JP2022525361A - ウイルス不活性化のための代替的界面活性剤 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、参照により本明細書に組み込まれる2019年3月19日出願の米国仮特許出願第62/820,330号の利益を主張するものである。
本発明は、少なくとも1つのウイルスを含有することが知られているか又は含有することが疑われる目的の組換えタンパク質を含む液体を得ることと;液体を少なくとも1つの界面活性剤に、液体中のエンベロープウイルスの不活性化を引き起こすのに十分な濃度及び時間で曝露することであって、界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、CAS85618-20-8、CAS181135-58-0、CAS181135-57-9、CAS250692-65-0、CAS228579-27-9、CAS349477-49-2、CAS70504-28-8、CAS59080-45-4、CAS69984-73-2、CAS148616-91-5、CAS148565-55-3、CAS69227-93-6、CAS82494-09-5、CAS253678-67-0、CAS106402-05-5、又はCAS93911-12-7のCAS登録番号を有することと;ウイルス不活性化液体を少なくとも濾過工程又はクロマトグラフィー工程を含む少なくとも1つの単位操作に曝露することと、を含む、目的の組換えタンパク質の精製中にエンベロープウイルスを不活性化するための方法を提供する。一実施形態では、界面活性剤は、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、及びCAS85618-20-8から選択される。一実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも30秒~少なくとも60分間又はそれ以上曝露される。関連実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも10分間曝露される。関連実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも30分間曝露される。別の関連実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも60分間又はそれ以上曝露される。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は、その臨界ミセル濃度(CMC)の少なくとも2.5倍~少なくとも10倍又はそれ以上である。関連実施形態では、界面活性剤の濃度は、そのCMCの少なくとも5倍である。関連実施形態では、界面活性剤の濃度は、そのCMCの少なくとも7.5倍である。別の関連実施形態では、界面活性剤の濃度は、そのCMCの少なくとも10倍である。関連実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも5℃~22℃の温度で行われる。関連実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも5℃の温度で行われる。関連実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも15℃の温度で行われる。別の実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも20℃の温度で行われる。別の実施形態では、不活性化は、TCID50アッセイを使用して測定される。別の実施形態では、液体は、目的の組換えタンパク質を含む。別の実施形態では、液体は、回収された宿主細胞培養液である。別の実施形態では、液体は、回収工程、濾過工程、又はクロマトグラフィー工程を含む単位操作からの流出液流、溶出液、プール、保存物、又は保持物由来である。別の実施形態では、液体は、深層濾過、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから回収される溶出液である。別の実施形態では、液体は、回収された細胞培養液、深層濾過からの溶出液、親和性クロマトグラフィーからの溶出液、イオン交換クロマトグラフィーからの溶出液、マルチモーダルクロマトグラフィーからの溶出液、疎水性相互作用クロマトグラフィーからの溶出液、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーからの溶出液を含有するプールである。一関連実施形態では、親和性クロマトグラフィーは、プロテインA、プロテインG、プロテインA/G、又はプロテインLクロマトグラフィーである。別の実施形態では、クロマトグラフィーは、親和性クロマトグラフィー、プロテインAクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー;疎水性相互作用クロマトグラフィー;混合モーダル若しくはマルチモーダルクロマトグラフィー、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから選択される。別の実施形態では、液体は、回収された宿主細胞培養液であり、単位操作は、深層濾過を含む。別の実施形態では、液体は、回収された宿主細胞培養液であり、単位操作は、プロテインA親和性クロマトグラフィーを含む。別の実施形態では、液体は、プロテインA溶出液であり、単位操作は、深層濾過を含む。別の実施形態では、単位操作は、深層濾過を含む。一実施形態では、単位操作は、精密濾過を含む。一実施形態では、界面活性剤の濃度はそのCMCの5倍であり、時間は少なくとも10分である。
本発明はまた、単離され、精製された目的の組換えタンパク質を製造するための方法であって、組換えタンパク質を発現する宿主細胞を用いてバイオリアクター内で細胞培養を確立し、目的の組換えタンパク質を発現するように細胞を培養することと;目的の組換えタンパク質を含有する細胞培養液を回収することと;目的の組換えタンパク質を含有する回収された液体を、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、CAS85618-20-8、CAS181135-58-0、CAS181135-57-9、CAS250692-65-0、CAS228579-27-9、CAS349477-49-2、CAS70504-28-8、CAS59080-45-4、CAS69984-73-2、CAS148616-91-5、CAS148565-55-3、CAS69227-93-6、CAS82494-09-5、CAS253678-67-0、CAS106402-05-5、又はCAS93911-12-7のCAS登録番号を有する界面活性剤に、エンベロープウイルスの不活性化を引き起こすのに十分な界面活性剤濃度及び時間で曝露することと;少なくとも2つの更なる単位操作により、目的の組換えタンパク質を含有するウイルス不活化液体を処理することと;単離され、精製された目的の組換えタンパク質を得ることと、を含む、方法を提供する。一実施形態では、界面活性剤は、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、及びCAS85618-20-8から選択される。一実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも30秒~少なくとも60分間又はそれ以上曝露される。関連実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも10分間曝露される。関連実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも30分間曝露される。別の関連実施形態では、液体は、界面活性剤に少なくとも60分間又はそれ以上曝露される。別の実施形態では、界面活性剤の濃度は、その臨界ミセル濃度(CMC)の少なくとも2.5倍~少なくとも10倍又はそれ以上である。関連実施形態では、界面活性剤の濃度は、そのCMCの少なくとも5倍である。関連実施形態では、界面活性剤の濃度は、そのCMCの少なくとも7.5倍である。別の関連実施形態では、界面活性剤の濃度は、そのCMCの少なくとも10倍である。関連実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも5℃~22℃の温度で行われる。関連実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも5℃の温度で行われる。関連実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも15℃の温度で行われる。別の実施形態では、液体の界面活性剤への曝露は、少なくとも20℃の温度で行われる。別の実施形態では、不活性化は、TCID50アッセイを使用して測定される。別の実施形態において、少なくとも1つの単位操作としては、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから選択される捕捉クロマトグラフィー工程が挙げられる。別の実施形態において、少なくとも1つの単位操作としては、イオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから選択されるポリッシュクロマトグラフィー工程が挙げられる。別の実施形態において、少なくとも1つの単位操作としては、ウイルス濾過、深層濾過、及びUF/DFから選択される工程が挙げられる。別の実施形態では、ウイルス不活性化工程を含む単位操作は、親和性クロマトグラフィーを含む単位操作の前に行われる。別の実施形態では、親和性クロマトグラフィーを含む単位操作は、ウイルス不活性化工程を含む単位操作の前に行われる。一実施形態では、ウイルス不活性化工程を含む単位操作は、深層濾過を含む単位操作の前に行われる。一実施形態では、上記の方法に従って、単離され、精製された目的の組換えタンパク質が提供される。一実施形態では、上記の方法に従って、単離された目的のタンパク質を含む医薬組成物が提供される。一実施形態では、界面活性剤の濃度はそのCMCの5倍であり、時間は少なくとも10分である。
ウイルスストック
xMuLV、PRV、及びMMVのウイルス株を、Romanowski et al.,Bioprocess Int 2008,6(2),44-52で先に記載したように生成した。細胞変性効果(CPE)を特定するために、ウイルスと互換性のあるインジケーター細胞株を使用した。xMuLVの場合、細胞株PG4(ネコの星状細胞株)を使用した。CPEは接種の7日後に測定した。細胞株324Kを使用して接種10日後のMMVのCPEを測定し、PRVの場合はVero細胞株を3日間のアッセイで使用した。
96種類の界面活性剤の初期スクリーニングは、ウイルスクリアランス研究で一般的に使用されるマウスレトロウイルスであるxMuLVを使用して実施した。Hampton Research(HR2-406),Aliso Viejo,CAからの96ディープウェルプレート上でスクリーニングを実施した。試験された界面活性剤は、非イオン性、双性イオン性、及びイオン性の特性を含む、様々な両性特性を有した。スクリーニングで評価された全ての界面活性剤は、それらの臨界ミセル濃度(CMC)値の10倍であるか、又はハンプトンキットで示されるように10%w/vであった。15℃で5%ウイルススパイクを30分間行った後、各界面活性剤の重複分析を評価した。界面活性剤の不活性化を停止するのに希釈が効果的であることを示すために、5%v/vの水スパイクを用いた対照も同時に実行した。複製実行及び対照実行の各々は、細胞毒性及び干渉を減らすために培地で1:300に希釈し、25%コンフルエントなPG4付着細胞とインキュベートした。インキュベーション期間後、接種したPG4細胞の任意のCPEについてウェルを分析した。
xMuLVを不活化した界面活性剤のうちの19種類は、化学物質の安全性に関する欧州連合指令67/548/ECに従って、現在危険ではないと見なされている。これらの界面活性剤は、更に2つのウイルス、別のエンベロープウイルスPRV、及び非エンベロープウイルスMMVに対して、CMC値の5倍で更に試験された。両方のウイルスを5%v/vで試験し、それ以外の場合は、上記の最初の界面活性剤スクリーニングで説明したのと同じ条件及びアッセイを使用した。
Anapoe C12E8(CAS番号3055-98-9)、Anapoe C12E9(CAS番号3055-99-90)、CYMAL(登録商標)-5(CAS番号250692-65-0)、Fos-Choline(登録商標)-10(CAS番号70504-28-8)、(Anatrace,Maumee,OHにより供給される)、及びN-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシド(CAS番号85618-20-8)(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)を、なおもウイルスを不活化するための最低濃度について評価した。臨界ミセル濃度の2.5倍、5倍、及び7.5倍の濃度を、15℃でxMuLVに対して評価し、上記のように界面活性剤とウイルスを30分間インキュベートした。
Anapoe C12E8、Anapoe C12E9、CYMAL(登録商標)-5、Fos-Choline(登録商標)-10、及びN-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシドを、5℃~22℃の温度で、xMuLVに対して、並びに3つの異なるタンパク質モダリティである、モノクローナル抗体(mAb#1)、二重特異性T細胞エンゲージャー(BiTE(登録商標)#1)、及びXmAb融合タンパク質(融合タンパク質#1)を含有する基質(宿主細胞培養液)で評価した。30秒、10分、及び30分の時点を取り、1:300に希釈した。これは、前述のように(Romanowski et al.,前述)、スピアマン-カーバー法を使用してバッファーマトリックスが毒性及び干渉を引き起こさない希釈であった。Triton X100対照(Millipore Sigma,Temacula,CA)を18℃で2回実行した。
Anapoe C12E8、Anapoe C12E9、CYMAL(登録商標)-5、Fos-Choline(登録商標)-10、及びN-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシドを3つの時点:30秒、10分、及び30分で、xMuLVに対して、並びに3つの異なるタンパク質モダリティである、モノクローナル抗体(mAb#1)、二重特異性T細胞エンゲージャー(BiTE(登録商標)#1)、及びXmAb融合タンパク質(融合タンパク質#1)を含有する基質(宿主細胞培養液)で評価した。30秒、10分、及び30分の時点を取り、1:300に希釈した。これは、スピアマン-カーバー法を使用してバッファーマトリックスが毒性及び干渉を引き起こさない希釈であった。
界面活性剤であるAnapoe C12E9のクリアランスを、モノクローナル抗体を含有するサンプルに対するプロテインAクロマトグラフィーの際に評価した。タンパク質サンプル(モノクローナル抗体を含有する宿主細胞培養液)に、0.03%の界面活性剤をスパイクし、プロテインAカラムに通した。Waters BioResolve(商標)ポリフェノール(Milford,MA)450Å、2.1×50mmカラムで、溶出ピークと界面活性剤をスパイクしたバッファーのクリアランスについて評価した。流量は65℃で0.5mL/分であった。0.1%TFA/0.1%ギ酸を含む水の固定相A、及び移動相Bとして90%n-プロパノールを用いた5分間のグラジエントを使用して、サンプルを分析した。
研究の範囲を拡張して、更に2つのアルキルエトキシレート誘導体を評価した。アルキルエトキシレート界面活性剤であるIsoC13E6(CMC:29.91mg/L)及びIso-C13E9(CMC:57.97mg/L)(Alfonic TDA-6エトキシレート、Novel-TDA6及びAlfonic TDA-9エトキシレート、Novel-TDA9、(Avantor,Radnor,PA;Sasol,Johannesburg,South Africa),CAS9043-30-5)としても入手可能)を、3つの濃度:それらのCMC値の2.5倍、5倍、及び7.5倍で試験した。サンプルは、mAb#1又は二重特異性T細胞エンゲージャー(BiTE(登録商標)#1)のいずれかを含有する宿主細胞培養液とともに、5%XMuLVスパイクを用いて5℃でインキュベートした。3つの時点:30秒、10分、及び30分での細胞毒性及び干渉を減少させるために、サンプルを1:300に希釈した。
界面活性剤スクリーニング
様々なイオン性、疎水性、及び構造的特性を備えた市販の96種類の界面活性剤を選択利用して、エンベロープモデルウイルスxMuLVに対して初期スクリーニングを実施した。表1に示すように、これらの界面活性剤のうちの51種類は、複製及び界面活性剤対照のいずれにおいてもCPEは特定されなかった。このグループには、非イオン性、双性イオン性、及び合成脂質界面活性剤が含まれていたが、試験されたイオン性界面活性剤はいずれもウイルスの不活化を示さなかった。
これらの「環境に優しい」界面活性剤は、分子構造に基づいて4つのクラスに分けられ、「CYMAL」、「Fos-Choline」、「Anapoe」、及び「チオグルコシド」とラベル付けされた(図1)。
19種類の「環境に優しい」界面活性剤を、異なるエンベロープウイルスであるPRV、及び非エンベロープウイルスであるマウス微小ウイルス(MMV)で更に試験した。19種類の界面活性剤は全てxMuLVと同様にPRVを不活化したが、MMVには影響を与えなかった。これは、界面活性剤がエンベロープウイルスには影響を与えるが、非エンベロープウイルスには影響を与えないことを示す。Triton X-100もエンベロープウイルスにのみ影響を及ぼし、これらの界面活性剤が同様の方法で脂質エンベロープを破壊する可能性があることを示す。
xMuLVの不活性化の必要な最低濃度を決定するために;CYMAL(登録商標)-5、Anapoe C12E8、Anapoe C12E9、FosCholine(登録商標)-10、及びN-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシドを、xMuLV、PRV、及びMMVに対して、それらのCMC値の2.5倍、5倍、及び7.5倍で重複して試験した。試験された全てのウイルスについて、2.5倍のCMCが細胞変性効果(CPE)を示した;したがって、その後の研究は、界面活性剤のCMC値の5倍で評価した。
Anapoe C12E8、Anapoe C12E9、N-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシド、CYMAL(登録商標)-5、及びFos-Choline(登録商標)-10を、3つのタンパク質治療モダリティである、モノクローナル抗体(mAb)、二重特異性T細胞エンゲージャー(BiTE(登録商標))、及び融合タンパク質(XmAb)の存在下、様々な温度で分析した(表2)。Anapoe界面活性剤及びN-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシドはいずれも、5℃及び15℃の両方で30分で完全な不活性化を示し、これは、製造環境の「最悪な場合のシナリオ」の温度を表す。これらの3つの界面活性剤は、BiTE(登録商標)及びmAbモダリティの両方については、Triton X-100に匹敵するLRV値を有し、融合タンパク質のクリアランスについては更に優れている。
ウイルス不活性化が起こる速度を評価をするために、3つの時点:30秒、10分、及び30分で試験した。30秒以内に、Anapoe C12E8及びN-ヘプチル-β-D-チオグルコピラノシドについて、試験した3つの治療モダリティ全てに対してxMuLVの完全な不活化が観察された。Anapoe C12E9は、mAb#1に対して30秒で完全な不活化を示し、融合タンパク質#1及びBiTE(登録商標)#1に対して10分以内に完全な不活化を示した(表5を参照)。Anapoe C12E9は、試験した3つの治療モダリティ全てで10分以内に完全なクリアランスを示した。Anapoe C12E9のCMC値はAnapoe C12E8の半分、つまり、同じLRVを実現するために必要な界面活性剤は大幅に少なくなることを意味する。商業用生産量へのスケールアップの場合、この特性は非常に有益である。
ウイルス不活化プロセス後に界面活性剤を完全に除去できるようにするために、mAbを含有する宿主細胞培養液に0.03%のAnapoe C12E8界面活性剤をスパイクし、プロテインAクロマトグラフィーを使用して親和性精製した。液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)を使用して、クロマトグラフィー実行後に残された界面活性剤の量を分析した。結果は、プロテインAクロマトグラフィー工程中に界面活性剤が除去されたことを示す(図2)。
強力なウイルスクリアランスに必要な界面活性剤の特異性を更に理解するために、分枝したイソプロピル基を組み込んだ更に2つのアルキルエトキシレートを評価した。いずれの界面活性剤もまた、CMC値の5倍又はそれを超える濃度でxMuLVの強力なクリアランスを有した。高LRVは、2つの治療モダリティである、mAb#1及びBiTE(登録商標)#1で観察された(表6)。これらの結果は、広範囲のAnapoe誘導体の強力なウイルス不活性化能力を示す。
濁度、溶解度、及び高分子量化学腫(HMW)で測定した場合、4つの異なるタンパク質モダリティの安定性に悪影響を与えるかどうかを判断するために、3種類の界面活性剤を更に試験した。加えて、HMWのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC-HPLC)及び低分子量化学種(LMW)の還元キャピラリー電気泳動-ドデシル硫酸ナトリウム(rCE-SDS)で製品品質を測定した。
パーセント高分子量(%HMW)及びパーセント低分子量(%LMW)を使用して、界面活性剤をスパイクしたサンプルの安定性を測定した。%HMWはサンプル中のタンパク質の凝集を測定し、%LMWはタンパク質のクリッピングを測定した。これらの製品品質属性は、界面活性剤の存在が親和性精製プロセス又は親和性精製された材料の製品品質に影響を与えるかどうかを判断するために、親和性カラム精製の前後に測定された。
Claims (55)
- 少なくとも1つのエンベロープウイルスを含有することが知られているか又は含有することが疑われる液体中のエンベロープウイルスを不活化する方法であって、
少なくとも1つのエンベロープウイルスを含有することが知られているか又は含有することが疑われる液体を得ることと;
前記液体を表1の界面活性剤に、ウイルス不活性化を引き起こすのに十分な濃度及び時間で曝露することと、
を含む、方法。 - 前記界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、CAS85618-20-8、CAS181135-58-0、CAS181135-57-9、CAS250692-65-0、CAS228579-27-9、CAS349477-49-2、CAS70504-28-8、CAS59080-45-4、CAS69984-73-2、CAS148616-91-5、CAS148565-55-3、CAS69227-93-6、CAS82494-09-5、CAS253678-67-0、CAS106402-05-5、又はCAS93911-12-7のCAS登録番号を有する、請求項1に記載の方法。
- 前記界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、又はCAS85618-20-8から選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記液体が、前記界面活性剤に少なくとも30秒~少なくとも60分間又はそれ以上曝露される、請求項1に記載の方法。
- 前記液体が、前記界面活性剤に少なくとも10分間曝露される、請求項4に記載の方法。
- 前記液体が、前記界面活性剤に少なくとも30分間曝露される、請求項4に記載の方法。
- 前記液体が、前記界面活性剤に少なくとも60分間又はそれ以上曝露される、請求項4に記載の方法。
- 前記界面活性剤の前記濃度が、その臨界ミセル濃度(CMC)の少なくとも2.5倍~少なくとも10倍又はそれ以上である、請求項1に記載の方法。
- 前記界面活性剤の前記濃度が、そのCMCの少なくとも5倍である、請求項8に記載の方法。
- 前記界面活性剤の前記濃度が、そのCMCの少なくとも7.5倍である、請求項8に記載の方法。
- 前記界面活性剤の前記濃度が、そのCMCの少なくとも10倍である、請求項8に記載の方法。
- 前記液体の前記界面活性剤への曝露が、少なくとも5℃~22℃の温度で行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記液体の前記界面活性剤への曝露が、少なくとも5℃の温度で行われる、請求項12に記載の方法。
- 前記液体の前記界面活性剤への曝露が、少なくとも15℃の温度で行われる、請求項12に記載の方法。
- 前記液体の前記界面活性剤への曝露が、少なくとも20℃の温度で行われる、請求項12に記載の方法。
- 前記濃度がそのCMCの5倍であり、前記時間が少なくとも10分である、請求項1に記載の方法。
- 不活性化が、TCID50アッセイを使用して測定される、請求項1に記載の方法。
- 前記液体が、目的の組換えタンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記液体が、回収された宿主細胞培養液である、請求項1に記載の方法。
- 前記液体が、回収工程、濾過工程、又はクロマトグラフィー工程を含む単位操作からの流出液流、溶出液、プール、保存物、又は保持物由来である、請求項1に記載の方法。
- 前記液体が、深層濾過、精密濾過、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから回収される溶出液である、請求項20に記載の方法。
- 前記液体が、回収された細胞培養液、深層濾過からの溶出液、精密濾過からの溶出液、親和性クロマトグラフィーからの溶出液、イオン交換クロマトグラフィーからの溶出液、マルチモーダルクロマトグラフィーからの溶出液、疎水性相互作用クロマトグラフィーからの溶出液、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーからの溶出液を含有するプールである、請求項20に記載の方法。
- 前記親和性クロマトグラフィーが、プロテインA、プロテインG、プロテインA/G、又はプロテインLクロマトグラフィーである、請求項22に記載の方法。
- 目的の組換えタンパク質の精製中にエンベロープウイルスを不活性化するための方法であって、
少なくとも1つのウイルスを含有することが知られているか又は含有することが疑われる前記目的の組換えタンパク質を含む液体を得ることと;
前記液体を少なくとも1つの界面活性剤に、前記液体中のエンベロープウイルスの不活性化を引き起こすのに十分な濃度及び時間で曝露することであって、前記界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、CAS85618-20-8、CAS181135-58-0、CAS181135-57-9、CAS250692-65-0、CAS228579-27-9、CAS349477-49-2、CAS70504-28-8、CAS59080-45-4、CAS69984-73-2、CAS148616-91-5、CAS148565-55-3、CAS69227-93-6、CAS82494-09-5、CAS253678-67-0、CAS106402-05-5、又はCAS93911-12-7のCAS登録番号を有することと;
前記ウイルス不活性化液体を少なくとも濾過工程又はクロマトグラフィー工程を含む少なくとも1つの単位操作に曝露することと、を含む、方法。 - 前記界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、及びCAS85618-20-8から選択される、請求項24に記載の方法。
- 前記濃度がそのCMCの5倍であり、前記時間が少なくとも10分である、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、目的の組換えタンパク質を含む、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、回収された宿主細胞培養液である、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、回収工程、濾過工程、又はクロマトグラフィー工程を含む単位操作からの流出液流、溶出液、プール、保存物、又は保持物由来である、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、深層濾過、精密濾過、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから回収される溶出液である、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、回収された細胞培養液、深層濾過からの溶出液、精密濾過からの溶出液、親和性クロマトグラフィーからの溶出液、イオン交換クロマトグラフィーからの溶出液、マルチモーダルクロマトグラフィーからの溶出液、疎水性相互作用クロマトグラフィーからの溶出液、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーからの溶出液を含有するプールである、請求項24に記載の方法。
- 前記親和性クロマトグラフィーが、プロテインA、プロテインG、プロテインA/G、又はプロテインLクロマトグラフィーである、請求項31に記載の方法。
- 前記クロマトグラフィーが、親和性クロマトグラフィー、プロテインAクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー;疎水性相互作用クロマトグラフィー;混合モーダル若しくはマルチモーダルクロマトグラフィー、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから選択される、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、回収された宿主細胞培養液であり、前記単位操作が、深層濾過を含む、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、回収された宿主細胞培養液であり、前記単位操作が、精密濾過を含む、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、回収された宿主細胞培養液であり、前記単位操作が、プロテインA親和性クロマトグラフィーを含む、請求項24に記載の方法。
- 前記液体が、プロテインA溶出液であり、前記単位操作が、深層濾過を含む、請求項24に記載の方法。
- 前記単位操作が、深層濾過を含む、請求項24に記載の方法。
- 前記単位操作が、精密濾過を含む、請求項24に記載の方法。
- 単離され、精製された目的の組換えタンパク質を製造するための方法であって、
組換えタンパク質を発現する宿主細胞を用いてバイオリアクター内で細胞培養を確立し、前記目的の組換えタンパク質を発現するように前記細胞を培養することと;
前記目的の組換えタンパク質を含有する細胞培養液を回収することと;
前記目的の組換えタンパク質を含有する前記回収された液体を、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、CAS85618-20-8、CAS181135-58-0、CAS181135-57-9、CAS250692-65-0、CAS228579-27-9、CAS349477-49-2、CAS70504-28-8、CAS59080-45-4、CAS69984-73-2、CAS148616-91-5、CAS148565-55-3、CAS69227-93-6、CAS82494-09-5、CAS253678-67-0、CAS106402-05-5、又はCAS93911-12-7のCAS登録番号を有する界面活性剤に、エンベロープウイルスの不活性化を引き起こすのに十分な界面活性剤濃度及び時間で曝露することと;
少なくとも2つの更なる単位操作により、前記目的の組換えタンパク質を含有する前記ウイルス不活化液体を処理することと;
単離され、精製された目的の組換えタンパク質を得ることと、
を含む、方法。 - 前記界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、及びCAS85618-20-8から選択される、請求項40に記載の方法。
- 前記濃度がそのCMCの5倍であり、前記時間が少なくとも10分である、請求項40に記載の方法。
- 請求項40に記載の、単離され、精製された目的の組換えタンパク質。
- 請求項40に記載の、単離された目的のタンパク質を含む医薬組成物。
- 単離され、精製された目的の組換えタンパク質を製造するための方法であって、
組換えタンパク質を発現する宿主細胞を用いてバイオリアクター内で細胞培養を確立し、前記目的の組換えタンパク質を発現するように前記細胞を培養することと;
前記目的の組換えタンパク質を含有する細胞培養液を回収することと;
少なくとも2つの単位操作により、前記目的の組換えタンパク質を含有する前記液体を処理することであって、少なくとも1つの単位操作中に、前記目的の組換えタンパク質を含有する前記液体を、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、CAS85618-20-8、CAS181135-58-0、CAS181135-57-9、CAS250692-65-0、CAS228579-27-9、CAS349477-49-2、CAS70504-28-8、CAS59080-45-4、CAS69984-73-2、CAS148616-91-5、CAS148565-55-3、CAS69227-93-6、CAS82494-09-5、CAS253678-67-0、CAS106402-05-5、又はCAS93911-12-7のCAS登録番号を有する界面活性剤と、エンベロープウイルスの不活性化を引き起こすのに十分な界面活性剤濃度及び時間で組み合わせる工程が存在することと、
単離され、精製された目的の組換えタンパク質を得ることと、
を含む、方法。 - 前記界面活性剤が、CAS3055-99-0、CAS3055-98-9、CAS9043-30-5、及びCAS85618-20-8から選択される、請求項45に記載の方法。
- 前記濃度がそのCMCの5倍であり、前記時間が少なくとも10分である、請求項45に記載の方法。
- 少なくとも1つの単位操作が、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから選択される捕捉クロマトグラフィー工程を含む、請求項45に記載の方法。
- 少なくとも1つの単位操作が、イオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーから選択されるポリッシュクロマトグラフィー工程を含む、請求項45に記載の方法。
- 少なくとも1つの単位操作が、ウイルス濾過、深層濾過、及びUF/DFから選択される工程を含む、請求項45に記載の方法。
- 前記ウイルス不活性化工程を含む前記単位操作が、親和性クロマトグラフィーを含む単位操作の前に行われる、請求項45に記載の方法。
- 親和性クロマトグラフィーを含む単位操作が、前記ウイルス不活性化工程を含む前記単位操作の前に行われる、請求項45に記載の方法。
- 前記ウイルス不活性化工程を含む前記単位操作が、深層濾過を含む単位操作の前に行われる、請求項45に記載の方法。
- 請求項45に記載の、単離され、精製された目的の組換えタンパク質。
- 請求項45に記載の、単離された目的のタンパク質を含む医薬組成物。
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