JP2022523442A - 抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体 - Google Patents
抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022523442A JP2022523442A JP2021553382A JP2021553382A JP2022523442A JP 2022523442 A JP2022523442 A JP 2022523442A JP 2021553382 A JP2021553382 A JP 2021553382A JP 2021553382 A JP2021553382 A JP 2021553382A JP 2022523442 A JP2022523442 A JP 2022523442A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- binding fragment
- bispecific antibody
- seq
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 223
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 209
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 209
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 209
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 161
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 64
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 163
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 99
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 81
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 72
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 52
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 22
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims description 17
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 13
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 54
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 11
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Chemical group 0.000 description 10
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 9
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 9
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 9
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 5
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 5
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 5
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 3
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000052088 human IL3RA Human genes 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 2
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- -1 LysC Proteins 0.000 description 2
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 1
- 229940086568 Alpha mannosidase I inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000000579 Epigen Human genes 0.000 description 1
- 108010016906 Epigen Proteins 0.000 description 1
- 241001482630 Epinnula magistralis Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000933320 Homo sapiens Breakpoint cluster region protein Proteins 0.000 description 1
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010052781 Interleukin-3 Receptor alpha Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000018883 Interleukin-3 Receptor alpha Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010038452 Interleukin-3 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010790 Interleukin-3 Receptors Human genes 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 1
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001436793 Meru Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000208474 Protea Species 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 101001059701 Spodoptera frugiperda Alpha-mannosidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000009227 antibody-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010087667 beta-1,4-mannosyl-glycoprotein beta-1,4-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- CEJLBZWIKQJOAT-UHFFFAOYSA-N dichloroisocyanuric acid Chemical compound ClN1C(=O)NC(=O)N(Cl)C1=O CEJLBZWIKQJOAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000405 induce cancer Toxicity 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 238000002407 reforming Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 108091052247 type I cytokine receptor family Proteins 0.000 description 1
- 102000042286 type I cytokine receptor family Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2019年3月11日出願の米国特許仮出願第62/816,464号の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、モノクローナル抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌細胞を殺傷するために抗体を使用する方法も提供される。
本出願は、ファイル名「PRD4012WOPCT Sequence Listing」及び2020年3月11日の作成日で、ASCII形式の配列表として、EFS-Webを介して電子的に提出されている、85kbのサイズを有する配列表を含有する。EFS-Webを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
a.第1の重鎖(HC1)と、
b.第2の重鎖(HC2)と、
c.第1の軽鎖(LC1)と、
d.第2の軽鎖(LC2)とを含み、
HC1は、LC1と会合し、HC2は、LC2と会合し、HC1は、配列番号1、配列番号2、及び配列番号3のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC1は、配列番号4、配列番号5、及び配列番号6のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、第1の抗原に対する結合部位を形成し、HC2及びLC2は、第2の抗原に対する結合部位を形成している。ある特定の実施形態では、第1の抗原に対する結合部位は、CD8+又はCD4+T細胞の表面上にあるVβ17に結合する。ある特定の実施形態では、第2抗原に対する結合部位は、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合する。
a.第1の重鎖(HC1)と、
b.第2の重鎖(HC2)と、
c.第1の軽鎖(LC1)と、
d.第2の軽鎖(LC2)とを含み、
HC1は、LC1と会合し、HC2は、LC2と会合し、HC1は、配列番号1、配列番号2、及び配列番号3のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC1は、配列番号4、配列番号5、及び配列番号6のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、Vβ17に特異的に結合する第1の抗原に対する結合部位を形成し、HC2は、配列番号34、配列番号35、及び配列番号36のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC2は、配列番号37、配列番号38、及び配列番号39のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、CD123に特異的に結合する第2の抗原に対する二重部位を形成している。ある特定の実施形態では、HC1は、配列番号13のアミノ酸配列を含み、LC1は、配列番号14のアミノ酸配列を含み、HC2は、配列番号15のアミノ酸配列を含み、LC2は、配列番号16のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Vβ17は、CD8+又はCD4+T細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、CD123は、癌細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約0.2pM未満のEC50でインビトロにおいて癌細胞のCD8+又はCD4+T細胞依存性細胞傷害を誘導する。
本明細書には、単離された抗Vβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物が記載される。本発明は、更に、単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該二重特異性抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、Vβ17及び/又はCD123に対する高親和性結合、Vβ17及び/又はCD123に対する高い特異性、並びに単独で又は他の抗癌療法と組み合わせて投与されたときに癌を治療又は予防する能力を含むがこれらに限定されない、1つ又は2つ以上の望ましい機能特性を有する。
a.それぞれ、配列番号1、2、3、4、5、及び6のポリペプチド配列を有し、
抗CD123抗体又はその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、これらは、
1.それぞれ、配列番号34、35、36、37、38、及び39のポリペプチド配列を有する。
別の一般的態様では、本発明は、癌細胞の表面上にあるCD123を標的化する方法に関し、この方法は、癌細胞を抗Vβ1717/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片に曝露することを含む。
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
a.第1の重鎖(HC1)と、
b.第2の重鎖(HC2)と、
c.第1の軽鎖(LC1)と、
d.第2の軽鎖(LC2)とを含み、
HC1は、LC1と会合し、HC2は、LC2と会合し、HC1は、配列番号1、配列番号2、及び配列番号3のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC1は、配列番号4、配列番号5、及び配列番号6のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、第1の抗原に対する結合部位を形成し、HC2及びLC2は、第2の抗原に対する結合部位を形成する。
a.第1の重鎖(HC1)と、
b.第2の重鎖(HC2)と、
c.第1の軽鎖(LC1)と、
d.第2の軽鎖(LC2)とを含み、
HC1は、LC1と会合し、HC2は、LC2と会合し、HC1は、配列番号1、配列番号2、及び配列番号3のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC1は、配列番号4、配列番号5、及び配列番号6のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、Vβ17に特異的に結合する第1の抗原に対する結合部位を形成し、HC2は、配列番号34、配列番号35、及び配列番号36のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC2は、配列番号37、配列番号38、及び配列番号39のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、CD123に特異的に結合する第2の抗原に対する結合部位を形成する。
マウスIgG1抗ヒトT細胞受容体Vβ17クローンE17.5FをBeckmanCoulter,Inc(Brea,CA)から得た。試料調製及びLC/MSMS分析を、Protea Bioscience Inc.(Morgantown,WV)で行った。試料を還元し、アルキル化し、7つのアリコートに分割し、トリプシン/LysC、キモトリプシン、LysC、ペプシン、及びAspN、エラスターゼ、及びプロテイナーゼK酵素でタンパク分解した。得られたペプチドを、ZipTip C18ピペットチップを用いて脱塩し、逆相クロマトグラフィを用いてオンラインで分離した。HCDフラグメンテーションを使用して、Thermo Q-Exactive分光計で質量分析を行った。MSデータセットを、デノボ配列タグをIMGTベースの抗体配列データベースにマッチさせることによって、PEAKSソフトウェアを使用して分析した。配列中のギャップは、デノボ同定されたペプチドのContig配列アセンブリを使用して割り当てた。全てのCDR及び超変異は、MS/MSスペクトルを検査することによって確認された。
HCDR1(配列番号1) 26~35
HCDR2(配列番号2) 50~58
HCDR3(配列番号3) 95~102
LCDR1(配列番号4) 24~34
LCDR2(配列番号5) 50~56
LCDR3(配列番号6) 89~97
VB11(抗Vβ17/抗CD123)及びVB13(Vβ17×ヌル)二重特異性抗体を、前述のように、ヒトIgG4として、knob-into-hole形式の完全長抗体として生成した(Atwell et al.J.Mol.Biol.270:26-35,1997)。可変領域をコードする核酸配列を、標準的なPCR制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、IgG4発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。二重特異性抗体は、中国ハムスター卵巣細胞株において一過性トランスフェクションによって発現させた。抗体を、Mab Select SuRe Protein Aカラム(GE healthcare、Piscataway,New Jersey)(Brown,Bottomley et al.1998)によって最初に精製した。カラムをpH7.2のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で平衡化し、2mL/分の流速で発酵上清を装填した。装填後、カラムをPBS(4CV)で洗浄し、続いてpH3.5の30mMの酢酸ナトリウムで溶出させた。Akta Explorer(GE healthcare)において280nmでの吸収度によって監視したタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、pH9.0の1%の3M酢酸ナトリウムを添加することによりpH5.0に中和した。研磨工程として、Superdex 200カラム(GE Healthcare)を使用して、予備的サイズ排除クロマトグラフィ(size exclusion chromatography、SEC)で抗体を精製した。試料の完全性を、エンドトキシン測定及びSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動により、還元及び非還元条件下で評価した。最終タンパク質濃度は、抗Vβ17/抗CD123に対して0.48mg/ml、Vβ17×ヌルに対して0.24mg/mLであった。これらのタンパク質濃度に基づく抗Vβ17/抗CD123及びVβ17×ヌルの最終EU濃度は、それぞれ、2.053EU/mg及び4.219EU/mgであった。
総PBMCからのVβ17+CD8+T細胞の刺激及び増殖
Vβ17+CD8+T細胞を増殖させるために、HLA A2ドナー(HPU-08694)からの全PBMCを、1μg/mLのFLU MP58ペプチド(DMSO中)で刺激した。総CD8+T細胞間のVβ17+細胞の頻度を、培養期間の8日目及び14日目に決定した。総CD8+T細胞間でVβ17+細胞の頻度を計数するために、総生PBMCを最初にゲートし、ダブレットを除外し、総CD8+T細胞をゲートし、次いでVβ17+細胞をゲートした(図3A)。0日目の総CD8+T細胞間のVβ17+細胞の頻度と比較して、これらの細胞の大幅な増殖が培養期間の8日目に観察された(図3B)。8日目のCD8+T細胞のより大きな画分は、このドナーにおけるVβ17+細胞(図3B)であった。
Kasumi-3細胞上
抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体の結合動態を理解するために、Kasumi-3細胞を、抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体及びVβ17×ヌルアーム対照と共に様々な濃度(濃度範囲5μg/mL~0μg/mL)でインキュベートした。細胞結合二重特異性抗体を、マウス抗ヒトIgG4 Fc-PE二次抗体で検出した。表9は、異なる濃度の二重特異性抗体で処理した場合の、PE(二次抗体)に対して陽性のKasumi-3細胞の頻度を示す。抗Vβ17/抗CD123及びヌル×CD123のEC50をそれぞれ6及び42.7nMと決定した(表9)。
濃縮されたFLU MP58ペプチド刺激CD8+T(14日目の培養から)を、様々な濃度の抗Vβ17/抗CD123二重特異性及びVβ17×ヌルアーム対照抗体と共にインキュベートした。マウス抗ヒトIgG4 Fc-PE二次抗体を使用して、二重特異性抗体を検出した。表10は、異なる濃度の二重特異性抗体で処理した場合の、PE(二次抗体)に対して陽性のCD8+T細胞の頻度を示す。抗Vβ17/抗CD123、Vβ17×ヌルのEC50を、それぞれ9.0nm及び18.7nmと決定した(表10)。
抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体媒介性細胞傷害の有効性を分析するために、CFSE標識された標的(Kasumi-3)細胞を、様々な濃度の抗Vβ17/抗CD123二重特異性及びVβ17×ヌルアーム対照抗体を用いて、0.5:1、1:1、5:1のエフェクタ対標的(ET)比で14及び24時間、培養14日目から刺激CD8+T細胞と共培養した。市販の抗CD123抗体を使用して、標的Kasumi-3細胞上でのCD123発現を調べた。標的細胞(Kasumi-3)をCFSEで標識して、フローサイトメトリ分析中にCFSE+として同定した。共培養期間後、7-AADを添加して、細胞傷害の指標として7-AAD+CFSE+細胞の割合を分析した。二重特異性抗体の不在下で観察された基礎細胞傷害を減じて、二重特異性抗体に応答して特異的な細胞傷害を得た。アッセイは、単一ドナー(HPU-08694)で1回実施した。14時間の時点で、0.5:1、1:1、及び5:1のET比での抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体のEC50は、それぞれ3.7、0.1、及び0.133pMであった(表11)。
Claims (34)
- 単離されたVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、
a.第1の重鎖(HC1)と、
b.第2の重鎖(HC2)と、
c.第1の軽鎖(LC1)と、
d.第2の軽鎖(LC2)とを含み、
HC1が、LC1と会合し、HC2が、LC2と会合し、HC1が、配列番号1、配列番号2、及び配列番号3のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC1が、配列番号4、配列番号5、及び配列番号6のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、第1の抗原に対する結合部位を形成し、HC2及びLC2が、第2の抗原に対する結合部位を形成している、
前記単離されたVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。 - 前記第1の抗原に対する前記結合部位が、CD8+又はCD4+T細胞上にあるVβ17に結合する、請求項1に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 前記第2の抗原に対する前記結合部位が、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合する、請求項1又は2に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- HC1及びLC1が、ヒト化されている、請求項1~3のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又は抗原結合断片。
- HC2及びLC2が、CD123に結合する、請求項1~4のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 前記二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、IgGアイソタイプである、請求項1~5のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 前記二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、IgG4アイソタイプである、請求項1~6のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 前記二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、約0.2pM未満のEC50でインビトロにおいて癌細胞のCD8+又はCD4+T細胞依存性細胞傷害を誘導する、請求項1~7のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1~8のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記HC1及び前記LC1をコードする、単離された核酸。
- 請求項1~8のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記HC2及び前記LC2をコードする、単離された核酸。
- 請求項9又は10に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
- 請求項11に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、
a.第1の重鎖(HC1)と、
b.第2の重鎖(HC2)と、
c.第1の軽鎖(LC1)と、
d.第2の軽鎖(LC2)とを含み、
HC1が、LC1と会合し、HC2が、LC2と会合し、HC1が、配列番号1、配列番号2、及び配列番号3のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC1が、配列番号4、配列番号5、及び配列番号6のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、Vβ17に特異的に結合する第1の抗原に対する結合部位を形成し、HC2が、配列番号34、配列番号35、及び配列番号36のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、及びHCDR3を含み、LC2が、配列番号37、配列番号38、及び配列番号39のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含んで、CD123に特異的に結合する第2の抗原に対する結合部位を形成している、
前記単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片。 - HC1が、配列番号13のアミノ酸配列を含み、LC1が、配列番号14のアミノ酸配列を含み、HC2が、配列番号15のアミノ酸配列を含み、LC2が、配列番号16のアミノ酸配列を含む、請求項13に記載の単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 前記Vβ17が、CD8+又はCD4+T細胞の表面上にある、請求項13又は14に記載の単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 前記CD123が、癌細胞又はCD34+幹細胞の表面上にある、請求項13~15のいずれか一項に記載の単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、約0.2pM未満のEC50でインビトロにおいて癌細胞のCD8+又はCD4+T細胞依存性細胞傷害を誘導する、請求項13~16のいずれか一項に記載の単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項13~17のいずれか一項に記載の抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記HC1及びLC1をコードする、単離された核酸。
- 請求項13~18のいずれか一項に記載の抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記HC2及びLC2をコードする、単離された核酸。
- 請求項18又は19に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
- 請求項20に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 請求項13~17のいずれか一項に記載の単離された抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、緩衝組成物。
- Vβ17発現CD8+又はCD4+T細胞を癌細胞に指向させる方法であって、Vβ17発現CD8+又はCD4+T細胞を、請求項13に記載の抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、前記Vβ17発現CD8+又はCD4+T細胞を、前記抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることが、前記Vβ17発現CD8+又はCD4+T細胞を癌細胞に指向させる、前記方法。
- 癌細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、前記癌細胞を、請求項13に記載の抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、前記癌細胞を前記抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることが、前記癌細胞の前記成長又は増殖を阻害する、前記方法。
- 前記癌細胞が、CD123発現癌細胞である、請求項23又は24に記載の方法。
- 請求項1~8のいずれか一項に記載のVβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キット。
- 請求項13~17のいずれか一項に記載の抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キット。
- Vβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、請求項12に記載の宿主細胞を培養して、前記Vβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成することと、前記Vβ17二重特異性抗体又はその抗原結合断片を前記細胞又は培養物から回収することとを含む、前記方法。
- 抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、請求項21に記載の宿主細胞を培養して、前記抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成することと、前記抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体又はその抗原結合断片を前記細胞又は培養物から回収することとを含む、前記方法。
- 単離されたヒト化Vβ17モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、前記ヒト化Vβ17モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、配列番号28のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記単離されたヒト化Vβ17モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
- 前記ヒト化Vβ17モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、配列番号28のアミノ酸配列を含む、請求項30に記載の単離されたヒト化Vβ17モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項30又は31に記載の単離されたヒト化Vβ17モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸。
- 請求項32に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
- 請求項33に記載のベクターを含む、宿主細胞。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962816464P | 2019-03-11 | 2019-03-11 | |
US62/816,464 | 2019-03-11 | ||
PCT/IB2020/000342 WO2020183245A2 (en) | 2019-03-11 | 2020-03-11 | ANTI-Vβ17/ANTI-CD123 BISPECIFIC ANTIBODIES |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022523442A true JP2022523442A (ja) | 2022-04-22 |
JPWO2020183245A5 JPWO2020183245A5 (ja) | 2023-03-17 |
Family
ID=71670296
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021553382A Pending JP2022523442A (ja) | 2019-03-11 | 2020-03-11 | 抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220127359A1 (ja) |
EP (1) | EP3937977A2 (ja) |
JP (1) | JP2022523442A (ja) |
KR (1) | KR20210138033A (ja) |
CN (1) | CN113874400A (ja) |
AU (1) | AU2020235475A1 (ja) |
BR (1) | BR112021017801A2 (ja) |
CA (1) | CA3132916A1 (ja) |
IL (1) | IL286147A (ja) |
MA (1) | MA55305A (ja) |
MX (1) | MX2021010857A (ja) |
WO (1) | WO2020183245A2 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE202019005887U1 (de) | 2018-07-03 | 2023-06-14 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR-Antikörpermoleküle und Verwendungen davon |
BR112023002488A2 (pt) * | 2020-08-10 | 2023-05-02 | Janssen Biotech Inc | Materiais e métodos para produzir linfócitos biomodificados contra vírus específicos |
KR20230084507A (ko) * | 2020-09-11 | 2023-06-13 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 다중-특이적 면역 표적화 분자 및 그의 용도 |
TW202227495A (zh) | 2020-09-11 | 2022-07-16 | 美商健生生物科技公司 | 用於調節β鏈介導之免疫的方法及組成物 |
WO2023077155A1 (en) * | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Janssen Biotech, Inc. | Compositions and methods for the modulation of beta chain-mediated immunity |
WO2023152633A1 (en) * | 2022-02-09 | 2023-08-17 | Janssen Biotech, Inc. | Methods and compositions comprising v beta 17 bispecific t cell engagers and bioengineered virus specific lymphocytes |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6084087A (en) * | 1991-09-27 | 2000-07-04 | New York Society For The Ruptured And Crippled Maintaing The Hospital For Special Surgery | DNA encoding conserved T-cell receptor sequences |
WO1999014318A1 (en) | 1997-09-16 | 1999-03-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method for the complete chemical synthesis and assembly of genes and genomes |
US6670127B2 (en) | 1997-09-16 | 2003-12-30 | Egea Biosciences, Inc. | Method for assembly of a polynucleotide encoding a target polypeptide |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
JP2008511337A (ja) | 2004-09-02 | 2008-04-17 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | ヘテロ多量体分子 |
JP5620626B2 (ja) | 2005-03-31 | 2014-11-05 | 中外製薬株式会社 | 会合制御によるポリペプチド製造方法 |
DE102005028778A1 (de) | 2005-06-22 | 2006-12-28 | SUNJÜT Deutschland GmbH | Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage |
WO2007147901A1 (en) | 2006-06-22 | 2007-12-27 | Novo Nordisk A/S | Production of bispecific antibodies |
ES2708124T3 (es) | 2009-04-27 | 2019-04-08 | Oncomed Pharm Inc | Procedimiento para preparar moléculas heteromultiméricas |
WO2011131746A2 (en) | 2010-04-20 | 2011-10-27 | Genmab A/S | Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof |
EP2635607B1 (en) | 2010-11-05 | 2019-09-04 | Zymeworks Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain |
JP6326371B2 (ja) | 2011-11-04 | 2018-05-16 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | Fcドメインにおける変異を有する安定なヘテロ二量体抗体デザイン |
TWI485161B (zh) * | 2012-03-02 | 2015-05-21 | Academia Sinica | 抗上皮細胞黏著分子(EpCAM)抗體及其使用方法 |
ME03724B (me) * | 2014-09-05 | 2021-01-20 | Janssen Pharmaceutica Nv | Agensi koji vezuju cd123 i njihove upotrebe |
TWI790206B (zh) * | 2016-07-18 | 2023-01-21 | 法商賽諾菲公司 | 特異性結合至cd3和cd123的雙特異性抗體樣結合蛋白 |
AU2018275109A1 (en) * | 2017-06-01 | 2020-01-02 | Xencor, Inc. | Bispecific antibodies that bind CD 123 CD3 |
-
2020
- 2020-03-11 WO PCT/IB2020/000342 patent/WO2020183245A2/en active Application Filing
- 2020-03-11 BR BR112021017801A patent/BR112021017801A2/pt unknown
- 2020-03-11 EP EP20742831.9A patent/EP3937977A2/en active Pending
- 2020-03-11 CN CN202080034083.XA patent/CN113874400A/zh active Pending
- 2020-03-11 JP JP2021553382A patent/JP2022523442A/ja active Pending
- 2020-03-11 US US17/437,771 patent/US20220127359A1/en active Pending
- 2020-03-11 MA MA055305A patent/MA55305A/fr unknown
- 2020-03-11 CA CA3132916A patent/CA3132916A1/en active Pending
- 2020-03-11 KR KR1020217031687A patent/KR20210138033A/ko unknown
- 2020-03-11 MX MX2021010857A patent/MX2021010857A/es unknown
- 2020-03-11 AU AU2020235475A patent/AU2020235475A1/en active Pending
-
2021
- 2021-09-05 IL IL286147A patent/IL286147A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3937977A2 (en) | 2022-01-19 |
IL286147A (en) | 2021-10-31 |
CN113874400A (zh) | 2021-12-31 |
WO2020183245A2 (en) | 2020-09-17 |
BR112021017801A2 (pt) | 2022-01-18 |
WO2020183245A3 (en) | 2020-12-03 |
US20220127359A1 (en) | 2022-04-28 |
MX2021010857A (es) | 2021-12-15 |
KR20210138033A (ko) | 2021-11-18 |
AU2020235475A1 (en) | 2021-09-30 |
CA3132916A1 (en) | 2020-09-17 |
MA55305A (fr) | 2022-01-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6971153B2 (ja) | 多重特異的nkエンゲイジャータンパク質 | |
AU2015311931B2 (en) | CD123 binding agents and uses thereof | |
US11952421B2 (en) | Bispecific antibodies against CD3EPSILON and ROR1 | |
JP6822849B2 (ja) | 多重特異的NKp46結合タンパク質 | |
JP6702893B2 (ja) | 多重特異的抗原結合タンパク質 | |
JP2022523442A (ja) | 抗Vβ17/抗CD123二重特異性抗体 | |
KR20160029128A (ko) | 이중특이적 cd3 및 cd19 항원 결합 구조체 | |
WO2015197582A1 (en) | Monomeric multispecific antigen binding proteins | |
CN111848796A (zh) | 用于选择针对bcma的抗体的方法 | |
CN115298221A (zh) | 结合b7h4的抗体 | |
WO2022081516A1 (en) | Bioengineered t cell mediated immunity, materials and other methods for modulating cluster of differentiation iv &/or viii | |
AU2022223152A1 (en) | Anti-gprc5d×bcma×cd3 trispecific antibody and use thereof | |
WO2022056197A9 (en) | Immune targeting molecules and uses thereof | |
US20240150464A1 (en) | Materials and methods for modulating t cell mediated immunity | |
JP2024507937A (ja) | Cd123及びガンマデルタt細胞受容体に結合する抗体 | |
WO2022152282A1 (zh) | 抗人cd22的单克隆抗体及其用途 | |
TW202037613A (zh) | 抗trem1抗體及相關方法 | |
CN117715940A (zh) | 抗trem-1抗体 | |
CN117986371A (zh) | 结合CD123和γ-δT细胞受体的抗体 | |
IL305346A (en) | Antibodies |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230309 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230309 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240213 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20240214 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240513 |