JP2022529002A - アデノ随伴ウイルスベクター製剤及び方法 - Google Patents

アデノ随伴ウイルスベクター製剤及び方法 Download PDF

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Abstract

本明細書中提供されるのは、組換えＡＡＶ粒子を含む製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤または凍結乾燥製剤である。同じく本明細書中提供されるのは、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法である。【選択図】図１Ａ

Description

１．関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６２／８３６，１１５号、出願日２０１９年４月１９日、の優先権を主張し、これはそのまま全体が本明細書中参照として援用される。
電子提出される配列表の参照
本出願は、テキストファイルとして本出願とともに提出される配列表を参照により組み込み、このテキストファイルは、ファイル名「１２６５６－１３１－２２８＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」、作成日２０２０年４月１６日、及びファイルサイズ７０，０９２バイトである。
２．導入部
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）産物の安定製剤及びその製剤化法が記載される。本製剤及び方法は、様々な疾患及び障害を治療するために治療用ｒＡＡＶ産物をヒト対象に送達するのに適している。
３．発明の背景
組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を利用したベクターは、開発中の遺伝子治療製品の中で現在最も広く用いられているものである。ｒＡＡＶベクターシステムが使用に好適であるのは、部分的には、野生型ウイルスに付随する疾患が付随しないこと、分裂細胞だけでなく非分裂細胞にも形質導入するＡＡＶの能力、及び臨床試験では長期の堅牢な導入遺伝子発現という結果が観察され、このことが、遺伝子治療適応症において送達の大きな可能性を示していることによる。また、天然及び組換えのｒＡＡＶベクターは、血清型が異なることで、異なる組織、臓器、及び細胞を特異的に標的とし、しかもベクターに対するいずれかの既存の免疫から逃れる助けとなることから、ＡＡＶを利用した遺伝子療法の治療用途は拡大している。
ＡＡＶ産物は、安全性及び有効性を実証するだけでなく、製造、輸送、貯蔵、及び投与中、安定を保ちかつ強力であり続けなければならない。どのような医薬品であれ、それを商品化する場合、輸送またはた貯蔵の必要条件が、周辺温度であるのか、冷蔵条件下であるのか、または凍結条件下であるのかにかかわらず、長期間の安定性を提供する製剤を同定することが有利であると思われる。ｒＡＡＶ産物の場合、製剤は、様々な条件により導入されるストレスに耐えることができ、それでもなお製品の品質を維持することができなくてはならない。すなわち、組換えＡＡＶ粒子を含む改善された製剤が必要とされている。
本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、凍結保護及び凍結乾燥保護賦形剤、及び非晶質塩とを含む、製剤を提供する。実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及び非晶質塩とを含む、安定製剤である。実施形態によっては、当該製剤は、凍結乾燥に適している。
実施形態によっては、緩衝剤は、Ｔｒｉｓ、スクロース、及び約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、製剤は、さらに、非イオン性界面活性剤、例えば、ポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、製剤は、さらに、可塑剤または安定剤、例えば、グリセロールを含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６のカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む。
本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びクエン酸ナトリウムを含む塩とを含む、製剤を提供する。実施形態によっては、緩衝剤は、Ｔｒｉｓ、スクロース、及び約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、製剤は、さらに、非イオン性界面活性剤、例えば、ポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、製剤は、さらに、可塑剤または安定剤、例えば、グリセロールを含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６のカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、医薬組成物は、本明細書中開示される液体組成物を凍結乾燥させた組成物である。実施形態によっては、医薬組成物は、再構築された凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、製剤は、液剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、本明細書中開示される液剤を凍結乾燥させた製剤である。実施形態によっては、製剤は、再構築された凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、製剤は、残存水分量が約１％～約７％である凍結乾燥製剤である。
本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤の製造法も提供する。
本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法も提供する。
本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用も提供する。
本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用も提供する。
本開示は、疾患または障害の治療を必要としている対象における疾患または障害の治療法も提供し、本方法は、本明細書中開示される組換えＡＡＶ粒子を含む製剤を投与することを含む。
実施形態によっては、本開示は、以下を提供する：
［１］組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）クエン酸ナトリウムを含む塩と
を含む、安定製剤。
［２］前記緩衝剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、［１］に記載の製剤。
［３］約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、［２］に記載の製剤。
［４］約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約４０ｍＭのＴｒｉｓを含む、［２］に記載の製剤。
［５］約５ｍＭのＴｒｉｓを含む、［２］に記載の製剤。
［６］ｐＨが約６．５～８．０である、［１］から［４］のいずれか１つに記載の製剤。
［７］ｐＨが約７．２～７．８である、［６］に記載の製剤。
［８］ｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である、［６］に記載の製剤。
［９］ｐＨが約７．５である、［６］に記載の製剤。
［１０］約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、［１］から［９］のいずれか１つに記載の製剤。
［１１］約５０ｍＭ～約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、または約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの糖を含む、［１０］に記載の製剤。
［１２］約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約４００ｍＭ、または約３００ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、［１０］に記載の製剤。
［１３］約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭ～約３５０ｍＭの糖を含む、［１０］に記載の製剤。
［１４］約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、または約３５０ｍＭの糖を含む、［１０］に記載の製剤。
［１５］約１９０ｍＭ～約２３０ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２５０ｍＭ、または約１５０ｍＭ～約２７０ｍＭの糖を含む、［１０］に記載の製剤。
［１６］約２１０ｍＭの糖を含む、［１０］に記載の製剤。
［１７］前記糖は、非還元糖である、［１］から［１６］のいずれか１つに記載の製剤。
［１８］前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、［１７］に記載の製剤。
［１９］前記非還元糖は、スクロースである、［１７］に記載の製剤。
［２０］前記糖は、還元糖である、［１］から［１６］のいずれか１つに記載の製剤。
［２１］前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、［２０］に記載の製剤。
［２２］前記還元糖は、ブドウ糖である、［２０］に記載の製剤。
［２３］約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む、［１］から［２２］のいずれか１つに記載の製剤。
［２４］約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、［２３］に記載の製剤。
［２５］約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、［２３］に記載の製剤。
［２６］約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、［２３］に記載の製剤。
［２７］約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、［２３］に記載の製剤。
［２８］約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、［２３］に記載の製剤。
［２９］さらに、約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む、［１］から［２８］のいずれか１つに記載の製剤。
［３０］約０．００２％の非イオン性界面活性剤を含む、［２９］に記載の製剤。
［３１］前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、またはＢＲＩＪ ３５を含む、［２８］または［２９］に記載の製剤。
［３２］前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８を含む、［３１］に記載の製剤。
［３３］組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約１ｍＭ～約２５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖、
ｃ）約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
［３４］組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約２ｍＭ～約１０ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの糖、
ｃ）約１０ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００１％～約０．００５％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
［３５］組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭの糖、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．５である、前記製剤。
［３６］前記糖は、非還元糖である、［３３］から［３５］のいずれか１つに記載の製剤。
［３７］前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、［３６］に記載の製剤。
［３８］前記非還元糖は、スクロースである、［１７］に記載の製剤。
［３９］約１．０Ｅ＋１１ゲノムコピー／ｍＬ（ＧＣ／ｍＬ）及び約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、［１］から［３８］のいずれか１つに記載の製剤。
［４０］約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬ、または約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、［３９］に記載の製剤。
［４１］前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６のカプシドタンパク質を含む、［１］から［４０］のいずれか１つに記載の製剤。
［４２］前記ｒＡＡＶ粒子は、前記ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む、［４１］に記載の製剤。
［４３］さらに、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、またはマンニトールからなる群より選択される可塑剤を含む、［１］から［４２］のいずれか１つに記載の製剤。
［４４］さらに、グリセロールを含む、［１］から［４２］のいずれか１つに記載の製剤。
［４５］約０．１％～約５％のグリセロールを含む、［４４］に記載の製剤。
［４６］約０．１％～約２％のグリセロールを含む、［４４］に記載の製剤。
［４７］約０．２５％～約２％のグリセロールを含む、［４４］に記載の製剤。
［４８］液剤である、［１］から［４７］のいずれか１つに記載の製剤。
［４９］凍結製剤である、［１］から［４７］のいずれか１つに記載の製剤。
［５０］凍結乾燥製剤または再構築された凍結乾燥製剤である、［１］から［４７］のいずれか１つに記載の製剤。
［５１］残存水分量が約１％～約７％である、［５０］に記載の製剤。
［５２］前記残存水分量は、約１％～約７％、約２％～約７％、約３％～約７％、約４％～約７％、約５％～約７％、約１％～約６％、約１％～約５％、約１％～約４％、または約１％～約３％である、［５１］に記載の製剤。
［５３］前記残存水分量は、約３％～約７％、約３％～約６％、または約３％～約５％である、［５１］に記載の製剤。
［５４］前記残存水分量は、約３％、約３．５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、または約６％である、［５１］に記載の製剤。
［５５］前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）中、－７０℃で貯蔵されている、［１］から［５４］のいずれか１つに記載の製剤。
［５６］前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、［１］から［５４］のいずれか１つに記載の製剤。
［５７］前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、［１］から［５４］のいずれか１つに記載の製剤。
［５８］前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、［１］から［５４］のいずれか１つに記載の製剤。
［５９］前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で４週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、［１］から［５４］のいずれか１つに記載の製剤。
［６０］組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤の製造法であって、ｒＡＡＶ粒子を、［１］から［４７］のいずれか１つに記載の製剤の緩衝剤、糖、塩、任意選択で可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤と混合し、それによりｒＡＡＶを含む前記製剤を製造することを含む、前記方法。
［６１］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
［６２］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
［６３］さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約５％にすることを含む、［６１］または［６２］に記載の製剤。
［６４］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
［６５］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
［６６］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
［６７］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
［６８］さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約７％にすることを含む、［６６］または［６７］に記載の使用。
［６９］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
［７０］ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
［７１］ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される、［６１］から［６５］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［７０］のいずれか１つに記載の使用。
［７２］凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、または９０％減少している、［６１］から［６５］及び［７１］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［７１］のいずれか１つに記載の使用。
［７３］凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、実質的に排除されている、［６１］から［６５］及び［７１］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［７１］のいずれか１つに記載の使用。
［７４］前記糖は、非還元糖である、［６１］から［６５］及び［７１］から［７３］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［７３］のいずれか１つに記載の使用。
［７５］前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、［７４］に記載の方法または［７４］に記載の使用。
［７６］前記非還元糖は、スクロースである、［７４］に記載の方法または［７４］に記載の使用。
［７７］前記糖は、還元糖である、［６１］から［６５］及び［７１］から［７３］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［７３］のいずれか１つに記載の使用。
［７８］前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、［７７］に記載の方法または［７７］に記載の使用。
［７９］前記還元糖は、ブドウ糖である、［７７］に記載の方法または［７７］に記載の使用。
［８０］前記可塑剤は、グリセロールを含む、［６１］から［６５］及び［７１］から［７９］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［７９］のいずれか１つに記載の使用。
［８１］前記製剤は、［１］から［４７］のいずれか１つに記載のものである、［６１］から［６５］及び［７１］から［８０］のいずれか１つに記載の方法または［６６］から［８０］のいずれか１つに記載の使用。
実施形態によっては、本明細書中開示される方法は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤を製造することを含み、当該ｒＡＡＶ粒子は、不純物を含む供給物（例えば、ｒＡＡＶ産生培養物）からｒＡＡＶ粒子を単離することにより製造され、ｒＡＡＶ粒子を単離する当該方法は、１つまたは複数の処理工程を含む。実施形態によっては、処理は、細胞培養物の収集、収集した細胞培養物の清澄化（例えば、遠心または深層濾過による）、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、滅菌濾過のうちの少なくとも１つである。さらなる実施形態において、処理は、細胞培養物の収集、収集した細胞培養物の清澄化（例えば、遠心または深層濾過による）、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、及び滅菌濾過のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む。実施形態によっては、処理は、収集した細胞培養物の遠心を含まない。
本開示は、単離組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤を製造する方法を提供し、本方法は、（ａ）遠心、深層濾過、タンジェンシャルフロー濾過、限外濾過、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及び疎水的相互作用クロマトグラフィーのうち１つまたは複数により、不純物を含む供給物からｒＡＡＶ粒子を単離すること、ならびに単離されたｒＡＡＶ粒子を製剤化して安定製剤を製造すること、を含む。
本開示は、単離組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤の医薬単位剤形を製造する方法を提供し、本方法は、（ａ）遠心、深層濾過、タンジェンシャルフロー濾過、限外濾過、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及び疎水的相互作用クロマトグラフィーのうち１つまたは複数により、不純物を含む供給物からｒＡＡＶ粒子を単離すること、ならびに単離されたｒＡＡＶ粒子を製剤化すること、を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．２５％（ｗ／ｖ）のグリセロールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．５％（ｗ／ｖ）ソルビトールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約３０ｍＭの硫酸ナトリウム、
ｃ）約２６３ｍＭのスクロース、及び
ｄ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）グリセロールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）ソルビトールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）硫酸ナトリウム、
ｃ）スクロース、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．２５％（ｗ／ｖ）のグリセロールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．５％（ｗ／ｖ）ソルビトールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約３０ｍＭの硫酸ナトリウム、
ｃ）約２６３ｍＭのスクロース、及び
ｄ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）グリセロールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）ソルビトールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）硫酸ナトリウム、
ｃ）スクロース、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．２５％（ｗ／ｖ）のグリセロールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．５％（ｗ／ｖ）ソルビトールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｅ）約３０ｍＭの硫酸ナトリウム、
ｆ）約２６３ｍＭのスクロース、及び
ｇ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）グリセロールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）ソルビトールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）硫酸ナトリウム、
ｃ）スクロース、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が２００ｍＭ未満である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）グリセロールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が２００ｍＭ未満である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）スクロース、
ｃ）クエン酸ナトリウム、
ｄ）ポロキサマー１８８、及び
ｅ）ソルビトールと
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が２００ｍＭ未満である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）Ｔｒｉｓ、
ｂ）硫酸ナトリウム、
ｃ）スクロース、及び
ｄ）ポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤であり、
ただし当該製剤は、イオン強度が２００ｍＭ未満である。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、マンニトールを含まない。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、約１５０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１００ｍＭ、約９０ｍＭ、約８０ｍＭ、約７０ｍＭ、約６０ｍＭ、約５０ｍＭ、約４０ｍＭ、約３０ｍＭ、約２０ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のマンニトールを含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２１０ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２６３ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約４０９ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約１４．６ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約４５ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約０ｍＭ～約２０ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約５０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２００ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約３００ｍＭ～約４００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約４００ｍＭ～約５００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約５００ｍＭ～約６００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約６００ｍＭ～約７００ｍＭの濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．２５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．１０％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０％～約０．１０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．１０％～約０．２０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．２０％～約０．３０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．３０％～約０．４０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．４０％～約０．５０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．５０％～約０．６０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．６０％～約０．７０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．７０％～約０．８０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．８０％～約０．９０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．９０％～約１．００％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．２５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．１０％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０％～約０．１０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．１０％～約０．２０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．２０％～約０．３０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．３０％～約０．４０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．４０％～約０．５０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．５０％～約０．６０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．６０％～約０．７０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．７０％～約０．８０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．８０％～約０．９０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．９０％～約１．００％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００２％（重量／体積、０．０２ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）～約０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００１％（重量／体積、０．００１ｇ／Ｌ）～約０．０１％（重量／体積、０．１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）～約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）～約０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００６％（重量／体積、０．００６ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００７％（重量／体積、０．００７ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００８％（重量／体積、０．００８ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００９％（重量／体積、０．００９ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００２％（重量／体積、０．０２ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００３％（重量／体積、０．０３ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００４％（重量／体積、０．０４ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０１％（重量／体積、０．１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。
実施形態によっては、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、塩賦形剤、糖を含む安定製剤を提供する。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、安定製剤は、凍結乾燥に適している。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである非晶質塩とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が３０ｍＭ～１００ｍＭである非晶質塩とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が２００ｍＭ超である非晶質塩とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである非晶質塩、及び界面活性剤とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、イオン強度が３０ｍＭ～１００ｍＭである非晶質塩、及び界面活性剤とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が２００ｍＭ超である非晶質塩、及び界面活性剤とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００１％～約０．５％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％～約０．１％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００１％～約０．５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％～約０．１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００２％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００３％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００４％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００８％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、塩は、薬学上許容される塩である。実施形態によっては、塩は、結晶化しない非晶質塩である。実施形態によっては、塩は、ナトリウム塩である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、または塩化ナトリウムである。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、または硫酸マグネシウムである。実施形態によっては、塩は、多価塩であり、この塩は、より高いイオン強度を有する多荷電イオン（一価の塩化ナトリウムに比べて添加された賦形剤１分子あたり）で構成されており、結晶化を最小限に抑えながらＡＡＶ凝集を阻害することができる。
実施形態によっては、塩賦形剤は、望ましいイオン強度を達成するように添加または調整される。実施形態によっては、非晶質塩は、イオン強度が約１５０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１０５ｍＭ、または約１００ｍＭ以下である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、緩衝剤のイオン強度が約１５０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１０５ｍＭ、または約１００ｍＭ以下である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８粒子またはｒＡＡＶ９粒子である。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が１５０ｍＭ、１４５ｍＭ、１４０ｍＭ、１３５ｍＭ、１３０ｍＭ、１２５ｍＭ、１２０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１１０ｍＭ以下である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、緩衝剤のイオン強度が１５０ｍＭ、１４５ｍＭ、１４０ｍＭ、１３５ｍＭ、１３０ｍＭ、１２５ｍＭ、１２０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１１０ｍＭ以下である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が６０ｍＭ超である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１１５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１００ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９０ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が３０ｍＭ超である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ～１００ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約１００ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１１５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭ～９５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭ～９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭ～８５ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ～１００ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３５ｍＭ～９５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４０ｍＭ～９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４５ｍＭ～８５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５０ｍＭ～８０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５５ｍＭ～７５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～７０ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有さない。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が約２００ｍＭ超である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２カプシドを有する。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８カプシドもｒＡＡＶ９カプシドも有さない。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、または３００ｍＭ超である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２カプシドを有する。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８カプシドもｒＡＡＶ９カプシドも有さない。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２００ｍＭ～約２１０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２１０ｍＭ～約２２０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２２０ｍＭ～約２３０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２３０ｍＭ～約２４０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２４０ｍＭ～約２５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２５０ｍＭ～約２６０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２６０ｍＭ～約２７０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２７０ｍＭ～約２８０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２８０ｍＭ～約２９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２９０ｍＭ～約３００ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドもＡＡＶ９カプシドも有さない。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００１％～約０．５％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％～約０．１％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００１％～約０．５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％～約０．１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００２％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００３％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００４％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００８％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、塩は、薬学上許容される塩である。実施形態によっては、塩は、結晶化しない非晶質塩である。実施形態によっては、塩は、ナトリウム塩である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、または塩化ナトリウムである。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、または硫酸マグネシウムである。実施形態によっては、塩は、多価塩であり、この塩は、より高いイオン強度（一価の塩化ナトリウムに比べて添加された賦形剤１分子あたり）を有する多荷電イオンで構成されており、結晶化を最小限に抑えながらＡＡＶ凝集を阻害することができる。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が約２００ｍＭ、約１９５ｍＭ、１８０ｍＭ、１７５ｍＭ、１７０ｍＭ、１６５ｍＭ、１６０ｍＭ、１５５ｍＭ、１５０ｍＭ、１４５ｍＭ、１４０ｍＭ、１３５ｍＭ、１３０ｍＭ、１２５ｍＭ、１２０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１１０ｍＭ以下である。
実施形態によっては、塩賦形剤は、望ましいイオン強度を達成するように添加または調整される。実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が約２００ｍＭ、約１９０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１５５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１５ｍＭ、または約１１０ｍＭ以下である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、緩衝剤のイオン強度が約１５０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１５ｍＭ、または約１１０ｍＭ以下である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８粒子である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１１５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１００ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９０ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ～１００ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約１００ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１４０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１３０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１２０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１１５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭ～９５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭ～９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭ～８５ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ～１００ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３５ｍＭ～９５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４０ｍＭ～９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４５ｍＭ～８５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５０ｍＭ～８０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５５ｍＭ～７５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～７０ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．４である。
ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．０～８．８である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．０～９．０である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．０である。ある特定の実施形態において安定製剤のｐＨは、約６．１である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．２である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．３である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．４である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．５である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．６である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．７である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．８である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約６．９である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．０である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．１である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．２である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．３である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．４である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．５である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．６である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．７である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．８である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約７．９である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．０である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．１である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．２である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．３である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．４である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．５である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．６である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．７である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．８である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約８．９である。ある特定の実施形態において、安定製剤のｐＨは、約９．０である。
ある特定の実施形態において、安定製剤のベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、４×１０９ＧＣ／ｍＬ、５×１０９ＧＣ／ｍＬ、６×１０９ＧＣ／ｍＬ、７×１０９ＧＣ／ｍＬ、８×１０９ＧＣ／ｍＬ、９×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、または約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである。
ある特定の実施形態において、安定製剤中の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凍結乾燥または再構築プロセスに対して、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００を超えて高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００を超えて高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、感染力は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、感染力は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、凝集は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、凝集は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、貯蔵後に再構築される。
ある特定の実施形態において、製剤は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で貯蔵される。
ある特定の実施形態において、製剤は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、または約４年間貯蔵される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凍結乾燥または再構築プロセスに対して、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、感染力は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、感染力は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、凝集は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、凝集は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、貯蔵後に再構築される。
ある特定の実施形態において、製剤は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で貯蔵される。
ある特定の実施形態において、製剤は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵される。ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、同じ条件で貯蔵した参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００を超えて高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００を超えて高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、ＩＶＲＰは、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、ＩＶＲＰは、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、遊離ＤＮＡが、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の遊離ＤＮＡは、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、遊離ＤＮＡは、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、遊離ＤＮＡは、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｒＡＡＶゲノム放出が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、寸法の変化が最大で約２０％、約１５％、約１０％、約８％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、寸法は、凍結／融解サイクルの前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、寸法の変化が最大で２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、または約１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、寸法は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、寸法は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００より高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００よりも高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、遊離ＤＮＡが、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の遊離ＤＮＡは、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、遊離ＤＮＡが、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の遊離ＤＮＡは、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、粒子寸法の変化が、最大で２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、または１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べた場合に、粒子寸法の変化が、最大で２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、または１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、参照製剤は、０．００１％のポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳである。
ある特定の実施形態において、参照製剤は、糖を含まない製剤である。ある特定の実施形態において、参照製剤は、可塑剤を含まない製剤である。
ある特定の実施形態において、製剤は、凍結乾燥プロセスにおいて、約－２０℃の温度に凍結される。ある特定の実施形態において、凍結製剤は、－２０℃に凍結された場合に、ｐＨを約ｐＨ６～約ｐＨ９に維持する。ある特定の実施形態において、凍結製剤は、－２０℃に凍結された場合に、ｐＨ値を凍結前のｐＨ値のプラスマイナス１単位の範囲内に維持する。
ある特定の実施形態において、製剤の凍結乾燥ケーキのガラス転移温度（Ｔｇ）は、３５℃より高い。
ある特定の実施形態において、製剤の最大凍結濃縮溶液（ｍａｘｉｍａｌｌｙ ｆｒｅｅｚｅ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）のガラス転移温度（Ｔｇ’）は、－４０℃より高い。
ある特定の実施形態において、水分量は、約０．５％～約１％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約１％～約２％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約２％～約３％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約３％～約４％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約４％～約５％である。
ある特定の実施形態において、水分量は、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．８％、約１．０％、約１．２％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約３．０％、約４．０％、または約５．０％である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、可塑剤または安定剤を含む。薬学上許容される安定剤または可塑剤として、グリセロール、キシリトール、及びソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、グリセロールを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．１％～約５％の可塑剤または安定剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．１％～約２％の可塑剤または安定剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．２５％～約２％の可塑剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．１％～約５％のグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．１％～約２％のグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．２５％～約２％のグリセロールを含む。
実施形態によっては、「約」という用語は、所定の値または範囲のプラスまたはマイナス１０％を意味する。実施形態によっては、「約」という用語は、表示された数字または範囲より約１０～２０％大きいまたは小さい範囲を示す。ある特定の実施形態において、「約」という用語は、挙げられた数字そのものを包含する。
本明細書中記載される組成物及び方法のさらに他の特長及び利点が、添付の図面と合わせて以下の詳細な説明を読むことで、より明確になるだろう。
４．１例示の実施形態
４．１．１セット１
１．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）クエン酸ナトリウムと
を含む、安定製剤。
２．前記緩衝剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項１に記載の製剤。
３．約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項２に記載の製剤。
４．約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約４０ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項２に記載の製剤。
５．約５ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項２に記載の製剤。
６．ｐＨが約６．５～８．０である、条項１から４のいずれか１つに記載の製剤。
７．ｐＨが約７．２～７．８である、条項６に記載の製剤。
８．ｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である、条項６に記載の製剤。
９．ｐＨが約７．５である、条項６に記載の製剤。
１０．約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、条項１から９のいずれか１つに記載の製剤。
１１．約５０ｍＭ～約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、または約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの糖を含む、条項１０に記載の製剤。
１２．約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約４００ｍＭ、または約３００ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、条項１０に記載の製剤。
１３．約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭ～約３５０ｍＭの糖を含む、条項１０に記載の製剤。
１４．約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、または約３５０ｍＭの糖を含む、条項１０に記載の製剤。
１５．約１９０ｍＭ～約２３０ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２５０ｍＭ、または約１５０ｍＭ～約２７０ｍＭの糖を含む、条項１０に記載の製剤。
１６．約２１０ｍＭの糖を含む、条項１０に記載の製剤。
１７．前記糖は、非還元糖である、条項１から１６のいずれか１つに記載の製剤。
１８．前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、条項１７に記載の製剤。
１９．前記非還元糖は、スクロースである、条項１７に記載の製剤。
２０．前記糖は、還元糖である、条項１から１６のいずれか１つに記載の製剤。
２１．前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、条項２０に記載の製剤。
２２．前記還元糖は、ブドウ糖である、条項２０に記載の製剤。
２３．約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む、条項１から２２のいずれか１つに記載の製剤。
２４．約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項２３に記載の製剤。
２５．約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項２３に記載の製剤。
２６．約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項２３に記載の製剤。
２７．約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項２３に記載の製剤。
２８．約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項２３に記載の製剤。
２９．さらに、約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む、条項１から２８のいずれか１つに記載の製剤。
３０．約０．００２％の非イオン性界面活性剤を含む、条項２９に記載の製剤。
３１．前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、またはＢＲＩＪ ３５を含む、条項２８または条項２９に記載の製剤。
３２．前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８を含む、条項３１に記載の製剤。
３３．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約１ｍＭ～約２５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖、
ｃ）約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
３４．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約２ｍＭ～約１０ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの糖、
ｃ）約１０ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００１％～約０．００５％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
３５．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭの糖、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．５である、前記製剤。
３６．前記糖は、非還元糖である、条項３３から３５のいずれか１つに記載の製剤。
３７．前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、条項３６に記載の製剤。
３８．前記非還元糖は、スクロースである、条項１７に記載の製剤。
３９．約１．０Ｅ＋１１ゲノムコピー／ｍＬ（ＧＣ／ｍＬ）～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、条項１から３８のいずれか１つに記載の製剤。
４０．約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬ、または約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、条項３９に記載の製剤。
４１．前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６のカプシドタンパク質を含む、条項１から４０のいずれか１つに記載の製剤。
４２．前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む、条項４１に記載の製剤。
４３．さらに、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、またはマンニトールからなる群より選択される可塑剤を含む、条項１から４２のいずれか１つに記載の製剤。
４４．さらに、グリセロールを含む、条項１から４２のいずれか１つに記載の製剤。
４５．約０．１％～約５％のグリセロールを含む、条項４４に記載の製剤。
４６．約０．１％～約２％のグリセロールを含む、条項４４に記載の製剤。
４７．約０．２５％～約２％のグリセロールを含む、条項４４に記載の製剤。
４８．液剤である、条項１から４７のいずれか１つに記載の製剤。
４９．凍結製剤である、条項１から４７のいずれか１つに記載の製剤。
５０．凍結乾燥製剤または再構築された凍結乾燥製剤である、条項１から４７のいずれか１つに記載の製剤。
５１．残存水分量が約１％～約７％である、条項５０に記載の製剤。
５２．前記残存水分量は、約１％～約７％、約２％～約７％、約３％～約７％、約４％～約７％、約５％～約７％、約１％～約６％、約１％～約５％、約１％～約４％、または約１％～約３％である、条項５１に記載の製剤。
５３．前記残存水分量は、約３％～約７％、約３％～約６％、または約３％～約５％である、条項５１に記載の製剤。
５４．前記残存水分量は、約３％、約３．５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、または約６％である、条項５１に記載の製剤。
５５．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から５４のいずれか１つに記載の製剤。
５６．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から５４のいずれか１つに記載の製剤。
５７．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から５４のいずれか１つに記載の製剤。
５８．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から５４のいずれか１つに記載の製剤。
５９．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で４週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から５４のいずれか１つに記載の製剤。
６０．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤の製造法であって、ｒＡＡＶ粒子を、条項１から４７のいずれか１つに記載の製剤の緩衝剤、糖、塩、任意選択で可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤と混合し、それによりｒＡＡＶを含む前記製剤を製造することを含む、前記方法。
６１．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
６２．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
６３．さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約５％にすることを含む、条項６１または６２に記載の方法。
６４．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
６５．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
６６．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
６７．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
６８．さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約７％にすることを含む、条項６６または６７に記載の使用。
６９．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
７０．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
７１．ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される、条項６１から６５のいずれか１つに記載の方法または条項６６から７０のいずれか１つに記載の使用。
７２．凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、または９０％減少している、条項６１から６５及び７１のいずれか１つに記載の方法または条項６６から７１のいずれか１つに記載の使用。
７３．凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、実質的に排除されている、条項６１から６５及び７１のいずれか１つに記載の方法または条項６６から７１のいずれか１つに記載の使用。
７４．前記糖は、非還元糖である、条項６１から６５及び７１から７３のいずれか１つに記載の方法または条項６６から７３のいずれか１つに記載の使用。
７５．前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、条項７４に記載の方法または条項７４に記載の使用。
７６．前記非還元糖は、スクロースである、条項７４に記載の方法または条項７４に記載の使用。
７７．前記糖は、還元糖である、条項６１から６５及び７１から７３のいずれか１つに記載の方法または条項６６から７３のいずれか１つに記載の使用。
７８．前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、条項７７に記載の方法または条項７７に記載の使用。
７９．前記還元糖は、ブドウ糖である、条項７７に記載の方法または条項７７に記載の使用。
８０．前記可塑剤は、グリセロールを含む、条項６１から６５及び７１から７９のいずれか１つに記載の方法。または条項６６から７９のいずれか１つに記載の使用。
８１．前記製剤は、条項１～４７のいずれか１つに記載のものである、条項６１から６５及び７１から８０のいずれか１つに記載の方法または条項６６から８０のいずれか１つに記載の使用。
４．１．２セット２
１．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）非晶質塩と
を含む、安定製剤であって、
凍結乾燥に適している、前記製剤。
２．前記緩衝剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項１に記載の製剤。
３．約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項２に記載の製剤。
４．約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約４０ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項２に記載の製剤。
５．約５ｍＭのＴｒｉｓを含む、条項２に記載の製剤。
６．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）イオン強度が６０ｍＭより高い非晶質塩と
を含む、安定製剤であって、
凍結乾燥に適している、前記製剤。
７．前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する、条項６に記載の製剤。
８．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである非晶質塩と
を含む、安定製剤であって、
凍結乾燥に適している、前記製剤。
９．前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する、条項８に記載の製剤。
１０．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）イオン強度が３０～１００ｍＭである非晶質塩と
を含む、安定製剤であって、
凍結乾燥に適している、前記製剤。
１１．前記ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ９カプシドを有する、条項１０に記載の製剤。
１２．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）緩衝剤、
ｂ）糖、及び
ｃ）イオン強度が２００ｍＭより高い非晶質塩と
を含む、安定製剤であって、
凍結乾燥に適している、前記製剤。
１３．前記ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８カプシドもｒＡＡＶ９カプシドも有さない、条項１２に記載の製剤。
１４．前記非晶質塩は、クエン酸ナトリウムである、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
１５．前記非晶質塩は、硫酸ナトリウムである、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
１６．前記非晶質塩は、硫酸アンモニウムである、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
１７．前記非晶質塩は、硫酸マグネシウムである、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
１８．前記非晶質塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、またはそれらの組み合わせである、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
１９．クエン酸ナトリウムを含む、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
２０．硫酸ナトリウムを含む、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
２１．硫酸アンモニウムを含む、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
２２．硫酸マグネシウムを含む、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
２３．クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、またはそれらの組み合わせを含む、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
２４．前記製剤は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、または約２００ｍＭの硫酸ナトリウムを含む、条項１から１３のいずれか１つに記載の製剤。
２５．ｐＨが約６．５～８．０である、条項１から２４のいずれか１つに記載の製剤。
２６．ｐＨが約７．２～７．８である、条項２５に記載の製剤。
２７．ｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である、条項２５に記載の製剤。
２８．ｐＨが約７．５である、条項２５に記載の製剤。
２９．約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、条項１から２８のいずれか１つに記載の製剤。
３０．約５０ｍＭ～約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、または約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの糖を含む、条項２９に記載の製剤。
３１．約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約４００ｍＭ、または約３００ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、条項２９に記載の製剤。
３２．約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭ～約３５０ｍＭの糖を含む、条項２９に記載の製剤。
３３．約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、または約３５０ｍＭの糖を含む、条項２９に記載の製剤。
３４．約１９０ｍＭ～約２３０ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２５０ｍＭ、または約１５０ｍＭ～約２７０ｍＭの糖を含む、条項２９に記載の製剤。
３５．約２１０ｍＭの糖を含む、条項２９に記載の製剤。
３６．前記糖は、非還元糖である、条項１から３５のいずれか１つに記載の製剤。
３７．前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、条項３６に記載の製剤。
３８．前記非還元糖は、スクロースである、条項３６に記載の製剤。
３９．前記糖は、還元糖である、条項１から３５のいずれか１つに記載の製剤。
４０．前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、条項３９に記載の製剤。
４１．約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む、条項１から４０のいずれか１つに記載の製剤。
４２．約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項４１に記載の製剤。
４３．約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項４１に記載の製剤。
４４．約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項４１に記載の製剤。
４５．約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項４１に記載の製剤。
４６．約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、条項４１に記載の製剤。
４７．さらに、約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む、条項１から４６のいずれか１つに記載の製剤。
４８．約０．００２％の非イオン性界面活性剤を含む、条項４７に記載の製剤。
４９．前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、またはＢＲＩＪ ３５を含む、条項４６または条項４７に記載の製剤。
５０．前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８を含む、条項４９に記載の製剤。
５１．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約１ｍＭ～約２５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖、
ｃ）約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
５２．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約２ｍＭ～約１０ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの糖、
ｃ）約１０ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００１％～約０．００５％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
５３．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭの糖、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％の非イオン性界面活性剤と
を含む、安定製剤であって、
ｐＨが約７．５である、前記製剤。
５４．前記糖は、非還元糖である、条項５１から５３のいずれか１つに記載の製剤。
５５．前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、条項５４に記載の製剤。
５６．前記非還元糖は、スクロースである、条項５５に記載の製剤。
５７．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤。
５８．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．２５％（ｗ／ｖ）のグリセロールと
を含む、安定製剤。
５９．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．５％（ｗ／ｖ）ソルビトールと
を含む、安定製剤。
６０．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約３０ｍＭの硫酸ナトリウム、
ｃ）約２６３ｍＭのスクロース、及び
ｄ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤。
６１．凍結乾燥に適している、条項１から６０のいずれか１つに記載の製剤。
６２．ｐＨが約７．５である、条項１から６１のいずれか１つに記載の製剤。
６３．ｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である、条項１から６１のいずれか１つに記載の製剤。
６４．ｐＨが約７．１である、条項１から６１のいずれか１つに記載の製剤。
６５．ｐＨが約６．５～８．０である、条項１から６１のいずれか１つに記載の製剤。
６６．ｐＨが約７．２～約７．８．である、条項１から６１のいずれか１つに記載の製剤。
６７．約１．０Ｅ＋１１ゲノムコピー／ｍＬ（ＧＣ／ｍＬ）～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、条項１から６６のいずれか１つに記載の製剤。
６８．約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬ、または約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、条項６７に記載の製剤。
６９．前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６のカプシドタンパク質を含む、条項１から６８のいずれか１つに記載の製剤。
７０．前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む、条項６９に記載の製剤。
７１．さらに、グリセロールまたはソルビトールからなる群より選択される安定剤を含む、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７２．さらに、グリセロールを含む、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７３．約０．１％～約５％のグリセロールを含む、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７４．約０．１％～約２％のグリセロールを含む、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７５．約０．２５％～約２％のグリセロールを含む、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７６．マンニトールを含まない、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７７．１５０ｍＭ、１００ｍＭ、５０ｍＭ、２０ｍＭ、または１０ｍＭ未満のマンニトールを含む、条項１から７０のいずれか１つに記載の製剤。
７８．前凍結乾燥製剤である、条項１から７７のいずれか１つに記載の製剤。
７９．残存水分量が約１％～約７％である、条項に記載の製剤。
８０．前記残存水分量は、約１％～約７％、約２％～約７％、約３％～約７％、約４％～約７％、約５％～約７％、約１％～約６％、約１％～約５％、約１％～約４％、または約１％～約３％である、条項７９に記載の製剤。
８１．前記残存水分量は、約３％～約７％、約３％～約６％、または約３％～約５％である、条項７９に記載の製剤。
８２．前記残存水分量は、約３％、約３．５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、または約６％である、条項７９に記載の製剤。
８３．前記水分量は、約１％～約２％である、条項７９に記載の製剤。
８４．前記水分量は、約１．５％、約１．４％、約１．３％、約１．２％、または約１．１％である、条項７９に記載の製剤。
８５．前記水分量は、約１％である、条項７９に記載の製剤。
８６．前記製剤の前記凍結乾燥ケーキのガラス転移温度（Ｔｇ）は、３５℃より高い、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
８７．前記製剤の最大凍結濃縮溶液のガラス転移温度（Ｔｇ’）は、－４０℃より高い、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
８８．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
８９．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９０．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９１．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９２．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で４週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９３．前記製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される、条項８７から９２のいずれか１つに記載の製剤。
９４．前記凍結乾燥製剤は、貯蔵後に再構築される、条項９４に記載の製剤。
９５．前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、凍結乾燥直後に、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％である、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９６．前記製剤のｒＡＡＶ粒子凝集のレベルは、参照製剤におけるＡＡＶ粒子凝集のレベルと比較した場合に、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％低下している、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９７．前記製剤の安定性は、ベクターゲノム含有量またはウイルス力価アッセイにより評価され、前記製剤は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同一条件で貯蔵された参照製剤のゲノム含有量と比較した場合に、前記ゲノム含有量が、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％多い、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９８．前記製剤の安定性は、前記製剤の相対効力を測定することにより評価され、前記製剤は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同一条件で貯蔵された参照製剤のゲノム含有量と比較した場合に、前記相対効力が、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％高い、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
９９．前記製剤の安定性は、感染力の低下により評価され、前記製剤は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同一条件で貯蔵された参照製剤の感染力の低下と比較した場合に、前記感染力の低下が、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％少ない、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
１００．前記製剤の安定性は、ｒＡＡＶゲノム放出により評価され、前記ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定され、前記製剤は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同一条件で貯蔵された参照製剤の相対蛍光レベルと比較した場合に、前記相対蛍光レベルが、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％低い、条項１から７８のいずれか１つに記載の製剤。
１０１．前記製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される、条項９７から１００のいずれか１つに記載の製剤。
１０２．前記凍結乾燥製剤は、貯蔵後に再構築される、条項１０１に記載の製剤。
１０３．前記製剤は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、または４０℃で貯蔵される、条項９７から１０２のいずれか１つに記載の製剤。
１０４．前記参照製剤は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳである、条項９６から１０３のいずれか１つに記載の製剤。
１０５．前記参照製剤は、糖を含まない製剤である、条項９６から１０４のいずれか１つに記載の製剤。
１０６．前記参照製剤は、可塑剤を含まない製剤である、条項９６から１０５のいずれか１つに記載の製剤。
１０７．前記製剤は、前記凍結乾燥プロセスにおいて、約－２０℃の温度に凍結される、条項１から１０６のいずれか１つに記載の製剤。
１０８．前記凍結製剤は、－２０℃に凍結されるときに、ｐＨを約ｐＨ６～約ｐＨ９に維持する、条項１から１０７のいずれか１つに記載の製剤。
１０９．前記凍結製剤は、－２０℃で凍結されるときに、ｐＨ値を凍結前のｐＨ値からプラスマイナス１単位の範囲内に維持する、条項１から１０７のいずれか１つに記載の製剤。
１１０．凍結乾燥用の安定化水性ｒＡＡＶ製剤である、条項１から１０９のいずれか１つに記載の製剤。
１１１．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤の製造法であって、ｒＡＡＶ粒子を、条項１から１０８のいずれか１つに記載の製剤の緩衝剤、糖、塩、任意選択で可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤と混合し、それによりｒＡＡＶを含む前記製剤を製造することを含む、前記方法。
１１２．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１１３．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１１４．さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約５％にすることを含む、条項１１２または１１３に記載の方法。
１１５．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１１６．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１１７．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１１８．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１１９．さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約７％にすることを含む、条項１１７または１１８に記載の方法。
１２０．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１２１．ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
１２２．ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される、条項１１２から１１６のいずれか１つに記載の方法または条項１１７から１２１のいずれか１つに記載の使用。
１２３．凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、または９０％減少している、条項１１２から１１６及び１２２のいずれか１つに記載の方法または条項１１７から１２１のいずれか１つに記載の使用。
１２４．凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、実質的に排除されている、条項１１２から１１６及び１２２のいずれか１つに記載の方法または条項１１７から１２１のいずれか１つに記載の使用。
１２５．前記糖は、非還元糖である、条項１１２から１１６及び１２２から１２４のいずれか１つに記載の方法または条項１１７から１２４のいずれか１つに記載の使用。
１２６．前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、条項１２５に記載の方法または条項１２５に記載の使用。
１２７．前記非還元糖は、スクロースである、条項１２５に記載の方法または条項１２５に記載の使用。
１２８．前記糖は、還元糖である、条項１１２から１１６及び１２２から１２４のいずれか１つに記載の方法または条項１１７から１２４のいずれか１つに記載の使用。
１２９．前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、条項１２２に記載の方法または条項１２２に記載の使用。
１３０．前記還元糖は、ブドウ糖である、条項１２８に記載の方法または条項１２８に記載の使用。
１３１．前記可塑剤は、グリセロールを含む、条項１１１から１１７及び１２２から１３０のいずれか１つに記載の方法または条項８２から１０５のいずれか１つに記載の使用。
１３２．前記製剤は、条項請求項１から１１０のいずれか１つに記載のものである、条項１１１から１１７及び１２２から１３１のいずれか１つに記載の方法または条項８２から１０６のいずれか１つに記載の使用。
１３３．ｒＡＡＶ産物の安定凍結乾燥製剤の製造法であって、前凍結乾燥させた製剤を凍結乾燥に供する工程を含み、前記前凍結乾燥させた製剤は、条項請求項１から１１０のいずれか１つに記載のものである、前記方法。
１３４．疾患の治療法または予防法であって、治療または予防を必要としている対象に、安定凍結乾燥製剤から再構築されたものであるｒＡＡＶ製剤を治療上有効量で投与することを含み、前記安定凍結乾燥製剤の前記前凍結乾燥させた製剤は、条項請求項１から１１０のいずれか１つに記載のものである、前記方法。
５．図面の簡単な説明
ウイルス粒子凝集は、イオン強度の影響を受ける。（Ａ）イオン強度の異なる緩衝剤に希釈した際に観察されるウイルス粒子凝集。塩１は塩化ナトリウムであり、塩２はクエン酸ナトリウムである。（Ｂ）ウイルス粒子凝集は、時間とともに増加する。 凝集を防ぐための最小イオン強度。異なるＮａＣｌ濃度で調製した１．８Ｅ＋１３ＧＣ／ｍＬのＡＡＶ８粒子の有効直径。粒子の直径が示すところによれば、粒子凝集を防ぐには９０ｍＭ以上のイオン強度が必要であるように思われる。 最小イオン強度は、血清型依存性である。異なるＮａＣｌ濃度で調整したＡＡＶ８（白抜き四角）及びＡＡＶ９（白抜き三角）の有効直径。ベクター濃度は、６．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬであった。 凝集の阻止は必要であるが、確実に安定製剤とするには不十分である。－８０℃で６ヶ月（６ヶ月、－８０℃）または２５℃で６ヶ月（６ヶ月、２５℃）貯蔵した後のウイルス粒子の寸法分布を示す。 ＤＮＡと結合した際に蛍光強度の顕著な上昇を呈する色素であるＳＹＢＲ金の存在下でのＡＡＶゲノム放出の検出。溶液は、（Ａ）ＮａＣｌまたは（Ｂ）クエン酸ナトリウムいずれかの存在下ポロキサマー１８８を含有するＴｒｉｓ緩衝剤中に、９．７Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬのＡＡＶ８粒子を含有する。実線は、凍結させなかった対照であり、破線は、３回の凍結融解サイクル後である。 凍結中に結晶化する塩の存在下では、ＤＮＡ放出が増加する。塩１はクエン酸ナトリウムであり、塩２は塩化ナトリウムである。対照試料中及び３回の凍結融解サイクル（３×Ｆ／Ｔ）後のＤＮＡ放出を示す。緩衝剤１はＴｒｉｓであり、緩衝剤２はリン酸ナトリウムであり、緩衝剤３はヒスチジンである。 ＳＹＢＲ金の存在下でのＡＡＶゲノム放出の検出。溶液は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ａ）または４％スクロース含有ＰＢＳ（Ｂ）いずれか中に、１Ｅ＋１２ＧＣ／ｍＬのＡＡＶ８を含有する。実線は、凍結させなかった対照であり、破線は１０回の凍結融解サイクル後である。 非晶質糖の添加は、共溶質結晶化を阻害し、より少ないＤＮＡ放出を呈する。結晶マンニトール成分及び非晶質スクロース成分を異なる比で含む緩衝剤での対照試料及び３回の凍結融解サイクル（３×Ｆ／Ｔ）後のＤＮＡ放出を示す。 ＧＣの減少は、凍結乾燥後の相対効力の同時低下を招く。凍結乾燥後の製剤の相対効力及びウイルスＤＮＡ力価を示す。「Ｃ」で標識した試料には、結晶性の増量剤が含まれていた。 凍結溶液のｐＨは、凍結乾燥固体の安定性に影響を及ぼす。液体及び凍結溶液のｐＨを、色で示す。２５℃で６ヶ月貯蔵後の凍結乾燥製剤の相対効力を示す。 凍結乾燥させなかった対照（「Ｌｉｑｕｉｄ」）、凍結乾燥後（「Ｐｏｓｔ Ｌｙｏ」）、ならびに室温で３ヶ月及び６ヶ月貯蔵後におけるＡＡＶ８製剤の相対効力パーセント。製剤は、Ｔｒｉｓ緩衝剤（黒塗りつぶし）またはリン酸緩衝剤（灰色塗りつぶし）のいずれかである。 ３５℃で貯蔵中の凍結乾燥ＡＡＶ８製剤の相対効力パーセント。残存水分量は、５．８％（丸）、４．７％（三角）、３．６％（菱形）、及び２．１％（四角）である。 ５℃（三角）または室温（四角）で貯蔵中の凍結乾燥ＡＡＶ８製剤の相対効力パーセント。 ＳＹＢＲ金の存在下でのＡＡＶゲノム放出の検出。溶液は、製剤緩衝剤のみ含有（太実線）、あるいは２．４Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬのＡＡＶ８を含有し、凍結乾燥前（実線）または異なる残存水分レベル：４．７％（点線）、３．６％（破線）、及び２．１％（一点鎖線）、まで凍結乾燥させ続いて水を用いて最初の体積に再構築させた後、のいずれかである。残存水分が低下するにつれてより多くのＡＡＶゲノムが放出される。 凍結乾燥後の製剤１Ａ、６Ａ、及び７ＡのＡＡＶ安定性の比較。Ａは、ＡＡＶカプシド損傷による遊離ＤＮＡ放出を示す。蛍光強度が高いほど、遊離ＤＮＡが多いことを示す。Ｂは、ウイルス力価減少の対数を示す。Ｃは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力を示す。 低温ＤＳＣにより特性決定した製剤４Ａの熱転移。 ３５℃で２週間後の製剤１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａ、及び５Ａの比較。Ａは、ＡＡＶカプシド損傷による遊離ＤＮＡ放出を示す。Ｂは、ウイルス力価を示す。Ｃは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力を示す。 イオン強度の異なるＮａＣｌまたはＮａ２ＳＯ４溶液に希釈した後のＡＡＶの粒子寸法、Ａは、Ｔ０での直径を示す。Ｂは、８時間後の直径を示す。Ｃは、３０ｍＭのＮａ２ＳＯ４の存在下でスクロース濃度を上昇させていった場合の、室温で２４時間後の直径を示す。 －２０℃に凍結させる場合の、ｄＰＢＳ、製剤４Ａ、及び製剤５ＡのｐＨシフトを示す。 －２０℃に凍結させる場合の、ｄＰＢＳ、製剤４Ａ、及び製剤５ＡのｐＨシフトを示す。 ＡＡＶカプシド１～９（配列番号４１～５１）のＣｌｕｓｔａｌ多重配列アラインメント。アミノ酸置換（最終行中、太字で示す）は、他の整列させたＡＡＶカプシドの相当する位置からアミノ酸残基を「動員する」ことにより、ＡＡＶ９カプシド及びＡＡＶ８カプシドに対してもたらすことができる。「ＨＶＲ」で指定される配列領域＝超可変領域。
６．詳細な説明
本明細書中提供されるのは、ｒＡＡＶ粒子を含む製剤である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、緩衝剤、１種または複数の安定剤（例えば、糖、ポリオール、アミノ酸）、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、凍結製剤または凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、凍結する間、非晶質のままである。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶ粒子を含む製剤は、室温で長期間貯蔵した場合、安定であり、感染力を大幅に低下させることがない。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、安定製剤、安定製剤が関係する治療法、及び安定製剤が関係するキットである。
実施形態によっては、第６．２章に記載される製剤は、第６．２章に記載される１つまたは複数の機能特性をそれらが有するように製剤化される。実施形態によっては、第６．２章に記載される安定製剤は、第６．２章に記載される１つまたは複数の特性をそれらが有するように製剤化される。ある特定の実施形態において、本明細書中提供される製剤は、様々な利点、例えば、凍結乾燥後の安定性の改善、及び様々な条件下での長期安定性の改善を有する。同じく本明細書中提供されるのは、第６．８章で使用される場合があるアッセイである。本発明者らは、驚いたことに、凝集を阻止するために必要な最小イオン強度がＡＡＶ血清型依存性であることを見出した。ＡＡＶ８凝集は、２００ｍＭ未満のイオン強度で阻止することができ、ＡＡＶ９に必要とされるイオン強度は、ＡＡＶ８よりも低い。本発明者らは、さらに驚いたことに、凍結する間の製剤成分の結晶化がｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノムの減少を促進することを見出した。本発明者らの知る限り、この種のゲノム減少についても、製剤開発を通じたゲノム減少を阻止する方法についても、公開された報告はない。本発明者らは、ゲノム減少が、以下の２通りの製剤化アプローチのいずれかにより軽減可能であることを見出した：（ａ）凍結する間に結晶化する塩の代わりに結晶化しない塩を用いて製剤化する、及び（ｂ）製剤に、結晶化を阻害する成分（例えば、糖）を含ませる。実施形態によっては、本明細書中開示される組成物のさらなる独自性として、クエン酸ナトリウムとスクロースの併用があり、これにより、他の塩に比べて凍結乾燥プロセスに独自の利点がもたらされる。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、凍結する間のｐＨシフトを阻止する緩衝剤を使用する。
本発明者らは、さらに驚いたことに、実施形態によっては、凍結乾燥ｒＡＡＶ製剤を可能な限り乾燥させることが、乾燥状態での最高の安定性をもたらすのではないことを見出した。結果として、実施形態によっては、本明細書中開示される安定ｒＡＡＶ製剤は、約１％～７％の残存水分量を含む。また、実施形態によっては、特定の理論に固執するつもりはないが、本明細書中開示される安定ｒＡＡＶ製剤は、乾燥状態で水の代用品として作用する可能性がある可塑剤（例えば、グリセロール）を含む。
６．１定義
特に定義されない限り、本明細書中使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。開示される方法をわかりやすくするため、複数の用語及び語句を、以下に定義する。
「約」は、例えば、本明細書中提供される方法で用いられる、組成物中の成分量、組成物中の成分濃度、流速、ｒＡＡＶ粒子収率、供給量、塩濃度、及び同様な値、ならびにそれらの範囲を修飾するが、この語は、例えば、濃縮物を作成または溶液を使用するのに用いられる典型的な測定及び取り扱い手順を通じて、そうした手順の故意ではない誤りを通じて、組成物の作成または方法の実行に用いられる成分の製造、原料、もしくは純度の違いを通じて、及び同様な考慮から起こり得る数量の変動を示す。「約」という用語は、特定の初期濃度または混合状態を持つ組成物の熟成故に異なる量も包含する。「約」という用語は、特定の初期濃度または混合状態を持つ組成物の混合または処理故に異なる量も包含する。「約」という用語で修飾されているか否かにかかわらず、特許請求の範囲は、当該量に対する等価物を含む。実施形態によっては、「約」という用語は、表示される数字または範囲より約１０～２０％大きいまたは小さい範囲を示す。さらなる実施形態において、「約」は、表示される数字または範囲のプラスマイナス１０％を示す。例えば、「約１０％」は、９％～１１％の範囲を示す。ある特定の実施形態において、「約」という用語は、挙げられた数字そのものを包含する。
「ＡＡＶ」とは、アデノ随伴ウイルスの略記であり、ウイルスそれ自身、またはその修飾物、誘導体、もしくは偽型を示すのに使用することができる。この用語は、全てのサブタイプならびに天然型及び組換え型の両方を包含するが、別途要求される場合を除く。「ｒＡＡＶ」という略記は、組換えアデノ随伴ウイルスを示す。「ＡＡＶ」という用語は、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ－１）、ＡＡＶ２型（ＡＡＶ－２）、ＡＡＶ３型（ＡＡＶ－３）、ＡＡＶ４型（ＡＡＶ－４）、ＡＡＶ５型（ＡＡＶ－５）、ＡＡＶ６型（ＡＡＶ－６）、ＡＡＶ７型（ＡＡＶ－７）、ＡＡＶ８型（ＡＡＶ－８）、ＡＡＶ９型（ＡＡＶ－９）、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、及びヒツジＡＡＶ、ならびにそれらの修飾物、誘導体、または偽型を含む。「霊長類ＡＡＶ」は、霊長類に感染するＡＡＶを示し、「非霊長類ＡＡＶ」は、非霊長類哺乳類に感染するＡＡＶを示し、「ウシＡＡＶＡＡＶ」は、ウシ科哺乳類に感染するＡＡＶを示す、などである。
「組換え」は、ＡＡＶ粒子に適用される場合、当該ＡＡＶ粒子が、自然のＡＡＶ粒子とは区別されるＡＡＶ粒子構築物をもたらす１つまたは複数の手法の生成物であることを意味する。
組換えアデノ随伴ウイルス粒子「ｒＡＡＶ粒子」は、少なくとも１種のＡＡＶカプシドタンパク質と、及びカプシドに包まれた異種ポリヌクレオチド（すなわち、野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド、例えば、哺乳類細胞に送達される導入遺伝子）を含むポリヌクレオチドｒＡＡＶベクターとで構成されたウイルス粒子を示す。ｒＡＡＶ粒子は、任意のＡＡＶ血清型のものが可能であり、そのような粒子には、任意の修飾物、誘導体、または偽型が含まれる（例えば、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、またはＡＡＶ－１０、あるいはそれらの誘導体／修飾物／偽型）。そのようなＡＡＶ血清型及び誘導体／修飾物／偽型、ならびにそのような血清型／誘導体／修飾物／偽型を生成する方法は、当該分野で既知である（例えば、Ａｓｏｋａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ２０（４）：６９９－７０８ （２０１２）を参照）。
本開示のｒＡＡＶ粒子は、任意の血清型、または血清型の任意の組み合わせ（例えば、２種以上の血清型を含むｒＡＡＶ粒子の集団、例えば、ｒＡＡＶ２粒子、ｒＡＡＶ８粒子、及びｒＡＡＶ９粒子のうち２種以上を含むもの）のものが可能である。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ１、ｒＡＡＶ２、ｒＡＡＶ３、ｒＡＡＶ４、ｒＡＡＶ５、ｒＡＡＶ６、ｒＡＡＶ７、ｒＡＡＶ８、ｒＡＡＶ９、ｒＡＡＶ１０、または他のｒＡＡＶ粒子、あるいはそれらの２種以上の組み合わせである。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８粒子またはｒＡＡＶ９粒子である。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５、及びＡＡＶ－１６からなる群より選択される血清型のＡＡＶカプシドタンパク質、またはそれらの誘導体、修飾物、もしくは偽型を有する。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９の血清型のＡＡＶカプシドタンパク質、またはそれらの誘導体、修飾物、もしくは偽型を有する。
「精製する（ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ）」、「精製（ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」、「分離する（ｓｅｐａｒａｔｅ）」、「分離する（ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ）」、「分離（ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）」、「単離する（ｉｓｏｌａｔｅ）」、「単離する（ｉｓｏｌａｔｉｎｇ）」、または「単離（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）」という用語は、本明細書中使用される場合、目的産物及び１種または複数の不純物を含む試料由来のｒＡＡＶ粒子の純度を上昇させることを示す。典型的には、目的産物の純度は、試料から少なくとも１種の不純物を（完全にまたは部分的に）除去することにより上昇する。実施形態によっては、試料中のｒＡＡＶの純度は、本明細書中記載される方法を使用することにより、試料から１種または複数の不純物を（完全にまたは部分的に）除去することにより上昇する。
本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から明白にそうではないと示されない限り、複数形を含む。
当然ながら、実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語を用いて本明細書中記載される場合はいつでも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」で記載されるそれ以外の類似の実施形態も提供されている。同じく当然ながら、実施形態が「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という語を用いて本明細書中記載される場合はいつでも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」で記載されるそれ以外の類似の実施形態も提供されている。
「及び／または」という用語は、例えば「Ａ及び／またはＢ」などの語句中で本明細書中使用される場合、Ａ及びＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；ならびにＢ（単独）を含むことを意図する。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句中で使用される場合、以下の実施形態のそれぞれを包含することを意図する：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
本開示の実施形態が、選択肢のマーカッシュグループまたは他のグループ分けで記載される場合、開示される方法は、列挙されるグループ全体をそのまま丸ごとでだけでなく、グループの個別の各メンバー及び主グループの全ての可能なサブグループ、ならびにグループメンバーのうち１つまたは複数が欠けている主グループも、包含する。開示される方法は、開示される方法のグループメンバーのいずれか１つまたは複数の明白な排除も構想している。
６．２ｒＡＡＶ粒子を含む製剤
実施形態によっては、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及び塩とを含む、製剤を提供する。実施形態によっては、塩は、薬学上許容される塩である。実施形態によっては、塩は、結晶化しない非晶質塩である。実施形態によっては、塩は、ナトリウム塩である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、または塩化ナトリウムである。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、または硫酸マグネシウムである。多価塩は、より高いイオン強度を有する多荷電イオン（一価の塩化ナトリウムに比べて添加された賦形剤１分子あたり）で構成されており、この塩は、結晶化を最小限に抑えながらＡＡＶ凝集を阻害することができる。そのため、組成物の非晶質マトリクスを維持する、一価の塩化ナトリウム以外の塩を含有するｒＡＡＶ配合組成物は、有用である可能性を秘めている。
６．２．１塩
実施形態によっては、塩賦形剤は、望ましいイオン強度を達成するように添加または調整される。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及び非晶質塩とを含み、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及び非晶質塩とを含み、イオン強度が２００ｍＭ超である安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及び非晶質塩とを含み、イオン強度が２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、または３００ｍＭ超である安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。
実施形態によっては、塩は、薬学上許容される塩である。実施形態によっては、塩は、結晶化しない非晶質塩である。実施形態によっては、塩は、ナトリウム塩である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、または塩化ナトリウムである。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、または硫酸マグネシウムである。実施形態によっては、塩は、多価塩であり、この塩は、より高いイオン強度を有する多荷電イオン（一価の塩化ナトリウムに比べて添加された賦形剤１分子あたり）で構成されており、結晶化を最小限に抑えながらＡＡＶ凝集を阻害することができる。
実施形態によっては、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、塩賦形剤、糖を含む安定製剤を提供する。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、安定製剤は、凍結乾燥に適している。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである非晶質塩とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が３０ｍＭ～１００ｍＭである非晶質塩とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が２００ｍＭより高い非晶質塩とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである非晶質塩、及び界面活性剤とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、イオン強度が３０ｍＭ～１００ｍＭである非晶質塩、及び界面活性剤とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに緩衝剤、糖、及びイオン強度が２００ｍＭより高い非晶質塩、及び界面活性剤とを含む、安定製剤であり、当該製剤は、凍結乾燥に適している。実施形態によっては、安定製剤は、界面活性剤も含む。実施形態によっては、安定製剤は、ポロキサマー１８８も含む。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００１％～約０．５％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％～約０．１％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００１％～約０．５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％～約０．１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．０００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００２％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００３％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００４％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約０．００８％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、塩は、薬学上許容される塩である。実施形態によっては、塩は、結晶化しない非晶質塩である。実施形態によっては、塩は、ナトリウム塩である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、または塩化ナトリウムである。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、または硫酸マグネシウムである。実施形態によっては、塩は、多価塩であり、この塩は、より高いイオン強度を有する多荷電イオン（一価の塩化ナトリウムに比べて添加された賦形剤１分子あたり）で構成されており、結晶化を最小限に抑えながらＡＡＶ凝集を阻害することができる。
実施形態によっては、塩賦形剤は、望ましいイオン強度を達成するように添加されるまたは調整される。実施形態によっては、非晶質塩は、イオン強度が約１５０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１０５ｍＭ、または約１００ｍＭ以下である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、緩衝剤イオン強度が約１５０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１０５ｍＭ、または約１００ｍＭ以下である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８粒子またはｒＡＡＶ９粒子である。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が１５０ｍＭ、１４５ｍＭ、１４０ｍＭ、１３５ｍＭ、１３０ｍＭ、１２５ｍＭ、１２０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１１０ｍＭ以下である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、緩衝剤イオン強度が１５０ｍＭ、１４５ｍＭ、１４０ｍＭ、１３５ｍＭ、１３０ｍＭ、１２５ｍＭ、１２０ｍＭ、１１５ｍＭ、または１１０ｍＭ以下である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が６０ｍＭ超である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１１５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１００ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９０ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ超である。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ～１００ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約８５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９０ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約９５ｍＭである。特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約１００ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～１１５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６５ｍＭ～９５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７０ｍＭ～９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約７５ｍＭ～８５ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３０ｍＭ～１００ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約３５ｍＭ～９５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４０ｍＭ～９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約４５ｍＭ～８５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５０ｍＭ～８０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約５５ｍＭ～７５ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約６０ｍＭ～７０ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有さない。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ９カプシドを有する。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が約２００ｍＭ超である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２カプシドを有する。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドもＡＡＶ９カプシドも有さない。
実施形態によっては、安定製剤は、イオン強度が２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、または３００ｍＭ超である。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２カプシドを有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２００ｍＭ～約２１０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２１０ｍＭ～約２２０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２２０ｍＭ～約２３０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２３０ｍＭ～約２４０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２４０ｍＭ～約２５０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２５０ｍＭ～約２６０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２６０ｍＭ～約２７０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２７０ｍＭ～約２８０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２８０ｍＭ～約２９０ｍＭである。ある特定の実施形態において、安定製剤は、イオン強度が約２９０ｍＭ～約３００ｍＭである。実施形態によっては、製剤中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドもＡＡＶ９カプシドも有さない。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭ未満の塩を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭの塩を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭの塩を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭの塩を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約６０ｍＭの塩を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２０ｍＭの塩を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約４０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約８０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約４０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２０ｍＭ～約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約３０ｍＭ～約７０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約４０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
６．２．２緩衝剤
緩衝剤は、当該分野で周知であり、緩衝剤として、特に制限なく、リン酸緩衝剤、ヒスチジン、クエン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、Ｔｒｉｓ、Ｂｉｃｉｎｅ、グリシン、Ｎ－グリシルグリシン、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、グリシルグリシン、リシン、アルギニン、リン酸ナトリウム、及びそれらの混合物が挙げられる。ある特定の実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジン（例えば、Ｌ－ヒスチジン）である。実施形態によっては、緩衝剤は、薬学上許容される緩衝剤である。実施形態によっては、緩衝剤は、Ｔｒｉｓを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭの緩衝剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭの緩衝剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約４０ｍＭの緩衝剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５ｍＭの緩衝剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約４０ｍＭのＴｒｉｓを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５ｍＭのＴｒｉｓを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、本明細書中開示される製剤に液状及び凍結状態で実質的に同じｐＨを提供することができる緩衝剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約６．５～８．０である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．０～８．０である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．２～７．８である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約６．６である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約６．８である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．０である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．２である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．３である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．４である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．５である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．６である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．７である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．８である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｐＨが約７．５である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが実質的に同じである。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが約６．５～８．０である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが約７．０～８．０である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが約７．２～７．８である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが約６．６、６．８、７．０、または７．２である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液状及び凍結状態でｐＨが約７．５である。
６．２．３糖
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、非還元糖を含む。実施形態によっては、非還元糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、またはそれらの組み合わせである。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、スクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、還元糖を含む。実施形態によっては、還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ラクトース、またはそれらの組み合わせである。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ブドウ糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、または約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約４００ｍＭ、または約３００ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭ～約３５０ｍＭの糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、または約３５０ｍＭの糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１９０ｍＭ～約２３０ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２５０ｍＭ、または約１５０ｍＭ～約２７０ｍＭの糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２１０ｍＭの糖を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約４００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約３５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約３００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約２００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭのスクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭ～約４００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１５０ｍＭ～約４００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２００ｍＭ～約４００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２５０ｍＭ～約４００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約３００ｍＭ～約４００ｍＭのスクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２００ｍＭ～約３００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２５０ｍＭ～約３５０ｍＭのスクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１６０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１７０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１８０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１９０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２１０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２２０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２３０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２４０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２６０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２７０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２８０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２９０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約３００ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約３５０ｍＭのスクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１９０ｍＭ～約２３０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１７０ｍＭ～約２５０ｍＭのスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１５０ｍＭ～約２７０ｍＭのスクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約２１０ｍＭのスクロースを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、糖及び塩を特定の比で含む。実施形態によっては、糖対塩の比は、モル比である。実施形態によっては、糖対塩のモル比は、約１、約２、約３、約５、約１０、約２０、約４０、または約６０である。実施形態によっては、糖対塩のモル比は、約５～約２０である。実施形態によっては、糖対塩のモル比は、約１０である。実施形態によっては、糖はスクロースを含み、塩はクエン酸ナトリウムを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、塩及び糖を特定の比で含む。実施形態によっては、塩対糖の比は、重量対重量（ｗ：ｗ）比である。実施形態によっては、塩対糖のｗ：ｗ比は、約３：１、約１：１、または約１：３である。実施形態によっては、塩対糖のｗ：ｗ比は、約３：１～約１：３である。実施形態によっては、塩対糖のｗ：ｗ比は、約１：１である。実施形態によっては、糖はスクロースを含み、塩はクエン酸ナトリウムを含む。
６．２．４界面活性剤
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、非イオン性界面活性剤を含む。薬学上許容される非イオン性界面活性剤として、特に制限なく、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、またはＢＲＩＪ ３５が挙げられる。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、ＢＲＩＪ ３５、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．０００１％～約０．５％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．０００５％～約０．１％の非イオン性界面活性剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．０００１％～約０．５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．０００５％～約０．１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００７％、または約０．０１％のポロキサマー１８８を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．０００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００１％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００２％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００３％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００４％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００５％のポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．００８％のポロキサマー１８８を含む。
６．２．５安定剤または可塑剤
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、可塑剤または安定剤を含む。薬学上許容される安定剤または可塑剤として、グリセロール、キシリトール、及びソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、グリセロールを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．１％～約５％の可塑剤または安定剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．１％～約２％の可塑剤または安定剤を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．２５％～約２％の可塑剤を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．１％～約５％のグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．１％～約２％のグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、さらに、約０．２５％～約２％のグリセロールを含む。
６．２．６製剤特性
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ガラス転移温度が、相応する純粋な糖溶液及び純粋な塩溶液のガラス転移温度よりも高い。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、スクロース及びクエン酸ナトリウムを含み、ガラス転移温度が、相応する純粋なスクロース及び純粋なクエン酸ナトリウム塩のガラス転移温度よりも高い。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約５０ｍＭ～約４００ｍＭのスクロース、及び約１０ｍＭ～１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬ、または約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、もしくはＡＡＶ．ＨＳＣ１６、またはそれらの組み合わせのカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８血清型、ＡＡＶ－９血清型、またはそれらの組み合わせのカプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、液剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、凍結製剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、本明細書中開示される液剤を凍結乾燥させた凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、再構築された凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、前凍結乾燥製剤である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、残存水分量が約１％～約７％である凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、残存水分量は、カールフィッシャー滴定法を用いて特定される。実施形態によっては、残存水分量は、約１％～約７％である。実施形態によっては、残存水分量は、約２％～約７％である。実施形態によっては、残存水分量は、約３％～約７％である。実施形態によっては、残存水分量は、約４％～約７％である。実施形態によっては、残存水分量は、約５％～約７％である。実施形態によっては、残存水分量は、約１％～約６％である。実施形態によっては、残存水分量は、約１％～約５％である。実施形態によっては、残存水分量は、約１％～約４％である。実施形態によっては、残存水分量は、約１％～約３％である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、残存水分量が約１％～約７％である凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、残存水分量は、約３％～約７％である。実施形態によっては、残存水分量は、約３％～約６％である。実施形態によっては、残存水分量は、約３％～約５％である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、残存水分量が約１％～約７％である凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、残存水分量は、約３％である。実施形態によっては、残存水分量は、約３．５％である。実施形態によっては、残存水分量は、約４％である。実施形態によっては、残存水分量は、約４．５％である。実施形態によっては、残存水分量は、約５％である。実施形態によっては、残存水分量は、約５．５％である。実施形態によっては、残存水分量は、約６％である。
本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約７０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約７０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約３０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約５０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約３０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約５０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で４週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で４週間貯蔵した後、少なくとも約３０％である。本明細書中開示される製剤の実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、製剤を３５℃で４週間貯蔵した後に少なくとも約５０％である。実施形態によっては、参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵される。実施形態によっては、相対効力％は、ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／５６０４２号、２０１９年１０月１４日出願、名称「ＭＥＴＨＯＤＳ ＦＯＲ ＭＥＡＳＵＲＩＮＧ ＴＨＥ ＩＮＦＥＣＴＩＶＩＴＹ ＯＦ ＲＥＰＬＩＣＡＴＩＯＮ ＤＥＦＥＣＴＩＶＥ ＶＩＲＡＬ ＶＥＣＴＯＲＳ ＡＮＤ ＶＩＲＵＳＥＳ」に開示されるとおりに特定され、この出願は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、製剤は、前凍結乾燥された製剤である。実施形態によっては、製剤は、液剤である。実施形態によっては、は、ｒＡＡＶ粒子と、ならびに約１ｍＭ～約２５ｍＭのＴｒｉｓ、約５０ｍＭ～約４００ｍＭのスクロース、約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤とを含み、当該製剤は、ｐＨが約７．２～約７．８である。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｒＡＡＶ粒子と、ならびに約１ｍＭ～約２５ｍＭの緩衝剤、約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖、約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤とを含み、当該製剤は、ｐＨが約７．２～約７．８である。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含み、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含み、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８を含み、製剤はさらに可塑剤（例えば、約０．１％～約２％のグリセロール）を含む。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、製剤は、液剤である。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ－８、ｒＡＡＶ－９、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｒＡＡＶ粒子と、ならびに約２ｍＭ～約１０ｍＭの緩衝剤、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの糖、約１０ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び約０．００１％～約０．００５％の非イオン性界面活性剤とを含み、当該製剤は、ｐＨが約７．２～約７．８である。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含み、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含み、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８を含み、製剤はさらに可塑剤（例えば、約０．１％～約２％のグリセロール）を含む。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、製剤は、液剤である。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ－８、ｒＡＡＶ－９、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、製剤約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、ｒＡＡＶ粒子と、ならびに約５ｍＭの緩衝剤、約２１０ｍＭの糖、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び約０．００２％の非イオン性界面活性剤とを含み、当該製剤は、ｐＨが約７．５である。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含み、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８を含む。実施形態によっては、緩衝剤はＴｒｉｓを含み、糖はスクロースを含み、非イオン性界面活性剤はポロキサマー１８８を含み、製剤はさらに可塑剤（例えば、約０．１％～約２％のグリセロール）を含む。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、製剤は、液剤である。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ－８、ｒＡＡＶ－９、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、製剤は、約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む。
本明細書中開示される製剤は、任意のＡＡＶカプシド血清型由来のカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶ粒子を含むことができる。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６由来のカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、もしくはＡＡＶ．ＨＳＣ１６カプシドタンパク質の誘導体、修飾物、または偽型であるカプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８及びＡＡＶ－９から選択されるＡＡＶカプシド血清型に由来するカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８のＡＡＶカプシド血清型を有する。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９のＡＡＶカプシド血清型を有する。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９カプシドタンパク質の誘導体、修飾物、または偽型であるカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８カプシドタンパク質のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるＡＡＶ－８カプシドタンパク質を有する、カプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子組成物は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質の誘導体、修飾物、または偽型であるカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、供給組成物中のｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるＡＡＶ－９カプシドタンパク質を有する、カプシドタンパク質を含む。
さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、モザイクカプシドを含む。さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、偽型ｒＡＡＶ粒子を含む。さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、２種以上のＡＡＶカプシド血清型のキメラカプシドタンパク質を含むカプシドを含む。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、薬学上許容されるキャリアを含む安定製剤である。
本明細書中使用される場合、「薬学上許容される」という用語は、生物学的に許容される製剤、その気体、液体、もしくは固体、または混合物であって、投与、ｉｎ ｖｉｖｏ送達、または接触を行う１種または複数の経路に適しているものを意味する。「薬学上許容される」組成物とは、生物学的にもそれ以外でも望ましくないところがない材料であり、例えば、そのような材料は、実質的に望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、対象に投与することができる。すなわち、そのような安定製剤は、例えば、本開示の方法に従って単離されたｒＡＡＶを対象に投与するのに使用することができる。補充活性化合物（例えば、保存剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、及び抗真菌剤）を組成物に組み込むことができる。医薬組成物は、本明細書中記述されるとおりまたは当業者に既知であるとおり、特定経路の投与または送達に適合性があるように製剤化することができる。したがって、医薬組成物は、様々な経路での投与に適した、キャリア、希釈剤、または賦形剤を含む。本発明のｒＡＡＶ粒子及び方法ならびに使用に適切な医薬組成物及び送達は、当該分野で既知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ （２００３） ２０ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （１９９０） １８ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．；Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ （１９９６） １２ｔｈ ｅｄ．， Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ， Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ， Ｎ．Ｊ．；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｓｏｌｉｄ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ （１９９３）， Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｉｎｃ．， Ｌａｎｃａｓｔｅｒ， Ｐａ．；Ａｎｓｅｌ ａｎｄ Ｓｔｏｋｌｏｓａ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ （２００１） １１ｔｈ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｍｄ．；及びＰｏｚｎａｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ （１９８０）， Ｒ． Ｌ． Ｊｕｌｉａｎｏ， ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ， Ｎ．Ｙ．， ｐｐ．２５３－３１５を参照）。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、既知の方法による投与用の、そのような製剤を必要としている患者に投与するのに適している薬学上許容される組成物であり、既知の方法とは、例えば、静脈内投与（例えば、ボーラスとして、またはある長さの時間にわたる持続点滴による）、あるいは筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、外用、または吸入経路によるものである。実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、全身投与または局所投与に適している。全身投与として、特に制限なく、経口、真皮下、腹腔内、皮下、経鼻、舌下、または直腸経路の投与が挙げられる。局所投与として、特に制限なく、外用、皮下、筋肉内、網膜下、くも膜下腔内、及び腹腔内経路の投与が挙げられる。
実施形態によっては、本明細書中開示される製剤は、医薬単位用量である。「単位用量」は、治療される対象に単位投薬するのに適した物理的に離散した単位を示し、各単位は、あらかじめ決められた量を、任意選択で医薬キャリア（賦形剤、希釈剤、ビヒクル、または充填剤）とともに含有し、この量は、１回または複数回用量で投与される場合に、所望の効果（例えば、予防効果または治療効果）をもたらすように計算されている。単位剤形は、例えば、アンプル及びバイアルに入っている場合があり、アンプル及びバイアルは、液体組成物、または凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）もしくは凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）状態の組成物を含む場合があり、例えば、滅菌液体キャリアを、投与またはｉｎ ｖｉｖｏ送達前に加えることができる。個別の単位剤形は、複数回用量キットまたは容器に入れることができる。組換えベクター（例えば、ＡＡＶ）配列、プラスミド、ベクターゲノム、及び組換えウイルス粒子、ならびにそれらの医薬組成物は、投与の簡便さ及び投薬の均一性を目的として、一回または複数回の単位剤形でパッケージ化することができる。実施形態によっては、組成物は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６由来のＡＡＶカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、ＡＡＶカプシド血清型は、ＡＡＶ－８である。実施形態によっては、ＡＡＶカプシド血清型は、ＡＡＶ－９である。
実施形態によっては、本開示は、本明細書中開示される組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む製剤の製造法を提供し、本方法は、ｒＡＡＶ粒子を、本明細書中開示される製剤の緩衝剤、糖、塩、任意選択で可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤と混合し、それによりｒＡＡＶを含む前記製剤を製造することを含む。製剤の各成分を混合して製剤を製造する方法は、当業者に既知である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．２５％（ｗ／ｖ）のグリセロールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
ｅ）約０．５％（ｗ／ｖ）ソルビトールと
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
ｂ）約３０ｍＭの硫酸ナトリウム、
ｃ）約２６３ｍＭのスクロース、及び
ｄ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
を含む、安定製剤である。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、マンニトールを含まない。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、１５０ｍＭ、１４０ｍＭ、１３０ｍＭ、１２０ｍＭ、１１０ｍＭ、１００ｍＭ、９０ｍＭ、８０ｍＭ、７０ｍＭ、６０ｍＭ、５０ｍＭ、４０ｍＭ、３０ｍＭ、２０ｍＭ、または１０ｍＭ未満のマンニトールを含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２１０ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２６３ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約４０９ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約１４．６ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約４５ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約０ｍＭ～約２０ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約５０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約２００ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約３００ｍＭ～約４００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約４００ｍＭ～約５００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約５００ｍＭ～約６００ｍＭの濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、スクロースを約６００ｍＭ～約７００ｍＭの濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．２５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．１０％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０％～約０．１０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．１０％～約０．２０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．２０％～約０．３０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．３０％～約０．４０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．４０％～約０．５０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．５０％～約０．６０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．６０％～約０．７０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．７０％～約０．８０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．８０％～約０．９０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ソルビトールを約０．９０％～約１．００％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．２５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．１０％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０％～約０．１０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．１０％～約０．２０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．２０％～約０．３０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．３０％～約０．４０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．４０％～約０．５０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．５０％～約０．６０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．６０％～約０．７０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．７０％～約０．８０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．８０％～約０．９０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、グリセロールを約０．９０％～約１．００％の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００２％（重量／体積、０．０２ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）～約０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００１％（重量／体積、０．００１ｇ／Ｌ）～約０．０１％（重量／体積、０．１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）～約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）～約０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００６％（重量／体積、０．００６ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００７％（重量／体積、０．００７ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００８％（重量／体積、０．００８ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０００９％（重量／体積、０．００９ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００２％（重量／体積、０．０２ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００３％（重量／体積、０．０３ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００４％（重量／体積、０．０４ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０１％（重量／体積、０．１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態において、安定製剤は、ポロキサマー１８８を約０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。
ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．４である。
ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．０～８．８である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．０～９．０である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．０である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．１である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．２である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．３である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．４である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．５である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．６である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．７である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．８である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約６．９である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．０である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．１である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．２である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．３である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．４である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．５である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．６である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．７である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．８である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．９である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．０である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．１である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．２である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．３である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．４である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．５である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．６である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．７である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．８である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約８．９である。ある特定の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約９．０である。
ある特定の実施形態において、安定製剤のベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、４×１０９ＧＣ／ｍＬ、５×１０９ＧＣ／ｍＬ、６×１０９ＧＣ／ｍＬ、７×１０９ＧＣ／ｍＬ、８×１０９ＧＣ／ｍＬ、９×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、または約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである。
６．３ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法を提供し、本方法は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本方法では、３回の凍結融解サイクル後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法は、さらに、製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約５％にすることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法を提供し、本方法は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本方法では、凍結乾燥及び再構築後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法は、さらに、製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約５％にすることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法を提供し、本方法は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本方法では、３回の凍結融解サイクル後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含み、可塑剤はグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法は、さらに、製剤を凍結乾燥させることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法を提供し、本方法は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本方法では、凍結乾燥及び再構築後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含み、可塑剤はグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法は、さらに、製剤を凍結乾燥させることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用を提供し、本使用は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本使用では、３回の凍結融解サイクル後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用は、さらに、製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約７％にすることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用を提供し、本使用は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本使用では、凍結乾燥及び再構築後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用は、さらに、製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約７％にすることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用を提供し、本使用は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本使用では、３回の凍結融解サイクル後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含み、可塑剤はグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用は、さらに、製剤を凍結乾燥させることを含む。
実施形態によっては、本開示は、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用を提供し、本使用は、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む本明細書中開示される製剤を製造することを含み、本使用では、凍結乾燥及び再構築後のｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している。実施形態によっては、製剤は、凍結製剤である。実施形態によっては、製剤は、凍結乾燥製剤である。実施形態によっては、塩は、クエン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含む。実施形態によっては、塩はクエン酸ナトリウムを含み、糖はスクロースを含み、可塑剤はグリセロールを含む。実施形態によっては、本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用は、さらに、製剤を凍結乾燥させることを含む。
本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法またはｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための化合物の使用の実施形態によっては、ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される。実施形態によっては、ＤＮＡ特異的蛍光染色は、ＳＹＢＲ金である。
本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法またはｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための化合物の使用の実施形態によっては、凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、または９０％減少している。実施形態によっては、凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約２０％減少している。実施形態によっては、凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約５０％減少している。実施形態によっては、凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約８０％減少している。実施形態によっては、凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、実質的に排除されている。
本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法またはｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための化合物の使用の実施形態によっては、糖は、非還元糖である。実施形態によっては、非還元糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、またはそれらの組み合わせである。実施形態によっては、非還元糖は、スクロースである。
本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法またはｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための化合物の使用の実施形態によっては、糖は、還元糖である。実施形態によっては、還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ラクトース、またはそれらの組み合わせである。実施形態によっては、還元糖は、ブドウ糖である。
本明細書中開示されるｒＡＡＶゲノム放出を減少させる方法またはｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための化合物の使用の実施形態によっては、可塑剤はグリセロール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、またはそれらの組み合わせを含む。実施形態によっては、可塑剤は、グリセロールである。
６．４ｒＡＡＶ粒子
提供される製剤は、任意の単離組換えＡＡＶ粒子を含むのに適しているとともに、任意の単離組換えＡＡＶ粒子の投与を含む、疾患または障害の治療を必要としている対象における疾患または障害の治療法に使用するのに適している。また、提供される方法は、任意の単離組換えＡＡＶ粒子を製剤化するのに適しているとともに、任意の単離組換えＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるのに適している。そのため、ｒＡＡＶは、任意の血清型、当該分野で既知であるそれらの修飾物または誘導体、あるいは当該分野で既知であるそれらの任意の組み合わせ（例えば、２種以上の血清型を含むｒＡＡＶ粒子集団、例えば、ｒＡＡＶ２粒子、ｒＡＡＶ８粒子、及びｒＡＡＶ９粒子のうち２種以上を含むもの）のものが可能である。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、もしくはＡＡＶ．ＨＳＣ１６、または他のｒＡＡＶ粒子、あるいはそれらの２種以上の組み合わせである。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶ血清型由来のカプシドタンパク質、あるいはそれらの誘導体、修飾物、または偽型を有する。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶカプシド血清型のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して、少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるカプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶカプシド血清型由来のカプシドタンパク質、あるいはそれらの誘導体、修飾物、または偽型を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶカプシド血清型のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるカプシドタンパク質を含む。
ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、Ｚｉｎｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１５， Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ． １２（６）： １０５６－１０６８に記載されるとおりのＡｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５を含み、この文献は、そのまま全体が参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、米国特許第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号、及び同第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載のとおりのＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰというアミノ酸挿入のうち１つを含み、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、米国特許第９，１９３，９５６号、同第９，４５８，５１７号、及び同第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載のとおりのＡＡＶ．７ｍ８を含み、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、米国特許第９，５８５，９７１号に開示されるいずれかのＡＡＶ、例えばＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂを含む。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は米国特許第９，８４０，７１９号及びＷＯ ２０１５／０１３３１３に開示されるいずれかのＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ．Ｒｈ７４及びＲＨＭ４－１を含み、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、ＷＯ ２０１４／１７２６６９に開示されるいずれかのＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ ｒｈ．７４を含み、この文献は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、Ｇｅｏｒｇｉａｄｉｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１６， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２３： ８５７－８６２及びＧｅｏｒｇｉａｄｉｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２５： ４５０に記載されるとおりのＡＡＶ２／５を含み、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、ＷＯ ２０１７／０７０４９１に開示されるいずれかのＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ２ｔＹＦを含み、この文献は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、Ｐｕｚｚｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１７， Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ２９（９）： ４１８に記載されるとおりのＡＡＶＬＫ０３またはＡＡＶ３Ｂを含み、この文献は、そのまま全体が参照として援用される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、米国特許第８，６２８，９６６号、同第８，９２７，５１４号、同第９，９２３，１２０号、及びＷＯ ２０１６／０４９２３０に開示されるいずれかのＡＡＶ、例えば、ＨＳＣ１、ＨＳＣ２、ＨＳＣ３、ＨＳＣ４、ＨＳＣ５、ＨＳＣ６、ＨＳＣ７、ＨＳＣ８、ＨＳＣ９、ＨＳＣ１０、ＨＳＣ１１、ＨＳＣ１２、ＨＳＣ１３、ＨＳＣ１４、ＨＳＣ１５、またはＨＳＣ１６を含み、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が参照として援用される。
ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、以下の特許及び特許出願のいずれかに開示されるＡＡＶを含み、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される：米国特許第７，２８２，１９９号、同第７，９０６，１１１号、同第８，５２４，４４６号、同第８，９９９，６７８号、同第８，６２８，９６６号、同第８，９２７，５１４号、同第８，７３４，８０９号、同第９，２８４，３５７号、同第９，４０９，９５３号、同第９，１６９，２９９号、同第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号，及び同第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、同第２０１５／０１２６５８８号、同第２０１７／００６７９０８号、同第２０１３／０２２４８３６号、同第２０１６／０２１５０２４号、同第２０１７／００５１２５７号、ならびに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９号、同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５号。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、以下の特許及び特許出願のいずれかに開示されるＡＡＶカプシドのＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるカプシドタンパク質を有し、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される：米国特許第７，２８２，１９９号、同第７，９０６，１１１号、同第８，５２４，４４６号、同第８，９９９，６７８号、同第８，６２８，９６６号、同第８，９２７，５１４号、同第８，７３４，８０９号、同第９，２８４，３５７号、同第９，４０９，９５３号、同第９，１６９，２９９号、同第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号，及び同第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、同第２０１５／０１２６５８８号、同第２０１７／００６７９０８号、同第２０１３／０２２４８３６号、同第２０１６／０２１５０２４号、同第２０１７／００５１２５７号、ならびに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９号、同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５号。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、国際出願公開ＷＯ ２００３／０５２０５１（例えば、配列番号２を参照）、ＷＯ ２００５／０３３３２１（例えば、配列番号１２３及び８８を参照）、ＷＯ ０３／０４２３９７（例えば、配列番号２、８１、８５、及び９７を参照）、ＷＯ ２００６／０６８８８８（例えば、配列番号１及び３～６を参照）、ＷＯ ２００６／１１０６８９、（例えば、配列番号５～３８を参照）、ＷＯ ２００９／１０４９６４（例えば、配列番号１～５、７、９、２０、２２、２４、及び３１を参照）、ＷＯ ２０１０／１２７０９７（例えば、配列番号５～３８を参照）、及びＷＯ ２０１５／１９１５０８（例えば、配列番号８０～２９４を参照）、ならびに米国出願公開第２０１５００２３９２４号（例えば、配列番号１、５～１０を参照）に開示されるカプシドタンパク質を有し、これら文献それぞれの内容は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、国際出願公開ＷＯ ２００３／０５２０５１（例えば、配列番号２を参照）、ＷＯ ２００５／０３３３２１（例えば、配列番号１２３及び８８を参照）、ＷＯ ０３／０４２３９７（例えば、配列番号２、８１、８５、及び９７を参照）、ＷＯ ２００６／０６８８８８（例えば、配列番号１及び３～６を参照）、ＷＯ ２００６／１１０６８９（例えば、配列番号５～３８を参照）、ＷＯ ２００９／１０４９６４（例えば、配列番号１～５、７、９、２０、２２、２４、及び３１を参照）、ＷＯ ２０１０／１２７０９７（例えば、配列番号５～３８を参照）、及びＷＯ ２０１５／１９１５０８（例えば、配列番号８０～２９４を参照）、ならびに米国出願公開第２０１５００２３９２４号（例えば、配列番号１、５～１０を参照）に開示されるＡＡＶカプシドのＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して、少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるカプシドタンパク質を有する。
ＡＡＶに基づくウイルスベクターの核酸配列、ならびに組換えＡＡＶ及びＡＡＶカプシドの作製法は、例えば、米国特許第７，２８２，１９９号、同第７，９０６，１１１号、同第８，５２４，４４６号、同第８，９９９，６７８号、同第８，６２８，９６６号、同第８，９２７，５１４号、同第８，７３４，８０９号、同第９，２８４，３５７号、同第９，４０９，９５３号、同第９，１６９，２９９号、同第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号，及び同第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、同第２０１５／０１２６５８８号、同第２０１７／００６７９０８号、同第２０１３／０２２４８３６号、同第２０１６／０２１５０２４号、同第２０１７／００５１２５７号、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９号、同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５号、ＷＯ ２００３／０５２０５１、ＷＯ ２００５／０３３３２１、ＷＯ ０３／０４２３９７、ＷＯ ２００６／０６８８８８、ＷＯ ２００６／１１０６８９、ＷＯ ２００９／１０４９６４、ＷＯ ２０１０／１２７０９７、及びＷＯ ２０１５／１９１５０８、ならびに米国出願公開第２０１５００２３９２４号に教示されている。
提供される方法は、導入遺伝子をコードする組換えＡＡＶの製造で使用するのに適している。実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、抗ＶＥＧＦ ＦａｂをコードするＡＡＶウイルスベクターである。特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、抗ＶＥＧＦ ＦａｂをコードするＡＡＶ８を利用したウイルスベクターである。より具体的な実施形態において、本明細書中提供されるのは、ラニビズマブをコードするＡＡＶ８を利用したウイルスベクターである。実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）をコードするＡＡＶウイルスベクターである。特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、ＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９を利用したウイルスベクターである。実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）をコードするＡＡＶウイルスベクターである。特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、ＩＤＳをコードするＡＡＶ９を利用したウイルスベクターである。実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）をコードするＡＡＶウイルスベクターである。特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、ＬＤＬＲをコードするＡＡＶ８を利用したウイルスベクターである。実施形態によっては、本明細書中提供されるのは、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）タンパク質をコードするＡＡＶウイルスベクターである。特定の実施形態において、本明細書中提供されるのは、ＴＰＰをコードするＡＡＶ９を利用したウイルスベクターである。
さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、偽型ｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、偽型ＡＡＶは、ｒＡＡＶ２／８またはｒＡＡＶ２／９の偽型ＡＡＶである。偽型ｒＡＡＶ粒子の製造法及び使用法は、当該分野で既知である（例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７５：７６６２－７６７１ （２００１）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７４：１５２４－１５３２ （２０００）；Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８：１５８－１６７ （２００２）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ｍｏｌｅｃ． Ｇｅｎｅｔ． １０：３０７５－３０８１， （２００１）を参照）。
さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、２種以上のＡＡＶカプシド血清型のキメラカプシドタンパク質を含むカプシドを含む。実施形態によっては、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶ血清型由来の２種以上のＡＡＶカプシドタンパク質のキメラである。
ある特定の実施形態において、一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）を使用することができる。ある特定の実施形態において、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用することができる（例えば、Ｗｕ， ２００７， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， １８（２）：１７１－８２， ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ， ２００１， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｖｏｌ． ８， Ｎｕｍｂｅｒ １６， Ｐａｇｅｓ １２４８－１２５４；ならびに米国特許第６，５９６，５３５号、同第７，１２５，７１７号、及び同第７，４５６，６８３号を参照、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される）。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶ血清型由来のカプシドタンパク質、あるいはその誘導体、修飾物、または偽型を有する。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶカプシド血清型のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して、少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一である、カプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９から選択されるＡＡＶカプシド血清型由来のカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８のＡＡＶカプシド血清型を有する。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９のＡＡＶカプシド血清型を有する。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９カプシドタンパク質の誘導体、修飾物、または偽型であるカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８カプシドタンパク質のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して、少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるＡＡＶ－８カプシドタンパク質を有する、カプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質の誘導体、修飾物、または偽型であるカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質のＶＰ１、ＶＰ２、及び／またはＶＰ３配列に対して、少なくとも８０％以上同一である、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち最大１００％同一であるＡＡＶ－９カプシドタンパク質を有する、カプシドタンパク質を含む。
さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、モザイクカプシドを含む。モザイクＡＡＶ粒子は、異なる血清型のＡＡＶに由来するウイルスカプシドタンパク質の混合物で構成される。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ｒＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５、及びＡＡＶ－１６から選択される血清型のカプシドタンパク質を含むモザイクカプシドを含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶｒｈ．８、及びＡＡＶｒｈ．１０から選択される血清型のカプシドタンパク質を含むモザイクカプシドを含む。
さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、偽型ｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、偽型ｒＡＡＶ粒子は、（ａ）ＡＡＶ ＩＴＲを含む核酸ベクター、及び（ｂ）ＡＡＶｘ（例えば、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５、及びＡＡＶ－１６）に由来するカプシドタンパク質で構成されたカプシド、を含む。さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶ血清型のカプシドタンパク質で構成される偽型ｒＡＡＶ粒子を含む。さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８カプシドタンパク質を含む偽型ｒＡＡＶ粒子を含む。さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質で構成される偽型ｒＡＡＶ粒子を含む。実施形態によっては、偽型ｒＡＡＶ８またはｒＡＡＶ９粒子は、ｒＡＡＶ２／８またはｒＡＡＶ２／９偽型粒子である。偽型ｒＡＡＶ粒子の製造法及び使用法は、当該分野で既知である（例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７５：７６６２－７６７１ （２００１）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７４：１５２４－１５３２ （２０００）；Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８：１５８－１６７ （２００２）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ｍｏｌｅｃ． Ｇｅｎｅｔ． １０：３０７５－３０８１， （２００１）を参照）。
さらなる実施形態において、ｒＡＡＶ粒子は、２種以上のＡＡＶカプシド血清型のキメラであるカプシドタンパク質を含むカプシドを含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８カプシドタンパク質と、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択されるＡＡＶ血清型由来の１種または複数のＡＡＶカプシドタンパク質とのキメラであるＡＡＶカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８カプシドタンパク質と、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ｒＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ．８、及びＡＡＶｒｈ．１０から選択されるＡＡＶ血清型由来の１種または複数のＡＡＶカプシドタンパク質とのキメラであるＡＡＶカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質と、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択される１種または複数のＡＡＶカプシド血清型のカプシドタンパク質とのキメラであるＡＡＶカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９カプシドタンパク質と、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ．８、及びＡＡＶｒｈ．１０から選択される１種または複数のＡＡＶカプシド血清型のカプシドタンパク質とのキメラであるＡＡＶカプシドタンパク質を含む。
６．５ｒＡＡＶ粒子の単離法
実施形態によっては、本開示は、本明細書中開示される単離組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む製剤の製造法を提供し、本方法は、（ａ）不純物（例えば、ｒＡＡＶ産生培養物）を含む供給物からｒＡＡＶ粒子を単離すること、及び（ｂ）単離したｒＡＡＶ粒子を、本明細書中開示される方法を使用して製剤化し、製剤を製造すること、を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される単離組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む製剤の製造法は、（ａ）不純物（例えば、ｒＡＡＶ産生培養物）を含む供給物からｒＡＡＶ粒子を単離すること、（ｂ）単離したｒＡＡＶ粒子のゲノム力価を特定すること、及び（ｃ）単離したｒＡＡＶ粒子を、本明細書中開示される方法を使用して製剤化し、製剤を製造すること、を含む。
実施形態によっては、本開示は、さらに、本明細書中開示される単離組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む製剤の医薬単位剤形を製造する方法を提供し、本方法は、不純物（例えば、ｒＡＡＶ産生培養物）を含む供給物からｒＡＡＶ粒子を単離すること、単離したｒＡＡＶ粒子のゲノム力価を特定すること、及び単離したｒＡＡＶ粒子を、本明細書中開示される方法を使用して製剤化すること、を含む。実施形態によっては、本明細書中開示される単離組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む製剤の医薬単位剤形を製造する方法は、不純物（例えば、ｒＡＡＶ産生培養物）を含む供給物からｒＡＡＶ粒子を単離すること、及び単離したｒＡＡＶ粒子を、本明細書中開示される方法を使用して製剤化すること、を含む。
単離されたｒＡＡＶ粒子は、当該分野で既知である方法を用いて単離されたものであることが可能である。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の単離法は、下流処理、例えば、細胞培養物の収集、収集した細胞培養物の清澄化（例えば、遠心または深層濾過による）、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、滅菌濾過、またはそれらの任意の組み合わせ（複数可）を含む。実施形態によっては、下流処理は、以下のうち少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む：細胞培養物の収集、収集した細胞培養物の清澄化（例えば、遠心または深層濾過による）、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、及び滅菌濾過。実施形態によっては、下流処理は、細胞培養物の収集、収集した細胞培養物の清澄化（例えば、深層濾過による）、滅菌濾過、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーを含む。実施形態によっては、下流処理は、収集した細胞培養物の清澄化、滅菌濾過、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーを含む。実施形態によっては、下流処理は、収集した細胞培養物の深層濾過による清澄化、滅菌濾過、タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーを含む。実施形態によっては、収集した細胞培養物の清澄化は、滅菌濾過を含む。実施形態によっては、下流処理は、遠心を含まない。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８血清型のカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の単離法は、細胞培養物の収集、収集した細胞培養物の清澄化（例えば、深層濾過による）、第一滅菌濾過、第一タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー、第二タンジェンシャルフロー濾過、及び第二滅菌濾過を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の単離法は、収集した細胞培養物の清澄化、第一滅菌濾過、第一タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー、第二タンジェンシャルフロー濾過、及び第二滅菌濾過を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の単離法は、収集した細胞培養物の深層濾過による清澄化、第一滅菌濾過、第一タンジェンシャルフロー濾過、アフィニティークロマトグラフィー、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー、第二タンジェンシャルフロー濾過、及び第二滅菌濾過を含む。実施形態によっては、本方法は、遠心を含まない。実施形態によっては、収集した細胞培養物の清澄化は、滅菌濾過を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８血清型のカプシドタンパク質を含む。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む。
ｒＡＡＶ粒子の製造に関して多数の方法が当該分野で既知であり、そのような方法として、形質移入、安定細胞株の産生、ならびにアデノウイルス－ＡＡＶハイブリッド、ヘルペスウイルス－ＡＡＶハイブリッド、及びバキュロウイルス－ＡＡＶハイブリッドをはじめとする感染性ハイブリッドウイルス産生システムが挙げられる。ｒＡＡＶウイルス粒子産生のためのｒＡＡＶ産生培養物は全て、以下を必要とする；（１）安定宿主細胞、そのような細胞として、例えば、ＨｅＬａ、Ａ５４９、またはＨＥＫ２９３細胞及びそれらの誘導体（ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞）などのヒト由来細胞株、Ｖｅｒｏなどの哺乳類細胞株、またはバキュロウイルス産生システムの場合のＳＦ－９などの昆虫由来細胞株；（２）適切なヘルパーウイルス機能、これは、野生型または変異型のアデノウイルス（例えば温度感受性アデノウイルス）、ヘルペスウイルス、バキュロウイルス、またはヘルパー機能を提供するプラスミド構築物により提供される；（３）ＡＡＶのｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子、ならびに遺伝子産物；（４）ＡＡＶ ＩＴＲ配列に挟まれた導入遺伝子（例えば、治療用導入遺伝子）；ならびに（５）ｒＡＡＶ産生を支援する適切な培地及び培地成分。当該分野で既知である適切な培地を、ｒＡＡＶベクターの産生に使用することができる。こうした培地として、特に制限なく、改変イーグル培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）をはじめとするＨｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ及びＪＲＨ製の培地、ならびに米国特許第６，７２３，５５１号に記載されるとおりのＳｆ－９００ ＩＩ ＳＦＭ培地が挙げられ、米国特許第６，７２３，５５１号はそのまま全体が本明細書中参照として援用される。
ｒＡＡＶ産生培養物は、利用される特定の宿主細胞に適切な様々な条件下（広い温度範囲にわたり、時間の長さを変化させながら、など）、定法で成長させることができる。当該分野で既知であるとおり、ｒＡＡＶ産生培養物として、付着依存性培養物が挙げられ、この培養物は、適切な付着依存性容器、例えば、ローラーボトル、中空繊維フィルター、マイクロキャリア、及び充填床または流動床バイオリアクターなどにおいて培養することができる。ｒＡＡＶベクター産生培養物として、浮遊培養に適した宿主細胞、例えば、ＨｅＬａ、ＨＥＫ２９３、Ｖｅｒｏ、及びその誘導体など、ならびにＳＦ－９細胞も挙げることができ、これら細胞は、さまざまなやり方で培養することができ、例えば、スピナーフラスコ、撹拌槽バイオリアクター、及びＷａｖｅバッグシステムなどの使い捨てシステムが挙げられる。ｒＡＡＶ粒子の産生に関して多数の浮遊培養物が、当該分野で既知であり、そのような培養物として、例えば、米国特許第６，９９５，００６号、同第９，７８３，８２６号、及び米国特許出願公開第２０１２０１２２１５５号に開示される培養物が挙げられ、これら文献はそれぞれ、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の産生法は、ｒＡＡＶを産生することができる細胞を含む細胞培養物を用意すること；細胞培養物に、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を最終濃度約０．１ｍＭ～約２０ｍＭで加えること；及び、細胞培養物を、ｒＡＡＶ粒子の産生が許容される条件下に維持すること、を包含する。実施形態によっては、ＨＤＡＣ阻害剤は、短鎖脂肪酸またはその塩を含む。実施形態によっては、ＨＤＡＣ阻害剤は、酪酸塩（例えば、酪酸ナトリウム）、バルプロ酸塩（例えば、バルプロ酸ナトリウム）、プロピオン酸塩（例えば、プロピオン酸ナトリウム）、またはそれらの組み合わせを含む。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、米国ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０２０／０３３８４２号、２０２０年２月１３日公開、名称「ＳＣＡＬＡＢＬＥ ＭＥＴＨＯＤ ＦＯＲ ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴ ＡＡＶ ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ」に開示されるとおりに産生され、この文献は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。
組換えＡＡＶ粒子は、宿主細胞を含む産生培養物の収集により、または産生培養物からの使用済み培地の収集により、ｒＡＶＶ産生培養物から収集することができるが、ただし培地を収集する場合、細胞は、インタクト宿主細胞から培地へのｒＡＡＶ粒子の放出を引き起こすことが当該分野で既知である条件下で培養されていることが条件である。組換えＡＡＶ粒子は、産生培養物の宿主細胞の溶解により、ｒＡＶＶ産生培養物から収集することもできる。細胞を溶解させる適切な方法は、当該分野で既知であり、そのような方法として、例えば、複数回の凍結融解サイクル、超音波処理、マイクロ流体化、ならびに界面活性剤及び／またはプロテアーゼなどの化学物質を用いた処理が挙げられる。
収集時、ｒＡＡＶ産生培養物は、以下のうち１種または複数を含有している可能性がある：（１）宿主細胞タンパク質、（２）宿主細胞ＤＮＡ、（３）プラスミドＤＮＡ、（４）ヘルパーウイルス、（５）ヘルパーウイルスタンパク質、（６）ヘルパーウイルスＤＮＡ、及び（７）培地成分、培地成分には、例えば、血清タンパク質、アミノ酸、トランスフェリン、及び他の低分子量タンパク質が含まれる。ｒＡＡＶ産生培養物は、さらに、産物関連不純物、例えば、不活性型ベクター、空のウイルスカプシド、凝集したウイルス粒子またはカプシド、誤って折り畳まれたウイルスカプシド、分解したウイルス粒子を含有する可能性がある。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ産生培養収集物は、清澄化されて、宿主細胞デブリが除去される。実施形態によっては、産生培養収集物は、一連の深層濾過フィルターでの濾過により清澄化される。清澄化は、当該分野で既知である様々な他の標準技法、例えば、遠心または当該分野で既知である孔径０．２ｍｍ以上の任意の酢酸セルロースフィルターでの濾過により達成することもできる。実施形態によっては、収集した細胞培養物の清澄化は、滅菌濾過を含む。実施形態によっては、産生培養収集物は、遠心により清澄化される。実施形態によっては、細胞培養物の清澄化は、遠心を含まない。
実施形態によっては、収集された細胞培養物は、濾過を用いて清澄化される。実施形態によっては、収集した細胞培養物の清澄化は、深層濾過を含む。実施形態によっては、収集した細胞培養物の清澄化は、さらに、深層濾過及び滅菌濾過を含む。実施形態によっては、収集した細胞培養物は、１種または複数の異なる濾過媒体を含むフィルター列車（ｆｉｌｔｅｒ ｔｒａｉｎ）を用いて清澄化される。実施形態によっては、フィルター列車は、深層濾過媒体を含む。実施形態によっては、フィルター列車は、１つまたは複数の深層濾過媒体を含む。実施形態によっては、フィルター列車は、２つの深層濾過媒体を含む。実施形態によっては、フィルター列車は、滅菌濾過媒体を含む。実施形態によっては、フィルター列車は、２つの深層濾過媒体及び滅菌濾過媒体を含む。実施形態によっては、深層濾過フィルター媒体は、多孔質深層濾過フィルターである。実施形態によっては、フィルター列車は、Ｃｌａｒｉｓｏｌｖｅ（登録商標）２０ＭＳ、Ｍｉｌｌｉｓｔａｋ＋（登録商標）Ｃ０ＨＣ、及び滅菌グレードのフィルター媒体を含む。実施形態によっては、フィルター列車は、Ｃｌａｒｉｓｏｌｖｅ（登録商標）２０ＭＳ、Ｍｉｌｌｉｓｔａｋ＋（登録商標）Ｃ０ＨＣ、及びＳａｒｔｏｐｏｒｅ（登録商標）２ ＸＬＧ ０．２μｍを含む。実施形態によっては、収集した細胞培養物を、前処理してから、深層濾過フィルターと接触させる。実施形態によっては、前処理は、収集した細胞培養物に塩を加えることを含む。実施形態によっては、前処理は、収集した細胞培養物に化学凝集剤を加えることを含む。実施形態によっては、収集した細胞培養物は、深層濾過フィルターと接触させる前に、前処理されない。
実施形態によっては、産生培養収集物は、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１９２１２９２１Ａ１号、２０１９年１１月８日公開、名称「ＳＣＡＬＡＢＬＥ ＣＬＡＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＰＲＯＣＥＳＳ ＦＯＲ ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴ ＡＡＶ ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ」に開示される濾過により清澄化され、この文献は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ産生培養収集物は、ヌクレアーゼ（例えば、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標））またはエンドヌクレアーゼ（例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ由来エンドヌクレアーゼ）で処理されて、産生培養物中に存在する高分子量ＤＮＡが消化される。ヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼ消化は、当該分野で既知である標準条件下、定法で行うことができる。例えば、ヌクレアーゼ消化は、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標）の最終濃度１～２．５単位／ｍｌ、温度範囲が室温～３７℃で、３０分間～数時間の期間、行われる。
滅菌濾過は、滅菌グレードのフィルター媒体を用いる濾過を包含する。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、０．２または０．２２μｍ孔径フィルターである。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）を含む。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、ポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ）を含む。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、親水性異種二層設計を有する。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、０．８μｍ前フィルター及び０．２μｍ最終フィルター膜の親水性異種二層設計を有する。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、１．２μｍ前フィルター及び０．２μｍ最終フィルター膜の親水性異種二層設計を有する。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、０．２または０．２２μｍ孔径フィルターである。さらなる実施形態において、滅菌グレードのフィルター媒体は、０．２μｍ孔径フィルターである。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、Ｓａｒｔｏｐｏｒｅ（登録商標）２ ＸＬＧ ０．２μｍ、Ｄｕｒａｐｏｒｅ（商標）ＰＶＤＦ膜０．４５μｍ、またはＳａｒｔｏｇｕａｒｄ（登録商標）ＰＥＳ １．２μｍ＋０．２μｍ公称孔径組み合わせのものである。実施形態によっては、滅菌グレードのフィルター媒体は、Ｓａｒｔｏｐｏｒｅ（登録商標）２ ＸＬＧ ０．２μｍである。
実施形態によっては、清澄化供給物は、タンジェンシャルフロー濾過（「ＴＦＦ」）で濃縮されてから、クロマトグラフィー媒体、例えば、アフィニティークロマトグラフィー媒体に添加される。ＴＦＦ限外濾過を用いたウイルスの大規模濃縮は、Ｐａｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：６０９－６１５ （１９９３）に記載されている。清澄化供給物のＴＦＦ濃縮は、技術的に管理可能な体積の清澄化供給物をクロマトグラフィーにかけることを可能にし、冗長な再循環時間を必要とせずに、カラム寸法をより合理的なものにすることを可能にする。実施形態によっては、清澄化供給物は、少なくとも２倍～少なくとも１０倍に濃縮される。実施形態によっては、清澄化供給物は、少なくとも１０倍～少なくとも２０倍に濃縮される。実施形態によっては、清澄化供給物は、少なくとも２０倍～少なくとも５０倍に濃縮される。実施形態によっては、清澄化供給物は、約２０倍に濃縮される。当業者ならわかるだろうが、ＴＦＦは、小分子不純物（例えば、培地成分、血清アルブミン、または他の血清タンパク質を含む、細胞培養物混入物）を除去し、透析濾過により、清澄化供給物を形成するために使用することも可能である。実施形態によっては、清澄化供給物は、透析濾過にかけられて、小分子不純物が除去される。実施形態によっては、透析濾過は、約３～約１０透析濾過体積の緩衝剤の使用を含む。実施形態によっては、透析濾過は、約５透析濾過体積の緩衝剤の使用を含む。当業者なら同じくわかるだろうが、ＴＦＦは、精製プロセスにおいて、精製プロセスの次の工程を行う前に緩衝剤を交換することが望ましい任意の工程で使用することも可能である。実施形態によっては、本明細書中開示される清澄化供給物からｒＡＡＶを単離する方法は、緩衝剤を交換するためのＴＦＦの使用を含む。
アフィニティークロマトグラフィーを使用して、組成物からｒＡＡＶ粒子を単離することができる。実施形態によっては、アフィニティークロマトグラフィーを使用して、清澄化供給物からｒＡＡＶ粒子を単離する。実施形態によっては、アフィニティークロマトグラフィーを使用して、タンジェンシャルフロー濾過にかけられた清澄化供給物からｒＡＡＶ粒子を単離する。適切なアフィニティークロマトグラフィー媒体は、当該分野で既知であり、そのような媒体として、特に制限なく、ＡＶＢ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）、ＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶＸ親和性樹脂、ＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶ９親和性樹脂、及びＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶ８親和性樹脂が挙げられる。実施形態によっては、アフィニティークロマトグラフィー媒体は、ＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶ９親和性樹脂である。実施形態によっては、アフィニティークロマトグラフィー媒体は、ＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶ８親和性樹脂である。実施形態によっては、アフィニティークロマトグラフィー媒体は、ＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶＸ親和性樹脂である。
アニオン交換クロマトグラフィーを使用して、組成物からｒＡＡＶ粒子を単離することができる。実施形態によっては、アフィニティークロマトグラフィーの後に、アニオン交換クロマトグラフィーを、最終濃縮及び精製工程として使用する。適切なアニオン交換クロマトグラフィー媒体は、当該分野で既知であり、そのような媒体として、特に制限なく、Ｕｎｏｓｐｈｅｒｅ Ｑ（Ｂｉｏｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、Ｃａｌｉｆ．）、及びＮ荷電アミノもしくはイミノ樹脂、例えば、ＰＯＲＯＳ ５０ ＰＩ、または任意のＤＥＡＥ、ＴＭＡＥ、第三級もしくは第四級アミン、または当該分野で既知であるＰＥＩ系樹脂（米国特許第６，９８９，２６４号；Ｂｒｕｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒａｐｙ ６（５）：６７８－６８６ （２００２）；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １１：２０７９－２０９１ （２０００））が挙げられる。実施形態によっては、アニオン交換クロマトグラフィー媒体は、第四級アミンを含む。実施形態によっては、アニオン交換媒体は、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー樹脂である。実施形態によっては、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー媒体は、メタクリル酸グリシジル－二メタクリル酸エチレンまたはスチレン－ジビニルベンゼン重合体を含む。実施形態によっては、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー媒体は、ＣＩＭｍｕｌｔｕｓ（商標）ＱＡ－１ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｃｏｌｕｍｎ（第四級アミン）、ＣＩＭｍｕｌｔｕｓ（商標）ＤＥＡＥ－１ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｃｏｌｕｍｎ（ジエチルアミノ）、ＣＩＭ（登録商標）ＱＡ Ｄｉｓｋ（第四級アミン）、ＣＩＭ（登録商標）ＤＥＡＥ、及びＣＩＭ（登録商標）ＥＤＡ Ｄｉｓｋ（エチレンジアミノ）からなる群より選択される。実施形態によっては、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー媒体は、ＣＩＭｍｕｌｔｕｓ（商標）ＱＡ－１ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｃｏｌｕｍｎ（第四級アミン）である。実施形態によっては、モノリスアニオン交換クロマトグラフィー媒体は、ＣＩＭ（登録商標）ＱＡ Ｄｉｓｋ（第四級アミン）である。実施形態によっては、アニオン交換クロマトグラフィー媒体は、ＣＩＭ ＱＡ（ＢＩＡ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ、Ｓｌｏｖｅｎｉａ）である。実施形態によっては、アニオン交換クロマトグラフィー媒体は、ＢＩＡ ＣＩＭ（登録商標）ＱＡ－８０（カラム体積は８０ｍＬ）である。当業者なら認めることができるだろうが、ｒＡＡＶは樹脂に結合したままで、不純物は洗い落とされるように、適切なイオン強度の洗浄緩衝剤を同定することができ、不純物として、上流の精製工程により導入される可能性があるものが挙げられるが、特に限定されない。
実施形態によっては、アニオン交換クロマトグラフィーは、ＰＣＴ国際公開出願第ＷＯ２０１９／２４１５３５号、２０１９年１２月１９日公開、名称「Ａｎｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＡＡＶ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ」に開示される方法に従って行われ、この文献は、そのまま全体が本明細書中参照として援用される。
実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子の単離法は、単離されたｒＡＡＶ粒子を含む組成物において、ベクターゲノム力価、カプシド力価、及び／またはフル対空カプシドの比を特定することを含む。実施形態によっては、ベクターゲノム力価は、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）またはデジタルＰＣＲ（ｄＰＣＲ）または液滴デジタルＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）により特定される。実施形態によっては、カプシド力価は、血清型特異的ＥＬＩＳＡにより特定される。実施形態によっては、フル対空カプシドの比は、分析用超遠心（ＡＵＣ）または透過型電子顕微鏡観察（ＴＥＭ）により特定される。
実施形態によっては、ベクターゲノム力価、カプシド力価、及び／またはフル対空カプシドの比は、分光光度測定により、例えば、組成物の２６０ｎｍでの吸光度を測定し、及び組成物の２８０ｎｍでの吸光度を測定することにより、特定される。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、組成物の吸光度を測定する前に、変性していない。実施形態によっては、ｒＡＡＶ粒子は、組成物の吸光度を測定する前に、変性している。実施形態によっては、組成物の２６０ｎｍ及び２８０ｎｍでの吸光度は、分光光度計を用いて特定される。実施形態によっては、組成物の２６０ｎｍ及び２８０ｎｍでの吸光度は、ＨＰＬＣを用いて特定される。実施形態によっては、吸光度は、ピーク吸光度である。組成物の２６０ｎｍ及び２８０ｎｍでの吸光度を測定する方法は、複数、当該分野で既知である。単離された組換えｒＡＡＶ粒子を含む組成物のベクターゲノム力価及びカプシド力価を特定する方法は、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１９２１２９２２Ａ１号、２０１９年１１月７日公開、名称「Ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｃｏｎｔｅｎｔ， ｃａｐｓｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｌｌ／ｅｍｐｔｙ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ」に開示されており、この文献はそのまま全体が本明細書中参照として援用される。
６．６キット
実施形態によっては、本開示は、単離された組換えＡＡＶ粒子の投与を含む、疾患または障害の治療を必要としている対象における疾患または障害の治療法を行うために使用可能な、本明細書中開示される製剤を含むキットを提供する。実施形態によっては、キットは、１つまたは複数の容器に、本明細書中開示されるｒＡＡＶ粒子を含む製剤を含む少なくとも１つの製剤を含む。実施形態によっては、キットは、単離された組換えＡＡＶ粒子の投与を含む、疾患または障害の治療を必要としている対象における疾患または障害の治療法を行うために必要及び／または十分な成分全てを含む。当業者なら容易にわかるだろうが、本明細書中開示されるｒＡＡＶ粒子を含む製剤は、確立されたキット様式のうちの１つに容易に組み込むことができ、そのようなキット様式は当該分野で周知である。
本明細書中提供される本開示が容易に理解でき、かつ本開示を実用的な効果のあるものにする目的で、ここでいくつかの実施形態を、以下の制限をかけない実施例により説明する。
６．７機能特性
ある特定の実施形態において、本明細書中記載される製剤または安定製剤は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内注射、上脈絡膜注射（例えば、マイクロニードルを備えた微量注入器などの上脈絡膜薬物送達デバイスを介する）、経硝子体手法（外科手技）を介した網膜下注射、強膜近傍投与、硝子体内投与、結膜下投与、網膜内投与、上脈絡膜腔を介した網膜下投与（例えば、上脈絡膜腔に挿入し後極に向かって進めることができるカテーテルを備えた網膜下薬物送達デバイスを介した外科手技、この場合微小針が網膜下腔に注射する）、及び／または後強膜近傍デポ手術（例えば、先端を挿入して強膜表面への直接付着を維持することができるカニューレを備えた強膜近傍薬物送達デバイスを介して）に適している。
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内注射、上脈絡膜注射（例えば、マイクロニードルを備えた微量注入器などの上脈絡膜薬物送達デバイスを介する）、経硝子体手法（外科手技）を介した網膜下注射、強膜近傍投与、硝子体内投与、結膜下投与、網膜内投与、上脈絡膜腔を介した網膜下投与（例えば、上脈絡膜腔に挿入し後極に向かって進めることができるカテーテルを備えた網膜下薬物送達デバイスを介した外科手技、この場合微小針が網膜下腔に注射する）、及び／または後強膜近傍デポ手術（例えば、先端を挿入して強膜表面への直接付着を維持することができるカニューレを備えた強膜近傍薬物送達デバイスを介して））に適した所望の密度を有する。
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内注射、上脈絡膜注射（例えば、マイクロニードルを備えた微量注入器などの上脈絡膜薬物送達デバイスを介する）、強膜近傍投与、硝子体内投与、結膜下投与、網膜内投与、経硝子体手法（外科手技）を介した網膜下注射、上脈絡膜腔を介した網膜下投与（例えば、上脈絡膜腔に挿入し後極に向かって進めることができるカテーテルを備えた網膜下薬物送達デバイスを介した外科手技、この場合微小針が網膜下腔に注射する）、及び／または後強膜近傍デポ手術（例えば、先端を挿入して強膜表面への直接付着を維持することができるカニューレを備えた強膜近傍薬物送達デバイスを介して））に適した所望の粘度を有する。
ある特定の実施形態において、安定製剤中の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凍結乾燥または再構築プロセスに対する安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、感染力は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、感染力は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、凝集は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、凝集は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される。
ある特定の実施形態において、安定製剤は、貯蔵後に再構築される。
ある特定の実施形態において、製剤は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で貯蔵される。
ある特定の実施形態において、製剤は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵される。ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、同じ条件で貯蔵された参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００より高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００より高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、ＩＶＲＰは、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、ＩＶＲＰは、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、遊離ＤＮＡが、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の遊離ＤＮＡは、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、遊離ＤＮＡは、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、遊離ＤＮＡは、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｒＡＡＶゲノム放出が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶゲノム放出は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、寸法の変化が最大で約２０％、約１５％、約１０％、約８％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、寸法は、凍結融解サイクルの前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、製剤をある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した後、寸法の変化が最大で２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、または１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、寸法は、凍結乾燥の前または後に測定される。ある特定の実施形態において、寸法は、凍結乾燥製剤の再構築の前または後に測定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも約２％、約５％、約７％、約１０％、約１２％、約１５％、約１７％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約１００％、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約１００倍、または約１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、感染力が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のウイルス感染力は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、凝集が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の凝集は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、安定性が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のある期間にわたる安定性は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００より高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００より高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）が、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、遊離ＤＮＡが、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の遊離ＤＮＡは、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、遊離ＤＮＡが、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍少ない。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の遊離ＤＮＡは、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、粒子寸法の変化が最大で２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、または１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、安定製剤中のｒＡＡＶ粒子は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、ある期間にわたり、例えば少なくとも、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間貯蔵した場合、参照製剤中の同じｒＡＡＶ粒子に比べて、粒子寸法の変化が、最大で２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、または１％である。ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。
ある特定の実施形態において、ｒＡＡＶ粒子の寸法は、第６．８章に開示されるアッセイ（単数または複数）により特定される。ある特定の実施形態において、参照製剤は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳである。
ある特定の実施形態において、参照製剤は、糖を含まない製剤である。ある特定の実施形態において、参照製剤は、可塑剤を含まない製剤である。
ある特定の実施形態において、製剤は、凍結乾燥のプロセスにおいて、約－２０℃の温度に凍結される。ある特定の実施形態において、凍結製剤は、－２０℃に凍結された場合に、ｐＨを約ｐＨ６～約ｐＨ９に維持する。ある特定の実施形態において、凍結製剤は、－２０℃に凍結された場合に、ｐＨ値を凍結前のｐＨ値のプラスまたはマイナス１単位の範囲内に維持する。
ある特定の実施形態において、製剤の凍結乾燥ケーキのガラス転移温度（Ｔｇ）は、３５℃より高い。
ある特定の実施形態において、製剤の最大凍結濃縮溶液のガラス転移温度（Ｔｇ’）は、－４０℃より高い。
ある特定の実施形態において、水分量は、約０．５％～約１％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約１％～約２％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約２％～約３％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約３％～約４％である。ある特定の実施形態において、水分量は、約４％～約５％である。
ある特定の実施形態において、水分量は、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．８％、約１．０％、約１．２％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約３．０％、約４．０％、または約５．０％である。
本明細書中使用される場合、及び特に記載がない限り、「約」という用語は、所定の値または範囲のプラスマイナス１０％を意味する。ある特定の実施形態において、「約」という用語は、挙げられた数字そのものを包含する。
６．８アッセイ
当業者なら、本明細書中記載されるとおりのアッセイ及び／または当該分野で既知である技法を使用して、本明細書中記載される組成物及び方法を調べる、例えば、本明細書中提供される製剤を試験することができる。第８章に提示される実施例も、そうしたアッセイをどのように使用して本明細書中提供される製剤を試験することができるかをより詳細に実証する。
Ｌｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１９ Ｃｅｌｌ ＆ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ， ５（４）：５３７－５４７（本明細書中そのまま全体が参照として援用される）に記載されるとおり、アッセイの例として、以下が挙げられるが、それらに限定されない：（１）ゲノムコピー特定のためのデジタル液滴ＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）、（２）分光光度測定によるＡＡＶのゲノム含有量及びフルカプシド％の分析、（３）カプシドのＤＮＡ分布及び純度を特定するサイズ排除クロマトグラフィー、（４）キャピラリー電気泳動を用いたカプシドウイルスタンパク質純度の評価（５）Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ効力法－ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＡＶベクターの感染力の差異を定量する信頼できる方法としての相対感染力、ならびに（６）カプシドの空／フル比及び寸法分布を特定する分析用超遠心（ＡＵＣ）。
６．８．１温度ストレスアッセイ
ｒＡＡＶ産物の安定凍結乾燥製剤は、前凍結乾燥された製剤を凍結乾燥することにより製造可能であり、前凍結乾燥された製剤は、第６．２章で提供される製剤のいずれかに従うものである。安定凍結乾燥製剤について選択した濃度で、ある期間にわたり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、または約４年間、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、３７℃、または４０℃で、温度ストレス展開安定性試験を行い、本明細書中提供される製剤の相対安定性を評価することができる。安定凍結乾燥製剤は、ある期間にわたり製剤を貯蔵した後、再構築される。
安定製剤の安定性を評価するのに使用可能なアッセイとして、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）、ベクターゲノム濃度（ｄｄＰＣＲによるＶＧＣ）、色素蛍光による遊離ＤＮＡ、動的光散乱、外観、感染力、効力、及びｐＨが挙げられるが、これらに限定されない。
６．８．２長期安定性アッセイ
ｒＡＡＶ産物の安定凍結乾燥製剤は、前凍結乾燥された製剤を凍結乾燥することにより製造可能であり、前凍結乾燥された製剤は、第６．２章で提供される製剤のいずれかに従うものである。長期展開の安定性試験を、ある期間の間、例えば、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年間、約３年間、または約４年間行い、本明細書中提供される製剤の－８０℃（≦－６０℃）及び－２０℃（－２５℃～－１５℃）でのｉｎ－ｖｉｔｒｏ相対効力及び他の品質の維持を実証することができる。
長期貯蔵後の安定性を評価するのに使用可能なアッセイとして、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）、ベクターゲノム濃度（ｄｄＰＣＲによるＶＧＣ）、色素蛍光による遊離ＤＮＡ、動的光散乱、外観、感染力、効力、及びｐＨが挙げられるが、これらに限定されない。
６．８．３Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイ
ｄｄＰＣＲによるＧＣ力価と遺伝子発現を関連づけるため、ＨＥＫ２９３細胞に形質導入し、細胞培養物上清を抗ＶＥＧＦ Ｆａｂタンパク質レベルについて評価することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイを行うことができる。ＨＥＫ２９３細胞を、３枚のポリ－Ｄ－リシンコート９６ウェル組織培養プレートに一晩播種する。次いで、細胞を野生型ヒトＡｄ５ウイルスで前感染させ、続いて、別個に調製した３種のｒＡＡＶ標準試料及び試験品の系列希釈物で形質導入する。各調製物は、別々のプレートの異なる位置に播種する。形質導入から３日目、細胞培養培地をプレートから収集し、ＥＬＩＳＡによりＶＥＧＦ結合Ｆａｂタンパク質レベルを測定する。ＥＬＩＳＡを行うため、ＶＥＧＦコーティングされた９６ウェルＥＬＩＳＡプレートをブロックし、次いで、収集した細胞培養培地とともにインキュベートして、ＨＥＫ２９３細胞が産生した抗ＶＥＧＦ Ｆａｂを捕捉する。Ｆａｂ特異的抗ヒトＩｇＧ抗体を用いて、ＶＥＧＦ捕捉されたＦａｂタンパク質を検出する。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）基質溶液を加え、展開させ、停止緩衝剤で停止させ、プレートをプレートリーダーで読む。ＨＲＰ生成物の吸光度またはＯＤを、希釈の対数に対してプロットし、各試験品の相対効力を、同一プレート上の標準試料を基準にして計算し、平行性類似性検定を合格した４パラメーターロジスティック回帰モデルで曲線当てはめする。以下の式を使用：ＥＣ５０標準試料÷ＥＣ５０試験品。試験品の効力は、３枚のプレートの重み付け平均から計算される、標準試料効力に対するパーセンテージとして報告する。
ｄｄＰＣＲによるＧＣ力価と機能的遺伝子発現を関連づけるため、ＨＥＫ２９３細胞に形質導入し、導入遺伝子（例えば、酵素）活性について評価することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイを行うことができる。ＨＥＫ２９３細胞を、３枚の９６ウェル組織培養プレートに一晩播種する。次いで、細胞を野生型ヒトアデノウイルス血清型５のウイルスで前感染させ、続いて、別個に調製した３種の酵素標準試料及び試験品の系列希釈物で形質導入する。各調製物は、別々のプレートの異なる位置に播種する。形質導入から２日目、細胞を溶解させ、低ｐＨで処理して酵素を活性化させ、導入遺伝子（酵素）により切断されると蛍光シグナルの上昇をもたらすペプチド基質を用いて酵素活性をアッセイする。蛍光またはＲＦＵを、希釈の対数に対してプロットし、各試験品の相対効力を、同一プレート上の標準試料を基準にして計算し、平行性類似性検定を合格した４パラメーターロジスティック回帰モデルで曲線当てはめする。以下の式を使用：ＥＣ５０標準試料÷ＥＣ５０試験品。試験品の効力は、３枚のプレートの重み付け平均から計算される、標準試料効力に対するパーセンテージとして報告する。
ＩＶＲＰは、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。ＩＶＲＰは、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥前のｒＡＡＶ粒子のＩＶＲＰと凍結乾燥製剤の再構築後のｒＡＡＶ粒子のＩＶＲＰを比較することにより、評価することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥製剤をある期間にわたり貯蔵した後の凍結乾燥製剤の再構築後のｒＡＡＶ粒子のＩＶＲＰを同じ条件で貯蔵及び再構築した参照製剤中のｒＡＡＶ粒子のＩＶＲＰと比較することによっても評価することができる。
６．８．４ベクターゲノム濃度アッセイ
ベクターゲノム濃度（ＧＣ）も、ｄｄＰＣＲを用いて評価することができる。ＧＣは、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。ＧＣは、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥前の製剤のＧＣ値と凍結乾燥製剤の再構築後の製剤のＧＣ値を比較することにより、評価することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥製剤をある期間にわたり貯蔵した後の再構築した製剤のＧＣ値を同じ条件で貯蔵及び再構築した参照製剤のＧＣ値と比較することによっても評価することができる。
６．８．５色素蛍光アッセイを用いた遊離ＤＮＡ分析
製剤の安定性は、ｒＡＡＶゲノム放出により評価することができ、この場合、ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される。遊離ＤＮＡは、ＤＮＡに結合するＳＹＢＲ（登録商標）金核酸ゲル染色（「ＳＹＢＲ金色素」）の蛍光により特定することができる。蛍光は、マイクロプレートリーダーを用いて測定することができ、ＤＮＡ標準物質を用いて定量することができる。ｎｇ／μＬ単位で結果を報告することができる。
測定された遊離ＤＮＡ（ｎｇ／μＬ）を遊離ＤＮＡのパーセンテージに変換する目的で、合計ＤＮＡを推定するために２つのアプローチを使用することができる。１つ目のアプローチでは、紫外可視分光測定により特定されたＧＣ／ｍＬ（ＯＤ）を用いて、試料中の合計ＤＮＡを推定した。式中、ＭはＤＮＡの分子量であり、１Ｅ６は、単位変換係数である：
推定される合計ＤＮＡ（ｎｇ／μＬ）＝１Ｅ６×ＧＣ／ｍＬ（ＯＤ）×Ｍ（ｇ／ｍｏｌ）／６．０２Ｅ２３
２つ目のアプローチでは、試料を、例えば０．０５％のポロキサマー１８８とともに、８５℃で２０分間加熱することができ、加熱した試料でＳＹＢＲ金色素アッセイにより測定された実際のＤＮＡを、合計として使用することができる。したがって、これは、全てのＤＮＡが回収されて定量されたという仮定を用いる。遊離ＤＮＡをｎｇ／μＬからパーセンテージに変換する上で、どのような変動も、報告結果における範囲として捕捉される可能性がある）。傾向を見るために、生のｎｇ／μＬを使用することも、一貫した方法により特定されたパーセンテージを使用することも、いずれも可能である。
相対蛍光レベルは、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。相対蛍光レベルは、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥前の製剤の相対蛍光レベルと凍結乾燥製剤の再構築後の相対蛍光レベルを比較することにより、評価することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥製剤をある期間にわたり貯蔵した後の再構築した製剤の相対蛍光レベルを同じ条件で貯蔵及び再構築した参照製剤の相対蛍光レベルと比較することによっても評価することができる。
６．８．６サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
製剤の安定性は、ｒＡＡＶ粒子の寸法を測定することにより評価することができ、この場合、ｒＡＡＶ粒子の寸法は、ＳＥＣにより特定される。ＳＥＣは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ａｒｃ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ＩＤ ０４４７（Ｃ３ＰＯ）で２５ｍｍ経路長のフローセルを用い、Ｓｅｐａｘ ＳＲＴ ＳＥＣ－１０００ Ｐｅｅｋカラム（ＰＮ ２１５９５０Ｐ－４６３０、ＳＮ：８Ａ１１９８２、ＬＮ：ＢＴ０９０、５μｍ１０００Ａ、４．６ｘ３００ｍｍ）を用いて行うことができる。移動相は、例えば、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％のポロキサマー１８８、ｐＨ６．５が可能であり、流速は０．３５ｍＬ／分で２０分間、カラムは周辺温度である。データ収集は、２点／秒のサンプリング速度及び１．２ｎｍ分解能で行うことができ、２１４、２６０、及び２８０ｎｍで２５点平均平滑化する。理想目的添加量は、１．５Ｅ１１のＧＣが可能である。試料は、５０μＬ、理想目的量の約１／３で注入する、または５μＬで注入することが可能である。ｒＡＡＶ粒子の寸法は、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。ｒＡＡＶ粒子の寸法は、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥前の製剤のｒＡＡＶ粒子の寸法を凍結乾燥及び再構築後の同じ製剤のｒＡＡＶ粒子の寸法を比較することによって評価することができる。製剤の安定性は、凍結乾燥製剤をある期間にわたり貯蔵した後の再構築した製剤のｒＡＡＶ粒子の寸法を同じ条件で貯蔵及び再構築した参照製剤のｒＡＡＶ粒子の寸法と比較することによっても評価することができる。
６．８．７動的光散乱（ＤＬＳ）アッセイ
製剤の安定性は、ｒＡＡＶ粒子の凝集レベルを測定することにより評価することができ、この場合、ｒＡＡＶ粒子の凝集レベルは、動的光散乱（ＤＬＳ）により特定される。ＤＬＳは、Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏＩＩＩで、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５４０ ３８４ウェルプレートを用いて、３０μＬの試料体積で行うことができる。１回の測定あたり、それぞれ１０秒間の捕捉を１０回行って収集することができ、試料１つあたり３回の測定を繰り返した。溶媒は、試料に使用された溶媒に従って設定することができ、例えば、ｄＰＢＳ中のｒＡＡＶ試料には「ＰＢＳ」、及びスクロース含有修飾ｄＰＢＳ中のＡＡＶ試料には「４％スクロース」である。データ品質基準（ベースライン、ＳＯＳ、雑音、当てはめ）を満たさない結果には「印をつけ」て分析から除外することができる。スクロース含有修飾ｄＰＢＳ試料については、低い遅延時間カットオフを１．４μｓから１０μｓに変更して、人工的に低いキュムラント分析直径結果を引き起こすことに対する約１ｎｍでのスクロース賦形剤ピークの影響を除外することができる。ｒＡＡＶ粒子の凝集レベルは、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。ｒＡＡＶ粒子の凝集レベルは、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。
方法の例は、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， ２００５， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １２（１）：１７１－１８９に記載されている（本明細書中そのまま全体が参照として援用される）。
６．８．８示差走査熱量測定
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、頻繁に使用される熱分析技法である。ＤＳＣは、試料の物理的特性及び化学的特性の変化によるエンタルピー変化を、温度または時間の関数として測定する。低温示差走査熱量測定（低温ＤＳＣ）は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＤＳＣ２５０を用いて実行することができる。試料約２０μＬを、Ｔｚｅｒｏパンに添加し、Ｔｚｅｒｏ（商標）Ｈｅｒｍｅｔｉｃ蓋で密閉することができる。試料は、２５℃で２分間平衡化し、次いで５℃／分で－６０℃に冷却し、２分間平衡化し、次いで５℃／分で２５℃に加熱することができる。熱流データは、従来様式で収集することができる。
６．８．９リアルタイム緩衝剤ｐＨ追跡
異なる製剤緩衝剤のｐＨを、ＩＮＬＡＢ ＣＯＯＬ ＰＲＯ－ＩＳＭ低温ｐＨプローブを用いてモニタリングした。このプローブは、－３０℃に下がってもｐＨを検出することができる。緩衝剤１ミリリットルを、１５ｍＬ Ｆａｌｃｏｎ試験管に入れ、次いでｐＨプローブを緩衝剤に沈めた。パラフィルム片を用いてＦａｌｃｏｎ試験管とｐＨプローブの間の隙間を密閉し、混入及び蒸発を回避した。プローブをＦａｌｃｏｎ試験管とともに－２０ ＡＤ冷凍庫に入れた。緩衝剤のｐＨ及び温度を、約２０時間の間、またはｐＨ対温度の挙動が繰り返しパターンになるまで、２．５分ごとに記録した。自動除霜プロセスにより引き起こされる温度変化は、緩衝剤ｐＨ安定性にとってのストレス条件を作り出した。製剤のｐＨは、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。製剤のｐＨは、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。
６．８．１０密度測定
密度は、参照として水を用いて、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＤＭＡ５００濃度計で測定することができる。濃度計は、試料ごとに、水、次いでメタノールで洗い、続いて風乾することができる。製剤の密度は、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。製剤の密度は、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。
６．８．１１粘度測定
粘度は、当該分野で既知である方法、例えば、２０１９年刊行及びその以前の版の米国薬局方（ＵＳＰ）（そのまま全体が本明細書中参照として援用される）に提示される方法を用いて測定することができる。製剤の粘度は、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。製剤の粘度は、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。
６．８．１２ウイルス感染力アッセイ
Ｆｒａｎｃｏｉｓ， ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ （２０１８） Ｖｏｌ． １０， ｐｐ． ２２３－２３６（そのまま全体が本明細書中参照として援用される）に記載されるとおりのＴＣＩＤ５０感染力価アッセイを使用することができる。ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／５６０４２号、出願日２０１９年１０月１４日に記載されるとおりの相対感染力アッセイを使用することができる。製剤のウイルス感染力は、前凍結乾燥製剤の凍結乾燥前に測定することができる。製剤のウイルス感染は、凍結乾燥製剤の再構築後に測定することができる。
６．８．１３結晶化及びガラス転移温度
方法例は、Ｃｒｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ８（１７）：１２８１－９０（そのまま全体が本明細書中参照として援用される）に記載される。
製剤の安定性は、凍結乾燥したケーキのガラス転移温度（Ｔｇ）を測定することにより評価することができる。
製剤の安定凍結ケーキのＴｇは、３５℃より高い。
あるいは、製剤の安定性は、最大凍結濃縮溶液のガラス転移温度（Ｔｇ’）を測定することにより評価することができる。
安定製剤のＴｇ’は、－４０℃より高い。
７．配列表
Figure 2022529002000002
Figure 2022529002000003
Figure 2022529002000004
Figure 2022529002000005
Figure 2022529002000006
Figure 2022529002000007
Figure 2022529002000008
Figure 2022529002000009
８．実施例
８．１実施例１：ＡＡＶ遺伝子治療用産物の製剤化及び送達の課題。
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、遺伝子治療ベクターの中でも最も盛んに研究されており、その研究は、有望な臨床結果及び商業的承認が増加する見込みによりますます盛んになっている。ＡＡＶ産物は、安全性及び有効性を実証するだけでなく、製造、輸送、貯蔵、及び投与中、安定を保ちかつ強力であり続けなければならない。ＡＡＶを商品化するためには、長期にわたり安定性を提供する製剤を同定することが必要である。冷蔵条件下、または室温で安定である製剤を同定することは、凍結条件下で輸送及び貯蔵する必要性を回避する目的において、有利であると思われる。凍結させなければならない産物の場合、製剤は、凍結により導入されるストレスに耐えることができなければならない。
乾燥製剤は、溶液で起こる分解経路の割合を大幅に減少させることにより、安定性を改善する可能性を提供する。凍結乾燥（Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）、すなわち凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）製剤は、凍結及び乾燥工程中、安定でなければならない。さらに、凍結乾燥を受ける製剤は、一貫して優れたケーキをもたらさなければならない。製剤成分は、凍結乾燥プロセスで製品が崩壊する危険性を軽減するように注意深く選択しなければならない。
ＡＡＶは、従来のタンパク質治療薬に比べて、独特の製剤化の課題を提供する。そのような課題として、ＡＡＶ粒子の複雑な性質、分析性、巨大分子の充填／完成面での課題、刊行された安定性／製剤情報の欠如、及び投与経路により課される制限が挙げられる。
ＡＡＶ粒子は、異なる化学的及び物理的分解経路に対して敏感な異なるタンパク質及び核酸からなる複雑な巨大分子集合体である。単一巨大分子実体（例えば、抗体などのポリペプチド、または核酸）用に開発された製剤に関する情報では、ポリペプチド及び核酸の両構成要素を含むＡＡＶ粒子も、同じ製剤で安定であるだろうという合理的予測を立てることができない。産業利用に適切なＧＭＰ対応分析性の欠如も、ＡＡＶ製剤開発を妨げている。当該分野では、不正確なバイオアッセイに頼るところが大きい。ＡＡＶ特異的分解経路は、特定される必要がある。ウイルス粒子凝集は、０．２μｍ濾過後に損失を招く可能性があるため、充填／完成プロセスの課題となっている。ＡＡＶ粒子について刊行された安定性／製剤情報が不足している。これは、部分的には、ＰＢＳ系緩衝剤中の凍結貯蔵（≦－６０℃）の一般的な欠陥によるところが大きい。ある種の投与経路、例えば、網膜下用及びくも膜下腔内用の製剤についても、一部のｒＡＡＶ産物について計画されているが、非常に限られた情報しかない。まとめると、これら及び他の課題により、新規安定ＡＡＶ製剤の開発は、非常に不確実な冒険的事業になっている。
８．２実施例２．凝集は、ＡＡＶ製剤の課題である。
ＡＡＶ粒子凝集についてはすでに記載があり、この凝集を防ぐには、溶液イオン強度が少なくとも２００ｍＭであることが必要であると報告されている。米国特許第９，０５１，５４２号。
ＡＡＶ粒子の凝集または自己会合を防ぐには、最小イオン強度が必要である。（図１Ａ及び図１Ｂ）。粒子の凝集または自己会合を防ぐために必要とされる最小イオン強度は、ＡＡＶ血清型依存性であることがわかった。ＡＡＶ８凝集は、２００ｍＭ未満のイオン強度で防ぐことが可能であり（図２）、ＡＡＶ９は、ＡＡＶ８よりも低いイオン強度を必要とする（図３）。少ない塩で製剤化できることは、凍結及び乾燥製剤にとっては有利である。しかしながら、粒子の凝集に血清型特異的差異があることは、血清型ごとに異なる製剤が必要になる可能性があることを示す。
８．３実施例３．凍結製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出は、製剤の課題である。
凝集を防ぐことは、必須ではあったが、確実に安定薬剤製品とするのに十分ではなかった。粒子凝集を防ぐことができる製剤中２５℃で貯蔵されたウイルス粒子の相対効力は、同じ製剤中－８０℃で貯蔵されたウイルス粒子の相対効力より顕著に低かった。このことは、溶液中のウイルス粒子にさらなる分解経路が存在することを示す。
凍結する間の製剤成分の結晶化が、ＡＡＶベクター粒子からのベクターＤＮＡ減少を促進することがわかった。この種のベクターＤＮＡ減少、及びそれを製剤開発に応用することは、これまでに報告されたことがなかった。このＤＮＡ減少は、以下の２種の製剤化アプローチのいずれかにより軽減することができる：（１）凍結する間に結晶化する塩の代わりに、結晶化しない塩を用いて製剤化すること、及び（２）結晶化を阻害する成分（例えば、糖）を、製剤に含ませること。
ウイルスゲノム放出は、３回の凍結融解サイクル後、対照に比べて増加することが検出された。図５。ゲノム放出の程度は、製剤中の塩の種類により影響を受けた。ＮａＣｌ存在下での凍結融解サイクルは、クエン酸ナトリウム存在下での凍結融解サイクルよりも多いゲノム放出を招いた。図５は、ＳＹＢＲ金とＤＮＡの結合を示し、ＤＮＡは、凍結する間に結晶化するＮａＣｌ（Ａ）の存在下で放出されるが、非晶質のままであるクエン酸ナトリウム（Ｂ）では最小限になる。
凍結する際に結晶塩に誘導されるウイルスゲノム放出を、Ｔｒｉｓ、リン酸ナトリウム、及びヒスチジン緩衝剤中で試験した。図６。これら緩衝剤のそれぞれにおいて、ＮａＣｌの存在は、非晶質クエン酸ナトリウムが存在する場合よりも多いウイルスゲノム放出がＮａＣｌの存在下で検出されることを招いた。
結晶化を阻害する成分（例えば、糖）を、製剤に含ませることは、凍結する際のウイルスゲノム放出を減少させる。ウイルスゲノム放出は、ＰＢＳ中１０回の凍結融解サイクル後でも検出された。図７Ａ。製剤に４％のスクロースを含ませることで、凍結する際のウイルスゲノム放出が阻止された。図７Ｂ。
非晶質糖を加えることで、共溶質結晶化が阻害され、より少ないＤＮＡ放出につながった。図８。ＡＡＶを、様々な質量比のマンニトール及びスクロースを用いて製剤化した。質量比には、マンニトール３部対スクロース１部、マンニトール２部対スクロース２部、スクロース１部対マンニトール３部、ならびにスクロース４部対マンニトールなし、及びマンニトール４部対スクロースなしが含まれていた。３回の凍結／融解後、ＤＮＡ放出は、スクロース（非晶質である）対マンニトール（結晶性である）の比が高いほど減少した。それより高いスクロース対マンニトールの比では、凍結していない対照と同等であることから裏付けられるとおり、遊離ＤＮＡ放出は、完全に阻害された。
８．４実施例４．ＡＡＶの凍結乾燥が突きつける独特の課題。
上記で検討したとおり、粒子凝集を防ぐために最低溶液イオン強度が必要である。凍結乾燥させる間、塩は、完全に結晶化しない限り、一般に崩壊温度を低下させる。しかしながら、結晶化すると、凍結する際のＤＮＡ放出に有利に働く。また、ゲノムコピー（ＧＣ）減少は、凍結乾燥後の相対効力の同時減少を招く。図９。ＡＡＶ粒子用の凍結乾燥プロセスは、崩壊温度を許容できないレベルまで低下させることなく、製剤成分の結晶化を防ぐやり方を見つけなければならない。緩衝剤（Ｔｒｉｓ、リン酸塩、及びヒスチジン）、塩（ＮａＣｌ及びクエン酸ナトリウム）、及び賦形剤（マンニトール、スクロース、及びグリセロール）を含む様々な配合を多数試験した。試験した全ての製剤には、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８が含まれていた。
最大凍結濃縮溶液のガラス転移温度（Ｔｇ’）は、崩壊温度と密接に相関するパラメーターである。スクロース／クエン酸塩製剤のＴｇ’は、純スクロース（－３２℃）（Ｃｈａｎｇ ａｎｄ Ｒａｎｄａｌｌ， Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２９： ６３２－６５６ （１９９２））及びクエン酸ナトリウム（－４３℃）（Ｉｚｕｔｓｕ ｅｔ ａｌ， Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ， ５７： １２３１－１２３６ （２００９））の個別Ｔｇ’値よりも高いことがわかった。この結果は、２種の分子間の相互作用に起因すると推定された。Ｋｅｔｓ ｅｔ ａｌ， Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ， ４８： ４６－５４（２００４）。スクロース／クエン酸塩製剤のこの特性により、この製剤は、ＡＡＶ凝集を阻止するために必要なイオン強度も提供しながら、凍結乾燥プロセスの開発により有利なものとなっている。
８．５実施例５．ＡＡＶの凍結乾燥が突きつける独特の課題。
凍結した溶液のｐＨは、凍結乾燥製剤の安定性に影響を及ぼす。３種の凍結乾燥ｒＡＡＶ製剤の安定性を、２５℃で６ヶ月貯蔵後に相対効力を測定することにより評価した。図１０。製剤１、２、及び３には、それぞれ、リン酸緩衝剤、Ｔｒｉｓ緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤が含まれていた。製剤１は、液体製剤と凍結製剤の間の呈色の差により示されるとおり、凍結する際ｐＨ７．５からより酸性のｐＨへのｐＨシフトを起こした。製剤２（ｐＨ７．５）及び製剤３（ｐＨ６．５）のｐＨは安定したままであった。製剤１及び製剤３の相対効力は、２５℃で６ヶ月貯蔵後、製剤２の相対効力よりも大幅に低下した。
Ｔｒｉｓまたはリン酸緩衝剤を含む凍結乾燥ＡＡＶ８製剤の安定性を比較した。凍結乾燥していない対照（「Ｌｉｑｕｉｄ」）、凍結乾燥後（「Ｐｏｓｔ Ｌｙｏ」）、ならびに室温貯蔵で３ヶ月後及び６ヶ月後の製剤の相対効力パーセントを、図１１に示す。リン酸緩衝剤製剤の相対効力は、Ｔｒｉｓ製剤の相対効力よりも大幅に低下した。リン酸緩衝剤は、凍結する間に酸性ｐＨシフトを起こした。
８．６実施例６．残存水分量はｒＡＡＶ安定性に影響を及ぼす。
残存水分レベルの異なる凍結乾燥製剤について安定性データを得た。図１３及び図１４。最も高い安定性は、中間の水分レベルで見られた。最大限乾燥させることは、必ずしも最良の安定性をもたらさない。乾燥しすぎは、ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の増加を招く。図１５。
過剰な残存水分は、凍結乾燥ケーキの可塑化機構を介してｒＡＡＶ粒子を安定化させる可能性がある。したがって、可塑剤または安定剤、例えばグリセロールなどを、残存水分をより高めるための代用品として製剤に用いることができる。可塑剤または安定剤、例えば、グリセロールの使用は、大部分の水の除去を単に目的とする乾燥プロセスも可能にしながら、安定性の改善という利益をもたらす。
開示される方法は、現段階で最も実用的かつ好適な実施形態であるとみなされるものに関して記載されてきたものの、当然のことながら、本開示により包含される方法は、開示される実施形態に限されず、そうではなくて、添付の特許請求の範囲の趣旨及び範囲に含まれる様々な修飾及び等価な配置を包含することを意図する。
８．７実施例７．凍結乾燥製剤においてＡＡＶを安定化させるには独特の賦形剤組成物が必要とされる。
緩衝剤系、可塑剤、及び塩／増量剤の影響を評価するため、５種の異なる製剤を、凍結乾燥試験１で比較した（表１）。４０℃で１ヶ月のストレス試験、ならびに２５℃及び５℃で１２ヶ月後、ベクターゲノム含有量（ＶＧＣ）／ウイルス力価及び効力データを、表２で比較した。表２に列挙した製剤及びそれらの濃度は、前凍結乾燥賦形剤濃度である。リン酸ナトリウムで緩衝化された製剤（製剤１、２、３、及び４）は全て、４０℃で１ヶ月（＜５％残存）及び２５℃で１２ヶ月（＜８０％残存）後に効力の低下を示した。製剤５（ＴＲＩＳで緩衝化）は、製剤１と比較した場合、４０℃で１ヶ月（３５％）及び５℃で１２ヶ月（９０％）後にはるかにそれより高い効力を示したが、これら２種の製剤の間の唯一の違いは緩衝剤系であった。このことは、ＡＡＶの凍結乾燥には、ｔｒｉｓ緩衝剤がリン酸緩衝剤よりも優れていることを示唆する。この試験に基づき、Ｔｒｉｓを、基本緩衝剤系として選択した。
また、マンニトール含有製剤（製剤３及び４）は、水分量が低いにもかかわらず、はるかに低いＶＧＣを示した。結晶性増量剤であるマンニトールは、ケーキ安定性及び構造ならびに凍結乾燥プロセス設計を改善する（すなわち崩壊させることなくより高温で主に乾燥を行う能力）ために一般的に使用される賦形剤であるが、この試験では、マンニトールの使用によりＡＡＶは不安定化した。製剤１の水分量（２．９％）が製剤３及び製剤４（１．２％及び１．４％）よりも高かったことを考慮して、凍結乾燥試験２では異なる製剤から同様な水分量である凍結乾燥ケーキを生成させて、マンニトールがＡＡＶを不安定化させる効果の機構をさらに調べた。
表１．凍結乾燥試験１で試験した製剤組成物
Figure 2022529002000010
表２．凍結乾燥試験１の安定性データまとめ
Figure 2022529002000011
凍結乾燥試験２の製剤組成物を表３に列挙する。表３に列記する製剤及びそれらの濃度は、前凍結乾燥賦形剤濃度である。マンニトールの影響の他、スクロース濃度、可塑剤、及び代替多価塩の効果を、凍結乾燥試験２で試験した。生物学的製剤において、スクロースは、凍結乾燥保護剤／凍結保護剤として及び安定剤としての両方で機能することができ、一方マンニトールは、より簡単な再構築、優れたケーキ外観、ならびに潜在的に効率的及び堅固な凍結乾燥サイクルのための増量剤として追加機能をもたらす。（Ｓｈｒｅｙａ， ２０１８）。従来の巨大分子治療薬、例えば、抗体及び酵素とは異なり、ＡＡＶは、ウイルスゲノムを保護するため、ならびに細胞取り込み及び細胞内輸送を仲介するため、カプシドの完全性を必要とする複雑な実体である。（Ｇｉｌｅｓ， ２０１８）。ＳＹＢＲ金蛍光アッセイを用いて、ＡＡＶカプシド完全性を評価した。このアッセイでは、ＳＹＢＲ金色素は、微量の遊離ＤＮＡ分子に結合して、カプシド損傷を間接的に検出する（すなわち、これは、損傷したカプシドから放出されたＤＮＡを検出する）。表４に示すとおり、純粋スクロース含有製剤（１Ａ）及びマンニトー含有製剤（６Ａ及び７Ａ）について、同様な水分量（約１％）が、凍結乾燥試験２で達成され、これらは、凍結乾燥試験１の水分量より低かった。マンニトールを、１：１４及び１：４のスクロース対マンニトールモル比でＡＡＶ製剤に加えた場合（製剤６Ａ及び７Ａ）、マンニトール含有製剤ではるかに高い蛍光強度が検出された。このことは、マンニトールにより形成された結晶性マトリクスが、ＡＡＶカプシドを損傷することにより、より多くのウイルスゲノムの放出を引き起こしたことを示唆する（図１５Ａ）。カプシド損傷と一致して、製剤６Ａ及び７Ａは、力価の０．４ｌｏｇの減少を示した。１Ａは、力価の減少は０．１６ｌｏｇだけだった（図１５Ｂ）。同じく、凍結乾燥直後、６Ａ及び７Ａの効力は、それぞれ２５％及び５７％に減少したが、一方で１Ａは、１０８％の効力を維持した（表４）。これらのデータは合わせて、マンニトール含有製剤での力価及び効力の減少が、結晶性マトリクスによるものであって、水分量の低下によるものではないことを示した。アデノウイルスに関する以前の製剤研究は、マンニトール対スクロースのモル比が８：１から２：１に低下するのと合わせて水分量が０．６％から１．４％に上昇することで、凍結乾燥後の力価回復の改善を示した。その研究者らは、低水分量の方が力価が不良であることは、低水分量、すなわち「過剰乾燥」によると結論付けた。（Ｃｒｏｙｌｅ， ２００１）しかしながら、それは妥当な結論ではない。なぜなら、彼らの研究において、水分量は、製剤の組成とともに変更されたからである。マンニトール含有製剤及びスクロース含有製剤で同様な水分量を達成することにより、本発明者らは、凍結乾燥製剤においてＡＡＶを安定化させるには、結晶性マトリクスよりも非晶質マトリクスの方が良いことを証明した。
表３．凍結乾燥試験２で試験した製剤組成物
Figure 2022529002000012
 ＊凍結乾燥試験２の製剤１Ａは、凍結乾燥試験１の製剤５と同じ組成物であるが、検討を容易にするため新たな番号付けを用いている。
製剤１Ａ、５Ａ、及び４Ａにおいて、それぞれ濃度を２１０ｍＭ、２６３ｍＭ、及び４０９ｍＭと変えることで、スクロースの影響をさらに試験した。
塩化ナトリウムは、塩の一部が結晶化しなければ、製剤の崩壊温度を大幅に低下させることができる。凍結及びアニーリング中のＮａＣｌの結晶化は、他の賦形剤により阻害することができる。（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ， ２００２）。製剤４Ａの熱分析を図１６の低温ＤＳＣにより特性決定した。－３７℃未満では、結晶化事象は検出されなかった。－３６．１℃のＴｇ’は、スクロースのガラス転移によるものであった。製剤４Ａで非常に高いスクロース濃度を用いた場合、ＮａＣｌの結晶化は抑制された。製剤４Ａ及び５Ａ（４０９ｍＭ及び２６３ｍＭのスクロース）は、カプシド損傷による遊離ＤＮＡの放出が、製剤１Ａ（２１０ｍＭのスクロース）よりも少ないことを示した。このことは、ＡＡＶ製剤における、ＮａＣｌ結晶化を阻害するスクロースの臨界及びスクロースの濃度依存性保護効果を実証する。図１７。
表４．凍結乾燥直後の結晶性製剤及び非晶質製剤におけるＡＡＶ安定性の比較
Figure 2022529002000013
クエン酸ナトリウムに加えて、溶液Ｔｇ’が凍結乾燥サイクルの開発に適したままであることを確実にしつつ、ＡＡＶ凝集を阻害する代替多価イオンを検討した。クエン酸塩をスクロースと組み合わせると、乾燥ケーキのガラス転移温度（Ｔｇ）が高くなる点で利益があり、これは、凍結乾燥ＡＡＶのより高い安定性をもたらすことが予想される（Ｋｅｔｓ， ２００３）。しかしながら、クエン酸塩は、特に筋肉内注射または皮下注射に関して注射部位痛を引き起こすことも知られている（Ｂｒａｚｅａｕ， １９９８）。エリスロポエチンの皮下製剤については、クエン酸塩を含まないことが推奨された（Ｂｒａｚｅａｕ， １９９８）。別の例は、「ヒュミラ無クエン酸塩」である。これは、「注射直後の痛みをより少なく」提供する改善された製剤として販売されている。（ヒュミラ無クエン酸塩ウェブサイト、閲覧日１９Ｍａｒ２０）。一部の投与経路に関して、クエン酸塩の存在は、疼痛感覚に影響するとは予想されていない。その理由は、経路及び疼痛受容体の有無によるか、クエン酸塩疼痛の相対的認知をマスクする手術が行われる可能性があるためかのいずれかによる。例えば、ゆっくりとした静脈内注入は、痛覚を希釈及び最小限にする可能性があり、または網膜下注射手術は、クエン酸塩製剤に伴う疼痛の認知を相対的に高く有することはない。こうした場合において、クエン酸塩の存在は、注射時の痛みに関する問題とはならない。筋肉内、上脈絡膜、及び皮下注射などの場合に関して、クエン酸塩の存在は、疼痛のより強い認知を引き起こす可能性がある。一部の投与経路に関するこの問題に対処するため、本発明者らは、凍結乾燥製剤用のクエン酸塩代替物を評価した。図１８Ａに示すとおり、同様なＡＡＶ凝集阻害効果を達成するために硫酸ナトリウムが必要とした濃度は、塩化ナトリウムよりもはるかに低かった。これは、スクロースがより低濃度の硫酸ナトリウムの結晶化をより十分に抑制することができるという点で有利である。結晶化は、マンニトール含有製剤の安定性の欠如により示されるとおり、ＡＡＶの安定化に負の影響を及ぼすように思われる。ＡＡＶの粒子寸法は、Ｎａ２ＳＯ４の存在下、室温で２４時間ストレスを加えた後も、一定したままであった。図１８Ｂ及び図１８Ｃ。より重要なことは、３０ｍＭのＮａ２ＳＯ４が、最大１４％のスクロース（４０９ｍＭ）の存在下でも、ＡＡＶ凝集を有効に阻害できることである。図１８Ｃ。他の同様な多価塩、ＭｇＳＯ４及び（ＮＨ４）２ＳＯ４も、凍結乾燥製剤においてＡＡＶ凝集を阻害するための代替塩として使用可能である。
凍結乾燥製剤に硫酸ナトリウムを使用することの実現可能性を評価するため、様々な製剤緩衝剤のＴｇ’を表５に示す。堅固な凍結乾燥プロセスのためには、Ｔｇ’は高いほど（マイナスが小さいほど、冷たくないほど）望ましく、理想的には－４０℃超である。製剤１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａ、及び５Ａは全て、望ましいＴｇ’温度を示したが、一方でＰＢＳ及びＮａＣｌ含有製剤（緩衝剤１及び２）は、凍結乾燥サイクルが長くなると思われ、サイクルが長くなると、塩の結晶化による崩壊を起こしやすくなる。
また、凍結する間のｐＨ安定性は、ＡＡＶ効力を維持する上で重要である。３ｐＨ単位のシフトが、ｄＰＢＳ系製剤緩衝剤で凍結する際に観察された。しかしながら、製剤４Ａ及び５Ａでは１ｐＨ単位のシフトしか見られなかった。図１９。これにより、部分的に、なぜＴｒｉｓ緩衝系がリン酸緩衝系よりも凍結乾燥に適切であるかを説明できる。リン酸緩衝剤が凍結する間ＡＡＶを低ｐＨにさらすことは、不安定化につながる。
表５．異なる賦形剤で構成された凍結乾燥製剤のＴｇ’
Figure 2022529002000014
少量の賦形剤添加物、例えば、グリセロールまたはソルビトールを加えることで、一部の凍結乾燥生物製剤が安定化する可能性があることは、実例も理論も存在するが、そのようなアプローチがＡＡＶでも機能するかどうかは不明である（Ｃｉｃｅｒｏｎｅ， ２００３）。水－二糖Ｈ結合をより強力なグリセロール－糖Ｈ結合で置き換えることによる「水の置き換え」または「可塑剤」挙動などの理論が、こうした添加物により生物製剤の安定性がどのように改善されるかを説明するために用いられるが、凍結乾燥ＡＡＶの安定性に対するこうした類の賦形剤の影響は、不明である。（Ｓｔａｒｃｉｕｃ， ２０１７；Ｃｉｃｅｒｏｎｅ， ２００３）。「水の置き換え」または「可塑剤」が安定性を助ける可能性を評価するため、製剤１Ａにグリセロール及びソルビトールを加えて（製剤２Ａ及び３Ａ）、より良好な凍結乾燥ＡＡＶ安定性を達成することが可能かどうか評価した。凍結乾燥ケーキのＴｇは、全成分のＴｇ、それらの重量パーセンテージ、及び水分量により特定した。前記章で検討したとおり、クエン酸塩とスクロースの間の分子間相互作用は、１ＡのＴｇを５８．７℃に上昇させたが、一方２Ａ及び３Ａは、それぞれＴｇが４２．０℃及び３７．８℃であった（表６）。グリセロール及びソルビトールなどの可塑剤は、非晶質凍結乾燥ケーキＴｇを低下させるものの、それらは、凍結乾燥ケーキがそのガラス転移温度より低い温度で貯蔵された場合に、逆可塑化を通じてガラスマトリクスのβ緩和を遅くすることにより、タンパク質治療薬を安定化させることができることが報告されている。（Ｃｉｃｅｒｏｎｅ， ２００３）。製剤１Ａ、２Ａ、及び３ＡのＴｇより低い３５℃では、グリセロールを添加した製剤２Ａにおいて、遊離ＤＮＡの放出をもたらすＡＡＶカプシド破壊がより少なく、効力がより高い結果となったが、ソルビトールを添加した製剤３Ａではそうはならなかった。このことは、凍結乾燥製剤においてＡＡＶを安定化するグリセロールの独自能力を実証しており、これは以前に報告されたことがなかった。図１７。驚いたことに、ソルビトール含有製剤（製剤３Ａ）は、グリセロールと同じ利益をもたらさず、ソルビトールを含まない製剤組成物に一致するほぼ理想的な遊離ＤＮＡ放出となった。このことは、グリセロールの凍結乾燥ＡＡＶを安定化する能力が特異的及び独特のものであること、ならびに「水の置き換え」または「可塑剤」賦形剤を使用することの一般概念が、凍結ＡＡＶにもたらすグリセロールの安定化の有益性を完全には説明しないことを示唆する。
表６．製剤１Ａ～５Ａの凍結乾燥ケーキの水分量及びＴｇ
Figure 2022529002000015
１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａ、及び５Ａのウイルス力価及びｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力を、３５℃で２週間の短期間ストレス試験後に試験した。５種の製剤は、３５℃で２週間後、４７％～７５％の効力を保持することができた（図１７Ｃ）。４０℃で４週間後に３５％の効力を有した製剤１Ａは、５℃で１２ヶ月後に９０％の効力を示した（表１の製剤５は、表３の製剤１Ａである）。図１２に示すとおり、効力は、３５℃という温度ストレスゆえに低下し、２週間から４週間でプラトーになる。本発明者らは、１％水分量範囲での製剤１Ａ～５Ａの長期安定性を知らないが、３５℃ストレス試験の結果は、より良好な長期安定性を示唆している。
今回、本発明者らは、Ｔｒｉｓで緩衝化されており、ＡＡＶ自己凝集を防ぐための塩として２０または３０ｍＭいずれかで最小量のクエン酸塩または硫酸塩いずれか、塩結晶化を阻害し凍結保護及び凍結乾燥保護ガラス状態をもたらすためのスクロース、ＡＡＶの表面吸着を防ぐためのポロキサマー１８８、ならびに「可塑剤」グリセロールを含有する製剤が、ＡＡＶに適切な凍結乾燥安定性をもたらすことを実証した。製剤１Ａ、２Ａ、４Ａ、及び５Ａは全て、好適なＴｇ’温度ならびにＡＡＶカプシドを凍結及び乾燥ストレスから保護することによる高い効力を維持ししつつ、ＡＡＶ凝集を阻害するために異なる賦形剤を独自に選択することによる、ＡＡＶ凍結乾燥用の製剤の候補である。
等価物
本発明は、その特定の実施形態に関連して詳細に記載されているものの、当然のことながら、機能的に等価である変異形態は、本発明の範囲内に含まれる。実際、本明細書中示され及び記載されるものに加えて、本発明の様々な修飾が、上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。そのような修飾は、添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。当業者なら、本明細書中記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物が、わかる、または常用実験に過ぎないものを用いて確かめることができるだろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲により包含されるものとする。
本明細書中言及される、全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それらの中で引用されるポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列の両方も含めて、個別の刊行物、特許、または特許出願それぞれが、具体的及び個別にそのまま全体が本明細書中参照として援用されると示されたのと同じ程度に、本明細書に参照として援用される。

Claims (134)

  1. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）緩衝剤、
    ｂ）糖、及び
    ｃ）非晶質塩と
    を含む、安定製剤であって、
    凍結乾燥に適している、前記製剤。
  2. 前記緩衝剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、請求項１に記載の製剤。
  3. 約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、請求項２に記載の製剤。
  4. 約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約４０ｍＭのＴｒｉｓを含む、請求項２に記載の製剤。
  5. 約５ｍＭのＴｒｉｓを含む、請求項２に記載の製剤。
  6. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）緩衝剤、
    ｂ）糖、及び
    ｃ）イオン強度が６０ｍＭより高い非晶質塩と
    を含む、安定製剤であって、
    凍結乾燥に適している、前記製剤。
  7. 前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する、請求項６に記載の製剤。
  8. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）緩衝剤、
    ｂ）糖、及び
    ｃ）イオン強度が６０ｍＭ～１５０ｍＭである非晶質塩と
    を含む、安定製剤であって、
    凍結乾燥に適している、前記製剤。
  9. 前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ８カプシドを有する、請求項８に記載の製剤。
  10. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）緩衝剤、
    ｂ）糖、及び
    ｃ）イオン強度が３０～１００ｍＭである非晶質塩と
    を含む、安定製剤であって、
    凍結乾燥に適している、前記製剤。
  11. 前記ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ９カプシドを有する、請求項１０に記載の製剤。
  12. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）緩衝剤、
    ｂ）糖、及び
    ｃ）イオン強度が２００ｍＭより高い非晶質塩と
    を含む、安定製剤であって、
    凍結乾燥に適している、前記製剤。
  13. 前記ｒＡＡＶ粒子は、ｒＡＡＶ８カプシドもｒＡＡＶ９カプシドも有さない、請求項１２に記載の製剤。
  14. 前記非晶質塩は、クエン酸ナトリウムである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  15. 前記非晶質塩は、硫酸ナトリウムである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  16. 前記非晶質塩は、硫酸アンモニウムである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  17. 前記非晶質塩は、硫酸マグネシウムである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  18. 前記非晶質塩は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、またはそれらの組み合わせである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  19. クエン酸ナトリウムを含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  20. 硫酸ナトリウムを含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  21. 硫酸アンモニウムを含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  22. 硫酸マグネシウムを含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  23. クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  24. 前記製剤は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、または約２００ｍＭの硫酸ナトリウムを含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の製剤。
  25. ｐＨが約６．５～８．０である、請求項１から２４のいずれか１項に記載の製剤。
  26. ｐＨが約７．２～７．８である、請求項２５に記載の製剤。
  27. ｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である、請求項２５に記載の製剤。
  28. ｐＨが約７．５である、請求項２５に記載の製剤。
  29. 約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、請求項１から２８のいずれか１項に記載の製剤。
  30. 約５０ｍＭ～約３５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、または約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの糖を含む、請求項２９に記載の製剤。
  31. 約１００ｍＭ～約４００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約２００ｍＭ～約４００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約４００ｍＭ、または約３００ｍＭ～約４００ｍＭの糖を含む、請求項２９に記載の製剤。
  32. 約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭ～約３５０ｍＭの糖を含む、請求項２９に記載の製剤。
  33. 約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、または約３５０ｍＭの糖を含む、請求項２９に記載の製剤。
  34. 約１９０ｍＭ～約２３０ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２５０ｍＭ、または約１５０ｍＭ～約２７０ｍＭの糖を含む、請求項２９に記載の製剤。
  35. 約２１０ｍＭの糖を含む、請求項２９に記載の製剤。
  36. 前記糖は、非還元糖である、請求項１から３５のいずれか１項に記載の製剤。
  37. 前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、請求項３６に記載の製剤。
  38. 前記非還元糖は、スクロースである、請求項３６に記載の製剤。
  39. 前記糖は、還元糖である、請求項１から３５のいずれか１項に記載の製剤。
  40. 前記還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、請求項３９に記載の製剤。
  41. 約１００ｍＭ未満のクエン酸ナトリウムを含む、請求項１から４０のいずれか１項に記載の製剤。
  42. 約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、請求項４１に記載の製剤。
  43. 約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、約２０ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭ、約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１０ｍＭ～約８０ｍＭ、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、請求項４１に記載の製剤。
  44. 約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、請求項４１に記載の製剤。
  45. 約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約６０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、請求項４１に記載の製剤。
  46. 約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む、請求項４１に記載の製剤。
  47. さらに、約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤を含む、請求項１から４６のいずれか１項に記載の製剤。
  48. 約０．００２％の非イオン性界面活性剤を含む、請求項４７に記載の製剤。
  49. 前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、またはＢＲＩＪ ３５を含む、請求項４６または請求項４７に記載の製剤。
  50. 前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８を含む、請求項４９に記載の製剤。
  51. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約１ｍＭ～約２５ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約５０ｍＭ～約４００ｍＭの糖、
    ｃ）約１０ｍＭ～約１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
    ｄ）約０．０００５％～約０．０１％の非イオン性界面活性剤と
    を含む、安定製剤であって、
    ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
  52. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約２ｍＭ～約１０ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの糖、
    ｃ）約１０ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
    ｄ）約０．００１％～約０．００５％の非イオン性界面活性剤と
    を含む、安定製剤であって、
    ｐＨが約７．２～約７．８である、前記製剤。
  53. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約２１０ｍＭの糖、
    ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
    ｄ）約０．００２％の非イオン性界面活性剤と
    を含む、安定製剤であって、
    ｐＨが約７．５である、前記製剤。
  54. 前記糖は、非還元糖である、請求項５１から５３のいずれか１項に記載の製剤。
  55. 前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、請求項５４に記載の製剤。
  56. 前記非還元糖は、スクロースである、請求項５５に記載の製剤。
  57. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
    ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び
    ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
    を含む、安定製剤。
  58. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
    ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
    ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
    ｅ）約０．２５％（ｗ／ｖ）のグリセロールと
    を含む、安定製剤。
  59. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約２１０ｍＭのスクロース、
    ｃ）約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
    ｄ）約０．００２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、及び
    ｅ）約０．５％（ｗ／ｖ）ソルビトールと
    を含む、安定製剤。
  60. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子と、ならびに
    ａ）約５ｍＭのＴｒｉｓ、
    ｂ）約３０ｍＭの硫酸ナトリウム、
    ｃ）約２６３ｍＭのスクロース、及び
    ｄ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８と
    を含む、安定製剤。
  61. 凍結乾燥に適している、請求項１から６０のいずれか１項に記載の製剤。
  62. ｐＨが約７．５である、請求項１から６１のいずれか１項に記載の製剤。
  63. ｐＨが約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、または７．８である、請求項１から６１のいずれか１項に記載の製剤。
  64. ｐＨが約７．１である、請求項１から６１のいずれか１項に記載の製剤。
  65. ｐＨが約６．５～８．０である、請求項１から６１のいずれか１項に記載の製剤。
  66. ｐＨが約７．２～約７．８である、請求項１から６１のいずれか１項に記載の製剤。
  67. 約１．０Ｅ＋１１ゲノムコピー／ｍＬ（ＧＣ／ｍＬ）～約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、請求項１から６６のいずれか１項に記載の製剤。
  68. 約１．０Ｅ＋１１ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ＧＣ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１４ＧＣ／ｍＬ、または約１．０Ｅ＋１５ＧＣ／ｍＬのｒＡＡＶ粒子を含む、請求項６７に記載の製剤。
  69. 前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ－１４、ＡＡＶ－１５及びＡＡＶ－１６、ｒＡＡＶ．ｒｈ８、ｒＡＡＶ．ｒｈ１０、ｒＡＡＶ．ｒｈ２０、ｒＡＡＶ．ｒｈ３９、ｒＡＡＶ．Ｒｈ７４、ｒＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ｒＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ｒＡＡＶ２．５、ｒＡＡＶ２ｔＹＦ、ｒＡＡＶ３Ｂ、ｒＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、またはＡＡＶ．ＨＳＣ１６のカプシドタンパク質を含む、請求項１から６８のいずれか１項に記載の製剤。
  70. 前記ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ－８またはＡＡＶ－９血清型のカプシドタンパク質を含む、請求項６９に記載の製剤。
  71. さらに、グリセロールまたはソルビトールからなる群より選択される安定剤を含む、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  72. さらに、グリセロールを含む、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  73. 約０．１％～約５％のグリセロールを含む、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  74. 約０．１％～約２％のグリセロールを含む、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  75. 約０．２５％～約２％のグリセロールを含む、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  76. マンニトールを含まない、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  77. １５０ｍＭ、１００ｍＭ、５０ｍＭ、２０ｍＭ、または１０ｍＭ未満のマンニトールを含む、請求項１から７０のいずれか１項に記載の製剤。
  78. 前凍結乾燥製剤である、請求項１から７７のいずれか１項に記載の製剤。
  79. 残存水分量が約１％～約７％である、請求項に記載の製剤。
  80. 前記残存水分量は、約１％～約７％、約２％～約７％、約３％～約７％、約４％～約７％、約５％～約７％、約１％～約６％、約１％～約５％、約１％～約４％、または約１％～約３％である、請求項７９に記載の製剤。
  81. 前記残存水分量は、約３％～約７％、約３％～約６％、または約３％～約５％である、請求項７９に記載の製剤。
  82. 前記残存水分量は、約３％、約３．５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、または約６％である、請求項７９に記載の製剤。
  83. 前記水分量は、約１％～約２％である、請求項７９に記載の製剤。
  84. 前記水分量は、約１．５％、約１．４％、約１．３％、約１．２％、または約１．１％である、請求項７９に記載の製剤。
  85. 前記水分量は、約１％である、請求項７９に記載の製剤。
  86. 前記製剤の凍結乾燥ケーキのガラス転移温度（Ｔｇ）は、３５℃より高い、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  87. 前記製剤の最大凍結濃縮溶液のガラス転移温度（Ｔｇ’）は、－４０℃より高い、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  88. 前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で３ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  89. 前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を室温で６ヶ月間貯蔵した後、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）中、－７０℃で貯蔵されている、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  90. 前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で１週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  91. 前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で２週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵されている、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  92. 前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、前記製剤を３５℃で４週間貯蔵した後、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも６０％であり、ただし参照ｒＡＡＶ粒子は、０．００１％ポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳ中、－７０℃で貯蔵される、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  93. 前記製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される、請求項８７から９２のいずれか１項に記載の製剤。
  94. 前記凍結乾燥製剤は、貯蔵後に再構築される、請求項９４に記載の製剤。
  95. 前記ｒＡＡＶ粒子の相対効力％は、凍結乾燥直後、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％である、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  96. 前記製剤のｒＡＡＶ粒子凝集のレベルは、参照製剤中のｒＡＡＶ粒子凝集のレベルと比較した場合に、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％低下している、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  97. 前記製剤の安定性は、ベクターゲノム含有量またはウイルス力価アッセイにより評価され、前記製剤は、前記製剤を１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同じ条件下で貯蔵した参照製剤のゲノム含有量と比較した場合、前記ゲノム含有量が、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％多い、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  98. 前記製剤の安定性は、前記製剤の相対効力を測定することにより評価され、前記製剤は、前記製剤を１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同じ条件下で貯蔵した参照製剤のゲノム含有量と比較した場合、前記相対効力が、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％高い、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  99. 前記製剤の安定性は、感染力の低下により評価され、前記製剤は、前記製剤を１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同じ条件下で貯蔵した参照製剤の感染力の低下と比較した場合、前記感染力の低下が、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％少ない、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  100. 前記製剤の安定性は、ｒＡＡＶゲノム放出により評価され、前記ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定され、及び前記製剤は、前記製剤を１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年間、２年間、または３年間貯蔵後、同じ条件下で貯蔵した参照製剤の相対蛍光レベルと比較した場合、前記相対蛍光レベルが、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、または約２００％低い、請求項１から７８のいずれか１項に記載の製剤。
  101. 前記製剤は、貯蔵前に凍結乾燥される、請求項９７から１００のいずれか１項に記載の製剤。
  102. 前記凍結乾燥製剤は、貯蔵後に再構築される、請求項１０１に記載の製剤。
  103. 前記製剤は、－８０℃、－７０℃、－２０℃、４℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、または４０℃で貯蔵される、請求項９７から１０２のいずれか１項に記載の製剤。
  104. 前記参照製剤は、０．００１％のポロキサマー１８８緩衝剤を含むＤＰＢＳである、請求項９６から１０３のいずれか１項に記載の製剤。
  105. 前記参照製剤は、糖を含まない製剤である、請求項９６から１０４のいずれか１項に記載の製剤。
  106. 前記参照製剤は、可塑剤を含まない製剤である、請求項９６から１０５のいずれか１項に記載の製剤。
  107. 前記製剤は、凍結乾燥のプロセスにおいて、約－２０℃の温度に凍結される、請求項１から１０６のいずれか１項に記載の製剤。
  108. 凍結製剤は、－２０℃に凍結されるときに、ｐＨを約ｐＨ６～約ｐＨ９に維持する、請求項１から１０７のいずれか１項に記載の製剤。
  109. 凍結製剤は、－２０℃で凍結される場合に、ｐＨ値を凍結前のｐＨ値のプラスまたはマイナス１単位の範囲内に維持する、請求項１から１０７のいずれか１項に記載の製剤。
  110. 凍結乾燥用のｒＡＡＶの安定化水性製剤である、請求項１から１０９のいずれか１項に記載の製剤。
  111. 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子を含む安定製剤の製造法であって、ｒＡＡＶ粒子を、請求項１から１０８のいずれか１項に記載の製剤の緩衝剤、糖、塩、任意選択で可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤と混合し、それによりｒＡＡＶを含む前記製剤を製造することを含む、前記方法。
  112. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
  113. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
  114. さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約５％にすることを含む、請求項１１２または１１３に記載の方法。
  115. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
  116. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出の減少法であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記方法。
  117. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
  118. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための糖の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
  119. さらに、前記製剤を凍結乾燥させて、残存水分量を約１％～約７％にすることを含む、請求項１１７または１１８に記載の使用。
  120. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、３回の凍結融解サイクル後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
  121. ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出を減少させるための可塑剤の使用であって、ｒＡＡＶ粒子、緩衝剤、糖、塩、可塑剤、及び任意選択で非イオン性界面活性剤を含む製剤を製造することを含み、凍結乾燥及び再構築後の前記ｒＡＡＶ粒子からのｒＡＡＶゲノム放出は、前記糖を含まない製剤におけるｒＡＡＶゲノム放出に比べて減少している、前記使用。
  122. ｒＡＡＶゲノム放出は、ＤＮＡ特異的蛍光染色の存在下で相対蛍光を測定することにより特定される、請求項１１２から１１６のいずれか１項に記載の方法または請求項１１７から１２１のいずれか１項に記載の使用。
  123. 凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、少なくとも約１０％、２０％、５０％、８０％、または９０％減少している、請求項１１２から１１６及び１２２のいずれか１項に記載の方法または請求項１１７から１２１のいずれか１項に記載の使用。
  124. 凍結により誘導されるｒＡＡＶゲノム放出は、実質的に排除されている、請求項１１２から１１６及び１２２のいずれか１項に記載の方法または請求項１１７から１２１のいずれか１項に記載の使用。
  125. 前記糖は、非還元糖である、請求項１１２から１１６及び１２２から１２４のいずれか１項に記載の方法または請求項１１７から１２４のいずれか１項に記載の使用。
  126. 前記非還元糖は、スクロース、トレハロース、またはラフィノースである、請求項１２５に記載の方法または請求項１２５に記載の使用。
  127. 前記非還元糖は、スクロースである、請求項１２５に記載の方法または請求項１２５に記載の使用。
  128. 前記糖は、還元糖である、請求項１１２から１１６及び１２２から１２４のいずれか１項に記載の方法または請求項１１７から１２４のいずれか１項に記載の使用。
  129. 還元糖は、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、またはラクトースである、請求項１２２に記載の方法または請求項１２２に記載の使用。
  130. 前記還元糖は、ブドウ糖である、請求項１２８に記載の方法または請求項１２８に記載の使用。
  131. 前記可塑剤は、グリセロールを含む、請求項１１１から１１７及び１２２から１３０のいずれか１項に記載の方法または請求項８２から１０５のいずれか１項に記載の使用。
  132. 前記製剤は、請求項１から１１０のいずれか１項に記載のものである、請求項１１１から１１７及び１２２から１３１のいずれか１項に記載の方法または請求項８２から１０６のいずれか１項に記載の使用。
  133. ｒＡＡＶ産物の安定凍結乾燥製剤の製造法であって、前凍結乾燥された製剤を凍結乾燥に供する工程を含み、前凍結乾燥された製剤は、請求項１から１１０のいずれか１項に記載のものである、前記方法。
  134. 疾患の治療または予防法であって、それを必要とする対象に、再構築された安定凍結乾燥製剤であるｒＡＡＶ製剤を治療上有効量で投与することを含み、前記安定凍結乾燥製剤の前凍結乾燥された製剤は、請求項１から１１０のいずれか１項に記載のものである、前記方法。
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