約３：２、又は約９：５から約３：２、又は約８：５から約３：２、又は約７：５から約３：２、又は約６：５から約３：２、又は約４：５から約３：２、又は約３：５から約３：２、又は約２：５から約３：２、又は約１：５から約３：２、又は約７：６から約３：２、又は約５：６から約３：２、又は約１：６から約３：２、又は約９：７から約３：２、又は約８：７から約３：２、又は約６：７から約３：２、又は約５：７から約３：２、又は約４：７から約３：２、又は約３：７から約３：２、又は約２：７から約３：２、又は約１：７から約３：２、又は約９：８から約３：２、又は約７：８から約３：２、又は約５：８から約３：２、又は約３：８から約３：２、又は約１：８から約３：２、又は約８：９から約３：２、又は約７：９から約３：２、又は約５：９から約３：２、又は約４：９から約３：２、又は約２：９から約３：２、又は約１：９から約３：２、又は約９：１から約３：４、又は約８：１から約３：４、又は約７：１から約３：４、又は約６：１から約３：４、又は約５：１から約３：４、又は約４：１から約３：４、又は約３：１から約３：４、又は約２：１から約３：４、又は約９：２から約３：４、又は約７：２から約３：４、又は約５：２から約３：４、又は約３：２から約３：４、又は約３：４から約３：４、又は約９：３から約３：４、又は約８：３から約３：４、又は約７：３から約３：４、又は約５：３から約３：４、又は約４：３から約３：４、又は約２：３から約３：４、又は約９：４から約３：４、又は約７：４から約３：４、又は約５：４から約３：４、又は約３：４から約３：４、又は約１：４から約３：４、又は約９：５から約３：４、又は約８：５から約３：４、又は約７：５から約３：４、又は約６：５から約３：４、又は約４：５から約３：４、又は約３：５から約３：４、又は約２：５から約３：４、又は約１：５から約３：４、又は約７：６から約３：４、又は約５：６から約３：４、又は約１：６から約３：４、又は約９：７から約３：４、又は約８：７から約３：４、又は約６：７から約３：４、又は約５：７から約３：４、又は約４：７から約３：４、又は約３：７から約３：４、又は約２：７から約３：４、又は約１：７から約３：４、又は約９：８から約３：４、又は約７：８から約３：４、又は約５：８から約３：４、又は約３：８から約３：４、又は約１：８から約３：４、又は約８：９から約３：４、又は約７：９から約３：４、又は約５：９から約３：４、又は約４：９から約３：４、又は約２：９から約３：４、又は約１：９から約３：４、又は約９：１から約３：５、又は約８：１から約３：５、又は約７：１から
約３：５、又は約６：１から約３：５、又は約５：１から約３：５、又は約４：１から約３：５、又は約３：１から約３：５、又は約２：１から約３：５、又は約９：２から約３：５、又は約７：２から約３：５、又は約５：２から約３：５、又は約３：２から約３：５、又は約１：２から約３：５、又は約９：３から約３：５、又は約８：３から約３：５、又は約７：３から約３：５、又は約５：３から約３：５、又は約４：３から約３：５、又は約２：３から約３：５、又は約１：３から約３：５、又は約９：４から約３：５、又は約７：４から約３：５、又は約５：４から約３：５、又は約３：４から約３：５、又は約３：５から約３：５、又は約９：５から約３：５、又は約８：５から約３：５、又は約７：５から約３：５、又は約６：５から約３：５、又は約４：５から約３：５、又は約３：５から約３：５、又は約２：５から約３：５、又は約１：５から約３：５、又は約７：６から約３：５、又は約５：６から約３：５、又は約１：６から約３：５、又は約９：７から約３：５、又は約８：７から約３：５、又は約６：７から約３：５、又は約５：７から約３：５、又は約４：７から約３：５、又は約３：７から約３：５、又は約２：７から約３：５、又は約１：７から約３：５、又は約９：８から約３：５、又は約７：８から約３：５、又は約５：８から約３：５、又は約３：８から約３：５、又は約１：８から約３：５、又は約８：９から約３：５、又は約７：９から約３：５、又は約５：９から約３：５、又は約４：９から約３：５、又は約２：９から約３：５、又は約１：９から約３：５、又は約９：１から約４：１、又は約８：１から約４：１、又は約７：１から約４：１、又は約６：１から約４：１、又は約５：１から約４：１、又は約４：１から約４：１、又は約３：１から約４：１、又は約２：１から約４：１、又は約９：２から約４：１、又は約７：２から約４：１、又は約５：２から約４：１、又は約３：２から約４：１、又は約１：２から約４：１、又は約９：３から約４：１、又は約８：３から約４：１、又は約７：３から約４：１、又は約５：３から約４：１、又は約４：３から約４：１、又は約２：３から約４：１、又は約１：３から約４：１、又は約９：４から約４：１、又は約７：４から約４：１、又は約５：４から約４：１、又は約３：４から約４：１、又は約１：４から約４：１、又は約９：５から約４：１、又は約８：５から約４：１、又は約７：５から約４：１、又は約６：５から約４：１、又は約４：５から約４：１、又は約３：５から約４：１、又は約２：５から約４：１、又は約１：５から約４：１、又は約７：６から約４：１、又は約５：６から約４：１、又は約１：６から約４：１、又は約９：７から約４：１、又は約８：７から約４：１、又は約６：７から約４：１、又は約５：７から約４：１、又は約４：７から約４：１、又は約３：７から約４：１、又は約２：７から約４：１、又は約１：７から約４：１、又は約９：８から約４：１、又は約７：８から約４：１、又は約５：８から約４：１、又は約３：８から約４：１、又は約１：８から約４：１、又は約８：９から約４：１、又は約７：９から約４：１、又は約５：９から約４：１、又は約４：９から約４：１、又は約２：９から約４：１、又は約１：９から約４：１、又は約９：１から約４：３、又は約８：１から約４：３、又は約７：１から約４：３、又は約６：１から約４：３、又は約５：１から約４：３、又は約４：１から約４：３、又は約３：１から約４：３、又は約２：１から約４：３、又は約９：２から約４：３、又は約７：２から約４：３、又は約５：２から約４：３、又は約３：２から約４：３、又は約４：３から約４：３、又は約９：３から約４：３、又は約８：３から約４：３、又は約７：３から約４：３、又は約５：３から約４：３、又は約４：３から約４：３、又は約２：３から約４：３、又は約１：３から約４：３、又は約９：４から約４：３、又は約７：４から約４：３、又は約５：４から約４：３、又は約３：４から約４：３、又は約１：４から約４：３、又は約９：５から約４：３、又は約８：５から約４：３、又は約７：５から約４：３、又は約６：５から約４：３、又は約４：５から約４：３、又は約３：５から約４：３、又は約２：５から約４：３、又は約１：５から約４：３、又は約７：６から約４：３、又は約５：６から約４：３、又は約１：６から約４：３、又は約９：７から約４：３、又は約８：７から約４：３、又は約６：７から約４：３、又は約５：７から約４：３、又は約４：７から約４：３、又は約３：７から約４：３、又は約２：７から約４：３、又は約１：７から約４：３、又は約９：８から約４：３、又は約７：８から約４：３、又は約５：８
から約４：３、又は約３：８から約４：３、又は約１：８から約４：３、又は約８：９から約４：３、又は約７：９から約４：３、又は約５：９から約４：３、又は約４：９から約４：３、又は約２：９から約４：３、又は約１：９から約４：３、又は約９：１から約４：５、又は約８：１から約４：５、又は約７：１から約４：５、又は約６：１から約４：５、又は約５：１から約４：５、又は約４：１から約４：５、又は約３：１から約４：５、又は約２：１から約４：５、又は約９：２から約４：５、又は約７：２から約４：５、又は約５：２から約４：５、又は約３：２から約４：５、又は約４：５から約４：５、又は約９：３から約４：５、又は約８：３から約４：５、又は約７：３から約４：５、又は約５：３から約４：５、又は約４：３から約４：５、又は約２：３から約４：５、又は約９：４から約４：５、又は約７：４から約４：５、又は約５：４から約４：５、又は約３：４から約４：５、又は約１：４から約４：５、又は約９：５から約４：５、又は約８：５から約４：５、又は約７：５から約４：５、又は約６：５から約４：５、又は約４：５から約４：５、又は約３：５から約４：５、又は約２：５から約４：５、又は約１：５から約４：５、又は約７：６から約４：５、又は約５：６から約４：５、又は約１：６から約４：５、又は約９：７から約４：５、又は約８：７から約４：５、又は約６：７から約４：５、又は約５：７から約４：５、又は約４：７から約４：５、又は約３：７から約４：５、又は約２：７から約４：５、又は約１：７から約４：５、又は約９：８から約４：５、又は約７：８から約４：５、又は約５：８から約４：５、又は約３：８から約４：５、又は約１：８から約４：５、又は約８：９から約４：５、又は約７：９から約４：５、又は約５：９から約４：５、又は約４：９から約４：５、又は約２：９から約４：５、又は約１：９から約４：５、又は約９：１から約５：１、又は約８：１から約５：１、又は約７：１から約５：１、又は約６：１から約５：１、又は約５：１から約５：１、又は約４：１から約５：１、又は約３：１から約５：１、又は約２：１から約５：１、又は約９：２から約５：１、又は約７：２から約５：１、又は約５：２から約５：１、又は約３：２から約５：１、又は約１：２から約５：１、又は約９：３から約５：１、又は約８：３から約５：１、又は約７：３から約５：１、又は約５：３から約５：１、又は約４：３から約５：１、又は約２：３から約５：１、又は約１：３から約５：１、又は約９：４から約５：１、又は約７：４から約５：１、又は約５：４から約５：１、又は約３：４から約５：１、又は約１：４から約５：１、又は約９：５から約５：１、又は約８：５から約５：１、又は約７：５から約５：１、又は約６：５から約５：１、又は約４：５から約５：１、又は約３：５から約５：１、又は約２：５から約５：１、又は約１：５から約５：１、又は約７：６から約５：１、又は約５：６から約５：１、又は約１：６から約５：１、又は約９：７から約５：１、又は約８：７から約５：１、又は約６：７から約５：１、又は約５：７から約５：１、又は約４：７から約５：１、又は約３：７から約５：１、又は約２：７から約５：１、又は約１：７から約５：１、又は約９：８から約５：１、又は約７：８から約５：１、又は約５：８から約５：１、又は約３：８から約５：１、又は約１：８から約５：１、又は約８：９から約５：１、又は約７：９から約５：１、又は約５：９から約５：１、又は約４：９から約５：１、又は約２：９から約５：１、又は約１：９から約５：１、又は約９：１から約５：２、又は約８：１から約５：２、又は約７：１から約５：２、又は約６：１から約５：２、又は約５：１から約５：２、又は約４：１から約５：２、又は約３：１から約５：２、又は約２：１から約５：２、又は約９：２から約５：２、又は約７：２から約５：２、又は約５：２から約５：２、又は約３：２から約５：２、又は約５：２から約５：２、又は約９：３から約５：２、又は約８：３から約５：２、又は約７：３から約５：２、又は約５：３から約５：２、又は約４：３から約５：２、又は約２：３から約５：２、又は約１：３から約５：２、又は約９：４から約５：２、又は約７：４から約５：２、又は約５：４から約５：２、又は約３：４から約５：２、又は約１：４から約５：２、又は約９：５から約５：２、又は約８：５から約５：２、又は約７：５から約５：２、又は約６：５から約５：２、又は約４：５から約５：２、又は約３：５から約５：２、又は約２：５から約５：２、又は約１：５から約５：２、又は約７：６から約５：２、又は約５：６から約５：２、又は約１：６から約５：２、又は約９
：７から約５：２、又は約８：７から約５：２、又は約６：７から約５：２、又は約５：７から約５：２、又は約４：７から約５：２、又は約３：７から約５：２、又は約２：７から約５：２、又は約１：７から約５：２、又は約９：８から約５：２、又は約７：８から約５：２、又は約５：８から約５：２、又は約３：８から約５：２、又は約１：８から約５：２、又は約８：９から約５：２、又は約７：９から約５：２、又は約５：９から約５：２、又は約４：９から約５：２、又は約２：９から約５：２、又は約１：９から約５：２、又は約９：１から約５：３、又は約８：１から約５：３、又は約７：１から約５：３、又は約６：１から約５：３、又は約５：１から約５：３、又は約４：１から約５：３、又は約３：１から約５：３、又は約２：１から約５：３、又は約９：２から約５：３、又は約７：２から約５：３、又は約５：２から約５：３、又は約３：２から約５：３、又は約５：３から約５：３、又は約９：３から約５：３、又は約８：３から約５：３、又は約７：３から約５：３、又は約５：３から約５：３、又は約４：３から約５：３、又は約２：３から約５：３、又は約９：４から約５：３、又は約７：４から約５：３、又は約５：４から約５：３、又は約３：４から約５：３、又は約１：４から約５：３、又は約９：５から約５：３、又は約８：５から約５：３、又は約７：５から約５：３、又は約６：５から約５：３、又は約４：５から約５：３、又は約３：５から約５：３、又は約２：５から約５：３、又は約１：５から約５：３、又は約７：６から約５：３、又は約５：６から約５：３、又は約１：６から約５：３、又は約９：７から約５：３、又は約８：７から約５：３、又は約６：７から約５：３、又は約５：７から約５：３、又は約４：７から約５：３、又は約３：７から約５：３、又は約２：７から約５：３、又は約１：７から約５：３、又は約９：８から約５：３、又は約７：８から約５：３、又は約５：８から約５：３、又は約３：８から約５：３、又は約１：８から約５：３、又は約８：９から約５：３、又は約７：９から約５：３、又は約５：９から約５：３、又は約４：９から約５：３、又は約２：９から約５：３、又は約１：９から約５：３、又は約９：１から約５：４、又は約８：１から約５：４、又は約７：１から約５：４、又は約６：１から約５：４、又は約５：１から約５：４、又は約４：１から約５：４、又は約３：１から約５：４、又は約２：１から約５：４、又は約９：２から約５：４、又は約７：２から約５：４、又は約５：２から約５：４、又は約３：２から約５：４、又は約１：２から約５：４、又は約９：３から約５：４、又は約８：３から約５：４、又は約７：３から約５：４、又は約５：３から約５：４、又は約４：３から約５：４、又は約２：３から約５：４、又は約１：３から約５：４、又は約９：４から約５：４、又は約７：４から約５：４、又は約５：４から約５：４、又は約３：４から約５：４、又は約５：４から約５：４、又は約９：５から約５：４、又は約８：５から約５：４、又は約７：５から約５：４、又は約６：５から約５：４、又は約４：５から約５：４、又は約３：５から約５：４、又は約２：５から約５：４、又は約１：５から約５：４、又は約７：６から約５：４、又は約５：６から約５：４、又は約１：６から約５：４、又は約９：７から約５：４、又は約８：７から約５：４、又は約６：７から約５：４、又は約５：７から約５：４、又は約４：７から約５：４、又は約３：７から約５：４、又は約２：７から約５：４、又は約１：７から約５：４、又は約９：８から約５：４、又は約７：８から約５：４、又は約５：８から約５：４、又は約３：８から約５：４、又は約１：８から約５：４、又は約８：９から約５：４、又は約７：９から約５：４、又は約５：９から約５：４、又は約４：９から約５：４、又は約２：９から約５：４、又は約１：９から約５：４、又は約９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、９：２、７：２、５：２、３：２、８：３、７：３、５：３、４：３、２：３又は１：３、９：４、７：４、５：４、３：４、１：４、９：５、８：５、７：５、６：５、４：５、３：５、２：５、１：５、７：６、５：６、１：６、９：７、８：７、６：７、５：７、４：７、３：７、２：7、１：７、９：８、７：８、５：８、３：７、１：８、８：９、７：９、５：９、４：９、２：９、１：９、５：1、５：２、５：３、５：４、４：１、４：３、３：１、３：２、３：４、３：５、２：１、２：３、又は２：５であってもよい。好ましくは、重量比は３：２又は７：３又は８：２であり、これはそれぞれ、アルテスネート塩が乳化剤の４０％に対して約６０％
の重量、又は乳化剤の３０％に対して７０％の重量、又は乳化剤の２０％に対して８０％の重量である場合を表わす。アルテスネートがナトリウム塩であり、乳化剤がラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）である場合、３：２の重量比は約１：１のモル比を、７：３の重量比は約１．７：１のモル比を、８：２の重量比は約２．９：１のモル比を表す。
別の実施形態によれば、乳化剤は界面活性剤である。前記界面活性剤が、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性の界面活性剤、又はそれらの組み合わせであってもよい。前記界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ソルビタン、ソルビタンエステル、ラウレス硫酸ナトリウム、サルコシル、コカミドプロピルベタイン（ＣＡＰＢ）、ラウリルエーテルスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ノニルフェノールエトキシレート、ヘキサデシルベタイン、ラウリルベタイン、エーテルエトキシレート、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレート、及び３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）からなる群より選択されてもよい。前記界面活性剤は、好ましくはラウリル硫酸ナトリウムであってもよい。
別の実施形態によれば、前記乳化剤がコール酸塩であってもよい。前記コール酸塩が、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸及びリトコール酸からなる群から選択されてもよい。
別の実施形態によれば、前記ｐＨ値が弱塩基で得られてもよい。例えば、前記弱塩基は、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、及び炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）等の炭酸塩であってもよい。
別の実施形態によれば、前記徐放性胃内滞留剤形はプロトンポンプ阻害薬をさらに含んでもよい。前記プロトンポンプ阻害薬は、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせである。
別の実施形態によれば、前記徐放性胃内滞留剤形は抗生物質をさらに含んでもよい。前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせであってもよい。
別の実施形態によれば、本発明の徐放性胃内滞留剤形は、本明細書に記載されるカルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒド共役体を含んでもよく、本発明のアルテスネートエマルジョンを含む徐放性胃内滞留剤形をさらに含んでもよい。
本発明の組成物の使用
一般的に医療従事者が推奨するヘリコバクター・ピロリ感染の治療
本発明の組成物は、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌、及びそれらの組み合わせの予防及び／又は治療において有用であり得る。
別の実施形態によれば、治療有効量の本発明の徐放性胃内滞留剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヘリコバクターピロリ感染、胃潰瘍又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法が提供される。
また、別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための、それを必要とする対象における本発明の徐放性胃内滞留剤形の使用が提供される。
また、別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための医薬品の調製のための、それを必要とする対象における本発明の徐放性胃内滞留剤形の使用が提供される。
また、別の実施形態によれば、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療のために使用するための、本発明の徐放性胃内滞留剤形が提供される。
第一選択除菌レジメンは、除菌率と患者のコンプライアンスがともに高い確率で達成される。現在、第一選択療法として２種類の１４日間の３剤併用療法レジメンが認められている。これらは、プロトンポンプ阻害薬（ＰＰＩ）と≪メトロニダゾールとクラリスロマイシン≫、又は≪アモキシシリンとクラリスロマイシン≫の組み合わせである。これらのレジメンは一般に８０％を超える除菌率を達成している。コンプライアンス違反は除菌率を大幅に低下させる可能性があるため、１日２回の投与スケジュールが推奨される。
第二選択除菌レジメンは、ビスマス、メトロニダゾール、テトラサイクリンに加えて、ＰＰＩ又はＨ２受容体拮抗薬（Ｈ２ＲＡ）（すなわち、シメチジン）による４剤併用療法が含まれる。ＰＰＩを選択した場合、レジメンは７日間投与できるが、Ｈ２ＲＡを使用する場合は１４日間が推奨される。４剤併用療法は、レジメンがより複雑な投与スケジュール（例えばＱＩＤ）を必要とし、忍容性が低い可能性があるため、第二選択と考えられる。したがって、４剤併用療法は通常、３剤併用療法の１つ又は複数のコースに失敗した患者のために用いられる。
ヘリコバクター・ピロリの除菌のための主な要因
一般的に使用される抗生物質（アモキシシリン、クラリスロマイシン及びメトロニダゾール）に耐性のあるヘリコバクター・ピロリの出現により、リファブチン及びアモキシシリン（ＴＡＬＩＣＩＡ（登録商標））などの他の抗生物質との組み合わせが提案されている。しかし、これらの併用療法は今のところ有効であるものの、第一選択療法として導入されるや否やこれらの併用療法に対する耐性が出現し、その後、着実に、そして強力に広がっていった。
現在のヘリコバクター・ピロリの除菌治療には、抗生物質による３剤併用療法があるが、特にアモキシシリンやテトラサイクリンに対するヘリコバクター・ピロリの多剤耐性など、何らかの弊害をもたらす危険性がある。これらの菌株のいくつかは、クラリスロマイシン、メトロニダゾール、及びレボフロキサシンに耐性がある（Ｃａｌｉｓｋａｎ ｅｔ
ａｌ．，２０１５．Ｒｅｖ．Ｓｏｃ．Ｂｒａｓ．Ｍｅｄ．Ｔｒｏｐ．，４８，２７８－２８４）。このため、天然薬剤は、過度のリスクなしに除菌という治療目標を達成する可能性があり、過度のリスクなしに根絶という治療目標を達成する可能性がある。
プロトンポンプ阻害薬も治療のための併用に関与し、胃酸のｐＨを上げるためだけでなく、その抗ウレアーゼ活性のために使用されていることは言及に値する。
本発明の一実施形態によれば、抗生物質の使用を減らし、抗生物質に耐性のある他のものの出現を避けるために、天然物、特にＥＯ（シンナムアルデヒド）、及びアルテスネートの組み合わせが開示される。
本発明の一実施形態によれば、アセタール、ヘミアセタール又は環状ヘミアセタール結合を介して、負に帯電したポリマー、特にカルボキシル化多糖ポリマー上に直接存在するシンナムアルデヒドの共役体が提供される。
この共役により、化学的安定化を提供するだけでなく、シンナムアルデヒドの急速な蒸発と分解を防ぐことができる。胃内滞留剤形で処方された錠剤は、胃の中で安定した状態を保つ。水和後、ヘミアセタール及び／又はアセタール結合にプロトン付加が起こり、生物活性剤が放出される（図１）。図２は、このようなシンナムアルデヒドとカルボキシメチルデンプンとの共役体の形成を示している。
感染性ヘリコバクター・ピロリの大部分（約８０％）は、その下にある上皮と接触しているのではなく、胃粘液中に存在していることに言及することが重要である。実際、消化管内の上皮細胞を覆う粘液層は、病原体がコロニー形成し、その下にある上皮と相互作用することを防止するように作用する物理的バリアである。粘膜表面に感染する病原体は、主に２つの目的をもっている：ｉ)粘液バリアを乗り越えること、ｉｉ)その下の上皮細胞と相互作用し、疾患を引き起こすことである。世界的に、粘液層はヘリコバクター・ピロリの保護ニッチとして機能しており、これは抗生物質による治療の失敗の重要な要素である。
そこで、ヘリコバクター感染部位への抗菌剤の到達を促進するために、粘膜を通過させる製剤化した粘液溶解薬の使用が提案された。しかし、ＥＯ、特に今回の場合には、シンナムアルデヒドは粘膜層への浸透性が高いため、粘液溶解薬は不要である（図１）。
本発明の別の実施形態では、水溶性アルテスネートが提供され、特に、胃酸液への溶解度が増加した水溶性アルテスネートが提供される。この特殊性により、ヘリコバクター・ピロリ感染の感染部位に原薬を送達するために、浮遊又は膨潤して胃内に長期間留まることができる徐放錠剤又はカプセルの製剤化が可能になると考えられる。さらに、ＲＯＳを生成できるエンドペルオキシド分子であるアルテスネートを使用することは、アルテスネートを介した細菌の細胞死に関与する根本的なメカニズムであると考えられる。
ヘリコバクター・ピロリ感染の除菌を成功させるために重要なパラメーター
ヘリコバクター・ピロリ感染の治療を成功させるために、いくつかのパラメータが本出願において確立されている。
徐放性胃内滞留剤形
ヘリコバクター・ピロリは胃に定着しているため、治療を成功させるために胃内滞留錠剤の剤形が提案されている。これらの胃内滞留剤形は、いくつかの方法に従って行うことができる。本発明は、好ましくは、浮遊錠剤又は膨潤錠剤の製剤を用いる。また、カルボキシル化ポリマーなどの生体接着性ポリマーを使用する粘膜接着性薬物送達システムも含まれる。
水溶性生物活性剤
多くの生物活性剤は親油性であり、一般に胃液中で不溶性又は低分散性であり、凝集する。これらの現象はまた、固体錠剤の剤形からの生物活性脂質剤のゆっくりとした崩壊を誘導し、そしてその有効性の制限ステップを構成している。精油などの油液体形態下の特定の生物活性脂質剤は、一般に、胃が空になって腸管に到達するまで胃液の表面上に残る。この場合、生物活性脂質剤と細菌との接触は全く又はほとんどなく、したがって、それらの有効性を大きく低下させる。この理由のために、本出願の本発明で使用されるシンナムアルデヒド及びアルテスネートは、カルボキシル化ポリマーと共役又は配位して、それらの水溶性、結果としてそれらの有効性を増強する。
ウレアーゼ阻害薬及びプロトンポンプ阻害薬
さらなる実施形態によれば、本発明の方法、本発明の使用、及び本発明の使用のための徐放性胃内滞留剤形は、プロトンポンプ阻害薬の使用をさらに含み得る。
ウレアーゼ酵素は、尿素を炭酸ガスとアンモニアに加水分解する触媒作用がある。ウレアーゼは細菌に存在するほか、哺乳類やヒトにも存在する。ウレアーゼが存在すると、有毒なアンモニア生成物が産生されるため、ヒトを含む哺乳類にとって非常に有害であると考えられている。しかし、哺乳類の細胞はウレアーゼを産生しない。実は、その発生源は体内、特に腸内の様々な細菌である。
したがって、本発明の組成物中に抗ウレアーゼ（ウレアーゼ阻害薬としても知られる）化合物を添加することは、ヘリコバクター・ピロリを首尾よく治療するために有用である。抗ウレアーゼの例としては、アセトヒドロキサム酸、ヒドロキシ尿素、並びにユーカリ及びタンポポ由来の植物抽出物が挙げられるが、これらに限定されない。
あるいは、実施形態において、本発明の剤形はまた、オメプラゾール又はパントプラゾールなどのプロトンポンプ阻害薬（ＰＰＩ）を含んでもよい。適切なプロトンポンプ阻害薬としては、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。プロトンポンプ阻害薬は、これらの化合物について既に知られている治療有効量で本発明の剤形中に存在してもよい。例えば、オメプラゾールは、１剤形当たり２０ｍｇ又は４０ｍｇの投与量で使用することができる。パントプラゾールは、１剤形当たり２０ｍｇ又は４０ｍｇの投与量で使用することができる。
本発明の方法又は使用において、プロトンポンプ阻害薬は、徐放性胃内滞留剤形の前又は同時に投与されてもよい。実施形態によれば、プロトンポンプ阻害薬は、徐放性胃内滞留剤形の約１０分から約６０分前に、又は約２０分から約６０分前に、又は約３０分から約６０分前に、又は約４０分から約６０分前に、又は約５０分から約６０分前に、又は約１０分から約５０分前に、又は約２０分から約５０分前に、又は約３０分から約５０分前に、又は約４０分から約５０分前に、又は約１０分から約４０分前に、又は約２０分から約４０分前に、又は約４０分から約５０分前に、又は約１０分から約３０分前に、又は約２０分から約３０分前に、又は約１０分から約２０分前に、又は約３０分前に投与（又は使用）することができる。
抗生物質
さらなる実施形態によれば、本発明の方法、本発明の使用、及び本発明の使用のための徐放性胃内滞留剤形は、抗生物質の使用をさらに含み得る。
実施形態において、本発明の剤形はまた、抗生物質を含んでもよい。適切な抗生物質には、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されるわけではない。抗生物質は、これらの化合物について既に知られている治療有効量で本発明の剤形中に存在してもよい。例えば、１剤形当たり１０００ｍｇのクラリスロマイシン又は５００ｍｇのアモキシシリンが使用されてもよい。
抗生物質は、徐放性胃内滞留剤形の前、後、又は同時に投与又は使用することができる。抗生物質は、徐放性胃内滞留剤形と同時に投与することができる。プロトンポンプ阻害
薬は、徐放性胃内滞留剤形と同時に投与してもよいし、その前に使用してもよいし、抗生物質は、徐放性胃内滞留剤形と同時に投与してもよいし、その後に投与してもよい。
他の生物活性剤との組み合わせ
別の実施形態によれば、他の天然生物活性剤との組み合わせは、治療効果を改善するために興味深い可能性がある。一般に、生物活性剤の組み合わせは、細菌の異なる標的（マルチターゲット）を指向することができる。例えば、シンナムアルデヒドは細菌膜を破壊し、ウレアーゼを阻害することができる。一方、アルテスネート複合体はＲＯＳを生成し、病原菌の生命構造やサイトトキシン関連遺伝子Ａ（ＣａｇＡ）、空胞化毒素Ａ（ＶａｃＡ）や細胞表面アドヘシン（ＢａｂＡ）などの病原性因子を劣化させることができる。多くの病原性因子は必須ではないが、それらの阻害は、単独での治療を可能にするために感染力を十分に弱めたり、又は従来の抗生物質との強力な相乗効果を提供し、それによって治療の特異性と除菌効率を高めることができる。
さらに、シンナムアルデヒドは、ヘリコバクター・ピロリ感染部位における他の生物活性剤の浸透を促進する浸透促進剤として作用することができる。本発明の例によれば、シンナムアルデヒド／デンプングリコレート複合体とアモキシシリンなどの抗生物質との組み合わせは、マウスにおいてヘリコバクター・ピロリを首尾よく除菌することを可能にする。先に述べたように、シンナムアルデヒドは錠剤から放出され、粘液を通って浸透し、同時にアモキシシリンがヘリコバクター・ピロリ定着部位に到達するための経路を生成する。
水溶性アルテスネートの調製方法
別の実施形態によれば、アルテスネートエマルジョンを含む徐放性胃内滞留製剤の調製方法であって、
ａ）乳化剤を含む緩衝液に、アルテスネート、又はその薬学的に許容される塩、又はその立体異性体を導入して、乳化アルテスネート溶液を得る工程、
ｂ）前記乳化アルテスネート溶液のｐＨ値を約７．５乃至約７．９に調整し、調整された乳化アルテスネート溶液を得る工程；並びに
ｃ）前記調整された乳化アルテスネート溶液を乾燥させて、約７．５乃至約７．９のｐＨ値を有する乳化アルテスネートの乾燥粉末を得る工程
を含む、調製方法が提供される。
乳化アルテスネートの乾燥粉末のｐＨ値は、約７．５から約７．９、又は約７．６から約７．９、又は約７．７から約７．９、又は約７．８から約７．９、又は約７．５から約７．８、又は約７．６から約７．８、又は約７．７から約７．８、又は約７．５から約７．７、又は約７．６から約７．７、又は約７．５から約７．６、又は約７．５、７．５５、７．６、７．６５、７．７、７．７５、７．８、７．８５、又は７．９であり得る。
前記アルテスネートの薬学的に許容される塩と前記乳化剤との重量比は、約９：１から約１：１である（上記の列挙も参照）。好ましくは、比率は７：３又は３：２である。
前記乳化剤が界面活性剤であってもよい。前記界面活性剤が、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性の界面活性剤、又はそれらの組み合わせであってもよい。前記界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ソルビタン、ソルビタンエステル、ラウレス硫酸ナトリウム、サルコシル、コカミドプロピルベタイン（ＣＡＰＢ）、ラウリルエーテルスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ノニルフェノールエトキシレート、ヘキサデシルベタイン、ラウリルベタイン、エーテルエトキシレート、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレート、及び３
－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）からなる群より選択されてもよい。前記界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムであってもよい。
前記乳化剤がコール酸塩であってもよい。前記コール酸塩が、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸及びリトコール酸からなる群から選択されてもよい。
前記ｐＨ値が炭酸塩などの弱塩基で得られてもよい。前記炭酸塩が、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、及び炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）並びにそれらの組み合わせからなる群から選択されてもよい。
前記乾燥が噴霧乾燥であってもよい。
本発明は、その範囲を限定するためではなく、本発明を説明するために与えられた以下の実施例を参照することによって、より容易に理解される。
実施例１
共役複合体の調製
本発明の水溶性固体粉末形態を、シンナムアルデヒド共役複合体の形態のいずれかで調製するために、以下の工程に従ってもよい。
ａ）シンナムアルデヒドから選択される少なくとも０．１％から１０％の油性液体生物活性脂質剤を提供する工程;
ｂ）適切な揮発性溶媒（好ましくは、メタノール中のコール酸、デオキシコール酸又は誘導体胆汁酸及びその塩）又はモノオレイン酸グリセリル中に、少なくとも１００℃以上の融点を有する乳化剤を提供する工程。
ｃ）負電荷及び少なくとも１つのカルボキシル官能基を有し、シンナムアルデヒドと相互作用してアセタール、ヘミアセタール又は環状ヘミアセタールを形成することができる少なくとも１つ以上のヒドロキシル基を有し、少なくともカルボキシル／カルボキシレートを有する親水性ポリマー（デンプングリコレート又はＣＭＳ、ＣＭ－セルロース等）の混合物を提供する工程。
ｄ）ａ）をｂ）に導入し、均質化された混合物ａｂが得られるまで混合する工程。
ｅ）溶液ａ及びｂをｃ）の混合物に直接噴霧し、室温で乾燥させるか、又は通気して過剰な溶媒を除去する工程。
カルボキシメチルデンプンの調製
ナトリウムデンプングリコレート（ＳＧ）は、アルカリ条件下で官能化剤としてクロロ酢酸ナトリウムを使用することによるデンプンのエーテル化によって合成される。反応媒体は、イソプロパノール／水（８０：２０ ｖ／ｖ）又はエタノール／水（８０：２０、ｖ／ｖ）の混合物である。可溶性ジャガイモデンプンとモノクロロ酢酸ナトリウムはシグマ－アルドリッチ（セントルイス、ミズーリ州、米国）から購入した。その他の化学薬品は試薬グレードのものを使用し、さらに精製することなく使用した。
実際には、１６０ｇの可溶性ジャガイモデンプン（ジャガイモデンプン、シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国又はクリアガムＰＢ－９９－ＥＸＰ、ロケット、レストロン、フランス）が２リットルのビーカーに導入された。次に、室温で撹拌しながら、１２００ｍＬのイソプロパノール／水（８５：１５、ｖ/ｖ）の混合物をビーカーに加えた。１
５分後、ＮａＯＨペレットを溶液に加えて最終濃度を約２．０（最大３．０Ｍ）にし、ＮａＯＨペレットが完全に溶解するまで撹拌を続けた。カルボキシメチル化の反応は、モノクロロ酢酸ナトリウムの添加量１５０gで開始し、１時間常に攪拌下におき、室温（２２℃）で一晩放置する前に、ゲル化又は凝集を避けるために４００ｍＬのメタノールを添加した。
反応終了後、攪拌を止め、デカンテーションにより上澄みからＳＧを分離した。過剰（約２．０Ｌ）のメタノール／水（８０：２０、ｖ/ｖ）溶液を添加することによってＳＧを洗浄した。沈殿した生成物ＳＧを、ワットマンセルロース濾紙上での濾過によって収集し、そして洗浄を、それぞれ（８０：２０、ｖ／ｖ）、（９０／１０）及び（９５／５）の比のメタノール／水で少なくとも３回繰り返した。最後に、ＳＧ塊を２Ｌの純メタノール(又はエタノール)中で脱水し、風乾して残留溶媒を除去し、粉末を得た。
置換度（ＤＳ）は滴定法により決定した。実際、カルボキシメチルデンプンのカルボキシル基は、ＨＣｌを含むエタノール溶液（５ｍＬの濃ＨＣｌと９５ｍＬの無水エタノール）で１．０ｇの粉末を３０分間処理することにより、最初に酸性（プロトン化）型に変換された。次いで、プロトン化デンプングリコレートを濾過し、エタノール／蒸留水（９０：１０）で数回洗浄して過剰の酸を完全に除去し、乾燥のために純アセトンで洗浄した。最後に、１００ｍｇのプロトン化デンプングリコレートを１００ｍＬの蒸留水に懸濁し、０．０５Ｍ水酸化ナトリウム溶液で滴定した。ＳＧのＤＳは約０．５６と推定される。
シンナムアルデヒド／デンプングリコレート複合体の調製
６．０ｇのデオキシコール酸（ナトリウム塩形態）を２０ｍＬのメタノール中に導入し、室温で穏やかに撹拌しながら均質化した。その後、常に室温で撹拌しながら、４．０ｇのトランス－シンナムアルデヒドを溶液中に分散させた。
５．０分間混合した後、トランス－シンナムアルデヒド／デオキシコレート乳化溶液を３０ｇのＳＧの表面上で直接蒸発させた。粉末を均一に分散させ、トランス－シンナムアルデヒド／デオキシコレート溶液のＳＧ顆粒への吸収を促進するために、振って混合することが重要である。約１０％（ｗ／ｗ）のシンナムアルデヒドを含む対応する粉末を乾燥させ、密閉して室温の暗所に保管した。
シンナムアルデヒド／ＳＧ複合体の特性評価
シンナムアルデヒド／ＳＧ複合体のＦＴＩＲ解析
ＦＴ－ＩＲスペクトルは、粉末分析用のＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ Ｔｏｔａｌ Ｒｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ（ＵＡＴＲ）装置を備えたＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｏｎｅ（商標）（パーキンエルマー インスツルメンツ、ノーウォーク、米国）で、スペクトル領域４０００－６５０ｃｍ－１を４ｃｍ－１分解能で２４スキャンして記録した。全てのスペクトルを、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（商標）ソフトウェア３．０２を使用して上記範囲にわたって正規化した。
試料は、油圧プレス（カーバー、ウォバシュ、インディアナ州、米国）を用いて直径１２ｍｍの平打ちパンチで直接圧縮（２．３トン／ｃｍ２）して得た粉末形態で直接分析した。
ＦＴＩＲスペクトル（図４）は、カルボキシメチル化後に、ＳＧが、カルボキシレートアニオン基に相当する１５９０及び１４１０ｃｍ－１の非対称及び対称伸縮振動に位置する吸収帯を示した。
シンナムアルデヒドをＳＧと複合化すると、２９３０－２８６０ｃｍ－１のＣ－Ｈ伸縮振動に相当するスペクトル領域の吸収帯の強度が増加することが観察された。さらに、シ
ンナムアルデヒドのＣ＝Ｃに起因する吸収帯が１６７５ｃｍ－１に新たに検出された。
シンナムアルデヒド／ＳＧ複合体のＳＥＭ分析
Ｓ－３４００Ｎ可変圧力ＳＥＭ（日本電子株式会社、東京、日本）を用いて、試料の形態と表面特性を様々な倍率（１５０乃至５００）で調べた。画像は電圧１０ｋＶ、高真空で得られたものである。
ＳＥＭ顕微鏡写真におけるＳＧ顆粒の形態は、形状が異なり、表面が適度に滑らかで、卵形又は洋ナシ形、大きさは１０乃至８０μｍとより大きいことが特徴である（図５）。上記顆粒は、偏心した穴を有し、はっきりと見える。シンナムアルデヒドと複合化させると、ＳＧ顆粒は未処理のものよりもやや大きくなり、互いに付着したままブドウのようになった。一般に、上記複合体は不規則な形状及び粗い表面を有する。
実施例２
アルテスネートの調製
炭酸ナトリウム塩形態下でのアルテスネートの調製
１８ｇのアルテスネートを５４ｍＬの水に分散させ、次いで３３ｍＬの炭酸水素ナトリウム水溶液（４．１６％）を添加した。この溶液を２５℃で２０分間穏やかに攪拌し、濾過した後、凍結乾燥して白色結晶粉末を得た。
捕捉によるデンプングリコレート中へのアルテスネートの固定化
１０ｇの水溶性アルテスネートを５０ｍＬのエタノール中に分散させ、透明な溶液が得られるまで均質化した。流動床造粒プロセスと同様に、噴霧器を使用して、上記溶液をデンプングリコレート粉末（４０ｇ）の表面に直接噴霧した。
水溶性アルテスネート固体粉末の調製
アルテスネートと乳化剤の重量比は、例えば９：１から１：１までの異なるものを用意することができる。好ましくは、アルテスネート／乳化剤の重量比は、約３：２（それぞれ６０％対４０％の重量）である。本発明の水溶性アルテスネート固体粉末形態を調製するために、以下の工程を実施することができる。
アルテスネートエマルジョン溶液の調製
１.ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ、０．１７Ｍ）２４ｇを、穏やかに攪拌しながら４０乃至５０℃に加熱した蒸留水４００ｍＬに分散させる；
２.上記溶液に炭酸ナトリウム１１．２g（０．２１Ｍ）を加え、攪拌しながら室温まで冷却する。炭酸水素ナトリウム（モル質量８４．０１ｇ/ｍｏｌ)も使用でき、この場合、５５ｍｇ（１．３１Ｍ）の炭酸水素ナトリウムが必要である；
３．上記溶液中に５６ｇのアルテスン酸（０．２９Ｍ）をゆっくりと導入し、溶液が透明になるまで均質化する。
４．必要に応じてｐＨ値を約７．６乃至７．８、好ましくはｐＨ７．７５に調整する；
５．乾燥前に蒸留水を加えて最終的に５００ｍＬの溶液を得る。
アルテスネートがナトリウム塩であり、乳化剤がラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）である場合、３：２の重量比は約１：１のモル比を、７：３の重量比は約１．７：１のモル比を、８：２の重量比は約２．９：１のモル比を表わす。
予想外に、溶液のｐＨは非常に重要である。許容されるｐＨ値は、７．５乃至７．９、好ましくは７．６乃至７．８であるべきである。ｐＨ８．０以上で調製されたアルテスネート粉末は、特に噴霧乾燥機で乾燥を行う場合、粘着性があり、流動性が低い。この場合、臼内にアルテスネート粉末量を完全に充填し、圧縮して錠剤を得ることが困難な場合がある。ｐＨ７．４以下では、良好な物性を示すが、溶解性に乏しいアルテスネート粉末が
得られる。
アルテスネートはアルカリ溶液中で非常に可溶性であるが、ＤＨＡに迅速に加水分解するので、弱塩基は、アルテスネート溶液のｐＨを増加させてアルテスネートの分解を回避するために好ましい。一般に、炭酸ナトリウム（又はカリウム）（Ｎａ２ＣＯ３）又は炭酸水素ナトリウム（又はカリウム）（ＮａＨＣＯ３）などの炭酸塩が好ましい。水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムなどのより強い塩基は、調製中にアルテスネートを分解又は加水分解する可能性がある。
ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）は、アルテスネートの溶解度及び安定性を改善するための乳化剤として使用される。さらに、エマルジョンは、保護乳化層によって環境から分離されたアルテスネートを閉じ込めることを可能にする。このような保護コーティングは、貯蔵寿命を延ばし、胃の中の胃酸への曝露を防ぎ、アルテスネートの分解を遅らせることができる。ラウリル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレート、及び３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）などのいくつかの界面活性剤で適切な複合体が調製された。胆汁酸塩（例えば、ＮＡＣＲＥＳ ＮＡ．２４（商標））とコール酸ナトリウムとの混合物もまた、複合体を調製するために首尾よく使用された。
液体から乾燥粉末アルテスネートを得るために、溶媒（アルコール又はアセトン）を用いた沈殿、フリーズドライ又は凍結乾燥などのいくつかの乾燥処理方法が使用され得る。しかし、これらの処理方法は非常に時間がかかり、工業的な製造が困難である。本出願では、噴霧乾燥法が好ましく使用される。なぜなら、噴霧乾燥法は拡張可能なプロセスであり、乾燥医薬粉末を製造するために広く使用されているからである。さらに、噴霧乾燥は、迅速であり、完全に自動化されており、連続的であり、再現性があり、単一工程であり、したがって、大きな改変なしに拡張可能である。
水溶性アルテスネート粉末を得るための噴霧乾燥
水溶性アルテスネート固体粉末を得るための乾燥は、Ｐｉｌｏｔｅｃｈ（商標）ＹＣ－５１０小型噴霧乾燥機を用いて行われた。該噴霧乾燥機は、０．７ｍｍの標準ノズルジェットを装備し、以下のパラメータを使用して操作した：入口温度１５０℃、出口温度８０乃至９０℃、噴霧流量約５００ｍＬ/ｈ、及び気流設定約４０ｍ３／ｈ。均質な溶液を確保するために、マグネチックスターラーを使用して、乾燥プロセス中に懸濁液を連続的に混合した。
上記のプロセスによって、水溶性アルテスネートは乳化形態の下で安定化され、アルテスン酸又は他の既知の製剤よりも長期間（＞１２時間）胃酸に対してより耐性がある。ヘリコバクター・ピロリは主に胃粘膜に定着するので、徐放性又は浮遊性錠剤にて製剤化された場合、この安定で可溶性の形態は、胃通過中にその抗菌活性を発揮するのに有用であり得る。細胞内のヘリコバクター・ピロリに対しては血流への吸収が必要である。この場合、この水溶性の安定したアルテスネート形態は生体内変換にＤＨＡよりも長い時間を必要とし、したがってその半減期が長くなると考えられる。
特性評価
溶解度
０．５ｇの異なるアルテスネート製剤（未処理アルテスネート、アルテスネートナトリウム、アルテスネート／ＳＧ複合体及びＷＳＡ粉末）を、１０ｍＬの模擬胃液（ＳＧＦ、ｐＨ１．２）中に分散させた。すべての溶液を、Ｇ２４環境インキュベーターシェーカー
（ニューブランズウィックサイエンティフィック社、ニュージャージー州、米国）内で穏やかに振とう（１００回転／分）しながら３６．５℃で培養した。２時間後、図８に示すように、未処理アルテスネートの溶液は乳白色の外観を示し、バイアルの底に重要な沈殿物があった。炭酸ナトリウム塩形態下のアルテスネートについては、溶液は濁っているが、明らかな沈殿は観察されなかった。対照的に、アルテスネート／ＳＧ複合体及びＷＳＡの溶液は、透明であり、沈殿は観察されず、完全に溶解していることを示した。ＳＧＦ中、３６．５℃で１２時間培養した後、未処理アルテスネートの変化は検出されなかった。アルテスネートナトリウム塩形態では、底部に沈殿が形成されるが、アルテスネート／ＳＧ複合体の溶液は濁った。ＷＳＡのみが変化せず、溶液は透明のままであった。したがって、降順で最も溶解性が高いのは水溶性アルテスネートであり、次にアルテスネート／ＳＧ複合体、アルテスネートナトリウム塩形態、未処理アルテスネートが続く。
ＦＴＩＲ分析
ここで図９を参照すると、アルテスネートの典型的な吸収帯は１７５０ｃｍ－１に位置し、コハク酸残基からのカルボキシル基に相当する。１５９０ｃｍ－１及び１４１０ｃｍ－１では吸収バンドは観測されなかった。これは、１５９０ｃｍ－１から１７５０ｃｍ－１にシフトしたカルボン酸（－ＣＯＯＨ）基の全てのカルボキシレート（－ＣＯＯ－）基のプロトン化によるものである。アルテスネート／ＳＧ複合体では、１７５０ｃｍ－１と１５９０ｃｍ－１に位置する吸収帯は、それぞれアルテスネートのカルボキシル基とデンプングリコレートの１５９０ｃｍ－１に起因するものである。
ＷＳＡについて前述したように、この形態はｐＨ値がわずかにアルカリ性（７．７５）であり、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）を使用したエマルジョンによって安定化されている。このため、アルキル（Ｃ－Ｈ）伸縮振動に相当する２９３０乃至２８６０ｃｍ－１のスペクトル領域に位置する吸収帯の強度が増加した。この増加は、主にＳＬＳのアルキル鎖の存在によるものである。さらに、カルボン酸（－ＣＯＯＨ）基に相当する１７５０ｃｍ－１並びにカルボキシレート（－ＣＯＯ－）基に相当する１５９０ｃｍ－１及び１４１０ｃｍ－１における吸収帯が観察された。これらの結果は、ＷＳＡが２つのカルボキシル形態を有することを明確に示している。主な形態はコハク酸塩（カルボキシレート、－ＣＯＯ－）であり、他方は中程度にコハク酸（カルボン酸、－ＣＯＯＨ）である。コハク酸塩型が多いことから、ＷＳＡが他のアルテスネート処理よりも高い溶解度を有することが説明できる。
ＳＥＭ分析
ここで図１０を参照すると、アルテスネート／ＳＧ複合体の形態はＳＧ顆粒の形態と類似している。しかし、アルテスネート／ＳＧ複合体顆粒はＳＧ顆粒よりも大きく（主に２０乃至４０μｍ対８０乃至１２０μｍ）、小さな微粒子で覆われているようであり、粗い表面を形成している。ＷＳＡの場合、顆粒は球状で、アルテスネート／ＳＧ複合体の顆粒に比べて約４０倍小さい。
実施例３
寒天ディスク拡散試験
シンナムアルデヒド／ＳＧ複合体（１）、未処理アルテスネート（２）、アルテスネート／ＳＧ複合体（３）、ＷＳＡ（４）及びシンナムアルデヒド／ＳＧとアルテスネート複合体の混合物（５）について、これらの試料を図１１及び図１２に示す濃度で水中に溶解した。天然（未処理）アルテスネート（０）については、使用される溶媒はメタノールである。
具体的には、あらかじめヘリコバクター・ピロリやカンピロバクター細菌の純粋培養液の較正済み接種物が事前に接種された標準培地の表面に、決められた濃度（２０乃至２５
ｍｇ／ｍＬ）の抗菌剤を含浸させた紙ディスクを付着させる。培養後、ペトリ皿を検査し、ディスクを囲む阻止帯の直径を測定し、試験した様々な抗菌剤の臨界値と比較して、臨床的分類（耐性、中間、感受性）を決定した。阻止帯の直径は、試験した細菌の感受性に比例する。結果を図１１乃至１５に示した。一般に、ヘリコバクター・ピロリ及びカンピロバクター・ピロリに対する最も有効な抗菌剤が、他の生物活性剤よりも大きい阻止帯を有するシンナムアルデヒド／ＳＧ複合体であることを示す結果が得られた。
実施例４
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）決定
合計で約５９株のヘリコバクター・ピロリをこの研究のために選択した。
試験株は、異なる地理的起源からの胃生検から分離された株である：アフリカ（アルジェリア及びコンゴから５株）、アジア（日本から５株）、アメリカ（コスタリカから３株）及びフランスで分離された４５株である。参照株ＣＣＵＧ１７８７４もまた含まれる。これらの株を－８０℃で凍結したストックとして維持する。
試験されたヘリコバクター・ピロリ株の同一性
３７７０、３３９２、３９９５、３９９７、４００１、４０１０、４０１１、４０１３、４０１５、４０２３、４０２５、４０２８、４０２９、４０３０、４０３２、４０３５、４０３７、４０３８、４０３９、４０４０、４０６３、４０６４、ＬＢ０１６、ＬＢ０２４、ＡＬＧ１２６、ＡＬＧ１４０、ＡＦＲ６５、ＡＦＲ６９、ＡＦＲ７３、ＡＦＲ７６、ＡＦＲ９３、ＣＲ９９０９２２ＮＮ、ＣＲ１２４５５、ＣＲ９９０９２７６、ＪＡＰ０９２３６、ＪＡＰ０９２４４、ＪＡＰ０９２６０、ＪＡＰ ＴＨ７９、ＪＡＰ ＴＨ６４、ＣＣＵＧ１７８７４、４８２０、５０１９、４８０５、４７８４、４８９８、４９７７、４６８２、４７１０、４７３１、４８００、４８１１、４８５９、４８７９、４８８２、４９２３、４９４７、４９６９、４９８３、５００５、５００９及び５０２１。
これらの株はすべてカンピロバクター及びヘリコバクターに関する国立リファレンスセンター（Ｃ.Ｎ.Ｒ）及びボルドー大学病院（ＣＨＵ）（アメリ・ラバ・レオン、ボルドー
セデックス）から提供されたものである。
研究された生物活性剤
１．シンナムアルデヒド／ＳＧ
２．天然アルテスネート
３．水溶性アルテスネート
最小発育阻止濃度の決定
これらの生物活性剤の抗菌活性は種々のヘリコバクター・ピロリ株の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定して決定した。ＭＩＣは寒天希釈法を用い、以下のパラメータで実施した：
培地
ミューラーヒントン２寒天培地（ビオメリュー）；
ヒツジ血液を１０％濃度で添加し、球形抽出物を含む。
細菌接種
約１０９ＣＦＵ／ｍｌの懸濁液は、微好気性条件下、３７℃で増殖させた４８時間培養物からブルセラブロス中で調製される。
試料調製
各化合物の２ｍｇ/ｍＬのストック溶液を水（天然アルテスネートの場合はメタノール）にて調製する。その後、最終濃度が０．０１５ｍｇ／Ｌになるように希釈液を調製する。合計で、各プレートには３５．８ｍＬの寒天、４ｍＬの球状抽出物を含むヒツジ血液、及び２００μＬの試料溶液が含まれ、これらは１２ｃｍの大型ペトリ皿に注がれた。
接種
接種はステア装置に由来する複数の接種装置を使用して実行され、プレートは、微好気性雰囲気（５％Ｏ２、１０％ＣＯ２、８５％Ｎ２）を含むワークステーション内で３７℃で４８時間培養された。
ＭＩＣは、ヘリコバクター・ピロリ株の増殖を阻害する生物活性剤の最小濃度として決定される。
結果
図１６及び図１７に、各化合物又はその組み合わせについて、ＭＩＣ５０及びＭＩＣ９０を示した。
結果は、シンナムアルデヒド／デンプングリコレート複合体のＭＩＣ５０及び９０がそれぞれ２０及び４０μｇ／ｍＬであることを示した。アルテスネート／ＳＧ複合体についても同様の結果が見られる。しかし、天然アルテスネートのＭＩＣ５０及び９０はそれぞれ２０及び８０μｇ／ｍＬである。
実施例５
アルテスネートの異なる治療による抗菌活性
この比較研究では、大腸菌を用い、未処理アルテスネート及び異なる治療を施したアルテスネート（アルテスネートナトリウム、アルテスネート/デンプングリコレート及び水溶性アルテスネート）の抗菌活性を評価した。
実際には、細菌クライオバイアルを解凍し、活性化のために９ｍＬのブロス中、３６．５℃で１８時間の間に２回培養した。
その後、１ｍＬの容量の培養物（約５．０×１０７ＣＦＵ／ｍＬの細菌濃度）を、天然アルテスネート（０．２％ｗ／ｗ）を含む４９ｍＬの培地中で穏やかに混合して、最終細菌濃度を約１．０×１０６ＣＦＵ／ｍＬとした。アルテスネートナトリウム塩形態、アルテスネート／ＳＧ複合体及びＷＳＡについても同様の調製を行った。３６．５℃で１８時間培養した後、各チューブの１ｍＬををペトリ皿にプレーティングし、３６．５℃で４８時間培養した。
ここで図１８を参照すると、結果は、抗菌活性が本質的にアルテスネートの溶解度に依存していることを明確に示している。未処理アルテスネートの場合、有意な変化は検出されない（図示せず）。しかし、アルテスネートナトリウム塩形態では、１０６から１０４ＣＦＵ／ｍＬへの減少が観察され、アルテスネート／ＳＧは１０６から1０２ＣＦＵ／ｍＬへの減少が示された。ＷＳＡのみが１０６ＣＦＵ/ｍＬから＜１０ＣＦＵ／ｍＬに減少し、より良い結果を提供した。
この実験では、アルテスネートの溶解度が調製方法によって異なることを除いて、すべての条件が類似している。ＷＳＡは水に非常に溶けやすいため、抗菌活性がより高く、アルテスネート／ＳＧも同様である。しかし、アルテスネートナトリウム塩形態はわずかにしか溶けないため、効果は低くなる。
ヘリコバクター・ピロリの除菌には、先に述べた要因のほかに、他の要因も重要である
：
１．アルテスネートは胃酸に溶けるものでなければならない。
２．アルテスネートは、例えば浮遊性製剤や徐放性製剤のように、長期間胃内に留まる必要がある。
３．細胞内ヘリコバクター・ピロリに対しては、アルテスネート、特に血流中の活性型（ＤＨＡ）下のその代謝物の生物学的利用能に依存する。
本願では、溶解性を向上させるために、ＷＳＡをナトリウム塩の形態で調製している。さらに、ＷＳＡが物理的に安定であり、特に胃酸中で安定であるのは、保護乳化層によって環境からアルテスネートを封じ込めるラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）のためである。このような保護層は、保存期間を延長し、胃内で胃酸にさらされるのを防ぎ、アルテスネートの分解を遅らせることができる。一方、現在市販されているアルテスネートは、水への溶解性が乏しく（０．６８ｍｇ/ｍＬ）、特に安定性に劣る。この安定性の低さから、市販のアルテスネートは経口投与すると胃内で速やかに加水分解されてジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ）になる。ＤＨＡも胃酸に溶けず、その抗菌活性はあまり重要ではないことは、上に詳述した結果によれば重要なことである。また、ＤＨＡは活性代謝物である。ＤＨＡは血流に吸収されるとすぐに、ＵＤＰ－グルクロン酸転移酵素、特にＵＧＴ１Ａ９とＵＧＴ２Ｂ７によって触媒されるグルクロン酸抱合を介して不活性代謝物（α-ジヒドロアルテミシニン-α-グルコロニド）に迅速に変換される。一方、アルテスネート／ＳＧ複合体やＷＳＡは胃酸に溶け、胃の中で局所的に抗菌活性を発揮するだけでなく、安定した状態を保つことができる。アルテスネートは、一旦肝臓を通過すると、血流に入る前にＤＨＡへの肝代謝（生体内変換）を受ける。この工程により遅延が生じ、おそらく血流中のＤＨＡの半減期が延長される。
実施例６
アルテスネートの薬物動態の研究
本研究では、未処理のアルテスネートと比較するため、アルテスネート／ＳＧ複合体のみを選択した。イン・ビボ研究は、ＣＤ－１マウス（体重約２０ｇ）で実施され、実験プロトコルは動物管理委員会の承認に従って実施されたものである。
動物供給施設から提供された医療記録を確認した後、実験前にマウスの順化について１週間観察した。４つのグループ（ｎ＝２０マウス/グループ)を以下のように治療した。
グループ－１：未処理アルテスネートを３．５ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内投与；
グループ－２：アルテスネート／デンプングリコレートを３．５ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内投与；
グループ－３：未処理アルテスネートを２００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与；及び
グループ－４：アルテスネート/デンプングリコレートを２００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与。
上記のように治療を施した後、血液試料を投与後５、１５、３０、４５、１２０及び４８０分に採取し、マウスを屠殺した。血漿を遠心分離によって分離し、処理前に－８０℃に保存した。
試料抽出
４００μＬの血漿を１ｍＬのアセトニトリル中に分散させてタンパク質を沈殿させ、試料の懸濁液を超音波浴中に１分間置く前にボルテックスで５分間撹拌した。沈殿したタンパク質を遠心分離（１５０００ｇ、１６℃で５分）によって分離し、上清を分析のためにマイクロプレートに集めた。
ＬＣ－ＭＳ/ＭＳ
アルテスネート及びその代謝物は、液体クロマトグラフィー（三連四重極Ｓｈｉｍａｄｚｕ（商標）ＬＣ－ＭＳ８０３０と連結したＵＨＰＬＣ）を用いて測定した。アルテスネートの活性、及びその毒性は、ペルオキシド架橋の結果である。したがって、代謝物は、エンドペルオキシド架橋がそのままの生物学的に活性なヒドロキシル化化合物と、ペルオキシド架橋がエポキシドに還元された生物学的に不活性なデオキシ代謝物に分けることができる。さらに、これらの代謝物はすべてグルクロン酸抱合を受け、尿又は糞便中に排泄される。ジヒドロアルテミシニンは、アルテスネートの主代謝物及び／又は一次代謝物であると思われる。変換（生体内変換）は、様々な程度で、異なる機構によって起こる。ジヒドロアルテミシニンはその後、ＵＤＰ－グルクロン酸転移酵素であるＵＧＴ１Ａ９及びＵＧＴ２Ｂ７によって触媒されるグルクロン酸抱合を介して不活性代謝物に変換される。ＵＧＴ１Ａ１やＵＧＴ１Ａ８が関与していることも報告されている。また、ジヒドロアルテミシニンは胆汁中にテトラヒドロフラノアセテートなどのマイナーグルクロニドとして排出される。
アルテスネートの代謝及び薬物動態が薬効及び副作用に及ぼす影響を系統的に解明するため、親薬物及びその２つの代謝物の血漿中濃度を測定した。
パラメータ最適化
化合物の溶液をアセトニトリル中１ｍｇ／ｍＬで調製し、アセトニトリル／水、１：１（ｖ/ｖ）比で１/１００に希釈した。システムをフローインジェクション分析（ＦＩＡ）モードで使用し、１μＬの希釈溶液を注入した。ｉ)分子イオン（ポジティブイオンモード）；ｉｉ）分子イオンのｍ/ｚ比、電圧（Ｑ１、コリジョンセル、Ｑ３）；ｉｉｉ）フラグメント選択とプリカーサーイオン（多重反応モニタリング）遷移など、分析するためのすべての条件を最適化した。本実験で使用する水はすべて脱イオン精製水である。
ＬＣ法の最適化
ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ溶液をマイクロモル濃度（μＭ）のオーダーの濃度に希釈して、分析方法のポイントに至らせた。クロマトグラフィー条件を最適化した（溶媒、ｐＨ、溶出モード、流速など）。好ましくは１又は２μＬの溶液を注入することによってクロマトグラムを記録した。
Figure 2022540064000023
Figure 2022540064000024
ジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ）についても同様の治療を行い、多重反応モニタリングのフラグメンテーション遷移はｍ／ｚ２６７．４乃至１６３．４であった。これらのフラグメントの値は近接しており、区別することが困難であることは注目に値する。一般に、アルテスネートは肝臓でＤＨＡに変換され、通常、血流中にアルテスネートの痕跡は現れない。外部標準から得られた結果に基づくと、保持時間（ｔＲ）はアルテスネート、ＤＨＡ及びＤＨＡ－グルクロニドでそれぞれ１．３５、１．２９及び１．１３分となる。
較正標準の調製
ＤＨＡのストック溶液は、正確に秤量した参照化合物をアセトニトリルに溶解して調製したものであった。ＤＨＡの一次ストック溶液（４００ｇ／ｍＬ）をアセトニトリルで調製し、アセトニトリルで希釈して０．０５、０．１、０．５、１．０及び５ｎｇ/ｍＬの希釈標準溶液を調製した。ストック溶液及び希釈標準溶液はすべて４℃で保存した。
結果
アルテスネートは静脈内投与後、速やかに加水分解され、活性代謝物であるジヒドロアルテミシニン（ＤＨＡ）に変化する。経口投与の場合、アルテスネートは、血流に入る前に肝臓でＤＨＡに変換される。その後、ＤＨＡはＵＤＰ－グルクロン酸転移酵素によって触媒されるグルクロン酸抱合を介して、主に生物学的に不活性な代謝物であるＤＨＡ－グルクロニドに変換され、主に尿中に排泄される。
血漿プロファイルの解析は、与えられた薬物の生物学的な取り扱いを理解する上で重要な側面である。アルテスネートの静脈内投与後の全てのプロファイルは、少なくとも１つの分布相を示し、複数の臓器コンパートメントが存在することを示唆した。ここで図１９を参照すると、製剤の静脈内投与後、アルテスネートは加水分解により活性代謝物ＤＨＡに速やかに変換され、１５分後に最大濃度（Ｃｍａｘ）に到達することが確認された。その後の、血漿濃度の減少は、脳、肝臓、前立腺などの高灌流臓器へのＤＨＡの急速な分布、あるいは活性型ＤＨＡが不活性型ＤＨＡ－グルクロニドに変換される可能性を示している。
静脈内投与について（表３）、結果は、ＤＨＡ活性代謝物の有意な差があることを示す。１５分後、ＤＨＡの最大濃度（Ｃｍａｘ）に達する。未処理アルテスネートについて、Ｃｍａｘは約０．０６ｎｍｏｌのＤＨＡ/ｍＬであるが、ＳＧ中に捕捉されたアルテスネートは０．０９ｎｍｏｌ／ｍＬである。
また、不活性代謝物であるＤＨＡ－グルクロニドについても同様のプロファイルが観察され、アルテスネート／ＳＧで最も重要であることがわかった。この観察は、アルテスネート／ＳＧがより可溶性であり、その生物学的利用能がより高く、したがって、より迅速に不活性化されるので、一貫している。
ここで図２０を参照すると、経口投与について、同様のプロファイルが認められる。より高い濃度のＤＨＡがアルテスネート／ＳＧについて検出される。しかし、ＤＨＡ－グルクロン酸塩におけるＤＨＡの変換の減速がアルテスネート／ＳＧについて観察される。前述したように、アルテスネートは、胃を通過する間に胃酸によってＤＨＡに加水分解されやすい。この活性代謝物は血流に直接吸収され、速やかに不活性代謝物であるＤＨＡ－グルクロニドに変換される。一方、アルテスネート／ＳＧ複合体は胃酸中及び肝臓への移行中に安定であり、血流に入る前にＤＨＡへの生体内変換によって生じる遅延がある。この遅延のため、ＤＨＡのＤＨＡ－グルクロニドへのグルクロン酸抱合が遅くなり、未処理アルテスネートのＣｍａｘが１５分であるのに対し、アルテスネート／デンプングリコレートのＣｍａｘは６０分であることが示されている（図２０、下）。また、アルテスネート／ＳＧについて観察されたグルクロン酸抱合の強度はより低く、これは、その生物学的利用能が未処理アルテスネートよりも高い理由を説明する。
Figure 2022540064000025
Figure 2022540064000026
組織分布プロファイル
血漿中濃度、組織中の薬物濃度、毒性との可能な関係を知る上で有用であり得る組織分布研究を行っている。静脈内投与された全ての製剤について、活性代謝物ＤＨＡのより高い濃度が脳で検出され、より低い濃度が肝臓及び前立腺で観察された。これら２つの臓器間のＤＨＡ濃度に有意差は観察されなかった。
経口投与されたすべての製剤において、投与後、肝臓及び前立腺で活性代謝薬物がより高い濃度で検出された。最も低い濃度は脳で観察された。さらに、アルテスネート／ＳＧ製剤と比較して、未処理アルテスネートは、本実験で得られたすべての結果において、有意に低い値を示す。
脳内の生体内分布
ここで図２１を参照すると、静脈内投与後、アルテスネート／ＳＧ製剤では１５分後に脳内で重要な量のＤＨＡが検出され（Ｔｍａｘ）、その曲線下面積（ＡＵＣ）は未処理アルテスネートに比べて約２倍高くなっている。脳内ではＤＨＡ－グルクロニドは検出され
ない。
ここで図２２を参照すると、経口投与の場合も同様の結果が得られている。アルテスネート／ＳＧ製剤の最大濃度は、脳内で１５分後に到達する。一方、静脈内投与では、不活性代謝物であるＤＨＡ－グルクロニドが脳内で検出される。ＤＨＡ－グルクロニドは静脈内投与では脳内に検出されないが、経口投与では有意な量が観察される。これは、静脈内投与量（３．５ｍｇ／ｋｇ）が経口投与量（２００ｍｇ／ｋｇ）より少ないことによるものと考えられる。ＤＨＡのＤＨＡ－グルクロン酸塩への変換について、アルテスネート／ＳＧ製剤ではグルクロン酸抱合が遅れ、Ｔｍａｘが６０分に観察されたのに対し、未処理アルテスネートではグルクロン酸抱合がより速く、１５分に観察された。この違いは、静脈内及び経口投与において、アルテスネート／ＳＧ製剤の見かけの半減期が未処理アルテスネートよりも予想外に優れている理由を説明することができる。
肝臓内の生体内分布
肝臓の初回通過は、消化管から吸収された薬物が肝臓内の酵素で代謝され、そのほとんどが肝臓から排出されず、したがって全身循環に到達しない場合に起こる。このような吸収障害を回避するために、静脈内投与は、薬物を臓器に直接送達することができる。
静脈内投与（図２３）では、アルテスネートは直接血流に乗り、ＤＨＡに加水分解される。結果は、ＤＨＡのＣｍａｘは、アルテスネートが最初に生体内変換を受けるべき経口投与について観察されたように１５分後ではなく、３０分後にのみ肝臓で検出されることを示す。このため、静脈内投与では肝臓中のＤＨＡの濃度が低くなることが観察された。
経口投与の場合、肝臓への蓄積量が静脈投与の約７０倍と重要な値であるという結果（図２４）が明確に示されている。この現象は、静脈内投与されたアルテスネートが直接血流に乗り、遅れて肝臓に到達するため、首尾一貫している。一方、経口投与されたアルテスネートは、血流に入る前に実質的に肝臓を通過し、生体内変換を受けるため、この臓器での濃度がより高いことが説明される。
一般に、アルテスネート／ＳＧ製剤はより高い生物学的利用能とより長い半減期を示し、これはおそらくデンプングリコール酸にアルテスネートが捕捉されるためである。実際、デンプングリコレートは多くの重要な役割を果たしている：すなわち、ｉ）デンプングリコレートはアルテスネートを保護するが、未処理アルテスネートは胃酸の通過中に加水分解される、ｉｉ）デンプングリコレートの加水分解によって引き起こされる遅延は、肝臓で吸収され生体内変換される前にアルテスネートを放出する、ｉｉｉ）デンプングリコレートは、血流中の活性代謝物ＤＨＡの通過を延長し、静脈内投与されたときのＤＨＡ－グルクロン酸抱合におけるＤＨＡの変換を遅延させ得る。
前立腺内の生体内分布
静脈内投与後、両製剤で同様の曲線下面積（ＡＵＣ）が観察された。しかし、前立腺中のＤＨＡは、未処理アルテスネートでは１５分後に、アルテスネート／ＳＧ製剤では３０分後に検出される。静脈内投与による不活性代謝物ＤＨＡ－グルクロニドは前立腺に検出されない。図２５を参照。
経口投与の場合（図２６）、同様のプロファイルが得られる。しかし、アルテスネート／ＳＧ製剤の脳内ＤＨＡの最大濃度は１５分後に到達するのに対し、未処理アルテスネートのそれは３０分後に到達している。
両製剤の不活性代謝物であるＤＨＡ－グルクロニドは、経口投与では前立腺で検出される。静脈内投与では前立腺にＤＨＡ－グルクロニドは検出されないが、経口投与では有意
な量が観察されている。これは、静脈内投与量（３．５ｍｇ／ｋｇ）が経口投与量（２００ｍｇ／ｋｇ）に比べて検出するには低すぎるためと思われる。ＤＨＡ－グルクロン酸塩の生成、グルクロン酸抱合反応はアルテスネート／ＳＧ複合体では遅く、Ｃｍａｘは６０分に観察される。しかし、この処理は未処理アルテスネートでは速く、Ｔｍａｘは１５分に観察される。この違いは、前立腺におけるアルテスネート／ＳＧ複合体のより高い生物学的利用能の理由を説明することができる。
実施例７
水溶性アルテスネートと市販アルテスネートの薬物動態プロファイルの比較
本研究の目的は、アルビノラットに強制経口投与した場合の水溶性アルテスネートと市販（未処理）アルテスネートの薬物動態を評価することである。
本研究における動物の管理及び使用に関するプロトコル及び手順は、実施前にＣＲ－ＭＴＬの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によってレビューされ承認されている。本研究期間中、動物の管理及び使用は米国の全米研究評議会及びカナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ）のガイドラインに従って実施される。２１匹の雄性スプラーグドーリーラット（４乃至８週齢、チャールズ・リバー・ラボラトリーズ、サンコンスタンより購入）を、以下の条件下で1週間順化させた：温度：１９℃乃至２５℃；湿度：３０％乃至７０％；明サイクル：１２時間明及び１２時間暗。全てのラットは、指定された手順の間を除いて、研究を通して自由に給餌される。飼料は、栄養成分及び環境汚染物質について供給者により分析される。分析の結果は供給者によって提供され、試験施設に保管されている。本研究の目的を阻害するような既知の汚染物質は飼料中に存在しない。
Figure 2022540064000027
以下に詳述するように、指定時間に全動物から血液が収集される（頸静脈）。実験終了時（１２０分）に、血液試料は腹部大動脈又は大静脈を通して収集される。
Figure 2022540064000028
収集後、Ｋ２ＥＤＴＡチューブ中の血液試料を湿った氷上に置き、内部設定通りに遠心分離する。血漿（１５０μＬ）をドライアイス上に置き、ＰＫバイオアナリシスのために－８０℃に維持するように設定された冷凍庫に移す。
試料抽出
ＩＳを含有する６０μＬのアセトニトリルを添加することによって、１０μＬの試料を抽出した。短時間ボルテックスし、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、５０μＬの上清を清浄なプレートに移し、５０μＬのＭｉｌｌｉ－Ｑ水で希釈した。標準品は、エステル安定性に配慮し、予めクエンチしたマトリックス中で調製した。
分析当日、血漿試料は１ｍＬのアセトニトリルと混合し、遠心分離してＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析した（２つの分析物）。血液マトリックス濃度中の試験項目分析物（２）の非コンパートメント分析は、標準操作手順に従い、各投与量レベル、性別、及び機会（１）について検証されたコンピュータソフトウェアＰｈｏｅｎｉｘを使用して実施される。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析では、以下の表７のパラメータを示す。
Figure 2022540064000029
結果
ここで図２７を参照すると、結果は、経口投与後に市販アルテスネートと水溶性アルテスネートとの間に有意な差があることを示す。１０分後（Ｔｍａｘ）に到達する最大平均濃度（Ｃｍａｘ）は、未処理アルテスネート及び水溶性アルテスネートでそれぞれ２９０
ｎｇ／ｍＬ及び１１７８ｎｇ／ｍＬである。さらに、水溶性アルテスネートの曲線下面積（ＡＵＣ）は、市販アルテスネートのＡＵＣよりも大きく、水溶性アルテスネートの生物学的利用能は、市販アルテスネートよりも大きい（約４．０倍）ことが示唆された。
実施例８
抗ヘリコバクター・ピロリ活性を評価するためのイン・ビボ試験
動物
ＳＰＦ（《特定病原体がない》）状態のＣ５７ＢＬ／６マウスを、ボルドー大学のＡ２ペットショップで、１週間、順化室にて飼育した後、次いで実験ゾーンに移し、そこでプロジェクトを実施した。
ヘリコバクター・ピロリの強制投与
ヘリコバクター・ピロリＰｒｅｍＳＳ１株（チューリッヒ大学、アンネミュラー博士より提供）を使用した。ｃａｇＰＡＩアイランドの機能性を、胃上皮ラインＡＧＳとの共培養モデルにおいてイン・ビトロで検証した：いわゆる《ハミングバード》表現型の誘導。
ヘリコバクター・ピロリＰｒｅｍＳＳ１株を６週齢のマウスに強制投与した。強制投与は３日連続で行い、細菌のリッチな懸濁液（マウス５匹に対して２乃至３皿のリッチな培養液）を使用した。ＰｒｅｍＳＳ１は、実験室で調製した《Pylo house made》と呼ばれる寒天（１０％ヒト血液で濃縮したウィルキンス－チャルグレン培地に、バンコマイシン１０μｇ／ｍｌ、トリメトプリム５μｇ／ｍｌ、アムホテリシンＢ１μｇ／ｍｌ、セフスロジン２μｇ／ｍｌを加えて選択性とした）上に注がれた。ＰｒｅｍＳＳ１は３７℃の微好気性雰囲気で２４時間培養した後に回収された。ヘリコバクター・ピロリは、採取前にその表現型及び生化学的特性（形態学、ウレアーゼ試験、オキシダーゼ試験）により同定された。
実際に、マウスは、強制投与日の前日に絶食させた。朝に１００μｌの細菌懸濁液を強制投与し、その後はケージ内で通常の条件で飼育した。夕方に、夜間絶食中に排泄物を食べることを防止するために、清潔なトイレ砂を入れたケージに移した。このプロトコルを３日間の強制投与の間繰り返した。細菌生存率試験は、細菌ペレットを《Ｐｙｌｏ ｈｏｕｓｅ ｍａｄｅ》寒天上に２４時間置くことにより、強制投与後に実施した。
治療前の天然化合物の調製
異なる試験化合物を、ヘリコバクター・ピロリ感染後のマウス（６週齢）に連続７乃至１４日間投与する。
各グループについて平均重量を設定する。各溶液について、必要とされる２倍容量を調製した。全ての溶液を、７乃至１４日間の治療の間、毎日即座に調製した。
必要量の化合物はすべて滅菌状態で精密天秤を使用して個別に秤量し、滅菌蒸留水に溶解させた。その後、チューブをアルミホイルで包み、光に当たらないようにした。
パントプラゾール及びアモキシシリンの調製
処置するマウスの数に必要な量のパントプラゾール（アローラボジェネリック）を、滅菌蒸留水中で１５０ｍｇ／ｋｇの投与量及び１００μＬ／マウスの容量で調製した。パントプラゾールを完全に溶解した後、アモキシシリン（パンファーマ研究所製アモックス）３０ｍｇ／ｋｇを添加した。
化合物ＮＡＣＩＮＮとアルテミシニン／ＳＧの調製
処置するマウスの数に応じて必要量のアルテミシニン／ＳＧ又はＮＡＣＩＮＮを秤量し、次いで水又はパントプラゾール溶液のいずれかに溶解し、次いで最低１５分間撹拌しながら３７℃にし、遮光した。溶液が十分に均質化されたら、アリコートを滅菌した２ｍＬエッペンドルフチューブに回収した。
実験の実施
最初の実験では、ヘリコバクター・ピロリを７日間、３週間強制経口投与した後、各グループの半数のマウスを犠牲にし、シンナムアルデヒド（Ｎａｃｉｎｎ）、アルテスネート／ＳＧ（Ａｒｔｅ／ＳＧ）複合体又は水溶性アルテスネート（ＷＳＡ）を単独又はアモキシシリンと組み合わせて、それら化合物の抗菌作用を迅速に判定することを計画した。プロトンポンプ阻害薬（ＰＰＩ）及びアモキシシリン（Ａｍｏｘ）単独もまた、この研究に含まれる。
犠牲
マウスは頸椎脱臼により犠牲にし、治療最終日の翌日に開腹術により開腹した。胃を分離し、食道と十二指腸の近くで切断して摘出した。胃は大弯近くを小さな湾曲末端はさみにより開き、内部にある食物を取り除くために、生理的食塩水を少し入れたペトリ皿に入れた。
次に、胃を十二指腸から食道まで大弯の軸に沿って２つに切断し、次に小弯の軸に沿って２つに切断した。噴門部を除去した右半胃を２つに切断し、前半部分を生理食塩水（細菌培養及び分子研究用）でチューブに導入し、後半部分を乾燥チューブに入れて－８０℃で保存した（補完実験）。左半胃は固定のため、ホルマリン入りチューブに入れた（炎症分析の組織学）。
ヘリコバクター・ピロリの定量的培養
マウスの胃の各４分の１は、２００μＬの生理的水を含むチューブ（ＲＮＡＳＥフリー、ＤＮＡＳＥフリー）に集められる。胃片を含むチューブを秤量し、胃の断片の重量を決定した。次に、胃の断片を、滅菌乳棒を使用して粉砕した。あらかじめボックスの中央部に堆積した１００μＬの生理的水を使って、実験室で調製したＧＳＳＡ寒天（１０％ヒト血液で濃縮し、バンコマイシン、トリメトプリム、アムホテリシンＢ、ナリジクス酸、バシトラシン、ポリミキシンＢ及びセフスロジンを添加して選択性としたウィルキンス－チャルグレン培地）をボックス全体に１０μＬの量を広げボックス全体に塗布した。次に、１００μＬの希釈液を使用して、以下のＧＳＳＡ培地のディッシュに接種した：１０－１の希釈液で２つのディッシュ、１０－２の希釈液で２つのディッシュ、及び１０－３の希釈液で２つのボックスに接種した。
残りの９０μＬは、分子生物学パート（後述の《ｑＰＣＲによるヘリコバクター・ピロリの相対定量》のセクション参照）用に抽出されたものである。
非感染マウス１０匹については、純粋な破砕胃１０μＬのみを広げた。
これらディッシュを３５℃の微好気性雰囲気で培養し、その表現型と生化学的特性（形態学、ウレアーゼ試験、オキシダーゼ試験）によりヘリコバクター・ピロリを同定した。少なくとも５日間培養した後、ディッシュを読み取った。コロニーカウントは、２人の独立した実験者によって行われた。結果は、胃のＣＦＵ／ｍｇで表される。図２８を参照。
定量的ＰＣＲによるヘリコバクター・ピロリの相対定量
自動抽出：粉砕した胃の一部を播種した後、残りの胃（９０μｌ）を用いて、ＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ ９６ ＤＮＡキットとＶｉｒａｌ ＮＡ Ｓｍａｌｌ Ｖｏｌｕｍｅ Ｋ
ｉｔを用いて、ＭａｇＮａ Ｐｕｒｅ ９６抽出器（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（登録商標））で、メーカーの推奨する方法で全ＤＮＡを抽出した。各粉砕材について、抽出したＤＮＡを１００μｌの溶出バッファー中で回収した。
定量的ＰＣＲ：Ｓｙｂｒ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）を用いて形成されたネオＰＣＲ産物が発する蛍光を検出することにより、抽出物中のヘリコバクター・ピロリＤＮＡ及びマウスハウスキーピング遺伝子の存在をリアルタイムの定量的ＰＣＲによって定量する。これは、ＰＣＲ産物が検出可能となるサイクルの数を決定し、閾値サイクルと呼ばれる。
ヘリコバクター・ピロリの特異的増幅は、ヘリコバクター・ピロリに２つのコピーで存在する２３ＳｒＲＮＡをコードする遺伝子を標的とする一対のプライマーを使用して実行される。ヘリコバクター・ピロリの２３ＳｒＲＮＡ遺伝子の２６７ｂｐフラグメントは、プライマーＨＰＹ－Ｓ及びＨＰＹ－Ａを使用して増幅される。プライマーは、３’末端の特異性について分析され、ヘリコバクター・ピロリに特異的であることを確認する。
これらのプライマーの配列は、ＨＰＹ－Ｓ（ＡＧＧＴＴＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＧＴＣＡＧＴＣ） （ＤＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）及びＨＰＹ－Ａ （ＣＧＣＡＴＧＡＴＡＴＴＣＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）である。これらの配列は、ヘリコバクター・ピロリの２３ＳｒＲＮＡ遺伝子（ジェンバンク アクセッション番号Ｕ２７２７０）のそれぞれ１９３１から１９５２、２１９７から２１７５の塩基に相当する。
ヘリコバクター・ピロリの定量は、マウスの参照遺伝子であるＧａｐｄｈとベータアクチンを介して正規化される。使用されるプライマーは、ｍＧａｐｄｈ１ｆｏｒ（ＣＴＧＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＡＣＡＣＣＴＡＴＧ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、ｍＧａｐｄｈ１ｒｅｖ（ＧＡＡＴＴＴＧＣＣＧＴＧＡＧＴＧＧＡＧＴＣ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、ｍＡｃｔｂ２ｆｏｒ（ＧＡＣＡＧＧＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴＧ）（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：３）及びｍＡｃｔｂ２ｒｅｖ（ＡＣＡＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）である。いずれもエクスプレステクノロジーズの協力でデザインされたものである。
５μＬのＤＮＡを２０μＬの反応混合物（プライマー０．４μＭ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（登録商標）社製《ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）４８０ＳｙｂｒＧｒｅｅｎＩ Ｍａｓｔｅｒ》キット付属Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ２Ｘ）に加え、２３Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子増幅には２０ｎｇ／μＬ、参照遺伝子増幅には２ｎｇ／μＬで実施する。
Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（登録商標）社製ＬＣ４８０（登録商標）での増幅は、以下のプログラムに従って行われた：
Figure 2022540064000030
試料中のマウス細胞（ＭＳＣＲマウス系統）及び細菌の数を定量するために、ＤＮＡ１マイクロリットルあたりのマウス細胞数及びＤＮＡ１マイクロリットルあたりの細菌数を示している２本の標準曲線を作成する。次いで、各マウスについて、ＤＮＡ１マイクロリットル当たりの細菌数の比（細菌数／ＤＮＡ１μＬ）を、ＤＮＡ１マイクロリットル当たりのマウス細胞数（マウス細胞／ＤＮＡ１μＬ）の関数として得ることによって、定量結果を算出する。各マウスのＤＮＡは二重に分析される。
試料中のマウス細胞（マウス系統ＭＳＣＲ）及び細菌の数を定量するために、ＤＮＡ１μｌあたりのマウス細胞数及びＤＮＡ１μｌあたりの細菌数を示す２つの標準曲線を実施した。次いで、各マウスについて、ＤＮＡ１μｌ当たりの細菌数の比をＤＮＡ１μｌ当たりのマウス細胞数の関数として得ることによって、定量結果を算出する。各マウスのＤＮＡは二重に分析される。
実験１
プロトンポンプ阻害薬の非存在下でのマウスにおけるさまざまな成分の抗菌活性の研究
グループ０：感染していないマウス（ＮＩ）、ｎ＝１０
グループ１：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス、ｎ＝１０
グループ２：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋ＡＲＴＥ／ＳＧ（４０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ３：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋Ｎａｃｉｎｎ（４０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０グループ４：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋アモキシシリン（Ａｍｏｘ、３０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
実験１の結果
ここで図２８を参照すると、プロトンポンプ阻害薬の非存在下で７日間治療した後、アモキシシリンを含む全ての試験化合物について、定量培養又は定量的ＰＣＲによって抗菌効果は検出されない。
実験２
マウスを用い、プロトンポンプ阻害薬存在下での各成分の抗菌活性を研究する。
本研究では、治療期間を１４日間とし、パントプラゾール（ＰＰＩ）を１５０ｍｇ／ｋｇの投与量で併用製剤に追加した。したがって、各グループは以下の通りである：
グループ０：感染していないマウス
グループ１：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋パントプラゾール（１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ２：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋ＡＲＴＥ／ＳＧ（４０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ３：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋Ｎａｃｉｎｎ（４０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ４：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋アモキシシリン（Ａｍｏｘ、３０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
実験２の結果
ここで図２９を参照する。プロトンポンプ阻害薬の存在下で１４日間治療した後、定量培養又は定量的ＰＣＲによってアモキシシリン（３０ｍｇ／ｋｇ）に対して検出されるある種の抗菌作用がある。しかし、アルテスネート／ＳＧ複合体とＮａｃｉｎｎ（シンナムアルデヒド）には僅かな抗菌効果が観察されたが、それらは４０ｍｇ／ｋｇの投与量では有意ではなかった（未処理感染マウスと異なる実験条件の間のＰ値＜０．０５マン・ホイットニー検定）。箱ひげ図の矩形は、中央値周辺の値の５０％を表し、端部のセグメントは、全てのデータの最小値及び最大値を示す。
実験３
プロトンポンプ阻害薬の存在下での高投与量での異なる成分の抗菌活性を研究する。
この研究では、ＡＲＴＥ／ＳＧ及びＮＡＣＩＮＮの投与量を増加させた。アルテスネート／デンプングリコレート（Ａｒｔｅ／ＳＧ）については、濃度を４０から２００ｍｇ／ｋｇ（５倍）に増加させ、Ｎａｃｉｎｎについては４０から１２０ｍｇ／ｋｇ（３倍）に増加させた。
グループ１：感染していないマウス（ＮＩ）＋ｎ＝１０
グループ２：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋アモキシシリン（Ａｍｏｘ、３０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ３：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋Ｎａｃｉｎｎ（１２０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ４：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋Ｎａｃｉｎｎ（１２０ｍｇ／ｋｇ）＋アモキシシリン（Ａｍｏｘ、３０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ５：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋Ａｒｔｅ／ＳＧ（２００ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
グループ６：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋Ａｒｔｅ／ＳＧ（２００ｍｇ／ｋｇ）＋アモキシシリン（Ａｍｏｘ、３０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
実験３の結果
ここで図３０を参照する。プロトンポンプ阻害薬の存在下で１４日間治療した後、結果は、単独で投与された全ての化合物に対して抗菌活性が観察されないことを示す。類似の結果が、アルテスネート／ＳＧとアモキシシリンとの組合せ製剤について観察される。しかしながら、パントプラゾール（１５０ｍｇ／ｋｇ）の存在下でのＮａｃｉｎｎ（シンナムアルデヒド １２０ｍｇ／ｋｇ）とアモキシシリン（３０ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ
は、有意な抗菌活性を示す。これらの結果は、定量的ＰＣＲ試験によって確認される。
マウスに強制投与できる液体の最大量は非常に限られており、（約１００μＬ）、アルテスネート／ＳＧ複合体（２００ｍｇ／ｋｇ）が懸濁液に完全に溶解しない可能性があり、それが失敗の原因となっていると言及するのは重要である。この障壁を克服するために、水溶性アルテスネートが開発された。
実験４
プロトンポンプ阻害薬の存在下で水溶性アルテスネートの抗菌活性を研究する。
先に述べたように、水溶性アルテスネート（ＷＳＡ）は、未処理アルテスネートや、デンプングリコレートに捕捉されたアルテスネート（アルテスネート／ＳＧ複合体）を含む他の治療よりも優れた抗菌活性を有している。これは主に溶液中でのＷＳＡの高い溶解性と安定性によるものと考えられている。
この理由のために、本実験は、イン・ビトロでの研究を強調し、そして確認することである。全ての条件は、アルテスネート／ＳＧが水溶性アルテスネートで置き換えられていることを除いて、先の実験と同様である。ＷＳＡの投与量は４０ｍｇ／ｋｇであり、これはアルテスネート／ＳＧ複合体の投与量（２００ｍｇ／ｋｇ）の５分の１である。
グループ１：感染していないマウス（ＮＩ）
グループ２：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋水溶性アルテスネート（ＷＳＡ、４０ｍｇ／ｋｇ）
グループ３：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋水溶性アルテスネート（ＷＳＡ、４０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）
グループ４：ｐｒｅ－ｍＳＳ１感染マウス＋水溶性アルテスネート（ＷＳＡ、４０ｍｇ／ｋｇ）＋アモキシシリン（Ａｍｏｘ、３０ｍｇ／ｋｇ）＋パントプラゾール（ＰＰＩ、１５０ｍｇ／ｋｇ）、ｎ＝１０
実験４の結果
次に図３１を参照すると、先に得られた結果と同様に、水溶性アルテスネート（ＷＳＡ、４０ｍｇ／ｋｇ）は、プロトンポンプ阻害薬の非存在下では、有意な抗菌活性が検出されないことがわかる。一方、プロトンポンプ阻害薬の存在下では、特にアモキシリンと併用した場合に顕著な差が認められる。これらの結果は、定量培養及び定量的ＰＣＲによって確認されている。
図２８から図３１のそれぞれにおいて、グラフ表現は箱ひげ図であり、矩形は中央値周辺の５０％の値を表し、両端のセグメントは全データの最小値と最大値を示している。未処理の感染マウスと異なる実験条件との間の＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１及び＊＊＊Ｐ＜０．００１（マン・ホイットニー検定）。
これらのデータは、ＮＡＣＩＮＮ（シンナムアルデヒド）と水溶性アルテスネート及び（イン・ビボで抗菌効果を得るためのＩＰＰと）組み合わせることの予想外の利点を実証している。さらに、アルテスネート又はシンナムアルデヒドとアモキシシリンの組み合わせは、予想外の良い結果を得ることを可能にする。
実験９
白血病を治療するためのシンナムアルデヒド／デンプングリコレート及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体のイン・ビトロ試験
この白血病研究において、ＡＲＴＥは、天然の（未処理、カプセル化されていない）アルテスネートを意味し、ＡＲＴＥ．ＳＧ（アルテスネート．デンプングリコレート）は、
アルテスネート／デンプングリコレート複合体を意味する。
方法論
細胞増殖測定
細胞増殖は、レサズリン（アラマーブルー）蛍光アッセイで追跡した。１日目において、細胞を９６ウェルプレートにおいて４×１０３細胞／ウェルの密度で１００μＬ培地中に播種し、３７℃で一晩培養した。０日目に、細胞を２μＭ又は種々の濃度のアルテスネート又はアルテスネート／デンプングリコレート複合体に最終容量２００μＬで曝露した。薬物添加後３日間培養を行った。３日目に、レサズリン（０．１ｍｇ／ｍＬ、シグマアルドリッチ）を２０μＬ／ウェルで添加し、プレートを３７℃で４時間培養し、次いで、ＣｌａｒｉｏＳｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーを用いて蛍光（λex＝５２９．５ｎｍ、λem＝５８２ｎｍ）を測定した。各実験において、全てのウェルは、それぞれアルテスネート及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体のための溶媒及びビヒクル対照として使用される同量のメタノール及びＨ２Ｏを含んでいた。使用したメタノールと水の量は、アルテスネート及びアルテスネート／デンプングリコレート複合体の両方の最大濃度条件によって必要とされる量に対応したものであった。
統計解析
ｓｔａｔｓパッケージを使用して、Ｒソフトウェア（ｖ３．３．２）で統計解析を実行した。
結果
１．アルテスネートに対して高い感受性をもつＡＭＬ細胞株の選択：
この試験の目的は、アルテスネートに対して高い感受性をもつＡＭＬ細胞株を選択することであった。それらの想定される選択された細胞は、カプセル化の前後にアルテミシニン感受性を試験するために使用され得る。この最初の目的は、アルテスネート（ＡＲＴＥ）に対する感受性を確認することに加えて、複合体形態（ＡＲＴＥ／デンプングリコレート）に対する感受性も試験することである。これは、カプセル化プロセスがイン・ビトロでＡＲＴＥの効率に影響するか否かについての情報を提供する。ＡＭＬ細胞株１０種とＣＭＬ細胞株１種の増殖に対する両薬剤の効果を試験した。薬物又は薬物/デンプングリコレート複合体の両方を２μＭで使用したが、これは少なくとも２種のＡＭＬ細胞株（ＭＶ４－１１及びＭＯＬＭ１３）において非常に有効であることが報告されている投与量である。水中のＡＲＴＥ／デンプングリコレートを、各実験について毎回新たに調製した。また、凍結後の安定性を評価するために、各実験において新鮮なＡＲＴＥ／デンプングリコレートと並行して凍結（－２０℃）したＡＲＴＥ／デンプングリコレート複合体の試験も行った。
ａ．カプセル化されたアルテスネート（アルテスネート／ＳＧ）は、以下の１１種の試験した白血病細胞株において、アルテスネート（ＡＲＴＥ）と同程度に効率的である:
アルテスネート／ＳＧ（ＡＲＴＥ．ＳＧ）（２μＭ）は、試験した全ての細胞株において、アルテスネート（ＡＲＴＥ）（２μＭ）と同程度に効率的であることを結果が示している（図３２）。
予想されたように、本発明者らは、ＭＶ４－１１及びＭＯＬＭ１３細胞がＡＲＴＥに対して高い感受性を持ち、ＡＲＴＥ．ＳＧに対しても一応感受性をもつことを見出した。加えて、ＴＨＰ１及びＮＢ４細胞株も同様に感受性をもっていた；３日目のそれらのシグナルは０日目のコントロールのシグナルよりも低く、死亡率効果を示している（図３３）。
ＮＢ４、ＭＯＬＭ１３、ＭＶ４－１１及びＴＨＰ１細胞を含むＡＲＴＥ及びＡＲＴＥ．ＳＧに対して高い感受性をもつ細胞;ＫＧ１、ＨＬ６０、ＭＬ２、Ｕ９３７及びＨＥＬ細
胞を含む中程度の感受性をもつ細胞;並びにＫＧ１ａ及びＫ５６２細胞を含む低い感受性をもつ細胞の３つの細胞グループに大別することができる。また、－２０℃で保存したＡＲＴＥ.ＳＧは、試験したすべての細胞株において、新たに調製したＡＲＴＥ.ＳＧと同等の効果があることが示された。
ｂ．カプセル化されたアルテスネート（ＡＲＴＥ．ＳＧ）は、４℃で安定である：
次に、ＡＲＴＥ．ＳＧの水溶液（蒸留水中５ｍＭ）に対する長期安定性を決定した。ＡＲＴＥ．ＳＧの安定性の低下は、感受性の低い細胞株で最も顕著に現れると考えられたため、したがって、本試験ではＫＧ１ａ細胞株が選択された。結果は、水に可溶化されたＡＲＴＥ.ＳＧが４℃で少なくとも１８日間安定であることを示す（図３４）。
ＡＲＴＥ．ＳＧ及びＡＲＴＥは、４種の代表的な白血病細胞株において同じＩＣ５０を有する
ＡＲＴＥとＡＲＴＥ．ＳＧとの間の同等の効率をさらに確認するために、上記の３つの感受性グループをカバーする４つの白血病細胞株に対する両方の薬物のＩＣ５０を計算した。これらの細胞株は、ＭＶ４－１１（高感受性）、ＫＧ１（中感受性）、ＫＧ１ａ（弱感受性）及びＫ５６２（弱感受性、ＣＭＬを表す唯一の細胞株）である。
水で調製されるＡＲＴＥ．ＳＧ（５ｍＭのストック）とは異なり、ＡＲＴＥのストック（２０ｍＭ）はメタノールで調製された。したがって、各薬物のＩＣ５０の計算に進む前に、４種の細胞株に対するメタノールの毒性効果を確認した。このために、ＩＣ５０実験で使用したＡＲＴＥの最高濃度（３２μＭ）に対応する投与量のメタノール（０．１６％）を使用した。このような投与量のメタノールは、本発明者らの実験条件下では、本発明者らの細胞の増殖に影響を与えないことが明らかであろう（図３５）。
予備試験では、試験した全ての細胞株においてＡＲＴＥ及びＡＲＴＥ．ＳＧについて同等のＩＣ５０を示唆している（図３６）。実際、ＫＧ１ａ及びＫ５６２は、それぞれ約２μＭ及び８μＭの最も低いＩＣ５０を有していた。予想通り、ＭＶ４－１１細胞はＩＣ５０が０．２５乃至０．５μＭと最も感受性が高く、一方、ＫＧ１細胞株はＩＣ５０が１μＭ前後と中程度の感受性を示した。
これらの結果を総合すると、ＡＲＴＥ．ＳＧはＡＭＬ細胞に対してＡＲＴＥと同等の効率を示し、カプセル化プロセスによる効率の低下はないことを示唆し、そしてＡＲＴＥ．ＳＧ（水に可溶化された）は－２０℃で安定であり、そして４℃で少なくとも１８日間安定である。
実験１０
ＡＭＬ細胞株の増殖に対するシンナムアルデヒドとデンプングリコレートの複合体の効果方法論：
シンナムアルデヒド／ＳＧ共役複合体（ＮＡＣＩＮＮ）の調製
各実験について、ＮＡＣＩＮＮのストック溶液を、５００μｇ/ｍｌの活性成分（１ｍｌあたり約９ｍｇの粉末）を含む水中で新たに調製した。
細胞増殖測定
細胞増殖は、レサズリン（アラマーブルー）蛍光アッセイで追跡した。１日目において、細胞を９６ウェルプレートにおいて４×１０３細胞／ウェルの密度で播種し、３７℃で一晩培養した。０日目に、細胞を最終容量２００μＬの所望の濃度のＮＡＣＩＮＮに曝露した。薬物添加後３日間培養を行った。３日目に、レサズリン（０．１ｍｇ／ｍＬ、シグ
マアルドリッチ）を２０μＬ／ウェルで添加し、プレートを３７℃で４時間培養し、次いで、ＣｌａｒｉｏＳｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーを用いて蛍光（λex＝５２９．５乃至１９ｎｍ、λem＝５８２乃至３６ｎｍ）を測定した。実験ごとに各条件について６つのウェル複製物を使用した。
統計解析
ｓｔａｔｓパッケージを使用して、Ｒソフトウェア（ｖ３．３．２）で統計解析を実行した。
結果
４種のＡＭＬ細胞株：ＫＧ１ａ、ＫＧ１、ＭＶ４－１１及びＫ５６２の増殖に対するＮＡＣＩＮＮの効果を試験した。そのため、１０μｇ／ｍｌで開始する１０倍連続希釈を使用する。試験した細胞株におけるＩＣ５０は１乃至１０μｇ／ｍｌの範囲であり、これは７．５乃至７５μＭに相当する（図３７）。
その結果、シンナムアルデヒドはＡＭＬに対しても抗癌効果を示したが、その程度はアルテスネートよりも低かった。ヘリコバクター・ピロリ及び同時に胃癌に対する完全な製剤を得るためには、２つの複合体を組み合わせればよい。
実験１１
水溶性アルテスネートの経口徐放性錠剤製剤
Figure 2022540064000031
 本製剤では、オイドラギットを浮遊剤として、ポビドンを結合剤として、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを制御放出剤として、及びクロスポビドンを崩壊剤として使用した。
イン・ビトロ溶解試験
ＷＳＡモノリシック錠剤のイン・ビトロ放出研究を、１００ｒｐｍ及び３７℃で溶解ディステック５１００装置（ノース・ブランズウィック、ニュージャージー州、米国）を用
いて、ＵＳＰパドル（Ａｐｐａｒａｔｕｓ２）法を用いて実施した。ここで図３８を参照すると、１Ｌの模擬胃液（ＳＧＦ、ｐＨ１．５）中のモノリシック錠剤（ｎ＝３）からのアルテスネート放出を、所定のサンプリング間隔（０、０．５、１．０、２．０、４．０、８．０、１２及び１６時間）で分光光度測定し、１ｍＬの容量を溶解媒体から取り出して、分光光度測定によりアルテスネートの濃度を推定した。ＨＰＬＣに比べ感度や精度が劣るものの、簡便かつ迅速に行えることから、この方法を選択した。オイドラギットの最大吸収が２６５ｎｍ程度であることから、アルテスネートの読み取りは２２２ｎｍを選択した。アルテスネートの放出量を推定し、全負荷量からの相対百分率として表す。
錠剤はＳＧＦと接触すると５乃至１０分後に直ちに浮遊した。アルテスネートの動的放出プロファイルは、３７℃で３０分後に、アルテスネートの約３２％（アルテスネートの６４ｍｇにほぼ相当する）の早い放出があることを示している。残りのアルテスネートは、１０乃至１２時間後に達成される持続的な放出が続く。
実験１２
シンナムアルデヒド／デンプングリコレート複合体の経口徐放性錠剤製剤
Figure 2022540064000032
 シンナムアルデヒドのイン・ビトロ溶解試験
シンナムアルデヒドモノリシック錠剤のイン・ビトロ放出研究を上記と同様の方法を用いて行った。模擬胃液（ＳＧＦ、ｐＨ１．５）１Ｌ中のモノリシック錠剤（ｎ＝３）からのシンナムアルデヒド放出を、試験試料１ｍＬ中のイソニアジド（２ｍＭ）溶液１ｍＬを（過剰に）添加した後、分光光度法によって推定する。ＳＧＦにおいて、イソニアジドはトランス－シンナムアルデヒド（等モル１：１）と反応し、３４０ｎｍに最大吸収をもつ誘導体を形成する。実際、錠剤はＳＧＦと接触して約０．５乃至１時間後に浮上した。ここで図を参照すると、シンナムアルデヒドの動的放出プロファイルは、３０分後に約４０％（４８ｍｇに相当する）の早い放出があり、続いて３７℃のＳＧＦで１２時間以上の長時間の間持続的にシンナムアルデヒドの放出があることを示している。
配列
Figure 2022540064000033
好ましい実施形態が上記で説明され、添付の図面に示されたが、本開示から逸脱することなく変更が行われ得ることが当業者には明らかであろう。そのような変更は、本開示の範囲に含まれる可能な変形形態と見なされる。

Claims (82)

  1. カルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒドの共役体を含む徐放性胃内滞留剤形であって、前記共役体が、前記シンナムアルデヒドのアルデヒド基と前記カルボキシル化多糖のヒドロキシル基との間で形成されるアセタール、ヘミアセタール又は環状ヘミアセタールを介して形成される、徐放性胃内滞留剤形。
  2. 前記カルボキシル化多糖が、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、カルボキシメチル高アミロースデンプン、カルボキシエチルデンプン、カルボキシエチル高アミロースデンプン、スクシニルデンプン、スクシニル高アミロースデンプン、カルボキシメチルグアーガム、カルボキシメチルヒドロキシプロピルグアーガム、ジェランガム、キサンタンガム、アルギン酸塩、ペクチン酸塩、ヒアルロン酸塩、又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  3. 前記カルボキシル化多糖が、カルボキシメチルセルロース、デンプングリコレート、又はそれらの組み合わせである、請求１又は請求項２に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  4. 前記カルボキシル化多糖が下記一般式（Ｉ）、又はその薬学的に許容される塩、及びその立体異性体を有する、請求項１に記載の徐放性胃内滞留剤形。
    Figure 2022540064000034
     （式（Ｉ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
    Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
    Figure 2022540064000035
     を表し；
    Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
    Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
    Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
    結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
    Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；
    ｍは０乃至４を表し；
    ｐは０乃至８を表し；そして
    Figure 2022540064000036
     は、前記Ｒ１’に結合する共有結合を示し、
    Figure 2022540064000037
     は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
  5. 前記一般式（Ｉ）の前記カルボキシル化多糖が下記一般式（Ｉａ）である、請求項２に記載の徐放性胃内滞留剤形。
    Figure 2022540064000038
     （式（Ｉａ）中、ｎは１５乃至１．６７×１０５を表し；
    Ｒ１とＲ１’はそれぞれ独立して
    Figure 2022540064000039
     を表し；
    Ｒ２は、ＯＨ、Ｒ１、Ｏ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ４、Ｏ－（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）pＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＣＯ２Ｒ３）（ＣＨ２）ｐＣＨ３、Ｏ－ＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｒ３、Ｏ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ－ＣＯＲ３、又はＯ－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ２）ｐ－ＣＯＲ３を表し；
    Ｒ３は、存在しないか、又は水素原子を表し；
    ｍは０乃至４を表し；
    ｐは０乃至８を表し；
    Ｒ４は、結合Ｚが存在する場合は酸素原子を表し、結合Ｚが存在しない場合はＲ５を表し；
    結合Ｚ’は、結合Ｚが存在しない場合、存在し;
    Ｒ５は、ＯＨ又はＲ１を表し；そして
    Figure 2022540064000040
     は、前記Ｒ１’に結合する共有結合を示し、
    Figure 2022540064000041
     は、前記Ｒ１に結合する共有結合を示す。）
  6. Ｒ２がＯ－ＣＨ２ＣＯＯ－を表す、請求項１乃至請求項５の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  7. 前記カルボキシル化多糖が、約０．０１乃至約１．０のカルボキシル含有基の置換度を有する、請求項１乃至請求項６の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  8. 前記置換度が約０．２乃至約０．４である、請求項７に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  9. 前記置換度が０．４である、請求項７に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  10. 前記シンナムアルデヒドが、前記カルボキシル化ポリマー上に約０．０１乃至約０．２０の置換度を有する、請求項１乃至請求項７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  11. 約７．５乃至７．９のｐＨ値を有し、かつ乳化剤で安定化されたアルテスネート又はその薬学的に許容される塩及びその立体異性体を含むアルテスネートエマルジョンを含む、徐放性胃内滞留剤形。
  12. 前記アルテスネートエマルジョンにおける前記アルテスネートの薬学的に許容される塩と前記乳化剤との重量比が、約９：１乃至約１：１である、請求項１１に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  13. 前記重量比が３：２である、請求項１２に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  14. 前記乳化剤が界面活性剤である、請求項１１乃至請求項１３の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  15. 前記界面活性剤が、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性の界面活性剤、又はそれらの組み合わせである、請求項１４に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  16. 前記界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ソルビタン、ソルビタンエステル、ラウレス硫酸ナトリウム、サルコシル、コカミドプロピルベタイン（ＣＡＰＢ）、ラウリルエーテルスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ノニルフェノ
    ールエトキシレート、ヘキサデシルベタイン、ラウリルベタイン、エーテルエトキシレート、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレート、及び３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）からなる群より選択される、請求項１４に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  17. 前記界面活性剤がラウリル硫酸ナトリウムである、請求項１４に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  18. 前記乳化剤がコール酸塩である、請求項１１乃至請求項１３の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  19. 前記コール酸塩が、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸及びリトコール酸からなる群から選択される、請求項１８に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  20. 前記ｐＨ値が弱塩基で得られるものである、請求項１１乃至請求項１９の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  21. 前記弱塩基が炭酸塩である、請求項２０に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  22. 前記炭酸塩が、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、及び炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）からなる群から選択される、請求項２１に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  23. プロトンポンプ阻害薬をさらに含む、請求項１乃至請求項２０の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  24. 前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせである、請求項２３に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  25. 抗生物質をさらに含む、請求項１乃至請求項１０の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  26. 前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせである、請求項２４に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  27. カルボキシル化多糖及びシンナムアルデヒドの共役体を含み、請求項１１乃至請求項２０の何れか一項に記載のアルテスネートエマルジョンを含む徐放性胃内滞留剤形をさらに含む、請求項１乃至請求項１０及び請求項２１乃至請求項２４の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  28. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療に使用するための、請求項１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  29. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療に使用するための、請求項１１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  30. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療に使用するための、請求項１乃至請求項２３の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  31. プロトンポンプ阻害薬を使用することをさらに含む、請求項３０に記載の使用のための徐放性胃内滞留剤形。
  32. 前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせである、請求項３１に記載の使用のための徐放性胃内滞留剤形。
  33. 抗生物質をさらに含む、請求項２８乃至請求項３０の何れか一項に記載の使用のための徐放性胃内滞留剤形。
  34. 前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせである、請求項３３に記載の使用のための徐放性胃内滞留剤形。
  35. 前記塩がその薬学的に許容される塩である、請求項４乃至請求項１０の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形。
  36. 治療有効量の請求項１乃至請求項２９の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法。
  37. 治療有効量の請求項１１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法。
  38. 治療有効量の請求項１乃至請求項２１の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療方法。
  39. 治療有効量のプロトンポンプ阻害薬を、それを必要とする前記対象に投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせである、請求項３９に記載の方法。
  41. 治療有効量の抗生物質を、それを必要とする前記対象に投与することをさらに含む、請求項３８乃至請求項４０の何れか一項に記載の方法。
  42. 前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブ
    ラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせである、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に、又は同時に投与される、請求項３９乃至請求項４０の何れか一項に記載の方法。
  44. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に投与される、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約１０分前から約６０分前に投与される、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約２０分前から約３０分前に投与される、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約３０分前に投与される、請求項４５に記載の方法。
  48. 前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形の前、後、又は同時に投与される、請求項４１乃至請求項４２の何れか一項に記載の方法。
  49. 前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形と同時に投与される、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記プロトンポンプ阻害薬が前記徐放性胃内滞留剤形の前に投与され、前記抗生物質が前記徐放性胃内滞留剤形と同時又は後に投与される、請求項３９乃至請求項４８の何れか一項に記載の方法。
  51. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための、それを必要とする対象における請求項１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形の使用。
  52. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための、それを必要とする対象における請求項１１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形の使用。
  53. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための医薬品の調製のための、それを必要とする対象における請求項１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形の使用。
  54. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための医薬品の調製のための、それを必要とする対象における請求項１１乃至請求項２７の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形の使用。
  55. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための、それを必要とする対象における請求項１乃至請求項２１の何れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形の使用。
  56. ヘリコバクター・ピロリ感染、胃潰瘍、胃癌又はそれらの組み合わせの予防又は治療のための医薬品の調製のための、それを必要とする対象における請求項１乃至請求項２１の何
    れか一項に記載の徐放性胃内滞留剤形の使用。
  57. プロトンポンプ阻害薬を使用することをさらに含む、請求項５５乃至請求項５６のいずれか一項に記載の使用。
  58. 前記プロトンポンプ阻害薬が、オメプラゾール、ランソプラゾール、デクスランソプラゾール、ラベプラゾール、パントプラゾール、エソメプラゾール、オメプラゾール、又はそれらの組み合わせである、請求項５７に記載の使用。
  59. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に、又は同時に使用するためのものである、請求項５７乃至請求項５８の何れか一項に記載の使用。
  60. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に使用するためのものである、請求項５９に記載の使用。
  61. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約１０分前から約６０分前に使用するためのものである、請求項６０に記載の使用。
  62. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約２０分前から約３０分前に使用するためのものである、請求項６１に記載の使用。
  63. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の約３０分前に使用するためのものである、請求項６１に記載の使用。
  64. 抗生物質をさらに含む請求項５５乃至請求項６３の何れか一項に記載の使用。
  65. 前記抗生物質が、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、リファブチン、スルファメトキサゾール及びトリメトプリム、アモキシシリン及びクラブラン酸塩、レボフロキサシン、並びにそれらの組み合わせである、請求項６４に記載の使用。
  66. 前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形の前、後、又は同時に使用するためのものである、請求項６４又は請求項６５に記載の使用。
  67. 前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形と同時に使用するためのものである、請求項６６に記載の使用。
  68. 前記プロトンポンプ阻害薬が、前記徐放性胃内滞留剤形の前に使用するためのものであり、前記抗生物質が、前記徐放性胃内滞留剤形と同時又は後に投与される、請求項５５乃至請求項６７の何れか一項に記載の使用。
  69. アルテスネートエマルジョンを含む徐放性胃内滞留製剤の調製方法であって、
    ａ）乳化剤を含む緩衝液に、アルテスネート、又はその薬学的に許容される塩、又はその立体異性体を導入して、乳化アルテスネート溶液を得る工程、
    ｂ）前記乳化アルテスネート溶液のｐＨ値を約７．５乃至約７．９に調整し、調整された乳化アルテスネート溶液を得る工程；並びに
    ｃ）前記調整された乳化アルテスネート溶液を乾燥させて、約７．５乃至約７．９のｐＨ値を有する乳化アルテスネートの乾燥粉末を得る工程
    を含む、調製方法。
  70. 前記乳化アルテスネートの乾燥粉末のｐＨ値が７．７５である、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記アルテスネートの薬学的に許容される塩と前記乳化剤との重量比が約９：１乃至約１：１である、請求項６９又は請求項７０に記載の方法。
  72. 前記重量比が３：２である、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記乳化剤が界面活性剤である、請求項６９乃至請求項７２の何れか一項に記載の方法。
  74. 前記界面活性剤が、非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性の界面活性剤、又はそれらの組み合わせである、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ソルビタン、ソルビタンエステル、ラウレス硫酸ナトリウム、サルコシル、コカミドプロピルベタイン（ＣＡＰＢ）、ラウリルエーテルスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ノニルフェノールエトキシレート、ヘキサデシルベタイン、ラウリルベタイン、エーテルエトキシレート、ミリスチル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、レシチン、オクチルフェノールエトキシレート（トリトンＸ－１００）、グリセリルモノステアレート、及び３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）からなる群より選択される、請求項７３に記載の方法。
  76. 前記界面活性剤がラウリル硫酸ナトリウムである、請求項７３に記載の方法。
  77. 前記乳化剤がコール酸塩である、請求項６９乃至請求項７２の何れか一項に記載の方法。
  78. 前記コール酸塩が、コール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸及びリトコール酸からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記ｐＨ値が弱塩基で得られるものである、請求項６９乃至請求項７８の何れか一項に記載の方法。
  80. 前記弱塩基が炭酸塩である、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記炭酸塩が、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、及び炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記乾燥が噴霧乾燥によるものである、請求項６９乃至請求項８１の何れか一項に記載の方法。
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